MX2012009482A - Compuestos biciclicos y sus usos como inhibidores duale de c-src / jak. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a compuestos bicíclicos aromáticos sustituidos que contienen anillos de pirimidina y piridina así como también sales aceptables para uso farmacéuticos de los mismos. Los compuestos de la presente invención son útiles como inhibidores de la tirosina quinasa, con preferencia inhibidores de la familia SRC de las quinasas (SFK), en particular como inhibidores múltiples de las SFK/JAK quinasas e incluso, con preferencia, como inhibidores duales de las c-SRC/JAK quinasas, inhibiendo así la activación de STAT3 y, por lo tanto, el crecimiento anormal de los tipos celulares particulares. Notablemente, los compuestos de la presente invención son útiles para el tratamiento o inhibición de ciertas enfermedades que son el resultado de la desregulación de STAT3.

Description

COMPUESTOS BICÍCLICOS Y SUS USOS COMO INHIBIDORES DUALES DE c-SRC / .IAK CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a compuestos bicíclicos aromáticos sustituidos que contienen anillos de pirimidina y piridina así como también sales aceptables para uso farmacéuticos de los mismos . Los compuestos de la presente invención son útiles como inhibidores de la tirosina quinasa, con preferencia inhibidores de la familia SRC de las quinasas (SFK), en particular como inhibidores múltiples de las SFK/JAK quinasas e incluso, con preferencia, como inhibidores duales de las c-SRC/JAK quinasas, inhibiendo así la activación de STAT3 y, por lo tanto, el crecimiento anormal de los tipos celulares particulares . Notablemente, los compuestos de la presente invención son útiles para el tratamiento o inhibición de ciertas enfermedades que son el resultado de la desregulación de STAT3.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La inflamación y el cáncer están vinculados tanto por vías oncogénicas (intrínsecas) y ambientales (extrínsecas) (Yu et al. , Nature Reviews Cáncer 2009) . La vía intrínseca se activa por alteraciones genéticas o epigenéticas en células transformadas . Tales alteraciones incluyen aquellas que causan la sobreexpresión o la activación persistente de receptores del factor de crecimiento con actividad de la tirosina quinasa intrínseca y receptores de citoquina con tirosina quinasas de la familia de Janus quinasa (JAK) asociadas . En las mutaciones oncogénicas en miembros de la familia JAK asociados a receptores también subyacen algunos tipos de cáncer. Estos receptores, así como también las tirosina quinasas no receptoras tales como c-SRC, pueden activarse por vías extrínsecas - factores ambientales que están asociados con la inflamación por cáncer - que incluyen radiación ultravioleta (UV), carcinógenos químicos, infección, estrés y humo de cigarillos . Las tirosina quinasas actividas inducidas por vías tanto intrínsecas como extrínsicas fosforilan y activan el transductor de la señal del factor de transcripción y el activador de la transcripción 3 (STAT3 ), que a su vez forma dímeros que se translocan al núcleo, donde estos directamente regulan la expresión de una batería de genes blanco. Además de la regulación por acumulación de numerosos genes involucrados en la proliferación, superviviencia, invas ión y metástasis, STAT3 induce la expresión de muchas citoquinas, quimioquinas y otros mediadores , tales como interleuquina-6 y ciclooxigenasa 4 que están asociados con la inflamación promotora del cáncer. Lo que es más importante, los receptores de muchas de estas citoquinas , quimioquinas y mediadores es que a su vez activan STAT3 en forma adicional, formando así bucles de realimentación autocrinos y paracrinos que dan lugar a un cambio estable en el programa genético y a l a promoción de la inflamación por cáncer.

Se sugiere que STAT3 tiene un rol crucial en la inducción y mantenimiento selectivos de un microambiente inflamatorio procarcinogénico, en el inicio de la transformación maligna y durante la progresión del cáncer. La activación persistente de STAT3 media la propagación de la inflamación promotora de tumores y aumenta la proliferación de las células tumorales, la superviviencia e invasión mientras suprime la inmunidad antitumoral. Por lo tanto, STAT3 es un blanco molecular atractivo para el desarrollo de terapias contra el cáncer novedosas o para modular respuestas inmunes para mejorar terapias contra el cáncer.

Numerosos inhibidores de moléculas pequeñas , que bloquean en forma efectiva la vía de señalización de STAT3 , ya son conocidos en la técnica previa (Deng et al. , Current Cáncer Drug Targets, 2007). Estos inhibidores, desde un punto de vista estructural, se divide en cinco clases de compuestos . Estos incluyen ( 1 ) productos naturales y derivados, tales como curcumina, resveratrol y otros, (2) tirfostinas, (3) complejos que contienen platino, (4) peptidomiméticos, y (5) azaspiranas .

Asimismo, es sabido de la técnica previa que en lugar de inhibir directa y específicamente STAT3 , es posible bloquear en forma efectiva la vía de señalización de STAT3 por la inhibición de los blancos corriente arriba. De hecho, de acuerdo con lo mencionado con anterioridad, el factor de transcripción de STAT3 es un efector corriente abajo de las JAK y c-SRC quinasas y se activa por la fosforilación de tirosina sobre la tirosina 705 (Y705) por estas quinasas, que es un prerrequisito para la dimerización de STAT3 y la activación de la función del factor de transcripción de STAT3.

Así, c-SRC y JAK actúan corriente arriba del factor de transcripción STAT3, y su inhibición dará lugar al bloqueo de la vía de señalización de STAT3 en un subgrupo de tumores dependientes de STAT3. Se ha informado (Johnson et al. , Clin. Cáncer Res, 2007 y WO 2008/077062, Board of Regents, The University of Texas S ystem) que los inhibidores de c-SRC y JAK tienen efectos antitumorales sinergísticos . De hecho, c-SRC puede inhibirse en forma rápida y duradera por, por ej emplo, Dasatinib, mientras que STAT3 experimenta sólo inactivaciones transitorias . La adición de inhibidores de JAK, tales como piridona 6 o AG490, durante la incubación de Dasatinib da lugar a la inhibición sostenida de STAT3 , si bien la activación de JAK por Dasatinib no se mostró. La inhibición combinada de c-SRC y JAK dio lugar a citotoxicidad sinergística causada por un aumento de la apoptosis . Por lo tanto, con el tratamiento combinado, puede obtenerse la inhibición duradera de varias vías, tales como la vía de señal ización de STAT3 , conocidas por su importancia para la superviviencia y proliferación de células cancerígenas .

La familia SRC de quinasas (SFK) está compuesta por tirosina quinasas no receptoras con roles clave en la regulación de las vías de transducción de señales que controlan la proliferación, movilidad, adhesión y superviviencia celular. Las SFK y ciertos receptores del factor de crecimiento se sobreexpresan en varios cánceres . Halpern M. S . , England J . M. , Kopen G. C, Christou A. A. , Taylor R. L. Jr. , Endogenous c-src as a Determinant of the Tumorigenicity of src Oncogenes, Proc Nati Acad Sd U S A. 1996 93 (2) : 824-827. Haura, E. B . , Zheng, Z. , Song, L. , Cantor, A. , Bepler, G. , Activated Epidermal Growth Factor Receptor-Stat-3 S ignaling Promotes Tumor Survival In Vivo in Non-Small Cell Lung Cáncer, Clin. Cáncer Res . 2005, 1 1 (23 ): 8288-8294. La c-SRC j uega un rol en las respuestas a la hipoxia regional, nutrientes limitados, y efectos celulares internos para autodestruir. La expresión y/o actividad aberrante de la c-SRC se observan en numerosos tumores sólidos y líquidos, y juegan roles críticos en la afectación de la quimioresistencia. Puede demostrarse que casi cualquier factor de crecimiento que deriva en la activación de tirosina quinasas receptoras activan la c-SRC, convirtiendo la c-SRC en un blanco muy attractivo para la terapia contra el cáncer. Dado que la activación y, tal vez, la sobreexpresión de c-SRC se ha implicado en cánceres, osteoporosis, apoplej ías, infartos de miocardios, y derrames vasculares, entre otros, un inhibidor de moléculas pequeñas de c-SRC puede ser beneficioso para el tratamiento de numerosos estados patológicos . Sin embargo, se ha demostrado que la inhibición de SFK por el uso de un inhibidor de la tirosina quinasa da lugar a citotoxicidad, detenimiento del ciclo celular, y apoptosis en carcinomas escamosos de cabeza y cuello y en líneas celulares de cáncer de pulmón de células no pequeñas . Johnson, F. M., Saigal, B . , Talpaz, M. , and Dónate, N. J., Dasatinib (BMS-354825) Tyrosine Kinase Inhibitor Suppresses Invasión and Induces Cell Cycle Arrest and Apoptosis of Head and Neck Squamous Cell Carcinoma and Non-small Cell Lung Cáncer Cells, Clin Cáncer Res, 1 1 : 6924-6932, 2005. En carcinomas escamosos de cabeza y cuello y en líneas celulares de cáncer de pulmón de células no pequeñas, Dasatinib da lugar a citotoxicidad, detenimiento del ciclo celular, y apoptosis. Sin embargo, a pesar de la inhibición duradera de SFK y la inhibición inicial de STAT3 , STAT3 no se inhibe en forma duradera.

Las Janus quinasas (JAK) son quinasas celulares y consisten en cuatro miembros - JAK 1 , JAK2, JAK3 y TYK2. Las JAK pueden jugar un rol crucial en la regulación del comportamiento celular inducido por un número de citoquinas de citoquinas y son componentes cruciales de diversas vías de transducción de señales que gobiernan la supervivencia, proliferación, diferenciación y apoptosis celular. La sobreactivación de JAK quinasas se ha implicado en tumorigénesis . En 2005 , se identificó una mutación recurrente en JAK2 (JAK2V6I7F) que deriva en una JAK2 constitutivamente activa en un gran número de pacientes con trastornos mieloproliferativos, que incluyen policitemia vera, trombocitemia esencial y mielofibrosis primaria.

Se han informado numerosos inhibidores selectivos de las quinasas de la familia SRC, tales como SU6656, Dasatinib, WO 99/61444 (Warner-Lambert Company) o WO 2007/088014 (F. Hoffmann La Roche AG), e inhibidores selectivos de JAK, tales como piridona 6, AG490 o los revelados en WO 2009/054941 (Merck & Co., Inc), WO 2009/029998 (Cytopia Research PTY LTD) o WO/2008/ 157208 (Incyte Corporation) . Las SFK también median vías de crecimiento de STAT en varios cánceres . Xi, S . , Zhang, Q. , Dyer, K. F. , Lerner, E. C, Smithgall, T. E., Gooding, W. E., Kamens , J. , and Grandis, J. R. , Src kinases Medíate STAT Growth Pathways in Squamous Cell Carcinoma of the Head and Neck, J B iol Chem, 278 : 3 1574-3 1583 , 2003. Por lo tanto, existe una necesidad importante por composiciones farmacéuticas y/o métodos de tratamiento para cáncer que inhibirán SFK y STAT.

Sin embargo, existe una necesidad adicional por desarrollar un inhibidor de quinasas objetivos múltiples . Un compuesto único que inhibe una combinación de numerosos blancos, tales como SFK y JAK, ofrece la ventaj a de inhibir simultáneamente numerosas vías de transducción de señales clave, interfiriendo así con numerosos procesos oncogénicos, mientras facilita el tratamiento y aumenta el confort de los pacientes . Por lo tanto, sería deseable generar moléculas inhibitorias de quinasas de moléculas pequeñas capaces de inhibir simultáneamente SFK (en particular c-SRC) y JAK.

Por la combinación de una actividad inhibitoria dual, tal como SFK (en particular c-SRC) y JAK, en una molécula simple, la ventaja reside en (i) la reducción de los riesgos relacionados con la toxicidad fuera del blanco encontrada cuando se administran dos inhibidores diferentes de quinasa dirigidos a SFK (en particular c-SRC) y JAK, (ii) la reducción de los costos de tratamiento, (iii) el aumento de la conformidad de los pacientes, y (iv) el bloqueo simultáneo de vías paralelas de activación de la vía STAT3 que derivará en un mejor respuesta antitumoral. Además, dado que el estado de la activación de STAT3 puede monitorearse a través de tipos tumorales, podría utilizarse un inhibidor de quinasas múltiple dirigido a SFK (en particular c-SRC) y JA en varios tipos de enfermedades con base en el estado de STAT3 en tales tumores.

Por consiguiente, la presente invención apunta a proporcionar compuestos que inhiban simultáneamente numerosas vías de transducción de señales clave en especial dirigidas hacia el estado de activación de STAT3. Tales compuestos tiene la ventaj a inesperada de presentar cualquiera de: -una inhibición para el bloqueo eficiente de STAT3 luego de la inhibición de c-Src y JAK2; -una inhibición de la fosforilación de STAT3 por ensayo in-cell Western, con preferencia con un IC50 < 500 nM; -en un modelo de xenoinj erto establecido por el uso de A43 1 y A549 (líneas celulares STAT3 positivas) una inhibición del crecimiento (>60%) de tumores establecidos en un dosis inferior a MTD con respuesta a dosis clara (con la dosis más elevada cercana a MTD) y una inhibición de la forforilación de STAT3 en tumores .

Los compuestos de la invención representan compuestos que muestran un buen compromiso particular e inesperado entre estos 3 criterios .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Este objetivo ha sido logrado por los Solicitantes, quienes inesperadamente generaron moléculas pequeñas inhibitorias novedosas de quinasas de c-SRC, JAK- 1 , JAK-2.

La presente invención proporciona compuestos que afectan la vía de STAT3. Los compuestos de la invención son útiles como composiciones farmacéuticas, por ejemplo donde la modulación de la vía de STAT3 se indica por el tratamiento de varias enfermedades humanas, tales como cáncer y/o enfermedades autoinmunes.

La presente invención proporciona un compuesto de la fórmula (I) que tiene la estructura (I) donde R l es H, arilo, arilo sustituido, alquilo, alquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterociclilo, heterociclilo sustituido, heterociclilalquilo o heterociclilalquilo sustituido, X es CH2 o C=0 R2 es H, alquilo (C i -C6), halógeno, CF3, u O-alquilo (C i -C6) Y es -NHCO-, -CONH-, -NHS02-, -NH-, -NCH3-CO-, -NHCH2-, O, -NHCONH- o -NHCOCH2- R3 es alquilo, alquilo sustituido, arilo, o arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido o heterocicloalquilo o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.

Con preferencia, la presente invención proporciona un compuesto de la fórmula (II) que tiene la estructura (II) donde R l es hidrógeno, alquilo (C 1 -C4) , fenilo, fenilo sustituido, piridina, o piridina sustituida, con preferencia R l es fenilo sustituido o piridina sustituida, X es CH2 o C=0 R2 es H, alquilo (C J - C Ó), halógeno, u O-alquilo (C i -C6), con preferencia R2 es H, CH3, Cl o F R3 es alquilo (C i -C6), cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heterocicloalquilo, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, y donde los sustituyentes se seleccionan del grupo que comprende alquilo C i -C4 lineal o ramificado, alquilo C 1 - C4 sustituido con halo o nitrilo, -O-alquilo (C i -C4), halógeno; o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.

Con preferencia, R3 se selecciona del grupo que consiste en: fenilo sustituido, donde los sustituyentes se seleccionan del grupo que comprende Cl, F, Br, CF3 y CH3.

La presente invención también abarca los compuestos de la invención para uso en terapia y para uso en un método para tratar enfermedades asociadas con la activación de la vía STAT3 , a través de la inhibición de obj etivos múltiples de c-SRC y JAK2.

Con preferencia, las enfermedades asociadas con la activación de la vía STAT3 son cáncer, enfermedades autoinmunes, enfermedades de implicancia ósea y enfermedades hematológicas.

Un obj etivo adicional de la presente invención es proporcionar una composición farmacéutica que comprenda los compuestos de la invención y al menos un excipiente, vehículo o diluyente aceptable para uso farmacéutico.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 muestra la actividad de inhibición de los compuestos de la invención en comparación con Taxol®.

La Figura 2 muestra la actividad de inhibición de los compuestos de la invención en comparación con Taxol®.

La Figura 3 muestra la inhibición del crecimiento tumoral de los compuestos de la invención en comparación con Erlotinib .

La Figura 4 muestra la inhibición de STAT fosforilada (pSTAT) por Tiros ina 705 en tumores de los compuestos de la invención.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente tienen el mismo significado comúnmente comprendido por aquellos con experiencia en la técnica a la que pertenece el contenido de la presente. De acuerdo con lo utilizado en la presente, las siguientes definiciones se ofrecen para facilitar la compresión de la presente invención. En caso de conflicto, primará la presente memoria descriptiva, que incluye definiciones.

El término "comprende" se utiliza en general en el sentido de inclusión, es decir para significar que se permite la presencia de una o más características o componentes .

De acuerdo con lo utilizado en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones, la forma singular "un", "una" y "el/la" incluyen referencias plurales a menos que el contexto indique claramente lo contrario.

El término "alquilo" se refiere a grupos alifáticos saturados, que incluyen grupos alquilo de cadena recta, grupos alquilo de cadena ramificada, grupos cicloalquilo (alicíclicos), grupos cicloalquilo sustituidos con alquilo, y grupos alquilo sustituidos con cicloalquilo. En ciertas realizaciones, un alquilo de cadena recta o ramificada tiene aproximadamente 30 o menos átomos de carbono en su estructura (por ej . , C i -C30 para cadena recta, C3-C3o para cadena ramificada), y alternativamente, aproximadamente 20 o menos, por ej . , de 1 a 6 carbonos .

Asimismo, "cicloalquilo" se refiere a un carbociclo saturado o parcialmente saturado, monocíclico o fundido o espiro policíclico, que con preferencia contiene de 3 a 10 carbonos por anillo, tales como ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y similares, a menos que se especifique lo contrario. Éste incluye sistemas monocíclicos tales como ciclopropilo y ciclohexilo, sistemas bicíclicos tales como decalina, y sistemas policíclicos tales como adamantano. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puenteado.

El término "alquilos sustituidos " se refiere a restos de alquilo que tiene sustituyentes que reemplazan un hidrógeno sobre uno o más carbonos de la estructura de hidrocarbono. Tales sustituyentes pueden incluir, por ej emplo, un hidroxilo, un carbonilo (tal como un carboxilo, un alcoxicarbonilo, un formilo, o un acilo), un tiocarbonilo (tal como un tioéster, un tioacetato, o un tioformato), un alcoxilo, un fosforilo, un fosfonato, un fosfinato, un amino, un amido, una amidina, una imina, un ciano, un nitro, un azido, un sulfhidrilo, un alquiltio, un sulfato, un sulfonato, un sulfamoilo, un sulfonamido, un sulfonilo, un heterociclilo, un aralquilo, o un resto aromático o heteroaromático. Aquellos con experiencia en la técnica comprenderán que los restos sustituidos sobre la cadena de hidrocarbono pueden estar sustituidos en ellos mismos, de ser adecuado. Por ej emplo, los sustituyentes de un alquilo sustituido pueden incluir formas sustituidas y no sustituidas de grupos amino, azido, imino, amido, fosforilo (que incluye fosfonato y fosfinato), sulfonilo (que incluye sulfato, sulfonamido, sulfamoilo y sulfonato), y sililo, así como también éteres, alquiltios, carbonilos (que incluyen cetonas, aldehidos, carboxilatos, y ésteres), -CN y similares. A continuación, se describen alquilos sustituidos representativos. Los cicloalquilos pueden además estar sustituidos con alquilos, alquenilos, alcoxis, alquiltios, aminoalquilos, alquilos sustituidos con carbonilo, -CN, y similares .

El término "heterocicloalquilo" o "heterociclilo" de acuerdo con lo utilizado en la presente, se refiere a un sistema anular de 3 a 10 miembros no aromático, parcialmente no saturado o completamente saturado, que incluye anillos simples de 3 a 8 átomos de tamaño y sistemas anulares bi o tricíclicos que pueden incluir anillos arilo o heteroarilo aromáticos de seis miembros fundidos a un anillo no aromático. Estos anillos heterocicloalquilo incluyen aquellos que tienen de uno a tres heteroátomos seleccionados en forma independiente de oxígeno, azufre y nitrógeno, donde los heteroátomos de nitrógeno y azufre puede opcionalmente estar oxidado y el heteroátomo de nitrógeno puede opcionalmente estar cuaternizado. El anillo heterocíclico ring puede estar sustituido en una o más posiciones anulares con sustituyentes tales como alquilo, carbonilo, halógeno, alcoxi, hidroxialquilo y similares . Los heterociclos representativos incluyen, pero sin limitación, pirrolidinilo, pirazolinilo, pirazol idinilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, morfolinilo, tiazolidinilo, isotiazolidinilo, y tetrahidrofurilo. El grupo puede ser un grupo terminal o un grupo puenteado.

El término "heteroátomo" se refiere a un átomo de cualquier elemento que no sea carbono o hidrógeno. Los heteroátomos ilustrativos incluyen boro, nitrógeno, oxígeno, fósforo, azufre y selenio.

El término "aralquilo" se refiere a un grupo al quilo sustituido con un grupo arilo (por ej . , un grupo aromático o heteroaromático).

Los términos "alquenilo" y "alquinilo" se refieren a grupos alifáticos no saturados análogos en longitud y sustitución posible a los alquilos descriptos con anterioridad, pero que pueden contener al menos un enlace doble o triple, respectivamente. El término "alquileno" se refiere a un radical orgánico formado a partir de un hidrocarbono alifático no saturado; "alquenileno" denota una cadena de carbono acíclico que incluye un enlace doble carbono-a-carbono.

El término "nitro" se refiere a -N02.

El término "halógeno" representa cloro, fluoro, bromo o yodo.

El término "sulfhidrilo" se refiere a -SH.

El término "hidroxilo" significa -OH.

El término "sulfonilo " se refiere a - S02.

Los términos "amina" y "amino" se refieren a aminas no sustituidas y sustituidas (-NH2). La amina sustituida puede estar sustituida en una o ambas posiciones de hidrógeno con, por ejemplo, un alquilo, un alquenilo, un arilo, un cicloalquilo , un cicloalquenilo, o un heterociclo . Así, el término "alquilamina" incluye un grupo amino, de acuerdo con lo definido con anterioridad, que tiene un alquilo sustituido o no sustituido unido al mismo.

El término "amido " se refiere a un carbonilo sustituido con amino (-CONH2-), donde el resto de amina puede estar sustituido en una o ambas posiciones de hidrógeno con, por ej emplo, un alquilo, un hidroxialquilo, un alquenilo, un arilo, un cicloalquilo, un cicloalquenilo, un heterocicloalquilalquilo o un heterociclo.

El término "acilamino" puede estar representado por la fórmula general : donde una o ambas posiciones de hidrógeno pueden estar sustituidas con, por ejemplo, un alquilo, un alquenilo, un arilo, un cicloalquilo, un cicloalquenilo, o un heterociclo.

El término "alquiltio " se refiere a un grupo alquilo, de acuerdo con lo definido con anterioridad, que tiene un radical de azufre unido al mismo. En ciertas realizaciones , el resto de "alquiltio " se representa por uno de -S-alquilo, -S-alquenilo, o -S-alquiniío. Los grupos alquiltio representativos incluyen metiltio, etiltio, y similares .

El término "carbonilo" se refiere a la fórmula general: donde el átomo de hidrógeno puede estar sustituido con, por ej emplo, un alquilo, un alquenilo, un arilo, un cicloalquilo, un cicloalquenilo, o un heterociclo.

El término "arilo" de acuerdo con lo utilizado en la presente se refiere a un sistema anular aromático mono, bi, u otra forma multicarbocíclica. El anillo aromático puede estar sustituido en una o más posiciones anulares con sustituyentes tales como los descriptos con anterioridad, por ejemplo, halógeno, azida, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, hidroxilo, alcoxilo, amino, nitro, sulfhidrilo, imino, amido, fosfonato, fosfinato, carbonilo, carboxilo, sililo, éter, alquiltio, sulfonilo, alquilsulfonilo, sulfonamido, cicloalquil sulfonamido, cetona, aldehido, éster, heterociclilo, heterociclil carbonilo, heterociclil alcoxi, heterocicloalquilalquilo, restos aromáticos o heteroaromáticos , -CF3 , -CN, o similares. El término "arilo" también incluye sistemas anulares policíclicos que tienen dos o más anillos cíclicos donde dos o más carbonos son comunes a dos anillos contiguos (los anillos son "anillos fundidos ") donde al menos uno de los anillos es aromático, por ej . , los otros anillos cíclicos pueden ser cicloalquilos, heterocicloalquilos , cicloalquenilos, cicloalquinilos, y/o arilos . Los grupos arilo representativos incluyen, pero sin limitación, fenilo, tolilo, antracenilo, fluorenilo, indenilo, azulenilo, y naftilo, así como también restos carbocíclicos o heterocíclicos benzofusionados tales como 5 ,6,7,8-tetrahidronaftilo, benzo[ l ,3]dioxolilo, benzo[ l ,4] dioxínilo.

El término "heteroarilo" se refiere a un sistema anular aromático de 5 - 15 miembros mono, bi, u otra forma multicíclica, que contiene uno o más heteroátomos, por ej emplo uno a cuatro heteroátomos, tales como nitrógeno, oxígeno, y azufre. Los heteroarilos también pueden fusionarse a anillos no aromáticos. El anillo heteroarilo puede estar sustituido en una o más posiciones con sustituyentes tales como los descriptos con anterioridad, como por ej emplo, halógeno, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, hidroxilo, amino, nitro, sulfhidrilo, imino, amido, fosfonato, fosfinato, carbonilo, carboxilo, sililo, éter, alquiltio, sulfonilo, cetona, aldehido, éster, un heterociclilo, un resto aromático o heteroaromático, -CF3, -CN, o similares. Los ej emplos ilustrativos de grupos heteroarilo incluyen, pero sin limitación, acridinilo, bencimidazolilo, benzofurilo, benzotiazolilo, benzotienilo, benzoxazolilo, carbazolilo, carbolinilo, cinolinilo, furazanilo, furilo, imidazolilo, indazolilo, indolizinilo, indolilo, isobenzofurilo, isoindolilo, isoquinolinilo, isotiazolilo, isoxazolilo, naftiridinilo, oxadiazolilo, oxazolilo, fenantridinilo, fenantrolinilo, fenarsazinilo, fenazinilo, fenotiazinilo, fenoxazinilo, ftalazinilo, pteridinilo, purinilo, pirazinilo, pirazolilo, pirazilo, piridazinilo, piridinilo, pirimidililo, pirimidilo, pirrolilo, quinolinilo, quinolizinilo, quinoxalinilo, quinoxaloilo, quinazolinilo, tetrazolilo, tiadiazolilo, tiantrenilo, tiazolilo, tienilo, tiofenilo, triazinilo, ( 1 ,2,3 ,)- y (l,2,4)-triazolilo, y similares . Los grupos heteroarilo representativos incluyen, pero sin limitación, un anillo aromático monocíclico, donde el anillo comprende 2 a 5 átomos de carbono y 1 a 3 heteroátomos .

El término "carbociclo" es reconocido en la técnica y se refiere a un anillo aromático o no aromático donde cada átomo del anillo es carbono.

El término "cicloalquilalquilo" se refiere a un radical que contiene un anillo cíclico que tiene 3 a aproximadamente 8 átomos de carbono directamente unidos a un grupo alquilo. El grupo cicloalquilalquilo puede estar unido a la estructura principal en cualquier átomo de carbono en el grupo alquilo que resulte en la creación de una estructura estable. Los ejemplos no limitantes de tales grupos incluyen ciclopropilmetilo, ciclobutiletilo y ciclopentiletilo.

El término "alcoxi" se refiere a un radical hidrocarbonado alifático saturado de cadena recta o ramificada enlazado a un átomo de oxígeno que está unido a una estructura nuclear. Los ej emplos de grupos alcoxi incluyen, pero sin limitación, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, isobutoxi, ter-butoxi, pentoxi, 3 -metil butoxi y similares .

El término "haloalquilo" y "haloalcoxi" significa alquilo o alcoxi, según el caso, sustituido con uno o más átomos de halógeno, donde los grupos alquilo o alcoxi son lo definido con anterioridad. El término "halo" se utiliza en la presente en forma intercambiable con el término "halógeno " para significar F, Cl, Br o I. Los ej emplos de "haloalquilo" incluyen, pero sin limitación, trifluorometilo, difluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, pentafluoroetilo, pentacloroetilo, 4,4,4-trifluorobutilo, 4,4-difluorociclohexilo, clorometilo, diclorometilo, triclorometilo, 1 -bromoetilo y similares. Los ejemplos de "haloalcoxi" incluyen, pero sin limitación, fluorometoxi, difluorometoxi, trifluorometoxi, 2,2,2-trifluoroetoxi, pentafluoroetoxi, pentacloroetoxi , clorometoxi, diclorometoxi, triclorometoxi, 1 -bromoetoxi y similares.

El término "heterociclilcarbonilo" o "heterociclilalcoxi" s ignifica carbonilo o alcoxi, según el caso, unido a un grupo heterociclilo, donde los grupos alcoxi y heterociclilo son lo definido con anterioridad.

El término "heterociclilalquilo" o "heterocicloal quilalquilo" se refiere a un radical anular heterocíclico directamente enlazado a un grupo alquilo. El radical heterociclilo o heterocicloalquilo definido con anterioridad puede estar unido a la estructura principal en cualquier átomo de carbono en el grupo alquilo que resulte en la creación de una estructura estable.

A menos que se especifique lo contrario, el término "sustituido" de acuerdo con lo utilizado en la presente se refiere a la sustitución con uno o más o cualquier combinación de los siguientes sustituyentes : hidroxi, halógeno, carboxilo, ciano, nitro, oxo (=0), tio (=S), alquilo sustituido o no sustituido, haloalquilo sustituido o no sustituido, alcoxi sustituido o no sustituido, haloalcoxi sustituido o no sustituido, alquenilo sustituido o no sustituido, alquinilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, arilalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquenilalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquenilo sustituido o no sustituido, amino sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, anillo heterociclilalquilo sustituido o no sustituido, heteroarilalquilo sustituido o no sustituido, anillo heterocíclico sustituido o no sustituido, guanida sustituida o no sustituida.

Los términos orto, meta y para se refieren a bencenos 1 ,2-, 1 ,3-y 1 ,4-disustituidos, respectivamente. Por ejemplo, los nombres 1 ,2-dimetilbenceno y orto-dimetilbenceno son sinónimos.

La presente invención proporciona un compuesto de la fórmula (I) que tiene la estructura (I) donde R l es H, arilo, arilo sustituido, alquilo, alquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterociclilo, heterociclilo sustituido, heterociclilalquilo o heterociclilalquilo sustituido, X es CH2 o C=0 R2 es H, alquilo (d -C6), halógeno, CF3, u O-alquilo (C i -C6) Y es -NHCO-, -CONH-, -NHS02 , -NH-, -NCH3-CO-, -NHCH2-, O, -NHCONH- o -NHCOCH2- R3 es alquilo, alquilo sustituido, arilo, o arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido o heterocicloalquilo; o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.

Con preferencia, Y es -NHCO- .

De acuerdo con una realización particular, la invención proporciona un compuesto de la fórmula (II) que tiene la estructura (II) donde R l es hidrógeno, alquilo (C 1 -C4) , fenilo, fenilo sustituido, piridina, o piridina sustituida, X es CH2 o C=0 R2 es H, alquilo (C i -C6), halógeno, u O-alquilo (C i -C ), R3 es alquilo (C i -C6), cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heterocicloalquilo, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, y donde los sustituyentes se seleccionan del grupo que comprende alquilo C | -C4 lineal o ramificado, alquilo C i -C sustituido con halo o nitrilo, -O-alquilo (C i -C4), halógeno. o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.

Con preferencia, R3 se selecciona del grupo que consiste en Con preferencia, R l es fenilo sustituido o piridina sustituida, Con preferencia, X es CH2 o C=0 Con preferencia, R2 es H, CH3, Cl o F Con más preferencia, R3 se selecciona del grupo que cons iste en: fenilo sustituido, donde los sustituyentes se seleccionan del grupo que comprende Cl, F, Br, CF3 y CH3.

Con más preferencia, R l se selecciona del grupo que consiste en: Con la mayor preferencia, R3 se selecciona del grupo que consiste en: Con preferencia, la presente invención comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en: N-(4-Metil-3-{ 2-[4-(4-metil-piperazin-l-carbonil)-fenilamino]-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il }-fenil)-3-trifluorometil-benzamida N-(4-Metil-3- {2-[4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino]-5-oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il }-fenil)-3-trifluorometil-benzamida 5-{6-[2-Metil-5-(3-trifluorometil-benzoilamino)-fenil]-ciclopropilamida del ácido 5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-ilamino}-piridin-2-carboxílico N- { 3-[2-(4-Ciclopropilsulfamoil-fenilamino)-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il]-4-metil-fenil}-3-trifluorometil-benzamida N-(4-Cloro-3-{2-[4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino]-5-oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il}-fenil)-3-trifluorometil-benzamida {4-cloro-3-[2-(4-metilcarbamoil-fenilamino)-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il]-fenil }-amida del ácido 4-trifluorometil-piridin-2-carboxílico 4,4,4-Trifluoro-3-metil-N-[4-metil-3-(2-{4-[2-(4-metil-piperazin-l-il)-etoxi]-fenilamino}-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il)-fenil]-butiramida l-Ciclopentil-3-(4-metil-3-{2-[4-(2-pirrolidin-l-il-etoxi)-fenilamino]-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il }-fenil)-urea N- (4-Metil-3-{ 5-0X0-2- [4-(2-pirrolidin- l-il-etoxi)-f enilamino] -7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il }-fenil)-3-trifluorometil-benzamida N- {4-Cloro-3-[2-(4-(ciclopropilcarbamoilmetoxi)fenilamino)-5-oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il]-fenil }-3-trifluorometil-benzamida N-(4-Cloro-3-{ 2-[3-metil-4-(4-metil-piperazin-l-il)-f enilamino] -5 -oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4, 3 -d]pirimidin-6-il } -fenil)-3-trifluorometil-benzamida 3-Bromo-N-(4-metil-3 - { 2-[4-(4-metil-piperazin- 1 - i 1 ) -fenilamino]-5-oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il }-fenil)-benzamida N-(4-Cloro-3- {2-[4-(4-metil-piperazin-l-ilmetil)-fenilamino]-5-o o-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il}-fenil)-3-tGifluorometil-benzamida o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.

De acuerdo con otra realización particular, la presente invención proporciona un compuesto seleccionado del grupo que consiste en: N-(4-Metil-3-{2-[4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino]-5-oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il}-fenil)-3-trifluorometil-benzamida 5-{ 6-[2-Metil-5-(3-trifluorometil-benzoilamino)-fenil]-ciclopropilamida del ácido 5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-ilamino }-piridin-2-carboxílico {4-cloro-3-[2-(4-metilcarbamoil-fenilamino)-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il]-fenil }-amida del ácido 4-trifluorometil-piridine-2-carboxílico o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.

De acuerdo con otra realización particular, la presente invención proporciona un compuesto seleccionado del grupo que consiste en: N-(4-Cloro-3-{ 2-[3-metil-4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino]-5-oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il }-fenil)-3-trifluorometil-benzamida N- {4-Cloro-3-[2-(4 (ciclopropilcarbamoilmeto i)fenilamino)-5-oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il]-fenil } - 3-trifluorometil-benzamida o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.

Los ejemplos adicionales de los compuestos abarcados por la presente invención incluyen los compuestos de la Tabla 1. La última columna representa el número de ejemplo (Ej) utilizado para la preparación de cada compuesto que aparece en la siguiente tabla.

Tabla 1 10 15 20 25 1H RMN (300 Hz, CDCI3) d 6-[5-(lsoquinolin-1- 8.99 (S, 1 H), 8.12-6.82 (m, ilamino)-2-metil- 15H), 4.12-3.66 (m, 2H)P 3.42- fenil]-2-[4-(4-metil- 104 3.00 (m, 6H), 2.75-2.48 (m, piperazin-1-il)- 11 4H), 2.35 (S, 3H), 2.2 (s, 3H) fenilamino]-7,8- E m/z 571.2 (M+1) dihidro-6H- pirido[4,3- d)pirimidin-5-ona 1H RMN (300 MHz, CDCI3) d N-(4-Metil-3-{2-[4- 9.0 (s, 1 H), 8.1 (s, 1 H), 7.6- (2-pirrolidin-1-il- 105 7.4 (m, 3H), 7.15-7.05 (d, 1 H), etoxi)-fenilamino]- 7.0-6.85 (m, 5H), 4.20-4.05 7,8-dihidro-5H- (m, 2H), 4.0 (s, 2H), 3.8 (s, pirido[4,3- 2H), 3.30-3.15 (m, 2H), 3.00- d]pirimidin-6-il}- 2.85 (m, 4H), 2.75 (s, 3H), fenil)-2-(2-metil- 2.72-2.60 (br s, 4H), 2.25 (s, tiazol-4-il)- 3H), 1.85-1.75 (br s, 4H) acetamida EM m/z 584.1 (M+1 ) 1H RMN (300 MHz, CDCI3) d (4-Metil-3-{2-[4-(2- 8.12 (s, 1 H), 7.8 (S, 1 H), 7.60- pirrolidin-1 -il-etoxi)- 7.42 (m, 5H), 7.2 (d, 1H), 7.1 fenilamino]-7,8- 106 (d, 1 H), 6.96-6.84 (m, 3H), dihidro-5H- 4.15-3.95 (m, 4H), 3.26 (t, pirido[4,3- 2H), 3.05-2.85 (m, 4H), 2.7- d]pirimidin-6-il}- 2.6 (m, 4H), 2.3 (s, 3H). 2.0- fenil)-amida del 1.65 (m, 4H) ácido 5- EM m/z 622.8 (M+1) trí luorometil- tioféno-2- carboxílico 25 De acuerdo con la presente invención, se producen sales aceptables para uso farmacéutico a partir de compuestos acídicos inorgánicos u orgánicos , o compuestos alcalinos inorgánicos u orgánicos . De acuerdo con lo utilizado en la presente, la frase "sal aceptable para uso farmacéutico" se refiere a una sal que retiene la efectividad biológica de los ácidos y bases libres de un compuesto especificado y que no es indeseable biológicamente o por otro motivo.

Una sal deseada puede prepararse por cualquier método adecuado conocido en la técnica, que incluye el tratamiento de la base libre con un ácido inorgánico, tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, y similares , o con un ácido orgánico, tal como ácido fórmico, ácido acético, ácido maleico, ácido succínico, ácido mandélico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido malónico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido glicólico, ácido salicílico; un ácido piranosidilo, tal como ácido glucurónico o ácido galacturónico; un ácido alfa-hidroxi, tal como ácido cítrico o ácido tartárico; un aminoácido, tal como ácido aspártico o ácido glutámico; un ácido aromático, tal como ácido benzoico o ácido cinnámico ; un ácido sulfónico, tal como ácido metansulfónico, ácido p-toluensulfónico o ácido etansulfónico; o similares.

En general, las sales se preparan por la reacción de la base libre con cantidades estoiquiométricas o con un exceso de la sal deseada que forma un ácido inorgánico u orgánico en un solvente adecuado o varias combinaciones de solventes . Por ejemplo, la base libre puede disolverse en una solución acuosa mezclada del ácido adecuado y la sal recuperada por técnicas estándares, por ej emplo, por evaporación de la solución. En forma alternativa, la base libre puede cargarse en un solvente orgánico tal como un alcanol inferior, éteres simétricos o asimétricos que contienen 2 a 10 átomos de carbono, un éster de alquilo, o mezclas de los mismos, y similares, y después se trata con el ácido adecuado para formar la sal correspondiente. La sal se recupera por técnicas de recuperación estándares, por ejemplo, por filtración de la sal deseada de la mezcla, o puede precipitarse por la adición de un solvente en el que la sal sea insoluble y del que pueda recuperarse.

Los ejemplos de solventes inorgánicos y orgánicos para llevar a cabo las varias reacciones incluyen cualquier solvente inorgánico u orgánico que no afecte adversamente los reactivos o el producto resultante, que incluye solventes halogenados tales como cloruro de metileno, cloroformo, solventes de éter tales como dietiléter, y otros solventes tales como tetrahidrofurano, dioxano, diglima, ciclooctano, benceno o tolueno, heptano, ciclohexano, solventes hidrocarbonados alifáticos así como también cicloalifáticos y aromáticos, agua, soluciones acuosas acidificadas , soluciones orgánicas e inorgánicas mezcladas, acetato de etilo, acetato de propilo y mezclas de los mismos .

También se abarcan en la presente invención sales formadas a partir de profármacos acídicos, tales como fosfatos, y compuestos alcalinos inorgánicos u orgánicos . Los cationes inorgánicos preferidos comprendidos en las sales son litio, sodio, potasio, rubidio, amonio, calcio, magnesio, zinc y manganeso. La producción de sales de fosfato se describe en, por ej . , G.R. Pettit et al. Anti- Cancer Drug Design 16 (2001 ) 185- 193.

Las sales de la presente invención también incluyen las formadas a partir de profármacos acídicos y aminas orgánicas , que incluyen, pero sin limitación, imidazol y morfolina. También pueden utilizarse sales alcalinas de aminoácidos. El término "aminoácidos " designa, de acuerdo con la invención, en particular los [alfa]- aminoácidos de aparición natural, pero además también incluye sus homólogos, isómeros y derivados . Pueden mencionarse enantiómeros como un ej emplo de isómeros. Los derivados pueden ser, por ej emplo, aminoácidos proporcionados con grupos de protección. Son aminoácidos alcalinos preferidos : arginina, ornitina, ácido diaminobutírico, lisina o hidroxi lisina y, en especial, L-arginina, L-lisina o L-hidroxi lisina; un dipéptido alcalino o un derivado de aminoácido alcalino aceptable para uso farmacéutico.

Los compuestos de la presente invención contienen al menos un centro quiral y, por lo tanto, pueden existir en diferentes formas enantioméricas . S i bien en particular los compuestos preferidos con enantioméricamente puros, se pretende el alcance de la presente invención cubra ambos enantiómeros per se, así como también sus mezclas en cualquier proporción, tal como mezclas racémicas .

También pueden obtenerse compuestos enantioméricamente puros de la presente invención a partir de sus racematos por cristalización de sus sales de adición con ácidos quirales (D.L. Minor et al. J . Med. Chem. 37 ( 1994) 4317-4328 ; Patente los Estados Unidos 4349472), o, en forma alternativa, puede aislarse por HPLC preparativa por el uso de fases quirales comercialmente disponibles. Otras vías para obtener los enantiómeros puros de compuestos de la presente invención son el uso de síntesis asimétrica (M.J. Munchhof et al. J. Org. Chem. 60( 1995) 7086-7087 ; R.P. Polniaszek et al. Tetrahedron Letters 28 ( 1987) 45 1 1 -45 14), la hidrogenación por transferencia asimétrica de las iminas (II) o sales de iminio (III) intermediarias (N. Uematsu et al. J. km. Chem. Soc. 118 ( 1996) 4916-4917 ; G. Meuzelaar et al. Eur. J. Org. Chem. 1999, 23 15-2321 ), o la resolución de derivados diastereoméricos de los mismos, según lo conocido por aquellos con experiencia en la técnica.

La invención también abarca profármacos de los compuestos de la invención. "Profármaco " significa un compuesto que es convertible in vivo por métodos metabólicos (por ej . , por hidrólisis, reducción u oxidación) a un compuesto de la fórmula (I). Por ej emplo, un profármaco de un éster de un compuesto de la fórmula I que contiene un grupo hidroxilo puede ser convertible por hidrólisis in vivo a la molécula original. Los ésteres adecuados de compuestos de la fórmula (I) que contienen un grupo hidroxilo, son, por ejemplo, acetatos, citratos , lactatos, tartratos, malonatos, oxalatos, salicilatos, propionatos, succinatos, fumaratos, maleatos, metilen-bis-P-hidroxinaftoatos, gestisatos, isetionatos, di-p-toluoiltartratos, metansulfonatos, etansulfonatos, bencensulfonatos , p-toluensulfonatos, ciclohexilsulfamatos y quinatos. Como otro ejemplo, un profármaco de un éster de un compuesto de la fórmula I que contiene un grupo carboxi puede ser convertible por hidrólisis in vivo a la molécula original. (Los ej emplos de profármacos de éster son los descriptos por F.J . Leinweber, Drug Metab. Res . , 18: 379, 1987).

La invención también abarca modificaciones químicas de los compuestos originales para prolongar sus vidas útiles circulantes . Los ej emplos de derivados adecuados de poli(etilenglicol) que poseen esta propiedad se describen en, por ej . , US 2005171328 (NEKTAR THERAPEUTICS AL CORP) o US 6.713.454 (NOBEX CORP) .

La presente invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende el compuesto de la presente invención y al menos un excipiente, vehículo o diluyente aceptable para uso farmacéutico.

Una composición farmacéutica de la invención se formula para ser compatible con vía de administración pretendida, que es, con preferencia, la administración oral. Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas de la invención pueden formularse para administración por inhalación, tal como aerosoles o polvos secos ; para administración oral, tal como en la forma de comprimidos, cápsulas, geles, j arabes , suspensiones, soluciones, polvos o gránulos; para administración rectal o vaginal, tal como supositorios; o para inyección parenteral (que incluye intravenosa, subcutánea, intramuscular, intravascular, o infusión) tal como una solución, suspensión o emulsión estéril.

Los compuestos de la presente invención y sus sales aceptables para uso farmacéutico, donde sean aplicables, pueden administrarse en la forma de una composición farmacéutica donde estén en asociación con un excipiente, vehículo o diluyente aceptable para uso farmacéutico, para tratar cualquier trastorno inducido por STAT3. Como los excipientes, vehículos o diluyentes adecuados, puede hacerse referencia a la literatura estándar que los describe, por ej emplo al capítulo 25.2 del Vol. 5 de "Comprehensive Medicinal Chemistry" , Pergamon Press 1990, y a "Lexikon der Hilfsstoffe für Pharmazie, Kosmetik und angrenzende Gebiete" , por H.P. Fiedler, Editio Cantor, 2002 (en alemán).

Los compuestos de la presente invención también pueden atraparse en microcápsulas preparadas , por ejemplo, por técnicas de coacervación o por polimerización interfacial, por ejemplo, hidroximetilcelulosa o microcápsulas de gelatina y microcápsulas de poli-(metilmetacilato), respectivamente, en sistemas de administración de fármacos coloides (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nanopartículas y nanocápsulas) o en macroemulsiones . Tales técnicas se revelan en Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. ( 1980).

Pueden prepararse preparaciones de liberación sostenida. Los ej emplos de preparaciones de liberación sostenida incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrofóbicos sólidos que contienen los compuestos de la presente invención, dichas matrices están en la forma de articulas moldeados, por ej . , películas, o microcápsulas . Los ejemplos de matrices de liberación sostenida incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, poli(2-hidroxietil-metacrilato), o alcohol(polivinílico)), polilactidas (Patente de los Estados Unidos N° 3.773.919), copolímeros de ácido L-glutámico y [gamma] etil-L-glutamato, acetato de etilen-vinilo acetato no degradable, copolímeros de ácido láctico-ácido glicólico degradables tales como LUPRON DEPOT(TM) (microesferas inyectables compuestas de copolímero de ácido láctico-ácido glicólico y acetato de leuprolida), y ácido poli-D-(-)-3 -hidroxibutírico.

Las composiciones farmacéuticas de la invención con preferencia comprenderán de 0,001 a 50% en peso del compuesto de la presente invención.

La dosis diaria de los compuestos de la presente invención necesariamente variará dependiendo del huésped tratado, la vía de administración particular, y la severidad y tipo de la enfermedad bajo tratamiento. Por consiguiente, la dosis óptima puede determinarse por el profesional a cargo del tratamiento de cualquier paciente particular.

Las composiciones farmacéuticas pueden incluirse en un contenedor, empaque, o dispensador junto con instrucciones para administración.

Los compuestos de la presente invención tiene la ventaja inesperada de presentar cualquiera de: una inhibición para el bloqueo eficiente de STAT3 luego de la inhibición de c-Src y JAK2 ; una inhibición de la fosforilación de STAT3 por ensayo in-cell Western que tiene con preferencia un IC50 < 500 nM, con más preferencia 400 nM, y aún con más preferencia < 300 nM; en un modelo de xenoinjerto establecido por el uso de A43 1 y A549 (líneas celulares STAT3 positivas) una inhibición del crecimiento (>60%) de tumores establecidos en un dosis inferior a MTD con respuesta a dosis clara (con la dosis más elevada cercana a MTD) y una inhibición de la forforilación de STAT3 en tumores.

Los compuestos de la invención representan compuestos que muestran un compromiso sorprendentemente bueno entre estos tres criterios . Los compuestos preferidos de la invención son compuestos que cumplen al menos uno, con preferencia al menos dos e idealmente los tres criterios enumerados con anterioridad.

Otra ventaj a de los compuestos de la presente invención es su baja selectividad e inhibición para con JAK3 y/o TYK2. Con preferencia, la inhibición de JAK3 y/o TYK2 es 200 veces menor en comparación con la inhibición para con c-SRC, JAK2 y/o JA 1.

La familia Src de quinasas ("SFK") tiene múltiples sustratos que derivan en diversos efectos biológicos que incluyen cambios en la proliferación, movilidad, invasión, supervivencia y angiogénesis . El rol de SFK en la iniciación y/o progresión del cáncer se ha demostrado en el cáncer de colon, cáncer pancreático, cáncer de mama, cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello (HNSCC), cáncer de próstata, otros tumores sólidos, numerosas malignidades hematológicas, cáncer hepático, ciertas leucemias y linfomas de células B. Talamonti et al. , J. Clin. Invest. , 91 , 53 ( 1993); Lutz et al. , B iochem. B iophys . Res . 243 , 503 ( 1998); Rosen et al. , J. B iol. Chem. , 261 , 13754 ( 1986); Bolen et al. , Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 84, 2251 ( 1987); Masaki et al , Hepatology, 27 , 1257 ( 1998); B iscardi et al. , Adv. Cáncer Res ., 76, 61 ( 1999) ; y Lynch et al. , Leukemia, 7 , 1416 ( 1993 ). Los métodos y composiciones descriptos en la presente pueden utilizarse en uno o más cánceres o trastornos de carcinoma.

Una "tirosina quinasa" es una enzima que transfiere un grupo de fosfato de ATP a un residuo de tirosina en una proteína. Las tirosina quinasas son un subgrupo de la clase más extensa de proteína quinasas . Fundamentalmente, una proteína quinasa es una enzima que modifica una proteína por la adición química de grupos de fosfato a un hidroxilo o grupo funcional fenólico. Tal modificación a menudo da lugar a un cambio funcional en la proteína o sustrato blanco por la alteración de la estructura, actividad, ubicación o asociación celular de la enzima con otras proteínas . Químicamente, la quinasa retira un grupo de fosfato de ATP y lo une en forma covalente a uno de los tres aminoácidos (serina, treonina o tirosina) que tienen un grupo hidroxilo libre. Numerosas quinasas actúan sobre serina y treonina, y algunas otras, sobre tirosina. También existe un número de quinasas que actúan sobre los tres aminoácidos .

Las tirosina quinasas se dividen en dos grupos : proteínas citoplásmicas y quinasas receptoras transmembranales . En humanos , existen 32 proteínas citoplásmicas de proteínas citoplásmicas y 48 proteína quinasas vinculadas a receptores .

En general, las tirosina quinasas j uegan roles críticos en la señalización entre células . B ásicamente, la activación de receptores de superficie celular (por ej . , el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGF)) por ligandos extracelulares da lugar a la activación de tirosina quinasas. Así, la tirosina quinasa genera residuos de fosfotirosina en la célula. El residuo de fosfotirosina actúa como una "baliza" y atrae proteínas de señalización al receptor vía los dominios SH2. Por lo tanto, un aspecto importante del mecanismo de señalización de una tirosina quinasa es el reconocimiento de la fosfotirosina por los dominios SH2 (también denominados en la presente dominio de homología 2 a Src o homología-2 a Src).

En general, las quinasas son enzimas conocidas por regul ar la mayoría de las vías celulares, en especial las vías involucradas en la transducción de señales o en la trasmisión de señales dentro de una célula. Dado que las proteína quinasas tienen un efecto profundo sobre una célula, la actividad de la quinasa se regula altamente. Las quinasas pueden encenderse o apagarse por fosforilación (a menudo por la -cis-fosforilación/autofosforilación de la quinasa propiamente dicha) y por la unión a proteínas activadoras , proteínas inhibidoras o moléculas pequeñas .

La actividad desregulada de la quinasa es una causa frecuente de enfermedad, en particular de cáncer donde las quinasas regulan numerosos aspectos que controlan el crecimiento, movimiento y la muerte celular. Por ej emplo, l a transformación neoplásica en la que múltiples defectos genéticos tales como translocación, mutaciones dentro de oncógenos y similares, se ha implicado en el desarrollo de leucemia. Numerosos de estos defectos genéticos se han identificado como componentes clave de las vías de señalización responsables de la proliferación y diferenciación. La familia Src de quinasas, "SFK" , también se denominan gen transformante (inductor de sarcoma) del virus del sarcoma Rous. Las SFK son proteínas citoplásmicas con actividad de proteína quinosa de tirosina específica que se asocian con la cara citoplásmica de la membrana plasmática. S ilverman L. , S igal C . T. , Resh M. D. , B inding of pp[delta] Ov-src to Membranes: Evidence for Múltiple Membrane Interactions, Biochem Cell B iol 1992 70( 10- 1 1 ): 1 187-92. Existen 9 Src quinasas en el genoma humano: v-Src, c-Src, Fyn, Yes, Fgr, Lyn, Hck, Lck, y B Ik. Estas proteínas están estrechamente relacionadas entre s í y comparten el mismo mecanismo regulatorio. Brickell, P. M, The p60c-src Family of Protein-Tyrosine Kinases: Structure, Regulation, and Function, Crit Rev Oncog. 1992 ;3 (4):401 -46. Más específicamente, las Src quinasas son proteínas 52-62 kD que tienen seis dominios funcionales distintos : SH4 (homología 4 ser), un dominio único, SH3 , SH2, SHl y una región regulatoria del extremo terminal C. Brown, M. T., Cooper, J . A. , Regulations , Substrates, and Functions of Src, B iochim. B iophys . Acta. 1996, 1287(2-3 ) : 121 -49.

Las "Src quinasas" (en la presente también denominadas : "familia Src de quinasas" "proteínas Src" y "SFK") normalmente se mantienen fuera de una interacción autoinhibitoria entre el módulo de unión a fosfotirosina (SH2) que está ubicado dentro de la proteína detrás del dominio catalítico de quinasa, y su fosfotirosina del extremo terminal C (Tyr 527).

De las numerosas vías STAT, se ha identificado STAT3 como una proliferación de células mediadoras . La inhibición de SFK no inhibe STAT3 en forma duradera. S i bien el inhibidor de SFK puede inhibir inicialmente STAT3 , en un período de tiempo breve, STAT3 luego se reactiva y expresa. Johnson, F.M. , Saigal, B , Talpaz, M. and Dónate, N.J. , Dasatin[iota]b (BMS- 354825) Tyrosine Kinase Inhibitor Suppresses Invasión and Induces Cell Cycle Arrest and Apoptosis of Head and Neck S quamous Cell Carcinoma and Non-Small Cell Lung Cáncer Cells, Clin. Cáncer Res . 1 1 : 6924-6932,2005.

Las proteínas STAT (Transductoras de Señales y Activadoras de la Transcripción) son factores de transcripción específicamente activados para regular la transcripción de genes cuando las células se topan con citoquinas y factores de crecimiento. Las proteínas STAT actúan como transductoras de señales en el citoplasma y como activadores de la transcripción en el núcleo. Kisseleva T. , Bhattacharya S . , Braunstein J. , Schindler C. W. , S ignaling Through the JAKJ STAT Pathway, Recent Advances and Future Challenges , Gene 285 : 1 -24 (2002). Las proteínas STAT regulan numerosos aspectos del crecimiento, supervivencia y diferenciación celular. Quadros, M. R., Peruzzi, F. , Kari, C, and Rodeck, U. , Complex Regulation of S ignal Transducers and Activators of Transcription 3 Activation in Normal and Malignant Keratinocytes, Cáncer Res, 64: 3934-3939, 2004. Los siete miembros mamíferos de la familia STAT identificados son: STAT1, STAT2, STAT3 , STAT4, STAT5 a, STAT5b y STAT6.

STAT3 puede activarse por receptores del factor de crecimiento, receptores de citoquia y tirosina quinasas no receptoras (familia de quinasas Src o JAK). De acuerdo con lo informado, la activación de STAT3 mediada por EGFR, EPO-R, e IL-6 R vía c-Src o JAK2.

La vía JAK-STAT se regula negativamente en múltiples niveles . Las fosfatasas de proteína tirosina eliminan fosfatos de receptores de citoquina así como también STAT actividadas Hebenstreit D. et al. (2005) Drug News Perspect. Vol. 18 (4), págs. 243-249. Más recientemente, se identificaron Supresores de la Señalización de Citoquina (SOCS) que inhiben la fosforilización de STAT por la unión a, e inhibición de JAK o por la competición con STAT por sitios de unión a fosfotirosina sobre receptores de citoquina. Krebs, L. et al. (2001 ) Stem Cells Vol. 19, págs . 378-387. Las STAT también se regulan negativamente por Inhibidores de Proteína de STAT Activadas (PIAS), que actúan en el núcleo a través de numerosos mecanismos . Shuai, K. (2006) Vol. 16 (2), págs . 196-202. Por ejemplo, PIAS1 y PIAS3 inhiben la activación transcripcional para STAT1 y STAT3 respectivamente por la unión y bloqueo del acceso a las secuencias de ADN que reconocen.

La vía de señalización de JAK-STAT participa en la regulación de respuestas celulares a citoquinas y factores de crecimiento. Por el empleo de Janus quinasas (JAK) y Transductores de Señales y Activadores de Transcripción (STAT), la vía transduce la señal portada por estos polipéptidos extracelulares al núcleo celular, donde las proteínas STAT activadas modifican la expresión de los genes . S i bien las STAT originalmente se descubrieron como blancos de Janus quinasas , en la actualidad se informa que ciertos estímulos pueden activarlas independientemente de las JAK. D W Leaman, S Pisharody, T W Flickinger, M A Commane, J Schlessinger, I M Kerr, D E Levy, and G R Stark Roles of JAKs in Activation of STATs and Stimulation of c-fos Gene Expression by Epidermal Growth Factor, Mol Cell B iol. 1996 16( 1 ) : 369-375. Esta vía juega un rol central en las decisiones del destino de las células principales, por la regulación de los procesos de proliferación, diferenciación y apoptosis celular.

S in suscribir a teoría alguna, se descubrió que los compuestos de la presente invención bloquean la vía de señalización de STAT3 por la inhibición de los activadores corriente arriba c-SRC y JAK2 involucrados en la activación de STAT3 por la fosforilacóon del residuo Tirosina 705 de STAT3. También se descubrió que los compuestos de la presente invención son inhibidores eficientes de JAK 1.

Por lo tanto, la presente invención proporciona compuesto que inhiben simultáneamente c-SRC, JAK2 y JAK1. Los compuestos de la presente invención son inhibidores de objetivos múltiples de c-SRC, JAK2 y JAK 1 , y, con más preferencia, inhibidores duales de c-SRC y JAK2.

Se sugiere que la vía de STAT3 tiene un rol crucial en la inducción selectiva y el mantenimiento de un microambiente inflamatorio procarcinogénicos, tanto en el inicio de la transformación malignante como durante la progresión del cáncer. La activación persistente de STAT3 media la propagación de la infl amación promotora de tumors y aumenta la proliferación, supervivencia e invasión de las células tumorales mientras suprime la inmunidad antitumoral (Hua Yu et al. ; Nature Reviews, Cáncer, Volume 9, Nov. 2009, p.798).

La presente abarca los compuestos de la invención para uso en terapia. Con preferencia, los compuestos de la invención se utilizan en un método para tratar enfermedades asociadas con la activación de la vía STAT3, a través de la inhibición de objetivos múltiples de c-SRC, JAK2 y JAK l , con preferencia a través de la inhibición de obj etivos múltiples de c-SRC y JAK2.

Otro objetivo de la invención es el uso del compuesto o la composición farmacéutica de la invención en la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir enfermedades asociadas con la activación de la vía de STAT3 , a través de la inhibición de objetivos múltiples de c-SRC , JAK2 y JAK l , con preferencia a través de la inhibición de objetivos múltiples de c-SRC y JAK2.

La presente invención además proporciona un método para tratar enfermedades asociadas con la activación de la vía de STAT3 , a través de la inhibición de obj etivos múltiples de c-SRC, JAK2 y JAKl , con preferencia a través de la inhibición de objetivos múltiples de c-SRC y JAK2, que comprende administrar a un sujeto necesitado de dicho tratamiento una cantidad efectiva para uso terapéutico del compuesto de la invención y/o la composición farmacéutica de la invención.

Con preferencia, la administración es oral, transdérmica o parenteral .

Con preferencia, las enfermedades asociadas con la activación de la vía de STAT3 son cáncer, enfermedades autoinmunes, de implicancia ósea y enfermedades hematológicas .

El cáncer se refiere a tumores sanguíneos o tumores sólidos. Los tumores sanguíneos son mieloma múltiple, leucemias (HTLV-I-dependiente, Eritroleucemia, leucemia mielogenosa aguda (AML), leucemia mielogenosa crónica (CML), leucemia de linfocítica de gránulos grandes (LGL)), neoplasias mieloproliferativas y linfomas (relacionado con EBV/de Burkitt, micosis fungoides, linfoma cutáneo de células T, linfoma de no Hodgkin (NHL), linfoma anaplásico de células grandes (ALCL)). Los tumores sólidos son cáncer de mama, cáncer de cabeza y cuello, melanoma, cáncer de ovario, cáncer de pulmón, cáncer pancreático, cáncer de colon, cáncer uterino, cáncer gástrico, cáncer renal, cáncer de vej iga, cáncer de hígado y cáncer de próstata.

En forma alternativa, las enfermedades están asociadas con la activación de c-SRC y/o la activación de JAK 1 y/o JAK2.

De acuerdo con otra realización particular de la presente invención, cuando el cáncer es cáncer de mama, cáncer de cabeza y cuello, melanoma, cáncer de ovario, cáncer de pulmón, cáncer pancreático, cáncer de colon, cáncer uterino, cáncer gástrico, cáncer renal, cáncer de vej iga, cáncer de hígado y cáncer de próstata, el compuesto preferido utilizado en el método para tratar dichas enfermedades se selecciona del grupo que comprende: N-(4-Metil-3 - { 2- [4-(4-metil-piperazin- l -il)-fenilamino] -5-oxo-7 ,8-dihidro-5H-pirido[4,3 -d]pirimidin-6-il } -fenil)-3-trifluorometil-benzamida Ciclopropilamida del ácido 5-{6-[2-Metil-5-(3-trifluorometil-benzoilamino)-fenil]-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-ilamino }-piridin-2-carboxílico {4-cloro-3-[2-(4-metilcarbamoil-fenilamino)-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il]-fenil }-amida del ácido 4-trifluorometil-piridin-2-carboxílico o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.

De acuerdo con una realización particular de la presente invención, cuando el cáncer es mieloma múltiple, leucemias, neoplasias mieloproliferativas y linfomas, el compuesto preferido utilizado en el método para tratar dichas enfermedades se selecciona del grupo que comprende: N-(4-Cloro-3-{2-[3-metil-4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino]-5-oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il}-fenil)-3-trifluorometil-benzamida N- {4-Cloro-3-[2-(4-ciclopropilcarbamoilmetoxi-fenilamino)-5-oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il]-fenil }-3-trifluorometil-benzamida o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.

Los compuestos listados arriba tienen un volumen de distribución muy bajo (Vd en ml/kg) y, por lo tanto, son más adecuados para tratar tumores sanguíneos dado que dichos compuestos no penetran o penetran débilmente los órganos y tejidos.

"Tratamiento" o "tratar" se refiere tanto a tratamiento terapéutico y profiláctico como a medidas preventivas. Aquellos necesitados de tratamiento incluyen aquellos que ya sufren el trastorno así como también aquellos a los que hay que prevenir del mismo. Por lo tanto, el suj eto a tratar en la presente puede haber sido diagnosticado como portador del trastorno o puede estar predispuesto o ser susceptible al trastorno.

De acuerdo con lo utilizado en la presente los términos "suj eto" o "paciente" son bien reconocidos en la técnica, y, se utilizan en forma intercambiable en la presente para hacer referencia a un mamífero, que incluye un perro, gato, rata, ratón, mono, vaca, caballo, cabra, ovej a, cerdo, camello, y, con la mayor preferencia, un humano. En algunas realizaciones , el suj eto es un sujeto necesitado de tratamiento o un sujeto con una enfermedad o trastorno. Sin embargo, en otras realizaciones , el sujeto puede ser un sujeto normal o un suj eto que ya haya experimentado una terapia contra el cáncer estándar, tal como quimioterapia estándar, radioterapia estándar, terapia o cirugía dirigidas . El término no denota una edad o sexo particular. Por lo tanto, se pretende cubrir suj etos adultos y recién nacidos , masculinos y femeninos.

El término "cantidad efectiva para uso terapéutico" se refiere a una cantidad de un fármaco efectiva para tratar una enfermedad o trastorno en un sujeto. En el caso de cáncer, la cantidad efectiva para uso terapéutico del fármaco puede reducir el número de células cancerígenas ; reducir el tamaño del tumor; inhibir (es decir, desacelerar en cierta medida y, con preferencia, detener) la infiltración de las células cancerígenas en los órganos periféricos ; inhibir (es decir, desacelerar en cierta medida y, con preferencia, detener) la metástasis tumoral; inhibir, en cierta medida, el crecimiento tumoral; inhibir, en cierta medida, la angiogénesis tumoral; inhibir, en cierta medida, en el caso de un tumor de origen epitelial (carcinoma) la transición epitelio-mesenquimal; inhibir, en cierta medida, el crecimiento de las células madre cancerígenas ; aumentar, en cierta medida, la respuesta inmune contra el tumor; y/o aliviar, en cierta medida, uno o más de los síntomas asociados con el cáncer. En la medida en que el fármaco pueda prevenir el crecimiento de y/o eliminar las células cancerígenas existentes, puede ser citostático y/o citotóxico. La frase "cantidad efectiva para uso terapéutico" se utiliza en la presente para significa una cantidad suficiente para prevenir, o, con preferencia, reducir en al menos 30%, con preferencia, en al menos 50%, con preferencia, en al menos 70% , con preferencia, en al menos 80% , con preferencia, en al menos 90% , un cambio clínicamente significativo en el crecimiento o progresión o en la actividad mitótica de una masa celular, grupo de células cancerígenas, o tumor blanco, u otra característica patológica.

Opcionalmente, los compuestos de la presente invención pueden utilizarse contra enfermedades proliferativas de células en combinación con tratamientos convencionales tales como irradiación y/o uno o más agentes quimioterapéuticos tales como Actinomicina, Altretamina, Bleomicin, Busulfán, Capecitabina, Carboplatin, Carmustina, Clorambucil , Cisplatin, Cladribina, Crisantaspasa, Ciclofosfamida, Citarabina, Dacarbazina, Daunorubicina, Doxorubicina, Epirubicina, Etoposida, Fludarabina, Fluorouracil, Gemcitabina, Idarubicina, Ifosfamida, Irinotecan, Lomustina, Melfalán, Mercaptopurina, Metotrexato, Mitomicina, Mitoxantrona, Oxaliplatin, Pentostatina, Procarbazina, Estreptozocina, Taxol, Temozolomida, Tiotepa, Tioguanina/Tioguanina, Topotecán, Treosulfán, Vinblastina, Vincristina, Vindesina o Vinorelbina.

Opcionalmente, los compuestos de la presente invención pueden utilizarse contra enfermedades proliferativas de células en combinación con otras terapias dirigidas, que incluyen otros inhibidores de quinasas.

Aquellos con experiencia en la técnica apreciarán que la invención descripta en la presente es susceptible a variaciones y modificaciones distintas a las específicamente descriptas. Debe comprenderse que la invención incluye todas tales variaciones y modificaciones sin desviarse del espíritu o características esenciales de la misma. La invención también incluye todos los pasos , características, composiciones y compuestos referidos o indicados en esta memoria descriptiva, en forma individual o colectiva, y cualquiera y todas las combinaciones o dos o más de dichos pasos y características . Por lo tanto, la presente revelación debe considerarse en todos sus aspectos ilustrativa y no restrictiva, indicándose el alcance de la invención por las Reivindicaciones adjuntas . Asimismo, se pretende abarcar con la presente todos los cambios que sean parte del significado y rango de equivalencias.

Todas las publicaciones, publicaciones de patentes , patentes, y otras referencia mencionadas en la presente se incorporan por referencia en su totalidad. Las publicaciones y aplicaciones discutidas en la presente se proporcionan únicamente por sus revelaciones previas a la fecha de presentación de la presente solicitud. Nada de lo expresado en la presente debe considerarse una admisión de que la presente invención no tiene derecho a antefechar tal publicación por mérito de invención previa. Además, los materiales, métodos , y ejemplos son únicamente ilustrativos y no se pretenden limitantes .

La descripción precedente se comprenderá en forma más completa con referencia a los siguientes Ejemplos . S in embargo, tales Ejemplos son representativos de métodos de práctica de la presente invención y no se los pretende para limitar el alcance de la invención.

EJEMPLOS La presente invención ejemplifica en forma adicional, pero no se limita, por los siguientes ejemplos que ilustran la preparación de compuestos de acuerdo con la invención.

Los siguientes compuestos sirven como materias primas comunes para los esquemas sintéticos generales: 11 3-Dimetilaminometilen-l-(2-metil-5-nitro-fenil) piperidin-4-ona Í41 Una mezcla de 2,2'-Bis(difenilfosfino)l,l'-binaftilo [BINAPj (54,35 mg, 0,085 mmol) y acetato de paladio (II) [Pd(OAc)2] (6,95 mg, 0,028 mmol) en tolueno seco (3ml) se agitó vigorosamente y se burbujeó nitrógeno a través de la suspensión durante 30 minutos. A esto, se agregó 14-Dioxa-8-aza-espiro[4.5]-decano (100 mg, 0,699 mmol), 2-Bromo-l-metil-4-nitro-benceno (181,29 mg, 0,839 mmol) y carbonato de cesio seco (683,5 mg, 2,097 mmol). Se burbujeó nitrógeno durante otros 30 minutos; la mezcla se dejó calentar a reflujo hasta el día siguiente. La mezcla se enfrió, se diluyó con acetato de etilo, se agregó agua y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y se combinaron los dos extractos orgánicos. Los orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y concentraron. La purificación adicional por cromatografía sobre gel de sílice gel con el uso de acetato de etilo / hexano 5- 10% como eluyente proporcionó 8-(2-Metil-5-nitro-fenil)-l ,4-dioxa-8-aza-espiro[4.5]decano [2] como un sólido amarillo [Rendimiento: - 193 mg, 82,7 %] .

A una solución de metil-5-nitro-fenil)- l ,4-dioxa-8-aza-espiro[4.5 ]decano [50 mg, 0, 179 mmol] en THF ( 1 mi) se añadió 1 mi de H2S04 10% (ac). La mezcla de reacción se calentó a 60°C durante 6 horas, y luego se particionó entre acetato de etilo y agua. La capa acuosa se extrajo dos veces más con acetato de etilo y las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con agua, salmuera, luego se secaron (sulfato de sodio), y filtraron. El filtrado se concentró para dar el compuesto deseado, es decir, l -(2-Metil-5-nitro-fenil)-piperidin-4-ona [3 ] como un líquido viscoso marrón. [Rendimiento: 37,5 mg, 89,2%] El compuesto obtenido se utilizó en el próximo paso sin purificación adicional .

Una solución de l -(2-Metil-5 -nitro-fenil)-piperidin-4-ona [ 100 mg, 0,426 mmol] en ?,?-Dimetilformamida dimetil acetal (DMA.DMF) [ 1 mi] se calentó a reflujo durante 12 horas. Luego del enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El producto bruto marrón oscuro obtenido se purificó en forma adicional por cromatografía sobre gel de sílice con el uso de acetato de etilo/hexano 30-60% como eluyente para obtener el producto deseado puro, es decir, 3 -Dimetilaminometilen- l -(2-Metil-5-nitro-fenil)-piperidin-4-ona [4] como un sólido naranj a [Rendimiento: 76,2 mg, 62,02%] RMN ? (300 MHz, CDCI3): d 7,9 (m, 1H), 7,8 (d, 1H), 7,6 (s.lH), 7,3(s,lH), 4,2( s, 2H), 3,2 (t, 2H), 3,1 (s, 6H), 2,6 (t, 2H), 2,4 (s,3H) 21 3-Dimetilaminometilen-l-(2-metil-5-nitro-fenil)-piperidin-2,4-diona.[91 Una mezcla de 2,2'-Bis(difenilfosfino)l,l'-binaftilo [BINAP] (54,35 mg, 0,085 mmol) y acetato de paladio (II) [Pd(OAc)2] (6,95 mg, 0,028 mmol) en tolueno seco (3ml) se agitó vigorosamente y se burbujeó nitrógeno a través de la suspensión durante 30 minutos. A esto, se agregaron metiléster del ácido 3-amino-propiónico (72,00 mg, 0,699 mmol), 2-bromo-l-metil-4-nitrobenceno (181,29 mg, 0,839 mmol) y carbonato de cesio seco (683,5 mg, 2,097 mmol). Se burbujeó nitrógeno durante otros 30 minutos; la mezcla se dejó calentar a reflujo hasta el día siguiente. La mezcla se enfrió, se diluyó con acetato de etilo, se agregó agua y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y se combinaron los dos extractos orgánicos . Los orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y concentraron. La purificación adicional por cromatografía sobre gel de sílice con el uso de acetato de etilo/hexano 5- 10% como eluyente proporcionó metiléster del ácido 3 -(2-Metil-5-nitro-fenilamino)propiónico[5] como un sólido amarillo [Rendimiento: 149,00 mg, 74,7%] Una solución de metiléster del ácido 3 -(2-Metil-5-nitro-fenilamino)propiónico ( 100 mg, 0,419 mmol] en 3 mi de solvente mezclado [THF/agua/metanol 1 :0,3 :0,5] se trató con hidróxido de litio [ 15 ,00 mg, 0,628 mmol] . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas , se concentró y acidificó [pH=2] con HC1 2M. El precipitado obtenido se filtró, se lavó con agua y se secó al vacío. El material bruto se lavó con éter, se secó al aire hasta el día siguiente para dar el producto deseado, es decir, ácido 3 -(2-Metil-5-nitro-fenilamino)-propiónico [6] como un sólido coloreado de amarillo. En base a la recuperación de masa (91 ,2 mg) se presumió que el rendimiento fue cuantitativo.

A una solución de ácido 3-(2-Metil-5-nitro-fenilamino)-propiónico [2,95 gm, 13 ,2 mmol] , 2,2-dimetil- l ,3 -dioxan-4,6-diona (ácido Meldrum (2,08 gm, 14,5 mmol), y 4-dimetilaminopiridina (DMAP) [2,42 gm, 198 mmol) en diclorometano anhidro (70 mi) a 0°C se agregó clorhidrato de l -(3 -dimetilaminopropil)-3-etilcarboiimida (EDC.HCl) [3 ,04 gm, 158 mmol), y la solución resultante se agitó hasta el día siguiente a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se lavó (50 mi x 4) con bisulfato de potasio (ac. ) 5 % . La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y concentró al vacío, dando así 2,2-Dimetil-5 - [3-(2-metil-5 -nitro-fenilamino)propionil] -[ l ,3 ]dioxan-4,6-diona bruta (7), que se disolvió en 60 mi de acetato de etilo y se calentó a reflujo durante 4 hrs. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacío. El producto bruto obtenido se purificó en forma adicional por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente: metanol 2% en cloroformo) para dar el producto deseado, es decir, l -(2-Metil-5-nitro-fenil)-piperidin-2,4-diona [8] como un sólido amarillo [Rendimiento: 1 ,91 gm, 58,6%] Una solución de l -(2-Metil-5-nitro-fenil)-piperidin-2,4-diona [ 100 mg, 0,402 mmol] en ?,?-Dimetilformamida dimetil acetal (DMA.DMF) [ 1 mi] se calentó a reflujo durante 3 hrs. Luego del enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El producto bruto obtenido se purificó en forma adicional por cromatografía en columna sobre gel de sílice con el uso de acetato de etilo/hexano 30-60% como eluyente para obtener el producto deseado puro, es decir, 3 -Dimetilaminometilen- l -(2-metil-5-nitro-fenil)-piperidin-2,4-diona [9] como un sólido amarillo oscuro [Rendimiento: 79,02 mg, 65 ,02%] RMN ? (300 MHz, CD30D) d 8,2-7,9 (m, 3 H), 7,5-7,34 (d, 1 H), 4,0-3 , 8 (m, 1 H), 3 ,7-3 ,5 (m, l H), 3 ,35( s, 3H), 3 ,2(s , 3H), 2,85 -2,65(m, 2H), 2,35 (s, 3H) Ácido 3-n .4-Dioxa-8-aza-espiro[4.51dec-8-il)-4-metil-benzoico un Una mezcla de 2,2'-Bis(difenilfosfino)l,l'-binaftilo [BINAP] (54,35 mg, 0,085 mmol) y acetato de paladio (II)[Pd(OAc)2] (6,95 mg, 0,028 mmol) en tolueno seco (3 mi) se agitó vigorosamente y se burbujeó nitrógeno a través de la suspensión durante 30 minutos. A esto, se agregó l,4-Dioxa-8-aza-espiro[4.5]-decano (100 mg, 0,699 mmol), metiléster del ácido 3-Bromo-4-metil-benzoico (192,1 mg, 0,839 mmol) y carbonato de cesio seco (683,5 mg, 2,09 mmol). Se burbujeó nitrógeno durante otros 30 minutos; la mezcla se dejó calentar a reflujo hasta el día siguiente. La mezcla se enfrió, se diluyó con acetato de etilo, se agregó agua y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y los dos extractos orgánicos se combinaron. Los orgánicos se lavaron con salmuera, luego se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y concentraron. La purificación adicional por cromatografía sobre gel de sílice con el uso de acetato de etilo/hexano 5-10% como eluyente proporcionó metiléster del ácido 3-(l ,4-Dioxa-8-aza-espiro[4.5]dec-8-il)-4-metil-benzoico [11] como un sólido amarillo [150,5 mg, 61,7%] Una solución de metiléster del ácido 3-(l,4-Dioxa-8-aza-espiro[4.5]dec-8-il)-4-metil-benzoico (100 mg, 0,343 mmol] en 3 mi de solvente mezclado [THF/agua/metanol 1:0,3:0,5] se trató con hidróxido de litio (12,25 mg, 0,514 mmol]. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas, se concentró y acidificó [pH=4] con HC12M. El precipitado obtenido se filtró, se lavó con agua y se secó al vacío. El material bruto se lavó con éter, se secó al aire hasta el día siguiente para dar el producto deseado, es decir ácido 3-(l,4-Dioxa-8-aza-espiro[4.5]dec-8-il)-4-metil-benzoico [12] como un sólido coloreado de amarillo. En base a la recuperación de masa (93,2 mg) se presumió que el rendimiento fue cuantitativo.

RMN ? (300 MHz, DMSO-d6) d 12,8 (s, 1H), 7,58-7, 50(m, 2H), 7,3-7,24 (m, 1H), 3,92 (s, 4H), 2,96-2,86 (t, 4H), 2,3 (s, 3H), 1,82- 1,74 (m, 2H).

Los compuestos de la presente invención se prepararon por vías sintéticas generales tipificadas por los ejemplos 1-10. En la Tabla 1, cada compuesto porta un número de ejemplo correspondiente a la vía sintética particular por el que se preparó.

Ejemplo 1 N-(3-í2-(4-Cloro-fenilamino)-7,8-dihidro-5H-piridof4.3- d1pirimidin-6-il1-4-metil-fenill-3-trifluorometil benzamida G 131 A una solución de 3-Dimetilaminometilen-l-(2-Metil-5-nitro- fenil)-piperidin-4-ona (12,06 gm, 41,7 mmol)[preparada como en la referencia 1] en Etanol (250 mi) se agregaron N-(4-Cloro-fenil)-guanidina (28,32 gm, 167 mmol) y acetato de sodio (27,32 gm, 334 mmol) y la solución se calentó a reflujo durante 12 horas. Luego del enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con agua, se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó [sulfato de sodio] y se concentró al vacío. El producto bruto obtenido se purificó en forma adicional por cromatografía en columna sobre gel de sílice con el uso de Metanol/Cloroformo 5-10% como eluyente para dar el producto deseado puro [11], es decir, (4-Cloro-fenil)-[6-(2-metil-5-nitro-fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido [4,3-d]pirimidin-2-il]-amina como un sólido amarillo. (Rendimiento: 2,50 gm, 15,2%).

A una solución de (4-Cloro-fenil)-[6-(2-metil-5-nitro-fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il] amina (100 mg, 0,25 mmol) en el solvente mezclado de THF (5 mi) y metanol (5 mi) se agregó Pd/C 10%, and la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente bajo un globo de hidrógeno. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró al vacío para dar [6-(5-Amino-2-metil-fenil)-5, 6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il]-(4-cloro-fenil)amina [12] como un sólido blancuzco [Rendimiento: 81,5 mg,88,2%] A una solución de [6-(5-Amino-2-metil-fenil)-5, 6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il]-(4-cloro-fenil)amina (54,87 mg, 0,15 mmol), ácido 3-trifluorometilbenzoico (28,51 mg, 0,15 mmol), y Diisipropiletilamina (DIPEA) (78 µ?, 0,45 mmol) en DMF (7,5 mi) se agregó hexafluorofosfato de 2-(7-Aza-lH-benzotriazol-l-il)-l, 1,3,3-tetrametiluronio (HATU) (59 mg, 0,15 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó con solución de bisulfato de sodio acuoso 5%, solución de bicarbonato de sodio saturado acuoso y salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a presión reducida. El producto bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (Si02, metanol 2-10% en cloroformo para dar N-{3-[2-(4- clorofenilamino)-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il]-4-metil-fenil}-3-trifluorometilbenzamida [13] como un sólido amarillo pálido. [Rendimiento: 60,6 mg, 75,2%] RMN ? (300 MHz, CDC13) d 8,22 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 8,06 (d, 1H), 7,84-7,78 (m, 1H), 7,75-7,7 (br s, 1H), 7,68-7,6 (m, 3H), 7,34-7,27 (m, 2H), 7,24-7,19 (m, 1H), 7,15-7,08 (m, 1H), 4,06 (s, 2H), 3,35-3,26 (m, 2H), 3,18-3,09 (m, 2H), 2,3 (s, 3H) MS: m/z 538,1 (M+l)+ Ejemplo 2 N-(4-Metil-3-[2-(pirimidin-5-ilamino)-7,8-dihidro-5H-pirido[4.3-dlpirimidin-6-il]-fenil |-3-trifluorometilbenzamida ?71 A una solución de 3-Dimetilaminometilen- l -(2-Metil-5-nitro-fenil)-piperidin-4-ona ( 12,06 gm, 41 ,7 mmol)[preparada como en la referencia 1 ] en Etanol (250 ml) se agregaron carbonato de guanidina (30, 17 gm, 167 mmol) y acetato de sodio (27 ,40 gm, 334 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 12 horas . Luego del enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con agua, se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó [sulfato de sodio] y evaporó. El producto bruto obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con el uso de Metanol/Cloroformo 2-5 % como eluyente para dar el producto deseado puro, es decir, 6-(2-Metil-5-nitro-fenil)-5 ,6,7,8-tetrahydro pirido[4,3 -d]pirimidin-2-ilamina [ 14] como un sólido amarillo. (Rendimiento: 3 ,00 gm, 25 ,2%) Una mezcla de 4,5Bis(difenil-fosfino)-9,9-dimetilxanteno [xanthopos] (8,6 mg, 0,01488 mmol) y Tris(dibencilidenacetona)di-paladio (0)[Pd2(dba)3](6,8 1 mg, 0,00744 mmol) en 1 ,4-dioxano seco (5 ml) se agitó vigorosamente y se burbuj eó nitrógeno a través de la suspensión durante 30 minutos. Se agregaron 5 -Bromo pirimidina ( 19,7 mg, 0, 1247 mmol), 6-(2-Metil-5-nitro-fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-ilamina (35 ,57 mg, 0, 1247 mmol) y carbonato de cesio seco ( 100 mg, 0,3 1 mmol). Se burbuj eó nitrógeno durante otros 30 minutos ; la mezcla se dej ó calentar a reflujo hasta el día siguiente. La mezcla se enfrió, se diluyó con acetato de etilo, se agregó agua y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y se combinaron los dos extractos orgánicos. Los orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y concentraron al vacío. La purificación adicional por cromatografía sobre gel de sílice con el uso de acetato de etilo/hexano 5 -10% como eluyente proporcionó [6-(2-Metil-5-nitro-fenil)-5 , 6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3 -d]pirimidin-2-il] -pirimidin-5-il-amina [ 15] como un sólido amarillo [Rendimiento: 9,75 mg, 21 ,7%] A una solución de [6-(2-Metil-5-nitro-fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il]-pirimidin-5-il-amina (100 mg, 0,275 mmol] en el solvente mezclado de THF (3 mi) y metanol (3 mi) se agregó Pd/C 10%, y la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente bajo un globo de hidrógeno. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró al vacío para dar [6-(5-Amino-2-metil-fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il]-pirimidin-5-il-amina [16] (Rendimiento: 84,2 mg 92,2%) como un sólido blancuzco.

A una solución de [6-(5-Amino-2-metil-fenil)-5, 6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il]-pirimidin-5-il-amina (50,0 mg, 0,15 mmol), ácido 3-trifluorometilbenzoico (28,5 mg, 0,15 mmol), y DIPEA (78 µ?, 0,45 mmol) en DMF se agregó HATU (59 mg,0.15 mmol), y la mezcla de reacción se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó con solución de bisulfato de sodio acuoso 5%, solución de bicarbonato de sodio saturado acuoso y salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a presión reducida. El producto bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (Si02, metanol 2-10% en cloroformo) para dar 49,75 mg (65,6%) de N-{4-Metil-3-[2-(pirimidin-5-ilamino)-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il]-fenil }-3-trifluorometil benzamida [17] como un sólido amarillo pálido.

RMN ? (300 MHz, CDC13) d 9,2-9,0 (m, 2H), 8,9 (s, 1H), 8,3-8 (m, 2H), 7,95-7,5 (m, 4H), 7,3-77 (m, 4H), 4,1 (s, 2H), 3,4-3,2 (t, 2H), 3,15-2,95 (t, 2H), 2,3 (s, 3H).

MS: m/z 506,4 (M+l)+ Ejemplo 3 N-("4-Metil-3-(2-f3-metil-4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino1-5-oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-dlpirimidin-6-iU-fenil)-3-trifluorometil-benzamida.[201 A una solución de 3-Dimetilaminometilen-l-(2-metil-5-nitro-fenil)-piperidin-2,4-diona [9], (12,6 gm, 41,7 mmol) [preparada como en la referencia 2] en Etanol (250 mi) se agregaron N-[3-Metil-4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenil]-guanidina (43,9 gm 167 mmol) y acetato de sodio (27,38 gm, 334 mmol) y la solución se calentó a reflujo durante 12 horas. Luego del enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con agua, se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó. El producto bruto obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con el uso de Metanol/Cloroformo 5-10% como eluyente para dar el producto deseado puro, es decir, 2-[3-metil-4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino]-6-(2-metil-5-nitro-fenil)-7,8-dihidro-6H-pirido[4,3-d]pirimidin-5-ona [18] como un sólido. (Rendimiento: 3,09 gm, 14,8%) A una solución de 2-[3-Metil-4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino]-6-(2-metil-5-nitro-fenil)-7,8-dihidro-6H-pirido[4,3-d]pirimidin-5-ona (100 mg, 0,198 mmol) en el solvente mezclado de THF (5 mi) y metanol (5 mi) se agregó Pd/C 10%, y la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente bajo un globo de hidrógeno. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró al vacío para dar 6-(5-Amino-2-metil-fenil)-2-[3-metil-4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino]-7,8-dihidro-6H-pirido[4,3-d]pirimidin-5-ona [19] (Rendimiento: 81,72 mg, 86,9%) como un sólido blancuzco.

A una solución de 6-(5-Amino-2-metil-fenil)-2-[3-metil-4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino]-7,8-dihidro-6H-pirido[4,3-d]pirimidin-5-ona (71,0 mg, 0,15 mmol), ácido 3-Trifluoro-metilbenzoico (28,5 mg, 0,15 mmol), y DIPEA (78 µ?, 0,45 mmol) en DMF se agregó HATU (59 mg, 0,15 mmol), y la mezcla de reacción se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó con solución de bisulfato de sodio acuoso 5%, solución de bicarbonato de sodio saturado acuoso y salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a presión reducida. El producto bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (Si02, metanol 2-10% en cloroformo) para dar 71,7 mg (74,2%) N-(3- { 2-[4-(2-Metoxi-4-metil-piperazin- l-il)-fenilamino] -5-0X0-7, 8-dihidro-5H-pirido[4, 3 -d]pirimidin-6-il }-4-metil-fenil)-3-trifluorometil-benzamida [20] como un sólido amarillo pálido.

RMN ? (300 MHz, CD3OD) d 8,76 (s, 1H), 8,25-8,04 (m, 3H), 8,06 (d, 1H), 7,82-7,6 (m, 3H), 7,56-7,4 (m, 3H), 7,2-7,35 (d, 1H), 7,05-6,92 (d, 1H), 4,1-3,92 (m, 1H), 3,1-2,9 (m, 6H), 2,6 (s, 3H), 2,25(s,3H), 2,15(s,3H) MS: m/z 630,5 (M+l)+ Ejemplo 4 N-(4-Metil-3-(2-r4-(4-metil-piperazin-l-carbonil)-fenilamino1-5-oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d1pirimidin-6-il }-fenil)-3-trifluorometilbenzamida.í241 A una solución de 3-Dimetilaminometilen- l -(2-metil-5-nitro-fenil)-piperidin-2,4-diona, ( 12,6 gm, 41 ,7 mmol)[preparada como en la referencia 2] en Etanol (250 mi) se agregaron carbonato de guanidina (30, 17 gm, 167 mmol) y acetato de sodio (27,40 gm, 334 mmol) y la solución se calentó a reflujo durante 12 horas. Luego del enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con agua, se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó [sulfato de sodio] y evaporó. El producto bruto obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con el uso de metanol/cloroformo 2-5 % como eluyente para dar el producto deseado puro, es decir, 2-Amino-6-(2-metil-5-nitro-fenil)-7 ,8-dihidro-6H-pirido[4,3 -d]pirimidin-5-ona [21] como un sólido. [Rendimiento: 2,63 gm, 21 ,2%] Una mezcla de 4,5 -B is(difenilfos-fino)-9,9-dimetilxanteno (xanthopos) (8,6 mg, 0,0148 mmol) y Tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0)[Pd2(dba)3] (6,8 1 mg, 0,0074 mmol) en 1 ,4-dioxano seco (5 mi) se agitó vigorosamente y se burbujeó nitrógeno a través de la suspensión durante 30 minutos . Se agregó (4-Iodo-fenil)-(4-metil-piperazin- l -il)-metanona (41 , 1 mg, 0, 1247 mmol), 2-Amino-6-(2-metil-5-nitro-fenil)-7,8-dihidro-6H-pirido[4,3 -d]pirimidin-5-ona (37 ,3 mg, 0, 1247 mmol) y carbonato de cesio seco ( 100 mg, 0,3 1 mmol). Se burbujeó nitrógeno durante otros 30 minutos ; la mezcla se dejó calentar a reflujo hasta el día siguiente. La mezcla se enfrió, se diluyó con acetato de etilo, se agregó agua y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y los dos extractos orgánicos se combinaron. Los orgánicos se lavaron con salmuera, luego se secó (sulfato de sodio), se filtró y concentró. La cromatografía sobre gel de sílice con el uso de acetato de etilo/hexano 5 - 10% como eluyente proporcionó 6-(2-Metil-5 -nitro-fenil)-2-[4-(4-metil-piperazin- 1 -carbonil)fenilamino] -7,8-dihidro-6H-pirido[4,3 - d]pirimidin-5-ona [22] como un sólido amarillo [Rendimiento: 12,3 mg, 19,7%] A una solución de 6-(2-Metil-5-nitro-fenil)-2-[4-(4-metil-piperazin-l-carbonil)fenilamino]-7,8-dihidro-6H-pirido[4,3-d]pirimidin-57 ona (100 mg, 0,199 mmol) en el solvente mezclado de THF (3 mi) y metanol (3 mi) se agregó Pd/C 10%, y la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente bajo un globo de hidrógeno. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró al vacío para dar 6-(5-Amino-2-metil-fenil)-2-[4-(4-metil-piperazin-l-carbonil)-fenilamino]-7,8-dihidro-6H-pirido[4,3-d]pirimidin-5-ona [23] como un sólido blancuzco [Rendimiento: 83,0 mg, 88,3%] A una solución de 6-(5-Amino-2-metil-fenil)-2-[4-(4-metil-piperazin-l-carbonil)fenilamino]-7,8-dihidro-6H-pirido[4,3-d]pirimidin-5-ona (70,7 mg, 0,15 mmol), ácido 3-trifluorometil benzoico (28,5 mg, 0,15 mmol), y DIPEA (78 µ?, 0,45 mmol) en DMF se agregó HATU (59 mg, 0,15 mmol), y la mezcla de reacción se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó con solución de bisulfato de sodio acuoso 5%, solución de bicarbonato de sodio saturado acuoso y salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a presión reducida. El producto bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (Si02, metanol 2-10% en cloroformo) para dar 69,8 mg (72,3%) de N-(4-Metil-3- { 2-[4-(4-metil-piperazin-l-carbonil)fenilamino]-5-oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il}-fenil)-3-trifluorometil-benzamida [24] como un sólido amarillo pálido.

RMN ? (300 MHz, CD3OD) d 8,9 (s, 1H), 8,25-8,4 (m, 2H), 8,06 (d, 1H), 7,82-7,9 (m, 3H), 7,6-7,8 (m, 3H), 7,25-7,35 (dd, 3H), 4,05- 4,15 (m, 2H), 3,6-3,92 (m, 6H), 2,5 (m, 4H), 2,2-2,4 (m, 6H).

MS: m/z 644,30 (M+l)+ Ejemplo 5 3-r2-(4-Cloro-fenilamino)-7,8-dihidro-5H-piridor4.3- d1pirimidin-6-in-4-metil-N-(3-trifluorometilfenil)benzamida. G281 A una solución de 3-Trifluorometil-fenilamina (24,1 mg, 0,15 mmol), ácido 3-(l,4-Dioxa-8-aza-espiro[4.5]dec-8-il)-4-metil-benzoico [preparado como en la referencia 3] (41,5 mg, 0,15, y DIPEA(78 µ?, 0,45 mmol) en DMF se agregó HATU (59 mg, 0, 15 mmol), y la mezcla de reacción se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y se lavó con solución de bisulfato de sodio acuoso 5% , solución de bicarbonato de sodio saturado acuoso y salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a presión reducida. El producto bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (Si02, metanol 2- 10% en cloroformo) para dar 43 , 1 mg (68,6%) de 3-( l ,4-Dioxa-8-aza-espiro[4.5]dec-8-il)-4-metil-N-(3 -trifluorometil-fenil)-benzamida [25] como un sólido amarillo pálido.

A una solución de 3-( l ,4-Dioxa-8-aza-espiro[4.5]dec-8-il)-4-metil-N-(3 -trifluorometil-fenil)-benzamida [ 100 mg, 0,237 mmol] en THF (2 mi) se agregaron 3 mi de H2S04 acuoso 10% . La mezcla de reacción se calentó a 60°C durante 6 horas, después se particionó entre acetato de etilo y agua. La capa acuosa se extrajo dos veces más con acetato de etilo y las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con agua, salmura, luego se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y concentraron para dar el compuesto deseado, es decir, 4-Metil-3 -(4-oxo-piperidin- l -il)-N-(3 -trifluorometil-fenil)-benzamida [26] como un líquido viscoso marrón. [Rendimiento: 76,6 mg, 85,6%] . El compuesto obtenido se utilizó en el próximo paso sin purificación adicional.

Una solución de 4-Metil-3 -(4-oxo-piperidin- l -il)-N-(3-trifluorometil-fenil)-benzamida [ 100 mg, 0,2656 mmol] en DMA.DMF [ l ml] se calentó a reflujo durante 3 horas . Luego del enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró al vacío para dar el producto bruto. El producto bruto obtenido se purificó en forma adicional por cromatografía en columna sobre gel de sílice con el uso de acetato de etilo/hexano 30-60% como eluyente para obtener el producto deseado puro, es decir, 3-(3-Dimetilaminometilen-4-oxo-piperidin- l -il)-4-metil-N-(3- trifluorometil-fenil)-benzamida [27] como un sólido marrón [Rendimiento: 13,7 mg, 12,02%] A una solución de 3-(3-Dimetilamino-metilen-4-oxo-piperidin-l-il)-4-metil-N-(3-trifluorometil-fenil)benzamida (17,9 gm, 41,7 mmol) en Etanol (250 mi) se agregaron N-(4-Cloro-fenil)-guanidina (28,32 gm, 167 mmol) y acetato de sodio (27,32 gm, 334 mmol) y la solución se calentó a reflujo durante 12 horas. Luego del enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con agua, se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó [sulfato de sodio] y evaporó. El producto bruto obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con el uso de Metanol/Cloroformo 5-10% como eluyente para dar el producto deseado puro i.e., 3-[2-(4-Cloro-phenilamino)-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il]-4-metil-N-(3-trifluorometil fenil)benzamida [28] como un sólido blancuzco. [Rendimiento: 1,83 gm,8.2%] RMN ? (300 MHz, CD3OD) d: 8,26 (s, 1H), 8,19-8,12 (m, 1H), 7,98-7,92 (m, 1H), 7,79-7,74 (m, 1H), 7,72-7,61 (m, 3H), 7,55 (t, 1H), 7,45-7,36 (m, 2H), 7,34-7,25 (m, 2H), 4,11 (s, 2H), 3,4-3,32 (m, 2H), 3,05 (t, 2H), 2,42 (s, 3H) MS: Calculado: m/z 538,1 (M+l)+ Ejemplo 6 ( 6-r2-Metil-5-(4-trifluorometilpirimidin-2-ilamino)-fenill- tetrahidropiridof4.3-d1pirimidin-2-il )-piridin-4-il-amina G341 Una mezcla de 2,2'-Bis(difenilfosfino)l,l'-binaftilo [BINAP] (54,35 mg, 0,085 mmol) y acetato de paladio (II) [Pd(OAc)2] (6,95 mg, 0,028 mmol) en tolueno seco (3 mi) se agitó vigorosamente y se burbujeó nitrógeno a través de la suspensión durante 30 minutos. A esto, se agregó 14-Dioxa-8-aza-espiro[4.5]-decano (100 mg, 0,699 mmol), 2-Bromo-l-metil-4-nitro-benceno (181,29 mg, 0,839 mmol) y carbonato de cesio seco (683,5 mg, 2,097 mmol). Se burbujeó nitrógeno durante otros 30 minutos; la mezcla se dejó calentar a reflujo hasta el día siguiente. La mezcla se enfrió, se diluyó con acetato de etilo, se agregó agua y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y se combinaron los dos extractos orgánicos . Los orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y concentraron. La purificación adicional por cromatografía sobre gel de sílice gel con el uso de acetato de etilo / hexano 5- 10% como eluyente proporcionó 8-(2-Metil-5-nitro-fenil)-l ,4-dioxa-8-aza-espiro[4.5] decano [2] como un sólido amarillo [Rendimiento: - 193 mg, 82,7%] .

A una solución de 8-(2-Metil-5-nitro-fenil)- 1 ,4-dioxa- 8-aza-espiro[4.5]decano ( 100 mg, 0,278 mmol) en el solvente mezclado de THF (3 mi) y metanol (3 mi) se agregó Pd/C 10% , y la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente baj o un globo de hidrógeno. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró al vacío para dar 3-( 1 ,4-Dioxa-8-aza-spiro[4.5]dec-8-il)-4-metil-fenilamina [29] (Rendimiento: 84,9 mg, 95 ,2%) como un sólido blancuzco.

Una mezcla de 4,5 Bis(difenil-fosfino)-9,9-dimetilxanteno [xanthopos] (8,6 mg, 0,01488 mmol) y Tris(dibencilidenacetona)di-paladio(0)[Pd2(dba)3] (6,81 mg, 0,00744 mmol) en 1 ,4-dioxano seco (5 mi) se agitó vigorosamente y se burbujeó nitrógeno a través de la suspensión durante 30 minutos . Se agregó 5 -Bromo pirimidina ( 19,7 mg, 0, 1247 mmol) , 3-( l ,4-Dioxa-8-aza-espiro[4.5]dec-8-il)-4-metil-fenilamina (30,96 mg, 0, 1247 mmol) y carbonato de cesio seco ( 100 mg, 0,3 1 mmol). Se burbuj eó nitrógeno durante otros 30 minutos ; la mezcla se dej ó calentar a refluj o hasta el día siguiente. La mezcla se enfrió, se diluyó con acetato de etilo, se agregó agua y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y se combinaron los dos extractos orgánicos. Los orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y concentraron al vacío. La purificación adicional por cromatografía sobre gel de sílice con el uso de acetato de etilo/hexano 5-10% como eluyente [3 -( l ,4-Dioxa-8-aza-espiro[4.5] dec-8-il)-4-metil-fenil] -(4-trifluorometil-pirimidin-2-il)-amina [30] como un sólido amarillo pálido [Rendimiento: 4,05 mg, 29,8%] A una solución de [3-( l ,4-Dioxa-8-aza-espiro[4.5]dec-8-il)-4-metil-fenil]-(4-trifluorometil-pirimidin-2-il)-amina [50 mg, 0, 126 mmol] en THF ( 1 mi) se añadió 1 mi de H2S04 10% (ac). La mezcla de reacción se calentó a 60°C durante 6 horas , y luego se particionó entre acetato de etilo y agua. La capa acuosa se extrajo dos veces más con acetato de etilo y las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con agua, salmuera, luego se secaron (sulfato de sodio), y filtraron. El filtrado se concentró para dar el compuesto deseado, es decir, l - [2-Metil-5-(4-trifluorometil-pirimidin-2-ilamino)-fenil] -piperidin-4-ona [3 1 ] como un líquido viscoso. [Rendimiento: 40,9 mg, 92,2%] El compuesto obtenido se utilizó en el próximo paso sin purificación adicional.

Una solución de l -[2-Metil-5 -(4-trifluorometil-pirimidin-2-ilamino)-fenil] -piperidin-4-ona [ 100 mg, 0,285 mmol] en N,N-Dimetilformamida dimetil acetal (DMA.DMF) [ 1 mi] se calentó a reflujo durante 12 horas. Luego del enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El producto bruto marrón oscuro obtenido se purificó en forma adicional por cromatografía sobre gel de sílice con el uso de acetato de etilo/hexano 30-60% como eluyente para obtener el producto deseado puro, es decir, 3 -Dimetil-aminometilen- l -[2-metil-5-(4-trifluorometil-pirimidin-2-ilamino)-fenil] -piperidin-4-ona [32] como un sólido naranj a [Rendimiento: 78,2 mg, 68,02%] A una solución de 3 -Dimetil-aminometilen- l -[2-metil-5 -(4-trifluorometil-pirimidin-2-ilamino)-fenil] -piperidin-4-ona ( 16,90 gm, 41 ,7 mmol) en Etanol (250 mi) se agregaron carbonato de guanidina (30, 17 gm, 167 mmol) y acetato de sodio (27,40 gm, 334 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 12 horas . Luego del enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con agua, se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó [sulfato de sodio] y evaporó. El producto bruto obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con el uso de Metanol/Cloroformo 2-5 % como eluyente para dar el producto deseado puro, es decir, 6-[2-Metil-5-(4-trifluorometil-pirimidin-2-ilamino)-fenil] -5 ,6,7, 8-tetrahidro-pirido [4,3 -d]pirimidin-2-ilamina [33 ] como un sólido amarillo pálido. (Rendimiento : 5 ,00 gm, 30,6%) Una mezcla de 4,5Bis(difenil-fosfino)-9,9-dimetilxanteno [xanthopos] (8,6 mg, 0,01488 mmol) y Tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0)[Pd2(dba)3](6,81 mg, 0,00744 mmol) en 1 ,4-dioxano seco (5 mi) se agitó vigorosamente y se burbujeó nitrógeno a través de la suspensión durante 30 minutos . Se agregó 5 -Bromo piridina ( 19,7 mg, 0, 1247 mmol), 6- [2-Metil-5 -(4-trifluorometil-pirimidin-2-ilamino)-fenil] -5 , 6, 7 , 8-tetrahidro-pirido [4, 3 -d]pirimidin-2-ilamina (50,02 mg, 0, 1247 mmol) y carbonato de cesio seco ( 100 mg, 0,3 1 mmol). Se burbujeó nitrógeno durante otros 30 minutos ; la mezcla se dej ó calentar a reflujo hasta el día siguiente. La mezcla se enfrió, se diluyó con acetato de etilo, se agregó agua y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y se combinaron los dos extractos orgánicos. Los orgánicos se lavaron con salmuera, se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y concentraron al vacío. La purificación adicional por la cromatografía sobre gel de sílice con el uso de acetato de etilo/hexano 5-10% como eluyente { 6- [2-Metil-5-(4-trifluorometil-pirimidin-2-ilamino)-fenil] -5 , 6, 7 , 8-tetrahidro-pirido [4, 3 -d] pirimidin-2-il } -piridin-4-il-amina [34] como un sólido amarillo pálido [Rendimiento: 17 ,75 mg, 29,8 %] RMN ]H (300 MHz, CDC13) d 8,65-8,55 (m, 3H), 8,5-8,4 (br s, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,2-8,1 (m, 2H), 7,85-7,75 (br s, 1H), 7,4 (s, 1H), 7,25-7,15 (m, 1H), 7,1-7,0 (m, 2H), 4,2 (s, 2H), 3,35 (t, 2H), 3,15 (t, 2H), 2,3 (s, 3H) MS m/z 478,9 (M+l) Ejemplo 7 1 4-Metil-3-(2-metilamino-7.8-dihidro-5H-piridoí4.3-d1pirimidin-6-il)-fenil1-3-(3-trifluorometil-fenin-urea Í431 A una solución de 3-Dimetilaminometilen- l-(2-metil-5-nitrofenil)piperidin-4-ona (12,06 gm, 41,7 mmol)[preparada como en la referencia 1] en Etanol (250 mi) se agregaron N-Metil guanidina (12,20 gm, 167 mmol) y acetato de sodio (27,32 gm, 334 mmol) y la solución se calentó a reflujo durante 12 horas. Luego del enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con agua, se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó [sulfato de sodio] y se concentró al vacío. El producto bruto obtenido se purificó en forma adicional por cromatografía en columna sobre gel de sílice con el uso de Metanol/Cloroformo 5-10% como eluyente para dar el producto deseado puro [41], es decir, Metil-[6-(2-metil-5-nitro-fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il]-amina como un sólido amarillo. (Rendimiento: 2,47 gm, 19,8%).

A una solución de Metil-[6-(2-metil-5-nitro-fenil)-5, 6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il]-amina (100 mg, 0,33 mmol) en el solvente mezclado de THF (5 mi) y metanol (5 mi) se agregó Pd/C 10%, y la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente bajo un globo de hidrógeno. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró al vacío para dar [6-(5-Amino-2-metil-fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il]-metil-amina [42] como un sólido blancuzco [Rendimiento: 84,0 mg, 93,4%].

A una solución clara agitada de [6-(5-Amino-2-metil-fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il]-metil-amina (75 mg, 0,278 mmol) en THF (1,5 mi) se agregó l-Isocianato-3-trifluorometilbenceno (57,3 mg, 0,306 mmol) todo de una vez, y la mezcla de reacción se dejó agitar durante 3 horas a temperatura ambiente. 3 horas después, la mezcla de reacción se diluyó con agua, se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a sequedad para obtener una masa pegajosa que se lavó con hexano para obtener 83,4 mg de l-[4-Metil-3-(2-metilamino-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il)-fenil]-3-(3-trifluorometil-fenil)-urea [43] [Rendimiento 65,6%] como un sólido color marrón claro.

RMN ? (300 MHz, CDC13) d 7,98 (s, 1H), 7,6-7,06 (m, 8H), 6,84 (d, 1H), 5,1-5,0 (m, 1H), 3,85 (s, 2H), 3,2-2,8 (m, 7H), 2,22 (s, 3H) MS m/z 457,1 (M+l) Ejemplo 8 l-(4-Metil-3-{ 2-[4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilaminol-5-oxo-7.8-dihidro-5H-piridol4.3-dlpirimidin-6-ill-fenin-3-(3-trifluorometilfeniDurea [461 A una solución de 3-Dimetilaminometilen-l-(2-metil-5-nitro-fenil)-piperidin-2,4-diona (12,6 gm, 41,7 mmol) [preparada como en la referencia 2] en Etanol (250 mi) se agregó N-[4-(4-Metil-piperazin-l-il)-fenil]-guanidina (38,9 gm, 167 mmol) y acetato de sodio (27,38 gm, 334 mmol) y la solución se calentó a reflujo durante 12 horas. Luego del enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con agua, se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó. El producto bruto obtenido se purificó por cromatografía sobre gel de sílice con el uso de Metanol/Cloroformo 5-10% como eluyente para dar el producto deseado puro, es decir, 6-(2-Metil-5-nitro-fenil)-2-[4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino]-7,8-dihidro-6H-pirido[4,3-d]pirimidin-5-ona [44] como un sólido. (Rendimiento: 4,30 gm, 21,9%).

A una solución de 6-(2-Metil-5-nitro-fenil)-2-[4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino]-7,8-dihidro-6H-pirido[4,3-d]pirimidin-5-ona (100 mg, 0,211 mmol) en el solvente mezclado de THF (5 mi) y metanol (5 mi) se agregó Pd/C 10%, y la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente bajo un globo de hidrógeno. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró al vacío para dar 6-(5-Amino-2-metil-fenil)-2-[4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino]-7,8-dihidro-6H-pirido[4,3-d]pirimidin-5-ona [45] (Rendimiento: 86,45 mg, 92,3%) como un sólido blanco.

A una solución clara agitada de 6-(5-Amino-2-metil-fenil)-2-[4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino]-7,8-dihidro-6H-pirido[4,3-d]pirimidin-5-ona (75 mg, 0,169 mmol) en THF (1,5 mi) se agregó l-Isocianato-3-trifluoro-metil-benceno (34,7 mg, 0,186 mmol) todo de una vez, y la mezcla de reacción se dejó agitar durante 3 horas a temperatura ambiente. 3 horas después, la mezcla de reacción se diluyó con agua, se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a sequedad para obtener una masa pegajosa que se lavó con hexano para obtener 56,7 mg de l-(4-Metil-3-{2-[4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino]-5-oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il }-fenil)-3-(3-trifluorometil-fenil)-urea [Rendimiento 53,2%] como un sólido color marrón claro.

RMN ? (300 MHz, CDC13) d 9,0 (s, 1H), 7,7-6,6 (m, 11H), 8,2-7,7 (m, 3H), 4,2-3,7 (m, 2H), 3,5-2,8 (m, 10H), 2,2-1,9 (m, 6H) MS m/z 631,2 (M+l) Ejemplo 9 (4-metil-3- { 2-[4-(4-metil-piperazin- l-il)-f eni lamino 1-7,8 - dihidro-5H-piridoí4,3-d1pirimidin-6-il}feninamida del ácido butan-1- sulfónico G491 A una solución de 3-Dimetilaminometilen-l-(2-metil-5- nitrofenil)-piperidin-4-ona (12,06 gm, 41,7 mmol) [preparada como en la referencia 1] en Etanol (250 mi) se agregaron N-[4-(4-Metil-piperazin-l-il)-fenil]-guanidina (38,9 gm, 167 mmol) y acetato de sodio (27,32 gm, 334 mmol) y la solución se calentó a reflujo durante 12 hours. Luego del enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con agua, se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó [sulfato de sodio] y se concentró al vacío. El producto bruto obtenido se purificó en forma adicional por cromatografía en columna sobre gel de sílice con el uso de Metanol/Cloroformo 5-10% como eluyente para dar el producto deseado puro [47], es decir, [6-(2-Metil-5-nitro-fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il]-[4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenil]-amina como un sólido amarillo. (Rendimiento: 3,65 gm, 19,0%).

A una solución de [6-(2-Metil-5-nitro-fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il]-[4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenil]-amina (100 mg, 0,217 mmol) en el solvente mezclado de THF (5 mi) y metanol (5 mi) se agregó Pd/C 10%, y la mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a temperatura ambiente bajo un globo de hidrógeno. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró al vacío para dar [6-(5-Amino-2-metil-fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il]-[4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenil]-amina [48] como un sólido blancuzco [Rendimiento: 83,7 mg, 89,6%].

A una solución de [6-(5-Amino-2-metil-fenil)-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il]-[4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenil]-amina (50,0 mg, 0,116 mmol) en Piridina (lml) a 0°C se agregó cloruro de butan- 1-sulfonilo (21,3 mg, 0,139 mmol) gota a gota. La mezcla de reacción se agitó durante 15 minutos a OoC y luego se le dejó alcanzar a temperatura ambiente. Luego, se dejó agitar durante 3 horas adicionales a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró al vacío. Luego, la masa de reacción se diluyó con agua y se extrajo con diclorometano. La capa de diclorometano se lavó con agua, luego con solución de salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a presión reducida. El producto bruto obtenido se purificó por cromatografía en columna (Si02, metanol 2-10% en cloroformo) para dar 50,4 mg (78,9%) de (4-metil-3-{2-[4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino]-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il }-fenil)-amida del ácido butan-1-sulfónico [49] como un sólido blancuzco.

RMN ? (300 MHz, CDC13) d 8,15 (s, 1H), 7,50 (d, 2H), 7,19 (d, 1H), 7,00-6,80 (m, 5H), 6,60-6,40 (m, 1H), 4,00 (s, 2H), 3,30-2,95 (m, 10H), 2,60 (t, 4H), 2,38 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 1,85-1,75 (m, 2H), 1,50-1,36 (m, 2H), 1,25 (s, 2H) MS m/z 550,2 (M+l) Ejemplo 10 6-[5-(Benzooxazol-2-ilamino)-2-metilfenin-2-r4-(4-metil-piperazin-l-in-fenilamino1-7,8-dihidro-6H-pirido[4.3-dlpirimidin-5-ona £541 A una solución clara de 6-(5-Amino-2-metil-fenil)-2-[4-(4-metil-piperazin- l -il)-fenilamino]-7,8-dihidro-6H-pirido[4,3-d]pirimidin-5-ona (75 mg, 0, 169 mmol) en DCM (5 mi) se agregó Di(2-piridil)tionocarbonato (47 mg, 0,203 mmol) todo de una vez, y la mezcla de reacción se dejó agitar durante 3 horas a temperatura ambiente. 3 horas después, la mezcla de reacción se diluyó con agua, se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a sequedad para obtener una masa pegajosa que se lavó con hexano para obtener 70,3 mg de 6-(5-Isotiocianato-2-metil-fenil)-2-[4-(4-metil-piperazin- l -il)-fenilamino]-7,8-dihidro-6H-pirido[4,3-d]pirimidin-5-ona [53][Rendimiento: 85,6%] de color marrón claro.

A una solución de 6-(5-Isotiocianato-2-metil-fenil)-2-[4-(4-metil-piperazin- l -il)-fenilamino]-7,8-dihidro-6H-pirido[4,3-d]pirimidin-5- ona (50,0 mg, 0,089 mmol), y 2-Amino-fenol (9,73 mg, 0,089 mmol) en THF (5 mi) se agregó EDC.HC1 (25,6 mg, 0,133 mmol), y la mezcla de reacción se calentó a relujo durante 12 hora bajo una atmósfera de nitrógeno. 12 horas después, la masa de reacción se concentró a sequedad para obtener un compuesto bruto. El compuesto bruto obtenido se sometió a HPLC preparativa. El compuesto deseado, es decir, 6-[5-(Benzooxazol-2-ilamino)-2-metil-fenil]-2-[4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino]-7,8-dihidro-6H-pirido[4,3-d]pirimidin-5-ona se obtuvo como un sólido marrón [54][Rendimiento: 57,7 mg , 63,2%] RMN ? (300 MHz, DMSO-D6) d 10,7 (s, 1H), 8,8 (s, 1H), 7,7-7,0 (m, 10H), 6,95-6,85 (d, 2H), 4,1-3,95 (m, 1H), 3,85-8,7 (m, 1H), 3,3-3,0 (m, 6H), 2,5-2,4 (m, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,15 (s, 3H) MS m/z 561,2 (M+l) Ejemplo 11 6-(5-(isoquinolin-l-ilamino)-2-metilfenil)-2-(4-(4-metilpiperazin-l-il)fenilamino -7.8-dihidropirido[4,3-d1pirimidin-5(6H)-ona Una mezcla de 2,2 ' -B is(difenilfosfino) l , l ' -binaftilo [B INAP] (28,00 mg, 0,045 1 mmol) y acetato de paladio (II) [Pd(OAc)2] (5 ,00 mg, 0,022 mmol) en tolueno seco (3 mi) se agitó vigorosamente y se burbujeó nitrógeno a través de la suspensión durante 30 minutos. A esto, se agregó 6-(5 -amino-2-metilfenil)-2-(4-(4-metilpiperazin- l -il)fenilamino)-7 , 8-dihidropirido[4,3 -d]pirimidin-5(6H)-ona [45] (200 mg, 0,45 1 mmol), 1-bromoisoquinolina ( 1 12,60 mg, 0,541 mmol) y carbonato de ces io seco (443 ,0 mg, 1 ,352 mmol). Se burbuj eó nitrógeno durante otros 30 minutos ; la mezcla se dej ó calentar a reflujo 15 hasta el día siguiente. La mezcla se enfrió, se diluyó con acetato de etilo, se agregó agua y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y los dos extractos orgánicos se combinaron. Los orgánicos se lavaron con salmuera, luego se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y concentraron. La purificación adicional por cromatografía sobre gel de sílice gel con el uso de acetato de etilo / hexano 5- 10% como eluyente proporcionó 6-(5-(isoquinolin- l -ilamino)-2-metilfenil)-2-(4-(4-metilpiperazin- 1 -il)fenilamino)-7,8-dihidropirido[4,3 -d]pirimidin-5(6H)-ona [60] como un sólido amarillo [Rendimiento: -223 mg, 87,0%] .

Ejemplo 12 - Datos farmacológicos Ensayos de c-Src y Jak 2 Quinasa: Los compuestos se observaron en el ensayo TR-FRET por la inhibición de JAK2 y c-Src quinasa. Se utilizó Ultra light poly GT (Perkin Elmer) como el sustrato para JAK2 y c-Src con una concentración de ATP de 10 D M y 50 D M, respectivamente. El anticuerpo antifosfo tirosina marcado con Eu (Perkin Elmer) se agregó a 1 nM y se midió la emisión de fluorescencia a 615 nm y 665 nm was con una longitud de onda de excitación de 340 nm. La proporción de 665 a 615 nm es proporcional a la fosforilación del sustrato y a la actividad de la quinasa. El ajuste de la curva de respuesta a dosis se llevó a cabo por el uso de un software GraphPad Prism.

Ensayo In-cell-western blot para pStat3 (ICW) : Se sembraron células A43 1 sobre una microplaca de 96 pocilios. Luego de privárseles suero hasta el día siguiente, las células se incubaron con compuestos durante 2 horas . Las células se fij aron con paraformaldehído 4% en PB S y luego se permeabilizaron con Tritón X- 100 0, 1 % en PBS (PBST). Las células se bloquearon con B SA 5 % en PBST durante 2 horas, seguido por incubación hasta el día siguiente con anticuerpo fosfo Stat3. Las células se lavaron e incubaron con anticuerpo secundario anticonejo marcado con europio durante 2 horas. Luego del lavado, se agregó solución mejoradora a los pocilios. La microplaca se leyó con el instrumento Víctor en el ajuste de Europio. Las lecturas Hoechst se utilizaron para normalizar el número de células . Los valores IC50 se calcularon con los valores normalizados de europia por el uso de Graphpad Prism.

Ensayo de viabilidad celular (ensayo XTT): Se sembraron células Mda-Mb-231 o A549 en una microplaca de 96 pocilios . Al día siguiente se agregaron compuestos a las células y se incubaron durante 72 horas . El tratamiento del compuesto se realizó en triplicado. 72 horas después se aspiraron los medios de cultivo celular de los pocilios y se agregó una solución de trabajo de XTT y las placas se incubaron durante 2-5 horas . La absorbancia de las muestras se midió con un espectrofotómetro en una longitud de onda de 465 nM. Los valores EC50 se calcularon por el uso de Graphpad Prism.

Las líneas celulares tumorales utilizadas en los ejemplos de la presente invención se procuraron a partir de ATCC. La descripción de las líneas celulares se incluye en la siguiente tabla: Abreviaturas : Resultados Las tablas 2 y 4 evidencian que los compuestos de la presente invención presente una actividad de inhibición dual contra c-SRC y JAK quinasas (JAK2 y JAK 1 ) y que, por lo tanto, cumplen los requerimientos de la presente invención. La tabla 2 también muestra la actividad de inhibición in vitro del crecimiento celular en líneas celulares cancerígenas A43 1 , A549 y MDA-MB-23 1 así como también una actividad de inhibición de la fosforilización de STAT3 en la línea celular cancerígena A43 1.

La tabla 3 muestra la actividad de Dasatinib (un inhibidor de c-SRC) y TG 101348 (un inhibidor de JAK2 altamente selectivo). Puede concluirse que estos compuestos no son inhibidores duales . Además, la actividad inhibitoria de la fosforilación de STAT3 es menos eficiente con estos compuestos en comparación con los compuestos de acuerdo con la presente invención. ro n o Oí OI Tabla 2 IV) OI O Ji Oí en en en r r en o en en Tabla 3 Tabla 4 Actividad antitumoural en un modelo de metástasis de B16F10 y supervivencia: Inyección IV de células tumorales B16F10 ?,????6 en la vena de la cola de 60 ratones C57B16 macho.

Un día después de la inyección de la célula tumoral, los ratones se dividieron aleatoriamente en 4 grupos de 15. De los 15 , se sacrificaron 6 ratones el día 14 para contar los focos metastásicos en los pulmos . A los 9 restantes se les dosificó en forma continua hasta su morbididad/mortalidad para registrar la supervivencia.

Formulación: HPC 20%, solución de etanol 2% en PBS para el compuesto No. 45 Solución salina normal para Taxol® Vía de dosificación: Oral para el compuesto No. 45 e i.p. para Taxol® Volumen de dosis : 10 ml/Kg de peso corporal Cronograma de dosificación: Una vez al día durante 14 días consecutivos (Q l Dx l4) para el estudio de metástasis y una vez al día en forma continua hasta su morbididad/mortalidad para el estudio de supervivencia Dosis : Grupo 1 : Vehículo Control- 0 MPK (mg/kg) del compuesto No. 45 Grupo 2 : 5 MPK de Taxol® Grupo 3 : 30 MPK del compuesto No. 45 Grupo 4: 100 MPK del compuesto No. 45 Registro diario del peso corporal de los animales Observación dos veces al día de los signos clínicos, morbididad y mortalidad Sacrificio de los ratones a Tmax (0,75 horas) el día de la última dosis Se contaron los focos metastásicos en los pulmones Observaciones durante la necropsia: Patología macroscópica en órganos internos tales como pulmón, hígado, riñon, bazo e intestinos, se observa histopatología de estos órganos en caso de patología macroscópica. Se recolectó plasma para la estimación de la concentración del fármaco y sangre completa para aislar PBMC para determinar la inhibición de pStat3 por citometría de flujo como una lectura de PD.

Se llevó a cabo un estudio similar con los compuestos No. 1 17 y No. 179.

Resultados: Las Figuras 1 y 2 muestran una mejor actividad de inhibición de los compuestos de la presente invención en comparación con Taxol® (paclitaxel ; un fármaco estándar utilizado en el modelo B 16-F 10)). Si bien paclitaxel no tiene actividad de inhibición de c-SRC o JAK quinasas, paclitaxel modula la actividad de STAT3 a través de la pérdida de la fosforilación de STAT3 (paclitaxel interrumpe la interacción de STAT3 con tubulina).

Actividad antitumoral en modelo de xenoinjerto A549: EXPT. 1 Inyección subcutánea (SC) de células tumorales A549 5x l 06 en el flanco izquierdo de 48 ratones desnudos atímicos hembra. 14 días después de la inyección de la célula tumoral, los ratones se dividieron aleatoriamente en 6 grupos de 8 cada uno con un volumen tumoral promedio de 134±5mm3.

Formulación: HPC 20%, solución de etanol 2% en PB S para los compuestos No. 45 , 1 17 y 179.

Solución salina normal para Erlotinib® Vía de dosificación: Oral para los compuestos No. 45, 1 17 y 179, y Erlotinib® Volumen de dosis : 10 ml/Kg de peso de corporal Cronograma de dosificación: Una vez al día durante 14 días consecutivos (Q l Dx l4) Dosis : Grupo 1. Vehículo Control Grupo 2. Erlotinib® - 100 MPK Grupo 3. Compuesto No. 45 - 10 MPK Grupo 4. Compuesto No. 45 - 30 MPK Grupo 5. Compuesto No. 45 - 100 MPK Grupo 6. Compuesto No. 1 17 - 30 MPK Grupo 7. Compuesto No. 1 17 - 100 MPK Grupo 8. Compuesto No. 179 - 10 MPK Grupo 9. Compuesto No. 179 - 30 MPK Registro diario del peso corporal de los animales Volúmenes tumorales registrado tres veces al día cada semana Observación dos veces al día de los signos clínicos , morbididad y mortalidad Sacrificio de los ratones a Tmax (0,75 horas) el día de la última dosis Observaciones durante la necropsia: Patología macroscópica en órganos internos tales como pulmón, hígado, riñón, bazo e intestinos, se observa histopatología de estos órganos en caso de patología macroscópica. Se recolectó plasma para la estimación de la concentración del fármaco y sangre completa para aislar PBMC (monocitos de sangre periférica) para determinar la inhibición de pStat3 por citometría de flujo como una lectura de PD. Los tumores se congelaron instantáneamente en nitrógeno líquido y se conservaron a -80°C para estimar pStat3 por citometría de flujo como una lectura de PD.

EXPT. 2 Inyección subcutánea (SC) de células tumorales A549 5x l 06 en el flanco izquierdo de 24 ratones desnudos atímicos hembra. 14 días después de la inyección de la célula tumoral, los ratones se dividieron aleatoriamente en 3 grupos de 8 cada uno con un volumen tumoral promedio de 75±7mm3.

Formulación: HPC 20% , solución de etanol 2% en PB S para el compuesto No. 45.

Solución salina normal para Erlotinib® Vía de dosificación: Oral para AUDK3024 y Erlotinib® Volumen de dosis : 10 ml/Kg de peso de corporal Cronograma de dosificación: Una vez al día durante 14 días consecutivos (Q l Dx l4) Dosis : Grupo 1. Vehículo control Grupo 2. Compuesto No. 45 - 150 MPK Grupo 3. Erlotinib® - 100 MPK Registro diario del peso corporal de los animales Volúmenes tumorales registrados tres veces al día cada semana Observación dos veces al día de los signos clínicos, morbididad y mortalidad Sacrificio de los ratones a Tmax (0,75 horas) el día de la última dosis Observaciones durante la necropsia: Patología macroscópica en órganos internos tales como pulmón, hígado, riñon, bazo e intestinos, se observa histopatología de estos órganos en caso de patología macroscópica. Se recolectó plasma para la estimación de la concentración del fármaco y sangre completa para aislar PBMC (monocitos de sangre periférica) para determinar la inhibición de pStat3 por citometría de flujo como una lectura de PD. Los tumores se congelaron instantáneamente en nitrógeno líquido y se conservaron a -80°C para estimar pStat3 por citometría de flujo como una lectura de PD.

Resultados: La Figura 3 muestra que los compuestos de la presente invención tienen una inhibición igual o mejor del crecimiento tumoral en comparación con Erlotinib, un inhibidor de la EGFR tirosina quinasa específico, lo que sugiere que la combinación de los compuestos con un inhibidor fuerte de la EGFR tirosina quinasa podría derivar en efectos sinergísticos por la inhibición combinada de las vías STAT3 y EGFR.

Actividad antitumoral en el modelo de xenoinjerto A431 : Inyección subcutánea (SC) de células tumorales A549 5x l 06 con Matrigel® en el flanco izquierdo de 24 ratones desnudos atímicos hembra. 14 días después de la inyección de la célula tumoral, los ratones se dividieron aleatoriamente en 3 grupos de 8 cada uno con un volumen tumoral promedio de 90± l mm3.

Formulación: HPC 20% , solución de etanol 2% en PBS para el compuesto No. 45.

Solución salina normal para Gefitinib® Vía de dosificación: Oral para el compuesto No. 45 y Gefitinib® Volumen de dosis : 10 ml/Kg de peso de corporal Cronograma de dosificación: Una vez al día durante 14 días consecutivos (Q l Dx l4) Experimento PK-PD en el modelo A43 1 : Se dejó a los tumores crecer a un tamaño de 250mm3. Los compuestos se dos ificaron una vez y se recolectaron los PBMC y los tumores a Tmax para la estimación de pStat3. También se recolectó plasma para estimar la concentración del fármaco.

Experimento de eficacia en el modelo A43 1 : Dosis : Grupo 1. Vehículo control Grupo 2. Compuesto No. 45 - 150 MP Grupo 3. Gefitinib® - 100 MPK Registro diario del peso corporal de los animales Volúmenes tumorales registrados tres veces al día cada semana Observación dos veces al día de los signos clínicos, morbididad y mortalidad Sacrificio de los ratones a Tmax (0,75 horas) el día de la última dosis Observaciones durante la necropsia: Patología macroscópica en órganos internos tales como pulmón, hígado, riñon, bazo e intestinos, se observa histopatología de estos órganos en caso de patología macroscópica. Se recolectó plasma para la estimación de la concentración del fármaco y sangre completa para aislar PBMC para determinar la inhibición de pStat3 por citometría de flujo como una lectura de PD. Los tumores se congelaron instantáneamente en nitrógeno líquido y se conservaron a -80°C para estimar pStat3 por citometría de flujo como una lectura de PD.

Determinación de la concentración del fármaco en plasma: Se trataron muestras de plasma con acetonitrilo y se centrifugaron. El sobrenadante se evaporó a sequedad y se reconsitituyó con la fase móvil y luego se analizó para la concentración del fármaco por LC-MS/MS en modo MRM. Las muestras tumorales se homogeneizaron y luego se sometieron al mismo procedimiento que el plasma. Se utilizó un grupo de muestras de estándares de calibración y de control de calidad para las muestras de plasma y tumor.

Cuantificación de pStat3 en PBMC y Tumores: Recolección de sangre y tratamiento de compuesto Se recolectó sangre venosa a través de la vena retro-orbital en un tubo de ensayo Vacutainer BD (tampón. Citrato Na 0, 109 M, 3 ,2%) BD Franklin (#8019827) y se transfirió a una placa de 6 pocilios (Costar#3516). La fosforilación de Stat3 se estimuló por la adición de hIL6 ( 10 ug/ml) durante 30 min. a 37°C . La sangre se fijó con formaldehído (2% v/v final) durante 10 min. a 37°C.

Separaciones de PBMC Se colocó sangre sobre Histopaque tibio (Sigma N° de cátalogo 1077 1 , proporción de 1 :2, 3 ,5 mi de sangre+7 ,5 mi de Histopaque). Se centrifugó (eppendorf#58 10R, rotor A-4-62) a 1500 rpm durante 30 min. a TA (con desaceleración cero). La capa leuco-plaquetaria (PB MC) se separó por la aspiración de la capa translúcida por el uso de pipetteman y se lavó dos veces con PB S - l x Permeabilización PBMC preenfriados se permeabilizaron por la adición de metanol helado, mientras se agitaban por vortex cuidadosamente (volumen final de MeOH 90% v/v) y se incubaron durante 30 min. sobre hielo.

Manchado por el uso de Anticuerpos (Ab) Primarios y Anticuerpos Secundarios Conjugados no marcados .

Los PB MC permeabilizados se lavaron una vez con PBS. Los PBMC se resuspendieron a células 2x 106 en 200 µ ? de tampón de incubación durante 10 min. a temperatura ambiente (TA). Se agregó Ab primario (disolución 1 : 100) y se incubó durante 45 min. a TA. Se lavaron como antes (dos veces) y se resuspendieron en Ab secundario conjugado con fluorocromo (disolución 1 : 500) y se incubaron a TA a oscuras durante 30 min. Se lavaron y resuspendieron en PBS 500 µ ? .

Análisis de pStat3 por FACS Se midió pStat3 por el uso de una máquina calibradora FACS (BD). Se utilizaron PBMC no manchados para los aj ustes de citometría. Los PBMC manchados con Ab primario (Policlonal de conejo a pSTAT3 -phosphor Y705- Abcam # ab30646) y Ab secundario (Anti-conejo de cabra IgG-Zymed 8 1 -61 1 1 ) [tratados como control (valor máximo M I )] , y IL-6, que estimuló por sí solo células manchadas con isotipos de control, se trataron como control positivo [modificaciones en los valores máximos hacia el lado derecho (M2)] . Se observan valores máximos de compuesto/inhibidor más células tratadas con IL6 [modificaciones hacia el lado izquierdo] . Se trazaron histogramas (número celular V/s FL 1 -H). Se calculó el porcentaj e de células que se fosforilan por la estimulación de IL6 (población M2), y la inhibición de la fosforilación por inhibidor (reducción en la población M2) sobre el histograma a través del marcado de valores máximos, M I y M2.

Tumores: Se separó el tumor y se trituraron 200 mg del mismo (45 mg por mi) por el uso de IKA 10 a Velocidad N° 4 durante 10 segundos . Se tamizó el extracto de tumor a través de 100 u, se centrifugó a 900 g durante 10 min. Las células se resuspendieron brevemente en PB S 0,5 - 1 mi. Se añadió formaldehído a una concentración final de formaldehído 2-4% . Se fij aron durante 10 minutos a 37°C. Los tubos se enfriaron sobre hielo durante 1 minuto.

Permeabilización Permeabilizar células por la adición de metanol 100% helado lentamente a células preenfriadas, mientras se agitan con vortex cuidadosamente, a una concentración final de metanol 90% . Alternativamente, para eliminar el fij ado previo a la permeabilización, peletear células por centrifugación y resuspender en metanol 90%. Incubar durante 30 minutos sobre hielo. Proceder con manchado o conservar las células a -20°C en metanol 90% . Alicuotar las células 0,5- 1 x 106 en cada tubo de ensayo (por volumen). Agregar 2-3 mi de Tampón de Incubación a cada tubo y enjuagar por centrifugación. Repetit. Resuspender las células en 100 µ? de Tampón de Incubación por tubo de ensayo. Analizar por citometría de flujo como los PBMC.

Resultados : Tabla 5 1 . El compuesto No. 45 mostró buena tolerancia (hasta 250 MPK) en ratones atímicos. 2. El compuesto No. 45 no causa efectos de toxicidad pronunciada sobre los órganos principales tras un tratamiento de 14 días de base diaria en ratones atímicos con la excepción de desviaciones menores en el tracto gastrointestinal . 3. En el modelo de metástasis B 16F 10, el compuesto No. 45 mostró buena actividad antitumoral. El compuesto No. 45 a 100 MPK causó una reducción del 75 % en recuentos metastás icos de los pulmones cuando se administró Q l Dx l4. 4. La actividad antitumoral del compuesto No. 45 en el modelo de supervivencia B 16F 10 resultó en una ventaj a de supervivencia de 37,5 % que es significativa para un modelo así de agresivo (dos ificación: Q l Dx l 4). 5. En el modelo de xenoinj erto A549 el compuesto No. 45 a 100 MPK (Q l Dx l4) mostró una inhibición del crecimiento tumoral del 64% . Una dosis mayor que 150 MPK resultó en una TGI de 54, si bien no estadísticamente significativa a partir del resultado 100 MPK. 6. No se observaron grandes efectos de toxicidad relaciona con compuestos hasta 150 MPK del compuesto No. 45 durante el estudio de eficacia A549.

Se muestran resultados adicionales, obtenidos con los compuestos No. 1 17 y 179, en la Tabla 6 y en la Figura 4.

Tabla 6 Distribución de volumen Un volumen de distribución elevado de un compuesto indica que el compuesto penetra en órganos y tej idos, siendo adecuado para el tratamiento de tumores sólidos , mientras que una volumen de distribución bajo indica que el compuesto presente una menor capacidad de penetrar en órganos y tej idos y que, por lo tanto, permanece en la circulación sanguínea. Por lo tanto, los compuestos con un volumen de distribución débil como el compuesto N° 171 son más adecuados para el tratamiento de tumores sanguíneos (hematológicos). La tabla 8 proporciona algunos valores de distribución de volumen de los compuestos de la presente invención.

Tabla 8

Claims (19)

1. REIVINDICACIONES compuesto de la fórmula (I) que tiene la estructura (I) donde R l es H, arilo, arilo sustituido, alquilo, alquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterociclilo, heterociclilo sustituido, heterociclilalquilo o heterociclilalquilo sustituido, X es CH2 o C=0 R2 es H, alquilo (C i -C6), halógeno, CF3, u O-alquilo (C C i -C6) Y es -NHCO-, -CONH-, -NHS02-, -NH-, -NCH3-CO- , -NHCH2- , O, -NHCONH- o -NHCOCH2- R3 es alquilo, alquilo sustituido, arilo, o arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido o heterocicloalquilo o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.
2. 2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 , de la fórmula (II) que tiene la estructura (?) donde Rl es hidrógeno, alquilo (C1-C4), fenilo, fenilo sustituido, piridina, o piridina sustituida, X es CH2 o C=0 R2 es H, alquilo (Ci-C6), halógeno, u O-alquilo (Ci-C6), R3 es alquilo (Ci-C6), cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heterocicloalquilo, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, y donde los sustituyentes se seleccionan del grupo que comprende alquilo C1-C4 lineal o ramificado, alquilo C]-C4 sustituido con halo o nitrilo, -O-alquilo (Ci-C4), halógeno. o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.
3. 3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, donde selecciona del grupo que consiste en:
4. 4. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 , donde R l es fenilo sustituido o piridina sustituida, X es CH2 o C=0 R2 es H, CH3, Cl o F R3 se selecciona del grupo que consiste en: fenilo sustituido, donde los sustituyentes se seleccionan del grupo que comprende Cl, F, Br, CF3 y CH3.
5. 5. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde R l se selecciona del grupo que consiste en: y R3 se selecciona del grupo que consiste en:
6. 6. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, seleccionado del grupo que consiste en: N-(4-Metil-3-{ 2-[4-(4-metil-piperazin- l-carbonil)-fenilamino]-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il }-fenil)-3-trifluorometil-benzamida N-(4-Metil-3-{ 2-[4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino]-5-oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il } -fenil)-3-trifluorometil-benzamida Ciclopropilamida del ácido 5-{6-|2-Metil-5-(3-trifluorometil-benzoilamino)-fenil]-5,6,7,8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-ilamino }-piridin-2-carboxílico N- { 3-[2-(4-Ciclopropilsulfamoil-fenilamino)-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il]-4-metil-fenil }-3-trifluorometil-benzamida N-(4-Cloro-3-{ 2-[4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino]-5-oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il J-feni -S-trifluorometil-benzamida {4-cloro-3-[2-(4-metilcarbamoil-fenilamino)-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il]-fenil }-amida del ácido 4-trifluorometil-piridin-2-carboxílico 4,4,4-Trifluoro-3-metil-N-[4-metil-3-(2-{4-[2-(4-metil-piperazin- l-il)-etoxi]-fenilamino } -7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il)-fenil]-butiramida l-Ciclopentil-3-(4-metil-3-{2-[4-(2-pirrolidin-l-il-etoxi)-fenilamino]-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il }-fenil)-urea N-(4-Metil-3-{ 5-oxo-2-[4-(2-pirrolidin-l-il-etoxi)-fenilamino]-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il }-fenil)-3-trifluorometil-benzamida N- {4-Cloro-3-[2-(4-ciclopropilcarbamoilmetoxi-fenilamino)-5-oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il]-fenil }-3-trifluorometil-benzamida N-(4-Cloro-3-{2-[3-metil-4-(4-metil-piperazin-l-il)-f enilamino] -5-0X0-7, 8-dihidro-5H-pirido[4, 3-d] pirimidin-6-il}-fenil)- 3-trifluorometil-benzamida 3-Bromo-N-(4-metil-3-{2-[4-(4-metil-piperazin-l-il)-f enilamino] -5 -oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4, 3 -d]pirimidin-6-il} -fenil)-benzamida N-(4-Cloro-3-{ 2-[4-(4-metil-piperazin-l-ilmetil)-fenilamino]-5-0X0-7, 8-dihidro-5H-pirido[4, 3 -d]pirimidin-6-il }-fenil)-3-trifluorometil-benzamida o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.
7. 7. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, seleccionado del grupo que consiste en: N-(4-Metil-3-{2-[4-(4-metil-piperazin-l-il)-fenilamino]-5-oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il }-fenil)-3-trifluorometil-benzamida Ciclopropilamida del ácido 5-{6-[2-Metil-5-(3-trifluorometil-benzoilamino)-fenil] -5,6,7, 8-tetrahidro-pirido[4,3-d]pirimidin-2-ilamino}-piridin-2-carboxílico {4-cloro-3-[2-(4-metilcarbamoil-fenilamino)-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il]-fenil }-amida del ácido 4-trifluorometil-piridin-2-carboxílico o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.
8. 8. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, seleccionado del grupo que consiste en: N-(4-Cloro-3 - { 2- [3 -metil-4-(4-metil-piperazin- l -il)-fenilamino] -5-oxo-7,8-dihidro-5H-pirido[4,3 -d]pirimidin-6-il } -fenil)-3 -trifluorometil-benzamida N- { 4-Cloro-3- [2-(4-ciclopropilcarbamoilmetoxi-fenilamino)-5-oxo-7 , 8-dihidro-5H-pirido[4,3-d]pirimidin-6-il] -fenil } -3-trifluorometil-benzamida o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo.
9. 9. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, para uso en terapia.
10. 10. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 , y al menos un excipiente, vehículo o diluyente aceptable para uso farmacéutico.
11. 1 1 . El compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, para uso en un método para tratar enfermedades asociadas con la activación de la vía STAT3 , a través de la inhibición de obj etivos múltiples de c-SRC y JAK2.
12. 12. El compuesto de la reivindicación 1 1 , donde dicha enfermedad es cáncer, enfermedades autoinmunes, enfermedades de implicancia ósea y enfermedades hematológicas .
13. 13. El compuesto de la reivindicación 12, donde dicho cáncer es cáncer de mama, cáncer de cabeza y cuello, melanoma, cáncer de ovario, cáncer de pulmón, cáncer pancreático, cáncer de colon, cáncer uterino, cáncer gástrico, cáncer renal, cáncer de vej iga, cáncer de hígado y cáncer de próstata, y donde dicho compuesto es cualquiera de los compuestos de la reivindicación 7.
14. 14. El compuesto de la reivindicación 12, donde dicho cáncer es mieloma múltiple, leucemias, neoplasias mieloproliferativas y linfomas y donde dicho compuesto es cualquiera de los compuestos de la reivindicación 8.
15. 15. Un método para tratar enfermedades asociadas con activación de la vía STAT3 , a través de inhibición de varios objetivos de c-SRC y JAK2 , que comprende administrar a un suj eto que lo requiera una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y/o la composición farmacéutica de la reivindicación 10.
16. 16. El método de reivindicación 15 , donde la enfermedad es cáncer, enfermedades autoinmunes, enfermedades de implicancia ósea y enfermedades hematológicas.
17. 17. El método de la reivindicación 16, donde dicho cáncer es cáncer de mama, cáncer de cabeza y cuello, melanoma, cáncer de ovario, cáncer de pulmón, cáncer pancreático, cáncer de colon, cáncer uterino, cáncer gástrico, cáncer renal, cáncer de vej iga, cáncer de hígado y cáncer de próstata, y donde dicho compuesto es cualquiera de los compuestos de la reivindicación 7.
18. 18. El método de la reivindicación 16, donde dicho cáncer es mieloma múltiple, leucemias, neoplasias mieloproliferativas y linfomas y donde dicho compuesto es cualquiera de los compuestos de la reivindicación 8.
19. 19. El método de la reivindicación 15 , donde dicha administración es oral, transdérmica o parenteral.