KR20140022053A - Akt 및 mek 억제제 화합물의 조합물, 및 사용 방법 - Google Patents

Akt 및 mek 억제제 화합물의 조합물, 및 사용 방법 Download PDF

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KR20140022053A
KR20140022053A KR1020137029126A KR20137029126A KR20140022053A KR 20140022053 A KR20140022053 A KR 20140022053A KR 1020137029126 A KR1020137029126 A KR 1020137029126A KR 20137029126 A KR20137029126 A KR 20137029126A KR 20140022053 A KR20140022053 A KR 20140022053A
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쿠이 린
미셸 난니니
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제넨테크, 인크.
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Abstract

본 발명은 a) 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 GDC-0973, PD-0325901로부터 선택된 또 다른 작용제 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 조합물을 제공한다.
<화학식 I>
Figure pct00010

상기 조합물은 과다증식성 장애, 예컨대 암을 치료하는데 특히 유용하다.

Description

AKT 및 MEK 억제제 화합물의 조합물, 및 사용 방법 {COMBINATIONS OF AKT AND MEK INHIBITOR COMPOUNDS, AND METHODS OF USE}
본 발명의 우선권
본원은 2011년 4월 1일 출원된 미국 가출원 번호 61/471,038에 대해 우선권을 주장한다. 이 가출원의 전체 내용은 이로써 본원에 참조로 포함된다.
발명의 분야
본 발명은 일반적으로 과다증식성 장애, 예를 들면 암에 대해 활성을 가지며, AKT 키나제 활성을 억제하는 화합물을 포함하는 화합물의 제약 조합물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 조합물을 포유동물 세포, 또는 연관된 병리학적 상태의 시험관내, 계내(in situ), 및 생체내 진단 또는 치료를 위해 사용하는 방법에 관한 것이다.
발명의 배경
단백질 키나제 (PK)는 ATP로부터의 말단 (감마) 포스페이트의 전달에 의한 단백질의 티로신, 세린 및 트레오닌 잔기 상의 히드록시 기의 인산화를 촉매화하는 효소이다. 신호 전달 경로를 통해, 이들 효소는 세포 성장, 분화 및 증식을 조정하며, 즉 실질적으로 세포 생명의 모든 측면은 어떻게든 PK 활성에 의존한다 (문헌 [Hardie, G. and Hanks, S. (1995) The Protein Kinase Facts Book. I and II, Academic Press, San Diego, CA]). 추가로, 비정상적 PK 활성은 상대적으로 생명을 위협하지 않는 질환, 예를 들면 건선에서부터 극히 치명적인 질환, 예를 들면 교모세포종 (뇌암)에 이르는 다수의 장애에 관련되어 왔다. 단백질 키나제는 치료적 조절을 위한 중요한 표적 부류이다 (문헌 [Cohen, P. (2002) Nature Rev. Drug Discovery 1:309]).
국제 특허 출원 공개 번호 WO 2008/006040은, 화합물 (S)-2-(4-클로로페닐)-1-(4-((5R,7R)-7-히드록시-5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-3-(이소프로필아미노)프로판-1-온 (하기 화학식 I)을 비롯한 다수의 AKT의 억제제를 개시한다.
<화학식 I>
Figure pct00001
현재, 과다증식성 질환, 예를 들면 암을 치료하는데 사용될 수 있는 개선된 방법 및 조성물에 대한 필요성이 남아있다.
발명의 개요
암 세포의 성장을 시험관내 및 생체내에서 억제하는 상가적 또는 상승작용적 효과는 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 특정 다른 특이적 작용제와 조합하여 투여함으로써 달성될 수 있다는 것이 결정되었다. 조합 및 방법은 과다증식성 장애, 예를 들면 암의 치료에 유용할 수 있다.
따라서, 본 발명의 특정 실시양태는 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 GDC-0973, PD-0325901로부터 선택된 또 다른 작용제 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서의 과다증식성 장애를 치료하기 방법을 제공한다.
<화학식 I>
Figure pct00002
특정 실시양태에서, 과다증식성 장애는 암이다.
특정 실시양태에서, 암은 PTEN 돌연변이와 연관된다.
특정 실시양태에서, 암은 AKT 돌연변이, 과다발현 또는 증폭과 연관된다.
특정 실시양태에서, 암은 PI3K 돌연변이와 연관된다.
특정 실시양태에서, 암은 Her2/ErbB2 증폭과 연관된다.
특정 실시양태에서, 암은 중피종, 자궁내막암, 췌장암, 유방암, 폐암, 난소암, 전립선암, 흑색종, 위암, 결장암, 신장암, 두경부암, 및 신경아교종으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 GDC-0973 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 투여된다.
특정 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 PD-0325901 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 투여된다.
특정 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 염은 하나 이상의 작용제와 동시에 투여된다.
특정 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 염 및 하나 이상의 작용제는 순차적으로 투여된다.
특정 실시양태에서, 하나 이상의 작용제의 투여를 조합물의 투여 전 약 1일 내지 약 10일에 개시한다.
특정 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 염의 투여를 조합물의 투여 전 약 1일 내지 약 10일에 개시한다.
특정 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 염의 투여 및 하나 이상의 작용제의 투여를 동일한 날에 개시한다.
본 발명의 특정 실시양태는 과다증식성 장애에 대해 GDC-0973, PD-0325901로부터 선택된 작용제로 치료받는 환자의 삶의 질을 향상시키기 위한 치료 용도의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
본 발명의 특정 실시양태는 a) 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 b) GDC-0973, PD-0325901로부터 선택된 하나 이상의 작용제를 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 AKT 키나제에 의해 조절되는 질환 또는 상태를 치료하기 위한 방법을 제공한다.
본 발명의 특정 실시양태는 a) 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 b) GDC-0973 및 PD-0325901로부터 선택된 하나 이상의 작용제의, 과다증식성 장애를 치료하기 위한 조합물을 제공한다.
본 발명의 특정 실시양태는 a) 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 b) GDC-0973 및 PD-0325901로부터 선택된 하나 이상의 작용제의, AKT 키나제에 의해 조절되는 질환 또는 상태를 치료하기 위한 조합물을 제공한다.
본 발명의 특정 실시양태는 포유동물에서 과다증식성 장애의 치료를 위한 의약의 제조에서의, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 GDC-0973 및 PD-0325901의 조합물의 용도를 제공한다.
본 발명의 특정 실시양태는 포유동물에서 AKT 키나제에 의해 조절되는 질환 또는 상태의 치료를 위한 의약의 제조에서의, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 GDC-0973 및 PD-0325901의 조합물의 용도를 제공한다.
본 발명의 특정 실시양태는 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 용기, 및 화학식 I의 화합물과 GDC-0973 및 PD-0325901로부터 선택된 하나 이상의 작용제의 투여를 지시하는 포장 삽입물 또는 표지를 포함하는, 과다증식성 장애를 치료하기 위한 키트를 제공한다.
본 발명의 특정 실시양태는 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 GDC-0973 및 PD-0325901로부터 선택된 하나 이상의 작용제를 과다증식성 장애의 치료에서 분리, 동시 또는 순차적 사용을 위한 조합 제제로서 포함하는 생성물을 제공한다.
상승작용/상가작용이, GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물을, 시험관내 흑색종, 폐암, 결장암, 난소암, 신장암, 유방암, 전립선암, 췌장암 세포주를 비롯한 다수의 세포 유형에 있어서 투여할 때 나타나서, 이러한 발견을 생체내 흑색종, 결장암 및 폐 이종이식편 모델에서 확인하였다. 상승작용은 Ras/Raf 즉 2가지 경로 활성화에 의해 작동되는 종양 유형에서 나타난다. 흑색종, 폐암 (예, NSCLC) 및 결장암 세포주는 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물이 다양한 세포에 투여될 때 상승작용을 나타낸다. 유방암 세포 (관강내 (ER+), Her2+, 및 기저성 삼중 음성 유방암을 포함함)도 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물이 투여될 때 상승작용을 입증할 수 있다. 심지어 Meki 단독에 민감한 세포에서도 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물이 투여될 때 상승작용이 관찰된다.
암 세포의 돌연변이 상태는 암 세포가 상이한 처치 프로토콜에 어떻게 반응할 것인지에 대한 바이오마커임이 밝혀졌다. 예를 들어, Kras 및/또는 Braf 돌연변이와 함께 PI3K 경로 (예 PI3K 또는 AKT) 돌연변이를 갖는 암 세포는 본원에 기재된 조합 치료에 양성 (예, 상승작용적) 반응을 나타낼 수 있다. 추가로, 암 세포의 PTEN 상태도 바이오마커이다. 따라서, 본 발명의 특정 실시양태는 이들 바이오마커의 조합과 이들 조합 치료를 갖는 암 세포의 치료 방법 (시험관내 또는 생체내)을 포함한다. 본 발명의 특정 실시양태는 이들 바이오마커의 조합을 갖는 조합 치료를 위한 환자를 선택하는 것을 포함한다.
A2058 (PTEN 없음(null)/Braf 돌연변이체) 흑색종 모델에서 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물로 강한 상승작용이 나타난다. 비교할 만한 단일 작용제 종양 성장 억제 (TGI)가 모든 투여량의 GDC-0973 및 보다 고투여량의 GDC-0068 (75 및 100 mg/kg)으로 나타난다. 50 mg/kg의 GDC-0068으로는 TGI가 나타나지 않는다. 두 약물의 조합은 상기 모델에서 최대 중량 감소 ~13%로 만족스럽게 허용되었다.
주어진 과다증식성 장애에 대한 개선된 치료를 제공함에 추가로, 본 발명의 특정 조합물의 투여는 상이한 치료를 받는 동일한 환자에 의해 경험되는 삶의 질에 비교하여 환자에 대한 삶의 질을 개선시킬 수 있다. 예를 들어, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 본원에 기재된 바와 같은 화학요법제의 조합물의 환자에의 투여는 동일한 환자가 요법으로서 화학요법제만을 받는 경우 경험하는 삶의 질에 비교하여 개선된 삶의 질을 제공할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 조합물을 사용하는 조합 요법은 필요한 화학요법제의 용량을 낮출 수 있으며, 이에 따라 고-용량 화학요법제와 연관된 부작용 (예를 들면, 오심, 구토, 탈모, 발진, 감소된 식욕, 체중 감소, 등)을 낮춘다. 조합물은 또한 감소된 종양 부담 및 연관된 유해 사례, 예를 들면 통증, 기관 기능장애, 체중 감소 등을 야기할 수 있다. 따라서, 본 발명의 한 측면은 본원에 기재된 작용제로 과다증식성 장애에 대해 치료받는 환자의 삶의 질을 개선시키기 위한 치료 용도를 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
도면의 간단한 설명
도 1은 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물 (2.5 mg/kg )의 종양 부피에 대한 결과를 나타낸다.
도 2는 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물 (5.0 mg/kg )의 종양 부피에 대한 결과를 나타낸다.
도 3은 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물 (7.5 mg/kg )의 종양 부피에 대한 결과를 나타낸다.
도 4는 시험관내에서 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물의 결장직장암 세포주에 대한 결과를 나타낸다.
도 5는 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물의 HCT-116 (결장 - PI3K 및 Kras 돌연변이체)에 대한 결과를 나타낸다. HCT-116 세포에서의 세포 생존율에 대한 조합 효과를 나타내는 2-차원 (2D) 열지도를 도시한다. GDC-0068의 농도 증가는 x-축 상에 나타내고, GDC-0973의 농도 증가는 y-축 상에 나타낸다. 억제 백분율 (% 억제) 열지도는 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합으로 또는 단일 작용제로서 각 농도에서의 억제 백분율을 나타내면서 우측에 나타내며; 비히클 (DMSO)에 노출시킨 대조군을 0으로 설정한다. BLISS 스코어는 각 용량 쌍에 대해 산출하여 열지도를 우측에 나타낸다.
도 6은 시험관내에서 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물의 NSCLC 세포주에 대한 결과를 나타낸다.
도 7은 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물의 H2122 (NSCLC - Kras 돌연변이체)에 대한 결과를 나타낸다. NCI-H2122 세포에서의 세포 생존율에 대한 조합 효과를 나타내는 2-차원 (2D) 열지도를 도시한다. GDC-0068의 농도 증가는 x-축 상에 나타내고, GDC-0973의 농도 증가는 y-축 상에 나타낸다. 억제 백분율 (% 억제) 열지도는 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합으로 또는 단일 작용제로서 각 농도에서의 억제 백분율을 나타내면서 우측에 나타내며; 비히클 (DMSO)에 노출시킨 대조군을 0으로 설정한다. BLISS 스코어는 각 용량 쌍에 대해 산출하여 열지도를 우측에 나타낸다.
도 8은 시험관내에서 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물의 흑색종 세포주에 대한 결과를 나타낸다.
도 9는 GDC-0068 및 GDC-0973의 단일 작용제 및 조합물의 A2058 (흑색종 - PTEN-/- 및 Braf 돌연변이체)에 대한 결과를 나타낸다. A2058 세포에서의 세포 생존율에 대한 조합 효과를 나타내는 2-차원 (2D) 열지도를 도시한다. BLISS 스코어는 각 용량 쌍에 대해 산출하여 열지도를 우측에 나타낸다. GDC-0068의 농도 증가는 x-축 상에 나타내고, GDC-0973의 농도 증가는 y-축 상에 나타낸다. 억제 백분율 (% 억제) 열지도는 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합으로 또는 단일 작용제로서 각 농도에서의 억제 백분율을 나타내면서 우측에 나타내며; 비히클 (DMSO)에 노출시킨 대조군을 0으로 설정한다.
도 10은 단일 작용제와 비교하여 AKT 및 MEK 경로 활성의 증대된 넉다운을 나타낸다.
도 11은 GDC-0973 및 GDC-0068의 조합물의 MDA-MB-468 유방암 세포주에 대한 결과를 나타낸다.
도 12는 시험관내에서 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물의 유방암 세포주에 대한 결과를 나타낸다.
도 13은 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물의 난소암에 대한 결과를 나타낸다.
도 14는 시험관내에서 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물의 전립선암 세포주에 대한 결과를 나타낸다.
도 15는 MX-1 유방 종양에서 GDC-0068 (PO 투여) + GDC-0973 (MEK 억제제)의 조합물의 결과를 나타낸다.
도 16은 H2122 NSCLC 종양에서 GDC-0068 (PO 투여) + GDC-0973 (MEK 억제제)의 조합물의 결과를 나타낸다.
도 17은 SW1990 췌장 종양에서 GDC-0068 (PO 투여) + GDC-0973 (MEK 억제제)의 조합물의 결과를 나타낸다.
도 18은 Pa_Tu-8902 췌장 종양에서 GDC-0068 (PO 투여) + GDC-0973 (MEK 억제제)의 조합물의 결과를 나타낸다.
도 19는 537Mel 흑색종 종양에서 GDC-0068 (PO 투여) + GDC-0973 (MEK 억제제)의 조합물의 결과를 나타낸다.
도 20은 A2058 흑색종 종양에서 GDC-0068 (PO 투여) + GDC-0973 (MEK 억제제)의 조합물의 결과를 나타낸다.
도 21은 HCT-116 결장직장 종양에서 GDC-0068 (PO 투여) + GDC-0973 (MEK 억제제)의 조합물의 결과를 나타낸다.
도 22a-22b는 단일 작용제 및 조합 요법을 포함하는 다양한 세포주의 세포 생존율의 억제 결과를 나타낸다. GDC-0068 세포 효능은 PI3K/PTEN/HER2의 변형으로 인한 Akt 활성화와 상관관계에 있는 반면, GDC-0973 세포 효능은 RAS 또는 B-RAF 돌연변이로 인한 MEK 활성화와 상관관계에 있다. GDC-0068- 및 GDC-0973-감수성 세포주는 종종 상호 배타적이다. 시험한 세포주의 약 3분의 1은 두 작용제에 대해 내성을 나타낸다 (도 22a-22b 참조). GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물은 각 단일 작용제 단독과 비교하여 시험한 대부분의 세포주에서 세포 생존율의 억제가 증대되었다. 조합 효과는 BLISS 독립 모델 (Lehar et al. 2007)을 이용하여 계산하였다.
도 22a 상단 그래프는 다중 암 세포주에서 GDC-0068 및 GDC-0973에 대한 단일 작용제 IC50을 나타낸다. 세포를 RPMI + 10% FBS 중 각각의 GDC-0068 또는 GDC-0973 또는 조합으로 증가 농도로 처리하고, CelTiter-Glo를 이용하여 생존율을 4일 후에 검정하였다. 상응하는 하단 그래프는 수가지의 특정한 유전자형에 대해 GDC-0068 및 GDC-0973 조합물 상승작용을 나타낸다. 착색된 블록킹은 돌연변이, 결실 또는 활성화를 나타낸다. B-RAF, RAS, HER2, PI3K 또는 PTEN에서의 돌연변이/변형은 각 세포주 (B-RAF, 갈색; RAS, 적색; HER2, 청색; PTEN, 암녹색; PI3K의 경우, 담녹색은 PIK3CA에서의 키나제 도메인 돌연변이를 나타내고, 담청색은 비-키나제 도메인 돌연변이 또는 증폭을 나타냄) 하에 착색 정사각형에 의해 나타낸다. PTEN 변형은, 웨스턴 블롯에 의해 이 단백질에 대한 비-검출가능한 신호, 또는 유전자에서의 돌연변이를 나타낸다. 각 세포주에 대한 조직 기원은 또한 유방 (Br), 결장 (Co), 비소세포 폐암 (Lu), 흑색종 (Me), 난소 (Ov), 전립선 (Pr) 및 신장 (Re)을 나타내는 문자와 함께 다른 색깔로 나타낸다.
도 22b는 다중 세포주에서 GDC-0068 및 GDC-0973에 대한 전체 양성 조합 Bliss 스코어를 나타낸다. 상승작용적 효과는 전체 양성 BLISS 스코어에 의해 나나타난 바와 같이 다중 세포주, 특히 RAS/RAF 경로의 활성화를 갖는 세포주 또는 2가지의 PI3K/Akt 및 RAS/RAF 경로 활성화를 갖는 세포주에서 관찰되었다.
전체 양성 BLISS 스코어는 각 세포주에서 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물로부터 산출하였다.
도 23은 537MEL 흑색종, PTEN 없음, Braf amp/del에서 GDC-0068 및 GDC-0973에 대한 Bliss 열 지도 및 % 억제를 나타내며; GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물은 두 경로를 억제하여 세포 사멸을 증가시킨다.
도 24는 GDC-0068 및 GDC-0973으로 24시간 동안 처리한 인간 HTC116 결장 세포주에 대한 웨스턴 블롯 분석을 나타낸다. HCT-116은 GDC-0068 및 GDC-0973과 함께 특정 농도에서 약 3 시간 동안 인큐베이션하였다. Akt, MEK 및 그의 하류 마커의 인산화를 웨스턴 블롯으로 분석하였다.
도 25는 537MEL 흑색종, PTEN 없음, Braf amp/del에서 GDC-0068 및 GDC-0973 조합 증가 효능을 나타낸다.
도 26은 GDC-0068 및 GDC-0973 조합에 대한 포스포-단백질 발현 수준 대 비히클 대조군에서의 유의한 변화를 나타낸다. A2058x1 종양은 100mg/kg의 GDC-0068 또는 7.5mg/kg의 GDC-0973 각각의 단일 용량 또는 조합하여 마우스에 투여한 후에 3시간째에 수확하였다. 종양은 역상 단백질 어레이(RPPA)를 이용하여 분석하였다.
도 27은 투여 후의 A2058 이종이식편 종양에서의 GDC-0068 및 GDC-0973 조합 대 각각의 단일 작용제에 대한 포스포-단백질 발현 수준에서의 유의한 변화를 나타낸다.
도 28은 MALME3M 세포에서의 세포 생존율에 대한 조합 효과를 나타내는 2-차원 (2D) 열지도를 나타낸다. GDC-0068의 농도 증가는 x-축 상에 나타내고, GDC-0973의 농도 증가는 y-축 상에 나타낸다. 억제 백분율 (% 억제) 열지도는 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합으로 또는 단일 작용제로서 각 농도에서의 % 억제를 나타내며; 대조군은 비히클 (DMSO)에 노출시켜 0으로 설정한다.
도 29는 MALME3 세포에서의 세포 생존율에 대한 조합 효과를 나타내는 2-차원 (2D) 열지도를 나타낸다. GDC-0068의 농도 증가는 x-축 상에 나타내고, GDC-0973의 농도 증가는 y-축 상에 나타낸다. 억제 백분율 (% 억제) 열지도는 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합으로 또는 단일 작용제로서 각 농도에서의 % 억제를 나타내며; 대조군은 비히클 (DMSO)에 노출시켜 0으로 설정한다. BLISS 스코어는 각 용량 쌍에 대해 산출하여 열지도를 우측에 나타낸다.
도 30은 NCI-BL2122 세포에서의 세포 생존율에 대한 조합 효과를 나타내는 2-차원 (2D) 열지도를 나타낸다. GDC-0068의 농도 증가는 x-축 상에 나타내고, GDC-0973의 농도 증가는 y-축 상에 나타낸다. 억제 백분율 (% 억제) 열지도는 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합으로 또는 단일 작용제로서 각 농도에서 % 억제를 나타내며; 대조군은 비히클 (DMSO)에 노출시켜 0으로 설정한다. BLISS 스코어는 각 용량 쌍에 대해 산출하여 열지도를 우측에 나타낸다.
도 31은 GDC-0068 및 GDC-0973 조합에 대한 AKT 및 MEK 경로의 포스포-단백질 발현 수준 (24시간) 및 조절의 변화를 도시한다. A2058x1 종양은 100mg/kg의 GDC-0068 또는 7.5mg/kg의 GDC-0973 각각의 단일 용량 또는 조합하여 마우스에 투여한 후에 24시간째에 수확하였다. 종양은 역상 단백질 어레이(RPPA)를 이용하여 분석하였다.
예시적 실시양태 및 정의 상세한 설명
용어 "포함하다(comprise)," "포함하는(comprising)," "포함하다(include)," "포함하는(including)," 및 "포함한다(includes)"가 본 명세서 및 특허청구범위에서 사용되는 경우, 전술된 특징, 정수, 성분, 또는 단계의 존재를 명시하기 위한 의도를 가지지만, 이들은 하나 이상의 다른 특징, 정수, 성분, 단계, 또는 그의 군의 존재 또는 추가를 불가능하게 하지는 않는다.
용어 "치료하다" 및 "치료"는 치유적 치료 및 예방적(prophylactic) 또는 예방적(preventative) 조치 둘 다를 지칭하며, 여기서 목표는 원하지않는 생리학적 변화 또는 장애, 예를 들면 성장, 발달 또는 암의 확산을 예방하거나 또는 늦추는 (완화시키는) 것이다. 본 발명의 목적을 위해, 유익하거나 또는 원하는 임상적 결과는 검출가능하거나 또는 검출가능하지않음의 여부와 관계없이 증상의 완화, 질환의 정도의 약화, 질환의 안정화된 (즉, 악화는 아님) 상태, 질환 진행의 지연 또는 늦춤, 질환 상태의 개선 또는 완화(palliation), 및 차도(remission) (부분적 또는 전체임의 여부와 관계 없음)를 포함하나, 이들로 한정되지는 않는다. "치료"는 또한 치료를 받지 않는 경우 예상되는 생존과 비교하여 생존의 연장을 의미할 수 있다. 치료를 필요로 하는 개체는 상태 또는 장애를 이미 가진 개체 및 상태 또는 장애를 가질 경향이 있는 개체 또는 상태 또는 장애가 예방될 개체를 포함한다.
어구 "치료 유효량"은 (i) 특정 질환, 상태, 또는 장애를 치료하거나, (ii) 특정 질환, 상태, 또는 장애의 하나 이상의 증상을 마멸, 개선, 또는 제거하거나, 또는 (iii) 본원에 기재된 특정 질환, 상태, 또는 장애의 하나 이상의 증상의 발병을 예방하거나 또는 지연시키는 본 발명의 화합물의 양을 의미한다. 암의 경우, 약물의 치료 유효량은 암 세포의 수를 감소시키고; 종양 크기를 감소시키고; 말초 기관 내의 암 세포 침윤을 억제 (즉, 어느 정도로 늦추고, 바람직하게는 정지시킴)하고; 종양 전이를 억제 (즉, 일부 정도로 늦추고, 바람직하게는 정지시킴)하고; 종양 성장을 일부 정도로 억제하고/하거나 암과 연관된 하나 이상의 증상을 일부 정도로 완화시킬 수 있다. 약물이 존재하는 암 세포의 성장을 예방하고/하거나 사멸시킬 수 있는 정도까지는, 세포증식억제적 및/또는 세포독성일 수 있다. 암 요법에 대해, 예를 들어 질환 진행까지의 시간 (TTP)을 평가하고/하거나 반응률 (RR)을 결정함으로써 효능이 측정될 수 있다.
용어 "암" 및 "암성"은 전형적으로 비조절된 세포 성장에 의해 특징지어지는 포유동물에서의 생리학적 상태를 지칭하거나 또는 기재한다. "종양"은 하나 이상의 암성 세포를 포함한다. 암의 예는 암종, 림프종, 모세포종, 육종, 및 백혈병 또는 림프성 악성종양을 포함하나, 이들로 한정되지는 않는다. 이러한 암의 보다 특정한 예는 편평세포암 (예를 들면, 상피 편평세포암), 소-세포 폐암, 비-소세포 폐암 ("NSCLC"), 폐의 선암종 및 폐의 편평세포 암종을 비롯한 폐암, 복막암, 간세포성암, 위장암을 비롯한 위(gastric) 또는 위(stomach)암, 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장암 또는 신암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종, 항문 암종, 음경 암종, 및 두경부암을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 위(gastric)암은 위의 임의의 부분에서 발달될 수 있고, 위에 걸쳐, 그리고 다른 기관; 특히 식도, 폐, 림프절, 및 간에 확산 될 수 있는 위(stomach)암을 포함한다.
"화학요법제"는 작용의 메카니즘에 상관없이 암의 치료에 유용한 생물학적 (대분자) 또는 화학적 (소분자) 화합물이다.
"백금 작용제"는 백금, 예를 들어 카르보플라틴, 시스플라틴 및 옥살리플라틴을 포함하는 화학요법제이다.
용어 "포유동물"은 인간, 마우스, 래트, 기니 피그, 원숭이, 개, 고양이, 말, 소, 돼지, 양, 및 가금류를 포함하나, 이들로 한정되지는 않는다. 용어 환자는 포유동물을 지칭하고, 한 실시양태에서 환자는 인간이다.
용어 "포장 삽입물"은 이러한 치료적 생성물의 사용에 대한 지시사항, 용법, 투여량, 투여, 금기 및/또는 경고에 대한 정보를 함유하는 관례상 치료적 제품의 상업용 패키지에 포함된 설명서를 지칭하는데 사용된다.
본원에 사용된 바와 같은 어구 "제약상 허용되는 염"은 본 발명의 화합물의 제약상 허용되는 유기 또는 무기 염을 지칭한다. 예시적인 염은 술페이트, 시트레이트, 아세테이트, 옥살레이트, 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 니트레이트, 비술페이트, 포스페이트, 산 포스페이트, 이소니코티네이트, 락테이트, 살리실레이트, 산 시트레이트, 타르트레이트, 올레에이트, 탄네이트, 판토테네이트, 비타르트레이트, 아스코르베이트, 숙시네이트, 말레에이트, 겐티시네이트, 푸마레이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 사카레이트, 포르메이트, 벤조에이트, 글루타메이트, 메탄술포네이트 "메실레이트", 에탄술포네이트, 벤젠술포네이트, p-톨루엔술포네이트, 및 파모에이트 (즉, 1,1'-메틸렌-비스-(2-히드록시-3-나프토에이트)) 염을 포함하나, 이들로 한정되지는 않는다. 제약상 허용되는 염은 또다른 분자, 예를 들면 아세테이트 이온, 숙시네이트 이온 또는 다른 반대 이온의 포함에 관여할 수 있다. 반대 이온은 모 화합물 상의 전하를 안정화시키는 임의의 유기 또는 무기 모이어티일 수 있다. 추가로, 제약상 허용되는 염은 그의 구조 내에 하나 초과의 하전된 원자를 가질 수 있다. 다수의 하전된 원자가 제약상 허용되는 염의 부분인 경우는 다수의 반대 이온을 가질 수 있다. 따라서, 제약상 허용되는 염은 하나 이상의 하전된 원자 및/또는 하나 이상의 반대 이온을 가질 수 있다.
원하는 제약상 허용되는 염은 당업계에 이용가능한 임의의 적합한 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어 유리 염기의 무기 산, 예를 들면 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 메탄술폰산, 인산 등, 또는 유기 산, 예를 들면 아세트산, 말레산, 숙신산, 만델산, 푸마르산, 말론산, 피루브산, 옥살산, 글리콜산, 살리실산, 피라노시딜산, 예를 들면 글루쿠론산 또는 갈락투론산, 알파 히드록시산, 예를 들면 시트르산 산 또는 타르타르산, 아미노산, 예를 들면 아스파르트산 또는 글루탐산, 방향족 산, 예를 들면 벤조산 또는 신남산, 술폰산, 예를 들면 p-톨루엔술폰산 또는 에탄술폰산 등으로의 처리. 일반적으로 염기성 제약 화합물로부터 제약상 유용하거나 또는 허용되는 염의 형성을 위해 적합하다고 고려되는 산은, 예를 들어 문헌 [P. Stahl et al, Camille G. (eds.) Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH]; [S. Berge et al, Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1 19]; [P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201 217]; [Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York]; [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., (1995) Mack Publishing Co., Easton PA]에 의해; 그리고 문헌 [The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C. 그의 웹사이트 상에 있음)]에서 논의된다. 이들 개시는 본원에 그의 참조로 포함된다.
어구 "제약상 허용되는"은 물질 또는 조성물이 제제를 포함하는 다른 성분, 및/또는 그로 치료되는 포유동물과 화학적으로 및/또는 독성학적으로 호환가능해야함을 나타낸다.
본원에서 사용되는 용어 "상승작용적"은 2종 이상의 단일 작용제의 상가적 효과보다 더 효과적인 치료 조합물을 지칭한다. 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염과 GDC-0973 및 PD-0325901 중 하나 간의 상승작용적 상호작용의 결정은 본원에 기재된 검정으로부터 얻은 결과에 기초할 수 있다. 이들 검정의 결과는 조합 지수(Combination Index)를 얻기 위해 초우(Chou) 및 탈랄라이(Talalay) 조합 방법 및 칼쿠신(CalcuSyn) 소프트웨어를 이용한 용량-효과 분석을 이용하여 분석될 수 있다 (문헌 [Chou and Talalay, 1984, Adv. Enzyme Regul. 22:27-55]). 본원에 의해 제공되는 조합물은 여러 검정 시스템에서 평가되었으며, 데이터는 항암제 중에서 상승작용, 상가작용 및 길항작용을 정량하기 위한 표준 프로그램을 이용하여 분석될 수 있다. 예를 들어, 초우 및 탈랄라이의 문헌 ["New Avenues in Developmental Cancer Chemotherapy," Academic Press, 1987, Chapter 2]에 기재된 프로그램이다. 0.8 미만의 조합 지수 값은 상승작용을 나타내고, 1.2 초과의 값은 길항작용을 나타내고, 0.8 내지 1.2의 값은 상가적 효과를 나타낸다. 조합 요법은 "상승작용"을 제공하고 "상승작용적"임을 입증할 수 있다, 즉, 활성 성분을 함께 사용하는 경우 달성되는 효과가 화합물을 개별적으로 사용하여 얻은 효과의 합보다 크다. 상승작용적 효과는 활성 성분이 (1) 공동-제제화되고 조합된 단위 투여 제제로 동시에 투여되거나 전달되는 경우; (2) 별개의 제제로서 교대로 또는 동시에 전달되는 경우; 또는 (3) 몇몇 다른 투약법에 의해 전달되는 경우 달성될 수 있다. 대체 요법으로 전달되는 경우, 상승작용적 효과는 화합물이 순차적으로, 예를 들어, 개별 시린지로 상이한 주사에 의해 투여되거나 전달되는 경우 달성될 수 있다. 일반적으로, 대체 요법 동안 유효 투여량의 각각의 활성 성분은 순차적으로, 즉, 연속적으로 투여되는 반면, 조합 요법에서 유효 투여량의 2종 이상의 활성 성분은 함께 투여된다. 조합 효과는 BLISS 독립성 모델 및 최고 단일 작용제 (HSA) 모델 양자 모두를 이용하여 평가되었다 (문헌 [Lehar et al. 2007, Molecular Systems Biology 3:80]). BLISS 스코어는 단일 작용제로부터의 강화작용의 정도를 정량하고, BLISS 스코어 (0 초과)는 단순 상가성보다 크다는 것을 제안한다. 250 초과의 누적 양성 BLISS 스코어는 시험 농도 범위 내에서 관찰된 강한 상승작용으로 간주된다. HSA 스코어 (0 초과)는 상응하는 농도에서 단일 작용제 반응의 최대치보다 큰 조합 효과를 제안한다.
한 측면은, GDC-0068, 및 GDC-0973 및 PD-0325901 중 하나, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, PI3K, AKT 또는 PTEN 돌연변이를 포함하고, 또한 한 예로서, RAS/RAF 돌연변이를 추가로 포함하는 암을 앓고 있는 환자에서의 종양 성장 억제 (TGI) 방법을 포함한다. 특정 실시양태에서, 조합물은 상승작용적이다. 특정 실시양태에서, 조합물의 TGI는 각 GDC-0068, 또는 GDC-0973 및 PD-0325901 단독 중 하나보다 크다. 특정 실시양태에서, 조합물의 TGI는 각 GDC-0068, 또는 GDC-0973 및 PD-0325901 단독 중 하나의 TGI보다 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 또는 75% 크다.
TGI의 측정 방법은 당업계에 공지되어 있다. 한 예시적인 방법에서, 치료 전후의 환자로부터 평균 종양 부피를 측정하고, 비교한다. 종양 부피는 당업계의 임의의 방법, 예를 들어 울트라칼(UltraCal) IV 캘리퍼 (프레드 브이.(Fred V.) 포울러 컴퍼니(Fowler Company))를 이용하여, 또는 PET (양전자 방출 단층촬영), 또는 일부 다른 방법에 의해 2차원적으로 (길이 및 폭) 측정할 수 있다. 식: 종양 부피 (mm3) = (길이 x 폭2) x 0.5를 이용할 수 있다. 다중 시기에 걸친 종양 부피의 측정을 혼합-모델링 선형 혼합 효과 (LME) 접근법 (Pinheiro et al. 2009)을 이용하여 수행할 수 있다. 이러한 접근법은 반복 측정 (및 다중 환자) 둘 다를 향할 수 있다. 입방 회귀 스플라인을 이용하여 각각의 용량 수준에서 종양 부피의 시간 과정에 대한 비-선형 프로파일을 피팅할 수 있다. 그 후, 이들 비-선형 프로파일을 혼합 모델내에서 용량과 관련시킬 수 있다. 하기 식을 이용하여 비히클에 대해 1일 당 피팅된 곡선하 면적 (AUC) %로서 비히클의 %로서의 종양 성장 억제율을 계산할 수 있다.
Figure pct00003
이 식을 이용하면, 100%의 TGI 값은 종양 정체를 나타내고, 약 1% 초과 약 100% 미만은 종양 성장 억제를 나타내며, 약 100% 초과는 종양 퇴행을 나타낸다.
화학식 I의 화합물의 제조
화학식 I의 화합물 및 그의 염은 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2008/006040에 기재된 바와 같이 또는 하기 실시예 1에 기재된 바와 같이 제조할 수 있다. 화학식 I의 화합물 제조시에, 중간체의 멀리있는 관능기 (예를 들어, 1급 또는 2급 아민 등)의 보호가 필요할 수 있다. 이러한 보호의 필요성은 멀리있는 관능기의 성질 및 제조 방법의 조건에 따라 달라질 것이다. 적합한 아미노-보호기 (NH-Pg)는 아세틸, 트리플루오로아세틸, t-부톡시카르보닐 (BOC), 벤질옥시카르보닐 (CBz) 및 9-플루오레닐메틸렌옥시카르보닐 (Fmoc)을 포함한다. 이러한 보호의 필요성은 당업자에 의해 쉽게 결정된다. 보호기 및 그의 사용에 관한 일반적인 설명에 대하여는, 문헌 [T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991]을 참조한다.
분리 방법
화학식 I의 화합물 제조를 위한 임의의 합성 방법에서, 반응 생성물을 서로 및/또는 출발 물질로부터 분리하는 것이 유리할 수 있다. 각 단계 또는 일련의 단계의 목적 생성물은 당업계 통상의 기술에 의해 원하는 정도의 균질성으로 분리 및/또는 정제된다. 전형적으로, 이러한 분리는 다단계 추출, 용매 또는 용매 혼합물로부터의 결정화, 증류, 승화, 또는 크로마토그래피를 포함한다. 크로마토그래피는 예를 들어 다음을 포함하는 임의의 수의 방법을 포함할 수 있다: 역상 및 정상(normal-phase); 크기 배제; 이온 교환; 고압, 중압 및 저압 액체 크로마토그래피 방법 및 장치; 소규모 분석; 모사 이동층 (SMB) 및 정제용 박층 또는 후층 크로마토그래피, 및 또한 소규모 박층 및 플래쉬(flash) 크로마토그래피 기술.
또 다른 부류의 분리 방법은 목적 생성물, 미반응 출발 물질, 반응 부산물 등에 결합하거나 이것들을 다른 방식으로 분리가능하게 하는 것으로 선택된 시약으로 반응 혼합물을 처리하는 것을 포함한다. 이러한 시약은 흡착제 또는 흡수제, 예컨대 활성탄, 분자체, 이온 교환 매질 등을 포함한다. 대안적으로, 시약은 염기성 물질의 경우에는 산, 산성 물질의 경우에는 염기, 결합 시약, 예컨대 항체, 결합 단백질, 선택적 킬레이팅제, 예컨대 크라운 에테르, 액체/액체 이온 추출 시약 (LIX) 등일 수 있다.
적절한 분리 방법의 선택은, 사용되는 물질의 성질에 따라 달라진다. 예를 들어, 증류 및 승화에서는 비점 및 분자량, 크로마토그래피에서는 극성 관능기의 존재 또는 부재, 다단계 추출에서는 산성 및 염기성 매질 중 물질의 안정성 등이다. 당업자는 원하는 분리 달성에 가장 적합한 기술을 적용할 것이다.
부분입체이성질체 혼합물은 이것들의 물리적 화학적 차이를 기초로 하여 당업자에게 널리 공지된 방법, 예컨대 크로마토그래피 및/또는 분별 결정화를 통해 개개의 부분입체이성질체로 분리될 수 있다. 거울상이성질체는 거울상이성질체 혼합물을 적절한 광학 활성 화합물 (예를 들어, 키랄 보조제, 예컨대 키랄 알콜 또는 모셔(Mosher's) 산 클로라이드)과의 반응으로 부분입체이성질체 혼합물로 전환시키고, 부분입체이성질체를 분리하며, 개개의 부분입체이성질체를 상응하는 순수한 거울상이성질체로 전환 (예를 들어, 가수분해)하여 분리될 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물 중 일부는 회전장애이성질체 (예를 들어, 치환된 비아릴)일 수 있고, 이것은 본 발명의 일부로서 고려된다. 거울상이성질체는 또한 키랄 HPLC 컬럼을 사용하여 분리될 수도 있다.
대응하는 입체이성질체가 실질적으로 없는 단일 입체이성질체, 예를 들어 거울상이성질체는 광학 활성 분할제를 사용한 부분입체이성질체의 형성과 같은 방법을 이용하여 라세미 혼합물을 분할함으로써 수득될 수 있다 ([Eliel, E. and Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds," John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994], [Lochmuller, C. H., J. Chromatogr., (1975) 113(3):283-302]). 본 발명의 키랄 화합물의 라세미 혼합물은 다음을 비롯한 임의의 적합한 방법에 의해 분리 및 단리될 수 있다: (1) 키랄 화합물을 사용한 이온성 부분입체이성질체 염의 형성 및 분별 결정화 또는 다른 방법에 의한 분리, (2) 키랄 유도체화 시약을 사용한 부분입체이성질체 화합물의 형성, 부분입체이성질체의 분리, 및 순수한 입체이성질체로의 전환, 및 (3) 키랄 조건하에 실질적으로 순수한 또는 풍부한 입체이성질체의 직접 분리. 문헌 ["Drug Stereochemistry, Analytical Methods and Pharmacology," Irving W. Wainer, Ed., Marcel Dekker, Inc., New York (1993)]을 참조한다.
상기 방법 (1)에서, 부분입체이성질체 염은 거울상이성질체적으로 순수한 키랄 염기, 예컨대 브루신, 퀴닌, 에페드린, 스트리크닌, α-메틸-β-페닐에틸아민 (암페타민) 등을 산성 관능기, 예컨대 카르복실산 및 술폰산을 함유하는 비대칭 화합물과 반응시켜 형성될 수 있다. 부분입체이성질체 염은 분별 결정화 또는 이온성 크로마토그래피에 의해 분리되도록 유도될 수 있다. 아미노 화합물의 광학 이성질체 분리를 위해서, 키랄 카르복실산 또는 술폰산, 예컨대 캄포르술폰산, 타르타르산, 만델산 또는 락트산을 첨가하여 부분입체이성질체 염이 형성되게 할 수 있다.
대안적으로, 상기 방법 (2)에서는, 분할할 대상을 키랄 화합물의 한 거울상이성질체와 반응시켜서 부분입체이성질체 쌍을 형성한다 ([E. and Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., 1994, p. 322]). 부분입체이성질체 화합물은 비대칭 화합물을 거울상이성질체적으로 순수한 키랄 유도체화 시약, 예컨대 멘틸 유도체와 반응시켜 형성될 수 있고, 이후에 부분입체이성질체를 분리하고 가수분해하여 순수하거나 풍부한 거울상이성질체를 수득한다. 광학 순도를 결정하는 방법은, 라세미 혼합물의 키랄 에스테르, 예컨대 멘틸 에스테르, 예를 들어 (-)멘틸 클로로포르메이트를 염기, 또는 모셔 에스테르, α-메톡시-α-(트리플루오로메틸)페닐 아세테이트 ([Jacob III. J. Org. Chem., (1982) 47:4165])의 존재하에 제조하고, 2종의 회전장애이성질체 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체의 존재에 대해 1H NMR 스펙트럼을 분석하는 것을 포함한다. 회전장애이성질체 화합물의 안정적인 부분입체이성질체는 회전장애이성질체 나프틸-이소퀴놀린 분리 방법 후의 정상 및 역상 크로마토그래피로 분리 및 단리될 수 있다 (WO 96/15111). 방법 (3)에서, 2종의 거울상이성질체의 라세미 혼합물은 키랄 고정상을 사용한 크로마토그래피로 분리될 수 있다 (["Chiral Liquid Chromatography" (1989) W. J. Lough, Ed., Chapman and Hall, New York], [Okamoto, J. of Chromatogr., (1990) 513:375-378]). 풍부하거나 순수한 거울상이성질체는 비대칭 탄소 원자를 갖는 다른 키랄 분자 구별에 이용되는 방법, 예컨대 광학 회전 및 원편광 이색성에 의해 구별될 수 있다.
화학요법제
화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합된 특정 화학요법제는 세포 증식을 시험관내 및 생체내 억제하는데 있어서 놀랍고 예기치못한 특성을 갖는다는 것이 입증되었다. 이러한 화학요법제는 GDC-0973, 및 PD-0325901을 포함한다.
XL-518로서 또한 공지된 GDC-0973은 미토겐 활성화 단백질 키나제 키나제 (MAPKK)로서 또한 공지된 MEK의 선택적 억제제이며, 인간 종양에서 종종 활성화되는 RAS/RAF/MEK/ERK 경로의 주요 성분이다. MEK/ERK 경로의 부적절한 활성화는 외인성 성장 인자의 부재에서 세포 성장을 촉진한다. 고형 종양에 대해 GDC-0973을 평가하는 I상 임상 시험이 진행중이다. GDC-0973은 국제 특허 출원 공개 번호 WO2007044515(A1)에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. GDC-0973의 명칭은 (S)-(3,4-디플루오로-2-(2-플루오로-4-아이오도페닐아미노)페닐)(3-히드록시-3-(피페리딘-2-일)아제티딘-1-일)메타논이고, 구조는 다음과 같다:
Figure pct00004
PD-0325901 (CAS 등록번호 391210-10-9, 화이자)은 암의 잠재적인 경구 정제 치료를 위한 제2-세대, 비-ATP 경쟁적, 알로스테릭 MEK 억제제이다 (US 6960614; US 6972298; US 2004/147478; US 2005/085550). 유방 종양, 결장 종양, 및 흑색종의 잠재적인 치료에 대한 II상 임상 시험을 수행하였다. PD-0325901의 명칭은 (R)-N-(2,3-디히드록시프로폭시)-3,4-디플루오로-2-(2-플루오로-4-아이오도페닐아미노)벤즈아미드이며, 구조는 다음과 같다:
Figure pct00005
제약 조성물
본 발명의 제약 조성물 또는 제제는 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 화학요법제, 및 제약상 허용되는 담체, 활택제, 희석제, 또는 부형제 중 하나 이상의 조합물을 포함한다.
한 예에는 GDC-0068, 또는 그의 염, 및 제약상 허용되는 담체, 활택제, 희석제, 또는 부형제 중 하나 이상의 경구 전달을 위한 제1 제제, 및 GDC-0973 및 PD-0325901 중 하나, 또는 그의 염, 및 제약상 허용되는 담체, 활택제, 희석제, 또는 부형제 중 하나 이상의 경구 전달을 위한 제2 제제가 포함된다. 한 예에서, 제2 제제는 GDC-0973 또는 그의 염을 포함한다.
화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 화학요법제는 제약상 허용되는 용매, 예컨대 물, 에탄올 등과 비용매화된 형태 및 또한 용매화된 형태로 존재할 수 있고, 본 발명에는 용매화된 형태 및 또한 비용매화된 형태가 모두 포함되도록 의도된다.
화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 화학요법제는 여러 호변이성질체 형태로 또한 존재할 수 있고, 이러한 모든 형태가 본 발명의 범위 내에 포함된다. 용어 "호변이성질체" 또는 "호변이성질체 형태"는 저에너지 장벽을 통해 상호전환가능한 상이한 에너지의 구조 이성질체를 지칭한다. 예를 들어, 양성자 호변이성질체 (또한 양성자성 호변이성질체로 공지됨)는 양성자의 이동을 통한 상호전환, 예컨대 케토-에놀 및 이민-엔아민 이성질체화를 포함한다. 원자가 호변이성질체는 결합 전자 중 일부의 재구성에 의한 상호전환을 포함한다.
제약 조성물은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 본원에 기재된 화학요법제를 임의의 제약상 불활성 부형제, 희석제, 담체, 또는 활택제와 함께 포함하는 1종 초과 (예를 들어, 2종)의 제약 활성제가 포함된 개별 투여 단위 및 벌크 조성물 모두를 포함한다. 벌크 조성물 및 각각의 개별 투여 단위는 고정된 양의 상기 제약 활성제를 함유할 수 있다. 벌크 조성물은 아직 개별 투여 단위로 형성되지 않은 물질이다. 예시적인 투여 단위는 경구 투여량 단위, 예컨대 정제, 환제, 캡슐 등이다. 유사하게, 본원에 기재된 본 발명의 제약 조성물을 투여함으로써 환자를 치료하는 방법은 벌크 조성물 및 개별 투여 단위의 투여를 포함하도록 또한 의도된다.
제약 조성물은 본원에 기재된 것들과 동일한 동위원소-표지된 화합물을 포함할 뿐만 아니라 1개 이상의 원자가 통상적으로 실측되는 원자 질량 또는 질량수와 상이한 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자로 대체된다는 사실을 포함한다. 명시된 바와 같이 임의의 특정 원자 또는 원소의 모든 동위원소가 본 발명의 화합물, 및 그의 용도의 범위 내인 것으로 의도된다. 화합물로 도입될 수 있는 예시적인 동위원소에는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 플루오린, 염소 및 아이오딘의 동위원소, 예컨대 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 32P, 33P, 35S, 18F, 36Cl, 123I 및 125I가 포함된다. 본 발명의 특정한 동위원소-표지된 화합물 (예를 들어, 3H 및 14C로 표지된 것들)은 화합물 및/또는 기재 조직 분포 검정에서 유용하다. 삼중수소 (3H) 및 탄소-14 (14C) 동위원소는 제조 및 검출감도의 용이성에 있어서 유용하다. 추가로, 보다 무거운 동위원소, 예컨대 중수소 (2H)로의 치환은 더 높은 대사 안정성으로부터 유래된 특정한 치료 이점 (예를 들어, 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투여량 요건)을 제공할 수 있고, 이에 따라 일부 상황에서 바람직할 수 있다. 양전자 방출 동위원소, 예컨대 15O, 13N, 11C 및 18F는 기재 수용체 점유율을 시험하는 양전자 방출 단층촬영 (PET) 연구에 유용하다.
화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화학요법제는 인간을 비롯한 포유동물에서 과다증식성 장애의 치유적 치료 (예방적 치료 포함)를 위해 치료 조합물을 사용하는 것에 대한 표준 제약학적 실시에 따라 제제화된다. 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 본원에 기재된 화학요법제 중 하나 이상과, 관련된 제약상 허용되는 담체, 활택제, 희석제, 또는 부형제 중 하나 이상을 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
적합한 담체, 희석제 및 부형제는 당업자에게 널리 공지되어 있고, 이는 물질, 예컨대 탄수화물, 왁스, 수용성 및/또는 팽윤성 중합체, 친수성 또는 소수성 물질, 젤라틴, 오일, 용매, 물 등을 포함한다. 사용되는 특정 담체, 희석제 또는 부형제는 본 발명의 화합물을 적용하는 수단 및 목적에 좌우될 것이다. 용매는 일반적으로 포유동물에 투여되기에 안전한 것으로 당업자에게 인식되어 있는 용매를 기준으로 선택된다 (GRAS). 일반적으로, 안전한 용매는 비-독성 수성 용매, 예컨대 물 및 수용성 또는 수혼화성인 다른 비-독성 용매이다. 적합한 수성 용매에는 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 (예를 들어, PEG 400, PEG 300), 등 및 그의 혼합물이 포함된다. 제제는 완충제, 안정화제, 계면활성제, 습윤제, 윤활제, 유화제, 현탁화제, 보존제, 항산화제, 불투명화제, 활택제, 가공 조제, 착색제, 감미제, 퍼퓸제, 향미제 및 다른 공지된 첨가제 중 하나 이상을 또한 포함하여 약물 (즉, 본 발명의 화합물 또는 이들의 제약 조성물)의 명쾌한 표현을 제공하거나 또는 제약 제품 (즉, 의약)의 제조를 보조할 수 있다.
제제는 통상의 용해 및 혼합 절차를 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 벌크 약물 물질 (즉, 본 발명의 화합물 또는 화합물의 안정화된 형태) (예를 들어, 시클로덱스트린 유도체 또는 다른 공지된 착화제를 사용한 착물)은 상기 기재된 하나 이상의 부형제의 존재하에 적합한 용매에 용해된다. 본 발명의 화합물은 전형적으로 제약 투여 형태로 제제화되어 용이하게 조절가능한 투여량의 약물을 제공하고 처방된 투약법에 환자가 순응하게 한다.
적용을 위한 제약 조성물 (또는 제제)은 약물을 투여하는데 사용되는 방법에 따라 다양한 방식으로 포장될 수 있다. 일반적으로, 분배를 위한 제품은 적절한 형태로 침착된 제약 제제를 갖는 용기를 포함한다. 적합한 용기는 당업자에게 널리 공지되어 있으며 물질, 예컨대 병 (플라스틱 및 유리), 사쉐, 앰플, 비닐 봉지, 금속 실린더 등을 포함한다. 용기는 포장재의 내용물에 대한 무분별한 접근을 예방하기 위해 부정 조작 방지 조립체 (tamper-proof assemblage)를 또한 포함할 수 있다. 게다가, 용기의 상부에는 용기의 내용물이 기재되어 있는 표지가 장착되어 있다. 표지는 또한 적절한 경고문을 포함할 수 있다.
본 화합물의 제약 제제는 다양한 경로 및 유형의 투여에 대해 제조될 수 있다. 예를 들어, 목적하는 정도의 순도를 갖는 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 임의로는 동결건조 제제, 밀링된 분말, 또는 수용액의 형태로 제약상 허용되는 희석제, 담체, 부형제 또는 안정화제와 혼합될 수 있다 (문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences (1995) 18th edition, Mack Publ. Co., Easton, PA]). 주위 온도에서, 적절한 pH에서, 및 목적하는 순도로 생리학상 허용되는 담체, 즉 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 비-독성인 담체와 혼합함으로써 제제화될 수 있다. 제제의 pH는 주로 화합물의 특정 용도 및 농도에 좌우되며, 약 3 내지 약 8의 범위일 수 있다.
제약 제제는 바람직하게는 멸균된다. 특히, 생체내 투여용으로 사용하고자 하는 제제는 멸균되어야 한다. 이러한 멸균은 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성된다.
제약 제제는 통상적으로 고체 조성물, 동결건조 제제 또는 수용액으로서 저장될 수 있다.
제약 제제는 양호한 의료 행위와 일치되는 방식으로, 즉 투여의 양, 농도, 스케줄, 경로, 비히클 및 경로로 복용 및 투여될 것이다. 이와 관련하여 고려하여야 할 인자에는 치료하고자 하는 특정 장애, 치료하고자 하는 특정 포유동물, 개별 환자의 임상적 상태, 장애의 원인, 작용제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄, 및 의약 진료의에게 공지된 다른 인자가 포함된다. 투여하고자 하는 화합물의 "치료 유효량"은 이러한 고려사항에 좌우될 것이며, 이는 응고 인자 매개성 장애를 예방하거나 개선하거나 치료하는데 필요한 최소량이다. 이러한 양은 바람직하게는 숙주에 독성이거나 숙주가 출혈에 유의하게 더 민감성이 되게 하는 양보다 적은 양이다.
허용되는 희석제, 담체, 부형제 및 안정화제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이며, 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산; 아스코르브산 및 메티오닌을 비롯한 항산화제; 보존제 (예컨대, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드 및 글루코스, 만노스, 덱스트린을 비롯한 다른 탄수화물; 킬레이트제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예컨대 나트륨; 금속 착물 (예를 들어, Zn-단백질 복합체); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예컨대 트윈 (TWEEN)TM, 플루로닉스 (PLURONICS)TM 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함한다. 예를 들어 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로구체, 마이크로에멀젼, 나노-입자 및 나노캡슐) 또는 마크로에멀젼 각각에서 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐을 예를 들어 계면 중합시키거나 코아세르베이션 (coacervation) 기술에 의해, 제조한 마이크로캡슐에 활성 제약 성분을 또한 넣을 수 있다. 이러한 기술은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 18th edition, (1995) Mack Publ. Co., Easton, PA]에 개시되어 있다.
화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 지속-방출형 제제를 제조할 수 있다. 지속-방출형 제제의 적합한 예에는 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스가 포함되며, 이러한 매트릭스는 성형물, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다. 지속-방출형 매트릭스의 예에는 폴리에스테르, 히드로겔 (예를 들어, 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트), 또는 폴리(비닐 알콜)), 폴리락티드 (US 3773919), L-글루탐산 및 감마-에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예컨대 루프론 디팟 (LUPRON DEPOT)TM (락트산-글리콜산 공중합체 및 류프롤리드 아세테이트로 이루어진 주사가능한 마이크로구체) 및 폴리-D (-) 3-히드록시부티르산이 포함된다.
제약 제제는 본원에 상술된 투여 경로에 적합한 것들을 포함한다. 제제는 편리하게는 단위 투여 형태로 존재할 수도 있고 제약 업계에 익히 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수도 있다. 기술 및 제제는 일반적으로 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 18th Ed. (1995) Mack Publishing Co., Easton, PA]에 기재되어 있다. 이러한 방법은 활성 성분을 하나 이상의 보조 성분을 구성하는 담체와 결합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로 제제는 활성 성분을 액체 담체 또는 미분된 고체 담체 또는 둘 다와 균일하고 밀접하게 결합시킨 다음, 필요한 경우 생성물의 형상을 만듦으로써 제조된다.
경구 투여에 적합한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 화학요법제의 제제는 각각 소정량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 화학요법제를 함유하는 환제, 경질 또는 연질, 예를 들어 젤라틴 캡슐, 카쉐, 트로키, 로젠지, 수성 또는 오일 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀젼, 시럽 또는 엘릭시르와 같은 별개 단위로서 제조될 수 있다. 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 상기 양 및 화학요법제의 상기 양은 조합된 제제로서의 환제, 캡슐, 용액 또는 현탁액으로 제제화될 수도 있다. 대안적으로, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 화학요법제는 교대로 투여하기 위한 환제, 캡슐, 용액 또는 현탁액으로 개별적으로 제제화될 수도 있다.
제제는 제약 조성물의 제조에 대해 당업계에 공지된 임의의 방법에 따라 제조될 수 있고, 이러한 조성물은 맛이 좋은 제제를 제공하기 위해 감미제, 향미제, 착색제 및 보존제를 포함하는 하나 이상의 작용제를 함유할 수 있다. 압축 정제는 자유 유동 형태, 예컨대 분말 또는 과립인 활성 성분을 적합한 기계에서 압축하고, 임의로 결합제, 윤활제, 불활성 희석제, 보존제, 표면 활성제 또는 분산제와 혼합함으로써 제조될 수 있다. 성형 정제는 불활성 액체 희석제로 습윤시킨 분말 활성 성분의 혼합물을 적합한 기계에서 성형함으로써 제조될 수 있다.
정제는 임의로 코팅시키거나 자국을 낼 수 있고, 임의로는 그로부터 활성 성분의 느린 또는 제어 방출을 제공하도록 제제화된다. 제약 제제의 정제 부형제는, 정제를 구성하는 분말 약물의 벌크 부피를 증가시키기 위한 충전제 (또는 희석제); 정제가 섭취되었을 때 그것을 작은 단편, 이상적으로는 개개의 약물 입자로 분해하여 약물의 신속한 용해 및 흡수를 촉진하는 것을 돕기 위한 붕해제; 과립 및 정제가 요구되는 기계적 강도로 확실히 형성될 수 있도록 하고, 정제가 압축된 후에 그것이 함께 뭉치도록 하여 포장, 운송 및 일상적인 취급 동안 정제가 그것의 성분 분말로 분해되는 것을 방지하는 결합제; 제조 동안 정제를 구성하는 분말의 유동성을 향상시키는 활택제; 정제화 분말이 제조 동안 정제를 압축하는 데 사용되는 장치에 확실히 부착되지 않도록 해주는 윤활제를 포함할 수 있다. 이들은 압축기를 통한 분말 혼합물의 흐름을 개선시키고, 완성된 정제가 장치로부터 튀어나올 때 마찰 및 파손을 최소화하며; 활택제와 유사한 기능을 갖는 부착방지제는 제조 동안 정제의 형상을 찍어내는 데 사용되는 기계와 정제를 구성하는 분말 사이의 부착을 감소시키고; 정제에 혼입된 향미제는 정제에 보다 기분좋은 맛을 부여하거나 불쾌한 맛을 차폐하며, 착색제는 식별성 및 환자 순응도에 도움을 준다.
정제의 제조에 적합한 비-독성의 제약상 허용되는 부형제와 혼합된 활성 성분을 함유하는 정제가 허용된다. 이들 부형제는, 예를 들어 불활성 희석제, 예컨대 탄산칼슘 또는 탄산나트륨, 락토스, 인산칼슘 또는 인산나트륨; 과립화제 및 붕해제, 예컨대 옥수수 전분, 또는 알긴산; 결합제, 예컨대 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 및 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘, 스테아르산 또는 활석일 수 있다. 정제는 코팅되지 않을 수도 있고, 위장관에서의 붕해 및 흡착를 지연시킴으로써 보다 긴 기간에 걸쳐 지속 작용을 제공하는 마이크로캡슐화를 포함하는 공지된 기술에 의해 코팅될 수도 있다. 예를 들어, 시간 지연 물질, 예컨대 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트가 단독으로 또는 왁스와 함께 사용될 수 있다.
눈 또는 다른 외부 조직, 예를 들어 구강 및 피부의 치료를 위해, 제제는 바람직하게는 활성 성분(들)을, 예를 들어 0.075 내지 20% w/w의 양으로 함유하는 국소 연고 또는 크림으로서 도포된다. 연고로 제제화되는 경우, 활성 성분은 파라핀계 또는 수-혼화성 연고 베이스와 함께 사용될 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 수중유 크림 베이스와 함께 크림으로 제제화될 수도 있다.
원하는 경우에, 크림 베이스의 수성 상은 다가 알콜, 즉 2개 이상의 히드록실 기를 갖는 알콜, 예컨대 프로필렌 글리콜, 부탄 1,3-디올, 만니톨, 소르비톨, 글리세롤 및 폴리에틸렌 글리콜 (PEG 400 포함) 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 국소 제제는 바람직하게는 피부 또는 다른 이환 부위를 통한 흡수 또는 침투를 증진시키는 화합물을 포함할 수 있다. 이러한 피부 침투 증진제의 예에는 디메틸 술폭시드 및 관련 유사체가 포함된다.
본 발명의 에멀젼의 유성 상은 공지된 성분으로부터 공지된 방식으로 구성될 수 있고, 지방 또는 오일, 또는 지방 및 오일 둘 다와 하나 이상의 유화제의 혼합물을 포함한다. 바람직하게는, 친수성 유화제가 안정화제로 작용하는 친지성 유화제와 함께 포함된다. 이와 함께, 안정화제(들)를 포함하거나 포함하지 않는 유화제(들)는 유화 왁스를 구성하고, 왁스는 오일 및 지방과 함께 크림 제제의 유성 분산 상을 형성하는 유화 연고 베이스를 포함한다. 제제에서 사용하기에 적합한 유화제 및 에멀젼 안정화제는 트윈® 60, 스팬® 80, 세토스테아릴 알콜, 벤질 알콜, 미리스틸 알콜, 글리세릴 모노-스테아레이트 및 나트륨 라우릴 술페이트를 포함한다.
제약 제제의 수성 현탁액은 수성 현탁액의 제조에 적합한 부형제와 혼합된 활성 물질을 함유한다. 이러한 부형제는 현탁화제, 예컨대 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 크로스카르멜로스, 포비돈, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 알긴산나트륨, 폴리비닐피롤리돈, 트라가칸트 검 및 아카시아 검, 및 분산제 또는 습윤제, 예컨대 자연 발생 포스파티드 (예를 들어, 레시틴), 지방산과 알킬렌 옥시드의 축합 생성물 (예를 들어, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트), 장쇄 지방족 알콜과 에틸렌 옥시드의 축합 생성물 (예를 들어, 헵타데카에틸렌옥시세탄올), 헥시톨 무수물 및 지방산으로부터 유도된 부분 에스테르와 에틸렌 옥시드의 축합 생성물 (예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트)을 포함한다. 수성 현탁액은 또한 하나 이상의 보존제, 예컨대 에틸 또는 n-프로필 p-히드록시벤조에이트, 하나 이상의 착색제, 하나 이상의 향미제 및 하나 이상의 감미제, 예컨대 수크로스 또는 사카린을 함유할 수 있다.
제약 조성물은 주사가능한 멸균 제제, 예컨대 주사가능한 멸균 수성 또는 유성 현탁액의 형태일 수 있다. 상기 현탁액은 앞서 언급된 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제를 사용하여 공지된 기술에 따라 제제화될 수 있다. 주사가능한 멸균 제제는 비-독성의 비경구적으로 허용되는 희석제 또는 용매 중 용액 또는 현탁액, 예컨대 1,3-부탄디올 중 용액 또는 동결건조 분말로부터 제조된 용액일 수 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 또한, 멸균 고정 오일을 통상적으로 용매 또는 현탁 배지로서 사용할 수 있다. 이 목적을 위해, 합성 모노- 또는 디글리세리드를 포함하는 임의의 무자극 고정 오일을 사용할 수 있다. 또한, 지방산, 예컨대 올레산을 주사제의 제조에 마찬가지로 사용할 수 있다.
단일 투여 형태를 제조하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료할 숙주 및 특정한 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, 인간에게 경구 투여하기 위한 지속-방출형 제제는 대략 1 내지 1000 mg의 활성 물질 화합물을 총 조성물의 약 5 내지 약 95% (중량:중량)로 다양할 수 있는 적절하고 편리한 담체 물질의 양과 함께 함유할 수 있다. 제약 조성물은 용이하게 측정가능한 투여량을 제공하도록 제조될 수 있다. 예를 들어, 정맥내 주입하기 위한 수용액은 약 30 mL/hr의 속도로 적합한 부피의 주입이 일어날 수 있도록 용액의 밀리리터 당 약 3 내지 500 ㎍의 활성 성분을 함유할 수 있다.
비경구 투여에 적합한 제제는 항산화제, 완충제, 정박테리아제, 및 제제를 의도된 수용자의 혈액과 등장성으로 만드는 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비-수성 멸균 주사 용액; 및 현탁화제 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비-수성 멸균 현탁액을 포함한다.
눈에 대한 국소 투여에 적합한 제제는 또한, 활성 성분이 적합한 담체, 특히 활성 성분을 위한 수성 용매에 용해 또는 현탁되어 있는 점안제를 포함한다. 활성 성분은 바람직하게는 이러한 제제에 약 0.5 내지 20% w/w, 예를 들어 약 0.5 내지 10% w/w, 예를 들어 약 1.5% w/w의 농도로 존재한다.
구강으로의 국소 투여에 적합한 제제는 활성 성분을 향미 베이스, 일반적으로는 수크로스 및 아카시아 또는 트라가칸트 중에 포함하는 로젠지; 활성 성분을 불활성 베이스, 예컨대 젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로스 및 아카시아 중에 포함하는 파스틸; 및 활성 성분을 적합한 액체 담체 중에 포함하는 구강세정제를 포함한다.
직장 투여를 위한 제제는, 예를 들어 코코아 버터 또는 살리실레이트를 포함하는 적합한 베이스를 갖는 좌제로서 존재할 수 있다.
폐내 또는 비강 투여에 적합한 제제는, 예를 들어 0.1 내지 500 마이크로미터 범위의 입도 (0.5, 1, 30 마이크로미터, 35 마이크로미터 등과 같이 증가하는 0.1 내지 500 마이크로미터 범위의 입도 포함)를 가지며, 비도를 통한 신속한 흡입에 의해 또는 구강을 통한 흡입에 의해 투여되어 폐포에 도달하게 된다. 적합한 제제는 활성 성분의 수성 또는 유성 용액을 포함한다. 에어로졸 또는 건조 분말 투여에 적합한 제제는 통상의 방법에 따라 제조될 수 있고, 다른 치료제, 예컨대 이하에 기재되는 장애의 치료 또는 예방에서 종전에 사용된 화합물과 함께 전달될 수 있다.
질 투여에 적합한 제제는 활성 성분에 더하여 적절한 것으로 당업계에 공지되어 있는 바와 같은 담체를 함유하는 페서리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 발포체 또는 스프레이 제제로서 존재할 수 있다.
제제는 단위-용량 또는 다중-용량 용기, 예를 들어 밀봉된 앰플 및 바이알에 포장될 수 있고, 사용 직전 주사용 멸균 액체 담체, 예를 들어 물의 첨가만을 필요로 하는 냉동-건조 (동결건조) 조건으로 보관될 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 이전에 기재한 종류의 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조된다. 바람직한 단위 투여 제제는 활성 성분의, 본원에서 앞서 언급된 바와 같은 1일 용량 또는 단위 1일 분할-용량, 또는 그의 적절한 분획을 함유하는 것들이다.
본 발명은 추가로 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 본원에 기재된 하나 이상의 화학요법제를 그에 따른 수의학적 담체와 함께 포함하는 수의학적 조성물을 제공한다. 수의학적 담체는 조성물의 투여 목적에 유용한 물질이며, 수의학적 분야에서 달리 불활성이거나 허용되고 활성 성분과 혼화성인 고체, 액체 또는 기체 물질일 수 있다. 이들 수의학적 조성물은 비경구로, 경구로 또는 임의의 다른 바람직한 경로에 의해 투여될 수 있다.
조합 요법
화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은, 전암성 및 비-신생물성 또는 비-악성 과다증식성 장애와 함께, 종양, 암 및 신생물성 조직을 포함하는 과다증식성 질환 또는 장애의 치료를 위한 다른 화학요법제와 조합하여 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 조합 요법으로서의 투여 요법에서, 항-과다증식성을 갖거나 과다증식성 장애를 치료하는 데 유용한 제2 화합물과 조합된다. 상기 투여 요법의 제2 화합물은 바람직하게는 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염에 대한 상보적 활성을 갖고, 이에 따라 이들은 서로에게 부정적인 영향을 주지 않는다. 이러한 화합물은 의도된 목적에 유효한 양으로 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 치료 조합물은 치료 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 매일 2회 내지 3주마다 1회 (q3wk)의 범위로 투여하고, 치료 유효량의 화학요법제를 매일 2회 내지 3주마다 1회의 범위로 투여하는 투여 요법에 의해 투여된다.
조합 요법은 동시 또는 순차 투약법으로서 투여될 수 있다. 순차적으로 투여되는 경우, 조합물은 2회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 조합 투여는 개별 제제를 사용하는 공투여, 및 바람직하게는 시간 간격이 존재하지만 둘 다의 (또는 모든) 활성제가 동시에 그들의 생물학적 활성을 발휘하는 임의 순서의 연속 투여를 포함한다.
본 발명의 한 구체적 측면에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 하나 이상의 작용제 투여 개시 후 약 1 내지 약 10일의 기간 동안 투여될 수 있다. 또 다른 본 발명의 구체적 측면에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 조합물의 투여 개시 전 약 1 내지 10일의 기간 동안 투여될 수 있다. 또 다른 본 발명의 구체적 측면에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 투여 및 화학요법제의 투여는 동일한 날에 개시한다.
상기 공투여되는 임의의 작용제에 적합한 투여량은 현재 사용되는 것들이며, 예컨대 치료 지수를 증가시키거나 독성 또는 다른 부작용 또는 결과를 완화시키기 위해 새롭게 규명된 작용제 및 다른 화학요법제 또는 치료의 조합 작용 (상승작용)에 기인하여 낮출 수 있다.
항암 요법의 특정한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 화학요법제, 뿐만 아니라 외과적 요법 및 방사선요법과 조합될 수 있다. 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 다른 제약 활성 화학요법제(들)의 양 및 관련 투여 시기는 목적한 조합 치료 효과를 달성하기 위해 선택될 것이다.
제약 조성물의 투여
화합물은 치료할 상태에 적절한 임의의 경로에 의해 투여될 수 있다. 적합한 경로는 경구, 비경구 (피하, 근육내, 정맥내, 동맥내, 흡입, 피내, 경막내, 경막외, 및 주입 기술 포함), 경피, 직장, 비강, 국소 (협측 및 설하 포함), 질, 복강내, 폐내 및 비강내를 포함한다. 국소 투여는 또한 경피 투여, 예컨대 경피 패치 또는 이온영동 장치의 사용을 포함할 수 있다.
약물의 제제는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., (1995) Mack Publishing Co., Easton, PA]에 논의되어 있다. 약물 제제의 다른 예는 문헌 [Liberman, H. A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, Vol 3, 2nd Ed., New York, NY]에서 찾아볼 수 있다. 국부 면역억제 치료를 위해, 화합물은 관류시키거나 그렇지 않으면 이식편을 이식 전에 억제제와 접촉시키는 것을 포함하는 병변내 투여에 의해 투여될 수 있다. 바람직한 경로가, 예를 들어 수용자의 상태에 따라 달라질 수 있음은 인지되어 있을 것이다. 화합물이 경구 투여되는 경우, 그것은 제약상 허용되는 담체, 활택제 또는 부형제와 함께 환제, 캡슐, 정제 등으로 제제화될 수 있다. 화합물이 비경구 투여되는 경우, 그것은 이하에 상술되는 바와 같이 제약상 허용되는 비경구 비히클 또는 희석제와 함께 주사가능한 단위 투여 형태로 제제화될 수 있다.
인간 환자를 치료하기 위한 용량은 1일당 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 약 20 mg 내지 약 1600 mg의 범위일 수 있다. 전형적인 용량은 화합물 약 50 mg 내지 약 800 mg일 수 있다. 용량은 특정한 화합물의 흡수, 분포, 대사 및 배출을 포함하는 약동학 (PK) 및 약역학 (PD) 특성에 따라 1일 1회 (QD), 1일 2회 (BID), 또는 더 빈번하게 투여될 수 있다. 또한, 독성 인자가 투여량 및 투여 요법에 영향을 줄 수도 있다. 경구 투여되는 경우, 환제, 캡슐 또는 정제는 명시된 기간 동안 매일 2회, 매일, 또는 덜 빈번하게, 예컨대 주 1회 또는 2주나 3주에 1회 섭취될 수 있다. 투약법은 다수의 요법 순환 동안 반복될 수도 있다.
치료 방법
(1) 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 (2) 화학요법제의 치료 조합물은 포유동물에서 AKT 키나제에 의해 조절되는 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는 질환, 상태 및/또는 장애를 치료하는 데 유용하다. 본 발명의 방법에 따라 치료할 수 있는 암은 중피종, 자궁내막암, 신경아교종, 췌장암, 유방암, 폐암, 난소암, 전립선암, 흑색종, 위암, 결장암, 두경부암을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 특정 조합물은 특정 암 표현형에 대해 개선된 효과를 제공하는 것으로 측정되었다. 예를 들어, 본 발명의 특정 조합물은 PTEN 돌연변이 (또는 낮음 또는 없음 상태), AKT 돌연변이 (또는 높은 pAKT 발현 또는 증폭 수준), PI3K 돌연변이, Her2/ErbB2 증폭, RAS 돌연변이, RAF 돌연변이 또는 상기의 조합과 관련된 암에 대해 개선된 효과를 제공한다.
따라서, 본원에 기재된 특정 조합물은 이러한 유형의 암에 대해 특히 유용할 수 있다.
예를 들어, 결장직장암에서, RAS/RAF 돌연변이 (KRAS G13D, G12D, G12V 또는 그의 조합)와 조합된 PI3k/AKT 돌연변이 (예를 들어, PI3K H1047R, E545K, D549N, P421L, L568F, L569F, P449T 또는 그의 조합)는 본원의 조합에 대해 강한 반응이 예측되고, GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물에 대해 강한 상승작용이 나타났다.
또한, 비-소세포 폐암에서, GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물에 대해 강한 상승작용이 나타났고, 여기서 (i) PI3k/AKT 돌연변이 (PI3k E545K, L997P, M772X, N996H 또는 그의 조합) 및 RAS/RAF 돌연변이 (Q61H, G12C, Q61K, N85K, G12S, BRAF V600E 또는 그의 조합)의 조합이 발견되고, (ii) RAS/RAF의 조합이 PI3k 돌연변이 없이 발견된다.
또한, 흑색종에서, GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물에 대해 강한 상승작용이 나타났고, 여기서 (i) BRAF V600E 돌연변이가 발견되고, (ii) BRAF V600E 돌연변이 또는 결실 또는 증폭이, 없음 또는 낮음 상태인 PTEN 돌연변이 또는 높은 pAKT 발현 또는 활성 수준과 함께 발견된다.
환자가 BRAF V600E 돌연변이를 포함하는지를 시험하는 키트는 상업적으로 입수가능하다. 한 예는 코바스(COBAS)® 4800 BRAF V600 돌연변이 시험 (로슈 분자 시스템 인크.)이며, 이것은 포르말린-고정, 파라핀-포매된 (FFPET) 인간 흑색종 조직 내 BRAF V600E 돌연변이를 검출한다. 이것은 흑색종 종양이 BRAF 유전자의 돌연변이된 형태로 잠복하는 환자를 치료하기 위해 고안된, 베무라페닙 또는 그의 제약상 허용되는 염과의 치료를 위한 동반 진단법으로서 미국에서 승인되었다. 전임상 및 임상 조사에서, 코바스® BRAF 돌연변이 시험은 BRAF V600E (1799 T>A) 돌연변이를 검출하는데 있어서 97.3% 양성 일치를 가졌는데, 이는 COSMIC 데이터베이스에 보고된 모든 BRAF 돌연변이의 >~85%를 나타낸다.
포르말린-고정, 파라핀-포매된 조직 (FFPET)에서, 코바스® BRAF 돌연변이 시험은 V600E 돌연변이를 >5% 돌연변이 수준에서 검출할 수 있다. 상기 시험은 또한 다른 V600 돌연변이 예컨대, V600D 및 V600K를 검출할 수 있다. 코바스® BRAF 돌연변이 시험은 시편, 예컨대, 환자로부터 수득한 조직 샘플 또는 종양 세포의 수령으로부터 8시간 미만 내에 수행될 수 있다. 코바스® 4800 BRAF V600 돌연변이 시험은 코바스® 4800 시스템 (v2.0)상 실시간 PCR 시험이며, 종양이 BRAF V600E 돌연변이를 운반하는 흑색종 환자를 선발하는 보조로서 사용되는 것을 의도한다.
PTEN 없음 (또는 낮음) 상태는 당업계에 공지된 것과 같은 임의의 적합한 수단에 의해 측정될 수 있다. 한 예에서, IHC가 사용된다. 대안적으로, 웨스턴 블롯 분석이 사용될 수 있다. PTEN에 대한 항체는 상업적으로 입수가능하다 (미국 메사추세츠주 비벌리에 소재하는 셀 시그널링 테크놀로지(Cell Signaling Technology), 미국 메사추세츠주 윈체스터에 소재하는 캐스케이드 바이오사이언시즈(Cascade Biosciences)). PTEN 상태에 대한 IHC 및 웨스턴 블롯 분석에 대한 예시적 절차는 문헌 [Neshat, M. S. et al. Enhanced sensitivity of PTEN-deficient tumors to inhibition of FRAP/mTOR, Proc. Natl Acad. Sci. USA 98, 10314-10319 (2001)] 및 [Perren, A., et. al. Immunohistochemical Evidence of Loss of PTEN Expression in Primary Ductal Adenocarcinomas of the Breast, American Journal of Pathology, Vol. 155, No. 4, October 1999]에 기재되어 있다. 추가로, AKT 돌연변이, PI3K 돌연변이, 및 Her2/ErbB2 증폭과 관련된 암은 당업계에 공지된 기술을 이용하여 확인할 수 있다.
소정의 샘플에서 비-활성화되거나 비-인산화된 AKT의 수준에 비한 AKT 활성화 또는 인산화 ("pAKT")의 수준은 당업계에 공지된 방법에 의해 측정될 수 있다. pAKT 상태는 비 (예를 들어, 종양 세포에서의 pAKT의 양 나누기 동일한 유형의 비-종양성 세포에서의 pAKT 양) 또는 감산 (예를 들어, 종양 세포에서의 pAKT의 양 마이너스 세포에서의 또는 동일한 유형의 비-종양성 세포에서의 pAKT 양)의 측면에서 표현될 수 있다. pAKT 프로파일은 또한 AKT의 인산화된 하류 표적 (예를 들어, pGSK 또는 PRAS40)의 양을 측정함으로써 경로의 활성화 수준의 측면에서 표현될 수 있다. 높은 pAKT는 기준선 값보다 높은 샘플에서의 전반적인 AKT의 활성화 또는 인산화 수준을 지칭한다. 한 예에서, 기준선 값은 소정의 세포 유형에 대한 pAKT의 기준 수준이다. 또 다른 예에서, 기준선 값은 샘플 세포, 예를 들어 비-암성 또는 세포의 소정의 군집에서의 pAKT의 평균(average) 또는 평균(mean) 수준이다. 또 다른 예에서, 높은 pAKT는 동일한 포유동물 또는 환자 군집으로부터의 동일한 유형의 정상인, 건강한 (예컨대 비-종양성) 세포의 평균과 비교하여, 종양 세포 내에 인산화 또는 활성화된 AKT를 과다-발현하거나 또는 -증폭한 종양 세포를 지칭한다. pAKT 프로파일은 또한 화학식 I의 화합물과 베무라페닙의 특정 조합의 효능을, 특히 베메라페닙 내성 암, 예컨대, 전이성 또는 절제불가능한 흑색종을 갖는 환자에서 예측하기 위해, 특정 PI3k/AKT 키나제 경로 억제제의 효능을, 또는 예를 들어 BRAF V600E 돌연변이 상태와 함께 예측하기 위한 다른 마커, 예를 들어 실시예 FOXO3a 국재화 프로파일과 접합하여 사용될 수 있다. 조직 샘플 내 pAKT를 측정하기 위한 키트는 상업적으로 입수가능하다 (예를 들어, 포스포-Akt (Thr308) STAR ELISA 키트, EMD 밀리포어).
PI3k, KRAS 및 AKT 돌연변이의 존재를 시험하기 위한 키트는 상업적으로 입수가능하다 (퀴아젠(Qiagen)).
한 구체적 측면에서, 본 발명은 본 발명의 조합물을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, PTEN 돌연변이 또는 발현의 소실, AKT 돌연변이 또는 증폭, PI3K 돌연변이 또는 증폭, Her2/ErbB2 돌연변이 또는 증폭, KRAS 돌연변이 또는 증폭, BRAF 돌연변이 또는 증폭 또는 이들의 조합과 관련된 암을 갖는 환자의 치료 방법을 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 PTEN 돌연변이 또는 발현의 소실, AKT 돌연변이 또는 증폭, PI3K 돌연변이 또는 증폭, 또는 Her2/ErbB2 증폭, KRAS 돌연변이 또는 증폭, BRAF 돌연변이 또는 증폭 또는 이들의 조합과 환자의 암의 관련이 본 발명의 조합물로 치료될 수 있는 암의 표지인, 환자의 암이 PTEN 돌연변이 또는 발현의 소실, AKT 돌연변이 또는 증폭, PI3K 돌연변이 또는 증폭, 또는 Her2/ErbB2 증폭, KRAS 돌연변이 또는 증폭, BRAF 돌연변이 또는 증폭 또는 이들의 조합과 관련되는지를 측정하는 것을 포함하는, 본 발명의 조합물로 치료될 수 있는 암을 갖는 환자의 확인 방법을 제공한다. 추가의 측면에서, 본 발명은 본 발명의 조합물로 이렇게 확인되는 환자를 치료하는 것을 더 포함하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 암은 난소암, 유방암, 흑색종, 결장암 또는 비-소세포 폐암이다.
제조품
본 발명의 또 다른 실시양태에서는, 앞서 기재된 질환 및 장애의 치료에 유용한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 함유하는 제조품 또는 "키트"가 제공된다. 한 실시양태에서, 키트는 용기 및 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다.
키트는 추가로 용기 상에 또는 용기와 결합하여 표지 또는 포장 삽입물을 포함할 수 있다. "포장 삽입물"이라는 용어는 치료 생성물의 사용과 관련한 지시사항, 용법, 투여량, 투여, 금기 및/또는 경고에 대한 정보를 함유하고 있는, 이러한 치료 생성물의 상업용 패키지에 통상적으로 포함되는 설명서를 가리킨다. 적합한 용기는, 예를 들어 병, 바이알, 시린지, 블리스터 팩 등을 포함한다. 용기는 다양한 재료, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로 형성될 수 있다. 용기는 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 상태를 치료하는 데 효과적이고 멸균 접근 포트를 가질 수 있는 그의 제제를 담고 있을 수 있다 (예를 들어, 용기는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개를 갖는 바이알 또는 정맥내 용액 백일 수 있음). 조성물 내 하나 이상의 활성제는 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 표지 또는 포장 삽입물은 조성물이 선택된 상태, 예컨대 암을 치료하는 데 사용됨을 지시한다. 한 실시양태에서, 표지 또는 포장 삽입물은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 조성물이 비정상적 세포 성장으로부터 발생한 장애를 치료하는 데 사용될 수 있음을 지시한다. 표지 또는 포장 삽입물은 또한 조성물이 다른 장애를 치료하는 데 사용될 수 있음을 지시할 수도 있다. 대안적으로, 또는 추가로, 제조품은 제약상 허용되는 완충제, 예컨대 정박테리아 주사용수 (BWFI), 포스페이트-완충 염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. 그것은 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질, 예컨대 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 시린지를 추가로 포함할 수 있다.
키트는 추가로 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 존재한다면 제2 제약 제제의 투여를 위한 지시서를 포함할 수 있다. 예를 들어, 키트가 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제1 조성물 및 제2 제약 제제를 포함하는 경우, 키트는 제1 및 제2 제약 조성물을 그것을 필요로 하는 환자에게 동시, 순차 또는 개별 투여하기 위한 지시서를 추가로 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 키트는 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 고체 경구 형태, 예컨대 정제 또는 캡슐의 전달에 적합하다. 이러한 키트는 바람직하게는 다수의 단위 투여량을 포함한다. 이러한 키트는 투여량을 그들의 의도된 사용 순서로 배열하여 갖는 카드를 포함할 수 있다. 이러한 키트의 한 예는 "블리스터 팩"이다. 블리스터 팩은 포장 산업에서 익히 공지되어 있으며, 제약 단위 투여 형태를 포장하는 데 널리 사용된다. 원하는 경우에는, 기억 보조장치가, 예를 들어 숫자, 문자 또는 다른 표시 형태로, 또는 투여량이 투여될 수 있는 치료 스케줄 상의 날짜를 나타내고 있는 달력 삽입물과 함께 제공될 수 있다.
한 실시양태에 따르면, 키트는 (a) 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 그 안에 담고 있는 제1 용기; 및 임의로는 (b) 제2 제약 제제를 그 안에 담고 있는 제2 용기를 포함할 수 있으며, 여기서 제2 제약 제제는 항-과다증식 활성을 갖는 제2 화합물을 포함한다. 대안적으로, 또는 추가로, 키트는 제약상 허용되는 완충제, 예컨대 정박테리아 주사용수 (BWFI), 포스페이트-완충 염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제3 용기를 추가로 포함할 수 있다. 그것은 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질, 예컨대 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 시린지를 추가로 포함할 수 있다.
키트가 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조성물 및 제2 치료제, 즉 화학요법제를 포함하는 경우, 상기 키트는 개별 조성물을 함유하기 위한 용기, 예컨대 분할된 병 또는 분할된 호일 패킷을 포함할 수 있지만, 개별 조성물은 또한 단일의 분할되지 않은 용기에 함유될 수도 있다. 전형적으로, 키트는 개별 성분의 투여를 위한 지시서를 포함한다. 키트 형태는 개별 성분이 바람직하게는 다른 투여 형태 (예를 들어, 경구 및 비경구)로 투여되거나, 다른 투여량 간격으로 투여되거나, 또는 조합물의 개개 성분의 적정이 처방 의사에 의해 요구될 때 특히 유리하다.
본 발명의 구체적 측면
본 발명의 한 구체적 측면에서, 과다증식성 장애는 암이다.
본 발명의 한 구체적 측면에서, 암은 PTEN 돌연변이와 연관된다.
본 발명의 한 구체적 측면에서, 암은 AKT 돌연변이, 과다발현 또는 증폭과 연관된다.
본 발명의 한 구체적 측면에서, 암은 PI3K 돌연변이와 연관된다.
본 발명의 구체적 측면에서, 암은 KRAS 돌연변이와 연관된다.
본 발명의 구체적 측면에서, 암은 BRAF 돌연변이와 연관된다.
본 발명의 구체적 측면에서, 암은 (1) PTEN, AKT 또는 PI3K 돌연변이, 및 (2) KRAS 또는 BRAF 돌연변이의 조합과 연관된다. 한 예에서, 암은 난소암, 유방암, 흑색종, 결장암 또는 비-소세포 폐암이다.
본 발명의 구체적 측면에서, 암은 GDC-0068 및 GDC-0973 단일 작용제 요법 중 하나 또는 둘 다에 대해 내성을 갖지만, GDC-0068 및 GDC-0973 요법의 조합에 대해서는 반응을 보인다. 한 예에서, 암은 난소암, 유방암, 흑색종, 결장암 또는 비-소세포 폐암이다.
본 발명의 구체적 측면에서, 암은 중피종, 자궁내막암, 췌장암, 유방암, 폐암, 난소암, 전립선암 (예를 들어, 거세 저항성 전립선암), 흑색종, 위암, 결장암, 신장암, 두경부암, 및 신경아교종이다.
본 발명의 구체적 측면에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 경구로 투여된다.
본 발명의 구체적 측면에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 GDC-0973 또는 PD-0325901 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 투여된다.
본 발명의 구체적 측면에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 GDC-0973 또는 PD-0325901 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 투여되고, 암은 췌장암이다.
본 발명의 구체적 측면에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 GDC-0973 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 투여되고, 암은 췌장암이다.
본 발명의 구체적 측면에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 GDC-0973 또는 PD-0325901 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 투여되고, 암은 결장암이다.
본 발명의 구체적 측면에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 GDC-0973 또는 PD-0325901 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 투여되고, 암은 유방암이다.
본 발명의 구체적 측면에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 GDC-0973 또는 PD-0325901 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 투여되고, 암은 난소암이다.
본 발명의 구체적 측면에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 GDC-0973 또는 PD-0325901 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 투여되고, 암은 폐암이다.
본 발명의 구체적 측면에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 GDC-0973 또는 PD-0325901 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 투여되고, 암은 흑색종이다.
본 발명의 구체적 측면에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 정제로 제제화된다.
실시예
본 발명을 설명하기 위하여, 하기 실시예가 포함된다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 제한하지 않으며 본 발명을 실행하는 방법을 제안하려는 의도일뿐임을 이해해야 한다.
실시예 1
Figure pct00006
(S)-2-(4- 클로로페닐 )-1-(4-((5R,7R)-7-히드록시-5- 메틸 -6,7- 디히드로 -5H- 시클로펜타[d]피리미딘 -4-일)피페라진-1-일)-3-( 이소프로필아미노 )프로판-1-온
단계 1: EtOAc (900 mL) 중의 에틸 풀레게네이트 (130 g, 662 mmol)를 드라이아이스-이소프로판올 조를 이용하여 -78℃로 냉각시켰다. 반응물의 색이 자주색으로 변할 때까지, 상기 혼합물을 오존분해하였다. 이 시점에, 오존 발생이 중단되었고, 반응물을 건조-빙조에서 제거하였다. 반응 혼합물이 황색으로 변할 때까지, 산소를 반응 혼합물을 통해 버블링하였다. 반응 혼합물을 진공하에 농축하고, 생성된 잔류물을 빙초산 (400 mL) 중에 용해시켰다. 용액을 0℃로 냉각시키고, Zn 분진 (65 g, 993 mmol)을 30분에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 이어서, 반응물을 2시간 동안 교반하고, 이 시점에 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하여 아연 분진을 제거하였다. 아세트산을 수성 NaOH 및 NaHCO3으로 pH 7로 중화시키고, 에테르 (3 X 800 mL)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수, MgSO4로 건조시키고, 농축하여 (2R)-에틸 2-메틸-5-옥소시클로펜탄-카르복실레이트를 갈색 액체 (107g, 95%)로서 수득하였다.
단계 2: 아세트산암모늄 (240.03 g, 3113.9 mmol)을 MeOH (1.2L) 중 (R)-에틸 2-메틸-5-옥소시클로펜탄카르복실레이트 (106.0 g, 622.78 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 질소하에 20시간 동안 교반하였고, 그 후 TLC 및 HPLC로 판단했을 때 반응은 완료되었다. 반응 혼합물을 농축하여 MeOH를 제거하였다. 생성된 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, H2O로 2회, 염수로 1회 세척하고, 건조하고 (Na2SO4), 여과하고, 농축하여 (R)-에틸 2-아미노-5-메틸시클로펜트-1-엔카르복실레이트 (102 g, 97% 수율)를 오렌지색 오일로서 수득하였다. LC/MS (APCI+) m/z 170 [M+H]+.
단계 3: 포름아미드 (303.456 ml, 7640.19 mmol) 중의 (R)-에틸 2-아미노-5-메틸시클로펜트-1-엔카르복실레이트 (161.61 g, 955.024 mmol) 및 포름산암모늄 (90.3298 g, 1432.54 mmol)을 함유하는 용액을 150℃의 내부 온도로 가열하고, 17시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉각하고, 2L 단일 목 플라스크로 옮겼다. 이어서, 잉여 포름아미딘을 고진공 증류로 제거하였다. 포름아미딘 방출이 멈추면, 잔잔한 용기 내에 남아있는 오일을 DCM에 용해시키고, 염수 (3 X 200 mL)로 세척하였다. 합한 수성 세척물을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조하고 (Na2SO4), 여과하고, 농축하였다. 생성된 갈색 오일을 최소량의 DCM에 용해시키고, 상기 용액을 분리 깔때기를 이용하여 에테르 교반 용액 (DCM 용액 대비 에테르 약 5 부피)에 첨가하였고, 이로써 약간의 갈색 침전물이 형성되었다. 상기 갈색 침전물을 중간 소결유리 깔때기를 통해 여과로 제거하고, 이를 에테르로 세정하고 처리하였다(dispose). 여과물을 농축하고, 에테르로부터 분쇄를 2회 반복한 후, 고진공 라인에서 건조하여 (R)-5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-올 (93.225 g, 65.00% 수율)을 갈색-황색의 물렁한(pasty) 고체로서 수득하였다. LC/MS (APCI-) m/z 149.2.
단계 4: 순수한 POCl3 (463.9 ml, 5067 mmol)을 첨가 깔때기로 DCE (1.2 L) 중 (R)-5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-올 (152.2 g, 1013 mmol)의 0℃ 용액에 서서히 첨가하였다. 첨가가 완료된 후, 반응 혼합물을 실온으로 가온한 후, 환류 가열하고 70분 동안 교반하였다. HPLC로 결정되는 바와 같이 반응이 완료되었다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 잉여 POCl3을 하기와 같이 4 부분으로 켄칭하였다: 반응 혼합물을 분리 깔때기로 옮기고, 빙조에서 냉각된 포화 NaHCO3 용액 및 얼음을 함유하는 비커로 떨어뜨렸다. 반응 혼합물의 각 부분의 첨가가 완료되면, 켄칭된 혼합물을 30분 동안 교반하여 분리 깔때기로 옮기기 전 POCl3의 완전한 파괴를 보장하였다. 혼합물을 분리 깔때기로 옮기고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 추출물을 건조하고 (Na2SO4), 여과하고, 농축하였다. 조물질을 하기와 같이 실리카 겔 상에서 정제하였다: 실리카 겔 (1 kg)을 3L 소결유리 깔때기 상에서 9:1 헥산:에틸 아세테이트 중에 슬러리화하고, 실리카를 진공하에 놓고, 모래로 덮었다. 조물질을 DCM/헥산 혼합물로 로딩하고, 화합물을 진공하에 1L 가지달린(sidearm) 플라스크를 이용하여 용출시켰다. 높은 Rf 부산물이 먼저 용출된 다음, (R)-4-클로로-5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘 (104.4 g, 61.09% 수율)이 갈색 오일로서 용출되었다. 트리에틸아민 (93.0 ml, 534 mmol) 및 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (34.8 g, 187 mmol)를 n-BuOH (250 mL) 중 (R)-4-클로로-5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘 (30.0 g, 178 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소하에 환류 가열하고, 밤새 (17시간) 교반하고, 그 후 이를 회전증발기 상에서 농축하였다. 생성된 오일을 DCM 중에 용해시키고, H2O로 세척하고, 건조하고 (Na2SO4), 여과하고, 농축하였다. 생성된 갈색 오일을 생성물이 깨끗하게 용출될 때까지 먼저 2:1 헥산:에틸 아세테이트로 용출시킨 다음, 1:1 → 1:5 DCM:에틸 아세테이트 구배로 용출시키는 실리카 겔 상에서 정제하여 (R)-tert-부틸 4-(5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (42.0 g, 74.1% 수율)를 베이지색 분말로서 수득하였다. LC/MS (APCI+) m/z 319.1 [M+H]+.
단계 5: 고체 77% 맥스. MCPBA (23.9 g, 107 mmol)를 CHCl3 (310 mL) 중 (R)-tert-부틸 4-(5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (20.0 g, 62.8 mmol)의 0℃ 용액에 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반한 후, 실온으로 가온하고, 90분 동안 교반하였다. HPLC는 7.5시간 후에 유사하게 보였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시킨 후, NaHCO3 (13.2 g, 157 mmol) 및 또다른 m-CPBA 0.5 당량을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 (14시간) 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, H2O (50 mL) 중 Na2S2O3 (29.8 g, 188 mmol)의 용액을 첨가 깔때기로 적가하였다. 그 후, H2O (70 mL) 중 Na2CO3 (24.6 g, 232 mmol)의 용액을 첨가 깔때기로 첨가하였다 (혼합물이 균질하게 변함). 반응 혼합물을 30분 동안 교반한 후, 혼합물을 CHCl3 (3 X 150 mL)로 추출하였다. 합한 추출물을 건조하고 (Na2SO4), 여과하고, 농축하여 N-옥시드를 수득하였다. LC/MS (APCI+) m/z 335.1 [M+H]+.
단계 6: Ac2O (77.0 ml, 816 mmol)를 단계 5로부터의 N-옥시드 (21.0 g, 62.8 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소하에 90℃ 모래조에서 가열하고, 100분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 잉여 아세트산 무수물을 회전 증발로 제거하였다. 생성된 오일을 DCM에 용해시킨 후, 얼음 포화 Na2CO3에 조심스럽게 부었다. 혼합물을 DCM으로 추출하고, 합한 추출물을 건조하고 (Na2SO4), 여과하고, 농축하여 (5R)-tert-부틸 4-(7-아세톡시-5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (23.6 g, 100%)를 갈색 발포체로서 수득하였다. LC/MS (APCI+) m/z 377.1 [M+H]+.
단계 7: LiOH-H2O (6.577 g, 156.7 mmol)를 2:1 THF:H2O (320 mL) 중 (5R)-tert-부틸 4-(7-아세톡시-5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (23.6 g, 62.69 mmol)의 0℃ 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반한 후, 실온으로 가온하였다. LC/MS는 3시간과 4.5시간에서 동일하게 보였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시킨 후, 포화 NH4Cl을 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 교반하고, 대부분의 THF를 회전 증발로 제거하였다. 혼합물을 EtOAc (3 X 250 mL)로 추출하고, 합한 추출물을 건조하고 (Na2SO4), 여과하고, 농축하였다. 조물질을 바이오타지 65M 상에서 4:1 DCM:에틸 아세테이트, 이어서 1:1 → 1:4 DCM:에틸 아세테이트로의 구배로 플래싱(flash)하였다. 생성물이 용출되면, 에틸 아세테이트를 칼럼을 통해 플러싱하였다. 이어서, 30:1 DCM:MeOH로 나머지 생성물 (8.83 g)을 용출시켰다. 혼합된 분획을 동일한 조건을 이용하여 바이오타지 40M으로 재-플래싱하여 또다른 2.99 g을 수득하고, 이로써 (5R)-tert-부틸 4-(7-히드록시-5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트의 합한 산출물 (11.82 g, 56.38% 수율)을 갈색 발포체로서 수득하였다. LC/MS (APCI+) m/z 335.1 [M+H]+.
단계 8: DCM (50 mL) 중 DMSO (5.45 ml, 76.8 mmol)의 용액을 DCM (150 mL) 중 옥살릴 클로라이드 (3.35 ml, 38.4 mmol)의 -78℃ 용액에 첨가 깔때기로 적가하였다. 반응 혼합물을 35분 동안 교반한 후, DCM (80 mL) 중 (5R)-tert-부틸 4-(7-히드록시-5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (9.17 g, 27.4 mmol)의 용액을 첨가 깔때기로 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 또다른 1시간 동안 -78℃에서 교반하고, 그 후 순수한 트리에틸아민 (18.0 ml, 129 mmol)을 혼합물에 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온으로 가온한 후, 30분 동안 교반하였다. H2O를 첨가하였다. 혼합물을 DCM (3 X 200 mL)로 추출하고, 합한 추출물을 건조하고 (Na2SO4), 여과하고, 진공중에 농축하였다. 조물질을 실리카 겔 (바이오타지 65M) 상에서 정제하는데, 칼럼을 약 800 mL 4:1 DCM:EtOAc, 이어서 생성물이 용출될 때까지 1:1 DCM:에틸 아세테이트로의 구배, 이어서 1:4 DCM:EtOAc 용출된 생성물로 플러싱하여 (R)-tert-부틸 4-(5-메틸-7-옥소-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (7.5 g, 82.3% 수율)를 갈색 발포체로서 수득하였다. 발포체를 DCM/헥산으로부터 농축시켜 (3 X), 매우 담갈색인 발포체를 수득하였다. HPLC >95% 면적. LC/MS (APCI+) m/z 333 [M+H]+.
단계 9: 트리에틸아민 (4.33 ml, 31.1 mmol; 사용 30분 전 질소로 탈기시킴) 및 포름산 (1.36 ml, 36.1 mmol; 사용 30분 전 질소로 탈기시킴)을 DCM (210 mL; 사용 30분 전 질소로 탈기시킴) 중 (R)-tert-부틸 4-(5-메틸-7-옥소-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (9.75 g, 29.3 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 교반한 후, Ru 촉매 (0.0933 g, 0.147 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 질소 양압하에 밤새 (18시간) 교반하였다. 반응 혼합물을 건조물로 농축하고, 고진공에서 건조하였다. 불순한 물질을 1:1 DCM:에틸 아세테이트 500 mL 플러싱된 것, 이어서 생성물까지 1:4 DCM:에틸 아세테이트 (두번째 지점), 이어서 순수한 에틸 아세테이트로의 구배, 이어서 25:1 DCM:MeOH 용출된 나머지 생성물이 로딩된 바이오타지 65M 상에서 플래싱하였다. 분획을 합하고, 회전 증발기 상에서 농축하였다. 잔류물을 DCM/헥산으로부터 다시 농축하여 tert-부틸 4-((5R,7R)-7-히드록시-5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (주) 및 tert-부틸 4-((5R,7S)-7-히드록시-5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (부) (9.35 g, 95.3% 수율)의 혼합물을 베이지색 발포체로서 수득하였다. LC/MS (APCI+) m/z 335 [M+H]+. 1H NMR (CDCl3)은 카르비놀 메틴의 적분에 의해 88% de를 나타내었다.
단계 10: 4-니트로벤조일 클로라이드 (4.27 g, 23.0 mmol)를 DCM (110 mL) 중 tert-부틸 4-((5R,7R)-7-히드록시-5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (7.0 g, 20.9 mmol) 및 트리에틸아민 (4.38 ml, 31.4 mmol)의 0℃ 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 그 후 포화 NaHCO3을 첨가하였다. 혼합물을 10분 교반한 후, DCM으로 추출하였다. 합한 추출물을 건조하고 (Na2SO4), 여과하고, 농축하였다. 조물질을 바이오타지 65M (3:1 헥산:에틸 아세테이트 로딩된 조물질, 이어서 2:1 헥산:에틸 아세테이트 용출된 tert-부틸 4-((5R,7R)-5-메틸-7-(4-니트로벤조일옥시)-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 및 약간의 혼합된 분획) 상에서 플래싱하였다. 이어서, tert-부틸 4-((5R,7S)-5-메틸-7-(4-니트로벤조일옥시)-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트를 1:2 헥산:에틸 아세테이트를 이용하여 용출하였다. 생성물을 가진 분획을 회전 증발로 농축하여 tert-부틸 4-((5R,7R)-5-메틸-7-(4-니트로벤조일옥시)-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (8.55 g, 84.5% 수율)를 황색 발포체로서 수득하였다. LC/MS (APCI+) m/z 484 [M+H]+. 1H NMR (CDCl3)은 단일 부분입체이성질체를 나타내었다. 다른 부분입체이성질체를 가진 분획을 회전 증발로 농축하여 tert-부틸 4-((5R,7S)-5-메틸-7-(4-니트로벤조일옥시)-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (0.356 g, 3.52% 수율)를 갈색 발포체로서 수득하였다. LC/MS (APCI+) m/z 484 [M+H]+.
단계 11: LiOH-H2O (0.499 g, 11.9 mmol)를 2:1 THF:H2O (40 mL) 중 tert-부틸 4-((5R,7R)-5-메틸-7-(4-니트로벤조일옥시)-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (2.30 g, 4.76 mmol)의 0℃ 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. THF를 회전 증발로 제거하고, 포화 NaHCO3을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 추출물을 포화 NaHCO3로 세척하고 (1 X), 건조하고 (Na2SO4), 여과하고, 농축하여 tert-부틸 4-((5R,7R)-7-히드록시-5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (1.59 g, 100.0% 수율)를 황색 발포체로서 수득하였다. 후처리 후의 HPLC는 딱 >98 면적% 순수인 생성물이었다. LC/MS (APCI+) m/z 335 [M+H]+. tert-부틸 4-((5R,7S)-7-히드록시-5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트를 유사한 방법을 이용하여 제조하였다.
단계 12: 4M HCl/디옥산 (11.2 ml, 44.9 mmol)을 디옥산 (15 mL) 중 tert-부틸 4-((5R,7R)-7-히드록시-5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (0.600 g, 1.79 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 질소하에 밤새 (20시간) 교반하였다. 혼합물을 건조물로 농축하고, 고진공 라인 상에서 건조하였다. 조물질을 에테르 중에 현탁시키고, 초음파처리하고, 5분 동안 교반하였다. 고체를 질소 압력이 있는 중간 소결유리 깔때기를 통한 여과에 의해 단리하고, 에테르로 세정하고, 질소 압력 하에 건조하고, 고진공 라인 상에서 추가로 건조하여 (5R,7R)-5-메틸-4-(피페라진-1-일)-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-7-올 디히드로클로라이드 (0.440 g, 79.8% 수율)를 황색 분말로서 수득하였다. LC/MS (APCI+) m/z 235. (5R,7S)-5-메틸-4-(피페라진-1-일)-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-7-올 디히드로클로라이드를 유사한 방법을 이용하여 제조하였다.
단계 13: 메틸 2-(4-클로로페닐)아세테이트 (36.7 g, 199 mmol) 및 파라포름알데히드 (6.27 g, 209 mmol)를 DMSO (400 mL) 중에 용해/현탁하고, NaOMe (537 mg, 9.94 mmol)로 처리하였다. 조물질의 TLC 분석에 의한 완료까지 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙냉수 (700 mL; 백색 에멀젼)에 붓고, 1M HCl 용액의 첨가로 중화시켰다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 X)로 추출하고, 유기부를 합하였다. 유기 층을 물 (2 X), 염수 (1 X)로 세척하고, 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공중에 농축하여 조 생성물을 황색 오일로서 수득하였다. 잔류물을 출발 물질/올레핀이 수집될 때까지 9:1 헥산:에틸 아세테이트로 용출되는 큰 소결유리 여과 실리카 겔 상에 로딩하였다. 이어서, 순수한 목적 생성물이 완전히 용출될 때까지 플러그를 1:1 헥산:에틸 아세테이트로 용출하였다. 농축된 순수한 분획으로 메틸 2-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로파노에이트를 무색 오일 (39.4g, 92%)로서 수득하였다.
단계 14: 메틸 2-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로파노에이트 (39.4 g, 184 mmol)를 DCM (500 mL) 중에 용해시키고, TEA (64.0 mL, 459 mmol)로 처리하였다. 용액을 0℃로 냉각시키고, MsCl (15.6 mL, 202 mmol)로 서서히 처리한 후, TLC 분석에 의한 완료까지 30분 동안 교반하였다. 상기 용액을 1N HCl 용액으로 분배하고, 수성 층을 DCM으로 1회 추출하였다. 합한 유기 층을 1N HCl 용액으로 1회 더 세척하고, 분리하고, 희석 NaHCO3 용액으로 세척하고, 분리하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공중에 농축하여 오렌지색 오일을 수득하였다. 잔류물을 실리카 겔 플러그가 있는 큰 소결유리 필터 상에 로딩하고, 9:1의 헥산:에틸 아세테이트로 용출시켜 TLC 분석에 의한 순수한 목적 생성물을 수득하였다. 농축된 수수 분획으로 메틸 2-(4-클로로페닐)아크릴레이트를 무색 오일 (30.8 g, 85%)로서 수득하였다. 상기 메틸 2-(4-클로로페닐)아크릴레이트 (500 mg, 2.54 mmol)를 THF (1.35 mL) 중의 용액으로서 THF (5.0 mL) 중 i-PrNH2 (217 uL, 2.54 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 LCMS 분석에 의한 완료까지 실온에서 밤새 교반하였다. Boc2O (584 uL, 2.54 mmol)를 피펫을 통해 교반 아민에 첨가하였다. 반응물을 혼합물의 LCMS 및 TLC 분석에 의한 완료까지 밤새 교반하였다. 용액을 진공중에 농축하여 메틸 3-(tert-부톡시카르보닐(이소프로필)아미노)-2-(4-클로로페닐)프로파노에이트를 무색 오일 (854 mg, 94%)로서 수득하였다. LC/MS (APCI+) m/z 256.1 [M-Boc]+.
단계 15: 메틸 3-(tert-부톡시카르보닐(이소프로필)아미노)-2-(4-클로로페닐)프로파노에이트 (133 g, 374 mmol)를 THF (1.0 L) 중에 용해시키고, 실온에서 KOTMS (56.0 g, 392 mmol)로 처리하였다. 혼합물을 조물질의 LCMS 분석에 의한 완료까지 밤새 교반하였다. 혼합물을 진공중에 농축하여 습윤 발포체를 수득하고, 이를 진공하에 밤새 건조시켜 칼륨 3-(tert-부톡시카르보닐(이소프로필)아미노)-2-(4-클로로페닐)프로파노에이트를 백색 고체 (148.7 g, 105%)로서 수득하였다. LC/MS (APCI+) m/z 242.1 [M-Boc-K]+.
단계 16: 칼륨 3-(tert-부톡시카르보닐(이소프로필)아미노)-2-(4-클로로페닐)프로파노에이트 (77.2 g, 203 mmol)를 THF (515 mL) 중에 용해시키고, 피발로일 클로라이드 (26.3 mL, 213 mmol)로 실온에서 처리하였다. 혼합물을 3시간 동안 교반하여 혼합 무수물을 형성하였다. (S)-4-벤질옥사졸리딘-2-온 (46.1 g, 260 mmol)을 THF (600 mL) 중에 용해시키고, 별개의 플라스크에서 -78℃로 냉각시켰다. 용액을 n-BuLi (헥산 중의 2.50M 용액 102 mL, 254 mmol)로 처리하고, 1시간 동안 교반하였다. 제조된 무수물 용액을 캐뉼라를 통해 교반 Li-옥사졸리디논에 첨가하고, 혼합물을 실온으로 밤새 가온하였다. 혼합물을 포화 염화암모늄 용액의 첨가로 켄칭한 후, 더 많은 물 및 에틸 아세테이트 사이에서 분배하였다. 수성 층을 수 회 추출하고, 유기부를 합하였다. 유기 층을 물, 이어서 염수로 세척하고, 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공중에 농축하였다. 잔류물을 크로마토그래피 (4:1 헥산:에틸 아세테이트로 용출되는 실리카 겔)를 통해 정제/분리하여 (부분입체이성질체) 완전히 분리된 부분입체이성질체를 점성 오일로서 수득하였다: tert-부틸 (R)-3-((S)-4-벤질-2-옥소옥사졸리딘-3-일)-2-(4-클로로페닐)-3-옥소프로필(이소프로필)카르바메이트 (12.16 g, 산 라세미체의 1/2을 기준으로 24%) 및 tert-부틸 (S)-3-((S)-4-벤질-2-옥소옥사졸리딘-3-일)-2-(4-클로로페닐)-3-옥소프로필(이소프로필)카르바메이트 (39.14 g, 산 라세미체의 1/2을 기준으로 77%). LC/MS (APCI+) m/z 401.2 [M-Boc]+.
단계 17: LiOH-H2O (168 mg, 4.00 mmol)를 이것이 용해될 때까지 실온에서 THF (30 mL) 및 물 (15 mL)의 교반 용액에 첨가하였다. 혼합물을 과산화수소 (물 중 35 중량% 용액 658 uL, 8.00 mmol)로 처리하고, 실온에서 10분 동안 교반하였다. 반응물을 빙조에서 0℃로 냉각시키고, tert-부틸 (S)-3-((S)-4-벤질-2-옥소옥사졸리딘-3-일)-2-(4-클로로페닐)-3-옥소프로필(이소프로필)카르바메이트 (1.00 g, 2.00 mmol)를 THF (15 mL) 중의 용액으로서 10분에 걸쳐 첨가 깔때기를 통해 적가하였다. 혼합물을 조물질의 LCMS 분석에 의한 완료까지 밤새 실온에서 교반하였다. 반응물을 0℃로 냉각시킨 후, 첨가 깔때기를 통해 10분의 기간에 걸쳐 1M Na2SO3 (9.00 mL) 용액으로 처리하였다. 첨가가 완료된 후, 혼합물을 실온으로 10분 동안 가온하였다. 혼합물을 농축하여 THF를 제거한 후, 물로 희석하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 2회 세척하였다 (폐기). 수성 층을 에틸 아세테이트로 분배한 후, pH 2-3가 얻어질 때까지 1M HCl과 교반하면서 점적 처리하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 유기부를 합하였다. 유기부를 염수로 세척하고, 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 여과하고, 진공중에 농축하였다. 무색 오일 생성물을 고진공 하에서 1시간 동안 건조하여 (S)-3-(tert-부톡시카르보닐(이소프로필)아미노)-2-(4-클로로페닐)프로판산을 점성 오일/발포체 (685 mg, 100%)로서 수득하였다. LC/MS (APCI+) m/z 242.1 [M-Boc]+.
단계 18: DCM (40 mL) 및 DIEA (5.0 mL, 28.7 mmol) 중 (5R,7R)-5-메틸-4-(피페라진-1-일)-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-7-올 디히드로클로라이드 (2.92 g, 9.51 mmol) 및 (S)-3-(tert-부톡시카르보닐(이소프로필)아미노)-2-(4-클로로페닐)프로판산 (3.25 g, 9.51 mmol)의 용액을 실온에서 10분 동안 교반하였다. HBTU (3.61g, 9.51 mmol)를 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트 (500 mL) 중에 용해시키고, 물 (6 X 100 mL)로 세척하였다. 유기 상을 건조하고, 농축하였다. 잔류물을 EtOAc-DCM/MeOH (20:1)에 의해 용출되는 칼럼 크로마토그래피에 적용시켜 tert-부틸 (S)-2-(4-클로로페닐)-3-(4-((5R,7R)-7-히드록시-5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-3-옥소프로필(이소프로필)카르바메이트 (3.68g, 69%)를 수득하였다. LC/MS (APCI+) m/z 558.2 [M+H]+.
단계 19: tert-부틸 (S)-2-(4-클로로페닐)-3-(4-((5R,7R)-7-히드록시-5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-3-옥소프로필(이소프로필) 카르바메이트 (2.50 g, 4.48 mmol)를 디옥산 (22.4 mL)에 용해시키고, 실온에서 디옥산 중 4M HCl (22.4 mL, 89.6 mmol)로 처리하였다. 생성된 용액을 밤새 교반하여 조물질의 LCMS 분석을 완료하였다. 용액을 진공에서 농축시켜 겔을 얻고, 이를 소량의 메탄올 (10 mL)에 용해시켰다. 용액을 피펫을 통해 교반된 에테르 (300 mL)에 옮겨 목적 생성물인 백색 침전물을 얻었다. 첨가는 백색 침전물이 황색 겔로 용해될 때 약 반이었다. 물질을 진공에서 농축시켜 황색 겔을 얻고, 이를 감압하에 밤새 방치하여 (S)-2-(4-클로로페닐)-1-(4-((5R,7R)-7-히드록시-5-메틸-6,7-디히드로-5H-시클로펜타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)-3-(이소프로필아미노)프로판-1-온 디히드로클로라이드를 담황색 분말로서 수득하였다 (2.14 g, 90%).
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실시예 2 시험관내 세포 증식 검정
화학식 I의 화합물과 특정 특이적 화학요법제의 조합물의 시험관내 효능을 셀타이터-글로(CellTiter-Glo)® 발광 세포 생존율 검정 (미국 위스콘신주 메디슨에 소재하는 프로메가 코포레이션(Promega Corp.)으로부터 상업적으로 입수가능함)을 이용하여 측정할 수 있다. 이 균질성 검정 방법은 딱정벌레목 (Coleoptera) 루시페라제의 재조합 발현에 기초하며 (US 5583024; US 5674713; US 5700670), 대사적으로 활성인 세포의 지표인 존재하는 ATP의 정량화에 기초한 배양물내 생존 세포의 수를 측정한다 (문헌 [Crouch et al (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88]; US 6602677). 셀타이터-글로® 검정을 자동 고처리량 스크리닝 (HTS)에 수용적이게 하는 96 또는 384 웰 포맷에서 수행할 수 있다 (문헌 [Cree et al (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404]). 균질성 검정 절차는 단일 시약 (셀타이터-글로® 시약)을 혈청-보충 배지에서 배양된 세포에 직접적으로 첨가하는 것을 포함한다. 세포 세척, 배지의 제거 및 다중 피펫팅 단계는 필요하지 않다. 시스템은 시약의 첨가 및 혼합 후 10분에 384-웰 포맷 중 15 세포/웰만큼 적게 검출한다.
균질성 "첨가-혼합-측정" 포맷은 세포 용해, 및 존재하는 ATP의 양에 비례하여 발광 신호의 생성을 초래한다. ATP의 양은 배양물내에 존재하는 세포의 수에 정비례한다. 셀타이터-글로® 검정은 루시페라제 반응에 의해 생성되는 "성장-유형" 발광 신호를 생성하고, 사용되는 세포 유형 및 배지에 따라 일반적으로 5시간 초과의 반감기를 갖는다. 생존 세포는 상대 발광 유닛 (RLU)에 반영된다. 대상인 딱정벌레 루시페린은 ATP의 AMP로의 수반 전환 및 광자의 생성을 갖고 재조합 반딧불이 루시페라제에 의해 산화적으로 디카르복실레이트화된다. 연장된 반감기는 시약 주입기를 사용할 필요를 제거하며, 다중 플레이트의 연속식 또는 배치식 모드 프로세싱에 가요성을 부여한다. 이 세포 증식 검정은 다양한 다중웰 포맷, 예를 들어 96 또는 384 웰 포맷으로 이용될 수 있다. 데이터는 광도계 또는 CCD 카메라 영상화 장치에 의해 기록될 수 있다. 발광 출력은 상대 광 유닛 (RLU)으로서 제시되고, 시간에 대해 측정된다.
실시예 3 생체내 종양 이종이식편 효능
본 발명의 대표적인 조합물의 효능을 설치류의 암 세포의 동종이식편 또는 이종이식편을 이식하고, 종양-함유 동물을 조합물로 처리함으로써 생체내 측정하였다. 세포주, 종양 세포내의 특정 돌연변이의 존재 또는 부재, 상기 화합물의 투여의 순서, 투여 요법, 및 다른 인자에 따라 다양한 결과가 예상된다. 대상체 마우스를 약물(들) 또는 대조군 (비히클)으로 처리하고, 수 주 이상에 걸쳐 모니터링하여 종양 이중화의 시간, 로그 세포 사멸 및 종양 억제를 측정하였다. 이 모델에서 시험된 본 발명의 대표적인 조합물에 대한 결과를 도면에 나타낸다. 도면의 데이터는 각각의 작용제의 개별적인 투여에 비해 대표적인 조합물이 개선된 결과를 제공함을 입증한다.
실시예 4 PTEN 상태의 측정
PTEN 상태는 당업계에 공지된 것과 같은 임의의 적합한 수단에 의해 측정될 수 있다. 한 예에서, IHC가 사용된다. 대안적으로, 웨스턴 블롯 분석이 사용될 수 있다. PTEN에 대한 항체는 상업적으로 입수가능하다 (미국 메사추세츠주 비벌리에 소재하는 셀 시그널링 테크놀로지(Cell Signaling Technology), 미국 메사추세츠주 윈체스터에 소재하는 캐스케이드 바이오사이언시즈(Cascade Biosciences)). PTEN 상태에 대한 IHC 및 웨스턴 블롯 분석에 대한 예시적 절차는 문헌 [Neshat, M. S. et al. Enhanced sensitivity of PTEN-deficient tumors to inhibition of FRAP/mTOR, Proc. Natl Acad. Sci. USA 98, 10314-10319 (2001)] 및 [Perren, A., et. al. Immunohistochemical Evidence of Loss of PTEN Expression in Primary Ductal Adenocarcinomas of the Breast, American Journal of Pathology, Vol. 155, No. 4, October 1999]에 기재되어 있다. 추가로, AKT 돌연변이, PI3K 돌연변이, 및 Her2/ErbB2 증폭과 관련된 암은 당업계에 공지된 기술을 이용하여 확인할 수 있다.
실시예 5 세포 생존율 검정
세포를 흑색의 투명-바닥 384-웰 플레이트 (카탈로그(Catalog) 353962; 미국 뉴저지주 프랭클린 레이크에 소재하는 벡톤 디킨슨(Becton Dickinson))에 1500 세포/웰의 밀도로 플레이팅하고, 37℃, 5% CO2에서 1.5일까지 밤새 인큐베이팅하였다. GDC-0068, GDC-0973, 또는 이 둘의 조합물의 단계적 희석물을 세포에 첨가하고 추가 96시간 동안 인큐베이션하였다. 제조업체의 프로토콜 (셀타이터-글로 발광 세포 생존율 검정 키트; 카탈로그 G7573; 미국 위스콘신주 메디슨에 소재하는 프로메가)에 기재된 바와 같이 세포의 아데노신 트리포스페이트 (ATP) 수준을 측정함으로써 세포 생존율을 측정하였다. 발광 신호를 엔비전(EnVision) 2101 멀티라벨 리더(Multilabel Reader)(미국 마이애미주 월섬에 소재하는 퍼킨엘머(PerkinElmer))에 기록하였다.
억제 백분율을, 아래와 같이, GDC-0068 및 GDC-0973 조합물에 노출된 세포의 상대 광 유닛(RLU)을 DMSO에 노출된 세포의 RLU로 나누고, 1에서 이 값을 뺌으로써 계산하였다:
억제 % = 1-(RLU조합물/RLUDMSO)
BLISS 분석은 예상 억제 %(E=EGDC -0068+EGDC -0973-EGDC -0068xEGDC -0973)를 실험적으로 관찰된 억제 % EOBS와 비교한다. BLISS 스코어는 예상 억제 % E와 실험적으로 관찰된 억제 % EOBS의 차이(△E=EOBS-E)이다.
BLISS 스코어는 단일 작용제로부터의 강화작용의 정도를 정량화하고, BLISS 스코어는 단순 상가성보다 크다는 것을 제안한다. 총 BLISS 스코어 > 250은 시험된 농도 범위 내에서 강한 상승작용이 관찰되는 것으로 간주된다.
조합물 강화작용의 예는 3개의 암 세포주에서의 열지도로 나타내었다: A2058, PTEN 결핍 및 B-RAFV600E 돌연변이와 관련된 흑색종 세포주 (도 9 참조); HCT-116, PIK3CAH1047R 및 KRASG13D 돌연변이와 관련된 결장직장암 (CRC) 세포주 (도 5 참조); 및 NCI-H2122, KRASG12C 돌연변이와 관련된 비-소세포 폐암 (NSCLC) 세포주 (도 7 참조). 개별적 용량 쌍에 대해 BLISS 스코어 ≥ 15인 강한 상승작용 효과는 3개의 모든 세포주에서 0.37 μM과 10 μM 사이의 GDC-0068 농도 및 0.062 μM과 0.56 μM 사이의 GDC-0973 농도에서 관찰되었다.
GDC-0068과 GDC-0973 사이의 상승작용 효과가 RAS/RAF 및/또는 PI3K/Akt 경로의 활성화에 의존하는지를 더 조사하기 위해서, 조합믈 효과를 흑색종 환자로부터 유래된 세포주의 세트에서 비교하였다: MALME3M B-RAFV600E 전이성 흑색종 세포주 및 환자-매칭된 MALME3 정상 피부 섬유모세포. MALME3M 세포는 낮은 농도에서 GDC-0973에 대해 반응을 나타내었고, 또한 GDC-0068의 단일 작용제 활성의 결여에도 불구하고 GDC-0973의 낮은 농도 및 GDC-0068 농도의 넓은 범위에서 강한 상승작용 효과가 관찰되었다 (도 28 참조). 그에 반해, MALME3 세포는 GDC-0973에 대해 내성이 있었고, GDC-0068과의 조합물에서 상승작용이 관찰되지 않았다 (도 29 참조). 유사하게, NSCLC 세포주 NCI-H2122와 같이 동일한 환자로부터 유래된 NCI-BL2122, 정상 B 림프모구 또한 GDC-0973 및 GDC-0068의 조합물에 대해 상승작용적 반응이 나타나지 않았으나 (도 30 참조), NCI-H2122 세포에서는 강한 상승작용이 나타났다 (도 7 참조). 이들 결과는 MEK 및 Akt 억제제의 조합물로의 치료 이익이, PI3K/Akt 및 RAS/RAF 경로 둘 다 또는 RAS/RAF 경로가 활성인 암 세포에서 선택적으로 관찰될 수 있다는 것을 제안한다.
실시예 6 웨스턴 블롯 분석
디쉬(Dish) (10 cm2)에 부피 10 mL로 2백만개 세포를 시딩(seeding)하고, 5% CO2하 37℃에서 밤새 (대략 16 시간) 인큐베이션을 하였다. 세포를 GDC-0068 1 μM 및 3 μM, GDC-0973 0.25 μM 및 0.75 μM, 또는 GDC-0068 1 μM 더하기 GDC-0973 0.25 μM에 3 시간 동안 노출시켰다. 노출 후, 세포를 차가운 포스페이트-완충 염수 (PBS)로 세척하고, 프로테아제 억제제 (로슈(Roche), 독일 소재), 1 mM 페닐메탄술포닐 플루오라이드 (PMSF), 및 시그마(Sigma) (미국 미주리주 세인트 루이스 소재)로부터의 포스파타제 억제제 칵테일(Cocktails) 1 및 2로 보충된 바이오소스(Biosource) (미국 캘리포니아주 칼스배드 소재)로부터의 1 x 세포 추출 완충제(Cell Extraction Buffer)에 용해시켰다. 단백질 농도를 브래드포드(Bradford) 방법 (바이오-래드(Bio-Rad) 단백질 검정 (미국 캘리포니아주 허큘레스 소재의 바이오-래드))을 사용하여 결정하였다. 이뮤노블롯을 위해, 동일한 단백질 양을 트리스-글리신 4-20% 구배 겔 (미국 캘리포니아주 칼스배드 소재의 인비트로젠(Invitrogen))을 통해 전기영동에 의해 분리하고; 단백질을 바이오-래드로부터의 프로토콜 및 크리테리온(Criterion) 시스템을 사용하여 니트로셀룰로스 막으로 옮겼다.
달리 명시되지 않는 한, 모두 셀 시그널링 테크놀로지스(Cell Signaling Technologies) (미국 마이애미주 비벌리에 소재)로부터의 하기 항체를 사용하였다:
항-pAkt (S473)
항-pAkt (T308)
항 pMEK1/2 (S217/221)
항-pFoxO1 (T24)/FoxO3a (T32)
항-pPRAS40 (T246)
항-p4EBP1 (T37/46)
항-pERK1/2 (T202/Y204)
항-pTSC2 (T1462)
항-pS6 (S235/236)
항-pS6 (S240/244)
폴리 (ADP-리보스) 폴리머라제 (PARP) 및 절단된 PARP
GAPDH (미국 캘리포니아주 롱 비치에 소재하는 어드밴스드 이뮤노케미칼(Advanced ImmunoChemical)).
Akt 및 MEK 신호전달에 대한 조합물의 효과를 조사하기 위해서, Akt 및 MEK 둘 다의 하류 표적을 GDC-0068 1 μM 및 3 μM, GDC-0973 0.25 μM 및 0.75 μM, 또는 GDC-0068 1 μM과 GDC-0973 0.25 μM의 조합물에 노출된 HCT-116 CRC 세포에서 웨스턴 블롯에 의해 평가하였고, 여기서 상승작용 효과가 관찰되었다. 도 24에 나타낸 바와 같이, Akt 및 MEK 둘 다의 하류 표적의 조합된 넉다운(knockdown)이 조합물에서 관찰되었고, 보다 많은 용량에서도 각 단일 작용제보다 양호한 넉다운을 나타내는, pTSC2, pS6 (s235/236 및 S240/244 둘 다), PARP 및 절단된 PARP와 같은 몇몇의 표적의 증대된 넉다운이 관찰되었다.
실시예 7 유동 세포측정법 검정
HCT-116 세포를 96-웰 조직 배양 판에 시딩하였다. 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션한 후, 세포를 GDC-0068 또는 GDC-0973, 또는 조합물에 4일 동안 증가하는 농도로 노출시켰다. 아폽토시스를 측정하기 위해서, 100 μL의 세포 현탁액을, 4 mM CaCl2를 함유하는 PBS 100 μL, 아넥신 V-플루오레세인 이소티오시아네이트 (FITC) (미국 뉴저지주 프랭클린 레이크에 소재하는 비디 파밍겐(BD Pharmingen)) 5 μL, 및 프로퓸 요오다이드 (PI) 5 μg/mL에 첨가하였다. 상기 혼합물을 얼음에서 30분 동안 인큐베이션하고, 세포를 유동 세포측정기 (미국 캘리포니아주 산호세에 소재하는 비디 바이오사이언시스(BD Biosciences))로 분석하였다.
프로피듐 아이오다이드- (PI) 또는 아넥신 V- (AV) 양성 세포의 백분율을 각 단일 작용제 또는 GDC-0068 및 GDC-0973의 조합물 페어에서 측정하였고, 세포 사멸 유도의 상승작용 효과를 BLISS 분석에 의해 분석하였다. 상기 조합물은, 각 단일 작용제 단독과 비교하여 PI+/AV+ 세포의 백분율이 증가되었고, GDC-0068 0.37 μM 내지 10 μM 및 GDC-0973 0.185 μM 내지 0.556 μM에서 강한 상승작용 효과 (BLISS 스코어 ≥15)가 관찰되었다. 따라서, GDC-0068과 GDC-0973 사이의 조합물은 또한 HCT-116 세포에서 세포 사멸 유도에 대한 상승작용 효과를 나타내었다.
또한, 수많은 변형 및 변경이 당업자에게 용이하게 명백할 것이기 때문에, 본 발명을 상기 기재된 것과 같이 나타낸 정확한 구성 및 방법으로 제한하는 것은 바람직하지 않다. 따라서, 모든 적합한 변형 및 등가물은 하기 특허청구범위에 의해 정의되는 범위 내에 있는 것으로 간주될 수 있다.

Claims (28)

  1. 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 GDC-0973, PD-0325901로부터 선택된 작용제 또는 그의 제약상 허용되는 염의, 과다증식성 장애의 예방적 또는 치유적 치료를 위한 조합물.
    <화학식 I>
    Figure pct00008
  2. 제1항에 있어서, 과다증식성 장애가 암인 조합물.
  3. 제2항에 있어서, 암이 PTEN 돌연변이와 연관된 것인 조합물.
  4. 제2항에 있어서, 암이 AKT 돌연변이, 과다발현 또는 증폭과 연관된 것인 조합물.
  5. 제2항에 있어서, 암이 PI3K 돌연변이와 연관된 것인 조합물.
  6. 제2항에 있어서, 암이 Her2/ErbB2 증폭과 연관된 것인 조합물.
  7. 제2항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 중피종, 자궁내막암, 췌장암, 유방암, 폐암, 난소암, 전립선암, 흑색종, 위암, 결장암, 신장암, 두경부암, 및 신경아교종으로부터 선택된 것인 조합물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 GDC-0973과 조합하여 투여되는 것인 조합물.
  9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 PD-0325901과 조합하여 투여되는 것인 조합물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 염이 하나 이상의 작용제와 동시에 투여되는 것인 조합물.
  11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 염및 하나 이상의 작용제가 순차적으로 투여되는 것인 조합물.
  12. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 작용제의 투여를 조합물의 투여 전 약 1일 내지 약 10일에 개시하는 것인 조합물.
  13. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 염의 투여를 조합물의 투여 전 약 1일 내지 약 10일에 개시하는 것인 조합물.
  14. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 염의 투여 및 하나 이상의 작용제의 투여를 동일한 날에 개시하는 것인 조합물.
  15. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 GDC-0973과 조합하여 투여하고, 암이 췌장암인 조합물.
  16. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 GDC-0973과 조합하여 투여하고, 암이 비-소세포 폐암인 조합물.
  17. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 GDC-0973과 조합하여 투여하고, 암이 유방암인 조합물.
  18. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 GDC-0973과 조합하여 투여하고, 암이 결장암인 조합물.
  19. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 GDC-0973과 조합하여 투여하고, 암이 흑색종인 조합물.
  20. 과다증식성 장애에 대해 GDC-0973, PD-0325901로부터 선택된 작용제 또는 그의 제약상 허용되는 염으로 치료받는 환자의 삶의 질을 향상시키기 위한 치료 용도의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  21. 과다증식성 장애를 치료하기 위한 a) 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 b) GDC-0973, PD-0325901로부터 선택된 하나 이상의 작용제 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조합물.
  22. AKT 키나제에 의해 조절되는 질환 또는 상태를 치료하기 위한 a) 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 b) GDC-0973, PD-0325901로부터 선택된 하나 이상의 작용제 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조합물.
  23. 포유동물에서 과다증식성 장애의 치료를 위한 의약의 제조에서의, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 GDC-0973, PD-0325901, 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조합물의 용도.
  24. 포유동물에서 AKT 키나제에 의해 조절되는 질환 또는 상태의 치료를 위한 의약의 제조에서의, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 GDC-0973, PD-0325901, 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조합물의 용도.
  25. 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 용기, 및 화학식 I의 화합물과 GDC-0973, PD-0325901로부터 선택된 하나 이상의 작용제 또는 그의 제약상 허용되는 염의 투여를 지시하는 포장 삽입물 또는 표지를 포함하는, 과다증식성 장애를 치료하기 위한 키트.
  26. 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 GDC-0973, PD-0325901로부터 선택된 하나 이상의 작용제 또는 그의 제약상 허용되는 염을 과다증식성 장애의 치료에서 분리, 동시 또는 순차적 사용을 위한 조합 제제로서 포함하는 생성물.
  27. 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 GDC-0973, PD-0325901로부터 선택된 또 다른 작용제 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조합물을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 과다증식성 장애를 치료하기 위한 방법.
    <화학식 I>
    Figure pct00009
  28. a) 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 b) GDC-0973, PD-0325901로부터 선택된 하나 이상의 작용제 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 AKT 키나제에 의해 조정되는 질환 또는 상태를 치료하기 위한 방법.
KR1020137029126A 2011-04-01 2012-03-30 Akt 및 mek 억제제 화합물의 조합물, 및 사용 방법 KR20140022053A (ko)

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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110086837A1 (en) * 2009-10-12 2011-04-14 Genentech, Inc. Combinations of a pi3k inhibitor and a mek inhibitor
EP2928488A1 (en) * 2012-12-07 2015-10-14 The General Hospital Corporation Combinations of a pi3k/akt inhibitor compound with an her3/egfr inhibitor compound and use thereof in the treatment of a hyperproliferative disorder
RU2015140573A (ru) * 2013-02-25 2017-03-30 Дженентек, Инк. Способы и композиции для обнаружения и лечения устойчивого к лекарственным средствам мутанта акт
EP3719137A1 (en) 2013-09-05 2020-10-07 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Ddx43 as a biomarker of resistance to mek1/2 inhibitors
CN113194941A (zh) 2018-12-19 2021-07-30 基因泰克公司 使用包括akt抑制剂、紫杉烷和pd-l1抑制剂的组合疗法治疗乳腺癌
TW202207910A (zh) * 2020-04-03 2022-03-01 開曼群島商百濟神州有限公司 用於治療癌症之米達替尼與利非芬尼之共同投藥
US11066358B1 (en) * 2021-02-17 2021-07-20 Warner-Lambert Company Llc Compositions of essentially pure form IV of N-((R)-2,3-dihydroxypropoxy)-3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-iodo-phenylamino)-benzamide and uses thereof
US11084780B1 (en) 2021-02-17 2021-08-10 Springworks Therapeutics, Inc. Crystalline solids of MEK inhibitor N-((R)-2,3-dihydroxypropoxy)-3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-iodo-phenylamino)-benzamide and uses thereof

Family Cites Families (107)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US3885035A (en) 1972-04-05 1975-05-20 Sandoz Ag Method for treating arrhythmia by using 1,4-bis(4 quinazolinyl) piperazines
US3956495A (en) 1973-10-30 1976-05-11 Eli Lilly And Company 2,4-Diaminoquinazolines as antithrombotic agents
US3966936A (en) 1974-02-21 1976-06-29 Pfizer Inc. Piperazino quinazoline bronchodilators
US4060615A (en) 1976-02-18 1977-11-29 Mead Johnson & Company 2-Piperazinyl-6,7-dimethoxyquinazolines
JPS562968A (en) 1979-06-21 1981-01-13 Mitsubishi Yuka Yakuhin Kk Novel pyrimidine derivative
JPS6270A (ja) 1985-03-07 1987-01-06 Sankyo Co Ltd シクロペンタ〔ｄ〕ピリミジン誘導体
US5583024A (en) 1985-12-02 1996-12-10 The Regents Of The University Of California Recombinant expression of Coleoptera luciferase
DE3752141T2 (de) 1986-02-24 1998-03-26 Mitsui Petrochemical Ind Mittel zur behandlung von neuropathie
US4889856A (en) 1987-08-31 1989-12-26 Merck & Co., Inc. 7,8-dihydro-4-(1-pierazinyl)-6H-thiopyrano-[3,2-d] pyrimidines as β-blockers
US4871739A (en) 1987-01-21 1989-10-03 Merck & Co., Inc. Substituted 6H-7,8-dihydrothiapyrano(3,2-D)-pyrimidines as hyopglycemic agents
US4994464A (en) 1987-08-31 1991-02-19 Merck & Co., Inc. Piperazinylpyrimidines as β-adrenergic receptor blockers
MX19185A (es) 1989-01-20 1993-12-01 Pfizer Procedimiento para preparar 3-(1,2,5,6-tretrahidropiridil)-pirrolopiridinas.
EP0664291B1 (en) 1992-10-05 2000-07-19 Ube Industries, Ltd. Pyrimidine compound
WO1995003286A1 (fr) 1993-07-23 1995-02-02 The Green Cross Corporation Derive de triazole et son utilisation pharmaceutique
GB9416189D0 (en) 1994-08-10 1994-09-28 Merck Sharp & Dohme Therapeutic agents
CN1102144C (zh) 1994-08-13 2003-02-26 株式会社柳韩洋行 新的嘧啶衍生物及其制备方法
US5543523A (en) 1994-11-15 1996-08-06 Regents Of The University Of Minnesota Method and intermediates for the synthesis of korupensamines
US5525625A (en) 1995-01-24 1996-06-11 Warner-Lambert Company 2-(2-Amino-3-methoxyphenyl)-4-oxo-4H-[1]benzopyran for treating proliferative disorders
JPH08336393A (ja) 1995-04-13 1996-12-24 Mitsubishi Chem Corp 光学活性なγ−置換−β−ヒドロキシ酪酸エステルの製造法
US7125880B1 (en) 1995-06-06 2006-10-24 Pfizer Inc. Corticotropin releasing factor antagonists
ZA979961B (en) 1996-11-15 1999-05-05 Lilly Co Eli 5-HT1F agonists
UA73073C2 (uk) 1997-04-03 2005-06-15 Уайт Холдінгз Корпорейшн Заміщені 3-ціанохіноліни, спосіб їх одержання та фармацевтична композиція
US6310060B1 (en) 1998-06-24 2001-10-30 Warner-Lambert Company 2-(4-bromo or 4-iodo phenylamino) benzoic acid derivatives and their use as MEK inhibitors
EP0993439B1 (en) 1997-07-01 2004-09-29 Warner-Lambert Company LLC 4-bromo or 4-iodo phenylamino benzhydroxamic acid derivatives and their use as mek inhibitors
US6821963B2 (en) 1997-07-01 2004-11-23 Warner-Lambert Company 4-Bromo or 4-iodo phenylamino benzhydroxamic acid derivatives and their use as MEK inhibitors
US6506798B1 (en) 1997-07-01 2003-01-14 Warner-Lambert Company 4-Arylamino, 4-aryloxy, and 4-arylthio diarylamines and derivatives thereof as selective MEK inhibitors
WO1999001421A1 (en) 1997-07-01 1999-01-14 Warner-Lambert Company 2-(4-bromo or 4-iodo phenylamino) benzoic acid derivatives and their use as mek inhibitors
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
CA2326324C (en) 1998-03-31 2010-05-11 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Nitrogen-containing heterocyclic compound
DE19853278A1 (de) 1998-11-19 2000-05-25 Aventis Pharma Gmbh Substituierte 4-Amino-2-aryl-cyclopenta[d]pyrimidine, ihre Herstellung, ihre Verwendung und sie enthaltende pharmazeutische Präparate
EP1140067A1 (en) 1999-01-07 2001-10-10 Warner-Lambert Company Antiviral method using mek inhibitors
WO2000040235A2 (en) 1999-01-07 2000-07-13 Warner-Lambert Company Treatment of asthma with mek inhibitors
AU2482800A (en) 1999-01-13 2000-08-01 Warner-Lambert Company Sulphohydroxamic acids and sulphohydroxamates and their use as mek inhibitors
WO2000041505A2 (en) 1999-01-13 2000-07-20 Warner-Lambert Company Anthranilic acid derivatives
ATE309205T1 (de) 1999-01-13 2005-11-15 Warner Lambert Co Benzenesulfonamid-derivative und ihre verwendung als mek-inhibitoren
CA2348236A1 (en) 1999-01-13 2000-07-20 Stephen Douglas Barrett 4-arylamino, 4-aryloxy, and 4-arylthio diarylamines and derivatives thereof as selective mek inhibitors
NZ513432A (en) 1999-01-13 2004-02-27 Warner Lambert Co 1-heterocycle substituted diarylamines
CA2355470C (en) 1999-01-13 2008-09-30 Warner-Lambert Company Benzoheterocycles and their use as mek inhibitors
GB9910577D0 (en) 1999-05-08 1999-07-07 Zeneca Ltd Chemical compounds
JP2003504400A (ja) 1999-07-16 2003-02-04 ワーナー−ランバート・カンパニー Ｍｅｋ阻害剤を用いた慢性痛の治療方法
PL352705A1 (en) 1999-07-16 2003-09-08 Warner-Lambert Company Method for treating chronic pain using mek inhibitors
HUP0202319A3 (en) 1999-07-16 2004-12-28 Warner Lambert Co Use of mek inhibitors for the preparation of pharmaceutical compositions treating chronic pain
DK1202724T3 (da) 1999-07-16 2004-01-26 Warner Lambert Co Fremgangsmåde til behandling af kronisk smerte under anvendelse af mek-inhibitorer
JP2003527379A (ja) 2000-03-15 2003-09-16 ワーナー−ランバート・カンパニー、リミテッド、ライアビリティ、カンパニー Ｍｅｘ阻害物質としての５−アミド置換ジアリールアミン類
DZ3401A1 (fr) 2000-07-19 2002-01-24 Warner Lambert Co Esters oxygenes d'acides 4-iodophenylamino benzhydroxamiques
EA200300187A1 (ru) 2000-08-25 2003-08-28 УОРНЕР-ЛАМБЕРТ КОМПАНИ Эл Эл Си Способ получения n-арилантраниловых кислот и их производных
CA2422377C (en) 2000-09-15 2010-04-13 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors
US7067532B2 (en) 2000-11-02 2006-06-27 Astrazeneca Substituted quinolines as antitumor agents
WO2002083139A1 (en) 2001-04-10 2002-10-24 Merck & Co., Inc. Inhibitors of akt activity
ES2301633T3 (es) 2001-04-30 2008-07-01 Glaxo Group Limited Pirimidinas condensadas como antagonistas del factor de liberacion de corticotropina (crf).
US7115741B2 (en) 2001-09-06 2006-10-03 Levy Daniel E 4-thieno[2,3-D]pyrimidin-4-YL piperazine compounds
AU2002357043B2 (en) 2001-12-06 2008-04-24 Merck Sharp & Dohme Corp. Mitotic kinesin inhibitors
US20030187026A1 (en) 2001-12-13 2003-10-02 Qun Li Kinase inhibitors
WO2003062225A1 (en) 2002-01-23 2003-07-31 Bayer Pharmaceuticals Corporation Pyrimidine derivatives as rho-kinase inhibitors
TW200306819A (en) 2002-01-25 2003-12-01 Vertex Pharma Indazole compounds useful as protein kinase inhibitors
SI1482932T1 (sl) 2002-03-13 2010-02-26 Array Biopharma Inc N3-alkilirani derivati benzimidazola kot inhibitorji mek
KR20040098013A (ko) 2002-03-13 2004-11-18 어레이 바이오파마 인크. Ｍｅｋ 억제제로서의 ｎ3 알킬화된 벤즈이미다졸 유도체
US7235537B2 (en) 2002-03-13 2007-06-26 Array Biopharma, Inc. N3 alkylated benzimidazole derivatives as MEK inhibitors
WO2003086394A1 (en) 2002-04-08 2003-10-23 Merck & Co., Inc. Inhibitors of akt activity
EP1496906A4 (en) 2002-04-08 2006-05-03 Merck & Co Inc INHIBITORS OF AKT ACTIVITY
EP1494676B1 (en) 2002-04-08 2013-05-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Fused quinoxaline derivatives as inhibitors of akt activity
CA2481229C (en) 2002-04-08 2010-09-21 Merck & Co., Inc. Substituted pyrazine inhibitors of akt
US20040053933A1 (en) 2002-05-10 2004-03-18 Neurocrine Biosciences, Inc. Ligands of melanocortin receptors and compositions and methods related thereto
JP2006507299A (ja) 2002-10-30 2006-03-02 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド Ａｋｔ活性の阻害薬
US20040102360A1 (en) 2002-10-30 2004-05-27 Barnett Stanley F. Combination therapy
BR0316680A (pt) 2002-11-28 2005-10-18 Schering Ag Pirimidinas inibidoras de chk, pdk e akt, sua produção e uso como agentes farmacêuticos
GB0308208D0 (en) 2003-04-09 2003-05-14 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
JP2006524254A (ja) 2003-04-24 2006-10-26 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド Ａｋｔ活性の阻害剤
ATE440825T1 (de) 2003-06-06 2009-09-15 Vertex Pharma Pyrimidin-derivate zur verwendung als modulatoren von atp-bindende kassette transportern
US7968545B2 (en) 2003-08-05 2011-06-28 Vertex Pharmaceuticals Inc. Compositions useful as inhibitors of voltage-gated ion channels
WO2005014557A1 (en) 2003-08-12 2005-02-17 F.Hoffmann-La Roche Ag Tetrahydroquinazoline derivatives as cfr antagonists
EP1666468A4 (en) 2003-09-09 2007-03-21 Ono Pharmaceutical Co CRF ANTAGONISTS AND HETEROBICYCLIC COMPOUNDS
US20050182061A1 (en) 2003-10-02 2005-08-18 Jeremy Green Phthalimide compounds useful as protein kinase inhibitors
RU2352558C2 (ru) 2003-10-21 2009-04-20 Уорнер-Ламберт Компани Ллс Полиморфная форма n-[(r)-2,3-дигидроксипропокси]-3,4-дифтор-2-(2-фтор-4 йодфениламино)бензамида
CN1882347A (zh) 2003-11-21 2006-12-20 阿雷生物药品公司 Akt蛋白激酶抑制剂
WO2005117909A2 (en) 2004-04-23 2005-12-15 Exelixis, Inc. Kinase modulators and methods of use
JP2007535551A (ja) 2004-04-28 2007-12-06 バーテックス　ファーマシューティカルズ　インコーポレイテッド Ｒｏｃｋおよび他のプロテインキナーゼの阻害剤として有用な組成物
CN1972934A (zh) 2004-06-28 2007-05-30 奥坦纳医药公司 4,6－二取代嘧啶及其作为蛋白激酶抑制剂的用途
US20060025074A1 (en) 2004-07-30 2006-02-02 Chih-Ming Liang Bluetooth-based headset
TWM266655U (en) 2004-09-23 2005-06-01 Blueexpert Technology Corp Bluetooth earphone device capable of wirelessly receiving and transmitting stereo sound signal and digital information signal
TW200621257A (en) 2004-10-20 2006-07-01 Astellas Pharma Inc Pyrimidine derivative fused with nonaromatic ring
UY29177A1 (es) 2004-10-25 2006-05-31 Astex Therapeutics Ltd Derivados sustituidos de purina, purinona y deazapurina, composiciones que los contienen métodos para su preparación y sus usos
AU2005322085B2 (en) 2004-12-28 2012-07-19 Exelixis, Inc. [1H-pyrazolo[3, 4-d]pyrimidin-4-yl]-piperidine or -piperazine compounds as serine-threonine kinase modulators (p70S6K, Atk1 and Atk2) for the treatment of immunological, inflammatory and proliferative diseases
CA2598956A1 (en) 2005-02-24 2006-08-31 Pfizer Products Inc. Bicyclic heteroaromatic derivatives useful as anticancer agents
CA2600745A1 (en) 2005-03-03 2006-09-08 The Burnham Institute For Medical Research Screening methods for protein kinase b inhibitors employing virtual docking approaches and compounds and compositions discovered thereby
ZA200710379B (en) 2005-05-20 2009-05-27 Vertex Pharma Pyrrolopyridines useful as inhibitors of protein kinase
UY29610A1 (es) 2005-06-21 2007-01-31 Cancer Rec Tech Ltd Aril-alquilaminas y heteroaril-alquilaminas como inhibidores de la quinasa proteínica
CA3052368A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-19 Exelixis, Inc. Azetidines as mek inhibitors
EP1948658A1 (en) 2005-10-13 2008-07-30 Glaxo Group Limited Pyrrolopyrimidine derivatives as syk inhibitors
TW200732331A (en) 2005-12-28 2007-09-01 Takeda Pharmaceuticals Co Fused heterocyclic compound and use thereof
JP2009534454A (ja) 2006-04-25 2009-09-24 アステックス、セラピューティックス、リミテッド 医薬化合物
KR20090024834A (ko) 2006-07-05 2009-03-09 인터뮨, 인크. Ｃ형 간염 바이러스 복제의 신규 억제제
UA95641C2 (en) * 2006-07-06 2011-08-25 Эррей Биофарма Инк. Hydroxylated cyclopenta [d] pyrimidines as akt protein kinase inhibitors
US9303040B2 (en) 2006-07-06 2016-04-05 Array Biopharma Inc. Substituted piperazines as AKT inhibitors
AU2007271182B2 (en) 2006-07-06 2012-03-15 Glaxo Group Limited Substituted N-phenylmethyl -5-oxo-proline-2-amides as P2X7-receptor antagonists and their methods of use
TW200808325A (en) 2006-07-06 2008-02-16 Astrazeneca Ab Novel compounds
US8063050B2 (en) 2006-07-06 2011-11-22 Array Biopharma Inc. Hydroxylated and methoxylated pyrimidyl cyclopentanes as AKT protein kinase inhibitors
US7910747B2 (en) 2006-07-06 2011-03-22 Bristol-Myers Squibb Company Phosphonate and phosphinate pyrazolylamide glucokinase activators
GB0613518D0 (en) 2006-07-06 2006-08-16 Phytopharm Plc Chemical compounds
CA2656618C (en) 2006-07-06 2014-08-26 Array Biopharma Inc. Cyclopenta [d] pyrimidines as akt protein kinase inhibitors
WO2008012635A2 (en) 2006-07-26 2008-01-31 Pfizer Products Inc. Amine derivatives useful as anticancer agents
CN105106199A (zh) 2006-12-14 2015-12-02 埃克塞利希斯股份有限公司 使用mek抑制剂的方法
EP2205242B1 (en) * 2007-09-12 2015-04-15 Genentech, Inc. Combinations of phosphoinositide 3-kinase inhibitor compounds and chemotherapeutic agents, and methods of use
BRPI0915901A2 (pt) * 2008-07-11 2015-10-27 Novartis Ag combinação de (a) um inibidor de fosfoinositídeo 3-quinase e (b) um modulador da via ras/raf/mek
ES2432821T3 (es) 2008-07-31 2013-12-05 Genentech, Inc. Compuestos de pirimidina, composiciones y métodos de utilización
AU2010298277B2 (en) * 2009-09-23 2014-07-03 Novartis Ag Combination

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