MX2007014066A - Compuestos y composiciones como inhibidores de cinasa de proteina. - Google Patents

Abstract

La invencion proporciona una clase novedosa de compuestos, composiciones farmaceuticas que comprenden a estos compuestos, y metodos para utilizar tales compuestos con el fin de tratar o prevenir las enfermedades o los trastornos asociados con una actividad de cinasa anormal o mal regulada, en particular las enfermedades o los trastornos que involucren una activacion anormal de las cinasas Abl, Bcr-Abl, Bmx, BTK, b-RAF, c-RAF, CSK, cSRC, Fes, FGFR3, Flt3, lKKa, IKK??, JNK1a1, JNK2a2, Lck, Met, MKK4, MKK6, p70S6K, PAK2, PDGFRa, PKA, PKCa, PKD2, ROCK-ll, Ros, Rsk1, SAPK2a, SAPK2??, SAPK3, SAPK4, SGK, Syk, Tie2 y TrkB.

Description

COMPUESTOS Y COMPOSICIONES COMO INHIBIDORES DE CINASA DE PROTEÍNA Campo de la Invención La invención proporciona una clase novedosa de compuestos, composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos, y métodos para utilizar tales compuestos con el fin de tratar o prevenir enfermedades o trastornos asociados con una actividad de cinasa anormal o mal regulada, en particular enfermedades o trastornos que involucren una activación anormal de las cinasas Abl, Bcr-Abl, Bmx, BTK, b-RAF, c-RAF, CSK, cSRC, Fes, FGFR3, Flt3, IKKa, IKKß, JNK1a1, JNK2a2, Lck, Met, MKK4, MKK6, p70S6K, PAK2, PDGFRa, PKA, PKCa, PKD2, ROCK-II, Ros, Rsk1, SAPK2a, SAPK2ß, SAPK3, SAPK4, SGK, Syk, Tie2 y TrkB.

Antecedentes de la [Invención Las cinasas de proteína representan una gran familia de proteínas, que tienen un papel central en la regulación de una amplia variedad de procesos celulares, y en el mantenimiento del control sobre la función celular. Una lista parcial, no limitante, de estas cinasas, incluye: cinasas de tirosina receptoras, tales como la cinasa receptora del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF-R), el receptor del factor de crecimiento nervioso, trkB, Met, y el receptor del factor de crecimiento de fibroblastos, FGFR3; cinasas de tirosina no receptoras, tales como Abl y la cinasa de fusión BCR-Abl, Lck, Csk, Fes, Bmx y c-src; y cínasas de serina/treonina, tales como las cinasas c-RAF, sgk, MAP (por ejemplo, MKK4, MKK6, etc.), y SAPK2a, SAPK2ß, y SAPK3. Se ha observado una actividad de cinasa aberrante en muchos estados de enfermedad, incluyendo trastornos proliferativos benignos y malignos, así como en las enfermedades resultantes de una activación inapropiada de los sistemas inmune y nervioso. Los compuestos novedosos de esta invención inhiben la actividad de una o más cinasas de proteína, y por consiguiente, se espera que sean útiles en el tratamiento de las enfermedades asociadas con cinasa. Breve descripción de ia Invención En un aspecto, la presente invención proporciona compuestos de la Fórmula I: en donde: n se selecciona a partir de 0, 1, y 2; m se selecciona a partir de 0, 1, y 2; Yi se selecciona a partir de N y CR5; en donde R5 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; Y2 se selecciona a partir de O y S; R-i se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; R2 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; R3 se selecciona a partir de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, y alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno; R4 se selecciona a partir de -NR5C(O)R6 y -C(O)NR5R6; en donde R se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; en donde R6 se selecciona a partir de arilo de 6 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4átomos de carbono, heteroarilo de 5 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, ciclo-alquilo de 3 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, y hetero-ciclo-alquilo de 3 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono; en donde cualquier arilo, hetero-arilo, ciclo-alquilo, o hetero-ciclo-alquilo de R6 está opcionalmente sustituido con 1 a 3 radicales seleccionados a partir de halógeno, hidroxilo, -NR R5, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, hetero-arilo de 5 a 10 átomos de carbono-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, heterociclo de 3 a 8 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, y heterociclo de 3 a 8 átomos de carbono-alcoxilo de 0 a 4 átomos de carbono; en donde cualquier sustituyente de hetero-arílo ó hetero-ciclo-alquilo de R6 está opcionalmente sustituido por 1 a 3 radicales independientemente seleccionados a partir de alquilo de 1 a 6 átomos de carbono e hidroxi-alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; R7 se selecciona a partir de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, arilo de 6 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, hetero-arilo de 5 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, cicloalquilo de 3 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, y hetero-ciclo-alquilo de 3 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono; y los derivados de N-óxido, derivados de profármaco, derivados protegidos, isómeros individuales, y mezclas de isómeros de los mismos; y las sales farmacéuticamente aceptables y solvatos (por ejemplo, hidratos) de estos compuestos. En un segundo aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que contiene un compuesto de la Fórmula I ó un derivado de N-óxido, isómeros individuales, y mezclas de isómeros de los mismos; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en mezcla con uno o más excipientes adecuados. En un tercer aspecto, la presente invención proporciona un método para el tratamiento de una enfermedad en un animal en donde la inhibición de la actividad de cinasa, en particular la actividad de Abl, Bcr-Abl, Bmx, BTK, b-RAF, c-RAF, CSK, cSRC, Fes, FGFR3, Flt3, IKKa, IKKß, JNK1a1, JNK2a2, Lck, Met, MKK4, MKK6, p70S6K, PAK2, PDGFRa, PKA, PKCa, PKD2, ROCK-II, Ros, Rsk1, SAPK2a, SAPK2ß, SAPK3, SAPK4, SGK, Syk, Tie2 y TrkB, pueda prevenir, inhibir, o aminorar la patología y/o sintomatología de las enfermedades, cuyo método comprende administrar al animal una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula I ó un derivado de N-óxido, isómeros individuales y mezclas de isómeros de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. En un cuarto aspecto, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula I en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad en un animal en donde la actividad de cinasa, en particular la actividad de Abl, Bcr-Abl, Bmx, BTK, b-RAF, c-RAF, CSK, cSRC, Fes, FGFR3, Flt3, IKKa, IKKß, JNK1a1, JNK2a2, Lck, Met, MKK4, MKK6, p70S6K, PAK2, PDGFRa, PKA, PKCa, PKD2, ROCK-II, Ros, Rsk1, SAPK2a, SAPK2ß, SAPK3, SAPK4, SGK, Syk, Tie2 y/o TrkB contribuya a la patología y/o sintomatología de la enfermedad. En un quinto aspecto, la presente invención proporciona un proceso para la preparación de compuestos de la Fórmula I y los derivados de N-óxido, derivados de profármaco, derivados protegidos, isómeros individuales, y mezclas de isómeros de los mismos, y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Descripción Detallada de la Invención Definiciones "Alquilo", como un grupo y como un elemento estructural de otros grupos, por ejemplo alquilo sustituido por halógeno y alcoxilo, puede ser de cadena recta o ramificada. Alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono incluye metoxilo, etoxilo, y similares. Alquilo sustituido por halógeno incluye trifluoro-metilo, penta-fluoro-etilo, y similares. "Arilo" significa un ensamble de anillo aromático monocíclico o bicíclico fusionado que contiene de 6 a 10 átomos de carbono del anillo. Por ejemplo, arilo puede ser fenilo o naftilo, de preferencia fenilo. "Arileno" significa un radical divalente derivado a partir de un grupo arilo. "Heteroarilo" es como se define para arilo anteriormente, en donde uno o más de los miembros del anillo es un heteroátomo. Por ejemplo, heteroarilo incluye piridilo, indolilo, indazolilo, quinoxazolinilo, quinolinilo, benzofuranilo, benzopíranilo, benzotiopiranilo, benzo-[1 ,3]-dioxol, imidazolilo, benzo-imidazolilo, pirimidinilo, furanilo, oxazolilo, isoxazolilo, triazolilo, tetrazolilo, pirazolilo, tienilo, etc. "Cicloalquilo" significa un ensamble de anillo monocíclico, bicíclico fusionado, o policíclico puenteado, saturado o parcialmente insaturado, que contiene el número de átomos del anillo indicado. Por ejemplo, ciclo-alquilo de 3 a 10 átomos de carbono incluye ciclo-propilo, ciclo-butilo, ciclo-pentilo, ciclo-hexilo, etc. "Hetero-ciclo-alquilo" significa ciclo-alquilo, como se define en esta solicitud, en el entendido de que uno o más de los átomos de carbono del anillo indicados sean reemplazados por una fracción seleccionada a partir de -O-, -N = , -NR-, -C(O)-, -S-, -S(O)- ó -S(O)2-, en donde R es hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, o un grupo protector de nitrógeno. Por ejemplo, hetero-ciclo-alquílo de 3 a 8 átomos de carbono, como se utiliza en esta solicitud para describir los compuestos de la invención, incluye morfolino, pirrolidinilo, pírrolídinil-2-ona, piperazinilo, piperidinilo, piperidinilona, 1 ,4-dioxa-8-aza-espiro-[4,5]-dec-8-ilo, etc. "Halógeno" (o halo) de preferencia representa cloro o flúor, pero también puede ser bromo o yodo. "Panel de Cinasa" es una lista de cinasas que comprende Abl (humana), Abl(T315l), JAK2, JAK3, ALK, JNK1a1, ALK4, KDR, Aurora-A, Lck, Blk, MAPK1, Bmx, MAPKAP-K2, BRK, MEK1, CaMKII(rata), Met, CDK1/ciclinaB, p70S6K, CHK2, PAK2, CK1, PDGFRa, CK2, PDK1, c-kit, Pim-2, c-RAF, PKA(h), CSK, PKBa, cSrc, PKCa, DYRK2, Plk3, EGFR, ROCK-I, Fes, Ron, FGFR3, Ros, Flt3, SAPK2a, Fms, SGK, Fyn, SIK, GSK3ß, Syk, IGF-1R, Tie-2, IKKß, TrKB, IR, WNK3, IRAK4, ZAP-70, ITK, AMPK(rata), LIMK1, Rsk2, Axl, LKB1, SAPK2ß, BrSK2, Lyn(h), SAPK3, BTK, MAPKAP-K3, SAPK4, CaMKIV, MARK1, Snk, CDK2/ciclinaA, MINK, SRPK1, CDK3/ciclinaE, MKK4(m), TAK1, CDK5/p25, MKK6(h), TBK1, CDK6/ciclinaD3, MLCK, TrkA, CDK7/ciclinaH/MAT1, MRCKß, TSSK1, CHK1, MSK1, Yes, CK1d, MST2, ZIPK, c-Kít (D816V), MuSK, DAPK2, NEK2, DDR2, NEK6, DMPK, PAK4, DRAK1, PAR-1Ba, EphA1, PDGFRß, EphA2, Pim-1, EphA5, PKBß, EphB2, PKCßl, EphB4, PKCd, FGFR1, PKC?, FGFR2, PKCT, FGFR4, PKD2, Fgr, PKG1ß, Flt1, PRK2, Hck, PYK2, HIPK2, Ret, IKKa, RIPK2, IRR, ROCK-ll(humana), JNK2a2, Rse, JNK3, Rsk1(h), PI3 K?, PI3 Kd y PI3-Kß. Los compuestos de la invención se rastrean contra el panel de cinasa (tipo silvestre y/o mutaciones de las mismas), e inhiben la actividad de cuando menos uno de estos miembros del panel. "Formas mutantes de BCR-Abl" significa cambios de aminoácidos individuales o múltiples de la secuencia de tipo silvestre. Las mutaciones en BCR-Abl actúan mediante la interrupción de los puntos de contacto críticos entre la proteína y el inhibidor (por ejemplo, Gleevec y similares), más frecuentemente mediante la inducción de una transición desde el estado inactivo hasta el estado activo, es decir, hasta una conformación en la que BCR-Abl y Gleevec son incapaces de enlazarse. A partir de los análisis de las muestras clínicas, el repertorio de mutaciones encontradas en asociación con el fenotipo resistente ha estado aumentando lentamente pero de una manera inexorable a través del tiempo. Las mutaciones parecen acumularse en cuatro regiones principales. Un grupo de mutaciones (G250E, Q252R, Y253F/H, E255K/V) incluye los aminoácidos que forman el ciclo de enlace de fosfato para ATP (también conocido como el ciclo-P). Un segundo grupo (V289A, P311L, T315I, F317L) se puede encontrar en el sitio de enlace de Gleevec, e interactúa directamente con el inhibidor por medio de enlaces de hidrógeno o interacciones de Van der Waals. El tercer grupo de mutaciones (M351T, E355G) se acumula en estrecha proximidad al dominio catalítico. El cuarto grupo de mutaciones (H396R/P) se localiza en el ciclo de activación, cuya conformación es el cambio molecular que controla la activación/inactivación de la cinasa. Las mutaciones puntuales de BCR-ABL asociadas con la resistencia a Gleevec detectadas en los pacientes con leucemia mielógena crónica (CML) y leucemia linfocítica aguda (ALL) incluyen: M224V, L248V, G250E, G250R, Q252R, Q252H, Y253H, Y253F, E255K, E255V, D276G, T277A, V289A, F311L, T315I, T315N, F317L, M343T, M315T, E355G, F359V, F359A, V379I, F382L, L387M, L387F, H396P, H396R, A397P, S417Y, E459K, y F486S (las posiciones de aminoácidos, indicadas por el código de una sola letra, son aquéllas para la secuencia GenBank, número de acceso AAB60394, y corresponden a ABL tipo la; Martinelli y colaboradores, Haematologica/The Hematology Journal, Abril de 2005; 90-4). A menos que se informe de otra manera para esta invención, Bcr-Abl se refiere a las formas de tipo silvestre y mutantes de la enzima. "Tratar", "tratando", y "tratamiento", se refieren a un método para aliviar o abatir una enfermedad y/o sus síntomas aunados. Descripción de las Molidades Preferidas La proteína de fusión BCR-Abl es un resultado de una translocación recíproca que fusiona el proto-oncogén Abl con el gen Bcr. Entonces, BCR-Abl es capaz de transformar las células-B a través del aumento de la actividad mitogénica. Este aumento da como resultado una reducción de la sensibilidad a la apoptosis, así como la alteración de la adhesión e inicio de las células progenitoras de leucemia mielógena crónica (CML). La presente invención proporciona compuestos, composiciones, y métodos para el tratamiento de una enfermedad relacionada con cinasa, en particular las enfermedades relacionadas con las cinasas, Abl, Bcr-Abl, Bmx, BTK, b-RAF, c-RAF, CSK, cSRC, Fes, FGFR3, Flt3, IKKa, IKKß, JNK1a1, JNK2a2, Lck, Met, MKK4, MKK6, p70S6K, PAK2, PDGFRa, PKA, PKCa, PKD2, ROCK-II, Ros, Rsk1, SAPK2a, SAPK2ß, SAPK3, SAPK4, SGK, Syk, Tíe2 y TrkB. Por ejemplo, la leucemia y otros trastornos de proliferación relacionados con BCR-Abl, se pueden tratar a través de la inhibición de las formas de tipo silvestre y mutantes de Bcr-Abl. En una modalidad, con referencia a los compuestos de la Fórmula I, están los compuestos de la Fórmula la: la en donde: n se selecciona a partir de 0 y 1; Yi se selecciona a partir de N y CH; Y2 se selecciona a partir de O y S; Ri se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; R2 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; R3 se selecciona a partir de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, y alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno; R se selecciona a partir de -NR5C(O)R6 y C(O)NR5R6; en donde R5 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; y en donde R6 se selecciona a partir de arilo de 6 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, hetero-arilo de 5 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, ciclo-alquilo de 3 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, y hetero-ciclo-alquilo de 3 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono; en donde cualquier arilo, hetero-arilo, ciclo-alquilo, o hetero-ciclo-alquilo de R6 está opcionalmente sustituido con 1 a 3 radicales seleccionados a partir de halógeno, hidroxilo, -NR5R5, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, heteroarilo de 6 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, heterociclo de 3 a 8 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, y heterociclo de 3 a 8 átomos de carbono-alcoxilo de 0 a 4 átomos de carbono; en donde cualquier sustituyente de hetero-arilo o hetero-ciclo-alquilo de R6 está opcionalmente sustituido por 1 a 3 radicales independientemente seleccionados a partir de alquilo de 1 a 6 átomos de carbono e hidroxi-alquilo de 1 a 6 átomos de carbono.

En otra modalidad, R2 se selecciona a partir de hidrógeno y metilo; y R3 se selecciona a partir de metilo y metoxilo. En otra modalidad, R se selecciona a partir de -NHC(O)R6 y -C(O)NHR6; en donde R6 se selecciona a partir de fenilo opcionalmente sustituido con 1 a 3 radicales seleccionados a partir de trifluoro-metilo, dimetil-amino, imidazolilo, morfolino, morfolino-metilo, piperazinilo, piperazinil-metilo, y pirrolidinil-metoxilo; en donde este imidazolilo, piperazinilo, piperazinil-metilo, está opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado a partir de metilo, etilo, e hidroxi-etilo. Los compuestos preferidos de la invención se seleccionan a partir de: N-[4-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluoro-metil-fenil]-4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pírimidin-4-il)-ureido]-benzamida; 4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-N-(4-piperazin-1-ilmetil-3-trifluoro-metil-fenil)-benzamida; 3-(4-metil-imidazol-1-il)-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-5-trifluoro-metil-benzamida; N-[4-metil-3-(2-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il-acetil-amino)-fenil]-3-trifluoro-metil-benzamida; N-(3-imidazol-1-il-5-trifluoro-metil-fenil)-4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureidoj-benzamida; N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-trifluoro-metil-benzamida; 4-(2-metil-imidazol-1-il)-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-trifluoro-metil-benzamida; N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-4-morfolin-4-il-3-trifluoro-metil-benzamida; N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluoro-metil-benzamida; N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-4-morfolin- 4-ilmetil-3-trifluoro-metil-benzamida; N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-morfolin-4-il-5-trifluoro-m etil -benzamida; N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimídin-4-il)-ureido]-fenil}-4-(4-metil-piperazin-1-íl)-3-trifluoro-m etil -benzamida; 4-(4-etil-piperazin-1-il)-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-trifluoro-metil-benzamida; N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-(4-metil-piperazin-1-il)-5-trifluoro-metil-benzamida; 3-dimetil-amino-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-5-trifluoro-metil-benzamida; 4-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-trifluoro-metil-benzamida; 3-(4-etil-piperazin-1-il)-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-5-trifluoro-metil-benzamida; 4-metil-N-[3-(4-metil-imidazol-1-il)-5-trifluoro-metíl-feníl]-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidín-4-il)-ureido]-benzamida; 3-[4-(2-hidroxi-etil)-piperazin-1-il]-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-5-trifluoro-metil-benzamida; N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-piperazin-1-il-5-trifluoro-metil-benzamida; N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-(pirrolidin-2-ilmetoxi)-5-trifluoro-metil-benzamida; N-{3-metoxi-5-[3-metil-3-(7H-pírrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-morfolin-4-il-5-trifluoro-metil-benzamida; N-{3-metoxi-5-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]- fenil}-3-(4-metil-imidazol-1-il)-5-trifluoro-metil-benzamida; 4-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-N-{3-metoxi-5-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-trifluoro-metil-benzamida; N-{3-metoxi-5-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ure¡do]-fenil}-4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluoro-metil-benzamida; y N-{3-metoxi-5-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-4-(2-metil-imidazol-1-il)-3-trifluoro-metil-benzamida. Los compuestos preferidos adicionales de la invención se detallan en los Ejemplos y en la Tabla I más adelante. Farmacología v Utilidad Los compuestos de la invención modulan la actividad de las cinasas, y como tales, son útiles para el tratamiento de enfermedades o trastornos en donde las cinasas contribuyan a la patología y/o sintomatología de la enfermedad. Los ejemplos de las cinasas que son inhibidas por los compuestos y composiciones descritas en la presente, y contra las cuales son útiles los métodos descritos en la presente incluyen, pero no se limitan a, Abl y Bcr-Abl. La cinasa de tirosina de Abelson (es decir, Abl, c-Abl) está involucrada en la regulación del ciclo celular, en la respuesta celular a la tensión genotóxica, y en la transmisión de información acerca del medio ambiente celular a través de la señalización de integrina. Sobre todo, parece que la proteína Abl sirve a un papel complejo como un módulo celular que integra las señales desde diferentes fuentes extracelulares e intracelulares, y que tiene infuencia sobre las decisiones con respecto al ciclo celular y a la apoptosis. La cinasa de tirosina de Abelson incluye los subtipos derivados, tales como la fusión quimérica (oncoproteína) BCR-Abl con una actividad de cinasa de tirosina mal regulada, o la v-Abl. La BCR-Abl es crítica en la patogénesis del 95 por ciento de la leucemia mielógena crónica (CML) y de 10 por ciento de la leucemia linfocítica aguda. STI-571 (Gleevec) es un inhibidor de la cinasa de tirosina oncogénica BCR-Abl, y se utiliza para el tratamiento de leucemia mieloide crónica (CML). Sin embargo, algunos pacientes en la etapa de crisis de ráfaga de leucemia míeloide crónica son resistentes al STI-571, debido a las mutaciones en la cinasa BCR-Abl. Se han reportado más de 22 mutaciones hasta la fecha, siendo las más comunes G250E, E255V, T315I, F317L y M351T. Los compuestos de la presente invención inhiben la cinasa abl, en especial la cinasa v-abl. Los compuestos de la presente invención también inhiben la cinasa BCR-Abl de tipo silvestre, y las mutaciones de la cinasa BCR-Abl, y por lo tanto, son adecuados para el tratamiento de cáncer y enfermedades tumorales positivas para Bcr-abl, tales como leucemias (en especial leucemia mieloide crónica y leucemia linfoblástíca aguda, en donde se encuentran en especial los mecanismos de acción apoptóticos), y también muestra efectos sobre el subgrupo de células totipotentes leucémicas, así como un potencial para la purificación de estas células in vitro después de remover las células (por ejemplo, remoción de médula ósea), y para el reimplante de las células una vez que se han limpiado de las células de cáncer (por ejemplo, reimplante de células de médula ósea purificadas). La senda de señalización Ras-Raf-MEK-ERK media la respuesta celular a las señales de crecimiento. Ras se muta hasta una forma oncogénica en aproximadamente el 15 por ciento del cáncer humano. La familia Raf pertenece a la cinasa de proteína serina/treonina, e incluye a tres miembros: A-Raf, B-Raf, y c-Raf (ó Raf-1). El enfoque sobre Raf siendo un objetivo de fármaco, se ha centrado en la relación de Raf como un efector corriente abajo de Raf. Sin embargo, los datos recientes sugieren que B-Raf puede tener un papel prominente en la formación de ciertos tumores sin requerimiento de un alelo Ras activado (Nature 417,949 - 954 (01 -julio-2002). En particular, se han detectado mutaciones de B-Raf en un gran porcentaje de melanomas malignos. Los tratamientos médicos existentes para melanoma están limitados en su efectividad, en especial para los melanomas en etapa tardía. Los compuestos de la presente invención también inhiben los procesos celulares que involucran a la cinasa b-Raf, proporcionando una nueva oportunidad terapéutica para el tratamiento de los cánceres humanos, en especial para melanoma. Los compuestos de la presente invención también inhiben los procesos celulares que involucran a la cinasa c-Raf. c-Raf es activada por el oncogén ras, que se muta en un amplio número de cánceres humanos. Por consiguiente, la inhibición de la actividad de cinasa de c-Raf puede proporcionar una manera de prevenir el crecimiento tumoral mediado por ras [Campbell, S. L., Oncogene, 17, 1395 (1998)]. El PDGF (Factor de Crecimiento Derivado de Plaquetas) es un factor de crecimiento que se presenta muy comúnmente, el cual tiene un papel importante tanto en el crecimiento normal como también en la proliferación celular patológica, tal como se ve en la carcinogénesis y en las enfermedades de las células de músculo liso de los vasos sanguíneos, por ejemplo en ateroesclerosis y trombosis. Los compuestos de la invención pueden inhibir la actividad del receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR), y por consiguiente, son adecuados para el tratamiento de enfermedades tumorales, tales como gliomas, sarcomas, tumores de próstata, y tumores de colon, mama, y ovario. Los compuestos de la presente invención se pueden utilizar no solamente como una sustancia inhibidora de tumor, por ejemplo en el cáncer pulmonar de células pequeñas, sino también como un agente para tratar los trastornos proliferativos no malignos, tales como ateroesclerosis, trombosis, psoriasis, escleroderma, y fibrosis, así como para la protección de las células totipotentes, por ejemplo para combatir el efecto hemotóxico de los agentes quimioterapéuticos, tales como 5-fluoro-uracilo, y en asma. Los compuestos de la invención se pueden utilizar en especial para el tratamiento de enfermedades que respondan a la inhibición de la cinasa receptora del factor de crecimiento derivado de plaquetas. Los compuestos de la presente invención muestran efectos útiles en el tratamiento de los trastornos que se presentan como un resultado de trasplante, por ejemplo trasplante alogénico, en especial rechazo de tejido, tal como especialmente bronquiolitis obliterativa (OB), es decir, un rechazo crónico de los trasplantes pulmonares alogénicos. En contraste con los pacientes sin bronquiolitis obliterativa, aquéllos que tienen bronquiolitis obliterativa con frecuencia muestran una concentración elevada de factor de crecimiento derivado de plaquetas en los fluidos de los lavados broncoalveolares. Los compuestos de la presente invención también son efectivos en las enfermedades asociadas con la migración y proliferación de células de músculo liso vasculares (en donde también con frecuencia tienen un papel el factor de crecimiento derivado de plaquetas y el receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas), tales como restenosis y ateroesclerosis. Estos efectos y sus consecuencias para la proliferación o migración de las células de músculo liso vasculares in vitro e in vivo, se pueden demostrar mediante la administración de los compuestos de la presente invención, y también mediante la investigación de su efecto sobre el engrosamiento de la íntima vascular en seguida de lesión mecánica in vivo. La familia de receptores de neurotrofina trk (trkA, trkB, trkC) promueve la sobrevivencia, el crecimiento, y la diferenciación de los tejidos neuronales y no neuronales. La proteína TrkB se expresa en las células de tipo neuroendocrino en el intestino delgado y en el colon, en las células alfa del páncreas, en los monocitos y macrófagos de los nodos linfáticos y del bazo, y en las capas granulares de la epidermis (Shibayama y Koisumi, 1996). La expresión de la proteína TrkB se ha asociado con un progreso desfavorable de los tumores de Wilms y de los neuroblastomas. Más aún, TrkB se expresa en las células de próstata cancerosas, pero no en las células normales. La senda de señalización corriente abajo de los receptores de trk involucra la cascada de activación de MAPK a través de los genes Shc, Ras activado, ERK-1, y ERK-2, y la senda de transducción gammal-PLC (Sugimoto y colaboradores, 2001). La cinasa c-Src transmite las señales oncogénicas de muchos receptores. Por ejemplo, la sobre-expresión del receptor de factor de crecimiento epidérmico o de HER2/neu en los tumores, conduce a la activación constitutiva de c-src, que es una característica para las células malignas, pero que está ausente de las células normales. Por otra parte, los ratones deficientes en la expresión de c-src exhiben un fenotipo osteopetrótico, indicando una participación clave de c-src en la función de los osteoclastos, y una posible involucración en los trastornos relacionados. La cinasa de la familia Tec, Bmx, una cinasa de proteína tirosina no receptora, controla la proliferación de las células de cáncer epiteliales mamarias. Se ha demostrado que el receptor 3 del factor de crecimiento de fibroblastos ejerce un efecto regulador negativo sobre el crecimiento óseo, y una inhibición de la proliferación de los condrocitos. La displasia tanatofórica es causada por diferentes mutaciones en el receptor 3 del factor de crecimiento de fibroblastos, y una mutación , TDI I FGFR3, tiene una actividad de cinasa de tirosina constitutiva que activa al factor de transcripción Statl , conduciendo a la expresión de un inhibidor del ciclo celular, paro del crecimiento, y un desarrollo óseo anormal (Su y colaboradores, Nature, 1 997, 386, 288-292).

FG FR3 también se expresa con frecuencia en múltiples cánceres de tipo mieloma. Los inhibidores de la actividad de FGFR3 son útiles en el tratamiento de las enfermedades inflamatorias o autoinmunes mediadas por células-T, incluyendo , pero no limitándose a, artritis reumatoide (RA), artritis de colágeno I I , esclerosis múltiple (MS), lupus eritematoso sistémico (SLE), psoriasis, diabetes de establecimiento juvenil , enfermedad de Sjogren , enfermedad de la tiroides, sarcoidosis, uveítis autoinmune, enfermedad inflamatoria del intestino (enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa), enfermedad celiaca, y miastenia gravis. La actividad de la cinasa del suero y regulada por glucocorticoide (SGK), está correlacionada con las actividades perturbadas del canal de iones, en particular aquéllas de los canales de sodio y/o potasio, y los compuestos de la invención pueden ser útiles para el tratamiento de hipertensión. Lin y colaboradores (1997), J. Clin. Invest. 100, 8:2072-2078 y P. Lin (1998) PNAS 95, 8829-8834, han demostrado una inhibición del crecimiento tumoral y de la vascularización, y también una reducción en las metástasis pulmonares durante las infecciones adenovirales o durante las inyecciones del dominio extracelular de Tie-2 (Tek) en los modelos de tumor de mama y xenoinjerto de melanoma. Los inhibidores de Tie-2 se pueden utilizar en situaciones en donde tenga lugar una neovascularización de una forma inapropiada (es decir, en retinopatía diabética, inflamación crónica, psoriasis, sarcoma de Kaposi, neovascularización crónica debida a degeneración macular, artritis reumatoide, hemangioma infantil, y cánceres). Lck tiene un papel en la señalización de células-T. Los ratones que carecen del gen Lck, tienen una mala capacidad para desarrollar timocitos. La función de Lck como un activador positivo de la señalización de células-T, sugiere que los inhibidores de Lck pueden ser útiles para el tratamiento de una enfermedad autoinmune, tal como artritis reumatoide. Las JNKs, junto con otras MAPKs, se han implicado por tener un papel en la mediación de la respuesta celular al cáncer, la acumulación de plaquetas inducida por trombina, trastornos de inmunodeficiencia, enfermedades autoinmunes, muerte celular, alergias, osteoporosis, y cardiopatía. Los objetivos terapéuticos relacionados con la activación de la senda de JNK incluyen leucemia mielógena crónica (CML), artritis reumatoide, asma, osteoartritís, isquemia, cáncer, y enfermedades neurodegenerativas. Como un resultado de la importancia de la activación de JNK asociada con la enfermedad del hígado o con episodios de isquemia hepática, los compuestos de la invención también pueden ser útiles para el tratamiento de diferentes trastornos hepáticos. También se ha reportado un papel para JNK en la enfermedad cardiovascular, tal como infarto de miocardio o insuficiencia cardíaca congestiva, debido a que se ha demostrado que JNK media las respuestas hipertróficas a diferentes formas de tensión cardíaca. Se ha demostrado que la cascada de JNK también tiene un papel en la activación de las células-T, incluyendo la activación del promotor IL-2. Por consiguiente, los inhibidores de JNK pueden tener un valor terapéutico en la alteración de las respuestas inmunes patológicas. También se ha establecido un papel para la activación de JNK en diferentes cánceres, sugiriendo el uso potencial de los inhibidores de JNK en el cáncer. Por ejemplo, la JNK constitutivamente activada está asociada con la tumorigénesis mediada por HTLV-1 [Oncogene 13:135-42 (1996)]. JNK puede tener un papel en el sarcoma de Kaposi (KS). Otros efectos proliferativos de otras citoqui nas implicadas en la proliferación del sarcoma de Kaposi , tales como el factor de crecimiento endotelial vascular (VEG F), I L-6, y TN Fa, también pueden ser mediados por JN K. En adición , la regulación del gen c-jun en células transformadas p210 BCR-ABL corresponde con la actividad de JNK, sugiriendo un papel para los inhibidores de JN K en el tratamiento de leucemia mielógena crónica (CM L) [Blood 92 :2450-60 ( 1 998)]. Se cree que ciertas condiciones proliferativas anormales están asociadas con la expresión de raf, y por consiguiente, se cree que responden a la inhibición de la expresión de raf. Los niveles anormalmente altos de expresión de la proteína raf también están implicados en la transformación y en la proliferación celular anormal . También se cree que estas condiciones proliferativas anormales responden a la inhibición de la expresión de raf. Por ejemplo, se cree que la expresión de la proteína c-raf tiene un papel en la proliferación celular anormal , debido a que se ha reportado que el 60 por ciento de todas las l íneas celulares de carcinoma pulmonar expresan niveles inusualmente altos de ARNm y proteína de c-raf. Otros ejemplos de las condiciones proliferativas anormales son trastornos hiperproliferativos, tales como cánceres, tumores, hiperplasia, fibrosis pulmonar, angiogénesis, psoriasis, ateroesclerosis, y proliferación de células de músculo liso en los vasos sangu íneos, tal como estenosis o restenosis en seguida de angioplastía. La senda de señalización celular de la que es parte raf, también se ha implicado en los trastornos inflamatorios caracterizados por proliferación de células-T (activación y crecimiento de células-T), tales como rechazo de injerto de tejido, choque por endotoxina, y nefritis glomerular, por ejemplo. Las cinasas de proteína activadas por tensión (SAPKs) son una familia de cinasas de proteína que representan el penúltimo paso en las sendas de transducción de señales que dan como resultado la activación del factor de transcripción c-jun y la expresión de genes regulados por c-jun. En particular, c-jun está involucrado en la transcripción de genes que codifican las proteínas involucradas en la reparación del ADN que sea dañado debido a agresiones genotóxicas. Por consiguiente, los agentes que inhiban la actividad de las cinasas de proteína activadas por tensión en una célula, impiden la reparación del ADN, y sensibilizan a la célula a los agentes que inducen el daño del ADN ó que inhiben la síntesis del ADN e inducen apoptosis de una célula, o que inhiben la proliferación celular. Las cinasas de proteína activadas por mitógeno (MAPKs) son miembros de las sendas de transducción de señales conservadas que activan los factores de transcripción, los factores de traducción, y otras moléculas objetivas, en respuesta a una variedad de señales extracelulares. Las cínasas de proteína activadas por mitógeno son activadas por la fosforilación en un motivo de fosforilación doble que tiene la secuencia Thr-X-Tyr, mediante las cinasas de cinasa de proteína activada por mitógeno (MKKs). En los eucariotes superiores, se ha correlacionado el papel fisiológico de la señalización de las cinasas de proteína activadas por mitógeno, con los eventos celulares tales como proliferación, oncogénesis, desarrollo, y diferenciación. De conformidad con lo anterior, la capacidad para regular la transducción de señales por medio de estas sendas (en particular por medio de MKK4 y MKK6), podría conducir al desarrollo de tratamientos y terapias preventivas para las enfermedades humanas asociadas con la señalización de las cinasas de proteína activadas por mitógeno, tales como enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes, y cáncer. La familia de las cinasas de proteína ríbosomal S6 humana consiste en cuando menos 8 miembros (RSK1, RSK2, RSK3, RSK4, MSK1, MSK2, p70S6K y p70S6 Kb). Las cinasas de proteína de la proteína ribosomal S6 tienen funciones pleotrópicas importantes, y entre ellas está un papel clave en la regulación de la traducción del ARNm durante la biosíntesis de proteína (Eur. J. Biochem, noviembre de 2000; 267(21 ):6321 -30, Exp Cell Res., 25 de noviembre de 1999; 253 (1):100-9, Mol. Cell Endocrino!. 25 de mayo de 1999;151(1-2):65-77). También se ha implicado la fosforilación de la proteína ribosomal S6 mediante p70S6 en la regulación de la movilidad celular (Immunol. Cell Biol. agosto de 2000;78(4):447-51 ), y del crecimiento celular (Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol., 2000;65:101-27), y por consiguiente, puede ser importante en la metástasis tumoral , en la respuesta inmune, y en la reparación de tejido, así como en otras condiciones de enfermedad . Las SAPKs (también llamadas "cinasas N-terminales jun" o "JNKs"), son una familia de cinasas de proteína que representan el penúltimo paso en las sendas de transducción de señales que dan como resultado la activación del factor de transcripción c-jun y la expresión de los genes regulados por c-jun. En particular, c-jun está involucrado en la transcripción de los genes que codifican las proteínas en la reparación del ADN que sea dañado debido a agresiones genotóxicas. Los agentes que inhiban la actividad de SAPK en una célula, impiden la reparación del ADN , y sensibilizan a la célula a las modalidades terapéuticas de cáncer que actúan mediante la inducción de daño del ADN . BTK tiene un papel en la enfermedad autoinmune y/o inflamatoria, tal como lupus eritematoso sistémico (SLE), artritis reumatoide, vasculitidas múltiples, púrpura trombocitopénica idiopática ( ITP), miastenia gravis, y asma. Debido al papel de BTK en la activación de las células-B , los inhibidores de BTK son útiles como inhibidores de la actividad patogénica mediada por las células-B , tal como la producción de anti-anticuerpos, y son útiles para el tratamiento de linfoma y leucemia de células-B . CHK2 es un miembro de la familia de cinasa de punto de verificación de las cinasas de proteína serina/treonina , y está involucrado en un mecanismo utilizado para la vigilancia del daño del ADN, tal como el daño causado por mutágenos ambientales y especies de oxígeno reactivo endógenas. Como un resultado, está implicado como un supresor de tumor y como un objetivo para la terapia de cáncer. CSK tiene influencia sobre el potencial metastásico de las células de cáncer, en particular cáncer de colon. Fes es una cinasa de proteína tirosina no receptora que se ha implicado en una variedad de sendas de transducción de señales de citoquina, así como en la diferenciación de las células mieloides. Fes también es un componente clave de la maquinaria de diferenciación de granulocitos. La actividad de la cinasa de tirosina receptora FLT-3 está implicada en las leucemias y en el síndrome mielodisplásico. En aproximadamente el 25 por ciento de la leucemia mielógena aguda, las células de leucemia expresan una forma constitutivamente activa de cinasa de tirosina (p)-FLT3 auto-fosforilada sobre la superficie celular. La actividad de p-FLT3 confiere una ventaja de crecimiento y sobrevivencia a las células leucémicas. Los pacientes con leucemia aguda, cuyas células de leucemia expresen la actividad de la cinasa p-FLT3, tienen un mal resultado clínico global. La inhibición de la actividad de cinasa p-FLT3 induce apoptosis (muerte celular programada) de las células leucémicas. Los inhibidores de IKKa e IKKß (1 y 2) son terapéuticos para las enfermedades que incluyen artritis reumatoide, rechazo de trasplante, enfermedad inflamatoria del intestino, osteoartritis, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, ateroesclerosis, psoariasis, esclerosis múltiple, embolia, lupus eritematoso sistémico , enfermedad de Halzheimer, isquemia cerebral , lesión cerebral traumática, enfermedad de Parkinson , esclerosis lateral amiotrófica , hemorragia subaracnoidea, u otras enfermedades o trastornos asociados con una producción excesiva de mediadores inflamatorios en el cerebro y en el sistema nervioso central . Met está asociada con la mayoría de los tipos de cánceres humanos mayores, y su expresión con frecuencia está correlacionada con un mal pronóstico y con metástasis. Los inhibidores de Met son terapéuticos para las enfermedades que incluyen cánceres, tales como cáncer pulmonar, NSCLC (cáncer pulmonar que no es de células pequeñas), cáncer óseo, cáncer pancreático, cáncer de piel , cáncer de cabeza y cuello, melanoma cutáneo o intraocular, cáncer uterino, cáncer de ovario, cáncer rectal , cáncer de la región anal , cáncer del estómago, cáncer del colon , cáncer de mama, tumores ginecológicos (por ejemplo, sarcomas uterinos, carcinoma de los tubos de falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma del cérvix, carcinoma de la vagina , o carcinoma de la vulva), Enfermedad de Hodgkin , cáncer del esófago, cáncer del intestino delgado, cáncer del sistema endocrino (por ejemplo, cáncer de la tiroides, paratiroides, o glándulas adrenales), sarcomas de los tejidos blandos, cáncer de la uretra , cáncer del pene, cáncer de próstata, leucemia crónica o aguda, tumores sólidos de la niñez, linfomas linfocíticos, cáncer de la vejiga, cáncer del riñon o del uréter (por ejemplo, carcinoma de células renales, carcinoma de la pelvis renal), malignidad pediátrica, neoplasmas del sistema nervioso central (por ejemplo, linfoma primario del sistema nervioso central, tumores de la columna vertebral, glioma del tallo cerebral, o adenomas de pituitaria), cánceres de la sangre, tales como leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica, etc., enfermedad cutánea neoplásica del esófago de Barrett (síndrome pre-maligno), psoriasis, micosis fungoides e hipertrofia prostática benigna, enfermedades relacionadas con diabetes, tales como retinopatía diabética, isquemia retinal, y neovascularización retinal, cirrosis hepática, enfermedad cardiovascular, tal como ateroesclerosis, enfermedad inmunológica, tal como enfermedad autoinmune, y enfermedad renal. De preferencia, la enfermedad es cáncer, tal como leucemia mieloide aguda y cáncer colo-rectal. La cinasa 2 relacionada con Nima (Nek2) es una cinasa de proteína regulada por el ciclo celular con una máquina actividad en el establecimiento de la mitosis, que se localiza en el centrosoma. Los estudios funcionales han implicado a la Nek2 en la regulación de la separación del centrosoma y la formación de huso. La proteína Nek2 se eleva de dos a cinco veces en las líneas celulares derivadas a partir de un número de tumores humanos, incluyendo aquéllos de origen cervical, de ovario, próstata, y particularmente de mama.

Las enfermedades o condiciones mediadas por p70S6K incluyen, pero no se limitan a, trastornos proliferativos, tales como cáncer y esclerosis tuberosa. Existe una creciente evidencia de que la terapia inhibidora de cinasa funciona de una manera consistente y confiable contra los cánceres en donde se activa constitutivamente el objetivo del fármaco de cinasa mediante mutaciones genéticas. Existen múltiples reportes de mutaciones que se encuentran en las cinasas resultantes de un proceso de selección tumoral natural. Una lista no limitante de ejemplos de las mismas incluiría: el mutante b-raf V599E en más del 60 por ciento de los casos de melanoma; los mutantes de F 3-ITD en el 30 por ciento de los casos de leucemia mielógena aguda; mutaciones de c-kit en los pacientes de GIST; PDGFRa en GIST y HES; PDGFRß en CMML; mutantes de PI3K en cánceres de colon y gástricos y en glioblastomas; y mutantes de EGFR en el 10 por ciento de los cánceres pulmonares (responden a Iressa®) y en los glioblastomas. De conformidad con lo anterior, la presente invención proporciona además un método para prevenir o tratar cualquiera de las enfermedades o trastornos descritos anteriormente, en un sujeto que necesite dicho tratamiento, cuyo método comprende administrar a este sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva (ver "Administration and Pharmaceutical Compositions", más adelante) de un compuesto de la Fórmula I ó una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Para cualquiera de los usos anteriores, la dosificación requerida variará dependiendo del modo de administración, de la condición particular que se vaya a tratar, y del efecto deseado. Administración y Composiciones Farmacéuticas En general, los compuestos de la invención se administrarán en cantidades terapéuticamente efectivas por medio de cualquiera de los modos usuales y aceptables conocidos en la técnica, ya sea solos o en combinación con uno o más agentes terapéuticos. Una cantidad terapéuticamente efectiva puede variar ampliamente, dependiendo de la severidad de la enfermedad, de la edad, y de la salud relativa del sujeto, de la potencia del compuesto utilizado, y de otros factores. En general, se indica que se obtienen resultados satisfactorios sistémicamente con dosificaciones diarias de aproximadamente 0.03 a 2.5 miligramos/kilogramo de peso corporal. Una dosificación diaria indicada en el mamífero superior, por ejemplo en seres humanos, está en el intervalo de aproximadamente 0.5 miligramos a aproximadamente 100 miligramos, convenientemente administrados, por ejemplo, en dosis divididas hasta cuatro veces al día, o en una forma retardada. Las formas de dosificación unitaria adecuadas para administración oral comprenden de aproximadamente 1 a 50 miligramos de ingrediente activo. Los compuestos de la invención se pueden administrar como composiciones farmacéuticas por cualquier vía convencional, en particular enteralmente, por ejemplo oralmente, por ejemplo en la forma de tabletas o cápsulas, o parenteralmente, por ejemplo en la forma de soluciones o suspensiones inyectables, tópicamente, por ejemplo en la forma de lociones, geles, ungüentos o cremas, o en una forma nasal o de supositorio. Las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la presente invención en forma libre o en una forma de sal farmacéuticamente aceptable, en asociación con cuando menos un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable, se pueden fabricar de una manera convencional mediante métodos de mezcla, granulación, o recubrimiento. Por ejemplo, las composiciones orales pueden ser tabletas o cápsulas de gelatina que comprendan al ingrediente activo junto con: a) díluyentes, por ejemplo lactosa, dextrosa, sacarosa, manitol, sorbitol, celulosa, y/o glicina; b) lubricantes, por ejemplo sílice, talco, ácido esteárico, su sal de magnesio o calcio, y/o polietilenglicol; para tabletas también c) aglutinantes, por ejemplo silicato de magnesio y aluminio, pasta de almidón, gelatina, tragacanto, metil-celulosa, carboxi-metil-celulosa de sodio, y/o polivinil-pirrolidona; si se desea d) desintegrantes, por ejemplo almidones, ágar, ácido algínico o su sal sódica, o mezclas efervesventes; y/o e) absorbentes, colorantes, saborizantes, y edulcorantes. Las composiciones inyectables pueden ser soluciones o suspensiones isotónicas acuosas, y los supositorios se pueden preparar a partir de emulsiones o suspensiones grasas. Las composiciones pueden esterilizarse y/o pueden contener adyuvantes, tales como agentes conservadores, estabilizantes, humectantes, o emulsionantes, promotores de solución, sales para regular la presión osmótica, y/o reguladores del pH. En adición, también pueden contener otras sustancias terapéuticamente valiosas. Las formulaciones adecuadas para aplicaciones transdérmicas incluyen una cantidad efectiva de un compuesto de la presente invención con un vehículo. Un vehículo puede incluir solventes farmacológicamente aceptables absorbibles para ayudar al paso a través de la piel del huésped. Por ejemplo, los dispositivos transdérmicos están en la forma de un parche que comprende un miembro de respaldo, un depósito que contiene al compuesto opcionalmente con vehículos, opcionalmente una barrera de control de velocidad para suministrar el compuesto a la piel del huésped a una velocidad controlada y previamente determinada durante un período de tiempo prolongado, y elementos para asegurar el dispositivo a la piel. También se pueden utilizar formulaciones transdérmicas de matriz. Las formulaciones adecuadas para aplicación tópica, por ejemplo a la piel y a los ojos, de preferencia son soluciones acuosas, ungüentos, cremas, o geles bien conocidos en la técnica. Éstos pueden pueden contener solubilizantes, estabilizantes, agentes mejoradores de tonicidad, reguladores del pH, y conservadores. Los compuestos de la invención se pueden administrar en cantidades terapéuticamente efectivas en combinación con uno o más agentes terapéuticos (combinaciones terapéuticas). Por ejemplo, se pueden presentar efectos sinérgicos con otras sustancias inmuno-moduladoras o anti-inflamatorias, por ejemplo cuando se utilizan en combinación con ciclosporina, rapamicina, o ascomicina, o análogos inmunosupresores de las mismas, por ejemplo ciclosporina A (CsA), ciclosporina G, FK-506, rapamicina, o compuestos comparables, corticosteroides, ciclofosfamida, azatioprina, metotrexato, brequinar, leflunomida, mizoribina, ácido micofenólico, micofenolato-mofetil, 15-desoxi-espergualina, anticuerpos inmuno-supresores, en especial anticuerpos monoclonales para los receptores de leucocitos, por ejemplo MHC, CD2, CD3, CD4, CD7, CD25, CD28, B7, CD45, CD58, o sus ligandos, u otros compuestos inmunomoduladores, tales como CTLA41g. Cuando los compuestos de la invención se administran en conjunto con otras terapias, las dosificaciones de los compuestos co-administrados, por supuesto, variarán dependiendo del tipo de co-fármaco empleado, del fármaco específico empleado, de la condición que se esté tratando, etc. La invención también proporciona combinaciones farmacéuticas, por ejemplo un estuche terapéutico, que comprenden: a) un primer agente que es un compuesto de la invención como se da a conocer en la presente, en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, y b) cuando menos un co-agente. El estuche terapéutico puede comprender instrucciones para su administración . Los términos "co-administración" o "administración combinada" , o similares, como se utilizan en la presente, pretenden abarcar la administración de los agentes terapéuticos seleccionados a un solo paciente, y pretenden incluir regímenes de tratamiento en donde los agentes no necesariamente sean administrados por la misma vía de administración o al mismo tiempo.

El término "combinación farmacéutica", como se utiliza en la presente, significa un producto que resulta de la mezcla o combinación de más de un ingrediente activo, e incluye tanto combinaciones fijas como no fijas de los ingredientes activos. El término "combinación fija" significa que los ingredientes activos, por ejemplo un compuesto de la Fórmula I y un co-agente, se administran ambos a un paciente de una manera simultánea en la forma de una sola entidad o dosificación . El término "combinación no fija" significa que los ingredientes activos, por ejemplo un compuesto de la Fórmula I y un co-agente, se administran ambos a un paciente como entidades separadas, ya sea de una manera simultánea, concurrente, o en secuencia , sin límites de tiempo específicos, en donde esta administración proporcione niveles terapéuticamente efectivos de los dos compuestos en el cuerpo del paciente. Esto último también se aplica a la terapia de cóctel , por ejemplo la administración de tres o más ingredientes activos.

Procesos para Hacer ¡os Compuestos de Ba Invemción La presente invención también incluye procesos para la preparación de los compuestos de la invención. En las reacciones descritas, puede ser necesario proteger a los grupos funcionales reactivos, por ejemplo los grupos hidroxilo, amino, ¡mino, tío, o carboxilo, en donde se deseen éstos en el producto final, para evitar su participación indeseada en las reacciones. Se pueden utilizar los grupos protectores convencionales de acuerdo con la práctica estándar, por ejemplo, ver T. W. Greene y P. G. M. Wuts en "Protective Groups in Organic Chemistry" , John Wiley and Sons, 1991. Los compuestos de la Fórmula I se pueden preparar procediendo como en el siguiente Esquema de Reacción I: Esquema de Reacción I en donde n, R.,, R2, R3, R4, R7, Y., e Y2 son como se definen en el Compendio de la Invención. Un compuesto de la Fórmula I se puede sintetizar mediante la reacción de un compuesto de la Fórmula II con un compuesto de la Fórmula III en la presencia de un solvente adecuado (por ejemplo, dicloro-metano, y similares), y una base adecuada (por ejemplo, di-isopropil-etil-amina, y similares). La reacción procede en un intervalo de temperatura de aproximadamente 0°C a aproximadamente 40°C, y puede tomar hasta aproximadamente 10 horas para terminarse. La mezcla de reacción opcionalmente se hace reaccionar de manera adicional para remover cualesquiera grupos protectores. Los ejemplos detallados de la síntesis de un compuesto de la Fórmula I se pueden encontrar en los Ejemplos que se encuentran más adelante. Procesos Adicionales para Hacer los Compuestos de la Invención Un compuesto de la invención se puede preparar como una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable, mediante la reacción de la forma de base libre del compuesto con un ácido inorgánico u orgánico farmacéuticamente aceptable. De una manera alternativa, una sal de adición de base farmacéuticamente aceptable de un compuesto de la invención se puede preparar mediante la reacción de la forma de ácido libre del compuesto con una base inorgánica u orgánica farmacéuticamente aceptable. De una manera alternativa, las formas de sal de los compuestos de la invención se pueden preparar utilizando sales de los materiales de partida o intermediarios. Las formas de ácido libre o de base libre de los compuestos de la invención, se pueden preparar a partir de la forma de sal de adición de base o de sal de adición de ácido correspondiente, respectivamente. Por ejemplo, un compuesto de la invención en una forma de sal de adición de ácido se puede convertir hasta la base libre correspondiente mediante su tratamiento con una base adecuada (por ejemplo, una solución de hidróxido de amonio, hidróxido de sodio, y similares). Un compuesto de la invención en una forma de sal de adición de base se puede convertir hasta el ácido libre correspondiente mediante su tratamiento con un ácido adecuado (por ejemplo, ácido clorhídrico, etc.). Los compuestos de la invención en una forma no oxidada, se pueden preparar a partir de los N-óxidos de los compuestos de la invención mediante su tratamiento con un agente reductor (por ejemplo, azufre, dióxido de azufre, trifenil-fosfina, borohidruro de litio, borohidruro de sodio, tricloruro de fósforo, tribromuro, o similares), en un solvente orgánico inerte adecuado (por ejemplo, acetonitrilo, etanol, dioxano acuoso, o similares), de 0°C a 80°C.

Los derivados de profármaco de los compuestos de la invención se pueden preparar mediante los métodos conocidos por los expertos ordinarios en este campo (por ejemplo, para mayores detalles, ver Saulnier y colaboradores, (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Volumen 4, página 1985). Por ejemplo, se pueden preparar los profármacos apropiados mediante la reacción de un compuesto no derivado de la invención con un agente carbamilante adecuado (por ejemplo, 1 , 1 -aciloxi-alquil-carbano-clorhidato, carbonato de para-nitro-fenilo, o similares). Los derivados protegidos de los compuestos de la invención se pueden hacer por medios conocidos por los expertos ordinarios en la técnica . Una descripción detallada de las técnicas aplicables a la creación de grupos protectores y su remoción se puede encontrar en T. W. Greene "Protective Groups in Organic Chemistry" , 3a Edición , John Wiley and Sons, Inc. 1999. Los compuestos de la presente invención se pueden preparar de una manera conveniente, o se pueden formar durante el proceso de la invención , como solvatos (por ejemplo, hidratos). Los hidratos de los compuestos de la presente invención se pueden preparar de una manera conveniente mediante recristalización a partir de una mezcla de solventes acuosos/orgánicos, utilizando solventes orgánicos tales como dioxina, tetrahidrofurano, o metanol . Los compuestos de la invención se pueden preparar como sus estereoisómeros individuales, mediante la reacción de una mezcla racémica del compuesto con un agente de resolución ópticamente activo, para formar un par de compuestos díaestereoisoméricos, separar los diaestereómeros, y recuperar los enantiómeros ópticamente puros. Aunque la resolución de los enantiómeros se puede llevar a cabo utilizando derivados diaestereoméricos covalentes de los compuestos de la i nvención , se prefieren los complejos disociables (por ejemplo, sales diaestereoméricas cristalinas). Los diaestereómeros tienen propiedades físicas distintas (por ejemplo, puntos de fusión , puntos de ebullición, solubilidades, reactividad , etc. ), y se pueden separar fácilmente aprovechando la ventaja de estas diferencias. Los diaestereómeros se pueden separar mediante cromatografía , o de preferencia, mediante técnicas de separación/resolución , basándose en las diferencias en la solubilidad . Entonces se recupera el enantiómero ópticamente puro, junto con el agente de resolución , por cualquier medio práctico que no dé como resultado la racemización . Una descripción más detallada de las técnicas aplicables a la resolución de los estereoisómeros de los compuestos a partir de su mezcla racémica se puede encontrar en Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H . Wilen , "Enantiomers, Racemates and Resolutions" , John Wiley and Sons, Inc. 1981 . En resumen , los compuestos de la Fórmula I se pueden hacer mediante un proceso que involucra: (a) aquél del esquema de reacción I ; y (b) opcionalmente convertir un compuesto de la invención en una sal farmacéuticamente aceptable; (c) opcionalmente convertir una forma de sal de u compuesto de la invención hasta una forma que no sea de sal ; (d) opcionalmente convertir una forma no oxidada de un compuesto de la invención en un N-óxido farmacéuticamente aceptable; (e) opcionalmente convertir una forma de N-óxido de un compuesto de la invención hasta su forma no oxidada; (f) opcionalmente resolver un isómero individual de un compuesto de la invención a partir de una mezcla de isómeros; (g) opcionalmente convertir un compuesto no derivado de la invención en un derivado de profármaco farmacéuticamente aceptable; y (h) opcionalmente convertir un derivado de profármaco de un compuesto de la invención hasta su forma no derivada. Hasta donde no se describa particularmente la producción de los materiales de partida, los compuestos son conocidos o se pueden preparar de una manera análoga a los métodos conocidos en la técnica, o como se da a conocer en los Ejemplos que se encuentran posteriormente en la presente. Un experto en la técnica apreciará que las transformaciones anteriores son solamente representativas de los métodos para la preparación de los compuestos de la presente invención , y que se pueden emplear de una manera similar otros métodos bien conocidos.

Ejem plos La presente invención se ejemplifica adicíonalmente, pero no se limita , mediante los siguientes Ejemplos que ilustran la preparación de los compuestos de la Fórmula I de acuerdo con la i nven ción .

Ejemplo 1 Síntesis de 3-(4-metil-»m¡dazoM-il)-N-4-met¡D-3 3-metiD°3°(f7H- pirrolo-r2.3-dl-pirimidin°4-¡l)-ureidol-fenil>-5-trifluoro°metñl° benzamida 4°cloro-7-Üoluen°4"Sulfonil)-7H°pir?rolo-r2.3-dl-pirimidsna A una solución de 6-cloro-desaza-purína (2.0 gramos, 13 milimoles, 1.0 equivalentes) en dicloro-metano (65 mililitros), se le agregan trietil-amina (1.98 mililitros, 14.3 milimoles, 1.1 equivalentes) y 4-dimetil-amino-piridina (catalítica). Se agrega cloruro de tosilo (2.55 gramos, 13.4 milimoles, 1 .03 equivalentes) en porciones a la mezcla de reacción, la cual se equilibra adicionalmente durante 30 minutos. Entonces la mezcla de reacción se divide entre dicloro-metano y agua . La capa orgánica se separa, y la capa acuosa se extrae con dicloro-metano . Los extractos orgánicos combinados se lavan con agua, se secan sobre Na2SO4, se filtran , y se concentran , para proporcionar el producto del título 2. El compuesto del título se utiliza en el siguiente paso sin mayor purificación. Metil-r7-ítoa uen-4-su lfon in-7H-pirrolo-r2.3°d1-pirñ?pp?ñ l i n° 4-? ll-amina Se agrega metil-amina (6.6 mililitros de 2.0 M en tetrahidro-furano , 1 3.1 mílimoles, 2.4 equivalentes) a una solución del 2 ( 1 .7 gramos, 5.5 milimoles, 1 .0 equivalentes) en tetrahidro-furano (5 mililitros) a 23°C. La reacción se agita adicionalmente durante 3 horas a temperatura ambiente, después de lo cual , el residuo sólido se divide entre acetato de etilo y agua . Las capas orgánicas se separan , se secan sobre Na2SO4, se filtran , y se concentran , para proporcionar el producto del título. El residuo se utiliza en el siguiente paso sin mayor purificación.

N°cloro-carbonil-N-met5l-f7-(toluen°4-sulfoni[l)-pirrólo- ¡"2.3-d1-p¡rim¡din-4-¡n-amina Un frasco Smith (2.5 mililitros) conteniendo el 3 (0.250 gramos, 0.82 milimoles, 1.0 equivalentes), trifosgeno (0.24 gramos, 0.82 milimoles, 1.0 equivalentes), y dioxano (2 mililitros) se somete a calentamiento con microondas utilizando un sintetizador Smith a 150°C durante un período de 20 minutos. Luego la mezcla de reacción se divide entre dicloro-metano y agua. La capa orgánica se separa, y la capa acuosa se extrae con dicloro-metano. Los extractos orgánicos combinados se lavan con agua, se secan sobre Na2O4, se filtran, y se concentran, para dar el producto del título, el cual se utiliza en el siguiente paso sin mayor purificación. Terbutil-éster del ácido í4-metil-3°í3-metil°3-r7-Üonyen-4-sulfonip-7H-pirro¡o-f2.3-d1-pirimidin-4-5S11-ure5do}-fen5ID-carbámico A una solución del 5 (0.182 gramos, 0.82 milimoles, 1.0 equivalentes) y di-isopropil-etil-amina (0.14 mililitros, 0.82 milimoles, 1.0 equivalentes) en dicloro-metano (2.0 mililitros) a 23°C, se le agrega por goteo el cloruro de carbamoílo 4 (0.3 gramos, 0.82 milimoles, 1.0 equivalentes) durante un período de 15 minutos. La mezcla de reacción se agita adicionalmente a temperatura ambiente durante un período de 8 horas, después de lo cual, se divide entre dicloro-metano y agua. La capa orgánica se separa, y la capa acuosa se extrae con dicloro-metano. Los extractos orgánicos combinados se lavan con agua, se secan sobre Na2SO4, se filtran, y se concentran, para proporcionar el producto del título, el cual se utiliza en el siguiente paso sin mayor purificación. 3°(5-amino-2-metin-fenin-1-metil-1°(7H-pio-rolo-r2.3°d1-pÍB-imidin-4-ill-urea A la urea cruda 6 (3.2 gramos, 5.8 milimoles, 1.0 equivalentes) en dicloro-metano (30 mililitros) se le agrega HCI 5-6N en isopropanol (11.6 mililitros, 58 milimoles, 10.0 equivalentes), para dar lugar a una solución transparente. La mezcla de reacción se agita adicionalmente a 23°C durante 30 minutos, conduciendo a la precipitación del producto. La masa de reacción se concentra al vacío, y se neutraliza con una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Los orgánicos se extraen utilizando acetato de etilo como solvente, se secan sobre Na2SO4, se filtran, y se concentran, para proporcionar el producto deseado. A una solución de la amina primaria cruda (2.3 gramos, 5.1 milimoles, 1.0 equivalentes) disuelta en (1:1 de THF:MeOH), se le agrega Na-Hg (3.5 gramos, 3.0 equivalentes basándose en el Na). La reacción se agita durante 15 minutos, después de lo cual, la mezcla de reacción se decanta para remover las sales de mercurio, y se concentra el líquido sobrenadante bajo presión reducida. El residuo sólido se divide entre acetato de etilo y agua. La capa orgánica se separa, se seca sobre Na2SO4, se filtra, y se concentra, para proporcionar el producto crudo. El producto crudo se purifica mediante cromatografía en columna por evaporación instantánea utilizando 9:1 por volumen/volumen de CH2CI2:MeOH como solvente, para proporcionar el compuesto del título 7 como un sólido. 3-(4-met¡.-im¡dazol-1-¡p-N-{4-met¡l-3-r3-met¡l-3-(7IHl-pirrolo-r2,3-d1-pirimidin°4-ip-ureidol-fenil -5-trifluoro°?pp?etil° benzamida A una solución del 7 (7 miligramos, 0.23 milimoles, 1.0 equivalentes), ácido 3-(4-metil-imidazol-1-il)-5-trifluoro-metil-benzoico (7.6 miligramos, 0.27 milimoles, 1.2 equivalentes), y DIPEA (40 microlitros, 0.27 milimoles, 1.2 equivalentes) en dimetíl-formamida (0.5 mililitros), se le agrega HATU (9.9 miligramos, 0.25 milimoles, 1.1 equivalentes). Después de agitar durante 1 hora a temperatura ambiente, se remueve el solvente al vacío. El residuo se disuelve en sulfóxido de dímetilo (1 mililitro). La solución resultante se somete a purificación mediante LC-MS de fase inversa, para dar el compuesto del título como una sal de ácido trifluoro-acético: 1H RMN 400 MHz (DMSO-d6) d 12.81 (bs, 1H), 12.28 (bs, 1H), 10.52 (bs, 1H), 9.40 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.40 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.48 (m, 2H), 7.19 (d, J = 8.32 Hz, 1H), 6.78 (m, 1H) 3.05 (s, 3H), 2.30 (s, 3H) 2.27 (s, 3H); MS m/z 549.2 (M + 1).

Ejemplo 2 Síntesis de N-r4-metil-3-f2-7H-pirrolo-í2.3-d]°pirimidi?p?° !- acetil-amino)-feniH-3-trífluoro-metfll-be?p)za?mida 10 11 12 ?, 150°C Dimetil-éster del ácido 2-r7-toluen-4-sulfonil)-7Hl-pirrolo°r2,3-d1-pirimidin-4-ip-malónico A la suspensión de NaH (25 miligramos, 0.62 milimoles, 3.1 equivalentes) en sulfóxido de dimetilo (2.0 mililitros), se le agrega malonato de dimetilo (0.071 mililitros, 0.62 milimoles, 3.1 equivalentes) a 23°C. Después de que cesa el desprendimiento de hidrógeno, se agrega el 2 (64 miligramos, 20 milimoles, 1.0 equivalentes). La reacción se equilibra adicionalmente a 80°C durante 3 horas. Luego la reacción se enfría a temperatura ambiente, y se apaga con NH4CI saturado. Los orgánicos se extraen utilizando acetato de etilo como solvente, se secan sobre Na2SO4, se filtran, y se concentran, para proporcionar el producto deseado (79 miligramos, 94 por ciento). Metü-éster del ácido 7-ftoluen-4-suHFonilD°7H-pir?rolo° r2.3-d1-pirimidin-4-il?-acético Una mezcla del 10 (0.63 gramos, 1.56 milimoles, 1.0 equivalentes) y metóxido de sodio (0.038 mililitros de una solución al 25 por ciento en peso/volumen, 0.16 milimoles, 0.1 equivalentes) en MeOH (15 mililitros), se calienta a 60°C durante 1 hora. Después de esto, la reacción se concentra, y el residuo se extrae con acetato de etilo después de apagar con NH CI. La capa orgánica se seca sobre Na2SO , se filtra, y se concentra. El producto crudo se purifica utilizando hexanos:acetato de etilo (2:1) como solvente, para proporcionar el producto deseado. N-(1°meti¡en-3- 2-f7-(toluen-4-sulfonil H°pio-rolo 2.3° d1-pirimidin-4-in-acetil-amino)-pent-2-enip-3-trifluoro-m®til° benzamida Una mezcla del 11 (60 miligramos, 0.17 milimoles, 1.0 equivalentes) y el 12 (153 miligramos, 0.51 milimoles, 3.0 equivalentes) se calienta a 150°C durante un período de 4 horas. En ese tiempo se completa la reacción, después de lo cual, se enfría la masa de reacción a temperatura ambiente. El producto crudo se purifica utilizando hexanos:acetato de etilo (2:1) como solvente, para proporcionar el producto deseado. f4-metil-3-(2-7H°p¡rroio-r2.3-d1-pipnnidin"4°¡haceftin" amino -fenip-amida del ácido 5.5.5-tríflluoro-2-metiill-penft-2-enoico A una solución del 13 (61 miligramos, 0.1 milimoles, 1.0 equivalentes) disuelto en (1:1 de THF:MeOH), se le agrega Na-Hg (172 miligramos, 7.0 equivalentes basándose en el Na). La reacción se agita durante 30 minutos, después de lo cual, la mezcla de reacción se decanta para remover las sales de mercurio, y se concentra el líquido sobrenadante bajo presión reducida. El residuo sólido se divide entre acetato de etilo y agua. La capa orgánica se separa, se seca sobre Na2SO4, se filtra, y se concentra, para proporcionar el producto crudo. Después de agitar durante 1 hora a temperatura ambiente, se remueve el solvente al vacío. El residuo se disuelve en sulfóxido de dimetilo (1 mililitro). La solución resultante se somete a purificación mediante LC-MS de fase inversa, para dar el compuesto del título como una sal de ácido trifluoro-acéticoMS m/z 454.2 (M + 1). Ejemplo 3 Síntesis de N°(3-imidazol-1-il-5-trifluoro-meti8°fen¡n-4°?pp?efep°3° r3-meti8-3-(7H-pirrolo-r2,3-dl-pirimidin-4-ip-ureido1-bengamida Na-Hg 4°metil°N-r3-f4-met¡l-imidazol-1-in°5-trif¡?u?oro°me{ fenip-3-{3-metil-3-r7-(toluen-4-sulfonin-7H-pirroDo-f2.3° pirimidin-4-il1-ureido>-benzamida A una solución del 15 (15 miligramos, 0.04 milimoles, 1.0 equivalentes) y di-isopropil-etil-amina (6.8 microlitros, 0.04 milimoles, 1.0 equivalentes) en dicloro-metano (0.5 mililitros) a 23°C, se le agrega por goteo el cloruro de carbamoílo 4 (14.5 miligramos, 0.04 milimoles, 1.0 equivalentes) durante un período de 15 minutos. La mezcla de reacción se agita adicionalmente a temperatura ambiente durante un período de 8 horas, después de lo cual, se divide entre dicloro-metano y agua. La capa orgánica se separa, y la capa acuosa se extrae con dicloro-metano. Los extractos orgánicos combinados se lavan con agua, se secan sobre Na2SO4, se filtran, y se concentran, para proporcionar el producto del título 16. El resjduo se utiliza en el siguiente paso sin mayor purificación. 4-metil-N-r3- 4-metil-imidazol°1-in°5-trif8yoro-me n° fenin-3-r3-metil-3-(7H-pirrolo-r2.3-d1-pirimidin-4-¡n-urei ]o1 benzamida A una solución del 16 (22 miligramos, 0.031 milimoles, 1.0 equivalentes) disuelto en (1:1 de THF:MeOH), se le agrega Na-Hg (22 miligramos, 2.0 equivalentes basándose en el Na). La reacción se agita durante 30 minutos, después de lo cual, la mezcla de reacción se decanta para remover las sales de mercurio, y se concentra el líquido sobrenadante bajo presión reducida. El residuo sólido se divide entre acetato de etilo y agua. La capa orgánica se separa, se seca sobre Na2SO4, se filtra, y se concentra, para proporcionar el producto crudo. Después de agitar durante 1 hora a temperatura ambiente, se remueve el solvente al vacío. El residuo se disuelve en sulfóxido de dimetilo (1 mililitro). La solución resultante se somete a purificación mediante LC-MS de fase inversa, para dar el compuesto del título como una sal de ácido trifluoro-acético: MS m/z 549.2 (M + 1).

Ejemplo 4 Síntesis de N"f4-(4-et¡l-piperazin-1-ilme ip-3°trif¡uoro°?pp?etil fen¡ll-4-met¡l-3-r3-metil-3-(7H-pirrolo 2.3-dl-p¡r.m¡d¡n-4-¡l)- u re id oí -benzamida 1. 1-etii-4-(4-nstro=2-trifluoro-metil-b@ncil) = piperazo A una solución de 1-metil-4-nitro-2-trifluoro-metil-benceno (1; 15 gramos, 73 milimoles, 1.0 equivalentes) en tetracloruro de carbono (250 mililitros), se le agregan NBS (13 gramos, 98 mililitros, 73 milimoles, 1.0 equivalentes) y AIBN (1.19 gramos, 7.3 milimoles, 0.1 equivalentes) como un iniciador. La reacción se pone a reflujo durante la noche, y luego se divide con agua. La capa orgánica se separa, y la capa acuosa se extrae con diclorometano. Los extractos orgánicos combinados se lavan con agua, se secan sobre Na2SO4, se filtran , y se concentran , para proporcionar los sólidos. Los sólidos se disuelven en diclorometano (300 mililitros). La solución transparente se trata con DI EA (12.55 mililitros, 73 milimoles, 1 .0 equivalentes) y N-etíl-piperazina (8.25 gramos, 73 milimoles, 1 .0 equivalentes). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 30 minutos (hasta terminar la reacción de acuerdo co la LC-MS ). La mezcla de reacción se lava con agua, se seca sobre Na2SO4, se filtra, y se concentra, para proporcionar el producto crudo. El producto crudo se purifica mediante cromatografía en columna por evaporación instantánea , utilizando 1 : 1 por volumen/volumen de hexanos:acetato de etilo como el solvente, para proporcionar el compuesto del título 2 como un sólido. 2. 4-(4=etil = pi erazi -1 -i l meftil)-3=Spfl Moro-metB l-tfeoti D D = am ina.

A una solución de 4-(4-etil-piperazin-1 -ilmetil)-3-trifluoro-metil-fenil-amina ( 10 gramos, 31 .54 milimoles, 1 .0 equivalentes) en MeOH (250 mililitros) se le agrega n íquel de Raney ( 1 .0 gramos, 10 por ciento en peso). La suspensión se agita bajo una atmósfera de hidrógeno ( 1 atmósfera) durante 24 horas. Al final de la reacción , como se indique mediante LC-MS , la masa de reacción se filtra sobre Celite, y el filtrado se concentra bajo presión reducida para dar el producto deseado. 3. N°[4-(4-etil-piperazin-1 -ilp??etil)-3-firifluoro=metill-ffe?piDl3=4-meti l-3=n it?r?"benzamída.

A una solución de 4-(4-etil-piperazin-1 -ilmetil)-3-trifluoro-metil-fenil-amina (8.0 gramos, 27.9 milimoles, 1 .0 equivalentes) en dicloro-metano ( 140 mililitros), se le agrega di-ísopropil-etil-amina (5.27 mililitros, 30.69 milimoles, 1 .1 equivalentes). La solución se enfría a 0°C, después de lo cual , se agrega en porciones cloruro de 4-metil-3-nitro-benzoílo (4.18 mililitros, 28.73 milimoles, 1 .03 equivalentes) a la mezcla de reacción, la cual se equilibra adicionalmente durante 30 minutos. Entonces la mezcla de reacción se divide entre dicloro-metano y agua. La capa orgánica se separa , y la capa acuosa se extrae con diclorometano. Los extractos orgánicos combinados se lavan con agua , se secan sobre Na2SO4, se filtran , y se concentran , para proporcionar el producto deseado, el cual se utiliza en el siguiente paso sin mayor purificación . 4. 3=amino-N-[4-(4-etiI-piperazin-1-il?pnetil)-3=í?rifluo?ro=met? f e n i B ] -4- m et i I - b e n za rn i d a .

En una solución de la N-[4-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluoro-metil-fenil]-4-metil-3-nitro-benzamida (10 gramos, 22.2 milimoles, 1.0 equivalentes) en MeOH (250 mililitros), se le agrega níquel de Raney (1.0 gramos, 10 por ciento en peso). La suspensión se agita bajo una atmósfera de hidrógeno (1 atmósfera) durante 24 horas. Al final de la reacción, como se indique mediante HPLC, la masa de reacción se filtra sobre Celite, y el filtrado se concentra bajo presión reducida, para dar el producto deseado 3: 1H RMN MHz (DMSO-d6) d 10.24 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.02 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.8 Hz, 1H, 7.16 (s, 1H), 7.13 (m, 2H), 5.1 (s, 2H), 3.55 (s, 2H), 2.37 (m, 10H) 2.11 (s, 3H), 1.05 (t, 3H). 4-cDoro-7-(toluen-4-sulfo?p?iI)-7H-piD'irc?lo-|[2,3< pipmidina.

A una solución de 6-cloro-desaza-purina (4, 10.0 gramos, 65 milimoles, 1.0 equivalentes) en dicloro-metano (325 mililitros), se le agregan trietil-amina (9.9 mililitros, 71.5 milimoles, 1.1 equivalentes) y 4-dimetil-amino-piridina (catalítica). Se agrega cloruro de tosilo (12.76 gramos, 66.9 milimoles, 1.03 equivalentes en porciones a la mezcla de reacción, la cual se equilibra adicionalmente durante 30 minutos. Luego la mezcla de reacción se divide entre dicloro-metano y agua. La capa orgánica se separa, y la capa acuosa se extrae con dicloro-metano. Los extractos orgánicos combinados se lavan con agua, se secan sobre Na2SO4, se filtran, y se concentran, para proporcionar el producto del título, el cual se utiliza en el siguiente paso sin mayor purificación. 6. Met?l-[7-(toluen-4°sulfonM)-7H-pirroDo-|[2,3°d]-pii?rDm?d??p?° 4=i!]-am5na Se agrega metil-amina (66 mililitros de 2.0 M en tetrahidrofurano, 13.1 milimoles, 2.4 equivalentes) a una solución de 4-cloro-7-(toluen-4-sulfonil)-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidina (17 gramos, 55 milimoles, 1.0 equivalentes) en tetrahidrofurano (50 mililitros) a 23°C. La reacción se agita adicionalmente durante 3 horas a temperatura ambiente. Después de que se termina la reacción, se remueve el tetrahidrofurano bajo presión reducida, y el residuo sólido se divide entre acetato de etilo:tetrahidrofurano (1:1) y agua. Las capas orgánicas se separan, se secan sobre Na2SO , se filtran, y se concentran para proporcionar el producto del título 5, el cual se utiliza en el siguiente paso sin mayor purificación. 7. M=cloro-carbon«S-N-metil-[7-(toluera=4-s iffonil)-7IKl = pirrolo-[2,3-d]-pir?midin-4-il]-a in?a Un frasco Smith (20 mililitros) conteniendo el 5 (2.50 gramos, 8.2 milimoles, 1.0 equivalentes), trifosgeno (2.4 gramos, 8.2 milimoles, 1.0 equivalentes), y dioxano (15 mililitros), se somete a calentamiento con microondas utilizando un sintetizador Smith a 150°C durante un período de 20 minutos. La mezcla de reacción se concentra. Entonces el residuo se divide entre dicloro-metano y agua. La capa orgánica se separa, y la capa acuosa se extrae con dicloro-metano. Los extractos orgánicos combinados se lavan con agua, se secan sobre Na2SO4, se filtran, y se concentran, para proporcionar el producto del título 6, el cual se utiliza en el siguiente paso sin mayor purificación. 8. N-[4-(4-etil-pi erazin-1-Dlmetil)°3-trifluoro°metil-'(FeniiD]-4- pirímidin-4-il)-u re ido}- benzamida.

A una solución de del 3 (3.45 gramos, 8.2 milimoles, 1.0 equivalentes) y piridina (0.66 mililitros, 0.82 milimoles, 1.0 equivalentes) en dicloro-metano (40 mililitros) a 23°C, se le agrega por goteo cloruro de carbamoílo d (3 gramos, 8.2 milimoles, 1.0 equivalentes) durante un período de 15 minutos. La mezcla de reacción se agita adicionalmente a temperatura ambiente durante un período de 8 horas, después de lo cual, se divide entre dicloro-metano y agua. La capa orgánica se separa, y la capa acuosa se extrae con dicloro-metano. Los extractos orgánicos combinados se lavan con agua, se secan sobre Na2SO , se filtran, y se concentran, para proporcionar el producto crudo 7. El residuo se purifica utilizando cromatografía en columna con MeOH/CH2CI2 (5:1) como eluyente, para proporcionar el producto del título 7. 9. N-[4-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-3-trg luoro°?metil-1Fe?n?iiO]' etil-3-[3°rnetil-3=(7H = pir?rolo-[2,3-d]-pirimidin=4=il)-ureDdo]-berczamida.

A la urea tosilada 7 (1.5 gramos, 2.0 milímoles, 1.0 equivalentes) disuelta en tetrahidrofurano (10 mililitros) se le agrega Na-Hg (0.92 gramos, 2.0 equivalentes basándose en el Na), seguido por trifluoro-etanol (291 microlitros, 4.0 milimoles, 2.0 equivalentes). La reacción se agita durante 15 minutos, se decanta para remover las sales de mercurio y el líquido sobrenadante, y se concentra bajo presión reducida. El residuo sólido se divide entre acetato de etilo y agua. Las capas orgánicas se separan, se secan sobre Na2SO4, se filtran, y se concentran, para proporcionar el producto crudo. El producto crudo se purifica mediante HPLC de preparación, para proporcionar el compuesto del título 8: 1H RMN 400 MHz (DMSO-d6) d 12.98 (bs, 1H), 12.42 (bs, 1H), 10.52 (bs, 1H), 8.68 (s, 1H) 8.65 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.11 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.6 (m, 1H), 7.47 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.9 (m, 1H), 3.78 (s, 3H) 3.62 (s, 2H), 2.51 (s, 3H), 2.43-2.35 (m, 10H), 1.04 (t, J = 6.9 Hz, 3H), EM m/z 595.3 (M + 1). Repitiendo los procedimientos descritos en los Ejemplos anteriores, y utilizando los materiales de partida apropiados, se obtienen los siguientes compuestos de la Fórmula I, como se identifican en la Tabla 1.

Ensayos Los compuestos de la presente invención se ensayan para medir su capacidad para inhibir de una manera selectiva la proliferación celular de las células 32D que expresan BCR-Abl (32D-p210), comparándose con las células 32D progenitoras. Los compuestos que inhiben selectivamente la proliferación de estas células transformadas por BCR-Abl se prueban para determinar su actividad anti-proliferativa sobre células Ba/F3 que expresan las formas de tipo silvestre o mutante de Bcr-abl. Inhibición de la proliferación celular dependiente de CI -Abl (método de Alta Producción). La línea celular de murino utilizada es la línea celular progenitora en hematopoiética 32D transformada con ADNc de BCR-Abl (32D-p210). Estas células se mantienen en RPMI/suero fetal de becerro al 10 por ciento (RPMI/FCS) complementado con 50 microgramos/mílilitro de penicilina, 50 microgramos/mililitro de estreptomicina, y L-glutamina 200 mM. Las células 32D no transformadas se mantienen de una manera similar con la adición del 15 por ciento de medio acondicionado WEHI como una fuente de IL3. Se aplican 50 microlitros de una suspensión de células 32D ó 32D-p210 en microplacas Greiner de 384 pozos (negras), a una densidad de 5,000 células por pozo. Se agregan 50 nanolitros del compuesto de prueba (1 mM en la solución de suministro de sulfóxido de dimetilo) a cada pozo (se incluye STI571 como un control positivo). Las células se incuban durante 72 horas a 37°C, con CO2 al 5 por ciento. Se agregan a cada pozo 10 microlitros de una solución de Azul Alamar al60 por ciento (Tek Diagnostics), y las células se incuban durante 24 horas adicionales. La intensidad de fluorescencia (excitación a 530 nanómetros, emisión a 580 nanómetros) se cuantifica utilizando el sistema AcquestMR (Molecular Devices). Inhibición de Sa proliferación celular dependiente de BCR-Abl. Se aplican las células 32D-p210 a placas TC de 96 pozos, a una densidad de 15,000 células por pozo. Se agregan a cada pozo 50 microlitros de dos diluciones en serie dobles del compuesto de prueba (Cmax es 40 µM) (se incluye STI571 como un control positivo). Después de incubar las células durante 48 horas a 37°C, con CO2 al 5 por ciento, se agregan 15 microlitros de MTT (Promega), a cada pozo, y las células se incuban durante 5 horas adicionales. La densidad óptica a 570 nanómetros se cuantifica espectrofotométricamente, y se determinan los valores IC50, la concentración requerida del compuesto para una inhibición del 50 por ciento, a partir de una curva de respuesta a la dosis. Efecto sobre Da distribución del ciclo celular. Se aplican células 32D y 32D-p210 a placas TC de seis pozos, a 2.5 x 106 células por pozo en 5 mililitros del medio, y se agrega el compuesto de prueba a 1 ó 10 µM (se incluye STI571 como un control). Se incuban las células durante 24 ó 48 horas a 37°C, con CO2 al 5 por ciento. Se lavan 2 mililitros de suspensión celular con suero regulado con fosfato, se fijan en EtOH al 70 por ciento durante 1 hora, y se tratan con PBS/EDTA/ARNasa A durante 30 minutos. Se agrega yoduro de propidio (Cf = 10 microgramos/mililitro), y se cuantifíca la intensidad de fluorescencia mediante citometría de flujo en el sistema FACScaliburMR (BD Biosciences). Los compuestos de prueba de la presente invención demuestran un efecto apoptótico sobre las células 32D-p210, pero no inducen apoptosis en las células 32D progenituras. Efecto sobre Da autofosforilación celular de BCR-Ab Se cuantifica la autofosforilación de BCR-Abl con ELISA de captura, utilizando un anticuerpo de captura específico de c-abl, y un anticuerpo anti-fosfotirosina. Se aplican células 32D-p210 a placas TC de 96 pozos, a 2 x 105 células por pozo, en 50 microlitros del medio. Se agregan a cada pozo 50 microlitros de diluciones en serie dobles de los compuestos de prueba (Cmax es 10 µM) (se incluye STI571 como un control positivo). Las células se incuban durante 90 minutos a 37°C, con CO2 al 5 por ciento. Entonces las células se tratan durante 1 hora sobre hielo con 150 microlitros de regulador de lisis (Tris-HCl 50 mM, pH de 7.4, NaCI 150 mM, EDTA 5 mM, EGTA 1 mM, y NP-40 al 1 por ciento) conteniendo inhibidores de proteasa y fosfatasa. Se agregan 50 microlitros del lisado celular a optiplacas de 96 pozos previamente recubiertas con anticuerpo específico anti-abl y se bloquean. Las placas se incuban durante 4 horas a 4°C. Después de lavar con regulador TBS-Tween 20, se agregan 50 microlitros de anticuerpo anti-fosfotirosina conjugado con fosfatasa alcalina, y la placa se incuba adicionalmente durante la noche a 4°C. Después de lavar con el regulador TBS-Tween 20, se agregan 90 microlitros de un sustrato luminiscente, y se cuantifica la luminiscencia utilizando el sistema AqcuestMR (Molecular Devices). Los compuestos de prueba de la invención que inhiben la proliferación de las células que expresan BCR-Abl, inhiben la auto-fosforilación celular de BCR-Abl de una manera dependiente de la dosis. Efecto sobre Da proSiferación de Das células que expresan formas mutantes de Bcr-abl. Se prueban los compuestos de la invención para determinar su efecto anti-proliferativo sobre células Ba/F3 que expresan las formas de tipo silvestre o mutantes de BCR-Abl (G250E, E255V, T315I, F317L, M351T) que confieren resistencia o una sensibilidad disminuida al STI571. El efecto anti-proliferativo de estos compuestos sobre las células que expresan BCR-Abl mutantes y sobre las células no transformadas, se probó a 10, 3.3, 1.1, y 0.37 µM, como se describe en lo anterior (en un medio que carecía de IL3). Los valores IC50 de los compuestos que carecían de toxicidad sobre las células no transformadas se determinaron a partir de las curvas de respuesta a la dosis obtenida como se describe anteriormente. FGFR3 (Ensayo Enzimático). Se lleva a cabo un ensayo de la actividad de cinasa con FGFR3 purificado (Upstate) en un volumen final de 10 microlitros, conteniendo 0.25 microgramos/mililitro de enzima en regulador de cinasa (Tris-HCl 30 mM, pH de 7.5, MgCI2 15 mM, MnCI2 4.5 mM, Na3VO 15 µM, y 50 microgramos/mililitro de albúmina de suero bovino), y sustratos (5 microgramos/mililitro de biotína-poli-EY(Glu, Tyr) (CIS-US, Inc.) y ATP 3 µM). Se hacen dos soluciones: la primera solución de 5 microlitros contiene la enzima FGFR3 en regulador de cinasa, que se dosificó primero en una ProxiPlate® de formato-384 (Perkin-Elmer), seguido por la adición de 50 nanolitros de los compuestos disueltos en sulfóxido de dimetilo, y luego se agregaron 5 microlitros de la segunda solución que contenía el sustrato (poli-EY) y ATP en regulador de cinasa a cada pozo. Las reacciones se incuban a temperatura ambiente durante 1 hora, se detienen mediante la adición de 10 microlitros de mezcla de detección HTRF, que contiene Tris-HCl 30 mM, pH de 7.5, KF 0.5 M, EDTA 50 mM, 0.2 miligramos/mililitro de albúmina de suero bovino, 15 microgramos/mililitro de estreptavidína-XL665 (CIS-US, Inc.), y 150 nanogramos/mililitro de anticuerpo anti-fosfotirosina conjugado con criptato (CIS-US, Inc.). Después de 1 hora de incubación a temperatura ambiente para permitir la interacción de la estreptavidina-biotina, se leen las señales fluorescentes resueltas en el tiempo en el Analyst GT (Molecular Devices, Corp.). Los valores IC50 se calculan mediante análisis de regresión lineal del porcentaje de inhibición de cada compuesto en 12 concentraciones (dilución de 1:3 desde 50 µM hasta 0.28 nM). En este ensayo, los compuestos de la invención tienen una IC5o en el intervalo de 10 nM a 2 µM.

FGFR3 (Ensayo Celular). Lo compuestos de la invención se prueban para determinar su capacidad para inhibir la proliferación de células Ba/F3-TEL-FGFR3 transformadas, la cual depende de la actividad de cinasa celular de FGFR3. Se cultivan las células Ba/F3-TEL-FGFR3 hasta 800,000 células/mililitro en suspensión, con RPMI 1640 complementado con suero bovino fetal al 10 por ciento como el medio de cultivo. Las células se dosifican en una placa de formato de 384 pozos a 5,000 células/pozo en 50 microlitros del medio de cultivo. Los compuestos de la invención se disuelven y se diluyen en sulfóxido de dimetilo (DMSO). Se hacen diluciones en serie de doce puntos a 1:3, en sulfóxido de dimetilo, para crear un gradiente de concentraciones típicamente desde 10 mM hasta 0.05 µM. Se agregan las células con 50 nanolitros de los compuestos diluidos, y se incuban durante 48 horas en una incubadora de cultivo celular. Se agrega a las células Alamar Blue® ( (TREK Diagnostics Systems), que se puede utilizar para monitorear el medio ambiente reductor creado por las células en proliferación, hasta una concentración final del 10 por ciento. Después de 4 horas adicionales de incubación en una incubadora de cultivo celular a 37°C, se cuantifican las señales de fluorescencia a partir del Alamar Blue® reducido (Excitación a 530 nanómetros, Emisión a 580 nanómetros) en el Analyst GT (Molecular Devices Corp.). Los valores IC50 se calculan mediante análisis de regresión lineal del porcentaje de inhibición de cada compuesto en doce concentraciones. FLT3 y PDGFRß (Ensayo Celular). Los efectos de los compuestos de la invención sobre la actividad celular de FLT3 y PDGFRß se conducen empleando métodos idénticos a los descritos anteriormente para la actividad celular de FGFR3, excepto que, en lugar de utilizar Ba/F3-TEL-FGFR3, se utilizan Ba/F3-FLT3-ITD y Ba/F3-Tel-PDGFRß, respectivamente. b-RAF - ensayo enzimá ico. Se prueban los compuestos de la invención para determinar su capacidad para inhibir la actividad de b-Raf. El ensayo se lleva a cabo en placas MaxiSorp de 384 pozos (NUNC) con paredes negras y fondo transparente. El sustrato, l?Ba, se diluye en DPBS (1:750), y se agregan 15 microlitros a cada pozo. Las placas se incuban a 4°C durante la noche, y se lavan tres veces con TBST (Tris 25 mM, pH de 8.0, NaCI 150 mM, y Tween 20 al 0.05 por ciento), utilizando el lavador de placas EMBLA. Las placas se bloquean mediante Superblock (15 microlitros/pozo) durante 3 horas a temperatura ambiente, se lavan tres veces con TBST, y se secan. Se agrega el regulador de ensayo conteniendo ATP 20 µM (10 microlitros) a cada pozo, seguido por 100 nanolitros ó 500 nanolitros del compuesto. Se diluye b-Raf en el regulador de ensayo (1 microlitro en 25 microlitros), y se agregan 10 microlitros de b-Raf diluido a cada pozo (0.4 microgramos/pozo). Las placas se incuban a temperatura ambiente durante 2.5 horas.

La reacción de cinasa se detiene lavando las placas seis veces con TBST. Se diluye el anticuerpo fosf-l?Ba (Ser32/36) en Superblock (1:10,000), y se agregan 15 microlitros a cada pozo. Las placas se incuban a 4°C durante la noche, y se lavan seis veces con TBST. Se diluye la IgG de cabra anti-ratón conjugada con ATP en Superblock (1:1,500), y se agregan 15 microlitros a cada pozo. Las placas se incuban a temperatura ambiente durante 1 hora, y se lavan seis veces con TBST. Se agregan a cada pozo 15 microlitros de sustrato fluorescente Attophos AP (Promega), y las placas se incuban a temperatura ambiente durante 15 minutos. Las placas se leen en el Acquest o Analyst GT utilizando un Programa de Intensidad de Fluorescencia (Excitación de 455 nanómetros, Emisión de 580 nanómetros). b-Raf - ensayo celular. Los compuestos de la invención se prueban en células A375, para determinar su capacidad para inhibir la fosforilación de MEK. La línea celular A375 (ATCC) se deriva a partir de un paciente de melanoma humano, y tiene una mutación V599E, sobre el gen B-Raf. Los niveles de MEK fosforilada se elevan debido a la mutación de B-Raf. Se incuban células A375 desde subconfluentes hasta confluentes con los compuestos durante 2 horas a 37°C, en un medio sin suero. Luego las células se lavan una vez con suero regulado con fosfato frío, y se Usan con el regulador de lisis conteniendo Tritón X100 al 1 por ciento. Después de la centrifugación, los sobrenadantes se someten a SDS-PAGE, y entonces se transfieren a membranas de nitrocelulosa. Luego las membranas se someten a Western blot con el anticuerpo anti-fosfo-MEK (ser217/221) (Señalización Celular). La cantidad de MEK fosforilada se monitorea mediante la densidad de las bandas de fosfo-MEK sobre las membranas de nitrocelulosa. Upstate KinaseProfiíerMR - Ensayo de ßnOace d© filtro radioenzi uático. Se evalúa los compuestos de la invención para determinar su capacidad para inhibir a los miembros individuales del panel de cinasa. Los compuestos se prueban por duplicado a una concentración final de 10 µM siguiendo este protocolo genérico. Observe que la composición del regulador de cinasa y los sustratos varía para las diferentes cinasas incluidas en el panel "Upstate KinaseProfilerMR". Se mezclan regulador de cinasa (2.5 microlitros, 10x - conteniendo MnCI2 cuando se requiera), cinasa activa (0.001-0.01 Unidades; 2.5 microlitros), péptido específico o Poli(Glu4-Tyr) (5-500 µM ó 0.01 miligramos/mililitro) en regulador de cinasa, y regulador de cinasa (50 µM; 5 microlitros), en un Eppendorf sobre hielo. Se agrega una mezcla de Mg/ATP (10 microlitros; MgCI2 67.5 (ó 33.75) mM, ATP 450 (ó 225) µM, y 1 µCi/µl [?32P]-ATP (3000Ci/mmol)), y la reacción se incuba a aproximadamente 30°C durante aproximadamente 10 minutos. La mezcla de reacción se mancha (20 microlitros) sobre un P81 de 2 centímetros x 2 centímetros (fosfocelulosa, para los sustratos de péptidos positivamente cargados), o un cuadro de papel Whatman No. 1 (para el sustrato de péptido de poli(Glu4-Tyr)). Los cuadros del ensayo se lavan cuatro veces, durante 5 minutos cada una, con ácido fosfórico al 0.75 por ciento, y se lavan una vez con acetona durante 5 minutos. Los cuadros del ensayo se transfieren a un frasco de cintilación, se agregan 5 mililitros de cóctel de cintilación, y se cuantifica la incorporación de 32P (cpm) al sustrato peptídico con un contador de cintílación Beckman. Se calcula el porcentaje de inhibición para cada reacción. Los compuestos de la Fórmula I, en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, exhiben valiosas propiedades farmacológicas, por ejemplo, como se indica mediante las pruebas in vitro descritas en esta solicitud. Por ejemplo, los compuestos de la Fórmula I de preferencia muestran una IC50 en el intervalo de 1 x 10"10 a 1 x 10"5 M, de preferencia menor de 500 nM, 250 nM, 100 nM, y 50 nM para BCR-Abl de tipo silvestre y mutante. Por ejemplo, la N-[4-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluoro-metil-fenil]-4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureidoj-benzamida (Ejemplo 4) tiene una IC50 de <5nM, <5nM, <5nM, <5nM, <5nM y <5nM para las Bcr-abl de tipo silvestre G250E, E255V, T315I, F317L y M351T, respectivamente. Por ejemplo, la N-[4-(4-etil-piperazin-1-ílmetil)-3-trifluoro-metil-fenil]-4-metil-3-[3-metíl-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pir¡m¡din-4-il)-ureidoj-benzamida (Ejemplo 4) tiene una IC50 de 36 nM, 15 nM, 3.8 nM y 100 nM para FGFR3, FLT-3, PDGFR-ß, respectivamente. Los compuestos de la invención inhiben algunas de las cinasas enlistadas en el perfil de cinasa por más del 40 por ciento, de preferencia más del 50 por ciento, y más preferiblemente más del 60 por ciento. Por ejemplo, la N-[4-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluoro-metil-fenil]-4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-benzam¡da (Ejemplo 4) muestra el siguiente perfil de inhibición (la cinasa se muestra con el porcentaje de inhibición entre paréntesis): Abl(T315L) (98 por ciento); Abl(m) (98 por ciento); Bmx(h) (100 por ciento); BTK(h) (99 por ciento); c-RAF(h) (97 por ciento); CSK(h) (100 por ciento); cSRC(h) (99 por ciento); Fes(h) (97 por ciento); FGFR3(h) (98 por ciento); Flt3(h) (96 por ciento); IKKa(h) (98 por ciento); IKKß(h) (96 por ciento); JNK1a1(h) (81 por ciento); JNK2a2(h) (99 por ciento); Lck(h) (100 por ciento); Met(h) (70 por ciento); MKK4(m) (87 por ciento); MKK6(h) (98 por ciento); p70S6K(h) (94 por ciento); PAK2(h) (62 por ciento); PDGFRa(h) (93 por ciento); PKA(h) (92 por ciento); PKCa(h) (61 por ciento); PKD2(h) (94 por ciento); ROCK-ll(h) (78 por ciento); Ros(h) (62 por ciento); Rsk1(h) (95 por ciento); SAPK2a(h) (92 por ciento); SAPK2ß(h) (85 por ciento); SAPK3(h) (92 por ciento); SAPK4(h) (82 por ciento); SGK(h) (81 por ciento); Syk(h) (63 por ciento); Tie2(h) (98 por ciento); y TrkB(h) (99 por ciento). Se entiende que los Ejemplos y las modalidades descritas en la presente son para propósitos ilustrativos solamente, y que las personas expertas en este campo pensarán en diferentes modificaciones o cambios a la luz de las mismas, y se deben incluir dentro del espíritu y panorama de esta solicitud , y dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas. Todas las publicaciones, patentes, y solicitudes de patente citadas en la presente se incorporan a la presente como referencia para todos los propósitos.

Claims (9)

1EJVINDIC ACIÓN ES

1. Un compuesto seleccionado a partir de la Fórmula I: en donde: n se selecciona a partir de 0, 1, y 2; ipm se selecciona a partir de 0, 1, y 2; Yi se selecciona a partir de N y CR ; en donde R5 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; Y2 se selecciona a partir de O y S; Ri se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; R2 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; R3 se selecciona a partir de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, y alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno; R4 se selecciona a partir de -NR5C(O)R6 y -C(O)NR5R6; en donde R5 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; en donde R6 se selecciona a partir de arilo de 6 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4átomos de carbono, heteroarilo de 5 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, ciclo-alquilo de 3 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, y hetero-ciclo-alquilo de 3 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono; en donde cualquier arilo, hetero-arilo, ciclo-alquilo, o hetero-ciclo-alquilo de R6 está opcionalmente sustituido con 1 a 3 radicales seleccionados a partir de halógeno, hidroxilo, -NR5R5, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, hetero-arilo de 5 a 10 átomos de carbono-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, heterociclo de 3 a 8 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, y heterociclo de 3 a 8 átomos de carbono-alcoxilo de 0 a 4 átomos de carbono; en donde cualquier sustituyente de hetero-arílo ó hetero-ciclo-alquilo de R6 está opcionalmente sustituido por 1 a 3 radicales independientemente seleccionados a partir de alquilo de 1 a 6 átomos de carbono e hidroxi-alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; R7 se selecciona a partir de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, arilo de 6 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, hetero-arilo de 5 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, cicloalquilo de 3 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, y hetero-cíclo-alquilo de 3 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono; y las sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, e isómeros del mismo.

2. El compuesto de la reivindicación 1, de la Fórmula la: la en donde: n se selecciona a partir de 0 y 1; Yi se selecciona a partir de N y CH; Y2 se selecciona a partir de O y S; Ri se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; R2 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; R3 se selecciona a partir de hidrógeno, halógeno, hidroxilo, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, y alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno; R4 se selecciona a partir de -NR5C(O)R6 y C(O)NR5R6; en donde R5 se selecciona a partir de hidrógeno y alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; y en donde R6 se selecciona a partir de arilo de 6 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, heteroarilo de 5 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, ciclo-alquilo de 3 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, y hetero-ciclo-alquilo de 3 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono; en donde cualquier arilo, hetero-arilo, ciclo-alquilo, o hetero-ciclo-alquilo de R6 está opcionalmente sustituido con 1 a 3 radicales seleccionados a partir de halógeno, hidroxilo, -NR5R5, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, alcoxilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, heteroarilo de 6 a 10 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, heterociclo de 3 a 8 átomos de carbono-alquilo de 0 a 4 átomos de carbono, y heterociclo de 3 a 8 átomos de carbono-alcoxilo de 0 a 4 átomos de carbono; en donde cualquier sustituyente de hetero-arilo o hetero-ciclo-alquilo de R6 está opcionalmente sustituido por 1 a 3 radicales independientemente seleccionados a partir de alquilo de 1 a 6 átomos de carbono e hidroxi-alquilo de 1 a 6 átomos de carbono.

3. El compuesto de la reivindicación 2, en donde R2 se selecciona a partir de hidrógeno y metilo; y R3 se selecciona a partir de metilo y metoxilo.

4. El compuesto de la reivindicación 3, en donde R4 se selecciona a partir de -NHC(O)R6 y -C(O)NHR6; en donde R6 se selecciona a partir de fenilo opcionalmente sustituido con 1 a 3 radicales seleccionados a partir de trifluoro-metilo, dimetil-amino, imidazolilo, morfolino, morfolino-metilo, piperazinilo, piperazinil-metilo, y pirrolidinil-metoxilo; en donde este imidazolilo, piperazinilo, piperazinil-metilo, está opcionalmente sustituido con un grupo seleccionado a partir de metilo, etilo, e hidroxi-etilo.

5. El compuesto de la reivindicación 4, seleccionado a partir de: N-[4-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluoro-metil-fenil]-4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-benzamida; 4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-N-(4-piperazin-1-ilmetil-3-trifluoro-metil-fenil)-benzamida; 3-(4-metil-imidazol-1-il)-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-5-trifluoro-metil-benzamida; N-[4-metil-3-(2-7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il-acetil-amino)-fenil]-3-t rifluoro-meti l-benza mida; N-(3-imidazo 1-1 -il-5-trifluoro -metil-fenil)-4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-u reíd o]-benza mida; N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-trifluoro-metil-benzamida; 4-(2-metil-imidazol-1-il)-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]- pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-trifluoro-metil-benzamida; N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-4-morfolin-4-il-3-trifluoro-metil-benzamida; N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluoro-metil-benzamida; N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-4-morfolin-4-ilmetil-3-trifluoro-metil-benzamida; N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-morfolin-4-il-5-trifluoro-m etil -benzamida; N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-4-(4-metil-piperazin-1-il)-3-trifluoro-metil-benzamida; 4-(4-etil-piperazin-1-il)-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-trifluoro-metil-benzamida; N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-(4-metil-piperazin-1-il)-5-trifluoro-metil -benzamida; 3-dimetil-amino-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-5-trifluoro-metil-benzamida; 4-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-trifluoro-metil-benzamida; 3-(4-etil-piperazin-1-il)-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-5-trifluoro-metil-benzamida; 4-metil-N-[3-(4-metil-imidazol-1-il)-5-trifluoro-metil-fenil]-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-benzamida; 3-[4-(2-hidroxi-etil)-piperazin-1-il]-N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-5-trifluoro-metil-benzamida; N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]- pirimidin-4-il )-ureido]-fenil}-3-piperazin-1 -il-5-trifluoro-metil-benzamida; N-{4-metil-3-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-(pirrolidin-2-ilmetoxi)-5-trifluoro-metil-benzamida; N-{3-metoxi-5-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-morfolin-4-il-5-trifluoro-metíl-benzamida; N- {3-metoxi-5-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-(4-metil-imidazol-1-il)-5-trifluoro-metil-benzamida; 4-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-N-{3-metoxi-5-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-3-trifluoro-metil-benzamida; N-{3-metoxi-5-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-4-(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-3-trifluoro-metil-benzamida; y N-{3-metoxi-5-[3-metil-3-(7H-pirrolo-[2,3-d]-pirimidin-4-il)-ureido]-fenil}-4-(2-metil-imidazol-1-il)-3-trifluoro-metil-benzamida.

6. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la reivindicación 1, en combinación con un excipiente farmacéuticamente aceptable.

7. Un método para el tratamiento de una enfermedad en un animal en donde la inhibición de la actividad de cinasa pueda prevenir, inhibir, o aminorar la patología y/o sintomatología de la enfermedad, cuyo método comprende administrar al animal una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la reivindicación 1.

8. El método de la reivindicación 7, en donde la cinasa se selecciona a partir de Abl, Bcr-Abl, Bmx, BTK, b-RAF, c-RAF, CSK, cSRC, Fes, FGFR3, Flt3, IKKa, IKKß, JNK1a1, JNK2a2, Lck, Met, MKK4, MKK6, p70S6K, PAK2, PDGFRa, PKA, PKCa, PKD2, ROCK-II, Ros, Rsk1, SAPK2a, SAPK2ß, SAPK3, SAPK4, SGK, Syk, Tie2 y TrkB.

9. El uso de un compuesto de la reivindicación 1, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad en un animal en donde la actividad de cinasa de Abl, Bcr-Abl, Bmx, BTK, b-RAF, c-RAF, CSK, cSRC, Fes, FGFR3, Flt3, IKKa, IKKß, JNK1a1, JNK2a2, Lck, Met, MKK4, MKK6, p70S6K, PAK2, PDGFRa, PKA, PKCa, PKD2, ROCK-II, Ros, Rsk1, SAPK2a, SAPK2ß, SAPK3, SAPK4, SGK, Syk, Tie2 y TrkB, contribuya a la patología y/o sintomatología de la enfermedad.