TWI232749B

TWI232749B - Preparations stabilized over long time

Info

Publication number: TWI232749B
Application number: TW089103623A
Authority: TW
Inventors: Yasushi Sato
Original assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1999-03-01
Filing date: 2000-03-01
Publication date: 2005-05-21
Also published as: EP1700605B1; EP1197221A4; PT1197221E; AU2695400A; HK1098963A1; KR20050099637A; EP1700605A2; JP4607336B2; DK1197221T3; EP1197221A1; HK1045652A1; ES2263450T3; CA2381229C; HK1046239B; CN1342087A; WO2000051629A1; JP2000247903A; DE60028037T2; AU772604B2; KR100656125B1

Description

1232749 A7 B7 五、發明說明（1 ) 技術領域本發明爲關於G - C S F (粒性細胞菌落刺激因子）製劑，且特別爲關於長期保存後亦令活性成分之損失少，且G - C S F的甲硫胺酸殘基之氧化體生成率低之安定化的G — C S F製劑。背景技術 G - C S F爲作用於嗜中性白血球的前驅細胞，且促進其增殖及分化成熟之分子量約2萬的糖蛋白質。

經由本申請人，將口腔底癌患者的腫瘤細胞所採集之細胞株予以培養，精製高純度之人類G - C S F以來，其契機地成功克隆出人類G - C S F基因，且使得現在可經由基因工程學之方法，於微生物和動物細胞中大量生產重組之G - C S F。又，本案申請人將此精製的G — C S F 成功的製劑化，並將其以預防感染劑型式於市場上供給製品（專利第2 1 1 6 5 1 5號）。 G - C S F爲以極微量使用，通常成人每一人，將含有0 · 1〜1 000微克（較佳爲5〜5 0 0微克）G — C S F之製劑以1〜7回/週之比例進行投藥。但是，此 G - C S F例如對於注射用安瓿、注射器等之器壁顯示出吸附性。又，G - C S F爲不安定’且易受外來因子影響，並且因溫度、濕度、氧氣、紫外線等則產生會合、聚合或氧化等物理性、化學性變化’其結果導致活性大爲降低 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1111111_

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -4- 1232749 A7 _ B7 五、發明說明（2 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 於是，爲了對市場供給安定的G - C S F製劑，乃進行各種的配方設計。例如，提案含有（a )由蘇胺酸、色胺酸、離胺酸、羥基離胺酸、組胺酸、精胺酸、半胱胺酸、胱胺酸、甲硫胺酸所選出之至少一種胺基酸；（b )至少一種之含硫還原劑；或（c )至少一種之抗氧化劑，所組成之群中選自至少一種之製劑（專利第2 5 7 7 7 4 4 號）等。又，已有含有以聚山梨酸酯等界面活性劑作爲安定劑的G — C S F製劑（特開昭6 3 — 1 4 6 8 2 6號）〇又，由減少對於容器的附著，抑制化學性變化之觀點而言，其有利作成冷凍乾燥製劑，且亦已報導含有麥芽糖、鼠李糖、蔗糖、海藻糖或胺基糖之G - C S F冷凍乾燥製劑（特表平8 - 5 0 4 7 8 4號）。

現在市場所供給的製品，爲了抑制其化學性、物理性變化，乃添加一般所使用之人類血淸白蛋白或精製之明膠等蛋白質作爲安定劑。但是，關於添加蛋白質作爲安定齊ij ’則具有必須除去病毒污染物等非常煩雜工程等之問題。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製但是，於不添加此類蛋白質之情形中，則多生成G -C S F之甲硫胺酸殘基的氧化體，帶來令品質惡化之問題發明之揭示本發明之目的爲在於提供即使長期保存亦爲安定，且 G - C S F之甲硫胺酸殘基的氧化體生成率低之G - -5- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232749 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（3 ) c S F製齊ϋ。爲了達成上述目的進行致力硏究，結果本發明者等人經由組合添加特定之胺基酸作爲安定劑，則發現即使於長期保存後亦令G — C S F殘存率筒，且G — C S F之甲石荒胺酸殘基的氧化體生成率低之G - C S F製劑，並且完成本發明。即’本發明爲提供2 5 C - 3個月長期保存g式驗後之 G — CSF殘存率爲90%以上，40 °C- 2個月長期保存試驗後之G - C S F殘存率爲9 0 %以上，5 0 °C — 1 個月之加速試驗後之G - C S F殘存率爲9 0 %以上， 6 0°C - 2週之加速試驗後之G - C S F殘存率爲9 0% 且5 0 °C — 1個月之加速試驗後或6 0 °C — 2週之加速試驗之G - C S F的甲硫胺酸殘基氧化體生成率爲1 %以下之安定的G—CSF製劑。本發明爲再提供則述之G - C S F製劑，其中含有由離胺酸、組胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、蘇胺酸、天冬醯胺所組成群中選出一種以上之胺基酸、及由斥水性胺基酸所選出之一種以上之胺基酸、及甲硫胺酸。本發明爲再提供前述之G - C S F製劑，其中斥水性胺基酸爲選自苯基丙胺酸、色胺酸及白胺酸。本發明爲再提供刖述之G - C S F製劑，其爲含有由離胺酸、組胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩胺酸所組成群中選出一種以上之胺基酸、及由苯基丙胺酸、色胺酸及白胺酸所組成群中選出一種以上之胺基酸、及甲硫胺酸。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -· 訂---------

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -6 - 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232749 A7 ___B7_____ 五、發明說明（4 ) 本發明爲再提供前述之G - C S F製劑’其含有苯基丙胺酸、精胺酸及甲硫胺酸。本發明爲再提供前述之G - C S F製劑’其中安定劑爲實質上不含蛋白質。本發明爲再提供前述之G - C S F製劑，其爲冷凍乾燥製劑。本發明爲再提供前述之G - C S F製劑，其爲再含有甘露醇。本發明爲再提供前述之G - C S F製劑’其爲再含有界面活性劑。本發明爲再提供前述之G - C S F製劑，其中界面活性劑爲聚氧乙烯山梨糖醇酐烷酯。本發明爲再提供前述之G 一 C S F製劑，其中界面活性劑爲聚山梨酸酯2 0和/或8 0。本發明爲再提供前述之G — C S F製劑，其中pH爲 5〜7。

本發明爲再提供前述之G - C S F製劑，其中pH 5 · 5 〜6 · 8 〇本發明爲再提供前述之G — C S F製劑，其中pH爲 6 · 5 〇本發明爲再提供前述之G — C S F製劑，其中G — C S F爲由C Η〇細胞所產生的G — C S F。本發明爲再提供安定的G - C S F製劑，其特徵爲含有由離胺酸、組胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、蘇胺本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1232749 A7 ____B7_ 五、發明說明（5 ) 酸、天冬醯胺所組成群中選出一種以上之胺基酸、及由斥水性胺基酸所選出之一種以上胺基酸，且p Η 5〜7之 2 5 °C - 3個f長期保存試驗後之G — C S F殘存率爲 9 0 %以上，4 0 °C — 2個月長期保持試驗後之G — C S F殘存率爲9 0 %以上，5 0 t — 1個月之加速試驗後之G — CSF殘存率爲90%以上，60°C - 2週之加速試驗後之G - C S F殘存率爲9 0%以上之安定的G -C S F製劑。本發明爲再提供安定的G - C S F製劑，其特徵爲含有由離胺酸、組胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩胺酸所組成群中選出一種以上之胺基酸、及苯基丙胺酸、色胺酸及白胺酸所組成群中選出一種以上之胺基酸，且p Η爲5〜7 之2 5 t - 3個月長期保存試驗後之G — C S F殘存率爲 9〇％以上，4 0 t： — 2個月長期保持試驗後之G — C S F殘存率爲9 0%以上，5 0°C — 1個月之加速試驗後之G — CSF殘存率爲90%以上，60 °C - 2週之加速試驗後之G - C S F殘存率爲9 0%以上之安定的G -C S F製齊ij。本發明爲再提供前述任一項之G - C S F製劑，其中 P Η 爲 6 · 5。本發明爲再提供該蛋白質之甲硫胺酸殘基氧化體生成之抑制方法，其特徵爲於含有具甲硫胺酸殘基生理活性蛋白質之組成物中，添加甲硫胺酸。本發明爲再提供前述之方法，其中生理活性蛋白質爲 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) _*

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -8- 1232749 A7 B7 五、發明說明（6 ) 細胞激動素或生理活性生肽。本發明爲再提供前述之方法，其中生理活性蛋白質爲菌落刺激因子或P T Η。本發明爲再提供前述之方法，其中生理活性蛋白質爲 G - CSF，促紅血球生成素或ΡΤΗ。本發明爲再提供前述之方法，其特徵爲不含有其他蛋白質作爲安定劑。本發明爲再提供前述之方法，其特徵爲含有具甲硫胺酸殘基生理活性蛋白質之組成物爲被冷凍乾燥或爲溶液狀肯g 〇

>QiN 本發明爲再提供含有具甲硫胺酸殘基生理活性蛋白質之安定化組成物，其爲含有甲硫胺酸及一種以上之其他胺基酸。本發明爲再提供前述含有具甲硫胺酸殘基生理活性蛋白質之安定化組成物，其中胺基酸爲由離胺酸、組胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、苯基丙胺酸、色胺酸、白胺酸、異白胺酸、纈胺酸、丙胺酸、脯胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、天冬醯胺、麩胺醯胺及酪胺酸所組成群中選出一種或二種以上。本發明爲再提供前述含有具甲硫胺酸殘基之生理活性蛋白質之安定化組成物，其特徵爲不含有其他蛋白質作爲安定劑。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

ϋ n 一I 1 em— I eat ί ϋ I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -9- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232749 A7 ____B7 _ 五、發明說明（8 ) )細胞、c 1 2 7細胞等之來自動物的培養細胞等中產生，並以各種方法進行萃取、分離精製。較佳爲以大腸桿菌、酵母菌或C Η 0細胞使用基因重組法所產生者。最佳爲以C Η 0細胞使用基因重組法所產生者。本發明之G - C S F製劑中，較佳之安定劑爲人類血淸白蛋白和精製明膠等之實質上不含蛋白質者。本發明之G - C S F製劑爲於2 5 t： — 3個月長期保存試驗後之G - C S F殘存率爲9 0 %以上，較佳爲9 5 %以上，4 0 °C — 2個月長期保存試驗後之G — C S F殘存率爲9 5 %以上，4 0 °C - 2個月長期保存試驗後之G 一 CSF殘存率爲90%以上，較佳爲95%以上，50 °C 一 1個月之加速試驗後之G — C S F殘存率爲9 0 %以上，較佳爲9 5 %以上，6 0 °C - 2週之加速試驗後之G 一 C S F殘存率爲9 0%以上，較佳爲9 5%以上，且 5〇°C 一 1個月之加速試驗後或6 0 °C — 2週之加速試驗之G - C S F的甲硫胺酸殘基氧化體生成率爲1 %以下，較佳爲檢測界限以下，比先前已知之G - C S F製劑爲極安定的製劑。本發明之G - C S F製劑之一例爲含有由離胺酸、組胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、蘇胺酸、天冬醯胺所組成群中選出一種以上之胺基酸，較佳爲由離胺酸、組胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩胺酸所組成群中選出一種以上之胺基酸，及由斥水性胺基酸所選出之一種以上之胺基酸，較佳爲苯基丙胺酸、色胺酸及白胺酸所組成群中選出一 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -11 - 1232749 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（9 ) 種以上之胺基酸、及甲硫胺酸之G 一 c S F製劑。更且，本發明之G- C S F製劑之一例爲含有由離胺酸、組胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、蘇胺酸、天冬醯胺所組成群中選出一種以上之胺基酸，較佳爲由離胺酸、組胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩胺酸所組成群中選出一種以上之胺基酸’及由斥水性胺基酸所選出之一種以上之胺基酸’較佳爲苯基丙胺酸、色胺酸及白胺酸所組成群中選出一種以上之胺基酸、及甲硫胺酸，且P Η爲5〜7爲牛寸Μ之2 5 C - 3個月長期保存試驗後之G - C S F殘存率爲9 0 %以上，4 0 °C — 2個月長期保持試驗後之G - C S F殘存率爲9 〇 %以上，5 0 °C — 1個月之加速試驗後之G — CSF殘存率爲90%以上，60°C — 2週期間之加速試驗後之G — C S F殘存率爲9 0%且5 0°C — 1 個月之加速試驗後或6 0 °C - 2週之加速試驗後之G -C S F的甲硫胺酸殘基氧化體生成率爲1 %以下之安定的 G — C S F製劑。本發明所使用之胺基酸爲包含游離之胺基酸及其鈉鹽、鉀鹽、鹽酸鹽等鹽。於本發明之製劑中，包含此些胺基酸之D -、L 一及DL —體，且更佳爲L 一體及其鹽。本發明製劑中所添加之胺基酸的添加量，可根據所使用之胺基酸種類，使用後述之試驗方法決定較佳之範圍。一般之最終投予量爲0·001〜50毫克/毫升。例如，苯基丙胺酸較佳爲以0·1〜25毫克/毫升，更佳爲 1〜20毫克/毫升，精胺酸較佳爲0 · 1〜25毫克/ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) - ·11111111

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -12- 1232749 A7 -----B7_ 五、發明說明（1〇 ) <升’更佳爲1〜2 0毫克/毫升，甲硫胺酸較佳爲 0·001〜5毫克/毫升，更佳爲〇·01〜4毫克/ 毫升。於本發明之製劑中，等張化劑可使用聚乙二醇、葡聚糖、甘露醇、山梨糖醇、肌醇、葡萄糖、果糖、乳糖、木 Μ、甘露糖、麥芽糖、蔗糖、鼠李糖等糖類。以甘露醇爲特佳。甘露醇之添加量於製劑中爲以1〜1 0 0毫克/毫升，較佳爲5〜6 0毫克/毫升。於本發明之製劑中可再含有界面活性劑。界面活性劑方令非離子界面活性劑例如爲山梨糖醇酐單辛酸酯、山梨糖醇酐單月桂酸酯、山梨糖醇酐單棕櫚酸酯等之山梨糖醇酐脂肪酸酯、甘油單辛酸酯、甘油單肉豆蔻酸酯、甘油單硬脂酸酯等之甘油脂肪酸酯、十甘油醯單硬脂酸酯、十甘油醯二硬脂酸酯、十甘油醯亞油酸酯等之聚甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐單月桂酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐單硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐單棕櫚酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐三油酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐三硬脂酸酯等之聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇四硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇四油酸酯等之聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯甘油醯單硬脂酸酯等之聚氧乙烯甘油脂肪酸酯、聚乙二醇二硬脂酸酯等之聚乙二醇脂肪酸酯、聚氧乙烯月桂醚等之聚氧乙烯烷醚、聚氧乙烯聚氧丙二醇醚、聚氧乙烯聚氧丙烯丙醚、聚氧乙烯聚氧丙烯鯨鱲醚等之聚氧乙烯聚氧丙烯烷醚 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 11 -ϋ ϋ ϋ ϋ 一：口、 .^1 n I n ϋ -

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -13- 1232749 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（11 ) 、聚氧乙烯壬苯醚等之聚氧乙烯烷基苯醚、聚氧乙烯箆麻油、聚氧乙烯硬化箆麻油（聚氧乙烯氫化箆麻油）等之聚氧乙烯硬化箆麻油、聚氧乙烯山梨糖醇蜜蠟等之聚氧乙烯蜜蠟衍生物、聚氧乙烯羊毛脂等之聚氧乙烯羊毛脂衍生物、聚氧乙烯硬脂酸醯胺等之聚氧乙烯脂肪酸醯胺等之具有 H L B 6〜1 8者，陰離子界面活性劑例如鯨蠟基硫酸鈉、月桂基硫酸鈉、油基硫酸鈉等之具有碳數1 0〜1 8個烷基之烷基硫酸鹽、聚氧乙烯月桂基硫酸鈉等之乙烯氧之平均附加莫耳數爲2〜4且烷基之碳數爲1 〇〜1 8個之聚氧乙烯烷基醚硫酸鹽、月桂基磺基琥珀酸酯鈉等之烷基碳數爲8〜18個之烷基磺基琥珀酸酯鹽、天然界之界面活性劑例如卵磷脂、甘油磷脂、神經鞘磷脂等之神經鞘磷脂，碳數1 2〜1 8個之脂肪酸之蔗糖脂肪酸酯等爲其典型例。於本發明之製劑中，可將此些界面活性劑之一種或二種以上組合添加。較佳之界面活性劑爲聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯，特佳者爲聚山梨酸酯20、 21、 4〇、6〇、65、 80、 81、 85，最佳者爲聚山梨酸酯2〇及80。本發明之含G - C S F製劑中所添加之界面活性劑的添加量，一般相對於G - C S F 1重量份爲以〇 · 0〇0 1〜1 0重量份，較佳相對於G — C S F 1重量份爲以0 · 0 1〜5重量份，較佳相對於G - C S F 1 重量爲以0·2〜2重量份。本發明之G _ C S F製劑的Ρ Η較佳爲5〜7，更佳 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -------訂---------

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -14- 1232749 A7 B7 五、發明說明（12 ) 之PH爲5 · 5〜6 · 8，再佳之pH爲6〜6 . 7，最佳之P Η爲6 · 5。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 於本發明之G - C S F製劑中，視所需亦可再含有稀釋劑、助溶劑、賦形劑、ρ Η調整劑、無痛化劑、緩衝劑、含硫還原劑、抗氧化劑等。例如，含硫還原劑可列舉Ν -乙醯半胱胺酸、Ν -乙醯高半胱胺酸、硫辛酸、硫基二元醇、硫基乙醇胺、硫基甘油、硫基山梨糖醇、锍基乙酸及其鹽、硫代硫酸鈉、谷胱甘肽、及碳數1〜7個之硫烷酸等之具有氫硫基之含硫還原劑等。又，抗氧化劑爲紅山梨酸、二丁基羥基甲苯、丁基羥基茴香醚、α-生育酚、醋酸生育酚、L -抗壞血酸及其鹽、L -抗壞血酸棕櫚酸酯、L -抗壞血酸硬脂酸酯、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、沒食子酸三戊酯、沒食子酸丙酯或乙二胺四醋酸鈉（

E D T A )、焦磷酸鈉、偏磷酸鈉等之嵌合劑。更且，亦可含有氯化鈉、氯化鉀、氯化鉀、氯化鈣、磷酸鈉、磷酸鉀、碳酸氫鈉等之無機鹽、檸檬酸鈉、檸檬酸鉀、醋酸鈉等之有機鹽等之通常所添加之成分。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本發明之G - C S F製劑爲包含溶液製劑、冷凍乾燥製劑、噴霧乾燥製劑等。最佳爲冷凍乾燥製劑。本發明之製劑爲將此些成分，於磷酸緩衝液（較佳爲磷酸-氫鈉-磷酸二氫鈉系）和/或檸檬酸緩衝液（較佳爲檸檬酸鈉之緩衝液）等之溶液製劑領域中公知的水性緩衝液中溶解，調製成溶液製劑，或將如此所調製之溶液製劑依據常法進行冷凍乾燥、或噴霧乾燥則可製造。 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232749 A7 B7 五、發明說明（13 ) 本發明之安定化之含G — C S F製劑通常爲以非經口投予途徑，例如注射劑（皮下注射、靜脈注射、肌肉注射 )等、經皮、經粘膜、經鼻、經肺等進行投藥，且亦可經口投予。本發明之G - C S F製劑通常爲被收納於密封、經滅菌之塑膠或玻璃容器中，且於使用時溶解於純水（注射用滅菌水）中供使用。本發明製劑中所含之G - C S F量可依據欲治療疾病之種類、疾病之重症度、患者年齢等而決定，但一般最終之投予濃度爲1〜100//g/m£，較佳爲1〇〜800 Mg/m£，更佳爲5〇〜50〇//g/m^。本發明之製劑於感染症和癌之化學治療中，若於投予抗生素、抗菌劑、抗癌劑等藥劑時同時投予，則可判知其改善患者抵抗力、活性等免疫應答力爲基礎的防禦機能，於臨床上極爲有用。因此，本發明之製劑可與此些藥劑倂用投予。本發明之G - C S F製劑爲如後述實施例所示般，於進行2 5 °C — 3個月長期保存試驗或4 0 °C — 2個月長期保存試驗後，或於進行5 0 °C - 1個月之加速試驗或6 0 °C 一 2週之加速試驗後，亦顯示出極爲良好的G - C S F 殘存率。又，於進行5 0 °C — 1個月之加速試驗後或6〇 °C 一 2週之加速試驗後，亦幾乎未觀察到G — C S F的甲硫胺酸殘基氧化體之生成率。本發明之G - C S F製劑爲於2 5 °C - 3個月長期保存試驗後之G - C S F殘存率爲本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -16 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232749 A7 B7 五、發明說明（14 ) 9 0 %以上，較佳爲9 5 %以上，4 0 °C — 2個月長期保存試驗後之G — C S F殘存率爲9 0%以上，較佳爲9 5 %以上，5 0 °C — 1個月之加速試驗後之G — C S F殘存率爲90%以上，較佳爲95%以上，60 °C - 2週之加速試驗後之G- C S F殘存率爲9 0%以上，較佳爲9 5 %以上，且5 0 °C — 1個月之加速試驗後或6 0 °C — 2週之加速試驗之G - C S F的甲硫胺酸殘基氧化體生成率爲 1 %以下，較佳爲檢測界限以下。本發明之製劑，由後述之實施例結果，可觀察到經由添加由離胺酸、組胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、蘇胺酸、天冬醯胺所組成群中選出一種以上之胺基酸、及由斥水性胺基酸中選出一種以上之胺基酸，則可特別令常溫中長期保存後之G — C S F殘存率增加，且經由添加甲硫胺酸，則可令G - C S F之甲硫胺酸殘基氧化體生成率爲 ‘檢測界限以下。本發明者等人雖未拘束於特定之理論，但推測令所添加的甲硫胺酸代替G - C S F之甲硫胺酸殘基被氧化，則可降低G - C S F之甲硫胺酸殘基氧化體生成率。更且，若根據本發明，特別於甲硫胺酸殘基之氧化體生成中，於更易受影響，且微量具有生理活性、具有甲硫胺酸殘基之生理活性蛋白質之組成物中添加甲硫胺酸，則可防止該生理活性蛋白質之甲硫胺酸殘基氧化體之生成。特別地，於該生理活性蛋白質組成物中’不含有其他蛋白質作爲安定劑時，蛋白質組成物爲被冷凍乾燥時’或蛋白本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -17 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232749 Α7 Β7 五、發明說明（15 ) 質組成物爲以溶液狀態之情形中，因爲易生成蛋白質之甲硫胺酸殘基氧化體，故甲硫胺酸之添加爲有效的。更且，於本發明之組成物中，添加其他一種以上之胺基酸，則可抑制甲硫胺酸殘基的氧化體生成，且可製造生理活性蛋白質之分解、凝集等被抑制之安定化之含有具甲硫胺酸殘基生理活性蛋白質之組成物。此時所添加之胺基酸可列舉離胺酸、組胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、苯基丙胺酸、色胺酸、白胺酸、異白胺酸、纈胺酸、丙胺酸、脯胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、天冬醯胺、麩胺醯胺、酪胺酸等，且較佳爲組胺酸、精胺酸、苯基丙胺酸。本發明之生理活性蛋白質可列例如。細胞激動素、間白素（I L 一 1〜I L 一 1 3等）、菌落刺激因子（粒性細胞菌落刺激因子（G - C S F )、巨噬細胞落菌刺激因子（Μ - C S F )、粒性細胞/巨噬細胞菌落刺激因子（G Μ - C S F )、促紅血球生成素（ ΕΡΟ)等）、干擾素（IFN—a、々、τ等）、腫瘤壞死因子（TNF - a、TNF — /3等）、轉形生長因子 (T G F )、血小板衍生長因子（P D G F )、L I F ( 白血病抑制因子）、ο n c 〇 s t a t i ο η Μ (〇S Μ )、移動抑制因子（MIF)、化學激動素、IL — 8、LD78、 M C P - 1 等，生理活性胜肽；胰島素、胰高血糖激素、副甲狀腺激素（Ρ Τ Η )、促胃酸激素、選擇蛋白、膽激動素、胃抑本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -18- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) I II----訂· — II---- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232749 A7 ______B7_ 五、發明說明（16 ) 制劑、多肽、P物質、促胃動素、脾多肽、神經降壓肽、腸胰高血糖激素、促胃酸酸激素釋出胜肽、促成長素抑制素—2 8、Dainolfin > Gallanin、Vallonin、胰抑制素、 ZeopSln等生物體酵素，於活性中心存在甲硫胺酸殘基之酵素（例如，蘋果酸脫氫酶等）等，或其變異體。本發明之生理活性蛋白質較佳爲細胞激動素或生理活性胜肽，更佳爲G - C S F、促紅血球生成素等之菌落刺激因子或P T Η，且再佳爲G - C S F、促紅血球生成素或 Ρ Τ Η。依據以下之實施例更詳細說明本發明，但本發明之範圍並不限定於此。業者可根據本發明之記載進行各種變更、修飾，且此些變更、修飾亦被包含於本發明。實施例試驗方法將每玻璃小瓶之各原料添加量爲如下述表1及表2般調製各調劑液，進行無菌過濾後，無菌地於各玻璃小瓶中正確充塡以1毫升，並且供於冷凍乾燥。冷凍乾燥終了後完全打栓，製成G - C S F冷凍乾燥製劑。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 11111111

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -19· 1232749 A7 B7 五、發明說明（17 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製適度尺張紙本 pH緩衝劑蘅寸繼^ 3 以磷緩衝劑作成 p Η6·5 聚山梨酯酸 0.1 mg 0.1 mg 甘露醇 5 Omg 5 Omg 甲硫胺酸 ο ο 精胺酸 1 Omg 1 Omg 苯基丙胺酸 1 Omg 1 Omg G-CSF 25 0 // g 250 // g 1 / 試料.1 試料.2 格規 A4 S) N (C 準標家

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^1 ^1 ·ϋ ϋ ϋ 一一口γ ϋ ϋ -ϋ ^1 ϋ ·_ϋ I

Μ 公 97 -20- 1232749 A7 B7 五、發明說明（18 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 p Η緩衝劑蘅… 輕£ 露链 3 以磷緩衝劑作成 pH6.5 以磷緩衝劑作成 pH6.5 蘅 ^ 繼 ^ 聚山梨酯酸 0.1 mg 0.1 mg 0 · 1 mg 0.1 mg 甘露醇 5 Omg 5 Omg 5 Omg 5 Omg 甲硫胺酸 ο o 〇〇精胺酸 Omg Omg 1 Omg 1 Omg 1 ! 苯基丙胺酸 Omg 1 Omg Omg 1 Omg G-CSF 250 // g 2 5 0 // g 250 // g 250 β g 試料.7 試料.8 試料.9 — 試料.10 --------訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -21 - 1232749 A7 B7 五、發明說明（19 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製蘅10 蘅^ 蘅10 蘅10 蘅10 蘅^ 蘅^ 蘅10 蘅10 Wx to 戰|X| 輕£ to 職|Χ| 輕s 輕£ 輕S 輕£ ΐ|ττ|\Γ 繼^ 繼^ 繼^ 繼η 繼η 露怪露怪露怪露怪羧怪鐵怪餾 h\f\ b^C\ txQ tx〇瀣 OJJ a ^ < OJJ a T—i ε 1 i UJJ S τ—Η UJJ a 1~\ a r—Η UJJ a ^―Η a \ < a ▼ 1 崎 S τ—Η WK 〇 Ο Ο 〇〇 Ο Ο O Ο Ο 0J) a 〇 a ο a ο bJ3 a ο bD B O 〇J) Β ο bX) e ο W) a O &J0 a O a ο 扭 ν·〇 v〇 un wn v〇 ιη UO »〇 νη 氍 Ο Ο Ο Ο o Ο Ο O o Ο Μ 氍氍氍氍氍氍氍氍氍鏗 m 應 b/Λ 猶 m n/a 羅鍵 ΧλΛ Η< 嫕 x\Y H< 擻氍氍氍氍氍氍氍稍 E Ε： E E 稍 « 稍浒浒浒擀浒擗 (¾ bD bJQ όΧ) bJO & 0X1 bD D/) $ $ 0S) 00 U 〇〇〇〇〇〇 Ο Ο 〇〇〇〇〇〇〇〇 ο ο 〇〇〇 Ti τ-\ 龚 r — cn τ—Η 寸 τ—Η un r—i VD 1—i f Η 〇〇 T-\ 龚 σ\ r—i 〇 CSI 龚 Μ ^ζΣ- (W Μ S鍇銶)s S 0 9迄_要喊_呂滕忉2氍稍猶 (Μεο 9迄_要)职_0 一:贼驭調运騰忉氍狴贮稍齡 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232749 A7 B7 五、發明說明（21 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 uo vd m un VO K Q. Qh Q. 怪繼蘅蘅蘅 1ΐ|ηΤ\Γ 戰 Μ !ΐΙττ1\Γ Qh 繼 m 繼露廳 mn. 氍 bJO OS) 0J) a r—Η e τ—H a τ—H 彐 Ο 〇〇 OJ) bJ!) 鑛 a a a 扭 CSI ) CN ) CO 4—> bJ!) a ! i CD s ο a \ i 〇 Vh di) bi3 a a S < ο ， i O τ i 〇 r—H IDS] bi) CD ^=! B a a Oh o \ { O ^1 O r—H Uh bJ] bJ) U 1 〇〇〇 ϋ o H 0 1 H 〇 i Ή \ ] 寸 cn uo CO VO m • j (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) % -------訂·--------

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -24- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232749 A7 ------B7______ 五、發明說明（22 ) 將如此無菌調製之含G - C S F冷凍乾燥製劑，於 6 〇 °C之恆溫槽內靜置2週及1個月，於5 0 °C之恆溫槽內靜置1個月、2個月、3個月；於4 0 t：之恆溫槽內靜置2個月、4個月、6個月；及於2 5 °C之恆溫槽內靜置 3個月、6個月。將加速品製劑、及未加速品製劑以1毫升純水正確溶解’作成下述方法的試驗試料。根據下述之方法1測定玻璃小瓶中的G - C S F含量 (殘存率）。又，根據下述之方法2測定玻璃小瓶中的G 一 C s F甲硫胺酸殘基氧化體生成率。方法] 試料爲使用C4逆相柱（4 · 6mmx2 5〇mm、 3 0 0 A )，並以移動相中使用純水、乙腈、三氟醋酸之逆相系高速液體層析法測定G - C S F含量。注入相當於 5微克份量之G — CSF，並以乙腈之梯度將G—CSF 溶出，且以2 1 5 n m之波長進行分光學檢測。使用本方法測定的G - C S F含量，並且根據下式，算出6 0 °C — 2週，及5 0 °C — 1個月加速後及於6 0 °C 2週及1個月，於50t 1個月、2個月、3個月，於4 0 °C 2個月、4個月、6個月；及於2 5 °C 3個月、6個月保存時之G-CSF殘存率（％)。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公t ) -25- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

^1 ϋ ·ϋ ϋ 1· I 一：口、 ϋ n I 1232749 A7 B7 五、發明說明（23 ) 殘存率f 〇/ 1 =(指定期間加速後之G - C S F含量）^ , n n ° ；藏口速品之G-CSF含量)—-Xl〇° (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 百式料爲使用C 4逆相柱（4 · 6 m m x 2 5 0 m m、 3 0 A )，並以移動相中使用純水、乙腈、三氟醋酸之逆相系高速液體層析法測定G - C S F來變化體及G —

C S F Me t殘基氧化體。以乙腈之梯度將G — CSF 溶出’且以2 1 5 n m之波長進行分光學檢測。使用本方法所測定之G - C S F未變化體及G — C S F M e t殘基氧化體之波峰面積，且根據下式，算

出60°C —週、及50°C— 1個月加速後之G — CSF

Met殘基氧化體生成率（％)。 G - CSF Me t殘基氧化體生成率（％)= (G-CSF M e t殘基氧化體）

"T5—CSF未變化體）+ (未加速品;^G —fsF含量）X1UU 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製實施例1 :各種p Η對於G - C S F殘存率所造成之效果將表1記載之各種P Η調製之試料1及試料2，以方法1記載之式算出進行6 0°C — 2週，及5 0°C — 1個月加速試驗後之G - C S F殘存率。所得結果示於表3。 -26- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 3 12 五 2749

、發明說明（24 )

PH6 · 5比pH7 · 4之配方，顯示出同等或更佳的安定性。 #施例2 :各種胺基酸對於G - c S F殘存率所造成之效果（1 ) 將添加表1記載之各種胺基酸所調製之試料3〜6 ( G— CSF含量1〇 ◦微克），及試料7〜10 (G — CSF含量250微克），以方法1記載之式算出進行 6〇C 一 2週，及5 0 〇C — 1個月加速試驗後之G — C S F殘存率。所得之結果示於表4及表5。 (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製〔表4〕含 100//g G — CSF 製劑試料.3 試料.4 試料.5 試料.6 苯基丙胺酸無添加 1 Omg 無添加 1 Omg 精胺酸無添加無添加 1 Omg 1 Omg 50 °C -1個月 7 2.9% 84.8% 8 2.4% 9 8.3 % 60 〇C -2 週 67.2% 7 7.9% 6 8.8% 9 5.0 % 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -27- 1232749 A7 B7 五、發明說明（25 ) L^5〕含 2 5 0 // g G - C S F 製劑試料.7 試料.8 試料.9 試料.1 0 苯基丙胺酸無添加 1 Omg 無添加 1 Omg 精胺酸無添加無添加 1 Omg 1 Omg 5〇 °C -1個月 7 6.6% 8 8.1% 9 6.3% 99.7% 60。。-2 週 74.0% 7 8.1% 90.7% 97.1% 於任一之G - C S F含量中，均以單獨添加苯基丙胺酸、或單獨添加精胺酸，比無添加胺基酸之配方製劑令安定性更爲提高，但並不夠充分。於倂用苯基丙胺酸與精胺酸下，則察見安定性的顯著提高。實施例3 :各種胺基酸對於G - C S F殘存率所造成之效果（2 ) 將添加表1記載之各種胺基酸所調製之試料1 1〜 2 0 (胺基酸1爲苯基丙胺酸、胺基酸2爲添加離胺酸、、組胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、天冬醯胺及麩胺醯胺之任何一種）、及試料 2 1〜3 3 (胺基酸1爲精胺酸、胺基酸2爲添加丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、甲硫胺酸、色胺酸、苯基丙胺酸、脯胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、天冬醯胺及麩胺醯胺之任何一種），以方法1記載之式算出進行6 0 °C 一 2週、及5 0 °C — 1個月加速試驗後之G — C S F殘存率。所得之結果示於表6。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） -28 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) - · 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232749 五、發明說明（26 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製〔表6 〕 50 °C -1個月 60 °C -2 週試料.11 9 2.8% 91.2% 試料.1 2 9 8.8% 97.5% 試料.1 3 9 8.0% 9 6.0% 試料.1 4 9 5.7% 9 6.7% 試料.1 5 95.6% 94.0% 試料.1 6 8 8.4% 87.8% 試料.1 7 9 6.4% 90.7% 試料.1 8 8 4.6% 81.7% 試料.1 9 9 5.0% 95.3% 試料.20 8 9.8% 8 7.2% (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ^1 ϋ ϋ I^eJ n ϋ ϋ I ϋ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232749 A7 ----------B7 五、發明說明（27 ) L47 ] 5 0 °C -1個月 60 〇C -2 週 —料· 2 1 8 9.0% 8 4.4% —料.22 8 8.9% 8 6.5% —式料· 2 3 96.3% 9 6.2% ^料· 2 4 8 8.5% 8 9.3% ----料· 2 5 95.5% 8 8.5% 式料.26 101.4% 9 8.6% 式料.27 97.0% 95.7% 試料.2 8 8 9.4% 8 2.5% 試料.29 90.9% 71.2% 試料.30 89.2% 8 5.2% 試料.3 1 90.6% 8 7.3% 試料.32 94.0% 8 8.6% 試料.3 3 90.1% 84.6% -1 -------------------訂----- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製於苯基丙胺酸與離胺酸、苯基丙胺酸與組胺酸、苯基丙胺酸與精胺酸、苯基丙胺酸與天冬胺酸、苯基丙胺酸與麩胺酸、苯基丙胺酸與蘇胺酸、苯基丙胺酸與天冬醯胺之組合、及精胺酸與酪胺酸、精胺酸與色胺酸、精胺酸與苯基丙胺酸之組合中分別觀察到顯著的長期保存安定性。實施例4 :長期保存試驗對於含有苯基丙胺酸1 0毫克、精胺酸1 〇毫克、甲本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -30- ' 1232749 A7 _____ __B7__— 一五、發明說明（29 ) 5〇°C 一 1個月保存後均觀察到G 一 c s F M e t殘基氧化體之生成，但經由添加1毫克以上的甲硫胺酸’則即使於長期保存後亦可完全抑制G - C S F M e t殘基氧化體之生成。又，以方法2記載之式所算出之G—CSF Met 殘基氧化體生成率之結果示於表9。〔表9〕試料.34 試料.35 試料.36 Met Omg Met 0.1 mg Met lmg 5〇 °C -1個月 1.2% N.D. N.D. 60 °C -2 週 1.7% N.D. N.D. N · D ·:檢測界限以下如此’經由添加0 · 1毫克以上之甲硫胺酸，則可完全抑制G - C S F M e t殘基氧化體之生成。實施例6 :對於副甲狀腺激素溶液製劑添加甲硫胺酸所造成之甲硫胺酸殘基氧化抑制作用將含有2 0 0微克/毫升之具1〜8 4個殘基之副甲狀腺激素（以下簡述爲P T Η )(以 W〇 9 0 1 4 4 1 5記載之方法製造），且每玻璃小瓶之各原料添加量爲如下述表1 0般所調製之試料3 7〜試料3 9之各調劑液，進行無菌過濾後，無菌地於各玻璃小本紙張尺度適用中關家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐) --- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232749 A7 ____B7 五、發明說明（31 ) ’經由對於製劑中添加甲硫胺酸，對於其他的化學分解反應不會造成影響，且僅對於蛋白質中之甲硫胺酸殘基氧化體生成抑制可造成專一性地改善。 I業上之利用領域本發明之G - C S F製劑，即使於長期保存後可令G - C S F的殘存率爲極高，且爲幾乎可完全抑制G — C S F之甲硫胺酸殘基氧化體生成率的安定製劑。 (請先閱讀背面之注咅？事項再填寫本頁) 1111111.

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -34- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

Claims

六、申請專利範圍 …"…一一~τ〒：第89103623號專利申請案一 .1 B sl|中文申請專利範圍修正本 J . , J 民國93年12月17日修正 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1 · 一種安定的G - C S F醫藥組成物，其特徵含有 1種以上選自離胺酸、組胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、蘇胺酸、天冬醯胺所成群之胺基酸、及1種以上選自斥水性胺基酸之胺基酸、及甲硫胺酸。 2 ·如申請專利範圍第1項之G - C S F醫藥組成物 ’其爲2 5 C - 3個月長期保存§式驗後之G — C S F殘存率爲9 0 %以上，4 0 t： — 2個月長期保存試驗後之G — C S F殘存率爲9 0 %以上，5 0 °C — 1個月之加速試驗後之G - C S F殘存率爲9 0 %以上，6 0 °C — 2週之加速試驗後之G — C S F殘存率爲9 0 %且5 0。(：一 1個月之加速試驗後或6 0 °C - 2週之加速試驗後之G - C S F 的甲硫胺酸殘基氧化體生成率爲1 %以下。 3 ·如申請專利範圍第1項之G - C S F醫藥組成物 ’其中斥水性胺基酸爲選自苯基丙胺酸、色胺酸及白胺酸〇經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 4 ·如申請專利範圍第1項之G - C S F醫藥組成物 ’其爲含有1種以上選自離胺酸、組胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩胺酸所成群之胺基酸、及1種以上選自苯基丙胺酸、色胺酸及白胺酸所成群之胺基酸、及甲硫胺酸。 5 .如申請專利範圍第1項之G - C S F醫藥組成物 ’其爲含有苯基丙胺酸、精胺酸及甲硫胺酸。本紙張尺度適用中國國家摞準j cNS ) A4Wt^ ( 210X 297-/^¾ ) 1232749 A8 Βδ C8 _ D8 六、申請專利範圍 6 .如申請專利範圍第1〜5項中任一項之G -C S F醫藥組成物，其中安定劑爲實質上不含有蛋白質。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 7 .如申請專利範圍第1〜5項中任一項之G -C S F醫藥組成物，其爲冷凍乾燥醫藥組成物。 8 .如申請專利範圍第1〜5項中任一項之G -C S F醫藥組成物，其更含有甘露糖醇。 9 .如申請專利範圍第1〜5項任一項之G - C S F 醫藥組成物，其爲更含有界面活性劑。 1 0 .如申請專利範圍第9項之G - C S F醫藥組成物，其中界面活性劑爲聚環氧乙烷山梨聚糖烷酯。 1 1 .如申_專利範圍第1 〇項之G — C S F醫藥組成物，其中界面活性劑爲聚山梨酸酯2 0及/或8 0。 1 2 .如申請專利範圍第1〜5項中任一項之G -CSF醫藥組成物，其中pH爲5〜7。 1 3 .如申請專利範圍第1 2項之G — C S F醫藥組成物，其中pH爲5 . 5〜6 · 8。 1 4 .如申請專利範圍第1 3項之G - C S F醫藥組成物，其中pH爲6.5。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1 5 .如申請專利範圍第1〜5項中任一項之G -C S F醫藥組成物，其中G — C S F爲由CHO細胞所產生的 G — C. S F。 16 .一種安定的G一CSF醫藥組成物，其特徵爲含有1種以上選自離胺酸 '組胺酸、精胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、蘇胺酸、天冬醯胺所成群之胺基酸、及一種以上本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（公釐） -2- 1232749 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍選自斥水性胺基酸之胺基酸，且ρ Η 5〜7，其中 2 5 °C - 3個月長期保存試驗後之G - c S F殘存率爲 9 0 %以上’ 4 0 °C — 2個月長期保持試驗後之〇一 C S F殘存率爲9 0 %以上’ 5 0 °c — 1個月之加速試驗後之G - C S F殘存率爲9 0 %以上，6 0 t — 2週之加速試驗後之G - C S F殘存率爲9 〇 %以上。 1 7 · —種安定的G - C S F醫藥組成物，其特徵爲含有1種以上選自離胺酸、組胺酸、精胺酸、天冬胺酸、鍵胺酸所成群之胺基酸、及1種以上選自苯基丙胺酸、色胺酸及白胺酸所成群之胺基酸，且p Η爲5〜7，其中 2 5 °C - 3個月長期保存試驗後之G - C S F殘存率爲 9 0 %以上，4 0 °C - 2個月長期保存試驗後之G 一 C S F殘存率爲9 0 %以上，5 0 °C - 1個月之加速試驗後之G - CSF殘存率爲90%以上，60 °C — 2週之加速試驗後之G - C S F殘存率爲9 0 %以上。 1 8 ·如申請專利範圍第1 6或1 7項之G — C S F 醫藥組成物，其中p Η爲6 . 5。 1 9 ·如申請專利範圍第1項之G — C S F醫藥組成物，其爲實質上不生成甲硫胺酸氧化物。 2 〇 ·如申請專利範圍第1項之G - C S F醫藥組成物，其爲含有甲硫胺酸和其他一種以上之胺基酸，且實質上不生成蛋胺酸氧化物。 2 1 ·如申請專利範圍第1 9或2 0項之G — C S F 醫藥組成物，其中安定劑爲實質上不含有蛋白質。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -3 - --------—— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232749 Α8 Β8 C8 D8 六、申請專利範圍 2 2 · —種抑制蛋白質之甲硫胺酸殘基氧化物生成的方法’其特徵爲於含有具甲硫胺酸殘基生理活性蛋白質之組成物中’添加甲硫胺酸，其中該生理活性蛋白質爲G 一 C. S F 或 Ρ Τ Η。 2 3 .如申請專利範圍第2 2項之方法，其中安定劑爲不含其他蛋白質。 2 4 .如申請專利範圍第2 2項之方法，其中含有甲硫胺酸殘基的生理活性蛋白質之組成物爲被冷凍乾燥或爲溶液狀態。 C— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 、1Τ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -4 -