TWI537271B - 經取代之嘌呤和７－去氮雜嘌呤化合物類 - Google Patents

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Description

經取代之嘌呤和7-去氮雜嘌呤化合物類 相關申請案
本申請案主張2010年12月3申請之美國臨時申請案第61/419,661號之優先權及權益，藉由引用方式將其全文併入本文。
本發明關於經取代之嘌呤和7-去氮雜嘌呤化合物類。
於真核細胞中，DNA係以組蛋白包封而形成染色質。大約150對的DNA鹼基對繞組蛋白的八聚物(組蛋白2A、2B、3以及4各兩個)兩次以形成核小體，其係染色質的基本單位。染色質順序的結構變化可能造成相關基因的轉錄改變。此過程係經高度控制，因為基因表現模式改變可能顯著影響基礎細胞程序，諸如諸如分化、增殖、以及細胞凋亡。控制染色質結構(以及轉錄)的變化係由對組蛋白之共價修飾來調解，尤其著名的為彼之N-端尾修飾。此等修飾通常表後生的，因其可能造成遺傳性的基因表現改變，但不影響自身之DNA序列。胺基酸側鏈之共價修飾(例如，甲基化、乙醯化、磷酸化，以及泛素化)係酵素性地調解。
選擇性添加甲基團至組蛋白的特定胺基酸位置係由獨特酵素家族，組蛋白甲基轉移酵素(HMT)，的作用來控制 。特別基因的表現程度受到相關的組蛋白位置是否存在甲基團的影響。位於特別組蛋白位置之甲基團的特殊效果持續，直至甲基團被組蛋白去甲基酶移除，或直至經修飾的組蛋白因核小體轉換(turnover)而被置換。以類似的方式，其他酵素類別可利用其他化學物質修飾DNA以及組蛋白，以及又其他酵素可移除這些物質以提供基因表現的暫時性控制。
用於轉錄調節之協調的生化系統集合必須受到嚴密的控制以供最佳化地進行細胞生長以及分化。當因異常的表現及/或針對DNA以及組蛋白修飾之酵素的活性打斷這些控制時造成疾病狀態。於人的癌症中，例如，有漸增人體證據指出失調之表觀遺傳酵素活性造成了不受控制的細胞增殖(與癌症相關及其他癌症-相關的表現型，諸如增加的細胞遷移及侵入)。除癌症外，漸增的證據指出表觀遺傳酵素於許多其他的人疾病中，包括代謝性疾病(諸如糖尿病)、發炎性疾病(諸如克隆氏症)、神經退化性疾病(諸如阿茲海默症)以及心血管疾病，扮演重要角色。因此選擇性地調控表觀遺傳酵素的異常行為能有效治療許多疾病。
因而，持續性需要能調控表觀遺傳酵素異常作用之新劑。本發明提供符合此需求之化合物。
本發明提供有用於調控表觀遺傳酵素異常作用的化合物。本發明亦提供此等化合物之醫藥上可接受的鹽類、酯 類以及/或N-氧化物。
於一面向中，本發明之特徵為下式(I)之經取代之嘌呤或7-去氮雜嘌呤化合物或彼之醫藥上可接受的鹽或酯。
於此式中，A為O或CH2；G及J各獨立地為H、鹵基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基或ORa，Ra為H、C1-C6烷基或C(O)-C1-C6烷基，其中C(O)O-C1-C6烷基、C1-C6烷基或C(O)-C1-C6烷基係任意地經一或更多選自由鹵基、氰基羥基、羧基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基以及C3-C8環烷基所組成的群組之取代基所取代；Q為H、NH2、NHRb、NRbRc、OH、Rb或ORb，其中Rb以及Rc各獨立地為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至7員雜環烷基、5至10員雜芳基或-M1-T1，其中M1為鍵結或任意地經鹵基、氰基、羥基或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基聯結以及T1為C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至10員雜芳基，或Rb以及Rc連同彼等所附接的N原子一起形成具有0或1個另外的雜原子連接至N原子的4至7員 雜環烷基，其任意地經C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜選自由環烷基或5至6員雜芳基取代，以及Rb、Rc，以及T1各任意地經一或更多C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代；X為N或CRx，其中Rx為H、鹵基、羥基、羧基、氰基或RS1，RS1為胺基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基，以及RS1任意地經任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代；L1為N(Y)、S、SO或SO2；當L1為N(Y)時L2為CO或不存在，或當L1為S、SO或SO2時L2不存在，其中當L2不存在時Y為H、Rd、SO2Rd或CORd，或當L2為CO時Y為H或Rd，Rd為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基，以及Rd為任 意地經一或更多選自由C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺醯基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基所取代，以及C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基係進一步任意地經C1-C6烷基、-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基所取代；R1、R2、R3、R4、R5、R6及R7各獨立地為H、鹵基、羥基、羧基、氰基、RS2，RS2為胺基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，以及RS2各任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基所取代；R8為H、鹵基或RS3，RS3為C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，以及RS3任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基胺基、C1-C6烷氧基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基以及C3-C8環烷基所組成的群組之取代基所取代； R9為，，或，其中Re、Rf、Rg以及Rh，各獨立地為-M2-T2，其中M2為鍵結、SO2、SO、S、CO、CO2、O、O-C1-C4烷基聯結、C1-C4烷基聯結、NH或N(Rt)，Rt為C1-C6烷基，以及T2為H、鹵基或RS4，RS4為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至8員雜環烷基或5至10員雜芳基，以及O-C1-C4烷基聯結、C1-C4烷基聯結、Rt以及RS4各任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代，Ri為H或任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基所取代的C1-C6烷基，D為O、NRj或CRjRk，Rj及Rk各獨立地為H或C1-C6烷基，或Rj以及Rk與彼等所附接的碳原子一起形成C3-C10環烷基環，以及E為-M3-T3，M3為鍵結或任意地經鹵基或氰基取代的C1-C6烷基聯結，T3為C3-C10環烷基、C6-C10芳基、5至10員雜芳基或4至10員雜環烷基，以及T3任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、硫基、羧基、氰基、 硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵基烷基、C1-C6鹵基烷氧基、C1-C6烷基硫基、C1-C6烷基磺醯基、C1-C6鹵基烷基磺醯基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧羰基、側氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C4-C12烷基環烷基、C6-C10芳基、C6-C10芳基氧基、C7-C14烷基芳基、C6-C10胺基芳基氧基、C6-C10芳基硫基、任意地經鹵基、C1-C4烷基、C1-C4鹵基烷基取代的4至6員雜環烷基、任意地經鹵基、C1-C4烷基取代的5至6員雜芳基所組成的群組之取代基所取代，以及經羥基、鹵基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧羰基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基係任意地進一步經鹵基、羥基或C1-C6烷氧基所取代；q為0、1、2、3或4；m為0、1或2；以及n為0、1或2。
式(I)化合物的子集包括式(II)化合物：
式(I)化合物的另一個子集包括式(IIIa)、(IIIb)或(IIIc)化合物：
式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)及(IV)化合物可包括以下一或更多特點。
m以及n之和至少為1。
m為1或2以及n為0。
m為2以及n為0。
A為CH2。
A為O。
L1為N(Y)。
L1為SO或SO2。
Y為Rd。
Rd為C1-C6烷基。
L2不存在。
Re、Rf、Rg以及Rh之至少一者為鹵基(諸如F、Cl及Br)、任意地經一或更多鹵基(諸如OCH3、OCH2CH3、O-iPr以及OCF3)取代的C1-C6烷氧基、任意地經一或更多鹵基(諸如SO2CF3)取代的C1-C6烷基磺醯基或任意地經一或更多鹵基(諸如CH3、i-Pr、t-Bu以及CF3)取代的C1-C6烷基。
Ri為H或C1-C6烷基。
R9為。
D為O。
D為NRj，如NH。
D為CRjRk，如CH2、CHCH3或C(CH3)2。
E為-M3-T3，其中M3為鍵結或C1-C3烷基聯結，T3為苯基、萘基、噻吩基、環丙基或環己基，以及T3任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、硫基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵基烷基、C1-C6鹵基烷氧基、C1-C6烷基硫基、C1-C6烷基磺醯基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧羰基、側氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C4-C12烷基環烷基、C6-C10芳基、C6-C10芳基氧基、C7-C14烷基芳基、C6-C10胺基芳基氧基、C6-C10芳基硫基、任意地經C1-C4烷基取代的4至6員雜環烷基、任意地經C1-C4烷基取代的5至6員雜芳基所組成 的群組之取代基取代，以及經羥基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧羰基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基。
T3為苯基，其係任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵基烷基、C1-C6鹵基烷氧基、C1-C6烷基磺醯基、C6-C10芳基及C6-C10芳基氧基以及C7-C14烷基芳基所組成的群組所取代。
X為N。
X為CRx，如CH。
Q為NH2或NHRb，其中Rb為-M1-T1，M1為鍵結或C1-C6烷基聯結，以及T1為C3-C8環烷基。
Q為H。
R9為或。
Re、Rf、Rg，以及Rh中至少一者係選自由F、Cl、CF3、OCF3、SO2CF3、C1-C4烷基以及C1-C4烷氧基所組成的群組。
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7以及R8各為H。
本發明亦關於式(IV)化合物或彼之N-氧化物或醫藥上可接受的鹽： 其中，A為O或CH2；Q為H、NH2、NHRb、NRbRc、OH、Rb或ORb，其中Rb以及Rc各獨立地為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至7員雜環烷基、5至10員雜芳基或-M1-T1，其中M1為鍵結或任意地經鹵基、氰基、羥基或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基聯結以及T1為C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至10員雜芳基，或Rb以及Rc連同彼等所附接的N原子一起形成具有0或1個另外的雜原子連接至N原子的4至7員雜環烷基，其任意地經C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜選自由環烷基或5至6員雜芳基取代，以及Rb、Rc，以及T1各任意地經一或更多C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代；X為N或CRx，其中Rx為H、鹵基、羥基、羧基、氰基或 RS1，RS1為胺基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基，以及RS1任意地經任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代；Y為H、Rd、SO2Rd或CORd，Rd為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基，以及Rd任意地經一或更多選自由C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、氰基、Cl-C6烷氧基、C1-C6烷基磺醯基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基所取代，以及C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基係進一步任意地經C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基所取代；R1及R2各獨立地為H、鹵基、羥基、羧基、氰基、RS2，RS2為胺基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，以及各RS2任意地經一或更多選自鹵基、羥基、 羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基之取代基所取代；Re、Rf、Rg以及Rh各獨立地為-M2-T2，其中M2為鍵結、SO2、SO、S、CO、CO2、O、O-C1-C4烷基聯結、C1-C4烷基聯結、NH或N(Rt)，Rt為C1-C6烷基，以及T2為H、鹵基或RS4，RS4為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至8員雜環烷基或5至10員雜芳基，以及O-C1-C4烷基聯結、C1-C4烷基聯結、Rt以及RS4各任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代，以及m為0、1或2。
例如，A為O。於式(IV)之特定的化合物中，A為O以及m為2。
於式(IV)之特定的化合物中，X為N。
例如，於特定的化合物中，Q為NH2或NHRb，其中Rb為-M1-T1，M1為鍵結或C1-C6烷基聯結以及T1為C3-C8環烷基。
例如，於式(IV)之特定的化合物中，R1以及R2各為H。
於式(IV)之特定的化合物中，Y為Rd。例如，Rd為任 意地經C3-C8環烷基或鹵基取代的C1-C6烷基。例如，Rd為任意地經C1-C6烷基或鹵基取代的C3-C8環烷基。
本發明亦關於一種式(IV)化合物，其中Re、Rf、Rg以及Rh中之至少一者為鹵基、任意地經一或更多鹵基取代的C1-C6烷氧基；任意地經一或更多鹵基取代的C1-C6烷基磺醯基；任意地經一或更多選自由CN、鹵基、C3-C8環烷基、羥基以及C1-C6烷氧基所組成的群組之取代基所取代的C1-C6烷基；任意地經一或更多C1-C6烷基或CN取代的C3-C8環烷基；或任意地經一或更多選自CN、鹵基、羥基、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基之取代基所取代的4至8員雜環烷基。例如，式(IV)化合物之至少一個Re、Rf、Rg以及Rh係選自F；Cl；Br；CF3；OCF3；SO2CF3；任意地經一或更多CN、鹵基、羥基、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基所取代的氧雜環丁基(oxetanyl)；任意地經一或更多選自C1-C4烷基之取代基所取代的C3-C8環烷基；以及任意地經一或更多選自鹵基、C3-C8環烷基、羥基或C1-C6烷氧基之取代基所取代的C1-C4烷基。
例如，本發明關於式(IV)化合物，其中Rf以及Rg之至少一者為任意地經羥基取代的烷基。例如，本發明關於一化合物，其中Rf以及Rg之至少一者為經羥基取代的第三丁基。
本發明關於選自化合物1-140之化合物。本發明亦關於選自化合物1-140之化合物之鹽。本發明亦關於選自化合物1-140之化合物之N-氧化物。本發明亦關於選自化合 物1-140之化合物之N-氧化物之鹽。例如，本發明關於選自化合物1-7、9-109以及111-140之化合物。
本發明亦關於包含治療上有效含量之式(IV)化合物及醫藥上可接受的載體的醫藥組成物。
本發明亦關於包含治療上有效含量之式(IV)化合物之鹽及醫藥上可接受的載體的醫藥組成物。
本發明亦關於包含治療上有效含量之式(IV)化合物之水合物及醫藥上可接受的載體的醫藥組成物。
本發明亦關於包含治療上有效含量之選自化合物1-140之化合物以及醫藥上可接受的載體之醫藥組成物。本發明亦關於包含治療上有效含量之選自化合物1-140之化合物之鹽以及醫藥上可接受的載體之醫藥組成物。本發明亦關於包含治療上有效含量之選自化合物1-140之化合物之N-氧化物以及醫藥上可接受的載體之醫藥組成物。本發明亦關於包含治療上有效含量之選自化合物1-140之化合物之醫之N-氧化物以及醫藥上可接受的載體之醫藥組成物。本發明亦關於包含治療上有效含量之選自化合物1-140之化合物之水合物以及醫藥上可接受的載體之醫藥組成物。
本發明提供一種醫藥組成物，其包含式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物之一或多者以及一或多種醫藥上可接受的載體。
本發明提供治療或預防癌症的方法。本發明提供治療癌症的方法。本發明亦提供預防癌症的方法。方法包括投 予治療上有效含量之式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)或(IIIc)化合物至有需要的個體。癌症可為血液癌症。較佳地，癌症為白血病。更佳地，癌症為急性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病或混合細胞系白血病。
本發明提供治療或預防由染色體11q23上之基因轉位所媒介的疾病或病症的方法。本發明提供治療由染色體11q23上之基因轉位所媒介的疾病或病症的方法。本發明亦提供預防由染色體11q23上之基因轉位所媒介的疾病或病症的方法。此方法包括投予治療上有效含量之之式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物至有需要的個體。
本發明提供治療或預防部分由於DOT1L-中介的蛋白質甲基化而媒介之疾病或病症或是由於DOT1L-中介的蛋白質甲基化而媒介之疾病或病症的方法。本發明提供治療部分由於DOT1L-中介的蛋白質甲基化而媒介之疾病或病症或是由於DOT1L-中介的蛋白質甲基化而媒介之疾病或病症的方法。本發明亦提供預防部分由於DOT1L-中介的蛋白質甲基化而媒介之疾病或病症或是由於DOT1L-中介的蛋白質甲基化而媒介之疾病或病症的方法。此方法包括投予治療上有效含量之式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物至有需要的個體。
本發明提供抑制細胞中DOT1L活性的方法。此方法包括令細胞與有效量之一或多種式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物接觸。
本發明之又一面向關於降低細胞中之組蛋白H3離胺酸殘基79(H3-K79)之甲基化程度。此方法可經由H3-K79甲基化來改善因DOT1活性引起或可能引起的任何症狀。
本發明關於本文所揭露的化合物於製備用於治療或預防癌症之藥物上之用途。用途包括投予治療上有效量之式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物至有需要的個體。癌症可為血液癌症。較佳地，癌症為白血病。更佳地，癌症為急性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病或混合細胞系白血病。
本發明關於本文所揭露的化合物於製備用於治療或預防由染色體11q23上之基因轉位所媒介的疾病或病症之藥物上之用途。用途包括投予治療上有效量之式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物至有需要的個體。
本發明關於本文所揭露的化合物於製備用於治療或預防部分由於DOT1L-中介的蛋白質甲基化而媒介之疾病或病症或是由於DOT1L-中介的蛋白質甲基化而媒介之疾病或病症之藥物上之用途。用途包括投予治療上有效量之式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物至有需要的個體。
本發明提供本文所揭露的化合物於抑制細胞中DOT1L活性上之用途。用途包括令細胞與有效量之一或多種式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物接觸。
本發明之再一面向關於本文所揭露的化合物於降低細胞中之組蛋白H3離胺酸殘基79(H3-K79)之甲基化程度上 之用途。用途包括令細胞與本發明化合物接觸。此用途可經由H3-K79甲基化來改善因DOT1活性引起或可能引起的任何症狀。
於本文之式中，可自以下發明詳細說明所定義者中選擇化學部分體的個別基團。
此外，本發明提供合成前述化合物之方法。經以下合成，治療上有效含量之一或多種化合物可與醫藥上可接受的載體一起被調製而用於投予至哺乳動物，尤其是人，以調控表觀遺傳酵素。於特定具體實施例中，本發明之化合物有用於治療、預防或降低癌症的風險，或有用於製造用於治療、預防或降低癌症的風險之藥物。因此，化合物或調製物可例如經口、非經腸道、經耳、經眼、經鼻或經局部途徑，而被投予以提供有效量之化合物予哺乳動物。
除非另行定義，本文所使用之所有技術及科學術語與本發明所屬技術領域之熟悉技藝者通常理解之意義相同。於說明書中，單數型亦包括複數意義，除非文意另行清楚指明。雖然類似於本文所述的方法及材料或等效物可用來實現或測試本發明，於以下將說明適合的方法及材料。藉引用方式將本文提及之所有出版品、專利申請案、專利及其他參考文獻併入本文。本文所引用的參考文獻並非所請發明之先前技術。若內容衝突時，將以本文的說明書為主，包括其定義。此外，材料、方法以及實例係僅用於說明而非限制。
由以下詳細說明及申請專利範圍將顯明本發明之其他 特徵及優點。
發明詳細說明
本發明提供可用於選擇性調控表觀遺傳酵素之異常行為之化合物家族。進一步地，化合物可用於治療或預防由表觀遺傳酵素之異常行為所引起或媒介的哺乳動物之疾病狀態。本發明包括這些化合物之醫藥上可接受的鹽類、酯類、互變異構物以及N-氧化物。
本發明提供新穎的經取代之嘌呤和7-去氮雜嘌呤化合物、用於製造化合物之合成方法、含有彼之醫藥組成物及化合物之其他用途。
1.經取代之嘌呤化合物和經取代的7-去氮雜嘌呤化合物本發明提供式(I)化合物： 或彼之醫藥上可接受的鹽或酯，其中：A為O或CH2；G及J各獨立地為H、鹵基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基或ORa，Ra為H、C1-C6烷基或C(O)-C1-C6烷基，其 中C(O)O-C1-C6烷基、C1-C6烷基或C(O)-C1-C6烷基係任意地經一或更多選自由鹵基、氰基羥基、羧基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基以及C3-C8環烷基所組成的群組之取代基所取代；Q為H、NH2、NHRb、NRbRc、OH、Rb或ORb，其中Rb以及Rc各獨立地為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至7員雜環烷基、5至10員雜芳基或-M1-T1，其中M1為鍵結或任意地經鹵基、氰基、羥基或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基聯結以及T1為C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至10員雜芳基，或Rb以及Rc連同彼等所附接的N原子一起形成具有0或1個另外的雜原子連接至N原子的4至7員雜環烷基，其任意地經C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜選自由環烷基或5至6員雜芳基取代，以及Rb、Rc，以及T1各任意地經一或更多C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代；X為N或CRx，其中Rx為H、鹵基、羥基、羧基、氰基或RS1，RS1為胺基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6 烯基C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基，以及RS1任意地經任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代；L1為N(Y)、S、SO或SO2；當L1為N(Y)時L2為CO或不存在，或當L1為S、SO或SO2時L2不存在，其中當L2不存在時Y為H、Rd、SO2Rd或CORd，或當L2為CO時Y為H或Rd，Rd為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基，以及Rd為任意地經一或更多選自由C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺醯基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基所取代，以及C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基係進一步任意地經C1-C6烷基、-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基所取代；R1、R2、R3、R4、R5、R6及R7各獨立地為H、鹵基 、羥基、羧基、氰基、RS2，RS2為胺基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，以及RS2各任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基所取代；R8為H、鹵基或RS3，RS3為C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，以及RS3任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基胺基、C1-C6烷氧基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基以及C3-C8環烷基所組成的群組之取代基所取代；Ro為，，或，其中Re、Rf、Rg以及Rh，各獨立地為-M2-T2，其中M2為鍵結、SO2、SO、S、CO、CO2、O、O-C1-C4烷基聯結、C1-C4烷基聯結、NH或N(Rt)，Rt為C1-C6烷基，以及T2為H、鹵基或RS4，RS4為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至8員雜環烷基或5至10員雜芳基，以及O-C1-C4烷基聯結、C1-C4烷基聯結、Rt以及RS4各任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以 及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代，Ri為H或任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基所取代的C1-C6烷基，D為O、NRj或CRjRk，Rj及Rk各獨立地為H或C1-C6烷基，或Rj以及Rk與彼等所附接的碳原子一起形成C3-C10環烷基環，以及E為-M3-T3，M3為鍵結或任意地經鹵基或氰基取代的C1-C6烷基聯結，T3為C3-C10環烷基、C6-C10芳基、5至10員雜芳基或4至10員雜環烷基，以及T3任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、硫基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵基烷基、C1-C6鹵基烷氧基、C1-C6烷基硫基、C1-C6烷基磺醯基、C1-C6鹵基烷基磺醯基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧羰基、側氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C4-C12烷基環烷基、C6-C10芳基、C6-C10芳基氧基、C7-C14烷基芳基、C6-C10胺基芳基氧基、C6-C10芳基硫基、任意地經鹵基、C1-C4烷基、C1-C4鹵基烷基取代的4至6員雜環烷基、任意地經鹵基、C1-C4烷基取代的5至6員雜芳基所組成的群組之取代基所取代，以及經羥基、鹵基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧羰基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基係任意地進一步經鹵基、羥基或C1-C6烷氧基所取代；q為0、1、2、3或4； m為0、1或2；以及n為0、1或2。
例如，m以及n之和為至少1。
例如，m為1或2以及n為0。
例如，m為2以及n為0。
例如，A為CH2。
例如，A為O。
例如，L1為N(Y)。
例如，L1為SO或SO2。
例如，Y為Rd。
例如，Rd為C1-C6烷基。
例如，L2係不存在。
例如，G以及J個獨立地為ORa。
例如，Ra為H。
例如，R9為。例如，R9為。
例如，Re、Rf、Rg以及Rh之至少一者為鹵基(諸如F、Cl及Br)、任意地經一或更多鹵基(諸如OCH3、OCH2CH3、O-iPr以及OCF3)取代的C1-C6烷氧基、任意地經一或更多鹵基(諸如SO2CF3)取代的C1-C6烷基磺醯基或任意地經一或更多鹵基(諸如CH3、異丙基、正丁基以及CF3)取代的C1-C6烷基。
例如，Ri為H或C1-C6烷基(如，甲基、乙基、正丙 基、異丙基、正丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、第二戊基以及正己基)。
例如，為未經取代的苯并咪唑基或以下基團之一：
例如，R9為。
例如，D為O。
例如，D為NRj。
例如，Rj為H。
例如，D為CRjRk。
例如，Rj以及Rk各為H。
例如，E為-M3-T3，其中M3為鍵結或C1-C3烷基聯結，T3為苯基、萘基、噻吩基、環丙基或環己基，以及T3任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、硫基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵基烷基、C1-C6鹵基烷氧基、C1-C6烷基硫基、C1-C6烷基磺醯基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧羰基、側氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C4-C12烷基環烷基、C6-C10芳基、C6-C10芳基氧基、C7-C14烷基芳基、C6-C10胺基芳基氧基、C6-C10芳基硫基、任意地經C1-C4烷基取代的4至6員雜環烷基、任意地經C1-C4烷基取代的5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代，以及經羥基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧羰基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基。
例如，T3為苯基，其係任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基(如，甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、第二戊基以及正己基)、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵基烷 基、C1-C6鹵基烷氧基、C1-C6烷基磺醯基、C6-C10芳基(如，苯基或萘基)及C6-C10芳基氧基以及C7-C14烷基芳基所組成的群組所取代。
例如，E為
例如，X為N。
例如，X為CRx。
例如，X為CH。
例如，Q為NH2或NHRb，其中Rb為-M1-T1，M1為鍵結或C1-C6烷基聯結，以及T1為C3-C8環烷基。
例如，Q為H。
例如，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7以及R8各為H。
例如，當R8為鹵基且附接至與J相同之碳原子時，J不為羥基。
例如，當R8為鹵基且附接至與G相同之碳原子時，G不為羥基。
例如，當M2為SO2、SO、S、CO或O時，T2不為鹵基。
例如，T2為經由雜原子而鍵結至M2之4-8員雜環烷基。
例如，T2為經由N原子而鍵結至M2之4-8員雜環烷 基。
例如，T2為經由C原子而鍵結至M2之4-8員雜環烷基。
本發明提供式(II)化合物： 或彼之醫藥上可接受的鹽或酯，其中：A為O或CH2；Q為H、NH2、NHRb、NRbRc、OH、Rb或ORb，其中Rb以及Rc各獨立地為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至7員雜環烷基、5至10員雜芳基或-M1-T1，其中M1為鍵結或任意地經鹵基、氰基、羥基或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基聯結以及T1為C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至10員雜芳基，或Rb以及Rc連同彼等所附接的N原子一起形成具有0或1個另外的雜原子連接至N原子的4至7員雜環烷基，其任意地經C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜選自由環烷基或5至6員雜芳基取代，以及Rb、Rc，以及T1各任意地經一或更多C1-C6烷基、C2- C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代；X為N或CRx，其中Rx為H、鹵基、羥基、羧基、氰基或RS1，RS1為胺基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基，以及RS1任意地經任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代；L1為N(Y)、S、SO或SO2；當L1為N(Y)時L2為CO或不存在，或當L1為S、SO或SO2時L2不存在，其中當L2不存在時Y為H、Rd、SO2Rd或CORd，或當L2為CO時Y為H或Rd，Rd為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基，以及Rd為任意地經一或更多選自由C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺醯基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基所取代，以及C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基係 進一步任意地經C1-C6烷基、-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基所取代；R1、R2、R3、R4、R5、R6及R7各獨立地為H、鹵基、羥基、羧基、氰基、RS2，RS2為胺基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，以及RS2各任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基所取代；R8為H、鹵基或RS3，RS3為C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，以及RS3任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基胺基、C1-C6烷氧基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基以及C3-C8環烷基所組成的群組之取代基所取代；R9為，或，其中Re、Rf、Rg以及Rh，各獨立地為-M2-T2，其中M2為鍵結、SO2、SO、S、CO、CO2、O、O-C1-C4烷基聯結、C1-C4烷基聯結、NH或N(Rt)，Rt為C1-C6烷基，以及T2為H、鹵基或RS4，RS4為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至8員雜環烷基或5至10 員雜芳基，以及O-C1-C4烷基聯結、C1-C4烷基聯結、Rt以及RS4各任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代，Ri為H或任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基所取代的C1-C6烷基，D為O、NRj或CRjRk，Rj及Rk各獨立地為H或C1-C6烷基，或Rj以及Rk與彼等所附接的碳原子一起形成C3-C10環烷基環，以及E為-M3-T3，M3為鍵結或任意地經鹵基或氰基取代的C1-C6烷基聯結，T3為C3-C10環烷基、C6-C10芳基、5至10員雜芳基或4至10員雜環烷基，以及T3任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、硫基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵基烷基、C1-C6鹵基烷氧基、C1-C6烷基硫基、C1-C6烷基磺醯基、C1-C6鹵基烷基磺醯基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧羰基、側氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C4-C12烷基環烷基、C6-C10芳基、C6-C10芳基氧基、C7-C14烷基芳基、C6-C10胺基芳基氧基、C6-C10芳基硫基、任意地經鹵基、C1-C4烷基、C1-C4鹵基烷基取代的4至6員雜環烷基、任意地經 鹵基、C1-C4烷基取代的5至6員雜芳基所組成的群組之取代基所取代，以及經羥基、鹵基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧羰基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基係任意地進一步經鹵基、羥基或C1-C6烷氧基所取代；q為0、1、2、3或4；m為0、1或2；以及n為0、1或2。
例如，m以及n之和為至少1。
例如，m為1或2以及n為0。
例如，m為2以及n為0。
例如，A為CH2。
例如，A為O。
例如，L1為N(Y)。
例如，L1為SO或SO2。
例如，Y為Rd。
例如，Rd為C1-C6烷基。
例如，L2係不存在。
例如，R9為。例如，R9為。
例如，Re、Rf、Rg以及Rh之至少一者為鹵基(諸如F、Cl及Br)、任意地經一或更多鹵基(諸如OCH3、OCH2CH3、O-iPr以及OCF3)取代的C1-C6烷氧基、任意地 經一或更多鹵基(諸如SO2CF3)取代的C1-C6烷基磺醯基或任意地經一或更多鹵基(諸如CH3、i-Pr、t-Bu以及CF3)取代的C1-C6烷基。
例如，Ri為H或C1-C6烷基(如，甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、第二戊基或正己基)。
例如，為未經取代的苯并咪唑基以下基團之一：
例如，R9為。
例如，D為O。
例如，D為NRj。
例如，Rj為H。
例如，D為CRjRk。
例如，Rj以及Rk各為H。
例如，E為-M3-T3，其中M3為鍵結或C1-C3烷基聯結，T3為苯基、萘基、噻吩基、環丙基或環己基，以及T3任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、硫基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵基烷基、C1-C6鹵基烷氧基、C1-C6烷基硫基、C1-C6烷基磺醯基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧羰基、側氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C4-C12烷基環烷基、C6-C10芳基、C6-C10芳基氧基、C7-C14烷基芳基、C6-C10胺基芳基氧基、C6-C10芳基硫基、任意地經C1-C4烷基取代的4至6員雜環烷基、任意地經C1-C4烷基取代的5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代，以及經羥基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧羰基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環 烷基或5至6員雜芳基。
例如，T3為苯基，其係任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基(如，甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、第二戊基以及正己基)、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵基烷基、C1-C6鹵基烷氧基、C1-C6烷基磺醯基、C6-C10芳基(如，苯基或萘基)及C6-C10芳基氧基以及C7-C14烷基芳基所組成的群組所取代。
例如，E為
例如，X為N。
例如，X為CRx。
例如，X為CH。
例如，Q為NH2或NHRb，其中Rb為-M1-T1，M1為鍵結或C1-C6烷基聯結，以及T1為C3-C8環烷基。
例如，Q為H。
例如，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7以及R8各為H。
例如，當R8為鹵基且附接至與J相同之碳原子時，J 不為羥基。
例如，當R8為鹵基且附接至與G相同之碳原子時，G不為羥基。
例如，當M2為SO2、SO、S、CO或O時，T2不為鹵基。
例如，T2為經由雜原子而鍵結至M2之4-8員雜環烷基。
例如，T2為經由N原子而鍵結至M2之4-8員雜環烷基。
例如，T2為經由C原子而鍵結至M2之4-8員雜環烷基。
本發明提供式(IIIa)或(IIIb)化合物： 彼之醫藥上可接受的鹽或酯，其中：A為O或CH2；G及J各獨立地為H、鹵基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基或ORa，Ra為H、C1-C6烷基或C(O)-C1-C6烷基，其 中C(O)O-C1-C6烷基、C1-C6烷基或C(O)-C1-C6烷基係任意地經一或更多選自由鹵基、氰基羥基、羧基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基以及C3-C8環烷基所組成的群組之取代基所取代；Q為H、NH2、NHRb、NRbRc、OH、Rb或ORb，其中Rb以及Rc各獨立地為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至7員雜環烷基、5至10員雜芳基或-M1-T1，其中M1為鍵結或任意地經鹵基、氰基、羥基或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基聯結以及T1為C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至10員雜芳基，或Rb以及Rc連同彼等所附接的N原子一起形成具有0或1個另外的雜原子連接至N原子的4至7員雜環烷基，其任意地經C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜選自由環烷基或5至6員雜芳基取代，以及Rb、Rc，以及T1各任意地經一或更多C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代；X為N或CRx，其中Rx為H、鹵基、羥基、羧基、氰基或RS1，RS1為胺基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6 烯基C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基，以及RS1任意地經任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代；L1為N(Y)、S、SO或SO2；當L1為N(Y)時L2為CO或不存在，或當L1為S、SO或SO2時L2不存在，其中當L2不存在時Y為H、Rd、SO2Rd或CORd，或當L2為CO時Y為H或Rd，Rd為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基，以及Rd為任意地經一或更多選自由C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺醯基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基所取代，以及C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基係進一步任意地經C1-C6烷基、-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基所取代；R1、R2、R3、R4、R5、R6及R7各獨立地為H、鹵基 、羥基、羧基、氰基、RS2，RS2為胺基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，以及RS2各任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基所取代；R8為H、鹵基或RS3，RS3為C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，以及RS3任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基胺基、C1-C6烷氧基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基以及C3-C8環烷基所組成的群組之取代基所取代；Re、Rf、Rg以及Rh，各獨立地為-M2-T2，其中M2為鍵結、SO2、SO、S、CO、CO2、O、O-C1-C4烷基聯結、C1-C4烷基聯結、NH或N(Rt)，Rt為C1-C6烷基，以及T2為H、鹵基或RS4，RS4為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至8員雜環烷基或5至10員雜芳基，以及O-C1-C4烷基聯結、C1-C4烷基聯結、Rt以及RS4各任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代，Ri為H或任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二- C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基所取代的C1-C6烷基；q為0、1、2、3或4；m為0、1或2；以及n為0、1或2。
例如，m以及n之和為至少1。
例如，m為1或2以及n為0。
例如，m為2以及n為0。
例如，A為CH2。
例如，A為O。
例如，L1為N(Y)。
例如，L1為SO或SO2。
例如，Y為Rd。
例如，Rd為C1-C6烷基。
例如，L2係不存在。
例如，G以及J各獨立地為ORa。
例如，Ra為H。
例如，Re、Rf、Rg以及Rh之至少一者為鹵基(諸如F、Cl及Br)、任意地經一或更多鹵基(諸如OCH3、OCH2CH3、O-iPr以及OCF3)取代的C1-C6烷氧基、任意地經一或更多鹵基(諸如SO2CF3)取代的C1-C6烷基磺醯基或任意地經一或更多鹵基(諸如CH3、異丙基、正丁基以及CF3)取代的C1-C6烷基。
例如，Ri為H或C1-C6烷基(如，甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、第二戊基或正己基)。
例如，為未經取代的苯并咪唑基或以下基團之一：
例如，X為N。
例如，X為CRx。
例如，X為CH。
例如，Q為NH2或NHRb，其中Rb為-M1-T1，M1為鍵結或C1-C6烷基聯結，以及T1為C3-C8環烷基。
例如，Q為H。
例如，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7以及R8各為H。
例如，當R8為鹵基且附接至與J相同之碳原子時，J不為羥基。
例如，當R8為鹵基且附接至與G相同之碳原子時，G不為羥基。
例如，當M2為SO2、SO、S、CO或O時，T2不為鹵基。
例如，T2為經由雜原子而鍵結至M2之4-8員雜環烷基。
例如，T2為經由N原子而鍵結至M2之4-8員雜環烷基。
例如，T2為經由C原子而鍵結至M2之4-8員雜環烷基。
本發明提供式(IIIc)化合物： 或彼之醫藥上可接受的鹽或酯，其中：A為O或CH2；G及J各獨立地為H、鹵基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基或ORa，Ra為H、C1-C6烷基或C(O)-C1-C6烷基，其中C(O)O-C1-C6烷基、C1-C6烷基或C(O)-C1-C6烷基係任意地經一或更多選自由鹵基、氰基羥基、羧基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基以及C3-C8環烷基所組成的群組之取代基所取代；Q為H、NH2、NHRb、NRbRc、OH、Rb或ORb，其中Rb以及Rc各獨立地為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至7員雜環烷基、5至10員雜芳基或-M1-T1，其中M1為鍵結或任意地經鹵基、氰基、羥基或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基聯結以及T1為C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至10員雜芳基，或Rb以及Rc連同彼等所附接的N原子一起形成具有0或1個另外的雜原子連接至N原子的4至7員雜環烷基，其任意地經C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6 烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜選自由環烷基或5至6員雜芳基取代，以及Rb、Rc，以及T1各任意地經一或更多C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代；X為N或CRx，其中Rx為H、鹵基、羥基、羧基、氰基或RS1，RS1為胺基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基，以及RS1任意地經任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代；L1為N(Y)、S、SO或SO2；當L1為N(Y)時L2為CO或不存在，或當L1為S、SO或SO2時L2不存在，其中當L2不存在時Y為H、Rd、SO2Rd或CORd，或當L2為CO時Y為H或Rd，Rd為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基，以及Rd為任意地經一或更多選自由C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺醯基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、 C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基所取代，以及C3-C7環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基係進一步任意地經C1-C6烷基、-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基所取代；R1、R2、R3、R4、R5、R6及R7各獨立地為H、鹵基、羥基、羧基、氰基、RS2，RS2為胺基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，以及RS2各任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基所取代；R8為H、鹵基或RS3，RS3為C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，以及RS3任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基胺基、C1-C6烷氧基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基以及C3-C8環烷基所組成的群組之取代基所取代；D為O、NRj或CRjRk，Rj及Rk各獨立地為H或C1-C6烷基，或Rj以及Rk與彼等所附接的碳原子一起形成C3-C10環烷基環；E為-M3-T3，M3為鍵結或任意地經鹵基或氰基取代的 C1-C6烷基聯結，T3為C3-C10環烷基、C6-C10芳基、5至10員雜芳基或4至10員雜環烷基，以及T3任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、硫基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵基烷基、C1-C6鹵基烷氧基、C1-C6烷基硫基、C1-C6烷基磺醯基、C1-C6鹵基烷基磺醯基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧羰基、側氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C4-C12烷基環烷基、C6-C10芳基、C6-C10芳基氧基、C7-C14烷基芳基、C6-C10胺基芳基氧基、C6-C10芳基硫基、任意地經鹵基、C1-C4烷基、C1-C4鹵基烷基取代的4至6員雜環烷基、任意地經鹵基、C1-C4烷基取代的5至6員雜芳基所組成的群組之取代基所取代，以及經羥基、鹵基取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧羰基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基係任意地進一步經鹵基、羥基或C1-C6烷氧基所取代；q為0、1、2、3或4；m為0、1或2；以及n為0、1或2。
例如，m以及n之和為至少1。
例如，m為1或2以及n為0。
例如，m為2以及n為0。
例如，A為CH2。
例如，A為O。
例如，L1為N(Y)。
例如，L1為SO或SO2。
例如，Y為Rd。
例如，Rd為C1-C6烷基。
例如，L2係不存在。
例如，G以及J各獨立地為ORa。
例如，Ra為H。
例如，D為O。
例如，D為NRj。
例如，Rj為H。
例如，D為CRjRk。
例如，Rj以及Rk各為H。
例如，E為-M3-T3，其中M3為鍵結或C1-C3烷基聯結，T3為苯基、萘基、噻吩基、環丙基或環己基，以及T3任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、硫基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵基烷基、C1-C6鹵基烷氧基、C1-C6烷基硫基、C1-C6烷基磺醯基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧羰基、側氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C4-C12烷基環烷基、C6-C10芳基、C6-C10芳基氧基、C7-C14烷基芳基、C6-C10胺基芳基氧基、C6-C10芳基硫基、任意地經C1-C4烷基取代的4至6員雜環烷基、任意地經C1-C4烷基取代的5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代，以及經羥基取代的C1-C6烷基、C1- C6烷氧羰基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基。
例如，T3為苯基，其係任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基(如，甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、第二戊基以及正己基)、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵基烷基、C1-C6鹵基烷氧基、C1-C6烷基磺醯基、C6-C10芳基(如，苯基或萘基)及C6-C10芳基氧基以及C7-C14烷基芳基所組成的群組所取代。
例如，E為
例如，X為N。
例如，X為CRx。
例如，X為CH。
例如，Q為NH2或NHRb，其中Rb為-M1-T1，M1為鍵結或C1-C6烷基聯結，以及T1為C3-C8環烷基。
例如，Q為H。
例如，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7以及R8各為H。
例如，當R8為鹵基且附接至與J相同之碳原子時，J不為羥基。
例如，當R8為鹵基且附接至與G相同之碳原子時，G不為羥基。
例如，當M2為SO2、SO、S、CO或O時，T2不為鹵基。
例如，T2為經由雜原子而鍵結至M2之4-8員雜環烷基。
例如，T2為經由N原子而鍵結至M2之4-8員雜環烷基。
例如，T2為經由C原子而鍵結至M2之4-8員雜環烷基。
本發明亦關於式(IV)化合物或彼之N-氧化物或醫藥上可接受的鹽：，其中A為O或CH2；Q為H、NH2、NHRb、NRbRc、OH、Rb或ORb，其中Rb以及Rc各獨立地為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、 C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至7員雜環烷基、5至10員雜芳基或-M1-T1，其中M1為鍵結或任意地經鹵基、氰基、羥基或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基聯結以及T1為C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至10員雜芳基，或Rb以及Rc連同彼等所附接的N原子一起形成具有0或1個另外的雜原子連接至N原子的4至7員雜環烷基，其任意地經C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜選自由環烷基或5至6員雜芳基取代，以及Rb、Rc，以及T1各任意地經一或更多C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代；X為N或CRx，其中Rx為H、鹵基、羥基、羧基、氰基或RS1，RS1為胺基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基，以及RS1任意地經任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代； Y為H、Rd、SO2Rd，或CORd，Rd為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基，以及Rd任意地經一或更多選自由C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺醯基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代，以及Rd上之C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基取代基各進一步任意地經C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基取代；R1以及R2各獨立地為H、鹵基、羥基、羧基、氰基、RS2，RS2為胺基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基，或C2-C6炔基，以及各RS2任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代；Re、Rf、Rg以及Rh，各獨立地為-M2-T2，其中M2為鍵結、SO2、SO、S、CO、CO2、O、O-C1-C4烷基聯結、C1-C4烷基聯結、NH或N(Rt)，Rt為C1-C6烷基，以及T2為H、 鹵基或RS4，RS4為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至8員雜環烷基或5至10員雜芳基，以及O-C1-C4烷基聯結、C1-C4烷基聯結、Rt以及RS4各任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基以及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代，以及m為0、1或2。
例如，A為O。於特定的式(IV)化合物中，A為O以及m為2。
於特定的式(IV)化合物中，X為N。
例如，於特定的化合物中，Q為NH2或NHRb，其中Rb為-M1-T1，M1為鍵結或C1-C6烷基聯結以及T1為C3-C8環烷基。
例如，於特定的式(IV)化合物中，R1以及R2各為H。
於特定的式(IV)化合物中，Y為Rd。例如，Rd為任意地經C3-C8環烷基或鹵基取代的C1-C6烷基。例如，Rd為任意地經C1-C6烷基或鹵基取代的C3-C8環烷基。
本發明亦關於式(IV)化合物，其中Re、Rf、Rg以及Rh之至少一者為鹵基、任意地經一或更多鹵基取代的C1-C6烷氧基、任意地經一或更多鹵基取代的C1-C6烷基磺醯基、任意地經一或更多選自CN、鹵基、C3-C8環烷基、羥 基或C1-C6烷氧基之取代基所取代之C1-C6烷基、任意地經一或更多C1-C6烷基或CN取代之C3-C8環烷基、或任意地經一或更多選自CN、鹵基、羥基、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基之取代基所取代之4至8員雜環烷基。例如，式(IV)化合物之Re、Rf、Rg以及Rh之至少一者為係選自F、Cl、Br、CF3、OCF3、SO2CF3、任意地經一或更多選自CN、鹵基、羥基、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基之取代基所取代之氧雜環丁基、任意地經一或更多選C1-C4烷基之取代基所取代之C3-C8環烷基，以及任意地經一或更多選自鹵基、C3-C8環烷基、羥基或C1-C6烷氧基之取代基所取代之C1-C4烷基。
例如，本發明關於式(IV)化合物，其中Rf以及Rg至少一者為任意地經羥基取代的烷基。例如，本發明關於化合物，其中Rf以及Rg至少一者為經羥基取代的第三丁基。
本發明關於選自化合物1-140之化合物。本發明亦關於選自化合物1-140之化合物之鹽。本發明亦關於選自化合物1-140之化合物之N-氧化物。本發明亦關於選自化合物1-140之化合物之N-氧化物之鹽。例如，本發明關於選自化合物1-7、9-109以及111-140之化合物。
本發明亦關於包含治療上有效含量之式(IV)化合物及醫藥上可接受的載體的醫藥組成物。
本發明亦關於包含治療上有效含量之式(IV)化合物之鹽及醫藥上可接受的載體的醫藥組成物。
本發明亦關於包含治療上有效含量之式(IV)化合物之水合物及醫藥上可接受的載體的醫藥組成物。
本發明亦關於包含治療上有效含量之選自化合物1-140之化合物以及醫藥上可接受的載體之醫藥組成物。本發明亦關於包含治療上有效含量之選自化合物1-140之化合物之鹽以及醫藥上可接受的載體之醫藥組成物。本發明亦關於包含治療上有效含量之選自化合物1-140之化合物之N-氧化物以及醫藥上可接受的載體之醫藥組成物。本發明亦關於包含治療上有效含量之選自化合物1-140之化合物之醫之N-氧化物以及醫藥上可接受的載體之醫藥組成物。本發明亦關於包含治療上有效含量之選自化合物1-140之化合物之水合物以及醫藥上可接受的載體之醫藥組成物。
本發明提供一種醫藥組成物，其包含式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物之一或多者以及一或多種醫藥上可接受的載體。
本發明亦關於一種醫藥組成物，其具有治療上有效含量之式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)或(IIIc)化合物之鹽以及醫藥上可接受的載體。
本發明亦關於一種醫藥組成物，其具有治療上有效含量之式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)或(IIIc)化合物之水合物以及醫藥上可接受的載體。
本發明提供治療或預防癌症的方法。本發明提供治療癌症的方法。本發明亦提供預防癌症的方法。方法包括投予治療上有效含量之式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)或(IIIc)化 合物至有需要的個體。癌症可為血液癌症。較佳地，癌症為白血病。更佳地，癌症為急性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病或混合細胞系白血病。
本發明提供治療或預防由染色體11q23上之基因轉位所媒介的疾病或病症的方法。本發明提供治療由染色體11q23上之基因轉位所媒介的疾病或病症的方法。本發明亦提供預防由染色體11q23上之基因轉位所媒介的疾病或病症的方法。方法包括投予治療上有效含量之之式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物至有需要的個體。
本發明提供治療或預防部分由於DOT1L-中介的蛋白質甲基化而媒介之疾病或病症或是由於DOT1L-中介的蛋白質甲基化而媒介之疾病或病症的方法。本發明提供治療部分由於DOT1L-中介的蛋白質甲基化而媒介之疾病或病症或是由於DOT1L-中介的蛋白質甲基化而媒介之疾病或病症的方法。本發明亦提供預防部分由於DOT1L-中介的蛋白質甲基化而媒介之疾病或病症或是由於DOT1L-中介的蛋白質甲基化而媒介之疾病或病症的方法。此方法包括投予治療上有效含量之式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物至有需要的個體。
本發明提供抑制細胞中DOT1L活性的方法。此方法包括令細胞與有效量之一或多種式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物接觸。
本發明之又一面向關於降低細胞中之組蛋白H3離胺酸殘基79(H3-K79)之甲基化程度。此方法可經由H3-K79 甲基化來改善因DOT1活性引起或可能引起的任何症狀。
本發明關於本文所揭露的化合物於製備用於治療或預防癌症之藥物上之用途。用途包括投予治療上有效量之式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物至有需要的個體。癌症可為血液癌症。較佳地，癌症為白血病。更佳地，癌症為急性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病或混合細胞系白血病。
本發明關於本文所揭露的化合物於製備用於治療或預防由染色體11q23上之基因轉位所媒介的疾病或病症之藥物上之用途。用途包括投予治療上有效量之式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物至有需要的個體。
本發明關於本文所揭露的化合物於製備用於治療或預防部分由於DOT1L-中介的蛋白質甲基化而媒介之疾病或病症或是由於DOT1L-中介的蛋白質甲基化而媒介之疾病或病症之藥物上之用途。用途包括投予治療上有效量之式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物至有需要的個體。
本發明提供本文所揭露的化合物於抑制細胞中DOT1L活性上之用途。用途包括令細胞與有效量之一或多種式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物接觸。
本發明之再一面向關於本文所揭露的化合物於降低細胞中之組蛋白H3離胺酸殘基79(H3-K79)之甲基化程度上之用途。用途包括令細胞與本發明化合物接觸。此用途可經由H3-K79甲基化來改善因DOT1活性引起或可能引起 的任何症狀。
於本文之式中，可自以下發明詳細說明所定義者中選擇化學部分體的個別基團。
此外，本發明提供合成前述化合物之方法。經以下合成，治療上有效含量之一或多種化合物可與醫藥上可接受的載體一起被調製而用於投予至哺乳動物，尤其是人，以調控表觀遺傳酵素。於特定具體實施例中，本發明之化合物有用於治療、預防或降低癌症的風險，或有用於製造用於治療、預防或降低癌症的風險之藥物。因此，化合物或調製物可，例如經口、非經腸道、經耳、經眼、經鼻或經局部途徑，而被投予以提供有效量之化合物予哺乳動物。
本發明包括列於表1中之代表性化合物。
如本文所使用者，“烷基”、“C1、C2、C3、C4、C5或C6烷基”或“C1-C6烷基”意圖包括C1、C2、C3、C4、C5或C6直鏈飽和脂族烴基團以及C3、C4、C5或C6支鏈飽和脂族烴基團基團。例如，C1-C6烷基意圖包括C1、C2、C3、C4、C5以及C6烷基基團。烷基的實例包括，具有一至六個碳原子之部分體，諸如，但不限於，甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、第二戊基或正己基。
於特定的具體實施例中，直鏈支鏈烷基具有六或更少個碳原子(如，針對直鏈為C1-C6，針對支鏈為C3-C6)，以及於另一具體實施例中，直鏈或支鏈烷基具有四或更少個碳原子。
如本文所使用者，術語“環烷基”意指具有3至30個碳原子之(如，C3-C10)飽和或不飽和非芳族烴單-或多-環系統。環烷基的實例包括，但不限於，環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、環戊烯基、環己烯基、環庚烯基以及金剛烷基。術語"雜環烷基"意指具有一或更多雜原子(諸如O、N、S或Se)之飽和或不飽和的非芳族5-8員單環、8-12員雙環，或11-14員三環系統。雜環烷基基團實例包括，但不限於，哌嗪基、吡咯啶基、二噁烷基、嗎啉基以及四氫呋喃基。
術語“任意地經取代的烷基”意指未經取代的烷基或於烴骨架之一或更多個碳原子上以標定的取代基置換一或更多個氫原子的烷基。這些取代基可包括，例如，烷基、烯基、炔基、鹵素、羥基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧羰基氧基、芳基氧基羰基氧基、羧酸根、烷基羰基、芳基羰基、烷氧羰基、胺基羰基、烷基胺基羰基、二烷基胺基羰基、烷基硫基羰基、烷氧基、磷酸根、膦酸根、亞膦酸根、胺基(包括烷基胺基、二烷基胺基、芳基胺基、二芳基胺基以及烷基芳基胺基)、醯胺基(包括烷基羰基胺基、芳基羰基胺基、胺甲醯基以及脲基)、甲脒基、亞胺基、巰基、烷基硫基、芳基硫基、硫代羧酸根、硫酸根、 烷基亞磺醯基、磺酸根、胺磺醯基、磺醯胺基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環基、烷基芳基，或芳族或雜芳族部分。
“芳基烷基”或“芳烷基”部分為經芳基取代的烷基(如，苯基甲基(苄基))。“烷基芳基”部分為經烷基取代的芳基經(如，甲基苯基)。
如本文所使用者，“烷基聯結”意圖包括C1、C2、C3、C4、C5或C6直鏈(線性)飽和二價脂族烴基團以及C3、C4、C5或C6支鏈飽和脂族烴基團。例如，C1-C6烷基聯結意圖包括C1、C2、C3、C4、C5以及C6烷基聯結基團。烷基聯結的實例包括具有一至六個碳原子的部分體，諸如，但不限於，甲基(-CH2-)、乙基(-CH2CH2-)、正丙基(-CH2CH2CH2-)、異丙基(-CHCH3CH2-)、正丁基(-CH2CH2CH2CH2-)、第二丁基(-CHCH3CH2CH2-)、異丁基(-C(CH3)2CH2-)、正戊基(-CH2CH2CH2CH2CH2-)、第二戊基(-CHCH3CH2CH2CH2-)或正己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-)。
“烯基”包括長度相近的不飽和脂族基團且可為上述烷基所取代，但其至少含有一個雙鍵。例如，術語“烯基”包括直鏈烯基基團(如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基)，以及支鏈烯基基團。於特定的具體實施例中，直鏈支鏈烯基基團之骨架具有六或更少個碳原子(如，針對直鏈為C2-C6，針對支鏈為C3-C6)。術語“C2-C6”包括含有二至六個碳原子 之烯基基團。術語“C3-C6”包括含有三至六個碳原子之烯基基團。
術語“任意地經取代的烯基”意指未經取代的烯基或或於烴骨架之一或更多個碳原子上以標定的取代基置換一或更多個氫原子的烯基。這些取代基可包括，例如，烷基、烯基、炔基、鹵素、羥基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧羰基氧基、芳基氧基羰基氧基、羧酸根、烷基羰基、芳基羰基、烷氧羰基、胺基羰基、烷基胺基羰基、二烷基胺基羰基、烷基硫基羰基、烷氧基、磷酸根、膦酸根、亞膦酸根、胺基(包括烷基胺基、二烷基胺基、芳基胺基、二芳基胺基以及烷基芳基胺基)、醯胺基(包括烷基羰基胺基、芳基羰基胺基、胺甲醯基以及脲基)、甲脒基、亞胺基、巰基、烷基硫基、芳基硫基、硫代羧酸根、硫酸根、烷基亞磺醯基、磺酸根、胺磺醯基、磺醯胺基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環基、烷基芳基，或芳族或雜芳族部分。
“炔基”包括長度相近的不飽和脂族基團且可為上述烷基所取代，但其至少含有一個參鍵。例如，“炔基”包括直鏈炔基基團(如，乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、庚炔基、辛炔基、壬炔基、癸炔基)，以及支鏈炔基基團。於特定的具體實施例中，直鏈支鏈炔基基團之骨架具有六或更少個碳原子(如，針對直鏈為C2-C6，針對支鏈為C3-C6)。術語“C2-C6”包括含有二至六個碳原子之炔基基團。術語“C3-C6”包括含有三至六個碳原子之炔基基 團。
術語“任意地經取代的炔基”意指未經取代的炔基或或於烴骨架之一或更多個碳原子上以標定的取代基置換一或更多個氫原子的炔基。這些取代基可包括，例如，烷基、烯基、炔基、鹵素、羥基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧羰基氧基、芳基氧基羰基氧基、羧酸根、烷基羰基、芳基羰基、烷氧羰基、胺基羰基、烷基胺基羰基、二烷基胺基羰基、烷基硫基羰基、烷氧基、磷酸根、膦酸根、亞膦酸根、胺基(包括烷基胺基、二烷基胺基、芳基胺基、二芳基胺基以及烷基芳基胺基)、醯胺基(包括烷基羰基胺基、芳基羰基胺基、胺甲醯基以及脲基)、甲脒基、亞胺基、巰基、烷基硫基、芳基硫基、硫代羧酸根、硫酸根、烷基亞磺醯基、磺酸根、胺磺醯基、磺醯胺基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環基、烷基芳基，或芳族或雜芳族部分。
其他任意地經取代的部分體(諸如任意地經取代的環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基)包括未經取代的部分體以及具有一或更多標定的取代基之部分體兩者。
“芳基”包括具有芳香性的基團，包括“共軛的”或具有至少一個芳族環且不含任何雜原子於環結構中的多環系統。實例包括苯基、苄基、1,2,3,4-四氫萘基等。
“雜芳基”基團為如上定義之芳基基團，除了於環結構中具有一至四個雜原子，以及可能稱為“芳基雜環”或“雜芳族”。如本文所使用者，術語“雜芳基”意圖包括穩定的 5-或6員單環或7-、8-、9-、10-、11-或12員雙環芳族雜環，其包含一或更多雜原子，如1或1-2或1-3或1-4或1-5或1-6個雜原子，或如，1、2、3、4、5或6個獨立地選自由氮、氧及硫所組成的群組之雜原子。氮原子可為經取代的或未經取代的(即，N或NR，其中R為H或其他取代基)。氮以及硫雜原子可任意地經氧化(即，N→O以及S(O)p，其中p=1或2)。要注意的是，於芳族雜環中之S以及O原子總數不超過1。
雜芳基基團之實例包括吡咯、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、咪唑、***、四唑、吡唑、噁唑、異噁唑、吡啶、吡嗪、噠嗪、嘧啶等。
此外，術語“芳基”以及“雜芳基”包括多環芳基以及雜芳基基團，如三環、雙環，如萘、苯并噁唑、苯并二噁唑、苯并噻唑、苯并咪唑、苯并噻吩、亞甲二氧基苯基、喹啉、異喹啉、萘啶、吲哚、苯并呋喃、嘌呤、苯并呋喃、去氮雜嘌呤、吲嗪。
於多環芳族環的情況中，僅一個環必須為芳族(如，2,3-二氫吲哚)，雖然所有的環均可為芳族(如，喹啉)。第二個環亦可為稠合的或橋接的。
芳基或雜芳基芳族環可在一或更多環位置經上述定意的取代基所取代。取代基，例如為烷基、烯基、炔基、鹵素、羥基、烷氧基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧羰基氧基、芳基氧基羰基氧基、羧酸根、烷基羰基、烷基胺基羰基、芳烷基胺基羰基、烯基胺基羰基、烷基羰基、 芳基羰基、芳烷基羰基、烯基羰基、烷氧羰基、胺基羰基、烷基硫基羰基、磷酸根、膦酸根、亞膦酸根、胺基(包括烷基胺基、二烷基胺基、芳基胺基、二芳基胺基以及烷基芳基胺基)、醯胺基(包括烷基羰基胺基、芳基羰基胺基、胺甲醯基以及脲基)、甲脒基、亞胺基、巰基、烷基硫基、芳基硫基、硫代羧酸根、硫酸根、烷基亞磺醯基、磺酸根、胺磺醯基、磺醯胺基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環基、烷基芳基或芳族或雜芳族部分。芳基基團亦可與脂環或雜環稠合或橋接，因彼等並非芳族所以形成了多環系統(如，四氫萘、亞甲二氧基苯基)。
如本文所使用者，“碳環化合物”或“碳環”意圖包括任何穩定的具有指定碳數之單環、雙環或三環，彼等之任一者可為飽和的、不飽和的或為芳族。例如，C3-C14碳環意圖包括具有3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14個碳原子的單環、雙環或三環。碳環的實例包括，但不限於，環丙基、環丁基、環丁烯基、環戊基、環戊烯基、環己基、環庚烯基、環庚基、環庚烯基、金剛烷基、環辛基、環辛烯基、環辛二烯基、茀基、苯基、萘基、二氫茚基、金剛烷基以及四氫萘基。碳環之定義中亦包括橋接的環，其包括，例如，[3.3.0]雙環辛烷、[4.3.0]雙環壬烷、[4.4.0]雙環癸烷以及[2.2.2]雙環辛烷。當一或更多個碳連結至兩個不相鄰的碳原子時產生橋接環。於一具體實施例中，橋接環為一或兩個碳原子。要注意的是，橋接總是將單環轉變成三環。當環為橋接時，環上的取代基亦可存在 於橋接上。亦包括稠合的(如，萘基、四氫萘基)以及螺環。
如本文所使用者，“雜環”包括含有至少一個雜環原子(如，N、O或S)之任何環結構(飽和的或部分不飽和的)。雜環的實例包括，但不限於，嗎啉、吡咯啶、四氫噻吩、哌啶、哌嗪以及四氫呋喃。
雜環基團的實例包括，但不限於，吖啶基、吖辛基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫基呋喃基、苯并硫基苯基、苯并噁唑基、苯并噁唑啉基、苯并噻吩基、苯并***基、苯并四唑基、苯并異噁唑基、苯并異噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、苯并二氫吡喃基、苯并哌喃基、噌啉基、十氫喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氫呋喃[2,3-b]四氫呋喃、呋喃基、呋呫基、咪唑啶基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚基、吲哚啉基、吲哚嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、靛红醯基、異苯并呋喃基、異苯并二氫吡喃基、異吲唑基、異吲哚啉基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異噁唑基、亞甲二氧基苯基、嗎啉基、萘啶基、八氫異喹啉基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,2,4-噁二唑5(4H)-酮、噁唑烷基、噁唑基、氧代吲哚基、嘧啶基、啡啶基、啡啉基、啡嗪基、吩噻嗪基、吩噁噻基、吩噁嗪基、呔嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑啶基、吡唑啉基、吡唑基、嗒嗪基、吡啶并噁 唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯啶基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹噁啉基、奎寧環基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、四唑基、6H-1,2,5-噻二嗪基，1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻嗯基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、硫基苯基、三嗪基、1,2,3-***基、1,2,4-***基、1,2,5-***基、1,3,4-***基、以及基。
如本文所使用者，術語“經取代的”表示標定的原子上任何之一或更多個氫原子被指定的基團置換，惟未超過標定的原子之正常價數且取代產生穩定的化合物。當取代基為側氧基或酮基時(即，=O)，則原子上的兩個氫原子被置換。酮基取代基不存在於芳族部分體。如本文所使用者，環雙鍵結為形成於兩個相鄰環原子之間的雙鍵(如，C=C、C=N或N=N)。“穩定的化合物”以及“穩定的結構”意指具充分強度而能自反應混合物分離成有用純度且能調製成有效治療劑之化合物。
當至取代基的鍵結為橫越連接環中之兩個原子的鍵結時，則該取代基可鍵結至環中的任何原子。當未指定取代基之原子且該取代基經由原子而鍵結至給定化學式之化合物中的其他部分時，該取代基可經由該式中的任何原子而被鍵結。可有取代基及/或變化體的組合，惟該組合產生穩定的化合物。
當於任何化合物之組成或化式中產生超過一個的任何變化時(如，R1)，每一者的定義與任一其他者的定義為獨立的。因此，例如，若基團為經0-2個R1部分體取代時，則基團可任意地經至多兩個R1部分體所取代，且每一R1係獨立地選自R1的定義。而且，可有取代基及/或變化體的組合，惟該組合產生穩定的化合物。
術語“羥基”或“氫氧基”包括具有-OH或-O-的基團。
如本文所使用者，“鹵基”或“鹵素”意指氟基、氯基、溴基以及碘基。術語“過鹵化的”通常所有氫原子中有部分被鹵素原子所置換。術語“鹵烷基”或“鹵烷氧基”意指經一或更多鹵素原子取代的烷基或烷氧基。
術語“羰基”包括含有以雙鍵連結至氧原子之碳的化合物以及部分體。含有羰基的部分體實例包括，但不限於，醛類、酮類、羧酸類、醯胺類、酯類、酸酐類等。
術語“羧基”意指-COOH或其C1-C6烷基酯。
“醯基”包括含有醯基基團(R-C(O)-)或羰基基團的部分體。“經取代的醯基”包括一或更多氫原子被例如，烷基基團、炔基基團、鹵素、羥基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧羰基氧基、芳基氧基羰基氧基、羧酸根、烷基羰基、芳基羰基、烷氧羰基、胺基羰基、烷基胺基羰基、二烷基胺基羰基、烷基硫基羰基、烷氧基、磷酸根、膦酸根、亞膦酸根、胺基(包括烷基胺基、二烷基胺基、芳基胺基、二芳基胺基以及烷基芳基胺基)、醯胺基(包括烷基羰基胺基、芳基羰基胺基、胺甲醯基以及脲基)、甲脒基、 亞胺基、巰基、烷基硫基、芳基硫基、硫代羧酸根、硫酸根、烷基亞磺醯基、磺酸根、胺磺醯基、磺醯胺基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環基、烷基芳基或芳族或雜芳族部分所置換的醯基基團。
“芳醯基”包括芳基或雜芳族部分鍵結至羰基基團部分體。芳醯基基團的實例包括苯基羧基、萘基羧基等。
“烷氧基烷基”、“烷基胺基烷基”以及“硫基烷氧基烷基”包括如上所述之烷基基團，其中氧、氮或硫原子置換一或更多烴骨架的碳原子。
術語“烷氧基”包括共價地連結至氧原子之經取代的以及未經取代的烷基、烯基以及炔基基團。烷氧基基團或烷氧基的實例包括，但不限於、甲氧基、乙氧基、異丙氧基、丙氧基、丁氧基以及戊氧基基團。經取代的烷氧基基團的實例包括鹵化的烷氧基基團。烷氧基基團可經諸如烯基、炔基、鹵素、羥基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧羰基氧基、芳基氧基羰基氧基、羧酸根、烷基羰基、芳基羰基、烷氧羰基、胺基羰基、烷基胺基羰基、二烷基胺基羰基、烷基硫基羰基、烷氧基、磷酸根、膦酸根、亞膦酸根、胺基(包括烷基胺基、二烷基胺基、芳基胺基、二芳基胺基以及烷基芳基胺基)、醯胺基(包括烷基羰基胺基、芳基羰基胺基、胺甲醯基以及脲基)、甲脒基、亞胺基、巰基、烷基硫基、芳基硫基、硫代羧酸根、硫酸根、烷基亞磺醯基、磺酸根、胺磺醯基、磺醯胺基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環基、烷基芳基或芳族或雜芳族 部分體之基團取代。經鹵素取代的烷氧基基團的實例包括，但不限於，氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、氯甲氧基、二氯甲氧基以及三氯甲氧基。
術語“醚”或“烷氧基”包括含有含有鍵結至兩個碳原子或雜原子之氧的氧化合物或部分體。例如，術語“烷氧基烷基”意指共價地鍵結至氧原子的烷基、烯基或炔基基團，而該氧原子共價地鍵結至烷基基團。
術語“酯”包括含有連結至氧原子之碳或雜原子的化合物或部分體，而該氧原子鍵結至羰基基團的碳。術語“酯”包括烷氧基羧基基團，諸如甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、丁氧基羰基、戊氧基羰基等。
術語“硫基烷基”包括含有連結至硫原子之烷基基團的化合物或部分體。硫基烷基基團可經諸如烷基、烯基、炔基、鹵素、羥基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧羰基氧基、芳基氧基羰基氧基、羧酸根、烷基羰基、芳基羰基、烷氧羰基、胺基羰基、烷基胺基羰基、二烷基胺基羰基、烷基硫基羰基、烷氧基、磷酸根、膦酸根、亞膦酸根、胺基(包括烷基胺基、二烷基胺基、芳基胺基、二芳基胺基以及烷基芳基胺基)、醯胺基(包括烷基羰基胺基、芳基羰基胺基、胺甲醯基以及脲基)、甲脒基、亞胺基、巰基、烷基硫基、芳基硫基、硫代羧酸根、硫酸根、烷基亞磺醯基、磺酸根、胺磺醯基、磺醯胺基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環基、烷基芳基或芳族或雜芳族部分體之基團取代。
術語“硫基羰基”或“硫基羧基”包括含有以雙鍵連結至硫原子之碳的化合物以及部分體。
術語“硫基醚”包括含有鍵結至兩個碳原子或雜原子之硫原子的部分體。硫基醚的實例包括，但不限於，烷硫基烷基、烷硫基烯基以及烷硫基炔基。術語“烷硫基烷基”包括以烷基、烯基或炔基基團鍵結至硫原子的部分體，而該硫原子鍵結至烷基基團。同樣地，術語“烷硫基烯基”意指部分體中之烷基、烯基或炔基基團鍵結至硫原子，而該硫原子共價地鍵結至烯基基團；以及烷硫基炔基”意指部分體中之烷基、烯基或炔基基團鍵結至硫原子，而該硫原子共價地鍵結至炔基基團。
如本文所使用者，“胺”或“胺基”意指未經取代的或經取代的-NH2。“烷基胺基”指化合物之基團中之-NH2的氮鍵結至至少一個烷基基團。烷基胺基基團的實例包括苄基胺基、甲基胺基、乙基胺基、苯乙基胺基等。“二烷基胺基”指化合物之基團中之-NH2的氮鍵結至至少兩個另外的烷基基團。二烷基胺基基團的實例包括，但不限於，二甲基胺基以及二乙基胺基。“芳基胺基”以及“二芳基胺基”指基團中之氮分別鍵結至至少一個或兩個芳基基團。“胺基芳基”以及“胺基芳基氧基”指經胺基取代的芳基以及芳基氧基。“烷基芳基胺基”、“烷基胺基芳基”或“芳基胺基烷基”意指胺基基團鍵結至至少一個烷基基團以及至少一個芳基基團。“烷胺基烷基”意指鍵結至氮原子之烷基、烯基或炔基基團，而該氮原子亦鍵結至烷基基團。“醯胺基”指基團中之 氮鍵結至醯基基團。醯胺基的實例包括，但不限於，烷基羰基胺基、芳基羰基胺基、胺甲醯基以及脲基基團。
術語“醯胺”或“胺基羧基”包括含有鍵結至羰基或硫基羰基基團之碳的氮原子之化合物或部分體。術語“烷胺基羧基”包括鍵結至胺基基團的烷基、烯基或炔基基團，而該胺基基團鍵結至羰基或硫基羰基基團之碳。其亦包括“芳基胺基羧基”基團，其包括鍵結至胺基基團的芳基或雜芳基部分體，而該胺基基團鍵結至羰基或硫基羰基基團之碳。術語“烷基胺基羧基”、“烯基胺基羧基”、“炔基胺基羧基”以及“芳基胺基羧基”包括其中之烷基、烯基、炔基以及芳基部分體分別鍵結至氮原子之部分體，而該氮原子則鍵結至羰基基團的碳。醯胺可經諸如直鏈烷基、支鏈烷基、環烷基、芳基、雜芳基或雜環之取代基所取代。醯胺基團上之取代基可進一步經取代。
藉由以氧化劑(如，3-氯過氧基苯甲酸(mCPBA)以及/或過氧化氫)進行處理，本發明之含氮化合物可被轉換成N-氧化物以得到本發明之其他化合物。因此，所有表示的以及請求的含氮化合物係經考量(就價數及結構進行考量)以包括所示的化合物以及其N-氧化物衍生物(其可標示為N→O或N+-O-)兩者。此外，於其他例子中，本發明化合物中之氮可被轉換成N-羥基或N-烷氧基化合物。例如，藉由氧化劑，諸如m-CPBA，來氧化母結構胺可製備N-羥基化合物。所有表示的以及請求的含氮化合物亦經考量(就價數及結構進行考量)以包括所示的化合物以及其N-羥 基(即，N-OH)以及N-烷氧基(即，N-OR，其中R為經取代的或未經取代的C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6炔基、3-14員碳環或3-14員雜環)衍生物兩者。
於此說明書中，於一些情況中，為方便之故，化合物的結構式表示特定的異構物，但本本發明包括所有異構物，諸如幾何異構物、基於不對稱碳之光學異構物、立體異構物、互變異構物等。此外，結構式所表示的化合物可存在結晶多晶型。要注意的是，本發明的範圍包括本發明化合物之任何晶型、晶型混合物或彼之酐或水合物。再者，本發明範圍包括於活體內降解本發明化合物而產生之所謂的代謝物。
“同分異構物”意指具有相同分子式但原子鍵結順序或原子空間排列不同的化合物。原子空間排列不同的異構物係稱為“立體異構物”。非另一者之鏡像的立體異構物係稱為“非鏡像異構物”，以及非彼此疊置之鏡像的立體異構物係稱為“鏡像異構物”或有時稱為光學異構物。含有等量之相對掌性之個別鏡像型式之混合物係稱為“消旋混合物”。
一個碳鍵結至四個不相同的取代基者稱為“掌性中心”。
“掌性異構物”意指至少具有一個掌性中心的化合物。具有超過一個以上掌性中心的可以個別非鏡像異構物或非鏡像異構物之混合物(“非鏡像異構物混合物”)的方式存在。當存在一個掌性中心時，立體異構物之特徵為掌性的絕對組態(R或S)。絕對組態意指取代基附接至掌性中心之 空間排列。根據Cahn,Ingold以及Prelog之序列規則(Sequence Rule)(Cahn et al.,Angew.Chem.Inter.Edit.1966,5,385；errata 511；Cahn et al.,Angew.Chem.1966,78,413；Cahn and Ingold,J.Chem.Soc.1951(London),612；Cahn et al.,Experientia 1956,12,81；Cahn,J.Chem.Educ.1964,41,116)來排序附接至掌性中心的取代基。
“幾合異構物”意指因繞雙鍵或環烷基聯結之受阻轉動而存在之非鏡像異構物(如，1,3-環丁基)。這些組態係以字首順式(cis)以及反式(trans)或Z以及E來表示，根據Cahn-Ingold-Prelog規則，其表示分子中的雙鍵位於相同側或相對側。
要了解的是，本發明之化合物可視為不同的掌性異構物或幾何異構物。亦應了解的是，當化合物具掌性異構物或幾合異構物型式時，本發明範圍意圖包括所有的異構物型式，且化合物的命名不排除任何異構物型式。
例如，式(I)化合物包括以下的掌性異構物以及幾何異構物。
此外，本發明討論之結構以及其他化合物包括所有彼等之阿托異構物(atropic isomer)。“阿托異構物”為立體異構物的一種類型，其中兩個異構物的原子之空間排列不同。阿托異構物因其繞中心鍵結之大基團的阻轉所產生的限制旋轉而存在。此阿托異構物普通以混合物型式存在，然而因近來層析術之進步，已可於所選的情況中分離具有兩種阿托異構物的混合物。
“互變異構物”為平衡存在且容易由一種異構物型式轉變成另一者之一或兩種結構異構物。此轉變肇因於伴隨著相鄰共軛雙鍵轉換之氫原子的型式遷移。互變異構物以溶液中之互變異構性組的混合物之型式存在。於可能發生互 變異構物的溶液中，將達到互變異構物的化學平衡。互變異構物的確切比例取決於數種因素，包括溫度、溶劑以及pH。互變異構物可由互變異構相互轉換之觀念係稱為互變異構物性。
於可行的各種互變異構物性類型中，經常觀察到兩者。於酮基-烯醇之互變異構性中，電子及氫原子轉移同時發生。環-鏈互變異構性源自於糖鏈中醛基團(-CHO)與相同分子中之一個羥基基團(-OH)反應而得到彼之呈葡萄糖的環(環形)型式。
常見的互變異構物對為：雜環中之(如，於核鹼基，諸如鳥嘌呤、胸腺嘧啶以及胞嘧啶中)酮-烯醇、醯胺-腈、內醯胺-內醯亞胺、醯胺-醯亞胺酸互變異構物型、胺-烯胺以及烯胺-烯胺。苯并咪唑亦呈現互變異構物型，當苯并咪唑於4、5、6或7位置含有於一或更多取代基時，可能產生不同的異構物。例如，經由互變異構，2,5-二甲基-1H-苯并[d]咪唑可與2,6-二甲基-1H-苯并[d]咪唑平衡存在。
互變異構的另一個實例係如下所示：
要了解的是，本發明之化合物可視為不同的掌性異構物或幾何異構物。亦應了解的是，當化合物具掌性異構物或幾合異構物型式時，本發明範圍意圖包括所有的異構物型式，且化合物的命名不排除任何異構物型式。
術語“結晶多型”、“多型”或“晶型”意指化合物中之結晶結構，其中化合物(或其鹽或溶劑化物)可以不同結晶包封排列進行結晶化，彼等皆具有相同的元素組成。不同的結晶型式通常具有不同的X-光繞射圖案、紅外線光譜、溶點、密度硬度、結晶形狀、光學及電性特性、安定性及溶解度。再結晶溶劑、結晶速率、儲存溫度及其他因素可能使一種晶型成為主要晶型。於不同情況下之結晶化作用可製備化合物之結晶多型。
本發明之化合物可為晶狀、半晶狀、非晶狀、非晶型、介晶態等。
式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)之化合物可為化合物本身及彼等之N-氧化物、鹽類、彼等之溶劑化物及彼等之前藥(若適用)。於經取代的嘌呤或7-去氮雜嘌呤化合物上，鹽可形成為介於陰離子以及帶正電基團(如，胺基)之間者。合適的陰離子包括氯離子、溴離子、碘離子、硫酸根、二硫酸根、胺基磺酸根、硝酸根、磷酸根、檸檬酸根、甲烷磺酸根、三氟乙酸根、乙酸根、麩胺酸根、醛糖酸根、戊二酸根、蘋果酸根、縮蘋酸根、琥珀酸根、反丁烯二酸根、酒石酸根、甲苯磺酸根、水楊酸跟、乳酸根、萘磺酸根以及乙酸根。同樣地，於經取代的嘌呤 或7-去氮雜嘌呤化合物上，鹽亦可形成為介於陽離子以及帶負電基團(如，羧酸根)之間者。合適的陽離子包括鈉離子、鉀離子、鎂離子、鈣離子以及銨陽離子，諸如四甲基銨離子。經取代的嘌呤或7-去氮雜嘌呤化合物亦包括含有四級氮原子的鹽類。前藥的實例包括酯類以及其他醫藥上可接受的衍生物，當施加彼至個體時，其可提供具活性之經取代的嘌呤或7-去氮雜嘌呤化合物。
另外，本發明之化合物，例如，化合物的鹽類，可存在於水合的或未經水合(無水)的型式或作為其他溶劑分子之溶劑化物。水合物的非限制性實例包括半水合物、單水合物、二水合物、三水合物等。溶劑化物的非限制性實例包括乙醇溶劑化物、丙酮溶劑化物等。
“溶劑化物”意指含有化學劑量含量或非化學劑量含量之溶劑的溶劑加成物型式。一些化合物傾向補集固定莫耳比之溶劑分子於晶狀固態中，因而形成溶劑化物。若溶劑為水，則形成水合物；若溶劑為醇，溶劑化物係形成為醇化物。結合一或更多分子的水與一分子的物質所形成的水合物，其中水為持其分子狀態為H2O。半水合物係由一分子的水與大於一分子的水之物質所形成，其中水為持其分子狀態為H2O。
如本文所使用者，術語“類似物”意指結構上彼此相似然組成略有不同之化學性化合物(如以不同的元素置換一原子或存在特別的官能基，或以另一個官能基置換一個官能基)。因此，類似物為功能與外觀上與對映化合物相似 或相容之化合物，但是彼等之結構與來源不同。
如本文所使用者，術語“衍生物”意指具有共同核結構之化合物以及以本文所述之各種基團來取代的化合物。例如，式(I)所表示之所有化合物為經取代的嘌呤化合物或經取代的7-去氮雜嘌呤化合物，且均以式(I)作為共同的核。
術語“生物同質”意指由原子或原子基團與廣義近似的原子或原子基團交換所得之化合物。生物同質置換的目的在於產生與母化合物具相似生物性質之新化合物。生物同質置換可以物理化學性或是拓撲性為基。羧酸生物同質之實例包括，但不限於，醯基磺醯亞胺、四唑、磺酸鹽以及磷酸鹽。見如，Patani and LaVoie,Chem.Rev.96,3147-3176,1996。
本發明意圖包括本化合物中存在的所有同位素。同位素包括具有相同原子序但質量數不同者。普通而非限制性的實例中，氫之同位素包括氚以及氘，以及碳的同位素包括C-13以及C-14。
2.經取代的嘌呤化合物以及經取代的7-去氮雜嘌呤化合物之合成
本發明提供用於合成式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)以及(IV)化合物之方法。根據以下實例中所示之流程，本發明亦提供用於合成本發明所揭示的化合物之方法細節。
於通篇說明書中，當說明化合物具有、包括或含有特定成分時，其意指組成物基本上由，或由，所記載之成分所組成。類似地，當說明方法或製程具有、包括或含有特定製程步驟時，製程亦基本上由，或由，所記載之製程步驟所組成。進一步地，應了解的是步驟的順序或實施特定作動的順序為不重要的，只要仍能操作本發明即可。此外，可同時執行兩個或更多個步驟。
本發明之合成步驟可耐受各種官能基，因此可使用各樣經取代的起始材料。製程通常於所有程序的終點或接近終點時產生所欲的最終化合物，雖然於特定的情況中進一步轉變化合物成為彼之醫藥上可接受的鹽、酯或前藥係所欲者。
利用熟此技藝者已知或藉由本發明之教示而使熟此技藝者明白的標準合成方法及程序，可使用市售的起始材料、熟知的化合物或易於製備的中間產物且以各種方法來製備本發明之化合物。可由相關的科學文獻或本領域之標準教材得知用於製備有機分子及官能基轉換及操作的標準合成方法及程序。不受限於任何一種或數種來源，經典的教材，諸如Smith,M.B.,March,J.,March’s Advanced Organic Chemistry：Reactions,Mechanisms,andStrucure,5th edition,John Wiley & Sons：New York,2001；Greene,T.W.,Wuts,P.G.M.,Protective Group in Organic Synthesis,3rd edition,John Wiley & Sons：New York,1999；R.Larock,Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers(1989)；L.Fieser and M.Fieser,Fieser and Fieser’s Agents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1994)；以及L.Paquette,ed.,Encyclopedia of Agents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1995)(皆藉引用方式併入本文)係有用的且為此技術領域所認可的有機合成參考教材。以下合成方法知敘述係用以闡述，而非限制，用於製備本發明化合物之普通程序。
根據以下敘述之流程A-W，由市售之起始材料或可依文獻程序製備之起始材料，可藉由熟此技藝者熟悉之各種方法而方便地製備本發明之化合物。本發明之具有式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)以及(IV)的化合物。除非另行指明，流程A-P中之R基團(諸如R、R’以及Ra)可對應至式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)中所定義的變數(即，R1、R2、Rb以及Rc)。流程中之“PG”意指保護基團。
熟此技藝者將注意到，可改變本文所述之反應順序及合成流程之特定步驟的順序，諸如導入以及移除保護基團。
熟此技藝者將了解，因應反應條件，特定的基團可能需要利用保護基團而被保護。保護基團亦可用於區別分子中的類似官能基。由Greene,T.W.,Wuts,P.G.M.,Protective Groups in Organic Synthesis,3rd edition,John Wiley & Sons：New York,1999A，可得知保護基團列表及如何導入以及移除這些基團。
較佳的保護基團包括，但不限於： 針對羥基部分：TBS、苄基、THP、Ac針對羧酸：苄基酯、甲基酯、乙基酯、烯丙酯針對胺：Cbz、BOC、DMB針對二醇：Ac(x2)、TBS(x2)或連同縮丙腈(acetonide)針對硫基：Ac針對苯并咪唑：SEM、苄基、PMB、DMB針對醛：二-烷基縮醛，諸如二甲氧基縮醛或二乙基縮醛。
於本文所述之反應流程中，可產生多種立體異構物。當未指定特別的立體異構物時，應了解立體異構物為可由反應生成之所有可行立體異構物。熟此技藝者將瞭解可使反應最佳化以得到一種較佳的異構物，或可設計新的流程以生成單一異構物。若生成混合物，可利用諸如薄層層析、製備型HPLC、製備型掌性HPLC或製備型SFC之技術諸如製備型來分離異構物。
以下縮寫適用於整份說明書並具有如下定義：
本發明提供用於製造本發明之化合物之方法。以下流程描述用於合成本發明化合物之可用的例示性化學法。
於諸如Et3N、K2CO3或於如MeCN或DMF、THF、iPrOH溶劑中之Hunig’s鹼或彼等之混合物之鹼存在下，藉由以適當的胺(包括氨)進行處理，由以上流程A所描述者可合成5’-胺基嘌呤-核糖中間產物(A-V)。合適的經保護之6-Cl腺苷酸衍生物(A-I)係轉變成6-胺基衍生物(A-II)。若需要，可加熱反應至100℃(若所需溫度高於混合物中之一或更多成分的沸點，則可於密封的管中進行反應)。流程中之R基團可代表烷基保護基團(如，2,4二甲氧基苄基)。藉由轉換5’-羥基基團成為脫離基(諸如於如CH2Cl2 、THF、MeCN、DMF或彼等之混合物之惰性溶劑中之Et3N、吡啶或K2CO3之鹼存在下，利用磺醯氯(MsCl)處理之MsO(即，CH3S(O)2O))，6-胺基產物(A-II)可被轉換成5’-疊氮基中間產物(A-III)。5’-脫離基接者被來自諸如DMF之惰性溶劑中之NaN3的疊氮陰離子所替代。以於諸如THF之溶劑中的DPPA、Ph3P以及DIAD進行處理，選擇性地(A-II)可直接轉換成(A-III)。於金屬觸媒(如Pd/C、PtO2)存在下以H2進行還原反應或以諸如Ph3P或PMe3之膦進行薛丁格爾(Staudinger)反應，(A-III)的疊氮基基團可還原成一級胺(A-IV)。於合適的諸如NaBH(OAc)3或NaCNBH3之還原劑存在下，以適當的酮或醛進行處理，一級胺(A-IV)可轉變成二級胺(A-V)。可加入另外的諸如Ti(OiPr)4之試劑。
選擇性地，可利於諸如THF之惰性溶劑中的磺醯胺(A-VI)、DEAD以及Ph3P來處理5’-羥基中間產物(A-II)。於諸如K2CO3、Cs2CO3之鹼存在下，可接者以苯硫基來處理所得的磺醯胺產物以得到二級胺(A-V)。
上述反應順序亦適用於始於(A-VII)之來蘇糖衍生物以得到於5’位置具相反組態之非鏡像異構物。
類似的反應順序可運用於2’-去氧基、或3’-去氧基、 或經取代的核糖或上述之來蘇糖(A-VIII)以得到5’-胺基嘌呤-核糖/來蘇糖中間產物。
用於導入6-NH2基團之選擇性方法，如下所示，為利用NaN3處理(A-IX)衍生物以生成6-疊氮基中間產物，接著以諸如PMe3或PPh3之三烷基膦還原成NH2部分(A-X)。
流程B：合成5’胺基7-去氮雜嘌呤核糖
可如上述流程B來合成5’-胺基-7-去氮雜嘌呤-核糖中間產物(B-V)。於諸如Et3N、K2CO3或Hunig’s鹼於如MeCN或DMF、THF、iPrOH或彼之混合物等溶劑中之鹼存在下，以適當的胺(包括氨)進行處理，含有6-氯取代基之適合的去保護7-去氮雜嘌呤-核糖中間產物(B-I)可轉變成對應的6-胺基衍生物(B-II)。若有需要，可加熱反應至100℃(若所需溫度大於混合物中之一或更多組分的沸點，則可於密封管中進行反應)。流程中之R基團可代表烷基保護基團(如，2,4二甲氧基苄基)。於諸如Et3N、吡啶或K2CO3於如CH2Cl2、THF、MeCN、DMF或彼之混合物 等惰性溶劑中之鹼存在下而以MsCl進行處理，藉由轉換5’-羥基基團成諸如MsO之脫離基，6-胺基產物(B-II)可轉變成5’-疊氮基中間產物(B-III)。接著以疊氮化物來源(諸如於如DMF惰性溶劑中之NaN3)之疊氮化物陰離子置換5’-脫離基。選擇性地，利用於諸如THF溶劑中之DPPA、Ph3P以及DIAD進行處理，(B-II)可直接轉變成(B-III)。於金屬觸媒(如Pd/C、PtO2)存在下以H2進行還原或利用諸如Ph3P或PMe3之膦的薛丁格爾反應進行還原，(B-III)的疊氮基基團可被還原成一級胺(B-IV)。於合適的諸如NaBH(OAc)3或NaCNBH3之還原劑存在下，以適當的酮或酵進行處理，一級胺(B-IV)可轉變成二級胺(B-V)。可加入另外的試劑，如Ti(OiPr)4。選擇性地，可利用於諸如THF之惰性溶劑中的磺醯胺(B-VI)、DEAD以及Ph3P來處理5’-羥基中間產物(B-II)。接著，於諸如K2CO3、Cs2CO3之鹼存在下，以硫苯酚處理所得的磺醯胺產物以得到二級胺(B-V)。此等反應順序亦可應用於來蘇糖衍生物，由(B-VII)開始而得到於5’-位置具相對構型之非鏡像異構物。
類似的反應順序可用於2’-去氧基或3’-去氧基或經取代的核糖或上述之來蘇糖(B-VIII)以得到5’-胺基7-去氮雜嘌呤-核糖/來蘇糖中間產物。
如下示者，另一選擇性的方法為經由以NaN3處理(B- IX)衍生物來導入6-NH2基團以產生6-疊氮基中間產物，接著以諸如PMe3或PPh3之三烷基膦進行還原成為NH2部分體(B-X)。
可利用如流程C所述者來製備5’-胺基嘌呤碳環中間產物(C-X)。以熟此技藝者所知悉之方法任意地保護環戊烷(C-I)以得到(C-II)。於諸如Et3N於如正丁醇之質子性溶 劑中之鹼存在下，以適當的4,6-二氯嘧啶-5-胺處理(C-II)。加熱反應或令其經受微波條件以得到中間產物(C-III)。於諸如AcOH之酸存在下，以原酸酯(C-IV)處理(C-III)而產生嘌呤中間產物(C-V)。反應通常被加熱。於諸如Et3N、K2CO3或Hunig’s鹼於如MeCN或DMF、THF、iPrOH或彼之混合物等溶劑中之鹼存在下，以適當的胺(包括氨)進行處理，可導入6-胺基取代基。若有需要，可加熱反應至100℃(若所需溫度大於混合物中之一或更多組分的沸點，則可於密封管中進行反應)。流程中之R基團可代表烷基保護基團(如，2,4二甲氧基苄基)。於諸如Et3N、吡啶或K2CO3於如CH2Cl2、THF、MeCN、DMF或彼之混合物等惰性溶劑中之鹼存在下而以MsCl進行處理，藉由轉換5’-羥基基團成諸如MsO之脫離基，6-胺基產物(C-VI)可轉變成5’-疊氮基中間產物(C-VII)。接著以於諸如DMF惰性溶劑中之NaN3的之疊氮化物陰離子置換5’-脫離基。選擇性地，利用於諸如THF溶劑中之DPPA、Ph3P以及DIAD進行處理，(C-VI)可直接轉變成(C-VII)。於金屬觸媒(如Pd/C、PtO2)存在下以H2進行還原或利用諸如Ph3P或PMe3之膦的薛丁格爾反應進行還原，(C-VII)的疊氮基基團可被還原成一級胺(C-VIII)。於合適的諸如NaBH(OAc)3或NaCNBH3之還原劑存在下，以適當的酮或醛進行處理，一級胺(C-VIII)可轉變成二級胺(C-X)。可加入另外的試劑，如Ti(OiPr)4。選擇性地，可利用於諸如THF之惰性溶劑中的磺醯胺(C-IX)、DEAD以及Ph3P來處 理5’-羥基中間產物(C-VI)。接著，於諸如K2CO3、Cs2CO3之鹼存在下，以硫苯酚處理所得的磺醯胺產物以得到二級胺(C-X)。
可利用如流程D所述者來製備5’-胺基7-去氮雜嘌呤碳環中間產物(D-X)。以熟此技藝者所知悉之方法任意地保護環戊烷(D-I)以得到((D-II)。於諸如Et3N於如EtOH、正丁醇之質子性溶劑中之鹼存在下，以適當的4,6-二氯嘧啶(D-III)處理(D-II)。加熱反應以得到中間產物(D-IV)。以諸如HCl或AcOH之酸處理(D-IV)而產生中間產物(D-V)。
於諸如Et3N、吡啶或K2CO3於如CH2Cl2、THF、MeCN、DMF或彼之混合物等惰性溶劑中之鹼存在下而以MsCl進行處理，藉由初始地轉換5’-羥基基團成諸如MsO之脫離基接著以於諸如DMF惰性溶劑中之NaN3的之疊氮化物陰離子置換脫離基，(D-V)之5’-羥基可轉變成5’-疊氮基中間產物(D-VI)。
於諸如Et3N、K2CO3或Hunig’s鹼於如MeCN或DMF、THF、iPrOH或彼之混合物等溶劑中之鹼存在下，以適當的胺(包括氨)處理(D-VI)，可導入6-胺基取代基。若有需要，可加熱反應至100℃(若所需溫度大於混合物中之一或更多組分的沸點，則可於密封管中進行反應)。流程中之R基團可代表烷基保護基團(如，2,4二甲氧基苄基)。於金屬觸媒(如Pd/C、PtO2)存在下以H2進行還原或利用諸如Ph3P或PMe3之膦的薛丁格爾反應進行還原，(D-VII)的疊氮基基團可被還原成一級胺(D-VIII)。於合適的諸如NaBH(OAc)3或NaCNBH3之還原劑存在下，以適當的酮或醛進行處理，一級胺(D-VIII)可轉變成二級胺(D-X)。可加入另外的試劑，如Ti(OiPr)4。選擇性地，可利用於諸如THF之惰性溶劑中的磺醯胺(D-IX)、DEAD以及Ph3P來處理5’-羥基中間產物(D-V)。可利用類似於將(D-VI)轉換成(D-VII)之條件來導入6-胺基基團。接著，可於諸如K2CO3、Cs2CO3之鹼存在下，以硫苯酚處理所得的磺醯胺產物以得到二級胺(D-V)。
熟此技藝者將明白適當地經取代之二氯嘧啶(D-III)可 用於7-去氮雜嘌呤部分體上之取代。
為了於5’-位置產生相對立體化學之適當的中間產物，可遵循上述之流程E中之反應順序。環戊烷(E-I)係任意地被保護，於諸如CH2Cl2中之溶劑中Et3N之存在下，以MsCl進行處理使5’-羥基轉變成脫離基。藉由以於密封管中於THF中之Me2NH的2.0M溶液進行處理，此5’-脫離基被Me2NH置換。加熱反應至40-80℃。以於諸如於CH2Cl2溶劑中之如mCPBA的氧化劑來氧化所得的三級胺以得到對應的N-氧化物。接著於50-120℃之如N,N-二甲基乙醯胺的惰性溶劑中加熱N-氧化物為以得到烯烴(E-III)。令烯烴經受氫溴化/氧化單離以製造反轉得5’立體異構物(E-IV)。合適的氫溴化試劑包括BH3-THF以及合適的氧 化單離條件包括H2O2/NaOH。中間產物(E-IV)可接著經受流程C及D所述之反應順序以產生中間產物(E-V)以及(E-VI)。
使用於流程C及D闡述的中間產物(F-I)及(F-III)以供合成嘌呤以及7-去氮雜嘌呤去氧基碳環衍生物。基於核糖的中間產物(F-V)、(F-VI)、(F-VIII)及(F-IX)可用於類似於以上流程A及B中之反應程序。
在諸如Et2O、DME、THF彼之混合物之惰性溶劑中的Zn/Cu存在下，以三氯乙醯氯進行[2+2]環加成反應，可如流程G中所述者來合成式(G-VIII、(G-XV)及(G-XXI)之環丁烷烯基酯類(G-I)。選擇性地，可使用Zn粉末於音波振動條件下執行[2+2]環加成反應。於於諸如MeOH之溶劑中之如NH4Cl之質子予體存在下，經由Zn粉末之處理來還原二氯化物(G-II)。可進一步藉由磷酸酯(G-V)進行處理來修飾環丁酮(G-IV)(其包括(G-III))以得到α,β不飽和的酯類(G-VI)。於標準條件下(如，氯甲酸異丁酯、Hunig’s鹼、N,O-二甲基羥基胺)，酸(VI)係轉換成Weinreb醯胺(G-VII)。於諸如Pd/C、PtO2或Pd(OH)2之金屬觸媒存在下使用H2進行氫化反應，可將雙鍵還原以得到環丁烷中間產物(G-VIII)。
可利用Wittig試劑(G-X)進行處理環丁酮(G-IX)以得到環丁烷烯醇醚(G-XI)，其經去保護而得到對應的酸(G-XII)。
於諸如KOtBu、LDA、NaHMDS、KHMDS或LiHMDS之鹼存在下，或於惰性溶劑中之LiCl存在下使用Et3N，亦可以穩定的磷酸酯(G-V)處理環丁酮(G-IX)而得到α,β不飽和酯(G-XIII)，藉由於惰性溶劑中之諸如Pd/C、Pd(OH)2或PtO2之金屬觸媒存在下，以H2進行處理，其可被還原成(G-XIV)。於合適的諸如氯甲酸異丁酯之偶合劑與諸如Hunig’s鹼之鹼存在下，以N,O-二甲基羥基胺進行處理，(G-XIV)的酸官能性可被轉變成對應的Weinreb 醯胺以得到(G-XV)。
於合適的諸如氯甲酸異丁酯之偶合劑與諸如Hunig’s鹼之鹼存在下，以N,O-二甲基羥基胺進行處理，亦可利用N,O-二甲基羥基胺來處理環丁酮(G-XVI)以得到對應的Weinreb醯胺(G-XVII)，其利用氨等效物而進行還原胺化接著視需要而進行去保護而得到胺(G-XVIII)。合適的氨等效物包括二苯甲基胺、NH3、NH4Cl、BnNH2、PMB-NH2、2,4 DMB-NH2，若需要，於諸如HCl或AcOH之酸存在下，其可經酮(G-XVII)及合適的諸如NaCN(BH3)或Na(OAc)3BH之還原劑處理。藉由熟此技藝熟知之方法可移除還原性胺化產物保護基團。選擇性地，可利用羥基胺酮(G-XVII)進行處理以形成對應的肟，於諸如Pd/C、PtO2或Pd(OH)2之金屬觸媒存在下，其可利用H2進行還原以得到中間產物(G-XVIII)。
經由包括以磷烷(G-V)處理(G-IV)之多-步驟順序，環丁烷(G-IV)可轉變成胺(G-XXI)以產生烯醇醚(G-XIX)。(G-XIX)處理後，於合適的諸如氯甲酸異丁酯之偶合劑及諸如Hunig’s鹼之鹼存在下，接著以N,O-二甲基羥基胺以得到對應的Weinreb醯胺(G-XX)，其在烯醇醚(如，TsOH/H2O、HCl/H2O)之含水水解及利用氨等效物進行還原性胺化並視需要進行去保護後產生胺(G-XXI)。合適的氨等效物包括二苯甲基胺、NH3、NH4Cl、BnNH2、PMB-NH2、2,4 DMB-NH2。供還原胺化之合適的還原劑包括NaCN(BH3)或Na(OAc)3BH，其係視需要於諸如HCl或AcOH之酸存在 下被利用。還原胺化產物上的保護基團可藉由熟此技藝者知悉的方式被移除。
經由流程H中所述之反應順序，環丁酮(H-I)可被轉變成苯并咪唑(H-III)、脲(H-IV)以及醯胺(H-V)。於合適的偶合劑(如，HATU、PPAA、COMU、EDC、EDCI)存在下、於鹼(如，Et3N、Hunig’s鹼、K2CO3)存在下，藉由以酸(H-I)與適當的苯二胺(H-II)進行處理可形成苯并咪唑(H-III)。若需要，可添加另外的試劑，諸如HOAT、HOBt或HOSu。於諸如AcOH之酸(其亦可作為溶劑)存在下，將所得的胺基-醯胺還化成苯并咪唑。通常於室溫至80℃的溫度範圍中進行反應。可如下述般轉變酸(H-I)成為脲(H-IV)。使用諸如LiAlH4或BH3.THF之試劑酸可被還原成對應的一級醇。若需要，於還原前可首先保護酮的官能性(如，成為縮酮)，然後再去保護。一級醇接著轉變成如甲磺 酸鹽之脫離基。以來自諸如NaN3之來源的疊氮化物置換所得的脫離基。於諸如Pd/C之金屬觸媒而使用H2或經由與諸如PMe3或PPh3之膦的薛丁格爾反應，疊氮基產物化合物係還原成對應的胺基化合物。在於諸如CH2Cl2之惰性溶劑中之諸如Et3N或K2CO3的鹼存在下，以一級胺與適當的異氰酸酯R-C=N=O進行處理而形成脲(H-IV)。於合適的偶合劑(如，HATU、PPAA、COMU、EDC、EDCI)存在下、於鹼(如，Et3N、Hunig’s鹼、K2CO3)存在下，藉由酸(H-I)與適當的胺R-NH2進行處理而形成醯胺(H-V)。若需要，可加入另外的試劑，諸如HOAT、HOBt或HOSu。
如以上流程I所示，使用類似於流程H中描述的程序接著進行Weinreb醯胺還原，Weinreb醯胺(I-I)及(I-V)可轉變成苯并咪唑醛(I-III)、脲醛(I-IV)及(I-VI)以及醯胺醛(I-V)。可使用於諸如CH2Cl2、THF之惰性溶劑中的DiBAL-H於10至-78℃的溫度來實施Weinreb醯胺還原。以適當的異氰酸酯進行處理接著以DiBAL-H進行還原，胺基Weinreb醯胺(I-V)亦可轉變成脲(I-VI)。
可如流程J中所述者來合成苯并咪唑(J-V)、脲(J-VI)以及醯胺(J-VII)中間產物。可使環丁酮(J-I)與磷烷(J-II)進行Wittig反應以產生烯醇醚(J-III)。烯醇醚酯接著經受類似於流程H中所述之反應條件以產生對應的烯醇醚苯并咪唑、脲及醯胺，以諸如TsOH/H2O、HCl之含水酸進行處理時，分別產生對應的醛中間產物(J-V)、(J-VI)及(J-VII)。
上述流程K中之式(K-V)表示以下之中間產物(K-I至K-IV)以及彼等對應之2'-或3'-去氧基中間產物，彼之合成係描述於流程A-F中。
如流程K中所述者，酮(K-VI)、(K-VII)及(K-VIII)以及醛(K-XII)、(K-XIII)及(K-XIV)係經由與(K-V)之還原胺化而轉變成對應之苯并咪唑(K-IX)及(K-XV)、脲(K-X)及(K-XVI)以及醯胺(K-XI)及(K-XVII)。若需要，於諸如HCl或AcOH之酸或諸如Ti(OiPr)4或MgSO4之路易士酸/脫水劑存在下，可利用諸如NaCN(BH3)或Na(OAc)3BH之合適的還原劑實施還原胺化。
於選擇性的反應順序中，可藉由流程L中描述之反應順序來製備標的苯并咪唑(L-V)、脲(L-VI)以及醯胺(L-VII)。於諸如HCl或AcOH之酸或諸如Ti(OiPr)4之路易士酸存在下於還原胺化條件下使用諸如之NaCNBH3或Na(OAc)3BH還原劑，胺(L-I)(其中Q及RC具有與流程K中者相同的定義)係經環丁烷(L-II)處理以得到酸(L-III)。使用類似於流程H中之反應條件，酸可轉變成對應之標的苯并咪唑(L-V)、脲(L-VI)及醯胺(L-VII)。
於酸化條件下(如，TsOH/H2O、HCl/H2O)，可水解烯醇醚(M-1)以得到醛(M-II)。於諸如HCl或AcOH之酸或諸如Ti(OiPr)4或MgSO4之路易士酸/脫水劑存在下，使用諸如之NaCNBH3或Na(OAc)3BH還原劑，由胺(M-III)(其中Q及RC具有如流程K中者相同的定義)進行還原胺化(M-II)。接續移除酯保護基團以得到酸(M-IV)。使用類似於流程H中所述之反應條件，酸(M-V)(其包括酸(M-IV))可轉變成對應之標的苯并咪唑(M-VII)、脲(M-VIII)及醯胺(M-IX)。
可如流程N所示者來合成式(N-XIII)之苯并咪唑、脲以及醯胺。利用諸如NaClO2之試劑進行氧化反應，醛(N-I)(其中X表示苯并咪唑、脲或醯胺官能性)可轉變成對應之酸。以式(N-IV)之磷酸酯及諸如於惰性溶劑中之LiHMDS、NaHMDS、KHMDS、KOtBu、LDA或Et3N/LiCl之合適的鹼來處理式(N-III)之環丁酮以得到環丁烷(N-V) ，於諸如Pd/C、PtO2或Pd(OH)2之合適的金屬觸媒存在下以H2進行處理使其還原以產生酸(N-VI)。
經由類似於流程H中所描述之系列反應，式(N-VII)之酸(其包括式(N-VI)之酸)可轉變成對應之苯并咪唑(N-IX)、脲(N-X)及醯胺(N-XI)。於鹼(如，Et3N、Hunig’s鹼、K2CO3)存在下使用合適的偶合劑(如，HATU、PPAA、COMU、EDC、EDCI)，經由與胺(N-XIII)(其中RC及Q具有如流程K中者相同的定義)之醯胺偶合反應，式(N-II)之苯并咪唑、脲及醯胺可接著轉變成式(N-XIII)之苯并咪唑、脲及醯胺。若需要，可加入另外的試劑，諸如HOAT、HOBt或HOSu。
可如流程O中所述者合成硫基醚(O-XIII)、亞碸(O-XIV)以及碸(O-XV)。利用諸如NaBH4之還原劑可將環丁酮(O-I)(其中X代表苯并咪唑、脲或醯胺官能性)還原成對應之醇，接著以諸如於惰性溶劑中之K2CO3的鹼及MsCl進行處理，其可轉變成諸如MsO之脫離基。首先利用以硫為基之諸如KSAc的親核劑進行處理接著於鹼性條件，如LiOH/H2O/MeOH進行水解，環丁烷(O-II)接著轉變成對應之硫基(O-III)。
經由類似於將(O-I)轉變成(O-III)之反應順序，醛(O- IV)可轉變成對應之硫基。
於合適的鹼(Cs2CO3、K2CO3、LiHMDS、NaHMDS、KHMDS、KOtBu、LDA)存在下以式(O-VIII)之磷酸酯進行處理接著於諸如Pd/C、PtO2或Pd(OH)2之合適的金屬觸媒存在下使用H2進行還原，環丁酮(O-VII)可轉變成酸(O-IX)。使用諸如BH3：THF之試劑或藉由與羰基二咪唑、Et3N接著與NaBH4進行反應，酸係選擇性地還原成一級醇。使用類似用於自彼之二級醇中間產物合成(O-III)及(O-VI)之反應，一級醇轉變成對應之硫基。
接著可利用中間產物(O-XII)來處理硫基(O-XI)，其中Q’代表如下描述之中間產物(O-XVI)、(O-XVII)、(O-XVIII)及(O-XIX)(以及對應之2'-或3'-去氧基中間產物)以及LG代表諸如Cl、TfO或MsO之脫離基。反應可於諸如K2CO3、Cs2CO3、Et3N或Hunig’s鹼之合適的存在下進行以得到硫基醚(O-XIII)，其可經由以諸如H2O2或mCPBA之合適的氧化劑進行處理而轉變成對應之亞碸(O-XIV)或碸(O-XV)。
使用標準反應條件可由胺(P-I)、(P-II)以及(P-III)合成胺、醯胺以及磺醯胺標的分子。於合適的偶合劑(如，HATU、PPAA、COMU、EDC、EDCI)存在下且於鹼(如，Et3N、Hunig’s鹼、K2CO3)存在下，藉由適當的羧酸來處理胺可產生醯胺標的分子。若需要，可加入另外的試劑，諸如HOAt,HOBt或HOSu。於諸如K2CO3或Et3N之鹼存在下，以適當的磺醯氯處理胺可產生磺醯胺標的分子。於諸如NaBH(OAc)3或NaCNBH3之合適的還原劑存在下，經由與適當的醛或酮之還原胺化反應可形成胺標的分子。可加入另外的試劑，如諸如AcOH或HCl之酸或諸如Ti(OiPr)4或MgSO4之路易士酸/脫水劑。
於本文描述中，當敘述成分具有、包括或包含特定成分或包含特定製程步驟時，其企圖說明本發明之成分亦基本上由或由所載之成分構成，以及本發明亦基本上由或由 所載之製程步驟構成。此外應瞭解，只要可操作本發明，則步驟的順序或執行特定動作的順序為不重要的。再者，可同時執行二或更多個步驟或動作。
由以上說明之方法所設計、選擇及/或最佳化之化合物一旦被產生，則可使用熟此技藝者知悉之各樣分析來定性以決定化合物是否具有生物活性。例如，可藉由傳統分析法來定性分子，其包括但不限於下述之分析法以決定分子是否具有預定的活性、結合性及/或結合特異性。
此外，可使用高產量篩選以加速使用彼之分析。因此，使用本領域熟知的技術，其可針對活性快速篩選本文所述之分子。用於施行高產量篩選之普通方法係描述於，例如，Devlin(1998)High Throughput Screening,Marcel Dekker；以及美國專利第5,763,263號。高產量分析可使用一或更多種不同的分析技術，包括但不限於本文所述者。
為進一步評估化合物之近似的特性，亦可使用重組人酵素系統或複合類人肝臟微粒體來量測細胞色素P450酵素之度量以及第II期代謝酵素活性。再者，亦可以化合物作為代謝酵素活性之基質而進行評估。這些活性通常有用於決定化合物引起藥物-藥物交互作用或產生能維持或不具有用於抗微生物活性的代謝物之潛能。
為評估化合物為具口服性生物有效潛能，亦可實施溶解度及Caco-2分析。後者為來自人上皮細胞之細胞株，其致能測量藥物吸收及通過通常生長於具有1微米膜之 24-井微量滴定板之井中的Caco-2細胞單層。可於單層的底側量測游離藥物濃度，評估可穿過腸單層之藥物量。適當的控制確保單層的完整性且需要緊密的間隙接合。使用此系統可估計P-糖蛋白媒介的流量。P-糖蛋白為位於頂膜的泵，形成極化的單層。此泵可消除橫越Caco-2細胞膜的主動或被動吸收，使得較少藥物通過腸上皮細胞層。通常一起獲得此等結果與溶解度量測且熟知這些因子影響哺乳類之口服生物有效性。動物中之生物有效性的測量及最終於人體內使用之傳統藥物動力學試驗將決定絕對的口服生物有效性。
亦可利用試驗結果來建立幫助預測物理-化學參數的模型，該參數影響藥物類特性。當該模型為可變時，可減少試驗性方法學而增加模型預測力的可靠度。
3.治療方法
混合細胞系白血病(MLL)與急性白血病於遺傳上不相同，急性白血病造成超過70%之嬰幼兒白血病及約10%之成人急性骨髓性白血病(AML)(Hess,J.L.(2004),Trends Mol Med 10,500-507；Krivtsov,A.V.，以及Armstrong,S.A.(2007),Nat Rev Cancer 7,823-833)。MLL為特別地侵略性類型白血病且具有此疾病的病人通常預後不佳。這些病人於現行的化療之後經常遭遇早期復發。因此目前急需用於遭受MLL之苦的病人之新的治療模式。
MLL疾病的通用標記為影響染色體11q23a上之MLL 基因的染色體轉位(Hess,2004；Krivtsov and Armstrong,2007)。一般而言，MLL基因編碼SET-域組蛋白甲基轉移酵素，此酵素催化於特定基因座之組蛋白H3之離胺酸4(H3K4)的甲基化(Milne et al.(2002)Mol細胞10,1107-1117；Nakamura et al.(2002),Mol細胞10,1119-1128)。基因位置係由SET-域外之與MLL內之識別元素的相互作用來確認(Ayton et al.(2004)Mol細胞Biol 24,10470-10478；Slany et al.,(1998)Mol細胞Biol 18,122-129；Zeleznik-Le et al.(1994)Proc Natl Acad Sci U S A 91,10610-10614)。於疾病-關聯的轉位中，缺少催化性SET-域，且剩下的MLL蛋白質與各樣配偶體融合，包括諸如AF4、AF9、AF10以及ENL之AF以及ENL蛋白家族的成員(Hess,2004；Krivtsov and Armstrong,2007；Slany(2009)Haematologica 94,984-993)。這些融合配偶體能與另外的組蛋白甲基轉移酵素-DOT1直接地或間接地相互作用(Bitoun et al.(2007)Hum Mol Genet 16,92-106；Mohan et al.(2010)Genes Dev.24,574-589；Mueller et al.(2007)Blood110,4445-4454；Mueller et al.(2009)PLoS Biol 7,e1000249；Okada et al.(2005)細胞121,167-178；Park et al.(2010)Protein J 29,213-223；Yokoyama et al.(2010)Cancer細胞17,198-212；Zhang et al.(2006)J Biol Chem 281,18059-18068)。因此，於剩下的MLL蛋白質中，轉位產物保有基因專一識別元素，但亦得到將DOT1L加入至這些位置的能力(Monroe et al. (2010)Exp Hematol.2010 Sep18.[印行前電子公開]Pubmed PMID：20854876；Mueller et al.,2007；Mueller et al.,2009；Okada et al.,2005)。DOT1L催化H3K79的甲基化，其係關於主動轉錄之基因的染色質修飾(Feng et al.(2002)Curr Biol 12,1052-1058；Steger et al.(2008)Mol細胞Biol 28,2825-2839)。肇因於加入DOT1L之MLL融合蛋白的異位H3K79甲基化造成包括HOXA9及MEIS1之白血病基因表現增加(Guenther et al.(2008)Gene& Development 22,3403-3408；Krivtsov et al.(2008)Nat Rev Cancer 7,823-833；Milne et al.(2005)Cancer Res 65,11367-11374；Monroe et al.,2010；Mueller et al.,2009；Okada et al.,2005；Thiel et al.(2010)Cancer細胞17,148-159)。因而，當DOT1L非於疾病自身中遺傳性改變時，其錯置的酵素活性為影響MLL病人之染色體轉位的直接結果；因此，DOT1L已被提出作為此疾病中之白血病基因的催化者(Krivtsov et al.,2008；Monroe et al.,2010；Okada et al.,2005；Yokoyama et al.(2010)Cancer細胞17,198-212)。進一步針對DOT1L於MLL中扮演之致病性角色之論理支持得自模型系統的研究，該系統展示於繁殖改變活性之MLL融合蛋白中需要DOT1L(Mueller et al.,2007；Okada et al.,2005)。
證據指出DOT1L致病性角色的催化活性對於MLL的致病性為重要因素且抑制DOT1L可提供針對此疾病之治療性干擾的藥學基礎。化合物治療造成帶有MLL轉位之 白血病細胞之選擇性的濃度相依性死亡而不會影響非-MLL轉型的細胞。以抑制劑治療之細胞的基因表現分析顯示於MLL-重排的白血病中之基因異常地過度表現的負調控且類似於MLL-AF9白血病小鼠模型中剔除Dot1L基因所造成的基因表現改變。
本發明藉由投予需要治療的個體治療上有效含量之本發明的化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物，而提供用於治療有需要的個體中之細胞增生病症的方法。細胞增生病症可為癌症或尚未成癌的病症。本發明進一步提供本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物之用途，其係用於製備有用於細胞增生疾病之治療的藥物。
本發明藉由投予需要治療的個體治療上有效含量之本發明的化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物，而提供用於治療有需要的個體中之血液癌症或血液腫瘤的方法。本發明進一步提供本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物之用途，其係用於製備有用於血液癌症或血液腫瘤之治療的藥物。
本發明藉由投予需要治療的個體治療上有效含量之本發明的化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物，而提供用於治療有需要的個體中之白血病的方法。白血病可為急性或慢性白血病。較佳地，白血病為急性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病或混合細胞 系白血病。本發明進一步提供本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物之用途，其係用於製備有用於白血病之治療的藥物。
本發明藉由投予需要治療的個體治療上有效含量之本發明的化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物，而提供用於治療有需要的個體中之由於染色體11q23上之基因轉位所媒介之疾病或病症的方法。該基因可為MLL基因。本發明進一步提供本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物之用途，其係用於製備有用於由於染色體11q23上之基因轉位所媒介之疾病或病症之治療的藥物。
本發明藉由投予需要治療的個體治療上有效含量之本發明的化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物，而提供用於治療有需要的個體中之由DOT1(如，DOT1L)-中介的蛋白質甲基化引起的疾病或病症的方法。本發明進一步提供本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物之用途，其係用於製備有用於由DOT1L中介的蛋白質甲基化引起的疾病或病症之治療的藥物。
本發明提供用於治療病程中受到調控組蛋白或其他蛋白質之甲基化程度影響之病症的方法，其中該甲基化程度至少部分由DOT1L活性所中介。調控組蛋白之甲基化程度可因此影響受甲基化而活化之標的基因及/或受甲基化而抑制之標的基因表現的程度。此方法包括投予需要治療 的個體治療上有效含量之本發明的化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體、溶劑化物或立體異構物。
受DOT1L-中介的蛋白質甲基化影響的病症可為癌症或尚未成癌的病症或神經系統疾病。本發明進一步提供本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物之用途，其係用於製備有用於癌症或神經系統疾病之治療的藥物。
本發明藉由投予需要治療的個體治療上有效含量之本發明的化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物，亦提供用於治療有需要的個體中之遭受DOT1L-中介的蛋白質甲基化影響之疾病的方法。此疾病可為症或神經系統疾病。本發明亦進一步提供本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體、溶劑化物或立體異構物之用途，其係用於製備有用於預防細胞增生疾病的藥物。
本發明之化合物可用於調控蛋白質(如，組蛋白)甲基化，如，調控組蛋白甲基轉移酵素或組蛋白去甲基酶酵素的活性。已報導組蛋白甲基化與癌症中特定基因的異常表現有關，且於非神經元細胞中沉默化神經元基因。本文中之化合物可用於治療這些疾病，即降低甲基化或恢復甲基化至約於對應正常細胞中之程度。
一般來說，作為甲基化調控子的化合物可用於調控細胞增殖，一般例如，於過度增殖的情況中可以試劑降低甲 基化，而於不充分的增殖時可以試劑進行刺激而使甲基化增加。因此，可以本發明化合物治療的疾病包括包括過度增生疾病，諸如良性細胞生長及惡性細胞生長。
如本文所使用者，“需要彼的個體”為具有細胞增生疾病的個體，或相對於族群具有較大之發生細胞增生病症的風險之個體。個體可具有癌症或初癌。較佳地，需要彼之個體癌症。更佳為血液癌症或白血病。“個體”包括哺乳類。哺乳類可為例如任何哺乳類，如人、靈長類、鳥、小鼠、大鼠、家禽、狗、貓、乳牛、馬、山羊、駱駝、綿羊或豬。較佳地，哺乳類為人。
如本文所使用者，術語“細胞增生疾病”意指細胞未受調控或不正常生長或兩者的情況中可能造成不想要之病症或疾病(可能為癌症或可能不是癌症)的發展。本發明之例示性細胞增生疾病包括各種細胞***不受調控的病症。例示性細胞增生病症包括，但不限於，腫瘤、良性腫瘤、惡性腫瘤、初癌病症、原位腫瘤、包囊腫瘤、轉移性腫瘤、液體腫瘤、固體腫瘤、免疫性腫瘤、血液腫瘤、癌症、癌、白血病、淋巴瘤、肉瘤以及快速***的細胞。本文所使用的術語“快速***的細胞”係定義為於相同組織中***速度超過或大於預期者或超過或大於附近或相鄰細胞所觀察到者的細胞。細胞增生病症包括初癌或初癌症狀。細胞增生病症包括癌症。較佳地，本文所提供的方法係用於治療或減緩癌症癥候。術語“癌症”包括固體腫瘤以及血液腫瘤及/或惡性腫瘤。“初癌細胞”或“初癌性細胞”為細胞瀰漫性 細胞增生病症(其為初癌或初癌症狀)。“癌症細胞”或“癌性細胞”為為細胞瀰漫性細胞增生病症(其為癌症)。可使用任何可再現的量測手段來辨識癌症細胞或初癌性細胞。可由組織類型或組織樣本(如，生物檢體樣本)的等級來辨識癌症細胞或初癌性細胞。可使用適當的分子標記來辨識癌症細胞或初癌性細胞。
例示性的非癌症狀或或疾病包括，但不限於，類風濕性關節炎；發炎；自體免疫疾病；淋巴增生病症；末端肥大症；風濕性脊椎炎；骨性關節炎；痛風，其他關節病症；敗血症；敗血性休克；內毒素休克；革蘭氏陰性敗血症；毒素休克癥候群；氣喘；成人呼吸窘迫癥候群；慢性阻塞性肺臟疾病；慢性肺臟發炎；發炎性腸道疾病；克隆氏病；牛皮癬；濕疹；潰瘍性結腸炎；胰臟纖維化；肝臟纖維化；急性及慢性腎臟疾病；大腸急躁症；發熱(pyresis)；再狹窄；腦瘧疾；中風及缺血性傷害；神經創傷；阿茲海默氏症；杭汀頓舞蹈病；帕金森氏病；急性及慢性疼痛；過敏性鼻炎；過敏性結膜炎；慢性心臟衰竭；急性冠狀動脈症候群；惡病質；瘧疾；痲瘋；利什曼病；萊姆病；雷德氏症候群；急性滑膜炎；肌肉變性；滑液囊炎；肌腱炎；腱鞘炎；椎間盤突出、破裂或脫出；骨硬化症；血栓；再狹窄；矽肺症；肺結節病；骨吸收疾病，諸如骨質疏鬆；移植物對抗宿主反應；多發性硬化症；紅斑性狼瘡；肌纖維痛；AIDS以及其他病毒性疾病，諸如帶狀皰疹、單純泡疹I或II型、流行性感冒病毒以及具大細胞病毒； 以及糖尿病。
例示性的癌症包括，但不限於，腎上皮癌、AIDS相關癌症、AIDS相關淋巴癌、肛門癌、肛門直腸癌症、肛門管的癌症、闌尾癌、兒童小腦星狀細胞瘤、兒童腦星狀細胞瘤、基底細胞癌、皮膚癌(非黑色素瘤)、膽管癌、肝外膽管癌、肝內膽管癌、膀胱癌、尿道膀胱癌、骨癌以及關節癌、惡性骨肉瘤以及惡性纖維組織球瘤、腦癌、腦腫瘤、腦幹胶質瘤、小腦星形細胞瘤、腦部毛細胞型星狀細胞瘤/惡性胶質瘤、室鼓膜瘤、髓母細胞瘤、幕上原始神經外胚葉腫瘤、視覺路徑以及視交叉-下丘腦胶質瘤、乳癌、支氣管腺瘤/良性腫瘤、類癌瘤、胃腸與神經系統癌症、神經系統淋巴瘤、中樞神經系統癌症、中樞神經系統淋巴瘤、子宮頸癌、兒童期癌症、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性骨髓增生疾病、結腸癌、大腸直腸癌、原發性皮膚T-細胞淋巴瘤、淋巴腫瘤、蕈狀肉芽腫、塞扎莱(Seziary)综合症、子宮內膜癌、食道癌、生殖細胞腫瘤、性腺外生殖細胞瘤、肝外膽管癌、眼癌、眼內黑素瘤、成视網膜细胞瘤、膽囊癌、胃癌、胃腸道類癌腫瘤、胃腸道間質瘤(GIST)、生殖細胞腫瘤、卵巢生殖细胞腫瘤、妊娠滋養细胞神經膠質瘤、頭頸部腫瘤、肝细胞癌、霍奇金氏淋巴瘤、下咽癌、眼內黑素瘤、眼癌症、小島細胞腫瘤、卡波西氏肉瘤、腎臟癌、腎癌、直腸癌、喉癌、急性淋巴细胞性白血病、急性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血 症(CMI)、多毛细胞白血病、唇及口腔癌、肝癌、肺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、AIDS相關淋巴癌、非霍奇金氏淋巴瘤、原發性中樞神經淋巴瘤、原發性巨球蛋白血症(Waldenstram macroglobulinemia)、髓母細胞瘤、黑素瘤、眼內黑素瘤、梅克爾细胞癌、惡性間皮瘤、間皮癌、頸部鳞状细胞癌、口癌、舌癌、多發性內分泌腺瘤、蕈樣真菌病、骨髓發育不良症候群、骨髓發育不良/骨髓增生疾病、慢性髓细胞性白血病、急性骨髓性白血病、多發性骨髓瘤、慢性骨髓增生疾病、鼻咽癌、神經胚細胞瘤、口腔癌、口腔(oral cavity)癌症、口咽癌、卵巢癌、卵巢上皮性癌、卵巢低惡性潛在的腫瘤、胰臟癌、小島細胞胰臟癌、副鼻竇及鼻腔癌症、副甲狀腺癌、睪丸癌、扁桃腺癌、嗜鉻細胞瘤、松果體母細胞瘤及顱內幕上原始神經外胚層腫瘤、腦下垂體腫瘤、血漿細胞腫瘤/多發性骨髓瘤、肋膜肺臟原胚瘤、***癌、直腸癌、腎盂以及尿道癌、移行細胞癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、唾腺癌、尤文氏肉瘤家族、卡波西氏肉瘤、軟組織肉瘤、子宮癌、子宮肉瘤、皮膚癌(非黑色素瘤)、皮膚癌(黑色素瘤)、默克(merkel)細胞皮膚癌、小腸癌、軟組織肉瘤、鱗狀上皮細胞癌、胃癌、顱內幕上原始神經外胚層腫瘤、睪丸癌、喉癌、胸腺瘤、胸腺瘤以及胸腺癌、甲狀腺癌、腎盂及尿道之移行細胞癌以及其他泌尿器官、妊娠滋養细胞腫瘤、尿道癌、子宮內膜癌、子宮肉瘤、子宮體惡性肉瘤、***癌、陰門癌、以及威姆氏(Wilm’s)腫瘤。
“血液系統的細胞增生病症”為涉及血液系統的細胞之細胞增生病症。血液系統的細胞增生病症可包括淋巴癌、白血病、骨髓樣腫瘤、肥胖細胞腫瘤、脊髓發育異常、良性克隆丙球蛋白病、淋巴瘤樣肉芽腫病、淋巴瘤樣丘疹病、紅血球過多症、慢性骨隨性白血病、骨髓纖維化以及原發性血小板過多症。血液系統的細胞增生病症可包括血液系統的增生、發育異常及細胞組織變形。較佳地，本發明之組成物可用於治療癌症，其係選自本發明之血液癌症或本發明之血液細胞增生病症所組成的群組。本發明之血液癌症可包括多發性骨髓瘤、淋巴瘤(包括霍金奇氏淋巴瘤、非霍金奇氏淋巴瘤、兒童淋巴瘤以及淋巴球的及皮膚來源的淋巴瘤)、白血病(包括兒童白血病、髮樣細胞白血病、急性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴球白血病、慢性骨髓性白血病、慢性骨髓球白血病及肥胖細胞白血病)、骨髓球腫瘤以及肥胖細胞腫瘤。
“肺臟的細胞增生病症”為涉及肺臟的細胞之細胞增生病症。肺臟的細胞增生病症可包括影響肺臟細胞之所有型式的細胞增生疾病。肺臟的細胞增生病症可包括肺癌、肺之初癌或初癌性症狀、肺臟之良性生長或病變以及肺臟之惡性生長或病變以及身體內除肺臟外之組織及器官中之中轉移性病變。較佳地，本發明之組成物可用以治療肺癌或肺臟之細胞增生疾病。肺癌可包括肺臟之所有型式的癌症。肺癌可包括惡性肺腫瘤、原位惡性腫瘤、典型類癌腫瘤以及非典型類癌腫瘤。肺癌可包括小細胞肺癌(“SCLC”)、 非小細胞肺癌(“NSCLC”)、鱗狀上皮細胞瘤、腺癌、大細胞癌、腺癌併鱗狀上皮細胞癌及中皮瘤。肺癌可包括“疤痕癌”、細支氣管肺泡癌、巨大細胞癌、梭形細胞癌以及大細胞神經內分泌癌。肺癌可包括具組織性及超微結構異質性之肺腫瘤(如，混合細胞型)。
肺臟的細胞增生病症可包括影響肺臟細胞之所有型式的細胞增生疾病。肺臟的細胞增生疾病包括肺癌、肺臟的初癌或初癌性病症。肺臟的細胞增生疾病可包括肺臟的增生、發育異常以及細胞組織變形。肺臟的細胞增生疾病可包括石棉誘發的增生、鱗狀轉移瘤、及良性反應間皮細胞組織變形。肺臟的細胞增生疾病可包括以複層鱗狀上皮細胞取代柱狀上皮細胞及黏膜部點型增生。個體暴露於吸入性傷害環境劑，諸如抽菸以及可能增加肺臟細胞增生疾病發展風險之石棉。可能使個體易發生肺臟細胞增生疾病的先前肺臟疾病，其包括慢性間隙肺臟疾病、肺壞死疾病、硬皮病、風濕性疾病、類肉瘤病、間質性肺癌、肺結核、反復性肺癌、特發性肺纖維化、肉芽腫、石棉肺病、纖維化肺泡癌以及霍金奇氏疾病。
“結腸的細胞增生病症”為涉及結腸的細胞之細胞增生病症。較佳地，結腸的細胞增生病症為結腸癌。較佳地，本發明的組成物可用以治療結腸癌症或結腸的細胞增生疾病。結腸癌可包括結腸之所有型式之癌症。結腸癌可包括偶發性及遺傳性結腸癌症。結腸癌可包括惡性結腸腫瘤、原位癌、典型類癌腫瘤以及非典型類癌腫瘤。結腸癌可包 括腺癌、鱗狀上皮細胞癌以及腺癌併鱗狀上皮細胞癌。結腸癌可與選自下列群組之遺傳性癥候群有關：遺傳性非息肉性大腸直腸癌、家族性結直腸瘜肉綜合症、Gardner氏癥候群、Peutz-Jeghers氏癥候群、Turcot氏癥候群以及幼年性息肉。結腸癌可由選自下列群組之遺傳性癥候群所引起：遺傳性非息肉性大腸直腸癌、家族性結直腸瘜肉綜合症、Gardner氏癥候群、Peutz-Jeghers氏癥候群、Turcot氏癥候群以及幼年性息肉。
結腸的細胞增生疾病可包括影響結腸細胞之所有型式的細胞增生疾病。結腸的細胞增生疾病可包括結腸癌、結腸的癌性病症、結腸的腺瘤性息肉及結腸的特異性病變。結腸的細胞增生病症可包括腺瘤。結腸的細胞增生疾病之特徵可為結腸的增生增生、組織變形以及發育異常。可能使個體易發生結腸細胞增生疾病的先前結腸疾病可包括先行結腸癌。目前之可能使個體易發生結腸細胞增生疾病的結腸疾病可包括克隆氏疾病以及潰瘍結腸炎。結腸的細胞增生病症可與選自下列群組之基因的突變相關：p53、ras、FAP以及DCC。因為存在選自p53、ras、FAP或DCC之基因的突變，個體發生結腸的細胞增生病症之風險提高。
“胰臟的細胞增生病症”為涉及胰臟的細胞之細胞增生病症。胰臟的細胞增生疾病可包括影響胰臟細胞的所有型式之細胞增生疾病。胰臟的細胞增生疾病可包括胰臟癌、胰臟的初癌或癌性病症、胰臟的增生以及胰臟的非典型增 生、胰臟的良性生長或或病變以及胰臟的惡性生長或病變、以及體內除胰臟外之組織及器官中之轉移性病變。胰臟癌包括所有型式之胰臟的癌症。胰臟癌可包括導管腺癌、腺鱗狀癌、中肺部巨大細胞癌、黏液性腺癌、類蝕骨巨大細胞癌、黏液腺瘤、腺泡癌、未分類大細胞癌、小細胞癌、惡性胰腺腫瘤、乳頭狀汗腺瘤、黏液囊腺瘤、乳突狀囊腫瘤以及漿液性囊腺瘤。胰臟癌亦可包括具組織性及超微結構異質性的胰臟腫瘤(如，混和細胞型態)。
“***的細胞增生病症”為涉及***的細胞之細胞增生病症。***的細胞增生疾病可包括影響***細胞之所有型式的細胞增生疾病。***的細胞增生疾病可包括***癌、***的初癌或癌性病症、***的良性生長或病變以及***的惡性生長或病變，以及體內除***以外之組織及器官中的轉移性病變。***的細胞增生疾病可包括***的增生、組織變形及發育異常。
“皮膚的細胞增生病症”為涉及皮膚的細胞之細胞增生病症。皮膚的細胞增生疾病可包括影響皮膚細胞之所有型式之細胞增生疾病。皮膚的細胞增生疾病可包括皮膚的初癌或癌性病症、皮膚的良性生長或病變、黑腫瘤、惡性黑腫瘤以及其他的皮膚惡性生長或病變，以及體內除皮膚以外之組織及器官中的轉移性病變。皮膚的細胞增生疾病可包括皮膚的增生、組織變形以及發育異常。
“卵巢的細胞增生病症”為涉及卵巢的細胞之細胞增生病症。卵巢的細胞增生疾病可包括影響卵巢細胞之所有型 式之細胞增生疾病。卵巢的細胞增生疾病可包括卵巢的初癌或癌性病症、卵巢的良性生長或病變、卵巢癌、卵巢的惡性生長或病變，以及體內除卵巢以外之組織及器官中的轉移性病變。卵巢的細胞增生疾病可包括卵巢細胞的增生、組織變形以及發育異常。
“***的細胞增生病症”為涉及***的細胞之細胞增生病症。***的細胞增生疾病可包括影響***細胞之所有型式之細胞增生疾病。***的細胞增生疾病可包括乳癌、***的初癌或癌性病症、***的良性生長或病變，***的惡性生長或病變以及體內除***以外之組織及器官中的轉移性病變。***的細胞增生疾病可包括***的增生、組織變形及發育異常。
***的細胞增生病症可為***的癌性病症。本發明之組成物可用以治療***的癌性病症。***的癌性病症可包括***的非典型增生、乳管原位癌(DCIS)、腺管內癌、葉狀原位癌(LCIS)、乳小葉原位癌及第0期或第0級或***的生長病變(如，第0期或第0級乳癌或原位癌)。***的癌性病症可根據美國癌症分期聯合委員會(AJCC)認可的TNM分類流程而被分級，其中原發性腫瘤(T)已被指定為T0或Tis級；以及其中局部淋巴結(N)已被指定為N0級；以及其中遠處轉移(M)已被指定為M0級。
***的細胞增生病症可為乳癌。本發明之組成物可用以治療乳癌。乳癌包括乳癌的所有型式。乳癌可包括原發性上皮細胞乳癌。乳癌可包括其中***與其他諸如淋巴癌 、肉瘤或黑腫瘤之腫瘤有關的癌症。乳癌可包括***的癌症、***的乳管癌症、***的葉狀癌症、***的未分化癌、***的惡性葉狀囊性肉瘤、***的血管肉瘤以及***的原發性淋巴癌。乳癌可包括第I、II、IIIA、IIIB、IIIC以及IV期乳癌。***的乳管癌可包括侵襲性癌、具明顯管內癌成分的侵襲性原位癌、炎性乳癌以及具有選自粉刺性、黏性(凝膠)、髓質性、具濾液中淋巴細胞之髓質性、乳突狀、纖維硬化性以及細管狀所組成群組之組織型之***管腺癌。***的乳小葉癌可包括具明顯原位成分之侵襲性乳小葉癌、侵襲性乳小葉癌以及浸潤性乳小葉癌。乳癌可包括佩哲氏病、具腺管內癌之佩哲氏病以及具侵襲性乳管癌之佩哲氏病。乳癌可包括具有組織性及超微結構異質性之***腫瘤(如，混和細胞型態)。
較佳地，本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物可用以治療乳癌。待治療的乳癌可包括家族性乳癌。待治療的乳癌可包括偶發性乳癌。待治療的乳癌可能發生於男性個體。待治療的乳癌可能發生於女性個體。待治療的乳癌可能發生於絕經前的女性個體或絕經後的女性個體。待治療的乳癌可能發生於30歲或30歲以上或30歲以下的個體。待治療的乳癌可能發生於50歲或50歲以上或50歲以下的個體。待治療的乳癌可能發生於70歲或70歲以上或70歲以下的個體。
待治療的乳癌可被分類為家族性或自發性之BRCA1、BRCA2或p53突變。待治療的乳癌可被分類為具有 HER2/neu基因增殖，如過度表現HER2/neu或如具低、中或高程度的HER2/neu表現。待治療的乳癌可被選自***受體(ER)、黃體激素受體(PR)、人上皮細胞生長因子受體-2、Ki-67、CA15-3、CA 27-29及c-Met所組成群組之標記來分類。待治療的乳癌可被分類為ER-未知、ER-富含或ER-缺乏。待治療的乳癌可被分類為ER-陰性或ER-陽性。乳癌的ER分類可由任何可再現裝置實現。乳癌的ER分類可由Onkologie 27：175-179(2004)中提出者實現。待治療的乳癌可被分類為PR-未知、PR-富含或PR-缺乏。待治療的乳癌可被分類為PR-陰性或PR-陽性。待治療的乳癌可被分類為受體陰性或受體陽性。待治療的乳癌可被分類為與血液中上升的CA 15-3或CA 27-29或兩者的濃度有關。
待治療的乳癌可包括***的局部型腫瘤。待治療的乳癌可包括與陰性守衛性淋巴結(SLN)切片相關之***的腫瘤。待治療的乳癌可包括與陽性守衛性淋巴結(SLN)切片相關之***的腫瘤。待治療的乳癌可包括與一或更多陽性輔助淋巴結相關之***的腫瘤，其中輔助淋巴結已被任何可行的方法分級。待治療的乳癌可包括具有淋巴結陰性狀態(如，淋巴結陰性)或淋巴結陽性狀態(如，淋巴結陽性)之***的腫瘤。待治療的乳癌可包括已轉移至體內其他部位之***的腫瘤。待治療的乳癌可被分類為轉移至選自由骨、肺、肝或腦所組成群組之位置者。待治療的乳癌可由選自由轉移性、局部型、區域的、局部-區域的、局部擴 散性、遠處的、多中心的、雙邊的、同側的、對側的、診對初期的、復發的及不能動手術者所組成群組之特徵而被分類。
本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物可用以於針對族群而言發生乳癌風險相對為高之個體中治療或預防***的細胞增生病症，或治療或預防乳癌。針對族群而言發生乳癌風險相對為高之個體為具有乳癌的家族或個人歷史的女性。針對族群而言發生乳癌風險相對為高之個體為具有BRCA1或BRCA2或兩者之胚原(germ-line)或自發突變的女性。針對族群而言發生乳癌風險相對為高之個體為具有乳癌的家族歷史以及具有BRCA1或BRCA2或兩者之胚原(germ-line)或自發突變的女性。針對族群而言發生乳癌風險相對為高之個體為大於30歲、大於40歲、大於50歲、大於60歲、大於70歲、大於80歲或大於90歲之女性。針對族群而言發生乳癌風險相對為高之個體具有***的非典型增生、乳管原位癌(DCIS)、腺管內癌、葉狀原位癌(LCIS)、乳小葉原位癌或***的第0期生長或病變(如，第0期或第0級乳癌或原位癌)。
待治療的乳癌可根據Scarff-Bloom-Richardson系統而組織性地分級，其中***腫瘤已被分為有絲***率為1、2或3；細胞核多型性為1、2或3；乳腺管形成為1、2或3分；以及Scarff-Bloom-Richardson總分為3及9之間。待治療的乳癌可根據乳癌治療的國際共識小組而被分級為第 1級、第1-2級、第2級、第2-3級或第3級。
待治療的癌症可根據美國癌症分期聯合委員會(AJCC)TNM分類系統而被分級，其中腫瘤(T)已被分為TX、T1、T1mic、T1a、T1b、T1c、T2、T3、T4、T4a、T4b、T4c或T4d階段；以及其中區域性淋巴結(N)已被分為NX、N0、N1、N2、N2a、N2b、N3、N3a、N3b或N3c階段；以及其中遠處轉移(M)可被分為MX、M0或M1階段。待治療的癌症可根據癌症分期聯合委員會(AJCC)而分類成第I階段、第IIA階段、第IIB階段、第IIIA階段、第IIIB階段、第IIIC階段或第IV階段。待治療的癌症可根據AJCC而分類成第GX級(如，無法估計級)、第1級、第2級、第3級或第4級。待治療的癌症可根據AJCC病理分類(pN)而分為pNX、pN0、PN0(I-)、PN0(I+)、PN0(mol-)、PN0(mol+)、PN1、PN1(mi)、PN1a、PN1b、PN1c、pN2、pN2a、pN2b、pN3、pN3a、pN3b或pN3c。
待治療的癌症可包括經測定為直徑為小於或等於約2公分的腫瘤。待治療的癌症可包括經測定為直徑為約2至5公分的腫瘤。待治療的癌症可包括經測定為直徑為小於或等於約3公分的腫瘤待治療的癌症可包括經測定為直徑為大於5公分的腫瘤。待治療的癌症可由顯微鏡特徵而被分類為良好分化、中等分化、不良分化或是未分化。待治療的癌症可由顯微鏡特徵與有絲***數目(如，細胞***量)或與細胞多核性(如，細胞中的改變)而被分類。待治療的癌症可由顯微鏡特徵分類為與細胞壞死面積相關(如， 細胞死亡面積或細胞退化面積)。待治療的癌症可被分類為具有異常核型、具有異常數目之染色體或具有一或更多外觀異常的染色體。待治療的癌症可被分類為非整倍體、三倍體、四倍體或具有改變的多倍體。待治療的癌症可被分類為具有染色體轉位，或全染色體的缺失或重複，或部分染色體的區域性缺失、重複或增殖。
待治療的癌症可為DNA細胞計數法、流式細胞計數法或影像細胞計數法所評估。待治療的癌症可被分類為具有10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%之於細胞***的合成期之細胞(如，細胞***的DNA合成期(S期))。待治療的癌症可被分類為具有低S期比率或高S期比率。
如本文所使用者，“正常細胞”為不可被分類為“細胞增生疾病”者之細胞。正常細胞不具可能導致不想要的症狀或疾病發生之未受調控或異常生長或兩者。較佳地，正常細胞具有正常運作之細胞週期檢查點控制機制。
如本文所使用者，“接觸細胞”意指化合物或其他關注成分直接與細胞接觸，或足夠靠近以誘發細胞中所欲的生物性效果的情況。
如本文所使用者，“候選化合物”意指本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物，其已或將要在一或更多活體外或活體內生物性分析中進行測試，以決定該化合物是否能引出於細胞、組織、系統、動物或人之中為研究員或臨床醫師尋求之所欲的生 物性或醫學性反應。候選化合物為本發明的化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物。生物性或醫學性反應可能為癌症的治療。生物性或醫學性反應可能為細胞增生疾病的治療或預防。活體外或活體內生物性分析可包括，但不限於，酵素活性分析、電泳遷移率分析、報導基因分析、活體外細胞存活率分析以及本文所述之分析。
如本文所使用者，“單一藥物治療”意指投予單一活性或治療性化合物至需要彼之個體。較佳地，單一藥物治療將涉及投予治療上有效含量的單一活性化合物。例如，將本發明的化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、類似物或衍生物之一者的癌症單一藥物治療投予至需要治療癌症的個體。於一面向中，單一活性化合物為本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物。
如本文所使用者，“治療”表示為對抗疾病、病況或病症之目的而管理及照護病患以及包括投予病患本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物以減緩疾病、病況或病症之症候或併發症，或是抑制疾病、病況或病症。
本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物亦可用於預防疾病、病況或病症。如本文所使用者，“預防”表示減少或抑制疾病、病況或病症之症候或併發症的開始。
如本文所使用者，術語"減緩"為意指降低病症之徵兆或症候之嚴重性的過程。重要的是，不需抑制而可減緩徵兆或症候。於一較佳具體實施例中，投予本發明之醫藥組成物而抑制徵兆或症候，然而，並不需要抑制。預期有效劑量能夠降低徵兆或症候的嚴重性。例如，若多重位置之至少一處中之癌症的嚴重性被降低，可能發生於多重位置之諸如癌症之病症的徵兆或症候被減緩。
如本文所使用者，術語"嚴重性"意指由初癌轉變成癌症或由良性狀態轉變成惡性狀態的可能性。選擇性地或附加性地，嚴重性意欲描述癌症的惡性度(stage)，例如，根據TNM系統(國際防癌聯盟(UICC)以及美國癌症分期聯合委員會(AJCC)所承認)或藉由其他業界認可的方法。癌症期數係指癌症的程度或嚴重性，其根據為諸如原發性腫瘤的位置、腫瘤大小、腫瘤數量以及涉及淋巴結(癌症擴散至淋巴結)等因素。選擇性地附加性地，嚴重性為意指由業界認可的方法來將腫瘤惡性度(見，國立癌症學烷，www.cancer.gov)。腫瘤惡性度為，就於顯微鏡下觀察到細胞有多不正常、腫瘤生長及擴散有多快而言，用來分類癌症細胞的系統。判定腫瘤惡性度時要考量許多因素，包括細胞的結構及生長模式。用於判定腫瘤惡性度之特定因素隨各類型癌症改變。嚴重性亦說明組織分級(亦稱為分化)，其意指腫瘤細胞與相同組織類型中之正常細胞的相似度(見，國立癌症學烷，www.cancer.gov)。此外，嚴重性說明細胞核惡性度(nuclear grade)，其意指腫瘤細胞中之核 的大小與形狀以及正在***之腫瘤細胞的百分比(見，國立癌症學烷，www.cancer.gov)。
於本發明之另一面向中，嚴重性說明腫瘤具分泌的生長因子、分解的胞外基質、血管化的、失去與鄰接組織之黏附性或轉移之程度。此外，嚴重性說明原發性腫瘤已轉移至其位置的位置數。最後，嚴重性包括治療各種類型及位置之腫瘤的困難度。例如，不能動手術的腫瘤，該等癌症接觸多重體內系統(血液以及免疫腫瘤)，以及該等癌症對傳統療法最具抗性或被視為最嚴重者。在這些情況中，延長個體的預期壽命及/或減少疼痛、降低癌性細胞的比例或限制細胞至一個系統，以及改進癌症期數/腫瘤惡性度/組織學級別/細胞核惡性度被視為減緩癌症的徵兆或癥候。
如本文所使用者，術語"癥候"係定義為疾病、病、受傷或身體不適的指示。癥候係為經受過該癥候的個體所感覺或注意，但可能不易被他人注意。他人係指非專業健康照護者。
如本文所使用者，術語"徵兆"亦定義為身體不適的指示。但徵兆係定義為可被醫生、護士或專業健康照護者所察覺者。
癌症為可能引起任何徵兆或癥候的疾病群組。徵兆以及癥候與癌症發生位置、癌症大小及其如何影響附近的器官或結構相關。若癌症擴散(轉移)，則癥候可能出現在體內部同的位置。
當癌症生長時，其開始推擠附近的器官、血管及神經。此壓力造成一些癌症的徵兆及癥候。若癌症位於重要區域中，諸如腦部特定的部分，即便最微小的腫瘤也可引起早期癥候。
然而有時候，癌症起始於不會引起任何癥候的位置直至癌症已長為相當大。胰臟癌，例如，通常不會生長至大到可由身體外部感知。一些胰臟癌不會引起癥候直至其開始生長至附近的神經(此引起背痛)。他者於膽管附近生長，其阻斷膽汁流動且造成皮膚變黃，如已知的黃膽。當胰臟癌引起徵兆或癥候時，其通常已為末期的病程。
癌症亦可引起諸如發燒、疲勞或體重減輕之癥候。此可能因為癌症細胞用盡體內大多數之能源供應或釋出改變體內代謝之物質。或著，癌症可使免疫系統反應而造成癥候。
有時候，癌症細胞釋出物質至血流中，其引起之癥候通常不被認為是來自癌症。例如，一些胰臟的癌症可釋出引起腿部靜脈發生血栓的物質。一些肺癌形成類激素物質，其影響血鈣濃度、影響神經及肌肉並引起虛弱感及暈眩。
當存在癌症細胞的各種子型時，癌症具有數種一般徵兆或癥候。得癌症時，多數人在病程中的某個時間點減輕體重。無法解釋的(非故意的)減少10磅或以上可能為癌症的第一徵兆，特別地為胰臟、胃、食道或肺的癌症。
癌症常伴隨發燒，但更常見於末期(advanced)疾病。 幾乎所有癌症患者於病程的某個時間點發燒，尤其是當癌症或其治療影響免疫系統且使身體更難以對抗感染時。較不常見的，發燒可為癌症的早期徵兆，諸如白血病或淋巴癌。
疲勞可為癌症末期的重要癥候。然而其可早期發生於諸如白血病之癌症，或若於一些如結腸或胃癌之癌症引起持續失血時發生。
於一些諸如骨癌或睪丸癌之癌症中，疼痛可為早期癥候。但疼痛最常為末期疾病的癥候。
與皮膚癌相關(見下一節)，可見到一些可能引起皮膚徵兆的內部癌症。這些改變包括皮膚看起來顏色比較深(色素沉澱)、呈黃色(黃膽)，或呈紅色(紅斑)；發癢；或過度毛生長。
選擇性地或附加的，癌症的子型具有特定的徵兆或癥候。腸行為或膀胱功能改變可能表示癌症。長期便秘、腹瀉或糞便大小改變能為結腸癌的徵兆。排尿疼痛、血尿或膀胱功能改變(諸如排尿頻率增加或減少)可能與膀胱或***癌有關。
皮膚狀況改變或新皮膚狀況出現可能表示癌症。皮膚癌症可能出血(出水)及像是未癒合的瘡。嘴部之長期存在的瘡可能為口腔癌，尤其是在抽菸、嚼食菸草或常喝酒的病人身上。陰莖或***上的瘡可能各為早期癌症的徵兆。
不正常的出血或洩放可能表示癌症。不正常的初顯可能發生於早期或末期癌症。痰(sputum)(痰(phlegm))中有血 可能為肺癌的徵兆。糞便中有血(或深色或黑色糞便)可能為結腸或直腸癌的徵兆。子宮頸或子宮內膜(子宮內壁的膜)癌可能引起***出血。血尿可能為膀胱或腎臟癌的徵兆。乳頭的帶血排出物可能為乳癌的徵兆。
***或身體其他部位之增厚或或腫塊可能表示存在癌症。許多癌症可透過皮膚而感知，大多數為在***、睪丸、淋巴結(腺體)，以及身體的軟組織中。腫塊或增厚可能為癌症的早期或晚期徵兆。任何腫塊或增可能表示癌症，尤其是若其為新生成或尺寸變大。
消化不良或吞嚥困難可能表示癌症。當這些癥候通常具有其他成因時，消化不良或吞嚥困難可能為食道、胃或咽(喉)癌的徵兆。
疣或有色痔的近況改變可能表示癌症。任何疣、有色痔或雀斑於顏色、大小或形狀的改變或失去其明確的範圍界線時表示可能發生癌症。例如，皮膚病變可為黑腫瘤。
持續咳嗽或聲音沙啞可能表是癌症。不停咳嗽可能為肺癌的徵兆。聲音沙啞可能為咽喉(聲帶)或甲狀腺癌的徵兆。
儘管以上列出之徵兆以及癥候係常見於癌症，仍有許多較不常見或未列示於此者。然而，本發明意及且包含所有業界認知的癌症的徵兆以及癥候。
治療癌症可使腫瘤的尺寸縮小。腫瘤尺寸縮小亦可稱為“腫瘤退行(regression)”。較佳地，於治療後，相較於治療前的尺寸，腫瘤尺寸減少5%或更多；更佳地，腫瘤尺 寸減少10%或更多；更佳地，減少20%或更多；更佳地，減少30%或更多；更佳地，減少40%或更多；仍更佳地，減少50%或更多；以及最佳地，減少75%或更多。可用任何可重現的測量手段來量測腫瘤的尺寸。可以腫瘤的直徑來量測腫瘤的尺寸。
治療癌症可使腫瘤的體積縮小。較佳地，於治療後，相較於治療前的尺寸，腫瘤體積減少5%或更多；更佳地，腫瘤體積減少10%或更多；更佳地，減少20%或更多；更佳地，減少30%或更多；更佳地，減少40%或更多；仍更佳地，減少50%或更多；以及最佳地，減少75%或更多。可用任何可重現的測量手段來量測腫瘤的體積。
治療癌症可使腫瘤的數目減少。較佳地，於治療後，相較於治療前的數目，腫瘤數目減少5%或更多；更佳地，腫瘤數目減少10%或更多；更佳地，減少20%或更多；更佳地，減少30%或更多；更佳地，減少40%或更多；仍更佳地，減少50%或更多；以及最佳地，減少75%或更多。可用任何可重現的測量手段來量測腫瘤的數目。可藉裸眼視覺計數腫瘤或以特定倍率來量測腫瘤的數目。較佳地，特定倍率為2x、3x、4x、5x、10x或50x。
治療癌症可使在其他組織或在原發性腫瘤遠處器官位置之轉移性病變的數目減少。較佳地，於治療後，相較於治療前的數目，轉移性病變數目減少5%或更多；更佳地，轉移性病變數目減少10%或更多；更佳地，減少20%或更多；更佳地，減少30%或更多；更佳地，減少40%或更 多；仍更佳地，減少50%或更多；以及最佳地，減少75%或更多。可用任何可重現的測量手段來量測轉移性病變的數目。可藉裸眼視覺計數轉移性病變或以特定倍率來量測轉移性病變的數目。較佳地，特定倍率為2x、3x、4x、5x、10x或50x。
相較於僅接受載體的族群，治療癌症可使經治療個體之族群的平均存活時間增加。較佳地，平均存活時間增加超過30天；更佳地，超過60天；更佳地，超過90天；以及最佳地，超過120天。可用任何可重現的測量手段來量族群的平均存活時間。可例如藉由在以活性化合物開始治療後，計算族群之平均存活時間，而量測族群之平均存活時間的增加。亦可例如藉由在以活性化合物完成第一回合的治療後，計算族群之平均存活時間，而量測族群之平均存活時間的增加。
相較於未經治療個體的族群，治療癌症可使經治療個體之族群的平均存活時間增加。較佳地，平均存活時間增加超過30天；更佳地，超過60天；更佳地，超過90天；以及最佳地，超過120天。可用任何可重現的測量手段來量族群的平均存活時間。可例如藉由在以活性化合物開始治療後，計算族群之平均存活時間，而量測族群之平均存活時間的增加。亦可例如藉由在以活性化合物完成第一回合的治療後，計算族群之平均存活時間，而量測族群之平均存活時間的增加。
相較於接受非本發明化合物或彼之醫藥上可接受的鹽 、前藥、代謝物、類似物或衍生物之藥物的單一藥物治療之族群，治療癌症可使經治療個體之族群的平均存活時間增加。較佳地，平均存活時間增加超過30天；更佳地，超過60天；更佳地，超過90天；以及最佳地，超過120天。可用任何可重現的測量手段來量族群的平均存活時間。可例如藉由在以活性化合物開始治療後，計算族群之平均存活時間，而量測族群之平均存活時間的增加。亦可例如藉由在以活性化合物完成第一回合的治療後，計算族群之平均存活時間，而量測族群之平均存活時間的增加。
相較於僅接受載體之族群，治療癌症可使經治療個體之族群的死亡率降低。相較於接受非本發明化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、類似物或衍生物之藥物的單一藥物治療之族群，治療癌症可使經治療個體之族群的死亡率降低。較佳地，死亡率降低超過2%；更佳地，超過5%；更佳地，超過10%；以及最佳地，超過25%。可用任何可重現的測量手段來量經治療之個體之族群的平均存活時間。可例如藉由在以活性化合物開始治療後，計算每單位時間與疾病相關之死亡的平均數目，而量測族群之死亡率的降低。亦可例如藉由在以活性化合物完成第一回合的治療後，計算每單位時間與疾病相關之死亡的平均數目，而量測族群之死亡率的降低。
治療癌症可使腫瘤的生長率降低。較佳地，於治療後，相較於治療前的數目，腫瘤生長率減少至少5%；更佳地，腫瘤生長率減少至少10%；更佳地，減少至少20%； 更佳地，減少至少30%；更佳地，減少至少40%；仍更佳地，減少至少50%；以及最佳地，減少至少75%。可用任何可重現的測量手段來量測腫瘤生長率。可根據每單位時間之腫瘤直徑的改變來量測腫瘤生長率。
治療癌症可使腫瘤的復甦生長(regrowth)降低。較佳地，於治療後，腫瘤復甦生長為小於5%；更佳地，腫瘤復甦生長小於10%；更佳地，小於20%；更佳地，小於30%；更佳地，小於40%；更佳地，小於50%；仍更佳地，小於50%；最佳地，小於75%。可用任何可重現的測量手段來量測腫瘤復甦生長。可例如藉由量測腫瘤(先前經治療後之收縮的腫瘤)直徑之來量測腫瘤復甦生長。腫瘤復甦生長降低係指於治療停止後，腫瘤無再生。
治療或預防細胞增生病症可使細胞增殖率降低。較佳地，於治療後，細胞增殖率降低至少5%；更佳地，降低至少10%；更佳地，降低至少20%；更佳地，降低至少30%；更佳地，降低至少40%；更佳地，降低至少50%；仍更佳地，降低至少50%；以及最佳地，降低至少75%。可用任何可重現的測量手段來量測細胞增殖率。可例如藉由於每單位時間測量組織樣本中之***細胞的數目來量測細胞增殖率。
治療或預防細胞增生病症可使增殖細胞的比例降低。較佳地，於治療後，增殖細胞的比例降低至少5%；更佳地，至少10%；更佳地，至少20%；更佳地，至少30%；更佳地，至少40%；更佳地，至少50%；仍更佳地，至少 50%；以及最佳地，至少75%。可用任何可重現的測量手段來量測增殖細胞的比例。較佳地，可藉由例如定量於組織樣本中相對於未***細胞數目之***細胞數目來量測增殖細胞的比例。增殖細胞的比例可等於有絲***指數。
治療或預防細胞增生病症可使細胞增殖之區域或區段的尺寸減小。較佳地，於治療後，相對於治療之前，細胞增殖之區域或區段的尺寸減小至少5%；更佳地，減小至少10%；更佳地，減小至少20%；更佳地，減小至少30%；更佳地，減小至少40%；更佳地，減小至少50%；仍更佳地，減小至少50%；以及最佳地，減小至少75%。可用任何可重現的測量手段來量測細胞增殖之區域或區段的尺寸。可以細胞增殖之區域或區段的尺寸之直徑或寬度來量測細胞增殖之區域或區段的尺寸。
治療或預防細胞增生病症可使具有異常外觀或型態之細胞的數目或比例降低。較佳地，於治療後，相較於治療前之尺寸，具有異常型態之細胞數目減少至少5%；更佳地，減少至少10%；更佳地，減少至少20%；更佳地，減少至少30%；更佳地，減少至少40%；更佳地，減少至少50%；仍更佳地，減少至少50%；以及最佳地，減少至少75%。可用任何可重現的測量手段來量測異常外觀或型態。可藉由如使用倒立組織培養顯微鏡來量測異常型態。異常型態可能為細胞多核性。
如本文所使用者，術語“選擇性地”意指一族群較另一族群具較高的發生頻率。互相比較之族群可為細胞族群。 較佳地，本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物選擇性地作用於癌症或癌性細胞上，而非正常細胞上。較佳地，本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物選擇性地調控一種分子標的(如，目標蛋白質甲基轉移酵素)，而非顯著地調控另一分子標的(如，非目標蛋白質甲基轉移酵素)。本發明亦提供選擇性地抑制酵素，諸如蛋白質甲基轉移酵素，活性之方法。較佳地，若與族群B相較時，族群A中之發生頻率多於兩次，則相較於族群B，情況選擇性地發生於族群A。若於族群A中之發生頻率大於五次，情況選擇性地發生。若於族群A中之發生頻率大於十次，情況選擇性地發生；更佳地，大於五十次；仍更佳地，大於100次；以及最佳地，相較於族群B，於族群A中之發生頻率大於1000次。例如，細胞死亡可謂選擇性地發生於癌症細胞中，若與正常細胞相較，其發生頻率多於兩次的話。
本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物可調控分子標的(如，目標蛋白質甲基轉移酵素)的活性。調控意指刺激或抑制分子標的之活性。較佳地，本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物調控分子標的之活性，若相較於相同情況但僅缺少前述化合物之情況中的分子標的之活性而言，其若相較於相同情況但僅缺少前述化合物之情況中的分子標的之活性而言，刺激或抑制分子標 的之活性達至少2倍的話。更佳地，本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物調控分子標的之活性，若相較於相同情況但僅缺少前述化合物之情況中的分子標的之活性而言，其刺激或抑制分子標的之活性達至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍。可用任何可重現的測量手段來量測分子標的之活性。可於活體外或活體內量測分子標的之活性。例如，可於活體外藉由酵素活性分析或DNA結合分析來量測分子標的之活性，或於活體內藉由分析報導基因來量測分子標的之活性。
本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物未顯著地調控分子標的之活性，若添加化合物後並未刺激或抑制分子標的之活性，相對於相同條件下但缺少該化合物者之活性，達超過10%。
如本文所使用者，術語“同功異構酵素選擇”意指相較於酵素之第二異構型，酵素之第一異構型為較佳抑制或刺激(如，相較於蛋白質甲基轉移酵素之同功異構酵素β，蛋白質甲基轉移酵素之同功異構酵素α具較佳抑制或刺激)。較佳地，本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物，以達成生物性效果需之計量而言，展現至少四倍的差異、較佳為十倍的差異、更佳為五十倍的差異。較佳地，本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物展現於抑制範圍上的差異，以及針對關注之分子標的，可利用 IC50(即50%抑制)來檢驗差異。
投予本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物至有需要之細胞或個體可進行調控(即，刺激或抑制)所關注之蛋白質甲基轉移酵素的活性。
本發明提供用於評估本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物之生物活性的方法或辨識作為調控DOT1L(如，抑制劑)之測試化合物的方法。DOT1L多肽以及核酸可用於篩檢結合至及/或調控(如，增加或減少)一或更多之DOT1L生物活性(包括但不限於H3K79甲基轉移酵素(HMTase)活性、SAM結合活性、組蛋白及/或核小體結合活性、AF10結合活性、AF10-MLL或其他MLL融和蛋白結合活性，以及/或任何其他關注之生物活性)之化合物。DOT1L多肽可為全長DOT1L多肽之功能性片段或功能性等效物，以及可包含任何關注之DOT1域，包括但不限於催化域、SAM結合域及/或帶正電域、AF10交互作用域及/或核輸出訊號。
可使用熟此技藝者瞭解的標準技術(見例示之試驗方法)來評估DOT1L結合至組蛋白、核小體、核酸或多肽。此等方法包括酵母以及哺乳類雙雜交分析以及共免疫沉澱技術。
例如，可由以下驗證調控DOT1L H3K79甲基轉移酵素活性之化合物：於測試化合物存在下令DOT1多肽與組蛋白或包含H3之多肽基質接觸；在足以使H3K79甲基化 的條件下偵測組蛋白或多肽之H3K79甲基化程度，其中當與缺乏測試化合物H3K79甲基化程度相較，測試化合物存在下之H3K79甲基化提升或降低代表測試化合物調控DOT1L H3K79甲基轉移酵素活性。
本發明之篩選方法可在基於細胞或無細胞之系統中執行。作為進一步選擇，可於全動物(包括基因轉殖之非人動物)進行分析。進一步，關於基於細胞的系統，DOT1L多肽(或分析中使用之任何其他多肽)可直接被添加或由細胞中之核酸製造。核酸可為細胞內生或可為外來的(如，遺傳修飾地細胞)。
於一些分析中使用免疫試劑，如抗體及抗原。於一些分析中可利用螢光來量測酵素活性。如本文所使用者，“螢光”意指分子吸收外來之較高能量光子之後於相同分子放出光子的過程。用於評估本文所揭露之化合物的生物活性之特定方法係描述於實例中。
投予本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物至需要彼之細胞或個體可調控(即，刺激或抑制)細胞內之標的(如，基質)的活性。可利用本發明之化合物來調控許多細胞內的標的，包括但不限於蛋白質甲基轉移酶。
活化意指將關切的組成(如，蛋白質或核酸)置於適合進行所欲之生物功能的狀態。關切的組成可能為活化的且具有非活化狀態。活化之關切的組成可具有抑制或刺激的生物功能或兩者。
提升意指增進關切的組成(如，蛋白質或核酸)之所欲的生物活性。提升可因增加關切的組成之濃度而發生。
如本文所使用者，“細胞週期檢查點路徑”意指關於細胞檢查點調控之生物化學路徑。細胞週期檢查點路徑可於一或更多包含細胞週期檢查點的功能上具有刺激或抑制的效果或兩者。細胞週期檢查點路徑包含至少兩個關切的組成，較佳為蛋白質，兩者均能調控細胞週期檢查點。細胞週期檢查點路徑可經由活化細胞週期檢查點路徑之一或更多組成而被活化。較佳地，細胞週期檢查點路徑為生物化學的訊號傳遞路徑。
如本文所使用者，“細胞週期檢查點調節物”意指關切的組成可至少部分作用於調控細胞週期檢查點。細胞週期檢查點調節物可於一或更多包含細胞週期檢查點的功能上具刺激或抑制效果或兩者。細胞週期檢查點調節物可為蛋白質或不適蛋白質。
治療癌症或細胞增生病症可使細胞死亡，以及較佳地，細胞死亡使得族群中之細胞數目減少至少10%。更佳地，細胞死亡意指減少至少20%；更佳地，減少至少30%；更佳地，減少至少40%；更佳地，減少至少50%；最佳地，減少至少75%。可利用任何可重現的手段來量測族群中之細胞數目。可藉由流式細胞分選儀(FACS)、免疫螢光顯微術以及光學顯微鏡來量測族群中之細胞的數目。量測細胞死亡之方法係見於Li et al.,Proc Natl Acad Sci U S A.100(5)：2674-8,2003。於一面向中，因細胞凋亡造成細 胞死亡。
較佳地，有效量之本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物對於正常細胞並沒有顯著細胞毒性。若投予治療上有效含量之劑量的化合物未引起大於10%正常細胞之死亡，則治療上有效含量的化合物對於正常細胞並沒有顯著細胞毒性。若投予治療上有效含量之劑量的化合物未引起大於10%正常細胞之死亡，治療上有效含量的化合物未顯著地影響正常細胞的生存力。於一面向中，因細胞凋亡造成細胞死亡。
令細胞接觸本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物可於癌症細胞中選擇性地引起或活化細胞死亡。投予有需要的個體本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物可於癌症細胞中選擇性地引起或活化細胞死亡。令細胞接觸本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物可於受細胞增生疾病影響之一或更多細胞中選擇性地引起細胞死亡。較佳地，投予有需要的個體本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物於受細胞增生疾病影響之一或更多細胞中引起細胞死亡。
本發明關於投予本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物至有需要之個體而治療或預防癌症的方法，其中投予本發明之化合物或彼之醫藥上可接受的鹽、前藥、代謝物、多形體或溶劑化物 造成一或更多下列情形：細胞累積於細胞週期之G1及/或S期、於癌症細胞中因細胞毒素使細胞死亡而於正常細胞中無顯著數量的細胞死亡、治療指數為至少2之動物中的抗腫瘤活性，以及細胞週期檢查點的活化。如本文所使用者，“治療指數”係最大耐受劑量除以有效劑量。
熟此技藝者可參照一般參考文件而獲得本文所討論之習知技術或相同技術之詳細說明。此等文件包括Ausubel et al.,Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley and Sons,Inc.(2005)；Sambrook et al.,Molecular Cloning,A Laboratory Manual(3rd edition),Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harbor,New York(2000)；Coligan et al.,Current Protocols in Immunology,John Wiley & Sons,N.Y.；Enna et al.,Current Protocols in Pharmacology,John Wiley & Sons,N.Y.；Fingl et al.,The Pharmacological Basis of Therapeutics(1975),Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,PA,18th edition(1990)。此等文件當然亦可指製造或使用本發明之面向。
本發明的化合物亦可被利用於治療或預防神經性疾病或病症。可利用本發明之化合物而被治療的神經性疾病或病症包括癲癇、精神***、雙向情感疾患或其他心理及/或精神疾病、神經疾病、骨骼肌肉萎縮以及神經退化性疾病如，神經性退化疾病。神經性退化疾病的實例包括：阿爾茲海默氏症、肌萎縮性側索硬化症(ALS)以及巴金森氏 症。另一類的神經性退化疾病包括至少部分由過多麩胺酸累積所引起之疾病。此類疾病包括：杭丁頓氏舞蹈氏症、脊髓延髓肌肉萎縮症(SBMA或肯尼迪(Kennedy's)病)、齒狀紅核蒼白球肌萎縮症(DRPLA)、脊髓小腦萎縮症1(SCA1)、脊髓小腦萎縮症2(SCA2)、Machado-Joseph疾病(MJD；SCA3)、脊髓小腦萎縮症6(SCA6)、脊髓小腦萎縮症7(SCA7)以及脊髓小腦萎縮症12(SCA12)。
任何其他之由DOT1媒介之因後天甲基化的疾病，可能為本文所述之化合物或方法治療或預防者。
4.醫藥組成物
本發明亦提供包含式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)以及(IV)與至少一種醫藥上可接受的賦型劑或載體之組合的醫藥組成物。
“醫藥組成物”為含有呈適合投予至個體型式的本發明化合物之調配物。於一具體實施例中，醫藥組成物為大體積型式或呈單位劑量型式。單位劑量型式係各樣型適之任一者，包括例如，膠囊、IV袋、錠劑、霧劑吸入器或小玻璃瓶上之單一泵。單位劑量組分之活性成分的數量(如，所揭露化合物或彼之鹽、水合物、溶劑化物或異構物的調配物)為根據特定治療的有效量且為可變的。熟此技藝者將瞭解，有時必須依據患者的年紀及狀況來進行劑量之例行變化。劑量亦取決於投服路徑。考量各樣的路徑，包括經口的、肺的、直腸的、非經口的、經皮的、皮下的、 靜脈內的、肌內的、腹膜內的、吸入性的、口腔的、舌下的、胸膜內的、脊髓內的、鼻內的等。本發明化合物之局部或經皮投服的劑型包括粉末、噴霧、軟膏、漿糊、乳油、洗劑、凝膠、溶液、貼布以及吸入劑。於一具體實施例中，於無菌情況下混合活性化合物及醫藥上可接受的載體，以及任何所需的防腐劑、緩衝液或推進給藥劑。
如本文使用者，術語“醫藥上可接受的”意指化合物、材料、組分、載體及/或劑量型式(於熟知的醫藥調整範圍中)為適合用於與人及動物的組織接觸而沒有過量的毒性、刺激性、過敏反應或其他問題或併發症，其具有合理的利/害比。
“醫藥上可接受的賦型劑”意指有用於製備普通為安全、無毒、既非生物非所欲亦非其他非所欲者之醫藥組成物的賦型劑，以及包括獸醫用途及人醫藥用途可接受之賦型劑。於本說明書及申請專利範圍中所使用之“醫藥上可接受的賦型劑”係指一種及超過一種此等賦型劑。
本發明之醫藥組成物係調配成可與所欲之投服路徑相容。投服路徑的實例包括非經口，如靜脈內、皮內、皮下；經口(如，吸入)；經皮(局部)；以及經黏膜投服。用於非經口、皮內或皮下施用之溶液或懸浮液可包括下列成分：無菌稀釋劑，諸如用於注射的水、鹽水溶液、定性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成的溶劑；抗菌劑，諸如苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，諸如乙二胺四乙酸；緩衝液，諸 如乙酸鹽、檸檬酸鹽或膦酸鹽，以及用於調整高張性之試劑，諸如氯化鈉或右旋糖。可利用酸或鹼，諸如氫氯酸或氫氧化鈉，來調整pH。非經口製備物可被密封於安瓿、拋棄式注射器或是由玻璃或塑膠製成之多重劑量管中。
可利用目前用於化學治療的許多習知的方法來將本發明之化合物或醫藥組成物投服至個體。例如，用於癌症之治療，可直接注射本發明之化合物至腫瘤中、注射至血流或體腔中，或以口服或利用貼片經過皮膚而施用。選擇的劑量必須足以構成有效的治療但不能高到引起不能接受的副作用。於治療期間及治療後持續一段合理的時間內，較佳應嚴密監控病況的狀態(如，癌症、初癌等)以及病患的健康狀態。
如本文所使用者，術語“治療上有效含量”意指治療、改善或預防指定的疾病或病況或是顯現可偵測的治療或抑制效果之藥物劑量。可藉由業界熟知之任何分析方法來檢測效果。針對個體之精確的有效量係視個體之體重、尺寸及健康；病況之本質及程度；以及所選用之治療的投服方式而定。於給定狀況之治療上有效的含量可由臨床醫生熟知及可調整之範圍內之例行性試驗來決定。於一較佳方面中，待治療的病況為癌症。於另一方面中，待治療之疾病或病況為細胞增生疾病。
針對任何化合物，可由細胞培養(如，贅生細胞)分析或是動物模型(通常為大鼠、小鼠、兔子、狗或豬)來初步地估計治療上有效含量。動物模型亦可用來決定投服之恰 當的濃度範圍及路徑。此資訊可接著被用來決定有用的劑量以及用於人中之投服路徑。可用細胞培養或試驗動物中之標準醫藥規程，如ED50(50%族群中之治療上有效劑量)以及LD50(50%族群中之致命劑量)，來判定治療/預防效果及毒性。界於毒性及治療效果之間的劑量比為治療指數，且其可以LD50/ED50之比表示。具有較大之治療指數之醫藥組成物係較佳者。劑量可於取決於施用之劑型、病患的敏感度及投服路徑的範圍中變化。
調整劑量及投服以提供充分的活性劑濃度或維持所欲的效果。需考量的因素包括疾病狀態的嚴重性、個體的一般健康情形、個體之年齡、體重及性別、飲食狀況、投服的時間及頻率、藥物的交互作用、反應靈敏度，以及對治療之耐受度/反應。取決於特定調配物之半生期及清除率，可每3至4天、每週或每兩週地投服長效醫藥組成物。
含有本發明之活性化合物的醫藥組成物可由一般熟知的方法所製造，如藉由傳統混合、溶解、製粒、製做糖衣、研磨、包囊、包埋或凍乾製程。可利用習知方式使用一或更多醫藥上可接受的載體，包含促使活性化合物成為醫藥上可使用之製備物的賦型劑及/或佐劑，來調配醫藥組成物。當然，適當的調配物係取決於所選擇的投服路徑。
適合於注射用途的醫藥組成物包括無菌的含水溶液(水溶的)或分散液，以及用於隨時製備無菌的注射溶液或分散液之無菌粉末。用於靜脈內投服，合適的載體包括生理食鹽水、液菌(bacteriostatic)水、Cremophor ELTM (BASF紐澤西州帕爾尼希帕)或磷酸鹽緩衝溶液(PBS)。於所有的情況中，組分必須為無菌且應呈易於灌注性能之液體狀。其於製造及儲存條件下必須為穩定的，以及必須能在免於諸如細菌及真菌的汙染下被保存。載體可為含有，例如水、乙醇、多元醇(如，甘油、丙二醇及液態聚乙二醇等)以及彼之適合的混合物，之溶劑或分散液。可藉由例如使用諸如卵磷脂之塗層、藉由維持於分散液中所需之粒徑及藉由使用表面活性劑，來維持適當的流動性。可藉由各種抗菌劑及抗真菌劑，例如對羥苯甲酸、氯丁醇、酚、抗壞血酸、乙汞硫柳酸鈉等，來防止微生物的作用。於許多情況中，較佳的是於組分中包括等滲透壓試劑，例如糖、諸如甘露醇及山梨醇之多元醇，以及氯化鈉。可能因試劑中包括的組分，例如單硬脂酸鋁及明膠，延緩吸收而造成注射組分的延時吸收。
可藉由將活性化合物併入至所需含量的適當溶劑及視需要之上述列舉之一種成分或成分組合，接著進行過濾消毒而製備無菌的注射溶液。普通地，分散液係藉由將活性化合物併入至含有基本分散介質及選自上述之其他所需成分之無菌的載體而製備。於用於製備無菌注射溶液之無菌粉末的情況中，製備方法為真空乾燥及冷凍乾燥，其由先前的活性成分及任何另外的所欲成分之消毒過濾的溶液產生活性成分與任何另外的所欲成分之粉末。
口服組分通常包括惰性稀釋劑或可食的醫藥上可接受的載體。其可包封於明膠膠囊中或壓製成錠劑。用於經口 治療投服之目的，活性化合物可併入賦型劑且以錠劑、片劑或膠囊之型式被使用。口服組分亦可使用如作為漱口劑之液體載體而製備，其中液體載體中之化合物係經口施用並進行漱口再吐出或被吞嚥。可包括醫藥上相容的結合劑及/或輔助物質作為組分的一部分。錠劑、丸粒、膠囊、片劑等可含有任何下列成分或具類似性質之化合物：諸如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠之結合劑；諸如澱粉或乳糖之賦型劑；諸如褐藻酸、羧甲基澱粉鈉(Primogel)或玉米澱粉之崩解劑；諸如硬脂酸鎂或Sterote之潤滑劑；諸如膠態二氧化矽之助流劑；諸如蔗糖或糖精之甜味劑；或諸如薄荷、冬青或柳橙口味之風味劑。
針對藉由吸入而進行之投服，化合物係由含有合適的擠藥推進器，如二氧化碳之氣體或噴霧器，之加壓容器或分配器呈氣溶膠噴霧的型式被傳送。
亦可藉由經黏膜或經皮手段進行系統性的投服。用於經黏膜或經皮投服，於調配物中使用針對待透過之障壁的適當滲透劑。此等滲透劑通常為習知者，其包括，例如用於經黏膜投服之清潔劑、膽鹽以及梭鏈孢酸衍生物。經黏膜投服可伴隨鼻液劑或栓劑使用。用於經皮投服，活性化合物係調配成業界習知的軟膏、油膏、凝膠或乳油。
活性化合物可與使化合物免於自體內快速消除(諸如釋放經控制的調配物，其包括植入及微囊包埋的傳遞系統)之醫藥上可接受的載體一同製備。可使用生物可降解的、生物可相容的聚合物，諸如乙烯醋酸乙烯酯、多元酸酐 、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯、以及聚乳酸。製備此等調配物的方法為熟此技藝者所知悉者。亦可由Alza公司以及Nova Pharmaceuticals,Inc購得這些材料。亦可使用微脂體懸浮液(包括經由單株抗體結合病毒抗原而以受感染細胞為標的之微脂體)作為醫藥上可接受的載體。此等可根據熟此技藝者習知之方法所製備，例如於美國專利第4,522,811中所述者。
調配呈劑量單元型式之經口或經皮投服的組分因易於投服且劑量均勻而為特別有利者。如本文所述之劑量單元型式意指物理上分離的單元，其適於作為用於待治療個體之單元劑量；連同所需的醫藥載體，各單元含有經計算之預定量的活性化合物以產生所欲的治療效果。本發明之劑量單元型式的規格係直接地視活性化合物之獨特特徵及欲達到之特別的治療效果而定。
於治療性應用中，根據本發明之醫藥組成物中之劑量，除了其他影響選擇劑量的因素，因介質、接受治療病患的年齡、體重及臨床狀況，以及施行治療之臨床醫生或醫事人員的經驗及判斷而不同。一般而言，劑量應充分以使腫瘤的生長變慢且較佳為使腫瘤退行，亦較佳為使癌症完全退行。劑量的範圍可為自約每天0.01 mg/kg至約每天5000 mg/kg。於較佳方面中，劑量的範圍可為自約每天0.01 mg/kg至約每天1000 mg/kg。於一方面中，劑量的範圍將為約0.1 mg/天至約50 g/天；約0.1 mg/天至約25 g/天；約0.1 mg/天至約10 g/天；約0.1 mg/天至約3 g/天； 或約0.1 mg/天至約1 g/天，呈單一、分隔或連續劑量(其中劑量可因病人的體重(kg)、身體的表面積(m2)以及年齡(年)而進行調整)。醫藥劑的有效量為，由臨床醫生或其他合格觀察者認定，提供客觀地可識別的改進者。例如，可參考腫瘤的直徑來量測病患中之腫瘤退行。腫瘤直徑的減少表示退行。治療後腫瘤不再發生亦可表示退行。如本文所使用者，術語“劑量生效方式”意指一含量的活性化合物在個體或細胞內產生所欲的生物效果。
醫組成物可被包含在容器、包裝或分配器中且附具投藥指示。
本發明之化合物可進一步形成鹽類。所有的此等形態亦包括於請求項發明的範圍中。
如本文所使用者，“醫藥上可接受的鹽類”意指本發明化合物的衍生物，其中化合物係經修飾為彼之酸或鹼鹽類。醫藥上可接受的鹽類的實例包括，但不限於，諸如胺、鹼之鹼性殘基的無機或有機酸鹽類，或諸如羧酸之酸性殘基的有機鹽類等。醫藥上可接受的鹽類包括習知之無毒鹽類或由例如無毒無機或有機酸所形成之親代化合物的四級銨鹽類。例如，此等習知之無毒鹽類包括，但不限於，衍生自無機及有機酸者，其中有機酸係選自2-乙醯氧基苯甲酸、2-羥基乙烷磺酸、乙酸、抗壞血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氫根、碳酸、檸檬酸、乙二胺四乙酸、乙烷二磺酸、1,2-乙烷磺酸、富馬酸、葡萄庚酸、葡萄糖酸、穀胺酸、羥乙酸、甘醇化對胺苯胂(glycollyarsanilic)酸、己基間 苯二酚(hexylresorcinic)、氫溴酸、氫氯酸、氫碘酸、羥基順丁烯二酸、羥基萘甲酸、2-羥乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂基磺酸、順丁烯二酸、蘋果酸、苯乙醇酸、甲基磺酸、萘磺酸、硝酸、草酸、帕莫酸、泛酸、苯乙酸、亞磷酸、聚半乳糖醛酸、丙酸、水楊酸、硬脂酸、次乙(subacetic)酸、琥珀酸、胺磺酸、對胺苯磺酸、硫酸、單寧酸、酒石酸、甲苯磺酸或常見的胺基酸，如，甘胺酸、丙胺酸、***酸、精胺酸等。
其他醫藥上可接受的鹽類的實例包括己酸、環戊基丙酸、丙酮酸、丙二酸、3-(4-羥基苯并基)苯甲酸、肉桂酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟腦磺酸、4-甲基雙環-[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、第三丁基乙酸、黏康酸等。本發明亦包含當存在於親代化合物中的酸性質子被金屬離子，如鹼金屬離子、鹼土族離子或鋁離子，取代時或與諸如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、三木甲胺、N-甲基葡萄糖胺等之有機鹼配位時時所形成的鹽類。
應瞭解的是，所有的醫藥上可接受的鹽類包括本文定義之相同鹽之溶劑加成形式(溶劑化物)或晶形(多形體)。
本發明化合物亦可製備成酯類，例如，醫藥上可接受的酯類。例如，化合物中之羧酸官能基可轉變成其對應之酯，如甲酯、乙酯或其他酯。化合物中之醇基也可轉變成其對應之酯，如乙酯、丙酯或其他酯。
本發明化合物亦可製備成前藥，例如，醫藥上可接受 的前藥。術語“前-藥”以及“前藥”在本文中係交替使用且係指在活體內釋出活性親代藥物之任何化合物。已知前藥可增進數種醫藥品中所欲之性質(如，溶解度、生物活性、製造等)，因而本發明化合物可以前藥形式遞送。因此，本發明欲含蓋目前所請求之化合物的前藥、遞送彼之方法及包含彼之組分。“前藥”一詞意圖包括，當投服此等前藥至個體中時，於活體內釋出本發明之活性親代藥物之任何共價地見結的載體。藉由對親代化合物進行例行性操作或活體內剪切修飾來修飾化合物中之官能基以製備本發明之前藥。前藥包括於其中之羥基、胺基、巰基、羧基或羰基基團係鍵結至任何在活體內可被切割以分別形成游離羥基、游離胺基、游離巰基、游離羧基或游離羰基之本發明化合物。
前藥的實例包括，但不限於，羥基官能基團之酯類(如，乙酯、二烷基胺基乙酯、甲酸酯、膦酸酯、硫酸酯以及苯甲酸酯衍生物)以及胺甲酸酯(如，N,N-二甲基胺基羰基)、羧基官能基團之酯類(如，乙基酯類、嗎啉基乙醇酯類)、N-醯基衍生物(如，N-醯基)、N-曼尼斯(Mannich)鹼、希夫(Schiff)鹼以及胺官能基團之烯胺酮、肟、縮醛、縮酮以及酮之烯醇酯類以及本發明化合物中之醛官能基團等，參見Bundegaard,H.,Design of Prodrugs,p1-92,Elesevier,New York-Oxford(1985)。
化合物或彼之醫藥上可接受的鹽類、酯類或前藥係經口、經鼻、經皮、肺臟地、吸入性地、經頰、經舌下、腹 膜間地、皮下地、黏膜間地、靜脈地、直腸地、胸膜間地、以及非經腸投服。於一具體實施例中，化合物係經口投服。熟此技藝者將瞭解特定投服路徑的優點。
根據包括病人類型、種族、年齡、體重、性別及醫病狀況；待治療之病況的嚴重性；投服路徑；病人的腎及肝功能；以及採用的特別化合物或彼之鹽等的各樣因素來選擇利用化合物之給藥方式。熟此技藝之醫生或獸醫可容易地決定預防、對抗或終止病況進展之藥物的有效量或開出藥物之有效量的處方。
調配或投服本發明化合物之技術可見於Remington：the Science and Practice of Pharmacy,19th edition,Mack Publishing Co.,Easton,PA(1995)。於具體實施例中，本文所述之化合物以及彼之醫藥上可接受的鹽類係與醫藥上可接受的載體或稀釋劑組合而用於醫藥品製備。合適的醫藥上可接受的載體包括惰性固體填料或稀釋劑以及無菌含水或有機溶液。此等醫藥組成物中之化合物的含量將充分以提供所欲之為本文所述範圍中的劑量。
本文中所使用知百分比及比例，除另行指明外，均以重量為單位。由不同的實例可知本發明之其他特徵及優點為顯而易見的。所提供的實例闡述有用於實作本發明的不同組分及方法學。實例並不限制申請的發明。基於本文所揭露者，熟此技藝者可辨別並採用有用於實作本發明之其他組分及方法學。
於本文所述之流程中，為簡便之故，可將化合物描繪 成一個特別的構型。此特別的構型不應被視為限制本發明為一種構型或另外的異構物、互變異構物、位向異構物或立體異構物，此構型亦不排除異構物、互變異構物、位向異構物或立體異構物的混合物。
分析本文描述之化合物而進行活性的調控，例如於以下實例中說明之組蛋白甲基化、細胞生長的調控及/或IC50。IC50值係表示為A=<0.1μM；B=>0.1μM且<1μM、C=>1μM且<10μM；以及D=>10μM且<50μM。
本文中所引用之所有出版品及專利文獻係藉由引用方式併入本文，如同特定及單獨地指出各該等出版品或文獻係藉由引用方式而併入本文。出版品及專利文獻的引用並不表示其任一者為恰當的先前技術，亦不表示其具有與本案相同的內容或日期。本發明已由以上描述被詳細說明，熟此技藝者將瞭解本發明可以各樣的具體實施例來實現，且前述說明及以下實例係用於闡述而非限制申請專利範圍。
5.實例
核磁共振(NMR)光譜係得自以400.130 MHz場強度操作的Bruker Avance 400或Bruker DRX 500 MHz NMR，HNMR光譜係得自500 MHz Bruker AVANCE III光譜儀。常見的反應溶劑為高效液相層析(HPLC)級或美國化學協會(ACS)級，以及得自製造商的無水溶劑，除非另行指明。利用Waters 2795分離模組及Waters 996光二極體陣列偵測器於Waters Micromass ZMD上實施LCMS，及利用Waters 2695分離模組及Waters 996光二極體陣列偵測器於Waters Micromass ZQ上實施LCMS，或利用Waters 600溶劑輸送模組、Waters 515輔助泵、Waters 2487 UV偵測器以及Gilson 215自動注射器及分液收集器於Waters Micromass Platform LCZ單一四極柱式質譜儀上實施LCMS。或者，使用SQ質譜儀與AGILENT 1200系列HPLC來實施LCMS分析。可得之LCMS資料係示於以下實施例及表1中。以慣用於m/z之格式[M+H]+來表示MS資料。
本發明之化合物可利用習知之適應於目前特殊情況的化學轉換來加以製備。
製備實例1：起始材料或中間產物
步驟1：(1R,2S,3R,5R)-3-((5-胺基-6-氯嘧啶-4-基)胺基)-5-(羥基甲基)環戊烷-1,2-二醇
平均分配(1R,2S,3R,5R)-3-胺基-5-(羥基甲基)環戊烷-1,2-二醇氯化氫(16.9 g,45.1 mmol)以及4,6-二氯嘧啶-5-胺(5.7 g,35 mmol)於乙醇(45 mL)中之混合物至三個試管且令其經受微波(CEM設備，最大值300 W，最大150℃，最大250 psi，線性變化3 min，維持30 min)以得到棕色溶液；HPLC/LC MS指出轉變成所欲的產物。合併三種反應混合物及於真空中進行濃縮以得到呈深棕色油之粗製的標題化合物，其以甲苯(2 x 30 mL)進行濃縮且未經純化：針對C10H15ClN4O3MS(ESI+)m/z 275.0(M+H)+；針對C10H15ClN4O3MS(ESI-)m/z 273.0(M-H)-。
步驟2：((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-乙氧基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲醇
以原甲酸三乙酯(120 mL,720 mmol)以及10-樟腦磺酸(8.11 g,34.9 mmol)處理上述的粗製產物(1R,2S,3R,5R)-3-((5-胺基-6-氯嘧啶-4-基)胺基)-5-(羥基甲基)環戊烷-1,2-二醇。具烈攪拌不均勻的棕色混合物以於10 min後得到近乎均勻的棕色溶液。於5h時，LC MS指出所欲的產物為主要產物，以及利用飽和含水NaHCO3(120 mL)驟止反 應。以水(75 mL)稀釋混合物、利用CH2Cl2(3 x 200 mL)進行萃取，及乾燥(Na2SO4)合併的有機物且於真空中進行濃縮以得到呈深棕色液體之粗製標題化合物，其無需進一步處理而用於下一步驟：針對C14H17ClN4O4MS(ESI+)m/z 341.0(M+H)+。
步驟3：((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲醇
將上述粗製產物((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-乙氧基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲醇溶於2,2-二甲氧基丙烷(214 mL,1740 mmol)中，且以對甲苯磺酸單水合物(13.2 g,69.5 mmol)進行處理以得到部分懸浮於混濁溶液中之棕色油，於室溫進行攪拌持續1 h 20 min；HPLC/LC MS指出完全轉換成所欲的產物。小心的加入碳酸氫鈉(8.76 g,104 mmol)以及最少量的水以驟止反應。於真空中移除揮發成分及以水(100 mL)稀釋剩下的含水層，以及以CH2Cl2(3 x 400 mL)進行萃取。乾燥(Na2SO4)合併的有機物及於真空中進行濃縮以得到棕色油。藉層析法(7 x 16 cm矽石；0-5% MeOH/CH2Cl2)進行純化以得到呈黃色泡沫之標題化合物(8.30 g，經3步驟後為74%)：針對C14H17ClN4O3MS(ESI+)m/z 325.1(M+H)+；針對C14H17ClN4O3MS(ESI-)m/z 369.0(M+HCO2)-； HPLC純度>95面積%。
步驟4：9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(疊氮基甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-6-氯-9H-嘌呤
將((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲醇(7.9 g,24 mmol)及於THF(100 mL)中之高分子負載的三苯基膦(3 mmol/g負載；11 g,34 mmol)的混合物冷卻至0℃(冰/鹵水浴)，並以逐滴加入之偶氮二甲酸二異丙酯(6.7 mL,34 mmol)進行處理。攪拌棕褐色漿料持續15 min，以及以逐滴加入之疊氮磷酸二苯酯(7.3 mL,34 mmol)於THF(24 mL)中的溶液進行處理。攪拌棕色反應混合物持續18.5 h直至冰浴消失；HPLC指出已轉換成所欲的產物。於21.5h時，過濾反應混合物、以CH2Cl2清洗固體，以及於真空中濃縮濾液。將紅-棕色殘留物溶於CH2Cl2(300 mL)中及利用飽和含水NaHCO3(1 x 100 mL)、水(1 x 100 mL)，以及鹵水(1 x 150 mL)進行清洗。乾燥(Na2SO4)分離的有機層及於真空中進行濃縮以得到紅-橙色油。藉由層析法(7 x 16 cm矽石；0-10%丙酮/CH2Cl2)進行純化以得到呈黃色油/泡沫之標題化合物(4.82 g,57%)：針對C14H16ClN7O2MS(ESI+)m/z 350.1(M+H)+；針對C14H16ClN7O2MS(ESI-)m/z 394.1(M+HCO2)-；HPLC純 度>95面積%。
步驟5：9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(疊氮基甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9H-嘌呤-6-胺
利用N,N-二異丙基乙基胺(0.93 mL,5.3 mmol)處理9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(疊氮基甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-6-氯-9H-嘌呤(1.29 g,3.69 mmol)以及(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(0.71 mL,4.7 mmol)於1-丁醇(10 mL)中之溶液，以及於80℃進行加熱持續16.5 h；HPLC/LC MS指出已轉換成所欲的產物。使反應混合物冷卻至室溫以及於氣流中移除揮發成分以得到棕色-橙色漿糊。藉由層析法(2 x 8 cm矽石；0-10%丙酮/CH2Cl2)進行純化以得到呈黃色-橙色泡沫/油之標題化合物(1.72 g,97%)：針對C23H28N8O4MS(ESI+)m/z 481.2(M+H)+；HPLC純度>95面積%。
步驟6：9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(胺基甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9H-嘌呤-6-胺
將9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(疊氮基甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9H-嘌呤-6-胺(1.72 g,3.58 mmol)於THF(16 mL)中之溶液冷卻至0℃(冰/鹵水浴)及以逐滴加入之三甲基膦於THF(6.30 mL,6.30 mmol)中之1.0 M溶液進行處理。30 min後移除冷浴並攪拌反應混合物持續1.5 h；HPLC/LC MS指出起始的疊氮化物經完全消耗。加入水(2.84 mL,157 mmol)至橙色溶液(注意氣體放洩)以及於室溫攪拌反應混合物持續2.75 h；HPLC指出已完全轉換成所欲的胺。於真空中濃縮反應混合物以得到橙色油。將殘留物溶於CH2Cl2(150 mL)中及以水(2 x 50 mL)以及鹵水(1 x 75 mL)進行清洗。乾燥(Na2SO4)分離的有機層及於真空中進行濃縮以得到呈淡黃色泡沫之標題化合物(1.6 g,98%)：針對C23H30N6O4MS(ESI+)m/z 455.2(M+H)+；HPLC純度>95面積%。
步驟1：3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸乙酯
將三乙醯氧基硼氫化鈉(0.839 g,3.96 mmol)加入至9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(胺基甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9H-嘌呤-6-胺(1.5 g,3.3 mmol)、3-(3-氧雜環丁基)丙酸乙酯(0.562 g,3.30 mmol)以及乙酸(0.188 mL,3.30 mmol)於1,2-二氯乙烷(26.0 mL,3.30E2 mmol)中之溶液以及於室溫攪拌反應過夜。次日藉HPLC耗盡起始物質而加入NaHCO3以及以DCM萃取含水相3次。以MgSO4乾燥合併的有機物以及藉FC(於MeOH中之DCM/7N NH3為95：5)進行純化以產生呈濃黃色樹脂/泡沫之乙基3-3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸酯(1.5 g；75%)。針對C32H44N6O6MS(ESI+)m/z 609.3[M+H]+。
步驟2：3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸乙酯
令3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸乙酯(0.06 g,0.1 mmol)溶於乙腈(2.6 mL,50 mmol)中，以及加入異丙基碘(0.098 mL,0.98 mmol)及三乙基胺(0.21 mL,1.5 mmol)。加熱反應至80℃持續12小時至反應看似停止時。加入另外的15當量三乙基胺及另外的15當量異丙基碘，且再持續反應8小時。反應看似再次停止，所以加入各為15當量的異丙基碘以及三乙基胺。於耗盡起始物質時濃縮反應並加入飽和Na2CO3(20 mls)以及DCM(20 mls)。使殘留物分隔於有機層以及含水層之間。以DCM萃取含水層3次，接著乾燥合併的有機物及藉由(於MeOH中之DCM/7N NH3為97：3)進行純化。產物仍摻有TEA-H+I-，所以加入20 mls飽和NaHCO3以及10 mls 1N NaOH至30 ml的產物於DCM中之溶液。攪拌混合物持續15分鐘接著以DCM萃取含水相3次。以MgSO4乾燥合併的有機物以及移除溶劑以產生呈棕色泡沫/固體脂純3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸乙酯(0.045 g；70%)而不再有胺鹽類(NMR結果)。針對C35H50N6O6 MS(ESI+)m/z 651.3[M+H]+。
將氫氧化鋰單水合物(0.838 g,20.0 mmol)加入至3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸乙酯(1.3 g,2.0 mmol)於四氫呋喃(30 mL,300 mmol)及甲醇(6.5 mL,160 mmol)中之溶液。於室溫攪拌反應過夜且至隔天早上起始物質被消耗並已轉變成酸。以1N HCl酸化反應至pH=6。於真空中移除揮發成分及藉由與乙醇進行共沸蒸餾來移除剩餘的水接著冷凍24小時。使用得的棕色固體而不需進一步的純化。
3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸乙酯
將3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aS)-6-{4-[(2,4-二甲氧基苄基)胺基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基}-2,2-二甲基四氫-3aH- 環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}胺基)環丁基]丙酸胺乙酯(1.8 g,3.0 mmol)溶於甲醇(20 mL,600 mmol)以中並加入氰基硼氫化鈉(0.19 g,3.0 mmol)。使用MeOH中之10%的AcOH溶液將pH調整至ca.6，然後一次加入甲醛(0.29 mL,3.9 mmol)。令反應持續3小時至MS指出起始材料被完全消耗。加入NaHCO3(飽和的)至反應混合物並接著以DCM萃取3次。以MgSO4乾燥合併的有機物及濃縮其成為黃色樹脂。藉FC(於MeOH中之DCM/7N NH3為93：7)純化殘留物以產生呈無色泡沫之3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸乙酯(1.6 g；87%)。針對C34H47N5O6MS(ESI+)m/z 622.3[M+H]+。
1H NMR(400 MHz,d3-氯仿)δH 8.282(s,1H),7.203-7.168(m,1H),6.877-6.865(m,1H),6.399-6.334(m,2H),6.242-6.236(m,1H),5.330(s,1H),4.890-4.835(m,2H),4.664-4.650(d,J=5.6 Hz,2H),4.391-4.354(m,1H),4.067-4.000(m,2H),3.757(s,3H),3.710(s,3H),2.864-2.784(m,0.5H(次甲基之反式異構物))，2.553-2.474(m,0.5H(次甲基之順式異構物)，2.432-2.370(m,1H),2.322-2.278(m,2H),2.212-2.089(m,4H),2.022 & 2.018(s,3H(肇因於N-甲基之順式及反式異構物之重疊的單態)，1.964-1.908(m,3H),1.778-1.584(m,4H),1.486(s,3H),1.363-1.296(m,1H),1.219(s,3H),1.182-1.146(m,3H)。
((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-乙氧基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲醇
以原甲酸三乙酯(120 mL,720 mmol)及10-樟腦磺酸(8.11 g,34.9 mmol)處理上述之粗製產物(1R,2S,3R,5R)-3-((5-胺基-6-氯嘧啶-4-基)胺基)-5-(羥基甲基)環戊烷-1,2-二醇。劇烈地攪拌不均勻的棕色混合物以於10分鐘後得到近乎均勻的棕色溶液。於5 h時，LC MS指出所欲的產物為主要產物以及以飽和含水NaHCO3(120 mL)驟止。以水(75 mL)稀釋混合物、以CH2Cl2(3 x 200 mL)進行萃取，以及乾燥(Na2SO4)合併的有機物並於真空中進行濃縮以得到呈深棕色液體之粗製標題化合物，其無需進一步處理：針對C14H17ClN4O4MS(ESI+)m/z 341.0(M+H)+。
步驟3：((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲醇
將上述粗製產物((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-乙氧基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲醇溶於2,2-二甲氧基丙烷(214 mL,1740 mmol)中並以對甲苯 磺酸單水合物(13.2 g,69.5 mmol)進行處以以得到部分懸浮於混濁溶液中的棕色油，於室溫進行攪拌持續1 h 20 min；HPLC/LC MS指出已完全轉換成所欲的產物。小心的加入碳酸氫鈉(8.76 g,104 mmol)以及最少量的水以驟止反應。於真空中移除揮發成分及以水(100 mL)稀釋剩下的含水層，以及以CH2Cl2(3 x 400 mL)進行萃取。乾燥(Na2SO4)合併的有機物及於真空中進行濃縮以得到棕色油。藉層析法(7 x 16 cm矽石；0-5% MeOH/CH2Cl2)進行純化以得到呈黃色泡沫之標題化合物(8.30 g，經3步驟後為74%)：針對C14H17ClN4O3MS(ESI+)m/z 325.1(M+H)+；針對C14H17ClN4O3MS(ESI-)m/z 369.0(M+HCO2)-。
步驟4：9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(疊氮基甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-6-氯-9H-嘌呤
將((3aR,4R,6R,6aS)-6-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲醇(7.9 g,24 mmol)及於THF(100 mL)中之高分子負載的三苯基膦(3 mmol/g負載；11 g,34 mmol)的混合物冷卻至0℃(冰/鹵水浴)，並以逐滴加入之偶氮二甲酸二異丙酯(6.7 mL,34 mmol)進行處理。攪拌棕褐色漿料持續15 min，以及以逐滴加入之疊氮磷酸二苯酯(7.3 mL,34 mmol)於THF(24 mL)中的溶液進行處理。攪拌棕色反應混合物持續18.5 h 直至冰浴消失；HPLC指出已轉換成所欲的產物。於21.5h時，過濾反應混合物、以CH2Cl2清洗固體，以及於真空中濃縮濾液。將紅-棕色殘留物溶於CH2Cl2(300 mL)中及利用飽和含水NaHCO3(1 x 100 mL)、水(1 x 100 mL)，以及鹵水(1 x 150 mL)進行清洗。乾燥(Na2SO4)分離的有機層及於真空中進行濃縮以得到紅-橙色油。藉由層析法(7 x 16 cm矽石；0-10%丙酮/CH2Cl2)進行純化以得到呈黃色油/泡沫之標題化合物(4.82 g,57%)：針對C14H16ClN7O2MS(ESI+)m/z 350.1(M+H)+；針對C14H16ClN7O2MS(ESI-)m/z 394.1(M+HCO2)-。
步驟5：9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(疊氮基甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9H-嘌呤-6-胺
利用N,N-二異丙基乙基胺(0.93 mL,5.3 mmol)處理9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(疊氮基甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-6-氯-9H-嘌呤(1.29 g,3.69 mmol)以及(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(0.71 mL,4.7 mmol)於1-丁醇(10 mL)中之溶液，以及於80℃進行加熱持續16.5 h；HPLC/LC MS指出已轉換成所欲的產物。使反應混合物冷卻至室溫以及於氣流中移除揮發成分以得到棕色-橙 色漿糊。藉由層析法(2 x 8 cm矽石；0-10%丙酮/CH2Cl2)進行純化以得到呈黃色-橙色泡沫/油之標題化合物(1.72 g,97%)：針對C23H28N8O4MS(ESI+)m/z 481.2(M+H)+。
步驟6：9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(胺基甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9H-嘌呤-6-胺
將9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(疊氮基甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9H-嘌呤-6-胺(1.72 g,3.58 mmol)於THF(16 mL)中之溶液冷卻至0℃(冰/鹵水浴)及以逐滴加入之三甲基膦於THF(6.30 mL,6.30 mmol)中之1.0 M溶液進行處理。30 min後移除冷浴並攪拌反應混合物持續1.5 h；HPLC/LC MS指出起始的疊氮化物經完全消耗。加入水(2.84 mL,157 mmol)至橙色溶液(注意氣體放洩)以及於室溫攪拌反應混合物持續2.75 h；HPLC指出已完全轉換成所欲的胺。於真空中濃縮反應混合物以得到橙色油。將殘留物溶於CH2Cl2(150 mL)中及以水(2 x 50 mL)以及鹵水(1 x 75 mL)進行清洗。乾燥(Na2SO4)分離的有機層及於真空中進行濃縮以得到呈淡黃色泡沫之標題化合物(1.6 g,98%)：針對 C23H30N6O4MS(ESI+)m/z 455.2(M+H)+。
步驟1：3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸乙酯
於室溫下，以乙酸(0.09 mL,2 mmol)處理9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(胺基甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(0.50 g,1.6 mmol)以及3-(3-氧雜環丁基)丙酸乙酯(0.27 g,1.6 mmol)於甲醇(10 mL)中之混合物，及抽空燒瓶並以氮沖洗(x3)。於室溫下，以基硼氫化鈉(0.26 g,4.1 mmol)處理反應混合物，其造成即時的氣體放洩，且於數分鐘內得到近乎無色的澄清溶液。於室溫攪拌反應混合物持續1 h；HPLC/LC MS指出產物對起始胺為~2：1的混合物。於1.5 h時，加入另外的於MeOH(1.0 mL)中之3-(3-氧雜環丁基)丙酸乙酯(66 mg,0.39 mmol)，及於室溫下攪拌反應混合物持續30 min；HPLC/LC MS指出~70%的轉換及些許二烷基化。於2 h 15 min時，加入水(4.0 mL)以及於真空中濃縮混合物。以飽和含水碳酸氫鈉(10 mL，至pH 9)稀釋殘餘的含及以CH2Cl2(3 x 15 mL)進行萃取。乾燥(Na2SO4)合併的有機物及於真空中進行濃縮以得到呈色泡沫之還原胺化產物，其未經進一步純化：針對C22H32N6O5MS(ESI+)m/z 461.1(M+H)+,483.1(M+Na)+。
步驟2：3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸乙酯
將上述的粗製二級胺溶於甲醇(10 mL)中及以氰基硼氫化鈉(0.30 g,4.8 mmol)進行處理。加入10% v/v的乙酸於甲醇中之溶液以調整pH至~6，接著逐滴加入37%含水甲醛(0.65 mL,6.3 mmol)而造成氣體放洩。於室溫下攪拌反應混合物持續1 h；HPLC/LC MS指出已完全轉換成所欲的產物。於1.5 h時，加入水(5.0 mL)以及於真空中濃縮反應混合物。以飽和含水NaHCO3(10 mL，至pH~9)稀釋殘留物以及以CH2Cl2(3 x 15 mL)進行萃取。利用少量的EtOH稀釋合併的有機物以得到澄清溶液、進行乾燥(Na2SO4)，及於真空中進行濃縮以得到近乎無色油。藉由層析法(4 x 17 cm矽石；0-5% 7 N甲醇NH3/CH2Cl2)進行純化而得到呈白色泡沫/無色油之標題化合物(0.50 g,60%)：針對C23H34N6O5MS(ESI+)m/z 475.1(M+H)+,497.1(M+Na)+。
步驟1：3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基 )胺基)環丁基)丙酸乙酯
於室溫下，利用乙酸(0.37 mL,6.5 mmol)處理9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(胺基甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(2.04 g,6.66 mmol)以及3-(3-氧雜環丁基)丙酸乙酯(1.2 g,7.0 mmol)於甲醇(41 mL)中的混合物以及抽空燒瓶並以氮沖洗(x3)。於室溫下，以氰基硼氫化鈉(1.0 g,16 mmol)處理反應混合物，其造成即時的氣體放洩，且於數分鐘內得到近乎無色的澄清溶液。於室溫下攪拌反應混合物持續；HPLC/LC MS指出起始物質仍存在。於1 h 20 min時，加入另外的於MeOH(3 mL)中之3-(3-氧雜環丁基)丙酸乙酯(0.50 g,2.93 mmol)。攪拌反應混合物持續30 min以及以水(12 mL)進行處理。於真空中濃縮混合物及以飽和含水碳酸氫鈉(40 mL，至pH 9)稀釋殘餘的含水層，及以CH2Cl2(3 x 60 mL)進行萃取。乾燥(Na2SO4)合併的有機物及於真空中進行濃縮以得到呈白色泡沫/極淡之黃色的粗製標題化合物，其未經進一步純化：針對C22H32N6O5MS(ESI+)m/z 461.2(M+H)+以及483.1(M+Na)+。
步驟2：3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸乙酯
以碳酸鉀(6.3 g,46 mmol)以及異丙基碘(3.9 mL,39 mmol)處理上述粗製3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸乙酯於乙腈(30 mL)中之溶液。在90℃加熱於密封管中的反應混合物持續6.5 h；HPLC指出產物對起始材料為4：1之混合物。於室溫下，攪拌反應混合物過夜(17.5 h)，以另外的異丙基碘(2.0 mL,20 mmol)進行處理，以及於90℃加熱持續3 h；HPLC/LC MS指出近乎完全轉換。將反應混合物冷卻至室溫以及藉由真空過濾來移除固體，以CH3CN進行淋洗，以及於真空中濃縮濾液以得到具沉澱物的暗橙色油。藉油層析法(5 x 14.5 cm矽石；0-10% 7 N甲醇NH3/CH2Cl2)進行純化以得到呈白色泡沫/無色油之標題化合物(0.49 g,15%)。藉由層析法(4 x 10.5 cm矽石；0-5% 7 N甲醇NH3/CH2Cl2)再次純化含有產物之混合分液以得到呈白色泡沫/無色油之標題化合物(1.66 g,40%)(經步驟1產物之二還原胺化汙染)：針對C25H38N6O5MS(ESI+)m/z 503.2(M+H)+。
3-(3-((((1R,2R,3S,4R)-4-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,3-二羥基環戊基)甲基)胺基)環丁基)丙酸乙酯
將三乙醯氧基硼氫化鈉(2.43 g,11.5 mmol)加入至(1S,2R,3R,5R)-3-(胺基甲基)-5-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇(2.6 g,5.7mmol)及3-(3-氧雜環丁基)丙酸乙酯(0.976 g,5.73 mmol)及乙酸(0.326 ml,5.73 mmol)於1,2-二氯乙烷(20 ml)中之溶液，以及於室溫下攪拌反應過夜。加入NaHCO3以及以DCM萃取含水層3次。以MgSO4乾燥合併的有機物、進行過濾、濃縮以及藉快速層析法(於MeOH中DCM/7N NH3為90：10)進行純化以生成所欲之呈濃黃色樹脂的化合物(1.8 g)。
N-(2,4-二甲氧基苄基)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((異丙基胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
以丙酮(1.34 mL,18.2 mmol)及逐滴的乙酸(0.94 mL,16 mmol)接著為三乙醯氧基硼氫化鈉(4.20 g,19.8 mmol)來處理7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(胺基甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(7.50 g,16.5 mmol)於1,2-二氯乙烷(140 mL,1800 mmol)中之溶液，於室溫下攪拌混合物持續4 h。HPLC分析指出完全反應。以200 mL CH2Cl2稀釋反應混合物以及以150 mL飽和NaHCO3進行清洗。以100 mL CH2Cl2清洗水相以及以Na2SO4乾燥合併的有機相，進行過濾及濃縮以產生置於真空下會產生剛性泡沫的油。粗製物質(9.3 g)係直接用於下一個步驟。
3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸乙酯
以3-(3-氧雜環丁基)丙酸乙酯(3.92 g,23.0 mmol)及逐滴的乙酸(1.0 mL,18 mmol)接著為三乙醯氧基硼氫化鈉(4.58 g,21.6 mmol)來處理N-(2,4-二甲氧基苄基)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((異丙基胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(9.50 g,15.3 mmol)於1,2-二氯乙烷(75 mL,950 mmol)中之溶液，以及於室溫下攪拌混合物持續6天。以150 mL CH2Cl2稀釋反應混合物以及100 mL飽和NaHCO3進行清洗。100 mL CH2Cl2清洗水相及以Na2SO4乾燥合併的有機相，進行過濾及濃縮以產生淺棕色的黏性玻璃。
藉由快速層析法(以於CH3OH/CH2Cl2中之7N NH3洗提SiO2)純化粗製物質以產生一些玻璃/剛性泡沫(7.10 g)。
3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸乙酯
以3-(3-氧雜環丁基)丙酸乙酯(2.58 g,15.2 mmol)及逐滴的乙酸(0.86 mL,15 mmol)接著為三乙醯氧基硼氫化鈉(3.86 g,18.2 mmol)來處理7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(胺基甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(8.00 g,15.2 mmol)於1,2-二氯乙烷(119.5 mL,1517 mmol)中之溶液，以及於室溫下攪拌混合物持續19 h。以150 mL CH2Cl2稀釋反應混合物及以150 mL飽和NaHCO3進行清洗。以70 mL CH2Cl2清洗水相及以Na2SO4乾燥合併的有機相，進行過濾及濃縮以產生置於高真空下會產生黏性泡沫之棕褐色玻璃。藉由快速層析法(以於CH3OH/CH2Cl2中之3-4%7N NH3洗提SiO2)純化粗製物質以產生置於高真空下會產生黏性泡沫之淺黃色黏性油(5.03 g)。MS 608.3(M+H)。
實例1：1-((3-((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)甲基)-3-(4-(第三-丁基)苯基)脲(化合物110)之合成
步驟1：3-側氧基環丁烷羧甲酯之合成
逐滴加入3-側氧基環丁烷羧酸(3.0 g,26.31 mmol)、MeOH(1.68 g,52.62 mmol)以及DMAP(2.57 g,21.05 mmol)於DCM(30 ml)中之混合物至DCC(5.96 g,28.95 mmol)於DCM(20 ml)中之溶液。於室溫下攪拌反應混合物過夜。過濾混合物。以0.5 M HCl溶液(50 ml)清洗濾液。以Na2SO4乾燥有機層並進行濃縮。藉由SGC(PE：EA=5：1)純化殘留物以得到標題化合物(4.0 g)。1H N.R(500 MHz,CDCl3)：δ3.77(s,3H),3.42-3.26(m,5H)ppm。
步驟2：3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁烷羧甲酯之合成
於45℃攪拌甲基3-側氧基環丁烷羧基ate(1.28 g粗產物)，9-((3aR,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-((甲基胺基)甲基 )四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(2.0 g,6.25 mmol)(Townsend et al Org Lett 2009,11,2976-2679)及Ti(iPrO)4(1.78 g,6.25 mmol)於MeOH(50 mL)中之溶液持續2 h，接著加入NaCNBH3(0.79 g,12.50 mmol)。於室溫下攪拌反應過夜。以含水的飽和NaHCO3(40 mL)驟止反應，進行過濾，以DCM(40 mL×3)進行萃取，利用Na2SO4乾燥及進行濃縮。藉由SGC(DCM：MeOH=12：1)純化殘留物以得到標題化合物(1.7 g，產率63%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.28-8.27(m,1H),8.21(s,1H),6.20-6.18(m,1H),5.52(dd,J=1.5,6.0 Hz,1H),5.00(dd,J=3.0,6.0 Hz,1H),5.33(brs,1H),3.65-3.63(m,3H),2.77-2.55(m,4H),2.19-2.11(m,5H),2.00-1.82(m,2H),1.59(s,3H),1.38(s,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：433.2[M+1]+。
步驟3：(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)甲醇之合成
於0℃加入LiAlH4(0.53 g,13.89 mmol)至3- ((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁烷羧甲酯(1.0 g,2.31 mmol)於THF(40 ml)中之溶液，以及攪拌混合物過夜。於持續攪拌15分鐘的期間，緩慢地將水(1.0 g)及15% NaOH溶液(3.0 g)加入至混合物。濃縮濾液以得到粗製之標題化合物，其係直接地用於下一個步驟。
步驟4：(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)甲基甲磺酸酯之合成
將作為DCM(5 ml)中之溶液的Et3N(467 mg,4.62 mmol)及MsCl(264 mg,2.31 mmol)加入至直接得自前一步驟之(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)甲醇於DCM(25 ml)中之溶液。攪拌混合物持續2 h，加入水(20 ml)及DCM(30 mlx2)。以Na2SO4乾燥有機層以及進行濃縮，利用製備型TLC(DCM：MeOH=10：1)進行純化以得到標題化合物(390 mg，兩步 驟之產率35%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.27(s,1H),8.21(s,1H),6.203-6.200(m,1H),5.529(dd,J=2.0,7.0 Hz,1H),5.010(dd,J=3.0,6.0 Hz,1H),4.354(dd,J=3.5,8.0 Hz,1H),4.197-4.182(m,2H),3.585(brs,1H),3.073-2.948(m,5H),2.595-2.513(m,2H),2.394(brs,1H),2.207(brs,1H),2.107(s,3H),2.030-1.989(m,1H),1.840-1.811(m,2H),1.586(s,3H),1.390(brs,1H),1.329-1.280(m,6H),0.905-0.878(m,1H)ppm；ESI-MS(m/z)：483.3[M+1]+。
步驟5：9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-(疊氮基甲基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺之合成
將NaN3(81 mg,1.24 mmol)加入至(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)甲基甲磺酸酯(150 mg,0.31 mmol)於DMF(3 ml)中之溶液。於70℃加熱混合物持續3 h。加入水(30 ml)，及以乙酸乙酯(20 ml x 3)萃取混合物。以Na2SO4乾燥合併的有機層以 及進行濃縮。利用製備型TLC(DCM：MeOH=30：1)純化殘留物以得到標題化合物(90 mg，產率67%)。ESI-MS(m/z)：430.2[M+1]+。
步驟6：9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-(胺基甲基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺之合成
將Pd/C(10 mg)加入至9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-(疊氮基甲基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(90 mg,0.21 mmol)於MeOH(6 ml)中之溶液。於H2氣體環境中，於室溫下攪拌混合物過夜。過濾混合物並濃縮濾液以得到標題化合物，其係直接用於下一個步驟。
步驟7：1-((3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)甲基)-3-(4-(第三-丁基)苯基)脲之合成
將1-第三-丁基-4-異氰酸苯酯(37 mg)加入至9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-(胺基甲基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺於DCM(4 ml)中之溶液。於室溫攪拌混合物持續1 h。濃縮混合物以及經由製備型TLC(DCM：MeOH=10：1)進行純化以得到標題化合物(55 mg，兩個步驟的產率45%)。ESI-MS(m/z)：578.3[M+1]+。
步驟8：化合物110之合成
於室溫攪拌1-((3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)甲基)-3-(4-(第三-丁基)苯基)脲(55 mg)於HCl/MeOH(2.5 mol/L)(2 mL)中之溶液持續2h，接著經濃縮而乾燥。加入於水(0.5 mL)以及MeOH(5 mL)中的K2CO3(52 mg)。於室溫攪拌所得的產物持續另外的10min，進行過濾並濃縮濾液。藉由製備型HPLC純化殘留物以得到呈白色固體之化合物110(10 mg，產率：25%)。1HNMR(500 MHz,MeOD)：δH8.26(s,1H),8.18(s,1H),7.26-7.19(m,4H),5.96(d,J=4.5 Hz,1H),4.674- 4.655(m,1H),4.24-4.16(m,2H),3.15(d,J=5.0 Hz,2H),2.83-2.73(m,3H),2.20-1.59(m,8H),1.26(s,9H)ppm；ESI-MS(m/z)：539.3[M+1]+。
實例2：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇(化合物2)之合成
步驟1：順式及反式3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁烷羧甲酯之合成
於45℃攪拌3-側氧基環丁烷羧甲酯(4.60 g,35.94 mmol)、9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(胺基甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(11.0 g,35.94 mmol)及Ti(iPrO)4(4.0 g,14.08 mmol)於MeOH(80 mL)中之溶液持續2 h，接著加入NaCNBH3(4.5 g,71.87 mmol)。於室溫下攪拌反應過夜。以含水的飽和NaHCO3(40 mL)驟止反應及進行過濾，以DCM(80 mL×3)進行萃取，以Na2SO4乾燥並進行濃縮。藉由製備型HPLC 純化殘留物以得到標題化合物(6.2 g，產率41%)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)：δH 8.38-8.34(m,1H),7.90(s,1H),5.98(d,J=3.0 Hz,1H),5.75(br s,2H),5.48-5.46(m,1H),5.03-5.01(m,1H),4.35-4.33(m,1H),3.69-3.66(m,3H),3.50-3.17(m,1H),3.05-2.73(m,3H),2.48-2.44(m,2H),1.95-1.91(m,2H),1.62(s,3H),1.39(s,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：419.2[M+1]+。
經由掌性HPLC(掌性CEL AD-H 20＊250mm，5um(Daicel)，管柱溫度：35℃，移動相：CO2/甲醇(0.1% DEA)=70/30，流速：50g/min)而分離3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁烷羧甲酯之順式/反式混合物(6.2g)以得到純順式產物(3.5 g)以及純反式產物(1.7g)。
步驟2：3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁烷羧基(1S,3s)-甲酯
加入2-碘丙烷(4.0 g,23.92 mmol)及K2CO3(1.0 g, 7.18 mmol)至順式3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4基)甲基)胺基)環丁烷羧甲酯(2.0 g,4.78 mmol)於CH3CN(15 ml)中之溶液。於密封管中將反應加熱至95℃過夜。過濾混合物，濃縮濾液以及藉由SGC(DCM：MeOH=12：1)進行純化以得到標題化合物(1.9 g，產率86%)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)：δH 8.37(s,1H),7.89(s,1H),6.03(d,J=1.5 Hz,1H),5.53-5.48(m,3H),5.00(br s,1H),4.25(brs,1H),3.66(s,3H),3.19-3.18(m,1H),2.96(brs,1H),2.80-2.78(m,1H),2.67-2.58(m,2H),2.20-2.12(m,4H),1.62(s,3H),1.39(s,3H),1.00(d,J=6.0 Hz,3H),0.84(d,J=6.0 Hz,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：461.4[M+1]+。
步驟3：(1S,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁烷羰醛之合成
於-78℃將DIBAL-H逐滴加入至3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4- d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁烷羧基(1S,3s)-甲酯(1.2 g,2.60 mmol)於DCM(50 ml)中之溶液，直到TLC判斷所有的起始物質皆被消耗。加入MeOH(2 ml)及於加入水(50 ml)時攪拌混合物至室溫持續30分鐘，以及以DCM(50 ml x 2)萃取混合物。以Na2SO4乾燥有機層及進行濃縮以得到粗製之標題化合物(1.0 g)，其係直接用於下一個步驟。1H NMR(500 MHz,CDCl3)：δH 9.56(d,J=2.5 Hz,1H),8.36(s,1H),7.88(s,1H),6.03(d,J=2.5 Hz,1H),5.66(br s,2H),5.50(dd,J=2.0,6.5 Hz,1H),5.01(dd,J=3.5,6.5 Hz,1H),3.331-3.337(m,1H),2.96-2.97(m,1H),2.77-2.59(m,3H),2.14-2.05(m,4H),1.60(s,3H),1.39(s,3H),1.01(d,J=6.5Hz,3H),0.85(d,J=6.0 Hz,3H)ppm。
步驟4：3-((1S,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙烯酸(E)-乙酯之合成
將2-(二乙氧基磷基)乙基乙酯(484 mg,2.16 mmol)、DBU(328 mg,2.16 mmol)及LiCl(91 mg,2.16mmol)加入 至(1S,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁烷羰醛(930 mg,2.16 mmol)於CH3CN：DCM=5：1(50 ml)之溶液中。於室溫攪拌混合物持續1 h，接著進行濃縮。加入水(20 ml)及以DCM(25 mlx3)萃取混合物。以Na2SO4，乾燥合併的有機層並進行濃縮，以及藉由SGC(DCM：MeOH=30：1)純化殘留物以得到標題化合物(900 mg，產率83%)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)：δH 8.36(s,1H),7.89(s,1H),6.94-6.90(m,1H),6.03(s,1H),5.72-5.89(m,1H),5.57(s,2H),5.52(d,J=4.5 Hz,1H),5.00(dd,J=3.5,6.0 Hz,1H),4.25(d,J=3.0 Hz,1H),4.21-4.17(m,2H),3.14(brs,1H),2.961-2.936(m,1H),2.74-2.52(m,3H),2.22-2.14(m,2H),1.79-1.76(m,2H),1.60(s,3H),1.40(s,3H),1.30-1.27(m,3H),1.00(d,J=7.0 Hz,3H),0.82(d,J=6.5 Hz,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：501.4[M+1]+。
步驟5：3-((1S,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸乙酯之合成
將Pd/C(20 mg)加入至3-((1S,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙烯酸(E)-乙酯(900 mg,1.8 mmol)於MeOH(50 ml)中之溶液。於氫氣體環境下，於室溫下攪拌混合物過夜。過濾混合物及濃縮濾液以得到標題化合物(700 mg，產率78%)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)：δH 8.36(s,1H),7.89(s,1H),6.03(d,J=2.5 Hz,1H),5.69(s,2H),5.51(dd,J=2.5,8.0 Hz,1H),4.99(dd,J=4.0,7.5 Hz,1H),4.26(brs,1H),4.13-4.08(m,2H),2.99-2.92(m,2H),2.706-2.655(m,1H),2.539-2.486(m,1H),2.18-2.02(m,4H),1.76(brs,1H),1.65-1.60(m,5H),1.43-1.37(m,5H),1.26-1.23(m,2H),0.97(d,J=9.0 Hz,3H),0.79(d,J=8.5 Hz,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：503.4[M+1]+。
步驟6：3-((1S,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸之合成
將LiOH.H2O(543 mg,1.29 mmol)加入至3-((1S,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸乙酯(650 mg,1.29 mmol)於THF：MeOH=5：1(30 ml)之溶液中。於室溫下攪拌混合物過夜，進行濃縮接著令其溶於MeOH(10 ml)中。於0℃逐滴加入1M HCl溶液直至pH=7。濃縮混合物及以製備型HPLC進行純化以得到標題化合物(170 mg)。
步驟7：N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-((1S,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙醯胺之合成
將4-第三-丁基苯-1,2-二胺(117 mg,0.72 mmol)、 EDCI(137 mg,0.72 mmol)、HOBT(97 mg,0.72 mmol)及TEA(217 mg,2.15 mmol)加入至3-((1S,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸(170 mg,0.36 mmol)於DCM(15 ml)中之溶液。於室溫下攪拌混合物過夜及進行濃縮。加入飽和的NaHCO3溶液(20 ml)及以DCM(20 mlx3)萃取混合物。以Na2SO4乾燥有機層並進行濃縮。利用製備型TLC(DCM：MeOH=12：1)純化粗製產物以得到標題化合物(110 mg粗產物)。
步驟8：9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺之合成
將N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-((1S,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙醯胺(110 mg)於AcOH(10 ml)中之溶液加熱 至65℃過夜。濃縮混合物，加入飽和的NaHCO3溶液(20 ml)，及以DCM(20 ml x 3)萃取混合物。以Na2SO4乾燥合併的有機層並進行濃縮以得到標題化合物(105 mg粗產物)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)：δH 8.36(s,1H),7.89(s,1H),7.48-7.24(m,3H),6.01(d,J=1.5 Hz,1H),5.60-5.53(m,3H),4.98(dd,J=3.0,6.5 Hz,1H),4.22(brs,1H),2.97(brs,1H),2.874-2.847(m,1H),2.56-2.50(m,3H),1.87-1.78(m,2H),1.70-1.54(m,7H),1.35-1.17(m,14H),0.90(d,J=6.5 Hz,3H),0.80(d,J=6.5 Hz,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：603.5[M+1]+。
步驟9：化合物2之合成
於室溫攪拌9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(105 mg)於HCl/McOH(2.5 mol/L)(10 mL)中之溶液持續2 h，接著進行濃縮來乾燥。加入於水(0.5 mL)中之K2CO3(96 mg)以及McOH(5 mL)，及於室溫攪拌所得的產物持續另外的10 min然後進行過濾。濃縮濾液及藉由製備型HPLC(xbridge 30mm＊150mm，移動相：A：水(10mM NH4HCO3)B：CAN，梯度：10min內35-45% B，6 min內45-45% B，於20min時停止，流速：50ml/min)純化殘留物以得到呈白色固體之化合物2(50 mg，產率：51%)。1HNMR(500 MHz,MeOD)：δH8.29 (s,1H),8.20(s,1H),7.47-7.39(m,3H),5.96(d,J=4.0 Hz,1H),4.70-4.75(m,1H),4.26-4.27(m,1H),4.05-4.06(m,1H),3.140-3.155(m,1H),3.00-2.76(m,5H),2.18-2.16(m,2H),1.87-1.85(m,2H),1.57-1.55(m,2H),1.36(s,9H),1.01(d,J=6.5 Hz,3H),0.94(d,J=6.5 Hz,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：563.4[M+1]+。
實例3：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇(化合物3)之合成
步驟1：3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁烷羧基(1R,3r)-甲酯之合成
將2-碘丙烷(3.5 g,20.3 mmol)及K2CO3(0.84 g,6.10 mmol)加入至3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁烷羧(1R,3r)-甲酯(1.7 g,4.07 mmol)於CH3CN(15 ml)中之溶液。於密封管中將反應加熱至95℃ 過夜。過濾混合物及濃縮濾液，以及藉由SGC(DCM：MeOH=12：1)進行純化以得到標題化合物(1.35 g，產率72%)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)：δH 8.36(s,1H),7.88(s,1H),6.03(d,J=2.0 Hz,1H),5.55(m,2H),5.49(dd,J=1.5,6.0 Hz,1H),5.01(dd,J=3.5,6.0 Hz,1H),4.254-4.247(m,1H),3.68(s,3H),3.60-3.50(m,1H),2.930-2.917(m,1H),2.79-2.74(m,2H),2.59-2.57(m,1H),2.25-2.12(m,4H),1.60(s,3H),1.39(s,3H),1.00(d,J=6.5 Hz,3H),0.83(d,J=7.0 Hz,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：461.3[M+1]+。
步驟2：(1R,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁烷羰醛之合成
於-78℃，將DiBAL-H逐滴加入至3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁烷羧(1R,3r)-甲酯(1.35 g,2.93 mmol)於DCM(50 ml)中之溶液，直至TLC判斷起始物質完全被消耗。加入MeOH(2 ml) 及於室溫攪拌混合物持續30分鐘。加入水(50 ml)及以DCM(50 mlx2)萃取混合物。以Na2SO4乾燥合併的有機層及進行濃縮以得到粗製之標題化合物(1.1 g)，其係直接用於下一個步驟。1H NMR(500 MHz,CDCl3)：δH 9.80(s,1H),8.35(s,1H),7.88(s,1H),6.04(s,1H),5.56(s,2H),5.50(d,J=6.5 Hz,1H),5.028-5.026(m,1H),4.26(brs,1H),3.33-3.30(m,1H),2.956-2.930(m,1H),2.80-2.55(m,3H),2.27-2.07(m,4H),1.60(s,3H),1.39(s,3H),1.00(d,J=7.0 Hz,3H),0.82(d,J=6.5 Hz,3H)ppm。
步驟3：3-((1R,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙烯酸(E)-乙酯之合成
將2-(二乙氧基磷基)乙基乙酯(573 mg,2.56 mmol)、DBU(389 mg,2.56 mmol)及LiCl(107 mg,2.56 mmol)加入至(1R,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁烷羰醛(1.1 g,2.56 mmol)於CH3CN：DCM=5：1(50 ml)中之溶液。於室溫攪拌混合物持續1 h以及進行濃縮，加入水(20 ml)至其中及以DCM(25 mlx3)萃取混合物。以Na2SO4乾燥合併的有機層並進行濃縮。藉由SGC(DCM：MeOH=30：1)純化殘留物以得到標題化合物(1.0 g，產率78%)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)：δH 8.35(s,1H),7.89(s,1H),7.16-7.11(m,1H),6.03(d,J=2.0 Hz,1H),5.79-5.76(m,1H),5.56(s,2H),5.51(dd,J=1.5,6.0 Hz,1H),5.02(dd,J=3.0,6.0 Hz,1H),4.25(d,J=8.0 Hz,1H),4.22-4.17(m,2H),3.44(brs,1H),2.93(brs,1H),2.78-2.56(m,3H),2.27-2.16(m,2H),1.93-1.91(m,2H),1.60(s,3H),1.40(s,3H),1.31-1.27(m,3H),0.98(d,J=6.5 Hz,3H),0.82(d,J=6.5 Hz,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：501.4[M+1]+。
步驟4：3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸乙酯之合成
將Pd/C(30 mg)加入至3-((1R,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙烯 酸(E)-乙酯(1.0 g,2.0 mmol)以及10% Pd/C(30 mg)於MeOH(50 ml)中之混合物。於氫氣體環境下，於室溫下攪拌混合物過夜。過濾所得的混合物及濃縮濾液以得到標題化合物(1.0 g，產率100%)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)：δH 8.36(s,1H),7.89(s,1H),6.03(d,J=2.5 Hz,1H),5.58(s,2H),5.51(dd,J=2.0,6.5 Hz,1H),5.00(dd,J=3.5,6.0 Hz,1H),4.276-4.269(m,1H),4.13-4.09(m,2H),3.38-3.37(m,1H),2.94-2.54(m,3H),2.22-1.97(m,5H),1.79-1.62(m,4H),1.60(s,3H),1.40(s,3H),1.28-1.23(m,2H),0.97(d,J=7.0 Hz,3H),0.79(d,J=7.0 Hz,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：503.4[M+1]+。
步驟5：3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸之合成
加入LiOH．H2O(301 mg,7.20 mmol)至3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸乙酯(360 mg,0.72 mmol)於THF：MeOH=5 ：1(30 ml)中之溶液。於室溫下攪拌混合物過夜，進行濃縮，接著將其溶於MeOH(10 ml)中。於0℃逐滴加入1 M HCl溶液直至pH=7。濃縮混合物以得到標題化合物之粗製產物，其係直接用於下一個步驟。
步驟6：N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙醯胺之合成
將4-(第三-丁基)苯-1,2-二胺(235 mg,1.43 mmol)、EDCI(274 mg,1.43 mmol)、HOBT(193 mg,1.43 mmol)以及TEA(435 mg,4.30 mmol)加入至3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸於DMF(5 ml)中之溶液。加熱混合物至45℃過夜且進行濃縮。加入飽和NaHCO3溶液(20 ml)及以DCM(20 mlx3)萃取混合物。以Na2SO4乾燥有機層及進行濃縮。利用製備型TLC(DCM：MeOH=12：1)純化粗製產物以得到標題化合物(110 mg)，其係用於下一個步驟而無需進一步的純化。
步驟7：9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺之合成
於65℃加熱N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙醯胺(110 mg)於AcOH(15 ml)中之溶液過夜。濃縮混合物，加入飽和的NaHCO3溶液(20 ml)及以DCM(20 ml x 3)萃取混合物。以Na2SO4乾燥合併的有機層以及進行濃縮以得到標題化合物(100 mg粗產物)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)：δH 8.36(s,1H),7.94(s,1H),7.48-7.27(m,3H),6.07(d,J=1.5 Hz,1H),5.64-5.58(m,3H),5.02(dd,J=3.0,6.0 Hz,1H),4.30(brs,1H),3.38-3.37(m,1H),2.97-2.95(m,1H),2.76-2.55(m,3H),1.97-1.74(m,5H),1.67-1.57(m,5H),1.45-1.40(m,12H),0.99(d,J=6.5 Hz,3H),0.83(d,J=6.5 Hz,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：603.5[M+1]+。
步驟8：化合物3之合成
於室溫攪拌9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(190 mg)於HCl/MeOH(2.5 mol/L)(15 mL)中之溶液持續2 h以及進行濃縮而乾燥。加入於水(0.5 mL)中之K2CO3(161 mg)以及MeOH(5 mL)。於室溫攪拌所得的產物持續另外的10 min接著進行過濾。濃縮濾液及藉由by製備型HPLC(xbridge 30mm＊150mm，移動相：A：水(10mM NH4HCO3)B：CAN，梯度：10min內35-45% B，6 min內45-45% B，於20min時停止，流速：50ml/min)純化殘留物以得到呈白色固體之化合物3(65 mg，產率：70%)。1HNMR(500 MHz,MeOD)：δH8.29(s,1H),8.19(s,1H),7.47-7.28(m,3H),5.95(d,J=4.5 Hz,1H),4.744-4.724(m,1H),4.27-4.26(m,1H),4.07-4.06(m,1H),3.56(brs,1H),3.01-2.78(m,5H),2.17(brs,2H),2.00-1.93(m,2H),1.80-1.79(m,2H),1.36(s,9H),1.02(d,J=5.5 Hz,3H),0.95(d,J=6.0 Hz,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：563.5[M+1]+。
實例4：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-氯-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇(化合物4)之合成
步驟1：N-(2-胺基-4-氯-5-(三氟甲基)苯基)-3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙醯胺之合成
將4-氯-5-(三氟甲基)苯-1,2-二胺(221 mg,1.05 mmol)、EDCI(201 mg,1.05 mmol)、HOBT(142 mg,1.05 mmol)以及TEA(320 mg,3.15 mmol)加入至3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸(250 mg,0.53 mmol)於中DCM(30 ml)中之溶液。於室溫下攪拌混合物過夜，加入飽和的NaHCO3溶液(20 ml)及以DCM(20 ml x 3)萃取混合物。以Na2SO4乾燥合併的有機層，進行過濾及濃縮。藉由製備型-TLC(DCM：MeOH=12：1)純化粗製產物以得到標題化合物(250 mg粗產物)。
步驟2：9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1s,3R)-3-(2-(5-氯-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基 )-9H-嘌呤-6-胺之合成
加熱N-(2-胺基-4-氯-5-(三氟甲基)苯基)-3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙醯胺(250 mg)於AcOH(15 ml)中之溶液至65℃過夜。濃縮混合物，加入飽和的NaHCO3溶液(20 ml)及以DCM(20 ml x 3)萃取混合物。以Na2SO4乾燥合併的有機層及進行濃縮以得到標題化合物(200 mg粗產物)。
步驟3：化合物4之合成
於室溫攪拌9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1s,3R)-3-(2-(5-氯-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(200 mg)於HCl/MeOH(2.5 mol/L)(15 mL)中之溶液持續2 h，將彼濃縮而。加入於水(0.5 mL)中之K2CO3(166 mg)及MeOH(5 mL)以及於室溫攪拌所得的產物持續另外的10 min。過濾混合物以及濃縮濾液。藉由製備型HPLC純化殘留物以得到呈白色固體之 化合物4(80 mg，產率：43%)。1HNMR(500 MHz,MeOD)：δH8.29(s,1H),8.19(s,1H),7.88(s,1H),7.68(s,1H),5.96(d,J=4.0 Hz,1H),4.748-4.730(m,1H),4.284-4.263(m,1H),4.09(br s,1H),3.65-3.50(m,1H),3.03-2.85(m,5H),2.191-2.176(m,2H),2.03-2.00(m,2H),1.80(brs,2H),1.02(d,J=6.0 Hz,3H),0.96(d,J=6.6 Hz,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：609.2[M+1]+。
實例5：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-氯-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇(化合物5)之合成
步驟1：N-(2-胺基-4-氯-5-(三氟甲基)苯基)-3-((1S,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙醯胺之合成
將4-氯-5-(三氟甲基)苯-1,2-二胺(334 mg,1.60 mmol)、EDCI(304 mg,1.60 mmol)、HOBT(215 mg,1.60 mmol)以及TEA(483 mg,4.80 mmol)加入至3-((1S,3r)-3- ((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸於DCM：DMF=15：1(30 ml)中之溶液。於室溫攪拌混合物過夜。濃縮混合物，加入飽和的NaHCO3溶液(20 ml)及以DCM(20 ml x 3)萃取所得的混合物。以Na2SO4乾燥合併的有機層以及進行濃縮。經由製備型TLC(DCM：MeOH=12：1)純化粗製的殘留物以得到標題化合物(220 mg)。
步驟2：9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-氯-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺之合成
於65℃加熱N-(2-胺基-4-氯-5-(三氟甲基)苯基)-3-((1S,3r)-3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙醯胺(220 mg)於AcOH(15ml)中之溶液過夜。濃縮混合物，加入飽和的NaHCO3溶液(20ml)及以DCM(20ml x 3)萃取混合物。以Na2SO4乾燥合併的 有機層及進行濃縮以得到標題化合物(190 mg)。
步驟3：化合物5之合成
於室溫攪拌9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-氯-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(190 mg)於HCl/MeOH(2.5 mol/L)(15 mL)中之溶液持續2 h，接著將其濃縮而乾燥。加入於水(0.5 mL)中的K2CO3(161 mg)及MeOH(5 mL)及於室溫攪拌所得的產物持續另外的10 min。過濾混合物及濃縮濾液。藉由製備型HPLC純化殘留物以得到呈白色固體之化合物5(90 mg，產率：51%)。1HNMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.29(s,1H),8.19(s,1H),7.88(s,1H),7.67(s,1H),5.95(d,J=5.0 Hz,1H),4.736-4.716(m,1H),4.268-4.246(m,1H),4.070-4.051(m,1H),3.15(brs,1H),3.00-2.71(m,5H),2.17(brs,2H),1.93-1.88(m,2H),1.58-1.56(m,2H),1.01(d,J=5.5 Hz,3H),0.95(d,J=6.0 Hz,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：609.2[M+1]+。
實例6：(2R,3R,4S,5R)-2-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-((5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇(化合物6)之合成
步驟1：7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(疊氮基甲基)-2,2-二甲基 四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺之合成
於0℃之冰/水浴中冷卻((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲醇(2.83 g,6.20 mmol)以及三苯基膦(2.28 g,8.68 mmol)於乾四氫呋喃(32 mL)中之溶液。逐滴加入偶氮二甲酸二異丙酯(1.71 mL,8.68 mmol)，接著加入疊氮磷酸二苯酯(1.87 mL,8.68 mmol)於四氫呋喃(5.3 mL,66 mmol)中之溶液。於加入DPPA溶液時產生白色乳狀沉澱。約30分鐘後，令反應混合物升溫至室溫及攪拌過夜。於24 h後，HPLC指出所有的起始物質全被消耗將反應混合物濃縮至初始體積之約1/2及藉由快速層析法(175 g矽膠，10-55% EA/hept)進行純化以產生呈些許黃色剛性泡沫之標題化合物(2.49 g,83%)：針對C23H27N7O5MS(ESI+)m/z 482.2(M+H)+；針對C23H27N7O5(ESI-)m/z 480.1(M+H)-,m/z 526.1(M+CO2H)-；HPLC純度97%。
步驟2：7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(胺基甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺之合成
以三甲基膦於四氫呋喃(7.24 mL,7.24 mmol)中之1.0 M溶液逐滴處理((3aR,4R,6R,6aR)-6-(疊氮基甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(2.49 g,5.17 mmol)於四氫呋喃(50 mL,600 mmol)中之溶液及攪拌混合物持續20 h。以水(1.80 mL,99.9 mmol)處理反應混合物及於室溫攪拌持續2 h。濃縮反應混合物，令粗製產物溶於90 mL之CH2Cl2以及及以四份的30 mL H2O以及15 mL鹵水進行清洗。以Na2SO4乾燥溶液進行過濾及濃縮。藉由快速層析法(120 g矽膠，於CH3OH/CH2Cl2中之3-10% 7N NH3)純化粗製物質以產生呈泡沫狀之標題化合物(1.76 g,75%)：針對C23H29N5O5MS(ESI+)m/z 456.2(M+H)+；針對C26H35N5O5(ESI-)m/z 454.1(M-H)-；HPLC純度92%(停留時間，2.65 min)。
步驟3：2-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)乙基甲酯之合成
以逐滴加入之乙酸(50 uL,0.88 mmol)處理7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(胺基甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(400 mg,0.88 mmol)及2-(3-氧雜環丁基)乙基甲酯(100 mg,0.70 mmol)[根據美國專利申請公開第2009/0118287號中之製程所製備]於1,2-二氯乙烷(12 mL)中之溶液。以一份的三乙醯氧基硼氫化鈉(260 mg,1.2 mmol)處理溶液及於室溫進行攪拌。於4 h後，HPLC指出反應完成約80%。加入另外的20 mg酮及攪拌持續2.5 h。以30 mL CH2Cl2稀釋反應混合物及以15 mL飽和的NaHCO3進行清洗。以15 mL CH2Cl2清洗水相及以Na2SO4乾燥合併的有機相。過濾有機相並進行濃縮以產生淡黃色玻璃，藉由快速層析法(70g矽膠；於CH3OH/CH2Cl2中之2% 7N NH3)純化彼以產生呈無色玻璃之標題化合物(270 mg,66%)：針對C30H39N5O7MS(ESI+)m/z 582.2(M+H)+；HPLC純度>95%(停留時間，2.88 min)。
步驟4：2-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基) 乙基甲酯之合成
以氰基硼氫化鈉(380 mg,6.1 mmol)處理2-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)乙基甲酯(267 mg,0.459 mmol)於甲醇(12 mL)中之溶液。藉由逐滴加入於甲醇中之冰醋酸(10%(v/v))來調整溶液之pH至~6。以逐滴加入之37%甲醛(0.57 mL,7.6 mmol)來處理混合物及於室溫攪拌混合物持續1 h，屆時，HPLC指出起始物質經消耗。濃縮反應混合物以移除甲醇。以25 mL NaHCO3稀釋殘留的含水溶液及以三份20 mL的CH2Cl2萃取水相。以20 mL飽和的NaHCO3清洗有機相，利用Na2SO4進行乾燥，進行過濾及濃縮以產生呈無色剛性泡沫之標題化合物(272 mg,100%)，其係充分純以用於下一個步驟：針對C31H41N5O7MS(ESI+)m/z 596.5(M+H)+；HPLC純度>95%(停留時間，2.89 min)。
步驟5：2-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)乙酸之合成
以逐滴加入之氫氧化鈉(36 mg,0.91 mmol)於水(0.9 mL,50 mmol)中之溶液來處理2-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)乙基甲酯(270 mg,0.453 mmol)於甲醇(8.6 mL)中之溶液，以及於50℃加熱混合物。於17 h後，HPLC指出反應完成。令反應混合物冷卻至室溫以及0.91 mL之1.0N HCl進行處理以調整pH至~7。濃縮溶液以移除甲醇，冷凍所得的含水懸浮液產生白色固體。使用此物質於下一個步驟(假設為定量回收)：針對C30H39N5O7MS(ESI+)m/z 582.4(M+H)+；針對C30H39N5O7MS(ESI-)m/z 580.4(M-H)-；HPLC純度>95%(停留時間，2.72 min)。
步驟6：N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-2-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)乙醯胺之合成
以逐滴加入之N,N-二異丙基乙基胺(0.261 mL,1.50 mmol)接著為N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲鹽(259 mg,0.681 mmol)來處理2-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)乙酸以及4-第三-丁基苯-1,2-二胺(89.4 mg,0.545 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(4.5 mL)中之溶液。於室溫攪拌溶液持續18 h，於此期間LCMS指出起始物質經消耗。於高真空下濃縮反應混合物。殘留物係溶於30 mL乙酸乙酯及20 mL之1/1的H2O/飽和的NaHCO3溶液中。萃取混合物並以35 mL的乙酸乙酯清洗水相。以兩份20 mL的H2O及20 mL鹵水清洗合併的有機相。The以Na2SO4乾燥有機相，進行過濾及濃縮以產生呈棕褐色的玻璃/剛性泡沫。純化粗製物質藉由快速層析法(35g矽膠；4% 7N NH3 in CH3OH/CH2Cl2)以產生呈淺棕褐色玻璃/剛性泡沫的標題化合物(272 mg,82%)，其係醯胺之位向異構物的混合物：針對C41H53N7O6MS(ESI+)m/z 728.8(M+H)+；MS(ESI-)for C41H53N7O6 m/z 726.9(M-H)-；HPLC純度>95%，(停留時間，3.14,3.17 min)因醯胺位向異構物而觀察到兩個峰值。
步驟7：7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-((5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲 基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺之合成
N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-2-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)乙醯胺(272 mg,0.374 mmol)係溶於乙酸(7.2 mL)終於以及65℃加熱溶液。於1.5 h後，HPLC指出完全反應。將反應冷卻至室溫以及於高真空下移除溶劑。殘留物係溶於35 mLCH2Cl2以及以25 mL飽和NaHCO3溶液以及20 mL 2% Na2CO3溶液清洗有機相。以Na2SO4乾燥有機相，進行過濾及濃縮以產生淡棕褐色的玻璃/剛性泡沫。藉由快速層析法(30g矽膠；於CH3OH/CH2Cl2中之4% 7N NH3)純化粗製物質以產生呈淡棕褐色玻璃之標題化合物(224 mg,84%)，其係繞環丁基環之順式以及反式非鏡像異構物的混合物：針對C40H51N7O5MS(ESI+)m/z 710.6(M+H)+；針對C41H51N7O5MS(ESI-)m/z 708.7(M-H)-；HPLC純度>95%(停留時間，3.29,3.33min)，由於繞環丁基環之非鏡像異構物而觀察到兩個波峰。
步驟8：化合物6之合成
令7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-((5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(170 mg,0.24 mmol)溶於已於冰浴中冷卻至0℃之三氟乙酸(5.0 mL)及水(0.5 mL)的混合物。於0℃攪拌溶液持續30分鐘，及升溫至室溫。於5 h後，於室溫濃縮粉紅色的反應混合物。殘留物係溶於10 mL之MeOH中並進行濃縮。重複此過程兩次並將殘留物置於高真空中。物質係溶於7 mL之MeOH中，及以130 mg K2CO3以及五滴水進行處理。攪拌混合物持續1 hr，於期間發現溶液為鹼性。通過細緻玻璃料而過濾混合物，以10 mL MeOH清洗固體及濃縮濾液以產生近乎無色的固體。藉由快速層析法(30g矽膠；於CH3OH/CH2Cl2中之12% 7N NH3)純化粗製物質以產生呈無色玻璃/剛性泡沫之化合物6(81 mg,65%)：針對C28H37N7O3MS(ESI+)m/z 520.4(M+H)+；針對C28H37N7O3MS(ESI-)m/z 518.5(M-H)-；HPLC純度>95%(停留時間，2.51 min)；1H NMR(400 MHz,d4-MeOH)δH ppm 8.08(s,1 H),7.48(br.s.,1 H),7.39(d,J=8.50 Hz,1 H),7.29(dd,J=8.40,4.87 Hz,1 H),6.63(m,1 H),6.12(d,J=4.15 Hz,1 H),4.40(m,1 H),4.09(m,2 H),3.15(m,0.5 H),3.02(d,J=8.09 Hz,1 H),2.92(d,J=7.26 Hz,1 H),2.84(m,0.5 H),2.65(m,2 H),2.43(m,1 H),2.29(m,1 H),2.20(d,J=5.80 Hz,3 H),2.13(m,1 H),1.99 (br.s.,1 H),1.67(m,1 H),1.37(d,J=3.94 Hz,9 H),1.30(dd,J=13.99,4.66 Hz,1 H)。
實例7：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇(化合物7)之合成
步驟1：4,6-二氯-5-(2,2-二乙氧基乙基)嘧啶之合成
藉由Montgomery法來製備標題化合物(見：Montgomery,J.A.；Hewson,K.J.Med.Chem.10,665(1967).)
步驟2：(1R,2S,3R,5R)-3-((6-氯-5-(2,2-二乙氧基乙基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(羥基甲基)環戊烷-1,2-二醇之合成
4,6-二氯-5-(2,2-二乙氧基乙基)嘧啶(5.35 g,20.2 mmol)及(1R,2S,3R,4R)-2,3-二羥基-4-(羥基甲基)環戊銨氯化物(9.29 g,24.3 mmol)之混合物係溶於乙醇(236 mL)中，以Et3N(11.2 mL,80.8 mmol)進行處理及於回流溫度加 熱持續23 h；HPLC/LC MS指出起始材料之消耗以及產物存在。濃縮反應混合物以得到棕褐色漿料，其以粗產物形態用於下一步驟：針對C16H26ClN3O5MS(ESI+)m/z 376.2(M+H)+；針對C16H26ClN3O5MS(ESI-)m/z 374.2(M-H)-；HPLC純度>95%(停留時間，2.436 min)。Variation on route from J.Med.Chem.10,665(1967)。
步驟3：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(羥基甲基)環戊烷-1,2-二醇之合成
以1 M之含水HCl(30 mL,30 mmol)溶液處理粗製(1R,2S,3R,5R)-3-((6-氯-5-(2,2-二乙氧基乙基)嘧啶-4-基)胺基)-5-(羥基甲基)環戊烷-1,2-二醇於1,4-二噁烷(160 mL)中之懸浮液及於室溫下攪拌持續69.5 h；HPLC指出完全轉換成單一種產物，LC MS顯示所欲產物的質量。以濃縮的含水NH4OH來中和反應混合物(至pH 7)以及於真空中移除揮發成分以得到棕色漿料，其未經進一步純化：針對C12H14ClN3O3MS(ESI+)m/z 284.1(M+H)+；針對C12H14ClN3O3MS(ESI-)m/z 282.2(M-H)-,328.2(M+HCO2)-；HPLC純度>95%(停留時間，1.947 min)。Variation on route from J.Med.Chem.10,665(1967)。
步驟4：((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶- 7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲醇之合成
以對甲苯磺酸單水合物(7.28 g,38.3 mmol)處理粗製的(1R,2S,3R,5R)-3-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(羥基甲基)環戊烷-1,2-二醇(10 g,~20 mmol，藉NMR測定之純度為54%)及2,2-二甲氧基丙烷(100 mL,800 mmol)之混合物，以及劇烈地攪拌黃色-棕色的反應混合物持續1.25 h，屆時，唯一的固體為細緻棕褐色沉澱物。HPLC指出起始材料近乎完全消耗。以水(30 mL)稀釋反應混合物及以固體NaHCO3(4.80 g,57.1 mmol)進行中和。於真空中謹慎地移除揮發成分，以及以EtOAc(3 x 100 mL)萃取所得的棕色含水溶液。乾燥(Na2SO4)合併的有機物及於真空中進行濃縮以得到棕褐色漿糊。藉由層析法(4 x 22 cm矽石；0-66% EtOAc/Hex)進行純化以得到呈無色泡沫/玻璃之標題化合物(4.38 g，經一步驟後為70%)：針對C15H18ClN3O3MS(ESI+)m/z 324.2(M+H)+；針對C15H18ClN3O3MS(ESI-)m/z 368.2(M+HCO2)-；HPLC純度>95%(停留時間，3.034 min)。
步驟5：7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(疊氮基甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-4-氯-7H-吡咯并 [2,3-d]嘧啶之合成
令((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲醇(2.68 g,8.28 mmol)溶於THF(32 mL)中，以PPh3(3.05 g,11.6 mmol)進行處理，以及於冰-鹵水浴中冷卻反應容器。經由注射器逐滴加入偶氮二甲酸二異丙酯[DIAD](2.3 mL,12 mmol)以及攪拌混合物持續10分鐘。經由注射器逐滴加疊氮磷酸二苯酯[DPPA](2.50 mL,11.6 mmol)於THF(7.8 mL)中之溶液以得到灰-白色的混合物，攪拌其持續21 h，使冰浴升溫至室溫；HPLC/LC MS指出起始物質經完全消耗並形成產物。於22.5 h時於真空中濃縮反應混合物以及藉由層析法(4 x 22 cm矽石；0-25% EtOAc/Hex)進行純化以得到呈澄清、無色油之標題化合物(2.27 g,78%)：針對C15H17ClN6O2MS(ESI+)m/z 349.2(M+H)+；針對C15H17ClN6O2MS(ESI-)m/z 393.2(M+HCO2)-；HPLC純度>95%(停留時間，4.169 min)。
步驟6：7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(疊氮基甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺之合成
以N,N-二異丙基乙基胺(1.4 mL,7.8 mmol)處理7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(疊氮基甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶及2,4-二甲氧基苄基胺(1.2 mL,7.8 mmol)於1-丁醇(18.6 mL)中之溶液，以及於80℃進行加熱持續22 h；HPLC/LC MS指出~90%轉換成所欲的產物。移除揮發成分及黃色-棕色漿糊係溶於CH2Cl2(90 mL)中，以及以水(2 x 30 mL)以及鹵水(1 x 45 mL)進行清洗。乾燥(Na2SO4)分離的有機層及於真空中進行濃縮以得到橙色的油。藉由層析法(2 x 22 cm矽石；0-50% EtOAc/Hex)進行純化以得到呈淡黃色玻璃/泡沫之標題化合物(2.23 g,72%)：針對C24H29N7O4MS(ESI+)m/z 480.5(M+H)+；針對C24H29N7O4MS(ESI-)m/z 524.3(M+HCO2)-；HPLC純度>95%(停留時間，3.551 min)。
步驟7：7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(胺基甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺之合成
將7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(疊氮基甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(2.23 g,4.65 mmol)於THF(33 mL,410 mmol)中之溶液冷卻至0℃及以1.0 M之三甲基膦於THF(9.3 mL,9.3 mmol)中之溶液進行處理。去除冷浴且利用攪拌持續1 h而使反應混合物升溫至室溫；由HPLC判定無殘留起始物質。於1.5 h時，加入水(4.3 mL,240 mmol)及攪拌反應混合物持續1 h 15 min；TLC指出單一種產物。於真空中濃縮反應混合物以得到淺橙色漿糊。以CH2Cl2(120 mL)稀釋殘留物及以水(2 x 40 mL)及鹵水(1 x 40 mL)進行清洗。乾燥(Na2SO4)有機層及於真空中進行濃縮以得到橙色的油。藉由層析法(2 x 22 cm矽石；於CH3OH/CH2Cl2中之0-5% 7 N NH3)進行純化以得到呈無色泡沫之標題化合物(1.97 g，經3步驟後為53%)：MS(ESI+)for C24H31N5O4 m/z 454.3(M+H)+；HPLC純度>95%(停留時間，2.541 min)。
步驟8：3-(2,2-二氯-3-氧雜環丁基)丙酸乙酯之合成
以逐滴加入之三氯乙醯氯(25 g,140 mmol)處理於二乙基醚(170 mL)中之4-戊烯酸乙酯(7.07 g,55.2 mmol)及鋅-銅偶和(10.2 g,140 mmol)以及1,2-二甲氧基乙烷(25 mL)之混和物。於室溫攪拌混合物持續3天。經由矽藻土墊來過濾淡紅色的不均勻的反應混合物及以300 mL Et2O清洗該墊。濃縮濾液至原始體積之約一半及以兩份150 mL的H2O及一份150 mL之飽和的來清洗有機相。以MgSO4乾燥有機相，進行過濾及濃縮以產生棕色液體。藉由真空蒸餾(90-100℃ @0.044托)來純化物質以產生呈淺黃色液體之標題化合物(10.49 g,80%)：GC純度95.8%(停留時間，4.92 min)。
步驟9：3-(3-氧雜環丁基)丙酸乙酯之合成
少量的3-(2,2-二氯-3-氧雜環丁基)丙酸乙酯(10.49 g,43.87 mmol)及氯化銨(12 g,220 mmol)於甲醇(310 mL,7600 mmol)中之溶液係經鋅粉末(14 g,220 mmol)處理。於回流溫度加熱反應混合物持續3 h，其後GC指出完成反應。將反應混合物冷卻至室溫及經由矽藻土進行過濾，以Et2O清洗墊。於真空中濃縮濾液以得到淡黃色溶液。以200 mL Et2O及100 mL水來稀釋溶液。以100 mL Et2O反萃取分離的含水層及以100 mL之1：1水/鹵水、50 mL水及150 mL之飽和的含水NaHCO3來清洗合併的有機相。 以MgSO4乾燥有機層，進行過濾及於真空中進行濃縮以得到呈淡黃色油之標題化合物(4.49 g,60%)，其純度足以用於下一個步驟：GC純度>95%(停留時間，4.24 min)。
步驟10：3-(3-氧雜環丁基)丙酸之合成
以水(0.75 mL)及2N氫氧化鈉(0.75 mL,1.41 mmol)溶液處理3-(3-氧雜環丁基)丙酸乙酯(200 mg,1.18 mmol)於甲醇(4 mL)中之溶液，及於55℃加熱溶液直至TLC(25% EA/hcpt)判定起始物質被消耗。於1 h後，發現起始物質經消耗。將反應混合物冷卻至室溫及進行濃縮以移除MeOH。以2 mL H2O稀釋水相並利用1N HCl使其酸化至pH~2。以NaCl使溶液飽和及以三份10 mL的乙酸乙酯進行萃取。以Na2SO4乾燥有機相，進行過濾及濃縮以產生呈淺橙色黏性油之標題化合物(157 mg,94%)，其係使用於下一個步驟：GC純度63.2%(停留時間，4.27 min)。
步驟11：N-(2-胺基-4-氯-5-(三氟甲基)苯基)-3-(3-氧雜環丁基)丙醯胺之合成
將3-(3-氧雜環丁基)丙酸(157 mg,0.696 mmol)及4-氯-5-(三氟甲基)苯-1,2-二胺(146 mg,0.696 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(2.5 mL)中之溶液冷卻至0℃。以逐滴的N,N-二異丙基乙基胺(0.364 mL,2.09 mmol)接著為全份的N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲鹽(291 mg,0.765 mmol)來處理溶液。攪拌溶液且緩慢地使其升溫至室溫。於40 h後，在高真空下部分地濃縮反應混合物。殘留的棕色液體係溶於25 mL EA及15 mL之1/1的飽和NaHCO3/H2O中並進行萃取。以兩份15 mL的乙酸乙酯清洗水相及以30 mL的H2O及鹵水清洗合併的有機相。以MgSO4乾燥有機相，進行過濾及濃縮以產生呈棕褐色的棕色黏性油/玻璃。藉由快速層析法(40g矽膠，50-80% EA/hept)純化粗製物質以產生呈些許棕褐色玻璃/剛性泡沫之標題化合物(72 mg,31%)：針對C14H14ClF3N2O2MS(ESI+)m/z 335.2(M+H)+；針對C14H14ClF3N2O2MS(ESI-)m/z 333.3(M-H)-；HPLC純度78.2%(停留時間，3.56 min)。
步驟12：3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁酮之合成
N-(2-胺基-4-氯-5-(三氟甲基)苯基)-3-(3-氧雜環丁基) 丙醯胺(72 mg,mmol)係溶於乙酸(3.2 mL)中及於65℃加熱溶液持續26 h，於期間HPLC指出起始物質被消耗且產生新產物。冷卻反應混合物及於高真空下移除溶劑。淺棕色殘留物係溶於20 mL乙酸乙酯中及以10 mL之飽和的NaHCO3與H2O清洗有機相。以Na2SO4乾燥有機相，進行過濾及濃縮以產生淺棕色玻璃。藉由製備型TLC(20cm x 20cm x 1.0mm製備型TLC板，3% MeOH/EA)純化粗製物質以產生呈棕褐色玻璃之標題化合物(45 mg,66%)：針對C14H12ClF3N2O MS(ESI+)m/z 317.2(M+H)+；針對C14H12ClF3N2O MS(ESI-)m/z 315.2(M-H)-；HPLC純度84.1%(停留時間，2.98 min)。
步驟13：7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺之合成
以逐滴加入之乙酸(10 uL,0.18 mmol)處理7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(胺基甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(80 mg,0.18 mmol)及3-(2-(6-氯-5-( 三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁酮(45 mg,0.14 mmol)於1,2-二氯乙烷(2.4 mL)中之溶液。以整份的三乙醯氧基硼氫化鈉(53 mg,0.25 mmol)處理溶液及於室溫進行攪拌直至HPLC判定完成。於4 h後，以10 mL CH2Cl2稀釋反應混合物及以10 mL飽和的NaHCO3進行清洗。以10 mL CH2Cl2清洗水相及以Na2SO4乾燥合併的有機相。過濾溶液及進行濃縮以產生淺棕褐色的玻璃/剛性泡沫。藉由快速層析法(25g矽膠；於CH3OH/CHCl3中之5% 7N NH3)純化粗製物質以產生呈無色玻璃/剛性泡沫之標題化合物(76 mg,71%)：針對C38H43ClF3N7O4MS(ESI+)m/z 754.3(M+H)+；針對C38H43ClF3N7O4MS(ESI-)m/z 752.3(M-H)-；HPLC純度90.5%(停留時間，3.24 min)。
步驟14：7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺之合成
以氰基硼氫化鈉(84 mg,1.3 mmol)處理7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫- 3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(76 mg,0.10 mmol)於甲醇(2.5 mL)中之溶液。藉由逐滴加入10%(v/v)之於甲醇中之冰醋酸溶液來調整溶液之pH。以逐滴加入之37%含水甲醛(0.12 mL,1.7 mmol)來處理混合物及於室溫攪拌混合物直至LCMS判定完成。於2 h後，反應完全及濃縮反應混合物以移除甲醇。以7 mL NaHCO3稀釋殘留的含水溶液及以三份10 m的CH2Cl2萃取水相。以Na2SO4乾燥有機相進行過濾及濃縮以產生無色的剛性泡沫/玻璃。藉由快速層析法(20g矽膠；於CH3OH/CH2Cl2中之4% 7N NH3)純化粗製物質以產生呈無色玻璃之標題化合物(62 mg,80%)：針對C39H45ClF3N7O4MS(ESI+)m/z 768.0(M+H)+；針對C39H45ClF3N7O4MS(ESI-)m/z 766.3(M-H)-；HPLC純度92.1%(停留時間，3.29 min)。
步驟15：化合物7之合成
將7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(60 mg,0.078 mmol)溶於在0℃冰浴經預冷的三氟乙酸(3.6 mL)及水(0.4 mL)之混合物中。於0℃攪拌溶液持續30分鐘，接著升溫至室溫。於3 h後，在室溫下，HPLC指出反應完成。濃縮粉紅色的反應混合物。殘留物係溶於10 mL MeOH中及 進行濃縮。重複此過程兩次及放置殘留物於高真空中持續1 h。物質係溶於7 mL MeOH中及以120 mg K2CO3和十滴水進行處理。攪拌混合物持續1 hr。經由細緻玻璃料過濾混合物，以10 mL MeOH清洗固體及濃縮濾液以產生近乎無色的固體。藉由快速層析法(30g矽膠；於CH3OH/CH2Cl2中之10-15% 7N NH3)純化粗製物質以產生呈無色玻璃/剛性泡沫之化合物7(31 mg,69%)：針對C27H31ClF3N7O2 MS(ESI+)m/z 578.3(M+H)+；針對C27H31ClF3N7O2MS(ESI-)m/z 576.4(M-H)-；HPLC純度>95%(停留時間，2.57 min)；1H NMR(400 MHz,d4-MeOD)δH 8.06(s,1 H),7.89(d,J=2.07 Hz,1 H),7.69(d,J=2.28 Hz,1 H),7.21(dd,J=3.42,1.76 Hz,1 H),6.59(d,J=3.52 Hz,1 H),4.33(t,J=6.84 Hz,1 H),3.89(q,J=5.25 Hz,1 H),3.03(m,0.5 H),2.89(m,2 H),2.70(m,0.5 H),2.49(m,1 H),2.40(m,2 H),2.27(br.s.,2 H),2.16(d,J=7.26 Hz,4 H),2.06(m,2 H),1.91(m,2 H),1.62(m,1 H),1.52(m,1 H)。
實例8：化合物8-140之合成
藉由類似於實例1-7或一般流程中所描述之反應流程來合成化合物8-140。以下提供如何製備彼等中之一部分的詳細說明。化合物2-140之MS及NMR資料係示於表1或本文中的實例。
化合物8：1-(3-((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)-3-(4-(第三-丁基)苯基)脲
(3-氧雜環丁基)胺甲酸苄酯
於室溫加入DPPA(2.89 g,10.52 mmol)至3-側氧基環丁烷羧酸(1.0 g,8.77 mmol)及DIEA(1.92 g,14.92 mmol)於甲苯(8 mL)中之溶液。於氬氣中加熱混合物至60℃持續3 h，然後加入苯甲醇(1.14 g,10.52 mmol)。於60℃攪拌混合物過夜。濃縮反應，藉由SGC(PE：EA=8：1)純化殘留物以得到所欲的化合物(240 mg，產率50%)。1H NMR(500MHz,CDCl3)：δH 7.38-7.33(m,5H),5.12(d,J=7.5 Hz,2H),4.34-4.33(brs,1 H),3.44-3.39(m,2H),3.10-3.07(brs,2H)ppm；ESI-MS(m/z)：220.2[M+1]+。
(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)胺甲酸苄酯
將Ti[OCH(CH3)2]4(216 mg,0.59 mmol)加入至9-((3aR,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-((甲基胺基)甲基)四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(190 mg,0.59 mmol)及苄基(3-氧雜環丁基)胺甲酸酯(240 mg,1.37 mmol)於MeOH(5 mL)中之溶液。於室溫攪拌混合物持續1 h。然後加入NaCNBH3(95 mg,1.52 mmol)，於室溫下攪拌反應過夜。過濾及蒸發反應，藉由製備型TLC(DCM： MeOH=20：1)純化殘留物以得到所欲的化合物(90 mg，產率29%)。
1H NMR(500MHz,MeOD)：δH 8.28(s,1H),8.21(s,1H),7.33-7.28(m,5H),6.19(d,J=2.0 Hz,1H),5.52-5.51(m,1H),5.03(s,1H),5.00-4.98(m,1H),4.34(t,J=3.5 Hz,1H),3.70(m,1H),2.58-2.47(m,4H),2.38-2.26(m,2H),2.09(s,3H),1.69-1.67(m,1H),1.58(s,3H),1.37(s,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：524.3[M+1]+。
N1-(((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)-N1-甲基環丁烷-1,3-二胺
填充H2至(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)胺甲酸苄酯(190 mg,0.17 mmol)及Pd(OH)2(14 mg,0.1 mmol)於MeOH(5 mL)中之溶液。於35℃攪拌反應持續5 h。以矽藻土過濾反應及進行濃縮而乾燥。藉由製備型TLC(DCM：MeOH=10：1)純化殘留物成所欲的化合物(28 mg，產率42%)。1H NMR(500MHz,MeOD)：δH 8.29(s,1H),8.21(s,1H).6.19(d,J=2.0 Hz,1H),5.51(dd,J=6.5以及2.0 Hz,1H),5.00(dd,J=6.0以及3.5 Hz,1H),4.34(d,J=8.5 Hz,1H),3.14-3.11(m,1 H),2.60-2.57(m,1 H),2.52-2.48(m,2 H),2.34-2.31(m,2 H),2.10(s,3 H),1.66(q,J=10.0 Hz, 1H),1.58(s,3H),1.48(q,J=10.0 Hz,1H),1.37(s,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：390.2[M+1]+。
1-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)-3-(4-(第三-丁基)苯基)脲
逐滴加入於DCM(0.5 mL)中之1-第三-丁基-4-異氰酸苯酯(18 mg,0.11 mmol)至N1-(((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)-N1-甲基環丁烷-1,3-二胺(28 mg,0.072 mmol)及TEA(22 mg,0.22 mmol)in於THF(3 mL)中之溶液。於室溫攪拌反應持續1小時。濃縮反應及藉由製備型TLC(兩次，DCM：MeOH：NH4OH=300：30：8,V/V)進行純化以得到呈淡白色固體之所欲的化合物(28 mg，產率：88%)。1H NMR(500MHz,MeOD)：δH 8.29(s,1H),8.24(s,1H),7.28-7.22(m,4H),6.25(d,J=2.5 Hz,1H),5.52-5.50(m,1H),5.07-5.05(m,1H),4.46-4.44(m,1H),3.88-3.85(m,1H),2.97(brs,1H),2.80-2.78(m,2H),2.48-2.42(m,2H),2.30(s,3H),1.84-1.82(m,1H),1.60(s,3H),1.58-1.56(m,1H),1.39(s,3H),1.28(s,9 H)ppm；ESI-MS(m/z)：565.3[M+1]+。
1-(3-((((2R,3S,4R,5R)-5-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)-3-(4-(第三-丁 基)苯基)脲
於室溫攪拌1-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)-3-(4-(第三-丁基)苯基)脲(125 mg,0.23 mmol)於TFA(0.90 mL)中之溶液及0.10 mL的水持續1小時。濃縮反應以進行乾燥，將其溶於MeOH(5 mL)中及逐滴加入於0.5 mL的水中之K2CO3(60 mg)。於室溫攪拌反應持續0.5 h及進行濃縮以得到殘留物，藉由製備型TLC(DCM：MeOH：NH4OH=300：30：8,V/V)進行純化以得到呈淡白色固體之所欲的化合物(75 mg，產率：65%)。1H NMR(500MHz,MeOD)：δH 8.27(s,1H),8.21(s,1H),7.28-7.20(m,4H),6.00-5.99(m,1H),4.77-4.75(m,1H),4.28-4.23(m,2H),3.92-3.88(m,1H),2.92(brs,1H),2.83-2.81(m,2H),2.59-2.56(m,2H),2.32(s,3H),1.74-1.64(m,2H),1.27(s,9 H)ppm；ESI-MS(m/z)：525.3[M+1]+。
化合物9以及12
化合物9：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇：
1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.07(s,1H),7.90(s,1H),7.69(s,1H),7.22(d,J=3.5 Hz,1H),6.61(d,J=3.5 Hz,1H),4.34(t,J=6.5 Hz,1H),3.89(t,J=5.0 Hz,1H),2.88(t,J=7.0 Hz,2H),2.74-2.68(m,1H),2.55-2.49(m,1H),2.46-2.35(m,2H),2.32-2.22(m,3H),2.17(s,3H),2.00-1.90(m,3H),1.68-1.60(m,1H),1.58-1.48(m,2H)ppm；LC-MS(m/z)：578.3[M+1]+。
化合物12：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇：
1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.07(s,1H),7.91(s,1H),7.70(s,1H),7.22(d,J=3.5 Hz,1H),6.61(d,J=4.0 Hz,1H),4.34(dd,J=7.0以及6.0 Hz,1H),3.90(t,J=5.0 Hz,1H),3.05-3.00(m,1H),2.92(t,J=7.5 Hz,2H),2.55-2.49(m,1H),2.47-2.35(m,2H),2.32-2.22(m,1H),2.20-2.02(m,8H),1.93-1.86(m,2H),1.70-1.60(m,1H)ppm；LC-MS(m/z)：578.3[M+1]+。
化合物10以及11
化合物10：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基((1r,3S)-3-(2-(5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇：
1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.06(s,1H),7.79(s,1H),7.62(d,J=9.0 Hz,1H),7.47(d,J=8.5 Hz,1H),7.20(d,J=3.5 Hz,1H),6.59(d,J=3.0 Hz,1H),4.33-4.30(m,1H),3.88-3.86(m,1H),3.32-3.31(m,1H),2.89-2.86(m,2H),2.67-2.66(m,1H),2.48-2.26(m,6H),2.14(s,3H), 1.95-1.93(m,3H),1.62-1.48(m,3H)ppm；LC-MS(m/z)：544.3[M+1]+。
化合物11：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基((1s,3R)-3-(2-(5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇：
1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.06(s,1H),7.79(s,1H),7.62(d,J=8.5 Hz,1H),7.47(d,J=8.5 Hz,1H),7.20(d,J=3.0 Hz,1H),6.59(d,J=3.5 Hz,1H),4.33-4.31(m,1H),3.90-3.87(m,1H),3.01-3.0(m,1H),2.92-2.89(m,2H),2.48-2.03(m,13H),1.93-1.89(m,2H),1.63-1.61(m,1H)ppm；LC-MS(m/z)：544.3[M+1]+。
化合物13：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
N-(2-胺基-4-(三氟甲基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙醯胺
加入N,N,N',N'-四甲基-0-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲鹽(0.44 g,1.2 mmol)至3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸(460 mg,0.77 mmol)、N,N二異丙基乙基胺(0.44 mL,2.6 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中之溶液。於室溫攪拌反應過夜，部分地濃縮接著加入NaHCO3(飽和)。以EtOAc萃取含水層3次及以MgSO4乾燥合併的有機物，進行過濾及濃縮，及藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為95：5)進行純化以生成呈固體之所欲的化合物(0.34 g)。
N-(2,4-二甲氧基苄基)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
於65℃攪拌N-(2-胺基-4-(三氟甲基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙醯胺(0.38 g,0.50 mmol)及乙酸(5 ml)過夜。於真空中移除揮發成分及藉由與乙醇共沸蒸餾接著置於高真空中1小時以移除剩餘的水。所得的殘留物經分隔於NaHCO3(飽和)及DCM之間。萃取含水層3次及以MgSO4乾燥合併的有機物，進行過濾及濃縮，接著藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為93：7)進行純化以產生灰白色的泡沫。
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
於室溫將三氟乙酸(5 ml)加入至水(0.5 ml)及N-(2,4-二甲氧基苄基)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.31 g,0.42 mmol)之混合物。令反應進行過夜，以三乙基矽烷(0.13 ml,0.84 mmol)驟止反應。於真空中移除揮發成分，以及所得的殘留物被分隔於飽和的NaHCO3及DCM/MeOH(10：1)之間。再以DCM/MeOH(10：1)萃取含水層3次以上及以MgSO4乾燥合併的有機物，進行過濾及濃縮。藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為87：13)純化殘留物以生成呈灰白色泡沫/膠之所欲的化合物(0.12 g)。針對C27H32F3N7O2MS(ESI+)m/z 544.5[M+H]+；針對C27H32F3N7O2MS(ESI-)m/z 542.3[M-H]-；HPLC純度>85%(停留時間，2.418分鐘)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOH)δH 8.078(s,1H),7.812(s,1H),7.654-7.634(m,1H),7.507-7.487(m,1H),7.229-7.214(m,1H),6.617-6.608(d,J=3.6 Hz,1H),4.361-4.322(m,1H),3.927-3.887(m,1H),3.062-3.024(m,0.5H(次甲基的反式異構物))，2.944-2.873(m,2H),2.758-2.554(m, 0.5H(次甲基的順式異構物))，2.554-2.507(m,1H),2.447-2.351(m,2H),2.291-2.263(m,2H),2.194-2.054(m,6H),1.960-1.887(m,3H),1.686-1.480(m,2H)。停留時間：2.418。HPLC條件：Agilent Zorbax Exlipse XDB-C18管柱，4.6 X 50 mm(1.8 um包裝)，溶劑A-水(0.1% TFA)，溶劑B-乙腈(0.07% TFA)。6 min梯度由5至95% B；維持1 min；接著循環。
化合物14：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙醯胺
加入N,N,N',N'-四甲基-0-(7-氮雜苯并***-1-基}六氟磷酸脲鹽(0.44 g,1.2 mmol)至3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6- (4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸(460 mg,0.77 mmol)、N,N-二異丙基乙基胺(0.44 mL,2.6 mmol)及4-第三-丁基苯-1,2-二胺(0.15 g,0.93 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(5 mL,60 mmol)中之溶液。於室溫攪拌反應過夜，部分地濃縮至估計值2 mls，接著加入NaHCO3(飽和)。以EtOAc(3x)萃取混合物及以MgSO4乾燥合併的有機物且進行濃縮。藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為95：5)進行純化以產生固體(0.24 g)。
7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
於60℃攪拌N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡 咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙醯胺(0.24 g,0.32 mmol)於乙酸(5 ml,90 mmol)中之溶液過夜。於真空中移除揮發成分，以及所得的殘留物經分隔於Na2CO3(2N)及DCM之間。以DCM萃取含水層3次及以MgSO4乾燥合併的有機物，進行過濾及濃縮。藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為94：6)純化殘留物以產生呈固體之所欲的化合物(0.20 g)。
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
於室溫將三氟乙酸(5 ml)加入至水(0.5 ml)及7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.20 g,0.28 mmol)之混合物。令反應進行過夜，以三乙基矽烷(0.088 ml,0.55 mmol) 驟止反應。於真空中移除揮發成分，以及所得的殘留物經分隔於飽和的NaHCO3及DCM/MeOH(10：1)之間。再以DCM/MeOH(10：1)萃取含水相3次以上及以MgSO4乾燥合併的有機物，進行過濾及濃縮，以及藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為87：13)進行純化以得到呈灰白色泡沫之所欲的產物(0.060 g)。針對C30H41N7O2MS(ESI+)m/z 532.3[M+H]+；針對C30H41N7O2MS(ESI-)for m/z 530.4[M-H]-；HPLC純度>94%(停留時間，2.723分鐘)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOH)δH 8.079(s,1H),7.500(s,1H),7.418-7.398(m,1H),7.310-7.307(m,1H),7.230-7.216(m,1H),6.619-6.610(m,1H),4.355-4.316(m,1H),3.926-3.887(m,1H),3.088-3.017(m,0.5H(次甲基的反式異構物))，2.879-2.809(m,2H),2.745-2.685(m,0.5H(次甲基的順式異構物)，2.532-2.512(m,1H),2.446-2.373(m,2H),2.294-2.276(m,2H),2.202-2.012(m,5H),1.685-1.603(m,1H),1.545-1.504(m,1H),1.383(s,1H)。停留時間：2.723 min。HPLC條件：Agilent Zorbax Exlipse XDB-C18管柱，4.6 X 50 mm(1.8 urn包裝)，溶劑A-水(0.1% TFA)，溶劑B-乙腈(0.07% TFA)6 min梯度由5至95% B；維持1 min；然後循環。
化合物15：(1R,2S,3R,5R)-3-{4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基}-5-{[丙-2-基({4-[5-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑-2-基]丁基})胺基]甲基}環戊烷-1,2-二醇
步驟1：7-[(3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-{[丙-2-基({4-[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基]丁基})胺基]甲基}-六氫環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
攪拌3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}環丁烷-1-羰醛(243 mg,0.59 mmol)、7-[(3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-[(丙-2-基胺基)甲基]-六氫環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(170 mg,0.49 mmol)及MgSO4(710 mg,5.90 mmol)於DCE(10 ml)中之溶液持續15分鐘，然後加入STAB(175 mg,0.83 mmol)至反應混合物及於室溫攪拌1h。由LCMS觀察反應，於1h後未見到胺。加入飽和的NaHCO3(20 ml)至反應混合物及攪拌持續5min。接著加入鹵水(10 ml)至反應混合物。以DCM(2 x 30 ml)萃取產物，以Na2SO4進行乾燥，進行過濾及蒸發。藉由矽膠層析法進行純化，以於MeOH：DCM(1：99-4：96)中之7N NH3進行洗提以得到呈油狀之所欲的產物(170 mg,47%)；針對C38H54F3N7O3Si MS(ESI+)m/z 742.40[M+H]+；HPLC純度100%(停留時間，1.78 min)；1H NMR(500 MHz，氯仿-d)δH ppm-0.25-0.11(9 H,m),0.66-1.04(8 H,m), 1.17-1.48(5 H,m),1.49-1.61(3 H,m),1.77-2.04(2 H,m),2.19-2.37(5 H,m),2.37-2.51(2 H,m),2.52-2.80(2 H,m),2.81-2.91(1 H,m),2.91-3.22(2 H,m),3.34-3.79(2 H,m),4.29-4.52(1 H,m),4.78-5.12(2 H,m),5.28-5.70(4 H,m),6.34(1 H,d,J=3.63 Hz),6.80-7.16(1 H,m),7.29-7.71(2 H,m),7.71-8.11(1 H,m),8.11-8.46(1 H,m)。
步驟2.(1R,2S,3R,5R)-3-{4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基}-5-{[丙-2-基({4-[5-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑-2-基]丁基})胺基]甲基}環戊烷-1,2-二醇
緩慢地將12N HCl(3 ml)加入至7-[(3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-({丙-2-基[(3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}環丁基)甲基]胺基}甲基)-六氫環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(170 mg,0.23 mmol)於MeOH(3 ml)中之溶液及於40℃攪拌持續2.5 h。由LCMS觀察反應，於2.5 h後，未見到起始物質。於真空中濃縮反應混合物，接著以於MeOH中之7N NH3進行鹽基化。然後進行蒸發而乾燥。藉由矽膠層析法進行純化，以於MeOH：DCM (1：9)中之7N NH3進行洗提以得到呈白色固體之所欲的產物(100 mg,76%)；針對C29H36F3N7O3MS(ESI+)m/z 572.40[M+H]+；HPLC純度99%(停留時間，2.17 min)；1H NMR(500 MHz，氯仿-d)δH ppm 0.78-1.19(6 H,m),1.35-1.69(2 H,m),1.80-2.04(1 H,m),2.11-2.87(10 H,m),2.88-3.18(3 H,m),3.79-4.06(1 H,m),4.15-4.47(1 H,m),4.82-5.12(1 H,m),6.43-6.77(1 H,m),7.19(1 H,d,J=3.47 Hz),7.47(1 H,d,J=8.35 Hz),7.63(1 H,d,J=8.51 Hz),7.79(1 H,s),7.95-8.24(1 H,m)。
化合物18：(1R,2S,3R,5R)-3-{4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基}-5-({甲基[(3-{[5-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}環丁基)甲基]胺基}甲基)環戊烷-1,2-二醇
步驟1：3-[2-(苄基氧基)-2-側氧基亞乙基]環丁烷-1-羧酸
於氮氣中加熱環丁烷酮-3-羧酸(5 g,43.82 mmol)、2-(二甲氧基磷氧基)乙基苄酯(13.58 g,52.59 mmol)、LiOH(4.20 g,23.95 mmol)以及3Å活化的分子篩(25 g，粉末狀)於中THF(250 ml)混合物至回流溫度持續4 h。使反應冷卻至室溫及加入EtOAc(100 ml)接著加入HCl(1N,100 ml)。經由矽藻土過濾混合物。使相分離及以EtOAc(4 x 50 ml)萃取含水層。以Na2SO4乾燥合併的有機層，進行過濾及濃縮以產生無色油。以SiO2進行快速層析乾燥，以7：3至1：1之Hept：EtOAc進行洗提，以得到呈無色油之所欲的產物(5.2 g,39%)；針對C14H14O4MS(ESI+)m/z 269.05[M+Na]+；針對C14H14O4MS(ESI-)for m/z 245.15[M-H]-；HPLC純度81%(停留時間，1.85 min)；1H NMR(250 MHz，氯仿-d)δHppm 2.95-3.62(5 H,m),4.96-5.31(2 H,m),5.75(1 H,t,J=2.21 Hz),7.27-7.45(5 H,m)。
步驟2. 2-{3-[甲氧基(甲基)胺甲醯基]環丁二烯}乙基苄酯
逐滴加入異丁基氯仿酯(1.70 ml,12.99 mmol)至冰冷的3-[2-(苄基氧基)-2-側氧基亞乙基]環丁烷-1-羧酸(2.0 g,8.12 mmol)、N-甲基-嗎啉(2.70 ml,24.36 mmol)於DCM(50 ml)中之溶液歷時5分鐘。另外的5 min之後，加入甲氧基(甲基)胺鹽酸鹽(1.58 g,16.24 mmol)及攪拌混合物過夜，同時升溫至室溫。然後以DCM(30 ml)稀釋反應混合物，以0.1N HCl(50 ml)接著為飽和的NaHCO3(50 ml)進行清洗，進行過濾及蒸發。藉由矽膠層析法進行純化，以1：9至3：7之EtOAc：庚烷進行洗提以得到所欲的產物(1.54 g,65%)；針對C16H19NO4MS(ESI+)m/z 290.10[M+H]+； HPLC純度100%(停留時間，1.86 min)；1H NMR(500 MHz，氯仿-d)δHppm 2.96(1 H,ddd,J=16.98,8.79,1.81 Hz),3.17-3.30(4 H,m),3.30-3.48(2 H,m),3.51-3.63(1 H,m),3.64-3.75(3 H,m),5.15(2 H,s),5.73(1 H,quin,J=2.25 Hz),7.29-7.42(5 H,m)。
步驟3. 2-{3-[甲氧基(甲基)胺甲醯基]環丁基}乙酸
將鈀炭催化劑(palladium on charcoal)(10%,0.1 g)加入至2-{3-[甲氧基(甲基)胺甲醯基]環丁二烯}乙基苄酯(1.54 g,5.32 mmol)於EtOH(20 ml)中之溶液及於室溫下的氫氣體環境攪拌持續6 h。經由矽藻土過濾反應混合物及蒸發至乾燥以得到無色油(1.04 g,89%)；針對C9H15NO4MS(ESI+)m/z 202.00[M+H]+；針對C9H15NO4MS(ESI)- m/z 200.05[M-H]-；HPLC純度92%(停留時間，1.10 min)；1H NMR(500 MHz,MeOD)δH ppm 1.84-2.08(2 H,m),2.28-2.53(4 H,m),2.56-2.72(1 H,m),3.06-3.22(3 H,m),3.38-3.56(1 H,m),3.68(3 H,d,J=8.04 Hz)。
步驟4i. 3-({[2-胺基-5-(三氟甲基)苯基]胺甲醯基}甲基)-N-甲氧基-N-甲基環丁烷-1-甲醯胺
於0℃將TEA(1.49 ml,10.70 mmol)加入至2-{3-[甲氧基(甲基)胺甲醯基]環丁基}乙酸、EDC.HCl(1.18 g,6.20 mmol)、HOBt.xH2O(0.77 g,5.69 mmol)於DCM(20 ml)中之懸浮液及於加入4-(三氟甲基)苯-1,2-二胺(1.04 g,10.34 mmol)之前持續攪拌5 min。於0℃再攪拌20 min接著升溫至室溫。由LC MS觀察反應，於2小時候，以1N HCl(50 ml)接著以NaHCO3(50 ml)清洗反應混合物。以Na2SO4進行乾燥，進行過濾及蒸發至乾燥。藉由矽膠層析法進行純化，以EtOAc進行洗提以得到呈卡其色固體之所欲的產物(0.83 g,44%)；針對C16H20N3O3MS(ESI+)m/z 360.00[M+H]+；HPLC純度90%(停留時間，1.64 min)；1H NMR(500 MHz,MeOD)δH ppm 2.02-2.16(2 H,m),2.31-2.68(4 H,m),2.69-2.88(1 H,m),3.18(3 H,d,J=4.41 Hz),3.36-3.59(1 H,m),3.65-3.76(3 H,m),6.81-6.97(1 H,m),7.02-7.27(1 H,m),7.28-7.48(1 H,m)。
步驟4ii. N-甲氧基-N-甲基-3-{[5-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}-環丁烷-1-甲醯胺
將3-({[2-胺基-5-(三氟甲基)苯基]胺甲醯基}甲基)-N-甲氧基-N-甲基環丁烷-1-甲醯胺(0.82 g,2.29 mmol)於AcOH(10 ml)中之溶液加入至回流溫度(~125℃)同時進行攪拌持續2.5 h。由LCMS觀察反應。使反應混合物冷卻至室溫然後於真空中蒸發。令殘留物溶於DCM(30ml)中及以飽和的NaHCO3(50 ml)進行清洗，以Na2SO4進行乾燥，進行過濾及蒸發。藉由矽膠層析法來純化粗製產物，以MeOH：DCM(2：98-5：95)進行洗提以得到黃色-棕色油(0.75 g,94%)；針對C16H18F3N3O2MS(ESI+)m/z 342.10[M+H]+；HPLC純度97%(停留時間，1.40 min)；1H NMR(500 MHz,MeOD)δH ppm 1.96-2.17(2 H,m),2.27-2.55(2 H,m),2.66-2.92(1 H,m),2.97-3.15(2 H,m),3.15-3.22(3 H,m),3.32-3.62(1 H,m),3.63-3.73(3 H,m),7.37-7.53(1 H,m),7.53-8.00(2 H,m)。
步驟5. N-甲氧基-N-甲基-3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}環丁烷-1-甲醯胺
於室溫下將K2CO3(381 mg,2.76 mmol)接著為SEM-Cl(430 μl,2.43 mmol)加入至N-甲氧基-N-甲基-3-{[5-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}環丁烷-1-甲醯胺(754 mg,2.21 mmol)於DMF(10 ml)中之溶液及攪拌過夜。由LCMS觀察反應。水(3 ml)、鹵水(30 ml)稀釋反應混合物然後以EtOAc(2 x 50ml)進行萃取。以Na2SO4進行乾燥，進行過濾及蒸發以得到澄清之橙色油。藉由矽膠層析法進行純化，以EtOAc：庚烷(1：1-1)進行洗提以得到為單一位向異構物之呈卡其色油之所欲的產物(217 mg,21%)；針對C22H32F3N3O3Si MS(ESI+)m/z 472.55[M+H]+；HPLC純度99%(停留時間，2.37 min)；1H NMR(250 MHz，氯仿-d)δH ppm-0.31-0.22(9 H,m),0.83-1.00(2 H,m),2.03-2.25(2 H,m),2.30-2.74(2 H,m),2.85-3.14(3 H,m),3.18(3 H,s),3.32-3.60(3 H,m),3.61-3.72(3 H,m),5.52(2 H,s),7.51(1 H,dd,J=8.38,1.22 Hz),7.70(1 H,s),7.79(1 H,d,J=8.53 Hz)；以及位向異構物混合物(280 mg,27%)，針對C22H32F3N3O3Si m/z 472.55[M+H]+；HPLC純度72%及21%(停留時間，2.39 & 2.36 min)；1H NMR(250 MHz，氯仿-d)δ ppm-0.08--0.01(9 H,m),0.81-0.99(2 H,m),1.94-2.24(2 H,m),2.38-2.74(2 H,m),2.90-3.14(3 H,m),3.14-3.22(3 H,m),3.33-3.63(3 H,m),3.63-3.70(3 H,m),5.40-5.64(2 H,m),7.40-7.74(2 H,m),7.75-8.14(1 H,m)。
步驟6. 3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}環丁烷-1-羰醛
於-10℃逐滴加入DIBAL(0.69 ml,0.69 mmol，於THF中為1M)至N-甲氧基-N-甲基-3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}環丁烷-1-甲醯胺於THF中之溶液，同時進行攪拌。於-10℃持續反應3小時。將反應混合物倒至飽和的含水酒石酸鈉鉀(Rochelle's salt)(20 ml)上，以Et2O(50 ml)進行稀釋及攪拌持續30分鐘。接著分離所得產物及以酒石酸鈉鉀(30 ml)、飽和的NaHCO3(30 ml)及鹵水(30 ml)進行清洗。以Na2SO4進行乾燥，進行過濾及蒸發以得到無色的膠(190 mg,87%)；針對C20H27F3N2O2Si MS(ESI+)m/z 413.6[M+H]+；HPLC純度87%(停留時間，2.25 min)；1H NMR(500 MHz，氯仿-d)δH ppm-0.10-0.09(9 H,m),0.88-1.00(4 H,m),1.63-1.97(2 H,m),2.07-2.23(2 H,m),2.24-2.37(0 H,m),2.37-2.42(1 H,m),2.43-2.66(2 H,m),2.93-3.34(4 H,m),5.49-5.61(2 H,m),7.16-7.31(2 H,m),7.32-7.32(2 H,m),7.49-7.61(1 H,m)六氫，7.73(1 H,s),783(1 H,d,J=8.35 Hz)。
步驟7. 7-[(3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-({[(3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}環丁基)甲基]胺基}甲基)-六氫環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
攪拌3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}環丁烷-1-羰醛(190 mg,0.46 mmol)、(1R,2S,3R,5R)-3-{4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基}-5-(胺基甲基)環戊烷-1,2-二醇(140 mg,0.46 mmol)及MgSO4(554 mg,4.61 mmol)於DCE(10 ml)中之溶液持續15分鐘。隨後加入STAB(137 mg,0.645 mmol)至反應混合物並進行攪拌。由LCMS觀察反應，未見到胺。加入飽和的NaHCO3(20ml)至反應混合物及攪拌持續5min。加入鹵水(10 ml)至反應混合物及以DCM(2 x 30 ml)萃取產物，以Na2SO4進行乾燥，進行過濾及蒸發。藉由矽膠層析法進行純化，以於MeOH：DCM(1：99-5：95)中之7N NH3進行洗提以得到呈粉紅色泡沫狀固體之所欲的 產物。合併混合的分液及以於MeOH：DCM(2 x 4：96)中之7N NH3且於製備型TLC板上進行洗提以得到總量170 mg,53%。針對C35H48F3N7O3Si MS(ESI+)m/z 700[M+H]+；HPLC純度100%(停留時間，1.79 min)；1H NMR(250 MHz，氯仿-d)δH ppm-0.26-0.16(9 H,m),0.72-0.97(2 H,m),1.30(3 H,s),1.38-1.60(5 H,m),1.91-2.59(8 H,m),2.60-3.27(6 H,m),3.35-3.70(2 H,m),4.52(1 H,t,J=5.94 Hz),4.78-5.20(4 H,m),5.39-5.66(2 H,m),6.36(1 H,d,J=3.65 Hz),7.03(1 H,d,J=3.65 Hz),7.42-7.59(1 H,m),7.69(1 H,s),7.79(1 H,d,J=8.53 Hz),8.32(1 H,s)。
步驟8. 7-[(3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-({甲基[(3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}環丁基)甲基]胺基}甲基)-六氫環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
將甲醛(36 μl,0.49 mmol,37%(含水))加入至7-[(3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-({[(3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}環丁基)甲基]胺基}甲基)-六氫環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4- 基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺於MeOH(5 ml)及THF(5 ml)中之溶液，及於室溫攪拌反應持續30 min。分部加入NaCNBH3(18 mg,0.29 mmol)，及於室溫下再進一步攪拌反應持續小時，隨後LC MS指示反應完成。於真空中濃縮反應.混合物，及令殘留物分隔於水(20 ml)與DCM(20 ml)之間且將層分離。以DCM(2 x 20 ml)萃取含水層，接著以Na2SO4乾燥合併的有機物，以及進行濃縮。藉由製備型TLC進行純化，以於MeOH：DCM(5：95)中之7N NH3進行洗提以得到呈無色的油之所欲的產物(114 mg,66%)；針對C36H50F3N7O3Si MS(ESI+)m/z 714.45[M+H]+；HPLC純度100%(停留時間，1.77 min)；1H NMR(500 MHz，氯仿-d)δH ppm-0.14-0.05(9 H,m),0.85-0.99(2 H,m),1.18-1.35(3 H,m),1.37-1.53(2 H,m),1.52-1.64(3 H,m),1.89-2.15(3 H,m),2.18-2.28(2 H,m),2.29-2.70(6 H,m),2.72-2.96(1 H,m),2.97-3.20(2 H,m),3.48(3 H,s),3.50-3.58(2 H,m),4.37-4.58(1 H,m),4.85-5.05(2 H,m),5.11-5.38(2 H,m),5.41-5.57(2 H,m),6.35(1 H,d,J=3.63 Hz),6.84-7.19(1 H,m),7.50(1 H,d,J=8.35 Hz),7.68(1 H,s),7.78(1 H,d,J=8.35 Hz),8.13-8.52(1 H,m)。
步驟9.(1R,2S,3R,5R)-3-{4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基}-5-({甲基[(3-{[5-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}環丁基)甲基]胺基}甲基)環戊烷-1,2-二醇
於0℃將HCl於MeOH(1：1,3 ml)中之溶液加入至7-[(3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-({甲基[(3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}環丁基)甲基]胺基}甲基)-六氫環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺糗進行攪拌。接著立即於40℃攪拌所得產物持續4h(由LCMS觀察反應)。反應進一步進行1h。LCMS仍顯示30%未經縮醛保護的SM。再加入1 ml之HCl(36%(含水))至反應混合物及於40℃繼續反應1h。接著於真空中蒸發反應混合物。令殘留物溶於DCM(100 ml)+MeOH(1 ml)中及以飽和的NaHCO3(2 x 50ml)進行清洗，以Na2SO4進行乾燥，進行過濾及蒸發。藉由製備型TLC進行純化，以MeOH：DCM(1：9)中之7N NH3進行洗提；針對C27H32F3N7O2MS(ESI+)m/z 544[M+H]+；HPLC純度96%(停留時間，2.03 min)；1H NMR(500 MHz,MeOD)δH ppm 1.47-1.58(1 H,m),1.58-1.69(1 H,m),1.87-2.12(1 H,m),2.12-2.54(10 H,m),2.53-2.91(3 H,m),2.93-3.15(2 H,m),3.88-4.08(1 H,m),4.32(1 H,dd,J=7.57,6.15 Hz),4.88-5.01(1 H,m),6.59(1 H,d,J=3.63 Hz),7.20(1 H,d,J=3.63 Hz),7.42-7.53(1 H,m),7.63(1 H,d,J=8.20 Hz),7.79(1 H,s),7.95-8.22(1 H,m)。
化合物19：7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
以逐滴加入之N,N-二異丙基乙基胺(0.453 ml,2.60 mmol)接著為整份之N,N,N',N'-四甲基-0-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲鹽(449 mg,1.18 mmol)來處理3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸(490 mg,0.79 mmol)及4-第三-丁基苯-1,2-二胺(155 mg,0.946 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(8.1 ml)於中之溶液。於室溫下攪拌反應混合物過夜。於高真空下濃縮反應混合物以及將殘留物分隔於50 ml EtOAc與50 ml之1/1的H2O/飽和的NaHCO3之間。以30 ml EtOAc萃取水相且及以30 ml的H2O及鹵水清洗合併的有機相。以Na2SO4乾燥有機相，進行過濾及濃縮以得到玻璃/剛性泡沫。藉由快速層析法(SiO2，以於CH3OH/CH2Cl2中之4% 7N N NH3進行洗提)純化粗製物質以得到呈醯胺位向異構物之混合物之所欲的中間產物(400mg)。於65℃加熱中間產物(0.40 g)於乙酸(15 ml)中之溶液持續2.5 h，將反應混合物冷卻及置於高真空下以移除乙酸。殘留物係溶於60 ml CH2Cl2及以40 ml的飽和NaHCO3及2% Na2CO3溶液進行清洗。以 Na2SO4乾燥有機相，進行過濾及濃縮以產生玻璃/剛性泡沫。將物質置於高真空中及直接用於下一個步驟(380 mg)。
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
將7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(390 mg,0.52 mmol)溶於於0℃冰浴中經預冷之三氟乙酸(7.2 ml)及水(0.8 ml)的混合物中。於0℃攪拌溶液持續30分鐘，接著升溫至室溫。於2.5後，於室溫下使殘留物溶於15 ml MeOH中且進行濃縮。重複此過程兩次並將殘留物置於高真空中。物質係溶於15 ml MeOH中(以得到漿料)及以500 mg K2CO3和8滴水進行處理。攪拌混合物持續1 hr，於期間發現溶液為鹼性。經由細緻玻璃料來過濾混合物，以 10 ml MeOH清洗固體且濃縮濾液以產生灰白色固體。將物質置於高真空下過夜。藉由快速層析法(SiO2，以於CH3OH/CH2Cl2中之8-10% 7N NH3進行洗提)純化粗製物質以得到玻璃/剛性泡沫(0.22g)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.06(s,1 H),7.48(br.s.,1 H),7.39(m,1 H),7.27(m,1 H),7.20(d,J=3.52 Hz,1 H),6.60(m,1 H),4.32(t,J=6.43 Hz,1 H),3.93(t,J=5.29 Hz,1 H),3.54(m,0.2 H),3.11(t,J=9.33 Hz,1 H),3.02(m,1 H),2.82(m,2 H),2.66(dd,J=1 3.68,8.09 Hz,1 H),2.46(m,1 H),2.36(m,1 H),2.23(m,3 H),2.05(m,1 H),1.91(m,3 H),1.59(m,3 H),1.36(s,9 H),1.02(m,6 H)。
化合物20：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
以逐滴加入之N,N-二異丙基乙基胺(72.5 ul,0.416 mmol)及整份之N,N,N',N'-四甲基-0-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲鹽(72.0 mg,0.189 mmol)處理3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸(78.5 mg,0.126 mmol)及4-氯-5-(三氟甲基)苯-1,2-二胺(31.9 mg,0.151mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(1.3 ml)中之溶液。於室溫攪拌反應混合物持續7.5 h。將反應混合物置於冰箱中過夜。於高真空下濃縮反應混合物及將殘留物分隔於20 ml EtOAc與20 ml之1/1的H2O/飽和NaHCO3之間。以10 ml EtOAc萃取水相及以10 ml的H2O和鹵水清洗合併的有機相。以Na2SO4乾燥有機相，進行過濾及濃縮。藉由快速層析法(SiO2，以於CH3OH/CH2Cl2中之3% 7N NH3進行洗提)純化粗製物質以得到呈玻璃/剛性泡沫之所欲的中間產物(區域異構(regiosomeric)醯胺及順式/反式非鏡像異構物，87 mg)。中間產物(0.087 g)係溶於乙酸(4.5 ml)中，於65℃加熱持續6 h，將其冷卻至室溫及於室溫 下攪拌持續48 hr。於65℃加熱反應持續8，於室溫下過夜接著再於65℃持續加熱6.5 h。冷卻混合物且置於高真空下以移除乙酸。殘留物係溶於15 ml CH2Cl2中及以10 ml的飽和NaHCO3和2% Na2CO3進行清洗。以Na2SO4乾燥有機相，進行過濾及濃縮以產生玻璃/剛性泡沫。將物質置於高真空中過夜。藉由製備型TLC純化粗製物質，以CH3OH/CH2Cl2中之4% 7N NH3於20cm x 20cm x 1.0mm的製備型TLC板上洗提兩次。單離產物以產生呈白色固體的產物(48 mg)。
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
令7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(525 mg,0.683 mmol)溶於於0℃冰浴中經預冷之三氟乙酸(9 ml) 和水(1 ml)的混合物中。於0℃攪拌溶液持續30分鐘，接著升溫至室溫。於4 h後，於室溫下濃縮混合物。殘留物係溶於20 ml MeOH中並進行濃縮。重複此過程兩次且將殘留物置於高真空中。物質係溶於15 ml MeOH中(以得到漿料)及以500 mg K2CO3和15滴水進行處理。攪拌混合物持續1 hr，於期間發現溶液為鹼性。經由細緻玻璃料來過濾混合物，以10 ml MeOH清洗固體及濃縮濾液以產生灰白色固體。將物質置於高真空過夜。藉由快速層析法(SiO2，以CH3OH/CH2Cl2中之12% 7N NH3進行洗提)純化粗製物質以得到無色玻璃/剛性泡沫。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.06(s,1 H),7.89(d,J=2.07 Hz,1 H),7.69(d,J=2.28 Hz,1 H),7.21(dd,J=3.42,1.76 Hz,1 H),6.59(d,J=3.52 Hz,1 H),4.33(t,J=6.84 Hz,1 H),3.89(q,J=5.25 Hz,1 H),3.03(m,0.5 H),2.89(m,2 H),2.70(m,0.5 H),2.49(m,1 H),2.40(m,2 H),2.27(br.s.,2H),2.16(d,J=7.26 Hz,4 H),2.06(m,2 H),1.91(m,2 H),1.62(m,1 H),1.52(m,1 H)。
化合物21：(1R,2S,3R,5R)-3-{4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基}-5-({[(3-{[6-氯-5-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}環丁基)甲基](丙-2-基)胺基}甲基)環戊烷-1,2-二醇
步驟1：7-[(3aS,4R,6R,6aR)-6-({[(3-{[6-氯-5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲 基}環丁基)甲基](丙-2-基)胺基}甲基)-2,2-二甲基-六氫環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
攪拌3-{[6-氯-5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}環丁烷-1-羰醛(223 mg,0.50 mmol)、7-[(3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-[(丙-2-基胺基)甲基]-六氫環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(172 mg,0.50 mmol)及MgSO4(600 mg,5.00 mmol)於DCE(10 ml)中之溶液持續15分鐘，接著加入STAB(148 mg,0.70 mmol)至反應混合物及於室溫下持續攪拌1h。由LCMS觀察反應，於2.5 h後未見到胺。將飽和的NaHCO3(20 ml)加入至反應混合物以及攪拌持續5min。接著加入鹵水(20 ml)至反應混合物。以DCM(2 x 30 ml)萃取產物，以Na2SO4進行乾燥，進行過濾及蒸發。藉由製備型HPLC進行純化以得到呈白色固體之所欲的產物(174 mg,45%)；針對C38H53ClF3N7O3SiMS(ESI+)m/z 776.30[M+H]+；HPLC純度100%(停留時間，1.68 min)；1H NMR(500 MHz,MeOD)δH ppm-0.25-0.11(9 H,m),0.90(2 H,td,J=7.88,3.47 Hz),1.30(3 H,s),1.37(6 H,t,J=7.49 Hz),1.55(3 H,s),1.63-1.84(1 H,m),1.99-2.37(2 H,m),2.37-3.03(6 H,m),3.04-3.28(3 H,m),3.34-3.50(1 H,m),3.61(2 H,td,J=7.92,2.29 Hz),3.79(1 H,br.s.),4.68(1 H,t,J=6.70 Hz),4.95-5.27(2 H,m),5.55-5.81(1 H,m),6.88(1 H,d,J=3.63 Hz),7.06-7.62(2 H,m),7.61-7.94(1 H,m),7.94-8.16(1 H,m),8.22(1 H,s)。
步驟2.(1R,2S,3R,5R)-3-{4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基}-5-({[(3-{[6-氯-5-(三氟甲基)-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}環丁基)甲基](丙-2-基)胺基}甲基)環戊烷-1,2-二醇
緩慢地將12N HCl(1.5 ml)加入至7-[(3aS,4R,6R,6aR)-6-({[(3-{[6-氯-5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基]甲基}環丁基)甲基](丙-2-基)胺基}甲基)-2,2-二甲基-六氫環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(174 mg,0.22 mmol)於MeOH(1.5 ml)中之溶液及於40℃攪拌持續6 h。由LCMS觀察反應，於2.5 h後未見到起始物質。於真空中濃縮反應混合物，接著以於MeOH(5 ml)中之7N NH3進行鹽基化。然後將所得的產物蒸發至乾燥。藉由矽膠層析法進行純化，以MeOH：DCM(1：9)中之7N NH3進性洗提以得到呈白色固體之所欲的產物(36 mg,27%)；針對C29H35ClF3N7O2 MS(ESI+)m/z 606.30[M+H]+；HPLC純度100%(停留時 間，2.59 min)；1H NMR(500 MHz,MeOD)δH ppm 0.93-1.09(6 H,m),1.41-1.64(2 H,m),1.76-2.06(1 H,m),2.15-2.65(9 H,m),2.65-2.88(1 H,m),2.91-3.13(3 H,m),3.80-4.09(1 H,m),4.19-4.46(1 H,m),4.88-4.94(1 H,m),6.46-6.77(1 H,m),7.19(1 H,d,J=3.63 Hz),7.69(1 H,s),7.89(1 H,s),8.06(1 H,s)。
化合物22：(1R,2S,3R,5R)-3-{4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基}-5-{[({3-[(5-第三-丁基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]環丁基}甲基)(丙-2-基)胺基]甲基}環戊烷-1,2-二醇
階段1：3-{[(2-胺基-4-第三-丁基苯基)胺甲醯基]甲基}-N-甲氧基-N-甲基環丁烷-1-甲醯胺
於0℃將N,N-二異丙基乙基胺(5.19 ml,29.82 mmol)加入至2-{3-[甲氧基(甲基)胺甲醯基]環丁基}乙酸(3 g,14.91 mmol)、4-第三丁基苯二胺(2.69 g,16.4 mmol)及(1-氰基-2-乙氧基-2-側氧基亞乙基胺基氧基)二甲基胺基-嗎啉基-碳鎓六氟磷酸鹽(7.02 g,16.4 mmol)於二氯甲烷(60 ml)中之懸浮液及於升溫至室溫之前持續攪拌20 min。將反應置於室溫持續4 h。濃縮反應混合物，殘留物係再溶於EtOAc(60ml)中。以水(3 x 60ml)然後為鹵水(60ml)清洗溶液，進行乾燥(MgSO4)及於減壓下進行濃縮。藉由乾式快速層析法來純化粗製物質，以100% EtOAc進行洗提 以得到呈棕色油之標題化合物(3.74 g,46%)：針對C19H29N3O3MS(ESI+)m/z 348.5[M+H]+；LC純度26%及44%(UV)、18%及68%(ELS)，(停留時間，1.65及1.71 min)。
階段2：3-[(5-第三-丁基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]-N-甲氧基-N-甲基環丁烷-1-甲醯胺
加熱經攪拌的3-{[(2-胺基-4-第三-丁基苯基)胺甲醯基]甲基}-N-甲氧基-N-甲基環丁烷-1-甲醯胺(70%,2.62 g,5.28 mmol)於乙酸(25 ml)中之溶液至回流溫度持續1h。於減壓下濃縮反應混合物，及將殘留物分隔於飽和的NaHCO3(含水)(25 ml)與EtOAc(25 ml)之間並使層分離。以EtOAc(2 x 25 ml)萃取分離的含水層，以鹵水(50 ml)清洗合併的有機物，進行乾燥(MgSO4)及濃縮。藉由矽石快速層析法來純化粗製物質，以於DCM中之MeOH中的1-10%之2M NH3進行洗提以得到呈黃色膠之標題化合物(2.02 g,93%)：針對C19H27N3O2MS(ESI+)m/z 330.5[M+H]+；LC純度80%(UV)、100%(ELS)，(停留時間，1.51 min)；1H NMR(500 MHz，氯仿-d)δH ppm 7.56(br.s.,1 H),7.48(d,J=8.5 Hz,1 H),7.30(dd,J=8.5,1.7 Hz,1 H),3.80-3.90(m,1 H),3.65(s,3 H),3.47-3.57(m,1 H),3.20(s,3 H),2.94-3.13(m,2 H),2.88(dt,J=16.1, 8.1 Hz,1 H),2.32-2.60(m,2 H),2.01-2.17(m,2 H),1.38(s,9 H)。
階段3：3-[(5-第三-丁基-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]-N-甲氧基-N-甲基環丁烷-1-甲醯胺
於下N2將碳酸鉀(1.36 g,9.81 mmol)加入至3-[(5-第三-丁基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]-N-甲氧基-N-甲基環丁烷-1-甲醯胺(80%,2.02 g,4.91 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(40 ml)中之溶液及攪拌反應持續1h。緩慢地加入2-(三甲矽基)乙氧基甲基氯化物(1.31 ml,7.36 mmol)，以及攪拌持續20 h。過濾反應混合物及於減壓下進行濃縮。殘留物係溶於EtOAc(50 ml)中，以及於進行乾燥(MgSO4)之前以水(3 x 50 ml)接著為鹵水(50 ml)進行清洗，以及進行濃縮。藉由矽石快速層析法來純化粗製物質，以於庚烷中之50-100% EtOAc進行洗提以得到呈無色膠之標題化合物(1.21 g,54%)針對C25H41N3O3Si：MS(ESI+)m/z 461.0[M+H]+；LC純度97%(UV)、100%(ELS)，(停留時間，1.98 min)；1H NMR(500 MHz，氯仿-d)δ ppm 7.58-7.89(m,1 H),7.33(s,2 H),5.39-5.53(m,2 H),3.65(s,3 H), 3.49-3.58(m,2 H),3.41(br.s.,1 H),3.10-3.23(m,3 H),3.03(s,3 H),2.32-2.63(m,2 H),2.00-2.18(m,2 H),1.32-1.45(m,9 H),0.91(td,J=8.1,4.9 Hz,2 H),-0.13-0.07(m,9 H)。
階段4：3-[(5-第三-丁基-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]環丁烷-1-羰醛
於-10℃下N2環境中逐滴加入氫化二異丁基鋁於甲苯(3.29 ml)中之1M溶液至3-[(5-第三-丁基-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]-N-甲氧基-N-甲基環丁烷-1-甲醯胺(0.61 g,1.32 mmol)於四氫呋喃(15 ml)中之溶液。was added under at.在加入甲醇(2 ml)及攪拌5 min以驟止反應之前，於此溫度下攪拌反應持續2.5 h。將溶液倒至飽和的含水酒石酸鈉鉀(20 ml)、以Et2O(30 ml)進行稀釋及攪拌持續30分鐘。接著分離所得的產物及以酒石酸鈉鉀、飽和NaHCO3(30 ml)及鹵水(30 ml)清洗有機層。乾燥(MgSO4)所得的產物及進行濃縮以得到呈無色膠之標題化合物(0.69 g,130%)，粗製產物係用於下一個反應。
階段5：7-[(3aS,4R,6R,6aR)-6-{[({3-[(5-第三-丁基-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]環丁基}甲基)(丙-2-基)胺基]甲基}-2,2-二甲基-六氫環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
將3-[(5-第三-丁基-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]環丁烷-1-羰醛(282.3 mg,0.7 mmol)、7-[(3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-[(丙-2-基胺基)甲基]-六氫環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(243.41 mg,0.7 mmol)及硫酸鎂(127.22 mg,1.06 mmol)攪拌入1,2-二氯乙烷(10 ml)中持續15 min。加入三乙醯氧基硼氫化鈉(179.21 mg,0.85 mmol)及攪拌反應過夜。藉由加入飽和的Na2CO3(10 ml)來驟止反應及以DCM(3 x 10 ml)萃取溶液。乾燥(MgSO4)合併的有機物及進行濃縮。by藉由質量導向製備型HPLC(酸化法)來純化粗製物質。於合併分液後，加入少量的於MeOH中之7M NH3以鹽基化溶液。於濃縮後，殘留物經分隔於水(5 ml)與DCM(5 ml)之間，及進行層分離。以DCM(2 x 3 ml)萃取含水層及乾燥(MgSO4)合併的有機物，且進行濃縮以得到呈無色膠之標題化合物(58.7 mg,11%)：針對C41H63N7O3Si MS(ESI+)m/z 730.2[M+H]+；LC純度95%(UV),100%(ELS)，(停留時間，1.65 min)；1H NMR(500 MHz，氯仿-d)δH 8.30(s,1 H),7.75(s,1 H),7.32(s,2 H),7.04(d,J=3.6 Hz,1 H),6.37(d,J=3.6 Hz,1 H),5.40-5.50(m,2 H),5.24(br.s.,2 H),4.89-5.04(m,2 H),4.45(d,J=5.2 Hz,1 H),3.50(s,3 H),2.11-3.09(m,13 H),2.01(s,6 H),1.34-1.49(m,6 H),1.29(s,3 H),0.85-1.02(m,8 H),-0.11-0.05(m,9 H)。
階段6：(1R,2S,3R,5R)-3-{4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基}-5-{[({3-[(5-第三-丁基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]環丁基}甲基)(丙-2-基)胺基]甲基}環戊烷-1,2-二醇
將7-[(3aS,4R,6R,6aR)-6-{[({3-[(5-第三-丁基-1-{[2-(三甲矽基)乙氧基]甲基}-1H-1,3-苯并二唑-2-基)甲基]環丁基}甲基)(丙-2-基)胺基]甲基}-2,2-二甲基-六氫環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(58.7 mg,0.08 mmol)溶於濃縮的HCl溶液(5 ml)及甲醇(5 ml)中，且加熱至40℃持續2h。於減壓下濃縮反應混合物，以及將殘留物分隔於飽和的NaHCO3(含水)(10 ml)與EtOAc(10 ml)之間。令層分離及以EtOAc(2 x 10 ml)萃取含水層，接著乾燥(MgSO4)合併的有機物並進行濃縮。藉由製備型TLC來純化粗製物質，以DCM中之MeOH中之10% 2M NH3進行洗提以得到呈無色膠之標題化合物 (24.7 mg,55%)：針對C32H45N7O2MS(ESI+)m/z 560.4[M+H]+；LC純度100%(UV)，(停留時間，5.10 min)；1H NMR(500 MHz，丙酮)δH 8.12(s,1 H),7.30-7.60(m,2 H),7.13-7.28(m,2 H),6.54(d,J=3.5 Hz,1 H),6.33(br.s.,1 H),4.85-5.07(m,1 H),4.36(t,J=6.2 Hz,1 H),4.08(t,J=5.2 Hz,1 H),3.01(d,J=7.7 Hz,1 H),2.93(d,J=7.4 Hz,2 H),2.78(br.s.,2 H),2.59-2.73(m,2 H),2.15-2.56(m,7 H),1.68(dt,J=12.4,9.7 Hz,1 H),1.44-1.62(m,2 H),1.35(s,9 H),0.90-1.07(m,6 H)。
化合物23：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5,6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5,6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
以逐滴加入之N,N-二異丙基乙基胺(0.44ml,2.5 mmol)接著為整份加入之N,N,N',N'-四甲基-0-(7-氮雜苯并***-1-基}六氟磷酸脲鹽(432 mg,1.14 mmol)處理3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸(450 mg,0.76 mmol)及4,5-二氯-1,2-苯二胺(161 mg,0.910 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(7.8 ml)中之溶液。於室溫攪拌反應混合物持續5.5 h。於高真空下濃縮反應混合物及使殘留物分隔於50 ml EtOAC與50 ml之1/1的H2O/飽和的NaHCO3之間。以30 ml EtOAc萃取水相及以30 ml的H2O及鹵水清洗合併的有機相。以Na2SO4乾燥有機相，進行過濾及濃縮成泡沫。藉由快速層析法(SiO2，以CH3OH/CH2Cl2中之5% 7N NH3進行洗提)來純化粗製物質以得到中間產物醯胺(呈醯胺位向異構物之混合物，520 mg)。
於65℃加熱於乙酸(16 ml)中之中間產物醯胺(0.52 g)持續5.5 h，冷卻反應混合物並將其置於高真空下以移除乙酸。殘留物係溶於70 ml CH2Cl2中及以50 ml的飽和NaHCO3以及2% Na2CO3溶液進行清洗。以Na2SO4乾燥有機相，進行過濾及濃縮以產生泡沫。將物質置於高真空中過夜及藉由快速層析法(SiO2，以CH3OH/CH2Cl2中之4% 7NH NH3進行洗提，2nd管柱，以經NH3/CH2Cl2飽和的2-6% EtOH進行洗提)純化殘留物兩次以生成所欲的化合物(377 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.10(s,1 H),7.63(d,J=1.66 Hz,2 H),7.21(m,1 H),7.13(d,J=8.29Hz,1 H),6.62(d,J=3.32 Hz,1 H),6.54(d,J=2.07 Hz,1 H),6.43(dd,J=8.40,2.38 Hz,1 H),4.96(m,2 H),4.65(s,2 H),4.51(m,1 H),3.84(d,J=1.04 Hz,3 H),3.76(s,3H),2.99(m,0.5 H),2.83(m,2 H),2.66(m,0.5 H),2.38(m,4 H),2.22(m,1 H),2.15(d,J=7.67 Hz,3 H),2.08(m,2 H),2.00(m,2 H),1.90(m,1 H),1.84(m,1 H),1.53(s,3 H),1.46(m,1 H),1.29(s,3 H)。
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5,6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
令7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5,6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(377 mg,0.513 mmol)溶於已於0℃冰浴中經預冷之三氟乙酸(7.1 ml)及水(0.8 ml)的混合物中。於0℃攪拌溶液持續30分鐘室溫且於室溫持續攪拌3 h。濃縮懸浮液且殘留物係溶於15 ml MeOH中並進行濃縮。重複此過程兩次且將殘留物置於高真空中。物質係溶於10 ml MeOH(產生漿料)中及以500 mg K2CO3及0.2 ml的水進行處理。攪拌混合物持續1.5 hr，於期間溶液的pH為~9。經由細緻玻璃料而過濾混合物以20 ml MeOH清洗固體及濃縮濾液以產生灰白色固體。將物質置於高真空中過夜及藉由快速層析法(SiO2，以CH3OH/CH2Cl2中之10-12% 7N NH3進行洗提)進行純化以得到所欲的產物(227 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.06(s,1 H),7.63(m,2 H),7.21(dd,J=3.63,2.38 Hz,1 H),6.59(d,J=3.52 Hz,1 H),4.32(m,1 H),3.88(m,1 H),3.01(m,0.5 H),2.84(m,2 H),2.70(m,0.5 H), 2.51(m,1 H),2.40(m,2 H),2.26(m,2 H),2.17(d,J=7.05 Hz,3 H),2.11(m,2 H),2.02(m,1 H),1.90(m,3 H),1.62(m,1 H),1.49(m,1 H)。
化合物24：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
N-(2-胺基-4-(三氟甲氧基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙醯胺
將N,N,N',N'-四甲基-0-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲鹽(1.2 g,3.2 mmol)加入至3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸(1.25 g,2.10 mmol)及N,N-二 異丙基乙基胺(1.2 mL,6.9 mmol)及4-(三氟甲氧基)苯-1,2-二胺(0.48 g,2.5 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)中之溶液。於室溫攪拌混合物過夜，進行部分濃縮至估計值為2 mls，然後加入NaHCO3(飽和)。以EtOAc(3x)萃取混合物及以MgSO4乾燥合併的有機物，進行過濾及濃縮。藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為95：5)來純化殘留物以生成呈油狀之所欲的化合物(2 g)。
N-(2,4-二甲氧基苄基)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
於60℃攪拌N-(2-胺基-4-(三氟甲氧基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙醯胺(2 g,2 mmol)於乙酸(4 ml)中之溶液過夜。於真空中移除揮發成分，以及藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為92：8)來純化剩下的殘留物以生成呈固體之所欲的化合物(1 g)。
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
於室溫下將三氟乙酸(20 ml)添加至(2 ml)及N-(2,4-二甲氧基苄基)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(1 g,1 mmol)之混合物。
攪拌反應持續1.5小時，接著以三乙基矽烷(0.43 ml,2.7 mmol)驟止反應。於真空中移除揮發成分及藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為87：13)來純化所得的殘留物兩次以得到呈泡沫之所欲的產物(0.28 g)。針對C27H32F3N7O3MS(ESI+)m/z 560.2[M+H]+；針對C27H32F3N7O3MS(ESI-)m/z 558.2[M-H]-；HPLC純度 >93%(停留時間，2.504分鐘)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOH)δH 8.081(s,1H),7.551-7.530(m,1H),7.414(s,1H),7.230-7.216(m,1H),7.156-7.134 m,1H),6.621-6.613(d,J=3.2 Hz,1H),4.362-4.326(m,1H),3.952-3.915(m,1H),3.237-3.182(m,0.5H(次甲基之反式異構物)，2.927-2.857(m,2.5H(含有次甲基之順式異構物))，2.697-2.646(m,1H),2.590-2.515(m,1H),2.479-2.408(m,1H),2.343-2.305(m,5H),2.210-2.174(m,2H),2.086-1.949(m,4H),1.721-1.545(m,2H)。停留時間：2.52 min 1HPLC條件：Agilent Zorbax Exlipse XDB-C18管柱，4.6 X 50 mm(1.8 urn包裝)，溶劑A-水(0.1% TFA)，溶劑B-乙腈(0.07% TFA)6 min提度由5至95% B；維持1 min hold；接著循環。
化合物25：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(乙基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(乙基)胺基)環丁基)丙醯胺
添加N,N,N',N'-四甲基-0-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲鹽(0.84 g,2.2 mmol)至3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(乙基)胺基)環丁基)丙酸(0.89 g,1.5 mmol)及N,N-二異丙基乙基胺(0.84 ml,4.8 mmol)以及4-第三-丁基苯-1,2-二胺(0.29 g,1.8 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(9ml)中之溶液。於室溫攪拌反應過夜，進行部分濃縮至估計值為2 ml，接著加入NaHCO3(飽和)。以EtOAc(3x)萃取混合物及以MgSO4乾燥合併的有機物，進行過濾及濃縮。藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為94：6)來純化殘留物以生成呈無色固體之所欲的化合物(0.88 g)。停留時間C：3.363分鐘。
7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(乙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
於60℃攪拌N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(乙基)胺基)環丁基)丙醯胺(0.88 g,1.2 mmol)於乙酸(3 mL)中之溶液過夜，於真空中移除揮發成分，以及藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為93：7)來純化剩下的殘留物以生成呈泡沫之所欲的化合物(0.85 g)。
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(乙基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
於室溫添加三氟乙酸(20 mL)至水(2 mL)以及7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(乙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.85 g,1.2 mmol)之混合物。令反應進行一小時，於期間加入三乙基矽烷(0.37 mL,2.3 mmol)。於真空中移除揮發成分及所得的殘留物係溶於MeOH(3 mls)中，加入1 ml之K2CO3(飽和)以及於室溫攪拌反應持續1小時。將混合物分隔於H2O與DCM/MeOH(9：1)之間。萃取(3x)含水層及以MgSO4乾燥合併的有機物，進行過濾及濃縮。藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為90：10)來純化所得的殘留物以產生成灰白色泡沫之所欲的產物(0.150 g)。針對C31H43N7O2MS(ESI+)m/z 546.3[M+H]+；針對C31H43N7O2 MS(ESI-)m/z 544.3[M-H]-；HPLC純度>91%(停留時間，2.734分鐘)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOH)δH 8.081(s,1H),7.493(s,1H),7.414-7.393(m,1H),7.291-7.266(m,1H),7.215-7.202(m,1H),6.619-6.609(d,J=4.0 Hz,1H),4.345-4.312(m,1H),3.923-3.885(m,1H),2.994-2.915(m,0.5 H(次甲基之反式異構物))，2.860-2.793(m,2H),2.701-2.578(m,3H),2.501-2.380(m,2H),2.259-2.234(m,2H),2.109-2.008(m,3H),1.920-1.880(m,3H),1.658-1.499(m,2H),1.364(s,9H),1.036-0.991(m,3H)。停留時間：2.734分鐘。HPLC條件：Agilent Zorbax Exlipse XDB-C18管柱，4.6 X 50 mm(1.8 um包裝)，溶劑A-水(0.1% TFA)，溶劑B-乙腈(0.07% TFA)。6 min梯度由5至95% B；維持1 min；接著循環。
化合物26：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
N-(2-胺基-4-溴苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙醯胺
添加N,N,N',N'-四甲基-0-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲鹽(1.20 g,3.16 mmol)至3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸(1.25 g,2.10 mmol)及N,N-二 異丙基乙基胺(1.21 ml,6.95 mmol)及4-溴苯-1,2-二胺(0.472 g,2.53 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(13.0 ml)中之溶液。於室溫攪拌反應過夜，進行部分地濃縮至估計值為2 mls，接著加入NaHCO3(飽和)。以EtOAc(3x)萃取混合物及以MgSO4乾燥合併的有機物，進行過濾及濃縮。藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為95：5)來純化殘留物以生成呈固體之所欲的化合物(1.2 g)。
7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
於60℃攪拌N-(2-胺基-4-溴苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙醯胺(1.2 g,1.6 mmol)於乙酸(4 ml,70 mmol)中之溶液過夜。於真空中移除揮發成分及藉 由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為91：9)直接地純化剩下的殘留物以得到泡沫(0.9 g)。
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
於室溫添加三氟乙酸(20 ml)至水(2 ml)及7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.9 g,1 mmol)之混合物。攪拌反應混合物持續一小時，加入三乙基矽烷(0.39 ml,2.4 mmol)。於真空中移除揮發成分以及藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為87：13)純化所得的殘留物兩次。殘留物係溶於MeOH/H2O(5：0.5 ml)中並加入K2CO3(100 mg)。攪拌混合物持續1小時接著進行濃縮，及藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為87：13)進行純化以得到呈灰白色泡沫/膠之所欲的產物(0.15 g)。針對C26H32BrN7O2MS(ESI+)m/z 554.1[M+H]+；針對 C26H32BrN7O2 MS(ESI-)m/z 552.1[M-H]-；HPLC純度>90%(停留時間，2.298分鐘)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOH)δH 8.080(s,1H),7.652(s,1H),7.425-7.403(m,1H),7.342-7.7.312(m,1H),7.232-7.217(m,1H),6.620-6.611(d,J=3.6 Hz,1H),4.358-4.318(m,1H),3.928-3.888(m,1H),3.099-3.039(m,0.5H(次甲基之反式異構物))，2.898-2.829(m,2H),2.777-2.726(m,0.5H(次甲基之順式異構物))，2.580-2.529(m,1H),2.453-2.397(m,2H),2.307-2.141(7H),2.068-2.017(m,1H),1.955-1.891(m,3H),1.695-1.506(m,2H)。
化合物27：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((異丙基(3-(2-(5-(1-甲基環丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((異丙基(3-(2-(5-(1-甲基環丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺
於0℃冷卻5'-{[3-(2-羧基乙基)環丁基](異丙基)胺 基}-5'-去氧基-2',3'-0-亞異丙基腺苷酸(0.463 g,0.976 mmol)以及4-(1-甲基環丁基)苯-1,2-二胺(0.184 g,1.04 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(10 ml)中之溶液。以逐滴加入之N,N-二異丙基乙基胺(0.462 ml,2.65 mmol)接著為整份加入之N,N,N',N'-四甲基-0-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲鹽(0.367 g,0.965 mmol)來處理溶液。於0℃攪拌混合物持續1 h，接著緩慢地升溫至室溫。在室溫下5 h後，儲存反應混合物於冰箱中過夜，將反應混合物置於高真空下。所得的玻璃係溶於30 ml H2O中及以30 ml之10% MeOH/EtOAc進行萃取。進一步以30 ml的EtOAc萃取水相。以25ml的飽和NaHCO3及鹵水清洗合併的有機相，及Na2SO4以進行乾燥。過濾混合物並進行濃縮以產生玻璃/泡沫(700 mg)。藉由快速層析法(SiO2，於中MeOH/CH2Cl2之4-5% 7N NH3)來純化粗製物質以得到中間產物醯胺(~80%純度，390 mg)。
中間產物醯胺(110 mg,0.174 mmol)係溶於4 ml乙酸中及於65℃加熱溶液。冷卻反應混合物及於高真空下移除揮發成分以產生玻璃。粗製產物係溶於25 ml CH2Cl2中及以20 ml飽和NaHCO3以及2% Na2CO3溶液進行情洗，以Na2SO4進行乾燥，進行過濾及濃縮以產生玻璃/剛性泡沫。藉由製備型TLC(SiO2，以CH3OH/CH2Cl2中之7% 7N NH3進行洗提)來純化粗製物質以得到呈剛性泡沫之所欲的產物(54 mg)。令另一批中間產物醯胺(389 mg)重複以上過程(除了藉由快速層析法進行純化，SiO2，以於 CH3OH/CH2Cl2中之4-5% 7N NH進行洗提)以產生另外的368mg之所欲的化合物，其係與上述苯并咪唑合併。
(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((異丙基(3-(2-(5-(1-甲基環丁基)-1H-苯并[d]
令9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((異丙基(3-(2-(5-(1-甲基環丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(422 mg,0.686 mmol)溶於已於0℃冰浴中預冷卻之三氟乙酸(6.3 ml,82 mmol)及水(0.7 ml,40 mmol)之混合物。於0℃攪拌溶液持續30分鐘，於期間移除冰浴及將混合物升溫至室溫。於室溫攪拌混合物持續2.5 h，其殘留物係溶於12 ml MeOH中，進行濃縮而乾燥。重複此過程兩次，將所得的玻璃置於高真空下。以11 ml MeOH過濾粗製產物殘留物，以600 mg K2CO3及0.5 ml H2O進行處理及於室溫進行攪拌直至由pH試紙判定溶液為鹼性。過濾混合物及以20 ml MeOH清洗固體。濃縮溶液而得到殘留物，並將其置於藉由快速層析法(SiO2，以 CH3OH/CH2Cl2中之10-12% 7N NH3進行洗提洗提)來純化粗製物質以生成呈剛性泡沫/玻璃所欲的化合物(256 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.30(m,1 H),8.20(d,J=1.04 Hz,1 H),7.38(d,J=8.09 Hz,1 H),7.22(br.s.,1 H),6.98(dd,J=8.50,1.66 Hz,1 H),5.96(m,1 H),4.74(t,J=4.87 Hz,1 H),4.27(d.J=3.11 Hz,1 H),4.08(m,1 H),3.56(m,1 H),3.13(m,1 H),3.00(m,1 H),2.90(dd,J=14.51,4.35 Hz,1 H),2.75(m,3 H),2.41(m,2 H),2.12(m,5 H),2.00(m,1 H),1.84(m,3 H),1.58(m,1 H),1.46(s,3 H),1.02(m,3 H),0.95(d,J=6.63 Hz,3 H)。
化合物28(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((異丙基((1r,3S)-3-(2-(5-(1-甲基環丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
藉由SFC分離非鏡像異構物。物質係吸收於MeOH/H2O中及將其冷凍成白色粉末(132 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)d ppm 8.30(s,1 H),8.20(s,1 H),7.38(d,J=8.09 Hz,1 H),7.22(s,1 H),6.99(dd,J=8.40,1.55 Hz,1 H),5.96(d,J=4.56 Hz,1 H),4.73(m,1 H),4.26(t,J=5.29 Hz,1 H),4.07(m,1 H),3.13(m,1 H),3.00(m,1 H),2.90(dd,J=14.41,4.46 Hz,1 H),2.76(t,J=7.15 Hz,2H),2.70(m,1 H),2.42(m,2 H),2.18(m,2 H),2.11(m,3 H),1.85(m,4 H),1.57(q,J=8.85 Hz,2 H),1.47(s,3 H),1.02(d,J=6.84 Hz,3 H),0.95(d,J=6.63 Hz,3 H)。
化合物29：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(1-甲基環丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
(1-甲基環丁基)苯
令苯(5.0 ml,56 mmol)及硫酸(1.17 ml,21.9 mmol)之混合物冷卻至0℃及以逐滴加入之亞甲基環丁烷(1.00 ml,10.8 mmol)苯(3.0 ml,34 mmol)中之溶液進行處理歷經1 h。完成添加時，攪拌另外的1 h同時升溫至室溫。以15 ml己烷萃取混合物。以10 ml H2O及10 ml飽和的NaHCO3清洗有機相，以Na2SO4進行乾燥，進行過濾及濃縮以產生無色液體。以Kugelrohr蒸餾(5-10托)來純化液體以產生呈無色液體之所欲的化合物。於75-85℃收集為無色液體第一分液之呈無色液體之產物(330 mg)。
1-(1-甲基環丁基)-4-硝基苯
於60分鐘內逐滴加入冷卻至0℃之70%硝酸(7：3，硝 酸：水，0.375 ml,5.92 mmol)至(1甲基環丁基)苯(346 mg.2.37 mmol)醋酸酐(1.4mL,15 mmol)中之溶液。於添加期間，使溶液的溫度低於5℃。完成添加時，攪拌反應持續60分鐘同時進行冷卻。將反應混合物倒入至40 ml之冰水以冰而使其溶解。以20ml的Et2O萃取水相三次，然後以25 ml H2O接著為兩份20ml的飽和NaHCO3溶液清洗合併的有機相。以Na2SO4乾燥有機相，進行過濾及濃縮以產生呈淺色油之產物(418 mg)，其係用於下一個步驟。1H NMR(400 MHz,CDCI3)d ppm 8.16(d.J=8.71 Hz,2 H),7.29(d,J=8.71 Hz,2 H),2.41{m,2 H),2.15(m,3 H),1.88(m,1 H).1.48(s,3 H)。
4-(1-甲基環丁基)苯胺
謹慎地以5%鈀碳觸媒(Pd on Carbon)(87 mg.0.041 mmol)處理1-(1-甲基環丁基)-4-硝基苯(708 mg,3.70 mmol)於乙醇(24 mL,410 mmol)中之溶液。清空反應燒瓶及以氫氣填充三次以及於氫氣體環境攪拌反應混合物持續19 h。經由solka floc®纖維素墊來過濾反應混合物及以25 mL EtOH進行清洗。移除溶劑以產生油，將其短暫地置於高真空下以產生所欲的化合物(609 mg)，其係直接用於下一個步驟。1H NMR(400 MHZ,CDCI3)o ppm 6.99(m,2 H),6.66(m,2 H),3.39(br.s.,2 H),2.35(m,2 H),2.05(m,3 H),1.82(m,1 H),1.42(s,3 H)。
2,2,2-三氟-N-(4-(1-甲基環丁基)-2-硝基苯基)乙醯胺
以三氟醋酸酐(1.97 mL,14.0 mmol)接著為氯仿(10 mL,120 mmol)來處理4-(1-甲基環丁基)苯胺(500 mg,2.79 mmol)及硝酸銨(220 mg,2.8 mmol)。於室溫攪拌反應混合物持續5 h時，固體已溶解。將反應混合物倒入50 ml H2O及以三份25 ml的CH2Cl2進行萃取。以10 mL飽和NaHCO3清洗合併的有機相，以Na2SO4進行乾燥，進行過濾及濃縮成油。藉由快速層析法(SiO2，以2.5-3.5%乙基醚/己烷進行洗提)來純化粗製物質以生成所欲的化合物(800 mg)。
4-(1-甲基環丁基)-2-硝基苯胺
以碳酸鉀(788 mg,5.70 mmol)於水(4.5 ml,250 mmol) 中之溶液來處理2,2,2-三氟-N-[4-(1-甲基環丁基)-2-硝基苯基]乙醯胺(580 mg.1.9 mmol)於甲醇(18 ml,440 mmol)中之溶液及於45℃加熱混合物持續50分鐘。使反應混合物冷卻至室溫及於真空中移除甲醇。以10 ml H2O過濾剩餘的水相及以三份20 ml的EtOAc進行萃取。以Na2SO4乾燥合併的有機相，進行過濾及濃縮以產生油。將物質置於高真空，其經固化而生成所欲的化合物(400 mg)。物質係直接用於下一個步驟。1H NMR(400 MHz.CDCI3)d ppm 7.90(d,J=2.07 Hz,1 H),7.23(dd,J=8.50,2.28 Hz,1 H),6.77(d,J=8.71 Hz,1 H),5.96(br.s.,2 H),2.33(m,2 H),2.13(m,1 H),2.04(m,2 H),1.84(m,1 H),1.43(s,3 H)。
4-(1-甲基環丁基)苯-1,2-二胺
謹慎地以於乙醇中呈漿料之10%鈀碳催化劑(14.2mg,0.0134 mmol)來處理4-(1-甲基環丁基)-2-硝基苯胺(138 mg.0.668 mmol)於乙醇(8.5 mL,140 mmol)中之溶液。清空反應燒瓶及填充氫氣三次，以及於氫氣體環境攪拌反應混合物持續4 h。經由纖維素(solka floc®)墊來過濾反應混合物及以20 ml MeOH來清洗墊。濃縮濾液以產生油，將其置於高真空下產生呈固體之所欲的化合物(119 mg)，其係直接用於下一個步驟。1H NMR(400 MHZ.CDCl3)δH ppm 6.66(m,1 H),6.53(m,2 H),3.34(br.s.,4 H),2.33(m,2 H),2.08(m,1 H),1.99(m.2 H).1.80(m,1H),1.42(s,3 H)。
N-(2,4-二甲氧基苄基)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(1-甲基環丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
以逐滴加入之N,N-二異丙基乙基胺(0.38 ml,2.2 mmol)接著為整份之N,N,N',N'-四甲基-0-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲鹽(372 mg,0.978 mmol)來處理3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸(387 mg,0.652 mmol)及[8]4-(1-甲基環丁基)苯-1,2-二胺(120 mg, 0.68 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(6.7 ml,87 mmol)中之溶液。於室溫攪拌反應混合物持續2.5 hr，接著於高真空下濃縮反應混合物。殘留物係分隔於40 ml EtOAc(加入些許CH2Cl2以助於溶化產物)與40 ml 1/1之H2O/飽和NaHCO3之間。以30 ml之1/1 EA/CH2Cl2萃取水相及以Na2SO4乾燥合併的有機相，進行過濾及濃縮。藉由快速層析法(SiO2，以於CH3OH/CH2Cl2中之5-6% 7N NH3進行洗提)來純化粗製物質以得到呈醯胺位向異構物之混合物的所欲的中間產物。
中間產物係溶於乙酸(5.4 ml,95 mmol)中及於65℃加熱溶液持續3小時。利用溫水浴而於高真空下移除乙酸。粗製產物係溶於30 ml CH2Cl2中及以10 ml的飽和NaHCO3及2% K2CO3溶液清洗有機相，進行過濾及濃縮成玻璃，其於高真空下生成泡沫於。藉由快速層析法(SiO2，以於CH3OH/CH2Cl2中之5% 7N NH3進行洗提)來純化粗製物質以產生所欲的產物(140 mg)。
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(1-甲基環丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
令N-(2,4-二甲氧基苄基)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(1-甲基環丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(128 mg,0.17 4 mmol)溶於已於0℃冰浴經預冷之三氟乙酸(3.60 ml,46.7 mmol)及水(0.4ml,20 mmol)之混合物中。於0℃攪拌溶液持續30分鐘，然後移除冰浴及將混合物升溫至室溫，維持此溫度持續另外的2.5小時。於真空中濃縮反應混合物。殘留物係溶於3 ml MeOH中及進行濃縮，以及重複此過程兩次。將所得的白色殘留物置於高真空中。合併粗製產物殘留物與其他批次之粗製物質(以相同方式製備~使用1/3量於此反應)，以5 mL MeOH進行稀釋，以140 mg K2CO3及10滴H2O進行處理及於室溫攪拌溶液直至pH試紙判定為鹼性。過濾混合物及以15 ml MeOH清洗固體。濃縮溶液成油，將其置於高真空中。藉由快速層析法(SiO2，以於CH3OH/CH2Cl2中之10-15% 7N NH3進行洗提)來純化粗製物質以產生呈玻璃/剛性泡沫之所欲的產物(68 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8 06(s,1 H),7.39(d,J=7.88 Hz,1 H),7.23(s,1 H),7.21(dd,J=3.63, 1.76 Hz,1 H),6.99(m,1 H),6.60(d,J=3.52 Hz,1 H),4.93(m,1 H),4.32(m,1 H),3.89(m,1 H),3.03(m,1 H),2.83(m,2 H),2.70(q,J=8.15 Hz,1 H),2.52(m,1 H),2.40(m,4 H),2.27(m,2H),2.18(d,J=6.22 Hz,3 H),2.11(m,4 H),2.03(m,1 H),1.86(m,4 H),1.62(m,1 H),1.51(m,1 H),1.47(s,3H)。
化合物30：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基((1r,3S)-3-(2-(5-(1-甲基環丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
以SFC分離非鏡像異構物。物質係溶於MeOH/H2O中且經冷凍成白色粉末(67 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.27(s,1 H),8.20(s,1 H),7.38(d,J=8.29 Hz,1 H),7.22(br.s.,1 H),6.99(dd,J=8.40,1.55 Hz,1 H),5.97(d,J=4.15 Hz,1 H),4.69(dd,J=5.18,4.15 Hz,1 H),4.22(t,J=5.60 Hz,1 H),4.16(m,1 H),2.77(m,2 H),2.72(d,J=8.09 Hz,1 H),2.67(m,2 H),2.42(m,2 H),2.21(m,2 H),2.15(s,3 H),2.10(m,3 H),1.85(m,4 H),1.47(s,3 H),1.46(m,2 H)。
化合物31：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((異丙基((1s,3R)-3-(2-(5-(1-甲基環丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
以SFC分離非鏡像異構物。由NMR發現物質為反式非鏡像異構物。物質係溶於MeOH/H2O中且經冷凍成白色粉末(63 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.31(s,1 H),8.20(s,1 H),7.38(d,J=8.29 Hz,1 H),7.22(s,1 H),6.99(dd,J=8.29,1.66 Hz,1 H),5.97(d,J=4.56 Hz,1 H),4.74(m,1 H),4.27(t,J=5.39 Hz,1 H),4.09(m,1 H),3.53(m,1 H),3.01(m,1 H),2.93(dd,J=14.72,4.35 Hz,1 H),2.80(t,J=7.46 Hz,2H),2.73(dd,J=1 4.51,7.46 Hz,1 H),2.42(m,2 H),2.13(m,5 H),2.01(m,3 H),1.82(m,3 H),1.47(s,3 H),1.02(d,J=6.63 Hz,3 H),0.95(d,J=6.63 Hz,3 H)。
化合物32：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪 唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
以SFC分離非對映異構物。(其條件為)產生120mg。製備方法：IC(2 x 15 cm)，35%異丙醇(0.2% DEA))/CO2，100巴，60 mL/min，220 nm。注射體積：0.75 mL，4 mg/mL甲醇。峰值1：5.27分鐘。1H NMR(400 MHz,d4-MeOH)δH 8.080(s,1H),7.495(s,1H),7.417-7.395(m,1H),7.303-7.281(m,1H),7.220-7.212(m,1H),6.619-6.610(m,1H),4.349-4.315(m,1H),2.837-2.802(m,2H),2.718-2.641(m,1H),2.508-2.365(m,3H),2.284-2.258(m,3H),2.156(s,3H),1.954-1.906(m,1H),1.549-1.460(m,2H),1.375(s,9H)。
化合物33：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(1-甲基環丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
9-((3aR,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(1-甲基環丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺
於0℃冷卻將3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸(0.461 g,1.03 mmol)及4-(1-甲基環丁基)苯-1,2-二胺(0.150 g,0.851 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(11 ml,140 mmol)中之溶液。以逐滴加入之N,N-二異丙基乙基胺(0.489 ml,2.81 mmol)接著為整份之N,N,N',N'-四甲基-0-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲鹽(0.388 g,1.02 mmol)來處理溶液。於0℃攪拌混合物持續30分鐘，接著緩慢地升溫至室溫，於室溫持續攪拌6 h。以30 ml H2O過濾反應混合物及以25 ml之10% MeOH/EtOAc進行萃取。以兩份20 ml的EtOAc進一步萃取水相。以25 ml的飽和NaHCO3及鹵水清洗合併的有機相及以Na2SO4進行乾燥。過濾溶液及進行濃縮以產生玻璃。藉由快速層析法(SiO2，以於MeOH/CH2Cl2中之5% 7N NH3進行提)純化粗製物質
中間產物醯胺係溶於乙酸(7.0 ml,120 mmol)中及於 65℃加熱溶液持續2.5 h，冷卻反應混合物，於高真空下以移除乙酸而產生玻璃。粗製產物係溶於25ml CH2Cl2中及以20 ml飽和NaHCO3、2% Na2CO3溶液進行清洗，以Na2SO4進行過濾，進行過濾及於真空中進行濃縮以產生玻璃/剛性泡沫。藉由快速層析法(SiO2，以於CH3OH/CH2Cl2中之5-7% 7N NH3進行洗提)來純化粗製物質以生成所欲的化合物(214 mg)。
(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(1-甲基環丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
令9-((3aR,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(1-甲基環丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(188 mg,0.320 mmol)溶於已於0℃冰浴中經預冷之三氟乙酸(4.00 ml,51.9 mmol)及水(0.4 ml,20 mmol)之混合物中。於0℃攪拌反應w持續30分鐘，接著移除冰浴及將混合物升溫至室溫，繼續進行攪拌持續另外的2 h。於真空中濃縮反應混合物。殘留物係溶於10 ml MeOH中以 及進行濃縮，以及重複此過程兩次。將所得的玻璃置於高真空下持續1 h。以7 ml MeOH過濾粗製產物殘留物，以150 mg K2CO3及10滴H2O進行處理及於室溫進行攪拌直至pH試紙判定溶液為鹼性。過濾混合物及以10 ml MeOH清洗固體。濃縮溶液成殘留物，將其置於高真空下。藉由快速層析法(SiO2，以於CH3OH/CH2Cl2中之10-15% 7N NH3進行洗提)來純化粗製物質以生成呈玻璃/剛性泡沫之所欲的化合物(66%)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.28(m,1 H),8.20(m,1 H),7.38(d,J=8.29 Hz,1 H),7.23(s,1 H),7.00(dd,J=8.40,1.55 Hz,1 H),5.98(t,J=3.21 Hz,1 H),4.70(m,1 H),4.24(q,J=5.18 Hz,1 H),4.17(m,1 H),3.10(m,0.4 H),2.80(m,3 H),2.71(d,J=5.60 Hz,2 H),2.43(m,2 H),2.23(dd,J=11.71,6.12 Hz,1 H),2.19(m,3 H),2.12(m,4 H),1.99(m,1 H),1.85(m,4 H),1.48(s,3 H),1.48(m,1 H)。
化合物34：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基((1s,3R)-3-(2-(5-(1-甲基環丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
以SFC分離非鏡像異構物。物質係溶於MeOH/H2O中且經冷凍成白色粉末(30 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.28(s,1 H),8.19(s,J=4.15 Hz,1 H),4.69(m,1 H),4.23(t,J=5.49 Hz,1 H),4.17(m,1 H),3.07(m,1 H),2.81(t,J=7.57 Hz,2 H),2.68(m,2 H),2.42(m,2H),2.17(s,3 H),2.09(m,6 H),1.97(m,2 H),1.84(m,3 H),1.47(s,3 H)。
化合物35：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
以下述之SFC分離法來分離非鏡像異構物(120mg)。
製備方法：IC(2 x 15 cm)，35%異丙醇(0.2% DEA))/CO2，100巴，60 mL/min，220 nm。注射體積：0.75 mL，4 mg/mL甲醇。峰值2：6.24分鐘。1H NMR (400 MHz,d4-MeOH)δH 8.078(s,1H),7.501(s,1H),7.422-7.401(m,1H),7.310-7.285(m,1H),7.228-7.219(m,1H),6.618-6.609(m,1H),4.355-4.320(m,1H),3.053-2.977(m,1H),2.874-2.836(m,2H),2.535-2.268(m,4H),2.177-2.003(m,8H),1.909-1.869(m,2H),1.677-1.595(m,1H),1.381(s,9H)。
化合物36：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基((1r,3S)-3-(2-(5-(1-甲基環丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
以SFC分離非鏡像異構物。物質係溶於MeOH/H2O且經冷凍成白色固體(15 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.06(s,1 H),7.38(d,J=8.09 Hz,1 H),7.23(br.s.,1 H),7.20(d,J=3.32 Hz,1 H),6.99(m,1 H),6.60(d,J=3.52 Hz,1 H),4.95(m,1 H),4.31(t,J=6.74 Hz,1 H),3.88(m,1 H),2.81(m,2 H),2.66(m,1 H),2.40(m,5 H),2.25(m,3 H),2.14(br.s.,3 H),2.11(m,3 H),1.91(m,2 H),1.83(m,1 H),1.61(m,1 H),1.51(m,1 H), 1.47(s,3 H)。
化合物37：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基((1r,3S)-3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
以SFC分離非鏡像異構物。進行冷凍以得到呈無色固體之所欲的產物(0.060 g)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOH)δH 8.079(s,1H),7.546-7.524(m,1H),7.409(s,1H),7.226-7.217(m,1H),7.150-7.124(m,1H),6.619-6.610(m,1H),4.355-4.320(m,1H),3.912-3.885(m,1H),2.881-2.845(m,2H),2.727-2.674(m,1H),2.538-2.262(m,6H),2.172(s,3H),1.955-1.916(m,3H),1.670-1.492(m,3H)。
化合物38：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(乙基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
藉由SFC分離非鏡像異構物。回收冷凍後呈無色固體之所欲的產物(32 mg)。
製備方法：Lux-3(2 x 15 cm)，30%乙醇(0.2% DEA))/CO2，100巴，65 mL/min，220 nm。注射體積：0.4 mL，6.2 mg/mL甲醇。1H NMR(400 MHz,d4-MeOH)δH 8.082(s,1H),7.493(s,1H),7.415-7.393(m,1H),7.295-7.270(m,1H),7.215-7.206(m,1H),6.621-6.612(m,1H),4.343-4.309(m,1H),3.924-3.897(m,1H),3.044-2.962(m,1H),2.834-2.798(m,2H),2.728-2.695(m,1H),2.660-2.607(m,2H),2.543-2.380(m,2H),2.281-2.257(m,3H),1.932-1.906(m,3H),1.660-1.523(m,3H),1.368(s,9H),1.050-1.014(t,J=7.2 Hz,3H)。
化合物39：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基((1s,3R)-3-(2-(5-(1-甲基環丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
以SFC分離非鏡像異構物。物質係溶於MeOH/H2O且經冷凍成白色粉末(19 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8 06(s,1 H),7.39(d.J=8.50 Hz,1 H),7.21(m,2 H),6.99(dd,J=8.29,1.45 Hz,1 H),6.59(d,J=3.52 Hz,1 H),4.94(m,1 H),4.32(dd,J=7.77,5.91 Hz,1 H),3.89(m,1 H),3.00(m,1 H),2.83(t,J=7.57 Hz,2 H),2.49(m,1 H),2.38(m,4 H),2.23(m,1 H),2.16(s.3 H),2.11(m,5 H),2 01(m,2 H),1.84(m.3 H),1.61(m,1 H),1.46(s,3 H)。
化合物40：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丙基甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
以SFC分離非鏡像異構物。物質係溶於MeOH/H2O且經冷凍以產生白色粉末(45 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.06(s,1 H),7.48(br.s.,1 H),7.39(d,J=8.29 Hz,1 H),7.27(m,1 H),7.20(d,J=3.73 Hz,1 H),6.60(d,J=3.52 Hz,1 H),4.32(dd,J=7.36,6.12 Hz,1 H),3.90(m,1 H),3.06(m,1 H),2.81(t,J=6.84 Hz,2 H),2.74(m,1 H),2.55(dd,J=12.75,7.77 Hz,1 H),2.41(m,1 H),2.37(d,J=6.84 Hz,2 H),2.29(m,3 H),1.91(m,3 H),1.60(m,1 H),1.50(m,2 H),1.36(s,9 H),0.87(m,1 H),0.48(d,J=8.09 Hz,2 H),0.10(m,2 H)。
化合物41：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
以SFC分離非鏡像異構物，接著由H2O/MeOH/CH3CN進行冷凍以產生白色粉末(100 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.06(s,1 H),7.48(br.s.,1 H),7.39(m,1 H),7.27(m,1 H),7.20(d,J=3.52 Hz,1 H),6.60(m,1 H),4.32(t,J=6.43 Hz,1 H),3.93(t,J=5.29 Hz,1 H),3.54(m,0.2 H),3.1 1(t,J=9.33 Hz,1 H),3.02(m,1 H),2.82(m,2 H),2.66(dd,J=13.68,8.09 Hz,1 H),2.46(m,1 H),2.36(m,1 H),2.23(m,3 H),2.05(m,1 H),1.91(m,3 H),1.59(m,3 H),1.36(s,9 H),1.02(m,6 H)。
化合物42：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丁基甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
步驟1：3-((1S,3r)-3-((環丁基甲基)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸乙酯
3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aS)-6-{4-[(2,4-二甲氧基苄基)胺基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基}-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}胺基)環丁基]丙酸胺乙酯(1.8 g,3.0 mmol)溶於甲醇中及加入氰基硼氫化鈉(0.37 g,5.9 mmol)。使用AcOH於甲醇中之10%溶液調整pH估計值6，接著加入整份環丁基甲醛(0.32 g,3.8 mmol)。令 反應進行持續5小時後，HPLC指出反應終止。加入1.3當量的環丁基甲醛及持續反應過夜。加入NaHCO3(飽和)至反應混合物，接著以DCM萃取3次。以MgSO4乾燥合併的有機物以及進行濃縮而成黃色樹脂。順式及反式異構物可經矽石分離。藉由FC(DCM/於MeOH中之7N NH3為96：4)進行純化以生成分離的兩個批次的產物，其各使一種相對的異構物富集至約90%。頂異構物：0.38 g(11：1混合物，順式)；底異構物：0.31 g(6：1混合物，反式)。針對C35H49N5O6MS(ESI+)m/z 676.7[M+H]+；HPLC純度>69%(停留時間，3.791)。
步驟2：N-(2-胺基-5-(第三-丁基)苯基)-3-((1S,3r)-3-((環丁基甲基)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙醯胺
頂異構物(順式)：加入氫氧化鋰單水合物(0.236 g,5.62 mmol)至3-((1S,3r)-3-((環丁基甲基)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3] 二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸乙酯(6 mL,70 mmol)及甲醇(1.5 mL,37 mmol)中之溶液。於室溫攪拌反應過夜，至隔天早上，起始物質經消耗且已轉變成酸。反應經1N HCl而酸化至pH=6。於真空中移除揮發成分以及藉由與乙醇共沸蒸餾接著置於凍乾機上72小時來移除剩餘的水。使用所得的白色固體而無需進一步的純化。停留時間：3.330分鐘。針對C36H49N5O6MS(ESI+)m/z 648.4[M+H]+；針對C36H49N5O6MS(ESI-)for m/z 646.4[M-H]-；HPLC純度>97%(停留時間，3.329)。
加入N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲鹽(0.334 g,0.880 mmol)至3-{順式-3-[(環丁基甲基){[(3aR,4R,6R,6aS)-6-{4-[(2,4-二甲氧基苄基)胺基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基}-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}胺基]環丁基}丙酸(0.38 g,0.59 mmol)及N,N-二異丙基乙基胺(0.337 mL,1.94 mmol)以及4-第三-丁基苯-1,2-二胺(0.116 g,0.704 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(3.63 mL,46.9 mmol)中之溶液。於室溫攪拌反應過夜，至隔天早上起始物質經消耗。部分濃縮反應成估計值為2 mLs接著加入NaHCO3(飽和)。以EtOAc萃取混合物3次及以MgSO4乾燥合併的有機物並進行濃縮。藉由FC(DCM/於MeOH中之7N NH3為95：5)來純化所得的殘留物以產生呈紫色-棕色非晶固體之N-(2-胺基-5-(第三-丁基)苯基)-3-((1S,3r)-3-((環丁基甲基)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基 )-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙醯胺(0.30 g；64%)。HPLC純度>19%(停留時間，3.574分鐘)。
步驟3：7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丁基甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
於65℃攪拌N-(2-胺基-4-第三-丁基苯基)-3-{順式-3-[(環丁基甲基){[(3aR,4R,6R,6aS)-6-{4-[(2,4-二甲氧基苄基)胺基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基}-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}胺基]環丁基}丙醯胺(0.3 g,0.4 mmol)於乙酸(1.0 mL,20 mmol)中之溶液過夜，至隔天早上起始物質經消耗。於真空中移除揮發成分，以及藉由FC(DCM/於MeOH中之7N NH3為93：7)來純化殘留物以產生呈灰白色固體之7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丁基甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡 咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺。針對C46H61N7O4MS(ESI+)m/z 777.7[M+H]+；HPLC純度>64%(停留時間，3.690分鐘)。
步驟4：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丁基甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
於室溫添加三氟乙酸(5 mL,60 mmol)至水(0.5 mL,20 mmol)及7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丁基甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.2 g,0.2 mmol)之混合物。使反應持續進行過夜，屆時以三乙基矽烷(0.082 mL,0.52 mmol)驟止亮粉紅色的懸浮液。於真空中移除揮發成分及所得的殘留物係溶於甲醇(15 mls)中。加入500 mgs的K2CO3以及8滴H2O及於室溫攪拌反應持續1小時。過濾混合物及以10 mLs甲醇清洗濾餅。濃縮濾液及藉由FC(DCM/於MeOH中之7N NH3為90：10)純化所得的殘留物以產生呈無色固體之(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5- ((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丁基甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇(0.037 g；20%)。針對C34H47N7O2 MS(ESI+)m/z 586.3[M+H]+；HPLC純度>89%(停留時間，2.970分鐘)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOH)δH 8.083(s,1H),7.498(s,1H),7.417-7.396(m,1H),7.302-7.277(m,1H),7.206-7.197(m,1H),6.621-6.612(m,1H),4.347-4.314(m,1H),3.912-3.885(m,1H),2.973-2.922(m,1H),2.836-2.800(m,2H),2.662-2.366(m,6H),2.282-2.241(m,3H),2.061-2.034(m,2H),1.912-1.494(m,10H),1.374(s,9H)。
化合物43：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
3-(3-(環丁基(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸乙酯
3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸乙酯(0.84 g,1.4 mmol)係溶於甲醇(10 ml)中及加入氰基硼氫化鈉(0.087g,1.4 mmol)。使用AcOH於MeOH中之10%溶液來調整pH至估計值為6，接著加入整份的環丁酮(0.15 ml,2.1 mmol)。於室溫攪拌反應持續3天。加入NaHCO3(飽和)至反應混合物，接著以DCM進行萃取(3x)。以MgSO4乾燥合併的有機物，進行過濾及濃縮。使用所得的物質而無需進一步的純化。
3-(3-(環丁基(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸
將氫氧化鋰單水合物(0.58 g,14 mmol)加入至3-(3-(環丁基(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸乙酯(0.91 g,1.4 mmol)於四氫呋喃(12 ml,150 mmol)及甲醇(3 ml,60 mmol)中之溶液。於室溫攪拌反應混合物過夜，於期間以1 N HCL進行酸化至pH=6。於真空中移除揮發成分，以及藉由與乙醇進行共沸蒸餾接著置於凍乾機上18小時來移除剩餘的水。使用所得的白色固體而無需進一步的純化。
N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-(環丁基(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙醯胺
加入N,N,N',N'-四甲基-0-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲鹽(0.783 g,2.06 mmol)至3-(3-(環丁基(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸(0.87 g,1.4 mmol)以及N,N-二異丙基乙基胺(0.789 ml,4.53 mmol)以及[8)4-第三-丁基苯-1,2-二胺(0.270 g,1.65 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(8.50 ml)中之溶液中，於室溫攪拌反應過夜，於期間部分濃縮混合物至估計值為2 mls，接著加入NaHCO3(飽和)。以EtOAc(3x)萃取混合物及以MgSO4乾燥合併的有機物，進行過濾及濃縮。藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7NNH3為95：5)來純化殘留物以生成呈固體之所欲的化合物(0.76 g)。
7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丁基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四 氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
於60℃攪拌N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-(環丁基(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙醯胺(0.76 g,0.97 mmol)於乙酸(2 ml)中之溶液過夜。於真空中移除揮發成分，以及藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為91：9)直接地純化剩下的殘留物以生成呈泡沫之所欲的化合物(0.61 g)。
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
於室溫添加三氟乙酸(10 ml,200 mmol)至水(1 ml,80 mmol)及7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丁基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.61 g,0.80 mmol)之混合物。於室溫攪拌反應過夜及添加三乙基矽烷(0.26 ml,1.6mmol)以驟止反應。於真空中移除揮發成分及所得的殘留物係溶於MeOH(15 mls)中，加入500 mg的K2CO3及8滴水，以及於室溫攪拌反應持續1小時。過濾混合物及以MeOH(10 ml)清洗濾餅。濃縮濾液及藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為90：10)來純化所得的殘留物以得到呈無色泡沫之所欲的產物(0.13 g)。針對C33H45N7O2MS(ESI+)m/z 572.2[M+H]+；針對C33H45N7O2 MS(ESI-)m/z 570.2[M-H]-；HPLC純度>90%(停留時間，2.850分鐘)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOH)δH 8.083(s,1H),7.492(s,1H),7.412-7.392(m,1H),7.309-7.286(m,1H),7.220-7.205(m,1H),6.620-6.610(d,J=4.0 Hz,1H),4.321-4.283(m,1H),3.888-3.848(m,1H),3.505-3.417(m,0.5H(次甲基之反式異構物))，3.231-3.147(m,0.5H)( 次甲基之順式異構物))，3.051-2.953(m,1H),2.871-2.732(m,3H),2.583-2.501(m,1H),2.441-2.368(m,1H),2.244-2.205(m,3H),2.170-1.833(m,9H),1.695-1.560(m,4H),1.384(s,9H)。
化合物44：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丙基甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
3-(3-((環丙基甲基)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸乙酯
3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸胺乙酯(0.90 g,1.5 mmol)係溶於甲醇(10 mL)中及加入氰基硼氫化鈉(0.093 g,1.5 mmol)。使用AcOH於MeOH中之10%溶液將pH調整為估計值6。於室溫攪拌反應過夜。加入 NaHCO3(飽和)至混合物，接著以DCM進行萃取3次。以MgSO4乾燥合併的有機物，進行過濾及濃縮。使用所得的物質而無需進一步的純化。
3-(3-((環丙基甲基)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸
添加氫氧化鋰單水合物(0.62 g,15 mmol)至3-(3-((環丙基甲基)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸乙酯(0.98 g,1.5 mmol)於四氫呋喃(13 ml)及甲醇(3 ml)中之溶液。於室溫攪拌反應持續24小時，以1N HCl進行酸化成pH=6。於真空中移除揮發成分以及藉由與乙醇進行共沸蒸餾接著置於凍乾機上18小時來移除剩餘的水。使用所得的白色固體而無需進一步的純化。
N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-((環丙基甲基 )(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙醯胺
將N,N,N',N'-四甲基-0-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲鹽(0.846 g,2.22 mmol)加入至3-(3-((環丙基甲基)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸(0.94 g,1.5 mmol)及N,N-二異丙基乙基胺(0.852 mL,4.89 mmol)及[8]4-第三-丁基苯-1,2-二胺(0.292 g,1.78 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(9.19 mL,119mmol)中之溶液。於室溫攪拌反應過夜，於室溫部分地濃縮成估計值為2 mls及加入NaHCO3(飽和)。以EtOAc(3x)萃取混合物及以MgSO4乾燥合併的有機物，進行過濾及濃縮。藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為95：5)來純化殘留物以生成呈固體之所欲的化合物(0.92 g)。
7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d] 咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丙基甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
於60℃加熱於乙酸(5 ml)中之N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-((環丙基甲基)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙醯胺(1.1 g,1.4 mmol)過夜。濃縮溶液及藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3離子為93：7)來進行純化以產生呈無色泡沫之所欲的化合物(0.57 g)。
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丙基甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
於室溫添加三氟乙酸(10 mL)至水(1 mL)及7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丙基甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.52 g,0.68 mmol)之混合物。於室溫攪拌反應過夜及加入三乙基矽烷(0.22 mL,1.4 mmol)。於真空中移除揮發成分及所得的殘留物係溶於MeOH(15 mls)中，加入500 mgs的K2CO3及8滴H2O，及於室溫攪拌反應持續1小時。過濾混合物及以10 ml MeOH清洗濾餅。濃縮濾液及藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為90：10)來純化所得的殘留物以得到呈灰白色泡沫之所欲的產物(0.196 g)。針對C33H45N7O2 MS(ESI+)m/z 572.6[M+H]+；針對C33H45N7O2 MS(ESI-)m/z 570.3[M-H]-；HPLC純度>90%(停留時間，2.850分鐘)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOH)δH 7.944(s,1H),7.361(s,1H),7.280-7.259(m,1H),7.172-7.150(m,1H),7.092-7.078(m,1H),6.484-6.475(d,J=3.6 Hz,1H),4.222-4.185(m,1H),3.815-3.779(m,1H),3.329(m,0.5H (次甲基之反式異構物))，2.961(m,0.5H(次甲基之順式異構物)，2.745-2.627(m,3H),2.503-2.450(m,1H),2.301-2.187(m,5H),2.036-1.890(m,2H),1.793-1.776(m,3H),1.529-1.385(m,2H),1.246(s,9H),0.808-0.739(m,1H),0.394-0.362(m,2H),0.012-0.013(m,2H)。停留時間：2.850分鐘。HPLC條件：Agilent Zorbax Exlipse XDB-C18管柱，4.6 X 50 mm(1.8 urn包裝)，溶劑A-水(0.1% TFA)，溶劑B-乙腈(0.07% TFA)6 min梯度由5至95% B；維持1 min；接著循環。
化合物45：3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丁基)胺基)環丁基)丙酸乙酯
3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸胺乙酯(1.7 g,2.8 mmol)係溶於甲醇(20 ml)中及加入氰基硼氫化鈉(0.35 g,5.6 mmol)。使用AcOH於MeOH中之10%溶液將pH調整至估計值為6，接著加入整份之異丁醛(0.33 ml,3.6 mmol)。於室溫攪拌反應持續3小時。加入另外的1.3當量之異丁醛及持續於室溫下攪拌過夜。添加NaHCO3(飽和)至反應混合物，以DCM(3x)進行萃取。以MgSO4乾燥合併的有機物及進行濃縮。藉由快速層析法(DCM/於 MeOH中之7N NH3為97：3)來純化殘留物以生成呈無色泡沫之所欲的化合物(1.75 g)。
3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丁基)胺基)環丁基)丙酸
添加氫氧化鋰單水合物(1.11 g,26.4 mmol)至3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丁基)胺基)環丁基)丙酸乙酯(1.75 g,2.64 mmol)於四氫呋喃(13 ml,160 mmol)及甲醇(3 ml,70 mmol)中之溶液。於室溫攪拌反應持續24小時，以1N HCl進行酸化成pH=6，於真空中揮發成分及藉由與乙醇進行共沸蒸餾接著置於凍乾機上18小時來移除剩餘的水。使用所得的白色固體而無需進一步的純化。
N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基 )-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丁基)胺基)環丁基)丙醯胺
添加N,N,N',N'-四甲基-0-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲鹽(1.52 g,4.01 mmol)至3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丁基)胺基)環丁基)丙酸(1.7 g,2.7 mmol)及N,N-二異丙基乙基胺(1.54 ml,8.82 mmol)及4-第三-丁基苯-1,2-二胺(0.527 g,3.21 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(16.6 ml)中之溶液。於室溫攪拌反應過夜，進行部分地濃縮至估計值為2 mls，然後加入NaHCO3(飽和)。接著以EtOAc萃取混合物3次及以MgSO4乾燥合併的有機物，進行過濾及濃縮，以及藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為95：5)來進行純化以產生呈固體之所欲的醯胺(1.71 g)。
7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丁基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄 基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
於60℃攪拌N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丁基)胺基)環丁基)丙醯胺(1.71 g,2.19 mmol)於乙酸(6 ml)中之溶液過夜，於真空中移除揮發成分以及藉由快速層析法(SiO2,DCM/於MeOH中之7N NH3為94：6)來純化剩下的殘留物以產生呈泡沫之所欲的化合物(0.9 g)。
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
於室溫添加三氟乙酸(20 ml,300 mmol)至水(2 ml,100 mmol)及7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丁基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.9 g,1 mmol)之混合物。攪拌反應過夜及加入三乙基矽烷(0.38 ml,2.4 mmol)。於真空中移除揮發成分及所得的殘留物係溶於MeOH(15 ml)中，加入500 mgs的K2CO3及8滴H2O，以及於室溫攪拌反應持續1小時。過濾混合物及以10 ml MeOH清洗濾餅。濃縮濾液及藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為90：10)來純化所得的殘留物以產生呈灰白色泡沫之所欲的產物(0.274g)。針對C33H47N7O2 MS(ESI+)m/z 574.6[M+H]+；針對C33H45N7O2 MS(ESI-)m/z 572.4[M-H]-；HPLC純度>86%(停留時間，2.918分鐘)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOH)δH 8.078(s,1H),7.497(s,1H),7.416-7.396(m,1H),7.305-7.284(m,1H),7.216-7.200(m,1H),6.621-6.612(d,J=3.6 Hz,1H),4.368-4.334(m,1H),3.930-3.894(m,1H),2.934-2.918 (m,1H),2.866-2.797(m,2H),2.652-2.583(m,1H),2.444-2.361(m,2H),2.287-2.199(m,2H),2.166-2.119(m,3.5H(含有次甲基之反式異構物))，2.048-2.012(m,1H),1.921-1.748(m,3.5H(含有次甲基之順式異構物))，1.622-1.494(m,2H),1.380(s,9H),1.269-1.252(m,1H),0.932-0.879(m,6H)。
化合物46：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
以SFC分離非鏡像異構物。所得的物質係溶於MeOH/H2O且經冷凍以產生白色粉末(23.7 mg)。1H NMR(400 MHZ,MeOD)δHppm 8.06(s,1 H),7.48(br.s.,1 H),7.39(d.J=8.71 Hz,1 H),7.28(dd,J=8.60,1.76 Hz,1 H),7.19(d,J=3.52 Hz,1 H),6.60(d.J=3.52 Hz,1 H),4.84(m,1 H),4.28(dd,J=7.26,6.22 Hz,1 H),3.84(t,J=5.70 Hz,1 H),3.16(m,1 H),2.99(m,1 H),2.80(t,J=7.15 Hz,2 H),2.73(dd,J=13.68,6.22 Hz,1 H),2.49(dd,J=13.68,7.67 Hz,1 H),2.38(m,1 H),2.22(m,3 H),2.00(m,4H),1.91(m,3 H),1.60(m,5 H),1.36(s,9 H)。
化合物47：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
藉由SFC來分離非鏡像異構物。所得的物質係溶於MeOH/H2O且經冷凍以產生白色粉末(21 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.06(s.1 H),7.63(br.s.,1 H),7.39(m,1 H),7.30(dd,J=8.50,1.66Hz,1 H),7.20(d.J=3.52 Hz,1 H),6.60(d,J=3.52 Hz,1 H),4.32(dd,J=7.67,6.01 Hz,1 H).3.88(m,1 H),2.82(t,J=7.15 Hz,2 H),2.71(m,1 H),2.52(m,1 H),2.41(m,2H),2.25(m,2 H),2.18(s,3 H),2.03(m,1 H),1.92(m,3 H),1.62(m,1 H),1.51(m,2 H)。
化合物48：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
藉由SFC來分離非鏡像異構物。於冷凍後得到無色固體(78 mg)。
化合物49：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(乙基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
以SFC分離非鏡像異構物。
Lux-3(2 x 15 cm)，30%乙醇(0.2% DEA))/CO2，100巴，65 mL/min，220 nm。注射量：0.4 mL，6.2 mg/mL甲醇。1H NMR(400 MHz,d4-MeOH)δH 8.081(s,1H),7.499(s,1H),7.416-7.395(m,1H),7.308-7.282(m,1H),7.226- 7.216(m,1H),6.619-6.610(m,1H),4.344-4.310(m,1H),3.922-3.895(m,1H),3.410-3.329(m,1H),2.875-2.837(m,2H),2.738-2.689(m,1H),2.659-2.607(m,2H),2.535-2.483(m,1H),2.452-2.380(m,1H),2.311-2.224(m,1H),2.158-2.121(m,3H),2.061-2.030(m,2H),1.913-1.863(m,2H),1.674-1.590(m,1H),1.381(s,9H),1.056-1.020(t,J=7.2 Hz,3H)。
化合物50：(1R,2S,3R,5R)-3-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
3-(3-((((1R,2R,3S,4R)-4-(6-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-9H-嘌呤-9-基)-2,3-二羥基環戊基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸乙酯
3-(3-((((1R,2R,3S,4R)-4-(6-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-9H-嘌呤-9-基)-2,3-二羥基環戊基)甲基)胺基)環丁基)丙酸胺乙酯(1.5 g,2.5 mmol)係溶於乙腈(66 mL)中及加入異丙基碘(2.5 mL,25mmol)及三乙基胺(5.2 mL,37 mmol)。 加熱反應至80℃持續12小時。加入另外的15當量TEA及另外的15當量異丙基碘，反應持續進行另外的小時。加入各15當量之另外的異丙基碘以及TEA及持續加熱過夜。濃縮反應及加入飽和的Na2CO3(20 ml)及DCM(20ml)。令層分離及進一步萃取含水層3次以上，乾燥合併的有機物以及藉由快速層析法(SiO2,DCM/於MeOH中之7N NH3為97：3)進行純化。
令所得的殘留物溶解於30 ml DCM中及以20 ml飽和的NaHCO3及10 ms之1N NaOH進行清洗。以DCM含水相3次，以MgSO4乾燥合併的有機物以及移除溶劑以產生呈泡沫/固體之所欲的產物(1.3 g)。
(3-((((1R,2R,3S,4R)-4-(6-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-9H-嘌呤-9-基)-2,3-二羥基環戊基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸
添加氫氧化鋰單水合物(0.838 g,20.0 mmol)至3-(3(3-((((1R,2R,3S,4R)-4-(6-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-9H-嘌呤-9-基)-2,3-二羥基環戊基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基) 丙酸乙酯(1.3 g,2.0 mmol)於四氫呋喃(30 ml,300 mmol)以及甲醇(6.5ml,160 mmol)中之溶液。於室溫攪拌反應過夜，以1 N HCl進行酸化至pH=6。於真空中移除揮發成分及藉由與乙醇進行共沸蒸餾接著藉由冷凍來移除剩餘的水。使用所得的固體而無需進一步的純化。
N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-((((1R,2R,3S,4R)-4-(6-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-9H-嘌呤-9-基)-2,3-二羥基環戊基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙醯胺
添加N,N,N',N'-四甲基-0-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲鹽(1.19 g,3.13 mmol)至3-{3-[{[(3aR,4R,6R,6aS)-6-{6-[(2,4-二甲氧基苄基)胺基]-9H-嘌呤-9-基}-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}{異丙基)胺基]環丁基}丙酸(1.30 g,2.09 mmol)及N,N-二異丙基乙基胺(1.20 ml,6.89 mmol)及4-第三-丁基苯-1,2-二胺(0.411 g,2.50 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(12.9 ml)中之溶液。攪拌反應持續2小時，加入NaHCO3(飽和)及以EtOAc(3x)萃取混合物，以及以MgSO4乾燥合併的有機物 ，進行過濾及濃縮。藉由快速層析法(DCM->DCM/於MeOH中之7N NH3為95：5)來純化殘留物以產生呈固體之所欲的醯胺(1.4 g)。
9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9H-嘌呤-6-胺
於60℃攪拌於乙酸(5 ml,90 mmol)中之N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-((((1R,2R,3S,4R)-4-(6-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-9H-嘌呤-9-基)-2,3-二羥基環戊基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙醯胺(1.4g,1.8 mmol)過夜。濃縮反應及藉由快速層析法(DCM->DCM/於MeOH中之7N NH3為94：6)來進行純化以產生呈泡沫之所欲的化合物(0.91 g)。
(1R,2S,3R,5R)-3-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基 )甲基)環戊烷-1,2-二醇
於室溫添加三氟乙酸(10 ml,100 mmol)至水(1 ml,60 mmol)及9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-9H-嘌呤-6-胺(0.91 g,1.2 mmol)之混合物。於室溫攪拌反應過夜。接著加熱反應至35℃及加入三乙基矽烷(0.39 ml,2.4 mmol)。於35℃進一步攪拌反應2天。於真空中移除揮發成分以及所得的殘留物係溶於MeOH(15 mls)中。加入500mgs的K2CO3以及8滴H2O及於室溫攪拌反應持續1小時。過濾混合物及以10 mls MeOH清洗濾餅。於冷凍數天後，濃縮濾液以及藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為90：10)來純化所得的殘留物以產生呈無色固體之所欲的產物(0.142 g)。
化合物51：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
藉由SFC來分離非鏡像異構物(25 mg)。'H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.06(s,1 H),7.48(br.s.,1 H),7.38(d,J=7.88 Hz,1 H),7.27(dd,J=8.60,1.55 Hz,1 H),7.19(d,J=3.52 Hz,1 H),6.60(d,J=3.73 Hz,1 H),4.85(m,1 H),4.29(m,1 H),3.85(t,J=5.60 Hz,1H),3.41(m,1 H),3.17(m,1 H),2.83(t,J=7.36 Hz,2 H),2.74(dd,J=13.68,6.63 Hz,1 H),2.51(dd,J=13.79,7.57 Hz,1 H),2.38(m,1 H),2.18(m,3 H),2.09(m,1 H),2.02(m,5H),1 83(m,2 H),1.60(m,3 H),1.36(s,9 H)。
化合物52：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5,6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
以SFC分離非鏡像異構物。所得的物質係溶於MeOH/H2O且經冷凍以產生奶油色固體(64 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.06(s,1 H),7.63(s,2 H),7.20(d.J=3.52 Hz,1 H),6.59(d,J=3.73Hz,1 H),4.32(dd.J=7.88,6.01Hz.1 H),3.88(dd,J=5.60,4.77 Hz,1 H),2.82(t,J=7.26 Hz,2 H),2.69(m,1 H),2.48(m,1 H),2.38(m,2 H),2.24(m,3 H),2.15(s,3 H),1.91(m,3 H),1.61(m,1 H),1.50(m,2 H)。
化合物53：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪 唑-2-基)乙基)環丁基)(異丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
藉由SFC來分離非鏡像異構物。於冷凍後回收無色固體(85 mg)。
化合物54：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丙基甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
藉由SFC來分離非鏡像異構物。所得的物質係溶於MeOH/H2O且經冷凍以產生白色粉末(53 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.06(s,1 H),7.48(br.s.,1 H),7.39(d,J=8.50 Hz,1 H),7.28(dd,J=8.60,1.76 Hz,1 H),7.21(d,J=3.52 Hz,1 H),6.60(d,J=3.52 Hz,1 H),4.32(dd,J=7.67,5.80 Hz,1 H),3.91(m,1 H),3.44(m,1 H),2.84(t,J=7.57 Hz,2 H),2.78(dd,J=13.27,7.05 Hz,1 H),2.58(dd,J=13.06,7.67 Hz,1 H),2.40(m,3 H),2.11(t,J=6.22 Hz,3 H),2.02(m,2 H).1.87(m,2 H),1.62(m,1H),1.37(s,9 H),0.87(m,1 H),0.49(m,2 H),0.12(m,2 H)。
化合物55：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
藉由SFC來分離非鏡像異構物。1H NMR(400 MHZ, MeOD)δH ppm 8.05(s,1 H),7.63(s.1 H),7.39(m,1 H),7.30(dd,J=8.50,1.66 Hz,1 H),7.20(d.J=3.52 Hz.1 H),6.59(d,J=3.73 Hz,1 H),4.32(dd,J=7.77,5.91 Hz,1 H),3.88(dd,J=5.70,4.66 Hz,1 H),2.99(m.1 H),2.84(t,J=7.57 Hz,2 H).2.48(m,1 H),2.41(dd,J=7.98,4.87 Hz,1 H),2.34(m,1 H),2.24(m,1 H),2.15(s,3 H).2.10(m.3 H),2.01(m,2 H),1.86(t.J=8.19 Hz,2 H),1.61(m,1 H)。
化合物56：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((異丙基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
N-(2-胺基-4-(三氟甲氧基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙醯胺
添加N,N,N',N'-四甲基-0-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲鹽(1.19 g,3.14 mmol)至3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)- 6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸(1.3 g,2.1 mmol)及N,N-二異丙基乙基胺(1.20 mL,6.90 mmol)及4-(三氟甲氧基)苯-1,2-二胺(0.482 g,2.51 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(13.0 mL,167 mmol)中之溶液。於室溫攪拌反應過夜及進行部分地濃縮至估計值為2 mls，然後加入NaHCO3(飽和)。以EtOAc(3x)萃取混合物及以MgSO4乾燥合併的有機物進行過濾及濃縮。藉由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為95：5)來純化殘留物以得到呈固體之所欲的醯胺(1.4 g)。
N-(2,4-二甲氧基苄基)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((異丙基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
於60℃加熱於AcOH中之N-(2-胺基-4-(三氟甲氧基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基) 胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙醯胺(1.4 g,1.8 mmol)過夜。於真空中濃縮反應混合物而得到粗製產物。
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((異丙基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
於室溫添加三氟乙酸(10 mL,100 mmol)至水(1 mL,60 mmol)及N-(2,4-二甲氧基苄基)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((異丙基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(0.91 g,1.2 mmol)之混合物。於室溫攪拌反應過夜，接著加入三乙基矽烷(0.37 mL,2.3 mmol)來驟止反應。於真空中移除揮發成分及所得的殘留物係溶於MeOH(15 mls)中。加入500 mgs的K2CO3及8滴H2O，以及於室溫攪拌反應持續1小時。過濾混合物及以10 mls MeOH清洗濾餅。濃縮濾液以及藉 由快速層析法(DCM/於MeOH中之7N NH3為90：10)來純化所得的殘留物以產生呈灰白色泡沫之所欲的產物(0.232g)。針對C29H36F3N7O3 MS(ESI+)m/z 588.2[M+H]+；針對C29H36F3N7O3 MS(ESI-)m/z 586.2[M-H]-；HPLC純度>90%(停留時間，2.570分鐘)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOH)δH 8.082 & 8.079(s,1H，肇因於順式及反式異構物之重疊峰值)，7.554-7.524(m,1H),7.414(s,1H),7.225-7.209(m,1H),7.155-7.127(m,1H),6.618-6.609(m,1H),4.363-4.323(m,1H),3.976-3.932(m,1H),3.606-3.524(m,0.5H(次甲基之反式異構物))，3.156-3.110(m,0.5H(次甲基之順式異構物)，3.089-3.006(m,1H),2.731-2.679(m,1H),2.544-2.360(m,2H),2.256-2.239(m,3H),2.093-2.061(m,2H),1.987-1.861(m,3H),1.648-1.568(m,2H),1.072-1.006(m,6H)。
化合物57：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基((1s,3R)-3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
以SFC分離非鏡像異構物。所得的物質經冷凍而得到固體(78 mg)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOH)δH 8.076(s,1H),7.548-7.527(m,1H),7.414(s,1H),7.227-7.218(m,1H),7.148-7.123(m,1H),6.616-6.607(m,1H),4.361-4.327(m,1H),3.926-3.899(m,1H),3.037-3.000(m,1H),2.907-2.870(m,2H),2.538-2.283(m,4H),2.178- 2.013(m,8H),1.913-1.872(m,2H),1.680-1.599(m,1H)。
化合物58：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5,6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
以SFC分離非鏡像異構物。所得的物質係溶於MeOH/H2O且經冷凍以產生棕褐色粉末(73 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.06(s,1 H),7.64(s,2 H),7.21(d,J=3.73 Hz,1 H),6.59(d,J=3.52Hz,1 H),4.32(dd,J=7.77,6.12 Hz,1 H),3.89(m,1 H),3.01(m,1 H),2.86(t,J=7.67 Hz,2 H),2.51(m,1 H),2.40(m,2 H),2.27(m,1 H),2.18(s,3 H),2.11(m,3 H),2.02(q,J=6.43 Hz.2 H),1.88(t,J=8.19 Hz,2 H),1.63(m,1 H)。
化合物59：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丁基甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
步驟1：3-((1R,3s)-3-((環丁基甲基)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸乙酯
3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aS)-6-{4-[(2,4-二甲氧基苄基)胺基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基}-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}胺基)環丁基]丙酸胺乙酯(1.8 g,3.0 mmol)溶於甲醇(20 mL,600 mmol)中及加入氰基硼氫化鈉(0.37 g,5.9 mmol)。使用AcOH於甲醇中之10%溶液調整pH估計值6，接著加入整份環丁基甲醛(0.32 g,3.8 mmol)。令反應持續進行5小時，於期間HPLC指出反應已終止。加入另外的1.3當量之環丁基甲醛及持續反應過夜。加入NaHCO3(飽和)至反應混合物，接著以DCM其3次。以MgSO4乾燥合併的有機物以及進行濃縮成黃色樹脂。可利用矽石分離順式以及反式異構物。藉由FC(DCM/於MeOH中之7N NH3為96：4)進行純化而生成2不同批次的產物，其各使一種相對的異構物富集至約90%。頂異構物：0.38 g(5：1混合物，順式)；底異構物：0.31 g(7：1混合物，反式)。針對C35H49N5O6 MS(ESI+)m/z 676.7[M+H]+；HPLC純度>69%(停留時間，3.791)。
步驟2：N-(2-胺基-5-(第三-丁基)苯基)-3-((1R,3s)-3-((環丁基甲基)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺 基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙醯胺
底異構物(反式)：添加氫氧化鋰單水合物(0.192 g,4.59 mmol)至3-((1R,3s)-3-((環丁基甲基)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸乙酯(0.31 g,0.46 mmol)於四氫呋喃(6 mL,70 mmol)及甲醇(1.5 mL,37 mmol)中之溶液。於室溫攪拌反應過夜及於隔日早上起始物質經消耗及已經轉變成酸。以1N HCl使反應酸化成pH=6。於真空中移除揮發成分及藉由與乙醇進行共沸蒸餾接著冷凍24小時來移除剩餘的水。使用所得的白色固體而無需進一步的純化。HPLC純度>94%(停留時間，3.344)。
加入脲酸鹽(0.273 g,0.718 mmol)至3-{反式-3-[(環丁基甲基){[(3aR,4R,6R,6aS)-6-{4-[(2,4-二甲氧基苄基)胺基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基}-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}胺基]環丁基}丙酸(0.31 g,0.48 mmol)及N,N-二異丙基乙基胺(0.275 mL,1.58 mmol)及4-第三-丁基苯-1,2-二胺(0.0943 g,0.574 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(2.96 mL,38.3 mmol)中之溶液。於室溫攪拌反應過夜及於隔日早上起始物質經消耗。部分地濃縮反應至估計值為2 mls接著加入NaHCO3(飽和)。以EtOAc萃取混合物3次以及以MgSO4乾燥合併的有機物並進行濃縮。藉由FC(DCM/於MeOH中之7N NH3為95：5)來純化所得的殘留物以產生呈紫色-棕色非晶固體之N-(2-胺基-5-(第三-丁基)苯基)-3-((1R,3s)-3-((環丁基甲基)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙醯胺(0.29 g；76%)。HPLC純度>20%(停留時間，3.650分鐘)。
步驟3：7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丁基甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
於65℃攪拌N-(2-胺基-5-(第三-丁基)苯基)-3-((1R,3s)-3-((環丁基甲基)(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二 甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙醯胺(0.3 g,0.4 mmol)於乙酸(1.0 mL,20 mmol)中之溶液過夜及於隔日早上起始物質經消耗。於真空中移除揮發成分及藉由FC(DCM/於MeOH中之7N NH3為93：7)來純化所得的殘留物以產生呈灰白色固體之7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丁基甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺。HPLC純度>73%(停留時間，3.709分鐘)。
步驟4：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丁基甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
於室溫添加三氟乙酸(5 mL,70 mmol)至水(0.5 mL,30 mmol)及7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丁基甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺 (0.23 g,0.30 mmol)之混合物。使反應進行過夜，於期間以三乙基矽烷(0.095 mL,0.59 mmol)淬熄亮粉紅色懸浮液。於真空中移除揮發成分及所得的殘留物係溶於MeOH(15 mls)中。加入500 mgs的K2CO3及8滴H2O及於室溫攪拌反應持續1小時。過濾混合物及以10 mLs甲醇清洗濾餅。濃縮濾液以及藉由FC(DCM/於MeOH中之7N NH3為90：10)來純化所得的殘留物以產生呈無色固體之(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(環丁基甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇(0.018 g,10%)。針對C34H47N7O2 MS(ESI+)m/z 586.4[M+H]+；HPLC純度>93%(停留時間，2.070分鐘)。1H NMR(400 MHz,d4-MeOH)δH 8.083(s,1H),7.501(s,1H),7.421-7.400(m,1H),7.315-7.290(m,1H),7.218-7.209(m,1H),6.621-6.612(m,1H),4.350-4.317(m,1H),3.930-3.903(m,1H),3.403-3.367(m,1H),2.880-2.843(m,2H),2.722-2.360(m,6H),2.323-2.241(m,2H),2.173-1.606(m,13H),1.387(s,9H)。
化合物60：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((異丙基((1r,3S)-3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
藉由SFC來分離非鏡像異構物。於冷凍後，回收無色固體(62 mg)。
化合物61：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((異丙基((1s,3R)-3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
藉由SFC來分離非鏡像異構物。所得的物質係溶於MeOH/H2O且經冷凍以產生灰白色粉末(89 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.06(s,1 H),7.52(d,J=8.71 Hz,1 H),7.40(s,1 H),7.19(d,J=3.52 Hz,1 H),7.12(m,1 H),6.59(d,J=3.52 Hz,1 H),4.88(m,1 H),4.33(m,1 H),3.94(t,J=5.39 Hz,1 H),3.52(m,1 H),3.01(m,1 H),2.87(t,J=7.15 Hz,2 H),2.68(dd,J=13.48,7.88 Hz,1 H),2.47(dd,J=13.27,7.46 Hz,1 H),2.37(m,1 H),2.21(m,3 H),2.04(m,3 H),1.84(m,2 H),1.58(m,1 H),1.02(d,J=6.63 Hz,3 H),0.98(d,J=6.43 Hz,3 H)。
化合物62：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
N-(4-(氧雜環丁烷-3-基)苯基)乙醯胺
秤入(4-乙醯胺基苯基)硼酸{670 mg,3.7 mmol)、碘化鎳(II)(35 mg,0.11 mmol)、反式-2-胺基環己醇(17 mg,0.11 mmol)，以及六甲基二矽氮烷鈉(690 mg,3.7 mmol)至微波反應小瓶。將隔片置於頂部，以氮進行沖洗以及加入異丙醇(5.7 ml,75 mmol)。以氮沖洗小瓶持續10分鐘以及加入3-碘基氧雜環丁烷(344 mg,1.87 mmol)至0.75 ml異丙醇中。以微波小瓶蓋取代隔片及於微波反應氣中加熱混合物(微波條件：CEM Discovery Explorer微波反應器；執行時間：10 min；於80℃持續30 min；功率：300 W)。以8 ml EtOH過濾粗製反應混合物以及經由solka floc®纖維素墊來過濾懸浮液。以35 ml EtOH清洗墊及濃縮濾液。藉由快速層析法(SiO2，以40-60%之EtOAc/CH2Cl2進行洗提)來純化粗製物質以得到呈油之所欲的產物(200 mg)。
N-(2-硝基-4-(氧雜環丁烷-3-基)苯基)乙醯胺
謹慎地加入硫酸(9.4 ml,180 mmol)至70%硝酸(7：3之硝酸：水，11ml,170 mmol)，將其冷卻至0℃歷時約5-10分鐘。於0℃攪拌混合物持續10分鐘，接著藉由移除冰浴而將彼升溫至室溫。將酸溶液移至分液漏斗及加入二氯 甲烷(20 mL,300 mmol)。搖晃漏斗持續5分鐘，以及令相分離。
有機相(上方的相)係經單離以及以另外的20 ml CH2Cl2重複過程。結合有機萃取物，假設有機相含有約5 g(~80 mmol)之無水HNO3。利用50倍過量，此需要約25 ml的溶液。於冰浴中冷卻硝酸溶液。以25 ml之冰HNO3/CH2Cl2溶液來處理N-(4-氧雜環丁烷-3-基苯基)乙醯胺(210 mg,0.70 mmol)及攪拌約30分鐘。謹慎地將反應混合物倒入至45 ml之10% NH4OH溶液且謹慎地搖晃。分離相及以20 ml CH2Cl2清洗水相。以Na2SO4乾燥合併的有機相，進行過濾及濃縮。藉由快速層析法(SiO2，以25-35%之EtOAc/CH2Cl2進行洗提)來純化粗製物質以產生呈固體之所欲的產物(170mg)。
2-硝基-4-(氧雜環丁烷-3-基)苯胺
於70℃加熱N-(2-硝基-4-氧雜環丁烷-3-基苯基)乙醯胺(125 mg,0.529 mmo)於含水胼(8ml,160 mmol)中之懸浮液持續2 h，使反應混合物冷卻至45℃以及於真空中移除胼以產生固體。藉由快速層析法(SiO2，以20%之EtOAc/CH2Cl2進行洗提)來純化粗製物質以產生所欲的產 物(71 mg)。
4-(氧雜環丁烷-3-基)苯-1,2-二胺
謹慎地以於乙醇中呈漿料之0%鈀碳催化劑(10 mg,0.009 mmol)來處理2-硝基-4-氧雜環丁烷-3-基苯胺(91 mg,0.47 mmol)於乙醇(6.1 ml)中之溶液。清空反應燒瓶及以氫氣填充三次以及於氫氣體環境下攪拌反應持續2 h。經由solka floc®纖維素墊來過氯反應混合物及以25ml MeOH清洗墊。濃縮濾液以產生油，於高真空下進行固化，過夜以生成所欲的化合物(72mg)。使用所得的物質於下一個步驟。1H NMR(400 MHZ,CDCl3)δH ppm 6.81(d,J=1.52 Hz,1 H),6.70(m,2 H),5.02(dd,J=8.34,5.81 Hz,2 H),4.74(m,2 H),4.09(m,1 H),3.45(br.s.,2 H),3.37(br.s.,2 H)。
N-(2,4-二甲氧基苄基)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
以逐滴加入之N,N-二異丙基乙基胺(0.24 ml,1.4 mmol)及整份加入之N,N,N',N'-四甲基-0-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲鹽(240mg,0.632 mmol)來處理3-(3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸(250 mg.0.42mmol)及4-氧雜環丁烷-3-基苯-1,2-二胺(72 mg,0.44 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(4.3 ml,56 mmol)中之溶液。於室溫攪拌反應混合物持續6小時，於期間於高真空下濃縮反應混合物。殘留物係分隔於30 ml EtOAc(加入一些MeOH以助於溶解產物)與30 ml之1/1的H2O/飽和NaHCO3之間。以30 mL EtOAc萃取水相及以Na2SO4乾燥合併的有機相，進行過濾及濃縮成玻璃/剛性泡沫。藉由快速層析法(SiO2，以於CH3OH/CH2Cl2中之6-7% 7N NH3進行洗提)來純化粗製物質。得到兩組產物，較差極性對及較佳極性對對應兩種從屬區域性異構物。各區域性異構物係於下一個步驟分別被處理。
醯胺(130 mg)係溶於5 ml冰醋酸及於65℃加熱持續2.25 h，反應經冷卻及置於冰箱中過夜。藉由溫水浴的幫助而於高真空下移除乙酸。兩批次之粗製產物係溶於30 ml CH2Cl2中及以10 ml的飽和NaHCO3及2% Na2CO3溶液清洗有機相，以Na2SO4進行乾燥，進行過濾及濃縮。藉由快速層析法(SiO2，以於CH3OH/CH2Cl2中之5.5-6.5% 7N NH3進行洗提)來純化粗製物質以生成所欲的化合物(140 mg)。
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
令N-(2,4-二甲氧基苄基)-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(115 mg,0.159 mmol)溶解於已於0℃冰浴中經預冷之三氟乙酸(4.00 ml,51.9 mmol)及水(0.40 ml,22mmol)之混合物。於0℃攪拌溶液持續2 h，使反應混合物升溫至室溫。於1小時後， 於真空中濃縮反應混合物。殘留物係溶於6 ml MeOH中，進行濃縮及重複過程兩次。將所得的殘留物置於高真空中。以2 ml MeOH過濾粗製產物殘留物，以140 mg的K2CO3及10滴H2O進行處理及於室溫進行攪拌直至pH試紙判定溶液為鹼性。經由細緻玻璃料來過濾溶液及以MeOH清洗固體。濃縮濾液成固體，將其置於高真空中過夜。藉由製備型TLC於兩個20cm x 20cm x 1.0mm製備型TLC板上且以於CH3OH/CH2Cl2中之14% 7N NH3進行洗提，純化粗製物質以得到呈無色玻璃之產物(37 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.06(s,1 H),7.52(br.s.,1 H),7.48(d,J=8.29 Hz,1 H),7.28(m,1 H),7.20(t,J=3.42 Hz,1 H),6.60(d,J=3.52 Hz,1 H),5.12(m,2 H),4.80(m,2 H),4.38(m,1 H),4.32(m,1 H),3.89(q,J=5.60 Hz,1 H),3.04(m,1 H),2.85(m,2 H),2.70(m,1 H),2.52(m,1 H),2.41(m.2 H),2.27(dd,J=10.99,6.63 Hz,2 H),2.19(s,3 H),2.17(s,3 H),2.14(m,1 H),2.03(d,J=7.88 Hz,1 H),1.91(m,3 H),1.62(m,1 H),1.51(m,1 H)。
化合物63：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基((1r,3S)-3-(2-(5-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
以SFC分離非鏡像異構物。所得的物質係溶於MeOH/H2O且經冷凍成棕褐色粉末(58 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.26(s,1 H),8.19(s,1 H),7.51(s,1 H),7.47(d,J=8.29 Hz,1 H),7.26(dd,J=8.29,1.45 Hz,1 H),5.97(d,J=3.94 Hz,1 H),5.11(dd,J=8.29,6.01 Hz,2 H),4.79(t,J=6.32 Hz,2 H),4.69(m,1 H),4.36(m,1 H),4.22(t,J=5.60 Hz,1 H),4.15(m,1 H),2.79(t,J=7.15 Hz,2 H),2.72(m,1 H),2.66(m,2 H),2.21(m,2 H),2.14(s,3 H),1.88(m,3 H),1.45(m,2H)。
化合物64：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
步驟1：3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸
以1 M含水氫氧化鈉溶液(1.56 mL,1.56 mmol)處理-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸乙酯(0.39 g,0.82 mmol)於甲醇(14 mL)中之溶液，及於50℃加熱反應混合物並持續攪拌3.5 h；HPLC/LC MS指出已轉換成所欲的產物。於真空中濃縮反應混合物以及以水(10 mL)過濾含水殘留物及以CH2Cl2(3 x 5 mL)進行萃。以1 M含水氯化氫溶液(1.44 mL,1.44 mmol)處理含水層以調整成pH 7。冷凍澄清無色的溶液以得到呈些許灰白色固體之粗製產物標題化合物(0.487 g,110%)，產生1.56 mmol NaCl(91 mg)：針對C21H30N6O5MS(ESI+)m/z 447.1(M+H)+；針對C21H30N6O5MS(ESI-)m/z 445.2(M-H)-；HPLC純度>95%(停留時間，1.949 min)。
步驟2：N-(2-胺基-5-(氧雜環丁烷-3-基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙醯胺
以N,N-二異丙基乙基胺(0.716 mL,4.11 mmol)處理上述粗製產物3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸及4-(氧雜環丁烷-3-基)苯-1,2-二胺(0.135 g,0.822 mmol)於二氯甲烷(8.0 mL)中之懸浮液，以及冷卻至-5℃(冰/鹵水)。加入N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲鹽[HATU](0.469 g,1.23 mmol)及攪拌反應混合物持續5.25 h，升溫至15℃；HPLC/LC MS指出完全轉換。於真空中濃縮反應混合物及以CH2Cl2(15 mL)及水(7.5 mL)進行稀釋。以 CH2Cl2(2 x 10 mL)萃取分離的含水層。乾燥(Na2SO4)合併的有機物及於真空中進行濃縮以得到棕色-紫色之半不透明之油/泡沫。藉由層析法(2 x 8 cm矽石；於NH3/CH2Cl2中之0-5% 7 N甲醇)進行純化以得到呈半不透明粉紅色泡沫之標題化合物的兩種醯胺位向異構物(0.45 g,82%)：針對C30H40N8O5MS(ESI+)m/z 593.3(M+H)+；針對C30H40N8O5MS(ESI-)m/z 591.3(M-H)-及637.4(M+HCO2)-；HPLC純度90%(停留時間，2.097 min)。
步驟3：9-((3aR,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺
N-(2-胺基-5-(氧雜環丁烷-3-基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙醯胺(0.446 g,0.752 mmol)係溶於乙酸(7.7 mL,140 mmol)中及於65℃加熱持續3.5 h；HPLC/LC MS指出完全轉換。於3.75 h時，藉利用最小升溫之蒸餾來移除乙酸以得到橙色油，其係溶於CH2Cl2(45 mL)中及以飽和含水NaHCO3(2 x 30 mL)進行清洗。以NaCl處理含水層 直至飽和及以CH2Cl2(2 x 20 mL)進行萃取。乾燥(Na2SO4)合併的有機層及於真空中進行濃縮以得到亮橙色油。藉由層析法(2 x 8 cm矽石；於NH3/CH2Cl2中之0-5% 7 N甲醇)進行純化以得到呈橙色泡沫之標題化合物(0.28 g,65%)：針對C30H38N8O4MS(ESI+)m/z 575.3(M+H)+；針對C30H38N8O4MS(ESI-)m/z 573.3(M-H)-；HPLC純度>95%(停留時間，2.142 min)。
步驟4：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
添加預冷的(冰浴)之三氟乙酸(6.4 mL,84 mmol)於水(0.75 mL,42 mmol)中之溶液至含有9-((3aR,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(0.28 g,0.42 mmol)之冷卻的(冰浴)燒瓶。於0℃攪拌反應混合物持續5.75 h；HPLC/LC MS指出起始材料幾乎完全地消耗。於6 h時，自冷浴移除燒瓶及於室溫下藉由蒸餾來移除揮發成分。以MeOH(15 mL)過濾殘留物及以碳酸鉀(0.32 g,2.3 mmol)及水(1 mL)進行處理，以及於室溫攪拌混合物持 續20 min；pH 2。加入另外的碳酸鉀(0.20 g,1.4 mmol)，以及攪拌混合物持續20 min；pH 8-9。經由細緻玻璃料來過濾溶液，以MeOH進行淋洗，以及於真空中濃縮濾液以得到棕褐色半-固體。藉由層析法(3 x 8 cm矽石；於NH3/CH2Cl2中之10-20% 7 N甲醇)進行純化以得到呈近乎無色玻璃之標題化合物(123 mg,55%)：針對C27H34N8O4MS(ESI+)m/z 535.3(M+H)+；針對C27H34N8O4MS(ESI-)m/z 533.3(M-H)-；HPLC純度>95%(停留時間，1.765 min)；1H NMR(400 MHz,d4-MeOH)順式/反式異構物混合物δH 8.29-8.25(m,1H),8.21-8.17(m,1H),7.51(s,1H),7.47(d,J=8.3 Hz,1H),7.26(dd,J=1.6,8.3 Hz,1H),6.00-5.96(m,1H),5.11(dd,J=5.8,8.3 Hz,2H),4.81-4.76(m,2H),4.73-4.68(m,1H),4.40-4.31(m,1H),4.27-4.13(一系列m,2H),3.13-3.03(m,0.4H),2.86-2.66(一系列m,4.6H),2.30-1.80(一系列m,8.6 H),1.55-1.40(m,1.4H)。
化合物65：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基((1s,3R)-3-(2-(5-(氧雜環丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
藉由SFC來分離非鏡像異構物。所得的物質係溶於MeOH/H2O且經冷凍成白色粉末(35 mg)。1H NMR(400 MHz,MeOD)δH ppm 8.28(s,1 H),8.19(s,1 H),7.51(s,1 H),7.48(d,J=8.29 Hz,1 H),7.27(dd,J=8.29,1.45 Hz,1 H),5.98(d,J=4.15 Hz,1 H),5.12(dd,J=8.40,5.91 Hz,2 H),4.79(t,J=6.32 Hz,2 H),4.69(dd,J=5.39,4.15 Hz,1 H),4.36(m,1 H),4.23(t,J=5.60 Hz,1 H),4.17(m,1 H),3.05(m.1 H),2.83(t,J=7.46 Hz,2 H),2.67(m.2 H),2.16(s,3 H),2.08(m,2 H),1.98(m,3 H),1.83(m,2 H)。
化合物67：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-[({3-[2-(5-環丁基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)乙基]環丁基}(丙-2-基)胺基)甲基]氧雜環戊烷-3,4-二醇
步驟1：3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}胺基)環丁基]丙酸苄酯
於室溫攪拌9-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(胺基甲基)-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]-9H-嘌呤-6-胺(1.45 g,4.736 mmol),3-(3-氧雜環丁基)丙酸苄酯(1.21 g,5.209 mmol)及乙酸(246.45 μl,4.31 mmol)於DCE：異丙醇(4：1,50 ml)中之懸浮液持續1 h。加物另外的等分之DCE(40 ml)及異丙醇(5 ml)至反應混合物以及持續反應1小時。接著加入STAB(1.28 g,6.03 mmol)及攪拌反 應混合物持續18小時。以1N Na2CO3(10 ml)淬熄反應混合物，及以DCM(2 x 30 ml)萃取產物。以Na2SO4進行乾燥，進行過濾以及蒸發至乾燥。藉由矽膠層析法進行純化，以於MeOH：DCM(1：99-3：97)中之7N NH3進行洗提以得到呈無色的油之所欲的產物1.51 g(58%)；針對C27H34N6O5 MS(ESI+)m/z 523.65[M+H]+；HPLC純度97%(停留時間，1.43 min)；1H NMR(500 MHz，氯仿-d)δH ppm 8.35(d,J=5.3 Hz,1H),7.87(d,J=33.8 Hz,1H),7.40-7.29(m,5H),6.08-5.94(m,1H),5.59-5.42(m,3H),5.10(d,J=4.0 Hz,2H),5.03-4.96(m,1H),4.33(dq,J=7.3,3.9 Hz,1H),3.12(ddd,J=23.0,14.6,7.5 Hz,1H),2.85-2.77(m,1H),2.74(dd,J=12.5,6.6 Hz,1H),2.39-2.07(m,4H),1.90-1.64(m,5H),1.61(s,4H),1.38(s,3H),1.28-1.06(m,1H)。
步驟2.3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}(丙-2-基)胺基)環丁基]丙酸苄酯
添加K2CO3(528.92 mg,3.83 mmol)至3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-四氫-2H- 呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}胺基)環丁基]丙酸苄酯(1.00 g,1.91 mmol)及2-碘丙烷(0.57 ml,5.74 mmol)於MeCN中之溶液及於密封管中於95℃持續攪拌18小時。以EtOAc(20 ml)過濾反應混合物，進行過濾及蒸發至乾燥。藉由矽膠層析法進行純化，以於MeOH：DCM(1：99-5：95)中之7N NH3進行洗提以得到呈無色的油之所欲的產物700 mg(65%)；針對C30H40N6O5 MS(ESI+)m/z 565.70[M+H]+；HPLC純度96%(停留時間，1.48 min)；1H NMR(500 MHz，氯仿-d)δH ppm 8.35(d,J=3.5 Hz,1H),7.88(d,J=3.2 Hz,1H),7.44-7.29(m,5H),6.03(t,J=2.2 Hz,1H),5.62-5.42(m,3H),5.10(d,J=3.3 Hz,2H),5.06-4.92(m,1H),4.26(dt,J=9.9,3.4 Hz,1H),3.46-2.84(m,2H),2.88-2.61(m,1H),2.51(ddd,J=14.0,9.1,7.5 Hz,1H),2.33-2.15(m,2H),2.50-2.13(m,2H),2.16-1.74(m,4H),1.60(s,3H),1.43-1.35(m,4H),0.96(d,J=6.7 Hz,3H),0.79(d,J=6.6 Hz,3H)。
步驟3. 3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}(丙-2-基)胺基)環丁基]丙酸
添加10% Pd-C(70 mg)至3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}(丙-2-基)胺基)環丁基]丙酸苄酯(790 mg,1.40 mmol)於EtOH(20 ml)中之溶液及於室溫下之氫氣體環境中攪拌持續18小時。加入另外的等分之10% Pd-C(70 mg)及於氫氣中持續攪拌反應持續4小時。於真空中進行過濾及蒸發，接著自DCM(2 x 20 ml)蒸發以得到680 mg(數量)之白色泡沫狀固體；針對C23H34N6O5MS(ESI+)m/z 475.20[M+H]+；HPLC純度100%(停留時間，1.11 min)；1H NMR(500 MHz，氯仿-d)δH ppm 8.29(d,J=16.3 Hz,1H),7.97(d,J=16.2 Hz,1H),6.86(s,2H),6.05(dd,J=4.3,1.7 Hz,1H),5.66-5.43(m,1H),5.00(ddd,J=19.3,6.3,3.2 Hz,1H),4.30(s,1H),3.47-2.85(m,2H),2.60(ddd,J=38.8,24.1,13.5 Hz,2H),2.19(ddd,J=14.7,11.9,7.1 Hz,2H),2.07-1.94(m,2H),1.81(dd,J=65.1,6.9 Hz,3H),1.66-1.46(m,5H),1.45-1.22(m,4H),1.00(d,J=6.4 Hz,3H),0.89(dd,J=12.2,6.6 Hz,3H)。
步驟4. 3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}(丙-2-基)胺基)環丁基]-N-(2-胺基-4/5-環丁基苯基)丙醯胺
於室溫添加TEA(0.54 ml,3.90 mmol)至3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}(丙-2-基)胺基)環丁基]丙酸(308.46 mg,0.65 mmol)、4-環丁基苯-1,2-二胺(210.90 mg,1.30 mmol)、(2E)-氰基(羥基亞胺基)乙酸乙酯(184.75 mg,1.30 mmol)及EDC.HCl(249.21 mg,1.30 mmol)於DCM(15 ml)中之溶液及攪拌持續兩小時。於真空中濃縮反應混合物，接著加入DCM(50 ml)。以飽和的NaHCO3(2 x 30ml)進行清洗。以DCM(50 ml)萃取含水相。以Na2SO4乾燥合併的有機物，進行過濾及蒸發。藉由矽膠層析法純化產物，以EtOAc接著為於MeOH：DCM(5：95)中之7N NH3進行洗提以得到灰色油468 mg(93%)；針對C33H46N8O4 MS(ESI+)m/z 619.35[M+H]+；HPLC純度80%(停留時間，1.44 min)。
步驟5. 9-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-[({3-[2-(5-環丁基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)乙基]環丁基}(丙-2-基)胺基)甲基]-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]-9H-嘌呤-6-胺
添加AcOH(10 ml)至3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}(丙-2-基)胺基)環丁基]-N-(2-胺基-4/5-環丁基苯基)丙醯胺(468 mg,0.61 mmol)及加熱至65℃同時攪拌持續4小時。於真空中濃縮反應混合物，接著令其溶解於DCM(100 ml)中及以飽和的NaHCO3(2 x 80 ml)進行清洗，以Na2SO4進行乾燥，進行過濾及蒸發。藉由快速矽膠層析法(Biotage,Isolera,25g筒)進行純化，以於MeOH：DCM(0-1：9)中之3N氨進行洗提以得到純度約為80%之所欲的產物。藉由製備型HPLC進行進一步的純化以得到呈灰色油之所欲的產物120 mg(27%)；針對C33H44N8O3 MS(ESI+)m/z 601[M+H]+；HPLC純度100%(停留時間，1.43 min)；1H NMR(500 MHz，氯仿-d)δH ppm 8.62(d,J=53.1 Hz,6H),8.57(s,2H),8.25(d,J=19.3 Hz,1H),7.90(d,J=20.3 Hz,1H),7.50(dd,J=8.3,3.9 Hz,1H),7.41(d,J=4.5 Hz,1H),7.18-7.06(m,1H),6.52(d,J=96.3 Hz,2H),6.07(dd,J=10.2,1.3 Hz,1H),5.52-5.39(m,1H),5.07(dd,J=6.2,3.4 Hz,1H),4.44(td,J=9.3,5.1 Hz,1H),3.59(dq,J=17.4,8.7 Hz,1H),3.36-3.10(m,2H),3.08-2.92(m,2H),2.87-2.72(m,2H),2.43- 2.27(m,2H),2.24-1.65(m,10H),1.57(s,4H),1.37(s,3H),1.10(d,J=6.6 Hz,3H),0.91(dd,J=8.9,6.8 Hz,3H)。
步驟6. (2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-[({3-[2-(5-環丁基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)乙基]環丁基}(丙-2-基)胺基)甲基]氧雜環戊烷-3,4-二醇
於0℃逐滴加入12N HCl(24 mmol,2ml)至9-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-[({3-[2-(5-環丁基-1H-1,3-苯并二唑-2-基)乙基]環丁基}(丙-2-基)胺基)甲基]-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]-9H-嘌呤-6-胺(120 mg,0.164 mmol)於MeOH(2 ml)中之溶液同時進行攪拌。接著升溫至室溫並持續6小時。將反應混合物冷卻至0℃及以於MeOH(10ml)中之7N NH3進行鹽基化。接著於真空中進行蒸發。粗製產物係於矽膠(1 ml)上被吸收，將其置於基於矽的固相萃取(Isolute)快速Si筒(10g)以及進行純化，以於MeOH：DCM(1：9)中之7N NH3進行洗提以得到白色固體36 mg(38%)；針對C30H40N8O3MS(ESI+)for m/z 561.45[M+H]+；HPLC純度100%(停留時間，1.13 min)；1H NMR(500 MHz，氯仿-d)δH ppm 8.29(d,J=4.6 Hz,1H),8.20(d,J=1.6 Hz,1H),7.50-7.18(m,2H),7.06(ddd,J=8.3,4.6,1.3 Hz,1H),6.01-5.90(m,1H),4.73(dd,J=9.8,5.1 Hz,1H),4.26(q,J=5.4 Hz,1H),4.14-4.03(m,1H),3.60-3.15(m,2H),3.07-2.86(m,2H),2.84-2.67(m,3H),2.42-2.31(m,2H),2.25-2.11(m,4H),2.10-1.95(m,2H),1.92-1.74(m,4H),1.57(dd,J=12.2,6.2 Hz,1H),1.02(dd,J=6.6,4.0 Hz,3H),0.95(dd,J=6.6,2.3 Hz,3H)。
化合物68：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-{[(3-{2-[5-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-1H-1,3-苯并二唑-2-基]乙基}環丁基)(甲基)胺基]甲基}氧雜環戊烷-3,4-二醇
步驟1：3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}胺基)環丁基]丙酸苄酯
於室溫攪拌9-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(胺基甲基)-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]-9H-嘌呤-6-胺(5.00 g,16.3 mmol)、3-(3-氧雜環丁基)-丙酸苄酯(4.17 g,18.0 mmol)及乙酸(0.85 ml,14.8 mmol)於DCE：異丙醇(7：2)(90 ml)中之懸浮液持續2 h。分次加入三乙醯氧基硼氫化鈉(4.40 g,20.8 mmol)及於室溫攪拌混合物持續18 h。以1M Na2CO3溶液(10 ml)淬熄反應混合物及以 DCM(3 x 30 ml)萃取產物。以Na2SO4乾燥合併的有機層，進行過濾以及蒸發至乾燥。藉由矽膠快速層析法進行純化，以於MeOH：99% DCM中之1% 7M NH3進行洗提以得到呈黃色油之產物(5.25 g,55%，純度89%)：針對C27H34N6O5MS(ESI+)m/z 523.6[M+H]+；LC純度89%(停留時間，1.60 min)；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δH 8.35(d,J=6.0 Hz,1H),7.91(s,1H),7.30-7.39(m,5H),6.01(dd,J=3.0 Hz,1.6,1H),5.72(br.s.,2H),5.50(dt,J=6.4 Hz,3.3,1H),5.10(d,J=3.8 Hz,2H),4.98-5.04(m,1H),4.31-4.38(m,1H),2.97-3.34(m,1H),2.72-2.85(m,2H),2.22-2.35(m,3H),2.14(td,J=8.3,4.3 Hz,1H),1.73-1.90(m,4H),1.64-1.71(m,1H,),1.62(d,J=1.4 Hz,3H),1.39(s,3H),1.10-1.27(m,1H)。
步驟2：3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}(甲基)胺基)環丁基]丙酸苄酯
令3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}胺基)環丁基]丙酸苄酯(3.2 g,6.12 mmol)溶解於甲醇(32 ml)中。加入於水中之甲醛(37%)(0.92 ml,12.3 mmol)及於分次加入氰基硼氫化鈉(0.54 g,8.57 mmol)之前持續 攪拌45 min。於加入水(1 ml)之前於室溫持續攪拌反應2 h及於室溫蒸發移除溶劑。藉由層析法利用於甲醇/DCM中之7M氨來純化殘留物以生成呈黃色油之所欲的化合物(非鏡像異構物的混合物)(2.05 g,62%，純度82%)：針對C28H36N6O5MS(ESI+)m/z 537.6[M+H]+；LC純度82%(停留時間，1.60 min)；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δH 8.32-8.38(m,1H),7.91-7.97(m,1H),7.32-7.39(m,5H),6.05-6.10(m,1H),5.61(br.s.,2H),5.53(ddd,J=16.5,6.4,1.8 Hz,1H),5.11(m,2H),4.93-5.00(m,1H),4.32-4.40(m,1H),2.50-2.88(m,1H),2.37-2.49(m,2H),2.21-2.30(m,2H),2.10(m,3H),1.91-2.04(m,1H),1.73-1.79(m,2H),1.64-1.72(m,2H),1.56-1.63(m,4H),1.41(s,3H),1.15(q,J=9.7 Hz,1H)。
步驟3：3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}(甲基)胺基)環丁基]丙酸
令3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}(甲基)胺基)環丁基]丙酸苄酯(1.19 g,2.22 mmol)溶解於乙醇(24 ml)中以及加入10%鈀炭催化劑(50%濕漿糊)(0.24 g)。於氫氣體環境下攪拌懸浮液持續18 h。接著進 行過濾及以乙醇(10 ml)清洗固體。於反應未完成時，加入另外的鈀炭催化劑(0.21 g)及於氫氣環境下使反應繼續進行另外的24 h。經由雙玻璃纖維進行過濾，以乙醇進行清洗以及蒸發至乾燥以生成呈白色泡沫之所欲的化合物(非鏡像異構物的混合物)(0.85 g,86%)：針對C21H30N6O5MS(ESI+)m/z 447.5[M+H]+；LC純度86%(停留時間，1.08 min)；1H NMR(500 MHz,d4-MeOD)δH 8.18-8.35(m,2H),6.14-6.30(m,1H),5.25-5.56(m,1H),5.01-5.11(m,1H),4.35-4.52(m,1H),3.63-3.81(m,1H),3.24-3.30(m,1H),2.98-3.16(m,1H),2.89(ddd,J=17.2,13.4,3.7 Hz,1H),2.36(m,2H),2.17-2.26(m,1H),1.98-2.17(m,3H),1.67-1.92(m,3H),1.49-1.64(m,4H),1.39(s,3H),1.20-1.33(m,1H)。
步驟4：2-(4-氟苯基)-2-甲基丙酸甲酯
以庚烷(2 x 20 ml)清洗氫化鈉(礦物油中之60%懸浮液)(2.64 g,66 mmol)及將之懸浮於THF(40 ml)中。加入2-(4-氟苯基)乙基甲酯(5.05 g,30 mmol)於THF(10 ml)中之溶液及攪拌持續30 min。於30 min內加入1 ml的甲碘化物(5.6 ml,90 mmol)，且初始時冷卻至10℃接著慢慢升溫至50℃，同時間氣體放洩。於4.5 h後，加入水(50 ml)及以EtOAc(2 x 50 ml)萃取混合物。於過濾及蒸發至乾燥之 前，以鹵水(30 ml)清洗合併的有機相及以MgSO4進行乾燥以得到橙色油(5.08 g,79%,1H NMR測定純度為91%)：針對C11H13FO2MS(ESI+)m/z 196.2[M+H]+；LC純度80%(停留時間，1.94 min)；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δH 7.29-7.34(m,2H),6.98-7.05(m,2H),3.66(s,3H),1.58(s,6H)。
步驟5：2-(4-氟苯基)-2-甲基丙-1-醇
令2-(4-氟苯基)-2-甲基丙酸甲酯(5.08 g,26.9 mmol)溶解於THF(51 ml)中及於30 min內逐滴加入氫化鋁鋰溶液(於THF中之1M)(38.8 ml,38.8 mmol)之前使其冷卻至0℃。當完全加入時，使反應升溫至室溫及攪拌持續3 h。於冰上再次冷卻之前，謹慎地加入水(1.35 ml)接著為於水(1.35 ml)中之15% NaOH及更多的水(4.05 ml)。於濾出固體之前，於室溫攪拌懸浮液持續30 min及以THF(2 x 30 ml)進行清洗。蒸發溶劑及藉由層析法利用EtOAc/庚烷來進行純化以得到澄清的油(3.48 g,80%)：針對C10H13FO MS(ESI+)m/z 168.2[M+H]+；LC純度94%(停留時間，1.76 min)；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δH 7.41-7.32(m,2H),7.15-7.00(m,2H),3.62(d,J=6.4 Hz,2H),1.35(s,6H)。
步驟6：1-氟-4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯
於N2環境中令氫化鈉(1.664 g,41.6 mmol,60%分散於礦物油中)懸浮於乾THF(18 ml)中及於0℃緩慢地添加於乾THF(18 ml)中之2-(4-氟苯基)-2-甲基丙-1-醇(3.500 g,20.8 mmol)至懸浮液。於完成添加後，令反應升溫至室溫維持1 h。於室溫緩慢地加入碘代甲烷(6.5 ml,0.104 mmol)及使反應維持3 h。藉由緩慢加入的H2O(35 ml)來驟止反應。使層分離及以EtOAc(3 x 35 ml)萃取含水層。以MgSO4乾燥合併的有機層，進行過濾及於真空中進行濃縮以得到粗製產物。藉由矽石快速層析法使用100%庚烷至10% EtOAc：90%庚烷間者作為洗提液來純化產物以得到呈無色油之產物(2.991 g,79%)：LC純度98%(停留時間，2.16 min)；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δH 7.40-7.32(m,2H),7.11-6.96(m,2H),3.39(s,2H),3.33(s,3H),1.33(s,6H)。
步驟7：1-氟-4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-2-硝基苯
於鹽冰/水浴中令氟-4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯(2.987 g,16.4 mmol)冷卻至-20℃及緩慢地逐滴加入硫酸(27 ml)同時進行攪拌。添加硫酸而使溶液變成亮橙色。緩慢地逐滴加入硝酸(3 ml)歷時15-20 min。添加硝酸而使溶 液變成深黃色/棕色且沉澱出些許白色固體。使反應於冰(450 g)上維持30 min。以DCM(2 x 225 ml)萃取混合物及以MgSO4乾燥合併的有機萃取物，進行過濾及於真空中進行濃縮以得到粗製產物。藉由矽石快速層析法使用100%庚烷至20% EtOAc：80%庚烷間者來純化產物以得到呈黃色油之產物(2.239 g,60%)：LC純度96%(停留時間，2.18 min)；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δH 8.08(dd,J=7.1,2.5 Hz,1H),7.67(ddd,J=8.7,4.1,2.5 Hz,1H),7.23(dd,J=10.6,8.8 Hz,1H),3.41(s,2H),3.33(s,3H),1.37(s,6H)。
步驟8：1-疊氮基-4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-2-硝基苯
令氟-4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-2-硝基苯(2.227 g,9.80 mmol)溶解於DMF(25 ml)中及於室溫加入疊氮化鈉(1.274 g,19.6 mmol)及攪拌反應過夜。以水(75 ml)驟止反應以及以TBME(3 x 75 ml)萃取混合物。以MgSO4乾燥合併的有機層，進行過濾及於真空中進行濃縮以得到粗製產物。藉由矽石快速層析法使用100%庚烷至15% EtOAc：85%庚烷間者作為洗提液來純化產物以得到呈黃色油之產物(2.301 g,75%，純度80%)：LC純度79%(停留時間，2.15 min)；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δH 7.97(d,J=2.2 Hz,1H),7.66(dd,J=8.5,2.2 Hz,1H),7.33-7.22(m,1H), 3.40(s,2H),3.33(s,3H),1.36(s,6H)。
步驟9：4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯-1,2-二胺
令疊氮基-4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-2-硝基苯(1.102 g,3.52 mmol)溶解於EtOH(30 ml)中及加入Pd/C(10% wt.)(0.110 g,10% wt.)。以N2沖洗反應3次接著以H2進行3次沖洗及於室溫攪拌反應過夜。經由矽藻土過濾混合物及於真空中濃縮濾液以得到粗製產物。藉由矽石快速層析法使用100%庚烷至100% EtOAc間者作為洗提液來純化產物以得到呈淡棕色油之產物，其經固化成深橙色固體(0.481 g,63%，純度90%)：針對C11H18N2O MS(ESI+)m/z 195.1[M+H]+；LC純度87%(停留時間，0.99 min)；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δH 6.65(dd,J=11.2,1.9 Hz,2H),6.58(d,J=7.9 Hz,1H),3.26(s,2H),3.24(s,3H),1.20(s,6H)。
步驟10：3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}(甲基)胺基)環丁基]-N-[2-胺基-4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯基]丙醯胺
將3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}(甲基)胺基)環丁基]丙酸(0.620 g,1.39 mmol)、4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯-1,2-二胺(0.466 g,2.08 mmol，純度87%)、EDC.HCl(0.532 g,2.78 mmol)及甲氧基(乙基-氰基(羥基亞胺基)乙酯)(0.395 g,2.78 mmol)加入至具有攪拌子的燒瓶，接著以N2進行沖洗。於室溫加入乾DCM(22 ml)及乾Et3N(1.2 ml,8.33 mmol)及維持反應過夜。藉由加入飽和的NaHCO3溶液(25 ml)來驟止反應及分離有機層。以DCM(2 x 25 ml)萃取含水層及以MgSO4乾燥合併的有機層，進行過濾及於真空中進行濃縮以得到粗製產物。藉由矽石快速層析法首先使用100% EtOAc來洗提二苯胺接著使用100% DCM至20%於MeOH中之2M NH3：80% DCM間者作為洗提液來純化產物以得到呈棕色油之產物(1.081 g，數量)：針對C32H46N8O5MS(ESI+)m/z 623.4[M+H]+；LC純度98%(停留時間，1.36 min)；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δH 8.39(d,J=7.8 Hz,1H),7.99(s,1H),7.42-7.30(m,1H),7.24-7.00(m,1H),6.96-6.81(m,1H),6.12(d,J=12.6 Hz,1H),5.77(d,J=6.7 Hz,1H),5.63(d,J=5.0 Hz,1H),5.14-4.93(m,1H),4.60-4.31(m,1H),4.28-3.69(m,2H),3.48-3.03(m,5H),2.65-2.48(m,1H),2.46-2.33(m,1H),2.34-2.10(m,7H),2.10-1.98(m,1H),2.00-1.66(m,4H),1.62(d,J=15.7 Hz,13H),1.44(d,J=6.5 Hz,4H),1.30(t,J=3.3 Hz,7H),1.12(d,J=52.3 Hz,1H)。
步驟11：9-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-{[(3-{2-[5-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-1H-1,3-苯并二唑-2-基]乙基}環丁基)(甲基)胺基]甲基}-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]-9H-嘌呤-6-胺
令3-[3-({[(3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]甲基}(甲基)胺基)環丁基]-N-[2-胺基-4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯基]丙醯胺(1.036 g,1.66 mmol)溶解於AcOH(17 ml)中且加熱至50℃持續5 h。於真空中濃縮反應及令殘留物溶解於DCM(75 ml)中及加入飽和的NaHCO3溶液(75 ml)。分離有機層及以DCM(2 x 75 ml)萃取含水層。以MgSO4乾燥合併的有機層，進行過濾及於真空中進行濃縮以得到呈深橙色油之粗製產物(0.850 g,94%)。使用中性製備型HPLC來純化產物以得到呈淡黃色油之產物(0.485 g,47%，純度88%)：針對C32H44N8O4MS(ESI+)m/z 605.4[M+H]+；LC純度88%(停留時間，1.25 min)；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δH 10.44(dd,J=207.7,22.9 Hz,1H),8.41(d,J=17.1 Hz,1H),8.16(d,J=13.8 Hz,1H),7.89-7.58(m,1H),7.54-7.29(m,2H),6.15(d,J=10.9 Hz,1H), 5.92-5.56(m,3H),4.98(d,J=12.5 Hz,1H),4.76-4.39(m,1H),3.47(d,J=6.2 Hz,2H),3.33(d,J=4.8 Hz,3H),2.98-2.43(m,4H),2.42-2.00(m,6H),1.99-1.88(m,2H),1.77-1.66(m,1H),1.64(s,3H),1.61-1.48(m,1H),1.44(d,J=8.1 Hz,3H),1.40(d,J=7.9 Hz,6H),1.28(dd,J=16.0,9.0 Hz,1H)。
步驟12：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-{[(3-{2-[5-(1-甲氧基-2-乙基丙-2-基)-1H-1,3-苯并二唑-2-基]乙基}環丁基)(甲基)胺基]甲基}氧雜環戊烷-3,4-二醇
令9-[(3aR,4R,6R,6aR)-6-{[(3-{2-[5-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-1H-1,3-苯并二唑-2-基]乙基}環丁基)(甲基)胺基]甲基}-2,2-二甲基-四氫-2H-呋喃[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基]-9H-嘌呤-6-胺(0.485 g,0.706 mmol，純度88%)溶解於MeOH(20 ml)中及於室溫加入濃縮的HCl(4.9 ml,10體積)及維持反應2.5 h。經於真空中濃縮反應及令殘留物溶解於最小量之MeOH(~2 ml)中。藉由加入飽和的NaHCO3溶液(10 ml)及EtOAc(30 ml)來驟止反應。使層分離及以EtOAc(2 x 30 ml)萃取含水層。以MgSO4乾燥合併的有機層，進行過濾及於真空中進行濃縮以得到粗製產物。藉由矽石快速層析法使用100% DCM及20%於MeOH中之2M NH3：80% DCM作為洗提液來純化產物以得到呈白色泡沫 之產物(0.213 g,53%)：針對C29H40N8O4MS(ESI+)m/z 565.4[M+H]+；LC純度100%(停留時間，2.11 min)(7 min)；1H NMR(500 MHz,d4-MeOD)δH 8.28(d,J=4.1 Hz,1H),8.22(d,J=3.2 Hz,1H),7.51(s,1H),7.42(dd,J=8.5,2.1 Hz,1H),7.29(dd,J=8.5,1.5 Hz,1H),6.01(t,J=3.9 Hz,1H),4.84-4.74(m,1H),4.41-4.29(m,1H),4.29-4.19(m,1H),3.48(s,2H),3.30(s,3H),3.14-2.98(m,1H),2.99-2.89(m,1H),2.90-2.73(m,2H),2.39(s,3H),2.37-2.30(m,1H),2.28-2.10(m,2H),2.08-1.86(m,4H),1.70-1.51(m,1H),1.38(s,6H)。
化合物69：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.06(s,1H),7.47(brs,1H),7.38(d,J=8.0 HZ,1H),7.27(d,J=8.0 Hz,1H),7.19(s,1H),6.60(s,1H),4.32(s,1H),3.88(s,1H),2.80(brs,2H),2.68(brs,1H),2.49-2.10(m,9H),1.90(brs,2H),1.62-1.49(m,3H),1.35(s,9H)ppm；ESI-MS(m/z)：532.3[M+1]+。
3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸苄酯
於30℃攪拌7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(胺基甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(20 g,43.91 mmol)、3-(3-氧雜環丁基)丙酸苄酯(12.2 g,52.69 mmol)及HOAc(15 mL)於DCE(200 mL)中之溶液持續3 h。加入NaBH(OAc)3(18.6 g,87.81 mmol)及於30℃攪拌反應混合物持續另外的1 h。以水(100 mL x 2)及鹵水(100 mL)清洗混合物，以Na2SO4進行乾燥，進行過濾及濃縮。藉由矽膠層析法使用EA：DCM：MeOH=10：10：1作為洗提液來純化殘留物以得到呈黃色固體之所欲的化合物(21 g，產率：65%，順式/反式=52/47)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.16(brs,1H),7.36-7.29(m,5H),7.22(d,J=3.5 Hz,1H),7.15(d,J=8.5 Hz,1H),6.66(brs,1H),6.54(d,J=2.0 Hz,1H),6.43(dd,J=8.5以及2.0 Hz,1H),6.20(brs,1H),5.41-5.39(m,1H),5.08(d,J=3.0 Hz,1H),4.99-4.95(m,1H),4.66(s,2H),4.30-4.25(m,1H),3.83(s,3H),3.76(s,3H),3.38-3.35(m,0.5H),3.11-3.06(m,0.5H),2.92-2.82(m,2H),2.29-2.18(m,3H),2.12-2.05(m,0.5H),1.90-1.68(m,4H),1.63-1.61(m,1H),1.60(s,3H),1.38(s,3H),1.35-1.28(m,0.5H),1.25(t,J=6.5 Hz,2H),1.15-1.12(m,0.5 H)ppm；ESI-MS(負模，m/z)：670.3[M-1]+。
3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)- 7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸苄酯
於回流溫度攪拌3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸苄酯(4 g,5.95 mmol)、2-碘丙烷(6 g,35.72 mmol)及K2CO3(2.5 g,17.86 mmol)於CH3CN(50 mL)中之混合物持續2天。使混合物冷卻至室溫，進行過濾及以CH3CN(20 mL)清洗濾餅。濃縮濾液及藉由全自動快速層析(Combi-Flash)(80 g矽膠，起始EA：DCM：MeOH=10：10：0至10：10：1梯度，60 mL/min,40 min,2.4 L之總溶劑體積)來純化殘留物以得到呈黃色固體之所欲的化合物(3 g，產率：71%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.15(s,1H),7.38-7.29(m,5H),7.19(d,J=4.0 Hz,1H),7.14(d,J=8.0 Hz,1H),6.65(d,J=3.0 Hz,1H),6.53(d,J=2.0 Hz,1H),6.41(dd,J=8.5以及2.0 Hz,1H),6.20(d,J=2.5 Hz,1H),5.36-5.32(m,1H),5.09(s,1H),5.07(s,1H),4.94-4.89(m,3H),4.65(s,2H),4.17-4.14(m,1H),3.82(s,3H),3.75(s,3H),3.41-3.35(m,0.5H),3.04-2.95(m,0.5H),2.94-2.86(m,1H),2.72-2.52(m,2H),2.25(t,J=7.5 Hz,1H),2.21(t,J=8.0 Hz,1H),2.05-1.90(m,2H),1.90-1.82(m,0.5H),1.76-1.70(m,0.5H),1.65-1.55(m,5H),1.42-1.34(m,4H),0.95(d,J=6.5 Hz,3H), 0.83-0.80(m,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：714.4[M+1]+。
3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸
添加於水(5 mL)中之LiOH.H2O(1.6 g,37.82 mmol)溶液至3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸苄酯(2.7 g,3.78 mmol)於THF/MeOH(15 mL/15 mL)中之溶液。於30℃混合物持續攪拌2 h。於減壓下移除揮發成分。以水(10 mL)過濾殘留物及以EA(15 mL×2)進行萃取。以1 N HCl溶液調整懸浮液之水層至pH=3-4及以EA(30 mL×3)進行萃取。以鹵水(50 mL)清洗合併的有機層。以Na2SO4乾燥有機相，進行過濾及濃縮以得到呈黃色固體之所欲的化合物(2.9 g)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.20(s,1H),7.92(s,0.5H),7.38-7.32(m,3H),7.28-7.23(m,1.5H),7.14(d,J=8.5 Hz,1H),6.68(brs,1H),6.56(d,J=2.0 Hz,1H),6.44(d,J=8.5 Hz,1H),6.25(s,1H),5.51-5.47(m,1H),5.18-5.13(m,1H),4.66(s,2H),4.61(s,1H),4.43-4.40(m,1H),3.96-3.90(m,0.5H),3.85(s,3H),3.77(s,3H),3.65-3.58(m,0.5H),3.50-3.40(m,2H),2.46-2.36(m,1H),2.20-2.00(m,4H),1.98-1.70(m,2.5H),1.70-1.58(m,4.5H),1.40(s,3H), 1.18(d,J=5.0 Hz,3H),0.90(t,J=6.0 Hz,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：624.3[M+1]+。
N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙醯胺
添加TEA(1.8 mL,12.99 mmol)至3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸(2.7 g,4.33 mmol)、4-(三氟甲氧基)苯-1,2-二胺(1.23 g,6.49 mmol)、HATU(2.5 g,6.49 mmol)及HOAT(0.88 g,6.49 mmol)於DCM(30 mL)中之溶液。於室溫攪拌混合物持續2 h。添加DCM(70 mL)至混合物及以水(20 mL×2)及鹵水(50 mL)進行清洗。以Na2SO4乾燥有機相，進行過濾及濃縮。藉由全自動快速層析(80 g矽膠，起始EA：DCM：MeOH=10：10：0至10：10：2梯度，60 mL/min,40 min,2.4 L總溶劑體積)來純化殘留物以得到以得到呈棕色固體之所欲的化合物(2.2 g，產率：67%(兩個步驟)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.21(s,1H),7.28-7.12(m,3H),6.73(brs,1H),6.69(brs,1H),6.56-6.52(m,2H),6.42(dd,J=8.0以及2.5 Hz,1H),6.26(d,J=1.5 Hz,1H),5.48(d,J=6.0 Hz,1H),5.20-5.16(m,1H),4.66(s,2H),4.46-4.42(m,1H),4.08- 3.98(m,0.5H),3.84(s,3H),3.76(s,3H),3.75-3.69(m,0.5H),3.60-3.38(m,2H),2.60-2.30(m,3H),1.92-1.86(m,1H),1.80-1.70(m,1H),1.59(d,J=3.5 Hz,3H),1.40(s,3H),1.25(t,J=7.5 Hz,3H),),1.00-0.80(m,2H)ppm；ESI-MS(m/z)：798.3[M+1]+。
N-(2,4-二甲氧基苄基)-7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((異丙基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
於65℃攪拌N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙醯胺(2.2 g,2.5 mmol)於HOAc(20 mL)中之溶液持續5 h。將混合物冷卻至室溫及進行濃縮。令殘留物溶解於DCM(50 mL)中，以15% Na2CO3溶液(20 mL×2)、水(20 mL)及鹵水(30 mL)進行清洗。以Na2SO4乾燥有機相，進行過濾及濃縮。藉由全自動快速層析(80 g矽膠，起始EA：DCM：MeOH=10：10：0至10：10：2梯度，60 mL/min,35 min,2.1 L總溶劑體積)來純化殘留物以得到呈棕色固體之所欲的化合物(1.4 g)，其係經掌性HPLC分離以得到順式-異構物(600 mg，產率：28%)及反式異構物(480 mg，產率：22%)。
順式-異構物：1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.17(s,1H),7.52(d,J=9.0 Hz,1H),7.39(s,1H),7.20(d,J=4.0 Hz,1H),7.12(d,J=8.0 Hz,1H),6.68(brs,1H),6.49(d,J=2.5 Hz,1H),6.39(dd,J=8.5以及2.0 Hz,1H),6.19(d,J=2.0 Hz,1H),5.35(dd,J=6.0以及2.0 Hz,1H),4.68-4.60(m,2H),4.18-4.13(m,1H),3.78(s,3H),3.73(s,3H),3.10-3.02(m,1H),2.95-2.88(m,1H),2.78-2.72(m,2H),2.69-2.57(m,2H),2.12-2.02(m,2H),1.86-1.76(m,2H),1.57(s,3H),1.52-1.40(m,2H),1.37(s,3H),0.96(d,J=6.5 Hz,3H),0.82(d,J=6.5 Hz,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：780.4[M+1]+。
反式-異構物：1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.15(s,1H),7.52(d,J=9.0 Hz,1H),7.40(s,1H),7.20(d,J=3.5 Hz,1H),7.12(d,J=8.0 Hz,1H),6.68(brs,1H),6.51(d,J=2.0 Hz,1H),6.40(dd,J=8.0以及2.5 Hz,1H),6.20(d,J=2.5 Hz,1H),5.35(dd,J=6.0以及2.0 Hz,1H),4.64(s,2H),4.20-4.16(m,1H),3.82(s,3H),3.73(s,3H),3.50-3.42(m,1H),2.95-2.90(m,1H),2.80(t,J=6.0 Hz,2H),2.75-2.58(m,2H),2.12-1.95(m,4H),1.75-1.65(m,2H),1.58(s,3H),1.38(s,3H),0.97(d,J=6.5 Hz,3H),0.83(d,J=6.5 Hz,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：780.4[M+1]+。
化合物70：(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧 啶-7-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸甲酯
利用AcOH將3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸甲酯(1.85 g,3.12 mmol)及NaBH3CN(590 mg,9.36 mmol)於MeOH(25 mL)中之溶液調整至pH=6，接者加入甲醛(936 mg,31.2 mmol)。於25℃攪拌反應過夜。以飽和的NaHCO3(5 mL)驟止反應，進行蒸發，加入水(10 mL)，以DCM(150 mL×3)進行萃取，以鹵水(80 mL)進行清洗，進行乾燥及濃縮。藉由SGC來純化殘留物以得到呈白色固體之所欲的化合物(1.85 g，產率97%)。1H NMR(500MHz,MeOD)：δH 8.12(s,1H),7.22(d,J=3.5 Hz,1H),7.14(d,J=8.5 Hz,1H),6.64(d,J=3.0 Hz,1H),6.55(d,J=2.5 Hz,1H),6.44(dd,J=8.5以及 2.5 Hz,1H),5.01-4.98(m,2H),4.65(s,2H),4.60-4.58(m,1H),4.30(s,1H),3.84(s,3H),3.76(s,3H),3.66(s,3H),3.44-3.38(m,1H),2.80-2.73(m,2H),2.48-2.43(m,4H),2.32(t,J=7.5 Hz,2H),2.20-2.16(m,4H),1.95-1.94(m,2H),1.82-1.81(m,2H),1.56(s,3H),1.31(s,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：608.3[M+1]+。
3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸
於50℃攪拌3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸甲酯(1.85 g,3.04 mmol)及LiOH(382 mg,15.24 mmol)於THF/MeOH/H2O(1：1：1,30 mL)中之溶液持續2 h。濃縮反應，以得到呈白色固體之所欲的化合物(2.25 g，鹽，純度85%)。使用粗製產於下一個步驟而無需進一步的純化。1H NMR(500MHz,MeOD)：δH 8.11(s,1H),7.92(s,1H),7.30(d,J=3.0 Hz,1H),7.14(d,J=8.0 Hz,1H),6.67(d,J=3.0 Hz,1H),6.54(d,J=2.0 Hz,1H),6.44(dd,J=10.0以及2.5 Hz,1H),5.05-5.03(m,2H),4.73(d,J=6.0 Hz,1H),4.65(s,2H),3.90-3.85(m,1H),3.85(s,3H),3.77(s,3H),3.30-3.18(m,2H),2.82 (s,3H),2.65-2.55(m,1H),2.53-2.46(m,3H),2.27-2.20(m,3H),2.12-2.11(m,2H),1.83-1.82(m,2H),1.57(s,3H),1.32(s,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：594.3[M+1]+。
N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙醯胺
於室溫攪拌3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸(2.25 g,3.8 mmol)、HOAt(680 mg,5 mmol)及HATU(1.9 g,5 mmol)於DCM(60 mL)中之溶液持續1 h，接著逐滴加入於DCM(3 mL)中之4-第三-丁基苯二胺(656 mg,4 mmol)及TEA(1.21 g,12 mmol)。於室溫下攪拌反應過夜。添加水(20 mL)及DCM(60 mL)至反應，以DCM(60 mL×2)進行萃取，以鹵水(10 mL)進行清洗，進行乾燥及濃縮。藉由SGC來純化殘留物以得到呈帶有黃色之固體之所欲的化合物(1.1 g，產率46%)。1H NMR(500MHz,MeOD)：δH 8.11(s,1H),7.21(d,J=4.0 Hz,1H),7.13(d,J=8.5 Hz,1H),6.98(d,J=8.5 Hz,1H),6.92(d,J=2.0 Hz,1H),6.77(dd,J=8.0以及1.5 Hz,1H),6.64(d,J=3.5 Hz,1H),6.54(d,J=2.0 Hz,1H),6.43(dd,J=8.0以及1.5 Hz,1H),5.02-4.99(m,2H),4.65- 4.61(m,3H),3.83(s,3H),3.75(s,3H),3.60-3.52(m,1H),2.97-2.83(m,2H),2.58(s,3H),2.54-2.38(m,4H),2.33-2.29(m,2H),2.18-2.04(m,3H),1.94-1.91(m,2H),1.55(s,3H),1.30(s,3H),1.25(s,9H)ppm；ESI-MS(m/z)：740.5[M+1]+。
7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
將N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-((1R,3s)-3-((((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙醯胺(1.1 g,1.49 mmol)於AcOH(8 mL)中之溶液加熱至65℃持續3 h。蒸發反應，令其溶解於MeOH(5 mL)中且以飽和NaHCO3溶液調整成pH=8，進行濃縮及藉由製備型TLC進行純化以得到呈白色固體之所欲的化合物(620 mg,58%)。1H NMR(500MHz,MeOD)：δH 8.10(s,1H),7.48(brs,1H),7.38(brs,1H),7.28(d,J=8.5 Hz,1H),7.21(d,J=3.0 Hz,1H),7.13(d,J=8.5 Hz,1H),6.62(brs,1H),6.53(s,1H),6.42(d,J=8.5 Hz,1H),4.98-4.90(m,2H),4.64(s,2H),4.50(brs,1H),3.83(s,3H),3.75(s,3H),3.01-2.98(m,1H),2.83(d,J=7.5 Hz,1H),2.44-2.34(m,4H),2.16 (s,3H),2.12-1.96(m,6H),1.84(t,J=7.5 Hz,2H),1.53(s,3H),1.36(s,9H),1.28(s,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：722.4[M+1]+。
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
於25℃攪拌7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊[d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(620 mg,0.86 mmol)於TFA(5 mL,90%)中之溶液持續1小時。使反應濃縮至乾燥，令其溶解於MeOH(5 mL)中並以飽和K2CO3溶液將其調整為pH=8。於室溫攪拌混合物持續0.5 h。接著濃縮反應以得到殘留物。藉由製備型HPLC來純化殘留物以得到呈白色固體之所欲的化合物(330 mg，產率73%)。1H NMR(500MHz,MeOD)：δH 8.07(s,1H),7.49(d,J=1.5 Hz,1H),7.40(d,J=11.0 Hz,1H),7.29(dd,J=11.0以及2.5 Hz,1H),7.21(d,J=5.0 Hz,1H),6.60(d,J=4.0 Hz,1H),4.92-4.89(m,1H),4.33(dd,J=9.5以及8.5 Hz,1H),3.90(d,J=5.5 Hz,1H),3.03-2.99(m,1H),2.85(d,J=9.5 Hz,1H),2.50-2.22(m,4H),2.16(s,3H),2.15-1.98(m,5H),1.88(t,J=10.0 Hz,2H),1.68-1.59(m,1H),1.37(s,9H)ppm；ESI-MS(m/z)： 532.3[M+1]+。
化合物71：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
於35℃攪拌順式-9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(920 mg,1.60 mmol)於3 M HCl/MeOH(20 mL)中之混合物持續2 h及進行蒸發而乾燥。令殘留物溶解於MeOH(15 mL)中及加入飽和的K2CO3溶液以調整成pH 8。然後，攪拌混合物持續5 min及進行過濾。濃縮濾液以及藉由製備型HPLC來純化粗製產物以得到呈白色固體之標的(400 mg，產率：47%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.27(s,1H),8.20(s,1H),7.47(s,1H),7.47(s,1H),7.40-7.37(m,1H),7.29-7.26(m,1H),5.98(d,J=4.5 Hz,1H),4.69(t,J=4.5 Hz,1H),4.24-4.20(m,1H),4.18-4.15(m,1H),2.81-2.76(m,2H),2.75-2.69(m,1H),2.67-2.62(m,2H),2.25-2.18(m,1H), 2.14(s,3H),1.90-1.85(m,3H),1.49-1.41(m,2H),1.36(s,9H)ppm；ESI-MS(m/z)：535.3[M+1]+。
化合物72：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
於35℃攪拌反式-9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(420 mg,0.73 mmol)於3 M HCl/MeOH(20 mL)中之混合物持續2 h以及進行蒸發而乾燥。令殘留物溶解於MeOH(15 mL)中及加入飽和的K2CO3溶液以將溶液調整成pH 8。然後攪拌混合物持續5 min及進行過濾。濃縮濾液及藉由製備型HPLC來純化粗製產物以得到呈白色固體之標的(198 mg，產率：51%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.28(s,1H),8.19(s,1H),7.48(s,1H),7.38(d,J=8.0 Hz,1H),7.28-7.26(m,1H),5.98(d,J=4.0 Hz,1H),4.69(t,J=5.5 Hz,1H),4.23(t,J=5.0 Hz,1H),4.19-4.16(m,1H),3.06-3.03(m,1H),2.80 (t,J=7.5 Hz,2H),2.68-2.64(m,2H),2.16(s,3H),2.09-1.95(m,5H),1.85-1.80(m,2H),1.36(s,9H)ppm；ESI-MS(m/z)：535.3[M+1]+。
3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(乙基)胺基)環丁基)丙酸苄酯
添加AcOH至混合物3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸苄酯(3.76 g,7.2 mmol)及NaBH3CN(5.9 g,93.6 mmol)於MeOH(40 mL)中之混合物以調整成pH=6。接著添加40% MeCHO(8.7 mL,122.5 mmol)及於30℃攪拌混合物持續1.5 h。加入水(15 mL)及於真空中濃縮混合物。然後以DCM(30 mL×3)萃取混合物。以鹵水清洗合併的有機相，以Na2SO4進行乾燥，進行過濾及濃縮。藉由SGC(DCM：MeOH=100：1-20：1)來純化粗製產物以得到呈白色固體之標的(2.6 g，產率：66%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.26(s,1H),8.23(m,1H),7.37-7.28(m,5H),6.24(s,1H),5.52-5.49(m,1H),5.10-5.06(m,3H),4.41-4.40(m,1H),3.20-2.90(m,2H),2.80-2.60(m,2H),2.12-1.77(m,4H),1.74-1.60(m,3H),1.39(s,3H),1.26-1.22(m,3H),0.94-0.89(m,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：551.3[M+1]+。
3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(乙基)胺基)環丁基)丙酸
添加10% Pd/C(2.3 g)至3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(乙基)胺基)環丁基)丙酸苄酯(2.6 g,4.73 mmol)於MeOH(40 mL)中之溶液及於氣體環境中、於50℃攪拌混合物持續20 h。過濾混合物及濃縮濾液以得到呈白色固體之標的(2 g，產率：92%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.27(s,1H),8.25(s,1H),6.30(s,1H),5.52-5.49(m,1H),5.14-5.12(m,1H),4.51-4.47(m,1H),3.43-3.36(m,2H),3.22-3.15(m,1H),2.94-2.89(m,2H),2.28-2.05(m,4H),1.96-1.80(m,2H),1.74-1.69(m,1H),1.65-1.59(m,5H),1.41-1.36(m,4H),1.03-0.99(m,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：461.3[M+1]+。
N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(乙基)胺基)環丁基)丙醯胺
添加4-第三-丁基苯-1,2-二胺(785 mg,4.79 mmol)至3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(乙基)胺基)環丁基)丙酸(2 g,4.35 mmol)、HOAT(768 mg,5.65 mmol)、HATU(2.2 g,5.65 mmol)及TEA(3 mL,21.3 mmol)於DCM(40 mL)中之溶液，及於室溫攪拌混合物2 h。加入水(15 mL)及以DCM(30 mL×2)萃取混合物。H2O(20 mL×2)清洗合併的有機相。以Na2SO4乾燥合併的有機層，進行過濾及濃縮。藉由SGC(DCM：MeOH=70：1-20：1)來純化粗製產物以得到呈白色固體之標的(1.6 g，產率：61%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.28-8.27(m,1H),8.24-8.23(m,1H),7.10-6.92(m,2H),6.81-6.76(m,1H),6.22(s,1H),5.54-5.52(m,1H),5.03(s,1H),4.36(s,1H),3.03-2.50(m,5H),2.32-2.26(m,2H),2.16-1.80(m,4H),1.73-1.69(m,2H),1.59(s,3H),1.39(s,3H),1.28-1.24(m,9H),0.94-0.85(m,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：607.3[M+1]+。
9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(乙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺
於65℃攪拌N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(乙基)胺基)環丁基)丙醯胺(1.6 g,2.64 mmol)於AcOH(20 mL)中之溶液持續15 h。於真空中濃縮溶液及以DCM(30 mL)進行稀釋。以飽和的NaHCO3溶液(20 mL×2)及鹵水(20 mL×1)清洗混合物。以Na2SO4乾燥合併的有機相，進行過濾及濃縮以得到呈白色固體之標的1.5 g(產率：97%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.28-8.26(m,1H),8.22(s,1H),7.48(s,1H),7.40-7.38(m,1H),7.30-7.27(m,1H),6.20-6.18(m,1H),5.52-5.49(m,1H),5.02-4.98(m,1H),4.34-4.31(m,1H),2.95-2.92(m,1H),2.79-2.68(m,4H),2.56-2.50(m,2H),2.09-1.81(m,5H),1.71-1.63(m,1H),1.58(s,3H),1.38(s,3H),1.36(s,9H),1.35-1.28(m,1H),0.89-0.85(m,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：589.3[M+1]+。
於35℃攪拌9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(乙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(1.35 g,2.30 mmol)於3 M HCl/MeOH(20 mL)中之混合物持續2 h及進行蒸發而乾燥。令殘留物溶解於MeOH(15 mL)中及加入飽和的K2CO3溶液以調整溶液成pH 8。然後攪拌混合物持續5 min及進行過濾。濃縮濾液及藉由掌性HPLC來分離粗製產物以及藉由製備型HPLC進行純化以得到呈白色固體之順式產物(280 mg，總產率：22%)以及反式產物(150 mg，總產率：12%)。
化合物73：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(乙基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
順式-異構物：1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.27(s,1H),8.20(s,1H),7.47(s,1H),7.39-7.37(m,1H),7.29-7.26(m,1H),5.97(d,J=4.5 Hz,1H),4.67(t,J=5.0 Hz,1H),4.24(t,J=5.5 Hz,1H),4.18-4.14(m,1H),3.06-3.03(m,1H),2.91-2.81(m,2H),2.79-2.75(m,2H),2.64-2.58(m,2H),2.25-2.19(m,1H),1.89-1.86(m,3H),1.52-1.47(m,2H),1.36(s,9H),0.98(t,J=7.0 Hz,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：549.3[M+1]+。
化合物74：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(乙基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
反式-異構物：1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.28(s,1H),8.20(s,1H),7.48(s,1H),7.39-7.37(m,1H),7.29- 7.26(m,1H),5.97(d,J=4.0 Hz,1H),4.67(t,J=5.0 Hz,1H),4.24(t,J=6.0 Hz,1H),4.18-4.14(m,1H),3.42-3.35(m,1H),2.91-2.78(m,4H),2.64-2.58(m,2H),2.10-2.07(m,3H),1.99-1.96(m,2H),1.85-1.79(m,2H),1.35(m,9H),0.98(t,J=6.5 Hz,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：549.3[M+1]+。
化合物76：(2R,3R,4S,5R)-2-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((異丙基((1s,3R)-3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
於30℃攪拌反式-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((異丙基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(480 mg,0.62 mmol)於90% TFA(5 mL)中之溶液持續2 h。於減壓下移除揮發成分。添加MeOH(6 mL)至殘留物及以NH3.H2O進行調整成pH=9~10。於室溫攪拌混合物持續30 min及進行濃縮。藉由HPLC來純化殘留物以 得到呈白色固體之所欲的化合物(182 mg，產率：50%)。1H NMR(400 MHz,MeOD)：δH8.09(s,1H),7.52(d,J=8.8 Hz,1H),7.39(s,1H),7.27(d,J=3.6 Hz,1H),7.12(d,J=8.8 Hz,1H),6.64(d,J=3.2 Hz,1H),6.11(d,J=4.0 Hz,1H),4.44(t,J=4.8 Hz,1H),4.12(t,J=6.0 Hz,1H),4.06-4.01(m,1H),3.62-3.53(m,1H),3.10-3.00(m,1H),2.92-2.65(m,4H),2.25-2.15(m,2H),2.10-1.98(m,3H),1.85-1.76(m,2H),1.03(d,J=6.4 Hz,3H),0.98(d,J=6.4 Hz,3H)ppm；19F NMR(400 MHz,MeOD)：δ-59.80 ppm；ESI-MS(m/z)：590.3[M+1]+。
化合物77以及78
化合物78：(2R,3R,4S,5R)-2-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(2,2,2-三氟乙基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇：
1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.09(s,1H),7.48(brs,1H),7.40-7.37(m,1H),7.28(dd,J=10.5以及1.5 Hz,1H),7.21(d,J=4.5 Hz,1H),6.65(d,J=4.5 Hz,1H),6.11(d,J=5.0 Hz,1H),4.44(t,J=6.0 Hz,1H),4.13-4.08(m,2H),3.30-3.15(m,3H),3.09-3.03(m,1H),2.97-2.90(m,1H),2.78(t,J=9.0 Hz,2H),2.28-2.20(m,2 H),1.92-1.78(m,3H),1.55-1.45(m,2H),1.37(s,9H)ppm；LC-MS(m/z)：602.3[M+1]+。
化合物77：(2R,3R,4S,5R)-2-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(2,2,2-三氟乙基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇：
1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.09(s,1H),7.48(brs,1H),7.39(d,J=10.5 Hz,1H),7.28(dd,J=10.5以及 2.0 Hz,1H),7.21(d,J=5.0 Hz,1H),6.64(d,J=4.5 Hz,1H),6.12(d,J=6.0 Hz,1H),4.45(t,J=6.0 Hz,1H),4.14-4.09(m,2H),3.68-3.60(m,1H),3.30-3.15(m,2H),3.11-3.04(m,1H),2.97-2.90(m,1H),2.80(t,J=9.5 Hz,2H),2.12-2.03(m,3 H),2.00-1.90(m,2H),1.90-1.80(m,2H),1.36(s,9H)ppm；LC-MS(m/z)：602.3[M+1]+。
3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸苄酯
添加AcOH至3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸苄酯(3.76 g,7.2 mmol)及NaBH3CN(5.9 g,93.6 mmol)MeOH(40 mL)中之溶液以調整成pH=6。然後，加入37% HCHO(8.7 mL,122.4 mmol)及於30℃攪拌混合物持續1.5 h。加入水(15 mL)及於真空中濃縮混合物。然後以DCM(30 mL×3)萃取混合物。以鹵水清洗合併的有機相，以Na2SO4進行乾燥，進行過濾及濃縮。藉由SGC(DCM：MeOH=100：1-20：1)來純化粗製產物以得到呈白色固體之標的(2.4 g，產率：67%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.27(s,1H),8.22(d,J=2.5 Hz,1H),7.35-7.30(m,5H),6.22(s,1H),5.55-5.52(m,1H),5.09(s,2H),5.04-5.01(m,1H),4.40-4.38(m,1H),2.76-2.65(m,3H),2.29-2.22(m,2H),2.18(s,3H),2.11- 1.95(m,2H),1.78-1.71(m,2H),1.64-1.61(m,2H),1.59(s,3H),1.41-1.39(m,1H),1.38(s,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：537.3[M+1]+。
3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸
添加10% Pd/C(2.3 g)至3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸苄酯(2.4 g,4.48 mmol)於MeOH(40 mL)中之溶液及於H2氣體環境中、於50℃攪拌混合物持續15 h。過濾混合物及濃縮濾液以得到呈白色固體之標的(1.9 g，產率：95%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.27(s,1H),8.24(s,1H),6.27(s,1H),5.54-5.52(m,1H),5.09-5.07(m,1H),4.50-4.47(m,1H),3.17-3.07(m,2H),3.02-2.90(m,1H),2.39-2.35(m,3H),2.31-2.05(m,4H),1.91-1.70(m,2H),1.64-1.51(m,5H),1.39(s,3H),1.23-1.15(m,1H)ppm；ESI-MS(m/z)：447.2[M+1]+。
N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙醯胺
添加4-第三-丁基苯-1,2-二胺(769 mg,4.69 mmol) 至3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸(1.9 g,4.26 mmol)、HOAT(753 mg,5.54 mmol)、HATU(2.1 g,5.54 mmol)及TEA(3 mL,21.3 mmol)於DCM(40 mL)中之溶液及於室溫攪拌混合物持續2 h。加入水(15 mL)及以DCM(30 mL×2)萃取混合物。以H2O(20 mL×2)清洗合併的有機相。以Na2SO4乾燥合併的有機層，進行過濾及濃縮。藉由SGC(DCM：MeOH=70：1-20：1)來純化粗製產物以得到呈白色固體之標的(1.8 g，產率：72%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.28(s,1H),8.23(d,J=3.0 Hz,1H),7.10-6.92(m,2H),6.81-6.76(m,1H),6.21(s,1H),5.56(s,1H),5.49(d,J=3.0 Hz,1H),5.01(s,1H),4.36(s,1H),2.69-2.49(m,3H),2.31-2.27(m,2H),2.13-2.00(m,5H),1.88-1.81(m,2H),1.75-1.65(m,2H),1.60(s,3H),1.41-1.35(m,4H),1.28-1.25(m,9H)ppm；ESI-MS(m/z)：593.4[M+1]+。
9-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(甲基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺
於65℃攪拌N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基 )環丁基)丙醯胺(1.8 g,3.04 mmol)於AcOH(20 mL)中之溶液持續15 h。於真空中濃縮溶液及以DCM(30 mL)進行稀釋。以飽和NaHCO3溶液(20 mL×2)及鹵水(20 mL×1)清洗混合物。以Na2SO4乾燥合併的有機相，進行過濾及濃縮以得到所欲的產物1.7 g(產率：97%)。
藉由掌性HPL分離所得的產物以得到920 mg之順式-異構物及420 mg之反式-異構物。
順式-異構物：1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.27(s,1H),8.21(s,1H),7.48(s,1H),7.40-7.38(m,1H),7.29-7.26(m,1H),6.19(d,J=2.5 Hz,1H),5.55-5.52(m,1H),4.99-4.97(m,1H),4.35-4.31(m,1H),2.77-2.73(m,2H),2.62-2.46(m,3H),2.10-2.01(m,4H),1.84-1.81(m,3H),1.58(s,3H),1.38-1.36(m,12H),1.19-1.14(m,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：575.3[M+1]+。
反式-異構物：1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.28(s,1H),8.21(s,1H),7.48(s,1H),7.40-7.38(m,1H),7.30-7.27(m,1H),6.19(d,J=1.5 Hz,1H),5.55-5.52(m,1H),5.01-4.98(m,1H),4.36-4.34(m,1H),2.96-2.92(m,2H),2.77(t,J=7.5 Hz,2H),2.58-2.50(m,2H),2.09(s,3H),2.04-1.90(m,4H),1.82-1.79(m,1H),1.70-1.66(m,2H),1.59(s,3H),1.38(s,3H),1.36(s,9H)ppm；ESI-MS(m/z)：575.3[M+1]+。
化合物87：(2R,3R,4S,5R)-2-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧 啶-7-基)-5-((異丙基((1r,3S)-3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
於30℃攪拌順式-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-((異丙基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(600 mg,0.77 mmol)於90% TFA(5 mL)中之溶液持續2 h。於減壓下移除揮發成分。添加MeOH(6 mL)至殘留物及以NH3.H2O進行調整成pH=9~10。於室溫攪拌混合物持續30 min以及進行濃縮。藉由製備型HPLC來純化殘留物以得到呈白色固體之所欲的化合物(260 mg，產率：57%)。1H NMR(400 MHz,MeOD)：δH8.09(s,1H),7.52(d,J=8.8 Hz,1H),7.39(s,1H),7.27(d,J=4.0 Hz,1H),7.12(dd,J=8.4以及0.8 Hz,1H),6.64(d,J=4.0 Hz,1H),6.12(d,J=4.4 Hz,1H),4.43(t,J=5.2 Hz,1H),4.11(t,J=5.2 Hz,1H),4.05-4.01(m,1H),3.20-3.10(m,1H),3.08-3.00(m,1H),2.88-2.65(m,4H),2.25-2.15(m,2H),1.92-1.82(m,3H),1.65-1.55(m,2H),1.02(d,J=6.4 Hz,3H),0.98(d,J=6.4 Hz,3H)ppm；19F NMR(400 MHz,MeOD)：δ-59.80 ppm；ESI-MS(m/z)：590.3[M+1]+。
化合物90以及75：
3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸苄酯
添加整份之NaB(OAc)3H(2.33 g,11 mmol)至7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(胺基甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(2.5 g,5.49 mmol)、3-(3-氧雜環丁基)丙酸苄酯(1.66 g,7.14 mmol)及HOAc(329 mg,5.49 mmol)於DCE(40 mL)中之溶液。於室溫攪拌所得的反應混合物過夜。添加飽和的含水NaHCO3(40 mL)以驟止反應，然後以DCM(50 mL×3)進行萃取，以無水Na2SO4進行乾燥及進行濃縮。藉由SGC(DCM：MeOH=100：1至50：1)來純化粗製產物以得到呈白色固體之所欲的化合物(2.3 g，產率：64%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.14(d,J=2.5 Hz,1H),7.35-7.28(m,5H),7.20(d,J=4.0 Hz,1H),7.13(d,J=8.0 Hz,1H),6.64(d,J=3.0 Hz,1H),6.53(d,J=2.0 Hz,1H),6.42(d,J=8.5 Hz,1H),6.18(d,J=2.5 Hz,1H),5.40-5.39(m,1H),5.08-5.07(m,2H),4.96-4.94(m,1H),4.64(s,2H),4.26-4.24(m,1H),3.82(s,3H),3.75(s,3H),3.10-3.05(m,0.55H),2.86-2.82(m,2H), 2.26-2.20(m,3 H),2.10-1.59(m,5H),1.58(s,3H),1.37(s,3H),1.35-1.25(m,0.6H),1.15-1.08(m,0.5H)ppm；LC-MS(m/z)：672.4[M+1]+。
3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸苄酯
於密封管中令3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)胺基)環丁基)丙酸苄酯(2.3 g,3.43 mmol)與K2CO3(3.3 g,24 mmol)及於MeCN(25 mL)中之2-碘丙烷(5.8 g,34.3 mmol)混合，然後邊攪拌邊加熱至95℃持續20 h。過濾反應混合物及以MeCN(30 mL)進行淋洗，於真空中蒸發濾液以得到呈白色固體之所欲的化合物(2.1 g，產率：88%)，其係使用於下一個步驟而無需進一步的純化。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.13(s,1H),7.35-7.29(m,5H),7.18(d,J=3.0 Hz,1H),7.13(d,J=8.5 Hz,1H),6.64(d,J=3.0 Hz,1H),6.53(d,J=2.5 Hz,1H),6.41(dd,J=8.5 以及2.5 Hz,1H),6.18(d,J=2.5 Hz,1H),5.33-5.32(m,1H),5.08-5.06(m,2H),4.90-4.89(m,1H),4.64(s,2H),4.15-4.14(m,1H),3.83(s,3H),3.75(s,3H),3.37-3.36(m,0.43H),3.01-2.98(m,0.59H),2.92-2.88(m,1H), 2.70-2.40(m,3 H),2.24-2.18(m,2 H),2.10-1.80(m,3 H),1.75-1.69(m,2H),1.61-1.52(m,5H),1.38(s,3H),0.94(d,J=6.5 Hz,3H),0.81-0.79(m,3 H)ppm；LC-MS(m/z)：714.0[M+1]+。
3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸
令3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸苄酯溶解於(1.5 g,2.1 mmol)MeOH(25 mL)中，加入Pd/C(10%於炭上，70%水，742 mg)及於1 atm之H2中、於35℃攪拌所得的混合物過夜。接著過濾混合物及以MeOH(15 mL×3)進行淋洗，於真空中蒸發濾液以得到呈白色固體之所欲的化合物(1.12 g，產率：85%)，其係用於下一個步驟而無需進一步的純化。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.18(s,1H),7.90(s,1H),7.35-7.32(m,1H),7.23-7.22(m,1H),7.12(d,J=8.5 Hz,1H),6.66(brs,1H),6.54(d,J=2.0 Hz,1H),6.43-6.41(m,1H),6.24-6.23(m,1H),5.47-5.46(m,1H),5.13-5.12(m,2H),4.64(s,2H),4.41-4.37(m,1H),3.84(s,3H),3.75(s,3H),3.64-3.58(0.6H),3.46-3.40(m,1.7H),2.45-1.60(m,9H),1.57(s,3H),1.38(s,3H),1.11(d,J=7.0 Hz,3H),0.87(d,J=6.5 Hz,3H)ppm；LC-MS(m/z)：624.0[M+1]+。
N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙醯胺
逐滴加入4-第三-丁基苯-1,2-二胺(433 mg,2.64 mmol)及TEA(533 mg,5.28 mmol)於DCM(10 mL)中之溶液至3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙酸(1.1 g,1.76 mmol)、HATU(1 g,2.64 mmol)、HOAT(359 mg,2.64 mmol)於DCM(30 mL)中之溶液，然後於室溫攪拌所得的反應混合物過夜。於以DCM(50 mL)進行稀釋之後，以水(30 mL×3)清洗混合物，進行乾燥及濃縮。藉由SGC(DCM：MeOH=100：1至40：1)來純化粗製產物以得到呈白色固體之所欲的化合物(680 mg，產率：50%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.16(s,1H),7.19(d,J=3.5 Hz,1H),7.14-7.10(m,1.7H),6.99-6.97(m,0.6H),6.92(s,0.6H),6.77(dd,J=8.0,2.0 Hz,1H),6.66-6.65(m,1H),6.54-6.53(m,1H),6.42(d,J=8.0 Hz,1H),6.20(d,J=2.0 Hz,1H),5.36-5.35(m,1H),4.96-4.95(m,1H),4.65(s,2H),3.83(s,3H),3.75(s,3H),3.17-2.73(m,4H),2.33-1.71(m,8H),1.58(s,3H),1.53-1.50(m,1H),1.38 (s,3H),1.28(s,9H),1.0(d,J=5.5 Hz,3H),0.84(d,J=5.0 Hz,3H)ppm；LC-MS(m/z)：770.0[M+1]+。
7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺
令N-(2-胺基-4-(第三-丁基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(4-((2,4-二甲氧基苄基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(異丙基)胺基)環丁基)丙醯胺(670 mg,0.87 mmol)溶解於HOAc(8 mL)中，然後邊攪拌邊加熱至65℃過夜。於真空中移除溶劑。令殘留物溶解於DCM(60 mL)中，接著以NaHCO3(飽和的20 mL)及水(20 mL)進行清洗，乾燥有機相及進行濃縮。藉由製備型TLC(DCM：MeOH=10：1)來純化粗製產物以得到呈白色固體之所欲的化合物(470 mg，產率：73%)，其係接著藉由掌性HPLC而被分離以得到呈白色固體之順式(243 mg)及反式異構物(180 mg)。
順式-異構物：1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.15(s,1H),7.47(s,1H),7.38-7.37(m,1H),7.27(dd,J=8.5以及1.5 Hz,1H),7.17(d,J=4.0 Hz,1H),7.10(d,J=8.5 Hz,1H),6.65(d,J=3.0 Hz,1H),6.49(d,J=2.5 Hz,1H),6.38(dd,J=8.0以及2.5 Hz,1H),6.18(d,J=2.5 Hz, 1H),5.33(dd,J=6.5以及2.5 Hz,1H),4.92-4.91(m,1H),4.63(s,2H),4.16-4.15(m,1H),3.78(s,3H),3.72(s,3H),3.08-3.07(m,1H),2.97-2.96(m,1H),2.72-2.66(m,4H),2.09-2.03(m,2 H),1.82-1.78(m,3H),1.56(s,3H),1.48-1.40(m,2H),1.38(s,3H),1.36(s,9H),0.95(d,J=7.0 Hz,3H),0.81(d,J=6.5 Hz,3H)ppm；LC-MS(m/z)：752.0[M+1]+。
反式-異構物：1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.14(s,1H),7.47(s,1H),7.38-7.37(m,1H),7.27(dd,J=8.5以及1.5 Hz,1H),7.18(d,J=3.5 Hz,1H),7.10(d,J=8.0 Hz,1H),6.64(d,J=4.0 Hz,1H),6.50(d,J=2.0 Hz,1H),6.39-6.37(m,1H),6.18(d,J=2.0 Hz,1H),5.33(dd,J=6.0以及2.5 Hz,1H),4.90(dd,J=6.5以及3.5 Hz,1H),4.62(s,2H),4.17-4.15(m,1H),3.80(s,3H),3.71(s,3H),3.44-3.43(m,1H),2.93-2.90(m,1H),2.77-2.68(m,3H),2.62-2.60(m,1H),2.05-1.93(m,5H),1.68-1.67(m,2H),1.56(s,3H),1.36(s,12H),0.95(d,J=7.0 Hz,3H),0.81(d,J=6.5 Hz,3H)ppm；LC-MS(m/z)：752.0[M+1]+。
化合物90：(2R,3R,4S,5R)-2-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
添加順式異構物-7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(235 mg,0.31 mmol)至TFA(2.7 mL)及水(0.3 mL)之混合物。於35℃使溶液開始反應並持續2 h，接著進行蒸發而乾燥。令殘留物與甲醇共蒸發兩次。接著令殘留物溶解於MeOH(20 mL)中。藉K2CO3(124 mg，溶解於1 mL的H2O中)且於室溫中持續攪拌1 h來中和溶液。於真空中移除溶劑，接著藉由製備型HPLC來純化粗製產物以得到呈白色固體之所欲的化合物(90 mg，產率：51%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.08(s,1H),7.47(s,1H),7.39-7.37(m,1H),7.28(d,J=2.5 Hz,1H),7.26(d,J=4.5 Hz,1H),6.62(d,J=4.5 Hz,1H),6.10(d,J=5.5 Hz,1H),4.43-4.41(m,1H),4.12-4.09(m,1H),4.04-4.01(m,1H),3.15-3.13(m,1H),3.04-3.01(m,1H),2.86-2.68(m,4H),2.21-2.17(m,2H),1.88-1.85(m,3H),1.60-1.57(m,2H),1.36(s,9H),1.01(d,J=8.0 Hz,3H),0.97(d,J=8.0 Hz,3H)ppm；LC-MS(m/z)：562.5[M+1]+。
化合物75：(2R,3R,4S,5R)-2-(4-胺基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
添加反式異構物7-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-N-(2,4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(175 mg,0.23 mmol)至TFA(2.7 mL)及水(0.3 mL)之混合物。於35℃使溶液開始反應並持續2 h，接著進行蒸發而乾燥。令殘留物與甲醇共蒸發兩次。接著令殘留物溶解於MeOH(20 mL)中。藉K2CO3(97 mg，溶解於1 mL的H2O中)且於室溫中持續攪拌1 h來中和溶液。於真空中移除溶劑，接著藉由製備型HPLC來純化粗製產物以得到呈白色固體之所欲的化合物(95 mg，產率：71%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.09(s,1H),7.49(s,1H),7.41-7.39(m,1H),7.30-7.27(m,2H),6.64(d,J=4.0 Hz,1H),6.12(d,J=5.5 Hz,1H),4.45-4.42(m,1H),4.13-4.11(m,1H), 4.05-4.03(m,1H),3.58-3.54(m,1H),3.06-3.02(m,1H),2.89-2.80(m,3H),2.74-2.70(m,1H),2.20-2.17(m,2H),2.03-1.99(m,3H),1.84-1.81(m,3H),1.38(s,9H),1.03(d,J=8.5 Hz,3H),0.98(d,J=8.0 Hz,3H)ppm；LC-MS(m/z)：562.5[M+1]+。
化合物96：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基((1r,3S)-3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
N-(2-胺基-4-(三氟甲氧基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙醯胺
添加4-(三氟甲氧基)苯-1,2-二胺(1.1 g,5.83 mmol)及TEA(2.05 mL,14.56 mmol)至3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙酸(1.2 g,2.91 mmol)、HATU(2.17 g,5.83 mmol)及HOAT(0.91 g,5.83 mmol)於DCM(17 mL)中之溶液。於室溫下攪拌混合物過夜。以DCM(50 mL)過濾混合物及以水(15 mL×3)及 鹵水(30 mL)進行清洗。以Na2SO4乾燥有機相，進行過濾及濃縮。藉由全自動快速層析(40 g矽膠，起始EA：DCM：MeOH=10：10：0至10：10：8梯度，40 mL/min,50 min,2.0 L總溶劑體積)來純化殘留物以得到呈黃色固體之所欲的化合物(1.0 g，產率：60%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH8.29(s,1H),8.25-8.24(m,1H),7.20-7.13(m,1H),6.95-6.85(m,0.4H),6.73(brs,0.8H),6.54(d,J=7.5 Hz,0.8H),6.22(d,J=2.0 Hz,1H),5.60-5.55(m,1H),5.03-5.00(m,1H),4.40-4.35(m,1H),3.40-3.35(m,0.3H),3.00-2.92(m,0.7H),2.70-2.47(m,3H),2.36-2.28(m,2H),2.20-1.80(m,6H),1.76-1.66(m,2H),1.60(s,3H),1.40(s,3H),1.26-1.16(m,1H)ppm；ESI-MS(m/z)：621.3[M+1]+。
9-((3aR,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺
於65℃攪拌N-(2-胺基-4-(三氟甲氧基)苯基)-3-(3-((((3aR,4R,6R,6aR)-6-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)甲基)(甲基)胺基)環丁基)丙醯胺(1.0 g,1.61 mmol)於HOAc(10 mL)中之溶液過夜。使混合物冷卻至室溫及進行濃縮。令殘留物溶解於DCM(50 mL)中，以飽和NaHCO3溶液(10 mL×2)、水(20 mL)及鹵水(30 mL)進行清洗。藉由掌性HPLC來分離 殘留物以得順式異構物(460 mg，產率：47%)及反式異構物(220 mg，產率：23%)。
順式-異構物：1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.28(s,1H),8.23(s,1H),7.53(d,J=9.0 Hz,1H),7.40(s,1H),7.13(dd,J=8.5以及1.0 Hz,1H),6.21(d,J=2.0 Hz,1H),5.55(dd,J=6.5,2.5 Hz,1H),5.01(q,J=3.5 Hz,1H),4.33-4.37(m,1H),2.81-2.78(m,2H),2.66-2.58(m,2H),2.53-2.49(m,1H),2.13-2.03(m,5H),1.86-1.84(m,3H),1.59(s,3H),1.43-1.39(m,4H),1.22-1.17(m,1H)ppm；LC-MS(m/z)：603.3[M+1]+。
反式-異構物：1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.29(s,1 H),8.22(s,1 H),7.52(brs,1H),7.40(s,1 H),7.13(d,J=9.0 Hz,1H),6.21(d,J=2.0 Hz,1H),5.55(dd,J=6.5以及2.0 Hz,1H),5.01(q,J=3.0 Hz,1H),4.38-4.34(m,1H),2.96-2.92(m,1H),2.84-2.81(m,2H),2.59-2.49(m,2H),2.10(s,3H),2.05-1.91(m,4H),1.85-1.79(m,1H),1.73-1.66(m,2H),1.60(s,3H),1.39(s,3H)ppm；LC-MS(m/z)：603.3[M+1]+。
化合物96
於30℃攪拌順式-9-((3aR,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(460 mg,0.77 mmol)於1 N HCl/MeOH (10 mL)中之溶液持續4 h。於減壓下移除揮發成分。添加MeOH(10 mL)至殘留物及以NH3.H2O進行調整成pH=10~11。於室溫攪拌混合物持續30 min及進行濃縮。藉由製備型HPLC來純化殘留物以得到呈白色固體之所欲的化合物(215 mg，產率：43%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.28(s,1 H),8.21(s,1 H),7.52(d,J=8.0 Hz,1H),7.40(s,1 H),7.12(dd,J=8.5以及0.5 Hz,1H),6.00(d,J=4.0 Hz,1H),4.71(t,J=4.5 Hz,1H),4.24(t,J=5.5 Hz,1H),4.18(t,J=6.0 Hz,1H),2.84-2.81(m,2H),2.77-2.68(m,3H),2.25-2.22(m,2H),2.17(s,3H),1.91-1.89(m,3H),1.51-1.45(m,2H)ppm；LC-MS(m/z)：563.3[M+1]+。
化合物97：(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基((1s,3R)-3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇
於30℃攪拌反式-9-((3aR,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)胺基)甲基)四氫呋喃并[3,4-d][1,3]二氧環戊烯-4- 基)-9H-嘌呤-6-胺(220 mg,0.37 mmol)於1 N HCl/MeOH(5 mL)中之溶液持續4 h。於減壓下移除揮發成分。添加MeOH(10 mL)至殘留物及以NH3.H2O進行調整成pH=10~11。於室溫攪拌混合物持續30 min及進行濃縮。藉由製備型HPLC來純化殘留物以得到呈白色固體之所欲的化合物(80 mg，產率：39%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.29(s,1 H),8.20(s,1 H),7.52(d,J=8.5 Hz,1H),7.40(s,1 H),7.11(d,J=8.5 Hz,1H),6.00(d,J=4.0 Hz,1H),4.72(t,J=4.5 Hz,1H),4.25(t,J=5.5 Hz,1H),4.18-4.20(m,1H),3.04-3.08(m,1H),2.83-2.86(m,2H),2.64-2.72(m,2H),2.17(s,3H),1.97-2.10(m,5H),1.82-1.85(m,2H)ppm；LC-MS(m/z)：563.3[M+1]+。
化合物106
添加MCPBA(91 mg,0.53 mmol)至溶液(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1r,3S)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇(300 mg,0.53 mmol)於30%含水二噁烷(20 mL)中之溶液。於室溫攪拌混合物持續3 h接著進行濃縮。藉由製備型HPLC來純化粗製產物以得到呈白色固體 之所欲的產物(160 mg，產率：45%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.24(s,1H),8.22(s,1H),7.49(brs,1H),7.42-7.38(m,1H),7.31-7.29(m,1H),6.00-5.96(m,1H),4.68-4.65(m,2H),4.43-4.36(m,1H),4.05-4.00(m,1H),3.88-3.76(m,1H),3.68-3.49(m,1H),3.46-3.37(m,1H),2.84-2.81(m,2H),2.42-2.15(m,4H),1.95-1.89(m,3H),1.39(s,1H),1.35-1.27(m,3H),1.25-1.21(m,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：579.4[M+1]+。
化合物107
添加MCPBA(91 mg,0.53 mmol)至(2R,3R,4S,5R)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1s,3R)-3-(2-(5-(第三-丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)環丁基)(異丙基)胺基)甲基)四氫呋喃-3,4-二醇(300 mg,0.53 mmol)於30%含水二噁烷(20 mL)中之溶液。於室溫攪拌混合物持續3 h接著進行濃縮。藉由製備型HPLC來純化粗製產物以得到呈白色固體之所欲的產物(80 mg，產率：26%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)：δH 8.25-8.22(m,2H),7.49(brs,1H),7.42-7.38(m,1H),7.31-7.28(m,1H),6.02-5.97(m,1H),4.69-4.60 (m,2H),4.47-4.32(m,2H),3.86-3.74(m,1H),3.70-3.54(m,1H),3.45-3.35(m,1H),2.97-2.72(m,4H),2.15-1.75(m,5H),1.39(s,1H),1.34-1.28(m,3H),1.26-1.22(m,3H)ppm；ESI-MS(m/z)：579.7[M+1]+。
實例9：超臨界流體層析
使用習知之技術而藉由超臨界流體層析(SFC)來純化化合物。例如採用Lotus Separations,LLC,Princeton,NJ方法。參見例如http：//www.lotussep.com。亦參見http：//www.greenchemistrygroup.org/Program2009.html。
以下列出SFC分離情況之特定的實例。可利用類似的方法分離本文提及之其他化合物。
實例10：生物分析規程及通用方法
細胞培養。人血液腫瘤細胞株THP-1、RS4；11以及MV4-11係得自ATCC，MOLM-13細胞係得自DSMZ。所 有細胞株均生長於含有10% FBS之RPMI 1640中以及維持供應商推薦之細胞密度與環境條件。生長介質中供應非必需胺基酸以及左旋麩醯胺酸。THP-1細胞株中亦供應0.05 mM β-巰基乙醇。
甲基化分析。細胞(5X105細胞/mL)係種於最終體積為2 mLs之12井之盤中。細胞係摻有化合物以從50 mM DMSO母液而成適當的濃度。於7天培養過程期間，每兩天更換化合物以及生長介質，使用錐藍排除法(Vicell)來計數細胞，於200 g成粒持續5分鐘及再次令其懸浮於新鮮之最終細胞濃度為5X105細胞/mL之含有化合物的生長介質中。於培養化合物後，自1 X 106細胞、使用市售之組蛋白萃取套組(Active Motif)來萃取組蛋白。利用BCA蛋白質分析(Pierce)以BSA標準曲線來定量經純化的組蛋白。以4-20%凝膠上之SDS-PAGE分離400 ng之經單離的組蛋白及將其轉移硝化纖維膜。以各種一級與二級抗體來培養膜並成像於Licor成像系統(Odyssey)上。H3K79-Me2兔多株抗體係購自Abcam。其他兔多株抗體，包括H3K4-Me3、H3K9-Me3、H3K27-Me2及H3K27-Me3，係購自細胞徵兆aling Technologies(CST)。小鼠單株總H3抗體係用作加載控制(CST)。經螢光標記之二級抗體係購自Odyssey。
細胞生長以及存活率分析。自指數型生長之細胞培養或得細胞及於每井種下3 X 104細胞。將樣本保持於96井之具黑壁的澄清底板(Corning)。於第0天將於0.2% DMSO中之最終濃度之50 uM化合物加入至適當的井。以MV4-11及MOLM-13處理持續14天，且THP-1細胞係被處理持續18天。於培養期間，藉由將樣本轉移至V-底板(Corning)、於RT轉子中以200 g旋轉持續5分鐘、再次懸浮於含有化合物的新鮮生長介質中及將彼轉移回分析板，而每兩天更換化合物以及生長介質。使用Guava Viacount分析來定期地計數細胞及以EasyCyte Plus儀器(Millipore)進行讀取。當達到推薦的細胞密度內時，分殖分析板。調整最終細胞計數以使其包括被分殖的細胞並指出總存活的細胞/井。
HOXA9(qPCR)。類似於甲基化分析，以化合物處理細胞持續7天。於RT轉子中於200 g使細胞成粒及使用Qiagen RNeasy套組來單離所有的RNA。使用Nanovue(GE Healthcare)來測定RNA的濃度及品質。使用高容量cDNA反轉錄套組(Applied Biosystems)使所有的RNA被反轉錄。用於HOXA9之預先設計之經標記的引子對係購自Applied Biosystems。qPCR反應含有50 ng的cDNA、1X經標記的引子及1X Taqman廣效型PCR混合物(Applied Biosystems)。於7900 HT快速即時PCR機器(Applied Biosystems)上利用PCR條件為2 min 50℃、10 min 95℃、40循環之15 sec 95℃及1 min 60℃來擴增樣本。使HOXA9之循環數常規化成管家基因B2微球蛋白(購自Applied Biosystems之預先設計的B2M控制)。DMSO控制百分比係由下式計算，控制百分比=(2^-△△CT)＊100，其中 △△CT為常規化的HOXA9樣本與控制監之差異(△CT樣本-△CT控制=△△CT)。
決定IC50。於DMSO中，在10個時間點，連續地稀釋測試化合物成3倍及將1μl置入384井的微量滴定板。陽性對照組(100%抑制標準)係最終濃度為2.5 uM之S-腺苷基-L-高半胱胺酸及陰性對照組(0%抑制標準)含有1 μl的DMSO。接著利用每井40 μl的DOT1L(1-416)(於分析緩衝液中之最終濃度為0.25nM：20mM TRIS,pH 8.0,10 mM NaCl,0.002% Tween20,0.005%牛皮凝膠，100 mM KCl，以及0.5 mM DTT)來培養化合物持續30分鐘。於每一個井加入10 μl基質混合物(相同的分析緩衝液及200 nM的S-[甲基-3H]-腺苷基-L甲硫胺酸、600 nM之未標記的S-[甲基-3H]-腺苷基-L甲硫胺酸以及20 nM寡核體)來起始反應。於室溫培養反應持續120分鐘及以每井100 μM的S-甲基-腺苷基-L甲硫胺酸來驟止反應。為用於檢測，將得自50 μl反應的基質固定於384井之經鏈黴抗生物素蛋白(Streptavidin)塗覆的特製平板(Flashplate)(Perkin Elmer)(其亦塗覆有0.2%聚乙烯亞胺)及以定量閃爍計數器(Perkin Elmer)進行讀取。IC50值係示於下表。於表中“A”表示IC50值<0.1μM；“B”表示IC50值>0.1μM且<1μM；“C”表示IC50值>1μM且<10μM；以及“D”表示IC50值>10μM且<50μM。
實例11：腫瘤抗-增生分析
活體外抗-增生分析。以MLL-重排的以及非-MLL-重排的人白血病細胞株來評估本發明化合物之抗-增生活性之有效性及選擇性。研究中所使用的細胞株係列示於圖1A中。MLL-重排者包括衍生自ALL、AML及雙表現型白血病之MLL-AF4、MLL-AF9或MLL-ENL融合的細胞株。這些細胞株含有DOT1L。列表中亦包括五種不具MLL-重排的細胞株，以及一種帶有部分串接複製之MLL基因(MLL-PTD)的細胞株。
以3 x 104細胞/井之密度將三倍指數型生長的細胞置入96-井之板中而使最終體積為150 μl。於增加的化合物2之濃度下培養細胞。每隔3-4天(直到第14天)，藉由測量細胞存活率來判定抗-增生活性。於計數細胞的當天，替換生長介質化合物2並分殖細胞使密度重回5 x 104細胞/井。
圖1之最大抑制50%濃度(IC50)結果指出化合物2對於所測試之四種MLL-重排的細胞株中的三種MV4；11(MLL-AF4)、MOLM-13(MLL-AF9)及KOPN-8(MLL-ENL)顯現有效的奈莫耳抗-增生活性。表現MLL-PTD的EOL-1細胞對於化合物2亦呈高度敏感(IC50=11 nM)。RS4；11細胞及兩種非MLL-重排的細胞(Reh及Kasumi-1)係對數1-3倍較不敏感者，以及兩種非-MLL-重排的細胞(Jurkat及HL-60)未顯示活性。整體而言，此結果指出化合物2有效地且選擇性地抑制MLL-重排的白血病細胞株及一個子集 之非-MLL-重排的白血病細胞株之增殖。
活體內抗-增生分析。以異種移殖MLL-重排的白血病之小鼠模型來評估本發明化合物之活體內抗-腫瘤活性。
利用迷你泵(Alzet Model 2001)而對帶有大小為80-120 mm3之MV4-11異種移殖腫瘤之共20隻分屬四群組(群組1、3、4及5)及共8隻單一群組(群組2)之母裸鼠(平均重量為0.023 kg)進行皮下植入。群組1僅接收來自泵的載體。群組2僅接收來自泵的載體及腹膜內注射(一日三次)(間隔8小時)的載體。群組3接收來自泵之112 mg/kg/天的化合物2及腹膜內注射(一日三次)(間隔8小時)之20 mg/kg的化合物2以達到每日劑量為172 mg/kg/天。群組4及5分別接收來自泵之112及56 mg/kg/天的化合物2。泵經設計以維持操作7天且進行兩次更換以達總共為期21天灌注之接觸(exposure)。
於第7、14及21天自群組4及5中之所有動物採集單一血液樣本並用於化合物2之血漿濃度分析。於第7及14天，依照下述時間點自群組3所採集血液樣本(每個時間點3隻動物)：皮下注射劑量前5分鐘，以及皮下注射後15 min、30 min、1、2及4小時。於第21天最後一次腹膜內注射後三小時，自群組3採集單一血液樣本。每隔4天測量腫瘤大小。於21天後中止研究並計算平均TGI。
圖2顯示於21天用劑期間之腫瘤生長。兩種載體控制組之腫瘤大小並無差別。與控制組相較，供應有皮下注射劑量之高劑量迷你泵的群組顯示於統計上顯著的TGI> 70%。與控制組相較，56及112 mg/kg/天的群組顯示非於統計上顯著的TGI值，分別為43及38%。圖2中之實施例2代表化合物。
圖3A顯示由第7、14及21天採取的平均血液樣本所測定的群組4及5中之化合物2之預估的穩定血漿濃度。此資料指出針對群組4之平均穩定化合物2血漿濃度為自99至152 ng/ml，針對群組5為自52至238 ng/ml。於第21天最後一次採樣的平均血漿濃度為99 ng/ml(群組4)及52 ng/ml(群組5)。
圖3B顯示化合物2之血漿濃度對腹膜內注射後之時間的作圖。就每次注射(一日三次)之後及每日AUC兩者相對因持續灌注造成的穩定血漿濃度所產生者之Cmax(4200至5000 ng/ml)而言，腹膜內注射造成暴露於化合物2之血漿中之顯著的增加。整體而言，此結果指出化合物2於異種移殖MLL-重排的白血病之小鼠模型中展現顯著的抗-腫瘤活性。
藉引用方式合併
為所有目的，藉引用方式將提及之各專利文獻及科學文章之全部內容併入本文。
等效物
在不悖離本發明之精神或必要特徵下，可以其他具體型式來實現本發明。因此前述的具體實施例被視為用於說 明而非限制本發明。本發明之範圍因此由後附之申請專利範圍而非以上描述來界定，且本發明包括申請專利範圍之等效含意及範圍內之所有改變。
圖1A以及1B分別為顯示使用MLL-重排的以及非-MLL-重排的人白血病細胞株之採區的化合物2的抗-增生活性之有效性及選擇性之表格及作圖。
圖2為顯示用劑21天後腫瘤生長之作圖。
圖3A為顯示群組4以及5中之化合物2之以第7、14及21天取樣的平均血液樣本測定之估計的穩態血漿濃度之作圖。
圖3B為顯示化合物2血漿濃度對腹膜內注射後的時間之作圖。

Claims (33)

  1. 一種式(IV)化合物，或彼之N-氧化物或醫藥上可接受的鹽： 其中A為O或CH2；Q為NH2；X為N或CH；Y為H、Rd、SO2Rd或CORd，Rd為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基，且Rd任意地經一或更多選自由C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺醯基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代，且Rd上之C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基及5至6員雜芳基取代基各進一步任意地經C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、鹵基、羥基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺 基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基或5至6員雜芳基取代；R1及R2各獨立地為H；Re及Rh各獨立地為H；Rf及Rg各獨立地為-M2-T2，其中M2為鍵結、SO2、SO、S、CO、CO2、O、O-C1-C4烷基聯結、C1-C4烷基聯結、NH或N(Rt)，Rt為C1-C6烷基，且T2為H、鹵基或RS4，RS4為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至8員雜環烷基或5至10員雜芳基，且O-C1-C4烷基聯結、C1-C4烷基聯結、Rt及RS4各任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、胺基、單-C1-C6烷基胺基、二-C1-C6烷基胺基、C3-C8環烷基、C6-C10芳基、4至6員雜環烷基及5至6員雜芳基所組成的群組之取代基取代；且m為0、1或2。
  2. 根據申請專利範圍第1項之化合物，其中Y為H或Rd，Rd為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或C3-C8環烷基，且Rd任意地經一或更多選自由C1-C6烷基、鹵基、羥基、羧基、氰基、胺基及C3-C8環烷基所組成的群組之取代基取代；且Rf及Rg各獨立地為-M2-T2，其中M2為鍵結或O-C1-C4烷基聯結，且T2為H、鹵基或RS4，RS4為C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基或氧雜環丁烷 基，且O-C1-C4烷基聯結及RS4各任意地經一或更多選自由鹵基、羥基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基及胺基所組成的群組之取代基取代。
  3. 根據申請專利範圍第2項之化合物，其中A為O。
  4. 根據申請專利範圍第2項之化合物，其中A為O且m為2。
  5. 根據申請專利範圍第2項之化合物，其中X為N。
  6. 根據申請專利範圍第2項之化合物，其中Y為Rd。
  7. 根據申請專利範圍第6項之化合物，其中Rd為任意地經環丙基、環丁基或鹵基取代的C1-C6烷基。
  8. 根據申請專利範圍第6項之化合物，其中Rd為各任意地經C1-C6烷基或鹵基取代的環丙基或環丁基。
  9. 根據申請專利範圍第2項之化合物，其中Rf及Rg之至少一者為鹵基；任意地經一或更多鹵基取代的C1-C6烷氧基；任意地經一或更多選自CN、鹵基、C3-C8環烷基、羥基或C1-C6烷氧基之取代基取代的C1-C6烷基；任意地經一或更多C1-C6烷基或CN取代的C3-C8環烷基；或任意地經一或更多選自CN、鹵基、羥基、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基之取代基取代的氧雜環丁烷基。
  10. 根據申請專利範圍第9項之化合物，其中Rf及 Rg之至少一者係選自由F；Cl；Br；CF3；OCF3；任意地經一或更多選自CN、鹵基、羥基、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基之取代基取代的氧雜環丁基；任意地經一或更多選自C1-C4烷基之取代基取代的C3-C8環烷基；及任意地經一或更多選自鹵基、C3-C8環烷基、羥基或C1-C6烷氧基之取代基取代的C1-C4烷基所組成之群組。
  11. 一種化合物，其係選自以下化合物所組成的群組： 及彼等之醫藥上可接受的鹽。
  12. 根據申請專利範圍第11項之化合物，其中該化合物係選自 或彼之醫藥上可接受的鹽。
  13. 根據申請專利範圍第12項之化合物，其中該化合物係
  14. 根據申請專利範圍第12項之化合物，其中該化合物係 之醫藥上可接受的鹽。
  15. 一種醫藥組成物，其包含治療上有效含量之根據申請專利範圍第1至10項中任一項之化合物及醫藥上可接受的載體。
  16. 一種醫藥組成物，其包含治療上有效含量之根據申請專利範圍第11項之化合物及醫藥上可接受的載體。
  17. 一種醫藥組成物，其包含治療上有效含量之根據申請專利範圍第12項之化合物及醫藥上可接受的載體。
  18. 一種醫藥組成物，其包含治療上有效含量之根據申請專利範圍第13項之化合物及醫藥上可接受的載體。
  19. 一種醫藥組成物，其包含治療上有效含量之根據申請專利範圍第14項之化合物及醫藥上可接受的載體。
  20. 一種根據申請專利範圍第1至11項中任一項之化合物於製造對有需要治療的個體用於治療癌症的藥物之 用途。
  21. 一種根據申請專利範圍第1至11項中任一項之化合物於製造用於治療血液癌症的藥物之用途。
  22. 一種根據申請專利範圍第1至11項中任一項之化合物於製造用於治療白血病的藥物之用途。
  23. 根據申請專利範圍第22項之用途，其中該白血病為急性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病或混合細胞系白血病。
  24. 根據申請專利範圍第23項之用途，其中該白血病為混合細胞系白血病(MLL)重排之白血病或特徵為MLL基因的部分串接複製(MLL-PTD)之白血病。
  25. 一種根據申請專利範圍第1至11項中任一項之化合物於製造用於治療由染色體11q23上的基因轉位所媒介之病症的藥物之用途。
  26. 一種根據申請專利範圍第1至11項中任一項之化合物於製造用於治療由DOT1L媒介蛋白的甲基化所媒介之病症的藥物之用途。
  27. 一種根據申請專利範圍第12項之化合物於製造對有需要治療的個體用於治療癌症的藥物之用途。
  28. 一種根據申請專利範圍第12項之化合物於製造用於治療血液癌症的藥物之用途。
  29. 一種根據申請專利範圍第12項之化合物於製造用於治療白血病的藥物之用途。
  30. 根據申請專利範圍第29項之用途，其中該白血 病為急性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病或混合細胞系白血病。
  31. 根據申請專利範圍第30項之用途，其中該白血病為MLL重排之白血病或特徵為MLL基因的部分串接複製(MLL-PTD)之白血病。
  32. 一種根據申請專利範圍第12項之化合物於製造用於治療由染色體11q23上的基因轉位所媒介之病症的藥物之用途。
  33. 一種根據申請專利範圍第12項之化合物於製造用於治療由DOT1L媒介蛋白的甲基化所媒介之病症的藥物之用途。
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