TWI228420B - Novel vaccine composition - Google Patents

Novel vaccine composition Download PDF

Info

Publication number
TWI228420B
TWI228420B TW091111304A TW91111304A TWI228420B TW I228420 B TWI228420 B TW I228420B TW 091111304 A TW091111304 A TW 091111304A TW 91111304 A TW91111304 A TW 91111304A TW I228420 B TWI228420 B TW I228420B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
virus
influenza
vaccine
preparation
antigen
Prior art date
Application number
TW091111304A
Other languages
English (en)
Inventor
Uwe Eichhorn
Original Assignee
Smithkline Beecham Pharma Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB0113083A external-priority patent/GB0113083D0/en
Priority claimed from GB0204116A external-priority patent/GB0204116D0/en
Application filed by Smithkline Beecham Pharma Gmbh filed Critical Smithkline Beecham Pharma Gmbh
Application granted granted Critical
Publication of TWI228420B publication Critical patent/TWI228420B/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16161—Methods of inactivation or attenuation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
    • C12N2760/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

1228420 A7 B7 五、發明説明（ ） 本發明有關於新穎流行性感冒病毒抗原製備物、其製備 方法及其於預防或治療之用法。特定言之，本發明係有關 於不活化流行性感冒疫苗，其係***而非完整的病毒疫 苗，且即使不使用有機汞類防腐劑也很安定。此外，根據 標準測試，本疫苗所包含之血球凝集素相當安定。該疫苗 可藉任何適合該疫苗之途徑投藥，如肌肉注射、皮下注射、 皮内注射或黏膜投藥（如鼻内投藥）。 流行性感冒病毒係世界上最常見的病毒之一，其可同時 侵襲人類與家畜。流行性感冒對經濟的影響十分重大。 流行性感冒病毒係一種顆粒直徑大小約125毫微米之 RNA被膜病毒。其基本上係由内部的病毒粒子或核糖核酸 (RNA)核心加上核蛋白質而組成，其外由具有雙層脂質構 造之病毒被膜及外部糖蛋白所包圍。病秦被膜内層主要係 由基質蛋白質所組成而外層大部份為來自宿主的脂質物。 顆粒表面之表面酷蛋白質神經胺酸苷酶（NA)及血球凝集素 (HA)呈現為長10至12毫微米之棘突。這些表面蛋白質，特 別係血球凝集素，可決定流行性感冒亞型之抗原特異性。 目前可用之流行性感f疫苗係不活化或活性減毒流行 性感冒疫苗。不活化流行性感冒疫苗係由三種可能型式之 杬原製備物組成：不活化完整病毒、次_病毒粒子，立中以 界面活性劑或其它試劑裂解純化之病毒顆粒以溶解脂質被 膜（即所謂的“裂解病毒（split)”疫苗）、或純化之^與na(次 f位疫苗）。這些不活化疫苗可經肌肉注射（im)或鼻内投 藥（1·Ι1·)給予。目前並無商品化之活性減毒疫苗。 -4 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) 規格（2ΐ〇χ 297公赞） 1228420 A7 B7 五、發明説明（2 ) 所有種類之流行性感冒疫苗通常為三價疫苗。其通常含 有源自二種流行性感冒A病毒株及一種流行性感冒B病毒 株之抗原。在大部分的情況下，藉單向放射免疫擴散法 (SRD)所測量之標準0·5毫升注射劑量中含有15微克得自各 病毒株之血球凝集素抗原成分（J.M·伍德（Wood)等人，An improved single radial immunodiffusion technique for the assay of influenza haemagglutinin antigen: adaptation for potency determination of inactivated whole virus and subunit vaccines. J. Biol· Stand· 5 (1977) 237-247; J· M.伍德等人，International collaborative study of single radial diffusion and Immunoelectrophoresis techniques for the assay of haemagglutinin antigen of influenza virus. J. Biol. Stand. 9 (1981) 317-330)。 每季併入流行性感冒疫苗之流行性感冒病毒株係由世 界衛生組織（World Health Organisation)及國家健康當局與疫 苗廠商共同研究所決定。 典型流行性感冒傳染可導致肺炎及下呼吸道疾病發生率 增加，且使住院率或死亡率增加。老年人或患有下列慢性 疾病者最容易感染這些併發症，但嬰幼兒亦可能感染嚴重 該類疾病。因此這些族群特別需要保護。 目前對於控制每年流行性感冒傳染發病率及死亡率的 努力係使用肌肉注射投予不活化流行性感冒疫苗。該類疫 苗對於預防呼吸道疾病及流行性感冒併發症之效力範圍由 健康成人之75°/。至老年人之50%以下。 -5 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（2[〇x 297公釐） 1228420 A7 B7 _ 五、發明説明（3 ) 國際採用的標準可用來測量流行性感冒疫苗之效力。下 表所列為可有效對抗流行性感冒疫苗的歐盟官方標準。理 論上，為符合歐盟需求，流行性感冒疫苗中所包含之所有 流行性感冒病毒株僅須符合表中一種標準即可。然而實際 上，所有病毒株須符合至少二種或所有的三種標準，特別 係一種新穎疫苗，如經不同途徑輸送之新穎疫苗。於某些 情況下二種標準可能已足夠。如所有病毒株符合三種標準 中之二種而某些但並非所有病毒株（如三種病毒株中的兩 種）符合第三種標準，如此係可接受的。成年人（18-60歲） 與老年人（>60歲）之需求不同。 18-60 歲 >60歲 血清轉化率* >40% >30% 轉化係數* * >2.5 >2.0 保護率* * * >70% >60% *血清轉化率（Seroconversion rate)定義為疫苗接種後，各疫 苗病毒株之血清血球凝集素抑制（HI)力價至少增加4倍之 疫苗百分比。 **轉化係數（Conversion factor)定義為接種後各疫苗病毒株 之血清HI幾何平均力價（GMT)的增加倍數。 ***保護率（Protection rate)定義為接種前後，各疫苗病毒株 之血清HI力價比等於或大於1 : 40的疫苗百分比，且其常可 視為保護指標。 對於一種實用商品化的新穎流行性感冒疫苗而言，其不 僅須符合這些標準，而且於實際上其必須至少與目前所使 -6 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1228420 A7
其同時必須能符合商品化對抗原 用之注射疫苗同樣有效 量及給藥次數的要求。 目前市售之商品化流行性咸田 、、A · 心目疫田為裂解病毒戋次罝尸 注射疫苗。這些疫苗係藉由裂 早位 士 , 灰知病毒顆粒而製備，並i雨堂 使用有機溶劑或界面活性劑 、吊 .^ 册病母蛋白質分離或純化i 各種不同程度。裂解病毒## 、、 又田的製備係使用加溶濃度之有 機溶劑或界面活性劑***旁敕、 此、、 疋整的泥行性感冒病毒（不論為 傳染性或不活化）’後再移除加錢及部分或大部分的病 毒脂質物。裂解病毒疫苗通常含有雜質性基質蛋白質及核 蛋白與可能的脂質’以及膜被覆蛋白冑。裂解病毒疫苗通 常包含大部分或全部的病毒結構蛋白質，但其比例並不一 定等同於其存在於完整病毒中者。另一方面，次單位疫苗 實質上係由尚純化病毒表面蛋白質、血球凝集素及神經胺 酸甞酶組成，這些表面蛋白質於接種時可誘導產生所需之 病毒中和抗體。 目前許多市售疫苗須含防腐劑以預防變質。經常使用之 防腐劑係乙基采硫代水楊酸鈉，其係一種含汞化合物。某 些民眾十分關切含汞化合物之影響。而目前並無適當的監 視系統可檢測低量至適量有機汞製劑對發展中神經系統之 影響，且對已接受高劑量有機汞製劑之兒童的特別研究仍 需數年方可完成。某些評論者強調不應過份誇大含乙基汞 硫代水楊酸鈉疫苗之潛在危險（歐費特（Offit); P.A. JAMA Vol.283 ; No·· 16)。然而，尋求製備疫苗之替代方法，取代 製造過程中所使用之乙基汞硫代水楊酸鈉，必定更加有 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公资) 1228420 A7 ______ B7 _ _ 五、發明説明（5 ) 利。因此有需要研發不含乙基汞硫代水楊酸鈉之疫苗，特 定言之為如流行性感冒疫苗類的疫苗，該類疫苗至少適合 推薦給某些族群供每年採用。 目前在商品化不活化流行性感冒疫苗的製造/純化過程 及/或於最終疫苗產物中應用防腐劑已成標準手續。在各種 純化階段中須採用防腐劑來預防微生物生長。在雞蛋來源 之流行性感冒疫苗中，通常將乙基汞硫代水楊酸鈉添加至 未經處理之尿囊液中，且於處理病毒時亦可再度添加。因 此，於製備末期會存有殘餘乙基汞硫代水楊酸鈉，且在最 終疫苗產物中可能再將防腐劑調整至所需濃度，如將濃度 調整為約100微克/毫升。 使用乙基汞硫代水楊酸鈉做為流行性感冒疫苗防腐劑 之副作用為安定作用。商品化流行性感冒疫苗中之乙基汞 硫代水楊酸鈉的作用為安定疫苗之HA成分，特定言之為 (但非特定性）流行性感冒B病毒株之HA。某些病毒株之血 球凝集素，如H3可能亦需要安定作用。因此，雖然有需要 考慮由流行性感冒疫苗中移除乙基汞硫代水楊酸鈉，或至 少減低最終疫苗中之乙基汞硫代水楊酸鈉濃度，但仍需克 服的問題是缺少乙基汞硫代水楊酸鈉，HA將無法充分安 定。 本發明中已發現可使用不含有機汞製劑之替代試劑來 安定不活化流行性感冒製備物中之HA。其HA可保持安 定，在經過一段時間後藉定量標準方法（特定言之為SRD) 進行檢測的結果發現其安定性遠超過經由相同方法製造、 -8 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Λ4規格（21〇 X 297公寶） 1228420 A7 -— —___B7 五、發明説明（6 ) <不σ 士疋化賦形劑之非安定化抗原製備物。法係如 上逑方法進伃β重要地，HA可保持安定達丨2個月之久，其 係流行性感冒疫苗最終產品之必須標準。 u本發明第一種觀點係提供一種不活化流行性感冒病毒 製備=，其中所含血球凝集素抗原不以乙基汞硫代水楊酸 鈉士疋或僅以低量乙基汞硫代水楊酸鈉安定化，其中之 血球凝集素可藉SRD分析測得。 低1乙基汞硫代水楊酸鈉係指對源自流行性感冒6之ha 產^較低度安定性之濃度，因此該已安定化HA仍需要其它 士疋賦形劑。低量乙基汞硫代水楊酸鈉通常為5微克/毫升 或以下。 通常，安定化HA係指經過一段時間後藉標準定量方法 (特定言之為SRD)仍可檢測到HA,且其安定性遠超過經由 相同方法製造、但不含安定化賦形劑之非安定化抗原製備 物。HA的安定作用較佳為能維持HA活性實質穩定達一 年。安疋作用較佳可使疫苗中包含的HA在經過6個月貯存 期後仍能提供可接受之保護作用，更佳為一年貯存期。 安定作用可適當地藉由安定賦形劑進行，較佳 改性賦形劑。膠微粒改性賦形劑通常為可併入膠微粒^賦 形劑，其中膠微粒係藉由可用來或適用於溶解膜蛋白質 的界面活性劑而形成，如個別或混合使用界面活性劑土溫 80(Tween 80 顶）、崔坦 X100 (Trit〇n χι〇〇 TM)及去氧膽^酯: 在不受理論限制之前題下，咸信該類賦形劑係藉由脂 質、界面活性劑及/或最終製備物中之蛋白質間的交互作用 -9 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Μ規格（21 〇 X 297公釐） 1228420 A7 B7 五、發明説明 :安定HA纟可形成賦形劑與蛋白質及脂質之混合膠微 =如土溫與去氧膽酸醋及殘餘脂質與/或崔坦x_100之膠 =权。據信這些複合膠微粒可保持表面蛋自質溶解。膠微 Ί佳„有適备賦形劑以利用電荷排斥作用限制蛋白質凝 集如採用γ有負電荷界面活性劑之膠微粒。 當膠微粒改性賦形劑包含：正電、負t、或兩性離子 π私兩性分子，如烷基硫酸鹽、或烷基-芳基-硫酸鹽；非 、兩f生刀子如垸基聚糖苷或其衍生物，如普連塔飢爾 (PlamaCare®)(漢孰爾（Henkel) K(}aA出品）、或烷基醇聚烯醚 或其衍生物，如婁雷斯（Laureth)-9。 較佳賦形劑為α·生育酚、或α_生育酚衍生物，如丁二酸_心 生月醇酉曰。其^較佳可用於本發明之生育紛衍生物包含 生育酚、D-δ生育酚、D-γ生育酚及DL_a_生育酚。可用之較 佳生育酚衍生物包含醋酸酯、丁二酸酯、磷酸酯、甲酸酯、 丙酸酯、丁嫂酯、硫酸酯及葡糖酸酯。最佳為丁二酸_ a- 生同醇酉曰。a-生育紛或衍生物之用量須足以安定血球凝集 素0 其它適當賦形劑可藉本技藝之標準方法來鑑別，並使用 如在此所述之SRD法來測試其安定性。 本發明之一較佳觀點係提供包含至少一種安定流行性 感目B病毒株血球凝集素抗原之流行性感冒病毒抗原製備 物。 本發明進一步之觀點係提供一種製備安定血球凝集素 抗原之方法’該方法包括於純化抗原時添加安定化膠微粒 -10 - 本紙浪尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1228420 A7 B7 五、發明説明（8 ) 改性賦形劑，較佳為α-生育酚或其衍生物，如丁二酸生 育醇S旨。 本發明進一步提供包含在此所述之抗原製備物的疫苗及 其預防病患流行性感冒傳染或疾病方法之用途，該方法包 括對病患投予如本發明之疫苗。 疫苗可藉任何適當遞送途徑進行投藥，如皮内注射、黏 膜投藥（如鼻内投藥）、口服、肌肉注射或皮下注射。其它 遞送途徑在本技藝中為眾所皆知。
較佳者為皮内注射遞送。任何適當裝置皆可用於皮内注 射遞送，如短針裝置，如敘述於US 4,886,499、US 5，190,521、 US 5,328,483、US 5,527,288、US 4,270,537、US 5,015,235、 US 5，141，496、US 5,417,662者。皮内注射疫苗亦可藉由可限 制實際穿透皮膚長度之針頭裝置（如描述於WO 99/34850及 ΕΡ 1092444者，其内容在此併入參考資料），及其功能相同 裝置來投藥。同樣適用者為喷射注射裝置，其可藉液體噴 射注射器將液態疫苗遞送至真皮或經可穿入角質層並產生 喷射之針頭送達真皮。喷射注射裝置係敘述於如US 5,480,381、US 5,599,302、US 5,334，144、US 5,993,412、US 5,649,912、US 5,569，189、US 5,704,911、US 5,383,851、US 5,893,397、US 5,466,220、US 5,339，163、US 5,3 12,335、US 5,503,627、US 5,064,413、US 5,52G，639、US 4,596,556、US 4,790,824、US 4,941，880、US 4,940,460、WO 97/37705及 WO 97/13537等專利中。同樣適合者為粉劑/顆粒衝擊輸送裝 置，其係使用壓縮氣體將粉末型式之疫苗加速通過皮膚外 -11 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（mo X 297公釐） 1228420 A7 B7 五、發明説明（9 ) 層至真皮。此外’傳統注射器可用於傳統曼陀氏（mant〇ux) 方法來進行皮内注射投藥。然而，使用傳統注射器需要技 巧嫻熟之操作者’因此較佳為採用不需要高度專業人員即 可正確投藥之裝置。 本發明依此提供一種可預防病患流行性感冒傳染或致 病之方法，該方法包括對病患以皮内注射投予如本發明之 流行性感冒疫苗。 本發明亦提供與如本發明疫苗併用之皮内注射裝置，特 定T之描述於如WO 99/34850或EP 1092444之裝置。 本發明亦提供膠微粒改性賦形劑之用途，較佳者為生 育酚或其衍生物，其可做為製造流行性感冒疫苗時之血球 减集素安定劑。 本發明特定言之為針對（但不限於）Β病毒株流行性感冒 血球凝集素之安定作用。 本發明較佳可維持ΗΑ之安定達6個月，更佳為12個月。 f佳α_生百紛為§旨類型式’更佳為丁二酸S旨或醋酸醋， 且取佳為丁二酸酉旨。 生育酚或衍生物之較佳濃度為1微克/毫升_10毫克/毫 升，更佳為10微克/毫升-500微克/毫升。 如本發明之疫苗通常同時含有八及8病 原，其典型上為含二種Α病卷挟及一稀R户主批秫足届今杬 物。然而，其中並来= 毒株之三價組合 適人於“未 價及單價纟苗。單價疫苗可能 口 * i國泥行疾病的情況下，如急 供投藥之時。 衣、XI反田以 -12 - 1228420 A7 B7 五、發明説明（1〇 ) 用於本發明之非活毒流行性感冒抗原製備物可選自由 下所組成之群：裂解病毒病毒抗原製備物、次單位抗原（可 由重組表現或由完整病毒製備）、不活化完整病毒（使用如 甲醛、β-丙内酯進行化學性不活化，或其它不活化方式， 如υ·ν·或加熱不活化）。較佳之抗原製備物可為裂解病毒製 備物、或由完整病毒製備之次單位抗原，特別係將表面抗 原純化後藉由裂解方法所製備者。最佳者為裂解病毒製備 物0 較佳流行性感冒病毒製備物之血球凝集素抗原或其中 各病毒株之血球凝集素抗原濃度為每毫升1-1000微克，較 佳為每毫升3-300微克且最佳約每毫升30微克，以上係以 SRD分析測量。 如本發明之疫苗可進一步包括佐劑或免疫興奮劑，如（但 不限於）任何來源之去毒性脂質Α及脂質Α之非毒性衍生 物、皂素及其它可刺激TH1型反應之試劑。 長久以來已知腸内菌（enterobacterial)脂多糖（LPS)係一種 有效的免疫系統刺激劑，然而由於其毒性，故不太適合做 為佐劑。有一種非毒性的LPS衍生物，單磷醯基脂質 A(MPL)，其係藉由自還原端葡萄糖胺移除核心碳水化合物 基團及磷酸鹽而製備，其可見述於呂畢（Ribi)等人著作 (1986，Immunology and Immunopharmacology of bacterial endotoxins，Plenum Publ. Corp·, NY，第 407-419 頁），且其構 造式如下： -13 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 'X 297公釐） 1228420 A7 B7 五、發明説明（11
(<pll)u CH3 有一種更進一步的去毒MPL變化型式，其係由雙糖主鏈 之位置3移除醯基鏈所產生，稱為3-0-脫醯基單磷醯基脂質 A (3D-MPL)。其可純化並藉GB 2122204B中所教示之方法製 備，該參考文獻亦揭示雙磷醯基脂質A、及其3-0-脫醯基變 體之製備方法。 較佳3D-MPL型式為具有直徑低於0.2微米之小顆粒的乳 劑，而其製造方法係揭示於WO 94/21292。包括單磷醯基脂 質A及表面活性劑之水性調配物見述於WO 9843670A2中。 本發明組合物中所運用調配之細菌脂多糖來源佐劑可 由細菌原料純化並加工，或亦可合成取得。如純化單磷醯 基脂質A可見述於呂畢等人，1986 (如上），而源自沙門桿菌 屬（Salmonella sp·)之3-0-脫醯基化單磷醯基或雙磷醯基脂 -14 本紙張尺度適用中國a家標準(CNS) A4规格（210 X 297公釐） 1228420 A7 B7 五、發明説明（12 ) 質A可見述於GB 2220211及US 4912094。其它純化及合成脂 多糖亦經描述（西爾傑斯（Hilgers)等人，1986，Int. Arch. Allergy· Immunol·，79(4):392-6 ;西爾傑斯等人，1987, Immunology, 60(1):141-6 ;及EP 0 549 074 B1)。特定言之，較 佳之細菌脂多糖佐劑為3D-MPL。 因此，可用於本發明之LPS衍生物為與LPS或MPL或 3D-MPL構造類似之免疫興奮劑。於本發明之另一觀點中， LPS衍生物可為一種醯化單醣，其係上述MPL構造之次級部 皂素係教示於：拉凱爾·杜伯依斯（Lacaille-Dubois)，Μ及華 葛納（Wagner) Η. (1996. A review of the biological and pharmacological activities of saponins. Phytomedicine，第 2卷， 第363-386頁）。皂素為廣泛分佈於植物及海生動物界之類固 醇或三萜婦糖苷。皂素可於水中形成膠態溶液，其於搖晃後 會起泡，其並可沉澱膽固醇。當皂素接近細胞膜時可於細 胞膜上產生類似氣孔的構造而導致細胞膜破裂。紅血球溶 血係該現象之實例，其為皂素之部份（而非全部）特性。 已知皂素可作為全身性投藥疫苗之佐劑。皂素單獨之佐 劑活性及溶血活性已於本技藝中廣泛研究（拉凱爾-杜伯依 斯及華葛納，如上）。如奎爾（Quil) A (源自南美樹木皂樹-石驗木（Quillaja Saponaria Molina)-之樹皮）、及其部分係見述 於 US 5,057,540 及 “Saponins as vaccine adjuvant”，肯席爾 (Kensil)，C· R·，Crit Rev Ther Drug Carrier Syst，1996，12(1-2): 1-55 ;及EP 〇 362 279 B1。稱為免疫興奮複合杨(Immune -15 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公费） 1228420 A7 B7 五、發明説明（13 )
Stimulating Complexes (ISCOMS))之特定結構中包含了奎爾 A之部分，其可溶血並已用於製造疫苗（莫連（Morein)，B·，EP 0 109 942 Bl; WO 96/11711; WO 96/33739)。溶血性皂素 QS21 及QS17(奎爾A之HPLC純化片段）已經描述為有效的全身性 佐劑，且其製備方法揭示於美國專利第5,057,540號及EP 0 362 279 B卜其它已用於全身性接種研究之皂素包含源自其 它植物種類者，如霞草屬（Gypsophila)與肥急草屬 (Saponaria)(邦福特（Bomford)等人，Vaccine，10(9):572-577， 1992) 〇 有一種混合了非毒性脂質A衍生物與皂素衍生物之加強 系統，特定言之為如揭示於WO 94/00153中之QS21及 3D-MPL之組合，或如揭示於WO 96/33739之反應原性較低 之組合物，其中QS21係以膽固醇中止反應。 有一種特別有效之佐劑調配物，其中所含之QS21及 3D-MPL係存於水中油乳劑中，其見述於WO 95/17210，且 為一種較佳之調配物。 如本發明一具體實施例中，其所提供之一種疫苗中包含 本發明流行性感冒抗原製備物，其係以去毒性脂質A或脂 質A之非毒性衍生物輔佐，較佳係以單磷醯基脂質A或其衍 生物輔佐。 該疫苗較佳額外包含皂素，較佳為QS21。 該$周配物較佳額外包含一種水中油乳劑。本發明亦提供 一種製備疫苗調配物之方法，其包括混合本發明抗原製備 物與藥學上可接受之賦形劑，如3D-MPL。 -16 - 本紙悵尺度適用中國國家樣準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1228420 A7 B7 五、發明説明（14 ) 如本發明之疫苗可進一步包括至少一種表面活性劑’其 特定言之為非離子表面活性劑。適當非離子表面活性劑係 選自由下列各物所組成之群··辛基-或壬基苯氧基聚氧乙醇 (如商品化之崔坦系列）、聚氧乙烯山梨醇酐酯（土溫系列）及 通式（I)之聚氧乙烯醚或酯：
(I) H0(CH2CH20)n-A-R 其中η為1-50，A係一個化學鍵或-C(O)-，R係Cuo燒基或苯 氧基Cbso烷基；及其二種或多種之混合。 屬於式（I)之較佳表面活性劑分子的η為4-24 ’更佳為 6-12，且最佳為9 ; R成分為Cuo ’ 較佳為C4- C2G烷基且最佳 為C 12燒基。 辛基苯氧基聚氧乙醇及聚氧乙婦山梨醇酐酯係見述於 “Surfactant systems” 艾特伍德（Attwood)及弗羅徐斯（Florence) 編著（1983，Chapman and Hall)。辛基苯氧基聚氧乙醇（包括t· 辛基苯氧基聚乙氧基乙醇（崔坦X-100))亦見述於Merck Index Entry 6858(1162頁，第 12 版，Merck & Co. Inc.，Whitehouse Station，N.J·，USA; ISBN 0911910-12-3)。聚氧乙烯山梨醇酐 酯（包括聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯（土溫80)係見述於
Merck Index Entry 7742 (1308頁，第 12版，Merck & Co· Inc·， Whitehouse Station，N.J·，USA; ISBN 0911910-12-3)。二者皆可 使用在此所述之方法製造，或購買市售商品（如西格馬 (Sigma)公司出品）。 特佳的非離子表面活性劑包含崔坦X-45、t-辛基苯氧基 聚乙氧基乙醇（崔坦Χ-1〇0)、崔坦χ-1〇2、崔坦X-U4、崔坦 -17 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Λ4規格（2Κ)Χ 297公釐） 1228420 A7 ____B7 五、發明説明（15 ) X-165、崔坦 χ-205、崔坦 χ-305、崔坦 N-57、崔坦 N-101、崔 坦N-128、布雷（Breij) 35、聚氧乙烯月桂醚（婁雷斯9)及聚 氧乙晞硬脂酸醚（史鐵雷斯（steareth) 9)。崔坦X-100及婁 雷斯9為特佳者。其它特佳者為聚氧乙晞山梨醇纤酯、聚氧 乙晞山梨醇奸單油酸g旨（土溫8〇)。 更進一步適當通式⑴之聚氧乙晞醚係選自下列群組：聚 氧乙稀-8-硬脂酸醚、聚氧乙缔月桂醚、聚氧乙烯_3弘月 桂醚、及聚氧乙烯-23•月桂醚。 聚氧乙埽月桂醚之替代術語或名稱揭示於€八3註冊登記 中。聚氧乙晞-9月桂醚之CAS註冊號碼為9002-92-0。聚氧乙 婦醚（如聚氧乙婦月桂醚）係見述於Merck index(第12版·· entry 7717，Merck & Co. Inc·，whitehouse Station，N.J·，USA; ISBN091191G_12_3)。婁雷斯9係由環氧乙燒與十二醇反應所 形成，且具有平均九個環氧乙烷單元。 來自上述各組表面活性劑之二或多種非離子表面活性 劑可存在於本發明所述之疫苗調配物。特定言之，較佳者 為聚氧乙烯山梨醇酐酯（如聚氧乙婦山梨醇酐單油酸酯（土 溫80))及辛氧醇（如t_辛基苯氧基聚乙氧基乙醇（崔坦）χ·ι〇〇) 之混合物。另一特佳非離子表面活性劑混合物包含婁雷斯9 以及聚氧乙烯山梨醇酯或辛氧醇或後二者都加入。 最終疫苗組合物中，如上述之非離子表面活性劑的較佳 濃度如下··聚氧乙少希山梨醇奸醋（如土溫8〇): 〇〇1至〇」％， 最佳約〇.1%(重量/體積）；辛基-或壬基苯氧基聚氧乙醇（如 崔坦X-100或其它崔坦系列之界面活性劑）：〇〇〇1至〇 ， -18 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Λ4規格<210 X 297公聲)------- 1228420 A7 _ — _ —______B7 _— _ 五、發明説明（16 ) 最佳為0.005至〇·〇2%(重量/體積）；通式⑴之聚氧乙烯醚（如 宴雷斯9) : 0.1至20%，較佳為〇丨至ίο%且最佳為〇丨至1%或 約0.5% (重量/體積）。 #某些疫苗調配物而言，其中亦可包含其它疫苗成分。 以本發明調配物而言，其亦可包含膽汁酸或其衍生物，特 足&之為其鹽類型式。其包含膽酸及其鹽類衍生物，特定 言之為膽酸或膽酸衍生物之鈉鹽。膽汁酸及其衍生物實例 包含膽酸、去氧膽酸、黎去氧膽酸、石膽酸、烏索去氧膽 酸（Ursodeoxycholic acid)、豬去氧膽酸及衍生物，如上述膽 汁酸之糖基、牛橫基-、醯胺丙基丙烷磺酸-、醯胺丙基 醯胺丙基-2-羥基-1-丙烷磺酸，或队斗貳（31：>葡萄糖醯胺丙 基）去氧膽胺。特佳實例為去氧膽酸鈉（NaD〇c)，其可存在 於最終疫苗劑型中。 本發明亦提供醫藥套組，其包括裝有如本發明疫苗之疫 田投藥裝置。該投藥裝置包含（但不限於)針頭裝置、液體 噴射裝置、藥粉裝置、及噴霧裝置（供鼻内投藥使用）。 如本發明之流行性感冒病毒原製備物可得自傳統雞胚 胎方法，或可來自採用組織培養以培育病毒或表現重組之 流行性感冒病毒表面抗原之任何新穎方法。可培育病毒之 適當細胞基質包含如犬腎細胞（如MDCK或出自MDCK株之 細胞、MDCK-類細胞）、猴子腎細胞（如AGMK細胞，包含非 洲綠猴腎細胞）、適當豬細胞株、或任何其它適於製造疫苗 使用的流行性感冒病毒之哺乳動物細胞類型。適當細胞基 質亦包含人類細胞，如MRC-5細胞。適當細胞基質不限於 -19 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210'X 297公I) 1228420 A7 -^_____ B7_ 五、發明説明（17 ) 、、、田胞株；如雞胚胎纖維母細胞之類的原代細胞亦可納入。 流行性感冒病毒抗原製備物可任選多種商業上可應用 方法來製備，如專利案號DD 300 833及DD 211 444所述之裂 解病毒流行性感冒步驟，此二專利在此併入成為參考文 獻。裂解病毒流行性感冒習慣上係使用溶劑/清潔劑處理來 製備，如使用三-磷酸正丁酯、或二***再加上土溫（稱為 “土溫-醚”裂解法），此法仍為某些製造廠所採用。其它目 前應用之病毒裂解劑包含界面活性劑或蛋白質水解酶或膽 鹽，如專利號DD 155 875所述之去氧膽酸鈉，此專利在此 併入成為參考文獻。可做為裂解病毒劑之界面活性劑包含 陽離子界面活性劑，如十六烷基三甲基溴化銨（ctab)，其 它離子界面活性劑，如硫酸十二酯、牛去氧膽酸酯 (Uurodeoxycholate)、或如上述之非離子界面活性劑，包含 崔坦X-100(如利納（Lina)等人所述之步驟，2〇〇〇, Bi〇k>gicals 28，95-103)及崔坦N-1(H，或任二種或多種界面活性劑之混 合。 裂解病毒疫苗 < 製備方法包含多種過濾及/或其它的分 離步驟，如超高速離心、超過濾、區帶離心及色譜法（如離 子交換）步驟的各種混合運用，並可視需要包含不活化步 驟’如加熱、甲駿、或·β丙内醋Μ V處理，其可於裂解 病毒之前或之後進行。病毒裂解步驟可以分批'連續或半 連續步驟進行。 如本發明之較佳裂解病毒流行性感冒疫苗抗原製備物 應包括製造過程中所殘存之土溫80及/或崔坦χ·100，但亦 -20 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CMS) Α4規格（210 X 297公楚) 1228420 A7 B7 五、發明説明（18 ) 可於裂解病毒抗原製備完成後添加或調節其濃度。較佳為 土溫80及崔坦X-1〇〇同時存在。疫苗劑型中這些非離子表面 活性劑之最終濃度的較佳範圍： 土溫80 : 0·01至1°/。，更佳約ο·ι%(體積/體積）。 崔坦X_100 : 0.001至0 1% (重量/體積），較佳為〇〇〇5至 0.02% (重量/體積）。 或者，如本發明之流行性感冒病毒抗原製備物可得自除 活流行性感冒病毒以外的來源，如血球凝集素抗原可以重 組製備。 本發明將進一步於下列非限制性實例中說明。 實例 實.羞1AJ·. 丁二醇酯做為不劑癌苗他λ ^n代-水H鋼含詈* # U 性感冒扁碁 抗原製備物之Μ備 . 單價裂解病毒疫苗係如下步驟製備。 病毒择種物之製備 於接種雞胚胎當天藉由混合操作病毒種苗及含毫克/ 毫升健大黴素（gentamycin)硫酸鹽及25微克/毫升氫基可體 松（hydrocortisoneX視病毒株而定）之磷酸鹽緩衝食^水製 備新鮮接種物。將病毒接種物保存於。 接種雞胚胎 使用9至11曰齡之雞胚胎複製病毒.蛋殼需去污。以〇2 毫升之病毒接種物接種雞蛋。於適溫（依病毒株而定）下培 養已接種雞蛋48至96小時。於培育期終了，藉冷卻殺死胚 -21 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇x 297公釐） 1228420 A7 B7 五、發明説明（19 ) 胎並將蛋貯存於2-8°C中12-60小時。 採集 自冷凍雞胚胎中採集尿囊液。通常每個蛋可收集8至10 毫升之原尿囊液。 由尿囊液濃縮及純化完整病毒 1. 澄:清 以中速離心（範圍：4000-14000重力加速度）澄清所採集之 尿囊液。 2. 吸附步驟 為在澄清病毒池（pool)中獲得CaHP04膠體，加入0.5莫耳/ 升NazHPO4及0.5莫耳/升CaCh溶液，依病毒株而定，使 CaHP04最終濃度達到1.5克至3.5克CaHP04/升。 於沉殿至少8小時後，移除上清液並依所使用之caHp〇4 量添加0·26莫耳/升之EDTA-Naz溶液重新溶解含流行性感 冒病毒之沉澱物。 3.過濾 於6微米濾膜過濾再懸浮之沉澱物。 4.蔗糖梯度離心 於含100微克/毫升乙基汞硫代水楊酸鈉之線性薦糖梯产 (0.55%(重量/體積））中藉等密度離心濃縮流行性感冒^ 毒。流速為8,15升/小時。 子内容物（以折 於離心結束，以四種不同濃度片段回收轉 射計測量藏糖）： - 片段1 55-52%蔗糖 -22 -
t a ® ^^^(CNS) Λ-Ι^(2ι〇 X 297^#) 1228420 A7 B7 五、發明説明（2〇 ) - 片段2 約52-38%蔗糖 - 片段3 38-20%蔗糖* - 片段4 20-0%蔗糖 *依病毒株而定，片段3可降低至15%蔗糖濃度。 進一步之疫苗製備僅使用片段2及3。 藉透析以磷酸鹽緩衝溶液沖洗片段3以降低蔗糖含量至 約6%以下。將出現於該稀釋片段之流行性感冒病毒製成丸 狀以移除可溶性污染物。 再懸浮顆粒狀物並徹底混合以獲得均質懸浮液。將片段 2及片段3之再懸浮顆粒合併並添加磷酸鹽緩衝溶液以獲得 約40升之容積。該產物係單價完整病毒濃縮物。 5·含去氧膽酸鈉之蔗糖梯度離心 將單價完整流行性感冒病毒濃縮物施以ENI-馬克（Mark) II超高速離心。K3轉子中含有線性蔗糖梯度（0.55%(重量/體 積）），其中並額外重疊了去氧膽酸鈉梯度。裂解病毒時添 加土溫80達到0.1 %(重量/體積），對B-病毒株-病毒並加入丁 二酸-α-生育醇酯達到〇·5微當量。最大去氧膽酸鈉濃度為 0.7-1.5%(重量/體積）且其係依病毒株而定。流速為8-15升/ 小時。 於離心終了時，以三種不同片段區間回收轉子中内容物 (蔗糖濃度係於折射計中測量）。片段2可進一步處理。片段 之蔗糖含量範圍（47-18%)係依病毒株而異並於估量後固 定。 6.無菌過滤 -23 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐） 1228420 A7 __ B7 五、發明説明（21 ) 以濾膜過濾裂解病毒之片段’最終使用〇.2微米之滤膜。 使用含0.025%(重量/體積）土溫80及（對b病毒株而言）〇 5微 當量之丁二酸-α-生育醇酯之磷酸鹽緩衝溶液進行稀釋。過 濾後之片段2的最終容量為原片段量之5倍。 7. 不活化作用 將過濾後之單價物質於22 ±2°C中培養，最長不超過84 小時（某些病毒株之培養時間可縮短）。再加入含〇. 〇 2 5 % (重 量/體積）土溫8 0之鱗酸鹽緩衝溶液以便將總蛋白質含量減 少至250微克/毫升的上限、。對B病毒株而言，使用含 0.025%(重量/體積）土溫80及〇·25微當量丁二酸-α-生育醇酯 之磷酸鹽緩衝食鹽水稀釋以λ便將總蛋白質含量降低至250 微克/毫升。添加甲醛至最終濃度為50微克/毫升並於20°C ±2°C中進行不活化作用至少72小時以上。 8. 超過濾 以配備有20仟道耳頓MWCO乙酸纖維素薄膜之超過濾裝 置將不活化裂解病毒病毒物質濃縮至少2倍。隨後以含 0.025%(重量/體積）土溫80之磷酸鹽緩衝溶液與含0.01 %(重 量/體積）土溫之磷酸鹽、緩衝食鹽水順序沖洗該物質。對B病 毒株則使用含0.01%(重量/體積）土溫80及0.1微當量丁二酸 -α·生育醇酯之磷酸鹽緩衝生理食鹽水沖洗。 9·最終滅菌過濾 超過濾後所產生之物質繼續以濾膜進行過濾，而最終的 薄膜孔徑達0.2微米。沖洗濾膜，必要時以含〇·〇1%(重量/ 體積）土溫80及（對Β病毒株而言）0.1微當量丁二酸-α-生育醇 -24 - 本紙張尺度適用十國國家標準(CNS) Α4規格(210 X烈7公釐） 1228420 A7 B7 五、發明説明（22 ) 酯之磷酸鹽緩衝食鹽水稀釋該物質，使蛋白質濃度不超過 500微克/毫升。 10.貯存 單價最終主產物最多可貯存於2-8°C中18個月。 安定性 表1·藉SRD測量比較單價最終主產物之各時期之HA含量 (微克/毫升）。 病4# 安定劑 製造完 成時 30°C 4週 2-8〇C 6個月 2-8〇C 12個月 B/Yamanashi/ 166/98 丁遠*生育義 (殘留汞3微W毫升） 169 139 (82%) 172 (>100%) ND B/Yamanashi/ 166/98 乙基汞硫代水楊酸鈉(108 微 192 160 (83%) 186 (97%) 178 (93%) B/Yamanashi/ 166/98 無 (殘留汞3微克/毫升） 191 122 (60%) 175 (92%) 154 (81%) B/約翰尼斯堡 (Jdiannesburgy 5/99 丁遠·生育_旨 (殘留汞4微义毫升） 166 183 (>100%) 158 (95%) 179 (>100%) B/約翰尼斯堡 /5/99 丁^<x-生育_旨 (殘留汞4微A毫升） 167 179 (>100%) 158 (95%) 178 (>100%) B/約翰尼斯堡 /5/99 丁 4·<χ-生育_旨 (殘留汞3微W細 144 151 (>100%) 130 (90%) 145 (>100%) -25 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Λ4規格(mo X 297公釐） A7 B7 1228420 五、發明説明（23 )
Β/約翰尼斯堡 /5/99* 乙絲硫代水： 159 ND 172 (>100%) 154 (97%) Β/約翰尼斯堡 /5/99** 無 169 107 (63%) 153 (90%) ON *以經許可之福祿澳力克司（FLUARIXTM)製備 '"如實例1 方法製備，但不用丁二酸生育醇酯、0N :進行中，ND ·· 未測定。 實例2-使用丁二酸-α-生育醇酯做為低乙基汞硫代水楊酸鈉 含量疫苗之皂定劑以製備流行性感冒疫苗 以如實例1所敘述之方法製備三種病毒株（Α/新卡多尼亞 (New Caldonia)/20/99(H1N1)IVR-I16、Α/巴拿馬（Panama)/2007/ 99(H3N2) Resvir-17及B/Yamanashi/166/98)之單價最終產物。 集合 集合適量之單價最終產物使A/新卡多尼亞 /20/99(HlNl)IVR-116、A/巴拿馬/2007/99(H3N2)Resvir-17之最 終HA濃度分別為30微克/毫升，且B/Yamanashi/166/98之最終 HA濃度為39微克/毫升。分別將土溫80及崔坦X-100調整至 580微克/毫升及90微克/毫升。以磷酸鹽緩衝食鹽水將最終 量調整為3升。最後以〇·8微米乙酸纖維素膜過濾三價集合 物以獲得三價最終主產物。將三價最終主產物裝填至注射 器中，每支0.5毫升以上。 -26 - 本紙張尺度適用令國國家標準謂)石 1228420 AT B7 五、發明説明（24 ) 表2.藉SRD測量自注射器收復之三價最終產物的各時期之 HA含量比較 疫苗調配物 病毒株 0個月 2個月 4個月 6個月 不含安定劑 之流行性感 冒疫苗 Α/新卡多尼亞 /20/99 33 (32-34) 32 (31-33) 36 (34-38) 31 (30-32) Α/巴拿馬/2007/99 29 (27-31) 31 (28-34) 34 (32-36) 32 (31-33) B/Yamanashi/166/ 98 36 (34-38) 33 (32-34) 32 (30-34) 31 (29-33) 含丁二酸-α-生育醇酯之 流行性感冒 疫苗 A/新卡多尼亞 /20/99 31 (30-32) 32 (31-33) 36 (34-38) 32 (31 -33) A/ 巴拿馬 /2007/99 33 (30-36) 33 (30-36) 36 (35-37) 33 (31-35) B/Yamanashi/166/ 98 37 (35-36) 36 (34-38) 38 (35-41) 36 (33-39) 實例3-用於測量血球凝集素含量之SRD方法
裝 玎
以NIBSC所建議之含抗-流行性感冒HA血清之瓊脂凝膠 塗鋪於玻璃培養皿（12.4-10.0公分）中。凝膠定型後，於瓊脂 糖上打出72個樣本孔（3毫米0)。將10微升之適量對照物及 -27 - 本紙張足度逍川中國國家標準(CNS) Λ4規格（210X 297公聲) 一~ 1228420 A7 B7 五、發明説明（25 ) 樣本稀釋液裝入小孔中。培養皿於室溫（20至25。〇之潮濕 室中培育24小時。隨後將培氧贩浸泡於NaCl溶液中隔夜再 以蒸餾水短暫沖洗。再將凝膠壓製並乾燥。當完全乾燥後， 以考馬斯亮藍（Coomassie Brillant Blue)溶液將培氧皿染色10 分鐘並於甲醇及醋酸混合物中脫色二次直到輪廓分明之著 色區清晰可見為止。俟培養皿乾燥後’以成直角的二個方 向測量圍繞抗原孔之染色區直徑。亦可使用其它裝備來測 量表面積。建立抗原稀釋液相對於表面積之的劑量-反應曲 線並依標準斜率-比例分析方法計算結果（范内（Finney)，D.J. (1952)· Statistical Methods in Biological Assay·儉敦：Griffin， 其由伍德（Wood)，JM等人引述（1977). J· Biol. Standard. 5, 237-247) 〇 實例4-以a-生育酚安定流行性感冒疫苗（低乙某灵硫代水楊 酸鈉含量）之臨庆試驗 以如實例2敘述所獲得之注射器用於臨床試驗。 H3N2 : A/巴拿馬/2007/99 RESVIR-17 H1N1 : A/新卡多尼亞/20/99 (H1N1)IVR-116 B : B/Yamanashi/166/98 表3 成年人 (歲） 低乙基汞硫代 添加乙基采ζί -28 - 本紙张又度適用_國國家標準(CNS) Λ4規格（210 X 297公釐） 1228420 A7 B7 五、發明説明（26 ) H3N4 H1N1 B H3N2 H1N1 B GMT 47 41 111 55 37 102 力價<綱 10.3% 13.8% 1.7% 5.3% 12.3% 8.8% 力價>40， SPR|%] 603% 552% 75.9% 70.2% 52.6% 75.4% 雜後 血清轉化率 m 103% 13.8% 1.7% 53% 123% 8.8% 抗體力價有 效增拳] 58.6% 741% 58.6% 632% 73.7% 52.6% 血清轉化率 (%] 58.6% 74.1% 58.6% 632% 73.7% 52.6% GMT 328 525 766 324 359 588 GMT倍數 73 13.0 6.9 5.9 9.8 5.9 -29 - 本紙悵尺度適用中國國家操準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1228420
AT B7 五、發明説明（27 ) 力價>40， 100.0% 100.0% 100.0% 100.0% 100.0% 100.0% SPR[%] n.d.=比例p=n/N 之 C.I·未定義，因 p*(l-p)*N<9 n/N=該（次）族群（N)總數中有反應者（η)之分數比，有反應 係指血清轉化或有效增加，請見：CPMAP/BWP/214/96 12， 1997 ， 3月，第 17ff頁 GMT =幾何平均力價，倒數 95% C.I. = 95%信賴區間， SPR =血清保護率（Seroprotection rate):接種前-或後保護力 價240之病患比例 力價=HI-抗體力價 血清轉化率=抗體由接種前<10增加至接種後240之病患比 例 GMT = GMT增加倍數 有效增加=接種前抗體力價210及接種後抗體增加4倍（二階 段力價）之病患比例 req. = EU 規定 血清轉化率= neg至pos或g.e· 4倍（neg :力價<10，pos :力 價>40)=血清轉化（<10至240)或有效增加之病患比例。 結果顯示該疫苗可提供與含乙基汞硫代水楊酸鈉做為 防腐劑之疫苗相同的保護能力。 實例5a-使用丁二酸-α-生育醇酯做為不含乙基汞硫代水楊 酸鈉疫苗之安定劑來製備流行性感冒病毒抗原 以如下步驟製備單價裂解病毒疫苗。 -30 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CMS) Α4規格（210 X 297公釐） 1228420 A7 B7 五、發明説明（28 ) 製備病毒接種物 於接種雞胚胎當天藉混合操作病毒種苗及含0.5毫克/毫 升健大黴素硫酸鹽與25微克/毫升氫基可體松（依病毒株而 定）之磷酸鹽緩衝食鹽水製備新鮮接種物。病毒接種物保存 於 2-8°C。 接種雞胚胎 使用9至11日齡之雞胚胎複製病毒。蛋殼需去污。以0.2 毫升病毒接種物接種雞蛋。於適溫（依病毒株而定）培育 60,000個接種之雞蛋48至96小時。於培養期結束後，藉冷卻 殺死胚胎並將雞蛋於2-8°C貯存12-60小時。 採集 自冷凍雞胚胎中採集尿囊液。通常每個蛋可收集8至10 毫升之原尿囊液。 由尿囊液濃度及純化完整病毒 澄清’ 以中速離心（範圍·· 4000-14000重力加速度）澄清所採集之 尿囊液。 沉澱步驟 將飽和硫酸按溶液加入已澄清之病毒池中以達到最終 硫酸銨濃度0.5莫耳/升。沉澱至少1小時後，經深度濾器（典 型為0.5微米）過濾移除沉澱物。 過遽 以多重濾膜過濾澄清之原始完整病毒主產物，最後一道 為確定無菌之薄膜（典型為0.2微米）。 -31 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1228420 A7 B7 五、發明说明（29 ) 超過濾 將已過濾之無菌原始單價完整病毒主產物於配有靡仟 道耳頓MWCO拜歐馬克司（ΒΙ0ΜΑχτΜ)薄膜之卡匿中濃縮至 少6倍。以至少Κ8倍之鱗酸鹽緩衝食鹽切洗濃縮保留物。 蔗糖梯度離心 於線性廉糖梯度（0.55%(重量/體積））藉等密度離心濃縮 流行性感冒病毒。流速為8 -15升/小時。 於離心結束，以四種不同濃度片段回收轉子内容物（以折 射計測量蔗糖濃度）： - 片段1 55-52%蔗糖 - 片段2 約52-38%蔗糖 - 片段3 38-20%蔗糖* - 片段4 20- 0%蔗糖 *依病毒株而定，片段3可降低至15%蔗糖濃度。 進一步製備疫苗僅使用片段2或是片段2與進一步純化 之片段3。 藉滲透過濾以磷酸鹽緩衝溶液沖洗片段3以降低薦糖含 量至約6%以下。該步驟可視需要省略。將出現於該稀釋片 段之流行性感冒病毒製成丸狀以移除可溶性污染物。 再懸浮該顆粒狀物並徹底混合以獲得均質懸浮物。將片 段2及片段3之再懸浮顆粒合併並添加磷酸鹽緩衝溶液以與 得約40升之容積。該產物為單價完整病毒濃縮物。 含去氧膽酸鈉之蔗糖梯度離心 將單價完整流行性感冒病毒濃縮物施以ΕΝΙ-馬克^超^ -32 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Λ4規格（210 X 297公赘） 1228420 A7 ____B7 五、發明説明（3〇 ) 速離心。K3轉子中含有線性蔗糖梯度（〇·55%(重量/體積））， 其中並額外重疊了去氧膽酸鈉梯度。裂解病毒時添加土溫 80達到0· 1 %(重量/體積），對Β-病毒株-病毒並加入丁二酸| 生育醇醋達到0.5微當量。最大去氧膽酸鈉濃度為 0.7-1.5%(重量/體積）且其係依病毒株而定。流速為8-15升/ 小時。 於離心結束時，以三種不同片段區間回收轉子中内容物 (蔗糖濃度係於折射計中測量）。將片段2做進一步處理。片 段之薦糖含里範圍（4 7-18%)係依病毒株而異並於估量後固 無菌過滤 以濾膜過濾裂解病毒之片段，最終使用〇.2微米之滤膜。 使用含0.025%(重量/體積）土溫8〇及（對β病毒株而言）〇 5微 當量之丁二酸-α_生育醇酯之磷酸鹽緩衝溶液進行稀釋。過 濾後之片段2的最終容量為原片段量之5倍。 不活化作用 將過滤後之單價物質於22±2°C中培養，最長不超過84 小時（依病毒株種類可縮短培育時間）。再加入含〇 〇25%(重 量/體積）土溫80之磷酸鹽緩衝溶液以便將總蛋白質含量減 少至450微克/毫升的上限。對β病毒株而言，使用含 0.025%(重量/體積）土溫80及0.25微當量丁二酸生育醇酯 之磷酸鹽緩衝食鹽水稀釋以便將總蛋白質含量降低至45〇 微克/毫升。添加甲醛至最終濃度為1〇〇微克/毫升並於2〇〇C ±2°C中進行不活化作用至少72小時以上。 -33 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Λ4規格（210 :< 297公釐） 1228420 A7 B7 五、發明説明（31 ) 超過濾 以配備有20仟道耳頓MWCO乙酸纖維素薄膜之超過濾裝 置將不活化裂解病毒病毒物質濃縮至少2倍。隨後以含 0.025%(重量/體積）土溫80之磷酸鹽緩衝溶液與含0.01%(重 量/體積）土溫之磷酸鹽緩衝食鹽水順序沖洗該物質。對B病 毒株則使用含〇·〇1 %(重量/體積）土溫80及0.1微當量丁二酸 -α-生育醇酯之磷酸鹽緩衝生理食鹽水沖洗。 最終無菌過滤 超過濾後所產生之物質再以濾膜進行過濾，最終的薄膜 孔徑達0.2微米。沖洗濾膜，必要時以含0.01%(重量/體積） 土溫80及（對Β病毒株而言）0.1微當量丁二酸-α-生育醇酯之 磷酸鹽緩衝食鹽水稀釋該物質，使蛋白質濃度不超過500 微克/毫升。 貯存 單價最終主產物最多可於2-8°C中貯存18個月。 安定性 表4.藉SRD測量比較單價最終主產物之各時期之HA含量 (微克/毫升）。 病毒株 安定劑 製造完成時 30°C 4週 2-8〇C 6個月 B/約翰尼斯堡 /5/99 丁二酸-α-生育醇酯 214 196( 92%) 206( 96%) B/約翰尼斯堡 /5/99** 無 169 107(63%) 153( 90%) -34 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Λ4規格（210 X 297公釐） 1228420 A7 B7 五、發明説明（32 ) 如實例1製備，但不厶丁一妒斗古丄 1 3 丁一酸生育醇酯。 用丁二酸4 ^ 〜不含乙基汞硫^^ ^ 酸鈉癌苗S安定劑以製供+ , " β - —~~病毒抗原製備物 實例5a中所述之方法的較佳變化如下： 於沉澱步驟（硫酸銨沉搬）後採集完整病毒。隨後進行澄 /月步驟，其中該液體係藉中速離心（範圍為4000一140⑼重力 加速度）澄清。依此，沉濺及澄清步驟之順序與實例5a顛倒。 供菌過濾、超過濾及超速離心（蔗糖梯度離心）之後步驟 如5a。然而’超速離心步驟所產生之片段不需要再加工步 驟0 該方法中之其它步驟如同實例5a所描述者。 依此，該實例中之步驟概述如下： 採集 沉澱（硫酸銨） 澄清 無菌過濾 超過濾 超南速離心 裂解病毒（較佳為去氧膽酸鈉） 無菌過濾 不活化作用 超過濾 最終無菌過滤 -35 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Λ4規格（210X297公釐） 1228420 A7 B7 五、發明説明（33 ) 實例5a之另一較佳變化係有關於在首次無菌過濾前之預 先過濾步驟。其使用非無菌濾器之薄膜，但其可於無菌過 滤前移除污染物，如白蛋白。如此可增加總產量。適當之 預先過濾薄膜為約0.8微米至約1.8微米，如1.2微米。預先 過濾步驟可用於實例5a或實例5b方案中。 實例6·使用丁二酸-α-生育醇酯做為不含乙基汞硫代水揚酸 納疫苗之安定劍以製備流行，f生感冒疫苗 以如實例5所述之方法製備三種病毒株·· A/新卡多尼亞 /20/99 (H1N1) IVR-116、A/巴拿馬/2007/99 (H3N2) Resvir-17及 B/Yamanashi/166/98之單價最終主產物。 集合 集合適量之單價最終主產物，使A/新卡多尼亞 /20/99(HlNl)IVR-116、A/巴拿馬/2007/99(H3N2)Resvir-17之最 終HA濃度分別為30微克/毫升，且B/Yamanashi/166/98之最終 HA濃度為36微克/毫升。分別將土溫80及崔坦X-100調整至 580微克/毫升及90微克/毫升。以磷酸鹽緩衝食鹽水將最終 量調整為3升。最後以0.8微米乙酸纖維素膜過濾三價集合 物以獲得三價最終主產物。將三價最終主產物裝填至注射 器中，每支0.5毫升以上。 表5.藉SRD測量三價最終主產物中的各時期之HA含量（微 克/毫升）比較。 -36 - 本紙張尺度適用中國國家標準< CNS) A4規格（210 X 297公嫠) 1228420 A7 B7 五、發明説明（34 ) 疫苗調配物 病毒株 0個月 30°C 4週 2-8°C 6個月 不含安定劑之流行 性感冒疫苗 Α/新卡多尼亞 /20/99 31 32 30 Α/ 巴拿馬 /2007/99 31 34 33 Β/約翰尼斯堡 /5/99* 35 25 31 含丁二酸-α-生育醇 酯 Α/新卡多尼亞 /20/99 34 35 34 Α/巴拿馬 /2007/99 33 33 34 Β/約翰尼斯堡 /5/99** 29 25 28 *調配物係以目標濃度39微克/毫升為主。* *調配物係以目 標濃度34微克/毫升為主。 實例7-製備物使用十二烷基硫酸鈉做為不含防腐劑疫苗 (低乙基汞硫代水楊酸鈉含量疫苗）之安定劑以製備流行性 感冒病毒抗原製備物 如實例1所述方法獲得B/約翰尼斯堡/5/99單價完整病毒濃 縮物。 -37 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Λ4規格（210 X 297公釐) 1228420 A7 B7 五、發明説明（35 ) 含去氧膽酸鈉之蔗糖梯度離心 將單價元整流行性感冒病毒濃縮物施以ENI•馬克Η超高 速離心。Κ3轉子中含有線性蔗糖梯度（〇 55%(重量/體積》， 其中並額外重疊了去氧膽酸鈉梯度。裂解病毒時添加土溫 80達到0.1%(重量/體積）。最大去氧膽酸鈉濃度為 0.7-1.5/。（重量/體積）且其係依病毒株而定。流速為升/ 小時。 於離心結束時，以三種不同片段區間回收轉子中内容物 (蔗糖濃度係於折射計中測量）。將片段2做進一步處理。片 段之蔗糖含量範圍（47-18%)係依病毒株而異並於估量後固 定。 無菌過濾 採取10毫升片段2樣本供進一步處理。以濾膜過濾裂解病 毒之片段’最終使用〇·2微米之濾膜。使用含0.025%(重量/ 體積）土溫80及（對Β病毒株而言）〇·5微當量之十二烷基硫酸 鈉之轉酸鹽緩衝溶液進行稀釋。過濾後之片段2的最終量為 原片段量之5倍。 不活化作用 將過濾後之單價物質於22 ±2°C中培養，最長不超過84 小時（依病毒株種類可縮短培育時間）。再加入含0.025%(重 量/體積）土溫80及0.5微當量十二烷基硫酸鈉之磷酸鹽緩衝 食鹽水以便將總蛋白質含量減少至250微克/毫升的上限。 添加甲醛至最終濃度為50微克/毫升並於20°C±2°C進行不 活化作用至少72小時以上。 -38 - 本紙張尺度適用t國國家標準(CNS) Λ4規格（210 X 297公釐） 1228420 A7 B7 五、發明説明（36 ) 超過遽 於配備有20仟道耳頓MWCO乙酸纖維素膜之超過濾裝置 中將不活化裂解病毒之病毒物質濃縮至少2倍。接著以4倍 容積之含0.01%(重量/體積）土溫與0.5微當量十二烷基硫酸 鈉的磷酸鹽緩衝食鹽水沖洗該物質。 最終無菌過濾 超過濾後所產生之物質再以濾膜進行過濾，最終的薄膜 孔徑達0·2微米。沖洗濾膜，必要時以含0.01%(重量/體積） 土溫80及0.5微當量十二烷基硫酸鈉之磷酸鹽緩衝食鹽水 稀釋該物質，使蛋白質濃度不超過500微克/毫升。 貯存 單價最終主產物貯存於2-8°C。 表7.藉SRD測量單價最終主產物中之各時期HA含量比較。 安定劑 製造完成時 30QC中4週 B/約翰尼斯堡 盔* 182 139 (77 %) /5/99 B/約翰尼斯堡 十二燒基硫酸鈉 288 264 f92 %) /5/99 *如實例7製備，但不添加十二烷基硫酸鈉 實例8-使用普連塔凱爾或婁雷斯-9做為不含防腐劑疫苗（低 乙基汞硫代水楊酸鈉含量疫苗）之安定劑以製備流行性感 冒病毒抗原製備物 如實例1所述方法獲得B/Yamanashi/166/98輩價完整病毒濃 縮物° -39 - 本紙張尺度適用中國·國家標準(CNS) A4規格（210X297公釐） 1228420 A7 B7 五、發明説明（37 ) 裂解 以pH 7.4之磷酸鹽緩衝食鹽水將單價完整流行性感f病 毒濃縮液稀釋至蛋白質濃度成為1，000微克/亳升。加人普連 塔凱爾®2000 UP或婁雷斯-9至最終濃度為1% (重量/體 積）。將該物質輕度混合3 0分鐘。接著將該物質覆蓋在吊桶 中之蔗糖緩衝層15% (體積/體積）上。於20°C中以貝克曼 (Beckman)外盪轉子SW 28以每分鐘25,000轉進行2小時超 速離心。 被*菌過滤 採集上清液以供進一步處理。以濾膜過濾裂解病毒之病 毒片段，最終的薄膜孔徑達0.2微米。 不活化作用 若需要可加入磷酸鹽緩衝食鹽水以降低總蛋白質含量 至不超過500微克/毫升。加入甲醛至最終濃度為ι〇〇微克/ 毫升並於20°C±2°C中進行不活化作用至少6日。 超過濾 將不活化物質中的土溫80及崔坦X 1〇〇分別調整為〇15〇/〇 及0.02%。於配備有30仟道耳頓MWCO之乙酸纖維素膜的超 過濾裝置中將不活化裂解病毒之病毒物質濃縮至少2倍。接 著再以4倍容積之磷酸鹽緩衝食鹽水沖洗該物質。 最終無菌過濾 超過濾後所產生之物質再以濾膜進行過濾，最終的薄膜 孔徑達0·2微米。沖洗滤膜並以鱗酸鹽緩衝食鹽水稀釋該物 質使蛋白質濃度不超過500微克/毫升。 -40 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格（210 X 297公釐） 1228420 A7 B7 五、發明説明（38 ) 貯存 單價最終主產物貯存於2-8°C。 表8.藉SRD測量比較單價最終主產物之各時期之HA含量。 安定劑 製造完成時 30QC中4週 B/Yamanashi/166/98 盔 143 98 Γ68 %) B/Yamanashi/166/9 8 普連塔凱爾® 476 477 _%) 2000 UP BA^manashi/l 66/98 窶雷斯-9 468 4940100 %) 實例9-經由ID及IM對老年人投予以α-生育酚安定之流行性 感冒疫苗（低乙基汞硫代水楊酸鈉含量）的臨床試驗 Α流行性感冒病毒抗原製備物之製備 以如下步驟製備單價裂解病毒疫苗。 病毒接種物之製備 於接種難胚胎當天藉混合操作病毒種苗及含0.5亳克/毫 升健大黴素硫酸鹽與25微克/毫升氫基可體松（依病毒株而 定）之磷酸鹽緩衝食鹽水製備新鮮接種物。（依病毒株而定）。 病毒接種物保存於2-81。 接種雞胚胎 ' 使用9至11日齡之雞胚胎複製病毒。蛋殼需去污。以0.2 毫升病毒接種物接種雞蛋。於適當溫度中培養（依病毒株而 定）接種過之雞蛋48至96小時。於培育期結束後，藉冷卻殺 死胚胎並將雞蛋於2-8°C貯存於12-60小時。 採集 自冷凍雞胚胎中採集尿囊液。通常每個蛋可收集8至10 -41 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1228420 A7 B7 五、發明説明（39 ) 毫升之原尿囊液。 由尿囊液濃縮及純化完整病毒 1. 澄清 以中速離心（範圍：4000- 14000重力加速度）澄清所獲得之 尿囊液。 2. 吸附步驟 為在澄清病毒池中獲得CaHP04膠體，加入0.5莫耳/升 Na2HP04及0.5莫耳/升CaCl2溶液，依病毒株而定，使CaHP04 最終濃度達到1.5克至3.5克CaHP04/升。 於沉澱至少8小時後，移除上清液並依所使用之CaHP04 量添加0.26莫耳/升之EDTA-Na2溶液重新溶解含流行性感 冒病毒之沉澱物。 3. 過濾 於6微米濾膜過濾再懸浮之沉澱物。 4. 蔗糖梯度離心 於含100微克/毫升乙基汞硫代水楊酸鋼之線性蔑糖梯度 (0.55%(重量/體積）)藉等密度離心濃縮流行性感冒病毒。流 速為8-15升/小時。 於離心結束，以四種不同濃度片段回收轉子内容物（以折 射計測量蔗糖）： - 片段1 55-52%蔗糖 鑛 片段2 約52-38%蔗糖 - 片段3 38-20%蔗糖* - 片段4 20-0%蔗糖 -42 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNLS) 規格（210 X ‘297公釐） 1228420 A7 _______B7 五、發明説明（) *依病毒株而定，片段3可降低至15%蔗糖。 進一步之疫苗製偷僅使用片段2及3。 藉滲透過濾以磷酸鹽緩衝溶液沖洗片段3以降低蔗糖含 量至約6%以下。將出現於該稀釋片段之流行性感f病毒製 成丸狀以移除可溶性污染物。 再懸浮顆粒狀物並徹底混合以獲得均質懸浮液。將片段 2及片段3之再懸浮顆粒合併並添加磷酸鹽緩衝溶液以獲得 約40升之谷積，該谷量適用於每批po ooo個蛋。該產物為 單價完整病毒濃縮物。 5·含去氧膽酸鈉之蔗糖梯度離心 將單價冤整流行性感冒病毒濃縮物施以ENI_馬克π超高 速離心。Κ3轉子中含有線性蔗糖梯度（〇.55%(重量/體積））， 其中並額外重璺了去氧膽酸納梯度。裂解病毒時添加土溫 80達到0· 1%(重量/體積），對Β_病毒株·病毒並加入丁二酸-α_ 生育醇酿達到〇·5微當量。最大去氧膽酸鈉濃度為 0.7-1.5%(重量/體積）且其係依病毒株而定。流速為8-15丨升/ 小時。 於離心終了時，以三種不同片段區間回收轉子中内容物 (蔗糖濃度係於折射計中測量）。片段2可進一步處理。片段 之蔗糖含量範圍（47-18%)係依病毒株而異並於估量後固 定。 6.無菌過濾 以濾膜過濾裂解病毒之片段，最終使用0.2微米之濾膜。 使用含0.025%(重量/體積）土溫80及（對Β病毒株而言）0.5微 -43 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Λ4規格（210 X 297公釐） 1228420 A7 B7
五、發明説明（41 當量之丁二酸-0C-生育醇酯之磷酸鹽緩衝溶液進行稀釋、尚 濾後之片段2的最終容量為原片段量之5倍。 7.不活化作用 將過濾後之單價物質於22±2°C中培養，最長不超過84 小時（某些病毒株之培養時間可縮短）。再加入含〇 〇25%(重 量/體積）土溫80之磷酸鹽緩衝溶液以便將總蛋白質含量減 少至250微克/毫升的上限。對B病毒株而言，使用本 0.025%(重量/體積）土溫80及0·25微當量丁二酸-α-生育醇酉旨 之磷酸鹽緩衝食鹽水稀釋以便將總蛋白質含量降低至25〇 微克/毫升。添加甲醛至最終濃度為50微克/毫升並於2〇γ ±20C中進行不活化作用至少72小時以上。 8·超過濾 以配備有20仟道耳頓MWCO乙酸纖維素薄膜之超過滤裝 置將不活化裂解病毒病毒物質濃縮至少2倍。隨後以含 0.025%(重量/體積）土溫80之磷酸鹽緩衝溶液與含0.01%(重 量/體積）土溫之磷酸鹽緩衝食鹽水順序沖洗該物質。對B病 毒株則使用含0.01%(重量/體積）土溫80及0.1微當量丁二酸 -α-生育醇酯之鱗酸鹽緩衝生理食鹽水沖洗。 9·最終無菌過濾 以濾膜過濾超過濾後所產生之物質，最終的薄膜孔徑達 〇·2微米。沖洗濾膜，必要時以含0.01%(重量/體積）土溫80 及（對Β病毒株而言）01微當量丁二酸生育醇酯之磷酸鹽 緩衝食鹽水稀釋該物質，使蛋白質濃度不超過1，〇〇〇微克/ 毫升、但血球凝集素濃度超過180微克/毫升。 -44 - 本紙張尺度適用中國國家標準((：^3) Λ4規格（21〇χ 297公釐）
裝 訂
1228420 A7 B7 五、發明説明（42 ) 10.貯存 單價最終主產物於2-8°C中最多可貯存18個月。 B 製備流行性感冒癌苗 以如上述A部分中所敘述之方法製備三種病毒株（A/新卡 多尼亞 /20/99(HlNl) IVR-116、A/ 巴拿馬 /2007/99(H3N2) Resvir-17及B/約翰尼斯堡/5/99)之單價最終主產物。 集合 集合適量之單價最終主產物，使A/新卡多尼亞 /20/99(HlNI)IVR-116、A/巴拿馬 12007/99(H3N2)Resvir-17 之最 終HA濃度分別為60微克/毫升，且B/約翰尼斯堡/5/99之最終 HA濃度為68微克/毫升。將土溫80、崔坦X-100及丁二酸-α-生育醇酯分別調整至1，000微克/毫升、110微克/毫升及160 微克/毫升。以磷酸鹽緩衝食鹽水將最終量調整為3升。最 後以0.8微米乙酸纖維素膜過濾三價集合物以獲得三價最 終主產物。將三價最終主產物裝填至注射器中，每支0.165 毫升以上。 疫苗投藥 疫苗預先裝填入注射器中，並藉皮内注射投藥至三角肌 部位。皮内注射（ID)針頭係如ΕΡ 1092444所述，具有皮膚 穿透限制器以確保適當之皮内注射。由於在注射部位形成 風疹塊（丘疹）即表示ID投藥之良好品質，因此於接種30分 鐘後研究者偕同實驗對象測量精確風疹塊尺寸。 每一劑（100微升）中包含下列成分： -45 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X ·29了公:f.) 1228420 A7 B7 五、發明説明（43 ) 來自三種流行性感冒病毒株之血 球凝集素 A/新卡多尼亞/20/99 ： 6·〇微克 A/巴拿馬/2007/99 : 6·〇微克 B/約翰尼斯堡5/99 : 6-0微克 乙基汞硫代水楊酸鋼防腐劑 : 〇·4_〇·8 微克 B 比較上述疫苗及標準三價裂解流行性感冒疫苗：福祿 澳力克司。所提供的福祿澳力克司疫苗係預先裝填之注射 器並藉肌肉注射投藥至三角肌。使用長度至少2.5公分/1英 吋（23號標準規格）針頭以確保適當之肌肉注射。 每一劑（0.5毫升）含下列成分： 球g 良自三種流行性感冒病毒株之血 连集素 A/新卡多尼亞/20/99 : 15.0微克 A/巴拿馬/2007/99 : 15.0微克 B/約翰尼斯堡5/99 15.0微克 乙基汞硫代水楊酸鈉防腐劑 ： _50.0微克__ 結果 疫苗投藥時全體受試人之平均年齡為7().4±62歲之標準 偏差（S.D.)，女性/男性比例為17 ·Μ。 -46 - 财 s 时料(cns)績格--—--- 1228420 A7 B7 五、發明説明（44 ) 免疫原性結果：衍生性免疫原性可變因素分析如下： 可變因素 流行性感冒-低乙 基汞硫代水楊酸鋼 疫苗 ID(N=65) 福祿澳力克司標準 疫苗 IM(N=65) GMT GMT LL UL GMT LL UL A/新卡多尼亞 PRE 99.5 76.9 128.7 90.0 70.1 115.7 POST 165.1 129.2 211.0 174.3 133.3 227.9 A/巴拿馬 PRE 75.5 54.7 104.2 69.2 51.9 92.4 POST 128.6 99.1 166.8 164.3 126.0 214.1 B/約翰尼斯堡 PRE 236.0 187.7 296.8 222.6 176.9 280.2 POST 341.2 276.0 421.7 402.4 312.1 518.9 血清轉化比率 % LL UL % LL UL A/新卡多尼亞 15.4 7.6 26.8 18.5 9.9 30.0 A/巴拿馬 20.0 11.1 31.8 29.2 18.6 41.8 B/約翰尼斯堡 92 3.5 19.0 16.9 8.8 28.3 轉化係數 GMT LL UL GMT LL UL A/新卡多尼亞 1.7 1.4 2.0 1.9 1.6 2.3 A/巴拿馬 1.7 1.4 2.1 2.4 1.9 3.0 B/約翰尼斯堡 1.4 1.2 1.7 1.8 1.5 2.1 血清保護比例 % LL UL % LL UL A/新卡多尼亞 PRE 87.7 77.2 94.5 90.8 81.0 96.5 POST 92.3 83.0 97.5 96.9 ： 89.3 99.6 -47 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1228420 A7 B7 五、發明説明（45 ) A/巴拿馬 PRE 75.4 63.1 85.2 81.5 70.0 90.1 POST 90.8 81.0 96.5 93.8 85.0 98.3 B/約翰尼斯堡 PRE 98.5 91.7 100.0 96.9 89.3 99.6 POST 100.0 94.5 100.0 98.5 91.7 100.0 N :有結果之試驗對象數目；％ :在規定變數範圍内之病患比例； LL/UL: 95% CI之上限或下限;Pre ··疫苗投藥前；Post :疫苗投藥後21天 10/65 (15.4%)的接種者有注射部位疼痛現象，此為福祿 澳力克司IM投藥後最常見之症狀。於ID組，3/65(4.6%)的接 種者有疼痛現象。其差異具統計學意義（p=0.038;費雪精準 檢定（Fisher exact test))。因此，經ID遞送之低乙基汞硫代 水楊酸鋼含量產品較佳。 結論 對老年族群以ID及IM投予低乙基汞硫代水楊酸鈉流行 性感冒疫苗皆可提供100%血清保護。 雖然ID組僅接受少於2.5倍之抗原，但以幾何平均數力 價、血清保護率、血清轉化率及轉化係數而言，可發現IM 及ID接種之個體對接種所產生的反應相當。對二種治療組 而言，疫苗-相關引發性/自發性全身性症狀的總發生率並 無可識別的差異。 實例10-皮内注射投予低乙基汞硫代水楊酸鋼流行性感冒 疫苗 使用一般針頭經ID投予天竺鼠以如實例9所述方法（除集 合係獨立進行以及疫苗未填充至注射器外）所製備之低乙 -48 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210X297公釐） 1228420 A 7 B7 五、發明説明（46 ) 基汞硫代水楊酸鈉裂解病毒流行性感冒疫苗以便評估其免 疫原性。 藉鼻内投予完整不活化三價流行性感冒病毒(總量200微 升中含各類HA各5微克）使每組5隻動物接觸抗原。於接觸 抗原後28天藉皮内注射或肌肉注射途徑接種動物。使用一 般針頭於天竺鼠背部投予〇· 1毫升之皮内注射劑量，其中含 0.1、0.3、或1.0微克之三價低乙基汞硫代水楊酸鈉裂解病 毒流行性感冒疫苗。另將1 .〇微克三價低乙基汞硫代水楊酸 納裂解病毒流行性感冒疫苗之肌肉注射劑量投予在天筑鼠 後腿’其容量為0.1毫升。組別如下： •第1組-0·1微克三價低乙基汞硫代水楊酸鈉裂解病毒流 行性感冒疫苗ID ; •第2組-〇·3微克三價低乙基汞硫代水楊酸鈉裂解病毒流 行性感冒疫苗ID ; 第3組-1 ·〇微克二價低乙基汞硫代水楊酸鋼裂解病毒流 行性感冒疫苗ID ; •第4組_ 1·〇微克三價低乙基汞硫代水楊酸鈉裂解病毒流 行性感冒疫苗IM ; 接種後14天，犧牲動物並使用標準血球凝集作用抑制分 析（HI)評估接種誘發之抗體力價。結果顯示於圖丨。所有三 種病毒株皆可接種誘發出強烈m反應。未注意到有明顯的 劑量相關反應表示以ID途徑投予非常低量之低乙基汞硫代 水楊酸鈉抗原仍可誘發非常有效的m抗體反應。藉出或刚 接種所誘發之m力價間並無明顯差異。因此，於天竺氣所 < 49 - 張尺度適用塌家 1228420 A7 ____ B7 _ 五、發明説明（47 ) 獲得之結果證實無論藉ID途徑或IM途徑輸送低乙基录硫 代水楊酸鈉含量三價裂解病毒流行性感冒抗原皆可謗發動 物類似程度之HI抗體。 實例11-皮内注射輸送低乙某汞硫代水揚酸鈉含量、經_佐劑 虛理之流行性感冒痏钴 計劃 於第0日以200微升之5微克三價完整不活化流行性感冒 病毒經鼻内投藥使天竺鼠接觸抗原。 接種-第28天-接種含每種病毒株各0.1微克HA之如實例9 所述製備之三價裂解流行性感冒病毒疫苗（但其集合步驟 所產生之各抗原最終濃度為1.0微克/毫升，而非如實例9之 6〇微克/毫升，如此可產生每1⑼微升含〇·1微克抗原的劑 量）。最終三價調配物係使用結核菌素注射器以皮内〉主射投 藥，經佐劑處理或不經佐劑處理，劑量為1〇〇微升。 犧牲-第42曰。 藉HI分析（第0、28、42日）測量抗體反應評估佐劑處理作 用。 所有ID試驗係使用標準針頭進行。 結果 G1-G5係指5組天竺鼠，每組5隻。 G1低乙基汞硫代水楊酸鈉含量三價裂解病毒0·1微克 G2低乙基汞硫代水楊酸鈉含量三價裂解病毒〇·1微克 屮3D-MPL 50微克 G3低乙基汞硫代水楊酸鈉含量三價裂解病毒0· 1微克 -50 -
1228420 A7 B7 五、發明説明（48 ) + 3D-MPL 10 微克 G4 低乙基汞硫代水楊酸鈉含量三價裂解病毒0.1微克 + 3D-MPLin 50微克 + QS21 50微克 G5 低乙基汞硫代水楊酸鈉含量三價裂解病毒0.1微克 + 3D-MPLin 10微克 + QS21 10 微克 3D-MPLin + QS21係指一種佐劑調配物，其包括一種含有 膽固醇的單層載體，其具有含二油醯基卵磷脂之雙層脂 質，其中QS 21及3D-MPL係與雙層脂質結合，或嵌於雙層 脂質中。該佐劑調配物係見述於EP 0 822 83 1 B，其揭露内 容在此併為參考文獻。 抗-A/新卡多尼亞120/99之HI力價 NC 免疫前 補強前 補強後 G1 5 10 92 G2 5 10 70 G3 5 11 121 G4 7 9 368 G5 5 10 243 抗-A/巴拿馬/2007/99之HI力價 P 免疫前 補強前 補強後 G1 5 485 7760 G2 5 279 7760 G3 5 485 8914 G4 7 485 47051 G5 5 320 17829 -51 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210 X 297公釐） 1228420 A7 B7 五、發明説明（49 ) 抗-B/約翰尼斯堡/5/99之HI力價 J 免疫前 補強前 補強後 G1 5 23 184 G2 5 11 121 G3 5 11 70 G4 6 15 557 G5 5 13 320 因此，不論是否使用佐劑，低乙基汞硫代水楊酸鈉三價 裂解病毒之流行性感冒抗原皆為一種有效之抗原體，當經 由ID或IM途徑投藥時，其可謗發強烈HI反應。這些反應顯 示出其可至少引發相當於標準福祿澳力克司製備物所謗發 之反應。 實例12_藉皮内注射對豬投予含乙基汞硫代水楊酸鈉及不 含乙基汞硫代水楊酸鈉痛苗之比較。 為評估裂解病毒流行性感冒疫苗（包含及不含乙基汞硫 代水楊酸鈉）之免疫原性，採用經ID途徑接種已接觸抗原的 豬模式。因大多數的人口都至少經歷過一次流行性感冒感 染’所以流行性感冒疫苗必須能補強業已存在之免疫反 應。因此所採用的動物為已接觸抗原者，如此可儘可能摹 擬人類的實際情況。 於此試驗中，4週齡豬藉鼻内投藥途徑初次接觸抗原。6 組（每組五隻）動物所接觸抗原情況如下： 第1組-於第〇日及14日初始接種二次三價完整不活化病 母（母種HA各50微克），第2組-於第〇日及14日初始接種二次 -52 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（2〗0〆297公釐） 1228420 A7 B7___ 五、發明説明（50 ) 三價完整不活化病毒（每種HA各50微克）；第3組-於第〇曰初 始接種單次三價完整不活化病毒（每種HA各50微克）；第4 組-於第0日及14日初始接種二次三價完整不活化病毒（每 種HA各25微克）；第5組-於第0日初始接種單次三價完整不 活化病毒（每種HA各25微克）；第6組-於第0日及14日初始接 種二次三價完整不活化病毒（每種HA各12.5微克）。 於最後接觸抗原後第28日，藉ID途徑以含每HA各3微克 之100微升三價裂解病毒抗原（病毒株A/新卡多尼亞H1N1、 A/巴拿馬H3N2、及B/約翰尼斯堡）接種動物。第1組接受含 乙基汞硫代水楊酸鈉防腐劑之標準福祿澳力克司做為疫苗 抗原。所有其它各組接受不含防腐劑之疫苗抗原。 本試驗中所獲得之HI結果見於圖2(以鼻内給藥途徑接種 給予含有或不含乙基汞硫代水楊酸鈉之3微克三價流行性 感冒抗原對於事先接受各種抗原劑量作為初始接觸抗原的 豬所產生之抗流行.性感冒HI力價）。 於本試驗中所引發的抗B病毒株之HI力價相當低，而抗 A/H3N2病毒株之HI力價則相當高。當初次接觸抗原之劑量 減低時，接種所得之反應效果較佳。幾乎在所有的個案中， 降低抗原濃度或減少初始接種次數（係指對兩次以5〇微克 進行初始接觸抗原者而了）可提高對接種之反應。對第1及2 組以50微克初始接種二次之動物而言，其對疫苗接種之反 應並不明顯’這點表示在此情況下不含防腐劑抗原（第2組） 之功能至少與福祿澳力克司（第1組）相同。以不含防腐劑之 三價流行性感冒抗原藉ID途徑投予各種已接觸抗原動物 -53 - 本紙張尺度逋用中國國家標準(CNS) Λ4規格（210 X 297公發） 1228420 A7 B7 五、發明説明（51 ) ，且該反應甚 (第3-6組），其對接種疫苗之強烈反應很明顯 至可發現在B病毒株，雖然其HI力價仍低。 -54 - 本紙張足度適用中國國家標準(CNS) Λ4規格（210X 297公釐)

Claims (1)

  1. A8 p 04號專利申請案 g 利範圍替換本(93年11月）D8 . 捕奈 -----~IT1,:,.: 1111 ---------Π > 鲁 _ 六、申請專利範圍 1 · 一種不活化流行性感冒病毒製備物，其所包含之血球凝 集素抗原係不以乙基汞硫代水楊酸鈉安定’或僅以低量 乙基汞硫代水楊酸鈉安定，其中_該血球凝集素係藉SRD 分析檢測，及其中該製備物包含可安定Η A的足量丁二酸 -ce-生育醇g旨。 2·如申請專利範圍第1項之不活化流行性感冒病毒製備 物，其中丁二酸-α-生育醇酯之濃度介於1微克/毫升至10 毫克/毫升之間。 3·如申請專利範圍第2項之不活化流行性感冒病毒製備 物，其中之丁二酸-α-生育醇酯之濃度介於10至500微克/ 愛升之間。 4·如申請專利範圍第1至3項中任一項之不活化流行性感冒 病毒製備物，其中該流行性感冒病毒抗原製備物係選包 括下列群組：裂解病毒病毒抗原製備物、次單位抗原、 化學不活化完整病毒或其它不活化完整病毒。 5·如申請專利範圍第4項之不活化流行性感冒病毒製備 物，其中該流行性感冒抗原製備物係一種裂解病毒抗原 製備物。 6·如申請專利範圍第1至3項中任一項之不活化流行性感冒 病毒製備物，其同時包括Α及Β兩種病毒株之血球凝集 素。 7·如申請專利範圍第6項之不活化流行性感冒病毒製備 物，其係一種三價流行性感冒病毒製備物。 8 ·如申請專利範圍第1至3項中任一項之不活化流行性感冒 78621-931103.doc , 1 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公复) 1228420 - 〇〇 C8 D8 六、申請專利範圍 病毒製備物，其中包含安定化B病毒株流行性感冒HA。 9. 一種流行性感冒疫苗，其包括如申請專利範圍第1至3項 中任一項之流行性感冒病毒製備物。 1 0.如申請專利範圍第9項之流行性感冒疫苗，其中藉SRD分 析測量所得之流行性感冒病毒病毒株之血球凝集素抗原 或各病毒株血球凝集素抗原之濃度為每毫升1-1000微 克。 11. 如申請專利範圍第9項之流行性感冒疫苗，其額外包括一 種佐劑。 12. —種製備安定血球凝集素抗原之方法，該方法包括在純 化抗原時加入α-生育酚或其衍生物，如丁二酸-ce-生育醇 酯。 1 3 · —種如申請專利範圍第1至3項中任一項之不活化流行 性感冒病毒製備物於製造用以預防病患之流行性感冒感 染或疾病之疫苗之用途。 14.如申請專利範圍第13項之用途，其中該疫苗係藉由皮内 注射、鼻内投藥、肌肉注射、口服或皮下注射輸送。 1 5. —種於製造流行性感冒疫苗時以α-生育酚或其衍生物做 為血球凝集素安定劑之用途。 78621-931103.doc - 2 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐）
TW091111304A 2001-05-30 2002-05-28 Novel vaccine composition TWI228420B (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB0113083A GB0113083D0 (en) 2001-05-30 2001-05-30 Novel compounds
GB0204116A GB0204116D0 (en) 2002-02-21 2002-02-21 Novel vaccine composition

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TWI228420B true TWI228420B (en) 2005-03-01

Family

ID=30445235

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW091111304A TWI228420B (en) 2001-05-30 2002-05-28 Novel vaccine composition

Country Status (30)

Country Link
US (2) US7316813B2 (zh)
EP (3) EP2495314A1 (zh)
JP (1) JP4074582B2 (zh)
KR (1) KR100871021B1 (zh)
CN (2) CN1279165C (zh)
AR (1) AR036039A1 (zh)
AT (1) ATE420159T1 (zh)
AU (2) AU2006200742C9 (zh)
BR (1) BRPI0210076B8 (zh)
CA (1) CA2448208C (zh)
CO (1) CO5540349A2 (zh)
CY (1) CY1108930T1 (zh)
CZ (1) CZ298697B6 (zh)
DE (1) DE60230760D1 (zh)
DK (1) DK1407008T3 (zh)
ES (1) ES2318020T3 (zh)
FR (1) FR13C0072I1 (zh)
HK (1) HK1067891A1 (zh)
HU (1) HU229368B1 (zh)
IL (2) IL158931A (zh)
MX (1) MXPA03010944A (zh)
MY (1) MY134424A (zh)
NO (1) NO335212B1 (zh)
NZ (1) NZ529755A (zh)
PL (1) PL206435B1 (zh)
PT (1) PT1407008E (zh)
SI (1) SI1407008T1 (zh)
TW (1) TWI228420B (zh)
WO (1) WO2002097072A2 (zh)
ZA (1) ZA200309250B (zh)

Families Citing this family (111)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU764368B2 (en) * 1999-09-24 2003-08-14 Smithkline Beecham Biologicals (Sa) Intranasal influenza virus vaccine
GB9923176D0 (en) 1999-09-30 1999-12-01 Smithkline Beecham Biolog Novel composition
US20100221284A1 (en) * 2001-05-30 2010-09-02 Saech-Sisches Serumwerk Dresden Novel vaccine composition
MY134424A (en) * 2001-05-30 2007-12-31 Saechsisches Serumwerk Stable influenza virus preparations with low or no amount of thiomersal
US20060110406A1 (en) 2003-02-25 2006-05-25 Medimmune Vaccines, Inc. Refrigerator-temperature stable influenza vaccine compositions
KR101251902B1 (ko) 2003-02-25 2013-04-08 메디뮨 엘엘씨 인플루엔자 백신 조성물의 제조 방법
CA2890962A1 (en) 2004-09-09 2006-03-16 Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh & Co. Kg Decreasing potential iatrogenic risks associated with influenza vaccines
EP2769735B1 (en) * 2004-10-06 2017-04-19 MedImmune, LLC Refrigerator-temperature stable influenza vaccine compositions
CA2586690A1 (en) * 2004-11-03 2006-06-15 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Influenza vaccination
US9161905B2 (en) * 2005-01-12 2015-10-20 Ocular Research Of Boston, Inc. Dry eye treatment
NZ561823A (en) 2005-03-23 2010-04-30 Glaxosmithkline Biolog Sa Use of an influenza virus and an oil-in-water emulsion adjuvant to induce cd4 t-cell and/or improved b-memory cell response
AP2745A (en) * 2005-08-02 2013-09-30 Novartis Vaccines & Diagnostic Reducing interference between oil-containing adjuvants and surfactant-containing antigens
NZ567817A (en) 2005-11-01 2012-01-12 Novartis Vaccines & Diagnostic Cell-derived viral vaccines with low levels of residual cell DNA by beta-propiolactone treatment
US11707520B2 (en) 2005-11-03 2023-07-25 Seqirus UK Limited Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture
CN102727885A (zh) 2005-11-04 2012-10-17 诺华疫苗和诊断有限公司 包含颗粒佐剂和免疫增强剂组合的流感疫苗
WO2007052061A2 (en) * 2005-11-04 2007-05-10 Novartis Vaccines And Diagnostics Srl Emulsions with free aqueous-phase surfactant as adjuvants for split influenza vaccines
DK2368572T3 (da) 2005-11-04 2020-05-25 Seqirus Uk Ltd Adjuvansvacciner med ikke-virionantigener fremstillet fra influenza-virusser dyrket i cellekultur
US20090304742A1 (en) * 2005-11-04 2009-12-10 Novartis Vaccines And Diagnostics Srl Influenza vaccines with reduced amount of emulsion adjuvant
JP2009514839A (ja) 2005-11-04 2009-04-09 ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス エスアールエル サイトカイン誘導剤を含むアジュバントインフルエンザワクチン
TWI457133B (zh) 2005-12-13 2014-10-21 Glaxosmithkline Biolog Sa 新穎組合物
WO2007085969A2 (en) 2006-01-27 2007-08-02 Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh & Co Kg Influenza vaccines containing hemagglutinin and matrix proteins
JP2009534303A (ja) * 2006-03-24 2009-09-24 ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス ゲーエムベーハー アンド カンパニー カーゲー 冷蔵しないインフルエンザワクチンの保存
PL2054431T3 (pl) 2006-06-09 2012-07-31 Novartis Ag Konformery adhezyn bakteryjnych
EP2043682B1 (en) 2006-07-17 2014-04-02 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Influenza vaccine
PT2043682E (pt) 2006-07-17 2014-07-11 Glaxosmithkline Biolog Sa Vacina da influenza
GB0614460D0 (en) 2006-07-20 2006-08-30 Novartis Ag Vaccines
CA3016948A1 (en) 2006-09-11 2008-03-20 Seqirus UK Limited Making influenza virus vaccines without using eggs
US8097419B2 (en) 2006-09-12 2012-01-17 Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc Compositions and method for rapid, real-time detection of influenza A virus (H1N1) swine 2009
US9481912B2 (en) 2006-09-12 2016-11-01 Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc Compositions and methods for detecting and identifying nucleic acid sequences in biological samples
US8080645B2 (en) 2007-10-01 2011-12-20 Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc Biological specimen collection/transport compositions and methods
US8652782B2 (en) 2006-09-12 2014-02-18 Longhorn Vaccines & Diagnostics, Llc Compositions and methods for detecting, identifying and quantitating mycobacterial-specific nucleic acids
EP2086582B1 (en) 2006-10-12 2012-11-14 GlaxoSmithKline Biologicals s.a. Vaccine comprising an oil in water emulsion adjuvant
NZ577405A (en) 2006-12-06 2012-08-31 Novartis Ag Vaccines including antigen from four strains of influenza virus
TW200908994A (en) 2007-04-20 2009-03-01 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
CA2692200A1 (en) 2007-06-27 2008-12-31 Novartis Ag Low-additive influenza vaccines
US9683256B2 (en) 2007-10-01 2017-06-20 Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc Biological specimen collection and transport system
US11041215B2 (en) 2007-08-24 2021-06-22 Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc PCR ready compositions and methods for detecting and identifying nucleic acid sequences
US10004799B2 (en) 2007-08-27 2018-06-26 Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc Composite antigenic sequences and vaccines
EP2772267B1 (en) 2007-08-27 2016-04-27 Longhorn Vaccines and Diagnostics, LLC Immunogenic compositions and methods
BRPI0816130A2 (pt) * 2007-08-28 2015-02-24 Baxter Int Métodos para a fabricação de uma preparação e para aumentar a resistência a uma infecção viral em um indivíduo.
DK2535428T3 (en) 2007-10-01 2015-11-23 Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc Biological prøvesamlings- and transport system, and methods of using
US11041216B2 (en) 2007-10-01 2021-06-22 Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc Compositions and methods for detecting and quantifying nucleic acid sequences in blood samples
GB0810305D0 (en) 2008-06-05 2008-07-09 Novartis Ag Influenza vaccination
GB0818453D0 (en) 2008-10-08 2008-11-12 Novartis Ag Fermentation processes for cultivating streptococci and purification processes for obtaining cps therefrom
CA2710480A1 (en) 2007-12-24 2009-07-02 Novartis Ag Assays for adsorbed influenza vaccines
US8506966B2 (en) * 2008-02-22 2013-08-13 Novartis Ag Adjuvanted influenza vaccines for pediatric use
EP2889042A3 (en) 2008-03-18 2015-10-14 Novartis AG Improvements in preparation of influenza virus vaccine antigens
RS54306B1 (en) 2008-04-16 2016-02-29 Glaxosmithkline Biologicals S.A. THE VACCINE
CA2741961A1 (en) 2008-11-05 2010-05-14 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Novel method
US20120093860A1 (en) * 2009-02-10 2012-04-19 Novartis Ag Influenza vaccines with increased amounts of h3 antigen
PL2396032T3 (pl) 2009-02-10 2017-05-31 Seqirus UK Limited Szczepionki przeciw grypie o obniżonych zawartościach skwalenu
EP2942062A1 (en) 2009-02-10 2015-11-11 Novartis AG Influenza vaccine regimens for pandemic-associated strains
USH2284H1 (en) 2009-04-27 2013-09-03 Novartis Ag Vaccines for protecting against influenza
EP2401384B1 (en) 2009-05-21 2012-10-03 Novartis AG Reverse genetics using non-endogenous pol i promoters
US9907746B2 (en) 2009-07-06 2018-03-06 Variation Biotechnologies, Inc. Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom
CA2767392C (en) 2009-07-06 2017-03-14 Variation Biotechnologies, Inc. Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom
AU2010277310B2 (en) 2009-07-31 2015-01-15 Seqirus UK Limited Reverse genetics systems
SG178904A1 (en) 2009-09-10 2012-04-27 Novartis Ag Combination vaccines against respiratory tract diseases
PL2491117T3 (pl) 2009-10-20 2014-05-30 Novartis Ag Udoskonalone sposoby odzyskiwania wirusa wykorzystujące odwrotną genetykę
GB0918830D0 (en) * 2009-10-27 2009-12-09 Glaxosmithkline Biolog Niederl Process
GB0919117D0 (en) 2009-10-30 2009-12-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Process
DE102009056871A1 (de) 2009-12-03 2011-06-22 Novartis AG, 4056 Impfstoff-Adjuvantien und verbesserte Verfahren zur Herstellung derselben
DE102009056884B4 (de) 2009-12-03 2021-03-18 Novartis Ag Impfstoff-Adjuvantien und verbesserte Verfahren zur Herstellung derselben
BR112012013426B8 (pt) 2009-12-03 2021-05-25 Novartis Ag métodos para a fabricação de uma emulsão de óleo-em-água, para preparar uma composição de vacina e para preparar um kit de vacina
DE102009056883B4 (de) 2009-12-03 2012-08-16 Novartis Ag Impfstoff-Adjuvantien und verbesserte Verfahren zur Herstellung derselben
EP2601933B1 (en) 2009-12-03 2015-10-07 Novartis AG Hydrophilic filtration during manufacture of vaccine adjuvants
FI2638895T3 (fi) 2009-12-03 2024-06-20 Seqirus Uk Ltd Ainesosien kierrätys emulsioiden homogenisoinnin aikana
KR20130048208A (ko) 2010-03-11 2013-05-09 이뮨 디자인 코포레이션 인플루엔자 백신
JP6072677B2 (ja) 2010-05-06 2017-02-01 ノバルティス アーゲー 微生物の不活化のための有機ペルオキシド化合物
WO2011141819A1 (en) 2010-05-12 2011-11-17 Novartis Ag Improved methods for preparing squalene
CN103025350A (zh) 2010-05-21 2013-04-03 诺华有限公司 流感病毒的重配方法
CA2801149A1 (en) 2010-06-01 2011-12-08 Novartis Ag Concentration of vaccine antigens without lyophilization
PL2575873T3 (pl) 2010-06-01 2016-06-30 Novartis Ag Zatężanie i liofilizacja antygenów szczepionkowych grypy
WO2011154976A2 (en) 2010-06-08 2011-12-15 Panacea Biotec Limited Improved influenza vaccine
CA2840079C (en) 2010-07-06 2018-07-03 Variation Biotechnologies Inc. Compositions and methods for treating influenza
CA2808965C (en) 2010-08-20 2020-01-07 Novartis Ag Soluble needle arrays for delivery of influenza vaccines
CA2812135A1 (en) 2010-09-07 2012-03-15 Novartis Ag Generic assays for detection of mammalian reovirus
CA2815275C (en) 2010-10-27 2023-09-19 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Immunogenic compositions derived from shigella
WO2012097346A1 (en) 2011-01-13 2012-07-19 Variation Biotechnologies, Inc. Compositions and methods for treating viral infections
AU2012205315B2 (en) 2011-01-13 2017-05-04 Variation Biotechnologies, Inc. Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom
JP5798356B2 (ja) * 2011-04-06 2015-10-21 一般財団法人化学及血清療法研究所 新規インフルエンザワクチン安定化剤
GB201216121D0 (en) 2012-09-10 2012-10-24 Novartis Ag Sample quantification by disc centrifugation
CA2852857A1 (en) 2011-10-20 2013-04-25 Novartis Ag Adjuvanted influenza b virus vaccines for pediatric priming
US20140328876A1 (en) 2011-11-18 2014-11-06 Variation Biotechnologies Inc. Synthetic derivatives of mpl and uses thereof
EP2802353A4 (en) 2012-01-12 2015-12-02 Variation Biotechnologies Inc COMPOSITIONS AND METHOD FOR THE TREATMENT OF VIRUS INFECTIONS
CA3207612A1 (en) 2012-01-26 2013-08-01 Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc Composite antigenic sequences and vaccines
US20150079077A1 (en) 2012-01-27 2015-03-19 Variation Biotechnologies, Inc. Methods and compositions for therapeutic agents
ES2628301T3 (es) 2012-03-02 2017-08-02 Seqirus UK Limited Recombinación de virus de gripe
GB201205189D0 (en) 2012-03-23 2012-05-09 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel medical use
US20130315955A1 (en) * 2012-04-13 2013-11-28 Protein Sciences Corporation Stability and potency of hemagglutinin
WO2013182498A1 (en) 2012-06-04 2013-12-12 Novartis Ag Improved safety testing
GB201218195D0 (en) 2012-10-10 2012-11-21 Istituto Zooprofilattico Sperimentale Delle Venezie Composition
MX2015006927A (es) 2012-12-03 2016-02-05 Novartis Ag Redistribucion de virus de la influenza.
WO2014108515A1 (en) 2013-01-10 2014-07-17 Novartis Ag Influenza virus immunogenic compositions and uses thereof
CN111334530A (zh) 2013-03-13 2020-06-26 诺华股份有限公司 乙型流感病毒重配
JP2016521282A (ja) 2013-05-10 2016-07-21 ノバルティス アーゲー インフルエンザワクチンにおけるナルコレプシーのリスクの回避
DE202013005130U1 (de) 2013-06-05 2013-09-10 Novartis Ag Influenza Virus Reassortierung
DE202013005100U1 (de) 2013-06-05 2013-08-26 Novartis Ag Influenza Virus Reassortierung
BR112015030582A2 (pt) 2013-06-06 2017-08-29 Novartis Ag Segmento de hemaglutinina da gripe quimérico e de neuraminidase quimérico, proteína de hemaglutinina quimérica, vírus da gripe rearranjado, métodos para preparação de um vírus da gripe rearranjado e para preparação de uma vacina e sistema de expressão
CN104436157A (zh) 2013-09-23 2015-03-25 恩金生物有限公司 流感疫苗和治疗
JP6487850B2 (ja) * 2013-11-29 2019-03-20 テルモ株式会社 アジュバント組成物およびこれを含むワクチン組成物、並びにこれらの製造方法
WO2016087479A1 (en) 2014-12-02 2016-06-09 Novartis Ag Manufacture of surfactant-containing compositions
WO2016183292A1 (en) 2015-05-14 2016-11-17 Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc Rapid methods for the extraction of nucleic acids from biological samples
JP2018524323A (ja) 2015-06-26 2018-08-30 セキラス ユーケー リミテッド 抗原がマッチしたインフルエンザワクチン
US10416171B2 (en) 2015-07-07 2019-09-17 Seqirus UK Limited Influenza potency assays
WO2017167768A1 (en) 2016-03-28 2017-10-05 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Novel vaccine composition
GB201614799D0 (en) * 2016-09-01 2016-10-19 Glaxosmithkline Biologicals Sa Compositions
CA3127639A1 (en) 2019-01-30 2020-08-06 Glaxosmithkline Biologicals Sa Oil/surfactant mixtures for self-emulsification
MX2022006005A (es) 2019-11-18 2022-10-27 Seqirus Pty Ltd Metodo para producir virus de la influenza reagrupados.
RU2754398C1 (ru) * 2020-06-25 2021-09-01 Общество с ограниченной ответственностью «ФОРТ» Способ получения четырехвалентной вакцины для профилактики гриппа
EP4171514A1 (en) 2020-06-30 2023-05-03 Seqirus UK Limited Cold filtration of oil-in-water emulsion adjuvants

Family Cites Families (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5520A (en) 1848-04-18 Oegan-pipb
US639A (en) 1838-03-17 of boston
US4270537A (en) 1979-11-19 1981-06-02 Romaine Richard A Automatic hypodermic syringe
DD155875A1 (de) 1980-12-31 1982-07-14 Willy Nordheim Verfahren zur herstellung eines ballaststoffarmen inaktivierten influenzaimpfstoffes
US4436727A (en) 1982-05-26 1984-03-13 Ribi Immunochem Research, Inc. Refined detoxified endotoxin product
DD211444A3 (de) 1982-08-19 1984-07-11 Saechsisches Serumwerk Verfahren zur herstellung von influenza-impfstoffen
SE8205892D0 (sv) 1982-10-18 1982-10-18 Bror Morein Immunogent membranproteinkomplex, sett for framstellning och anvendning derav som immunstimulerande medel och sasom vaccin
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
DD300833A7 (de) 1985-10-28 1992-08-13 Saechsische Landesgewerbefoerd Verfahren zur herstellung von inaktivierten influenza-vollvirusimpfstoffen
CA1283827C (en) 1986-12-18 1991-05-07 Giorgio Cirelli Appliance for injection of liquid formulations
GB8704027D0 (en) 1987-02-20 1987-03-25 Owen Mumford Ltd Syringe needle combination
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
CA1331443C (en) 1987-05-29 1994-08-16 Charlotte A. Kensil Saponin adjuvant
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4940460A (en) 1987-06-19 1990-07-10 Bioject, Inc. Patient-fillable and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
US5339163A (en) 1988-03-16 1994-08-16 Canon Kabushiki Kaisha Automatic exposure control device using plural image plane detection areas
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
FR2638359A1 (fr) 1988-11-03 1990-05-04 Tino Dalto Guide de seringue avec reglage de la profondeur de penetration de l'aiguille dans la peau
AU626049B2 (en) * 1989-05-29 1992-07-23 Lion Corporation Method for preparing vaccine for dental caries and vaccinal compositions for dental caries used as nasal drop
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5190521A (en) 1990-08-22 1993-03-02 Tecnol Medical Products, Inc. Apparatus and method for raising a skin wheal and anesthetizing skin
US5527288A (en) 1990-12-13 1996-06-18 Elan Medical Technologies Limited Intradermal drug delivery device and method for intradermal delivery of drugs
GB9118204D0 (en) 1991-08-23 1991-10-09 Weston Terence E Needle-less injector
SE9102652D0 (sv) 1991-09-13 1991-09-13 Kabi Pharmacia Ab Injection needle arrangement
CA2085827C (en) 1991-12-23 2003-10-14 Lucas A. T. Hilgers Adjuvant composition containing synthetic hydrophobic lipopolysaccharide
IL101007A (en) * 1992-02-18 1997-08-14 Pharmos Ltd Dry stable compositions prepared by lyophilization
US5328483A (en) 1992-02-27 1994-07-12 Jacoby Richard M Intradermal injection device with medication and needle guard
JP3755890B2 (ja) 1992-06-25 2006-03-15 スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス（ソシエテ・アノニム） アジュバント含有ワクチン組成物
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5569189A (en) 1992-09-28 1996-10-29 Equidyne Systems, Inc. hypodermic jet injector
US5334144A (en) 1992-10-30 1994-08-02 Becton, Dickinson And Company Single use disposable needleless injector
EP0812593B8 (en) 1993-03-23 2010-11-10 SmithKline Beecham Biologicals S.A. Vaccine compositions containing 3-0 deacylated monophosphoryl lipid a
AU5543294A (en) * 1993-10-29 1995-05-22 Pharmos Corp. Submicron emulsions as vaccine adjuvants
GB9326253D0 (en) * 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
WO1995024176A1 (en) 1994-03-07 1995-09-14 Bioject, Inc. Ampule filling device
US5466220A (en) 1994-03-08 1995-11-14 Bioject, Inc. Drug vial mixing and transfer device
US5616487A (en) * 1994-09-15 1997-04-01 Aastrom Biosciences, Inc. Stabilized retrovirus compositions
AUPM873294A0 (en) 1994-10-12 1994-11-03 Csl Limited Saponin preparations and use thereof in iscoms
US5599302A (en) 1995-01-09 1997-02-04 Medi-Ject Corporation Medical injection system and method, gas spring thereof and launching device using gas spring
UA56132C2 (uk) 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
US5730723A (en) 1995-10-10 1998-03-24 Visionary Medical Products Corporation, Inc. Gas pressured needle-less injection device and method
ATE214603T1 (de) 1995-06-30 2002-04-15 American Cyanamid Co Stabile makrolide und makrolide imptstoff- zusammensetzungen
US20020165168A1 (en) * 1995-12-16 2002-11-07 Joachim Bunger Use of sugar derivatives as antimicrobial, antimycotic and/or antiviral active substances
US5893397A (en) 1996-01-12 1999-04-13 Bioject Inc. Medication vial/syringe liquid-transfer apparatus
GB9607549D0 (en) 1996-04-11 1996-06-12 Weston Medical Ltd Spring-powered dispensing device
US5919480A (en) * 1996-06-24 1999-07-06 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Liposomal influenza vaccine composition and method
US6403098B1 (en) 1996-09-26 2002-06-11 Merck & Co., Inc. Rotavirus vaccine formulations
DE19649895A1 (de) * 1996-12-02 1998-06-04 Henkel Kgaa Schäumende Körperreinigungsmittel
ATE444760T1 (de) * 1997-01-13 2009-10-15 Univ Emory Glutathion zur behandlung von influenzainfektionen
GB9705740D0 (en) * 1997-03-20 1997-05-07 Medeva Europ Ltd A method of preservation
EP0971739B1 (en) 1997-04-01 2004-10-06 Corixa Corporation Aqueous immunologic adjuvant compositions of monophosphoryl lipid a
US5993412A (en) 1997-05-19 1999-11-30 Bioject, Inc. Injection apparatus
GB9711990D0 (en) 1997-06-11 1997-08-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
JP4426091B2 (ja) * 1997-09-05 2010-03-03 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム サポニンを含有する水中油型エマルション
IT1298087B1 (it) 1998-01-08 1999-12-20 Fiderm S R L Dispositivo per il controllo della profondita' di penetrazione di un ago, in particolare applicabile ad una siringa per iniezioni
KR20010042573A (ko) * 1998-04-09 2001-05-25 장 스테판느 애쥬번트 조성물
FR2780278B1 (fr) * 1998-06-24 2001-01-19 Oreal Composition conditionnante et detergente et utilisation
DE19841796A1 (de) * 1998-09-12 2000-03-16 Beiersdorf Ag Kombinationen von Antiadhäsiva (Kohlenhydrate) und Mikrobiziden
DE60014076T2 (de) * 1999-04-19 2005-10-13 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Adjuvans-zusammensetzung, enthaltend saponin und ein immunstimulatorisches oligonukleotid
AUPQ233799A0 (en) * 1999-08-19 1999-09-09 Minister For Agriculture, Minister For Land And Water Conservation For And On Behalf Of The State Of New South Wales Recombinant sub-unit vaccine
CN1391483A (zh) * 1999-09-24 2003-01-15 史密丝克莱恩比彻姆生物有限公司 作为佐剂的聚氧乙烯脱水山梨醇酯和辛苯昔醇组合及其在疫苗中的应用
WO2001021152A1 (en) * 1999-09-24 2001-03-29 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Adjuvant comprising a polyxyethylene alkyl ether or ester and at least one nonionic surfactant
AU764368B2 (en) * 1999-09-24 2003-08-14 Smithkline Beecham Biologicals (Sa) Intranasal influenza virus vaccine
US6494865B1 (en) 1999-10-14 2002-12-17 Becton Dickinson And Company Intradermal delivery device including a needle assembly
TR200201048T2 (tr) * 1999-10-19 2002-08-21 The Procter & Gamble Company Soğuk algınlığı ve gribi andıran semptomların önlenmesi ve tedavisi için bileşimler
AR030829A1 (es) * 2000-10-02 2003-09-03 Smithkline Beecham Biolog Una formulacion de vacuna, procedimiento para la produccion de la misma, uso de dicha preparacion y un estuche para su administracion via intranasal
US20040096463A1 (en) * 2001-02-23 2004-05-20 Nathalie Garcon Novel vaccine
MY134424A (en) * 2001-05-30 2007-12-31 Saechsisches Serumwerk Stable influenza virus preparations with low or no amount of thiomersal
US9856414B2 (en) 2013-06-10 2018-01-02 Dober Chemical Corp. Compositions, systems and methods of making coated additive components

Also Published As

Publication number Publication date
CN101069744A (zh) 2007-11-14
AU2006200742C9 (en) 2015-03-26
FR13C0072I1 (fr) 2014-01-31
IL188834A0 (en) 2009-02-11
IL188834A (en) 2011-01-31
PL366990A1 (en) 2005-02-07
CN1533434A (zh) 2004-09-29
HUP0400445A2 (hu) 2004-07-28
US20080181914A1 (en) 2008-07-31
SI1407008T1 (sl) 2009-06-30
CZ298697B6 (cs) 2007-12-27
NZ529755A (en) 2005-11-25
IL158931A (en) 2008-04-13
ZA200309250B (en) 2005-05-25
CY1108930T1 (el) 2014-07-02
JP2004527264A (ja) 2004-09-09
CN101069744B (zh) 2012-04-25
ATE420159T1 (de) 2009-01-15
ES2318020T3 (es) 2009-05-01
CZ20033253A3 (cs) 2004-04-14
EP1407008B1 (en) 2009-01-07
EP2495314A1 (en) 2012-09-05
WO2002097072A8 (en) 2004-02-19
MY134424A (en) 2007-12-31
AU2006200742C1 (en) 2014-10-16
WO2002097072A2 (en) 2002-12-05
KR20040025682A (ko) 2004-03-24
AU2002344182C1 (en) 2014-11-06
PT1407008E (pt) 2009-02-26
BR0210076A (pt) 2004-06-22
KR100871021B1 (ko) 2008-11-27
AU2006200742B2 (en) 2010-05-27
CA2448208A1 (en) 2002-12-05
US20040241187A1 (en) 2004-12-02
PL206435B1 (pl) 2010-08-31
EP1407008A2 (en) 2004-04-14
BRPI0210076B1 (pt) 2020-01-07
MXPA03010944A (es) 2005-04-08
NO20035208D0 (no) 2003-11-24
DE60230760D1 (de) 2009-02-26
DK1407008T3 (da) 2009-04-27
HK1067891A1 (en) 2005-04-22
JP4074582B2 (ja) 2008-04-09
NO335212B1 (no) 2014-10-20
AR036039A1 (es) 2004-08-04
BRPI0210076A8 (pt) 2017-05-23
HUP0400445A3 (en) 2011-06-28
AU2006200742A1 (en) 2006-03-16
BRPI0210076B8 (pt) 2021-05-25
WO2002097072A3 (en) 2003-04-24
HU229368B1 (en) 2013-11-28
CN1279165C (zh) 2006-10-11
US7316813B2 (en) 2008-01-08
CA2448208C (en) 2011-11-29
CO5540349A2 (es) 2005-07-29
EP2039761A1 (en) 2009-03-25
AU2002344182B2 (en) 2006-01-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI228420B (en) Novel vaccine composition
JP6211555B2 (ja) 新規なワクチン
US20140302090A1 (en) Novel vaccine
AU2002344182A1 (en) Influenza vaccine composition
JP5813645B2 (ja) インフルエンザに対する新規ワクチン組成物
ES2361981T3 (es) Formulaciones de vacunas de la gripe para administración intradérmica.

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Annulment or lapse of patent due to non-payment of fees