TR201815685T4 - Kanser tedavisi için akt ve mek inhibe edici bileşiklerin kombinasyonları. - Google Patents

Kanser tedavisi için akt ve mek inhibe edici bileşiklerin kombinasyonları. Download PDF

Info

Publication number
TR201815685T4
TR201815685T4 TR2018/15685T TR201815685T TR201815685T4 TR 201815685 T4 TR201815685 T4 TR 201815685T4 TR 2018/15685 T TR2018/15685 T TR 2018/15685T TR 201815685 T TR201815685 T TR 201815685T TR 201815685 T4 TR201815685 T4 TR 201815685T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
gdc
cancer
combination
compound
pharmaceutically acceptable
Prior art date
Application number
TR2018/15685T
Other languages
English (en)
Inventor
Lee Brian
Lin Kui
Nannini Michelle
Punnoose Elizabeth
Sampath Deepak
Original Assignee
Genentech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Genentech Inc filed Critical Genentech Inc
Publication of TR201815685T4 publication Critical patent/TR201815685T4/tr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A61K31/497—Non-condensed pyrazines containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/517—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinazoline, perimidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A61K31/166—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide having the carbon of a carboxamide group directly attached to the aromatic ring, e.g. procainamide, procarbazine, metoclopramide, labetalol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4402—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof only substituted in position 2, e.g. pheniramine, bisacodyl
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/70—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings condensed with carbocyclic rings or ring systems

Abstract

Bu buluş, a) formül I bileşiği: (formül I) veya onun farmasötik açıdan kabul edilebilir tuzunu; ve GDC-0973, PD-0325901 ve bunların farmasötik açıdan kabul edilebilir tuzları arasından seçilen başka bir ajanı içeren kombinasyonlar ortaya koyar. Bu kombinasyonlar, bilhassa kanser gibi hiperproliferatif hastalıkların tedavisi için faydalıdırlar.

Description

TARIFNAMEKANSER TEDAVISI ICIN AKT VE MEK INHIBE EDICI BILESIKLERIN KOMBINASYONLARIBULUSUN RUÇHAN HAKKIBu bulus basvurusu, 1 Nisan 2011 tarihinde basvurusu yapilmis olan 61/47l.038 sayili ABD Geçici Patent Basvurusuna dayanarak rüçhan hakki talep etmektedir.BULUSUN ALANIBu bulus, genel itibariyla, kanser gibi hiperproliferatif hastaliklara karsi aktiviteye sahip olan bilesiklerden ineydana gelen ve AKT kinaz aktivitesini inhibe eden bilesikler barindiran fannas'otikkoinbiiiasyoiilar ile ilgilidir.BULUSUN ARKA PLANIProtein kinazlar (PK), terminal (gama) fosfatin ATP'den transfer edilmesi yoluyla proteinlerin tirozin, serin ve treonin artiklari üzerindeki hidroksi gruplarinin fosforilasyonunu katalize eden enzimlerdir. Bu enzimler, 'Öyle ya da böyle PK aktivitesiiie bagli olarak, sinyal iletim yolaklari araciligiyla hücre büyümesini,farklilasmasini ve proliferasyonunu, yani hücre yasamiyla ilgili hemen hemen tüin evreleri modüle ederler (Hardie, G. and Hanks, S. (1995) The Protein Kiiiase Facts Book. 1 and 11, Academic Press, San Diego, CA). Öte yandan, anormal PK aktivitesi, psoriasis gibi hayati tehlikesi nispeten düsük sayilabilecek hastaliklardan glioblastoin (beyin kanseri) gibi epey ölümcül ve tehlikeli hastaliklara degin muhtelif hastaliklarin bir belirtisi olarak tanimlanmistir. Protein kinazlar, 'Önemli bir terap'otik modülasyon hedefi sinifini teskil ederler (Cohen,P. (2002) Nature Rev. Drug Discovery 12309).WO 2008/006040 sayili Uluslararasi Patent Basvurusunda, asagida gösterilen (S)-2-(4-klor0fenil)-l-(4-((5R,7R)-7-hidr0ksi-5-metil-6,7- dihidro-SH-siklopenta [d]pirimidin-4-i1) piperazin-l -il)-3- (izopropilamino)propan-l-on (formül I) bilesiginin aralariiidabulundugu bir dizi AKT inhibitörü tartisilmaktadir:HO (1)_WC 2010/006225 sayili Uluslararasi Patent Basvurusunda, bir proliferatif hastaligin, özellikle de bir solid tümör hastaliginin tedavisi için Ras/Raf/Mek yolagini modüle eden bir bilesik ve bir fosfoinositid 3-kinaz inhibe edici bilesik içeren bir farinasötik kombinasyon; bu gibi bir kombinasyon ihtiva eden bir farmasötik bilesim; bu gibi birkombinasyonun bir proliferatif hastaligin tedavisi için olan bir ilacinhazirlanmasinda kullanimi; eszamanli, ayri ayri veya sirali kullanima yönelik bir kombine preparat olarak bu gibi bir kombinasyonu barindiran bir ticari paket veya ürün; ve bir sicakkanli hayvanin, özellikle de bir insanin tedavisine yönelik bir tedavi yöntemitartisilmaktadir.Kanser gibi hiperproliferatif hastaliklarin tedavisinde kullanimayönelik gelismis bilesimlere günümüzde hâlâ ihtiyaç duyulmaktadir.BULUSUN OZETIFormül l'e sahip olan bilesik veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu belirli baska spesifik ajanlar ile kombinasyon halinde uygulanarak, in vitro ortamda ve in Vivo ortamda kanser hücrelerinin büyümesinin inhibisyonunda aditif veya sinerjistik etkiler elde edilebilecegi belirlenmistir. Bu kombinasyonlar ve ilgili yöntemler, kanser gibi hiperproliferatif hastaliklarin tedavisinde faydaliolabilirler.Bu bulusun birinci özelligi, kolon kanseri, melanom, akciger kanseri ve prostat kanseri arasindan seçilen bir hiperproliferatif hastaligin tedavisinde kullanim için olan ve asagida gösterilen formül I'e sahip olan bir bilesik veya onun bir farmas'otik açidan kabul edilebilir tuzu ile GDC-0973 veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilirtuzuiidan meydana gelen bir kombinasyondur: Bulusun yapilarindan birinde, bulusun birinci özelligine göre kullanim için bulusun birinci özelligine uygun bir kombinasyon söz konusu olup, burada hiperproliferatif hastalik kolon kanseri, metastatik melanom ve küçük hücreli olmayan akciger kanseri arasindan seçilenbir hastaliktir.Bulusun bir diger yapisinda, bulusun birinci özelligine göre kullanim için bulusun birinci özelligine uygun bir kombinasyon söz konusuolup, burada:a) formül I bilesigi veya onun tuzu, GDC-O973 veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu ile eszamanli uygulanir; veya b) formül I bilesigi veya onun tuzu ile GDC-0973 veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu sirayla uygulanirlar; veyac) GDC-O973 veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzunun uygulanmasi, kombinasyonun uygulanmasindan yaklasik 1 ilâ yaklasik 10 gün önce baslar; veya(1) formül I bilesigi veya onun tuzunun uygulanmasi, kombinasyonunuygulanmasindan yaklasik 1 ilâ yaklasik 10 gün önce baslar; veyae) formül I bilesigi veya onun tuzunun uygulanmasi ile GDC-O973 veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzunun uygulanmasiayni gün baslarlar.Bulusun belirli yapilarinda, kanser, PTEN mutasyonu ile iliskili birkanser hastaligidir.Bulusun belirli yapilarinda, kanser, AKT mutasyonu, asiriekspresyonu veya ainplifikasyonu ile iliskili bir kanser hastaligidir.Bulusun belirli yapilarinda, kanser, PI3K mutasyonu ile iliskili birkanser hastaligidir.Bulusun belirli yapilarinda, kanser, HerZ/ErbBZ ainplifikasyonu ileiliskili bir kanser hastaligidir.Bulusun belirli yapilarinda, bir formül I bilesigi veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu, GDC-0973 veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu ile kombinasyon halindeuygulanir.Bulusun belirli yapilarinda, seçilen kaiiserlerden biri için GDC-O973 ile tedavi gören bir hastanin yasam kalitesini artirmak üzere terapötik maksatla kullanim için olan bir formül I bilesigi veya onun birfarmasötik açidan kabul edilebilir tuzu ortaya koyulmaktadir.Bulusun belirli yapilarinda, AKT kinazin modüle ettigi seçilenkanserlerden birinin tedavisinde kullanim için olan ve a) bir formül lbilesigi veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu ile b) GDC-O973 ve PD-0325901'den meydana gelen bir kombinasyon ortaya koyulmaktadir.Bulusun belirli yapilarinda, seçilen kanserlerden birinin tedavisinde kullanim için, bir formül I bilesigi veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzunun, bir kabin ve forinül I bilesiginin GDC-O973 ve PD-0325901 ile uygulanacagina isaret eden bir kullanma talimativeya etiketin bulundugu bir kit ortaya koyulmaktadir.Bulusun belirli yapilarinda, seçilen kanserlerden birinin tedavisinde ayri ayri, eszamanli veya sirali kullanim için bir kombine preparat olarak, formül I'e sahip olan bir bilesik veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzunun, GDC-0973'ün ve PD-0325901'inbulundugu bir ürün ortaya koyulmaktadir.Aralarinda melanom, akciger, kolon, yumurtalik, böbrek, meme, prostat, pankreas kanser hücre hatlarinin bulundugu birçok hücre çesidinde in vitro ortamda GDC-0068 ve GDC-O973 koinbinasyonu verildiginde sinerji/aditivite görülmektedir ve bu bulgu in Vivo ortamda melanom, kolon ve akciger ksenogreft modellerinde de teyit edilmistir. Ras/Raf'a veya her iki yolak aktivasyonuna da dayali tümör çesitlerinde Sinerji gözlemlenmistir. GDC-0068 ve GDC-O973 kombinasyonu muhtelif hücrelere dozlandiginda melanom, akciger (Örnegin NSCLC) ve kolon hatlarinin Sinerji sergiledikleri görülmüstür. GDC-0068 ve GDC-0973 kombinasyonu ile yapilan dozlamada, (luminal (ER+), Her2+ ve bazal üçlü negatif meme kanserhücrelerinin dahil oldugu) meme kanser hücreleri de Sinerjisergileyebilirler. GDC-0068 ve GDC-0973 kombinasyonu ile yapilan uygulama karsisinda, tek basina Meki'ye duyarli hücrelerde dahiSinerji gözlemlenmistir.Kanser hücresinin mutasyoii duruinunun o kanser hücresinin farkli tedavi protokollerine nasil cevap verecegine isaret eden bir biyomarker oldugu kesfedilmistir. Örnegin, Kras ve/veya Braf mutasyonlari ile birlikte PI3K yolagi (örnegin PI3K veya AKT) mutasyonlari barindiran kanser hücreleri, burada açiklanan kombinasyon tedavilerine pozitif (örnegin sinerjistik) cevaplar verebilirler. Ayrica, kanser hücresinin PTEN durumu da birbiyomarkerdir.A2058 (PTEN yok/Braf mutant) melanoin modelinde, GDC-0068 ve GDC-0973 kombinasyonu kullanildiginda kuvvetli bir Sinerji saptanmistir. Bütün GDC-0973 dozlarinda ve yüksek GDC-0068 dozlarinda (75 ve 100 mg/kg), denk ve karsilastirilabilir tek ajan tümör büyümesi inhibisyonu (TGI) kaydedilmistir. 50 mg/kg GDC- 0068 kullanildiginda TGl görülmemektedir. Iki ilacin da yer aldigi kombinasyon bu modelde iyi tolere edilmis ve yaklasik %13düzeyinde bir maksimum agirlik kaybi meydana gelmistir.
SEKILLERE DAIR KISA AÇIKLAMALAR Sekil 1'de, GDC-0068 ile GDC-0973'ten (2,5 mg/kg) olusankombinasyon ile tümör hacimlerine istinaden elde edilen sonuçlargösterilmektedir.Sekil 2'de, GDC-0068 ile GDC-0973'ten (5,0 mg/kg) olusan kombinasyon ile tümör hacimlerine istinaden elde edilen sonuçlar gösterilmektedir.Sekil 3'te, GDC-0068 ile GDC-O973'ten (7,5 mg/kg) olusan kombinasyon ile tümör hacimlerine istinaden elde edilen sonuçlar gösterilmektedir.Sekil 4'te, GDC-0068 ile GDC-0973'ten olusan kombinasyon ile in vitro ortamda kolorektal kanser hücre hatlarina karsi elde edilen sonuçlar gösterilmektedir.Sekil 5'te, GDC-0068 ile GDC-0973'ten olusan koinbinasyon ile HCT- 116'ya (Kolon - PI3K ve Kras Mutant) karsi elde edilen sonuçlar gösterilmektedir. Söz konusu kombinasyonun HCT-116 hücrelerinde hücre Viyabilitesine etkilerinin gösterildigi iki boyutlu (2D) isi haritalari sunulmaktadir. X ekseni üzerinde artan sirayla GDC-0068 konsantrasyonlari, y ekseni üzerinde ise artan sirayla GDC-O973 konsantrasyonlari yer almaktadir. Sag tarafta, kombinasyon halinde veya ayri ajanlar olarak kullanilan GDC-0068 ile GDC-O973'ün her konsantrasyonuna istinaden kaydedilen inhibisyon yüzdelerinin gösterildigi yüzde inhibisyon (% inhibisyon) isi haritalari bulunmaktadir; vehiküle (DMSO) maruz birakilan kontrol O'a ayarlanmistir. Solda gösterilen isi haritalari ve her doz çifti için BLISS skorlari hesaplanmistir.Sekil 6'da, GDC-0068 ile GDC-O973'ten olusan kombinasyon ile in vitro ortamda NSCLC hücre hatlarina karsi elde edilen sonuçlar gösterilmektedir.Sekil 7'de, GDC-0068 ile GDC-0973'ten olusan kombinasyon ile H2122'ye (NSCLC - Kras Mutant) karsi elde edilen sonuçlargösterilmektedir. Söz konusu kombinasyonun NCI-H2122hücrelerinde hücre Viyabilitesine etkilerinin gösterildigi iki boyutlu (2D) isi haritalari sunulmaktadir. X ekseni üzerinde artan sirayla GDC-OO68 konsantrasyonlari, y ekseni üzerinde ise artan sirayla GDC-O973 konsantrasyonlari yer almaktadir. Sag tarafta, kombinasyon halinde veya ayri ajanlar olarak kullanilan GDC-0068 ile GDC-0973'ün her konsantrasyonuna istinaden kaydedilen inhibisyon yüzdelerinin gösterildigi yüzde inhibisyon (% inhibisyon) isi haritalari bulunmaktadir; vehiküle (DMSO) maruz birakilan kontrol 0'a ayarlanmistir. Solda gösterilen isi haritalari ve her doz çifti için BLISS skorlari hesaplanmistir.Sekil 8'de, GDC-0068 ile GDC-O973'ten olusan kombinasyon ile in vitro ortamda Melanom hücre hatlarina karsi elde edilen sonuçlar gösterilmektedir.Sekil 9'da, GDC-0068 ile GDC-0973'ten olusan kombinasyon ile A2058'e (Melaiioin - PTEN -/- ve Braf Mutant) karsi elde edilen sonuçlar gösterilmektedir. Söz konusu kombinasyonun A2058 hücrelerinde hücre Viyabilitesine etkilerinin gösterildigi iki boyutlu (2D) isi haritalari sunulmaktadir. Solda gösterilen isi haritalari ve her doz çifti için BLISS skorlari hesaplanmistir. X ekseni üzerinde artan sirayla GDC-0068 konsantrasyonlari, y ekseni üzerinde ise artan sirayla GDC-O973 konsantrasyonlari yer almaktadir. Sag tarafta, kombinasyon halinde veya ayri ajanlar olarak kullanilan GDC-0068 ile GDC-0973'ün her konsantrasyonuna istinaden kaydedilen inhibisyon yüzdelerinin gösterildigi yüzde inhibisyon (% inhibisyon) isi haritalari bulunmaktadir; vehiküle (DMSO) maruz birakilankontrol 0'a ayarlanmistir.10Sekil 10'da, tek ajan uygulamalarinda elde edilen sonuçlara kiyasla AKT ve MEK yolak aktivitelerinde kaydedilen daha yüksek knockdown gösterilmektedir.Sekil ll'de, GDC-O973 ile GDC-0068'den meydana gelen kombinasyon ile MDA-MB-468 meme kaiiseri hücre hattina karsi elde edilen sonuçlar gösterilmektedir.Sekil 12'de, GDC-0068 ile GDC-0973'ten meydana gelen kombinasyon ile in vitro ortamda meme kanseri hücre hatlarina karsi elde edilen sonuçlar gösterilmektedir.Sekil 13'te, GDC-0068 ile GDC-O973'ten meydana gelen kombinasyon ile yumurtalik kanserine karsi elde edilen sonuçlar gösterilmektedir.Sekil 14'te, GDC-0068 ile GDC-0973'ten meydana gelen kombinasyon ile in vitro ortamda prostat kanseri hücre hatlarina karsi elde edilen sonuçlar gösterilmektedir.Sekil 15'te, Oral Dozlanan GDC-0068 + GDC-O973 (MEK inhibitör'û) kombinasyonu ile MX-l Meme Tümörlerinde elde edilen sonuçlar gösterilmektedir.Sekil 16'da, Oral Dozlanan GDC-0068 + GDC-0973 (M EK inhibitör'u) kombinasyonu ile H2122 NSCLC Tümörlerinde elde edilen sonuçlar gösterilmektedir.Sekil l7'de, Oral Dozlanan GDC-0068 + GDC-0973 (MEK inhibitörü) kombinasyonu ile SW1990 Pankreas tümörlerinde elde edilen sonuçlar gösterilmektedir.Sekil 18'de, Oral Dozlanan GDC-0068 + GDC-O973 (MEK inhibitörü) kombinasyonu ile Pa_Tu-8902 Pankreas Tümörlerinde elde edilensonuçlar gösterilmektedir.llSekil l9'da, Oral Dozlanan GÜÇ-0068 + GDC-0973 (M EK inhibitörü) kombinasyonu ile 537Mel Melanoin Tümörlerinde elde edilen sonuçlar gösterilmektedir.Sekil 20'de, Oral Dozlanan GDC-0068 + GDC-0973 (MEK inhibitörü) kombinasyonu ile A2058 Melanoin Tümörlerinde elde edilen sonuçlar gösterilmektedir.Sekil 21'de, Oral Dozlanan GDC-0068 + GDC-0973 (MEK inhibitörü) koinbinasyonu ile HCT-116 Kolorektal Tümörlerinde elde edilen sonuçlar gösterilmektedir.Sekiller 22a-22b'de, çesitli hücre hatlarinda hücre viyabilitesini inhibe etme konusunda tek ajan tedavileri ile kombinasyon tedavisi arasinda yapilan karsilastirmanin sonuçlari gösterilmektedir. GDC-0068 hücre potensi PI3K/PTEN/HER2'deki alterasyonlardan kaynaklanan Akt aktivasyonu ile iliskili bir profil çizerken, GDC-0973 hücre potensi RAS veya B-RAF mutasyonlarindan kaynaklanan MEK aktivasyonu ile iliskili bir profil çizmistir. GDC-0068'e ve GDC-0973'e duyarli hücre hatlari genelde karsilikli olarak birbirlerini dislarlar. Test edilen hücre hatlarinin yaklasik üçte biri her iki ajana da direnç göstermistir (bkz: Sekiller 22a-22b). GDC-0068 ve GDC-0973 kombinasyonu, test edilen hücre hatlarinin çogunda tek ajan uygulamalarina kiyasla hücre viyabilitesini daha kuvvetli ölçüde inhibe etmistir. Kombinasyon etkileri, BLISS bagimsizlik modeli (Lehar et al. 2007) kullanilarak degerlendirilmistir.Sekil 22a'da yer alan üstteki grafikte, Birden Çok Kanser Hücre Hattinda GDC-0068 ve GDC-0973 için kaydedilen Tek Ajan IC50 Degerleri gösterilmektedir. Hücreler, RPMI + %10 FBS'de artan konsantrasyonlarda tek basina GDC-0068 veya GDC-0973 ya dabunlardan olusan kombinasyon ile islemden geçirilmis ve 4 gün12geçtikten sonra CellTiter-Glo kullanilarak viyabilite bakimindan analiz edilmislerdir. Alttaki mütekabil grafikte, bir dizi spesifik genotip için kaydedilen GDC-0068 ve GDC-0973 koinbinasyon sinerjisi gösterilmektedir. Renkli bloklar, bir Mutasyon, Delesyon veya Aktivasyonun varligina isaret etmektedir. B-RAF, RAS, HER2, PI3K veya PTEN'deki mutasyonlar/alterasyonlar, her hücre hatti altinda renkli bir kare ile gösterilmektedirler (B-RAF, kahverengi; RAS, kirmizi; HER2, mavi; PTEN, koyu yesil; PI3K'ye istinaden, açik yesil PIK3CA'da kinaz domaini inutasyonlari bulunduguna isaret etmektedir, açik mavi ise kinaz domaininde olmayan baska mutasyonlar veya ainplifikasyonlar bulunduguna isaret etmektedir).
PTEN alterasyonlari, ya bu proteine iliskin olarak Western blot ile tespit edilebilir olmayan bir sinyal söz konusu olduguna ya da gende bir mutasyon bulunduguna isaret etmektedirler. Her hücre hattina istinaden doku kaynaklari da farkli renklerde gösterilmektedir ve ilgili dokulari temsil eden kisaltmalar söyledir: meme (Br), kolon (C0), küçük hücreli olmayan akciger kanseri (Lu), melanom (Me), yumurtalik (OV), prostat (Pr) ve böbrek (Re).Sekil 22b'de, Birden Çok Hücre hattinda GDC-0068 ve GDC-O973 için hesaplanan toplam pozitif kombinasyon Bliss Skorlari gösterilmektedir. Toplam pozitif BLISS skorlari ile anlasildigi üzere birden çok hücre hattinda, 'Özellikle de RAS/RAF yolagi aktivasyonunun söz konusu hücre hatlarinda ya da PI3K/Akt ve RAS/RAF yolagi aktivasyonlarinm her ikisinin de söz konusu oldugu hücre hatlarinda sinerjistik etkiler gözlemlenmistir. GDC-0068 ve GDC-0973'e iliskin toplam pozitif BLISS skorlari her hücre hattinda ayri ayri hesaplanmistir.13Sekil 23'te, 537MEL Melanom, PTEN yok, Braf amp/delde GDC- 0068 Ve GDC-0973 için kaydedilen Bliss Isi Haritasi ve % Inhibisyon gösterilmektedir; GDC-0068 ile GDC-O973'ten meydana gelen kombinasyon her iki yolagi da inhibe etmis ve hücre Ölümünü artirmistir.Sekil 24'te, GDC-0068 ve GDC-0973 ile 24 Saat Boyunca Uygulamaya Tabi Tutulan Insan HTC116 Kolon Hücre Hattina Iliskin Yapilan Westem Blot Analizi gösterilmektedir. HCT-116 hücreleri, belirtilen konsantrasyonlardaki GDC-0068 ve GDC-0973 ile yaklasik 3 saat boyunca inkübe edilmislerdir. Akt, MEK ve onlarin downstream markerlerinin fosforilasyonu Western blotlar ile analiz edilmistir.Sekil 25'te, 537MEL Melanom, PTEN yok, Braf amp/delde GDC- 0068 ve GDC-0973 kombinasyonunun daha iyi bir etkinlik sagladigi gösterilmektedir.Sekil 26'da, Vehikül Uygulanan Kontrole Kiyasla GDC-0068 ve GDC-0973 Kombinasyonu ile Fosfo-Protein Ekspresyon Seviyelerinde Saglanan Istatistiksel Açidan Aiilamli Degisimler gösterilmektedir. Farelere tek doz halinde 100 ing/kg GDC-0068 veya 7,5 ing/kg GDC-0973 ya da kombinasyon verildikten 3 saat sonra A2058X1 tümörleri toplanmistir. Tümörler, ters faz protein dizisi (RPPA) kullanilarak analiz edilmislerdir.Sekil 27'de, A2058 ksenogreft tümörlerinde Tek Ajan Uygulamalarina Kiyasla GDC-0068 ve GDC-0973 Koinbinasyonu ile dozlamadan sonra Fosfo-Protein Ekspresyon Seviyelerinde Kaydedilen Istatistiksel Açidan Anlamli Degisimler gösterilmektedir.Sekil 28'de, MALME3M hücrelerinde kombinasyonun hücreViyabilitesine etkilerinin gösterildigi iki boyutlu (2D) isi haritalari14sunulmaktadir. X ekseni üzerinde artan sirayla GDC-0068 konsantrasyonlari, y ekseni üzerinde ise artan sirayla GDC-O973 konsantrasyonlari yer almaktadir. Yüzde inhibisyon (% inhibisyon) isi haritasi, kombinasyon halinde veya ayri ajanlar olarak kullanilan GDC-0068 ile GDC-0973'ün her konsantrasyonuna istinaden kaydedilen inhibisyon yüzdelerini göstermektedir; kontrol vehiküle (DMSO) maruz birakilmistir ve O'a ayarlanmistir.Sekil 29'da, MALME3 hücrelerinde kombinasyonun hücre Viyabilitesine etkilerinin gösterildigi iki boyutlu (2D) isi haritalari sunulmaktadir. X ekseni üzerinde artan sirayla GDC-0068 konsantrasyonlari, y ekseni üzerinde ise artan sirayla GDC-O973 konsantrasyonlari yer almaktadir. Yüzde inhibisyon (% inhibisyon) isi haritasi, kombinasyon halinde veya ayri ajanlar olarak kullanilan GDC-0068 ile GDC-0973'ün her konsantrasyonuna istinaden kaydedilen inhibisyon yüzdelerini göstermektedir; kontrol vehiküle (DMSO) maruz birakilmistir ve O'a ayarlaninistir. Sagda gösterilen isi haritalari ve her doz çifti için BLISS skorlari hesaplanmistir.Sekil 30'da, NCI-BL2122 hücrelerinde kombinasyonun hücre Viyabilitesine etkilerinin gösterildigi iki boyutlu (2D) isi haritalari sunulmaktadir. X ekseni üzerinde artan sirayla GDC-0068 konsantrasyonlari, y ekseni üzerinde ise artan sirayla GDC-O973 konsantrasyonlari yer almaktadir. Yüzde inhibisyon (% inhibisyon) isi haritasi, kombinasyon halinde veya ayri ajanlar olarak kullanilan GDC-OO68 ile GDC-0973'ün her konsantrasyonuna istinaden kaydedilen inhibisyon yüzdelerini göstermektedir; kontrol vehiküle (DMSO) maruz birakilmistir ve O'a ayarlanmistir. Sagda gösterilen isiharitalari ve her doz çifti için BLISS skorlari hesaplanmistir.15Sekil 3l'de, GÜÇ-0068 ve GDC-0973 kombinasyonu ile fosfo-protein ekspresyon seviyelerinde elde edilen degisimler (24 saat) ve AKT ve MEK yolaklarinda saglanan modülasyon gösterilmektedir. Farelere tek doz halinde 100 mg/kg GDC-0068 veya 7,5 mg/kg GDC-0973 ya da kombinasyon verildikten 24 saat sonra A2058Xl tümörleri toplanmistir. Tümörler, ters faz protein dizisi (RPPA) kullanilarakanaliz edilmislerdir.BULUSUN ORNEK NITELIGINDEKI YAPILARINA DAIR AYRINTILI AÇIKLAMA VE TANIMLARBu tarifnainede ve istemlerde geçen "ihtiva eder", "ihtiva eden", "içerir", "içeren" ve türevi kelime ve terimler, atif yapilan özellikler, tainsayilar, komponentler ya da basamaklarin mevcut oldugunu gösterirler, ancak baska özellik veya özelliklerin, tamsayi veya tamsayilarin, komponent veya komponentlerin, basamak veya basamaklarin ya da bunlardan olusan grup veya gruplarin mevcut olmadigina ya da bulusun kapsamina dahil edilemeyecegine dair biryargi veya ima tasimazlar."Tedavi etme" ve "tedavi" terimleri, hem terapötik tedaviyi, hem de amaci istenmeyen bir fizyolojik degisim veya bozuklugu, örnegin kanserin büyümesi, gelismesi veya yayilmasini önlemek veya yavaslatmak (azaltmak) olan profilaktik veya önleyici uygulama ve tedbirleri içine alan bir anlam tasirlar. Bu bulusun amaçlari bakimindan, faydali ya da istenen klinik sonuçlar arasinda, sadece bunlarla sinirli kalmaksizin, tespit edilebilir düzeyde olsun ya daolmasin, semptomlarin hafiflemesi, hastaligin yayiliminin azalmasi,16stabil (yani kötülesmeyen) hastalik durumu, hastalik progresyonunun gecikmesi ya da yavaslamasi, hastalik durumunun iyilesmesi ya da palyasyonu ve (kismi ya da tam) remisyon vardir. "Tedavi", tedavi verilmeyen durumda beklenen sag kalima kiyasla sag kalimin uzatilmasi anlainina da gelebilir. Tedaviye ihtiyaci olanlar arasinda, ilgili hastalik veya bozukluktan halihazirda mustarip olanlar, ilgili hastalik veya bozukluga yatkinligi bulunanlar ve ilgili hastalik veyabozuklugun meydana gelmesinin `Önlenmesi gerekenler bulunur."Terapötik açidan etkin miktar" tabiri, (i) belirli bir hastaligi, rahatsizligi ya da bozuklugu tedavi etmek, (ii) belirli bir hastalik, rahatsizlik ya da bozukluga ait bir veya daha fazla sayida semptomu hafifletmek, iyilestirmek veya ortadan kaldirmak ya da (iii) burada tanimlanan belirli bir hastalik, rahatsizlik ya da bozukluga ait bir veya daha fazla sayida semptomun baslamasini `onlemek ya da geciktirinek için, bu bulusa konu olan bir bilesikten kullanilmasi gereken iniktar anlamina gelir. Kanser söz konusu ise, ilacin terap'otik açidan etkin miktari, kanser hücrelerinin sayisini azaltabilir; tümör boyutlarini küçültebilir; periferik organlara yönelik kanser hücresi infiltrasyonunu iiihibe edebilir (yani, belirli bir düzeye kadar yavaslatabilir ve tercihen durdurabilir); tümör metastazini inhibe edebilir (yani, belirli bir düzeye kadar yavaslatabilir ve tercihen durdurabilir); tümör büyümesini belirli bir düzeye kadar inhibe edebilir ve/veya kanserle iliskili semptomlarin birini veya birden fazlasini belirli bir düzeye kadar hafifletebilir. Ilaç kanser hücrelerinin çogalmasini önleyebildigi ve/veya mevcut kanser hücrelerini öldürebildigi düzeyde sitostatikve/veya sitotoksik olabilir. Kanser tedavisinde etkinlik, örnegin17hastalik progresyonuna kadar geçen süre (TTP) degerlendirilerekve/Veya cevap orani (RR) tayin edilerek Ölçülebilir."Kanser" ve "kanseröz" terimleri, normalde düzensiz ve kontrolsüz hücre büyümesi ile karakterize edilen ve memelilerde görülen fizyolojik durum ve hastaliklara atif yapar veya bu gibi hastalik ve durumlari tanimlarlar. Bir "tümör", bir veya daha fazla sayida kanseröz hücre içerir. Kanser hastaliklarina örnek olarak, sadece bunlarla sinirli kalmaksizin, karsinom, lenfoma, blastom, sarkom ve lösemi ya da lenfoid malignensiler gösterilebilir. Bu tarz kanser hastaliklarina verilebilecek daha somut örnekler arasinda, skuam'oz hücreli kanser (örnegin epitel skuamöz hücreli kanser); küçük hücreli akciger kanseri, küçük hücreli olinayan akciger kanseri ("NSCLC"), akciger adenokarsinomu ve skuamöz akciger karsinomu da dahil akciger kanseri; peritoneum kanseri; hepatoselüler kanser; gastrointestinal kanser de dahil gastrik kanser ya da mide kanseri; pankreas kanseri, glioblastom; serviks kanseri; yumurtalik kanseri; karaciger kanseri; mesane kanseri; hepatom; meme kanseri; kolon kanseri; rektal kanser; colorektal kanser; endometrium ya da uterin karsinomu; tükürük bezi karsinomu; böbrek kanseri ya da renal kanser; prostat kanseri; vulva kanseri; tiroid kanseri; hepatik karsinom; anal karsinom; penis karsinomu; ve bas ve boyun kanseri sayilabilir. Burada bahsi geçen gastrik kanser, mideniii herhangi bir kisminda gelisebilecek ve mide boyunca ve diger organlara, özellikle de özofagus, akcigerler, lenf nodlari ve karacigere yayilabilecek olanmide kanserini içine alan bir anlam tasir.18Bir "kemoterapötik ajan", nasil bir etki mekanizmasina sahip oldugu fark etmeksizin, kanser tedavisinde faydali olan bir biyolojik (büyükmolekül) veya kimyasal (küçük molekül) bilesigi teskil eder.Bir "platin ajani", karboplatin, sisplatin ve oksaliplatinin `Örnekgösterilebilecegi, platin içeren bir kemoterapötik ajandir."Memeli" terimi, sadece bunlarla sinirli kalinaksizin, insanlar, fareler, siçanlar, gine domuzlari, inayinunlar, köpekler, kediler, atlar, inekler, domuzlar, koyunlar ve kümes hayvanlarim içine alan bir anlam tasir.
Hasta terimi bir meineliye atif yapar ve bulusun yapilarindan birinde,hasta bir insandir."Kullanma talimati" terimi, terapötik ürünlerin koyuldugu ticari ambalajlara dahil edilen ve endikasyonlar, kullanim sekli, dozaj, uygulama sekli, kontrendikasyonlar ve/Veya ilgili terap'otik ürünlerin kullanimina iliskin uyarilar hakkinda bilgi veren talimatname metnineatif yapar.Burada geçen "farmasötik açidan kabul edilebilir tuz" ifadesi, bu bulusa uygun bir bilesigin farmasötik açidan kabul edilebilir organik veya inorganik tuzlarina atif yapar. Ornek niteligindeki tuzlar arasinda, sadece bunlarla sinirli kalmaksizin, sülfat, sitrat, asetat, oksalat, klorür, bromür, iyodür, nitrat, bisülfat, fosfat, asit fosfat, izonikotinat, laktat, salisilat, asit sitrat, tartrat, oleat, tannat, pantotenat, bitartrat, askorbat, süksinat, maleat, gentisinat, fumarat, glukonat, glukuronat, sakkarat, format, benzoat, glutamat,metansülfonat "mesilat", etansülfonat, benzensülfonat, p-19toluensülfonat ve pamoat (yani l,1'-metilen-bis-(Z-hidroksi-3-naftoat)) tuzlari sayilabilir. Bir farinasötik açidan kabul edilebilir tuz, baska bir molekülü, örnegin bir asetat iyonunu, bir süksinat iyonunu ya da baska bir karsit iyonu da içine alan bir yapida olabilir. Karsit iyon, parent bilesik üzerindeki yükü stabilize eden herhangi bir organik ya da inorganik moiete olabilir. Bunun yani sira, bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzun yapisinda birden fazla sayida yüklü atom bulunabilir.
Farmasötik açidan kabul edilebilir tuzun yapisinda birden fazla sayida yüklü atoinun bulundugu hallerde, söz konusu tuz birden fazla sayida karsit iyona sahip olabilir. Sonuç olarak, bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuz, bir veya daha fazla sayida yüklü atoin ve/veya bir veyadaha fazla sayida karsit iyon içerebilir.Istenen farinasötik açidan kabul edilebilir tuz, sektörde kullanilan uygun herhangi bir yöntein ile hazirlanabilir. Örnegin, hidroklorik asit, hidrobromik asit, sülfürik asit, nitrik asit, metansülfonik asit, fosforik asit veya benzeri bir inorganik asitle ya da asetik asit, inaleik asit, süksinik asit, mandelik asit, fumarik asit, malonik asit, piruvik asit, oksalik asit, glikolik asit, salisilik asit, bir piranosidil asit, örnegin, glukuronik asit ya da galakturonik asit, bir alfa hidroksi asit, örnegin sitrik asit ya da tartarik asit, bir amino asit, örnegin aspartik asit ya da glutainik asit, bir aromatik asit, örnegin benzoik asit ya da sinnamik asit, bir sülfonik asit, örnegin p-toluensülfonik asit ya da etansülfonik asit veya benzeri bir organik asitle serbest bazi isleme tâbi tutinak suretiyle hazirlanabilir. Bazik farinasötik bilesiklerden farmasötik açidan faydali veya kabul edilebilir tuzlar olusturmak için kullanima genelde uygun olduklari düsünülen asitler, örnegin asagidabelirtilen eserlerde tartisilmaktadirlar: P. Stahl et al, Cainille G. (eds.)20Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge et al, Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) l 19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201 217; Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Acadeinic Press, NeW York; Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., (1995) Mack Publishing Co., Easton PA; ve The Orange Book (Food & DrugAdministration, Washington, D.C.'nin web sitesinde yer almaktadir)."Farmasötik açidan kabul edilebilir" tabiri, atif yapilan maddenin ya da bilesimin formülasyonda bulunan diger bilesenlerle ve/Veya tedavinin uygulanacagi memeliyle kimyasal ve/Veya toksikolojikaçidan geçimli olmasi gerektigine isaret eder.Burada geçen "sinerjistik" terimi, tek baslarina uygulanan iki veya daha fazla sayida a janin aditif etkilerinden daha etkin ve etkili olan bir terap'otik kombinasyonu nitelemek için kullanilmaktadir. Formül I'e sahip olan bir bilesik veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu ile GDC-0973 ve PD-0325901'den biri arasindaki bir sinerjistik etkilesim, burada açiklanan eseylerden elde edilen sonuçlar temelinde belirlenebilir. Bu eseylerin sonuçlari, bir Kombinasyon Indeksi elde etmeye odakli CalcuSyn yazilimi ile Chou ve Talaly kombinasyon yöntemi ve Doz-Etki Analizi (Chou and Talalay, 1984, Adv. Enzyme Regul. 22:27-5 5) gerçeklestirilerek analiz edilebilirler. Burada sunulan kombinasyonlar bir dizi farkli esey sisteminde degerlendirilmislerdir ve elde edilen veriler, antikanser ajanlari arasindaki Sinerji, aditivite ve antagonizmayi ölçmeye yarayan bir standart program kullanilarakanaliz edilebilir. Chou ve Talalay imzali "'New Avenues in21Developinental Cancer Chemotherapy', Academic Press, 1987" eserinin ikinci bölümünde örnek bir program anlatilmaktadir. 0,8'den küçük Kombinasyon Indeksi degerleri Sinerji bulunduguna, l,2'den büyük degerler antagonizma söz konusu olduguna ve 0,8 ile 1,2 arasinda kalan degerler aditif etkilerin bulunduguna isaret ederler.
Kombinasyon tedavisi "Sinerji" saglayabilir ve "sinerjistiklik" söz konusu oldugunu, yaiii etkin bilesenler birlikte kullanildiklarinda ulasilan etkinin söz konusu bilesikler ayri ayri kullanilarak elde edilen etkilerin toplamindan büyük oldugunu kanitlayabilir. Etkin bilesenler (1) bir kombine, birim dozaj forinülasyonu halinde birlikte formüle edilip eszamanli uygulandiklarinda veya verildiklerinde, (2) ayri formülasyon halinde dönüsümlü veya birbirlerine paralel olarak verildiklerinde ya da (3) belirli baska bir rejimle verildiklerinde bir sinerjistik etkiye ulasilabilir. Dönüsümlü tedaviye istinaden, bilesikler sirayla, örnegin ayri enjektörlerle yapilan farkli en jeksiyonlar halinde uygulandiklarinda veya verildiklerinde bir sinerjistik etkiye ulasilabilir. Genelde, dönüsümlü tedavi sirasinda her etkin bilesenin etkin dozaji sirayla, yaiii art arda uygulanirken, kombinasyon tedavisinde iki veya daha fazla sayida etkin bilesenin etkin dozajlari birlikte uygulanirlar. Kombinasyon etkileri, hem BLISS bagimsizlik modeli hem de en yüksek tek ajan (HSA) modeli kullanilarak degerlendirilmislerdir (Lehar et al. 2007, Molecular Systems Biology 3:80). BLISS skorlariyla tek ajan uygulamalarina kiyasla elde edilen kuvvetlenme derecesi ölçülür ve bir (O'dan büyük olan) pozitif BLISS skoru basit aditiviteden daha fazlasinin söz konusu oldugunu gösterir.
Bir 250'den büyük kümülatif pozitif BLISS skoru, test edilen konsantrasyon araliklari dahilinde kuvvetli bir siiierji söz konusuoldugu seklinde degerlendirilir. Bir (O'dan büyük) HSA skoru,22mütekabil konsantrasyonlarda tek ajan kullanimlarinda kaydedilen cevaplarin maksimumundan daha büyük bir kombinasyon etkisi sözkonusu olduguna isaret eder.Tümör büyümesi inhibisyonunu (TGI) ölçme yöntemleri sektörde bilinirler. Bir örnek yöntemde, tedaviden önce ve sonra hastanin ortalama tümör hacimleri belirlenir ve daha sonra kiyaslanir. Tümör hacimleri, sektörde bilinen herhangi bir yöntemle, örnegin UltraCal IV kumpas (Fred V. Fowler Company) veya PET (pozitron emisyon tomografisi) ya da baska bir yöntein kullanilarak iki boyut (uzunluk ve genislik) cinsinden ölçülebilirler. Tümör hacmi (mm3) = (uzunluk X genislikz) x 0,5 denklemi kullanilabilir. Tümör hacimlerinin birden çok zaman araliginda ölçümü bir karma modelli Lineer Karma Etkiler (LME) yaklasimi (Pinheiro et al. 2009) kullanilarak gerçeklestirilebilir. Bu yaklasimla, tekrarlanan ölçümlerin hepsi (ve birden çok hasta) dikkate alinip degerlendirilebilir. Kübik regresyon Splaynlari kullanilarak, her doz seviyesindeki tümör hacmine karsi zaman için lineer olmayan bir profil olusturulabilir. Daha sonra bu lineer olmayan profiller karma model kapsaminda dozla iliskilendirilebilirler. Vehiküle göre bir yüzde degeri olarak tümör büyümesi inhibisyonu degeri, asagida gösterilen denklem kullanilarak, vehiküle göre beher günde olusturulan egri altinda kalan alanin (AUC)yüzde cinsinden degeri olarak hesaplanabilir:AUCtedavi/gün )]0 TG] = 100 1 - /° l (Avcvemküi/gün23Bu denklem kullanilarak elde edilen bir %100 TG] degeri tümör stazina, yaklasik %l'den büyük fakat yaklasik %100'den küçük bir deger tümör büyümesi inhibisyonuna ve yaklasik %100'den büyük birdeger tümör regresyonuna isaret eder.BIR FORMUL i BILESIGININ HAZIRLANMASIForinül I'e sahip olan bilesik ve onun tuzlari, WO 2008/006040 sayili Uluslararasi Patent Basvurusunda ya da asagidaki Ornek 1'de tarif edildigi gibi hazirlanabilir. Formül 1 bilesikleri hazirlanirken, ara ürünlerin uzak fonksiyonalitelerinin (Örnegin primer veya sekonder aminler ve benzeri) korunmasi gerekebilir. Bu tarz bir korumaya ihtiyaç duyulup duyulniadigi, uzak fonksiyonalitenin niteligine ve hazirlama yöntemlerinin kosullarina bagli olarak anlasilacaktir. Uygun amin-koruma gruplari (NH-Pg) arasinda, asetil, trifloroasetil, t- bütoksikarbonil (BOC), benziloksikarbonil (CBz) ve 9- florenilmetilenoksikarboni1 (Finoc) bulunur. Sektörde bilgi ve beceri sahibi uzmanlar bu gibi bir korumanin saglanmasinin gerekip gerekmedigini kolayca belirleyebilirler. Koruma gruplari ve onlarin kullanimi hakkinda genel bir tarif ve açiklama için bkz: T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.AYIRMA YÖNTEMLERI Formül 1 bilesiklerini hazirlamak için kullanilan sentez yöntemlerininherhangi birinde, reaksiyon ürünlerini birbirlerinden ve/Veya baslangiçmaddelerinden ayirmak fayda saglayabilir. Her basamak veya24basamak serisinin istenen ürünleri, ulasilan ürün, sektörde yaygin kullanilan tekniklerden faydalanilarak istenen homojenlik derecesine ulasilana dek ayristirilir ve/Veya saflastirilirlar. Bu gibi standart ayirina teknikleri arasinda, çok-fazli ekstraksiyon, bir çözücü veya çözücü karisiinindan kristalizasyon, distilasyon, sübliniasyon ve kromatografi bulunur. Farkli birçok kromatografi yönteminden herhangi biri uygulanabilir; bunlar arasinda örnegin sunlar sayilabilir: ters-faz ve normal faz; boyut dislama; iyon degistirme; yüksek, orta ve düsük basinçli sivi kromatografisi yöntemleri ve aparati; küçük ölçekli analitik; benzetimli hareketli yatak (SMB) ve preparatif ince veya kalin tabaka kromatografisi; ve ayrica küçük ölçekli ince tabaka veflas kromatografisi teknikleri.Bir diger ayirma yöntemi çesidi, bir istenen ürün, reaksiyona girmemis baslangiç maddesi, reaksiyon yan ürünü ya da benzeri baska bir maddeye baglanma veya onu ayrilabilir hale getirme kabiliyetine sahip olmasindan dolayi seçilen bir reaktifin bahsi geçen maddenin bulundugu bir karisima uygulanmasina dayanir. Bu gibi reaktiiler arasinda, aktif karbon, moleküler elek, iyon degistirme vasatlari ve benzeri adsorbanlar ve absorbanlar bulunur. Reaktifler, alternatif olarak, bir bazik madde söz konusu ise asitleri, bir asidik madde söz konusu ise bazlari, antikorlarin örnek gösterilebilecegi baglanma reaktiflerini, baglanma proteinlerini, taç eterler gibi seçici selatörleri, sivi/sivi iyon degistirme reaktiflerini (LIX) veya benzeri baskaunsurlari teskil edebilirler.Ayirma yöntemi olarak hangi yöntemin kullanilacagi, ayrilmasihedeflenen maddelerin tabiatina baglidir. Örnek vermek gerekirse,25distilasyon ve süblimasyonda kaynama noktasi ve molekül agirligi, kromatografide polar fonksiyonel gruplarin bulunup buluninamasi, çok-fazli ekstraksiyonda maddelerin asidik ve bazik vasatlardaki stabilitesi ve benzeri faktörler önem arz eder. Sektörde bilgi ve beceri sahibi uzinanlar, istenen sonuca ulasmak için hangi tekniklerin dahaverimli ve faydali olacagini anlayacaklardir.Diastereoinerik karisimlar, sektörde bilgi ve beceri sahibi uzmanlarca iyi bilinen yöntemler, örnegin kromatografi ve/Veya fraksiyonel kristalizasyon yöntemleri kullanilarak, fiziksel kimyasal farklari temelinde diastereomerlerine ayrilabilirler. Enantiyomerler, enantiyomerik karisimin optik bakimdan aktif uygun bir bilesikle (örnegin bir kira] alkol veya Mosher asit klorür gibi bir kira] yardimciyla) tepkiineye sokularak bir diastereoinerik karisima dönüstürülmesi, diastereomerlerin ayrilmasi ve münferit diastereoizomerlerin mütekabil saf enantiyomerlere dönüstürülmesi (örnegin hidroliz) yoluyla ayrilabilirler. Ayrica, bulusa konu olan bilesiklerden bazilari atropizomer (örnegin substitüsyonlu biariller) olabilirler ve bu bulusun bir parçasi olarak degerlendirilirler.Enantiyomerler, bir kiral HPLC kolonu kullamlarak da ayrilabilirler.Bir tekil stereoizomer, örnegin inütekabil stereoizomeri hemen hemen hiç bulunmayan bir enantiyoiner, rasemik karisiiniii örnegin optik açidan aktif ayristirici ajanlar yardimiyla diastereoinerler olusturulmasina dayanan bir yöntein kullanilarak ayristirilmasi yoluyla elde edilebilir (Eliel, E. and Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds," John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994; Lochmuller, C. H., J. Chromatogr., (1975) 113(3):283-302). Bulusa26konu olan kiral bilesiklerden olusan rasemik karisimlar, uygun herhangi bir yöntem kullanilarak ayristirilabilir ve izole edilebilirler ve bu gibi yöntemler arasinda asagida belirtilenler sayilabilir: (l) kiral bilesiklerle iyonik diastereomerik tuzlarin olusturulinasi ve bunlarin fraksiyonel kristalizasyon veya baska yöntemler tatbik edilerek ayristirilmasi; (2) derive edici reaktiflerle diastereomerik bilesiklerin olusturulmasi, diastereomerlerin ayristirilmasi ve bunlarin saf stereoizomerlere dönüstürülmesi; ve (3) büyük ölçüde saf veya zenginlestirilmis stereoizomerlerin dogrudan dogruya kiral kosullar altinda ayristirilmasi. Bkz: "Drug Stereochemistry, Analytical Methods and Pharmacology," Irving W. Wainer, Ed., Marcel Dekker, Inc., New York (1993). Yöntem (1)'de, diastereoinerik tuzlar, brusin, kinin, efedrin, striknin, 0t-metil-ß-feniletilamin (amfetamin) ve benzeri enantiyoinerik olarak saf kiral bazlarin karboksilik asit ve sülfonik asit gibi asidik fonksiyonalite tasiyan asimetrik bilesiklerle tepkimeye sokulmasi yoluyla olusturulabilirler. Diastereoinerik tuzlar, fraksiyonel kristalizasyon veya iyonik kromatografi yoluyla ayrismalari yönünde indüklenebilirler. Amino bilesiklerinin optik izoinerlerinin ayristirilmasi için kamforsülfonik asit, tartarik asit, mandelik asit veya laktik asit gibi kiral karboksilik veya sülfonik asitlerin ilave edilmesi de diasetereomerik tuzlarin olusmasinisaglayabilir.Alternatif olarak, yöntem (2)'de, ayristirilmasi hedeflenen substrat bir kiral bilesigin bir enantiyomeri ile tepkimeye sokularak bir diastereomerik çift olusturulur (E. and Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., 1994, p. 322).Diastereomerik bilesikler, asimetrik bilesiklerin meti] derivatlari gibi27enantiyomerik olarak saf kiral derive edici reaktiflerle tepkimeye sokulmasi ve ardindan diastereomerler ayristirilip hidrolize tâbi tutularak saf veya zenginlestirilmis enantiyomer elde edilmesi yoluyla olusturulabilirler. Bir optik saflik belirleme yönteminde, rasemik karisimin bir inentil ester, örnegin bir baz esliginde (-) mentil kloroformat ya da Mosher esteri, yani a-metoksi-oi-(triflorometil)fenil asetat (Jacob III. J. Org. Chem., (1982) 47:4165) gibi kiral esterleri olusturulur ve iki atr0pizomerik enantiyomer veya diastereomerin bulunup bulunmadigi yönünden lH NMR spektrumu analiz edilir.
Atropizomerik bilesiklerin stabil diastereomerleri, atropizomerik naftil-izokinolinleri ayristirma amaçli yöntemler tatbik edilerek normal- ve ters-faz kromatografisi yoluyla ayristirilip izole edilebilirler (WO 96/15111). Yöntem (3)'te, iki enantiyomerden olusan bir rasemik karisim, bir kira] sabit faz kullanilarak kromatografi yoluyla ayristirilabilir ("Chiral Liquid Chromatography" (1989) W. J. Lough, Ed., Chapman and Hall, New York; Okamoto, J. of Chromatogr., (1990) 5132375-378). Zenginlestirilmis veya saflastirilmis enaiitiyomerler, asimetrik karbon atomlari bulunan diger kira] molekülleri ayirt etmek maksadiyla, optik çevirme ve daireseldikroizm gibi yöntemler uygulanarak ayirt edilebilirler.KEMOTERAPOTIK AJANLARBelirli kemoterapötik ajanlar, formül I'e sahip olan bir bilesik veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu ile kombinasyon halinde kullanildiklarinda in vitro ve in Vivo ortamlarda hücreselproliferasyonu inhibe etme konusunda sasirtici ve beklenmedik 28özellikler ortaya koymuslardir. Bu gibi kemoterapötik ajanlararasinda, GDC-0973 ve PD-0325901 ve bulunmaktadir.XL-518 adiyla da bilinen GDC-0973, insan tümörlerinde siklikla aktive olan RAS/RAF/MEK/ERK yolaginin kilit bilesenlerinden biri olan mitojen aktive protein kinaz kinaz (MAPKK) adiyla da bilinen MEK'in seçici bir inhibitörüdür. MEK/ERK yolaginin uygunsuz aktivasyonu, eksojen büyüme faktörlerinin bulunmadigi hallerde hücre büyüinesini destekler ve artirir. GDC-0973'ün solid tümörlere karsi degerlendirildigi bir Faz l klinik deneyi halen devam etmektedir.
GDC-0973, WO 2007044515 (A1) sayili Uluslararasi Patent Basvurusunda tarif edildigi gibi hazirlanabilir. GDC-0973'ün adi sudur: (8)-(3,4-diflor0-2-(2-f10ro-4-iyodofenilamino)fenil)(3-hidroksi-3-(piperidin-2-il)azetidin-l-il)metanon; ve yapisi asagida gösterildigigibidir: HO 0 N H NH N iPD-0325901 (CAS Kayit No. 391210-10-9, Pfizer), kanser hastaliklari için bir potansiyel oral tablet tedavisi olan bir ikinci jenerasyon, ATP kompetitif olmayan, allosterik MEK inhibitörüdür (US 6960614; US 6972298; US 2004/ 147478; US 2005/0855 50). Meme tümörleri, kolon tümörleri ve melanomun potansiyel tedavisine iliskin olarak Faz IIklinik deneyleri gerçeklestirilmistir. PD-0325901, (R)-N-(2,3-29dihidroksipropoksi) -3,4-dif10r0 -2-(2-flor0-4-iy0d0fenilamino) benzainid olarak adlandirilmaktadir ve asagida gösterilen yapiyasahiptir:FARMASOTIK BILESIMLERBulusa konu olan farmasötik bilesimler veya formülasyonlar arasinda, formül I bilesiginin veya onun bir farinasötik açidan kabul edilebilir tuzunun, GDC-O973'ün ve bir veya daha fazla sayida farmasötik açidan kabul edilebilir tasiyici, glidant, seyreltici veya yardimcimaddenin yer aldigi kombinasyonlar bulunur.Bir Örnekte, GDC-0068 veya onun bir tuzu ile bir veya daha fazla sayida farmasötik açidan kabul edilebilir tasiyici, glidant, seyreltici veya yardiinci maddenin yer aldigi oral uygulamali bir birinci formülasyon ve GDC-0973 veya onun bir tuzu ile bir veya daha fazla sayida farmasötik açidan kabul edilebilir tasiyici, glidant, seyreltici veya yardimci inaddenin yer aldigi oral uygulainali bir ikinciformülasyon bulunur.Formül 1 bilesigi veya onun farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu ile GDC-O973, solvatsiz formda bulunabilecekleri gibi, su, etanol vebenzeri farmasötik açidan kabul edilebilir çözücüler ile birlikte30solvatli formda da bulunabilirler ve bu bulusun hem solvatli formlari hem de solvatsiz formlari içine alan bir kapsama sahip olmasihedeflenmektedir.Forinül I bilesigi veya onun bir farinasötik açidan kabul edilebilir tuzu ve GDC-0973, farkli tautomerik formlarda da bulunabilirler ve bu gibi tautoinerik formlarin hepsi bu bulusun kapsami içerisinde sayilir.
"Tautoiner" ya da "tautoinerik form" teriini, farkli enerji degerleri sergileyen ve bir düsük enerji bariyeri araciligiyla birbirlerine dönüstürülebilecek olan yapisal izomerlere atif yapar. Örnegin, (prototropik tautomerler olarak da bilinen) proton tautoinerleri, keto- enol veya imin-enamin izoinerizasyonu gibi, bir proton migrasyonu araciligiyla birbirlerine dönüstürülebilirler. Valans tautoinerleri ise, baglanina elektronlarinin bazilarinin yeniden düzenlenmesi yoluylakarsilikli dönüstürülebilirler.Farmasötik bilesiinler, hem bulk bilesimi, hem de farmasötik açidan etkin olmayan yardimci maddeler, seyrelticiler, tasiyicilar veya glidantlar ile birlikte bir formül l bilesigi veya onun bir fannas'otik açidan kabul edilebilir tuzu ve GDC-O973 dahil birden fazla sayida (örnegin iki) farmas'otik açidan etkin maddeden olusan ayri dozaj biriinlerini kapsarlar. Bulk bilesim ve her bir ayri dozaj birimi, yukarida bahsi geçen farmasötik açidan etkin maddelerden sabit miktarlarda içerebilir. Bulk bilesim, henüz ayri münferit dozaj birimleri haline büründürülmemis olan üründür. Tablet, hap, kapsül ve benzeri bir oral dozaj birim, bir temsili dozaj birimi olarak gösterilebilir. Bulusa konu olan bir farmasötik bilesimi uygulainaksuretiyle bir hastayi tedavi etineye dayanan burada açiklanan tedavi31yöntemi de benzer sekilde bulk bilesim ve münferit ayri dozaj birimleri ile yapilabilecek uygulamalari ayri ayri içine alan bir anlamve kapsamda tasarlanmistir.Farmasötik bilesimler, bir veya daha fazla sayida atomun dogada genelde bulunduklari atomik kütle veya kütle numarasindan farkli bir atomik kütle veya kütle numarasina sahip olan bir atomla ikame edilmis olmasi hariç burada açiklanan bilesiklerle özdes olan izot0pik olarak etiketli bilesikleri de kapsar. Belirtilen belirli bir atom veya elementin bütün izotoplari, bu bulusa konu olan bilesiklerin ve onlarin kullanim sekillerinin kapsami dahilinde sayilirlar. Bilesiklere dahil edilebilecek 'ornek niteligindeki izotoplar arasinda, 2H, 3.H, lIC, 13C, MC, BN, 'SN, '50, 170, '80, 321), 331)) 358, 181:, 360, 1231 ve 1251 gibi hidrojen, karbon, nitrojen, oksijen, fosfor, sülfür, flor, klor ve iyot izotoplari bulunur. Belirli izot0pik olarak etiketli bulusa uygun bilesikler (örnegin 3H ve 14c ile etiketli olanlar), bilesik ve/veya substrat doku dagilim eseylerinde kullanima uygundurlar. Trityumlu (3 H) ve karbon-14 (MC) izotoplari, hazirlanmalari ve tespit edilineleri kolay oldugu için faydalidlrlar. Ayrica, döteryum (21-1) gibi daha agir izotoplarla ikame yapilmasi, söz konusu durumda metabolik stabilite daha kuvvetli olacak olmasina bagli olarak belirli terapötik avantajlar saglayabilir (örnegin, in Vivo yari ömrü artirabilir ya da dozaj gerekliliklerinin azalmasini saglayabilir) ve dolayisiyla bazi durumlarda tercih edilebilir. 150, 13N, 1'C ve 18F gibi pozitron yayan izotoplar, substrat reseptörü kullanimini incelemek amaciyla pozitronemisyon tomografisinde (PET) kullanilabilirler.Formül 1 bilesigi veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu32ile GDC-0973, insanlar da dahil olinak üzere memelilerde seçilen kanser hastaliklarindan birinin (profilaktik tedaviyi de içine alan bir anlamda) terapötik tedavisine yönelik bir terapötik kombinasyonda kullanilmak üzere standart farmasötik pratige göre formüle edilirler.
Bulusun yapilarindan birinde, bir veya daha fazla sayida farmasötik açidan kabul edilebilir tasiyici, glidant, seyreltici veya yardimci madde ile birlikte bir formül I bilesigi veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzunu ve GDC-0973 içeren bir farmasötik bilesim ortaya koyulmaktadir.Kullanima uygun tasiyicilar, seyrelticiler ve yardimci maddeler sektörde bilgi ve beceri sahibi uzmanlarca iyi bilinmekte olup, bu tarz maddeler arasinda örnegin karbonhidratlar, vakslar, suda çözünür ve/veya sisebilir polimerler, hidrofilik veya hidrofobik maddeler, jelatin, yaglar, çözücüler, su ve benzerleri bulunur. Kullanilacak olan tasiyici, seyreltici veya yardimci madde, bulusa konu olan bilesigin hangi yolla ve amaçla uygulanacagina bagli olacaktir. Çözücüler, genelde, sektörde bilgi ve beceri sahibi uzmanlarin memelilere yönelik uygulama için güvenilir kabul ettikleri (GRAS) çözücüler arasindan seçilirler. Genel itibariyla, güvenli çözücüler, suyun ve suda çözünür veya suyla karisabilir nitelikte olan diger toksik olmayan çözücülerin 'Örnek gösterilebilecegi toksik olmayan aköz çözücülerdir.
Uygun aköz çözücüler arasinda, su, etanol, propilen glikol, polietilen glikoller (örnegin PEG 400, PEG 300), benzeri maddeler ve bunlarin karisimlari bulunur. Formülasyonlarda bir veya daha fazla sayida tampon, stabilize edici ajan, yüzey aktif madde, islatici ajan, kayganlastirici ajan, emülsifiye edici, süspanse edici ajan, koruyucu,antioksidan, opaklastirici ajan, glidant, isleme yardimcisi,33renklendirici, tatlandirici, koku verici ajan, aroma maddesi ve sik bir ilaç (Örnegin bulusa konu olan bir bilesik ya da onun bulundugu bir farmas'otik bilesim) sunumu saglayacak ya da farmas'otik ürünün (ilaç) üretiminde yardimci olacak bilinen baska katki maddeleri debulunabilir.Formülasyonlar, konvansiyonel çözündürme ve karistirma prosedürleri uygulanarak hazirlanabilirler. Örnegin, bulk etkin madde (yani bulusa konu olan bilesik ya da onun stabilize formu, 'Örnegin bir siklodekstrin derivati veya bilinen baska bir komplekslestirme ajani ile olusturulmus bir kompleks), yukarida açiklanan yardiinci maddelerden birinin veya birden fazlasinin esliginde uygun bir çözücüde çözündürülür. Bulusa konu olan bilesik, normalde, ilaç dozajinin kolayca kontrol altinda tutulabilmesini saglayacak ve hastanin reçete edilen dozlama rejimine uyabilmesine olanaksaglayacak farmas'otik dozaj formlarinda formüle edilir.Uygulama için hazirlanan farmasötik bilesim (veya formülasyon), ilacin hangi metotla uygulanacagina bagli olarak çesitli farkli yollarla ambalajlanabilir. Piyasaya sürülen bir ürünün bünyesinde genelde bir kap ve bu kabin içerisinde uygun bir formda farmasötik formülasyon bulunur. Uygun kap çesitleri sektörde bilgi ve beceri sahibi uzmanlarca iyi bilininekte olup, bunlara 'Örnek olarak sise (plastik ve cam), sase, ampul, plastik torba, metal silindir ve benzeri malzemeler gösterilebilir. Kapta, uygun olmayan kisilerin ambalajin içindekilere erisimini 'önlemeye yarayan kurcalamaya dayanikli bir düzenek debulunabilir. Buna ek olarak, kabin üzerine kabin içindekileri34tanimlayan bir etiket yapistirilir. Bu etikete, gerekiyorsa ürünle ilgiliuyarilar da yazilabilir.Bilesiklerin farmasötik formülasyonlari, çesitli farkli uygulama yollari ve çesitlerine uygun farkli forinlarda hazirlanabilirler. Örnegin, istenen saflik derecesine sahip olan formül I bilesigi veya onun bir farmas'otik açidan kabul edilebilir tuzu, bir liyofilize formülasyon, ögütülinüs toz ya da bir aköz çözelti formunda istege bagli olarak farmasötik açidan kabul edilebilir seyrelticiler, tasiyicilar, yardiinci maddeler veya stabilizatörlerle (Remington's Pharinaceutical Sciences (1995) 18th edition, Mack Publ. C0., Easton, PA) karistirilabilir.
Formülasyon çalismasi, bilesigin istenen saflik derecesinde ve uygun pH'de ortam sicakligi altinda fizyolojik açidan kabul edilebilir tasiyicilarla, yani kullanildiklari dozajlar ve konsantrasyonlarda alicilar için toksik olmayan tasiyicilarla karistirilmasi yoluyla gerçeklestirilebilir. Formülasyonun pH seviyesi, temelde bilesigin kullanim sekline ve konsantrasyonuna bagli olmakla birlikte, yaklasik3 ile yaklasik 8 arasi degerlerde seyredebilir.Farmasötik formülasyonun steril olmasi tercih edilir. Daha soinut ifade etmek gerekirse, in Vivo uygulama için kullanilacak olan formülasyonlar steril olnialidirlar. Bu sterilizasyon, formülasyonu steril filtrasyon membranlarindan geçirerek filtrasyona tâbi tutinaksuretiyle kolayca saglanabilir.Farmasötik formülasyon bir kati bilesim, bir liyofilize formülasyonveya bir ak'oz çözelti olarak saklanabilir.35Farmasötik formülasyonlar, iyi tip uygulamasina uygun bir tarzda, yani söz konusu ilkelere uygun miktarlar, konsantrasyonlar, programlar, seyir, vehiküller ve uygulama yolu ile dozlanacak ve uygulanacaklardir. Bu baglamda dikkate alininasi gereken faktörler arasinda, tedavi edilmesi hedeflenen hastaligin ne oldugu, tedavi edilmesi hedeflenen memelinin türü, tedavi edilecek hastanin klinik durumu, hastaligin sebebi, ajanin uygulanacagi yer, uygulama yöntemi, uygulama prograini ve tibbi uygulamayi yürütecek uzmanlarca bilinen baska faktörler bulunur. Uygulanacak olan bilesigin "terapötik açidan etkin miktari", bu gibi faktörler üzerine yapilan mülahazalar temelinde tayin edilecek ve koagülasyon faktörü aracili hastaligi önlemek, hafifletmek ya da tedavi etmek için gereken asgari miktar olacaktir. Bu miktarin konakçi için olan veya konakçiyi kanamaya karsi istatistiksel açidan anlamli ölçüde daha duyarli halegetiren seviyeden düsük olmasi tercih edilir.Kabul edilebilir seyrelticiler, tasiyicilar, yardimci maddeler ve stabilizatörler, kullanildiklari dozajlar ve konsantrasyonlarda alicilar için toksik olinayan maddeler olup, bunlar arasinda fosfat, sitrat ve baska organik asitlerin örnek gösterilebilecegi tamponlar; askorbik asit ve metioninin örnek gösterilebilecegi antioksidanlar; koruyucular (örnegin oktadesildimetilbenzil amonyum klor'ur; heksametonyum klorîir; benzalkonyum klorür, benzetonyum klorür; fenol, bütil veya benzil alkol; alkil parabenler, örnegin metil veya propil paraben, katekol; rezorkinol; sikloheksanol; 3-pentanol; ve m-kresol); düsük molekül agirlikli (yaklasik 10 artiktan daha kisa) polipeptidler; proteinler, örnegin serum albümini, jelatin veya immünoglobulinler;polivinilpirolidon gibi hidrofilik polimerler; glisin, glutamin,36asparajin, histidin, arjinin veya lizin gibi ainino asitler; glukoz, mannoz veya dekstrinler gibi monosakkaritler, disakkaritler ve diger karbonhidratlar; EDTA gibi selatlama ajanlari; sukroz, mannitol, trehaloz veya sorbitol gibi sekerler; sodyum gibi tuz-Olusturucu karsit- iyonlar; inetal koinpleksleri (örnegin Zn-protein kompleksleri); ve/Veya TWEENTM, PLURONICSTM veya polietilen glikol (PEG) gibi iyonik olmayan yüzey aktif maddeler sayilabilir. Etkin farmas'otik bilesenler, örnegin koaservasyon teknikleriyle ya da arayüzey polimerizasyonuyla hazirlanan mikrokapsüllerin, örnegin sirasiyla hidroksimetilselüloz ya da jelatin-mikrokapsüller ve poli- (metilmetakrilat) mikrokapsüllerin içinde, koloidal ilaç tasiina sistemlerinin (örnegin lipozomlar, albümin mikrosferler, mikroemülsiyonlar, nano-partiküller ve nanokapsüller) içinde ya da makroemülsiyonlarin içinde hapsedilmis halde de sunulabilirler. Bu teknikler, "Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, (1995)Mack Publ. C0., Easton, PA" eserinde açiklanmaktadir.Bir formül I bilesigi veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzundan sürekli-salimli preparatlar hazirlanabilir. Sürekli-salimli preparatlara verilebilecek uygun Örneklerden biri bir Formül 1 bilesigi veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzunun bulundugu kati hidrofobik polimerlerden olusan yari-geçirgen matrisler olup, bu matrisler sekillendirilmis materyaller formunda, 'Örnegin film ya da mikrokapsül formunda kullanilirlar. Sürekli-salimli matrislere örnek olarak polyesterler, hidrojeller (örnegin poli(2-hidroksietil-metakrilat) ya da poli(vinilalkol)), polilaktidler (US 3773919), L-glutamik asit ve gama-etil-L-glutamat kopolimerleri, bozundurulamayan etilen-Vinilasetat, bozundurulabilir laktik asit-glikolik asit kopolimerleri, örnegin37LUPRON DEPOTTM (laktik asit-glikolik asit kopoliineri ve löprolid asetattan olusan enjekte edilebilir mikrosferler) ve poli-D-(-)-3-hidroksibütirik asit gösterilebilir.Farinasötik formülasyonlar, burada ayrintilariyla açiklanan uygulaina yollari için uygun olan formülasyonlardir. Forinülasyonlar birim dozaj formunda sunulabilir ve eczacilik sektöründe iyi bilinen uygun yöntemlerden herhangi biriyle hazirlanabilirler. Ilgili teknikler ve formülasyonlar genel hatlariyla "Remington's Pharinaceutical Sciences 18th Ed. (1995) Mack Publishing C0., Easton, PA" eserinde bulunabilirler. Bu yönteinlerde, etkin bilesenin bir veya daha fazla sayida yardimci bileseni teskil eden tasiyici ile bir araya getirildigi bir basamak bulunur. Forinülasyonlar genelde etkin bilesenin sivi tasiyicilar veya ince parçali kati tasiyicilar ya da hem SlVl hem de kati tasiyicilar ile ünifomi ve yogun ölçüde bir araya getirilmesi ve dahasonra gerekiyorsa ürünün sekillendirilmesi yoluyla hazirlanirlar.Bir formül I bilesigi veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu ve/Veya kemoterapötik ajanin yer aldigi oral uygulama için uygun formülasyonlar, her birinde önceden belirlenmis miktarda bir formül l bilesigi veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu ve/Veya bir kemoterapötik ajan bulunan haplar, sert veya yumusak kapsüller, örnegin jelatin kapsüller, kaseler, yuvarlak yassi haplar, lozanjlar, aköz veya yag süspansiyonlari, dagilabilir tozlar veya granüller, emülsiyonlar, suruplar veya eliksirler gibi ayri birimler haliiide hazirlanabilirler. Formül 1 bilesigi veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzundan kullanilacak miktar ile kemoterapötikajandan kullanilacak miktar, bir birlesik formülasyon olarak bir hap,38kapsül, çözelti veya süspansiyon içerisinde birlikte formüle edilebilir.
Alternatif olarak, formül I bilesigi veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu ile kemoterapötik ajan, dönüsümlü uygulama ile kullanilmak üzere, bir hap, kapsül, çözelti veya süspansiyondabirbirlerinden ayri formüle edilebilirler.Formülasyonlar, farmasötik bilesimlerin üretimine istinaden sektörde bilinen uygun herhangi bir yöntemden istifade edilerek hazirlaiiabilirler ve bu tarz bilesimlere, lezzetli ve yenilebilir bir preparat elde etmek maksadiyla tatlandirici maddeler, aroma maddeleri, renklendiriciler ve koruyucularin aralarinda bulundugu bir veya daha fazla sayida madde katilabilir. Sikistirilmis tabletler, istege bagli olarak bir baglayici, kayganlastirici, inert seyreltici, koruyucu, yüzey aktif madde ya da dagitici madde ile birlikte karistirilmis halde olan ve serbest akiskan bir formda, örnegin toz ya da granüller formuiida bulunaii etkin bileseniii uygun bir makiiiede sikistirilmasi yoluyla hazirlanabilirler. Kaliplanmis tabletler, bir inert sivi seyreltici ile nemlendirilmis haldeki toz halinde etkin bileseiiden olusan birkarisimin uygun bir makinede kaliplanmasi yoluyla yapilabilirler.Tabletler, istege bagli olarak kaplanabilir veya çizilebilirler ve istege bagli olarak, etkin bilesenin tabletteri yavas veya koiitrollü bir ölçüde saliiiinasini saglayacak bir sekilde formüle edilebilirler. Tablet formundaki bir farmasötik formülasyonda yardimci madde olarak sunlar bulunabilir: Tableti meydana getirecek olan toz halindeki ilacin bulk hacmini artirmak için kullaiiilan dolgu maddesi (veya seyreltici); Tableti yutuldugunda kirilip küçük fragmanlar haline gelmeye, idealolarak ayri ilaç partikülleri haline gelmeye yönlendirmek ve ilacin39hizli çözünüp absorbe olmasini tesvik etmek için kullanilan dagiticilar; Granüller ve tabletlerin gerekli mekanik inukaveinete sahip olmalarini saglamak ve bir tabletin Sikistirildiktan sonra forinunu korumasini saglamak, öyle ki tabletin ambalajlama, sevkiyat ve rutin elleçleme faaliyetleri sirasinda kirilip bilesen tozlarina ayrilmasini önlemek için kullanilan baglayici; Tableti olusturan tozun üretim sirasindaki akiskanligini artirinak için kullanilan glidant; Tableti olustururken kullanilan tozun üretim sirasinda tableti preslemek maksadiyla kullanilan ekipinana yapismamasini saglainak için kullanilan kayganlastirici. Bu maddeler, toz karisimlarinin preslerden geçerkenki akiskanliklarini artirirlar ve bitmis tabletler ekipmandan çikarilirken meydana gelebilecek sürtünme ve kirilma olaylarini minimize ederler; Glidanta benzer bir isleve sahip olan ve tableti olusturan toz ile üretim sirasinda tablet basinak için kullanilan makine arasindaki yapisinayi azaltmak için kullanilan yapisina önleyici; Tabletlere daha hos bir tat kazandirmak ya da hos olmayan bir tadi gizlemek maksadiyla dahil edilen aroma maddesi; Urünün tanininasina ve hasta uyumu saglanmasina yardimci olmakmaksadiyla kullanilan renklendirici.Etkin maddeyi, tablet üretimi için uygun toksik olmayan farmas'otik açidan kabul edilebilir yardimci maddelerle karisik halde ihtiva eden tabletler kabul edilebilir sayilirlar. Bahsi geçen yardiinci maddeler arasinda, örnegin, kalsiyum veya sodyum karbonat, laktoz, kalsiyum veya sodyum fosfat gibi inert seyrelticiler; misir nisastasi veya alginik asit gibi granüle edici ve dagitici ajanlar; nisasta, jelatin veya akasya gibi baglanina maddeleri ve inagnezyum stearat, stearik asit veya talkgibi kayganlastirici maddeler sayilabilir. Tabletler kaplamasiz bir40sekilde sunulabilecekleri gibi, hedef maddenin gastrointestinal sistemde dagilip adsorbe olmasini geciktirmek ve böylelikle daha uzun bir süre boyunca devam eden bir etki olusmasini saglamak maksadiyla, mikroenkapsülasyonun `Örnek gösterilebilecegi sektörde bilinen tekniklerle kaplanarak da sunulabilirler. Örnegin, tek basina ya da bir vaks ile birlikte gliseril monostearat veya gliseril distearat gibibir geciktirici madde kullanilabilir.Göz veya baska harici dokularin, örnegin agiz ve cildin tedavisinde, formülasyonlarin etkin bilesen(ler)i örnegin %0,075 ile %20 a/a arasi bir miktarda ihtiva eden bir topikal merhem veya krem formunda uygulanmalari tercih edilir. Etkin bilesenler bir merhem formunda formüle edilmislerse, bir parafinik veya suyla karisabilir merhem baziyla kullanilabilirler. Alternatif olarak, etkin bilesenler, bir su içinde-yag krem baziyla birlikte bir krem formunda formüleedilebilirler.Istenirse, krem bazinin aköz fazina bir polihidrik alkol, yani propilen glikol, bütan 1,3-diol, mannitol, sorbitol, gliserol ve (PEG 400 de dahil) polietilen glikol gibi iki veya daha fazla sayida hidroksil grubu barindiran bir alkol ya da bunlarin bir karisimi katilabilir. Topikal formülasyonlarda etkin bilesenin cilde veya diger olasi etki altindaki bölgelere adsorbe olabilmesini veya nüfuz edebilmesini kolaylastiracak bir bilesik bulunmasi arzu edilebilir. Bu gibi dermal penetrasyon artiricilara 'Örnek olarak dimetil sülfoksit ve ona benzeyenanaloglar gösterilebilir.Bir kati yag veya bir sivi yag ya da hem bir kati yag hem de bir sivi41yagi ile en az bir adet emülsifiye ediciden olusan bir karisimin örnek olarak gösterilebilecegi bu bulusa uygun emülsiyonlarin yag fazi bilinen bilesenlerden bilinen bir yolla olusturulabilirler. Tercihen, bir stabilizatör görevi gören bir lipofilik emülsifiye edici ile birlikte bir hidrofilik emülsifiye edici kullanilir. Stabilizatör(ler)le birlikte ya da stabilizatör(ler) olmadan emülsifiye edici(ler), emülsifiye edici vaks denen olusumu meydana getirir ve bu vaks da, sivi yag ve kati yag ile birlikte, krem formülasyonlariniii yagli daginik faziiii teskil eden emülsifiye edici merhem bazini olusturur. Formülasyonda kullaniin için uygun emülsifiye ediciler ve emülsiyon stabilizatörleri arasinda, Tween® 60, Span® 80, setostearil alkol, benzil alkol, miristil alkol,gliseril monostearat ve sodyum lauril sülfat bulunur.Farmasötik formülasyonlarin aköz süspansiyoiilariiida, etkin maddeler aköz süspansiyonlarin üretimi için uygun yardimci maddeler ile karisim halinde bulunurlar. Bu yardimci maddelere örnek olarak, sodyum karboksimetilsel'ûloz, kroskarmelloz povidon, metilsel'üloz, hidroksipropil metilselüloz, sodyum alginat, polivinilpirolidon, kitre ve akasya zamki gibi bir süspanse edici ajan ve bir dogada kendiliginden olusan fosfatid (örnegin lesitin), bir alkilen oksit ile bir yag asidinin (örnegin polioksietilen stearat) bir kondenzasyon ürünü, etilen oksit ile bir uzun Zincirli alifatik alkolün (örnegin heptadekaetilenoksisetanol) bir kondenzasyon ürünü, etilen oksit ile bir yag asidi ve bir heksitol anhidritten (örnegin polioksietilen sorbitan monooleat) elde edilmis bir kismi esterin bir kondenzasyon ürünü gibi dagitici veya islatici ajanlar gösterilebilir. Aköz süspansiyon, etil veya n-propil p-hidroksi-benzoat gibi bir veya daha fazla sayida koruyucu,bir veya daha fazla sayida renkleiidirici ajan, bir veya daha fazla42sayida aroina maddesi ve sukroz veya sakarin gibi bir veya daha fazlasayida tatlandirici ajan da ihtiva edebilir.Farmasötik bilesimler, bir enjekte edilebilir steril preparat formunda, örnegin bir enjekte edilebilir steril aköz veya yagsi süspansiyon formunda olabilirler. Bu süspansiyon, yukarida daha önceden bahsi geçmis olan uygun dagitici veya islatici ajanlar ve süspanse edici ajanlar kullanilarak sektörde bilinen prosedürler çerçevesinde formüle edilebilir. Enjekte edilebilir steril preparat, bir toksik olmayan, parenteral olarak kabul edilebilir seyreltici veya çözücüde hazirlanmis bir enjekte edilebilir steril çözelti veya süspansiyon, örnegin 1,3- bütandiolde hazirlanmis bir çözelti olabilir ya da bir liyofilize tozdan hazirlanabilir. Kullanilabilecek kabul edilebilir vehiküller ve çözücüler arasinda, su, Ringer çözeltisi ve izotonik sodyum klorür çözeltisi bulunur. Bunlarin yani sira, konvansiyonel uygulamaya göre, çözücü veya süspanse edici vasat olarak steril sabit yaglar kullanilabilir. Sentetik mono- veya digliseritler de dahil olmak üzere herhangi bir hafif sabit yag bu amaçla kullanilabilir. Enjekte edilebilir preparatlar hazirlanirken, bunlarin yani sira oleik asit gibi yag asitleride kullanilabilir.Tasiyici madde ile bir araya getirilip bir tekli dozaj formu üretilirken kullanilacak olan etkin bilesen miktari, tedavi edilmesi hedeflenen konakçinin hangi türe mensup olduguna ve tatbik edilecek uygulama yoluna bagli olarak farklilik gösterecektir. Örnegin, insanlarda oral yolla kullanilmasi hedeflenerek hazirlanan bir süreli salimli forinülasyon, toplam bilesim iniktarinin (agirlik:agirlik) yaklasik %5'iile yaklasik %95'i arasi bir düzeyde olabilecek uygun ve ise yarar bir43miktarda tasiyici madde ile bilestirilmis halde yaklasik 1 ilâ 1000 mg etkin madde ihtiva edebilir. Farmasötik bilesim, uygulama için kolayca ölçülebilir miktarlar saglayacak sekilde hazirlanabilir.
Omegin, intravenöz intüzyonla uygulanmasi hedeflenen bir aköz çözelti, yaklasik 30 1nL/saat hizla uygun bir hacimde infüzyon yapilabilmesi adina çözeltinin her mililitresi basina yaklasik 3 ile 500ug arasi bir miktarda etkin bilesen içerebilir.Parenteral uygulama için uygun formülasyonlar arasinda, formülasyonu uygulamanin yapilacagi alicinin kaiiiyla izotonik hale getiren antioksidanlar, tamponlar, bakteriyostatlar ve solütlerin bulunabilecegi aköz olan ve olmayan steril en jeksiyoiiluk çözeltiler ve süspanse edici ajanlar ve kivamlastirici ajanlarin bulunabilecegi aközolan ve olmayan steril süspansiyonlar yer alir.Gözde topikal uygulama için uygun formülasyonlar arasinda, etkin bilesenin uygun bir tasiyici, özellikle de söz konusu etkin bilesen için uygun bir aköz çözücü içerisinde çözündürülerek veya süspanse edilerek kullanildigi göz damlalari da bulunur. Bu tarz formülasyonlarda etkin bilesen tercihen yaklasik %0,5 ile %20 a/a arasi, örnegin yaklasik %0,5 ile %10 a/a arasi bir konsantrasyonda,örnegin yaklasik %1,5 a/a konsantrasyonunda bulunur.Agizda topikal uygulama için uygun formülasyonlar arasinda, etkin bileseni genelde sukroz, akasya veya kitre olmak üzere bir aromali baz bünyesinde ihtiva eden lozanjlar; etkin bileseni jelatin ve gliserin yada sukroz ve akasya gibi bir inert baz bünyesinde barindiran pastiller44ve etkin bileseni uygun bir sivi tasiyici içerisinde ihtiva eden agizgargaralari bulunur.Rektal uygulanmak üzere hazirlanan formülasyonlar, örnegin kakao yagi veya bir salisilat ihtiva edeii uyguii bir bazla bir supozituar olaraksunulabilirler.Intrapulmoner veya nazal uygulama için uygun formülasyonlar, keseciklere ulasabilmesi için nazal pasaja dogru hizli inhalasyon yoluyla ya da agizdan inhalasyon yoluyla uygulanmak üzere, örnegin (0,5 mikron, 1 mikron, 30 mikron, 35 mikron ve benzeri mikron cinsinden artislarin söz konusu oldugu 0,] ile 500 mikron arasi partikül büyüklüklerini içine alan bir anlamda) 0,1 ile 500 mikron arasi bir partikül büyüklügünde hazirlanirlar. Uygun formülasyonlar arasinda, etkin bilesenin bulundugu aköz veya yagli çözeltiler sayilabilir. Aerosol veya kuru toz seklinde uygulama için uygun fomiülasyonlar, konvansiyonel yöntemlere göre hazirlanabilir ve baska terapötik ajanlarla, örnegin asagida belirtilen hastaliklarin tedavisi veya profilaksisinde bugüne dek kullanilagelmis olanbilesiklerle birlikte uygulanabilirler.Vajinal uygulama için uygun formülasyonlar, etkin bilesenin yani sira örnegin sektörde bu tarz formülasyonlarda kullanima uygun olduklari bilinen tasiyicilarin bulundugu peserler, tamponlar, kremler, jeller,macunlar, köpükler ya da sprey formülasyonlari olarak sunulabilirler.Formülasyonlar, birim doz veya çoklu doz kaplarmda, örneginsizdirinaz kapatilmis ampuller veya flakonlarda ambalajlanabilir ve45kullanimdan hemen önce su gibi steril bir sivi tasiyicinin ekleninesini gerektiren dondurarak kurutma (liyofilize) kosullari altiiida saklanabilirler. Ekstaniporaiie enjeksiyonluk çözeltiler ve süspansiyonlar, daha önceden açiklanmis olan tipte steril tozlar, granüller ve tabletlerden hazirlanirlar. Tercih edilen birim dozaj formülasyonlari, etkin bilesenin burada yukarida aktarilmis oldugu gibi bir günlük doz veya birim günlük alt-dozunu ya da onun uygunbir parçasini ihtiva eden forini'ilasyonlardir.Bulusun bir yapisinda, bir veteriner tasiyici ile birlikte bir formül l bilesigi veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu ve GDC- 0973'ün bulundugu veteriner bilesimler ortaya koyulmaktadir.
Veteriner tasiyicilar, bilesimi uygulamak için kullanilabilecek olan ve veterinerlik sektöründe inert veya kabul edilebilir olup etkin bileseiile geçimli olan kati, sivi veya gaz halindeki maddelerdir. Bu veteriner bilesimler, parenteral yolla, oral yolla ya da tercih edilen baskaherhangi bir yolla uygulanabilirler.KOMBINASYON TEDAVISIFormül 1 bilesigi veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu, premalign olan ve neoplastik olmayan ya da malign olmayan hiperproliferatif hastaliklar ile birlikte tümörleri, kanser hastaliklarini ve neoplastik doku durumlarini içine alan bir anlamda bir hiperproliferatif hastalik veya bozuklugun tedavisi için olan baska kemoterap'otik ajanlar ile kombinasyon halinde kullanilabilir. Bulusun belirli yapilarinda, bir Formül 1 bilesigi veya onun bir farinasötikaçidan kabul edilebilir tuzu, koinbinasyon tedavisini teskil eden bir46dozlaina rejimi kapsaminda GÜÇ-0973 ile kombine edilir. Bulusun yapilarindan birinde, bu terap'otik kombinasyon, terapötik açidan etkin miktardaki bir formül I bilesiginin veya onun bir farmas'otik açidan kabul edilebilir tuzunun günde iki defa ile üç haftada bir defa (q3Wk) arasi bir siklikta uygulandigi ve terapötik açidan etkin miktarda GDC- 0973'ün günde iki defa ile üç haftada bir defa arasi bir sikliktauygulandigi bir dozlaina rejimi ile uygulanir.Kombinasyon tedavisi eszamanli ya da sirali bir rejiin olarak uygulanabilir. Sirali uygulama yapilacaksa, kombinasyon iki veya daha fazla sayida uygulama yapilarak uygulanabilir. Kombine uygulama, hem ayri formülasyonlar kullanilarak gerçeklestirilen birlikte uygulamayi, hem de uygulamalar arasinda bir zaman araligi birakilan fakat her iki etkin maddenin de (veya bütün etkin maddelerin) sahip olduklari biyolojik aktiviteleri eszamanli olarak ortaya koymalarina olanak saglayacak herhangi bir siraylagerçeklestirilen sirali uygulamayi içine alan bir anlam tasir.Bulusun yapilarindan birinde, formül l bilesigi veya onun farmas'otik açidan kabul edilebilir tuzu, GDC-0973 uygulamasina baslandiktan sonraki yaklasik 1 ilâ yaklasik 10 günlük bir süre boyunca uygulanabilir. Bulusun bir diger spesifik yapisinda, formül I bilesigi veya onun farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu, GDC-O973 uygulamasina baslanmadan `onceki yaklasik 1 ilâ yaklasik 10 günlük bir süre boyunca uygulanabilir. Bulusun bir diger spesifik yapisinda, formül I bilesigi veya onun farmas'otik açidan kabul edilebilir tuzununuygulanmasi ile GDC-0973'i`in uygulanmasi ayni gün baslatilir.47Yukarida belirtilen birlikte uygulanilinasi tasarlanan ajanlarin uygun dozajlari günümüzde kullanilan dozajlardir ve yeiii ortaya konmus olan madde ile diger kemoterapötik ajanlar veya tedavilerin kombine etkisi (Sinerji) sayesinde, Örnegin terapötik indeksi artirmak ya da toksisiteyi veya baska yan etkiler veya istenmeyen sonuçlari hafifletmek adina düsürülebilirler. Formül 1 bilesigi veya onun bir farmas'otik açidan kabul edilebilir tuzu ile GDC-0973'ün miktarlari ve uygulama zamanlainalari, istenen kombine terapötik etkiye ulasmahedefi göz Önünde tutularak seçileceklerdir.FARMASOTIK BILESIMLERIN UYGULANMASIBilesikler, tedavi edilmesi hedeflenen hastalik için uygun herhangi bir yolla uygulanabilirler. Uygun yollar arasinda, oral, parenteral (subkütan, intramüsküler, intravenöz, intraarteriyel, inhalasyon, intradermal, intratekal, epidural ve infüzyon teknikleri dahil), transdermal, rektal, iiazal, t0pikal (bukkal ve dilalti dahil), vajinal, intraperitoneal, intrapulmoner ve intranazal uygulama yollari bulunur.
Topikal uygulama kapsaminda ayrica transdermal uygulama, örnegintransdermal yamalar veya iyontoforez cihazlari da kullanilabilir.Ilaçlarin formülasyonu, "Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., (1995) Mack Publishing Co., Easton, PA" eserinde tartisilmaktadir. "Liberman, H. A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, Vol 3, 2nd Ed., New York, NY" eserinde, ilaç formülasyonlarina dair baska örnekler bulunabilir. Lokal immünosüpresif tedavisi için, bilesikler, greftinperfüzyonunu veya greftin transplantasyondan önce inhibitör ile temas48ettirilmesini içine alan bir anlamda intralezyonel uygulama ile uygulanabilirler. Tercih edilen uygulama yolunun örnegin alicinin durumuna göre farklilik gösterebilecegi anlasilacaktir. Bilesik oral yolla uygulanacaksa, bir farmasötik açidan kabul edilebilir tasiyici, glidant veya yardimci madde ile birlikte bir hap, kapsül, tablet veya benzeri baska bir formda formüle edilebilir. Bilesik parenteral yolla uygulanacaksa, asagida detaylandirilmis oldugu gibi, bir farmasötik açidan kabul edilebilir parenteral vehikül veya seyreltici ile birlikte birenjekte edilebilir birim dozaj formunda formüle edilebilir.Insan hastalarinda kullanilabilecek olan dozlar, beher gün için yaklasik 20 mg ilâ 1600 mg formül l bilesigi veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu arasinda degisir. Yaklasik 50 mg ile yaklasik 800 mg bilesik arasi dozlar tipik dozlar olarak gösterilebilir.
Bir doz, bilesigin absorbsiyonu, dagiliini, metabolizmasi ve atilimini içine alan bir anlamda farmakokinetik (PK) ve farinakodinamik (PD) özelliklerine bagli olarak günde bir defa (QD), günde iki defa (BID) veya daha sik araliklarla uygulanabilir. Bunun yani sira, dozaj ve uygulama rejimi toksisite faktörlerinden de etkilenebilir. Oral yolla uygulanacak olan bir hap, kapsül veya tablet, belirlenmis bir süre boyunca günde iki defa, günde bir defa veya daha az siklikta, örnegin haftada bir defa veya iki haftada bir veya üç haftada bir alinabilir.Rejim, bir dizi tedavi döngüsü boyunca tekrarlanabilir.TEDAVI YÖNTEMLERI(1) Bir forinül I bilesigi veya onun bir farmasötik açidan kabuledilebilir tuzu ile (2) bir kemoterapötik ajandan olusan terapötik49kombinasyonlar, sadece bunlarla sinirli kalmaksizin ve fakat nieinelilerde AKT kinazin module edici etkisiyle görülenler de dahil olmak üzere hastaliklar, rahatsizliklar ve/veya bozukluklarin tedavisi için faydalidirlar. Burada açiklanan yöntemlere göre tedavi edilebilecek olan kanser hastaliklari arasinda, sadece bunlarla sinirli kalmaksizin, mezotelyoma, gliom, pankreas kanseri, meme kanseri, akciger kanseri, yumurtali kanseri, prostat kanseri, melanom, gastrikkanser, kolon kanseri ve bas ve boyun kanseri bulunur.Belirli kombiiiasyonlarin belirli kanser fenotiplerine karsi gelismis etkiler sagladiklari belirlenmistir. Örnegin, belirli kombinasyonlar, PTEN inutasyonu (veya düsük veya yok durumu), AKT mutasyonu (veya yüksek pAKT ekspresyon veya amplifikasyon seviyeleri), PI3K inutasyonu, Her2/ErbBZ ainplifikasyonu, RAS mutasyonlari, RAF mutasyonlari veya yukarida belirtilenlerin bir kombinasyonu ilebaglantili kanserlere karsi gelismis etkiler saglarlar.Buna bagli olarak, burada açiklanan belirli kombinasyonlar bilhassabu kanser çesitlerine karsi faydali olabilirler.Örnegin kolorektal kanserde, RAS/RAF mutasyonlari ile birlikte PEK/AKT mutasyonlarinin (örnegin PI3K H1047R, E545K, D549N, P421L, L568F, L569F, P449T veya bunlarin kombinasyonlari) bulunmasi, burada açiklanan kombinasyonlara kuvvetli cevaplar verileceginin habercisidir ve GDC-0068 arti GDC-O973kombinasyonuna istinaden kuvvetli siner ji görülmüstür.50Ayrica küçük hücreli olinayan akciger kanserinde, (i) Pl3K/AKT mutasyonlari (PI3K E545K, L997P, M772X, N996H veya bunlarin kombinasyonlari) ve RAS/RAF mutasyonlarinin (Q61H, G12C, Q61K, N85K, GlZS, BRAF V600E veya bunlarin kombinasyonlari) birlikte bulundugu ve (ii) PI3K inutasyonlarinin buluninadigi ancak RAS/RAF kombinasyonlarinin bulundugu durumlarda GDC-0068 arti GDC-0973 kombinasyonuna istinaden kuvvetli Sinerjigözlemlenmistir.Öte yandan melanomda, (i) BRAF V600E mutasyonlarinin bulundugu ve (ii) PTEN mutasyonlari, yok veya düsük durumuyla ya da yüksek pAKT ekspresyon veya aktivite seviyeleriyle birlikte BRAF V600E mutasyonlari veya delesyonlari veya amplifikasyonlarmin söz konusu oldugu durumlarda GDC-0068 arti GDC-0973 koinbinasyonunaistinaden kuvvetli Sinerji kaydedilmistir.Bir hastada BRAF V600E mutasyonu bulunup buluninadigini test etmek için kullanilabilecek kitler ticari piyasada mevcuttur. Bunlariii bir örnegi, forinaline sabitlenmis, parafine gömülmüs (FFPET) insan melanom dokusunda BRAF V600E mutasyonunu tespit edebilen COBAS® 4800 B RAF V600 Mutasyon Testidir (Roche Molecular Systems Inc.). Bu ürün ABD'de, BRAF geninin mutasyonlu formunu barindiran melanoin tümörlerinin yer aldigi hastalari tedavi etmek için tasarlanmis vemurafenib veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu ile tedavi için bir es tani testi olarak onaylanmistir.
Preklinik ve klinik arastirmalarda, C0bas® BRAF Mutasyonu Testi, COSMIC veritabaninda rapor edilen bütün BRAF inutasyonlarinin >~ %85'ini temsil eden BRAF V600E (1799 T>A) mutasyonunu tespit51etme konusunda %97,3 oraninda pozitif uyusma göstermistir.
Formaline sabitlenmis, parafine gömüsmüs dokuda (FFPET), Cobas® BRAF Mutasyonu Testi, > %5 mutasyon seviyesindeki V600E mutasyonlarini tespit edebilir. Test, V600D ve V600K gibi baska V600 mutasyonlarini da tespit edebilir. Cobas® BRAF Mutasyonu Testi, hastadan alinan doku numunesi veya tümör hücreleri gibi numunelerde numune alimini takip eden <8 saat içerisinde gerçeklestirilebilir. Cobas® 4800 BRAF V600 Mutasyonu Testi, Cobas® 4800 System, v2.0'de gerçeklestirilen bir gerçek zainanli PCR testidir ve BRAF V600E niutasyonu tasiyan tümörlerin bulundugu melanom hastalarinin belirlenip seçilmesinde yardimci olmasi içinkullanilir.PTEN yok (veya düsük) durumu, sektörde bilinen uygun herhangi bir araçla ölçülebilir. Bunlara verilebilecek örneklerden biri lHC'dir.
Alternatif olarak, Western blot analizi de kullanilabilir. PTEN antikorlari ticari piyasada mevcuttur (Cell Signaling Technology, Beverly, MA, Cascade Biosciences, Winchester, MA). "Neshat, M. S. et al. Enhanced sensitivity of PTEN-deficient tuinors to iiihibition of FRAP/mTOR, Proc. Natl Acad. Sci. USA 98, 10314-10319 (2001)" ve "Perren, A., et. al. lmmunohistochemical Evidence of Loss of PTEN Expression in Primary Ductal Adenocarcinomas of the Breast, American Journal of Pathology, Vol. 155, No. 4, October 1999" eserlerinde, PTEN durumunun tespitine yönelik IHC ve Western blot analizi için örnek prosedürler bulunabilir. Ek olarak, sektörde bilinen teknikler kullanilarak, AKT mutasyonu, PI3K mutasyonu ve Her2/ErbB2 amplifikasyonu ile baglantili kanserler de belirleniptanimlanabilir.52Bir numunede aktive olmayan veya fosforlanmis olmayan AKT'nin seviyesine kiyasla AKT aktivasyon veya fosforilasyon ("pAKT" seviyesi) sektörde bilinen yöntemlerle ölçülebilir. pAKT durumu, bir oran (örnegin bir tümör hücresindeki pAKT miktari ayni tipteki tümöröz olmayan bir hücredeki pAKT miktarina bölünerek elde edilen deger) olarak veya bir çikarma isleminin sonucu (öniegin bir tümör hücresindeki pAKT miktarindan hücredeki veya ayni tipteki tümöröz olmayan bir hücredeki pAKT miktari çikarilarak elde edilen deger) olarak ifade edilebilir. pAKT profili, AKT'nin fosforlanmis downstream hedeflerinin (örnegin pGSK veya PRAS40) ölçülerek hesaplanan yolagin aktivasyon seviyesi cinsinden de ifade edilebilir.
Bir yüksek pAKT, numunedeki genel AKT içeriginin aktivasyon veya fosforilasyon seviyelerinin bir taban çizgisi degerinden daha yüksek olduguna isaret eder. Bir örnekte, taban çizgisi degeri, belirli bir hücre tipine iliskin bazal pAKT seviyelerini teskil eder. Bir diger örnekte, taban çizgisi degeri, belirli bir numune hücresi popülasyonundaki, örnegin kanseröz olan veya olmayan hücrelerdeki ortalama pAKT seviyesidir. Bir diger örnekte, bir yüksek pAKT, ayni memeliden veya bir hasta popülasyonundan alinan ayni tipteki normal ve saglikli (örnegin tümöröz olinayan) hücrelerin ortalamasina kiyasla, fosforlanmis veya aktive AKT'yi asiri düzeyde eksprese eden veya amplifiye eden bir tümör hücresinin bulunduguna isaret eder. pAKT profili, baska inarkerlerle birlikte de kullanilabilir, örnegin belirli PI3K/AKT kinaz yolagi inhibitörlerinin etkinligini kestirmek için FOXO3a lokalizasyon profilleriyle birlikte ya da örnegin basta metastatik veya cerrahi olarak çikarilamayacak olan melanom gibi vemerafenibe dirençli kanser hastaliklarinin bulundugu hastalardaolmak üzere formül I bilesikleri ile vemurafenibden olusan belirli53kombinasyonlarin etkinligini kestirmek için BRAF V600E mutasyon durumuyla birlikte kullanilabilir. Doku numunelerinde pAKT ölçümü yapmaya yaraya kitler ticari piyasada mevcuttur (örnegin fosfo-Akt(Thr308) STAR ELISA kiti, EMD Millipore).PI3K, KRAS ve AKT mutasyonlarinin varligini test etmeye yarayankitler ticari piyasada mevcuttur (Qiageii).URETIM NESNELERIBulusun bir diger yapisinda, yukarida belirtilen hastaliklar ve bozukluklarin tedavisinde faydali olan bir formül I bilesiginin veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzunun bulundugu bir üretim nesnesi veya "kit" ortaya koyulmaktadir. Bulusun yapilarindan birinde, kitte bir kap ve bir formül I bilesigi veya oiiun bir farniasötikaçidan kabul edilebilir tuzu bulunur.Kitte, kabiii üzerinde veya kap ile birlikte sunulan bir etiket veya kullanma talimati da bulunabilir. "Kullanma talimati" terimi, terapötik ürünlerin koyuldugu ticari ambalajlara dahil edilen ve endikasyonlar, kullanim sekli, dozaj, uygulama sekli, kontrendikasyonlar ve/veya ilgili terap'otik ürünlerin kullanimina iliskin uyarilar hakkiiida bilgi veren talimatname metnine atif yapar. Uygun kaplar arasinda, `Örnegin siseler, flakonlar, enjektörler, blister ambalajlar ve benzerleri sayilabilir. Kap, çesitli farkli malzemelerden yapilmis, `Örnegin cam veya plastikten yapilmis olabilir bir kap olabilir. Kap, hedef rahatsizligi tedavi etme konusunda etkin ve etkili olan bir formül Ibilesigini veya onun farmasötik açidan kabul edilebilir tuzunu ya da54onun yer aldigi bir formülasyonu barindirabilir ve bir steril giris portuna sahip olabilir (örnegin kap, bir hipoderinik enjeksiyon ignesi kullanilarak delinebilecek bir tipanin yer aldigi bir flakon ya da bir intravenöz çözelti torbasi olabilir). Bilesimde yer alan etkin maddelerden en az biri bir formül I bilesigidir ya da onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzudur. Etiket veya kullanma talimatinda, bilesimin seçilen rahatsizligi, örnegin kanseri tedavi etinek için kullanildigina isaret edilir. Bulusun yapilarindan birinde, etiket veya kullanma talimatinda, bir forinül I bilesigini veya onun farmasötik açidan kabul edilebilir tuzunu içeren bilesimin anormal hücre büyümesinden kaynaklanan bir hastaligi tedavi etmek için kullanilabilecegine isaret edilir. Etiket veya kullanma talimatinda, bilesimin baska hastaliklari tedavi etmek için kullanilabilecegine de isaret edilebilir. Alternatif veya ek olarak, üretim nesnesi kapsaminda, örnegin bakteriyostatik enjeksiyonluk su (BWFI), fosfat-tamponlu salin, Ringer çözeltisi ve dekstroz çözeltisi gibi bir farinasötik açidan kabul edilebilir tampon içeren bir ikinci kap da yer alabilir. Uretim nesnesi kapsaminda, ticari açidan ve kullanici açisindan bakildiginda ürünle beraber sunulmasi tercih edilebilecek olan baska materyaller, örnegin baska tamponlar, seyrelticiler, filtreler, igneler ve enjektörlerde yer alabilir.Kitte, bir formül I bilesiginin veya oiiun farmasötik açidan kabul edilebilir tuzunun ve varsa ikinci farmasötik formülasyonun nasil uygulanmasi gerektigini anlatan bir talimatname de bulunabilir. Örnegin, eger ilgili kitte bir formül I bilesigini veya onun farmasötik açidan kabul edilebilir tuzunu içeren bir birinci bilesim ve onun yanisira bir ikinci farmasötik formülasyon varsa, bu kitte, söz konusu55birinci ve ikinci farmasötik bilesiinlerin ilgili tedaviye ihtiyaci olan bir hastaya eszamanli olarak, sirayla veya ayri ayri uygulanmalariningerektigini ortaya koyan bir taliinatname de bulunabilir.Bulusun bir diger yapisinda, bir formül I bilesiginin veya onun farmasötik açidan kabul edilebilir tuzunun örnegin tablet veya kapsül gibi kati oral formlariyla yapilacak uygulamalara uygun kitler söz konusudur. Bu gibi bir kitte bir dizi birim dozajin bulunmasi tercih edilir. Bu gibi kitlerde, dozajlarin hedeflenen kullanim amacina göre yerlestirilmis oldugu bir kart da bulunabilir. Bu gibi bir kite verilebilecek örneklerden biri "blister ambalaj"dir. Blister ambalajlar, ambalajlama sektöründe iyi bilinmekte olup, farmasötik birim dozaj formlarini ambalajlamak için yaygin olarak kullanilmaktadirlar.
Istenirse, rakam, harf veya baska tip bir isaret karakteri formunda ya da tedavi programi içerisinde dozajlarin uygulanabilecegi günlerigösteren bir takvim formunda bir hatirlatici da kite dahil edilebilir.Bulusun yapilarindan birine göre, bir kit, (a) bir formül I bilesiginin veya onun farmasötik açidan kabul edilebilir tuzunun yer aldigi ve (b) bir ikinci farmasötik formülasyonun yer aldigi bir ikinci kap ihtiva edebilir ve burada bahsi geçen ikinci farmasötik formülasyonda GDC- 0973 bulunur. Alternatif veya ek olarak, kitte, bakteriyostatik enjeksiyonluk su (BWFI), fosfat-tamponlu salin, Ringer çözeltisi ve dekstroz çözeltisi gibi bir farmasötik açidan kabul edilebilir tampon içeren bir üçüncü kap da bulunabilir. Kitte, ticari açidan ve/veya kullanici açisindan tercih edilebilecek baska materyaller, örnegin baska tamponlar, seyrelticiler, filtreler, igneler ve enjektörler debulunabilir.56Bir formül I bilesiginin veya onun farmasötik açidan kabul edilebilir tuzunun yer aldigi bir bilesim ile GDC-O973'ün yer aldigi bir bilesimin bulundugu bir kitte, ilgili bilesimleri ayri ayri içeren, örnegin bölümlere ayrilmis bir sise veya bölümlere ayrilmis bir folyo ambalaj içerisinde ihtiva eden bir kap yer alabilir; bununla birlikte, söz konusu bilesimler bölümlere ayrilmamis ayni kap içerisinde beraber de sunulabilirler. Kitte, normalde, ayri komponentlerin nasil uygulanmalari gerektigini anlatan bir kullanma talimati dokümani bulunur. Ayri koinponentlerin farkli dozaj formlari (örnegin oral ve parenteral) halinde uygulanmalarinin tercih edildigi, farkli dozlama araliklariyla uygulanmalarinin hedeflendigi ya da kombinasyon bilesenlerinin uygulamayi yürüten doktor tarafindan titre edilmesinintercih edildigi durumlarda, kit formu bilhassa avantaj saglar.SPESIFIK BULUS YAPILARIBulusun bir spesifik yapisinda, kanser, PTEN mutasyonu ile iliskilidir.Bulusun bir spesifik yapisinda, kanser, AKT mutasyonu, asiriekspresyonu veya amplifikasyonu ile iliskilidir.Bulusun bir spesifik yapisinda, kanser, PI3K mutasyonu ile iliskilidir.Bulusun bir spesifik yapisinda, kanser, KRAS mutasyonu ileiliskilidir.Bulusun bir spesifik yapisinda, kanser, BRAF inutasyonu ile iliskilidir.57Bulusun bir spesifik yapisinda, kanser, (l) PTEN, AKT veya PI3K mutasyonu ile (2) bir KRAS veya BRAF mutasyonununkombinasyonu ile iliskilidir.Bulusun bir spesifik yapisinda, kanser, GDC-0068 ve GDC-O973 tek ajan tedavilerinden birine veya her ikisine de dirençlidir, fakat GDC-0068 ve GDC-0973 kombinasyon tedavisiiie duyarlidir.Bulusun bir spesifik özelliginde, formül I bilesigi veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu, GDC-0973 veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu ile koinbinasyon halindeuygulanir ve kanser, kolon kanseridir.Bulusun bir spesifik özelliginde, formül I bilesigi veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu, GDC-0973 veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu ile koinbinasyon halindeuygulanir ve kanser, akciger kanseridir.Bulusun bir spesifik özelliginde, formül l bilesigi veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu, GDC-0973 veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu ile kombinasyon halindeuygulanir ve kanser, melanomdur.ÖRNEKLERBulusu örneklendirmek amaciyla asagidaki örnekler sunulmustur.Bulusun kapsaminin bu örnekler ile sinirli olmadigi, bu örneklerin 58yalnizca bulusu tatbik ederken kullanilabilecek bir yöntem önermekmaksadiyla sunulmus olduklari anlasilmalidir.Ornek 1(S)-2-(4-klor0fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidr0ksi-S-metil-6,7-dihidr0- 5H-siklopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-il)-3-(izopr0pilamin0) propan-l-onBasamak l: EtOAc (900 mL) içerisinde yer alan etil pülegenat (130 g, 662 mmol) bir kuru buz-izopropanol banyosunda -78°C sicakliga ulasana dek sogutuldu. Daha sonra bu karisim, rengi mora dönene dek ozonolize tâbi tutuldu. Bu asamada ozon olusumu kesildi ve reaksiyon karisimi kuru-buz banyosundan çikarildi. Reaksiyon karisiminin rengi sariya dönene dek içerisinden oksijen geçirildi. Akabinde, reaksiyon karisimi vakum uygulanarak konsantre edildi ve kalan artik bir miktar glasiyel asetik asitte (400 mL) çözünd'ûrûldü. Çözelti 0°C sicakliga ulasana dek sogutuldu ve ardiiidan 30 dakika boyunca parça parça Zn tozu (65 g, 993 mmol) eklendi. Daha sonra, reaksiyon karisimi 2 saat boyunca karismaya birakildi ve m'ûteakiben, bir Celite peddengeçirilip filtrelenerek çinko tozundan arindirildi. NaOH ve NaHCO359kullanilarak asetik asit nötralize edilip pH seviyesi 7'ye getirildi ve daha sonra asetik asit bir miktar eterle (3 X 800 mL) ekstrakte edildi.
Bir araya toplanan organiklerin tuzlu su ve MgSO4 ile kurutulmalari ve ardindan konsantre edilmeleri sonucunda, kahverengi renkli bir sivi formunda (2R)-eti1 2-meti1-5-oksosiklopentan-karboksilat (107 g, %95) elde edildi.Basamak 2: MeOH (1,2 L) içerisinde yer alan bir (R)-etil 2-metil-5- oksosiklopentankarboksilat (106,0 g, 622,78 inmol) çözeltisine amonyum asetat (240,03 g, 3113,9 mmol) ilave edildi. Elde edilen reaksiyon karisimi oda sicakligi altinda 20 saat boyunca nitrojen atmosferinde karistirildi ve ardindan TLC ve HPLC ile yapilan degerlendirmeye göre reaksiyonun tamamlandigi saptandi. Reaksiyon karisimi konsantre edilerek MeOH çikarildi. Kalaii artigin DCM'de çözündürülmesi, HZO ile iki defa ve tuzlu suyla bir defa yikanmasi, kurutulmasi (NaZSO4), filtreleninesi ve ardindan konsantre edilmesi sonucunda turuncu renkli bir yag formunda (R)-etil 2-amin0-5- metilsiklopent-l-enkarboksilat (102 g, %97) elde edildi. LC/MS (APCI+) m/z 170 [M+H]+.Basamak 3: Formamidde (303,456 mL, 7640,]9 mmol) yer alan ve (R)-etil 2-amin0-5-metilsiklopent-l-enkarboksilat (161,61 g, 955,024 mmol) ve amonyum format (90,3298 g, 1432,54 mmol) içeren bir çözelti, 150°C'ye tekabül eden bir dahili sicakliga ulasana dek isitildi ve 17 saat boyunca karistirildi. Daha sonra reaksiyon karisimi sogutulup 2 L hacimli bir tek boyunlu siseye aktarildi. Akabinde, yüksek vakumlu distilasyon uygulanarak fazla formamidin çikarildi.Formamidin çikisi sona erdiginde, imbikte kalan yag DCM içerisinde60çözündürüldü ve tuzlu suyla (3 X 200 mL) yikandi. Aköz yikama sulari birlikte DCM ile ekstrakte edildiler. Bir araya toplanan organik ekstraktlar kurutuldu (NaZSO4), ardindan filtrelendi ve son olarak konsantre edildiler. Elde edilen kahverengi renkli yag ininiinal DCM içerisinde çözündürüldü ve bu çözelti bir ayirma hunisinin yardimiyla bir karistirilnns eter çözeltisine (yaklasik 5 hacim eter-DCM çözeltisi) eklenerek bir iniktar kahverengi renkli presipitat olusinasi saglandi.
Bu kahverengi renkli presipitat bir vasat sinter hunisinde filtrasyon yapilarak çikarildi ve bu huni daha sonra eterle durulanip akabinde atildi. Olusan filtrat konsantre edildi, eterden tritürasyon iki defa daha tekrarlandi ve elde edilen 'ürün yüksek vakuin hatti üzerinde kurutularak kahverengi-yesil renkli bir macunsu kati formunda (R)-5- metil-6,7-dihidro-5H-siklopenta[d]pirimidin-4-ole (93,225 g, %65,00 veriin) ulasildi. LC/MS (APCI-) m/z 149,2.Basamak 4: DCE (1,2 L) içerisinde yer alan bir (R)-5-metil-6,7- dihidro-5H-siklopenta[d]pirimidin-4-ol (152,2 g, 1013 mmol) çözeltisine 0°C sicaklik altinda bir ekleme hunisi yardimiyla yavasça sek POCl3 (463,9 inL, 5067 mmol) ilave edildi. Bu islem tamamlandiktan sonra, elde edilen reaksiyon karisiini oda sicakligina ulasana dek isitildi, ardindan geri akis sicakligina ulasana dek isitildi ve 70 dakika boyunca karistirildi. Reaksiyonun tamamlandigi HPLC ile belirlendi. Reaksiyon karisimi oda sicakligina ulasana dek sogutuldu ve akabinde POC13 fazlasi 4 parça halinde asagida tarif edildigi gibi söndüri'ildü: Reaksiyon karisimi bir ayirma hunisine aktarildi ve bir buz banyosu içerisinde sogutulmus doymus NaHCO3 ile buzdan olusan bir çözeltinin bulundugu bir behere bu huniaraciligiyla damlatildi. Reaksiyon karisiminin her bir kisini ilave61edildikten sonra, söndürülmüs olan karisim 30 dakika boyunca karistirilarak, ayirma hunisine aktarilinadan 'Önce POClg'ün tamamen ortadan kalktigindan emin olundu. Karisim ayirma hunisiiie aktarildi ve DCM ile iki defa ekstrakte edildi. Bir araya toplanan ekstraktlar kurutuldu (NaZSO4), ardindan filtrelendi ve son olarak konsantre edildiler. Ham ürün, asagida tarif edildigi gibi silika jel üzerinde saflastirildi: Silika jel (1 kg) 9:1 oraninda heksanrctil asetatla birlikte 3 L hacimli bir sinterli huniye aktarilarak bulamaç haliiie getirildi, vakum uygulanarak silika çökeltildi ve daha sonra bunun üzeri kuinla kaplandi. Ham ürüne bir DCM/heksan karisimi yüklendi ve bilesik 1 L hacimli kollu siselerde vakum altinda elüe edildi. Ilk önce yüksek Rf degerleri ortaya koyan yan ürünler elüe oldu ve bu sayede kahverengi renkli bir yag formunda (R)-4-kloro-5-metil-6,7-dihidro- 5H-siklopenta[d]pirimidin (104,4 g, %61,09 verim) elde edildi. Bir miktar n-BuOH'de (250 mL) yer alan bir (R)-4-kloro-5-metil-6,7- dihidro-5H-siklopenta[d]pirimidin (30,0 g, 178 inmol) çözeltisinin üzerine trietilamin (93,0 ml, 534 mmol) ve tert-bütil piperazin-l- karboksilat (34,8 g, 187 mmol) ilave edildi. Elde edilen reaksiyon karisimi nitrojen atmosferi altinda geri akis sicakligina ulasana dek isitildi ve gece boyunca (17 saat) karistirildi, ardindan bir döner buharlastiricida konsantre edildi. Olusan yag bir miktar DCM'de çözündürüldü, HZO ile yikandi, kurutuldu (NaZSO4), filtrelendi ve son olarak konsantre edildi. Olusan kahverengi renkli yagin önce ürün temiz bir sekilde elüe olana dek 2:1 heksanlar:etil asetat ile ve daha sonra 1:] ilâ l:5 DCMzetil asetat gradyaniyla elüsyon yapilarak silika jel üzerinde saflastirilmasi sonucunda, bej renkli bir toz formunda (R)-tertbütil 4-(5-metil-6,7-dihidro-5H-siklopenta[d]pirimidin-4-il)62piperazin-l-karboksilat (42,0 g, %74,1 verim) elde edildi. LC/MS (APCI+) m/z 319,1 [M+H]+.Basamak 5: CHCl3'te (310 mL) yer alan 0°C sicakliktaki bir (R)-tert- bütil 4-(5-metil-6,7-dihidro-5H-siklopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin- l-karboksilat (20,0 g, 62,8 mmol) çözeltisinin üzerine bir miktar maksimum %77 kati MCPBA (23,9 g, 107 mmol) parça parça ilave edildi. Elde edilen reaksiyon karisimi 5 dakika boyunca karistirildi, ardindan oda sicakligina varana dek isitildi ve 90 dakika boyunca karistirildi. 7,5 saat sonra HPLC ile bakildiginda benzer bir görüntü gözlemlendi. Bunun 'uzerine reaksiyon karisimi 0°C sicakliga ulasana dek sogutuldu, daha sonra NaHC03 (13,2 g, 157 mmol) ve 0,5 esdegeri düzeyinde biraz daha m-CPBA ilave edildi. Reaksiyon karisimi takip eden gece boyunca (14 saat) karistirildi. Ardindan reaksiyon karisimi 0°C sicakliga ulasana dek sogutuldu ve ekleme hunisi yardimiyla HZO'de (50 mL) yer alan bir Na25203 (29,8 g, 188 mmol) çözeltisi damlatildi. Bunu takiben, yine ekleme hunisi araciligiyla HZO'da (70 mL) yer alan bir Na2C03 (24,6 g, 232 mmol) çözelti eklendi. Reaksiyon karisimi müteakip 30 dakika boyunca karistirildi ve daha sonra karisim bir miktar CHC13 (3 X 150 mL) ile ekstrakte edildi. Bir araya toplanan ekstraktlarin kurutulmalari (NaZSO4), filtrelenmeleri ve konsantre edilineleri sonucunda N-oksitelde edildi. LC/MS (APCI+) m/z 335,1 [M+H]+.Basamak 6: Basamak 5'te elde edilen N-oksidin (21.0 g, 62.8 mmol) üzerine ACZO (77,0 ml, 816 mmol) ilave edildi. Elde edilen reaksiyon karisimi 90°C sicakliktaki bir kum banyosunda nitro jen atmosferialtinda isitildi ve 100 dakika boyunca karistirildi. Daha sonra63reaksiyon karisimi oda sicakligina ulasana dek sogutuldu ve asetik anhidrit fazlasi döner buharlastirma uygulamasiyla uzaklastirildi.
Olusan yag bir miktar DCM'de çözündürüldü ve elde edilen çözelti buzla doygunlastirilmis Na2C03'ün üzerine dikkatle döküldü.
Karisiinin DCM ile ekstrakte edilmesi ve bir araya toplanan ekstraktlarin kurutulmalari (NaZSO4), filtrelenmeleri ve konsantre edilmeleri sonucunda, kahverengi renkli bir köpük formunda tert-bütil 4-(7-asetoksi-5-metil-6,7-dihidro-5H-sik10penta[d]pirimidin-4- il)piperazin-1-karboksilat (23,6 g, %100) elde edildi. LC/MS (APCI+) m/z 377,1 [M+H]+.Basamak 7: 2:] Tl-leHZO'da (320 mL) yer alan 0°C sicakliktaki bir (5R)-tert-bütil 4-(7-asetoksi-5-metil-6,7-dihidro-5H-siklopenta[d] pirimidin-4-il)piperazin-l-karboksilat (23,6 g, 62,69 mmol) çözeltisinin üzerine LiOH-HZO (6,577 g, 156,7 mmol) ilave edildi.
Elde edilen reaksiyon karisimi 10 dakika boyunca karistirildi ve daha sonra oda sicakligina ulasana dek isitildi. 3 saat ve 4,5 saat sonra yapilan LC/MS'de ayni görüntü gözlemlendi. Bunun üzerine reaksiyon karisimi 0°C sicakliga ulasana dek sogutuldu ve ardindan karisimin üzerine doymus NH4C1 ilave edildi. Karisim 5 dakika boyunca karistirildi ve döner buharlastirma uygulamasiyla THF'nin büyük bir kismi uzaklastirildi. Karisim bir miktar EtOAc (3 X 250 mL) ile ekstrakte edildi ve bir araya toplanan ekstraktlar kurutuldu (Na2504), filtrelendi ve konsantre edildiler. Olusturulan ham ürün Biotage 65M'den hizla geçirildi: 4:l DCM:eti1 asetat, daha sonra 1:l ilâ l:4 DCMzetil asetat gradyani. Urün elüe olduktan sonra, etil asetat kolondan geçirilip bosaltildi. Daha sonra 3021 DCMzMeOH ile,ürünün geri kalani (8,83 g) elüe edildi. Karisik fraksiyonlarin ayni64kosullar altinda Biotage 40 M'den yeniden hizla geçirilmeleri sonucunda 2,99 g daha 'ürün elde edildi ve sonuç olarak, kahverengi renkli bir köpük formunda bir birlesik (5R)-tert-büti1 4-(7-hidroksi-5- meti1-6,7-dihidro-5 H-siklopenta[d] pirimidin-4-il) piperazin- 1 - karboksilat (11,82 g, %56,38 verim) çiktisina ulasildi. LC/MS (APCI+) m/z 335,1 [M+H]+.Basamak 8: DCM'de (150 mL) yer alan -78°C sicakliktaki bir ioksalil klorür (3,35 mL, 38,4 mmol) çözeltisinin üzerine bir ekleine hunisi araciligiyla DCM'de (50 mL) yer alan bir DMSO (5,45 ml, 76,8 mmol) çözeltisi dainlatildi. Elde edilen reaksiyon karisimi müteakip dakika boyunca karistirildi ve daha sonra yine ekleme hunisi araciligiyla DCM'de (80 mL) yer alan bir (5R)-tert-bütil 4-(7-hidroksi- -metil -6,7-dihidr0-5H-siklopenta[d]pirimidin-4-i1) piperazin-l- karboksilat (9,17 g, 27,4 minol) çözeltisi yavasça ilave edildi. Daha sonra reaksiyon karisimi -78°C sicaklik altinda 1 saat daha karistirildi ve akabinde karisima sek trietilainin (18,0 m1, 129 mmol) eklendi.
Müteakiben reaksiyon karisiini oda sicakligina ulasana dek isiiimaya birakildi ve daha sonra 30 dakika boyunca karistirildi. Akabinde H20 eklendi. Karisim bir miktar DCM (3 X 200 mL) ile ekstrakte edildi ve bir araya toplanan ekstraktlar kurutuldu (NaZSO4), filtrelendi ve vakum altinda konsantre edildiler. Olusan ham ürün silika jelde saflastirildi (Biotage 65M): ürün elüe olana dek kolondan önce yaklasik 800 mL 4:] DCMzEtOAc, ardindan 1:1 DCM:etil asetat gradyani geçirildi, daha sonra 124 DCMzEtOAc ile ürün elüe edilerek, kahverengi renkli bir köpük formunda (R)-tert-büti1 4-(5-meti1-7- okso-6,7-dihidr0-5H-siklopenta [d]pirimidin-4-il) piperazin- 1 - karboskilat (7,5 g, %82,3 verim) elde edildi. Bu köpügün65DCM/heksanlardan konsantre edilmesi (3 X) sonucunda, çok açik kahverengi renkli bir köpük elde edildi. HPLC > %95 alan. LC/MS (APCI+) m/Z 333 [M+H]+.Basamak 9: DCM'de (kullanilmadan 30 dakika önce nitro jenle gazdan arindirilmis 210 mL) yer alan bir (R)-tert-bütil 4-(5-metil-7-okso-6,7- dihidro-5H-siklopenta[d]pirimidin-4-i1)piperazin-1-karboksilat (9,75 g, 29,3 mmol) çözeltisinin üzerine trietilamin (kullanilinadan 30 dakika önce nitrojenle gazdan arindirilmis 4,33 ml, 31,1 inmol) ve formik asit (kullanilmadan 30 dakika önce nitrojenle gazdan arindirilmis 1,36 ml, 36,1 inmol) ilave edildi. Elde edilen karisim 5 dakika boyunca karistirildi ve ardindan üzerine bir Ru katalizörü (0,0933 g, 0,147 mmol) eklendi. Akabinde karisimi pozitif nitrojen basinci altinda gece boyunca (18 saat) karistirildi. Takiben reaksiyon karisimi kuruyana dek konsantre edildi ve yüksek vakuma tâbi tutularak kurutuldu. Olusan saf olinayan madde, Biotage 65M'ye yüklendi, 500 inL 1:1 DCMzetil asetatla yikandi, daha sonra ürüne (2. nokta) ulasilana dek 1:4 DCMtetil asetatla, ardindan sek etil asetata varana degin ilgili gradyanla elüsyon yapildi, ardindan 25:] DCMzMeOH ile ürünün geri kalani elüe edildi. Fraksiyonlar bir araya toplandi ve bir döner buharlastiricida buharlastirildilar. Kalan artigin DCM/heksanlardan tekrar konsantre edilmesi sonucunda, bej renkli bir köpük formunda bir tert-bütil 4-((5R,7R)-7-hidroksi-S-inetil-6,7- dihidro-SH-siklopenta [d]pirimidin-4-il) piperazin- 1 -karboksilat (majör) ve tert-bütil 4-((5R,7S)-7-hidroksi-5-meti1-6,7-dihidr0-5H- siklopenta[d]pirimidin-4-i1)piperazin-1-karboksilat (minör) karisimi(9,35 g, %95,3 verim) elde edildi. LC/MS (APCI+) m/Z 335 [M+H]+.66lH NMR (CDC13), karbinol metinin entegrasyonunun sagladigi %88oraninda diastereoselektivite söz konusu oldugunu göstermektedir.Basamak 10: DCM'de (110 mL) yer alan ve tert-bütil 4-((5R,7R)-7- hidroksi-5-metil-6,7-dihidr0-5H-siklopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin- l-karboksilat (7,0 g, 20,9 mmol) ve trietilainin (4,38 ml, 31,4 inmol) içeren 0°C sicakliktaki bir çözeltinin 'uzerine 4-nitrobenzoil klorür (4,27 g, 23,0 mmol) ilave edildi. Reaksiyon karisimi gece boyunca oda sicakliginda karistirildi ve daha sonra üzerine doymus NaHC03 eklendi. Daha sonra karisim 10 dakika boyunca karistirildi ve ardindan DCM ile ekstrakte edildi. Bir araya toplanan ekstraktlar kurutuldu (Na2804), filtrelendi ve konsantre edildiler. Ham ürün Biotage 65M'den hizla geçirildi (321 heksanlarzetil asetat ham ürüne yüklendi, daha sonra 2:] heksanlarzetil asetatla tert-bütil 4-((5R,7R)-5- metil-7-(4-nitrobenzoiloksi)-6,7-dihidr0-5H-siklopenta[d] pirimidin-4- il)piperazin-1-karboksilat ve birkaç karisik fraksiyon elüe edildi).
Daha sonra 122 heksanlarzetil asetat kullanilarak tert-bütil 4((5R,7S)- -meti1-7-(4-nitrobenzoi10ksi)-6,7-dihidr0-5H-siklopenta[d] pirimidin- 4-il)piperazin- 1 -karboksilat elüe edildi. Ürünü barindiran fraksiyonlarin döner buharlastirma yoluyla konsantre edilmeleri sonucunda, sari renkli bir köpük formunda tert-bütil 4-((5R,7R)-5- n1etil-7-(4-nitr0benzoiloksi)-6,7-dihidro-5H-siklopenta[d] pirimidin-4- il)piperazin-1-karboksilat (8,55 g, %84,5 verim) elde edildi. lH NMR (CDC13), tek diastereoiner göstermektedir. Diger diastereomerin bulundugu fraksiyonlarin döner buharlastirma yoluyla konsaiitre edilmeleri sonucunda, kahverengi renkli bir köpük formunda tert-bütil4-((5R,7S)-5-meti1-7-(4-nitr0benzoiloksi) -6,7-dihidro -5H-siklopenta67[d]pirimidin-4-il)piperazin-1-karboksilat (0,356 g, %3,52 verim) elde edildi. LC/MS (APCI+) m/z 484 [M+H]+.Basamak 11: 2:] THFiHzO'da (40 inL) yer alan 0°C sicakliktaki bir tert-bi'itil 4-((5R,7R)-5-metil-7-(4-nitrobenzoiloksi)-6,7-dihidr0-5H- siklopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin-l-karboksilat (2,30 g, 4,76 mmol) çözeltisinin üzerine L10H-H20 (0,499 g, 11,9 mmol) ilave edildi. Elde edilen reaksiyon karisimi oda sicakligina ulasana dek isitildi ve 1 saat boyunca karistirildi. THF döner buharlastirma yoluyla çikarildi, doymus NaHCO3 eklendi ve karisim bir miktar etil asetat ile ekstrakte edildi. Bir araya toplanan ekstraktlarin doymus NaHC03 ile yikanmalari (1 X), kurutulmalari (NaZSO4), filtrelenmeleri ve konsantre edilmeleri sonucunda sari renkli bir köpük formunda 4- ((5R,7R)-7-hidroksi-5-metil-6,7-dihidro-5H-siklopenta[d]pirimidin-4- il)piperazin-l-karboksilat (1,59 g, %100,0 verim) elde edildi. Workup isleminden sonra yapilan HPLC'ye göre, üründe sadece > %98 alan safligi söz konusuydu. LC/MS (APCI+) m/z 335 [M+H]+. Benzer bir yöntem kullanilarak tert-bütil 4-((5R,7Sv)-7-hidroksi-5-metil-6,7- dihidro-5 H-siklopenta[d] pirimidin-4-i1) piperazin- 1 -karboksilathazirlandi.Basamak 12: Dioksanda (15 mL) yer alan bir tert-b'ûtil 4-((5R,7R)-7- hidroksi-S-meti1-6,7-dihidr0-5H-siklopenta[d]pirimidin-4-il)piperazin- l-karboksilat (0,600 g, 1,79 mmol) çözeltisinin üzerine 4M HCl/dioksan (11,2 ml, 44,9 mmol) ilave edildi. Reaksiyon karisimi nitrojen atinosferinde oda sicakligi altinda gece boyunca (20 saat) karistirildi. Daha sonra karisim kuruyana dek konsantre edildi veyüksek vakum hatti üzerinde kurutuldu. Ham ürün eterde süspanse68edildi, ultrasona tâbi tutuldu ve 5 dakika boyunca karistirildi. Katilarin nitro jen basinci yardiiniyla bir orta boy sinterli huniden geçirilip filtre edilerek izole edilmeleri, eter ile durulanmalari, nitrojen basinci altinda kurutulinalari ve bir yüksek vakum hatti üzerinde bir kez daha kurutulmalari sonucunda, sari renkli bir toz formunda (5R,7R)-5- metil-4-(piperazin-1-il)-6,7-dihidro-5H-siklopenta[d]pirimidin -7-ol dihidroklorür (0,440 g, %79,8 verim) elde edildi. LC/MS (APCI+) m/z 235. Benzer bir yöntem kullanilarak (5R,7S)-5-metil-4- (piperazin-l-il)-6,7-dihidro -5H-siklopenta [d]pirimidin-7-01dihidroklorür hazirlandi.Basamak 13: Bir miktar metil 2-(4-klorofenil)asetat (36,7 g, 199 mmol) ve paraformaldehit (6,27 g, 290 mmol), DMSO'da (400 mL) çözündürüldü/süspanse edildi ve NaOMe (537 mg, 9,94 mmol) ile islemden geçirildi. Elde edilen karisim, TLC analizi ile ham ürüne ulasildigi anlasilip reaksiyon tainainlanana dek oda sicakligi altinda 2 saat boyunca karismaya birakildi. Daha sonra karisim buzlu soguk suyun (700 mL; beyaz emülsiyon) üzerine döküldü ve IM HC] çözeltisi eklenerek nötralize edildi. Aköz katman bir miktar etil asetat (3 X) ile ekstrakte edildi ve organikler bir araya toplandilar. Organik katman bir miktar su (2 X) ve tuzlu suyla (1 X) yikandi, ayrildi, MgSO4 ile kurutuldu, filtrelendi ve vakuma tâbi tutularak konsantre edildi ve bu islemler sonucunda sari renkli bir yag formunda ham ürün elde edildi. Kalan artik, silika jel bulunan büyük boy bir sinterli filtreye yüklendi ve baslangiç maddesi/olefin toplanana dek 9:l heksanlarzetil asetat ile elüe edildi. Daha sonra, istenen saf ürüntamamen elüe olana dek dolgu 1:l heksanlarzetil asetat ile elüe edildi.69Konsantre saf fraksiyonlardan, renksiz bir yag formunda inetil 2-(4-klorofenil)-3-hidroksipropanoat (39,4 g, %92) elde edildi.Basamak 14: Bir miktar metil 2-(4-klorofenil)-3-hidroksipropanoat (39,4 g, 184 mmol) DCM'de (500 mL) çözündürüldü ve TEA (64,0 mL, 459 mmol) ile islemden geçirildi. Çözelti 0°C sicakliga ulasana dek sogutuldu ve üzerine yavasça MsCl (15,6 mL 202 mmol) uygulanarak islemden geçirildi, daha sonra TLC analizi ile yapilan gözleme göre reaksiyonun tamamlandigi görülene dek 30 dakika boyunca karismaya birakildi. Daha sonra çözelti lN HC] çözeltisi ile bölüsti'irüldi'i ve aköz katman DCM ile bir kez ekstrakte edildi. Bir araya toplanan organik katmanlar IN HC] çözeltisi ile bir kez daha yikandilar, ayrildilar, seyreltil NaHCO3 çözeltisi ile yikaiidilar ve son olarak ayrildilar. Organik katmanin MgSO4 ile kurutulmasi, filtrelenniesi ve vakum altiiida konsantre edilmesi sonucunda turuncu renkli bir yag olustu. Kalaii artik, bir silika jel dolgusu buluiian büyük boy bir sinterli filtreye yüklenip 9:] heksanlarzetil asetat ile elüe edildi ve bu islemler sonucunda, TLC analizi ile saptandigi 'uzere istenen saf ürün elde edildi. Konsantre saf fraksiyonlardan, renksiz bir yag formunda metil 2-(4-k10rofenil)akrilat (30,8 g, %85) elde edildi. Bu metil (2-(4-klorofeni1)akrilat (500 mg, 2,54 mmol), THF'de (1,35 mL) yer alan bir çözelti olarak, 0°C sicaklikta THF'de (5,0 mL) yer alan karistiriliiiis bir i-PrNH2 (217 uL, 2,54 mmol) çözeltisinin üzerine ilave edildi. Elde edilen reaksiyon karisimi, LCMS analiz ile reaksiyonuii tamamlandigi görülene dek gece boyunca oda sicakligi altinda karismaya birakildi. Daha soiira, sürekli karistirilan aminin üzerine pipet araciligiyla BOCZO (584 uL, 2,54 mmol) eklendi.
Reaksiyon, karisiiiida yapilan LCMS ve TLC analizi ile tanianilandigi70tespit edilene dek gece boyunca karismaya birakildi. Çözeltinin vakuma tâbi tutularak konsantre edilmesi sonucunda, renksiz bir yag formunda mctil 3-(tert-bütoksikarboni1(izopropil)amino)-2-(4- klorofenil)propanoat (854 mg, %94) elde edildi. LC/MS (APCI+) m/z 256,1 [M-Boc]+.Basamak 1 5 : Bir miktar metil 3 -(ter- bütoksikarbonil(i20pr0pil)amino)-2-(4-klorofenil)propanoat (133 g, 374 inmol) THF'de (1,0 L) çözündürüldü ve oda sicakliginda KOTMS (56,0 g, 392 mmol) ile islemden geçirildi. Karisim, ham üründe yapilan LCMS analizi ile reaksiyonun tamamlandigi saptanana dek gece boyunca karismaya birakildi. Ardindan karisim vakum altinda konsantre edilerek bir islak köpük elde edildi ve bunun gece boyunca vakum altinda kurumaya birakilmasi sonucunda beyaz renkli bir kati formunda 3-(tert-bütoksikarbonil(izopropil)amino)-2-(4-klorofenil) propanoata (148,7 g, %105) ulasildi. LC/MS (APCI+) m/z 242,1 [M- Boc-K]+.Basamak 1 6: Bir miktar potaswm 3 -(tert- bütkoksikarbonil(izopropil9amirio)-2-(4-klorofenil9propanoat (77,2 g, 203 mmol) THF'de (515 mL) çözündürüldü ve oda sicakliginda pivaloil klorûr (26,3 mL, 213 mmol) ile islemden geçirildi. Karisim, karisik anhidrit olusana dek 3 saat boyunca karisinaya birakildi. Ayri bir sisede (S)-4-beziloksazolidin-Z-on (46,1 g, 260 mmol) THF'de (600 mL) çözündürüldü ve -78°C sicakliga ulasana dek sogutuldu. Çözelti n-BuLi (heksanlarda yer alan 102 mL hacminde bir 2,50 M çözelti, 254 minol) ile islemden geçirildi ve bir saat boyuncakarismaya birakildi. Hazirlanan anhidr çözelti, sürekli karistirilan Li-71oksazolidinonun üzerine kanül yardiiniyla ilave edildi ve karisim oda sicakligina ulasana dek gece boyunca isinmaya birakildi. Daha sonra karisim, doymus amonyum klor'ur çözeltisi eklenerek söndür'ûldü ve daha fazla su ve etil asetat arasinda bölüst'ürüldü. Aköz katman birkaç defa ekstrakte edildi ve organikler bir araya toplandilar. Organik katman önce su ve ardindan tuzlu suyla yikandi, ayrildi, MgSO4 üzerinde kurutuldu, filtreleiidi ve vakuma tâbi tutularak konsantre edildi. Kalan artigin kromatografi (421 heksanlarzetil asetat ile elüsyon yapilan silika jel) ile saflastirilmasi/ayristirilmasi (diastereomerler) sonucunda, Viskoz yaglar formunda bulunan tamamen ayrismis diastereomerler elde edildi: tert-b'i'itil (R)-3-((S)-4-benzil-2- oksooksazolidin-3-il) -2-(4-klorofenil)-3-oksopropil (izopropil) karbainat (12,16 g, asit rasematin 1/2'si temelinde %24) ve tert-bütil (S)-((S)-4-benzi1 -2-oksooksazolidin-3-il) -2-(4-klorofenil)-3- oksopropil(izopropil)karbamat (39,14 g, asit rasematin 1/2'si teinelinde %77). LC/MS (APCI+) m/z 401,2 [M-Boc]+.Basamak 17: THF (30 mL) ile suyun (15 mL) bulundugu oda sicakligindaki sürekli karistirilan bir çözeltinin üzerine çözünene dek LiOH-HZO (168 mg, 4,00 minol) ilave edildi. Elde edilen karisim bir miktar hidrojen peroksit (suda yer alan 658 uL hacimli agirlikça %35'1ik bir çözelti, 8,00 minol) ile islemden geçirildi ve 10 dakika boyunca oda sicakliginda karismaya birakildi. Daha sonra reaksiyon bir buz banyosunda 0°C sicakliga ulasana dek sogutuldu ve 10 dakikalik bir süre boyunca THF'de (15 mL) yer alan bir çözelti olarak ekleme hunisi araciligiyla tert-bütil (S)-3((S)-4-benzil-2- 0ksooksazolidin-3-il)-2-(4-klor0feni1) -3-oksopropil (izopropil) karbainat (1,00 g, 2,00 inmol) ilave edildi. Ham üründe yapilan LCMS72analizi ile reaksiyonun tamamlandigi gözleinlenene dek, karisim oda sicakligi altinda gece boyunca karisinaya birakildi. Reaksiyon 0°C sicakliga ulasana dek sogutuldu ve daha sonra on dakikalik bir süre boyunca ekleme hunisi araciligiyla 1M NaZSO3 (9,00 mL) çözeltisi ile isleman geçirildi. Ekleme tamamlandiktan sonra, karisim oda sicakligina varana dek 10 dakika boyunca isinmaya birakildi. Karisim, içerisindeki THF'yi çikarmak maksadiyla konsantre edildi ve daha sonra bir miktar su ile seyreltildi. Aköz katman etil asetat (atilmistir) ile iki defa yikandi. Aköz katman, etil asetatla bölümlere ayrildi ve daha sonra pH 2-3 seviyesine ulasilana dek sürekli karistirilip üzerine lM HCl damlatildi. Aköz katman etil asetat ile iki defa ekstrakte edildi ve organikler bir araya toplandilar. Organik bir miktar suyla yikandi, ayrildi, MgSO4 ile kurutuldu, filtrelendi ve vakuma altinda konsantre edildi. Renksiz yag ürünü bir saat boyunca yüksek vakuma tâbi tutulup karistirilarak, bir Viskoz yag/köpük formunda (S)-3-(tert- bütoksikarb0nil(izopropil)amin0)-2-(4-klorofenil)propanoik asit (685 mg, %100) elde edildi. LC/MS (APCI+) m/z 242,1 [M-Boc]+.Basamak 18: DCM (40 mL) ile DlEA'da (5,0 mL, 28,7 minol) yer alan ve (5R,7R)-5-metil-4-(piperazin-1-il)-6,7-dihidr0-5H-siklopenta [d]pirimidin-7-ol dihidroklorür (2,92 g, 9,51 inmol) ve (S)-3-(tert- bütoksikarbonil(izopropil)amino)-2-(4-klorofenil)propanoik asit (3,25 g, 9,51 mmol) içeren bir çözelti oda sicakligi altinda 10 dakika boyunca karistirildi. Daha sonra karisimin üzerine HBTU (3,61 g, 9,51 mmol) ilave edildi. Karisim takip eden 1 saat boyunca oda sicakligi altinda karistirildi. Ardindan çözücü çikarildi ve kalan artik bir miktar etil asetatta (500 mL) çözündürüldü ve su (6 X 100 mL) ileyikandi. Organik faz kurutuldu ve konsantre edildi. Kalan artigin73kolon kromatografisine tâbi tutulup EtOAc-DCM/MeOH (20:l) ile elüe edilmesi sonucunda tert-bütil (S)-2-(4-klor0fenil)-3-(4-((5R,7R)- 7-hidr0ksi-5-metil -6,7-dihidr0-5H-siklopenta[d] pirimidin-4-il) piperazin-l-i1)-3-oksopropil(izopropil)karbamat (3,68 g, %69) elde edildi. LC/MS (APCI+) m/z 558,2 [M+H]+.Basamak 19: Bir miktar tert-bütil (S)-2-(4-klorofenil)-3-(4-((5R,7R)- 7-hidr0ksi-5-metil-6,7-dihidro -5H-sik10penta [d]pirimidin-4-il) piperazin-l-il)-3-0ksopr0pil(izopr0pil) karbainat (2,50 g, 4,48 mmol) dioksanda (22,4 mL) çözündürüldü ve dioksanda (22,4 mL, 89,6 mmol) yer alan 4M HCl ile oda sicakligi altinda islemden geçirildi.
Elde edilen çözelti, ham üründe yapilan LCMS analizi ile reaksiyonun tamamlandigi saptanana dek gece boyunca karismaya birakildi. Daha sonra çözelti vakum altinda konsantre edilerek bir jel elde edildi ve bu jel minimal miktarda metanolde (10 mL) çözündürüldü. Ardindan çözelti pipet yardimiyla karistirilinis etere (300 mL) aktarilarak beyaz renkli bir presipitat halinde istenen ürün elde edildi. Söz konusu ekleine isleminin yaklasik olarak yarisinda, beyaz renkli presipitat eriyip sari renkli bir jel haline geldi. Madde vakum altinda konsantre edilerek sari renkli bir jel elde edildi ve bu jelin gece boyunca indirgenmis basinç altinda bekletilmesi sonucunda, açik sari renkli bir toz formunda (S)-2-(4-klor0fenil)-1-(4-((5R,7R)-7-hidroksi-5-metil- 6,7-dihidro-SH-siklopenta [d]pirimidin-4-il) piperazin- l -il)-3- (izopropilamino)propan-1-on dihidroklorür (2,14 g, %90) elde edildi. lH NMR (D20, 400 MHZDDDD8,39 (s, lH), 7,37-7,35 ((1, J = 8,4 Hz, 2H), 7,23-7,20 ((1, J = 8,4 Hz, 2H), 5,29-5,25 (m, lH), 4,33- 4,29 (m, lH), 4,14-4,10 (m, lH), 3,89-3,19 (m, llH), 2,23-2,l7 (m,74lH), 2,08-1,99 (m, 1H), 1,20-1,18 (m, 6H), 0,98-0,96 (d, J = 6,8 HZ, 3H). Ms (APCI+) [M+H]+458.Ornek 2: In Vitro Hücre Proliferasyonu EseyleriFormül 1 bilesigi ile belirli spesifik kemoterapötik ajanlarin bulundugu kombinasyonlarin in vitro potensi, ticari piyasada Promega Corp., Madison, WI firmasindan edinilebilecek olan CellTiter-Glo® Luminesan Hücre Viyabilitesi Eseyi kullanilarak ölçülebilir. Bu homojen esey yöntemi, Coleoptera lüsiferazinin rekombinan ekspresyonuna dayanir (US 5583024; US 5674713; US 5700670) ve metabolik açidan aktif hücrelerinir göstergesi olan mevcut ATP niiktarina dair yapilan ölçüm temelinde kültürdeki canli hücrelerin sayisini belirlemeye yarar (Crouch et al (1993) J . Immunol. Meth. 160281-88; US 6602677). CellTiter-Glo® Eseyi 96 veya 384 kuyucuklu formatta gerçeklestirilebilir ve bu olanak, eseyin otomatik yüksek verimli taramada (HTS) kullanilmasini mümkün kilar (Cree et al (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404). Homojen esey prosedüründe, reaktif (CellTiter-G10® Reaktifi) tek basina dogrudan serum takviyeli vasatta kültürlenen hücrelere eklenir. Hücrelerin yikanmasina, vasatin çikarilmasina ve birden çok pipetleme yapilmasina gerek yoktur. Bu sistem, reaktif ilave edilip içerik karistirildiktan sonraki 10 dakika içerisinde bir 384 kuyucuklu formatta 15 hücre/kuyucuk kadar az birseviyede belirleme yapabilir.Homojen "ekle-karistir-ölç" formati, mevcut ATP miktariyla orantili bir lüminesan sinyalin olusmasi ve hücre lizisi sonucunu dogurur.ATP miktari, kültürde bulunan hücrelerin sayisiyla dogru orantilidir.75CellTiter-Glo® Eseyi, kullanilan hücre tipine ve vasata bagli olarak yari-ömrü genellikle bes saatten daha uzun olan, lusiferaz reaksiyonuyla üretilen bir "isilti-tipi" lüminesan sinyal olusturur. Canli hücreler, bagil lüminesan birimleriyle (RLU) ifade edilir. Substrat olarak kullanilan Kinkanatli Lüsiferini, rekombinan atesböcegi lüsiferazi ile oksitlenerek karboksilden arindirilir ve eszamanli olarak ATP AMP'ye dönüsür ve fotonlar olusur. Bahsi geçen daha uzun süreli yari-ömür, reaktif en jektörleri kullanma ihtiyacini ortadan kaldirir ve birden çok plakada yürütülen sürekli veya kesikli isleme için esneklik saglar. Bu hücre proliferasyonu eseyi, çesitli farkli çok- kuyucuklu formatlarla, Örnegin 96 veya 834 kuyucuklu formatla kullanilabilir. Veriler, lüminometre veya CCD kamera görüntüleme cihazi ile kayit altina alinabilir. Lüminesans çiktisi, zamana karsiölçülen bagil isik birimleri (RLU) cinsinden ifade edilir.Ornek 3: In Vivo Tümör Ksenogreft EtkinligiBulusa uygun temsili koinbinasyonlarin etkinligi, kanser hücreleri allogreftleri veya ksenogreftleri siçanlara implante edilerek ve tümör barindiran hayvanlar söz konusu koinbinasyonlar ile tedavi edilerek in Vivo ortamda ölçüldü. Hücre hattina, tümör hücrelerinde belirli niutasyonlarin bulunup bulunmadigina, bilesiklerin hangi sirayla uygulandigina, dozlama rejimine ve baska faktörlere bagli olarak degisken sonuçlar beklenebilir. Denek fareler, ilaç(lar) veya kontrol (Vehikül) ile uygulamaya tâbi tutuldular ve tümörün iki katina katlanmasina, logaritmik hücre ölümüne ve tümör inhibisyonuna kadar geçen süreyi ölçmek maksadiyla birkaç hafta veya daha uzun birsüre boyunca izlendiler. Bu modelde test edilmis olan bulusun temsili76koinbinasyonlarina ait sonuçlar Sekillerde sunulmaktadir. Sekillerde gösterilen veriler, temsili kombinasyonlarin ilgili ajanlar tek baslarina uygulandiklarinda elde edilen sonuçlara kiyasla daha iyi gelismissonuçlar sagladiklarini kanitlamaktadir.Ornek 4: PTEN Durumunun OlçülmesiPTEN duruinu, sektörde bilinen uygun herhangi bir yolla ölçülebilir.
Bunlara verilebilecek örneklerden biri lHC'dir. Alternatif olarak, Western blot analizi de kullanilabilir. PTEN antikorlari ticari piyasada mevcuttur (Cell Signaling Technology, Beverly, MA, Cascade Biosciences, Winchester, MA). "Neshat, M. S. et al. Enhanced sensitivity of PTEN-deficient tumors to inhibition of FRAP/mTOR, Proc. Natl Acad. Sci. USA 98, 10314-10319 (2001)" ve "Perren, A., et. al. Immunohistochemical Evidence of Loss of PTEN Expression in Primary Ductal Adenocarciuomas of the Breast, American Journal of Pathology, Vol. 155, No. 4, October 1999" eserlerinde, PTEN durumunun tespitine yönelik IHC ve Western blot analizi için örnek prosedürler bulunabilir. Ek olarak, sektörde bilinen teknikler kullanilarak, AKT mutasyonu, PI3K mutasyonu ve Her2/ErbBZamplifikasyonu ile baglantili kanserler de belirlenip tanimlanabilir.Ornek 5: Hücre Viyabilitesi EseyleriHücreler, siyah reiikli ve berrak tabanli 384 adet kuyucuktan olusan plakalara (Katalog 353962; Becton Dickinson; Franklin Lakes, NJ) kuyucuk basina 1500 hücre düsecek bir yogunlukta yatirildilar ve 37°C sicaklik, %5 COz'de tüin geceyi içine alan bir ile '1,5 gün arasi77bir süre boyunca inkübe edildiler. Daha soiira hücrelere GDC-0068, GDC-O973 veya bunlarin kombinasyonunun seri seyreltileri ilave edildi ve elde edilen içerik 96 saat daha inkübe edildi. Daha sonra, üreticinin ortaya koydugu protokol (CellTiter-Glo lüminesan Hücre Viyabilitesi Eseyi kiti; Katalog G7573; Promega, Madison, WI) takip edilerek hücresel adenozin trifosfat (ATP) seviyeleri ölçülüp hücre Viyabilitesi belirlendi. Lüminesans sinyali, bir EnVision 2101 Çok- etiketli Okuyucuda (PerkinElmer; Waltham, MA) kaydedildi. Yüzde inhibisyon, asagida ifade edildigi gibi, GDC-0068 ve GDC-O973 kombinasyonuna maruz birakilan hücrelerin bagil isik birimi (RLU) DMSO'ya maruz birakilan hücrelerin RLU'suna bölünüp çikan sonuç1 'den çikarilarak hesaplandi:0/0 inhibisyon : 1 - (RLUkombinasyon / RLUDMso)BLISS analizinde, beklenen % inhibisyon (EZEQDCOO68+EGDC-0973'EGDC- OOÖSXEGDC.0973), deneysel olarak gözleinlenen % inhibisyon E035 ile karsilastirildi. BLISS skoru, beklenen % inhibisyon E ile deneysel olarak gözlemlenen inhibisyon E055 arasindaki farki (AEîEOBS-E)teskil etmektedir.BLISS skorlariyla tek ajan uygulanialarina kiyasla elde edilen kuvvetlenme derecesi ölçülür ve bir pozitif BLISS skoru basit aditiviteden daha fazlasinin söz konusu oldugunu gösterir. Bir 250'den büyük toplam pozitif BLISS skoru, test edilen konsantrasyon araliklari dahilinde kuvvetli bir Sinerji söz konusu oldugu seklindedegerlendirilir.78Asagida belirtilen üç kanser hücre hattina istinaden olusturulan isi haritalari ile kombinasyon potenslerine dair örnekler gösterilmektedir: PTEN bulunmayan ve B-RAFVÖOOE mutasyonu bulunan bir melanom hücre hatti olan A2058 (bkz: Sekil 9); i>iK3CA”'047R ve KRASGl3D mutasyonlari bulunan bir kolorektal kanser (CRC) hücre hatti olan HCT-116 (bkz: Sekil 5); ve bir KRASGIZCmutasyonu bulunan bir küçük hücreli olmayan akciger kanseri (NSCLC) hücre hatti olan NCI-H2122 (bkz: Sekil 7). Uç hücre hattinda da 0,37 ile 10 mm arasinda kalan GDC-0068 konsantrasyonlari ve 0,062 ile 0,56 um arasinda kalan GDC-0973 konsantrasyonlarinda, her doz çifti için 2 olan BLISS skorlari esliginde kuvvetli sinerjistik etkilergözlemlendi.GDC-0068 ile GDC-O973 arasindaki sinerjistik etkinin RAS/RAF ve/veya PI3K/Akt yolaklarinin aktivasyonuna bagli olup olmadigini arastirmak maksadiyla, bir melanom hastasindan aliiian bir hücre hatlari setinde kombinasyon etkileri karsilastirildi: MALME3M B- RAFVÖOOE metastatik inelanom hücre hatti ve hasta-eslestirilmis MALME3 normal cilt fibroblastlari. MALME3M hücreleri, düsük konsantrasyonlarda GDC-0973'e duyarlilik gösterdi ve GDC-0068'in tek ajan aktivitesinin söz konusu olmamasina ragmen düsük GDC- 0973 konsantrasyoiilari ve genis bir GDC-0068 konsantrasyon araliginda kuvvetli sinerjistik etki gözlemlendi (bkz: Sekil 28). Buna karsin, MALME3 hücreleri GDC-0973'e karsi direnç gösterdi ve GDC-0068 ile yapilan kombinasyonda sinerjizm tespit edilmedi (bkz: Sekil 29). Benzer sekilde, NSCLC hücre hatti NCI-H2122 olarak ayni hastadan alinmis olan NCI-BL2122 normal B lenfoblastlari da NCI-H2122 hücrelerinde görülen kuvvetli sinerjinin (bkz: Sekil 7) tersine79GDC-0973 ve GDC-0068 kombinasyonuna karsi herhangi bir sinerjistik cevap sergilemediler (bkz: Sekil 30). Bu sonuçlar, RAS/RAF yolaginin ya da hem PI3IUAkt yolagini hem de RAS/RAF yolaginin aktif oldugu kanser hücrelerinde MEK ve Akt inhibitörlerinden meydana gelen kombinasyonlarla seçici olarakterap'otik bir fayda elde edilebilecegini göstermektedir.Ornek 6: Western Blot AnaliziKaplara (10 cmz) 10 mL hacmindeki iki milyon hücre ekildi ve takip eden gece boyunca (yaklasik 16 saat) %5 COZ atmosferi altinda 37°C sicaklikta inkübasyon gerçeklestirildi. Daha sonra hücreler 3 saat boyunca 1 ve 3 uM GDC-0068, 0,25 ve 0,75 uM GDC-0973 veya 1 uM GDC-0068 arti 0,25 uM GDC-0973'e tâbi tutuldular. Bu islemin ardindan hücreler soguk fosfat tamponlu salin (PBS) ile yikandilar ve proteaz inhibitörleri (Roche, Almanya), 1 mM fenilmetansülfonil florür (PMSF) ve Sigma (St. Louis, M0) mamulü Fosfataz Inhibitörü Kokteylleri 1 ve 2 takviyeli Biosource (Carlsbad, CA) mamulü 1 X Hücre Ekstraksiyon Tamponunda lize edildiler. Protein konsantrasyonu, Bradford yöntemi (Bio-Rad Protein Eseyi (Bio-Rad; Hercules, CA) ile belirlendi. Immünoblotlar için, Tris-Glisin %4-20 gradyanli jellerle (Invitrogem Carlsbad, CA) gerçeklestirilen elektroforez ile esit miktarlarda protein ayristirildi; proteinler, Bio- Rad'in gelistirmis oldugu Criterion sistemi ve protokolü kullanilaraknitroselüloz membranlara aktarildilar.Aksi belirtilmedikçe, hepsi Cell Signaling Technologies'den (Beverly,MA) temin edilmis olan asagida antikorlar kullanilmistir:80anti-pAkt (8473)anti-pAkt (T308)anti pMEKl/Z (8217/221)anti-pFoxOl (T24)/FoxO3a (T32)anti-pPRAS4O (T246)anti-p4EBP1 (T37/46)anti-pERK 1 / 2 (T2 02/Y204)anti-pTSC2 (T1462)anti-pSö (8235/236)anti-pSö (8240/244)poli (ADP-riboz) polimeraz (PARP) ve yarilmis PARP GAPDH (Advanced lmmunoChemical; Long Beach, CA)Kombinasyonun Akt ve Mek sinyaline etkisini incelemek için, 1 ve 3 uM GDC-0068, 0,25 ve 0,75 uM GDC-0973 ya da sinerjistik etkinin gözlemlendigi l uM GDC-0068 arti 0,25 uM GDC-0973 kombinasyonuna maruz birakilan HCT-116 CRC hücrelerinde Western blotlar üzerinden Akt ile MEK'in her ikisinin de downstream hedefleri degerlendirildi. Sekil 24'te gösterildigi gibi, koinbinasyon kullanildiginda Akt ile MEK'in her ikisinin de downstream hedeflerinin birlikte knockdown oldugu, pTSC2, p86 (hem 5235/236 hem de 8240/244), PARP ve yarilmis PARP gibi bir dizi hedefin kuvvetli ölçüde knockdown oldugu, ajanlardan herhangi birinin tek basina ama daha yüksek bir dozda kullanildigi duruma kiyasla dahaiyi bir knockdown meydana geldigi gözlemlendi.Örnek 7: Akis Sitometrisi Eseyleri81HCT-l 16 hücreleri 96 kuyucuklu doku kültürü plakalarina ekildiler. 37°C, %5 COz'de gece boyunca inkübasyon yapildiktan sonra, hücreler 4 gün boyunca artan konsantrasyonlarda GDC-0068 veya GDC-0973 ya da bu ikisinin kombinasyonuna tâbi tutuldular.
Apoptozu tespit etinek için, 4 mM CaClg, 5 ”L anneksin V-floresein izotiosiyanat (FITC) (BD Pharmingen; Franklin Lakes, NJ) ve 5 ug/mL propidyuin iyodür (PI) içeren 100 uL PBS'ye 100 uL hücre süSpansiyonu eklendi. Karisim 30 dakika boyunca buz üzerinde inkübe edildi ve hücreler bir akis sitoinetresi (BD Biosciences; SanJose, CA) ile analiz edildiler.Hem tek basina ajan uygulamalarinda hem de GDC-0068 ve GDC- 0973 çiftinden olusan kombinasyon ile yapilaii uygulamada propidyuin iyodür- (PI) veya anneksin V- (AV) pozitif hücrelerin yüzdesi ölçüldü ve hücre 'Ölümü iiidüksiyoiiuiia yönelik siiierjistik etki BLISS analizi ile analiz edildi. Kombinasyoii uygulamasi tek ajan uygulamalarina kiyasla daha yüksek bir PI+/AV+ hücre yüzdesi sagladi Ve 0,37 ilâ 10 uM GDC-0068 ile 0,185 ilâ 0,556 uM GDC-0973'te kuvvetli sinerjistik etki (BLISS skoru 2 15) gözlemlendi. Dolayisiyla, GDC-0068 ve GDC-0973 arasindaki kombinasyon HCT-116 hücrelerinde hücre ölümü indüksiyonu konusunda da sinerjistik etkisagladi.Sektörde bilgi ve beceri uzmanlarin kolaylikla anlayabilecekleri üzere yukarida gösterilen yapi ve proseste pek çok modifikasyon ve degisiklik yapilabilir ve dolayisiyla bulusun kapsaniinin yukarida anlatildigi gibi olan yapi ve proses ile sinirli kalmasihedeflenmemektedir.82TARIFNAME IÇERISINDE ATIF YAPILAN REFERANSLARBasvuru sahibi tarafindan atif yapilan referanslara iliskin bu liste,yalnizca okuyucunun yardimi içindir ve Avrupa Patent Belgesinin birkismini olusturmaz. Her ne kadar referanslarin derlenmesine büyükönem verilmis olsa da, hatalar veya eksiklikler engellenememektedirve EPO bu baglamda hiçbir sorumluluk kabul etmemektedir.Tarifname içerisinde atifta bulunulan patent dökümanlari:° US 61471038 B [0001]° WO 2008006040 A [0004] [0038] ° WO 2010006225 A [0005]° WO 9615111 A [0044]° WO 2007044515 A1 [0046]° US 6960614 B [0047]° US 6972298 B [0047]- US 2004147478 A [0047] . us 2005085550 A [0047] . US 3773919 A [0063] . us 5583024 A i0137i . us 5674713 A [0137] . US 5700670 A i0137i . US 6602677 B [0137]Tarifnamede belirtilen patentlestirilmemis literatür:- HARDIE, G. ; HANKS, S. The Protein Kinase Facts Book. Academic Press, 1995, I, , II [0003]- COH EN, P. Nature Rev. Drug Discovery, 2002, vol. 1, 309 [0003]° Handbook of Pharmaceutical Salts.
Properties, Selection and Use. Zurich: Wiley-VCH, 2002 [0033]0 S. BERGE et al. Journal of Pharmaceutical Sciences, 1977, vol. 66(1),1-19[0033]' LOCHMULLER, C. H. J.
Chromatogr., 1975, vol. 113 (3), 283- 302 [0043]° Drug Stereochemistry, Analytical Methods and Pharmacology. Marcel Dekker, Inc, 1993 [0043]0 E.; WILEN, S. Stereochemistry of Organic Compounds. John Wiley & Sons, Inc, 1994, 322 [0044]° JACOB III. J. Org. Chem., 1982, vol. 47, 4165 [0044] 0 P. GOULD. International J. of Pharmaceutics, 1986, vol. 33 (201), 217 [0033]° ANDERSON et al. The Practice of Medicinal Chemistry. Academic Press, 1996 [0033]° Remingt0n°s Pharmaceutical Sciences. Mack Publishing Co, 1995
[0033] [0064] [0088]0 The Orange Book. Food & Drug Administration [0033]° CHOU ; TALALAY. Adv. Enzyme Regul., 1984, vol. 22, 27-55 [0035]o CHOU ; TALALAY. New Avenues in Developmental Cancer Chemotherapy. Academic Press, 1987
[0035]° LEHAR et al. Molecular Systems Biology, 2007, vol. 3, 80 [0035]0 T. W. GREENE. Protective Groups in Organic Synthesis. John Wiley & Sons, 1991 [0038]o ELIEL, E. ; WILEN, S.
Stereochemistry of Organic Compounds. John Wiley & Sons, Inc, 1994 [0043]83' Chiral Liquid Chromatography.
Chapman and Hall, 1989 [0044]° OKAMOTO. J. of Chromatogr., 1990, vol. 513, 375-378 [0044]0 CHEMICAL ABSTRACTS, 391210- -9 [0047]° Remingtonas Pharinaceutical Sciences. Mack Publ. Co, 1995 [0058]
[0062]- Pharmaceutical Dosage Forins.
Marcel Decker, vol. 3 [0088]' NESHAT, M. S. et al. Enhanced sensitivity of PTEN-deficient tumors to inhibition of FRAP/mTOR. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 2001, vol. 98, 10314- 10319 [0097] [0140]° PERREN, A. Immunohistochemical Evidence of Loss of PTEN Expression in Primary Ductal Adenocarcinomas of the Breast. American Journal of Pathology, October 1999, vol. 155 (4
[0097] [0140]° CROUCH et al. J. lmmunol. Meth., 1993, vol. 160, 81-88 [0137]o CREE et al. AntiCancer Drugs, 1995, vol. 6, 398-404 [0137]SEKILLERDEKI YAZILARIN ANLAMLARISEKIL 1A : GDC - 0068 ve GDC - 0973B : Tümör HacimleriC = Ortalama Tümör Hacmi D = Münferit Tümör Hacmi E = VehikülF : Tümör HacmiG = Test A jamH = Uygulama Yolu1 = ProgramJ : DozK : GünL = Son GünM = (hacim)N = (alt,üst)SEKIL 4O = In Vitro Kolorektal Kanser P = lC50°lerR = Bliss SkorlariS : DokuT = Hücre HattiU :Akt yolagi aktivasyonuV = Ras/Raf aktivasyonuY : digerleriZ : Toplam Pozitif8485A1 = ToplamB1 = KolonCl = moleküler alt- tipDl : PI3K aktivasyonuEl : MAPK aktivasyonuFl = ÇevrimGl = MaksimumHl = PI3K ve Ras yolagi mutasyonlari yüksek siklikta birlikte görülmüslerdirIl = Her iki yolak motasyonunun da bulundugu hücrelerde kuvvetli Sinerji görülmüst'ürJ 1 = AKTZ mutasyonuKl : PI3K MutasyonuSEKIL 5Ll = (kolon - PI3K ve Kras Mutant) in vitro Mek ve Akt KombinasyonuMl : Toplam BlissNl : Pozitif Bliss01 = MinumumPl = Bliss Skoru AraligiR1 = Bliss skoruSl : InhibisyonSEKIL 6Tl = moleküler alt-tip Ul : akcigerV1 : B Lenfoblasti86Y] = Bilinen herhangi bir P13K yolagi mutasyonunun yer almadigi, yalnizca Ras / Raf mutasyonlarinin bulundugu hücreler de dahil test edilen bütün hücrelerde kuvvetli Sinerji görülmüstür.Zl : (NSCLC -Kras Mutant) In Vitro Mek ve Akt KombinasyonuSEKIL 8A2 = MelanomB2 = Normal Fibroblast C2 : yüksekD2 = Siklikla Pten- ile birlikte, bazen P13K mutasyonu veya Akt3 asiri ekspresyonu ile birlikte görülen agirlikli olarak Braf mutasyonu.E2 = Bilinen herhangi bir PI3K yolagi mutasyonunun yer almadigi, yalnizca BRaf mutasyonunun bulundugu hücreler de dahil test edilenbütün melanom hücrelerinde kuvvetli Sinerji görülmüstür.SEKIL 9F2 = Maksimum % InhibisyonG2 : KombinasyonH2 : Sadece12 = A2058 (Melanom - PTEN -/- ve Braf Mutant) In Vitro Mek ve Akt KombinasyonuJ 2 = Minimal In Vitro Tek Ajan AktivitesiSEKIL 10K2 = Tek ajan uygulamalarina kiyasla her iki yolak aktivitesinde de kaydedilen daha kuvvetli knockdownL2 : memeM2 : hücre viyabilitesinin % inhibisyonu87N2 = Bliss ek skoru02 = Kombinasyon etkisi P2 = Akti etkisiR2 : MEKi etkisiSZ : tek ajan etkisiSEKIL 11TZ = SinerjiU2 : MDAMB468ide tek bilesik dozu cevabiV2 = MDAMB468”de normalize edilmis tek bilesik dozu cevabi Y2 = ViyabiliteZZ = Normalize VerilerA3 : BagilB3 : MutlakC3 = kombinasyonSEKIL 12D3 : PTEN yokE3 : Bazal alt - tipF3 = Artan SinerjiG3 = BazalH3 = Lumiiial13 : 0068 + MEKI, bazi meme kanseri hücre hatlarinda iyikombinasyon faydalari göstermektedirler.SEKIL 13 J 3 : Yumurtalik K3 : KOPYA88L3 = P13K ve Ras yolagi mutasyonlari düsük siklikta birlikte görülmüslerdir.M3 = Yumurtalik kanserlerinde Raf-l ve A-Raf aktivasyonu görülmüs ancak Braf aktivasyonu görülmemistir.N3 : Tek basina GDC - 0068 kullanimina ya da her iki ajanin birlikte kullanimina dirençli hücreler de dahil olmak üzere bilinen herhangibir Ras / Raf mutasyonu bulunmayan hücrelerde Sinerji görülmüstür.SEKIL 14 03 = Prostat P3 = Hem PI3K mutasyonu hem de Braf mutasyonu bulunan bir hücrehattinda Sinerji görülmüstür.SEKIL 15 R3 = MX-l Meme Tümörlerinde Oral Dozlanan GDC - 0068 + GDC- 0973 (MEK inhibitörü)SEKIL 16S3 : metil selüloz tweenT3 = H2122 NSCLC Tümörlerinde Oral Dozlananan GDC-0068 + GDC 0973(MEK inhibitörü)SEKIL 17 U3 = SWl99O Pankreas Tümörlerinde Oral Dozlanan GDC-0068+GDC-O973 (MEK inhibitörü)SEKIL 1889V3 = Pa_Tu-8902 Pankreas Tümörlerinde Oral Dozlanan GDC-0068 + GDC-0973 (MEK inhibitör'ü)SEKIL 19 Y3 : 537Mel Melanom Tümörlerinde Ora] Dozlanan GDC-9968 + GDC-0973 (MEK inhibitörü)SEKIL 20 Z3 : A2058 Melanom Tümörlerinde Ora] Dozlanan GDC-0068 + GDC-0973 (M EK inhibitörü)SEKIL 21 A4 : HCT-116 Kolorektal Tüinörlerinde Oral Dozlanan GDC-0068 + GDC-O973 (MEK inhibitörü)SEKIL 22aB4 = Tek Ajan IC50”leriC4 : GenotiplerD4 : Birden Çok Hücre Hattinda GDC-0068 ve GDC-O973Kombinasyonunun SinerjisiSEKIL 22b E4 : Kombinasyon Bliss SkorlariSEKIL 24 F4 = Yarilmis

Claims (3)

ISTEMLER
1. Kolon kanseri, melanom, akciger kanseri ve prostat kanseri arasindan seçilen bir hiperproliferatif hastaligin tedavisinde kullanim için, asagida gösterilen formül I'e sahip olan bir bilesik veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu ile GDC-0973 veya onun bir farmas'otik açidan kabul edilebilir tuzunun bir kombinasyonu:
2. Istein l'e uygun kullanim için, istem l'e uygun koinbinasyon olup, burada hiperproliferatif hastalik kolon kanseri, metastatik melanom ve küçük hücreli olinayan akciger kanseri arasindan seçilir.
3. Istem 1 veya Z'ye uygun kullaniin için, istem l”e veya Z'ye uygun kombinasyon olup, burada: a) formül I bilesigi veya onun tuzu, GDC-O973 veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu ile eszamanli uygulanir; veya b) formül I bilesigi veya onun tuzu ile GDC-0973 veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzu sirayla uygulanirlar; veya c) GÜÇ-0973 veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzunun uygulanmasi, kombinasyonun uygulanmasindan yaklasik 1 ila yaklasik 10 gün önce baslar; veya (1) formül I bilesigi veya onun tuzunun uygulanmasi, kombinasyonun uygulanmasindan yaklasik 1 ilâ yaklasik 10 gün önce baslar; veya e) formül I bilesigi veya onun tuzunun uygulanmasi ile GDC-O973 veya onun bir farmasötik açidan kabul edilebilir tuzunun uygulanmasi ayni gün baslarlar.
TR2018/15685T 2011-04-01 2012-03-30 Kanser tedavisi için akt ve mek inhibe edici bileşiklerin kombinasyonları. TR201815685T4 (tr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161471038P 2011-04-01 2011-04-01

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201815685T4 true TR201815685T4 (tr) 2018-11-21

Family

ID=46931964

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2018/15685T TR201815685T4 (tr) 2011-04-01 2012-03-30 Kanser tedavisi için akt ve mek inhibe edici bileşiklerin kombinasyonları.

Country Status (16)

Country Link
US (1) US9682082B2 (tr)
EP (1) EP2694073B1 (tr)
JP (1) JP6147246B2 (tr)
KR (1) KR20140022053A (tr)
CN (2) CN110433165A (tr)
AU (1) AU2012236164A1 (tr)
BR (1) BR112013025397A2 (tr)
CA (1) CA2831932A1 (tr)
ES (1) ES2688809T3 (tr)
IL (1) IL228643A0 (tr)
MX (1) MX2013011333A (tr)
PL (1) PL2694073T3 (tr)
RU (1) RU2013148817A (tr)
SG (1) SG194047A1 (tr)
TR (1) TR201815685T4 (tr)
WO (1) WO2012135779A1 (tr)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2776944A1 (en) * 2009-10-12 2011-05-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Combinations of a pi3k inhibitor and a mek inhibitor
CA2894153A1 (en) * 2012-12-07 2014-06-12 The General Hospital Corporation Combinations of a pi3k/akt inhibitor compound with an her3/egfr inhibitor compound and use thereof in the treatment of a hyperproliferative disorder
EP2959014B1 (en) * 2013-02-25 2019-11-13 Genentech, Inc. Methods and compositions for detecting and treating drug resistant akt mutant
WO2015035146A2 (en) * 2013-09-05 2015-03-12 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Ddx43 as a biomarker of resistance to mek1/2 inhibitors
EP3897612A1 (en) 2018-12-19 2021-10-27 Genentech, Inc. Treatment of breast cancer using combination therapies comprising an akt inhibitor, a taxane, and a pd-l1 inhibitor
KR20230048476A (ko) * 2020-04-03 2023-04-11 베이진 리미티드 암 치료 시에 사용하기 위한 미르다메티닙과 리피라페닙의 공동 투여
US11066358B1 (en) * 2021-02-17 2021-07-20 Warner-Lambert Company Llc Compositions of essentially pure form IV of N-((R)-2,3-dihydroxypropoxy)-3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-iodo-phenylamino)-benzamide and uses thereof
US11084780B1 (en) * 2021-02-17 2021-08-10 Springworks Therapeutics, Inc. Crystalline solids of MEK inhibitor N-((R)-2,3-dihydroxypropoxy)-3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-iodo-phenylamino)-benzamide and uses thereof

Family Cites Families (107)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US3885035A (en) 1972-04-05 1975-05-20 Sandoz Ag Method for treating arrhythmia by using 1,4-bis(4 quinazolinyl) piperazines
US3956495A (en) 1973-10-30 1976-05-11 Eli Lilly And Company 2,4-Diaminoquinazolines as antithrombotic agents
US3966936A (en) 1974-02-21 1976-06-29 Pfizer Inc. Piperazino quinazoline bronchodilators
US4060615A (en) 1976-02-18 1977-11-29 Mead Johnson & Company 2-Piperazinyl-6,7-dimethoxyquinazolines
JPS562968A (en) 1979-06-21 1981-01-13 Mitsubishi Yuka Yakuhin Kk Novel pyrimidine derivative
JPS6270A (ja) 1985-03-07 1987-01-06 Sankyo Co Ltd シクロペンタ〔ｄ〕ピリミジン誘導体
US5583024A (en) 1985-12-02 1996-12-10 The Regents Of The University Of California Recombinant expression of Coleoptera luciferase
WO1987004928A1 (en) 1986-02-24 1987-08-27 Mitsui Petrochemical Industries, Ltd. Agents for treating neurophathy
US4871739A (en) 1987-01-21 1989-10-03 Merck & Co., Inc. Substituted 6H-7,8-dihydrothiapyrano(3,2-D)-pyrimidines as hyopglycemic agents
US4889856A (en) 1987-08-31 1989-12-26 Merck & Co., Inc. 7,8-dihydro-4-(1-pierazinyl)-6H-thiopyrano-[3,2-d] pyrimidines as β-blockers
US4994464A (en) 1987-08-31 1991-02-19 Merck & Co., Inc. Piperazinylpyrimidines as β-adrenergic receptor blockers
MX19185A (es) 1989-01-20 1993-12-01 Pfizer Procedimiento para preparar 3-(1,2,5,6-tretrahidropiridil)-pirrolopiridinas.
KR100262254B1 (ko) 1992-10-05 2000-07-15 나카히로 마오미 피리미딘 화합물
WO1995003286A1 (fr) 1993-07-23 1995-02-02 The Green Cross Corporation Derive de triazole et son utilisation pharmaceutique
GB9416189D0 (en) 1994-08-10 1994-09-28 Merck Sharp & Dohme Therapeutic agents
EP0775120B1 (en) 1994-08-13 2003-06-04 Yuhan Corporation Novel pyrimidine derivatives and processes for the preparation thereof
US5543523A (en) 1994-11-15 1996-08-06 Regents Of The University Of Minnesota Method and intermediates for the synthesis of korupensamines
US5525625A (en) 1995-01-24 1996-06-11 Warner-Lambert Company 2-(2-Amino-3-methoxyphenyl)-4-oxo-4H-[1]benzopyran for treating proliferative disorders
JPH08336393A (ja) 1995-04-13 1996-12-24 Mitsubishi Chem Corp 光学活性なγ−置換−β−ヒドロキシ酪酸エステルの製造法
US7067664B1 (en) 1995-06-06 2006-06-27 Pfizer Inc. Corticotropin releasing factor antagonists
ZA979961B (en) 1996-11-15 1999-05-05 Lilly Co Eli 5-HT1F agonists
UA73073C2 (uk) 1997-04-03 2005-06-15 Уайт Холдінгз Корпорейшн Заміщені 3-ціанохіноліни, спосіб їх одержання та фармацевтична композиція
ATE277895T1 (de) 1997-07-01 2004-10-15 Warner Lambert Co 4-brom or 4-iod-phenylamino- benzhydroxamsäurederivate und ihre anwendung als mek-inhibitoren
US6310060B1 (en) 1998-06-24 2001-10-30 Warner-Lambert Company 2-(4-bromo or 4-iodo phenylamino) benzoic acid derivatives and their use as MEK inhibitors
WO1999001421A1 (en) 1997-07-01 1999-01-14 Warner-Lambert Company 2-(4-bromo or 4-iodo phenylamino) benzoic acid derivatives and their use as mek inhibitors
US6506798B1 (en) 1997-07-01 2003-01-14 Warner-Lambert Company 4-Arylamino, 4-aryloxy, and 4-arylthio diarylamines and derivatives thereof as selective MEK inhibitors
US6821963B2 (en) 1997-07-01 2004-11-23 Warner-Lambert Company 4-Bromo or 4-iodo phenylamino benzhydroxamic acid derivatives and their use as MEK inhibitors
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
ES2356886T3 (es) 1998-03-31 2011-04-14 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Compuestos heterocíclicos nitrogenados.
DE19853278A1 (de) 1998-11-19 2000-05-25 Aventis Pharma Gmbh Substituierte 4-Amino-2-aryl-cyclopenta[d]pyrimidine, ihre Herstellung, ihre Verwendung und sie enthaltende pharmazeutische Präparate
HUP0104933A3 (en) 1999-01-07 2003-12-29 Warner Lambert Co Antiviral method using mek inhibitors
AU2483000A (en) 1999-01-07 2000-07-24 Warner-Lambert Company Treatment of asthma with mek inhibitors
WO2000041505A2 (en) 1999-01-13 2000-07-20 Warner-Lambert Company Anthranilic acid derivatives
CA2348236A1 (en) 1999-01-13 2000-07-20 Stephen Douglas Barrett 4-arylamino, 4-aryloxy, and 4-arylthio diarylamines and derivatives thereof as selective mek inhibitors
IL144215A0 (en) 1999-01-13 2002-05-23 Warner Lambert Co 1-heterocycle substituted diarylamines
JP4621355B2 (ja) 1999-01-13 2011-01-26 ワーナー−ランバート カンパニー リミテッド ライアビリティー カンパニー ベンゾ複素環およびｍｅｋ阻害剤としてのその使用
EP1144371B1 (en) 1999-01-13 2005-11-09 Warner-Lambert Company Llc Benzenesulphonamide derivatives and their use as mek inhibitors
WO2000042002A1 (en) 1999-01-13 2000-07-20 Warner-Lambert Company Sulphohydroxamic acids and sulphohydroxamates and their use as mek inhibitors
GB9910577D0 (en) 1999-05-08 1999-07-07 Zeneca Ltd Chemical compounds
KR20020016899A (ko) 1999-07-16 2002-03-06 로즈 암스트롱, 크리스틴 에이. 트러트웨인 Ｍｅｋ 억제제를 사용한 만성 동통의 치료 방법
HUP0202319A3 (en) 1999-07-16 2004-12-28 Warner Lambert Co Use of mek inhibitors for the preparation of pharmaceutical compositions treating chronic pain
AU5786000A (en) 1999-07-16 2001-02-05 Warner-Lambert Company Method for treating chronic pain using mek inhibitors
KR20020015379A (ko) 1999-07-16 2002-02-27 로즈 암스트롱, 크리스틴 에이. 트러트웨인 엠이케이 억제제를 사용하는 만성 동통의 치료방법
JP2003527379A (ja) 2000-03-15 2003-09-16 ワーナー−ランバート・カンパニー、リミテッド、ライアビリティ、カンパニー Ｍｅｘ阻害物質としての５−アミド置換ジアリールアミン類
CN1219753C (zh) 2000-07-19 2005-09-21 沃尼尔·朗伯公司 4－碘苯氨基苯氧肟酸的氧合酯
CZ2003477A3 (cs) 2000-08-25 2003-10-15 Warner - Lambert Company Llc Způsob přípravy N-aryl-anthranilových kyselin a jejich derivátů
EP1317450B1 (en) 2000-09-15 2006-11-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors
US7067532B2 (en) 2000-11-02 2006-06-27 Astrazeneca Substituted quinolines as antitumor agents
WO2002083139A1 (en) 2001-04-10 2002-10-24 Merck & Co., Inc. Inhibitors of akt activity
PL366934A1 (en) 2001-04-30 2005-02-07 Glaxo Group Limited Fused pyrimidines as antagonists of the corticotropin releasing factor (crf)
US7115741B2 (en) 2001-09-06 2006-10-03 Levy Daniel E 4-thieno[2,3-D]pyrimidin-4-YL piperazine compounds
AU2002357043B2 (en) 2001-12-06 2008-04-24 Merck Sharp & Dohme Corp. Mitotic kinesin inhibitors
US20030187026A1 (en) 2001-12-13 2003-10-02 Qun Li Kinase inhibitors
MXPA04007191A (es) 2002-01-23 2005-03-31 Bayer Pharmaceuticals Corp Derivados de pirimidina como inhibidores de rho-quinasa.
TW200306819A (en) 2002-01-25 2003-12-01 Vertex Pharma Indazole compounds useful as protein kinase inhibitors
AR038972A1 (es) 2002-03-13 2005-02-02 Array Biopharma Inc Derivados de bencimidazol n3 alquilado como inhibidores de mek
PT3000810T (pt) 2002-03-13 2017-10-25 Array Biopharma Inc Derivados de benzimidazole alquilado n3 como inibidores de mek
US7235537B2 (en) 2002-03-13 2007-06-26 Array Biopharma, Inc. N3 alkylated benzimidazole derivatives as MEK inhibitors
AU2003226250B2 (en) 2002-04-08 2007-08-16 Merck Sharp & Dohme Corp. Inhibitors of Akt activity
US7273869B2 (en) 2002-04-08 2007-09-25 Merck & Co., Inc. Inhibitors of Akt activity
CA2480880C (en) 2002-04-08 2011-03-22 Merck & Co., Inc. Inhibitors of akt activity
JP4394960B2 (ja) 2002-04-08 2010-01-06 メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド Ａｋｔ活性阻害薬
AU2003230367A1 (en) 2002-05-10 2003-11-11 Neurocrine Biosciences, Inc. Substituted piperazine as melanocortin receptors ligands
DE60336576D1 (de) 2002-10-30 2011-05-12 Merck Sharp & Dohme Hemmer der akt aktivität
US20040102360A1 (en) 2002-10-30 2004-05-27 Barnett Stanley F. Combination therapy
NZ539823A (en) 2002-11-28 2008-04-30 Schering Aktiengessellschaft Chk-, Pdk- and Akt-inhibitory pyrimidines, their production and use as pharmaceutical agents
GB0308208D0 (en) 2003-04-09 2003-05-14 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
EP1620095A4 (en) 2003-04-24 2009-04-01 Merck & Co Inc INHIBITORS OF AKT ACTIVITY
EP1646615B1 (en) 2003-06-06 2009-08-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrimidine derivatives as modulators of atp-binding cassette transporters
CA2554566A1 (en) 2003-08-05 2005-02-17 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Condensed pyramidine compounds as inhibitors of voltage-gated ion channels
JP2007501821A (ja) 2003-08-12 2007-02-01 エフ．ホフマン−ラ　ロシュ　アーゲー Ｃｆｒアンタゴニストとしてのテトラヒドロキナゾリン誘導体
BRPI0414238A (pt) 2003-09-09 2006-10-31 Ono Pharmaceutical Co antagonistas de crf e compostos heterobicìclicos
WO2005039564A1 (en) 2003-10-02 2005-05-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Phthalimide compounds useful as protein kinase inhibitors
CA2542210A1 (en) 2003-10-21 2005-05-06 Warner-Lambert Company Llc Polymorphic form of n-[(r)-2,3-dihydroxy-propoxy]-3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-iodophenylamino)-benzamide
AU2004293026B2 (en) 2003-11-21 2012-01-19 Array Biopharma Inc. AKT protein kinase inhibitors
CA2563699C (en) 2004-04-23 2014-03-25 Exelixis, Inc. Kinase modulators and method of use
ATE464303T1 (de) 2004-04-28 2010-04-15 Vertex Pharma Als inhibitoren von rock und anderen proteinkinasen geeignete zusammensetzungen
WO2006000589A1 (en) 2004-06-28 2006-01-05 Altana Pharma Ag 4,6-disubstituted pyrimidines and their use as protein kinase inhibitors
US20060025074A1 (en) 2004-07-30 2006-02-02 Chih-Ming Liang Bluetooth-based headset
TWM266655U (en) 2004-09-23 2005-06-01 Blueexpert Technology Corp Bluetooth earphone device capable of wirelessly receiving and transmitting stereo sound signal and digital information signal
TW200621257A (en) 2004-10-20 2006-07-01 Astellas Pharma Inc Pyrimidine derivative fused with nonaromatic ring
UY29177A1 (es) 2004-10-25 2006-05-31 Astex Therapeutics Ltd Derivados sustituidos de purina, purinona y deazapurina, composiciones que los contienen métodos para su preparación y sus usos
US7994172B2 (en) 2004-12-28 2011-08-09 Exelixis, Inc. [1H-pyrazolo[3, 4-D]pyrimidin-4-yl]-piperidine or -piperazine compounds as serine-theoronine kinase modulators (P70s6k, Atk1 and Atk2) for the treatment of immunological, inflammatory and proliferative diseases
WO2006090261A1 (en) 2005-02-24 2006-08-31 Pfizer Products Inc. Bicyclic heteroaromatic derivatives useful as anticancer agents
US20090131474A1 (en) 2005-03-03 2009-05-21 Martino Forino Screening methods for protein kinase b inhibitors employing virtual docking approaches and compounds and compositions discovered thereby
MX2007014619A (es) 2005-05-20 2009-02-13 Vertex Pharma Pirrolopiridinas de utilidad como inhibidores de proteina quinasa.
AR054485A1 (es) 2005-06-21 2007-06-27 Cancer Rec Tech Ltd ARIL-ALQUILAMINAS Y HETEROARIL-ALQUILAMINAS COMO INHIBIDORES DE PROTEINA QUINASA A Y B, UN PROCESO PARA SU PREPARACION, COMPOSICIONES FARMACEUTICAS QUE LAS CONTIENEN Y SU USO EN LA FABRICACIoN DE MEDICAMENTOS PARA EL TRATAMIENTO O PROFILAXIS DE ENFERMEDADES ORIGINADAS EN EL CRECIMIENTO ANORMAL DE LA
PL1934174T3 (pl) * 2005-10-07 2011-09-30 Exelixis Inc Azetydyny jako inhibitory w leczeniu chorób proliferacyjnych
BRPI0617241A2 (pt) 2005-10-13 2016-11-08 Glaxo Group Ltd composto ou um sal ou solvato do mesmo, composição farmacêutica, método para tratar uma doença ou condição mediada por atividade syk inadequada em um mamífero, e, uso de um composto ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo
US20090253687A1 (en) 2005-12-28 2009-10-08 Shoji Fukumoto Fused Heterocyclic Compounds and Their Use as Mineralocorticoid Receptor Ligands
EP2013206A1 (en) 2006-04-25 2009-01-14 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical compounds
KR20090024834A (ko) 2006-07-05 2009-03-09 인터뮨, 인크. Ｃ형 간염 바이러스 복제의 신규 억제제
GB0613518D0 (en) 2006-07-06 2006-08-16 Phytopharm Plc Chemical compounds
TW200808325A (en) 2006-07-06 2008-02-16 Astrazeneca Ab Novel compounds
UA95641C2 (en) * 2006-07-06 2011-08-25 Эррей Биофарма Инк. Hydroxylated cyclopenta [d] pyrimidines as akt protein kinase inhibitors
PT2049478E (pt) 2006-07-06 2012-07-16 Glaxo Group Ltd N-fenilmetil-5-oxo-prolina-2-amidas substituídas como antagonistas do recetor p2x7 e seus métodos de utilização
UA99597C2 (ru) 2006-07-06 2012-09-10 Еррей Біофарма Інк. Пиримидилциклопентаны как ингибиторы акт протеинкиназ
WO2008006039A1 (en) 2006-07-06 2008-01-10 Array Biopharma Inc. Dihydrothieno pyrimidines as akt protein kinase inhibitors
US7910747B2 (en) 2006-07-06 2011-03-22 Bristol-Myers Squibb Company Phosphonate and phosphinate pyrazolylamide glucokinase activators
US8063050B2 (en) 2006-07-06 2011-11-22 Array Biopharma Inc. Hydroxylated and methoxylated pyrimidyl cyclopentanes as AKT protein kinase inhibitors
WO2008012635A2 (en) 2006-07-26 2008-01-31 Pfizer Products Inc. Amine derivatives useful as anticancer agents
CN101605540A (zh) 2006-12-14 2009-12-16 埃克塞利希斯股份有限公司 使用mek抑制剂的方法
RU2523890C2 (ru) 2007-09-12 2014-07-27 Дженентек, Инк. Комбинации ингибиторов фосфоинозитид 3-киназы и химиотерапевтических агентов и способы применения
WO2010006225A1 (en) * 2008-07-11 2010-01-14 Novartis Ag Combination of (a) a phosphoinositide 3-kinase inhibitor and (b) a modulator of ras/raf/mek pathway
PE20110403A1 (es) * 2008-07-31 2011-07-04 Genentech Inc Compuestos biciclicos fusionados de pirimidina en el tratamiento del cancer
JP2013505939A (ja) * 2009-09-23 2013-02-21 グラクソスミスクライン・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー 組合せ

Also Published As

Publication number Publication date
IL228643A0 (en) 2013-12-31
US9682082B2 (en) 2017-06-20
MX2013011333A (es) 2014-04-16
WO2012135779A1 (en) 2012-10-04
JP6147246B2 (ja) 2017-06-14
RU2013148817A (ru) 2015-05-10
US20140155372A1 (en) 2014-06-05
CN103841976A (zh) 2014-06-04
JP2014512355A (ja) 2014-05-22
NZ617243A (en) 2016-02-26
ES2688809T3 (es) 2018-11-07
EP2694073B1 (en) 2018-08-08
EP2694073A1 (en) 2014-02-12
AU2012236164A1 (en) 2013-11-21
SG194047A1 (en) 2013-11-29
CN110433165A (zh) 2019-11-12
CA2831932A1 (en) 2012-10-04
BR112013025397A2 (pt) 2019-09-24
EP2694073A4 (en) 2014-09-03
KR20140022053A (ko) 2014-02-21
PL2694073T3 (pl) 2019-06-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2694485B1 (en) Combination of akt inhibitor compound and vemurafenib for use in therapeutic treatments
TWI694076B (zh) ***并嘧啶化合物及其用途
KR101506062B1 (ko) 혈관 저해 물질과 탁산의 병용
TR201815685T4 (tr) Kanser tedavisi için akt ve mek inhibe edici bileşiklerin kombinasyonları.
CN109790166A (zh) 咪唑并吡啶化合物用于治疗癌症
CN101222850B (zh) 治疗对药物有抗性的癌症的方法
CN101340909A (zh) 抑制flt3激酶的方法
US9573899B2 (en) USP7 inhibitor compounds and methods of use
CN104394855A (zh) 用于测定肝细胞癌(hcc)患者的治疗的有效响应的生物标记
AU2022243600A1 (en) Alk-5 inhibitors and uses thereof
US9566334B2 (en) Combinations of a PI3K/AKT inhibitor compound with an HER3/EGFR inhibitor compound and use thereof in the treatment of a hyperproliferative disorder
NZ617243B2 (en) Combinations of akt and mek inhibitor compounds, and methods of use