SU1303036A3

SU1303036A3 - Способ получени 3-/5-рибонуклеотидов/

Info

Publication number: SU1303036A3
Application number: SU823430749A
Authority: SU
Inventors: Деметриос Аргуделис Александр; Вумак Стромэн Дейвид
Original assignee: Дзе Апджон Компани (Фирма)
Priority date: 1981-04-20
Filing date: 1982-04-19
Publication date: 1987-04-07
Also published as: NL8201595A; SE459861B; DE3213921A1; IT1151719B; CH653037A5; ES511499A0; GB2097002B; KR830010195A; AU545748B2; SE8202433L; ES8308927A1; FR2504142B1; HU191085B; IL65385A0; FR2504142A1; IT8220810A0; KR880002416B1; IL65385A; AU8198882A; CA1163938A

Abstract

Изобретение относитс к микробиологии и касаетс получени биологически активных веществ. Цель изобретени - разработка способа получени новых биологически активных соединений, обладающих высокой антибактериальной активностью. Штамм Streptomyces rochei NRRL 3533 вьфа- щивают в жидкой питательной среде.. Провод т ферментацию и инкубирование . Далее собирают фильтраты культур , выдел ют целевые продукты. Полу- ченные вещества про вл ют активность против грамположительных и грамотри- цательных микроорганизмов. Они могут использоватьс в качестве дезинфеци- рующих и лечебных средств. 17 табл. а S (У) с со о со о со О5. о

Description

Изобретение относитс к микробиологии , и касаетс получени биологически активных веществ.

Цель изобретени - разработка способа получени новых биологически активных соединений, обладающих высокой антибактериальной активностью in vivo в отношении грамположитель- ной и грамотрицательной микрофлоры.

Пример, Streptomyces rochei NRRL 3533 выращивают в среде,, содержащей , г/л: глюкоза 10, Difco пентон 4, Difco дрожжевой экстракт 4, MgSO

«7Н,0 0,5; 2; 4, в те- чение трех дней при 28 С-в круговой

качалке. Мицелий используют дл ино- кулировани ферментационной среды указанного состава. Ферментацию провод т в течение 48 ч при в круговой качалке, В конце 48-го часа ин- тывают как описано выше, Метанольные кубировани добавл ют U-57930 до ко- элюаты из колонки с Амберлитом ХАД-2 нечной концентрации 50 мг/л и ферментацию продолжают при 32 С, Спуст

Фракции 12-80 объедин ют, концентрируют до водного раствора и сушат вымораживанием до получени препарата АДА-34,1 в количестве 12,22 г,

В другой серии опытов 6 л -ферментационного бульона, содержащего 2 г трансформированного U-57930, обрабасобирают , раствор, не концентриру досуха, хроматографируют на Дауэкс-1 Дл зтого приготавливают колонку с 300 мл Дауэкс-1 (Х-4) в ацетатной форме. Через колонку пропускают ме- танольньш раствор АДА-143В рН 8,2. Отработанный продукт собирают со скоростью 2,5 мл/мин - фракции 1-60 по 20 мл. Затем колонку промывают 1,5л воды (10 мл/мин; фракции 66- 108), После этого колонку злюируют 5%-ной уксусной кислотой (скорость 10 мл/мин, фракции 109-310).. Получа- 35 ют следующие группы фракций:

12 ч еще раз добавл ют U-57930 до концентрации 150 мг/л. Соединение U 57930 имеет следующую структурную формулу:

X

Щ

Н-С-С1

I

CONH-CH НО/-0.

SCH.

он

Спуст еще 12 ч инкубировани концентрацию и-57930 повышают до 250 мг/л, Ферментацию продолжают при 32°С в течение 24 ч. Далее собирают фильтраты культур и определ ют содержание сое- динени и-57930. Концентраци последнего не более 1 мг/л, 249 мг/л соединени транспортированы в бионеактивный материал.

Используемый штамм .Streptomyces rochei вл етс известньм и хранитс в коллекции NRILL под номером 3533,

Берут 12 л ферментационного бульона , содержащего 3 г инактиварованного и-57930, фильтруют при рН 7,7, Содер- жащую мицелий лепешку промывают 1,2 л воды и удал ют. Прозрачный фильтрат и промьшки объедин ют, устанавливают рН 6,0 и пропускают через колонку,

тывают как описано выше, Метанольные элюаты из колонки с Амберлитом ХАД-2

заполненную 600 мл Амберлита ХАД-2 со скоростью потока 40 мл/мин, Отра- ботанньм продукт тестируют на биоактивность до и после обработки щелочной фосфатазой и сливают. Колонку промьгеают 2 л воды. Водную промывку также провер ют на биоактивность перед и после обработки щелочной фосфатазой и сливают. Затем колонку элю- ируют смесью метанол - вода (70 : : 30 об./об.), Собирают фракции по 20 мл со скоростью 20 мл/мин.

В другой серии опытов 6 л -ферментационного бульона, содержащего 2 г трансформированного U-57930, обрабатывают как описано выше, Метанольные элюаты из колонки с Амберлитом ХАД-2

собирают, раствор, не концентриру досуха, хроматографируют на Дауэкс-1, Дл зтого приготавливают колонку с 300 мл Дауэкс-1 (Х-4) в ацетатной форме. Через колонку пропускают ме- танольньш раствор АДА-143В рН 8,2. Отработанный продукт собирают со скоростью 2,5 мл/мин - фракции 1-60 по 20 мл. Затем колонку промывают 1,5л воды (10 мл/мин; фракции 66- 108), После этого колонку злюируют 5%-ной уксусной кислотой (скорость 10 мл/мин, фракции 109-310).. Получа- ют следующие группы фракций:

313

группы 1 и J. объедин ют, концентрируют до водного раствора и высушивают вымораживанием до получени препарата АДА-2.1 в количестве 1,48 г. Группы 3 и 4 также объедин ют и обра- батывают аналогичным образом до получени АДА-2,2 в количестве 2,5 г.Препараты АДА-2.1 и АДА-2.2 после обработки щелочной фосфатазой дают U 57930.

Препараты АДА-34.1, .1 и АДА- 2.2 объедин ют и очищают методом распределени в двойном противотоке. Ма- териал, полученный при объединении указанных препаратов,, в количестве 160,20 г раствор ют в 25 мл (кажда фаза) системы растворител , состо щей из равных объемов 1-бутанола и воды (1:1). Эти растворы ввод т в центральные трубки изготовленного из стекла устройства дл двойного распределени в противотоке (100 трубок, 25 мл/фаза). Полученное распределение анализируют спуст 150 циклов на биоактивность перед (-Е) и после (+Е) обработки щелочной фосфатазой. Получены следующие результаты:

Нижний коллектор

Zone (Sarcina lutea-sensitive)

-Е

+Е

Нижн машина Zone (S.lutea- sensitive)

-Е

О Следы

+Е

45 46

30

Получают следующие группы фракций. Каждую из групп концентрируют до водного раствора и высушивают вымораживанием до получени соответствующих препаратов: группа I - нижний коллектор 1-50} группа II - нижний коллектор 51-100; нижн машина - 50-30; группа III - нижн машина 29-0,верхн машина 1-50, верхний коллектор 100-30.

5 1303036

Получают следующие группы препаратов: из первой группы - препарат АДА.-47.1. (9,78 г); из второй - пре парат АДА-47.2 (0,30 г) из третьей - препарт АДА-47.3 (5,29 г). Препараты 5 АДА-47,2 и АДА-47.3 объедин ют и очищают с помощью хроматографии на ДЕАЕ-Сефадексе.

Перемешивают 300 г ДЕАЕ-Сефадекса А-25 в течение .1 ч с водой и в течение О 2 ч с 0,5 н, водной гидроокисью натри . Ионообменник промывают водой до тех пор, пока рН не достигает значени -7,5. Затем материал перемешивают в течение 2 ч с 0,5 н.водной ук- 15 сусной кислотой, промьшают водой до нейтрального рН, выпивают в колонку и набивают под давлением 0,9 кг до посто нного веса. Затем колонку промывают 4 л воды, 8 л 0,1%-ного вод- 20 ного раствора трис-(оксиметил)ами- нометана (ТОАМ)и 3 л 0,03 М ТОАМ- ацетатного буфера рН 8,0 (получают при растворении 3,64 г ТОАМ в 800 мл воды, устанавливают рН 8,0 лед ной уксусной кислотой и затем довод т объем до 1 л). Исходные материалы - препараты АДА-47.,2 и АДА-47.3 в количестве приблизительно 5,50 г раствор ют в 20 мл 0,03 М ТОАМ-ацетатного -30 буфера рН 8,О-и ввод т в верхнюю часть колонны. Затем колонну элюиру- ют потоком вниз 0,3 М ТОАМ-ацетат- ным буфером рН 8,0. Собирают фракции 1-190 (20мл). В этот момент элюирова- 35 ние колонны начинают вести снизу вверх. Фракции A,B,C,D и Е (по 1 л кажда ) собирают..

Тестирование на биоактивность, перед (Е) и после (+Е) обработки 40 щелочной фосфатазой дает следующие результаты:

Фракци

Zone (S.lutea- sensitive)

-Е

fE

3

6

9

12

15

18

21

24

27

30

33

36

лучают;

ппа

I

III

IV

I

VII

43,5

36

23,5

15

О

о о

15 17

21

23

22

21

22

21

22

23

22,5

22

20,5

20

44

36

23

16

О

о о 1620

26

27

30

29

24

23

24

26

35

44

51

54

52,5

52

54,5

56

Фракции

34-38

75-90 101-111 114-150 151-164 165-186

С, 1 лист

Объем, мл 280 (АДА-69В)

330 (АДА-69С) 180 (АДА-69В) 580 (АДА-69Е) 100 (АДА-69Г) 125 (АДА-69С) (АДА-69А)

Группа I (АДА-69В) содержит U- 57930 и ее сливают. Группа II (АДА- 69С) содержит неизвестный материал который дает U-57930 при обработке щелочной фосфатазой. УФ: нм.

Группа III (АДА-69Б) содержит U-57930- -цитидилат, и ее затем обрабатывают. УФ: 270 нм.. Группа IV (АДА-69Е) содержит U-57930-аденилат. УФ:Л,,ц 260 нм. Группа V (АДА-69Г) содержит смесь U-57930-аденилата, U-57930-ури- дилата и и 57930-г.уанилата. Группа VI (АДА-69С) содержит U-57930-гуани55

лат, и ее затем обрабатывают. УФ Дмакс 254, плечо на 275 нм. Группа VII

(АДА-69А) содержит смесь U-57930-rya- .нилата и U-57930-уридилата, затем этот раствор обрабатывают.

Группы III, IV и VI пропускают через колонки, содержащие Амберлит ХАД-2. Отработанный продукт сливают. Колонки промьшают водой,, а затем элю- ируют смесью метанол.- вода (70 : : 30 об./об.). Фракции анализируют (УФ) и тестируют на биоактивность перед и .после обработки щелочной фос- фатазой. Соответствзтощие фракции объеции .51-60 содержит и-57930-аденш1ат, фpaкци 62-73 (АДА-92.В) - U-57930- -уридилат, фракции 75-110 - U-57930- -гуанилат.

Подготавливают колонку из 50 мл Амберлита ХАД-2. Группу фракций АДА- 94В, содержащую U-57930-уридилат, про пускают через колонку со скоростью 2 мл/мин. Отработанный продукт слидин ют , концентрируют до водного рас- О вают. Колонку промьшают 200 мл воды.

20

твора и высушивают вымораживанием.

В табл. 1 приведены данные об использованном количестве Амберлита дл каждой группы, количестве воды, которой осуществл ют промывку, ме- танольного элюата и материала, кото- рьм получают.

Материал, полученный из группы III, носит название АДА-73.1, из группы 1У-АДА-74.1, из группы VI-AДA-75.1 Удаление ТОАМ-ацетатного буфера из группы V(AflA-69F) и группы VII (АДА-69А) с помощью хроматографии на Амберлите ХАД-2 осуществл ют еле- 25 дующим образом.

Готов т колонку из 300 мл Амберлита ХАД-2. Группы V и VII, содержащие смесь и-57930-аденилата,и-57930- -уридилата д U-57930-гуанидилата, npo-jQ пускают через колонку. Отработанный продукт сливают. Колонку промывают 600 мл воды. Отработанный продукт сливают Колонку злюируют смесью метанол - вода (70:30). Фракции, содержащие биоактивный материал, после обработки щелочной фосфатазой объедин ют , 300 мл смеси концентрируют до водного раствора и высушивают вымораживанием , в результате чего полу- .,. чают препарат АДА-71.1 (670 мг).

Берут 600 мл ДЕАЕ-Сефадекса в ацетатной форме, промьшают 0,ОЗМ ТОАМ- ацетатом рН 8,0, набивают в стекл нную колонку (внешний диаметр 4,5 см, высота 40 см) под гидростатическим давлением.

Препарат АДА-71.1. раствор ют в Ю мл 0,03 М ТОАМ-ацетатного буфера рН 8,0 и ввод т в верхнюю часть колонки . Колонку элюируют: 0,ОЗМ ТОАМ- ацетатом, рН 8,0 (фракции 1-79);0,12М ТОАМ-ацетатом, рН 8,0 (фракции 80- 395); 0,25М ТОАМ-ацетатом, рН §,0

Промывки сливают. Колонку элюируют смесью метанол - вода (70:30 об./об.). Фракции,содержащие (по данным УФ-спек- троскопии) U-57930-уридилат, объеди- J5 н ют (200 мл), концентрируют до вод- ного раствора и высушивают вымораживанием до получени АДА-95.1 (60 мг). Характеристики U-57930 3-(5 -цити- дилата) - ИК-спектры поглощени (в нуджоле и КВг) и наиболее сильные пики приведены в табл. 2-5.

Образец - эмульси в минеральном масле. Т„дкс 87% (1848,0 ), при 3800 плотность 0,964 см /рт.

Образец - таблетка КВг.. Т,а 100%. (403.1); при 400 см Т 78%,- плотность 0,964 .

УФ спектр поглощени ,мопс (а): в воде при. рН 2,0 279 нм (6,5); рН 7,0 270-нм (9,9); рН 11,0 271 нм (9,6).

.jNjO, S., (Мол.м.715). Рассчитано,%: С 43,64, Н 6,01; N 9,79; О 26,88; S 4,47, С1 4,89; Р 4,33

Cct. М07°(С, 0,854, вода). Хорошо раствор етс в воде, метаноле и этаноле. Мало растворим в ацетоне и других кетонах, этилацетате и других сложных: эфидах, хлороформе, метиленхлориде. Нерастворим в насыщенных углеводородах. Антибактериальна активность U-57930 3-(5 -ци- тидилат) неактивен in vitro. Однако обработка щелочной фосфатазой или . фосфодиэстеразой I приводит к получению и-57930, которьш высокоактивен против различных грамположительных микроорганизмов как in vitro, так и in vivoo Т.пл. 205-207 С(с разложением ) о

Характеристики U-57930 3-(5-адени- лата) - ИК-спектр поглощени (в нуджоле и КВг) и наиболее сильные пики

35

50

(фракции 396-750).55

Фракции по 20 мл собирают, анали- приведены в табл. 6-9. зируют с помощью УФ-спектроскопии и Образец - эмульси в минеральном тестируют на биоактивность до и после масле. 85% (1864,4); при обработки щелочной фосфатазой. Фрак- 3800 плотность О, 964 см Урт.

ции .51-60 содержит и-57930-аденш1ат, фpaкци 62-73 (АДА-92.В) - U-57930- -уридилат, фракции 75-110 - U-57930- -гуанилат.

Подготавливают колонку из 50 мл Амберлита ХАД-2. Группу фракций АДА- 94В, содержащую U-57930-уридилат, пропускают через колонку со скоростью 2 мл/мин. Отработанный продукт сли0

5

jQ .,.

Промывки сливают. Колонку элюируют смесью метанол - вода (70:30 об./об.). Фракции,содержащие (по данным УФ-спек- троскопии) U-57930-уридилат, объеди- 5 н ют (200 мл), концентрируют до вод- ного раствора и высушивают вымораживанием до получени АДА-95.1 (60 мг). Характеристики U-57930 3-(5 -цити- дилата) - ИК-спектры поглощени (в нуджоле и КВг) и наиболее сильные пики приведены в табл. 2-5.

35

50

55

Образец таблетка КВч. (405,0); при 4000 см т 77%, плот- ность 0,964 см /рт.

УФ-спектр поглощени , Я 1, в воде при рН 2,0 258 нм (16,0), рН 7,0 261 нм (16,5); рН 11,0 261 нм (16,0)

N,0,0 SC1P Мол.м. 723).

Рассчитано,%: С 44,81 Н 5,94; N 13,55; О 22,13; S 4,41; Ct 4,84; Р 4,28.

Найдено,%: .N 12,87; S 5,39; CI 4,76; Р 3,83.

Ld.1 +94 (С, 0,887, вода).

Хорошо растворим в воде, метаноле и этаноле. Слабо растворим в ацетоне и других кетонах, этилацетате и других сложных эфирах, хлороформе и метиленхлориде. Нерастворим в насыщенных углеводородах.

.Антибактериальна активность. U- 57930 3-(5 -аденилат) неактивен in vitro. Однако после обработки щелочной фосфатазой или фосфодиэстеразой I получают и-57930, который обладает высокой активностью против различных грамположительных микроорганизмов как in vitro, так и in vivo. U-57930

20

25

Образец - эмульси в минеральном масле. Т макс 97% (8762,6); при 3800 см Т 97% , плотность 0,964 см Урт. Образец - таблетка КВч. Т 97% (405,0); при 4000 см- Т 77%; плотность 0,964 .

УФ-спектр поглощени , (а): в воде при рН 2,0 256 нм (13,4); 280 нм (8,4), рН 7,0 254 нм (14,5); 273 нм (9,7);-рН 11,0 259 нм (12,6), 266 нм (12,4).

Найдено,%: N 13, 32; S 4,86, С1 4,49; Р 3,25.

.О,,

SC1P (мол.м.739). Рассчитано , %: С 43,84; Н 5,8Г

, ,,. , г О 23,27; S 4,33; С1 4,73; 3-(5 -аденилат) активен з.п vivo (.под-30 Р 4 19.

кожно, мышам) с CD пор дка 0,62 (0,48-0,79) мг/кг против S.pyogenes. Т.пл. 203,5-205°С (с разложением). Характеристика U-57930 3-(5 -уриСыЗ

2 л

Р +97 0(0, вода, 0,855). Хорошо раствор етс в воде, метаноле и этаноле. Плохо раствор етс

в ацетоне и других кетонах, этил- дилат) - полосы поглощени в ИК-спек- ацетате и других сложных эфирах, хло- тре (в нуджоле и КВг) и наиболее сильные пики приведены в табл. 10-13.

роформе и метиленхлориде. Нераствбрим в насьш1;енных углеводородах, Антибактериальна активность. U-57930 3-(5- -гуанилат) неактивен in vitro. ОднаОбразец - эмульсии в минеральном масле. Т.,., 86% (3764,5); при 3800 см

плотность 0,964 CM VpT.

Образец - таблетка КВг. Т 101% (405,0) ; при 4000 см , , плотность 0,964 см /рт.

УФ-спектр поглощени , X„акс (а): в воде при рН 2,0 261 нм (11,5); рН 7,0 262 нм (10,7); рН 11,0 262 нм (11,5).

(Мол.м.716).

Рассчитано,%: С 43,57; Н 5,86; N 7,82; О 29,05; S 4,46; С1 4,89; Р 4,33.

Cccjj° +105° (С, 0,94, вода).

Хорошо раствор етс в воде, метаноле , этаноле. Плохо раствор етс в ацетоне и. других кетонах, этил- ацетате и других сложных эфирах, хлороформе и метиленхлориде. Нераствори в насыщенных углеводородах.

5

0

5

Антибактериальна активность. и-5793р 3-(5 -уридилат) неактивен in vitro. Однако после обработки щелочной фосфатазой или фосфодизсте- разой I получают U-57930, обладающий высокой активностью против различных грамположительных организмов как in vitro, так и in vivo. Т.пл. 202-203 0 (с разложением). Характеристики U-57930 3-(5 -гу- анилата) - полосы ИК-поглощени (нуд- жоль КВг); и наиболее сильные пики приведены в табл. 14-17.

Найдено,%: N 13, 32; S 4,86, С1 4,49; Р 3,25.

.О,,

Рассчитано ,

СыЗ

2 л

в ацетоне и других кетонах, этил- ацетате и других сложных эфирах, хло- роформе и метиленхлориде. Нераствбрим в насьш1;енных углеводородах, Антибактериальна активность. U-57930 3-(5- -гуанилат) неактивен in vitro. Одна40 ко после обработки щелочной фосфата- .зой или фосфодиэстеразой I получают и-57930, который обладает высокой активностью против различных грампо- ложительньк организмов как in vitro,

45 так и in vivo. Т.пл. 219-220 С (с .разложением).

Полученные вещества про вл ют активность против различных грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов , в св зи с чем они могут использоватьс в качестве дезинфеци- .рующих и лечебных средств. В частности , они активны в отношении Staphy- lococcus aureus, микоплазм, Pseudo- monas mirabilis. Streptococcus hemo- lyticus. В качестве антибактериальных агентов их используют в виде различных композиций.

Возможные формы и композиции антибактериальных средств.

Капсулы (1).

Готов т твердые желатиновые капсулы дл орального приема, содержа- щие,г: и-57930 Е 250,- кукурузный крахмал 100} тальк 75; стеарат магни 25. Компоненты тщательно перемешивают и заполн ют капсулы. Используют дл систематического лечени взрослых больных путем орального приема через каждые 6 ч. Можно готовить капсулы с содержанием активного компонента 10; 25;50;100;500 мг вместо 250 г.

Капсулы (2).

Готов т желатиновые капсулы дл орального применени , содержащие,г: соединение U-57930E 200; тетрациклина гидрохлорид 250; тальк 75, стеарат магни 25. Тетрациклин может быть заменен хлорамфениколом, окситетрациклином , хлортетрациклином, фумагил- лином, стрептомицином, дигидроново- биоцином или новобиоцином. Если вместо тетрациклина используют пенициллин G, то доза его составл ет 250000 ёд. на капсулу.

Таблетки (3).

Берут 500 г соединени U-57930E, 125 г лактозы, 65 г кукурузного крах мала, 25 г стеарата магни , и 3 г легкого жидкого вазелина, тщательно смешивают до получени комков. Их размельчают , продалива сквозь сито № 16.

3

Полученные гранулы прессуют в таблетки , в которых содержитс 500 мг активного соединени .

Приведенные примеры использовани рибонуклеотидов вл ютс иллюстративными и не ограничивают возможности использовани иных лекарственньк форм

Claims

Формула изобретени

Способ получени 3-(5 -рибонуклеотидов ) общей формулы (I)

ОН,

с

Н-С-С1 CO JH-CH

HoJ-o

20

.

SCHj

он

где R - 5-рибонуклеотид, заключающийс в том, что штамм Strep- tomyces rochei NRRL 3533 культивируют в жидкой питательной среде, со- .держащей источники.углерода, азота и минеральные соли, с дробньм добавлением в процессе культивировани в культуральную жидкость соединени общей формулы (I), где R - водород, с последующим выделением целевого продукта.

Таблица 1

30

13

1303036

Примечание, Тип дан в локальной области пика: BRD - широкий;

AVG - средний; SHP - резкий; SH - плечо; М - возможно перекрывание с минеральным маслом.

Таблица 3

14

Продолжение табл.2

Табгица 4

35 37 33 42 32 30 18

SH

AVG

AVG

SH

AVG

SH

AVG

Т 7

1 ,/0

I

Частота, см

1649,2 1071,5 3408,5 1057,0 1088,8 1215,1 1614,5 1491,0 3102,7

2980,1 2963,8

1528,6 1576,0

39 35 33 33 32 36

SH

AVG AVG AVG AVG AVG

Таблица 5 T,%Частота, см

1251,8

1286,5

889,1

525,5

1462,1

1384,0

595,0

572,8

788,8

1450„5 992,3

634,5

Таблица

23

1303036

24 Продолжение табл.8

Таблица 9

25

1303036

26

Таблица 10

Таблица 12

Т,% Частота, см Т,% Частота,

1685,0 1070,5 1090,7 1055,0 3387,3 1647,3 1214,2 1255,7 3114,4 2962,0 2931,0 1463,0 889,1

16 19

BRD BRD

Частота,

Таблица 13

-1

см

1384,0

567,0

1605,8

1423,5

992,3

523,6

2879,0

973,1

1576,0

634,5

2863,5

1297,1

.Таблица 14

36

21

SH AVG

2

1

6

4

51

73

6

11

21

26

34

18

44

24

31

44

AVGM

BRDM

SHM

AVGM

BRDM

BED

AVG

AVG

AVG

AVG

AVG

AVGM

AVG

AVGM

AVG

AVG

1303036

32 Продолжение табл.14

39 41 14 9

42 42 52 51 36 51 46 42 .43 45 40 34

AVG

AVG

SH

AVG

AVG

AVG

SH

AVG

AVG

AVG

AVG

SHP

AVGM

BRD

AVG

AVG

Таблица 15

33

130303634

Продолжение табл.15

Редактор В. Петраш

Составитель Г. Смирнова

Техред Л.блейник Корректор Т. Колб

Заказ 1228/58 Тираж 500Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-33, Раушска наб, д. 4/5

Производственно-полиграфическое предпри тие, г. Ужгород, ул. Проектна , 4