HU191085B - Process for producing 3-/5-comma above-ribonucleotide/derivatives - Google Patents

Description

(57) KIVONAT

A találmány tárgya eljárás (1) általános képletű vegyületek S-ÍS'-ribonukleotidj-származékainak előállítására. Az eljárás értelmében Streptomyces rochei törzset (1) általános képletnek megfelelő vegyület (R jelentése hidrogénatom) jelenlétében vizes, szén-, nitrogén-, oxigénés foszfor-forrást tartalmazó táptalajon tenyésztenek, és a kapott 3-(5'-ribonukleotid)-okat elkülönítik, υ A kapott ribonukleotidok erős in vivő hatással rendelkeznek különböző mikroorganizmusokkal szemben.

191 085

A találmány tárgya eljárás olyan linkomicin- és klindamicintípusú vegyületek új 3-ribonnkleotidjainak előállítására, melyek molekulájában a propil-liigrinsav egységet különböző ciklusos aminosavak helyettesítik.

A linkomicin antibiotikum sajátságait és előállítását a 3 086 912 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírás közli. A klindamicint a 3 486 163 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírásban oltalmazzák. Ezeknek az antibiotikumoknak kiterjedt terápiás alkalmazásuk van inipd az ember-, mind az állatgyógyászatban. Világszerte számos szabadalmat adtak meg, melyek ezen antibiotikumokra és sokféle származékukra vonatkoznak.

A 3 671 647 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírás közli a linkamicin és klindamicin 3-nukleotidjait. E szabadalmi leírásban közölt valamennyi linkomicinés klindainicin-származék közös szerkezeti egysége a propil-higrinsav. Az S. aureus-on végzett in vivő kísérletek megmutatták, hogy e 3-nukleotidoknak a hatékonysága az alapvegyület hatásának megközelítőleg tizedrésze.

A találmány szerinti vegyületek az (1) általános képletű vegyületek 3-(5’-ribonukleotid)-szánnazékai. Az (1) általános képletben R jelentése (a), (b), (c) vagy (d) képletű csoport.

A találmány értelmében az (1) általános képletű vegyületeket úgy állítjuk elő, hogy a Streptomyces rochei NRRL 3533 letéti számú törzset megfelelő tápanyagokat tartalmazó vizes közegben tenyésztjük egy olyan (1) általános képletnek megfelelő vegyület jelenlétében, amelynek képletében R jelentése hidrogénatom, majd a tenyészet közegéből elkülönítjük a kívánt 3-(5'-ribonukleotid)származékot.

Meglepő módon úgy találtuk, hogy a találmányunk szerinti nukleotidok in vivő baktériumellenes hatékonysága ugyanaz, mint a?, alapvcgyülctcké. Mivel ezek a sajátságok nagyon lényegesek, a találmány szerinti nukleotidokat főként terápiás felhasználásra tartjuk alkalmasnak. E vegyületek alkalmazhatók olyan egyének megelőző és terápiás ellátására, akik protozoa-típusú parazitát hordoznak. így például, ha a protozoa maláriaparazita, akkor ez állatokat is megbetegíthet: egerek például fertőzve lehetnek Plasinodium bcrglici-vcl; madarakat, így például a kacsákat fertőzheti P. ophurae, csirkéket a P. gallinacium; az emlősök közül a majmokat megtámadhatja a P. cynomolgi, az embereket pedig fertőzheti a P. falciparum, P. vivas és P. malariae.

A Sporozoa osztály Coccidia rendjéhez tartozó (ez a mikroparazita idézi elő a kokcidiózist) protozoa-típusú paraizitákat hordozó emlősök a találmány szerinti vegyületek adagolásával kezelhetők. E vegyületek az állatgyógyászatban például a következő esetekben alkalmazhatók: Ejmeria zurnii-, E. bovis- és E. ellipsoidalis-val fertőzött szarvasmarha; E. parva- és E. faurei-val fertőzött birka és kecske, E. debliecki-, E. scabra- vagy Isospora suis-sal fertőzött sertés, Isospora bigemina-,1. felis-, E. canis-, vagy E. felina-val fertőzött kutya és macska; E. tenella-val fertőzött baromfi; E. stiedae- vagy E. perforans-val fertőzött nyúl; és E. mustelae-val fertőzött menyét.

Azon linkomicin és klindamicin-származékok. amelyek 3-ribouuklcotidokká alakíthatók, az 1. mellékletben találhatók. A liiikozamiind egység 3-helyzetű hidroxilcsoportja helyett a molekula nukleotidként adenilsavat, guanilsavat, citidilsavat vagy uridilsavat tartalmaz. 2 . ______ - -· 1

Az 1. mellékletben definiált alapvegyületek az egyesült államo t beli 4 278 789 számú szabadalmi leírásban leírt eljárások segítségével állíthatók elő.

Az 1. mellékletben közölt vegyületek 3-(5^f-ribonukleotidj-származékai a 3 671 647 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírásban közölt eljárások segítségével készíthetők. Ugyanezen szabadalmi leírás módszereinek követésével állíthatjuk elő c nukleotidok sóit is.

A találmány szerinti nuklcotidokból úgy állíthatók elő gyógyszerkészítmények, amint ezt a 4 278 789 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírás kompozícióra vonatkozó példái leírják. E készítmények úgy formulázhatók, hogy ezekben a példákban szereplő hatóanyagot egy találmány szerinti nukleotiddal helyettesítünk. Ezt a helyettesítést niolckula-cgyenértékek alapján végezzük.

A találmány szerinti nukleotidok meghatározására és jelemzésére a következő általános és különleges módszerek alkalmazhatók.

3-(5'-ribonukleotidj-származékok mérése

Mivel a találmány szerinti 3-ribonukleotidoknak in vitro baktériumellenes hatásuk nincsen, ezért a baktériumellenes hatású kiinduló vegyületből való képződésük könnyen követhető úgy, hogy az antibiotikus hatékonyság csökkenését megmérjük. A baktériumellenes hatású kiinduló vegyület kultúraszűrletekben, vagy reakcióelegyekben való mennyiségi meghatározására a Sarcina lutea ATCC 9341 törzzsel végezhető szabványmeghatározást használjuk. A 3-ribonukleotidoknak fermentlevekben, kivonatokban és tisztított anyagokban való jelenléte esetén a meghatározást úgy végezzük, hogy előbb a foszfodiészter-kötcst hidrolizáljuk nyers alkálikus foszfatázzal vagy kigyómércg-foszfodiésztcrázzal, az alább leírt eljárások szerint. A hidrolizátumban lévő, baktériumellenes hatású vegyületet standard módszerrel határozzuk meg.

Enzimes hidrolízis

Alkálikus foszfatáz: törzsoldatot (0,5 mg/inl, 0, 54 cgység/mg) készítünk galambból alkálikus foszfatázából /EC 3.1.3.1 (Sigma)/ trisz(hidroximetil)-aminometán hidroklorid (a következőkben: Tris) pufféról dattal, 0,01M, pH értéke 8,0. A vizsgálandó mintákat 1:2 arányban hígítjuk az cnzim-pufferkevcrékkel, majd 28 °C hőmérsékleten 18 órán át inkubáljuk.

Kígyóméreg-foszfodiészteráz: törzsoldatot (lOOmg/ml, 0,026 egység/mg) készítünk tisztított kígyóméreg-fószfodiészterázból /EC 2.1.4.1 (Sigma)/desztillált vízzel. Az inkubációs elegy tartalma: 0,2 ml a vizsgálandó minta 1 mg/ml koncentrációjú vizes oldatából, továbbá 0,6 ml 0.01M Tris puffer, melynek pH értéke 9,0, továbbá 0,1 ml 0,3M magnézium-klorid-oldat és 0,1 ml enzimtörzsoldat. Az inkubálást 37 °C hőmérsékleten 18 órán át végezzük.

Lép-foszfodiészteráz: törzsoldatot (1 mg/ml, 19,6 egység/mg) készítünk lép-foszfodiészterázból /EC 3.1.4.18 (Sigma)/ desztillált vízben. Az inkubációs elegy tartalma: 0,4 ml a vizsgálandó minta 0,5 mg/ml koncentrációjú vizes oldatából, továbbá 0,5 ml 0,02M Tris puffer, melynek pH értéke 7,0 és 0,1 ml enzim-törzsoldat. Az inkubálást 37 °C-on 18 órán át végezzük.

19J 085

A készítmények és az enzimes hidrolizátumok vékonyrétegkromatográfiás (a továbbiakban: VRK) elemzése

A 3-ribonukleotidok termelését és tisztítását úgy követjük nyomon, hogy S. lutea ellenében mérjük (lásd fentebb), továbbá VRK meghatározás útján. A VRKhoz adszorbensként sziiikagél G-t, és (futtatószerként) butanon-aceton-víz (186 :52 :20, térfogat/térfogat) vagy butanon-aceton-víz (8:5:1, térfogat/térfogat) elegyeit használjuk. A biológiailag hatásos kiinduló anyagokat S. lutea-val oltott agaron bioautográfiával detektáljuk.

A 3-nukleotidok enzimes vagy kémiai hidrolízistermékeit a következő VRK rendszerek segítségével választjuk el:

A: sziiikagél GF lemez (Aualtech Inc.), ftillalószcr víz;

B: sziiikagél FG lemez, futtatószer n-propanol, tömény ammónium-hidroxid és víz 55:10:35 (térfogat/térfogat) arányú elegye;

C: NM-Polygram Cellulose 300 (Brinkman Instruments Inc.) lemez, futtatószer 1-butanol, víz és hangyasav 77 :13 :10 (térfogat/térfogat) arányú elegye.

Az UV színképterületen elnyelő anyagokat rövid hullámhosszú UV lámpa segítségével detektáljuk. A biológiailag hatástalan, UV területen nem-abszorbeáló anyagokat permanganátperjodát permetreagenssel mutatjuk ki. A biológiailag aktív nuklcotidokat S. lutea-val oltott agaron bioautográfiával detektáljuk.

Az alábbi példa bemutatja a fermentációs és tisztítási eljárásokat az U-57 930, illetve az U-57 930E jelzésű vegyület nukleotid-származékainak előállítására során. Az 1. mellékletben definiált többi vegyület 3-ribonukleotidjai e példában közölt eljárásokkal vagy ezekkel egyenértékű eljárásokkal állíthatók elő. (Az U-57 930E jelű vegyület az U-57 930 jelű vegyület hidrokloridsója.)

A találmány szerinti eljárás részletesen ismertetjük az alábbi kiviteli példában. Ha külön megjegyzést nem teszünk, akkor a százalék tömegszázalékot, oldószerek aránya pedig mindig térfogati arányt jelent.

1. példa

A) A fermentációs eljárás

Streptomyces rockéi NRRL 3533 törzset tenyésztünk egy közegben, mely a következőket tartalmazza: 10 g/liter glükóz, 4 g/liter Difco-pepton, 4 g/liter Difco élesztőkivonat, 0,5 g/liter MgSO₄ · 7H₂O, 2,0 g/liter KH₂PO_4l 4 g/liter K₂HPO₄. A tenyészetet forgó rázógépen, 28 °C hőmérsékleten 3 napon át tartjuk. E tenyészetből származó micélhimot használjuk fel az azonos alkatrészeket tartalmazó fermentációs közeg oltására. A fermentációt 48 órán át, 28 °C hőmérsékleten, forgó rázógépen végezzük. A 48 órás inkubálás végén 50 mg/liter koncentrációhoz elegendő U-57 930 vegyületet /(1) képletű vegyület, melyben R jelentése hidrogénatom/ adunk hozzá, majd a fermentációt 32 °C hőmérsékleten folytatjuk, 12 óra elmúltával további U-57 930 vegyületet adunk hozzá olyan mennyiségben, hogy a koncentrációja 150 mg/liter legyen. További 12 óra eltel,.......... - ......1 tével az U-57 930 koncentrációját 250 mg/literre növeljük. A fermentációt 32 °C hőmérsékleten 24 órán át végezzük az U-57 930 utolsó részletének hozzáadása után, Ebben az időpontban végzett mérés azt mutatja, hogy a kultúraszűrlet legfeljebb 1 mg/liter U-57 930 vegyületet tartalmaz, tehát e vegyület fennmaradó része, azaz 249 mg/liter, biológiailag hatástalan vegyületté alakult át.

Az S. rochei NRRL 3533 ismert mikroba, mely általánosan rendelkezésre áll, igénylés esetén, az NRR1 bankban. E bank címe: Northern Ulilizatiou and Research Division, Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture, Peoria, 111. USA.

B) Elkülönítési és tisztítási eljárások

Az U-57 930 3-ribonukIcotidjainak elkülönítése a fermentléből Adszorpció Amberlite XAD-2 gyantán: A körülbelül 12 liter térfogatú fermentlevet, mely 3 g inaktivált U-57 930 anyagot tartalmaz, 7, 7 pH értéken szűrési segédanyag alkalmazásával megszűrjük. A micéliumtömeget 1,2 liter vízzel megmossuk, és elvetjük. A tiszta szűrletet egyesítjük a mosófolyadékkal, 6,0 pH-ra állítjuk és útfolyaíjuk egy 600 ml Amberlite XAD-2-ből (Rohm and Haas Co., Philadelphia, PA) készített oszlopon, 40 ml/perc áramlási sebességgel. Az eltávozó folyadék biológiai aktivitását megvizsgáljuk alkálikus foszfatázzal való kezelés előtt és után, majd elvetjük. Az oszlopot 2 liter vízzel átmossuk. A vizes niosófolyadék alkálikus foszfatázzal való kezelés előtt és után biológiailag hatástalan, ezért elvetjük. Ezt követően az oszlopot metanol és víz 70:30 (térfogat/térfogat) arányú elegyével eluáljuk. Az eluálást 20 ml/perc sebességgel végezzük, és 20 ml térfogatú frakciókat fogunk fel. Az alkálikus foszfatázzal végzett kezelés előtti (—E) és utáni (+E) hatékonysági vizsgálat eredménye a következő:

A frakció sorszáma	Zóna (S. lutea) (mm)
-E	+E
5	0	0
10	0	0
11	0	0
13	0	36
20	33	55
. 25	32	54
40	31	50
45	29	48
50	26	39
55	23	38
60	21	37
65	19	27
70	17	26
75	17	26
80	16	26
85	16	26
90	16	26
95	15	26
100	16	26
110	16	21
120	16	21
130	15	21
140	15	21

U 085

Zóna (S. lutea) (mm) A frakció sorszáma —Ε +E

150	15	21
160	15	21
170	15	21
180	15	21
190	15	21
200	15	21

Λ 12 80 sorszámú frakciókat egyesítjük, vizes oldal I töményítjük, és liofilizáljuk. Így 12,22 g készítményt) ?z jutunk, melynek jele ADA-34.1.

Egy másik kísérletsorozatban 6 liter, 2 g „inaktivá ” U-57 930 anyagot tartalmazó fcrmcntlével kezelünk a fenti módon. Az Amberliter XAD-2 oszlopról távc?ó metanolos eluátumot ADA-143B jelzéssel megőrizzük. Ezt az oldatot nem pároljuk be szárazra, hanem az alábbi leírás szerint Dowex-1 kromatográfiával tisztítjuk.

Dowex-1 kromatográfia: az oszlopot 300 ml Dowex-1 (X-4) acetát-formából készítjük. Az ADA-143B jelű metanolos oldatot, melynek pH értéke 8,2, átvezetjük az oszlopon, és az elfolyó folyadékot 2,5 ml/perc áramlási sebesség mellett 20 ml térfogatú frakciókban fogjuk fel (1-60 sorszámú frakciók). Ezután az oszlopot 1,5 liter vízzel átmossuk (áramlási sebesség 10 ml/perc, 66-108 sorszámú frakciók). Ezt követően az oszlopot 5%-os ecetsavval eluáljuk (10 ml/perc, 109—310 sorszámú frakciók). A következő frakciókat egyesítjük:

1. gyűjtés

2. gyűjtés

3. gyűjtés

4. gyűjtés

5. gyűjtés

6. gyűjtés

7. gyűjtés

8. gyűjtés

1-80 frakciók 81-110 frakciók 111-130 frakciók 131-150 frakciók 151-190 frakciók 191—230 frakciók 231-270 frakciók 271-310 frakciók

1000 ml (ADA-1A)

600 ml (ADA-2A) 450 ml (ADA-3A) 450 ml (ADA-4A) 900 ml (ADA-5A) 900 ml (ADA-6A) 900 ml (ΛΗΛ-7Λ) 900 ml (ADA-8A)

Az alkálikus foszfatázzal végzett kezelés előtti (—E) és utáni (+E) hatékonysági vizsgálat eredménye a következő:

	Zóna (S. lutea) (mm)
—E	+ E
1. Gyűjtés	31	52
2. Gyűjtés	36	49
3. Gyűjtés	34	45
4. Gyűjtés	18	40
5. Gyűjtés	25	30
6. Gyűjtés	27	29
7. Gyűjtés	27	29
8. Gyűjtés	29	31

Az 1. és 2. gyűjtést egyesítjük, vizes oldattá töményítjük, majd liofilizáljuk. Így 1,48 g anyaghoz jutunk, melynek jele ADA-2.1 a 3. és 4. gyűjtést szintén egyesítjük, és hasonló módon kezeljük, így 2,5 g anyagot kapunk, melynek jele ADA-2.2.

Alkálikus foszfatázzal kezelve az ADA-2.1 és ADA-2.2 készítmények U-57 930 vegyületet adnak.

Az ADA-34.1, ADA-2.1 és ADA-2.2 készítményeket egyesítjük, és az alább következő, kettős ellenáramú megoszlásos eljárással tisztítjuk.

Kettős ellenáramú megoszlatás: az ADA-34.1, ADA5 2.1 és ADA-2.2 készítmények egyesítésével nyert 16,20 g anyagot 1-butanol és víz 1:1 arányú elegyéből álló oldószerrendszer mindkét fázisának 25 ml-ében oldjuk. Az oldatokat egy üvegből készült kettős ellenáramú megoszlási berendezés (100 cső/25 ml/fázis) középső csöveibe öntjük. A megoszlást 150 átvitel után elemezzük a biológiai hatékonyság szempontjából, alkálikus foszfatázzal végzett kezelés eltilt ( E) és után (+E). Az eredmények a következők:

Zóna (S. lutea-ra Alsó kollektor érzékeny) (mm)

-Ε +E

5	29	31
10	31	33
15	30	33
20	27	33
25	22	33
30	17	34
35	0	34
40	0	33,5
45	0	33
50	0	34
55	0	34
60	0	35
65	0	36
70	0	38
75	0	39
80	0	40
85	0	41
90	0	42
95	0	43
100	0	43,5

Zóna (S. lutea-

Alsó gép	érzékeny) (nini)
-E	+E
50	0	45
45	nyomnyi	46
40	15	47
35	17	47,5
30	17	47
25	18	47
20	17,5	48
15	17	48
10	16	48
5	15	50
0	nyomnyi	50
Felső gép'
5	nyomnyi	49
10	nyomnyi	48,5
15	nyomnyi	.48
20	nyomnyi	48,5
25	nyomnyi	49

191 085

Alsó kollektor	Zóna (S. lutea-ra érzékeny) (mm)
-E	+ E
30	30	50
35	nyomnyi	51
40	15	52
45	16	53
50	21	54

Felső kollektor	Zóna (S. lutea-ra érzékeny) (mm)
-E	+ E
100	17,5	54
95	17	53,5
90	19	53,5
85	20	53,5
80	21	53,5
75	22	53,5
70	24	53,5
65	26	53,5
60	28	53,5
55	30	52,5
50	32,5	52
45	33	52
40	35	52
35	36	52
30	39	49
25	41	47
20	43	48
15	43	46
10	43	43
5	35	35

A következő gyűjtéseket végezzük (lásd alább). Mindegyik gyűjtést vizes oldattá töniényítjük, majd a megfelelő készítménnyé liofilizáljuk.

I. Gyűjtés: Alsó kollektor 1—50;

II. Gyűjtés; Alsó kollektor 51-100; alsó gép 50-30;

III. Gyűjtés: Alsó gép 29-0; felső gép 1—50;

felső kollektor 100-30. A következő készítményeket kapjuk:

Az I. Gyűjtésből: ADA-47.1, 9,78 g

A II. Gyűjtésből: ADA-47.2, 0,30 g

Alii. Gyűjtésből: ADA-47,3, 5,29g

Az ADA-47.2 és ADA-47.3 készítményeket egyesítjük, és az alábbi leírás szerint DEAE-Sephadex kromatográfia útján tisztítjuk.

DEAE-Sephadex kromatográíía: 300 g DEAE-Sephadex (A-25) gyantát 1 órán át keverünk vízzel, majd 2 órán át 0,5N vizes nátrium-hidroxid-oldattal. Az ioncserélőt addig mossuk vízzel, amíg a pH körülbelül 7,5. Ezután az anyagot 2 órán át 0,5N vizes ecetsavval keverjük, vízzel közömbös pH eléréséig mossuk, utána az oszlopba öntjük, és 1 kg nyomással állandó magasságra tömörítjük. Az oszlopot utánmossuk 4 liter vízzel, 8 liter 0,1 %-os vizes trisz(hidroximetil)-aininometán (a továbbiakban THAM) oldattal, továbbá 3 liter 0,03M THAM-acetát pufferral, melynek pH értéke 8,0 (ezt úgy készítjük, hogy 3,64 g THAM-t 800 ml vízbe oldunk, és a pH-t ecetsavval 8,0 értékre állítjuk, majd a térfogatát 1 literre kiegészítjük).

Az ADA-47,2 és ADA-47,3 egyesítésével kapott kb. 5,50 g tömegű anyagot 20 ml 0,03M THAM-acctát-oldatban (pH 8,0) feloldjuk, és az oszlop tetejére öntjük. Az oszlopot ezután eluáljuk 0,3M 8,0 pH értékű THAMacetát pufferr oldattal. Az 1—186 frakciókat (kb. 20 ml) összegyűjtjük, ekkor az oszlop eluálását felfelé áramlással folytatjuk. Összegyűjtjük az Λ, B, C, D és E frakciókat (minden egyes frakció térfogata 1 liter). A biológiai aktivitás vizsgálata alkálikus foszfatázzal végzett kezelés előtt (-E) és után (+E) a következő eredményeket mu tatja.

frakció sorszáma	Zóna (S. lutea-ra érzékeny) (mm)
-E	+ E
3	0	0
6	0	0
9	0	0
12	0	0
15	0	0
18	0	0
21	0	0
24	0	0
27	0	0
30	0	0
33	0	0
36	38	39
39	43,5	44
42	36	36
45	23,5	23
48	15	16
51	0	0
54	0	0
57	0	0
60	0	0
63	0	0
66	0	0
69	15	16
72	17	20
75	21	26
78	23	27
81	23	30
84	23	29
87	22	24
90	21	23
93	21	24
96	22	26
99	21	35
102	22	44
105	23	51
108	22,5	54
111	22,5	52,5
114	22	52
117	22	54,5
120	20,5	56
123	20	56

191 035

A frakció sorszáma	Zóna (S. lutea-ra érzékeny) (nmi)
-E .	+ E
126	20,5	56
129	20	55
132	20,5	55
135	21	55
138	21	54
141	20	54
•144	20,5	54
147	21	54
150	23	54
153	21,5	52

A frakció sorszáma	Zóna (S. lutea-ra érzékeny) (mm)
-E	+E
156	20	53
159	20	54
162	20	54,5
165	20	54,5
168	21	55
171	22	55
174	22,5	54
177	23	54
180	24	54
183	24	54
186	0	46,5
A	24	23
B	15	28
C	20	44
D	22	23
E	22	24

A következő gyűjtéseket végeztük:

I. Gyűjtés 34- 48 frakciók, 280 ml (ADA-69B)

II. Gyűjtés 75- 90 frakciók, 330 ml (ADA-69C)

III. Gyűjtés 101-111 frakciók, 180 ml (ADA-69D)

IV. Gyűjtés 114—150 frakciók, 580 ml (ADA-69E)

V. Gyűj tés 151-164 frakciók, 100 ml (ADA-69F)

VI. Gyűjtés 165—186 frakciók, 125 ml (ADA-69G)

VII. Gyűjtés C frakció, 1 liter (ADA-69A)

Az I. gyűjtés (ADA-69B) változatlan U-57 930 vegyületet tartalmaz, ezért elvetjük.

Az A—E frakciók közül csak a C frakciót tartjuk meg, a többit elvetjük.

A II. gyűjtés (ADA-69C) egy ismeretlen anyagot tartalmaz, mely alkalikus foszfatázzal kezelve U-57 930-at ad. EJV: X_max 275 nm.

Á III. gyűjtés (ADA-69D) 3-(citidin-5'-foszfát)U-57 930-al turluliuaz, és ezt az alább leírt módon kezeljük. UV: X_niax 270 nm.

A IV. gyűjtés (ADA-69E) 3-(adenozin-5'-foszfát)U-57 930-at tartalmaz, ezt az alább leirt módon kezeljük. UV: X_max 260 nm.

Az V. gyűjtés (ADA-69F) S-fadenozin-S'-foszfátU-57 390, 3-(uridin-5'-foszfát)- U-57 930 és 3-(guanozinS'-foszfát)- U-57 930 keverékét tartalmazza. Ezt az oldatot az alább leírt módon kezeljük.

A VI. gyűjtés (ADA-69G) 3-(guanozin-5'-foszfát)U-57 930-at tartalmaz, ezt az alább leírt módon kezeljük. UV: X_max 254 nm; sh 275-nél.

A VII. gyűjtés (ADA-69A) 3-(guanozin-5'-foszfát)U-57 930, 3-(uridin-5'-foszfát)- és U-57 930 keverékét tartalmazza. Ezt az oldatot az alább leírt módon kezeljük.

Lényegében tiszta 3-(citidin-5’-foszfát)- U-57 930, 3-(adenozin-5'-foszfát)- U-57 930 és S-fguanozin-S'-foszfát)- U-57 930 elkülönítése a III., IV., illetve VI. gyűjtésekből: A THAM-acetát puffer eltávolítása Amberlite XAD-2 kromatográfia segítségével.

A III., IV. és VI. gyűjtéseket, melyeket a fentebb leírt módon kaptunk, Amberlite XAD-2-t tartalmazó oszlopokon vezetjük át. A lecsepegő folyadékot elvetjük. Az oszlopokat átmossuk vízzel, majd metanol és víz. 70:30 arányú elegyével eluáljuk. A frakciókat UV segítségével elemezzük, továbbá az alkalikus foszfatázzal való kezelés előtt, és kezelés után a biológiai hatékonyság vizsgálatával. A megfelelő frakciókat egyesítjük, vizes oldattá koncentráljuk, és liofilizáljuk. Az alábbi táblázatban összegezzük az Amberlite XAD-2 minden egyes gyűjtésére használt mennyiségét, a vizes mosófolyadék mennyiségét, a metanolos eluátum és a kapott anyag mennyiségét.

Gyűjtés	A felhasznált Amberlite XAD-2, ml	Vizes mosó- folyadék, ml	Metanolos eluátum, ml	Elkülönített anyag, ml
III.	50	200	300	150
IV.	200	800	600	3510
VI.	50	200	300	470

A III. gyűjtésből kapott anyagot ADA-73.1, a IV. gyűjtésből kapott anyagot ADA-74.1, és a VI. gyűjtésből kapott anyagot ADA-75.1 jelzéssel őrizzük.

A THAM-acetát puffer eltávolítása az V. gyűjtésből (ADA-69F) és a VII. gyűjlésből (ADA-69A) Amberlite XAD-2 kromatográfiával.

Az oszlopot 300 ml Amberlite XAD-2 gyantából készítjük. Az oszlopon átvisszük az V. és VII. gyűjtéseket, melyek 3-(adenozin-5'-foszfát)- U-57 930, 3-(uridin5' foszfát)- U-57 930 és 3-(guanozin-5'-foszfát)- U-57 930 keverékét tartalmazzák. A lccsepcgő folyadékot eldobjuk. Az oszlopot átmossuk 600 ml vízzel, és a lecsepegő folyadékot szintén elvetjük. Ezután az oszlopot metanol és víz 70-30 arányú elegyével eluáljuk. Azon frakciókat, melyek alkálikus foszfatázzal való kezelés után biológiailag hatásos anyagot adnak egyesítjük, ez 300 ml, melyet vizes oldattá töményílüuk és liofilizáhmk. így kapjuk az ADA-71.1 jelzésű, 670 ing súlyú készítményt. Az ADA71.1 jelű készítményt az alábbi leírt módon kezeljük.

A 3-(uridin-5'-foszfát)- U-57 930 a 3-(adenozin-5'foszfát)- U-57 930 és 3-(guanozin-5'-foszfát)- U-57 930 elválasztása DEAE-Sephadex kromatográfiával: 600 ml

-611

191 085

--------- J

DEAE-Sephadex acetát-formájú gyantát, melyet a fentebb leírt módon készítünk, 0,03M THAM-acetát pufferoldattal (pH 8,0) átmosunk, majd egy üvegoszlopba tömörítjük (belső átmérő 4,5 cm, magasság 40 cm) hidrosztatikus nyomás segítségével.

Az ADA-71.1 készítményt (lásd fentebb) 10 ml 0.03M THAM-acetát puffer-oldatban (pH 8,0) feloldjuk, és az oszlop tetejére öntjük. Az oszlop eluálása a következőként történik.

1. 0,03M THAM-acetát, pH 8,0 (1—79 frakciók);

2. 0,12M THAM-acetát, pH 8,0 (80-395 frakciók);

3. 0,25M THAM-acélát, pH 8,0 (396 -750 frakciók);

ml térfogatú frakciókat gyűjtünk, és elemezzük egyrészt UV segítségével, másrészt megvizsgáljuk biológiai hatékonyságukat alkálikus foszfatázzal végzett kezelés előtt és után Az 51-60 frakciók 3-(adcnozin-5'foszfát)- U-57 930-oi, a 62 -73 frakciók (ADA-94.B) 3-(uridin-5'-foszfát)- U-57 930-ot, a 75-110 frakciók pedig 3-(guanozin-5'-foszfát)- U-57 930-ot tartalmaznak.

Lényegében tiszta 3-(uridin-5'-foszfát)- U-57 930 elkülönítése; a THAM-acetát puffer eltávolítása Amberlite XAD-2 kromatográfiával; Oszlopot készítünk 50 ml Amberlite XAD-2 gyantából. Az ADA-94B gyűjtést, mely 3-(uridin-5'-foszfát)- U-57 930-ot tartalmaz, 2 ínl/perc sebességgel vezetjük át az oszlopon. A lecsepegő folyadékot elvetjük. Az oszlopot átmossuk 200 ml vízzel, és ezt a mosófolyadékot is elvetjük. Ezután az oszlopot metanol és víz 70-30 arányú elegyével eluáljuk. A 3-(uridin5-foszfát)- U-57930-t tartalmazó frakciókat (ennekmegállapítása UV segítségével történik) egyesítjük (200 ml) vizes oldattá töményitjük, és liofilizáljuk. így kapjuk a 60 mg súlyú ADA-95.1 jelű készítményt.

A 3-(uridin-5'-foszfát)- U-5 7 930 jellemzése

1. Az ÍR színkép adatai

Az IR színkép elnyelési sávjaj (Nujol és Kbr) a következők:

a) Nujol

Sáv- frekvencia	Erős- ség	Típus	Sáv- frekvencia	Erős- ség	Típus
3417,3	24	SH	1249,0	33	SH
3341,1	19	BRD	1214,3	21	AVG
3211,8	19	BRD	1146,8	42	SH
3108,6	25	BRD	1080,9	15	BRD
2951,4	2	BRDM	1070,6	12	AVG
2926,3	1	BRDM	1056,1	14	SH
2854,9	2	BRDM	992,4	39	AVG
2729,6	48	BRDM	972,2	29	AVG
2693,9	51	SH	955,8	49	SH
2535,7	65	SH	930,7	51	AVG
1649,3	8	AVG	889,2	36	AVG
1610,7	26	AVG	860,3	52	AVG
1575,0	35	AVG	849,7	53	AVG
1528,7	31	AVG	804,4	46	SH
1489,2	23	AVG	788,9	40	AVG
1462,2	9	AVG M	721,4	44	AVG M
1404,3	41	BRD	705,0	47	BRD
1377,3	18	AVGM	654,9	45	SH
1368,6	31	SHM	632,7	38	AVG
1286,6	34	AVG

Magyarázat a Táblázathoz:

Sávfrekvencia: hullámhosszban (cm^-1)

Erősség: a transzmittancia százalékában (%T).

A csúcs környezetére vonatkozó adatok: BRD jelentése széles;

AVG jelentése átlagos; SHP jelentése éles; SH jelentése vállas. M jelentése: lehetséges, hogy az ásványolaj zavar.

A 25 legerősebb csúcs

%T	Frekvencia	%T	Frekvencia
1	2926,2	24	3417,2
2	2951,3	25	3108,5
2	2854,8	26	1610,6
8	1649,2	31	1528,6
9	1462,1	31	1368,5
12	1070,5	33	1249,0
14	1056,0	34	1286,5
15	1089,8	35	1575,0
18	1377,2	36	889,1
19	3341,0	38	632,6
19	3211,7	39	992,3
21	1214,2	39	972,1
23	1489,1

Előkészítés: eldörzsölés ásványolajjal. Max % T: 87 @ 1848.0 %T 3800 cm^-1-nél: 83 Sűrűség (cm^-1/pt): 0,964

b) KBr

Sáv- frekvencia	Erős- ség	Típus	Sáv- frekvencia	Erős- ség	Típus
3408,6	10	BRD	1088,9	12	BRD
3102,8	26	SH	1071,5	9	AVG
2963,9	28	AVG	1057,1	11	SH
2930,2	27	BRD	992,4	35	AVG
2878,1	37	AVG	972,2	36	AVG
2862,7	39	SH	956,8	45	SH
2768,1	51	SH	928,8	48	AVG
2511,6	. 65	BRD	889,2	32	AVG
1649,3	4	AVG	859,3	47	AVG
1614,6	20	SH	851,6	47	SH
1576,0	30	AVG	804,4	39	SH
1528,7	28	AVG	788,9	34	AVG
1491,1	21	AVG	743,6	47	SH
1462,2	33	AVG	705,0	40	AVG
1450,6	35	SH	654,9	39	SH
1404,3	37	AVG	634,6	35	AVG
1384,0	33	AVG	595,1	33	AVG
1360,9	42	SH	572,9	33	AVG
1286,6	32	AVG	525,6	32	AVG
1251,9	30	SH	447,5	36	AVG
1215,2	18	AVG

Magyarázat a Táblázathoz:

Sávfrekvencia: hullámszámbaii (cm^-1) Intenzitás: a transzmittancia százalékában (%T)

-713

191 085

A csúcs környezetére vonatkozó adatok: BRD jelentése széles; AVG jelentése átlagos; SHP jelentése éles; SH jelentése vállas.

A 25 legerősebb csúcs

%T	F rekvencia	%T	Frekvencia
4	1649,2	30	1251,8
9	1071,5	32	1286,5
10	3408,5	32	889,1
11	1057,0	32	525,5
12	• 1088,8	33	1462,1
18	1215,1	33	1384,0
20	1614,5 '	33	595,0
21	1491,0	33	572,8
26	3102,7	34	788,8
27	2930,1	35	1450,5
28	2963,8	35	992,3
28	1528,6	35	634,5
30	1576,0

Előkészítés: KBr pasztilla Max%Tr: 100 @403,1 %T: 4000 cm^-1-nél: 78 Sűrűség (cm^-1/pt): 0,964

2. UV elnyelési színkép /X_max (a)/

Vízben, a következő értékek melleit: pH 2,0. 279 nm (6,5) pH 7,0, 270 nm (9,9) pH 11,0, 271 nm (9,6)

3. Elemi összetétel

Összegképlet; C₂₆H43ClN₅0nPS. Molekulasúly: 715. Számított; C 43,64, H 6,01, N 9,79, 0 26,88, S 4,47,

Cl 4,89, P 4,33%.

4. Optikai forgatóképesség;

(α)θ—107° (c = 0,854, víz).

5. Oldhatóság:

Igen jól oldódik vízben, metanolban és etanolban. Némileg oldható acetonban és más ketonokban, etilacetátban és más észterekben, kloroformban, diklórmetánban. Telített szénhidrogén-típusú oldószerekben oldhatatlan.

6. Baktériumellenes hatás:

A 3-(citidin-5'-foszfát)- U-57 930 in vitro hatástalan. Alkálikus foszfatáz vagy foszfodiészteráz I hatására U-57 930 vegyületté alakul, mely számos Gram pozitív organizmussal szemben mind in vitro, mind in vivő igen hatékony.

7. Olvadáspont: 205—207 °C (bomlás közben).

A 3-(adenozm-5'-foszfát]- U-57 930 jellemzése

1. Az IR színkép adatai

Az IR színkép elnyelési sávjai (Nujol és KBr) a következők:

Sáv- frekvencia	Erős- ség	Típus	Sáv- frekvencia	Erős- ség	Típus
3335,3	16	BRD	1245,1	24	SH
3267,8	17	BRD	1213,3	17	AVG
3210,8	17	BRD	1175,7	43	SH
2954,3	3	BRDM	1146,8	40	SH
2924,4	2	BRDM	1089,9	13	AVG
2868.4	6	SH M	1069,6	10	AVG
2854,9	4	AVG M	1055,1	13	SH
2727,6	46	BRD M	991,5	35	AVG
2520,2	61	BRD	972,2	36	AVG
1684,0	22	SH	957,7	45	SH
1641,6	14	AVG	930,7	48	AVG
1600,1	28	AVG	889,2	32	AVG
1576,0	31	AVG	861,3	47	AVG
1550,9	43	SH	848,7	49	AVG
1509,4	53	SH	818,8	45	AVG
1463,1	15	AVGM	798,6	40	AVG
1420,7	35	AVG	722,4	36	AVGM
1377,3	24	AVGM	708,9	40	SH
1367,6	35	SH M	647,1	33	SH
1332,0	36	AVG	635,6	31	AVG
1299,2	34	AVG

Magyarázat a Táblázathoz:

Sávfrekvencia: hullámszámban (cm^-1)

Erősség: a transzmittancia százalékában (%T)

A csúcs környezetére vonatkozó adatok: BRD jelentése széles; AVG jelentése átlagos; SHP jelentése éles; SH jelentése vállas; M jelentése: lehetséges, hogy az ásványolaj zavar.

A 25 legerősebb csúcs

%T	Frekvencia	%T	Frekvencia
2	2924,3	22	1684,0
3	2954,2	24	1377,2
4	2854,8	24	1245,0
6	2868,3	28	1600,0
10	1069,5	31	1576,0
13	1089,8	31	635,5
13	1055,0	32	889,1
14	1641,5	33	647,0
15	1463,0	34	1299,1
16	3335,2	35	1420,6
17	3267,7	35	1367,5
17	3210,7	35	991,5-

1213,2

Előkészítés: eldörzsölés ásványolajjal. Max%T: 85 @ 1864,4 %T: 3800 cm^-1-nél: 81 Sűrűség (cm^-’/pl): 0,964

b) KBr
Sáv- frekvencia	Erős- ség	Típus	Sáv- frekvencia	Erős. ség	Típus
3375,8	7	BRD	1090,8	8	AVG
3223,4	10	BRD	1069,6	5	AVG
3124,0	17	SH	1050,3	8	SH

-815

191 085

Sáv- frekvencia	Erős- ség	Típus	Sáv- frekvencia	Erős- ség	Típus
2963,0	22	AVG	990,5	27	AVG
2929,2	22	BRD	972,2	29	AVG
2878,1	31	AVG	956,8	38	SH
2863,6	33	SH	929,8	42	AVG
2756,6	45	BRD	889,2	24	AVG
2521,2	60 .	BRD	861,3	38	AVG
2188,5	75	BRD	851,6	40	SH
1678,2	15	SH	818,8	36	AVG
1643,5	7	AVG '	807,3	36	BRD
1602,0	20	AVG	798,6	30	AVG
1576,0	23	AVG	768,7	41	BRD
1553,8	35	SH	721,4	30	AVG
1511,4	49	SH	706,9	31	BRD
1475,7	27	AVG	648,1	26	AVG
1421,7	29	AVG	636,5	26	AVG
1384,0	32	AVG	584,5	28	SH
1332,0	31	AVG	571,9	26	AVG
1301,1	28	AVG	533,3	27	Sll
1246,1	19	SII	522,7	25	AVG
1215,2	12	AVG	503,4	25	AVG
1176,7	36	SH

Magyarázat a Táblázathoz:

Sávfrekvencia: hulláinszámban (cm^-1)

Erősség: a transzmittancia százalékában (%T)

A csúcs környezetére vonatkozó adatok: BRD jelentése széles; AVG jelentése átlag; SHP jelentése éles; ' SH jelentése vállas.

3. Elemi összetétel összegképlet: C_I7I1₄₃C1N₇0|oPS. Molekulasúly: 723. Számított: C 44,81, H 5,94, N 13,55, O 22,13, S 4,42,

Cl 4,84, P 4,28%.

Talált: N 12,87, S 5,39, Cl 4,76, P 3,83 %.

4. Optikai forgatóképesség:

(α)θ +94° (c = 0,887, víz).

5. Oldhatóság

Igen jól oldja víz, metanol és etanol. Némileg oldja acélon és más ketonok, etil-acetát és egyéb észterek, kloroform és diklór-metán. Telített szénhidrogéntípusú oldószerekben oldhatatlan.

6. Baktériumellenes íratás

A 3-(adenozin-5’-foszfát)- U-57 930 in vitro hatástalan. Alkálikus foszfatázzal vagy foszfodiészteráz I-val kezelve U-57 930 keletkezik, amely számos Gram-pozitív organizmussal szemben mint in vitro, mind in vivő igen hatékony. Úgy találtuk, hogy a 3-(adcnozin-5’-foszfát)- U-57 930 in vivő hatásos (egereken szubkután adagolással), CK_S0 értéke 0,62 (0,48-0,79) mg/kg S. Pyogenes kórokozóval szemben.

7. Olvadáspont: 203,5—205 °C (bomlás közben).

A 3-(uridin-5’-foszfát)- U-57 930 jellemzése

1. Az IR színkép adatai

Az IR színkép elnyelési sávjai (Nujol és Kbr) a követkr zők:

A 25 legerősebb csúcs

%T	Frekvencia	%T	Frekvencia
5	1069,5	23	1576,0
77	3375,7	24	889,1
'7	1643,5	25	522,6
8	1090,7	25	503,3
8	1050,2	26	648,0
10	3223,3	26	636,5
12	1215,1	26	571,8
15	1678,1	27	1475,6
17	3124,0	27	990,5
19	1246,0	27	533,2
20	1602,0	28	1301,0
22	2963,0	28	584,5
22	2929,1

Előkészítés: KBr pasztilla Max%T: 95 @405,0 %T: 4000 cm^-1-nél: 77 Sűrűség (cm^-1/pt): 0,964

2. UV elnyelési színkép /X_mnx (a)/ Vízben, a következő értékek mellett: pH 2,0, 258 nm (16,0) pH 7,0, 261 nm (16,5) pH 11,0, 261 nm (16,0)

a) Nujol

Sáv- rekvencia	Erős- ség	Típus	Sáv- frekvencia	Erős- ség	Típus
3330,4	19	BRD	1332,9	44	BRD
3224,4	21	BRD	1296,3	40	SH
2952,4	1	BRD M	1251,9	28	BRD
2924,4	0	BRDM	1215,2	19	AVG
2867,5	4	SHM	1089,9	13	AVG
2854,0	3	AVGM	1071,5	9	AVG
2733,4	49	SÍIM	1056,1	13	SH
2695,8	53	síi	991,5	39	AVG
2532,8	67	SH	973,2	39	AVG
1757,3	73	SH	957,7	48	SH
1685,9	8	AVG	931,7	49	AVG
1647,4	21	SH	890,2	34	AVG
1602,0	41*	AVG	858,4	50	AVG
1574,1	42	AVG	813,0	43	AVG
1555,7	43	BRD	798,6	47	AVG
1462,2	12	AVGM	767,7	50	AVG
1425,5	37	SH	721,4	42	AVGM
1378,3	22	AVGM	634,6	35	AVG
1367,6	37	SHM

Magyarázat a Táblázathoz:

Sávfrekvencia: hulláinszámban (cm^-1)

Erősség: a transzmittancia százalékában (%T)

A csúcs környezetére vonatkozó adatok: BRD jelen9

-917

191 085 tése széles; AVG jelentése átlagos; SHP jelentése éles; SH jelentése vállas; M jelentése: lehetséges, hogy az ásványolaj zavar.

A 25 legerősebb csúcs

%T	Frekvencia	%T	Frekvencia
0	2924,3	22	1378,2
1,	2952,3	28	1251,8
3	2854,0	34	890,1
4	2867,5	35	634,5
8	' 1685,8	37	1425,5
9	1071,5	37	1367,5
12	1462,1	39	991,5
13	1089,8	39	973,1
13	1056,0	40	1296,2
19	3330,3	41	1602,0
19	1215,1	42	1574,0
21	3224,3	42	721,3
21	J 647,3

Előkészítés: eldörzsölés ásványolajjal. Max%T: 86@3764,5 %T: 3800cm^-1-nél: 85 Sűrűség (cm^-*/pt): 0,964

b) KBr

Sáv- frekvencia	Erős- ség	Típus	Sáv- frekvencia	Erős- ség	Típus
3387,4	12	BRD	1055,1	10	SÍI
3114,4	25	SH	992,4	35	AVG
2962,0	26	AVG	973,2	36	AVG
2931,1	26	BRD	956,8	45	SH
2879,1	36	AVG	929,8	48	AVG
2863,6	38	SÍI	889,2	31	AVG
2833,7	43	SH	852,3	46	AVG
2509,6	64	BRD	813,0	40	AVG
1685,0	6	BRD	811,1	40	SH
1647,4	17	SH	798,6	43	AVG
1605,9	35	SH	782,2	48	BRD
1576,0	37	AVG	768,7	48	AVG
1556,7	39	BRD	707,9	43	AVG
1463,1	31	AVG	669,3	43	SH
1423,6	35	AVG	649,1	40	SH
1384,0	32	AVG	634,6	37	AVG
1331,0	43	AVG	585,4	38	SH
1297,2	38	SH	567,1	34	AVG
1255,8	24	AVG	523,7	35	AVG
1214,3	17	AVG	447,5	39	AVG
1090,8	10	AVG
1070,6	7	AVG

Magyarázat a Táblázathoz:

Sávfrekvencia: hullániszámban (cm^-1)

Erősség: a transzmittancia százalékában (%T)

Λ csúcs környezetére vonatkozó adatok: BRI) jelentése széles; AVG jelentése átlagos; SHP jelentése éles; SH jelentése vállas.

A 25 legerősebb csúcs

%T	Frekvencia	%T	Frekvencia
6	1685,0	32	1384,0
7	1070,5	34	567,0
10	1090,7	35	1605,8
10	1055,0	35	1423,5
12	3387,3	35	992,3
17	1647,3	35	523,6
17	1214,2	36	2879,0
24	1255,7	36	973,1.
25	3114,3	37	1576,0
26	2962,0	37	634,5
26	2931,0	38	2863,5
31	1464,0	38	1297,1
31	889,1

Előkészítés: KBr pasztilla Max%T: 101 @405,0 %T: 4000 cm^-1-nél: 76 Sűrűség (cm^-,/pt): 0,964

2. UV elnyelési színkép |Á„,_ax (a)/

Vízben, a következő értékek mellett. pH 2,0, 261 nm (11,5) pH 7,0, 262 nm (10,7) pH 11,0, 262nm (11,5)

3. Elemi összetétel összegképlet: C₂₆H4₂N₄C10₁₃PS. Molekulasúly: 716. Számított: C 43,57. II 5.86. N 7,82, 0 29,05, S 4,46,

Cl 4,89, P 4,33%.

4. Optikai forgatóképesség (a)^ +105° (c = 0,94, víz).

5. Oldhatóság

Igen jól oldja víz, metanol és etanol. Némileg oldja aceton, egyéb ketonok, etil-acetát és egyéb észterek, kloroform és diklór-metán. Telített, szénhidrogéntípusú oldószerekben oldhatatlan.

6. Baktériumellenes hatás

A 3-(uridin-5'-foszfát)- U-57 930 in vitro hatástalan. Alkálikus foszfatáz vagy foszfodiészteráz I hatására U-57 930 vegyületté alakul, amely számos Grampozitív organizmussal szemben mind in vitro, mind in vivő igen hatékony.

7. Olvadáspont: 202-203 °C (bomlás közben).

A 3-(guanozin-5'-foszfát)- U-57 930 jellemzése

1. Az IR színkép adatai

Az ÍR színkép elnyelési sávjai (Nujol és KBr) a következők:

-1019 '91 085

a) Nujol

Sáv- frekvencia	Erős- ség	Típus	Sáv- frekvencia	Erős- ség	Típus
3335,3	16	BRD	1250,0	36	SH
3227,2	19	BRD	1213,3	21	AVG
2953,3	2	AVGM	1173,8	39	AVG
2925,3	1	BRDM	1149,7	41	AVG
2868,4	6·	SHM	1087,9	14	SH
2855,9	4	AVGM	1071,5	9	AVG
2737,3	51	BRD.M	991,5	42	AVG
2521,2	73	BRD	972,2	42	AVG
1684,0	6	AVG	956,8	52	SH
1635,8	11	AVG	929,8	51	AVG
1598,2	21	AVG	890,2	36	AVG
1572,1	26	AVG	860,3	51	AVG
1534,5	34	AVG	800,5	46	AVG
1462,2	18	AVGM	783,1	42	SHP
1414,9	44	AVG	720,4	43	AVGM
1377,3	24	AVGM	707,9	45	BRD
1365,7	31	AVG	681,9	40	AVG
1312,7	44	AVG	635,6	34	AVG

Magyarázat a Táblázathoz: Sávfrekvencia: huliámszámban (cin^-1)

Erősség: a transzmittancia százalékában (% T) A csúcs környezetére vonatkozó adatok: BRD jelentése széles; AVG jelentése átlagos; SHP jelentése éles; SH jelentése vállas; M jelentése: lehetséges, hogy az ásványolaj zavar. A 25 legerősebb csúcs
%T	Frekvencia	%T	Frekvencia
1	2925,2	24	1377,2
2	2953,2	26	1572,0
4	2855,8	31	1365,6
6	2868,3	34	1534,5
6	1684,0	34	635,5
9	1071,5	36	1250,0
11	1635,7	36	890,1
14	1087,8	39	1173,7
16	3335,2	40	681,8
18	1462,1	41	1149,6
19	3227,1	42	991,5
. 21	1598,1	42	972,1

1213,2

Előkészítés: cldörzsölés ásványolajjal.

Max%T	: 97 @3 762,6
. %T: 3800 cm-1-nél: 97
Sűrűség /(cm 1/pt): 0,964
b) KBr
Sáv-	Erős-	Sáv-	Erős-
frekvencia	ség TlPus	frekvencia	ség	Típus
3380,6	9 BRD	1174,7	31	AVG
3234,0	13 BRD	1147,7	33	BRD
2963,0	22 AVG	1088,9	9	BRD

b) KBr

Sáv- frekvencia	Erős- ség	Típus	Sáv- frekvencia	Erős- ség	Típus
2929,2	21	BRD	1070,6	6	AVG
2878,1	31	AVG	991,5	33	AVG
2862,7	33	SH	972,2	34	AVG
2744,0	44	BRD	956,8	43	SH
2522,2	61	BRD	929,8	44	AVG
1683,0	4	BRD	889,2	28	AVG
1634,8	6	AVG	8(.0,3	4J	AVG
1598,2	14	AVG	800,5	36	AVG
1571,2	19	AVG	783,1	32	AVG
1534,5	26	AVG	715,6	38	SH
1482,4	38	AVG	705,0	38	SH
1461,2	36	AVG	679,9	33	AVG
1448,7	36	BRD	635,6	31	AVG
1413,9	34	AVG	584,5	34	SH
1384,0	29	AVG	571,9	32	AVG
1359,9	30	AVG	523,7	31	AVG
1312,7	37	AVG	502,5	30	AVG
1250,9	29	SH	447,5	34	AVG
1213,3	16	AVG

Magyarázat a Táblázathoz:

Sávfrekvencia: hullámszámban (cm^-1)

Erősség: a tianszmittancia százalékában (% T)

A csúcs környezetére vonatkozó adatok: BRD jelentése széles, AVG jelentése átlagos; SHP jelentése éles; SH jelentése vállas.

Λ 25 legerősebb csúcs

%T	Frekvencia	%T	Frekvencia
4	1683,0	29	1384,0
6	1634,7	29	1250,8
6	1070,5	30	1359,8
9	3380,5	30	502,5
9	1088,8	31	2878,0
13	3234,0	31	1174,6
14	1598,1	31	635,5
16	1213,2	31	523,6
19	1571,1	32	783,0
21	2929,1	32	571,8
22	2963,0	33	2862,6
26 28	1534,5 889,1	33	1147,6

Előkészítés: KBr pasztilla Max%T: 97 @405,0 %T 4000 cm^-Énéi: 77 Sűrűség (cm^-1/pt): 0,964

2. UV elnyelési színkép /A,_nax(a)/

Vízben, a következő értékek mellett: pH 2,0, 256 nm (13,4); 280 nm (8,4) sb pH 7,0, 254 nm (14,5); 273 nm (9,7) sh pH 11,0, 259 nm (12,6); 266 nm (12,4) sh

Ί F.lpmi n^?7Pfptpl ' Összegképlet: C^IUjClN.jOnPS. Molekulasúly: 739.

-1119 J C85 . 21

Számított: C 43,84, H 5,81, N 13,26, 0 23,27, S 4,33, Cl 4,73,P 4,19%

Talált: N 13,32, S 4,86, Cl 4,49, P 3,25 %

4. Optikai forgatóképesség:

(«)□ +97° (c = 0,855, víz).

5. Oldhatóság

Igen jól oldja víz, metanol és etanol. Némileg oldható acejonban, egyéb ketonokban, etil-acetátban, és más észterekben, kloroformban és diklór-metánban. Telített szénhidrogén-tipusií oldószerekben oldhatatlan.

6. Baktériumellenes hatás

A 3-(guanozin-5'-foszfát)- U-57 930 in vitro hatástalan. Alkálikus foszfatáz vagy foszfodiészteráz I hatására U-57 930 vegyületté alakul, mely számos Grampozitív organizmussal szemben mind in vitro, mind in vivő hatékony.

7. Olvadáspont: 219—220 °C (bomlás közben).

Mivel a találmány szerinti vegyületek különböző Gram-pozltív és Gram-negatív mikrobával szemben hatásosak, különböző környezetekben felhasználhatók e mikrobák gátlására; így például fertőtlenítők minősegében alkalmazhatók S. aureus gátlására elmosogatott főzőedényeken. Ugyancsak fertőtlenítőkként használhatók különböző S. aureus mikroorganizmusokkal fertőzött fogászati és orvosi eszközökön. A találmány szerinti vegyületek alkalmazhatók továbbá fehérneműk bakteriosztatikus öblítésére, papírok és különböző szövedékek impregnálására; azonkívül alkalmazhatók érzékeny mikroorganizmusok szaporodásának nieggátlására lemezen végzett meghatározások során, és más mikrobiológiai közegekben.

A találmány szerinti vegyületek használhatók a Mycoplasma genus (nem) tagjai által előidézett betegségek kezelésére is. E kórokozók közül a legismerte'bbck a PPLO (a tüdő-mellhártyagyulladást előidéző, és ehhez hasonló) mikroorganizmusok, így például M. honűnis, M. salivarium, M. mycoides, M. Hypopneutnodia, M. hyorhinis, M. gallisepticum, M. arthriditis és egyéb baktériumfajok, melyek fertőző hatással vannak az emberre és állatokra, például a háziállatokra, ilyen a birka, kutya, szarvasmarha, sertés és baromfi (így például csirke, pulyka, kacsa és liba), továbbá laboratóriumi állatok (például patkányok és egerek).

Az U-57 930-3-(5'-ribonukleotid)-ok alkalmasak a vese fertőzéseinek és egyéb infekcióknak a kezelésére, ha Gram-ncgatív vagy Gram-pozitív baktériumok L formái vannak jelen, példáid a P. mirabilis L formái.

Mivel a találmány szerinti vegyületek amfotér jellegű anyagok, sókat képezhetnek mind bázisokkal, mind savakkal. E sók a szokásos eljárásokkal készíthetők. Az ehhez felhasználható szerves savakra példaként említhetjük a sósavat, kénsavat, foszforsavat és ezekhez hasonló savakat. A szervetlen bázisokra példaként felhozhatjuk mindazon bázisos, szervetlen hidroxidokat és sókat, amelyekkel a nátrium-, kálium-, kalcium- és lítiumsók, valamint ezekhez hasonló sók képezhetők. A találmány szerinti vegyületek sói ugyanazon célokra használhatók, mint a kiinduló vegyületek.

A találmány szerinti vegyületek megfelelő kompozí12 ciók kialakítására alkalmas baktériumellenes hatóanyagok. Ezeket a kompozíciókat előnyösen létrehozhatjuk embereknek és állatoknak való adagolás céljából adagolási egység formájában, amilyenek például a tabletták, kapszulák, pilulák, porok, szemcsék, steril parenterális oldatok vagy szuszpenziók, orálisan (szájon át) adagolható oldatok vagy szuszpenziók, továbbá olyan olaj/víz emulziók, melyek a hatóanyag szabad bázis formájának vagy gyógyászatilag elfogadható sóinak megfelelő menynyiségét tartalmazzák.

Orális adagolás céljára az adagolási egységformát elkészülhetjük akár sz.iliírtl. akár folyudékformában. Szilárd kompozíciók, például tabletták előállítása céljából a fő hatóanyagot a szokásos tabletta-alkatrészekkel kevetjük, amilyenek a talkum, magnézium-sztearát, dikalciumfoszfat, inagnéziumalumínium-szilikát, kalcium-szulfát, keményítő, laktóz, akáciamézga, metil-cellulóz és funkcionálisan hasonló anyagok, azaz a gyógyszerészeiben használt hígító- és vivőanyagok. A tabletták lehetnek rétegezettek, vagy másként kialakítottak abból a célból, hogy az adagolási forma előnyösen hosszú időtartamú vagy késleltetett hatást biztosítson, vagy lehetővé tegye a tablettába foglalt hatóanyag előre meghatározott időpontban bekövetkező hatását. így például a tabletta magában foglalhat egy belső és egy külső alkatrészt, melyek közül a külső a belsőt mintegy beburkolja. E két alkatrész elválasztható egymástól egy enteroszolvens (bélben oldódó) réteggel, melynek célja az, hogy meggátolja a tablettának a gyomorban való szétesését, és így lehetővé teszi, hogy a belül elhelyezkedő alkatrész érintetlenül jusson a duodcnumba, vagy késleltetett módon szabaduljon föl. Ilyen enteroszolvens réteg, vagy tevonat céljára számos anyag felhasználható; példaként említhetünk több polimér savat vagy polimer savak keverékét olyan anyagokkal, mint a sellak, cetil-alkohol, cűlulóz-acetát-ftalát, sztirol-maleinsav kopolimer, és erekhez hasonló anyagok. Egy más eljárás szerint az e nlített két komponensű rendszert felhasználhatjuk olyan tabletták elkészítésére, melyek két vagy több, egymással össze nem férhető (inkompatibilis) hatóanyagot tartalmaznak. A pilulák ugyanúgy készíthetők, mint a tabletták; mindössze abban különböznek, hogy alakjuk más, és szacharózt vagy más édesítőszert, továbbá aromaanyagot tartalmaznak. A kapszulákat legegyszerűbb kiviteli formáikban a tablettákhoz hasonlóan úgy készíthetjük, hogy a hatóanyagot közömbös, gyógyszerészeti célra alkalmas hígítószerrel keverjük, és az így kapott keveréket megfelelő méretű keményzselatin-kapszulába töltjük. Egy másik kiviteli forma szerint a kapszulákat úgy állítjuk elő, hogy a találmány szerinti hatóanyagot tartalmazó polimer savval burkolt gyöngyökkel töltjük meg a keményzselatin-kapszulákat. Lágyzselatin-kapszulákat úgy készítünk, hogy a hatóanyagnak gyógyászatilag elfogadható növényi olajjal, vagy más, közömbös olajjal alkotott pépes keverékét gépi úton kapszulázzuk.

Orális (szájon át) adagolás céljára készíthetünk cseppfolyós adagolási egységformákat, így például szirupokat, eliéíreket és szuszpenziókat. Egy találmány szerinti hatóanyagot feloldhatunk vizes vivőanyagban cukorral, aromás ízesítő anyagokkal és tartósító anyagokkal együtt, szirup kialakítása céljából. Elixírt úgy készítünk, hogy vivőanyagként vizes etanolt használunk, alkalmas ízesítőkkel, például nádcukorral, és aromás izesítő-1223

191 085 szerrel együtt. Szuszpenziókat készíthetünk a találmány szerinti hatóanyagok oldhatatlan származékaiból szirup' bán használt vivőanyag és szuszpendálószer segítségével. Alkalmas szuszpendálószer például az akáciamézga, tragakanta, metil-cellulóz, és ezekhez hasonló anyagok. Helyi (lokális, topikus) felhasználásra alkalmas kenő csők úgy állíthatók elő, hogy a hatóanyagot alkalmas kenőcs-alapanyagban, például vazelinban, lanolinban, polietilén-glikolokban, ezek keverékeiben, vagy más, . ezekhez hasonló, anyagokban diszpergáljuk. Előnyösen úgy járunk el, hogy a hatóanyagot kolloid malomban , finoman megőröljük, cseppfolyós vazelin mint őrlőszer segítségével, és ezt követően diszpergáljuk a kenőcsalapanyagban. Helyi használatra alkalmas krémet és lemosóoldatokat úgy készítünk, hogy a hatóanyagot először olajos fázisban diszpergáljuk, majd ezt az olajos fázist emulgeáljuk vkben.

Parenterális adagolás céljára cseppfolyós adagolási egységformákat készítünk egy találmány szerinti Hatóanyag és steril vivőanyag segítségével. E célra előnyös vivőanyag a víz. A hatóanyag, függően az adagolási formáktól és koncentrációtól, szuszpendátva vagy oldva lehet a vivőanyagban. Oldatok készítésének céljára egy találmány szerinti hatóanyag vízben oldható alakját oldhatjuk injekciós célra alkalmas vízben, és szűrés útján sterilizálva tölthetjük alkalmas fiolába vagy ampullába, s utána lezárjuk. Előnyös a vivőanyagban adjuvánsok feloldása, erre a célra alkalmazhatunk egy helyi érzéstelenítőt, tartósítószert és pufferanyagokat. A stabilitás növelése céljából a kompozíciót liofilizálhatjuk úgy, hogy az ampullába való betöltés után lefagyasztjuk, és fagyasztott állapotban távolítjuk el a vizet vákuumban. A száraz, liofilizált port ezután az ampullába zárjuk, és mellékelünk egy injekciós célra alkalmas vizet tartalmazó ampullát, amelynek segítségével felhasználás előtt a liofilizált port feloldhatjuk. Parenterális célra szuszpenziókat lényegében ugyanilyen módon készíthetünk azon kivétellel, hogy a hatóanyagot a vivőanyagban szuszpendáljuk oldás helyett. Ebben az esetben a sterilizálást nem végezhetjük el szűrés útján. A hatóanyag sterilizálható úgy, hogy etilén-oxid hatása alá helyezzük a steril vivőanyagban való szuszpendálás előtt. Tartós hatás elérése céljából intramuszkuláris szuszpenziót készítünk a hatóanyag valamely oldhatatlan származékából, például trimetil-szilil-éteréből vagy pamoesavas sójából. Előnyös valamilyen felületaktív vagy nedvesítőszer belefoglalása a kompozícióba, a hatóanyag egyenletes eloszlásának megkönnyítése végett.

Az adagolási egységforma fogalma, amint ezt a leírásban és igénypontokban használjuk, fizikailag elkülönített egységeket jelent, amelyek egységenként adagolhatok embereknek vagy állatoknak. Minden egyes egység a hatóanyag előre meghatározott mennyiségét tartalmazza, melyet úgy állapítunk meg, hogy létrehozza a kívánt terápiás hatást. A hatóanyag e mennyiségét a szükséges, gyógyszerészeti célra alkalmas hígítószerrel, és/vagy vivőanyaggal keverjük. Az új adagolási egységformákat a következő tényezők szerint állapítottuk meg: (a) a hatóanyag egyéni sajátságaitól, és az elérni kívánt terápiás hatástól függően, és (b) azon korlátozásoktól függően, melyeket mindig tekintetbe kell vennünk, ha egy hatóanyagot embereken vagy állatokon való terápiás felhasználás céljából alakítunk kompozíciókká. Ezt a leírásban részletesen kifejtjük, és ezek is a találmányi bejelentés jellemző sajátságai. A találmány szerinti célszerű adagolási egysegformákra példaként említhetjük a tablettákat, kapszulákat, pilulákat, végbélkúpokat, pasztillákat, granulumokat, a teáskanállal és evőkanállal adagolható formákat, ampullákat, fiolákat és az előbbiek bármelyikének elkülöníthető többszörösét, továbbá e leírásban említett egyéb formákat.

A hatóanyagot az adagolási egységformában alkalmas gyógyszerészeti vivőanyaggal keverjük, a kényelmes és hatékony adagolás céljából. Az előnyös kiviteli forma az, ha az adagolási egységek szisztémás kezelés céljára 10, 25, 50, 100, 250, illetve 500 mg mennyiségű hatóanyagot tartalmaznak; parenterális kezelés céljára az előnyös koncentráció 5—65 tömcg/térfogal-száz.alék. Az olyan kompozíciók adagolását, melyek egy találmány szerinti hatóanyagon kívül még egy vagy több, más hatóanyagot is tartalmaznak, minden egyes jelenlévő hatóanyag megfelelő dózisára való tekintettel kell megállapítani.

A találmány szerinti eljárást részletesen szemléltetik a következő példák, amelyek azonban nem korlátozó jellegűek.

A példákban hatóanyagként U-57 930E 3-(5'-riboi!ukleotid)-származékát használjuk, de nyilvánvaló, hogy ezek csak példák, és ugyanígy alkalmazhatók a találmány szerinti más hatóanyagok is.

1. példa a kompozíciók előállítására: kapszulák

Az alábbi anyagok megadott mennyiségeiből 1000 darab kétrészes kcményzselatin-kapszulát állítunk elő orális alkalmazás céljára. Minden egyes kapszula 250 mg U 57 930E 3-(5'-ribonukieotid)-ot tartalmaz.

U-57 930E- 3-(5’-ribonukleotid)	250 g
Búzakeményítő	100 g
Talkum	75 g
Magnézium-sztearát	25 g
Ezeket az anyagokat alaposan	összekeverjük,

szokott módon kapszulázzuk.

E kapszulák alkalmasak felnőtt egyének fertőzésének szisztémás kezelésére úgy, hogy minden 6 órában 1 kapszulát adagolunk.

A fenti eljárás alkalmazásával ugyanígy készíthetünk olyan kapszulákat, amelyek az U-57 930E S-fS'-ribonukleotid)-ját tartalmazzák úgy, hogy a fenti formulában a 250 g hatóanyag helyére 10, 25, 50, 100, illetve 503 g U-57 930E 3-(5'-ribonukleotid)-ot helyettesítünk.

2. példa a kompozíciók előállítására: kapszulák

Az alábbi anyagok megadott mennyiségeiből 1000 darab kétrészes kcményzselatin-kapszulát állítunk elő orális adagolás céljára. Minden egyes kapszula 200 mg U-57 930E 3-(5’-ribonukleotid)-ot és 250 mg tetracik'in-hidrokloridot tartalmaz.

U-57 930E- 3-(5'-ribonuklcotid)	200 g
Tetraciklin-hidroklorid	250 g
Talkum	75 g
Magnézium-sztearát	25 g

-1325

191 085

Az alkatrészeket alaposan összekeverjük, és utána a szokott módon kapszulázzuk.

E kapszulák alkalmasak felnőtt egyének fertőzésének szisztémás kezelésére úgy, hogy minden 6 órában 1 kapszulát adagolunk.

- A fenti eljárás alkalmazásával ugyanígy készíthetünk olyan kapszulákat, melyek az U-57 930E- 3-(5'-ribonuklcotid) mellett az alábbi antibiotikumok bármelyikét tartalmazza-tetraciklin-hidroklorid helyett. Ez esetben az alábbi antibiotikumok 250 g-ját helyettesítjük a fenti formulába. Ilyen antibiotikumoknak a klóramfenikol, oxitetraciklin, klórtetraciklin, fumagillin, erilrotnicin, sztreptomicin,’ dilüdro-novobiocin és novobiocin. Ha egy penicillint, így például kálium-penicillin G-t használunk a tctraciklin helyett, akkor ebből kapszulánként ¹⁵ 25 0 000 egységet alkalmazunk.

Ezek a kombinációk alkalmasak felnőtt egyének kevert fertőzéseinek szisztémás kezelésére úgy, hogy minden 6 órában 1 kapszulát adagolunk. 20

3. példa a kompozíciók előállítására: tabletták

Az alábbi anyagok megadott mennyiségeiből 1000 tablettát állítunk elő orális alkalmazás céljára. Minden 25 egyes tabletta 500mg U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid)-ot tartalmaz.

U-57 930E- 3-(5’-ribonukleotid)	500 g
Laktóz	125 g
Búzakeményítő	65 g
Magnézium-sztearát	25 g
Cseppfolyós könnyű vazelin	3 g
Az anyagokat alaposan összekeverjük	és finomra

őröljük, majd 16. számú szitán átvezetjük. A kapott 35 granulumokat olyan tablettákká sajtoljuk, melyek mindegyike 500 mg U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid)-ot tartalmaz.

E tabletták alkalmasak felnőtt egyének fertőzéseinek, többek között maláriafertőzéseinek szisztémás kezeiésére orális adagolás útján úgy, hogy naponta háromszor 1 tablettát adagolunk.

A fenti eljárás szerint, azon kivétellel, hogy az 500 g hatóanyagot 250 g-ra csökkentjük, 250 mg U-57 930E3-(5'-ribonukleotid)-ot tartalmazó tablettákat állítha- ^5 tünk elő.

4. példa a kompozíciók előállítására: tabletták

Az alábbi anyagok megadott mennyiségeiből 1000 darab tablettát készítünk, orális alkalmazás céljára. Minden egyes tabletta 250 mg U-57 930E 3-(5'-ribonukleotid)-ot, továbbá összesen 250 mg (egyenként 83,3 mg) szulfadiazint, szulfamerazint és szulfametazint 55 tartalmaz.

U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid)	250 g
Szulfadiazin	83,3 g
Szulfamerazin	83,3 g
Szulfametazin	83,3 g
Laktóz	50 g
BÚ2akeményítő	50 g
Kalcium-sztearát	25 g
Könnyű folyós vazelin	5 g

Az alkatrészeket alaposan összekeverjük, és egy 1.66 számú (finomságú) szitán visszük át. Az így kapott granulumokat olyan tablettákká sajtoljuk, melyek mindegyike 250 mg U-57 930E- S-ÍS'-ribonukleotidj-ot, és 6 összesen 250 mg (egyenként 83,3 mg) szulfadiazint, szulfamerazint, és szulfametazint tartalmaz.·

E tabletták felhasználhatók fertőzések szisztémás kezelésére orális adagolással úgy, hogy először 4 tablettát, majd utána minden 6 órában 1 tablettát adagolunk.

Vizeletúti fertőzések kezelése céljából a fentebb említett három szulfoiiamidot előnyösen 250 g szulfametil-tiadiazollal vagy 250 g szulfacetamiddal helyettesítjük.

5. példa kompozíciók előállítására: orális adagolásra alkalmas szirup

Orális alkalmazás céljára 100 ml vizes szuszpenziót állítunk elő, melynek minden 5 miében 250 mg U-57 930E- 3-(5'-ribomiklcotid), lovábbá összesen 500 mg szulfonainid van jelen, az alábbi anyagok megadott mennyiségeiből:

U-57 930E- 3-(5’-ribonukleotid) 50 g

Szulfadiazin 33,3 g

Szulfamerazin 33,3 g

Szulfametazin 33,3 g

Citromsav 2 g

Benzoesav 1 g

Szacharóz 700 g

Tragakanta 5 g

Citromolaj 2 ml

Ionmentesbe11 víz, amennyi szükséges 1000 ml-hcz.

A citromsavat, benzoesavat, szacharózt, tragakantát és citromolajat annyi vízben diszpergáljuk, hogy 850 ml keveréket kapjunk. Az U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid)-ot, és a finom eloszlású szulfonamidokat a sziruppal rgyütt addig keverjük, amíg eloszlásuk egyenletessé válik. Ezután a szuszpenziót vízzel 1000 ml-re egészítjük ki.

Az így előállított kompozíció felhasználható felnőtt egyének tüdőgyulladásának szisztémás kezelésére úgy, hogy naponta 4 alkalommal 1 evőkanállal (10 ml) adagoljuk.

6. példa kompozíciók előállítására: parenterális adagolásra alkalmas oldat

Steril, vizes oldatot állítunk elő intramuszkuláris adagolás céljára, melynek 1 ml-e 200 mg U-57 930E3-(5'-ribonukleotid)-ot tartalmaz. Az oldatot az alábbi anyagok megadott mennyiségeiből készítjük:

U-57 930E- 3-(5'-ribonuklcotid) 200 g

Lidocain hidroklorid 4 g

Metil-paraben 2,5 g

Propil-paraben 0.17 g

Injekciós célra alkalmas v(z, amennyi szükséges 1000 ml-hcz.

Az alkatrészeket vízben oldjuk, és az oldatot szűréssel sterilizáljuk. A steril oldatot ampullákba töltjük, és az ampullákat lezárjuk.

-1427

191 085

7. példa a kompozíciók előállítására: parenterális adagolásra alkalmas kompozíció

At. alábbi anyagok megadott mennyiségeiből intramuszkuláris alkalmazás céljára steril, vizes kompozíciót állítunk elő, melynek 1 ml-e 200 mg U-57 930E- 3-(5'ribonukleotid)-ot, továbbá 400 mg spektinomicin-szulfátot tartalmaz.

U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid) 200 g

Spektinomicin-szulfát 400 g

Laktóz 50 g

Injekciós célra alkulnqis v(z, amennyi szükséges lOOOmi-hez.

Az U-57 930E- S-ÍS'-ribonukleotidj-ot, spektinomicinszulfátot és laktózt vízben diszpergáljuk, majd sterilizáljuk. A steril kompozíciót steril ampullákba töltjük aszeptikus módon úgy, hogy minden egyes ampulla 2 ml-1 tartalmazzon.

8. példa a kompozíciók előállítására: helyi (lokális, topikus) kezelésére alkalmas kenőcs

1000 g súlyú, 0,25% hatóanyagot tartalmazó kenőcsöt állítunk elő az alábbi anyagok megadott mennyiségeiből:

U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid) 2,5 g

Cink-oxid 50 g

Kalatnin 50 g

Nehéz folyós vazelin 250 g

Gyapjúzsír 200 g

Fehér vazelin, amennyi szükséges 1000 g-hoz.

A fehér vazelint és gyapjúzsírt megolvasztjuk, és 100 g folyós vazelint adunk hozzá.. Ezután hozzáadjuk az U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid)-ot, cinkoxidot és kalamint, majd a megmaradt folyós vazelint, és a keveréket addig gyúrjuk, amíg a poralakú anyagok finoman elosztanak, és egyenletesen diszpergálódnak. A porkeveréket belekeverjük a fehér vazelin keverékébe, és a keverést addig folytatjuk, amíg a kenőcs megszilárdul.

E kenőcsöt lokálisan alkalmazhatjuk emlősállatok bőrén, fertőzések kezelésére.

A fenti kompozíció a cink-oxid és kalamin elhagyásával is előállítható.

A fenti eljárás szerint állíthatunk elő olyan kenőcsöket, amelyek az U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid)-ot 0,5, 1, 2, illetve 5% mennyiségben tartalmazzák^-, ez esetben a fenti fornrulázásban szereplő 2,5 g hatóanyagot rendre 5, 10, 20, illetve 50 g U-57 930E- 3-(5'r.ibonukleotid)-dal Irelye t tcsítjük.

9. példa kompozíció előállítására: krém

Az alábbi anyagok megadott mennyiségeiből 1000 g hüvelykrémet állítunk elő.

U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid)	50 g
Tegacid Regular1	150 g
Spermacet	100 g
Propilénglikol	50 g
Poliszorbát 80	5 g
Metil-paraben	1 g
lonmen tesített víz, amennyi szükséges	1000 g-iioz.

Megjegyzés: ^JA Tegacid Regular ön-emulgeáló gliceril-monosztearát (Goldschmidt Chemical Corpoartion, New York, Ν. Y.).

A Tegacid-ot és Spermacetet összeolvasztjuk 70— 80 °C-on. A metil-parabent feloldjuk 500 Jnl vízben és propilén glikolt, Poliszorbát 80-at, és U-57 930E- 3-(5 ribonukleotid)-ot hozzáadjuk, tartva a 75—80 °C hőmérsékletet. A metil-parabent tartalmazó keveréket lassan, á’landó keverés közben hozzáadjuk a Tegacid-ot, és Spermacetet tartalmazó olvadékhoz, legalább 30 perc alatt, miközben a hőmérsékletet 40 45 °C-ra hagyjuk csökkenni. A krém pH értékét 3,5-re állítjuk 2,5 g citromsav, és 0,2 g kétszer bázisos nátriumfoszfát 50 g vízzel készült oldatával. Végül a keverékhez elegendő v’zet adunk 1000 g vegtömeg elérésére, és a koinpozíc ót a homogenitás fenntartása céljából addig keverjük, a níg kihűl és megszilárdul.

E kompozíció alkalmas nők hüvelyfertőzéseinek a kezelésére.

10. példa a kompozíciók előállítására: szemkenőcs

Az alábbi anyagok megadott mennyiségeiből 1000 g

.cinkcnőcsöt állítunk elő, mely 0,5% (5'-iibonukleotid)-ot tartalmaz.	U-57 930E-
U-57 93OE- 3-(5'-ribonukleotid)	5 g
Bacitracin	12,2 g
Polimixin B szulfát (10 000 egység/ing)	1 g
Könnyű folyós vazelin	250 g
Gyapjúzsír	200 g
Fehér vazelin, amennyi szükséges	1000 g-hoz.
A szilárd hatóanyagokat légmikronizáló segítségével

finoman eloszlatjuk, és hozzáadjuk a könnyű, folyós vazelinhoz. A keveréket kolloid malmon át vezetjük, a mikronizált részecskék egyenletes eloszlatása végett. A gyapjúzsírt és a fehér vazelint összeolvasztjuk, és a hőmérsékletet 45—50 °C-ra állítjuk. A folyós vazelint hozzáadjuk, és a krémet addig keverjük, amíg megszilárdul. A kenőcsöt célszerűen 1 dram-ot (azaz 3,888 g-ot) tartalmazó szemkenőcs-tubusokba csomagoljuk.

A kenőcs alkalmas emberek és állatok szemfertőzéseinek kezelésére.

A fenti kompozíció egy előnyös formája tartalmazhat 5 g (0,5%) metil-prednizolont gyulladás kezelésére; egy másik kiviteli formában a bacitracin és a polimixin B szulfát mellőzhető.

11. példa a kompozíciók előállítására: szem- és fülcseppek

Az alábbi anyagok megadott mennyiségeiből 1000 ml steril, vizes oldatot állítunk elő szemészeti és fülészeti célra. Az oldat 1 nd-e 10 mg U-57 93OE- 3-(5'-ribonukleotid)-ot és 5 mg inctil-prcdnizoloiit tartalmaz.

U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid)	10 g
Nátrium-inetil-prednizolon-foszfát	5 g
Nátrium-citrát	4,5 g
Nátrium-hidrogén-szulfit	1. g
Polietilén-glikol 4000	120 g
Mirisztil-T-pikolinium-klorid	0,2 g
Polivinil-pirrolidon	1 g
lonincntcsílctt víz, amennyi szükséges	1000 mi hez.

-1529

085

Az alkatrészeket vében oldjuk, és az így kapott olda tót szűréssel sterilizáljuk. A szűrletet aszeptikus modor steril cseppentő edényben helyezzük el.

Az így előállított kompozíció felhasználható a szem, és a fül gyulladásainak és fertőzéseinek helyi (lokális) kezelésére, továbbá az emberi szervezet más, érzékeny szöveteinek helyi kezelésére.

12. példa a kompozíció előállítására: pasztillák

000 pasztillát állítunk elő az alábbi anyagok megadott mennyiségeiből:

U-57 93 0E- 3-(5'-ribonukleotid) 100 g

Neomicin-szulfát 50 g

Polimixin B szulfát (10 000 egység/mg) 1 g p-Ainino-bcnzocsav etilésztcr 50 g

Kalcium-sztcarát 150g

Porított szacharóz, amennyi szükséges 5000 g-hoz.

A porított alkatrészeket alaposan összekeverjük, majd a tabletta készítés szokásos módszereivel 0,5 g súlyú pasztilákká préseljük.

Felhasználás során a pasztillát a szájban kell tartani, és lassan feloldódni hagyni, a száj és torok fertőzéseinek kezelése céljából.

13. példa a kompozíciók előállítására: végbélkúp

Az alábbi anyagok megadott mennyiségeiből 1000 végbélkúpot készítünk, melyek mindegyikének súlya 2,5 g; egy kúp 100 mg U-57 930E 3-(5'-ribonukleotid)-ot tartalmaz.

U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid) 100 g

Polimixin B szulfát (10 000 egység/mg) 1,25 g Metil-prednizolon 1 g p-Amino-benzoesav etilészter 75 g

Cinkoxid 62,5 g

Propilén-glikol 162,5 g

Polietilén-glikol 4000, amennyi szükséges 2500 g-hoz.

Az U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid)-ot, polimixin B szulfátot, metil-prednizolont, p-amino-benzoesav etilésztert, és cink-oxidot hozzáadjuk a propilén-glikolhoz, és a keveréket addig őröljük, amíg a porok finoman elosztanak, és egyenletesen diszpergálódnak. A polietilénglikol 4000-t megolvasztjuk, és ehhez lassan, keverés közben adjuk a propilén-glikolos diszperziót. A szuszpenziót 40 °C hőmérsékleten nem-hűtött formákba öntjük.

A kompozíciót kihűlni es megszilárdulni hagyjuk, majd eltávolítjuk az öntőformából, és minden egyes végbélkúpot fóliával burkolunk.

A kúpokat gyulladás és fertőzés helyi kezelése céljából a végbélbe vezetjük.

A fenti kompozíció a szteroid mellőzésével is elkészíthető.

14. példa a kompozíciók előállítására: masztitis (emlőgyulladás) kezelésére alkalmas kenőcs

Az alábbi anyagok megadott mennyiségeiből 1000 g kenőcsöt állítunk elő,mely alkalmas fejőstehén masztitisének kezelésére.

U-57 930E- 3-(5’-ribonukleotid) Metil-prednizolon-acetát Könnyű folyós vazelin Vízmentes klór-butanol

Poliszorbát 80

2%-os alumínium-monosztearát Mogyoróolaj-gélv

Fehér vazelin, amennyi szükséges g

0,5 g 300 g g 5 g

400 g 1000 g-hoz.

Az U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid)-ot és a metilprcdnizolon-acctátot addig őröljük a könnyű, folyós vazelinnel, amig finom eloszlást, és egyenletes diszperziót kapunk. A klór-butanolt, poliszorbát 80-at, mogyoróolaj-gélt és fehér vazelint 50 °C-ra melegítjük, hogy meg15 olvadjon, és belekeverjük a folyós vazelinnel alkotott diszperziót. Folyamatos keverés közben a diszperziót lehűlni (és megszilárdulni) hagyjuk szobahőmérsékleten, majd 10 g adagot tartalmazó, egyszeri felhasználásra szánt masztitis-fecskendőkbe töltjük.

2C

75. példa a kompozíciók előállítására: állattakarmány

Az alábbi anyagok megadott mennyiségeiből 1000 g takarmánykeveréket állítunk elő.

U-57 930E- 3-(5'ribonukleotid)	10g
Szójababliszt	400 g
Halliszt	400 g
Búzacsíraolaj	50 g
Cirokinelasz	140 g
Az alkatrészeket összekeverjük egymással, és szemesé

sítjük. A kompozíció laboratóriumi állatoknak, például patkányoknak, egereknek, tengerimalacoknak és hörcsö35 göknek laboratóriumi tápként adható, megelőzés céljára, hajón való szállítás előtt.

Más áltatok esetében, amilyen például a baromfi, mint a csirke, kacsa, pulyka és liba, a kompozíció hozzáadható az áltatok mindennapi táplálékához olyan mennyiség40 ben, amely szolgáltatja az U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid) kívánt adagját.

76. példa a kompozíciók előállítására: kapszulák

Az alábbi anyagok megadott mennyiségeiből orális alkalmazás céljára 1000 darab kétrészes keményzselatinkapszulát állítunk elő, melyek mindegyike 200 mg U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid)-ot és 200 mg hidroxiklorochin-szulfátot tartalmaz.

U-57 93OE- 3-(5'-ribonukleotid)	200 g
HRIroxi-klorocliin-szulfát	200 g
Talkum	75 g
Magnézium-sztearát	25 g
Az alkatrészeket alaposan összekeverjük, majd a

szokásos módon kapszulázzuk.

E kapszulák alkalmasak felnőtt egyének orális kezelésére a P vivax ismétlődő támadásával szemben úgy, θθ hogy hetenként 1 kapszulát adagolunk.

7. példa a kompozíciók előállítására: tabletták

Az alábbi anyagok megadott mennyiségeiből 1000 65 tablettát állítunk elő, melyek mindegyike 125 mg

-1631

191 085

U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid)-ot és 325 mg kin.nszulfátot tartalmaz.

U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid) 125 g

Kinin-szulfát 325 g

Laktóz 50 g

Búzakeményítő 50 g

Kalcium-sztcarát 25 g

Könnyű folyós vazelin 5 g

Az alkatrészeket alaposan összekeverjük, az így képződött darabokat széttörjük és aprítjuk úgy, hogy egy 16. számú (finomságú) szitán átnyomjuk. A keletkező granulumokat tablettákká préseljük, melyek mindegyike 125 mg U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid)-ot és 325 mg kinin-szulfátot tartalmaz. E tabletták alkalmasak a malária orális kezelésére úgy, hogy 7 napon át 8 óránként 2 tablettát, majd utána 7 napon át naponta 3-szor 1 tablettát adagolunk.

18. példa a kompozíciók előállítására: orális adagolásra alkalmas szirup

Az alábbi anyagok megadott mennyiségeiből 1000 ml, orális használatra alkalmas, vizes szuszpenziót állítunk elő, melynek minden 10 ml-ében 25 nig pyrimethamin, 250 mg U-57 930E- 3-(5’-ribonukleotid) és 500 mg szulfadiazin van jelen.

U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid) 25 g

Pyrimethamin 2,5 g

Szulfadiazin 50 g

Citromsav 2 g

Benzoesav 1 g

Szacharóz 700 g

- Tragakanta , 5 g

Citromolaj 2 ml lonmentesített víz, amennyi szükséges 1000 ml-hez.

A citromsavat, benzoesavat, szacharózt, tragakantát és citromolajat annyi vízben diszpergáljuk, hogy 850 ml térfogatot kapjunk. Az U-57 93OE- S-fS'-ribonukleotid)-ot, pyrimethamint és szulfadiazint a szirupba adva addig keverjük, amíg egyenletes eloszlást kapunk. Ezután a térfogatot 1000 ml-re egészítjük ki. E kompozíció alkalmas felnőtt egyének maláriájának megelőző kezelésére úgy, hogy hetenként 1 evőkanállal (10 ml) adagolunk.

19. példa a kompozíciók előállítására: parenterális kompozíció

Az alábbi anyagok megadott mennyiségeiből intramuszkuláris adagolás céljára steril, vizes kompozíciót állítunk elő, amelynek 1 ml-ében 200 mg U-57 930E3-(5'-riboiuikleotid) van jelen.

U-57 930E- 3-(5'-ribonukleotid) 200 g

Laktóz 50 g

Injekciós célra alkalmas víz, amennyi szükséges lOOOml-hcz.

Az U-57 930E- S^S'-ribonuklcotidj-ot és a laktózt vízben diszpergáljuk és sterilizáljuk. A steril kompozíciót aszeptikus módon steril ampullákba töltjük úgy, hogy minden ampulla 2 ml-t tartalmazzon.

A őlasmodium berghei ellen in vivő mutatott hatások

Hatóanyag	MED1 (mg/kg)	CDjo 2(ing/kg)
Sub Q3	01	Sub Q	OI
U-57 930E	0,16	1,6	16(12-22)	>50
U-21 251F	<20	-	53(46-61)	-
U-24 729 A	<1,25	-	4,7(3,2-6,9)	—
U-82.84(klorochin)	<5,10	12,5	11,5(8,8-15)	14
Klorochin-(PO4)2	<5	—	<20	—

Magyarázat a Táblázathoz:

*MED: Az a dózis, amelynek hatására az átlagos túlélési idő (ST₅₀) szignifikánsan mcguövekedett (p = 0,05) a kezeletlen kontrollok ST₅₀ értékével szemben.

²CD₅₀: Közepes védő dózis, mg/kg-ban, 95%-os megbízhatósági határokkal,

3: Az adagolás módja.

U-57 930E: a 3-(adenoziu-5^,-foszfát) U-57 930 jelű vegyület hidroklorid-só formájában.

U-21 251F: klindamicin-hidroklorid-hidrát.

U-24 729A: l'-dimetil-4^,-depropil-4^,-(R,S)-n-pentilklindamicin-hidroklorid.

A makáriaellenes (P. berghei-vel szemben mutatott) hatás vizsgálata

Vizsgáló módszer

18-20 g testsúlyú hím CF-1 egereket 10-es csoportokban ketrecekbe helyeztünk, és intraperitoneálisan fertőztük olyan egerek teljes vérével, melyeket a vérvétel előtt 3 nappal P. berghei-vel fertőztünk. Oltásra a heparinizált, fiziológiás sóoldattal 1:10 arányban hígított vér 0,2 ml mennyisége szolgált. Ez a térfogat megközelítőleg 10⁶ parazitát tartalmazott.

A fertőzés után 4 órával az egerek valamennyi 10-es csoportját vagy szubkután úton 0,2 ml, vagy orálisan (szondán át) 0,5 ml kívánt hatóanyag-koncentrációjú oldattal kezeltünk. Ezt a kezelést 4 napon át naponta egyszer végeztük. Ezután az állatokat 28 napon át figyeltük. cs feljegyeztük a pusztulást. Tiaumatikusnak tekintettük a 6. nap előtti elhullást.

A különböző analógok és az egyedi analógok különböző hatóanyag-koncentrációit hatékonyság szempontjából az állatok átlagos túlélési ideje alapján értékeltük ki ninden egyes kezelési szinten, értékelés alapjaként tekintettük továbbá az egyedi analóg átlagos védő dózisát. A számításokat IBM 370 digitális számítógépen végeztük. Λ kezeit csoportokon kapott eredményeket összehasonlítottuk egyrészt a kezeletlen csoportokon, másrészt a klorochinna] kezelt csoportokon nyert eredményekkel.

Λ találmány szerinti hatóanyagok más, sejten belüli parazitákkal szemben Is hatásosak, Így például a Plasmolia, Toxoplasma és Leislimania fajokkal szemben; olyan protozoákkal szemben, melyek elemésztik a vörösvérsejteket, amilyenek például Entamoeba histolytica, 17

-1733

191 085 és egyes Trypanosoma fajok; egyes férgekkel szemben, melyek elsorvasztják a vörösvérsej teket a kórfolyamat során, ilyenek például a Schistoszómák.

1. MELLÉKLET ι .

A (II) általános képletű vegyület, ahol Rí . lehet egyszeresen vagy többszörösen helyettesítve a piridingyűrű bármely olyan helyzetébe, amely még nincsen R₂ csoporttal helyettesítve, és jelentése hidrogénatom, 1—8 szénatomos alkil- vagy helyettesített alkilcsoport, és ennek izomerjei, továbbá cikloalkil- és helyettesített cikloalkilcsoport, helyettesített oxigénatomot vagy helyettesített nitrogénatomot tartalmazó csoport, halogénatom, fenil- vagy helyettesített fenil-csoport, továbbá -(CH₂)„-, -OII, - (C1I₂)„, -NR₄R_s összetételű csoportok és ennek izomerjei, ahol — n jelentése 1-től 8-ig terjedő egész szám;

R₄ésR₅ jelentése hidrogénatom vagy 1—8 szénatomos alkilcsoport és ennek izomerjei;

R2 lehet egyszeresen vagy többszörösen helyettesítve a piridingyűrű bármely olyan helyzetébe, amely még nincsen Rt cso0

II porttal helyettesítve, és jelentése -C-X, ahol —

X a 7(R)-hidroxi-inetil-l-merkapto-a-linkozauiiuid, 7(S)-hidroxi-metil-1-mcrkapto-alinkozaminid, 7(S)-halo-metil-l-merkaptoa-linkozaminid, 7 (R)-halo-metil-1 -merkapto-a-linkozaminid, 7(S)-metoxi-metil-l-merkapto-a-linkozaminid, 7-dezoxi-7(S)-metiltio-metil-l-merkapto-a-linkozaminid, 7-dezoxi-7(S)-(2-hidroxi-etil-lio)-metil-l-merkapto-a-litikozaininid vagy 7-dezoxi-7(S)(3 -hidroxi - propil - tio)-me til -1 -inerkapto-alinkozaminid amino-csoportja, és gyógyászatilag elfogadható sóik.

A (III) általános képletű vegyület ahol —

Rt és R₂ lehet a gyűrű 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8- vagy

9- helyzetében, és jelentésük ugyanaz, mint fentebb;

R₃ jelentése hidrogénatom, metil-, etil- és 2hidroxi-etilcsoport;

n jelentése 1,2,3 vagy 4 és gyógyászatilag elfogadható sóik.

A (IV) általános képletű vegyület, ahol — θ A, B és E jelentése nitrogén, oxigén, kén vagy —CRjRi—;

Rí és R₂ jelentése ugyanaz, mint fentebb, és kapi' csolódhatnak a gyűrű bármely szén- vagy nitrogénatomjához;

R, többszörösen kötődhet a gyűrű bármely

-.· szénatomjához;

és gyógyászatilag elfogadható sóik.

Az (V) általános képletű vegyület ahol — θ A, B, D és E jelentése nitrogén, oxigén, kén vagy

-CR,R,- ;

Rí és R₂ jelentőse ugyanaz, mint fentebb, és kapcsolódhatnak a gyűrű bármely szén- vagy nitrogénatomjához;

Rj kötődhet többszörösen a gyűrű bármely szénatomjához;

és gyógyászatilag elfogadható sóik.

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

Claims (2)

1. Eljárás (1) általános képletű vegyületek előállítására - a képletben R jelentése (a), (b), (c) vagy (d) képletű csoport —, azzal jellemezve, hogy Streptomyces rochci, NRRL 3533 letéti számú törzset vizes, 5 szén-, oxigén-, niliogén- és foszfor-forrást tartalmazó táptalajon olyan (1) általános képletűnek megfelelő vegyület jelenlétében tenyésztünk, amelynek képletében R jelentése hidrogénatom, és a tenyészközegből a kapott

S-ÍS'-ribonukleotidokat) elkülönítjük.

0 2. Eljárás mikrobaellenes hatású gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, az 1. igénypont szerinti eljárással előállított (1) általános képletű vegyületet a gyógyszerkészítésben szokásos hígító-, vivő- és egyéb segédanyagokkal összekeverve

5 gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.

2 lap rajz

-18ni 085

NSZ0₄: C 12 P 19/64; C 12 P 19/30;

A 61 K 31/71

Hl) (IV) l

*3

IV)

Í9

-1991 085

NSZO₄: 3 12 P 19/64; C 12 P 19/30; A 61 K 31/71