KR20090122241A - 리파아제 분말제제, 그 제조방법 및 사용 - Google Patents

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Abstract

리조푸스 오리자에(Rhizopus oryzae) 유래 및/또는 리조푸스 델레마(Rhizopus delemar) 유래의 리파아제와, 지방 함유량이 5질량% 이상인 대두 분말을 함유하는 조립물인 리파아제 분말제제이다. 이 리파아제 분말제제로 함으로써 리파아제 활성이 향상한다.
리조푸스 오리자에, 리조푸스 델레마, 리파아제, 대두 분말, 분말제제

Description

리파아제 분말제제, 그 제조방법 및 사용{POWDERY LIPASE PREPARATION, METHOD FOR PRODUCTION THEREOF, AND USE THEREOF}
본 발명은 각종 에스테르화 반응, 에스테르 교환반응 등에 바람직하게 사용할 수 있는 리파아제 분말제제, 나아가 지방산 에스테르 및/또는 지방산을 함유하는 리파아제 분말제제, 이들의 제조방법, 이들 리파아제 분말제제를 이용하는 에스테르 교환방법 등에 관한 것이다.
리파아제는 지방산 등의 각종 카르본산과 모노알코올이나 다가알코올 등의 알코올류와의 에스테르화 반응, 복수의 카르본산에스테르간의 에스테르 교환반응 등에 폭넓게 사용되고 있다. 이 중 에스테르 교환반응은 동식물 유지류의 개질을 비롯해, 각종 지방산의 에스테르, 당에스테르나 스테롤에스테르의 제조법으로서 중요한 기술이다. 이들 반응의 촉매로서 유지 가수분해 효소인 리파아제를 이용하면, 실온 내지 약 70℃ 정도의 온화한 조건하에서 에스테르 교환반응을 행할 수 있어 종래의 화학반응에 비해 부반응의 억제나 에너지 비용이 저감화될 뿐만 아니라, 촉매로서의 리파아제가 천연물이기 때문에 안전성도 높다. 또한 그 기질 특이성이나 위치 특이성에 의해 목적물을 효율적으로 생산할 수 있다. 그런데, 분말 리파아제를 그대로 에스테르 교환반응에 이용해도 활성이 충분히 발현되지 않을 뿐만 아니 라, 원래가 수용성인 리파아제를 유성 원료 중에 균일하게 분산시키는 것은 곤란하며 또 그 회수도 곤란하다.
이 때문에, 종래는 리파아제를 어떠한 담체, 예컨대 음이온 교환수지(특허문헌 1), 페놀 흡착수지(특허문헌 2), 소수성 담체(특허문헌 3), 양이온 교환수지(특허문헌 4), 킬레이트수지(특허문헌 5) 등에 고정화해서 에스테르화나 에스테르 교환반응 등에 이용하는 것이 일반적이다. 또한 리파아제와 리파아제의 담체로서 작용하는 물질을 용해하고 있는 수상(水相)이 소수상으로 분산되어 있는 에멀젼을 제조해 그 에멀젼으로부터 물을 제거함으로써, 수상을 리파아제로 피복한 고체입자로 변화시키는 고정화 리파아제 입자의 제조방법이 제안되어 있다(특허문헌 6).
이와 같이, 종래에는 리파아제를 고정화해서 에스테르 교환반응에 이용하고 있었으나, 이러한 고정화 리파아제는 고정화 처리에 의한 본래의 리파아제 활성의 손실을 수반할 뿐만 아니라, 다공성 담체를 이용한 경우에는 미세공에 원료나 생성물이 끼어, 결과적으로 에스테르 교환율의 저하를 초래하고 있었다. 더욱이 종래의 고정화 리파아제를 이용한 에스테르 교환반응에 있어서는, 담체가 보유하는 수분이 반응계에 들어오기 때문에, 부반응, 예컨대 유지류의 에스테르 교환반응에 있어서의 디글리세리드나 모노글리세리드의 생성 등을 피하기란 곤란했다.
이러한 상황을 감안하여 분말 리파아제를 이용하는 각종 기술이 개발되고 있다. 예컨대, 불활성 유기용매의 존재하 또는 비존재하, 에스테르 교환반응시에 분산 리파아제 분말입자의 90% 이상을 1∼100㎛의 범위의 입자지름으로 유지하도록, 에스테르를 함유하는 원료에 분말 리파아제를 분산시켜서 에스테르 교환반응을 행 하는 방법이 제안되어 있다(특허문헌 7). 또한 인지질 및 지용성 비타민을 포함하는 효소 용액을 건조시켜 얻은 효소 분말을 이용하는 것이 제안되어 있다(특허문헌 8).
그러나 리파아제 활성이 더욱 향상된 분말 리파아제가 요구되고 있다.
한편, 효소 함유 용액에 곡물분을, 또는 곡물분 및 당류를 첨가해서 그 효소 함유 용액을 건조시키는 것을 특징으로 하는 효소 고정제제의 제조방법이 제안되어 있다(특허문헌 9). 여기서는, 사용할 수 있는 효소로서 리파아제, 셀룰라아제, 프로테아제, 아밀라아제 및 펙티나아제를 들 수 있으며, 이 제조방법에 의해 얻어진 효소 고정제제는 효소 활성 저하물질 존재하에서의 효소의 비활성화를 억제할 수 있다고 하고 있으나, 효소 활성이 향상하는 것에 대해서는 기재되어 있지 않다. 또한 여기서 실제로 제조되고 있는 것은 셀룰라아제 또는 프로테아제에 지방 함량이 적은 탈지 대두분을 적용한 예뿐이고, 리파아제를 이용한 예는 구체적으로 기재되어 있지 않다.
특허문헌 1: 일본국 공개특허공보 소60-98984호
특허문헌 2: 일본국 공개특허공보 소61-202688호
특허문헌 3: 일본국 공개특허공보 평2-138986호
특허문헌 4: 일본국 공개특허공보 평3-61485호
특허문헌 5: 일본국 공개특허공보 평1-262795호
특허문헌 6: 일본국 특허공보 제3403202호
특허문헌 7: 일본국 특허공보 제2668187호
특허문헌 8: 일본국 공개특허공보 제2000-106873호
특허문헌 9: 일본국 공개특허공보 평11-246893호
본 발명은 리파아제 활성이 향상한 리파아제 분말제제를 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 또한 이들 리파아제 분말제제의 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 또한 이들 리파아제 분말제제를 이용하는 에스테르 교환방법 및 에스테르화 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 특정한 기원의 리파아제를, 지방 함량이 높은 대두 분말을 이용해 분말로 만들고, 얻어진 리파아제 분말제제를 에스테르화 반응 및/또는 에스테르 교환반응에 사용하면, 리파아제 활성이 월등히 향상한다는 지견에 기초하여 이루어진 것이다.
즉, 본 발명은 리조푸스 오리자에(Rhizopus oryzae) 유래 및/또는 리조푸스 델레마(Rhizopus delemar) 유래의 리파아제와, 지방 함유량이 5질량% 이상인 대두 분말을 함유하는 조립물(造粒物)인 것을 특징으로 하는 리파아제 분말제제를 제공한다.
본 발명은 또한 리조푸스 오리자에 유래 및/또는 리조푸스 델레마 유래의 리파아제와, 지방 함유량이 5질량% 이상인 대두 분말을 용해·분산시킨 수용액을 건조시키는 것을 특징으로 하는 리파아제 분말제제의 제조방법을 제공한다.
본 발명은 또한 상기 리파아제 분말제제를 이용해 지방산에스테르, 지방산, 및 알코올에서 선택되는 1종 이상에 에스테르 교환반응 또는 에스테르화 반응을 행하는 것을 특징으로 하는, 에스테르 교환물 또는 에스테르화물의 제조방법을 제공한다.
본 발명에 따르면, 에스테르 교환반응 또는 에스테르화 반응을 효율적으로 행하면서 반응 후에 회수해서 다시 이용할 수 있는, 효소 활성이 월등히 향상한 리파아제 분말제제를 제공할 수 있다.
또한 본 발명에 따르면, 종교상의 이유나 건강상의 이유 등으로 동물 유래의 단백이나 유지를 섭취할 수 없는 사람들을 위한 식품 또는 식품 첨가제를 제조하는데, 안전하면서 저렴한 비용으로 사용할 수 있는 리파아제 분말제제를 얻을 수 있다.
도 1은 실시예 2(본 발명 1)에서 얻어진 리파아제 분말제제와 리파아제 분말제제를 이용한 경우의 에스테르 교환반응률의 경시변화를 나타낸다.
본 발명에서 이용하는 리파아제로서는, 리조푸스속의 리조푸스 델레마 및 리조푸스 오리자에를 사용할 수 있다. 1,3-특이성 리파아제인 것이 바람직하다.
이들 리파아제로서는 로빈(Robin)사의 상품:피칸타아제(Picantase) R8000이나, 아마노엔자임(Amano Enzyme)사의 상품:리파아제 F-AP15 등을 들 수 있으나, 가장 적합한 리파아제로서는 리조푸스 오리자에 유래, 아마노엔자임사의 상품:리파아 제 DF "Amano" 15-K(리파아제 D라고도 함)를 들 수 있다. 이것은 분말 리파아제이다. 한편, 이 리파아제 DF "Amano" 15-K에 대해서 종래에는 리조푸스 델레마 유래의 표기였다.
본 발명에서 사용하는 리파아제로서는, 리파아제의 배지 성분 등을 함유한 리파아제 함유 수용액을 건조시켜 얻어진 것이어도 된다.
본 발명에서 이용하는 지방 함유량이 5질량% 이상인 대두 분말로서는, 지방 함유량이 10질량% 이상인 것이 바람직하고, 15질량% 이상인 것이 더 바람직하며, 한편 25질량% 이하인 것이 바람직하다. 특히 지방 함유량이 18∼23질량%인 대두 분말이 바람직하다. 여기서 지방으로서는 지방산트리글리세리드 및 그 유연(類緣)체를 들 수 있다. 대두의 지방 함량은 속슬렛(Soxhlet) 추출법 등의 방법에 의해 용이하게 측정할 수 있다.
본 발명에서는, 이러한 대두 분말로서 전지 대두분을 이용할 수 있다. 또한 대두 분말의 원료로서 두유를 이용할 수도 있다. 대두 분말은 대두를 상법에 의해 분쇄하여 제조할 수 있으며, 그 입자지름은 0.1∼600㎛ 정도인 것이 바람직하다.
리파아제에 대한 대두 분말의 사용량은 질량 기준으로 0.1∼200배의 양인 것이 바람직하고, 0.1∼20배의 양인 것이 보다 바람직하며, 0.1∼10배의 양이 가장 바람직하다.
본 발명의 리파아제 분말제제는 수분 함량이 10질량% 이하인 것이 바람직하고, 특히 1∼8질량%인 것이 바람직하다.
본 발명의 리파아제 분말제제의 입자지름은 임으로 할 수 있으나, 리파아제 분말제제의 90질량% 이상이 입자지름 1∼100㎛인 것이 바람직하다. 평균입자지름은 10∼80㎛가 바람직하다. 또한 리파아제 분말제제의 형상은 구형상인 것이 바람직하다.
리파아제 분말제제의 입자지름은, 예컨대 호리바(HORIBA)사의 입도분포측정장치(LA-500)를 이용해 측정할 수 있다.
본 발명의 리파아제 분말제제는 리파아제 및 대두 분말을 용해·분산시킨 수용액을, 스프레이 드라이(spray drying), 프리즈 드라이(freeze drying) 및 용제 침전·건조 중에서 선택되는 어느 1종의 건조방법으로 건조시켜서 제조할 수 있다.
여기서 리파아제 및 대두 분말을 용해·분산시킨 수용액은, 분말 리파아제와 대두 분말을 물에 용해·분산시키거나, 대두 분말이 용해·분산된 수용액에 분말 리파아제를 혼합하거나, 또는 나중에 설명하는 리파아제 함유 수용액에 대두 분말을 혼합함으로써 얻을 수 있다.
리파아제 및 대두 분말을 용해·분산시킨 수용액을 건조시키는 과정에서는, 리파아제 및/또는 대두 분말의 입자가 응집하여 리파아제 및 대두 분말을 함유하는 조립물이 형성된다. 이 조립물은 리파아제의 배지 성분을 포함하고 있어도 된다.
이렇게 해서 조제한 리파아제 분말제제는, 그대로 에스테르 교환 또는 에스테르화에 사용할 수 있다.
리파아제 및 대두 분말을 용해·분산시킨 수용액 중의 물의 양은, 리파아제 및 대두 분말과의 합계 질량에 대해 물의 질량을 조정한다. 구체적으로는, 리파아제 및 대두 분말과의 합계 질량에 대한 물의 질량이 0.5∼1000배인 것이 바람직하 고, 1.0∼500배인 것이 보다 바람직하며, 3.0∼100배가 가장 바람직하다.
특히 스프레이 드라이에 의해 리파아제 분말제제를 제조하는 경우에는, 장치의 특성으로부터 리파아제 및 대두 분말과의 합계 질량에 대한 물의 질량이 2.0∼1000배인 것이 바람직하고, 2.0∼500배인 것이 보다 바람직하며, 3.0∼100배가 가장 바람직하다. 한편, 리파아제 함유 수용액을 원료로서 사용하는 경우로서, 리파아제 함유 수용액 중의 리파아제 함량이 불분명한 때에는, 프리즈 드라이, 그 외의 감압건조에 의해 리파아제 함유 수용액을 분말화해 리파아제 함량을 구함으로써 리파아제 질량을 산출할 수 있다.
여기서 리파아제 함유 수용액으로서는, 균체(菌體)를 제거한 리파아제 배양액, 정제 배양액, 이들로부터 얻은 리파아제를 다시 물에 용해·분산시킨 것, 시판의 분말 리파아제를 다시 물에 용해·분산시킨 것, 시판의 액상 리파아제 등을 들 수 있다. 또한 리파아제 활성을 보다 높이기 위해서 염류 등의 저분자 성분을 제거한 것이 보다 바람직하고, 또 분말 성상(性狀)을 보다 높이기 위해서 당 등의 저분자 성분을 제거한 것이 보다 바람직하다.
리파아제 배양액으로서는, 예컨대 대두분, 펩톤, 콘·스팁·리커(corn steep liquor), K2HPO4, (NH4)2SO4, MgSO4·7H2O 등을 함유하는 수용액을 들 수 있다. 이들 농도로서는, 대두분 0.1∼20질량%, 바람직하게는 1.0∼10질량%, 펩톤 0.1∼30질량%, 바람직하게는 0.5∼10질량%, 콘·스팁·리커 0.1∼30질량%, 바람직하게는 0.5∼10질량%, K2HPO4 0.01∼20질량%, 바람직하게는 0.1∼5질량%이다. 또한 (NH4)2SO4는 0.01∼20질량%, 바람직하게는 0.05∼5질량%, MgSO4·7H2O는 0.01∼20질량%, 바람직하게는 0.05∼5질량%이다. 배양 조건은, 배양 온도가 10∼40℃, 바람직하게는 20∼35℃, 통기량이 0.1∼2.0VVM, 바람직하게는 0.1∼1.5VVM, 교반 회전수가 100∼800rpm, 바람직하게는 200∼400rpm, pH가 3.0∼10.0, 바람직하게는 4.0∼9.5로 제어하는 것이 좋다.
균체의 분리는 원심분리, 막여과 등으로 행하는 것이 바람직하다. 또한 염류나 당 등의 저분자 성분의 제거는 UF막 처리에 의해 행할 수 있다. 구체적으로는, UF막 처리를 행하여 리파아제를 함유하는 수용액을 1/2량의 체적으로 농축한 후, 농축액과 동일한 양의 인산 버퍼를 첨가하는 조작을 1∼5회 반복함으로써, 저분자 성분을 제거한 리파아제 함유 수용액을 얻을 수 있다.
원심분리는 200∼20000×g, 막여과는 MF막으로 하고, 필터 프레스(filter press) 등으로 압력을 3.0㎏/㎡ 이하로 컨트롤하는 것이 바람직하다. 균체 내 효소의 경우는 호모지나이저(homogenizer), 와링 블렌더(Waring blender), 초음파 파쇄, 프렌치 프레스(French press), 볼 밀(ball mill) 등으로 세포 파쇄하고, 원심분리, 막여과 등으로 세포 잔여물을 제거하는 것이 바람직하다. 호모지나이저의 교반 회전수는 500∼30000rpm, 바람직하게는 1000∼15000rpm, 와링 블렌더의 회전수는 500∼10000rpm, 바람직하게는 1000∼5000rpm이다. 교반시간은 0.5∼10분, 바람직하게는 1∼5분이 좋다. 초음파 파쇄는 1∼50kHz, 바람직하게는 10∼20kHz의 조건으로 행하는 것이 좋다. 볼 밀은 지름 0.1∼0.5㎜ 정도의 유리제의 소구(小球)를 이용하는 것이 좋다.
건조공정 전의 공정에 있어서, 리파아제 함유 수용액을 농축해도 된다. 농축방법은 특별히 한정되는 것은 아니지만, 증발기(evaporator), 플래쉬 증발기(flash evaporator), UF막 농축, MF막 농축, 무기염류에 의한 염석, 용제에 의한 침전법, 이온교환 셀룰로오스 등에 의한 흡착법, 흡수성 겔에 의한 흡수법 등을 들 수 있다. 바람직하게는 UF막 농축, 증발기가 좋다. UF막 농축용 모듈로서는, 분획분자량 3000∼100000, 바람직하게는 6000∼50000의 평막(flat membrane) 또는 중공사막(hollow fiber membrane), 재질은 폴리아크릴니트릴계, 폴리설폰계 등이 바람직하다.
다음으로, 리파아제 및 대두 분말을 용해·분산시킨 수용액을 건조하는 방법인 스프레이 드라이, 프리즈 드라이, 또는 용제 침전·건조에 대해서 설명한다.
스프레이 드라이는, 예컨대 노즐 향류(向流)식, 디스크 향류식, 노즐 병류(竝流)식, 디스크 병류식 등 분무건조기를 이용해서 행하는 것이 좋다. 바람직하게는 디스크 병류식이 좋고, 아토마이저(atomizer) 회전수는 4000∼20000rpm, 가열은 입구온도 100∼200℃, 출구온도 40∼100℃로 제어해서 스프레이 드라이하는 것이 바람직하다. 특히 리파아제와 대두 분말을 함유하는 수용액의 온도를 20∼40℃로 조정하고, 이어서 70∼130℃의 건조분위기 내에 분무하는 것이 바람직하다. 또한 건조 전에 수용액의 pH를 7.5∼8.5로 조정해 두는 것이 바람직하다.
프리즈 드라이(동결건조)는, 예컨대 탁상형(bench-top)의 소량용 동결건조기, 플레이트식(plate type) 동결건조기에 의해 행하는 것이 바람직하다. 또한 감 압건조에 의해 조제할 수도 있다.
용제 침전·건조는 리파아제 및 대두 분말을 용해·분산시킨 수용액을, 사용하는 용제에 서서히 첨가해 침전물을 생성시키고, 얻어진 침전물을 원심분리기를 이용해 원심분리를 행하여 침전을 회수한 후 감압건조한다. 일련의 조작은 리파아제 분말제제의 변성·열화를 방지하기 위해서, 실온 이하의 저온 조건하에서 행하는 것이 바람직하다.
용제 침전에서 이용하는 용제로서, 예컨대 에탄올, 아세톤, 메탄올, 이소프로필알코올, 및 헥산 등의 수용성 용제 또는 친수성 용제를 들 수 있으며, 이들의 혼합 용제도 사용할 수 있다. 그 중에서도 리파아제 분말제제의 활성을 보다 높이기 위해서, 에탄올 또는 아세톤을 이용하는 것이 바람직하다.
사용하는 용제의 양은 특별히 한정되지 않으나, 리파아제 및 대두 분말을 용해·분산시킨 수용액의 체적에 대해 1∼100배의 체적의 용제를 사용하는 것이 바람직하고, 2∼10배의 체적의 용제를 사용하는 것이 보다 바람직하다.
또한, 용제 침전한 후 침전물은 방치 후에 여과에 의해 얻을 수 있는데, 1000∼3000×g 정도의 가벼운 원심분리에 의해 얻을 수도 있다. 얻어진 침전물의 건조는, 예컨대 감압건조에 의해 행할 수 있다.
본 발명에서는 리파아제 분말제제를 제조하는 과정에서, 지방산에스테르 및/또는 지방산을 더 첨가해도 된다. 구체적으로는, 리파아제 및 대두 분말을 용해·분산시킨 수용액에, 지방산에스테르 및/또는 지방산을 접촉시킨 후 건조시킴으로써 얻을 수 있다. 이러한 지방산에스테르 및/또는 지방산의 접촉을 행함으로써, 리파 아제 활성 및 안정성을 보다 향상시킬 수 있다.
사용하는 지방산에스테르로서는, 모노알코올 또는 다가알코올과 지방산과의 지방산에스테르를 들 수 있다. 다가알코올의 지방산에스테르는 부분 에스테르여도 되고, 풀 에스테르여도 된다.
여기서, 모노알코올로서는 알킬모노알코올, 식물스테롤(phytosterol) 등의 스테롤류를 들 수 있다. 알킬모노알코올을 구성하는 알킬 부분은, 탄소수가 6∼12인 중쇄알킬 또는 탄소수가 13∼22인 장쇄알킬인 것이 바람직하고, 포화여도 되고 불포화여도 되며, 직쇄여도 되고 분기쇄여도 된다. 식물스테롤로서는, 예컨대 시토스테롤(sitosterol), 스티그마스테롤(stigmasterol), 캄페스테롤(campesterol), 푸코스테롤(fucosterol), 스피나스테롤(spinasterol), 브라시카스테롤(brassicasterol) 등이 바람직하다. 또한 다가알코올로서는, 글리세린, 디글리세린이나 데카글리세린 등의 글리세린 축합물, 프로필렌글리콜 등의 글리콜류, 소르비톨 등을 들 수 있다.
사용하는 지방산에스테르의 구성 지방산 및 사용하는 지방산은 특별히 한정되지 않으나, 유지 유래의 지방산인 것이 바람직하다. 예컨대, 헥산산, 옥탄산, 데칸산, 운데칸산 등의 탄소수가 6∼12인 중쇄지방산, 올레인산, 리놀산, 리놀렌산, 리시놀산, 에루스산(erucic acid) 등의 탄소수가 13∼22인 장쇄불포화지방산을 들 수 있다. 그 외에 테트라데칸산, 헥사데칸산, 옥타데칸산, 에이코산산(eicosanoic acid), 도코사노산(docosanoic acid) 등의 장쇄포화지방산도 들 수 있다.
사용하는 지방산에스테르로서는 유지, 유지 유래의 지방산을 구성 성분으로 하는 디글리세리드, 모노글리세리드로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상이 바람직하다. 또한 지방산에스테르의 일부를 가수분해함으로써 얻어지는, 부분 에스테르와 지방산의 혼합물을 사용할 수도 있다.
한편, 리파아제 분말제제에 사용하는 지방산에스테르 및 지방산은, 리파아제 분말제제를 이용해서 행하는 에스테르 교환이나 에스테르화에 사용하는 원료와 동일한 것을 선택하는 것이 바람직하다.
여기서 지방산에스테르로서 사용하는 유지는 특별히 한정되지 않으나, 가수분해 반응 및 에스테르화 반응을 행함으로써 리파아제 분말제제를 제조하는 경우에는, 반응온도에 있어서 액체의 유지를 사용하는 것이 바람직하다.
유지로서, 예컨대 채종유, 해바라기유, 올리브유, 옥수수유, 야자유, 참기름, 홍화유, 대두유, 그들의 하이올레인 품종의 유지, 면실유, 라이스유, 아마인유, 팜유, 팜유의 분별유, 팜핵유(palm kernel oil), 동백유, 카카오버터, 시아버터, 살버터(sal butter) 및 일립버터(illipe better) 등의 식물성 유지, 트리올레인(트리올레인산글리세리드), 트리카프릴린(트리옥탄산글리세리드), 트리아세틴(트리초산글리세리드), 트리부티린(트리부탄산글리세리드) 등의 트리글리세리드(합성유지), 어유, 소기름, 라드 등의 동물성 유지의 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 들 수 있다. 이들 중에서도 식물성 유지가 바람직하다.
지방산에스테르, 또는 지방산에스테르와 지방산을 원료로서 사용하는 경우, 리파아제 및 대두 분말을 용해·분산시킨 수용액에, 지방산에스테르, 또는 지방산에스테르와 지방산을 첨가해 접촉시키고, 스터러(stirrer)나 쓰리원 모터(three- one motor) 등으로 균일하게 교반해 가수분해 및/또는 유화·분산시킨 후에, 스프레이 드라이, 프리즈 드라이 또는 용제 침전·건조로부터 선택되는 1종의 건조방법으로 건조시킴으로써, 리파아제 분말제제를 제조할 수 있다.
여기서 건조를, 에스테르화 반응을 수반하는 탈수에 의해 행할 수도 있다. 즉, 가수분해 및/또는 유화·분산시킨 후, 계속해서 탈수하면서 에스테르화 반응을 행하고, 필요에 따라 미반응물 등의 유분을 여과함으로써, 리파아제 분말제제를 제조할 수 있다.
리파아제 분말제제의 제조에 사용하는 지방산에스테르 및/또는 지방산의 첨가량은 리파아제 및 대두 분말의 합계 질량에 대해 0.1∼500배의 질량인 것이 바람직하고, 0.2∼100배의 질량인 것이 보다 바람직하며, 0.3∼50배의 질량이 가장 바람직하다.
단, 스프레이 드라이를 사용해서 리파아제 분말제제를 제조하는 경우, 사용하는 지방산에스테르 및/또는 지방산의 첨가량은 리파아제 및 대두 분말의 합계 질량에 대해 0.1∼10배의 질량인 것이 바람직하고, 0.2∼10배의 질량인 것이 보다 바람직하며, 0.3∼10배의 질량이 가장 바람직하다.
스프레이 드라이를 사용하는 경우, 지방산에스테르 및/또는 지방산의 첨가량이 많아지면, 수분의 증발이 불완전해지거나 얻어지는 리파아제 분말제제가 과잉의 지방산에스테르 및/또는 지방산에 의해 회수하기 어려워지는 등의 문제가 발생하기 때문이다.
스프레이 드라이 장치의 개량이나 회수 형태의 변경에 의해, 사용하는 지방 산에스테르 및/또는 지방산의 첨가량의 상한치를 높게 할 수도 있으나, 필요 이상으로 지방산에스테르 및/또는 지방산을 함유하면 여과 등의 공정이 필요해진다.
지방산에스테르 및/또는 지방산을 함유하는 리파아제 분말제제를 용제 침전을 이용해 제조하는 경우, 사용하는 용제의 양은, 지방산에스테르 및/또는 지방산과, 리파아제 및 대두 분말을 용해·분산시킨 수용액을 합계한 전체 질량 값에 대해 1∼100배 값의 체적의 용제를 사용하는 것이 바람직하고, 2∼10배 체적의 용제를 사용하는 것이 보다 바람직하다.
용제 침전을 행하기 전에, 나중에 설명하는 여과조제를 첨가한 경우에는, 여과조제를 더 첨가한 질량을 전체 질량으로 하여 용제를 사용한다.
본 발명에서는 또한 여과조제를 첨가하는 공정을 포함할 수 있다.
건조를, 에스테르화 반응을 수반하는 탈수에 의해 행하는 경우에는, 에스테르화 반응 전, 에스테르화 반응 중 또는 에스테르화 반응 후에 여과조제를 첨가할 수 있다. 여과조제를 첨가함으로써, 에스테르화 반응을 한 후에 여과처리를 순조롭게 행할 수 있으므로 바람직하다.
에스테르화 반응 전 또는 에스테르화 반응 중에 여과조제를 첨가하는 경우에는, 유지를 또한 첨가해도 된다. 첨가함으로써 점도가 증가해 교반하기 어려워진 경우에, 이와 같이 유지를 추가함으로써 반응 용액의 유동성이 양호해지기 때문이다.
사용할 수 있는 여과조제로서는, 실리카겔, 셀라이트, 셀룰로오스, 전분, 덱스트린, 활성탄, 활성백토, 카올린, 벤토나이트, 탈크, 모래 등을 들 수 있다. 이 중 실리카겔, 셀라이트, 셀룰로오스가 바람직하다. 여과조제의 입자지름은 임의여도 되지만, 1∼100㎛가 바람직하고, 5∼50㎛가 특히 바람직하다.
에스테르화 반응 전후 또는 반응 중에 사용할 수 있는 여과조제는, 리파아제 및 대두 분말의 합계 질량에 대해 1∼500질량%의 양을 첨가하는 것이 바람직하고, 10∼200질량%의 양을 첨가하는 것이 더욱 바람직하다. 이 범위의 양을 사용하면, 여과시의 부담이 보다 적어져 대규모의 여과설비나 고도한 원심분리 등의 여과 전처리를 필요로 하지 않기 때문이다.
또한 본 발명의 에스테르화 반응을 수반하는 탈수 이외의 건조방법에 의해 얻어지는 리파아제 분말제제 중에 여과조제를 함유시킬 수도 있다. 스프레이 드라이 또는 프리즈 드라이에 의해 건조를 행하여 리파아제 분말제제를 얻는 경우에는, 건조 전 또는 후 중 언제든지 여과조제를 첨가해도 된다.
용제 침전 후에 건조시키는 방법에 의해 건조를 행하는 경우에는, 건조시켜 얻어진 리파아제 분말제제에 여과조제를 첨가하는 것이 바람직하다.
얻어진 리파아제 분말제제에 함유시키는 여과조제의 양은, 리파아제와 대두 분말의 합계 질량을 기준으로 해서 1∼500질량%로 할 수 있으며, 10∼200질량%인 것이 더 바람직하다.
다음으로, 본 발명의 리파아제 분말제제를 이용해 에스테르 교환반응 또는 에스테르화 반응을 함으로써 얻어지는 에스테르 교환물 또는 에스테르화물의 제조방법에 대해서 설명한다.
본 발명의 리파아제 분말제제를 사용해서 행하는 에스테르 교환반응은, 지방 산에스테르, 지방산 및 알코올에서 선택되는 1종 이상과, 지방산에스테르와의 에스테르 교환반응이며, 예컨대 상법에 의한 유지와 유지의 에스테르 교환반응, 유지와 지방산에스테르와의 에스테르 교환반응, 알코올분해(alcoholysis)나 산가수분해(acidolysis)의 에스테르 교환반응을 들 수 있다.
또한 본 발명의 리파아제 분말제제를 사용해서 행하는 에스테르화 반응은, 지방산의 부분 에스테르와 지방산과의 에스테르화 반응, 또는 1가 또는 다가알코올과 지방산과의 에스테르화 반응이며, 예컨대 글리세린과 지방산과의 에스테르화 반응 등을 들 수 있다.
더욱 상세하게는, 유지와 유지와의 에스테르 교환반응으로서, 예컨대 장쇄지방산의 트리글리세리드인 채종유와 식물 유래의 중쇄지방산 트리글리세리드인 트리옥탄산글리세리드를 에스테르 교환시키는 반응을 행할 수 있으며, 장쇄와 중쇄가 혼합된 트리글리세리드를 제조할 수 있다.
또한 유지와 지방산에 의한 산가수분해를 사용한 에스테르 교환반응으로서는, 리파아제가 갖는 1,3-특이성 리파아제를 많이 이용한 구조의 유지를 제조할 수 있다. 글리세린 골격의 2위치에 특정 지방산을 남겨서 1,3위치의 지방산을 목적의 지방산에 치환하는 것이다. 얻어진 것은 초콜릿 등에 사용하는 유지에 이용할 수 있으며, 또한 특정의 영양 효과를 갖는 유지에 이용할 수 있다.
본 발명의 리파아제 분말제제를 이용한 에스테르 교환반응이나 에스테르화 반응의 조건에 대해서는 특별히 한정되지 않고, 상법에 따라 행할 수 있다.
일반적으로는, 가수분해의 원인이 되는 수분의 혼입을 막으면서 상압(常壓) 또는 감압(減壓)하에서 행해진다. 반응온도로서는, 사용하는 원료 및 원료를 혼합한 혼합물의 응고점에도 따르지만, 20∼80℃ 정도에서 행하는 것이 바람직하며, 응고점에 의해 한정되지 않는다면 40∼60℃에서 행하는 것이 보다 바람직하다.
또한 리파아제 분말제제의 반응원료에의 첨가량으로서는, 0.05∼10질량%가 바람직하며, 0.05∼5질량%가 보다 바람직하다. 최적의 양은 반응온도, 설정하는 반응시간, 얻어진 리파아제 분말제제의 활성 등에 의해 결정된다. 반응 종료 후, 리파아제 분말제제는 여과·원심분리 등에 의해 제거되며, 제조가 불가능한 활성으로 저하할 때까지 반복 사용(안정성의 평가)할 수 있다.
따라서 통상 고가인 리파아제는, 될 수 있는 한 소량이면서 높은 활성과 높은 안정성을 동시에 리파아제 분말제제에 부여할 수 있는 것이 바람직하다.
이렇게 해서 얻어진 에스테르 교환물 또는 에스테르화물은 특별히 한정되지 않지만, 식품분야에 사용되는 에스테르 교환 유지 또는 에스테르화 유지인 것이 바람직하고, 나아가 종교상의 이유나 건강상의 이유 등으로 동물 유래의 단백이나 유지를 섭취할 수 없는 사람들을 위한 식품 또는 식품 첨가제를 제조하는데 사용할 수 있는, 식물유 유래의 에스테르 교환 유지 또는 에스테르화 유지인 것이 보다 바람직하다.
다음에 본 발명을 제조예 및 실시예에 의해 상세하게 설명한다.
실시예 1
아마노엔자임사의 상품:리파아제 DF "Amano" 15-K(리파아제 D라고도 함)의 효소용액(150000U/㎖)에 두유(지방 함유량이 20질량%인 대두 분말 분산액:메이라 쿠(주)사 제품)를 교반하면서 3배의 양을 첨가하고, 0.5N의 NaOH용액으로 pH7.8로 조정한 후(액온도:실온), 입구온도 130℃로 분무해 분무건조(도쿄리카키카이(주)사, SD-1000형)를 행했다. 얻어진 리파아제 분말제제의 95질량%가 입자지름 1∼100㎛였다.
비교예 1
두유를 첨가하지 않는 것 이외에는 실시예 1과 동일하게 해서 리파아제 분말제제를 얻었다.
실시예 1 및 비교예 1에서 얻은 리파아제 분말제제의 활성을 이하의 방법으로 측정했다.
리파아제 활성의 측정방법
1,2,3-트리올레오일글리세린과 1,2,3-트리옥타노글리세린을 1:1(w)의 비율로 혼합한 기름에, 리파아제 분말제제를 첨가해 60℃에서 반응시켰다. 경시적으로 10㎕를 샘플링해 헥산 1.5㎖로 희석한 후, 리파아제 분말제제를 여과한 용액을 가스크로마토그래피(GC)용 샘플로 했다. GC(칼럼:DB-1ht)로 분석해 아래식으로부터 반응률을 구했다. GC조건은 칼럼온도:150℃, 승온:15℃/분, 최종온도 370℃이다.
반응률(%)={C34area/(C24area+C34area)}×100
식 중 C24는 1,2,3-트리옥타노글리세린, C34는 1,2,3-트리옥타노글리세린의 하나의 지방산이 올레인산으로 치환된 것을 나타내며, area는 그들 에리어 면적이다. 각 시간에 있어서의 반응률에 기초하여 해석 소프트(origin ver.6.1)에 의해 반응속도상수 k값을 구했다.
리파아제 분말제제의 활성은 효소용액을 그대로 분무건조시켰을 때의 k값을 100으로 해서, 상대 활성으로 나타냈다.
결과를 정리하여 표 1에 나타낸다.
조건(체적비) 상대 활성(%)
비교예 1 리파아제 용액 100
실시예 1 리파아제 용액:두유=1:3(pH7.8) 504
표 1의 결과로부터, 본 발명에 따르면 리파아제 활성이 대폭으로 향상함을 알 수 있다.
실시예 2
실시예 1에서 이용한 것과 동일한 리파아제 DF "Amano" 15-K의 효소용액(150000U/㎖)에 탈취 전지 대두 분말(지방 함유량이 23질량%, 상품명:알파플러스 HS-600, 닛신코스모푸드(주)사 제품) 10% 수용액을 교반하면서 3배의 양을 첨가하고, 0.5N NaOH용액으로 pH7.8로 조정한 후, 분무건조(도쿄리카키카이(주)사, SD-1000형)를 행했다(본 발명 1).
탈취 전지 대두 분말 수용액의 농도를 10질량%(이하 %로 약칭함), 15%(본 발명 2), 20%(본 발명 3)로 비교한 결과, 10% 수용액을 첨가함으로써 가장 에스테르 교환 활성이 높은 분말을 얻을 수 있었다.
또한 탈취 전지 대두 분말 10% 용액을 미리 오토클레이브(autoclave) 멸균(121℃, 15분)하여 실온 정도로 식힌 다음 상기 공정으로 분말화를 행한 결과(본 발명 4), 더욱 활성이 높은 효소 분말을 얻을 수 있었다.
결과를 정리하여 표 2에 나타낸다.
조건(체적비) 상대 활성(%)
본 발명 1 리파아제 용액:10%HS-600=1:3(pH7.8) 409
본 발명 2 리파아제 용액:15%HS-600=1:3(pH7.8) 209
본 발명 3 리파아제 용액:20%HS-600=1:3(pH7.8) 227
본 발명 4 리파아제 용액:10%HS-600=1:3(pH7.8) 440
실시예 3
실시예 1에서 이용한 것과 동일한 리파아제 DF "Amano" 15-K의 효소용액(150000U/㎖)에 첨가하는 대두분의 종류를 검토했다. 대두분 수용액의 농도는 10%로 했다.
미국산 대두분(상품명:Organic Soy Flour, Arrowhead Mills사 제품, 믹서로 슬러리를 조정한 후, 가제 등으로 걸러진 용액을 사용, 지방 함유량이 7질량%) 또는 탈지 대두 분말(상품명:소야플라워 FT-N, 닛신코스모푸드(주)사 제품, 지방 함유량이 0.2질량%, 비교예 2)을 이용한 것 이외에는 실시예 1과 동일하게 해서 리파아제 분말제제를 제조했다.
얻어진 리파아제 분말제제의 리파아제 활성을 표 3에 나타낸다.
조건(체적비) 상대 활성(%)
실시예 3 리파아제 용액:10% 미국 대두분(pH7.8) 465
비교예 2 리파아제 용액:10% 탈지 대두 분말(pH7.8) 22
표 3의 결과로부터, 대두 분말로서 지방 함량이 적은 탈지 대두 분말을 이용하면, 리파아제 활성을 향상시킬 수 없음을 알 수 있다.
실시예 4
시아올레인(상품명:Lipex205, Aarhuskarlshamn사 제품) 200g에 대해 실시예 2(본 발명 1)에서 얻어진 리파아제 분말제제 2g을 첨가해 60℃에서 20시간 교반하여 에스테르 교환반응을 행했다. 경시적으로 10㎕를 샘플링해 헥산 1.5㎖로 희석한 후 분말효소를 여과한 용액을 가스크로마토그래피(GC)용 샘플로 했다. 트리아실글리세리드 조성 중의 디스테아로일모노올레오일글리세린(SSO와 SOS의 혼합물)의 비율을 반응률로 했다. 마찬가지로 비교예 1에서 얻어진 리파아제 분말제제의 에스테르 교환반응을 행했다. 그 결과, 도 1에 나타나는 바와 같이, 실시예 2에서 얻어진 효소는 명백하게 활성이 높음을 알 수 있었다.

Claims (10)

  1. 리조푸스 오리자에(Rhizopus oryzae) 유래 및/또는 리조푸스 델레마(Rhizopus delemar) 유래의 리파아제와, 지방 함유량이 5질량% 이상인 대두 분말을 함유하는 조립물(造粒物)인 것을 특징으로 하는 리파아제 분말제제.
  2. 제1항에 있어서,
    대두 분말의 지방 함유량이 10∼25질량%인 것을 특징으로 하는 리파아제 분말제제.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    대두 분말이 전지 대두분인 것을 특징으로 하는 리파아제 분말제제.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    리파아제 분말제제의 90질량% 이상이 입자지름 1∼100㎛인 것을 특징으로 하는 리파아제 분말제제.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    에스테르 교환용 또는 에스테르화용인 것을 특징으로 하는 리파아제 분말제제.
  6. 리조푸스 오리자에 유래 및/또는 리조푸스 델레마 유래의 리파아제와, 지방 함유량이 5질량% 이상인 대두 분말을 용해·분산시킨 수용액을 건조시키는 것을 특징으로 하는 리파아제 분말제제의 제조방법.
  7. 제5항에 있어서,
    건조 전에 수용액의 pH를 7.5∼8.5로 조정하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서,
    건조를 분무건조에 의해 행하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  9. 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    분무건조 직전에, 리파아제와 대두 분말을 함유하는 수용액의 온도를 20∼40℃로 조정하고, 이어서 70∼130℃의 건조분위기 내로 분무하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  10. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 기재된 리파아제 분말제제를 이용하여, 지방산에스테르, 지방산 및 알코올에서 선택되는 1종 이상에 에스테르 교환반응 또는 에스테르화 반응을 행하는 것을 특징으로 하는 에스테르 교환물 또는 에스테르 화물의 제조방법.
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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5585454B2 (ja) * 2009-02-04 2014-09-10 不二製油株式会社 乳化粉末リパーゼ製剤の製造方法
JP2011115065A (ja) * 2009-12-01 2011-06-16 Nisshin Oillio Group Ltd リパーゼ粉末製剤及びその使用
JP5823103B2 (ja) * 2010-07-07 2015-11-25 株式会社Adeka リパーゼ製剤及びその製造方法
JP5258941B2 (ja) * 2011-08-19 2013-08-07 日清オイリオグループ株式会社 リパーゼ活性の回復方法
JP5728335B2 (ja) * 2011-08-31 2015-06-03 日清オイリオグループ株式会社 エステル交換油脂の製造方法及びその装置
JP6121941B2 (ja) * 2014-05-14 2017-04-26 長谷川香料株式会社 大豆食品の風味付与剤
EP3622043A1 (en) * 2017-05-08 2020-03-18 Bunge Loders Croklaan B.V. Emulsifiers

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3660571A (en) * 1968-03-28 1972-05-02 Takeda Chemical Industries Ltd Disease control composition for silkworms
DK402583D0 (da) 1983-09-05 1983-09-05 Novo Industri As Fremgangsmade til fremstilling af et immobiliseret lipasepraeparat og anvendelse deraf
DK153762C (da) 1985-02-27 1989-01-09 Novo Industri As Fremgangsmaade til fremstilling af et immobiliseret lipasepraeparat
JPH0640822B2 (ja) 1985-12-13 1994-06-01 旭電化工業株式会社 微生物リポプロテインリパ−ゼの製造方法
JPS62269685A (ja) * 1986-05-15 1987-11-24 Showa Denko Kk 酵素粒剤
GB8729890D0 (en) 1987-12-22 1988-02-03 Unilever Plc Improvements in & relating to fat processes
JP2749587B2 (ja) 1988-04-11 1998-05-13 花王株式会社 固定化酵素の製造方法
JP2794201B2 (ja) * 1989-07-31 1998-09-03 味の素株式会社 固定化リパーゼ酵素剤
JP2668187B2 (ja) 1993-09-17 1997-10-27 日清製油株式会社 リパーゼ粉末を用いたエステル交換法
WO1997001632A1 (en) * 1995-06-27 1997-01-16 Unilever N.V. Immobilized enzyme and its use for the processing of triglyceride oils
JP4195118B2 (ja) 1998-03-04 2008-12-10 花王株式会社 酵素固形製剤の製造方法
JP2000106873A (ja) 1998-10-06 2000-04-18 Nisshin Oil Mills Ltd:The 熱安定性酵素およびその製造法
JP3690951B2 (ja) * 1999-12-22 2005-08-31 日清オイリオグループ株式会社 油脂のエステル交換反応方法
RU2233325C1 (ru) 2003-01-08 2004-07-27 Государственное образовательное учреждение Воронежская государственная технологическая академия Способ получения комплексного ферментного препарата липазы и липоксигеназы
WO2004105495A2 (en) * 2003-05-29 2004-12-09 Micro Baked Close Corporation Bread premix and bread produced utilizing same
MY142014A (en) * 2004-04-08 2010-08-16 Nisshin Oillio Group Ltd A lipase powder, methods for producing the same and use thereof
MY155007A (en) * 2004-04-08 2015-08-28 Nisshin Oillio Group Ltd A 1,3-specific lipase powder, methods for producing the same and use thereof
JP4394598B2 (ja) * 2004-08-24 2010-01-06 日清オイリオグループ株式会社 リパーゼ粉末組成物及びそれを用いたエステル化物の製造方法
JP4478540B2 (ja) * 2004-09-16 2010-06-09 日清オイリオグループ株式会社 リパーゼ粉末、その製造方法及びその使用
KR101259199B1 (ko) 2005-03-16 2013-04-29 후지 세이유 가부시키가이샤 대두 퍼프의 제조법
JP4931368B2 (ja) * 2005-05-25 2012-05-16 日清オイリオグループ株式会社 官能基交換反応用リパーゼ含有組成物、その製造方法及びその使用
JP2007068426A (ja) * 2005-09-05 2007-03-22 Nisshin Oillio Group Ltd リパーゼ粉末製剤、その製造方法及び使用
CA2657664A1 (en) * 2006-07-19 2008-01-24 The Nisshin Oillio Group, Ltd. A process for preparing a hard butter suitable for chocolate products

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