CN103391939B - 作为表观遗传酶调节剂的经取代的嘌呤和7-氮杂嘌呤化合物 - Google Patents

作为表观遗传酶调节剂的经取代的嘌呤和7-氮杂嘌呤化合物 Download PDF

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Abstract

本发明涉及经取代的嘌呤和7-氮杂嘌呤化合物。本发明还涉及包含这些化合物的药物组合物，以及通过向有需要的对象给予这些化合物和药物组合物来治疗由DOT1介导的蛋白甲基化起作用的疾病(例如癌症和神经疾病)的方法。

Description

作为表观遗传酶调节剂的经取代的嘌呤和7-氮杂嘌呤化合物
相关申请的交叉引用
本申请要求2010年12月3日提交的美国临时申请号61/419,661的优先权和权益，其全部内容通过引用纳入本文。
发明背景
在真核细胞中，DNA经组蛋白包装形成染色质。DNA的约150个碱基对在组蛋白的八聚体(各两个组蛋白2A、2B、3和4)上缠绕两圈形成核小体——染色质的基本单位。染色质的有序结构变化能引起关联基因转录中的改变。该过程高度受控，因为基因表达模式的变化深度影响基础细胞过程，诸如分化、增殖和凋亡。通过共价修饰组蛋白，最特别是其N端尾部来介导对染色质结构(并因而对转录)变化的控制。这些修饰通常指表观遗传学修饰，因为它们会导致基因表达中可遗传的变化，但对所述DNA本身的序列没有影响。氨基酸侧链的共价修饰(例如，甲基化、乙酰化、磷酸化和泛素化)是酶促介导的。
向组蛋白上的特定氨基酸位点选择性添加甲基基团受到被称为组蛋白甲基转移酶(HMT)的独特酶家族作用的控制。特定基因的表达水平受到相关组蛋白位点处甲基基团存在与否的影响。具体组蛋白位点处的甲基基团的特定作用持续直至所述甲基基团被组蛋白去甲基化酶移除，或持续直至所述修饰的组蛋白通过核小体转换被替代。以类似的方式，其它酶类能够用其它化学物质修饰DNA和组蛋白，并且其它酶也能移除这些物质以从时间上控制基因表达。
必须严格控制转录调节后生化***的协调收集，从而使细胞最优化地进行生长和分化。当这些控制受到负责DNA和组蛋白修饰的酶的异常表达和/或活性干扰时，产生疾病状态。例如，在人癌症中，越来越多的证据提示表观遗传酶活性失调导致与癌症相关的细胞增殖失控及其它癌症相关表型，例如增强的细胞迁移和入侵。除癌症以外，表观遗传酶在众多其它人疾病中起作用的证据越来越多，所述疾病包括代谢疾病(例如糖尿病)、炎性疾病(例如克罗恩氏病)、神经变性疾病(例如阿尔茨海默病)和心血管疾病。因此，选择性调节表观遗传酶的异常作用就一定范围疾病的治疗而言具有广泛前景。
目前正需要调节表观遗传酶的异常作用的新试剂。本发明提供满足该需求的化合物。
发明概述
本发明提供用于调节表观遗传酶的异常作用的化合物。本发明还提供这些化合物的药学上可接受的盐、酯和/或N-氧化物。
一方面，本发明主要以下式(I)的经取代的嘌呤或7-氮杂嘌呤化合物或其药学上可接受的盐或酯为特点。
在该式中，
A是O或CH2；
G和J各自独立为H、卤素、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基或ORa，Ra是H、C1-C6烷基或C(O)-C1-C6烷基，其中，C(O)O-C1-C6烷基、C1-C6烷基或C(O)-C1-C6烷基可任选地被选自卤素、氰基羟基、羧基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基和C3-C8环烷基的一个或多个取代基取代；
Q是H、NH2、NHRb、NRbRc、Rb或ORb，其中Rb和Rc各自独立地是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～7元杂环烷基、5～10元杂芳基或-M1-T1，其中M1是键或可任选地被卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基连接基团，T1是C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～10元杂芳基，或者Rb和Rc和连接它们的N原子一同形成具有除所述N原子以外的0或1个额外杂原子的4～7元杂环烷基，所述4～7元杂环烷基可任选地被C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代，且Rb、Rc和T1可各自任选地被选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
X是N或CRx，其中Rx是H、卤素、羟基、羧基、氰基或RS1，RS1是氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基，且RS1可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
L1是N(Y)、S、SO或SO2；
当L1是N(Y)时，L2是CO或不存在，或者当L1是S、SO或SO2时，L2不存在，其中当L2不存在时，Y是H、Rd、SO2Rd或CORd，或者当L2是CO时，Y是H或Rd，Rd是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基，Rd可任选地被选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺酰基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代，其中C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基还可任选地被C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代；
R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7各自独立地是H、卤素、羟基、羧基、氰基、RS2，RS2是氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，且各RS2可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
R8是H、卤素或RS3，RS3是C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，RS3可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基氨基、C1-C6烷氧基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基和C3-C8环烷基的一个或多个取代基取代；
R9是或其中Re、Rf、Rg、和Rh各自独立是-M2-T2，其中M2是键、SO2、SO、S、CO、CO2、O、O-C1-C4烷基连接基团、C1-C4烷基连接基团、NH或N(Rt)，Rt是C1-C6烷基，且T2是H、卤素或RS4，RS4是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～8元杂环烷基或5～10元杂芳基，且O-C1-C4烷基连接基团、C1-C4烷基连接基团、Rt、和RS4各自可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代，Ri是H或可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代的C1-C6烷基，D是O、NRj或CRjRk，Rj和Rk各自独立是H或C1-C6烷基，或者Rj和Rk与连接它们的碳原子共同形成C3-C10环烷基环，E是-M3-T3，M3是键或可任选地被卤素或氰基取代的C1-C6烷基连接基团，T3是C3-C10环烷基、C6-C10芳基、5～10元杂芳基或4～10元杂环烷基，T3可任选地被选自卤素、羟基、巯基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷硫基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6卤代烷基磺酰基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧基羰基、氧代、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C4-C12烷基环烷基、C6-C10芳基、C6-C10芳氧基、C7-C14烷基芳基、C6-C10氨基芳基氧基、C6-C10芳硫基、可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基取代的4～6元杂环烷基、可任选地被卤素、C1-C4烷基和C1-C6烷基(被羟基、卤素、C1-C6烷氧基羰基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、可进一步任选地被卤素、羟基或C1-C6烷氧基取代的4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代)取代的5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
q是0、1、2、3或4；
m是0、1或2；以及
n是0、1或2。
式(I)化合物的一个子集包括式(II)的那些化合物：
式(I)化合物的另一个子集包括式(IIIa)、(IIIb)或(IIIc)的那些化合物：
或
式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)和(IV)化合物可包括以下一个或多个特征。
m与n之和至少是1。
m是1或2且n是0。
m是2且n是0。
A是CH2。
A是O。
L1是N(Y)。
L1是SO或SO2。
Y是Rd。
Rd是C1-C6烷基。
L2不存在。
Re、Rf、Rg和Rh中的至少一个是卤素(例如F、C1和Br)，可任选地被一个或多个卤素取代的C1-C6烷氧基(例如OCH3、OCH2CH3、O-iPr和OCF3)，可任选地被一个或多个卤素取代的C1-C6烷基磺酰基(例如SO2CF3)，或者可任选地被一个或多个卤素取代的C1-C6烷基(例如CH3、i-Pr、t-Bu和CF3)。Ri是H或C1-C6烷基。
R9是
D是O。
D是NRj，例如，NH。
D是CRjRk，例如，CH2、CHCH3或C(CH3)2。
E是-M3-T3，其中M3是键或C1-C3烷基连接基团，T3是苯基、萘基、噻吩基、环丙基或环己基，且T3可任选地被选自卤素、羟基、巯基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷硫基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧基羰基、氧代、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C4-C12烷基环烷基、C6-C10芳基、C6-C10芳氧基、C7-C14烷基芳基、C6-C10氨基芳氧基、C6-C10芳硫基、可任选地被C1-C4烷基取代的4～6元杂环烷基、可任选地被C1-C4烷基和C1-C6烷基(被羟基、C1-C6烷氧基羰基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代)取代的5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代。
T3是可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基磺酰基、C6-C10芳基和C6-C10芳氧基，以及C7-C14烷基芳基的一个或多个取代基取代的苯基。
X是N。
X是CRx，例如，CH。
Q是NH2或NHRb，其中Rb是-M1-T1，M1是键或C1-C6烷基连接基团，且T1是C3-C8环烷基。
Q是H。
R9是或
Re、Rf、Rg和Rh中的至少一个选自F、C1、CF3、OCF3、SO2CF3、C1-C4烷基和C1-C4烷氧基。
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各为H。
本发明还涉及式(IV)的化合物或其N-氧化物或其药学上可接受的盐：
其中A是O或CH2；
Q是H、NH2、NHRb、NRbRc、OH、Rb，或ORb，其中Rb和Rc各自独立地是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～7元杂环烷基、5～10元杂芳基或-M1-T1，其中M1是键或可任选地被卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基连接基团且T1是C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～10元杂芳基，或者Rb和Rc和连接它们的N原子一同形成具有除所述N原子以外的0或1个额外杂原子的4～7元杂环烷基，所述4～7元杂环烷基可任选地被C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代，并且Rb、Rc和T1各自可任选地被选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
X是N或CRx，其中Rx是H、卤素、羟基、羧基、氰基或RS1，RS1是氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基，并且RS1可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
Y是H、Rd、SO2Rd或CORd，Rd是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基，并且Rd可任选地被选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺酰基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代，并且其中的C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基还可任选地被C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代；
R1和R2各自独立地是H、卤素、羟基、羧基、氰基、RS2，RS2是氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，并且各RS2可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
Re、Rf、Rg、和Rh各自独立地是-M2-T2，其中M2是键、SO2、SO、S、CO、CO2、O、O-C1-C4烷基连接基团、C1-C4烷基连接基团、NH或N(Rt)，Rt是C1-C6烷基，T2是H、卤素或RS4，RS4是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～8元杂环烷基或5～10元杂芳基，并且O-C1-C4烷基连接基团、C1-C4烷基连接基团、Rt和RS4各自可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代，并且
m是0、1或2。
例如，A是O。在式(IV)的某些化合物中，A是O且m是2。
在式(IV)的某些化合物中，X是N。
例如，在某些化合物中，Q是NH2或NHRb，其中Rb是-M1-T1，M1是键或C1-C6烷基连接基团且T1是C3-C8环烷基。
例如，在某些式(IV)化合物中，R1和R2各为H。
在某些式(IV)化合物中，Y是Rd。例如，Rd是可任选地被C3-C8环烷基或卤素取代的C1-C6烷基。例如，Rd是可任选地被C1-C6烷基或卤素取代的C3-C8环烷基。
本发明还涉及式(IV)化合物，其中，Re、Rf、Rg和Rh中至少一个是卤素、可任选地被一个或多个卤素取代的C1-C6烷氧基；可任选地被一个或多个卤素取代的C1-C6烷基磺酰基；可任选地被选自CN、卤素、C3-C8环烷基、羟基和C1-C6烷氧基的一个或多个取代基取代的C1-C6烷基；可任选地被一个或多个C1-C6烷基或CN取代的C3-C8环烷基；或者可任选地被选自CN、卤素、羟基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基的一个或多个取代基取代的4～8元杂环烷基。例如，式(IV)化合物的至少一个Re、Rf、Rg和Rh选自F、C1、Br、CF3、OCF3、SO2CF3；可任选地被选自CN、卤素、羟基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基的一个或多个取代基取代的氧杂环丁基(oxetanyl)；可任选地被选自C1-C4烷基的一个或多个取代基取代的C3-C8环烷基；以及可任选地被选自卤素、C3-C8环烷基、羟基和C1-C6烷氧基的一个或多个取代基取代的C1-C4烷基。
例如，本发明涉及式(IV)的化合物，其中Rf和Rg中至少一个是可任选地被羟基取代的烷基。例如，本发明涉及的化合物中Rf和Rg中至少一个是被羟基取代的叔丁基。
本发明涉及选自化合物1-140的化合物。本发明还涉及选自化合物1-140的化合物的盐。本发明还涉及选自化合物1-140的化合物的N-氧化物。本发明还涉及选自化合物1-140的化合物的N-氧化物的盐。例如，本发明涉及选自化合物1-7、9-109和111-140的化合物。
本发明还涉及含治疗有效量的式(IV)化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明还涉及含治疗有效量的式(IV)化合物的盐和药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明还涉及含治疗有效量的式(IV)化合物的水合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明还涉及含治疗有效量的选自化合物1-140的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。本发明还涉及含治疗有效量的选自化合物1-140的化合物的盐和药学上可接受的载体的药物组合物。本发明还涉及含治疗有效量的选自化合物1-140的化合物的N-氧化物和药学上可接受的载体的药物组合物。本发明还涉及含治疗有效量的选自化合物1-140的化合物的盐的N-氧化物和药学上可接受的载体的药物组合物。本发明还涉及含治疗有效量的选自化合物1-140的化合物的水合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明提供包含式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)中的一种或多种化合物和一种或多种药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明提供治疗或预防癌症的方法。本发明提供治疗癌症的方法。本发明还提供预防癌症的方法。本发明包括给予有需要的对象治疗有效量的式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)或(IIIc)化合物。所述癌症可以是血液癌症。优选所述癌症是白血病。更优选所述癌症是急性骨髓性白血病、急性淋巴细胞性白血病或混合谱系白血病。
本发明提供治疗或预防由染色体11q23上基因易位介导的疾病或紊乱的方法。本发明提供治疗由染色体11q23上基因易位介导的疾病或紊乱的方法。本发明还提供预防由染色体11q23上基因易位介导的疾病或紊乱的方法。本发明方法包括给予有需要的对象治疗有效量的式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物。
本发明提供治疗或预防由DOTl介导的蛋白甲基化起一定作用的疾病或紊乱或者由DOTl介导的蛋白甲基化介导的疾病或紊乱的方法。本发明提供治疗由DOTl介导的蛋白甲基化起一定作用的疾病或紊乱或者由DOTl介导的蛋白甲基化介导的疾病或紊乱的方法。本发明还提供预防由DOTl介导的蛋白甲基化起一定作用的疾病或紊乱或者由DOTl介导的蛋白甲基化介导的疾病或紊乱的方法。本发明包括给予有需要的对象治疗有效量的式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物。
本发明提供抑制细胞内DOTlL活性的方法。本发明包括使所述细胞接触有效量的式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物中的一种或多种。
本发明的其它方面还涉及减少细胞内组蛋白H3赖氨酸残基79(H3-K79)的甲基化水平的方法。所述方法包括使细胞接触本发明的化合物。所述方法可以用于改善由通过H3-K79甲基化的DOTl活性引起或加强的任何病症。
本发明涉及本文公开的化合物在治疗或预防癌症中所用药物的制备中的应用。所述应用包括用于给予有需要的对象治疗有效量的式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物。所述癌症可以是血液癌症。优选所述癌症是白血病。更优选所述癌症是急性骨髓性白血病、急性淋巴细胞性白血病或混合谱系白血病。
本发明提供本文公开的化合物在制备用于治疗或预防由染色体11q23上基因易位介导的疾病或紊乱的药物中的应用。所述应用包括给予有需要的对象治疗有效量的式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物。
本发明提供本文公开的化合物在制备用于治疗或预防DOTl介导的蛋白甲基化起一定作用的疾病或紊乱或者由DOTl介导的蛋白甲基化介导的疾病或紊乱的药物中的应用。所述应用包括给予有需要的对象治疗有效量的式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物。
本发明提供本文公开的化合物在抑制细胞内DOTlL活性中的应用。所述应用包括使所述细胞接触有效量的式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物中的一种或多种。
本发明的其它方面还涉及本文公开的化合物在减少细胞内组蛋白H3赖氨酸残基79(H3-K79)的甲基化水平中的应用。所述应用包括使细胞接触本发明的化合物。所述应用可改善由通过H3-K79甲基化的DOTl活性引起或加强的任何病症。
在本文所述式中，可从后文详细说明中定义的化学部分的相应组中选择变量。
此外，本发明提供合成前述化合物的方法。合成之后，治疗有效量的所述化合物中的一种或多种可与药学上可接受的载体一同被配制用于给予哺乳动物(尤其是人类)，以调控表观遗传酶。在某些实施方式中，本发明的化合物有利于治疗、预防或降低癌症风险，或有利于制造用于治疗、预防或降低癌症风险的药物。因此，例如可通过口服、胃肠道外、耳部、眼部、鼻部或局部途径给予所述化合物或所述制剂以提供有效量的所述化合物至所述哺乳动物。
除非另外定义，否则，本文中使用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域普通技术人员通常所理解的同样含义。在说明书中，单数形式也包含复数形式，除非上下文另有明确说明。虽然在本发明的实施或测试中可以采用类似于或等同于本文所述的那些方法和材料，但是下面描述了合适的方法和材料。本文提到的所有出版物、专利申请、专利或其它参考文献均通过引用纳入。本文引用的文献并非承认是所要求权利的发明的在先技术。在抵触的情况下，以本说明书(包括定义在内)为准。此外，材料、方法和实施例都仅是说明性，并不意在构成限制。
从以下发明详述和所附权利要求书很容易了解本发明的其他特征和优点。
附图说明
图1A和1B分别是采用MLL重排和非MLL重排的人白血病细胞系组证明化合物2的抗增殖活性的效能和选择性的表和图。本研究中所用的细胞系列于图1A。
图2显示剂量给药21天的肿瘤生长曲线。
图3A显示组4和5中通过测定在第7、14和21天采取的平均血液样品估计化合物2的稳定状态血浆浓度的图。
图3B显示化合物2血浆浓度对应ip注射后时间关系的曲线。
具体实施方式
本发明提供可用于选择性调节表观遗传酶的异常作用的化合物家族。此外，所述化合物可用于治疗或预防哺乳动物体内由表观遗传酶异常作用引起或介导的疾病状态。本发明包括这些化合物的药学上可接受的盐、酯、互变异构体和N-氧化物。
本发明提供新颖的经取代的嘌呤和7-氮杂嘌呤化合物，用于制造所述化合物的合成方法，包含所述化合物的药物组合物以及所述化合物的不同应用。
1.经取代的嘌呤化合物和取代的7-氮杂嘌呤化合物
本发明提供式(I)化合物：
或其药学上可接受的盐或酯，式中：
A是O或CH2；
G和J各自独立地是H、卤素、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基或ORa，Ra是H、C1-C6烷基或C(O)-C1-C6烷基，其中，C(O)O-C1-C6烷基、C1-C6烷基或C(O)-C1-C6烷基可任选地被选自卤素、氰基羟基、羧基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基和C3-C8环烷基的一个或多个取代基取代；
Q是H、NH2、NHRb、NRbRc、Rb或ORb，其中Rb和Rc各自独立是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～7元杂环烷基、5～10元杂芳基或-M1-T1，其中M1是键或可任选地被卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基连接基团，T1是C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～10元杂芳基，或者Rb和Rc和连接它们的N原子一同形成具有除所述N原子以外的0或1个额外的杂原子的4～7元杂环烷基，所述4～7元杂环烷基可任选地被C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代，且Rb、Rc和T1各自可任选地被选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
X是N或CRx，其中Rx是H、卤素、羟基、羧基、氰基或RS1，RS1是氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基，且RS1可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
L1是N(Y)、S、SO或SO2；
当L1是N(Y)时，L2是CO或不存在，或者当L1是S、SO或SO2时，L2不存在，其中当L2不存在时，Y是H、Rd、SO2Rd或CORd，或者当L2是CO时，Y是H或Rd，Rd是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基，Rd可任选地被选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺酰基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代，其中C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基还可任选地被C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代；
R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7各自独立地表示H、卤素、羟基、羧基、氰基、RS2，RS2是氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，各RS2可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
R8是H、卤素或RS3，RS3是C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，RS3可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基氨基、C1-C6烷氧基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基和C3-C8环烷基的一个或多个取代基取代；
R9是或其中Re、Rf、Rg、和Rh各自独立地是-M2-T2，其中M2是键、SO2、SO、S、CO、CO2、O、O-C1-C4烷基连接基团、C1-C4烷基连接基团、NH或N(Rt)，Rt是C1-C6烷基，且T2是H、卤素或RS4，RS4是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～8元杂环烷基或5～10元杂芳基，且O-C1-C4烷基连接基团、C1-C4烷基连接基团、Rt和RS4各自可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代，Ri是H或可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代的C1-C6烷基，D是O、NRj或CRjRk，Rj和Rk各自独立地是H或C1-C6烷基，或者Rj和Rk与连接它们的碳原子共同形成C3-C10环烷基环，E是-M3-T3，M3是键或可任选地被卤素或氰基取代的C1-C6烷基连接基团，T3是C3-C10环烷基、C6-C10芳基、5～10元杂芳基或4～10元杂环烷基，且T3可任选地被选自卤素、羟基、巯基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷硫基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6卤素烷基磺酰基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧基羰基、氧代、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C4-C12烷基环烷基、C6-C10芳基、C6-C10芳氧基、C7-C14烷基芳基、C6-C10氨基芳基氧基、C6-C10芳硫基、可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基取代的4～6元杂环烷基、可任选地被卤素、C1-C4烷基和C1-C6烷基(被羟基、卤素、C1-C6烷氧基羰基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、可进一步任选地被卤素、羟基或C1-C6烷氧基取代的4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代)取代的5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
q是0、1、2、3或4；
m是0、1或2；以及
n是0、1或2。
例如，m与n之和至少是1。
例如，m是1或2且n是0。
例如，m是2且n是0。
例如，A是CH2。
例如，A是O。
例如，L1是N(Y)。
例如，L1是SO或SO2。
例如，Y是Rd。
例如，Rd是C1-C6烷基。
例如，L2不存在。
例如，G和J各自独立地是ORa。
例如，Ra是H。
例如，R9是例如，R9是
例如，Re、Rf、Rg和Rh中的至少一个是卤素(例如F、Cl和Br)，可任选地被一个或多个卤素取代的C1-C6烷氧基(例如OCH3、OCH2CH3、O-iPr和OCF3)，可任选地被一个或多个卤素取代的C1-C6烷基磺酰基(例如SO2CF3)，或者可任选地被一个或多个卤素取代的C1-C6烷基(例如CH3、异丙基、正丁基和CF3)。
例如，Ri是H或C1-C6烷基(例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基和正己基)。
例如，是未取代的苯并咪唑基或以下基团中的一个：
例如，R9是
例如，D是O。
例如，D是NRj。
例如，Rj是H。
例如，D是CRjRk。
例如，Rj和Rk各为H。
例如，E是一M3-T3，其中M3是键或C1-C3烷基连接基团，T3是苯基、萘基、噻吩基、环丙基或环己基，并且T3可任选地被选自卤素、羟基、巯基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷硫基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧基羰基、氧代、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C4-C12烷基环烷基、C6-C10芳基、C6-C10芳氧基、C7-C14烷基芳基、C6-C10氨基芳氧基、C6-C10芳硫基、可任选地被C1-C4烷基取代的4～6元杂环烷基、可任选地被C1-C4烷基和C1-C6烷基(被羟基、C1-C6烷氧基羰基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代)取代的5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代。
例如，T3是可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基(例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基和正己基)、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基磺酰基、C6-C10芳基(例如，苯基和萘基)和C6-C10芳氧基，以及C7-C14烷基芳基的一个或多个取代基取代的苯基。
例如，E是 或
例如，X是N。
例如，X是CRx。
例如，X是CH。
例如，Q是NH2或NHRb，其中Rb是-M1-T1，M1是键或C1-C6烷基连接基团，T1是C3-C8环烷基。
例如，Q是H。
例如，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各为H。
例如，当R8是卤素且连接与J相同的碳原子时，J不是羟基。
例如，当R8是卤素且连接与G相同的碳原子时，G不是羟基。
例如，当M2是SO2、SO、S、CO或O时，T2不是卤素。
例如，T2是通过杂原子连接M2的4～8元杂环烷基。
例如，T2是通过N原子连接M2的4～8元杂环烷基。
例如，T2是通过C原子连接M2的4～8元杂环烷基。
本发明提供式(II)化合物：
或其药学上可接受的盐或酯，式中：
A是O或CH2；
Q是H、NH2、NHRb、NRbRc、Rb或ORb，其中Rb和Rc各自独立地是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～7元杂环烷基、5～10元杂芳基或一M1-T1，其中M1是键或可任选地被卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基连接基团且T1是C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～10元杂芳基，或者Rb和Rc和连接它们的N原子一同形成具有除所述N原子以外的0或1个额外杂原子的4～7元杂环烷基，所述4～7元杂环烷基可任选地被C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代，并且Rb、Rc和T1各自可任选地被选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
X是N或CRx，其中Rx是H、卤素、羟基、羧基、氰基或RS1，RS1是氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基，且RS1可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
L1是N(Y)、S、SO或SO2；
当L1是N(Y)时，L2是CO或不存在，或者当L1是S、SO或SO2时，L2不存在，其中当L2不存在时，Y是H、Rd、SO2Rd或CORd，或者当L2是CO时，Y是H或Rd，Rd是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基，Rd可任选地被选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺酰基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代，其中C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基还可任选地被C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代；
R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7各自独立地表示H、卤素、羟基、羧基、氰基、RS2，RS2是氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，且各RS2可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
R8是H、卤素或RS3，RS3是C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，且RS3可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基氨基、C1-C6烷氧基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基和C3-C8环烷基的一个或多个取代基取代；
R9是或其中Re、Rf、Rg、和Rh各自独立地是-M2-T2，其中M2是键、SO2、SO、S、CO、CO2、O、O-C1-C4烷基连接基团、C1-C4烷基连接基团、NH或N(Rt)，Rt是C1-C6烷基，T2是H、卤素或RS4，RS4是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～8元杂环烷基或5～10元杂芳基，且O-C1-C4烷基连接基团、C1-C4烷基连接基团、Rt和RS4各自可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代，Ri是H或可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代的C1-C6烷基，D是O、NRj或CRjRk，Rj和Rk各自独立是H或C1-C6烷基，或者Rj和Rk和连接它们的碳原子共同形成C3-C10环烷基环，E是-M3-T3，M3是键或可任选地被卤素或氰基取代的C1-C6烷基连接基团，T3是C3-C10环烷基、C6-C10芳基、5～10元杂芳基或4～10元杂环烷基，且T3可任选地被选自卤素、羟基、巯基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷硫基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6卤代烷基磺酰基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧基羰基、氧代、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C4-C12烷基环烷基、C6-C10芳基、C6-C10芳氧基、C7-C14烷基芳基、C6-C10氨基芳基氧基、C6-C10芳硫基、可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基取代的4～6元杂环烷基、可任选地被卤素、C1-C4烷基和C1-C6烷基(被羟基、卤素、C1-C6烷氧基羰基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、可进一步任选地被卤素、羟基或C1-C6烷氧基取代的4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代)取代的5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
q是0、1、2、3或4；
m是0、1或2；以及
n是0、1或2。
例如，m与n之和至少是1。
例如，m是1或2且n是0。
例如，m是2且n是0。
例如，A是CH2。
例如，A是O。
例如，L1是N(Y)。
例如，L1是SO或SO2。
例如，Y是Rd。
例如，Rd是C1-C6烷基。
例如，L2不存在。
例如，R9是例如，R9是
例如，Re、Rf、Rg和Rh中的至少一个是卤素(例如F、Cl和Br)、可任选地被一个或多个卤素取代的C1-C6烷氧基(例如OCH3、OCH2CH3、O-iPr和OCF3)，可任选地被一个或多个卤素取代的C1-C6烷基磺酰基(例如SO2CF3)，或可任选地被一个或多个卤素取代的C1-C6烷基(例如CH3、异丙基、正丁基和CF3)。
例如，Ri是H或C1-C6烷基(例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基或正己基)。
例如，是未取代的苯并咪唑基或以下基团中的一个：
例如，R9是
例如，D是O。
例如，D是NRj。
例如，Rj是H。
例如，D是CRjRk。
例如，Rj和Rk各为H。
例如，E是-M3-T3，其中M3是键或C1-C3烷基连接基团，T3是苯基、萘基、噻吩基、环丙基或环己基，且T3可任选地被选白卤素、羟基、巯基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷硫基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧基羰基、氧代、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C4-C12烷基环烷基、C6-C10芳基、C6-C10芳氧基、C7-C14烷基芳基、C6-C10氨基芳氧基、C6-C10芳硫基、可任选地被C1-C4烷基取代的4～6元杂环烷基、可任选地被C1-C4烷基和C1-C6烷基(被羟基、C1-C6烷氧基羰基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代)取代的5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代。
例如，T3是可任选地被选白卤素、羟基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基(例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基和正己基)、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基磺酰基、C6-C10芳基(例如，苯基和萘基)和C6-C10芳氧基，以及C7-C14烷基芳基的一个或多个取代基取代的苯基。
例如，E是 或
例如，X是N。
例如，X是CRx。
例如，X是CH。
例如，Q是NH2或NHRb，其中Rb是-M1-T1，M1是键或C1-C6烷基连接基团，T1是C3-C8环烷基。
例如，Q是H。
例如，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各为H。
例如，当R8是卤素且连接与J相同的碳原子时，J不是羟基。
例如，当R8是卤素且连接与G相同的碳原子时，G不是羟基。
例如，当M2是SO2、SO、S、CO或O时，T2不是卤素。
例如，T2是通过杂原子连接M2的4～8元杂环烷基。
例如，T2是通过N原子连接M2的4～8元杂环烷基。
例如，T2是通过C原子连接M2的4～8元杂环烷基。
本发明提供式(IIIa)或(IIIb)化合物：
或
或其药学上可接受的盐或酯，式中：
A是O或CH2；
G和J各自独立地是H、卤素、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基或ORa，Ra是H、C1-C6烷基或C(O)-C1-C6烷基，其中，C(O)O-C1-C6烷基、C1-C6烷基或C(O)-C1-C6烷基可任选地被选自卤素、氰基羟基、羧基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基和C3-C8环烷基的一个或多个取代基取代；
Q是H、NH2、NHRb、NRbRc、Rb或ORb，其中Rb和Rc各自是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～7元杂环烷基、5～10元杂芳基或-M1-T1，其中M1是键或可任选地被卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基连接基团，T1是C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～10元杂芳基，或者Rb和Rc和连接它们的N原子一同形成具有除所述N原子以外的0或1个额外杂原子的4～7元杂环烷基，所述4～7元杂环烷基可任选地被C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代，且Rb、Rc和T1各自可任选地被选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
X是N或CRx，其中Rx是H、卤素、羟基、羧基、氰基或RS1，RS1是氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基，且RS1可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
L1是N(Y)、S、SO或SO2；
当L1是N(Y)时，L2是CO或不存在，或者当L1是S、SO或SO2时，L2不存在，其中当L2不存在时，Y是H、Rd、SO2Rd或CORd，或者当L2是CO时，Y是H或Rd，Rd是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基，Rd可任选地被选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺酰基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代，其中C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基还可任选地被C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代；
R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7各自独立地是H、卤素、羟基、羧基、氰基、RS2，RS2是氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，且各RS2可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
R8是H、卤素或RS3，RS3是C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，且RS3可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基氨基、C1-C6烷氧基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基和C3-C8环烷基的一个或多个取代基取代；
Re、Rf、Rg和Rh各自独立地是-M2-T2，其中M2是键、SO2、SO、S、CO、CO2、O、O-C1-C4烷基连接基团、C1-C4烷基连接基团、NH或N(Rt)，Rt是C1-C6烷基，T2是H、卤素或RS4，RS4是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～8元杂环烷基或5～10元杂芳基，且O-C1-C4烷基连接基团、C1-C4烷基连接基团、Rt和RS4各自可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代，
Ri是H或可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代的C1-C6烷基；
q是0、1、2、3或4；
m是0、1或2；以及
n是0、1或2。
例如，m与n之和至少是1。
例如，m是1或2且n是0。
例如，m是2且n是0。
例如，A是CH2。
例如，A是O。
例如，L1是N(Y)。
例如，L1是SO或SO2。
例如，Y是Rd。
例如，Rd是C1-C6烷基。
例如，L2不存在。
例如，G和J各自独立地是ORa。
例如，Ra是H。
例如，Re、Rf、Rg和Rh中的至少一个是卤素(例如F、Cl和Br)、可任选地被一个或多个卤素取代的C1-C6烷氧基(例如OCH3、OCH2CH3、O-iPr-和OCF3)、可任选地被一个或多个卤素取代的C1-C6烷基磺酰基(例如SO2CF3)、或可任选地被一个或多个卤素取代的C1-C6烷基(例如CH3、异丙基、正丁基和CF3)。
例如，Ri是H或C1-C6烷基(例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基和正己基)。
例如，是未取代的苯并咪唑基或以下基团中的一个：
例如，X是N。
例如，X是CRx。
例如，X是CH。
例如，Q是NH2或NHRb，其中Rb是-M1-T1，M1是键或C1-C6烷基连接基团，T1是C3-C8环烷基。
例如，Q是H。
例如，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各为H。
例如，当R8是卤素且连接与J相同的碳原子时，J不是羟基。
例如，当R8是卤素且连接与G相同的碳原子时，G不是羟基。
例如，当M2是SO2、SO、S、CO或O时，T2不是卤素。
例如，T2是通过杂原子连接M2的4～8元杂环烷基。
例如，T2是通过N原子连接M2的4～8元杂环烷基。
例如，T2是通过C原子连接M2的4～8元杂环烷基。
本发明提供式(IIIc)化合物：
或其药学上可接受的盐或酯，式中：
A是O或CH2；
G和J各自独立地是H、卤素、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基或ORa，Ra是H、C1-C6烷基或C(O)-C1-C6烷基，其中，C(O)O-C1-C6烷基、C1-C6烷基或C(O)-C1-C6烷基可任选地被选自卤素、氰基羟基、羧基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基和C3-C8环烷基的一个或多个取代基取代；
Q是H、NH2、NHRb、NRbRc、Rb或ORb，其中Rb和Rc各自独立是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～7元杂环烷基、5～10元杂芳基或-M1-T1，其中M1是键或可任选地被卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基连接基团，T1是C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～10元杂芳基，或者Rb和Rc和连接它们的N原子一同形成具有除所述N原子以外的0或1个额外杂原子的4～7元杂环烷基，所述4～7元杂环烷基可任选地被C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代，且Rb、Rc和T1各自可任选地被选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
X是N或CRx，其中Rx是H、卤素、羟基、羧基、氰基或RS1，RS1是氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基，且RS1可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
L1是N(Y)、S、SO或SO2；
当L1是N(Y)时，L2是CO或不存在，或者当L1是S、SO或SO2时，L2不存在，其中当L2不存在时，Y是H、Rd、SO2Rd或CORd，或者当L2是CO时，Y是H或Rd，Rd是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基，Rd可任选地被选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺酰基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代，其中C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基还可任选地被C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代；
R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7各自独立地是H、卤素、羟基、羧基、氰基、RS2，RS2是氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，且各RS2可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
R8是H、卤素或RS3，RS3是C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，RS3可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基氨基、C1-C6烷氧基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基和C3-C8环烷基的一个或多个取代基取代；
D是O、NRj或CRjRk，Rj和Rk各自独立地是H或C1-C6烷基，或Rj和Rk与连接它们的碳原子一同形成C3-C10环烷基环；
E是-M3-T3，M3是键或可任选地被卤素或氰基取代的C1-C6烷基连接基团，T3是C3-C10环烷基、C6-C10芳基、5～10元杂芳基或4～10元杂环烷基，且T3可任选地被选自卤素、羟基、巯基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷硫基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6卤代烷基磺酰基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧基羰基、氧代、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C4-C12烷基环烷基、C6-C10芳基、C6-C10芳氧基、C7-C14烷基芳基、C6-C10氨基芳氧基、C6-C10芳硫基、可任选地被卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基取代的4～6元杂环烷基、可任选地被卤素、C1-C4烷基和C1-C6烷基(被羟基、卤素、C1-C6烷氧基羰基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、可进一步任选地被卤素、羟基或C1-C6烷氧基取代的4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代)取代的5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
q是0、1、2、3或4；
m是0、1或2；以及
n是0、1或2。
例如，m与n之和至少是1。
例如，m是1或2且n是0。
例如，m是2且n是0。
例如，A是CH2。
例如，A是O。
例如，L1是N(Y)。
例如，L1是SO或SO2。
例如，Y是Rd。
例如，Rd是C1-C6烷基。
例如，L2不存在。
例如，G和J各自独立地是ORa。
例如，Ra是H。
例如，D是O。
例如，D是NRj。
例如，Rj是H。
例如，D是CRjRk。
例如，Rj和Rk各为H。
例如，E是-M3-T3，其中M3是键或C1-C3烷基连接基团，T3是苯基、萘基、噻吩基、环丙基或环己基，且T3可任选地被选自卤素、羟基、巯基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷硫基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧基羰基、氧代、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C4-C12烷基环烷基、C6-C10芳基、C6-C10芳氧基、C7-C14烷基芳基、C6-C10氨基芳氧基、C6-C10芳硫基、可任选地被C1-C4烷基取代的4～6元杂环烷基、可任选地被C1-C4烷基和C1-C6烷基(被羟基、C1-C6烷氧基羰基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代)取代的5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代。
例如，T3是可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、硝基、C1-C6烷基(例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基和正己基)、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6烷基磺酰基、C6-C10芳基(例如，苯基和萘基)和C6-C10芳氧基，以及C7-C14烷基芳基的一个或多个取代基取代的苯基。
例如，X是N。
例如，X是CRX。
例如，X是CH。
例如，Q是NH2或NHRb，其中Rb是-M1-T1，M1是键或C1-C6烷基连接基团，T1是C3-C8环烷基。
例如，Q是H。
例如，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各为H。
例如，当R8是卤素且连接与J相同的碳原子时，J不是羟基。
例如，当R8是卤素且连接与G相同的碳原子时，G不是羟基。
例如，当M2是SO2、SO、S、CO或O时，T2不是卤素。
例如，T2是通过杂原子连接M2的4～8元杂环烷基。
例如，T2是通过N原子连接M2的4～8元杂环烷基。
例如，T2是通过C原子连接M2的4～8元杂环烷基。
本发明还涉及式(IV)的化合物或其N-氧化物或药学上可接受的盐：
其中A是O或CH2；
Q是H、NH2、NHRb、NRbRc、OH、Rb或ORb，其中Rb和Rc各自独立是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～7元杂环烷基、5～10元杂芳基或-M1-T1，其中M1是键或可任选地被卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基连接基团且T1是C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～10元杂芳基，或者Rb和Rc和连接它们的N原子一同形成具有除所述N原子以外的0或1个额外杂原子的4～7元杂环烷基，所述4～7元杂环烷基可任选地被C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代，并且Rb、Rc和T1各自可任选地被选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
X是N或CRX，其中RX是H、卤素、羟基、羧基、氰基或RS1，RS1是氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基，且RS1可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
Y是H、Rd、SO2Rd或CORd，Rd是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基，且Rd可任选地被选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基磺酰基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代，并且其中的C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基还可任选地被C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、卤素、羟基、羧基、C(O)OH、C(O)O-C1-C6烷基、OC(O)-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基或5～6元杂芳基取代；
R1和R2各自独立地是H、卤素、羟基、羧基、氰基、RS2，RS2是氨基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C2-C6烯基或C2-C6炔基，且各RS2可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代；
Re、Rf、Rg和Rh各自独立地是-M2-T2，其中M2是键、SO2、SO、S、CO、CO2、O、O-C1-C4烷基连接基团、C1-C4烷基连接基团、NH或N(Rt)，Rt是C1-C6烷基，T2是H、卤素、或RS4，RS4是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～8元杂环烷基或5～10元杂芳基，且O-C1-C4烷基连接基团、C1-C4烷基连接基团、Rt和RS4各自可任选地被选自卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4～6元杂环烷基和5～6元杂芳基的一个或多个取代基取代，并且
m是0、1或2。
例如，A是O。在某些式(IV)化合物中，A是O且m是2。
在某些式(IV)化合物中，X是N。
例如，在某些化合物中，Q是NH2或NHRb，其中Rb是-M1-T1，M1是键或C1-C6烷基连接基团且T1是C3-C8环烷基。
例如，在某些式(IV)化合物中，R1和R2各为H。
在某些式(IV)化合物中，Y是Rd。例如，Rd是可任选被C3-C8环烷基或卤素取代的C1-C6烷基。例如，Rd是可任选被C1-C6烷基或卤素取代的C3-C8环烷基。
本发明还涉及式(IV)化合物，其中，Re、Rf、Rg和Rh中至少一个是卤素，可任选地被一个或多个卤素取代的C1-C6烷氧基；可任选地被一个或多个卤素取代的C1-C6烷基磺酰基；可任选地被选自CN、卤素、C3-C8环烷基、羟基和C1-C6烷氧基的一个或多个取代基取代的C1-C6烷基；可任选地被一个或多个C1-C6烷基或CN取代的C3-C8环烷基；或者可任选地被选自CN、卤素、羟基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基的一个或多个取代基取代的4～8元杂环烷基。例如，式(IV)化合物的Re、Rf、Rg和Rh中的至少一个选自F、Cl、Br、CF3、OCF3、SO2CF3；可任选地被选自CN、卤素、羟基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基的一个或多个取代基取代的氧杂环丁基(oxetanyl)；可任选地被选自C1-C4烷基的一个或多个取代基取代的C3-C8环烷基；以及可任选地被选自卤素、C3-C8环烷基、羟基和C1-C6烷氧基的一个或多个取代基取代的C1-C4烷基。
例如，本发明涉及式(IV)的化合物，其中Rf和Rg中至少一个是可任选地被羟基取代的烷基。例如，本发明涉及其中Rf和Rg中至少一个是被羟基取代的叔丁基的化合物。
本发明涉及选自化合物1-140的化合物。本发明还涉及选自化合物1-140的化合物的盐。本发明还涉及选自化合物1-140的化合物的N-氧化物。本发明还涉及选自化合物1-140的化合物的N-氧化物的盐。例如，本发明涉及选自化合物1-7、9-109和111-140的化合物。
本发明还涉及含治疗有效量的式(IV)化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明还涉及含治疗有效量的式(IV)化合物的盐和药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明还涉及含治疗有效量的式(IV)化合物的水合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明还涉及含治疗有效量的选自化合物1-140的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。本发明还涉及含治疗有效量的选自化合物1-140的化合物的盐和药学上可接受的载体的药物组合物。本发明还涉及含治疗有效量的选自化合物1-140的化合物的N-氧化物和药学上可接受的载体的药物组合物。本发明还涉及含治疗有效量的选自化合物1-140的化合物的盐的N-氧化物和药学上可接受的载体的药物组合物。本发明还涉及含治疗有效量的选自化合物1-140的化合物的水合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明提供包含式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)或(IIIc)中的一种或多种化合物和一种或多种药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明还涉及含治疗有效量的式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)或(IIIc)化合物的盐和药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明还涉及含治疗有效量的式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)或(IIIc)化合物的水合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明提供治疗或预防癌症的方法。本发明提供治疗癌症的方法。本发明还提供预防癌症的方法。本发明包括给予有需要的对象治疗有效量的式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)或(IIIc)化合物。所述癌症可以是血液癌症。优选所述癌症是白血病。更优选所述癌症是急性骨髓性白血病、急性淋巴细胞性白血病或混合谱系白血病。
本发明提供治疗或预防由染色体11q23上基因易位介导的疾病或紊乱的方法。本发明提供治疗由染色体11q23上基因易位介导的疾病或紊乱的方法。本发明还提供预防由染色体11q23上基因易位介导的疾病或紊乱的方法。本发明包括给予有需要的对象治疗有效量的式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物。
本发明提供治疗或预防由DOT1介导的蛋白甲基化起一定作用的疾病或紊乱或者由DOT1介导的蛋白甲基化介导的疾病或紊乱的方法。本发明提供治疗由DOT1介导的蛋白甲基化起一定作用的疾病或紊乱或者由DOT1介导的蛋白甲基化介导的疾病或紊乱的方法。本发明还提供预防由DOT1介导的蛋白甲基化起一定作用的疾病或紊乱或者由DOT1介导的蛋白甲基化介导的疾病或紊乱的方法。本发明包括给予有需要的对象治疗有效量的式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物。
本发明提供抑制细胞内DOT1L活性的方法。本发明包括使所述细胞接触有效量的式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物中的一种或多种。
本发明的其它方面还涉及减少细胞内组蛋白H3赖氨酸残基79(H3-K79)的甲基化水平的方法。所述方法包括使细胞接触本发明的化合物。所述方法可以用于改善由通过H3-K79甲基化的DOT1活性引起或加强的任何病症。
本发明涉及本文公开的化合物在制备用于治疗或预防癌症的药物中的应用。所述应用包括给予有需要的对象治疗有效量的式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物。所述癌症可以是血液癌症。优选所述癌症是白血病。更优选所述癌症是急性骨髓性白血病、急性淋巴细胞性白血病或混合谱系白血病。
本发明提供本文公开的化合物在制备用于治疗或预防由染色体11q23上基因易位介导的疾病或紊乱的药物中的应用。所述应用包括用于给予有需要的对象治疗有效量的式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物。
本发明提供本文公开的化合物在制备用于治疗或预防DOT1介导的蛋白甲基化起一定作用的疾病或紊乱或者由DOT1介导的蛋白甲基化介导的疾病或紊乱的药物中的应用。所述应用包括用于给予有需要的对象治疗有效量的式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物。
本发明提供本文公开的化合物在抑制细胞内DOT1L活性中的应用。所述应用包括使所述细胞接触有效量的式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)化合物中的一种或多种。
本发明的其它方面还涉及本文公开的化合物在减少细胞内组蛋白H3赖氨酸残基79(H3-K79)的甲基化水平中的应用。所述应用包括使细胞接触本发明的化合物。所述应用可改善由通过H3-K79甲基化的DOT1活性引起或加强的任何病症。
在本文所述式中，可从后文详细说明中定义的化学部分的相应组选择变量。
此外，本发明提供合成前述化合物的方法。合成之后，治疗有效量的所述化合物中的一种或多种可与药学上可接受的载体一同被配制用于给予哺乳动物(尤其是人类)，以调控表观遗传酶。在某些实施方式中，本发明的化合物有利于治疗、预防或降低癌症风险或者有利于制造用于治疗、预防或降低癌症风险的药物。因此，例如可通过口服、胃肠道外、耳部、眼部、鼻部或局部途径给予所述化合物或所述制剂以提供有效量的所述化合物至所述哺乳动物。
本发明的代表性化合物包括表1所列的化合物。
表1
本文中所用的“烷基”、“C1、C2、C3、C4、C5或C6烷基”或“C1-C6烷基”意图包括C1、C2、C3、C4、C5或C6直链(线性)饱和脂族烃基团和C3、C4、C5或C6支化饱和脂族烃基团。例如，C1-C6烷基意图包括C1、C2、C3、C4、C5和C6烷基基团。烷基的例子包括具有1～6个碳原子的部分，例如但不限于，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基或正己基。
在某些实施方式中，直链或支化烷基具有六个或更少碳原子(例如，针对直链为C1-C6，针对支链为C3-C6)，在其它实施方式中，直链或支化烷基具有四个或更少碳原子。
本文中所用的术语“环烷基”指的是具有3～30个碳原子(例如，C3-C10)饱和或不饱和非芳香烃单-或多-环***。环烷基的例子包括但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基和金刚烷基。所用术语“杂环烷基”指的是具有一个或多个杂原子(例如O、N、S或Se)的饱和或不饱和非芳香5～8元单环的、8～12元双环的或11～14元三环的环***。杂环烷基基团的例子包括但不限于，哌嗪基、吡咯烷基、二噁烷基、吗啉基和四氢呋喃基。
术语“可任选地被取代的烷基”指的是未被取代的烷基或在烃主链的一个或多个碳原子上以指定取代基替代一个或多个氢原子的烷基。所述取代基可包括，例如，烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸根合、亚膦酸根合、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、巯基羧酸酯、硫酸酯、烷基亚磺酰基、磺酸根合、氨磺酰基、亚磺酰氨基、硝基、三氯甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷芳基、或者芳族或杂芳族部分。
“芳基烷基”或“芳烷基”部分是被芳基取代的烷基(例如，苯基甲基(苄基))。“烷基芳基”部分是被烷基取代的芳基(例如，甲基苯基)。
本文中所用的“烷基连接基团”意图包括C1、C2、C3、C4、C5或C6直链(线性)饱和二价脂族烃基团和C3、C4、C5或C6支化饱和脂族烃基团。例如，C1-C6烷基连接基团意图包括C1、C2、C3、C4、C5和C6烷基连接基团。烷基连接基团的例子包括具有1～6个碳原子的部分，例如但不限于甲基(-CH2-)、乙基(-CH2CH2-)、正丙基(-CH2CH2CH2-)、异丙基(-CHCH3CH2-)、正丁基(-CH2CH2CH2CH2-)、仲丁基(-CHCH3CH2CH2-)、异丁基(-C(CH3)2CH2-)、正戊基(-CH2CH2CH2CH2CH2-)、仲戊基(-CHCH3CH2CH2CH2-)或正己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-)。
“烯基”包括长度相近的不饱和脂族基团且可被上述烷基所取代，但其至少含有一个双键。例如，所用术语“烯基”包括直链烯基基团(例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基)和支化烯基基团。在某些实施方式中，直链或支化烯基基团的主链上具有6个或更少的碳原子(例如，针对直链为C2-C6，针对支链为C3-C6)。术语“C2-C6”包括含有2～6个碳原子的烯基基团。术语“C3-C6”包括含有3～6个碳原子的烯基基团。
术语“可任选被取代的烯基”指的是未被取代的烯基或者在一个或多个烃主链碳原子上以指定的取代基替代一个或多个氢原子的烯基。所述取代基可包括，例如，烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸根合、亚膦酸根合、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、巯基羧酸酯、硫酸酯、烷基亚磺酰基、磺酸根合、氨磺酰基、亚磺酰氨基、硝基、三氯甲基、氰基、杂环基、烷基芳基、或者芳族或杂芳族部分。
“炔基”包括长度相近的不饱和脂族基团且可被上述烷基所取代，但其至少含有一个三键。例如，“炔基”包括直链炔基基团(例如，乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、庚炔基、辛炔基、壬炔基、癸炔基)和支化炔基基团。在某些实施方案中，直链或支化炔基基团的主链上具有6个或更少的碳原子(例如，针对直链为C2-C6、针对支链为C3-C6)。术语“C2-C6”包括含有2～6个碳原子的炔基基团。术语“C3-C6”包括含有3～6个碳原子的炔基基团。
术语“可任选地被取代的炔基”指的是未被取代的炔基或者在烃主链的一个或多个碳原子上以指定的取代基替代一个或多个氢原子的炔基。所述取代基可包括，例如，烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸根合、亚膦酸根合、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、巯基羧酸酯、硫酸酯、烷基亚磺酰基、磺酸根合、氨磺酰基、亚磺酰氨基、硝基、三氯甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基、或者芳族或杂芳族部分。
其它可任选地被取代的部分(例如可任选取代的环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基)包括未被取代的部分和具有一个或多个指定取代基的部分二者。
“芳基”包括具有芳香性的基团，包括“共轭的”或具有至少一个芳香环且在所述环结构中不含任何杂原子的多环***。例子包括苯基、苄基、1，2，3，4-四氢萘基等。
“杂芳基”基团是在环结构中具有1～4个杂原子的如上定义的芳基基团，并且还可称为“芳基杂环”或“杂芳族”。本文中所用的术语“杂芳基”意图包括稳定的5或6元单环或7、8、9、10、11或12元双环芳族杂环，其由碳原子和一个或多个杂原子(例如1或1-2或1-3或1-4或1-5或1-6个杂原子，或例如1、2、3、4、5或6个杂原子)组成，所述杂原子独立地选自氮、氧和硫。所述氮原子可以是被取代或未取代的(即，N或NR，其中R是H或如上定义的其它取代基)。所述氮和硫杂原子可任选地被氧化(即，N→O和S(O)p，其中p＝1或2)。应注意，所述芳族杂环中S和O原子的总数不多于1。
杂芳基基团的例子包括吡咯、呋喃、噻吩、噻唑、异噻唑、咪唑、***、四唑、吡唑、噁唑、异噁唑、吡啶、吡嗪、哒嗪、嘧啶等。
此外，术语“芳基”和“杂芳基”包括多环芳基和杂芳基基团，例如，三环、二环，例如萘、苯并噁唑、苯并二噁唑、苯并噻唑、苯并咪唑、苯并噻吩、亚甲二氧基苯基、喹啉、异喹啉、萘啶、吲哚、苯并呋喃、嘌呤、苯并呋喃、氮杂嘌呤、中氮茚。
在多环芳族环的情况中，仅一个环必须是芳族环(例如，2，3-二氢吲哚)，尽管所有环均可以是芳族环(例如，喹啉)。第二个环还可以是稠合的或桥接的。
芳基或杂芳基芳族环可在一个或多个环位置上被上述取代基取代，所述取代基例如烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、烷氧基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸酯、烷基羰基、烷基氨基羰基、芳烷基氨基羰基、烯基氨基羰基、烷基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、烯基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基硫羰基、磷酸酯、膦酸根合、亚膦酸根合、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、巯基羧酸酯、硫酸酯、烷基亚磺酰基、磺酸根合、氨磺酰基、亚磺酰氨基、硝基、三氯甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷芳基、或者芳族或杂芳族部分。芳基基团还可与脂环或杂环稠合或桥接，因其不属于芳族所以形成多环***(例如，萘满、亚甲二氧基苯基)。
本文中所用的“碳环”或“碳环的环”意图包括任何稳定的具有特定数量的碳原子的单环、二环或三环形环，所述碳原子中任何一个都可以是饱和的、不饱和的或芳族的。例如，C3-C14碳环意图包括具有3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个碳原子的单环、二环或三环。碳环的例子包括但不限于，环丙基、环丁基、环丁烯基、环戊基、环戊烯基、环己基、环庚烯基、环庚基、环庚烯基、金刚烷基、环辛基、环辛烯基、环辛二烯基、芴基、苯基、萘基、茚满基、金刚烷基和四氢萘基。桥环也包括在碳环的定义内，包括，例如，[3.3.0]二环辛烷、[4.3.0]二环壬烷、[4.4.0]二环癸烷和[2.2.2]二环辛烷。当一个或多个碳原子连接两个非毗邻碳原子时产生桥环。在一个实施方式中，桥环是一个或两个碳原子。应注意，桥环常使单环转变成三环。当环桥接时，所述环上的取代基也可出现在桥接上。还包括稠合的环(例如，萘基、四氢萘基)和螺环。
本文中所用的“杂环”包括含有至少一个环杂原子(例如，N、O或S)的任何环结构(饱和或部分不饱和)。杂环的例子包括但不限于，吗啉、吡咯烷、四氢噻吩、哌啶、哌嗪和四氢呋喃。
杂环基团的例子包括但不限于：吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并噁唑啉基、苯并噻唑基、苯并***基、苯并四唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、色烯(苯并吡喃)基、噌啉基、十氢喹啉基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2，3-b]四氢呋喃、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、假吲哚基、二氢吲哚基、中氮茚基、吲哚基、3H-吲哚基、靛红酰基、异苯并呋喃基、异苯并二氢吡喃基、异吲唑基、异二氢吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、亚甲二氧基苯基、吗啉基、萘啶基、八氢异喹啉基、噁二唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基、1，2，4-噁二唑5(4H)-酮、噁唑烷基、噁唑基、羟吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、二苯并氧硫杂环己二烯基(phenoxathinyl)、吩噁嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并噁唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基、6H-1，2，5-噻二嗪基、1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基(thienyl)、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、苯硫基、三嗪基、1，2，3-***基、1，2，4-***基、1，2，5-***基、1，3，4-***基和呫吨基。
本文所用的术语“被取代的”表示指定原子上的任何一个或多个氢原子被指示基团替代，条件是不超过所述指定原子的正常化合价并且生成稳定化合物。当取代基是氧代或酮(即，＝O)时，则所述原子上有两个氢原子被替代。在芳族部分不存在酮取代基。本文中所用的环双键是在两个毗邻环原子之间形成的双键(例如C＝C、C＝N或N＝N)。“稳定化合物”和“稳定结构”意指具有充分强度而能从反应混合物分离成有用纯度、并且能配制成有效治疗剂的化合物。
当连接取代基的键显示为跨过连接环内两个原子的键时，所述取代基可键合至所述环中的任何原子。当没有表示所列取代基通过哪个原子连接所给式的化合物的其它部分时，所述取代基可通过该式中的任何原子键合。只有当取代基和/或变量的组合产生稳定化合物时，才允许该组合。
当在化合物的任何组成或式中出现一次以上的任何变量时(例如R1)，其每次出现的定义独立于各其它出现的定义。因此，例如，若显示一个基团被0-2个R1部分取代，则该基团可任选地被至多两个R1部分取代，且每次出现R1都独立地选自R1的定义。并且，只有取代基和/或变量的组合产生稳定的化合物时，才允许该组合。
术语“羟基”或“氢氧基”包括带有-OH或-O-的基团。
本文中所用的“卤”或“卤素”指的是氟基、氯基、溴基和碘基。术语“全卤代的”一般指的是所有氢原子被卤素原子替代的部分。术语“卤代烷基”或“卤代烷氧基”指的是被一个或多个卤素原子取代的烷基或烷氧基。
术语“羰基”包括含有通过双键连接氧原子的碳的化合物和部分。含有羰基的部分的例子包括但不限于醛、酮、羧酸、酰胺、酯、酐等。
术语“羧基”指的是一COOH或其C1-C6烷基酯。
“酰基”指的是含有酰基基团(R-C(O)-)或羰基基团的部分。“被取代的酰基”包括其一个或多个氢原子被例如烷基基团、炔基基团、卤素、羟基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸根合、亚膦酸根合、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、巯基羧酸酯、硫酸酯、烷基亚磺酰基、磺酸根合、氨磺酰基、亚磺酰氨基、硝基、三氯甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基、或者芳族或杂芳族部分的取代基替代的酰基基团。
“芳酰基”包括芳基或杂芳族部分键合至羰基基团的部分。芳酰基基团的例子包括苯基羧基、萘基羧基等。
“烷氧基烷基”、“烷基氨基烷基”和“硫代烷氧基烷基”包括如上所述的烷基基团，其中氧、氮或硫原子替代一个或多个烃主链碳原子。
术语“烷氧基的”或“烷氧基”包括共价连接氧原子的被取代或未取代的烷基、烯基和炔基基团。烷氧基基团的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、异丙氧基、丙氧基、丁氧基和戊氧基基团。取代的烷氧基基团的例子包括卤代烷氧基基团。所述烷氧基基团可被以下基团取代，例如，烯基、炔基、卤素、羟基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸根合、亚膦酸根合、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、巯基羧酸酯、硫酸、烷基亚磺酰基、磺酸根合、氨磺酰基、亚磺酰氨基、硝基、三氯甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷芳基、或者芳族或杂芳族部分。被卤素取代的烷氧基基团的例子包括但不限于，氟代甲氧基、二氟代甲氧基、三氟代甲氧基、氯代甲氧基、二氯代甲氧基和三氯代甲氧基。
术语“醚”或“烷氧基”包括含有键合至两个碳原子或杂原子的氧的化合物或部分。例如，所述术语包括“烷氧基烷基”指的是共价键合至氧原子的烷基、烯基或炔基基团，而该氧原子共价键合至烷基基团。
术语“酯”包括含有连接至氧原子的碳或杂原子的化合物或部分，所述氧原子键合至羰基基团的碳。术语“酯”包括烷氧基羧基基团，例如，甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、丁氧基羰基、戊氧基羰基等。
术语“硫代烷基”包括含有连接硫原子的烷基基团的化合物或部分。所述硫代烷基基团可被以下基团取代，例如，烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、芳氧基羰基氧基、羧酸酯、羧酸、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫羰基、烷氧基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、巯基羧酸酯、硫酸酯、烷基亚磺酰基、磺酸根合、氨磺酰基、亚磺酰氨基、硝基、三氯甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基、或者芳族或杂芳族部分。
术语“硫代羰基”或“硫代羧基”包括含有通过双键连接硫原子的碳的化合物和部分。
术语“硫醚”包括含有键合至两个碳原子或杂原子的硫原子的部分。硫醚的例子包括但不限于烷基硫代烷基、烷基硫代烯基和烷基硫代炔基。术语“烷基硫代烷基”包括以烷基、烯基或炔基基团键合至硫原子的部分，而该硫原子键合至烷基基团。类似地，术语“烷基硫代烯基”指的是其中烷基、烯基和炔基基团键合至硫原子、且该硫原子共价键合至烯基基团的部分；以及“烷基硫代炔基”指的是其中烷基、烯基或炔基基团键合至硫原子、且该硫原子共价键合至炔基基团的部分。
本文中所用的“胺”或“氨基”指的是未被取代或取代的-NH2。“烷基氨基”包括其中-NH2的氮连接至少一个烷基基团的化合物的基团。烷基氨基基团的例子包括苄基氨基、甲基氨基、乙基氨基、苯乙基氨基等。“二烷基氨基”包括其中-NH2的氮连接至少两个其它烷基基团的基团。二烷基氨基基团的例子包括但不限于，二甲基氨基和二乙基氨基。“芳基氨基”和“二芳基氨基”包括其中N分别连接至少一个或两个芳基基团的基团。“氨基芳基”和“氨基芳氧基”指的是被氨基取代的芳基和芳氧基。“烷基芳基氨基”、“烷基氨基芳基”或“芳基氨基烷基”指的是连接至少一个烷基基团和至少一个芳基基团的氨基基团。“烷基氨基烷基”指的是连接氮原子的烷基、烯基或炔基基团，所述氮原子还连接另一个烷基基团。“酰基氨基”包括其中氮原子连接酰基基团的基团。酰基氨基的例子包括但不限于，烷基羰基氨基、酰基羰基氨基、氨甲酰基和脲基基团。
术语“酰胺”或“氨基羧基”包括含有连接至羰基或硫代羰基基团的碳原子的氮原子的化合物或部分。所述术语包括“烷基氨基羧基”基团，其包括连接至氨基基团的烷基、烯基或炔基基团，而该氨基基团连接至羰基或硫代羰基基团的碳。所述术语还包括“芳基氨基羧基”基团，其包括连接至氨基基团的芳基或杂芳基部分，而该氨基基团连接至羰基或硫代羰基基团的碳。术语“烷基氨基羧基”、“烯基氨基羧基”、“炔基氨基羧基”和“芳基氨基羧基”包括其中的烷基、烯基、炔基和芳基部分分别连接氮原子、且所述氮原子进而连接羰基基团上的碳的部分。酰胺可被例如直链烷基、支化烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环的取代基取代。酰胺基团上的取代基可进一步被取代。
可通过用氧化剂(例如，3-氯过氧苯甲酸(mCPBA)和/或过氧化氢)处理本发明的含氮化合物转换成N-氧化物以提供本发明的其它化合物。因此，当化合价和结构允许时，考虑所有显示的和要求保护的含氮化合物，包括所示化合物及其N-氧化衍生物(其可被指定为N→O或N+-O-)。此外，在其它例子中，可将本发明化合物中的氮转化为N-羟基化合物或N-烷氧基化合物。例如，N-羟基化合物可通过由氧化剂(例如m-CPBA)氧化现有的胺来制备。在化合价和结构允许时，还考虑所有显示的和要求保护的含氮化合物，涵盖所示化合物及其N-羟基衍生物(即，N-OH)和N-烷氧基衍生物(即，N-OR，其中R是取代或未取代的C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6炔基、3-14元碳环或3-14元杂环)。
在本说明书中，在一些情况中为方便起见，化合物的结构式代表特定的异构体，但本发明包括所有异构体，例如几何异构体、基于不对称碳原子的光学异构体、立体异构体、互变异构体等。此外，所述式代表的化合物可具有结晶多晶型。应注意，本发明化合物的任何晶型、晶型混合物或其酐或水合物都包括在本发明的范围内。此外，在体内降解本发明化合物而生成的所谓代谢物包括在本发明的范围内。
“异构”指的是具有同样分子式但原子连接序列或其原子的空间排列不同的化合物。原子空间排列不同的异构体称为“立体异构体”。彼此不成镜像的立体异构体称为“非对映异构体”，而彼此成不可叠加镜像的异构体称为“对映异构体”或有时称为光学异构体。含有等量相对手性的各对映异构体形式的混合物称为“外消旋混合物”。
连接四个不相同取代基的碳原子称为“手性中心”。
“手性异构体”指的是具有至少一个手性中心的化合物。具有多于一个手性中心的化合物可以个别非对映异构体形式或以非对映异构体的混合物(称为“非对映体混合物”)形式存在。当存在一个手性中心时，立体异构体的特征是该手性中心的绝对构型(R或S)。绝对构型指的是取代基连接手性中心的空间排列。根据Cahn、Ingold和Prelog的序列规则(SequenceRule)来排序连接至手性中心的取代基。(Cahn等，Angew.Chem.Inter.Edit.1966，5，385；errata511；Cahn等，Angew.Chem.1966，78，413；Cahn和Ingold，J.Chem.Soc.1951(London)，612；Cahn等，Experientia1956，12，81；Cahn，J.Chem.Educ.1964，41，116)。
“几何异构体”指的是因为绕其双键或环烷基连接基团(例如，1，3-环丁基)的受阻转动而存在的非对映异构体。这些构型通过前缀顺式和反式或Z和E而拥有不同的名称，根据Cahn-Ingold-Prelog规则，所述前缀表示所述基团在该分子中的双键相同侧或相对侧。
应理解，本发明的化合物可描述为不同手性异构体或几何异构体。还应理解，当化合物具有手性异构或几何异构形式时，表示所有异构形式都意图包括在本发明的范围内，并且所述化合物的命名不排除任何异构形式。
例如，式(I)的化合物包括以下手性异构体和几何异构体中的那些。
此外，本发明讨论的结构和其它化合物包括其所有阿托异构体(Atropicisomers)。“阿托异构体”是立体异构体的一种类型，其中两个异构体的原子空间排列不同。阿托异构体由于围绕中心键的大基团旋转的阻碍使其存在旋转限制。所述阿托异构体通常以混合物形式存在，然而，因近期在色谱技术领域的进步，已可在所选的情况中分离两种阿托异构体的混合物。
“互变异构体”是平衡存在的两种或更多种结构异构体之一，其易于从一种异构体形式转换成另一种异构体形式。这种转换造成伴随相邻共轭氢键转变的氢原子的形式迁移。互变异构体在溶液中以互变集合的混合物形式存在。在允许互变异构化的溶液中，互变异构体会达到化学平衡。所述互变体的精确比例取决于若干因素，包括温度、溶剂和pH。互变异构体可由互变异构化而相互转换的概念称为互变异构性。
可能的各种互变异构性类型中，常见的有两种。在酮-烯醇互变异构中，电子和氢原子转移同时发生。环-链互变异构性源自糖链分子中的醛基团(-CHO)与相同分子中的一个羟基基团(-OH)反应生成用葡萄糖表示的环(环形)形式。
常见的互变异构体对是：杂环中(例如，在核碱基例如鸟嘌呤、胸腺嘧啶和胞嘧啶中)的酮-烯醇、酰胺-腈、内酰胺-内酰亚胺、酰胺-酰亚氨酸互变异构体，胺-烯胺和烯胺-烯胺。苯并咪唑也呈互变异构体，当苯并咪唑在第4、5、6或7位含有一个或多个取代基时，可能出现不同的异构体。例如，2，5-二甲基-1H-苯并[d]咪唑可以通过互变异构化与其异构体2，6-二甲基-1H-苯并[d]咪唑平衡存在。
互变异构的另一个例子如下所示。
应理解，本发明的化合物可描述为不同互变异构体。还应理解，当化合物具有互变异构形式时，意图将所有互变异构形式都包括在本发明的范围内，并且所述化合物的命名不排除任何互变异构形式。
术语“结晶多型体”、“多形体”或“晶型”指的是化合物中的结晶结构，其中化合物(或其盐或溶剂合物)可以不同结晶堆积(packing)排列进行结晶，其都具有相同的元素组成。不同结晶形式通常具有不同X射线衍射图案，红外图谱、熔点、密度硬度、晶体形状、光学和电性质、稳定性和溶解性。重结晶溶剂、结晶速率、储藏温度和其它因素可导致一种晶体形式成为主要晶型。可通过在不同条件下的结晶化作用制备所述化合物的结晶多型。
本发明的化合物可以是晶体、半晶体、非晶体、无定形化合物或介晶化合物。
式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)的化合物包括所述化合物本身及其N-氧化物、盐、其溶剂合物及其可应用的药物前体。例如，在经取代的嘌呤或7-氮杂嘌呤化合物上，可形成介于阴离子和带正电基团(例如，氨基)之间的盐。合适的阴离子包括氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、硫酸氢根、氨基磺酸根、硝酸根、磷酸根、柠檬酸根、甲磺酸根、三氟乙酸根、谷氨酸根、葡糖醛酸根、戊二酸根、苹果酸根、马来酸根、琥珀酸根、富马酸根、酒石酸根、甲苯磺酸根、水杨酸根、乳酸根、萘磺酸根和醋酸根。同样地，在经取代的嘌呤或7-氮杂嘌呤化合物上，还可形成介于阳离子和带负电基团(例如，羧酸根)之间的盐。合适的阳离子包括钠离子、钾离子、镁离子、钙离子和铵阳离子例如四甲基铵离子。经取代的嘌呤或7-氮杂嘌呤化合物还包括含有季氮原子的那些盐。药物前体的例子包括酯和其它药学上可接受的衍生物，其通过给予对象而能够提供活性经取代的嘌呤或7-氮杂嘌呤化合物。
此外，本发明的化合物，例如，所述化合物的盐，可以以水合或非水合(无水)形式或以与其它溶剂分子的溶剂合物形式存在。水合物的非限制性例子包括半水合物、单水合物、二水合物、三水合物等。溶剂合物的非限制性例子包括乙醇溶剂合物、丙酮溶剂合物等。
“溶剂合物”指的是含有化学计量或非化学计量溶剂的溶剂加成形式。一些化合物趋于以晶状固态捕集固定摩尔比例的溶剂分子，从而形成溶剂合物。若溶剂是水，则形成的溶剂合物是水合物；若溶剂是醇，则形成的溶剂合物是醇化物。水合物通过使一个或多个水分子与所述物质的一个分子结合而形成，其中所述水保持其分子状态为H2O。半水合物通过使一个水分子与所述物质的多于一个分子结合而形成，其中所述水保持其分子状态为H2O。
本文中所用的术语“类似物”指的是结构上与一种化合物相似但组成上稍有不同的另一种化合物(比如一个原子由另一元素的原子替代，或存在特定官能团，或一个官能团由另一个官能团替代)。因此，类似物是与对照化合物在功能和外观上相似或相当，但结构或来源不同的化合物。
本文中定义的术语“衍生物”指的是具有常规核心结构但被本文所述的不同基团取代的化合物。例如，式(I)代表的全部化合物都是经取代的嘌呤化合物或经取代的7-氮杂嘌呤化合物，但以式(I)作为常规核心。
术语“生物电子等排体”指的是由原子或原子基团与另一种广义近似的原子或原子基团交换生成的化合物。生物电子等排替代的目的是生成具有与母体化合物生物性质相似的新型化合物。所述生物电子等排替代可以物理化学或拓扑学为基础。羧酸生物电子等排体的例子包括但不限于，酰基磺酰胺、四唑、磺酸盐和膦酸盐。参见例如，Patani和LaVoie，Chem.Rev.96，3147-3176，1996。
本发明意在囊括提出的所有化合物中出现的原子的全部同位素。同位素包括具有相同原子序号但不同质量数的那些原子。通过一般实施例的非限制方式，氢的同位素包括氚和氘，碳的同位素包括C-13和C-14。
2.经取代的嘌呤化合物和经取代的7-氮杂嘌呤化合物的合成
本发明提供合成式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)和(IV)化合物的方法。本发明还提供根据以下实施例中所示方案合成本发明公开的不同化合物的详细方法。
通过该说明书，当描述组合物具有、包括或包含具体成分时，也意指所述组合物基本由或由所述成分组成。类似地，当描述方法或过程具有、包括、包含具体工艺步骤时，所述过程也基本由或由所述工艺步骤组成。此外，应理解，只要本发明保持可行，步骤的顺序或进行某些动作的顺序是不重要的。而且，可同时实施两个或多个步骤或动作。
本发明的合成过程可允许多种官能团，因此可使用多种被取代的起始材料。所述过程一般在总体过程结束或接近结束时提供所需最终化合物，尽管在某些例子中希望将所得化合物进一步转换成药学上可接受的盐、酯或其药物前体。
可使用市售可得的起始材料、文献中已知的化合物或由易制备的中间体，通过采用本领域技术人员已知的标准合成方法和过程或技术员按本文指导显而易见的合成方法和过程，通过不同方式制备本发明的化合物。用于有机分子制备和官能团转化与操控的标准合成方法和过程可获自相关科学文献或获自本领域的标准教材。尽管不受任何一个或数个来源限制，经典教材例如Smith，M.B.，March，J.，March’sAdvancedOrganicChemistry：Reactions，Mechanisms，andStructure(《马奇高等有机化学：反应，机理和结构》)，第五版，纽约的约翰威利父子公司(JohnWiley&Sons：NewYork)，2001；Greene，T.W.，Wuts，P.G.M.，ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis(《有机合成中的保护基团》)，第三版，纽约的约翰威利父子公司，1999；R.Larock，ComprehensiveOrganicTransformations(《复杂有机转化》)，VCH出版社(1989)；L.Fieser和M.Fieser，FieserandFieser’sReagentsforOrganicSynthesis(《Fieser和用于有机合成的Fieser试剂》)，约翰威利父子公司(1994)；和L.Paquette编，EncyclopediaofReagentsforOrganicSynthesis(《有机合成试剂百科全书》)，约翰威利父子公司(1995)，其全文通过引用纳入本文，是有用且被本领域技术人员已知公认的有机合成参考教材。以下合成方法的描述旨在说明而非限制制备本发明化合物的一般方法。
本发明的化合物可通过本领域技术人员熟悉的不同方法而方便地制备。本发明的具有式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)和(IV)的化合物可以根据以下方案A-W所述的方法，由市售可得的起始材料或使用文献方法可制备的起始材料制备。除非另有说明，否则，方案A-P中的R基团(例如R、R’和Ra)可对应于如式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)或(IV)中定义的变量(即，R1、R2、Rb和Rc)。所述方案中的“PG”指的是保护基团。
本领域的普通技术人员应注意，在本文所述的反应序列与合成方案过程中，可改变某些步骤的顺序，例如保护基团的引入和去除。
本领域的普通技术人员会意识到，可能需要在所述反应条件中通过使用保护基团保护某些基团。还可使用保护基团来区分分子中的相似官能团。可在Greene，T.W.，Wuts，P.G.M.，ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis(《有机合成中的保护基团》)，第三版，纽约的约翰威利父子公司(JohnWiley&Sons：NewYork)，1999中找到保护基团的列表以及如何引入和去除这些基团。
优选的保护基团包括但不限于：
对于羟基部分：TBS、苄基、THP、Ac
对于羧酸：苄酯、甲酯、乙酯、烯丙酯
对于胺：Cbz、BOC、DMB
对于二醇：Ac(×2)TBS(×2)或与丙酮化合物共同使用时
对于硫醇：Ac
对于苯并咪唑：SEM、苄基、PMB、DMB
对于醛：二烷基缩醛例如二甲氧基缩醛或二乙基乙酰基。
本文所述的反应方案中可产生多种立体异构体。没有指明具体的立体异构体时，被理解成意味着该反应可能产生所有可能的立体异构体。本领域普通技术人员将意识到，可使所述反应最优化以择优地得到一种异构体，或可设计新方案以产生单一异构体。若产生混合物，则可使用诸如制备型薄层层析、制备型HPLC、制备型手性HPLC或制备型SFC的技术来分离所述异构体。
贯穿本说明书使用以下缩写，其定义如下：
AA酸铵
Ac乙酰基
ACN乙腈
AcOH乙酸
atm大气
Bn苄基
BOC叔丁氧基羰基
BOP(苯并***-1-基氧基)三(二甲氨基)六氟磷酸鏻
Cbz苄氧基羰基
COMU(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉基碳鎓六氟磷酸盐
d天
DBU1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯
DCE1，2氯乙烷
DCM氯甲烷
DEA乙胺
DEAD偶氮二羧酸二乙酯
DIAD偶氮二羧酸二异丙酯
DiBAL-H氢化二异丁基铝
DIPEAN，N-二异丙基乙胺(胡尼碱)
DMAPN，N-二甲基-4-氨基吡啶
DMB2，4甲氧基苄基
DMF甲基甲酰胺
DMSO二甲亚砜
DPPA叠氮磷酸二苯酯
EA或EtOAc乙酸乙酯
EDC或EDCIN-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺
ELS蒸发光散射
ESI-电喷雾负模式
ESI+电喷雾正模式
Et2O***
Et3N或TEA三乙胺
EtOH乙醇
FA蚁酸
FC快速色谱
h小时
H2O水
HATUO-(7-氮杂苯并***-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HCl盐酸
HOAT1-羟基-7-氮杂苯并***
HOBt1-羟基苯并***
HOSuN-羟基琥珀酰亚胺
HPLC高效液相色谱
Inj.Vol.注射体积
I.V.或IV静脉内
KHMDs六甲基二硅基胺基钾
LC/MS或LC-MS液相色谱质谱
LDA异丙基胺基锂
LG离去基团
LiHMs六甲基二硅基胺基锂
M摩尔
m/z质/电比
m-CPBA间-氯过苯甲酸
MeCN乙腈
MeODd4-甲醇
MeOH甲醇
MgSO4硫酸镁
min分钟
MS质谱计或质谱
Ms甲磺酰基
MsCl甲磺酰氯
MsO甲磺酸酯
MWI微波辐射
Na2CO3碳酸钠
NaHCO3碳酸氢钠
NaHMDs六甲基二硅基胺基钠
NaOH氢氧化钠
NISN-碘代琥珀酰亚胺
NMR核磁共振
o/n或O/N过夜
PE石油醚
PG保护基团
PMB对-甲氧基苄基
PPAA1-丙基磷酸环酐
ppm百万分之分数
prepHPLC制备型高效液相色谱
prepTLC制备型薄层层析
p-TsOH对-甲苯磺酸
rt或RT室温
SEM2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基
SEMCl氯化(三甲基甲硅烷基)乙氧甲基
SFC超临界色谱
SGC硅胶色谱
STAB三乙酰氧基硼氢化钠
TBAF四正丁基氟化铵
TFA三氟乙酸
TfO三氟甲磺酸酯
THF四氢呋喃
THP四氢吡喃
TLC薄层层析
Ts甲苯磺酰基
TsOH甲苯磺酸
UV紫外
本发明提供制备本发明化合物的方法。以下方案描述可合成本发明化合物的示例性化学反应。
方案A：5'-氨基嘌呤核糖(A-V)的合成
可以按照上述方案A的描述合成5’-氨基嘌呤-核糖中间体(A-V)。通过在存在碱(例如Et3N、K2CO3或胡尼碱)的溶剂(例如MeCN或DMF、THF、iPrOH或其混合物)中用适当的胺(包括氨)处理，使合适保护的6-Cl腺苷衍生物(A-I)转化为6-氨基衍生物(A-II)。若需要，也可加热该反应至100℃(若所需温度高于所述混合物中的一种或多种成分的沸点，则该反应可在密封试管中进行)。所述方案中的R基团可代表烷基保护基团(例如，2，4二甲氧基苄基)。可通过在存在碱(例如Et3N、吡啶或K2CO3)的惰性溶剂(例如CH2Cl2、THF、MeCN、DMF或其混合物)中用甲磺酰氯(MsCl)处理，通过使5’-羟基基团转换成离去基团(例如MsO)(即，CH3S(O)2O)，使所述6-氨基产物(A-II)转化成5’-叠氮基中间体(A-III)。然后，用来自惰性溶剂(例如DMF)中的NaN3的叠氮基阴离子替代5’-离去基团。或者可以通过用内含DPPA、Ph3P和DIAD的溶剂(例如THF)处理使(A-II)直接转化成(A-III)。可通过采用金属催化剂(例如，Pd/C、PtO2)存在下的H2还原或通过采用膦(例如Ph3P或PMe3)的施陶丁格反应(Staudingerreaction)使(A-III)的叠氮基基团还原成伯胺(A-IV)。可通过在合适还原剂(例如NaBH(OAc)3或NaCNBH3)存在下采用恰当的酮或醛处理，使所述伯胺(A-IV)转换成仲胺(A-V)。可添加额外试剂例如Ti(OiPr)4。
或者，可采用内含磺酰胺(A-VI)、DEAD和Ph3P的惰性溶剂(例如THF)处理所述5’-羟基中间体(A-II)。然后可在碱(例如K2CO3、Cs2CO3)存在下用苯硫酚处理所得磺酰胺产物以生成仲胺(A-V)。
还可对来苏糖衍生物从(A-VII)起始施加上述这些反应顺序以生成在5’位置有相反构型的非对映异构体。
对于2’-脱氧核糖或3’-脱氧核糖或取代的核糖或上述来苏糖(A-VIII)，可使用一组相似的反应顺序以获得5’氨基嘌呤-核糖/来苏糖中间体。
引入6-NH2基团的替代性方法如下所示，该方法通过用NaN3处理(A-IX)衍生物以产生6-叠氮基中间体，然后用三烷基膦(例如PMe3或PPh3)还原至NH2部分(A-X)。
方案B：5’氨基7-氮杂嘌呤核糖的合成
可以按照上述方案B的描述合成5’-氨基-7-氮杂嘌呤-核糖中间体(B-V)。通过在存在碱(例如Et3N、K2CO3或胡尼碱)的溶剂(例如MeCN或DMF、THF、iPrOH或其混合物)中用适当的胺(包括氨)处理，使含有6-氯取代基的合适保护的7-氮杂嘌呤-核糖中间体(B-I)转化成相应的6-氨基衍生物(B-II)。若需要，可加热该反应至100℃(若所需温度高于所述混合物中的一种或多种成分的沸点，则该反应可在密封试管中进行)。所述方案中的R基团可代表烷基保护基团(例如，2，4二甲氧基苄基)。可通过在存在碱(例如Et3N、吡啶或K2CO3)的惰性溶剂(例如CH2Cl2、THF、MeCN、DMF或其混合物)中用MsCl处理，通过使5’-羟基基团转换成离去基团(例如MsO)，使所述6-氨基产物(B-II)转化成5’-叠氮基中间体(B-III)。然后，用来自惰性溶剂(例如DMF)中的叠氮化物来源(例如NaN3)的叠氮阴离子替代5’-离去基团。或者可以通过用内含DPPA、Ph3P和DIAD的溶剂(例如THF)处理，使(B-II)直接转化成(B-III)。可通过采用金属催化剂(例如，Pd/C、PtO2)存在下的H2还原或通过采用膦(例如Ph3P或PMe3)的施陶丁格(Staudinger)反应使(B-III)的叠氮基基团还原成伯胺(B-IV)。可通过在合适还原剂(例如NaBH(OAc)3或NaCNBH3)存在下采用恰当的酮或醛处理，使所述伯胺(B-IV)转换成仲胺(B-V)。可添加额外试剂例如Ti(OiPr)4。或者，可采用内含磺酰胺(B-VI)、DEAD和Ph3P的惰性溶剂(例如THF)处理所述5’-羟基中间体(B-II)。然后可在碱(例如K2CO3、Cs2CO3)存在下用苯硫酚处理所得磺酰胺产物以生成仲胺(B-V)。还可对来苏糖衍生物从(B-VII)起始施加这些反应顺序以生成在5’位置有相反构型的非对映异构体。
对于2’-脱氧核糖或3’-脱氧核糖或取代的核糖或上述来苏糖(B-VIII)，可使用一组相似的反应顺序以获得5’-氨基7氮杂嘌呤-核糖/来苏糖中间体。
引入6-NH2基团的替代性方法如下所示，该方法通过用NaN3处理(B-IX)衍生物以产生6-叠氮基中间体，然后用三烷基膦(例如PMe3或PPh3)还原至NH2部分(B-X)。
方案C：嘌呤-碳环中间体的合成
可按照方案C的描述制备5’-氨基嘌呤碳环中间体(C-X)。可选地通过本领域普通技术人员已知的方法保护环戊烷(C-I)以生成(C-II)。在存在碱(例如Et3N)的质子溶剂(例如正丁醇)中用适当的4，6-二氯嘧啶-5-胺处理(C-II)。加热该反应或对其施予微波环境以生成中间体(C-III)。通过在酸(例如AcOH)存在下用原酸酯(C-IV)处理(C-III)产生嘌呤中间体(C-V)。通常加热该反应。可通过在存在碱(例如Et3N，K2CO3或胡尼碱)的溶剂(例如MeCN或DMF、THF、iPrOH或其混合物)中用适当胺(包括氨)处理引入6-氨基取代基。若需要，也可加热该反应至100℃(若所需温度高于所述混合物中的一种或多种成分的沸点，则该反应可在密封试管中进行)。所述方案中的R基团可代表烷基保护基团(例如，2，4二甲氧基苄基)。可通过在存在碱(例如Et3N、吡啶或K2CO3)的惰性溶剂(例如CH2Cl2、THF、MeCN、DMF或其混合物)中用MsCl处理，通过使5’-羟基基团转换成离去基团(例如MsO)，使所述6-氨基产物(C-VI)转化成5’-叠氮基中间体(C-VII)。然后，用来自惰性溶剂(例如DMF)中的NaN3的叠氮基阴离子替代5’-离去基团。或者可以通过用内含DPPA、Ph3P和DIAD的溶剂(例如THF)处理，使(C-VI)直接转化成(C-VII)。可通过采用金属催化剂(例如，Pd/C、PtO2)存在下的H2还原或通过采用膦(例如Ph3P或PMe3)的施陶丁格(Staudinger)反应，使(C-VII)的叠氮基基团还原成伯胺(C-VIII)。可通过在合适还原剂(例如NaBH(OAc)3或NaCNBH3)存在下采用恰当的酮或醛处理，使所述伯胺(C-VIII)转换成仲胺(C-X)。可添加额外试剂例如Ti(OiPr)4。或者，可采用内含磺酰胺(C-IX)、DEAD和Ph3P的惰性溶剂(例如THF)处理所述5’-羟基中间体(C-VI)。然后可在碱(例如K2CO3、Cs2CO3)存在下用苯硫酚处理所得磺酰胺产物以生成仲胺(C-X)。
方案D：7-氮杂嘌呤-碳环中间体的合成
可按照方案D的描述制备5’-氨基7-氮杂嘌呤碳环中间体(D-X)。可选地通过本领域普通技术人员已知的方法保护环戊烷(D-I)以生成(D-II)。在存在碱(例如Et3N)的质子溶剂(例如EtOH、正丁醇)中用适当的4，6-二氯嘧啶(D-III)处理(D-II)。加热该反应以生成中间体(D-IV)。通过用酸(例如HCl或AcOH)处理(D-IV)产生中间体(D-V)。
可通过在存在碱(例如Et3N、吡啶或K2CO3)的惰性溶剂(CH2Cl2、THF、MeCN、DMF或其混合物)中用MsCl处理，然后用来自惰性溶剂(例如DMF)中的NaN3的叠氮基阴离子替代离去基团，通过初始地使5’-羟基基团转换成离去基团(例如MsO)，使(D-V)的5’羟基转化成5’叠氮基中间体(D-VI)。或者可以通过用内含DPPA、Ph3P和DIAD的溶剂(例如THF)处理，使(D-V)直接转化成(D-VI)。
可通过在存在碱(例如Et3N，K2CO3或胡尼碱)的溶剂(例如MeCN或DMF、THF、iPrOH或其混合物)中用适当胺(包括氨)处理(D-VI)引入6-氨基取代基。若需要，也可加热该反应至100℃(若所需温度高于所述混合物中的一种或多种成分的沸点，则该反应可在密封试管中进行)。所述方案中的R基团可代表烷基保护基团(例如，2，4二甲氧基苄基)。可通过采用金属催化剂(例如，Pd/C、PtO2)存在下的H2还原或通过采用膦(例如Ph3P或PMe3)的施陶丁格(Staudinger)反应使(D-VII)的叠氮基基团还原成伯胺(D-VIII)。可通过在合适还原剂(例如NaBH(OAc)3或NaCNBH3)存在下采用恰当的酮或醛处理，使所述伯胺(D-VIII)转换成仲胺(D-X)。可添加额外试剂例如Ti(OiPr)4。或者，可采用内含磺酰胺(D-IX)、DEAD和Ph3P的惰性溶剂(例如THF)处理所述5’-羟基中间体(D-V)。然后，可采用类似于使(D-VI)转换成(D-VII)所用的那些条件引入6-氨基基团。然后可在碱(例如K2CO3、Cs2CO3)存在下用苯硫酚处理所得磺酰胺产物以生成仲胺(D-X)。
普通技术人员将意识到，获得合适取代的二氯嘧啶(D-III)将允许所述7-氮杂嘌呤部分上的取代。
方案E：5’-位置立体化学结构的转化
为生成5’-位置处相反立体化学结构的合适中间体，随后可进行如上述方案E所述的反应顺序。可选地保护环戊烷(E-I)，通过在存在Et3N的溶剂(例如CH2Cl2)中用MsCl处理使5’-羟基转化成离去基团。通过用内含2.0M的Me2NH的THF溶液在密封试管中处理，用Me2NH替代所述5’-离去基团。加热该反应至40-80℃。在溶剂(例如CH2Cl2)中用氧化剂(例如mCPBA)氧化所得叔胺以生成相应的N-氧化物。然后，使所述N-氧化物在惰性溶剂(例如N，N-二甲基乙酰胺)中以50-120℃加热以生成烯烃(E-III)。使所得烯烃经历硼氢化/氧化作用直至产生反向的5’立体异构体(E-IV)。合适的硼氢化试剂包括BH3-THF，合适的氧化作用条件包括H2O2/NaOH。然后，可使所得中间体(E-IV)进行方案C和D描述的反应顺序以提供中间体(E-V)和(E-VI)。
方案F：2’和3’脱氧环戊烷与核糖
使用方案C和D概括方法中的中间体(F-I)和(F-III)能够合成嘌呤和7-氮杂嘌呤脱氧碳环衍生物。在类似于上述方案A和B中描述的那些反应过程中，可以使用所述基于核糖的中间体(F-V)、(F-VI)、(F-VIII)和(F-IX)。
方案G：环丁烷的合成
式(G-VIII)、(G-XV)和(G-XXI)的环丁烷可以按照方案G的描述合成。可在存在Zn/Cu对的惰性溶剂(例如Et2O、DME、THF或其混合物)中使用氯化三氯乙酰对烯酯(G-I)进行[2+2]环加成作用。或者，可在声处理条件下采用Zn粉进行所述[2+2]环加成反应。通过在存在质子供体(例如NH4Cl)的溶剂(例如MeOH)中采用Zn粉处理还原所述二氯化物(G-II)。还可通过用膦酸酯(G-V)处理进一步加工环丁酮(G-IV)(包括(G-III))以生成α，β不饱和酯(G-VI)。标准条件下(例如，氯甲酸异丁酯、胡尼碱、N，O-二甲羟胺)使酸(VI)转化成Weinreb酰胺(G-VII)。然后通过在金属催化物(如Pd/C、PtO2或Pd(OH)2)存在下使用H2氢化还原所述双键以生成环丁烷中间体(G-VIII)。
所述环丁酮(G-IX)可使用维悌希(Wittig)试剂(G-X)处理以生成环丁烷烯醇醚(G-XI)，其去保护后生成相应的酸(G-XII)。
还可在碱(例如KOtBu、LDA、NaHMDS、KHMDS或LiHMDS)存在下用稳定化膦酸酯(G-V)或在存在LiCl的惰性溶剂中用Et3N处理所述环丁酮(G-IX)以生成α，β不饱和酯(G-XIII)，其可通过在存在金属催化剂(例如Pd/C、Pd(OH)2或PtO2)的惰性溶剂中采用H2处理还原至(G-XIV)。通过在合适的偶联剂(例如氯甲酸异丁酯)和碱(例如胡尼碱)存在下用N，O-二甲基羟基胺处理，使(G-XIV)的酸官能性转化成相应的Weinreb酰胺以生成(G-XV)。
所述环丁酮(G-XVI)还可在合适的偶联剂(例如氯甲酸异丁酯)和碱(例如胡尼碱)存在下用N，O-二甲基羟基胺处理以生成相应的Weinreb酰胺(G-XVII)，其在用氨当量还原性胺化后根据需要去保护以生成所述胺(G-XVIII)。合适的氨当量包括二甲苯胺、NH3、NH4Cl、BnNH2、PMB-NH2、2，4DMB-NH2，其可在酸存在下(若需要，例如HCl或AcOH)用所述酮(G-XVII)与合适的还原剂(例如NaCN(BH3)或Na(OAc)3BH)处理。所得还原性胺化产物上的保护基团可通过本领域普通技术人员已知的方法去除。或者，所述酮(G-XVII)可用羟胺处理以形成相应肟，然后可在金属催化剂(例如Pd/C、PtO2或Pd(OH)2)存在下用H2还原生成中间体(G-XVIII)。
可通过涉及用正膦(G-V)处理以生成烯醇醚(G-XIX)的多步顺序，使所述环丁烷(G-IV)转化成胺(G-XXI)。然后，在合适的偶联剂(例如氯甲酸异丁酯)和碱(例如胡尼碱)存在下用N，O-二甲基羟基胺处理(G-XIX)以生成相应的Weinreb酰胺(G-XX)，其在烯醇醚(例如TsOH/H2O、HCl/H2O)水性水解和氨当量的还原性胺化后根据需要去保护以生成胺(G-XXI)。合适的氨当量包括二甲苯胺、NH3、NH4Cl、BnNH2、PMB-NH2、2，4DMB-NH2。用于还原性胺化的合适还原剂包括在酸存在下(若需要，例如HCl或AcOH)使用的NaCN(BH3)或Na(OAc)3BH。所得还原性胺化产物上的保护基团可通过本领域普通技术人员已知的方法去除。
方案H：环丁烷的加工
可通过方案H中描述的反应顺序使环丁酮(H-I)转化成苯并咪唑(H-III)、脲(H-IV)和酰胺(H-V)。所述苯并咪唑(H-III)可通过在合适偶联剂(例如HATU、PPAA、COMU、EDC、EDCI)与碱(例如Et3N、胡尼碱、K2CO3)存在下用适当的苯二胺(H-II)处理酸(H-I)而形成。如需要，可添加额外的试剂例如HOAT、HOBt或HOSu。然后，在酸(例如AcOH)存在下使所得氨基酰胺环化成所述苯并咪唑，所述酸也可作为溶剂。所述反应通常在室温～80℃的温度范围进行。所述脲(H-IV)可按以下步骤通过转化所述酸(H-I)来制备。使用试剂(如LiAlH4或BH3.THF)使所述酸还原成相应的伯醇。若需要，可以首先保护所述酮官能(例如，缩酮)，然后还原并后续去保护。然后，使所述伯醇转换成离去基团，例如甲磺酸盐。用例如NaN3来源的叠氮基替代所得离去基团。在金属催化剂(例如Pd/C)存在下使用H2或通过施陶丁格反应(Staudingerreaction)用膦(例如PMe3或PPh3)使所得叠氮基产物化合物还原成相应的氨基化合物。然后，所述脲(H-IV)通过在存在碱(例如Et3N或K2CO3)的惰性溶剂(例如CH2Cl2)中用适当异氰酸酯R-C＝N＝O处理所述伯胺形成。所述酰胺(H-V)通过在合适偶联剂(例如HATU、PPAA、COMU、EDC、EDCI)与碱(例如Et3N、胡尼碱、K2CO3)存在下用适当的胺R-NH2处理酸(H-I)形成。如需要，可添加额外的试剂例如HOAT、HOBt或HOSu。
方案I：环丁烷Weinreb酰胺的加工
如上述方案I所示，使用如方案H中描述的相似方法，可使Weinreb酰胺(I-I)和(I-V)转化成苯并咪唑醛(I-III)、脲醛(I-IV)和(I-VI)以及酰胺醛(I-V)，然后进行Weinreb酰胺还原。所述Weinreb酰胺的还原可在惰性溶剂(例如CH2Cl2、THF)中于10～-78℃的温度下使用DiBAL-H进行。还可通过采用适当的异氰酸酯处理随后用DiBAL-H还原，使氨基Weinreb酰胺(I-V)转化成脲(I-VI)。
方案J：环丁烷的加工
可按方案J的描述合成苯并咪唑(J-V)、脲(J-VI)和酰胺(J-VII)。可使环丁酮(J-I)与正膦(J-II)发生维蒂希反应(Wittigreaction)以产生烯醇醚(J-III)。然后，对所述烯醇醚施加与方案H中所述那些相似的反应条件以产生相应的烯醇醚苯并咪唑、脲和酰胺，所述产物经过水性酸(例如TsOH/H2O、HCl)处理分别生成相应的醛中间体(J-V)、(J-VI)和(J-VII)。
方案K：丁烷和胺的偶联
上述方案K中的式(K-V)(K-V)代表以下中间体(K-I至K-IV)及其相应的2′-或3′脱氧中间体，方案A-F中描述了它们的合成。
如方案K所示，通过用(K-V)还原性胺化使酮(K-VI)、(K-VII)与(K-VIII)和醛(K-XII)、(K-XIII)与(K-XIV)转化成相应的苯并咪唑(K-IX)与(K-XV)、脲(K-X)与(K-XVI)和酰胺(K-XI)与(K-XVII)。所述还原性胺化可在酸(若需要，例如HCl或AcOH)或路易斯酸/脱水剂(例如Ti(OiPr)4或MgSO4)存在下采用合适的还原剂(例如NaCN(BH3)或Na(OAc)3BH)进行。
方案L：备选偶联
在备选的反应顺序中，可以通过方案L中描述的反应顺序制备目标苯并咪唑(L-V)、脲(L-VI)和酰胺(L-VII)。在酸(例如HCl或AcOH)或路易斯酸(例如Ti(OiPr)4)存在下使用还原剂(例如NaCNBH3或Na(OAc)3BH)，在还原性胺化条件下采用环丁烷(L-II)处理胺(L-I)以生成酸(L-III)，所述胺(L-I)中，Q和Rc的定义与方案K中相同。可使用与方案H中的那些相似反应条件使所述酸转化成相应的目标苯并咪唑(L-V)、脲(L-VI)和酰胺(L-VII)。
方案M：备选偶联
烯醇醚(M-1)可在酸性条件下(例如TsOH/H2O、HCl/H2O)水解以生成醛(M-II)。采用胺(M-III)(其中Q和RC的含义与方案K中相同)，使用还原剂(例如NaCNBH3或Na(OAc)3BH)，在酸(例如HCl或AcOH)或路易斯酸/脱水剂(例如Ti(OiPr)4或MgSO4)存在下实施(M-II)的还原性胺化。然后，进行后续的酯保护基团去除，以生成酸(M-IV)。可采用与方案H中所述那些相似的反应条件使酸(M-V)(包括酸(M-IV))转化成相应的目标苯并咪唑(M-VII)、脲(M-VIII)和酰胺(M-IX)。
方案N：酰胺的合成
可按方案N中的描述合成式(N-XIII)的苯并咪唑、脲和酰胺。可采用试剂(例如NaClO2)通过氧化使醛(N-I)转化成相应的酸，所述醛(N-I)中X代表苯并咪唑、脲或酰胺官能。可采用式(N-IV)的膦酸酯与合适的碱(例如LiHMDS、NaHMDS、KHMDS、KOtBu、LDA或Et3N/LiCl)在惰性溶液中处理式(N-III)的环丁酮以生成环丁烷(N-V)，通过在合适的金属催化剂(例如Pd/C、PtO2或Pd(OH)2)存在下用H2处理还原生成酸(N-VI)。
可通过与方案H中所述那些相似的一系列反应使包括式(N-VI)的酸的式(N-VII)的酸转化成相应的苯并咪唑(N-IX)、脲(N-X)和酰胺(N-XI)。然后，可通过采用胺(N-XIII)(其中Rc和Q的定义与方案K中相同)的酰胺偶联反应，使用合适的偶联剂(例如HATU、PPAA、COMU、EDC、EDCI)在碱(例如Et3N、胡尼碱、K2CO3)存在下，使式(N-II)的苯并咪唑、脲和酰胺转化成式(N-XIII)的苯并咪唑、脲和酰胺。如需要，可添加额外的试剂例如HOAT、HOBt或HOSu。
方案O：5，-含硫类似物
可按方案O中的描述合成硫醚(O-XIII)、亚砜(O-XIV)和砜(O-XV)。环丁酮(O-I)(其中X代表苯并咪唑、脲或酰胺官能)可用还原剂(例如NaBH4)还原以生成相应的醇，其进而可通过在惰性溶剂中用MsCl和碱(例如K2CO3)处理转化成离去基团(例如MsO)。然后，通过先采用基于硫的亲核试剂(例如KSAc)处理然后在碱性条件下(例如LiOH/H2O/MeOH)硫酯水解使环丁酮(O-II)转化成相应的硫醇(O-III)。
通过与使(O-I)转化成(O-III)相似的反应顺序使醛(O-IV)转化成相应的硫醇。
可通过在合适的碱(Cs2CO3、K2CO3、LiHMDS、NaHMDS、KHMDS、KOtBu、LDA)存在下用式(O-VIII)的膦酸酯处理然后在合适的金属催化剂(如Pd/C、PtO2或Pd(OH)2)存在下用H2还原，使环丁酮(O-VII)转化成酸(O-IX)。使用试剂(例如BH3：THF)或通过与羰基二咪唑、Et3N随后NaBH4反应，选择性地使所述酸还原成所述伯醇。采用与(O-III)和(O-VI)所用由其仲醇中间体合成的那些相似的反应使所述伯醇转化成相应的硫醇。
然后，用中间体(O-XII)处理硫醇(O-XI)，其中Q’代表下文描述的中间体(O-XVI)、(O-XVII)、(O-XVIII)和(O-XIX)(以及相应的2′-或3′-脱氧中间体)，而LG代表离去基团(例如Cl、TfO或MsO)。所述反应可在合适的碱(例如K2CO3、Cs2CO3、Et3N或胡尼碱)存在下进行以生成硫醚(O-XIII)，其可通过用合适的氧化剂(H2O2或mCPBA)处理转化成相应的亚砜(O-XIV)或砜(O-XV)。
方案P：胺、酰胺和磺酰胺封端(Cap)
可采用标准反应条件由胺(P-I)、(P-II)和(P-III)合成所述胺、酰胺和磺酰胺目标分子。所述酰胺目标分子通过在合适偶联剂(例如HATU、PPAA、COMU、EDC、EDCI)与碱(例如Et3N、胡尼碱、K2CO3)存在下用适当的羧酸处理所述胺产生。如需要，可添加额外的试剂例如HOAt、HOBt或HOSu。所述磺酰胺目标分子可在碱(例如K2CO3或Et3N)存在下用合适的磺酰氯处理所述胺产生。所述胺目标分子可通过在合适的还原剂(例如NaBH(OAc)3或NaCNBH3)存在下采用适当醛或酮通过还原性胺化反应形成。可添加额外的试剂，例如酸(AcOH或HCl)或路易斯酸/脱水剂(Ti(OiPr)4或MgSO4)。
方案Q：4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯-1，2-二胺的制备
方案R：4-环丁基苯-1，2-二胺的制备
方案S：1-(3，4-二氨基苯基)环丁腈的制备
方案T：4-环丙基苯-1，2-二胺的制备
方案U：1-(3，4-二氨基苯基)环丙腈的制备
方案V：4-(2，2，2-三氟乙基)苯-1，2-二胺的制备
方案W：2-(3，4-二氨基苯基)-2-甲基丙腈的制备
贯穿该说明书，当描述组成物具有、包括或包含具体成分时，或描述过程具有、包括或囊括具体工艺步骤时，预计本发明的组成物也基本由、或由所述成分组成，本发明的过程也基本由、或由所述工艺步骤组成。此外，应理解，只要本发明保持可行，步骤的顺序或某些动作进行的顺序是不重要的。而且，可同时实施两个或更多个步骤或动作。
通过上述方法设计、选择和/或最优化的化合物一旦生成，即可用本领域技术人员己知的多种实验表征以确定所述化合物是否具有生物活性。例如，所得分子可通过传统实验表征以确定其是否具有预测活性、结合活性和/或结合特异性，所述传统实验包括但不限于下文所述的那些。
此外，可使用高通量筛选来加速所用实验的分析。因此，使用本领域已知的技术能够快速筛选本文所述分子的活性。用于进行高通量筛选的一般方法论已有描述，例如，Devlin(1998)HighThroughputScreening(《高通量筛选》)，MarcelDekker；和美国专利号5,763,263。高通量实验可使用一种或多种不同的实验技术，包括但不限于本文所述的那些。
为进一步评估化合物的药物样性质，还可用重组人酶***或更复杂的***(例如人肝脏微粒体)来检测细胞色素P450酶活和II期代谢酶活抑制性。此外，还可使化合物作为这些代谢酶活的底物来评估。这些活性有利于测定化合物引起药物-药物相互作用或者产生保留或没有有用抗生素活性代谢的潜力。
为估计化合物口服可被生物利用的潜力，还可进行溶解性和Caco-2实验。所述后者是来自人上皮的细胞系，该细胞系允许药物摄取的测量并通过Caco-2细胞单层传代，所述Caco-1细胞单层通常在配有1微米膜的24孔微量滴定板中生长。游离药物浓度可在所述单层的基侧边检测，评估通过肠单层的药物量。需要适当控制以确保单层完整性和间隙连接的紧密性。使用该相同***可评估P-糖蛋白介导的流出。P-糖蛋白是定位于细胞顶膜的泵浦，形成极化的单层。该泵浦可终止经Caco-2细胞膜的主动或被动摄取，导致几乎无药物通过肠上皮层。这些结果通常与溶解性测量联合完成，已知这两个因素有助于哺乳动物内口服生物可利用度。使用传统药代动力学实验检测动物内以及最终人内的生物可利用度，确定其绝对口服生物可利用度。
实验结果还可用于建立模型，所述模型协助预测导致药物样性质的理化参数。当如此模型经过检验，随着该模型可预言性的可靠性增加，可以减少实验方法。
3.治疗方法
混合谱系白血病(MLL)在遗传上是构成超过70％婴儿白血病和约10％成人急性骨髓性白血病(AML)的急性白血病的不同形式(Hess，J.L(2004)，TrendsMolMed10，500-507；Krivtsov，A.V.，和Armstrong，S.A.(2007)，NatRevCancer7，823-833)。MLL代表特别侵袭性形式的白血病，而患有该病的患者一般预后差；这些患者通常遭受现有化疗术治疗后的早期复发。因此，现在非常需要用于遭受MLL患者的新治疗形式。
MLL疾病的普遍特征是影响染色体11q23上的MLL基因的染色体易位(Hess，2004；Krivtsov和Armstrong，2007)。正常情况下，MLL基因编码SET结构域组蛋白甲基转移酶，该酶催化特定基因位置的组蛋白H3的赖氨酸4(H3K4)的甲基化(Milne等.(2002)MolCell10，1107-1117；Nakamura等.(2002)，MolCell10，1119-1128)。基因定位由MLL内SET结构域外的识别元件的特定相互作用产生(Ayton等.(2004)MolCellBiol24，10470-10478；Slany等，(1998)MolCellBiol18，122-129；Zeleznik-Le等.(1994)ProcNatlAcadSciUSA91，10610-10614)。在疾病关联的易位中，催化性SET结构域丢失，而保留的MLL蛋白与不同伙伴融合，所述融合伙伴包括AF和ENL蛋白家族的成员(例如AF4、AF9、AF10和HENL)(Hess，2004；Krivtsov和Armstrong，2007；Slany(2009)Haematologica94，984-993)。这些融合伙伴能直接或间接地与另一种组蛋白甲基转移酶DOT1L相互反应(Bitoun等.(2007)HumMolGenet16，92-106；Mohan等.(2010)GenesDev.24，574-589；Mueller等.(2007)Blood110，4445-4454；Mueller等.(2009)PLoSBiol7，e1000249；Okada等.(2005)Cell121，167-178；Park等.(2010)ProteinJ29，213-223；Yokoyama等.(2010)CancerCell17，198-212；Zhang等.(2006)JBiolChem281，18059-18068)。因此，易位产物在MLL蛋白的剩余部分保留了基因特异性识别元件，但也具有招募DOT1L至这些位置的能力(Monroe等.(2010)ExpHematol.2010Sep18.[电子出版先于印刷出版]PubmedPMID：20854876；Mueller等，2007；Mueller等，2009；Okada等，2005)。DOT1L催化H3K79的甲基化，是与积极转录的基因相关联的染色质修饰(Feng等，(2002)CurrBiol12，1052-1058；Steger等.(2008)MolCellBiol28，2825-2839)。由MLL融合蛋白招募DOT1L造成的异常H3K79甲基化导致引起白血病基因(包括HOXA9和MEIS1)表达增强(Guenther等.(2008)Genes&Development22，3403-3408；Krivtsov等.(2008)NatRevCancer7，823-833；Milne等.(2005)CancerRes65，11367-11374；Monroe等.，2010；Mueller等.，2009；Okada等.，2005；Thiel等.(2010)CancerCell17，148-159)。因此，尽管所述疾病本身内DOT1L在遗传上没有改变，其错位酶活性是影响MLL患者的染色体易位的直接后果；因此，己提出DOT1L是该疾病中白血病发生的催化型驱动者(Krivtsov等，2008；Monroe等，2010；Okada等，2005；Yokoyama等.(2010)CancerCell17，198-212)。MLL中DOT1L的致病作用的进一步支持来自模型***中证明MLL融合蛋白的转化活性的传递需要DOT1L的研究(Mueller等，2007；Okada等，2005)。
证据表明，DOT1L的酶活对于MLL的发病很关键，而抑制DPT1L可提供本疾病治疗性发明的药学基础。化合物处理导致选择性、浓度依赖性的含MLL-易位的白血病细胞杀伤，而对非MLL转化细胞无作用。处理细胞的抑制剂的基因表达分析显示MLL-重排白血病中基因异常过表达的下调和与MLL-AF9白血病小鼠模型中Dot1L基因的基因敲除所致的基因表达变化的相似性。
本发明提供用于通过给予有需要的对象所述治疗、治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、同质构象体或溶剂合物，治疗需要的对象内细胞增殖性疾病的方法。所述细胞增殖性疾病可以是癌症或癌前病症。本发明还提供本发明化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物在制备用于治疗细胞增殖性疾病的药物中的应用。
本发明提供用于通过给予有需要的对象所述治疗、治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、同质构象体或溶剂合物，治疗需要的对象内血液癌症或血液肿瘤的方法。本发明还提供本发明化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物在制备用于治疗血液癌症或血液肿瘤的药物中的应用。
本发明提供用于通过给予有需要的对象所述治疗、治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、同质构象体或溶剂合物，治疗需要的对象内白血病的方法。所述白血病可以是急性或慢性白血病。优选地，所述白血病是急性骨髓性白血病、急性淋巴细胞性白血病或混合谱系白血病。本发明还提供本发明化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物在制备用于治疗白血病的药物中的应用。
本发明提供用于通过给予有需要的对象所述治疗、治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、同质构象体或溶剂合物，治疗需要的对象内由染色体11q23上基因易位介导的疾病或紊乱的方法。所述基因可以是MLL基因。本发明还提供本发明化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物在制备用于治疗由染色体11q23上基因易位介导的疾病或紊乱的药物中的应用。
本发明提供用于通过给予有需要的对象所述治疗、治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、同质构象体或溶剂合物，治疗需要的对象内由DOT1(例如DOT1L)介导的蛋白甲基化介导的疾病或紊乱的方法。本发明还提供本发明化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物在制备用于治疗由DOT1L介导的蛋白甲基化介导的疾病或紊乱的药物中的应用。
本发明提供用于治疗疾病的方法，所述疾病的进程通过调节组蛋白或其它蛋白的甲基化状态来影响，其中，所述甲基化状态至少部分由DOT1L活性介导。所述组蛋白甲基化状态的调节能进而影响由甲基化激活的靶基因和/或由甲基化抑制的靶基因的表达水平。所述方法包括对需要所述治疗的对象给予治疗有效量的本发明化合物，或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体、溶剂合物或立体异构体。
DOT1L介导的蛋白甲基化起作用的疾病可以是癌症或癌前病症或神经疾病。本发明还提供本发明化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物在制备用于治疗癌症或神经疾病的药物中的应用。
本发明还提供通过给予治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物至需要该治疗的对象来保护需要的对象抵抗DOT1L介导的蛋白甲基化起作用的疾病的方法。所述疾病可以是癌症或神经疾病。本发明还提供本发明化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体、溶剂合物或立体异构体在制备用于预防细胞增殖性疾病的药物中的应用。
本发明的化合物可用于调节蛋白(例如组蛋白)甲基化，例如，调节组蛋白甲基转移酶或组蛋白脱甲基酶的活性。已报道组蛋白甲基化涉及癌症中某些基因的异常表达和非神经元细胞中神经元基因的沉默。本文描述的化合物可用于治疗这些疾病，即，用以减少甲基化或恢复甲基化约略至其在正常细胞中的对应水平。
一般而言，甲基化调节剂的化合物可一般用于调控细胞增殖。例如，在一些情况下，可以采用减少甲基化的试剂来降低过度增殖，而采用增加甲基化的试剂来促进不足的增殖。因此，可用本发明化合物治疗的疾病包括过度增殖疾病，例如良性细胞生长和恶性细胞生长。
本文中所用的“有需要的对象”是患有细胞增殖性疾病的对象或相对于大部分群体其发展细胞增殖性疾病的风险增高的对象。所述对象可患有癌症或初癌。优选地，所述有需要的对象患有癌症。更优选地，所述有需要的对象患有血液癌症或白血病。“对象”包括哺乳动物。所述哺乳动物可以是，例如，任何哺乳动物，例如，人、灵长类、鸟、小鼠、大鼠、家禽、狗、猫、牛、马、山羊、骆驼、绵羊或猪。优选地，所述哺乳动物是人。
本文中所用的术语“细胞增殖性疾病”指的是细胞的失调或异常生长(或两者皆有)可导致不需状况或疾病的发展的状况，所述状况可以是或可以不是癌症。本发明的示例性细胞增殖性疾病包括细胞***失控的不同状况。示例性细胞增殖性疾病包括但不限于：肿瘤、良性肿瘤、恶性肿瘤、癌前病症、原位肿瘤、包封性肿瘤、转移性肿瘤、液体瘤、实体瘤、免疫学肿瘤、血液肿瘤、癌症、癌、白血病、淋巴瘤、肉瘤和快速***细胞。本文所用的术语“快速***细胞”定义为以超过或大于在相同组织内的邻近或毗连细胞中预计或观察到的速度***的任何细胞。细胞增殖性疾病包括初癌或癌前病症。细胞增殖性疾病包括癌症。优选地，本文提供的方法用于治疗或减轻癌症症状。术语“癌症”包括实体瘤以及血液肿瘤和/或恶性肿瘤。“初癌细胞”或“癌前细胞”是显示细胞增殖性疾病是初癌或癌前病症的细胞。“癌症细胞”或“癌细胞”是显示细胞增殖性疾病是癌症的细胞。可以使用任何可重复的检测方法来鉴定癌细胞或癌前细胞。癌细胞或癌前细胞可通过组织样品(例如，活检样品)的组织学分型或分级来鉴定。癌细胞或癌前细胞可通过使用适当的分子标志物来鉴定。
示例性的非癌病症或疾病包括但不限于：类风湿性关节炎、炎症、自体免疫疾病、淋巴增殖性病症、肢端肥大症、类风湿性脊椎炎、骨关节炎、痛风、其它关节炎病症、败血症、感染性休克、内毒素休克、革兰氏阴性败血症、中毒性休克综合症、哮喘、成人呼吸窘迫综合征、慢性阻塞性肺病、慢性肺部炎症、炎性肠病、克罗恩氏病、牛皮癣、湿疹、溃疡性结肠炎、胰腺纤维化、肝纤维化、急性和慢性肾病、肠易激综合症、发热(pyresis)、再狭窄、脑型疟疾、中风和缺血损伤、神经外伤、阿尔茨海默病、亨廷顿病、帕金森病、急性和慢性疼痛、过敏性鼻炎、变应性结膜炎、慢性心力衰竭、急性冠状动脉综合症、恶病质、疟疾、麻疯病、利什曼病、莱姆病、莱特尔综合征、急性滑膜炎、肌肉萎缩，粘液囊炎、腱炎、腱鞘炎、椎间盘脱出、破裂或脱垂综合症、骨质疏松症、血栓症、再狭窄、硅肺、肺部肉瘤症、骨再吸收疾病(例如骨质疏松症)、移植物抗宿主反应、多发性硬化、狼疮、纤维肌痛、AIDS和其它病毒性疾病例如带状疱疹病毒，I型或II型单纯疱疹病毒、流感病毒和巨细胞病毒、以及糖尿病。
示例性的癌症包括但不限于，肾上皮癌、AIDS相关癌症、AIDS相关淋巴癌、***癌、***直肠癌、***管癌、阑尾癌、儿童小脑星状细胞瘤、儿童脑星状细胞瘤、基底细胞癌、皮肤癌(非黑色素瘤)、胆管癌、肝外胆管癌、肝内胆管癌、膀胱癌、尿道膀胱癌、骨癌以及关节癌、恶性骨肉瘤以及恶性纤维组织球瘤、脑癌、脑肿瘤、脑干胶质瘤、小脑星形细胞瘤、脑部毛细胞形星状细胞瘤/恶性胶质瘤、室鼓膜瘤、髓母细胞瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤、视觉路径和视交叉-下丘脑胶质瘤、乳癌、支气管腺瘤/良性肿瘤、类癌瘤、胃肠癌症、神经***癌症、神经***淋巴瘤、中枢神经***癌症、中枢神经***淋巴瘤、子***、儿童期癌症、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性骨髓增生疾病、结肠癌、大肠直肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、淋巴肿瘤、菌状肉芽肿、赛扎莱(Seziary)综合症、子宫内膜癌、食道癌、生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞瘤、肝外胆管癌、眼癌、眼内黑素瘤、成视网膜细胞瘤、胆囊癌、胃癌、胃肠道类癌肿瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、生殖细胞肿瘤、卵巢生殖细胞肿瘤、妊娠滋养细胞神经胶质瘤、头颈部肿瘤、肝细胞(肝)癌、霍奇金氏淋巴瘤、下咽癌、眼内黑素瘤、眼癌、胰岛细胞肿瘤(内分泌胰腺)、卡波西氏(Kaposi)肉瘤、肾脏癌、肾癌、肾脏癌、喉癌、急性成淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、多毛细胞白血病、唇及口腔癌、肝癌、肺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、AIDS相关淋巴癌、非霍奇金氏淋巴瘤、原发性中枢神经淋巴瘤、原发性巨球蛋白血症(Waldenstrammacroglobulinemia)、髓母细胞瘤、黑素瘤、眼内(眼)黑素瘤、梅克尔细胞癌、恶性间皮瘤、间皮瘤、颈部鳞状细胞癌、口癌、舌癌、多发性内分泌腺瘤、菌样真菌病、骨髓发育不良综合症、骨髓发育不良/骨髓增生疾病、慢性髓细胞性白血病、急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、慢性骨髓增生疾病、鼻咽癌、神经胚细胞瘤、口腔(oral)癌、口腔(oralcavity)癌症、口咽癌、卵巢癌、卵巢上皮性癌、卵巢低恶性潜在肿瘤、胰腺癌、胰岛细胞胰腺癌、副鼻窦及鼻腔癌症、副甲状腺癌、睾丸癌、扁桃腺癌、嗜铬细胞瘤、松果体母细胞瘤和颅内幕上原始神经外胚层肿瘤、脑下垂体肿瘤、血浆细胞肿瘤/多发性骨髓瘤、胸膜肺原胚瘤、***癌、直肠癌、肾盂和尿道癌、移行细胞癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、尤文氏肉瘤家族、卡波西氏肉瘤、软组织肉瘤、子宫癌、子宫肉瘤、皮肤癌(非黑色素瘤)、皮肤癌(黑色素瘤)、默克细胞皮肤癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状上皮细胞癌、胃癌、颅内幕上原始神经外胚层肿瘤、睾丸癌、喉癌、胸腺瘤、胸腺瘤和胸腺癌、甲状腺癌、肾盂和尿道以及其它泌尿器官的移行细胞癌、妊娠滋养细胞肿瘤、尿道癌、子宫内膜癌、子宫肉瘤、子宫恶性肉瘤、***癌、阴门癌和威姆氏(Wilm’s)肿瘤。
“血液***的细胞增殖性疾病”是涉及血液***的细胞的细胞增殖性疾病。血液***的细胞增殖性疾病包括淋巴瘤、白血病、髓细胞样肿瘤、肥大细胞肿瘤、脊髓发育不良、良性单克隆丙种球蛋白病、淋巴瘤样肉芽肿病、淋巴瘤样丘疹、真性红细胞增多、慢性髓细胞性白血病、特发性髓样化生、和原发性血小板增多症。血液***的细胞增殖性疾病可包括血液***的细胞增生、发育不良和化生。优选地，本发明的组合物可用于治疗选自本发明所述的血液癌症或本发明所述的血液细胞增殖性疾病的癌症。本发明的血液癌症可包括多发性骨髓瘤、淋巴瘤(包括霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、儿童淋巴瘤、以及淋巴细胞和皮肤源性的淋巴瘤)、白血病(包括儿童白血病、毛细胞白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、和肥大细胞白血病)、髓细胞样肿瘤和肥大细胞肿瘤。
“肺部细胞增殖性疾病”是涉及肺部细胞的细胞增殖性疾病。肺部细胞增殖性疾病可包括影响肺部细胞的细胞增殖性疾病的所有形式。肺部细胞增殖性疾病可包括肺癌、肺部初癌或癌前病症、肺的良性生长或损伤、肺的恶性生长或损伤、以及除肺以外的体内组织和器官内的转移性损伤。优选地，本发明的组合物可用于治疗肺癌或肺部细胞增殖性疾病。肺癌可包括肺部癌症的所有形式。肺癌可包括恶性肺肿瘤、原位恶瘤、典型类癌瘤和非典型性类癌瘤。肺癌可包括小细胞肺癌(“SCLC”)、非小细胞肺癌(“NSCLC”)、鳞状细胞癌、腺癌、小细胞癌、大细胞癌、腺鳞细胞癌和间皮瘤。肺癌可包括“瘢痕癌”、细支气管肺泡癌、巨细胞癌、梭形细胞癌和大细胞神经内分泌癌。肺癌可包括具有组织和超微结构异质性(例如，混合细胞类型)的肺部肿瘤。
肺部细胞增殖性疾病可包括影响肺部细胞的细胞增殖性疾病的所有形式。肺部细胞增殖性疾病包括肺癌、肺部的癌前病症。肺部的细胞增殖性疾病包括肺的增生、化生和发育不良。肺部的细胞增殖性疾病可包括石棉诱导的增生、鳞状化生和良性反应性间皮化生。肺部的细胞增殖性疾病包括由分层鳞状上皮细胞替代柱状上皮细胞，以及黏膜发育不良。暴露于吸入损伤性环境试剂(例如吸烟和石棉)的个体肺部发展细胞增殖性疾病的风险可能增高。可使个体趋于发展肺部细胞增殖性疾病的先前肺部疾病可包括慢性间质性肺病、坏死性肺病、硬皮病、风湿性疾病、结节病、间质性肺炎、结核、重复性肺炎、特发性肺纤维化、肉芽肿、石棉沉滞症、纤维化肺泡炎和霍奇金病。
“结肠细胞增殖性疾病”是涉及结肠细胞的细胞增殖性疾病。优选地，所述结肠细胞增殖性疾病是结肠癌。优选地，本发明的组合物可用于治疗结肠癌或结肠细胞增殖性疾病。结肠癌可包括结肠癌症的所有形式。结肠癌可包括散发性结肠癌和遗传性结肠癌。结肠癌可包括恶性结肠肿瘤、原位恶瘤、典型类癌瘤和非典型性类癌瘤。结肠癌可包括腺癌、鳞状细胞癌和腺鳞状细胞癌。结肠癌可与选自遗传性非息肉症结肠直肠癌、家族性腺瘤性息肉病、加德纳综合症、波伊茨-耶格综合症、特考特综合症和幼年性息肉病的遗传性综合症相关。结肠癌可由选自遗传性非息肉症结肠直肠癌、家族性腺瘤性息肉病、加德纳综合症、波伊茨-耶格综合症、特考特综合症和幼年性息肉病的遗传性综合症相关引起。
结肠细胞增殖性疾病可包括影响结肠细胞的细胞增殖性疾病的所有形式。结肠细胞增殖性疾病可包括结肠癌、结肠的癌前病症、结肠的腺瘤息肉和结肠的异时性损伤。结肠的细胞增殖性疾病可包括腺瘤。结肠细胞增殖性疾病的特点可以是结肠的增生、化生和发育不良。可使个体趋于发展结肠细胞增殖性疾病的先前结肠疾病包括前期结肠癌。可使个体趋于发展结肠细胞增殖性疾病的现有疾病可包括克罗恩病和溃疡性结肠炎。结肠的细胞增殖性疾病可能与选自p53、ras、FAP和DCC的基因突变相关联。由于选自p53、ras、FAP和DCC的基因突变的存在，个体可能升高发展结肠细胞增殖性疾病的风险。
“胰腺细胞增殖性疾病”是涉及胰腺细胞的细胞增殖性疾病。胰腺细胞增殖性疾病可包括影响胰腺细胞的细胞增殖性疾病的所有形式。胰腺细胞增殖性疾病可包括胰腺癌、胰腺初癌或癌前病症、胰腺增生和胰腺发育不良、胰腺良性生长或损伤、以及胰腺恶性生长或损伤，除胰腺以外的体内组织和器官内的转移性损伤。胰腺癌包括胰腺癌症的所有形式。胰腺癌可包括导管腺癌、腺鳞癌、多形性巨细胞癌、黏液腺癌、破骨细胞样巨细胞癌、粘液囊腺癌、腺泡癌、未分型大细胞癌、小细胞癌、胰母细胞瘤、***状肿瘤、粘液性囊腺瘤、乳突水泡肿瘤和浆液性囊腺瘤。胰腺癌还可包括具有组织和超微结构异质性(例如，混合细胞类型)的胰腺肿瘤。
“***细胞增殖性疾病”是涉及***细胞的细胞增殖性疾病。***细胞增殖性疾病可包括影响***细胞的细胞增殖性疾病的所有形式。***细胞增殖性疾病可包括***癌、***初癌或癌前病症、***良性生长或损伤、以及***恶性生长或损伤，除***以外的体内组织和器官内的转移性损伤。***的细胞增殖性疾病包括***的增生、化生和发育不良。
“皮肤细胞增殖性疾病”是涉及皮肤细胞的细胞增殖性疾病。皮肤细胞增殖性疾病可包括影响皮肤细胞的细胞增殖性疾病的所有形式。皮肤细胞增殖性疾病可包括皮肤初癌或癌前病症、皮肤良性生长或损伤、黑素瘤、恶性黑素瘤和其它皮肤恶性生长或损伤，以及除皮肤以外的体内组织和器官内的转移性损伤。皮肤的细胞增殖性疾病包括皮肤的增生、化生和发育不良。
“卵巢细胞增殖性疾病”是涉及卵巢细胞的细胞增殖性疾病。卵巢细胞增殖性疾病可包括影响卵巢细胞的细胞增殖性疾病的所有形式。卵巢细胞增殖性疾病可包括卵巢初癌或癌前病症、卵巢良性生长或损伤、卵巢癌、卵巢恶性生长或损伤，除卵巢以外的体内组织和器官内的转移性损伤。皮肤的细胞增殖性疾病包括卵巢的增生、化生和细胞发育不良。
“***细胞增殖性疾病”是涉及***细胞的细胞增殖性疾病。***细胞增殖性疾病可包括影响***细胞的细胞增殖性疾病的所有形式。***细胞增殖性疾病可包括乳腺癌、乳腺初癌或癌前病症、***良性生长或损伤、以及***恶性生长或损伤，除***以外的体内组织和器官内的转移性损伤。***的细胞增殖性疾病包括乳腺的增生、化生和发育不良。
***的细胞增殖性疾病可以是***的癌前病症。本发明的组合物可用于治疗***的癌前病症。***的癌前病症可包括乳腺非典型增生、原位导管癌(DCIS)、乳管癌、叶状原位癌(LCIS)、小叶癌和乳腺0期或0级生长或损伤(例如，0期或0级乳腺癌或原位癌)。***的癌前病症可根据美国癌症联合委员会(AJCC)认可的TNM分类方案分期，其中指定原发性肿瘤(T)为T0或Tis期；指定局部***(N)为NO期；指定远端转移(M)为MO期。
***的细胞增殖性疾病可以是乳腺癌。优选地，本发明的组合物用于治疗乳腺癌。乳腺癌包括乳腺癌症的所有形式。乳腺癌可包括原发性上皮乳腺癌。乳腺癌可包括乳腺被其它肿瘤囊括的癌，所述肿瘤例如淋巴瘤、肉瘤或黑素瘤。乳腺癌可包括乳腺的癌症、乳腺导管癌、乳腺小叶癌、乳腺未分化癌、乳腺囊性肉瘤、乳腺血管肉瘤和原发性乳腺淋巴瘤。乳腺癌可包括I、II、IIIA、IIIB、IIIC和IV期乳腺癌。乳腺导管癌可包括侵袭性癌、管内成分主导的原位侵袭性癌、炎性乳腺癌、和组织类型选自粉刺型、黏液型(胶质)、髓质型、淋巴细胞浸润髓质型、***状、硬癌和管状的乳腺导管癌。乳腺小叶癌可包括原位成分主导的侵袭性小叶癌、侵袭性小叶癌和浸润性小叶癌。乳腺癌可包括佩吉特病(Paget’sdisease)、伴随管内癌的佩吉特病和伴随侵袭性导管癌的佩吉特病。乳腺癌可包括具有组织和超微结构异质性(例如，混合细胞类型)的***肿瘤。
优选地，本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物可用于治疗乳腺癌。待治疗的乳腺癌可包括家族性乳腺癌。待治疗的乳腺癌可包括散发性乳腺癌。待治疗的乳腺癌可在雄性对象内发生。待治疗的乳腺癌可在雌性对象内出现。待治疗的乳腺癌可在绝经前期雌性对象或绝经后期雌性对象内出现。待治疗的乳腺癌可在等于或长于30岁的对象、或者小于30岁的对象内出现。待治疗的乳腺癌已在等于或长于50岁的对象、或者小于50岁的对象内出现。待治疗的乳腺癌可在等于或长于70岁的对象、或者小于70岁的对象内出现。
可将待治疗的乳腺癌分类以鉴定BRCA1、BRCA2或p53的家族性或自发性突变。待治疗的乳腺癌可按具有HER2/neu基因扩增、过表达HER2/neu、或者具有低水平、中等水平或高水平HER2/neu表达分类。待治疗的乳腺癌可按选自***受体(ER)、孕酮受体(PR)、人表皮生长因子受体-2、Ki-67、CA15-3、CA27-29和c-Met的标志物分类。待治疗的乳腺癌可按ER-未知、ER-富含或ER-缺乏分类。待治疗的乳腺癌可按ER-阴性或ER-阳性分类。乳腺癌的ER分类可通过任何可重复方式进行。乳腺癌的ER分类按Onkologie27：175-179(2004)中所述进行。待治疗的乳腺癌可按PR-未知、PR-富含或PR-缺乏分类。待治疗的乳腺癌可按PR-阴性或PR-阳性分类。待治疗的乳腺癌可按受体阴性或受体阳性分类。待治疗的乳腺癌可按CA15-3或CA27-29或两者血液水平升高的相关性分类。
待治疗的乳腺癌可包括***的局部肿瘤。待治疗的乳腺癌可包括与阴性前哨***(SLN)活检相关的***肿瘤。待治疗的乳腺癌可包括与阳性前哨***(SLN)活检相关的***肿瘤。待治疗的乳腺癌可包括与一种或多种阳性腋***相关的***肿瘤，其中所述腋***已通过任何可行方法分期。待治疗的乳腺癌可包括已分类为具有结阴性状态(例如，***阴性)或结阳性状态(例如，***阳性)的***肿瘤。待治疗的乳腺癌可包括已转移至体内其它位置的***肿瘤。待治疗的乳腺癌可按已转移至选自骨、肺、肝或脑的位置分类。待治疗的乳腺癌可根据选自转移型、局部型、区域型、局部区域型、局部晚期、远端、多中心型、双侧、同侧、对侧、新诊断的、复发和不宜手术的特点分类。
本发明的化合物，或者其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物可用于治疗或预防相对于大部分群体具有增高的发展乳腺癌风险的对象内的***细胞增殖性疾病，或者治疗或预防所述对象内的乳腺癌。相对于大部分群体具有增高的发展乳腺癌风险的对象是有乳腺癌家族史或个人史的雌性对象。相对于大部分群体具有增高的发展乳腺癌风险的对象是具有BRCA1或BRCA2或两者的种系突变或自突变的雌性对象。相对于大部分群体具有增高的发展乳腺癌风险的对象是具有乳腺癌家族史和BRCA1或BRCA2或两者的种系突变或自突变的雌性对象。相对于大部分群体具有增高的发展乳腺癌风险的对象是大于30岁、大于40岁、大于50岁、大于60岁、大于70岁、大于80岁或大于90岁的雌性。相对于大部分群体具有增高的发展乳腺癌风险的对象是患有乳腺非典型增生、原位导管癌(DCIS)、乳管癌、叶状原位癌(LCIS)、小叶癌、和乳腺0期或0级生长或损伤(例如，0期或0级乳腺癌或原位癌)的对象。
待治疗的乳腺癌可根据Scarff-Bloom-Richardson***进行组织学分级，其中已指定乳腺肿瘤有丝***计分为1、2或3；核多形性得分为1、2或3；小管形成得分为1、2或3；总Scarff-Bloom-Richardson得分介于3和9之间。待治疗的乳腺癌可根据关于乳腺癌治疗的国际专家共识会议(IntemationalConsensusPanelontheTreatmentofBreastCancer)指定为选自1级、1-2级、2级、2-3级或3级的级别。
待治疗的癌症可按照美国癌症联合委员会(AJCC)TNM分类***分级，其中已指定肿瘤(T)为TX、T1、T1mic、T1a、T1b、T1c、T2、T3、T4、T4a、T4b、T4c或T4d期；已指定局部***(N)为NX、NO、N1、N2、N2a、N2b、N3、N3a、N3b或N3c期；可指定远端转移(M)为MX、MO或M1期。待治疗的癌症可根据美国癌症联合委员会(AJCC)分类，按I期、IIA期、IIB期、IIIA期、IIIB期、IIIC期或IV期分期。待治疗的癌症可根据AJCC分类，按GX级(例如，无法固定级别)、1级、2级、3级或4级指定分级。待治疗的癌症可根据AJCC病理学分类(pN)，按pNX、pN0、PN0(I-)、PN0(I+)、PN0(mol-)、PN0(mol+)、PN1、PN1(mi)、PN1a、PN1b、PN1c、pN2、pN2a、pN2b、pN3、pN3a、pN3b或pN3c分期。
待治疗的癌症可包括经测定直径少于或等于约2厘米的肿瘤。待治疗的癌症可包括经测定直径为约2～约5厘米的肿瘤。待治疗的癌症可包括经测定直径大于或等于约3厘米的肿瘤。待治疗的癌症可包括经测定直径大于5厘米的肿瘤。待治疗的癌症还可通过显微形态按分化的、中等分化的、分化不足的或未分化的分类。待治疗的癌症可通过显微形态关于有丝***计数(例如，细胞***量)或核多形性(例如，细胞内变化)分类。待治疗的癌症可通过显微形态按坏死区域相关性(例如，死亡或变性细胞区域)分类。待治疗的癌症可按具有异常染色体组型、具有异常数量的染色体、或者具有一种或多种形态异常的染色体来分类。待治疗的癌症可按异倍体、三倍体、四倍体或具有变化倍性分类。待治疗的癌症可按具有易位染色体，或者整个染色体缺失或重叠，或者染色体部分的局部缺失、重叠或扩增分类。
待治疗的癌症可通过DNA细胞计数术、流式细胞计数术或图像细胞计数术评价。待治疗的癌症可按有10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％细胞在细胞***合成期(例如，在细胞***的S期)分类。待治疗的癌症可按具有低S期比值或高S期比值分类。
本文中所用的“正常细胞”是无法以“细胞增殖性疾病”部分来分类的细胞。正常细胞缺乏可导致发展不需状况或疾病的失调或异常(或两者)的生长。优选地，正常细胞具有正常的功能细胞周期检验点控制机制。
本文中所用的“接触细胞”指的是化合物或其它物质组合物直接接触细胞，或足够接近以诱导细胞内所需生物效应的状况。
本文中所用的“候选化合物”指的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物，其已经或即将在一种或多种体外或体内生物学实验中测试，从而测定所述化合物是否有可能引起研究者或医师选择的细胞、组织、***、动物或人内所需的生物学或医学响应。候选化合物是本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物。所述生物学或医学响应可以是癌症治疗。所述生物学或医学响应可以是细胞增殖性疾病的治疗或预防。体外或体内生物学实验可包括但不限于，酶活实验、电泳迁移率变动实验、报告基因实验、体外细胞活力实验和本文所述的实验。
本文所用的“单一疗法”指的是给予有需要的对象单一的活性或治疗性化合物。优选地，单一治疗涉及给予治疗有效量的单一活性化合物。例如，采用本发明化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、类似物或衍生物之一对需要治疗癌症的对象进行癌症单一治疗。一方面，所述单一活性化合物是本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物。
本文所用的“治疗的”或“治疗”描述以对抗疾病、病症或紊乱为目的处理并护理患者(包括给予本发明的化合物或药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物)，以减轻疾病、病症或紊乱的症状或并发症，或消除所述疾病、病症或紊乱。
本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物还可用于预防疾病、病症或紊乱。本文中所用的“预防”描述减少或消除所述疾病、病症或紊乱的症状或并发症的发生。
本文中所用的术语“减轻”意在描述一个过程，通过该过程疾病的迹象或症状的严重度减少。重要的是，迹象或症状可被减轻而非消除。在一个优选实施方式中，给予本发明的药物组合物导致迹象或症状的消除，然而，消除不是必需的。期望有效剂量减少迹象或症状的严重度。例如，若所述癌症的严重度在多个位置中的至少一处减少，则出现在多个位置的疾病例如癌症的迹象或症状得到减轻。
本文中所用的术语“严重度”意在描述癌症从初癌或良性状态转为恶性状态的潜力。或者或此外，严重度意在描述癌症病期，例如，按TNM***(由国际抗癌联盟(UICC)和美国癌症联合委员会(AJCC)认可)或由其它本领域公认方法所述的病期。癌症病期指的是所述癌症的程度或严重度，基于以下因素：例如所述原发性肿瘤的位置、肿瘤尺寸、肿瘤数量和***涉及程度(癌症扩散至***)。或者或此外，严重度意在描述由本领域公认方法(参见，国立癌症研究院(NationalCancerInstitute)，WWW.cancer.gov)判定的肿瘤级别。肿瘤级别是用于按癌细胞在显微镜下的外观异常程度和肿瘤可能生长和扩散的速度快慢分类癌细胞的***。确定肿瘤分类时考虑许多因素，包括所述细胞的结构和生长模式。用于测定肿瘤级别的具体因素随各类癌症而不同。严重度也描述组织学级别(也称为分化)，指的是所述肿瘤细胞与相同组织类型的正常细胞有多相似(参见，国立癌症研究院(NationalCancerInstitute)，www.cancer.gov)。此外，严重度描述核级别，其指的是肿瘤细胞中细胞核的尺寸和形状，以及***中肿瘤细胞的百分比(参见，国立癌症研究院(NationalCancerInstitute)，www.cancer.gov)。
本发明的另一个方面中，严重度描述肿瘤已分泌生长因子、降解胞外基质、成为血管化、失去与毗连组织的黏附、或转移的程度。此外，严重度描述原发性肿瘤已转移到达的位置数量。最后，严重度包括不同类型和位置的肿瘤的治疗难度。例如，认为不宜手术的肿瘤、更易进入多个身体***的那些癌症(血液的和免疫的肿瘤)以及对传统治疗最具抗性的那些肿瘤是最严重的。在这些情况中，认为减轻癌症的迹象或症状是所述对象延长生命的期望和/或减少痛苦、减少癌细胞或限制细胞在一个***中所占比例，以及改善癌症病期/肿瘤级别/组织学级别/核级别。
本文中所用的术语“症状”定义为疾病、病患、损伤或体内不正常的某事物的指示。症状由经历该症状的个体感受或注意，但可能不易被他人注意。他人定义为非健康护理专业人员。
本文中所用的术语“迹象”也定义为体内不正常的某事物的指示。但迹象定义为可由医生、护士或其它健康护理专业人员可见的事物。
癌症是可能引起几乎任何迹象或症状的一组疾病。所述迹象和症状取决于癌症的位置、癌症的大小以及所述癌症影响周边器官或结构的程度。若癌症扩散(转移)，则症状可能出现在身体的不同部位。
由于癌症生长，其开始压迫周边器官、血管和神经。该压力产生所述癌症迹象和症状中的一些。若所述癌症位于危险区域(例如脑的某些部分)，甚至最小的肿瘤也会引起早期症状。
但有时癌症起始于不引起任何症状直至癌症生长至很大规模的位置。例如，胰腺癌常常在生长至足够大之前从体外无法感知。一些胰腺癌不引起症状直至其开始环绕周边神经生长(这导致背痛)。其它围绕胆管生长，这阻碍胆汁流动并引起皮肤泛黄(称为黄疸)。当胰腺癌引起这些迹象或症状时，其通常已达到晚期。
癌症还可引起症状例如发烧、疲劳或体重减少。这可能是因为癌细胞用尽了大多数身体能量供给或释放改变身体代谢的物质。或者所述癌症可能引起免疫***以产生这些症状的方式予以反应。
有时，常常不认为癌细胞释放进入血液循环引起症状的物质来自癌症。例如，胰腺癌中的一些癌症会释放引起腿静脉中发展血凝块的物质。一些肺癌制造影响血钙水平，影响神经和肌肉并引起虚弱和头昏的激素样物质。
当存在多种癌细胞亚型时，癌症呈现若干一般迹象或症状。大多数患有癌症的人会在其患病的某些时间减重。无法解释的(无意识的)体重减轻10磅或更多可能是癌症的最初迹象，尤其是胰腺癌、胃癌、食道癌或肺癌。
发烧在患癌中非常普遍，但在晚期疾病中最为常见。几乎所有癌症患者在某些时间尤其是所述癌症或其治疗影响免疫***并使其更难于为身体对抗感染时会发烧。比较不常见的是，发烧可能是癌症(例如白血病或淋巴瘤)的早期迹象。
疲劳可能是癌症发展的重要症状。尽管在癌症(例如白血病)中或如果所述癌症正引起失血(例如一些结肠癌或胃癌)，可能早期会出现疲劳。
一些癌症例如骨癌或睾丸癌中，疼痛可能是早期症状。但最常见的是，疼痛是晚期疾病症状。
连同皮肤癌(参见下一部分)一起，一些内部癌症会导致可见的皮肤迹象。这些变化包括皮肤外观更暗沉(色素沉着过度)、泛黄(黄疸)或泛红(红斑)；痒；或毛发过度生长。
或者或此外，癌症亚型呈现特殊的迹象或症状。肠习惯或膀胱功能中的变化可指示癌症。长期便秘、腹泻或粪便尺寸的改变可能是结肠癌的迹象。排尿疼痛、尿中有血或膀胱功能改变(例如排尿频率更高或更低)可能与膀胱癌或***癌有关。
皮肤状况或新皮肤外观状况的改变可能指示癌症。皮肤癌可能流血，且伤处看似不痊愈。口中长期持续的伤处(尤其出现在吸烟、咀嚼烟草或经常饮酒的患者中)可能是口腔癌。***或***上的伤处可能是感染或早期癌症的迹象。
不平常的流血或溢出可能指示癌症。不平常的流血可能在早期或晚期癌症中出现。唾液(痰)中含血可能是肺癌的迹象。粪便中含血(或暗沉或黑色粪便)可能是结肠癌或直肠癌的迹象。宫颈或子宫内膜(子宫内层)的癌症可导致***出血。尿液中含血可能是膀胱癌或肾癌的迹象。从***溢出血可能是乳腺癌的迹象。
***中或身体其他部位中的增厚或肿块可能表示存在癌症。许多癌症可通过皮肤感知，其主要在***、睾丸、***(腺)和身体的软组织中。肿块或增厚可能是癌症的早期或晚期迹象。任何肿块和增厚都可能指示癌症，尤其是新形成或尺寸生长的肿块和增厚。
消化不良或吞咽困难可能指示癌症。虽然这些症状通常有其它起因，但消化不良或吞咽问题可能是食道癌、胃癌或咽癌(喉咙)的迹象。
疣或痔的近期变化可能指示癌症。颜色、尺寸或形状发生改变或失去其明确边界的任何疣、痔或斑点指示癌症的潜在发展。例如，皮肤损伤可能是黑素瘤。
持续的咳嗽或嘶哑可能指示癌症。不断的咳嗽可能是肺癌的迹象。嘶哑可能是喉(声带)或甲状腺的癌症。
尽管上文列举的迹象和症状是癌症中较常见的一些，仍然有许多其它迹象和症状较不常见且未列于此。然而，所有本领域公认的癌症迹象和症状是本发明预期且涵盖的。
癌症治疗可导致肿瘤尺寸减小。肿瘤尺寸减小还可称为“肿瘤消退”。优选地，治疗后，肿瘤尺寸相对于其治疗前尺寸减少5％或更多；更优选地，肿瘤尺寸减少10％或更多；更优选地，减少20％或更多；更优选地，减少30％或更多；更优选地，减少40％或更多；甚至更优选地，减少50％或更多；最优选地，减少多于75％或更多。肿瘤尺寸可通过任何可重复的测量方式测量。可按肿瘤的直径测量肿瘤尺寸。
癌症治疗可导致肿瘤体积减小。优选地，治疗后，肿瘤体积相对于其治疗前尺寸减少5％或更多；更优选地，肿瘤体积减少10％或更多；更优选地，减少20％或更多；更优选地，减少30％或更多；更优选地，减少40％或更多；甚至更优选地，减少50％或更多；最优选地，减少多于75％或更多。肿瘤体积可通过任何可重复的测量方式测量。
癌症治疗导致肿瘤数量的减少。优选地，治疗后，肿瘤数量相对于其治疗前数量减少5％或更多；更优选地，肿瘤数量减少10％或更多；更优选地，减少20％或更多；更优选地，减少30％或更多；更优选地，减少40％或更多；甚至更优选地，减少50％或更多；最优选地，减少多于75％或更多。肿瘤数量可通过任何可重复的测量方式测量。肿瘤的数量可通过对肉眼或以特定放大倍数可见的肿瘤计数来测量。优选地，所述特定放大倍数是2×、3×、4×、5×、10×或50×。
肿瘤治疗可导致远离所述原发肿瘤位点的其它组织或器官中的转移性损伤数量减少。优选地，治疗后，转移性损伤的数量相对于其治疗前数量减少5％或更多；更优选地，转移性损伤数量减少10％或更多；更优选地，减少20％或更多；更优选地，减少30％或更多；更优选地，减少40％或更多；甚至更优选地，减少50％或更多；最优选地，减少多于75％。转移性损伤数量可通过任何可重复的测量方式测量。转移性损伤数量可通过对肉眼或以特定放大倍数可见的转移性损伤计数来测量。优选地，所述特定放大倍数是2×、3×、4×、5×、10×或50×。
癌症治疗可导致相较于接受单一载体的群体，受治疗对象群体的平均生存时间增加。优选地，平均生存时间增加多于30天；更优选地，多于60天；更优选地，多于90天；最优选地，多于120天。群体平均生存时间的增加可通过任何可重复方式测量。例如，群体平均生存时间的增加可通过计算采用活性化合物治疗起始后群体的平均生存长度来测量。例如，群体平均生存时间的增加还可通过计算采用活性化合物完成第一轮治疗后群体的平均生存长度来测量。
癌症治疗可导致相较于未受治疗的群体，受治疗对象群体的平均生存时间增加。优选地，平均生存时间增加多于30天；更优选地，多于60天；更优选地，多于90天；最优选地，多于120天。群体平均生存时间的增加可通过任何可重复方式测量。例如，群体平均生存时间的增加可通过计算采用活性化合物治疗起始后群体的平均生存长度来测量。例如，群体平均生存时间的增加还可通过计算采用活性化合物完成第一轮治疗后群体的平均生存长度来测量。
癌症治疗可导致相较于接受采用非本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、类似物或衍生物为药物的单一疗法的群体，接受治疗的对象群体的平均生存时间增加。优选地，平均生存时间增加多于30天；更优选地，多于60天；更优选地，多于90天；最优选地，多于120天。群体平均生存时间的增加可通过任何可重复方式测量。例如，群体平均生存时间的增加可通过计算采用活性化合物治疗起始后群体的平均生存长度来测量。例如，群体平均生存时间的增加还可通过计算采用活性化合物完成第一轮治疗后群体的平均生存长度来测量。
癌症治疗可导致相较于只接受载体的群体，受治疗对象群体的死亡率减少。癌症治疗可导致相较于未受治疗的群体，受治疗对象群体的死亡率减少。癌症治疗可导致相较于接受采用非本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、类似物或衍生物为药物的单一疗法的群体，接受治疗的对象群体的死亡率减少。优选地，所述死亡率减少多于2％；更优选地，多于5％；更优选地，多于10％；最优选地，多于25％。受治疗对象群体的死亡率减少可通过任何可重复的方式测量。例如，群体死亡率的减少可通过计算采用活性化合物治疗起始后每单位时间内群体的平均疾病相关死亡数来测量。例如，群体死亡率的减少还可通过计算采用活性化合物第一轮治疗结束后每单位时间内群体的平均疾病相关死亡数来测量。
癌症治疗可导致肿瘤生长速率减少。优选地，治疗后，肿瘤生长速率相对治疗前的数字减少至少5％；更优选地，肿瘤生长速率减少至少10％；更优选地，减少至少20％；更优选地，减少至少30％；更优选地，减少至少40％；更优选地，减少至少50％；甚至更优选地，减少至少50％；最优选地，减少至少75％。肿瘤生长速率可通过任何可重复的测量方式测量。肿瘤生长速率可根据肿瘤直径/单位时间的变化来测量。
癌症治疗可导致肿瘤再生长减少。优选地，治疗后，肿瘤再生长少于5％；更优选地，肿瘤再生长少于10％；更优选地，少于20％；更优选地，少于30％；更优选地，少于40％；更优选地，少于50％；甚至更优选地，少于50％；最优选地，少于75％。肿瘤再生长可通过任何可重复的测量方式测量。例如，肿瘤再生长可通过在治疗后肿瘤缩减一段时间后测量肿瘤直径的增加来测量。肿瘤再生长的减少由治疗后肿瘤重新出现的停止来指示。
细胞增殖性疾病的治疗和预防可导致细胞增殖速率的减少。优选地，治疗后，细胞增殖的速率减少至少5％；更优选地，至少10％；更优选地，至少20％；更优选地，至少30％；更优选地，至少40％；更优选地，至少50％；甚至更优选地，至少50％；最优选地，至少75％。细胞增殖速率可通过任何可重复的测量方式测量。例如，细胞增殖速率通过测量每单位时间内组织样品中***中细胞的数量来测量。
细胞增殖性疾病的治疗和预防可导致增殖细胞所占比例减少。优选地，治疗后，增殖细胞的比例减少至少5％；更优选地，至少10％；更优选地，至少20％；更优选地，至少30％；更优选地，至少40％；更优选地，至少50％；甚至更优选地，至少50％；最优选地，至少75％。增殖细胞的比例可通过任何可重复的测量方式测量。优选地，增殖细胞的比例例如通过定量组织样品中相对于未***细胞数量的***中细胞数量来测量。增殖细胞的比例可等同于有丝***指数。
细胞增殖性疾病的治疗和预防可导致细胞增殖的范围或区域尺寸减小。优选地，治疗后，细胞增殖范围或区域的尺寸相对其治疗前的尺寸减少至少5％；更优选地，减少至少10％；更优选地，减少至少20％；更优选地，减少至少30％；更优选地，减少至少40％；更优选地，减少至少50％；甚至更优选地，减少至少50％；最优选地，减少至少75％。细胞增殖范围或区域的尺寸可通过任何可重复的测量方式测量。细胞增殖的范围或区域尺寸可按细胞增殖的范围或区域的直径或宽度来测量。
细胞增殖性疾病的治疗和预防可导致具有异常外观或形态的细胞数量或比例减少。优选地，治疗后，具有异常形态的细胞的数量相对其治疗前的规模减少至少5％；更优选地，减少至少10％；更优选地，减少至少20％；更优选地，减少至少30％；更优选地，减少至少40％；更优选地，减少至少50％；甚至更优选地，减少至少50％；最优选地，减少至少75％。异常细胞外观或形态可通过任何可重复的测量方式来测量。例如，异常细胞形态可通过显微镜(例如，使用倒置组织培养显微镜)来测量。异常细胞形态可以是核多形性形式。
本文中所用的术语“选择性地”指的是相较于另一个群体趋于更频繁地出现在一个群体中。所述比较的群体可以是细胞群。优选地，本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物选择性地作用于癌细胞或癌前细胞而非正常细胞。优选地，本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物选择性地作用以调节一种分子靶标(例如，靶标蛋白甲基转移酶)而不显著调节其它分子靶标(例如，非靶标蛋白甲基转移酶)。本发明还提供用于选择性抑制酶(例如蛋白甲基转移酶)活性的方法。优选地，若事件相对于群体B在群体A中出现频率多于两倍，则其相对于群体B在群体A中选择性出现。若事件在群体A中更频繁出现多于5倍，则其选择性出现。若事件在群体A中更频繁出现多于10倍，则其选择性出现；更优选地，多于50倍；甚至更优选地，多于100倍；最优选地，相对于群体B在群体A中更频繁出现多于1000倍。例如，若细胞死亡在癌细胞中的死亡频率相较于正常细胞出现多于2倍，则可认为细胞死亡选择性出现在癌细胞中。
本发明的化合物，或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物可调节分子靶标(例如，靶标蛋白甲基转移酶)的活性。调节指的是刺激或抑制分子靶标的活性。优选地，本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物调节分子靶标的活性，条件是其对所述分子靶标活性的刺激或抑制是相同条件下但仅缺乏所述化合物存在时所述分子靶标活性的至少两倍。更优选地，本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物调节分子靶标的活性，条件是其对所述分子靶标活性的刺激或抑制是相同条件下但仅缺乏所述化合物存在时所述分子靶标活性的至少5倍，至少10倍，至少20倍，至少50倍，至少100倍。分子靶标的活性可通过任何可重复方式测量。分子靶标的活性可在体外或体内测量。例如，分子靶标的活性可在体外通过酶活实验或DNA结合实验来测量，或分子靶标的活性可在体内通过检测报告基因的表达来测量。
本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物不显著调节分子靶标的活性，条件是添加所述化合物刺激或抑制所述分子靶标活性相对于相同条件下但仅缺乏所述化合物存在时的所述分子靶标活性不超过10％。
本文中所用的术语“同功酶选择性”指的是酶的第一同种型相较于酶的第二同种型的优先抑制或刺激(例如，蛋白甲基转移酶同种型α相较于蛋白甲基转移酶同种型β的优先抑制或刺激)。优选地，本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物在达到生物效应所需剂量时显示最少四倍差异，优选10倍差异，更优选50倍差异。优选地，本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物显示越过抑制范围的差异，就感兴趣的分子靶标而言，以IC50(即，50％抑制)作为该差异的例子。
对有需要的细胞或对象给予本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物可导致对感兴趣的蛋白甲基转移酶活性的调节(即，刺激或抑制)。
本发明提供评价本发明化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物的生物活性的方法，或鉴定测试化合物为DOT1L调节剂(例如，抑制剂)的方法。DOT1L多肽和核酸可用于筛选化合物，所述化合物结合和/或调节(例如增加或减少)DOT1L的一种或多种生物活性，包括但不限于H3K79HMT酶活性、SAM结合活性、组蛋白和/或核小体结合活性、AF10结合活性、AF10-MLL或其它MLL融合蛋白结合活性，和/或感兴趣的任何其它生物活性。DOT1L多肽可以是全长DOT1L多肽的功能性片段或其功能等同物，且可包括任何感兴趣的DOT1结构域，包括但不限于催化结构域、SAM结合结构域和/或带正电的结构域、AF10相互作用结构域和/或核输出信号。
评价DOT1L结合组蛋白、核小体、核酸或多肽的方法可使用本领域技术人员明白的标准技术进行(参见示例性方法的实施例)。所述方法包括酵母和哺乳动物双杂交实验和共免疫沉淀技术。
例如，调节DOT1LH3K79HMT酶活性的化合物可通过以下方法检验：使DOT1L多肽在测试化合物存在下接触含有H3的组蛋白或肽底物；在足以提供H3K79甲基化的条件下检测所述组蛋白或肽底物的H3K79甲基化水平，其中，所述测试化合物存在下的H3K79甲基化相较于不存在所述测试化合物时组蛋白H3K79甲基化水平的升高或减少指示所述测试化合物调节DOT1LH3K79HMT酶活性。
本发明的筛选方法可在基于细胞或无细胞***内进行。作为另一个选择，所述实验可在整体动物(包括转基因非人类动物)内实施。此外，关于基于细胞的***，可向所述细胞直接添加或可由所述细胞内核酸产出所述DOT1L多肽(或所述实验中使用的任何其它多肽)。所述核酸对于所述细胞可以是内源性的或可以是外来的(例如，来自遗传修饰的细胞)。
在一些实验中，使用免疫学试剂(例如抗体和抗原)。一些实验中酶活性的测量中可使用荧光。本文中所用的“荧光”指的是一个过程，通过该过程分子吸收高能光子从而从同一分子发射光子。评估本公开化合物的生物活性的具体方法于实施例中描述。
对有需要的细胞或对象给予本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物导致对细胞内靶标(例如，底物)活性的调节(即，刺激或抑制)。可采用本发明的化合物调节若干细胞内靶标，所述细胞内靶标包括但不限于蛋白甲基转移酶。
激活指的是使物质(例如，蛋白质或核酸)组合物进入合适于行使所需生物功能的状态。能够被激活的物质组合物还具有未激活的状态。被激活的物质组合物可具有抑制或刺激(或两者)的生物功能。
升高指的是物质(例如，蛋白质或核酸)组合物的所需生物活性的增加。升高可通过增加物质组合物的浓度而出现。
本文中所用的“细胞周期检验点通路”指的是涉及细胞周期检验点调节的生化通路。细胞周期检验点通路可具有刺激或抑制(或两者)包含细胞周期检验点的一种或多种功能的作用。细胞周期检验点通路由有助于调节细胞周期检验点的至少两种物质(优选蛋白质)的组合物组成。细胞周期检验点通路可通过激活所述细胞周期检验点通路的一个或多个成员来激活。优选地，细胞周期检验点通路是生化信号通路。
本文中所用的“细胞周期检验点调节剂”指的是能行使功能至少部分调节细胞周期检验点的物质组合物。细胞周期检验点调节剂可具有刺激或抑制(或两者)包含细胞周期检验点的一种或多种功能的作用。细胞周期检验点调节剂可以是或不是蛋白质。
癌症或细胞增殖性疾病的治疗可导致细胞死亡，优选地，细胞死亡导致群体中细胞数量减少至少10％。更优选地，细胞死亡意味着减少至少20％；更优选地，减少至少30％；更优选地，减少至少40％；更优选地，减少至少50％；最优选地，减少至少75％。群体中细胞数量可通过任何可重复的方式检测。群体中的细胞数量可通过荧光激发的细胞分选(FACS)、免疫荧光显微镜和光学显微镜测量。测量细胞死亡的方法如Li等.，ProcNatlAcadSciUSA.100(5)：2674-8，2003.中所示。一方面，细胞死亡由凋亡产生。
优选地，本发明化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物的有效量对正常细胞无显著细胞毒性。化合物的治疗有效量对正常细胞无显著细胞毒性，条件是所述治疗有效量的化合物不诱导多于10％的正常细胞死亡。化合物的治疗有效量不显著影响正常细胞活力，条件是所述治疗有效量的化合物不诱导多于10％的正常细胞死亡。一方面，细胞死亡由凋亡产生。
使细胞接触本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物可在癌细胞中选择性诱导或激活细胞死亡。给予有需要的对象本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物可在癌细胞中选择性诱导或激活细胞死亡。使细胞接触本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物可在受细胞增殖性疾病影响的一种或多种细胞内选择性诱导细胞死亡。优选地，给予有需要的对象本发明的化合物及其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物在受细胞增殖性疾病影响的一种或多种细胞中选择性诱导细胞死亡。
本发明涉及通过给予有需要的对象本发明的化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物来治疗或预防癌症的方法，其中，本发明化合物或其药学上可接受的盐、药物前体、代谢物、多形体或溶剂合物的给予导致以下情况的一种或多种：细胞周期G1和/或S期的细胞累积、通过癌细胞中细胞死亡而正常细胞无显著量细胞死亡的细胞毒性、治疗指数至少为2的动物内抗肿瘤活性和细胞周期检验点的激活。本文中所用的“治疗指数”是最大耐受剂量除以有效剂量。
本领域技术人员可查阅详述本文讨论已知技术或等同技术的一般参考课本。这些课本包括Ausubel等，CurrentProtocolsinMolecularBiology，(《新编分子生物学实验指南》)约翰威利父子公司(2005)；Sambrook等，MolecularCloning，ALaboratoryManual(《分子克隆：实验室手册》)(第三版)，纽约冷泉港的冷泉港出版社(2000)；Coligan等，CurrentProtocolsinImmunology(《最新免疫实验方法》)纽约的约翰威利父子公司；Enna等，CurrentProtocolsinPharmacology(《最新药理学实验方法》)纽约的约翰威力父子公司；Fingl等，ThePharmacologicalBasisofTherapeutics(《治疗的药理学基础》)(1975)，Remington′sPharmaceuticalSciences(《雷明顿药物科学》)宾夕法尼亚州伊斯顿的马克出版公司(MackPublishingCo.，Easton，PA)第18版(1990)。当然，在开发或使用本发明的一方面中也可参考这些课本。
本发明的化合物还可用于治疗或预防神经疾病或紊乱。可用本发明的化合物治疗的神经疾病或紊乱包括癫痫、精神***症、双向障碍或其它心理上和/或精神障碍、神经病、骨骼肌萎缩和神经变性疾病，例如，神经变性疾病。示例性的神经变性疾病包括：老年痴呆症、肌肉萎缩性一侧硬化(ALS)和帕金森病。另一类神经变性疾病包括至少部分由多聚谷氨酰胺聚集引起的疾病。该类疾病包括：亨廷顿氏(Huntington’s)病、脊髓延髓性肌萎缩(SBMA或肯尼迪氏(Kennedy’s)病)、齿状核红核苍白球丘脑下核萎缩(DRPLA)、1型脊髓小脑性共济失调(SCA1)、2型脊髓小脑性共济失调(SCA2)、马查多-约瑟夫(Machado-Joseph)病(MJD；SCA3)、6型脊髓小脑性共济失调(SCA6)、7型脊髓小脑性共济失调(SCA7)和12型脊髓小脑性共济失调(SCA12)。
由DOT1介导的表观遗传甲基化起作用的任何其它疾病，都可以使用本文所述的化合物和方法来治疗或预防。
4.药物组合物
本发明还提供包含式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)和(IV)的化合物结合至少一种药学上可接受的赋形剂或载体的药物组合物。
“药物组合物”是包含其形式合适给予对象的本发明化合物的制剂。在一个实施方式中，所述药物组合物是散装或单位剂型。所述单位剂型是多种形式中的任何一种，包括例如，胶囊、IV袋、片剂、配有单泵的气雾剂吸入器或小瓶。组合物的单位剂量中活性成分的质量(例如，本公开化合物或其盐、水合物、溶剂合物或异构体的制剂)是有效量，且按涉及的具体治疗而不同。本领域技术人员应理解，有时有必要根据患者的年龄和状况对所述剂型制定变化的标准程序。所述剂型还取决于给药途径。预期有多种途径，包括口服、经肺、经直肠、肠胃外、透皮、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内、吸入、颊部、舌下、胸膜内、鞘内、鼻内等。本发明化合物的局部或透皮给予的剂型包括粉剂、喷剂、油膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、溶液剂、贴剂和吸入剂。在一个实施方式中，所述活性化合物在无菌条件下与药学上可接受的载体和任何需要的防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。
本文中所用的术语“药学上可接受的”是指合理医疗判断范围内的这些化合物、材料、组合物、载体和/或剂型，其适用于接触人体和动物组织、与合理的效益/风险比相适应的、不会产生过度毒性、刺激性、过敏反应或其它问题或并发症。
“药学上可接受的赋形剂”指的是药物组合物制备中所用的赋形剂，所述药物组合物通常安全、无毒且在生物学或另外方面上符合需要，所述赋形剂包括兽药用和人类药物用的赋形剂。本说明书和权利要求中所用的“药学上可接受的赋形剂”包括一种和多于一种所述赋形剂。
本发明的药物组合物配制为与其预期的给予途径相容。给予途径的示例包括胃肠道外给予，例如，静脉内、皮内、皮下、口服(如吸入)、透皮(局部)和经粘膜给予。用于胃肠道外、皮内或皮下应用的溶液或悬液可包括以下组分：无菌稀释剂如注射用水、盐水溶液、非挥发油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂如乙二胺四乙酸；缓冲剂如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；和调节张力的试剂如氯化钠或右旋糖。pH可用酸或碱调节，例如盐酸或氢氧化钠。胃肠道外制剂可封装在安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。
本发明的化合物或药物组合物可用当前用于化疗的熟知方法中的许多给予对象。例如，就治疗癌症而言，本发明的化合物可直接注射进入肿瘤，注射进入血流或体腔或口服或通过贴片经皮施加。所选剂量应足够建立有效治疗但不至高到导致不能接受的副作用。应优选在治疗过程中和治疗后的适度时段内严密监控病症(例如，癌症、初癌等)的状态和患者的健康。
本文中所用的术语“治疗有效量”指治疗、改善或预防经鉴定的疾病或病症，或显示可检测治疗或抑制效果的药剂用量。所述效果可通过本领域已知的任何实验方法检测。对象的准确有效量取决于对象的体重、大小和健康；病症的本质和程度；以及给药选定的疗法。给定情况的治疗有效量能通过临床医生技巧和判断范围内的常规实验测定。在优选方面，所述待治疗的疾病或病症是癌症。在另一方面，所述待治疗的疾病或病症是细胞增殖性疾病。
就任何化合物而言，所述治疗有效量可在最初于细胞培养实验(例如，肿瘤细胞)或在动物模型(通常是大鼠、小鼠、兔、狗或猪)中评估。还可使用动物模型确定合适的浓度范围和给药途径。此类信息还可用于确定人体中有用的给药剂量和途径。治疗/预防功效和毒性可在细胞培养或实验动物中通过标准药学方法确定，例如，ED50，(对群体中50％治疗有效的剂量)和LD50(对群体中50％致死的剂量)。毒性和疗效的剂量比是治疗指数，可表示为LD50/ED50。优选具有高治疗指数的药物组合物。该剂量可根据所用剂型、患者的敏感性和给药途径在此范围内变化。
对剂量和给药进行调整以提供足够水平的一种或多种活性试剂或维持所需效果。需要考虑的因素包括疾病状况的严重性、对象的总体健康状况、对象的年龄、体重和性别、饮食、给药的时间和频率、药物相互作用、对治疗的反应敏感性以及耐受/响应。根据特定制剂的半衰期和清除率，长效药物组合物可每3-4天，每周或每两周给予一次。
本发明包含活性化合物的药物组合物可以一般所知方式制造，如，通过常规的混合、溶解、造粒、制造糖衣剂、水飞、乳化、包胶、包封或冻干工艺的方法。药物组合物可以传统方式使用一种或多种药学上可接受的载体来制备，所述载体包括便于将所述活性化合物加工至药学上可用制剂内的赋形剂和/或助剂。当然，适当的制剂依赖于所选的给药途径。
适于注射应用的药物组合物包括无菌水溶液(水溶性时)或分散液，以及用于临时制备无菌注射液或分散液的无菌粉末。对于静脉内给予，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、克列莫佛EMTM(新泽西州帕西潘尼的巴斯夫公司(BASF))或磷酸缓冲盐水(PBS)。所有情况下，所述组合物必须无菌，并应该是达到存在易注射性(easysyringability)程度的流体。它在制造和贮存的条件下必须是稳定的并且必须保存抵御微生物如细菌和真菌的污染作用。载体可以是包含水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物的溶剂或分散介质。可维持合适的流动性，例如通过使用诸如卵磷脂的涂覆材料、分散液情况下通过保持所需粒度以及通过使用表面活性剂。也可通过各种抗菌剂和抗真菌剂，如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等实现防止微生物的作用。在许多情况下，组合物中优选包含等张剂，例如糖、多元醇如甘露醇和山梨醇以及氯化钠。通过组合物中包含延迟吸收的试剂如单硬脂酸铝和明胶能延长可注射组合物的吸收。
可将所需量的活性化合物和一种上述组分或其组合根据需要掺入合适溶剂后过滤灭菌，从而制备无菌注射液。通常，将活性活化物掺入含有碱性分散介质和上述其它所需成分的无菌载体中制备分散剂。在用于制备无菌注射液的无菌粉末情况中，制备方法是真空干燥和冷冻干燥，由其之前无菌过滤的溶液得到活性组分和任何其它所需组分的粉末。
口服组合物通常包括惰性稀释剂或可食用的药学上可接受的载体。它们可包封在凝胶胶囊中或压制成片剂。对于口服治疗给药目的，所述活性化合物可用赋形剂掺入并以片剂、含片或胶囊的形式使用。口服组合物也可使用液体载体制备以用作漱口水，其中液体载体中的所述化合物口服使用以及冲刷并吐出或吞咽。药学上可相容的结合剂和/或佐剂物质可作为组合物的一部分包含在内。片剂、丸剂、胶囊、含片等可含有任何以下成分或具有相似特性的化合物：粘合剂例如微晶纤维素、黄蓍胶和明胶；赋形剂例如淀粉或乳糖，崩解剂例如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂例如硬脂酸镁或Sterote；助流剂例如胶态二氧化硅；甜味剂例如蔗糖或糖精；或调味剂例如薄荷、水杨酸甲酯、橙调味剂。
就吸入给予而言，所述化合物以来自包括合适推进剂(例如，如二氧化碳气体)或喷雾剂的受压容器或分配器的气雾剂喷雾形式递送。
也可通过经粘膜或透皮方法全身给予。就经粘膜或透皮给予而言，在制剂中采用适合渗透屏障的渗透剂。该渗透剂通常为本领域已知，并包括例如用于经粘膜给予的去污剂、胆汁盐和夫西地酸衍生物。经粘膜给予可通过使用鼻喷雾或栓剂实现。对于透皮给予，所述活性化合物配制在药膏、软膏、凝胶或霜剂中，如本领域通常已知。
所述活性化合物可联合药学上可接受的载体制备，所述药学上可接受的载体保护所述化合物不被身体快速清除，例如控释配方，包括植入和微囊化递送***。可利用生物可降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。制备该制剂的方法是本领域技术人员显而易见的。所述材料还可市购获自阿尔扎公司(AlzaCorporation)和诺华制药股份有限公司(NovaPharmaceuticals，Inc.)。也可使用脂质体悬液(包括以抗病毒抗原的单克隆抗体靶向感染细胞的脂质体)作为药学上可接受的载体。这些可按本领域技术人员已知的方法制备，例如，如美国专利号4,522,811中所述。
尤其有益处的是配制成单位剂型的口服或肠道外组合物以便于给药和使剂量均一。本文所用的单位剂量形式指作为单一剂量用于待治疗对象的物理离散单位，每个单位包含预定量的活性化合物与所需药物载体，该预定量经计算能够产生所需治疗效果。本发明单位剂型的具体规格受制于并直接取决于所述活性化合物的独特特点和需要达到的具体治疗效果。
在治疗施用中，如本发明所述使用的药物组合物的剂型根据试剂、接受患者的年龄、体重和临床病症以及给予该治疗的医师或从业者的经验和判断、以及影响所选剂型的其他因素而变化。一般而言，所述剂量应足够导致减缓肿瘤生长，优选使肿瘤生长消退，还优选导致所述癌症的完全消退。剂量可在约0.01mg/kg/天～约5000mg/kg/天范围内。在优选方面中，剂量可在约1mg/kg/天～约1000mg/kg/天范围内。在一方面中，所述剂量可在约0.1mg/天～约50g/天；约0.1mg/天～约25g/天；约0.1mg/天～约10g/天；约0.1mg～约3g/天或约0.1mg～约1g/天，以单一、分开或连续剂量(所述剂量可根据患者的体重(kg)、体表面积(m2)和年龄(岁)调整)。药剂有效量是提供由医师或其他有资格的观察者注意的可客观识别的改善的量。例如，患者内的肿瘤消退可考察所述肿瘤的直径来检测。肿瘤直径的减少表示消退。消退还由治疗停止后肿瘤无法再发生表示。本文中所用的术语“剂量有效方式”指的是活性化合物在对象或细胞内产生所需生物学效应的量。
所述药物组合物可与给药说明书一同包括在容器、包装或分配器内。
本发明的化合物能进一步形成盐。预期所有这些形式也落在要求保护的本发明范围内。
本文中所用术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物的衍生物，其中通过制备其酸或碱盐修饰母体化合物。药学上可接受的盐的例子包括但不限于：碱性残基(如胺)的无机酸或有机酸盐，或者酸性残基(如羧酸)的碱金属盐或有机盐，等等。药学上可接受的盐包括由(例如)无毒无机酸或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐或季铵盐。例如，所述传统无毒盐包括但不限于，获自以下无机酸或有机酸的那些盐：2-乙酰氧基苯甲酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乙酸盐、抗坏血酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、碳酸盐、柠檬酸盐、依地酸盐、乙二磺酸盐、1，2-乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、苷醇酸盐、甘苯砷酸盐(glycollylarsanilic)、己基间苯二酚盐(hexylresorcinic)、哈胺盐(hydrabamic)、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、羟基马来酸盐、羟萘甲酸盐、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂基磺酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、辛酸盐、硝酸盐、草酸盐、帕莫酸盐(pamoic)、泛酸盐、苯乙酸盐、磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、亚乙酸盐、琥珀酸盐、氨基磺酸盐、对氨基苯磺酸盐、硫酸盐、单宁酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、和常见氨基酸(例如甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、精氨酸)的盐等。
药学上可接受的盐的其它例子包括己酸盐、环戊烷丙酸盐、丙酮酸盐、马来酸盐、3-(4-羟基苯甲酰)苯甲酸盐、肉桂酸盐、4-氯苯磺酸盐、2-萘磺酸盐、4-甲苯磺酸盐、樟脑磺酸盐、4-甲基双环-[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸盐、3-苯基丙酸盐、三甲基乙酸盐、叔丁基乙酸盐、粘康酸盐等。本发明还包括当母体化合物中存在的酸性质子被金属离子(例如，碱金属离子、碱土金属离子或铝离子)替代或与有机碱(例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、缓血酸胺、N-甲基葡萄糖胺等)配对时形成的盐。
应理解对药学上可接受的盐的所有参考包括如本文定义的相同盐的溶剂加成形式(溶剂合物)或晶体形式(多形体)。
本发明的化合物还可制备为酯，例如，药学上可接受的酯。例如，可使化合物中的羧酸官能团转化成其相应的酯，例如，甲基、乙基或其它酯。还可使化合物中的醇基团转化成其相应的酯，例如，乙酸酯、丙酸酯或其它酯。
本发明的化合物还可制备为药物前体，例如，药学上可接受的药物前体。本文中术语“前药”和“药物前体”可互换使用，指在体内释放活性母体药物的任何化合物。由于已知药物前体增强许多所需的药物性质(例如，溶解性、生物可利用度、制造性等)，本发明的化合物可以药物前体形式递送。因此，本发明意在涵盖本文要求保护的化合物的药物前体、所述相同物质的递送方法和包含所述相同物质的组合物。“药物前体”意图包括任何共价键合的载体，当向对象给予所述药物前体时所述载体在体内释放本发明的活性母体药物。本发明的药物前体通过修饰所述化合物中存在的官能团来制备，所述修饰通过在常规操作中或在体内对所述母体化合物切割修饰的方式进行。药物前体包括本发明的化合物，其中羟基、氨基、巯基、羧基或羰基基团连接可在体内切割的任何基团以分别形成游离羟基、游离氨基、游离巯基、游离羧基或游离羰基基团。
药物前体的例子包括但不限于酯(例如，乙酸酯、二烷基氨基乙酸酯、甲酸酯、磷酸酯、硫酸酯和苯甲酸酯衍生物)和羟基官能团的氨基甲酸酯(例如，N，N-二甲基氨基羰基)、羧基官能团的酯(例如，乙酯、吗啉乙醇酯)、N-酰基衍生物(例如，N-乙酰基)N-曼尼斯碱、席夫碱和氨基官能团的烯胺酮(enaminones)、以及本发明化合物中的酮和醛官能团的肟、缩醛、缩酮和烯醇酯等，参见Bundegaard，H.，DesignofProdrugs(《药物前体设计》)第1～92页，Elesevier，纽约-牛津(1985)。
所述化合物或其药学上可接受的盐、酯或药物前体通过口服、经鼻、透皮、经肺、吸入、颊部、舌下、腹腔内、皮下、肌肉内、静脉内、经直肠、胸膜内、鞘内和胃肠道外给予。在一个实施方式中，口服给予所述化合物。本领域技术人员应认识到具体给药途径的优势。
利用所述化合物的剂量方案可取决于多种因素，包括患者的类型、人种、年龄、重量、性别和医疗状况；待治疗病症的严重程度；给药途径；患者的肾功能和肝功能；以及所用的具体化合物及其盐。普通有经验的内科医师或兽医可容易地确定和处方用于防止、逆转或阻止疾病进程所需的药物的有效量。
本发明公开的化合物的制备和给药技术可在Remington：theScienceandPracticeofPharmacy(《雷明顿：药物科学和实践》)，第19版，宾夕法尼亚州伊斯顿的马克出版公司(MackPublishingCo.，Easton，PA)(1995)中找到。在一个实施方式中，本文所述的化合物及其药学上可接受的盐以药物制剂形式联合药学上可接受的载体或稀释剂使用。合适的药学上可接受的载体包括惰性固体填料或稀释剂和无菌水性或有机溶液。所述药物组合物中存在的所述化合物量足够提供本文所述范围内的所需剂量。
除非另外说明，否则，本文所用的所有的百分数和比例都是以重量计。本发明的其它特征和优势在不同实施例中是显而易见的。本文提供的实施例显示本发明实践中的不同成分和方法。所述实施例不限制该要求保护的发明。基于本公开，技术人员可鉴定并使用有利于实践本发明的其它成分和方法。
为了简明起见，在本文所述的合成方案中化合物可能以一种具体构型绘制。不应认为所述具体构型意在限制本发明为一种或其它异构体、互变异构体、区域异构体或立体异构体，也不排除异构体、互变异构体、区域异构体或立体异构体的混合物。
实验考察本文所述的化合物对活性(例如，组蛋白甲基化)的调节，对细胞生长和/或IC50的调节，所述实验于下文实施例中描述。IC50值以A＝＜0.1μM；B＝＞0.1μM和＜1μM；C＝＞1μM和＜10μM；以及D＝＞10μM和＜50μM表示。
本文引用的所有出版物和专利文献都通过引用纳入本文，就好像每个所述出版物或文献都特定和单独表示通过引用纳入本文。对上述出版物和专利文献的引用并不表示承认上述任何内容是相关的在先技术，也并不表示承认其内容或日期。现在，本发明已以所述说明书方式描述，本领域技术人员应认识到可以多种实施方式实践本发明，而上文的说明书和下文的实施例旨在说明而非限制本发明的权利要求。
5.实施例
核磁共振(NMR)谱获自以场强400.130MHz操作的BrukerAvance400或BrukerDRX500MHzNMR，或者HNMR图谱获自500MHzBrukerAVANCEIII分光仪。常规反应溶剂为高效液相色谱(HPLC)级或美国化学协会(ACS)级，并且由于获自生产商从而是无水的(除非另外注明)。LCMS在配备Waters2795分离模块和Waters996光电二极管矩阵检测器的WatersMicromassZMD和配备Waters2695分离模块和Waters996光电二极管矩阵检测器的WatersMicromassZQ或配备Waters600溶剂递送模块、Waters515辅助泵、Waters2487UV检测器和Gilson215自动取样器和分组收集器的WatersMicromassPlatformLCZ单独四极质谱仪上实行。或者，LCMS分析使用连接AGILENT1200系列HPLC的SQ质谱仪实行。可用的LCMS数据于下文实施例以及表1中提供。MS数据使用m/z惯例以[M+H]+格式提供。
可使用适应手头的具体情况的已知化学转化形式制备本发明的化合物。
制备型实施例1：起始材料或中间体
步骤1：(1R，2S，3R，5R)-3-((5-氨基-6-氯嘧啶-4-基)氨基)-5-(羟甲基)环戊烷-1，2-二醇
将盐酸(1R，2S，3R，5R)-3-氨基-5-(羟甲基)环戊烷-1，2-二醇(16.9g，45.1mmol)和4，6-二氯嘧啶-5-胺(5.7g，35mmol)在乙醇(45mL)中的混合物在三个试管间平均分配并施予微波条件(CEM装置，至多300W，最高150℃，最高250psi，变温3分钟，持续30分钟)以获得棕色溶液；HPLC/LCMS指示转化成所需产物。合并所述三种反应混合物并真空浓缩以获得深棕色油状的粗制标题化合物，其用甲苯浓缩(2×30mL)，无需纯化即可用于：针对C10H15ClN4O3MS(ESI+)m/z275.0(M+H)+；针对C10H15ClN4O3MS(ESI-)m/z273.0(M-H)-。
步骤2：((3aR，4R，6R，6aS)-6-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-乙氧基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲醇
用原甲酸乙酯(120mL，720mmol)和10-樟脑磺酸(8.11g，34.9mmol)处理上述粗制(1R，2S，3R，5R)-3-((5-氨基-6-氯嘧啶-4-基)氨基)-5-(羟甲基)环戊烷-1，2-二醇。强烈搅拌所述异质棕色混合物以在10分钟后获得接近同质的棕色溶液。5h时，LCMS指示所需产物为主要产物，用饱和水性NaHCO3(120mL)淬灭该反应。所得混合物用水(75mL)稀释，用CH2Cl2(3×200mL)萃取，合并的有机物干燥(Na2SO4)并真空浓缩以获得深棕色液状粗制标题化合物，其无需进一步操作即可用于：针对C14H17ClN4O4MS(ESI+)m/z341.0(M+H)+。
步骤3：((3aR，4R，6R，6aS)-6-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲醇
上述粗制((3aR，4R，6R，6aS)-6-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-乙氧基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲醇收集到2，2-二甲氧基丙烷(214mL，1740mmol)中并用对甲苯磺酸一水合物(13.2g，69.5mmol)处理以获得部分悬于浑浊溶液中的棕色油状物，其在室温下搅拌1小时20分钟；HPLC/LCMS指示完全转化成所需产物。通过小心添加碳酸氢钠(8.76g，104mmol)和最小量的水淬灭该反应。真空去除挥发性物质，剩余水性层用水(100mL)稀释并用CH2Cl2(3×400mL)萃取。所得结合的有机物干燥(Na2SO4)并真空浓缩以得到棕色油状物。柱层析纯化(7×16cm二氧化硅；0-5％MeOH/CH2Cl2)得到黄色泡沫状标题化合物(8.30g，经过三个步骤后74％)：针对C14H17ClN4O3MS(ESI+)m/z325.1(M+H)+；针对C14H17ClN4O3MS(ESI-)m/z369.0(M+HCO2)-；HPLC纯度＞95面积％。
步骤4：9-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-6-氯-9H-嘌呤
使((3aR，4R，6R，6aS)-6-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲醇(7.9g，24mmol)和聚合物负载的三苯基膦(3mmol/g上样；11g，34mmol)在THF(100mL)中的混合物冷却至0℃(冰/盐水浴)，然后用偶氮二羧酸二异丙酯(6.7mL，34mmol)逐滴处理。使所得茶色浆状物搅拌15分钟，然后用内含叠氮磷酸二苯酯(7.3mL，34mmol)的THF(24mL)溶液逐滴处理。冰浴期满后，使所得棕色反应混合物搅拌18.5h；HPLC指示转换成所需产物。在21.5h过滤该反应混合物，所得固体用CH2Cl2洗涤，所得滤液真空浓缩。红棕色残留物收集到CH2Cl2(300mL)中，并用饱和水性NaHCO3(1×100mL)、水(1×100mL)和盐水(1×150mL)洗涤。使分离的有机层干燥(Na2SO4)并真空浓缩以获得红-橙色油状物。柱层析纯化(7×16cm二氧化硅；0-10％丙酮/CH2Cl2)得到黄色油状/泡沫状标题化合物(4.82g，57％)：针对C14H16ClN7O2MS(ESI+)m/z350.1(M+H)+；针对C14H16ClN7O2MS(ESI-)m/z394.1(M+HCO2)-；HPLC纯度＞95面积％。
步骤5：9-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-9H-嘌呤-6-胺
9-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-6-氯-9H-嘌呤(1.29g，3.69mmol)和(2，4-二甲氧基苯基)甲胺(0.71mL，4.7mmol)在1-丁醇(10mL)中的混合物用N，N-二异丙基乙胺(0.93mL，5.3mmol)处理，并在80℃加热16.5h；HPLC/LCMS指示转化成所需产物。使所得反应混合物冷却至室温，并在气流下去除挥发性物质以获得棕色-橙色糊状物。柱层析纯化(2×8cm二氧化硅；0-10％丙酮/CH2Cl2)得到黄色-橙色泡沫状/油状标题化合物(1.72g，97％)：针对C23H28N8O4MS(ESI+)m/z481.2(M+H)+；HPLC纯度＞95面积％。
步骤6：9-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(氨基甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-9H-嘌呤-6-胺
使内含9-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-9H-嘌呤-6-胺(1.72g，3.58mmol)的THF(16mL)溶液冷却至0℃(冰/盐水浴)并用内含1.0M三甲基膦的THF(6.30mL，6.30mmol)溶液逐滴处理。30分钟后移去冷浴，搅拌该反应混合物1.5h；HPLC/LCMS指示完全消耗起始叠氮化物。向所述橙色溶液添加水(2.84mL，157mmol)(注意到气体逸出)，然后在室温下搅拌该反应混合物2.75h；HPLC指示完全转化成所需的胺。使所得反应混合物真空浓缩以获得橙色油状物。所述残余物收集到CH2Cl2(150mL)中，并用水(2×50mL)和盐水(1×75mL)洗涤。使分离的有机层干燥(Na2SO4)并真空浓缩以获得灰黄色泡沫状的标题化合物(1.6g，98％)：针对C23H30N6O4MS(ESI+)m/z455.2(M+H)+；HPLC纯度＞95面积％。
步骤1：3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(6-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯
向内含9-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(氨基甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-9H-嘌呤-6-胺(1.5g，3.3mmol)、3-(3-氧代环丁基)丙酸乙酯(0.562g，3.30mmol)和乙酸(0.188mL，3.30mmol)的1，2-二氯乙烷(26.0mL，3.30E2mmol)溶液添加三乙氧基硼氢化钠(0.839g，3.96mmol)，室温搅拌该反应过夜。次日早晨添加NaHCO3通过HPLC消耗起始材料，所得水相用DCM萃取三次。合并的有机物用MgSO4干燥并通过FC(DCM/7NNH3在MeOH中95:5)纯化以产出厚黄色树脂/泡沫状的3-3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(6-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯(1.5g；75％)。针对C32H44N6O6MS(ESI+)m/z609.3(M+H)+。
步骤2：3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(6-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸乙酯
3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(6-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯(0.06g，0.1mmol)收集到乙腈(2.6mL，50mmol)中，然后添加异丙碘(0.098mL，0.98mmol)和三乙胺(0.21mL，1.5mmol)。将该反应加热至80℃12小时(此时反应显示终止)。另外添加15当量的三乙胺和15当量的异丙碘，使该反应多持续8个小时。反应再次显示终止时另添加各15当量的异丙碘和三乙胺。消耗起始材料后，浓缩该反应并添加饱和的Na2CO3(20mL)和DCM(20mL)。残余物在有机层和水层间分配。所述水层用DCM萃取3次，然后使合并的有机物干燥并通过FC(DCM/7NNH3在MeOH中97:3)纯化。产物仍由TEA-H+I-污染，于是向30mL内含所述产物的DCM溶液添加20mL饱和的NaHCO3和10mL1NNaOH。搅拌该混合物15分钟然后用DCM萃取所得水性液3次。合并的有机物用MgSO4干燥并去除溶剂以产出棕色泡沫状/固态的纯3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(6-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸乙酯(0.045g；70％)，通过NMR显示不含额外胺盐。针对C35H50N6O6MS(ESI+)m/z651.3(M+H)+。
向内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(6-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸乙酯(1.3g，2.0mmol)的四氢呋喃(30mL，300mmol)和甲醇(6.5mL，160mmol)溶液添加氢氧化锂一水合物(0.838g，20.0mmol)。使该反应在室温下搅拌过夜至次日早晨消耗起始材料并转化成酸。用1NHCl酸化该反应至pH＝6。真空去除挥发性物质，用乙醇共沸蒸馏去除残留的水，然后冻干24小时。所得棕色固体无需进一步纯化即可使用。
3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯
3-[3-({[(3aR，4R，6R，6aS)-6-{4-[(2，4-二甲氧基苄基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基}-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]甲基}氨基)环丁基]丙酸乙胺酯(1.8g，3.0mmol)收集到甲醇(20mL，600mmol)中，然后添加氰基硼氢化钠(0.19g，3.0mmol)。使用内含10％AcOH的MeOH溶液调整pH至约6，然后一次性添加***(0.29mL，3.9mmol)。使该反应进行3小时，此时MS指示起始材料完全消耗。向该反应混合物添加NaHCO3(饱和)，然后用DCM萃取3次。合并的有机物用MgSO4干燥并浓缩至黄色树脂状。该残留物通过FC(DCM/7NNH3在MeOH中93:7)纯化以产出无色泡沫状的3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯(1.6g；87％)。针对C34H47N5O6MS(ESI+)m/z622.3(M+H)+。
1HNMR(400MHz，d3-氯仿)δH8.282(s，1H)，7.203-7.168(m，1H)，6.877-6.865(m，1H)，6.399-6.334(m，2H)，6.242-6.236(m，1H)，5.330(s，1H)，4.890-4.835(m，2H)，4.664-4.650(d，.J＝5.6Hz，2H)，4.391-4.354(m，1H)，4.067-4.000(m，2H)，3.757(s，3H)，3.710(s，3H)，2.864-2.784(m，0.5H(反式异构体的次甲基))，2.553-2.474(m，0.5H(顺式异构体的次甲基)，2.432-2.370(m，1H)，2.322-2.278(m，2H)，2.212-2.089(m，4H)，2.022＆2.018(s，3H(归因于顺式和反式异构体的N-甲基的单重重叠)，1.964-1.908(m，3H)，1.778-1.584(m，4H)，1.486(s，3H)，1.363-1.296(m，1H)，1.219(s，3H)，1.182-1.146(m，3H)。
((3aR，4R，6R，6aS)-6-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-乙氧基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲醇
用原甲酸乙酯(120mL，720mmol)和10-樟脑磺酸(8.11g，34.9mmol)处理上述粗制(1R，2S，3R，5R)-3-((5-氨基-6-氯嘧啶-4-基)氨基)-5-(羟甲基)环戊烷-1，2-二醇。强烈搅拌所述异质棕色混合物以在10分钟后获得接近同质的棕色溶液。5h时，LCMS指示所需产物为主要产物，用饱和水性NaHCO3(120mL)淬灭该反应。所得混合物用水(75mL)稀释，用CH2Cl2(3×200mL)萃取，合并的有机物干燥(Na2SO4)并真空浓缩以获得深棕色液状粗制标题化合物，其无需进一步操作即可用于：针对C14H17ClN4O4MS(ESI+)m/z341.0(M+H)+。
步骤3：((3aR，4R，6R，6aS)-6-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲醇
上述粗制((3aR，4R，6R，6aS)-6-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-2-乙氧基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲醇收集到2，2-二甲氧基丙烷(214mL，1740mmol)中并用对甲苯磺酸一水合物(13.2g，69.5mmol)处理以获得部分悬于浑浊溶液中的棕色油状物，其在室温下搅拌1小时20分钟；HPLC/LCMS指示完全转化成所需产物。通过小心添加碳酸氢钠(8.76g，104mmol)和最小量的水淬灭该反应。真空去除挥发性物质，剩余水性层用水(100mL)稀释并用CH2Cl2(3×400mL)萃取。所得结合的有机物干燥(Na2SO4)并真空浓缩以得到棕色油状物。柱层析纯化(7×16cm二氧化硅；0-5％MeOH/CH2Cl2)得到黄色泡沫状标题化合物(8.30g，经过三个步骤后74％)：针对C14H17ClN4O3MS(ESI+)m/z325.1(M+H)+；针对C14H17ClN4O3MS(ESI-)m/z369.0(M+HCO2)-。
步骤4：9-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-6-氯-9H-嘌呤e
使((3aR，4R，6R，6aS)-6-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲醇(7.9g，24mmol)和聚合物负载的三苯基膦(3mmol/g上样；11g，34mmol)在THF(100mL)中的混合物冷却至0℃(冰/盐水浴)，然后用偶氮二羧酸二异丙酯(6.7mL，34mmol)逐滴处理。所得茶色浆状物搅拌15分钟，然后用内含叠氮膦酸二苯酯(7.3mL，34mmol)的THF(24mL)溶液逐滴处理。冰浴期满后，使所得棕色反应混合物搅拌18.5h；HPLC指示转换成所需产物。在21.5h过滤该反应混合物，所得固体用CH2Cl2洗涤，所得滤液真空浓缩。红棕色残留物收集到CH2Cl2(300mL)中，并用饱和水性NaHCO3(1×100mL)、水(1×100mL)和盐水(1×150mL)洗涤。使分离的有机层干燥(Na2SO4)并真空浓缩以获得红-橙色油状物。柱层析纯化(7×16cm二氧化硅；0-10％丙酮/CH2Cl2)得到黄色油状/泡沫状标题化合物(4.82g，57％)：针对C14H16ClN7O2MS(ESI+)m/z350.1(M+H)+；针对C14H16ClN7O2MS(ESI-)m/z394.1(M+HCO2)-。
步骤5：9-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-9H-嘌呤-6-胺
9-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-6-氯-9H-嘌呤(1.29g，3.69mmol)和(2，4-二甲氧基苯基)甲胺(0.71mL，4.7mmol)在1-丁醇(10mL)中的混合物用N，N-二异丙基乙胺(0.93mL，5.3mmol)处理，并在80℃加热16.5h；HPLC/LCMS指示转化成所需产物。使所得反应混合物冷却至室温，并在气流下去除挥发性物质以获得棕色-橙色糊状物。柱层析纯化(2×8cm二氧化硅；0-10％丙酮/CH2Cl2)得到黄色-橙色泡沫状/油状标题化合物(1.72g，97％)：针对C23H28N8O4MS(ESI+)m/z481.2(M+H)+。
步骤6：9-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(氨基甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-9H-嘌呤-6-胺
使内含9-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-9H-嘌呤-6-胺(1.72g，3.58mmol)的THF(16mL)溶液冷却至0℃(冰/盐水浴)并用内含1.0M三甲基膦的THF(6.30mL，6.30mmol)溶液逐滴处理。30分钟后移去冷浴，搅拌该反应混合物1.5h；HPLC/LCMS指示完全消耗起始叠氮化物。向所述橙色溶液添加水(2.84mL，157mmol)(注意到气体逸出)，然后在室温下搅拌该反应混合物2.75h；HPLC指示完全转化成所需的胺。使所得反应混合物真空浓缩以获得橙色油状物。所述残余物收集到CH2Cl2(150mL)中，并用水(2×50mL)和盐水(1×75mL)洗涤。使分离的有机层干燥(Na2SO4)并真空浓缩以获得灰黄色泡沫状的标题化合物(1.6g，98％)。针对C23H30N6O4MS(ESI+)m/z455.2(M+H)+。
步骤1：3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯
9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-(氨基甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(0.50g，1.6mmol)和3-(3-氧代环丁基)丙酸乙酯(0.27g，1.6mmol)在甲醇(10mL)中的混合物用乙酸(0.09mL，2mmol)于室温处理，然后将该烧瓶抽真空并用氮气吹扫(×3)。在室温用氰基硼氢化钠(0.26g，4.1mmol)处理该反应混合物，立刻观察到气体逸出并在数分钟内获得接近无色、澄清溶液。在室温搅拌该反应混合物1h；HPLC/LCMS指示产物混合物与起始胺的比约为2∶1。1.5h时额外添加内含3-(3-氧代环丁基)丙酸乙酯(66mg，0.39mmol)的MeOH(1.0mL)，在室温下搅拌该反应混合物30分钟；HPLC/LCMS指示约70％转化以及一些脱烷作用。2小时15分钟时添加水(4.0mL)，然后真空浓缩所得混合物。残留的水层用饱和水性碳酸氢钠稀释(10mL，至pH9)，然后用CH2Cl2(3×15mL)萃取。使合并的有机物干燥(Na2SO4)并真空浓缩以获得白色泡沫状的还原性胺化产物，其无需进一步纯化即可用于：针对C22H32N6O5MS(ESI+)m/z461.1(M+H)+，483.1(M+Na)+。
步骤2：3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯
上述粗制仲胺收集到甲醇(10mL)中，然后用氰基硼氢化钠(0.30g，4.8mmol)处理。添加内含10％v/v乙酸的甲醇溶液以调整pH至约6，然后逐滴添加37％水性甲醛(0.65mL，6.3mmol)，其使气体逸出。在室温搅拌该反应混合物1h；HPLC/LCMS指示完全转化成所需产物。1.5小时时添加水(5.0mL)，然后真空浓缩该反应混合物。残留物用饱和水性碳酸氢钠稀释(10mL，至pH约为9)，然后用CH2Cl2(3×15mL)萃取。所得合并有机物用小量EtOH稀释以得到澄清溶液，干燥(Na2SO4)并真空浓缩以得到接近无色的油状物。柱层析纯化(4×17cm二氧化硅；0-5％7N甲醇的NH3/CH2Cl2)得到白色泡沫状/无色油状标题化合物(0.50g，60％)：针对C23H34N6O5MS(ESI+)m/z475.1(M+H)+，497.1(M+Na)+。
步骤1：3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯
9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-(氨基甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(2.04g，6.66mmol)和3-(3-氧代环丁基)丙酸乙酯(1.2g，7.0mmol)在甲醇(41mL)中的混合物用乙酸(0.37mL，6.5mmol)于室温处理，然后将该烧瓶抽真空并用氮气吹扫(×3)。在室温用氰基硼氢化钠(1.0g，16mmol)处理该反应混合物，立刻观察到气体逸出并在数分钟内获得接近无色、澄清溶液。在室温搅拌该反应混合物1h；HPLC/LCMS指示残留起始材料。在1小时20分钟时额外添加内含3-(3-氧代环丁基)丙酸乙酯(0.50g，2.93mmol)的MeOH(3mL)。搅拌该反应混合物30分钟，用水处理(12mL)。使该混合物真空浓缩，所得残留水层用饱和水性碳酸氢钠稀释(40mL，至pH9)然后用CH2Cl2(3×60mL)萃取。使合并的有机物干燥(Na2SO4)并真空浓缩以获得白色泡沫状/非常灰黄色油状的粗制标题化合物，其无需进一步纯化即可用于：针对C22H32N6O5MS(ESI+)m/z461.2(M+H)+和483.1(M+Na)+。
步骤2：3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸乙酯
内含上述粗制3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯的乙腈(30mL)溶液用碳酸钾(6.3g，46mmol)和异丙碘(3.9mL，39mmol)处理。使密封试管内的所述反应混合物在90℃加热6.5h；HPLC指示产物对起始材料为4:1的混合物。使所得反应混合物在室温搅拌过夜(17.5h)，用额外的异丙碘(2.0mL，20mmol)处理，然后在90℃加热3h；HPLC/LCMS指示接近完全转化。使所述反应混合物冷却至室温并通过真空过滤去除固体，用CH3CN漂洗，然后真空浓缩所得滤液以获得带有沉淀的暗橙色油状物。柱层析纯化(5×14.5cm二氧化硅；0-10％7N甲醇的NH3/CH2Cl2)得到白色泡沫状/无色油状标题化合物(0.49g，15％)。含有产物的混合馏分通过柱层析(4×10.5cm二氧化硅；0-5％7N甲醇的NH3/CH2Cl2)重新纯化以获得白色泡沫状/无色油状的标题化合物(1.66g，40％)(其受来自步骤1的二次还原性胺化副产物污染)：针对C25H38N6O5MS(ESI+)m/z503.2(M+H)+。
3-(3-((((1R，2R，3S，4R)-4-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-比咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，3-二羟基环戊基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯
向内含(1S，2R，3R，5R)-3-(氨基甲基)-5-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)环戊烷-1，2-二醇(2.6g，5.7mmol)和3-(3-氧代环丁基)丙酸乙酯(0.976g，5.73mmol)和乙酸(0.326mL，5.73mmol)的1，2-二氯乙烷(20mL)溶液添加三乙酰氧基硼氢化钠(2.43g，11.5mmol)，然后反应在室温搅拌过夜。添加NaHCO3，所得水层用DCM萃取3次。合并的有机物用MgSO4干燥，过滤，浓缩，然后通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中90∶10)纯化以生成厚黄色树脂状的所需化合物(1.8g)。
N-(2，4-二甲氧基苄基)-7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-((异丙基氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-7H-比咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
内含7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(氨基甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(7.50g，16.5mmol)的1，2-二氯乙烷(140mL，1800mmol)溶液用丙酮(1.34mL，18.2mmol)和乙酸(0.94mL，16mmol)逐滴处理然后通过三乙酰氧基硼氢化钠(4.20g，19.8mmol)，所得混合物在室温搅拌4h。HPLC分析指示该反应完全。所得反应混合物用200mLCH2Cl2稀释，然后用150mL饱和NaHCO3洗涤。所得水相用100mLCH2Cl2洗涤，所得合并有机相通过Na2SO4干燥，过滤并浓缩以产出油状物，其置于高真空下时产生硬泡沫。所得粗制材料(9.3g)直接用于下一步骤。
3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸乙酯
内含N-(2，4-二甲氧基苄基)-7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-((异丙基氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(9.50g，15.3mmol)的1，2-二氯乙烷(75mL，950mmol)溶液用3-(3-氧代环丁基)丙酸乙酯(3.92g，23.0mmol)和乙酸(1.0mL，18mmol)逐滴处理然后通过三乙酰氧基硼氢化钠(4.58g，21.6mmol)，所得混合物在室温下搅拌6天。所得反应混合物用150mLCH2Cl2稀释，然后用100mL饱和NaHCO3洗涤。水相用100mLCH2Cl2洗涤，合并有机相通过Na2SO4干燥，过滤并浓缩以产出浅棕色粘性成玻璃状物。
所得粗制材料通过快速色谱(SiO2用内含2-3％7NNH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱)纯化以产出稍成玻璃状/硬泡沫(7.10g)。
3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯
内含7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(氨基甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(8.00g，15.2mmol)的1，2-二氯乙烷(119.5mL，1517mmol)溶液用3-(3-氧代环丁基)丙酸乙酯(2.58g，15.2mmol；)和乙酸(0.86mL，15mmol)逐滴处理然后通过三乙酰氧基硼氢化钠(3.86g，18.2mmol)，所得混合物在室温下搅拌19h。反应混合物用150mLCH2Cl2稀释，然后用150mL饱和NaHCO3洗涤。所得水相用70mLCH2Cl2洗涤，所得合并有机相通过Na2SO4干燥，过滤并浓缩以产出茶色玻璃状物，其置于高真空下产生粘性泡沫。所得粗制材料通过快速色谱(SiO2用3-4％7N内含NH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱)纯化以产出浅黄色粘性油状物(5.03g)，其在高真空下产生粘性泡沫。MS608.3(M+H)。
实施例1：1-((3-((((2R，3S，4R，5R)-5-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-3，4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)甲基)-3-(4-(叔丁基)苯基)脲(化合物110)的合成
步骤1：3-氧代环丁烷基羧酸甲酯的合成
向内含DCC(5.96g，28.95mmol)的DCM(20mL)溶液逐滴添加内含3-氧代环丁烷基羧酸(3.0g，26.31mmol)、MeOH(1.68g，52.62mmol)和DMAP(2.57g，21.05mmol)的DCM(30mL)混合物。该反应混合物在室温下搅拌过夜。过滤该混合物。所得滤液用0.5MHCl溶液(50mL)洗涤。有机层用Na2SO4干燥，并浓缩。所得残余物通过SGC(PE:EA＝5:1)纯化以获得标题化合物(4.0g)。1HN.R(500MHz，CDCl3)：δ3.77(s，3H)，3.42-3.26(m，5H)ppm.
步骤2：3-((((3aR，4R，6R，6aR))-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁烷基羧酸甲酯的合成
内含3-氧代环丁烷基羧酸甲酯(1.28g粗制)、9-((3aR，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-((甲基氨基)甲基)四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(2.0g，6.25mmol)(Townsend等OrgLett2009，11，2976-2679)和Ti(iPrO)4(1.78g，6.25mmol)的MeOH(50mL)溶液在45℃搅拌2h，然后添加NaCNBH3(0.79g，12.50mmol)。该反应在室温下搅拌过夜。该反应用饱和水性NaHCO3(40mL)淬灭，过滤，用DCM(40mL×3)萃取，通过Na2SO4干燥并浓缩。所得残余物通过SGC(DCM:MeOH＝12:1)纯化以获得标题化合物(1.7g，产率63％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.28-8.27(m，1H)，8.21(s，1H)，6.20-6.18(m，1H)，5.52(dd，J＝1.5，6.0Hz，1H)，5.00(dd，J＝3.0，6.0Hz，1H)，5.33(brs，1H)，3.65-3.63(m，3H)，2.77-2.55(m，4H)，2.19-2.11(m，5H)，2.00-1.82(m，2H)，1.59(s，3H)，1.38(s，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：433.2[M+1]+。
步骤3：(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)甲醇的合成
在0℃向内含3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁烷基羧酸甲酯(1.0g，2.31mmol)的THF(40mL)溶液添加LiAlH4(0.53g，13.89mmol)，所得混合物搅拌过夜。向所述混合物缓慢添加水(1.0g)和15％NaOH溶液(3.0g)，搅拌15分钟，过滤该混合物。浓缩所得滤液以获得粗制标题化合物，其直接用于下一步骤。
步骤4：甲磺酸(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)甲酯的合成
向从先前步骤中直接提取的(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋哺并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)甲醇的DCM(25mL)溶液添加内含Et3N(467mg，4.62mmol)和MsCl(264mg，2.31mmol)的DCM(5mL)溶液。所得混合物搅拌2h。添加水(20mL)和DCM(30mL×2)。所得有机层通过Na2SO4干燥并浓缩，用制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)纯化以生成标题化合物(390mg，两步产率35％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.27(s，1H)，8.21(s，1H)，6.203-6.200(m，1H)，5.529(dd，J＝2.0，7.0Hz，1H)，5.010(dd，J＝3.0，6.0Hz，1H)，4.354(dd，J＝3.5，8.0Hz，1H)，4.197-4.182(m，2H)，3.585(brs，1H)，3.073-2.948(m，5H)，2.595-2.513(m，2H)，2.394(brs，1H)，2.207(brs，1H)，2.107(s，3H)，2.030-1.989(m，1H)，1.840-1.811(m，2H)，1.586(s，3H)，1.390(brs，1H)，1.329-1.280(m，6H)，0.905-0.878(m，1H)ppm；ESI-MS(m/z)：483.3[M+1]+。
步骤5：9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-(((3-(叠氮基甲基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺的合成
向内含甲磺酸(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)甲酯(150mg，0.31mmol)的DMF(3mL)溶液添加NaN3(81mg，1.24mmol)。所述混合物在70℃加热3h。添加水(30mL)，用乙酸乙酯萃取该混合物(20mL×3)。用Na2SO4干燥合并的有机层，然后浓缩。所得残余物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝30:1)纯化以获得标题化合物(90mg，产率67％)。ESI-MS(m/z)：430.2[M+1]+。
步骤6：9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-(((3-(氨基甲基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺的合成
向内含9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-(((3-(叠氮基甲基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(90mg，0.21mmol)的MeOH(6mL)溶液添加Pd/C(10mg)。所述混合物在室温于H2气氛下搅拌过夜。过滤所述混合物，浓缩所得滤液以获得标题化合物，其直接用于下一步骤。
步骤7：1-((3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)甲基)-3-(4-(叔丁基)苯基)脲的合成
向内含9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-(((3-(氨基甲基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺的DCM(4mL)溶液添加1-叔丁基-4-异氰酸基苯(37mg)。所述混合物在室温搅拌1h。浓缩该混合物并通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)纯化以生成标题化合物(55mg，两步产率45％)。ESI-MS(m/z)：578.3[M+1]+。
步骤8：化合物110的合成
内含1-((3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)甲基)-3-(4-(叔丁基)苯基)脲(55mg)的HCl/MeOH(2.5mol/L)(2mL)溶液在室温下搅拌2h，然后浓缩至干。添加内含K2CO3(52mg)的水(0.5mL)和MeOH(5mL)。所得混合物在室温下再搅拌10分钟，过滤，浓缩所得滤液。残余物通过制备型HPLC纯化以生成白色固态化合物110(10mg，产率：25％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.26(s，1H)，8.18(s，1H)，7.26-7.19(m，4H)，5.96(d，J＝4.5Hz，1H)，4.674-4.655(m，1H)，4.24-4.16(m，2H)，3.15(d，J＝5.0Hz，2H)，2.83-2.73(m，3H)，2.20-1.59(m，8H)，1.26(s，9H)ppm；ESI-MS(m/z)：539.3[M+1]+。
实施例2：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇(化合物2)的合成
步骤1：顺式和反式3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁烷基羧酸甲酯的合成
内含3-氧代环丁烷基羧酸甲酯(4.60g，35.94mmol)、9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-(氨基甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(11.0g，35.94mmol)和Ti(iPrO)4(4.0g，14.08mmol)的MeOH(80mL)溶液在45℃搅拌2h，然后添加NaCNBH3(4.5g，71.87mmol)。该反应在室温下搅拌过夜。该反应用饱和水性NaHCO3(40mL)淬灭，过滤，用DCM(80mL×3)萃取，通过Na2SO4干燥并浓缩。残留物通过制备型HPLC纯化以获得标题化合物(6.2g，产率41％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)：δH8.38-8.34(m，1H)，7.90(s，1H)，5.98(d，J＝3.0Hz，1H)，5.75(brs，2H)，5.48-5.46(m，1H)，5.03-5.01(m，1H)，4.35-4.33(m，1H)，3.69-3.66(m，3H)，3.50-3.17(m，1H)，3.05-2.73(m，3H)，2.48-2.44(m，2H)，1.95-1.91(m，2H)，1.62(s，3H)，1.39(s，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：419.2[M+1]+。
顺式/反式3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁烷基羧酸甲酯的混合物(6.2g)通过手性HPLC(CHIRALCELAD-H20*250mm，5um(大赛公司(Daicel))，柱温：35℃，流动相：CO2/甲醇(0.1％DEA)＝70/30，流速：50g/分钟)分离以生成纯顺式产物(3.5g)和纯反式产物(1.7g)。
步骤2：(1S，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁烷基羧酸甲酯的合成
向内含顺式3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁烷基羧酸甲酯(2.0g，4.78mmol)的CH3CN(15mL)溶液添加2-碘代丙烷(4.0g，23.92mmol)和K2CO3(1.0g，7.18mmol)。在密封试管中加热该反应至95℃过夜。过滤该混合物，所得滤液浓缩并通过SGC(DCM:MeOH＝12:1)纯化以获得标题化合物(1.9g，产率86％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)：δH8.37(s，1H)，7.89(s，1H)，6.03(d，J＝1.5Hz，1H)，5.53-5.48(m，3H)，5.00(brs，1H)，4.25(brs，1H)，3.66(s，3H)，3.19-3.18(m，1H)，2.96(brs，1H)，2.80-2.78(m，1H)，2.67-2.58(m，2H)，2.20-2.12(m，4H)，1.62(s，3H)，1.39(s，3H)，1.00(d，J＝6.0Hz，3H)，0.84(d，J＝6.0Hz，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：461.4[M+1]+。
步骤3：(1S，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁烷基醛的合成
在-78℃向内含(1S，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁烷基羧酸甲酯(1.2g，2.60mmol)的DCM(50mL)溶液逐滴添加DIBAL-H，直至通过TLC测定消耗所有起始材料。添加MeOH(2mL)并使该混合物搅拌至室温30分钟。然后添加水(50mL)，用DCM(50mL×2)萃取该混合物。所得有机层通过Na2SO4干燥并浓缩以获得直接用于下一步骤的粗制标题化合物(使用1.0g)。1HNMR(500MHz，CDCl3)：δH9.56(d，J＝2.5Hz，1H)，8.36(s，1H)，7.88(s，1H)，6.03(d，J＝2.5Hz，1H)，5.66(brs，2H)，5.50(dd，J＝2.0，6.5Hz，1H)，5.01(dd，J＝3.5，6.5Hz，1H)，3.331-3.337(m，1H)，2.96-2.97(m，1H)，2.77-2.59(m，3H)，2.14-2.05(m，4H)，1.60(s，3H)，1.39(s，3H)，1.01(d，J＝6.5Hz，3H)，0.85(d，J＝6.0Hz，3H)ppm。
步骤4：(E)-3-((1S，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙烯酸乙酯的合成
向内含(1S，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁烷基醛(930mg，2.16mmol)的CH3CN:DCM＝5:1(50mL)溶液添加2-(二乙氧基磷酰基)乙酸乙酯(484mg，2.16mmol)、DBU(328mg，2.16mmol)和LiCl(91mg，2.16mmol)。该混合物在室温搅拌1h，然后浓缩。添加水(20mL)，所述混合物用DCM(25mL×3)萃取。合并的有机层通过Na2SO4干燥，浓缩，所得残余物通过SGC(DCM:MeOH＝30:1)纯化以获得标题化合物(900mg，产率83％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)：δH8.36(s，1H)，7.89(s，1H)，6.94-6.90(m，1H)，6.03(s，1H)，5.72-5.89(m，1H)，5.57(s，2H)，5.52(d，J＝4.5Hz，1H)，5.00(dd，J＝3.5，6.0Hz，1H)，4.25(d，J＝3.0Hz，1H)，4.21-4.17(m，2H)，3.14(brs，1H)，2.961-2.936(m，1H)，2.74-2.52(m，3H)，2.22-2.14(m，2H)，1.79-1.76(m，2H)，1.60(s，3H)，1.40(s，3H)，1.30-1.27(m，3H)，1.00(d，J＝7.0Hz，3H)，0.82(d，J＝6.5Hz，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：501.4[M+1]+。
步骤5：3-((1S，3r)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸乙酯的合成
向内含(E)-3-((1S，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙烯酸乙酯(900mg，1.8mmol)的MeOH(50mL)溶液添加Pd/C(20mg)。所述混合物在室温于氢气气氛下搅拌过夜。过滤所述混合物，浓缩所得滤液以获得标题化合物(700mg，产率78％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)：δH8.36(s，1H)，7.89(s，1H)，6.03(d，J＝2.5Hz，1H)，5.69(s，2H)，5.51(dd，J＝2.5，8.0Hz，1H)，4.99(dd，J＝4.0，7.5Hz，1H)，4.26(brs，1H)，4.13-4.08(m，2H)，2.99-2.92(m，2H)，2.706-2.655(m，1H)，2.539-2.486(m，1H)，2.18-2.02(m，4H)，1.76(brs，1H)，1.65-1.60(m，5H)，1.43-1.37(m，5H)，1.26-1.23(m，2H)，0.97(d，J＝9.0Hz，3H)，0.79(d，J＝8.5Hz，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：503.4[M+1]+
步骤6：3-((1S，3r)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸的合成
向内含3-((1S，3r)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸乙酯(650mg，1.29mmol)的THF:MeOH＝5:1(30mL)溶液添加LiOH.H2O(543mg，1.29mmol)。所述混合物在室温下搅拌过夜，浓缩，然后收集到MeOH(10mL)中。在0℃逐滴添加1MHCl溶液直至pH＝7。浓缩该混合物并用制备型HPLC纯化以生成标题化合物(170mg)。
步骤7：N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-((1S，3r)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酰胺的合成
向内含3-((1S，3r)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸(170mg，0.36mmol)的DCM(15mL)溶液添加4-叔丁基苯-1，2-二胺(117mg，0.72mmol)、EDCI(137mg，0.72mmol)、HOBT(97mg，0.72mmol)和TEA(217mg，2.15mmol)。所述混合物在室温下搅拌过夜，并浓缩。添加饱和的NaHCO3溶液(20mL)，所得混合物用DCM(20mL×3)萃取。有机层用Na2SO4干燥，然后浓缩。所得粗制物用制备型TLC(DCM:MeOH＝12:1)纯化以获得标题化合物(110mg粗制物)。
步骤8：9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺的合成
加热内含N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-((1S，3r)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋哺并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酰胺(110mg)的AcOH(10mL)溶液至65℃过夜。浓缩该混合物，添加饱和的NaHCO3溶液(20mL)，所得混合物用DCM(20mL×3)萃取。所述合并有机层通过Na2SO4干燥并浓缩以生成标题化合物(105mg粗制物)。1HNMR(500MHz，CDCl3)：δH8.36(s，1H)，7.89(s，1H)，7.48-7.24(m，3H)，6.01(d，J＝1.5Hz，1H)，5.60-5.53(m，3H)，4.98(dd，J＝3.0，6.5Hz，1H)，4.22(brs，1H)，2.97(brs，1H)，2.874-2.847(m，1H)，2.56-2.50(m，3H)，1.87-1.78(m，2H)，1.70-1.54(m，7H)，1.35-1.17(m，14H)，0.90(d，J＝6.5Hz，3H)，0.80(d，J＝6.5Hz，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：603.5[M+1]+。
步骤9：化合物2的合成
内含9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(105mg)的HCl/MeOH(2.5mol/L)(10mL)溶液在室温搅拌2h，然后浓缩至干。添加内含K2CO3(96mg)的水(0.5mL)和MeOH(5mL)，所得混合物在室温下另搅拌10分钟，然后过滤。浓缩滤液，所得残余物通过制备型HPLC(Xbridge30mm*150mm，流动相：A：水(10mMNH4HCO3)，B：CAN，梯度：10分钟内35-45％B，6分钟内45-45％B，停止于20分钟，流速：50mL/分钟)纯化以生成白色固态化合物2(50mg，产率：51％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.29(s，1H)，8.20(s，1H)，7.47-7.39(m，3H)，5.96(d，J＝4.0Hz，1H)，4.70-4.75(m，1H)，4.26-4.27(m，1H)，4.05-4.06(m，1H)，3.140-3.155(m，1H)，3.00-2.76(m，5H)，2.18-2.16(m，2H)，1.87-1.85(m，2H)，1.57-1.55(m，2H)，1.36(s，9H)，1.01(d，J＝6.5Hz，3H)，0.94(d，J＝6.5Hz，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：563.4[M+1]+。
实施例3：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇(化合物3)的合成
步骤1：(1R，3r)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁烷基羧酸甲酯的合成
向内含(1R，3r)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁烷基羧酸甲酯(1.7g，4.07mmol)的CH3CN(15mL)溶液添加2-碘代丙烷(3.5g，20.3mmol)和K2CO3(0.84g，6.10mmol)。在密封试管中加热该反应至95℃过夜。过滤该混合物，所得滤液浓缩并通过SGC(DCM:MeOH＝12:1)纯化以获得标题化合物(1.35g，产率72％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)：δH8.36(s，1H)，7.88(s，1H)，6.03(d，J＝2.0Hz，1H)，5.55(m，2H)，5.49(dd，J＝1.5，6.0Hz，1H)，5.01(dd，J＝3.5，6.0Hz，1H)，4.254-4.247(m，1H)，3.68(s，3H)，3.60-3.50(m，1H)，2.930-2.917(m，1H)，2.79-2.74(m，2H)，2.59-2.57(m，1H)，2.25-2.12(m，4H)，1.60(s，3H)，1.39(s，3H)，1.00(d，J＝6.5Hz，3H)，0.83(d，J＝7.0Hz，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：461.3[M+1]+。
步骤2：(1R，3r)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁烷基醛的合成
在-78℃向内含(1R，3r)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁烷基羧酸甲酯(1.35g，2.93mmol)的DCM(50mL)溶液逐滴添加DiBAL-H，直至通过TLC测定完全消耗起始材料。添加MeOH(2mL)，所得混合物在室温下(RT)搅拌30分钟。添加水(50mL)，所述混合物用DCM(50mL×2)萃取。合并的有机层通过Na2SO4干燥并浓缩以获得直接用于下一步骤的粗制标题化合物(1.1g)。1HNMR(500MHz，CDCl3)：δH9.80(s，1H)，8.35(s，1H)，7.88(s，1H)，6.04(s，1H)，5.56(s，2H)，5.50(d，J＝6.5Hz，1H)，5.028-5.026(m，1H)，4.26(brs，1H)，3.33-3.30(m，1H)，2.956-2.930(m，1H)，2.80-2.55(m，3H)，2.27-2.07(m，4H)，1.60(s，3H)，1.39(s，3H)，1.00(d，J＝7.0Hz，3H)，0.82(d，J＝6.5Hz，3H)ppm。
步骤3：(E)-3-((1R，3r)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙烯酸乙酯的合成
向内含(1R，3r)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁烷基醛(1.1g，2.56mmol)的CH3CN:DCM＝5:1(50mL)溶液添加2-(二乙氧基磷酰基)乙酸乙酯(573mg，2.56mmol)、DBU(389mg，2.56mmol)和LiCl(107mg，2.56mmol)。该混合物在室温下搅拌1h并浓缩，然后添加水(20mL)，所得混合物用DCM(25mL×3)萃取。用Na2SO4干燥合并的有机层，然后浓缩。所得残余物通过SGC(DCM:MeOH＝30:1)纯化以获得标题化合物(1.0g，产率78％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)：δH8.35(s，1H)，7.89(s，1H)，7.16-7.11(m，1H)，6.03(d，J＝2.0Hz，1H)，5.79-5.76(m，1H)，5.56(s，2H)，5.51(dd，J＝1.5，6.0Hz，1H)，5.02(dd，J＝3.0，6.0Hz，1H)，4.25(d，J＝8.0Hz，1H)，4.22-4.17(m，2H)，3.44(brs，1H)，2.93(brs，1H)，2.78-2.56(m，3H)，2.27-2.16(m，2H)，1.93-1.91(m，2H)，1.60(s，3H)，1.40(s，3H)，1.31-1.27(m，3H)，0.98(d，J＝6.5Hz，3H)，0.82(d，J＝6.5Hz，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：501.4[M+1]+。
步骤4：3-((1R，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸乙酯的合成
向内含(E)-3-((1R，3r)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙烯酸乙酯(1.0g，2.0mmol)和10％Pd/C(30mg)的MeOH(50mL)混合物添加Pd/C(30mg)。所述混合物在室温于氢气气氛下搅拌过夜。过滤所得混合物，浓缩滤液以获得标题化合物(1.0g，产率100％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)：δH8.36(s，1H)，7.89(s，1H)，6.03(d，J＝2.5Hz，1H)，5.58(s，2H)，5.51(dd，J＝2.0，6.5Hz，1H)，5.00(dd，J＝3.5，6.0Hz，1H)，4.276-4.269(m，1H)，4.13-4.09(m，2H)，3.38-3.37(m，1H)，2.94-2.54(m，3H)，2.22-1.97(m，5H)，1.79-1.62(m，4H)，1.60(s，3H)，1.40(s，3H)，1.28-1.23(m，2H)，0.97(d，J＝7.0Hz，3H)，0.79(d，J＝7.0Hz，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：503.4[M+1]＋。
步骤５：3-((1R，3s)-3-((((3aR，4R，６R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][１，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸的合成
向内含3-((1R，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸乙酯(360mg，0.72mmol)的THF∶MeOH＝5∶1(30mL)溶液添加LiOH.H2O(301mg，7.20mmo１)。所述混合物在室温下搅拌过夜，浓缩，然后在MeOH(10mL)中溶解。在0℃逐滴添加1MHCl溶液直至pH＝7。浓缩所得混合物以生成粗制标题化合物，其直接用于下一步骤。
步骤６：N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-((1R，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酰胺的合成
向内含3-((1R，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸的DMF(5mL)溶液添加4-(叔丁基)苯-1，2-二胺(235mg，1.43mmol)、EDCI(274mg，1.43mmol)、HOBT(193mg，1.43mmol)和TEA(435mg，4.30mmol)。所述混合物在45℃加热过夜并浓缩。添加饱和的NaHCO3溶液(20mL)，所得混合物用DCM(20mL×3)萃取。有机层用Na2SO4干燥，然后浓缩。所得粗制物用制备型TLC(DCM∶MeOH＝12∶1)纯化以获得标题化合物(110mg)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。
步骤７：9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺的合成
在65℃加热内含N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-((1R，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酰胺(110mg)的AcOH(15mL)溶液过夜。浓缩该混合物，添加饱和的NaHCO3溶液(20mL)，所得混合物用DCM(20mL×3)萃取。所述合并有机层通过Na2SO4干燥并浓缩以生成标题化合物(100mg粗制物)。1HNMR(500MHz，CDCl3)：δH8.36(s，1H)，7.94(s，1H)，7.48-7.27(m，3H)，6.07(d，J＝1.5Hz，1H)，5.64-5.58(m，3H)，5.02(dd，J＝3.0，6.0Hz，1H)，4.30(brs，1H)，3.38-3.37(m，1H)，2.97-2.95(m，1H)，2.76-2.55(m，3H)，1.97-1.74(m，5H)，1.67-1.57(m，5H)，1.45-1.40(m，12H)，0.99(d，J＝6.5Hz，3H)，0.83(d，J＝6.5Hz，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：603.5[M+1]+。
步骤８：化合物3的合成
内含9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(190mg)的HCl/MeOH(2.5mol/L)(15mL)溶液在室温搅拌2h，然后浓缩至干。添加内含K2CO3(161mg)的水(0.5mL)和MeOH(5mL)。所得混合物在室温另搅拌10分钟，然后过滤。浓缩滤液，所得残余物通过制备型HPLC(Xbridge30mm*150mm，流动相：A：水(10mMNH4HCO3)，B：CAN，梯度：10分钟内35-45％B，6分钟内45-45％B，停止于20分钟，流速：50mL/分钟)纯化以生成白色固态化合物3(65mg，产率：70％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.29(s，1H)，8.19(s，1H)，7.47-7.28(m，3H)，5.95(d，J＝4.5Hz，1H)，4.744-4.724(m，1H)，4.27-4.26(m，1H)，4.07-4.06(m，1H)，3.56(brs，1H)，3.01-2.78(m，5H)，2.17(brs，2H)，2.00-1.93(m，2H)，1.80-1.79(m，2H)，1.36(s，9H)，1.02(d，J＝5.5Hz，3H)，0.95(d，J＝6.0Hz，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：563.5[M+1]＋。
实施例4：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(5-氯-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇(化合物4)的合成
步骤1：N-(2-氨基-4-氯-5-(三氟甲基)苯基)-3-((1R，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酰胺的合成
向内含3-((1R，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸(250mg，0.53mmol)的DCM(30mL)溶液添加4-氯-5-(三氟甲基)苯-1，2-二胺(221mg，1.05mmol)、EDCI(201mg，1.05mmol)、HOBT(142mg，1.05mmol)和TEA(320mg，3.15mmol)。室温下搅拌该混合物过夜，然后添加饱和的NaHCO3溶液(20mL)，所得混合物用DCM(20mL×3)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。所得粗制物通过制备型TLC(DCM∶MeOH＝12∶1)纯化以获得标题化合物(250mg粗制物)。
步骤２：9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-((((1s，3R)-3-(2-(5-氯-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺的合成
内含N-(2-氨基-4-氯-5-(三氟甲基)苯基)-3-((1R，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酰胺(250mg)的AcOH(15mL)溶液加热至65℃过夜。浓缩该混合物，添加饱和的NaHCO3溶液(20mL)，所得混合物用DCM(20mL×3)萃取。所述合并有机层通过Na2SO4干燥并浓缩以生成标题化合物(200mg粗制物)。
步骤3：化合物4的合成
内含9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-((((1s，3R)-3-(2-(5-氯-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(200mg)的HCl/MeOH(2.5mol/L)(15mL)溶液在室温搅拌2h，然后浓缩至干。添加内含K2CO3(166mg)的水(0.5mL)和MeOH(5mL)，所得混合物在室温下另搅拌10分钟。过滤该混合物，并浓缩滤出液。所得残余物通过制备型HPLC纯化以生成白色固态的化合物4(80mg，产率：43％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.29(s，1H)，8.19(s，1H)，7.88(s，1H)，7.68(s，1H)，5.96(d，J＝4.0Hz，1H)，4.748-4.730(m，1H)，4.284-4.263(m，1H)，4.09(brs，1H)，3.65-3.50(m，1H)，3.03-2.85(m，5H)，2.191-2.176(m，2H)，2.03-2.00(m，2H)，1.80(brs，2H)，1.02(d，J＝6.0Hz，3H)，0.96(d，J＝6.6Hz，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：609.2[M+1]+。
实施例5：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5-氯-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇(化合物5)的合成
步骤1：N-(2-氨基-4-氯-5-(三氟甲基)苯基)-3-((1S，3r)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酰胺的合成
向内含3-((1S，3r)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸的DCM∶DMF＝15∶1(30mL)溶液添加4-氯-5-(三氟甲基)苯-1，2-二胺(334mg，1.60mmol)、EDCI(304mg，1.60mmol)、HOBT(215mg，1.60mmol)和TEA(483mg，4.80mmol)。该混合物在室温条件搅拌过夜。浓缩该混合物，添加饱和的NaHCO3溶液(20mL)，所得混合物用DCM(20mL×3)萃取。用Na2SO4干燥合并的有机层，然后浓缩。所得粗制残余物通过制备型TLC(DCM∶MeOH＝12∶1)纯化以获得标题化合物(220mg)。
步骤２：9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-((((1r，3S)-3-(2-(5-氯-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺的合成
在65℃加热内含N-(2-氨基-4-氯-5-(三氟甲基)苯基)-3-((1S，3r)-3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酰胺(220mg)的AcOH(15mL)溶液过夜。浓缩该混合物，添加饱和的NaHCO3溶液(20mL)，所得混合物用DCM(20mL×3)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，浓缩生成标题化合物(190mg)。
步骤3：化合物5的合成
内含9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-((((1r，3S)-3-(2-(5-氯-6-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(190mg)的HCl/MeOH(2.5mol/L)(15mL)溶液在室温搅拌2h，然后浓缩至干。添加内含K2CO3(161mg)的水(0.5mL)和MeOH(5mL)，所得混合物在室温下另搅拌10分钟。过滤该混合物，并浓缩滤出液。所得残余物通过制备型HPLC纯化以生成白色固态的化合物5(90mg，产率：51％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.29(s，1H)，8.19(s，1H)，7.88(s，1H)，7.67(s，1H)，5.95(d，J＝5.0Hz，1H)，4.736-4.716(m，1H)，4.268-4.246(m，1H)，4.070-4.051(m，1H)，3.15(brs，1H)，3.00-2.71(m，5H)，2.17(brs，2H)，1.93-1.88(m，2H)，1.58-1.56(m，2H)，1.01(d，J＝5.5Hz，3H)，0.95(d，J＝6.0Hz，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：609.2[M+1]＋。
实施例6：(2R，3R，4S，5R)-2-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-((5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇(化合物6)的合成
步骤1：7-((3aR，4R，6R，6aR)-6-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺的合成
使内含((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲醇(2.83g，6.20mmol)和三苯基膦(2.28g，8.68mmol)的干燥四氢呋喃(32mL)溶液在冰/水浴中冷却至0℃。逐滴添加偶氮二羧酸二异丙酯(1.71mL，8.68mmol)，然后添加内含叠氮膦酸二苯酯(1.87mL，8.68mmol)的四氢呋喃(5.3mL，66mmol)溶液。加入DPPA溶液后，形成白色乳状沉淀。约30分钟后，使所述反应混合物升温至室温，并搅拌过夜。24h后，HPLC指示已消耗全部起始材料。使该反应混合物浓缩至原始体积的约1/2，然后通过快速色谱(175g硅胶，10-55％EA/庚烷)纯化以产出浅黄色硬泡沫状标题化合物(2.49g，83％)：针对C23H27N7O5MS(ESI+)m/z482.2(M+H)+；C23H27N7O5的(ESI-)m/z480.1(M+H)-，m/z526.1(M+CO2H)-；HPLC纯度97％。
步骤２：7-((3aR，4R，6R，6aR)-6-(氨基甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺的合成
内含((3aR，4R，6R，6aR)-6-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(2.49g，5.17mmol)的四氢呋喃(50mL，600mmol)溶液用内含1.0M三甲基膦的四氢呋喃(7.24mL，7.24mmol)溶液逐滴处理，所得混合物搅拌20h。该反应混合物用水(1.80mL，99.9mmol)处理，然后在室温搅拌2h。浓缩该反应混合物，粗制产物收集在90mLCH2Cl2中，然后用四份30mLH2O和15mL盐水洗涤。所述溶液用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。所得粗制材料通过快速色谱(120g硅胶，3-10％7NNH3在CH3OH/CH2Cl2中)纯化以生成泡沫状的标题化合物(1.76g，75％)：针对C23H29N5O5MS(ESI+)m/z456.2(M+H)+；C26H35N5O5的(ESI-)m/z454.1(M-H)-，HPLC纯度92％(保留时间，2.65分钟)。
步骤３：2-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)乙酸甲酯的合成
内含7-((3aR，4R，6R，6aR)-6-(氨基甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(400mg，0.88mmol)和2-(3-氧代环丁基)乙酸甲酯(100mg，0.70mmol)[使用美国专利申请公开2009/0118287中找到的方法制备]的1，2-二氯乙烷(12mL)溶液用乙酸(50uL，0.88mmol)逐滴处理。一部分所述溶液用三乙酰氧基硼氢化钠(260mg，1.2mmol)处理，然后在室温搅拌直至HPLC完成。4h后，HPLC指示该反应约有80％完成。额外添加20mg酮，持续搅拌2.5h。所述反应混合物用30mLCH2Cl2稀释并用15mL饱和的NaHCO3洗涤。水相用15mLCH2Cl2洗涤，合并的有机相用Na2SO4干燥。过滤并浓缩该有机相以产出浅黄色玻璃状物，其通过快速色谱(70g硅胶；2％7NNH3在CH3OH/CH2Cl2中)纯化以产出无色玻璃状的标题化合物(270mg，66％)：针对C30H39N5O7MS(ESI+)m/z582.2(M+H)+；HPLC纯度＞95％(保留时间，2.88分钟)。
步骤４：2-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)乙酸甲酯的合成
内含2-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)乙酸甲酯(267mg，0.459mmol)的甲醇(12mL)溶液用氰基硼氢化钠(380mg，6.1mmol)处理。通过逐滴添加内含10％(v/v)冰醋酸的甲醇溶液调节所述溶液的pH至约为6。所述混合物用37％甲醛(0.57mL，7.6mmol)逐滴处理，所得混合物在室温搅拌1h(HPLC指示至该时间已消耗起始材料)。浓缩该反应混合物以去除甲醇。余留的水性溶液用25mLNaHCO3稀释，所得水相用三份20mLCH2Cl2萃取。所得有机相用20mL饱和的NaHCO3洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩以产出无色硬泡沫状的标题化合物(272mg，100％)，发现其足够纯以用于下一步骤：针对C31H41N5O7MS(ESI+)m/z596.5(M+H)+；HPLC纯度＞95％(保留时间，2.89分钟)。
步骤５：2-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)乙酸的合成
内含2-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)乙酸甲酯(270mg，0.453mmol)的甲醇(8.6mL)溶液用内含氢氧化钠(36mg，0.91mmol)的水(0.9mL，50mmol)溶液逐滴处理，并在50℃加热该混合物。17h后，HPLC指示该反应完成。使该反应混合物冷却至室温，用0.91mL1.0NHCl处理以调节pH至约为7。浓缩该溶液以去除甲醇，冻干所得水性悬液以产出白色固体。如下一步骤中所述使用该材料，假定定量回收：针对C30H39N5O7MS(ESI+)m/z582.4(M+H)+；针对C30H39N5O7MS(ESI-)m/z580.4(M-H)-；HPLC纯度＞95％(保留时间，2.72分钟)。
步骤６：N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-2-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)乙酰胺的合成
内含2-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)乙酸和4-叔丁基苯-1，2-二胺(89.4mg，0.545mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(4.5mL)溶液用N，N-二异丙基乙基胺(0.261mL，1.50mmol)逐滴处理，然后用N，N，N＇，N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(259mg，0.681mmol)处理。使该溶液在室温搅拌18h，该时间过程中LCMS指示起始材料已被消耗。高真空下浓缩该反应混合物。所得残余物收集在30mL乙酸乙酯和20mL1/1H2O/饱和NaHCO3溶液中。萃取该混合物，水相用35mL乙酸乙酯洗涤。合并的有机相用两份20mLH2O和20mL盐水洗涤。所述有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩以产出茶棕色玻璃状/硬泡沫状物。粗制材料通过快速色谱(35g硅胶；4％7NNH3在CH3OH/CH2Cl2中)纯化以产出浅茶色玻璃状/硬泡沫状标题化合物(272mg，82％)，其为区域异构体酰胺的混合物：针对C41H53N7O6MS(ESI+)m/z728.8(M+H)+；针对C41H53N7O6MS(ESI-)m/z726.9(M-H)-；HPLC纯度＞95％(保留时间，3.14、3.17分钟)，由于酰胺区域异构体，观察到两个峰。
步骤７：7-((3aR，4R，6R，6aR)-6-(((3-((5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺的合成
N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-2-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)乙酰胺(272mg，0.374mmol)收集在乙酸(7.2mL)中，然后在65℃加热该溶液。1.5h后，HPLC指示该反应完全。使所述反应冷却至室温，并在高真空下去除溶剂。所得残余物收集在35mLCH2Cl2中，有机相用25mL饱和NaHCO3溶液和20mL2％Na2CO3溶液洗涤。所述有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩以产出浅茶色玻璃状/硬泡沫状物。粗制材料通过快速色谱(30g硅胶；4％7NNH3在CH3OH/CH2Cl2中)纯化以产出浅茶色玻璃状标题化合物(224mg，84％)，其为环丁基环的顺式和反式非对映异构体的混合物：针对C40H51N7O5MS(ESI+)m/z710.6(M+H)+；针对C41H51N7O5MS(ESI-)m/z708.7(M-H)-；HPLC纯度＞95％(保留时间，3.29、3.33分钟)，由于环丁基环的非对映异构体，观察到两个峰。
步骤8：化合物6的合成
使7-((3aR，4R，6R，6aR)-6-(((3-((5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(170mg，0.24mmol)溶解于已在冰浴中0℃预冷的三氟乙酸(5.0mL)和水(0.5mL)的混合物中。所述溶液在0℃搅拌30分钟，然后升温至室温。室温下5h后，浓缩当前很粉红的反应混合物。所得残余物收集在10mLMeOH中并浓缩。该处理重复两次，将所得残余物置于高真空1h。所述材料收集在7mLMeOH中并用130mgK２CO3和五滴水处理。使该混合物搅拌1小时，该时间过程中发现所述溶液呈碱性。使该混合物通过细玻璃料过滤，所得固体用10mLMeOH洗涤，浓缩所得滤液以产出接近无色的固体。所得粗制材料通过快速色谱(30g硅胶，12％7NNH3在CH3OH/CH2C12中)纯化以生成无色玻璃状/硬泡沫状化合物6(81mg，65％)：针对C28H37N7O3MS(ESI+)m/z520.4(M+H)+；针对C28H37N7O3MS(ESI-)m/z518.5(M-H)-；HPLC纯度＞95％(保留时间，2.51分钟)；1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δHppm8.08(s，1H)，7.48(br.s.，1H)，7.39(d，J＝8.50Hz，1H)，7.29(dd，J＝8.40，4.87Hz，1H)，6.63(m，1H)，6.12(d，J＝4.15Hz，1H)，4.40(m，1H)，4.09(m，2H)，3.15(m，0.5H)，3.02(d，J＝8.09Hz，1H)，2.92(d，J＝7.26Hz，1H)，2.84(m，0.5H)，2.65(m，2H)，2.43(m，1H)，2.29(m，1H)，2.20(d，J＝5.80Hz，3H)，2.13(m，1H)，1.99(br.s.，1H)，1.67(m，1H)，1.37(d，J＝3.94Hz，9H)，1.30(dd，J＝13.99，4.66Hz，1H)。
实施例7：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇(化合物7)的合成
步骤1：４，6-二氯-5-(2，2-二乙氧基乙基)嘧啶的合成
标题化合物通过Montgomery的方法制备，参见：Montgomery，J.A.；Hewson，K.JMed.Chem.10，665(1967).
步骤2：(1R，2S，3R，5R)-3-((6-氯-5-(2，2-二乙氧基乙基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(羟甲基)环戊烷-1，2-二醇的合成
4，6-二氯-5-(2，2-二乙氧基乙基)嘧啶(5.35g，20.2mmo1)和(1R，2S，3R，4R)-2，3-二羟基-4-(羟甲基)环戊二烯并氯化铵(9.29g，24.3mmo1)的混合物收集在乙醇(236mL)中，用Et3N(11.2mL，80.8mmo1)处理并在回流下加热23h；HPLC/LCMS指示消耗起始材料且存在产物。浓缩该反应混合物以获得茶色浆状物，其为继续应用的粗制物：针对C16H26ClN3O5MS(ESI+)m/z376.2(M+H)+；针对C16H26ClN3O5MS(ESI-)m/z374.2(M-H)-；HPLC纯度＞95％(保留时间，2.436分钟)。途径变化自J.Med.Chem.10，665(1967)。
步骤3：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(羟甲基)环戊烷-1，2-二醇的合成
内含粗制(1R，2S，3R，5R)-3-((6-氯-5-(2，2-二乙氧基乙基)嘧啶-4-基)氨基)-5-(羟甲基)环戊烷-1，2-二醇的1，4-二噁烷(160mL)悬液用1MHCl水溶液(30mL，30mmo1)处理，然后在室温搅拌69.5h；HPLC指示完全转化成一种产物，LCMS显示所需产物的质量。反应混合物用浓缩的水性NH4OH中和(至pH7)，真空去除挥发性物质以获得棕色浆状物，其无需进一步纯化即可使用：针对C12H14C1N3O3MS(ESI+)m/z284.1(M+H)+；针对C12H14ClN3O3MS(ESI-)m/z282.2(M-H)-，328.2(M+HCO2)-；HPLC纯度＞95％(保留时间，1.947分钟)。途径变化自J.Med.Chem.10，665(1９67)。
步骤4：((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲醇的合成
粗制(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(羟甲基)环戊烷-1，2-二醇(10g，约20mmol，54％纯(通过NMR))和2，2-二甲氧基丙烷(100mL，800mmo1)的混合物用对甲苯磺酸一水合物(7.28g，38.3mmo1)处理，所得黄棕色反应混合物剧烈搅拌1.25h，此时仅固体呈均匀茶色沉淀。HPLC指示起始材料接近完全消耗。所述反应混合物用水(30mL)稀释，然后用固态NaHCO3(4.80g，57.1mmo1)中和。小心地真空去除挥发性物质，所得棕色水溶液用EtOAc(3×100mL)萃取。所得合并的有机物干燥(Na2SO4)并真空浓缩以得到茶色糊状物。柱层析纯化(4×22cm二氧化硅；0-66％EtOAc/Hex)得到无色泡沫/玻璃状标题化合物(4.38g，经过一个步骤后70％)：针对C15H18C1N3O3MS(ESI+)m/z324.2(M+H)+；针对C15H18C1N3O3MS(ESI-)m/z368.2(M+HCO2)-；HPLC纯度＞95％(保留时间，3.034分钟)。
步骤5：7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成
使((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲醇(2.68g，8.28mmo1)溶解于THF(32mL)，用PPh3(3.05g，11.6mmo1)处理，然后使反应容器在冰-盐水浴中冷却。通过注射器逐滴添加偶氮二羧酸二异丙酯[DIAD](2.3mL，12mmo1)，所得混合物搅拌10分钟。通过注射器逐滴添加内含叠氮膦酸二苯酯[DPPA](2.50mL，11.6mmo1)的THF(7.8mL)溶液，以获得灰白色混合物，其搅拌21h，使冰浴升温至室温；HPLC/LCMS指示起始材料完全消耗，产物形成。22.5h时真空浓缩反应混合物，并通过柱层析(4×22cm二氧化硅；0-25％EtOAc/Hex)纯化以获得透明、无色油状标题化合物(2.27g，78％)：针对C15H17ClN6O2MS(ESI+)m/z349.2(M+H)+；针对C15H17ClN6O2MS(ESI-)m/z393.2(M+HCO2)-；HPLC纯度＞95％(保留时间，4.169分钟)。
步骤6：7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺的合成
内含7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶和2，4-二甲氧基苄基胺(1.2mL，7.8mmol)的1-丁醇(18.6mL)溶液用N，N-二异丙基乙基胺(1.4mL，7.8mmol)处理并在80℃加热22h；HPLC/LCMS指示约90％转化成所需产物。去除挥发性物质，所得黄棕色糊状物收集在CH2C12(90mL)中并用水(2×30mL)和盐水(1×45mL)洗涤。使分离的有机层干燥(Na2SO4)并真空浓缩以获得橙色油状物。通过柱层析(2×22cm二氧化硅；0-50％EtOAc/Hex)纯化获得灰黄色玻璃/泡沫状标题化合物(2.23g，72％)。针对C24H29N7O4MS(ESI+)m/z480.5(M+H)+；针对C24H29N7O4MS(ESI-)m/z524.3(M+HCO2)-；HPLC纯度＞95％(保留时间，3.551分钟)。
步骤7：7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(氨基甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺的合成
使内含7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(叠氮基甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(2.23g，4.65mmol)的THF(33mL，410mmol)溶液冷却至0℃，然后用内含1.0M三甲基膦的THF(9.3mL，9.3mmol)溶液逐滴处理。移去该冷浴，搅拌1h使所述反应混合物升温至室温；HPLC指示无起始材料残留。1.5h时，添加水(4.3mL，240mmol)，搅拌所述反应混合物1小时15分钟；TLC指示一种产物。真空浓缩该反应混合物以获得浅橙色糊状物。所得残余物用CH2C12(120mL)稀释并用水(2×40mL)和盐水(1×40mL)洗涤。使有机层干燥(Na2SO4)并真空浓缩以获得橙色油状物。柱层析纯化(2×22cm二氧化硅；0-5％7NNH3在CH3OH/CH2C12中)得到无色泡沫状标题化合物(1.97g，经过三个步骤后53％)：针对C24H31N5O4MS(ESI+)m/z454.3(M+H)+；HPLC纯度＞95％(保留时间，2.541分钟)。
步骤8：3-(2，2-二氯-3-氧代环丁基)丙酸乙酯的合成
内含4-戊烯酸乙酯(7.07g，55.2mmol)和锌-铜对(10.2g，140mmol)的二***(170mL)和1，2-二甲氧基乙烷(25mL)的混合物用三氯乙酰氯(25g，140mmol)逐滴处理。该混合物在室温下搅拌3天。使所得微红色异质反应混合物通过硅藻土垫过滤，然后用300mLEt2O洗涤该垫。使滤液浓缩至约原始体积的一半，所得有机相用两份150mLH2O和一份150mL饱和NaHCO3洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤并浓缩以产出棕色液体。所得材料通过真空蒸馏(90-100℃0.044托)纯化以产出浅黄色液态标题化合物(10.49g，80％)：GC纯度95.8％(保留时间，4.92分钟)。
步骤9：3-(3-氧代环丁基)丙酸乙酯的合成
内含3-(2，2-二氯-3-氧代环丁基)丙酸乙酯(10.49g，43.87mmol)和氯化铵(12g，220mmol)的甲醇(310mL，7600mmol)溶液用小份锌粉(14g，220mmol)处理。该反应混合物回流加热3h，过后GC指示反应完全。使该反应混合物冷却至室温，然后通过硅藻土过滤，用Et2O冲洗该垫。所得滤液真空浓缩以获得灰黄色溶液。所述溶液用200mLEt2O稀释，然后用100mL水洗涤。分离的水层用100mLEt2O反萃取，合并的有机相用100mL1∶1水/盐水、50mL水和150mL饱和水性NaHCO3洗涤。有机层用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩以获得浅黄色油状标题化合物(4.49g，60％)，其足够纯以用于下一步骤：GC纯度95％(保留时间，4.24分钟)。
步骤10：3-(3-氧代环丁基)丙酸的合成
内含3-(3-氧代环丁基)丙酸乙酯(200mg，1.18mmol)的甲醇(4mL)溶液用水(0.75mL)和2N氢氧化钠(0.75mL，1.41mmol)溶液处理，所得溶液在55℃加热直至通过TLC(25％EA/庚烷)验证起始材料被消耗。1h后，发现起始材料被消耗。使反应混合物冷却至室温并浓缩以去除MeOH。水相用2mLH2O稀释并用1NHC1酸化至pH约为2。用NaCl使所述溶液饱和，并用三份10mL乙酸乙酯萃取。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩以产出浅橙色粘性油状标题化合物(157mg，94％)，其用于下一步骤：GC纯度63.2％(保留时间，4.27分钟)。
步骤11：N-(2-氨基-4-氯-5-(三氟甲基)苯基)-3-(3-氧代环丁基)丙酰胺的合成
使内含3-(3-氧代环丁基)丙酸(157mg，0.696mmol)和4-氯-5-(三氟甲基)苯-1，2-二胺(146mg，0.696mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2.5mL)溶液在0℃冷却。所述溶液用N，N-二异丙基乙基胺(0.364mL，2.09mmol)逐滴处理，然后通过一份N，N，N′，N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(291mg，0.765mmol)。搅拌该溶液使其缓慢升温至室温。40小时后，在高真空下部分浓缩该反应混合物。余留的棕色液体收集在25mLEA和15mL1/1饱和NaHCO3/H2O中并萃取。水相用两份15mL乙酸乙酯洗涤，合并的有机相用30mL份的H2O和盐水洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩以产出茶棕色粘性油状/玻璃状物。所得粗制材料通过快速色谱(40g硅胶，50-80％EA/hept)纯化以产出浅茶色玻璃/硬泡沫状标题化合物(72mg，31％)：针对C14H14ClF3N2O2MS(ESI+)m/z335.2(M+H)+；针对C14H14ClF3N2O2MS(ESI-)m/z333.3(M-H)-；HPLC纯度＞78.2％(保留时间，3.56分钟)。
步骤12：3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁酮的合成
N-(2-氨基-4-氯-5-(三氟甲基)苯基)-3-(3-氧代环丁基)丙酰胺(72mg，mmol)收集在乙酸(3.2mL)中，所得溶液在65℃加热26h，然后HPLC指示消耗起始材料并已形成新产物。使该反应混合物冷却，并在高真空下去除溶剂。浅棕色残余物收集在20mL乙酸乙酯中，有机相用分成几份的10mL饱和NaHCO3和H2O洗涤。所述有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩以产出浅棕色玻璃状物。所得粗制材料通过制备型TLC(20cm×20cm×1.0mm制备型TLC板，3％MeOH/EA)纯化以产出茶色玻璃状标题化合物(45mg，66％)：针对C14H12ClF3N2OMS(ESI+)m/z317.2(M+H)+；针对C14H12ClF3N2OMS(ESI-)m/z315.2(M-H)-；HPLC纯度＞84.1％(保留时间，2.98分钟)。
步骤13：7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺的合成
内含7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(氨基甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(80mg，0.18mmol)和3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁酮(45mg，0.14mmol)的1，2-二氯乙烷(2.4mL)溶液用乙酸(10uL，0.18mmol)逐滴处理。一部分所述溶液用三乙酰氧基硼氢化钠(53mg，0.25mmol)处理，然后在室温搅拌直至HPLC完成。4h后，所得反应混合物用10mLCH2C12稀释并用10mL饱和NaHCO3洗涤。所得水相用10mLCH2C12洗涤，合并的有机相用Na2SO4干燥。所述溶液过滤并浓缩以产出浅茶色玻璃状/硬泡沫状物。所得粗制材料通过快速色谱(25g硅胶，5％7NNH3在CH3OH/CH2C13中)纯化以生成无色玻璃状/硬泡沫状标题化合物(76mg，71％)：针对C38H43ClF3N7O4MS(ESI+)m/z754.3(M+H)+；针对C38H43ClF3N７O4MS(ESI-)m/z752.3(M-H)-；HPLC纯度90.5％(保留时间，3.24分钟)。
步骤14：7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺的合成
内含7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(76mg，0.10mmol)的甲醇(2.5mL)溶液用氰基硼氢化钠(84mg，1.3mmol)处理。通过逐滴添加内含10％(v/v)冰醋酸的甲醇溶液调节所述溶液的pH至约为6。所得混合物用37％水性甲醛(0.12mL，1.7mmol)逐滴处理，该混合物室温搅拌直至LCMS完成。2h后，该反应完成，浓缩所述反应混合物以去除甲醇。余留的水性溶液用7mLNaHCO3稀释，所得水相用三份10mLCH2C12萃取。所述有机相用Na2gO4干燥，过滤并浓缩以产出无色硬泡沫状/玻璃状物。所得粗制材料通过快速色谱(20g硅胶，4％7NNH3在CH3OH/CH2C12中)纯化以生成无色玻璃状标题化合物(62mg，80％)：针对C39H45ClF3N7O4MS(ESI+)m/z768.0(M+H)+；针对C39H45ClF3N7O4MS(ESI-)m/z766.3(M-H)-；HPLC纯度92.1％(保留时间，3.29分钟)。
步骤15：化合物7的合成
使7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(60mg，0.078mmol)溶解于已在冰浴中于0℃预冷的三氟乙酸(3.6mL)和水(0.4mL)的混合物中。所述溶液在0℃搅拌30分钟，然后升温至室温。室温3h后，HPLC指示该反应完成。浓缩当前很粉红的反应混合物。所得残余物收集在10mLMeOH中并浓缩。该过程重复两次，将所得残余物置于高真空1h。所述材料收集在7mLMeOH中并用120mgK2CO3和十滴水处理。使所述混合物搅拌1小时。使该混合物通过细玻璃料过滤，所得固体用10mLMeOH洗涤，浓缩所得滤液以产出接近无色的固体。所得粗制材料通过快速色谱(30g硅胶，10-15％7NNH3在CH3OH/CH2C12中)纯化以生成无色玻璃状/硬泡沫状化合物7(31mg，69％)：针对C27H31ClF3N7O2MS(ESI+)m/z578.3(M+H)+；针对C27H31ClF3N7O2MS(ESI-)m/z576.4(M-H)-；HPLC纯度＞95％(保留时间，2.57分钟)；1HNMR(400MHz，d4-MeOD)δH8.06(s，1H)，7.89(d，J＝2.07Hz，1H)，7.69(d，J＝2.28Hz，1H)，7.21(dd，J＝3.42，1.76Hz，1H)，6.59(d，J＝3.52Hz，1H)，4.33(t，J＝6.84Hz，1H)，3.89(q，J＝5.25Hz，1H)，3.03(m，0.5H)，2.89(m，2H)，2.70(m，0.5H)，2.49(m，1H)，2.40(m，2H)，2.27(br.s.，2H)，2.16(d，J＝7.26Hz，4H)，2.06(m，2H)，1.91(m，2H)，1.62(m，1H)，1.52(m，1H)。
实施例8：化合物8-140的合成
通过实施例1-7所述的那些相似方法或通过通用方案中描述的反应方案合成化合物8-140。其中一些如何制备的详细描述提供如下。化合物2-140的MS和NMR数据在表1或本文提供的实施例中提供。
化合物8：1-(3-((((2R，3S，4R，5R)-5-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-3，4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)-3-(4-(叔丁基)苯基)脲
(3-氧代环丁基)氨基甲酸苄酯
室温下向内含3-氧代环丁烷基羧酸(1.0g，8.77mmol)和DIEA(1.92g，14.92mmol)的甲苯(8mL)溶液添加DPPA(2.89g，10.52mmol)。氩气下于60℃加热该混合物3h，然后添加苯甲醇(1.14g，10.52mmol)。60℃搅拌所述混合物过夜。浓缩该反应，残余物通过SGC(PE:EA＝8:1)纯化以获得所需化合物(240mg，产率50％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)：δH7.38-7.33(m，5H)，5.12(d，J＝7.5Hz，2H)，4.34-4.33(brs，1H)，3.44-3.39(m，2H)，3.10-3.07(brs，2H)ppm；ESI-MS(m/z)：220.2[M+1]+。
(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)氨基甲酸苄酯
向9-((3aR，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-((甲基氨基)甲基)四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(190mg，0.59mmol)和(3-氧代环丁基)氨基甲酸苄酯(240mg，1.37mmol)的MeOH(5mL)溶液中添加Ti[OCH(CH3)2]4(216mg，0.59mmol)。所述混合物在室温搅拌1h。然后添加NaCNBH3(95mg，1.52mmol)，所述反应在室温搅拌过夜。过滤并蒸发该反应，所得残余物通过制备型TLC(DCM∶MeOH＝20∶1)纯化以获得所需化合物(90mg，产率29％)。
1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.28(s，1H)，8.21(s，1H)，7.33-7.28(m，5H)，6.19(d，J＝2.0Hz，1H)，5.52-5.51(m，1H)，5.03(s，1H)，5.00-4.98(m，1H)，4.34(t，J＝3.5Hz，1H)，3.70(m，1H)，2.58-2.47(m，4H)，2.38-2.26(m，2H)，2.09(s，3H)，1.69-1.67(m，1H)，1.58(s，3H)，1.37(s，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：524.3[M+1]+。
N1-(((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)-N1-甲基环丁烷基-1，3-二胺
向内含(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)氨基甲酸苄酯(190mg，0.17mmol)和Pd(OH)2(14mg，0.1mmol)的MeOH(5mL)溶液充H2。所述反应在35℃搅拌5h。用硅藻土过滤该反应并浓缩至干。所得残余物通过制备型TLC(DCM∶MeOH＝10∶1)纯化以获得所需化合物(28mg，产率42％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.29(s，1H)，8.21(s，1H)，6.19(d，J＝2.0Hz，1H)，5.51(dd，J＝6.5和2.0Hz，1H)，5.00(dd，J＝6.0和3.5Hz，1H)，4.34(d，J＝8.5Hz，1H)，3.14-3.11(m，1H)，2.60-2.57(m，1H)，2.52-2.48(m，2H)，2.34-2.31(m，2H)，2.10(s，3H)，1.66(q，J＝10.0Hz，1H)，1.58(s，3H)，1.48(q，J＝10.0Hz，1H)，1.37(s，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：390.2[M+1]+。
1-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)-3-(4-(叔丁基)苯基)脲
向N1-(((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)-N1-甲基环丁烷基-1，3-二胺(28mg，0.072mmol)和TEA(22mg，0.22mmol)的THF(3mL)溶液逐滴添加内含1-叔丁基-4-异氰酸苯(18mg，0.11mmol)的DCM(0.5mL)。所述反应在室温搅拌1小时。该反应浓缩并通过制备型TLC(两次，DCM∶MeOH∶NH4OH＝300∶30∶8，V/V)纯化以获得灰白色固态所需化合物(28mg，产率：88％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.29(s，1H)，8.24(s，1H)，7.28-7.22(m，4H)，6.25(d，J＝2.5Hz，1H)，5.52-5.50(m，1H)，5.07-5.05(m，1H)，4.46-4.44(m，1H)，3.88-3.85(m，1H)，2.97(brs，1H)，2.80-2.78(m，2H)，2.48-2.42(m，2H)，2.30(s，3H)，1.84-1.82(m，1H)，1.60(s，3H)，1.58-1.56(m，1H)，1.39(s，3H)，1.28(s，9H)ppm；ESI-MS(m/z)：565.3[M+1]+。
1-(3-((((2R，3S，4R，5R)-5-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-3，4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)-3-(4-(叔丁基)苯基)脲
使内含1-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)-3-(4-(叔丁基)苯基)脲(125mg，0.23mmol)的TFA(0.90mL)和0.10mL水溶液在室温搅拌1小时。使该反应浓缩至干，溶解于MeOH(5mL)，然后逐滴添加内含K2CO3(60mg)的0.5mL水。所述反应在室温搅拌0.5h，然后浓缩，所得的残留物通过制备型TLC(DCM∶MeOH∶NH4OH＝３00∶30∶8，V/V)纯化以获得灰白色固态所需化合物(75mg，产率：65％)。１HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.27(s，1H)，8.21(s，1H)，7.28-7.20(m，4H)，6.00-5.99(m，1H)，4.77-4.75(m，1H)，4.28-4.23(m，2H)，3.92-3.88(m，1H)，2.92(brs，1H)，2.83-2.81(m，2H)，2.59-2.56(m，2H)，2.32(s，3H)，1.74-1.64(m，2H)，1.27(s，9H)ppm；ESI-MS(m/z)：525.3[M+1]+。
化合物9和12
化合物9：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇：
1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.07(s，1H)，7.90(s，1H)，7.69(s，1H)，7.22(d，J＝3.5Hz，1H)，6.61(d，J＝3.5Hz，1H)，4.34(t，J＝6.5Hz，1H)，3.89(t，J＝5.0Hz，1H)，2.88(t，J＝7.0Hz，2H)，2.74-2.68(m，1H)，2.55-2.49(m，1H)，2.46-2.35(m，2H)，2.32-2.22(m，3H)，2.17(s，3H)，2.00-1.90(m，3H)，1.68-1.60(m，1H)，1.58-1.48(m，2H)ppm；LC-MS(m/z)：578.3[M+1]+。
化合物12：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇：
1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.07(s，1H)，7.91(s，1H)，7.70(s，1H)，7.22(d，J＝3.5Hz，1H)，6.61(d，J＝4.0Hz，1H)，4.34(dd，J＝7.0和6.0Hz，1H)，3.90(t，J＝5.0Hz，1H)，3.05-3.00(m，1H)，2.92(t，J＝7.5Hz，2H)，2.55-2.49(m，1H)，2.47-2.35(m，2H)，2.32-2.22(m，1H)，2.20-2.02(m，8H)，1.93-1.86(m，2H)，1.70-1.60(m，1H)ppm；LC-MS(m/z)：578.3[M+1]+。
化合物10和11
化合物10：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基((1r，3S)-3-(2-(5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇：
1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.06(s，1H)，7.79(s，1H)，7.62(d，J＝9.0Hz，1H)，7.47(d，J＝8.5Hz，1H)，7.20(d，J＝3.5Hz，1H)，6.59(d，J＝3.0Hz，1H)，4.33-4.30(m，1H)，3.88-3.86(m，1H)，3.32-3.31(m，1H)，2.89-2.86(m，2H)，2.67-2.66(m，1H)，2.48-2.26(m，6H)，2.14(s，3H)，1.95-1.93(m，3H)，1.62-1.48(m，3H)ppm；LC-MS(m/z)：544.3[M+1]+。
化合物11：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基((1s，3R)-3-(2-(5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇：
1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.06(s，1H)，7.79(s，1H)，7.62(d，J＝8.5Hz，1H)，7.47(d，J＝8.5Hz，1H)，7.20(d，J＝3.0Hz，1H)，6.59(d，J＝3.5Hz，1H)，4.33-4.31(m，1H)，3.90-3.87(m，1H)，3.01-3.0(m，1H)，2.92-2.89(m，2H)，2.48-2.03(m，13H)，1.93-1.89(m，2H)，1.63-1.61(m，1H)ppm；LC-MS(m/z)：544.3[M+1]+。
化合物13：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
N-(2-氨基-4-(三氟甲基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酰胺
向内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸(460mg，0-77mmol)、N，N二异丙基乙基胺(0.44mL，2.6mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(5mL)的溶液添加N，N，N′，N′-四甲基-0-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(0.44g，1.2mmol)。室温搅拌该反应过夜，部分浓缩，然后添加NaHCO3(饱和)。水性层用EtOAc萃取三次，合并的有机物用MgSO4干燥，过滤，浓缩并通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中95∶5)纯化以生成固态的所需化合物(0.34g)。
N-(2，4-二甲氧基苄基)-7-((3aS，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
在65℃搅拌N-(2-氨基-4-(三氟甲基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酰胺(0.38g，0.50mmol)和乙酸(5mL)过夜。真空去除挥发性物质，用乙醇共沸蒸馏去除残留的水，然后高真空下1小时。所得残余物在NaHCO3(饱和)和DCM间分配。萃取水层(3×)，合并的有机层用MgSO4干燥，过滤，浓缩然后通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中93∶7)纯化以产出灰白色泡沫。
(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
在室温向水(0.5mL)N-(2，4-二甲氧基苄基)-7-((3aS，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.31g，0.42mmol)的混合物添加三氟乙酸(5mL)。使反应进行过夜，然后用三乙基硅烷(0.13mL，0.84mmol)淬灭反应。真空去除挥发性物质，所得残余物在饱和NaHCO3和DCM/MeOH(10∶1)之间分配。更多地用DCM/MeOH(10∶1)萃取水层(3×)，合并的有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩。所得残余物通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中87∶13)纯化以生成灰白色泡沫/胶状所需化合物(0.12g)。针对C27H32F3N7O2MS(ESI+)m/z544.5[M+H]+；针对C27H32F3N7O2MS(ESI-)m/z542.3[M-H]-；HPLC纯度＞85％(保留时间，2.418分钟)1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δH8.078(s，1H)，7.812(s，1H)，7.654-7.634(m，1H)，7.507-7.487(m，1H)，7.229-7.214(m，1H)，6.617-6.608(d，J3.6Hz，1H)，4.361-4.322(m，1H)，3.927-3.887(m，1H)，3.062-3.024(m，0.5H(反式异构体的次甲基))，2.944-2.873(m，2H)，2.758-2.554(m，0.5H(顺式异构体的次甲基))，2.554-2.507(m，1H)，2.447-2.351(m，2H)，2.291-2.263(m，2H)，2.194-2.054(m，6H)，1.960-1.887(m，3H)，1.686-1.480(m，2H)。保留时间：2.418，HPLC条件：AgilentZorbaxExlipseXDB-C18柱，4.6×50mm(1.8um装填)，溶剂A-水(0.1％TFA)，溶剂B-乙腈(0.07％TFA)。6分钟梯度：5～95％B；1分钟暂停；然后再循环。
化合物14：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酰胺
向内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸(460mg，0.77mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(0.44mL，2.6mmol)和4-叔丁基苯-1，2-二胺(0.15g，0.93mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(5mL，60mmol)溶液添加N，N，N′，N′-四甲基-0-(7-氮杂苯并***-1-基}六氟磷酸脲(0.44g，1.2mmol)。室温搅拌该反应过夜，部分浓缩至约2mL，然后添加NaHCO3(饱和)。所述混合物用EtOAc(3×)萃取，合并的有机物用MgSO4干燥并浓缩。通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中95∶5)纯化以产出固体(0.24g)。
7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
在60℃搅拌内含N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酰胺(0.24g，0.32mmol)的乙酸(5mL，90mmol)溶液过夜。真空去除挥发性物质，使余留的残余物在Na2CO3(2N)和DCM之间分配。水层用DCM(3×)萃取，合并的有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩。所得残余物通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中94∶6)纯化以产出固态所需化合物(0.20g)。
(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
在室温向水(0.5mL)和7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.20g，0.28mmol)的混合物添加三氟乙酸(5mL)。使反应进行过夜，然后用三乙基硅烷(0.088mL，0.55mmol)淬灭反应。真空去除挥发性物质，所得残余物在饱和NaHCO3和DCM/MeOH(10∶1)之间分配。用DCM/MeOH(10∶1)更多地萃取水相三次，合并的有机物用MgSO4干燥，过滤，浓缩并通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中87∶13)纯化以生成灰白色泡沫状所需产物(0.060g)。针对C30H41N7O2MS(ESI+)m/z532.3(M+H)+；针对C30H41N7O2MS(ESI-)m/z530.4(M-H)-；HPLC纯度＞94％(保留时间，2.723分钟)。1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δH8.079(s，1H)，7.500(s，1H)，7.418-7.398(m，1H)，7.310-7.307(m，1H)，7.230-7.216(m，1H)，6.619-6.610(m，1H)，4.355-4.316(m，1H)，3.926-3.887(m，1H)，3.088-3.017(m，0.5H(反式异构体的次甲基))，2.879-2.809(m，2H)，2.745-2.685(m，0.5H(顺式异构体的次甲基)，2.532-2.512(m，1H)，2.446-2.373(m，2H)，2.294-2.276(m，2H)，2.202-2.012(m，5H)，1.685-1.603(m，1H)，1.545-1.504(m，1H)，1.383(s，1H)。保留时间：2.723分钟，HPLC条件：AgilentZorbaxExlipseXDB-C18柱，4.6×50mm(1.8μm装填)，溶剂A-水(0.1％TFA)，溶剂B-乙腈(0.07％TFA)6分钟梯度5～95％B；1分钟暂停；然后再循环。
化合物15：(1R，2S，3R，5R)-3-{4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基}-5-{[丙-2-基({4-[5-(三氟甲基)-1H-1，3-苯并二唑-2-基]丁基})氨基]甲基}环戊烷-1，2-二醇
步骤1：7-[(3aS，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-{[丙-2-基({4-[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基]丁基})氨基]甲基}-六氢环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
使内含3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基]甲基}环丁烷-1-醛(243mg，0.59mmol)，7-[(3aS，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-[(丙-2-基氨基)甲基]-六氢环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(170mg，0.49mmol)和MgSO4(710mg，5.90mmol)的DCE(10mL)溶液搅拌15分钟。然后，向所述反应混合物添加STAB(175mg，0.83mmol)，在室温搅拌1h。通过LCMS监测该反应，1h后无胺可见。向反应混合物添加饱和NaHCO3(20mL)然后搅拌5分钟。然后向所述反应混合物添加盐水(10mL)。产物用DCM(2×30mL)萃取，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。通过硅胶柱色谱纯化，用内含7NNH3的MeOH：DCM(1∶99-4∶96)洗脱获得油状所需产物(170mg，47％)；针对C38H54F3N7O3SiMS(ESI+)m/z742.40[M+H]+；HPLC纯度100％(洗脱时间，1.78分钟)；1HNMR(500MHz，氯仿-d)δHppm-0.25-0.11(9H，m)，0.66-1.04(8H，m)，1.17-1.48(5H，m)，1.49-1.61(3H，m)，1.77-2.04(2H，m)，2.19-2.37(5H，m)，2.37-2.51(2H，m)，2.52-2.80(2H，m)，2.81-2.91(1H，m)，2.91-3.22(2H，m)，3.34-3.79(2H，m)，4.29-4.52(1H，m)，4.78-5.12(2H，m)，5.28-5.70(4H，m)，6.34(1H，d，J＝3.63Hz)，6.80-7.16(1H，m)，7.29-7.71(2H，m)，7.71-8.11(1H，m)，8.11-8.46(1H，m)。
步骤2.(1R，2S，3R，5R)-3-{4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基}-5-{[丙-2-基({4-[5-(三氟甲基)-1H-1，3-苯并二唑-2-基]丁基})氨基]甲基}环戊烷-1，2-二醇
向内含7-[(3aS，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-({丙-2-基[(3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基]甲基}环丁基)甲基]氨基}甲基)-六氢环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(170mg，0.23mmol)的MeOH(3mL)溶液缓慢添加12NHCl(3mL)，然后在40℃搅拌2.5h。所述反应通过LCMS监测，2.5h后无起始材料可见。真空浓缩该反应混合物，然后用内含7NNH3的MeOH碱化。然后将该反应混合物蒸发至干。通过硅胶柱色谱纯化，用内含7NNH3的MeOH∶DCM(1∶9)洗脱获得白色固态所需产物(100mg，76％)；针对C29H36F3N7O3MS(ESI+)m/z572.40[M+H]+；HPLC纯度99％(保留时间，2.17分钟)；1HNMR(500MHz，氯仿-d)δHppm0.78-1.19(6H，m)，1.35-1.69(2H，m)，1.80-2.04(1H，m)，2.11-2.87(10H，m)，2.88-3.18(3H，m)，3.79-4.06(1H，m)，4.15-4.47(1H，m)，4.82-5.12(1H，m)，6.43-6.77(1H，m)，7.19(1H，d，J＝3.47Hz)，7.47(1H，d，J＝8.35Hz)，7.63(1H，d，J＝8.51Hz)，7.79(1H，s)，7.95-8.24(1H，m)。
化合物18：(1R，2S，3R，5R)-3-{4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基}-5-({甲基[(3-{[5-(三氟甲基)-1H-1，3-苯并二唑-2-基]甲基}环丁基)甲基]氨基}甲基)环戊烷-1，2-二醇
步骤1：3-[2-(苄氧基)-2-氧代亚乙基]环丁烷-1-羧酸
使内含环丁酮-3-羧酸(5g，43.82mmol)、-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸苄酯(13.58g，52.59mmol)、LiOH(4.20g，23.95mmol)和活性分子筛(25g，粉末形式)的THF(250mL)混合物在氮气下回流加热4小时。使该反应冷却至室温，依次添加EtOAc(100mL)和HCl(1N，100mL)。通过硅藻土过滤该混合物。分离两相，水层用EtOAc(4×50mL)萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩以产出无色油状物。通过SiO2干快速色谱，用Hept∶EtOAc从7∶3至1∶1洗脱获得无色油状所需产物(5.2g，39％)；针对C14H14O4MS(ESI+)m/z269.05[M+Na]+；针对C14H14O4MS(ESI-)m/z245.15[M-H]-；HPLC纯度81％(保留时间，1.85分钟)；1HNMR(250MHz，氯仿-d)δHppm2.95-3.62(5H，m)，4.96-5.31(2H，m)，5.75(1H，t，J＝2.21Hz)，7.27-7.45(5H，m)。
步骤2.2-{3-[甲氧基(甲基)氨基甲酰基]环丁烯}乙酸苄酯
向内含3-[2-(苄氧基)-2-氧代亚乙基]环丁烷-1-羧酸(2.0g，8.12mmol)、N-甲基-吗啉(2.70mL，24.36mmol)的DCM(50mL)冰***液逐滴添加氯甲酸异丁酯(1.70mL，12.99mmol)超过5分钟。另外5分钟后，添加甲氧基(甲基)胺盐酸盐(1.58g，16.24mmol)，所述混合物搅拌过夜同时升温至室温。然后所述反应混合物用DCM(30mL)稀释，用0.1NHCl(50mL)然后饱和NaHCO3(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。通过硅胶柱色谱纯化，用EtOAc∶庚烷从1∶9至3∶7洗脱获得所需产物(1.54g，65％)；针对C16H19NO4MS(ESI+)m/z290.10[M+H]+；HPLC纯度100％(保留时间，1.86分钟)；1HNMR(500MHz，氯仿-d)δHppm2.96(1H，ddd，J＝16.98，8.79，1.81Hz)，3.17-3.30(4H，m)，3.30-3.48(2H，m)，3.51-3.63(1H，m)，3.64-3.75(3H，m)，5.15(2H，s)，5.73(1H，quin，J＝2.25Hz)，7.29-7.42(5H，m)。
步骤3.2-{3-[甲氧基(甲基)氨基甲酰基]环丁基}乙酸
向内含2-{3-[甲氧基(甲基)氨基甲酰基]环亚丁基}乙酸苄酯(1.54g，5.32mmol)的EtOH(20mL)溶液添加炭载钯(10％，0.1g)，然后在室温于氢气气氛下搅拌6h。使该反应混合物过滤通过硅藻土并蒸发至干以生成无色油状物(1.04g，89％)；针对C9H15NO4MS(ESI+)m/z202.00[M+H]+；针对C9H15NO4MS(ESI)-m/z200.05[M-H]-；HPLC纯度92％(保留时间，1.10分钟)；1HNMR(500MHz，MeOD)δHppm1.84-2.08(2H，m)，2.28-2.53(4H，m)，2.56-2.72(1H，m)，3.06-3.22(3H，m)，3.38-3.56(1H，m)，3.68(3H，d，J＝8.04Hz)。
步骤4i.3-({[2-氨基-5-(三氟甲基)苯基]氨基甲酰基}甲基)-N-甲氧基-N-甲基环丁烷-1-羧酰胺
在0℃向内含2-{3-[甲氧基(甲基)氨基甲酰基]环丁基}乙酸、EDC.HCl1.18g，6.20mmol)、HOBt.xH2O(0.77g，5.69mmol)的DCM(20mL)悬液添加TEA(1.49mL，10.70mmol)，搅拌5分钟，然后添加4-(三氟甲基)苯-1，2-二胺(1.04g，10.34mmol)。该混合物在0℃再搅拌20分钟，然后升温至室温。所述反应通过LCMS监测，2小时后用1NHCl(50mL)然后饱和NaHCO3(50mL)洗涤所述反应混合物。用Na2SO4干燥，过滤和蒸发至干。通过硅胶柱色谱纯化，用EtOAc洗脱获得米色固态所需产物(0.83g，44％)；针对C16H20N3O3MS(ESI+)m/z360.00[M+H]+；HPLC纯度90％(保留时间，1.64分钟)；1HNMR(500MHz，MeOD)δHppm2.02-2.16(2H，m)，2.31-2.68(4H，m)，2.69-2.88(1H，m)，3.18(3H，d，J＝4.41Hz)，3.36-3.59(1H，m)，3.65-3.76(3H，m)，6.81-6.97(1H，m)，7.02-7.27(1H，m)，7.28-7.48(1H，m)。
步骤4ii.N-甲氧基-N-甲基-3-{[5-(三氟甲基)-1H-1，3-苯并二唑-2-基]甲基}-环丁烷-1-羧酰胺
使内含3-({[2-氨基-5-(三氟甲基)苯基]氨基甲酰基}甲基)-N-甲氧基-N-甲基环丁烷-1-羧酰胺(0.82g，2.29mmol)的AcOH(10mL)溶液加热至回流(约125℃)同时搅拌2.5h。该反应由LCMS监测。使该反应混合物冷却至室温，然后真空蒸发。使所得残余物溶解于DCM(30mL)然后用饱和NaHCO3(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用MeOH∶DCM(2∶98-5∶95)洗脱获得黄棕色油状物(0.75g，94％)；针对C16H18F3N3O2MS(ESI+)m/z342.10[M+H]+；HPLC纯度97％(保留时间，1.40分钟)；1HNMR(500MHz，MeOD)δHppm1.96-2.17(2H，m)，2.27-2.55(2H，m)，2.66-2.92(1H，m)，2.97-3.15(2H，m)，3.15-3.22(3H，m)，3.32-3.62(1H，m)，3.63-3.73(3H，m)，7.37-7.53(1H，m)，7.53-8.00(2H，m)。
步骤5.N-甲氧基-N-甲基-3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基]甲基}环丁烷-1-羧酰胺
在室温向内含N-甲氧基-N-甲基-3-{[5-(三氟甲基)-1H-1，3-苯并二唑-2-基]甲基}环丁烷-1-羧酰胺(754mg，2.21mmol)的DMF(10mL)溶液依次添加K2CO3(381mg，2.76mmol)和SEM-Cl(430μl，2.43mmol)，并搅拌过夜。由LCMS监测该反应。所述反应混合物用水(3mL)、盐水(30mL)稀释，然后用EtOAc(2×50mL)萃取。用Na2SO4干燥，过滤和蒸发以获得澄清橙色油状物。通过硅胶柱色谱纯化，用EtOAc∶庚烷(1∶1-1)洗脱获得单一区域异构体形式的米色油状所需产物(217mg，21％)；针对C22H32F3N3O3SiMS(ESI+)m/z472.55[M+H]+；HPLC纯度99％(保留时间，2.37分钟)；1HNMR(250MHz，氯仿-d)δHppm-0.31-0.22(9H，m)，0.83-1.00(2H，m)，2.03-2.25(2H，m)，2.30-2.74(2H，m)，2.85-3.14(3H，m)，3.18(3H，s)，3.32-3.60(3H，m)，3.61-3.72(3H，m)，5.52(2H，s)，7.51(1H，dd，J＝8.38，1.22Hz)，7.70(1H，s)，7.79(1H，d，J＝8.53Hz)以及以区域异构体混合物形式(280mg，27％)；C22H32F3N3O3Sim/z472.55[M+H]+；HPLC纯度72％和21％(保留时间2.39&2.36分钟)；1HNMR(250MHz，氯仿-d)δppm-0.08--0.01(9H，m)，0.81-0.99(2H，m)，1.94-2.24(2H，m)，2.38-2.74(2H，m)，2.90-3.14(3H，m)，3.14-3.22(3H，m)，3.33-3.63(3H，m)，3.63-3.70(3H，m)，5.40-5.64(2H，m)，7.40-7.74(2H，m)，7.75-8.14(1H，m)。
步骤6.3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基]甲基}环丁烷-1-醛
在-10℃向内含N-甲氧基-N-甲基-3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基]甲基}环丁烷-1-羧酰胺的THF溶液中逐滴添加DIBAL(0.69mL，0.69mmol，在THF中为1M)，同时搅拌。使该反应在-10℃持续3小时。将该反应混合物倾倒至饱和罗谢尔盐水溶液(20mL)上，用Et2O(50mL)稀释并搅拌30分钟。然后，分离该混合物，有机层用罗谢尔盐(30mL)、饱和NaHCO3(30mL)和盐水(30mL)洗涤。用Na2SO4干燥，过滤并蒸发以获得无色胶状物(190mg，87％)；针对C20H27F3N2O2SiMS(ESI+)m/z413.6[M+H]+；HPLC纯度87％(保留时间，2.25分钟)；1HNMR(500MHz，氯仿-d)δHppm-0.10-0.09(9H，m)，0.88-1.00(4H，m)，1.63-1.97(2H，m)，2.07-2.23(2H，m)，2.24-2.37(0H，m)，2.37-2.42(1H，m)，2.43-2.66(2H，m)，2.93-3.34(4H，m)，5.49-5.61(2H，m)，7.16-7.31(2H，m)，7.32-7.32(2H，m)，7.49-7.61(1H，m)，7.73(1H，s)，7.83(1H，d，J＝8.35Hz)。
步骤7.7-[(3aS，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-({[(3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基]甲基}环丁基)甲基]氨基}甲基)-六氢环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
使内含3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基]甲基}环丁烷-1-醛(190mg，0.46mmol)、(1R，2S，3R，5R)-3-{4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基}-5-(氨基甲基)环戊烷-1，2-二醇(140mg，0.46mmol)和MgSO4(554mg，4.61mmol)的DCE(10mL)溶液搅拌15分钟。然后，向所述反应混合物添加STAB(137mg，0.645mmol)，然后搅拌。通过LCMS监测该反应，此后无胺出现。向反应混合物添加饱和NaHCO3(20mL)然后搅拌5分钟。向该反应混合物添加盐水(10mL)，然后用DCM(2×30mL)萃取产物，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。通过硅胶柱色谱纯化，用内含7NNH3的MeOH∶DCM(1∶99-5∶95)洗脱获得粉色泡沫状固态的所需产物。合并混合的馏分，在制备型TLC板上纯化，用内含7NNH3的MeOH∶DCM(2×4∶96)洗脱获得总共170mg，53％。针对C35H48F3N7O3SiMS(ESI+)m/z700[M+H]+；HPLC纯度100％(保留时间，1.79分钟)；1HNMR(250MHz，氯仿-dδHppm-0.26-0.16(9H，m)，0.72-0.97(2H，m)，1.30(3H，s)，1.38-1.60(5H，m)，1.91-2.59(8H，m)，2.60-3.27(6H，m)，3.35-3.70(2H，m)，4.52(1H，t，J＝5.94Hz)，4.78-5.20(4H，m)，5.39-5.66(2H，m)，6.36(1H，d，J＝3.65Hz)，7.03(1H，d，J＝3.65Hz)，7.42-7.59(1H，m)，7.69(1H，s)，7.79(1H，d，J＝8.53Hz)，8.32(1H，s)。
步骤8.7-[(3aS，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-({甲基[(3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基]甲基}环丁基)甲基]氨基}甲基)-六氢环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
向内含7-[(3aS，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-({[(3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基]甲基}环丁基)甲基]氨基}甲基)-六氢环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺的MeOH(5mL)和THF(5mL)溶液添加甲醛(36μl，0．49mmol，37％(aq))，然后在室温搅拌该反应30分钟。NaCNBH3(18mg，0.29mmol)分成几份添加，在室温再搅拌该反应2小时，然后LCMS显示反应完全。真空下浓缩该反应混合物，然后使所得残余物在水(20mL)和DCM(20mL)之间分配，分离各层。水层用DCM(2×20mL)萃取，然后用Na2SO4干燥合并的有机层，并浓缩。通过制备型TLC纯化，用内含7NNH3的MeOH∶DCM(5∶95)洗脱获得无色油状的所需产物(114mg，66％)；针对C36H50F3N7O3SiMS(ESI+)m/z714.45[M+H]+；HPLC纯度100％(保留时间，1.77分钟)；1HNMR(500MHz，氯仿-d)δHppm-0.14-0.05(9H，m)，0.85-0.99(2H，m)，1.18-1.35(3H，m)，1.37-1.53(2H，m)，1.52-1.64(3H，m)，1.89-2.15(3H，m)，2.18-2.28(2H，m)，2.29-2.70(6H，m)，2.72-2.96(1H，m)，2.97-3.20(2H，m)，3.48(3H，s)，3.50-3.58(2H，m)，4.37-4.58(1H，m)，4.85-5.05(2H，m)，5.11-5.38(2H，m)，5.41-5.57(2H，m)，6.35(1H，d，J＝3.63Hz)，6.84-7.19(1H，m)，7.50(1H，d，J＝8.35Hz)，7.68(1H，s)，7.78(1H，d，J＝8.35Hz)，8.13-8.52(1H，m)。
步骤9.(1R，2S，3R，5R)-3-{4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基}-5-({甲基[(3-{[5-(三氟甲基)-1H-1，3-苯并二唑-2-基]甲基}环丁基)甲基]氨基}甲基)环戊烷-1，2-二醇
在0℃向7-[(3aS，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-({甲基[(3-{[5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基]甲基}环丁基)甲基]氨基}甲基)-六氢环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺添加内含HCl的MeOH(1∶1，3mL)溶液，并搅拌。然后立刻在40℃搅拌该混合物4h(由LCMS监测反应)。所述反应另持续1h。LCMS仍显示30％缩醛去保护的SM。向所述反应混合物另外添加1mLHCl(36％水性)并在40℃另持续1h。然后，真空蒸发所述反应混合物。使所得残余物溶解于DCM(100mL)+MeOH(1mL)中，然后用饱和NaHCO3(2×50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。通过制备型TLC纯化，用内含7NNH3的MeOH∶DCM(1∶9)洗脱；针对C27H32F3N7O2MS(ESI+)m/z544[M+H]+；HPLC纯度96％(保留时间，2.03分钟)；1HNMR(500MHz，MeOD)δHppm1.47-1.58(1H，m)，1.58-1.69(1H，m)，1.87-2.12(1H，m)，2.12-2.54(10H，m)，2.53-2.91(3H，m)，2.93-3.15(2H，m)，3.88-4.08(1H，m)，4.32(1H，dd，J＝7.57，6.15Hz)，4.88-5.01(1H，m)，6.59(1H，d，J＝3.63Hz)，7.20(1H，d，J＝3.63Hz)，7.42-7.53(1H，m)，7.63(1H，d，J＝8.20Hz)，7.79(1H，s)，7.95-8.22(1H，m)。
化合物19：7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸(490mg，0.79mmol)和4-叔丁基苯-1，2-二胺(155mg，0.946mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(8.1mL)溶液用N，N-二异丙基乙基胺(0.453mL，2.60mmol)逐滴处理，然后用一份N，N，N′，N′-四甲基-0-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(449mg，1.18mmol)处理。反应混合物在室温搅拌过夜。所述反应混合物高真空下浓缩，使所得残余物在50mLEtOAc和50mL1/1H2O/饱和NaHCO3之间分配。水相用30mLEtOAc萃取，合并的有机相用分成几份的30mLH2O和盐水洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩以获得玻璃状/硬泡沫状物。粗制材料通过快速色谱(SiO2，用内含4％7NNNH3的CH3OH/CH2Cl2)纯化以获得酰胺区域异构体混合物形式的所需中间体(400mg)。在65℃加热内含中间体(0.40g)的乙酸(15mL)溶液2.5h，使该反应混合物冷却并置于高真空下以去除乙酸。所得残余物收集在60mLCH2Cl2中并用分成几份的40mL饱和NaHCO3和2％Na2CO3溶液洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩以产出玻璃状/硬泡沫状物。将该材料置于高真空下并直接用于下一步骤(380mg)。
(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
使7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(390mg，0.52mmol)溶解于己在冰浴中于0℃预冷的三氟乙酸(7.2mL)和水(0.8mL)的混合物中。该溶液在0℃搅拌30分钟，然后升温至室温。室温2.5后，使所得残余物收集在15mLMeOH中并浓缩。该处理重复两次，将所得残余物置于高真空下。所得材料收集在15mLMeOH中(生成浆状物)，然后用500mgK2CO3和8滴水处理。使该混合物搅拌1小时，该时间过程中发现所述溶液呈碱性。使该混合物通过细玻璃料过滤，所得固体用10mLMeOH洗涤，浓缩所得滤液以产出灰白色固体。使该材料留在高真空中过夜。所得粗制材料通过快速色谱(SiO2用内含8-10％7NNH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱)纯化以获得玻璃状/硬泡沫(0.22g)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.06(s，1H)，7.48(br.s.，1H)，7.39(m，1H)，7.27(m，1H)，7.20(d，J＝3.52Hz，1H)，6.60(m，1H)，4.32(t，J＝6.43Hz，1H)，3.93(t，J＝5.29Hz，1H)，3.54(m，0.2H)，3.11(t，J＝9.33Hz，1H)，3.02(m，1H)，2.82(m，2H)，2.66(dd，J＝13.68，8.09Hz，1H)，2.46(m，1H)，2.36(m，1H)，2.23(m，3H)，2.05(m，1H)，1.91(m，3H)，1.59(m，3H)，1.36(s，9H)，1.02(m，6H)。
化合物20：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸(78.5mg，0.126mmol)和4-氯-5-(三氟甲基)苯-1，2-二胺(31.9mg，0.151mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(1.3mL)溶液用N，N-二异丙基乙基胺(72.5ul，0.416mmol)逐滴处理，然后用一份N，N，N′，N′-四甲基-0-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(72.0mg，0.189mmol)处理。该反应混合物在室温搅拌7.5h。将该反应混合物置于冰箱内过夜。在高真空下浓缩该反应混合物，使所得残留物在20mLEtOAc和20mL1/1H2O/饱和NaHCO3之间分配。水相用10mLEtOAc萃取，合并的有机相用分成几份的10mLH2O和盐水洗涤。用Na2SO4干燥有机层，过滤并浓缩。粗制材料通过快速色谱(SiO2，用内含3％7NNH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱)纯化以获得玻璃状/硬泡沫状所需中间体(区域异构的酰胺和顺式/反式非对映异构体，87mg)。所述中间体(0.087g)收集在乙酸(4.5mL，)中，在65℃加热6h，冷却至室温然后在室温搅拌48小时。该反应在65℃加热8小时，然后在室温过夜，然后在65℃另加热6.5小时。使所述混合物冷却然后置于高真空下以去除乙酸。所得残余物收集在15mLCH2Cl2中并用分成几份的10mL饱和NaHCO3和2％Na2CO3溶液洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩以产出玻璃状/硬泡沫状物。将该材料置于高真空中过夜。所得粗制材料通过制备型TLC纯化，在20cm×20cm×1.0mm制备型TLC板上用内含4％7NNH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱。分离产物条带，产出白色固态产物(48mg)。
(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
使7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(6-氯-5-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(525mg，0.683mmol)溶于己在冰浴中于0℃预冷的三氟乙酸(9mL)和水(1mL)的混合物中。所述溶液在0℃搅拌30分钟，然后升温至室温。室温下4h后，浓缩该混合物。所得残余物收集在20mLMeOH中并浓缩。该过程重复两次，将所得残余物置于高真空下。所得材料收集在15mLMeOH中(生成浆状物)，然后用500mgK2CO3和15滴水处理。使该混合物搅拌1小时，该时间过程中发现所述溶液呈碱性。使该混合物通过细玻璃料过滤，所得固体用10mLMeOH洗涤，浓缩所得滤液以产出灰白色固体。使该材料留在高真空中过夜。所得粗制材料通过快速色谱(SiO2用内含12％7NNH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱)纯化以获得无色玻璃状/硬泡沫。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.06(s，1H)，7.89(d，J＝2.07Hz，1H)，7.69(d，J＝2.28Hz，1H)，7.21(dd，J＝3.42，1.76Hz，1H)，6.59(d，J＝3.52Hz，1H)，4.33(t，J＝6.84Hz，1H)，3.89(q，J＝5.25Hz，1H)，3.03(m，0.5H)，2.89(m，2H)，2.70(m，0.5H)，2.49(m，1H)，2.40(m，2H)，2.27(br.s.，2H)，2.16(d，J＝7.26Hz，4H)，2.06(m，2H)，1.91(m，2H)，1.62(m，1H)，1.52(m，1H)。
化合物21：(1R，2S，3R，5R)-3-{4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基}-5-({[(3-{[6-氯-5-(三氟甲基)-1H-1，3-苯并二唑-2-基]甲基}环丁基)甲基](丙-2-基)氨基}甲基)环戊烷-1，2-二醇
步骤1：7-[(3aS，4R，6R，6aR)-6-({[(3-{[6-氯-5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基]甲基}环丁基)甲基](丙-2-基)氨基}甲基)-2，2-二甲基-六氢环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
内含3-{[6-氯-5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基]甲基}环丁烷-1-醛(223mg，0.50mmol)、7-[(3aS，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-[(丙-2-基氨基)甲基]-六氢环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(172mg，0.50mmol)和MgSO4(600mg，5.00mmol)的DCE(10mL)溶液搅拌15分钟。然后，向所述反应混合物添加STAB(148mg，0.70mmol)，在室温搅拌1h。通过LCMS监测该反应，2.5h后无胺可见。向反应混合物添加饱和NaHCO3(20mL)然后搅拌5分钟。然后向所述反应混合物添加盐水(20mL)。产物用DCM(2×30mL)萃取，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。通过制备型HPLC纯化获得白色固态所需产物(174mg，45％)；针对C38H53ClF3N7O3SiMS(ESI+)m/z776.30[M+H]+；HPLC纯度100％(保留时间，1.68分钟)；1HNMR(500MHz，MeOD)δHppm-0.25-0.11(9H，m)，0.90(2H，td，J＝7.88，3.47Hz)，1.30(3H，s)，1.37(6H，t，J＝7.49Hz)，1.55(3H，s)，1.63-1.84(1H，m)，1.99-2.37(2H，m)，2.37-3.03(6H，m)，3.04-3.28(3H，m)，3.34-3.50(1H，m)，3.61(2H，td，J＝7.92，2.29Hz)，3.79(1H，br.s.)，4.68(1H，t，J＝6.70Hz)，4.95-5.27(2H，m)，5.55-5.81(1H，m)，6.88(1H，d，J＝3.63Hz)，7.06-7.62(2H，m)，7.61-7.94(1H，m)，7.94-8.16(1H，m)，8.22(1H，s)。
步骤2.(1R，2S，3R，5R)-3-{4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基}-5-({[(3-{[6-氯-5-(三氟甲基)-1H-1，3-苯并二唑-2-基]甲基}环丁基)甲基](丙-2-基)氨基}甲基)环戊烷-1，2-二醇
向内含7-[(3aS，4R，6R，6aR)-6-({[(3-{[6-氯-5-(三氟甲基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基]甲基}环丁基)甲基](丙-2-基)氨基}甲基)-2，2-二甲基-六氢环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(174mg，0.22mmol)的MeOH(1.5mL)溶液缓慢添加12NHCl(1.5mL)，然后在40℃搅拌6h。通过LCMS监测该反应，2.5h后无起始材料可见。真空浓缩该反应混合物，然后用内含7NNH3的MeOH(5mL)碱化。然后将该反应混合物蒸发至干。通过硅胶柱色谱纯化，用内含7NNH3的MeOH∶DCM(1∶9)洗脱获得白色固态所需产物(36mg，27％)；针对C29H35ClF3N7O2MS(ESI+)m/z606.30[M+H]+；HPLC纯度100％(保留时间，2.59分钟)；1HNMR(500MHz，MeOD)δHppm0.93-1.09(6H，m)，1.41-1.64(2H，m)，1.76-2.06(1H，m)，2.15-2.65(9H，m)，2.65-2.88(1H，m)，2.91-3.13(3H，m)，3.80-4.09(1H，m)，4.19-4.46(1H，m)，4.88-4.94(1H，m)，6.46-6.77(1H，m)，7.19(1H，d，J＝3.63Hz)，7.69(1H，s)，7.89(1H，s)，8.06(1H，s)。
化合物22：(1R，2S，3R，5R)-3-{4-氨基-7H-比咯并[2，3-d]嘧啶-7-基}-5-{[({3-[(5-叔丁基-1H-1，3-苯并二唑-2-基)甲基]环丁基}甲基)(丙-2-基)氨基]甲基}环戊烷-1，2-二醇
第一阶段：3-{[(2-氨基-4-叔丁基苯基)氨基甲酰基]甲基}-N-甲氧基-N-甲基环丁烷-1-羧酰胺
在0℃向内含2-{3-[甲氧基(甲基)氨基甲酰基]环丁基}乙酸(3g，14.91mmol)、4-tBu亚苯基二胺(2.69g，16.4mmol)和(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-六氟磷酸碳鎓(7.02g，16.4mmol)的二氯甲烷(60mL)悬液添加N，N-二异丙基乙基胺(5.19mL，29.82mmol)，搅拌20分钟，然后使其升温至室温。使该反应在室温保留4h。浓缩该反应混合物，使所得残余物在EtOAc(60mL)中重新溶解。所述溶液用水(3×60mL)，然后盐水(60mL)洗涤，干燥(MgSO4)并在减压下浓缩。粗制材料通过干快速色谱纯化，用100％EtOAc洗脱以获得棕色油状标题化合物(3.74g，46％)：针对C19H29N3O3MS(ESI+)m/z348.5[M+H]+；LC纯度26％和44％(UV)，18％和68％(ELS)，(保留时间，1.65和1.71分钟)。
第2阶段：3-[(5-叔丁基-1H-1，3-苯并二唑-2-基)甲基]-N-甲氧基-N-甲基环丁烷-1-羧酰胺
使内含3-{[(2-氨基-4-叔丁基苯基)氨基甲酰基]甲基}-N-甲氧基-N-甲基环丁烷-1-羧酰胺(70％，2.62g，5.28mmol)的乙酸(25mL)的搅拌后溶液加热至回流1h。在减压下浓缩该反应混合物，所得残余物在饱和NaHCO3(液)(25mL)和EtOAc(25mL)之间分配，然后分离各层。水层用EtOAc(2×25mL)萃取，合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩。粗制材料通过二氧化硅快速柱层析纯化，用内含1-10％2MNH3在MeOH中的DCM洗脱以获得黄色胶状的标题化合物(2.02g，93％)：针对C19H27N3O2MS(ESI+)m/z330.5[M+H]+；LC纯度80％(UV)，100％(ELS)，(保留时间，1.51分钟)；1HNMR(500MHz，氯仿-d)δHppm7.56(br.s.，1H)，7.48(d，J＝8.5Hz，1H)，7.30(dd，J＝8.5，1.7Hz，1H)，3.80-3.90(m，1H)，3.65(s，3H)，3.47-3.57(m，1H)，3.20(s，3H)，2.94-3.13(m，2H)，2.88(dt，J＝16.1，8.1Hz，1H)，2.32-2.60(m，2H)，2.01-2.17(m，2H)，1.38(s，9H)。
第3阶段：3-[(5-叔丁基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基)甲基]-N-甲氧基-N-甲基环丁烷-1-羧酰胺
在N2下向内含3-[(5-叔丁基-1H-1，3-苯并二唑-2-基)甲基]-N-甲氧基-N-甲基环丁烷-1-羧酰胺(80％，2.02g，4.91mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(40mL)溶液添加碳酸钾(1.36g，9.81mmol)，该反应搅拌1h。缓慢添加2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(1.31mL，7.36mmol)，搅拌保持20h。减压下过滤该反应混合物并浓缩。所得残余物收集在EtOAc(50mL)中，然后依次用水(3×50mL)和盐水(50mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)并浓缩。粗制材料通过二氧化硅快速色谱纯化，用内含50-100％EtOAc的庚烷洗脱以获得无色胶状标题化合物(1.21g，54％)：针对C25H41N3O3SiMS(ESI+)m/z461.0[M+H]+；LC纯度97％(UV)，100％(ELS)，(保留时间，1.98分钟)；1HNMR(500MHz，氯仿-d)δppm7.58-7.89(m，1H)，7.33(s，2H)，5.39-5.53(m，2H)，3.65(s，3H)，3.49-3.58(m，2H)，3.41(br.s.，1H)，3.10-3.23(m，3H)，3.03(s，3H)，2.32-2.63(m，2H)，2.00-2.18(m，2H)，1.32-1.45(m，9H)，0.91(td，J＝8.1，4.9Hz，2H)，-0.13-0.07(m，9H)。
第4阶段：3-[(5-叔丁基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基)甲基]环丁烷-1-醛
在N2下于-10℃向内含3-[(5-叔丁基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基)甲基]-N-甲氧基-N-甲基环丁烷-1-羧酰胺(0.61g，1.32mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液逐滴添加内含1M二异丁基氢化铝溶液的甲苯(3.29mL)。在该温度搅拌该反应2.5h，然后通过添加甲醇(2mL)淬灭反应并搅拌5分钟。将所述溶液倾倒至饱和罗谢尔盐水溶液(20mL)上，用Et2O(30mL)稀释并搅拌30分钟。然后，分离该混合物，有机层用罗谢尔盐(30mL)、饱和NaHCO3(30mL)和盐水(30mL)洗涤。使其干燥(MgSO4)并浓缩以获得无色胶状的标题化合物(0.69g，130％)，其以粗制物形式直接用于下一反应。
第5阶段：7-[(3aS，4R，6R，6aR)-6-{[({3-[(5-叔丁基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基)甲基]环丁基}甲基)(丙-2-基)氨基]甲基}-2，2-二甲基-六氢环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]-7H-比咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
使3-[(5-叔丁基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基)甲基]环丁烷-1-醛(282.3mg，0.7mmol)，7-[(3aS，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-[(丙-2-基氨基)甲基]-六氢环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(243.41mg，0.7mmol)和硫酸镁(127.22mg，1.06mmol)在1，2-二氯乙烷(10mL)中搅拌15分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(179.21mg，0.85mmol)，该反应搅拌过夜。通过添加饱和Na2CO3(10mL)淬灭该反应，用DCM(3×10mL)萃取该溶液。使合并的有机层干燥(MgSO4)并浓缩。粗制材料通过质谱导向的制备型HPLC(酸化方法)纯化。合并所述馏分后，添加小量内含7MNH3的MeOH以碱化该溶液。浓缩后，使所得残余物在水(5mL)和DCM(5mL)之间分配，然后分离各层。所得水层用DCM(2×3mL)萃取，使合并的有机层干燥(MgSO4)并浓缩以获得无色胶状的标题化合物(58.7mg，11％)：针对C41H63N7O3SiMS(ESI+)m/z730.2[M+H]+；LC纯度95％(UV)，100％(ELS)，(保留时间，1.65分钟)；1HNMR(500MHz，氯仿-d)δH8.30(s，1H)，7.75(s，1H)，7.32(s，2H)，7.04(d，J＝3.6Hz，1H)，6.37(d，J＝3.6Hz，1H)，5.40-5.50(m，2H)，5.24(br.s.，2H)，4.89-5.04(m，2H)，4.45(d，J＝5.2Hz，1H)，3.50(s，3H)，2.11-3.09(m，13H)，2.01(s，6H)，1.34-1.49(m，6H)，1.29(s，3H)，0.85-1.02(m，8H)，-0.11-0.05(m，9H)。
第6阶段：(1R，2S，3R，5R)-3-{4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基}-5-{[({3-[(5-叔丁基-1H-1，3-苯并二唑-2-基)甲基]环丁基}甲基)(丙-2-基)氨基]甲基}环戊烷-1，2-二醇
使7-[(3aS，4R，6R，6aR)-6-{[({3-[(5-叔丁基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-1，3-苯并二唑-2-基)甲基]环丁基}甲基)(丙-2-基)氨基]甲基}-2，2-二甲基-六氢环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(58.7mg，0.08mmol)溶解于浓缩的HCl溶液(5mL)和甲醇(5mL)中，然后至40℃加热2h。在减压下浓缩该反应混合物，所得残余物在饱和NaHCO3(液)(10mL)和EtOAc(10mL)之间分配。分离各层，所得水层用EtOAc(2×10mL)萃取，然后，合并的有机层干燥(MgSO4)并浓缩。粗制材料通过制备型TLC纯化，用内含10％2MNH3在MeOH内的DCM洗脱以获得无色胶状的标题化合物(24.7mg，55％)：针对C32H45N7O2MS(ESI+)m/z560.4[M+H]+；LC纯度100％(UV)，(保留时间，5.10分钟)；1HNMR(500MHz，丙酮)δH8.12(s，1H)，7.30-7.60(m，2H)，7.13-7.28(m，2H)，6.54(d，J＝3.5Hz，1H)，6.33(br.s.，1H)，4.85-5.07(m，1H)，4.36(t，J＝6.2Hz，1H)，4.08(t，J＝5.2Hz，1H)，3.01(d，J＝7.7Hz，1H)，2.93(d，J＝7.4Hz，2H)，2.78(br.s.，2H)，2.59-2.73(m，2H)，2.15-2.56(m，7H)，1.68(dt，J＝12.4，9.7Hz，1H)，1.44-1.62(m，2H)，1.35(s，9H)，0.90-1.07(m，6H)。
化合物23：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-比咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5，6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5，6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸(450mg，0.76mmol)和4，5-二氯-1，2-苯二胺(161mg，0.910mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(7.8mL)溶液用N，N-二异丙基乙基胺(0.44mL，2.5mmol)逐滴处理，然后用一份N，N，N′，N′-四甲基-0-(7-氮杂苯并***-1-基}六氟磷酸脲(432mg，1.14mmol)处理。室温下搅拌该反应混合物5.5小时。在高真空下浓缩该反应混合物，使所得残留物在50mLEtOAc和50mL1/1H2O/饱和NaHCO3之间分配。水相用30mLEtOAc萃取，合并的有机相用分成几份的30mLH2O和盐水洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩至泡沫状。粗制材料通过快速色谱(SiO2，用内含5％7NNH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱)纯化以获得中间体酰胺(酰胺区域异构体的混合物形式，520mg)。
内含中间体酰胺(0.52g)的乙酸(16mL)在65℃加热5.5h，所述反应混合物冷却后置于高真空下以去除乙酸。所得残余物收集在70mLCH2Cl2中并用分成几份的50mL饱和NaHCO3和2％Na2CO3溶液洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩至产出泡沫状物。使所得材料置于高真空下过夜，所得残余物通过快速色谱(SiO2，用内含4％7NHNH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱，第二柱用2-6％EtOH饱和w/NH3/CH2Cl2洗脱)纯化两次以获得所需化合物(377mg)，1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.10(s，1H)，7.63(d，J＝1.66Hz，2H)，7.21(m，1H)，7.13(d，J＝8.29Hz，1H)，6.62(d，J＝3.32Hz，1H)，6.54(d，J＝2.07Hz，1H)，6.43(dd，J＝8.40，2.38Hz，1H)，4.96(m，2H)，4.65(s，2H)，4.51(m，1H)，3.84(d，J＝1.04Hz，3H)，3.76(s，3H)，2.99(m，0.5H)，2.83(m，2H)，2.66(m，0.5H)，2.38(m，4H)，2.22(m，1H)，2.15(d，J＝7.67Hz，3H)，2.08(m，2H)，2.00(m，2H)，1.90(m，1H)，1.84(m，1H)，1.53(s，3H)，1.46(m，1H)，1.29(s，3H)。
(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5，6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
使7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5，6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(377mg，0.513mmol)溶解于已在冰浴中于0℃预冷的三氟乙酸(7.1mL)和水(0.8mL)的混合物中。所述溶液在0℃搅拌30分钟，然后升温至室温并在室温下持续搅拌3h。浓缩所述悬液，所得残余物收集在15mLMeOH中并浓缩。该过程重复两次，将所得残余物置于高真空下。所得材料收集在10mLMeOH中(生成浆状物)，然后用500mgK2CO3和0.2mL水处理。使该混合物搅拌1.5小时，该时间过程中该溶液的pH约为9。使该混合物通过细玻璃料过滤，所得固体用20mLMeOH洗涤，浓缩所得滤液以产出灰白色固体。所得材料留在高真空下过夜，然后通过快速色谱(SiO2，用内含10-12％7NNH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱)纯化以获得所需产物(227mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.06(s，1H)，7.63(m，2H)，7.21(dd，J＝3.63，2.38Hz，1H)，6.59(d，J＝3.52Hz，1H)，4.32(m，1H)，3.88(m，1H)，3.01(m，0.5H)，2.84(m，2H)，2.70(m，0.5H)，2.51(m，1H)，2.40(m，2H)，2.26(m，2H)，2.17(d，J＝7.05Hz，3H)，2.11(m，2H)，2.02(m，1H)，1.90(m，3H)，1.62(m，1H)，1.49(m，1H)。
化合物24：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
N-(2-氨基-4-(三氟甲氧基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酰胺
向内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸(1.25g，2.10mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(1.2mL，6.9mmol)和4-(三氟甲氧基)苯-1，2-二胺(0.48g，2.5mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液添加N，N，N′，N′-四甲基-0-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(1.2g，3.2mmol)。室温搅拌该混合物过夜，部分浓缩至约2mL，然后添加NaHCO3(饱和)。所述混合物用EtOAc(3×)萃取，合并的有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩。所得残余物通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中95∶5)纯化以产出油状所需化合物(2g)。
N-(2，4-二甲氧基苄基)-7-((3aS，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
使内含N-(2-氨基-4-(三氟甲氧基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酰胺(2g，2mmol)的乙酸(4mL)溶液在60℃搅拌过夜。真空去除挥发性物质，余留的残余物通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中92∶8)纯化以获得固态所需化合物(1g)。
(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
在室温下向水(2mL)和N-(2，4-二甲氧基苄基)-7-((3aS，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(1g，1mmol)的混合物添加三氟乙酸(20mL)。
搅拌该反应1.5小时，然后用三乙基硅烷(0.43mL，2.7mmol)淬灭该反应。真空去除挥发性物质，余留的残余物通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中87∶13)纯化两次以获得泡沫状所需产物(0.28g)。针对C27H32F3N7O3MS(ESI+)m/z560.2[M+H]+；针对C27H32F3N7O3MS(ESI-)m/z558.2[M-H]-；HPLC纯度＞93％(保留时间，2.504分钟)1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δH8.081(s，1H)，7.551-7.530(m，1H)，7.414(s，1H)，7.230-7.216(m，1H)，7.156-7.134m，1H)，6.621-6.613(d，J3.2Hz，1H)，4.362-4.326(m，1H)，3.952-3.915(m，1H)，3.237-3.182(m，0.5H(反式异构体的次甲基)，2.927-2.857(m，2.5H(包含顺式异构体的次甲基))，2.697-2.646(m，1H)，2.590-2.515(m，1H)，2.479-2.408(m，1H)，2.343-2.305(m，5H)，2.210-2.174(m，2H)，2.086-1.949(m，4H)，1.721-1.545(m，2H)。保留时间：2.52分钟1HPLC条件：AgilentZorbaxExlipseXDB-C18柱，4.6×50mm(1.8μm装填)，溶剂A-水(0.1％TFA)，溶剂B-乙腈(0.07％TFA)6分钟梯度从5至95％B；1分钟暂停；然后再循环。
化合物25：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(乙基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(乙基)氨基)环丁基)丙酰胺
向内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(乙基)氨基)环丁基)丙酸(0.89g，1.5mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(0.84mL，4.8mmol)和4-叔丁基苯-1，2-二胺(0.29g，1.8mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(9mL)溶液添加N，N，N′，N′-四甲基-0-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(0.84g，2.2mmol)。室温搅拌该反应过夜，部分浓缩至约2mL，然后添加NaHCO3(饱和)。所述混合物用EtOAc(3×)萃取，合并的有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩。所得残余物通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中94∶6)纯化以产出无色固态所需化合物(0.88g)。保留时间C：3.363分钟。
7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(乙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
使内含N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(乙基)氨基)环丁基)丙酰胺(0.88g，1.2mmol)的乙酸(3mL)溶液在60℃搅拌过夜，真空去除挥发性物质，剩余残留物通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中93∶7)纯化以生成泡沫状的所需化合物(0.85g)。
(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(乙基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
在室温下向水(2mL)和7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(乙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.85g，1.2mmol)的混合物添加三氟乙酸(20mL)。使该反应进行1小时，此时添加三乙基硅烷(0.37mL，2.3mmol)。真空去除挥发性物质，所得残余物收集在MeOH(3mL)中，添加1mLK2CO3(饱和)，所述反应在室温搅拌1小时。使该混合物在H2O和DCM/MeOH(9∶1)之间分配。萃取水层(3×)，合并的有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩。所得残余物通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中90∶10)纯化以产出灰白色泡沫状所需产物(0.150g)。针对C31H43N7O2MS(ESI+)m/z546.3[M+H]+；针对C31H43N7O2MS(ESI-)m/z544.3[M-H]-；HPLC纯度＞91％(保留时间，2.734分钟)1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δH8.081(s，1H)，7.493(s，1H)，7.414-7.393(m，1H)，7.291-7.266(m，1H)，7.215-7.202(m，1H)，6.619-6.609(d，J4.0Hz，1H)，4.345-4.312(m，1H)，3.923-3.885(m，1H)，2.994-2.915(m，0.5H(反式异构体的次甲基))，2.860-2.793(m，2H)，2.701-2.578(m，3H)，2.501-2.380(m，2H)，2.259-2.234(m，2H)，2.109-2.008(m，3H)，1.920-1.880(m，3H)，1.658-1.499(m，2H)，1.364(s，9H)，1.036-0.991(m，3H)。保留时间：2.734分钟。HPLC条件：AgilentZorbaxExlipseXDB-C18柱，4.6×50mm(1.8μm装填)，溶剂A-水(0.1％TFA)，溶剂B-乙腈(0.07％TFA)。6分钟梯度从5至95％B；1分钟暂停；然后再循环。
化合物26：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
N-(2-氨基-4-溴苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酰胺
向内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸(1.25g，2.10mmol)和[N，N-二异丙基乙基胺(1.21mL，6.95mmol)和4-溴苯-1，2-二胺(0.472g，2.53mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(13.0mL)溶液添加N，N，N′，N′-四甲基-0-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(1.20g，3.16mmol)。室温搅拌该反应过夜，部分浓缩至约2mL，然后添加NaHCO3(饱和)。所述混合物用EtOAc(3×)萃取，合并的有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩。所得残余物通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中95∶5)纯化以生成固态所需化合物(1.2g)。
7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
使内含N-(2-氨基-4-溴苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酰胺(1.2g，1.6mmol)的乙酸(4mL，70mmol)溶液在60℃搅拌过夜，真空去除挥发性物质，剩余残留物直接通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中91∶9)纯化以生成泡沫状物(0.9g)。
(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
在室温下向水(2mL)和7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.9g，1mmol)的混合物添加三氟乙酸(20mL)。使该反应混合物搅拌1小时，添加三乙基硅烷(0.39mL，2.4mmol)。真空去除挥发性物质，所得残留物通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中87∶13)纯化两次。所得残余物收集在MeOH/H2O(5∶0.5mL)中，然后添加K2CO3(100mg)。所述混合物搅拌1小时，然后浓缩并通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中87∶13)纯化以生成灰白色泡沫状/胶状所需产物(0.15g)。灰白色泡沫状/胶状环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇(0.15g；20％)。针对C26H32BrN7O2MS(ESI+)m/z554.1[M+H]+；针对C26H32BrN7O2MS(ESI-)m/z552.1[M-H]-；HPLC纯度＞90％(保留时间，2.298分钟)。1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δH8.080(s，1H)，7.652(s，1H)，7.425-7.403(m，1H)，7.342-7.7.312(m，1H)，7.232-7.217(m，1H)，6.620-6.611(d，J3.6Hz，1H)，4.358-4.318(m，1H)，3.928-3.888(m，1H)，3.099-3.039(m，0.5H(反式异构体的次甲基))，2.898-2.829(m，2H)，2.777-2.726(m，0.5H(顺式异构体的次甲基))，2.580-2.529(m，1H)，2.453-2.397(m，2H)，2.307-2.141(7H)，2.068-2.017(m，1H)，1.955-1.891(m，3H)，1.695-1.506(m，2H)。
化合物27：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((异丙基(3-(2-(5-(1-甲基环丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-((异丙基(3-(2-(5-(1-甲基环丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺
使内含5′-{[3-(2-羧基乙基)环丁基](异丙基)氨基}-5′-脱氧-2′，3′-0-异亚丙基腺苷(0.463g，0.976mmol)和4-(1-甲基环丁基)苯-1，2-二胺(0.184g，1.04mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液在0℃冷却。
所述溶液用N，N-二异丙基乙基胺(0.462mL，2.65mmol)逐滴处理，然后用一份N，N，N′，N′-四甲基-0-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(0.367g，0.965mmol)处理。所述混合物在0℃搅拌1h，然后缓慢升温至室温。室温下5h后，将所述反应混合物储存在冰箱中过夜，然后将该反应混合物置于高真空下。所得玻璃状物收集在30mLH2O中，然后用一份30mL的10％MeOH/EtOAc萃取。水相另用一份30mL的EtOAc萃取。合并的有机相用分成几份的25mL饱和NaHCO3和盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥。所述混合物过滤并浓缩以产出玻璃/泡沫状物(700mg)。所得粗制材料通过快速色谱(SiO2，4-5％7NNH3在MeOH/CH2Cl2中)纯化以生成中间体酰胺(约80％纯度，390mg)。
所得中间体酰胺(110mg，0.174mmol)收集在4mL乙酸中，然后在65℃加热该溶液。冷却所述反应混合物，高真空下去除挥发性物质以产出玻璃状物。所得粗产物收集在25mLCH2Cl2中，用20mL饱和NaHCO3和2％Na2CO3溶液洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩以产出玻璃/硬泡沫状物。所得粗制材料通过制备型TLC(SiO2，用内含7％7NNH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱)纯化以产出硬泡沫状所需产物(54mg)。对另一批所述中间体酰胺(389mg)重复上述过程(除了通过快速色谱纯化，SiO2用内含4-5％7NNH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱)以另外产出368mg所需化合物，该所需化合物与上述苯并咪唑合并。
(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((异丙基(3-(2-(5-(1-甲基环丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
使9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-((异丙基(3-(2-(5-(1-甲基环丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(422mg，0.686mmol)溶解于已在冰浴中于0℃预冷的三氟乙酸(6.3mL，82mmol)和水(0.7mL，40mmol)的混合物中。使该溶液在0℃搅拌30分钟，然后移开冰浴，使所述混合物升温至室温。所述混合物在室温下搅拌2.5h，然后使所得残余物收集在12mLMeOH中，浓缩至干。该过程重复两次，将所得玻璃状物置于高真空下。所得粗残余物用11mLMeOH稀释，用600mgK2CO3和0.5mLH2O处理，然后在室温下搅拌直至该溶液通过pH试纸测为碱性。过滤该混合物，固体用20mLMeOH洗涤。所述溶液浓缩至残余物，置于高真空下。所得粗制材料通过快速色谱(SiO2，用内含10-12％7NNH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱)纯化以生成硬泡沫/玻璃状所需化合物(256mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.30(m，1H)，8.20(d，J＝1.04Hz，1H)，7.38(d，J＝8.09Hz，1H)，7.22(br.s.，1H)，6.98(dd，J＝8.50，1.66Hz，1H)，5.96(m，1H)，4.74(t，J＝4.87Hz，1H)，4.27(d.J＝3.11Hz，1H)，4.08(m，1H)，3.56(m，1H)，3.13(m，1H)，3.00(m，1H)，2.90(dd，J＝14.51，4.35Hz，1H)，2.75(m，3H)，2.41(m，2H)，2.12(m，5H)，2.00(m，1H)，1.84(m，3H)，1.58(m，1H)，1.46(s，3H)，1.02(m，3H)，0.95(d，J＝6.63Hz，3H)。
化合物28(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((异丙基((1r，3S)-3-(2-(5-(1-甲基环丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
非对映异构体通过SFC分离。该材料收集在MeOH/H2O中，然后冻干成白色粉末(132mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)dppm8.30(s，1H)，8.20(s，1H)，7.38(d，J＝8.09Hz，1H)，7.22(s，1H)，6.99(dd，J＝8.40，1.55Hz，1H)，5.96(d，J＝4.56Hz，1H)，4.73(m，1H)，4.26(t，J＝5.29Hz，1H)，4.07(m，1H)，3.13(m，1H)，3.00(m，1H)，2.90(dd，J＝14.41，4.46Hz，1H)，2.76(t，J＝7.15Hz，2H)，2.70(m，1H)，2.42(m，2H)，2.18(m，2H)，2.11(m，3H)，1.85(m，4H)，1.57(q，J＝8.85Hz，2H)，1.47(s，3H)，1.02(d，J＝6.84Hz，3H)，0.95(d，J＝6.63Hz，3H)。
化合物29：(1R，2S，3R，5R)-3一(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基(3-(2一(5-(1-甲基环丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
(1-甲基环丁基)苯
使苯(5.0mL，56mmol)和硫酸(1.17mL，21.9mmol)的搅拌混合物冷却至0℃，然后用内含亚甲基环丁烷(1.00mL，10.8mmol)的苯(3.0mL，34mmol)逐滴处理超过1小时。所述添加完成后，使该反应混合物再搅拌1h，同时升温至室温。该混合物用15mL己烷萃取。有机相用10mLH2O和10mL饱和NaHCO3洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩以产出无色液体。所述液体通过库格尔若蒸馏法(5-10托)纯化以产出无色液态所需化合物。在75-85℃收集的第一馏分为无色液体(330mg)产物。
1-(1-甲基环丁基)-4-硝基苯
向在0℃冷却的内含(1-甲基环丁基)苯(346mg，2.37mmol)的乙酸酐(1.4mL，15mmol)溶液逐滴添加70％硝酸(7∶3，硝酸∶水，0.375mL，5.92mmol)。在该添加过程中，所述溶液的温度保持在5℃以下。添加完成后，冷却下搅拌该反应60分钟。将该反应混合物倾倒至40mL冰水中，使冰融化。水相用3×20mL份Et2O萃取，合并的有机相用25mLH2O之后两份20mL饱和NaHCO3溶液洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩以产出浅色油状产物(418mg)，其如此用于下一步骤。1HNMR(400MHz，CDCI3)dppm8.16(d.J＝8.71Hz，2H)，7.29(d，J＝8.71Hz，2H)，2.41{m，2H)，2.15(m，3H)，1.88(m，1H).1.48(s，3H)。
4-(1-甲基环丁基)苯胺
内含1-(1-甲基环丁基)-4-硝基苯(708mg，3.70mmol)的乙醇(24mL，410mmol)溶液用5％碳载Pd(87mg，0.041mmol)小心地处理。反应烧瓶用氢气排气并填充三次，然后使反应混合物在氢气气氛下搅拌19h。反应混合物通过solkafloc垫过滤，然后用25mLEtOH洗涤该垫。去除溶剂以产出油状物，使该油状物在高真空下短时放置以产出所需化合物(609mg)，其可直接用于下一步骤。1HNMR(400MHZ，CDCI3)oppm6.99(m，2H)，6.66(m，2H)，3.39(br.s.，2H)，2.35(m，2H)，2.05(m，3H)，1.82(m，1H)，1.42(s，3H)。
2，2，2-三氟-N-(4-(1-甲基环丁基)-2-硝基苯基)乙酰胺
4-(1-甲基环丁基)苯胺(500mg，2.79mmol)和硝酸铵(220mg，2.8mmol)用三氟乙酸酐(1.97mL，14.0mmol)处理，然后用氯仿(10mL，120mmol)处理。使该反应混合物在室温下搅拌至5小时后固体全部溶解。将该反应混合物倾倒至50mLH2O中，然后用三份25mLCH2Cl2萃取。合并的有机相用10mL饱和NaHCO3，洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩成油状。所得粗制材料通过快速色谱(SiO2，用2.5-3.5％***/己烷洗脱)纯化以生成所需化合物(800mg)。
4-(1-甲基环丁基)-2-硝基苯胺
内含2，2，2-三氟-N-[4-(1-甲基环丁基)-2-硝基苯基]乙酰胺(580mg.1.9mmol)的甲醇(18mL，440mmol)溶液用内含碳酸钾(788mg，5.70mmol)的水(4.5mL，250mmol)溶液处理，然后在45℃加热该混合物50分钟。使该反应混合物冷却至室温，然后真空去除甲醇。残留的水相用10mLH2O稀释，然后用三份20mLEtOAc萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩至产出油状物。将该材料置于高真空下，然后其固化以生成所需化合物(400mg)。该材料直接用于下一步骤。1HNMR(400MHz.CDCI3)dppm7.90(d，J＝2.07Hz，1H)，7.23(dd，J＝8.50，2.28Hz，1H)，6.77(d，J＝8.71Hz，1H)，5.96(br.s.，2H)，2.33(m，2H)，2.13(m，1H)，2.04(m，2H)，1.84(m，1H)，1.43(s，3H)。
4-(1-甲基环丁基)苯-1，2-二胺
内含4-(1-甲基环丁基)-2-硝基苯胺(138mg.0.668mmol)的乙醇(8.5mL，140mmol)溶液用乙醇中呈浆状的10％碳载钯(14.2mg，0.0134mmol)小心处理。反应烧瓶用氢气排气并填充三次，然后使反应混合物在氢气气氛下搅拌4h。反应混合物通过solkafloc垫过滤，然后用20mLMeOH洗涤该垫。浓缩所得滤液以产出油状物，将该油状物置于高真空下以产生固态所需化合物(119mg)，其直接用于下一步骤。1HNMR(400MHZ.CDCl3)δHppm6.66(m，1H)，6.53(m，2H)，3.34(br.s.，4H)，2.33(m，2H)，2.08(m，1H)，1.99(m.2H).1.80(m，1H)，1.42(s，3H)。
N-(2，4-二甲氧基苄基)-7-((3aS，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(1-甲基环丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸(387mg，0.652mmol)和[8]4-(1-甲基环丁基)苯-1，2-二胺(120mg，0.68mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(6.7mL，87mmol)溶液用N，N-二异丙基乙基胺(0.38mL，2.2mmol)逐滴处理，然后用一份N，N，N′，N′-四甲基-0-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(372mg，0.978mmol)处理。使所述反应混合物在室温下搅拌2.5小时，然后在高真空下浓缩该反应混合物。使所得残余物在40mLEtOAc(添加一些CH2Cl2以协助溶解该产物)和40mL1/1H2O/饱和NaHCO3之间分配。水相用30mL1/1EA/CH2Cl2萃取，合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗制材料通过快速色谱(SiO2，用内含5-6％7NNH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱)纯化以获得酰胺区域异构体混合物形式的所需中间体。
所得中间体收集在乙酸(5.4mL，95mmol)中，然后在65℃加热该溶液3小时。在温水浴的协助下，在高真空下去除乙酸。所得粗产物收集在30mLCH2Cl2中，有机相用分成几份的10mL饱和NaHCO3和2％K2CO3溶液洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩至玻璃状物，其在高真空下产出泡沫状物。所得粗制材料通过快速色谱纯化(SiO2，用内含5％7NNH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱)以产出所需产物(140mg)。
(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(1-甲基环丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
使N-(2，4-二甲氧基苄基)-7-((3aS，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(1-甲基环丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(128mg，0.174mmol)溶解于已在冰浴中于0℃预冷的三氟乙酸(3.60mL，46.7mmol)和水(0.4mL，20mmol)的混合物。所述溶液在0℃搅拌30分钟，然后移开冰浴，使所述混合物升温至室温，在该温度另保留2.5小时。真空浓缩该反应混合物。所得残余物收集在3mLMeOH中并浓缩，该过程重复两次。将所得白色残余物置于高真空中。使粗制残余物与另一批粗制材料(相同方式制备，在该反应中使用约1/3的量)合并，用5mLMeOH稀释，用140mgK2CO3，10滴H2O处理，并在室温下搅拌直至所述溶液由pH试纸测为碱性。过滤该混合物，固体用15mLMeOH洗涤。所述溶液浓缩成油状，置于高真空下。所得粗制材料通过快速色谱(SiO2用内含10-15％7NNH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱)纯化以产出玻璃/硬泡沫状的所需产物(68mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm806(s，1H)，7.39(d，J＝7.88Hz，1H)，7.23(s，1H)，7.21(dd，J＝3.63，1.76Hz，1H)，6.99(m，1H)，6.60(d，J＝3.52Hz，1H)，4.93(m，1H)，4.32(m，1H)，3.89(m，1H)，3.03(m，1H)，2.83(m，2H)，2.70(q，J＝8.15Hz，1H)，2.52(m，1H)，2.40(m，4H)，2.27(m，2H)，2.18(d，J＝6.22Hz，3H)，2.11(m，4H)，2.03(m，1H)，1.86(m，4H)，1.62(m，1H)，1.51(m，1H)，1.47(s，3H)。
化合物30：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基((1r，3S)-3-(2-(5-(1-甲基环丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
非对映异构体通过SFC分离。该材料收集在MeOH/H2O中，然后冻干成白色粉末(67mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.27(s，1H)，8.20(s，1H)，7.38(d，J＝8.29Hz，1H)，7.22(br.s.，1H)，6.99(dd，J＝8.40，1.55Hz，1H)，5.97(d，J＝4.15Hz，1H)，4.69(dd，J＝5.18，4.15Hz，1H)，4.22(t，J＝5.60Hz，1H)，4.16(m，1H)，2.77(m，2H)，2.72(d，J＝8.09Hz，1H)，2.67(m，2H)，2.42(m，2H)，2.21(m，2H)，2.15(s，3H)，2.10(m，3H)，1.85(m，4H)，1.47(s，3H)，1.46(m，2H)。
化合物31：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((异丙基((1s，3R)-3-(2-(5-(1-甲基环丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
非对映异构体通过SFC分离。通过NMR发现该材料为反式非对映异构体。该材料收集在MeOH/H2O中，然后冻干成白色粉末(63mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.31(s，1H)，8.20(s，1H)，7.38(d，J＝8.29Hz，1H)，7.22(s，1H)，6.99(dd，J＝8.29，1.66Hz，1H)，5.97(d，J＝4.56Hz，1H)，4.74(m，1H)，4.27(t，J＝5.39Hz，1H)，4.09(m，1H)，3.53(m，1H)，3.01(m，1H)，2.93(dd，J＝14.72，4.35Hz，1H)，2.80(t，J＝7.46Hz，2H)，2.73(dd，J＝14.51，7.46Hz，1H)，2.42(m，2H)，2.13(m，5H)，2.01(m，3H)，1.82(m，3H)，1.47(s，3H)，1.02(d，J＝6.63Hz，3H)，0.95(d，J＝6.63Hz，3H)。
化合物32：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离。(条件列于下文)产出120mg。制备方法：IC(2×15cm)，35％异丙醇(0.2％DEA))/CO2，100巴，60mL/分钟，220nm，注射体积0.75mL，4mg/mL甲醇峰1:5.27分钟。1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δH8.080(s，1H)，7.495(s，1H)，7.417-7.395(m，1H)，7.303-7.281(m，1H)，7.220-7.212(m，1H)，6.619-6.610(m，1H)，4.349-4.315(m，1H)，2.837-2.802(m，2H)，2.718-2.641(m，1H)，2.508-2.365(m，3H)，2.284-2.258(m，3H)，2.156(s，3H)，1.954-1.906(m，1H)，1.549-1.460(m，2H)，1.375(s，9H)。
化合物33：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(1-甲基环丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
9-((3aR，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(1-甲基环丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺
使内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸(0.461g，1.03mmol)和4-(1-甲基环丁基)苯-1，2-二胺(0.150g，0.851mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(11mL，140mmol)溶液在0℃冷却。所述溶液用N，N-二异丙基乙基胺(0.489mL，2.81mmol)逐滴处理，然后用一份N，N，N′，N′-四甲基-0-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(0.388g，1.02mmol)处理。所述混合物在0℃搅拌30分钟，然后缓慢升温至室温并在室温下持续搅拌6h。所述反应混合物用30mLH2O稀释，然后用分成几份的25mL的10％MeOH/EtOAc萃取。水相另用两份20mL的EtOAc萃取。合并的有机相用分成几份的25mL饱和NaHCO3、盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥。所述溶液过滤并浓缩以产出玻璃状物。粗制产物通过快速色谱(SiO2，用内含5％7NNH3的MeOH/CH2Cl2洗脱)纯化。
所得中间体酰胺收集在乙酸(7.0mL，120mmol)中，所述溶液在65℃加热2.5h，冷却该反应混合物并在高真空下去除乙酸以产出玻璃状物。所得粗产物收集在25mLCH2Cl2中，用20mL饱和NaHCO3、2％Na2CO3溶液洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩以产出玻璃/硬泡沫状物。所得粗制材料通过快速色谱(SiO2，用内含5-7％7NNH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱)纯化以生成所需化合物(214mg)。
(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(1-甲基环丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
使9-((3aR，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(1-甲基环丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(188mg，0.320mmol)溶解于已在冰浴中于0℃预冷的三氟乙酸(4.00mL，51.9mmol)和水(0.4mL，20mmol)的混合物。在0℃搅拌该溶液。在0℃搅拌该反应30分钟，然后移开冰浴，使所述混合物升温至室温，另持续搅拌2小时。真空浓缩该反应混合物。所得残余物收集在10mLMeOH中并浓缩，该过程重复两次。将所得玻璃状物在高真空下放置1小时。所得粗残余物用7mLMeOH稀释，用150mgK2CO3和10滴H2O处理，然后在室温下搅拌直至该溶液由pH试纸测为碱性。过滤该混合物，固体用10mLMeOH洗涤。所述溶液浓缩至残余物，置于高度真空下。所得粗制材料通过快速色谱(SiO2，用内含10-15％7NNH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱)纯化以生成玻璃/硬泡沫状的所需化合物(66％)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.28(m，1H)，8.20(m，1H)，7.38(d，J＝8.29Hz，1H)，7.23(s，1H)，7.00(dd，J＝8.40，1.55Hz，1H)，5.98(t，J＝3.21Hz，1H)，4.70(m，1H)，4.24(q，J＝5.18Hz，1H)，4.17(m，1H)，3.10(m，0.4H)，2.80(m，3H)，2.71(d，J＝5.60Hz，2H)，2.43(m，2H)，2.23(dd，J＝11.71，6.12Hz，1H)，2.19(m，3H)，2.12(m，4H)，1.99(m，1H)，1.85(m，4H)，1.48(s，3H)，1.48(m，1H)。
化合物34：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基((1s，3R)-3-(2-(5-(1-甲基环丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
非对映异构体通过SFC分离。该材料收集在MeOH/H2O中，然后冻干成白色粉末(30mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.28(s，1H)，8.19(s，J＝4.15Hz，1H)，4.69(m，1H)，4.23(t，J＝5.49Hz，1H)，4.17(m，1H)，3.07(m，1H)，2.81(t，J＝7.57Hz，2H)，2.68(m，2H)，2.42(m，2H)，2.17(s，3H)，2.09(m，6H)，1.97(m，2H)，1.84(m，3H)，1.47(s，3H)。
35：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离。随后的SFC分离(120mg)。
制备方法：IC(2×15cm)，35％异丙醇(0.2％DEA))/CO2，100巴，60mL/分钟，220nm，注射体积0.75mL，4mg/mL甲醇峰2:6.24分钟。1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δH8.078(s，1H)，7.501(s，1H)，7.422-7.401(m，1H)，7.310-7.285(m，1H)，7.228-7.219(m，1H)，6.618-6.609(m，1H)，4.355-4.320(m，1H)，3.053-2.977(m，1H)，2.874-2.836(m，2H)，2.535-2.268(m，4H)，2.177-2.003(m，8H)，1.909-1.869(m，2H)，1.677-1.595(m，1H)，1.381(s，9H)。
化合物36：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基((1r，3S)-3-(2-(5-(1-甲基环丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离。该材料收集在MeOH/H2O中，然后冻干成白色固体(15mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.06(s，1H)，7.38(d，J＝8.09Hz，1H)，7.23(br.s.，1H)，7.20(d，J＝3.32Hz，1H)，6.99(m，1H)，6.60(d，J＝3.52Hz，1H)，4.95(m，1H)，4.31(t，J＝6.74Hz，1H)，3.88(m，1H)，2.81(m，2H)，2.66(m，1H)，2.40(m，5H)，2.25(m，3H)，2.14(br.s.，3H)，2.11(m，3H)，1.91(m，2H)，1.83(m，1H)，1.61(m，1H)，1.51(m，1H)，1.47(s，3H)。
化合物37：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基((1r，3S)-3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离。冻干获得无色固体所需产物(0.060g)。1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δH8.079(s，1H)，7.546-7.524(m，1H)，7.409(s，1H)，7.226-7.217(m，1H)，7.150-7.124(m，1H)，6.619-6.610(m，1H)，4.355-4.320(m，1H)，3.912-3.885(m，1H)，2.881-2.845(m，2H)，2.727-2.674(m，1H)，2.538-2.262(m，6H)，2.172(s，3H)，1.955-1.916(m，3H)，1.670-1.492(m，3H)。
化合物38：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(乙基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离。冻干后回收无色固态所需产物(32mg)。
制备方法：Lux-3(2×15cm)，30％乙醇(0.2％DEA))/CO2，100巴，65mL/分钟，220nm，注射体积：0.4mL，6.2mg/mL甲醇。1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δH8.082(s，1H)，7.493(s，1H)，7.415-7.393(m，1H)，7.295-7.270(m，1H)，7.215-7.206(m，1H)，6.621-6.612(m，1H)，4.343-4.309(m，1H)，3.924-3.897(m，1H)，3.044-2.962(m，1H)，2.834-2.798(m，2H)，2.728-2.695(m，1H)，2.660-2.607(m，2H)，2.543-2.380(m，2H)，2.281-2.257(m，3H)，1.932-1.906(m，3H)，1.660-1.523(m，3H)，1.368(s，9H)，1.050-1.014(t，J＝7.2Hz，3H)。
化合物39：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基((1s，3R)-3-(2-(5-(1-甲基环丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离。该材料收集在MeOH/H2O中，然后冻干成白色粉末(19mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm806(s，1H)，7.39(d.J＝8.50Hz，1H)，7.21(m，2H)，6.99(dd，J＝8.29，1.45Hz，1H)，6.59(d，J＝3.52Hz，1H)，4.94(m，1H)，4.32(dd，J＝7.77，5.91Hz，1H)，3.89(m，1H)，3.00(m，1H)，2.83(t，J＝7.57Hz，2H)，2.49(m，1H)，2.38(m，4H)，2.23(m，1H)，2.16(s.3H)，2.11(m，5H)，201(m，2H)，1.84(m.3H)，1.61(m，1H)，1.46(s，3H)。
化合物40：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丙基甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离。该材料收集在MeOH/H2O中，然后冻干以产出白色粉末(45mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.06(s，1H)，7.48(br.s.，1H)，7.39(d，J＝8.29Hz，1H)，7.27(m，1H)，7.20(d，J＝3.73Hz，1H)，6.60(d，J＝3.52Hz，1H)，4.32(dd，J＝7.36，6.12Hz，1H)，3.90(m，1H)，3.06(m，1H)，2.81(t，J＝6.84Hz，2H)，2.74(m，1H)，2.55(dd，J＝12.75，7.77Hz，1H)，2.41(m，1H)，2.37(d，J＝6.84Hz，2H)，2.29(m，3H)，1.91(m，3H)，1.60(m，1H)，1.50(m，2H)，1.36(s，9H)，0.87(m，1H)，0.48(d，J＝8.09Hz，2H)，0.10(m，2H)。
化合物41：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离，然后由H2O/MeOH/CH3CN冻干以产出白色粉末(100mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.06(s，1H)，7.48(br.s.，1H)，7.39(m，1H)，7.27(m，1H)，7.20(d，J＝3.52Hz，1H)，6.60(m，1H)，4.32(t，J＝6.43Hz，1H)，3.93(t，J＝5.29Hz，1H)，3.54(m，0.2H)，3.11(t，J＝9.33Hz，1H)，3.02(m，1H)，2.82(m，2H)，2.66(dd，J＝13.68，8.09Hz，1H)，2.46(m，1H)，2.36(m，1H)，2.23(m，3H)，2.05(m，1H)，1.91(m，3H)，1.59(m，3H)，1.36(s，9H)，1.02(m，6H)。
化合物42：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丁基甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
步骤1：3-((1S，3r)-3-((环丁基甲基)(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯
使胺3-[3-({[(3aR，4R，6R，6aS)-6-{4-[(2，4-二甲氧基苄基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基}-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]甲基}氨基)环丁基]丙酸乙酯(1.8g，3.0mmol)收集在甲醇(20mL，600mmol)中，然后添加氰基硼氢化钠(0.37g，5.9mmol)。使用内含10％AcOH的MeOH溶液调整pH至约6，然后添加一份环丁烷甲醛(0.32g，3.8mmol)。使该反应进行5小时，此时HPLC指示反应已终止。另添加1.3当量的环丁烷甲醛，所述反应过夜进行。向该反应混合物添加NaHCO3(饱和)，然后用DCM萃取3次。合并的有机物用MgSO4干燥并浓缩至黄色树脂状。顺式和反式异构体可在二氧化硅上分离。通过FC(DCM/7NNH3在MeOH中96∶4)纯化产出分离的两批产物，其各富含一种异构体约达90％。上方异构体：0.38g(11∶1混合物，顺式)，下方异构体：0.31g(6∶1混合物，反式)。针对C35H49N5O6MS(ESI+)m/z676.7[M+H]+；HPLC纯度＞69％(保留时间，3.791)。
步骤2：N-(2-氨基-5-(叔丁基)苯基)-3-((1S，3r)-3-((环丁基甲基)(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酰胺
上方异构体(顺式)：向3-((1S，3r)-3-((环丁基甲基)(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯(6mL，70mmol)和甲醇(1.5mL，37mmol)溶液添加氢氧化锂一水合物(0.236g，5.62mmol)。使该反应在室温下搅拌过夜至次日早晨消耗起始材料并转化成酸。用1NHCl酸化该反应至pH＝6。真空去除挥发性物质，用乙醇共沸蒸馏去除残留的水，然后在冷冻干燥机上处理72小时。所得灰白色固体无需进一步纯化即可使用。保留时间：3.330分钟。针对C36H49N5O6MS(ESI+)m/z648.4[M+H]+；针对C36H49N5O6MS(ESI-)m/z646.4[M-H]-；HPLC纯度＞97％(保留时间，3.329)。
向内含3-{顺-3-[(环丁基甲基){[(3aR，4R，6R，6aS)-6-{4-[(2，4-二甲氧基苄基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基}-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]甲基}氨基]环丁基}丙酸(0.38g，0.59mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(0.337mL，1.94mmol)和4-叔丁基苯-1，2-二胺(0.116g，0.704mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(3.63mL，46.9mmol)溶液添加N，N，N′，N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(0.334g，0.880mmol)。所述反应在室温搅拌过夜，至次日早晨起始材料已消耗。所述反应部分浓缩至约2mL，然后添加NaHCO3(饱和)。所述混合物用EtOAc萃取3次，合并的有机物用MgSO4干燥并浓缩。所得残余物通过FC(DCM/7NNH3在MeOH中95∶5)纯化以产出紫色-棕色无定形固态的N-(2-氨基-5-(叔丁基)苯基)-3-((1S，3r)-3-((环丁基甲基)(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酰胺(0.30g；64％)。HPLC纯度＞19％(保留时间，3.574分钟)。
步骤3：7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丁基甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
使内含N-(2-氨基-4-叔丁基苯基)-3-{顺-3-[(环丁基甲基){[(3aR，4R，6R，6aS)-6-{4-[(2，4-二甲氧基苄基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基}-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]甲基}氨基]环丁基}丙酰胺(0.3g，0.4mmol)的乙酸(1.0mL，20mmol)溶液在65℃搅拌过夜，至次日早晨时起始材料已被消耗。真空去除挥发性物质，所得残余物通过FC(DCM/7NNH3在MeOH中93∶7)纯化以产出灰白色固态的7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丁基甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺。针对C46H61N7O4MS(ESI+)m/z777.7[M+H]+；HPLC纯度＞64％(保留时间，3.690分钟)。
步骤4：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丁基甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
在室温下向水(0.5mL，20mmol)和7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丁基甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.2g，0.2mmol)的混合物添加三氟乙酸(5mL，60mmol)。使该反应进行过夜，然后用三乙基硅烷(0.082mL，0.52mmol)淬灭该明亮粉红色悬液。真空去除挥发性物质，所得残余物收集在甲醇(15mL)中。添加500mgK2CO3和8滴H2O，所述反应在室温搅拌1小时。过滤该混合物，用10mL甲醇洗涤滤饼。浓缩所得滤液，所得残余物通过FC(DCM/7NNH3在MeOH中90∶10)纯化以产出无色固态的(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丁基甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇(0.037g；20％)。针对C34H47N7O2MS(ESI+)m/z586.3[M+H]+；HPLC纯度＞89％(保留时间，2.970分钟)。1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δH8.083(s，1H)，7.498(s，1H)，7.417-7.396(m，1H)，7.302-7.277(m，1H)，7.206-7.197(m，1H)，6.621-6.612(m，1H)，4.347-4.314(m，1H)，3.912-3.885(m，1H)，2.973-2.922(m，1H)，2.836-2.800(m，2H)，2.662-2.366(m，6H)，2.282-2.241(m，3H)，2.061-2.034(m，2H)，1.912-1.494(m，10H)，1.374(s，9H)。
化合物43：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
3-(3-(环丁基(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯
3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯(0.84g，1.4mmol)收集在甲醇(10mL)中，然后添加氰基硼氢化钠(0.087g，1.4mmol)。使用内含10％AcOH的MeOH溶液调整pH至约6，然后添加一份环丁酮(0.15mL，2.1mmol)。室温下搅拌该反应3天。向该反应混合物添加NaHCO3(饱和)，然后用DCM萃取3次。合并的有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩。该材料无需进一步纯化即可使用。
3-(3-(环丁基(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸
向内含3-(3-(环丁基(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯(0.91g，1.4mmol)的四氢呋喃(12mL，150mmol)和甲醇(3mL，60mmol)溶液添加氢氧化锂一水合物(0.58g，14mmol)。在室温下搅拌该反应混合物过夜，然后用1NHCl酸化至pH＝6。真空去除挥发性物质，用乙醇共沸蒸馏去除残留的水，然后在冷冻干燥机上处理18小时。所得灰白色固体无需进一步纯化即可使用。
N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-(环丁基(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酰胺
向3-(3-(环丁基(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸(0.87g，1.4mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(0.789mL，4.53mmol)和[8)4-叔丁基苯-1，2-二胺(0.270g，1.65mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(8.50mL)溶液中添加N，N，N′，N′-四甲基-0-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(0.783g，2.06mmol)。所述反应在室温搅拌过夜，此时该混合物部分浓缩至约2mL，然后添加NaHCO3(饱和)。所述混合物用EtOAc(3×)萃取，合并的有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩。所得残余物通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中95∶5)纯化以生成固态所需化合物(0.76g)。
7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丁基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
内含N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-(环丁基(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酰胺(0.76g，0.97mmol)的乙酸(2mL)溶液在60℃搅拌过夜。真空去除挥发性物质，剩下的残余物直接通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中91∶9)纯化生成泡沫状所需化合物(0.61g)。
(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
室温下向水(1mL，80mmol)和7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丁基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.61g，0.80mmol)的混合物添加三氟乙酸(10mL，200mmol)。在室温搅拌所述反应过夜，通过添加三乙基硅烷(0.26mL，1.6mmol)淬灭该反应。真空去除挥发性物质，所得残余物收集在MeOH(15mL)中，添加500mgK2CO3和8滴水，所述反应在室温搅拌1小时。过滤该混合物，滤饼用MeOH(10mL)洗涤。浓缩滤液，所得残余物通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中90∶10)纯化以生成无色泡沫状的所需产物(0.13g)。针对C33H45N7O2MS(ESI+)m/z572.2[M+H]+；针对C33H45N7O2MS(ESI-)m/z570.2[M-H]-；HPLC纯度＞90％(保留时间，2.850分钟)。1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δH8.083(s，1H)，7.492(s，1H)，7.412-7.392(m，1H)，7.309-7.286(m，1H)，7.220-7.205(m，1H)，6.620-6.610(d，J＝4.0Hz，1H)，4.321-4.283(m，1H)，3.888-3.848(m，1H)，3.505-3.417(m，0.5H(反式异构体的次甲基)，3.231-3.147(m，0.5H)(顺式异构体的次甲基))，3.051-2.953(m，1H)，2.871-2.732(m，3H)，2.583-2.501(m，1H)，2.441-2.368(m，1H)，2.244-2.205(m，3H)，2.170-1.833(m，9H)，1.695-1.560(m，4H)，1.384(s，9H)。
化合物44：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丙基甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
3-(3-((环丙基甲基)(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯
胺3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯(0.90g，1.5mmol)收集在甲醇(10mL)中，然后添加氰基硼氢化钠(0.093g，1.5mmol)。使用内含10％AcOH的MeOH溶液调节pH至约为6。该反应在室温下搅拌过夜。向该反应混合物添加NaHCO3(饱和)，然后用DCM萃取3次。合并的有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩。该材料无需进一步纯化即可使用。
3-(3-((环丙基甲基)(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸
向内含3-(3-((环丙基甲基)(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯(0.98g，1.5mmol)的四氢呋喃(13mL)和甲醇(3mL)溶液添加氢氧化锂一水合物(0.62g，15mmol)。所述反应在室温搅拌24小时，用1NHCl酸化至pH＝6。真空去除挥发性物质，用乙醇共沸蒸馏去除残留的水，然后在冷冻干燥机上处理18小时。所得灰白色固体无需进一步纯化即可使用。
N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-((环丙基甲基)(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酰胺
向内含3-(3-((环丙基甲基)(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸(0.94g，1.5mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(0.852mL，4.89mmol)和[8]4-叔丁基苯-1，2-二胺(0.292g，1.78mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(9.19mL，119mmol)溶液添加N，N，N′，N′-四甲基-0-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(0.846g，2.22mmol)。所述反应在室温搅拌过夜，部分浓缩至约2mL，然后添加NaHCO3(饱和)。所述混合物用EtOAc(3×)萃取，合并的有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩。所得残余物通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中95∶5)纯化以生成固态所需化合物(0.92g)。
7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丙基甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
使内含N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-((环丙基甲基)(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酰胺(1.1g，1.4mmol)的乙酸(5mL)在60℃加热过夜。所得溶液浓缩并通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中93∶7)纯化以产出无色泡沫状所需化合物(0.57g)。
(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丙基甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
在室温下向水(1mL)和7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丙基甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.52g，0.68mmol)的混合物添加三氟乙酸(10mL)。该反应在室温搅拌过夜，然后添加三乙基硅烷(0.22mL，1.4mmol)。真空去除挥发性物质，所得残余物收集在MeOH(15mL)中，添加500mgK2CO3和8滴H2O，所述反应在室温搅拌1小时。过滤该混合物，滤饼用10mLMeOH洗涤。浓缩滤液，所得残余物通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中90∶10)纯化以生成灰白色泡沫状的所需产物(0.196g)。针对C33H45N7O2MS(ESI+)m/z572.6[M+H]+；针对C33H45N7O2MS(ESI-)m/z570.3[M-H]-；HPLC纯度＞90％(保留时间，2.850分钟)。1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δH7.944(s，1H)，7.361(s，1H)，7.280-7.259(m，1H)，7.172-7.150(m，1H)，7.092-7.078(m，1H)，6.484-6.475(d，J＝3.6Hz，1H)，4.222-4.185(m，1H)，3.815-3.779(m，1H)，3.329(m，0.5H(反式异构体中的次甲基))，2.961(m，0.5H(顺式异构体中的次甲基)，2.745-2.627(m，3H)，2.503-2.450(m，1H)，2.301-2.187(m，5H)，2.036-1.890(m，2H)，1.793-1.776(m，3H)，1.529-1.385(m，2H)，1.246(s，9H)，0.808-0.739(m，1H)，0.394-0.362(m，2H)，0.012-0.013(m，2H)。保留时间：2.850分钟，HPLC条件：AgilentZorbaxExlipseXDB-C18柱，4.6×50mm(1.8μm装填)，溶剂A-水(0.1％TFA)，溶剂B-乙腈(0.07％TFA)6分钟梯度从5至95％B；1分钟暂停；然后再循环。
化合物45：3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丁基)氨基)环丁基)丙酸乙酯
胺3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯(1.7g，2.8mmol)收集在甲醇(20mL)中，然后添加氰基硼氢化钠(0.35g，5.6mmol)。使用内含10％AcOH的MeOH溶液调整pH至约6，然后添加一份异丁醛(0.33mL，3.6mmol)。室温下搅拌该反应3小时。另添加1.3当量的异丁醛并持续搅拌过夜。向该反应混合物添加NaHCO3(饱和)，然后用DCM萃取3次。合并的有机物用MgSO4干燥并浓缩。所得残余物通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中97∶3)纯化以产出无色泡沫状所需化合物(1.75g)。
3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丁基)氨基)环丁基)丙酸
向内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丁基)氨基)环丁基)丙酸乙酯(1.75g，2.64mmol)的四氢呋喃(13mL，160mmol)和甲醇(3mL，70mmol)溶液添加氢氧化锂一水合物(1.11g，26.4mmol)。所述反应在室温下搅拌24小时，用1NHCl酸化至pH＝6，真空去除挥发性物质，用乙醇共沸蒸馏去除残留的水，然后在冷冻干燥机上处理18小时。所得灰白色固体无需进一步纯化即可使用。
N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丁基)氨基)环丁基)丙酰胺
向内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丁基)氨基)环丁基)丙酸(1.7g，2.7mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(1.54mL，8.82mmol)和4-叔丁基苯-1，2-二胺(0.527g，3.21mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(16.6mL)溶液添加N，N，N’，N’-四甲基-0-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(1.52g，4.01mmol)。室温搅拌该反应过夜，部分浓缩至约2mL，然后添加NaHCO3(饱和)。然后混合物用EtOAc萃取三次，合并的有机物用MgSO4干燥，过滤，浓缩，然后通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中95:5)纯化以产出固态所需胺(1.71g)。
7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丁基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
使内含N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丁基)氨基)环丁基)丙酰胺(1.71g，2.19mmol)的乙酸(6mL)溶液在60℃过夜搅拌，真空去除挥发性物质，所得残余物通过快速色谱(SiO2，DCM/7NNH3在MeOH中94:6)纯化以产出泡沫状所需化合物(0.9g)。
(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
室温下向水(2mL，100mmol)和7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丁基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.9g，1mmol)的混合物添加三氟乙酸(20mL，300mmol)。使该反应混合物搅拌过夜，添加三乙基硅烷(0.38mL，2.4mmol)。真空去除挥发性物质，所得残余物收集在MeOH(15mL)中，添加500mgK2CO3和8滴H2O，所述反应在室温搅拌1小时。过滤该混合物，滤饼用10mLMeOH洗涤。浓缩滤液，所得残余物通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中90:10)纯化以生成灰白色泡沫状的所需产物(0.274g)。针对C33H47N7O2MS(ESI＋)m/z574.6[M＋H]+；针对C33H45N7O2MS(ESI-)m/z572.4[M-H]-；HPLC纯度＞86％(呆留时间，2.918分钟)。1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δH8.078(s，1H)，7.497(s，1H)，7.416-7.396(m，1H)，7.305-7.284(m，1H)，7.216-7.200(m，1H)，6.621-6.612(d，J＝3.6Hz，1H)，4.368-4.334(m，1H)，3.930-3.894(m，1H)，2.934-2.918(m，1H)，2.866-2.797(m，2H)，2.652-2.583(m，1H)，2.444-2.361(m，2H)，2.287-2.199(m，2H)，2.166-2.119(m，3.5H(含有反式异构体的次甲基))，2.048-2.012(m，1H)，1.921-1.748(m，3.5H(含有顺式异构体的次甲基))，1.622-1.494(m，2H)，1.380(s，9H)，1.269-1.252(m，1H)，0.932-0.879(m，6H)。
化合物46：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离。该材料收集在MeOH/H2O中，然后冻干以产出白色粉末(23.7mg)。1HNMR(400MHZ，MeOD)δHppm8.06(s，1H)，7.48(br.s.，1H)，7.39(d.J＝8.71Hz，1H)，7.28(dd，J＝8.60，1.76Hz，1H)，7.19(d，J＝3.52Hz，1H)，6.60(d.J＝3.52Hz，1H)，4.84(m，1H)，4.28(dd，J＝7.26，6.22Hz，1H)，3.84(t，J＝5.70Hz，1H)，3.16(m，1H)，2.99(m，1H)，2.80(t，J＝7.15Hz，2H)，2.73(dd，J＝13.68，6.22Hz，1H)，2.49(dd，J＝13.68，7.67Hz，1H)，2.38(m，1H)，2.22(m，3H)，2.00(m，4H)，1.91(m，3H)，1.60(m，5H)，1.36(s，9H)。
化合物47：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离。该材料收集在MeOH/H2O中，然后冻干以产出白色粉末(21mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.06(s.1H)，7.63(br.s.，1H)，7.39(m，1H)，7.30(dd，J＝8.50，1.66Hz，1H)，7.20(d.J＝3.52Hz，1H)，6.60(d，J＝3.52Hz，1H)，4.32(dd，J＝7.67，6.01Hz，1H).3.88(m，1H)，2.82(t，J＝7.15Hz，2H)，2.71(m，1H)，2.52(m，1H)，2.41(m，2H)，2.25(m，2H)，2.18(s，3H)，2.03(m，1H)，1.92(m，3H)，1.62(m，1H)，1.51(m，2H)。
化合物48：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离。冻干后获得无色固体(78mg)。
化合物49：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(乙基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离。
Lux-3(2×15cm)，30％乙醇(0.2％DEA))/CO2，100巴，65mL/分钟，220nm。注射体积：0.4mL，6.2mg/mL甲醇。1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δH8.081(s，1H)，7.499(s，1H)，7.416-7.395(m，1H)，7.308-7.282(m，1H)，7.226-7.216(m，1H)，6.619-6.610(m，1H)，4.344-4.310(m，1H)，3.922-3.895(m，1H)，3.410-3.329(m，1H)，2.875-2.837(m，2H)，2.738-2.689(m，1H)，2.659-2.607(m，2H)，2.535-2.483(m，1H)，2.452-2.380(m，1H)，2.311-2.224(m，1H)，2.158-2.121(m，3H)，2.061-2.030(m，2H)，1.913-1.863(m，2H)，1.674-1.590(m，1H)，1.381(s，9H)，1.056-1.020(t，J＝7.2Hz，3H)。
化合物50：(1R，2S，3R，5R)-3-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
3-(3-((((1R，2R，3S，4R)-4-(6-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-2，3-二羟基环戊基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸乙酯
使胺3-(3-((((1R，2R，3S，4R)-4-(6-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-2，3-二羟基环戊基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯(1.5g，2.5mmol)收集在乙腈(66mL)中，然后添加异丙基碘化物(2.5mL，25mmol)和三乙胺(5.2mL，37mmol)。该反应加热至80℃，12小时。另添加15当量的TEA和15当量的iPrI，所述反应另持续8小时。另添加各15当量的iPrI和TEA，加热持续过夜。浓缩该反应，并添加饱和的Na2CO3(20mL)和DCM(20mL)。分离各层，水层另外多萃取三次，合并的有机物干燥并通过快速色谱(SiO2，DCM/7NNH3在MeOH中97:3)纯化。
所得残余物溶解于30mLDCM中，并用20mL饱和的NaHCO3和10mL1NNaOH洗涤。水相用DCM萃取3次，合并的有机物用MgSO4干燥并去除溶剂以产出泡沫/固态所需产物(1.3g)。
(3-((((1R，2R，3S，4R)-4-(6-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-2，3-二羟基环戊基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸
向内含3-(3(3-((((1R，2R，3S，4R)-4-(6-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-2，3-二羟基环戊基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸乙酯(1.3g，2.0mmol)的四氢呋喃(30mL，300mmol)和甲醇(6.5mL，160mmol)溶液添加氢氧化锂一水合物(0.838g，20.0mmol)。该反应在室温搅拌过夜，用1NHCl酸化至pH＝6。真空去除挥发性物质，用乙醇共沸蒸馏去除残留的水，然后冷冻干燥。所得固体无需进一步纯化即可使用。
N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-((((1R，2R，3S，4R)-4-(6-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-2，3-二羟基环戊基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酰胺
向内含3-{3-[{[(3aR，4R，6R，6aS)-6-{6-[(2，4-二甲氧基苄基)氨基]-9H-嘌呤-9-基}-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]甲基}{异丙基)氨基]环丁基}丙酸(1.30g，2.09mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(1.20mL，6.89mmol)和4-叔丁基苯-1，2-二胺(0.411g，2.50mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(12.9mL)溶液添加N，N，N’，N’-四甲基-0-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(1.19g，3.13mmol)。使该反应搅拌2小时，添加NaHCO3(饱和)，所得混合物用EtOAc萃取三次，合并的有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩。所得残余物通过快速色谱(DCM→DCM/7NNH3在MeOH中95∶5)纯化以产出固态的所需酰胺(1.4g)。
9-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-9H-嘌呤-6-胺
使内含N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-((((1R，2R，3S，4R)-4-(6-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-2，3-二羟基环戊基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酰胺(1.4g，1.8mmol)的乙酸(5mL，90mmol)在60℃搅拌过夜。该反应浓缩并通过快速色谱(DCM-＞DCM/7NNH3在MeOH中94∶6)纯化以产出泡沫状所需化合物(0.91g)。
(1R，2S，3R，5R)-3-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
在室温下向水(1mL，60mmol)和9-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-9H-嘌呤-6-胺(0.91g，1.2mmol)的混合物添加三氟乙酸(10mL，100mmol)。该反应在室温下搅拌过夜。然后加热该反应至35℃，然后添加三乙基硅烷(0.39mL，2.4mmol)。使该反应在35℃另搅拌两天。真空去除挥发性物质，所得残余物收集在MeOH(15mL)中。添加500mgK2CO3和8滴H2O，该反应在室温下搅拌1小时。过滤该混合物，滤饼用10mLMeOH洗涤。浓缩滤液，所得残余物通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中90∶10)纯化以在冻干数日后产出无色固态所需产物(0.142g)。
化合物51：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离(25mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.06(s，1H)，7.48(br.s.，1H)，7.38(d，J＝7.88Hz，1H)，7.27(dd，J＝8.60，1.55Hz，1H)，7.19(d，J＝3.52Hz，1H)，6.60(d，J＝3.73Hz，1H)，4.85(m，1H)，4.29(m，1H)，3.85(t，J＝5.60Hz，1H)，3.41(m，1H)，3.17(m，1H)，2.83(t，J＝7.36Hz，2H)，2.74(dd，J＝13.68，6.63Hz，1H)，2.51(dd，J＝13.79，7.57Hz，1H)，2.38(m，1H)，2.18(m，3H)，2.09(m，1H)，2.02(m，5H)，183(m，2H)，1.60(m，3H)，1.36(s，9H)。
化合物52：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5，6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离。该材料收集在MeOH/H2O中，然后冻干以产出奶油色固体(64mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.06(s，1H)，7.63(s，2H)，7.20(d.J＝3.52Hz，1H)，6.59(d，J＝3.73Hz，1H)，4.32(dd.J＝7.88，6.01Hz.1H)，3.88(dd，J＝5.60，4.77Hz，1H)，2.82(t，J＝7.26Hz，2H)，2.69(m，1H)，2.48(m，1H)，2.38(m，2H)，2.24(m，3H)，2.15(s，3H)，1.91(m，3H)，1.61(m，1H)，1.50(m，2H)。
化合物53：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离。冻干后回收无色固体(85mg)。
化合物54：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丙基甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离。该材料收集在MeOH/H2O中，然后冻干以产出白色粉末(53mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.06(s，1H)，7.48(br.s.，1H)，7.39(d，J＝8.50Hz，1H)，7.28(dd，J＝8.60，1.76Hz，1H)，7.21(d，J＝3.52Hz，1H)，6.60(d，J＝3.52Hz，1H)，4.32(dd，J＝7.67，5.80Hz，1H)，3.91(m，1H)，3.44(m，1H)，2.84(t，J＝7.57Hz，2H)，2.78(dd，J＝13.27，7.05Hz，1H)，2.58(dd，J＝13.06，7.67Hz，1H)，2.40(m，3H)，2.11(t，J＝6.22Hz，3H)，2.02(m，2H).1.87(m，2H)，1.62(m，1H)，1.37(s，9H)，0.87(m，1H)，0.49(m，2H)，0.12(m，2H)。
化合物55：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(5-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离。1HNMR(400MHZ，MeOD)δHppm8.05(s，1H)，7.63(s.1H)，7.39(m，1H)，7.30(dd，J＝8.50，1.66Hz，1H)，7.20(d.J＝3.52Hz.1H)，6.59(d，J＝3.73Hz，1H)，4.32(dd，J＝7.77，5.91Hz，1H)，3.88(dd，J＝5.70，4.66Hz，1H)，2.99(m.1H)，2.84(t，J＝7.57Hz，2H).2.48(m，1H)，2.41(dd，J＝7.98，4.87Hz，1H)，2.34(m，1H)，2.24(m，1H)，2.15(s，3H).2.10(m.3H)，2.01(m，2H)，1.86(t.J＝8.19Hz，2H)，1.61(m，1H)。
化合物56：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((异丙基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
N-(2-氨基-4-(三氟甲氧基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酰胺
向内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸(1.3g，2.1mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(1.20mL，6.90mmo1)和4-(三氟甲氧基)苯-1，2-二胺(0.482g，2.51mmo1)的N，N-二甲基甲酰胺(13.0mL，167mmo1)溶液添加N，N，N’，N’-四甲基-0-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(1.19g，3.14mmol)。所述反应在室温搅拌过夜，部分浓缩至约2mL，然后添加NaHCO3(饱和)。所述混合物用EtOAc(3×)萃取，合并的有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩。所得残余物通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中95∶5)纯化以生成固态的所需酰胺(1.4g)。
N-(2，4-二甲氧基苄基)-7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-((异丙基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
使内含N-(2-氨基-4-(三氟甲氧基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酰胺(1.4g，1.8mmol)的AcOH在60℃加热过夜。真空浓缩该反应混合物生成粗产物。
(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((异丙基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
在室温下向水(1mL，60mmol)和N-(2，4-二甲氧基苄基)-7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-((异丙基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.91g，1.2mmol)的混合物添加三氟乙酸(10mL，100mmol)。室温搅拌该反应过夜，然后通过添加三乙基硅烷(0.37mL，2.3mmol)淬灭该反应。真空去除挥发性物质，所得残余物收集在MeOH(15mL)中。添加500mgK2CO3和8滴H2O，该反应在室温下搅拌1小时。过滤该混合物，滤饼用10mLMeOH洗涤。浓缩滤液，所得残余物通过快速色谱(DCM/7NNH3在MeOH中90:10)纯化以生成灰白色泡沫状的所需产物(0.232g)。针对C29H36F3N7O3MS(ESI+)m/z588.2[M+H]+；针对C29H36F3N7O3MS(ESI-)m/z586.2[M-H]-；HPLC纯度＞90％(保留时间，2.570分钟)。1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δH8.082&8.079(s，1H，重叠峰的出现归因于顺式和反式异构体)，7.554-7.524(m，1H)，7.414(s，1H)，7.225-7.209(m，1H)，7.155-7.127(m，1H)，6.618-6.609(m，1H)，4.363-4.323(m，1H)，3.976-3.932(m，1H)，3.606-3.524(m，0.5H(反式异构体的次甲基))，3.156-3.110(m，0.5H(顺式异构体的次甲基)，3.089-3.006(m，1H)，2.731-2.679(m，1H)，2.544-2.360(m，2H)，2.256-2.239(m，3H)，2.093-2.061(m，2H)，1.987-1.861(m，3H)，1.648-1.568(m，2H)，1.072-1.006(m，6H)。
化合物57：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基((1s，3R)-3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离。冻干所述材料以生成固体(78mg)。1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δH8.076(s，1H)，7.548-7.527(m，1H)，7.414(s，1H)，7.227-7.218(m，1H)，7.148-7.123(m，1H)，6.616-6.607(m，1H)，4.361-4.327(m，1H)，3.926-3.899(m，1H)，3.037-3.000(m，1H)，2.907-2.870(m，2H)，2.538-2.283(m，4H)，2.178-2.013(m，8H)，1.913-1.872(m，2H)，1.680-1.599(m，1H)。
化合物58：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(5，6-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离。该材料收集在MeOH/H2O中，然后冻干以产出茶色粉末(73mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.06(s，1H)，7.64(s，2H)，7.21(d，J＝3.73Hz，1H)，6.59(d，J＝3.52Hz，1H)，4.32(dd，J＝7.77，6.12Hz，1H)，3.89(m，1H)，3.01(m，1H)，2.86(t，J＝7.67Hz，2H)，2.51(m，1H)，2.40(m，2H)，2.27(m，1H)，2.18(s，3H)，2.11(m，3H)，2.02(q，J＝6.43Hz.2H)，1.88(t，J＝8.19Hz，2H)，1.63(m，1H)。
化合物59：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丁基甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
步骤1：3-((1R，3s)-3-((环丁基甲基)(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯
使胺3-[3-({[(3aR，4R，6R，6aS)-6-{4-[(2，4-二甲氧基苄基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]甲基)氨基)环丁基]丙酸乙酯(1.8g，3.0mmol)收集在甲醇(20mL，600mmol)中，然后添加氰基硼氢化钠(0.37g，5.9mmo1)。使用内含10％AcOH的甲醇溶液调整pH至约6，然后添加一份环丁烷甲醛(0.32g，3.8mmo1)。使该反应进行5小时，此时HPLC指示反应已终止。另添加1.3当量的环丁烷甲醛，所述反应过夜进行。向该反应混合物添加NaHCO3(饱和)，然后用DCM萃取3次。合并的有机物用MgS04干燥并浓缩至黄色树脂状。顺式和反式异构体可在二氧化硅上分离。通过FC(DCM/7NNH3在MeOH中96∶4)纯化产出分离的两批产物，其各富含一种异构体约达90％。上方异构体：0.38g(5∶1混合物，顺式)。下方异构体：0.31g(7∶1混合物，反式)。针对C35H49N5O6MS(ESI+)m/z676.7[M+H]+；HPLC纯度＞69％(保留时间，3.791)。
步骤2：N-(2-氨基-5-(叔丁基)苯基)-3-((1R，3s)-3-((环丁基甲基)(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酰胺
下方异构体(反式)：向内含3-((1R，3s)-3-((环丁基甲基)(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯(0.31g，0.46mmol)的四氢呋喃(6mL，70mmol)和甲醇(1.5mL，37mmol)溶液添加氢氧化锂一水合物(0.192g，4.59mmol)。使该反应在室温下搅拌过夜至次日早晨消耗起始材料并转化成酸。用1NHCl酸化该反应至pH＝6。真空去除挥发性物质，用乙醇共沸蒸馏去除残留的水，然后冻干24小时。所得灰白色固体无需进一步纯化即可使用。HPLC纯度＞94％(保留时间，3.344)。
向内含3-{反式-3-[(环丁基甲基){[(3aR，4R，6R，6aS)-6-{4-[(2，4-二甲氧基苄基)氨基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基]甲基)氨基]环丁基}丙酸(0.31g，0.48mmol)和[N，N-二异丙基乙基胺(0.275mL，1.58mmol)和4-叔丁基苯-1，2-二胺(0.0943g，0.574mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2.96mL，38.3mmol)溶液添加N，N，N′，N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(0.273g，0.718mmol)。所述反应在室温搅拌过夜，至次日早晨起始材料已消耗。所述反应部分浓缩至约2mL，然后添加NaHCO3(饱和)。所述混合物用EtOAc萃取3次，合并的有机物用MgSO4干燥并浓缩。所得残余物通过FC(DCM/7NNH3在MeOH中95∶5)纯化以产出紫色-棕色无定形固态的N-(2-氨基-5-(叔丁基)苯基)-3-((1R，3s)-3-((环丁基甲基)(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酰胺(0.29g；76％)。HPLC纯度＞20％(保留时间，3.650分钟)。
步骤3：7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丁基甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
使内含N-(2-氨基-5-(叔丁基)苯基)-3-((1R，3s)-3-((环丁基甲基)(((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酰胺(0.3g，0.4mmol)的乙酸(1.0mL，20mmol)溶液在65℃搅拌过夜，至次日早晨时已消耗起始材料。真空去除挥发性物质，所得残余物通过FC(DCM/7NNH3在MeOH中93:7)纯化以产出灰白色固态的7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丁基甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺。HPLC纯度＞73％(保留时间，3.709分钟)。
步骤4：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丁基甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
在室温下向水(0.5mL，30mmol)和7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丁基甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(0.23g，0.30mmol)的混合物添加三氟乙酸(5mL，70mmol)。使该反应进行过夜，然后用三乙基硅烷(0.095mL，0.59mmol)淬灭该明亮粉红色悬液。真空去除挥发性物质，所得残余物收集在MeOH(15mL)中。添加500mgK2CO3和8滴H2O，该反应在室温下搅拌1小时。过滤该混合物，用10mL甲醇洗涤滤饼。浓缩滤液，所得残余物通过FC(DCM/7NNH3在MeOH中90∶10)纯化以产出无色固态的(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(环丁基甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇(0.018g，10％)。针对C34H47N7O2MS(ESI+)m/z586.4[M+H]+；HPLC纯度＞93％(保留时间，2.070分钟)。1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δH8.083(s，1H)，7.501(s，1H)，7.421-7.400(m，1H)，7.315-7.290(m，1H)，7.218-7.209(m，1H)，6.621-6.612(m，1H)，4.350-4.317(m，1H)，3.930-3.903(m，1H)，3.403-3.367(m，1H)，2.880-2.843(m，2H)，2.722-2.360(m，6H)，2.323-2.241(m，2H)，2.173-1.606(m，13H)，1.387(s，9H)。
化合物60：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((异丙基((1r，3S)-3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离。冻干后回收无色固体(62g)。
化合物61：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((异丙基((1s，3R)-3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
非对映异构体通过SFC分离。该材料收集在MeOH/H2O中，然后冻干以产出灰白色粉末(89mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.06(s，1H)，7.52(d，J＝8.71Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.19(d，J＝3.52Hz，1H)，7.12(m，1H)，6.59(d，J＝3.52Hz，1H)，4.88(m，1H)，4.33(m，1H)，3.94(t，J＝5.39Hz，1H)，3.52(m，1H)，3.01(m，1H)，2.87(t，J＝7.15Hz，2H)，2.68(dd，J＝13.48，7.88Hz，1H)，2.47(dd，J＝13.27，7.46Hz，1H)，2.37(m，1H)，2.21(m，3H)，2.04(m，3H)，1.84(m，2H)，1.58(m，1H)，1.02(d，J＝6.63Hz，3H)，0.98(d，J＝6.43Hz，3H)。
化合物62：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
N-(4-(氧杂环丁烷-3-基)苯基)乙酰胺
将(4-乙酰氨基苯基)硼酸{670mg，3.7mmol)，碘化镍(II)(35mg，0.11mmol)，反-2-氨基环已醇(17mg，0.11mmol)和六甲基二硅氮烷钠(690mg，3.7mmol)称重并放入微波反应瓶。上方放置隔膜，通入氮气，添加异丙醇(5.7mL，75mmol)。所述小瓶通入氮气10分钟，然后在0.75mL异丙醇中添加3-碘氧杂环丁烷(344mg，1.87mmol)。用微波瓶盖替换该隔膜，然后在微波反应器中加热该混合物(微波条件：CEMDiscoveryExplorer微波反应器；升温时间：10分钟；80℃保持30分钟；功率：300W)。所得粗制反应混合物用8mLEtOH稀释，使该悬液过滤通过solkafloc垫。所述垫用35mLEtOH洗涤，然后浓缩滤液。所得粗制材料通过快速色谱(SiO2，用40-60％EtOAc/CH2Cl2洗脱)纯化以生成油状所需化合物(200mg)。
N-(2-硝基-4-(氧杂环丁烷-3-基)苯基)乙酰胺
向在0℃冷却超过约5-10分钟的70％硝酸(7:3，硝酸:水，11mL，170mmol)小心添加硫酸(9.4mL，180mmol)。所述混合物在0℃搅拌10分钟，然后通过移开冰浴使其升温至室温。将所述酸溶液转移至分离漏斗，添加二氯甲烷(20mL，300mmol)。振荡该漏斗5分钟，然后使各相分离。
分离有机相(上层相)，然后用额外的20mLCH2Cl2重复该过程。合并有机提取物，假定该有机相含有约5g(-80mmol)无水HNO3。使用50倍过量，这需要约25mL溶液。使硝酸溶液在冰浴中冷却。N-(4-氧杂环丁烷-3-基苯基)乙酰胺(210mg，0.70mmol)用25mL冷HN03/CH2Cl2溶液处理并搅拌约30分钟。将所述反应混合物小心倾倒至45mL10％NH4OH溶液中，然后小心振荡。分离各相，所得水相用20mLCH2Cl2洗涤。合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。所得粗制材料通过快速色谱(SiO2，用25-35％EtOAc/CH2C12洗脱)纯化以生成固态所需产物(170mg)。
2-硝基-4-(氧杂环丁烷-3-基)苯胺
使内含N-(2-硝基-4-氧杂环丁烷-3-基苯基)乙酰胺(125mg，0.529mmo)的水性肼(8mL，160mmol)悬液在70℃加热2h，该反应混合物冷却至45℃，然后真空去除所述肼以产出固体。所得粗制材料通过快速色谱(SiO2，用20％EtOAc/CH2Cl2洗脱)纯化以产出所需产物(71mg)。
4-(氧杂环丁烷-3-基)苯-1，2-二胺
内含2-硝基-4-氧杂环丁烷-3-基苯胺(91mg，0.47mmol)的乙醇(6.1mL)溶液用乙醇中呈浆状的10％碳载钯(10mg，0.009mmol)小心处理。使该反应烧瓶用氢气排气并填充三次，然后使反应在氢气气氛下搅拌2h。反应混合物通过solkafloc垫过滤，然后用25mLMeOH洗涤该垫。浓缩滤液以产出油状物，使其在高真空下凝固过夜以生成所需化合物(72mg)。将该材料按现状用于下一个步骤。1HNMR(400MHZ，CDC13)δHppm6.81(d，J＝1.52Hz，1H)，6.70(m，2H)，5.02(dd，J＝8.34，5.81Hz，2H)，4.74(m，2H)，4.09(m，1H)，3.45(br.s.，2H)，3.37(br.s.，2H)。
N-(2，4-二甲氧基苄基)-7-((3aS，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸(250mg.0.42mmol)和4-氧杂环丁烷-3-基苯-1，2-二胺(72mg，0.44mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(4.3mL，56mmol)溶液用N，N-二异丙基乙基胺(0.24mL，1.4mmol)逐滴处理，然后用一份N，N，N′，N′-四甲基-0-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲(240mg，0.632mmol)处理。使所述反应混合物在室温下搅拌6小时，然后在高度真空下浓缩该反应混合物。使所得残余物在30mLEtOAc(添加一些MeOH以协助溶解该产物)和30mL1/1H2O/饱和NaHCO3之间分配。水相用30mLEtOAc萃取，合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩成玻璃/硬泡沫状物。所得粗制材料通过快速色谱(SiO2，用内含6-7％7NNH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱)纯化。发现两组产物，极性较低对和极性较高对对应于两种辅助区域异构体。在下一步骤中分开处理各区域异构体。
使所述酰胺(130mg)收集在5mL冰乙酸中，然后在65℃加热2.25h，使该反应冷却然后置于冰箱中过夜。在温水浴的协助下，在高度真空下去除乙酸。使两批粗产物收集在30mLCH2Cl2中，有机相用分成几份的10mL饱和NaHCO3和2％Na2CO3溶液洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。所得粗制材料通过快速色谱(SiO2，用内含5.5-6.5％7NNH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱)纯化以生成所需化合物(140mg)。
(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
使N-(2，4-二甲氧基苄基)-7-((3aS，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(115mg，0.159mmol)溶解于已在冰浴中于0℃预冷的三氟乙酸(4.00mL，51.9mmol)和水(0.40mL，22mmol)的混合物中。所述溶液在0℃搅拌2h，使反应混合物升温至室温。之后，真空浓缩该反应混合物。所得残余物收集在6mLMeOH中，浓缩，该过程重复两次。将所得残余物置于高度真空中。所得粗残余物用2mLMeOH稀释，用140mgK2CO3和10滴H2O处理，然后在室温下搅拌直至该溶液由pH试纸测为碱性。所述溶液通过细玻璃料过滤，所得固体用MeOH洗涤。使滤液浓缩成固体，将其置于高真空下过夜。所得粗制材料通过制备型TLC纯化，在两个20cm×20cm×1.0mm制备型TLC板上，用内含14％7NNH3的CH3OH/CH2Cl2洗脱以生成无色玻璃状产物(37mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.06(s，1H)，7.52(br.s.，1H)，7.48(d，J＝8.29Hz，1H)，7.28(m，1H)，7.20(t，J＝3.42Hz，1H)，6.60(d，J＝3.52Hz，1H)，5.12(m，2H)，4.80(m，2H)，4.38(m，1H)，4.32(m，1H)，3.89(q，J＝5.60Hz，1H)，3.04(m，1H)，2.85(m，2H)，2.70(m，1H)，2.52(m，1H)，2.41(m.2H)，2.27(dd，J＝10.99，6.63Hz，2H)，2.19(s，3H)，2.17(s，3H)，2.14(m，1H)，2.03(d，J＝7.88Hz，1H)，1.91(m，3H)，1.62(m，1H)，1.51(m，1H)。
化合物63：(2R，3R，4S，SR)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基((1r，3S)-3-(2-(5-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
非对映异构体通过SFC分离。该材料收集在MeOH/H2O中，然后冻干成茶色粉末(58mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.26(s，1H)，8.19(s，1H)，7.51(s，1H)，7.47(d，J＝8.29Hz，1H)，7.26(dd，J＝8.29，1.45Hz，1H)，5.97(d，J＝3.94Hz，1H)，5.11(dd，J＝8.29，6.01Hz，2H)，4.79(t，J＝6.32Hz，2H)，4.69(m，1H)，4.36(m，1H)，4.22(t，J＝5.60Hz，1H)，4.15(m，1H)，2.79(t，J＝7.15Hz，2H)，2.72(m，1H)，2.66(m，2H)，2.21(m，2H)，2.14(s，3H)，1.88(m，3H)，1.45(m，2H)。
化合物64：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
步骤1：3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸
内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸乙酯(0.39g，0.82mmol)的甲醇(14mL)溶液用1M氢氧化钠水溶液(1.56mL，1.56mmol)处理，然后在50℃搅拌加热该反应混合物3.5h；HPLC/LCMS指示转换成所需产物。真空浓缩反应混合物，水性残余物用水(10mL)稀释然后用CH2Cl2(3×5mL)萃取。水性层用1M氯化氢水溶液(1.44mL，1.44mmol)处理调整至pH7。冻干所述澄清无色溶液以获得稍呈灰白色固体的粗制标题化合物(0.487g，110％)，产量以1.56mmolNaCl(91mg)计：针对C21H30N6O5MS(ESI+)m/z447.1(M+H)+；针对C21H30N6O5MS(ESI-)m/z445.2(M-H)-；HPLC纯度＞95％(保留时间，1.949分钟)。
步骤2：N-(2-氨基-5-(氧杂环丁烷-3-基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酰胺
内含上述粗制的3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸和4-(氧杂环丁烷-3-基)苯-1，2-二胺(0.135g，0.822mmol)的二氯甲烷(8.0mL)悬液用N，N-二异丙基乙基胺(0.716mL，4.11mmol)处理，然后冷却至-5℃(冰/盐水)。添加N，N，N′，N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并***-1-基)六氟磷酸脲[HATU](0.469g，1.23mmol)，然后搅拌该反应混合物5.25h，升温至15℃；HPLC/LCMS指示转化完全。真空浓缩该反应混合物，然后用CH2Cl2(15mL)和水(7.5mL)稀释。分离的水层用CH2Cl2(2×10mL)萃取。所得结合的有机物干燥(Na2SO4)并真空浓缩以得到棕色-紫色半透明的油状/泡沫状物。通过柱层析(2×8cm二氧化硅；0-5％7N甲醇的NH3/CH2Cl2)纯化得到半透明粉红色泡沫状的所述标题化合物的两种酰胺区域异构体(0.45g，82％)：针对C30H40N8O5MS(ESI+)m/z593.3(M+H)+；针对C30H40N8O5MS(ESI-)m/z591.3(M-H)-和637.4(M+HCO2)-；HPLC纯度90％(保留时间，2.097分钟)。
步骤3：9-((3aR，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺
N-(2-氨基-5-(氧杂环丁烷-3-基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酰胺(0.446g，0.752mmol)收集在乙酸(7.7mL，140mmol)中并在65℃加热3.5h；HPLC/LCMS指示转化完全。3.75h时，通过最小化加热的蒸馏去除乙酸以获得橙色油状物，使其收集在CH2Cl2(45mL)中并用饱和水性NaHCO3(2×30mL)洗涤。用NaCl处理该水层直至饱和，然后用CH2Cl2(2×20mL)萃取。干燥合并的有机层(Na2SO4)，真空浓缩以获得浅橙色油状物。通过柱层析(2×8cm二氧化硅；0-5％7N甲醇的NH3/CH2Cl2)纯化得到浅橙色泡沫状标题化合物(0.28g，65％)：针对C30H38N8O4MS(ESI+)m/z575.3(M+H)+；针对C30H38N8O4MS(ESI-)m/z573.3(M-H)-；HPLC纯度＞95％(保留时间2.142分钟)。
步骤4：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基(3-(2-(5-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-醇
向含有9-((3aR，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(0.28g，0.42mmol)的冷却的(冰浴)烧瓶添加预冷的(冰浴)内含三氟乙酸(6.4mL，84mmol)的水(0.75mL，42mmol)溶液。在0℃搅拌该反应混合物5.75h；HPLC/LCMS指示起始材料接近完全消耗。6h时，从冰浴移开所述烧瓶，然后通过室温下蒸馏去除挥发性物质。残余物用MeOH(15mL)稀释，然后用碳酸钾(0.32g，2.3mmol)和水(1mL)处理，所得混合物在室温搅拌20分钟；pH2。添加额外的碳酸钾(0.20g，1.4mmol)，所述混合物搅拌20分钟；pH8-9。使该溶液通过细玻璃料过滤，用MeOH漂洗，所得滤液真空浓缩以获得茶色半固体。通过柱层析(3×8cm二氧化硅；10-20％7N甲醇的NH3/CH2Cl2)纯化得到接近无色的玻璃状标题化合物(123mg，55％)：针对C27H34N8O4MS(ESI+)m/z535.3(M+H)+；针对C27H34N8O4MS(ESI-)m/z533.3(M-H)-；HPLC纯度＞95％(保留时间1.765分钟)；1HNMR(400MHz，d4-MeOH)顺式/反式异构体的混合物δH8.29-8.25(m，1H)，8.21-8.17(m，1H)，7.51(s，1H)，7.47(d，J＝8.3Hz，1H)，7.26(dd，J＝1.6，8.3Hz，1H)，6.00-5.96(m，1H)，5.11(dd，J＝5.8，8.3Hz，2H)，4.81-4.76(m，2H)，4.73-4.68(m，1H)，4.40-4.31(m，1H)，4.27-4.13(m系列，2H)，3.13-3.03(m，0.4H)，2.86-2.66(m系列，4.6H)，2.30-1.80(m系列，8.6H)，1.55-1.40(m，1.4H)。
化合物65：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基((1s，3R)-3-(2-(5-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
非对映异构体通过SFC分离。该材料收集在MeOH/H2O中，然后冻干成白色粉末(35mg)。1HNMR(400MHz，MeOD)δHppm8.28(s，1H)，8.19(s，1H)，7.51(s，1H)，7.48(d，J＝8.29Hz，1H)，7.27(dd，J＝8.29，1.45Hz，1H)，5.98(d，J＝4.15Hz，1H)，5.12(dd，J＝8.40，5.91Hz，2H)，4.79(t，J＝6.32Hz，2H)，4.69(dd，J＝5.39，4.15Hz，1H)，4.36(m，1H)，4.23(t，J＝5.60Hz，1H)，4.17(m，1H)，3.05(m.1H)，2.83(t，J＝7.46Hz，2H)，2.67(m.2H)，2.16(s，3H)，2.08(m，2H)，1.98(m，3H)，1.83(m，2H)。
化合物67：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-[({3-[2-(5-环丁基-1H-1，3-苯并二唑-2-基)乙基]环丁基}(丙-2-基)氨基)甲基]四氢呋喃-3，4-二醇
步骤1：3-[3-({[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]甲基}氨基)环丁基]丙酸苄酯
在室温下使内含9-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(氨基甲基)-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]-9H-嘌呤-6-胺(1.45g，4.736mmol)、3-(3-氧代环丁基)丙酸苄酯(1.21g，5.209mmol)和乙酸(246.45μl，4.31mmol)的DCE∶iPrOH(4∶1，50mL)悬液搅拌1h。向所述反应混合物额外添加等份的DCE(40mL)和iPrOH(5mL)，持续1小时。然后，向所述反应混合物添加STAB(1.28g，6.03mmol)，然后搅拌18小时。用1NNa2CO3(10mL)淬灭该反应混合物，用DCM(2×30mL)萃取该产物。用Na2SO4干燥，过滤和蒸发至干。通过硅胶柱色谱纯化，用内含7NNH3的MeOH∶DCM(1∶99-3∶97)洗脱获得无色油状的所需产物，1.51g(58％)；针对C27H34N6O5MS(ESI+)m/z523.65[M+H]+；HPLC纯度97％(保留时间，1.43分钟)；1HNMR(500MHz，氯仿-d)δHppm8.35(d，J＝5.3Hz，1H)，7.87(d，J＝33.8Hz，1H)，7.40-7.29(m，5H)，6.08-5.94(m，1H)，5.59-5.42(m，3H)，5.10(d，J＝4.0Hz，2H)，5.03-4.96(m，1H)，4.33(dq，J＝7.3，3.9Hz，1H)，3.12(ddd，J＝23.0，14.6，7.5Hz，1H)，2.85-2.77(m，1H)，2.74(dd，J＝12.5，6.6Hz，1H)，2.39-2.07(m，4H)，1.90-1.64(m，5H)，1.61(s，4H)，1.38(s，3H)，1.28-1.06(m，1H)。
步骤2.3-[3-({[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]甲基}(丙-2-基)氨基)环丁基]丙酸苄酯
向内含3-[3-({[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]甲基}氨基)环丁基]丙酸苄酯(1.00g，1.91mmol)和2-碘代丙烷(0.57mL，5.74mmol)的MeCN溶液添加K2CO3(528.92mg，3.83mmol)，然后在密封试管内于95℃搅拌18小时。反应混合物用EtOAc(20mL)稀释，过滤并蒸发至干。通过硅胶柱色谱纯化，用内含7NNH3的MeOH∶DCM(1∶99-5∶95)洗脱获得无色油状的所需产物，700mg(65％)；针对C30H40N6O5MS(ESI+)m/z565.70[M+H]+；HPLC纯度96％(保留时间，1.48分钟)；1HNMR(500MHz，氯仿-d)δHppm8.35(d，J＝3.5Hz，1H)，7.88(d，J＝3.2Hz，1H)，7.44-7.29(m，5H)，6.03(t，J＝2.2Hz，1H)，5.62-5.42(m，3H)，5.10(d，J＝3.3Hz，2H)，5.06-4.92(m，1H)，4.26(dt，J＝9.9，3.4Hz，1H)，3.46-2.84(m，2H)，2.88-2.61(m，1H)，2.51(ddd，J＝14.0，9.1，7.5Hz，1H)，2.33-2.15(m，2H)，2.50-2.13(m，2H)，2.16-1.74(m，4H)，1.60(s，3H)，1.43-1.35(m，4H)，0.96(d，J＝6.7Hz，3H)，0.79(d，J＝6.6Hz，3H)。
步骤3.3-[3-({[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]甲基}(丙-2-基)氨基)环丁基]丙酸
向内含3-[3-({[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]甲基}(丙-2-基)氨基)环丁基]丙酸苄酯(790mg，1.40mmol)的EtOH(20mL)溶液添加10％Pd-C(70mg)，然后在氢气气氛下于室温搅拌18h。额外添加等份10％Pd-C(70mg)，所述反应在氢气下持续搅拌4小时。过滤所述反应物并真空蒸发，然后从DCM(2×20mL)蒸发以生成白色泡沫状固体680mg(定量)。针对C23H34N6O5MS(ESI+)m/z475.20[M+H]+；HPLC纯度100％(保留时间，1.11分钟)；1HNMR(500MHz，氯仿-d)δHppm8.29(d，J＝16.3Hz，1H)，7.97(d，J＝16.2Hz，1H)，6.86(s，2H)，6.05(dd，J＝4.3，1.7Hz，1H)，5.66-5.43(m，1H)，5.00(ddd，J＝19.3，6.3，3.2Hz，1H)，4.30(s，1H)，3.47-2.85(m，2H)，2.60(ddd，J＝38.8，24.1，13.5Hz，2H)，2.19(ddd，J＝14.7，11.9，7.1Hz，2H)，2.07-1.94(m，2H)，1.81(dd，J＝65.1，6.9Hz，3H)，1.66-1.46(m，5H)，1.45-1.22(m，4H)，1.00(d，J＝6.4Hz，3H)，0.89(dd，J＝12.2，6.6Hz，3H)。
步骤4.3-[3-({[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]甲基}(丙-2-基)氨基)环丁基]-N-(2-氨基-4/5-环丁基苯基)丙酰胺
在室温下向内含3-[3-({[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]甲基}(丙-2-基)氨基)环丁基]丙酸(308.46mg，0.65mmol)、4-环丁基苯-1，2-二胺(210.90mg，1.30mmol)、(2E)-氰基(羟基亚氨基)乙酸乙酯(184.75mg，1.30mmol)和EDC.HCl(249.21mg，1.30mmol)的DCM(15mL)溶液添加TEA(0.54mL，3.90mmol)，然后搅拌2小时。真空浓缩所述反应混合物，然后添加DCM(50mL)。其用饱和NaHCO3(2×30mL)洗涤。用DCM(50mL)萃取水性液。合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。所得产物通过硅胶柱色谱纯化，用EtOAc然后内含7NNH3的MeOH∶DCM(5∶95)洗脱以生成灰色油状物，468mg(93％)；针对C33H46N8O4MS(ESI+)m/z619.35[M+H]+；HPLC纯度80％(保留时间，1.44分钟)。
步骤5.9-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-[({3-[2-(5-环丁基-1H-1，3-苯并二唑-2-基)乙基]环丁基}(丙-2-基)氨基)甲基]-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]-9H-嘌呤-6-胺
向3-[3-({[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]甲基}(丙-2-基)氨基)环丁基]-N-(2-氨基-4/5-环丁基苯基)丙酰胺(468mg，0.61mmol)添加AcOH(10mL)，然后加热至65℃同时搅拌4小时。真空浓缩该反应混合物，然后使其溶解于DCM(100mL)，用饱和NaHCO3(2×80mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。通过快速硅胶色谱(Biotage，Isolera，25g筒)纯化，用内含3N氨的MeOH∶DCM(0-1∶9)洗脱以生成纯度约为80％的所需产物。通过制备型HPLC进一步纯化获得灰色油状所需产物，120mg(27％)；针对C33H44N8O3MS(ESI+)m/z601[M+H]+；HPLC纯度100％(保留时间，1.43分钟)；1HNMR(500MHz，氯仿-d)δHppm8.62(d，J＝53.1Hz，6H)，8.57(s，2H)，8.25(d，J＝19.3Hz，1H)，7.90(d，J＝20.3Hz，1H)，7.50(dd，J＝8.3，3.9Hz，1H)，7.41(d，J＝4.5Hz，1H)，7.18-7.06(m，1H)，6.52(d，J＝96.3Hz，2H)，6.07(dd，J＝10.2，1.3Hz，1H)，5.52-5.39(m，1H)，5.07(dd，J＝6.2，3.4Hz，1H)，4.44(td，J＝9.3，5.1Hz，1H)，3.59(dq，J＝17.4，8.7Hz，1H)，3.36-3.10(m，2H)，3.08-2.92(m，2H)，2.87-2.72(m，2H)，2.43-2.27(m，2H)，2.24-1.65(m，10H)，1.57(s，4H)，1.37(s，3H)，1.10(d，J＝6.6Hz，3H)，0.91(dd，J＝8.9，6.8Hz，3H)。
步骤6.(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-[({3-[2-(5-环丁基-1H-1，3-苯并二唑-2-基)乙基]环丁基}(丙-2-基)氨基)甲基]四氢呋喃-3，4-二醇
在0℃向内含9-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-[({3-[2-(5-环丁基-1H-1，3-苯并二唑-2-基)乙基]环丁基}(丙-2-基)氨基)甲基]-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]-9H-嘌呤-6-胺(120mg，0.164mmol)的MeOH(2mL)溶液逐滴添加12NHCl(24mmol，2mL)，同时搅拌。然后，使其升温至室温，持续6小时。使该反应混合物冷却至0℃，然后用内含7NNH3的MeOH(10mL)碱化。然后使其真空蒸发。使该粗产物吸收至硅胶(1mL)，置于Isolute快速Si筒(10g)上并纯化，用内含7NNH3的MeOH∶DCM(1∶9)洗脱以生成白色固体，36mg(38％)；针对C30H40N8O3MS(ESI+)m/z561.45[M+H]+；HPLC纯度100％(保留时间，1.13分钟)；1HNMR(500MHz，氯仿-d)δHppm8.29(d，J＝4.6Hz，1H)，8.20(d，J＝1.6Hz，1H)，7.50-7.18(m，2H)，7.06(ddd，J＝8.3，4.6，1.3Hz，1H)，6.01-5.90(m，1H)，4.73(dd，J＝9.8，5.1Hz，1H)，4.26(q，J＝5.4Hz，1H)，4.14-4.03(m，1H)，3.60-3.15(m，2H)，3.07-2.86(m，2H)，2.84-2.67(m，3H)，2.42-2.31(m，2H)，2.25-2.11(m，4H)，2.10-1.95(m，2H)，1.92-1.74(m，4H)，1.57(dd，J＝12.2，6.2Hz，1H)，1.02(dd，J＝6.6，4.0Hz，3H)，0.95(dd，J＝6.6，2.3Hz，3H)。
化合物68：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-{[(3-{2-[5-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-1H-1，3-苯并二唑-2-基]乙基}环丁基)(甲基)氨基]甲基}四氢呋喃-3，4-二醇
步骤1：3-[3-({[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]甲基}氨基)环丁基]丙酸苄酯
使内含9-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(氨基甲基)-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]-9H-嘌呤-6-胺(5.00g，16.3mmol)、3-(3-氧代环丁基)-丙酸苄酯(4.17g，18.0mmol)和乙酸(0.85mL，14.8mmol)的DCE∶iPrOH(7∶2)(90mL)悬液在室温搅拌2h。以几份形式添加三乙酰氧基硼氢化钠(4.40g，20.8mmol)，所述混合物留在室温搅拌18小时。用1MNa2CO3溶液(10mL)淬灭所述反应混合物，用DCM(3×30mL)萃取该产物。用Na2SO4干燥合并的有机层，过滤和蒸发至干。通过硅胶快速柱色谱纯化，用内含1％7MNH3的MeOH∶99％DCM洗脱生成黄色油状产物(5.25g，55％，89％纯)：针对C27H34N6O5MS(ESI+)m/z523.6[M+H]+；LC纯度89％(保留时间，1.60分钟)；1HNMR(500MHz，CDCl3)δH8.35(d，J＝6.0Hz，1H)，7.91(s，1H)，7.30-7.39(m，5H)，6.01(dd，J＝3.0Hz，1.6，1H)，5.72(br.s.，2H)，5.50(dt，J＝6.4Hz，3.3，1H)，5.10(d，J＝3.8Hz，2H)，4.98-5.04(m，1H)，4.31-4.38(m，1H)，2.97-3.34(m，1H)，2.72-2.85(m，2H)，2.22-2.35(m，3H)，2.14(td，J＝8.3，4.3Hz，1H)，1.73-1.90(m，4H)，1.64-1.71(m，1H，)，1.62(d，J＝1.4Hz，3H)，1.39(s，3H)，1.10-1.27(m，1H)。
步骤2：3-[3-({[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]甲基}(甲基)氨基)环丁基]丙酸苄酯
使3-[3-({[(3aR，4Rv6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]甲基}氨基)环丁基]丙酸苄酯(3.2g，6.12mmol)溶解于甲醇(32mL)中。添加内含甲醛的水(37％)(0.92mL，12.3mmol)，搅拌45分钟，然后分成几份添加氰基硼氢化钠(0.54g，8.57mmol)。室温搅拌该反应2小时，然后添加水(1mL)，室温下蒸发去除溶剂。所得残余物通过色谱纯化，用内含7M氨的甲醇/DCM生成黄色油状所需化合物(非对映异构体混合物)(2.05g，62％，82％纯)：针对C28H36N6O5MS(ESI+)m/z537.6[M+H]+；LC纯度82％(保留时间，1.60分钟)；1HNMR(500MHz，CDCl3)δH8.32-8.38(m，1H)，7.91-7.97(m，1H)，7.32-7.39(m，5H)，6.05-6.10(m，1H)，5.61(br.s.，2H)，5.53(ddd，J＝16.5，6.4，1.8Hz，1H)，5.11(m，2H)，4.93-5.00(m，1H)，4.32-4.40(m，1H)，2.50-2.88(m，1H)，2.37-2.49(m，2H)，2.21-2.30(m，2H)，2.10(m，3H)，1.91-2.04(m，1H)，1.73-1.79(m，2H)，1.64-1.72(m，2H)，1.56-1.63(m，4H)，1.41(s，3H)，1.15(q，J＝9.7Hz，1H)。
步骤3：3-[3-({[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]甲基}(甲基)氨基)环丁基]丙酸
使3-[3-({[(3aRv4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]甲基}(甲基)氨基)环丁基]丙酸苄酯(1.19g，2.22mmol)溶解于乙醇(24mL)，然后添加10％炭载钯(50％湿糊)(0.24g)。在氢气气氛下搅拌所得悬液18小时。然后将其过滤，用乙醇(10mL)洗涤所得固体。由于该反应不完全，额外添加炭载钯(0.21g)，在氢气下使反应另外持续24小时。通过双玻璃纤维过滤，用乙醇洗涤并蒸发至干以生成白色泡沫状所需化合物(非对映异构体的混合)(0.85g，86％)：针对C21H30N6O5MS(ESI+)m/z447.5[M+H]+；LC纯度86％(保留时间，1.08分钟)；1HNMR(500MHz，d4-MeOD)δH8.18-8.35(m，2H)，6.14-6.30(m，1H)，5.25-5.56(m，1H)，5.01-5.11(m，1H)，4.35-4.52(m，1H)，3.63-3.81(m，1H)，3.24-3.30(m，1H)，2.98-3.16(m，1H)，2.89(ddd，J＝17.2，13.4，3.7Hz，1H)，2.36(m，2H)，2.17-2.26(m，1H)，1.98-2.17(m，3H)，1.67-1.92(m，3H)，1.49-1.64(m，4H)，1.39(s，3H)，1.20-1.33(m，1H)。
步骤4：2-(4-氟苯基)-2-甲基丙酸甲酯
氢化钠(60％悬液在矿物油中)(2.64g，66mmol)用庚烷(2×20mL)洗涤，然后悬于THF(40mL)中。添加内含2-(4-氟苯基)乙酸甲酯(5.05g，30mmol)的THF(10mL)溶液，搅拌30分钟。以1mL为一份添加碘甲烷(5.6mL，90mmol)超过30分钟，起始冷却至10℃，然后随着气体逸出停止而温和升温至50℃。4.5h后，添加水(50mL)，所得混合物用EtOAc(2×50mL)萃取。合并的有机相用盐水(30mL)洗涤，用MgSO4干燥，然后过滤并蒸发至干以剩余橙色油状物(5.08g，79％，91％纯由1HNMR测定)：针对C11H13FO2MS(ESI+)m/z196.2[M+H]+；LC纯度80％(保留时间，1.94分钟)；1HNMR(500MHz，CDCl3)δH7.29-7.34(m，2H)，6.98-7.05(m，2H)，3.66(s，3H)，1.58(s，6H)。
步骤5：2-(4-氟苯基)-2-甲基丙-1-醇
使2-(4-氟苯基)-2-甲基丙酸甲酯(5.08g，26.9mmol)溶解于THF(51mL)并冷却至0℃，然后逐滴添加氢化铝锂溶液(1M在THF中)(38.8mL，38.8mmol)超过30分钟。添加完成时，使该反应升温至室温，然后搅拌3小时。再次冰上冷却后，小心添加水(1.35mL)，然后添加内含15％NaOH的水(1.35mL)和更多水(4.05mL)。所得悬液在室温下搅拌30分钟，然后滤出固体并用THF(2×30mL)洗涤。蒸发溶剂，所得产物通过色谱纯化，使用EtOAc/庚烷以生成澄清油状物(3.48g，80％)：针对C10H13FOMS(ESI+)m/z168.2[M+H]+；LC纯度94％(保留时间，1.76分钟)；1HNMR(500MHz，CDCl3)δH7.41-7.32(m，2H)，7.15-7.00(m，2H)，3.62(d，J＝6.4Hz，2H)，1.35(s，6H)。
步骤6：1-氟-4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯
在N2下使氢化钠(1.664g，41.6mmol，60％分散于矿物油中)悬于干燥THF(18mL)，然后在0℃向所述悬液缓慢添加内含2-(4-氟苯基)-2-甲基丙-1-醇(3.500g，20.8mmol)的干燥THF(18mL)。添加完成后，使所述反应升温至室温，留置1小时。室温下缓慢添加碘代甲烷(6.5mL，0.104mmol)，所述反应留置3小时。通过缓慢添加H2O(35mL)淬灭所述反应。分离各层，水层用EtOAc(3×35mL)萃取。合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩以生成粗产物。所得产物通过二氧化硅快速柱层析纯化，使用介于100％庚烷～10％EtOAc∶90％庚烷之间的洗脱剂获得无色油状产物(2.991g，79％)：LC纯度98％(保留时间，2.16分钟)；1HNMR(500MHz，CDCl3)δH7.40-7.32(m，2H)，7.11-6.96(m，2H)，3.39(s，2H)，3.33(s，3H)，1.33(s，6H)。
步骤7：1-氟-4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-2-硝基苯
使氟-4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯(2.987g，16.4mmol)在盐冰/水浴中冷却至-20℃，然后在搅拌时缓慢逐滴添加硫酸(27mL)。添加硫酸使所述溶液变为亮橙色。缓慢逐滴添加硝酸(3mL)超过15-20分钟。添加硝酸使溶液变为深黄/棕色并有一些白色固体沉淀。使反应留置30分钟，然后倾倒至冰(450g)上。所述混合物用DCM(2×225mL)萃取，合并的有机萃取物用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩以生成粗产物。所得产物通过二氧化硅快速柱层析纯化，使用介于100％庚烷～20％EtOAc：80％庚烷之间以获得黄色油状产物(2.239g，60％)：LC纯度96％(保留时间，2.18分钟)；1HNMR(500MHz，CDCl3)δH8.08(dd，J＝7.1，2.5Hz，1H)，7.67(ddd，J＝8.7，4.1，2.5Hz，1H)，7.23(dd，J＝10.6，8.8Hz，1H)，3.41(s，2H)，3.33(s，3H)，1.37(s，6H)。
步骤8：1-叠氮基-4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-2-硝基苯
在室温下使氟-4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-2-硝基苯(2.227g，9.80mmo1)溶解于DMF(25mL)，然后添加叠氮化钠(1.274g，19.6mmo1)，使反应搅拌过夜。用水(75mL)淬灭该反应，所述混合物用TBME(3×75mL)萃取。合并的有机层用MgSO4干燥，真空过滤并浓缩以生成粗产物。所得产物通过二氧化硅快速柱层析纯化，使用介于100％庚烷～15％EtOAc：85％庚烷之间的洗脱剂获得黄色油状产物(2.301g，75％，80％纯)：LC纯度79％(保留时间，2.15分钟)；1HNMR(500MHz，CDCl3)δH7.97(d，J＝2.2Hz，1H)，7.66(dd，J＝8.5，2.2Hz，1H)，7.33-7.22(m，1H)，3.40(s，2H)，3.33(s，3H)，1.36(s，6H)。
步骤9：4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯-1，2-二胺
使叠氮基-4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-2-硝基苯(1.102g，3.52mmo1)溶解于EtOH(30mL)，然后添加Pd/C(10％重量)(0.110g，10％重量)。该反应用N2排气3次，然后用H2排气3次，在室温搅拌该反应过夜。通过硅藻土过滤所述混合物，所得滤液真空浓缩以获得粗产物。所得产物通过二氧化硅快速柱层析纯化，使用介于100％庚烷～100％EtOAc之间的洗脱剂获得浅棕色油状的产物，其凝固成深橙色固体(0.481g，63％，90％纯)：针对C11H18N2OMS(ESI+)m/z195.1[M+H]+；LC纯度87％(保留时间，0.99分钟)；1HNMR(500MHz，CDCl3)δH6.65(dd，J＝11.2，1.9Hz，2H)，6.58(d，J＝7.9Hz，1H)，3.26(s，2H)，3.24(s，3H)，1.20(s，6H)。
步骤10：3-[3-({[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]甲基}(甲基)氨基)环丁基]-N-[2-氨基-4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯基]丙酰胺
向配有搅拌子的烧瓶添加3-[3-(｛[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]甲基}(甲基)氨基)环丁基]丙酸(0.620g，1.39mmo1)、4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯-1，2-二胺(0.466g，2.08mmol，87％纯)、EDC.HCl(0.532g，2.78mmol)和OXYMA(氰基(羟基亚氨基)乙酸乙酯)(0.395g，2.78mmo1)，然后用N2排气。在室温下添加干燥的DCM(22mL)和干燥的Et3N(1.2mL，8.33mmo1)，使该反应过夜。通过添加饱和NaHCO3溶液(25mL)淬灭该反应，然后分离有机层。水层用DCM(2×25mL)萃取，合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩以生成粗产物。产物通过二氧化硅快速柱层析纯化，先使用100％EtOAc洗脱二苯胺，然后介于100％DCM～20％内含2MNH3的MeOH：80％DCM之间的洗脱剂获得棕色油状产物(1.081g，定量)：针对C32H46N8O5MS(ESI+)m/z623.4[M+H]+；LC纯度98％(保留时间，1.36分钟)；1HNMR(500MHz，CDCl3)δH8.39(d，J＝7.8Hz，1H)，7.99(s，1H)，7.42-7.30(m，1H)，7.24-7.00(m，1H)，6.96-6.81(m，1H)，6.12(d，J＝12.6Hz，1H)，5.77(d，J＝6.7Hz，1H)，5.63(d，J＝5.0Hz，1H)，5.14-4.93(m，1H)，4.60-4.31(m，1H)，4.28-3.69(m，2H)，3.48-3.03(m，5H)，2.65-2.48(m，1H)，2.46-2.33(m，1H)，2.34-2.10(m，7H)，2.10-1.98(m，1H)，2.00-1.66(m，4H)，1.62(d，J＝15.7Hz，13H)，1.44(d，J＝6.5Hz，4H)，1.30(t，J＝3.3Hz，7H)，1.12(d，J＝52.3Hz，1H)。
步骤11：9-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-{[(3-{2-[5-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-1H-1，3-苯并二唑-2-基]乙基｝环丁基)(甲基)氨基]甲基｝-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]-9H-嘌呤-6-胺
使3-[3-({[(3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]甲基}(甲基)氨基)环丁基]-N-[2-氨基-4-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)苯基]丙酰胺(1.036g，1.66mmo1)溶解于AcOH(17mL)中，然后至50℃加热5h。真空浓缩该反应，使所得残余物溶解于DCM(75mL)，然后添加饱和NaHCO3溶液(75mL)。分离所述有机层并且用DCM(2×75mL)萃取所述水层。合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩以获得深橙色油状的粗产物(0.850g，94％)。所得产物通过中性制备型HPLC纯化以获得浅黄色油状产物(0.485g，47％，88％纯)：针对C32H44N8O4MS(ESI+)m/z605.4[M+H]+；LC纯度88％(保留时间，1.25分钟)；1HNMR(500MHz，CDCl3)δH10.44(dd，J＝207.7，22.9Hz，1H)，8.41(d，J＝17.1Hz，1H)，8.16(d，J＝13.8Hz，1H)，7.89-7.58(m，1H)，7.54-7.29(m，2H)，6.15(d，J＝10.9Hz，1H)，5.92-5.56(m，3H)，4.98(d，J＝12.5Hz，1H)，4.76-4.39(m，1H)，3.47(d，J＝6.2Hz，2H)，3.33(d，J＝4.8Hz，3H)，2.98-2.43(m，4H)，2.42-2.00(m，6H)，1.99-1.88(m，2H)，1.77-1.66(m，1H)，1.64(s，3H)，1.61-1.48(m，1H)，1.44(d，J＝8.1Hz，3H)，1.40(d，J＝7.9Hz，6H)，1.28(dd，J＝16.0，9.0Hz，1H)。
步骤12：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-{[(3-{2-[5-(1-甲氧基-2-乙基丙-2-基)-1H-1，3-苯并二唑-2-基]乙基｝环丁基)(甲基)氨基]甲基}四氢呋喃-3，4-二醇
使9-[(3aR，4R，6R，6aR)-6-｛[(3-{2-[5-(1-甲氧基-2-甲基丙-2-基)-1H-1，3-苯并二唑-2-基]乙基)环丁基)(甲基)氨基]甲基)-2，2-二甲基-四氢-2H-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基]-9H-嘌呤-6-胺(0.485g，0.706mmol，88％纯)溶解于MeOH(20mL)，然后在室温添加浓HCl(4.9mL，10vo1)，使反应留置2.5小时。真空浓缩该反应，使所得残余物溶解于最小量的MeOH(约2mL)中。通过添加饱和的NaHCO3溶液(10mL)和EtOAc(30mL)淬灭该反应。分离各层，水层用EtOAc(2×30mL)萃取。合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩以生成粗产物。所得产物通过二氧化硅快速柱层析纯化，使用介于100％DCM和20％内含2MNH3的MeOH：80％DCM之间的洗脱剂获得白色泡沫状的产物(0.213g，53％)：针对C29H40N8O4MS(ESI+)m/z565.4[M+H]+；LC纯度100％(保留时间，2.11分钟)(7分钟)；1HNMR(500MHz，d4-MeOD)δH8.28(d，J＝4.1Hz，1H)，8.22(d，J＝3.2Hz，1H)，7.51(s，1H)，7.42(dd，J＝8.5，2.1Hz，1H)，7.29(dd，J＝8.5，1.5Hz，1H)，6.01(t，J＝3.9Hz，1H)，4.84-4.74(m，1H)，4.41-4.29(m，1H)，4.29-4.19(m，1H)，3.48(s，2H)，3.30(s，3H)，3.14-2.98(m，1H)，2.99-2.89(m，1H)，2.90-2.73(m，2H)，2.39(s，3H)，2.37-2.30(m，1H)，2.28-2.10(m，2H)，2.08-1.86(m，4H)，1.70-1.51(m，1H)，1.38(s，6H)。
化合物69：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇.
(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇.1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.06(s，1H)，7.47(brs，1H)，7.38(d，J＝8.0HZ，1H)，7.27(d，J＝8.0Hz，1H)，7.19(s，1H)，6.60(s，1H)，4.32(s，1H)，3.88(s，1H)，2.80(brs，2H)，2.68(brs，1H)，2.49-2.10(m，9H)，1.90(brs，2H)，1.62-1.49(m，3H)，1.35(s，9H)ppm；ESI-MS(m/z)：532.3[M+1]+。
3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸苄酯
使内含7-((3aR，4R，6R，6aR)-6-(氨基甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(20g，43.91mmo1)、3-(3-氧代环丁基)丙酸苄酯(12.2g，52.69mmo1)和HOAc(15mL)的DCE(200mL)溶液在30℃搅拌3小时。添加NaBH(OAc)3(18.6g，87.81mmo1)，然后在30℃再搅拌该反应混合物1小时。所得混合物用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。所得残余物通过硅胶柱层析纯化，使用EA∶DCM∶MeOH＝10∶10∶1为洗脱剂以获得黄色固态所需化合物(21g，产率：65％，顺式/反式＝52/47)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.16(brs，1H)，7.36-7.29(m，5H)，7.22(d，J＝3.5Hz，1H)，7.15(d，J＝8.5Hz，1H)，6.66(brs，1H)，6.54(d，J＝2.0Hz，1H)，6.43(dd，J＝8.5和2.0Hz，1H)，6.20(brs，1H)，5.41-5.39(m，1H)，5.08(d，J＝3.0Hz，1H)，4.99-4.95(m，1H)，4.66(s，2H)，4.30-4.25(m，1H)，3.83(s，3H)，3.76(s，3H)，3.38-3.35(m，0.5H)，3.11-3.06(m，0.5H)，2.92-2.82(m，2H)，2.29-2.18(m，3H)，2.12-2.05(m，0.5H)，1.90-1.68(m，4H)，1.63-1.61(m，1H)，1.60(s，3H)，1.38(s，3H)，1.35-1.28(m，0.5H)，1.25(t，J＝6.5Hz，2H)，1.15-1.12(m，0.5H)ppm；ESI-MS(负模式，m/z)：670.3[M-1]+。
3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸苄酯
使内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸苄酯(4g，5.95mmo1)、2-碘代丙烷(6g，35.72mmo1)和K2CO3(2.5g，17.86mmo1)的CH3CN(50mL)混合物回流搅拌2天。使该混合物冷却至室温，过滤，然后用CH3CN(20mL)洗涤滤饼。浓缩所得滤液，所得残余物通过Combi-F1ash(80g硅胶，通过起始EA∶DCM∶MeOH＝10∶10∶0～10∶10∶1的梯度，60mL/分钟，40分钟，2.4L总溶剂体积)纯化以获得黄色固态所需化合物(3g，产率：71％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.15(s，1H)，7.38-7.29(m，5H)，7.19(d，J＝4.0Hz，1H)，7.14(d，J＝8.0Hz，1H)，6.65(d，J＝3.0Hz，1H)，6.53(d，J＝2.0Hz，1H)，6.41(dd，J＝8.5和2.0Hz，1H)，6.20(d，J＝2.5Hz，1H)，5.36-5.32(m，1H)，5.09(s，1H)，5.07(s，1H)，4.94-4.89(m，3H)，4.65(s，2H)，4.17-4.14(m，1H)，3.82(s，3H)，3.75(s，3H)，3.41-3.35(m，0.5H)，3.04-2.95(m，0.5H)，2.94-2.86(m，1H)，2.72-2.52(m，2H)，2.25(t，J＝7.5Hz，1H)，2.21(t，J＝8.0Hz，1H)，2.05-1.90(m，2H)，1.90-1.82(m，0.5H)，1.76-1.70(m，0.5H)，1.65-1.55(m，5H)，1.42-1.34(m，4H)，0.95(d，J＝6.5Hz，3H)，0.83-0.80(m，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：714.4[M+1]+。
3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸
向内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸苄酯(2.7g，3.78mmo1)的THF/MeOH(15mL/15mL)溶液添加内含LiOH.H2O(1.6g，37.82mmo1)的水(5mL)溶液。在30℃搅拌该混合物2小时。减压下去除挥发性物质。所得残余物用水(10mL)稀释，然后用EA(15mL×2)萃取。用1NHCl溶液调节所述悬液水层的pH＝3-4，用EA(30mL×3)萃取。合并的有机层用盐水(50mL)洗涤。所得有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，以获得黄色固态的所需化合物(2.9g)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.20(s，1H)，7.92(s，0.5H)，7.38-7.32(m，3H)，7.28-7.23(m，1.5H)，7.14(d，J＝8.5Hz，1H)，6.68(brs，1H)，6.56(d，J＝2.0Hz，1H)，6.44(d，J＝8.5Hz，1H)，6.25(s，1H)，5.51-5.47(m，1H)，5.18-5.13(m，1H)，4.66(s，2H)，4.61(s，1H)，4.43-4.40(m，1H)，3.96-3.90(m，0.5H)，3.85(s，3H)，3.77(s，3H)，3.65-3.58(m，0.5H)，3.50-3.40(m，2H)，2.46-2.36(m，1H)，2.20-2.00(m，4H)，1.98-1.70(m，2.5H)，1.70-1.58(m，4.5H)，1.40(s，3H)，1.18(d，J＝5.0Hz，3H)，0.90(t，J＝6.0Hz，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：624.3[M+1]+。
N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酰胺
向内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸(2.7g，4.33mmo1)、4-(三氟甲氧基)苯-1，2-二胺(1.23g，6.49mmo1)、HATU(2.5g，6.49mmo1)和HOAT(0.88g，6.49mmo1)的DCM(30mL)溶液添加TEA(1.8mL，12.99mmo1)。该混合物室温搅拌2小时。向该混合物添加DCM(70mL)，然后用水(20mL×2)和盐水(50mL)洗涤。用Na2SO4干燥有机层，过滤并浓缩。所得残余物通过Combi-Flash(80g硅胶，通过起始EA∶DCM∶MeOH＝10∶10∶0～10∶10∶2的梯度，60mL/分钟，40分钟，2.4L总溶剂体积)纯化以获得棕色固态所需化合物(2.2g，产率：67％(两步))。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.21(s，1H)，7.28-7.12(m，3H)，6.73(brs，1H)，6.69(brs，1H)，6.56-6.52(m，2H)，6.42(dd，J＝8.0和2.5Hz，1H)，6.26(d，J＝1.5Hz，1H)，5.48(d，J＝6.0Hz，1H)，5.20-5.16(m，1H)，4.66(s，2H)，4.46-4.42(m，1H)，4.08-3.98(m，0.5H)，3.84(s，3H)，3.76(s，3H)，3.75-3.69(m，0.5H)，3.60-3.38(m，2H)，2.60-2.30(m，3H)，1.92-1.86(m，1H)，1.80-1.70(m，1H)，1.59(d，J＝3.5Hz，3H)，1.40(s，3H)，1.25(t，J＝7.5Hz，3H)，)，1.00-0.80(m，2H)ppm；ESI-MS(m/z)：798.3[M+1]+。
N-(2，4-二甲氧基苄基)-7-((3aR，4R，6R，6aR)-6-((异丙基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-IH-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
使内含N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酰胺(2.2g，2.5mmo1)的HOAc(20mL)溶液在65℃搅拌5小时。将该混合物冷却至室温并浓缩。使所得残余物溶解于DCM(50mL)，用15％Na2CO3溶液(20mL×2)、水(20mL)和盐水(30mL)洗涤。用Na2SO4干燥有机相，过滤并浓缩。所得残余物通过Combi-F1ash(80g硅胶，通过起始EA∶DCM∶MeOH＝10∶10∶0～10∶10∶2的梯度，60mL/分钟，35分钟，2.1L总溶剂体积)纯化以获得棕色固态所需化合物(1.4g)，其通过手性HPLC分离以获得顺式异构体(600mg，产率：28％)和反式异构体(480mg，产率：22％)。
顺式异构体：1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.17(s，1H)，7.52(d，J＝9.0Hz，1H)，7.39(s，1H)，7.20(d，J＝4.0Hz，1H)，7.12(d，J＝8.0Hz，1H)，6.68(brs，1H)，6.49(d，J＝2.5Hz，1H)，6.39(dd，J＝8.5和2.0Hz，1H)，6.19(d，J＝2.0Hz，1H)，5.35(dd，J＝6.0和2.0Hz，1H)，4.68-4.60(m，2H)，4.18-4.13(m，1H)，3.78(s，3H)，3.73(s，3H)，3.10-3.02(m，1H)，2.95-2.88(m，1H)，2.78-2.72(m，2H)，2.69-2.57(m，2H)，2.12-2.02(m，2H)，1.86-1.76(m，2H)，1.57(s，3H)，1.52-1.40(m，2H)，1.37(s，3H)，0.96(d，J＝6.5Hz，3H)，0.82(d，J＝6.5Hz，3H)ppm；EsI-Ms(m/z)：780.4[M+1]+。
反式异构体：1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.15(s，1H)，7.52(d，J＝9.0Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.20(d，J＝3.5Hz，1H)，7.12(d，J＝8.0Hz，1H)，6.68(brs，1H)，6.51(d，J＝2.0Hz，1H)，6.40(dd，J＝8.0和2.5Hz，1H)，6.20(d，J＝2.5Hz，1H)，5.35(dd，J＝6.0和2.0Hz，1H)，4.64(s，2H)，4.20-4.16(m，1H)，3.82(s，3H)，3.73(s，3H)，3.50-3.42(m，1H)，2.95-2.90(m，1H)，2.80(t，J＝6.0Hz，2H)，2.75-2.58(m，2H)，2.12-1.95(m，4H)，1.75-1.65(m，2H)，1.58(s，3H)，1.38(s，3H)，0.97(d，J＝6.5Hz，3H)，0.83(d，J＝6.5Hz，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：780.4[M+1]+。
化合物70：(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
3-((1R，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸甲酯
用AcOH调节内含3-((1R，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸甲酯(1.85g，3.12mmo1)和NaBH3CN(590mg，9.36mmo1)的MeOH(25mL)溶液的pH＝6，然后添加甲醛(936mg，31.2mmo1)。在25℃搅拌所述反应过夜。所述反应用饱和NaHCO3(5mL)淬灭，蒸发，添加水(10mL)，用DCM(150mL×3)萃取，用盐水(80mL)洗涤，干燥并浓缩。所得残余物通过SGC纯化以获得白色固态所需化合物(1.85g，产率97％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.12(s，1H)，7.22(d，J＝3.5Hz，1H)，7.14(d，J＝8.5Hz，1H)，6.64(d，J＝3.0Hz，1H)，6.55(d，J＝2.5Hz，1H)，6.44(dd，J＝8.5和2.5Hz，1H)，5.01-4.98(m，2H)，4.65(s，2H)，4.60-4.58(m，1H)，4.30(s，1H)，3.84(s，3H)，3.76(s，3H)，3.66(s，3H)，3.44-3.38(m，1H)，2.80-2.73(m，2H)，2.48-2.43(m，4H)，2.32(t，J＝7.5Hz，2H)，2.20-2.16(m，4H)，1.95-1.94(m，2H)，1.82-1.81(m，2H)，1.56(s，3H)，1.31(s，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：608.3[M+1]+。
3-((1R，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸
使内含3-((1R，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸甲酯(1.85g，3.04mmo1)和LiOH(382mg，15.24mmo1)的THF/MeOH/H2O(1∶1∶1，30mL)溶液在50℃搅拌2小时。浓缩该反应以获得白色固态所需化合物(2.25g，盐，纯度85％)。粗产物无需进一步纯化即可直接用于下一步骤。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.11(s，1H)，7.92(s，1H)，7.30(d，J＝3.0Hz，1H)，7.14(d，J＝8.0Hz，1H)，6.67(d，J＝3.0Hz，1H)，6.54(d，J＝2.0Hz，1H)，6.44(dd，J＝10.0和2.5Hz，1H)，5.05-5.03(m，2H)，4.73(d，J＝6.0Hz，1H)，4.65(s，2H)，3.90-3.85(m，1H)，3.85(s，3H)，3.77(s，3H)，3.30-3.18(m，2H)，2.82(s，3H)，2.65-2.55(m，1H)，2.53-2.46(m，3H)，2.27-2.20(m，3H)，2.12-2.11(m，2H)，1.83-1.82(m，2H)，1.57(s，3H)，1.32(s，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：594.3[M+1]+。
N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-((1R，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酰胺
使内含3-((1R，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸(2.25g，3.8mmo1)、HOAt(680mg，5mmo1)和HATU(1.9g，5mmo1)的DCM(60mL)溶液在室温下搅拌1小时，然后逐滴添加内含4-叔丁苯二胺(656mg，4mmo1)和TEA(1.21g，12mmo1)的DCM(3mL)。该反应在室温下搅拌过夜。向所述反应添加水(20mL)和DCM(60mL)，用DCM萃取(60mL×2)，用盐水(10mL)洗涤，干燥并浓缩。所得残余物通过SGC纯化以获得黄色固态所需化合物(1.1g，产率46％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.11(s，1H)，7.21(d，J＝4.0Hz，1H)，7.13(d，J＝8.5Hz，1H)，6.98(d，J＝8.5Hz，1H)，6.92(d，J＝2.0Hz，1H)，6.77(dd，J＝8.0和1.5Hz，1H)，6.64(d，J＝3.5Hz，1H)，6.54(d，J＝2.0Hz，1H)，6.43(dd，J＝8.0和1.5Hz，1H)，5.02-4.99(m，2H)，4.65-4.61(m，3H)，3.83(s，3H)，3.75(s，3H)，3.60-3.52(m，1H)，2.97-2.83(m，2H)，2.58(s，3H)，2.54-2.38(m，4H)，2.33-2.29(m，2H)，2.18-2.04(m，3H)，1.94-1.91(m，2H)，1.55(s，3H)，1.30(s，3H)，1.25(s，9H)ppm；ESI-MS(m/z)：740.5[M+1]+。
7-((3aS，4R，6R，6aR)-6-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
使内含N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-((1R，3s)-3-((((3aR，4R，6R，6aS)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酰胺(1.1g，1.49mmo1)的AcOH(8mL)溶液至65℃加热3h。使所述反应蒸发，溶解于MeOH(5mL)中，用饱和NaHCO3溶液调节pH＝8，浓缩并通过制备型TLC纯化以获得白色固态所需化合物(620mg，58％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.10(s，1H)，7.48(brs，1H)，7.38(brs，1H)，7.28(d，J＝8.5Hz，1H)，7.21(d，J＝3.0Hz，1H)，7.13(d，J＝8.5Hz，1H)，6.62(brs，1H)，6.53(s，1H)，6.42(d，J＝8.5Hz，1H)，4.98-4.90(m，2H)，4.64(s，2H)，4.50(brs，1H)，3.83(s，3H)，3.75(s，3H)，3.01-2.98(m，1H)，2.83(d，J＝7.5Hz，1H)，2.44-2.34(m，4H)，2.16(s，3H)，2.12-1.96(m，6H)，1.84(t，J＝7.5Hz，2H)，1.53(s，3H)，1.36(s，9H)，1.28(s，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：722.4[M+1]+。
(1R，2S，3R，5R)-3-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)环戊烷-1，2-二醇
使内含74(3aS，4R，6R，6aR)-6-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢-3aH-环戊二烯并[d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(620mg，0.86mmo1)的TFA(5mL，90％)溶液在25℃搅拌1小时。使所述反应浓缩至干，溶解于MeOH(5mL)并用饱和K2CO3溶液调节pH＝8。该混合物室温搅拌0.5小时。然后浓缩该反应以获得残余物。所得残余物通过制备型HPLC纯化以获得白色固态所需化合物(330mg，产率73％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.07(s，1H)，7.49(d，J＝1.5Hz，1H)，7.40(d，J＝11.0Hz，1H)，7.29(dd，J＝11.0和2.5Hz，1H)，7.21(d，J＝5.0Hz，1H)，6.60(d，J＝4.0Hz，1H)，4.92-4.89(m，1H)，4.33(dd，J＝9.5和8.5Hz，1H)，3.90(d，J＝5.5Hz，1H)，3.03-2.99(m，1H)，2.85(d，J＝9.5Hz，1H)，2.50-2.22(m，4H)，2.16(s，3H)，2.15-1.98(m，5H)，1.88(t，J＝10.0Hz，2H)，1.68-1.59(m，1H)，1.37(s，9H)ppm；ESI-MS(m/z)：532.3[M+1]+。
化合物71：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
使内含顺-9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(920mg，1.60mmol)的3MHCl/MeOH(20mL)混合物在35℃搅拌2小时，然后蒸发至干。使所得残余物溶解于MeOH(15mL)，然后添加饱和K2CO3溶液以调节所述溶液至pH8。然后，所述混合物搅拌5分钟并过滤。浓缩所得滤液，粗产物通过制备型HPLC纯化以获得白色固态目标物(400mg，产率：47％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.27(s，1H)，8.20(s，1H)，7.47(s，1H)，7.47(s，1H)，7.40-7.37(m，1H)，7.29-7.26(m，1H)，5.98(d，J＝4.5Hz，1H)，4.69(t，J＝4.5Hz，1H)，4.24-4.20(m，1H)，4.18-4.15(m，1H)，2.81-2.76(m，2H)，2.75-2.69(m，1H)，2.67-2.62(m，2H)，2.25-2.18(m，1H)，2.14(s，3H)，1.90-1.85(m，3H)，1.49-1.41(m，2H)，1.36(s，9H)ppm；ESI-MS(m/z)：535.3[M+1]+。
化合物72：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
使内含反式-9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(420mg，0.73mmol)的3MHCl/MeOH(20mL)混合物在35℃搅拌2小时并蒸发至干。使所得残余物溶解于MeOH(15mL)，然后添加饱和K2CO3溶液以调节所述溶液至pH8。然后，所述混合物搅拌5分钟并过滤。浓缩所得滤液，粗产物通过制备型HPLC纯化以获得白色固态目标物(198mg，产率：51％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.28(s，1H)，8.19(s，1H)，7.48(s，1H)，7.38(d，J＝8.0Hz，1H)，7.28-7.26(m，1H)，5.98(d，J＝4.0Hz，1H)，4.69(t，J＝5.5Hz，1H)，4.23(t，J＝5.0Hz，1H)，4.19-4.16(m，1H)，3.06-3.03(m，1H)，2.80(t，J＝7.5Hz，2H)，2.68-2.64(m，2H)，2.16(s，3H)，2.09-1.95(m，5H)，1.85-1.80(m，2H)，1.36(s，9H)ppm；ESI-MS(m/z)：535.3[M+1]+。
3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(乙基)氨基)环丁基)丙酸苄酯
向内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸苄酯(3.76g，7.2mmol)和NaBH3CN(5.9g，93.6mmol)的MeOH(40mL)混合物添加AcOH以调节pH＝6。然后，添加40％MeCHO(8.7mL，122.5mmol)，使所述混合物在30℃搅拌1.5小时。添加水(15mL)，真空浓缩所述混合物。然后，该混合物用DCM(30mL×3)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗制物通过SGC(DCM∶MeOH＝100∶1-20∶1)纯化以获得白色固态目标物(2.6g，产率：66％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.26(s，1H)，8.23(m，1H)，7.37-7.28(m，5H)，6.24(s，1H)，5.52-5.49(m，1H)，5.10-5.06(m，3H)，4.41-4.40(m，1H)，3.20-2.90(m，2H)，2.80-2.60(m，2H)，2.12-1.77(m，4H)，1.74-1.60(m，3H)，1.39(s，3H)，1.26-1.22(m，3H)，0.94-0.89(m，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：551.3[M+1]+。
3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(乙基)氨基)环丁基)丙酸
向内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(乙基)氨基)环丁基)丙酸苄酯(2.6g，4.73mmol)的MeOH(40mL)溶液添加10％Pd/C(2.3g)，然后在H2气氛下于50℃搅拌该混合物20小时。过滤所述混合物，浓缩所得滤液以获得白色固态目标物(2g，产率92％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.27(s，1H)，8.25(s，1H)，6.30(s，1H)，5.52-5.49(m，1H)，5.14-5.12(m，1H)，4.51-4.47(m，1H)，3.43-3.36(m，2H)，3.22-3.15(m，1H)，2.94-2.89(m，2H)，2.28-2.05(m，4H)，1.96-1.80(m，2H)，1.74-1.69(m，1H)，1.65-1.59(m，5H)，1.41-1.36(m，4H)，1.03-0.99(m，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：461.3[M+1]+。
N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(乙基)氨基)环丁基)丙酰胺
向内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(乙基)氨基)环丁基)丙酸(2g，4.35mmol)、HOAT(768mg，5.65mmol)、HATU(2.2g，5.65mmol)和TEA(3mL，21.3mmol)的DCM(40mL)溶液添加4-叔丁基苯-1，2-二胺(785mg，4.79mmol)，并在室温搅拌该混合物2小时。添加水(15mL)，所述混合物用DCM(30mL×2)萃取。合并的有机相用H2O(20mL×2)洗涤。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗制物通过SGC(DCM∶MeOH＝70∶1-20∶1)纯化以获得白色固态目标物(1.6g，产率：61％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.28-8.27(m，1H)，8.24-8.23(m，1H)，7.10-6.92(m，2H)，6.81-6.76(m，1H)，6.22(s，1H)，5.54-5.52(m，1H)，5.03(s，1H)，4.36(s，1H)，3.03-2.50(m，5H)，2.32-2.26(m，2H)，2.16-1.80(m，4H)，1.73-1.69(m，2H)，1.59(s，3H)，1.39(s，3H)，1.28-1.24(m，9H)，0.94-0.85(m，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：607.3[M+1]+。
9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(乙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺
使内含N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(乙基)氨基)环丁基)丙酰胺(1.6g，2.64mmol)的AcOH(20mL)溶液在65℃搅拌15小时。所述溶液真空浓缩并用DCM(30mL)稀释。所得混合物用饱和NaHCO3溶液(20mL×2)和盐水(20mL×1)洗涤。合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩以获得白色固态的目标物1.5g(产率：97％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.28-8.26(m，1H)，8.22(s，1H)，7.48(s，1H)，7.40-7.38(m，1H)，7.30-7.27(m，1H)，6.20-6.18(m，1H)，5.52-5.49(m，1H)，5.02-4.98(m，1H)，4.34-4.31(m，1H)，2.95-2.92(m，1H)，2.79-2.68(m，4H)，2.56-2.50(m，2H)，2.09-1.81(m，5H)，1.71-1.63(m，1H)，1.58(s，3H)，1.38(s，3H)，1.36(s，9H)，1.35-1.28(m，1H)，0.89-0.85(m，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：589.3[M+1]+。
使内含9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(乙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(1.35g，2.30mmol)的3MHCl/MeOH(20mL)混合物在35℃搅拌2小时并蒸发至干。使所得残余物溶解于MeOH(15mL)，然后添加饱和K2CO3溶液以调节所述所述溶液至pH8。然后，所述混合物搅拌5分钟并过滤。浓缩所得滤液，粗制物通过手性HPLC分离，用制备型HPLC纯化以获得白色固态的顺式产物(280mg，总产率：22％)和反式产物(150mg，总产率：12％)。
化合物73：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(乙基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
顺式异构体：1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.27(s，1H)，8.20(s，1H)，7.47(s，1H)，7.39-7.37(m，1H)，7.29-7.26(m，1H)，5.97(d，J＝4.5Hz，1H)，4.67(t，J＝5.0Hz，1H)，4.24(t，J＝5.5Hz，1H)，4.18-4.14(m，1H)，3.06-3.03(m，1H)，2.91-2.81(m，2H)，2.79-2.75(m，2H)，2.64-2.58(m，2H)，2.25-2.19(m，1H)，1.89-1.86(m，3H)，1.52-1.47(m，2H)，1.36(s，9H)，0.98(t，J＝7.0Hz，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：549.3[M+1]+。
化合物74：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(乙基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
反式异构体：1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.28(s，1H)，8.20(s，1H)，7.48(s，1H)，7.39-7.37(m，1H)，7.29-7.26(m，1H)，5.97(d，J＝4.0Hz，1H)，4.67(t，J＝5.0Hz，1H)，4.24(t，J＝6.0Hz，1H)，4.18-4.14(m，1H)，3.42-3.35(m，1H)，2.91-2.78(m，4H)，2.64-2.58(m，2H)，2.10-2.07(m，3H)，1.99-1.96(m，2H)，1.85-1.79(m，2H)，1.35(m，9H)，0.98(t，J＝6.5Hz，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：549.3[M+1]+。
化合物76：(2R，3R，4S，5R)-2-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((异丙基((1s，3R)-3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
使内含反式-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7-((3aR，4R，6R，6aR)-6-((异丙基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(480mg，0.62mmol)的90％TFA(5mL)溶液在30℃搅拌2小时。在减压下去除挥发性物质。向所得残余物添加MeOH(6mL)并用NH3.H2O调节pH＝9～10。所得混合物在室温搅拌30分钟并浓缩。所得残余物通过制备型HPLC纯化以获得白色固态所需化合物(182mg，产率50％)。1HNMR(400MHz，MeOD)：δH8.09(s，1H)，7.52(d，J＝8.8Hz，1H)，7.39(s，1H)，7.27(d，J＝3.6Hz，1H)，7.12(d，J＝8.8Hz，1H)，6.64(d，J＝3.2Hz，1H)，6.11(d，J＝4.0Hz，1H)，4.44(t，J＝4.8Hz，1H)，4.12(t，J＝6.0Hz，1H)，4.06-4.01(m，1H)，3.62-3.53(m，1H)，3.10-3.00(m，1H)，2.92-2.65(m，4H)，2.25-2.15(m，2H)，2.10-1.98(m，3H)，1.85-1.76(m，2H)，1.03(d，J＝6.4Hz，3H)，0.98(d，J＝6.4Hz，3H)ppm；19FNMR(400MHz，MeOD)：δ-59.80ppm；ESI-MS(m/z)：590.3[M+1]+。
化合物77和78
化合物78：(2R，3R，4S，5R)-2-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(2，2，2-三氟乙基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇：
1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.09(s，1H)，7.48(brs，1H)，7.40-7.37(m，1H)，7.28(dd，J＝10.5和1.5Hz，1H)，7.21(d，J＝4.5Hz，1H)，6.65(d，J＝4.5Hz，1H)，6.11(d，J＝5.0Hz，1H)，4.44(t，J＝6.0Hz，1H)，4.13-4.08(m，2H)，3.30-3.15(m，3H)，3.09-3.03(m，1H)，2.97-2.90(m，1H)，2.78(t，J＝9.0Hz，2H)，2.28-2.20(m，2H)，1.92-1.78(m，3H)，1.55-1.45(m，2H)，1.37(s，9H)ppm；LC-MS(m/z)：602.3[M+1]+。
化合物77：(2R，3R，4S，5R)-2-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(2，2，2-三氟乙基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇：
1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.09(s，1H)，7.48(brs，1H)，7.39(d，J＝10.5Hz，1H)，7.28(dd，J＝10.5和2.0Hz，1H)，7.21(d，J＝5.0Hz，1H)，6.64(d，J＝4.5Hz，1H)，6.12(d，J＝6.0Hz，1H)，4.45(t，J＝6.0Hz，1H)，4.14-4.09(m，2H)，3.68-3.60(m，1H)，3.30-3.15(m，2H)，3.11-3.04(m，1H)，2.97-2.90(m，1H)，2.80(t，J＝9.5Hz，2H)，2.12-2.03(m，3H)，2.00-1.90(m，2H)，1.90-1.80(m，2H)，1.36(s，9H)ppm；LC-MS(m/z)：602.3[M+1]+。
3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸苄酯
向内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸苄酯(3.76g，7.2mmol)和NaBH3CN(5.9g，93.6mmol)的MeOH(40mL)混合物添加AcOH以调节至pH＝6。然后，添加37％HCHO(8.7mL，122.4mmol)，使所述混合物在30℃搅拌1.5小时。添加水(15mL)，真空浓缩所述混合物。然后，该混合物用DCM(30mL×3)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗制物通过SGC(DCM∶MeOH＝100∶1-20∶1)纯化以获得白色固态目标物(2.4g，产率：67％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.27(s，1H)，8.22(d，J＝2.5Hz，1H)，7.35-7.30(m，5H)，6.22(s，1H)，5.55-5.52(m，1H)，5.09(s，2H)，5.04-5.01(m，1H)，4.40-4.38(m，1H)，2.76-2.65(m，3H)，2.29-2.22(m，2H)，2.18(s，3H)，2.11-1.95(m，2H)，1.78-1.71(m，2H)，1.64-1.61(m，2H)，1.59(s，3H)，1.41-1.39(m，1H)，1.38(s，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：537.3[M+1]+。
3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸
向内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸苄酯(2.4g，4.48mmol)的MeOH(40mL)溶液添加10％Pd/C(2.3g)，并在H2气氛下于50℃搅拌该混合物15小时。过滤所述混合物，浓缩所得滤液以获得白色固态目标物(1.9g，产率95％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.27(s，1H)，8.24(s，1H)，6.27(s，1H)，5.54-5.52(m，1H)，5.09-5.07(m，1H)，4.50-4.47(m，1H)，3.17-3.07(m，2H)，3.02-2.90(m，1H)，2.39-2.35(m，3H)，2.31-2.05(m，4H)，1.91-1.70(m，2H)，1.64-1.51(m，5H)，1.39(s，3H)，1.23-1.15(m，1H)ppm；ESI-MS(m/z)：447.2[M+1]+。
N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酰胺
向内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸(1.9g，4.26mmol)、HOAT(753mg，5.54mmol)、HATU(2.1g，5.54mmol)和TEA(3mL，21.3mmol)的DCM(40mL)溶液添加4-叔丁基苯-1，2-二胺(769mg，4.69mmol)，所述混合物在室温下搅拌2小时。添加水(15mL)，所述混合物用DCM(30mL×2)萃取。合并的有机相用H2O(20mL×2)洗涤。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗制物通过SGC(DCM∶MeOH＝70∶1-20∶1)纯化以获得白色固态目标物(1.8g，产率：72％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.28(s，1H)，8.23(d，J＝3.0Hz，1H)，7.10-6.92(m，2H)，6.81-6.76(m，1H)，6.21(s，1H)，5.56(s，1H)，5.49(d，J＝3.0Hz，1H)，5.01(s，1H)，4.36(s，1H)，2.69-2.49(m，3H)，2.31-2.27(m，2H)，2.13-2.00(m，5H)，1.88-1.81(m，2H)，1.75-1.65(m，2H)，1.60(s，3H)，1.41-1.35(m，4H)，1.28-1.25(m，9H)ppm；ESI-MS(m/z)：593.4[M+1]+。
9-((3aR，4R，6R，6aR)-6-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺
使内含N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酰胺(1.8g，3.04mmol)的AcOH(20mL)溶液在65℃搅拌15小时。所述溶液真空浓缩并用DCM(30mL)稀释。所得混合物用饱和NaHCO3溶液(20mL×2)和盐水(20mL×1)洗涤。合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并浓缩以获得所需产物1.7g(产率：97％)。
所述产物通过手性HPLC分离以获得920mg顺式异构体和420mg反式异构体。
顺式异构体：1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.27(s，1H)，8.21(s，1H)，7.48(s，1H)，7.40-7.38(m，1H)，7.29-7.26(m，1H)，6.19(d，J＝2.5Hz，1H)，5.55-5.52(m，1H)，4.99-4.97(m，1H)，4.35-4.31(m，1H)，2.77-2.73(m，2H)，2.62-2.46(m，3H)，2.10-2.01(m，4H)，1.84-1.81(m，3H)，1.58(s，3H)，1.38-1.36(m，12H)，1.19-1.14(m，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：575.3[M+1]+。
反式异构体：1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.28(s，1H)，8.21(s，1H)，7.48(s，1H)，7.40-7.38(m，1H)，7.30-7.27(m，1H)，6.19(d，J＝1.5Hz，1H)，5.55-5.52(m，1H)，5.01-4.98(m，1H)，4.36-4.34(m，1H)，2.96-2.92(m，2H)，2.77(t，J＝7.5Hz，2H)，2.58-2.50(m，2H)，2.09(s，3H)，2.04-1.90(m，4H)，1.82-1.79(m，1H)，1.70-1.66(m，2H)，1.59(s，3H)，1.38(s，3H)，1.36(s，9H)ppm；ESI-MS(m/z)：575.3[M+1]+。
化合物87：(2R，3R，4S，5R)-2-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((异丙基((1r，3S)-3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
使内含顺式-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7-((3aR，4R，6R，6aR)-6-((异丙基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(600mg，0.77mmol)的90％TFA(5mL)溶液在30℃搅拌2小时。在减压下去除挥发性物质。向所得残余物添加MeOH(6mL)并用NH3.H2O调节pH＝9～10。所得混合物在室温搅拌30分钟并浓缩。所得残余物通过制备型HPLC纯化以获得白色固态所需化合物(260mg，产率57％)。1HNMR(400MHz，MeOD)：δH8.09(s，1H)，7.52(d，J＝8.8Hz，1H)，7.39(s，1H)，7.27(d，J＝4.0Hz，1H)，7.12(dd，J＝8.4和0.8Hz，1H)，6.64(d，J＝4.0Hz，1H)，6.12(d，J＝4.4Hz，1H)，4.43(t，J＝5.2Hz，1H)，4.11(t，J＝5.2Hz，1H)，4.05-4.01(m，1H)，3.20-3.10(m，1H)，3.08-3.00(m，1H)，2.88-2.65(m，4H)，2.25-2.15(m，2H)，1.92-1.82(m，3H)，1.65-1.55(m，2H)，1.02(d，J＝6.4Hz，3H)，0.98(d，J＝6.4Hz，3H)ppm；19FNMR(400MHz，MeOD)：δ-59.80ppm；ESI-MS(m/z)：590.3[M+1]+。
化合物90和75：
3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸苄酯
向内含7-((3aR，4R，6R，6aR)-6-(氨基甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(2.5g，5.49mmol)、3-(3-氧代环丁基)丙酸苄酯(1.66g，7.14mmol)和HOAc(329mg，5.49mmo1)的DCE(40mL)溶液添加一份NaB(OAc)3H(2.33g，11mmol)。然后，所得反应混合物在室温下搅拌过夜。添加饱和水性NaHCO3(40mL)淬灭该反应，然后用DCM(50mL×3)萃取，用无水Na2SO4干燥并浓缩。粗制物通过SGC(DCM∶MeOH＝100∶1～50∶1)纯化以获得白色固态所需化合物(2.3g，产率：64％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.14(d，J＝2.5Hz，1H)，7.35-7.28(m，5H)，7.20(d，J＝4.0Hz，1H)，7.13(d，J＝8.0Hz，1H)，6.64(d，J＝3.0Hz，1H)，6.53(d，J＝2.0Hz，1H)，6.42(d，J＝8.5Hz，1H)，6.18(d，J＝2.5Hz，1H)，5.40-5.39(m，1H)，5.08-5.07(m，2H)，4.96-4.94(m，1H)，4.64(s，2H)，4.26-4.24(m，1H)，3.82(s，3H)，3.75(s，3H)，3.10-3.05(m，0.55H)，2.86-2.82(m，2H)，2.26-2.20(m，3H)，2.10-1.59(m，5H)，1.58(s，3H)，1.37(s，3H)，1.35-1.25(m，0.6H)，1.15-1.08(m，0.5H)ppm；LC-MS(m/z)：672.4[M+1]+。
3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸苄酯
使3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)氨基)环丁基)丙酸苄酯(2.3g，3.43mmol)与K2CO3(3.3g，24mmol)和2-碘代丙烷(5.8g，34.3mmol)在MeCN(25mL)中于密封试管中混合，加热至95℃同时搅拌20小时。所述反应混合物过滤并用MeCN(30mL)漂洗，所得滤液真空蒸发以获得白色固态所需化合物(2.1g，产率：88％)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.13(s，1H)，7.35-7.29(m，5H)，7.18(d，J＝3.0Hz，1H)，7.13(d，J＝8.5Hz，1H)，6.64(d，J＝3.0Hz，1H)，6.53(d，J＝2.5Hz，1H)，6.41(dd，J＝8.5和2.5Hz，1H)，6.18(d，J＝2.5Hz，1H)，5.33-5.32(m，1H)，5.08-5.06(m，2H)，4.90-4.89(m，1H)，4.64(s，2H)，4.15-4.14(m，1H)，3.83(s，3H)，3.75(s，3H)，3.37-3.36(m，0.43H)，3.01-2.98(m，0.59H)，2.92-2.88(m，1H)，2.70-2.40(m，3H)，2.24-2.18(m，2H)，2.10-1.80(m，3H)，1.75-1.69(m，2H)，1.61-1.52(m，5H)，1.38(s，3H)，0.94(d，J＝6.5Hz，3H)，0.81-0.79(m，3H)ppm；LC-MS(m/z)：714.0[M+1]+。
3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸
使3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸苄酯(1.5g，2.1mmol)溶解于MeOH(25mL)，添加Pd/C(10％在碳上，70％水，742mg)，所得混合物在1个大气压H2下于35℃搅拌过夜。然后，所述混合物过滤并用MeOH(15mL×3)漂洗，所得滤液真空蒸发以获得白色固态所需化合物(1.12g，产率：85％)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.18(s，1H)，7.90(s，1H)，7.35-7.32(m，1H)，7.23-7.22(m，1H)，7.12(d，J＝8.5Hz，1H)，6.66(brs，1H)，6.54(d，J＝2.0Hz，1H)，6.43-6.41(m，1H)，6.24-6.23(m，1H)，5.47-5.46(m，1H)，5.13-5.12(m，2H)，4.64(s，2H)，4.41-4.37(m，1H)，3.84(s，3H)，3.75(s，3H)，3.64-3.58(0.6H)，3.46-3.40(m，1.7H)，2.45-1.60(m，9H)，1.57(s，3H)，1.38(s，3H)，1.11(d，J＝7.0Hz，3H)，0.87(d，J＝6.5Hz，3H)ppm；LC-MS(m/z)：624.0[M+1]+。
N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酰胺
向内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酸(1.1g，1.76mmol)、HATU(1g，2.64mmol)、HOAT(359mg，2.64mmol)的DCM(30mL)溶液逐滴添加内含4-叔丁基苯-1，2-二胺(433mg，2.64mmol)和TEA(533mg，5.28mmol)的DCM(10mL)溶液，然后在室温下搅拌所得反应混合物过夜。用DCM(50mL)稀释后，所述混合物用水(30mL×3)洗涤，干燥并浓缩。粗制物通过SGC(DCM∶MeOH＝100∶1～40∶1)纯化以获得白色固态所需化合物(680mg，产率：50％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.16(s，1H)，7.19(d，J＝3.5Hz，1H)，7.14-7.10(m，1.7H)，6.99-6.97(m，0.6H)，6.92(s，0.6H)，6.77(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H)，6.66-6.65(m，1H)，6.54-6.53(m，1H)，6.42(d，J＝8.0Hz，1H)，6.20(d，J＝2.0Hz，1H)，5.36-5.35(m，1H)，4.96-4.95(m，1H)，4.65(s，2H)，3.83(s，3H)，3.75(s，3H)，3.17-2.73(m，4H)，2.33-1.71(m，8H)，1.58(s，3H)，1.53-1.50(m，1H)，1.38(s，3H)，1.28(s，9H)，1.0(d，J＝5.5Hz，3H)，0.84(d，J＝5.0Hz，3H)ppm；LC-MS(m/z)：770.0[M+1]+。
7-((3aR，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺
使N-(2-氨基-4-(叔丁基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(4-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(异丙基)氨基)环丁基)丙酰胺(670mg，0.87mmol)溶解于HOAc(8mL)，然后加热至65℃同时搅拌过夜。真空除去溶剂。使所得残余物溶解于DCM(60mL)，然后用NaHCO3(饱和20mL)和水(20mL)洗涤，使有机相干燥并浓缩。所得粗制物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)纯化以获得白色固态的所需化合物(470mg，产率：73％)，然后通过手性HPLC分离所得化合物以获得白色固态的顺式(243mg)和反式(180mg)异构体。
顺式异构体：1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.15(s，1H)，7.47(s，1H)，7.38-7.37(m，1H)，7.27(dd，J＝8.5和1.5Hz，1H)，7.17(d，J＝4.0Hz，1H)，7.10(d，J＝8.5Hz，1H)，6.65(d，J＝3.0Hz，1H)，6.49(d，J＝2.5Hz，1H)，6.38(dd，J＝8.0和2.5Hz，1H)，6.18(d，J＝2.5Hz，1H)，5.33(dd，J＝6.5和2.5Hz，1H)，4.92-4.91(m，1H)，4.63(s，2H)，4.16-4.15(m，1H)，3.78(s，3H)，3.72(s，3H)，3.08-3.07(m，1H)，2.97-2.96(m，1H)，2.72-2.66(m，4H)，2.09-2.03(m，2H)，1.82-1.78(m，3H)，1.56(s，3H)，1.48-1.40(m，2H)，1.38(s，3H)，1.36(s，9H)，0.95(d，J＝7.0Hz，3H)，0.81(d，J＝6.5Hz，3H)ppm；LC-MS(m/z)：752.0[M+1]+。
反式异构体：1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.14(s，1H)，7.47(s，1H)，7.38-7.37(m，1H)，7.27(dd，J＝8.5和1.5Hz，1H)，7.18(d，J＝3.5Hz，1H)，7.10(d，J＝8.0Hz，1H)，6.64(d，J＝4.0Hz，1H)，6.50(d，J＝2.0Hz，1H)，6.39-6.37(m，1H)，6.18(d，J＝2.0Hz，1H)，5.33(dd，J＝6.0和2.5Hz，1H)，4.90(dd，J＝6.5和3.5Hz，1H)，4.62(s，2H)，4.17-4.15(m，1H)，3.80(s，3H)，3.71(s，3H)，3.44-3.43(m，1H)，2.93-2.90(m，1H)，2.77-2.68(m，3H)，2.62-2.60(m，1H)，2.05-1.93(m，5H)，1.68-1.67(m，2H)，1.56(s，3H)，1.36(s，12H)，0.95(d，J＝7.0Hz，3H)，0.81(d，J＝6.5Hz，3H)ppm；LC-MS(m/z)：752.0[M+1]+。
化合物90：(2R，3R，4S，5R)-2-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
向TFA(2.7mL)和水(0.3mL)的混合物添加顺式异构体-7-((3aR，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(235mg，0.31mmol)。使所述溶液在35℃静置2小时并蒸发至干。所得残余物用甲醇共蒸发两次。然后使残余物溶解于MeOH(20mL)。所得溶液通过K2CO3(124mg，溶解于1mL的H2O)中和并在室温搅拌1小时。真空去除溶剂，然后所得粗制物通过制备型HPLC纯化以获得白色固态所需化合物(90mg，产率51％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.08(s，1H)，7.47(s，1H)，7.39-7.37(m，1H)，7.28(d，J＝2.5Hz，1H)，7.26(d，J＝4.5Hz，1H)，6.62(d，J＝4.5Hz，1H)，6.10(d，J＝5.5Hz，1H)，4.43-4.41(m，1H)，4.12-4.09(m，1H)，4.04-4.01(m，1H)，3.15-3.13(m，1H)，3.04-3.01(m，1H)，2.86-2.68(m，4H)，2.21-2.17(m，2H)，1.88-1.85(m，3H)，1.60-1.57(m，2H)，1.36(s，9H)，1.01(d，J＝8.0Hz，3H)，0.97(d，J＝8.0Hz，3H)ppm；LC-MS(m/z)：562.5[M+1]+。
化合物75：(2R，3R，4S，5R)-2-(4-氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
向TFA(2.7mL)和水(0.3mL)的混合物添加反式异构体7-((3aR，4R，6R，6aR)-6-(((3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-N-(2，4-二甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-胺(175mg，0.23mmol)。使所述溶液在35℃静置2小时并蒸发至干。所得残余物用甲醇共蒸发两次。然后使残余物溶解于MeOH(20mL)。所得溶液通过K2CO3(97mg，溶解于1mL的H2O)中和并在室温搅拌1小时。真空去除溶剂，然后所得粗制物通过制备型HPLC纯化以获得白色固态所需化合物(95mg，产率71％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.09(s，1H)，7.49(s，1H)，7.41-7.39(m，1H)，7.30-7.27(m，2H)，6.64(d，J＝4.0Hz，1H)，6.12(d，J＝5.5Hz，1H)，4.45-4.42(m，1H)，4.13-4.11(m，1H)，4.05-4.03(m，1H)，3.58-3.54(m，1H)，3.06-3.02(m，1H)，2.89-2.80(m，3H)，2.74-2.70(m，1H)，2.20-2.17(m，2H)，2.03-1.99(m，3H)，1.84-1.81(m，3H)，1.38(s，9H)，1.03(d，J＝8.5Hz，3H)，0.98(d，J＝8.0Hz，3H)ppm；LC-MS(m/z)：562.5[M+1]+。
化合物96：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基((1r，3S)-3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
N-(2-氨基-4-(三氟甲氧基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酰胺
向内含3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酸(1.2g，2.91mmol)、HATU(2.17g，5.83mmol)和HOAT(0.91g，5.83mmol)的DCM(17mL)溶液添加4-(三氟甲氧基)苯-1，2-二胺(1.1g，5.83mmol)和TEA(2.05mL，14.56mmol)。在室温下将该混合物搅拌过夜。该混合物用DCM(50mL)稀释，用水(15mL×3)和盐水(30mL)洗涤。用Na2SO4干燥有机相，过滤并浓缩。所得残余物通过Combi-Flash(40g硅胶，通过起始EA∶DCM∶MeOH＝10∶10∶0～10∶10∶8的梯度，40mL/分钟，50分钟，2.0L总溶剂体积)纯化以获得黄色固态所需化合物(1.0g，产率：60％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.29(s，1H)，8.25-8.24(m，1H)，7.20-7.13(m，1H)，6.95-6.85(m，0.4H)，6.73(brs，0.8H)，6.54(d，J＝7.5Hz，0.8H)，6.22(d，J＝2.0Hz，1H)，5.60-5.55(m，1H)，5.03-5.00(m，1H)，4.40-4.35(m，1H)，3.40-3.35(m，0.3H)，3.00-2.92(m，0.7H)，2.70-2.47(m，3H)，2.36-2.28(m，2H)，2.20-1.80(m，6H)，1.76-1.66(m，2H)，1.60(s，3H)，1.40(s，3H)，1.26-1.16(m，1H)ppm；ESI-MS(m/z)：621.3[M+1]+。
9-((3aR，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺
使内含N-(2-氨基-4-(三氟甲氧基)苯基)-3-(3-((((3aR，4R，6R，6aR)-6-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)丙酰胺(1.0g，1.61mmol)的HOAc(10mL)溶液在65℃搅拌过夜。将该混合物冷却至室温并浓缩。使所得残余物溶解于DCM(50mL)，用饱和的NaHCO3溶液(10mL×2)、水(20mL)和盐水(30mL)洗涤。所得残余物通过手性HPLC分离以获得顺式异构体(460mg，产率：47％)和反式异构体(220mg，产率：23％)。
顺式异构体：1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.28(s，1H)，8.23(s，1H)，7.53(d，J＝9.0Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.13(dd，J＝8.5和1.0Hz，1H)，6.21(d，J＝2.0Hz，1H)，5.55(dd，J＝6.5，2.5Hz，1H)，5.01(q，J＝3.5Hz，1H)，4.33-4.37(m，1H)，2.81-2.78(m，2H)，2.66-2.58(m，2H)，2.53-2.49(m，1H)，2.13-2.03(m，5H)，1.86-1.84(m，3H)，1.59(s，3H)，1.43-1.39(m，4H)，1.22-1.17(m，1H)ppm；LC-MS(m/z)：603.3[M+1]+。
反式异构体：1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.29(s，1H)，8.22(s，1H)，7.52(brs，1H)，7.40(s，1H)，7.13(d，J＝9.0Hz，1H)，6.21(d，J＝2.0Hz，1H)，5.55(dd，J＝6.5和2.0Hz，1H)，5.01(q，J＝3.0Hz，1H)，4.38-4.34(m，1H)，2.96-2.92(m，1H)，2.84-2.81(m，2H)，2.59-2.49(m，2H)，2.10(s，3H)，2.05-1.91(m，4H)，1.85-1.79(m，1H)，1.73-1.66(m，2H)，1.60(s，3H)，1.39(s，3H)ppm；LC-MS(m/z)：603.3[M+1]+。
化合物96
使内含顺-9-((3aR，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(460mg，0.77mmol)的1NHCl/MeOH(10mL)溶液在30℃搅拌4h。在减压下去除挥发性物质。向所得残余物添加MeOH(10mL)并用NH3.H2O调节pH＝10～11。所得混合物在室温搅拌30分钟并浓缩。所得残余物通过制备型HPLC纯化以获得白色固态所需化合物(215mg，产率43％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.28(s，1H)，8.21(s，1H)，7.52(d，J＝8.0Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.12(dd，J＝8.5和0.5Hz，1H)，6.00(d，J＝4.0Hz，1H)，4.71(t，J＝4.5Hz，1H)，4.24(t，J＝5.5Hz，1H)，4.18(t，J＝6.0Hz，1H)，2.84-2.81(m，2H)，2.77-2.68(m，3H)，2.25-2.22(m，2H)，2.17(s，3H)，1.91-1.89(m，3H)，1.51-1.45(m，2H)ppm；LC-MS(m/z)：563.3[M+1]+。
化合物97：(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲基((1s，3R)-3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇
使内含反-9-((3aR，4R，6R，6aR)-2，2-二甲基-6-((甲基(3-(2-(5-(三氟甲氧基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)氨基)甲基)四氢呋喃并[3，4-d][1，3]二氧代-4-基)-9H-嘌呤-6-胺(220mg，0.37mmol)的1NHCl/MeOH(5mL)溶液在30℃搅拌4小时。在减压下去除挥发性物质。向所得残余物添加MeOH(10mL)并用NH3.H2O调节pH＝10～11。所得混合物在室温搅拌30分钟并浓缩。所得残余物通过制备型HPLC纯化以获得白色固态所需化合物(80mg，产率39％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.29(s，1H)，8.20(s，1H)，7.52(d，J＝8.5Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.11(d，J＝8.5Hz，1H)，6.00(d，J＝4.0Hz，1H)，4.72(t，J＝4.5Hz，1H)，4.25(t，J＝5.5Hz，1H)，4.18-4.20(m，1H)，3.04-3.08(m，1H)，2.83-2.86(m，2H)，2.64-2.72(m，2H)，2.17(s，3H)，1.97-2.10(m，5H)，1.82-1.85(m，2H)ppm；LC-MS(m/z)：563.3[M+1]+。
化合物106
向内含(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1r，3S)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇(300mg，0.53mmol)的30％水性二噁烷(20mL)溶液添加MCPBA(91mg，0.53mmol)。该混合物在室温搅拌3h，然后浓缩。所得粗产物通过制备型HPLC纯化以获得白色固态所需产物(160mg，产率45％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.24(s，1H)，8.22(s，1H)，7.49(brs，1H)，7.42-7.38(m，1H)，7.31-7.29(m，1H)，6.00-5.96(m，1H)，4.68-4.65(m，2H)，4.43-4.36(m，1H)，4.05-4.00(m，1H)，3.88-3.76(m，1H)，3.68-3.49(m，1H)，3.46-3.37(m，1H)，2.84-2.81(m，2H)，2.42-2.15(m，4H)，1.95-1.89(m，3H)，1.39(s，1H)，1.35-1.27(m，3H)，1.25-1.21(m，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：579.4[M+1]+。
化合物107
向内含(2R，3R，4S，5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((((1s，3R)-3-(2-(5-(叔丁基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)环丁基)(异丙基)氨基)甲基)四氢呋喃-3，4-二醇(300mg，0.53mmol)的30％水性二噁烷(20mL)溶液添加MCPBA(91mg，0.53mmol)。该混合物在室温搅拌3h，然后浓缩。所得粗产物通过制备型HPLC纯化以获得白色固态所需产物(80mg，产率26％)。1HNMR(500MHz，MeOD)：δH8.25-8.22(m，2H)，7.49(brs，1H)，7.42-7.38(m，1H)，7.31-7.28(m，1H)，6.02-5.97(m，1H)，4.69-4.60(m，2H)，4.47-4.32(m，2H)，3.86-3.74(m，1H)，3.70-3.54(m，1H)，3.45-3.35(m，1H)，2.97-2.72(m，4H)，2.15-1.75(m，5H)，1.39(s，1H)，1.34-1.28(m，3H)，1.26-1.22(m，3H)ppm；ESI-MS(m/z)：579.7[M+1]+。
实施例9：超临界流体色谱
使用已知的技术通过超临界流体色谱(SFC)纯化化合物。例如通过新泽西州普林斯顿市LotusSeparations公司实行的方法。例如参见：http://www.lotussep.com还参见：http://www.greenchemistrygroup.org/Program2009.htmL。
某些实施例的SFC分离条件如下所列。本文所述的其它化合物可通过类似方法分离。
实施例10：生物实验方案和基本方法
细胞培养。人血液肿瘤细胞系THP-1、RS4；11和MV4-11获自ATCC，MOLM-13细胞获自DSMZ。所有细胞系使用销售商推荐的细胞密度和环境条件在含有10％FBS的RPMI1640中生长并保持。培养基补充非必需氨基酸和L-谷氨酰胺。THP-1细胞还补充0.05mMβ-巯基乙醇。
甲基化分析。细胞以5×105细胞/mL，以2mL的终体积接种于12孔板中。给予细胞来自50mMDMSO母液的合适浓度的化合物。在7天孵育过程中每两天更新化合物和培养基，通过使用台盼蓝排除(Vicell)对细胞计数，在200g沉降5分钟，在包含化合物的新鲜培养基中以终细胞浓度5×105细胞/mL重悬。化合物孵育后，使用市售的组蛋白提取试剂盒(活性基序公司(ActiveMotif))从1×106个细胞提取组蛋白。纯化的组蛋白使用BCA蛋白质测定法(皮尔斯公司(Pierce))用BSA标准曲线定量。400ng分离的组蛋白通过SDS-PAGE在4-20％胶上分开，然后转移至硝酸纤维素膜。膜用不同的第一和第二抗体孵育，然后在Licor显影***(Odyssey)上成像。H3K79-Me2兔多克隆抗体购自阿柏堪穆公司(Abcam)。其它兔多克隆抗体(包括H3K4-Me3、H3K9-Me3、H3K27-Me2和H3K27-Me3)购自细胞信号转导技术公司(CST)。使用小鼠单克隆总H3抗体作为上样对照(CST)。荧光标记的第二抗体购自Odyssey。
细胞生长和活力分析。细胞获自指数生长细胞培养物，并以3×104细胞/孔接种。使样品保持在96孔黑色壁透明底的板(康宁公司(Corning))中。在第0天向适当的孔添加0.2％DMSO中终浓度为50μM的化合物。MV4-11和MOLM-13处理持续14天，而THP-1细胞处理18天。孵育过程中每两天替换化合物和培养基，通过转移样品至V-底板(康宁公司(Corning))，在室温转子中以200g离心5分钟，在包含化合物的新鲜培养基中重悬，然后转移回所述实验板。使用GuavaViacount分析并在EasyCytePlus仪(密理博公司(Millipore))上读取来周期性地对细胞计数。必要时分开实验板以使细胞在推荐密度内。调整最终细胞计数以计入分开的细胞，然后以总活细胞/孔报告。
HOXA9(qPCR)。
与甲基化实验类似，细胞用化合物处理7天。细胞在室温转子中以200g沉降，然后使用恰根(Qiagen)RNeasy试剂盒分离总RNA。RNA的浓度和质量通过使用Nanovue(GE医疗保健公司(GEHealthcare))来测定。总RNA使用高容量cDNA逆转录试剂盒(应用生物***公司(AppliedBiosystems))逆转录。HOXA9的预设标记引物组购自应用生物***公司(AppliedBiosystems)。qPCR反应包括50ngcDNA、1×标记的引物和1×TaqMan通用PCR预混试剂(应用生物***公司(AppliedBiosystems))。样品在7900HT快速实时PCR仪(应用生物***公司(AppliedBiosystems))上采用以下PCR条件运行：50℃2分钟，95℃10分钟，95℃15秒循环40次，60℃1分钟。HOXA9循环数根据管家基因B2微球蛋白(来自应用生物***公司(AppliedBiosystems)的B2M预设对照)作标准化。DMSO对照的百分数采用以下等式计算：对照百分数＝(2^-ΔΔCT)*100，其中ΔΔCT是标准化的HOXA9样品和对照间的差异(ΔCT样品-ΔCT对照＝ΔΔCT)。
IC50的测定。使测试化合物在DMSO中连续稀释3倍(10个点)，并取1μL置于384孔微量滴定板内。阳性对照(100％抑制标准)是2.5μM终浓度的S-腺苷-L-高半胱氨酸，而阴性对照(0％抑制标准)含有1μLDMSO。然后，化合物用40μl/孔的DOT1L(1-416)(实验缓冲液中终浓度为0.25nM：20mMTRIS，pH8.0、10mMNaCl、0.002％吐温20、0.005％牛皮明胶、100mMKCl和0.5mMDTT)孵育30分钟。添加10μl/孔的底物混合物(带有200nMS-[甲基-3H]-腺苷-L甲硫氨酸、600nM的未标记的S-[甲基-3H]-腺苷-L甲硫氨酸和20nM寡聚核小体的相同实验缓冲液)以起始反应。反应在室温孵育120分钟，然后用10μl/孔的100μMS-甲基-腺苷-L甲硫氨酸淬灭。为了检测，将来自50μl反应物的底物固定在384孔链霉亲和素包被的闪盘(帕金埃尔默公司(PerkinElmer))(还包被0.2％的聚乙烯亚胺)上，然后在TopCount闪烁计数器(帕金埃尔默公司(PerkinElmer))上读数。IC50值示于下表。在该表中，“A”表示IC50值＜0.1μM；“B”表示IC50值＞0.1μM且＜1μM；“C”表示IC50值＞1μM且＜10μM；“D”表示IC50值＞10μM且＜50μM。
实施例11：肿瘤抗增殖实验
体外抗增殖实验。本发明化合物的抗增殖活性的能力和选择性使用一组MLL-重排和非MLL-重排人白血病细胞系来评估。本研究中所用的细胞系列于图1A。所述MLL-重排组包括源自包括MLL-AF4、MLL-AF9或MLL-ENL融合的ALL、AML和双表型白血病的细胞系。这些细胞系招募DOT1L。所述组还包括不具有MLL-重排的五种细胞系和含有MLL基因部分随机重复(MLL-PTD)的一种细胞系。
指数生长的细胞以三个重复在96孔板中以3×104细胞/孔的密度，按终体积为150μL铺板。细胞在浓度增加的化合物2存在下孵育。抗增殖活性通过由至多14天的每3-4天检测细胞活性来测定。在细胞计数日，替换生长培养基和化合物2，分离细胞回到5×104细胞/孔的密度。
图1所示的半最大抑制浓度(IC50)显示，化合物2对测试的四种MLL-重排细胞系中的三种(MV4；11(MLL-AF4)、MOLM-13(MLL-AF9)和KOPN-8(MLL-ENL))显示有效的纳摩尔抗增殖活性。表达MLL-PTD的EOL-1细胞也对化合物2高度敏感(IC50＝11nM)。RS4；11细胞和两种非MLL-重排细胞(Reh和Kasumi-1)的敏感性对数减少1-3，而两种非MLL-重排细胞(Jurkat和HL-60)显示无活性。总之，所得结果指示，化合物2有效且选择性抑制MLL-重排的白血病细胞系和非MLL-重排的白血病细胞系的子集的增殖。
体内抗增殖实验。本发明的化合物的体内抗肿瘤活性在MLL-重排白血病小鼠异种移植模型中评估。
携带尺寸在80-120mm3范围内的MV4-11异种移植肿瘤的四组20只(组1、3、4和5)和一组8只(组2)雌性裸小鼠(平均体重0.023kg)用微型泵(Alzet，2001型)皮下植入。组1仅从所述泵接受载体。组2仅从所述泵接受载体+ip注射一日三次(8小时间隔)载体。组3从所述泵接受112mg/kg/天化合物2+ip注射一日三次(8小时间隔)20mg/kg化合物2，总每日剂量为172mg/kg/天。组4和组5从所述泵分别接受112和56mg/kg/天的化合物2。泵被设计成维持7天，更换两次，以提供21天接触的总输注持续时间。
在第7、14和21天从组4和组5中的所有动物采集单一血液样品并测试化合物2的血浆水平。在第7和14天按以下时间点(3只动物/时间点)从组3采集血液样品：ip给药之前5分钟，以及ip给药之后15分钟、30分钟、1小时、2小时和4小时。在第21天，于最后一次ip注射后三小时从组3采集单一血液样品。每4天测量肿瘤尺寸。21天后，研究终止，计算平均TGI。
图2显示21天给药过程中的肿瘤生长。两个载体对照组之间的肿瘤尺寸无差异。补充ip给药的高剂量微型泵组相较于对照显示统计学上显著的＞70％的TGI。相较于对照，56和112mg/kg/天组分别显示无统计学意义的43％和38％的TGI值。图2中，化合物2称为实施例2。
图3A显示组4和5中通过测定在第7、14和21天采取的平均血液样品估计稳定状态的化合物2的血浆浓度。该数据表示平均稳定状态的化合物2血浆浓度的范围是：99～152ng/mL(组4)和52～238ng/mL(组5)。第21天的最后采样的平均血浆水平是：99ng/mL(组4)和52ng/mL(组5)。
图3B显示ip注射后化合物2血浆浓度与时间关系的曲线。ip注射使暴露于化合物2的血浆在各一日三次注射后的Cmax(4200～5000ng/mL)和每天的AUCs方面显著增加超过通过持续输注导致的稳定状态血浆水平产生的那些情况。总之，所得结果表示化合物2显示在MLL-重排的白血病小鼠异种移植模型中的显著抗肿瘤活性。
通过引用纳入
本文参考的各专利文件和科学论文的全部公开内容通过引用纳入以用于全部目的。
等同形式
本发明体现在其他特定形式中，而不偏离其精神或基本特性。因此认为前述实施方式在所有方面是说明性的，而不对本文所述发明构成限制。因此由附加的权利要求而不是前面描述指示发明的范围，并且因此意味着包含与权利要求等同含义和范围之内的所有改变。

Claims (27)

1.式(IV)的化合物或药学上可接受的盐：
式中
A是O或CH2；
Q是NH2、NHRb、NRbRc或OH，其中Rb和Rc各自独立是C1-C6烷基；
X是N或CRx，其中Rx是H、卤素、羟基、羧基、氰基或氨基；
Y是H或Rd，Rd是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、环丙基或环丁基，且Rd任选地被选自下组的一个或多个取代基取代：C1-C6烷基、卤素、羟基、羧基、氰基、氨基、环丙基和环丁基；
R1和R2，各自独立地是H或卤素；
Re、Rf、Rg和Rh各自独立地是–M2-T2，其中M2是键或O-C1-C4烷基连接基团，且T2是H、卤素或RS4，RS4是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、环丙基、环丁基，或氧杂环丁基，并且O-C1-C4烷基连接基团和RS4各自任选地被选自下组的一个或多个取代基取代：卤素、羟基、羧基、氰基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基和氨基，并且
m是0、1或2。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，A是O。
3.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，A是O且m是2。
4.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，X是N。
5.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，Q是NH2或NHRb。
6.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R1和R2各为H。
7.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，Y是Rd。
8.如权利要求7所述的化合物，其特征在于，Rd是任选地被环丙基、环丁基或卤素取代的C1-C6烷基。
9.如权利要求7所述的化合物，其特征在于，Rd是各自任选地被C1-C6烷基或卤素取代的环丙基或环丁基。
10.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，Re、Rf、Rg和Rh中至少一个是卤素；任选地被一个或多个卤素取代的C1-C6烷氧基；任选地被选自氰基、卤素、羟基和C1-C6烷氧基的一个或多个取代基取代的C1-C6烷基；任选地被选自C1-C6烷基和氰基的一个或多个取代基取代的环丙基；任选地被选自C1-C6烷基和氰基的一个或多个取代基取代的环丁基，或者任选地被选自氰基、卤素、羟基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基中的一个或多个取代的氧杂环丁基。
11.如权利要求10所述的化合物，其特征在于，Re、Rf、Rg和Rh中至少一个选自F、Cl、Br、CF3、OCF3、任选地被选自氰基、卤素、羟基、C1-C6烷基和C1-C6烷氧基的一个或多个取代基取代的氧杂环丁基、C1-C4烷氧基、任选地被选自C1-C4烷基和CN的一个或多个取代基取代的环丙基、任选地被选自C1-C4烷基和CN的一个或多个取代基取代的环丁基，和可任选地被选自CN、卤素、羟基和C1-C6烷氧基的一个或多个取代基取代的C1-C4烷基。
12.一种化合物，其选自如下列表：
及其药学上可接受的盐。
13.如权利要求12所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自及其药学上可接受的盐。
14.如权利要求13所述的化合物，其特征在于，所述化合物是
15.如权利要求13所述的化合物，其特征在于，所述化合物是
的药学上可接受的盐。
16.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的如权利要求1～11中任一项所述的化合物和药学上可接受的载体。
17.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的如权利要求12所述的化合物和药学上可接受的载体。
18.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的如权利要求13所述的化合物和药学上可接受的载体。
19.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的如权利要求14所述的化合物和药学上可接受的载体。
20.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的如权利要求15所述的化合物和药学上可接受的载体。
21.如权利要求1～15中任一项所述的化合物在制备治疗有需要的对象的癌症的药物中的应用。
22.如权利要求1～15中任一项所述的化合物在制备治疗有需要的对象的血液癌症的药物中的应用。
23.如权利要求1～15中任一项所述的化合物在制备治疗有需要的对象的白血病的药物中的应用。
24.如权利要求23所述的应用，其特征在于，所述白血病是急性骨髓性白血病、急性淋巴细胞性白血病或混合谱系白血病。
25.如权利要求23所述的应用，其特征在于，所述白血病是MLL重排白血病或以MLL基因部分随机重复(MLL-PTD)为特征的白血病。
26.如权利要求1～15中任一项所述的组合物在制备治疗有需要的对象的由染色体11q23上的基因易位介导的疾病的药物中的应用。
27.如权利要求1～15中任一项所述的组合物在制备治疗有需要的对象的由DOT1L介导的蛋白甲基化介导的疾病的药物中的应用。
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