CZ298654B6 - Fermentovaný a vysušený rostlinný materiál, zpusob jeho prípravy, farmaceutický výrobek, dietní doplnek a použití vysušeného rostlinného materiálu - Google Patents
Fermentovaný a vysušený rostlinný materiál, zpusob jeho prípravy, farmaceutický výrobek, dietní doplnek a použití vysušeného rostlinného materiálu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ298654B6 CZ298654B6 CZ20000418A CZ2000418A CZ298654B6 CZ 298654 B6 CZ298654 B6 CZ 298654B6 CZ 20000418 A CZ20000418 A CZ 20000418A CZ 2000418 A CZ2000418 A CZ 2000418A CZ 298654 B6 CZ298654 B6 CZ 298654B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- fermented
- immunostimulatory
- dried
- metastasis
- material according
- Prior art date
Links
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 title claims abstract description 9
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title claims abstract 4
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 16
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 title claims 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 7
- 239000005418 vegetable material Substances 0.000 title abstract 5
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 52
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 claims abstract description 44
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims abstract description 28
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims abstract description 22
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims abstract description 22
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 22
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 22
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 18
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims abstract description 18
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 18
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims abstract description 7
- OLBNOBQOQZRLMP-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethoxy-p-benzoquinone Chemical compound COC1=CC(=O)C=C(OC)C1=O OLBNOBQOQZRLMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 claims description 29
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 26
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 18
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 15
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 claims description 12
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 claims description 12
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 claims description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- ZJKWJHONFFKJHG-UHFFFAOYSA-N 2-Methoxy-1,4-benzoquinone Chemical compound COC1=CC(=O)C=CC1=O ZJKWJHONFFKJHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims 2
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 claims 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 claims 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 25
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 abstract description 3
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 abstract 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 33
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 27
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 19
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 18
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 16
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 16
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 9
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 7
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 7
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 7
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 7
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 7
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 7
- 150000004057 1,4-benzoquinones Chemical class 0.000 description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 6
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 5
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 5
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 4
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 4
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- 150000005208 1,4-dihydroxybenzenes Chemical class 0.000 description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 3
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 3
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 206010027457 Metastases to liver Diseases 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 3
- 150000004054 benzoquinones Chemical class 0.000 description 3
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 3
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 3
- -1 hydroquinone glycosides Chemical class 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 3
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 3
- 238000003210 sulforhodamine B staining Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BCIBKWCJOCMBSI-UHFFFAOYSA-N 2-dodecyl-6-methoxycyclohexa-2,5-diene-1,4-dione Chemical compound CCCCCCCCCCCCC1=CC(=O)C=C(OC)C1=O BCIBKWCJOCMBSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000008886 Ceratonia siliqua Species 0.000 description 2
- 235000013912 Ceratonia siliqua Nutrition 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 2
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 2
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 2
- TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N hydroxyl Chemical compound [OH] TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 2
- 235000019362 perlite Nutrition 0.000 description 2
- 239000010451 perlite Substances 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 2
- 150000004059 quinone derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 150000004053 quinones Chemical class 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 231100000338 sulforhodamine B assay Toxicity 0.000 description 2
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N 1,4-Benzenediol Natural products OC1=CC=C(O)C=C1 QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NADHCXOXVRHBHC-UHFFFAOYSA-N 2,3-dimethoxycyclohexa-2,5-diene-1,4-dione Chemical compound COC1=C(OC)C(=O)C=CC1=O NADHCXOXVRHBHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthene Chemical compound C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3OC2=C1 GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000219748 Cyamopsis Species 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 238000004435 EPR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 235000017367 Guainella Nutrition 0.000 description 1
- 229920002907 Guar gum Polymers 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 1
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 1
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 1
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 1
- 206010027458 Metastases to lung Diseases 0.000 description 1
- 239000006057 Non-nutritive feed additive Substances 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 1
- 208000006431 amelanotic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000002001 anti-metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000002026 chloroform extract Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 235000017471 coenzyme Q10 Nutrition 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229960003722 doxycycline Drugs 0.000 description 1
- XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N doxycycline monohydrate Chemical compound O.O=C1C2=C(O)C=CC=C2[C@H](C)[C@@H]2C1=C(O)[C@]1(O)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@H](N(C)C)[C@@H]1[C@H]2O XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229960002154 guar gum Drugs 0.000 description 1
- 235000010417 guar gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000665 guar gum Substances 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000008258 liquid foam Substances 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000000684 melanotic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000695 menaquinone group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 238000003801 milling Methods 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 238000003305 oral gavage Methods 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000029553 photosynthesis Effects 0.000 description 1
- 238000010672 photosynthesis Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 125000004151 quinonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 208000011581 secondary neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000724 thymus hormone Substances 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
- 150000003669 ubiquinones Chemical class 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- 235000019143 vitamin K2 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011728 vitamin K2 Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
- A23L7/20—Malt products
- A23L7/25—Fermentation of cereal malt or of cereal by malting
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
- A61K36/062—Ascomycota
- A61K36/064—Saccharomycetales, e.g. baker's yeast
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/14—Yeasts or derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
- A23L7/10—Cereal-derived products
- A23L7/152—Cereal germ products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
- A61K36/899—Poaceae or Gramineae (Grass family), e.g. bamboo, corn or sugar cane
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
- A23V2200/308—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on cancer prevention
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Grain Derivatives (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
Rešení se týká fermentovaného, vysušeného rostlinného materiálu, který má imunostimulacní úcinek a inhibuje vznik metastázy, dále farmaceutických prípravku, které tento rostlinný materiál obsahují, výrobního procesu a využití vysušeného materiálu pri výrobe dietního doplnku a farmaceutických prípravku, které mají imunostimulacní úcinky a inhibují vznik metastáz. Materiál, pripravitelný podle predloženého rešení, fermentací pšenicných klícku pomocí Saccharomyces cervisiae ve vodném prostredí, muže být použit pro lécení stavu s poškozenou imunitou a pro zabránení vzniku metastáz z primárních nádoru.
Description
Oblast techniky
Vynález se týká fermentovaného a vysušeného rostlinného materiálu, který má imunostimulační účinek a potlačuje vznik metastázy, farmaceutických prostředků, které jej obsahují, způsobu přípravy materiálu, použití vysušeného rostlinného materiálu jako dietního doplňku a výroby imu10 nostimulačních a zvláště farmaceutických prostředků potlačujících vznik metastázy.
Dosavadní stav techniky
Jedním z hlavních cílů léčení nádorů je potlačování metastáz, neboť primární nádor, který je způsoben maligním růstem buněk, se šíří metastázami do sousedních buněk a orgánů a způsobuje vznik těchto sekundárních nádorů, které nemohou být chirurgicky odstraněny a též se mohou stát odolné k chemoterapii.
Výzkumníci se stále více soustřeďují na vývoj imunomodulačních materiálů a byly intenzivně zkoumány přírodní materiály - hlavně rostlinného původu.
Je dobře známou skutečností, že sloučeniny s chinonovou strukturou hrají důležitou biologickou roli. Několik chinonových derivátů se nachází v rostlinách, jako jsou např. ubichinony, plastochi25 nony a menachinony, které hrají roli ve fotosyntéze, ale také v buněčném dýchacím systému obratlovců, tedy také lidí, ve srážení krve atd. Několik benzochinonových derivátů je též používáno pro léčebné účely. Adriamycin, daunorubicin a mitomycin C jsou chinonové deriváty s cytostatickým účinkem, zatímco jiné benzochinony a hydrochinony mají antimikrobiální účinek a jsou aktivními složkami antibiotik, jako jsou Tetran-B, Metacyclin a Doxycyclin, vhodných pro léčení bakteriálních infekcí.
V literatuře se udává, že 2,6-dimethoxy-p-benzochinon (2,6-DMBQ) a 2-methoxy-p-benzochinon (2-MBQ) mají fungicidní a bakteriostatický účinek a jsou též cytotoxické pro maligní nádorové buňky. [Int. J. Quant. Chem.: Quant Biol. Symp. 7, 217-222 (1980), 9., 27-30 (1982) a
12., 257-261 (1985); Phytochemistry 27., 225 (1971) aj. Agric. Food Chem. 39., 266 (1991)].
Bylo ukázáno, že směs 2,6-dimethoxy-p-benzochinonu a kyseliny askorbové inhibuje růst buněk Ehrlichova ascitického nádoru u myší (Proč. Nati. Acad. Sci. USA 81., 2088-2091 (1985)]. 2,6-dimethoxy-p-benzochinon a 2-methoxy-p-benzochinon byly nalezeny a izolovány u několika rostlin [Mágy. Kém. Folyóirat 102/7., 320-325 (1996)]. Tyto dvě sloučeniny lze nalézt v největším množství ve formě glykosidu v pšenici (Tricitum vulgaris), přesněji řečeno v pšeničných klíčcích. Sloučeniny byly v padesátých letech izolovány z pšeničných klíčků, fermentovány kvasinkami a chemicky určeny za účelem zkoumání zhoršování kvality chleba, do něhož byly pšeničné klíčky přidány. [Helv. Him. Acta 33., 433 (1950); J. Chem. Soc. London 1952, 4821-4823],
Podle literárních údajů je v pšeničných klíčcích 0,05 hmotnostních % 2-MBQ, 2,6-DMBQ pak 0,01 hmotnostních % (ve formě glykosidu). Přítomnost chinonů ve formě glykosidů je vysvětlována skutečností, že chinony, zvláště p-benzochinony substituované methoxy- skupinou jsou reaktivní, zatímco jejich hydrochinon-glykosidy jsou stabilnější a inertní.
Během našich pokusů, týkajících se studia fermentace pšeničných klíčků, jsme dospěli k závěru, že suchý výtěžek získaný z fermentované tekutiny, vzniklé fermentací pšeničných klíčků pekařskými kvasnicemi (Saccharomyces cerevisiae), má překvapující imunostimulační účinek a rovněž potlačuje vznik metastázy a může být úspěšně aplikován jako aktivní součást imunostimulačních farmaceutických prostředků a farmaceutických prostředků potlačujících vznik metastázy.
-1 CZ 298654 B6
Tento nález je překvapující, protože ačkoli je v literatuře zmínka [Proč. Nati. Acad, Sci. USA 80., 129 (1983)] že směs 2,6-DMBQ s kyselinou askorbovou inhibuje růst buněk Ehrlichova ascitického nádoru - jsou výjimečně vhodné pro kvantitativní analýzu růstu nádorů a pro studium jejich biochemických funkcí - výtažek popsaný v tomto vynálezu, který obsahuje vedle neidentifikovatelných složek 2,6-DMBQ a 2-MBQ - se ukázal být prakticky neúčinný na tyto primární nádorové buňky, dokonce i v kombinaci s kyselinou askorbovou - obecně na všechny primární nádory, se ukázal být velmi účinný pouze při léčení metastáz. Okolnosti léčby primárních nádorů a metastáz, jež se z nich vyvíjejí, jsou zásadně odlišné, takže nebylo pro výzkumné pracovníky ío samozřejmé, že rostlinný výtěžek, obsahující složky o nichž je známo, že jsou účinné při léčení primárních nádorů a ještě nejsou plně identifikované pokud se týká jejich chemického složení, by mohl mít imunostimulační účinek a potlačující účinek na metastázu. [Cancer, Principles and
Practice of Oncology, sv. 1.4. vydání, J. B. Lippincott Company, Philadelphia, 1993.]
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález se tedy týká fermentovaného a vysušeného rostlinného materiálu s imunostimulačním účinkem a schopností potlačovat metastázu, kteiý je možno získat fermentací pšeničných klíčků pekařskými kvasnicemi ve vodném prostředí, filtrací fermentovaného roztoku, aby byl zbaven buněk a jeho vysušením.
Předkládaný vynález má také vztah k takovým farmaceutickým prostředkům s imunostimulačním účinkem a schopností potlačovat metastázu, jejichž aktivní složka obsahuje fermentovaný, vysu25 šený rostlinný materiál, popsaný v předkládaném vynálezu.
Předkládaný vynález se také týká použití výše zmíněného fermentovaného a vysušeného rostlinného materiálu pro výrobu farmaceutických prostředkům s imunostimulačním účinkem a schopností potlačovat metastázu.
Předkládaný vynález se také týká způsobu léčení savců při stimulování imunního systému a potlačování metastáz pomocí farmaceutických prostředků popsaných v předkládaném vynálezu.
Vynález se dále týká dietního doplňku, který obsahuje v předkládaném vynálezu popsaný, fer35 mentovaný a vysušený rostlinný materiál a maltodextrin.
Podle vynálezu byl fermentovaný a vysušený rostlinný materiál určen a zkoušen na základě jeho obsahu 2,6-DMBQ. Rádi bychom zde poznamenali, že plné určení chemického složení výtažku nebylo pomocí dostupných metod možné, tedy všechny údaje se vztahují k obsahu 2,6-DMBQ jako k základu.
Ukázalo se jako vhodné použít pro výrobu fermentovaného a vysušeného rostlinného materiálu, popsaného v předkládaném vynálezu, pšeničné klíčky - které jsou vedlejším produktem při mletí mouky a dostupné ve velkém množství - rozemleté na mouku, buď v jejich původním stavu, nebo zbavené tuku. Použití pšeničných klíčků zbavených tuku nemá žádné zvláštní výhody. Fermentace byla provedena za pomoci pekařských kvasnic (Saccharomyces cerevisiae). Tento typ kvasinek je komerčně dostupný. Doba fermentace byla 10 až 24 hodin, s výhodou 15 až 20 hodin nebo 18 hodin. Teplota fermentace je 25 až 35 °C, s výhodou 30 °C. Hmotnostní poměr pšeničných klíčků a kvasinek je 4 : 1 až 2 : 1, s výhodou 3 : 1, hmotnostní poměr sušiny a vody je 1 : 6 až 1 : 12, s výhodou 1 : 9.
Fermentace - v laboratorním měřítku - může být například provedena tak, že je do skleněného fermentoru k čerstvě rozemletým pšeničným klíčkům přidána suspenze kvasinek ve vodě a mícháním nebo třepáním se smísí. Fermentovaná tekutina pění.
-2CZ 298654 B6
Po skončení fermentace je směs centrifugována po dobu 15 minut při 2000 až 4500 otáčkách za minutu, s výhodou 3000 otáček za minutu. Supematant je povařen, ochlazen a vysušen vhodným způsobem, například lyofilizací nebo sušením rozprašované tekutiny.
Produkt, rudohnědý prášek je materiál, připravený podle tohoto vynálezu. Je vhodné udržovat materiál do dalšího použití v chladu a v utěsněných nádobách, protože má hygroskopický charakter. Obsah 2,6-DMBQ výsledného materiálu je 0,4 mg/g.
V případě fermentace ve velkém měřítku (např. 4 m3) je vhodné použít stálého vzduchování, ío například 0,5 1 vzduchu na 1 1 fermentované tekutiny za minutu a pomalého míchání. Doba fermentace je 18 hodin. Aby se zabránilo tvorbě pěny, mohou být použity obvyklé přísady - je výhodné použít slunečnicový olej. Na konci fermentačního procesu je vzduchování a míchání přerušeno a fermentovaná tekutina je od suspenze pšeničné klíčky - kvasinky oddělena běžným způsobem, například ve šnekovém odstřeďovacím zařízení, potom v odlučovači a protlačováním filtračním zařízením. Pokud je nezbytné, může být přidán pomocný filtrační materiál. Je vhodné použít 5 až 10 kg filtračního perlitu na m3 fermentované tekutiny. Fermentovaná tekutina je prudce filtrována a kvalita filtrování je kontrolována mikroskopicky. Filtrovaná fermentovaná tekutina prakticky neobsahuje buňky, což znamená, že při 10 pozorováních není nalezena dohromady více než jedna kvasinková buňka. Výsledná fermentovaná tekutina, která obsahuje 1,5 hmotnost20 ního procenta sušiny, je odpařována ve vakuovém kondenzátoru, s výhodou při teplotě 40 až 50 °C a po ukončení vakua je povařena při atmosférickém tlaku po dobu 15 minut. To má za následek snížení škodlivých enzymatických aktivit. Následně je směs sušena vysoušením rozprašované tekutiny, například v rotačním rozprašovacím přístroji. Pokud je použit výše popsaný fermentační proces, pak obsah 2,6-DMBQ ve výsledném fermentovaném a vysušeném rostlin25 ném materiálu je 0,12 až 0,52 mg/g sušiny a obsah 2-MBQ je 0,05 až 0,28 mg/g sušiny - v závislosti na obsahu benzochinonu v použitých pšeničních klíčcích.
Protože je výsledný produkt hygroskopický, aby se zvýšila efektivita vysoušení rozprašováním a efektivita použití výsledného produktu, může se během vysoušení rozprašováním použít jedna z běžných přísad, například maltodextrin, arabská guma, guarová guma (Cyamopsis sp)., xanthan, mouka z Ceratonia siliqua (locust beán) atd. Přednostně je používán maltodextrin. Vhodným postupem je určit obsah sušiny ve směsi odpařené ve vakuovém kondenzátoru a povařené, a přidat pak tolik maltodextrinu, že obsah sušiny ve směsi, která bude vysušena, bude 30 hmotnostních procent. Je vhodné rozpustit maltodextrin v horké vodě a ochlazený jej přidat ke kondenzo35 váné směsi. Po vysušení konečný produkt - prášek - obsahuje 60 hmotnostních % fermentovaného, vysušeného rostlinného materiálu a 40 hmotnostních % maltodextrinu.
Stabilita získaného materiálu může být kontrolována sledováním změn koncentrace 2,6-DMBQ. Kvantitativní analýza může být prováděna pomocí HPLC. Prášek vyráběný pomocí výše popsa40 ného postupu zůstává stabilní po dobu 3 let při teplotě místnosti.
Fermentovaný a vysušený rostlinný materiál, připravený podle tohoto vynálezu, se může použít jako aktivní složka v imunostimulačních farmaceutických prostředcích a ve farmaceutických prostředcích, potlačujících vznik metastázy. Farmaceutický prostředek může také obsahovat vedle výše uvedené aktivní složky kyselinu askorbovou nebo jiné cytostatické látky.
Fermentovaný a vysušený rostlinný materiál může být zpracován do obvyklých pevných nebo tekutých farmaceutických prostředků pro perorální nebo parenterální podávání. Při této výrobě farmaceutických prostředků se musí vzít v úvahu hygroskopický charakter fermentovaného a vysušeného rostlinného materiálu. Vhodnou formou jsou kapsle, které chrání aktivní složku před vzdušnou vlhkostí.
Při výrobě farmaceutických prostředků se mohou použít pomocné látky, obvykle používané ve farmaceutické praxi. Protože tyto látky a jejich možné použití jsou detailně popsány ve farma55 ceutické literatuře, výběr a příprava vhodné formy je běžnou praxí. Jedna dávka účinné složky
-3CZ 298654 B6 může se může měnit v širokých mezích v závislosti na stavu pacienta a za výběr vhodné účinné dávky musí být vždy zodpovědný lékař. Běžně se mohou získat vhodné výsledky jestliže je dávka 0,001 až 100 g, výhodněji 0,01 až 50 g, ještě výhodněji 0,1 až 40 g na kg tělesné hmotnosti, například při dávkách 0,1 až 10, 1 až 25 nebo 10 až 30 g.
Fermentovaný a vysušený rostlinný materiál, připravený podle tohoto vynálezu, může být také míchán s kyselinou askorbovou (vitamin C). Podle našich pokusů může kyselina askorbová u materiálu, připraveného podle tohoto vynálezu, zvýšit inhibiční účinek na metastázu. Poměr hmotnostní fermentovaného a vysušeného rostlinného materiálu a kyseliny askorbové může být například 10 : 1 až 1 : 1, s výhodou 6 : 1 až 2 : 1, ještě výhodněji 3 : 1, 4 : 1 nebo 5:1.
Vynález se také týká imunostimulačního léčení anebo léčení při potlačování metastázy fermentovaným a vysušeným rostlinným materiálem, připraveným podle tohoto vynálezu. Cílem léčení je dát pacientovi účinnou dávku fermentovaného a vysušeného rostlinného materiálu.
Fermentovaný a vysušený rostlinný materiál může být také použit jako dietní doplněk pro savce. V tomto případě je výhodné podávat směs obsahující maltodextrin a běžné pomocné látky, používané v potravinářském průmyslu, například aromatické látky, sladidla, barvicí činidla atd. Dietní doplněk může být například vyráběn granulováním směsi obsahující 60 hmotnostních procent suchého materiálu a 40 hmotnostních procent maltodextrinu spolu s aromatickými látkami a sladidly v tekutém základu a balením instantního granulátu například do pytlů.
Přehled obrázků na výkresech 25
Obrázek 1. Kalibrační diagram měření 2,6-DMBQ pomocí HPLC Obrázek 2. HPLC chromatogram chloroformového extraktu z materiálu Obrázek 3. HPLC chromatogram ethanolového extraktu z materiálu
Obrázek 4. Vazba nádorových buněk B16 v přítomnosti lyofilizovaného materiálu o různých 30 koncentracích v 60. a 90. minutě po přidání. (Každá hodnota představuje průměr osmi paralelních měření ± standardní odchylka, hodnoceno spektrofotometrickým měřením)
Obrázek 5. Účinek různých dávek lyofilizovaného materiálu na bujení buněk B16 za 24 a za 48 hodin po začátku působení. (Každá hodnota představuje průměr osmi paralelních měření ± standardní odchylka, hodnoceno spektrofotometrickým měřením)
Obrázek 6. Vývoj lidského melanomu A2058 v přítomnosti různých dávek lyofilizovaného materiálu 24 hodin po začátku působení. Vyhodnocení kultur bylo provedeno na základě proteinu (SRB) a dehydrogenázové aktivity (MTT) paralelními spektrofotometrickými měřeními. (Každá hodnota představuje průměr osmi paralelních měření ± standardní odchylka)
Obrázek 7. Podíl apoptotických buněk (FACS analýza) v in vitro kulturách lidského melanomu A2058 po působení různými dávkami lyofilizovaného materiálu.
Následující příklady slouží pro ilustraci fermentovaného a vysušeného rostlinného materiálu, při45 praveného podle tohoto vynálezu, jeho přípravy a farmakologických účinků.
-4CZ 298654 B6
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1. Fermentace pšeničných klíčků v laboratorním měřítku
Suspenze 33,3 g kvasinek (Saccharomyces cerevisiae) a 1000 ml pitné vody bylo přidáno k 100 g čerstvých pšeničných klíčků (podle maďarského standardu MSZ-081361-80), rozemletých na mouku. Směs byla třepána ve třepačce po dobu 18 hodin při 30 °C. Během této doby přecházela fermentovaná tekutina do pěnového stavu a dosáhla trojnásobku svého původního objemu. Po ío fermentaci byla směs centrifugována 15 minut při 3000 otáčkách/minutu. Po povaření a ochlazení byl supematant vysušen lyofilizací a výsledná lyofilizovaná látka byla do dalšího použití uložena v mrazáku (-10 °C). Obsah 2,6-DMBQ ve výsledném lyofilizátu byl 0,4 mg/g sušiny (0,04 hmotnostního procenta).
Příklad 2. Fermentace pšeničných klíčků ve velkém měřítku
300 kg pšeničných klíčků, rozemletých na mouku (podle maďarského standardu) a 100 kg kvasinek bylo umístěno do fermentoru o objemu 5 m3 a byla přidána pitná voda, až objem dosáhl
4000 litrů. Doba fermentace byla 18 hodin, během ní bylo používáno stálé vzduchování (0,5 1 vzduchu/1 fermentované tekutiny/minutu) a pomalé míchání (30 otáček/minutu). Aby se zabránilo tvorbě pěny, byl ke směsi přidán slunečnicový olej - 1 1/m3. Po fermentaci bylo vzduchování a míchání přerušeno a fermentovaný roztok byl oddělen napřed na šnekovém odstřeďovacím zařízení, potom v odlučovači a nakonec protlačováním filtračním zařízením s textilním filtrem.
Jako pomocný materiál bylo přidáno 10 kg filtračního perlitu/m3. Fermentovaná tekutina byla prudce filtrována a kvalita filtrování byla kontrolována mikroskopicky. Filtrovaná fermentovaná tekutina prakticky neobsahala žádné buňky, což znamená, že při 10 pozorováních nebyla nalezena dohromady více než jedna kvasinková buňka. Výsledná fermentovaná tekutina, která obsahovala 1,5 hmotnostního procenta sušiny, byla odpařována ve vakuovém kondenzátoru při tep30 lotě 40 až 50 °C a po ukončení vakua byla povařena při atmosférickém tlaku po dobu 15 minut. Potom byl stanoven obsah sušiny v roztoku a bylo přidáno tolik maltodextrinu - napřed byl rozpuštěn v horké vodě a potom zchlazen - že obsah sušiny v roztoku se stal 30 % její hmotnosti. Poté byl roztok sušen vysoušením rozprašované tekutiny v rotačním rozprašovacím sušicím přístroji s tiyskou, ve kterém byla teplota vycházejícího vzduchu 90 °C. Výsledný konečný produkt
- prášek - obsahoval 60 hmotnostních % fermentovaného, vysušeného rostlinného materiálu, připraveného podle předloženého vynálezu, a 40 hmotnostních % maltodextrinu. Obsah 2,6DMBQ - stanoveno HPLC metodou, popsanou v následujícím příkladě - byl 0,4 mg/g sušiny.
Příklad 3. Charakteristiky látky připravené podle předloženého vynálezu
Látka připravená podle předloženého vynálezu může být charakterizována dvěma způsoby, buď určením obsahu 2,6-DMBQ, anebo tzv. otiskem palce na chromatogramu. V obou případech je použita HPLC chromatografie.
Analýza byla provedena jak u látky, vytvořené jak bylo popsáno v příkladu 1, tak u látky získané jak bylo popsáno v příkladu 2 a výsledky byly v obou případech shodné.
A. Kvantitativní a kvalitativní analýza benzochinonových derivátů
Příprava vzorku
Před analýzou se stalo nezbytné zvýšit koncentraci benzochinonů v lyofilizátu. Aby se toho dosáhlo, tento lyofilizát byl rozpuštěn na původní koncentraci v destilované vodě (na obsah
1 hmotnostního % sušiny) - (0,5 g lyofilizátu, 50 ml destilované vody). Roztok byl extrahován ve
-5 CZ 298654 B6 třech krocích vždy 25 ml chloroformu. Zbytková vlhkost v chloroformové fázi byla nakonec odstraněna bezvodým síranem sodným. Po filtraci byla chloroformová fáze odpařena a ke zbytku byl přidán chloroform do celkového objemu 5 ml. Tento vzorek byl injikován v průběhu HPLC analýzy.
Kvantitativní a kvalitativní analýza benzochinonových derivátů byla provedena metodou HPLC. Popis metody HPLC
Použité HPLC zařízení se skládá z pumpy Beckman model 114 M, LaborMim UV popřípadě Merck-Hitachi-DAD mod. 4500 diodového maticového detektoru a integrační jednotky Waters typ 740. Pro měření byl použit 10μ sloupec Chromsil 08 (250 x 4 mm). Detekce UV byla provedena při frekvenci 290 mm a rychlost průtoku byla 2 ml/minutu.
Složení použitého elučního roztoku bylo následující: Na2HPO4 25 mmol, NaH2PO4 25 mmol, Na2EDTA 25 mmol, NH2OH.HC1 20 mmol, 10 objemových % methanolu, pH=6,05.
Výše popsanou metodou byly analyzovány tři různé benzochinony a hydrochinony. Je však malý rozdíl mezi retenčními časy sloučenin. Snížením koncentrace elučního roztoku - organická fáze na 10 % - byl zvýšen rozsah selektivity. Analýza retenčních údajů ukázala, že p-benzochinony vykazují vyšší retenci, než odpovídající hydrochinony a retence se s počtem methoxy- skupin zvyšuje. Koncentrace všech tří standardů byla 0,1 mg/ml. Tabulka 2 ukazuje údaje o retenčních časech (tR) standardů a kapacitním faktoru (k'). Protože účelem měření byla detekce a kvantitativní definice 2,6-dimethoxy-p-benzochinonu, v následujícím bude tato část měření detailně diskutována. Bylo testováno zda je vypracovaná metoda vhodná pro kvantitativní analýzu 2,6dimethoxy-p-benzochinonu. Použitý kalibrační diagram je ukázán na obrázku 1. Při použití korelačního koeficientu 0,99 je výsledkem přímka. Bylo též kontrolováno, zda mohou být měření reprodukována, u každého vzorku byla provedena tři paralelní měření a byl vypočten rozptyl výsledků. Tabulka 1 ukazuje paralelní výsledky měření, provedených na vzorcích v průběhu období šesti měsíců a jejich rozptyl. Naše výsledky ukazují, že měřicí metoda je vhodná pro přesné a reprodukovatelné měření 2,6-dimethoxy-p-benzochinonu.
Tabulka 1
Paralelní hodnoty kvantitativní analýzy 2,6-DMBQ a rozptyl výsledků
| Datum | Obsah 2,6-DMBQ (mg/50 g vzorku) | (σ- %) | ||
| 27.4. | 3,45 | 3,54 | 3,66 | 0,08-2 |
| 28.4. | 3,27 | 3,68 | 3,31 | 0,18-5 |
| 10.5. | 1,56 | 1,49 | 1,48 | 0,03-1,9 |
| 10.5. | 3,65 | 3,42 | 0,12-3 | |
| 8.6. | 3,00 | 2,98 | 2,86 | 0,06-2 |
| 9.6. | 2,92 | 3,06 | 2,87 | 0,08-2,3 |
| 10.6. | 3,34 | 3,23 | 3,36 | 0,05-1,5 |
-6CZ 298654 B6
Tabulka 2
Retenční Časy (tR) a kapacitní faktor (k') zkoušených látek
| Standard | tR | k' |
| 2,6-DMBQ | 13,4 | 5,0 |
| 2,6-DMHQ | 5,1 | 1,2 |
| 2,6-MBQ | 8,5 | 2,7 |
Obrázek 2 ukazuje chromatogram HPLC chloroformového vzorku, připraveného jak bylo popsáno výše. Chromatogram ukazuje pouze jeden vrchol, charakteristický pro 2,6-DMBQ. Obsah 2,6-DMBQ ve vzorku byl určen na základě následujícího.
B. Otisk palce na chromatogramu Příprava vzorku
Padesát mililitrů 96% ethanolu (objem) bylo přidáno k 5 g vysušené látky (připravené jak bylo popsáno v příkladu 2). Směs byla třepána po dobu 30 minut při teplotě 50 °C a 200 obrátek/min. Potom byla směs filtrována, vysušena do sucha a zbývající materiál byl rozpuštěn v 10 ml methanolu. Filtrovaný roztok byl injikován na sloupec.
Metoda HPLC
Vybavení HPLC, sloupec a podmínky popsané výše byly použity také zde, kromě toho, že složení elučního roztoku bylo následující: Na2HPO4 1,25 mmol, NaH2PO4 1,25 mmol, Na2EDTA 1,25 mmol, NH2OH.HC1 2,50 mmol, 5 objemových % methanolu.
Obrázek 3 ukazuje výsledný HPLC chromatogram. Je vidět, že za těchto podmínek se objevily dva charakteristické vrcholy, jeden v 4,7 minuty (5) a jeden v 5,8 minuty (6). Při retenčním čase 7,3 a 7,7 minuty následovaly rychle jeden za sebou dva vrcholy, které nelze zcela oddělit. Vrchol s menší intenzitou se objevil v 9,8 minuty (9), následovaný charakteristickým intenzivním vrcho30 lem (11) v 13,1 minuty. V 15 minutách následoval menší vrchol (12) a další intenzivní vrchol (14) v 18 minutách. V čase 21,8 minuty ukázal chromatogram menší vrchol (15) a okolo doby 31 minut plošší vrchol, obsahující několik látek.
C. Testy stability
Rozklad látky, připravené podle tohoto vynálezu, byl zjišťován pomocí změn koncentrace 2,6dimethoxy-p-benzochinonu. Provedli jsme pokusy s uložením při třech různých teplotách (teplota místnosti 20 °C, 40 °C a 60 °C). Lyofilizát - 1 g - byl uložen ve zkumavkách, které byly vzduchotěsně uzavřeny. Pokus trval 8 měsíců a každý týden byly provedeny tři paralelní měření na vzorcích, odebraných ze všech tří sérií, uložených při různých teplotách. Kvantitativní analýza benzochinonových derivátů byla provedena pomocí HPLC.
Testy ukázaly, že suchá látka, připravená podle tohoto vynálezu, zůstala stabilní dokonce po třech letech při teplotě místnosti, tj. obsah 2,6-DMBQ zůstal prakticky nezměněn. Současně látka není stabilní při 40 °C - 2,6-DMBQ se rozkládá během několika týdnů a při 60 °C se obsah 2,6DMBQ sníží rychle během několika dní.
V obou sériích měření byl také studován rozklad 2-methoxy-p-benzochinonu. Tato sloučenina je ještě méně stabilní než 2,6-dimethoxy-p-benzochinon a následkem toho jeho přítomnost nelze
-7CZ 298654 B6 prokázat již po jednom týdnu u vzorků uložených při teplotě 40 °C nebo 60 °C. Při teplotě místnosti zůstává koncentrace této sloučeniny také nezměněna.
Příklad 4. Testy účinnosti
Jak u lyofilizovaného preparátu připraveného, jak je popsáno v příkladě 1, tak u látky vysušené při rozprašování, jak je popsáno v příkladě 2, byla testována jejich účinnost. Byla použita standardizovaná sušina s obsahem 2,6-DMBQ 0,4 mg/g sušiny a její HPLC křivka byla taková, jaká je ukázána na obrázku 2. S oběma látkami byly získány stejné výsledky - tedy látka, připravená podle tohoto vynálezu, bude nadále nazývána jednoduše lyofilizát. Dále budou diskutovány výsledky biologických a toxikologických testů, které se týkají tohoto lyofilizátu, se zvláštním důrazem na opětné ustavení imunity, nádorový růst a na potlačení vzniku metastáz.
I. Nádorový růst a účinek na potlačení metastáz (testy in vivo)
Při testech byly použity následující injikovatelné typy nádorů, rostoucí na myších a krysách: silně metastázující varianta (3LL-HH) Lewisova plicního karcinomu (myší rakovina plic), myší melanom B16 a xenoimplantát lidského karcinomu tlustého střeva HCR-25.
Nádory 3LL-HH (LLT-HH) a B16 byly udržovány na inbredních myších C57B1/6. Xenoimplantát HCR-25 byl injikován myším CBA/CA, u kterých byla předem potlačena imunita pomocí operativního odstranění brzlíku a ozářením celého těla. V případě nádorů 3LL-HH a HCR-25 byly nádorové buňky transplantovány do sleziny, v případě melanomu B16 do svalů levé zadní končetiny. Zvířatům v léčené a kontrolní skupině, kterým byl injikován nádor HCR25 byla též odstraněna slezina 21 dnů po transplantaci nádoru.
Léčení lyofilizátem, popsané ve vynálezu, bylo započato 24 hodin po injekci nádoru. Denní dávky 3 g/kg tělesné hmotnosti byly podávány ústy žaludeční sondou, ve formě vodní suspenze
0,6 g/ml.
Testy byly v případě nádoru 3LL-HH ukončeny 14 dní po transplantaci, v případě nádoru B16 21 dní po transplantaci a v případě nádoru HCR-25 51 dní po transplantaci úplným vykrvácením zvířat v narkóze.
Tabulky 3, 4 a 5 shrnují výsledky testů.
Tabulka 3
Účinek léčení lyofilizátem, připraveným podle vynálezu, na počet metastáz v játrech v případě myší plicní rakoviny 3LL-HH, injikované do sleziny
| Léčení | Počet injikovaných buněk | Počet metastáz v játrech |
| Kontrola | 3x107 | 104,0±28,2 |
| Lyofilizát | 3x107 | 29,8 ± 16,4* |
*p<0,01 každá testovaná skupina obsahovala 10 zvířat
-8CZ 298654 B6
Tabulka 4
Účinek léčení lyofilizátem, připraveným podle vynálezu, na počet metastáz v játrech 51 dní po injikování lidského karcinomu tlustého střeva HCR-25 do sleziny myší CBA/CA s potlačenou imunitou
| Léčení | Váha sleziny s nádorem (g) | Počet metastáz v játrech |
| Kontrola - slezina neodstraněna | 1,02 ±0,59 | 42,0 ± 25,8 |
| Lyofilizát - slezina neodstraněna | 0,62 ± 0,47 | 19,5 ±19,0 |
| Kontrola - slezina odstraněna* | 0,10 ±0,02 | 19,1 ±13,5 |
| Lyofilizát - slezina odstraněna* | 0,08 ± 0,02 | 10,6 ±11,6 |
'Odstranění sleziny bylo provedeno 21 dní po injikování nádoru do sleziny každá testovaná skupina obsahovala 12 zvířat
Tabulka 5
Úěinek léčení lyofilizátem, připraveným podle vynálezu, na hmotnost končetiny, do které byl 15 injikován nádor a na počet metastáz v plicích v případě melanomu B16, injikovaného do svalů končetiny 21 dní po injekci nádoru
| Léčení | Váha končetiny s nádorem (průměr) | Počet metastáz v plicích |
| Kontrola | 7,6 ± 0,43 | 42,4 ± 10,2 |
| Lyofilizát | 7,2 ±0,38 | 6,2 ± 3,7* |
*p<0,01 každá testovaná skupina obsahovala 10 zvířat
Výše uvedené výsledky ukazují, že léčení lyofilizátem, popsaným ve vynálezu, významně snížilo - o 71 % - počet metastáz v plicích, když byl nádor 3LL-HH injikován do sleziny. (Tabulka 3.)
V případě lidského karcinomu tlustého střeva HCR-25, léčení po dobu 50 dní snížilo jak hmotnost sleziny s nádorem, tak počet metastáz v játrech. Počet metastáz byl 50% jak ve srovnání s kontrolní skupinou, u které byla slezina odstraněna, tak ve srovnání s kontrolní skupinou, u které slezina odstraněna nebyla. (Tabulka 4.)
V případě melanomu B16, injikovaného do svalu, hmotnost nádoru rostoucího ve svalu se následkem léčení nezměnila, ale počet metastáz v plicích se velmi výrazně snížil, o 85 % ve srovnání s kontrolní skupinou. (Tabulka 5.)
II. Testy in vitro
Protože výše uvedené testy ukázaly nepochybně, že lyofilizát, popsaný ve vynálezu, může významně snížit počet metastáz maligních nádorů, byly také zkoušeny účinky výrobků na různé fáze tvorby metastáz. Tvorba metastáz sestává z několika fází, v nichž kromě proliferační a
-9CZ 298654 B6 apoptotické aktivity buněk primárního nádoru, hraje úlohu adhezní schopnost nádorových buněk a obranné mechanizmy organizmu proti nádorovým buňkám. V in vitro testech byl studován účinek lyofilizátu na buněčné množení, apoptózu a adhezní schopnost.
Značná část in vitro testů byla provedena s buňkami myšího melanomu B16, v prvním kroku byl tento nádor použit pro testování lyofilizátu.
1. Test adheze
Adhezní schopnost nádorových buněk byla testována na 96-jamkové mikrodestičce. Dávky lyofilizátu byly 300, 3000 a 30 000 pg/ml. Bylo použito kultivační médium RPMI jak bez séra, tak v přítomnosti 10% FCS. Adhezní schopnost byla testována 10, 30, 60, 90 a 120 minut po inkubaci za obvyklých okolností. Hodnocení bylo provedeno kolorimetrickým postupem na základě SRB testu. (Mossmann, T.: J. Immunol. Meth. 65, 55-63 /1983/). Test je založen na obarvení celkového obsahu proteinů v kultuře sulforhodaminem-B, absorbance byla odečítána spektrofotometrem při 570 nm. Obrázek 4. ukazuje jen dva časové okamžiky, které však odpovídajícím způsobem reprezentují účinek lyofilizátu. Bylo ukázáno, že pokud dávka lyofilizátu byla 3000 pg/ml nebo 1 Okřát vyšší, snižuje dramaticky adhezní schopnost nádorových buněk, jak v přítomnosti, tak i v nepřítomnosti séra. Pokud dávka je 300 pg/ml, není takový účinek pozoro20 ván.
2. Test proliferace
V tomto testu byly nádorové buňky umístěny 24 hodin před testováním na 96-jamkovou mikro25 destičku. Po působení vhodnými dávkami lyofilizátu byla proliferační aktivita buněk také testována pomocí SRB testu, 24, 28 a 72 hodin po působení. Výsledky opakovaných testů ukázaly, že působení v rozmezí 900 až 15 000 pg/ml je takové, že nádorové buňky dosáhnou jednovrstevného nárůstu a - jak ukázala metoda vylučování trypanové modři - zahynou. (Kaltenbach, J. P. a kol.: Exp. Cell Res. 15, 112-117/1985/). (Obrázek 5.)
Naše testy s lidským amelanotickým melanomem (nádorové buňky A2058 - Todaro, G. J. a kol.: Proč. Nati. Acad, Sci. USA 77, 5258-5262 /1980/) ukázaly podobné výsledky, jaké byly získány s myším melanotickým melanomem (obrázek 6.). V tomto případě tohoto nádoru byl také paralelně k SRB testu proveden MTT test, představující metabolickou aktivitu buňky (Cole, S. P. C.:
Cancer Chemother. Pharmacol. 17, 259-263 /1986/). Test je založen na skutečnosti, že metabolicky aktivní buňka převede pomocí své dehydrogenované aktivity tetrazoliovou sůl na barevný formazanový produkt. Barevná reakce, která je úměrná velikosti aktivity, může být měřena spektrofotometrem při 570 nm. MTT test jasně kázal, že se funkční aktivita nádorových buněk snížila, dokonce když dávka byla 300 pg/ml (obrázek 4.). Protože v případě buněk, které dosáhnou nárůstu, nebyla příčina apoptózy známá, apoptotická aktivita celé buněčné populace byla testována pomocí průtokové cytometrické analýzy (FACS) (obrázek 7.). Jak ukazuje obrázek 7., nádorové buňky byly ve stavu apoptózy - v závislosti na dávce - v neobvyklém velkém rozsahu.
III. Test účinků na imunní reakci
Účinek lyofilizátu, popsaného ve vynálezu, byl zjišťován na dvou různých modelech. V jedné sérii testů byla studována možnost blastické transformace mononukleámích buněk, získaných ze sleziny zvířat po působení lyofilizátu, zatímco ve druhé sérii testů byl účinek lyofilizátu studován pomocí transplantačního modelu celkového přihojení kůže kožního aloimplantátu, transplanto50 váné v oblasti zad u myši.
-10CZ 298654 B6
1. Test blastické transformace T-lymfocytů
Působení lyofilizátu, popsaného ve vynálezu, významně zvyšuje blastickou transformaci T-lymfocytů, které hrají důležitou úlohu v imunní reakci. Bylo to ukázáno pomocí následujícího poku5 su.
Myším C57B16 byl podáván po dobu 6 týdnů, 5krát v týdnu ústy pomocí žaludeční sondy lyofilizát, popsaný ve vynálezu v dávce 3 g/kg (0,6 g/ml vodní suspenze). Po ukončení léčení byly lymfocyty, získané promýváním sleziny těchto zvířat, převedeny na buněčnou kulturu, na kterou bylo působeno 1 pg/ml Con A. Po 48 hodinách byly buňky, ve kterých probíhá syntéza DNA, označeny pomocí 0,4 pCi 3H tymidinu. Úroveň značení byla zjišťována pomocí detektoru scintilace v roztoku. (Beckman). Jak je ukázáno v tabulce 6. působení Con A významně zvyšuje - ve srovnání s kontrolou - zabudování 3H TdR, tj. blastickou transformaci.
Tabulka 6
Zabudování 3H tymidinu do slezinných lymfocytů kontrolních a lyofilizátem léčených myší
| Léčení | 1 pg/ml Con A | |
| průměr (cpm) | SEM | |
| Kontrola | 3760,6 | 583,3 |
| Lyofilizát | 8041,8 | 957,1 |
2. Testování imunostimulačního účinku na transplantačním modelu kožního aloimplantátu
Nejlepší model pro předvedení obnovy poškozené imunní reakce je transplantační test s kožním aloimplantátem u myší, u kterých byla navozena částečná imunitní nedostatečnost pomocí tymektomie (operativním odstraněním brzlíku). Myší kmeny C57Bi6 a B10LP se liší pouze v lokusu H-3 takže kůže, transplantovaná za členů jednoho kmene na druhý, není odhojena během 7 dnů, ale pouze po 3 týdnech. Pokud byl příjemce operativně zbaven brzlíku, odhojení nastává průměrně po padesáti dnech. Všechny látky, které podporují zrání a diferenciaci lymfocytů dřeně, jako jsou hormony brzlíku, zkracují dobu nezbytnou pro odvržení transplantované kůže. (J. Immunopharmacology 7, 67-78 /1985/). Tentýž účinek může být pozorován v našich testech, když byla aplikována léčba lyofilizátem, popsaným ve vynálezu.
Myši C57Bi6 byly použity jako příjemci a myši B10LP jako dárce. Myším-příjemcům byl operativně odstraněn brzlík a za 7 týdnů následovala kožní transplantace. Podávání lyofilizátu - ústně 5krát týdně, 30 mg/kg - bylo zahájeno 1 týden po tymektomii. Léčení bylo ukončeno 70 dní po kožní transplantaci. Případné odvržení kůže bylo sledováno denně.
Tabulka 7 ukazuje, že doba odvržení u myší, kterým nebyla provedena tymektomie, byla 21 dnů (samci), případně 28,7 dnů (samice). U myší, kterým byla tymektomie provedena, byla doba odvržení prodloužena na 52,4, případně 41,6 dnů. Léčba lyofilizátem, popsaným ve vynálezu, zkracovala významně u tymektomizovaných a léčených myší přežívání kožních transplantátů (štěpů). To ukazuje, že imunitní nedostatečnost, navozená tymektomii, byla významně snížena následkem léčení, což znamená, že lyofilizát má imunnostimulační účinek.
- 11 CZ 298654 B6
Tabulka 7
Účinek lyofilizátu, připraveného podle vynálezu, na odvržení kožních štěpů (příjemci myši C57Bi6, dárci myši BiqLP)
| Léčení | Doba potřebná k odvržení | |||
| samci | samice | |||
| průměr (dny) | SEM | průměr (dny) | SEM | |
| Kontrola (neodstraněný brzlík) | 21,0 | 3,1 | 28,7 | 4,5 |
| Kontrola (odstraněný brzlík) | 52,4 | 5,0 | 41,6 | 5,5 |
| Lyofilizát (30 mg/kg) | 28,8* | 8,6 | 32,6** | 4,5 |
*0,001<p<0,01 vzhledem ke kontrole s odstraněným brzlíkem **0,01<p<0,05 vzhledem ke kontrole s odstraněným brzlíkem
Testy in vivo a in vitro s lyofilizátem, připraveným podle vynálezu ukazují, že tento výrobek má výrazný účinek proti vzniku metastáz u několika živočišných pokusných modelů. Tento účinek je pravděpodobně svázán s imunostimulačním účinkem, pozorovaným jak v in vivo, tak i v in vitro testech, aleje možné, že snížení počtu metastáz je také ovlivněno antiproliferativními, apoptózu způsobujícími účinky, účinkem látky na adhezi buněk a účinkem, který způsobuje tvorbu volných radikálů.
IV. Test schopnosti vazby radikálů
Protože benzochinony mají dobře známý účinek na tvorbu volných radikálů, byla také u lyofili20 zátu, připraveného podle vynálezu, testována schopnost vazby radikálů. Pomocí metody elektron spin rezonance byla měřena jak vazba peroxidového radikálu (SSA), tak vazba hydroxylového radikálu (OH-SA). Lyofilizát měl významnou SSA aktivitu, čistá aktivita vazby radikálu 1 mg látky odpovídá aktivitě 5,64 pg peroxid dismutázy (SOD). Lyofilizát neměl žádnou OH-SA aktivitu, ale štěpí systém peroxid vodíku/Fe, tvořící hydroxylové radikály, takže může být předpo25 kládáno, že má tzv. nechelátorovou („non-chelator“) aktivitu.
V. Toxikologické testy (subakutní)
Byly provedeny 77 dní trvající toxikologické testy, podle doporučení Registru průmyslové toxi30 kologie živočichů - údaje (RITA). (Exp. Toxic. Pathol. 47, 247-266 /1995/) na krysách F34 a myších C57B16. Zvířatům byla denně podávána dávka 3 g/kg (0,6 g/ml vodní suspenze). Během podávání byly pozorovány změny na váze zvířat, případné patologické fyzické změny, spontánní úhyn zvířat. Po uzavření testu byly zváženy srdce, plíce, brzlík, slezina, játra, ledviny a varlata a z patologického hlediska bylo prozkoumáno 34 orgánů, předepsaných RITA. Nebylo pozorováno žádné spontánní uhynutí zvířat a váha zvířat se měnila jako u kontrolní skupiny. Na závěr testu váhy různých orgánů neukázaly ve srovnání s kontrolní skupinou žádné změny. Během pokusu nebyly pozorovány u léčených zvířat žádné patologické změny, které by mohly být způsobeny lyofilizátem.
Výše uvedené výsledky ukazují, že fermentovaný rostlinný materiál, připravený podle vynálezu, není toxický a protože má imunostimulační účinek, je indikován ve všech stavech, při kterých je imunní systém poškozen. Pro jeho výše popsané biologické charakteristiky, může mít své doplňující použití při léčení maligních nádorů, hlavně pro zabránění vzniku metastáz.
- 12CZ 298654 B6
Průmyslová využitelnost
Materiál, připravený podle předloženého vynálezu, může být použit pro léčení stavů 5 s poškozenou imunitou a pro zabránění vzniku metastáz z primárních nádorů.
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (12)
1. Imunostimulační a metastázy inhibující fermentovaný a vysušený rostlinný materiál připravitelný fermentací pšeničných klíčků pomocí Saccharomyces cervisiae ve vodném prostředí.
2. Imunostimulační a metastázy inhibující fermentovaný a vysušený materiál podle nároku 1, připravitelný fermentací pšeničných klíčků pomocí Saccharomyces cervisiae ve vodném prostředí, přičemž jeho HPLC chromatogram odpovídá chromatogramu uvedenému na obrázku
3.
20 3. Imunostimulační a metastázy inhibující fermentovaný a vysušený materiál podle nároku 1, připravitelný fermentací pšeničných klíčků pomocí Saccharomyces cervisiae ve vodném prostředí, přičemž jeho obsah 2,6-dimethoxy-p-benzochinonu je 0,12 až 0,52 mg/g sušiny a jeho obsah 2-methoxy-p-benzochinonu je 0,05 až 0,28 mg/g sušiny, jakje určeno pomocí HPLC.
25
4. Imunostimulační a metastázy inhibující fermentovaný a vysušený materiál podle nároku 1, připravitelný fermentací pšeničných klíčků pomocí Saccharomyces cervisiae ve vodném prostředí, přičemž jeho obsah 2,6-dimethoxy-p-benzochinonu je 0,4 mg/g sušiny.
5. Způsob přípravy imunostimulačního a metastázy inhibujícího fermentovaného a vysušeného
30 materiálu podle nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že se mleté pšeničné klíčky fermentují ve vodném prostředí za přítomnosti Saccharomyces cervisiae a fermentovaná tekutina se oddělí, přefiltruje, odpaří, povaří a vysuší samotná nebo za přítomnosti doplňkových sušicích látek.
35
6. Způsob přípravy imunostimulačního a metastázy inhibujícího fermentovaného a vysušeného materiálu podle nároku 5, vyznačující se tím, že se fermentace provádí pří teplotě 30 °C po dobu 18 hodin za stálého míchání a probublávání vzduchem.
7. Způsob přípravy imunostimulačního a metastázy inhibujícího fermentovaného a vysušeného
40 materiálu podle nároků 5a 6, vyznačující se tím, že se vysušení provádí za přítomnosti maltodextrinu.
8. Imunostimulační a metastázy inhibující farmaceutický produkt, vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní látku vysušený materiál podle nároků 1 až 4.
9. Dietní doplněk pro savce, vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní látku vysušený materiál podle nároků 1 až 4.
10. Dietní doplněk podle nároku 9, vyznač u j í cí se tí m , že obsahuje 60 % hmotn. pří50 pravý imunostimulačního a metastázy inhibujícího fermentovaného a vysušeného materiálu podle nároků 1 až 6 a dále 40 % hmotn. maltodextrinu.
11. Použití imunostimulačního a metastázy inhibujícího fermentovaného a vysušeného materiálu podle nároků 1 až 4 pro výrobu farmaceutického prostředku s imunostimulačním účinkem a inhi55 bujícího vznik metastáz.
- 13 CZ 298654 B6
12. Použití imunostimulačního a metastázy inhibujícího fermentovaného a vysušeného materiálu podle nároků 1 až 4 pro výrobu dietního doplňku pro savce.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU9701392A HUP9701392D0 (en) | 1997-08-13 | 1997-08-13 | Immunostimulating and methastasis-inhibiting plant extract, pharmaceutical compositions containing thereof, process for production of plant extract and use for production of immunostimulating and metastasis-inhibiting pharmaceutical composition thereof |
| HU9801797A HU223344B1 (hu) | 1997-08-13 | 1998-08-05 | Immunstimuláns és metasztázist gátló fermentált, szárított anyag, ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények, eljárás az előállítására és alkalmazásai |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2000418A3 CZ2000418A3 (cs) | 2000-06-14 |
| CZ298654B6 true CZ298654B6 (cs) | 2007-12-05 |
Family
ID=90014226
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20000418A CZ298654B6 (cs) | 1997-08-13 | 1998-08-11 | Fermentovaný a vysušený rostlinný materiál, zpusob jeho prípravy, farmaceutický výrobek, dietní doplnek a použití vysušeného rostlinného materiálu |
Country Status (31)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6355474B1 (cs) |
| EP (1) | EP1003536B1 (cs) |
| JP (3) | JP4387586B2 (cs) |
| KR (2) | KR100544376B1 (cs) |
| CN (1) | CN1192099C (cs) |
| AT (1) | ATE227580T1 (cs) |
| AU (1) | AU754815B2 (cs) |
| BG (1) | BG64038B1 (cs) |
| BR (1) | BR9811936B1 (cs) |
| CA (1) | CA2300208C (cs) |
| CZ (1) | CZ298654B6 (cs) |
| DE (1) | DE69809434T2 (cs) |
| DK (1) | DK1003536T3 (cs) |
| EA (1) | EA003090B1 (cs) |
| EE (1) | EE04222B1 (cs) |
| ES (1) | ES2186208T3 (cs) |
| GE (1) | GEP20032988B (cs) |
| HK (1) | HK1033097A1 (cs) |
| HU (1) | HU223344B1 (cs) |
| ID (1) | ID25515A (cs) |
| IL (1) | IL134493A (cs) |
| ME (1) | ME00638B (cs) |
| NO (1) | NO323562B1 (cs) |
| PL (1) | PL191414B1 (cs) |
| PT (1) | PT1003536E (cs) |
| RS (1) | RS49692B (cs) |
| SK (2) | SK282917B6 (cs) |
| TR (1) | TR200000404T2 (cs) |
| UA (1) | UA67747C2 (cs) |
| WO (1) | WO1999008694A1 (cs) |
| YU (1) | YU7200A (cs) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1235931C (zh) | 1998-04-24 | 2006-01-11 | Ck威特科有限公司 | 使用硅烷或硅烷处理的填料的粉末涂料或粘合剂 |
| FR2815822B1 (fr) * | 2000-10-30 | 2004-08-27 | Roquette Freres | Additif carbone pour fermentations alimentaires et compositions alimentaires le contenant |
| FR2834718B1 (fr) * | 2002-01-15 | 2004-12-24 | Cognis France Sa | Substances actives cosmetiques et/ou pharmaceutiques |
| US20040043084A1 (en) * | 2002-05-02 | 2004-03-04 | George Cioca | Method of enhancing biological activity of plant extracts |
| HUP0202638A3 (en) * | 2002-08-09 | 2007-08-28 | Hidvegi Mate Dr | Use of fermented wheat-germ extract for preparation of antiphlogistic compositions |
| BR0215836A (pt) * | 2002-08-13 | 2005-06-07 | Mate Hidvegi | Uso de germe de trigo fermentado na alimentação e na prática veterinária |
| EA009170B1 (ru) * | 2002-08-13 | 2007-10-26 | Мате Хидвеги | Применение ферментированных зародышей пшеницы в ветеринарной практике |
| WO2007140277A1 (en) | 2006-05-24 | 2007-12-06 | Vitality Concepts Corporation | Method for embedding and targeted release of micronutrients in activated dietary fibers |
| US7365102B1 (en) | 2007-02-26 | 2008-04-29 | Delphi Technologies, Inc. | Process for pre-reforming hydrocarbon fuels |
| HUP0900614A2 (en) | 2009-09-29 | 2011-05-30 | Mate Dr Hidvegi | Preparation comprising dehydrated, fermented material with amorphous crystaline structure and process for its production |
| WO2010100515A2 (en) * | 2009-03-06 | 2010-09-10 | Hidvegi Mate | Fractions of wheat germ ferment |
| JPWO2011083768A1 (ja) * | 2010-01-08 | 2013-05-13 | 住友ベークライト株式会社 | 細胞凝集塊形成用培養容器 |
| US20120164132A1 (en) * | 2010-08-02 | 2012-06-28 | Mate Hidvegi | Anticancer and immunomodulating molecules and fractions containing said molecules, and process for preparing said fractions and said molecules from fermented vegetal material, and their uses |
| GB201108560D0 (en) | 2011-05-20 | 2011-07-06 | 3 Ch Ltd | Use of fermented wheat germ in the treatment of inflammatory bowel disease |
| GB201110746D0 (en) | 2011-06-23 | 2011-08-10 | Biropharma Uk Ltd | Wheat germ derived material |
| US11090353B2 (en) | 2013-04-22 | 2021-08-17 | David Wales | Gluten-free grain-concentrate substitute for fermented wheat germ drug product and method preparation |
| US11129389B2 (en) | 2013-04-22 | 2021-09-28 | David Wales | Gluten-free grain-concentrate substitute for fermented wheat germ food product and method of preparation |
| JP2017033691A (ja) * | 2015-07-30 | 2017-02-09 | 三菱自動車工業株式会社 | 車載電池パック、リチウムイオン補充装置、及びリチウムイオン補充方法 |
| CN107455551A (zh) * | 2016-06-06 | 2017-12-12 | 铜陵安尔生物科技有限公司 | 麦胚发酵黄酮提取物及其制备方法与在动物饲养中的应用 |
| JP6739774B2 (ja) * | 2018-06-25 | 2020-08-12 | 学校法人立命館 | がんの治療、予防、改善、抑制又は転移抑制用組成物 |
| HUE065477T2 (hu) | 2018-11-27 | 2024-05-28 | Gyula Bencze | Fermentált búzacsíra élelmiszer termék helyettestésére alkalmas gluténmentes gabonakoncentrátum és eljárás annak elõállítására |
| WO2022091075A1 (en) * | 2020-11-01 | 2022-05-05 | Aili Life Sciences Ltd. | Combination compositions of probiotics with fermented wheat germ extract and uses thereof |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ285508B6 (cs) * | 1993-08-09 | 1999-08-11 | Edward Baral | Použití trifenylethylenových antiestrogenů pro zvyšování citlivosti rakovinných buněk k lyzi zprostředkované zabíječskými buňkami |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63230774A (ja) * | 1987-03-19 | 1988-09-27 | Seinosuke Ueda | 紫青系色素の製法 |
| JP2618286B2 (ja) * | 1990-10-25 | 1997-06-11 | 免疫代謝薬製造株式会社 | 降圧酵母製剤及びその製造法 |
| KR940001544B1 (ko) * | 1990-11-21 | 1994-02-24 | 강권중 | 은행잎을 위시한 천연약재로부터 미생물의 공서배양에 의한 건강식품의 제조방법 |
| JP3296433B2 (ja) * | 1990-11-30 | 2002-07-02 | 日本食品化工株式会社 | 酒類の製造法 |
| US5231017A (en) | 1991-05-17 | 1993-07-27 | Solvay Enzymes, Inc. | Process for producing ethanol |
| EP0625187B1 (en) * | 1992-02-06 | 1997-04-23 | Bio-Technical Resources, Inc. | Concentrated beer flavor product |
| JPH07155136A (ja) * | 1993-12-03 | 1995-06-20 | Nippon Mektron Ltd | 植物発酵エキス粉末の製造方法 |
| EP1090553A3 (en) * | 1993-12-24 | 2001-04-18 | Dsm N.V. | Dry yeast compositions |
| ES2163430T3 (es) * | 1994-01-06 | 2002-02-01 | Hyd Kutato Fejleszto Ktf | Productos alimenticios para la prevencion del desarrollo de enfermedades y procedimiento para su preparacion. |
| JP3471879B2 (ja) * | 1994-01-20 | 2003-12-02 | ルードヴィッヒ インスティテュート フォー キャンサー リサーチ | セリンキナーゼ活性の抑制方法、ｐｉ３−キナーゼのサブユニット間の結合活性の調整方法、ｐｉ３−キナーゼのサブユニット結合抗体、この抗体を生成するハイブリドーマ細胞系、核酸分子、プラスミド、アゴニスト、アンタゴニスト、ｐｉ３−キナーゼ活性を抑制するサブユニット結合分子、サブユニットの存在検出方法、ｐｉ３−キナーゼ活性の抑制剤製造方法、およびｐｉ３−キナーゼ活性の抑制剤 |
| JP2875739B2 (ja) * | 1994-04-27 | 1999-03-31 | エーザイ株式会社 | ＮＦκＢ活性阻害剤 |
| DK0684306T4 (da) * | 1994-05-27 | 2004-05-10 | Agrano Ag | Fremgangsmåde til fremstilling af en biomasse ud fra et kornsubstrat, anvendelse af de ved fremgangsmåden opnåede produkter, samt brödbagningsgærstof |
| JP4167733B2 (ja) * | 1996-12-16 | 2008-10-22 | 花王株式会社 | ＮＦ−κＢ活性化抑制剤 |
-
1998
- 1998-08-05 HU HU9801797A patent/HU223344B1/hu active IP Right Grant
- 1998-08-11 CA CA002300208A patent/CA2300208C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-08-11 RS YUP-72/00A patent/RS49692B/sr unknown
- 1998-08-11 JP JP2000509431A patent/JP4387586B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-11 EA EA200000212A patent/EA003090B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 KR KR1020007001459A patent/KR100544376B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 CN CNB988101254A patent/CN1192099C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-08-11 SK SK186-2000A patent/SK282917B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 BR BRPI9811936-2A patent/BR9811936B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 DE DE69809434T patent/DE69809434T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-11 CZ CZ20000418A patent/CZ298654B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 EE EEP200000078A patent/EE04222B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 KR KR1020057013782A patent/KR100544377B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 ID IDW20000424A patent/ID25515A/id unknown
- 1998-08-11 IL IL13449398A patent/IL134493A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 ME MEP-2000-72A patent/ME00638B/me unknown
- 1998-08-11 GE GEAP19985247A patent/GEP20032988B/en unknown
- 1998-08-11 AT AT98940483T patent/ATE227580T1/de active
- 1998-08-11 PT PT98940483T patent/PT1003536E/pt unknown
- 1998-08-11 EP EP98940483A patent/EP1003536B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-11 YU YU7200A patent/YU7200A/sh unknown
- 1998-08-11 AU AU88802/98A patent/AU754815B2/en not_active Ceased
- 1998-08-11 SK SK182-2000A patent/SK1822000A3/sk unknown
- 1998-08-11 DK DK98940483T patent/DK1003536T3/da active
- 1998-08-11 WO PCT/HU1998/000077 patent/WO1999008694A1/en active IP Right Grant
- 1998-08-11 TR TR2000/00404T patent/TR200000404T2/xx unknown
- 1998-08-11 PL PL338891A patent/PL191414B1/pl unknown
- 1998-08-11 ES ES98940483T patent/ES2186208T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-13 US US09/485,221 patent/US6355474B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-11-08 UA UA2000020979A patent/UA67747C2/uk unknown
-
2000
- 2000-02-10 NO NO20000675A patent/NO323562B1/no not_active IP Right Cessation
- 2000-03-06 BG BG104220A patent/BG64038B1/bg unknown
-
2001
- 2001-06-05 HK HK01103870A patent/HK1033097A1/xx unknown
-
2009
- 2009-07-21 JP JP2009170505A patent/JP4861458B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-08-01 JP JP2011168726A patent/JP4886087B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ285508B6 (cs) * | 1993-08-09 | 1999-08-11 | Edward Baral | Použití trifenylethylenových antiestrogenů pro zvyšování citlivosti rakovinných buněk k lyzi zprostředkované zabíječskými buňkami |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ298654B6 (cs) | Fermentovaný a vysušený rostlinný materiál, zpusob jeho prípravy, farmaceutický výrobek, dietní doplnek a použití vysušeného rostlinného materiálu | |
| EP0925068B1 (en) | Use of a pharmaceutical composition containing polyphenols from grapes or from wine, in particular resveratrol, and yeast extracts | |
| KR101409194B1 (ko) | 에쿠올 농도 조절제 | |
| EP1997501B1 (en) | Isoteupolioside and uses | |
| JP6192167B2 (ja) | 発酵食品抽出組成物 | |
| US20100240603A1 (en) | Expression inhibitor of nuclear transcription factor ap-1 and pharmaceuticals and products using the same | |
| WO1998056755A1 (fr) | Substances physiologiquement actives tkr2449, leur procede de preparation et micro-organisme | |
| US6616928B1 (en) | Active oxygen scavenger and cancer chemopreventer from Grifola | |
| RU2735829C1 (ru) | Антимикробное средство на основе лишайника ягеля рода cladonia rangiferina и способ его получения | |
| JP4614158B2 (ja) | 新規セスキテルペン系化合物及びその製造方法 | |
| MXPA00001557A (en) | Immunostimulatory and metastasis inhibiting fermented vegetal material | |
| JPH11217336A (ja) | 抗アレルギー剤、活性酸素消去作用剤 | |
| WO2024076227A1 (es) | Proceso para la obtención de sustratos con actividad terapéutica a partir del género pleurotus y composiciones que los comprenden | |
| JPH02218611A (ja) | ニユーモシステイス・カリニイの抑制方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20160811 |