TWI438279B - 脂肪酶粉末製劑，其製造方法及使用 - Google Patents

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Description

脂肪酶粉末製劑，其製造方法及使用
本發明係有關於可適用於各種酯化反應、酯交換反應等的脂肪酶粉末製劑，更有關於含有脂肪酸酯及/或脂肪酸的脂肪酶粉末製劑、其製造方法、使用此等脂肪酶粉末製劑的酯交換方法等。
脂肪酶係範圍廣泛地使用於脂肪酸等各種羧酸與一元醇或多元醇等醇類的酯化反應、複數之羧酸酯間的酯交換反應等。其中，以動植物油脂類之改質為首，酯交換反應係作為各種脂肪酸之酯、糖酯或甾醇酯(sterol ester)之製造法的重要技術。若使用乃油脂水解酵素之脂肪酶作為此等反應之觸媒，則可在室溫至約70℃左右之溫和條件下進行酯交換反應，與以往之化學反應相比，不僅可抑制副反應或降低能量成本，更由於作為觸媒之脂肪酶為天然物質，故安全性亦高。另外，因為其基質特異性或位置特異性，故可有效地生產目的物。然而，若直接把粉末脂肪酶使用於酯交換反應則無法充分表現活性，並且原本為水溶性之脂肪酶在油性原料中係難以均勻地分散，亦難以回收。
因此，從以前到現在，脂肪酶一般係固定於某種載體，例如固定於陰離子交換樹脂(專利文獻1)、酚吸附樹脂(專利文獻2)、疏水性載體(專利文獻3)、陽離子交換樹脂(專利文獻4)、螯合樹脂(專利文獻5)等而使用於酯化或酯交換反應。更進一步，提案有一種固定化脂肪酶粒子之製造 方法，該方法係將脂肪酶與作為脂肪酶載體用之物質予以溶解於水相中，將此水相分散至疏水相中而製造乳液，藉由從該乳液去除水，而將水相變成被覆脂肪酶之固體粒子(專利文獻6)。
如此，以往係將脂肪酶固定化而使用於酯交換反應，但該固定化脂肪酶不僅因為固定化處理而損失原本之脂肪酶活性，並且當使用多孔性載體時，細孔中會堵塞原料或產物，結果導致酯交換率之降低。再者，在使用以往之固定化脂肪酶的酯交換反應中，由於載體會將所保持之水分帶進反應系中，而難以避免發生副反應(例如於油脂類之酯交換反應中，生成二甘油酯(diglyceride)或單甘油酯(monoglyceride)等)。
有鑑於此種狀況，開發有使用粉末脂肪酶之各種技術。例如提案有一種在不活性有機溶媒之存在下或不存在下，在酯交換反應時使90%以上之分散脂肪酶粉末粒子保持於1至100μm之範圍之粒徑，將粉末脂肪酶分散於含有酯之原料中而進行酯交換反應的方法(專利文獻7)。另外，提案有使用一種將含有磷脂質及脂溶性維生素之酵素溶液乾燥而得的酵素粉末(專利文獻8)。
但是，仍需求能使脂肪酶活性更加提升之粉末脂肪酶。
另一方面，提案有一種酵素固定製劑之製造方法，其特徵為在含有酵素之溶液中添加穀物粉、或穀物粉及糖類，並使該含有酵素之溶液乾燥(專利文獻9)。在此，可使用之酵素係列舉如脂肪酶、纖維素酶、蛋白酶、澱粉酶 及果膠酶，由此製造方法所得之酵素固定製劑係在酵素活性低之物質存在下可抑制酵素失活，但關於是否能提升酵素活性則毫無記載。另外，在此，實際上所製造者僅有在纖維素酶或蛋白酶中適用脂肪含量少之脫脂大豆粉的例子，並未具體記載使用脂肪酶之例。
[專利文獻1]日本特開昭60-98984號公報
[專利文獻2]日本特開昭61-202688號公報
[專利文獻3]日本特開平2-138986號公報
[專利文獻4]日本特開平3-61485號公報
[專利文獻5]日本特開平1-262795號公報
[專利文獻6]日本專利3403202號公報
[專利文獻7]日本專利2668187號公報
[專利文獻8]日本特開2000-106873號公報
[專利文獻9]日本特開平11-246893號公報
本發明之目的係提供一種使脂肪酶活性上升之脂肪酶粉末製劑。
另外，本發明之目的係提供此等脂肪酶粉末製劑之製造方法。
此外，本發明之目的係提供使用此等脂肪酶粉末製劑之酯交換方法及酯化方法。
本發明係將特定來源之脂肪酶使用脂肪含量高之大豆粉末來造粒，若將所得之脂肪酶粉末製劑使用於酯化反應及/或酯交換反應，則可使脂肪酶活性大幅上升，基於此見 解而完成本發明。
亦即，本發明係提供一種脂肪酶粉末製劑，其係含有源自米根黴菌(Rhizopus oryzae)及/或源自德氏根黴菌(Rhizopus delemar)之脂肪酶與脂肪含量為5質量%以上之大豆粉末的粒狀物。
另外，本發明係提供一種脂肪酶粉末製劑之製造方法，其特徵為：將溶解、分散有源自米根黴菌(Rhizopus oryzae)及/或源自德氏根黴菌(Rhizopus delemar)之脂肪酶與脂肪含量為5質量%以上之大豆粉末的水溶液予以乾燥。
此外，本發明係提供一種酯交換物或酯化物之製造方法，其特徵為：使用上述脂肪酶粉末製劑，對於從脂肪酸酯、脂肪酸及醇類中選出之一種以上，進行酯交換反應或酯化反應。
若依據本發明，則可提供一種使酵素活性大幅上升之脂肪酶粉末製劑，該製劑可有效地進行酯交換反應或酯化反應，且在反應後能回收而再度利用。
另外，若依據本發明，則可獲得一種脂肪酶粉末製劑，該製劑可安全且廉價地使用於製造因宗教上之理由或健康上之理由等而不能攝取源自動物之蛋白質或油脂的人們所需之食品或食品添加劑。
本發明所用之脂肪酶，可使用根黴菌屬(Rhizopus)之德氏根黴菌(Rhizopus delemar)及米根黴菌(Rhizopus oryzae)。尤以1, 3-特異性脂肪酶為佳。
此等脂肪酶可列舉如Robin公司之商品「Picantase R8000」、或天野酵素公司之商品「脂肪酶F-AP15」等，最適用之脂肪酶可列舉如源自米根黴菌(Rhizopus oryzae)之天野酵素公司之商品「脂肪酶DF "Amano" 15-K」(亦稱為脂肪酶D)。此商品為粉末脂肪酶。又，關於此「脂肪酶DF "Amano" 15-K」，以往係標示為源自德氏根黴菌(Rhizopus delemar)。
就本發明所使用之脂肪酶而言，亦可為將含有脂肪酶之培養基成分等的含脂肪酶水溶液予以乾燥而獲得者。
本發明所使用的脂肪含量為5質量%以上之大豆粉末，較佳係脂肪含量為10質量%以上，更佳係15質量%以上，另一方面，較佳係25質量%以下。尤以脂肪含量為18至23質量%之大豆粉末為佳。在此，就脂肪而言可列舉如脂肪酸三甘油酯及其類似物。大豆之脂肪含量可藉由索司勒萃取法(soxhlet extraction)等方法而容易地測定。
在本發明中，就如此之大豆粉末而言，可使用全脂大豆粉。另外，大豆粉末之原料亦可使用豆漿。大豆粉末係可藉由將大豆以常法粉碎而製造，其粒徑係以0.1至600μm左右為佳。
相對於脂肪酶，大豆粉末之使用量係以質量基準之0.1至200倍之量為佳，又以0.1至20倍之量為更佳，尤以0.1至10倍之量為最佳。
本發明之脂肪酶粉末製劑係以水分含量為10質量%以下為佳，尤以1至8質量%為更佳。
本發明之脂肪酶粉末製劑之粒徑可為任意值，但以脂肪酶粉末製劑之90質量%以上之粒徑為1至100μm者為佳。平均粒徑係以10至80μm為佳。另外，脂肪酶粉末製劑之形狀係以球狀為佳。
脂肪酶粉末製劑之粒徑係可使用例如HORIBA公司之粒度分布測定裝置(LA-500)來測定。
本發明之脂肪酶粉末製劑係可藉由將溶解、分散有脂肪酶及大豆粉末之水溶液以從噴霧乾燥法、冰凍乾燥法及溶劑沉澱‧乾燥法中選出之一種乾燥方法予以乾燥而製造。
在此，該溶解、分散有脂肪酶及大豆粉末之水溶液，係可藉由將粉末脂肪酶與大豆粉末溶解、分散於水中，或是在溶解、分散有大豆粉末之水溶液中混合粉末脂肪酶，或是在後述說明之含有脂肪酶之水溶液中混合大豆粉末而製得。
在將溶解、分散有脂肪酶及大豆粉末之水溶液乾燥的過程中，脂肪酶及/或大豆粉末之粒子係凝集而形成含有脂肪酶及大豆粉末的粒狀物。此粒狀物亦可含有脂肪酶之培養基成分。
如此操作而調製之脂肪酶粉末製劑，係可直接使用於酯交換或酯化。
在溶解、分散有脂肪酶及大豆粉末之水溶液中之水之量，係相對於脂肪酶及大豆粉末之合計質量而調整水之質 量。具體而言，相對於脂肪酶及大豆粉末之合計質量，水之質量係以0.5至1,000倍為佳，又以1.0至500倍為更佳，並以3.0至100倍為最佳。
尤其是在以噴霧乾燥法製造脂肪酶粉末製劑時，從裝置之特性來看，相對於脂肪酶及大豆粉末之合計質量，水之質量係以2.0至1,000倍為佳，又以2.0至500倍為更佳，並以3.0至100倍為最佳。
另外，在使用含有脂肪酶之水溶液作為原料的情況下，當含有脂肪酶之水溶液中的脂肪酶含量為不明時，可藉由冰凍乾燥法、其他之減壓乾燥法將含有脂肪酶之水溶液予以粉末化而求得脂肪酶含量，以計算出脂肪酶質量。
在此，含有脂肪酶之水溶液可列舉如：將從已去除菌體之脂肪酶培養液、精製培養液中所得之脂肪酶，再度溶解、分散於水中者；將市售之粉末脂肪酶再度溶解、分散於水中者；市售之液狀脂肪酶等。再者，為了更加提升脂肪酶活性，較佳為經去除鹽類等低分子成分者；另外，為了更加提升粉末性狀，較佳為經去除糖等低分子成分者。
就脂肪酶培養液而言，可列舉如含有大豆粉、蛋白腖(Peptone)、玉米漿(Corn steep liquor)、K2 HPO4 、(NH4 )2 SO4 、MgSO4 ‧7H2 O等之水溶液。此等之濃度係宜為：大豆粉為0.1至20質量%(較佳為0.1至10質量%)，蛋白腖為0.1至30質量%(較佳為0.5至10質量%)，玉米漿為0.1至30質量%(較佳為0.5至10質量%)，K2 HPO4 為0.01至20質量%(較佳為0.05至5質量%)，MgSO4 ． 7H2 O為0.01至20質量%(較佳為0.05至5質量%)。培養條件係宜控制成：培養溫度為10至40℃(較佳為20至35℃)，通氣量為0.1至2.0VVM(較佳為0.1至1.5VVM)，攪拌回轉數為100至800rpm(較佳為200至400rpm)，pH值為3.0至10.0(較佳為4.0至9.5)。
菌體之分離係以藉由離心分離、膜過濾等來進行為佳。另外，鹽類或糖等低分子成分之去除係可藉由UF膜處理來進行。具體而言，進行UF膜處理，將含有脂肪酶之水溶液濃縮成1/2量之體積後，藉由重複添加1至5次與濃縮液同量之磷酸緩衝液，而可獲得經去除低分子成分的含有脂肪酶之水溶液。
離心分離較佳為200至20,000×g，膜過濾較佳為以MF膜、壓濾(filter press)等將壓力控制在3.0kg/m2 以下。當使用菌體內酵素時，宜為以均質機、瓦林混合機(Waring blender)、超音波粉碎、法式壓碎機(French press)、球磨機等進行細胞粉碎，再以離心分離、膜過濾等除去細胞殘渣。均質機之攪拌回轉數為500至30,000rpm(較佳為1,000至15,000rpm)，瓦林混合機之攪拌回轉數為500至10,000rpm(較佳為1,000至5,000rpm)。攪拌時間為0.5至10分鐘，較佳為1至5分鐘。超音波粉碎宜以1至50kHz(較佳為10至20kHz)之條件下進行。球磨機可使用直徑0.1至0.5mm左右之玻璃製小球。
在乾燥步驟前之途中之步驟，亦可濃縮該含有脂肪酶之水溶液。濃縮方法並無特別限定，可列舉如蒸發器、閃 蒸器(flash evaporator)、UF膜濃縮、MF膜濃縮、藉無機鹽類而進行之鹽析、藉溶劑而進行之沉澱法、藉離子交換纖維素等而進行之吸附法、藉吸水性膠而進行之吸水法等。以UF膜濃縮、蒸發器為較佳。就UF膜濃縮用模組而言，較佳係截留分子量(Molecular Weight cut-off)為3,000至100,000(較佳為6,000至50,000)之平膜或中空系膜，材質較佳為聚丙烯晴系、聚碸系等。
其次，針對將溶解、分散有脂肪酶及大豆粉末之水溶液乾燥的方法如噴霧乾燥法、冰凍乾燥法、或溶劑沉澱乾燥法，來加以說明。
噴霧乾燥法係宜以使用噴嘴逆流式、碟盤逆流式、噴嘴並流式、碟盤並流式(disk co-current)等噴霧乾燥機進行。以碟盤並流式為佳，並且較佳係霧化器回轉數為4,000至20,000rpm、加熱係控制成入口溫度為100至200℃且出口溫度為40至100℃而進行噴霧乾燥者為佳。尤其是較佳為將含有脂肪酶與大豆粉末之水溶液的溫度調整到20至40℃，接著在70至130℃之乾燥環境內進行噴霧。另外，較佳為在乾燥前先將水溶液之pH值調整成7.5至8.5。
冰凍乾燥(凍結乾燥)較佳係例如以實驗尺寸之少量用凍結乾燥機進行棚段式凍結乾燥。更進一步，亦可藉由減壓乾燥而調製。
溶劑沉澱‧乾燥法，係將溶解、分散有脂肪酶及大豆粉末之水溶液緩緩地添加至所使用之溶劑中，而生成沉澱物，再將所得之沉澱物使用離心分離機進行離心分離並回 收沉澱物後，進行減壓乾燥。為了防止脂肪酶粉末製劑之變性、劣化，這一連串之操作宜在室溫以下之低溫條件下進行。
溶劑沉澱時所用之溶劑係可列舉如乙醇、丙酮、甲醇、異丙醇、及己烷等水溶性溶劑或親水性溶劑，亦可使用此等之混合溶劑。其中，為了更加提升脂肪酶粉末製劑之活性，以使用乙醇或丙酮為較佳。
所使用之溶劑之量並無特別限制，但以相對於溶解、分散有脂肪酶及大豆粉末之水溶液的體積，較佳為使用1至100倍之體積之溶劑，更佳為使用2至10倍之體積之溶劑。
另外，進行溶劑沉澱後，雖然可在靜置後藉由過濾而獲得沉澱物，但亦可藉由1,000至3,000×g左右之輕度離心分離而獲得。所得之沉澱物之乾燥係例如可藉由減壓乾燥而進行。
在本發明，於製造脂肪酶粉末製劑的過程中，亦可添加脂肪酸酯及/或脂肪酸。具體而言，可藉由在使脂肪酸酯及/或脂肪酸接觸到溶解、分散有脂肪酶及大豆粉末之水溶液後，再進行乾燥而獲得。藉由進行此種脂肪酸酯及/或脂肪酸之接觸，而可更加提升脂肪酶活性及安定性。
所使用之脂肪酸酯，可列舉如一元醇或多元醇與脂肪酸的脂肪酸酯。多元醇之脂肪酸酯係可為部分酯，亦可為全酯。
在此，一元醇係可列舉如烷基一元醇、植物甾醇 (phytosterol)等甾醇類。構成烷基一元醇之烷基部分係以碳數6至12之中鏈烷基或碳數13至22之長鏈烷基為較佳，可為飽和或不飽和，可為直鏈或支鏈。就植物甾醇而言，例如以穀甾醇(sitosterol)、豆甾醇(Stigmasterol)、菜油甾醇(campesterol)、海藻甾醇(fucosterol)、菠菜甾醇(spinasterol)、菜籽甾醇(brassicasterol)等為較佳。另外，就多元醇而言，可列舉如甘油、二甘油或十甘油等甘油縮合物、丙二醇等二醇類、山梨醇等。
所使用之脂肪酸酯之構成脂肪酸、以及所使用之脂肪酸係並無特別限定，但以源自油脂之脂肪酸為較佳。例如可列舉如：己酸、辛酸、癸酸、十一烷酸等碳數6至12之中鏈脂肪酸；油酸、亞麻油酸、次亞麻油酸、蓖麻油酸、芥子酸等碳數13至22之長鏈不飽和脂肪酸。除此之外，亦可列舉如十四烷酸、十六烷酸、十八烷酸、二十烷酸、二十二烷酸等長鏈飽和脂肪酸。
所使用之脂肪酸酯，宜為從以油脂、源自油脂之脂肪酸作為構成成分的二甘油酯、單甘油酯中選出之1種或2種以上。另外，亦可使用藉由將脂肪酸酯之一部分進行水解而獲得之部分酯與脂肪酸之混合物。
此外，在脂肪酶粉末製劑中所使用之脂肪酸酯及脂肪酸，較佳係選擇與在使用脂肪酶粉末製劑進行酯交換或酯化時所使用之原料為相同者。
在此，作為脂肪酸酯使用之油脂係並無特別限制，在以進行水解反應及酯化反應而製造脂肪酶粉末製劑時，較 佳為使用在反應溫度下為液體的油脂。
就油脂而言，可列舉如：菜籽油、葵花油、橄欖油、玉米油、椰子油、芝麻油、紅花油、大豆油、該等之高油精(high olein)品種之油脂、棉籽油、米油、亞麻仁油、棕櫚油、棕櫚油之分離油、棕櫚仁油、山茶油、可可脂、牛油樹油(Shea Butter)、沙羅雙樹油、以及依利伯脂(illipe butter)等植物性油脂；三油精(triolein)(亦即三油酸甘油酯)、三辛精(tricaprylin)(亦即三辛酸甘油酯)、三乙醯甘油(triacetin)(亦即三乙酸甘油酯)、三丁醯甘油(tributyrin)(亦即三丁酸甘油酯)等三甘油酯(合成油脂)；魚油、牛油、豬油等動物性油脂等油脂中之1種或2種以上之混合物。此等之中，以植物性油脂為較佳。
將脂肪酸酯、或將脂肪酸酯與脂肪酸作為原料使用時，在溶解、分散有脂肪酶及大豆粉末之水溶液中添加脂肪酸酯、或脂肪酸酯與脂肪酸並使之接觸，以攪拌器或三一馬達(three-one motor)等均勻地攪拌而使其水解及/或乳化、分散後，再以從噴霧乾燥法、冰凍乾燥法或溶劑沉澱乾燥法中選出之1種乾燥方法來乾燥，而可製成脂肪酶粉末製劑。
在此，亦可藉由伴隨著酯化反應之脫水來進行乾燥。亦即，在水解及/或乳化、分散後，接著一邊脫水一邊進行酯化反應，並因應需要而過濾未反應物等油分，藉此而可製成脂肪酶粉末製劑。
在製造脂肪酶粉末製劑時所使用之脂肪酸酯及/或脂 肪酸的添加量，係相對於脂肪酶及大豆粉末之合計質量，較佳為0.1至500倍之質量，更佳為0.2至100倍之質量，最佳為0.3至50倍之質量。
惟，在使用噴霧乾燥法製造脂肪酶粉末製劑時，所使用之脂肪酸酯及/或脂肪酸的添加量，係相對於脂肪酶及大豆粉末之合計質量，較佳為0.1至10倍之質量，更佳為0.2至10倍之質量，最佳為0.3至10倍之質量。
此係由於當使用噴霧乾燥法時，若脂肪酸酯及/或脂肪酸的添加量過多，則會發生例如水分之蒸發變得不完全，或是所得之脂肪酶粉末製劑會因過多之脂肪酸酯及/或脂肪酸而變得難以回收等之問題。
藉由改良噴霧乾燥之裝置或改變回收狀態，亦可提高所使用之脂肪酸酯及/或脂肪酸的添加量的上限值，但若含有需求量以上之脂肪酸酯及/或脂肪酸，則會變得必須進行過濾等步驟。
使用溶劑沉澱來製造含有脂肪酸酯及/或脂肪酸之脂肪酶粉末製劑時，相較於脂肪酸酯及/或脂肪酸與溶解、分散有脂肪酶及大豆粉末之水溶液的總合計質量，所使用之溶劑之量係以使用1至100倍之值之體積的溶劑為佳，又以使用2至10倍之體積的溶劑為更佳。
在進行溶劑沉澱前，當添加有後述說明之過濾助劑時，要以再加上過濾助劑之質量作為總質量之方式來使用溶劑。
在本發明中，可復包含添加過濾助劑之步驟。
當藉由伴隨著酯化反應之脫水來進行乾燥時，可在酯化反應前、酯化反應中、或酯化反應後添加過濾助劑。藉由添加過濾助劑，而可在酯化反應後使過濾處理能順利地進行，故為較佳。
在酯化反應前或酯化反應中添加過濾助劑時，此時亦可復添加油脂。此係由於當因添加過濾助劑而使黏度增加、攪拌情形變差時，藉由如此地添加油脂，即可使反應溶液之流動性變好。
可使用之過濾助劑，係列舉如矽膠、矽藻土、纖維素、澱粉、糊精(dextrin)、活性碳、活性白土、高嶺土、皂土、滑石、砂等。其中以矽膠、矽藻土、纖維素為較佳。過濾助劑之粒徑可為任意值，但以1至100μm為佳，尤以5至50μm為特佳。
在酯化反應前後或反應中所可使用之過濾助劑，係以相對於脂肪酶及大豆粉末之合計質量為1至500質量%之量來添加為較佳，又以10至200質量%之量來添加為更佳。若使用在此範圍內之量，則可使過濾時之負擔更為減少，而不需要大規模之過濾設備或高度之離心分離等過濾前處理。
另外，在本發明的藉由除了伴隨著酯化反應之脫水以外之乾燥方法而獲得的脂肪酶粉末製劑中，亦可含有過濾助劑。在藉由噴霧乾燥法或冰凍乾燥法來進行乾燥而獲得脂肪酶粉末製劑時，亦可在乾燥前或乾燥後添加過濾助劑。
在藉由於溶劑沉澱後再乾燥之方法來進行乾燥時，較 佳為在經乾燥而得之脂肪酶粉末製劑中添加過濾助劑。
所得之脂肪酶粉末製劑中所含有的過濾助劑的量，係以脂肪酶與大豆粉末之合計質量為基準，可為1至500質量%，又以10至200質量%為較佳。
其次，針對使用本發明之脂肪酶粉末製劑進行酯交換反應或酯化反應而獲得的酯交換物或酯化物的製造方法，來加以說明。
使用本發明之脂肪酶粉末製劑而進行之酯交換反應，係為從脂肪酸酯、脂肪酸及醇類中選出之一種以上與脂肪酸酯的酯交換反應，例如可列舉如：藉常法進行的油脂與油脂之酯交換反應、油脂與脂肪酸酯之酯交換反應、醇解(Alcoholysis)或酸解(acidolysis)之酯交換反應。
另外，使用本發明之脂肪酶粉末製劑而進行之酯化反應，係為脂肪酸之部分酯與脂肪酸的酯化反應、或是一元醇或多元醇與脂肪酸的酯化反應，例如可列舉如甘油與脂肪酸的酯化反應等。
更詳細言之，就油脂與油脂之酯交換反應而言，例如，可使作為長鏈脂肪酸之三甘油酯的菜籽油與作為源自植物之中鏈脂肪酸之三甘油酯的三辛酸甘油酯進行酯交換反應，而製成長鏈與中鏈混合的三甘油酯。
另外，使用油脂與脂肪酸之酸解(acidolysis)的酯交換反應，係可製成善加利用脂肪酶所具有之1, 3-特異性脂肪酶的結構的油脂。其係在甘油骨架之2位上殘留特定之脂肪酸並將1、3位之脂肪酸取代成目的之脂肪酸者。所得 者係可利用於作為巧克力等所使用之油脂，又亦可利用於作為具有特定營養效果之油脂。
關於使用本發明之脂肪酶粉末製劑而進行之酯交換反應或酯化反應的條件，並無特別限定，可依據常法來進行。
一般而言，係一邊避免成為水解原因的水分混入，一邊在常壓或減壓下進行。就反應溫度而言，雖然是依據所使用之原料、以及已混合原料之混合物之凝固點而有所不同，但以在20至80℃左右進行為佳，若不受凝固點所限定，則以在40至60℃進行為更佳。
另外，脂肪酶粉末製劑對於反應原料之添加量，以0.05至10質量%為佳，又以0.05至5質量%為更佳。最適量係依據反應溫度、所設定之反應時間、所得之脂肪酶粉末製劑之活性等來決定。反應結束後，脂肪酶粉末製劑係藉由過濾、離心分離等而被去除，可重複使用直到降低至無法進行製造之活性為止(安定性之評估)。
因此，通常為高價之脂肪酶，期望能同時賦予如盡可能少量使用且高活性、以及高安定性等特性於脂肪酶粉末製劑。
如此所獲得之酯交換物或酯化物係無特別限定，較佳為在食品領域所使用之酯交換油脂或酯化油脂，更佳為可使用於製造因宗教上之理由或健康上之理由等而不能攝取源自動物之蛋白質或油脂的人們所需之食品或食品添加劑的源自植物油之酯交換油脂或酯化油脂。
接著，以製造例及實施例更為詳細說明本發明。
(實施例) 實施例1
在天野酵素公司之商品「脂肪酶DF“Amano”15-K」(亦稱為脂肪酶D)的酵素溶液(150,000U/ml)中一邊攪拌一邊添加3倍量之豆漿(脂肪含量為20質量%之大豆粉末分散液，名酪(音譯：MEIRAKU)股份公司製)，以0.5N氫氧化鈉溶液調整成pH值7.8後(液溫度為室溫)，以入口溫度130℃噴霧而進行噴霧乾燥(東京理科器械股份公司，SD-1000型)。所得之脂肪酶粉末製劑之95質量%之粒徑為1至100μm。
比較例1
除了不添加豆漿以外，與實施例1進行同樣操作，而獲得脂肪酶粉末製劑。
將實施例1及比較例1所得之脂肪酶粉末製劑之活性使用以下之方法來測定。
脂肪酶活性之測定方法
在以1：1(w)之比率混合1,2,3-三油酸甘油酯與1,2,3-三辛酸甘油酯(1,2,3-trioctanoglycerol)的油中，添加脂肪酶粉末製劑並於60℃使其反應。經時性地進行取樣10μl，並以己烷1.5ml稀釋後，將已過濾脂肪酶粉末製劑之溶液作為氣相層析(GC)用樣品。以GC(管柱：DB-1ht)分析，並藉由下式求得反應率。GC條件係：管柱溫度為150℃，昇溫速度為15℃/分鐘，最終溫度為370℃。
反應率(%)={C34area/(C24area+C34area)}×100
式中，C24係表示1, 2, 3-三辛酸甘油酯，C34係表示1, 2, 3-三辛酸甘油酯之一個脂肪酸經油酸取代者，area係該等之區域面積。基於各時間中之反應率，以解析軟體(origin ver. 6. 1)求出反應速度定數k值。
脂肪酶粉末製劑之活性係將直接使酵素溶液噴霧乾燥時之k值作為100，以相對活性表示。
彙總結果，示於表1。
由表1之結果可知，若依據本發明則可使脂肪酶活性大幅上升。
實施例2
在與實施例1所用者相同之「脂肪酶DF "Amano" 15-K」的酵素溶液(150,000U/ml)中一邊攪拌一邊添加3倍量之脫臭全脂大豆粉末(脂肪含量為23質量%，商品名為「Alphaplus HS-600」，日清cosmofoods股份公司製)10%水溶液，以0.5N氫氧化鈉溶液調整成pH值7.8後，進行噴霧乾燥(東京理科器械股份公司，SD-1000型)(本發明1)。
將脫臭全脂大豆粉末水溶液之濃度以10質量%(以下 略稱為%)、15%(本發明2)、20%(本發明3)加以比較時，可知藉由添加10%之水溶液，能獲得酯交換活性最高之粉末。
另外，預先將脫臭全脂大豆粉末10%溶液進行高壓釜滅菌(121℃，15分鐘)，在冷卻至室溫左右後，於上述步驟進行粉末化(本發明4)，可獲得活性更高之酵素粉末。
彙總結果，示於表2。
實施例3
檢討在與實施例1所用者相同之「脂肪酶DF "Amano" 15-K」的酵素溶液(150,000U/ml)中添加之大豆粉之種類。使大豆粉水溶液之濃度為10%。
除了使用美國產大豆粉(商品名「Organic Soy Flour」，Arrowhead Mills公司製，使用以混合器調整漿液後再以紗布篩濾的溶液，脂肪含量為7質量%)或脫脂大豆粉末(商品名為「Soyaflower FT-N」，日清cosmofoods 股份公司製，脂肪含量為0.2質量%，比較例2)以外，與實施例1進行同樣操作，而製造脂肪酶粉末製劑。
將所得之脂肪酶粉末製劑之脂肪酶活性示於表3。
由表3之結果可知，若使用脂肪含量少之脫脂大豆粉末作為大豆粉末，則無法提升脂肪酶活性。
實施例4
添加實施例2(本發明1)所得之脂肪酶粉末製劑2g於牛油樹油精(Shea olein)(商品名：「Lipex205」，Aarhuskarlshamn公司製)200g中，於60℃攪拌20小時，進行酯交換反應。經時性地進行取樣10μl，並以己烷1.5ml稀釋後，將已過濾粉末酵素之溶液作為氣相層析(GC)用樣品。將三醯基甘油酯組成中之二硬脂醯基單油酸甘油酯(SSO與SOS之混合物)之比率作為反應率。同樣地進行比較例1所得之脂肪酶粉末製劑之酯交換反應。結果如第1圖所示，可知實施例2所得之酵素活性明顯地較高。
第1圖表示使用實施例2(本發明1)所得之脂肪酶粉末製劑與比較例1所得之脂肪酶粉末製劑時的酯交換反應率 的經時變化。
該代表圖無元件符號及其所代表之意義。

Claims (9)

  1. 一種酯交換用或酯化用脂肪酶粉末製劑，其係含有源自米根黴菌(Rhizopus oryzae)及/或源自德氏根黴菌(Rhizopus delemar)之脂肪酶與脂肪含量為5質量%以上之大豆粉末的粒狀物；相對於脂肪酶，大豆粉末之使用量以質量基準為0.1至200倍之量。
  2. 如申請專利範圍第1項之脂肪酶粉末製劑，其中，大豆粉末之脂肪含量為10至25質量%。
  3. 如申請專利範圍第1項或第2項之脂肪酶粉末製劑，其中，大豆粉末為全脂大豆粉。
  4. 如申請專利範圍第1項或第2項之脂肪酶粉末製劑，其中，脂肪酶粉末製劑之90質量%以上之粒徑為1至100μm。
  5. 一種酯交換用或酯化用脂肪酶粉末製劑之製造方法，其特徵為：將溶解、分散有源自米根黴菌(Rhizopus oryzae)及/或源自德氏根黴菌(Rhizopus delemar)之脂肪酶與脂肪含量為5質量%以上之大豆粉末的水溶液予以乾燥；相對於脂肪酶，大豆粉末之使用量以質量基準為0.1至200倍之量。
  6. 如申請專利範圍第5項之製造方法，其中，在乾燥前先將水溶液之pH值調整成7.5至8.5。
  7. 如申請專利範圍第5項或第6項之製造方法，其中，藉由噴霧乾燥而進行乾燥。
  8. 如申請專利範圍第5項或第6項之製造方法，其中，在 即將噴霧乾燥之前，先將含有脂肪酶與大豆粉末之水溶液之溫度調整成20至40℃，接著在70至130℃之乾燥環境內進行噴霧。
  9. 一種酯交換物或酯化物之製造方法，其特徵為：使用申請專利範圍第1項至第4項中任一項之脂肪酶粉末製劑，對於從脂肪酸酯、脂肪酸及醇類中選出之一種以上，進行酯交換反應或酯化反應。
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