PT97689B

PT97689B - Processo para a preparacao de composicoes farmaceuticas incorporando como ingrediente activo isoxazol-4-carboxilamida e hidroxialquilideno-cianoacetamida

Info

Publication number: PT97689B
Application number: PT97689A
Authority: PT
Inventors: Robert R Bartlett; Friedrich-Johannes Kammerer
Original assignee: Hoechst Ag
Priority date: 1990-05-18
Filing date: 1991-05-16
Publication date: 1998-09-30
Also published as: IL98163A; CZ290474B6; BR9008022A; JPH05506425A; FI105683B; JPH11322700A; RU94033835A; CY2123B1; WO1991017748A1; CZ290737B6; NO924433L; GR3023638T3; HU9203619D0; CS145091A3; JP3233610B2; SK281317B6; CA2083179A1; LV10575A; SK281318B6; CN1051074C

Description

GSP

Na literatura foram já descritos uma série de processos para a preparação de isoxazol-4-carboxilamidas (DE 2 524 959; DE 2 655 009,· DE 3 405 727).

Da Patente Europeia 13 376 é conhecido que a (4-trifluormetil)-anilida do ácido 5-metilisoxazol-4-carboxílico, devido às suas propriedades farmacológicas, pode ser utilizada como agente antirreumát&co, antiinflamatório, antipirético e analgésico, bem como para o tratamento de esclerose múltipla. São ali igualmente descritos processos para a preparação deste composto.

ϊ

Descobriu-se agora gue as isoxazol-4-carboxilamidas de fórmula I e as hidroxialquilideno-cianoacetamidas de fórmula Ia e a sua forma tautomerica Ib possuem actividade anti-tumórica. Muitos dos agentes anti-tumóricos conhecidos produzem durante a terapia, como acções colaterais, náuseas, vómitos, ou diarreias, que também tornam necessário um tratamento médico hospitalar. Além disso estes medicamentos modificam também a velocidade de crescimento de outras células corporais, o que conduz então a sintomas tais como, por exemplo, queda de cabelo ou anemia. S_stes sintomas, no tratamento do Homem e dos animais com os compostos de fórmula I, não foram observados. Estas substâncias activas, ao contrário dos agentes anticancerígenos citotóxicos conhecidos até ao presente, não tem a propriedadede prejudicar o sistema imune (Bartlett, Inb. J. Immumopharmac., 1986, Qs 199-204). Consequentemente abre-se uma nova via da terapia de tumores, visto que o sistema de defesa próprio do organismo não é prejudicado, enquanto que as células do tumor são impedidas de crescer. Surpreendentemente, um grande número de células de tumores são inibidos por estas substâncias activas, enquanto que as células do sistema imune, como por exemplo os linfócitos T, são inibidos apenas para uma concentração superior até 50 vezes.

A invenção refere-se pois à utilização de pelo menos um composto de fórmula I, Ia ou Ib.

(la) (lb) das suas eventuais formas estereoisoméricas e/ou eventualmen te de pelo menos um dos seus sais fisiologicamente aceitáveis, em gue

R¹ representa

a) hidrogénio

b) alguilo com 1 a 6 átomos de carbono,

c) alguilo com 1 a 4 átomos de carbono, substituído uma ou mais vezes por

1) halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

d) fenilo,

R representa

a) hidrogénio,

b) alguilo com 1 a 4 átomos de carbono,

c) fenilalquilo cmm 1 ou 2 átomos de carbono na parte alguilo, especialmente benzilo,

1) alcenilo com 2 a 3 átomos de carbono,

r³ representa

a) um radical heterocíclico insaturado, com 1, 2 ou 3 núcleos, possuindo no sistema de anel 3 a 13 átomos de carbono e 1 a 4 heteroátomos escolhidos do grupo formado por oxigénio, enxofre e azoto, dos quais no máximo um é diferente de azoto, insubstituido ou substituido uma ou mais vezes por

1) halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

2) alquilo com 1 a 3 átomos de carbono,

3) alquilo com 1 a 3 átomos de carbono substituído uma ou mais vezes por

3.1. halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

4) alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono,

5) alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono substitui do uma ou mais vezes por

5.1. halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

6) nitro,

7) hidroxi,

8) carboxi,

9) carbamoilo,

10) grupos oxo,

b) um radical de fórmula II

(II) na qual R , presentam

1)

2)

3)

R podem ser iguais ou diferentes e re4)

5)

6) 7)

8)

9) hidrogénio, alquilo com 1 a 3 átomos de carbono alquilo com 1 a 3 átomos de carbono substituído uma ou mais vezes por

3.1. halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

5 6 em que R representahhidrogenio e R e R em conjunto com o anel fenilo de fórmula II formam um anel naftalino, /56 em que R representa hidrogénio e R e R formam um radical metilenodioxi, alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono, alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono substituído uma ou mais vezes por

7.1. halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo, alquilmercapto com 1 a 3 átomos de carbono, alquilmercapto com 1 a 3 átomos de carbono subs tituido uma ou mais vezes por

9.1. halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

lo)	halogéneo, tal como iodo	fluor, cloro, bromo ou
11)	nitro,
12)	ciano,
13)	hidroxi,
14)	carboxi,
15)	alquilsulfonilo com	1 a 3 átomos de carbono
16)	carboalcoxi com 1 a deia alquilo,	3 átomos de carbono na ca-
17)	benzoilo,
13)	benzoilo substituidc	> uma ou mais vezes por
	18.1. halogéneo.	tal como fluor, cloro, bro

mo ou iodo

18.2. alquilo com 1 a 3 átomos de carbono,

18.3. alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono

19) fenilo,

20) fenilo substituído uma ou mais vezes por

	20.1. 20. 2. 20.3.	alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono, halogeneo tal como fluor, cloro, bromo ou iodo, alquilo com 1 a 3 átomos de carbono,
21)	fenoxi,
22)	fenoxi	substituído uma	ou mais vezes por

22.1. alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono substituído uma ou mais vezes por

22.1.1. halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo.

22.2. halogéneo, tal como fluor, cloro, bro mo ou iodo,

22.3. alguilo com 1 a 3 átomos de carbono substituído uma ou mais vezes por 22.3.1 halogéneo, ,tal como fluor, cloro, bromo ou iodo, c) um radical de fórmula III

- (CHJ -COOR¹⁰ (III)

XI

na qual _R10 representa

1) hidrogénio

2) alquilo com 1 a 4 átomos de carbono,

d)

n é um número inteiro compreendido entre 1 e 12,

R e R em conj unto com o átomo de azoto ao qu, estão ligados formam um anel com 4 a 9 membros substituídos por .1

1) carbonilo no átomo de azoto adjacente ao átomo de carbono,

a) R e R em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados formam um anel de 5 a 6 membros de fórmula IV

-N

(IV) na qual W representa

1) - CH₂-,

2) - CH₂-CH₂-,

3) - CH₂-CH-, i

CH~

4) - CH₂-CH-, t

^C2^H5

5) - CH -CH-,

I

OH

6) - GH₂-O- ou

7) - CH₂-SR*⁷ representa

a) hidrogénio,

b) alguilo com 1 a 17 átomos de carbono,

c) alguilo com 1 a 3 átomos de carbono subs tituido uma ou mais vezes por halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

d) fenil-alquilo com 1 ou 2 átomos de carbo no na parte alguilo, especialmente benzi lo, o⁸

R representa

a) hidrogénio,

b) metilo,

c) alcenilo com 2 a 3 átomos de carbono, para a preparação de medicamentos para o tratamento de doen ças cancerígenas.

Entre estes medicamentos são preferidos o composto 4-trifluormetil-anilida do ácido 5-metilisoxazol-4-carboxílico (composto 1) e N-(4-trifluormetil)-2-ciano-3-hidroxicrotonamida (composto 2).

Os sais fisiologicamente aceitáveis apropriados do composto de formula I são por exemplo os sais alcalinos, alcalinoterrosos e de amónio, incluindo os de bases de amónio orgânicas.

Aos radicais heterocíclicos insaturados, com 1, 2 ou 3 núcleos, com 3 a 13 átomos de carbono, pertencem por exemplo tienilo, piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridazinilo, imidazolilo, tiazolilo, tiazolinilo, oxazolilo, tiazdiazolilo, benzoxazolilo, benzimidazolilo, guinolilo, pirazolilo, acridinilo, indolilo, tetrazolilo ou indazolilo.

composto de fórmula 1 e os seus sais fisiologicamente aceitáveis prestam-se, de forma particular, para o tratamento de um grande número de doenças cancerígenas, Aos tipos de cancros gue são especialmente inibidos por meio destes compostos pertencem por exemplo leucemias, especialmente leucemias crónica dos tipos de células T e B, cancro dos nódulos linfáticos, por exemplo linfoma de Hodgkin ou linfoma não-Hodgkin, carcinomas, sarcomas ou cancro da pele. As substâncias activas podem ser administradas ou por si próprias, isoladamente, por exemplo na forma de microcápsulas, em misturas entre si ou em combinação com substancias auxiliares e/ou substâncias veiculares apropriadas,

A preparação do composto de fórmula I, Ia ou Ib é realizada de forma conhecida (DE 2 524 959; DE 2 655 009; DE 3 405 727; DE 2 524 929; DE 2 555 789; DE 2 557 003).

Os compostos de fórmula I, Ia ou Ib podem ser preparados;

a) fazendo reagir um composto de fórmula V

O

na qual X representa um átomo de halogénio, de preferência cloro ou bromo, e R¹ tem o significado indicado na fórmula I, com uma amina de fórmula VI

H-N.

(VI)

R

3 na gual R e R tem os significados indicados na fórmula I, ou

b) tratando-se um composto de fórmula VI

HC-OR¹

II

CH,-CO-C-CONH

R' (VI) na gual R representa alquilo com 1 a 4 átomos de 4 5 .6 carbono e R , R e R tem os significados indicados na fórmula I, com uma quantidade preferivelmente pelo menos equimolecular de hidroxilamina num dissolvente orgânico,* ou

c) fazendo-se reagir um composto de fórmula V na gual

X e R¹ têm os significados indicados acima, com uma amina alifática primária de fórmula VII

Η,Ν- (CH_O) - COOR Λ ζ η

na qual η e R^° tem o significado indicado na fórmula I, ou

d) fazendo-se reagir um composto de fórmula V na gual

X e R¹ têm o significado indicado acima, com um lactame de fórmula VIII

H-N (CH,) m

(VIII) na qual m é um número inteiro de 1 a 6, ou

e) fazendo-se reagir um composto de fórmula V na gual X

1a. ... . .

e R tem o significado indicado acima, com uma amina de fórmula IX / \

H-N W (IX) na qual W tem o significado indicado na fórmula I, ou

f) fazendo-se reagir o composto de fórmula I na presença de um agente básico, transformando-o no correspon dente composto de fórmula Ia ou lb.

U_m outro objectivo da invenção são os novos compostos de fórmula I

ο

II

(I) das suas eventuais formas estereoisoméricas e/ou de pelo menos um dos seus sais fisiologicamente aceitáveis,

na qual

R¹ representa

a) hidrogénio,

b) alquilo com 2 a 6 átomos de carbono,

o) alquilo com 1 a 4 átomos de carbono substituido uma ou mais vezes por

1) halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

d) fenilo.

representa

a) hidrogénio,

b) alcenilo com 2 a 3 átomos de carbono,

c) benzilo,

R^ representa

a) piridilo substituído uma ou mais vezes por

1) hidrogénio

2) halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

3) nitro

4) alquilo com 1 a 3 átomos de carbono

5) alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono

b) um radical de fórmula II

(II) na qual 4 5 6

R , R t R podem ser iguais ou diferentes e representam

1) halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

2) nitro

3) hidrogénio

4) benzoilo, substituído uma ou mais vezes por

4.1 halogéneo, tal como fluor, cloro bromo ou iodo

4.2 metilo

4.3 metoxi

5)alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono substituído uma ou mais vezes por

5.1 halogénio, tal como fluor, cloro bromo ou iodo,

6) alquilo com 1 a 3 átomos de carbono substituído uma ou mais vezes por

6.1 halogéneo, tal como fluor, cloro bromo ou iodo,

8) alquilsulfonilo com 1 a 3 átomos de carbono na cadeia alquilo, ,5

9) em que R representa hidrogénio e R e (5 r em conjunto formam um radical metilenodioxi,

10) ciano

11) alquilmercapto com 1 a 3 átomos de carbono na cadeia alquilo,

12) benzoilo,

13) alquilo com 1 a 4 átomos de carbono

c) pirimidinilo substituido uma ou mais vezes por

1) alquilo com 1 a 3 átomos de carbono,

d) indolilo,

e) indazolinilo,

Um outro objectivo da invenção são os novos compostos de fórmula Ia ou de fórmula Ib

(la) (Ib)

as suas eventuais formas estereoisoméricas e/ou eventualmente os seus sais fisiologicamente aceitáveis, nas quais os s :

a)

7 8 radicais R , R e R são definidos como segue

R

1)

2)

R

1) representa hidrogénio alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, representa hidrogénio

2) metilo r representa

1) fenilo

2) fenilo substituído uma ou mais vezes por

2.1 halogéneo

2.2 alquilo com 1 a 3 átomos de carbono substituido uma ou mais vezes por halogéneo, tal como fluor, clorobromo ou iodo,

b) R representa

1) alquilo com 1 a 4 átomos de carbono

2) hidrogénio

3) trifluormetilo

Ηθ representa

1) hidrogénio

2) metilo

3) alcenilo com 2 a 3 átomos de carbono, r^ representa

1) piridilo

2) piridilo substituido uma ou mais vezes por

2.1 halogéneo, tal como fluor, bromo ou iodo,

uLUESl <, rjKCAU^SK ;3

2.1 etilo com 1 a 3 átomos âe carbono

3) pirimidinilo, substituido como para 2)

4) tiazolilo, substituido como para 2) e

4.1 alcoxicarbonilo com 1 a 3 átomos de carbono na cadeia alquilo

5) benzotiazolilo, substituido como para 2)

6) benzimidazolilo, substituido como para 2)

7) iadazolilo, substituido como para 2),

8) fenilo,

9) fenilo substituido uma ou mais vezes por

9.1 alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono substituido uma ou mais vezes por

9.1.1 halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo

9.2. halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

9.3 o radical mstilenodioxi,

9.4 nitro

9.5 benzoilo,

9,6 benzoilo substituido uma ou mais vezes por

9.6.1 halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo

9.6.2 alquilo com 1 a 3 átomos de carbono

9.6.3 alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono,

9.6.4 alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono substituido uma ou mais vezes por halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

9.7 carboxi

9.8 hidroxi

9.9 fenoxi substituído uma ou mais vezes por

9.9.1 halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

9.9.2 alquilo com 1 a 3 átomos de carbono substituído uma ou mais vezes por halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

c) R representa

1) hidrogénio

2) alquilo com 1 a 4 átomos de carbono

R representa

1) hidrogénio

2) metilo 3

R representa

1) um radical de fórmula III π

-(CH₂)₄-COOR^iU na qual R¹^ representa

1.1 hidrogénio

1.2 alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, n é um número inteiro compreendido entre 1 e 8

d) R representa hidrogénio alquilo com 1 a 4 átomos de carbono,

1)

2)

3 /

R e R em conjunto com o átomo de azoto ao qual estáo ligados formam um anel de 4 a 9 membros substituídos por

2.1 carbonilo no átomo de azoto adjacente ao átomo de ©rbono, ou

3 /

R e R em conjunto com o atomo de azoto ao qual estão ligados formam um anel piperidino eventual mente substituido por alguilo com 1 a 3 átomos de carbono.

XJm outro objectivo da invenção é também a utilização dos novos compostos de fórmula I, Ia ou lb e/ou de pelo menos um dos seus sais fisiologicamente aceitáveis para a preparação de medicamentos para a profilaxia e/ou o tratamento de doenças reumáticas.

São também objecto da invenção medicamentos gue consistam em pelo menos um composto de fórmula I e/ou pelo menos um dos seus sais fisiologicamente aceitáveis, ou que contém pelo menos um destes substâncias activas em combinação com substâncias veiculares, diluentes e/ou outras substâncias auxiliares farmacêuticas apropriadas e fisiologicamente aceitáveis.

Os medicamentos de acordo com a invenção podem ser administrados por via oral, tópica, rectal e também eventualmente parentérica, sendo preferida a aplicação oral.

As formas de composição galénica sólidas ou líguidas apropriadas são por exemplo granulados, pós, drageias, comprimidos, cápsulas ou microcápsulas, supositórios xaropes, sucos, suspensões, emulsões, gotas ou soluções injectáveis, bem como preparados com libertação retardada da substância activa, em cuja preparação tomam parte substâncias auxiliares correntes, tais como substâncias veiculares, desintegrantes, aglutinantes, substâncias de revestimento, intumescentes, lubrifácantes, apalatantes, edulcorantes ou auxiliais -

res de dissolução. Gomo substâncias auxiliares utilizadas mais freguentemente mencionam-se por exemplo carbonato de magnésio, dióxido de titânio, lactose, manite e outros açucares, talco, albumina de leite, gelatina, amidos, celulose e os seus derivados, óleos animais e vegetais, polietilenoglicóis e dissolventes, como entre outros água, esterilizada, e álcoois monofuncionais ou polifuncionais, por exemplo glicerina.

Preferivelmente as composições farmacêuticas são preparadas e administradas na forma de unidade de dosagem, contendo cada unidade como componente activo uma determinada dose de pelo menos um dos compostos de fórmula I e/ou pelo menos um dos seus sais fisiologicamente aceitáveis. No caso de formas de unidade de dosagem sólidas, tais como comprimidos, cápsulas, drageias ou supositórios, esta dose pode ascender até cerca de 300 mg, mas de preferência é de cerca de 10 a 50 mg.

Para o tratamento de um paciente adulto (70 kg) gue padeça de leucemia estão indicadas - consoante a eficácia do composto de fórmula I e/ou dos seus sais fisiologi camente aceitáveis no homem - doses diárias de cerca de 5 a 300 mg de substância activa, de preferência cerca de 25 a 100 mg. para administração oral. Em determinadas circunstâncias, porém, podem também ser aplicadas doses diárias mais altas ou mais reduzidas. A administração da dose diária pode realizar-se tanto por uma única administração, na. forma de uma única, unidade de dosagem, ou também de várias unidades de dosagem menores, bem como também por administração múltipla de doses repartidas a determinados intervalos.

Finalmente, os compostos de fórmula I e/ou pelo menos um dos seus sais fisiologicamente aceitáveis podem ser formulados na preparação das formas de composição galénica mencionadas acima também em conjunto com outras subs· tâncias activas apropriadas, por exemplo outros agentes anti19 , _u______ mi

IHifSHHiWTehMíitMW*»*

-tumóricos, imunoglobulinas, anticorpos monoclonais, agentes imunoestimulantes ou antibióticos. Egtes compostos podem também ser acompanhados por uma terapia de radiações.

Ensaios farmacológicos e resultados

Como teste de eficácia de agentes guimioterapeuticos recorreu-se ao teste de proliferação de culturas celulares in vitro.

Exemplo 1

Ensaio de proliferação

Meio Clicks/RPMI 1640 (5θί5θ) com L-glutamina sem NaKCOy na forma de pó para 10 1 (Seromed, Biochrom, Berlim, Alemanha) é dissolvida em 9 1 de água bidestilada e é esterilizada por filtração para frascos de 900 ml cada um.

Melo de lavagem

900 ml do meio base são tamponizados com 9,5 ml de solução de hidrogenocarbonato de sódio a 7,5% e 5 ml de HEPES (ácido N-2-hidroxietil-piperazino-N-2-etanosulfónico) (Gibco, Eggenstein, Alemanha).

Meio de utilização

900 ml do meio base mais 19 ml de solução de NaKCO₃ (7,5%: 10 ml de solução de HEPES e 10 ml de solução de L-glutamina (200 ml-l)).

Meio para a proliferação de linfocitos induzida por mitogénlo meio de utilização é adicionado de 1% de soro de vitelo fetal (FCS) inactivado por calor (30 min.,

56°C).

Meio das células de tumor

Para a manutenção das células de tumor e das células de hibridoma o meio de utilização é adicionada de 5% de FCS.

Meio de cultura para linhas de células

Para a manutenção das linhas de células misturam-se 900 ml do meio de utilização com 10% de FCS, 10 ml de solução de NEA (non-essential amino acids) (Gibco), ml de solução de piruvato de sódio (100 mM, Gibco) e -2 ml de mercaptoetanol 10 molar.

Obtenção e tratamento, das células de baço, para a proliferação. de linfocitos induzida por microgénio

Os ratos são mortos por deslocação cervi cal e retiram-se-lhes os baços em condiçSes estéreis. Sobre um crivo esterilizado, com uma abertura de malha de 80 mesh, desagregam-se os baços e com uma seringa de plástico (10 ml) passam-se cuidadosamente para uma placa de Petri com o meio de crescimento. Para eliminação dos eritrócitos da sus pensão de células do baço a mistura é incubada cerca de 1 min. com agitação ocasional, em solução de cloreto de amónio hipotónica 0,17 M à temperatura ambihente. Os eritrócitos são lisados deste modo, enquanto que a vitalidade e reactividade dos linfocitos não são influenciados. Após centrifugação (7 min./340 g) o lisado é descartado, as células são lavadas por 2 vezes e são tomadas de cada vez em meio de ensaio.

Prolefiração de linfocitos induzida por mitoqénio /

x 10 células de baço tratadas, de ratos NMRI fémeas, são pipetadas conjuntamente com diversos mitogénios e preparados para 200 ul de um meio de ensaio por cavidade, em placas de microtítúlo de fundo chato. Utili·

zacn-se as seguintes concentrações de mitogénio e preparado:

Concanavalina A /~Serva_7i 0,5 -0,25 - 0,12 jtg/ml

Lipopolisacarídeo /^-Calbiochem__7í 1,0 - 0,5 - 0,1 ^ug/ml fitohemaglutinina / Gibco_7 : 0,5 - 0, 25 - O,12 % Stammlosung mitogénio de erva-dos-cancros / Gibco_7 composto 1 ou 2s 50, 25, 10, 7,5, 5, 2,5, 1, 0,5, 0,1 ^pMol

Como controles positivos os grupos foram definidos com adição de mitogénio mas sem o preparado. Nos controles negativos trata-se de células em meios de culturas com o preparado mas sem adição de mitogénio. Cada concentração de mitogénio foi ensaiada 4 vezes com todas as concentra ções de preparado. Após 48 h de incubação a 37°C/5% CC>₂ adi ciona-ae gota a gota às células 25 ul/cavidade de tricio-timidina (Amersharn) com uma actividade de O, 25 uCi/cavidade (9,25 x 10 Bq). Segue-se uma outra incubação nas mesmas condições, durante um período de tempo de 16 h. Para a avaliação do preparado de ensaio as células são recolhidas sobre papel de filtro por meio de um aparelho de recolha de células (Plow Laboratories), recolhendo-se a timidína não incorporada num balão de recolha especial. 0 papel de filtro é seco, é perfurado e conjuntamente com 2 ml de cintilador (Rotiszint 22, firma R_oth) é colocado em frascos gue são depois arrefecidos durante 2 h a 4°C. A quantidade de radioactividade introduzida nas células é medida com um contador beta (firma Packard, Tricarb-460 c).

P-reparacão das células de tumor e linhas de células para_o teste de proliferação

As linhas de células ou células de tumor utilizadas no ensaio são tomadas na fase de crescimento logarítmico da cultura mãe, são lavadas 2 vezes em meio de lavagem e são postas em suspensão no correspondente meio.

Realização e avaliação do teste de. proliferação

teste de proliferação foi realizado em placas de microtítulo de fundo redondo. 0 composto 1 e interleucina foram dissolvidos, em cada caso em 50 ul/cavidade do correspondente meio e ajustou-se o numero de células (5 x 10 ) com 100 ^1/cavidade de modo gue se produzisse um volume fiscal de 200 ^μϊ/cavidade. Em todos os ensaios determinaram-se os valores em guadroplicado. As células sem preparado e sem factor de crescimento foram definidas como controle negativo, e as células sem preparado e com factor de crescimento forneceram os valores para os controles positivos. 0 valor dos controles negativos foi obtido de todos os valores determinados e a diferença de controle positivo menos controle negativo foi estabelecida como 100%.

As placas foram incubadas 72 b a 37°C/ /5% de COg e determinou-se a taxa de proliferação de forma correspondente à da proliferação de linfócitos induzida por nitogénio.

A_s linhas de células foram obtidas da colecção inicial, American Type Culture Collection (ATCC).

guad.ro 1 mostra as concentrações às guais tem lugar uma inibição de 50%:

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Exemplo 2

Toxicidade aguda em administração oral composto 1 foi administrado oralmente a ratos ou ratazanas para determinação da toxicidade aguda.

Os valores LD₅₀ foram determinados de harmonia com Litchfield e Wilcoxon.

peso dos ratos NMRI (NMR.I ϊ N_aval Medical Research Institute) é âe 20 a 25 g e o dos ratos SD (SD: Sprague-Dawmey) é de 120 a 165 g. A_ntes do ensaio submetem-se os ratos a um jejum de ©rca de 18 h. D_ecorridas 5 h depois da administração da substância ensaiada reestabele ce-se de novo a alimentação normal. P_assadas 3 semanas os animais foram mortos com clorofórmio e dissecados. Utilizaram-se por cada dose 6 animais. Os resultados estão indicados no guadro 2

Quadro 2

rato NMRI rato SD

Composto 1

Toxicidade aguda per OS LD_5o (mgAg)

445 (362 - 546) rato 235 (167 - 332)

Composto 2 toxicidade aguda per OS

LDg₀ (mgAg)

SD 160 (133 - 193)

Exemplo 3

Toxicidade aguda após administração intraperitoneal

A toxicidade aguda depois da administração intraperitoneal das substâncias de ensaio foi realizada com ratos NMRI (20 a 25 g) e ratos SD (120 a 195 g). A substancia ensaiada foi posta em suspensão numa solução a

1% de carboximetil-celulose de sódio. A_s diversas doses das

substâncias de ensaio foram administradas aos ratos num volume de 10 ml/kg de peso conporal e às ratazanas num volume de 5 ml/kg de peso corporal. Utilizaram-se para cada dose 10 animais. Decorridas 3 semanas determinou-se a toxici dade aguda de acordo com o método de Litchfield e Wilcoxon. Os resultados estão indicados no quadro 3.

Quadro 3 rato NMRI rato SD

Exemplo 4

Composto 1

Composto 2 toxicidade aguda intraperito neal ld₅₀ (mg/kg)

185 (163 - 210) rato NMRI 170 (153 - 189) toxicidade aguda intraperitoneal LD (mg/kg) (100 - 200)

A Preparação de 4-trifluormetil-anilida do ácido 5-metilisoxazol-4-carboxilico

Uma solução de 0,05 mol de cloreto de ácido 5-metilisoxazol-4-carboxílico (7,3 g) em 20 ml de acetonitrilo é adicionada gota a gota â temperatura ambiente a uma solução de 0,1 mol de 4-trifluormetilanilina (16,1 g) em 150 ml de acetonitrilo. Depois de 20 minutos de agitação o cloridrato de 4-trifluormetilanilina precipitado é isolado por filtração, é lavado duas vezes com 20 ml de acetonitrilo de cada vez e os filtrados depois de reunidos são concentrados a pressão reduzida. Ofotem-se assim 12,8 g da 4-trifluormetil-anilida do ácido 5-metilisoxazol-4-carboxílico (composto 1) cristalino branco.

B Preparação de N-(4-trifluormetilfenil)-2-ciano-3-hidroxicrotonamida

Dissolvem-se 0,1 mol de 4-trifluormetil-anilida do ácido 5-metil-isoxazol-4-carboxílico em 100 ml

de metanol e a +10°C misturam-se com uma solução de 0,11 mol (4,4 g) de soda cáustica em 100 ml de água. Agita-se durante 30 minutos e depois da diluição com água acidifica-se com ácido clorídrico concentrado. A massa cristalina precipitada é separada por filtração, e lavada com água e é seca ao ar. 0 rendimento e de 24,4 g de N-(4-trifluormetilfenil)-2-ciano-3-hidroxicrotonamida (composto 2). P_onto de fusão em metanol 205 a 2O6°C.

Exemplos de preparação

A estrutura de todos os compostos descritos adiante foi confirmada por análise elementar e por espectros IR e

5. Ν- (4-α1οΓθάΐί1νιαΓϊΏ6ίοχί)-ί5Ώϋ-5-5^1ΐ3οχηζο1-4--θ5Γΐ)θxamida

0,1 mol (19,4 g) de 4-clorodifluormetoxianilina, dissolvidos em 180 ml de acetonitrilo, são misturados gota a gota a temperatura ambiente com uma solução de 0,05 mol (7,3 g) de cloreto de ácido 5-metilisoxazol-4-carfooxílico em 30 ml de acetonitrilo, mediante agitação. Agita-se por mais 20 minutos e separa-se por filtração o líquido do sal prsipitado. 0 filtrado é concentrado â secura a pressão reduzida. Ofetem-se assim 28,5 g (94,2% do rendimento teórico) de um produ to cristalino.

Ponto de fusão /recristalizado em ciclohexano-acetona 20:1 (v/v)_?í 112-113°C.

Analogamente ao exemplo descrito acima são preparados também os seguintés compostos de fórmula I.

6. N-(4-fluorfenil)-ispxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 162 a 164°c) obtido a partir do cloreto de ácido isoxazol-4-carboxílico e 4-fluoranilina.

7. N-(4-clorofenil)-isoxazol-4-carboxamida / de ponto de fusão 175 a 177°C (decomposição )__7 obtido a partir de cloreto de ácido isoxazol-4-carboxílico e 4-cloroanilina.

8. N-(4-bromofenil)-isoxazol-4-carboxamida /”de ponto de fusão 184 a 186° C (decomposição)__7 obtido a partir do cloreto de ácido isoxazol-4-carboxílico e 4-bromoanilina.

9. N^Ur.ÍQ.dfi,fanAl.).r..A,g,QXaa9Àr,á.zXiarteai^Í,<3a / ^de ponto de fusão 207 a 2O8°C_7 obtido a partir de cloreto de ácido isoxazol-4-carboxílico e 4-iodoanilina.

10.

11.

12.

13.

N- (4-nitrofenil)-isoxazol-4-carboxamida / de ponto de fusão 208 a 2lo°C (decomposição)_7 obtido a partir do cloreto do ácido isoxazol-4-carboxílico e 4-nitroanilina.

N-(3,4-metilenodioxifenil)-isoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 168 a 169°C) obtido a partir de cloreto do ácido isoxazol-4-carboxílico e 3,4-metilenodioxianilina.

N- (4-benzoilfenil)-isoxazol-4-carboxamida /de ponto de fusão 197 a 199°C (decomposição)_7 a partir do cloreto do ácido isoxazol-4-carboxxlico e 4-aminobenzofenona.

r'í- (4-fluor fenil )-5-etilisoxazol-4-carbox amida (de ponto de fusão 75 a 77°C) a partir de cloreto do ácido 5-etilisoxazol-4-carboxílico e 4-fluoranilina

14. N-(4-clorofenil)-5-etilisoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 103 a 105°C) a partir de cloreto do ácido 5-etilisoxazol-4-carboxílico e 4-carboxílico e 4-cloroanilina.

15. H-(4-bromofenil)~5-etilisoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 117 a 118°C) a partir de cloreto do acido 5-etilisoxazol-4-carboxílico e 4-bromoanilina.

16. ^;T-(4-n,itr.Qfe,nil.)-.5.-etilisoxazol-4-carb.o.x amida (de ponto de fusão 139 a 141°C) a partir de cloreto do ácido 5-etilisoxazol-4-carbox£lico e 4-nitroanilina.

17. N-(3,4-metilenodioxifenil)-5-etilisoxazol-4-carboxamlda (de ponto de fusão 105 a 106°C) a partir de cloreto do ácido 5-etilisoxazol-4-carboxílico e 3,4-metilenodioxianilina

18. N-(4-trifluormetoxjfenil)-5-etilisoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 52 a 54°C) a partir de 5-etilisoxazol-4-carboxamida e 4-trifluormetoxianilina

19. N- (4-benzoilfenil),-.5-etilisQxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 168 a 170°C) a partir de cloreto do ácido 5-etilisoxazol-4-carboxílico e 4-aminobenzofenona.

20.

21.

N-/ 4-(4-fluorbenzoil)-fenil 7-5-etilisoxazQl-4-carboxamida (de ponto de fusão 153 a 155°C) a partir de cloreto de ácido 5-etilisoxazol-4-carboxilico e 4-(4-fluorbenzoil)-anilina.

(4- clorobenzo i 1) - f en i 1_ 7- 5- et i l isoxazo1-4- carboxamida (de ponto de fusão 159 a 161°c) a partir de cloreto de ácido 5-etilisoxazol-4-carboxílico e 4-(4-clorobenzoil)-anilina

22. N-/ 4-(4-bromobenzoil)-fenil 7-5-etilisoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 178 a 181°C) a partir de cloreto de ácido 5-etilisoxazol-4-carboxílico e 4-(4-bromobenzoil)-anilina.

N- (4-benzoilfenil) -5-propillsoxazol-4-.carboxam.iâa (de ponto de fusão 134 a 135°C) a partir de cloreto do ácido 5-propilisoxazol-4-carboxílico e 4-aminobenzofenona.

N- (4-clorofenil) -5-butilisoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 81 a 92°C) a. partir de cloreto de ácido 5-butilisoxazol-4-carboxílico e 4-cloroanilina.

N-(4-benzoilfenil)-5-butilisoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 108 a 110°C) a partir de cloreto do ácido 5-foutilisoxazol-4-carboxílico e de 4-aminobenzofenona.

H-(4-fluorfenil)-5-trifluormetilisoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 97°C) a partir de cloreto de ácido 5-trifluormetilisoxazol-4-carboxílico e 4- fluor anil ina

N-(4-cloro fen il)-5-tri f1uor met ili spxazo1-4-carboxamida (de ponto de fusão 90 a 92°c) a partir de cloreto do ácido 5-trifluormetil-isoxazol-4-carboxílico e 4-cloroanilina.

N-(4-nitrofenil)-5-trifluormetilisoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 136 a 138°C) a partir de cloreto do ácido 5-trifluormetil-isoxazol-4-carboxílico e 4-nitroanilina

N- ¢3./ 4-met il enod iox i- f eni 1) - 5-tr i f 1 uor met ilisox azol-4-carboxamida (de ponto de fusão 114 a 116°C) a partir de cloreto de ácido 5-trifl uormetilisoxazol-4-carboxílico e 3,4-metilenodioxianilina.

H-(4-trifluormetilfenil)-5-clorometillsoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 136 a 137°c) a partir de cloreto de ácido 5-clorometilisoxazol-4-carboxílico e 4-trifluormetilanilina.

N- (4-trifluortnetilfenil) -5-fenilisoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 159 a 160°C) a partir de cloreto de ácido 5-fenilisoxazol-4-carboxílico e 4-trifluormetilanilina.

N- (4-fluorfenil) -5-fenillsoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 151 a 153°C) a partir de cloreto do ácido 5-fenilisoxazol-4-carboxílico e 4-fluoranilina.

M~. (4-met i 1 sul.£on.í 1 f eni 1) - 5-meti 1 isoxazo 1 -4- car box.a-. mida (de ponto de fusão 170 a 172°C) a partir de cloreto do ácido 5-metilisoxazol-4-carboxílico e 4-metilsulfonilanilina.

N-benzil-N-(4-trifluormetilfenil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 87 a 89°C) a partir de cloreto do ácido 5-metilisoxazol-4-carboxílico e N-benzil-4-trifluormetilanilina.

N- (3.5-di-t-butil-4-hidroxifenil)-5-metilispxazol-4-carboxamida /de ponto de fusão 199 a 2O3°C (decomposição)_7 a partir de cloreto do ácido 5-metilisoxazol-4-carboxílico e 3,5-di-t-butil-4-hidroxianilina

N-(5-cloro-2-piridil)-isoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 254 a 255°C) a partir de cloreto de ácido isoxazol-4-carboxílico e 2-amino-5-cloropiridina.

N- (5-cloro-2-piridil)-5-etilispxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 133 a 136°c) a partir de cloreto do ácido 5-etilisoxazol-4-carboxílido e 2-amino-5-cloropiridina.

N-(5-bromo-2-piridil)-5-etilisoxazol-4-carboxamlda (de ponto de fusão 144 a 145°C) a partir de cloreto do ácido 5-etilisoxazol-4-carboxílico e 2-amino-5-bromopiridina.

N- (5-nitro-2-oiridil)-5-etilisoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 236 a 237°C) a partir de cloreto do ácido 5-etilisoxazol-4-carboxílico e 2-amino-5-nitropiridina.

N- (5-cloro-2--piridil).-5-.fenilisoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 160 a 161°C) a partir de cloreto do ácido 5-fenilisoxazol-4-carboxílico e 2-amino-5-cloropir idina, ponto de fusão 155 a 157°C) a partir de cloreto do ácido 5-metilisoxazol-4-carboxílico e 5-aminoindol.

N-(6-indazolil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 198 a 202°C) a partir de cloreto de ácido 5-metilisoxazol-4-carboxílico e 6-aminoindazol.

N- (5-indazolil) -5-,metilisoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 218 a 22O°c) a partir de cloreto do ácido 5-metilisoxazol-4-oarboxílico e 5-aminoindazol.

N- alil-N-fenil-5-metilisoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 79 a 85°C) a partir de cloreto do ácido 5-metilisoxazol-4-carboxilico e N-alilanilina.

H-Z 3-(1,1,2,2-tetrafluoretpxi)-fenil 7-5-metilisoxazol-4-carboxamlda (de ponto de fusão 97°C) a partir de cloreto de ácido 5- mêtilisoxazol-4-carboxílico e 3- (1,1, 2, 2-tetrafluoretoxi)-anilina.

N- (4-cianofenil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 197 a 200°C) a partir de cloreto do ácido 5-metilisoxazol-4-carboxílico e 4-cianoanilina.

H-(4-metilmercaptofenil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 134 a 136°C) a partir de cloreto do ácido 5-metiliso^,kazol-4-carboxílico e 4-metilmercaptoanilina.

H- (4, 6-dimetil-2~~piridil) -5-metilisoxazol-4-cgtrboxamida (de ponto de fusão 210 C) a partir de cloreto de ácido 5-metilisoxazol-4-carboxílico e 2-amino-4, 6“dimetilpiridina.

N-(4,6-di meti1-2-paraz in ill-5-metilisoxazol-4-carboxamida (de ponto de fusão 222 a 226°C) a partir de ^cloreto do ácido 5-metilisoxazol-4-carboxílico e 2-amino-4, 6-dimfetilpirazina.

N- (4-trifluormefoxifenil)-2-ciano-3-hidroxicrotonamida. Dissolvem-se 0,1 mol (28,6 g) de N- (4-trifluormetoxifenil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida em 100 ml de etanol e a 20°G misturam-se com uma solução de 0,11 mol (4,4 g) de soda cáustica em 100 ml de água. Agita-se durante 30 minutos e depois de diluição com água acidifica-se com ácido clorídrico concentrado. A massa cristalina gue precipita é separada por filtração, é lavada com água e seca ao ar. Obtem-se assim 27,7 g (97,1% do rendimento teórico) de N-(4-trifluormetoxifenil)-2-ciano-3-hidroxicrotonamida de ponto de fusão 171-176°C (de etanol).

Analogamente ao exemplo descrito acima foram preparados também os seguintes compostos de fórmula la ou Ib.

2-ciano-3-hidroxi-N-/~4- (l, 1, 2, 2-tetrafluoretoxi)-fen.il. /-crotonamida (de ponto de fusão 166-164°C)

a partir de N-/~4- (l_z l_z 2, 2-tetrafluoretoxi)-fenil__/-5-metilisoxazol-4-carboxamida.

N- (5-cl0ro-2-pirid.il.).-2-cianp-3-hidroxicrotpn amida /de ponto de fusão 213 a 215°C (decomposição)__7 a partir de N- (5-cloro- 2-piridil) -5-metilisoxazol-4-carboxamida.

⁵³ N- (2-glpro-3-piridil)-2-cianQ.-3-hidrpxi.crptonamida (de ponto de fusão 128 a 131°c) a partir de N-(2-cloro-3-piridil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida.

N-(4-benzoil.fenil )-2--C.iano-3-hidroxicrotonamida (de ponto de fusão 186 a 188°C) a partir de N-(4-benzoilfenil)-5-metil-isoxazol-4-carboxamida.

H-/ 4-(4-clorobenzoil)-fenil 7-2-ciano-3-hidroxi-4-metilcrotonamida (de ponto de fusão 157 a 159°C) a partir de N-/~4- (4-clorobenzoil)-fenil_J7-5-etilisoxazol-4-carboxamida.

1Τ-1Ί-/~4- (4-bromobenzoil) -fenil /-2-ciano-3-hidroxicro tonamida (de ponto de fusão 221 a 223°C) a partir de 4-(4-bromobenzoil)-fenil_7-5-metilisoxazol-4-carboxamida.

N-/~4-(4-metoxibenzoil)-fenil /-2-ciano-3-bidroxicrotonamida (de pontode fusão 74 a 75°C) a partir de N-/”4-(4-metoxibenzoil)-fenil_7-5-metilisoxazol-4-carboxamida.

N-/~4- (4-meti.lbenzoil) -fenil 7-2-çiano-3-hid;roxicrotonamida (de ponto de fusão 177 a 179°C) a partir de N-/”4- (4-metilbenzoil)-fenil_J7-5-metilisoxazol-4-carboxamida.

⁵⁹ N- (5-cloro-2-piriâil)-2-ciano-3-hidroxi-4-metilcrotonamida (de ponto de fusão 206 a 208°C) a partir de

N- (5-cloro-2-piridil )-5-etilisoxazol-4-carboxa.mida.

17- (5-bromo- 2-piridil) -2-ciano-3-hidroxi-4-metilcrotonamida (de ponto de fusão 200 a 2O2°C (decomposição)) a partir de N-(5-bromo-2-piridil)-5-etilisoxazol-4-carboxamida.

2-ciano-3-hidroxi-4-.metl 1-N- (4-nitrofeni 1) -crotonamida (de pf. 202 a 2O3°C (decomposição) a partir de N-(4-nitrofenil)-5-etilisoxazol-4-carboxamida

N- (3,4-metilenodloxifenil·) -2-ciano-3-nidroxi-4-meT11crotonamida (de pf. 99 a 100°c) a partir de R-(3,4-metilenodioxifenil)-5-etilisoxazol-4-carboxamida,

R-(4-benzoilfenil)-2-ciano-3-hidroxi-4-propilcrotpnamlda a partir de N-(4-benzoilfenil)-5-butilisoxazol-4-carboxamida, ^N~(5-bromo-2-piridil)-2-ciano-3-h idroxicrofonamida / de pf. 220 a 223°C (decomposição)_7a partir de N-(5-bromo-2~piridil)~5-metilisoxazol-4-carboxamida.

65. R-/4-(4-clorobenzoil)-fenil /~2-ciano-3-hidroxlcrotonamida /de pf. 219 a 223°C (decomposição)__/ a partir de 24-(4-clorobenzoil)-fenil__7-5-metilisoxazol-4-carboxamida.

66. N-Z 4- (4-fluorbenzoil)-fenil /-2-ciano-3-hidroxicrotonamida /~de pf. 229 a 231°C (decomposição) J a partir de R-/~4-(4-fluorbenzoil)-fenil__7-5-metilisoxazo1-4-carboxamida.

67. R-Z4- (4-fluorbenzoil)-fenil /-2-ciano-4-metil-3-hidroxicroton.amida. (de pf. 147 a 148°C) a partir de R-Z~A- (4-fluorbenzoil)-fenil_->7-5-etilisoxazol-4-carboxamida.

N-/~4-(4-bromobenzoil)-fenil /-2-ciano-3-hidroxi-4metilcrotonamida (de pf. 153 a 155°C) a partir de N4- (4-bromofoenzoil)-fenil__7-5-etilisoxazol-4-carboxamida.

69. N- (4-trifluormetox.i) - fenil-2-clanp-3-hidroxi-4-met ilcrotonamida (de pf. 166 a 167°C) a partir de N-(4-trifluormetoxi)-fenil-5-etilisoxazol-4-carboxamida.

70. N-(4-fluorofenil)-2-ciano-3-hidroxi-4-metilcrptonamida (de pf. 145°C) a partir de N-(4-fluor fenil)-5-etilisoxazol-4-carhoxamida.

71- N- (3.4-metilenodioxifenil,)-2-ciano-3-hidroxi-4-metilcrotonamida (de pf. 99 a 100°C) a partir de N-(3.4-metilenodioxi£enil)-5-etilisoxazol-4-carboxamida ². N- (4-metilsul fonil) -.fenil-2-ciano-3-hÍdroxicrotonamlda (de pf. 196 a 198°c) a partir de N-(4-metilsulfonil )-fenil-5-metilisoxazol-4-carboxamida

N-alil-N-fenil-2-ciano-3-hidroxicrotonamida (de pf.

a 50°C) a partir de N-alil-N-fenil-5-metilisoxazol-4- car.boxamida.

N- (4-etoxiça.rbonilmetil-2-tiazolil)-2-ciano-3-hidroxiorotonamida (de pf, 147°C) a partir de N-(4-etoxicarbonilmetil-2-tiazolil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida.

75· N- (2-b©rLZ imldazolxll- 2- ciano-3-h idrox ierotongmida (de ponto de decomposição > 300°C) a partir de N-(2-benzimidazolil)-5-metilisoxazol-4-carboxamid.a.

⁷⁶ N- (4-metil-2-tiazolil)-2-ciano-3-hidroxicrotonamida / de pf. 210 a 212°G (decomposição )_/a partir de N-(4-metil-2-tiazolil)-5-m2tilisoxazol-4-carboxamida.

ΊΊ Ν-(4-cloro-2-benzotiazolil)-2-ciano-3-hióroxicrotonami •«O *— da / de pf. 211 a 213 C (decomposição)__/ a partir de N (4-cloro-2-benzot iazolil )-5-metilisox azol-4-carboxamida

N-(3-piridil)-2-ciano-3-bidroxicrotonamida / de pf.

240 a 25O°C (decomposição )_7 a partir de N-(3-piridil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida.

N~ (4, 6-dimetil·-2-piridil) -2-ciano-3-hidroxIcrotonamida (de pf. 184 a 186°c) a partir de H-(4,6-dimetil-2-piridil)-5-metilisoxasol-4-carboxamida

H-(4,6-dimetil-2-pirimidil)-2-çiano-3-hidroxicrotonamida (de pf. 221°G) a partir de N-(4, 6-dircetil-2-pirimidil )-5-metilisoxazol-4-carboxamida.

V-(6-indazolil) -2»ci_ano-3-hiàroxicrotonamiáa (de pf.

> 300°C) a partir de N«(6-indazolil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida.

N- (5-indazolil.) - 2-ciano-3«b idròxlcrotonamida (de pf. 220 ?a 223°G) a partir de H-(5-indazolil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida.

N- (.4-carboxi-3-hidroxifenil) -2-ciano-3-hidroxicrotonamida / ^âe P^£· ^{242 a} 246°C (decomposição)__/ a partir de N-(4-carboxi-3-hidroxifenil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida

84. N-(3-carboxi-4-hidroxifenil)-2-ciano-3-bidroxicrotonamida /~de pf. 248 a 252°C (decomposição )__7 a partir de N-(3-carboxi-4-hidroxifenil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida.

E— (4-carboxi-3-clorofenil)-2-ciano-3-hiâroxicrotonamida /~de pf. 218 a 224°C (decomposição)_7 a partir ♦ X

de N- (4-carboxi-3-clorofenil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida

IT- (4-hidroxifenil)-2-ciano-3-hidroxicrotonamida /~de ponto de decomposição 184 a 186°C (decomposição)__7 a partir de N-(4-hidroxifenil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida

H-/?-(4-trif1uormetilfenoxi)-fenil 7-2-ciano-3-hidroxi-4-metllcrotonamida (de pf. 147 a 149°C) a partir de N-/~4-(4-trifluormetilfenoxi)-fenil_7-5-metilisoxazol-4-carboxamida

N-/ 4-(4-trifluormetilfenoxi)-fenil 7-2-ciano-3-hidroxicrotonamida (de pf. 171 a 173°C) a partir de IT-Z4- (4-trifluormetilfenoxi)-fenil__7-5-metilisoxazol-4-carboxamida

H-metil-H-(4-trifluormetilfenil) - 2-ciano-3-hidroxicrotonamida ( de pf. 69 a 7O°c) a partir de N-metil-N- (4-trifluormetil£enil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida

Piperidida do ácido 2-hidroxietiliderÍOcianoacático a partir de N- (5-rnetil-4-isoxazolilcarbonil) -piperidina

4-metilpiperidida do ácido 2-hidrox.ietilidenocianoacéti-co a partir de N-(5-metil-4-isoxazolil-carbonil)-4-hidroxipiperidina

17- (.4-car.boxibutil) - 2-ciano-3-b idroxicrotonamida (de ponto de fusão 92°G) a partir do ácido N-(5-metil-4-isoxazolilcarbonil) -5-atnino valer ico.

³ H-(4.=.et oxicarbon ilb.ut.il) - 2-ciano-3-hidroxicrotonamida (a partir de N-(4-etoxicarbonilbutil)-5-metil39

isoxazol-4-carboxamida.

N-(6-carboxibexil)-2-ciano-3-bidroxicrotonamlda (de ponto de fusão 93 a 94°C) a partir do ácido N- (5-metil-4-isoxazolil-carbonil)-7-aminoheptanoico.

- 40 Quadro 4

Compostos de fórmula I

Exemplo R-, N2

OHj H

Η H

f»—

Cl

Η H

H

Q¹

Quadro 4 (continuação) Exemplo

C₂H₅

C₂H₅ yy.,

0₂H₅ /

Br

Tabela 4 (continuação)

Quadro 4 (continuação)

Exemplo NQ R-j,

R<

Quadro 4 (continuação)

Exemplo

V

Quadro 4 (continuação)

Exemplo

NS R-l R₂ R,

jssassaí

Quadro 4 (continuação)

Exemplo

N2 Ε_χ R₂

Claims

- Processo para a preparação de composições farmacêuticas para o tratamento de doenças cancerígenas, caracterizado por se incorporar como ingrediente activo numa quantidade até 300 mg por unidade de dosagem, de pelo menos um composto de fórmula I, Ia ou Ib das suas eventuais formas estereoisoméricas e/ou eventualmente de pelo menos um dos seus sais fisiologicamente aceitáveis, em gue

R¹ representa

a) hidrogénio

b) alquilo com 1 a 6 átomos de carbono,

c) alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, substituido uma ou mais vezes por

1) halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

d) fenilo,

R representa

a) hidrogénio,

b) alquilo com 1 a 4 átomos de carbono,

c) fenilalquilo com 1 ou 2 átomos de carbono na parte alquilo, especialmente benzilo,

d) alcenilo com 2 a 3 átomos de carbono,

R representa

a) um radical heterociclico insaturado, com 1,

2 ou 3 núcleos, possuindo no sistema de anel 3 a 13 átomos de carbono e 1 a 4 heteroátomos escolhidos do grupo formado por oxigénio, enxofre e azoto, dos quais no máximo um é diferente de azoto, insubstituído ou substituido uma ou mais vezes por

1) halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,
2) alquilo com 1 a 3 átomos de carbono,
3) alquilo com 1 a 3 átomos de carbono substituido uma ou mais vezes por

Jl

b)

3.1. halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo
4) alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono,
5) alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono substituido uma ou mais vezes por

5.1. halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,
6) nitro,
7) hidroxi,
8) carboxi,
9) carbamoilo,
10) grupos oxo, um radical de fórmula II ser iguais rentes e representam (II) ou dife1) hidrogénio,

2) alquilo com 1 a 3 átomos de carbono

3) alquilo com 1 a 3 átomos de carbono subs tituido uma ou mais vezes por

3.1. halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo, , 4 ,5

4) em gue R representa hidrogénio e R e r em conjunto com o anel fenilo de fórmula II formam um anel naftalino,

4 5

5) em que R representa hidrogénio e R e g

r formam um radical metilenodioxi,

6) alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono,

7) alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono substituído uma ou mais vezes por

7.1. halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

8) alguilmercapto com 1 a 3 átomos de carbono,

9) alguilmercapto com 1 a 3 átomos de carbono substituído uma ou mais vezes por

9.1. halogeneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

10) halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,
11) nitro,
12) ciano,
13) hidroxi,
14) carboxi,
15) alquilsulfonilo com 1 a 3 átomos de carbono,
16) carboalcoxi com 1 a 3 átomos de carbono na cadeia alquilo,
17) benzoilo,
18) benzoilo substituído uma ou mais vezes por

18.1. halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

18.2. alquilo com 1 a 3 átomos de carbono,

18.3. alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono,
19) fenilo,
20) fenilo substituído uma ou mais vezes por

20.1. alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono,

20.2. halogéneo tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

20.3. alquilo com 1 a 3 átomos de carbono
21) fenoxi,
22) fenoxi substituído uma ou mais vezes por

22.1. alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono substituído uma ou mais vezes por

22.1.1. halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

22.2. halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

22.3. alquilo com 1 a 3 átomos de carbo no substituído uma ou mais vezes por

22.3.1. halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

c) um radical de fórmula III

-(CH₂) n-^G0°R¹⁰ (UI) na gual R^° representa

1) hidrogénio

2) alquilo com 1 a 4 átomos de carbono, n é um número inteiro compreendido entre

1 e 12,

2 3 ?

d) R e R em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados formam um anel com 4 a 9 membros substituído por

1) carbonilo no átomo de azoto adjacente ao átomo de carbono,

2 3

e) R e R em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados formam um anel de 5 a 6 membros de fórmula IV

ΛΛ

-N_v Λ^τ (IV) na qual W representa

1) - ch₂-.

2) - CH₂-GH

3) - CH₂-CH-, i

ch₃

4) - CH₇-CH-,

I

CÃ 2 5

5) - CH₂-CH-, i

OH

6) - CH₂-O- OU

7) - CH₂-SR⁷ representa

a) hidrogénio,

b) alquilo com 1 a 17 átomos de carbono,

c) alquilo com 1 a 3 átomos de carbono substituido uma ou mais vezes por halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

d) fenil-alguilo com 1 ou 2 átomos de carbono na parte alquilo, especialmente benzilo,

O

R^u representa

a) hidrogénio,

b) metilo,

c) alcenilo com 2 a 3 átomos de carbono, em combinação com uma substância veicular fisiologicamente aceitável e eventualmente com outros aditivos e/ou outras subs- 53 -

tancias auxiliares, conferindo-se posição uma forma apropriada para adminis· tração.

a com2§ Processo para a preparação de uma composição farmacêutica caracterizado por se incorporar como ingrediente activo, numa quantidade até 300 mg por unidade de dosagem, pelo menos um composto de fórmula I, Ia ou Ib, das suas eventuais formas estereoisoméricas e/ou de pelo menos um dos seus sais fisiologicamente aceitáveis.

(I) na qual

R²

R' representa

a.) hidrogénio,

b) alquilo com 2 a 6 átomos de carbono,

c) alquilo com 1 a 4 átomos de carbono subs tituido ou uma ou mais vezes por

l) halogéneo, tal como fluor, cloro, bromo ou iodo,

d) fenilo representa

a) hidrogénio,

b) alcenilo com 2 a 3 átomos de carbono,

c) benzilo, .representa wfcraecfas

OTKHKraiJWtE arjZ-AJ&iSiiuM·· fâ ^Ti^^TiSíSCEESEsr,.,,..^^

R representa

a) piridilo substituído uma ou mais vezes por

b)

1)

2)

3)

4)

5) um radical de hidrogénio halogéneo, tal como fluor, clorc bromo ou iodo, nitro alquilo com 1 a 3 átomos de carbono alcoxi com 1 a 3 átomos de carbono, formula 11'

4 5 6 na gual R , R , R podem ser iguais ou diferentes e representam

1) halogéneo, tal como fluor, cloro