TW201134488A - PD-1 antibodies - Google Patents

PD-1 antibodies Download PDF

Info

Publication number
TW201134488A
TW201134488A TW100107884A TW100107884A TW201134488A TW 201134488 A TW201134488 A TW 201134488A TW 100107884 A TW100107884 A TW 100107884A TW 100107884 A TW100107884 A TW 100107884A TW 201134488 A TW201134488 A TW 201134488A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
sequence
ser
val
thr
lys
Prior art date
Application number
TW100107884A
Other languages
English (en)
Inventor
Kerry Louise Tyson
Original Assignee
Ucb Pharma Sa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ucb Pharma Sa filed Critical Ucb Pharma Sa
Publication of TW201134488A publication Critical patent/TW201134488A/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

201134488 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種抗體分子，其具有針對人類PD-1的 抗原決定基的專一性，並關於包含該抗體分子的組合物。本 發明亦關於該抗體分子、組合物的治療用途，以及用於製造 該抗體分子的方法。 【先前技術】 計劃性凋亡（Programmed Death)l(PD-l)，也稱爲 CD279 •，基因名稱PDCD1;存取號NP_005009，爲一細胞表面接受 者，其在調節免疫系統中的催動性及抑制性信號之間的平衡 以及維持周邊耐受性扮演關鍵角色（Ishida，Y et al. 1992 EMBO J 1 1 3 887 ； Kier, Mary E et al. 2008 Annu Rev Immunol 26 6 7 7-704 ； Okazaki, T aku et al. 2007
International Immunology 19 813-824)。其係與 CD28 同源的 免疫球蛋白超家族中的抑制性成員。PD-1的結構爲單體第1 型穿膜蛋白質，由一類似免疫球蛋白可變區胞外結構域及一 胞質結構域構成，該胞質結構域包含一免疫接受者酪胺酸系 抑制性功能域（motif)(ITIM)及一免疫接受者酪胺酸系開關功 能域（motif)(ITSM)。PD-1的表現可在T細胞、B細胞、天然 殺手（NK)細胞及單核球上誘導，例如經由T細胞受體（TCR) 或B細胞受體（BCR)信號活化淋巴球（Kier, Mary E et al. 2008 Annu Rev Immunol 26 677-704 ； Agata, Y et al 1 996 Int Immunol 8 765-72)。PD-1 有 2 個已知的配體，即 PD-L1(B7-H1、CD274)與 PD-L2(B7-DC ' CD273)，此等係 B7 家族的細 201134488 胞表面表現成員（Freeman, Gordon et al. 2000 J Exp Med 192 1027; Latchman, Y et al. 200 1 Nat Immunol 2 261)。當配體 結合時，PD-1會招集（recruit)磷解酶例如SHP-1及SHP-2至 其胞內酪胺酸功能域，其接著將由TCR或BCR信號活化的 效應子分子去憐酸化（Chemnitz，J et al. 2004 J Immunol 173 9 4 5-954 ； Riley, James L 2009 Immunological Reviews 229 114-125)。於此方式，PD-1僅在同時結合TCR或BCR時， 才會將抑制性信號傳達到T與B細胞內。 PD-1已爲人證明會經由細胞固有及細胞非固有的功能機 制而下調效應T細胞反應。經由PD-1，抑制性信號會在T 細胞中誘導出應變缺失或無反應狀態，造成細胞無法群集地 擴張或生產最適量的效應子細胞激素。PD-1也可經由其具有 的由共同刺激抑制存活信號的能力而誘導T細胞的凋亡，此 會導致關鍵的抗細胞凋亡分子，例如BC1-Xl的表現減少 (Kier, Mary E et al. 2 0 0 8 Annu Rev Immunol 26 677-704) o 除了此等直接效果以外，最近的出版物啓示PD-1藉由促進 誘導及維持調節性T細胞（TREG)而參與效應子細胞的壓制。 例如，在樹狀細胞上表現的PD-L1，顯示會與TGF-β共效作 用而促進誘導具有增強的壓抑子（suppressor)功能的CD4 + FoxP3+ TREG(Francisco, Loise M et al. 200 9 J Exp Med 206 3015-3029)。 PD-1在周邊耐受性及發炎性疾病的重要性的第1個徵兆 係來自於觀察到PD-1基因剔除（knockout)(Pdcdl_/_)小鼠會 發展出自發性的自體免疫。50%的於C57BL/6背景的Pdcdl^ 201134488 小鼠，會在14個月齡發展出狼瘡狀的腎絲球腎炎及關節炎 ，且BALB/c-Pdcdl·/·小鼠會從5週後發展出致命的擴大性心 肌病並產生對抗心肌旋轉蛋白I(troponin I)的自體抗體 (Nishimura, H et al. 1 999 Immunity 11 141-151 ；
Nishimura, H et al. 200 1 Science 291 3 1 9-322)。再者，對於 非肥胖糖尿病（NOD)小鼠品系誘導PD-1缺失，驚人地加速糖 尿病的開始及影響，造成所有的NOD-Pdcdli小鼠在10週 齡發展出糖尿病（Wang，J et al. 2005 Proc Natl Acad Sci USA 1 02 1 1 8 23)。此外，使用經誘導自體免疫的鼠科動物的模型 例如實驗性自體免疫腦脊髓炎（EAE)或移植/移植物對抗寄主 (GVHD)模型，已有數個群組顯示阻斷PD-1-PD-L的交互作 用會使病情惡化，且進一步確認了 PD-1在發炎性疾病中的 關鍵角色。重要的是，證據顯示PD-1在人類如同在小鼠當 中具有相當的免疫調節功能，其在人類PDCD 1多型性關聯 於多種自體免疫疾病，包括全身紅斑性狼瘡（SLE)、多發性 硬化（MS)、第I型糖尿病（TID)、類風濕性關節炎（RA)，及 Grave 氏症（Okazaki, Taku et al. 2007 International
Immunology 1 9 8 1 3-824 ； Prokunina, L et al. 2002 Nat
Genet 32 666-669 ； Kroner, A et al. 2005 Ann Neurol 58 5 0-57 ； Prokunina, L et al 2004 Arthritis Rheum 50 1 770) 0 已有數個使用自體免疫的鼠科動物模型增強PD-1信號 及調節免疫.性疾病的治療方案的報告。其中一方案係試圖產 生過度表現PD-L1的人造樹狀細胞。在以MOG胜肽免疫誘 導EAE前或後對於小鼠注射載有抗原的PD-L1-樹狀細胞， 201134488 會減少脊椎神經的發炎及該疾病的臨床嚴重程度（H ir at a, S et al. 2005 J Immunol 174 188 8- 1 897)。另一方案係試圖藉由使 用表現小鼠PD-L1的重組腺病毒傳遞PD-1信號以治癒 BXSB小鼠中的狼瘡狀的症狀。注射此病毒部分地防止發展 出如同蛋白質尿頻率減低顯示的腎炎、血清抗dsDN A Ig減 少，及腎病狀較佳（Ding，H et al. 2006 Clin Immunol 118 25 8)。此等結果暗示PD-1信號增強在人類自體免疫疾病可 能有治療益處。其他更適當當做人類藥物治療的治療方案， 係使用抗人類PD-1的激動性（agonistic)單株抗體。此激動性 抗體的結合會理想地、獨立地經由PD-1傳達抑制性信號， 同時也會與來自天然PD-1 - PD1-L交互作用的進行中的內生 性信號產生共效。激動性抗PD-1 mAb據預測會調節多種參 與發炎性疾病的免疫細胞形式，包括T細胞、B細胞、NK 細胞及單核球，且因此在治療多種人類自體免疫或發炎性病 症有其利用價値。 雖然已有人敘述幾個拮抗性抗PD-1抗體，但到目前爲 止，據本案發明人等所知，文獻中敘述的唯一的PD-1激動 性抗體仍會阻斷PD-1-PD1L與PD1-PD2L交互作用。例如參 見 W02004/056875 » 因此，在該技術領域仍需要適於治療病患的改良的激動 性抗PD-1抗體，尤其不會阻斷PD1-PDL1或該 PD1-PDL2 之交互作用者。 【發明內容】 吾人已鑑別出，例如藉由減低’T細胞反應適於治療或預 201134488 防免疫病症的高親和性激動性抗PD-1抗體。可經由投予 PD-1專一性抗體到一對象治療的免疫病症的非限定例，包括 但不限於類風濕性關節炎、多發硬化、發炎性腸疾病、 Crohn氏症、全身紅斑性狼瘡、第I型糖尿病、移植排斥、 移植物對抗寄主病（graft-versus-host disease)、過度增殖性 免疫病症、癌症及傳染病。 在此，將衍生出人類化抗體的鼠科動物抗體親代融合瘤 稱爲選殖體19。在此，從選殖體19衍生的選殖的重組抗體 稱爲抗體 CA051_00949，也稱爲949。 抗體可變結構域的殘基，傳統上係依據Kabat等人設計 的系統編號。此系統由 Kabat et al.，1987，in Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Department of Health and Human Services，NIH，USA[以下稱爲“Kabat et al_(前揭 )”]提出。除非特別指明，本說明書係使用此編號系。 該Kabat殘基設計並不永遠直接對應於胺基酸殘基的線 形編號。實際的線形胺基酸序列可能比起嚴格的Kabat編號 ’會包含較少或額外的胺基酸，對應於基本的可變結構域結 構的框架或互補決定區（CDR)縮短或***結構成分。對於一 給定抗體，殘基的正確Kabat編號可藉由排列同源性殘基在 具有「標準」 Kabat編號序列的抗體序列而決定。 重鏈可變結構域的CDR，依據Kabat編號系統，係位 在殘基 31-35(CDR-H1)、殘基 50-65(CDR-H2)及殘基 95-102(CDR-H3)。然而依據 Chothia(Chothia，C. and Lesk，A.M. J· Mol. Biol·，196，901 -9 1 7(1 987))，相當於 CDR-H1 的環圈 201134488 從殘基26延伸到殘基32。因此除非另外指明，在此使用的 「CDR-H1」係意指殘基26至35，如同Kabat編號系及 Chothia氏拓樸環圈組合的定義。 依據Kabat編號系統，輕鏈可變結構域的CDR係位在殘 基 24-34(CDR-Ll)、殘基 50-5 6(CDR-L2)及殘基 89-97(CDR-L3)。 此處使用的用語「激動性抗體」，係敘述能夠刺激PD-1的生物學信號活性的抗體，其造成在胞內結構域招集磷解 酶，而造成T或B細胞受體信號，及與活化相關的表型特徵 去活化。 本發明使用的抗體可使用任何該技術領域中適當的方法 獲得。包括融合蛋白的PD-1多胜肽/蛋白質，例如表現該多 胜肽的PD-1-Fc融合蛋白質或細胞（重組或天然）（例如經活化 的T細胞），可使用於生產專一性識別PD-1的抗體。該PD-1 多胜肽可爲「成熟的」多胜肽或其在生物學上有活性的片段 或其衍生物。適當地，該PD-1多胜肽爲成熟的人類多胜肽 或其胞外結構域或其片段。該胞外結構域一般包含PD-1蛋 白質（SWISS PROT entry Q15116)的胺基酸 21-170。PD-1 多 胜肽可由該技術領域爲人熟知的方法，從包含表現系的基因 工程的寄主細胞製備或可從天然的生物源回收。於本申請案 ，用語「多胜肽」包括胜肽、多胜肽及蛋白質。除非特別指 明，此等係可互換使用。該PD-1多胜肽有時會是較大蛋白 質例如融合蛋白質的一部分，例如融合於親和性標籤。生產 的對抗PD-1多胜肽的抗體，可使用周知及例行的實驗步驟 201134488 例如參見 Handbook of Experimental Immunology, D. M. Weir(ed.), Vol 4，Blackwell Scientific Publishers, Oxford,
England，1 986)，需要對動物免疫時，藉由投予該多胜狀到 動物，較佳爲非人類動物而獲得。可免疫的有許多溫血動物 ，例如兔 '小鼠、大鼠、羊、牛、駱铌或豬。然而一般最適 者爲小鼠、兔、豬及大鼠。 單株抗體可藉由該技術領域中已知的任意方式製備，例 如融合瘤技術（Kohler & Milstein，1 975，Nature，256: 495-497)、三體雜交瘤（trioma)技術、人類 B細胞融合瘤技術 (Kozbor et al., 1 983，Immunology Today, 4 ： 72)，及 EBV-融 合瘤技術（Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, pp77-96, Alan R Liss, Inc., 1 985) o 本發明使用的抗體也可使用單一淋巴球抗體方法，藉由 選殖及表現從選擇用於表現專一性抗體的單一淋巴球產生的 免疫球蛋白可變區cDNA而產生，例如Babcook，J. ei α/., 1 996, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93(15) ： 7843 -78481 ； WO92/02 55 1 ； W O 2 0 0 4 / 0 5 1 2 6 8 及國際專利申請案號 W02004/1 06377敘述的方法。 抗體的篩選可使用測定對人類 PD-1的結合的分析法及/ 或測定激動PD 1活性的能力的分析法。結合分析法的例子有 ELISA’具體而言，使用人類Pp-1與人類 Fc的融合蛋白 ，其係固定在平板上’並使用接合的二次抗體以偵測結合於 該融合蛋白質的抗PD_1抗體。適當的激動及配體阻斷分析 法，在此於實施例中敘述。 201134488 人類化抗體（其包括移植有CDR的抗體），爲有來自於非 人類物種的1個或更多互補決定區及來自人類免疫球蛋白分 子的框架的抗體分子（參見#//7 US 5,585,089; WO91 /09967) 。應瞭解：可以僅需要轉移CDR的專一性決定殘基而不用轉 移完整的 CDR(參見例如，Kashmiri ei α/.，2005，Methods, 36, 2 5-3 4)。人類化抗體視情形可更包含衍生自非人類物種的1 個以上框架殘基，從此衍生出CDR。 本發明提供激動性人類化抗體，其具有針對人類 PD-1 的專一性。 一激動性鼠科動物抗PD-1抗體（選殖體19)，敘述於 卩(：1718 2 00 9/06 94 0(未公開），該抗體的可變區及€011的序列 ，提供如第1圖。具體而言，此抗體的CDR係提供於第1 圖（c)、序列識別號1-6。 於第2圖（a)提供衍生自選殖體19的經改良的CDRL3(序 列識別號：6)的版本（序列識別號：7)，其中潛在的去醯胺部 位已經修飾過。因此，本發明的一具體例提供結合於人類 PD-1的一種'人類化激動性抗體，包含一重鏈及一輕鏈，其中 該重鏈的可變結構域包含：當做CDR-H1的序列識別號：1 所示的序列、當做CDR-H2的序列識別號：2所示的序列、 當做CDR-H3的序列識別號：3所示的序列，該輕鏈的可變 結構域包含當做CDR-L1的序列識別號：4所示的序列、當 做CDR-L2的序列識別號：5所示的序列，及當做CDR-L3 的序列識別號：7所示的序列。 此處使用的用語「人類化抗體分子J ，係指一抗體分子 -11 - 201134488 ，其中該重鏈及/或輕鏈包含來自提供者抗體（例如鼠科動物 單株抗體）的1或更多個CDR(視需要可包括1或更多經修飾 的CDR)，其係移植在接受者抗體（例如人類抗體）的重鏈及/ 或輕鏈可變區框架。評論見 Vaughan et al，Nature Biotechnology，16，535-539, 1998。於一具體例，並不是轉 移完整CDR，而僅將在此敘述的CDR當中任一者而來的專 一性決定殘基的1個或更多轉移到人類抗體框架（參見例如， Kashmiri et al., 2005, Methods, 3 6, 25-34)° 於一具體例 > 僅 將在此敘述的CDR當中1個或更多而來的專一性決定殘基 的轉移到人類抗體框架。於另一具體例，僅將在此如上敘述 的各CDR而來的專一性決定殘基轉移到人類抗體框架。 當移植CDR或專一性決定殘基時，關於CDR自此衍生 的提供者抗體類型/形式可使用的任意適當接受者可變區框架 序列，包括小鼠、靈長類及人類框架區。適合的本發明的人 類化抗體，具有包含人類接受者框架區及如第1圖（c)或第2 圖（a)的1個或更多CDR的可變結構域。因此於一具體例提 供一激動性人類化抗體，其結合於人類 PD-1，其中該可變 結構域包含人類接受者框架區及非人類提供者CDR。 本發明可使用‘的人類框架，例如K0L、NEWM、REI、 EU、TUR、TEI、LAY 及 POM(Kabat et al·，前揭）。例如可使 用 K0L與NEWM當做重鏈，可使用REI當做輕鏈，可使用EU 、LAY及P0M當做重鏈與輕鏈兩者。或者可使用人類生殖系 序列；此等可從http: //vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk /取得 於本發明的人類化抗體中，該接受者重鏈及輕鏈並不一 -12- 201134488 定需要從相同抗體衍生，視需要可包含從不同鏈衍生的框架 區的複合鏈。 針對本發明的人類化抗體的重鏈的適合框架區，係由人 類次群組 VH1序列1-3 1-46與JH4(序列識別號：52)—起 衍生。因此，於一實施例，提供一種激動性人類化抗體，其 包含當做CDR-H1的序列識別號：1所示的序列、當做CDR-H2的序列識別號：2所示的序列、當做CDRH3的序列識別 號：3所示的序列，其中該重鏈框架區係同時衍生自人類次 群組VH1序列卜3 1-46與 JH4。人類 JH4的序列如下： (YFDY)WGQGTLVTVS(序歹IJ 識別號：56) » 其 YFDY 功能域 (motif)爲部分 CDR-H3，且並非框架4的一部分（Ravetch， JV. et al., 1981, Ce//，27，583-59 1 )。 本發明的人類化抗體重鏈的另一適合框架區，係同時衍 生自人類次群組VH1序列1-2 Ι-e與JH4(序列識別號：54) 因此，於一實施例中，提供一激動性人類化抗體，包含當做 CDR-H1的序列識別號：1所示的序列 '當做CDR-H2的序歹IJ 識別號：2所示的序列、當做CDRH3的序列識別號：3所示 的序列，其中該重鏈框架區係同時衍生自人類次群組VH1序 列1_2 Ι-e與JH4，參見例如序列識別號：46)。人類 JH4之 序歹IJ 如下：（YFDY)WGQGTLVTVS(序歹IJ 識別號：56)。YFDY 功能域（motif)爲部分 CDR-H3 ’且非框架 4的一部分 (Ravetch, JV. ei α/·，1981, Ce//，27，583 -59 1 )。於一具體例 ，抗體的重鏈可變結構域包含於序列識別號：46所示的抗體 -13- 201134488 本發明的人類化抗體的輕鏈的適合框架區，係同時衍生 自人類生殖系次群組VK1序列2-1-(1) L23與JK4(序列識別 號：48)。因此，於一實施例，提供一激動性人類化抗體， 包含：當做CDR-L1之序列識別號：4所示的序列、當做 CDR-L2的序列識別號：5所示的序列，及當做CDRL3的序 列識別號：6或序列識別號：7所示的序列，其中該輕鏈框 架區同時衍生自人類次群組序列2_1-(1) L23與JK4。JK4序 列如下：（LT)FGGGTKVEIK(序列識別號：57)。該LT功能 域（motif)爲CDR-L3的一部分，非框架 4的一部分（Hieter， PA., et al., 1 982, J. Biol. Chem., 25 7, 1 5 1 6- 1 522)。 本發明的人類化抗體的輕鏈的另一適合的框架區，係同 時衍生自人類生殖系次群組VK3序列6-1 -(1) A27與JK4(序 列識別號：50)。因此，於一實施例，提供一激動性人類化 抗體，包含：當做CDR-L1的序列識別號：4所示的序列、 當做CDR-L2的序列識別號：5所示的序列、當做〇010^3的 序列識別號：6或序列識別號：7所示的序列，其中該輕鏈 框架區同時衍生自人類次群組序列VK3 6-1-(1) A27與JK4 。JK4 序列如下：（LT)FGGGTKVEIK(序列識另(J 號：57)。LT 功能域（motif)爲 CDR-L3的一部分，非框架4的一部分 (Hieter, PA., et al., 1 982, J. Biol. Chem.，257，1 5 1 6- 1 522)。 又，本發明的人類化抗體中，框架區與接受者抗體的序 列不需要完全相同。例如，可將非常見的殘基改變爲針對該 接受者鏈類型或形式的更爲常發生的殘基。或者，可將接受 者框架區中的選定殘基改變成對應於在提供者抗體的相同位 -14- 201134488 置發現的殘基（參見 Reichmann ei α/·，1998，Nature，3 3 2, 3 23 -3 24)。此種改變應保持爲需要回復提供者抗體的親和性 的最小程度。選擇接受者框架區的殘基的實驗步驟’提出於 WO 9 1 /09967。 適當地，本發明的人類化抗體分子中’若該接受者重鏈 同時具有人類VH1序列1-3 1-46與JH4，則該重鏈的接受者 框架區，除了 3個提供者CDR(序列識別號：1、2及3)以外 ，還在 25、37、41、48、71、73 及 76(依據 Kabat et al·，.（前 揭））當中至少1個位置包含提供者殘基。因此於一實施例， 提供一人類化抗體，其中該重鏈的可變結構域的至少各位置 25、37、41、48、71、73及76的殘基爲提供者殘基，參見 例如序列識別號：30的序列。於一實施例，提供一人類化抗 體，其中，其中該重鏈的可變結構域的至少各位置25、37、 41、48的殘基爲提供者殘基，參見例如序列識別號：38的 序列。於一實施例，提供一人類化抗體，其中該重鏈的可變 結構域的至少位置25的殘基爲提供者殘基，參見例如序列 識別號：40的序列。 適當地，本發明的人類化抗體分子中。若該接受者重鏈 具有人類 VH1序列1-2 Ι-e與JH4，則該重鏈的接受者框 架區，除了 3個提供者CDR(序列識別號：1、2及3)以外， 還在 25、37、41、48、71、76 及 78 [依據 Kabat et al.，（前揭 )]當中至少1個位置包含提供者殘基。因此，於一實施例提 供一人類化抗體，其中該重鏈的可變結構域的至少各位置25 ' 37、41、48、71、76及78的殘基爲提供者殘基，參見例 201134488 如序列識別號：42所示的序列。於一實施例，提供一人類化 抗體，其中該重鏈的可變結構域的至少各位置25、37、41、 48的殘基爲提供者殘基，見例如序列識別號：44所示的序 列。 適當地，依據本發明的人類化抗體分子中，若該接受者 輕鏈同時具有人類次群組VK1序列2-1-(1) L23與 JK4，則 該輕鏈的接受者框架區，除了 3個提供者CDR(序列識別號 :4、5及6或7)以外，還在1、2、3、4、47、60及70 [依 據Kabat et al.，（前揭）]當中至少1個位置包含提供者殘基。 因此，於一實施例，包括一人類化抗體，其中該輕鏈的可變 結構域的各位置1、2、3、4、47、60及70爲提供者殘基， 參見例如序列識別號：1 〇。於一實施例，提供一人類化抗體 ，其中該輕鏈的可變結構域的至少各位置1、2、3及4的殘 基爲提供者殘基，比如例如序列識別號：18或序列識別號： 20。於一具體例，該抗體包含序列識別號：66所示序列。於 一實施例提供一人類化抗體，其中該輕鏈的可變結構域的至 少各位置1、2及3的殘基爲提供者殘基，見例如序列識別 號：22或序列識別號：24。 適當地，於依據本發明的人類化抗體分子中，若該接受 者輕鏈同時具有人類次群組VK3序列6-1-(1) A27與JK4， 則該輕鏈的接受者框架區，除了該3個提供者CDR(序列識 別號：4、5及6或7)’在位置2、47、58、70、71及85至 少其中之一更包含提供者殘基。因此，於一實施例提供一人 類化抗體，其中在該輕鏈的可變結構域的至少各位置2、47 -16- 201134488 、58、70、71及85的該殘基爲提供者殘基，見例如序列識 別號：26或序列識別號：28。 提供者殘基係來自提供者抗體的殘基，即從其原始衍生 CDR的抗體。提供者殘基可取代成衍生自人類接受者框架（ 接受者殘基）的適當殘基。 針對各框架取代提供者殘基的適當人類接受者殘基如下 表： VK1 輕鏈 2-1(1) L23
Kabat位置 取代提供者的人類殘基 1 丙胺酸 2 異白胺酸 3 精胺酸 4 甲硫胺酸 47 ***酸 6〇 絲胺酸 7〇 天冬胺酸 VK3 輕鏈 6-1-(1) A27
Kabat位置 取代提供者的人類殘基 2 異白胺酸 47 白胺酸 58 異白胺酸 70 天冬胺酸 7 1 ***酸 85 纈胺酸 -17· 201134488 VH1 重鏈 1-3 1-46
Kab at位置 取代提供者的人類殘基 25 37 4 1 48 7 1 73 76 絲胺酸 纈胺酸 脯胺酸 甲硫胺酸 精胺酸 蘇胺酸 絲胺酸 VH1 重鏈 1-2 1-e
Kab at位置 取代提供者的人類殘基 25 絲胺酸 37 纈胺酸 41 脯胺酸 48 甲硫胺酸 7 1 丙胺酸 76 絲胺酸 78 丙胺酸 或互補的重 PD-1的人 3 〇、序列識 本發明的抗體分子適當地各包含互補的輕鏈 鏈。因此’於一具體例，本發明提供結合於人類 類化激動性抗體，具有包含選自由序列識別號： -18 · 201134488 別號：3 8、序列識別號：40、序列識別號：42、序列識別號 :44及序列識別號：46構成的群組的序列的重鏈；及包含 選自由序列識別號：1 〇、序列識別號：1 8、序列識別號：20 、序列識別號：22、序列識別號：24、序列識別號：26及序 列識別號：28構成的群組的序列的輕鏈。 本發明的抗體分子適當地各包含互補的輕鏈或互補的重 鏈。因此，於一具體例，本發明提供一人類化激動性抗體， 其結合於人類 PD-1，具有包含選自由序列識別號：30、序 列識別號：3 8、序列識別號：40、序列識別號：42、序列識 別號：44及序列識別號：46構成的群組的序列的重鏈，及 具有選自於由序列識別號：1 0、序列識別號：1 8、序列識別 號：20、序列識別號：22、序列識別號：24、序列識別號： 26、序列識別號：28及序列識別號：66構成的群組的序列 的輕鏈。 於一具體例，該重鏈包含選自序列識別號·· 30與序列識 別號：46的序列，及包含依據序列識別號：66的序列的輕 鏈。 應瞭解到：可對於CDR或本發明提供的其他序列（例如 可變結構域）進行1個以上胺基酸的取代、加成及/或刪除， 而不會顯著改變該抗體結合於PD-1的能力並激動PD-1活性 。任意胺基酸取代、加成及/或刪除的效果可以輕易地由該技 術領域中具有通常知識者測試，例如藉由使用在此使用的方 法’尤其是實施例敘述的方法，以決定PD-1結合及PD-1激 動。 I：； Η -19- 201134488 於另一具體例，本發明的抗體包含一重鏈，其中該重鏈 的可變結構域包含與序列識別號·· 3 0、序列識別號：3 8、序 列識別號：40、序列識別號：42、序列識別號：44或序列識 別號：46的序列中任一者有至少60%相同性或相似性的序列 。於一具體例，本發明的抗體包含一重鏈，其中該重鏈的可 變結構域具有與序列識別號：30、序列識別號：38、序列識 別號：40、序列識別號：42、序列識別號：44或序列識別號 :4 6的序列中任一者有至少7 0 %、8 0 %、9 0 %、9 5 %或9 8 % 相同性或相似性的序列。 此處使用的「相同性」，係指在該排列的序列中的任意 特定位置，在該等序列之間的胺基酸殘基相同。在此使用的 「相似性」係指在該排列的序列的任意特定位置，在該等序 列之間的胺基酸殘基爲相似形式。例如，白胺酸可取代成異 白胺酸或纈胺酸。其他常互相取代的胺基酸包括但不限於： -***酸、酪胺酸及色胺酸（具有芳香族側鏈的胺基酸）； -離胺酸、精胺酸及組胺酸（具有鹼性側鏈的胺基酸）； -天冬胺酸及麩胺酸（具有酸性側鏈的胺基酸）； -天冬醯胺酸及麩醯胺酸（具有醯胺側鏈的胺基酸）；及 -半胱胺酸及甲硫胺酸（具有含硫側鏈的胺基酸）。相同性及 相似性的程度可以輕易地計算（Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, New York, 1 9 8 8 ； Biocomputing. Informatics and Genome
Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, New York, 1993 ； Computer Analysis of Sequence Data, Part 1，Griffin, -20- 201134488 A.Μ.，and Griffin，H.G.，eds·，Humana Press，New Jersey， 1 9 94 ; Sequence Analysis in Molecular Biology， von
Heinje，G. 5 Academic Press, 1 987，Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and D evereux, J·，eds., M Stockton Press, New York， 1991， the BLAST™ so ft ware available from NCBI(Altschul5 S.F. et aLt 1 990, J. Mol. Biol. 215 ： 403-4 1 0 ； Gish, W. & States, D.J. 1 993, Nature Genet. 3 ： 266-272. Madden, T. L. et al，，1 996，Meth. Enzymol. 266 : 1 3 1 -1 41 ； Altschul, S.F. et al,t 1 997, Nucleic Acids Res. 25 ： 33 89-3402 ; Zhang, J. & Madden, T.L. 1 997，Genome Res. 7 · 649-656) 〇 於另一具體例，本發明的抗體包含一輕鏈，其中該輕鏈 的可變結構域包含與序列識別號：1 0、序列識別號：1 8、序 列識別號：20、序列識別號：22、序列識別號：24、序列識 別號：2 6或序列識別號：2 8的序列中任一者有至少6 0 %相 同性或相似性的序列。 於一具體例，本發明之抗體包含一輕鏈，其中該輕鏈的 可變結構域包含與序列識別號：1 0、序列識別號：1 8 '序列 識別號：2〇、序列識別號：22、序列識別號：24、序列識別 號：2 6或序列識別號：2 8的序列中任一者有至少7 0 %、8 0 % 、90%、95%或98%相同性或相似性的序列。 於一具體例，本發明之抗體包含與在此提供的序列例如 序列識別號：6 6或序列識別號：7 0有至少7 0 %、8 0 %、9 0 % 、9 5 %或9 8 %相同性或相似性的序列。 -21 - I：； 201134488 於一具體例，本發明之抗體包含與在此提供的序列，例 如序列識別號：3 4、序列識別號：5 8、序列識別號：62、序 列識別號：76或序列識別號：80有至少70%、80%、90%、 95%或98%相同性或相似性的序列。 於本發明之其他具體例，該抗體包含一重鏈及一輕鏈， 其中該重鏈的可變結構域包含與序列識別號：3 0、序列識別 號：3 8、序列識別號：40、序列識別號：42、序列識別號： 44或序列識別號：46的序列中任一者有至少60%相同性或 相似性的序列，且該輕鏈的可變結構域包含與序列識別號： 1 〇、序列識別號：1 8、序列識別號：20 '序列識別號：22、 序列識別號：24、序列識別號：26或序列識別號：28的序 列中任一者有至少60%相同性或相似性的序列。 適當地，該抗體包含一重鏈及一輕鏈，其中該重鏈的可 變結構域包含與序列識別號：30、序列識別號：38、序列識 別號：40、序列識別號：42、序列識別號：44或序列識別號 :46的序列中任一者有至少70%、80%、90%、95%或98% 相同性或相似性的序列，該輕鏈的可變結構域包含與序列識 別號：1 〇、序列識別號：18、序列識別號：20 '序列識別號 ·· 22、序列識別號·· 24 '序列識別號·· 26或序列識別號·· 28 的序列中任一者有至少70%、80%、90%、95%或98%相同 性或相似性的序列。 於本發明的另一具體例，該抗體包含一重鏈及一輕鏈， 其中該重鏈的可變結構域包含與序列識別號：30、序列識別 號：3 8、序列識別號：40、序列識別號：42、序列識別號： -22- 201134488 44、序列識別號：46、序列識別號：5 8、序列識 序列識別號：76或序列識別號：80的序列中任 6 0%相同性或相似性的序列，該輕鏈的可變結構 列識別號：1 〇.、序列識別號：1 8、序列識別號： 別號：22、序列識別號：24、序列識別號：26、 :28、序列識別號：66或序列識別號：70的序 有至少60%相同性或相似性的序列。 適當地，該抗體包含一重鏈及一輕鏈，其中 變結構域包含與序列識別號：30、序列識別號： 別號：40、序列識別號：42、序列識別號：44、 :46、序列識別號：58、序列識別號：62、序列 或序列識別號：80的序列中任一者有至少70% 、95%或98%相同性或相似性的序列，該輕鏈的 包含與序列識別號：1 〇、序列識別號：1 8、序列 、序列識別號：22、序列識別號：24、序列識另!J 列識別號：28、序列識別號：66或序列識別號 中任一者有至少 7 〇 %、8 0 %、9 0 %、9 5 %或 9 8 % 似性的序列。 本發明的抗體分子可包含一完整的抗體分子 子具有全長的重鏈及輕鏈或其片段，且可爲但不 經修飾的Fab、Fab’、經修飾的Fab’、F(ab’）2、 構域抗體（例如VH或VL或VHH)、scFv、二價 價抗體、雙-scFv '雙功能抗體（diabodies)、： (triabodies)、四功能抗體（tetrabodies)及上述任 別號：62 、 一者有至少 域包含與序 20、序列識 序列識別號 列中任一者 該重鏈的可 3 8、序列識 序列識別號 識別號：76 、8 0% ' 90% 可變結構域 識別號：20 號：26 、序 :7 0的序列 相同性或相 ，該抗體分 限於Fab、 Fv '單一結 :、三價或四 三功能抗體 一者的抗原 -23- 201134488 決定基結合片段（見例如 Holliger and Hudson，2005，Nature Biotech. 23(9) : 1126-1136 ； Adair and Lawson, 2005，Drug Design Reviews - Online 2(3), 209-217)。製作及製造此等抗 體片段的方法在該技術領域係爲人熟知（見例如 Verma et al., 1 9 9 8, Journal of Immunological Methods, 216, 165-181) 。本發明使用的其他抗體片段包括敘述於國際專利申請案 W02005/003 1 69' W02005/003 1 70 及 W02005/003 1 7 1 的 Fab 與Fab’片段。多價抗體可包含多重專一性，例如雙專一性， 或可爲單專一性（見例如 WO 92/22853及WO05/1 1 3605)。 於一具體例，提供一重鏈與一輕鏈的組合，重鏈係選自 序列識別號：58、序列識別號：62、序列識別號：76或序列 識別號：80，輕鏈包含序列識別號：66。 於一具體例，提供一重鏈與一輕鏈的組合，重鏈係選自 序列識別號：58，輕鏈包含序列識別號：·66。 於一具體例，提供一重鏈與一輕鏈的組合，重鏈係選自 序列識別號：62，輕鏈包含序列識別號：66。 於一具體例，提供一重鏈與一輕鏈的組合，重鏈係選自 序列識別號：76，輕鏈包含序列識別號：66。 於一具體例，提供一重鏈與一輕鏈的組合，重鏈係選自 序列識別號：8 0，輕鏈包含序列識別號：66。 於一具體例，提供一重鏈與一輕鏈的組合，重鏈係選自 序列識別號：58、序列識別號：62或序列識別號：76，輕鏈 係依據序列識別號：70。 於一具體例，提供一重鏈與一輕鏈的組合，重鏈係選自 -24- 201134488 序列識別號：58，輕鏈係依據序列識別號：70。 於一具體例，提供一重鏈與一輕鏈的組合，重鏈係選自 序列識別號：62，輕鏈係依據序列識別號：70。 於一具體例，提供一重鏈與一輕鏈的組合，重鏈係選自 序列識別號：76，$1.鏈係依據序列識別號：70。 於一具體例，提供一重鏈與一輕鏈的組合，重鏈係選自 序列識別號：80，輕鏈係依據序列識別號：70。 於一具體例，依據本案揭示的抗體，係以PD-1結合抗 體融合蛋白質的形式提供，其包含免疫球蛋白部分（moiety) ’例如Fab或Fab’片段，且於其直接或間接連結有1或2個 單結構域抗體（dAb)，例如W02009/040562所述。 於一具體例，該融合蛋白質包含2個結構域的抗體，例 如一可變重鏈（VH)及可變輕鏈（VL)的配對，可視情形以雙硫 鍵連結。 於一具體例，該融合蛋白質的Fab或Fab’要素與該單 結構域抗體或抗體有相同或相似的專一性。於一具體例，該 Fab或Fab’與該單結構域抗體或抗體有不同的專一性，即 指融合蛋白質爲多價。於一具體例，依據本發明的多價融合 蛋白質具有一白蛋白結合部位，例如在此VH/VL配對提供 —白蛋白結合部位。 本發明抗體分子的不變區結構域，若存在，可依據對該 抗體分子預期的功能尤其是需要的效應子功能選擇。例如， 該不變區結構域可爲人類IgA、IgD、IgE、IgG或IgM結構 域》尤其，當該抗體分子欲用在治療用途且需要抗體效應子 -25- 201134488 功能時，可使用人類IgG不變區結構域，特別是IgGl及 IgG3 .構造同型（isotype)。或者，當抗體分子欲用在治療用 途且不需要抗體效應子功能時，例如僅簡單激動PD-1活性 時，可使用IgG2與IgG4構造同型（isotype)。應了解：也 可使用此等不變區結構域的序列變異體。例如，可使用如 Angal et al., Molecular Immunology, 1 9 9 3, 3 0( 1 ), 105-108 戶斤 述IgG4分子中的位置241的絲胺酸改變成脯胺酸者。該技 術領域中具有通常知識者應瞭解抗體可進行各種轉譯後修飾 。此等修飾的形式及範圍時常取決於用於表現該抗體的寄主 細胞株及培養條件。此等修飾可包括糖化、甲硫胺酸氧化、 二酮哌阱形成、天冬胺酸異構化及天冬醯胺酸去醯胺化。常 見的修飾爲由羧基肽解酶的作用而喪失羧基端鹼性殘基（例 如離胺酸或精胺酸）（敘述於 Harris, RJ. •/oMrna/ 〇/ Chromatography 7 0 5 : 1 2 9 - 1 3 4，1 9 9 5 )。因此。該抗體重鏈 例如第8圖（a)所示序列識別號·_ 3 6的C末端離胺酸可能不 存在。 於一具體例，提供一抗體重鏈，係包含依據序列識別號 :5 8所示的序列或由此序列構成。 於一具體例，提供一抗體重鏈，係包含依據序列識別號 :62所示的序列或由此序列構成。 於一具體例，提供一抗體重鏈，係包含依據序列識別號 :7 6所示的序列或由此序列構成。 於一具體例，提供一抗體重鏈，係包含依據序列識別號 :80所示的序列或由此序列構成。 -26- 201134488 於一具體例，提供一輕鏈，係包含依據序列識別號：70 所示的序列或由此序列構成。 於一具體例，該抗體重鏈包含一 CH1結構域，且該抗 體輕鏈包含一CL結構域，係爲kappa或lambda其中之~ 〇 生物分子，例如抗體或片段，會包含酸性及/或鹼性官能 基，因此造成該分子帶有淨正電或淨負電。整體「觀察到」 的電荷量取決於該實體的絕對胺基酸序列、該帶電基團在 3D結構中的局部環境，及該分子的環境條件。等電點（pi)爲 特定分子或其之溶劑可進入的表面不帶有淨電荷的pH。於 一具體例，本發明的PD-1抗體及片段可以加工爲具有適當 的等電點。此可使抗體及/或片段具有更爲堅牢的性質，尤其 是適當溶解性及/或穩定性槪況及/或改良的純化特性。 因此，於本發明一態樣提供一人類化PD-1抗體，已加 工成具有與原始鑑別的抗體949有不同的等電點。該抗體例 如可加工能將一胺基酸琴基例如酸性胺基酸殘基取代成1或 更多個鹼性胺基酸殘基。或者，可導入鹼性胺基酸殘基或移 除酸性胺基.酸殘基》或者，若該分子具有無法接受的高pi 値，視需要可導入酸性殘基以降低pi。當操作pi時，必需 仔細處理以保留該抗體或片段的所欲活性係爲重要。因此於 一具體例中，該經加工的抗體或片段與「未經修飾」的抗體 或片段具有相同或實質上相同的活性。 可使用程式例如 ExPASY http ： //www.expasy.ch/tools/pitool.html 及 -27- 201134488 http : "www.iut-arles.up.univ-mrs.fr/w3bb/d_abim/compo- p-html來預測該抗體或片段的等電點。 本發明的抗體分子適當地具有高結合親和性，尤其是奈 米莫耳（nanomolar)。親和性可使用該技術領域中已知的適當 方法測量，包括BIAcore，使用單離的天然或重組PD-1或適 當的融合蛋白質/多胜肽，如在此實施例所述者。於一實施例 ’親和性係使用重組人類 PD-1胞外結構域，如在此的實 施例所述者測量。於一實施例，使用的該重組人類 PD-1 胞外結構域爲單體。適當地，本發明的抗體分子針對單離的 人類 PD-1，有約6nM或更好的結合親和性》於一具體例， 本發明的抗體分子有約5nM或更好的結合親和性。於一具體 例，本發明之抗體分子有約4nM或更好的結合親和性。於一 具體例，本發明的抗體分子有約3nM或更好的結合親和性。 於一具體例，本發明提供一人類化抗體，其結合親和性爲約 5 η Μ或更好。 應瞭解：本發明提供的抗體的親和性，可使用該技術領 域中已知的任意適當方法改變。因此本發明也關於本發明的 抗體分子的變異體，其對於PD-1的親和性有改善。此種變 異體可藉由一些親和性成熟實驗流程獲得，包括··使CDR 突變（Yang ei a/·，J. Mol. Biol.，254，3 92-403，1 995)、鏈曳 步（shuffling)(Marks et al., B io/T echnology, 1 0, 779-783, 1 992)、使用五 _ co/ί·變異株（Low ei fl/·，J. Mol. Biol.，250, 3 5 9-3 68，1 996)、DMA 曳步（shuffing)(Patten ei a/·，Curr. Opin. Biotechnol.，8, 724-73 3，1 997)、噬菌體呈現（Thompson -28- 201134488 et aL·, J. Mol. Biol., 256, 77-88, 1 996) ，及有性 P CR(Cr am eri et a l.，Nature, 391，288-29 1，1 998)。Vaughan 筝乂（#痗）討論此等親和性成熟的方法。 於一具體例，本發明的抗體分子激動人類 PD-1活性。 適於決定一抗體激動PD-1的能力的分析法，在此敘述於實 施例。於一較佳具體例，本發明的抗體不會阻斷PD-1與其 配體PD-1 L間的交互作用。用於決定是否抗體阻斷PD-1與 其配體PD-1L之間的交互作用的適當方法，在此敘述於實施 例（Freeman, Gordon et al. 2 0 0 0 J Exp Med 1 9 2 1 0 2 7 ；
Butte, Mannish et al, 2007 Immunity 27(1 ) 2007)。 視需要，可將本發明使用的抗體接合到1個或更多效應 子（effector)分子。應瞭解到：該效應子分子可包含單一效應 子分子或2個或更多此種分子，其連結成形成可附著到本發 明抗體的單一部分。當希望獲得連結有效應子分子的抗體片 段時，可藉由標準化學或重組DNA程序，其中該抗體片段 直接連結或經由偶聯劑而連結於該效應子分子。用於接合此 種效應子分子至抗體的技術，在該技術領域中爲人所周知（ 見 Hellstrom et al., Controlled Di ug Delivery, 2nd Ed., Robinson e t al., eds . ,1987, pp. 623-53 ； Thorpe et a L， 1 982 , Immunol. Rev .,62 : 1 19- 58 and Dubo wchik et al,，
1999，Pharmacology and Therapeutics, 8 3，67-1 23)。特定的 化學程序包括例如 WO 93/0623 1、W0 92/225 8 3、W0 89/00195、WO 89/01476 及 WO 03/031581 所述者。或者，當 該效應子分子爲蛋白質或多胜肽，該連結可使用重組DNA -29- 201134488 程序達成’例如wo 86/01533與EP0392745所述。 在此使用的用語效應子分子，包括例如抗腫瘤藥劑、藥 物 '毒素 '生物學上有活性的蛋白質例如酵素、其他抗體或 抗片段 '合成或天然發生的聚合物、核酸及其片段例如 DNA、RNA及其片段、放射核（radi〇nuciide)尤其是放射碗、 放射性同位素、螯合金屬、奈米微粒及報告者基團（reporter groups)例如螢光化合物或可由NMR或ESR分光光譜儀偵測 的化合物。 效應子分子之例，可包括：細胞毒素或細胞毒性藥劑 ’其爲對於細胞有害（例如殺死）的任意藥劑。例子包括 combrestatins、海兔毒素（dolastatins)、epothilones、 staurosporin、maytansinoids、spongistatins、rhizoxin、 halichondrins、roridins、hemiasterlins、紫杉醇（taxol)、 cytochalasin B、gramicidin D、溴化乙淀（ethidium bromide)、吐根素（emetine)、絲裂黴素（mitomycin)、依托 泊苷（etoposide)、替尼泊ft (tenoposide)、長春新驗 (vincristine)、長春鹼（vinblastine)、秋水仙鹼（colchicin) 、阿黴素（doxorubicin)、道諾黴素（daunorubicin)、二經基 蒽二酮（dihydroxy anthracin dione) 雙經惠酸 (mitoxantrone)、米拉黴素(mithramycin)、放線菌素 (actinomycin) D、1-去氫睪酮（Ι-dehydrotestosterone)、腎 上腺醣皮質激素（glucocorticoids)、普魯卡因（Procaine)、 丁卡因（tetracaine)、利多卡因（lidocaine)、普萘洛爾 (propranolol)及嘿玲徽素（Puromycin) ’及其類似物或问源 -30- 201134488 物。 效應子分子也包括但不限於：抗新陳代謝物[例如甲 氛蝶 Π令（methotrexate)、6 -疏嘌 Π令（6-mercaptopurine)、6-硫鳥嘌 Π令（6-thioguanine)、阿糖胞音（cytarabine)、5 -氟尿 喃陡（5-fluorouracil decarbazine)]、院基化藥劑[例如二氯 甲基二乙胺（mechlorethamine)、thioepa chlorambucil、美 法侖（melphalan) '卡氮芥（carmustine)(BSNU)及洛莫司汀 (lomustine)(CCNU) 、 cyclothosphamide 、 白消安 (busulfan)、二溴甘露醇（dibromomannitol)、鏈脲菌素 (s t r e p t ο ζ 〇 t 〇 c i η)、絲裂黴素（m i t 〇 m y c i n) C、及順式二氯二 胺銷 11 ( cis-dichlorodiamine platinum)(II)(DDP)順鈾 (cisplatin)]、蒽環黴素（anthracycline)[例如道諾黴素 (daunorubicin)(以前名稱爲 daunomycin)及阿黴素 (doxorubicin)]、抗體[例如更生黴素（dactinomycin)(以前 稱爲 ac t i η〇my ci η)、博來黴素（b 1 eom y ciη)、光神黴素 (mithramycin)、安曲黴素（anthramycin)(AMC)、卡奇黴素 (calicheamicin)或度卡黴素（duocarmycins)，及抗細胞有絲 ***藥劑（例如長春新驗（vincristine)與長春鹼 (vinblastine) 〇 其他效應子分子可包括螯合的放射核，例如1111 η與 90Y ' Lu177、Bi213、Cf2 52、Ir192 及 w188/Re188 ;或藥物， 例如但不限於烷基磷醯膽鹼、拓樸異構酶I抑制劑、類紫杉 醇（taxoid)及蘇拉明（suramin)。 其他效應子分子包括蛋白質、胜肽及酵素。關注的酵素 -31- 201134488 包括但不限於蛋白酶、水解酶、裂合酶、異構酶、轉移酶。 該關注的蛋白質、多胜肽及胜肽，包括但不限於免疫球蛋白 '毒素例如雞母珠毒素（abrin)、篦麻毒素（ricin)A、假單胞 菌外毒素、或霍亂毒素、蛋白質例如胰導素、腫瘤壞死因子 、α-干擾素、β -干擾素、神經生長因子、血小板衍生的生長 因子’或組織血栓分解酶原活化子、栓塞劑或抗血管生成劑 ’例如血管生長抑制素（angios tat in)或內皮抑制素 (endostatin)，或生物學反應修飾劑例如淋巴激素 (lymphokine)、介白素- I(il-I)、介白素-2(IL-2)、.顆粒細胞 巨噬體群落刺激因子（GM-CSF)、顆粒細胞群落刺激因子（G-CSF)、神經生長因子（NGF)或其他生長因子及免疫球蛋白。 其他效應子分子可包括有用於例如診斷的可偵測的物質 。可偵測的物質的例子，包括各種酵素、假肢（prosthetic)基 團、螢光材料、冷光材料、生物冷光材料、放射核、正電子 發射金屬（用於正電子發射斷層攝影），及非放射性順磁性金 屬離子。關於金屬離子一般請見美國專利號4,741，900，其 可接合於抗體以供診斷用途。適當的酵素包括辣根過氧化酶 (horseradish peroxidase)、鹼性磷解酶、beta-半乳糖苷酶或 乙醯膽鹼酯解酶；適當的假肢基團包括鏈黴親合素 (streptavidin)、抗生物素蛋白（avidin)及生物素；適當的螢光 材料包括繳形花內酯（umbelliferone)、螢光素、異硫氰酸螢 光素、玫瑰紅（rhodamine)、二氯三阱基胺螢光素、丹磺醯氯 ，及藻紅蛋白；適當的冷光材料包括發光醇（luminol);適當 的生物冷光材料，包括螢火蟲發光酶（luciferase)、螢火蟲發 -32- 201134488 光素（luciferin)及水母發光蛋白（aequ〇rin);適當的放射核， 包括 125Ι、131Ι、ιηΙη 及 99Tc。 於另一實施例’該效應子分子可增強該抗體於體內的半 衰期’及/或降低該抗體的免疫產生性，及/或增強該抗體跨 越上皮到達免疫系的傳遞。此形式的適當的效應子分子，例 如包括聚合物、白蛋白、白蛋白結合蛋白質，或白蛋白結合 化合物，例如WO05/1 1 7984中所述者。 當該效應子分子爲一聚合物，一般而言，其可爲合成或 天然發生的聚合物’例如可視情形經取代的直鏈或支鏈聚伸 院基、聚伸烯基或聚氧伸烷基聚合物，或分支或非分支的多 糖，例如同聚多糖或異聚多糖。 在上述合成聚合物中可存在的特定的視情形的取代基， 包括1或更多個羥基、甲基或甲氧基。 合成聚合物的特定例，包括視情形經取代的直鏈或支鏈 聚（乙二醇）、聚（丙二醇）聚（乙烯醇）或其衍生物，尤其是視情 形經取代的聚（乙二醇），例如甲氧基聚（乙二醇）或其衍生物 〇 特定的天然發生的聚合物，包括乳糖、直鏈澱粉、葡聚 糖、肝糖或其衍生物。 在此使用「衍生物」係意欲包括反應性衍生物，例如硫 醇選擇性反應基，例如馬來醯亞胺等。該反應基可直接連結 或經由連結子區段連結到該聚合物。應瞭解：此種基團的殘 基在一些例子中會以該抗體片段與該聚合物間的連結基團的 形式形成該產物的一部分。 -33- 201134488 該聚合物的大小可視需要改變，但一般而言平均分子量 在500Da至50000Da的範圍，例如5000至40000Da，例如 20000至40000Da。該聚合物大小，具體而言可依據該產物 的所欲用途選擇，例如定位至某個組織例如腫瘤的能力或延 長的循環半哀期（評論請見.Chapman, 2002，Advanced Drug Delivery Reviews, 54，53 1 -545)。因此，例如若期待該產物 離開循環並穿透組織例如使用在治療腫瘤，則使用小分子量 的聚合物爲有利，例如分子量約5 000Da者。對於該產物留 在循環中的應用，使用較高分子量聚合物爲有利，例如分子 量在20000Da至40000Da的範圍者。 適當的聚合物包括聚伸烷基聚合物例如聚（乙二醇），或 更具體而言，甲氧基聚（乙二醇）或其衍生物，及具體而言， 分子量爲約1 5000Da至約40000Da者。 於一實施例，用於本發明的抗體係附著於聚（乙二醇 )(PEG)部分。於一特定實施例，該抗體爲一抗體片段，且該 PEG分子可經由任意可得的位在該抗體片段的胺基酸側鏈或 末端胺基酸官能基而附著，例如任意游離的胺基、亞胺基、 硫醇、羥基或羧基。此種胺基酸可在該抗體片段中天然發生 或可使用重組 DNA方法加工到該片段中（見例如 US 5,2 1 9,996 ； US 5,667,425 ； W098/2597 1, W Ο 2 0 0 8 / 0 3 8 0 2 4) 。於一實施例，本發明的抗體分子爲一經修飾的Fab片段， 其中該修飾係在其重鏈的C-末端加成1或更多個胺基酸以使 效應子分子附著。適當地，該額外的胺基酸形成含有1個或 更多個半胱胺酸殘基的經修飾的絞鏈區，該效應子分子可附 -34- 201134488 著於此。可使用多重部位以附著2或更多個PEG分子。 適當地’PEG分子係經由位在該抗體片段的至少1個半 胱胺酸殘基的硫醇基而共價連結。附著於該經修飾的抗體片 段的各聚合物分子，可共價地連結於位在該片段中的半胱胺 酸殘基的硫原子。該共價連結一般而言爲雙硫鍵或尤其是 硫-碳鍵。當使用硫醇基當做附著點時，可使用經適當活化 的效應子分子，例如硫醇選擇性衍生物，例如馬來醯亞胺及 半胱胺酸衍生物。可使用經活化的聚合物當做製備如上述聚 合物修飾的抗體片段時的起始材料。該經活化的聚合物可爲 任何含有硫醇反應基的聚合物，例如α-鹵化羧酸或酯，例如 碘乙醯胺、醯亞胺例如馬來醯亞胺、乙烯基颯或二硫醚。此 種起始材料可由市售商品獲得（例如購自Nektar，前身爲 Shearwater Polymers Inc.，Huntsville，AL，US A)，或可由市 售可得的起始材料使用習知的化學程序製備。特定的PEG分 子包括20K甲氧基-PEG-胺（由Nektar，前身爲Shearwater ;Rapp Polymere ;及 SunBio 購得）及 M-PEG-SPA(由 Nektar ，前身爲Shearwater獲得）。 於一具體例，該抗體爲一經修飾的Fab片段或二Fab， 例如依照EP 0948544或EP1090037揭示的方法經PEG化， 即在其上共價連結 PEG[聚（乙二醇）][亦見"P〇ly(ethylene glycol)Chemistry, Biotechni cal and Biomedical
Applications", 1992, J. Milton Harris(ed), Plenum Press, New York, "Poly(ethylene glycol) Chemistry and Biological Applications", 1997, J. Milton Harris and S. Zalipsky(eds), -35- 201134488
American Chemical Society， Washington DC and "Bioconjugation Protein Coupling Techniques for the Biomedical Sciences"，1998，M. A si am and A. Dent, Grove Publishers, New York ; Chapman, A. 2002，Advanced Drug Delivery Reviews 2002，54: 531-545]。於一實施例，PEG 係 在絞鏈區（hinge region)附著於半胱胺酸。於一實施例，經 PEG修飾的Fab片段具有馬來醯亞胺基，係共價連結於經修 飾的絞鏈區的單一硫醇基。離胺酸殘基可共價連結於該馬來 醯亞胺基，且對於該離胺酸殘基的各胺基可附著分子量約 20,000Da的甲氧基聚（乙二醇）聚合物。附著於該Fab片段的 PEG的總分子量，因此可約爲40,000Da。 特定的PEG分子包括Ν,Ν’-雙（甲氧基聚（乙二醇）MW 20,000)修飾的離胺酸的2-[3-(Ν-馬來醯亞胺基）丙醯胺]乙醯 胺，也稱爲 PEG2MAL40K(由 Nektar 購得，前身爲 Shearwater) ° PEG連結子的其他來源，包括NOF，其供應GL2- 400MA2(其中下列結構中的 m爲5)及GL2-400MA(其中m 爲2)，且n約爲450 : H3C〇-(CH2CH20)n、
Η3〇0-(〇ΗρΗ20)η-^Ν Ο m爲2或5 即指各PEG約 20,000Da。 以下爲其他的PEG效應子分子型式： -36- 201134488
於一具體例，提供一抗體，其係經PEG化（例如以此處 所述之PEG)、經由半胱胺酸殘基附著於該鏈的胺基酸 226 或附近例如該重鏈的胺基酸 226(利用序列式編號）。 本發明也提供一單離的DNA序列，其編碼爲本發明抗 體分子的重鏈及/或輕鏈。適當地，該DNA序列編碼爲本發 明抗體分子的重鏈或輕鏈。本發明的DNA序列，可包含合 成DNA，例如由化學處理產生者、cDNA、基因體DNA或其 任意組合。 編碼爲本發明抗體分子的DNA序列，可利用該技術領 域中具有通常知識者周知的方法獲得。例如編碼爲部分或所 有抗體重鏈及輕鏈的DNA序列，可視需求從已決定的DNA 序列或依據對應的胺基酸序列合成。 編碼爲接受者框架序列的DNA，對於該技術領域中具有 通常知識者爲普遍可得的，且可依據其已知的胺基酸序列輕 易地合成。 可使用分手生物學的標準技術製備編碼爲本發明抗體分 子的DNA序列。所欲的DNA序列可使用寡核苷酸合成技術 -37- 201134488 完整或部分合成。可適當使用點突變及聚合酶連鎖反應 (PCR)技術·> 適當的DNA序列的例子，提供於第2-12圖’具體而 言，序列識別號 11、13、15、17、19、21、23、25、27、 29、 31、 33、 35、 37、 39、 41、 43、 45 及 47° 適當的DNA序列的其他例子，提供於第20、22、24及 26-38圖，尤其是序列識別號：65、序列識別號：73、序列 識別號：75、序列識別號：77、序列識別號：79、序列識別 號：81及序列識別號：83。 本發明亦關於一選殖或表現載體，其包含本發明的DN A 序列當中1或更多種。因此，提供一選殖或表現載體’包含 編碼爲本發明抗體的DNA序列當中1或更多種。適當地’ 該選殖或表現載體包含2個DNA序列，係各編碼爲本發明 抗體分子的輕鏈及重鏈以及適當的信號序列。於一實施例’ 該載體包含介於重鏈及輕鏈之間的基因間的序列（.參見 W003/048208) ° 構建載體的一般方法、轉染方法及培養方法，在該技術 領域中爲周知的。於此方面，係參考“Current Protocols in Molecular Biology”， 1999, F. M. Ausubel(ed), Wiley Interscience, New York and the Maniatis Manual produced by C ο 1 d S p r i n g H a r b o r P u b 1 i s h i n g。 並提供一寄主細胞，其係包含1或更多選殖或表現載體 ，該1或更多選殖或表現載體包含編碼爲本發明抗體的1或 更多DNA序列。可使用任意適當的寄主細胞/載體系以表現 -38- 201134488 編碼爲本發明的抗體分子的DNA序列。可使用細菌例如五· CO/z_及其他微生物系，或使用真核細胞例如哺乳動物、寄主 細胞表現系。適合的哺乳動物寄主細胞包括CHO、骨髓瘤或 融合瘤細胞。 本發明亦提供製造依照本發明的抗體分子的方法，包含 以下步驟：在適於引導從編碼爲本發明抗體分子的DNA表 現蛋白質的條件下培養含有本發明載體的寄主細胞，及單離 該抗體分子。 該抗體分子可僅包含重鏈或輕鏈多胜肽，於該情形僅需 使用重鏈或輕鏈多胜肽編碼序列來轉染寄主細胞。爲了生產 包含重鏈及輕鏈兩者的產物，可將2個載體轉染該細胞株， 第1載體編碼爲輕鏈多胜狀，第2載體編碼爲重鏈多胜肽。 或者’可使用單一載體，該載體包括編碼爲輕鏈及重鏈多胜 肽的序列。 依照本案揭示的抗體與片段係由寄主細胞以良好水平表 現。因此，該抗體及/或片段的性質係最適化及可導入商業化 〇 因爲本發明的抗體有用於治療及/或預防病理情形，本發 明也提供一種醫藥或診斷組合物，係包含本發明的抗體分子 組合1或更多種醫藥上可接受的賦形劑、稀釋劑或擔體。因 此提供使用本發明的抗體於製造藥劑的用途。該組合物經常 以無菌、醫藥組合物的一部分的形式供應，該組合物正常狀 態下會包括醫藥上可接受的擔體。本發明的醫藥組合物可額 外包含醫藥上可接受的佐劑。 -39- 201134488 本發明亦提供一種製備醫藥或診斷組合物的方法，係包 含添加及混合本發明的抗體分子與1或更多種醫藥上可接受 的賦形劑、稀釋劑或擔體的步驟。 該抗體分子可爲該醫藥或診斷組合物中唯一的有活性的 成分’或可伴隨其他有活性的成分，該其他有活性的成分包 括其他抗體成分，例如抗TNF、抗IL-Ιβ、抗T細胞、抗 IFNY或抗LPS抗體，或非抗體成分例如黃嘌呤。 於另一具體例’依照本案揭示的抗體、片段或組合物， 係與另一醫藥上有活性的藥劑組合使用，該另一醫藥上有活 性的藥劑例如皮質類固醇（例如丙酸氟替卡松）（fluticasonoe propionate)及 /或 beta-2-激動劑[例如沙 丁胺醇（saibutamol)] 、沙美物羅（salmeterol)或formoterol)，或細胞生長及增殖的 抑制劑（例如雷帕黴素（rapamycin)、環磷醯胺、甲氨喋呤）， 或 CD28及/或CD40抑制劑。於一具體例，該抑制劑爲小分 子。於另一具體例，該抑制劑爲專一於該標靶的抗體。 該醫藥組合物適當地包含醫藥上有效量的本發明抗體。 在此使用的用語「醫藥上有效量」，係指治療、減輕或預防 目標疾病或病症或產生可偵測的治療或預防效果所需的治療 藥劑的量。對於任意抗體，該治療上有效量可在細胞培養分 析法或動物模型中在起初時估算，動物模型通常是囈齒類、 兔、犬、豬或靈長類。該動物模型也可用於決定適當的濃度 範圍及投予途徑。然後可使用此種資訊決定在人類投予的有 用劑量及途徑。 針對人類對象的精確的治療上有效的量，取決於疾病狀 -40- 201134488 態的嚴重度、該對象的一般健康、年齡、體重及性別、飲食 、投予時間及頻度、藥物組合、反應靈敏性及對治療的耐受 性/反應。該量可由例行的實驗決定，且係由臨床人員判斷。 —般而言’治療上有效量範圍爲〇·〇1 mg/kg至50 mg/kg，例 如 〇· 1 mg/kg至20 mg/kg。醫藥組合物可以便利地以單位 劑型的形式存在，其每一劑量包含預定量的本發明的有活性 的藥劑。 可將組合物個別對於一病患投予，或者與其他藥劑、藥 物或激素組合（例如同時、依序或分別）投予。 本發明抗體分子的投予劑量，取決於欲治療的病狀的本 性、存在的發炎的程度以及是否該抗體係用於預防或治療已 存在的病狀。 投藥的頻度取決於該抗體分子的半衰期及其效果的持續 性。若該抗體分子半衰期短（例如2至1 0小時），可能需要每 曰投藥1或更多次。或者，若該抗體分子的半衰期長（例如2 至15天），可能僅需每日投藥1次、每週1次或甚至每1或 2個月1次。 該醫藥上可接受的擔體其本身不應誘導產生對於接受該 組合物的個體有害的抗體，且不應有毒性。適合的單體可爲 大型、緩慢代謝的巨大分子，例如蛋白質、多胜肽、微脂體 '多醣、多乳酸、聚甘醇酸、聚胺基酸、胺基酸共聚物，及 無活性的病毒微粒。 醫藥上可接受的鹽類，可使用例如無機酸鹽，例如鹽酸 鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽及硫酸鹽，或有機酸鹽，例如乙酸鹽 -41 - 201134488 、丙酸鹽、丙二酸鹽及苯甲酸鹽。 該醫藥組合物中的醫藥上可接受的擔體，可額外包含液 體，例如水、鹽液、甘油及乙醇。此外在此組合物中可存在 輔助物質，例如溼潤劑或乳化劑，或pH緩衝物質。此種擔 體能使該醫藥組合物配方爲錠劑、藥九、糖衣錠、膠囊、液 體、凝膠、糖漿、漿劑及懸浮劑，以供該病患攝取。 投予用的適當形式，包括適於非口服投予的形式，例如 注射或輸液投予，例如藉由大九藥注射或連續輸液。當該產 物供注射或輸液時，其形式可爲懸浮液、溶液或在油性或水 性載具中的乳劑，且可含有可供配方的藥劑，例如懸浮劑、 保存劑、安定劑及/或分散劑。或者，該抗體分子可爲乾燥形 式，供於使用前以適當的無菌液體復水。 配方後，可將本發明的組合物直接對於對象投予。欲治 療的對象可爲動物。然而，於1或更多具體例中，該組合物 係適於對人類對象投予。 適當地，於依照本案揭示的配方中，最終配方的pH與 該抗體或片段的等電點値不相似，例如配方的pH爲7，則 pi爲8 -9或以上爲適當。雖不希望受理論限制，據認爲此情 形會使最終配方有改善的穩定性，例如抗體或片段保留在溶 液中。 於一具體例，pH範圍在4.0至7.0的該醫藥配方包含： 1至200mg/mL的依照本案揭示的抗體、1至l〇〇mM的緩 衝液、0.001至1%的界面活性劑、a) 10至500mM安定 劑、b) 10至500mM安定劑及5至500 mM張力劑，或c) -42- 201134488 5至500mM張力劑。 例如，約pH6的配方可包含1至50mg/mL抗體、20mM L-組胺酸HC1、240 mM海藻糖及0.02%聚山梨醇酯 20。 或者，約pH 5.5的配方可包含：1至50mg/mL抗體、20mM 檸檬酸鹽緩衝液、240mM蔗糖、20mM精胺酸、及0.02% 聚山梨醇酯20。 本發明的醫藥組合物可藉由任意數的途徑投予，包括但 不限於口服、靜脈內、肌肉內、動脈內、髓內、椎管內、心 室內、經皮、穿皮（例如見WO98/20734)、皮下、腹膜內、鼻 內、腸內、局部、舌下、***內或直腸途徑。也可使用無痛 皮下推進器（Hypospray)投予本發明的醫藥組合物。通常，該 醫藥組合物可製備成可注射劑，爲液體溶液或懸浮液形式。 也可製備成適於在注射前溶於或懸浮於液體載具中的的固體 劑型。 直接傳遞該組合物一般而言係由皮下、腹膜內、靜脈內 或肌肉內注射達成，或傳遞至組織的空隙間。該組合物也可 投予到患部。劑量治療可爲單劑時程或多劑時程。 應瞭解：該組合物中的有活性的成分爲抗體分子。如此 ’其易於在胃腸道分解。因此，若該組合物要使用胃腸道的 途徑投予，該組合物需要含有保護抗體免於分解但會在從胃 腸道吸收時釋出抗體的藥劑。 完整的關於醫藥上可接受的擔體的討論，可見 Remington's Pharmaceutical S c i en c e s (M ack Publishing
Company, N.J. 1991)。 -43- 201134488 於一具體例’該配方係以供局部投予，包括吸入的配方 的形式提供。 適當的可吸入的製備物包括可吸入的粉末、含有推進氣 體的計量氣溶膠、或不含推進氣體的可吸入溶液。依照本案 揭示的含有有活性的成分的可吸入粉末，可僅含上述有活性 的物質，或含有上述有活性的物質與生理上可接受的賦形劑 的混合物。 此等可吸入粉末可包括單糖（例如葡萄糖或***糖）、 雙糖（例如乳糖、蔗糖、麥芽糖）、寡糖及多醣（例如葡聚糖） 、多元醇（例如山梨醇、甘露醇、木糖醇）、鹽醣（例如氯化鈉 、碳酸鈣），或此等彼此的混合物。可適當使用單糖或雙糖 ，以水合物的形式使用乳糖或葡萄糖爲尤佳但非排除性^ 用於沉澱於肺的微粒需要微粒大小小於1 0微米，例如 1-9微米，例如從0.1至5 μπι，尤其1至5 μιη。該有活性的 成分（例如該抗體或片段）的微粒大小最爲重要。 可用於製備該可吸入氣溶膠的推進氣體爲該技術領域已 知。適合的推進氣體選自烴例如正丙烷、正丁烷或異丁烷， 及鹵化烴例如甲烷、乙烷、丙烷、丁烷、環丙烷或環丁烷的 氯化及/或氟化衍生物。上述推進氣體可以其本身使用或使用 其混合物。 尤其適當的推進氣體爲鹵化的烷衍生物，選自TG 1 1、 TG 12、TG 134a及 TG227。在上述鹵化烴當中， 丁01343(1，1，1，2-四氟乙烷）及丁0227( 1，1，1，2,3,3,3-七氟丙烷） 及其混合物特別適當。 -44- 201134488 該含有推進氣體的可吸入氣溶膠也可含有其他成分，例 如共溶劑、安定劑、表面活性劑（界面活性劑）、抗氧化劑、 潤滑劑及調整pH的藥劑。這些所有的成分爲該技術領域中 已知。 依照本發明的含有推進氣體的可吸入氣溶膠可含有至多 5重量％的有活性的物質。依照本發明的氣溶膠含有例如 0.002至5重量％、0.01至3重量％、0.015至2重量％、 〇·1至2重量％、0.5至2重量％，或0.5至1重量％的有 活性的成分。 或者，對於肺的局部投予可藉由例如採用噴霧器裝置、 連接於壓縮機的噴霧器（例如連接於Pari Master(R)壓縮機的 Pari LC-Jet Plus(R)噴霧器，由 Pari Respiratory Equipment, Inc.，Richmond，Va.製造）投予液體溶液或懸浮液配方。 本發明的抗體可以分散於溶劑的形式傳遞，例如溶液或 懸浮液形式。其可懸浮於適當的生理溶液例如鹽液或其他藥 理上可接受的溶劑或緩衝溶液。在該技術領域中已知的緩衝 溶液可對每lml水含有0.05 mg至0.15 mg依地酸二鈉、8.0 mg 至 9.0 mg NaCl、0.15 mg 至 0.25 mg 聚山梨醇醋、0.25 mg至0.30 mg檸檬酸酐，及0.45 mg至0·55 mg檸檬酸鈉 ，以達成pH爲約4.0至5.0。懸浮液可採用例如冷凍乾燥抗 ΗιΒι 體。 該治療懸浮液或溶液配方，也可含有1或更多種賦形劑 。賦形劑在該技術領域中爲人周知，且包括緩衝液（例如： 檸檬酸鹽緩衝液、磷酸鹽緩衝液、乙酸鹽緩衝液及重碳酸鹽 -45 - 201134488 緩衝液）、胺基酸、尿素、醇、抗壞血酸、磷脂質、蛋白質（ 例如血清白蛋白）、EDTA、氯化鈉、微脂體、甘露醇、山梨 醇及甘油》可將溶液或懸浮液包裹在微脂體中或生物可分解 的微球體中。該配方一般而言係採用無菌製程以實質上無菌 的形式提供。 其可包括藉由該技術領域中具有通常知識者熟悉的方法 ，過濾該用於配方的緩衝溶劑/溶液、無菌懸浮該抗體於該無 菌的緩衝溶劑溶液中，及分配該配方到無菌容器而生產及除 菌。 依照本案揭示的噴霧器配方，可提供爲例如包裝在箔封 套的單劑單位（例如密封的塑膠容器或小玻璃瓶）。各小玻璃 瓶於例如2 mL的溶劑/溶液緩衝液中含有單位劑量。 在此揭示的抗體可能適於經由噴霧傳遞。 亦設想本發明之抗體可藉由使用基因療法投予。爲了達 成此目的，將於適當DNA組分控制下的編碼爲抗體分子的 重鏈及輕鏈的DNA序列導入病患使得從該DNA序列表現抗 體鏈並且於原地組裝。 本發明也提供一種抗體分子（或包含該抗體分子的組合 物），用於控制發炎性疾病例如急性或慢性發炎性疾病。適 當地，該抗體分子（或包含該抗體分子的組合物）可用於減低 發炎過程或預防發炎過程。於一具體例，提供體內減少已活 化的T細胞，尤其涉及不適當的發炎性免疫反應者，例如招 集到如此反應的鄰近/位置處。 在此使用的減少已活化的T細胞用語，可爲比起在治療 201134488 前或未治療時，減少 10、20、30、40、50、60、70、80、 90%或更高比例。 有利地，以本發明的抗體、片段或組合物治療，能減少 已活化的T細胞的水平，而不會減低該病患的T細胞（未活 化的T細胞）的一般水平。結果會得到較少的副作用，且可 能防止病患的T細胞耗竭。 本發明也提供本發明的抗體分子用於治療或預防免疫病 症。該免疫病症例如選自由以下構成的群組：感染（病毒性 、細菌性、真菌性及寄生蟲性）、與感染相關的內毒素性休 克、關節炎、類風濕性關節炎、氣喘、COPD、***症、 阿兹海默症（Alzheimer’s Disease)、腸炎病、克羅恩症 Crohn’s disease)、潰瘍性結腸炎、佩羅尼症（peyronie’s Disease)、腹腔疾病、膽囊疾病、藏毛病、腹膜炎、牛皮癖 、脈管炎、手術粘連、中風，第I型糖尿病、萊姆病（lyme disease)、關節炎、腦膜腦炎、自體免疫性葡萄膜炎、免疫 媒介的中樞及周邊神經系的發炎病症，例如多發硬化、狼瘡 (例如全身紅斑性狼瘡）及格林巴爾症候群（Guill ain-Barr syndrome)、過敏性皮炎、自體免疫性肝炎、纖維化性肺泡炎 、葛瑞夫兹病（Grave’s disease )、IgA腎病，特發性血小 板減少性紫癒、美尼爾氏病（Meniere’s disease)、天皰瘡 (pemphigus)、原發性膽汁性肝硬化、結節病、硬皮病、韋格 納肉芽腫（wegeher’s granulomatosis) '其他自體免疫性疾病 、胰腺炎、創傷（手術）、移植物對抗寄主病（£^£〖-¥6^113_ h 〇 s t d i s e a s e)、移植排斥.反應、心臟疾病包括缺血性疾病例 -47- 201134488 如心肌梗塞以及動脈粥狀硬化、血管內凝血、骨吸收、骨質 疏鬆、骨關節炎、牙周病和胃酸過少（hypochlorhydia)，或關 於缺乏母胎耐受性的***症。 於一具體例，本發明的抗體使用於治療過敏、COPD、 自體免疫疾病或類風濕性關節炎。 本發明也提供本發明的抗體分子用於治療或預防疼痛， 尤其是與發炎相關的疼痛。 本發明更提供使用本發明的抗體分子、片段或組合物於 製造藥劑以治療或預防免疫病症，尤其是該免疫病症爲類風 濕性關節炎、氣喘或C0PD。 本發明更提供使用本發明的抗體分子、片段或組合物以 製造藥劑以治療或預防1或更多種在此敘述的醫學跡象。 本發明的抗體分子、片段或組合物可利用在希望增加 PD-1於人類或動物體的作用的任意療法。 於一具體例，本發明的抗體分子或包含該抗體分子的組 合物係用於控制發炎性疾病，例如此處所述者。 本發明也提供一種治療罹患或有風險罹患免疫病症的人 類或動物對象的方法，該方法包含對於該對象投予有效量的 本發明的抗體分子或包含該抗體分子的組合物。 於一具體例，提供一種用於純化抗體的方法（尤其是本 發明的抗體或片段），包含以下步驟： 以非結合模式實施陰離子交換層析，以使雜質保留在管柱上 而抗體洗提出來。 在該方法使用的適當的離子交換樹脂，包括Q.FF樹脂 -48· 201134488 (GE-Healthcare供應）。該步驟例如可於pH約8實施。 該處理可更包含使用陽離子交換樹脂的起始捕捉步驟’ 係於例如pH約4至5，例如4.5實施。該陽離子交換層析 可例如採用的樹脂例如CaptoS樹脂或SP sepharose FF(GE-Healthcare供應）。然後可將該抗體或片段使用離子性鹽溶液 例如氯化鈉，例如於200mM的濃度從該樹脂洗提出來。 因此該一或多個層析步驟若適當，可包含1個或更多個 清洗步驟。 該純化處理也可包含1或更多個過濾步驟，例如濾洗步 驟。 因此，於一具體例提供一經純化的抗PD-1抗體或片段 ，例如人類化抗體或片段，尤其是本發明的抗體或片段於實 質上純化的形式，尤其是不含或實質上不含內毒素及/或寄主 細胞蛋白質或DNA。 如上述使用的純化形式，係意指純度至少90%，例如9 1 、92、93、94、95、96、97、98、99% w/w 或更純。 實質上不含內毒素，一般而言係指每mg抗體產物的內 毒素含量1 EU或更少，例如每mg產物爲0.5或 0.1 EU。 實質上不含寄主細胞蛋白質或DNA —般而言係指每mg 抗體產物的寄主細胞蛋白質及/或DNA含量爲400pg或更少 ，例如每mg爲l〇〇pg或更少，尤其適當時爲每mg爲 20pg。 本發明的抗體分子也可用在診斷，例如涉及PD-1的疾 病狀態的體外診斷及造影。 -49- 201134488 本說明書中，上下文中的包含（comprising)意指包括 (inclu.ding)。 其中，本發明在技術上適當的具體例可以組合。 此處所述的具體例包含某些特性/要素。該揭示也延伸至 由該等特性/要素組成或基本上組成的分別的具體例。 本發明將於以下實施例參照圖式僅以例舉的方式敘述。 實施例 第1圖的細節： a) 抗體949的輕鏈V區（序列識別號：8) b) 抗體949的重鏈V區（序列識別號：9) c) 抗體949的CDRH1(序列識別號：1)、CDRH2(序列識別 號：2)、CDRH3(序列識別號：3)、CDRL1 (序列識別號：4) 、CDRL2(序歹IJ識另IJ號：5)、 CDRL3(序歹IJ識別號：6) 第2圖 a) 經修飾的CDRL3 (去醯胺化部位經修飾） b) 949 VK1 gLl V區（序列識別號：10) c) 949 VK1 gLl V 區 DNA(序列識別號：1 1) d) 帶有信號序列的949 VK1 gLl V區（序列識別號：12) e) 帶有信號序列的949 VK1 gLl V區DNA(序列識別號： 13) f) 949 VK1 gLl輕鏈V +不變區（序列識別號：14) 第3圖 a) 949 VK1 gLl輕鏈V +不變區 DNA(序列識別號：15) 201134488 b) 帶有信號序列的949 VKlgLl輕鏈V+不變區（序列識 別號：1 6) c) 帶有信號序列的 949 VK1 gLl輕鏈 V + 不變區 DNA(序歹[J識別號：17) d) 94 9 VK1 gL9 V區（序列識別號：1 8) 第4圖 a) 949 VK1 gL9 V 區 DNA(序列識別號：19) b) 949 VK1 gLl 1 V區（序列識別號：20) c) 949 VK1 gLl 1 V 區 DNA(序列識別號：21) d) 949 VK1 gL12 V區（序列識別號：22) e) 949 VK1 gL12 V 區 DNA(序列識別號：23) f) 949 VKl gL14V 區（序歹[J 識別號：24) 第 5圖 a) 949 VKl gL14 V 區 DNA(序列識別號：25) b) 949 VK3 gLl V區（序列識別號：26) c) 949 VK3 gLl V 區 DNA(序列識別號：27) d) 949 VK3 gLl 1 V區（序列識別號：28) e) 949 VK3 gLl 1 V 區 DNA(序列識別號：29) f) 949 gHla V區（序列識別號：30) 第6圖 a) 9 49 gHla V區DNA(序列識別號：31) b) 帶有信號序列的949 gHla V區（序列識別號：32) c) 帶有信號序列的949 gHla V區DNA(序列識別號·· 33) d) 949 gHla V區及不變區（序列識別號：34) ι：ϊ -51- 201134488 第7圖 a) 949 gHla V區及不變區 DN A(序列識別號：3 5) 第8圖 a)帶有信號序列的949 gHla V區及不變區（序列 識別號.3 6) 第9圖 a)帶有信號序列的949 gHla V區及不變區DNA(序列識 別號：37) 第10圖 a) 949 gH8a V區（序列識別號：38) b) 949 gH8a V區DNA(序列識別號：39) c) 949 gH2 0a V區（序列識別號：40) d) 949 gH2 0a V 區 DNA(序列識別號：41) e) 949 gHlb V區（序列識別號：42) f) 949 gHlbV區（序列識別號：43) 第1 1圖 a) 949 gH 8b V區（序列識別號：44) b) 949 gH8b V區DNA(序列識別號：45) c) 949 gH20b V區（序列識別號：46) d) 949 gH20b V 區 DNA(序列識別號：47) e) 人類VK1 2-1-(1) L23 JK4接受者框架（序列識別號：48) f) 人類VK1 2-1-(1) L23 JK4接受者框架DNA(序列識別 號：49) 第12圖 -52- 201134488 a) 人類 VK3 6-1-(1) A27 JK4接受者框架（序列識別 號· 50) b) 人類 VK3 6-1-(1) A27 JK4接受者框架 DNA(序列識 別號：51) c) 人類 VH1 1-3 1-46 JH4接受者框架（序列識別號：.52) d) 人類 VH1 1-3 1-46 JH4接受者框架 DNA(序列識別 號：53) e) 人類 VH1 1-2 1-e JH4接受者框架（序列識別號：54) f) 人類 VH1 1-2 1-e JH4接受者框架 DNA(序列識別 號：55) 第13圖顯示藉由抗體949抑制人類CD4+ T細胞增殖 。CD4+ T細胞係從人類 PBMC利用負面選擇純化’並與包 覆有抗CD3+對照（BSA)或抗PD-1抗體/重組PD-L2的 Dynalbead —起培養。增殖（y軸）係於第6日藉由3H-胸腺嘧 啶倂入測定。棒狀代表最大反應％(抗CD3/BSA) ’且爲4個 不同的提供者培養物的平均値+/_ S.E.M.。 第14圖爲以抗體949的配體阻斷分析。將表現PD-1的 HEK293細胞與純化過的嵌合949或人類化949，或構造同 型（isotype)符合的正對照及陰性對照一起預溫育’之後與重 組PD-L2 —起溫育。抗體949阻斷PD-L2對於PD-1的結合 ，係找出與抗小鼠IgG H + L PE接合抗體結合的PD-L2來 評估。括號中的圖式爲在預溫育階段加入的人類化949的計 算濃度pg/mL。
第15圖爲利用抗體949從人類PD-1/CD28/TCR( SEAP -53- 201134488 報告者細胞株刺激SEAP。將抗體稀釋物與報告者細胞一起 溫育，並決定釋出的SEAP。數據係以誘導倍數繪製（信號/背 景信號）。 第16圖顯示949嵌合及人類化移植物與來自馬來猴與 恆河猴的P D -1間的交叉反應性。9 4 9移植物結合於經空載體 (d)或來自人類（a)、馬來猴（b)或恆河猴（c)的PD-1轉染的 HEK293細胞的情形，係以細胞流式計數儀測定。數據以 PD-1抗體相關於螢光的幾何平均呈現。 第17圖顯示鼠科動物的輕鏈、接受者框架及人類化輕 鏈的排列。CDR字體加粗黑並加底線。提供者殘基字體加粗 黑、斜體且重點提示。 第18圖顯示鼠科動物的重鏈、接受者框架及人類化重 鏈的排列。CDR字體加粗黑並加底線。提供者殘基字體加粗 黑、斜體且重點提示。 第 19圖顯示 949gHla重鏈（V +不變區-hu IgG4P delta Lys)(序列識別號：58)。 第20圖顯示 949gHla重鏈（V +不變區 -hu IgG4P delta Lys，外顯子加底線）（序列識別號：59)。 第21圖顯示帶有信號序列的949gHla重鏈（V +不變 區 -hu IgG4P delta Lys)，信號序列加底線並爲斜體（序列 識別號：60)。 第22圖顯示949gHla重鏈（V +不變區-hu IgG4P delta Lys，外顯子加底線），信號序列加底線並爲斜體（序列 識別號：6 1)。 -54- 201134488 第23圖顯示949gHla重鏈（V +不變區-hu IgG 1 delta Lys)(序列識別號：62)。 第24圖顯示949gHla重鏈（V +不變區-hu IgGl delta Lys，外顯子加底線）（序列識別號：63)。 第25圖顯示帶有信號序列的949gHla重鏈（V +不變 區-hu IgGl delta Lys)，信號序列加底線並爲斜體（序列識別 號：64)。 第26圖顯示帶有信號序列的 949gHla重鏈（V +不變 區-h u I g G 1 d e 11 a L y s外顯子加底線），信號序列加底線並 爲斜體（序列識別號：65)。 第27圖顯示 (a) 49 VK1 gL15 V-區胺基酸及核酸序列及對應的胺基酸序 列，其中包括信號序列（序列識別號：66)。 (b) 949 VK1 gL15 V-區（序列識別號：67)。 (c) 帶有信號序列的949 VK1 gL15 V-區’信號序列加底線 並爲斜體（序列識別號：68) ° 第2 8圖顯不 (a) 949 VK1 gLl 5 V-區核酸序列’係包括信號序列。也顯示 輕鏈可變區及不變區的胺基酸序列（序列識別號：6 9) ° (b) 949 VKlgL15輕鏈（V+不變區）（序列識別號：7〇)° 第29圖顯示 (a) 949VK1 gL15輕鏈可變及不變區核酸序列。也顯示輕鍵 胺基酸序列’係包括信號序列.（序列識別號：7 1) ° (b) 帶有信號序列的9 4 9 V K1 g L 1 5輕鏈’信號序列加底線 -55- 201134488 並爲斜體（序列識別號：72) ° 第30圖顯示 (a)帶有信號序列的9 4 9 V Κ1 g L1 5輕鏈，信號序列加底線 並爲斜體（序列識別號：73) ° 第3 1圖顯示 (a) 帶有信號序列的949gH20b V -區’信號序列加底線並爲 斜體（序列識別號：74) ° (b) 帶有信號序列的949gH20b V -區’信號序列加底線並爲 斜體（序列識別號：75) ° (c) 949gH20b 重鏈（V + 不變區 _ hu kG4? delta Lys)(序列識 別號：76)。 第3 2圖顯示 (a) 949gH20b 重鏈（V + 不變區-hu [gG4? delta Lys)(序列識 別號：77)。 第33圖顯示 (a)帶有信號序列的949gH20b重鏈（V+不變區_hu U041* delta Lys)，信號序列加底線並爲斜體（序列識別號‘· 78) ° 第3 4圖顯示 (a)帶有信號序列的949gH20b重鏈（V+不變區_hu U041* delta Lys,外顯子加底線）’信號序列加底線並爲斜體（序列 識別號：79)。 第35圖顯示 (a) 949gH20b 重鏈（v + 不變區 _ hu U01 delta Lys)(序列識 別號：80)。 -56- 201134488 第3 6圖顯示 ⑷949gH20b重鏈（V +不變區—hu U01 delta [丫8，外顯子 加底線）（序列識別號：81) ° 第37圖顯示 (a)帶有信號序列的949gH20b重鏈（V +不變區-hu IgGl delta Lys)，信號序列加底線並爲斜體（序列識別號：82)。 第38圖顯示 (a)帶有信號序列的949gH20b重鏈（V +不變區_ hu W01 delta Lys，外顯子加底線）’信號序列加底線並爲斜體（序列 識別號：83)。 【實施方式】 實施例 實施例1 :產生抗PD-1抗體選殖體19的方法 抗體選殖體19的產生已敘述於國際申請案W0201 0/029434 〇 1.1骨髓瘤細胞株 爲了融合，使用來自德國微生物及細胞培養物收集中心 (German Collection of Microorganisms and Cell Cultures)(DSMZ GmbH, Braunschweig)的骨髓瘤細胞株 SP2/0-Agl4。該細胞株爲BALB/c脾細胞與骨髓瘤細胞株 P 3 X63Ag8的雜交體。該細胞據敘述爲不合成或分泌免疫球 蛋白鏈、對於8-氮雜鳥嘌呤於20 pg/ml有耐受性，且於 Η AT培養基中（次黃嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶）不生長。 該SP2/0細胞係例行地於組織培養燒瓶中於標準生長培養基（ -57- 201134488 具有10% FCS)維持。2週期間之後會使用新的冷凍的等分的 SP2/0細胞，以避免發生HGPRT-陽性回復株。該骨髓瘤細胞 在所有黴漿菌試驗中均顯示陰性。 1.2免疫及篩選用的抗原 使用敘述爲生產 CD28Fc[Evans ei a/. TVai /mmwwo/. 6, 27 1 -9(2005)]的方法製備重組蛋白質 PD-lFc，並在0.01 M HEPES、150 mM NaCl、 pH 7.4 濃縮成爲 5.1 mg/ml。於還 原及非還原條件進行的該抗原的SDS-PAGE分析，使該蛋白 質純度成爲>95%。 1.3免疫 對於5隻小鼠（約8週齡）使用免疫實驗流程在60天的期 間經由腹腔免疫。爲了免疫，製備該免疫原的明礬沉澱物。 對各次追加新鮮製備明礬沉澱物。對該小鼠以50 gg蛋白質 免疫，並追加25 pg蛋白質。使用3隻小鼠於融合。 1.4細胞的一般操作 細胞係使用層流空氣系統、無菌材料及無菌溶液，於無 '菌條件操作。細胞係於37°C於含有5%二氧化碳的潮溼氣 體氛圍中培養。爲了培養融合瘤細胞，使用完整的生長培養 基（CGM)，其含有DMEM並補充2-锍基乙醇、L-麩醯胺酸、 GlutaMax，HT、非必需胺基酸、丙酮酸鈉、抗生素/抗真菌溶 液（濃度使用製造商提供者）及不同濃度的FCS(10%、15%或 2 0%) 〇 1 . 5製備脾細胞及細胞融合物 使該3隻免疫過的小鼠於C02中窒息後，無菌移走脾 -58- 201134488 臟。製備混合（pool)後的脾臟的單一細胞懸浮液。將該脾細 胞及骨髓瘤細胞以DMEM洗滌幾次，並於1 ml 50%(w/v) PEG 3 5 50(脾細胞與SP2/0的比値爲2.5:1及2.4: 1)存在下 融合2次。.將產生的融合瘤再度懸浮於含有20% FCS的 CGM及氨基蝶呤的培養基（HAT培養基）。將各融合的細胞懸 浮液（140 C1/井）放入8個96井組織培養平底盤（Corning-Costar)，其在含20% FCS的CGM中含有140 Cl/井腹膜流出 物細胞當做饋子細胞（feeder cells)。將該等平板溫育1〇日。 於此其間，對細胞添加2次HAT培養基。將一部分脾細胞 製備物（約8x106個脾細胞）在24井盤的1個井中培養10日 ，將該細胞培養上清當做ELISA中的正對照。 1.6篩選試驗法 使用ELISA篩選細胞上清中的IgG。將96井平底聚苯 乙烯微滴定盤（Greiner,型錄號65 506 1 )以50 μΐ/井 PD-lFc 抗原（5pg/ml)於0.5 Μ碳酸鹽/重碳酸鹽緩衝液、pH 9.6包 覆。於潮濕腔室於4°C溫育過夜後，將該等平板以含有 0.01% Triton X-100 tris 緩衝鹽液洗滌（TBS，50 mM Tris, pH 7.8，500 mM氯化鈉）（洗滌緩衝液），並以200 μΐ/well 2% FCS於TBS(阻斷緩衝液）於室溫（RT)在振盪器上阻斷1小時 。將井以洗滌緩衝液洗滌，並將1〇〇μ1細胞培養上清加至適 當的井中。使用來自SP 2/0骨髓瘤細胞的細胞培養上清當做 負對照。至於正對照，使用來自脾細胞培養物的細胞培養上 清。將該等平盤於振盪器上於室溫溫育1小時，再洗滌數次 。爲了偵測結合的抗體，將平板與50 μΐ/井接合於鹼性磷解 -59- 201134488 酶（1:5000)的山羊抗小鼠IgG(Fab專一性）一起在阻斷緩衝 液中於室溫培養1小時，再洗滌數次，並添加150 μΐ/井受質 緩衝液（2 mM 4-硝基苯基磷酸鹽於5%二乙醇胺+ 0.5 mM MgCl2，pH 9.8)。於12通道Dynex Opsys MR微平盤讀取儀 於 405 nm估算光學密度（OD)。OD405nm高於平均値的 OD4 0 5nm 2倍的平盤的井選定爲陽性。 1.7選擇穩定的抗體生產者 將從陽性IgG生產培養物的細胞轉移到48-井平盤的井 ，並培養幾天（取決於該細胞的生長特性）。實施在PD-lFc上 及未預包覆抗原的ELISA，以選擇專一性結合者。將來自 ELISA陽性井的細胞冷凍於冷凍培養基（90 % FCS、10 % DMS0)。將+—部分細胞再培養以生產細胞培養上清供進一步 定性。 1.8極限稀釋選殖 鑑別陽性細胞後，儘快選殖融合瘤細胞以減少非生產細 胞過度生長（第1次選殖）。爲了確保該抗體真的是單株抗體 ，再度選殖該融合瘤（第2次選殖）。在2次的選殖程序均使 用極限稀釋的方法。將IgG生產細胞分配到含有饋子細胞的 96井盤，使密度爲每井1-3細胞。8-10日後（取決於生長特 性），在顯微鏡上以目視檢查所有平盤以偵測單株抗體生長 。從來自此等井的培養上清使用上述篩選試驗法篩選專一性 免疫球蛋白。選擇考量生長特性及ELISA信號的適當選殖體 ，轉移到24井盤的井中，並培養數日。實施篩選試驗法。 重複此程序2至3次。分別選擇適當的次選殖體供第2次選 -60- 201134488 殖程序或培養以供冷凍保存。此程序獲得生產稱爲選殖體1 9 的抗PD-1抗體。 1.9製備抗體的構造同型 製備融合瘤上清並於無菌、無疊氮化物的PBS中稀釋。 使用 Iso S trip Mouse Monoclonal Antibody Isotyping Kit(Santa Cruz ； sc-24958)，使經純化的單株抗體構造同型 化成1 pg/ml於PBS。發現選殖體19爲構造同型（isotype) I g G 1 κ。 1.10選殖體19的定序 選殖並定序編碼爲選殖體19的基因，如第1圖。該抗 體命名爲抗體 CA051_00949(常簡寫爲949)。 實施例2 :抗體949的定性與選擇 2.1抗體選擇的基本理由 爲了產生能夠經由PD-1轉誘導抑制性信號到T細胞的 治療藥劑，選擇激動性抗PD-1單株抗體。此抗體以膜近側 抗原決定基當做目標可確保其不會阻斷內生性配體（PD-L1或 PD-L2)對於PD-1的結合。因此，該激動性抗體會額外地且 有可能使來自該等配體的任何天然的抑制性信號經由PD-1 轉誘導。該抗體的人類化版本在廣泛的涉及T或B淋巴球活 性的人類疾病有潛在的治療利用性。 2.2 分析由抗體949在人類 CD4+ T細胞上誘導的PD-1 激動性 爲了證明抗體949(親代可變區，鼠科動物IgGl)可經由 PD-1誘導發信號，測試其抑制T細胞受體（TCR)衍生的活化 -61 - 201134488
信號的能力。此藉由共價偶聯949與TCR活化抗CD3抗體 至Dynalbead而達成。然後將該等珠粒加入初級人類CD4+ T 細胞培養物，在6日後藉由3H-胸腺嘧啶倂入測定增殖結果 〇 將經甲本擴醯基活化的4.5μιη Dynalbeads(M450 ; Invitrogen)於0.1M無菌磷酸鹽緩衝液（pH 7.5)中洗滌並於 3 7°C以連續反轉混合8小時在每1x1 〇7個珠粒裝載2 pg抗 人類CD3(選殖體OKT3)。然後清洗該等珠粒以移走未接合 的抗CD3，將試樣於37°C以連續反轉混合19小時第2次於 每lxlO7個珠粒包覆3BSA、非激動性對照抗PD-1抗體 、9W或重組人類 PD_L2.mFc。接著將珠粒洗滌並溫育於 0·2Μ Tris / 0.1% BSA(pH 8.5) 3小時以不活化游離的甲苯磺 醯基，再清洗並再懸浮珠粒於PBS / 0.1% BSA / 2mM EDTA(pH 7·4)。藉由將該等珠粒以螢光染料標定的構造同型 (isotype)專一性抗體染色並以細胞流式計數儀分析，以確認 該珠粒組上有均等的抗CD3及抗體/配體包覆。 針對人類T細胞增殖探討，將新鮮的肝素處理的血液以 RPMI 1 : 1稀釋，並且以密度梯度分離（Ficoll Hypaque)單離 淋巴球。使用 MACS(CD4+ T cell isolation Kit II ; Miltenyi 81〇化〇從全？81^(：以負選擇純化004+1'細胞。於96井圓底 平盤將lxl 05人類CD 4+ T細胞/井與該包覆的珠粒以1: 1 比例培養，並於37°C / 5% C02 / 1 00%濕度培養6曰。增殖 係於6曰後，藉由添加0.5μίΜ/井3H-胸腺嘧啶培養至少6 小時而測定。細胞收獲於玻璃纖維濾器上，並以β-閃爍計數 -62- 201134488 測定納入的3h-胸腺嘧啶。 2.3結果 第13圖顯示於存在抗CD3加上抗PD-1抗體或BSA對 照的經包覆珠粒下，測定到的人類 CD4+ T細胞的第6曰的 增殖反應結果。數據係以最大反應的百分比表示（抗CD3加 上BSA對照），且係4位不同的提供者反應的平均。CD4+ T 細胞增殖受抗體949抑制，使得觀察到的平均增殖僅爲最大 的5 1.6 %。在重組人類 P D - L2，利用當做針對P D -1發信號 的正對照，觀察到相似的CD4+ T細胞增殖抑制。於比較上 ，使用非激動性抗PD-1 mAb，其如預期在此試驗中對於 CD4+ T細胞增殖沒有作用。此證明抗體949能經由PD-1誘 導激動性信號，並因此導致抑制人類 CD4+ T細胞反應。 實施例3 :抗體 CA05 1_00949的人類化 抗體CA051_00949係藉由移植來自小鼠抗體V區的互 補決定區（CDR，第lc圖）到人類生殖系抗體 V-區框架而人 類化。爲了回復該抗體的活性，也保留一些來自小鼠V區的 框架殘基在該人類化序列。此等殘基係使用 Adair d a/.(1991)(Humanised antibodies WO91/09967)指出的方法選 擇。該小鼠抗體（提供者）V區序列與人類生殖系抗體（接受 者）V區序列的排列，與該設計的人類化序列，一起顯示於 第17圖及第18圖。 從提供者移植到接受者序列的CDR，如Kabat的定義 (Kab at et al. Sequence of proteins of immunological interest( 1 9 87), Bethesda MD, National Institutes of Health, -63- 201134488 US)，例外是使用組合 Chothia/Kabat定義的 CDR-H1(見 Adair et al.(1991) Humanised antibodies. WO91/09967)。 抗體949的重鏈CDR係移植於人類 V-區VH1 1-3 1-46 力口上 JH4 J -區（V BASE，http : //vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/)， 該重鏈框架殘基均來自人類生殖系基因，例外爲殘基 25、 37、41、48、71、73及76(Kabat編號法），其各保留提供者 .殘基***酸（F25)、甲硫胺酸（M37)、組胺酸（H41)、異白胺 酸（148)、纈胺酸（V71)、離胺酸（K73)及蘇胺酸（T76)。人類框 架的的位置1的麩醯胺殘基係取代爲麩胺酸（E 1)以提供均質 產物表現及純化：在抗體及抗體片段的N末端將麩.醯胺變換 爲焦麩胺酸已廣爲人報告。獲得的人類化序列命名爲949 gHla。藉由移植 CDR 到人類 V-區 VH1 1-2 1-e MiJH4J-區（V BASE，http: //vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/)，獲得一替代 的人類化重鏈序列，即949 gHlb。該重鏈框架殘基均來自人 類生殖系基因，例外爲殘基25 ' 37、41、48、71、76及 78(Kabat編號法），其各保留提供者殘基***酸（F25)、甲 硫胺酸（M37)、組胺酸（H41)、異白胺酸（148)、纈胺酸（V71) 、蘇胺酸（T76)及纈胺酸（V78)。人類框架的的位置1的麩醯 胺殘基係取代爲麩胺酸（E 1)以提供均質產物表現及純化。 人類 V-區 VK1 2-1-(1) L23 加上 JK4 J-區（V BASE, http ://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/)被選爲輕鏈 CDR 的接受者。該 輕鏈框架殘基均來自人類生殖系基因，例外爲殘基1、2、3 、4、47、60及70(Kabat編號法），其各保留提供者殘基麩 胺酸（E1)、天冬醯胺酸（N2)、纈胺酸（V3)、白胺酸（L4)、色 -64- 201134488 胺酸（W47)、天冬胺酸（D60)及絲胺酸（S70)。得到的人類化 序列命名爲949 VK1 gLl。藉由移植CDR到人類 V-區VK3 6-1-(1) A27 加上 JK4 J- cpe.cam.ac.uk/)，獲得一替代的人類化輕鏈序列，即949 VK3 gLl。 該輕鏈框架殘基均來自人類生殖系基因，例外爲 殘基2、47、58、70、71及85(Kabat編號法），其中各保留 提供者殘基天冬醯胺酸（N2)、色胺酸（W47)、纈胺酸（V5 8)、 絲胺酸（S70)、酪胺酸（Y71)及蘇胺酸（T85)。 編碼爲人類化 949 VK1 gLl、949 VK3 gLl、949 gHla 及 949 gHlb輕鏈及重鏈 V-區序列的基因，係藉由 Entelechon GmbH的自動合成方法設計及建構。藉由以寡核 苷酸點突變修飾創造出一些人類化重鏈及輕鏈的不同變異體 ，且於有些情形，CDRL3去醯胺化部位經修飾（第2a圖）。 該人類化949輕鏈V-區基因序列係選殖到UCB-Celltech人 類輕鏈表現載體pKH 10.1，該載體包含編碼爲人類Kappa鏈 不變區的DNA(Km3異型）。將人類化949重鏈V-區基因序 列選殖到 UCB-Celltech人類 gamma-4重鏈表現載體 pVhr 4P FL中，該載體包含編碼爲人類 gamma-4重鏈不變 區的DNA，並且有絞鏈穩定化突變 S241P(Angal et al.，Mol Immunol. 1 993，3 0( 1 ) : 1 05-8)，並選殖到人類 gamma-4P 重 鏈載體的版本，該載體中已經移除C末端離胺酸殘基的密碼 子，pVhr 4P delta Lys。該人類化949重鏈V-區基因序列 也選殖到 UCB-Celltech人類 gamma-Ι 重鏈表現載體 pVhr ldelta Lys，該載體包含編碼爲人類gamma-1重鏈不 -65- 201134488 變區的DNA，其C末端離胺酸殘基已經移除。短暫的共同轉 染輕鏈及重鏈載體到 HEK293懸浮細胞中，係使用 293 Fectin(12347-019 Invitrogen)達成，並造成表現該人類化重 組949抗體。 視使用的框架，藉由使從抗體949衍生的第1(c)圖的 CDR與來自選殖體19的第2(a)圖的CD RL3包含經修飾的去 醯胺化部位及下列的提供者殘基當中1個或更多個’可產生 人類化重鏈及輕鏈的一些不同的變異體。該等序列提供於第 2-11圖及第17與18圖。 3.1 供人類化的Ab949殘基 VK1 輕鏈 2-1-(1) L23
Kabat位置 取代提供者的人類殘基 1 2 3 4 47 60 70 丙胺酸 異白胺酸 精胺酸 甲硫胺酸 ***酸 絲胺酸 天冬胺酸 VK3 輕鏈 6-1-(1) A27 Kabat位置 取代提供者的人類殘基 2 異白胺酸 47 白胺酸 58 異白胺酸 -66- 201134488 70 天冬胺酸 7 1 ***酸 85 纈胺酸 VH 重鏈1 -3 1-46 Kabat位置 取代提供者的人類 25 絲胺酸 37 纈胺酸 41 脯胺酸 48 甲硫胺酸 7 1 精胺酸 73 蘇胺酸 76 絲胺酸 VH 重鏈卜2 1 - e Kabat位置 取代提供者的人類 25 絲胺酸 37 纈胺酸 41 脯胺酸 48 甲硫胺酸 7 1 丙胺酸 76 絲胺酸 78 丙胺酸 實施例4 於實施例3產生的人 4.1親和性 -67- 201134488 結合親和性測定 該試驗格式涉及以固定化抗人類 Fc捕捉949或其人類 化版本，及接著在該捕捉的表面上滴定該人類 PD-1。 BIA(Biamolecular Interaction Analysis)係使用 BIAcore 3 000(BIAcore AB)實施。將 Affinipure F(ab’）2 片段、山羊抗 人類 IgG、Fc 專一性片段（Jackson ImmunoResearch)，使用 胺偶聯化學方法固定化在CM5感測晶片上，使捕捉水平爲 «6 000反應單位（RU)。以相似方法製備空白表面，省略該程 序中的 Fc片段。使用 HBS-EP緩衝液（1 OmM HEPES pH 7.4、0.15 M NaCl、3 mM EDTA、0.005 %界面活性劑 P20、 BIAcore AB)當做跑動緩衝液，流速 10 μΐ/min。注射約 1 pg/mL的949 IgG 10 μΐ以獲得由固定化抗人類IgG-Fc捕捉 約200RU。將人類PD-1在各濃度（50nM或以下）在流速30 pL/min對捕捉的949或人類化變異體滴定。將該表面利用注 射 40 mM HC1 10 μί 再注射 5 mM NaOH 5 μί，於流速 1 0pL/min 再生。 使用ΒΙΑ評估軟體（3.2版）依照標準程序分析背景減除 結合曲線。從擬合演算法決定動力學參數。 表1顯示94 9及各種人類化版本的數據。除了 1個 (VK1 gLllgHla)以外的所有測試的移植物，對PD-1的親和 性比起949親代抗體有所改善。該嵌合物含有949可變區及 人類IgG4不變結構域。 -68- 201134488 表1 抗體 ka(l/Ms) kd(l/s) KD(nM) 949親代 2.66E+05 1.35E-03 5.07 949嵌合 1.95E+05 1.17E-03 5.98 949 VKlgLl gHla 2.11E+05 7.82E-04 3.71 949 VK1 gLl gHlb 1.91E+05 5.56E-04 2.92 949 VK1 gLll gHla 2.07E+05 1.15E-03 5.54 949 VK1 gL9 gH8a 2.45E+05 5.74E-04 2.35 949 VK1 gL9 gH20a 2.30E+05 7.27E-04 3.17 949 VK1 gL9 gH8b 2.27E+05 5.32E-04 2.34 949 VK1 gL9 gH20b 2.47E+05 6.58E-04 2.66 949 VK1 gL12 gH8a 2.34E+05 5.74E-04 2.46 949 VK1 gL12 gH20a 2.26E+05 7.66E-04 3.38 949 VK1 gLl2 gH8b 2.22E+05 6.14E-04 2.77 949 VK1 gLl2 gH20b 2.20E+05 8.35E-04 3.80 949 VK1 gLl4 gH8a 2.09E+05 9.92E-04 4.75 949 VK1 gLl4 gH8b 2.03E+05 8.88E-04 4.38 949 VK3 gLl gHla 2.10E+05 8.44E-04 4.02 949 VK3 gLl gHlb 2.07E+05 6.50E-04 3.14 949 VK3 gLll gHla 2.23E+05 1.09E-03 4.89 -69- 201134488 4.2分析抗體949及949的人類化版本的配體阻斷活性 實施PD-1配體結合試驗以決定是否抗體949(949的嵌 合人類IgG4(親代v區）及人類化暫時選殖體）有能力阻斷配 體結合。於此等試驗中，將表現P D -1的Η E K細胞與經純化 或暫時表現的抗體上清一起溫育30分鐘，再與重組人類 PD-L2.mFc融合蛋白質—起溫育。然後利用接合有ΡΕ的抗 小鼠IgG H + L抗體顯露pD-L2.mFc結合至表現PD-1的細 胞。 方法 將HEK293細胞以5 X 106/井藉由與5pg人類 PD-1 DNA及293 fectin(Invitrogen)於6井平盤一起培養過夜而暫 時轉染。翌日添加表現PD-1的HEK2 93細胞1 X 1〇5/井到96 井U-盤50μΙ：，並在冰上與50pL人類IgG4對照（lOpg/mL) 或經純化的嵌合949( 1 0、3.3或1 .lpg/mL)或對照抗PD-1抗 體（10、3.3或1.14§/!!11〇或15(^1^純淨的人類化949暫時 上清一起預溫育30分鐘。添加重組人類 PD-L2.mFc融合 蛋白質到細胞使最終濃度爲0.3 pg/mL，再於冰上溫育3 0分 鐘。將Η E K細胞於F A C S緩衝液中洗滌2次。將接合有藻紅 蛋白（Phycoerythrin)的抗小鼠H + L IgG稀釋1/200並對每井 對細胞九粒（pellet)添加50μί。將細胞於冰上溫育30分鐘。 將細胞於FAC S緩衝液中洗滌2次並立即用在流式細胞計數 儀。 結果 . 第14圖的數據顯示當預先以對照igG4或抗PD-1抗體 -70- 201134488 阻斷時，PD-L2.mFc結合於經PD-1轉染的Η ΕΚ細胞。由幾 何平均螢光強度增加顯示對照IgG4未抑制PD-L2結合於細 胞。於1與lOgg/mL之間的濃度，經純化、嵌合949抗體 未抑制PD-L2結合於PD-1表現細胞。具有已知配體阻斷性 質的對照抗PD-1抗體，在測試的濃度未阻斷PD-L2結合於 PD- 1表現細胞，確認配體阻斷可於此試驗格式檢測。抗體 949的所有人類化版本也不會抑制PD-L2結合於細胞上表現 PD-1 者。 4.3 分析抗體949及其人類化版本的功能活性 使用Jurkat細胞株開發出一報告者基因試驗法，該細胞 株穩定表現一嵌合報告者，其包含胞外配體結合及人類 PD-1穿膜結構域及人類 CD28信號化及人類 ΊΧΙΙζ胞內結構域 。此等細胞具有在NFkB-依存性啓動子控制下的報告者基因 ，且該細胞當以重組人類 PD-配體1或2刺激時，會生產分 泌的鹼性磷解酶（SEAP)，證明此報告者試驗法能檢測PD-1 激動性。此試驗法用於比較親代鼠科動物抗體949與一些人 類化建構物的功能激動性活性。 依照國際申請案W02007/060406敘述的方法產生人類 PD-l/CD2 8/TCRg嵌合建構物。將Jurkat細胞穩定地以SEAP 報告者載體中的人類 PD-1/CD28/TCRG嵌合體轉染。細胞以 大批製備並保存在液態氮中直到使用。將細胞解凍並分配於 15μί的培養基，使每384井各30,000細胞。將抗體/建構物 於ΝΜ6培養基中製備成4Χ最終濃度，添加5pL體積至2重 複井。溫育18小時後，如包裝說明的指示，分析4pL上清 201134488 的 SEAP 活性，（Clontech，Great EscapeTM SEAP)。活性係以 誘導倍數計算（信號除以背景信號）。 第15圖的數據顯示抗體949刺激從Jurkat人類PD-1/CD28/TCRC SEAP報告者細胞株釋出SEAP。對照人類抗體 ，即CAN-1，未刺激釋出SEAP。該原始CA949建構物，即 cLcH，及建構物VK1 gL12 gH8b，在該試驗法中產生相似的 滴定價。表2顯示所有測試的人類化建構物在此試驗法中 產生SEAP回應，證明其在人類化後維持激動性功能。 表2 949的人類化版本在人類 PD-1/CD28/TCR( SEAP報 告者試驗法中的比較。 EC50値係計算當成需要產生該抗體產生的最大信號的 50%所需的抗體濃度 |................................................................................................................ EC50 (ug/mL) 1VK1 qL9 gH8a 0.22 |VK1 gL9 gH8b 0.23 |VK1 gL9 gH20a 0.25 VK1 gL9 gH20b 0.27 (VK1 gL12gH8a 0.29 1VK1 gL12gH8b 0.20 |VK1 gL12gH20a 0.18 1VK1 gL12gH20b 0.18 !VK1 gL14gH8a 0.15 |VK1 gL14gH8b 0.11 l949cLcH I 0.08 4.4 結合於HEK293人類、馬來猴及恆河猴PD-1的949 嵌合及949人類化移植物的流式細胞計數儀分析 爲了確認抗體949的人類化移植物維持對非人類靈長類 -72- 201134488 PD-1的交叉反應性，對於HEK293懸浮細胞實施流式細胞計 數分析’該細胞已經暫時轉染編碼爲全長人類、馬來猴或恆 河猴PD-1的DNA。藉由以5 X 106/井將HEK293細胞與5pg DNA與293 fectin(Invitrogen)在6井平盤中溫育而暫時轉染 。於次日，將表現人類、馬來猴或恆河猴的PD-1的HEK293 細胞再度懸浮於0.2% BSA(w/v) PBS + 0.09%疊氮化鈉並於 4°C與所述濃度的949嵌合、949人類化移植物、949嵌合 (經純化）或對照抗體一起溫育1小時。將細胞以PBS洗滌， 並與 2次抗體 -1 : 1〇〇〇 FITC(Fab)2 山羊抗人類專一性 Fc(109-006-098 Jackson)於 4°C 溫育 1 小時。分析於 FACSCalibur(Becton Dickinson)上進行。 結果顯示於第1 6圖。顯示i)所有的移植物專一性結合 於表現PD-1的細胞（第16a、d圖）、ii)其均保留對原始序列 的人類PD-1結合均等體（第16a圖），及iii)其均與來自馬 來猴的PD-1交叉反應（第16b圖），及來自恆河猴的PD-1交 叉反應（第1 6c圖）。 應了解本發明已藉由實施例闡述，但絕對未意欲限制本 發明，在下述申請專利範圍的範疇內可有詳細的修飾變化。 本發明各具體例的較佳特色作了必要修正，就如同其他具體 例。在此說明書中引用所有的出版物，包括但不限於專利及 專利申請案，係納入當做參考，如同各個別的出版品特別及 個別在此完整納入當做參照一般。 -73- 201134488 【圖式簡單說明】 第1圖顯示依照本案揭示的關於抗體949的胺基酸序列 〇 第2-12圖顯示依照本案揭示的關於抗體的某些胺基酸 或DNA序列。 第1 3圖顯示抗體949抑制人類 CD4+ T細胞增殖。 第1 4圖顯示使用抗體949與人類化版本進行配體阻斷 試驗。 第15圖顯示以抗體949刺激從人類 PD-1/CD28/Zeta 報告者細胞株釋出SEAP。 第16圖顯示 949嵌合與人類化移植物對PD-1的種間 交叉反應。 第17圖顯示鼠科動物輕鏈、接受者框架及人類化輕鏈 的排列。 第18圖顯示鼠科動物重鏈、接受者框架及人類化重鏈 的排列。 第19圖顯示抗體於huIgG4格式中的重鏈的胺基 酸序列。 第20圖顯示抗體M9於huIgG4格式中的重鏈的核酸 序列。 第21圖顯示抗體949於huIgG4格式中的重鏈的胺基 酸序列，包括信號序列。 第22圖顯示抗體949於huIgG4格式中的重鏈的核酸 序列，包括信號序列。 -74- 201134488 第23圖顯示抗體949於huIgGl格式中的重鏈的胺基 酸序列。 第24圖顯示抗體949於huIgGl格式中的重鏈的核酸 序列。 第25圖顯示抗體949於huIgG1格式中的重鏈的胺基 酸序列，包括信號序列。 第26圖顯示抗體949於huIgGl格式中的重鏈的核酸 序列，包括信號序列。 第27至30圖顯示針對可變區的各種胺基酸或核苷酸序 列，其中CDR3已修改爲移除去醯胺化部位。 第31至38圖顯示針對可變區、及可變區加上不變區的 各種胺基酸或核苷酸序列。 【主要元件符號說明】 姐。 /v\s a -75- 201134488 序列表 <u〇>優稀美製藥股份有限公司 <120> PD“ 抗體 <130> G0131-TO1 <150> 61/312702 <151> 2010-03-Η <160> 83 <170> Patcntln version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213>人造序列 <220> 重組 <400> 1
Gly Tyr Thv Phc Thr Thr Tyr Pro lie GIu 1 5 10 <21〇> 2 <211> 17 <2I2> PRT 人造序列 <220> <223>重組 <400> 2
Asn Phe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn G)u Lys Phe Lys 15 10 15
Gly <210> 3 <21i> 11 <212> PRT <2i3>人造序列 <220> <223>重組 <400> 3
Glu .\sn Tyr Gly Ser His Gly Giy Phe Val Tyr 1 5 10 <210> 4 <2Π> 12 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>重組 <400> 4 201134488 <21C> 5 <2Π> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>重組 <^0C> 5 Sci Tlir Ser Asn Leu Ala Ser <210> 6 <211> 9 <212> ERT 人造序列 <220> <223>重組 <400> 6
Gin Gin Tyr Asn Gly Tyr Pro Leu Thr <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>重組 <400> 7 Gin Gin Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr <210> 8 <211> 108 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223> 重組 <400> 8
Glu Asn Val Leu Thr Gin Scr Pro Ala lie Met Scr Ala Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Scr Ser Val lie Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Qly Ala Ser Pro Lys Lea Trp 35 40 45
He Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr lie Ser Ser Val Glu 65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Gly Tyr Pro * 85 90 95 2 201134488
Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu He Lys 100 105 <210> 9 <211> 119 <212> PRT <21 >人造序列 <220> <223>重組 <400> 9
Gin Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Va] Lys Pro Gly Ala IS 10 15
Ser Val Lys Met Scr Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30
Pro 11c Glu Trp Met Lys Gin Asa His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Asn Phe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Lys Leu Thr Val Glu Lys Ser Ser Thr Thr Val Tyr 65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Arg Leu Thr Scr Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 - 95
Ala Arg Glu Asn Tyr Gly Ser His Gly Gly Phe Val Tyr Trp G)y Gin 100 105 110
Gly Thr Leu Va! Tht Val Scr Π5 <210> 20 <211> 108 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>重組 <400> 10
Glu Asn Val Leu Thr Gin Scr Fro Phc Scr Leu Ser Ala Scr Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr 11c Thr Cys Arg Ala Scr Scr Ser Val lie Ser Ser 20 25 30
Tyt Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Ala Lys Ala Pro Lys Leu Trp 35 40 45 lie Tyr Scr Thr Ser Asti Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Scr 50 55 60 201134488
Pro Glu Asp Phc Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Gly Tyr Pro 85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Tlir Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> H <211> 324 <212> <213>人造序列 <400> 11 60 120 180 240 300 324 gagaatgtgc tgacacagag cccctutca ctgtctgcat ctgtgggaga ccgggtcaca ataacctgca gggctagctc aagcgigatc agctcatacc tgcactggta tcagcaaaag cccgccaaag ctcctaagct ctggatctac tccacctcca acttggcatc tggcgtgcct gaiagatttt ctgggagcgg ttccgggaca asctataccc tgacgattas ttccctscaa ccggaggact tcgccaccta ttactgtcag cagtacaacg gctacccact gacattcggc
Sgagggacta aagtcgaaat caag
<2I0> 12 <211> 128 <212> PRT 人造序列 <220> <223〉重組 <400> 12
Met Ser Val Pro Tin G】n Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 15 10 15
Asp Ala Arg Cys Glu Asn Val Leu Thr Gin Ser Pro Phe Ser Leu Ser 20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thx lie Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser 35 40 45
Va] lie Ser Ser Tyr Leu His Τϊρ Tyi Glrj G】n Lys Pro Ala Lys Ala 50 55 60
Pro Lys Leu 丁rp lie Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 65 70 15 80
Asp Arg Phe Ser Giy Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr lie 85 90 95
Scr Scr Leu Gin Pro Glu Asp Phc Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr 100 105 110
As, Gly Tyr Pro Uu Phc Gly Gly G,y Lys Val Glu llc^Lys <210> 13 4 .201134488 <211> 384 <212> DNA <213>人造序列 <22〇> <223〉重組 <^00> 13 atgagtgtgc caactcaggt tctcggatig ctgcttcigt ggcttactga tgcccgctgc 60 gasaatgtgc tgacacagag ccccttltca ctstctgcat ctglgggaga ccgggtcaca 120 ataacctgca mctasctc aagcgtgatc agctcatacc tgcactggta tcaacaaaag 180 cccgccaaag ctcctaagct ctggatctac tccacctcca acttggcatc tggcgtgcct 240 gatagatttt ctgggagcgg ttccgggaca agctataccc fgacgattag ttccctgcaa 300 ccggaggact ccgccaccta ttactgtcag cagtacaacg gctacccact gacattcggc 360 igagggacta aagtcgaaat caag 384 <210> 14 <211> 215 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>重組 <400> 14
Glu Asn Val Leu Thr Gin Ser Pro Phe Ser Leu Set Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val He Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Ala Lys Ala Pro Lys Leu Trp 35 40 45 lie Tyr Set l,r Se, Asn Leu AU Se, Gly Va, Pro Asp ArB Phe Sex
Gly Ser Gly Ser Oly Ur Ser Tyr l.r Leu Tht lie Ser Ser Leu Gin
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Gly Tyr Pro 85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Tbr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala 100 ]05 110
Ala Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Scr
Gly -Π. Ala Set Val Val Cys Leu Leu ASn Asn Pho Tyr Pro Arg Glu
Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160
Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 s 5 201134488
Scr Ser Thr Leu Tlir Leu Ser Lys Ala Asp 了yr Glu Lys His Lys Val 185 190
Tyr Ala Cys Glu Va) Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val llir Lys 195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 15 <211> 645 <212> m 人造序列 <220> <223>重組 <400> 15 gagaatgt«c tgacacagag ccccttltca ctgtctscat ctgtg^gaga ccgg£tcaca 60 ataacctgca gggctaectc aagegtsate asctcatacc tgcactggta tcagcaaaag 120 cccgccaaag ctcctaagct ctggatctac 〖ccacctcca aettggeate tggcgtgcct 180 gatagatttr ctma^cgg ticcgggaca a^ctataccc tgaegattag ttccctgcaa 240 ccggaggact tcgccaccta ttactgtcag cagtacaacg gctacccact gacattcggc 300 g£ag£gacta aagtcgaaat caagcgtacg gtagcggccc catctgtctt catcttcccg 360 ccatctgatg agcagttgaa atctggaact scctctgttg tgtgcctgct gaataaette 420 latcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 480 caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 5-M) aegetgagea aageagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 600 ggcctgagct ogcccgtcac aaagagette aacaggggag agtgt 645
<210> 16 <211> 235 <2i2> PRT <^3>人造序列 <220> <223>重組 <400> 16
Met Ser Val Pro Thr GU Val Leu Giy Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 1 5 10 15
Asp Ala Arg Cys Glu Asii Val Leu Thr Gin Ser Pro Phe Ser Leu Ser 20 25 30
Ala Scr Val Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Ser Scr 35 40 45
Val He Scr Scr Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Ala Lys Ala 50 55 60
Pro Lys Leu Trp lie Tyr Ser Thr Scr Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 65 70 75 8〇 6 201134488
Asp Ars Phe Ser Gly Ser Gly Scr Gly Thr Ser Tyr Thr Uu Thr lie 85 90 95
Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin G3n Tyr 100 105 110
Asn Gly Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ihr Lys Val Glu lie Lys 115 120 125
Arg Thr Val Ala Ala Pro Set Val Phe lie Phe Pro Pro Scr Asp Glu 130 135 140
Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn \sn Phe 145 150 】55 160
Tyr Pro Are Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin 165 170 175
Ser Gly Asn Scr Gin Glu Scr Val Thr Glu Gin Asp Scr Lys Asp Scr 180 185 190
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 195 200 205
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val ThT His Gin Gly Leu Sct Set 210 215 220
Pro Val Tlir Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 17 <211> 705 <212> DNA <2】3>人造序列 <220> . <223>重組 <400> 17 atgagtgtgc caactcaggt teteggattg ctgcttctgt ggcttactga tgcccgctgc gagaatgtgc tsacacagag ccccttttca ctgtctgcat ccgtss^aga ccgggtcaca ataacctgca gggctagctc aagcgtgatc agctcatacc tgcactggta tcagcaaaag cccgccaaag cicctaagct ctggatclac tccacctcca aettggeate tggcgtgcct gatagatttt ctgggagcgg ticcgggaca agctataccc tgaegattag ttocctgcaa ccggaggact tcgccaccta ttactgtcag cagtacaacg gctacccact gacattcggc ssagggacla aagtcgaaat caagcgtacg gtagcggccc catctgtctt catcttcccg ccatctgatg agcagtt£aa atclggaact gcctctgttg tgtgcctgcl gaataaette latcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcclcag cagcacccig aegetgagea aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag ggcctgagct cgcccgtcac aaagagette aacaggggag agigt 7 20 列序 mi 8 了造 組 8 2S-1 Ξ //- 111] 22 ο433 s<4 3
Glu Asn Val Leu Thr Gin Ser Pro Phe Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Ars Ala Scr Ser Ser Val lie Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu His 了rp Tyr Gin Gin Lys Pro Ala Lys Ala Pro Lys Leu Phe 35 40 45
He Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr He Ser Ser Leu G1d 65 70 75 SO
Pro G】u Asp Phe Ah Thr Tyi* Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Gly Tyr Pro 85 90 95
Leu Thr Phe Giy Gly Glv Thr Lys Val Glu lie Lys 100 10S <210> 19 <211> 324 <212> _ <2U>人造序列 <220> <223>重組 <400> 19 gagaatgtgc tgacacagag ccccttttca ctgtctgcat ctgtgggaga ccgggtcaca 60 ataacctgca gggctagctc aagcgtgatc agctcatacc tgcactggta tcagcaaaag 120 cccgccaaag cicctaagct cticatctac tccacctcca aettggeate tggcgtgcct 180 ageagatitt ctgggagcgg ttccgggaca gactataccc tgaegattag ttccctgcaa 240 ccggaggact tcgccaccta ttactgtcag cagiacaacg gctacccact gacattcggc 300 ggagggacta aagtcgaaat caag 324 <210> 20 <211> 108 <232> PRT <213>人造序列 <220> <223>重組 <400> 20
Glu Asn Val Leu Thr Gin Scr Pro Phe Scr Leu Ser Ala Scr Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val lie Ser Ser 8 201134488 20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pio Ala Lys Ala Pro Lys Leu Trp 35 40 45
IlegrSerBrSer Asn Uu A!a Ser Giy Val Pro Asp Arg Phe Ser
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 SO
Pro Glu Asp Phc Ala Tht Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Ser Tyr Pro 85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu I3c Lys 100 105 <210> 21 <211> 324 <212> m <213>人造序列 <220> <223>重組 <400> 21 60 120 380 240 300 324 gagaatgtgc tgacacagag ccccttttca ctgtctgcat ctgigggaga ccgggtcaca ataacctgca gggctagctc aagcgtgatc agctcatacc tgcactggta tcagcaaaag cccgccaaag ctcctaagct ctggatctac tccacctcca aettggeate tggcgigcct gatagatttt ctgggagcgg ttccgggaca agctataccc tgaegattag ttccctgcaa ccggaggact icgccaccta ttactgtcag caglacaact cctacccact gacattcggc Egsggg^cta aagtcgaaat caag
<210> 22 <211> 108 <212> PRT 人造序列 <220> <223>重組 <400> 22
Glu Asn Val Met Thr Gin Scr Pro Fhe Ser Leu Scr Ala Scr Val Gly 1 5 】0 15
Asp Arg Val Thr lie Tlir Cys Arg Ala Ser Ser Ser Yal lie Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Ala Lys Ala Pro Lys Leu Phe 35 40 45 lie Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Scr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 GVy Ser (Jly Ser Gly Tlu Asp Tyr Thr Leu Thi lie Scr Sei Leu Gin 65 70 75 80 9 201134488
Pro Glu Asp Phe Ala Ήιγ Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asti Gly Tyr Pro 85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Va】G】u He Lys 100 105 <210> 23 <1\\> 324 <212> DNA <2B>人造序列 <220> <223>重組 <40» 23 gagaatgtga tgacacagag ccccttitca ctgtctgcat ctgtgggaga ccgggtcaca aiaacctgca gggctagctc aagc£tgatc agctcatacc tacactggta tcagcaaaag cccgccaaag ctcctaagct cttcatctac tccacctcca acttggcatc tggcgtgcct agcagatttt ctgggagcgg ttccgggaca gactataccc tgacgattag ttccctgcaa ccggaggact tcgccaccta ttactgtcag cagtacnacg gctacccact gacattcggc ggagggacca aagtcgaaat caag
<210> 24 <231> 108 <212> PRT 人造序列 <220> <223>重組 <400> 24
Glu Asn Val Met Thr Gin Ser Pro Phe Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 10 15 60 120 180 240 300 324
Asp Arg Val Thr He Ήιγ Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val lie Scr Ser 20 25 30
Tyr Lcn His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Ala Lys Ala Pro Lys Lc« Vht 35 40 45 lie Tyr Ser llir Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 GJy Ser GJy Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Ihr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Ser Tyr Pro 85 90 95
Leu Thr Phe Qly Gly Gly ITir Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 25 <211> 324 <212> m <2B>人造序列 <220> <223>重組 10 201134488 <400> 25 60 120 ISO 240 300 324 gagaatgtga tgacacagag ccccttttca ctgtctgcat ccgtgggaga ccggglcaca ataacctgca gggctagctc aagcgtgatc a^cccatacc tgcactggta tcascaaaag cccgccaaag ctcctaagct cttcatctac tccacctcca acttsgcatc tggcgtgcct agcagatttt ctgggagcgg ttccgggaca gactataccc tgacgattag ttccctgcaa ccggaggact tcgccaccta tlactgtcag cagtacaact cctacccact gacattcggc geagssacta aagtcgaaat caag
<210> 26 <212> 108 <212> P8T 人造序列 <220> <223>重組 <400> 26
Clu Asn Val Leu Thr Gin Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Scr Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val lie Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin ASa Pro Arg Leu Trp 35 AO 45
He Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr lie Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Rie Ala Ihr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Gly Tyr Pro 85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 27 <211> 324 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223>重組 <4〇〇> 27 60 120 】80 240 300 324 gaaaacgtcc tgacacaatc tccgggtaca ctgtcactga gccctggaga gagagctacc ttgagctgcc gagcctcaag tagegtgatt agctcctacc tgcactggta tcagcaaaag cctgggcaag caccaaggct gtggatctat agcacctcca atctggcctc lggtgtgcct gacagattct cigsctctgg stctesaacc tcctacaccc igacratatc acgcctggag ccagaggact tcgccacata ctactgccag cagtacaacg gctatcccct gacctuggc Sgagggacta asgtggaaat caaa 11 201134488
<210> 28 <211> 108 <212> PRT 人造序列 <220> <223〉重組 <400> 28
Glix Asn Val Leu Thr G】n Ser Pro G]y Ήιτ Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Vai lie Ser Ser 20 25 30
Tyr \j^n His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg I-eu Trp 35 40 45 lie TV〇r Sex Thr Ser AS„ Leu Ala Ser G.y Val Pro Asp Arg Phe Ser
Gly Ser Gly Set Gly Tbr Ser Tyr Thr Leu Thr He Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe A1a Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Ser Tyr Pro 85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie hys 100 105 <210> 29 <213> 324 <212> Wk <2! 3>又造序列 <220> <223>重組 <400> 29 gaaaacgtcc tgacacaatc tccgggtaca ctgtcactga gccciggaga gagagctacc 60 ttgagctgcc gagcctcaag tagegtgatt agctcctacc tgcactggta tcagcaaaag 120 cctgggcaag caccaaggct gtggatctat agcacctcca atctggcctc tggtgtgcct ]g〇 gacagattct: clggctctgg gtctggaacc tcctacaccc tgactatatc acscctggag 240 cca£aggact tcgccacata ctactsccas cagtacaact cctatcccct gacctttggc 3〇〇 ggagggacta aggtggaaat caaa 324
<210> 30 <211> 119 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>重組 <400> 30
Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro GJy Ala 15 10 15
Ser Vai Lys Val Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr 12 s 201134488 20 25 30
Pro lie Olu Trp Met Arg Gin Ala His Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Asn Phc His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asrs Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Thr Thr Thr Val Tyr 65 70 75 80
Met Glu I^u Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Va] Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Asn Tyr Gly Ser His Gly Gly Phe Val Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Scr 115 <210> 31 <211> 357 <212> Wk 人造序列 <220> <223>重組 <400> 31 60 】20 180 240 300 357 gaagtgcaac tggtgcagtc tggagctgaa gEgaagaaac ctggtgctag cgtcaaaglg tcctgcaaag ccticggcta taccttcacc acgtacccaa ttgagtggat gaggcaggca cacggacaag gattggagtg gatcggcaac tttcacccct acaacgacga cacgaagtac aacgagaagt tcaagggtce cgtgacaatg accgtcgata agagcacgac cactgtttat atggagctga gctcactgag atccgaagat actgccgtct actattgtgc ccgagagaat tacggatcac acgggggatt tgtttactgg ggacaaggca cactggttac cgtctcg
<2!0> 32 <211> 138 <212> WV 人造序列 <22Q> <223>重組 <400> 32
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly 15 10 15
Val His Ser Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30
Pro G)y Ala Ser Va) Lys Val Scr Cys Lys Ala Phc Gly Tyr Thr Phc 35 40 45
Thr Thr Tyr Pro lie Glu Trp Met Arg Gin Ala His Gly Gin Gly Leu 50 55 60 13 201134488
Glu Trp lie Gly Asn Phe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn 65 70 75 80
GluLysPheLySGlyAr2ValTftrMetSrVa.ASpLys Ser Thr ^
Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 · 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Giu Asn Tyr Gly Ser His Gly Gly Phe Val Tyr 115 120 125
Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Tiir Val Ser 130 135
<210> 33 <2Π> 414 <212> DNA 人造序列 <220> <223>重組 <400> 33 atggaatgga gctgggtctt tctcttcttc ctgtccgtga caactggtgt gcactctgaa 60 gtgcaantgg tEcagtctgg aecigaaBtg aagaaacctg gtgctagcgt caaagtgtcc 120 tgcaaagcct tcggctatac cttcaccacg tacccaattg agtggatgag gcaggcacac 180 ggacaaggat iggagtggat cggcaacm cacccclaca acgacgacac gaagtacaac 240 gagaagttca agggtcgcgt gacaatgacc gtcgataaga gcacgaccac igittatatg 300 gagctgagct cactgagatc cgaagatact gccgtctaci attgtgcccg agagaatiac 360 ggalcacacg ggggatttgt ttactgggga caaggcacac tggttaccgt ctcg 414 <210> 34 <211> 447 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>重組 <400> 34
Cluval G1nLeuVa! Ser Gly Ala G,u Va, LyS Lys Pro G,y Ala
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30
Pr〇neO,uTrpMet Arg Ma His GIy Oln Leu Trp He
Gly Asn Phe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 L?s G1y Axg Val Thr Met Val Asp Lys Ser Thr T,r Val Tyr
Met Glu Leu Ser Scr Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 14 201134488 85 90 95
Ala Arg Glu Asn Tyr Gly Ser His G3y Gly Phe Val Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Va] Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Scr 145 150 155 160
Trp A$n Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215. 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 70S m 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp llir Leu Met lie Ser Arg Ihr 245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu 260 265 270
VaJ Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asm Ala Lys 275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu G!u Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Scr Ser lie Glu Lys Thr lie 325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 3S0
Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365
Val Lys Gly Bie Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 15 201134488
Gly Gin Pro Givt Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Scr 385 390 395 400
Asp Gly Scr Phe Phe LcU Tyr Scr Arg Leu Ihr Val Asp Lys Ser Arg
Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Mec His Glu Ala Leu 420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <2U)> 35 <21l> 1948 <212> im <213>人造序列 <220> <223>重組 <400> 35 gaagigcaac tgstgcagtc tggagctgaa gtgaagaaac ctggtgctag cstcaaagtg icctscaaag ccucggcia taccttcacc acgtacccaa tigagtggat gaggeaggea cacggacaag gauggagtg gatcggcaac tucacccct acaacgacga cacgaagtac aacgasaagt tcaagggicg cetgacaatg accgtceata agageaegae cactgtttat atggagctga gctcactgag atccgaagat actgccgtct actattgtgc ccgagagaat tacggatcac acgggggatt tgtttactgg ggacaaggca cactggttac cglctcgagc gcttctacaa agggcccatc cgtcttcccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag agcacagccg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg tfigaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacgaagacc tacacctgca aegtagatea caagcccagc aacaccaagg tggacaagag aguggtgag aggccagcac agggagggag sgtgtctgct ggaagccagg ctcagccctc ctgcctggac ficaccccggc tgtgcagccc cagcccaggg cagcaaggca igccccatct gtctcctcac ccggaggcct ctgaccaccc cactcatgcc cagggagagg gtcttctgga tttttccacc aggctccggg cagccacagg ctggatgccc ctaccccagg ccctgcacat acaggggcag Stgctgcgct cagacctgcc aagagccata tccgggagga ccctgcccct gacctaagcc caccccaaag gccaaactct ccactccctc agctcagaca ccttctctcc tcccagatct gagtaactcc caatcttctc tctgcagagt ccaaatatgg tcccccatgc ccaccatgcc caggiaagee aacccaggcc icgccctcca gcuaaggcg ggacaggigc cctagaglag cctgcatcca gggacaggcc ccagccgggt gctgacgcat ccacctccat ctctlcctca gcacctgagt tcctgsRggS accaicagtc ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact ctcargatct cccggacccc tgaggicacg tgcgiggtgjg tggacfitgag ccaggaagac cccgasgtcc agttcaactg gtacgiggat ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg ageagttcaa cagcacgtac cgtgtgfitca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 560 1020 1080 1140 1200 1260 1320 138D 1440 1500 16 201134488 tccatcgaga aaaccatctc caaagcc2aa ggtgggaccc acggggtgcg agggccacat 1560 ggacagaggl cagcicggcc caccctcigc cctgggagtg accgctgtgc caacctctgt 1620 ccctacaggg cagccccgag agccacaggt gtacaccctg cccccalccc aggaggagat 1680 gaccaagaac caggtcagcc igacctgcct ggtcaaaggc Uctacccca gcgacatcgc 1740 cgtggagigg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctuccgtgct 18(X) ggactccgac ggclcctlct icctctacag caggctaacc gtggacaaga gcaggtggca 丨8® ggaggggaat gtcttctcaE gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacaca 1920 gaagagcctc tccctgtctc tgggtaaa 1948
<210> 36 <21I> 466 <212> PRT <21人造序列 <220> <223>重組 <400> 36
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr TKr Gly 】 5 10 】5
Val His Ser Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30
Pro Gly Ala Ser Va] Lys Val Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe 35 40 45
Thr Thr Tyr Pro He Glu Trp Met Arg Gin Ala His Gly Gin Gly Leu 50 55 60
Glu Trp lie Gly Asn Phe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn 65 70 75 80
Glu Lys Phe Lys Gly Axg Val Thr Met Thr Va] Asp Lys Ssr Thr Thr 85 90 95
Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Scr Leu Arg Scr Glu Asp Tiir Ala Val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Asn Tyr Gly Ser His Gly Gly Phe Val Tyr 115 120 125
Trp Giy Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ssr Thr Lys Gly 130 135 240
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Scr Arg Ser Thr Ser Glu Ser 145 150 355 160
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 165 170 175
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Scr Gly Val His Ttir Phe 180 185 190 17 201134488
Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 195 200 205
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asa Va] 210 215 220
Asp His Lys Pro Sex Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys 225 230 235 240
Tyr Giy Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 01υ Phe Leu Gly Giy 245 250 255
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He 260 265 270
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu 275 ' 280 285
Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 290 295 300
Asn Ala Lys Thi Lys Pro Arg Glu Glu Gin File Asn Ser Thr Tyr Arg 305 310 315 320
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 325 330 335
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Set Asn Lys Gly I-eu Pro Ser Ser He Glu 340 345 350
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Givi Pro Gin Vai Tvr 355 360 365
Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Me\ Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 370 375 380
Thr Cys Leu Val Ly& Gly Phe Tyr Pro Scr Asp lie Ala Val Glu Trp 3S5 390 395 400
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro VaJ 405 410 415
Leu Asp Set Asp Gly Ser Phe PKe I^u Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp 420 425 430
Lys Ssr Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Set Cys Ser Va! Met His 435 440 445
Glu Ala ί-eu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu 450 455 460
Oly Lys 465 <210> 37 <21l> 2005 <212> DNA 18 201134488 <213>人造序列 <220> <223>重組 <4CKfc> 37 atggaatgga gctgggtctt tctcttcttc ctgtccgtga caactggtgt gcacrctgaa gtgcaactgg tgcagtctgg agctgaagtg aagaaacctg gtgctagcgt caaagtgtcc tgcaaagcct tcggctatac cttcaccacg tacccaattg agtggaigag gcaggcacac ggacaaggat tggagtggat cggcaacttt cacccctacs acgacgacac gaagtacaac gagaagttca agggtcgcgt gacaatgacc gtcgataaga gcacgaccac tgtttatatg gagctgagct cactgagatc cgaagatact gccgtctsct attgtgcccg agagaattac ggatcacacg ggggautgt ttactgggga caaggcacac tggitaccgt ctcgaecgct tctacaaagg gcccatccgl cuccccctg scgccctgc丨 ccaggagcac ctccgagagc acagccgccc tgggctgcct ggicaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg aactcaggcg ccctgaccag cgscgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccciccagca gcttgggcac gaagacctac acctgcaacg tagalcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagagagl tggigagagg ccagcacagg gagggaBggl: gtctectgga agccaggcic agccctcctg cctggacEca ccccggctgt scasccccag cccagsgcag caaggcatgc cccatctfitc tcctcacccg gaggcctctg accaccccac tcatgcccag ggagagggtc lictggattt ttccaccagg ctccssgcag ccacaggctg galgccccla ccccag^ccc tgcgcataca ssggcaggtg ctgcgctcag acctgccaag agccatatcc gggaggaccc tgcccctgac ctaagcccac cccaaaggcc aaactctcca ctccctcagc tcagacacct tcictcctcc cagatctgag taactcccaa tcttctctct gcagagtcca aatatggtcc cccatgccca ccatgcccag gtaagccaac ccaggcctcg ccctccagct caaggcggga caggtgccct agagtagcct gcatccaggg acaggcccca gccggstsct gacgcatcca cctccatctc ttcctcagca cctgagctcc tggggggacc atcagtcttc ctgttccccc caaaacccaa ggacacictc aigatctccc gfiacccctea ggtcacgigc gtggtgsi£fi acgt£a£cca ggaagacccc gaggtccast tcaactsgta cgtggatssc stggasstsc alaatgccaa £acaaasccg cmaggagc agttcaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga acggcaagga giacaagtgc aaggtctcca acaaaggcct cccgtcctcc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggt gggacccacg gggtgcgagg gccacatgga cagaggtcag ctcggcccac cctctgccct gggagtgacc gctgtgccaa cctctgtccc tacagggcag ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagigggag agcaatgggc agccgg3gaa caactacaag accacgccic ccgtgctgga ciccgacggc tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga gmaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc ctgtctctgg gtaaa 60 120 ISO 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 950 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 ]620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2005 19 201134488 <210> 38 <211> 119 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>重組 <40O> 38
Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly AJa Glu Va】Lys Lys Pro Gly A】a 15 10 15
Sct Val Lys Val Scr Cys Lys Ala Phc G】y Tyr Thr Pile Thr Thr Tyr 20 25 30
Pro lie Glu Trp Met Arg Gin Ala His Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 AS
Giy Asn Phe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Asn Tyr Gly Ser His Gly Gly Phe Val Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 115 <210> 39 <211> 357 <212> m 人造序列 <220> <223> 重組 <400> 39 gaagtgcaac tgstgcagtc tggagctgaa gtgaagaaac clggtgctag cgtcaaagtg tcctgcaaag cctlcggcla taccttcacc acjgtacccaa Ugaglggal gaggeaggea cacggacaag gattggagtg gatcggcaac tttcacccct acaacgacga cacsaagtac aacgagaagt tcaagggtcg cgtgacaatg accagggata ccagcacgag caclgtttat atggagctga gctcactgag atccgaagat actgccgtct actattgtgc ccgsgagaat tacggatcac acgggggatt tgtttactgg ggacaaggca cactggttac egteteg <210> 40 <211> 119 <212> FRT <2U>人造序列 <220> <223>重組 <400> 40
Glu Val Gin ljt\x Val Gin Set Gly Ala Gla Val Lys Lys Pro Gly Ala 20 60 120 180 240 300 357 201134488 1 5 10 】5
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30
Pro lie Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 GJy Asn Hie His Pro Tyr Asn Asp Asp Tlir Lys Tyt Asn Glu Lys Ph^c 50 55 60
Lys Gly Arg Val Br Met T^r Arg ASP Π. Scr T.r Scr Tl,r Val lyr
Met CHu Leu Ser Ser Leu Arg Ser G】u· Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Asn Tyr Gly Scr His Cly Giy Phe Val Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 115 <2I0> 41 <21 ]> 35T <232> DMA <213>人造序列 <220> <223>重組 <400> 41 gaagtgcaac tggtgcagtc tggagctgaa gtgaagaaac ctggtgctag cgtcaaagtg 60 tcctgcaaag ccttcggcca taccttcacc acgtacccaa ttgagtgggt gaggeaggea 120
cccg^acaas sattgga^tg gatgggcaac tttcacccct acaacgacga cacgaagtac 18G aacgagaagt icaagggtcg cgtgacaatg accagggata ccagcacgag cactgtttat 240 atggagctga gctcaclgag atccgaagat actgccgtct actattgtgc ccgagagaat 300 tacggatcac acgggggatt tgtttactgg ggacaaggca cactggttac egteteg 357 <23〇> 42 <211> 119 <21Q> m <2I3>人造序列 <22Q> <223>重組 <400> 42
Glu Val Gin Leu Val Gin Scr Gly Ala Glu Val L>s Lys Pro Gly Scr 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30
Pro Ik Glu Trp Met Arg Gin Ma His Gly Gin Gly Leu G]u Trp 】le 35 40 45
B 21 201134488
Gly Asn Phe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Arg Vai Thr He ΊΤιγ Val Asp Lys Set Thr Thr Thr Val Tyr 65 70 75 SO
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Scr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Asn Tyr Gly Scr His Gly Gly Phe Val Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 115
<210> 43 <2]1> 357 <212> DNA 人造序列 <220> <223>重糸且 <400> 43 60 320 180 240 300 357 gaa2t£cagc ttstgcaaag cg^csctgas gicaaaazgc ccg«atcaag cstgsaagtc tcatgcaaag ccttcggcta caccttcaca acgtacccta tcgagtggat gaggeagget catggccaag gactgsaalg gattgggaac ttccacccat acaacsacga caccaagtac aacgagaagt tcaoggggcg cgttacta(a accgtggaca agagcactac caccgtgtac atggagerga gcagictgag aagegaggat acagccgtgt actattgtgc acgggagaat tatggetetc aeggeggatt tgtgtactgg ggccaaggaa cactggttac tgteteg <210> 44 <211> 119 <212> PRT <2]3>人造序列 <220> <223>重組 <400> 44
Giu Val Gin Uu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 IS
ScrValLvsgi Sc, Cvs Lvs Ala Phe G!y Tyr Th，Phe Th〇rT,r T,
Pro lie Glu Trp Met Arg: Gin Ala IHs Gly Gin Gly L&u Glu Trp lie 35 40 45
Gly Asn Phe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Arg Va] Thr lie Ώιι Ala Asp Lys Ser Thr Ser Ihr Ala lyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 22 201134488
Ala Arg Glu Λεη Tyr Gly Scr His Gly Gly Phe Val Tyr Trp Gly Gin 100 105 310
Gly Thr Leu Val Thr Va] Ser 115 <210> 45 <211> 357 <212> mk <213>人造序列 <220> <223>重組 <400> 45 60 120 ISO 240 300 357 gaagtgcagc ttgtgcaaag cggcgctgag gtcaaaaagc ccggatcaag cgtgaaagtc tcatgcaaag ccucggcta caccttcaca acgtacccu tcgagtggat gaiggcaggct catggccaag gactggaatg gatlgggaac ttccacccat acaacgacga caccaagtac aacgagaagt tcaaggggcg cgttactata accgccgaca agagcactag caccgcctac atggagctga gcagtctgag aagcgaggat acagccgtgt actattfitgc acgggagaat tatggctctc acggcggait tgtgtactgg ggccaaggaa cactggttac tgtctcg <210> 46 <211> Π9 <212> PRT <233>人造序列 <220> <223>重，組 <400> 46
Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro GJy Ser 15 iO 15
Sex Val Lys Va] Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30
Pro lie Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Giy Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 AQ 45
Gly Asn Phe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe SO 55 60
Lys Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Tlir Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Asn Tyr Gly Scr His Gly Gly Phe Val Tyr Trp Cly Gin 100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 115 <210> ΑΊ <21i> 357 23 201134488 <212> DNA <213>人造序列 <220> 60 120 180 240 300 357 <223>重組 <400> 47 gaagtgcagc tlgtgcaaag cggcgctgas gtcaaaaagc ccggaicaag cgigaaagtc tcatgcaaag ccagcggcta caccttcaca acgtacccta tcgaglgggt gaggcaggct cccggccaag gsctggaatg gaiggggaac ttccacccat acaacgacga caccaagtac aacgagaagt tcaaggggcg cgitactata accgccgaca agagcaciag caccgcctac atggagctga gcagtctgag aagcgiiggat acagccgtgt actatigtgc acgggagaal utggctctc acggcggau tgtgtactgg sgccaaggaa caetggttac tgtcurg
<2I0> 48 <21I> 107 <212> PRT 人造序列 <220> <223>重組 <400> 48
Ala lie Arg Met Thr Gin Scr Pro Phe Ser Leu Scr Ala Scr Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg val n： lie Cys TrP Ala Ser 0!„ G.y He Ser Ser Tyr
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Ala Lys Ala Pro Lys Leu Phe I]e 35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Scr Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr lie Scr Scr Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Cla TVr Tyr Scr Ih, Pro Leu
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Vai Glu lie Lys 100 105 <21Q> 49 <21 ]> 321 <212> m 人造序列 <22Q> <223>重組 <400> 49 60 120 ISO 240 gccatccgga igacccagtc iccaltctcc ctglctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgct gggccagtca gggeattage agttatttag cctggtatca gcaaaaacca gcaaaagccc etaagetett caictanat gcaiccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca aggttcagcg gcagtggatc tgssacggat tacactctca ccaicagcas cctgcagcct 24 201134488 gaagattttg caactlatta ctgtcaacag tattatagta cccctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 50 <211> 108 <212> PRT 人造序列 <220> <223>重組 <40Q> 50
Glu lie Val Leu Tbr Gin Ser Pro Gly Thr Lsu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arjg Ala TTir Leu Scr Cys Arg Ala Scr Gin Ser Val Set Scr Scr 20 25 30
Tyr Leu A1a Trp Tyr Gin G!n Lys Pro Giy Gin Ala Pro Arg Leu I.eu 35 40 45 lie Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly lie Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Scr Gly Thr Asp Phe Tbr Leu llir lie Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe klh Val T>-r Tyi Cys Gin Gin Tyr Cly Scr Scr Pro 85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu He Lys 100 105 <210> 51 <211> 324 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223>重組 <400> 51 gaaaitgtst tgacgcagtc tccaggcacc ctgtclttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagigtiage agcagciact tagcct^ta ccagcagaaa 120 cctgsccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac !ggcatccca 180 gacagguca gtggcagtgg gtcigggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cclgaagsitl ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacctct cactncggc 300
Sgagggacca aggtggagat caaa 324 <210> 52 <231> 112 <212> PRT <213>人造序列 <223>重組 <400> 52 25 I? 201134488
Gin Val Gin Leu Val Gin Scr Gly Ala Glu Vai Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys Va〗Ser Cys Lys A】a Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30
Tyr Met His Trp Va】Arg Gin Ala Pro Gly Gin Giy Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly lie He Asn Pro Ser Gly Giy Ser Thr Ser Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60
Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80
Met Glu Uu Ser Ser Leu Arg Ser Giu Asp Thr A】a Vai Tyr Tyr Cys 85 90 95 A】a Arg Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly G】n Gly Thr Leu Va] Thr Val Ser 100 105 110 <210> 53 <211> 336 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223>重組 <400> 53 60 120 180 240 300 336 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaage ctggggcctc agtgaaggtt tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata igcactgggt gcgacaggcc cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac atggagctga gcagcctgag atetgaggae acggccgtgt attactgtgc gagaiactlt gactactggg gccagggaac cctggtcacc gtctcc
<210> 54 <211> 112 <212> PRT 人造序列 <220> <223〉重組 <400〉 54
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 20 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Giy Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Ala【]e Sei 丁rp Val Arg G]n Ala Pro G】y Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Giy Gly lie He Pro lie Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60 26 201134488
Gin Oly Arg Val Thr He Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 55 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val ΊΙιγ Val Ser 100 105 110
<210> 55 <2il> 336 <2t2> DNA 人造序列· <220> <223>重組 <400> 55 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag Etgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 50 iccigcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta rcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcugagtg gaigggaggg atcatcccla tcUtggtac ascaaactac 180 gcacagaagt tccagsscag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atcigaggac acggccgtgt attactgtgc gagatacttt 300 gactactggg gccagggaac cctggtcacc gtctcc 336
<2i0> 56 <211> 14 <212> PKY 人造序列 <220> <223>重組 <400> 56
Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 1 5 ]〇
<210> 57 <211> 12 <212> PRT 人造序列 <220> d2%重組 <400> 57
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 1 5 10 > > > > 0164 3 tl n 1 It» <2<2<2<2 <220> <223> 58 446 PK1' 人造序列 重組 <400> 58
Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ma Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15 27 201134488
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30
Pro lie Giu Trp Met Arg Gin Ala His Gly Gin Gly Leu Glu 丁rp I]e 35 40 45
Gly Asn Phe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Arg Vai Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Thr Thr Thr Vai Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Asn Tyr Gly Scr His Gly Gly Phe Val Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Fhe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser llir Ala Ala 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160
Trp Ash Ser Gly Ala Leu Thr Scr Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Tlir Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 230 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Giu Phe Leu Gly Gly Pro Scr Val 225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg Thr 245 250 255
Pro Glu Va] Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu 260 265 270
Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 Z95 300
Val Leu ΊΙιγ Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 28 201134488 305 310 315 ~ 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr He 325 330 335
Set Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 u Le 's Γ -Th U5 e6 L3 Τ» c s va n G1 Π As so LV36 Γ Th 6 M u G, u Gl n5 .—5 G3 Γ 6 s r0 so LV37 va
As Γ 5 ¢7 S3 o f p f Ty sn A f 6 s u G1 rp Tr u o 1 8 G3 va
As uLsval o pr o 5 Γ 9 p 3 Γ Th Γ Th. s Ly Γ Ty STI90 A 3 n As u G1 r0 p n y5 18 G 3 cl si· sLy p As va Γ TT1 uo Le41 r8 M f c s T Ty tt u e5 £40 c ph Γ c s y G1 p As A1 uo 13 G4 s Hi c, M va Γ c s s 5 CV42 Γ c s c ph va Π As yo )o~ G4 ϋ G1 n G1 p Tr
f o 〇〇 u 6 ο Γ c S4 A L G, U5 Le44 Γ 6 s u Γ c s tt Le ΓΟ se44 s Ly n G1 Γ w TV s —3 H 4 n As s Hi
<210> 59 <211> 1945 <m> DMA 人造序列 <220> <223>重組 <4〇〇> 59 gaagtgcaac tggtgcagtc tggagctgaa gtg&agaaac ctggtgctag cgtcaaagLg tcctgcaaag ccitcggcta taccttcacc acgucccaa ttgagtggat gaggeaggea cacggacaag gailggagtg gatcggcaac tttcacccct acaacgacga cacgaagtac aacgagaagt tcaagsgtcg cgtgacaatg accgtcgata agageaegae cactgtttat aiggagciga gctcactgag atccgaagai acigccgict actaugtgc ccgagagaat tacggatcac acgggggatl tgtttactgg ggacaaggca cactggttac csictcgagc gcnctacaa agggcccatc cgtcticccc ctggcgccct gctccaggag cacctccgag agcacagccg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgccct acagtcctca gsactctact ccc(cagcag cgtgstgacc glgccctcca gcagcltggg cacgaagacc tacacctgca aegtagatea caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttggtgag aggccagcac agggagggag ggtgtctgct ggaagccagg ctcagccclc ctgcciggac gcaccccggc tgtgcagccc cagcccaggg cagcaaggca tgccccatct gtctcctcac ccggaggcct ctgaccaccc cactcatgcc cagggasagg gtcttctgga tttticcacc aggctccsss cagccacagg ctgsatsccc ccaccccagg ccctgcscat acagsggcag gtgctgcgct cagacctgcc aagagccata tccgggagga ccctgcccct gacctaagcc 29 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 201134488
Phe Phe Leu Ser Va] Thr Thr Gly 10 15 Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 25 30 caccccaaag gccaaactct ccactccclc gagtaactcc caatcttctc cctgcagagt caggtaagcc aacccaggcc tcgccctcca ccigcaicca gggacaggcc ccagccgggt gcacctgagt tcctgggggg accatcagtc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggat ccgcgggage agcagttcaa cagcacgtac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa ggacagaggt cagctcggcc caccctctgc ccctacaggg cagccccgag agccacaggt gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga ggactccgac ggctccttct tcctctacag ggaggggaat gtcttctcat gctccgtgat gaagagcctc tccctgtctc tgggt
<210> 60 <211> 46S <212> PRT 人造序列 <220> <223>重組 <4〇0> 60
Met QH Trp Scr Trp Val Phe Leu 1 5
Vai His Scr Glu Val Gin Uu Va] 20 agctcagaca ccitctcEcc tcccagatci ccaaatatgg tcccccatgc ccaccatgcc gctcaaggcg ggacaggtgc cctagafitag gctgacgcat ccacctccat ctcttcctca ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact tscgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac ggcgtggagg tgcataafgc caagacaaag cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc ggtgggaccc acggggtgcg agggccacat cctgggagtg accgctgtgc caacctctgt gtacaccctg cccccaiccc aggaggagat ggtcaaaggc ttciacccca gcgacatcgc gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct caggctaacc gtggacaaga gcaggtggca gcatgaggct ctgcacaacc actacacaca 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 I860 1920 1945
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Pile Gly Tyr Thr Phe 35 40 45
Thr Thr Tyr Pro lie Glu Trp Met Arg Gin Ala His Gly Gin Gly Leu 50 55 60
Glu Trp ile Gly Asn Phe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn 65 70 75 80
Glu Lys Pbe Lys Gly Atg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Thr TTir 85 90 95
Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Scr Glu Asp Tlir Ala Val 100 〗05 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Asn Tyr Gly Ser His Gly Gly Phe Val Tyr 30 I：； 201134488 115 120 125
Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Cly 130 135 140
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser 145 150 155 160
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phc Pro Glu Pro Val 165 170 175
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 180 385 190
Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 195 200 205
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val 210 215 220
Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser lys 225 230 235 240
Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Uu Gly Gly 245 250 255
Pro Scr Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 260 265 270
Ser Arg Thr Pro G1u Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin G)u 275 280 285
Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Va】His 290 295 300
Arg 326
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Tyr 305 310 315
Val Vai Ser Va) Leu Thx Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 325 330 335
Glu Tyr Lys Cys Lys Va) Scr Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu 340 345 350
Lys Thr Jle Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 355 360 36S
Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Scr Leu 370 375 380
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 385 390 395 400
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asu Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 405 410 415 31 201134488
Leu Asp Ser Asp Gly Scr Phe Phe Leu Tyr Scr Arg Leu TTir Val Asp 420 425 430
Lys Ser At£ Trp Gin GU Gly Asu Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 435 440 445
Glw Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Scr Leu Scr Leu Scr Ltu 450 455 460
Gly 465
<210> 61 <211> 2002 <212> RNA <213>人造序列 <220> <223〉重組 <4C0> 6! atggaatgga gctgggictt tctcttcttc ctgtccgtga caactggtgt gcactctgaa 60 gtgcaactgg tgcagtctgg agctgaagtg aagaaacctg gtgctagcgt caaagtgicc 320 tgcaaagcct 〖cggctatac cttcaccacg tacccaaug agtggatgag gcaggcacac 180 ggacaaggat iggagtggat cggcaacttt cacccctaca acgacgacac gaagtacaac 240 gdgaagttca agggtcgcgt gacaatgacc gtegataaga gcacgaccac tgtttatatg 300 gagetgaget cactgagatc cgaagatact gccgtctact attgtgcccg agagaattac 360 ggatcacacg ggggatttgt ttactgggga caaggcacac tggttaccgt ctcgagcgct 420 tctacaaagg gcccatccgt cttccccctg gcgccctgct ccaggagcac ctccgagagc 4S0 acagccgccc Igggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgisg 540 aactcaggcg ccctgaccag cg«cgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 600 ctctactccc icagcagcgt ggtfiacc&tg ccctccagca gcttgggcac gasgacctac 660 acctgcaacg tagatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagapgt tggtgagagg 720 ccagcacsgg gagggagggt gtctgctgga agccaggctc agccctcctg cctggacgca 780 ccccggctgt gcagccccag cccagggcag caaggcatgc cccatctgtc tcctcacccg 840 gaggcctctg accaccccac tcatgcccag ggagagggtc ttctggattt ttccaccagg 900 ctccgggcag ccacaggctg gatgccccta ccccaggccc tgcgcataca ggggcaggtg 960 ctgcgctcag acclgccaag agccatatcc gggaggaccc tgcccctgac ctaagcccac 1020 cecaaaggcc aaactctcca ctccctcagc tcagacacct tctctcctcc cagatctgag 1080 taactcccaa icttctctct gcagagtcca aatatggtcc cccatgccca ccatgcccag Π40 gtaagccaac ccaggcctcg ccctccagct caaggcggga caggtgccct agagtagcct 1200 gcatccaggg acaggcccca gccgggtgct gacgcatcca cctccatcic llcctcagca 】260 cctgagttcc tg£gmacc atcagtcttc ctgttccccc caaaacccaa ggacacictc 1320 atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc gtggtggtgg acgtgascca ggaagacccc 1380 gasgtccagt tcaaclggla cgtgsatggc stggagglgc ataatgccaa sacaaagccs 1440 eggsaggage agttcaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccas iS〇〇 32 201134488 1560 1620 1680 1740 J80D I860 1920 1980 2002 gactggctga acggcaagga gtacaagtsc aaggtctcca acaaagscct cccgicctcc atcgagaaaa ccatc.tccaa agccaaaggt gggacccacg gggtgcgagg gccacatgga cagaggtcag ctcggcccac cctctgccct gggagtgacc gctgtgccaa cctctgtccc tacagggcag ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc laccccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga mgaatgtc ttctcatgct ccgtsatgca uasgctctg cacaaccact acacacagaa gagcctcrcc ctgtcictgg gt
<210> 62 <2U> 449 <212> PRT 人造序列 ^23> Sffl <400> 62
Glu Val Gin Leu Val Gin Scr Giy Ala Glia Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys Va! Ser Cys Lys Aia Phe Gly Tyr Tbr Phe Thr Tlu Tyr 20 25 30
Pro lie G1U Trp Met Arg Gin Ala His Gly Gin Gly Leu G.u Trp He
Gly Asn Phe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Gl« Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Arg Va】Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Thr Thr Tin Val Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 A.aArgG.uAsnTKGlyS.H.Ol.^PheVa. ^ T；g Gly Gin
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Tlir Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Set Lys Ser rrhr Ser Gly Gly ΙΉτ Ala Ala 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro G1u Pro Val Thr Val Ser 145 150 〗55 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His. Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Ser Ser Gly i^u Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val ThT Val Pro 180 185 190 33 201134488
Ser Ser Ser Leu Oly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Yal Asn His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Tlu Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240
Pro Set Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 245 250 255
Scr ^rg Thr Pro Gly Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Scr His Glu 260 265 270
Asp Pro Glu Yal Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320
Clu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Clu Pro Gin Val Tyr 340 345 350 TT,r Leu Pro Pro Ser Arg Asp Giu Leu T.r Lys Asn Gin Val Ser Leu
Thr Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 】le Ala Val Glu Trp 370 375 380
Glu Scr Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Va) 385 390 395 400
Uu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Va] Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
Gly 列 3 序 5 A6319gAl 07172737 34 201134488 <220> <223>重組 <400> 63 gaagtgcaac tggtgcsgtc tggagcrgaa gtgaaga«ac ctggtgctag cgtcaaagtg tcctgcaaag ccttcggcta taccttcacc acgtacccaa ttsagtggaT gaggcaggca cacggacaag gattggastg gatcggcaac tttcacccct acaacgacga cacgaagtac aacgagaagt icaagggtcg cgtgacaatg accgtcgata agagcacgac cactgittat atggagctga gctcactgag aiccgaagat actgccgtct actattgtgc ccgagagaat tacggatcac acgggggatt igtttactgg ggacaaggca cactggttac cgtotcgagc gcttctacaa ag£gcccatc ggicctcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctgig ggcacagcgg ccctgggctg cctggtca£g gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg tggaactcag gcgccctgac cagcggcglg caceccttcc cggctgtcct acagtcctca ggactctacc ccctcagcag cglggtgacc gtgccctcca gcascttggg cacccagacc tacatctgca acgtgaalca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttggtgag aggccagcac agggagggag ggtgtctgct ggaagccagg ctcagcgctc ctgcctggac gcaicccggc tatgcagccc cagtccaggg cagcaaggca ggccccgtct gcctcttcac ccggaggcct ctgcccgc.cc cactcatgct cagggagagg gtcttctggc tttttcccca ggctctgggc aggcacaggc taggtgcccc taacccaggc cctgcacaca aaggggcagg tgctgggctc agacctgcca agagccaiat ccgggaggac cctgcccctg acctaagccc acccca^agg ccaaactctc cactccctca gcicg^acac cttcictcct cccagaictg agtaactccc aatcttctct ctgcagagcc caaatcttgt gacaaaactc acacatgccc accgtgccca ggtaagccag cccaggcctc gccctccasc tcaaggcggg acaggtgccc tagagtagcc tgcatccagg gacaggcccc agccgggtgc tgacacgtcc acctccatct cttcctcagc acctgaactc ctggggggac cgtcagtctt cctctlcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgs cgtggeggtg cataatgcca agacaaa£cc ^cgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg tgggacccgt ggggtgcgag 2£ccacatgg acaea£gcc£ gctcggccca ccctctgccc (gagagtgac cgctgracca acctctgtcc ctscagggca gccccgagaa ccacaggigt acaccctgcc cccatcccgg gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc gacatcgccg t^agtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct cccgtgctsg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt geacaagagc aggtggcsgc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac ucacgcaga agagccictc cctgtctccg ggt
<210> 64 <211> 468 <212> PRT 人造序列 60 120 180 240 300 360 420 480 540 ωο m m 780 $40 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1953 35 201134488 <220> <223>重組 <400> 64
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phc Leu Ser Val Thr Thr Gly 1 5 10 15
Val His Ser Glu Va] Gin Leu VaJ Gin Ser Gly Ala Giu Val Lys Lys 20 25 30
Fro Gly Ala Ser Val Lys Val Scr Cys Lys Ala Phe Gly Tyr Thr Fhe 35 40 45
Thr Thr Tyr Pro lie Glu Trp Met Arg Gin Ala His Gly Gin Gly I^u 50 55 60
Glu Trp I3c Gly Asn Phe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn 65 70 75 80
CuLysPheLvsGlyA.Van.^etBrVa, Asp L,s Ser
Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg GJu Asn Tyr Gly Ser His Gly Gly Phe Val Tyr 115 120 125
Trp Gly Gin Gly Thr Leti Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 130 135 HO
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Tlir Scr Gly Gly 145 150 155 160
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 165 170 175
Tlir Val Scr Trp Asn Scr Giy Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 180 185 190
Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Val 195 200 205
Thr Val Pro Ser Ser Sei Leu Giy Thr G】n Thr Tyr lie Cys Asn Val 210 215 220
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 225 230 235 240
Ser Cys Asp Lys Tlir His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 245 250 255
Leu Gly 01 y Pro Scr Val Pho Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 260 265 270
Leu Met He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 36 v1·!；i 201134488 275 280 285
Ser Hjs Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 290 3¾)
Val Asp Gly Val
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu On Tyi Asn Scr 305 310 315 320 T,rTyrArgValValSerVa,LeuT,rValLeuHiSGl„AspTrpUu
Asn Cly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Vai Scr Asn Lys Ala Leu Pro Ala 340 345 350
Pro He Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arc Glu Pro 355 360 365
Gin Vai Tyr Uu Pro Pro Ser Ara Asp G5« Leu Thr Lvs ASn Gin
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Fhe Tyr Pro Ser Asp lie Ala 385 390 395 · A00
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 405 410 415
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phc Phc Uu Tyr Scr Lys Leu 420 425 430
Thr Va! Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Scr 435 440 445
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Sex Leu Scr 450 455 460
Leu Ser Pro Gly 465 <210> 65 <21 i> 2010 <212> 腿 <2〖3>人造序列 <22Q> <223>重組 <400> 65 60 120 180 240 300 360 420 480 atggaatgga gctgggtctt tctcttcitc cigtccgtga caactggtgt gcactctgaa gtgcaactgg tgcagtctgg agctgaagtg aagaaacctg gtgciagcgt caaagtgtcc tgcaaagcct tcggctatac cctcaccacg tacccaattg aglggatgag gcaggcacac gcacaaggat tggagtggat cggcaacttt cacccctaca acgacgacac gaagtacasc gagaagtlca agggtcgcgt gacaatgacc gtegataaga gcacgaccac tgUtatatg fiagcigagct cactgagatc cgaagatact gccgtctact attgtgcccg agagaattac ggatcacacfi ggggatttfit uactgggga caaggcacac tggttaccgt ctcgagcgct tctacaaase gcccalcest cttccccclg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 37 l：i 201134488 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccsgtgac ggtgtcgigg 540 aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accitcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 600 ctctaclccc tcagcagcgi ggtgaccgtg ccclccagca gcttg^cac ccagacciac 660 atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaagglgg acaagaaagt tggtgagagg 720 ccagcacagg gagggagggt gtclgctfiga aficcaggctc agcgctcctfi cctggacgca 780 tcccggctat gcagccccag tccaggscag caaggcaggc cccgtctgcc tcttcacccg 840
gaggcctctg cccgceccac 丨catgctcag ggagagggtc uctggcttt ttccccasgc 90Q tctgggcagg cacaggctag gtgcccctaa cccaggccct gcacacaaag gggcaggtgc 960 tsggctca£d cctgccaasa sccatatccg ggaggaccct gccccxsacc taascccacc 1020 ccaaaggcca aaccctccac tccctcagct cggacacctt ctctccrccc agatctgagt 1080 aactcccaat cttctctctg cagagcccaa atcttgtgac aaaactcaca catgcccacc 1140 gtgcccaggc aagccagccc aggcctcgcc ciccagctca aggcgggaca ggtgccctag 1200 agtagcctgc atccagggac aggccccagc cgggtgctga cacgtccacc tccatctctt 1260 ccicagcacc igaacccctg gggggaccgt cagtcltccl citcccccca aaacccaagg 1320 acaccctcat gatctcccgg acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg 1380 aagaccctsa sgtcaasttc aacts£tacg tgsacsgcst sgagetscat aatgccaasa 1440 caaagccgcg ggaggagcag taca&cagca cgtaccgtgt ggtcagcgic ctcaccgtcc 1500 tgcaccagga ctggctgaat ggcaamst acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc 1560 cagcccccat cgagaaaacc atciccaaag ccaaaggtgg gacccgtggg gtgcgagggc 1620 cacatggaca gaggccggct cggcccaccc tctgccctga gagtgaccgc tgtaccaacc 1680 tctgtcccta cagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 1740 gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcia tcccagcgac 1800 alc^ccglgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1860 gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1920 tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1980 acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 2010 <210> 66 <21i> 108 <212> PRT <2】3>人造序列 <220> <223>重組 <400> 66
Glu Asn Val Leu Thr Gin Ser Pro Phe Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly ] 5 10 15
Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Va] lie xSei Ser 20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Ala Lys Ala Pro Lys Leu Phe 38 201134488
He Tyr Ser Tin Ser Asn Leu Ala Ser Giy Val Pro Ser Are Phe Sct 50 55 60
Giy Sex Gly Ser Gly Ihr Asp Tyr Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Scr Tvr Pro 85 90 95
Leu 錄 ％
Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 105 <2]〇> 67 <21!> 324 <212> iM <2U>人造序列 <320> <223>重組 <400> 67 gagaatgtgc tgacacagag ccccttttca ctgtcigcat ctgtgggaga ccgggtcaca ataacctgca gggctagctc aagcgtgatc agcicalacc igcaciEEia tcagcaaaag cccgccaaag ctcctaagct cltcatctac tccacctcca acttggcatc cgscgtgcct agcagatttt ctgggagcgg tlccgggaca gactataccc tgacgattag ttcccigcaa ccggaggact tcgccaccta Uactgtcag caglacaacl ccucccacl gacauc肪c g£agggacta aagtcgaaat caag 60 120 180 240 300 324 <210> 68 <211> 128 <212> PUT <213>人造序列 <22Q> <223>重組 <400> 68 Met Scr Val Pro Thr Gin Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu ΊΉγ 15 10 15
Asp Ala Arg Cys Glu Asn Val Leu Thr Gin Scr Pro Phe Scr Leu Scr 20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Tlu lie Thr Qys Arg A!a Ser Set Scr 35 40 45
Val He Ser Scr Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Ala Lys Ala 50 55 60
Pro Lys Leu Phe lie Tyr Ser ITir Ser Asn Leu Ala Ser Gly VaJ Pro 65 70 75 80
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr ASp Tyr T^r Leu Thr lie
Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr 100 105 110 39 201134488
Asn Ser Tyr Pro Leu Thr Fhe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Π5 120 325
<210> 69 <211> 384 <2!2> IWA <^3>人造序列 <220> 重組 <400> 69 60 120 180 240 300 360 m atgagtgtgc caactcaggt tctcggattg ctgcttctgt ggcttactga tgcccgctgc gagaatglgc tgacacagag ccccttttca clgtcigcat ctgtgggaga ccgggtcaca ataacctgca gggctagctc aagcgtgatc agctcatacc tgcaclggta tcagcaaaag cccgccaaag ctcctaagct cttcatctac tccacctcca acltggcatc tggcgtgcct agcagatttt ctgggagcgg ttccgggaca gaciataccc tgacgattag ttccctgcaa ccggaggact tcgccaccta ttactgtcag cagtacaact cctacccact gacattcggc SSagggacta aagtcgaaat caag
<210> 70 <211> 215 <212> PRT 人造序列 <220> <223>重組 <400> 70
Glu Asn Val Leu Thr Gin Ser Pro Phe Ser Leu Ser A】a Ser Val Gly 1 5 】0 35
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser ,Ser Ser Val Ik Ser Ser 20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Ala Lys Ala Pro Lys Leu Phe 35 40 45 lie Tyr Scr Thr Scr Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Scr Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Hit lie Scr Scr Leu Gin 6S 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Ser Tyr Pro 85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg llir Val Ala 100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser 115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 40 201134488
Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Uu Gin Ser Gly Asn Ser
Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 Π5
Ser Ser ΊΙιγ Leu Thr Leu Ser Lys Aia Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205
Ser Phe Asn Arg Giy Glu Cys 210 215 <210> 71 <211> 645 <212> DNA <213>人造序列 <220> 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 645 <223>重組 <400> 7i gagaatfitgc tgacacagag ccccttttca ctgtctgcat ctgtgggaga ccgggtcaca ataacctgca sggctagctc aagcgtgatc agctcatacc tgcactagta tcagcaaaag cccgccaaag ctcctaagct cttcatctac tccacctcca acttggcatc tggcgtgcct agcagatlti ctgggagcgg ttccgggaca gactataccc igacgaltag ttccclgcaa ccgg^ggact tcgccaccta ttactgtcag cagtacaact cctacccact gacattcggc SSagggacta aastcgaaat caagcgtacg gtagcggccc catctgtctt catcttcccg ccatcigatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc tatcccagag a^gccaaagt acagtgiaag gtggataace ccctccaatc £ggtaactcc caggagagcg tcacagagca ggacagcsag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag ggcctgagct c^cccgtcac aaagascltc aacaggggag agt£t <210> 72 <211> 235 <212> PRT <2!3>人造序列 <220> <223>重組 <400> 72
Met Ser Val Pro Thf Gin Va. Leu Gly Leu Uu Leu Leu Trp Uu Tl,r
Asp Ala Arg Cys Glu Asn Val Leu Thr Gin Ser Pro Fne Ser Leu Ser 20 25 30
Ala Ser Vai Gly Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser 35 40 45 41 201134488
Val lie Ser Ser Tyr Lsu His Tip Tyr Gin Gin Lys Pro Ala Lys Ala 50 55 60
Pro Lys Leu Phe lie Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 65 70 75 80
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ihr Leu Thr lie 85 90 95
Scr Scr Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr 200 105 110
Asn Scr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly C!y Thr Lys Val Glu lie Lys 115 120 125
Aig Thr Val Ala Ala Pro Set Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu 130 135 140
Gin Leu Lys Ser Gly Tlir Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 145 150 155 160
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gift Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin 165 】7〇 175
Ser Gly Asn Ser G1n Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Scr 180 185 190 llir Tyr Scr Leu Scr Ser Thr Leu Thr Leu Scr Lys Ala Asp Tyr Glu 195 200 205
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Clu Val Thr His Gin Gly Leu Scr Scr 210 215 220
Pro Val Thr Lys Str Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <2L0> 73 <2ll> 705 <2i2> DNA <213>人造序列 <220> <223〉重組 <400> 73 60 120 】80 240 300 360 420 480 540 atgagtstgc caactcaggt teteggattg ctgcttcigt ggcttactga t£ccc;ct£c sagaaigigc tgacacagag ccccttttca ctgtctgcat ctgigggaga ccggglcaca alaacctsca gggctagctc aagcgtgaic agctcalacc tgcactggta tcagcaaaag cccgccaaag ctcctaagct cttcatctac tccacclcca aettggeate tggcgtgcct sgcagatttt cEgggagcgg ttccgggaca gaciataccc tgaegattag ttcccigcaa ccggaggact tcgccaccta tractgtcag cagtacaact cctacccact gacattegge ggagggacta aagicgaaat caagcgtacg giagcggccc catctgtcti catcttcccg ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaaiaacttc tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 42 201134488
600 660 70S caggagagcg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcas cagcaccctg acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag ggcctgagct cgcccgtcac aaagagctic aacaggggag agtgt <210> 74 <211> 138 <2!2> PRT <213>人造序列 <220> <223>重組 <400> 74
Mel Giu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Hie Leu Ser Val Thr Thr Gly 15 LO 15
ValHisSerGluVal Gin Leu Val Gin Ser Gly A,a du Va, Lys Lys
Pro Gly Set Ser Val Lys Va3 Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr llvr Phe
Thr Thr Tyr Pro lie Glu Trp VaJ Arg Gin Ala Pro Gly GJn Gly leu 50 55 60
Glu Trp Met Gly Asn Phe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn 65 70 75 80
Glu Lys Phe LyS Oly Arg Val TT,. He Thr Ala Asp Lys Ser gr Ser
Thr Ala Tyr itet Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Asn Tyr Cly Ser His Gly Gly Phe Va] Tyr 115 120 125
Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Scr 130 135 <210> 75 <211> 414 <212> m 人造序列 <220> 重組 <400> 75 60 120 180 240 300 360 414 atggagtggt cctgggtgtt ictcttcttt ctctccgtca caacgggigt icatagcgaa etgcagctt£ tgcaaagcgg cgctgaggtc aaaaagcccg gatcaagcgt gaaagtctca tgcaaagcca gcggctacac cttcacaacg taccctatcg agigggtgag gcaggctccc ggccaaggac tggaatggai ggggaacttc cacccataca acgacgacac caagtacaac gagaagttca ag£ggcgcgt tactataacc gccgacaaga gcactagcac cgcctacatg gagetgagea gtclgagaag cgaggataca gccgtgtact attgtgcacg ggagaattat ggctctcacg gcggatttgt gtactggigc caaggaacac iggttacigt ctcg 43 201134488
<210> 76 <211> 446 <212> FRT 人造序列 <220> <223>重組 <40ft> 76
Glu Va] Gin Leu Va】Gin Ser Gly A]a Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 】5
Scr Val Lys Val Scr Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phc Tnr Tiir Tyr 20 25 30
Pro I!e Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu GJu Trp Met 35 40 45
Gly Asn Phe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr He llir Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Le^ Ser Set Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Asn Tyr Gly Scr His Gly Cly Phc Val Tyr Trp Gly Gin 100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Scr Vai US 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Τητ Ala Ala
-130 135 HO
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Tlir Val Ser 145 150 155 .160
Trp Asn Scr Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175
Leu Gin Scr Scr Gly Leu Tyr Ser Leu Scr Ser Val Val Thr Va) Pro 280 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly TTir Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Va】 225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met ile Ser Arg Thr 245 250 255 ii； 44 201134488
Pro Glu Val Thr Cys Va】Val Val Asp Val Ser Gin Glu Asp P【o Glu 260 265 270
Val Gin Phe Asn Tip Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Scr Thr Tyr Arg Va] Val Ser 290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Lsu Asn Gly Lys Gla Tyr Lvs 305 3J0 315 320
Cys Lys Yal Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr He 325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Fro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350
Pro Ser Gin G]u Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380· GJy Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr llir Pro Pro Val Leu Asp Scr 385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu ΊΤιγ Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415
Trp Gin Glu Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Val Mel His Glu Ala Leu 420 425 430
His Asti His Tyr rThr Gin Lys Scr Leu Set Leu Scr Leu Gly 435 440 445 <230> 77 <211> 1945 <2】2> DNA <2Ϊ3>人造序列 <220> 從3〉重組 <400> 77 60 120 180 240 300 360 420 480 540 gaagtgcagc ttgtgcaaag eggegetgag gtcaaaaagc ccggatcaag cgtgaaagtc tcatgcaaag ccagcggcta caccttcaca acgtacccta tcgagigggt gaggeaggei cccggccaag gatggggaac ttccacccat acaacgacga caccaagtac aaegagaast tcaaggggcg cgltactata accgccgaca agagcactag caccgcciac atggagctga gcagtctgag aagegaggat acagccgtgt actattgtgc acgggagaat tatggclctc aeggeggatt tgtgtactgg ggccaaggaa cacxsguac tgtetegage gcttctacaa agggcccatc cgtcttcccc ctggcgccct gciccaggag cacctccgag agcacagccg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg . tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 45 201134488 ggactctsct ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gca^cttggg cacgaagacc 600 tacacctgca acgtagatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttggtgas 660 aggccagcac agggagggag ggtgtctgct ggaagccagg ctcagccctc ctgcctggac 720 gcaccccggc tgtgcagccc cagcccaggg cagcaaggca tgccccatct gtctcctcac 780 ccggaggcct ctgaccaccc cactcatgcc cagggagagg gtcttctgga tttttccacc 840 afigctccggg cagccacagg ctggatgccc ctaccccagg ccctgcgcat acaggggcag. 900 gtgctgcgct cagacctgcc aagagccata tccgggagga ccctgcccct gacciaagcc 960 caccccaaag gccaaactct ccactccctc agctcagaca ccttctctcc ccccagatct 1020 gagtaactcc caatcttctc ictgcagagt ccaaatatgg tcccccatgc ccaccaigcc 1080 caggtaagcc aacccaggcc tcgccctcca gctcaaggcg ggacaggtgc cctagagtag 1140 cctgcatcca gggacaggcc ccagccgggi gctgacgcat ccacctccat ctcttcctca 1200 gcaccteagt tcctgggggg accatcagtc ttcctgttcc ccccaaaacc caaggacact 1260 ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg tgcgtggtgg tggacgtgag ccaggaagac 1320 cccgaggtcc agtlcaactg gtacgtggat ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag 1380 ccgcgggagg aEcagttcaa cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac 1440 caggactggc tgaacggcaa ggaglacaag ucaaggtct ccaacaaagg cctcccgtcc 1500 tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa ggtgggaccc acggggtgcg agggccacat 1560 ggacagaggt cagctcggcu caccctctgc ccigggagig accgctgtgc caacclctgl 1620 ccctacasgg cagccccgag agccacaggt gtacaccclg cccccatccc aggaggagal 1680 gaccaagaac casgtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc 】740 cstgeagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct 1800 ggactccgac ggctccuct icctctacag caggciaacc gtggacaaga gcaggtggca i860
Sgaggggaat gtcttcicat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacaca 1920 gaagagcctc tccctgtctc tgggt 1945 <210> 78 <211> 465 <212> PRT dl3>人造序列 <220> <223>重組 <400> 78
Met G丨u Trp Ser 了卬 Val ?he Leu Phe Phe Leu Ser Va丨 Thr Thr Gly 1 5 10 15
Val His Ser Glu Val Gla Uu Val Gin Ser Gly Ala Glu Va\ Lys Lys 20 25 30
Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45
Thr Thr Tyr Pro He Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro Giy Gin GJy Leu 50 55 60 46 201134488
Glu Trp Met Gly Asn Fhe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn 65 70 75 80
Glu Lys Phc Lys Gly Arg Val Tlir lie Thr Ala Asp Lys Scr Thr Scr 85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Asn Tyr Gly Ser His Gly Gly Phe Val Tyr 115 )20 125
TrpGIvGlnG.^rLeuVall.rValSerSerAlaSer^LvsGlv
Pro Ser Val Pbe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser 145 150 155 160
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phc Pro Glu Pro Val 165 170 175 llir Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 180 185 190
Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 195 200 205 ^ValProSerSerScrUuaivl.rLysl.rTg^CysA.Vai
Asp His Lys Pro Scr Asn Thr Lys Val Asp lys Arg Val Glu Ser Lys 225 230 235 240
Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phc Leu Gly Gly 245 250 255
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Fro Lys Asp Thr Leu Met lie 260 265 270
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Va】Asp Val Ser Gin Glu 275 280 285
Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 290 295 300
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Gl\i Glu Gin Phe Asn Ser Tiir T^r Arg 305 310 315 320
Val Va] Ser Val Uu Thr Va] Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 325 330 335
Glu T^r Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser lie Olu 340 345 350
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Va] Tyr 355 360 365 47 201134488
Thr Leu Pro Pro Ser Glu Glu Glu Mel Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 370 375 380
ThT Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu 了卬 385 390 395 400
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Clu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 405 410 415
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Fhe Phc Leu Tyr Scr Arg Leu Thr Val Asp 420 425 430
Lys Scr Arg Trp Gin Glu Oly Asn Va] Phc Scr Cys Sct Val Met His 435 440 445
Glu Ala Leu His Asa His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu 450 455 460
Gly 465 <210> 79 <211> 2002 <212> im <213>人造序列 <220> <223〉重組 <400> 79 atggagtggt cctgggtgtt tetettetu ctctccglca caacgggtgt teatagegaa 60 gtgcagcttg tgc2aagcgg cgctgaggtc aaaaagcccg gatcaagcgt gaaagtctca 120 tgcaaagcca gcsgctac&c cttcacaacg taccctatc» agt^sstgag gca^ctccc 180 ggccaaggac tggaatggat ggggaactcc cacccaiaca acgacgacac caagtacaac 240 gagaagttca aggggcgcgt iactataacc gccgacaaga gcactagcac cgcctacatg 300 gagetgagea gtctgagaag cgaggataca gccgtgcact attgtgcac^ ggagaattac 360 ggctctcacg gcggatttgt gtactggggc caaggaacac tggttactgr cicgagcgct 420 tctacaaagf gcccatccgt cttccccctg gcgccctgct ccaggagcac ctccgagagc 480 acagccgccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccsgtgac ggtgtcgtgg 540 aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 600 ctctactccc ccagcascgt ggtsaccgtfi ccctccagca scugsscac gaagacctac 660 acctgcaacg tagatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagagagt tgglgagagg 720 ccagcacagg gagggagggt glctgclgga agccaggcu agccctcclg cctggacgca 780 ccccggctgt gcagccccag cccagggcag caaggcatgc cccaictgic tcctcacccg 840 easgectetg accaccccac tcatscccag ggagagggtc ttctggattt ttccaccagg 900 ctccgggcag ccacaggctg gatgccccta ccccaggccc tgcgcataca ggggcaggtg 960 ctgcgctcag acctgccaag agccatatcc gggaggaccc tgcccctgac ctaagcccac 1020 cccaaaggcc aaactctcca ctccctcagc tcagacacct tctctcctcc cagatctgag 1080 laacicccaa tcttctctct gcagagtcca aatatggtcc cccaisccca ccatgcccag 1140 48 201134488 gtaasccaac ccaggcctcg： ccctccagct caaggcggga caggxgccct agagtagccc 】200 gcatccaggg acaggcccca gccggg^sct gacgcatcca cctccatctc ttcctcagca 1260 cctgagttcc tggggggacc arcagtcttc ctgitccccc caaaacccaa ggacactctc 1320 atgatctccc ggacccctga ggtcacgigc gtggtggigg acgtgagcca ggaagacccc 1380 gaggtccagt icaactggta cgtggaiggc gtssaggtgc ataatgccaa gacsaagccg 1440 cssgajggagc agttcaacag cacgtaccgt gtsgtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag 1500 gactggctga acggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaaggcci cccgtcctcc 1560 atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggt gggacccacg gggtgcgagg gccacatgga 1620 cagaggtcag ctcggcccac cctctgccct ggsastgacc gctgtgccaa ccicistccc 1680 tacagggcag ccccgaga^c cacaggtgia caccctgccc ccatcccagg aggagatgac 1740 caagaaccag gtcagcctga ccigcciggt caaaggcttc caccccsgcg acatcgccgt 1S00 gsagtgggag agcaalgsgc agccggagaa caaciacaag accacgcctc ccstgctgga 1860 clccgacggc tccttcttcc tciacagcag gciaaccgtg gacaagagca ggtggcagga 1920 ggggaatgic ttctcatgci ccgtgatgca igaggctctg cacaaccaci acacacagaa 1980 g3gccictcc ctgtctctgg gt 2002 <λιο> δ〇 <211> 449 <212> m 人造序列 <220> <223>重組 <400> 80
Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 IS
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr 20 25 30
Pro lie Glu Tip Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met
35 40 AS
Gly Asn Pile His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe SD 55 60
Lys Gly Aig Va】Thr [ie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 7Q 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Tlu AJa Val Tyr Tyr Cys &5 90 95
Ala Arg Glu Asn Tyr Gly Ser His Q\y Gly Phe Val Tyr Trp Gly Gin 100 105 Π0
Gly llir Leu Val Tlu Val Scr Scr Ala Scr Thr Lys Gly Fro Scr Val 115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Scr Scr Lys Scr Thr Ser Gly Cly Thr Ala Ala 49 201134488 130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 350 155 160
Trp Asn Ser Cly Ala Leu Thr Ser Gly Va) His Tlir Phe Pro Ala Va] 165 170 375
Leu Gin Scr Scr Cly Leu Tyr Scr Leu Scr Scr Val Val Thr Val Pro 180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Tin Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 '
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Fro Lys Pro Lys Asp ΊΤιγ Leu Met He 245 250 255
Ser Arg Thr Fro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270
Asp Pro G]u Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Vfil His 275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300
Val Val Scr Val Leu Tlir Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu 325 330 335
Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu ΊΤιγ Lys Asn Girt Va3 Ser Leu 355 360 365
Thr Cys Leu Va] Lys Gly Phe Tyx Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pto Pro Val 385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp G】y Ser Phe fte Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 lys Ser Arg Trp Oln Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 50 201134488
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445
Gly <210> 81 <211> 1953 <212> DNA 人造序列 <220> <223>重組 <4〇〇> 8】 gaagtgcagc Ugcgcaaag cggcgctgag gtcaaaaagc ccggatcaag cgtgaaagtc tcatgcaaas ccagcggcta caccltcaca acgtacccta tcgagtgggt gaggca§gct cccggccaag gacig£aats gatggggaac tcccacccat acaacgacga caccaagtac aacgagaagt tcaaggggcg cgttactata accgccgaca agagcactag caccgcctac atggagciga gcaglclgag aagcgaggat acagccgtgt actattglgc acgggagaat tatsgctctc acggcggatt tgt£tact£g ggccaaggaa cactggitac tgtctcgagc gcttctacaa agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg ggcacagcgg ccclgggct8 cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctstcct acagtcctca ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc Etgccctcca gcagcttggg cacccagacc tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttggtgag aggccagcac agggagg£ag gglgtctsct ggaagccagg ctcagcgctc ctgcctegac gcatcccggc tatgcagccc cagtccaggg cagcaaggca ggccccgtci gcctcucac ccggaggcct cfgcccgccc cactcatgct cagggagagg gtctictggc tmtcccca ggctctgggc aggcacaggc taggtgcccc taactxaggc cctgcacaca aaggggcagg tgctgggctc agacctgcca agagccatat ccgggaggac cctgcccctg acctaagocc accccaaagg ccaaactctc cactccclca gctcggacac cttctctcct cccagatc(g agtaactccc aatcltctct cigcagagcc caaatcttgt gacaaaactc acacatgccc accgtgccca ggtaagccag cccaggcctc gccccccagc tcaaggcggg acaggtgccc tagagtagcc tgcatccagg gaca^gcccc agccgggtgc tgacacgtcc acctccatct cttcctcagc acctgaactc ctgggggsac cgtca«tctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacacccl catgatctcc cggacccctg aggtcacaig cglggtggtg gac^tgagcc acgaaiaccc iga^gtcaag ucaact££；i acgtggacgg cgtgsaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tccigcacca ggactggctg aatggca^gg agtacaagtg caagglctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accaictcca aagccaaagg tgsgacccgi ggsstscgag ggccacatgg acagaggccg gctcggccca ccctctgccc tgagagtgac cgctgtacca acctctgtcc ctacagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gatgagctga ccaagaacca gstcagcctg acctgcctgg icaaaggctt ctatcccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa saccacgcct 51 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 \m 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 201134488 cccgtgctgg actccgacgg electtcttc ctciacagca agctcaccgi ggacaagagc I860 aggtggcagc aggggaacg^ ctlctcatgc tccgtgatgc aigaggccci scacaaccac 1920 tacacgcaga agagcctctc cctstctccg ggt 1953 <210> 82 <211> 468 <232> PRT <213>人造序列 <220> 側〉重組 <400> 82
Met CHu 丁rp Scr 丁rp Yal Phe Leu Pbe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly 1 5 10 15
Val His Set Giu Val Gin Leu Val Gin Scr Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30
Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Fne 35 40 45
Tnr Thr Tyr Pro lie Glu Trp Val Arg Gin Ala Pro 〇]y Gin Gly Leu 50 55 60
Glu Trp Met Gly Asn Phe His Pro Tyr Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn 65 70 75 80
Glu Lys Phc Lys Giy Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Scr Thr Scr 85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr A]a Val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Asn Tyr Giy Ser His Gly Cly Phe Val Tyr 115 120 J25
Trp Gly G!n Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Tl*r L>*s Gly 130 135 140
Pro Set Val Phc Pro Leu Ala Pro Scr Scr Lys Scr Thr Scr Gly Gly 145 150 155 160
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 165 170 175 llir Val Ser Trp Asn Ser Giy Ala Leu ΊΉγ Ser Gly Val His Thr Phe 180 185 190
Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 195 200 205
Tiir Val Pro Set Ser Ser Leu Gly Thr Gin Tlir Tyr lie Cys Asn Val 210 215 220
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Va丨 Asp Lys Lys Val G1u Pro Lys 52
S 201134488 225 230 235 240
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 245 250 255
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 260 265 270
Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Vd Val Asp Val 275 280 285
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 290 295 300
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro kxg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser 305 310 31S 320
Thr Tyr Arg Vai Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu 325 330 335
Asn GJy Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Scr Asn Lys Ala Leu Pro Ala 340 345 350
Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys GLy Gin Pro Arg Glu Pro 355 360 365
Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin 370 375 380
Val Ser Leu Thr Cys leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Scr Asp lie Ala 385 390 395 400
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Tbr Iht 405 410 415
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp GJy Ser Plie Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 420 425 430
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Set Cys Ser A35 AAQ AA5
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser 450 455 460
Leu Scr Pro Gly 465 <210> 83 <211> 2010 <212> m. <213>人造序列 <220> <223>重組 <400 83 atggagtggt cctgggtgtt tetettettt ctctccgtca caacgggtgt teatagegaa 60 gtgcagcttg tgcaaagcgg cgctgaggtc aaaaagcccg gatcaagcgt gaaagtctca 120 53 201134488 igcaaagcca gcggctacac cttcacaacg taccciatcg agtgggtgag gcaggctccc ISO ggccaaggac tg^aatsgat «maacttc cacccataca acgacgacac caagtacaac 2Ί0 gagaagttca aggggcgcgt tactatascc gccgacaaga gcactagcac cgcctacatg 300 gagctgagca gictgagaag cgaggataca gccgrstact attgigcacg ggagaattac 360 g^cictcacg gcggatltgt gtactggtsc caaggaacac tggitactgt ctc°agcsct 420 tctacaaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac clctgggggc 480 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacltccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 540 aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gicctcagga 600 ctctaciccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 660 alctjgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaagt tggtgagagg 720 ccagcacagg gagggagggt gtctgctgga agccaggctc agcgctcctg cctggacgca 780 tcccggctat gcagccccag cccagggcag caaggcaggc cccgtctgcc tcttcacccs 840 xaggcctctg cccaccccac tcaigctcai： ggagaggglc ttctggcttt ttccccaggc 900 tctgggcagg cacaggctag gigcccctaa cccaggccct gcacacaaag gggcaggtgc 960 tgggclcaga cctgccaaga gccatatccg ggaggaccct gccccigacc taagcccacc 1020 ccaaaggcca aactctccac tccctcagct cggacacctt ctctcctccc agatctgagt 10的 aactcccaat cttctctctg cagagcccaa atcitgtgac aaaactcaca catgcccacc 1140 gtgcccasgt aagcca^ccc agscctcscc ctccagctca aggcsesaca egtsccctaa 1200 agtagcctgc atccagggac aggccccagc cgggtgctga cacgtccacc tccatctctt 1260 cctcagcacc !gaactcctg gggggaccgt caglcttcct cttcccccca aaacccaagg 1320 acaccctcat gatctcccgg acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac stgagccacg 1380 aagaccctga ggtcaaguc aactggtacg tggacggcgi ggaggtgcat aatgccaaga 1440 caaagccgcg g^aggagcag tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc 1500 tgcaccagga ctggctgaat ggcaagsagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc 1560 cagcccccai cgagaaaacc atctccaaag ccaaaggtgg gacccgtggg gtgcgagggc 3620 cacatggaca Eaggccggct cggcccaccc tctgccctga gagtgaccgc tgtaccaacc 1680 tctgtcccta cagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca cccigccccc atcccgggat 1740 £agct£acca agaaccaggt cagcctgacc tscct£gtca aaggcttcta tcccagcgac 〗800 atcgccgtgg agtgggagas caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1860 gtgciggact ccgacggctc cltcttcctc lacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1920 Iggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcaig aggctctgca caaccactac 】980 acgcagaaga gccictccct stctccgggt 2010 54

Claims (1)

  1. 201134488 七、申請專利範圍： 1. —種人類化激動性抗體（agonistic antibody)，其結合於人 類 PD-1，係包含一重鏈及一輕鏈，其中該重鏈的可變結 構域包含：當做CDR-H1的序列識別號：1所示的序列、 當做CDR-H2的序列識別號：2所示的序列、當做CDR-H3 的序列識別號：3所示的序列，且該輕鏈的可變結構域包 含：當做CDR-L1的序列識別號：4所示的序列、當做 CDR-L2的序列識別號：5所示的序列，及當做CDR-L3的 序列識別號：7所示的序列。 2. —種人類化激動性抗體，其結合於人類 PD-1，係包含一 重鏈，其中該重鏈的可變結構域包含：當做CDR-H1的序 列識別號：1所示的序列、當做CDR-H2的序列識別號：2 所示的序列及當做CDR-H3的序列識別號：3所示的序 列，且該重鏈框架區衍生自人類次群組序列VH 1 -3 1 -46 + JH4(序列識別號：52)。 3 .如申請專利範圍第2項之人類化抗體，其中該重鏈的可變 結構域在位置2 5、3 7、4 1、4 8、7 1、7 3及7 6其中至少1 個的殘基爲提供者殘基。 4. 如申請專利範圍第3項之人類化抗體，其係具有序列識別 號：30、序列識別號：38或序列識別號：40所示的重鏈可 變結構域序列。 5. —種人類化激動性抗體，其結合於人類 PD-1，係包含一 重鏈，其中該重鏈的可變結構域包含：當做CDR-H1的序 列識別號：1所示的序列、當做CDR-H2的序列識別號：2 所示的序列、當做CDR-H3的序列識別號：3所示的序 201134488 列，且重鏈框架區衍生自人類次群組序列VH 1 ·2 1 -e + JH4(序列識別號：54)。 6. 如申請專利範圍第5項之人類化抗體，其係具有序列識別 號：46所示的重鏈可變結構域序列。 7. 如申請專利範圍第5項之人類化抗體，其中該重鏈的可變 結構域在位置25、37、41、48、71、76及78當中至少1 個的殘基爲提供者殘基。 8. 如申請專利範圍第7項之人類化抗體，其係具有序列識別 號：42或序列識別號：44所示的重鏈可變結構域序列。 9. 一種人類化激動性抗體，其結合於人類 PD-1，係包含一 輕鏈，其中該輕鏈的可變結構域包含：當做CDR-L1的序 列識別號：4所示的序列、當做CDR-L2的序列識別號：5 所示的序列、當做CDR-L3的序列識別號：6或序列識別 號：7所示的序列，且該輕鏈框架區係衍生自人類次群組 序列 VK1 2-1(1) L23 + JK4(序列識別號：48) » 10. 如申請專利範圍第9項之人類化抗體，其中該輕鏈的可 變結構域在位置1、2、3、4、47、60及70當中至少1個 的殘基爲提供者殘基。 1 1.如申請專利範圍第1 〇項之人類化抗體，其係具有序列識 別號：10、序列識別號·· 18、序列識別號：20、序列識別 號：22、序列識別號：24或序列識別號：66所示的輕鏈 可變結構域序列。 12·—種人類化激動性抗體，其結合於人類PD-1，係包含一 輕鏈，其中該輕鏈的可變結構域包含：當做CDR-L1的序 列識別號：4所示的序列、當做CDR-L2的序列識別號：5 I：' -2- 201134488 所示的序列、當做CDR-L3的序列識別號：6或序列識別 號：7所示的序列，且該輕鏈框架區衍生自人類次群組序 歹IJ VK3 6-1-(1) A27 + JK4(序列識別號：50)。 1 3 .如申請專利範圍第1 2項之人類化抗體，其中該輕鏈的可 變結構域在位置2、47、58、70、71及85當中至少1個 的殘基爲提供者殘基。 1 4.如申請專利範圍第1 3項之人類化抗體，其係具有序列識 別號：26或序列識別號：28所示的輕鏈可變結構域序列 〇 15. —種人類化激動性抗體，其結合於人類 PD-1，係具有一 重鏈及一輕鏈，該重鏈包含選自由以下構成的群組的序 列：序列識別號：3 0、序列識別號：3 8、序列識別號： 40、序列識別號：42、序列識別號：44及序列識別號： 46，該輕鏈包含選自由以下構成的群組的序列：序列識別 號：10、序列識別號：18、序列識別號：20、序列識別 號：22、序列識別號：24、序列識別號：26、序列識別 號：28及序列識別號：66 » 16. —種人類化激動性抗體，其結合於人類PD-1，係具有一 重鏈及一輕鏈，該重鏈包含選自由以下構成的群組的序 列：序列識別號：46、序列識別號：58、序列識別號： 6 2、序列識別號：7 6及序列識別號：8 0，該輕鏈包含選 自由以下構成的群組的序列：序列識別號：1 〇、序列識別 號：18、序列識別號：20、序列識別號：22、序列識別 號：24、序列識別號：26、序列識別號：28、序列識別 號：66及序列識別號：70。 201134488 1 7 ·如申請專利範圍第1至1 6項中任一項的激動性抗體分 子，其中該抗體分子選自由以下構成的群組：具有全長重 鏈及輕鏈的完整抗體分子，或其片段例如Fab、經修飾的 Fab’、Fab，、F(ab’）2、Fv、VH、VL 或 scFv 片段。 18. —種人類化激動性抗體，其結合於人類 PD-1，其中該輕 鏈的可變結構域包含與如申請專利範圍第1 5項的抗體的 輕鏈可變結構域至少有80%相同性或相似性的序列，且該 重鏈的可變結構域包含與如申請專利範圍第1 5項的抗體 的重鏈可變結構域至少有8 0%相同性或相似性的序列。 19. 一種人類化激動性抗體，其結合於人類 PD-1，其中該輕 鏈的可變結構域包含與如申請專利範圍第16項的抗體的 輕鏈可變結構域至少有80%相同性或相似性的序列，且該 重鏈的可變結構域包含與如申請專利範圍第1 6項的抗體 的重鏈可變結構域至少有80%相同性或相似性的序列。 20. —種人類化激動性抗體，其對於單離的人類 PD-1(例如 人類胞外結構域）有小於5nM的結合親和性。 2 1.—種單離的DNA序列，其係編碼爲如申請專利範圍第1 至1 9項中任一項的抗體的重鏈及/或輕鏈。 2 2.—種選殖或表現載體，其係包含一個以上如申請專利範圍 第2 1項的D N A序列。 23. —種寄主細胞，其係包含一個以上如申請專利範圍第22 項的選殖或表現載體。 24. 如申請專利範圍第23項之寄主細胞，其中該選殖或表現 載體包含序列識別號：59、序列識別號：61、序列識別 號：63、序列識別號：65、序列識別號：75、序列識別 201134488 號：77、序列識別號：79、序列識別號：81或序列識別 號：83所示的DNA序列。 25.如申請專利範圍第24項之寄主細胞，其中該選殖或表現 載體更包含序列識別號：1 1、序列識別號：1 3、序列識別 號：1 5、序列識別號：1 7、序列識別號：19、序列識別 號：21、序列識別號：23、序列識別號：25、序列識別 號：27、序列識別號：29 '序列識別號：67、序列識別 號：69、序列識別號：71或序列識別號·· 73所示的DNA 序列。 26·—種製造如申請專利範圍第1至20項中任一項之抗體的 方法，包含培養如申請專利範圍第21項之寄主細胞，及 單離該抗體。 2 7 種醫藥組合物，包含如申請專利範圍第！至2〇項中任 一項之抗體’組合一個以上醫藥上可接受的賦形劑、稀釋 劑或擔體。 2 8·如申請專利範圍第27項之醫藥組合物，更包含其他活性 成分。 2 9 ·如申請專利範圍第1至1 9項中任一項之抗體或如申請專 利範圍第23或24項之醫藥組合物，係用於治療或預防免 疫病症。 3 〇 . —種如申請專利範圍第1至2 0項中任一項之抗體的用途 ’係用於製造藥劑以治療或預防免疫病症。
TW100107884A 2010-03-11 2011-03-09 PD-1 antibodies TW201134488A (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US31270210P 2010-03-11 2010-03-11

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW201134488A true TW201134488A (en) 2011-10-16

Family

ID=43910995

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW100107884A TW201134488A (en) 2010-03-11 2011-03-09 PD-1 antibodies

Country Status (8)

Country Link
US (2) US9102728B2 (zh)
EP (1) EP2545076B1 (zh)
JP (2) JP6174321B2 (zh)
CN (1) CN102892785B (zh)
AR (1) AR080501A1 (zh)
CA (1) CA2791944A1 (zh)
TW (1) TW201134488A (zh)
WO (1) WO2011110621A1 (zh)

Families Citing this family (159)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW201134488A (en) * 2010-03-11 2011-10-16 Ucb Pharma Sa PD-1 antibodies
RU2625034C2 (ru) 2011-04-20 2017-07-11 МЕДИММЬЮН, ЭлЭлСи Антитела и другие молекулы, которые связывают в7-н1 и pd-1
EP2742953B1 (en) * 2011-08-11 2021-09-22 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. Therapeutic agent for autoimmune diseases comprising pd-1 agonist
PT2771031T (pt) 2011-10-28 2018-05-24 Prothena Biosciences Ltd Anticorpos humanizados que reconhecem a alfa-sinucleína
BR112014018561A8 (pt) 2012-01-27 2017-07-11 Neotope Biosciences Ltd Anticorpo; ácido nucleico; célula hospedeira; composição farmacêutica; uso de um anticorpo; método para produção de um anticorpo; e método para produção de uma linhagem celular que produz um anticorpo
US9708601B2 (en) * 2012-04-26 2017-07-18 Vaccinex, Inc. Fusion proteins to facilitate selection of cells infected with specific immunoglobulin gene recombinant vaccinia virus
UA118441C2 (uk) 2012-10-08 2019-01-25 Протена Біосаєнсиз Лімітед Антитіло, що розпізнає альфа-синуклеїн
AU2013204922B2 (en) * 2012-12-20 2015-05-14 Celgene Corporation Chimeric antigen receptors
US20150368316A1 (en) * 2013-02-07 2015-12-24 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University A selective high-affinity immune stimulatory reagent and uses thereof
CN111643663A (zh) 2013-03-15 2020-09-11 细胞基因公司 修饰的t淋巴细胞
RU2723050C2 (ru) 2013-05-02 2020-06-08 Анаптисбайо, Инк. Антитела, направленные к белку запрограммированной гибели клетки-1 (pd-1)
CN103242448B (zh) * 2013-05-27 2015-01-14 郑州大学 一种全人源化抗pd-1单克隆抗体及其制备方法和应用
CN104250302B (zh) * 2013-06-26 2017-11-14 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗pd‑1抗体及其应用
US10513555B2 (en) * 2013-07-04 2019-12-24 Prothena Biosciences Limited Antibody formulations and methods
EP3049442A4 (en) 2013-09-26 2017-06-28 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
PL3081576T3 (pl) * 2013-12-12 2020-03-31 Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd. Przeciwciało anty pd-1, jego fragment wiążący antygen i ich zastosowanie medyczne
TWI681969B (zh) * 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
TWI680138B (zh) 2014-01-23 2019-12-21 美商再生元醫藥公司 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
US11059898B2 (en) * 2014-03-24 2021-07-13 Cancer Research Technology Limited Modified antibodies containing modified IGG2 domains which elicit agonist or antagonistic properties and use thereof
PT3157956T (pt) * 2014-06-19 2020-04-09 Regeneron Pharma Animais não humanos com um gene 1 de morte programada humanizada em células
US9982052B2 (en) 2014-08-05 2018-05-29 MabQuest, SA Immunological reagents
WO2016020856A2 (en) 2014-08-05 2016-02-11 MabQuest SA Immunological reagents
AU2015314756A1 (en) 2014-09-13 2017-03-16 Novartis Ag Combination therapies of alk inhibitors
AU2015330731B2 (en) 2014-10-10 2020-07-09 Idera Pharmaceuticals, Inc. Treatment of cancer using TLR9 agonist with checkpoint inhibitors
GB201419084D0 (en) 2014-10-27 2014-12-10 Agency Science Tech & Res Anti-PD-1 antibodies
CN104479020B (zh) * 2014-12-26 2019-08-02 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 一种抗pd-1人源抗体
CN105061597B (zh) * 2015-06-09 2016-04-27 北京东方百泰生物科技有限公司 一种抗pd-1的单克隆抗体及其获得方法
MX2018000621A (es) 2015-07-13 2018-05-11 Cytomx Therapeutics Inc Anticuerpos anti-pd-1, anticuerpos anti-pd-1 activables, y metodos de uso de los mismos.
EP3322448A4 (en) 2015-07-16 2019-03-06 Bioxcel Therapeutics, Inc. NOVEL METHOD FOR THE TREATMENT OF CANCER WITH IMMUNOMODULATION
CN106699888B (zh) 2015-07-28 2020-11-06 上海昀怡健康科技发展有限公司 一种pd-1抗体及其制备方法和应用
KR20220131277A (ko) 2015-09-01 2022-09-27 아게누스 인코포레이티드 항-pd-1 항체 및 이를 이용하는 방법
BR112018004181A2 (pt) 2015-09-02 2018-09-25 Immutep S.A.S. anticorpos anti-lag-3
US10786567B2 (en) * 2015-09-28 2020-09-29 Suzhou Suncediabiopharmaeuticals Co., Ltd. Stable anti-PD-1 antibody pharmaceutical preparation and application thereof in medicine
EP3355920A4 (en) 2015-09-29 2019-05-15 Celgene Corporation PD-1 BINDING PROTEINS AND METHOD OF USE THEREOF
CN108368175B (zh) 2015-09-29 2021-08-06 上海张江生物技术有限公司 Pd-1抗体及其用途
WO2017055484A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for determining the metabolic status of lymphomas
KR102146319B1 (ko) 2015-10-02 2020-08-25 에프. 호프만-라 로슈 아게 Pd1 및 tim3에 특이적인 이중특이성 항체
PE20181092A1 (es) * 2015-10-02 2018-07-09 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-pd1 y metodos de uso
HRP20221041T1 (hr) * 2015-10-02 2022-11-11 Symphogen A/S Anti-pd-1 antitijela i sastavi
JP6954648B2 (ja) 2015-10-19 2021-10-27 シージー オンコロジー， インコーポレイテッド 併用療法による固形腫瘍又はリンパ系腫瘍の治療方法
CN106632674B (zh) * 2015-10-30 2018-11-16 泽达生物医药有限公司 一种抗pd-1单克隆抗体、其药物组合物及其用途
MX2018006973A (es) * 2015-12-09 2019-05-16 Corvus Pharmaceuticals Inc Anticuerpos anti-cd73 humanizados.
EP3400443B1 (en) 2016-01-04 2020-09-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of pd-1 and tim-3 as a measure for cd8+ cells in predicting and treating renal cell carcinoma
JP2019509759A (ja) * 2016-01-14 2019-04-11 ビーピーエス バイオサイエンス、インク．Ｂｐｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ， Ｉｎｃ． 抗ｐｄ−１抗体及びその使用
EP3405497A2 (en) 2016-01-22 2018-11-28 Mabquest SA Immunological reagents
US11214617B2 (en) 2016-01-22 2022-01-04 MabQuest SA Immunological reagents
WO2017132827A1 (en) * 2016-02-02 2017-08-10 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Pd-1 antibodies
CN108778301A (zh) 2016-03-10 2018-11-09 永恒生物科技股份有限公司 通过联合疗法来治疗实体瘤或淋巴瘤的方法
AU2017234163B2 (en) 2016-03-15 2023-01-19 Mersana Therapeutics, Inc. NaPi2b-targeted antibody-drug conjugates and methods of use thereof
WO2017165742A1 (en) 2016-03-24 2017-09-28 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating gastrointestinal immune-related adverse events in anti-ctla4 anti-pd-1 combination treatments
MA44483A (fr) 2016-03-24 2019-01-30 Millennium Pharm Inc Procédés pour traiter des événements indésirables gastro-intestinaux d'origine immunitaire dans des traitements oncologiques immunitaires
CN107286242B (zh) * 2016-04-01 2019-03-22 中山康方生物医药有限公司 抗pd-1的单克隆抗体
TWI755395B (zh) 2016-05-13 2022-02-21 美商再生元醫藥公司 抗-pd-1抗體與輻射治療癌症之組合
EP3243832A1 (en) 2016-05-13 2017-11-15 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding molecules comprising a tnf family ligand trimer and pd1 binding moiety
UA127200C2 (uk) 2016-05-18 2023-06-07 Бьорінгер Інгельхайм Інтернаціональ Гмбх Молекула антитіла до pd1
CN106008714B (zh) * 2016-05-24 2019-03-15 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 抗人pd-1人源化单克隆抗体及其应用
BR112018076260A2 (pt) 2016-06-20 2019-03-26 Kymab Limited anticorpo ou fragmento do mesmo que se liga especificamente a hpd-l1, anticorpo biespecífico ou proteína de fusão, uso de um anticorpo ou fragmento, método, composição farmacêutica, método de modulação, método de inibição, método de tratamento, ácido nucleico, vetor, hospedeiro e imunocitocina
US10457726B2 (en) 2016-06-30 2019-10-29 University Of Connecticut Antibody and antigen-binding fragment compositions targeting cell surface antigens in tumors and methods of use thereof
RU2656181C1 (ru) * 2016-07-13 2018-05-31 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" Анти-pd-1-антитела, способ их получения и способ применения
AU2017306062B2 (en) 2016-08-02 2021-12-09 Vaccinex, Inc. Improved methods for producing polynucleotide libraries in vaccinia virus/eukaryotic cells
WO2018027524A1 (en) * 2016-08-09 2018-02-15 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Pd-1 antibody formulation
MY189618A (en) 2016-09-14 2022-02-21 Beijing hanmi pharm co ltd Antibody specifically binding to pd-1 and functional fragment thereof
EP3515943A4 (en) 2016-09-19 2020-05-06 Celgene Corporation METHODS OF TREATING VITILIGO WITH PD-1 BINDING PROTEINS
EA201990747A1 (ru) * 2016-09-19 2019-10-31 Способы лечения иммунных нарушений с применением белков, связывающих pd–1
CN110049777A (zh) 2016-11-01 2019-07-23 安奈普泰斯生物有限公司 针对程序性死亡-1(pd-1)的抗体
EP3541841A1 (en) 2016-11-18 2019-09-25 Symphogen A/S Anti-pd-1 antibodies and compositions
US11135307B2 (en) 2016-11-23 2021-10-05 Mersana Therapeutics, Inc. Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates
BR112019011582A2 (pt) 2016-12-07 2019-10-22 Agenus Inc. anticorpos e métodos de utilização dos mesmos
EP3565840A1 (en) * 2017-01-06 2019-11-13 Crescendo Biologics Limited Single domain antibodies to programmed cell death (pd-1)
MX2019008207A (es) 2017-01-09 2019-12-11 Tesaro Inc Métodos para tratar el cáncer con anticuerpos anti-pd-1.
AU2018225102A1 (en) 2017-02-21 2019-09-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-PD-1 antibodies for treatment of lung cancer
US20180271996A1 (en) 2017-02-28 2018-09-27 Mersana Therapeutics, Inc. Combination therapies of her2-targeted antibody-drug conjugates
BR112019018915A2 (pt) 2017-03-15 2020-04-14 Pandion Therapeutics Inc imunotolerância direcionada
WO2018172508A1 (en) 2017-03-24 2018-09-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating melanoma
EP3601338A4 (en) * 2017-03-29 2020-12-16 Celgene Corporation FORMULATIONS INCLUDING PROTEINS BINDING PD-1 AND THEIR PREPARATION METHODS
PE20191494A1 (es) 2017-04-03 2019-10-21 Hoffmann La Roche Inmunoconjugados de un anticuerpo anti-pd-1 con un il-2 mutante o con il-15
CN116375876A (zh) 2017-04-05 2023-07-04 豪夫迈·罗氏有限公司 特异性结合pd1和lag3的双特异性抗体
KR20220083863A (ko) 2017-04-05 2022-06-20 심포젠 에이/에스 Pd-1, tim-3 및 lag-3을 표적화하는 조합 요법
US11603407B2 (en) 2017-04-06 2023-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Stable antibody formulation
KR20200010354A (ko) 2017-05-24 2020-01-30 팬디온 테라퓨틱스, 인코포레이티드 표적화된 면역관용
WO2018226580A2 (en) * 2017-06-05 2018-12-13 Janssen Biotech, Inc. Antibodies that specifically bind pd-1 and methods of use
JP2020529862A (ja) * 2017-06-25 2020-10-15 システィミューン， インク．Ｓｙｓｔｉｍｍｕｎｅ， Ｉｎｃ． 抗ｐｄ−１抗体とその作製及び使用方法
JP2020532991A (ja) 2017-09-07 2020-11-19 オーガスタ ユニバーシティ リサーチ インスティテュート，インコーポレーテッド プログラム細胞死タンパク質１に対する抗体
WO2019071150A1 (en) * 2017-10-06 2019-04-11 University Of Utah Research Foundation FUSION PROTEIN FOR TARGETED THERAPY OF AUTOIMMUNE DISEASE
US11638760B2 (en) 2017-11-27 2023-05-02 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
US10174092B1 (en) 2017-12-06 2019-01-08 Pandion Therapeutics, Inc. IL-2 muteins
US10946068B2 (en) 2017-12-06 2021-03-16 Pandion Operations, Inc. IL-2 muteins and uses thereof
CN111757757A (zh) 2017-12-21 2020-10-09 梅尔莎纳医疗公司 吡咯并苯并二氮呯抗体共轭物
US20210072244A1 (en) 2018-01-04 2021-03-11 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating melanoma resistant
JP7366908B2 (ja) 2018-01-15 2023-10-23 ナンジン レジェンド バイオテック カンパニー，リミテッド Ｐｄ－１に対する単一ドメイン抗体及びその変異体
JP2021511793A (ja) 2018-01-31 2021-05-13 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｌａｇ３に結合する抗原結合部位を含む二重特異性抗体
TW202340257A (zh) 2018-02-09 2023-10-16 日商小野藥品工業股份有限公司 雙特異性抗體
GB201802573D0 (en) 2018-02-16 2018-04-04 Crescendo Biologics Ltd Therapeutic molecules that bind to LAG3
EP3756012A1 (en) 2018-02-21 2020-12-30 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of sk1 as biomarker for predicting response to immunecheckpoint inhibitors
AR114127A1 (es) 2018-03-02 2020-07-22 Lilly Co Eli Anticuerpos agonistas contra pd-1 y usos de estos
CN112424230A (zh) * 2018-05-14 2021-02-26 英美偌科有限公司 双功能结合多肽
US11208485B2 (en) * 2018-10-11 2021-12-28 Inhibrx, Inc. PD-1 single domain antibodies and therapeutic compositions thereof
US20230021500A1 (en) 2018-10-29 2023-01-26 Mersana Therapeutics, Inc. Cysteine engineered antibody-drug conjugates with peptide-containing linkers
CN113039207B (zh) * 2018-11-16 2022-10-28 南京金斯瑞生物科技有限公司 人源化抗人pd-l1单克隆抗体及其制备方法和用途
WO2020104479A1 (en) 2018-11-20 2020-05-28 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating cancers and resistant cancers with anti transferrin receptor 1 antibodies
US20230183379A1 (en) 2018-11-20 2023-06-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Bispecific antibody targeting transferrin receptor 1 and soluble antigen
WO2020115261A1 (en) 2018-12-07 2020-06-11 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating melanoma
WO2020120592A1 (en) 2018-12-12 2020-06-18 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for predicting and treating melanoma
US20220064332A1 (en) 2018-12-19 2022-03-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating cancers by immuno-modulation using antibodies against cathespin-d
WO2020127885A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Compositions for treating cancers and resistant cancers
JP7442536B2 (ja) 2019-01-30 2024-03-04 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル ガンを患っている被験体が免疫チェックポイント阻害剤で反応を達成するかを特定するための方法及び組成物
WO2020161083A1 (en) 2019-02-04 2020-08-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for modulating blood-brain barrier
US20220098674A1 (en) 2019-02-13 2022-03-31 Inserm (Institut National De La Santé Et Dr La Recherch Médicale) Methods and compositions for selecting a cancer treatment in a subject suffering from cancer
WO2020168244A1 (en) 2019-02-15 2020-08-20 Incelldx, Inc. Assaying bladder-associated samples, identifying and treating bladder-associated neoplasia, and kits for use therein
WO2020221796A1 (en) 2019-04-30 2020-11-05 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating melanoma
CA3141327A1 (en) 2019-05-20 2020-11-26 Pandion Operations, Inc. Madcam targeted immunotolerance
JP7490679B2 (ja) * 2019-06-05 2024-05-27 アナプティスバイオ インコーポレイティッド Ｐｄ－１アゴニストおよびそれを使用する方法
US20210038684A1 (en) 2019-06-11 2021-02-11 Alkermes Pharma Ireland Limited Compositions and Methods for Cancer Immunotherapy
CA3143680A1 (en) 2019-06-18 2020-12-24 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Combination of hepatitis b virus (hbv) vaccines and anti-pd-1 or anti-pd-l1 antibody
EP3986460A2 (en) 2019-06-18 2022-04-27 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Combination of hepatitis b virus (hbv) vaccines and anti-pd-1 antibody
WO2021006199A1 (ja) 2019-07-05 2021-01-14 小野薬品工業株式会社 Ｐｄ－１／ｃｄ３二重特異性タンパク質による血液がん治療
US20220332825A1 (en) 2019-08-08 2022-10-20 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Bispecific protein
WO2021048292A1 (en) 2019-09-11 2021-03-18 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating melanoma
CN114761386A (zh) 2019-09-17 2022-07-15 比亚尔R&D投资股份公司 作为酸性神经酰胺酶抑制剂的经取代n-杂环甲酰胺及其作为药物的用途
CN114787135A (zh) 2019-09-17 2022-07-22 比亚尔R&D投资股份公司 经取代的咪唑甲酰胺及其在治疗医学病症中的用途
AU2020351178A1 (en) 2019-09-17 2022-03-17 Bial-R&D Investments, S.A. Substituted, saturated and unsaturated N-heterocyclic carboxamides and related compounds for their use in the treatment of medical disorders
US20220354811A1 (en) 2019-10-03 2022-11-10 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for modulating macrophages polarization
WO2021074391A1 (en) 2019-10-17 2021-04-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for diagnosing nasal intestinal type adenocarcinomas
WO2021083959A1 (en) 2019-10-29 2021-05-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating uveal melanoma
AU2020408198A1 (en) 2019-12-19 2022-07-14 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and vaccine compositions to treat cancers
EP4090770A1 (en) 2020-01-17 2022-11-23 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating melanoma
EP4100126A1 (en) 2020-02-05 2022-12-14 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Methods for discontinuing a treatment with a tyrosine kinase inhibitor (tki)
US11981715B2 (en) 2020-02-21 2024-05-14 Pandion Operations, Inc. Tissue targeted immunotolerance with a CD39 effector
WO2021170777A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for diagnosing, prognosing and managing treatment of breast cancer
CN115484978A (zh) 2020-03-05 2022-12-16 尼奥克斯医疗有限公司 使用免疫细胞治疗癌症的方法和组合物
EP4157876A1 (en) 2020-05-26 2023-04-05 Boehringer Ingelheim International GmbH Anti-pd-1 antibodies
EP4189395A1 (en) 2020-07-28 2023-06-07 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Methods and compositions for preventing and treating a cancer
US11932692B2 (en) 2020-09-03 2024-03-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cancer pain by administering a PD-1 inhibitor
IL300314A (en) 2020-10-08 2023-04-01 Affimed Gmbh Coupling materials with triple specificity
WO2022084531A1 (en) 2020-10-23 2022-04-28 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating glioma
EP4244391A1 (en) 2020-11-16 2023-09-20 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for predicting and treating uveal melanoma
WO2022101484A1 (en) 2020-11-16 2022-05-19 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for predicting and treating uveal melanoma
WO2022120388A2 (en) 2020-12-04 2022-06-09 Tidal Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles, and methods of synthesis and use thereof
US20240165094A1 (en) 2021-03-17 2024-05-23 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods and compositions for treating melanoma
US20240158861A1 (en) 2021-04-23 2024-05-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating cell senescence accumulation related disease
WO2022239820A1 (ja) * 2021-05-13 2022-11-17 公益財団法人神戸医療産業都市推進機構 炎症性疾患を治療又は予防するための抗ヒトｐｄ－１アゴニスト抗体及びこれを含有する医薬組成物
GB202107994D0 (en) 2021-06-04 2021-07-21 Kymab Ltd Treatment of cancer
CA3216098A1 (en) 2021-07-30 2023-02-02 Uwe Reusch Duplexbodies
WO2023012147A1 (en) 2021-08-03 2023-02-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies and methods of use
WO2023028501A1 (en) 2021-08-23 2023-03-02 Immunitas Therapeutics, Inc. Anti-cd161 antibodies and uses thereof
WO2023078900A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating triple negative breast cancer (tnbc)
WO2023089377A2 (en) * 2021-11-19 2023-05-25 Mirobio Limited Engineered pd-1 antibodies and uses thereof
WO2023118165A1 (en) 2021-12-21 2023-06-29 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating melanoma
US20240002331A1 (en) 2022-06-08 2024-01-04 Tidal Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles, and methods of synthesis and use thereof
WO2024033400A1 (en) 2022-08-10 2024-02-15 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Sk2 inhibitor for the treatment of pancreatic cancer
WO2024033399A1 (en) 2022-08-10 2024-02-15 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Sigmar1 ligand for the treatment of pancreatic cancer
WO2024038183A1 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Immunocore Limited Multi-domain binding molecules
WO2024038193A1 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Immunocore Limited Multi-domain binding molecules
WO2024050421A2 (en) * 2022-08-30 2024-03-07 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Antigen binding molecules targeting programmed cell death protein 1 (pd-1)
WO2024056716A1 (en) 2022-09-14 2024-03-21 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of dilated cardiomyopathy
WO2024086827A2 (en) 2022-10-20 2024-04-25 Repertoire Immune Medicines, Inc. Cd8 t cell targeted il2
WO2024084034A1 (en) 2022-10-21 2024-04-25 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of osteoarthritis

Family Cites Families (60)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4741900A (en) 1982-11-16 1988-05-03 Cytogen Corporation Antibody-metal ion complexes
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
DK336987D0 (da) 1987-07-01 1987-07-01 Novo Industri As Immobiliseringsmetode
GB8719042D0 (en) 1987-08-12 1987-09-16 Parker D Conjugate compounds
GB8720833D0 (en) 1987-09-04 1987-10-14 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
GB8907617D0 (en) 1989-04-05 1989-05-17 Celltech Ltd Drug delivery system
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
GB9014932D0 (en) * 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
WO1992002551A1 (en) 1990-08-02 1992-02-20 B.R. Centre Limited Methods for the production of proteins with a desired function
GB9112536D0 (en) 1991-06-11 1991-07-31 Celltech Ltd Chemical compounds
GB9113120D0 (en) 1991-06-18 1991-08-07 Kodak Ltd Photographic processing apparatus
GB9120467D0 (en) 1991-09-26 1991-11-06 Celltech Ltd Anti-hmfg antibodies and process for their production
FR2716640B1 (fr) 1994-02-28 1996-05-03 Procedes Machines Speciales Dispositif de centrage et de blocage d'une pièce en vue de son rodage à l'aide d'un rodoir à expansion.
CA2143491C (en) * 1994-03-01 2011-02-22 Yasumasa Ishida A novel peptide related to human programmed cell death and dna encoding it
US5980898A (en) 1996-11-14 1999-11-09 The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command Adjuvant for transcutaneous immunization
GB9625640D0 (en) 1996-12-10 1997-01-29 Celltech Therapeutics Ltd Biological products
GB9812545D0 (en) 1998-06-10 1998-08-05 Celltech Therapeutics Ltd Biological products
BR0013581A (pt) * 1999-08-23 2002-07-02 Dana Faber Cancer Inst Inc Pd-1, um receptor para b7-4, e usos para isto
US6936704B1 (en) * 1999-08-23 2005-08-30 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Nucleic acids encoding costimulatory molecule B7-4
AU2001271731A1 (en) * 2000-06-28 2002-01-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. PD-L2 molecules: novel PD-1 ligands and uses therefor
EP1383912A4 (en) * 2001-04-02 2007-11-28 Wyeth Corp PD-1, A RECEPTOR FOR B7-4, AND USES THEREOF
AR036993A1 (es) * 2001-04-02 2004-10-20 Wyeth Corp Uso de agentes que modulan la interaccion entre pd-1 y sus ligandos en la submodulacion de respuestas inmunologicas
US20040033497A1 (en) * 2002-08-13 2004-02-19 Alarcon-Riquelme Marta E. Polymorphisms of PD-1
US6908963B2 (en) 2001-10-09 2005-06-21 Nektar Therapeutics Al, Corporation Thioester polymer derivatives and method of modifying the N-terminus of a polypeptide therewith
JP4488740B2 (ja) * 2001-11-13 2010-06-23 ダナ−ファーバー キャンサー インスティテュート，インコーポレイテッド 免疫細胞活性化を調節する作用剤およびその使用方法
GB0129105D0 (en) 2001-12-05 2002-01-23 Celltech R&D Ltd Expression control using variable intergenic sequences
EP1464702A4 (en) * 2001-12-28 2005-09-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd METHOD FOR PROTEIN STABILIZATION
PT2206517T (pt) * 2002-07-03 2023-11-07 Tasuku Honjo Composições de imunopotenciação contendo anticorpos anti-pd-l1
PT1570267E (pt) 2002-12-03 2012-01-03 Ucb Pharma Sa Ensaio para a identificação de células produtoras de anticorpos
ATE514713T1 (de) * 2002-12-23 2011-07-15 Wyeth Llc Antikörper gegen pd-1 und ihre verwendung
GB0312481D0 (en) 2003-05-30 2003-07-09 Celltech R&D Ltd Antibodies
WO2005003169A2 (en) 2003-07-01 2005-01-13 Celltech R & D Limited Modified antibody fab fragments
GB0315457D0 (en) 2003-07-01 2003-08-06 Celltech R&D Ltd Biological products
GB0315450D0 (en) 2003-07-01 2003-08-06 Celltech R&D Ltd Biological products
GB0400440D0 (en) * 2004-01-09 2004-02-11 Isis Innovation Receptor modulators
GB0411186D0 (en) 2004-05-19 2004-06-23 Celltech R&D Ltd Biological products
GB0412181D0 (en) 2004-06-01 2004-06-30 Celltech R&D Ltd Biological products
CN111925445A (zh) * 2004-07-09 2020-11-13 中外制药株式会社 抗-磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体
DK2439273T3 (da) * 2005-05-09 2019-06-03 Ono Pharmaceutical Co Humane monoklonale antistoffer til programmeret død-1(pd-1) og fremgangsmåder til behandling af cancer ved anvendelse af anti-pd-1- antistoffer alene eller i kombination med andre immunterapeutika
NZ601439A (en) * 2005-06-08 2012-11-30 Brigham & Womens Hospital Methods and compositions for the treatment of persistent infections and cancer by inhibiting the programmed cell death 1 (pd-1) pathway
GB0523954D0 (en) 2005-11-24 2006-01-04 Ucb Celltech Bioassays
WO2008011344A2 (en) * 2006-07-17 2008-01-24 Nationwide Children's Hospital Inc. Disruption of programmed death-1 (pd-1) ligands to adjuvant adeno-associated virus vector vaccines
GB0619291D0 (en) 2006-09-29 2006-11-08 Ucb Sa Altered antibodies
SI2079760T1 (sl) * 2006-12-27 2016-11-30 Emory University Sestavki in metode za zdravljenje okužb
ES2616355T3 (es) * 2007-06-18 2017-06-12 Merck Sharp & Dohme B.V. Anticuerpos para el receptor humano de muerte programada PD-1
WO2009014708A2 (en) * 2007-07-23 2009-01-29 Cell Genesys, Inc. Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof
US9243052B2 (en) * 2007-08-17 2016-01-26 Daniel Olive Method for treating and diagnosing hematologic malignancies
WO2009026472A1 (en) * 2007-08-21 2009-02-26 The General Hospital Corporation Methods for inducing tolerance
JP5592792B2 (ja) 2007-09-26 2014-09-17 ユセベ ファルマ ソシエテ アノニム 二重特異性抗体の融合体
WO2009114335A2 (en) 2008-03-12 2009-09-17 Merck & Co., Inc. Pd-1 binding proteins
WO2009140177A2 (en) * 2008-05-15 2009-11-19 Biogen Idec Ma Inc. Anti-fn14 antibodies and uses thereof
CA2736816C (en) * 2008-09-12 2018-05-22 Isis Innovation Limited Pd-1 specific antibodies and uses thereof
EP2342229A1 (en) * 2008-09-12 2011-07-13 ISIS Innovation Limited Pd-1 specific antibodies and uses thereof
WO2010035012A1 (en) 2008-09-26 2010-04-01 Ucb Pharma S.A. Biological products
KR101814408B1 (ko) * 2008-09-26 2018-01-04 다나-파버 캔서 인스티튜트 인크. 인간 항-ｐｄ-１, ｐｄ-ｌ１, 및 ｐｄ-ｌ2 항체 및 그의 용도
WO2010063011A2 (en) * 2008-11-28 2010-06-03 Emory University Methods for the treatment of infections and tumors
JP4883377B2 (ja) * 2009-07-10 2012-02-22 カシオ計算機株式会社 鍵盤装置
JP5920929B2 (ja) * 2010-03-11 2016-05-18 ユセベ ファルマ ソシエテ アノニム Ｐｄ−１抗体
TW201134488A (en) * 2010-03-11 2011-10-16 Ucb Pharma Sa PD-1 antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
EP2545076A1 (en) 2013-01-16
WO2011110621A1 (en) 2011-09-15
JP2016155827A (ja) 2016-09-01
CN102892785A (zh) 2013-01-23
US20160068586A1 (en) 2016-03-10
AR080501A1 (es) 2012-04-11
CA2791944A1 (en) 2011-09-15
US9499603B2 (en) 2016-11-22
US20110229461A1 (en) 2011-09-22
CN102892785B (zh) 2016-05-11
JP2013521769A (ja) 2013-06-13
EP2545076B1 (en) 2016-08-31
US9102728B2 (en) 2015-08-11
JP6174321B2 (ja) 2017-08-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TW201134488A (en) PD-1 antibodies
US8993731B2 (en) PD-1 antibody
AU2021203876A1 (en) Anti-CD3 antibodies, activatable anti-CD3 antibodies, multispecific anti-CD3 antibodies, multispecific activatable anti-CD3 antibodies, and methods of using the same
KR102648966B1 (ko) Folr1 및 cd3에 대한 t 세포 활성화 이중특이적 항원 결합 분자
KR102161460B1 (ko) St2 항원 결합 단백질
CN108055848B (zh) 抗pacap抗体及其用途
KR20190133160A (ko) 항-gprc5d 항체 및 항-gprc5d 항체를 포함하는 분자
TW201738272A (zh) 抗ｐａｃａｐ抗體及其用途
AU2016334623A1 (en) Bispecific antibodies with tetravalency for a costimulatory TNF receptor
KR20180099723A (ko) 항-tl1a/항-tnf-알파 이중특이적 항원 결합 단백질 및 그의 용도
AU2016329120A1 (en) Bispecific antibodies specific for a costimulatory TNF receptor
KR20180030656A (ko) Cd22에 결합하는 항체 분자
KR20170085552A (ko) Tnf 계열 리간드 삼량체를 포함하는 항원 결합 분자
KR20200014414A (ko) Pd-1과 특이적으로 결합하는 항체 및 사용 방법
KR20150122761A (ko) Ｔ 세포 활성화 항원 결합 분자
KR20180030662A (ko) Cd79에 결합하는 항체 분자
AU2016371034A1 (en) Antibodies specifically binding HLA-DR and their uses
KR20220040483A (ko) 칼리크레인 관련 펩티다제 2 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질 및 이의 용도
WO2014144935A2 (en) Anti-cd25 antibodies and their uses
KR20230137393A (ko) Psma 결합 단백질 및 이의 용도
TW202216743A (zh) Ｉｌ－１０突變蛋白及其融合蛋白
KR20230017841A (ko) Cd3 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질 및 이의 용도
KR20180089521A (ko) Tnf 알파에 결합하는 항체 분자
CN114144435A (zh) 针对人trem-1的抗体及其用途
EA044746B1 (ru) АНТИТЕЛА И АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ ФРАГМЕНТЫ ПРОТИВ ГЛИКОПРОТЕИНА ШИПОВ SARS-CoV-2