SE459861B - Linkomycin-3-(5'-ribonukleotider) och foerfarande foer deras framstaellning - Google Patents
Linkomycin-3-(5'-ribonukleotider) och foerfarande foer deras framstaellningInfo
- Publication number
- SE459861B SE459861B SE8202433A SE8202433A SE459861B SE 459861 B SE459861 B SE 459861B SE 8202433 A SE8202433 A SE 8202433A SE 8202433 A SE8202433 A SE 8202433A SE 459861 B SE459861 B SE 459861B
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- avg
- formula
- substituted
- brd
- compound
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/06—Pyrimidine radicals
- C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/30—Nucleotides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
- C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/30—Nucleotides
- C12P19/305—Pyrimidine nucleotides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/30—Nucleotides
- C12P19/32—Nucleotides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two N-atoms in the same ring, e.g. purine nucleotides, nicotineamide-adenine dinucleotide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/38—Nucleosides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
l0 15 20 25 30 35 459 861 ankor infekterade med P. lophurae och kycklingar infekte- rade med P. gallinaceum och däggdjur som primater t.ex. apor infekterade med P. cynomolgi och människor infekterade med P. falciparum, P. vivax och P. malariae.
Däggdjursvärdar för parasitiska protosoer av typen Sporazoa ordning Coccidia (en mikroparasit som ger sjukdo- men coccidiosis) kan behandlas genom administration av fö- reningarna enligt föreliggande uppfinning. rade med Eimeria zurnii, E. bovis, E. och getter infekterade med E. parva, terade med E. debliecki, Boskap infekte- ellipsoidalis, får E. faurei, svin infek- E. scabra och Isospora suis, hun- dar och katter infekterade med Isospora bigemina, I. felis, E. canis, E. felina, höns infekterade med E. tenella, ka- niner infekterade med E. stiedae, E perforans och mink in- fekterad med E. mustelae kan behandlas.
Föreningarna av linkomycin- och klindamycin-typ, vilka kan omvandlas till 3- ribonukleotider visade i schema 2. I stället för hydroxyl vid 3-ställning i linkosaminiddelen substituerad en nukleotid utvald ur gruppen som består av adenylsyra, guanylsyra, cytidylsyra och uridylsyra. 3-ribonukleotiderna i föreliggande uppfinning kan framstäl- las genom mikrobiologiska omvandlingsförfaranden. 3-(5'- ribonukleotiderna) erhålles genom omvandling av U-57930 vi- sad i schema 3.
Särskild beskrivnin ____________.__¶ Grundföreningarna visade i schema 2 kan framställas genom förfarande visade i amerikanska patentskriften 4 278 789. 3-(5'-ribonukleotiderna) av föreningarna i schema 2 kan framställas enligt det förfarande som visas i amerikanska patentskriften 3 671 647. Salter av dessa nukleotider kan framställas enligt det förfarande som beskrives i ameri- 10 15 20 25 30 35 459 861 kanska patentskriften 3 671 647.
Formlerna för nukleotiderna enligt föreliggande uppfinning @ kan följa exemplen i amerikanska patentskriften 4 278 789.
Beredningarna framställes genom att man substituerar en nukleotid enligt föreliggande uppfinning mot den aktiva fö- I reningen i dessa exempel. Substitutionen kan ske pâ ekvi- ' molär bas.
Allmänna prov och bestämningsförfaranden, vilka kan utnytt- jas för att bestämma och karakterisera nukleotider enligt uppfinningen är följande: Prov på 3-(5'-ribonukleotider) Emedan 3-ribonukleotider enligt föreliggande uppfinning saknar in vitro antibakteriell aktivitet kan deras bildning ur antibakteriellt aktiva grundföreningar lätt följas ge- nom att mäta förlusten av sådan antibiotisk aktivitet. För att bestämma mängden av antibakteriell-aktiv grundföre- ning i kulturfiltrat eller reaktionsblandningar användes ett standardprov med Sarcina lutea ATCC 9341. För att prova närvaro av de 3-ribonukleotider i odlingsvätskor, extrakt | och renade material, hydrolyseras först fosfordiestern med orent alkaliskt fosfatas eller ormgift-fosfodiesteras med § nedan beskrivna förfaranden. Den antibakteriella aktivite- ten hos föreningen i hydrolysatet bestämmas med standard- prov.
Enzymatiska hydrolyser Alkaliskt fosfatas: Förrådslösningar (0,5 mg/ml, 0,54 en- heter/mg) från duvinälvs alkaliskt fosfatas, EC 3.l.3.l (Sigma) framställt i tris-(hydroximetyl)-aminometan-hydro- klorid-buffert, 0,01 M, pH-värde 8,0. Proverna behandlas utspädda l:Z med enzymbuffertblandning och inkuberas vid 280 C under 18 timmar. 10 15 20 25 30 35 459 861 Ormgift-fosfodiesteras: Förrådslösningar (100 mg/ml, 0,026 enheter/mg) av renat ormgift-fosfodiesteras EC 3.l.4.l (Sigma) framställes i destillerat vatten. Inkubationsbland- ningar innehållande 0,2 ml av en lösning (l mg/ml) av pro- vet som skall behandlas i vatten, 0,6 ml av en 0,01 M tris- hydrokloridbuffert, pH-värde 9,0, 0,1 ml 0,3 M MgCl 0,1 ml av enzymförrâdslösningen. vid 370 C under 18 timmar. 2 och Inkubationen genomföras Mjältfosfodiesteras: Förrådslösningar av mjältfosfodi- esteras EC 3.l.4.l8 (Sigma) framställdes (1 mg/ml, 19,6 enheter/mg) i destillerat vatten. Inkubationsblandningar innehållande 0,4 ml av en lösning (0,5 mg/ml) av provet som skall behandlas i vatten, 0,5 ml 0,02 M trisbuffert, pH- värde 7,0 och 0,l ml enzymförrådslösning.
Inkubationen sker vid 370 C under l8 timmar.
Tunnskiktskromatografisk analys av preparat och enzymatiska hydrolysater.
Framställning och rening av 3-ribonukleotider sker genom prov mot S.~lutea (se ovan) och med användning av tunn- skiktskromatografi på kiselgel G och metyletylketon-aceton- vatten (l86:52:20, räknat på volym) eller etylacetat- aceton-vatten (8:5:l) som lösningsmedelssystem. aktiva.grundföreningen Den bio; upptäckas genom bioautografi på agar inkuberad med S. lutea.
Produkterna från enzymatisk eller kemisk hydrolys av 3- nukleotider separeras med följande tunnskiktskromatogra- fiska system: A: Kiselgel GF plattor (Analtech Inc.); vatten som lös- ningsmedelssystem.
B: Kiselgel GF plattor; n-propylalkoho1-koncenterad ammo- niumhydroxid-vatten (S5:l0:35, räknat på volym). 10 15 20 25 30 35 459 861 C: NM-polygram cellulosa 300 (Brinkman Instruments Inc.); l-butanol-vatten-myrsyra (77:l3:lO, räknat på volym).
Ultraviolettabsorberande material bestämmas genom kortvà- gig UV-strålning. Bioinaktiv, icke UV-absorberande mate- rial bestämmes genom en permanganat-perjodat sprutreagens.
Bioaktiva nukleotidmaterial bestämmes genom bioautografi på agar inkuberad med S. lutea.
I följande exempel visas odlings- och reningsförfaranden för framställning av nukleotiden av de föreningar som kal- las U-5793OE. Strukturformeln för U-5793DE visas i schema 3. Följande förfaranden i detta exempel eller uppenbara ekvivalenter därav kan framställas 3-ribonukleotider av andra föreningar visade i schema 2.
Följande exempel belyser förfarandet och produkter enligt föreliggande uppfinning men är icke avsedda att vara be- gränsande. Alla procentuppgifter avser vikt-% och alla lös- ningsmedelsblandningar avser volym där inte annat anges.
Exemgel l A. Odlingsförfarande Streptomyces rochei, NRRL 3533 växer i ett medium bestående av glukos 10 g/l; Difco pepton 4 g/l; Difco jästextrakt 4 g/l; MgSO4°7H2O 0,5 g/l; KHZPO4 2,0 g/l; KZHPO4 4 g/l under 3 dagar vid 280 C på en rotationsskakapparat. Myce- lium från denna tillväxt användes för att inokulera ett od- lingsmedium innehållande samma ingredienser. Odlingen ut- fördes under 48 timmar vid 280 C på en rotationsskakappa- rat. Vid slutet av denna 48 timmars inkubationstid tillsät- tes U57930 till en slutlig koncentration av 50 mg/l och od- lingen fortsattes vid 320 C. Efter 12 timmar tillsättes yt- terligare U-57930 till en total koncentration av 150 mg/1.
Efter ytterligare 12 timmar ökas koncentrationen av U-57930 10 15 20 25 30 459 861 till 250 mg/l. Odlingen fortsättes vid 320 C under 24 tim- mar efter den sista tillsatsen av U-57930. Vid denna tid- punkt skördas kulturfiltratet och visade sig innehålla högst l mg/l U-57930. De återstående 249 mg/l är omvandla- de till bioinaktivt material.
S. rochei. NRRL 3533 är en känd bakterie tillgänglig för allmänheten vid begäran från NRRLs depositionssamlingar.
Adressen till depositionsorganet är Northern Utilization and Research Division, Agricultural Research Service, U.S.
Department of Agriculture, Peoria, Ill. USA.
B. Isolering och reningsförfaranden Isolering av U-57930 3-ribonukleotider från odlingsvätskan Adsorption på Amberlite XAD-2: Odlingsvätskan (ca 12 l) in- nehållande 3 g inaktiverad U-57930 filtrerades vid skörde- pH-värdet 7,7 med användning av filterhjälpmedel. Mycelial- kakan tvättades med 1,2 l vatten och kastades. Det klara filtratet och tvättvattnet sammanslogs och pH-värdet juste- rades till 6,0 och fick passera över en kolonn framställd ur 600 ml Amberlite XAD- 2 (Rohm and Haas Co., Philadelphia, PA, USA), vid en strömningsmängd pâ 40 ml/minut. De använ- da provades beträffande bioaktivitet före och efter behand- lingen med alkalifosfatas och kastades. med 2 l vatten.
Kolonnen tvättades Den vattenhaltiga tvättvätskan visade sig också vara bioinaktiv innan och efter behandlingen med alkaliskt fosfatas och kastades. Kolonnen eluerades sedan med metanol-vatten (70:30, räknat på volym). Fraktioner på 20 ml uppsamlades med en hastighet av 20 ml/minut. Prov på den biologiska aktiviteten före (-E) och efter (fE) be- handlingen med alkaliskt fosfatas visade följande. 10 15 20 25 30 35 fraktion nr 5 10 11 13 20 25 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 110 120 130 140 150 160 " 170 180 190 200 Fraktionerna 12 - 80 sammanslogs, koncentrerades till en vattenlösning och frystorkades varvid erhölls preparatet ADA-34,1, 12,22 g.
OOOC) 33 32 31 29 26 23 21 19 17 17 16 16 16 16 16 16 15 15 15 15 15 15 15 15 15 -459 861 zon (S. lutea) +E 0 0 0 36 55 54 50 48 39 38 37 27 26 26 26 26 26 26 26 21 21 21 21 21 21 21 21 21 21 10 15 20 25 459 861 I en ytterligare serie experiment behandlades 6 1 odlings- vätska innehållande 2 g "inaktiverat" U- 57930 som ovan be- skrivits.
Metanoliska eluaten Amberlite XAD-2 kolonn be- hölls som ADA-l43B. Denna lösning koncentrerades icke till torrhet utan renades genom Dowex-1 kromatografi som be- skrives nedan.
Dowex-1 kromatografi: Kolonnen preparerades med 300 ml Dowex-1 (X-4) i acetatform. En metanolisk lösning, ADA-1435 med ett pH-värde pâ 8,2 fick passera genom kolonnen. Ut- gående material uppsamlades med en hastighet av 2,5 m1/mi- nut i 20 ml fraktioner. (Fraktioner 1 - 60). Kolonnen tvät- tades med 1,5 1 vatten (10 ml/minut; fraktionerna 66 - 108). Kolonnen eluerades därefter med 5-procentig ättik- syra (hastighet 10 ml/minut, fraktionerna 109 - 310) . Föl- jande sammanslagningar gjordes: sammanslagning 1 fraktioner l- 80 1000 ml (ADA-1A) " 2 " 81-110 600 ml (ADA-2A) " 3 " lll-130 450 ml (ADA-3A) " 4 " 131-150 450 ml (ADA-4A) " 5 “ 151-190 900 ml (ADA-5A) “ 6 “ 191-230 900 ml (ADA-6A) " 7 " 231-270 900 ml (ADA-7A) u 8 u 271-310 900 ml (ADA-8A) Prov före (-E) och efter (+E) behandlingen med fosfatas visade följande: alkaliskt 10 15 20 25 30 35 459 861 zon (S. lutea) -E +E sammanslagning 1 31 52 “ 2 36 49 " 3 34 45 " 4 18 40 " 5 25 30 " 6 27 29 " 7 27 29 " 8 29 31 Sammanslagning 1 och 2 sammanslogs äter, koncentrerades till en vattenlösning och frystorkades varvid erhölls preparatet ADA-2,1, 1,48 g.
Sammanslagning 3 och 4 kombinerades och behandlades på lik- nande sätt och därvid erhölls ADA-2,2, 2,5 g.
Preparaten ADA-2,1 och -2,2 gav U-57930 efter behandling med alkaliskt fosfatas.
Preparaten ADA-34,1, -2,1 och -2,2 sammanslogs och renades genom motdubbelströmsfördelning enligt det förfarande som beskrives nedan.
Motdubbelströmsfördelning: Materialet erhållet vid samman- slagning av preparate%ADA-34,l, -2,1 och -2,2, 16,20 g upp- löštes i 25 ml av vardera fasen i ett lösningsmedelssystem innehållande lika volymer l-butanol-vatten (lzl). Lösning- arna tillsattes i mittrören på en motdubbelströmsfördel- ningsapparat av glas (100 rör, 25 ml/fas). Fördelningen ana- lyserades efter 150 överföringar beträffande biologiskt ak- tivitet före (-E) och efter (+E) med alkaliskt fosfatas.
Resultat enligt följande: 10 15 20 25 30 35 459 861 lägre uppsamlare 5 10 15 20 25 - 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 lägre maskin 50 45 40 35 30 25 20 15 10 10 zon (S. lutea-känsliga) -E +E 29 31 30 27 22 F' \J OOOOOOCCJOOCDOOO zon (S. lutea-känsliga) 31 33 33 33 33 34 34 33,5 33 _34 34 35 36 38 39 40 41 42 43 43,5 -E +E 0 45 spår 46 l5 47 17 47,5 17 47 18 47 17,5 48 17 48 16 48 15 50 spår 50 459 861 ll zon (S. lutea-känsliga) 10 15 20 25 30 35 övre maskin -E * +E 5 spår 49 10 spår 48,5 15 spår 48 20 spår 48,5 25 spår 49 30 30 50 35 spår 51 40 15 52 45 16 53 50 21 S4 övre uppsamlare 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 l7,5 17 19 20 21 22 24 26 28 30 32,5 33 35 36 39 41 43 43 43 35 54 53,5 53,5 53,5 53,5 53,5 53,5 53,5 53,5 52,5 52 52 52 52 49 47 48 46 43 35 10 15 20 25 30 35 459 861 12 Följande sammanslagningar gjordes. Varje sammanslagning koncentrerades till en vattenlösning och frystorkades var- vid erhölls motsvarande preparat.
Sammanslagning I: lägre uppsamlare l - 50 IIÉ lägre uppsamlare 51 - 100; lägre maskin 50 - 30 III: lägre maskin 29 - 0; övre maskin l - 50; övre uppsamlare 100 - 30 Preparaten som därvid erhölls var: från pol I preparat ADA-47,1, 9,78 g från pol II preparat ADA-47,2, 0,30 g från pol III preparat ADA-47,3, 5,29 g.
Preparaten ADA-47,2 och -47,3 sammanslogs och renades ge- nom DEAE-Sephadex kromatografi beskriven nedan.
DEAE-Sephadex kromatografi: 300 g DEAE-Sephadex (A-25) om- rördes 1 timme med vatten och 2 timmar med 0,5 N vatten- lösning av natriumhydroxid. Jonbytaren tvättades med vatten tills dess pH-värde var cirka 7,5. Materialet omrördes un- der 2 timmar med 0,5 N vattenlösning av ättiksyra, tvätta- des med vatten till neutralt pH-värde och slogs i en ko- lonn och packades under l kg tryck till konstant höjd. Ko- lonnen tvättades med 4 l vatten, 8 l 0,l-procentig vatten- lösning av tris-(hydroximetyl)aminometan (THAM) och 3 l 0,03 H THAM acetatbuffert pH-värde 8,0 (framställt genom upplösning av 3,64 g THAM i 800 ml vatten, justering av pH- värdet till 8,0 med isättiksyra och justering av volymen till 1 l).
Utgângsmaterialet, preparaten ADA-47,2 och 47,3, cirka 5,50 g upplöstes i 20 ml 0,03 M TEAM-acetat, pH-värde 8,0 buf- fert och sattes till kolonnens övre ände. Kolonnen eluera- des sedan genom en nedströmmande 0,3 M THAM-acetatbuffert 459 861 13 med ett pH-värde 8,0. Fraktionerna 1 - 190 (20 ml) uppsam- lades. Därefter fortsattes elueringen genom strömming upp- åt i kolonnen. Fraktionerna A, B, C, D och E (på vardera 1 1) uppsamlades. Prov på bioaktiviteten före (-E) och efter (+E) behandlingen med alkaliskt fosfatas visaäe följande: zon (S. lutea-känsliga) 10 15 20 25 30 35 fraktion nr ~E +E 0 O 6 0 0 9 0 0 12 0 0 15 0 O 18 0 0 21 0 0 24 0 O 27 0 O 30 O 0 33 .O 0 36 38 39 39 43,5 44 42 36 36 45 23,5 23 48 15 16 51 0 0 ' 54 O 0 ' 57 0 0 60 O 0 63 0 0 66 0 0 69 15 16 72 17 20 75 21 26 78 23 27 10 15 20 25 30 35 459 861 fraktio Dnr 81 84 87 90 93 96 99 102 105 108 lll 114 117 120 123 14 zøn (S. lutea-känsliga) Följande sammanslagningar gjordes: Sammanslagning I I! II n..
II " III " IV " V u VI " VII fraktion Sammanslagning I (ADA-69B) innehöll oförändrat och kastades.
-E +E 23 30 23 29 22 24 21 23 21 24 22 26 21 35 22 44 23 51 22,5 54 22,5 52,5 22 52 22 54,5 20,5 56 20 56 fraktioner 34- 38, 280 ml (ADA-69B) 75- 90, 330 ml (ADAf69C) 101-lll, 180 ml (ADA-69D) 114-150, 580 ml (ADA-69E) 151-164, 100 ml (ADA-69F) 165-186, 125 m1 (ABA-ess) C, l 1 (ADA-69A) U-57930 Sammanslagning II (ADA-69C) innehöll ett okänt material vilket gav U-57930 vid behandling med alkaliskt fosfatas.
UV: Å max 275 nm. ' 10 15 20 25 30 459 861 15 Sammanslagning III (ADA-69D) innehåller U-57930 cytidylat och behandlades som beskrivas nedan. UV: Ä max 270 nm.
Sammanslagning IV (ADA-69E) innehåller U-57930 adenylat och behandlades som beskrevs senare. UV: Å nmx 260 nm.
Sammanslagning V (ADA-69F) innehöll en blandning av U-57930 adenylat, U-57930 uridylat och U-57930 guanylat.
Lösningen behandlades som nedan beskrives.
Sammanslagning VI (ADA-69G) innehåller U-57930 guanylat och behandlades på ovan beskrivet sätt. UV: Å max 254 0Ch terasspunkt vid 275.
Sammanslagning VII (ADA-69A) innehöll en blandning av U-57930 guanylat och U-57930 uridylat. Lösningen behandla- des som senare beskrives.
Isolering av i huvudsak rent U-57930 cytidylat, U-§7930 adenylat och U-57930 guanylat från sammanslagning III, IV och VI. Avlägsnande av THAM-acetatbuffert genom Amberlite XAD-2 kromatografi: Sammanslagning III, IV och VI erhållna på ovan beskrivet sätt överfördes till en kolonn innehål- lande Amberlite XAD-2. Det genomgângna kastades. Kolonnen tvättades med vatten och eluerades med metanol-vatten (70:3O räknat på volym). Fraktionerna analyserades genom ultraviolett och med test beträffande bioaktiviteten före och efter behandlingen med alkalisktzfosfatasr Lämpliga fraktioner sammanfördes, koncentrerades till en vattenlös- ning och frystorkades. Detaljer beträffande mängden Amber- lite XAD-2 använd för varje sammanslagning, mängden vatten och mängden metanoleluat och mängden material erhållet uppräknas i följande tabell. 459 861 10 15 20 25 30 35 16 Amberlite XAD-2 vatten metanol- isolerat samman- använd tvätt eluat material slagning (ml) (ml) (ml) (mg) III 50 200 300 150 IV 200 800 600 3510 VI 50 200 300 470 Materialet erhållet från sammanslagning III kallades ADA-73,1 från sammanslagning IV ADA-74,1 och från samman- slagning VI ADA-75,1.
Avlägsnande THAM-acetatbuffert från sammanslagning V (ADA- 69F) och sammanslagning VII (ADA-69A) genom Amberlite XAD-2 kromatografi: En kolonn framställdes ur 300 ml Amberlite XAD-2. Sammanslagning V och VII innehållande en blandning av U-57930 adenylat, U-57930 ruidylat och U-57930 guanylat passerade genom kolonnen. Utgående material kastades. Kolon- nen tvättades med 600 ml vatten. Utgående material kasta- des. Kolonnen eluerades med metanol-vatten (70:30). Frak- tioner som gav bioaktivt material efter behandling med al- kaliskt fosfatas sammanslogs med 300 ml, koncentrerades till en vattenlösning och frystorkades varvid erhölls prepa- rat ADA-71,1, 670 mg. Preparat -71,1 behandlades som be- skrives nedan.
Separation av U-57930 uridylat från U-57930 adenylat och U-57930 guanylat. DEAE-Sephadex kromatografi. 600 ml DEAE Sefihadex i acetatform, framställt på ovan beskrivet sätt tvättades med 0,03 M THAM-acetat pH-värde 8,0 buffert och packades i en glaskolonn (ID, 4,5 cm, höjd 40 cm) under hydrostatiskt tryck.
Preparat ADA-71,1 (se ovan) upplöstes i 10 ml 0,03 M THAM- acetat, pH-värde 8,0 och tillfördes kolonnens övre del.
Kolonnen eluerades med: 10 15 20 25 30 459 861 l7 l) 0,03 M THAM-acetat, pH-värde 8¿0 (fraktioner l~79) 2) 0,12 M THAM-acetat, pH-värde 8,0 (fraktioner 80-395) 3) 0,25 M THAM-acetat, pH-värde 8,0 (fraktioner 396-750) Fraktionerna på 20 ml uppsamlades och analyserades med UV och genom prövning av bioaktiviteten före och efter behand- ling med alkaliskt fosfatas. Fraktionerna 51 - 60 innehöll' U-57930 adenylat, fraktionerna 62 - 73 (ADA-94B) innehöll U-57930 uridylat, fraktionerna 75 - ll0 innehöll U-57930 guanylat.
Isolering av i huvudsak rent U-57930 uridylat. Avlägsnande av THAM-acetatbuffert med Amberlite XAD-2 kromatografi.
Kolonnen framställdes ur 50 ml Amberlite XAD-2. Sammanslag- ning ADA-94B, innehållande U-57930 uridylat fick passera över kolonnen med en hastighet av 2 ml/minut. Utgående ma- terial kastades. Kolonnen tvättades med 200 ml vatten, tvättvätskan kastades. Kolonnen eluerades med metanol-vat- ten (70:30 räknat på volym). Fraktioner innehållande (vid ultraviolett) U-57930 uridylat sammanslags (200 ml), kon- centrerades till en vattenlösning och frystorkades varvid erhölls ADA-95,1, 60 mg.
Kännetecken på U-57930 3'(5'-cytidylat) 1. IR-värde Tabellen upptar IR-absorption (Nujol och KBr) enligt föl- jande: 10 15 20 25 30 459 861 18 band inten- band inten- frekv. sitet typ frekv. sitet typ 34l7,3 24 SH l249,0 33 SH 334l,l 19 BRD l2l4,3 21 AVG 32ll,8 19 BRD l146,8 42 SH 3l08,6 25 BRD l089,9 15 BRD 295l,4 BRD M l070,6 12 AVG 2926,3 BRD M l0S6,l 14 SH 2854,9 2 BRD M 992,4 39 AVG 2729,6 48 BRD M 972,2 39 AVG 2693,9 51 SH 955,8 49 SH 2535,7 65 SH 930,7 51 AVG l649,3 8 AVG 889,2 36 AVG l6l0,7 26 AVG 860,3 52 AVG l575,0 35 AVG 849,7 53 AVG l528,7 31 AVG 804,4 46 SH l489,2 23 AVG 788,9 40 AVG l462,2 9 AVG M 721,4 44 AVG M 1404,3 41 BRD 705,0 47 BRD l377,3 18 AVG M 654,9 45 SH l368,6 31 SH M 632,7 38 AVG l286,6 34 AVG Band frekv.: bandfrekvensen anges i vâgtal (cm_l) intensitet: intensitet i procent transmission ( % T) Datatyp i omrâdet intill toppar: BRD - bred; AVG - genom- snittlig; SHP - spetsig; SH - terasspunkt.
Topplistan bearbetad. * anger tillagda toppar.
M: betyder möjlig interferens med mineralolja. 10 15 20 19 25 kraftigaste tgpparna 459 861 % T frekvens % T frekvens l 2926,2 24 34l7,2 2 295l,3 25 3l08,5 2 2854,8 26 l6l0,6 8 l649,2 31 l528,6 9 l462,1 31 1368,5 12 1070,5 33 l249,0 14 l056,0 34 l286,5 15 l089,8 35 l575,0 18 _ l377,2 36 889,1 19 334l,0 38 632,6 19 3211,? 39 992,3 21 l214,2 39 972,1 23 1489,1 Preparat; mineralolja Max. % T: 87 @ 1848,0 æ T vid 3800 (cnfln 83 Täthet (Cm_l/pt): 0,964 10 15 20 25 459 861 20 band inten- band inten- frekv. sitet typ frekv. sitet typ 3408,6 10 BRD l088,9 12 BRD 3l02,8 26 SH l07l,5 9 AVG 2963,9 28 AVG l057,l ll SH 2930,2 27 BRD 992,4 35 AVG 2878,l 37 AVG 972,2 36 AVG 2862,7 39 SH 956,8 45 SH 2768,l 51 SH 928,8 48 AVG 25ll,6 65 BRD 889,2 32 AVG l649,3 4 AVG 859,3 47 AVG 16l4,6 20 SH 851,6 47 SH l576,0 30 AVG 804,4 39 SH 1528,? 28 AVG 788,9 34 AVG 149l,l 21 AVG 743,6 47 SH l462,2 33 AVG 705,0 40 AVG l450,6 35 SH 654,9 39 SH 1404,3 37 AVG 634,6 35 AVG l384,0 33 AVG 595,1 33 AVG 1360,9 42 SH 572,9 33 AVG l286,6 32 AVG 525,6 32 AVG l25l,9 30 SH 447,5 36 AVG l2l5,2 18 AVG Band frekv.: bandfrekvens i vågtal (cm_l) Intensitet: intensitet i procent transmission (% T) Data typ i omrâdet intill toppar: BRD - bred; AVG - genom- k snittlig; SHP - spetsig; SH - terasspunkt Topplistan bearbetad. * anger tillagda toppar 459 861 21 25 kraftigaste topparna % T frekvens % T frekvens lfi49,2 30 l25l,8 l07l,5 32 l286,5 10 3408,5 32 889,1 ll l057,0 32 525,5 12 lO88,8 33 l462,l 18 l2l5,l 33 l384,0 20 l6l4,5 33 595,0 21 l49l,0 33 572,8 25 3lO2,7 34 788,8 27 2930,l 35 l450,5 28 2963,8 35 992,3 28 l528,6 35 634,5 30 l576,0 Preparat: KBR pellet Max % T = 100 G 403,1 % T vid 4000 (cm'1)= 70 Täthet (cm'1/pt)= 0,964 2. UV-absorptíonsspektrmn[hmax (afl i vatten vid pH-värde 2,0, 279 nm (6,5) pH-värde 7,0, 270 nm (9,9 pH~värde 11,0, 271 (9,6) 3. Elementarsammansättning Molformel: C26H43N5Ol2 SClP. Molvikt 715. Beräknad C 43,64; H 6,01; N 9,79; O 26,88; S 4,47; Cl 4,89; P 4,33. 4. Optisk vridning [ 25 o ujlb , +10? (c, 0,854, vatten) 10 15 20 459 861 22 5. Lösligheter Ytterst löslig i vatten, metanol och etanol. Lätt lös- lig i aceton och andra ketoner, etylacetat och andra est- rar, kloroform, metylenklorid. Olöslig i mättade kolväte- lösningsmedel. 6. Antibakteriell aktivitet U-57930 3-(5'-cytidylat) är icke aktiv in vitro. Emel- lertid ger behandling med alkaliskt fosfatas eller fosfodi- esteras ett utbyte av U-57930 vilken är ytterst aktiv mot ett antal grampositiva organismer, både in vitro och in vivo. 7- Smältpunkt: 205 - 2070 C (under sönderdelning).
Egenskaper hos U-57930 3'(5'-adenylat) l. IR-värden Tabellen räknar upp IR-absorptioner (Nujol och KBr) enligt följande 10 15 20 25 30 459 861 23 band inten- band inten- frekv. sitet typ frekv. sitet typ 3335,3 16 BRD l245,l 24 SH 3267,8 17 BRD l213,3 17 AVG 32l0,8 17 BRD ll75,7 43 SH 2954,3 BRD M ll46,8 40 SH 2924,4 BRD M l089,9 13 AVG 2868,4 SH M lO69,6 10 AVG 2854,9 AVG M l05S,l 13 SH 2727,6 46 BRD M 991,5 35 AVG 2520,2 61 BRD 972,2 36 AVG l684,0 22 SH 957,7 45 SH l64l,6 14 AVG 930,7 48 AVG l600,l 28 AVG 889,2 32 AVG l576,0 31 AVG 861,3 47 AVG 1550,9 43 SH 848,7 49 AVG l509,4 53 SH 818,8 45 AVG l463,l 15 AVG M 798,6 40 AVG 1420,? 35 AVG 722,4 36 AVG M l377,3 24 AVG M 708,9 40 SH l367,6 35 SH M 647,1 33 SH l332,0 36 AVG 635,6 31 AVG l299,2 34 AVG Band frekv.: bandfrekvens i vâgtal (cm-1) Intensitet: intensitet i procent transmission (% T) Data typ i omrâdet intill toppar: BRD - bred; AVG - genom- snittlig; SHP - spetsig; SH - terasspunkt Topplistan bearbetad. * anger tillagda toppar M: betyder möjlig interferens med mineralolja. 459 861 24 25 kraftigaste topparna % T frekvens - % T frekvens 2 2924,3 22 l684,0 3 2954,2 24 l377,2 4 2854,8 24 1245,0 6 2868,3 28 l600,0 10 l069,5 31 l576,0 13 l089,8 31 635,5 13 l05S,0 32 889,1 14 l64l,5 33 647,0 15 l463,0 34 l299,l 16 3335,2 35 l420,6 17 3267,7 35 l367,5 17 32l0,7 35 991,5 17 l2l3,2 Preparat: mineralolja max % T; ss G 1ss4,4 % T vid ssoo (cm7l)= 81 Täthet (cm-1/pt): 0,964 10 15 20 25 30 459 25 band inten- band inten- frekv. sitet typ frekv. sitet typ 3375,8 7 BRD 1090,8 AVG 3223,4 10 BRD l069,6 AVG 3124,0 17 SH 1050,3 8 SH 2963,0 22 AVG 990,5 27 AVG 2929,2 22 BRD 972,2 29 AVG 2878,l 31 AVG 956,8 38 SH 2863,6 33 SH 929,8 42 AVG 2756,6 45 BRD 889,2 24 AVG 252l,2 60 BRD 861,3 38 AVG 2188,5 75 BRD 851,6 40 SH l678,2 15 SH 818,8 36 AVG 1643,5 7 AVG 807,3 36 BRD l602,0 20 AVG 798,6 30 AVG 1576,0 23 AVG 768,7 41 BRD 1553,8 35 SH 721,4 30 AVG 15l1,4 49 SH 706,9 31 BRD 1475,7 27 AVG 648,1 26 AVG l42l,7 29 AVG 636,5 26 AVG 1384,0 32 AVG 584,5 28 SH l332,0 31 AVG 571,9 26 AVG 1301,l 28 AVG 533,3 27 SH l246,l 19 SH 522,7 25 AVG l2l5,2 12 AVG 503,4 25 AVG 1176,7 36 SH Band frekv.: bandfrekvens i vàgtal (cm_l) Intensitet: int Data typ i området intill toppar: snittlig; SHP - spetsig; SH - terasspunkt Topplistan bearbetad. * anger tillagda toppar ensitet i procent transmission (% T) BRD - bred; AVG - genom- 861 10 15 20 25 30 35 459 861 26 25 kraftigaste topparna frekvens % T frekvens 5 l069,S 9 23 l576,0 7 337s,7' 24 889,1 7 l643,5 25 522,6 8 l090,7 25 503,3 8 l050,2 26 647,0 10 3223,3 26 636,5 12 l2l5,l 26 571,8 15 l678,l 27 l475,6 17 3l24,0 27 990,5 19 l246,0 27 533,2 20 l602,0 28 l30l,O 22 2963,0 28 584,5 22 2929,l Preparat: KBR pellet max. 9 T= 95 @ 4os,o % T vid 4ooo (cm'1)= 77 Tächet (cm'l/pt)= 0,964 2. Uvabsorptionsspektrmm[Änmx (aü i vatten vid pH 2,0, 258 (l6,0) pH 7,0, 261 (16,5) pH 11,0, 261 (l6,0) 3. Elementarsammansättning Molekylformel C27H43N70l0 SClP. Molvikt 723.
Beräknat C 44,81; H 5,94; N 13,55; O 22,13; S 4,42; Cl 4,84; P 4,28.
Erhållet N 12,87; S 5,39; Cl 4,76; P 3,83 10 15 20 25 4. 459 861 27 Optisk vridning ßi]D25, +94° (c, o,ss7, vatten).
. Lösligheter Stor löslighet i vatten, metanol och etanol. Något lös- lig i aceton och andra ketoner, etylacetat och andra estrar, kloroform och metylenklorid. Olöslig i mättade kolvätelösningsmedel.
Antibakteriell aktivitet u-57930 [3-(5'-adenylatfl lertid, behandling med alkaliskt fosfatas eller fosfo- diester I ger U-57930 vilken är ytterst aktiv mot ett är inte aktiv in vitro. Emel- stort antal grampositiva organismer båda in vitro och in vivo. U-57930 3-(5'~adenylat) har visat sig aktivt in vivo (subkutant, mus) med en CD50 på 0,62 (O,48 - 0,79) mg/kg mot S. pyogenes.
Smältpunkt 203,5 - 2o5° c (under sönderdelning) Egenskaper hos U-57930 3~(5'-uridylat) . IR-värden Tabellerna räknar upp IR-absorptioner (Nujol och KBr) enligt följande: 10 15 20 459 861 28 band inten- band inten- frekv. sitet typ frekv. sitet typ 3330,4 19 BRD l332,9 44 BRD 3224,4 21 BRD l296,3 40 SH 2952,4 1 BRD M l25l,9 28 BRD 2924,4 BRD M l2l5,2 19 AVG 2867,5 SH M l089,9 13 AVG 2854,0 AVG M l07l,S 9 AVG 2733,4 49 SH M l056,l 13 SH 2695,8 53 SH 991,5 39 AVG 2532,8 67 SH 973,2 39 AVG l757,3 73 SH 957,7 48 SH l685,9 8 AVG 931,7 49 AVG l647,4 21 SH 890,2 34 AVG l602,0 41 AVG 858,4 50 AVG l574,l 42 AVG 8l3)0 43 AVG 1555,? 43 BRD 798,6 47 AVG l462,2 12 AVG M 767,7 50 AVG l425,5 37 SH 721,4 42 AVG l378,3 22 AVG M 634,6 35 AVG l367,6 37 SH M band frekv.: bandfrekvens i vågtal (cm_l) Intensitet: intensitet i procent transmission (% T) Data typ i området intill toppar: BRD - bred; AVG - genom- snittlig; SHP - spetsig; SH - terasspunkt Topplistan är obearbetad M: betyder möjlig interferens med mineralolja 10 15 20 29 25 kraftigaste tøpparna % frekvens % frekvens 0 2924,3 22 l378,2 1 2952,3 28 l25l,8 3 2854,0 34 890,1 4 2867,5 35 634,5 8 l685,8 37 l425,5 9 l071,5 37 l367,5 12 l462,l 39 991,5 13 l089,8 39 973,1 13 lO56,0 40 l296,2 19 3330,3 41 l602,0 19 12l5,1 42 l574,0 21 3224,3 42 721,3 21 l647,3 Preparat: mineralolja Max %_T: 86 Û 3764,5 % T vid 3800 (cm- 1)= ss Täthet 459 861 10 15 20 25 30 459 861 30 band inten- band' inten- frekv. sitet typ frekv. sitet typ 3387,4 12 BRD l055,l 10 SH 31l4,4 25 SH 992,4 35 AVG 2962,0 26 AVG 973,2 36 AVG 293l,l 26 BRD 956,8 45 SH 2879,1 36 AVG 929,8 48 AVG 2863,6 38 SH 889,2 31 AVG 2833,? 43 SH 859,3 46 AVG 2509,6 64 BRD 813,0 40 AVG l685,0 6 BRD 811,1 40 SH l647,4 17 SH 798,6 43 AVG l605,9 35 SH 782,2 48 BRD l576,0 37 AVG 768,7 48 AVG 1556,? 39 BRD 707,9 43 AVG l463,1 31 AVG 669,3 43 SH l423,6 35 AVG 649,1 40 SH 1384,0 32 AVG 634,6 37 AVG l33l,O 43 AVG 585,4 38 SH l297,2 38 SH 567,1 34 AVG l255,8 24 AVG 523,7 35 AVG l214,3 17 AVG 447,5 39 AVG l090,8 10 AVG l070,6 7 AVG Band frekv.: bandfrekvens i vâgtal (cm_l) Intensitet: intensitet i procent transmission (% T) Data typ i området intill toppar: BRD - bred; AVG - genom- snittlig; SHP - spetsig; SH - terasspunkt Topplistan bearbetad. * anger tillagda toppar 10 15 20 25 30 35 % T 7 10 10 l2 17 17 24 25 26 26 31 31 31 459 861 25 kraftigaste tgpparna frekvens % T frekvens 1685,0 32 1384,0 lO70,5 34 567,0 1090,? 35 l605,8 l055,0 35 1423,5 3387,3 35 992,3 1647,3 35 523,6 12l4,2 36 2879,0 1255,? 36 973,1 31l4,3 37 l576,0 2962,0 37 634,5 293l,O 38 2863,5 l463,0 38 l297,l 889,1 Preparat: KBR pellet Max % T: 101 @ 405,0 % T vid 4000 (cm' l : 76 rather (cm“l/pt)= 0,964 2. UV-absorptionsspektrum ÉÅ max (a1] I vatten vid pH 2,0, 261 (ll,5) pH 7,0, 262 (10,7) pH 11,0, 262 (ll,5) ~ 3. Elementarsammansättning Molekylformelz C Beräknat C 43,57;,H 5,86; N 7,82; O 29,05; S 4,46; Cl 4,89; P 4,33 4. Optisk vridning [q]D25 +1os° (c, 0,94, vatten) 2sH42N4°13 SClP. Molvikt 716. 459 861 32 5. Lösligheter Mycket löslig i vatten, metanol och etanolfl Lätt löslig i aceton och andra ketoner, etylacetat och andra est- rar, kloroform och metylenklorid. Olöslig i mättade kol- 5 väten. Z 6. Antibakteriell aktivitet U-57930 3-(5'-uridylat) är inte aktiv in vitro. Emel- lertid ger behandling med alkaliskt fosfatas och fosfo- lO diesteras I U-57930 vilket är ytterst aktivt mot ett antal grampositiva organismer både in vitr0 och in vivo. 7. Smältpunkt 15 202 - 2030 C (under sönderdelning) Égenskaper hos U~5793O 3-(5'~guanylat) 1. Tabeller över IR-absorptioner (Nujol och KBr) enligt 20 följande: 10 15 20 25 459 861 33 band ínten- band inten- frekv. sitet typ freky. sitet typ 3335,3 16 BRD l250,0 36 SH 3227,2 19 BRD l2l3,3 21 AVG 2953,3 2 AVG M ll73,8 39 AVG 2925,3 l BRD M 1149,? 41 AVG 2868,4 6 SH M l087,9 14 SH 2855,9 4 AVG M l07l,5 9 AVG 2737,3 51 BRD M 991,5 42 AVG 252l,2 73 BRD 972,2 42 AVG l684,0 6 AVG 956,8 52 SH l635,8 ll AVG 929,8 51 AVG l598,2 21 AVG 890,2 36 AVG l572,l 26 AVG 860,3 51 AVG l534,5 34 AVG 800,5 46 AVG l462,2 18 AVG M 783,1 42 SHP l4l4,9 44 AVG 720,4 43 AVG l377,3 24 AVG M 707,9 45 BRD 1365,? 31 AVG 681,9 40 AVG 1312,? 44 AVG 635,6 34 AVG Band frekv.: bandfrekvens i Vâgtal (cm_l) Intensitet: intensitet i procent transmission (% T) Data typ i området intill toppar: BRD - bred; AVG - genom- snittlig; SHP - spetsig; SH - terasspunkt Topplistan bearbetad. * anger tillagda toppar M: betyder möjlig interferens med mineralolja s, 459 861 34 25 kraftigaste topparna % T frekvens % T frekvens ________________ ________________ 1 2925,2 24 l377,2 2 2953,2 26 lS72,0 4 285S,8 3l l365,6 6 2868,3 34 l534,5 6 l684,0 34 635,5 9 l07l,5 36 l250,0 ll 1635,? 36 890,1 14 l087,8 39 ll73,7 16 3335,2 40 681,8 18 l462,l 41 ll49,6 19 3227,l 42 991,5 21 l598,l 42 972,1 21 l2l3,2 Preparat: mineralolja Max % T= 97 G 37s2,6 % T vid saoo (cm'l)= 97 Täthet (cm'1/pt); 0,964 10 15 20 25 30 459 861 35 band inten- band inten- frekv. sitet typ frekv. sitet typ 3380,6 9 BRD ll74,7 31 AVG 3234,0 13 BRD ll47,7 33 BRD 2963,0 22 AVG 1088,9 BRD 2929,2 21 BRD l070,6 AVG 2878,l 3l AVG 991,5 33 AVG 2862,7 33 SH 972,2 34 AVG 2744,0 44 BRD 956,8 43 SH 2522,2 61 BRD 929,8 44 AVG 1683,0 BRD 889,2 28 AVG l634,8 AVG 860,4 41 AVG l598,2 14 AVG 800,5 36 AVG l57l,2 19 AVG 783,1 32 AVG l534,5 26 AVG 715,6 38 SH l482,4 38 AVG 705,0 38 SH l46l,2 36 AVG 679,9 33 AVG 1448,? 36 BRD 635,6 31 AVG l4l3,9 34 AVG 584,5 34 SH l384,0 29 AVG 571,9 32 AVG l359,9 30 AVG 523,7 31 AVG 1312,? 37 AVG 502,5 30 AVG l250,9 29 SH 447,5 34 AVG l2l3,3 16 AVG Band frekv.: bandfrekvens i vågtal (cm- 1» Intensitet: intensitet i procent transmission (% T) Data typ i området intill toppar: BRD - bred; AVG - genom- snittlig; SHP - spetsig; SH- terasspunkt Topplistan är bearbetad. * anger tillagda toppar 10 15 20 25 30 35 459 861 36 25 kraftigaste tqpparna % T fi;ekvens % T frekvens , 4 l683,0 29 l384,0 6 1634,? 29 1250,8 6 1070,5 30 l359,8 9 3380,5 30 502,5 9 l088,8 31 2878,0 13 3234,0 31 1174,6 14 l598,l 31 635,5 16 1213,2 31 523,6 19 l57l,l 32 783,0 21 2929,l 32 571,8 22 2963,0 33 2862,6 26 1534,5 33 ll47,6 28 889,1 Preparat: KBR pellet max 5 T= 97 @ 405,0 5 T vid 4000 (cmfl)= 71 Täthet (cm"l/pt)= 0,964 2.
UV-absorptionsspektrum [Å max (aíj I vatten vid: pH 2,0, 256 ¶13,4; 280 (8,4) terasspunkt pH 7,0, 254 (14,S); 273 (9,7) terasspunkt pH 11,0, 259 (12,6); 266 (l2,4) terasspunkt ~ _ Elementarsammansättning Molekylformel: C27H43N70ll SCIP. Molvikt 739.
Beräknat C 43,84; H 5,81; N 13,26; O 23,27; S 4,33; Cl 4,73; P 4,19 Erhållet N 13,32; S 4,86; C1 4,49; P 3,25 . Optisk vridning hd]D25, +97° (c, 0,855, vatten) 10 15 20 25 30 35 459 861 37 5. Lösligheter Mycket löslig i vatten, metanol och etanol. Lätt löslig i aceton och andra ketoner, etylacetat och andra estrar, kloroform och metylenklorid. Olöslig i mättade kolväten. 6. Antibakteriell aktivitet U-57930 3-(5'-guanylat) är icke aktiv in vitro. Emel- lertid ger behandling med alkaliskt fosfatas eller fosfodiesteras I U-57930, vilken är ytterst aktiv mot ett antal grampositiva organismer både in vitro och in vivo. 7. Smältpunkt 219 - 2200 C (under sönderdelning).
Emedan föreningarna enligt föreliggande uppfinning är verk- samma mot olika grampositiva och gramnegativa mikroorganis- mer, kan de användas i olika omgivningar för att förhindra tillväxt av sådan mikroorganismer. De kan exempelvis använ- das som desinfektionsmedel för att förhindra S. aureus på tvättade och lagrade ätredskap förorenade med denna bakte- rie. De kan också användas som desinfektionsmedel för oli- ka dentala och medicinska utrustningar nedsmutsade med S. aureus. Vidare kan föreningarna enligt uppfinningen använ- das som bakteriostatiskt sköljmedel för tvättade kläder och för impregnerade papper och tyger och de är också användba- ra för att undertrycka tillväxt av känsliga organismer på plattor och andra mikrobiologiska media.
Föreningarna enligt föreliggande uppfinning är också an- vändbara vid behandling av sjukdomar som orsakas av indi- vider ur släktet Mycoplasma, varvid den mest allmänt kända bildar PPLO (pleuropneumonia-lika organismer), såsom M. hominis, M. salivarium, M. mycoides, M. hyopneumonia, M. hyorhinis, M. gallisepticum, M. arthriditis och andra arter hos djur innefattande husdjur som får, hundar, bo- 10 15 20 25 30 35 459 861 38 skapssvin och fjäderfä (t.ex. kycklingar, kalkoner, ankor och gäss) och laboratoriedjur (t.ex. råttor och möss).
U-57930 3-(5'-ribonukleotider) kan användas vid behand- ling av njurar och andra infektioner när L-formen av gram- negativa och gram-positiva bakterier är närvarande, t.ex.
L-formen av P. mirabilis.
Emedan föreningarna enligt föreliggande uppfinning är amfo- tera substanser kan de bilda salter med syror och baser genom användning av standardförfaranden. Exempel på oorga- niska syror vilka kan användas för att bilda salter är saltsyra, svavelsyra, fosforsyra och liknande. Exempel pâ oorganiska baser är natrium, kalium, liknande. kalcium, litium och Salter av föreningar kan användas för samma ända- mål som grundföreningarna.
Föreningarna enligt föreliggande uppfinning är användbara som antibakteriella medel i lämpliga kompositioner. Dessa kompositioner framställes företrädesvis för administration till människor och djur i enhetsdosform, såsom tabletter, kapslar, piller, pulver, granuler, sterila, parenterala lösningar eller suspensioner och orala lösningar eller suspensioner och olja-vatten emulsioner innehållande lämp- liga kvantiteter av den aktiva föreningen i form av den fria basen eller dess farmakologiska acceptabla salter.
För oral administration kan antingen den fasta eller den flytande enhetsdosformen framställas. För framställning av blandas den huvud- sakligen aktiva ingrediensen med konventionella ingredien- ser såsom talk, magnesiumstearat, dikalciumfosfat, magne- siumaluminiumsilikat, kalciumsulfat, stärkelse, laktos, akacia, metylcellulosa och funktionellt liknande material fasta kompositioner, såsom tabletter, som farmaceutiska utspädningsmedel och bärare. Tabletterna kan lamineras eller på annat sätt sammansättas för till- handahållande av en dosform som ger fördelen av förlängd 10 l5 20 25 30 35 459 861 39 eller fördröjd verkan eller en förutbestämd på vartannat följande verkan av inneslutna medikamenter. Tabletten kan exempelvis bestå av en inre dos och en yttre doskomponent, varvid den senare föreligger i form av ett täckskikt över den tidigare. De tvâ komponenterna kan skiljas åt av ett enteriskt skikt vilkas tjänar att motstå sönderdelning i magen och tillåter innerkomponenten att passera oskadad genom duodenum eller fördröjer frigöringen av läkemedlet.
Olika material kan användas för sådana enteriska skikt el- ler beläggningar, sådana material innefattar ett antal po- lymera syror eller blandningar av polymera syror med så- dana material som shellack, cetylalkohol, cellulosaacetat- ftalat, styrenmaleinsyrasampolymer och liknande. Alterna- tivt kan tvâ komponentsystem användas för framställning av tabletter innehållande tvâ eller flera med varandra icke förenliga aktiva ingredienser. Wafers framställas på samma sätt som tabletter, som endast skiljer sig i form och in- förande av sackaros eller andra sötningsmedel och smakäm- nen. I sin enklaste utföringsform framställes kapslar lik- som tabletter genom blandningen av föreningen med en be- redning av inerta farmaceutiska utspädningsmedel och fyll- medel varefter blandningen fylles på hårda gelatinkapslar av lämplig storlek. Enligt en annan utföringsform kan kaps- lar framställas genom att fylla hårda gelatinkapslar med hårda polymera syrabelagda bönor innehållande föreningen med formlerna enligt uppfinningen. Mjuka gelatinkapslar kan framställas genom maskininkapsling av en uppslamning av föreningen enligt uppfinningen och en acceptabel vegetabi- lisk olja, ljus flytande petrolaum eller andra inerta oljor.
Flytande enhetsdosformer för oral administration som si- raper, elixir och suspensioner kan framställas. En vatten- löslig form av föreningen enligt uppfinningen-kan upplösas i en vattenhaltig bärare tillsammans med socker, aromatis- ka smakämnen och konserveringsmedel under bildning av en sirap. Ett elixir framställes med användning av hydroalko- 4 10 15 20 25 30 35 459 861 40 holisk (etanol) bärare med lämpliga sötningsmedel som sackaros tillsammans med aromatiska smakämnen. Suspensio- ner kan framställas av olösliga former i en sirapsformig bärare med hjälp av ett suspensionsmedel som akacia, dra- gant, metylcellulosa och liknande.
Lokala liniment kan framställas genom att den aktiva före- ningen dispergeras i en lämplig linimentbas, såsom petro- latum, lanolin, polyetyelnglykol, blandningar därav och liknande. Företrädesvis fördelas föreningarna fint med hjälp av en kolloidkvarn och utnyttjande av ljus flytande petrolatum som finpulvriserande medel före dispersion i linimentbasen. Krämer och lotioner för lokal applikation framställes genom att föreningen dispergeras i en olje- fas innan den emulgeras i oljefasen i vatten.
För parenteral administration framställes flytande enhets- dosformer med utnyttjande föreningar enligt uppfinningen och en steril bärare, varvid vatten föredrages. Föreningen kan, beroende på den form och koncentration som användes, antingen suspenderas eller lösas i en bärare. Vid fram- ställning av lösningar kan en vattenlöslig form av före- ningen enligt uppfinningen upplösas i vattnet för injek- tion och filtersteriliseras innan den fylls på lämpliga behållare eller ampuller och förseglas. Företrädesvis kan hjälpmedel såsom lokalanestetika, konserveringsmedel och buffertmedel upplösas i bäraren. För att förbättra stabili- teten kan kompositionen frysas efter fyllning på behållare och vattnet avlägsnas i vakuum. Det torra lyofiliserade pulvret kan sedan förseglas i behållaren och en medföljan- de vattenbehâllare för injektion utnyttjas för att rekon- stituera pulvret före användning_ Parenterala suspensioner framställes i huvudsak på samma sätt.med undantag av att föreningen suspenderas i en bärare i stället för att upp- lösas och sterilisering kan ej genomföras genom filtrering.
Föreningen kan steriliseras genom att utsättas för etylen- l0 15 20 25 30 35 459 861 41 oxid innan den suspenderas i en steril bärare. För för- dröjd verkan framställesn en intramuskulär suspension i olöslig form, såsom trimetylsilyleter eller pamoatsaltet.
Företrädesvis innefattas ett ytaktivt medel eller ett vät- medel i kompositionen för att underlätta fördelningen av föreningen.
Uttrycket enhetsdosform användes i beskrivningen och kraven för att beteckna fysikaliskt skilda enheter lämpliga som enhetsdoser för människor och djur, varje enhet innehållan- de en förutbestämd mängd aktivt material beräknad att ge den önskade terapeutiska effekten i förening med nödvändi- ga farmaceutiska utspädningsmedel eller bärare. Beskriv- ningen av de nya enhetsdosformerna enligt föreliggande upp- finning dikteras av och är direkt beroende på (a) de unika egenskaperna hos aktiva material och den speciella terapeu- tiska effekt som önskas och (b) inneboende begränsningar i möjligheten att rena ett aktivt material för terapeutisk användning på människor och djur som i detalj visas i be- skrivningen och utgör ett drag enligt föreliggande uppfin- ning. Exempel på lämpliga enhetsdosformer enligt förelig- gande uppfinning är tabletter, kapslar, piller, drageër, suppositorier, pulverpaket, granuler, wafers, kapslar, te- skedsvis, matskedsvis, droppvis, ampuller, behållare, skilda multipla: av föregående och andra här beskrivna fOrmEI .
Den aktiva föreningen förenas med en lämplig farmaceutisk bärare i enhetsform för praktisk och effektiv administra- tion. Enligt en föredragen utföringsform av föreliggande uppfinning innehåller enhetsdoserna 10, 25, 50, 100, 250, och 500 mg mängder av en förening med enligt uppfinningen för systemisk behandling; 5 till 65 % vikt/volym för paren- teral behandling. Dosen av en komposition innehållande en aktiv förening och en eller flera aktiva ingredienser be- stämmes med hänvisning till vanliga doser för sådana in- lO 15 20 25 30 35 459 861 42 gredienser.
Följande exempel belyser föredragna utföringsformer enligt uppfinnarens uppfattning och avses inte vara begränsande.
Enligt exemplen utnyttjas 3-(5'-ribonukleotid) av U-5793OE eller U-60970E som aktiv förening men det är uppenbart att dessa endast är exempel på lämpliga föreningar och andra aktiva föreningar inom ramen för uppfinningen kan också användas. U-60970E är 4-cis-n-butyl-L-pipekolinsyraamid av 7-Cl-metyltiolinkosaminid. Framställningen visas i exempel 7 i amerikanska patentskrlften 4 276 789.
Hänvisningarna till U-57930E eller U-6097OE betecknar ne- dan 3-(5'-ribonukleotid) av dessa föreningar. 3-ribonu- kleotiderna är de som visas här.
Beredningsexempel l - kapslar l0OO hårda gelatinkapslar i tvâ stycken för oral använd- ning, var och en innehållande 250 mg U-57930E eller U-60970E framställdes ut följande typer och mängder av ma- terial: U-57930E eller U-6D87OE 250 g majsstärkelse 100 g talk 75 g magnesiumstearat 25 g Materialen blandades noggrant och inkapslades på vanligt sätt.
Den nämnda kapseltypen är användbar vid systemisk behand- ling av infektioner på vuxna människor genom oral admini- stration av en kapsel var sjätte timma. 10 15 20 25 30 35 459 861 43 Liknande förfarande användes varvid kapslar framställdes innehållande U-57930E eller U-60970E i mängder på 10, 25, 50, 100 och 500 mg genom att i stället insätta 10, 25, 50, 100 och 500 g U-57930E eller U-60970E i stället för de 250 g som användes ovan.
Sammansättningsexempel 2 Å kapslar 1000 gelatinkapslar i tvâ stycken för oral användning var- dera innehâllande 200 mg U-57930E eller U-60970E och 250 mg tetracyklinhydroklorid framställdes ur följande typer och mängder av ingredienser: U-57930E eller U-60970E 200 g tetracyklinhydroxklorid 250 g talk 75 g magnesiumstearat 25 g Ingredienserna blandas noggrant och inkapslas på vanligt sätt.
Föregående kapslar är användbara för systemisk behandling av infektioner på vuxna människor genom oral administra- tion av en kapsel var sjätte timma.
Med användning av ovanstående förfarande kan kapslar på liknande sätt framställas innehållande U-57930E eller U-60970E och var och en av följande antibiotika i stället föf'tetracyklin genom ersättande av de 250 g tetracyklin med motsvarande mängd av kloramfenikol, oxitetracyklin, klortetracyklin, fumagillin, erytromycin, streptomycin, dihydronovobiooin och novobiocin. När ett penicillin såsom kaliumpenicillin G användes i stället för tetracyklin ut- nyttjas 250.000 enheter per kapsel.
Sådana kombinationsprodukter är användbara för systemisk behandling av blandade infektioner på vuxna människor ge- l0 l5 20 25 30 35 459 861 44 nom oral administration av en kapsel var sjätte timma.
Sammansättningsexempel 3 - tabletter 1000 tabletter för oral användning var och en innehållande 500 mg U-57930E eller U-60970E framställdes ur följande typer och mängder av material: U-S7930E eller U-609703 500 g laktos 125 g majsstärkelse 65 g magnesiumstearat 25 g ljust flytande petrolaum 3 g Ingredienserna blandas noggrant och kornas. Kornen nedbry- tes genom att de tvingas genom en sikt med sikttal nr l6.
De resulterande granulerna pressas sedan till tabletter, varvid varje tablett innehåller 500 mg U-57930E eller u6o37oE.
Föregående tabeller är användbara för systemisk behandling av infektioner, innefattande malariainfektioner hos vuxna människor genom oral administration av l tablett 3 gånger dagligen.
Med användning av ovanstående förfarande med undantag av att mängden U-57930E eller U-609703 reduceras till 250 g kan tabletter innnehålla 250 mg U-5793OE eller U-6097OE framställas.
Sammansättningsexempel 4 - tabletter 1000 orala tabletter, var och en innehållande 250 mg U-57930E eller U-60970E och totalt 250 mg (83,3 mg varde- ra) av sulfadiazin, sulfamerazin och sulfametazin fram- ställdes ur följande typer och mängder av material: 10 15 20 25 30 35 459 861 45 11-579302 eller U-6o97oE 250 g sulfadiazin 83,3 g sulfamerazin 83,3 g sulfametazin 83,3 g laktos S0 g majsstärkelse 50 g kalciumstearat 25 g ljusflytande petrolatum 5 g Ingredienserna blandas och kornas. Kornen nedbrytes genom att de pressas genom en sikt med sikttalen l6. De resulte- rande granulerna pressas sedan till tabletter, var och en innehållande 250 mg U-57930E eller U-60970E och en total mängd av 250 mg(83,3 mg vardera) av sulfadiazin, sulfa- merazin och sulfametazin.
Föregående tabletter är användbara för systemisk behand- ling av infektion genom oral administration av 4 tabletter först sedan l var sjätte timme.
För behandling av urininfektioner utbytes lämpligen de tre sulfatyperna i ovanstående beredning mot 250 g sulfametyl- tiadiazol eller 250 g sulfacetamid.
Sammansättningsexempel 5 - oral sirag 1000 ml av en vattensuspension för oral användning innehål- lande i varje 5 ml 250 mg U-57930E eller U~6097OE och 500 mg total mängd sulfa framställdes ur följande typer och mängder av ingredienser: U-5793OE eller U~60970E 50 g sulfadiazin 33,3 g sulfamerazin 33,3 g sulfametazin 33,3 g citronsyra ' 2 g bensoesyra 1 g __.._.._.___._.._..._._.__ __.. .________ ___ __ ____________,____ 10 15 20 25 30 35 459 861 46 sackaros 700 g dragant 5 gi citronolja 2 ml dejoniserat vatten, till 1000 ml Citronsyran, bensoesyran, sackaroset, draganten och citron- oljan dispergeras i tillräcklig mängd vatten för erhållande av 850 ml lösning. U-57930E eller U-60970E samt de finför- delade sulfapreparaten omröres i sirapen tills det de är jämnt fördelade. Tillräckligt med vatten tillsättes för att erhålla l000 ml.
Den på så sätt framställda kompositionen är användbar för systemisk behandling av pneumoni hos vuxna människor med en dos av l matsked (10 ml) 4 gånger dagligen.
Sammansättningsexempel 6 - parenteral lösning En steril vattenlösning för intramuskulär användning inne- hållande 200 mg U-57930E eller U-60970E i l ml framställ- des ur följande typer och mängder av material: U-57930E eller U-609703 200 g lidokainhydroklorid 4 g metylparaben 2,5 g propylparaben 0,17 g vatten för injektion upp till 1000 ml Ingredienserna upplöstes i vatten och lösningen sterilisera- des genom filtrering. Den sterila lösningen fylles på behål- lare och behâllarna förseglas.
Sammansättningsexempel 7 - parenteral beredning En steril vattenlösning för intramuskulär användning inne~ hållande i varje ml 200 mg U-57930E eller U-609703 och 10 15 20 25 30 35 47 400 mg spektinomycinsulfat framställdes genom att följande 459 861 i I I typer och mängd blandas U-57930E eller U-60970E 200 g 'spektinomycinsulfat 400 g laktos 50 g vatten för injektion upp till 1000 ml U-57930E eller U-60970E, spektinomycinsulfat och laktos dispergeras i vatten och steriliseras. Den sterila bland- ningen fylles aseptiskt pâ sterila behållare i en mängd av 2 ml.
Sammansättningsexempel 8 ~ lokal liniment l000 g av ett liniment innehållande 0,25 % framställdes 1 följande typer och mängder ingredienser: U-57930E eller U-60970E 2.5 g zinkoxid 50 g kalamin 50 g flytande petrolatum (tungt) 250 g ullfett 200 g vitt petrolatum till 1000 g Det vitåpetrolatumet och ullfett smältes och 100 g fly- tande petroletum tillsattes. U-57930E eller U-6097OE, zinkoxid och kalamin tillsättes till det kvarvarande fly- tande petrolatumet och blandas i en blandningskvarn till dess pulvren är finfördelade och jämnt fördelade. Pulver- blandningen omröres i den vita petrolatumblandningen och omröres till dess linimentet stelnar.
Föregående liniment är användbart för lokal behandling av huden på däggdjur för behandling av infektioner.
Föregående sammansättning kan framställas genom uteslutande 10 15 20 25 30 35 459 861 48 zinkoxid och kalamin. I Om förfarandet enligt ovan följdes kan liknande liniment framställas innehållande U-57930E eller U~60970E i mängder på 0,5, 1, 2 och 5 % genom att ersätta de ovan nämnda 2,5 g U-57930E eller U-60970E med 5, 10, 20, 50 g av nämn- da föreningar.
Sammansättningsexempel 9 - kräm 1000 g vaginalkräm framställdes från följande typer och mängder ingredienser: U-5793OE eller U~6097OE 50 g tegacidregularl l50 g spermaceti l00 g propylenglykol 50 g polysorbat 80 5 g metylparaben l g dejoniserat vatten till l000 g lsjälvemulgerande glycerylmonostearat från Goldschmidt Chemical Corporation, New York, N.Y.
Tegaciden och spermacetin smältes samman vid en temperatur av 70 - 800 C. Metylparaben upplöses i cirka 500 g vatten och propylenglykol, polysorbat 80 och U-57930E och U-60970E tillsättes i sin tur vid en temperatur av 75 - 800 C. Metylparabenblandningen tillsättes långsamt till tegaciden och spermacetin-smältan under konstant omrörning.
Tillsatsen fortsättes under åtminstone 30 minuter med kon- tinuerlig omröring till dess temperaturen sänkts till 40 ~ 450 C. pH-värdet i den slutliga krämen justeras till 3,5 genom införande av 2,5 g citronsyra och 0,2g dibasiskt natriumfosfat löst i 50 g vatten. Slutligen tillsättes till- räcklig mängd vatten för att ge l000 g ocn framställningen omröres till dess att den är homogen och kyles och stelnar. 10 15 25 30 35 459 861 49 Föregående komposition är användbar för behandling av va- ginala infektioner hos människa.
Sammansättningsexempel 10 - liniment, oftalmiskt 1000 g av ett oftalmiskt liniment innehållande 0,5 U-57930E eller U-60970E framställdes från följande typer och mängder ingredienser: U-57930 eller U-609703 5 g bacitracin 12,2 g polymyxin B sulfat (l0.000 enheter/mg l g ljust flytande petrolatum 250 g ullfett 200 g vit petrolatum till 1000 g De fasta ingredienserna finfördelades med hjälp av en luft- finfördelare och tillsättes till den ljusa flytande petro- latum. Blandningen får passera genom en kolloidkvarn för erhållande av jämn fördelning av de finfördelade partik- larna. Ullfettet och det vita petrolatumet sammansmältes och färgas varefter temperaturen justeras till 45 - 500 C.
Den flytande petrolatumuppslamningen tillsattes linimentet och omrördes tills dess linimentet stelnar. Lämpliga lini- ment förpackas i oftalmiska rör innehållande 3,9 g.
Föregående liniment kan med nytta tillföras ögat för behand- ling av lokala infektioner hos människa och andra djur.
Företrädesvis kan föregående komposition innehålla 5 g (0,5 %) metylprednisolon för behandling av inflammation och alternativt bacitracin och polymyxin B sulfat kan ute- slutas. 10 15 20 25 30 35 459 861 50 Sammansättningsexempel ll - ögon-örondroppar 1000 ml sterila lösningar för ögat eller örat användes in- nehållande 10 mg U-57930E eller U-60970E och 5 mg metyl- prednisolon i varje framställd ml från följande typer och mängder av ingredienser: U-57930E eller U-60970E 10 g metylprednisolon-fosfat-natrium 5 g natriumcitrat 4,5 g natriumvätesulfit l g polyetylenglykol 4000 120 g myristyl-T-pikoliniumklorid 0,2 g polyvinylpyrrolidon l g dejoniserat vatten till 1000 ml Ingredienserna upplöstes i vatten och den resulterande lös- ningen steriliseras genom filtrering. Lösningen fylles aseptiskt pâ sterila droppbehâllare.
Kompositioner framställda på detta sätt är användbara för lokal behandling av inflammationer och injektioner i ögat och örat liksom.andra känsliga vävnader i djurkroppen- Sammansättningsexempel l2 - dragêer 10.000 drageër framställes från följande av ingredienser: typer och mängder U-57930E eller U-60970E 100 g neomycinsulfat 50 g polymyxin B sulfat (l0.000 enheter/mg) l g etylaminobensoat 50 g kalciumstearat 150 g pulvriserad sackaros till 5000 g 10 15 20 25 30 35 459 861 51 De pulvriserade materialen blandades tillsammans och slogs till halvgramsdrageër enligt vanlig teknik och fram- ställning av sammansatta tabletter.
Drageërna hålls i munnen och tillåtes upplösa sig långsamt varvid erhålles behandling av mun och strupe på människor.
Sammansättningsexempel 13 - rektala suppositorier 1000 suppositorier, var och en vägande 2,5 g och innehål- lande 100 mg U-5793OE eller U-6097OE framställdes från föl- jande typer och mängder ingredienser: U-57930E eller U-60970 E 100 g polymyxin B sulfat (l0.000 enheter/mg) 1,25 g metylprednisolon 1 g etylaminobensoat 75 g zinkoxid 62,5 g propylenglykol 162,5 g polyetylenglykol 4000 till 2500 g U~57930E eller U-6097OE, polymyxin B sulfat, metylpred- nisolon, etylaminobensoat och zinkoxid tillsättes till propylenglykolen och blandas till dess pulvret är finförde- lat och jämnt fördelat. Polyetylenglykol 4000 smältes och propylenglykoldispersionen tillsättes långsamt under omrö- ring. Suspensionen slås sedan i okylda formar vid 400 C.
Kompositionen tillâtes kallna och stelna och avlägsnas se- dan från formen och varje suppositorium inslås i folie.
Föregående suppositorier införes reaktal för lokal behand- ling av inflammation och infektion.
Alternativt kan föregående komposition framställes med ute- slutande av steroiden. 10 15 20 25 30 35 459 861 52 Sammansättningsexempel 14 - mastitisliniment 1000 g liniment för behandling av mastitis för mjölkkor framställdes ur följande typer och mängder ingredienser: U-5793OE eller Ü-60970E 25 g metylprednisolonacetat 0,5 g ljust flytande petrolatum 300 g klorobutanol, vattenfri 5 g polysorbat 80 5 g 2 % aluminium-monostearat- jordnötsolja gel 400 g vit petrolatum till 1000 g U-57930E eller U-60970E och metylprednisolonacetat maldes med ljust flytande petrolatum till dess materialet är fin- fördelat och jämnt fördelat. Klorobutanol, polysorbat 80, jordnötsolja gel och vitt petrolatum upphettas till 490 C och bildar en smälta i vilken flytande petrolatumdispersio- nen röres in. Under kontinuerlig omröring tillåtes disper- sionen kallna bch stelna) till rumstemperatur och fylles på engångsmastitissprutor i doser om 10 g.
Sammansättningsexempel l5 - djurföda 1000 g av födoämnesbehandling framställdes ur följande ty- per och mängder av ingredienser: U-57930E eller U-60970E 10 g sojabönmjöl 400 g fiskmjöl 400 g vetegroddolja 50 g sorghummolass 140 g Ingredienserna blandas samman och slås till pellets. Sam- mansättningen kan tillföras laboratoriedjur, d.v.s. råttor, möss, marsvin och hamstrar för profylaktisk behandling 10 15 20 25 30 35 459 861 53 under transport.
För andra djur som fjäderfä, t.ex. kycklingar, ankor, kal- koner och gäss kan kompositionen tillföras djurens regul- jära föda i mängder beräknade att ge den önskade dosen U-5793OE eller Uf6097OE.
Sammansättningsexempel 16 Följande förfarandet hos var och en av föregående samman- sättningsexempel l till 15 kan varje antibakteriell före- ning enligt föreliggande uppfinning ersättas med en ekvi~ valent mängd U-57930E eller U-60970E som anges i exemplen för att ge terapeutiska egenskaper.
Pâ liknande sätt kan var och en av ovanstående fria bas- föreningar användas i form av ett farmaceutiskt(eller far- makologiskt) acceptabelt salt, t.ex. hydrokloriden, sul- fatet, fosfatet, natriumsaltet, kaliumsaltet, kalciumsal- tet eller litiumsaltet. »v Sammansättningsexempel 17 - kapslar 1000 hårda gelatinkapslar i två stycken för oral användning, var och en innehållande 200 mg U-57930E eller U-60970E och 200 mg hydroxiklorokinsulfat framställes ut följande typer och mängder av ingredienser: U-5793OE eller U-60970E 200 g hydroxiklorkinsulfat 200 g talk 75 g magnesiumstearat 25 g Ingredienserna blandas noggrant och inkapslas på vanligt sätt. 10 15 20 25 30 35 459 861 54 Föregående kapslar är användbara för att förhindra återkom- mande attacker av P. vivax på vuxna människor genom oral administration av 1 kapsel i veckan.
Sammansättningsexempel 18 - tabletter 1000 orala tabletter var och en innehållande 125 mg U-57930E eller U-60970E och 325 mg kininsulfat framställdes ur följande typer och mängder av material: U-57930E eller U-6097OE 125 g kininsulfat 325 g laktos 50 g majsstärkelse 50 g kalciumstearat 25 g ljust flytande petrolatum S g Ingredienserna blandas noggrant och kornas. Kornen bryts ned genom att pressas genom en sikt med sikttalet 16. De resulterande granulerna pressas till tabletter, var och en innehållande 125 mg U-57930E eller U-60970E och 325 mg kininsulfat.
Dessa tabletter är användbara för behandling av malaria genom oral administration av 2 tabletter var åttonde timme under 7 dagar därefter l tablett 3 gånger dagligen under 7 dagar.
Sammansättningsexempel 19 - oral sirap 1000 ml av en vattensuspension för oral användning in- nehâllande i varje 10 ml en 25 mg pyrimetamin, 250 mg U-5793QE eller U-60970E och 500 mg sulfadiazin framställdes ur följande typer och mängder ingredienser: 10 l5 20 25 30 35 459 861 55 U-57930E eller U-60970E 25 g pyrimetamin 2,5 mg sulfadiazin 50 g citronsyra 2 g bensoesyra 1 g sackaros 700 g dragant 5 g citronolja 2 ml dejoniserat vatten till 1000 ml Citronsyran, bensoesyran, sackarosen, draganten och citron- oljan dispergeras i tillräcklig mängd vatten för erhållande av 850 ml lösning. U-57930E eller U-60970E pyrimetamin och sulfadiazin omröres i sirapen tills dess de är jämnt förde- lade. Tillräckligt med vatten tillsättes för att erhålla 1000 ml.
Beredningen framställd på detta sätt är användbar vid pro- fylaktisk behandling av malaria hos vuxna människor vid en dos av l tesked (10 ml) per vecka.
Sammansättningsexempel 20 - parenteral beredning Steril vattenkomposition för intramuskulär användning in- nehållande i l ml 200 mg U-57930E eller U-6097OE framställd ur följande typer och mängder av ingredienser: U-57930E eller U-60970E 200 g laktos 50 g vatten för injektion till 1000 ml U-57930E eller U-60970E och laktosen dispergerades i vatten och steriliserades. Den sterila kompositionen fylldes asep- tiskt i en mängd av 2 ml på sterila behållare. 10 15 20 25 30 35 459 861 56 Sammansättningsexempel 21 Förfarandet enligt vart och ett av föregående exempel följ- des varvid den antimalaria-aktiva föreningen enligt före- liggande uppfinning ersattes med ekvivalenta mängder U-57930E eller U-60970E som visas besitta terapeutiska egenskaper. Pâ liknande sätt kan ovanstående föreningar användas i form av farmaceutiskt (eller farmakologiskt) acceptabla salter, t.ex. hydrokloriden, sulfatet, fosfatet, natriumsaltet, kaliumsaltet, kalciumsaltet eller litium- saltet.
In vivo-resultat gentemot P. berghei MEDI (mg/kg) CD 2 (mg/kg) 50 förening sub. Q3 OI sub. Q OI U-57930E 0,16 1,6 16 (12-22) >5O U-2l25lF <20 -- 53 (46-61) -- U-24729A < 1,25 -- 4,7 (3,2-6,9) -- U-8284 klorkinin < 5-10 l2,5 ll,5 (8,8-15) l4 klorokin (P04)2 < 5 -~ <20 -” lMED = dos med vilken medianöverlevande tiden (ST50) ökas signifikant (p = 0,05) över ST50 för obehandlade kontrolldjur. 2CDšO = Median skyddande dos i mg/kg 95 % sannolikhet.
Administratíonsväg.
Anti-malariaprov (P. berghei) Testförfarande. Hanmöss, CF-l (18 - 20 g) hölls i burar om l0 och infekteraåes intraperitonellt med helblod från mus infekterat med P. berghei 3 dagar före blödning. En 0,2 ml mängd hepariniserat blod, utspätt med 1:10 med salt tjäna- 10 15 20 25 459 861 57 de som inokulum. Denna volym innehöll approximativt 106 parasiter. 4 timmar efter infektion behandlades varje grupp om 10 möss antingen subkutant med 0,2 ml eller oralt med 0,5 ml av den önskade läkemedelskoncentrationen. Behandlingen fortsat- te l gäng varje dag under 4 dagar. Djuren observerades un- der 28 dagar och dödsfall upptecknades. Död före sjätte dagen betraktades som traumatisk.
Utvecklingen av effektiviteten för olika analoger och läke- medelskoncentrationer av individuella analoger baserade på genomsnittlig överlevandetid av djuren för varje behandlings- nivâ och genomsnittlig skyddande dos för de individuella analoga föreningarna. Beräkningarna utfördes på en IBM 370 dator. Resultaten baserade sig på behandlade grupper jäm- fördes med resultaten från obehandlade grupper eller grup- per behandlade med klorokin.
Andra protosoer inom ramen för föreliggande uppfinning är intracellulära parasiter exempelvis arter av Plasmodia, Toxoplasma och Leishmanía, protosoer som förbrukad de röda blodkropparna (RBC) hos behandlade patienter exempelvis Entamoeba histolytica och vissa Trypanosoma och andra hel- minter vilka sväljer röda blodkroppar under förfarandet exempelvis Schistosomes. 58 459 861 Schema 1 5 H i: 3 C113 H N H [ß HO-C-H C3H7 H I? H -N-C-H H H ß 10 0 Ho 5 OH H H* (1) H 3 SCH3 H OH 15 20 (2) 25 H OH 30 Å. 35 10 15 20 25 30 459 861 59 Schema 2 där Rl vilken kan vara enkelt eller flerfaldigt substitue- rad i varje ställning i pyridinringen som inte redan är upptagen av R2 utväljes ur den grupp som består av vä- te, alkyl och substituerad alkyl där alkyldelen innehål- ler l - 8 kolatomer och isomera former därav, cykloalkyl och substituerad cykloalkyl, substituerat syre, substitue- rat kväve, halogen, fenyl och substituerad fenyl, -(CH2)n-OH, -(CH2)n-NR4R5 och isomera former därav där n betecknar ett heltal från 1 till 8, där R4 och RS betecknar väte eller alkyl med 1 - 8 kolatomer samt isomera former därav, där R2 vilken kan vara enkelt substituerad i varje ställning i pyridinringen som inte redan är substituerad med Rl betecknar O Il -c-x och där X betecknar en aminofunktion av en förening utvald ur gruppen 7(R)-hydroxi-metyl-l-tio-N,-linkosaminid, 7(S)- hydroxi-metyl-l-tio-CL-linkosaminid, 7(S)-halogen-metyl-l- tio-fÅ~linkosaminid, 7(R)-halogen~metyl-l-tio-&rlinkos~ aminid, 7(S)-metoxi-metyl-l-tio-OL-linkosaminid, 7-deoxi- 7(S)-(metyltio)-metyl-l-tio-05-linkosaminid, 7-deoxi-7(S)- (2-hydroxietyltio)-metyl-l~tio-Ii-linkosamínid och 7~de- oxi-7(S)-(3-hydroxipropyltio)-metyl-l-tio-fl,-linkosaminid och farmaceutiskt acceptabla salter därav. 10 459 861 60 där Rl och R2, vilka kan föreligga i 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 eller 9-ställning i ringen tidigare definieraß och där R 3 betecknar H, CH3, C2H5 och -CH2-CH2-OH, där n betecknar ett helt tal från l till 4 och farmaceutiskt acceptabla salter därav. 10 15 20 25 30 35 |H"fflf?|ñ”:' 61 Schema_3 U-57930 U-57930 3-(5'-Cytídylaß U-57930 3-(5'-adenyïat) U-57930 3-(5'-urídyïatfi U-57930 3-(5'-guanyïatfi I coNH- ca 6 459 861 CH; a H-C-C1 7 H0 5 H OR 0
Claims (12)
1. l. 3-(5'-ribonukleotiden) av en förening med formeln l (CH2)n CH O fww C-NH 10 CH w-Z OH SCH OH där Rl kan vara enkelt eller flerfaldigt substituerad i 3, 4, 5, 7, 8 eller 9-ställning i ringen och är utvald ur en grupp som består av väte, alkyl, och substituerad alkyl 20 där alkyldelen innehåller l - 8 kolatomer, isomera former därav, cykloalkyl och substituerad cykloalkyl, substitue- rat syre, substituerat kväve, halogen, fenyl och substitue- rad fenyl, -(CH2)n-OH- -(CH2)n-NR R 25 mera former därav; där R3 betecknar H, CH3, C2H5 och -C52-CH2-OH; där n betecknar ett helt tal från l till 4, där Y betecknar en grupp bestående utav 7(S)-halogen och 7(R)-halogen och farmakologiskt acceptabla salter därav. 30
2. Förening enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d att 7(S)-halogen är 7(S)-kloro.
3. n - G t av att den utgöres av en förening med formeln 4 5 och isomera former där- av där n betecknar ett helt tal från l till 8, där R4 och Rs betecknar väte eller alkyl med l - 8 kolatomer och iso- âV 3-(5'-ribonukleotiden) enligt krav 1, k ä n n e t e c k-
4. ; (H \D CD =3\ .nå 63 Czfls fe É HC-Cl
5. N H C NH - CH HO O H S-CH 10 3 OH och farmaceutiskt acceptabla salter därav. 15 4. 3-(5'-ribonukleotiden) av en förening enligt krav 1 med formeln C4H9 ïflß O HC-Cl 20 || ß N C-NH-CH H H 0 OH 25 -CH3 H och farmaceutiskt acceptabla salter därav. 30 5. 3-(5'-ribonukkxmiden)av en förening enligt krav 1 med formeln 0 3 5 N 'ff 10 15 20 25 30 459 861 64 där X är QIUPP vald ur gruppen bestående av 7(S)-halogen- metyl-l-tio-mf-linkosaminid och 7(R)-halogen-metyl~l-tio- ck-lindosaminid samt farmaceutiskt acceptabla salter därav
6. 3-(5'-ribonukhäfiiåäfi av en förening enligt krav 1 med formeln Czfis o N ”o ä* H där X definieras i krav 5 samt farmaceutiskt acceptabla salter därav.
7. - 3'(5"rib0flüklGfififiEfl) av enförening enligt krav 1 med førmeln 235 "usla 211 Z O I N där X definieras i krav 5 samt farmaceutiskt acceptabla salter därav.
8. Förening enligt krav 1 med formeln Jin 01 UD CO Ch -A 65 CH2CH3 ïH3 H-C-Cl N CONH - CH H H I. R SCH3 OH där R betecknar NH2 /' N I 44l\ N o O i H _.ï-O-CH2 OH 0 OH OH 459 861 66
9. En förening enligt krav 1 med formeln CH CH 2 I 3 CH3 I H-e-cl N coNH - ca H Ho o on scH3 on där R betecknar OH OH 459 851 67
10. l0. En förening enligt krav 1 med formeln CH CH CH 2 3 I 3 I-I-C-Cl N CONH " CH H HO O OR SCH3 OH där R betecknar OH OH 459 861 68
11. ll. En förening enligt krav 1 med formeln cH2cH3 CH I 3 H-c-cl N CONH - CH H Ho O on scH3 on vari R betecknar OH Naz/:gQ:N N/J K _.ï-o-cfiz ou °~\ OH OH 10 15 20 25 30 35 459 861 69
12. l2. Förfarande för framställning av en 3-(5'-ribonukleotid) av en förening enligt krav 1 med formeln (mån RL ca 3 o 'b 'v Y N H | c-Na ---- cH Ra Ho o oH C113 on vari Rl kan vara enkelt eller dubbelt flerfaldigt substi- tuerad i 3, 4, 5, 7, 8 eller 9-ställning i ringen med en grupp vald ur gruppen väte, alkyl och substituerad alkyl, där alkyldelen innehåller l - 8 kolatomer och isomera former därav, cykloalkyl och substituerad cykloalkyl, substitue- rat syre, substituerat kväve, halogen, fenyl och substitue- rad fenyl, -(CH2)n-OH, -(CH2)n-NR4R5 samt isomera former därav, där n betecknar ett helt tal från l till 8, där R¿ och R5 betecknar väte eller alkyl med l - 8 kolatomer samt isomera former därav, där R3 betecknar en grupp vald ur grup- pen bestående av H, CH3, CZHS och -CH2-CH2-OH, där n be- tecknar ett helt tal från l till 4, där Y betecknar en grupp vald ur gruppen bestående av 7(S)-halogen och 7(R)-halogen och farmaceutiskt acceptabla salter därav, k ä n n e - t e c k n a t av att man odlar Streptomyces rochei, NRRL 3533 i ett vattenhaltigt medium innehållande näringsmedel i närvaro av en förening med ovanstående formel och utvin- ner den önskade 3-(5'-ribonukleotiden) ur odlingsvätskan.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US06/255,541 US4368193A (en) | 1981-04-20 | 1981-04-20 | Process for treating malaria |
US06/255,542 US4383109A (en) | 1981-04-20 | 1981-04-20 | Lincomycin nucleotides |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SE8202433L SE8202433L (sv) | 1982-10-21 |
SE459861B true SE459861B (sv) | 1989-08-14 |
Family
ID=26944757
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SE8202433A SE459861B (sv) | 1981-04-20 | 1982-04-19 | Linkomycin-3-(5'-ribonukleotider) och foerfarande foer deras framstaellning |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
KR (1) | KR880002416B1 (sv) |
AU (1) | AU545748B2 (sv) |
CA (1) | CA1163938A (sv) |
CH (1) | CH653037A5 (sv) |
DE (1) | DE3213921A1 (sv) |
ES (1) | ES8308927A1 (sv) |
FR (1) | FR2504142B1 (sv) |
GB (1) | GB2097002B (sv) |
HU (1) | HU191085B (sv) |
IL (1) | IL65385A (sv) |
IT (1) | IT1151719B (sv) |
NL (1) | NL8201595A (sv) |
PL (1) | PL133485B1 (sv) |
SE (1) | SE459861B (sv) |
SU (1) | SU1303036A3 (sv) |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3671647A (en) * | 1971-03-24 | 1972-06-20 | Upjohn Co | Lincomycin 3-nucleotides and the salts thereof |
-
1982
- 1982-03-19 CA CA000398814A patent/CA1163938A/en not_active Expired
- 1982-03-25 GB GB8208830A patent/GB2097002B/en not_active Expired
- 1982-03-26 AU AU81988/82A patent/AU545748B2/en not_active Ceased
- 1982-03-30 IL IL65385A patent/IL65385A/xx unknown
- 1982-04-15 DE DE19823213921 patent/DE3213921A1/de not_active Ceased
- 1982-04-16 NL NL8201595A patent/NL8201595A/nl not_active Application Discontinuation
- 1982-04-17 KR KR8201712A patent/KR880002416B1/ko active
- 1982-04-17 ES ES511499A patent/ES8308927A1/es not_active Expired
- 1982-04-19 SU SU823430749A patent/SU1303036A3/ru active
- 1982-04-19 IT IT20810/82A patent/IT1151719B/it active
- 1982-04-19 FR FR828206685A patent/FR2504142B1/fr not_active Expired
- 1982-04-19 SE SE8202433A patent/SE459861B/sv not_active IP Right Cessation
- 1982-04-20 PL PL1982236043A patent/PL133485B1/pl unknown
- 1982-04-20 CH CH2386/82A patent/CH653037A5/de not_active IP Right Cessation
- 1982-04-20 HU HU821214A patent/HU191085B/hu not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
NL8201595A (nl) | 1982-11-16 |
DE3213921A1 (de) | 1983-01-05 |
IT1151719B (it) | 1986-12-24 |
CH653037A5 (de) | 1985-12-13 |
ES511499A0 (es) | 1983-10-01 |
GB2097002B (en) | 1985-06-19 |
KR830010195A (ko) | 1983-12-26 |
AU545748B2 (en) | 1985-08-01 |
SE8202433L (sv) | 1982-10-21 |
ES8308927A1 (es) | 1983-10-01 |
FR2504142B1 (fr) | 1985-07-26 |
HU191085B (en) | 1987-01-28 |
SU1303036A3 (ru) | 1987-04-07 |
IL65385A0 (en) | 1982-05-31 |
FR2504142A1 (fr) | 1982-10-22 |
IT8220810A0 (it) | 1982-04-19 |
KR880002416B1 (ko) | 1988-11-08 |
IL65385A (en) | 1985-10-31 |
AU8198882A (en) | 1982-10-28 |
CA1163938A (en) | 1984-03-20 |
PL236043A1 (sv) | 1982-11-08 |
PL133485B1 (en) | 1985-06-29 |
GB2097002A (en) | 1982-10-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI87367C (sv) | Förfarande för framställning av en antiparasitisk förening | |
JP2587241B2 (ja) | 新規化合物、その製法及びそれを含む医薬組成物 | |
BE903232A (fr) | Composes antibiotiques et leur procede de preparation | |
US3857948A (en) | Salinomycin | |
IE51019B1 (en) | Esters of hydroxylalkyl-purines,processes for preparing them and therapeutical composition containing these esters as active ingredients | |
US4022889A (en) | Therapeutic compositions of antibiotic U-44,590 and methods for using the same | |
NL8006229A (nl) | Lincomycine en clindamycine-analoga. | |
US4464466A (en) | Process of producing lincomycin nucleotides | |
MXPA97008611A (en) | Compounds of dialquiltiacumic | |
HU179463B (en) | Process for preparing deoxy-narasin antibiotic complex | |
US4383109A (en) | Lincomycin nucleotides | |
SE459861B (sv) | Linkomycin-3-(5'-ribonukleotider) och foerfarande foer deras framstaellning | |
US5439934A (en) | Method and compositions for helmintic, arthropod ectoparasitic and acaridal infections with novel agents | |
SU751332A3 (ru) | Способ получени антибиотического комплекса а-35512 | |
NZ200342A (en) | A method for controlling pasteurella infections | |
CS198195B2 (en) | Process for preparing 4-imino-1,3-diazabicyclo/3,1,0/hexan-2-one | |
JP2506568B2 (ja) | 抗生物質10381b2の製法および該抗生物質を含有する食肉用動物の成長促進用組成物 | |
US4368193A (en) | Process for treating malaria | |
US4110435A (en) | Antibiotic a-28086 factor d and process for production thereof | |
US4110436A (en) | Antibiotic a-28086 factor d and process for production thereof | |
JPH02138187A (ja) | 新規化合物、その製法及びそれを含む医薬組成物 | |
US5198464A (en) | Method and compositions for helmintic, arthropod ectoparasitic and acaridal infections with novel agents | |
EP0369503B1 (en) | Method for the control of pneumocystis carinii | |
US5155097A (en) | Polycyclic ether antibiotic having anthelmintic, anticoccidial and growth promotant activity | |
CA1041930A (en) | Antibiotic a-28086 complex from streptomyces aureofaciens |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
NUG | Patent has lapsed |
Ref document number: 8202433-2 Effective date: 19911108 Format of ref document f/p: F |