UA67747C2 - Ферментований та висушений рослинний матеріал для імуностимуляції та запобігання метастазам, спосіб його виготовлення, фармацевтичний продукт та харчова добавка для ссавців, що його містять - Google Patents
Ферментований та висушений рослинний матеріал для імуностимуляції та запобігання метастазам, спосіб його виготовлення, фармацевтичний продукт та харчова добавка для ссавців, що його містять Download PDFInfo
- Publication number
- UA67747C2 UA67747C2 UA2000020979A UA2000020979A UA67747C2 UA 67747 C2 UA67747 C2 UA 67747C2 UA 2000020979 A UA2000020979 A UA 2000020979A UA 2000020979 A UA2000020979 A UA 2000020979A UA 67747 C2 UA67747 C2 UA 67747C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- fermented
- dried
- fermentation
- metastases
- benzoquinone
- Prior art date
Links
- 239000000463 material Substances 0.000 title claims abstract description 84
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 title claims abstract description 32
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 title claims abstract description 19
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 31
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title abstract description 13
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title abstract 3
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims abstract description 23
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims abstract description 23
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 22
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 21
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 21
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 9
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 25
- OLBNOBQOQZRLMP-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethoxy-p-benzoquinone Chemical compound COC1=CC(=O)C=C(OC)C1=O OLBNOBQOQZRLMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 15
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 claims description 12
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 claims description 12
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 claims description 12
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 claims description 7
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- ZJKWJHONFFKJHG-UHFFFAOYSA-N 2-Methoxy-1,4-benzoquinone Chemical compound COC1=CC(=O)C=CC1=O ZJKWJHONFFKJHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 claims 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 abstract description 12
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 21
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 15
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 15
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 13
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 8
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 7
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 7
- 150000004057 1,4-benzoquinones Chemical class 0.000 description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 6
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 6
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 6
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 5
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 5
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 150000004054 benzoquinones Chemical class 0.000 description 4
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 4
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 4
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 4
- 150000005208 1,4-dihydroxybenzenes Chemical class 0.000 description 3
- 208000003468 Ehrlich Tumor Carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 3
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000010911 splenectomy Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- -1 ubiquinones Chemical class 0.000 description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 206010027457 Metastases to liver Diseases 0.000 description 2
- 206010027458 Metastases to lung Diseases 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 2
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 2
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 235000019362 perlite Nutrition 0.000 description 2
- 239000010451 perlite Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 2
- 150000004059 quinone derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 150000004053 quinones Chemical class 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 2
- QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N 1,4-Benzenediol Natural products OC1=CC=C(O)C=C1 QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KPQFKCWYCKXXIP-XLPZGREQSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-(methylamino)pyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(NC)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 KPQFKCWYCKXXIP-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 2-[6-(diethylamino)-3-(diethyliminiumyl)-3h-xanthen-9-yl]-5-sulfobenzene-1-sulfonate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1S([O-])(=O)=O IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 230000010736 Chelating Activity Effects 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 1
- 206010015719 Exsanguination Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 239000001698 Lecitin citrate Substances 0.000 description 1
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 1
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 1
- 208000006552 Lewis Lung Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 1
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 1
- 208000006431 amelanotic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000002001 anti-metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- UFJGAGFPFYQSCU-UHFFFAOYSA-M benzoyl(trimethyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].C[N+](C)(C)C(=O)C1=CC=CC=C1 UFJGAGFPFYQSCU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000004098 cellular respiration Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000002026 chloroform extract Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 235000017471 coenzyme Q10 Nutrition 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 229960003722 doxycycline Drugs 0.000 description 1
- XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N doxycycline monohydrate Chemical compound O.O=C1C2=C(O)C=CC=C2[C@H](C)[C@@H]2C1=C(O)[C@]1(O)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@H](N(C)C)[C@@H]1[C@H]2O XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N hydroxyl Chemical compound [OH] TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000000684 melanotic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000695 menaquinone group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229940042016 methacycline Drugs 0.000 description 1
- MHIGBKBJSQVXNH-IWVLMIASSA-N methacycline Chemical compound C=C([C@H]1[C@@H]2O)C3=CC=CC(O)=C3C(=O)C1=C(O)[C@@]1(O)[C@@H]2[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C1=O MHIGBKBJSQVXNH-IWVLMIASSA-N 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 238000003801 milling Methods 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000029553 photosynthesis Effects 0.000 description 1
- 238000010672 photosynthesis Methods 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 125000004151 quinonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 208000011581 secondary neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004753 textile Substances 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 239000000724 thymus hormone Substances 0.000 description 1
- 238000003211 trypan blue cell staining Methods 0.000 description 1
- 150000003669 ubiquinones Chemical class 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- 235000019143 vitamin K2 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011728 vitamin K2 Substances 0.000 description 1
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 description 1
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
- A23L7/20—Malt products
- A23L7/25—Fermentation of cereal malt or of cereal by malting
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
- A61K36/062—Ascomycota
- A61K36/064—Saccharomycetales, e.g. baker's yeast
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/14—Yeasts or derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
- A23L7/10—Cereal-derived products
- A23L7/152—Cereal germ products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
- A61K36/899—Poaceae or Gramineae (Grass family), e.g. bamboo, corn or sugar cane
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
- A23V2200/308—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on cancer prevention
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Grain Derivatives (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
Винахід стосується ферментованого, висушеного рослинного матеріалу для імуностимуляції та запобігання метастазам, фармацевтичної композиції та харчової добавки, які містять цей матеріал, способу виготовлення висушеного матеріалу. Матеріал, згідно з винаходом, може бути одержаний шляхом ферментації зародків пшениці у водному середовищі в присутності Saccharomyces cerevisiae з наступним висушуванням ферментованої рідини.
Description
Опис винаходу
Винахід стосується ферментованого та висушеного рослинного матеріалу для імуностимуляції та запобігання 2 метастазам, фармацевтичних композицій з нього, способу приготування матеріалу та застосування висушеного рослинного матеріалу як харчової добавки та у виробництві фармацевтичних композицій для імуностимуляції та особливо запобігання метастазам.
Одним з основних завдань при лікуванні пухлин є запобігання метастазам, оскільки первинна пухлина, яка виникає внаслідок злоякісного росту клітин, через метастази розповсюджується до сусідніх клітин і органів і 70 викликає в подальшому вторинні пухлини, які не можуть бути видалені хірургічним шляхом, а також можуть бути резистентними до хіміотерапії.
Дослідники все більше концентрують свої зусилля на розробці матеріалів для імуностимуляції, при цьому інтенсивно вивчаються матеріали природного, головним чином рослинного походження.
Добре відомий той факт, що сполуки хінонової структури відіграють важливу біологічну роль. В рослинах знайдені деякі похідні хінону, такі як убіхінони, пластохінони та менахінони, які беруть участь у фотосинтезі, а також у системі клітинного дихання хребетних, в тому числі людини, в згортанні крові тощо.
Деякі похідні бензохінону застосовуються в медицині. Похідними хінону є Адріаміцин, Даунорубіцин та Мітоміцин
С, які володіють цитостатичною дією. Інші бензо- та гідрохінони володіють протимікробними властивостями і являють собою активні інгредієнти препаратів з групи антибіотиків для лікування бактеріальних інфекцій, таких як Тетран-Б, Метациклін та Доксициклін.
В літературі є дані про те, що 2,6б-диметокси-п-бензохінон (2,6-ДМБХ) і 2-метокси-п-бензохінон (2-МБХ) володіють фунпцидними та бактеріостатичними властивостями, а також цитотоксич-ністю у відношенні злоякісних клітин (пі У. б)апі спет.: Сцапі. Віої. Зутр. 7., 217-222 (1980), 9., 27-30 (1982) та 12. 257-261 (1985); Рпуїоспетівігу 27., 225 (1971) та 9. Адгіс. Роод Спет. 39., 266 (1991)). Показано, що суміш с 2,6-диметокси-п-бензохінону та аскорбінової кислоти інгібує ріст клітин пухлини асциту Ерліха у мишей |Ргос. (у
Май. Асад. Зсі. ИБА 81., 2088-2091 (1984) та 82, 1439-1442 (1985)Ї. 2,6-Диметокси-п-бензохінон та 2-метокси-п-бензохінон знайдені та виділені з деяких рослин |Маду. Кет. Роїуоігаї 102/7., 320-325 (1996).
Дві вказані сполуки знайдені головним чином у формі глікозидів у пшениці (Тгйісцт миїЇдагів), а точніше - у зародках пшениці. Сполуки були виділені в 50-х роках із зародків пшениці, ферментованих за допомогою в дріжджів та ідентифіковані з метою перевірки погіршення якості хліба, в якому містилися зародки пшениці «Її
ІНеїм. Ніт. Асіа 33., 433 (1950); У. Спет. 5ос. І опдоп 1952, 4821-4823).
За даними літератури, кількість 2-МБХ у зародках пшениці становить біля 0,0595, тоді як 2,6-ДМБХ -- біля - 0,0195 (у формі глікозиду). Присутність хінонів у формі глікозидів пояснюється тим фактом, що хінони, особливо ча п-бензохінони, які містять метоксильні групи, є реактивними сполуками, тоді як їх гідрохінонові глікозиди більш стабільні та інертні. ее,
Під час дослідження ферментації зародків пшениці ми дійшли висновку, що сухий екстракт, одержаний з ферментованої рідини, яка утворюється під час ферментування зародків пшениці пекарськими дріжджами (Засспаготусез сегемівіае) має несподівану здатність до імуностимуляції та запобігання метастазам і може бути « успішно застосований як активний інгредієнт фармацевтичних композицій для імуностимуляції та запобігання З 70 метастазам. с Дане відкриття було несподіваним" тому що, хоча літературні дані (Ргос. Май. Асад. Зсі. ОБА 80., 129
Із» (1983)) повідомляють, що суміш 2-ДМБХ та аскорбінової кислоти інгібує ріст клітин пухлини асциту Ерліха, які чудово підходять для кількісного аналізу росту пухлин та для дослідження їх біохімічних функцій, екстракт, описаний у винаході (він містить окрім компонентів, які не можуть бути ідентифіковані, 2,6-ДМБХ та 2-МБХ), 42 виявився практично неефективним у відношенні клітин первинної пухлини асциту Ерліха, навіть при сполученні з б аскорбіновою кислотою, так само як і у відношенні інших первинних пухлин, і виявився дуже ефективним тільки в -І лікуванні метастазів. Аспекти лікування первинних пухлин та метастазів, які розвиваються з них, є відмінними суттєво, тож для дослідника той факт, що рослинний екстракт містить компоненти, хімічна природа яких ще 7 повністю не ідентифікована, з встановленою ефективністю в лікуванні первинних пухлин, не означає вочевидь, «їз» 20 що їх композиції повинні володіти здатністю до імуностимуляції та запобігання метастазам ІСапсег, Ргіпсіріев «мч апа Ргасіїсе ої Опсоіоду, Мої 1, 4 едікоп, У. В. ІІрріпсої Сотрапу, Рпйадеї!рніа, 19931).
Таким чином, даний винахід стосується ферментованого та висушеного рослинного матеріалу для імуностимуляції та запобігання метастазам, який одержують ферментуванням зародків пшениці у водному середовищі за допомогою пекарських дріжджів, фільтруванням ферментованої рідини для відокремлення клітин 59 та її висушуванням.
ГФ) Даний винахід стосується також фармацевтичної композиції для імуностимуляції та запобігання метастазам, 7 активним інгредієнтом якої є ферментований та висушений рослинний матеріал, описаний у винаході.
Даний винахід розглядає також застосування вищевказаного ферментованого та висушеного рослинного матеріалу у виробництві фармацевтичних композицій для імуностимуляції та запобігання метастазам. бо Даний винахід стосується також способів лікування ссавців описаними у винаході фармацевтичними композиціями з метою стимуляції їх імунної системи та запобігання метастазам.
Винахід також розглядає харчову добавку, яка містить описаний у винаході ферментований та висушений рослинний матеріал і мальтодекстрин.
Згідно винаходу ферментований висушений рослинний матеріал ідентифікований та досліджений на основі бо вмісту 2,6-ДМБХ. Ми хотіли 6 відзначити, що повна ідентифікація хімічного складу екстракту була неможливою за допомогою доступних методів, тож всі дані розглядають вміст 2,6-ДМБХ як основний показник.
Цей показник виявився придатним для застосування при виробництві описаного в даному винаході ферментованого та висушеного рослинного матеріалу із зародків пшениці, які є побічним продуктом помелу муки і доступні у великих кількостях при одержанні муки стандартної якості, як в їх оригінальному так і в знежиреному стані. Використання знежирених зародків пшениці не має специфічних переваг. Ферментація була здійснена за допомогою пекарських дріжджів (Засспаготусевз сегемівіае). Даний тип дріжджів є комерційно доступним. Період ферментації становив приблизно 10-24 години, переважно 15-20 годин або біля 18 годин.
Температура ферментації становила приблизно 25-35"С, переважно біля 30"С. Масове співвідношення зародків 70 пшениці і дріжджів становило 4:1-2:1, переважно біля 3:11, масове співвідношення сухого матеріалу та води становило 1:6-1:12, переважно біля 1:9.
Ферментація у лабораторних масштабах може бути здійснена, наприклад, шляхом додавання у скляний ферментатор до свіже змолотих зародків пшениці суспензії дріжджів у воді з наступним перемішуванням або струшуванням суміші. Ферментована рідина стає пінистою.
Після ферментації суміш центрифугують протягом 5-15 хвилин при 2000-4500об/хв, переважно при
ЗО00боб/хв. Супернатант кип'ятять, охолоджують та висушують відповідним способом, наприклад шляхом ліофілізації або пульверизаційної сушки.
Продукт, червонувато-брунатний порошок, є матеріалом згідно винаходу. Доцільно зберігати матеріал до подальшого використання охолодженим у герметично закритих контейнерах внаслідок його гігроскопічності.
Вміст 2,6-ДМБХ в кінцевому сухому матеріалі становить біля 0,4мг/г. У випадку ферментування в промислових масштабах (наприклад, 4 кубічних метри) слід застосовувати тривалу аерацію, наприклад 0,5 літрів повітря на 1 літр ферментованої рідини за хвилину і повільне перемішування. Період ферментації становить біля 18 годин.
Для запобігання піноутворенню можуть бути застосовані звичайні добавки, перевага надається соняшниковій олії. В кінці процесу ферментації аерація і перемішування припиняються і ферментована рідина сч ов Відокремлюється від суспензії зародків пшениці та дріжджів звичайним способом, наприклад у гвинтовому декантаторі, а далі на сепараторі і фільтр-пресі При необхідності може бути доданий матеріал для і) фільтрування. Підходить використання 5-10кг фільтруючого перліту на кубічний метр ферментованої рідини.
Ферментована рідина ретельно фільтрується і якість фільтрування перевіряється за допомогою мікроскопу.
Відфільтрована ферментована рідина повинна практично не містити клітин, що означає не більше ніж 1 клітину М зо дріжджів при дослідженні 10 полів зору мікроскопу. Одержану ферментовану рідину, яка містить біля 1,595 по масі сухого матеріалу випарюють у вакуумному конденсаторі, переважно при температурі приблизно 40-50 і - далі після зняття вакууму кип'ятять при атмосферному тиску протягом приблизно 15 хвилин. Це призводить до М зменшення небезпечної ферментної активності. Далі суміш висушують шляхом пульверизаційної сушки, наприклад в обертальному пульверизаційному апараті Якщо був застосований описаний вище процес - ферментації, вміст 2,6-ДМБХ в кінцевому ферментованому висушеному рослинному матеріалі становить «о 0,12-0,52мг/г сухого матеріалу і вміст 2-МБХ становить 0,05-0,28мг/г сухого матеріалу - в залежності від вмісту бензохінону у використаних зародках пшениці.
Оскільки кінцевий продукт є гігроскопічним, для збільшення ефективності пульверизаційної сушки і використання кінцевого продукту, під час пульверизаційної сушки може бути застосована одна із звичайних « домішок, наприклад Мальтодекстрин, камедь акації, гуміарабік, ксантанова камедь, борошно бобів акації тощо. пт») с Переважно використовують мальтодекстрин. Придатним для одержання способом є визначення вмісту сухого матеріалу в суміші, яка була випарена у вакуумному згущувачі і піддавалася кип'ятінню і подання такої ;» кількості мальтодекстрину, щоб вміст сухого матеріалу в суміші, яку висушують, складав біля 3095 по масі.
Можна розчинити мальтодекстрин в гарячій воді і охолодженим додати до суміші, яка згущується. Після висушування кінцевий продукт -- порошок -- містить біля 6095 по масі ферментованого та висушеного
Ф рослинного матеріалу і біля 4095 по масі мальтодекстрину.
Стабільність одержаного матеріалу може бути перевірена шляхом моніторингу змін концентрації 2,6-ДМБХ.
Ш- Кількісний аналіз може бути здійснений методом високоефективної рідинної хроматографії (НРІ С). Порошок, -І одержаний згідно описаного вище процесу залишається стабільним при кімнатній температурі протягом приблизно трьох років. о Ферментований та висушений рослинний матеріал згідно винаходу може бути використаний як активний "М інгредієнт фармацевтичних композицій для імуностимуляції та запобігання метастазам. Фармацевтична композиція окрім вказаного активного інгредієнту може містити аскорбінову кислоту або інші цитостатичні матеріали. 5Б Ферментований та висушений рослинний матеріал може бути перетворений на звичайні тверді або рідкі фармацевтичні композиції для перорального або парентерального введення. Під час виробництва (Ф, фармацевтичних композицій" повинен братися до уваги гігроскопічний характер ферментованого та висушеного ка рослинного матеріалу. Придатною лікарською формою є капсула, яка захищає активний інгредієнт від вологості повітря. во При виготовленні фармацевтичних композицій можуть бути застосовані допоміжні матеріали які зазвичай застосовуються в фармацевтичній практиці. Оскільки вказані матеріали та їх можливе застосування детально описані у фармацевтичній літературі, вибір відповідної лікарської форми є рутинним завданням. Дозування активного інгредієнту може варіювати у широких межах, в залежності від стану пацієнту, і вибір відповідної ефективної дозованої форми завжди повинен здійснюватися лікарем. Загалом добрі результати можуть бути 65 одержані у дозах 0,001-100г, переважно 0,01-50г, навіть більш переважно 0,1-40г на кг маси тіла, наприклад у дозах 0,1-10г, 1-25г або 10-30Гг.
Ферментований висушений матеріал згідно винаходу може також буди змішаний з аскорбіновою кислотою (вітамін С). За результатами наших експериментів, аскорбінова кислота може підсилювати ефект запобігання метастазам матеріалу згідно винаходу. Масове співвідношення ферментованого, висушеного рослинного матеріалу та аскорбінової кислоти може бути наприклад 10:1-1:1, переважно 6:1-2:1, більш переважно 3:1, 41 або 5:1.
Винахід також розглядає спосіб лікування для імуностимуляції та/або запобігання метастазам ферментованим та висушеним рослинним матеріалом згідно винаходу. Суттю лікування є введення пацієнту ефективної дози ферментованого та висушеного рослинного матеріалу. 70 Ферментований та висушений рослинний матеріал також може бути використаний як харчова добавка для ссавців. В цьому випадку перевага надається застосуванню суміші, яка містить мальтодекстрин і звичайні допоміжні речовини, які застосовують в харчовій промисловості, наприклад ароматизатори, підсолоджувачі, барвники тощо. Харчова добавка може бути виготовлена наприклад шляхом гранулювання суміші, яка містить 6096 висушеного матеріалу і 4095 мальтодекстрину, ароматизатори і підсолоджувачі, у псевдорідкому шарі з /5 наступним пакуванням розчинного грануляту в мішки.
Фігури, що додаються:
Фіг.1 - Калібрувальна діаграма НРІ С вимірювань 2,6-ДМБХ
Фіг.2 - Хроматограма НРІ С хлороформного екстракту матеріалу
Фіг.3 - Хроматограма НРІ С етанольного екстракту матеріалу
Фіг.4 - Зв'язування клітин пухлини В1б в присутності різних концентрацій люфілізату на 60-й та 90-й хвилині після початку обробки. (Кожне значення є середнім 8 паралельних вимірювань «з стандартне відхилення, визначення шляхом спектрофотометричних вимірювань.)
Фіг5 - Вплив різних доз ліофілізату на проліферацію клітин В1б через 24 та 48 годин після початку обробки. (Кожне значення є середнім 8 паралельних вимірювань х стандартне відхилення, визначення шляхом с ов спектрофотометричних вимірювань.)
Фіг.б6 - Розвиток людської меланоми А2058 в присутності різних доз ліофілізату через 24 години після і) початку обробки. Оцінка культури здійснювалась на основі білку (проба ЗКВ) та активності дегідрогенази (проба
МТТ) шляхом паралельних спектрофотометричних вимірювань. (Кожне значення є середнім 8 паралельних вимірювань «х стандартне відхилення). М зо Фіг.7 - Вміст апоптозних клітин (метод РАС5) в культурі людської меланоми А2058 після обробки різними дозами ліофілізату іп міго. -
Наступні приклади служать для ілюстрації ферментованого та висушеного матеріалу згідно винаходу, його М виготовлення та фармакологічних властивостей.
Приклад 1 в.
Ферментування зародків пшениці «о
Суспензію з 33,Зг дріжджів (Засспаготусев сегемізідез та 100О0мл питної води додають до 100г свіжих зародків пшениці у вигляді борошна стандартної якості (згідно угорського стандарту М572-081361-80). Суміш струшують в шейкері протягом 18 годин при 30 С. Протягом цього періоду ферментована рідина стає пінистою і збільшується в об'ємі приблизно втричі. Після ферментації суміш центрифугують протягом 15 хвилин при «
ЗООбоб/хв. Після кип'ятіння та охолодження супернатант висушують шляхом ліофілізації і одержаний з с ліофілізований матеріал зберігають для подальшого використання у морозильній камері (-107С). Вміст 2,6-ДМБХ в одержаному ліофілізаті становив О,4мг/г сухого матеріалу (0,0496). з Приклад 2
Ферментація зародків пшениці в промислових масштабах
ЗООкг зародків пшениці у вигляді борошна стандартної якості (згідно угорського стандарту) і 7ООкг
Ге» дріжджів вміщують до ферментатору об'ємом 5 кубічних метрів, додають питну воду до об'єму 4000л. Період ферментації становить 18 годин, протягом якого застосовують тривалу аерацію (0,5л повітря на 1 літр
Ш- ферментованої рідини за хвилину) і повільне перемішування (ЗОоб/хв). Для запобігання пінсоутворенню до суміші -І додають 1л/м? соняшникової олії. Після ферментації аерацію та перемішування припиняють і ферментовану рідину відокремлюють спочатку у гвинтовому декантаторі, потім у сепараторі і після цього на фільтр-пресі з е текстильним фільтром. При цьому додають допоміжний матеріал в кількості 1Окг фільтруючого перліту на "І кубічний метр. Ферментована рідина ретельно фільтрується, її чистота перевіряється за допомогою мікроскопу.
Відфільтрована ферментована рідина повинна практично не містити клітин, що означає максимум 1 дріжджову клітину при дослідженні 10 полів зору мікроскопу. Одержану ферментовану рідину, яка містить біля 1,595 сухого матеріалу, випарюють у вакуумному конденсаторі при температурі 40-50 С і після зняття вакууму кип'ятять при атмосферному тиску приблизно 15 хвилин. Після цього визначають вміст сухого матеріалу в розчині і додають
Ф, таку кількість розчиненого в гарячій воді і охолодженого мальтодекстрину, щоб вміст сухого матеріалу в ко розчині становив біля 3095. Після цього розчин висушують способом пульверизаційної сушки в обертальному пульверизаційному апараті із зрізаним соплом, при температурі повітря на виході 907С. Одержаний кінцевий бо продукт - порошок -- містить 6095 ферментованого рослинного матеріалу згідно винаходу і 4095 мальтодекстрину. Вміст 2,6-ДМБХ, який визначають методом НРІ С (згідно способу, який описаний в наступному прикладі), становив О0,4мг/г сухого матеріалу.
Приклад З
Характеристики матеріалу згідно винаходу 65 Матеріал згідно винаходу може бути охарактеризований двома шляхами -- шляхом визначення вмісту 2,6-ДМБХ, або так званою характеристичною хроматограмою. В обох випадках застосовується хроматографія
НРІС.
Аналіз проводили як для матеріалу, виготовленого за способом, що описаний в Прикладі 1, так і для матеріалу, одержаного за способом, що описаний в Прикладі 2. Результати в обох випадках були ідентичними.
А. Кількісний та якісний аналіз похідних бензохінону
Приготування зразка
Перед проведенням аналізу необхідно збільшити концентрацію бензохінонів в ліофілізаті Для цього ліофілізат розводять до оригінальної концентрації первинної дистильованою водою (вміст сухого матеріалу 1905) -
О,5г ліофілізату в 5Омл дистильованої води. Розчин екстрагують Зх25мл хлороформу в З етапи. Залишкову 7/0 Вологість, яка лишається в хлороформній фазі, видаляють безводним сульфатом натрію. Після фільтрування хлороформну фазу випарюють до досягнення остаточного об'єму 5мл. Цей зразок вводили в хроматограф під час проведення НРІ С -аналізу.
Якісний та кількісний аналіз похідних бензохінону здійснювали методом НРІ С.
Опис методу високоефективної рідинної хроматографії (НРІ С). Застосоване обладнання НРІ С складається з /5 насосу моделі ВесКтап 114М, детектору І арогМіт ОМ відповідно Мегек-Нігаспі-АО моделі 4500 та інтегруючого пристрою типу УУаїегз 740. Для вимірювань було використано колонку СПпготві!Ї С18 (250х4мм) 10М. УФ визначення проводилося на довжині хвилі 29Онм, об'ємна витрата становила 2мл/хв.
Склад застосованого елюенту був наступним: Ма»2НРО4 - 25 ммоль, МанНоРО, - 25 ммоль, Ма»ЕеЕОТА - 25 ммоль, МНоОНОИНСІ - 20 ммоль, метанол - 1095 по об'єму, рН-6,05.
Три різних бензо- та гідрохінони були проаналізовані за допомогою вищеописаного методу. Існує невелика різниця між часом утримання цих сполук. Шляхом зниження концентрації елюенту -- органічної фази до 1095 - селективність була істотно збільшена. Аналіз даних часу утримання показав, що п-бензохінони мають більший час утримання, ніж відповідні гідрохінони і цей показник збільшується із збільшенням кількості метоксигруп.
Концентрація всіх трьох проб становила 0,1мг/мл. В табл.?2 наведений час утримання (їв) для стандартних (су Зразків та дані фактору місткості (Кк). Метою вимірювань було виявлення та кількісне визначення 2,6-диметокси-п-бензохінону, тому в подальшому ця частина вимірювань буде обговорена детально. Ми і) перевірили придатність розробленого методу для кількісного аналізу 2,6-диметокси-п-бензохінону.
Калібрувальна діаграма, яка застосовувалася, наведена на фіг.1. З коефіцієнтом кореляції 0,99 результатом є пряма лінія. Нами також перевірена відтворюваність вимірювань, тобто для кожного зразка проведені З рч- паралельних вимірювання і обчислений розкид результатів. В табл.1ї наведені результати паралельних вимірювань, проведених на зразках протягом періоду 6 місяців, та їх розкид. Наші результати показують, що М метод вимірювань є придатним для точних та відтворюваних вимірювань 2,6-диметокси-п-бензохінону. рч- в зв Ф « овло 5 зам» 2 с . о
Ф з - в» що
На фіг.2 показано хроматограму НРІ С хлороформного зразка, виготовленого за описаним вище способом.
Хроматограма показує лише одну характеристику піка для 2,6-ДМБХ. Вміст 2,6-ДМБХ в зразку визначали на
ОСНОВІ цього піку.
В. Характеристична хроматограма
Ф) Підготовка проби ко 5Омл 9695 (по об'єму) етанолу додають до 5г матеріалу, висушеного за допомогою пульверизаційної сушки (виготовленого за способом, що описаний у Прикладі 2). Суміш струшують протягом 30 хвилин при температурі во ЗО0"С та 200 циклів на хвилину. Після цього суміш фільтрують, випарюють до суха і сухий залишок розчиняють у 10мл метанолу. Розчин відфільтровують і впорскують до колонки.
Метод НРІС
В методі були використані обладнання НРІ С, колонка та умови, які описані вище, однак відрізнявся склад елюенту: Ма»НРО, - 1,25 ммоль, МанН»оРоО, - 1,25 ммоль, Ма»2ЕеЕОТА - 1,25 ммоль, МНгОНОНСІ - 2,50 ммоль, 595 по 65 об'єму метанолу.
Фіг.З показує одержану хроматограму НРІС. На ньому показано, що при даних умовах з'являється 2 характерних піки -- один на 4,7хв (5) та один на 5,вхв (6). При часі утримання 7,Зхв та 7,7хв один за другим швидко з'являються 2 піки (7,8), які повністю не можна розділити. Пік меншої інтенсивності з'являється на 9,вхв (9), за ним характерний інтенсивний пік (11) приблизно на 13,1хв. Приблизно на 15хв з'являється менший пік (12) та інший інтенсивний пік (14) -- на 18хв. На 21,8хв хроматограма показує менший пік (15) і приблизно на Зі1хв -- плаский пік, що містить кілька матеріалів.
С. Вивчення стабільності
Руйнування матеріалу згідно винаходу вивчалося за змінами концентрації 2,6-диметокси-п-бензохінону. Ми здійснили експерименти по зберіганню матеріалу при трьох різних температурах (кімнатна температура - 207С, /0. З0'С ї 60"С). Ліофілізат (приблизно 1г) зберігали в герметично закритих пробірках. Тривалість експерименту становила 8 тижнів, кожного тижня здійснювали З паралельних вимірювання зразків з усіх трьох серій, які зберігалися при різних температурах. Кількісне визначення похідних бензохінону здійснювали методом НРІ С.
Результати досліджень показали, що висушений матеріал згідно винаходу залишається стабільним навіть після трьох років зберігання при кімнатній температурі, тобто вміст 2,6-ДМБХ лишається практично незмінним. 7/5 Водночас матеріал є нестабільним при 40"7С - 2,6-ДМБХ руйнується протягом кількох тижнів, а при 607С вміст 2,6-ДМБХ швидко знижується протягом кількох днів.
Руйнування 2-метокси-п-бензохінону також було досліджено у всіх серіях вимірювань. Ця сполука є менш стабільною, ніж 2,6-диметокси-п-бензохінон і внаслідок цього її не було виявлено у зразках після 1 тижня зберігання при 40"С або 60"С. При кімнатній температурі концентрація цієї сполуки лишалася незмінною.
Приклад 4
Дослідження ефективності
Обидва матеріали (ліофілізат, виготовлений згідно Прикладу 1 та матеріал, виготовлений згідно Прикладу 2) були випробувані на ефективність. Було використано стандартизований висушений матеріал з вмістом 2,6-ДМБХ 0,4мг/г сухого матеріалу і такими показниками НРІС, як показано на фіг.2. Обидва матеріали сч продемонстрували однакові результати, тому матеріал згідно винаходу ми будемо називати далі просто ліофілізат. Нижче будуть обговорені результати біологічних і токсикологічних випробувань цього ліофілізату, з і) особливим акцентом на відновленні імунітету, впливі на ріст пухлин та запобіганні метастазам.
Ї. Вплив на пухлинний ріст та запобігання метастазам (дослідження іп мімо)
В дослідженнях були використані наступні типи пухлин, придатні до прищеплення у мишей та щурів: варіант М зо легеневої карциноми Льюїса (легеневий рак мишей) з високим утворенням метастазів (ЗІ -НН), мишача меланома В16 та карцинома товстої кишки людини НСК-25 придатна до перехресного прищеплення. -
Пухлини ЗІ -НН (ІСТ-НН) та В16 були прищеплені інбредним мишам С5781/6. Мишей СВА/СА піддавали М тимектомії та опроміненню всього тіла з метою пригнічення імунітету. Після цього їм вводили ін'єкційним способом ксенотрансплантант НСМК-25. У випадку пухлин ЗІЇ-НН та НСМК-25 клітини пухлини були ї- трансплантовані в селезінку, у випадку меланоми В16 -- в м'язи лівої задньої кінцівки. Експериментальну та «о контрольну групи тварин, яким була ін'єкційно введена пухлина НСК-25, піддавали спленектомії через 21 день після трансплантації пухлини.
Введення описаного у винаході ліофілізату починали через 24 години після ін'єкції пухлини. Денна доза становила Зг/кг маси тіла і вводилася перорально в формі водної суспензії О,бг/мл з перевіркою знаходження у « шлунку. шщ с Випробування припиняли через 14 днів після трансплантації у випадку пухлини ЗІ -НН, через 21 день після трансплантації у випадку пухлини В16 та через 51 день після трансплантації у випадку пухлини НСК-25 через ;» умертвіння тварин шляхом знекровлювання під наркозом.
В табл.3З, 4 та 5 наведені результати досліджень.
Ф
Вплив лікування ліофілізатом згідно винаходу на кількість печінкових метастазів у випадку мишачого раку легенів ЗІ І -НН, введеного з з т --
Кожна група містила 10 тварин. 25 о людини НСК-25 в селезінку миші СВА/СА з пригніченим імунітетом т во бо Кожна група містила 10 тварин.
метастазів через 21 день після ін'єкційного введення меланоми В16 у м'язи кінцівки й
Кожна група містила 10 тварин. то Наведені вище результати показують, що лікування ліофілізатом, описаним у винаході, значно зменшувало (на 71905) кількість легеневих метастазів у випадку ін'єкції пухлини ЗІ -НН в селезінку (табл.3).
У випадку карциноми товстої кишки людини НОСК-25 лікування протягом 50 днів знижувало як вагу селезінки з пухлиною, так і кількість печінкових метастазів. Кількість метастазів в порівнянні з контрольною групою становила біля 5095 як в групі тварин з спленектомією, так і в групі тварин без спленектомії (табл.4). т5 У випадку ін'єкційного введення меланоми В1б в м'язи вага пухлини, яка росла в м'язах, внаслідок лікування не змінювалася, але кількість легеневих метастазів знижувалася дуже значно -- на 8595 порівняно з контрольною групою (табл.б).
ІЇ. Дослідження іп міго
Оскільки вищеописані експерименти недвозначно показали, що описаний у винаході ліофілізат може істотно 720 знижувати метастазування злоякісних пухлин, ми вивчили також дію продуктів на різні фази утворення метастазів. Утворення метастазу складається з кількох фаз, у яких окрім проліферації та апоптозної активності клітин первинної пухлини відіграють роль потенціал адгезії клітин пухлини та захисні механізми організму проти клітин пухлини. В дослідженнях іп міго ми вивчали вплив ліофілізату на проліферацію та апоптоз клітин та адгезію. сч 25 Оскільки велика частина досліджень іп мімо була присвячена клітинам мишачої меланоми В16, в першу чергу (о) сама ця пухлина була взята для вивчення ліофілізату іп міїго. 1. Дослідження адгезії
Адгезію клітин пухлини вивчали на 96б-чарунковій мікроплаті. Дози ліофілізату становили 300, 3000 та М
З00б0Омкг/мл. Було використане середовище для культури КРМІ, як за відсутності сироватки, так і в присутності 30 1095 ЕС. Адгезію вивчали після інкубації М звичайних умовах на 10-й, 30-й, 60-й, 90-й та 120-й хвилині. «І
Оцінку здійснювали за процесом колориметрії на основі пропи ЗКВ |Моззтапп Т.: У. Іттипої. Мей. 65, 55-63 м (1983)). Випробування базується на забарвленні загального вмісту білку і. культурі сульфородаміном В, поглинання вимірюється шляхом спектрофотометрії на довжині хвилі 57Онм. Фіг.4 показує тільки 2 моменти часу, - однак вони адекватно представляють вплив ліофілізату. Було показано, що у випадку дози ліофілізату со 35 ЗОбОмкг/мл або в 10 разів більше, адгезія клітин пухлини різко знижується, як в присутності сироватки, так і за її відсутності. При дозі ЗООмкг/мл такого ефекту не спостерігалося. 2. Дослідження проліферації
В цьому експерименті клітини пухлини за 24 години до обробки вміщували на 96-чарункову мікроплату. Після « обробки відповідними дозами ліофілізату проліферативну активність клітин визначали, допомогою проби ЗКВ з через 24, 48 та 72 години після обробки. Результати повторних випробувань показали, що під впливом доз с 900-1500О0мкг/мл клітини пухлини підходили до поверхні моношару і, як показав метод виключення барвника :з» тріпана голубого, гинули І(КаїПепбрасі .. Р. ей а|.: Ехр. СеїЇ Кев. 15, 112-117 (1985)).
Наші дослідження на амеланотичній меланомі людини |клітини пухлини А2О58 - Тодаго, 0. у. еї аї.: Ргос.
Май. Асад. Зсі. ОБА 77, 52 --.1-5262 (1980)) показали подібні результати до мишачої меланотичної меланоми
Фу но (фіг.б). У випадку цієї пухлини паралельно о пробою 5КВ була проведена проба МТТ, яка визначає метаболічні активність клітини ІСоіїе, 5. Р. С: Сапсег Спетоїпег. РІПапгтасої, 17, 259-263 (1986)). Тест базується на -і здатності метаболічно активних клітин трансформувати сіль тетразолію у забарвлений продукт формазан, -1 головним чином Через їх дегідроіеназну активність. Кольорова реакція, яка є пропорційною до активності, може бути виміряна спектрофотометрично при 57Онм. Проба МТТ чітко показала, що функціональна активність клітин т» 50 пухлини знижується навіть при дозі ЗО0Омкг/мл (фіг.4). Оскільки у випадку, коли клітини підходять до поверхні, -Ч причина апоптозу лишалася невідомою, ми вивчили апоптозну активність клітинної популяції в цілому за допомогою методу протокової цитометрії (ГАС) (фіг.7). Як показано на фіг.7, надзвичайно висока частина клітин пухлини знаходилася в стані апоптозу, причому цей показник залежав від дози ліофілізату.
І. Дослідження впливу на імунну реакцію
Вплив описаного у винаході ліофілізату вивчали на двох різних моделях. В одній серії експериментів
ГФ) вивчали можливість баластної трансформації мононуклеарних клітин, одержаних з селезінки тварин, яким з вводили ліофілізат, тоді як в другій на моделі алотрансплантації шкіри вивчали загальне зв'язування шкіри, трансплантованої в ділянку спини миші. 1. Вивчення бластної трансформації Т-лімфоцитів бо Обробка описаним у винаході ліофілізатом значно підвищує бластну трансформацію Т-лімфоцитів, які відіграють важливу роль в імунній реакції. Це було показано за допомогою наступного експерименту.
Мишам С578І16 вводили перорально (з шлунковою пробою) описаний у винаході ліофілізат в дозі Зг/кг (водна суспензія О,бг/мл) 5 разів на тиждень протягом б тижнів. Після завершення введення лімфоцити, б одержані з селезінки тварин шляхом перфузії, були вміщені в культуру клітин, оброблену мкг/мл Соп А. Після 48 годин клітини, які показували синтез ОНК, маркунали 0,4 мкКі ЗН-тимідином. Ступінь маркування визначали за допомогою рідинного сцинтілляційного лічильника (ВесКктап). Як показано в табл.б, обробка Соп А значно збільшує інкорпорацію ЗН-Так в порівнянні з контролем, що є ознакою бластної трансформації. шен (10 середнє значення (срт) 7 2. Вивчення імуностимулюючого впливу на моделі алотрансплантаці ї шкіри
Найкращою моделлю для ілюстрації відновлення недостатньої імунної реакції є тест алотрансплантації шкіри на мишах ч частковим імунодефіцитом, викликаним тимектомією (хірургічне видалення тимусу). Лінії мишей 75 С578110 та В10ЇР відрізняються тільки розташуванням Н-3. Таким чином шкіра, трансплантована від членів однієї лінії членам іншої не відторгається протягом 7 днів, а тільки приблизно після З тижнів. Якщо перцепієнт переніс тимектомію, відторгнення виникає в середньому після 50 днів. Всі засоби, які підвищують дозрівання та диференціювання лімфоцитів кісткового мозку, такі як гормони тимусу, зменшують необхідний для відторгнення трансплантованої шкіри період |У. Іттипорпагтасоіоду 7, 67-78 (1985)). Такий же ефект може спостерігаєтися у наших експериментах при введенні описаного у винаході ліофілізату.
Як перцепієнти були використані миші С57В110, як донори - миші В10І Р. Перцепієнти були піддані тимектомії і через 7 тижнів здійснена трансплантація. Пероральне введення ліофілізату в дозі ЗОмг/кг 5 разів на тиждень було розпочате через 1 тиждень після тимектомії. Введення було закінчено через 70 днів після трансплантації шкіри. Можливе відторгнення шкіри перевірялося щоденно. В табл.7 с показаний час відторгнення, який для мишей, що не піддавалися тимектомії, становив 21 день (самці) та 28,7 Ге) днів (самки). У мишей з тимектомією час відторгнення був подовжений до 52.4 і 41,6 днів відповідно. Введення ліофілізату згідно винаходу мишам з тимектомією значно скорочувало виживаність шкірних трансплантантів. Це означає, що імунодефіцит, викликаний тимектомією, був значно зменшений в результаті лікування, що означає наявність у ліофілізату імуностимулюючої дії. - « т
Група тварин - самки з 000000 ення | 1 середнє значення (днів) « 400 Люфтізтірмію 00001000 в60000010в60100000заяи000001450000ОВ я ч я») 0,01«р«0,05 порівняно з контролем з тимектомією и?
Випробування ліофілізату згідно винаходу іп мімо та іп міго показали на декількох тваринних моделях, що цей продукт має значну антиметастатичну дію. Ефект, вірогідно, пов'язаний з імуностимулюючою дією, яка
Ге»! спостерігалася як іп мімо, так і іп мйго, але ми припускаємо можливість зменшення кількості метастазів шляхом викликання апоптозу, впливу матеріалу на адгезію та впливу, який викликає утворення вільних - радикалів. -І ІМ. Вивчення радикал-зв'язуючої дії
Оскільки бензохінони мають добре встановлений вплив на утворення вільних радикалів, ми також вивчили ть радикал-зв'язуючу активність описаного у винаході ліофілізату. За допомогою методу електронного спінового "І резонансу було виміряне зв'язування супероксидних (З5А) та гідроксильних (ОН-5А) радикалів. Ліофілізат виявив значну чисту радикал-зв'язуючу активність щодо ЗА, яка для 1мг ліофілізату відповідала активності 5,64мкг супероксиддисмутази (5003). Ліофілізат виявив активність ОН-5А, але він руйнував систему утворення гідроксильних радикалів пероксид водню/Ре, що навело нас на думку, що він має так звану нехелатну активність.
М. Токсикологічні випробування (підгостри) іФ) Були проведені токсикологічні випробування протягом 77 днів згідно рекомендаціям Реєстру Промислової ко Токсикології Тваринних даних (КІТА) (Ехр. Тохіс. Раїйої. 47, 247-266 (1995)| на щурах Е344 та мишах С57В8116.
Тваринам щодня вводили ліофілізат в дозі Змг/кг у вигляді водної суспензії О,бг/мл. Протягом введення бо спостерігали за змінами ваги тварин, можливими патологічними фізичними змінами, спонтанною загибеллю тварин. По закінченні випробувань була визначена вага серця, легенів, тимусу, селезінки, печінки, нирок та яєчок і 34 органи патологічна досліджені згідно рекомендацій КІТА. Спонтанної загибелі не спостерігалося, вага тварин змінювалася подібно до контрольної групи Вивчення ваги різних органів показало відсутність змін порівняно з контрольною групою. Протягом патологічного дослідження тварин, яким вводили ліофілізат, не б5 Виявлено ніяких змін, якім могли 6 бути викликані ліофілізатом.
Вищенаведені результати показують, що ферментований рослинний матеріал згідно винаходу є нетоксичним і внаслідок імуностимулюючої дії показаний для застосування при всіх станах, при яких уражена імунна система.
Внаслідок описаних вище біологічних характеристик він може мати застосування у медичному лікуванні злоякісних пухлин як додатковий засіб, головним чином в запобіганні метастазам.
Claims (10)
1. Ферментований та висушений рослинний матеріал для імуностимуляції та запобігання метастазам, 70 одержаний з ферментованої рідини, отриманої шляхом ферментації зародків пшениці за допомогою зЗасспаготусез сегемізіде у водному середовищі.
2. Матеріал за п. 1, який відрізняється тим, що його хроматограма НРІС значною мірою відповідає хроматограмі, яка показана на фіг. 3.
З. Матеріал за п. 1, який відрізняється тим, що вміст 2,6-диметокси-п-бензохінону в ньому становить 0,12-0,52 мг/г сухого матеріалу і вміст 2-метокси-п-бензохінону становить 0,05-0,28 мг/г сухого матеріалу, що визначено методом НРІ С.
4. Матеріал за п. 3, який відрізняється тим, що вміст 2,6-диметокси-п-бензохінону становить 0,4 мг/г сухого матеріалу.
5. Спосіб виготовлення ферментованого та висушеного матеріалу для імуностимуляції та запобігання 20р Метастазам, згідно з яким змолоті зародки пшениці ферментуються у водному середовищі в присутності зЗасспаготусез сегемізіде і ферментована рідина сепарується, ретельно фільтрується, згущується, випарюється кип'ятінням і висушується окремо або в присутності допоміжних висушуючих матеріалів.
6. Спосіб за п. 5, який відрізняється тим, що ферментація проводиться при температурі біля З0"С, протягом біля 18 годин в умовах постійної аерації та перемішування. сч
7. Спосіб за п. 6, який відрізняється тим, що висушування проводиться в присутності мальтодекстрину.
8. Фармацевтичний продукт для імуностимуляції та запобігання метастазам, який містить як активний (о) інгредієнт висушений рослинний матеріал, одержаний з ферментованої рідини, отриманої шляхом ферментації зародків пшениці у водному середовищі за допомогою Засспаготусез сегемівіає.
9. Харчова добавка для ссавців, яка містить висушений рослинний матеріал, одержаний з ферментованої чн зо рідини, отриманої шляхом ферментації зародків пшениці у водному середовищі за допомогою Засспаготусев сегемівіае. «
10. Харчова добавка за п. 9, яка відрізняється тим, що містить висушений матеріал, одержаний згідно зі чн способом за п. 5, який складається з бОбо за масою ферментованого матеріалу та 4095 за масою мальтодекстрину. о (Се)
- . и? (о) -і -і щ» що іме) 60 б5
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU9701392A HUP9701392D0 (en) | 1997-08-13 | 1997-08-13 | Immunostimulating and methastasis-inhibiting plant extract, pharmaceutical compositions containing thereof, process for production of plant extract and use for production of immunostimulating and metastasis-inhibiting pharmaceutical composition thereof |
| HU9801797A HU223344B1 (hu) | 1997-08-13 | 1998-08-05 | Immunstimuláns és metasztázist gátló fermentált, szárított anyag, ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények, eljárás az előállítására és alkalmazásai |
| PCT/HU1998/000077 WO1999008694A1 (en) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Immunostimulatory and metastasis inhibiting fermented vegetal material |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA67747C2 true UA67747C2 (uk) | 2004-07-15 |
Family
ID=90014226
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2000020979A UA67747C2 (uk) | 1997-08-13 | 1998-11-08 | Ферментований та висушений рослинний матеріал для імуностимуляції та запобігання метастазам, спосіб його виготовлення, фармацевтичний продукт та харчова добавка для ссавців, що його містять |
Country Status (31)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6355474B1 (uk) |
| EP (1) | EP1003536B1 (uk) |
| JP (3) | JP4387586B2 (uk) |
| KR (2) | KR100544376B1 (uk) |
| CN (1) | CN1192099C (uk) |
| AT (1) | ATE227580T1 (uk) |
| AU (1) | AU754815B2 (uk) |
| BG (1) | BG64038B1 (uk) |
| BR (1) | BR9811936B1 (uk) |
| CA (1) | CA2300208C (uk) |
| CZ (1) | CZ298654B6 (uk) |
| DE (1) | DE69809434T2 (uk) |
| DK (1) | DK1003536T3 (uk) |
| EA (1) | EA003090B1 (uk) |
| EE (1) | EE04222B1 (uk) |
| ES (1) | ES2186208T3 (uk) |
| GE (1) | GEP20032988B (uk) |
| HK (1) | HK1033097A1 (uk) |
| HU (1) | HU223344B1 (uk) |
| ID (1) | ID25515A (uk) |
| IL (1) | IL134493A (uk) |
| ME (1) | ME00638B (uk) |
| NO (1) | NO323562B1 (uk) |
| PL (1) | PL191414B1 (uk) |
| PT (1) | PT1003536E (uk) |
| RS (1) | RS49692B (uk) |
| SK (2) | SK282917B6 (uk) |
| TR (1) | TR200000404T2 (uk) |
| UA (1) | UA67747C2 (uk) |
| WO (1) | WO1999008694A1 (uk) |
| YU (1) | YU7200A (uk) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1235931C (zh) | 1998-04-24 | 2006-01-11 | Ck威特科有限公司 | 使用硅烷或硅烷处理的填料的粉末涂料或粘合剂 |
| FR2815822B1 (fr) * | 2000-10-30 | 2004-08-27 | Roquette Freres | Additif carbone pour fermentations alimentaires et compositions alimentaires le contenant |
| FR2834718B1 (fr) * | 2002-01-15 | 2004-12-24 | Cognis France Sa | Substances actives cosmetiques et/ou pharmaceutiques |
| US20040043084A1 (en) * | 2002-05-02 | 2004-03-04 | George Cioca | Method of enhancing biological activity of plant extracts |
| HUP0202638A3 (en) * | 2002-08-09 | 2007-08-28 | Hidvegi Mate Dr | Use of fermented wheat-germ extract for preparation of antiphlogistic compositions |
| BR0215836A (pt) * | 2002-08-13 | 2005-06-07 | Mate Hidvegi | Uso de germe de trigo fermentado na alimentação e na prática veterinária |
| EA009170B1 (ru) * | 2002-08-13 | 2007-10-26 | Мате Хидвеги | Применение ферментированных зародышей пшеницы в ветеринарной практике |
| WO2007140277A1 (en) | 2006-05-24 | 2007-12-06 | Vitality Concepts Corporation | Method for embedding and targeted release of micronutrients in activated dietary fibers |
| US7365102B1 (en) | 2007-02-26 | 2008-04-29 | Delphi Technologies, Inc. | Process for pre-reforming hydrocarbon fuels |
| HUP0900614A2 (en) | 2009-09-29 | 2011-05-30 | Mate Dr Hidvegi | Preparation comprising dehydrated, fermented material with amorphous crystaline structure and process for its production |
| WO2010100515A2 (en) * | 2009-03-06 | 2010-09-10 | Hidvegi Mate | Fractions of wheat germ ferment |
| JPWO2011083768A1 (ja) * | 2010-01-08 | 2013-05-13 | 住友ベークライト株式会社 | 細胞凝集塊形成用培養容器 |
| US20120164132A1 (en) * | 2010-08-02 | 2012-06-28 | Mate Hidvegi | Anticancer and immunomodulating molecules and fractions containing said molecules, and process for preparing said fractions and said molecules from fermented vegetal material, and their uses |
| GB201108560D0 (en) | 2011-05-20 | 2011-07-06 | 3 Ch Ltd | Use of fermented wheat germ in the treatment of inflammatory bowel disease |
| GB201110746D0 (en) | 2011-06-23 | 2011-08-10 | Biropharma Uk Ltd | Wheat germ derived material |
| US11090353B2 (en) | 2013-04-22 | 2021-08-17 | David Wales | Gluten-free grain-concentrate substitute for fermented wheat germ drug product and method preparation |
| US11129389B2 (en) | 2013-04-22 | 2021-09-28 | David Wales | Gluten-free grain-concentrate substitute for fermented wheat germ food product and method of preparation |
| JP2017033691A (ja) * | 2015-07-30 | 2017-02-09 | 三菱自動車工業株式会社 | 車載電池パック、リチウムイオン補充装置、及びリチウムイオン補充方法 |
| CN107455551A (zh) * | 2016-06-06 | 2017-12-12 | 铜陵安尔生物科技有限公司 | 麦胚发酵黄酮提取物及其制备方法与在动物饲养中的应用 |
| JP6739774B2 (ja) * | 2018-06-25 | 2020-08-12 | 学校法人立命館 | がんの治療、予防、改善、抑制又は転移抑制用組成物 |
| HUE065477T2 (hu) | 2018-11-27 | 2024-05-28 | Gyula Bencze | Fermentált búzacsíra élelmiszer termék helyettestésére alkalmas gluténmentes gabonakoncentrátum és eljárás annak elõállítására |
| WO2022091075A1 (en) * | 2020-11-01 | 2022-05-05 | Aili Life Sciences Ltd. | Combination compositions of probiotics with fermented wheat germ extract and uses thereof |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63230774A (ja) * | 1987-03-19 | 1988-09-27 | Seinosuke Ueda | 紫青系色素の製法 |
| JP2618286B2 (ja) * | 1990-10-25 | 1997-06-11 | 免疫代謝薬製造株式会社 | 降圧酵母製剤及びその製造法 |
| KR940001544B1 (ko) * | 1990-11-21 | 1994-02-24 | 강권중 | 은행잎을 위시한 천연약재로부터 미생물의 공서배양에 의한 건강식품의 제조방법 |
| JP3296433B2 (ja) * | 1990-11-30 | 2002-07-02 | 日本食品化工株式会社 | 酒類の製造法 |
| US5231017A (en) | 1991-05-17 | 1993-07-27 | Solvay Enzymes, Inc. | Process for producing ethanol |
| EP0625187B1 (en) * | 1992-02-06 | 1997-04-23 | Bio-Technical Resources, Inc. | Concentrated beer flavor product |
| KR100340091B1 (ko) * | 1993-08-09 | 2002-09-27 | 베르찌 이스트반 | 킬러세포개재세포용해를위한암세포감작용약학적제제 |
| JPH07155136A (ja) * | 1993-12-03 | 1995-06-20 | Nippon Mektron Ltd | 植物発酵エキス粉末の製造方法 |
| EP1090553A3 (en) * | 1993-12-24 | 2001-04-18 | Dsm N.V. | Dry yeast compositions |
| ES2163430T3 (es) * | 1994-01-06 | 2002-02-01 | Hyd Kutato Fejleszto Ktf | Productos alimenticios para la prevencion del desarrollo de enfermedades y procedimiento para su preparacion. |
| JP3471879B2 (ja) * | 1994-01-20 | 2003-12-02 | ルードヴィッヒ インスティテュート フォー キャンサー リサーチ | セリンキナーゼ活性の抑制方法、ｐｉ３−キナーゼのサブユニット間の結合活性の調整方法、ｐｉ３−キナーゼのサブユニット結合抗体、この抗体を生成するハイブリドーマ細胞系、核酸分子、プラスミド、アゴニスト、アンタゴニスト、ｐｉ３−キナーゼ活性を抑制するサブユニット結合分子、サブユニットの存在検出方法、ｐｉ３−キナーゼ活性の抑制剤製造方法、およびｐｉ３−キナーゼ活性の抑制剤 |
| JP2875739B2 (ja) * | 1994-04-27 | 1999-03-31 | エーザイ株式会社 | ＮＦκＢ活性阻害剤 |
| DK0684306T4 (da) * | 1994-05-27 | 2004-05-10 | Agrano Ag | Fremgangsmåde til fremstilling af en biomasse ud fra et kornsubstrat, anvendelse af de ved fremgangsmåden opnåede produkter, samt brödbagningsgærstof |
| JP4167733B2 (ja) * | 1996-12-16 | 2008-10-22 | 花王株式会社 | ＮＦ−κＢ活性化抑制剤 |
-
1998
- 1998-08-05 HU HU9801797A patent/HU223344B1/hu active IP Right Grant
- 1998-08-11 CA CA002300208A patent/CA2300208C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-08-11 RS YUP-72/00A patent/RS49692B/sr unknown
- 1998-08-11 JP JP2000509431A patent/JP4387586B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-11 EA EA200000212A patent/EA003090B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 KR KR1020007001459A patent/KR100544376B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 CN CNB988101254A patent/CN1192099C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-08-11 SK SK186-2000A patent/SK282917B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 BR BRPI9811936-2A patent/BR9811936B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 DE DE69809434T patent/DE69809434T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-11 CZ CZ20000418A patent/CZ298654B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 EE EEP200000078A patent/EE04222B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 KR KR1020057013782A patent/KR100544377B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 ID IDW20000424A patent/ID25515A/id unknown
- 1998-08-11 IL IL13449398A patent/IL134493A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 ME MEP-2000-72A patent/ME00638B/me unknown
- 1998-08-11 GE GEAP19985247A patent/GEP20032988B/en unknown
- 1998-08-11 AT AT98940483T patent/ATE227580T1/de active
- 1998-08-11 PT PT98940483T patent/PT1003536E/pt unknown
- 1998-08-11 EP EP98940483A patent/EP1003536B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-11 YU YU7200A patent/YU7200A/sh unknown
- 1998-08-11 AU AU88802/98A patent/AU754815B2/en not_active Ceased
- 1998-08-11 SK SK182-2000A patent/SK1822000A3/sk unknown
- 1998-08-11 DK DK98940483T patent/DK1003536T3/da active
- 1998-08-11 WO PCT/HU1998/000077 patent/WO1999008694A1/en active IP Right Grant
- 1998-08-11 TR TR2000/00404T patent/TR200000404T2/xx unknown
- 1998-08-11 PL PL338891A patent/PL191414B1/pl unknown
- 1998-08-11 ES ES98940483T patent/ES2186208T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-13 US US09/485,221 patent/US6355474B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-11-08 UA UA2000020979A patent/UA67747C2/uk unknown
-
2000
- 2000-02-10 NO NO20000675A patent/NO323562B1/no not_active IP Right Cessation
- 2000-03-06 BG BG104220A patent/BG64038B1/bg unknown
-
2001
- 2001-06-05 HK HK01103870A patent/HK1033097A1/xx unknown
-
2009
- 2009-07-21 JP JP2009170505A patent/JP4861458B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-08-01 JP JP2011168726A patent/JP4886087B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA67747C2 (uk) | Ферментований та висушений рослинний матеріал для імуностимуляції та запобігання метастазам, спосіб його виготовлення, фармацевтичний продукт та харчова добавка для ссавців, що його містять | |
| Giri et al. | In vitro production of phenolic compounds and antioxidant activity in callus suspension cultures of Habenaria edgeworthii: A rare Himalayan medicinal orchid | |
| EA014234B1 (ru) | Композиция для лечения больных гепатитом с или биологически активная добавка для профилактики или смягчения симптомов гепатита с | |
| Nyong et al. | Effect of methods of extraction on phytochemical constituents and antibacterial properties of Tetracarpidium conophorum seeds | |
| Benslimane et al. | Pomegranate Peel Extract Activities as Antioxidant and Antibiofilm against Bacteria Isolated from Caries and Supragingival Plaque. | |
| Abdel-Hameed et al. | Total phenolic, in vitro antioxidant activity and safety assessment (acute, sub-chronic and chronic toxicity) of industrial taif rose water by-product in mice | |
| Raphaël et al. | Phytochemical study and antioxidant activities of Terminalia catappa L. and Mitragyna ciliata Aubrev and Pellegr medicinal plants of Gabon | |
| Sontakke et al. | Evaluation of the Phytochemical Potential of Brassica junceal Seeds | |
| KIM et al. | In vitro antioxidant and anticancer activities of extracts from a fermented food | |
| MXPA00001557A (en) | Immunostimulatory and metastasis inhibiting fermented vegetal material | |
| RU2716161C1 (ru) | Способ получения лекарственного средства, обладающего адаптогенной активностью | |
| Junita et al. | Antioxidant Activity Test of" Aia Tempayang" With DPPH Metode (2, 2-Diphenyl-1 Picrylhydrazyl) | |
| JPH11116497A (ja) | 活性酸素フリーラジカル消去剤及び活性酸素フリーラジカル起因疾患予防剤 | |
| YAN | ANTI-INFLAMMATORY AND ANTI-GLYCOLYTIC EFFECT OF MOMORDICA CHARANTIA AQUEOUS EXTRACT AND CHARANTIN IN LIPOPOLYSACCHARIDE INDUCED RAW264. 7 CELLS | |
| Amanda et al. | Immunomodulatory Effects of Ethanol Extract of Lime Peel on Phagocytosis Activity and Delayed-Type Hypersensitivity Response | |
| TW202333760A (zh) | 刺果番荔枝（Ａｎｎｏｎａ ｍｕｒｉｃａｔａ）發酵液之生物活性物質用於製備抑制黑色素生成以及提升人類丹和白血球細胞抗氧化力之組合物之用途 | |
| CN108379276A (zh) | 甘露葡萄糖醛酸寡糖在制备抗癌药物或抗癌保健品中的应用 | |
| KR20100062453A (ko) | 클로로겐산의 녹색 현상을 이용한 클로로겐산의 함량 측정 방법 | |
| Krishnaveni et al. | Free radical scavenging activity of Ceiba seeds | |
| Seeja et al. | Investigation of total phenolic contents, antioxidant activities and analyses of active compounds in some sweet peppers (Capsicum annuum L.) | |
| Tiple et al. | ISOLATION AND SCREENING OF FLAVONOIDS FROM GLYCINE MAX AND VIGNA RADIATA | |
| JM et al. | Phytochemical screening and Invitro antioxidant activity of Lantana camara | |
| CN101001617A (zh) | 抗肿瘤剂 |