JP6147246B2 - Ａｋｔ及びｍｅｋ阻害剤化合物の組み合わせ、及び使用方法 - Google Patents

Description

発明の優先権
この出願は、２０１１年４月１日に出願された米国仮出願番号６１／４７１０３８に対する優先権を主張する。この仮出願の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

発明の分野
本発明は、癌など過剰増殖性疾患に対する活性を有する化合物の薬学的組み合わせに関し、これはＡＫＴキナーゼ活性を阻害する化合物を含む。本発明はまた、哺乳動物細胞又は関連する病態のインビトロ、インサイツ、及びインビボでの診断又は治療のための組み合わせを使用する方法に関する。

発明の背景
タンパク質キナーゼ（ＰＫ）は、タンパク質のチロシン、セリン及びトレオニン残基上の水酸基のリン酸化を、ＡＴＰからの末端（ガンマ）リン酸の転移によって触媒する酵素である。シグナル伝達経路を介して、これらの酵素は、細胞増殖、分化、増殖を調節し、即ちいろいろな点で細胞寿命のほぼすべての態様はＰＫ活性に依存する（Hardie, G. and Hanks, S. (1995) The Protein Kinase Facts Book. I and II, Academic Press, San Diego, CA）。更に、異常なＰＫ活性は、乾癬など比較的非致死的な疾患から神経膠芽腫（脳腫瘍）など極めて悪性の疾患に至るまで疾患の宿主に関連している。プロテインキナーゼは、治療上の調節のための重要な標的クラスである（Cohen, P. (2002) Nature Rev. Drug Discovery 1:309）。

国際特許出願公開番号ＷＯ２００８／００６０４０は、化合物（Ｓ）−２−（４−クロロフェニル）−１−（４−（（５Ｒ、７Ｒ）−７−ヒドロキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−イル）−３−（イソプロピルアミノ）プロパン−１−オン（式Ｉ）を含む、多数のＡＫＴの阻害剤を議論している。

現在、癌など過剰増殖性疾患を治療するために使用することができる改善された方法及び組成物が必要とされている。

インビトロ及びインビボで癌細胞の増殖を阻害することにおける相加効果又は相乗効果は、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩を、特定の他の特定の薬剤と組み合わせて投与することによって達成することができることが究明されている。組合せ及び方法は、癌などの過剰増殖性疾患の治療に有用であり得る。

従って本発明の特定の実施態様は、哺乳動物における過剰増殖性疾患を治療するための方法であって、哺乳動物に、式Ｉの化合物
又はその薬学的に許容される塩；及びＧＤＣ−０９７３、ＰＤ−０３２５９０１又はその薬学的に許容される塩から選択される一以上の薬剤を投与することを含む。

特定の実施態様において、過剰増殖性疾患は癌である。
特定の実施態様において、癌はＰＴＥＮ変異と関連付けられている。
特定の実施態様において、癌はＡＫＴ変異、過剰発現又は増幅と関連付けられている。
特定の実施態様において、癌はＰＩ３Ｋ変異と関連付けられている。
特定の実施態様において、癌はＨｅｒ２／ＥｒｂＢ２増幅と関連付けられている。
特定の実施態様において、癌は、中皮腫、子宮内膜癌、膵臓癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、黒色腫、胃癌、結腸癌、腎臓癌、頭頸部癌、及びグリオーマから選択される。
特定の実施態様において、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩は、ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与される。
特定の実施態様において、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩は、ＰＤ−０３２５９０１又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与される。
特定の実施態様において、式Ｉの化合物又はその塩は一以上の薬剤と同時に投与される。
特定の実施態様において、式Ｉの化合物又はその塩は一以上の薬剤と逐次に投与される。
特定の実施態様において、一以上の薬剤の投与は、組み合わせの投与の約１日から約１０日前に開始する。
特定の実施態様において、式Ｉの化合物又はその塩の投与は、組み合わせの投与の約１日から約１０日前に開始する。
特定の実施態様において、式Ｉの化合物又はその塩の投与及び一以上の薬剤の投与は同日に開始する。
本発明の特定の実施態様は、ＧＤＣ−０９７３及びＰＤ−０３２５９０１から選択される薬剤により過剰増殖性疾患を治療される患者の生活の質を改善するための治療用途のために、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
本発明の特定の実施態様は、ａ）式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩、及びｂ）ＧＤＣ−０９７３及びＰＤ−０３２５９０１から選択される一以上の薬剤を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物においてＡＫＴキナーゼによって調節される疾患又は状態を治療するための方法を提供する。
本発明の特定の実施態様は、過剰増殖性疾患を治療するための、ａ）式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩、及びｂ）ＧＤＣ−０９７３及びＰＤ−０３２５９０１から選択される一以上の薬剤の組み合わせを提供する。
本発明の特定の実施態様は、ＡＫＴキナーゼによって調節される疾患又は状態を治療するための、ａ）式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩、及びｂ）ＧＤＣ−０９７３及びＰＤ−０３２５９０１から選択される一以上の薬剤の組み合わせを提供する。
本発明の特定の実施態様は、哺乳動物における過剰増殖性疾患の治療のための医薬の調製における、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩及びＧＤＣ−０９７３及びＰＤ−０３２５９０１の組み合わせの使用を提供する。
本発明の特定の実施態様は、哺乳動物におけるＡＫＴキナーゼによって調節される疾患又は状態を治療するための医薬の調製における、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩及びＧＤＣ−０９７３及びＰＤ−０３２５９０１の組み合わせの使用を提供する。
本発明の特定の実施態様は、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩、容器、及び、過剰増殖性疾患を治療するためにＧＤＣ−０９７３及びＰＤ−０３２５９０１から選択される一以上の薬剤と一緒での式Ｉの化合物の投与を示す添付文書又はラベルを含むキットを提供する。
本発明の特定の実施態様は、剰増殖性疾患の治療において、別々に、同時に又は逐次に使用するための併用製剤として、式Ｉ又はその薬学的に許容される塩を有する化合物、及びＧＤＣ−０９７３及びＰＤ−０３２５９０１から選択される一以上の薬剤を含む製品を提供する。

ＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせが、インビトロで、メラノーマ、肺癌、結腸癌、卵巣癌、腎臓癌、乳癌、前立腺癌、膵臓癌の細胞株を含む多くの細胞型に投与されるときに相乗効果／相加効果が見られ、これらの知見は、インビボにおいてメラノーマ、結腸癌、肺癌の異種移植モデルにおいて確認されている。相乗効果はＲａｓ／Ｒａｆによって、又は両方の経路の活性化によって駆動される腫瘍型において見られる。メラノーマ、肺癌（ＮＳＣＬＣなど）及び結腸癌の系統は、ＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせが様々な細胞に投与されるときに相乗効果を示す。乳癌細胞（管腔（ＥＲ＋）、ＨＥＲ２＋、及び基底トリプルネガティブ乳癌を含む）はまた、ＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせが投与されたときに相乗効果を発揮できる。Ｍｅｋｉ単独に感受性のある細胞においてさえ、ＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせが投与されたときに相乗効果が観察される。

癌細胞の変異状態は、いかに癌細胞が異なる治療プロトコールに応答するであろうかに関してのバイオマーカーであることが発見されている。例えば、ＰＩ３Ｋ経路（ＰＩ３Ｋ又はＡＫＴなど）の変異をＫｒａｓ及び／又はＢｒａｆ変異と組み合わせて有する癌細胞は、本明細書に記述される併用療法に対して正の（例えば相乗的）応答を示す。更に、癌のＰＴＥＮの状態もまたバイオマーカーである。従って、本発明の特定の実施態様は、これらの併用療法とこれらのバイオマーカーの組み合わせを有する（インビトロ又はインビボで）癌細胞を治療する方法を含む。本発明の特定の実施態様は、これらのバイオマーカーの組み合わせを有する併用療法において患者を選択することを含む。

強力な相乗効果が、Ａ２０５８（ＰＴＥＮ欠損／Ｂｒａｆ変異）メラノーマモデルにおいて、ＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせで見られる。匹敵する単剤の腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）は、ＧＤＣ−０９７３の全用量及びＧＤＣ−００６８の高用量（７５及び１００ｍｇ／ｋｇ）で見られる。ＧＤＣ−００６８の５０ｍｇ／ｋｇではＴＧＩは見られない。両薬物の組み合わせは、最大の体重減少が〜１３％で、このモデルにおいてよく耐容された。

所与の過剰増殖性疾患の治療の改善を提供することに加えて、本発明の所定の組み合わせの投与は、異なる治療を受ける同一の患者が経験する生活の質に比べて、患者の生活の質を改善することができる。例えば、本明細書に記載される式Ｉの化合物の投与又はその薬学的に許容される塩及び薬剤の組み合わせを患者に組み合わせて投与することは、治療として化学療法剤のみを受ける場合に同じ患者が経験するであろう生活の質に比べて、生活の質の向上を提供することができる。例えば、本明細書に記載される組み合わせによる併用療法は、必要な治療薬剤の用量を減らすことができ、それによって、高用量の化学療法剤に関連した副作用（例えば、吐き気、嘔吐、脱毛、発疹、食欲減退、体重減少など）を軽減する。本組み合わせはまた、腫瘍量の減少、及び痛み、臓器機能不全、体重減少などの関連する有害事象の低減を生じる可能性がある。従って、本発明の一態様は、本明細書に記載される薬剤により過剰増殖性疾患を治療される患者の生活の質を改善するための治療的用途のために、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。

図１は、腫瘍体積においてＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３（２．５ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせの結果を示す。 図２は、腫瘍体積においてＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３（５．０ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせの結果を示す。 図３は、腫瘍体積においてＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３（７．５ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせの結果を示す。 図４は、インビトロでの結腸直腸癌細胞株に対するＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせの結果を示す。 図５は、ＨＣＴ−１１６（結腸−ＰＩ３Ｋ及びＫｒａｓ変異）に対するＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせの結果を示す。ＨＣＴ１１６細胞における細胞生存率への併用効果を示す２次元（２Ｄ）ヒートマップを示す。ＧＤＣ−００６８の増加する濃度をｘ軸上に、ＧＤＣ−０９７３の増加する濃度をｙ軸上に示す。併用で又は単剤としての何れかのＧＤＣ−００６８及びＧＤＣ−０９７３の各濃度での阻害の割合を示す阻害の割合（阻害の％）ヒートマップが右に示され；ビヒクル（ＤＭＳＯ）に曝露した対照群は０に設定される。ＢＬＩＳＳスコアは、各用量ペアに対して計算され、ヒートマップが左に示される。 図６は、インビトロでのＮＳＣＬＣ細胞株に対するＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせの結果を示す。 図７は、Ｈ２１２２ （ＮＳＣＬＣ−Ｋｒａｓ変異）に対するＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせの結果を示す。ＮＣＩＨ２１２２細胞における細胞生存率に対する併用効果を示す２次元（２Ｄ）ヒートマップを示す。ＧＤＣ−００６８の増加する濃度をｘ軸上に、ＧＤＣ−０９７３の増加する濃度をｙ軸上に示す。併用で又は単剤としての何れかのＧＤＣ−００６８及びＧＤＣ−０９７３の各濃度での阻害の割合を示す阻害の割合（阻害の％）ヒートマップが右に示され；ビヒクル（ＤＭＳＯ）に曝露した対照は０に設定される。ＢＬＩＳＳスコアは、各用量ペアに対して計算され、ヒートマップが左に示される。 図８は、インビトロでのメラノーマ細胞株に対するＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせの結果を示す。 図９は、Ａ２０５８（メラノーマ−ＰＴＥＮ−／−及びＢｒａｆ変異）に対するＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の単剤及び組み合わせの結果を示す。Ａ２０５８細胞における細胞生存率に対する併用効果を示す２次元（２Ｄ）ヒートマップを示す。ＢＬＩＳＳスコアは、各用量ペアに対して計算され、ヒートマップが左に示される。ＧＤＣ−００６８の増加する濃度をｘ軸上に、ＧＤＣ−０９７３の増加する濃度をｙ軸上に示す。併用で又は単剤としての何れかのＧＤＣ−００６８及びＧＤＣ−０９７３の各濃度での阻害の割合を示す阻害の割合（阻害の％）ヒートマップが右に示され；ビヒクル（ＤＭＳＯ）に曝露した対照は０に設定される。 図１０は、単剤に比較して、ＡＫＴ及びＭＥＫ経路の活性の増強されたノックダウンを示す。 図１１は、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８乳癌細胞株に対するＧＤＣ−０９７３とＧＤＣ−００６８の組み合わせの結果を示す。 図１２は、インビトロでの乳癌細胞株に対するＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせの結果を示す。 図１３は、卵巣癌に対するＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせの結果を示す。 図１４は、インビトロでの前立腺癌細胞株に対するＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせの結果を示す。 図１５は、ＭＸ−１***腫瘍において、経口投与されたＧＤＣ−００６８＋ＧＤＣ−０９７３（ＭＥＫ阻害剤）の組み合わせの結果を示す。 図１６は、Ｈ２１２２ ＮＳＣＬＣ腫瘍において、経口投与されたＧＤＣ−００６８＋ＧＤＣ−０９７３（ＭＥＫ阻害剤）の組み合わせの結果を示す。 図１７は、ＳＷ１９９０膵臓腫瘍において、経口投与されたＧＤＣ−００６８＋ＧＤＣ−０９７３（ＭＥＫ阻害剤）の組み合わせの結果を示す。 図１８は、Ｐａ＿Ｔｕ−８９０２膵臓腫瘍において、経口投与されたＧＤＣ−００６８＋ＧＤＣ−０９７３（ＭＥＫ阻害剤）の組み合わせの結果を示す。 図１９は、５３７Ｍｅｌメラノーマ腫瘍において、経口投与されたＧＤＣ−００６８＋ＧＤＣ−０９７３（ＭＥＫ阻害剤）の組み合わせの結果を示す。 図２０は、Ａ２０５８メラノーマ腫瘍において、経口投与されたＧＤＣ−００６８＋ＧＤＣ−０９７３（ＭＥＫ阻害剤）の組み合わせの結果を示す。 図２１は、ＨＣＴ−１１６結腸直腸腫瘍において、経口投与されたＧＤＣ−００６８＋ＧＤＣ−０９７３（ＭＥＫ阻害剤）の組み合わせの結果を示す。 図２２ａ〜２２ｂは、単剤と併用療法を比較する様々な細胞株の細胞生存率の阻害の結果を示す。ＧＤＣ−００６８の細胞効力は、ＰＩ３Ｋ／ＰＴＥＮ／ＨＥＲ２における変化に起因するＡｋｔ活性化と相関したが、ＧＤＣ−０９７３の細胞効力はＲＡＳ又はＢＲＡＦ変異に起因するＭＥＫ活性化と相関した。ＧＤＣ−００６８−とＧＤＣ−０９７３に感受性細胞株はしばしば互いに排他的である。試験された約３分の１は両方の薬剤に耐性を示した（図２２ａ〜２２ｂを参照）。ＧＤＣ−００６８−とＧＤＣ−０９７３の組み合わせは、試験された大半の細胞株において何れか単剤単独と比較して、細胞生存率の抑制の強化を生じた。併用効果はＢＬＩＳＳの独立モデル（Lehar et al. 2007）を使用して評価された。 図２２ａの上のグラフは、複数の癌細胞株におけるＧＤＣ−００６８−とＧＤＣ−０９７３の単剤のＩＣ５０を示す。細胞をＧＤＣ−００６８−又はＧＤＣ−０９７３のどちらかで又はＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ中で併用して増加する濃度で処置し、ＣｅｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏを用いて４日後に生存率をアッセイした。対応する下のグラフは、幾つかの特定の遺伝子型に対するＧＤＣ−００６８−及びＧＤＣ−０９７３の併用相乗効果を示す。着色されたブロッキングは変異、欠失、又は活性化を示す。Ｂ−ＲＡＦ、ＲＡＳ、ＨＥＲ２、ＰＩ３Ｋ又はＰＴＥＮにおける変異／変化は各細胞株の下の色つき四角で示される（Ｂ−ＲＡＦ、茶色；ＲＡＳ、赤；ＨＥＲ２、青；ＰＴＥＮ，濃緑色；ＰＩ３Ｋにおいては、薄緑色はＰＩＫ３ＣＡにおけるキナーゼドメインの変異を示す、薄青色は非キナーゼドメインの変異又は増幅を示す）。ＰＴＥＮの変化は、ウェスタンブロットによるこのタンパク質の非検出可能なシグナル又は遺伝子の変異のどちらかを示す。各細胞株の組織起源は、乳癌（Ｂｒ）、結腸（Ｃｏ）、非小細胞癌（Ｌｕ）、メラノーマ（Ｍｅ）、卵巣癌（Ｏｖ）、前立腺癌（Ｐｒ）及び腎臓癌（Ｒｅ）を示す文字を付した異なる色でも示される。 図２２ｂは複数の細胞株におけるＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の全陽性組み合わせＢｌｉｓｓスコアを示す。全陽性Ｂｌｉｓｓスコアにより示されるように、相乗効果が複数の細胞株で、特にＲＡＳ／ＲＡＦ経路の活性化を持つ細胞株又はＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ及びＲＡＳ／ＲＡＦ経路の活性化を持つ細胞株において観察された。 全陽性Ｂｌｉｓｓスコアが、各細胞株においてＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせから計算された。 図２３は、５３７ＭＥＬ Ｍｅｌａｎｏｍａ，ＰＴＥＮ欠損、Ｂｒａｆ ａｍｐ／ｄｅｌにおけるＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３のＢｌｉｓｓヒートマップと阻害％を示し；ＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせは両方の経路を阻害し細胞死を増加させる。 図２４は、ＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３で２４時間処置されたヒトＨＴＣ１１６結腸細胞株のウエスタンブロット分析を示す。ＨＴＣ１１６細胞は、所定濃度でのＧＤＣ−００６８及びＧＤＣ−０９７３とともに３時間インキュベートされた。Ａｋｔのリン酸化、及びそれらの下流マーカーはウエスタンブロットにより分析された。 図２５は、ＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせは、５３７ＭＥＬ Ｍｅｌａｎｏｍａ，ＰＴＥＮ欠損、Ｂｒａｆ ａｍｐ／ｄｅｌにおける有効性を増加することを示している。 図２６は、ＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせにおいて、ビヒクル対照に対するリン酸化タンパク質発現レベルの著しい変化を示す。Ａ２０５８ｘ１腫瘍は、ＧＤＣ−００６８を１００ｍｇ／ｋｇで又はＧＤＣ−０９７３を７．５ｍｇ／ｋｇでの何れかの単一用量で、或いはその併用でマウスに投与された３時間後に収集された。腫瘍は逆相タンパク質アレイ（ＲＰＰＡ）を用いて分析した。 図２７は、投薬後のＡ２０５８異種移植腫瘍において、ＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせの何れかの単剤に対するリン酸化タンパク質発現レベルの有意な変化を示す。 図２８は、ＭＡＬＭＥ３Ｍ細胞における細胞生存率への併用効果を示す２次元（２Ｄ）ヒートマップを示す。ＧＤＣ−００６８の増加する濃度をｘ軸上に、ＧＤＣ−０９７３の増加する濃度をｙ軸上に示す。阻害の割合（阻害の％）ヒートマップは、併用で又は単剤としての何れかのＧＤＣ−００６８及びＧＤＣ−０９７３の各濃度での阻害の割合を示し；ビヒクル（ＤＭＳＯ）に曝露した対照群は０に設定される。 図２９は、ＭＡＬＭＥ３細胞における細胞生存率への併用効果を示す２次元（２Ｄ）ヒートマップを示す。ＧＤＣ−００６８の増加する濃度をｘ軸上に、ＧＤＣ−０９７３の増加する濃度をｙ軸上に示す。阻害の割合（阻害の％）ヒートマップは、併用で又は単剤としての何れかのＧＤＣ−００６８及びＧＤＣ−０９７３の各濃度での阻害の割合を示し；ビヒクル（ＤＭＳＯ）に曝露した対照群は０に設定される。ＢＬＩＳＳスコアは、各用量ペアに対して計算され、ヒートマップが右に示される。 図３０は、ＮＣＩ−ＢＬ２１２２細胞における細胞生存率への併用効果を示す２次元（２Ｄ）ヒートマップを示す。ＧＤＣ−００６８の増加する濃度をｘ軸上に、ＧＤＣ−０９７３の増加する濃度をｙ軸上に示す。阻害の割合（阻害の％）ヒートマップは、併用で又は単剤としての何れかのＧＤＣ−００６８及びＧＤＣ−０９７３の各濃度での阻害の割合を示し；ビヒクル（ＤＭＳＯ）に曝露した対照群は０に設定される。ＢＬＩＳＳスコアは、各用量ペアに対して計算され、ヒートマップが右に示される。 図３１は、ＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせによるリン酸化タンパク質発現レベルの変化（２４時間）及びＡＫＴ及びＭＥＫ経路の調節を示す。Ａ２０５８ｘ１腫瘍は、ＧＤＣ−００６８を１００ｍｇ／ｋｇで又はＧＤＣ−０９７３を７．５ｍｇ／ｋｇでの何れかの単一用量で、或いはその併用で、マウスに投与された２４時間後に収集された。腫瘍は逆相タンパク質アレイ（ＲＰＰＡ）を用いて分析した。

発明を実施するための最良の形態及び定義
用語「含む（comprise）」、「含めた（comprising）」、「含む（include）」、「含めた（including）」及び「含む（includes）」は、本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、定められた特徴、整数、成分、又は工程の存在を特定することを意図するが、１つまたは複数の他の特徴、整数、成分、工程、又はその群の存在又は追加を除外しない。

「治療する」および「治療」という用語は、治療的処置および防止的または予防的措置の両方を意味し、その目的は、癌の増殖、発達または拡散などの望ましくない生理的変化または障害の防止または減速（減少）である。本発明の目的のために、有益なまたは所望の臨床結果には、それだけに限らないが、検出可能であれ検出不能であれ、症状の軽減、疾患の程度の減少、病状の安定化（すなわち、悪化しない）、疾患の悪化の遅延または減速、病態の改善または緩和、および（部分的また完全な）寛解が挙げられる。「治療」はまた、治療を受けない場合に予想される生存時間と比較した生存時間の延長を意味することができる。治療を必要としているものには、既にその状態または障害を有しているもの、および状態または障害を有しがちであるもの、または状態または障害が予防すべきであるものが含まれる。

「治療有効量」という句は、（ｉ）特定の疾患、状態、または障害を治療する、（ｉｉ）特定の疾患、状態、または障害の１つもしくは複数の症状を弱め、改善し、または除去する、あるいは（ｉｉｉ）本明細書に記載されている特定の疾患、状態、または障害の１つもしくは複数の症状の発症を防止または遅延させる、本発明の化合物の量を意味する。癌の場合、薬物の治療有効量は、癌細胞の数を減少させ；腫瘍の大きさを減少させ；末梢器官への癌細胞浸潤を阻害（すなわち、ある程度遅延、好ましくは停止）し；腫瘍転移を阻害（すなわち、ある程度減速、好ましくは停止）し；腫瘍増殖をある程度阻害し；かつ／または癌と関連する症状の１つもしくは複数をある程度軽減し得る。薬物が増殖を防止し、かつ／または存在する癌細胞を殺し得る範囲で、それは細胞増殖阻害性および／または細胞毒性でよい。癌治療のために、例えば、疾患の悪化までの時間（ＴＴＰ）の評価および／または反応速度（ＲＲ）の決定によって、有効性を測定することができる。

「癌」および「癌の」という用語は、未制御の細胞増殖によって典型的には特徴付けられる哺乳動物における生理条件を意味し、または説明する。「腫瘍」は、１個または複数の癌細胞を含む。癌の例には、それだけに限らないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病またはリンパ性悪性腫瘍が挙げられる。このような癌のさらなる特定の例には、扁平上皮細胞癌（例えば、上皮性扁平細胞癌）；小細胞肺癌、非小細胞肺癌（「ＮＳＣＬＣ」）、肺腺癌および肺扁平上皮癌を含めた肺癌；腹膜癌、肝細胞癌、消化管癌を含めた胃部または胃癌、膵癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、および頭頸部癌が挙げられる。本明細書で使用される場合、胃癌は、胃の任意の部分に発生することができ、胃全体及び他の臓器；特に食道、肺、リンパ節、肝臓に広がる場合がある胃癌を含む。

「化学療法剤」は、作用機序に関わらず癌の治療に有用な生物学的（大分子）または化学的（小分子）化合物である。

「白金剤」は、例えばカルボプラチン、シスプラチン、及びオキサリプラチンなど白金を含む化学療法剤である。

「哺乳動物」という用語には、これらだけに限らないが、ヒト、マウス、ラット、モルモット、サル、イヌ、ネコ、ウマ、雌ウシ、ブタ、およびヒツジ、ならびに家禽が含まれる。患者なる用語は、哺乳動物を意味し、一実施態様では、患者はヒトである。

「添付文書」という用語は、このような治療薬の使用に関する適応症、用法、投与量、投与、禁忌症および／または警告についての情報を含有する、治療薬の商業用パッケージ中に通常含まれる指示を意味するために使用される。

「薬学的に許容される塩」という句は、本明細書において使用する場合、本発明の化合物の薬学的に許容される有機または無機塩を意味する。例示的な塩には、これらだけに限定されないが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩「メシル酸塩」、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、およびパモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエ酸塩））が挙げられる。薬学的に許容される塩は、酢酸イオン、コハク酸イオンまたは他の対イオンなどの他の分子の包含を伴ってもよい。対イオンは、親化合物上の電荷を安定化させる任意の有機または無機部分でよい。さらに、薬学的に許容される塩は、その構造中に複数の電荷を帯びた原子を有し得る。複数の電荷を帯びた原子が薬学的に許容される塩の部分である例は、複数の対イオンを有することができる。それ故、薬学的に許容される塩は、１つもしくは複数の電荷を帯びた原子および／または１つもしくは複数の対イオンを有することができる。

所望の薬学的に許容される塩は、当技術分野で利用可能な任意の適切な方法によって調製されうる。例えば、遊離塩基の無機酸（塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、メタンスルホン酸、リン酸など）による処理、あるいは有機酸（酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、ピラノシジル酸（pyranosidyl acid）（グルクロン酸またはガラクツロン酸など）、αヒドロキシ酸（クエン酸または酒石酸など）、アミノ酸（アスパラギン酸またはグルタミン酸など）、芳香族酸（安息香酸またはケイ皮酸など）、スルホン酸（ｐ−トルエンスルホン酸またはエタンスルホン酸など）、あるいは同様のものなど）。基本の医薬化合物からの薬学的に有用または許容される塩の形成のために適切であると一般に考えられる酸は、例えば、P.Stahlら、Camille G.（編）Handbook of Pharmaceutical Salts.Properties,Selection and Use.(2002)Zurich:Wiley-VCH;S.Bergeら、Journal of Pharmaceutical Sciences(1977)66(1)1 19;P.Gould、International J.of Pharmaceutics(1986)33 201 217;Andersonら、The Practice of Medicinal Chemistry(1996)、Academic Press、New York;Remington's Pharmaceutical Sciences、第18版、(1995)Mack Publishing Co.、Easton PA;およびThe Orange Book(Food & Drug Administration、Washington,D.C.、ウェブサイト上）に議論されている。これらの開示は、それらへの参照により本明細書中に組み込まれている。

「薬学的に許容される」という句は、物質または組成物が、製剤を構成する他の成分、および／またはそれによって治療される哺乳動物と化学的および／または毒物学的に適合性でなくてはならないことを示す。

「相乗的」という用語は、本明細書において使用する場合、２つ以上の単一の薬剤の相加効果より有効な治療薬の組合せを意味する。式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩とＧＤＣ−０９７３及びＰＤ−０３２５９０１のうちの一つとの間の相乗的な相互作用の決定は、本明細書に記載されているアッセイから得られた結果に基づいてもよい。組合せインデックスを得るためのChouおよびTalalayの組合せ法およびＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェアによる用量効果分析を使用して、これらのアッセイの結果を分析することができる（ChouおよびTalalay、1984、Adv.Enzyme Regul.22:27-55）。本明細書において提供される組合せをいくつかのアッセイ系において評価した。データは、抗癌剤の間の相乗作用、相加作用、および拮抗作用を定量化するための標準的プログラムを用いて分析することができる。例示的なプログラムは、好ましくはChouおよびTalalayにより「New Avenues in Developmental Cancer Chemotherapy」、Academic Press、1987、第２章に記載されているものである。０．８未満の組合せインデックス値は相乗作用を示し、１．２超の値は拮抗を示し、０．８〜１．２の値は相加効果を示す。併用療法は、「相乗作用」を実現し、「相乗的」であること、すなわち活性成分が共に使用される場合に達成される作用が、化合物を別々に使用することからもたらされる作用の合計より大きいことを証明し得る。活性成分を、（１）同時製剤および投与する、または合わせた単位製剤において同時に送達するとき；（２）別々の製剤として交互にまたは並行して送達するとき；あるいは（３）いくつかの他の投与計画によるときに、相乗効果を達成し得る。交互の治療において送達する場合、化合物が逐次に、例えば、別々のシリンジ中の異なる注射剤によって投与または送達するときに、相乗効果を達成し得る。一般に、交互の治療の間、有効量の各活性成分は逐次に、すなわち連続的に投与し、一方、併用療法において、有効量の２種以上の活性成分が共に投与する。一般に、交互治療の間、各活性成分の有効用量は、逐次に、即ち連続的に投与されるが、併用療法では、二つ以上の活性成分の有効用量が一緒に投与される。併用効果はＢＬＩＳＳ独立モデル及び最高単剤（ＨＳＡ）モデルの両方を用いて評価した（Lehar et al. 2007, Molecular Systems Biology 3:80）。ＢＬＩＳＳスコアは、単一薬剤からの相乗作用の程度を定量化し、陽性ＢＬＩＳＳスコア（０より大きい）は単純加算よりも大きいことを示唆している。２５０を超える累積陽性ＢＬＩＳＳスコアは、試験された濃度の範囲内濃度内における強い相乗効果と考えられている。ＨＳＡスコア（０より大きい）は、単一薬剤応答の最大値よりも対応する濃度で大きい併用効果を示唆している。

一態様は、ＰＩ３Ｋ、ＡＫＴ又はＰＴＥＮ変異を含み、一例において、ＲＡＳ／ＲＡＦ変異を更に含む癌に罹患した患者において、ＧＤＣ−００６８、ならびにＧＤＣ−０９７３とＰＤ−０３２５９０１のうち一つ、又はその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）の方法を含む。特定の実施態様において、組み合わせは相乗的である。特定の実施態様において、組み合わせのＴＧＩは、ＧＤＣ−００６８またはＧＤＣ−０９７３及びＰＤ−０３２５９０１単独のうち一つのＴＧＩよりも大きい。特定の実施態様において、組み合わせのＴＧＩは、ＧＤＣ−００６８またはＧＤＣ−０９７３及びＰＤ−０３２５９０１単独のうち一つのＴＧＩよりもおよそ１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０又は７５パーセント大きい。

ＴＧＩを測定する方法は、当該技術分野で知られている。一例の方法では、平均腫瘍体積が決定され、治療前と後で患者から比較した。腫瘍体積は、当該技術分野において任意の方法、例えばＵｌｔｒａＣａｌ ＩＶキャリパー（Fred V. Fowler Company）を使用して、又はＰＥＴ（陽電子放射断層撮影法）によって、または他の方法によって、二次元（長さと幅）で測定することができる。腫瘍体積（ｍｍ^３）＝（長さｘ幅^２）ｘ０．５なる式を用いることができる。複数の期間にわたって腫瘍体積の測定を、混合モデリング線形混合効果（ＬＭＥ）のアプローチを用いて行うことができる（Pinheiro et al. 2009）。このアプローチは、反復測定（および複数の患者）の両方に対処することができる。キュービックスプライン回帰は、各用量レベルで腫瘍体積の経時変化に対する非線形プロファイルに適合するために使用することができる。これらの非線形プロファイルは、その後、混合モデル内での用量に関連することができる。ビヒクルのパーセントとしての腫瘍増殖阻害は、以下の式を用いて、ビヒクルに対する日当たりの近似曲線下面積（ＡＵＣ）のパーセントとして計算することができる。
この式を用いて、１００％のＴＧＩ値は腫瘍鬱血を示し、約１％より大きく約１００％未満は腫瘍増殖阻害を示し、約１００％より大きいものは腫瘍退縮を示す。

式Ｉの化合物の調製
式Ｉの化合物及びその塩は、国際特許出願公開番号ＷＯ２００８／００６０４０に記載又は下記実施例１に記載されるように調製することができる。式Ｉの化合物を調製するとき、中間体の遠隔官能基（例えば、第一級または第二級アミン等）の保護が必要となる場合がある。そのような保護の必要性は、遠隔官能基の性質および調製方法の条件に応じて異なってくる。適切なアミノ保護基（ＮＨ−Ｐｇ）は、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）および９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）を含む。そのような保護の必要性は、当業者によって容易に判断される。保護基の概要およびその使用については、T. W. Greene、Protective Groups in Organic Synthesis、John Wiley & Sons、ニューヨーク、１９９１年を参照されたい。

分離の方法
式Ｉの化合物を調製するための合成法のいずれかにおいて、反応生成物を互いにおよび／または出発材料から分離することが有利な場合がある。各ステップまたは一連のステップの所望の生成物は、当該技術分野において一般的な技術により、望ましい程度の均質性になるまで分離および／または精製される。一般にそのような分離は、多相抽出、溶媒もしくは溶媒混合物からの結晶化、蒸留、昇華またはクロマトグラフィーを伴う。クロマトグラフィーは、例えば、逆相および順相；サイズ排除；イオン交換；高、中および低圧液体クロマトグラフィー方法および装置；小規模分析；疑似移動床（ＳＭＢ）および分取薄層または厚層クロマトグラフィー、ならびに小規模薄層およびフラッシュクロマトグラフィーの技術を含む多数の方法を伴い得る。

別の種類の分離法は、所望の生成物、未反応の出発材料、反応副生成物等に結合するため、または別の分離可能な状態にするために選択された試薬による反応混合物の処理を伴う。そのような試薬は、活性炭、分子篩、イオン交換媒体等の吸着剤または吸収剤を含む。あるいは、試薬は、塩基性物質の場合は酸、酸性物質の場合は塩基、抗体等の結合試薬、結合タンパク質、クラウンエーテル等の選択的キレート剤、液／液イオン交換試薬（ＬＩＸ）等であってもよい。

適切な分離の方法の選択は、関与する材料の性質に依存する。例えば、蒸留および昇華における沸点および分子量、クロマトグラフィーにおける極性官能基の有無、多相抽出における酸性および塩基性媒体中の材料の安定性等である。当業者であれば、所望の分離を達成する可能性が最も高い技術を適用するであろう。

ジアステレオマー混合物は、クロマトグラフィーおよび／または分別結晶によって等、当業者に既知の方法により、それらの物理化学的相違に基づき、個々のジアステレオマーに分離することができる。鏡像異性体は、適切な光学活性化合物（例えば、キラルアルコールまたはモッシャーの酸塩化物等のキラル補助基）と反応させることによって鏡像異性体混合物をジアステレオマー混合物に変換し、ジアステレオマーを分離し、個々のジアステレオマーを対応する純鏡像異性体に変換する（例えば、加水分解する）ことによって分離することができる。また、本発明の化合物のいくつかは、アトロプ異性体（例えば、置換ビアリール）であってよく、この発明の一部とみなされる。鏡像異性体は、キラルＨＰＬＣカラムの使用によって分離することもできる。

単一の立体異性体、例えばその立体異性体を実質的に含まない鏡像異性体は、光学活性分割剤を使用するジアステレオマーの形成等の方法を使用する、ラセミ混合物の分割によって得ることができる（Eliel, E.およびWilen, S.「Stereochemistry of Organic Compounds」、John Wiley & Sons, Inc.、ニューヨーク、1994年；Lochmuller, C. H.、J. Chromatogr.、(1975年)、113巻、3号、283-302頁）。本発明のキラル化合物のラセミ混合物は、（１）キラル化合物によるイオン性のジアステレオマー塩の形成および分別結晶または他の方法による分離、（２）キラル誘導体化試薬によるジアステレオマー化合物の形成、ジアステレオマーの分離および純立体異性体への変換、ならびに（３）直接キラル条件下における実質的に純または富化立体異性体の分離を含む任意の適切な方法によって分離および単離することができる。「Drug Stereochemistry, Analytical Methods and Pharmacology」、Irving W. Wainer編、Marcel Dekker, Inc.、ニューヨーク（1993年）を参照されたい。

方法（１）では、ジアステレオマー塩は、ブルシン、キニーネ、エフェドリン、ストリキニーネ、α−メチル−β−フェニルエチルアミン（アンフェタミン）等の鏡像異性的に純粋なキラル塩基の、カルボン酸およびスルホン酸等の酸性官能基を担持する不斉化合物との反応により形成することができる。ジアステレオマー塩は、分別結晶またはイオンクロマトグラフィーによって分離するように誘発することができる。アミノ化合物の光学異性体の分離のために、ショウノウスルホン酸、酒石酸、マンデル酸または乳酸等、キラルカルボン酸またはスルホン酸の添加により、ジアステレオマー塩の形成をもたらすことができる。

あるいは、方法（２）により、分割される基質がキラル化合物の１個の鏡像異性体と反応してジアステレオマー対を形成する（E.およびWilen, S.、「Stereochemistry of Organic Compounds」、John Wiley & Sons, Inc.、1994年、322頁）。ジアステレオマー化合物は、不斉化合物をメチル誘導体等の鏡像異性的に純粋なキラル誘導体化試薬と反応させ、それに続くジアステレオマーの分離および加水分解によって純または富化鏡像異性体を得ることにより、形成することができる。光学純度を測定する方法は、塩基またはモッシャーエステル、ラセミ混合物のα−メトキシ−α−（トリフルオロメチル）フェニルアセテート（Jacob III.、J. Org. Chem.、(1982年)、47巻、4165頁）の存在下、メンチルエステル、例えば（−）メンチルクロロホルメート等のキラルエステルを作製するステップと、２種のアトロプ異性鏡像体（atropisomeric enantiomer）またはジアステレオマーの存在について^１Ｈ ＮＭＲスペクトルを分析するステップとを含む。アトロプ異性化合物の安定したジアステレオマーは、アトロプ異性ナフチル−イソキノリンの分離のための方法に続く順相および逆相クロマトグラフィーにより、分離および単離することができる（国際公開第９６／１５１１１号）。方法（３）により、２種の鏡像異性体のラセミ混合物は、キラル固定相を使用するクロマトグラフィーによって分離することができる（「Chiral Liquid Chromatography」（1989年）、W. J. Lough編、Chapman and Hall、ニューヨーク；Okamoto、J. of Chromatogr.、（1990年）、513巻、375-378頁）。富化または精製された鏡像異性体は、旋光度および円偏光二色性等、不斉炭素原子を有する他のキラル分子を識別するために使用される方法によって識別することができる。

化学療法剤
特定の化学療法剤は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩と組み合わせて、細胞増殖をインビトロおよびインビボで阻害することにおいて驚くべき予想外の特性を示した。このそような化学療法剤には、ＧＤＣ−０９７３及びＰＤ−０３２５９０１が挙げられる。

ＧＤＣ−０９７３はまたＸＬ−５１８としても知られ、ヒトの腫瘍でしばしば活性化されるＲＡＳ／ＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路の重要なコンポーネントであるマイトジェン活性化プロテインキナーゼキナーゼ（ＭＡＰＫＫ）としても知られるＭＥＫの選択的阻害剤である。ＭＥＫ／ＥＲＫ経路の不適切な活性化は、外因性増殖因子の非存在下で細胞増殖を促進する。固形腫瘍においてＧＤＣ−０９７３を評価する第一相臨床試験が進行中である。ＧＤＣ−０９７３は、国際特許出願公開番号ＷＯ２００７０４４５１５（Ａ１）号に記載されているように調製することができる。ＧＤＣ−０９７３は、（Ｓ）−（３，４−ジフルオロ−２−（２−フルオロ−４−ヨードフェニルアミノ）フェニル）（３−ヒドロキシ−３−（ピペリジン−２−イル）アゼチジン−１−イル）メタノンなる名称と下記の構造を有する。

ＰＤ−０３２５９０１（ＣＡＳ登録番号３９１２１０−１０−９、ファイザー）は、癌の潜在的な経口錠剤の治療のための第二世代、非ＡＴＰ競合性、アロステリックＭＥＫ阻害剤である（米国特許第６９６０６１４号；米国特許第６９７２２９８号；米国特許出願公開第２００４／１４７４７８号；米国特許出願公開第２００５／０８５５５０号）。第ＩＩ相臨床試験が、乳癌、結腸腫瘍、黒色腫の可能性のある治療のために行われている。ＰＤ−０３２５９０１は、（Ｒ）−Ｎ−（２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−３，４−ジフルオロ−２−（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）ベンズアミドと命名され、下記構造を有する。

薬学的組成物
本発明の薬学的組成物または製剤は、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩、化学療法剤、及び一以上の薬学的に許容される担体、流動促進剤、希釈剤、または賦形剤との組合せを含む。

一例は、ＧＤＣ−００６８又はその塩、及び一以上の薬学的に許容される担体、流動促進剤、希釈剤、または賦形剤の経口送達のための第一製剤、及びＧＤＣ−０９７３とＰＤ−０３２５９０１のうちの一つ又はその塩、及び一以上の薬学的に許容される担体、流動促進剤、希釈剤、または賦形剤の経口送達のための第二製剤を含む。一例において、第二製剤はＧＤＣ−０９７３又はその塩を含む。

式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩、および化学療法剤は、非溶媒和形態、および水、エタノールなどの薬学的に許容される溶媒との溶媒和形態で存在してもよく、本発明は溶媒和および非溶媒和形態の両方を包含することを意図する。

式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩、および化学療法剤はまた、異なる互変異性型で存在してもよく、全てのこのような形態は、本発明の範囲内に包含される。「互変異性体」または「互変異性型」という用語は、低いエネルギー障壁によって相互転換可能な異なるエネルギーの構造異性体を意味する。例えば、プロトン互変異性体（プロトトロピック互変異性体としても知られている）には、ケトエノールおよびイミン−エナミン異性化などのプロトンの移動を介した相互変換が含まれる。原子価互変異性体には、結合電子のいくつかの再編成による相互変換が含まれる。

薬学的組成物は、薬学的に不活性な賦形剤、希釈剤、担体、または流動促進剤と共に、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩と本明細書に記載されている化学療法剤とを含む複数（例えば、２種）の医薬活性剤からなるバルク組成物および個々の投与単位の両方を包含する。バルク組成物および各々の個々の投与単位は、固定された量の前記医薬活性剤を含有することができる。バルク組成物は、個々の投与単位にまだ形成されていない材料である。例示的な投与単位は、錠剤、丸剤、カプセル剤などの経口投与単位である。同様に、本明細書において記載されている、本発明の医薬組成物を投与することによって患者を治療する方法はまた、バルク組成物および個々の投与単位の投与を包含することを意図している。

薬学的組成物はまた、本明細書に記載されたものと同一の同位体標識された化合物を包含するが、１個または複数の原子が、天然に通常見出される原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子によって置き換えられている。規定されているような任意の特定の原子または元素の全ての同位体は、本発明の化合物、およびそれらの使用の範囲内に企図される。化合物に組み込むことができる例示的な同位体には、^２Ｈ、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１３Ｎ、^１５Ｎ、^１５Ｏ、^１７Ｏ、^１８Ｏ、^３２Ｐ、^３３Ｐ、^３５Ｓ、^１８Ｆ、^３６Ｃｌ、^１２３Ｉおよび^１２５Ｉなどの、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、塩素およびヨウ素の同位体が挙げられる。特定の同位体標識された本発明の化合物（例えば、^３Ｈおよび^１４Ｃで標識されたもの）は、化合物および／または基質組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム化した（^３Ｈ）および炭素１４（^１４Ｃ）同位体は、それらの調製の容易性および検出性のために有用である。さらに、重水素（^２Ｈ）などのより重い同位体による置換は、より高い代謝安定性（例えば、インビボ半減期の増加または投与必要量の減少）からもたらされる特定の治療上の利益をもたらすことができ、それ故にいくつかの状況下では好ましいであろう。^１５Ｏ、^１３Ｎ、^１１Ｃおよび^１８Ｆなどのポジトロン放出同位体は、基質受容体占有率を調べるポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）研究のために有用である。

式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩および化学療法剤は、ヒトを含めた哺乳動物において（予防的治療を含めた）高増殖性障害の治療上の処置のための治療薬の組合せにおける使用のために標準的薬務に従って製剤される。本発明は、１種または複数の薬学的に許容される担体、流動促進剤、希釈剤、または賦形剤と合わせて、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩及び本明細書に記載される一以上の化学療法剤のを含む医薬組成物を提供する。

適切な担体、希釈剤および賦形剤は当業者には周知であり、炭水化物、ワックス、水溶性および／または膨潤性ポリマー、親水性または疎水性材料、ゼラチン、油、溶媒、水などの材料が挙げられる。使用される特定の担体、希釈剤または賦形剤は、本発明の化合物が適用される手段および目的によって決まる。溶媒は、哺乳動物に投与するのに、当業者に安全と認められる（ＧＲＡＳ）溶媒に基づいて一般に選択される。一般に、安全な溶媒は、水中で可溶性または混和性の、水および他の無毒性溶媒などの無毒性水性溶媒である。適切な水性溶媒には、水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ３００）など、およびこれらの混合物が挙げられる。製剤にはまた、薬物（すなわち、本発明の化合物またはその医薬組成物）の洗練された提示または医薬品（すなわち、医薬）の製造における補助を提供するために、１種または複数の緩衝液、安定化剤、界面活性剤、湿潤剤、滑沢剤、乳化剤、懸濁化剤、保存剤、抗酸化剤、不透明化剤、流動促進剤、加工助剤、着色剤、甘味料、香料剤、香味剤および他の公知の添加剤を含み得る。

製剤は、従来の溶解および混合手順を使用して調製し得る。例えば、原薬（すなわち、本発明の化合物または化合物の安定化した形態（例えば、シクロデキストリン誘導体との複合体または他の公知の複合体形成剤）は、上記の賦形剤の１種または複数の存在下で適切な溶媒に溶解する。本発明の化合物は典型的には、医薬品剤形に製剤され、薬物の容易に制御可能な投与量を実現し、処方された投与計画による患者の薬剤服用順守を可能にする。

使用のための医薬組成物（または製剤）は、薬物投与のために使用される方法によって、種々の方法で包装し得る。一般に、分配のための物品には、その中に適切な形態の医薬製剤が入れられる容器が含まれる。適切な容器は当業者には周知であり、ビン（プラスチックおよびガラス）、小容器、アンプル、プラスチック袋、金属円筒などの材料が含まれる。容器はまた、パッケージの内容への不注意なアクセスを防止するためのいたずら防止の集合体を含み得る。さらに、容器は、その上に容器の内容を記載するラベルを有する。ラベルはまた、適切な警告を含んでもよい。

化合物の医薬製剤は、投与の様々な経路およびタイプのために調製し得る。例えば、所望の程度の純度を有する式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩は、凍結乾燥した製剤、粉砕した粉末、または水溶液の形態で、薬学的に許容される希釈剤、担体、賦形剤または安定剤と任意選択で混合し得る（Remington's Pharmaceutical Sciences(1995）、第18版、Mack Publ.Co.、Easton、PA）。製剤は、周囲温度にて適切なｐＨで所望の程度の純度で、生理学的に許容できる担体、すなわち、用いられる投与量および濃度でレシピエントにとって無毒性の担体と混合することによって行い得る。製剤のｐＨは、特定の使用および化合物の濃度によって主に決まるが、約３〜約８の範囲でよい。

薬学的製剤は、好ましくは無菌である。特に、インビボ投与のために使用される製剤は、無菌でなくてはならない。このような滅菌は、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成される。

薬学的製剤は通常、固体組成物、凍結乾燥した製剤として、または水溶液として保存することができる。

薬学的製剤は、良好な医療行為と調和する態様、すなわち、量、濃度、スケジュール、コース、ビヒクルおよび投与経路で服用および投与する。このような状況において考慮する要因には、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床症状、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与の日程計画、および医師には公知の他の要因が挙げられる。投与する化合物の「治療有効量」はこのような見地によって決定され、凝固因子が媒介する障害を予防、改善、または治療するのに必要な最小量である。このような量は、ホストにとって有毒である量未満またはホストを有意により出血を起こしやすくする量未満である。

許容される希釈剤、担体、賦形剤および安定剤は、用いる投与量および濃度でレシピエントにとって無毒性であり、（リン酸、クエン酸および他の有機酸などの）緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含めた抗酸化剤；保存剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン（メチルまたはプロピルパラベンなど）；カテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなど）；親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）；アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリシンなど）；グルコース、マンノース、またはデキストリンを含めた単糖類、二糖類および他の炭水化物；キレート剤（ＥＤＴＡなど）；糖類（スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなど）；塩形成対イオン（ナトリウムなど）；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；および／または非イオン性界面活性剤（ＴＷＥＥＮ^ＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ^ＴＭまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）など）が挙げられる。活性医薬成分はまた、例えば、コアセルベーション技術によって、または界面重合によって調製したマイクロカプセル、例えば、各々、コロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフィア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）中、またはマクロエマルジョン中のヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に封入し得る。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences、第18版、(1995)Mack Publ.Co.、Easton、PAに開示されている。

式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩の持続放出調製品を調製してもよい。持続放出調製品の適切な例には、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、マトリックスは、造形物品の形態、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルである。持続放出マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３７７３９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγ−エチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）などの分解性乳酸−グリコール酸コポリマー（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドからなる注射用ミクロスフィア）、およびポリ−Ｄ（−）３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。

薬学的製剤には、本明細書において詳述する投与経路に適したものが含まれる。製剤は、製剤分野で周知の方法のいずれかによって調製し得る単位剤形で便利に提示し得る。技術および製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences、第18版(1995)Mack Publishing Co.、Easton、PAに一般に見出される。このような方法には、活性成分を１種または複数の補助成分を構成する担体と混合するステップが含まれる。一般に、活性成分を液体担体または微粉化した固体担体または両方と均一におよび密接に混合し、次いで必要に応じて、生成物を造形することによって製剤は調製される。

経口投与に適した式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩および／または化学療法剤の製剤は、各々が所定の量の式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩および／または化学療法剤を含有する、丸剤、ハードもしくはソフトの、例えばゼラチンカプセル、カシェ剤、トローチ剤、ロゼンジ、水性もしくは油懸濁剤、分散性散剤もしくは顆粒剤、乳剤、シロップ剤またはエリキシル剤などの個別単位として調製し得る。式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩の量および化学療法剤の量は、合わせた製剤として丸剤、カプセル剤、溶液剤または懸濁剤に製剤し得る。代わりに、式Ｉの化合物および化学療法剤は、交互投与のための丸剤、カプセル剤、溶液剤または懸濁剤に別々に製剤し得る。

製剤は、薬学的組成物の製造のための技術分野で公知の任意の方法に従って調製してもよい。このような組成物は、口当たりがいい調製品を提供するために、甘味剤、香味剤、着色剤および保存料を含めた１種または複数の薬剤を含有し得る。圧縮錠剤は、適切な機械中で粉末または顆粒などの易流動性形態の活性成分を圧縮し、結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤、表面活性剤または分散剤と任意選択で混合することによって調製し得る。成形錠剤は、適切な機械中で不活性な液体希釈剤で湿らせた粉末の活性成分の混合物を成形することによって作製し得る。錠剤は、任意選択でコーティングまたは刻み目を付けてもよく、活性成分のそこからの持続放出または制御放出を実現するために任意選択で製剤される。

薬学的製剤の錠剤賦形剤には、錠剤を構成する粉末の薬物のバルク容量を増加するための充填剤（または希釈剤）；錠剤が摂取され、薬物の急速な溶解および吸収を促進する場合、錠剤が小さな断片、理想的には個々の薬物粒子に分解されるのを促す崩壊剤；顆粒剤および錠剤が必要とされる機械的強度で形成され、圧縮された後で錠剤をまとめられることを確実にし、包装、輸送および日常的な取扱いの間にそれがその成分粉末に分解することを防止するための結合剤；生産の間に錠剤を構成する粉末の流動性を改善するための流動促進剤；製造の間に錠剤をプレスするために使用される装置に打錠用粉末が付着しないことを確実にする滑沢剤（それらは、プレスを通る混合粉体の流れを改善し、完成した錠剤が装置から排出されるときに摩擦および破損を最小化する）；流動促進剤の機能と同様の機能を有し、錠剤を構成する粉末と製造の間に錠剤の形状を打ち出すのに使用される機械との間の接着を減少させる抗接着剤；より心地よい味を与えるため、または不快な味を隠すために錠剤に組み込まれるフレーバー；ならびに識別および患者の薬剤服用順守を助けるための着色剤を含めてもよい。

錠剤の製造に適した無毒性の薬学的に許容される賦形剤と混合した活性成分を含有する錠剤が許容される。これらの賦形剤は、例えば、不活性希釈剤（炭酸カルシウムもしくは炭酸ナトリウム、ラクトース、カルシウムまたはリン酸ナトリウムなど）；造粒剤および崩壊剤（トウモロコシデンプン、またはアルギン酸など）；結合剤（デンプン、ゼラチンまたはアカシアなど）；および滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクなど）でよい。錠剤はコーディングされていなくてもよく、またはマイクロカプセル化を含めた公知の技術によってコーティングされて、消化管内での崩壊および吸着を遅らせ、それによってより長期間に亘る持続性の作用を実現してもよい。例えば、時間遅延材料（モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリル単独またはワックスと合わせたものなど）を用いてもよい。

目または他の外部組織、例えば、口および皮膚の治療のために、製剤は好ましくは、活性成分（複数可）を例えば０．０７５〜２０％ｗ／ｗの量で含有する局所軟膏またはクリーム剤として施用される。軟膏に製剤された場合、活性成分はパラフィン性または水混和性の軟膏基剤と共に用いてもよい。代わりに、活性成分は、水中油型クリーム基剤と共にクリームに製剤し得る。

必要に応じて、クリーム基剤の水相は、多価アルコール、すなわち、２個以上のヒドロキシル基を有するアルコール（プロピレングリコール、ブタン１，３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ４００を含めた）、ならびにこれらの混合物など）を含み得る。局所製剤は、皮膚または他の患部領域を通る活性成分の吸収または浸透を増強する化合物を望ましくは含み得る。このような皮膚浸透増強剤の例には、ジメチルスルホキシドおよび関連する類似体が挙げられる。

本発明の乳剤の油性相は、脂肪もしくは油と、または脂肪および油の両方と少なくとも１種の乳化剤の混合物を含めた、公知の成分から公知の態様で構成し得る。好ましくは、親水性乳化剤が、安定剤として作用する親油性乳化剤と共に含まれる。一緒になって、安定剤（複数可）を有するまたは有さない乳化剤（複数可）は、乳化ワックスを構成し、ワックスは油脂と一緒になって、クリーム製剤の油性分散相を形成する乳化軟膏基剤を構成する。製剤における使用に適した乳化剤および乳化安定剤には、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０、Ｓｐａｎ（登録商標）８０、セトステアリルアルコール、ベンジルアルコール、ミリスチルアルコール、モノステアリン酸グリセリルおよびラウリル硫酸ナトリウムが挙げられる。

薬学的製剤の水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混合した活性材料を含有する。このような賦形剤には、懸濁化剤（カルボキシメチルセルロースナトリウム、クロスカルメロース、ポビドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガムおよびアラビアゴムなど）、ならびに分散剤または湿潤剤（天然リン脂質（例えば、レシチン）、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン）、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、エチレンオキシドと脂肪酸および無水ヘキシトール由来の部分エステルとの縮合生成物（例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン）など）が挙げられる。水性懸濁液はまた、１種または複数の保存剤（エチルまたはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエートなど）、１種または複数の着色剤、１種または複数の香味剤、および１種または複数の甘味剤（スクロースまたはサッカリンなど）を含有し得る。

薬学的組成物は、無菌注射用水性または油性懸濁剤などの無菌注射用調製品の形態でよい。この懸濁剤は、上記のそれらの適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して公知の技術によって製剤し得る。無菌注射用調製品は、１，３−ブタンジオール中の溶液などの無毒性の非経口的に許容される希釈剤もしくは溶媒中の、または凍結乾燥した粉末から調製した溶液剤または懸濁剤でよい。用いてもよい許容されるビヒクルおよび溶媒の中に、水、リンゲル液および等張食塩液がある。さらに、無菌不揮発性油は、溶媒または懸濁媒として通常用いてもよい。この目的のために、合成モノまたはジグリセリドを含めて任意の無菌性不揮発性油を用いてもよい。さらに、オレイン酸などの脂肪酸は同様に、注射剤の調製において使用し得る。

単一の剤形を生じさせるために担体材料と合わせ得る活性成分の量は、治療されるホストおよび特定の投与方法によって変化するであろう。例えば、ヒトへの経口投与用の持続放出製剤は、全組成物の約５〜約９５％（重量：重量）で変化し得る適切で好都合な量の担体材料と配合された約１〜１０００ｍｇの活性材料を含有し得る。薬学的組成物は、投与のために容易に測定可能な量を提供するために調製することができる。例えば、静脈内注入用の水溶液は、約３０ｍＬ／時間の速度の適切な容量の注入が起こり得るように、溶液１ミリリットル毎に約３〜５００μｇの活性成分を含有し得る。

非経口投与に適切な製剤には、水性および非水性の無菌注射液（抗酸化剤、緩衝液、制菌剤および製剤を意図するレシピエントの血液と等張にさせる溶質を含有し得る）；ならびに水性および非水性の無菌懸濁剤（懸濁化剤および増粘剤を含み得る）が挙げられる。

目への局所投与に適した製剤にはまた、活性成分が、適切な担体、特に活性成分のための水性溶媒に溶解または懸濁した、点眼薬が含まれる。活性成分は、好ましくはこのような製剤中に約０．５〜２０％ｗ／ｗ、例えば約０．５〜１０％ｗ／ｗ、例えば約１．５％ｗ／ｗの濃度で存在する。

口腔内の局所投与に適した製剤には、香味を付けた基剤、通常スクロースおよびアカシアまたはトラガカント中に活性成分を含むロゼンジ；ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアなどの不活性な基剤中に活性成分を含む香錠；ならびに適切な液体担体中に活性成分を含む口内洗浄剤が含まれる。

直腸投与のための製剤は、例えば、カカオバターまたはサリチレートを含む適切な基材を有する坐薬として提示し得る。

肺内または経鼻投与に適した製剤は、例えば０．１〜５００ミクロンの範囲の粒径（０．５ミクロン、１ミクロン、３０ミクロン、３５ミクロンなどのミクロン単位で、０．１ミクロン〜５００ミクロンの範囲の粒径を含めた）を有し、肺胞嚢に達するように鼻腔を通る急速な吸入によってまたは口を通る吸入によって投与する。適切な製剤には、活性成分の水性または油性溶液が含まれる。エアロゾルまたは乾燥粉末による投与に適した製剤は、従来の方法に従って調製してもよく、下記で説明するような障害の治療または予防においてこれまで使用された化合物などの他の治療剤と共に送達してもよい。

膣投与に適した製剤は、活性成分に加えて当技術分野において適切であるとして公知のものなどの担体を含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤またはスプレー製剤として提示し得る。

製剤は、単位用量または複数用量の容器、例えば密封したアンプルおよびバイアルに詰めてもよく、注射のために使用の直前に無菌液体担体、例えば水を添加することのみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）した状態で保存してもよい。即時調合注射液および懸濁液は、上記のものなどの無菌粉末、顆粒および錠剤から調製される。好ましい単位製剤は、活性成分の、本明細書における上記のような１日用量もしくは単位１日部分用量、またはその適切な画分を含有するものである。

本発明は、したがって獣医学的担体と一緒に、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩及び本明細書に記載される少なくとも一の化学療法剤を含む獣医学的組成物をさらに提供する。獣医学的担体は、組成物を投与する目的のために有用な材料であり、その他の場合は不活性もしくは獣医学的技術分野において許容される固体、液体または気体材料でよく、活性成分と適合する。これらの獣医学的組成物は、非経口、経口でまたは任意の他の所望の経路によって投与し得る。

併用療法
式Ｉの化合物又は薬学的に許容されるその塩は、前悪性及び非腫瘍性又は非悪性の過剰増殖性疾患と共に、腫瘍、癌、および腫瘍性組織を含めた過剰増殖性疾患または障害の治療のために、他の化学療法剤と組み合わせて用いてもよい。ある実施態様において、式Ｉの化合物又は薬学的に許容されるその塩は、抗過剰増殖特性を有する又は過剰増殖性障害の治療において有用である第二化合物と、併用療法として投薬計画で組み合わされる。投薬計画の第二化合物は好ましくは、それらが互いに悪影響を与えないような、式Ｉまたは薬学的に許容されるその塩に相補的活性を有する。このような化合物は、意図する目的に有効な量で投与され得る。一実施態様では、治療の組み合わせは投薬計画によって管理され、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩の治療的有効量は、１日２回から３週間に１回（ｑ３ｗｋ）の範囲で投与され、治療的有効量の化学療法剤は、１日２回から３週間に１回の範囲で投与される。

併用療法は、同時または逐次の投与計画として投与し得る。逐次に投与する場合、組合せは、２つ以上の投与で投与し得る。合わせた投与には、別々の製剤、およびいずれかの順序の連続投与が含まれ、両方（または全て）の活性剤がそれらの生物活性を同時に及ぼす期間があることが好ましい。

本発明の一の特定の態様において、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩は、一以上の薬剤の投与を開始した後に約１日から約１０日の期間において投与することができる。本発明の別の特定の態様において、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩は、組み合わせを開始する前の約１日から約１０日の期間において投与することができる。本発明の別の特定の態様において、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩の投与、及び化学療法剤の投与は同日に開始する。

上記の同時投与した薬剤のいずれかについての適切な用量は、現在使用されているものであり、治療係数を増加させ、あるいは毒性または他の副作用もしくは結果を軽減するなどで、新規に同定された薬剤および他の化学療法剤または治療の合わせた作用（相乗作用）によって低下し得る。

抗癌治療の特定の実施態様において、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩は、化学療法剤と合わせてもよく、外科療法および放射線療法と合わせてもよい。式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩及び薬学的に活性な化学療法剤（複数可）の量、及び投与の相対的タイミングは、所望の組み合わせた治療効果を達成するために選択される。

薬学的組成物の投与
本発明の化合物は、治療される状態に適した任意の経路によって投与し得る。適切な経路には、経口、非経口（皮下、筋内、静脈内、動脈内、吸入、皮内、くも膜下腔内、硬膜外、および注入技術を含めた）、経皮、直腸、経鼻、局所（口腔および舌下を含めた）、膣内、腹腔内、肺内および鼻腔内が挙げられる。局所投与は、経皮パッチまたはイオン導入装置のような経皮投与の使用を含むことができる。

薬物の製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences、第18版、(1995)Mack Publishing Co.、Easton、PAにおいて議論されている。薬物製剤の他の例は、Liberman,H.A.およびLachman,L.、編、Pharmaceutical Dosage Forms、Marcel Decker、第３巻、第２版、New York、NYに見出すことができる。局所免疫抑制治療のために、化合物は、潅流またはさもなければ移植前に移植片を阻害剤と接触させることを含めて、病巣内投与によって投与し得る。好ましい経路は、例えばレシピエントの状態によって変化し得ることを理解されたい。化合物を経口投与する場合、薬学的に許容される担体、流動促進剤、または賦形剤と共に、丸剤、カプセル剤、錠剤などとして製剤し得る。化合物を非経口的に投与する場合、下記で詳述するように、薬学的に許容される非経口ビヒクルまたは希釈剤と共に、および単位用量の注射剤形中で製剤され得る。

ヒト患者を治療する用量は、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩を約２０ｍｇ〜約１６００ｍｇの範囲であり得る。典型的な用量は、化合物約５０ｍｇ〜約８００ｍｇであり得る。用量は、特定化合物の吸収、分布、代謝、および***を含めた薬物動態（ＰＫ）および薬力学的（ＰＤ）特性によって、１日１回（ＱＤ）、１日２回（ＢＩＤ）、またはさらに頻繁に投与し得る。さらに毒性要因は、投与量および投与計画に影響を与え得る。経口投与する場合、丸剤、カプセル剤、または錠剤は、特定の期間に１日２回、１日１回またはより少なく（週１回または２週間もしくは３週間毎に１回など）摂取してもよい。投与計画は、数サイクルの治療で繰り返してもよい。

治療方法
（１）式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩と（２）化学療法剤との治療薬の組合せは、それだけに限らないが、哺乳動物におけるＡＫＴキナーゼにより調製されるものを含めた疾患、状態および／または障害の治療に有用である。本発明の方法に従って処置され得る癌としては、限定されないが、中皮腫癌、子宮内膜癌、グリオーマ、膵臓癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、前立腺、膵臓癌、メラノーマ、胃癌、結腸癌、頭頸部癌を含む。

本発明の特定の組み合わせは、特定の癌表現型に対して改善された効果を与えることが決定されている。例えば、本発明の特定の組み合わせは、ＰＴＥＮの変異（低いか又は欠損状態）、ＡＫＴの変異（又は抗ｐＡＫＴ発現レベル又は増幅レベル）、ＰＩ３Ｋの変異、またはＨｅｒ２／ＥｒｂＢ２増幅、ＲＡＳ変異、ＲＡＦ変異又は上記の組み合わせと関連付けられた癌に対して改善された効果を提供する。

従って、本明細書に記載される特定の組合せは、これらのタイプの癌に対して特に有用であり得る。

例えば、結腸直腸癌において、ＲＡＳ／ＲＡＦ変異（ＫＲＡＳ Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ又はその組み合わせ）と組み合わせたＰＩ３ｋ／ＡＫＴ変異（例えばＰＩ３Ｋ Ｈ１０４７Ｒ、Ｅ５４５Ｋ、Ｄ５４９Ｎ、Ｐ４２１Ｌ、Ｌ５６８Ｆ、Ｌ５６９Ｆ、Ｐ４４９Ｔ又はその組み合わせ）は、本明細書中の組み合わせに対する強い応答を予測し、強い相乗効果がＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせで見られる。

また、非小細胞肺癌においても、強い相乗効果がＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせで見られ、（ｉ）ＰＩ３ｋ／ＡＫＴ変異（ＰＩ３ｋ Ｅ５４５Ｋ、Ｌ９９７Ｐ、Ｍ７７２Ｘ、Ｎ９９６Ｈ又はその組み合わせ）及びＲＡＳ／ＲＡＦ変異（Ｑ６１Ｈ、Ｇ１２Ｃ、Ｑ６１Ｋ、Ｎ８５Ｋ、Ｇ１２Ｓ、ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ又はその組み合わせ）の組み合わせが生じ、（ｉｉ）ＰＩ３ｋ変異無しでＲＡＳ／ＲＡＦの組み合わせが生じる。

また、メラノーマにおいても、強い相乗効果がＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせで見られ、（ｉ）ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ変異が生じ、（ｉｉ）ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ変異又は欠失又は増幅が、ＰＴＥＮ変異、欠損又は低い状態とともに、又は高ｐＡＫＴ発現又は活性レベルとともに生じる。

患者が、ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ変異を含むか否かを調べるためのキットは市販されている。一例は、ＣＯＢＡＳ（登録商標）４８００ ＢＲＡＦ Ｖ６００変異試験（Roche Molecular Systems Inc.）であり、これは、ホルマリン固定、パラフィン包埋（ＦＦＰＥＴ）ヒトメラノーマ組織におけるＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ変異を検出する。それは、メラノーマ腫瘍がＢＲＡＦ遺伝子の変異型形態を抱える患者を治療するために設計された、ベムラフェニブ又はその薬学的に許容される塩による治療のためのコンパニオン診断薬として米国で承認されている。前臨床および臨床試験では、ｃｏｂａｓ（登録商標）ＢＲＡＦ変異試験は、ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ（１７９９ Ｔ＞Ａ）変異の検出において９７．３％の陽性一致を有し、これはＣＯＳＭＩＣデータベースに報告された全ＢＲＡＦ変異の＞〜８５％を表している。

ホルマリン固定、パラフィン包埋組織（ＦＦＰＥＴ）では、ｃｏｂａｓ（登録商標）ＢＲＡＦ変異試験は、＞５％の変異レベルでＶ６００Ｅ変異を検出することができる。試験ではまた、Ｖ６００Ｄ及びＶ６００Ｋなどの他のＶ６００変異を検出することができる。ｃｏｂａｓ（登録商標）変異試験は、患者から得られた組織サンプルまたは腫瘍細胞などの検体料の受領から８時間未満のうちに実施することができる。ｃｏｂａｓ（登録商標）４８００ＢＲＡＦ Ｖ６００変異試験は、ｃｏｂａｓ（登録商標）４８００システムｖ２．０上でのリアルタイムＰＣＲ試験であり、腫瘍がＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ変異を保有するメラノーマ患者を選択する際の補助として使用されることを意図している。

ＰＴＥＮ欠損（又は低い）状態は、当技術分野で知られている任意の適切な手段によって測定することができる。一例では、ＩＨＣが使用される。別法として、ウエスタンブロット分析を用いることができる。ＰＴＥＮに対するする抗体は市販されている（Cell Signaling Technology, Beverly, MA, Cascade Biosciences, Winchester, MA）。ＰＴＥＮの状態についてのＩＨＣおよびウェスタンブロット分析の事例手順は、Neshat, M. S. et al. Enhanced sensitivity of PTEN-deficient tumors to inhibition of FRAP/mTOR, Proc. Natl Acad. Sci. USA 98, 10314-10319 (2001)及びPerren, A., et. al. Immunohistochemical Evidence of Loss of PTEN Expression in Primary Ductal Adenocarcinomas of the Breast, American Journal of Pathology, Vol. 155, No. 4, October 1999で説明されている。更に、ＡＫＴ変異、ＰＩ３Ｋの変異、及びＨｅｒ２／ＥｒｂＢ２増幅に関連付けられている癌は、当技術分野で知られている技術を用いて同定することができる。

与えられたサンプルにおいて、非活性化又は非リン酸化ＡＫＴのレベルと比較した、ＡＫＴの活性化又はリン酸化（ｐＡＫＴ）のレベルは、当技術分野で公知の方法により測定することができる。ｐＡＫＴの状態は比率（例えば、腫瘍細胞におけるｐＡＫＴ量を同じタイプの非腫瘍性細胞におけるｐＡＫＴの量で割る）又は減算（例えば、腫瘍細胞におけるｐＡＫＴ量から同じタイプの非腫瘍性細胞におけるｐＡＫＴの量を引く）を単位として表すことができる。ｐＡＫＴプロファイルはまた、ＡＫＴリン酸化の下流標的（例えば、ｐＧＳＫ又はＰＲＡＳ４０）の量を測定することによって経路の活性化のレベルを単位として表現することができる。高いｐＡＫＴは、ベースライン値よりも高いサンプルの全体的なＡＫＴの活性化又はリン酸化レベルを意味する。一例では、ベースライン値は、特定の細胞型のｐＡＫＴの基礎レベルである。別の例では、ベースライン値は、例えば、非癌性又は細胞について、サンプル細胞の特定の集団におけるｐＡＫＴの普通のレベル又は平均レベルである。別の例では、高ｐＡＫＴは、同じ哺乳動物又は患者集団の何れかに由来する同じタイプの正常で健常な（例えば、非腫瘍）細胞の平均と比較した場合、細胞内でリン酸化又は活性化ＡＫＴを過剰発現するか又は過剰に増幅された腫瘍細胞を指す。ｐＡＫＴプロファイルは、特に、転移性又は切除不能なメラノーマなどベムラフェニブ耐性癌患者において、特定のＰＩ３ｋ／ＡＫＴキナーゼ経路阻害剤の有効性を予測するための例えばＦＯＸＯ３ａ局在化プロファイル、又はベムラフェニブと式Ｉの化合物の特定の組み合わせの有効性を予測するために例えばＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ変異状態など他のマーカーと組み合わせて使用することもできる。組織サンプルでｐＡＫＴを測定するためのキットが市販されている（例えば、リン酸化Ａｋｔ（Ｔｈｒ３０８）ＳＴＡＲ ＥＬＩＳＡキット、ＥＭＤミリポア）。

ＰＩ３ｋ、ＫＲＡＳ及びＡＫＴ変異の存在を試験するためのキットは市販されている（Ｑｉａｇｅｎ）。

特定の態様において、本発明は、ＰＴＥＮの変異又は発現の欠損、ＡＫＴの変異又は増幅、ＰＩ３Ｋの変異又は増幅、Ｈｅｒ２／ＥｒｂＢ２の変異又は増幅、ＫＲＡＳの変異又は増幅、ＢＲＡＦの変異又は増幅、又はその組み合わせと関連付けられている癌を有する患者を、患者へ本発明の組み合わせを投与することを含み治療するための方法を提供する。別の態様において、本発明は、患者の癌がＰＴＥＮの変異又は発現の欠損、ＡＫＴの変異又は増幅、ＰＩ３Ｋの変異又は増幅、又はＨｅｒ２／ＥｒｂＢ２の変異又は増幅、ＫＲＡＳの変異又は増幅、ＢＲＡＦの変異又は増幅、又はその組み合わせと関連付けられているかを決定することを含む、本発明の組み合わせで治療することができる癌を有する患者を同定するための方法を提供し、ここで、ＰＴＥＮの変異又は発現の欠損、ＡＫＴの変異又は増幅、ＰＩ３Ｋの変異又は増幅、又はＨｅｒ２／ＥｒｂＢ２の変異又は増幅、ＫＲＡＳの変異又は増幅、ＢＲＡＦの変異又は増幅、又はその組み合わせと患者の癌との関連は、本発明の組合せで治療することができる癌を示す。更なる態様において、本発明は、本発明の組み合わせで識別された患者を治療することを更に含む方法を提供する。一実施態様において、癌は、卵巣癌、乳癌、メラノーマ、結腸癌又は非小細胞肺癌である。

製造品
本発明の他の実施形態において、上記の疾患および障害の治療に有用な式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する製造品、または「キット」を提供する。一実施態様では、キットは、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩を含む容器を含む。

キットは、容器上または容器に付随したラベルまたは添付文書をさらに含み得る。用語「添付文書」とは、このような治療薬の使用に関する適応症、用法、投与量、投与、禁忌症および／または警告についての情報を含む、治療薬の商業用パッケージ中に通常含まれる指示を意味するために使用される。適切な容器には、例えば、ビン、バイアル、シリンジ、ブリスターパックなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの種々の材料から形成し得る。容器は、症状の治療のために有効な式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩またはその製剤を保持することができ、無菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって穴を開けることが可能なストッパーを有する静脈注射用溶液のバッグまたはバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１種の活性剤は、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩である。ラベルまたは添付文書は、組成物が癌などの選択した疾患の治療に使用されることを示す。一実施態様では、ラベルまたは添付文書は、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩を含む組成物が異常細胞増殖からもたらされる障害を治療するために使用することができることを示す。ラベルまたは添付文書はまた、組成物が他の障害を治療するために使用することができることを示し得る。代わりに又はさらに製造品は、薬学的に許容される希釈バッファー、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化塩水、リンガー溶液およびデキストロース溶液を含む第二の容器をさらに含んでもよい。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含めた、商業的および使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。

キットは、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩、および存在する場合は第２の薬学的製剤の投与のための指示をさらに含み得る。例えば、キットが、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩を含む第１の組成物と第２の医薬製剤とを含む場合、そのキットは、それを必要としている患者への第１および第２の医薬組成物の同時、逐次または別々の投与のための指示をさらに含み得る。

他の実施態様では、キットは、錠剤またはカプセル剤などの式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩の固体経口剤形の送達のために適切である。このようなキットは、多数の単位用量を好ましくは含む。このようなキットは、それらの意図した使用の順番に配置した投与量を有するカードを含むことができる。このようなキットの一例は、「ブリスターパック」である。ブリスターパックは、包装産業において周知であり、医薬の単位剤形を包装するために広範に使用されている。必要に応じて、例えば数字、文字、または他のマークの形態の、または適量を投与することができる治療スケジュールにおける日を指定するカレンダーの折り込みを有する、記憶補助を提供することができる。

一実施態様によれば、キットは、（ａ）その中に含まれている式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩を有する第１の容器と；任意選択で（ｂ）その中に含まれている第２の医薬製剤を有する第２の容器（第２の薬学的製剤は、抗過剰増殖活性を有する第２の化合物を含む）とを含み得る。代わりに、またはさらに、キットは、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液およびデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝液を含む第３の容器をさらに含み得る。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含めた、商業的および使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。

キットが式Ｉの組成物又はその薬学的に許容される塩と第２の治療剤、すなわち化学療法剤とを含む場合、キットは、別々の組成物を含有するための容器（分割されたビンまたは分割されたホイルパケットなど）を含んでもよいが、別々の組成物はまた、単一の分割されていない容器中に含有されてもよい。典型的には、キットは、別々の成分の投与のための指示を含む。別々の成分が異なる剤形（例えば、経口および非経口）で好ましくは投与するとき、異なる投与間隔で投与するとき、または組合せの個々の成分を用量設定することが処方する医師の所望であるときに、キット形態は特に有利である。

発明の特定の態様
本発明の一つの特定の態様において、過剰増殖性疾患は癌である。
本発明の一つの特定の態様において、癌はＰＴＥＮ変異と関連付けられている。
本発明の一つの特定の態様において、癌はＡＫＴ変異、過剰発現又は増幅と関連付けられている。
本発明の一つの特定の態様において、癌はＰＩ３Ｋ変異と関連付けられている。
本発明の一つの特定の態様において、癌はＫＲＡＳ変異と関連付けられている。
本発明の一つの特定の態様において、癌はＢＲＡＦ変異と関連付けられている。
本発明の一つの特定の態様において、癌は（１）ＰＴＥＮ、ＡＫＴ又はＰＩ３Ｋ変異と（２）ＫＲＡＳ又はＢＲＡＦ変異の組み合わせと関連付けられている。一例において、癌は、卵巣癌、乳癌、メラノーマ、結腸癌又は非小細胞肺癌である。
本発明の一つの特定の態様において、癌はＧＤＣ−００６８及びＧＤＣ−０９７３の単剤療法の一つ又は療法に耐性であるが、ＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の併用療法に応答性である。一例において、癌は、卵巣癌、乳癌、メラノーマ、結腸癌又は非小細胞肺癌である。
本発明の一つの特定の態様において、癌は、中皮腫、子宮内膜癌、膵臓癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌（例えば、去勢抵抗性前立腺癌）、メラノーマ、胃癌、結腸癌、腎臓癌、頭頸部癌、及びグリオーマから選択される。
本発明の一つの特定の態様において、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩、及びテモゾロミドが経口投与される。
本発明の特定の態様において、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩は、ＧＤＣ−０９７３又はＰＤ−０３２５９０１又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与される。
本発明の特定の態様において、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩は、ＧＤＣ−０９７３又はＰＤ−０３２５９０１又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与され、かつ癌は膵臓癌である。
本発明の特定の態様において、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩は、ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与され、かつ癌は膵臓癌である。
本発明の特定の態様において、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩は、ＧＤＣ−０９７３又はＰＤ−０３２５９０１又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与され、かつ癌は結腸癌である。
本発明の特定の態様において、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩は、ＧＤＣ−０９７３又はＰＤ−０３２５９０１又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与され、かつ癌は乳癌である。
本発明の特定の態様において、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩は、ＧＤＣ−０９７３又はＰＤ−０３２５９０１又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与され、かつ癌は卵巣癌である。
本発明の特定の態様において、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩は、ＧＤＣ−０９７３又はＰＤ−０３２５９０１又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与され、かつ癌は肺癌である。
本発明の特定の態様において、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩は、ＧＤＣ−０９７３又はＰＤ−０３２５９０１又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与され、かつ癌はメラノーマである。
本発明の一つの特定の態様において、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩が錠剤として処方される。

一般的調製方法

本発明を説明するために、以下の実施例を含める。しかしながら、これらの実施例は、本発明を限定するものではなく、本発明を実施する方法を示唆することを意味するにすぎないことを理解すべきである。

実施例１
（Ｓ）−２−（４−クロロフェニル）−１−（４−（（５Ｒ，７Ｒ）−７−ヒドロキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−イル）−３−（イソプロピルアミノ）プロパン−１−オン

工程１：ＥｔＯＡｃ（９００ｍＬ）中のプレゲン酸エチル（１３０ｇ、６６２ｍｍｏｌ）を、ドライアイス−イソプロパノール浴を用いて−７８℃に冷却した。反応物が紫色に変色するまで、この混合物をオゾン処理に供した。この時点で、オゾンの発生を止め、反応物をドライアイス浴から除去した。黄色になるまで、酸素を反応混合物に吹き込んだ。反応混合物を真空下に濃縮し、得られた残渣を氷酢酸（４００ｍＬ）に溶解した。溶液を０℃に冷却し、Ｚｕ末（６５ｇ、９９３ｍｍｏｌ）を３０分かけて少しずつ加えた。次いで反応物を２時間撹拌し、この時点でセライトのパッドを通して反応混合物を濾過して、亜鉛末を除去した。酢酸をＮａＯＨおよびＮａＨＣＯ_３水溶液でｐＨ７に中和し、エーテル（３×８００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物をブライン、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、濃縮して、（２Ｒ）−エチル２−メチル−５−オキソシクロペンタンカルボキシレートを茶褐色液体として得た（１０７ｇ、９５％）。

工程２：酢酸アンモニウム（２４０．０３ｇ、３１１３．９ｍｍｏｌ）を、（Ｒ）−エチル２−メチル−５−オキソシクロペンタンカルボキシレート（１０６．０ｇ、６２２．７８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１．２Ｌ）溶液に加えた。反応混合物を窒素下室温で２０時間撹拌し、その後ＴＬＣおよびＨＰＬＣにより判断した通り完結した。反応混合物を濃縮してＭｅＯＨを除去した。得られた残渣をＤＣＭに溶解し、Ｈ_２Ｏで２回、ブラインで１回洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、濾過し、濃縮して、（Ｒ）−エチル２−アミノ−５−メチルシクロペント−１−エンカルボキシレート（１０２ｇ、９７％収率）をオレンジ色油として得た。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ１７０［Ｍ＋Ｈ］＋。

工程３：（Ｒ）−エチル２−アミノ−５−メチルシクロペント−１−エンカルボキシレート（１６１．６１ｇ、９５５．０２４ｍｍｏｌ）およびギ酸アンモニウム（９０．３２９８ｇ、１４３２．５４ｍｍｏｌ）を含むホルムアミド（３０３．４５６ｍｌ、７６４０．１９ｍｍｏｌ）溶液を、内温１５０℃に加熱し、１７時間撹拌した。反応混合物を冷却し、２Ｌの１つ口フラスコに移した。次いで過剰のホルムアミジンを高真空蒸留により除去した。ホルムアミジンの蒸発が止まった時点で、蒸留器中に残った油をＤＣＭに溶解し、ブライン（３×２００ｍＬ）で洗浄した。合わせた水性洗液をＤＣＭで抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、濾過し、濃縮した。得られた茶褐色油を最少量のＤＣＭに溶解し、この溶液を分液漏斗を用いてエーテルの撹拌溶液（約５容量のエーテル対ＤＣＭ溶液）に加えて、茶褐色がかった沈殿物が生成した。この茶褐色沈殿物を中間のガラス漏斗を通して濾別し、これをエーテルで濯ぎ、廃棄した。濾液を濃縮し、エーテルから摩砕し、これをさらに２回繰り返し、次いで高真空ライン上で乾燥して、（Ｒ）−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−オール（９３．２２５ｇ、６５．００％収率）を黄茶褐色糊状固体として得た。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰＣＩ−）ｍ／ｚ１４９．２。

工程４：ＰＯＣｌ_３（４６３．９ｍｌ、５０６７ｍｍｏｌ）を無溶媒で、（Ｒ）−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−オール（１５２．２ｇ、１０１３ｍｍｏｌ）のＤＣＥ（１．２Ｌ）０℃溶液に添加用漏斗によりゆっくり加えた。添加完了後、反応混合物を室温に加温し、次いで加熱還流させ、７０分間撹拌した。反応はＨＰＬＣにより完結したと決定した。反応混合物を室温に冷却し、過剰のＰＯＣｌ_３を以下の通りに４分割でクエンチした：反応混合物を分液漏斗に移し、氷浴中で冷却した氷および飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を含むビーカーに滴下した。反応混合物のそれぞれの分割部分の滴下を完了した時点で、クエンチした混合物を３０分撹拌してＰＯＣｌ_３の分解を完了し、その後分液漏斗に移した。混合物を分液漏斗に移し、ＤＣＭで２回抽出した。合わせた抽出物を乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、濾過し、濃縮した。粗製物を以下の通りにシリカゲル上で精製した：シリカゲル（１ｋｇ）を、真空下でシリカを設置し、砂で最上層を覆った、３Ｌのガラス漏斗上で９：１のヘキサン：酢酸エチルにスラリー化した。粗製物をＤＣＭ／ヘキサン混合物とともに仕込み、真空下１Ｌのサイドアームフラスコを用いて化合物を溶離した。高Ｒｆの副生成物が最初に、次いで（Ｒ）−４−クロロ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン（１０４．４ｇ、６１．０９％収率）が茶褐色油として溶離した。トリエチルアミン（９３．０ｍｌ、５３４ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシレート（３４．８ｇ、１８７ｍｍｏｌ）を、（Ｒ）−４−クロロ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン（３０．０ｇ、１７８ｍｍｏｌ）のｎ−ＢｕＯＨ（２５０ｍＬ）溶液に加えた。反応混合物を窒素下に加熱還流させ、終夜（１７時間）撹拌し、その後回転蒸発器上で濃縮した。得られた油をＤＣＭに溶解し、Ｈ_２Ｏで洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、濾過し、濃縮した。得られた茶褐色油を、生成物がきれいに溶離されるまで最初に２：１のヘキサン類：酢酸エチルで、次いで濃度勾配１：１から１：５のＤＣＭ：酢酸エチルで溶離するシリカゲル上で精製して、（Ｒ）−ｔｅｒｔブチル４−（５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（４２．０ｇ、７４．１％収率）をベージュ色粉体として得た。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ３１９．１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

工程５：最大７７％の固体のＭＣＰＢＡ（２３．９ｇ、１０７ｍｍｏｌ）を、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（２０．０ｇ、６２．８ｍｍｏｌ）のＣＨＣｌ３（３１０ｍＬ）０℃溶液に少しずつ加えた。反応混合物を５分間撹拌し、次いで室温に加温し、９０分間撹拌した。ＨＰＬＣは７．５時間後同様に見えた。反応混合物を０℃に冷却し、次いでＮａＨＣＯ_３（１３．２ｇ、１５７ｍｍｏｌ）およびさらに０．５当量のｍ−ＣＰＢＡを加えた。反応混合物を終夜（１４時間）撹拌した。反応混合物を０℃に冷却し、Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３（２９．８ｇ、１８８ｍｍｏｌ）のＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）溶液を添加用漏斗により滴下添加した。続いてＮａ_２ＣＯ_３（２４．６ｇ、２３２ｍｍｏｌ）のＨ_２Ｏ（７０ｍＬ）溶液を滴下漏斗により滴下添加した（混合物は均一に変化した）。反応混合物を３０分間撹拌し、次いで混合物をＣＨＣｌ_３（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、濾過し、濃縮して、Ｎ−オキシドを得た。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ３３５．１［Ｍ＋Ｈ］＋。

工程６：Ａｃ_２Ｏ（７７．０ｍｌ、８１６ｍｍｏｌ）を、工程５からのＮ−オキシド（２１．０ｇ、６２．８ｍｍｏｌ）に加えた。反応混合物を窒素下９０℃の砂浴中で加熱し、１００分間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、過剰の無水酢酸を回転蒸発器により除去した。得られた油をＤＣＭに溶解し、次いでこれを氷冷した飽和Ｎａ_２ＣＯ_３に注意深く注ぎ入れた。混合物をＤＣＭで抽出し、合わせた抽出物を乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、濾過し、濃縮して、（５Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（７−アセトキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（２３．６ｇ、１００％）を茶褐色発泡体として得た。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ３７７．１［Ｍ＋Ｈ］＋。

工程７：ＬｉＯＨ−Ｈ_２Ｏ（６．５７７ｇ、１５６．７ｍｍｏｌ）を、（５Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（７−アセトキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（２３．６ｇ、６２．６９ｍｍｏｌ）の２：１ ＴＨＦ：Ｈ_２Ｏ（３２０ｍＬ）０℃溶液に加えた。反応混合物を１０分間撹拌し、次いで室温に加温した。ＬＣ／ＭＳは、３時間および４．５時間で同一に見えた。反応混合物を０℃に冷却し、次いで飽和ＮＨ_４Ｃｌを混合物に加えた。混合物を５分間撹拌し、ＴＨＦの殆どを回転蒸発器により除去した。混合物をＥｔＯＡｃ（３×２５０ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物を乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、濾過し、濃縮した。粗製物をＢｉｏｔａｇｅ６５Ｍ（４：１のＤＣＭ：酢酸エチル次いで１：１から１：４のＤＣＭ：酢酸エチルへの濃度勾配）でフラッシュした。生成物が溶離した時点で、酢酸エチルをカラムを通してフラッシュした。次いで３０：１のＤＣＭ：ＭｅＯＨは残りの生成物（８．８３ｇ）を溶離した。混合したフラクションを、同一の条件を用いてＢｉｏｔａｇｅ４０Ｍで再度フラッシュして、さらに２．９９ｇを得、これを合わせて（５Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（７−ヒドロキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１１．８２ｇ、５６．３８％収率）を茶褐色発泡体として得た。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ３３５．１［Ｍ＋Ｈ］＋。

工程８：ＤＭＳＯ（５．４５ｍｌ、７６．８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液を、塩化オキサリル（３．３５ｍｌ、３８．４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１５０ｍＬ）−７８℃溶液に添加用漏斗により滴下添加した。反応混合物を３５分間撹拌し、次いで（５Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（７−ヒドロキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（９．１７ｇ、２７．４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（８０ｍＬ）溶液を添加用漏斗によりゆっくり加えた。反応混合物を−７８℃でさらに１時間撹拌し、その後トリエチルアミン（１８．０ｍｌ、１２９ｍｍｏｌ）を無溶媒で混合物に加えた。次いで反応混合物を室温に加温し、次いで３０分間撹拌した。Ｈ_２Ｏを加えた。混合物をＤＣＭ（３×２００ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物を乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、濾過し、真空で濃縮した。粗製物をシリカゲル（Ｂｉｏｔａｇｅ６５Ｍ）上で（カラムを約８００ｍＬの４：１のＤＣＭ：ＥｔＯＡｃで、次いで生成物が溶離するまで１：１のＤＣＭ：酢酸エチルへの濃度勾配で、次いで生成物を溶離した１：４のＤＣＭ：ＥｔＯＡｃでフラッシュした。）精製して、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−メチル−７−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（７．５ｇ、８２．３％収率）を茶褐色発泡体として得た。発泡体をＤＣＭ／ヘキサン類から濃縮（３回）し、超薄茶褐色発泡体を得た。ＨＰＬＣ＞９５面積％。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ３３３［Ｍ＋Ｈ］＋。

工程９：トリエチルアミン（４．３３ｍｌ、３１．１ｍｍｏｌ、使用前に３０分窒素で脱気した）およびギ酸（１．３６ｍｌ、３６．１ｍｍｏｌ、使用前に３０分窒素で脱気した）を、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−メチル−７−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（９．７５ｇ、２９．３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２１０ｍＬ、使用前に３０分窒素で脱気した）溶液に加えた。混合物を５分間撹拌し、次いでＲｕ触媒（０．０９３３ｇ、０．１４７ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を窒素の正圧下終夜（１８時間）撹拌した。反応混合物を濃縮乾固し、高真空で乾燥した。フラッシュした１：１のＤＣＭ：酢酸エチル５００ｍＬ、次いで生成物まで（２スポット）１：４のＤＣＭ：酢酸エチル、次いで酢酸エチル単体への濃度勾配、次いで残りの生成物を溶離した２５：１のＤＣＭ：ＭｅＯＨを取り込んだＢｉｏｔａｇｅ６５Ｍ上で、不純物をフラッシュした。フラクションを合わせ、回転蒸発器上で濃縮した。残渣をＤＣＭ／ヘキサン類から再度濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５Ｒ，７Ｒ）−７−ヒドロキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（主）とｔｅｒｔ−ブチル４−（（５Ｒ，７Ｓ）−７−ヒドロキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（副）との混合物（９．３５ｇ、９５．３％収率）をベージュ色発泡体として得た。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ３３５［Ｍ＋Ｈ］＋．^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）は、カルビノールメチンの積分により８８％ｄｅを示す。

工程１０：４−ニトロベンゾイルクロリド（４．２７ｇ、２３．０ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５Ｒ，７Ｓ）−７−ヒドロキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（７．０ｇ、２０．９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４．３８ｍｌ、３１．４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１１０ｍＬ）０℃溶液に加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、その後飽和ＮａＨＣＯ_３を加えた。混合物を１０分撹拌し、次いでＤＣＭで抽出した。合わせた抽出物を乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、濾過し、濃縮した。粗製物をＢｉｏｔａｇｅ６５Ｍ上でフラッシュした（３：１のヘキサン類：酢酸エチルは粗製物を取り込み、次いで２：１のヘキサン類：酢酸エチルはｔｅｒｔ−ブチル４−（（５Ｒ，７Ｒ）−５−メチル−７−（４−ニトロベンゾイルオキシ）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートおよび少量の混合フラクションを溶離した）。次いで、１：２のヘキサン類：酢酸エチルを用いてｔｅｒｔ−ブチル４−（（５Ｒ，７Ｓ）−５−メチル−７−（４−ニトロベンゾイルオキシ）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートを溶離した。生成物を含むフラクションを回転蒸発器により濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５Ｒ，７Ｒ）−５−メチル−７−（４−ニトロベンゾイルオキシ）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（８．５５ｇ、８４．５％収率）を黄色発泡体として得た。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ４８４［Ｍ＋Ｈ］＋．^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）は単一のジアステレオマーを示す。他のジアステレオマーを含むフラクションを回転蒸発器により濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５Ｒ，７Ｓ）−５−メチル−７−（４−ニトロベンゾイルオキシ）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（０．３５６ｇ、３．５２％収率）を茶褐色発泡体として得た。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ４８４［Ｍ＋Ｈ］＋。

工程１１：ＬｉＯＨ−Ｈ_２Ｏ（０．４９９ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５Ｒ，７Ｒ）−５−メチル−７−（４−ニトロベンゾイルオキシ）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（２．３０ｇ、４．７６ｍｍｏｌ）の２：１ ＴＨＦ：Ｈ_２Ｏ（４０ｍＬ）０℃溶液に加えた。反応混合物を室温に加温し、１時間撹拌した。回転蒸発器によりＴＨＦを除去し、飽和ＮａＨＣＯ_３を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出物を飽和ＮａＨＣＯ_３で（１回）洗浄し、乾燥（Ｎａ_２ＳＯ_４）し、濾過し、濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５Ｒ，７Ｒ）−７−ヒドロキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１．５９ｇ、１００．０％収率）を黄色発泡体として得た。処理後のＨＰＬＣは生成物が＞９８面積％純度であった。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ３３５［Ｍ＋Ｈ］＋．ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５Ｒ，７Ｓ）−７−ヒドロキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレートを同様の方法を用いて調製した。

工程１２：４ＭのＨＣｌ／ジオキサン（１１．２ｍｌ、４４．９ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５Ｒ，７Ｒ）−７−ヒドロキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−カルボキシレート（０．６００ｇ、１．７９ｍｍｏｌ）のジオキサン（１５ｍＬ）溶液に加えた。反応混合物を窒素下室温で終夜（２０時間）撹拌した。混合物を濃縮乾固し、高真空ライン上で乾燥した。粗製物をエーテルに懸濁し、超音波処理し、５分間撹拌した。窒素圧で中間のガラス漏斗を通して固体を濾取し、エーテルで濯ぎ、窒素圧下乾燥し、さらに高真空ライン上で乾燥して、（５Ｒ，７Ｒ）−５−メチル−４−（ピペラジン−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−７−オール二塩酸塩（０．４４０ｇ、７９．８％収率）を黄色粉体として得た。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ２３５．（５Ｒ，７Ｓ）−５−メチル−４−（ピペラジン−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−７−オール二塩酸塩を同様の方法を用いて調製した。

工程１３：メチル２−（４−クロロフェニル）アセテート（３６．７ｇ、１９９ｍｍｏｌ）およびパラホルムアルデヒド（６．２７ｇ、２０９ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（４００ｍＬ）に溶解／懸濁し、ＮａＯＭｅ（５３７ｍｇ、９．９４ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を室温で２時間撹拌すると、粗製物のＴＬＣ分析により完結した。反応物を氷冷水（７００ｍＬ、白色乳濁液）に注ぎ入れ、１ＭのＨＣｌ溶液を加えて中和した。水層を酢酸エチル（３回）で抽出し、有機物を合わせた。有機層を水（２回）、ブライン（１回）で洗浄し、分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮して、粗生成物を黄色油として得た。シリカゲルを有する大きなガラス製フィルター上に残渣を仕込み、出発物／オレフィンを収集するまで９：１のヘキサン類：酢酸エチルで溶離した。次いで純粋な所望の生成物が完全に溶離されるまでプラグを１：１のヘキサン類：酢酸エチルで溶離した。濃縮した純粋なフラクションより、メチル２−（４−クロロフェニル）−３−ヒドロキシプロパノエートを無色油として得た（３９．４ｇ、９２％）。

工程１４：メチル２−（４−クロロフェニル）−３−ヒドロキシプロパノエート（３９．４ｇ、１８４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５００ｍＬ）に溶解し、ＴＥＡ（６４．０ｍＬ、４５９ｍｍｏｌ）で処理した。溶液を０℃に冷却し、ＭｓＣｌ（１５．６ｍＬ、２０２ｍｍｏｌ）でゆっくり処理し、次いで３０分間撹拌すると、ＴＬＣ分析により完結した。溶液を１ＮのＨＣｌ溶液で分配し、水層をＤＣＭで１回抽出した。合わせた有機層を１ＮのＨＣｌ溶液でさらに１回洗浄し、分離し、希薄ＮａＨＣＯ_３溶液で洗浄し、分離した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮して、オレンジ色油を得た。シリカゲルのプラグを有する大きなガラス製フィルター上に残渣を仕込み、９：１のヘキサン類：酢酸エチルで溶離して、ＴＬＣ分析により純粋な所望の生成物を得た。純粋なフラクションを濃縮して、メチル２−（４−クロロフェニル）アクリレートを無色油として得た（３０．８ｇ、８５％）。このメチル２−（４−クロロフェニル）アクリレート（５００ｍｇ、２．５４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１．３５ｍＬ）溶液として、ｉ−ＰｒＮＨ２（２１７μＬ、２．５４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５．０ｍＬ）撹拌溶液に０℃で加えた。反応物を室温で終夜撹拌すると、ＬＣＭＳ分析により完結した。Ｂｏｃ２Ｏ（５８４μＬ、２．５４ｍｍｏｌ）をピペットを介して撹拌しながらアミンに加えた。反応物を終夜撹拌すると、混合物のＬＣＭＳおよびＴＬＣ分析により完結した。溶液を真空で濃縮して、メチル３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（イソプロピル）アミノ）−２−（４−クロロフェニル）プロパノエートを無色油として得た（８５４ｍｇ、９４％）。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ２５６．１［Ｍ−Ｂｏｃ］＋。

工程１５：メチル３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（イソプロピル）アミノ）−２−（４−クロロフェニル）プロパノエート（１３３ｇ、３７４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１．０Ｌ）に溶解し、ＫＯＴＭＳ（５６．０ｇ、３９２ｍｍｏｌ）で室温にて処理した。混合物を終夜撹拌すると、粗製物のＬＣＭＳ分析により完結した。混合物を真空で濃縮して、湿潤発泡体を得、これを終夜真空乾燥して、カリウム３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（イソプロピル）アミノ）−２−（４−クロロフェニル）プロパノエートを白色固体として得た（１４８．７ｇ、１０５％）。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ２４２．１［Ｍ−Ｂｏｃ−Ｋ］＋。

工程１６：カリウム３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（イソプロピル）アミノ）−２−（４−クロロフェニル）プロパノエート（７７．２ｇ、２０３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５１５ｍＬ）に溶解し、塩化ピバロイル（２６．３ｍＬ、２１３ｍｍｏｌ）で室温にて処理した。混合物を３時間撹拌して、混合無水物を生成した。（Ｓ）−４−ベンジルオキサゾリジン−２−オン（４６．１ｇ、２６０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６００ｍＬ）に溶解し、分離フラスコ中−７８℃に冷却した。溶液をｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン類中２．５０Ｍ溶液１０２ｍＬ、２５４ｍｍｏｌ）で処理し、１時間撹拌した。調製した無水物溶液をカヌーレを介して撹拌しながらＬｉ−オキサゾリジノンに加え、混合物を室温に終夜加温した。飽和塩化アンモニウム溶液を加えて混合物をクエンチし、次いでさらに水と酢酸エチルとの間で分配した。水層を数回抽出し、有機物を合わせた。有機層を水、次いでブラインで洗浄し、分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。クロマトグラフィー（４：１のヘキサン類：酢酸エチルで溶離したシリカゲル）により残渣を精製／分割（ジアステレオマー）して、完全に分割されたジアステレオマーを粘稠性油として得た：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−３−（（Ｓ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−２−（４−クロロフェニル）−３−オキソプロピル（イソプロピル）カルバメート（１２．１６ｇ、酸ラセミ体の１／２に基づいて２４％）およびｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−３−（（Ｓ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−２−（４−クロロフェニル）−３−オキソプロピル（イソプロピル）カルバメート（３９．１４ｇ、酸ラセミ体の１／２に基づいて７７％）。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ４０１．２［Ｍ−Ｂｏｃ］＋。

工程１７：ＬｉＯＨ−Ｈ_２Ｏ（１６８ｍｇ、４．００ｍｍｏｌ）を、溶解するまでＴＨＦ（３０ｍＬ）と水（１５ｍＬ）との撹拌溶液に室温で加えた。混合物を過酸化水素（水中３５重量％溶液６５８μＬ、８．００ｍｍｏｌ）で処理し、室温で１０分間撹拌した。反応物を氷浴中０℃に冷却し、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−３−（（Ｓ）−４−ベンジル−２−オキソオキサゾリジン−３−イル）−２−（４−クロロフェニル）−３−オキソプロピル（イソプロピル）カルバメート（１．００ｇ、２．００ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１５ｍＬ）溶液として添加用漏斗により１０分かけて滴下添加した。混合物を室温で終夜撹拌すると、粗製物のＬＣＭＳ分析により完結した。反応物を０℃に冷却し、次いで添加用漏斗により１ＭのＮａ_２ＳＯ_３（９．００ｍＬ）溶液で１０分かけて処理した。添加完了後、混合物を室温に１０分間加温した。混合物を濃縮してＴＨＦを除去し、次いで水で希釈した。水層を酢酸エチルで２回洗浄した（廃棄した）。水層を酢酸エチルで分配し、次いで１ＭのＨＣｌで撹拌しながらｐＨが２〜３になるまで滴下処理した。水層を酢酸エチルで２回抽出し、有機物を合わせた。有機物をブラインで洗浄し、分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。無色のオイル状生成物を高真空下に１時間乾燥して、（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（イソプロピル）アミノ）−２−（４−クロロフェニル）プロパン酸を粘稠性油／発泡体として得た（６８５ｍｇ、１００％）。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ２４２．１［Ｍ−Ｂｏｃ］＋。

工程１８：（５Ｒ，７Ｒ）−５−メチル−４−（ピペラジン−１−イル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−７−オール二塩酸塩（２．９２ｇ、９．５１ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（イソプロピル）アミノ）−２−（４−クロロフェニル）プロパン酸（３．２５ｇ、９．５１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４０ｍＬ）およびＤＩＥＡ（５．０ｍＬ、２８．７ｍｍｏｌ）溶液を室温で１０分間撹拌した。ＨＢＴＵ（３．６１ｇ、９．５１ｍｍｏｌ）を混合物に加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣を酢酸エチル（５００ｍＬ）に溶解し、水（６×１００ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥し、濃縮した。ＥｔＯＡｃ−ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（２０：１）により溶離したカラムクロマトグラフィーに残渣を供して、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（４−クロロフェニル）−３−（４−（（５Ｒ，７Ｒ）−７−ヒドロキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル（イソプロピル）カルバメート（３．６８ｇ、６９％）を得た。ＬＣ／ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ５５８．２［Ｍ＋Ｈ］＋。

工程１９：ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（４−クロロフェニル）−３−（４−（（５Ｒ，７Ｒ）−７−ヒドロキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−イル）−３−オキソプロピル（イソプロピル）カルバメート（２．５０ｇ、４．４８ｍｍｏｌ）をジオキサン（２２．４ｍＬ）に溶解し、ジオキサン中４ＭのＨＣｌ（２２．４ｍＬ、８９．６ｍｍｏｌ）で室温にて処理した。得られた溶液を終夜撹拌すると、粗製物のＬＣＭＳ分析により完結した。溶液を真空で濃縮して、ゲル状物を得、これを最少量のメタノール（１０ｍＬ）に溶解した。溶液をピペットを介して撹拌したエーテル（３００ｍＬ）に移して、所望の生成物の白色沈殿物を得た。約半量滴下した際、黄色ゲル状物に白色沈殿物が融解した。物質を真空で濃縮して、黄色ゲル状物を得、これを減圧下に終夜放置して、（Ｓ）−２−（４−クロロフェニル）−１−（４−（（５Ｒ，７Ｒ）−７−ヒドロキシ−５−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−シクロペンタ［ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペラジン−１−イル）−３−（イソプロピルアミノ）プロパン−１−オン二塩酸塩を薄黄色粉体として得た（２．１４ｇ、９０％）。
^１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ、４００ＭＨｚ）δ ８．３９（ｓ、１Ｈ）、７．３７−７．３５（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．２３−７．２０（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、５．２９−５．２５（ｍ、１Ｈ）、４．３３−４．２９（ｍ、１Ｈ）、４．１４−４．１０（ｍ、１Ｈ）、３．８９−３．１９（ｍ、１１Ｈ）、２．２３−２．１７（ｍ、１Ｈ）、２．０８−１．９９（ｍ、１Ｈ）、１．２０−１．１８（ｍ、６Ｈ）、０．９８−０．９６（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）．ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）［Ｍ＋Ｈ］^＋４５８。

実施例２ インビトロ細胞増殖アッセイ
式Ｉ化合物の特定の化学療法剤との組合せのインビトロ有効性は、Promega Corp., Madison, WIから市販されている発光細胞生存アッセイであるＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）によって測定することができる。この均質なアッセイ方法は、甲虫類ルシフェラーゼの組換え発現に基づき（米国特許第５５８３０２４号；米国特許第５６７４７１３号；米国特許第５７００６７０号）、代謝的に活性な細胞の指標である、存在するＡＴＰの定量化に基づいて、培養物中の生細胞の数を決定する（Crouch et al (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88；米国特許第６６０２６７７号）。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイは、９６か３８４のウェルフォーマットにて実行することができ、自動化ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）に準じる（Cree et al (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404）。均一なアッセイ手順は、血清添加培地中で培養した細胞に単一試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を直接添加することを含む。細胞洗浄、培地の除去および複数のピペッティング工程は必要ない。システムは、試薬の添加及び混合の１０分後に３８４−ウェルフォーマット中僅か１５細胞／ウェルを検出した。

均質な「添加混合測定（add-mix-measure）」フォーマットにより細胞の溶解と存在するＡＴＰの量と比例した発光シグナルの生成が生じる。ＡＴＰの量は培養物中に存在する細胞の数に正比例する。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイは、用いた細胞の種類及び培地に応じて、ルシフェラーゼ反応によって生成される「増殖タイプ（ｇｌｏｗ−ｔｙｐｅ）」の発光シグナルを生成する。このシグナルは一般に５時間を超える半減期を有する。生細胞は相対的な発光単位（ＲＬＵ）に反映される。基質であるカブトムシルシフェリンは、組み換えホタルルシフェラーゼによって酸化的に脱炭酸され、ＡＴＰがＡＭＰに付随して転換され、光子が生成する。半減期の延長により試薬の注入を行う必要がなくなり、複数のプレートの連続的な又はバッチモード処理に柔軟性が生じる。この細胞増殖アッセイは、様々なマルチウェルフォーマット、例えば９６又は３８４のウェルフォーマットと共に用いられる。データは、ルミノメーター又はＣＣＤカメラ撮像装置によって記録されてよい。発光出力は、時間と共に測定される相対的な光単位（ＲＬＵ）として表される。

実施例３ インビボ腫瘍異種移植片有効性
本発明の併用の有効性は、齧歯動物の癌細胞の同種異系移植片又は異種移植片を着床させて、腫瘍を併用にて処置することによってインビボで測定された。細胞株、腫瘍細胞中の特定の変異の有無、化合物の投与、投薬計画及び他の要因に応じて、結果が変わりうることは予測される。被検体マウスを、薬剤（一又は複数）又は対照（ビヒクル）にて処置し、数週間以上モニターし、腫瘍倍加までの時間、ログ細胞障害及び腫瘍抑制を測定した。このモデルで試験された本発明代表的組み合わせの結果が図に示される。図のデータは、代表的な組み合わせが、個別にそれぞれの薬剤の投与に比べて改善された結果を提供することを示している。

実施例４ ＰＴＥＮの状態の測定
ＰＴＥＮの状態は、当技術分野で知られている任意の適切な手段によって測定することができる。一例では、ＩＨＣが使用される。別法として、ウエスタンブロット分析を用いることができる。ＰＴＥＮに対するする抗体は市販されている（Cell Signaling Technology, Beverly, MA, Cascade Biosciences, Winchester, MＡ）。ＰＴＥＮの状態についてのＩＨＣおよびウェスタンブロット分析の事例手順は、Neshat, M. S. et al. Enhanced sensitivity of PTEN-deficient tumors to inhibition of FRAP/mTOR, Proc. Natl Acad. Sci. USA 98, 10314-10319 (2001) and Perren, A., et. al. Immunohistochemical Evidence of Loss of PTEN Expression in Primary Ductal Adenocarcinomas of the Breast, American Journal of Pathology, Vol. 155, No. 4, October 1999で説明されている。更に、ＡＫＴ変異、ＰＩ３Ｋの変異、及びＨｅｒ２／ＥｒｂＢ２増幅に関連付けられている癌は、当技術分野で知られている技術を用いて同定することができる。

実施例５ 細胞生存率アッセイ
細胞を、黒い透明底型の３８４ウェルプレート（カタログ３５３９６２；Becton Dickinson; Franklin Lakes, NJ）の中に、１５００細胞／ウェルの密度で蒔き、３７℃、５％ＣＯ_２で一晩から１．５日インキュベートした。次いで、ＧＤＣ−００６８、ＧＤＣ−０９７３又は両方の組み合わせの連続希釈物を細胞に添加し、更に９６時間インキュベートした。細胞生存率は、製造業者のプロトコルに記載されているように細胞のアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）のレベルを測定することにより決定した（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光細胞生存率アッセイキット；カタログＧ７５７３；Promega, Madison, WI）。発光シグナルはエンビジョン２１０１マルチラベルリーダーに記録された（PerkinElmer; Waltham, MA）。

阻害の割合は、下記に表すように、ＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせに曝露された細胞の相対光単位（ＲＬＵ）をＤＭＳＯに曝露された細胞のＲＬＵで割り、１から差し引くことにより計算された。
阻害の割合＝１−（ＲＬＵ_{組み合わせ}／ＲＬＵ_ＤＭＳＯ）

ＢＬＩＳＳ解析は、期待される阻害の％（Ｅ＝Ｅ_{ＧＤＣ−００６８}＋Ｅ_{ＧＤＣ−０９７３}−Ｅ_{ＧＤＣ−００６８}×Ｅ_{ＧＤＣ−０９７３}）を観察される阻害の％Ｅ_ＯＢＳと比較した。ＢＬＩＳＳスコアは、期待される阻害の％と実験的に観察される阻害Ｅ_ＯＢＳの間の相違（ΔＥ＝Ｅ_ＯＢＳ−Ｅ）である。

ＢＬＩＳＳスコアは、単一薬剤からの相乗作用の程度を定量化し、陽性ＢＬＩＳＳスコアは単純加算よりも大きいことを示唆している。２５０を超える総ＢＬＩＳＳスコアは、試験された濃度の範囲内濃度内における強い相乗効果と考えられている。

組合せの有効性の例は、３つの癌細胞株においてヒートマップとして示される：Ａ２０５８、ＰＴＥＮ欠損とＢ−ＲＡＦ^{Ｖ６００Ｅ}変異を持つメラノーマ細胞株（図９を参照）；ＨＣＴ−１１６、ＰＩＫ３ＣＡ^{Ｈ１０４７Ｒ}及びＫＲＡＳ^Ｇ１３Ｄ変異を持つ結腸直腸癌（ＣＲＣ）細胞株（図５を参照）；及びＮＣＩ−Ｈ２１２２、ＫＲＡＳ^Ｇ１２Ｃ変異を持つ非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株（図７を参照）。個々の用量ペアにおいて１５以上（≧１５）のＢＬＩＳＳスコアを持つ強い相乗効果が、全３つの細胞株においてＧＤＣ−００６８の濃度が０．３７から１０μＭの間で及びＧＤＣ−０７９３の濃度が０．０６２から０．５６μＭの間で観察された。

ＧＤＣ００６８とＧＤＣ０９７３の間の相乗効果はＲＡＳ／ＲＡＦおよび／またはＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路の活性化に依存しているかどうかを更に調べるため、組み合わせの効果を、メラノーマ患者由来の細胞株一式：ＭＡＬＭＥ３Ｍ Ｂ−ＲＡＦ^{Ｖ６００Ｅ}転移性メラノーマ細胞株及び患者に適合したＭＡＬＭＥ３ 正常皮膚線維芽細胞にて比較した。ＭＡＬＭＥ３Ｍ細胞は低濃度でＧＤＣ０９７３に対して感受性を示し、そしてＧＤＣ００６８の単剤活性の欠如にもかかわらず、強い相乗効果は低濃度のＧＤＣ０９７３及び広範囲のＧＤＣ００６８の濃度でも観察された（図２８を参照）。これに対して、ＭＡＬＭＥ３細胞はＧＤＣ０９７３に耐性であって、ＧＤＣ００６８との組み合わせでは全く相乗効果は観察されなかった（図２９を参照）。同様に、ＮＳＣＬＣ細胞株ＮＣＩＨ２１２２と同じ患者由来の正常なＢリンパ芽球であるＮＣＩＢＬ２１２２はまた、ＮＣＩＨ２１２２細胞における強い相乗効果とは対照的に（図７を参照）、ＧＤＣ０９７３とＧＤＣ００６８の組み合わせに相乗的応答を示さなかった（図３０を参照）。これらの結果は、ＭＥＫ及びＡｋｔの阻害剤の組み合わせによる治療的有用性は、ＲＡＳ／ＲＡＦ経路又はＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路とＲＡＳ／ＲＡＦ経路の両方が活性である癌細胞において選択的に観察されてもよいことを示している。

実施例６ ウエスタンブロット分析
皿（１０ｃｍ^２）に１０ｍＬ量で２万個の細胞を播種し、続いて３７℃で５％ＣＯ_２下で一晩（約１６時間）インキュベートした。細胞を、１および３μＭのＧＤＣ００６８、０．２５および０．７５μＭのＧＤＣ０９７３又は１μＭのＧＤＣ００６８＋０．２５μＭのＧＤＣ０９７に対して３時間曝露した。曝露後、細胞を冷却リン酸緩衝液生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、プロテアーゼ阻害剤（Roche, Germany）、１ｍＭのフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）、及びＳｉｇｍａ（St.Louis, MO）のホスファターゼ阻害剤カクテル１と２を補充したＢｉｏｓｏｕｒｃｅ（Carlsbad, CA）の１×細胞抽出緩衝液に溶解した。タンパク質濃度はブラッドフォード法を用いて決定した（Ｂｉｏ−Ｒａｄタンパク質アッセイ（Bio-Rad; Hercules, CA）。イムノブロットについては、タンパク質の等量がトリス−グリシンの４〜２０％勾配ゲルを介して電気泳動により分離され；タンパク質は、Ｂｉｏｒａｄからの基準システムとプロトコルを用いてニトロセルロース膜上に移された。

次の抗体は、他に特定されない限り全てCell Signaling Technologies (Beverly, MA)からのものが使用された。
抗ｐＡｋｔ（Ｓ４７３）
抗ｐＡｋｔ（Ｔ３０８）
抗ｐＭＥＫ１／２（Ｓ２１７／２２１）
抗ｐＦｏｘＯ１（Ｔ２４）／ＦｏｘＯ３ａ（Ｔ３２）
抗ｐＰＲＡＳ４０（Ｔ２４６）
抗ｐ４ＥＢＰ１（Ｔ３７／４６）
抗ｐＥＲＫ１／２（Ｔ２０２／Ｙ２０４）
抗ｐＴＳＣ２（Ｔ１４６２）
抗ｐＳ６（Ｓ２３５／２３６）
抗ｐＳ６（Ｓ２４０／２４４）
ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）及び切断型ＰＡＲＰ
ＧＡＰＤＨ（Advanced ImmunoChemicalから；Long Beach, CA）

ＡｋｔとＭＥＫシグナル伝達における組み合わせの効果を調べるために、ＡｋｔとＭＥＫの両方の下流ターゲットが、０．２５μＭでのＧＤＣ−０９７３と組み合わせた、０．２５μＭおよび３μＭでのＧＤＣ−００６８、０．２５および０．７５μＭでのＧＤＣ−０９７３、又は１μＭでのＧＤＣ−００６８に対して曝露されたＨＣＴ１１６ＣＲＣ細胞でにウエスタンブロットにより評価された。図２４に示すように、組み合わせにおいて、ＡｋｔとＭＥＫの両方の下流ターゲットの組み合わせノックダウンが、ｐＴＳＣ２、ｐＳ６（ｓ２３５／２３６とＳ２４０／２４４の両方）、ＰＡＲＰ及び切断型ＰＡＲＰなど、幾つかのターゲットの強化されたノックダウンを伴い、観察され、さらに高用量での各単剤単独よりも優れたノックダウンを示している。

実施例７ フローサイトメトリーアッセイ
ＨＣＴ１１６細胞が９６ウェル組織培養プレート播種された。３７℃、５％ＣＯ_２での一晩のインキュベーション後に、細胞は、増加した濃度でのＧＤＣ−００６８又はＧＤＣ−０９７３のどちらかに対して又は組み合わせに対して４日間曝露された。アポトーシスを検出するために、１００μＬの細胞懸濁液を、４ｍＭのＣａＣｌ_２、５μＬのアネキシンＶフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）（BD Pharmingen; Franklin Lakes,NJ）及び５μｇ／ｍＬのヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を含有する１００μＬのＰＢＳに添加した。混合物を３０分間氷上でインキュベートし、細胞をフローサイトメトリー（BD Biosciences; San Jose,CA）で分析した。

ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）又はアネキシンＶ（ＡＶ）陽性細胞の割合がＧＤＣ−００６８及びＧＤＣ−０９７３の各単剤又は組み合わせペアで測定され、細胞死誘導の相乗効果がＢＬＩＳＳ分析により分析された。組み合わせは、各単剤単独と比較して、ＰＩ＋／ＡＶ＋細胞の割合の増加をもたらし、０．３７から１０μＭのＧＤＣ−００６８及び０．１８５から０．５５６μＭのＧＤＣ−０９７３で強い相乗効果（ＢＬＩＳＳスコア≧１５）が観察された。従って、ＧＤＣ−００６８とＧＤＣ−０９７３の組み合わせはまた、ＨＣＴ１１６細胞における細胞死誘導に相乗効果をもたらした。

更に、多くの修正及び変更が当業者には容易に明らかになるであろうゆえ、上述のように示されている厳密な構成及びプロセスに本発明を限定することは望ましくない。従って、全ての適切な修正及び均等物は、添付の特許請求の範囲によって定義される範囲内にあると考えることができる。

Claims (21)

1. 式Ｉの化合物
   又はその薬学的に許容される塩を含む、哺乳動物における、メラノーマ又は結腸直腸癌から選択される過剰増殖性疾患の治療的処置のための医薬であって、
   前記医薬がＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩から選択される一以上の薬剤と組み合わせて、同時に又は逐次に、哺乳動物に投与される、医薬。
2. ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩を含む、哺乳動物における、メラノーマ又は結腸直腸癌から選択される過剰増殖性疾患の治療的処置のための医薬であって、
   前記医薬が式Ｉの化合物
   又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて、同時に又は逐次に、哺乳動物に投与される、医薬。
3. 式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩と、ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩から選択される一以上の薬剤とが同時に投与される、請求項１又は２に記載の医薬。
4. 式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩と、ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩から選択される一以上の薬剤とが逐次に投与される、請求項１又は２に記載の医薬。
5. ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩から選択される一以上の薬剤の投与が、式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩の投与の約１日から約１０日前に開始される、請求項４に記載の医薬。
6. 式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩の投与が、ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩から選択される一以上の薬剤の投与の約１日から約１０日前に開始される、請求項４に記載の医薬。
7. 式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩の投与と、ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩から選択される一以上の薬剤の投与が同日に開始される、請求項４に記載の医薬。
8. 式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩がＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与され、過剰増殖性疾患が結腸直腸癌である、請求項１から７の何れか一項に記載の医薬。
9. 式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩がＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与され、過剰増殖性疾患がメラノーマである、請求項１から７の何れか一項に記載の医薬。
10. 式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩が、ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩と組み合わせて投与される、請求項１から８の何れか一項に記載の医薬。
11. メラノーマ又は結腸直腸癌から選択される過剰増殖性疾患を治療するための組み合せ療法で使用される、
    式Ｉの化合物
    又はその薬学的に許容される塩を含む、医薬であって、
    組み合せ療法は、ａ）式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩、及びｂ）ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩から選択される一以上の薬剤を、同時に又は逐次に、投与することを含む、医薬。
12. メラノーマ又は結腸直腸癌から選択される過剰増殖性疾患を治療するための組み合せ療法で使用される、ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩を含む、医薬であって、
    組み合せ療法は、ａ）式Ｉの化合物
    又はその薬学的に許容される塩、及びｂ）ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩から選択される一以上の薬剤を、同時に又は逐次に、投与することを含む、医薬。
13. メラノーマ又は結腸直腸癌である、ＡＫＴキナーゼにより調節される疾患又は状態を治療するための組み合せ療法で使用される、
    式Ｉの化合物
    又はその薬学的に許容される塩を含む、医薬であって、
    組み合せ療法は、ａ）式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩、及びｂ）ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩から選択される一以上の薬剤を、同時に又は逐次に、投与することを含む、医薬。
14. メラノーマ又は結腸直腸癌である、ＡＫＴキナーゼにより調節される疾患又は状態を治療するための組み合せ療法で使用される、ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩から選択される一以上の薬剤を含む、医薬であって、
    組み合せ療法は、ａ）式Ｉの化合物
    又はその薬学的に許容される塩、及びｂ）ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩から選択される一以上の薬剤を、同時に又は逐次に、投与することを含む、医薬。
15. 哺乳動物において、メラノーマ又は結腸直腸癌を治療するための医薬の調製における、式Ｉの化合物
    又はその薬学的に許容される塩、及びＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩の組み合わせの使用。
16. 哺乳動物において、メラノーマ又は結腸直腸癌である、ＡＫＴキナーゼにより調節される疾患又は状態の治療のための医薬の調製における、式Ｉの化合物
    又はその薬学的に許容される塩、及びＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩の組み合わせの使用。
17. 式Ｉの化合物
    又はその薬学的に許容される塩、容器、及び、ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩から選択される一以上の薬剤と共に式Ｉの化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを示す添付文書又はラベルを含む、メラノーマ又は結腸直腸癌を治療するためのキット。
18. ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩から選択される一以上の薬剤、容器、及び、式Ｉの化合物
    又はその薬学的に許容される塩と共にＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩から選択される一以上の薬剤を投与することを示す添付文書又はラベルを含む、メラノーマ又は結腸直腸癌を治療するためのキット。
19. メラノーマ又は結腸直腸癌の治療において、同時に又は逐次に使用するための別々に分かれた併用製剤として、式Ｉの化合物
    又はその薬学的に許容される塩、及びＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩から選択される一以上の薬剤を含む、製品。
20. 式Ｉの化合物
    又はその薬学的に許容される塩、及びＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩から選択される別の薬剤との組み合わせを含む、哺乳動物におけるメラノーマ又は結腸直腸癌を治療するための医薬。
21. ａ）式Ｉの化合物
    又はその薬学的に許容される塩、及びｂ）ＧＤＣ−０９７３又はその薬学的に許容される塩から選択される一以上の薬剤を含む、哺乳動物において、メラノーマ又は結腸直腸癌であるＡＫＴキナーゼによって調節される疾患又は状態を治療するための医薬。