PT2444085E - Compostos de diaril-hidantoínas como antagonistas do recetor androgénio para tratamento de cancro - Google Patents

Compostos de diaril-hidantoínas como antagonistas do recetor androgénio para tratamento de cancro Download PDF

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PT2444085E
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Charles L Sawyers
Michael E Jung
Charlie D Chen
Samedy Ouk
Chris Tran
Dongwon Yoo
Derek Welsbie
John Wongpivat
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Univ California
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Description

DESCRIÇÃO ""Compostos de diaril-hidantoínas como antagonistas do recetor androgénio para tratamento de cancro"
CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção diz respeito a um composto de diaril-hidantoína para utilização no tratamento da hiperplasia benigna da próstata, do cancro da mama e do cancro do ovário.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO 0 cancro da próstata é a incidência mais comum de cancro e a segunda causa principal de morte por cancro do homem ocidental. Quando o cancro está confinado localmente, a doença pode ser curada por cirurgia ou radioterapia. No entanto, 30% deste tipo de cancro tem recaídas na forma de metástases distantes e outros estão em estado avançado ao serem diagnosticados. A doença no estado avançado é tratada por castração e/ou administração de antiandrogénios, a chamada terapia de privação de androgénio. A castração reduz os níveis circulantes de androgénio e reduz a atividade do recetor de androgénio (AR) . A administração de antiandrogénios bloqueia a função do AR, competindo com a sua ligação ao androgénio e reduzindo assim a atividade do AR. Embora inicialmente eficazes, estes tratamentos rapidamente deixam de ter sucesso e o cancro torna-se hormono-resistente.
Recentemente, foi identificada e validada a superexpressão do AR como causa do cancro da próstata hormono-resistente. Ver Chen, C.D., Welsbie, D.S., Tran, C., Baek, S.H., Chen, R., Vessella, R., Rosenfeld, M.G., and
Sawyers, C.L., Molecular determinants of resistance to antiandrogen therapy, Nat. Med., 10: 33-39, 2004. A superexpressão do AR é suficiente para causar a progressão do cancro da próstata de um estado hormono-dependente para um estado hormono-resistente, sugerindo que inibidores dos AR melhores do que os atuais fármacos podem retardar a progressão do cancro da próstata. Demonstrou-se que os AR e a sua ligação a ligantes são necessários para o crescimento do cancro da próstata hormono-resistente, indicando que o AR é ainda um alvo para esta doença. Também ficou demonstrado que superexpressão do AR converte antiandrogénios de antagonistas para agonistas no cancro da próstata hormono-resistente (um antagonista do AR inibe a atividade do AR e um agonista do AR estimula a atividade do AR) . Os resultados do presente trabalho explicam por que razão a castração e os antiandrogénios não conseguem evitar a progressão do cancro da próstata e revelam propriedades não reconhecidas do cancro da próstata hormono-resistente. A bicalutamida (nome da marca: Casodex) é o antiandrogénio mais comumente utilizado. Embora tenha um efeito inibitório no AR no caso do cancro da próstata hormono-dependente, não consegue suprimir o AR quando o cancro se torna hormono-resistente. São apontadas duas insuficiências aos atuais antiandrogénios como a razão para a sua incapacidade em impedir a progressão do cancro da próstata desde a fase hormono-dependente até a uma doença hormono-resistente, assim como em tratar eficazmente o cancro da próstata hormono-resistente. Uma insuficiência é a sua fraca atividade antagonista e a outra é a sua forte atividade agonista quando o AR é superexpresso no cancro da próstata hormono-resistente. Por conseguinte, inibidores mais eficazes do AR, com atividades antagonisticas mais potentes e atividades agonistas mínimas são necessários para retardar a progressão da doença e para tratar o fatal cancro da próstata hormono-resistente.
Antiandrogénios não esteroides, tais como a bicalutamida, têm sido preferidos a compostos esteroides para o tratamento do cancro da próstata porque são mais seletivos e possuem menos efeitos colaterais. Esta classe de compostos está descrita em muitas patentes, tais como as Patentes U.S. n.2s 4 097 578, 5 411 981, 5 705 654, os Pedidos Internacionais PCT WO 97/00071 e WO 00/17163 e o Pedido de Patente Publicado US n.2 2004/0009969. A Patente U.S. n.2 5 434 176 inclui reivindicações gerais que abrangem um grande número de compostos, mas vias sintéticas são apresentadas apenas para uma pequena fração destes compostos e dados farmacológicos são apresentados apenas para dois deles, e um perito na especialidade não poderá facilmente imaginar outros compostos específicos.
Uma vez que o mecanismo do cancro da próstata hormono-resistente não era conhecido, não havia nenhum sistema biológico para testar os compostos descritos nessas patentes quanto ao seu efeito no cancro da próstata hormono-resistente. Em especial, a capacidade da superexpressão do AR no cancro da próstata hormono-resistente de transformar inibidores de antagonistas em agonistas não era reconhecida. Novas propriedades do cancro da próstata hormono-resistente estão descritas nos Pedidos PCT US04/42221 e US05/05529. 0
Pedido Internacional PCT US05/05529 apresentou uma metodologia para identificar, em compostos, as características antagonistas e agonistas dos recetores de androgénio. No entanto, para cada composto produzido deve ser levado a cabo o processo moroso de determinação das características antagonistas e agonistas. Ou seja, não há nenhum método para prever com precisão as características relevantes para o tratamento do cancro da próstata a partir apenas da estrutura química de um composto.
Em WO 2006/028226 descrevem-se derivados de imidazolidina que possuem um grupo alquilo substituído em 3, que exibem atividade antiandrogénio.
Em EP0580459 descrevem-se compostos de fenilimidazolidina substituídos e a sua utilização como medicamentos.
Em US 5,434,176 e US 5,411,981 descrevem-se fenilimidazolidinas possuindo actividade anti-androgénica. Há necessidade de novos compostos de tio-hidantoína com propriedades farmacológicas desejáveis e vias sintéticas para prepará-los. Uma vez que as atividades são sensíveis a pequenas mudanças estruturais, um composto pode ser eficaz no tratamento do cancro da próstata, enquanto um segundo composto pode ser ineficaz mesmo que difira apenas ligeiramente do primeiro composto, por exemplo, pela substituição de um único substituinte. A identificação de compostos com elevada potência antagonista da atividade do androgénio e com atividade agonista mínima deveria dominar o cancro da próstata hormono-resistente (HRPC) e evitar ou retardar a progressão do cancro da próstata hormono-dependente (HSPC). Por conseguinte, há necessidade na arte de identificar moduladores seletivos do recetor de androgénio, tais como moduladores que sejam não esteroides, não tóxicos e seletivos para tecidos.
RESUMO DA INVENÇÃO A invenção proporciona um composto com forte atividade antagonista e atividades mínimas agonistas contra AR para utilização no tratamento da hiperplasia benigna da próstata, do cancro da mama e do cancro do ovário. A invenção inclui um composto com a fórmula
ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para utilização no tratamento da hiperplasia benigna da próstata, do cancro da mama e do cancro do ovário. 0 composto pode ser para utilização numa dosagem na gama de cerca de 0,001 mg por kg de peso corporal por dia a cerca de 100 mg por kg de peso corporal por dia, de cerca de 0,01 mg por kg de peso corporal por dia a cerca de 100 mg por kg de peso corporal por dia, de cerca de 0,1 mg por kg de peso corporal por dia a cerca de 10 mg por kg de peso corporal por dia, ou de cerca de 1 mg por kg de peso por dia corporal. O composto pode ser para administração por injeção intravenosa, por injeção nos tecidos, pelas vias intraperitoneal, oral ou nasal. O composto pode ser para utilização na forma de uma composição com uma forma selecionada do grupo constituído por uma solução, dispersão, suspensão, pó, cápsula, comprimido, pílula, cápsula de libertação temporizada, comprimido de libertação temporizada e pílula de libertação temporizada.
Também se descreve um método para sintetizar um composto de diarilo da fórmula:
que compreende misturar o Composto I
com o Composto II
num primeiro solvente polar para formar uma mistura, aquecer a mistura, adicionar à mistura um segundo solvente polar, igual ou diferente do primeiro solvente polar, e uma solução aquosa de ácido, refluxar a mistura, resfriar a mistura e combiná-la com água, separar o composto diarilo da mistura, em que R51 compreende uma cadeia alquilica de 1 a 4 átomos de carbono, R52 é selecionado de entre o grupo composto por ciano, hidroxi, metilcarbamoilo, alquilo substituído com metilcarbamoílo, alquilo substituído com metilsulfonacarbamoílo, metilaminometilo, dimetilaminometilo, metilsulfoniloximetilo, metoxicarbonilo, 3-ciano-4-trifluorometilfenilcarbamoílo, alquilo substituído com carbamoílo, carboximetilo, metoxicarbonilmetilo, metanossulfonilo, alquilo substituído com 4-ciano-3-trifluorometilfenilcarbamoílo, alquilo substituído com carboxi, 4-metanossulfonil-l-piperazinilo, piperazinilo, alquilo substituído com hidroxietilcarbamoílo e alquilo substituído com hidroxietoxicarbonilo e R53 é selecionado do grupo constituído por F e H. R51 pode compreender uma cadeia alquílica de 1 a 2 átomos de carbono, R52 pode ser selecionado do grupo composto por carbamoílo e metilcarbamoílo e R53 pode ser F. São também descritos métodos de síntese de um composto da fórmula:
que compreende misturar 4-isotiocianato-2-trifluoromet ilbenzonitrilo e JV-metil-4-(1-cianociclobutilamino) -2-fluorobenzamida em dimetilformamida para formar uma primeira mistura, aquecer esta para formar uma segunda mistura, adicionar álcool e ácido à segunda mistura para formar uma terceira mistura, refluxar a terceira mistura para formar uma quarta mistura, arrefecer a quarta mistura, combinar a quarta mistura com água e extrair uma camada orgânica; isolar o composto da camada orgânica. É igualmente descrito um método de síntese de RD162' compreendendo a mistura de iV-met il-2-f luoro-4-(1, 1-dimetilcianometil)aminobenzamida e 4-isotiocianato-2-trifluorometilbenzonitrilo em DMF e aquecimento para formar uma primeira mistura, e processamento como atrás referido. 0 composto para utilização da invenção possui uma substancial atividade antagonista no recetor do androgénio e nenhuma atividade agonista, em células do cancro da próstata hormono-resistente.
Também se descreve aqui um método que inclui proporcionar o composto da invenção, avaliar o composto quanto à inibição da atividade do recetor do androgénio e determinar se a inibição é superior a um primeiro predeterminado nivel, avaliar o composto quando à estimulação da atividade do recetor de androgénio em células de cancro hormono-resistente, determinar se a estimulação é inferior a um segundo predeterminado nivel e selecionar o composto se a inibição for superior ao primeiro nivel predeterminado e inferior ao segundo nivel predeterminado. Os niveis predeterminados podem ser iguais aos da bicalutamida. A etapa de avaliação da inibição pode incluir a determinação da concentração inibitória (CI50) num sistema repórter de resposta dos AR ou num sistema de segregação de antigénios específicos da próstata. A etapa de avaliação da estimulação pode compreender a determinação da variação de expressão através de concentrações crescentes num sistema repórter de resposta dos AR ou num sistema de segregação de antigénios específicos da próstata. 0 método de avaliação da inibição e/ou estimulação pode compreender a avaliação de um efeito do composto no crescimento do tumor de um animal.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
As figuras a seguir apresentam os resultados da análise farmacológica de certos compostos. A Figura 1 é um gráfico que mostra o efeito agonístico da bicalutamida em LNCaP-AR, nomeadamente as atividades agonistas da bicalutamida no cancro da próstata hormono-resistente com superexpressão de AR. Células LNCaP com AR superexpresso foram tratadas com concentrações crescentes de DMSO como veículo ou com bicalutamida na ausência de R1881. A atividade do repórter de resposta dos AR foi medida. A Figura 2 é um gráfico que mostra um ensaio antagonistico da bicalutamida em LNCaP-AR. Atividades agonistas da bicalutamida no cancro da prostata hormono-dependente. Células LNCaP foram tratadas com concentrações crescentes de DMSO como veículo ou bicalutamida na ausência de R1881. A atividade do repórter de resposta dos AR foi medida. A Figura 3 é um gráfico que mostra o efeito dos compostos em LNCaP-AR. A Figura 4 é um gráfico que mostra o efeito dos compostos em LNCaP-AR. A Figura 5 é um gráfico que mostra mostra o efeito de inibição em LNCaP-AR.
Nas Figuras 6-10, o Exemplo 5-3b é RD7 e o Exemplo 7-3b é RD37 .
Figura 6. Inibição do crescimento de células LNCaP com superexpressão de AR. Células LNCaP com superexpressão de AR e privadas de androgénio foram tratadas com concentrações crescentes de DMSO como veículo ou com compostos de teste na presença de 100 pM de R1881. Após 4 dias de incubação, o crescimento celular foi medido pelo teste de MTS.
Figura 7. Efeito inibitório no crescimento do modelo de xenoenxerto de LNCaP com superexpressão de AR. Ratos com xenoenxertos tumorais de LN-AR estabelecidos foram randomizados e tratados com compostos específicos por via oral, uma vez por dia. O tamanho do tumor foi medido com um paquímetro. (A) Os ratos foram tratados com 1 mg/kg de bicalutamida, Exemplo 7-3b, ou com veículo, durante 44 dias. (B) Os ratos foram tratados com 0,1, 1 ou 10 mg/kg do veículo do Exemplo 7-3b, durante 44 dias.
Figura 8. Efeito inibitório na expressão de PSA do modelo de xenoenxerto de LNCaP com superexpressão de AR. Os ratos foram tratados com 0,1, 1 ou 10 mg/kg do veículo do
Exemplo 7-3b durante 44 dias, por via oral, uma vez por dia. Os tumores foram retirados dos ratos após 44 dias de tratamento, o lisado tumoral foi extraído e o nível de PSA em lisado de tecido foi determinado pelo método ELISA.
Figura 9. Efeito inibitório sobre o crescimento e o PSA do modelo de xenoenxerto de LAPC4 hormono-resistente. Ratos com tumores estabelecidos foram divididos aleatoriamente e tratados com 1 mg/kg de bicalutamida, exemplo 7-3b, ou veiculo, durante 17 dias por via oral, uma vez ao dia. (A) 0 tamanho do tumor foi medido com um paquímetro. (B) Os tumores foram retirados dos ratos após 17 dias de tratamento, extraiu-se lisado tumoral e o nível de PSA em lisado de tecido foi determinado pelo método ELISA.
Figura 10. Efeito inibitório no crescimento de células de cancro da próstata hormono-dependente. Células LNCaP privadas de androgénio foram tratadas com concentrações crescentes de DMSO como veículo ou com compostos de teste na presença de 1 pM de R1881. Após 4 dias de incubação, o crescimento celular foi avaliado pelo teste de MTS. A Figura 11 é um gráfico que mostra o tamanho dos tumores. Células LNCaP com superexpressão de AR foram injetadas nos flancos de ratos SCID castrados, por via subcutânea. Quando os tumores atingiram cerca de 100 milímetros cúbicos, os ratos foram divididos aleatoriamente em cinco grupos. Cada grupo tinha nove animais. Depois de terem atingido este volume de tumor, receberam oralmente ou veículo, ou bicalutamida, ou RD162, a 10 ou 50 mg/kg diariamente. Os tumores foram medidos tridimensionalmente, ou seja, em largura, comprimento e profundidade, com um paquímetro. A Figura 12 mostra os resultados experimentais do tamanho do tumor. No dia 18, foram captadas imagens dos animais por meio de uma câmara CCD ótica, 3 horas após a administração da última dose de tratamento. Uma ROI (região de interesse) foi desenhada sobre o tumor para medição da atividade da luciferase em fotões por segundo. Os painéis à direita são uma representação das medições nas ROIs. O gráfico da Figura 13 mostra as curvas farmacocinéticas de RD162 resultantes da administração intravenosa (curva superior) e oral (curva inferior).
0 gráfico da Figura 14 mostra a absorvância do PSA medida em células LN-AR após o tratamento com várias doses de diversos compostos. A Figura 15 apresenta uma tabela com várias caracteristicas dos compostos. Apresenta também um gráfico com as caracteristicas farmacocinéticas de diversos compostos, em termos da concentração sérica do composto em função do tempo. A Figura 16 é um gráfico mostrando o peso da próstata após tratamento com vários compostos. Administrou-se 10, 25 ou 50 mg de composto por quilo de peso corporal por dia, conforme indicado pela legenda de cada barra. Os compostos foram administrados a ratinhos FVB saudáveis. Após tratamento com composto durante 14 dias, o peso do trato urogenital foi determinado por remoção e pesagem das vesículas seminais, próstata e bexiga. Três ratos receberam um determinado composto a fim de se obter os dados apresentados por cada barra no gráfico. Um grupo de ratos não foi tratado com composto e os seus resultados correspondem à barra rotulada "sem tratamento". Um outro grupo de ratos foi tratado apenas com solução veículo: os resultados correspondem ao da barra identificada como "veículo". A Figura 17 é um gráfico apresentando uma análise de PSA realizada em paralelo com o protocolo experimental apresentado na Fig. 6. A Figura 18 é um gráfico mostrando o efeito de diferentes regimes de doses de RD162 no volume do tumor. A Figura 19 é um gráfico apresentando a taxa de emissão de fotões associada à atividade da luciferase no dia 17 relativamente à taxa no dia 0, após tratamento com RD162 às doses de 0,1, 1 e 10 mg/kg de peso corporal por dia e sem tratamento com RD162. A Figura 20 apresenta os resultados de um teste em que ratos SCID foram injetados com a linha celular LN-AR (HR) para induzir o crescimento do tumor. Um grupo de ratos foi tratado com o composto RD162, a uma dose de 10 mg por quilograma de peso corporal, por dia; o outro grupo de ratos foi tratado apenas com solução veiculo. (A) 0 volume de tumor relativo em função do tempo é apresentado para cada grupo de ratos. (B) Imagens de cada grupo de ratos, com a emissão de fotões associada à atividade da luciferase apresentada como contornos de cor, no dia 31. (C) Taxa de emissão de fotões associada à atividade da luciferase apresentada várias vezes para cada grupo de ratos. A Figura 21 é um gráfico apresentando a absorvância do PSA associada às células LN-AR tratadas com diferentes concentrações de RD162, RD162' , RD162", RD170 e com solução veiculo. A Figura 22 é um gráfico apresentando a absorvância do PSA associada a células LN-CaP tratadas com diferentes concentrações de RD37, RD131, RD162, bicalutamida e DMSO. A Figura 23 apresenta os resultados de um teste conduzido com ratos não transgénicos do tipo selvagem (WT), ratos castrados transgénicos com luciferase (Cast) e ratos não castrados transgénicos com luciferase (Intact).
Apresentam-se dados para: ratos castrados transgénicos com luciferase, com uma pélete de testosterona implantada correspondendo a 12,5 mg por quilo de peso corporal e a um período de libertação de 90 dias (T/Cast), ratos não castrados transgénicos com luciferase, com uma pélete de testosterona implantada correspondendo a 12,5 mg por quilo de peso corporal e a um período de libertação de 90 dias (Intact + T) , ratos castrados transgénicos com luciferase, tratados com uma pélete de testosterona implantada e bicalutamida (BIC + T/Cast) ou com RD162 (RD162 + T/Cast) a 10 mg por quilo de peso corporal por dia. (A) Peso do trato urogenital aos 14 dias. (B) Taxa de emissão de fotões aos 14 dias. Em nenhum caso foi induzido um estado de doença hormono-resistente. A Figura 24 é um gráfico da atividade da luciferase na linha celular LIAR, com vários compostos administrados em concentrações desde 125 nmol até 1000 nmol. A Figura 25 é um gráfico da atividade da luciferase para a linha celular LN/AR, para vários compostos administrados em concentrações na gama de 1,25 até 10 pmol. A Figura 26 é um gráfico da atividade da luciferase para a linha celular 4AR, para vários compostos administrados em concentrações na gama de 1,25 até 10 pmol. A Figura 27 é um gráfico dos niveis de PSA para a linha celular 1AR, para vários compostos administrados em concentrações na gama de 1,25 até 10 pmol. A Figura 28 é um gráfico dos niveis de PSA para a linha celular LN/AR, para vários compostos administrados em concentrações na gama de 125 nmol até 1000 nmol. A Figura 29 é um gráfico da atividade da luciferase para vários compostos administrados em concentrações na gama de 125 nmol até 1000 nmol.
DESCRIÇÃO DETALHADA A seguir, analisam-se em pormenor concretizações da invenção. Na descrição das concretizações, é empregada terminologia especifica por razões de clareza. No entanto, a invenção não está limitada à terminologia especifica aqui escolhida. Síntese de compostos de diaril-hidantoína É descrita a síntese de compostos diariltio-hidantoína da seguinte fórmula:
em que R71 inclui uma cadeia alquílica de 1 a 4 átomos de carbono, R72 pode ser carbamoílo, por exemplo, -NH(CO)2, ou metilcarbamoílo, por exemplo, (CO)NHCH3. Um grupo amida ligado ao átomo de carbono do carbonilo de outra estrutura é designado como substituinte do carbamoílo. Por exemplo, R73 pode ser um átomo de flúor ou de hidrogénio. Ou seja, um átomo de flúor pode estar ligado a qualquer um dos carbonos do anel arilo da direita que não esteja ligado ao substituinte R72 ou ao átomo de azoto. Como alternativa, nenhum átomo de flúor pode estar ligado aos carbonos do anel arilo direito que não estejam ligados ao substituinte R72 ou ao átomo de azoto. Por exemplo, um átomo de hidrogénio pode estar ligado a cada um dos carbonos do anel arilo direito que não estão ligados ao substituinte R72 ou ao átomo de azoto.
Uma lista de vários compostos de referência é apresentada nas Tabelas 5-11. 0 composto para utilização da invenção (RD162' ) está apresentado na Tabela 5. Os compostos estão agrupados em níveis, em que os compostos do Nível 1 ao Nível 3 são supostamente superiores à bicalutamida para o tratamento do cancro da próstata, os compostos da Nível 4 são comparáveis à bicalutamida em eficácia e os compostos dos Níveis 5 e 6 são piores do que a bicalutamida para o tratamento do cancro da próstata. Uma descrição mais pormenorizada do protocolo empregue para classificar os compostos em níveis é apresentada adiante.
Definições
Como aqui empregue, o termo "alquilo" denota cadeias de hidrocarbonetos ramificadas ou não ramificadas, de preferência com cerca de 1 a cerca de 8 carbonos, tais como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo, terc-butilo, 2-metilpentilpentilo, hexilo, iso-hexilo, heptilo, 4,4-dimetilpentilo, octilo, 2,2,4-trimetilpentilo e afins. "Alquilo substituído" inclui um grupo alquilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos funcionais que podem estar ligados a essas cadeias, tais como hidroxilo, bromo, flúor, cloro, iodo, mercapto ou tio, ciano, alquiltio, heterociclilo, arilo, heteroarilo, carboxilo, carbalcoílo, alquilo, alcenilo, nitro, amino, alcoxilo, amido e afins, para formar grupos alquilo como trifluorometilo, 3-hidroxi-hexilo, 2-carboxipropilo, 2-fluoroetilo, carboximetilo, cianobutilo e semelhantes.
Salvo indicação em contrário, o termo "cicloalquilo" como aqui empregue, isoladamente ou enquanto parte de outro grupo, inclui grupos de hidrocarbonetos cíclicos saturados contendo 1 a 3 anéis, incluindo alquilo monocíclico, alquilo bicíclico e alquilo tricíclico, contendo um total de 3 a 20 carbonos formando os anéis, de preferência 3 a 10 carbonos formando o anel, que incluem ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, ciclooctilo, ciclodecilo, ciclododecilo e ciclo-hexenilo. "Cicloalquilo substituído" inclui um grupo cicloalquilo opcionalmente substituído com 1 ou mais substituintes tais como halogéneo, alquilo, alcoxi, hidroxi, arilo, ariloxi, arilalquilo, cicloalquilo, alquilamido, alcanoílamino, oxo, acilo, arilocarbonilamino, amino, nitro, ciano, tiol e/ou alciltio e/ou qualquer um dos substituintes incluídos na definição de "alquilo substituído". Por exemplo,
e semelhantes.
Salvo indicação em contrário, o termo "alcenilo" como aqui empregue, isoladamente ou enquanto parte de outro grupo, refere-se a radicais de cadeia linear ou ramificada, de 2 a 20 carbonos, de preferência de 2 a 12 carbonos, e mais de preferência de 2 a 8 carbonos na cadeia normal, que incluem uma ou mais ligações duplas na cadeia normal, tais como vinilo, 2-propenilo, 3-butenilo, 2-butenilo, 4-pentenilo, 3-pentenilo, 2-hexenilo, 3-hexenilo, 2-heptenilo, 3-heptenilo, 4-heptenilo, 3-octenilo, 3-nonenilo, 4-decenilo, 3-undecenilo, 4-dodecenilo, 4, 8, 12-tetradecatrienilo e semelhantes. "Alcenilo substituído" inclui um grupo alcenilo substituído opcionalmente com um ou mais substituintes, tais como os substituintes atrás referidos, na definição de "alquilo substituído" e "cicloalquilo substituído".
Salvo indicação em contrário, o termo "alcinilo" como aqui empregue, isoladamente ou enquanto parte de um outro grupo, refere-se a radicais de cadeia linear ou ramificada, de 2 a 20 carbonos, de preferência de 2 a 12 carbonos e de maior preferência de 2 a 8 carbonos na cadeia normal, que incluem uma ou mais ligações triplas na cadeia normal, tais como 2-propinilo, 3-butinilo, 2-butinilo, 4-pentinilo, 3-pentinilo, 2-hexinilo, 3-hexinilo, 2-heptinilo, 3-heptinilo, 4-heptinilo, 3-octinilo, 3-noninilo, 4-decinilo, 3-undecinilo, 4-dodecinilo e semelhantes. "Alcinilo substituído" inclui um grupo alcinilo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, tais como os substituintes incluídos na definição anterior de "alquilo substituído" e "cicloalquilo substituído".
Os termos "arilalquilo", "arilalcenilo" e "arilalcinilo" como aqui empregues, isoladamente ou enquanto parte de outro grupo, referem-se a grupos alquilo, alcenilo e alcinilo, conforme descrito anteriormente, com um substituinte arilo. Entre os exemplos representativos de arilalquilo constam, mas não lhes estando limitados, benzilo, 2-feniletilo, 3-fenilpropilo, fenetilo, benzidrílo, naftilmetilo e semelhantes. "Arilalquilo substituído" inclui grupos arilalquilo em que a parte arilo é opcionalmente substituída com um ou mais substituintes, tais como os substituintes incluídos na definição anterior de "alquilo substituído" e "cicloalquilo substituído".
Os termos "halogéneo" ou "halo" como aqui empregues, isoladamente ou enquanto parte de outro grupo, referem-se a cloro, bromo, flúor e iodo.
Os termos "alquilo halogenado", "alcenilo halogenado" e "alcinilo" como aqui empregues, isoladamente ou enquanto parte de outro grupo, referem-se a "alquilo", "alcenilo" e "alcinilo", que são substituídos por um ou mais átomos selecionados entre flúor, cloro, bromo, e iodo.
Salvo indicação em contrário, os termos "arilo" ou "Ar" como aqui empregues, isoladamente ou enquanto parte de outro grupo, referem-se a grupos aromáticos monocíclicos e policíclicos, contendo 6 a 10 carbonos na parte do anel (como fenilo ou naftilo, incluindo 1-naftilo e 2-naftilo) . Um a três anéis adicionais podem ser fundidos a um anel carbociclico ou a um anel heterocíclico (tais como os anéis arilo, cicloalquilo, heteroarilo ou ciclo-heteroalquilo). "Arilo substituído" inclui um grupo arilo substituído opcionalmente com um ou mais grupos funcionais, como halo, haloalquilo, alquilo, haloalquilo, alcoxi, haloalcoxi, alcenilo, trifluorometilo, trifluorometoxi, alcinilo, cicloalquilalquilo, ciclo-heteroalquilo, ciclo-heteroalquilalquilo, arilo, heteroarilo, arilalquilo, ariloxi, ariloxialquilo, arilalcoxi, alcoxicarbonilo, arilcarbonilo, arilalcenilo, aminocarbonilarilo, ariltio, arilsulfinilo, arilazo, heteroarilalquilo, heteroarilalcenilo, heteroaril-heteroarilo, heteroariloxi, hidroxi, nitro, ciano, amino, amino substituído onde o amino inclui 1 ou 2 substituintes (que são alquilo, arilo ou qualquer dos outros compostos arílicos mencionados nas definições), tiol, alquiltio, ariltio, heteroariltio, ariltioalquilo, alcoxiariltio, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, alquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo, alcoxicarbonilo, aminocarbonilo, alquilcarboniloxi, arilcarboniloxi, alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, arilsulfinilo, arilsulfinilalquilo, arilsulfonilamino ou arilsulfonaminocarbonilo e/ou qualquer um dos substituintes alquilo aqui apresentados.
Salvo indicação em contrário, o termo "heterocíclico" ou "heterociclo" aqui empregue representa um sistema de anel monocíclico, estável, de 5 a 10 membros, substituído ou não, que pode ser saturado ou insaturado, e que consiste de átomos de carbono e de um a quatro heteroátomos selecionados entre N, O ou S, e em que os heteroátomos de azoto e enxofre podem estar opcionalmente oxidados e o heteroátomo de azoto pode opcionalmente estar quaternizado. O anel heterocíclico pode estar ligado a qualquer heteroátomo ou átomo de carbono que resulte na formação de uma estrutura estável. Entre os exemplos de tais grupos heterocíclicos constam, mas não lhes estando limitados, piperidinilo, piperazinilo, oxopiperazinilo, oxopiperidinilo, oxopirrolidinilo, oxoazepinilo, azepinilo, pirrolilo, pirrolidinilo, furanilo, tienilo, pirazolilo, pirazolidinilo, imidazolilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, oxazolilo, oxazolidinilo, isooxazolilo, isooxazolidinilo, morfolinilo, tiazolilo, tiazolidinilo, isotiazolilo, tiadiazolilo, tetra- hidropiranilo, tiomorfolinilo, sulfdxido de tiomorfolinilo, tiomorfolinilsulfona e oxadiazolilo. 0 termo "aromático heterocíclico" como aqui empregue, isoladamente ou enquanto parte de outro grupo, remete a um anel aromático de 5 ou 7 membros, que inclui 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos tais como azoto, oxigénio ou enxofre e tais anéis fundidos a um anel arilo, cicloalquilo, heteroarilo ou heterocicloalquilo (por exemplo, benzotiofenilo, indolilo) e inclui possíveis N-óxidos. "Heteroarilo substituído" inclui um grupo heteroarilo opcionalmente substituído com 1 a 4 substituintes, tais como os substituintes incluídos na definição anterior de "alquilo substituído" e "cicloalquilo substituído". Exemplos de grupos heteroarilo incluem o seguinte:
e semelhantes.
Exemplo 1 4-isotiocianato-2-trifluorometilbenzonitrilo, (la) 4-Amino-2-trifluorometilbenzonitrilo (2,23 g, 12 mmole) foi adicionado às porções, durante 15 minutos, a uma mistura heterogénea e bem agitada de tiofosgénio (1 ml, 13 mmole) em água (22 ml), à temperatura ambiente. A agitação continuou por mais 1 h. 0 meio reacional foi extraído com clorofórmio (3x15 ml) . A fase orgânica combinada foi seca em MgSCh e evaporada até à secura, sob pressão reduzida, para dar o produto desejado, 4-isotiocianato-2-trifluorometilbenzoni- trilo, (la) , na forma de um sólido acastanhado, que foi usado como tal na etapa seguinte (2,72 g, 11,9 mmole, 99%).
Exemplo 2 2-1). Éster terc-butílico do ácido (4-aminofenil)carbâmico, (2a)
Uma solução aquosa de carbonato de potássio (1,52 g, 11 mmole, em 5 ml de água) foi adicionada a uma solução de 1,4-diaminobenzeno (3,24 g, 30 mmole) em THF (30 ml) e DMF (10 ml) . A esta mistura adicionou-se pirocarbonato de di-terc-butilo, B0C2O (2,18 g, 10 mmole), gota a gota, ao longo de 0,5 h. A mistura reacional foi agitada mais 4 h à temperatura ambiente. A mistura foi então vertida em água fria (40 ml) e extraída com clorofórmio (3x50 ml). A fase orgânica combinada foi seca em MgSCh e concentrada, obtendo-se um resíduo de cor castanha, que foi submetido a cromatografia flash (diclorometano/acetona, 4:1), obtendo-se éster terc-butílico do ácido (4-aminofenil)carbâmico, (2a) na forma de um sólido amarelo (1,98 g, 9,5 mmole, 95%) (rendimento calculado com base no B0C2O) . 2-2). Éster terc-butílico do ácido {4-[(1-ciano-l-metiletil) amino]fenil}carbâmico, 2b
Uma mistura de 2a (0,83 g, 4 mmole), cianidrina de acetona (4 ml) e MgSCh (2 g) foi aquecida a 802C e agitada por 2,5 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, o composto 2b foi cristalizado em água (30 ml) . O sólido foi filtrado e seco para se obter éster terc-butílico do ácido {4-[ (1-ciano-l-metiletil)amino]fenil}carbâmico, 2b (1,08 g, 3,9 mmole, 98%) . 2-3). Éster terc-butilico do ácido {4-[3-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-4-imino-5,5-dimetil-2-tioxoimidazolidin- 1-il]fenil}carbâmico, (2 c)
Trietilamina (0,202 g, 2 mmole) foi adicionada a uma solução de la (0,456 g, 2 mmole) e 2b (0,57 g, 2 mmole) em THF seco (5 ml) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15h e foi concentrada, resultando num resíduo escuro que foi submetido a cromatografia flash (éter etílico/acetona, 97:3), obtendo-se éster terc-butílico do ácido {4-[3-(4-ciano-3- trifluorometilfenil)-4-imino-5,5-dimetil-2-tioxoimidazolidin- 1- il]fenil}carbâmico, (2c) (0,15 g, 0,3 mmole, 15%). 2- 4). 4-[3-(4-aminofenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxo- imidazolidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo,2d, [RD9]
Uma mistura de 2c (0,15 g, 0,3 mmole) em HC1 aquoso 3N (1 ml) e metanol (4 ml) foi aquecida sob refluxo durante 2 h.
Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (5 ml) e extraída com diclorometano (8 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCd, concentrada e submetida a cromatografia (diclorometano/acetona, 9:1), obtendo-se 4-[3-(4-aminofenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxoimidazolidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 2d, [RD9] (0,118 g, 0,29 mmole, 97%) na forma de um sólido amarelo.
3Η RMN (400 MHz, CDC13) δ 1,54 (s, 6H) , 6,73-6,75 (m, 2H) , 7, 00-7,03 (m, 2H) , 8,02 (dd, Ji = 8,2 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) ,
8,16 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 8,20 (d, J = 8,2 Hz, 1H) ; 13C RMN (100 MHz, CDCI3) δ 22,7, 66,2, 109, 1, 114,3, 114, 9, 120,4, 122,0 (q, J= 272,5 Hz), 127,0 (q, J= 4,9 Hz), 130,4, 132,5 (q, J= 33,0 Hz), 133,4, 135,6, 138,5, 149,2, 175,3, 180,4. 2-5). 4-[3-(4-azidofenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxo-imidazo- lidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 2e, [RD10]
Uma solução aquosa de ácido sulfúrico (25% em peso, 1 ml) foi adicionada a uma solução de 2d (0,10 g, 0,25 mmole) em acetona (1 ml) a -5 °C. Uma solução aquosa de NaNCb (0,024 g, 0,35 mmole, em 0,5 ml de água) foi adicionada lentamente a esta mistura ao longo de 0,1 h. A mistura reacional foi deixada sob agitação a -5 °C durante mais lhe, em seguida, uma solução aquosa de NaN3 (0,02 g, 0,3 mmole em 0,3 ml de água) foi adicionada gota a gota. No fim da adição, o meio reacional foi aquecido até à temperatura ambiente e agitado durante mais 3 h. O produto foi extraído com diclorometano (3x5 ml) . A camada orgânica combinada foi seca em MgSCb, concentrada e submetida a cromatografia (diclorometano), obtendo-se 4-[3-(4-azidofenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2- tioxoimidazolidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 2e, [RD10] (0,08 g, 0,18 mmole, 72%) na forma de um sólido amarelo.
!H RMN (400 MHz, CDC13) δ 1,54 (s, 6H) , 7,17-7,20 (m, 2H) , 7,27-7,30 (m, 2H) , 7,84 (dd, Ji = 8,3 Hz, Ji = 1,8 Hz, 1H) ,
7,96 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 7,97 (d, J = 8,3 Hz, 1H) ; 13C RMN (100 MHz, CDCI3) δ 23, 7, 66,4, 110, 1, 114, 8, 120,4, 122,1 (q, J = 272,5 Hz), 127,0 (q, J = 4,7 Hz), 131,1, 131,5, 132,3, 133,3 (q, J = 33,0 Hz), 135,3, 137,1, 141,7, 174,8, 180,1. MS para C19H13F3N6OS, estimado 430,4, encontrado 430,1.
Exemplo 3 3-1). 2-(4-hidroxifenilamino)-2-metilpropanonitrilo, 3a
Uma mistura de 4-aminofenol (1,09 g, 10 mmole), cianidrina de acetona (10 ml) e MgSCb (2 g) foi aquecida a 80 °C e agitada durante 4 h. Após concentração do meio sob vácuo, o composto 3a foi cristalizado em água (20 ml) . O sólido foi filtrado e seco, obtendo-se 2-(4-hidroxifenilamino)-2-metilpropanonitrilo, 3a (1,69 g, 9,6 mmole, 96%). 3-2) . 4-[3-(4-hidroxifenil)-5-imino-4,4-dimetil-2-tioxo-imi- dazolidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 3b
Trietilamina (0,101 g, 1 mmole) foi adicionada a uma solução de 3a (0,352 g, 2 mmole) em THF seco (5 ml) e de la (0,456 g, 2 mmole) . A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 48 h, concentrada, e o resíduo escuro obtido foi submetido a cromatografia flash (diclorometano/acetona, 85:15), obtendo-se 4-[3- (4-hidroxifenil)-5-imino-4,4-dimetil- 2- tioxoimidazolidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 3b (0,274 g, 0,68 mmole, 34%). 3- 3) . 4-[3-(4-hidroxifenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxo-imida- zolidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 3c, [RD8]
Uma mistura de 3b (0,202 g, 0,5 mmole) em HC1 aquoso 2N (2 ml) e metanol (5 ml) foi aquecida sob refluxo durante 2 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (10 ml) e extraida com acetato de etilo (10 ml) . A camada orgânica foi seca em
MgSCb, concentrada e cromatografada (diclorometano/acetona, 9:1), obtendo-se 4-[3-(4-hidroxifenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxoimidazolidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 3c, [RD8] (0,198 g, 0,49 mmole, 98%), na forma de um pó branco.
!H RMN (CDC13, 400 MHz) 1,57 (s, 6H) , 6,26 (s, OH), 6,90- 6,93 (m, 2H) , 7,11-7,14 (m, 2H) , 7,84 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7, 95-7, 98 (m, 2H) ; 13C RMN (CDC13,100 MHz) 23, 6, 66,5, 109, 9, 114, 9, 115,7, 116, 8, 121, 9 (q, J= 272,7
Hz), 127,2 (q, J= 4,7 Hz), 130,6, 132,3, 133,5 (q, J= 33,2
Hz), 135,3, 137,2, 157,0, 175,3, 180,2.
Exemplo 4 Éster 4-[3-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-5,5-dimetil-4-oxo-2-tioxoimidazolidin-l-il]fenilico de ácido cloroacético, 4a, [RD13]
Cloreto de cloroacetilo (0,045 g, 0,4 mmole) foi adicionado a uma mistura de 3c (0,101 g, 0,25 mmole) e trietilamina (0,041 g, 0,41 mmole) em THF seco (1,5 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. Cloridrato de trietilamina foi separado por filtração. O filtrado foi concentrado e cromatografado (diclorometano/acetona, 95:5), obtendo-se 84% de éster 4-[3-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-5,5-dimetil-4- oxo-2-tioxoimidazolidin-l-il]fenílico de ácido cloroacético, 4a, [RD13] (0,101 g, 0,21 mmole) na forma de pó branco.
3Η RMN (CDC13, 400 MHz) 1,58 (s, 6H) , 4,32 (s, 2H) , 7,33 (s, 4H) , 7,83 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,9 Hz, 1H) , 7,95-7,97 (m, 2H) ; 13C RMN (CDC13,100 MHz) 23,7, 40,8, 66,5, 110, 1, 114.8, 121,9 (q, J= 212,5 Hz), 122,7, 127,1 (q, J= 4,7 Hz), 130, 9, 132,3, 132, 9, 133,5 (q, J = 33,2 Hz), 135,3, 137, 1, 150.9, 165,5, 174,8, 180,0.
Exemplo 5 5-la). 2-metil-2-(4-metilfenil)aminopropanonitrilo, 5a
Uma mistura de p-toluidina (1,07 g, 10 mmole) e cianidrina de acetona (10 ml) foi aquecida a 80 °C e agitada durante 4 h. O meio foi concentrado e seco sob vácuo, obtendo-se 2-metil-2-(4-metilfenil)aminopropanonitrilo, 5a (1,72 g, 9,9 mmole, 99%) na forma de um sólido castanho. 5-lb). 2-metil-2-(4-metilfenil)aminopropanonitrilo, 5a
Cianeto de sódio (0,735 g, 15 mmole) foi adicionado a uma mistura de p-toluidina (1,07 g, 10 mmole) e acetona (1,16 g, 20 mmole) em 90% de ácido acético (10 ml) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 12 h e, em seguida, acetato de etilo (50 ml) foi adicionado. A camada orgânica foi lavada com água (4x30 ml) , seca em sulfato de magnésio e concentrada sob vácuo até à secura, obtendo-se 2-metil-2-(4-metilfenil)aminopropanonitrilo, 5a (1,65 g, 9,5 mmole, 95%) na forma de sum sólido de cor castanha. 5-2) . 4-[3-(4-metilfenil)-5-imino-4,4-dimetil-2-tioxo-imida- zolidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 5b
Trietilamina (0,101 g, 1 mmole) foi adicionada a uma solução de la (0,456 g, 2 mmole) e 5a (0,348 g, 2 mmole) em THF seco (3 ml) . A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 2 dias e, em seguida, concentrada, obtendo-se um resíduo escuro que foi submetido a cromatografia flash (diclorometano/acetona, 95:5) para dar 4-[3-(4-metilfenil)-5-imino-4,4-dimetil-2-tioxoimidazolidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 5b (0,136 g, 0,34 mmole, 17%). 5-3a). 4-[3-(4-metilfenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxo-imidazo-lidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 5c
Uma mistura de 5b (0.121 g, 0,3 mmole) em HC1 aquoso 2N (2 ml) e metanol (5 ml) foi aquecida sob refluxo durante 2 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (10 ml) e extraída com acetato de etilo (10 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCb, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 4- [3-(4-metilfenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxoimidazolidin-l-il ]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 5c (0,118 g, 0,294 mmole, 98%) na forma de um pó branco. 5- 3b). 4-[3-(4-metilfenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxo-imidazo-lidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 5c,[RD7]
Uma mistura de la (0,547 g, 2,4 mmole) e 5a (0,348 g, 2 mmole) em DMF seco (0,6 ml) foi agitada durante 36 h. A esta mistura adicionou-se metanol (20 ml) e HC1 2N (5 ml) . A segunda mistura foi refluxada durante 6 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (30 ml) e extraída com acetato de etilo (40 ml). A camada orgânica foi seca em MgSCd, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 4-[3-(4-metilfenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxoimidazolidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 5c, [RD7] (0,596 g, 1,48 mmole, 74%) na forma de um pó branco.
!H RMN (CDC13, 400 MHz) 1,61 (s, 6H) , 2,44 (s, 3H) , 7,17- 7,20 (m, 2H) , 7,33-7,36 (m, 2H) , 7,86 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7, 96-7, 98 (m, 2H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 21,3, 23, 6, 66,4, 110, 0, 114, 9, 121, 9 (q, J = 272, 6 Hz), 127,1 (q, J= 4,7 Hz), 129,2, 130,6, 132,2, 132,3, 133,4 (q, J= 33,2 Hz), 135,2, 137,2, 140,1, 175,1, 179,9.
Exemplo 6 6-1). 2-metil-2-fenilaminopropanonitrilo, 6a
Uma mistura de aminobenzeno (0,931 g, 10 mmole) e cianidrina de acetona (2 ml) foi aquecida sob refluxo e agitada durante 20 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em acetato de etilo (40 ml) e lavada com água fria (2x30 ml). A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada sob vácuo até à secura, para dar 2-metil-2-fenilaminopropanonitrilo, 6a (1,51 g, 9,4 mmole, 94%) na forma de uma suspensão liquida de cor castanha. 6-2). 4-[3-fenil-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxoimidazolidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 6b, [RD10]
Uma mistura de la (0,274 g, 1,2 mmole) e 6a (0,160 g, 1 mmole) em DMF seco (0,2 ml) foi agitada durante 48 horas. A esta mistura adicionou-se (10 ml) de metanol e HC1 2N (3 ml). A segunda mistura foi refluxada durante 6 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (20 ml) e extraída com acetato de etilo (20 ml). A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 4-3-fenil-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxoimidazolidin-l-il]-2-trifluo-rometilbenzonitrilo, 6b, [RD10] (0,276 g, 0,71 mmole, 71%) na forma de um pó branco.
3H RMN (CDCls, 400 MHz) 1,60 (s, 6H) , 7,28-7,31 (m, 2H) , 7,50-7,58 (m, 3H) , 7,85 (dd, Ji = 8,3 Hz, Ji = 1,8 Hz, 1H) , 7, 96-7, 99 (m, 2H) ; 13C RMN (CDC13, 100 MHz) 23, 7, 66,4, 110.2, 114,8, 121,9 (q, J= 272,6 Hz), 127,1 (q, J= 4,7 Hz), 129,5, 129,8, 129,9, 132,2, 133,4 (q, J = 33,2 Hz), 135,1, 135.2, 137,2, 175,0, 179,9.
Exemplo 7 7-la). 1-(4-metilfenil)aminociclobutanonitrilo, 7a
Cianeto de sódio (0,147 g, 3 mmole) foi adicionado a uma mistura de p-toluidina (0,214 g, 2 mmole) e ciclobutanona (0,21 g, 3 mmole) em ácido acético a 90% (3 ml) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 12 h e, em seguida, adicionou-se 20 ml de acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água (3x10 ml) , seca em sulfato de magnésio e concentrada sob vácuo até à secura para dar l-(4-metilfenil)aminociclobutanonitrilo, 7a (0,343 g, 1,84 mmole, 92%) na forma de um sólido de cor castanha. 7-lb). 1-(4-metilfenil)aminociclobutanonitrilo, 7a
Cianeto de trimetilsililo (0,93 ml, 7 mmole) foi adicionado gota a gota a uma mistura de p-toluidina (0,535 g, 5 mmole) e ciclobutanona (0,42 g, 6 mmole). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 6 h e, em seguida, concentrada sob vácuo para se obter um liquido de cor castanha, que foi submetido a cromatografia (diclorometano) para dar l-(4- metilfenil)aminociclobutanonitrilo, 7a (g 0,912, 4,9 mmole, 98%) na forma de um sólido amarelado. 7-2) . 4-(8-imino-6-tioxo-5-(4-metilfenil)-5,7-diazaspiro- [3.4] oct-7-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 7b A uma solução de la (2,28 g, 10 mmole) em DMF seco (3 ml) foi adicionado progressivamente, ao longo de 20 horas, uma solução de 7a (1,764 g, 9 mmole) em DMF seco (3 ml) à temperatura ambiente. O meio foi agitado durante mais 4 h. Depois de o DMF ter evaporado, o resíduo foi cromatografado (diclorometano/acetona, 95:5) para dar 4-(8-imino-6-tioxo-5-(4-metilfenil)-5,7-diazaspiro[3.4]oct-7-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 7b (1,937 g, 4,68 mmole, 52%). 7-3a). 4-(8-oxo-6-tioxo-5-(4-metilfenil)-5,7-diazaspiro- [3.4] oct-7-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 7c [RD37]
Uma mistura de 7b (0,041 g, 0,1 mmole) em HC1 aquoso 2N (3 ml) e metanol (1 ml) foi aquecida sob refluxo durante 2 h.
Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (5 ml) e extraída com acetato de etilo (6 ml). A camada orgânica foi seca em MgSCb, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 4 —(8 — oxo-6-tioxo-5-(4-metilfenil)-5,7-diazaspiro[3.4]oct-7-il) -2-trifluorometilbenzonitrilo, 4- (8-oxo-6-tioxo-5-(4- metilfenil)-5,7-diazaspiro[3.4]oct-7-il)-2- trifluorometilbenzonitrilo, 7c (0,04 g, 0,096 mmole, 96%) na forma de um pó branco. 7-3b). 4-(8-oxo-6-tioxo-5-(4-metilfenil)-5,7-diazaspiro- [3.4]oct-7-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 7c, [RD37]
Uma mistura de la (0,912 g, 4 mmole) e 7a (0,558 g, 3 mmole) em DMF seco (0,5 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. A esta mistura adicionou-se metanol (30 ml) e HC1 aquoso 2N (6 ml) . A segunda mistura foi refluxada durante 6 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (50 ml) e extraída com acetato de etilo (60 ml). A camada orgânica foi seca em MgSCb, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 4-(8-oxo-6-tioxo-5-(4-metilfenil)-5,7-diazaspiro[3.4]oct-7-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 7c (0,959 g, 2,31 mmole, 77%) na forma de um pó branco.
!H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1, 62-1, 69 (m, 1H) , 2,16-2,22 (m, 1H) , 2,46 (s, 3H) , 2,55-2, 66 (m, 4H) , 7,19-7,26 (m, 2H) , 7,36-7,42 (m, 2H) , 7,86 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) ,
7,96 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 7,99 (d, J = 1,8 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 13,7, 21,3, 31,4, 67,4, 109, 9, 114, 9, 121,9 (q, J= 272,6 Hz), 127,1 (q, J= 4,7 Hz), 129,5, 130,8, 132,2, 132,4, 133,3 (q, J = 33,2 Hz), 135,2, 137,3, 140,1, 175,0, 180,0.
Exemplo δ 8-1). 1-(4-metilfenil)aminociclopentanonitrilo, 8a
Cianeto de trimetilsililo (ml 0,865, 7 mmole) foi adicionado gota a gota a uma mistura de p-toluidina (0,535 g, 5 mmole) e ciclopentanona (0,589 g, 7 mmole). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 6 h e, em seguida, concentrada sob vácuo, obtendo-se um liquido de cor castanha que foi submetido a cromatografia (diclorometano) para dar l-(4- metilfenil)aminociclopentanonitrilo, 8a (0,981 g, 4,9 mmole, 98%) na forma de um sólido amarelado. 8-2). 4-(4-Oxo-2-tioxo-l-(4-metilfenil)-1,3-diazaspiro- [4.4]non-3-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 8b, [RD35]
Uma mistura de la (0,296 g, 1,3 mmole) e 8a (0,2 g, 1 mmole) em DMF seco (0,2 ml) foi agitada durante 48 horas. A esta mistura adicionou-se (10 ml) de metanol e HC1 aquoso 2N (3 ml) . A segunda mistura foi refluxada durante 6 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (20 ml) e extraída com acetato de etilo (30 ml). A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 4-(4-oxo-2-tioxo-1-(4-metilfenil)-l,3-diazaspiro[4.4]non-3-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 8b, [RD35] (0,3 g, 0,7 mmole, 70%) na forma de um pó branco.
!H RMN (CDC13, 400 MHz) 1,47-1,57 (m, 2H) , 1,81-1,92 (m, 2H) , 2,20-2,24 (m, 2H) , 2,27-2,34 (m, 2H) , 2,43 (s, 3H) , 7,18-7,22 (m, 2H) , 7,33-7,36 (m, 2H) , 7,86 (dd, Ji = 8,2 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,96 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,98 (d, J = 1,8 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 21,3, 25,2, 36,3, 75, 1, 110,0, 114,9, 121,9 (q, J= 272,5 Hz), 127,1 (q, J= 4,7 Hz), 129,5, 130,7, 123,2, 133,0, 133,4 (q, J = 33,2 Hz), 135,1, 137,4, 140,0, 176,3, 180,2.
Exemplo 9 9-1). 1-(4-metilfenil)aminociclo-hexanonitrilo, 9a
Cianeto de sódio (0,147 g, 3 mmole) foi adicionado a uma mistura de p-toluidina (0,214 g, 2 mmole) e ciclo-hexanona (0,294 g, 3 mmole) em ácido acético 90% (3 ml) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 12 h e, em seguida, adicionou-se 20 ml de acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água (3x10 ml) , seca em sulfato de magnésio e concentrada sob vácuo até à secura para dar 1—(4 — metilfenil)aminociclo-hexanonitrilo, 9a (0,398 g, 1,86 mmole, 93%) na forma de um sólido de cor castanha. 9-2) . 4-(4-imino-2-tioxo-l-(4-metilfenil)-1,3-diazaspiro- [4.5] dec-3-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 9b
Trietilamina (0,05 g, 0,5 mmole) foi adicionada a uma solução de la (0,228 g, 1 mmole) e 9a (0,214 g, 1 mmole) em THF seco (2 ml) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 dias e, em seguida, foi concentrada, obtendo-se um resíduo escuro que foi submetido a cromatografia flash (diclorometano/acetona, 95:5) para dar 4-(4-imino-2-tioxo-l-(4-metilfenil)-1,3-diazaspiro[4.5]dec-3-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 9b (0,035 g, 0,08 mmole, 8%). 9-3). 4-(4-Oxo-2-tioxo-l-(4-metilfenil)-1,3-diazaspiro- [4.5] dec-3-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 9-c, [RD48]
Uma mistura de 9b (0,035 g, 0,08 mmole) em HC1 aquoso 2N (1 ml) e metanol (3 ml) foi aquecida sob refluxo durante 2 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (5 ml) e extraída com acetato de etilo (6 ml). A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 4-(4-oxo-2-tioxo-1-(4-metilfenil)-l,3-diazaspiro[4.5]dec-3-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 9c, [RD48] (0,034 g, 0,076 mmole, 95%) na forma de um pó branco.
3Η RMN (CDC13, 400 MHz) 1,02-1,05 (m, 1H) , 1, 64-1,76 (m, 4H) , 2,03-2,12 (m, 5H) , 2,44 (s, 3H) , 7,12-7,15 (m, 2H) , 7,33-7,36 (m, 2H) , 7,85 (dd, Ji = 8,2 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,96 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 7,97 (d, J = 1,8 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 20,7, 21,3, 24,0, 32, 6, 67,4, 109, 9, 114,9, 122,0 (q, J= 272,5 Hz), 127,3 (q, J= 4,6 Hz), 130,0, 130,5, 132,0, 132,5, 133,3 (q, J = 33,2 Hz), 135,2, 137,3, 140,1, 174,1, 180,1.
Exemplo 10 10-1). 1-(4-metilfenil)aminociclo-hexanonitrilo, 10a
Cianeto de sódio (0,147 g, 3 mmole) foi adicionado a uma mistura de p-toluidina (0,214 g, 2 mmole) e ciclo-heptanona (0,337 g, 3 mmole) em ácido acético 90% (3 ml) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 12 h e, em seguida, adicionou-se 20 ml de acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água (3x10 ml) , seca em sulfato de magnésio e concentrada sob vácuo até à secura para dar 1— (4 — metilfenil)aminociclo-hexanonitrilo, 10a (0,438 g, 1,92 mmole, 96%) na forma de um sólido de cor castanha. 10-2). 4-(4-imino-2-tioxo-l-(4-metilfenil)-1,3-diazaspiro- [4.5]undec-3-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 10b
Trietilamina (0,05 g, 0,5 mmole) foi adicionada a uma solução de la (0,228 g, 1 mmole) e 9a (0,228 g, 1 mmole) em THF seco (2 ml) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente por 2 dias e, em seguida, foi concentrada, obtendo-se um resíduo escuro que foi submetido a cromatografia flash (diclorometano/acetona, 95:5) para dar 4-(4-imino-2-tioxo-1-(4-metilfenil)-l,3-diazaspiro[4.5]undec-3-il)-2-trifluoro-metilbenzonitrilo, 10b (0,036 g, 0,08 mmole, 8%) . 10- 3). 4-(4-oxo-2-tioxo-l-(4-metilfenil)-1,3-diazaspiro- [4.5]undec-3-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 10 c, [RD49]
Uma mistura de 9b (0,036 g, 0,08 mmole) em HC1 aquoso 2N (1 ml) e metanol (3 ml) foi aquecida sob refluxo durante 2 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (5 ml) e extraída com acetato de etilo (6 ml). A camada orgânica foi seca em MgSCb, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 10c (0,034 g, 0,075 mmole, 94%) na forma de um pó branco.
!H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1,24-134 (m, 2H) , 1,37-1,43 (m, 2H), 1,53-1,60 (m, 2H), 1,74-1,82 (m, 2H), 2,19-2,25 (m, 4H), 2,44 (s, 3H) , 7,16-7,19 (m, 2H) , 7,32-7,35 (m, 2H) , 7,83 (dd,
Ji = 8,2 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7, 95-7, 97 (m, 2H) ; 13C RMN (CDC13, 100 MHz) 21,4, 22,2, 30, 9, 36,3, 71, 1, 110, 0, 114,9, 121,9 (q, J= 272,5 Hz), 127,2 (q, J= 4,6 Hz), 129,6, 130,5, 132,3, 133,0, 133,2 (q, J = 33,2 Hz), 135,1, 137,4, 140,0, 175,9, 179,7.
Exemplo 11 11- 1). 1-(4-hidroxifenil)aminociclobutanonitrilo, 11a
Cianeto de trimetilsililo (0,93 ml, 7 mmole) foi adicionado gota a gota a uma mistura de 4-hidroxianilina (0,545 g, 5 mmole) e ciclobutanona (0,42 g, 6 mmole) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 6 h e, em seguida, concentrada sob vácuo, obtendo-se um líquido de cor castanha que foi submetido a cromatografia (diclorometano:acetona, 98:2) para dar 11a (g 0,903, 4,8 mmole, 96%) na forma de um sólido amarelado. 11- 2). 4-(8-oxo-6-tioxo-5-(4-hidroxifenil)-5,7-diazaspiro- [3.4]oct-7-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, lib, [RD58]
Uma mistura de la (0,57 g, 2,5 mmole) e 7a (0,376 g, 2 mmole) em DMF seco (0,5 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 40 h. A esta mistura adicionou-se metanol (30 ml) e HC1 aquoso (5 ml) . A segunda mistura foi refluxada durante 6 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (40 ml) e extraída com acetato de etilo (50 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCb, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 98:2) para dar 11b (0,659 g, 1,58 mmole, 79%) na forma de um pó branco.
!H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1,55-1,63 (m, 1H) , 2,01-2,09 (m, 1H), 2,50-2,65 (m, 4H), 6,97-7,01 (m, 2H), 7,20-7,24 (m, 2H), 8,02 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 8,14 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 8,21 (d, J= 8,3 Hz, 1H) ; 13C RMN (Acetona-cA, 100 MHz) 13,4, 31,3, 67,5, 108, 9, 114, 8, 116, 1, 123,5 (q, J = 271,5
Hz), 127,4 (q, J = 4,9 Hz), 131,3, 131,8 (q, J = 32,7 Hz), 133,3, 135,5, 136,2, 138,5, 158,1, 175,1, 180,7.
Exemplo 12 12- 1). 1-(4-bifenilamino)ciclobutanocarbonitrilo, 12a
Cianeto de trimetilsililo (0,2 ml, 1,5 mmole) foi adicionado gota a gota a uma mistura de 4-bifenilamina (0,169 g, 1 mmole) e ciclobutanona (0,098 g, 1,4 mmole). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 6 h e, em seguida, concentrada sob vácuo, obtendo-se um líquido de cor castanha que foi submetido a cromatografia (diclorometano) para dar 12a (0,24 g, 0,97 mmole, 97%) na forma de um sólido branco. 12- 2). 4-(8-oxo-6-tioxo-5-(4-bifenil)-5,7-diazaspiro[3.4]oct-7-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 12b[RD57]
Uma mistura de la (0,137 g, 0,6 mmole) e 12a (0,124 g, 0,5 mmole) em DMF seco (0,2 ml) foi agitada à temperatura ambiente por 3 dias. A esta mistura adicionou-se metanol (5 ml) e HC1 aquoso 2N (1 ml) . A segunda mistura foi refluxada durante 6 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (10 ml) e extraída com acetato de etilo (15 ml). A camada orgânica foi secada em MgSCb, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 12b (0,162 g, 0,34 mmole, 68%) na forma de um pó branco.
!H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1, 67-1,76 (m, 1H) , 2,19-2,31 (m, 1H), 2,59-2,74 (m, 4H), 7,40-7,44 (m, 3H), 7,47-7,53 (m, 2H), 7, 64-7, 67 (m, 2H) , 7,79-7,82 (m, 2H) , 7,88 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,97 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 8,02 (d, J = 1,8
Hz, 1H) ; 13C RMN (CDC13, 100 MHz) 13,7, 31,5, 67,5, 110,0, 114,9, 122,0 (q, J= 272, 6 Hz), 127,1 (q, J= 4,7 Hz), 127,3, 128.1, 128,7, 129,0, 130,2, 132,3, 133,5 (q, J = 33,2 Hz), 134.2, 135,2, 137,2, 139,6, 142,8, 174,9, 179,9.
Exemplo 13 13- 1). 1-(2-naftilamino)ciclobutanocarbonitrilo, 13a
Cianeto de trimetilsililo (0,27 ml, 2 mmole) foi adicionado gota a gota a uma mistura de 2-aminonaftaleno (0,143 g, 1 mmole) e ciclobutanona (0,098 g, 1,4 mmole). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 12 h e, em seguida, concentrada sob vácuo, obtendo-se um líquido de cor castanha que foi submetido a cromatografia (diclorometano) para dar 13a (0,209 g, 0,94 mmole, 94%) na forma de um sólido amarelo. 13- 2). 4-(8-oxo-6-tioxo-5-(4-bifenil)-5,7-diazaspiro[3.4]oct- 7-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 12b, [RD85]
Uma mistura de la (0,137 g, 0,6 mmole) e 13a (0,111 g, 0,5 mmole) em DMF seco (0,2 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 3 dias. A esta mistura adicionou-se metanol (5 ml) e HC1 aquoso (1 ml) . A segunda mistura foi refluxada durante 6 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (10 ml) e extraída com acetato de etilo (15 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCb, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 12b (0,146 g, 0,325 mmole, 65%) na forma de um pó branco.
!H RMN (CDCI3, 400 MHz) 158-1, 68 (m, 1H) , 2,17-2,29 (m, 1H) , 2,61-2,75 (m, 4H) , 7,40 (dd, Ji = 8,6 Hz, J2 = 2,0 Hz, 1H) , 7,58-7, 65 (m, 2H) , 7, 86-8, 00 (m, 5H) , 8,04 (J = 1,8 Hz, 1H) , 8,06 (d, J = 8,6 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDC13, 100 MHz) 13,7, 31,6, 67,7, 110, 0, 114, 9, 122,0 (q, J = 272, 6 Hz), 126, 8, 127,1 (q, J = 4,8 Hz), 127,2, 127,7, 128, 0, 128,3, 129,1, 130,2, 132,2, 132,5, 133,4, 133,5 (q, J = 33,1 Hz), 133,6, 135,2, 137,2, 175,0, 180,1.
Exemplo 14 14- 1). 2-(4-metil-2-piridinamino)-2-metilpropanonitrilo, 14a
Cianeto de trimetilsililo (0,27 ml, 2 mmole) foi adicionado gota a gota a uma mistura de 2-amino-4-metilpiridina (0,108 g, 1 mmole) e acetona (0,58 g, 10 mmole). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente por 6 dias e, em seguida, foi concentrada sob vácuo, obtendo-se um líquido de cor castanha que foi submetido a cromatografia (diclorometano:acetona, 60:40) para dar 14a (0,133 g, 0,76 mmole, 76%) na forma de um sólido branco. 14- 2). 4-[4,4-dimetil-3-(4-metilpiridin-2-il)-5-oxo-2-tioxo- imidazolidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 14b, [RD83]
Uma mistura de la (0,91 g, 0,4 mmole) e 14a (0,053 g, 0,3 mmole) em DMF seco (0,2 ml) foi agitada à temperatura ambiente por 6 dias. A esta mistura adicionou-se (5 ml) de metanol e HC1 aquoso (1 ml). A segunda mistura foi refluxada durante 5 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (10 ml) e extraída com acetato de etilo (15 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCb, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 14b (0,07 g, 0,174 mmole, 58%) na forma de um pó branco.
!H RMN (CDCÍ3, 400 MHz) 1,70 (s, 6H) , 2,44 (s, 3H) , 7,19 (d, J= 4,4 Hz, 1H) , 7,45 (t, J= 0,6 Hz, 1H) , 7,82 (dd, Ji = 8,2 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,95 (d, J= 1,8 Hz, 1H) , 7,97 (d, J= 8,2 Hz, 1H) , 8,47 (d, J= 5,0 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDC13, 100 MHz) 21,1, 24,1, 67, 1, 110,2, 114, 8, 121, 9 (qj = 272,6
Hz), 124,4, 125,1, 127,3 (q, J= 4,8 Hz), 132,4, 133,5 (q, J = 33,2 Hz), 135,3, 137,1, 149,2, 149,5, 150,0, 175,2, 179,0.
Exemplo 15 15- 1). 2-(2-piridinamino)-2-metilpropanonitrilo, 15a
Cianeto de trimetilsililo (0,27 ml, 2 mmole) foi adicionado gota a gota a uma mistura de 2-aminopiridina (0, 094 g, 1 mmole) e acetona (0,58 g, 10 mmole) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 6 dias e, em seguida, concentrada sob vácuo, obtendo-se um líquido de cor castanha que foi submetido a cromatografia (diclorometano: acetona, 60:40) para dar 15a (0,131 g, 0,81 mmole, 81%) na forma de um sólido branco. 15- 2). 4-[4,4-dimetil-3-(4-piridin-2-il)-5-oxo-2-tioxo-imida- zolidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 15b, [RD82]
Uma mistura de la (0,91 g, 0,4 mmole) e 15a (0, 048 g, 0,3 mmole) em DMF seco (0,3 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 10 dias. A esta mistura adicionou-se (5 ml) de metanol e HC1 aquoso (1 ml). A segunda mistura foi refluxada durante 5 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (10 ml) e extraída com acetato de etilo (15 ml). A camada orgânica foi seca em MgSCb, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 15b (0,059 g, 0,153 mmole, 51%) na forma de um pó branco.
!H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1,73 (s, 6H) , 7,38 (dd)Ji = 7,3 Hz, J2 = 5,4 Hz, 1H) , 7,71 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 7,87 (dd, Ji = 8.2 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,95 (td, Ji = 7,8 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,95 (d, J= 1,3 Hz, 1H) , 7,98 (d, J= 8,2 Hz, 1H) , 8,62 (dd, Ji = 4,7 Hz, J2 = 1,3 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDC13, 100 MHz) 24,2, 67,1, 110,3, 114,8, 121,9 (q, J = 272,6 Hz), 123,7, 123,8, 127,3 (q, J= 4,8 Hz), 132,4, 133,6 (q, J= 33,2 Hz), 135,3, 137,1, 138,2, 149,5, 149,6, 175,1, 179,0.
Exemplo 16 16- 1). 1-(5-metil-2H-pirazol-3-ilamino)-ciclobutano-carboni-trilo, 16a
Cianeto de trimetilsililo (0.532 ml, 4,0 mmole) foi adicionado gota a gota a uma mistura de 3-amino-5-metilpirazol (0,194 g, 2,0 mmole) e ciclobutanona (0,154 g, 2.2 mmole). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 40 h e, em seguida, concentrada sob vácuo, obtendo-se um líquido escuro que foi submetido a cromatografia (diclorometano) para dar 16a (0,267 g, 1,52 mmole, 76%) na forma de um pó de cor esbranquiçada. 16-2). 4-[5-(5-metil-2H-pirazol-3-il)-8-oxo-6-tioxo-5,7- diazaspiro[3.4]oct-7-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 16b, [RD84]
Uma mistura de la (0,0684 g, 0,3 mmole) e 16a (0,053 g, 0,3 mmole) em DMF seco (0,2 ml) foi agitada à temperatura ambiente por 4 dias. A esta mistura adicionou-se (10 ml) de metanol e HC1 aquoso 2N (2 ml). A segunda mistura foi refluxada durante 5 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (30 ml) e extraída com acetato de etilo (30 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCb, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 97:3) para dar 16b (0,0826 g, 0,2 mmole, 67%) na forma de um pó branco.
3Η RMN (acetona de, 400 MHz) 1, 66-1,76 (m, 1H) , 2,00-2,07 (m, 1H), 3,35 (s, 3H), 2,56-2,63 (m, 2H), 2,85-2,93 (m, 2H), 8,04 (dd, Ji = 8,2 Hz, J2 = 1,6 Hz, 1H) , 8,18 (d, J = 1,6 Hz,
1H) , 8,22 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 11,99 (s, 1H) ; 13C RMN (acetona de, 100 MHz) 10,2, 13, 1, 31,1, 67,4, 102,5, 109, 1, 114,8, 122,5 (q, J= 271,4 Hz), 127,8 (q, J= 4,8 Hz), 131,9 (q, J= 33,6 Hz), 133, 6, 135, 6, 138,4, 139, 9, 145, 0, 175, 0, 179,6.
Exemplo 17 4-[3-(4-hidroxifenil)-4,4-dimetil-2,5-ditioxoimidazolidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 17a, [RD59]
Uma mistura de 3c (0,081 g, 0,2 mmole) e reagente de Lawesson (0,097 g, 0,24 mmole) em tolueno (3 ml) foi aquecida sob refluxo durante 15 h. Após arrefecimento até à
temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (10 ml) e extraída com acetato de etilo (10 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCb, concentrada e cromatografada (diclorometano:pentano, 9:1) para dar 17a (0,0185 g, 0,044 mmole, 22%) na forma de um pó branco.
3H RMN (CDC13, 400 MHz) 1,65 (s, 6H) , 6, 95-6, 97 (m, 2H) , 7,15-7,18 (m, 2H) , 7,75 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,86 (d, J = 1,8
Hz, 1H) , 7,98 (dd, Ji = 8,2 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCls, 100 MHz) 27,9, 77, 8, 110, 9, 114,7, 116,7, 121, 9 (q, J = 272,6 Hz), 128,1 (q, J = 4,8 Hz), 129,1, 130,7, 133,3, 133.5 (q, J= 33,2 Hz), 135,5, 140,3, 156,8, 179,9, 207,9.
Exemplo 18 4-[3-(4-hidroxifenil)-4,4-dimetil-2,5-dioxoimidazolidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 18a, [RD60]
Peróxido de hidrogénio a 30% (3 ml 26 mmole) foi adicionado gota a gota a uma solução de 3c (0,121 g, 0,4 mmole) em ácido acético glacial (3 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 12 h e, em seguida, adicionou-se 20 ml de acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com água (3x15 ml), seca em sulfato de magnésio, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 18a (0,102 g, 0,261 mmole, 87%) na forma de um pó branco.
3H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1,52 (s, 6H) , 6,70-6,73 (m, 2H) , 7,01-7,04 (m, 2H) , 7,92 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 8,00 (dd, Ji = 8,4 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 8,15 (d, J = 1,8 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 23,7, 63, 7, 108,4, 115, 0, 116,7, 121, 9 (q, J = 272,6 Hz), 123,5 (q, J = 4,8 Hz), 124,0, 128,5, 130,5, 133.6 (q, J= 33,2 Hz), 135,5, 136,2, 153,4, 157,2, 174,5.
Exemplo 19 19-1). 3-fluoro-2-metil-2-(4-metilfenil)aminopropionitrilo, 19a
Cianeto de trimetilsililo (0,146 ml, 1,1 mmole) foi adicionado gota a gota a uma mistura de p-toluidina (0,107 g, 1 mmole) e fluoroacetona (0,082 g, 1,1 mmole). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 12 h e, em seguida, concentrada sob vácuo, obtendo-se um líquido de cor castanha que foi submetido a cromatografia (diclorometano) para dar 19a (0,179 g, 0,93 mmole, 93%) na forma de um sólido amarelado. 19-2). 4-(4-fluorometil-4-metil-5-oxo-2-tioxo-3-(4-metilfe- nil)imidazolidin-l-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 19b, [RD68]
Uma mistura de la (0,16 g, 0,7 mmole) e 19a (0, 096 g, 0,5 mmole) em DMF seco (0,3 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 48 horas. A esta mistura adicionou-se (10 ml) de metanol e HC1 aquoso 2N (2 ml) . A segunda mistura foi refluxada durante 6 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (30 ml) e extraída com acetato de etilo (30 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 19b (0,168 g, 0,4 mmole, 80%) na forma de um pó branco.
3H RMN (CDC13, 400 MHz) 1,49 (s, 3H) , 2,44 (s, 3H) , 4,35 (dd, Ji = 47,2 Hz, J2 = 10,0 Hz, 1H) , 4,71 (dd, Ji = 45,2 Hz, J2 = 10 Hz, 1H) , 7,22-7,26 (m, 2H) , 7,35-7,39 (m, 2H) , 7,82 (dd, Ji = 8,2 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,93 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 7,98 (d, J= 8,2 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 17,0 (d, J= 4,6 Hz), 21,3, 69,3 (d, J= 18,3 Hz), 81,9 (d, J= 179,5 Hz), 109,9, 114,8, 121,8 (q, J= 272,6 Hz), 127,2 (q, J= 4,7 Hz), 129,3, 130, 9, 131, 6, 132,3, 133,3 (q, J = 33,2 Hz), 135,3, 137,0, 140,5, 174, 1, 181,4; 19F RMN (CDCI3, 376 MHz) -62,5, 110,9.
Exemplo 20 20-1). 2-metil-2-(4-trifluorometilfenil)aminopropanonitrilo, 20a
Uma mistura de 4-trifluorometilanilina (1,61 g, 10 mmole), cianidrina de acetona (5 ml) e sulfato de magnésio (2 g) foi aquecida a 80 °C e agitada durante 12 h. Ao meio adicionou-se acetato de etilo (50 ml) e, em seguida, lavou-se com água (3x30 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCh e concentrada sob vácuo até à secura para dar 20a (2,166 g, 9,5 mmole, 95%) na forma de um sólido de cor castanha. 20-2). 4-(4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxo-3-(4-trifluorometil fenil) imidazolidin-l-il)-2-trifluorometilbenzo-nitrilo, 20b, [RD66]
Uma mistura de la (g 0,114, 0,5 mmole) e 20a (0,092 g, 0,4 mmole) em DMF seco (0,3 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 48 horas. A esta mistura adicionou-se (10 ml) de metanol e HC1 aquoso (3 ml) . A segunda mistura foi refluxada durante 6 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (20 ml) e extraída com acetato de etilo (20 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 20b (g 0, 117, 0,256 mmole, 64%) na forma de um pó branco.
!H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1,61 (s, 6H) , 7,45-7,49 (m, 2H) , 7, 80-7,83 (m, 2H) , 7,85 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,97 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 7,99 (d, J = 8,2 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDC13, 100 MHz) 23, 8, 66, 6, 110,3, 114, 8, 121,8 (q,J = 272, 6 Hz), 123,5 (q, J = 271,1 Hz), 127,0 (q, J = 4,6 Hz), 127,1 (q, J= 4,7 Hz), 130,3, 131,9 (q, J= 32,9 Hz),, 132,2, 133,5 (q, J= 33,3 Hz), 135,3, 136, 9, 138,4, 174, 6, 179, 9.
Exemplo 21 21-1). 3-cloro-2-clorometil-2-(4-metilfenil)aminopropano- nitrilo, 21a
Cianeto de trimetilsililo (0,27 ml, 2 mmole) foi adicionado gota a gota a uma mistura de p-toluidina (0,107 g, 1 mmole) e 1,3-dicloroacetona (0,254 g, 2 mmole) . A mistura reacional foi aquecida até 80 °C e agitada durante 6 h. À mistura adicionou-se 20 ml de acetato de etilo e, em seguida, lavou-se com água (2x20 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCt, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 21a (0,192 g, 0,79 mmole, 79%) na forma de um pó de cor castanha. 21-2). 4-(4,4-bisclorometil-5-oxo-2-tioxo-3-(4-metilfenil)- imidazolidin-l-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 21b, [RD67]
Uma mistura de la (0,16 g, 0,7 mmole) e 21a (0,122 g, 0,5 mmole) em DMF seco (0,5 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 10 dias. A esta mistura adicionou-se metanol (10 ml) e HC1 aquoso 2N (2 ml) . A segunda mistura foi refluxada durante 6 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (20 ml) e extraída com acetato de etilo (30 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 21b (0,09 g, 0,19 mmole, 38%) na forma de um pó branco.
!H RMN (CDC13, 400 MHz) 2,44 (s, 3H) , 3,54 (d *7 = 11,8 Hz,
2H) , 3,93 (d, J= 11,8 Hz, 2H), 7,37-7,40 (m, 2H), 7,48-7,51 (m, 2H) , 7,79 (dd, Ji = 8,2 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,88 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 7,98 (d, J = 8,2 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 21,4, 42,8, 74,3, 110,7, 114,7, 121,7 (qj = 272,6
Hz), 127,2 (q, J= 4,7 Hz), 128,8, 131,0, 131,1, 132,4, 133,8 (q, J= 33,2 Hz), 135,5, 136,9, 140,9, 169,5, 182,5.
Exemplo 22 22-1). 1-(4-metilfenil)aminociclo-hexanonitrilo, 22a.
Cianeto de sódio (0,245 g, 5 mmole) foi adicionado a uma mistura de ácido antranilico (0,411 g, 3 mmole) e acetona (1 ml, 13,6 mmole) em ácido acético 90% (3 ml) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 12 h e, em seguida, adicionou-se 50 ml de acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com salmoura (3x30 ml). A camada orgânica foi seca em sulfato de magnésio, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 90:10) para dar 22a (0,551 g, 2,7 mmole, 90%) na forma de um sólido de cor castanha. 22-2). Ácido 2-[3-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-5,5-dime-til-4-oxo-2-tioxoimidazolidin-l-il]benzóico, 22b, [RD65]
Uma mistura de la (0,114 g, 0, mmole) e 22a (0,103 g, 0,5 mmole) em DMF seco (0,5 ml) foi agitada à temperatura ambiente por 3 dias. A esta mistura adicionou-se metanol (10 ml) e HC1 aquoso 2N (3 ml) . A segunda mistura foi refluxada durante 6 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (20 ml) e extraída com acetato de etilo (30 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (acetato de etilo :pentano, 2:1) para dar 22b (0,143 g, 0,33 mmole, 66%) na forma de um pó branco.
!H RMN (CDC13, 400 MHz) 1.47 (s, 3H) , 1.78 (s, 3H) , 7.39 (d, J = 7,7 Hz, 1H) , 7,63 (t, J = 7,7 Hz, 1H) 7, 76-7,82 (m, 2H) , 7, 90-7, 98 (m, 2H) , 8,22 (d, J = 6,8 Hz, 1H) , 8,96 (bs, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 20, 6, 26,2, 67, 6, 110, 1, 114,8, 121,9 (q, J= 272, 6 Hz), 127,2 (q, J= 4,7 Hz), 128,9, 131,0, 130,2, 132,5, 133,2 (q, J = 33,3 Hz), 133,7, 134,7, 135,4, 135,8, 137,3, 169,8, 175,3, 180,7.
Exemplo 23 23-1). 1-(2-metilfenil)aminociclobutanonitrilo, 23a
Cianeto de trimetilsililo (0,66 ml, 5 mmole) foi adicionado gota a gota à mistura de p-toluidina (0,321 g, 3 mmole) e ciclobutanona (0,28 g, 4 mmole). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 6 h e, em seguida, concentrada sob vácuo, obtendo-se um liquido de cor castanha que foi submetido a cromatografia (diclorometano) para dar 23a (0,541 g, 2,91 mmole, 97%) na forma de um sólido amarelado. 23-2). 4-(8-oxo-6-tioxo-5-(2-metilfenil)-5,7-diazaspiro- [3.4]oct-7-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 23b, [RD71]
Uma mistura de la (g 0,114, 0,5 mmole) e 23a (0,093 g, 0,5 mmole) em DMF seco (0,3 ml) foi agitada à temperatura ambiente por 3 dias. A esta mistura adicionou-se (10 ml) de metanol e HC1 aquoso 2N, (3 ml) . A segunda mistura foi refluxada durante 6 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (20 ml) e extraída com acetato de etilo (30 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCt, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 23b (g 0,116, 0,28 mmole, 56%) na forma de um pó branco.
!H RMN (CDC13, 400 MHz) 1, 63-1, 69 (m, 1H) , 2,26 (s, 3H) ,
2,28-2,41 (m, 2H), 2,58-2,76 (m, 3H), 7,21 (d, J = 7,6 Hz, 1H) , 7,39-7,49 (m, 3H) , 7,89 (dd, Ji = 8,2 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,97 (d, J= 8,2 Hz, 1H) , 8,00 (d, J= 1,8 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 14,2, 18, 0, 30,7, 32,2, 67, 6, 109, 9, 114,9, 121,9 (q, J= 272, 6 Hz), 127,0 (q, J= 4,7 Hz), 127,5, 129,8, 130,2, 131,9, 132,3, 133,4, 133,5 (q, J = 34,3 Hz), 135,2, 135,8, 137,1, 138,0, 175,3, 178,7.
Exemplo 24 24-1). 1-aminociclopentanocarbonitrilo, 24a
Amoníaco anidro foi borbulhado numa mistura de ciclopentanona (0,452 g) e cianeto de trimetilsililo (0,66 ml, 5 mmole) . O excesso de amoníaco foi refluxado com um condensador de gelo seco-acetona. Após 1 h de refluxo, o meio foi deixado a desgaseificar do amoníaco e, em seguida, a restante mistura foi concentrada sob vácuo para dar 24a (g 0,522, 4,75 mmole, 95%) na forma de um líquido incolor. 24-2). 4-(4-imino-2-tioxo-l,3-diazaspiro[4.4]non-3-il)-2- trifluorometilbenzonitrilo, 24-b
Trietilamina (0,101 g, 0,1 mmole) foi adicionada a uma solução de la (0, 684 g, 3 mmole) e 24a (0,33 g, 3 mmole) em THF seco (5 ml) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h e, em seguida, foi concentrada, obtendo-se um resíduo de cor castanha que foi submetido a cromatografia flash (diclorometano/acetona, 93:7) para dar 24b (0,741 g, 2,19 mmole, 73%). 24-3). 4-(4-oxo-2-tioxo-l,3-diazaspiro[4.4]non-3-il)-2- trifluorometilbenzonitrilo, c 24, [RD77]
Uma mistura de 24b (0,741 g, 2,19 mmole) em HC1 aquoso 2N (4 ml) e metanol (20 ml) foi aquecida sob refluxo durante 1 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (20 ml) e extraída com acetato de etilo (40 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCb, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 24c (0,72 g, 2,12 mmole, 97%) na forma de um pó branco.
ΤΗ RMN (CDC13, 400 MHz) 1, 86-190 (m, 2H) , 1, 96-2,05 (m, 4H) , 2,26-2,30 (m, 2H) , 7,80 (dd, Ji = 8,2 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,92 (d, J= 1,8 Hz, 1H) , 7,97 (d, J= 8,2 Hz, 1H) 8,20 (bs, NH) ; 13C RMN (CDC13, 100 MHz) 25,3, 38,1, 71, 0, 110, 1, 114,8, 121,8 (q, J= 272,7 Hz), 126,8 (q, J= 4,7 Hz), 131,9, 133.6 (q, J= 34,3 Hz), 135,3, 136,7, 176, 1, 179, 8.
Exemplo 25 25) . 4-[1-(4-nitrofenil)-4-oxo-2-tioxo-l,3-diazaspiro- [4.4] non-3-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 25a, [RD55]
Uma mistura de 25c (0,0678 g, 0,2 mmole), 1,8- diazabiciclo [5.4.0] undec-7-eno (0,05 g, 0,33 mmole) e 4-fluoronitrobenzeno (0,056 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida (0,5 ml) foi colocada sob árgon num tubo selado e aquecida a 130 °C durante 40 h. A mistura reacional foi vertida em acetato de etilo (5 ml) e lavada com água (2x10 ml). A camada orgânica foi seca em MgSCb, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 25a (0,038 g, 0, 084 mmole, 42%) na forma de um pó branco.
3H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1,53-1,56 (m, 2H) , 1, 90-1, 93 (m, 2H), 2,14-2,18 (m, 2H), 2,37-2,40 (m, 2H), 7,54-7,57 (m, 2H), 7,85 (dd, Ji = 8,2 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,97 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 7,98 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 8,39-8,43 (m, 2H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 25,2, 36,5, 75, 3, 110,3, 114, 8, 121,8 (q, J = 272,6 Hz), 125,2, 127,0 (q, J = 4,7 Hz), 131,4, 132,1, 133.6 (q, J = 34,3 Hz), 135,3, 136, 9, 141,7, 148, 1, 175, 6, 180,2.
Exemplo 26 26) . 4-[1-(4-cianofenil)-4-oxo-2-tioxo-l,3-diazaspiro- [4.4] non-3-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 26a, [RD54]
Uma mistura de 24c (0,0678 g, 0,2 mmole), 1,8- diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (0,061 g, 0,4 mmole) e 4-fluorocianobenzeno (0,048 g, 0,4 mmole) em dimetilformamida (0,5 ml) foi colocada sob árgon num tubo selado e aquecida a 140 °C durante 5 dias. A mistura reacional foi vertida em acetato de etilo (5 ml) e lavada com água (2x10 ml). A camada orgânica foi seca em MgSCd, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 26a (0,023 g, 0,052 mmole, 26%) na forma de um pó branco.
3Η RMN (CDC13, 400 MHz) 1,51-1,55 (m, 2H) , 1, 90-1, 93 (m, 2H), 2,12-2,16 (m, 2H), 2,33-2,38 (m, 2H), 7,47-7,50 (m, 2H), 7,81-7,87 (m, 3H) , 7, 95-7, 99 (m, 2H) ; 13C RMN (CDC13, 100 MHz) 25,2, 36,5, 75,3, 110,3, 113, 9, 114,7, 117,5, 121,8 (qj = 272, 6 Hz), 127,0 (q, J= 4,8 Hz), 131,2, 132,1, 133, 6 (q, J = 34,3 Hz), 133,8, 135,3, 136,9, 140,0, 175,6, 180,1.
Exemplo 27 27-1). l-metil-4-(4-metilfenilamino)piperidina-4- carbonitrilo, 27a
Cianeto de sódio (g 0,318, 6,5 mmole) foi adicionado a uma mistura de p-toluidina (0.535 g, 5 mmole) e l-metil-4-piperidinona (0,678 g, 6 mmole) em ácido acético 90% (5 ml). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 6 h e, em seguida, adicionou-se 100 ml de diclorometano. A camada orgânica foi lavada com uma solução de NaOH 2N (2x50 ml) , seca em sulfato de magnésio, concentrada e cromatografada (DCM e, em seguida, acetona) para dar 27a (0,722 g, 3,15 mmole, 63%). 27.2). 4-(4-imino-8-metil-2-tioxo-l-(4-metilfenil)-1,3,8- triazaspiro[4.5]dec-3-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 27b
Trietilamina (0,02, 0,2 mmole) foi adicionada a uma solução de la (0,228 g, 1 mmole) e 27a (g 0,114, 0,5 mmole) em THF seco (2 ml) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 20 h e, em seguida, foi concentrada, obtendo-se um resíduo escuro que foi submetido a cromatografia flash (diclorometano/acetona, 90:10 e, em seguida, acetona) para dar 27b (0,059 g, 0,13 mmole, 26%). 27-3). 4-(8-metil-4-oxo-2-tioxo-l-(4-metilfenil)-1,3,8- triazaspiro[4.5]dec-3-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 27c, [RD53]
Uma mistura de 27b (0, 059 g, 0,13 mmole) em HC1 aquoso 2N (1 ml) e metanol (3 ml) foi aquecida sob refluxo durante 2 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (5 ml) e extraída com acetato de etilo (10 ml) . A camada orgânica foi seca sobre MgSCd, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 60:40) para dar 27c (0,055 g, 0,012 mmole, 92%) na forma de um pó branco.
3Η RMN (Acetona-de, 400 MHz) 1, 93-1, 99 (m, 1H) , 2,00-2,04 (m, 1H), 2,18 (s, 3H), 2,24-2,28 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,61-2,72 (m, 4H), 7,18-7-20 (m, 2H), 7,32-7,35 (m, 2H), 8,03 (dd,
Ji = 8,2 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 8,16 (d, J= 1,8 Hz, 1H) , 8,22 (d, J = 8,2 Hz, 1H) ; 13C RMN (Acetona-cb, 100 MHz) 20,3, 31,4, 45,1, 49, 8, 65, 1, 109, 1, 114, 8, 122,4 (q, J = 275,1 Hz), 127,7 (q, J= 4,8 Hz), 130,0, 130,5, 131,9 (q, J= 32,6
Hz), 132,6, 133,5, 135,6, 138,3, 139,4, 174,0, 180,6.
Exemplo 28 4-(8-metil-4-oxo-2-tioxo-l,3,8-triazaspiro[4.5]dec-3-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 28a, [RD52] O composto 28a foi sintetizado de acordo com o procedimento descrito na Patente U.S. 5 958 936.
3H RMN (Acetona-d<i, 400 MHz) 1, 93-2,00 (m, 2H) , 2,09-2,16 (m, 2H), 2,25 (s, 3H), 2,42-2,49 (m, 2H), 2,75-2,80 (m, 2H), 7.97 (dd, Ji = 8,2 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 8,11 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 8,20 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 9,80 (bs, NH) ; 13C RMN (Acetona-d<i, 100 MHz) 32, 9, 45,4, 50,1, 62,3, 109, 1, 114, 8, 122,4 (q, J= 271,6 Hz), 127,5 (q, J= 4,8 Hz), 131,8 (q, J= 32,7 Hz), 133,2, 135,6, 135,6, 138,0, 175,2, 180,4.
Exemplo 2 9 4-[3-(4-hidroxibutil)-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxoimidazolidin- 1- il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, RU 59063 O composto RU 59063 foi sintetizado de acordo com o procedimento descrito por Teutsch et al [J Steroid. Biochem. Molec. Biol. 1994, 48(1), 111-119].
3H RMN (CDC13, 400 MHz) 1,55 (s, 6H) , 1,58-1, 62 (m, 2H) , 1, 86-1, 89 (m, 2H) , 2,25 (bs, OH), 3,65-3,71 (m, 4H) , 7,74 (dd, Ji = 8,0 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,92 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 7.98 (d, J = 8,0 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 23,1, 24,7, 29, 6, 43, 9, 61,7, 65,2, 109,7, 114, 9, 121,9 (q, J = 272,6 Hz), 127,1 (q, J = 4,8 Hz), 132,2, 133,7 (q, J = 34,3
Hz), 135,2, 137,2, 175,3, 178,2.
Exemplo 30 30-1). 1-metilaminociclobutanocarbonitrilo, 30a
Metilamina foi borbulhada numa mistura refrigerada de ciclobutanona (0,21 g, 3 mmole) e cianeto de trimetilsililo (0,396 g, 4 mmole) até o volume duplicar. A mistura foi misturada durante 3 h e, em seguida, foi concentrada a seco para dar 30a (0,33 g, quantitativo). 30-2). 4-(5-metil-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-7-il)- 2- trifluorometilenzonitrilo, 30b, [RD73]
Uma mistura de la (g 0,114, 0,5 mmole) e 30a (0,055 g, 0,5 mmole) em DMF seco (0,2 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 0,5 h. A esta mistura adicionou-se 10 ml de metanol e 2 ml de HC1 2N. A segunda mistura foi refluxada durante 2h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (20 ml) e extraída com acetato de etilo (30 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 30b (0,148 g, 0,435 mmole, 87%) na forma de um pó branco.
3H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1, 95-2,06 (m, 1H) , 2,21-2,32 (m, 1H) , 2,58-2,71 (m, 4H) , 3,44 (s, 3H) , 7,77 (dd, Ji = 8,2 Hz, J2 = 2,0 Hz, 1H) , 7,89 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 7,93 (d, J = 8,2
Hz, 1H) ; 13C RMN (CDC13, 100 MHz) 13,7, 30,3, 30,4, 66, 1, 109,7, 114,9, 121,9 (q, J= 272, 6 Hz), 126,9 (q, J= 4,8 Hz), 132,1, 133,2 (q, J= 34,3 Hz), 135,2, 137,3, 175,1, 178,7. 30-3). 4—(5—metil—6,8—dioxo—5,7—diazaspiro[3.4]oct—7—il)—2— trifluorometilbenzonitrilo, 30 °C, [RD74]
Peróxido de hidrogénio (2 ml, 30%) foi adicionado a uma mistura de 30b (0,068 g, 0,2 mmole) em ácido acético glacial (3 ml). Após agitação à temperatura ambiente durante 10 h, a mistura reacional foi vertida em acetato de etilo (20 ml) e, em seguida, lavada com água (2x20 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona) para dar 30c (g 0,057, 0,176 mmole, 88%) na forma de um pó branco.
3H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1,91-2,35 (m, 1H) , 2,21-2,31 (m, 1H) , 2,50-2,61 (m, 4H) , 3,12 (s, 3H) , 7,89 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,97 (dd, Ji = 8,2 Hz, J2 = 2,0 Hz, 1H) , 8,12 (d, J = 2,0 Hz, 1H),; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 13, 9, 25,4, 29,3, 63.4, 108,1, 115,1, 121,6 (q, J = 272,6 Hz), 122,9 (q, J = 4,8 Hz), 127, 9, 133, 5 (q, J= 34,3 Hz), 135,3, 136,5, 152,7, 174.4.
Exemplo 31 31-1). 1-metilaminociclopentanocarbonitrilo, 31a
Metilamina foi borbulhada numa mistura refrigerada de ciclopentanona (0,252 g, 3 mmole) e cianeto de trimetilsililo (0,396 g, 4 mmole) até o volume duplicar. A mistura foi misturada durante 3 h e, em seguida, concentrada a seco para dar 31a (0,372 g, quantitativo). 31-2). 4-(l-metil-4-oxo-2-tioxo-l,3-diazaspiro[4.4]non-3-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 31b, [RD75]
Uma mistura de la (g 0,114, 0,5 mmole) e 31a (0,062 g, 0,5 mmole) em DMF seco (0,2 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 0,5 h. A esta mistura adicionou-se 10 ml de metanol e 2 ml de HC1 2N. A segunda mistura foi refluxada durante 2h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (20 ml) e extraída com acetato de etilo (30 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 31b (0,159 g, 0,45 mmole, 90%) na forma de um pó branco.
3Η RMN (CDC13, 400 MHz) 1,91-2,05 (m, 6H) , 2,16-2,21 (m, 2H) , 3,27 (s, 3H) , 7,77 (dd, Ji = 8,2 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) ,
7,89 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 7,91 (d, J = 8,2 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCls, 100 MHz) 26,4, 30,3, 35,4, 73,2, 109,5, 114, 9, 121,9 (q, J= 272, 6 Hz), 126,9 (q, J= 4,8 Hz), 132,2, 133,2 (q, J= 34,3 Hz), 135,2, 137,5, 176,8, 178,5. 31-3). 4-(l-metil-2,4-dioxo-l,3-diazaspiro[4.4]non-3-il)-2- trifluorometilbenzonitrilo, 31c, [RD76]
Peróxido de hidrogénio (2 ml, 30%) foi adicionado a uma mistura de 31b (0,07 g, 0,2 mmole) em ácido acético glacial (3 ml) . Após agitação à temperatura ambiente durante 10 h, a mistura reacional foi vertida em acetato de etilo (20 ml) e, em seguida, lavada com água (2x20 ml). A camada orgânica foi seca em MgSCb, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona) para dar 31c (g 0,057, 0,168 mmole, 84%) na forma de um pó branco.
3Η RMN (CDC13, 400 MHz) 1, 88-1, 99 (m, 6H) , 2,12-2,17 (m, 2H) , 2,98 (s, 3H) , 7,88 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,97 (dd, Ji = 8,2 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 8,12 (d, J = 1,8 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCls, 100 MHz) 25,2, 26,5, 34,8, 70, 1, 108, 0, 115, 1, 122,0 (q, J= 212,5 Hz), 122,9 (q, J= 4,9 Hz), 127,9, 133,5 (q, J= 32,9 Hz), 135,3, 136,6, 152,7, 176,1.
Exemplo 32 4- (8-metilimino-6-tioxo-5-p-tolil-5,7-diazaspiro[3.4]oct-7-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo, 32a, [RD90]
Uma mistura de 7b (0, 042 g, 0,1 mmole), DBU (0,023 g, 0,15 mmole) e iodometano (0,073 g, 0,5 mmole) em DMF (0,3 ml) foi agitada durante 15 h à temperatura ambiente. Depois de o DMF ter evaporado, o meio foi cromatografado (diclorometano) para dar 32a (0,011 g, 0, 026 mmole, 26%) na forma de um pó branco.
3Η RMN (CDC13, 400 MHz) 1,58-1,65 (m, 1H) , 2,04-2,13 (m, 1H), 2,45 (s, 3H), 2,70-2,77 (m, 2H), 3,06-3,10 (m, 2H), 3,58 (s, CH3-N, isómero principal) [2,70 (s, CH3-N, isómero secundário)], 7,20-7,34 (m, 4H) , 7,75-7,91 (m, 3H) ; (CDCI3, 100 MHz) 12,6, 21,4, 30,2, 33,7 (35,3 para o outro isómero), 66,9, 109,1, 115,2, 122,1 (q, J = 272,5 Hz), 128,5 (q, J = 4,9 Hz), 129,8, 130,4, 130,6, 132,8, 133,2 (q, J = 32,9 Hz), 133,5, 134,9, 139,8, 157,0, 180,2.
Exemplo 33 1-[3-(4-ciano-3-trifluorometil-fenil)-5,5-dimetil-2-tioxo-l-p-tolilimidazolidin-4-ilideno]-3-etiltioureia, 33, [RD91]
Uma mistura de 5b (0,06 g, 0,149 mmole), et iltioisocianato (0, 087 g, 1 mmole) e Cul (0,01 q, 0,05 mmole) em DMF (0,1 ml) foi aquecida com microondas durante 45 minutos. Em seguida, o meio foi lavado com salmoura e extraído com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca em MgSCt, concentrada e cromatografada (HPLC, coluna de alumina) para dar 33a (0, 054 g, 0,108 mmole, 72%) na forma de um pó branco.
!H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1,15 (t J = 7,23 Hz, 3H) , 1,70 [1,75 isómero secundário] (s, 6H) , 2,42 (s, 3H), 3,28-3,39 (m, 2H) [3,15-3,22 (m, 2H) , isómero secundário], 6,50 (bs, 1H) [6,93 (bs, 1H) , isómero secundário], 7,14-7,18 (m, 2H) , 7,32-7,35 (m, 2H) , 7,77-7, 94 (m, 3H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 13,31 (13,83 secundário), 21,3, 25,22 (24,89 secundário), 40,31 (40,67 secundário), 68,1, 109,9, 114,9, 122,3 (q, J = 272,5 Hz), 127,6 (q, J = 4,9 Hz), 129, 1, 129,59 (129,55 secundário), 130,52 (130,57 secundário), 132,27 (132,15 secundário), 132,9 (q, J = 32,9 Hz), 134,27 (134,15 secundário), 134,9, 135,2, 156,33 (156,06 secundário), 180,28 (180,06 secundário), 187,24 (186,63 secundário).
Exemplo 34 1-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-6-tioxo-5-p-tolil-5,7-diazaspiro[3.4]oct-8-ilideno]-3-feniltioureia, 34a, [RD92]
Uma mistura de 7b (0,021 g, 0,05 mmole) e feniltioisocianto (0, 027 g, 0,2 mmole) em DMF (0,3 ml) foi agitada durante 2 dias a 60 °C. Após o DMF ter evaporado, o meio foi cromatografado (diclorometano) para dar 34a (0,015 g, 0,028 mmole, 57%) na forma de um pó branco.
!H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1,59-1, 67 (m, 1H) , 2,12-2,22 (m, 1H) , 2,45 (s, 3H) , 2,61-2,71 (m, 2H) , 2,81-2,87 (m, 2H) , 7,18-7,27 (m, 6H), 7,33-7,41 (m, 5H), 7,60-7,62 (m, 1H), 8,40 (bs, 1H) ; 13C RMN (CDC13, 100 MHz) 13, 6, 21,4, 32,3, 69, 6, 110,7, 114,8, 121,6, 122,0 (q, J = 272,5 Hz), 126,3, 128,0 (q, J = 4,9 Hz), 128,9, 129,4, 130,7, 132,5, 133,2 (q, J = 32,9 Hz), 134,1, 134,9, 137,7, 139,2, 140,2, 154,8, 180,3, 185,5.
Exemplo 35 1-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-3-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-6-tioxo-5-p-tolil-5,7-diazaspiro[3.4]oct-8-ilideno]tioureia, 35a, [RD93]
Uma mistura de la (0,502 g, 2,2 mmole) e 7a (0,186 g, 1 mmole) em DMF (1 ml) foi agitada à temperatura ambiente. Após 20 horas de agitação, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida para dar um liquido viscoso de cor laranja, que foi cromatografado (diclorometano:acetona, 99:1) para dar 35a (0,269 g, 0,42 mmole, 42%) na forma de um pó amarelo.
Estrutura por raios-X de 35a
Exemplo 36 36-1). 1-(4-hidroximetilfenilamino)ciclobutanocarbonitrilo, 36a
Cianeto de trimetilsililo (0,66 ml, 5 mmole) foi adicionado gota a gota a uma mistura de ácido 4-aminobenzóico (0,492 g, 4 mmole) e ciclobutanona (0,35 g, 5 mmole) em diclorometano (10 ml) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 6 h e, em seguida, concentrada sob vácuo, obtendo-se um liquido de cor castanha que foi submetido a cromatografia (diclorometano) para dar 36a (0,677 g, 3,36 mmole, 84%) na forma de um sólido de cor castanha. 36-2). 4-[8-(4-hidroximetilfenil)-5-oxo-7-tioxo-6-azaspiro- [3.4]oct-6-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 36b, [RD110]
Uma mistura de la (0,342 g, 1,5 mmole) e 36a (0,21 g, 1 mmole) em DMF seco (0,5 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. A esta mistura adicionou-se metanol (20 ml) e HC1 aquoso 2N (5 ml) . A segunda mistura foi refluxada durante 6 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (40 ml) e extraída com acetato de etilo (60 ml). A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 90:10) para dar 36b (0,296 g, 0,69 mmole, 69%) na forma de um pó branco.
!H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1, 63-1, 68 (m, 1H) , 2,17-2,26 (m, 1H) , 2,52-2, 68 (m, 4H) , 4,75 (s, 2H) , 7,30 (d, J = 8,1 Hz, 2H) , 7,58 (d, J = 8,1 Hz, 2H) , 7,88 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,95-7, 98 (m, 2H) ; 13C RMN (CDC13, 100 MHz) 13,7, 31,5, 64,4, 67,5, 109, 9, 114, 9, 121,9 (q, J = 272,6
Hz), 127,1 (q, J= 4,7 Hz), 128,3, 130,0, 132,2, 133,3, 133,4 (q, J= 33,2 Hz), 134,2, 137,2, 142,9, 174,9, 179,9.
Exemplo 37 4-[5-(4-formilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-7-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 37a, [RD114] A uma mistura de 36b (0,303 g, 0,7 mmole) e periodinano de Dess-Martin (0,417 g, 1 mmole) em diclorometano (5 ml) foi adicionado piridina (1,01 g, 1 mmole). A mistura foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente e, em seguida, éter etílico (10 ml) foi adicionado para precipitar o subproduto da reação. Após filtração e concentração sob pressão reduzida, a mistura foi cromatografada (diclorometano:acetona, 95:5) para dar 37a (0,24 g, 0,56 mmole, 80%) na forma de um pó branco.
3H RMN (CDC13, 400 MHz) 1, 62-1,73 (m, 1H) , 2,24-2,30 (m, 1H) , 2,50-2,58 (m, 2H) , 2, 69-2,75 (m, 2H) , 7,53 (d, J = 8,1
Hz, 2H) , 7,85 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,97-7,99
(m, 2H) , 8,11 (d, J = 8,1 Hz, 2H) , 10,12 (s, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 13,7, 31,7, 67,5, 110,2, 114,8, 121,9 (q, J = 272,6 Hz), 127,0 (q, J = 4,7 Hz), 129,1, 131,0, 131,2, 132,2, 133,3 (q, J = 33,2 Hz), 135,3, 136,9, 140,5, 174,5, 179,8, 190,8.
Exemplo 38 4—{5—[4—(1-hidroxietil)fenil]-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro- [3.4]oct-7-il}-2-trifluorometilbenzonitrilo, [RD116]
Uma mistura de 37a (g 0,043, 0, 1 mmole) e THF seco (1 ml) , num frasco seco à chama, foi colocada sob árgon e resfriada até -782C. Em seguida, iodeto de metilmagnésio (1,1 ml, 0,1 M) foi adicionado. A mistura foi agitada a -782C durante 30 minutos e aquecida lentamente à temperatura ambiente. O meio foi lavado com água (3 ml) e extraído com acetato de etilo (10 ml) . A camada orgânica foi seca com
MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 95:5) para dar 38a (0,037 g, 0,082 mmole, 82%) na forma de um pó branco.
3H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1,57 (d*J = 6,5 Hz, 3H) , 1,61-1,71 (m, 1H), 2,09 (d, J= 3,2 Hz, OH), 2,16-2,28 (m, 1H), 2,52-2,60 (m, 2H) , 2, 63-2, 69 (m, 2H) , 5,00 (dd, Ji = 6,5 Hz, q, J2 = 3,1 Hz, 1H) , 7,29 (d, J= 8,3 Hz, 2H) , 7,60 (d, J= 8,2 Hz, 2H) , 7,85 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7, 95-7, 98 (m, 2H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 13,7, 25,3, 31,5, 67,4, 69, 8, 110.0, 114,9, 121,9 (q, J= 272, 6 Hz), 127,0 (q, J= 4,7 Hz), 127.1, 129,9, 132,2, 133,4 (q, J = 33,2 Hz), 134,1, 135,2, 137.1, 147, 6, 174, 9, 179, 9.
Exemplo 39 Éster etílico do ácido 3-{4-[7-(4-ciano-3-trifluoro- metilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]Oct-5-il]fenil}-acrílico, 39a [RD117]
Uma mistura de 37a (0,043 g, 0,1 mmole) e (carbetoxietilideno)trifenilfosforano (0,039 g, 0,12 mmole) em diclorometano (2 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 10 horas. O meio foi concentrado e cromatografado (diclorometano) para dar 39a (0, 048 g, 0, 096 mmole, 96%) na forma de um pó branco.
3Η RMN (CDC13, 400 MHz) 1,35 (t*7= 7,1 Hz, 3H) , 1,66-1,70 (m, 1H), 2,19-2,65 (m, 1H), 2,51-2,69 (m, 2H), 2,66-2,72 (m, 2H) , 4,28 (q, J = 7,1 Hz, 2H) , 6,51 (d, J = 16,1 Hz, 1H) , 7,35 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 7,72 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 7,73 (d, J = 16,1 Hz, 1H) , 7,85 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7, 96-7, 98 (m, 2H) ; 13C RMN (CDC13, 100 MHz) 13,7, 14,3, 31, 6, 60, 8, 67,5, 110, 0, 114, 9, 120,5, 121, 8 (q, J = 272,6
Hz), 127,0 (q, J= 4,7 Hz), 129,5, 130,5, 132,2, 133,4 (q, J = 33,2 Hz), 135,2, 136,0, 136,5, 137,0, 142,7, 166,5, 174,7, 179,8.
Exemplo 40 4—{5—[4—(3-hidroxipropenil)fenil]-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]Oct-7-il}-2-trifluorometilbenzonitrilo, 40a, [RD120] A uma mistura de 39a (0,05 g, 0,1 mmole) em diclorometano (2 ml) a -782C adicionou-se uma solução de hidreto de diisobutilaluminio em THF (0,11 ml, 1 M, 0,11 mmole). A mistura foi agitada a -782C durante 3 horas. Após aquecimento até à temperatura ambiente, a mistura foi lavada com uma solução aquosa de tiossulfato de sódio e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 95:5) para dar 40a (0, 040 g, 0, 089 mmole, 89%) na forma de um pó branco .
3Η RMN (CDC13, 400 MHz) 1,57-1, 68 (m, 1H) , 2,17-2,39 (m, 1H) , 2,55-2,61 (m, 2H) , 2,61-2,67 (m, 2H) , 4,39 (d, J = 4,7 Hz, 2H) , 6,47 (dt, Ji = 16,0 Hz, J2 = 5,3 Hz, 1H) , 6,70 (d, J = 16,0 Hz, 1H) , 7,29 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 7,59 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 7,85 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,96-7,98 (m, 2H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 13,7, 31,5, 63,4, 67,4, 110,0, 114,8, 120,5, 121,8 (q, J = 272,6 Hz), 127,0 (q, J = 4,7 Hz), 127,9, 129,2, 130,1, 131,1, 132,1, 133,4 (q, J = 33,2 Hz), 135,2, 137,1, 138,4, 174,8, 179,9.
Exemplo 41 41-1) Ácido 3-[4-(1-cianociclobutilamino)fenil]propiónico, 41a (41-1)
Cianeto de trimetilsililo (0,4 g, 4 mmole) foi adicionado gota a gota a uma mistura de ácido 3-(4-aminofenil)propiónico (0,33 g, 2 mmole), ciclobutanona (0,35 g, 5 mmole) e sulfato de sódio (lg) em 1,4-dioxano (5 ml). A mistura foi agitada durante 15 horas. Após filtração para eliminar o sulfato de sódio, o meio foi concentrado sob vácuo, obtendo-se um líquido de cor castanha que foi submetido a cromatografia (diclorometano:acetona, 50:50) para dar 41a (0,472 g, 1,93 mmole, 97%) na forma de um sólido amarelado. 41-2) Éster metílico do ácido 3-{4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenilJpropiónico, 41b (41-2) [RD128]
Uma mistura de la (0,661 g, 2,9 mmole) e 41a (0,472 g, 1,93 mmole) em DMF seco (2 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 15 horas. A esta mistura adicionou-se metanol (10 ml) e HC1 aquoso (5 ml, 2 M) . A segunda mistura foi refluxada durante 3h. Após arrefecimento até à
temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (10 ml) e extraída com acetato de etilo (3x30 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 41b (0,582 g, 1,19 mmole, 62%) na forma de um pó branco.
3Η RMN (CDC13, 400 MHz) 1, 60-1,70 (m, 1H) , 2,14-2,26 (m, 1H) , 2,51-2,56 (m, 2H) , 2,58-2, 67 (m, 2H) , 2,71 (t, J = 7,8 Hz, 2H) , 3,05 (t, J= 7,8 Hz, 2H) , 3,69 (s, 3H) , 7,23 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 7,41 (d, J= 8,2 Hz, 2H) , 7,85 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,95 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 7,98 (d, J = 1,8 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDC13, 100 MHz) 13,7, 30,5, 31,4, 35, 1, 51,8, 67,5, 109, 9, 114, 9, 121, 9 (q, J= 272,7 Hz), 127,1 (q, J = 4,7 Hz), 129,9, 130,0, 133,2, 132,3, 133,3 (q, J = 33,2
Hz), 135,7, 137,2, 142,5, 173,1, 174,9, 179,9. 41-3) ácido 3-{4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-οχο-β-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]feniljpropiónico, 41c (41- 3) [RD132]
Uma mistura de 41 b (0,487 g, 1 mmole) em metanol (10 ml) e solução de hidróxido de sódio (10 ml, 2 M) foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. O metanol foi evaporado. O resíduo foi ajustado a pH = 5 com HC1 aquoso (2M) e, em seguida, foi extraído com acetato de etilo (3x50 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCh e concentrada até à secura para dar 41c (0,472 g, 0,99 mmole, 99%). 41-4) 3-{4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo- 5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]feniljpropionamida, 41d (41-4) [RD133] A uma suspensão de 41c (0,094 g, 0,2 mmole) em THF (10 ml), a -5 °C, adicionou-se cloreto de tionilo (ml 0,019, 0,26 mmole) . O meio foi agitado a -5 °C durante uma hora. Em seguida, amoníaco foi borbulhado na mistura. O excesso de
amoníaco foi condensado num condensador de refluxo a -782C durante 30 minutos e, em seguida, foi permitido evaporar. O meio foi filtrado. O filtrado foi concentrado e cromatografado (diclorometano:acetona, 70:30) para dar 41d (0,09 g, 0,19 mmole, 95%) na forma de um pó de cor esbranquiçada.
3Η RMN (acetona-de, 400 MHz) 1,52-160 (m, 1H) , 2,01-2,09 (m, 1H) , 2,49-2,58 (m, 4H) , 2,61-2,67 (m, 2H), 2,98 (t, J = 7,5 Hz, 2H) , 6,20 (bs, 1H) , 6,78 (bs, 1H) , 7,31 (d, J = 8,2
Hz, 2H) , 7,44 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 8,03 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 8,15 (d, J= 1,8 Hz, 1H) , 8,22 (d, J= 8,3 Hz, 1H) ; 13C RMN (acetona-cb, 100 MHz) 13,4, 30,7, 31,2, 36,4, 67,5, 109,0, 114,8, 122,5 (q, J = 271,5 Hz), 127,5 (q, J = 4,7 Hz), 129,5, 130,0, 131,8 (q, J= 32,5 Hz), 133,3, 133,8, 135,6, 138,4, 143,2, 171,6, 174,9, 178,0. 41-5) 3-{4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo- 5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenil}-N-metilpropionamida, 41e (41-5) [RD134] A uma suspensão de 41c (0,094 g, 0,2 mmole) em THF (10 ml), a -5 °C, adicionou-se cloreto de tionilo (0,019 ml, 0,26 mmole) . O meio foi agitado a -5 °C durante uma hora. Em seguida, metilamina foi borbulhada na mistura a -5 °C, durante 30 minutos. O meio foi filtrado. O filtrado foi concentrado e cromatografado (diclorometano:acetona, 75:25) para dar 41e (0,092 g, 0,19 mmole, 95%) na forma de um pó de cor esbranquiçada.
3H RMN (acetona-de, 400 MHz) 1,51-1,60 (m, 1H) , 2,01-2,11 (m, 1H) , 2,48-2,58 (m, 4H) , 2,61-2,67 (m, 2H), 2,77 (d, J = 4,6 Hz, 3H) , 2,98 (t, J = 7,5 Hz, 2H) , 7,03 (bs, NH) , 7,33 (d, J= 8,2 Hz, 2H) , 7,42 (d, J= 8,2 Hz, 2H) , 8,01 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 8,13 (d, J= 1,8 Hz, 1H) , 8,20 (d, J = 8,3 Hz, 1H) ; 13C RMN (acetona-ch, 100 MHz) 13,4, 25,3, 30.0, 31,2, 37,0, 67, 6, 109, 0, 114, 8, 122,5 (q, J = 271,5
Hz), 127,4 (q, J= 4,7 Hz), 129, 5, 130, 0, 131, 9 (q, J= 32,5
Hz), 133,3, 133,8, 135,6, 138,4, 143,1, 171,7, 175,0, 178,0. 41-6) 3-{4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo- 5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenil}-N-(2-hidroxietil)propionamida, 41f (41-6) [RD135] A uma suspensão de 41c (0,094 g, 0,2 mmole) em THF (10 ml), a -5 °C, adicionou-se cloreto de tionilo (0,019 ml, 0,26 mmole) . O meio foi agitado a -5 °C durante uma hora. 2-
Aminoetanol (0,0183 g, 0,03 mmole) foi adicionado à mistura a -5 °C. Após mais 30 minutos de agitação, o meio foi filtrado. O filtrado foi concentrado e cromatografado (diclorometano:acetona, 50:50) para dar 41f (0,093 g, 0,18 mmole, 90%) na forma de um pó de cor esbranquiçada.
3H RMN (acetona-de, 400 MHz) 1,51-161 (m, 1H) , 2,01-2,11 (m, 1H) , 2,49-2, 66 (m, 6H) , 2,99 (t, J = 7,5 Hz, 2H) , 3,27 (dd, Ji = 11,2 Hz, J2 = 5,6 Hz, 3H) , 3,51 (dd, Ji = 11,2 Hz, J2 = 5,6 Hz, 2H) , 3,87 (bs, OH), 7,20 (bs, NH) , 7,33 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 7,43 (d, J= 8,2 Hz, 2H) , 8,02 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 8,14 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 8,22 (d, J = 8,3
Hz, 1H) ; 13C RMN (acetona-cb, 100 MHz) 13,4, 31,0, 31,2, 37.1, 42,0, 61,2, 67, 6, 109, 0, 114, 8, 122,5 (q, J = 271,5
Hz), 127,4 (q, J= 4,7 Hz), 129, 6, 130,0, 131, 9 (q, J= 32,5
Hz), 133,3, 133,8, 135,6, 138,4, 143,0, 171,9, 175,0, 178,1. 42-1) Ácido 4-[4-(1-cianociclobutilamino)fenil]butírico, 42a
Cianeto de trimetilsililo (0,50 g, 5 mmole) foi adicionado gota a gota a uma mistura de ácido 4 — (4 — aminofenil) butírico (0,537 g, 3 mmole), ciclobutanona (0,35 g, 5 mmole) e sulfato de sódio (1 g) em 1,4-dioxano (10 ml). A mistura foi agitada durante 15 horas. Após filtração para remover o sulfato de sódio, o meio foi concentrado sob vácuo, obtendo-se um liquido de cor castanha, que foi submetido a cromatografia (diclorometano:acetona, 50:50) para dar 42a (0,665 g, 2,58 mmole, 86%) na forma de um sólido amarelado. 42-2) Éster metílico do ácido 4—{4—[7—(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenilJbutírico, 42b [RD129]
Uma mistura de la (0,547 g, 2,4 mmole) e 42a (0,342 g, 1,5 mmole) em DMF seco (2 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 15 horas. A esta mistura adicionou-se metanol (10 ml) e HC1 aquoso (5 ml, 2 M) . A segunda mistura foi refluxada durante 3h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (10 ml) e extraída com acetato de etilo (3x30 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano) para dar 42b (0,594 g, 1,18 mmole, 79%) na forma de um pó branco.
3Η RMN (CDC13, 400 MHz) 1, 60-1,70 (m, 1H) , 1, 98-2,07 (m, 2H) , 2,14-2,26 (m, 1H) , 2,40 (t, J = 7,4 Hz, 2H) , 2,52-2,60 (m, 2H) , 2, 62-2, 68 (m, 2H) , 2,74 (t, J = 7,4 Hz, 2H) , 3,68 (s, 3H) , 7,22 (d, J= 8,2 Hz, 2H) , 7,38 (d, J= 8,2 Hz, 2H) , 7,86 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,95 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 7,98 (d, J = 1,8 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDC13, 100 MHz) 13,7, 26,1, 31, 4, 33,5, 34,8, 51,7, 67,5, 109, 9, 114, 9, 121,9 (q, J = 272,7 Hz), 127,1 (q, J = 4,7 Hz), 129,7, 130,1, 132,3, 133,0, 133,3 (q, J = 33,2 Hz), 135,2, 137,2, 143,5, 173,8, 175,0, 179,9. 42-3) ácido 4-{4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]feniljbutirico, 42c [RD141]
Uma mistura de 42b (0,501 g, 1 mmole) em metanol (10 ml) e solução de hidróxido de sódio (10 ml, 2 M) foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. O metanol foi evaporado. O resíduo foi ajustado a pH 5 com HC1 aquoso (2M) e, em seguida, o meio foi extraído com acetato de etilo (3x50 ml). A camada orgânica foi seca em MgSCh e concentrada até à secura para dar 42c (g 0,482, 0,99 mmole, 99%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 5.
!H RMN (CDC13, 400 MHz) 1, 60-1,70 (m, 1H) , 1, 98-2,07 (m, 2H) , 2,14-2,26 (m, 1H) , 2,45 (t, J = 7,3 Hz, 2H) , 2,51-2,59 (m, 2H) , 2, 62-2, 68 (m, 2H) , 2,77 (t, J = 7,3 Hz, 2H) , 7,23 (d, J= 8,1 Hz, 2H) , 7,40 (d, J= 8,1 Hz, 2H) , 7,85 (dd, J = 8,3, 1,8 Hz, 1H) , 7,95 (d, J= 8,3 Hz, 1H) , 7,97 (d, J= 1,8 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 13,7, 25, 9, 31,4, 33,4, 34,7, 67,5, 109, 9, 114, 9, 121, 9 (q, J= 272, 6 Hz), 127,1 (q, J = 4,7 Hz), 129,8, 130,1, 132,3, 133,0, 133,4 (q, J = 33,1
Hz), 135,2, 137,2, 143,3, 174,9, 178,9, 179,9. 42-4) 4-{4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo- 5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]feniljbutiramida, 42d [RD130] A uma suspensão de 42c (0,097 g, 0,2 mmole) em THF (10 ml) a -5 °C adicionou-se cloreto de tionilo (0,019 ml, 0,26 mmole) . O meio foi agitado a -5 °C durante uma hora. Em seguida, amoníaco foi borbulhado na mistura. O excesso de amoníaco foi condensado num condensador de refluxo a -782C, durante 30 minutos e, em seguida, foi permitido evaporar. O meio foi filtrado. O filtrado foi concentrado e cromatografado (diclorometano:acetona, 70:30) para dar 42d (0,093 g, 0,19 mmole, 95%) na forma de um pó de cor esbranquiçada.
3Η RMN (CDC13, 400 MHz) 1,57-1,70 (m, 1H) , 2,00-2,08 (m, 2H) , 2,16-2,25 (m, 1H) , 2,31 (t, J = 7,3 Hz, 2H) , 2,51-2,59 (m, 2H) , 2, 62-2, 68 (m, 2H) , 2,77 (t, J = 7,3 Hz, 2H) , 5,56
(bs, 1H) , 5,65 (bs, 1H) , 7,22 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 7,39 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 7,85 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,95 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 7,97 (d, J= 1,8 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 13,7, 26,5, 31,4, 34, 8, 35, 0, 67,5, 109, 9, 114, 9, 121.9 (q, J= 272,7 Hz), 127,1 (q, J= 4,7 Hz), 129,8, 130,1, 132,2, 133,0, 133,3 (q, J = 33,2 Hz), 135,2, 137,2, 143,5, 173, 8, 174, 9, 179, 9. 42-5) 4-{4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo- 5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenil}-N-metilbutiramida, 42e, [RD131] A uma suspensão de 42c (0,097 g, 0,2 mmole) em THF (10 ml) a -5 °C foi adicionado cloreto de tionilo (0,019 ml, 0,26 mmole) . O meio foi agitado a -5 °C durante uma hora. Em seguida, metilamina foi borbulhada na mistura, a -5 °C, ao longo de 30 minutos. O meio foi filtrado. O filtrado foi concentrado e cromatografado (diclorometano:acetona, 75:25) para dar 42e (0,095 g, 0,19 mmole, 95%) na forma de um pó de cor esbranquiçada.
3H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1,52-1, 64 (m, 1H) , 1,94-2,01 (m, 2H), 2,10-2,17 (m, 1H), 2,20 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,46-2,62 (m, 4H) , 2,69 (t, J= 7,3 Hz, 2H) , 2,73 (d, J= 4,7 Hz, 3H) , 6.09 (bs, 1H), 7,16 (d, J= 8,2 Hz, 2H) , 7,33 (d, J= 8,2 Hz, 2H) , 7,82 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,91 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 7,94 (d, J = 1,8 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 13,7, 26,2, 26,8, 31,4, 35,0, 35,7, 67,5, 109,7, 114,9, 121,9 (q, J= 272,7 Hz), 127,1 (q, J= 4,7 Hz), 129,7, 130.0, 132,3, 133,8, 133,3 (q, J = 33,2 Hz), 135,2, 137,3, 143,7, 173,3, 174,9, 179,8. 42-6) N- (4—{4—[7—(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6- tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenil}butanoil)metano-sulfonamida, 42f [RD157]
Uma mistura de ácido 4-{4-[7-(4-ciano-3- trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenil}butandico (42 c) (g 0,049, 0,1 mmole), cloreto de 2,4,6-triclorobenzoilo (0,244 g, 1 mmole), 4- dimetilaminopiridina (0,122 g, 1 mmole) e metanossulfonamida (0,019 g, 0,2 mmole) em diclorometano foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas. A mistura foi concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 80:20) para dar N-(4 — {4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5- il]fenil}butanoíl)metanossulfonamida (42f) [RD157] (0,053 g, 0,094 mmole, 94%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 8, na forma de um pó branco.
3H RMN (acetona-de, 400 MHz) 1,51-160 (m, 1H) , 1,96-2,11 (m, 3H) , 2,49 (t, J = 7,3 Hz, 2H) , 2,51-2,57 (m, 2H) , 2,61- 2,67 (m, 2H) , 2,75 (t, J = 7,5 Hz, 2H) , 2,94 (bs, 1H) , 3,24 (s, 3H) , 7,33 (d, J= 8,3 Hz, 2H) , 7,43 (d, J= 8,2 Hz, 2H) , 8,02 (dd, J = 8,3, 1,6 Hz, 1H) , 8,02 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 8,21 (d, J = 8,3 Hz, 1H) ; 13C RMN (acetona-de, 100 MHz) 13,4, 25,8, 31,2, 34,3, 35,2, 40,6, 67,6, 109,0, 114,8, 122,5 (q, J= 271,5 Hz), 127,5 (q, J= 4,9 Hz), 129, 6, 130,1, 131,9 (q, J= 33,6 Hz), 133,3, 133, 9, 135, 6, 138,4, 143, 1, 171, 9, 175.0, 180,5. 42- 7) W-metil-4-{4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-6,8-dioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]feniljbutiramida, 42g [RD158]
Peróxido de hidrogénio (30%, 0,4) foi adicionado gota a gota a uma solução de JV-metil-4-{ 4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il] fenil }butanamida iV(OE) (0,032 g, 0, 064 mmole) em ácido acético glacial (0,5 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas e, em seguida, foi lavada com água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca em sulfato de magnésio, concentrada e cromatografada (diclorometano: acetona, 80:20) para dar iV-metil-4-{ 4-[ 7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-6,8-dioxo-5,7- diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenil}butiramida (42 g) [RD158] (0,029 g, 0,06 mmole, 94%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 9, na forma de um pó branco.
!H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1,63-1,71 (m, 1H) , 1,93-2,04 (m, 2H), 2,18-2,27 (m, 3H), 2,44-2,53 (m, 2H), 2,57-2,65 (m, 2H), 2,70 (t, J= 7,3 Hz, 2H) , 2,79 (d, J= 4,8 Hz, 3H) , 5,79 (bs, 1H), 7,21 (d, J= 8,2 Hz, 2H), 7,34 (d, J= 8,2 Hz, 2H), 7,92 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 8,03 (dd, J= 8,3, 1,8 Hz, 1H) , 8,18 (d, J = 1,8 Hz, 1H).
Exemplo 43 43- 1) Éster terc-butílico do ácido 4-(4-aminofenil)-piperazina-l-carboxílico, 43a
Uma mistura de 4-iodoanilina (0,654 g, 3 mmole), éster terc-butílico do ácido piperazina-l-carboxílico (0,67 g, 3,6 mmole), fosfato de potássio (g 1,272, 6 mmole), etilenoglicol (0,33 ml) e iodeto de cobre (0,03 g, 0,15 mmole) em 2-propanol (3 ml) foi colocada sob árgon num tubo selado e aquecida a 80 °C durante 30 horas. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, o meio foi lavado com água (50 ml) e extraído com acetato de etilo (100 ml). A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 70:30) para dar 43a (0,36 g, 1.3 mmole, 43%) na forma de um pó amarelo. 43-2) éster tert-butílico do ácido 4-[4-(l- cianociclobutilamino)fenil]piperazina-l-carboxilíco, 43b
Cianeto de trimetilsililo (0,3 g, 3 mmole) foi adicionado gota a uma mistura de 43a (0,415 g, 1,5 mmole), ciclobutanona (0,21 g, 3 mmole) e sulfato de sódio (1 g) em diclorometano (5 ml). A mistura foi agitada durante 15 horas. Após filtração para eliminar o sulfato de sódio, o meio foi concentrado sob vácuo, obtendo-se um líquido de cor castanha que foi submetido a cromatografia (diclorometano:acetona, 75:25) para dar 43b (0,448 g, 1,26 mmole, 84%) na forma de um sólido amarelo. 43-3) éster tert-butílico do ácido 4-{4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-imino-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct- 5-il]fenil}piperazina-l-carboxílico, 43c [RD139] e ácido tert-butílico do ácido 4-{4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-(4-ciano-3-trifluorometilfeniltio-carbamoílimino)-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenil}-piperazina-l-carboxílico, 43d [RD140]
Uma mistura de la (0,228 g, 1 mmole) e 43b (0,472 g, 0,63 mmole) em DMF seco (1 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas. A mistura foi concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 90:10) para dar 43c (0,173 g, 0,296 mmole, 47%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 10, na forma de um pó de cor esbranquiçada e 43d (0,169 g, 0,21 mmole, 33%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 11, na forma de um pó amarelo.
!H RMN (CDC13, 400 MHz) 1,48, (s, 9H) , 1,57-1, 67 (m, 1H) , 2.01- 2,09 (m, 1H) , 2,59-2,70 (m, 4H) , 3,25 (t, J = 5,1 Hz, 4H) , 3,59 (t, J = 4,9 Hz, 4H) , 7,02 (d, J= 8,9 Hz, 2H) , 7,20 (d, J= 8,9 Hz, 2H) , 7,81 (d, J= 7,4 Hz, 1H) , 7,93 (s, 1H) , 7,97 (d, J = 8,1 Hz, 1H).
1H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1,48, (s, 9H) , 1,57-1, 64 (m, 1H) , 2.01- 2,10 (m, 1H) , 2, 60-2, 89 (m, 4H) , 3,24 (t, J = 5,1 Hz, 4H) , 3,57 (t, J= 4,9 Hz, 4H) , 7,02 (d, J= 8,9 Hz, 2H) , 7,20 (d, J= 8,9 Hz, 2H) , 7,54-7, 98 (m, 4H) , 7,97 (d, J= 8,1 Hz, 1H) . 43-4) 4-[8-OXO-5-(4-piperazin-l-il-fenil)-6-tioxo-5,7- diazaspiro[3.4]oct-7-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo, 43e [RD137]
Uma mistura de 43c (0,117 g, 0,2 mmole), metanol (5 ml) e HC1 aquoso (2 ml, 2 M) foi refluxada durante 2 horas. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (10 ml) e extraída com acetato de etilo (3x30 ml). A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 50:50 e, em seguida, metanol: acetona, 50:50) para dar 43e (0, 089 g, 0,184 mmole, 92%) na forma de um pó branco.
3H RMN (CD3OD, 400 MHz) 1,51-1,61 (m, 1H) , 2,01-2,11 (m, 1H), 2,48-2,59 (m, 4H), 2,90-2,97 (m, 4H), 3,25-3,30 (m, 4H), 7,03 (d, J = 8,9 Hz, 2H) , 7,16 (d, J = 8,9 Hz, 2H) , 7,86 (dd,
Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 8,02 (d, J= 8,3 Hz, 1H) , 8,07 (d, J = 1,8 Hz, 1H) ; 13C RMN (CD3OD, 100 MHz) 13,2, 30,9, 45, 1, 48, 9, 67,5, 108, 9, 114, 8, 115, 9, 122,3 (q, J = 271,7
Hz), 126,4, 127,3 (q, J= 4,7 Hz), 130,4, 132,2 (q, J= 33,2 Hz), 133,0, 135,4, 138,1, 152,1, 175,4, 180,4. 43-5) 4-{5-[4-(4-metanossulfonilpiperazin-l-il)fenil]-8-oxo- 6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-7-il}-2-trifluorometilbenzonitrilo, 43f [RD138]
Uma mistura de 43e (0, 049 g, 0,1 mmole), cloreto de metanossulfonilo (0,012 ml, 0,15 mmole) e trietilamina (0,15 ml) em diclorometano foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. O meio foi filtrado. O filtrado foi concentrado e cromatografado (diclorometano:acetona, 95:5) para dar 43f (0, 042 g, 0, 074 mmole, 74%) na forma de um pó branco.
3H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1, 62-1,70 (m, 1H) , 2,14-2,23 (m, 1H), 2,51-2,58 (m, 2H), 2,61-2,67 (m, 2H), 2,84 (s, 3H), 3,39 (s, 8H) , 7,05 (d, J= 8,9 Hz, 2H) , 7,20 (d, J= 8,9 Hz, 2H) , 7,84 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,95 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 7,97 (d, J = 1,8 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 13,7, 31,4, 34,6, 45,7, 48,4, 67,5, 109,8, 114,9, 117,0, 121,9 (q, J= 272,7 Hz), 126,8, 127,1 (q, J= 4,7 Hz), 130,7, 132,3, 133,4 (q, J = 33,2 Hz), 135,2, 137,3, 151,1, 175,0, 180,2.
Exemplo 44 44-1) ácido 3-{4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-OXO-6- tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]feniljacrílico, 44a
Uma mistura de 39a (0, 025 g, 0,05 mmole) em metanol (2 ml) e solução de hidróxido de sódio (2 ml, 2 M) foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. O metanol foi evaporado. O resíduo foi ajustado a pH = 5 com HC1 aquoso (2M) e, em seguida, foi extraído com acetato de etilo (3x50 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCh e concentrada até à secura para dar 44a (0,02 g, 0,042 mmole, 85%). 44-2) 3-{4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo- 5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]feniljacrilamida, 44b [RD119] A uma suspensão de 44b (0,02 g, 0,042 mmole) em THF (1 ml) a -5 °C foi adicionado cloreto de tionilo (0,007 ml, 0,1 mmole) . O meio foi agitado a -5 °C durante uma hora. Em seguida, amoníaco foi borbulhado na mistura. O excesso de amoníaco foi condensado num condensador de refluxo a -782C, durante 30 minutos e, em seguida, foi permitido evaporar. O meio foi filtrado. O filtrado foi concentrado e cromatografado (diclorometano:acetona, 70:30) para dar 44b (0,014 g, 0,03 mmole, 71%) na forma de um pó de cor esbranquiçada.
ΤΗ RMN (DMSO-cb, 400 MHz) 1,49-1,52 (m, 1H) , 1, 88-1, 93 (m,
1H) , 2,37-2,46 (m, 2H) , 2,57-2,62 (m, 2H) , 6,66 (d, J = 15,9 Hz, 1H) , 7,16 (bs, 1H) , 7,43 (d, J= 8,3 Hz, 2H) , 7,47 (d, J = 15,9 Hz, 1H) , 7,58 (bs, 1H) , 8,03 (dd, Ji = 8,3 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H), 8,23 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 8,34 (d, J = 8,3 Hz, 1H) .
Exemplo 45 [RD145]
Cianeto de trimetilsililo (0,4 g, 4 mmole) foi adicionado gota a gota a uma mistura de cloridrato de 4- metanossulfonilfenilamina (0,415 g, 2 mmole), ciclobutanona (0,28 g, 4 mmole) e sulfato de sódio (1 g) em DMF (3 ml) . A mistura foi agitada durante 15 horas a 120 °C. Após filtração para remover o sulfato de sódio, o filtrado foi lavado com salmoura e extraído com acetato de etilo. A camada orgânica foi concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 90:10) para dar 1-(4-metanossulfonilfenilamino) ciclobutanocarbonitrilo (45a) (0,116 g, 0,44 mmole, 22%) na forma de um sólido amarelado. 4-Metanossulfonilfenilamina (0,201 g, 1,17 mmole, 59%) também foi recuperado.
Uma mistura de 4-isotiocianato-2-trifluorometilbenzo-nitrilo (la) (0,0141 g, 0,62 mmole) e 1-(4-metanossulfonil-fenilamino)ciclobutanocarbonitrilo (45a) (0,11 g, 0,42 mmole) em DMF seco (2 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 3 dias. A esta mistura adicionou-se (10 ml) de metanol e HC1 aquoso 2N (5 ml). A segunda mistura foi refluxada durante 3h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (10 ml) e extraída com acetato de etilo (3x30 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 97:3) para dar 4-[5-(4-metanossulfonilfenil)-8-oxo-6-tioxo- 5,7-diazaspiro[3.4]oct-7-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo (45b) [RD145] (0,031 g, 0,065 mmole, 15%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 14, na forma de um pó branco.
3H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1, 63-1,72 (m, 1H) , 2,21-2,28 (m, 1H), 2,46-2,54 (m, 2H), 2,68,2,74 (m, 2H), 3,16 (s, 3H), 7,57 (d, J= 8,3 Hz, 2H) , 7,85 (dd, J= 8,3, 1,8 Hz, 1H) , 7,97 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 7,98 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 8,17 (d, J = 8,3 Hz, 2H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 13, 6, 31,8, 44,4, 67,5, 110.2, 114,8, 122,4 (q, J= 271,5 Hz), 127,0 (q, J= 4,9 Hz), 129,4, 131,4, 132,1, 133,6 (q, J = 33,3 Hz), 135,3, 136,8, 140.3, 141,8, 174,4, 179,9.
Exemplo 4 6
Cianeto de trimetilsililo (0,69 g, 7 mmole) foi adicionado gota a gota a uma mistura de ácido 4-aminofenilacético (0,755 g, 5 mmole) e ciclobutanona (0,49 g, 7 mmole) em dioxano (20 ml). A mistura foi agitada durante 8 horas a 80 °C. A mistura foi concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 60:40) para dar ácido [ 4 — (Ιο i anoc i c 1 olout i 1 ami no) fenil]acético (46a) (1,138 g, 4,95 mmole, 99%) na forma de um sólido branco. 46-1) RD146
Uma mistura de 4-isotiocianato-2-trifluorometil- benzonitrilo (la) (0, 638 g, 2,8 mmole) e de ácido [4 —(Ιο i anoc i c 1 obut i 1 ami no) fenil]acético (46a) (0,46 g, 2,0 mmole) em DMF (5 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 15 horas. A esta mistura adicionou-se metanol (20 ml) e HC1 aquoso 2N (10 ml) . A segunda mistura foi refluxada durante 1 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (10 ml) e extraida com acetato de etilo (3x50 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano puro e, em seguida, diclorometano:acetona, 95:5) para dar éster metilico do ácido {4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo- 5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenil}acético (46b) [RD146] (0,532 g, 1,124 mmole, 56%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 15, na forma de um pó branco.
!H RMN (CDC13, 400 MHz) 1, 60-1, 69 (m, 1H) , 2,15-2,25 (m, 1H) , 2,50-2,58 (m, 2H) , 2,61-2,66 (m, 2H) , 3,72 (bs, 5H) , 7,27 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 7,50 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 7,84 (dd, J= 8,3, 1,8 Hz, 1H) , 7,94 (d, J= 8,2 Hz, 1H) , 7,97 (d, J = 1,6 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 13,7, 31,4, 44,7, 52,3, 67,4, 109, 9, 114, 9, 122,0 (q, J= 272,5 Hz), 127,0 (q, J = 4,9 Hz), 130,0, 131,1, 132,3, 133, 0 (q, J = 33,3 Hz), 134,1, 135,2, 135,9, 137,2, 171,4, 174,9, 179,9. 46-2) RD147
Uma mistura de éster metílico do ácido {4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenil}acético (46b) (0,095 g, 0,2 mmole) e uma solução de hidróxido de sódio (1 ml, 2 M) em metanol (2 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. O metanol foi evaporado. O resíduo foi ajustado a pH=5 com HC1 aquoso 2M e, em seguida, a mistura foi extraída com acetato de etilo (3x10 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCh e concentrada até à secura para dar ácido {4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)- 8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenil]acético (4 6 c) [RD147] (g 0,087, 0,19 mmole, 95%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 16.
!H RMN (CDC13, 400 MHz) 1, 60-1, 69 (m, 1H) , 2,15-2,25 (m, 1H) , 2,50-2, 64 (m, 4H) , 3,73 (s, 2H) , 7,26 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 7,51 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 7,84 (dd, J = 8,3, 1,8 Hz,
1H) , 7,95 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,96 (d, J = 1,6 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 13,7, 31,4, 40,2, 40,8, 67,4, 109, 9, 114,9, 122,0 (q, J= 272,5 Hz), 127,0 (q, J= 4,9 Hz), 129,9, 131.2, 132,3, 133,3 (q, J = 33,3 Hz), 133,9, 135,2, 136,1, 137.2, 174,1, 174,9, 179,9. 46-3) RD148
Cloreto de tionilo (0,238 g, 2 mmole) foi adicionado gota a gota a uma mistura de ácido {4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenil}acético (46c) (0,357 g, 0,777 mmole) em THF (5 ml) arrefecido a 0 °C. A mistura foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente e, em seguida, borbulhou-se amoníaco na mistura. O excesso de amoníaco foi condensado num condensador de refluxo a -78 °C, durante 30 minutos e, em seguida, foi deixado evaporar. O meio foi filtrado e o filtrado foi concentrado e cromatografado (diclorometano:acetona, 70:30) para dar 2-{4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenil}acetamida (4 6d) [RD148] (0,345 g, 0,75 mmole, 97%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 17, na forma de um pó de cor esbranquiçada.
3Η RMN (CDC13, 400 MHz) 1, 62-1, 66 (m, 1H) , 2,18,2,23 (m, 1H) , 2,49-2,55 (m, 2H) , 2,61-2,66 (m, 2H) , 3,63 (s, 2H) , 5,91
(bs, 1H) , 6,10 (bs, 1H) , 7,27 (d, J= 8,1 Hz, 2H) , 7,50 (d, J = 8,1 Hz, 2H) , 7,83 (dd, J = 8,3, 1,8 Hz, 1H) , 7,95 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,96 (d, J = 1,6 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDC13, 100 MHz) 13,7, 31,5, 42,5, 67,4, 109, 9, 114, 9, 121, 9 (q,J = 272,4 Hz), 127,1 (q, J= 4,9 Hz), 130,2, 131,1, 132,2, 133,3 (q, J= 33,3 Hz), 134,1, 135,2, 136,8, 137,2, 172,8, 174,8, 180,0. 46-4) RD149
Cloreto de tionilo (0,238 g, 2 mmole) foi adicionado gota a gota a uma mistura de ácido {4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenil}acético (46c) (0,357 g, 0,777 mmole) em THF (5 ml) arrefecido a 0 °C. A mistura foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente e, em seguida, metilamina (0,5 ml) foi adicionada. A mistura foi agitada por mais 2 horas. O meio foi filtrado e o filtrado foi concentrado e cromatografado (diclorometano: acetona, 80:20) para dar iV-metil-2-{ 4-[ 7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenil}acetamida (46e) [RD149] (0,348 g, 0,738 mmole, 95%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 18, na forma de um pó de cor esbranquiçada.
3H RMN (CDCls, 400 MHz) 1,61-1,70 (m, 1H) , 2,17-2,31 (m, 1H) , 2,50-2,56 (m, 2H) , 2,61-2,68 (m, 2H) , 2,82 (d, J = 4,8
Hz, 3H) , 3,62 (s, 2H) , 7,27 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 7,50 (d, J = 8.3 Hz, 2H) , 7,84 (dd, J = 8,3, 1,8 Hz, 1H) , 7,95 (d, J = 8,2
Hz, 1H) , 7,96 (d, J = 1,6 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 13, 7, 26, 6, 31, 5, 43, 1, 67,4, 110, 0, 114,9, 122,0 (q, J= 272,5 Hz), 127,1 (q, J= 4,9 Hz), 130,2, 131,0, 132,2, 133,3 (q, J= 33.3 Hz), 134,1, 135,2, 137,0, 137,1, 170,1, 174,8, 179,9.
Exemplo 47 N-{4-[3-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-5,5-dimetil-4-oxo-2-tioxo-imidazolidin-l-il]feniljmetanossulfonamida (47a) [RD150]
Uma mistura de 4-[3-(4-aminofenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxoimidazolidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo (2d) (0,02 g, 0,05 mmole), cloreto de metanossulfonilo (0,009 g, 0,075 mmole) e piridina (0,006 g, 0,075 mmole) em diclorometano (1 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 15 horas. O meio foi lavado com água (2 ml) e extraído com acetato de etilo (5 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (HPLC, coluna de alumina) para dar N- {4-[3-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-5,5-dimetil-4-oxo-2-tioxo-imidazolidin-1- il]fenil(metanossulfonamida (47a) [RD150] (0,009 g, 0,018 mmole, 36%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 2, na forma de um pó branco.
3H RMN (DMSO-de, 400 MHz) 1,46 (s, 6H) , 3,07 (s, 3H) , 7,32 (s, 4H), 8,05 (dd, J= 8,2, 1,2 Hz, 1H) , 8,26 (d, J= 1,2 Hz, 1H) , 8,35 (d, J= 8,2 Hz, 1H) , 10,08 (bs, 1H) ; 13C RMN (DMSO-d6, 100 MHz) 23,3, 40,4, 66,7, 109, 0, 115,5, 119, 9, 122,6 (q, J= 272,2 Hz), 128,5 (q, J= 4,7 Hz), 130,8, 131,2, 131,5 (q, J= 32,3 Hz), 134,5, 136,6, 138,6, 139,5, 175,4, 180,4.
Exemplo 48 N-{4-[3-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-5,5-dimetil-4-oxo-2-tioxoimidazolidin-l-il]fenil}acetamide, 48a, [RD151]
Uma mistura de 4-[3-(4-aminofenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxoimidazolidin-l-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo (2d) [RD9] (0,008 g, 0,02 mmole), cloreto de acetilo (0,004 g, 0,03 mmole) e trietilamina (0,003 g, 0,03 mmole) em diclorometano (1 ml) foi agitada a 0 °C durante 2 horas. A mistura foi concentrada e cromatografada (diclorometano: acetona, 90:10) para dar N-{4-[3-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-5,5-dimetil-4-oxo-2-tioxoimidazolidin-l-il ]fenil}acetamida, 48a, [RD151] (0,007 g, 0,016 mmole, 80%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 3, na forma de um pó branco.
3H RMN (CDC13, 400 MHz) 1,58 (s, 6H) , 2,21 (s, 3H) , 7,24 (d, J= 8,6 Hz, 2H) , 7,48 (bs, 1H) , 7,69 (d, J= 8,6 Hz, 2H) , 7,83 (dd, J = 8,2, 1,9 Hz, 1H) , 7,96 (d, J = 1,2 Hz, 1H) , 7,97 (d, J = 8,2 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 23,6, 53,4, 66,4, 110, 0, 114, 8, 120,7, 122, 6 (q, J = 272,2 Hz), 127,1 (q, J = 4,7 Hz), 129, 1, 130,2, 132,2, 133,5 (q, J = 32,3 Hz), 135,2, 137,1, 139,2, 168,1, 175,0, 180,0.
Exemplo 4 9 Ácido sulfúrico concentrado foi lentamente adicionado a uma mistura de ácido 4-aminobenzóico (4 g, 29,2 mmole) em metanol arrefecido a 0 °C. Após a adição, a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura foi lavada com uma solução saturada de bicarbonato de sódio e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca em MgSCb e concentrada sob vácuo, obtendo-se éster metílico do ácido 4-aminobenzóico (49a) (4,22 g, 27,9 mmole, 96%) na forma de um sólido esbranquiçado.
Uma mistura de éster metílico do ácido 4-aminobenzóico (0,32 g, 2,12 mmole), acetonaciano-hidrina (3 ml) e sulfato de sódio (1 g) foi refluxada durante 15 horas. Após filtração para remover o sulfato de sódio, o filtrado foi lavado com salmoura e extraído com acetato de etilo. A camada orgânica foi concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 60:40) para dar éster metílico do ácido 4-[(cianodimetilmetil)amino]benzóico (49b) (0,398 g, 1,95 mmole, 92%) na forma de um sólido branco. 49-1) RD152
Uma mistura de 4-isotiocianato-2-trifluorometil- benzonitrilo (la) (0,228 g, 1 mmole) e éster metílico do ácido 4-[(cianodimetilmetil)amino]benzóico (49b) (0,14 g, 0,64 mmole) em DMF (2 ml) foi aquecida sob irradiação de microondas a 60 °C, durante 12 horas. A esta mistura adicionou-se metanol (6 ml) e HC1 aquoso 2N (2 ml). A segunda mistura foi refluxada durante 4 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (10 ml) e extraída com acetato de etilo (3x30 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano; diclorometano:acetona, 75:25) para dar éster metílico do ácido 4-[3-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-5,5-dimetil-4-oxo-2-tioxo-imidazolidin-1-il ] benzóico (49 c) [RD152] (0,18 g, 0,4 mmole, 63%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 19, na forma de um pó branco.
3H RMN (CDCls, 400 MHz) 1,60 (s, 6H) , 3,95 (s, 3H) , 7,40 (d, J= 8,6 Hz, 2H) , 7,84 (dd, J= 8,2, 1,9 Hz, 1H) , 7,96 (d, J = 1,2 Hz, 1H) , 7,97 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 8,21 (d, J = 8,6 Hz, 2H) ; 13C RMN (CDCls, 100 MHz) 23, 8, 52,6, 66, 6, 110,3, 114,8, 121,9 (q, J= 272,7 Hz), 127,1 (q, J= 4,7 Hz), 129,8, 131.2, 131,4, 132,2, 133,5 (q, J = 32,3 Hz), 135,3, 137,0, 139.2, 165,9, 174,7, 179,7. 49-2) RD153
Uma mistura de éster metilico do ácido 4-[3-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-5,5-dimetil-4-oxo-2-tioxoimidazolidin-1-iljbenzdico (49c) (0,02 g, 0,0435 mmole) e metilamina (2 ml, destilado de uma sua solução aquosa a 40%) foi mantida a -20 °C durante 15 horas. Após evaporação da metilamina, a mistura foi cromatografada (diclorometano: acetona, 80:20) para dar 4-[3- (4-ciano-3-trifluorometilfenil)-5,5-dimetil-4-oxo-2-tioxo-imidazolidin-l-il]-N-metilbenzamida (49d) [RD153] (0,01 g, 0,0224 mmole, 51%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 20. Éster metilico do ácido 4-[3-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-5,5-dimetil-4-oxo-2-tioxo-imidazolidin-1-il]benzóico (49c) (0,08 g, 0,0179 mmole, 41%) também foi recuperado.
3H RMN (Acetona-de, 400 MHz) 1,60 (s, 6H) , 2,90 (d*7 = 4,6
Hz, 3H) , 7,48 (d, J= 8,6 Hz, 2H) , 7,80 (bs, 1H) , 7,99 (d, J = 8,6 Hz, 2H) , 8,06 (dd, J = 8,2, 1,8 Hz, 1H) , 8,18 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 8,25 (d, J = 8,2 Hz, 1H) ; 13C RMN (Acetona-de, 100 MHz) 23, 8, 54,0, 66,5, 110,3, 114, 8, 121, 9 (q ,J = 272,7 Hz), 127,1 (q, J= 4,7 Hz), 128,2, 129, 9, 133,5 (q, J = 32,3 Hz), 135,7, 135,8, 138,2, 138,3, 139,2, 166,0, 174,9, 179,7.
Exemplo 50 50-1) RD154
Uma mistura de 4-[8-(4-hidroximetilfenil)-5-oxo-7-tioxo- 6-azaspiro[3.4]oct-6-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo (36b) (0,086 g, 0,2 mmole) e anidrido metanossulfónico (0,07 g, 0,4 mmole) em diclorometano (1 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 15 horas. A mistura foi concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 98:2) para dar éster 4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenilmetílico do ácido metanossulfónico, (50a) [RD154] (0,089 g, 0,175 mmole, 88%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 22, na forma de um pó branco.
ΤΗ RMN (CDC13, 400 MHz) 1, 63-1,70 (m, 1H) , 2,17-2,31 (m, 1H), 2,48-2,57 (m, 2H), 2,64-2,70 (m, 2H), 3,04 (s, 3H), 5,30 (s, 2H) , 7,37 (d, J= 8,3 Hz, 2H) , 7,62 (d, J= 8,3 Hz, 2H) , 7,84 (dd, J = 8,3, 1,8 Hz, 1H) , 7,97 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,98 (d, J= 1,6 Hz, 1H) . 50-2) RD155
Metilamina (0,5 ml) foi borbulhada numa mistura de éster 4- [7- (4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenilmet1lico do ácido metanossulfónico, (50a) (0,059 g, 0,115 mmole) em THF (3 ml) arrefecido a -78 °C. Após 1 hora de reação a -78 °C, a mistura foi concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 95:5, metanol) para dar 4—[5—(4— meti1aminometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4] oct-7-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo (50b) [RD155] (0,042 g, 0,095 mmole, 82%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 23, na forma de um pó branco.
3H RMN (CDC13, 400 MHz) 1,57-1,70 (m, 1H) , 2,16-2,24 (m, 1H), 2,52 (s, 3H), 2,53-2,57 (m, 2H), 2,60-2,68 (m, 2H), 3,85 (s, 2H) , 7,27 (d, J= 8,3 Hz, 2H) , 7,55 (d, J= 8,3 Hz, 2H) , 7.84 (dd, J = 8,3, 1,8 Hz, 1H) , 7,95 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7.97 (d, J = 1,6 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 13,7, 31.5, 36,4, 55, 6, 67,4, 110, 0, 114, 9, 122,0 (q, J = 272,5
Hz), 127,0 (q, J= 4,9 Hz), 129,1, 129,6, 129,8, 132,2, 133,3 (q, J= 33,3 Hz), 133,7, 135,2, 142,4, 174,8, 179,9. 50-3) RD156
Uma mistura de éster 4-[ 7-(4-ciano-3- trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenilmetilico do ácido metanossulfónico (50a) (0,02 q, 0,039 mmole) e dimetilamina (0,5 ml, destilada de uma sua solução aquosa a 40%) em THF (1 ml) foi agitada durante 2 horas a -78 °C. A mistura foi concentrada e cromatografada (diclorometano: acetona, 95:5, acetona) para dar 4— [5— (4 — dimetilaminometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct- 7-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo (50c) [RD156] (0,017 g, 0,037 mmole, 95%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 24, na forma de um pó branco.
3H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1,57-1,70 (m, 1H) , 2,16-2,24 (m, 1H), 2,32 (s, 6H), 2,55-2,60 (m, 2H), 2,63-2,69 (m, 2H), 3,53 (s, 2H) , 7,27 (d, J= 8,3 Hz, 2H) , 7,55 (d, J= 8,3 Hz, 2H) , 7.84 (dd, J = 8,3, 1,8 Hz, 1H) , 7,95 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7.97 (d, J = 1,6 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 13,7, 31.5, 45,5, 63,7, 67,4, 110, 0, 114, 9, 122,0 (q, J = 272,5
Hz), 127,0 (q, J= 4,9 Hz), 129, 1, 129, 6, 129, 8, 132,2, 133,3 (q, J= 33,3 Hz), 133,7, 135,2, 142,4, 174,8, 179,9.
Exemplo 51
Cianeto de sódio (0,245 g, 5 mmole) foi adicionado a uma mistura de ácido 4-aminobenzóico (0,274 g, 2 mmole) e ciclobutanona (0,21 g, 3 mmole) em ácido acético a 90% (4,5 ml) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 horas. A mistura foi lavada com HC1 aquoso (pH 2) e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca com sulfato de magnésio e concentrada até à secura sob vácuo para dar ácido 4-(1-cianociclobutilamino)benzóico (51a) (0,426 g, 1,97 mmole, 99%), na forma de um sólido branco. 51-1) RD159 e RD160
Uma mistura de 4-isotiocianato-2-trifluorometilbenzo-nitrilo (la) (0,51 g, 2,22 mmole) e ácido 4-(l-cianociclobutilamino)benzóico (51a) (0,343 g, 1,59 mmole) em DMF (2 ml) foi aquecida sob irradiação de microondas a 60 °C e agitada durante 16 horas. A esta mistura adicionou-se (10 ml) de metanol e HC1 aquoso 2M (5 ml) . A segunda mistura foi refluxada durante 12 horas. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (20 ml) e extraída com acetato de etilo (3x30 ml) . A camada orgânica foi seca com MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 95:5) para dar éster metílico do ácido 4-[ 7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]benzóico (51b) [RD159] (0,09 g, 0,196 mmole, 12%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 25, na forma de um pó branco, bem como N-(3-ciano-4-trifluorometilfenil)-4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]benzamida (51b' ) [RD160] (0,28 g, 0,45 mmole, 29%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 26, na forma de um pó branco.
3Η RMN (CDC13, 400 MHz) 1,67-1,71 (m, 1H) , 2,20-2,26 (m, 1H), 2,49-2,57 (m, 2H), 2,66-2,73 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 7,42 (d, J= 8,4 Hz, 2H) , 7,85 (dd, J= 8,3, 1,7 Hz, 1H) , 7,97 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 7,98 (d, J = 1,7 Hz, 1H) , 8,26 (d, J = 8,3 Hz, 2H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 13,7, 31, 6, 52, 6, 67,5, 110.1, 114,8, 121,8 (q, J= 272,7 Hz), 127,0 (q, J= 4,7 Hz), 130.2, 131,4, 131,5, 132,2, 133,4 (q, J = 33,2 Hz), 135,2, 137,0, 139,2, 165, 9, 174, 6, 179,7.
3H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1,67-1,71 (m, 1H) , 2,18-2,26 (m, 1H), 2,50-2,58 (m, 2H), 2,68-2,74 (m, 2H), 7,47 (d, J = 8,5
Hz, 2H) , 7,83 (d, J= 8,7 Hz, 1H) , 7,84 (dd, J= 8,3, 1,9 Hz, 1H) , 7,96 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 9,97 (d, J = 1,9 Hz, 1H) , 8,10-8,14 (m, 3H), 8,21 (d, J= 1,9 Hz, 1H), 8,88, (s, 1H) . 51-2) RD161
Uma mistura de éster metilico do ácido 4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]benzóico (51b) (0,046 g, 0,1 mmole) e metilamina (1 ml destilado de uma sua solução aquosa a 40%) foi mantida a -20°C durante 15 horas. Após a evaporação da metilamina, a mistura foi cromatografada (diclorometano: acetona, 80:20) para dar iV-metil-4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]benzamida (51c) [RD161] (0,041 g, 0,085, 84%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 27.
3H RMN (CDC13, 400 MHz) 1, 63-1,70 (m, 1H) , 2,18-2,26 (m, 1H), 2,48-2,56 (m, 2H), 2,65-2,71 (m, 2H), 3,05 (d, J = 4,8
Hz, 3H), 6,32 (bs, 1H), 7,39 (d, J= 8,3 Hz, 2H), 7,84 (dd, J = 8,3, 1,7 Hz, 1H) , 7,95-7, 98 (m, 4H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 13, 6, 27,0, 31, 6, 67,4, 110,3, 114, 8, 121,8 (q J = 272,7 Hz), 127,0 (q, J= 4,7 Hz), 128,7, 130,3, 132,1, 133,3 (q, J= 33,2 Hz), 135,2, 136,3, 137,0, 137,8, 167,2, 174,6, 179,8.
Exemplo 52 [RD162]
Cloreto de tionilo (2,38 g, 20 mmole) foi adicionado lentamente a uma solução de ácido 2-fluoro-4-nitrobenzóico (2,97 g, 16 mmole) em DMF (50 ml) resfriado a -5 °C. A mistura foi agitada por mais uma hora a -5 °C. Metilamina (0,62 g, 20 mmole, destilada de fresco de uma sua solução aquosa a 40%) foi adicionada ao meio reacional. A segunda mistura foi agitada por mais 1 hora. Acetato de etilo (300 ml) foi adicionado à mistura, que foi lavada com salmoura (3x150 ml). A camada orgânica foi seca em MgSCh e concentrada para dar JV-metil-2-f luoro-4-nitrobenzamida (52a) (2,89 g,
14.6 mmole, 91%) na forma de um sólido amarelo. 3H RMN
(Acetona d6, 400 MHz) 3,05 (dj = 4,3 Hz, 3H) , 6,31 (dd, J = 13,5, 2,1 Hz, 1H) , 6,40 (dd, J = 8,5, 2,1 Hz, 1H) , 7,64 (dd, J = 8,6, 8,6 Hz, 1H).
Uma mistura de JV-metil-2-f luoro-4-nitrobenzamida (52a) (2,89 g, 14,6 mmole) e ferro (5,04 g, 90 mmole) em acetato de etilo (40 ml) e ácido acético (40 ml) foi refluxada durante 1 hora. As partículas sólidas foram filtradas. O filtrado foi lavado com água e extraído com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano: acetona, 95:5) para dar JV-metil-2-f luoro-4-aminobenzamida (52b) (2,3 g, 13,7 mmole, 94%) na forma de um sólido esbranquiçado. 3H RMN (acetona-d6, de 400 MHz) 2,86 (d, J = 4,3 Hz, 3H) , 5,50 (bs, 2H) , 6,37 (dd, Ji = 14,7 Hz, J2 = 2,1 Hz, 1 H) , 6,50 (dd, J = 8,5, 2,1 Hz, 1 H) , 7,06 (bs, 1 H) , 7,68 (dd, J = 8,8 Hz, 1 H) ; 13C RMN (acetona-d6, 100 MHz) 25, 8, 99, 6 (d*7 = 13,8 Hz), 109,2 (d, J= 12,8 Hz), 110,0 (d, J = 1,6 Hz), 132,5 (d, J = Hz 4,8), 153,5 (d, J = 12.6 Hz), 162,2 (d, J= 242,5 Hz), 164,0 (d, J = Hz 3,1).
Cianeto de sódio (1,47 g, 30 mmole) foi adicionado a uma mistura de iV-met il-2-f luoro-4-aminobenzamida (52b) (1,68 g, 10 mmole) e ciclobutanona (1,4 g, 20 mmole) em ácido acético a 90% (20 ml) . A mistura reacional foi agitada a 80 °C durante 24 horas. A mistura foi lavada com água e extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca com sulfato de magnésio e concentrada até à secura sob vácuo. O sólido foi lavado com uma mistura de éter etílico e hexano 50:50 (10 ml) para remover ciclobutanonaciano-hidrinas e dar, após filtração, JV-metil-4- (1-cianociclobutilamino) -2-
fluorobenzamida (52c) (2,19 g, 8,87 mmole, 89%) . 3Η RMN (CDCI3, 400 MHz) 1, 87-1, 95 (m, 1H) , 2,16-2,27 (m, 1H) , 2,35-2,41 (m, 2H) , 2,76-2, 83 (m, 2H) , 2,97 (d, J = 4,4 Hz, 3H) , 4,68 (bs, 1H) , 6,29 (dd, J = 14,3, 1,8 Hz, 1H) , 6,48 (dd, J = 8,3, 1,8 Hz, 1H) , 6,75 (q, J = 4,4 Hz, 1H) , 7,90 (dd, J = 8,3, 8,3 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDC13, 100 MHz) 15,7,
26,7, 33, 9, 49, 4, 100,2 (d, J= 29,5 Hz), 110,6, 111,0 (d, J = 11,8 Hz), 133,1 (d, J = 4,2 Hz), 148,4 (d, J = 12,0 Hz), 162,0 (d, J= 244,1 Hz), 164,4 (d, J= 3,6 Hz).
Uma mistura de 4-isotiocianato-2-trifluorometil- benzonitrilo (la) (2,16 g, 9,47 mmole) e JV-metil-4-(1-cianociclobutilamino)-2-fluorobenzamida (52 c) (1,303 g, 5,27 mmole) em DMF (20 ml) foi aquecida sob irradiação de microondas a 80 °C durante 16 horas. A esta mistura adicionou-se metanol (50 ml) e HC1 aquoso 2N (20 ml) . A segunda mistura foi refluxada durante 3 horas. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (100 ml) e extraída com acetato de etilo (150 ml). A camada orgânica foi seca com MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 95:5) para dar iV-metil-4-[7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]-2-fluorobenzamida (52d) [RD162] (1,43 g, 3,0 mmole, 57%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 28, na forma de um pó amarelo.
3H RMN (CDC13, 400 MHz) 1, 65-1,75 (m, 1H) , 2,18-2,30 (m, 1H), 2,49-2,57 (m, 2H), 2,67-2,73 (m, 2H), 3,07 (d, J = 4,4
Hz, 3H) , 6,75 (q, J = 4,6 Hz, 1H) , 7,17 (dd, J = 11,5, 1,9
Hz, 1H) , 7,26 (dd, J = 8,3, 1,9 Hz, 1H), 7,83 (dd, J = 8,2, 2,0 Hz, 1H) , 7,95 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 7,97 (d, J = 8,3 Hz, 1H) 8,30 (dd, J= 8,3, 8,3 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 13, 6, 27,0, 31, 7, 67,4, 110,3, 114, 8, 118,2, 118,5, 121, 9 (q, J= 272,7 Hz), 126,6, 127,0 (q, J= 4,8 Hz), 132,1, 133,3 (q, J = 33,2 Hz), 133, 8, 135,3, 136, 8, 139, 1 (d, J = 10,9 Hz), 160,5 (d, J= 249,1 Hz), 162,7 (d, J= 3,3 Hz), 174,3, 179,8; 19F RMN (CDCI3, 100 MHz) -111,13, -62,58.
Exemplo 53 [RD163]
Uma mistura de 4-nitro-3-fluorofenol (0,314 g, 2 mmole) e ferro (0,56 g, 10 mmole) em acetato de etilo (4 ml) e ácido acético (2 ml) foi refluxada durante 3 horas. As partículas sólidas foram filtradas. O filtrado foi lavado com água e extraído com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca em MgSCd e concentrada para dar 4-amino-3-fluorofenol (53a) (0,25 g, 19,6 mmole, 98%) na forma de um sólido de cor castanha. 3H RMN (CDC13, 400 MHz) 6,48-6,58 (m, 2H) , 6,61- 6,70 (m, 1H) , 7,87 (bs, 3H) .
Cianeto de sódio (0,194 g, 4 mmole) foi adicionado a uma mistura de 4-amino-3-fluorofenol (0,29 g, 2,28 mmole) e ciclobutanona (0,175 g, 2,5 mmole) em ácido acético a 90% (3 ml) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 15 horas. O meio foi lavado com água e extraído com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca com sulfato de magnésio, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 90:10) para dar 1-(2-fluoro-4-hidroxifenilamino)ciclobutano-carbonitrilo (53b) (0,271 g, 1,31 mmole, 58%) na forma de um sólido esbranquiçado. 3H RMN (CDCI3, 400 MHz) 2,13-2,20 (m, 2H) , 2,36-2,41 (m, 2H) , 2,70,2,75 (m, 2H) , 4,00 (bs, 1H) , 6,46 (bs, 1H) , 6,52 (ddd,
Ji = 2,2 Hz, J2 = 0, 65 Hz, J3 = 0,22 Hz, 1H) , 6,57 (d, J = 2,3 Hz), 6,62 (dd, Ji = 3,0 Hz, J2 = 0,67 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 15, 7, 34,1, 50, 9, 104,0 (dj = 21,9 Hz), 111,0 (d, J = 3,4 Hz), 115,8 (d, J =3,7 Hz), 121,8, 125,3 (d, J = 12,3 Hz), 150,1 (d, J= 10,4 Hz), 152,8 (d, J= 239,3 Hz).
Uma mistura de 4-isotiocianato-2-trifluorometil-benzonitrilo (la) (0,228 g, 1,0 mmole) e 1-(2-fluoro-4- hidroxifenilamino)-ciclobutanocarbonitrilo (53b) (0,145 g, 0,7 mmole) em DMF seco (2 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. A esta mistura adicionou-se metanol (10 ml) e HC1 aquoso 2M (2 ml). A segunda mistura foi refluxada durante 1 hora. Após arrefecimento até à
temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (10 ml) e extraída com acetato de etilo (50 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano puro e, em seguida, diclorometano:acetona, 90:10) para dar 4-[5-(2-fluoro-4- hidroxifenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-7-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo (53c) [RD163] (0,17 g, 0,39 mmole, 56%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 29, na forma de um pó de cor esbranquiçada.
3H RMN (CDCI3, 400 MHz) 1, 66-1,75 (m, 1H) , 2,18-2,28 (m, 1H), 2,42-2,50 (m, 1H), 2,54-2,67 (m, 3H), 6,76 (d, J = 2,2
Hz, 2H) , 7,15 (t, J = 2,1 Hz, 1H) , 7,35 (bs, 1H) , 7,87 (dd,
Ji = 8,2 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 7,97 (d, J= 8,2 Hz, 1H) , 7,98 (d, J = 1,8 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDC13, 100 MHz) 13,8, 31,0, 67, 6, 104, 8 (d, J = 22,3 Hz), 109,8, 112,6, 114,4 (d, J = 13,1 Hz), 114,9, 121,9 (q, J = 272,8 Hz), 127,1 (q, J = 4,8 Hz), 132,0, 132,3, 133,5 (q, J = 33,3 Hz), 135,3, 137,2, 159,3 (d, J = 11,2 Hz), 159,6 (d, J = 249,7 Hz), 175,2, 180,5; 19F RMN (CDCI3, 100 MHz) -117,5, -62,49.
Exemplo 54 [RD168]
Uma mistura de 4-nitro-2-fluorobenzonitrilo (1,83 g, 5 mmole) e ferro (1,68 g, 6 mmole) numa mistura de ácido acético (40 ml) e acetato de etilo (40 ml) foi refluxada durante 2 horas. O sólido foi filtrado e o filtrado foi lavado com água e extraído com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca com sulfato de magnésio, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 95:5) para dar 4-amino-2-fluorobenzonitrilo (54a) (0,653 g, 4,8 mmole, 96%).
Cianeto de sódio (0,74 g, 15 mmole) foi adicionado a uma mistura de 4-amino-2-fluorobenzonitrilo (1,36 g, 10 mmole) e ciclopentanona (1,26 g, 15 mmole) em ácido acético a 90% (10 ml) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas e, em seguida, o meio foi aquecido a 80 °C e agitado por mais 5 horas. O meio foi lavado com água e extraído com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca com sulfato de magnésio, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 97:3) para dar 4-(l- cianociclopentilamino)-2-fluorobenzonitrilo (54b) (2,07 g,
9,03 mmole, 90%) na forma de um sólido amarelo. 3Η RMN (CDCI3, 400 MHz) 1,69-1,91 (m, 4H) , 2,13-2,18 (m, 2H) , 2,37-2,42 (m, 2H) , 5,08 (bs, 1H) , 6,54-6, 62 (m, 2H) , 7,39 (t, J= 7,3 Hz, 1H) ; 13C RMN (CDC13, 100 MHz) 23,7, 39,8, 56, 8, 89,6 (d, J= 15,8 Hz), 101,2 (d, J= 23,8 Hz), 110,9, 115,2, 120,8, 134,1 (d, J= 2,4 Hz), 150,3 (d, J= 11,2 Hz), 164,5 (d, J = 254,1 Hz).
Uma mistura de 4-isotiocianato-2-trifluorometil- benzonitrilo (la) (0,171 g, 0,75 mmole) e 4-(l- cianociclopentilamino)-2-fluorobenzonitrilo (54b) (0,115 g, 0,5 mmole) em DMF seco (1 ml) foi aquecida sob irradiação de microondas a 60 °C, durante 48 horas. A esta mistura adicionou-se metanol (3 ml) e HC1 aquoso 2M (2 ml). A segunda mistura foi refluxada durante 1 hora. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (10 ml) e extraída com acetato de etilo (15 ml). A camada orgânica foi seca com MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 98:2) para dar 4 — [ 1 — (4-ciano-3-fluorofenil)-4-oxo-2-tioxo-l,3-diazaspiro[4.4]non- 3-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo (54 c) [RD168] (0,017 g, 0,037 mmole, 7%), cuja estrutura é ilustrada pela Fórmula 30, na forma de um pó de cor esbranquiçada.
3Η RMN (CDC13, 400 MHz) 1,53-1,63 (m, 2H) , 1, 89-2,00 (m, 2H), 2,09-2,16 (m, 2H), 2,35-2,42 (m, 2H), 7,27-7,37 (m, 2H), 7,78-7, 90 (m, 3H) , 7,95 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 7,97 (d, J = 8,3
Hz, 1H) ; 13C RMN (CDCI3, 100 MHz) 25,2, 36,5, 75,3, 103,2 (d, J = 15,3 Hz), 110,4, 112,8, 114,7, 119,2 (d, J = 20,7
Hz), 121,9 (q, J = 272,8 Hz), 127,0 (q, J = 4,8 Hz), 132,1, 133,7 (q, J= 33,2 Hz), 134,6, 135,3, 135,8, 136,8, 141,8 (d, J= 9,5 Hz), 163,4 (d, J= 261,5 Hz), 175,3, 180, 1.
Exemplo 55 [RD136 e RD142]
Podem ser sintetizados outros compostos de diaril-hidantoína, incluindo os compostos ilustrados nas Fórmulas 35 e 36 que se seguem.
Fórmula 36 [RD142]
Exemplo 56 [RD162' ] A seguir, reações sensíveis ao ar ou humidade foram conduzidas sob atmosfera de árgon, utilizando material de vidro seco em estufa e técnicas padrão de seringas/septos. As reações foram monitorizadas com uma placa de TLC de S1O2 à luz UV (254 nm) , seguido de visualização com uma solução corante de p-anisaldeído ou ninidrina. Cromatografia em coluna foi realizada em gel de sílica 60. Espectros ΤΗ RMN foram realizados a 400 MHz em CDCI3, salvo indicação em contrário, e os resultados foram reportados como segue, em ppm ( ) do padrão interno (TMS, 0,0 ppm): deslocamento químico (multiplicidade, integração, constante de acoplamento em Hz).
Ácido periódico (1,69 g, 7,41 mmole) foi dissolvido em acetonitrilo (25 mL) sob agitação vigorosa e, em seguida, trióxido de crómio (0,16 g, 1,60 mmole) foi dissolvido na solução. Acrescentou-se 2-fluoro-4-nitrotolueno (0,33 g, 2,13 mmole) sob agitação. Ocorreu uma reação exotérmica com formação imediata de um precipitado branco. Após 1 h de agitação, o líquido sobrenadante da mistura reacional foi decantado para um balão e o solvente foi removido por evaporação. Os resíduos foram extraídos com cloreto de metileno (2x30 mL) e água (2x30 mL) . A camada orgânica foi seca em MgS04 e concentrada para dar ácido 2-fluoro-4-nitrobenzóico (Fórmula 37) (0,32 mg, 81%) na forma de um sólido branco. RMN 8,06 (ddd, 1 RJ =9,9, 2,2 e 0,3), 8,13 (ddd, 1 H, J = 8,6, 2,2 e 0,9), 8,25 (ddd, 1 H, J = 8,6, 7,0 e 0,3).
Cloreto de tionilo (0,15 g, 1,30 mmole) foi adicionado lentamente a uma solução de ácido 2-fluoro-4-nitrobenzóico (Fórmula 37) (0,20 g, 1,10 mmole) em DMF (5 mL) arrefecido a -5 °C. A mistura foi agitada por mais uma hora a -5 °C.
Excesso de metilamina (destilada de fresco de uma sua solução aquosa a 40%) foi adicionado ao meio reacional. A segunda mistura foi agitada por mais 1 hora. Acetato de etilo (50 mL) foi adicionado à mistura, que foi lavada com salmoura (2x50 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCh e concentrada para dar iV-met il-2-f luoro-4-nitrobenzamida (Fórmula 38) (0,18 g, 85%) na forma de um sólido amarelado. ΤΗ RMN (acetona-de) 3,05 (d, 3 H, J=4,3), 6,31 (dd, 1 H, J=13,5 e 2,1), 6,40 (dd, 1H, J= 8,6 e 2,1), 7,64 (dd, 1H, J= 8,6 e 8,6).
Uma mistura de iV-met il-2-f luoro-4-nitrobenzamida (Fórmula 38) (0,18 g, 0,91 mmole) e ferro (0,31 g, 5,60 mmole) em acetato de etilo (5 mL) e ácido acético (5 mL) foi refluxada durante 1 h. As partículas sólidas foram filtradas. O filtrado foi lavado com água e extraído com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de SiCh (diclorometano:acetona, 95:5) para dar N-metil-2-fluoro-4- aminobenzamida (Fórmula 39) (0,14 g, 92%) na forma de um sólido esbranquiçado. ΤΗ RMN (acetona-cb) 2,86 (d, 3 H^J = 4.3) , 5,50 (br s, 2 H) , 6,37 (dd, 1 H, J = 14,7 e 2,1), 6,50 (dd, 1H, J = 8,6 e 2,1), 7,06 (br s, 1H) , 7,68 (dd, 1H, J = 8,8 e 8,8).
Uma mistura de iV-met il-2-f luoro-4-aminobenzamida (Fórmula 39) (96 mg, 0,57 mmole), cianidrina de acetona (0,3 mL, 3,14 mmole) e sulfato de magnésio (50 mg) foi aquecida a 80 °C e agitada durante 12 h. Acrescentou-se acetato de etilo (25 mL) e, em seguida, lavou-se com água (2x25 mL). A camada orgânica foi seca em MgSCb, concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de SiCb (diclorometano:acetona, 95:5) para dar N- metil-2-fluoro-4-(1,1-dimetilcianometil)-aminobenzamida (Fórmula 40) (101 mg, 75%) na forma de um sólido branco. . RMN 1,74 (s, 6 H), 2,98 (dd, 3 H, J = 4,8 e 1,1), 6,58 (dd, 1 H, J = 14,6 e 2.3) , 6,63 (dd, 1 H, J = 8,7 e 2,3), 6,66 (br s, 1 H) , 7,94 (dd, 1 H, J = 8,7 e 8,7).
4-Amino-2-trifluorometilbenzonitrilo (2,23 g, 12 mmole) foi adicionado às porções, ao longo de 15 min, a uma mistura heterogénea e bem agitada de tiofosgénio (1 mL, 13 mmole) em água (22 mL) , à temperatura ambiente. Manteve-se a agitação por mais 1 h. O meio reacional foi extraído com clorofórmio (3x15 ml) . A fase orgânica combinada foi seca com MgSCh e evaporada até à secura sob pressão reduzida para dar o desejado produto 4-isotiocianato-2-trifluorometilbenzonitrilo (Fórmula 41) na forma de um sólido acastanhado, que foi utilizado como tal na etapa seguinte (2,72 g, 11,9 mmole, 99%). ΤΗ RMN 7,49 (dd, 1 HJ = 8,3 e 2,1), 7,59 (d, 1 H, J = 2,1), 7,84 (d, 1 H, J = 8,3).
Uma mistura de iV-met il-2-f luoro-4-(1, 1-dimet il- cianometil)aminobenzamida (Fórmula 40) (30 mg, 0,13 mmole) e 4-isotiocianato-2-trifluorometilbenzonitrilo (Fórmula 41) (58 mg, 0,26 mmole) em DMF (1 mL) foi aquecida sob irradiação de microondas a 100 °C, durante 11 horas. A esta mistura adicionou-se metanol (20 mL) e HC1 aquoso IN (5 mL) . A segunda mistura foi refluxada durante 1,5 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (50 mL) e extraída com acetato de etilo (50 mL). A camada orgânica foi seca em MgSCd, concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de SiCh (diclorometano:acetona, 95:5) para dar RD162' (Fórmula 42) (15 mg, 25%) na forma de um cristal incolor. ΤΗ RMN 1,61 (s, 6 H) , 3,07 (d, 3 Hf = 4,1), 6,71 (m, 1 H) , 7,15 (dd, 1H, J= 11,7 e 2,0), 7,24 (dd, 1H, J= 8,4 e 2,0), 7,83 (dd, 1H, J = 8,2 e 2,1), 7,95 (d, 1H, J= 2,1), 7,99 (d, 1H, J= 8,2), 8,28 (dd, 1H, J= 8,4 e 8,4).
Uma mistura de N-metil-2-fluoro-4-aminobenzamida (Fórmula 39) (62 mg, 0,37 mmole), ciclopentanona (0,07 mL, 0,74 mmole) e TMSCN (0,1 mL, 0,74 mmole) foi aquecida a 80 °C e agitada durante 13h. Acrescentou-se acetato de etilo (2x20 mL) e, em seguida, lavou-se com água (2x20 mL) . A camada orgânica foi seca em MgSCd, concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (diclorometano:acetona, 95:5) para dar iV-met il-2-f luoro-4-(1-cianociclopentil)aminobenzamida (Fórmula 43) (61 mg, 63%) na forma de um sólido branco. ΤΗ RMN [ΧΊ7,95 (dd, 1H, J = 8,8, 8.8 Hz), 6,65 (br s, 1H) , 6,59 (dd, 1H, J = 8,8, 2,3 Hz), 6,50 (dd, 1H, J = 14,6, 2,3 Hz), 4,60 (br s, 1H) , 2,99 (dd, 3H, J = 4,8, 1,1 Hz), 2,36-2,45 (m, 2H) , 2,10-2,18 (m, 2H) , 1,82-1,95 (m, 4H).
Uma mistura de iV-metil-2-fluoro-4-(1-cianociclopentil) aminobenzamida (Fórmula 43) (57 mg, 0,22 mmole) e 4-isotiocianato-2-trifluorometilbenzonitrilo (0,15 g, 0,65 mmole) em DMF (3 mL) foi aquecida sob irradiação de microondas (recipiente aberto) a 130 °C, durante 12 horas. A esta mistura adicionou-se metanol (20 mL) e HC1 aquoso 1 N (5 mL) . A segunda mistura foi refluxada durante 1,5 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (50 mL) e extraída com acetato de etilo (50 mL). A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (diclorometano:acetona, 95:5) para dar 4- (3- (4-ciano-3-(trifluorometil)fenil)-4-oxo-2-tioxo-1,3-diazaspiro[4.4]nonan-l-il) -2-f luor o-iV-met ilbenzamida, RD162" (Fórmula 44) (8 mg, 7%) na forma de um sólido amarelo pálido. !H RMN 8,28 (dd, 1H*7 = 8,4, 8,4 Hz), 7,98 (d, 1H, J = 8,3
Hz), 7,96 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 7,84 (dd, 1H, J = 8,3, 1,8 Hz), 7,27 (dd, 1H, J= 8,4, 1,8 Hz), 7,17 (dd, 1H, J= 11,7, 1.8 Hz), 6, 67-6, 77 (m, 1H) , 3,07 (d, 3H, J = 4,3 Hz), 2,32-2,41 (m, 2H), 2,13-2,21 (m, 2H), 1,85-1,96 (m, 2H), 1,49-1,59 (m, 2H).
Anidrido trifluoroacético (0,85 mL, 6,14 mmole) foi adicionado a uma solução de ácido 4-(4-aminofenil)butirico (0,5 g, 2,79 mmole) em clorofórmio (10 mL) a 0 °C. A mistura foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 3 horas. A mistura foi repartida em clorofórmio (20 mL) e água (20 mL). A camada orgânica foi seca em MgSCb, concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (diclorometano:acetona, 9:1) para dar ácido 4 — [4 — (2,2,2-trifluoroacetilamino)fenil]butanóico (Fórmula 45) (0,53 g, 69%). ΤΗ RMN 7,81 (br s, 1H) , 7,48 (d, 2H,J = 8,5 Hz), 7,22 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 2,68 (t, 2H, J = 7,5 Hz), 2,38 (t, 2H, J= 7,5 Hz), 1,96 (p, 2H, J= 7,5 Hz).
Cloreto de tionilo (71 mg, 0,60 mmole) foi adicionado lentamente a uma solução de ácido 4-[4-(2,2,2-trifluoroacetilamino)fenil]butanóico (Fórmula 45) (0,15 g, 0,55 mmole) em DMF (5 mL) arrefecido a -5 °C. A mistura foi agitada por mais uma hora a -5 °C. Excesso de dimetilamina (destilada de fresco de uma sua solução aquosa a 40%) foi adicionado ao meio reacional. A segunda mistura foi agitada por mais 1 hora. Acetato de etilo (50 mL) foi adicionado à mistura, que foi lavada com salmoura (2x50 ml) . A camada orgânica foi seca em MgSCb e concentrada para dar N,N- dimetil-4-[4-(2,2,2-trifluoroacetilamino)fenil]butanamida (Fórmula 46) (0,17 g, quantit.) na forma de um sólido amarelado. ΤΗ RMN 9,70 (br s, 1H) , 7,55 (d, 2H^7 = 8,6
Hz), 7,11 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 2,91 (s, 3H) , 2,89 (s, 3H) , 2,60 (t, 2H, J= 7,7 Hz), 2,27 (t, 2H, J= 7,7 Hz), 1,89 (p, 2H, J = 7,7 Hz).
Solução de NaOH 1 N (3 mL) foi adicionada a uma solução de N, iV-dimet il-4-[4-(2,2,2-trifluoroacetilamino)fenil] butanamida (Fórmula 46) (0,17 g, 0,55 mmole) em metanol (2 mL) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 14 horas. A mistura foi repartida em clorofórmio (25 mL) e água (25 mL). A camada orgânica foi seca em MgSCg, concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (diclorometano: acetona, 9:1) para dar JV, W-dimetil-4-(4-aminofenil) butanamida (Fórmula 47) (74 mg, 66%) na forma de um sólido branco. ΤΗ RMN 6,97 (d, 2H>J =8,3 Hz), 6,61 (d, 2H, J= 8,3 Hz), 3,56 (br s, 2H) , 2,92 (s, 6 H) , 2,56 (t, 2H, J = 7,7 Hz), 2,28 (t, 2H, J = 7,7 Hz), 1,91 (p, 2H, J = 7,7 Hz) .
Uma mistura de N, W-dimetil-4-(4-aminofenil) butanamida (Fórmula 47)(74 mg, 0,36 mmole), ciclobutanona (54 mg, 0,78 mmole) e TMSCN (77 mg, 0,78 mmole) foi aquecida a 80 °C e agitada durante 15 h. Acrescentou-se acetato de etilo (2x20 mL) e, em seguida, lavou-se com água (2x20 mL) . A camada orgânica foi seca em MgSCb, concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (diclorometano : acetona, 9:1) para dar JV, JV-dimetil-4-[4-(1-cianociclobutilamino)fenil]butanamida (Fórmula 48) (58 mg, 57%) na forma de um sólido branco. ΤΗ RMN 7,07 (d, 2HJ = 8,5 Hz), 6,59 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 3,94 (br s, 1H) , 2,94 (s, 3H) , 2,93 (s, 3H) , 2,75-2, 83 (m, 2H) , 2,60 (t, 2H, J = 7,6
Hz), 2,33-2,42 (m, 2H) , 2,30 (t, 2H, J = 7,6 Hz), 2,11-2,28 (m, 2H) , 1,93 (p, 2H, J= 7,6 Hz).
Uma mistura de N, iV-dimet il-4-[ 4-(1-cianociclobutilamino) fenil]butanamida (Fórmula 48)(58 mg, 0,20 mmole) e 4-isotiocianato-2-trifluorometilbenzonitrilo (74 mg, 0,32 mmole) em DMF (3 mL) foi aquecida sob refluxo durante 2 horas. A esta mistura acrescentou-se metanol (20 mL) e HC1 aquoso IN (5 mL). A segunda mistura foi refluxada durante 1,5 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (50 mL) e extraida com acetato de etilo (50 mL) . A camada orgânica foi seca em
MgSCh, concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (diclorometano:acetona, 95:5) para dar 4-(4-(7-(4-ciano-3-(trifluorometil)fenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7- diazaspiro [3.4] octan-5-il) fenil) -N, iV-dimet ilbutanamida, RD169 (fórmula 49) (mg 44, 42%) na forma de um sólido amarelo pálido. ΤΗ RMN 7,98 (s, 1H) , 7,97 (d, 1H*7 = 8,2 Hz), 7,86
(d, 1H, J= 8,2 Hz), 7,42 (d, 2H, J= 8,3 Hz), 7,22 (d, 2H, J = 8,3 Hz), 2,99 (s, 3H) , 2,96 (s, 3H) , 2,78 (t, 2H, J = 7,5 Hz), 2,62-2,70 (m, 2H), 2,52-2,63 (m, 2H), 2,40 (t, 2H, J = 7,5 Hz), 2,15-2,30 (m, 1H) , 2,04 (p, 2H, J = 7,5 Hz), 1,62- 1,73 (m, 1H).
Uma mistura de ácido 4-(4-aminofenil)butírico (0,20 g, 1,12 mmole), ciclobutanona (0,17 mL, 2,23 mmole) e TMSCN (0,30 mL, 2,23 mmole) foi aquecida a 80 °C e agitada durante 13 h. Acrescentou-se acetato de etilo (2x30 mL) e, em seguida, lavou-se com água (2x30 mL) . A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (diclorometano:acetona, 9:1) para dar ácido 4—[4—(1— cianociclobutilamino)fenil]butanóico (Fórmula 50) (0,21 g,
74%) na forma de um sólido amarelado. ΤΗ RMN 7,06 (d, 2HJ = 8,6 Hz), 6,59 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 2,75-2,83 (m, 2H) , 2,59 (t, 2H, J= 7,5 Hz), 2,37 (t, 2H, J= 7,5 Hz), 2,33-2,42 (m, 2H), 2,11-2,28 (m, 2H), 1,92 (p, 2H, J= 7,5 Hz).
Uma mistura de ácido 4— [4— (1 — cianociclobutilamino)fenil]butanóico (Fórmula 50) (0,21 g, 0,83 mmole) e 4-isotiocianato-2-trifluorobenzonitrilo (0,25 g, 1,08 mmole) em tolueno (10 mL) foi aquecida sob refluxo durante 2 horas. A esta mistura adicionou-se HC1 aquoso 1 N (5 mL) . A segunda mistura foi refluxada durante 1,5 h. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água fria (50 mL) e extraída com acetato de etilo (50 mL). A camada orgânica foi seca em MgSCh, concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (diclorometano:acetona, 95:5) para dar ácido 4-(4-(7-(4-ciano-3-(trifluorometil)fenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]octan-5-il)fenil)butanóico, RD141 (Fórmula 51) (60 mg, 15%). ΤΗ RMN 7,98 (d, 1H>7 =1,8 Hz), 7,97 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,86 (dd, 1H, J = 8,3, 1,8 Hz), 7,42 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,24 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 2,79 (t, 2H, J= 7,5 Hz), 2,62-2,68 (m, 2H), 2,51-2,59 (m, 2H), 2,47 (t, 2H, J= 7,5 Hz), 2,14-2,26 (m, 1H) , 2,06 (p, 2H, J= 7,5
Hz), 1,60-1,70 (m, 1H).
A uma solução de ácido 4-(4-(7-(4-ciano-3-(trifluorometil)fenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7- diazaspiro[3.4]octan-5-il)fenil)butanóico, RD141 (Fórmula 51) (60 mg, 0,12 mmole) em DMF (3 mL) adicionou-se cloreto de tionilo (0,01 mL, 0,15 mmole) a 0 °C. A mistura foi agitada a 0 °C durante 1 hora. Em seguida, amoníaco foi borbulhado na mistura. A mistura foi repartida em acetato de etilo (25 mL) e água (25 mL). A camada orgânica foi seca com MgSCh, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 70:30) para dar 4-(4-(7-(4-ciano-3-(trifluorometil)fenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]octan-5-il)fenil)butanamida, RD130
(Fórmula 52) (37 mg, 61%) na forma de um pó branco. TH RMN 7,97 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 7,95 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,85 (dd, 1H, J = 8,3 Hz), 7,39 (d, 2H, J = 8,3 Hz), 7,22 (d, 2H, J = 8,3 Hz), 5,59 (br s, 2H) , 2,77 (t, 2H, J = 7,5 Hz), 2,62-2,68 (m, 2H) , 2,51-2,59 (m, 2H) , 2,31 (t, 2H, J = 7,5 Hz), 2,16- 2,25 (m, 1H), 2,05 (p, 2H, J = 7,5 Hz), 1,57-1,70 (m, 1H).
Uma solução de DMSO (0,01 mL, 0,12 mmole) em diclorometano seco (1 mL) foi adicionada a uma solução agitada de cloreto de oxilo (0,01 mL, 0,09 mmole) em diclorometano seco (2 mL), a -78 °C. Após 15 min, uma solução de diclorometano de 4-(4-(7-(4-ciano-3-(trifluorometil)-fenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]octan-5-il)fenil)-butanamida, RD130 (Fórmula 52) (35 mg, 0,07 mmole) foi adicionada à mistura reacional. A agitação continuou durante 20 min a -78 °c, e, em seguida, trietilamina (0,03 mL, 0,22 mmole) foi adicionada. Após 30 min a -78 °c, a mistura reacional foi aquecida até à temperatura ambiente e, em seguida, foi extinguida com uma solução aquosa saturada de NH4CI. A mistura reacional foi diluída com diclorometano e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi seca com MgSCb, concentrada e cromatografada (diclorometano:acetona, 95:5) para dar 4-(5-(4-(3-cianopropil)fenil)-8-oxo-6-tioxo- 5,7-diazaspiro[3.4]octan-7-il)-2-(trifluorometil)benzonitrilo, RD170 (Fórmula 53) (29 mg, 87%) na forma de um óleo viscoso. !H RMN 7,98 (d, 1H*J = 1,8 Hz), 7,98 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,86 (dd, 1H, J = 8,3, 1,8 Hz), 7,43 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,27 (d, 2H, J= 8,4 Hz), 2,90 (t, 2H, J= 7,3 Hz), 2,63-2,73 (m, 2H) , 2,52-2, 62 (m, 2H) , 2,42 (t, 2H, J = 7,3 Hz), 2,18- 2,30 (m, 1H) , 2,07 (p, 2H, J= 7,3 Hz), 1, 63-1,73 (m, 1H) .
Análise farmacológica dos compostos
Compostos cujas vias sintéticas foram descritas atrás, foram avaliados quanto às suas atividades antagonista e agonista sobre os AR em células de cancro da próstata hormono-resistente, utilizando processos semelhantes aos dos pedidos PCT US04/42221 e US05/05529. Uma série de compostos exibiu uma atividade antagonista potente e uma atividade agonista minima sobre os AR superexpressos em cancro da próstata hormono-resistente.
Ensaio biológico in vitro
Efeito dos compostos nos AR de acordo com um ensaio repórter
Os compostos foram testados por um sistema repórter artificial de resposta do AR numa linha celular do cancro da próstata hormono-resistente. Neste sistema, as células LNCaP de cancro da próstata foram concebidas para expressar estavelmente um nivel de AR cerca de 5 vezes superior ao nivel endógeno. Os AR exógenos possuem propriedades semelhantes aos AR endógenos, na medida em que são ambos estabilizados por um androgénio sintético R1881. As células com superexpressão de AR também foram concebidas para incorporar estavelmente um repórter de resposta do AR e a atividade do repórter destas células apresenta caracteristicas de cancro da próstata hormono-resistente. Responde a baixas concentrações de um androgénio sintético, o R1881, é inibida por concentrações elevadas de bicalutamida (ver Tabela 1) e exibe atividade agonista com bicalutamida (Figura 1 e Tabela 2). Em consonância com dados publicados, a bicalutamida inibiu o repórter de resposta do AR e não exibiu atividade agonista em células de cancro da próstata hormono-dependente (Figura 2) . Nós examinámos a atividade antagonista dos compostos cuja síntese foi descrita atrás, na presença de 100 pM de R1881. Células de engenharia LNCaP (LNCaP-AR, também abreviado LN-AR) foram mantidas em meio de Iscove contendo 10% de soro bovino fetal (FBS). Dois dias antes do tratamento com os compostos, as células foram cultivadas em meio de Iscove contendo 10% de FBS tratado com carvão (CS-FBS) para eliminação de androgénios. As células foram divididas e cultivadas em meio de Iscove contendo 10% CS-FBS, com 100 pM de R1881 e concentrações crescentes dos compostos experimentais. Após dois dias de incubação, as atividades do repórter foram analisadas. A Tabela 1 lista as CI50 destes compostos para a inibição dos AR no cancro da próstata hormono-resistente. A substância de controlo bicalutamida possui uma CI50 de 889 nM. A maioria dos compostos identificados (diariltio-hidantoínas) possui uma CI50 de 100 a 200 nM para a inibição do AR no cancro da próstata hormono-resistente. Em contraste, os compostos antiandrogénicos dados como exemplos na Patente U.S. 5 705 654, tais como nos exemplos 30-2, 30-3, 31-2, 31-3 e 24-3 (RD73-RD77) não possuem atividade inibitória dos AR neste sistema.
Uma propriedade anteriormente não reconhecida da superexpressão do AR no cancro da próstata hormono-resistente é a sua capacidade de mudar antagonistas para agonistas. Por isso, somente os compostos com mínima ou nenhuma atividade agonista são qualificados como antiandrogénios no caso desta doença. Para determinar as atividades agonistas de diferentes compostos, examinámos a sua atividade estimulante sobre o AR utilizando o repórter de resposta do AR como medida no sistema LN-AR, na ausência de R1881. A Tabela 2 lista as atividades agonistas de compostos diferentes. Em consonância com os resultados anteriores, a bicalutamida ativou o AR no cancro da próstata hormono-resistente. Os derivados de diariltio-hidantoína, como nos exemplos 7-3b (RD37), 33 (RD91), 34 (RD92), e 35 (RD93) não possuem qualquer atividade agonista. Por outro lado, o RU59063 e outros compostos antiandrogénios dados como exemplos na Patente 5 705 654, nomeadamente nos exemplos 30-2, 30-3, 31-2, 31-3 e 24-3 (RD73-RD77), ativaram fortemente o AR no cancro da próstata hormono-resistente.
Para examinar a especificidade dos inibidores dos AR, compostos específicos foram testados em células LNCaP superexpressando o recetor da glicocorticóide (GR), o membro mais próximo do AR na família de recetores nucleares. Estas células também transportam um repórter de resposta do GR e a atividade do repórter foi induzida por dexametasona, um agonista do GR, e a indução foi bloqueada por RU486, um inibidor do GR. Do Exemplo 7-3b, (RD37) (4-(8-oxo-6-tioxo-5- (4-metilfenil)-5,7-diazaspiro[3.4]oct-7-il)-2-trifluorometil-benzonitrilo) não teve qualquer efeito no GR neste sistema.
Efeito de compostos no AR de acordo com a medição dos níveis segregados de antigénio específico da próstata(PSA)
Está bem estabelecido que os níveis de PSA são indicadores da atividade do AR no cancro da próstata. Para avaliar se os compostos afetam a função do AR num ambiente fisiológico, foram determinados os níveis segregados de PSA endógeno induzidos por R1881 em células LNCaP com superexpressão de AR (LNCaP-AR, também abreviado para LN-AR). As células LNCaP-AR são uma linha de carcinoma dos gânglios linfáticos de células da próstata transduzidas com um plasmídeo de expressão dos recetores de androgénio. Células LNCaP-AR foram mantidas em meio de Iscove contendo FBS a 10%. Dois dias antes do tratamento com os compostos, as células foram cultivadas em meio de Iscove contendo CS-FBS a 10% para privação de androgénios. As células foram divididas e cultivadas em meio de Iscove contendo CS-FBS a 10%, com concentrações adequadas de R1881 e dos compostos experimentais. Após quatro dias de incubação, os níveis segregados de PSA foram analisados por meio de kits ELISA PSA (American Qualex, San Clemente, CA) O nível de PSA segregado em células LNCaP-AR foi fortemente induzido por 25 pM de R1881. Em contraste, não houve indução de PSA nas células LNCaP originais até a concentração de R1881 ter atingido 100 pM. Isto é coerente com a nossa observação anterior, de que o AR no cancro da próstata hormono-resistente é hipersensível aos androgénios. Uma inibição dose-dependente da atividade do AR foi realizada para determinar a CI50 de diferentes compostos na inibição da expressão de PSA, e os resultados estão apresentados na
Tabela 1. As CI50 dos específicos compostos relativamente à expressão de PSA são muito semelhantes às medidas com o ensaio do repórter, confirmando que os derivados de diaril- hidantoína são fortes inibidores do AR no cancro da próstata hormono-resistente.
Analisámos igualmente as atividades agonistas de compostos específicos sobre o AR no cancro da próstata hormono-resistente utilizando PSA segregado como marcador substituto. Para fazer isso, células LNCaP com superexpressão de AR e privadas de androgénio foram incubadas com concentrações crescentes de compostos cuja síntese é descrita acima, na ausência de R1881, e o PSA segregado no meio de cultura foi medido 4 dias mais tarde. A Tabela 3 apresenta as atividades agonistas dos específicos compostos. De forma consistente com os resultados obtidos no ensaio do repórter, os derivados de diariltio-hidantoína, nomeadamente nos exemplos 7-3b (RD37), 33 (RD91), 34 (RD92) e 35 (RD93), não possuem atividade agonista. Por outro lado, RU59063 e outros compostos antiandrogénicos apresentados como exemplos na Patente U.S. 5 705 654, tal como nos Exemplos 30-2 (RD73) , 30-3 (RD74) e 31-2 (RD75) estimularam a expressão de PSA no cancro da próstata hormono-resistente .
Efeito dos compostos na atividade mitocondrial no AR pelo
teste de MTS Células LNCaP-AR foram mantidas em meio de Iscove contendo FBS a 10%. Os compostos foram analisados quanto ao seu efeito no crescimento de células de cancro da próstata hormono-resistente. Utilizaram-se células LNCaP super-expressadas, porque estas células comportam-se como células de cancro da próstata hormono-resistente tanto in vitro como in vivo (1). A atividade mitocondrial foi avaliada pelo teste de MTS, um substituto para o crescimento. Células LNCaP com superexpressão de AR (LN-AR) foram mantidas em meio de Iscove contendo FBS a 10%. Dois dias antes do tratamento com os compostos, as células foram cultivadas em meio de Iscove contendo FBS-CS a 10% para privação de androgénios. As células foram divididas e cultivadas em meio de Iscove contendo CS-FBS a 10%, com concentrações adequadas de R1881 e concentrações crescentes dos compostos experimentais. Após quatro dias de incubação, o crescimento celular foi monitorizado pelo teste de MTS (Promega, Madison, WI).
De forma coerente como os testes do repórter e do PSA, o crescimento de LNCaP com superexpressão de AR foi estimulado por 25 μΜ de R1881, mas as células originais não foram estimuladas até a concentração de R1881 ter atingido 100 μΜ. A Figura 2 mostra o efeito inibitório dos compostos selecionados no crescimento do cancro da próstata hormono-resistente, na presença de 100 pM de R1881. O atual fármaco bicalutamida não inibiu o cancro da próstata hormono-resistente. Em contraste, os compostos do Exemplo 5-3b, (RD7) (4-[3-(4-metilfenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxoimidazolidin-1-il]-2-trifluorometilbenzonitrilo), e do Exemplo 7-3b, (RD37) (4 - (8-oxo-6-tioxo-5-(4-metilfenil)-5,7-diazaspiro[3.4]oct-7-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo), inibiram potentemente o cancro da próstata hormono-resistente.
Avaliámos se a inibição do crescimento no teste de MTS ocorria tendo AR como alvo. Os compostos dos Exemplos 5-3b, (RD7) (4-[3-(4-metilfenil)-4,4-dimetil-5-oxo-2-tioxo- imidazolidin-l-il]-2-trifluorometil-benzonitrilo) , e Exemplo 7-3b, (RD37) (4-(8-oxo-6-tioxo-5-(4-metilfenil)-5,7- diazaspiro[3.4]oct-7-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo), foram testados em células DU-145, uma linha celular do cancro da próstata que não possui expressão do AR. Estes compostos não tiveram qualquer efeito inibitório no crescimento de células DU-145. Os compostos não inibiram outras células para além das células do cancro da próstata expressando AR, já que não tiveram nenhum efeito no crescimento de MCF7 e SkBr3, duas linhas celulares do cancro da mama comumente usadas, ou de 3T3, uma linha celular de fibroblasto de rato normal.
Nas Figuras 3, 4 e 5 estão apresentados exemplos da atividade biológica in vitro de derivados de diariltio-hidantoína. Por exemplo, com base na atividade relativa da luciferase, a Fig. 3 indica que a uma concentração de 500 nM os compostos ficaram classificados, por ordem dos mais ativos para os menos ativo, da seguinte forma: RD152 > RD153 > RD145 > RD163 > RD161 = RD162 > bicalutamida. Por exemplo, com base no nivel relativo de PSA, a Fig. 4 indica que a uma concentração de 500 nM os compostos ficaram classificados, por ordem dos mais ativos para os menos ativos, da seguinte forma: RD138 > RD131 > RD37 > RD133 > RD134 > RD137 > RD138 > RD135 > bicalutamida. Por exemplo, com base em unidades relativas de MTS, a Fig. 5 indica que a uma concentração de 500 nM os compostos ficaram classificados, por ordem dos mais ativos para os menos ativos, da seguinte forma: RD168 > RD37 > RD141 > RD162 > bicalutamida.
Efeito inibitório em xenoenxertos tumorais de cancro da próstata hormono-resistente 0 composto do Exemplo 7-3b, (RD37) (4-(8-oxo-6-tioxo-5- (4-metilfenil)-5,7-diazaspiro[3.4]oct-7-il)-2-trifluorometil-benzonitrilo), foi utilizado para avaliar se os derivados de diaril-hidantoína possuíam efeito in vivo no cancro da próstata hormono-resistente. Primeiro, avaliou-se o efeito deste composto em xenoenxertos tumorais estabelecidos a partir de células LNCaP com AR superexpresso. Células de engenharia em Matrigel (Collaborative Biomedical) foram injetadas por via subcutânea nos flancos de ratos SCID machos castrados. 0 tamanho do tumor foi medido semanalmente, em três dimensões, com um paquímetro. Depois de os xenoenxertos tumorais estarem estabelecidos (tamanho do tumor atingindo pelo menos 40 mm3) , os ratos com tumores foram randomizados e tratados com diferentes doses de compostos, por via oral e uma vez por dia. Consistente com a observação clínica, o atual fármaco bicalutamida não inibiu o crescimento do cancro da próstata hormono-resistente (acontecendo o mesmo com o veículo) (Figura 7a) . Em contraste, o composto do Exemplo 7-3b, (RD37) (4-(8-oxo-6-tioxo-5-(4-metilfenil)-5,7-
diazaspiro[3.4]oct-7-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo), inibiu fortemente o crescimento destes tumores (Figura 7a) e a inibição é dose-dependente (Figura 7b) . Além disso, o composto do Exemplo 7-3b (RD37) inibiu a expressão de PSA (Figura 8), o marcador clínico para o cancro da próstata hormono-resistente. O composto do Exemplo 7-3b, (RD37) (4-(8-oxo-6-tioxo-5- (4-metilfenil)-5,7-diazaspiro[3.4]oct-7-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo) , também foi testado noutro modelo de xenoenxerto do cancro da próstata hormono-resistente, o LAPC4 hormono-resistente. Este modelo foi criado pela passagem (passaging) do cancro da próstata hormono-dependente em ratos castrados, o que reproduz a progressão clínica do cancro da próstata (2) . Semelhante aos resultados obtidos com o modelo de xenoenxerto de LNCaP com AR superexpresso, o atual fármaco bicalutamida não inibiu nem o crescimento nem a expressão de PSA no modelo de xenoenxerto de LAPC4 hormono-resistente (o mesmo acontecendo com o veículo) (Figuras 9a e 9b) . Em contraste, o composto do Exemplo 7-3b (RD37) inibiu fortemente o crescimento e a expressão de PSA destes tumores (Figuras 9a e 9b).
Efeito inibitório no crescimento de células de cancro da próstata hormono-dependente
Para determinar se os derivados de diariltio-hidantoína também inibem as células de cancro da próstata hormono-dependente, foram testados alguns compostos específicos no crescimento de células LNCaP, medindo o MTS da atividade mitocondrial. Contrariamente a não ter qualquer efeito sobre o crescimento do cancro da próstata hormono-resistente, o atual fármaco bicalutamida inibiu ligeiramente as células LNCaP hormono-dependente de forma dose-dependente. Os compostos do Exemplo 5-3b, (RD7) (4-[3-(4-metilfenil)-4,4- dimetil-5-oxo-2-tioxoimidazolidin-l-il]-2- trifluorometilbenzonitrilo), e do Exemplo 7-3b (RD37) (4 — (8 — oxo-6-tioxo-5-(4-metilfenil)-5,7-diazaspiro[3.4]oct-7-il)-2-trifluorometilbenzonitrilo) inibiram o cancro da próstata hormono-dependente com uma potência 10 vezes superior à da bicalutamida (Figura 10).
Ensaio biológico in vivo
Todas as experiências em animais foram realizadas em conformidade com as diretrizes do Animal Research Committee da Universidade de Califórnia em Los Angeles. Os animais foram adquiridos da Taconic e mantidos numa coluna de fluxo laminar, numa determinada colónia de flora. Células LNCaP-AR e de LNCaP-vector foram mantidas em meio RPMI suplementado com FBS a 10%. 105 células em 100 μΐ de meio de Matrigel e RPMI 1:1 foram injetadas por via subcutânea nos flancos de ratos SCID machos intactos ou castrados. 0 tamanho do tumor foi medido semanalmente, em três dimensões, (comprimento x largura x profundidade), com um paquímetro. Os ratos foram divididos aleatoriamente por grupos de tratamento quando o tamanho do tumor atingiu aproximadamente 100 mm3. Os fármacos foram administrados oralmente, todos os dias, a doses de 10 mg/kg e 50 mg/kg. Para obtenção de leituras farmacodinâmicas, geraram-se imagens dos animais através de uma câmara ótica CCD, 3 horas após a administração da última dose de tratamento. Uma ROI foi desenhada sobre o tumor para medição da atividade da luciferase em fotões/segundo. Os painéis da direita são uma representação das medições nas ROI. Os resultados estão apresentados nas Figuras 11 e 12. Durante 18 dias, o composto RD162 foi eficaz em impedir o crescimento do tumor e até mesmo em causar o encolhimento do tumor, e foi distintamente mais eficaz do que a bicalutamida. A farmacocinética da bicalutamida, 4-[ 7-(4-ciano-3-trifluorometilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]tolueno [RD37], N-metil-4-{4-[7-(4-ciano-3-trifluorometil-fenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]fenil}-butanamida [RD131], e de N-metil-4-[7-(4-ciano-3-trifluoro-metilfenil)-8-oxo-6-tioxo-5,7-diazaspiro[3.4]oct-5-il]-2-fluorobenzamida (52d) [RD162] foi avaliada in vivo utilizando ratos FVB com 8 semanas, adquiridos de Charles River Laboratories. Os ratos foram divididos em grupos de três, para cada ponto no tempo. Dois ratos não foram tratados com composto e outros dois ratos foram tratados com solução veiculo. Cada grupo foi tratado com 10 mg por quilograma de peso corporal. O fármaco foi dissolvido numa mistura 1:5:14 de DMSO: PEG400:H20 (solução veiculo) e foi administrado aos ratos pela veia caudal. Os animais foram aquecidos sob uma lâmpada de aquecimento durante aproximadamente 20 minutos antes do tratamento para dilatar a veia caudal. Cada rato foi colocado num restringidor de ratos (Fisher Sci. Cat# 01-288-32A) e foi injetado com 200 μΐ de composto em solução veiculo na veia dilatada da cauda. Após a administração de fármaco, os animais foram mortos por inalação de CO2, em momentos diferentes: 5 min, 30 min, 2 h, 6 h, 16 h. Os animais foram sangrados imediatamente após a exposição ao CO2, por meio de punção cardíaca (seringa BD de 1 ml + agulha 27G 5/8) . Para dosagem oral, o fármaco foi dissolvido numa mistura 50:10:1:989 de DMSO:carboximetilcelulose:Tween80:H2O antes da administração oral com uma seringa de alimentação.
Para determinar a concentração do fármaco, amostras de soro foram analisadas por HPLC (bomba Waters 600, controlador Waters 600 e detector Waters 2487) equipado com uma coluna Alltima C18 (3 μ, 150 mm x 4,6 mm). Os compostos RD37, RD131 e RD162 foram analisados no comprimento de onda de 254 nm e a bicalutamida no comprimento de onda de 270 nm.
As amostras para análise por HPLC foram preparadas de acordo com o procedimento a seguir: Células sanguíneas foram separadas do soro por centrifugação. - A 400 μΐ de soro adicionou-se 80 μΐ de uma solução 10 μΜ de um padrão interno e 520 μΐ de acetonitrilo. Ocorreu precipitação. - A mistura foi agitada por vórtex durante 3 minutos e, em seguida, colocada sob ultrassons durante 30 minutos. - As partículas sólidas foram filtradas ou separadas por centrifugação.
- O filtrado foi seco sob fluxo de árgon até à secura. A amostra foi reconstruída até 80 μΐ com acetonitrilo, antes da análise por HPLC para determinação da concentração de fármaco. - A curva padrão do fármaco foi utilizada para melhorar a precisão. A concentração plasmática de RD162 em função do tempo resultante da administração intravenosa e oral está apresentada na Figura 13. A concentração em estado estacionário (Css) de bicalutamida, RD131 e RD162 é dada na Tabela 4. A concentração em estado estacionário de RD162 é praticamente tão boa como a da bicalutamida, e consideravelmente melhor do que a de RD131.
Classificação dos compostos em niveis
As Tabelas de 5 a 10 apresentam compostos de diaril-hidantoína agrupados em Níveis de 1 a 6. A Tabela 11 apresenta compostos de diaril-hidantoína a que não foram atribuídos níveis. A classificação dos compostos em níveis baseou-se nos dados disponíveis e numa apreciação analítica. Os dados considerados incluíam testes in vitro (sistema repórter de resposta do AR na linha celular LNCaP, medição do nível de PSA, ensaio mitocondrial de MTS) e testes in vivo (tamanho do tumor medido diretamente ou por emissão induzida pelo gene repórter da luciferase, ensaios farmacocinéticos com base nos níveis no plasma sanguíneo) . Nem todos os compostos foram submetidos a todos os testes, assim como nem todos os dados gerados são apresentados. A classificação dos compostos entre si foi baseada na sua utilidade para o tratamento do cancro da próstata, em particular durante a classificação de dois compostos para os quais não foram realizados os mesmos testes. As características consideradas na classificação incluem a atividade antagonista sobre os AR e a ausência de atividade agonista sobre os AR em células do cancro da próstata hormono-resistente, a prevenção do crescimento do tumor, o encolhimento do tumor e o comportamento farmacocinético, com um tempo de residência no sangue mais prolongado sendo considerado vantajoso. Nível 1
Em geral, os compostos do Nível 1 são diariltio-hidantoínas, com o anel arilo esquerdo dissubstituído, que são dissubstituídos no carbono direito da hidantoína e têm um substituinte de oxigénio ou azoto no carbono esquerdo da hidantoína. Prevê-se que o substituinte de amido hidrólise para a forma de oxigénio em soluções aquosas, tal como verificado em sistemas biológicos in vitro e in vivo. 0 composto RD100 dispõe de uma boa atividade, com um substituinte de iodo em vez de CF3 no anel arilo esquerdo.
Os compostos do Nível 1 (ver Tabela 5) foram considerados muito melhores do que a bicalutamida para o tratamento do cancro da próstata. No entanto, RD37 e RD131 mostraram metabolizar rapidamente, ou seja, exibem um tempo de residência curto no sangue. 0 composto RD162 apresentava uma farmacocinética desejável. A Figura 17 mostra que sob tratamento com bicalutamida, os níveis de PSA para as células LNCaP permaneciam iguais ou aumentavam relativamente ao tratamento com solução veículo, ao passo que sob tratamento com RD162, os níveis de PSA diminuíam. A Figura 18 mostra que sob tratamento com solução veículo, os tumores continuavam a aumentar em tamanho. Por outro lado, sob tratamento com RD162, a uma dose de 1 mg/kg de peso corporal por dia, a taxa de crescimento do tumor diminuiu e o tamanho do tumor parecia estabilizar após cerca de 17 dias. Sob tratamento com RD162, a uma dose de 10 mg/kg de peso corporal por dia, o tamanho do tumor diminuiu com o tempo. A Figura 19 ilustra que sob tratamento com RD162, a uma dose de 10 mg/kg de peso corporal por dia, a emissão de fotões associada com a atividade da luciferase diminuía. A Figura 20 mostra que o tratamento com RD162 a esta dose resultou numa diminuição ou estabilização do tamanho do tumor e numa redução na emissão de fotões associada com a atividade da luciferase. A Figura 21 mostra que sob tratamento com RD162, RD162' , RD 162", RD 169 e RD 170, às doses de 100, 200, 500 e 1000 nM, os níveis de PSA das células LN-AR diminuíram. Além disso, quanto maior a dose, mais baixo o nível de PSA. A Figura 23 apresenta o peso do trato urogenital e a taxa de emissão de fotões associada à atividade da luciferase, no início e após 14 dias de tratamento com bicalutamida ou com RD162, para ratos intactos e castrados. O peso e a taxa de emissão de fotões aumentaram tanto para os ratos intactos, como castrados. O tratamento de ratos castrados com RD162 resultou numa redução no peso e na emissão de fotões para os ratos castrados não tratados, tal como aconteceu com o tratamento com bicalutamida.
Assim, os compostos do Nível 1 são particularmente vantajosos para utilização como antagonistas do AR e como agentes terapêuticos para o cancro da próstata hormono-resistente. Podem ser úteis para tratar outras doenças ou estados clínicos relacionados com o AR, tais como a hiperplasia benigna da próstata, queda de cabelo e acne. Estes e outros compostos relacionados podem igualmente ser úteis como moduladores de outros recetores nucleares, tais como o recetor de glicocorticóide, o recetor de estrogénio e os recetores ativados por proliferadores peroxissomais, e como agentes terapêuticos para doenças em que os recetores nucleares desempenham um papel, tais como o cancro da mama, cancro do ovário, diabetes, doenças cardíacas e doenças relacionadas com o metabolismo. Podem igualmente ser úteis em testes, por exemplo, como padrões ou como intermediários ou pró-fármacos.
Nível 2
Os compostos do Nível 2 (ver Tabela 6) são significativamente melhores do que a bicalutamida para o tratamento do cancro da próstata, embora haja indicações de que o RD54 possa atuar como agonista. A Figura 3 mostra que os compostos RD145, RD152, RD153, RD162 e RD163 do Nível 1 e o RD161 do Nível 2 administrados a concentrações entre 125 nM e 1000 nM atuam no sentido de reduzir a atividade da luciferase nas células LNCaP-AR, enquanto as soluções controlo de DMSO e de bicalutamida exercem pouco ou nenhum efeito. A Figura 4 ilustra, por exemplo, que a concentrações de 1000 nM, os compostos RD37 e RD131 do Nível 1 causam um decréscimo maior no nível de PSA das células LNCaP-AR do que os compostos RD133, RD134 e RD138 do Nível 2. A Figura 11 apresenta o volume do tumor ao longo do tempo e pode-se ver sob tratamento com solução de bicalutamida ou veículo, os tumores continuam a crescer, enquanto sob tratamento com RD162 do Nível 1, os tumores diminuem de tamanho. A Figura 12 ilustra que a emissão de fotões associada com a atividade da luciferase permaneceu semelhante ou aumentou sob tratamento com bicalutamida relativamente ao tratamento com solução veículo, ao passo que a emissão de fotões diminuiu sob tratamento com RD162. A Figura 14 ilustra que sob tratamento com bicalutamida houve pouca ou nenhuma diminuição nos níveis de PSA, enquanto sob tratamento com RD131 e RD162 os níveis de PSA diminuíram. A Figura 15 ilustra que a CI50 para RD37, RD131 e RD162 do Nível 1 era muito inferior à CI50 da bicalutamida.
Em geral, os compostos do Nivel 2 são estruturalmente semelhantes aos compostos do Nivel 1, mas com diferentes substituintes no anel arilo direito. Os compostos do Nível 2 são vantajosos como antagonistas do AR e como agentes terapêuticos para o cancro da próstata hormono-resistente. Podem ser úteis para tratar outras doenças ou estados clínicos relacionados com os AR, tais como hiperplasia benigna da próstata, queda de cabelo e acne. Estes e outros compostos relacionados também podem ser úteis como moduladores de outros recetores nucleares, tais como o recetor de estrogénio e os recetores ativados por proliferadores peroxissomais, e como agentes terapêuticos para doenças em que os recetores nucleares desempenham um papel, como o cancro da mama, cancro de ovário, diabetes, doenças cardíacas e doenças relacionadas com o metabolismo. Podem igualmente ser úteis em testes, por exemplo, como padrões, ou como intermediários ou pró-fármacos.
Nível 3
Os compostos de Nível 3 (ver Tabela 7) foram considerados ligeiramente superiores à bicalutamida para o tratamento do cancro da próstata. RD133, RD134 e RD138 (do Nível 2) causaram uma maior redução no nível de PSA de células LNCaP-AR do que os compostos RD135 e RD137 do Nivel 3. Todos estes compostos causaram uma maior redução no nível de PSA do que a bicalutamida.
Outros compostos do Nível 3 (que não se apresentam) não eram diariltio-hidantoínas e eram comparáveis em atividade aos compostos de monoaril-hidantoína da arte prévia, nomeadamente RD2, RD4 e RD5.
Por conseguinte, os compostos de Nível 3 são úteis como antagonistas do AR e como agentes terapêuticos para o cancro da próstata hormono-resistente. Podem ser úteis para tratar outras doenças ou estados clínicos relacionados com o AR, tais como hiperplasia benigna da próstata, queda de cabelo e acne. Estes e outros compostos relacionados também podem ser úteis como moduladores de outros recetores nucleares, tais como o recetor de estrogénio e os recetores ativados por proliferadores peroxissomais, e como agentes terapêuticos para doenças em que os recetores nucleares desempenham um papel, como o cancro da mama, cancro do ovário, diabetes, doenças cardíacas e doenças relacionadas com o metabolismo. Podem igualmente ser úteis em testes, por exemplo, como padrões, ou como intermediários ou pró-fármacos.
Nível 4
Os compostos do Nível 4 (ver Tabela 8) não foram considerados melhores do que a bicalutamida para o tratamento do cancro da próstata. Os compostos RD39 e RD40 do Nível 4 e o RD37 do Nível 1, por exemplo, diferem apenas no substituinte do carbono inferior direito do anel de hidantoína. Os substituintes no anel arilo direito também podem afetar a atividade.
Alguns compostos do Nível 4 (tanto aqueles apresentados como os não apresentados) não eram compostos de diarilo (não possuíam o anel arilo direito), não eram tio-hidantoínas, não eram dissubstituídos no carbono direito inferior do anel de hidantoína, e/ou tinham substituintes que não oxigénio ou amido no carbono inferior esquerdo do anel de hidantoína. Isto fornece provas das vantagens surpreendentes das diariltio-hidantoínas que são dissubstituídas no carbono direito inferior do anel de hidantoína e que têm oxigénio ou amido no carbono esquerdo inferior do anel de hidantoína.
Por conseguinte, os compostos do Nível 4 podem ser úteis como antagonistas do AR e como agentes terapêuticos para o cancro da próstata hormono-resistente, pelo menos na medida em que são comparáveis à bicalutamida. Podem ser úteis para tratar outras doenças ou estados clínicos relacionados com os AR, tais como hiperplasia benigna da próstata, queda de cabelo e acne. Estes e outros compostos relacionados também podem ser úteis como moduladores de outros recetores nucleares, tais como o recetor de estrogénio e os recetores ativados por proliferadores peroxissomais, e como agentes terapêuticos para doenças em que os recetores nucleares desempenham um papel, como o cancro da mama, cancro de ovário, diabetes, doenças cardíacas e doenças relacionadas com o metabolismo. Podem igualmente ser úteis em testes, por exemplo, como padrões, ou como intermediários ou pró-fármacos.
Nível 5
Os compostos de Nível 5 (ver Tabela 9) eram inativos ou quase inativos e, como tal, eram piores do que a bicalutamida para o tratamento do cancro da próstata. Os substituintes no anel arilo direito são importantes para determinar a atividade.
Alguns compostos do Nível 5 (são apresentados apenas alguns) não eram compostos de diarílicos (não possuíam o anel arilo direito), não eram tio-hidantoínas, não eram dissubstituídos no carbono direito inferior do anel de hidantoína, e/ou tinham substituintes que não oxigénio ou amido no carbono inferior esquerdo do anel de hidantoína. Isso fornece provas das vantagens surpreendentes das diariltio-hidantoínas que são dissubstituídas no carbono direito inferior do anel de hidantoína e possuem oxigénio ou amido no carbono esquerdo inferior do anel de hidantoína. Em particular, o substituinte terminal de RD155, RD156 e RD158 (CTRNRxRy, em que Rx,y = H ou metilo) não é visto como contribuindo para a atividade destes compostos.
Os compostos do Nível 5 não seriam desejáveis para o tratamento do cancro da próstata ou como antagonistas do AR, embora estes e outros compostos relacionados possam ser úteis como moduladores de outros recetores nucleares, tais como o recetor de estrogénio e os recetores ativados por proliferadores peroxissomais, e como agentes terapêuticos para doenças em que os recetores nucleares desempenham um papel, como o cancro da mama, cancro do ovário, diabetes, doenças cardíacas e doenças relacionadas com o metabolismo. Podem igualmente ser úteis em testes, por exemplo, como padrões, ou como intermediários ou pró-fármacos.
Nível 6
Os compostos de Nível 6 (ver Tabela 10) eram inativos ou quase inativos e além disso eram agonistas fortes. Como tal, eram muito inferiores à bicalutamida para o tratamento do cancro da próstata. Os compostos comparativos eram muito inferiores aos compostos inventivos. Nomeadamente, o RD72 possuía uma atividade muito fraca, com um substituinte de cloro no anel arilo esquerdo, enquanto o RD7, com um trifluormetano, e o RD100, com iodo, ficaram classificados no Nível 1. Os resultados para os compostos de Nível 6 fornecem provas das vantagens surpreendentes das diariltio-hidantoínas que são dissubstituídas no carbono direito inferior do anel de hidantoína e que têm oxigénio ou amido no carbono esquerdo inferior do anel de hidantoína e com determinados substituintes no anel arilo esquerdo.
Os compostos do Nivel 6 não são desejáveis para o tratamento do cancro da próstata ou como antagonistas do AR.
Compostos que não foram classificados
Para vários compostos, não havia dados experimentais suficientes para classificá-los. Estes compostos estão apresentados na Tabela 11.
Com base nos dados e métodos da invenção, e fundamentado na avaliação de muitos compostos, incluindo alguns aqui não apresentados, podem-se fazer algumas observações sobre os compostos não classificados. Prevê-se que o composto RD1 do exemplo comparativo esteja ao Nivel 3, com os compostos RD3-RD5 dos exemplos comparativos. Prevê-se que o composto RD89 hidrólise em RD37 (Nivel 1) e, por conseguinte, deverá ter uma atividade comparável. Prevê-se que RD104 hidrólise em RD58 (Nivel 1) e, por conseguinte, deverá ter uma atividade comparável. Prevê-se que RD105 hidrólise em RD8 (Nivel 1), e que RD139 e RD140 hidrolisem em RD138 (Nivel 2), e, portanto, devem ter atividade comparável.
Em suma, foram identificados e produzidos compostos novos que apresentam provas de ser muito superiores à bicalutamida para o tratamento do cancro da próstata.
Sensibilidade da atividade anticancerigena dos compostos a diferenças estruturais
Os inventores determinaram que aquilo que parece ser uma pequena alteração na estrutura dos compostos de hidantoina pode resultar numa grande variação no desempenho dos compostos no tratamento do cancro da próstata. Por exemplo, o RD161 e o RD162 diferem apenas num único substituinte de flúor num anel arilo e o RD162 encontra-se no Nivel 1, enquanto o RD161 está no Nivel 2, ambos sendo melhor do que a bicalutamida para o tratamento do cancro da próstata, mas o RD162 sendo superior. No entanto, o RD149, que difere do RD161 somente por ter um átomo de carbono adicional entre o grupo de metilcarbamoilo e o anel arilo, não é melhor do que a bicalutamida para o tratamento do cancro da próstata e está classificado no Nivel 4. 0 efeito de RD161, RD162 e RD149 sobre a atividade da luciferase pode ser visto na Figura 24. A uma determinada concentração de composto, a atividade da luciferase após exposição a RD161 e a RD162 é inferior à atividade de luciferase após exposição a RD149. 0 composto RD9 difere do RD8 apenas por ter um grupo amino substituído por um grupo hidroxilo. No entanto, enquanto o RD8 está no Nível 1, muito superior à bicalutamida para o tratamento do cancro da próstata, o RD9 está no Nível 4, que não é superior à bicalutamida. 0 efeito de RD8 e RD9 na atividade da luciferase na linha celular 4AR pode ser visto na Figura 27. Para uma determinada dose, a atividade da luciferase após exposição a RD8 é inferior à atividade da luciferase após exposição a RD9. 0 efeito de RD8 e de RD9 na atividade da luciferase na linha celular 4AR pode ser visto na Figura 26. Para uma determinada dose, a atividade da luciferase após exposição a RD8 é inferior à atividade da luciferase após exposição a RD9. 0 efeito de RD8 e de RD9 nos niveis de PSA na linha celular LN/AR pode ser visto na Figura 25. Para uma determinada dose, o nivel de PSA após a exposição a RD8 é inferior ao nivel de PSA após a exposição a RD 9 .
Os compostos RD130 e RD131 diferem entre si apenas por um substituinte metilo na extremidade de um grupo carbamoilo e ambos os compostos estão classificados no Nivel 1, embora o RD131 seja especialmente vantajoso. 0 RD129 é igual ao RD130, exceto que um grupo metoxi é substituído por um grupo amino. No entanto, o RD129 ficou classificado no Nível 3. 0 RD128 é semelhante ao RD129, mas tem menos um carbono na cadeia de ligação do grupo éster ao anel arilo; o RD128 está classificado no Nível 3. 0 efeito de RD130, RD131, RD128 e RD129 nos níveis de PSA na linha celular LN/AR pode ser visto na Figura 28. Para uma dada concentração, o nível PSA após exposição a RD130 e RD131 é menor do que o nível de PSA após exposição a RD128 e RD129.
Os compostos RD153 e RD155 diferem entre si em que o primeiro possui um grupo metilcarbamoílo ligado a um anel arilo e um substituinte dimetilo associado ao grupo tio-hidantoína, enquanto o último tem um grupo metilamino ligado ao anel arilo direito e um substituinte ciclobutilo ligado ao grupo tio-hidantoína. Enquanto o RD153 se encontra no Nível 1, muito melhor do que a bicalutamida para o tratamento do cancro da próstata, o RD155 está no Nível 5, inativo ou quase inativo no tratamento do cancro da próstata. 0 efeito de RD153 e RD155 na atividade da luciferase na linha celular LN/AR pode ser visto na Figura 29. Para uma dada concentração, a atividade da luciferase após exposição ao RD153 é inferior à atividade da luciferase após exposição a RD15 5 .
Os compostos RD58 e RD60 diferem entre si na substituição de um tio por um grupo oxo e um substituinte dimetilo por um substituinte ciclobutilo. Enquanto o RD58 está no Nivel 1, o RD60 está no Nível 4.
Composições farmacêuticas e administração 0 composto para utilização da invenção pode ser útil como uma composição farmacêutica preparada com uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto, tal como aqui definido, e um transportador ou diluente farmaceuticamente aceitável. 0 composto para utilização da invenção pode ser formulado como composições farmacêuticas e administrado a um indivíduo com necessidade de tratamento, por exemplo, um mamífero, tal como um paciente humano, numa variedade de formas adaptadas à via de administração selecionada, por exemplo, pelas vias oral, nasal, intraperitoneal ou parentérica, pelas vias intravenosa, intramuscular, tópica ou subcutânea, ou por injeção nos tecidos.
Por conseguinte, o composto para utilização da invenção pode ser administrado sistemicamente, por exemplo, por via oral, em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável, tal como um diluente inerte ou um transportador assimilável comestível, ou por inalação ou por insuflação. Pode ser colocado em cápsulas de gelatina mole ou dura, prensado na forma de comprimidos, ou incorporado diretamente na alimentação do paciente. Para administração terapêutica oral, o composto para utilização pode ser combinado com um ou mais excipientes e usado sob a forma de comprimidos passíveis de ser ingeridos, comprimidos bucais, trociscos, cápsulas, elixires, suspensões, xaropes, bolachas e semelhantes. 0 composto para utilização pode ser combinado com um transportador inerte de pó fino e inalado ou insuflado pelo indivíduo. Estas composições e preparações devem conter pelo menos 0,1% do composto de diaril-hidantoína. A percentagem das composições e preparações pode, evidentemente, variar e pode situar-se convenientemente entre cerca de 2% e cerca de 60% do peso de uma determinada forma de dosagem unitária. A quantidade de composto para utilização em tais composições terapeuticamente úteis é tal que se obtém um nível de dosagem eficaz.
Os comprimidos, trociscos, pílulas, cápsulas e similares também podem conter o seguinte: ligantes como goma adragante, goma arábica, amido de milho ou gelatina; excipientes como fosfato dicálcico; um agente desagregante como amido de milho, fécula de batata, ácido algínico e afins; um lubrificante, como estearato de magnésio; e um edulcorante como sacarose, frutose, lactose ou aspartame, ou um aromatizante como hortelã-pimenta, óleo de Wintergreen, ou aromatizante de cereja podem ser adicionados. Quando a forma de dosagem unitária é uma cápsula, para além de materiais do tipo referido, pode conter um transportador líquido na forma de um óleo vegetal ou de um polietilenoglicol. Vários outros materiais podem estar presentes como revestimentos ou para alterar a forma física da forma de dosagem unitária sólida. Por exemplo, comprimidos, pílulas ou cápsulas podem ser revestidas com gelatina, cera, goma laca ou açúcar e assim por diante. Um xarope ou elixir pode conter o composto ativo, sacarose ou frutose como agente de edulcoração, metilparabeno e propilparabeno como conservantes, corantes e aromatizantes como sabor a cereja ou laranja. Obviamente, qualquer material utilizado na preparação de uma forma de unidade de dosagem deve ser farmaceuticamente aceitável e substancialmente não tóxico nas quantidades empregues. Além disso, o composto de diaril-hidantoína para utilização pode ser incorporado em preparações e dispositivos de libertação sustentada. Por exemplo, o composto de diaril-hidantoína para utilização pode ser incorporado em cápsulas de libertação temporizada, comprimidos de libertação temporizada e pílulas de libertação temporizada. 0 composto para utilização da invenção também pode ser administrado por via intravenosa ou intraperitoneal, por perfusão ou por injeção. As soluções do composto para utilização podem ser preparadas em água, misturando opcionalmente um tensioativo não tóxico. Dispersões também podem ser preparadas, em glicerol, polietilenoglicóis líquidos, triacetina, suas misturas e óleos. Sob condições normais de armazenamento e de utilização, estas preparações podem conter um conservante para impedir o crescimento de microorganismos.
As formas farmacêuticas de dosagem adequadas para injeção ou perfusão podem incluir soluções ou dispersões aquosas esterilizadas ou pós esterilizados compreendendo o composto de diaril-hidantoína para utilização, que são adaptados para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões esterilizadas injetáveis ou perfusíveis, opcionalmente encapsuladas em lipossomas. Em qualquer um dos casos, a forma de dosagem final deverá ser estéril, fluida e estável sob as condições de fabrico e de armazenagem. 0 liquido transportador ou veiculo pode ser um solvente ou meio de dispersão liquido que inclui, por exemplo, água, etanol, um poliol (por exemplo, glicerol, propilenoglicol, polietilenoglicóis líquidos e assim por diante) , óleos vegetais, ésteres glicerílicos não tóxicos e suas misturas adequadas. A fluidez adequada pode ser mantida, por exemplo, através da formação de lipossomas, da granulometria requerida no caso de dispersões, ou pela utilização de tensioativos. A prevenção da ação de microorganismos pode ser conseguida por diversos agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabeno, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal e assim por diante. Em muitos casos, é preferível incluir agentes isotónicos, por exemplo, açúcares, tampões ou cloreto de sódio. A absorção prolongada das composições injetáveis pode ser conseguida através de composições com agentes que retardam a absorção, por exemplo, gelatina e monoestearato de alumínio.
Soluções injetáveis esterilizadas são preparadas através da incorporação no solvente apropriado do composto de diaril-hidantoína para utilização, na quantidade necessária, com vários dos outros ingredientes enumerados acima, conforme necessário, seguido de esterilização por filtração. No caso de pós estéreis para a preparação das soluções injetáveis esterilizadas, os métodos preferidos de preparação são técnicas de secagem sob vácuo e liofilização, que produzem um pó do princípio ativo e de mais qualquer outro ingrediente desejado presente nas soluções anteriormente esterilizadas por filtração.
Para administração tópica, o composto de diaril-hidantoína para utilização pode ser aplicado na sua forma pura. No entanto, geralmente é desejável administrá-lo através da pele, na forma de composições ou formulações, em combinação com um transportador dermatologicamente aceitável, que pode ser um sólido ou um líquido.
Os transportadores sólidos úteis incluem sólidos finamente divididos, como talco, argila, celulose microcristalina, sílica, alumina e assim por diante. Outros transportadores sólidos incluem nanopartícuias ou micropartícuias poliméricas não tóxicas. Os transportadores líquidos úteis incluem água, álcoois ou glicóis ou misturas álcool/água/glicol, em que o composto de diaril-hidantoína para utilização pode ser dissolvido ou disperso em níveis eficazes, opcionalmente com o auxílio de tensioativos não tóxicos. Adjuvantes, como fragrâncias e agentes antimicrobianos adicionais, podem ser adicionados a fim de otimizar as propriedades para um determinado uso. As composições líquidas resultantes podem ser aplicadas com compressas absorventes, usadas para impregnar ligaduras e outros emplastros, ou pulverizadas sobre a área afetada por meio de pulverizadores do tipo bomba ou aerossol.
Espessantes como polímeros sintéticos, ácidos gordos, sais e ésteres de ácidos gordos, álcoois gordos, celuloses modificadas ou materiais minerais modificados também podem ser empregues com transportadores líquidos para formar pastas para espalhar, géis, pomadas, sabonetes e afins, para aplicação direta sobre a pele do utilizador.
Exemplos de composições dermatológicas úteis que podem ser utilizadas para administração do composto de diaril-hidantoína para utilização à pele são conhecidos na arte; por exemplo, ver Jacquet et al. (Patente US 4 608 392), Geria (Patente US 4 992 478), Smith et al (Patente US 4 559 157) e Wortzman (Patente US 4 820 508) .
As dosagens úteis do composto para utilização da presente invenção podem ser determinadas comparando a sua atividade in vitro e atividade in vivo em modelos animais. Métodos de extrapolação para os seres humanos de dosagens eficazes em ratos e outros animais são conhecidos na arte; por exemplo, ver Patente US 4 938 949.
Por exemplo, a concentração do composto de diaril-hidantoína para utilização numa composição líquida, tal como uma loção, pode ser de aproximadamente 0,1-25% em peso, ou seja de cerca de 0,5-10% em peso. A concentração numa composição semissólida ou sólida, na forma de gel ou pó, pode ser aproximadamente de 0,1-5% em peso, ou cerca de 0,5-2,5% em peso. A quantidade do composto para utilização da invenção necessária para o tratamento irá variar não apenas com o específico sal selecionado mas também com a via de administração, a natureza do estado clínico tratado e a idade e a condição do paciente e será, finalmente, a critério do médico ou clínico assistente.
As dosagens eficazes e as vias de administração dos agentes da invenção são convencionais. A quantidade exata (dose efetiva) do agente variará de indivíduo para indivíduo, dependendo, por exemplo, da espécie, idade, peso e estado geral ou clínico do indivíduo, gravidade ou mecanismo do distúrbio a ser tratado, o específico agente ou veículo utilizado, o método e a frequência de administração, e assim por diante. Uma dose terapeuticamente eficaz pode ser determinada empiricamente, através de processos convencionais conhecidos pelos peritos na especialidade. Ver, por exemplo, The Pharmacological Basis of Therapeutics, Goodman and Gilman, eds. , Macmillan Publishing Co., New York. Por exemplo, uma dose eficaz pode ser estimada inicialmente em ensaios de culturas celulares ou em modelos animais adequados. O modelo animal também pode ser usado para determinar os intervalos de concentração adequados e as vias de administração. Esta informação pode em seguida ser usada para determinar doses e vias de administração úteis para os seres humanos. Uma dose terapêutica também pode ser selecionada por analogia com as dosagens de agentes terapêuticos semelhantes. O modo específico de administração e o regime de dosagem será selecionado pelo médico assistente, tendo em conta as particularidades do caso (por exemplo, o indivíduo, a doença, o estado clínico envolvido, e se o tratamento é profilático). O tratamento pode envolver diariamente doses únicas ou múltiplas de compostos, durante um período de poucos dias a meses ou mesmo anos.
Em geral, no entanto, uma dose adequada será na faixa de cerca de 0,001 a cerca de 100 mg/kg, por exemplo, desde cerca de 0,01 até cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dia, tal como acima de cerca de 0,1 mg/kg, ou num intervalo de cerca de 1 a cerca de 10 mg/kg de peso corporal do destinatário por dia. Por exemplo, uma dose adequada pode ser cerca de 1 mg/kg, 10 mg/kg ou 50 mg/kg de peso corporal por dia. O composto para utilização da invenção é administrado convenientemente sob a forma de dosagem unitária; por exemplo, contendo entre 0,05 e 10 000 mg, 0,5 e 10 000 mg, 5 e 1000 mg ou cerca de 100 mg de princípio ativo por forma de dosagem unitária. O composto para utilização pode ser administrado para atingir concentrações máximas no plasma entre, por exemplo, cerca de 0,5 e aproximadamente 75 μΜ, entre cerca de 1 e 50 μΜ, entre cerca de 2 e cerca de 30 μΜ, ou entre cerca de 5 e cerca de 25 μΜ. As concentrações plasmáticas típicas desejáveis incluem no mínimo ou não superior a 0,25, 0,5, 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100 ou 200 μΜ. Por exemplo, os níveis plasmáticos podem ser entre cerca de 1 e 100 micromolar, ou entre cerca de 10 e cerca de 25 micromolar. Isto pode ser alcançado, por exemplo, através de injeção intravenosa de uma solução de 0,05 a 5% do composto para utilização, opcionalmente uma solução salina, ou administrado por via oral na forma de um bolus contendo cerca de 1-100 mg do composto de diaril-hidantoína para utilização. Níveis de sangue desejáveis podem ser mantidos por perfusão contínua para dar 0,00005-5 mg/kg de peso corporal por hora, por exemplo, pelo menos, ou não mais do que 0,00005, 0,0005, 0,005, 0,05, 0,5 ou 5 mg/kg/h. Em alternativa, estes níveis podem ser obtidos por perfusões intermitentes contendo aproximadamente 0,0002-20 mg/kg de peso corporal, por exemplo, no mínimo, ou não mais de 0,0002, 0,002, 0,02, 0,2, 2, 20 ou 50 mg de composto de diaril-hidantoína para utilização por kg de peso corporal. 0 composto para utilização da invenção pode ser convenientemente apresentado numa dose única ou em doses divididas administradas a intervalos adequados, por exemplo, duas, três, quatro ou mais sub-doses por dia. A sub-dose em si pode ser dividida, por exemplo, em várias administrações discretas livremente intervaladas; tal como várias inalações de um insuflador. 0 composto para utilização da invenção apresenta pouca ou nenhuma atividade agonista relativamente a células do cancro da próstata hormono-resistente. Uma vez que este composto é um forte inibidor do AR, pode ser usado no tratamento da hiperplasia benigna da próstata. Como o AR pertence à família de recetores nucleares, este composto pode ser para utilização no tratamento de cancro da mama ou cancro do ovário em que os recetores nucleares desempenham um papel.
As concretizações ilustradas e discutidas neste fascículo destinam-se somente a ensinar os peritos na especialidade sobre a melhor maneira conhecida pelos inventores de produzir e utilizar a invenção. Nada neste fascículo deve ser considerado como limitação ao âmbito de aplicação da presente invenção. Todos os exemplos apresentados são representativos e não limitativos.
Lisboa, 2015-05-15

Claims (4)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Composto com a fórmula
    ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para utilização num método de tratamento de um distúrbio hiperproliferativo em que o distúrbio hiperproliferativo é selecionado de entre o grupo que consiste em hiperplasia benigna da próstata, cancro da mama e cancro do ovário.
  2. 2. Composto para utilização de acordo com a reivindicação 1 em que o distúrbio hiperproliferativo é hiperplasia benigna da próstata.
  3. 3. Composto para utilização de acordo com a reivindicação 1 em que o distúrbio hiperproliferativo é cancro da mama.
  4. 4. Composto para utilização de acordo com a reivindicação 1 em que o distúrbio hiperproliferativo é cancro do ovário. Lisboa, 2015-05-15
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