PT862418E

PT862418E - Processo para a preparacao de microcapsolas morfologicamente uniformes, assim como microcapsulas preparadas de acordo com este processo

Info

Publication number: PT862418E
Application number: PT96937286T
Authority: PT
Inventors: Georg Rossling; Celal Albayrak; Johannes Tack; Reinhard Schmitz
Original assignee: Actipac Biosystems Gmbh
Priority date: 1995-11-24
Filing date: 1996-10-30
Publication date: 2001-12-28
Also published as: NO982364D0; IL124373A0; KR100479895B1; NO982364L; AU712351B2; ES2161379T3; HK1018689A1; HUP9903334A2; CN1193742C; EP0862418B1; NZ321592A; EP0862418A1; JP2008273964A; ATE204469T1; AU7495596A; CN1213963A; KR19990071595A; US6294204B1; IL124373A; NO320493B1

Description

1

Descrição “Processo para a preparação de microcápsulas morfologicamente uniformes, assim como microcápsulas preparadas de acordo com este processo” A invenção refere-se a um processo para a fabricação de microcápsulas morfologicamente uniformes que contêm péptidos, proteínas ou outras substâncias biologicamente activas solúveis em água, como princípios activos, assim como microcápsulas fabricadas de acordo com este processo.

Como se sabe, os péptidos e as proteínas constituem princípios activos com grande farmacodinâmica que, no entanto, na aplicação por via oral, por causa da sua sensibilidade à hidrólise, se decompõem no meio ácido do estômago e também por degradação enzimática e portanto são parcialmente inactivados, pelo que a sua actividade no tracto gastroinstestinal é consideravelmente diminuída.

Uma rápida inactivação de proteínas e péptidos é, no entanto, também observada depois da aplicação parentérica e especialmente depois da aplicação intravenosa, por causa dos frequentemente muito curtos períodos de semiduração. Isto significa que não obstante apresentarem grande farmacodinâmica e dosagens terapêuticas teoricamente pequenas, podem ser necessárias administrações múltiplas de elevadas dosagens que significam uma grande sobrecarga para os pacientes.

As formulações apropriadas que evitam os mencionados inconvenientes são os sistemas de depósito com a forma de microcápsulas poliméricas ou nanocápsulas poliméricas, que também são conhecidas para péptidos e inúmeras vezes descritas na literatura.

Elas possuem as vantagens de: 2

- os péptidos e proteínas serem protegidos contra a rápida inactivação, - as dosagens pequenas serem formacologicamente activas, - as administrações múltiplas poderem ser reduzidas, - ser possível, em princípio, uma libertação controlada de péptidos e proteínas, - as substâncias activas encapsuladas serem transportadas de maneira controlada pelos objectivos e - poderem ser reduzidas as acções secundárias indesejadas.

Os processos conhecidos para a micro-encapsulação ou nano-encapsulação de substituído-tâncias solúveis em água podem subdividir-se nos seguintes grupos: - coacervação ou separação das fases de emulsão - encapsulação por secagem por pulverização - evaporação do solvente na fase orgânica ou aquosa.

Todos os processos incluem a incorporação das substâncias activas numa matriz polimérica ou numa matriz copolimérica biodegradável.

Os polímeros conhecidos na literatura para esta finalidade são poliamidas, poli-anidridos, poliésteres, poliortoésteres, poliacetatos, polilactonas, poliortocarbonatos, etc. Até hoje, tiveram utilização sobretudo os polímeros de polilactido-co-glicólido.

Assim, por exemplo, a partir dos documentos US 4 675 189 (Syntex Inc.), US 4 835 139 (Debiopharm S.A.) e EP 302 582 BI (Southern Research Inst.) são conhecidas composições farmacêuticas de péptidos e proteínas solúveis em água, sob a forma de cápsulas que são preparadas à base da coacervação ou da separação de fases de emulsão.

Nestas publicações são descritos processos em que o copolímero utilizado, preferivelmente um polímero de poli-(lactido-co-glicólido) é dissolvido num solvente orgânico halogenado, preferivelmente diclorometano, e nesta solução é dispersa uma solução aquosa 3 3

do péptido. Em seguida adiciona-se um assim chamado agente de coacervação. O agente de coacervação é solúvel no solvente orgânico, mas o polímero é insolúvel no agente de coacervação, pelo que se verifica a precipitação do polímero com inclusão dos polipéptidos dispersos. Como agente de coacervação utiliza-se normalmente óleo de silicone para a separação de fases. Depois da adição do óleo de silicone, deve ainda adicionar-se também uma grande quantidade de heptano que exerce o endurecimento das microcápsulas. A eficiência de encapsulação destes processos é geralmente igual a cerca de 70% (US 4 835 136). As microcápsulas preparadas possuem um diâmetro de 1 a 500 μιη, de acordo com os exemplos, preferivelmente de 10 a 50 μτη.

Os inconvenientes deste processo consistem, além da utilização de agentes toxicologicamente problemáticos, tais como o diclorometano, o heptano e o óleo de silicone, também na necessidade de utilização de grandes quantidades de solvente, resultante da encapsulação por meio de agentes de coacervação, como o óleo de silicone.

Um processo descrito no documento EP-A 315875 (Hoechst AG) para a preparação de microcápsulas biodegradáveis de péptidos e proteínas solúveis em água baseia-se no processo de secagem por pulverização, no qual uma solução aquosa de um péptido ou de uma proteína é emulsionada uma solução de polímero orgânico e esta emulsão é seca por pulverização.

Como polímero biologicamente degradável utiliza-se uma mistura de ácido poli--hidroxibntírico e de polímero de poli-Qactido-co-glicólido) na proporção de mistura compreendida entre 99:1 e 20:80. O péptido ou a proteína encontra-se sob uma forma micronizada ou de solução aquosa. Como solventes interessam os seleccionados entre clorofórmio, diclorometano,

DMF ou uma mistura solvente constituída por água/etanol/clorofónnio. De acordo com os exemplos utiliza-se clorofórmio. A secagem por pulverização realiza-se a temperaturas compreendidas de preferência entre 45°C e 95°C.

Neste processo, é inconveniente o perigo potencial de explosão, no caso de utilização de solventes não halogenados e de utilização simultânea de temperaturas mais altas no processo de secagem. Além disso, a utilização de solventes não inflamáveis, como o dicloroetano, conduz a contaminações com resíduos de solvente, toxicologicamente perigosas no produto final. Além do mais, as microcápsulas secas por pulverização apresentam em princípio uma forte tendência para aglomeração, obtendo-se aglomerados com o tamanho de cerca de 100 μην

As micropartículas preparadas de acordo com o “processo de solvente - evaporação” são descritas em dois pedidos de patentes de invenção canadianas CA 2 100 925 (Rhone-Meriuex) e CA 2 099 941 (Tanabe Seiyaku Co.).

Usualmente, neste método dispersa-se a solução aquosa do péptido ou da proteína numa solução de polímero orgânico ou coloca-se os cristais de substância activa em suspensão na solução polimérica. Depois da adição de uma segunda fase aquosa com uma substância tensioactiva, vaporiza-se o solvente do polímero.

Este método é muito variável e permite preparar normalmente emulsões de tipo AJO (água em óleo) ou emulsões complexas de tipo A/O/A.

De acordo com o documento CA 2 099 941, em primeiro lugar dissolve-se a substância activa solúvel em água e o polímero biodegradável num solvente ou mistura de solventes, em que os dois sejam solúveis. Em seguida, elimina-se este solvente e dissolve-se a dispersão sólida resultante num solvente orgânico não miscível com água. A solução resultante (fase oleosa) é emulsionada numa fase aquosa, de modo a obter-se uma emulsão de tipo AJO.

Finalmente, evapora-se o solvente orgânico da fase oleosa desta emulsão. O documento EP-A-0 442 671 descreve a preparação de uma emulsão de tipo A/O/A, em que se prepara, em primeiro lugar, uma emulsão de tipo AIO que seguidamente se adiciona a uma fase aquosa que contém um agente emulsionante. Por eliminação da fase orgânica, obtém-se finalmente microcápsulas.

Os exemplos concretos da memória descritiva da patente de invenção referem a utilização de polímero de poli-(lactido-co-glicólido) (PLGA) como matriz e a hormona libertadora da tireotropina (HLT, em inglês TRH) ou os seus derivados como substância activa que se dissolve, em primeiro lugar, numa mistura de acetonitrilo/etanol e eventualmente água, ou apenas acetonitrilo, ou acetonitrílo e gelatina aquosa, ou de diclorometano e etanol.

Como solvente orgânico para a solução da dispersão sólida utiliza-se diclorometano ou clorofórmio. Uma solução aquosa de álcool polivinílico constitui a fase aquosa. O tamanho das microcápsulas fica compreendido no intervalo entre 1 pm e 100 pm e de acordo com os exemplos concretos vai desde cerca de 50 até <100 pm.

De acordo com o documento CA 2 100 925, prepara-se microcápsulas de IILHL (em inglês LHRH) e seus análogos por dispersão prévia da HLHL, sob a forma de pó, em dois solventes orgânicos, em que um dos solventes (designado por solvente de dispersão) possibilita a preparação de uma suspensão homogénea da hormona pulverizada por simples agitação. O segundo solvente é facilmente miscível com a água e consequentemente faz com que seja possível a microdispersão da fase orgânica na fase aquosa.

Como segundo solvente utiliza-se o diclorometano ou, em alternativa, o clorofórmio. As cápsulas possuem um diâmetro compreendido entre lpme 250 pm. De preferência, as cápsulas são maiores do que 50 - 60 pm. 6 6

A morfologia das microcápsulas assim preparadas também é igualmente muito diferente. Como já se disse antes, os solventes halogeuados utilizados são toxicologicamente críticos. Além disso, este processo precisa também de grandes quantidades de substâncias tensioactivas. O objectivo da presente invenção foi o de se desenvolver um processo simples e económico para a preparação de microcápsulas morfologicamente homogéneas que não aglomeram com a utilização de solventes toxicologicamente aceitáveis, cuja eficiência de encapsulação deve ser pelo menos igual a 85% e preferivelmente maior do que 90%, e deve proporcionar microcápsulas com dimensões que vão desde 200 nm até 500 pm com elevado grau de carga. Além disso, o processo deve possibilitar o aumento à escala O objectivo da invenção é conseguido surpreendentemente de uma maneira simples por meio do método de “Transição de Fases Induzida” que se realiza dissolvendo um polímero usual para a preparação das microcápsulas, tal como um poliéster de um ácido hidrocarboxílico, ou um polímero em bloco de poliésteres de ácidos hidrocarboxílicos e polietileno-glicol (PEG) num solvente ou numa mistura de solventes isentos de halogéneos, não miscível ou parcialmente miscível com a água, e dispersando nesta solução a solução de substância activa tamponada, a um valor de pH compreendido no intervalo entre 6,0 e 8,0. Por homogeneização obtém-se uma emulsão de tipo AJO estável à qual se adiciona uma solução aquosa que contém uma substância tensioactiva ou uma mistura de substâncias tensioactivas, como fase exterior, sob agitação, de modo a obter-se uma emulsão de tipo A/O/A trifásica. Em seguida, elimina-se o solvente ou mistura de solventes pelos métodos usuais, de preferência sob uma pressão hipobárica e/ou sob uma corrente de ar/azoto. As microcápsulas são concentradas e eventualmente liofilizadas. O tamanho das partículas é, nesse caso, controlado pela velocidade de agitação, em que são obtidas partículas de dimensões menores (< 8 pm) - tais como as que são necessárias no caso de o produto se destinar a ser aplicado intravenosamente - com elevadas velocidades de agitação.

Caso se pretenda, depois da eliminação do solvente, as microcápsulas são ainda submetidas a uma filtração por fluxo transversal por meio da qual ficam isentas do agente tensioactivo residual e das quantidades residuais do solvente restante. Desta forma consegue-se diminuir ou evitar o estímulo inicial repentino, isto é, uma elevada administração de substância activa imediatamente depois da aplicação (por meio da substância activa ligada à superfície das partículas).

Para a liofilização, adiciona-se eventualmente crioprotectores tais como açúcares, álcoois de açúcares ou derivados de poHvinilpirrolidona.

Os poliésteres preferidos de ácidos hidroxicarboxílicos que podem ser utilizados no processo de acordo com a presente invenção são: poliglicólidos (PGA) e copolímeros de gbcólidos, tais como copolímeros de ghcólidosdactidos (PGA/PLLA) ou copolímeros glicólidos/carbonato de trimetileno (PGA/TMC); L-polilactidos (PLA) e estereocopolímeros de polilactidos, tais como poli-L-lactido (PLLA), copolímeros de poli-DL-lactido e copolímeros de L-lactido/DL-lactido; copolímeros de PLA, tais como copolímeros de lactido/tetrametilglicólido, copolímero lactido/õ-valerolactona e copolímero lactido/e-caprolactona; poU^-Mdroxibutirato (PHBA), copolímeros ΡΗΒΑ/β-hidroxivalerato (PHBA/HVA), ροΐί-β-hidroxipropionato (PHPA), poli-p-dioxanona (PDS), poli-ô-valero-1aetnnaJ polissacáridos hidrofobizados, ácido hialurónico, dextranos ou amilopectina hidrofobizada e poli-s-caprolactona.

Como polímeros de blocos de poliésteres de ácidos hidroxicarboxílicos e polietileno--glicol linear ou em estrela (PEG), no processo de acordo com a presente invenção, podem ser utilizados os mencionados seguidamente: polímeros de blocos AB de PLA e PEG, copolímeros de triblocos ABA de PLA--PEG-PLA, copolímeros de blocos S(3)-PEG-PTA e copolímeros de blocos S(4)-PEG-PLA.

De acordo com a invenção utiliza-se preferivelmente o polímero Resomer® 505, especialmente Resomer® RG-756 ou Resomer® RG-858

Resomer® é uma marca da firma Bohringer Lngelheiiii. Trala-se de um polímero de (DL-lactido-co-glicólido).

Os solventes ou misturas de solventes isentos de halogéneos, preferidos de acordo com a presente invenção, são seleccionados entre acetona, etanol, acetatos de alquilo, tais como os acetatos de metilo, etilo, propilo, isopropilo ou butilo, formatos de alquilo, tais como os formatos de metilo, etilo, propilo, isopropilo ou butilo, triacetina, citrato de trietilo e/ou lactatos de alquilo(Ci-C4), por exemplo, lactato de metilo ou de etilo.

De maneira especialmente preferida utiliza-se o acetato de etilo, o acetato de isopropilo e o formato de propilo.

No sentido utilizado na presente invenção, as soluções tamponadas são as soluções aquosas de péptidos, proteínas ou dos seus sais fisiologicamente aceitáveis ou de outras substâncias biologicamente activas solúveis em água que são reguladas preferivelmente para um valor de pH compreendido entre 6,0 e 8,0, preferivelmente para um valor de entre pH 6,5 e 7,4, com uma solução de tris-(Mdroximetil)-aminometano ou com uma solução tampão de fosfato.

Um outro tampão utilizável de acordo com a invenção é o tampão de citrato em que as concentrações de tampão ficam compreendidas, em geral, no intervalo entre 5 mmol/L e 300 mmol/L.

Com o processo de acordo com a invenção é possível encapsular quaisquer péptidos ou proteínas solúveis emi água. O processo de acordo com a invenção é especialmente apropriado para a encapsulação de albumina do soro humano, insulina e interferões e antagonistas da IILHL ou os seus análogos.

De maneira muito especialmente vantajosa, pelo processo de acordo com a presente invenção, é possível preparar microcápsulas morfologicamente uniformes de albumina do soro humano, insulina, interferões e dos péptidos mencionados seguidamente: a) DesA(2)Nal-P-Ala-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tir-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2, b) DesA(2)Nal-Gli-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tir-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2, c) Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tir-D-Lis(Mor)-Leu-Lis(Mor)Pro-D-Ala-NH2.

As significações de DesA(2)Nal e D-Cit e as estruturas químicas dos péptidos a) a c) são referidas nas Figuras 1 e 2.

De acordo com a invenção, como substâncias tensioactivas são preferíveis as substâncias do grupo dos Poloxâmeros®, éteres alquílicos de polietileno-glicol, polissorbatos (Tween®, Span®), ésteres de sacarose (Sistema®, Holanda), ésteres de sacarose (ésteres de açúcar Ryoto, Tóquio), gelatina, polivinilpinolidona, poliglicósidos de álcoois gordos, Charps, Charpso, decil-p-D-glicopiranósido, decil-p-D-maltopiranósido, dodecil-P-D-maltopiranosido, oleato de sódio, grupo das Poloxamina®, pohetileno-ghcol, álcool poliviníhco, éteres de ácidos gordos polioxietilados (Brij®), Triton X 100 ou as suas misturas.

Preferivelmente utiliza-se álcool pohvinílico, Brij®, Poloxâmeros®, Poloxamina® e Tween®. São também objecto da invenção microcápsulas morfologicamente uniformes que são preparadas de acordo com o processo mencionado e possuem um diâmetro entre 200 nm e 500 pm, de preferência compreendido entre 0,2 pm e 8 pm.

Com base no conjunto favorável de polímero e solvente, no processo de acordo com a presente invenção não se verifica a formação de aglomerados das microcápsulas.

Assim, as Figuras 3 e 4 mostram fotomicrografias obtidas com o microscópio óptico (las microcápsulas de acordo com a invenção, preparados de acordo com o Exemplo 10 (Fig. 3) ou de acordo com o Exemplo 15 (Fig. 4). Um milímetro na fotografia corresponde a 1 pm na realidade. As fotomicrografias mostram nitidamente a morfologia uniforme, não se detectando aglomerados de partículas. A eficiência de microencapsulação do processo é pelo menos igual a 85%, atingindo-se de preferência eficiências de encapsulação compreendidas entre 90-95%. Como eficiência da microencapsulação entende-se a massa da substância activa encapsulada· 100/massa da substância activa utilizada. O grau de carga das microcápsulas preparadas fica compreendido entre 3 e 30% (grau de carga = massa de substância activa · 100/massa de substância activa + massa de polímero).

Em seguida, esclarece-se mais pormenorizadamente a invenção com base em exemplos de realização, sem restringir o seu âmbito.

Exemplo 1

Dissolve-se 1,7 g do polímero Resomer® RG-756 em 29 mL de acetato de etilo e introduz-se num recipiente de aço (altura 11,5 cm, diâmetro interno 8 cm). Em seguida, dispersa-se 3 mL de uma solução aquosa de tris-(hidroximetil)-arninometano 5 mmolar (pH 7,4) que contém 200 mg de albumina humana, com o auxílio de um agitador mecânico (Dispennat-FT, VMA-Getzmann GmbH, disco dissolvedor de 5 cm) na solução de polímero durante 6 minutos a 10000 rotações/min à temperatura ambiente. À emulsão de tipo A/O assim obtida adiciona-se, sob agitação (8000 rotações/min), 45 mL de uma solução aquosa constituída por uma solução de álcool polivinílico a 2% (peso molecular 9000 - 10000,

Aldrich). Depois de um tempo de dispersão igual a 10 segundos, passa-se a emulsão de tipo A/O/A para um balão dc três tubuladuras de 500 mL e agita-se por meio de um agitador KPG. A seguir elimina-se o acetato de etilo utilizado como solvente, a 20°C, por aplicação de uma pressão hipobárica (900 mbar), uma corrente de azoto ou de ar. Decorridas 5 horas, lava-se a suspensão com 5 litros de água ou de uma solução aquosa e concentra-se até se obter um volume de suspensão pretendido. Realiza-se uma filtração por fluxo transversal por meio de um sistema Sartocon Mini® (Sartorius AG, Gõttingen). Mistura-se a suspensão, quase isenta de solvente e de agente emulsionante, com um crioprotector (por exemplo, com um açúcar, um álcool de açúcar ou um derivado de polivinilpirrolidona), e congela-se o mais rapidamente possível, por exemplo, com azoto líquido e liofiliza-se. O liofilizado recolocado em suspensão em água ou numa solução aquosa contém micro-cápsulas com um teor de albumina humana de 9% (massa de albumina humana· 100/massa de albumina humana + massa de polímero = grau de carga) e que possuem um diâmetro entre 0,2 pm e 8 pm. A eficiência de encapsulação é igual a 86%.

Exemplo 2

Procede-se como se descreveu no Exemplo 1, com a excepção de não se dissolver 1,7 g de Resomer® RG-756 em 29 mL de acetato de etilo, mas sim em 40 mL de acetato de metilo.

Exemplo 3

Procede-se como se descreveu no Exemplo 1, com a excepção de se utilizar, em vez de 1,7 g de Resomer® RG-756, uma quantidade de 1,1 g do polímero Resomer® RG-858.

Exemplo 4

Proccdc-sc como no Exemplo 1, com a excepção de se utilizar, em vez de 1,7 g do polímero Resomer® RG-756, uma quantida de 3,0 g do polímero Resomer® RG-858.

Exemplo 5

Procede-se como no Exemplo 1, com a excepção de se utilizar, em vez de uma solução a 2% de PVA, uma solução a 2% de Brij® 35.

Exemqplo 6

Procede-se como no Exemplo 1, com a excepção de se utilizar, em vez de uma solução a 2% de PVA, uma solução a 2% de Brij® 96.

Exemplo 7

Procede-se como no Exemplo 1, com a excepção de se utilizar, em vez de uma solução a 2% de PVA, uma solução a 2% de Tween® 20.

Exemplo 8

Dissolve-se 1,1 g do polímero Resomer® RG-858 em 29 mL de acetato de etilo e transfere-se para um recipiente de aço (altura 11,5 cm, diâmetro interno 8 cm).

Em seguida dispersa-se 7 mL de uma solução de tris-(hidroximetil)-ammometano 5 mmolar (pH 7,4) que contém 50 mg do péptido DesA(2)Nal-p-Ala-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tir--D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 (péptido a) e 2 mL de etanol, com o auxílio de um agitador mecânico (Dispennat-FT, VMA-Getzmann GmbH, disco dissolvedor de 5 cm) na solução de polímero durante 6 minutos a 10000 rotações/min, à temperatura ambiente. À emulsão de tipo A/O assim obtida adiciona-se, sob agitação (8000 rotações/min), 45 mL de uma solução aquosa constituída por uma solução de álcool polivimlico a 2% (peso molecular 9000 - 10000, Aldrich). Depois de um período de dispersão de 10 segundos, transfere-se a emulsão de tipo A/O/A para um balão de três tubuladuras de 500 mL e agita-se por meio de um agitador KPG. Em seguida elimina-se o acetato de etilo utilizado como solvente, a 20°C, por exposição uma pressão hipobárica (900 mbar), a uma corrente de azoto ou de ar. Decorridas 5 horas, lava-se a suspensão com 5 litros de água ou de uma solução aquosa e concentra-se até um volume da suspensão pretendido. Realiza-se tuna filtração por fluxo transversal por meio de um sistema Sartocon Mini® (Saitorius AG, Gõttinger) (valor crítico igual a 0,2 μπι). A suspensão isenta de solvente e quase isenta de emulsionante é misturada com um crioprotector (por exemplo, um açúcar, um álcool de açúcar ou um derivado de polivimlpirrolidona), congela-se o mais rapidamente possível, por exemplo, com azoto liquido e liofiliza-se. O liofilizado recolocado em suspensão em água ou numa solução aquosa contém microcápsulas com um teor de substância activa igual a 4%. As microcápsulas possuem um diâmetro entre 0,2 pm e 8 pm. A eficiência de encapsulação é da ordem de 93%.

Exemplo 9

Dissolve-se 1,1 g do polímero Resomer® RG-858 em 29 mL de acetato de etilo e transfere-se para um recipiente de aço (altura 11,5 cm, diâmetro interno 8 cm). Em seguida dispersa-se na solução polimérica 5 mL de uma solução aquosa 5 mmolar de tris-(hidroxi-metil)-ammometano (pH 7,4) que contém 48 mg do péptido DesA(2)Nal-Gli-D-Cpa-D-Pal--Ser-Tir-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 (péptido b) com o auxílio de um agitador mecânico (Dispennat-FT, VMA-Gctzmann GmbH, disco dissolvedor de 5 cm) durante 6 minutos a 10000 rotações/min, à temperatura ambiente. À emulsão de tipo A/O assim obtida adiciona-se, sob agitação (8000 rotações/min), 45 mL de uma solução aquosa constituída por uma solução de álcool polivinílico a 2% (peso molecular 9000 - 10000, Aldrich). Depois de um período de dispersão de 10 segundos, transfere-se a emulsão de tipo A/O/A para um balão de três tubuladuras de 500 mL e agita-se por meio de um agitador KPG. O acetato de etilo solvente é eliminado em seguida por colocação a uma pressão hipobárica (900 mbar), a 20°C, uma corrente de azoto ou de ar. Decorridas 5 horas, lava-se a suspensão com 5 litros de água ou de uma solução aquosa e concentra-se até um volume da suspensão pretendido. Realiza-se uma filtração por fluxo transversal por meio de um sistema Sartocon Mini® (Sartorius AG, Gõttinger) (valor crítico igual a 0,2 pm). A suspensão isenta de solvente e quase isenta de emulsionante é misturada com um crioprotector (por exemplo, com um açúcar, um álcool de açúcar ou um derivado de polivinilpirrolidona), congela-se o mais rapidamente possível, por exemplo, com azoto líquido e liofiliza-se. O liofilizado recolocado em suspensão em água ou numa solução aquosa contém microcápsulas com um teor de substância activa igual a 4%. As microcápsulas possuem um diâmetro entre 0,2 pm e 8 pm. A eficiência de encapsulação é da ordem de 95,7%.

Exemplo 10

Dissolve-se 1,1 g do polímero Resomer® RG-858 em 30 mL de formato de propilo e transfere-se para um recipiente de aço (altura 11,5 cm, diâmetro interno 8 cm). Em seguida, dispersa-se 5 mL de uma solução aquosa 5 mmolar de trís-{hidroximetil)-aimnometano (pH 7,0) que contém 50 mg do antagonista de HLHL Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tir-D--Lis(Mo)-Lcu-Lis(Mor)-Pro-D-Ala-NH2 (péptido c) com o auxílio de um agitador mecânico 15 15

(Dispermat-FT, VMA-Getzmann GmbH, disco dissolvedor de 5 cm) na solução de polímero durante 6 minutos a 10000 rotações/min, à temperatura ambiente. A emulsão de tipo A/O assim obtida adiciona-se, sob agitação (8000 rotações/min), 45 mL de uma solução aquosa constituída por uma solução de álcool polivinílico a 2% (peso molecular 9000 -10000, Aldrich). Depois de um período de dispersão de 10 segundos, coloca-se a emulsão de tipo A/O/A num balão de três tubuladuras de 500 mL e agita-se por meio de um agitador KPG. Em seguida, elimina-se o acetato de etilo utilizado como solvente, a 20°C, por exposição a uma pressão hipobárica (900 mbar), a uma corrente de azoto ou de ar. Decorridas 5 horas, lava-se a suspensão com 5 litros de água ou de uma solução aquosa e concentra-se até um volume da suspensão pretendido. Realiza-se uma filtração por fluxo transversal por meio de um sistema Sartocon Mini® (Sartorius AG, Gõttinger) (valor crítico igual a 0,2 pm). A suspensão isenta de solvente e quase isenta de emulsionante é congelada o mais rapidamente possível, com azoto líquido e liofiliza-se. O liofilizado recolocado em suspensão em água ou numa solução aquosa contém microcápsulas com um teor de substância activa igual a 3,9%. As microcápsulas possuem um diâmetro entre 0,2 pm e 8 pm. A eficiência de encapsulação é da ordem de 90,7%.

Exemplo 11

Dissolve-se 1,5 g do polímero Resomer® RG-858 em 30 mL de acetato de isopropilo e coloca-se num recipiente de aço (altura 11,5 cm, diâmetro interno 8 cm). Em seguida, na solução de polímero dispersa-se 5 mL de uma solução aquosa de tris-(hidroxiinetil)-amino-metano 5 mmolar (pH 7,0) que contém 50 mg de antagonista de HLHL como no Exemplo 10 com o auxílio de um agitador mecânico (Dispermat-FT, VMA-Getzmami GmbH, disco dissolvedor de 5 cm) na solução de polímero durante 6 minutos a 10000 rotações/min, à temperatura ambiente. A emulsão de tipo AJO assim obtida adiciona-se, sob agitação (8000 rotações/min), 45 mL de uma solução aquosa constituída por uma solução de álcool polivinílico a 2% (peso molecular 9000 - 10000, Aldrich). Depois de um período de dispersão de 10 segundos, transfere-se a emulsão de tipo A/O/A para um balão de três tubuladuras de 500 mL e agita-se por meio de um agitador KPG. Em seguida, elimina-se o acetato de etilo utilizado como solvente, a 20°C, por exposição a uma pressão hipobárica (900 mbar), uma corrente de azoto ou de ar. Decorridas 5 horas, lava-se a suspensão com 5 litros de água ou de uma solução aquosa e concentra-se até um volume da suspensão pretendida. Realiza-se uma filtração por fluxo transversal por meio de um sistema Sartocon Mini® (Sartorius AG, Gõttinger) com uma membrana de poliolefina (valor crítico igual a 0,2 pm) e liofiliza-se a suspensão isenta de solvente e quase isenta de agente emulsionante. O liofilizado recolocado em suspensão em água ou numa solução aquosa contém microcápsulas com um teor de substância activa igual a 2,9% e as microcápsulas possuem um diâmetro entre 0,2 pm e 8 pm. A eficiência de encapsulação é da ordem de 90,6%.

Exemplo 12

Procede-se como no Exemplo 1, sendo a solução 5 mmolar de tris-(hidroximetil)-amino-metano (pH 7,0) substituída por uma solução tampão de fosfato 5 mmolar (STP, pH 7,2).

Exemplo 13

Procede-se como no Exemplo 1, com a excepção de se utilizar, em vez de 200 mg de HAS dissolvido em 3 mL de tampão de Tris (pH = 7,4), uma quantidade de 750 mg de HAS dissolvido em 5 mL de tampão de Tris (pH = 7,4). 17

V 0 liofilizado recolocado em suspensão em água ou numa solução aquosa contém microcápsulas com teor de HAS igual a 30%. A eficiência de encapsulação é da ordem de 90,9%.

Exemplo 14

Procede-se como no Exemplo 13, com a excepção de se utilizar, em vez da solução de álcool polivinílico a 2%, uma solução a 2% de ‘Poloxamer F 127’.

Exemplo 15

Procede-se como no Exemplo 13, com a excepção de se utilizar, em vez da solução de álcool polivinílico a 2%, uma solução a 2% de ‘Poloxamin T 707’.

Exemplo 16

Procede-se como no Exemplo 13, com a excepção de se utilizar, em vez da solução de álcool polivinílico a 2%, uma solução a 2% de ‘Poloxamin T 908’.

Exemplo 17

Procede-se como no Exemplo 1, sendo os 200 mg de HAS substituídos por 200 mg de insulina (humana, recombinante (pfs), Sigma Chemie N°. 10259).

Exenqplo 18

Procede-se como no Exemplo 1, sendo os 200 mg de HAS substituídos por 200 mg de interferão (leucócitos humanos (pfs) (a-EFh, Le), Sigma Chemie N°. 11008).

Exemplo 19

Proccdc-se como no Exemplo 1, sendo os 200 mg de HAS substituídos por 200 mg de insulina (humana, gama (pfs) (γ-IFN), Sigma Chemie. N°. 16507).

Exemplo 20

Dissolve-se 120 mg de insulina em 0,8 mL de HC1 (0,1 N) e mistura-se com 2 mL de uma solução de NaCl (0,9%). Em seguida, regula-se o valor de pH da solução com NaOH (0,1 N) igual a 6-7. Adiciona-se esta solução a uma solução de 500 mg de polímero RG-858 em 10 mL de acetato de etilo e em seguida agita-se com um aparelho ‘Ultraturrax’ (a 10 000--15000 r.p.m.) durante 3-4 minutos. Em seguida, adiciona-se, sob agitação, 50 mL de uma solução aquosa a 2% de ‘Polaxamin T707’. Depois de realizada a adição, transfere-se a suspensão para um balão de três tubuladuras, dotado de um agitador. Por aphcação de uma pressão hipobárica elimina-se o solvente (acetato de etilo), sob agitação. Lava-se o resíduo assim obtido com 5 litros de água numa filtração por fluxo transversal (Sartocon Mim® Sartorius AG, Gottingen). O resíduo que contém as microcápsulas quase isento de solvente e de agente tensioactivo, eventualmente sob adição de um crioprotector, é rapidamente congelado e liofilizado. O liofilizado recolocado em suspensão em água ou com uma solução aquosa contém microcápsulas com um grau de carregamento de 15% em peso.

Exemplo 21

Procede-se como no Exemplo 20, com a excepção de se utilizar, em vez da solução a 2% de ‘Polaxamin T707’, uma solução a 2% de ‘Polaxamer-407 (F127)\ O grau de carregamento das microcápsulas obtidas é da ordem de 17%.

Exemplo 22

Procede-se como no Exemplo 20, com a excepção de se utilizar, em vez da solução a 2% de ‘Polaxamin T707’, uma solução a 2% de ‘Polaxamer-188 (F68). O grau de carregamento das microcápsulas obtidas é da ordem de 16%.

Exemplo 23

Procede-se de maneira análoga ao Exemplo 20. No entanto, neste caso, são utilizados 700 mg de polímero e 223 mg de insulina. O liofilizado recolocado em suspensão em água ou numa solução aquosa contém microcápsulas com um teor de insulina igual a 20%.

Lisboa, 20 de Setembro de 2001

0 AGENTE OFICIAL DE propriedade INDUSTRIAL

JOkO CMfl.0S MWK m

Claims

1 1

Reivindicações Processo para a preparação de microcápsulas morfologicamente uniformes de polímeros ou copolímeros biodegradáveis, que contêm péptidos, proteínas ou outras substâncias biologicamente activas solúveis em água, enquanto substância activa, de acordo com o método de “Transição de Fases Induzida”, caracterizado pelos factos seguintes: - se dissolver poliésteres de ácidos bidroxicarboxílicos ou polímeros de bloco de poli-ésteres de ácidos hidroxicarboxflicos e polietileno-gbcol num solvente ou numa mistura de solventes isentos de halogéneos, não miscíveis ou parcialmente miscíveis com água, - nesta solução, se dispersar a solução de substância activa tamponada que possui um valor de pH compreendido entre 6,0 e 8,0, - em seguida, se adicionar a esta emulsão de tipo A/O uma solução aquosa que contém uma substância tensioactiva ou uma mistura de substâncias tensioactivas, - em seguida, se eliminar o solvente ou a mistura de solventes na forma e da maneira usual e - caso se pretenda, se eliminar o solvente restante, a substância activa não micro-encapsulada e/ou a substância tensioactiva.

2. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de se utilizar, como solvente isento de halogéneos, um solvente seleccionado entre acetona, etanol; acetato de alquilo(Ci-C4), triacetina, citrato de trietilo, formatos de alquilo(Ci-C4) e lactatos de alquilo(Ci-Gi) ou as suas misturas. Processo de acordo com uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo facto de se utilizar, como solvente isento de halogéneos, um solvente seleccionado entre acetato de metilo, acetato de etilo, acetato de isopropilo e formato de propilo. Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo facto de se utilizar, como solução tampão, uma solução tampão de fosfato, uma solução tampão de citrato ou uma solução tampão de tris-(hidroximetil)-aminometano. Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo facto de a solução de substância activa tamponada possuir um valor de pH compreendido entre 6,0 e 8,0. Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo facto de se utilizar, como polímero, Resomer®, preferivelmente Resomer® RG-756 ou Resomer® RG-858. Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo facto de se utilizar, como substância activa, albumina do soro humano, péptidos, proteínas, interferões, ‘Betaseron®’, insulina, antagonistas da HLHL ou os seus análogos. Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo facto de se utilizar, como substância activa: a) DesA(2)Nal-3-Ala-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tir-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2, b) DesA(2)Nal-Gli-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tir-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 3 ou c) Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tir-D-Lis(Mor>Leu-Lis(Mor)Pro-D-Ala-NH2.

9. Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo facto de se realizar a eliminação do solvente ou da mistura de solventes, assim como da substância activa que eventualmente aderiu à superfície das partículas e/ou do agente tensioactivo, por meio de uma filtração por fluxo transversal.

10. Microcápsulas morfologicamente uniformes, com um grau de carregamento compreendido entre 3% e 30% em peso e com um diâmetro entre 200 nm e 500 μια, preparadas de acordo com o processo das reivindicações 1 a 9. 11. Microcápsulas de acordo com a núvindicaçSo 10, com um diSmetto compreendido entre 0,2 pm e 8 pm. Lisboa, 28 de Setembro de 2001 0 AGENTE OFICIAL DE PROPRIEDADE INDUSTRIAL

joKo imos ^ AgenU QJicitá ia Proyric-·^ industrial Praça Dscae ωa, '-'33DA T eleí one: 2La42VaOA - F ax; 2T3VH531