KR20150107872A

KR20150107872A - 고체 형태의 선택적인 cdk4/6 억제제

Info

Publication number: KR20150107872A
Application number: KR1020157022487A
Authority: KR
Inventors: 브라이언 패트릭 체칼; 네이선 디 이데
Original assignee: 화이자 인코포레이티드
Priority date: 2013-02-21
Filing date: 2014-02-08
Publication date: 2015-09-23
Also published as: JP2017186376A; EP3431475A1; PL3431475T3; IL240277B; CN107759594A; RU2015132371A; HUE040434T2; DK3431475T3; TW201444834A; EP2958916B1; EP2958916A1; RU2619944C2; JP2014162794A; CA2900322C; KR20170094012A; HUE054212T2; ES2694787T3; SG11201505680RA; HK1211032A1; JP6381016B2

Abstract

본 발명은 세포 증식성 질환, 예컨대, 암의 치료에 있어서, 개선된 특성을 갖는 하기 화학식 1의 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 결정형 자유 염기, 상기 자유 염기를 포함하는 약학 조성물 및 투여 형태, 및 상기 화합물, 조성물 및 투여 형태를 제조하는 방법 및 사용하는 방법에 관한 것이다:
[화학식 1]

Description

고체 형태의 선택적인 CDK4/6 억제제{SOLID FORMS OF A SELECTIVE CDK4/6 INHIBITOR}

본원은 2013년 2월 21일자 미국 가출원 제 61/767,761 호를 우선권 주장하고, 이의 전체가 참조로서 본원에 혼입된다.

본 발명은 개선된 물리화학적 특성을 갖는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 자유 염기에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 세포 증식성 질환, 예컨대, 암의 치료에 있어서, 상기 자유 염기를 포함하는 약학 조성물 및 투여 형태, 및 상기 화합물, 조성물 및 투여 형태를 제조하는 방법 및 사용하는 방법에 관한 것이다.

화합물 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(또한, 본원에서 "화합물 1"로도 지칭됨)은 하기 화학식 1의 구조로 나타낼 수 있고, 또한 팔보시클립 또는 PD-0332991로서 공지되어 있다:

[화학식 1]

화합물 1은 CDK4 및 CDK6의 강력하고 선택적인 억제제이다.

화합물 1 및 이의 약학적으로 허용되는 염은 WO 2003/062236 및 US 6,936,612, US 7,208,489 및 7,456,168에 개시되어 있고, 상기 특허는 하이드로클로라이드 염으로서 화합물 1의 제조를 기재하고 있다. WO 2005/005426 및 US 7,345,171 및 US 7,863,278은 이세티오네이트 염의 다형체 형태를 비롯하여 화합물 1의 자유 염기 및 다양한 일-산 부가염 및 이-산 부가염의 제조를 기재하고 있다. 일-이세티오네이트 염으로서 화합물 1의 제조 공정은 WO 2008/032157 및 US 7,781,583에 기재되어 있다. 상기 참조 문헌의 각각의 내용은 이의 전체가 참조로서 본원에 혼입된다.

화합물 1은 강력하고 선택적인 CDK4/CDK6 억제제이면서, 자유 염기로서의 이의 사용은 제약 개발에 대한 도전으로 나타나고 있다. 예를 들면, WO 2005/005426의 실시예 4에서와 같은 통상적인 염 파괴(salt break) 과정에 의해 제공된 자유 염기는 매우 정적인 성향이 있고 작은 1차 입자를 형성하여, 체질에 의해 분산되기 어려운 크고 단단한 응집물로 응집되어 추가 개발에 적합하지 않았다. 본 발명은 개선된 물리화학적 특성 및 제조가능성을 입증하는 더 큰 1차 입자 크기를 갖는 화합물 1의 자유 염기를 제공한다.

화합물 1의 자유 염기인 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온은 형태 A 및 형태 B를 비롯하여 하나 이상의 다형체 형태로 존재할 수 있고, 이때 형태 A는 더 안정한 결정 형태이다. 자유 염기는 무수물일 수 있거나, 다양한 양의 물 또는 하나 이상의 용매를 함유할 수 있다.

본 발명은 당해 분야에 기재된 통상적인 염 파괴 방법에 의해 제공된 자유 염기보다 큰 1차 입자 크기, 매우 감소된 비표면적, 및 낮은 표면 에너지 측정값을 갖는 화합물 1의 결정형 자유 염기를 제공한다. 본원에 개시된 큰 입자 크기의 화합물 1의 자유 염기는 다양한 방법에 의해 구별가능하다.

본 발명의 다형체 및 고체 형태는 분말 X-선 회절분석법(PXRD), 고체 상태 NMR(ssNMR), 시차 주사 열량계법(DSC), 진동 분광법(예를 들면, IR 및 라만(Raman) 분광법), 편광 현미경기법(PLM), 주사 전자 현미경기법(SEM), 고열 광학 현미경기법, 전자 결정학, 단일 결정 X-선 회절분석법, 정량 분석, 입자 크기 분석(PSA)(예를 들면, 입자 크기, 입자 크기 분포(PSD), 및 입자 형태), 비표면적(SSA) 분석, 표면 에너지 분석(예를 들면, 역 가스 크로마토그래피 또는 IGC)에 의해, 용해도 연구 및 용해 연구에 의해, 또는 상기한 기법의 조합에 의해 구별될 수 있다.

일 양상에서, 본 발명은 2 m²/g 이하의 비표면적을 갖는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 결정형 자유 염기를 제공한다. 일부 실시양태에서, 자유 염기는 1 m²/g 이하의 비표면적을 갖는다.

바람직한 실시양태에서, 화합물 1의 결정형 자유 염기는 자유 염기 다형체 형태 A이다. 일부 이러한 실시양태에서, 결정형 자유 염기는 10.1 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 다른 이러한 실시양태에서, 결정형 자유 염기는 8.0 ± 0.2 및 10.1 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 결정형 자유 염기는 8.0 ± 0.2, 10.1 ± 0.2 및 11.5 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 추가 실시양태에서, 결정형 자유 염기는 8.0 ± 0.2, 10.1 ± 0.2, 10.3 ± 0.2 및 11.5 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 추가 실시양태에서, 결정형 자유 염기는 도 1에 나타낸 것과 본질적으로 동일한 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다.

일부 실시양태에서, 화합물 1의 결정형 자유 염기(형태 A)는 12.5 ppm ± 0.2 ppm의 공명(ppm) 값을 포함하는 ¹³C 고체 상태 NMR(ssNMR) 스펙트럼을 갖는다. 다른 실시양태에서, 결정형 자유 염기는 12.5 ppm 및 112.4 ppm ± 0.2 ppm의 공명(ppm) 값을 포함하는 ¹³C 고체 상태 NMR 스펙트럼을 갖는다. 추가 실시양태에서, 결정형 자유 염기는 12.5 ppm, 112.4 ppm 및 143.2 ppm ± 0.2 ppm의 공명(ppm) 값을 포함하는 ¹³C 고체 상태 NMR 스펙트럼을 갖는다.

본원에 기재된 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물 1의 자유 염기는 입자 크기 분석에 의해 구별된다. 일부 이러한 실시양태에서, 결정형 자유 염기는 약 5 ㎛ 내지 약 150 ㎛, 바람직하게는 약 10 ㎛ 내지 약 100 ㎛, 더욱 바람직하게는 약 15 ㎛ 내지 약 80 ㎛의 1차 입자 크기를 갖는다. 다른 이러한 실시양태에서, 결정형 자유 염기는 (i) 약 5 ㎛ 내지 약 10 ㎛의 D10 값; (ii) 약 10 ㎛ 내지 약 45 ㎛의 D50 값; (iii) 약 30 ㎛ 내지 약 125 ㎛의 D90 값; 또는 상기 (i), (ii) 및 (iii)의 조합을 특징으로 하는 1차 입자 크기 분포를 갖는다. 추가 실시양태에서, 결정형 자유 염기는 약 2 내지 약 3의 (D90-D10)/D50의 1차 입자 크기 분포 비를 갖는다. 추가 실시양태에서, 결정형 자유 염기는 약 15 ㎛ 내지 약 125 ㎛의 부피 평균 직경(D[4,3])을 갖는다.

일부 실시양태에서, 화합물 1의 결정형 자유 염기는 무수물이다. 다른 실시양태에서, 화합물 1의 결정형 자유 염기는 용매화물, 특히 수화물이다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 본 발명에 따른 큰 1차 입자 크기를 갖는 화합물 1의 결정형 자유 염기, 및 약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 종종, 약학 조성물은 자유 염기 다형체 형태 A를 포함한다.

본 발명은 본 발명의 상기 약학 조성물을 포함하는 캡슐을 추가로 제공한다. 일부 이러한 실시양태에서, 캡슐은 본원에 기재된 바와 같이 큰 1차 입자 크기를 갖는 0.1 내지 200 mg, 바람직하게는 25 내지 150 mg의 화합물 1의 자유 염기(바람직하게는 다형체 형태 A)를 포함한다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 본 발명의 약학 조성물 치료 효과량을 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 포유동물, 바람직하게는 인간에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 치료 방법은 화합물 1을 하나 이상의 추가 치료제와 함께 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.

추가 양상에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같이 큰 1차 입자 크기를 갖는 화합물 1의 자유 염기를 제조하는 방법을 제공한다. 하나의 방법은 화합물 1의 작은 입자 크기 자유 염기를 제 1 용매 및 제 2 용매의 혼합물에 용해하고 가열하여 용해를 수행하고, 적절한 온도로 냉각하여 화합물 1의 자유 염기(형태 A)의 시드 결정을 제공한 후, 결정화하여 화합물 1의 큰 입자 크기 자유 염기를 제공하는 것을 수반한다. 이 공정에 사용된 작은 입자 크기 자유 염기는 통상적인 염 파괴 과정, 예를 들면, 중간체 비닐 에터를 산성 가수분해하여 산 부가염을 수득한 후, 실시예 5에 기재된 바와 같이 염기성화하여 단리될 수 있다. 또 다른 방법은 중간체 비닐 에터를 물 및 제 1 용매의 혼합물에서 산성 가수분해(이는 용해를 수득하기 위해 가열을 필요로 할 수 있다)하고, 제 2 용매를 첨가하고 염기성화하여 동일반응계에서 생성된 자유 염기를 포함하는 제 2 혼합물을 수득하고, 필요한 경우 가열하여 용해하고 물을 증류 제거하여 적절한 온도에서 화합물 1의 자유 염기(형태 A)의 시드 결정을 수득한 후, 결정화하여 큰 1차 입자 크기를 갖는 화합물 1의 자유 염기를 수득하는 것을 수반한다. 본 발명은 또한 상기 방법으로 제조된 본원에 기재된 특성을 갖는 화합물 1의 자유 염기를 제공한다.

각각의 상기 방법에서, 제 1 용매는 알코올이고, 제 2 용매는 방향족 용매이다. 적합한 알코올은 비제한적으로, 비교적 고비점 알코올, 예컨대, n-부탄올, t-부탄올, n-프로판올, 펜탄올, 1,4-부탄다이올 또는 프로필렌 글리콜 등을 포함한다. 적합한 방향족 용매는 비제한적으로, 아니솔, 메시틸렌, m-자일렌, 클로로벤젠, 피리딘 등을 포함한다. 수율을 개선하기 위해, 상기 방법은 실온 초과 또는 미만의 온도로 가열하거나 냉각하는 것을 포함할 수 있다. 종종, 반응 혼합물을 약 30℃ 내지 약 150℃, 더욱 종종 약 50℃ 내지 약 120℃의 온도로 가열하여 용해할 수 있다. 결정화 동안, 반응 혼합물을 실온 이하의 온도, 예를 들면, 약 0℃ 내지 약 30℃, 바람직하게는 약 5℃, 약 10℃, 약 15℃ 또는 약 20℃의 온도로 가열하는 것이 바람직할 수 있다.

상기 및 다른 양상 및 실시양태는 본원에 기재된 상세한 설명에 의해 추가로 기재된다. 본원에 기재된 각각의 실시양태는 조합된 실시양태와 상반되지 않게 본원에 기재된 임의의 다른 실시양태와 조합될 수 있다.

도 1은 화합물 1의 자유 염기 다형체 형태 A의 PXRD 패턴을 도시한다.
도 2는 화합물 1의 자유 염기 다형체 형태 A의 탄소 CPMAS 스펙트럼을 도시한다. 별표로 표시된 피크는 스피닝 측파대(sideband)이다.
도 3은 화합물 1의 자유 염기 다형체 형태 B의 PXRD 패턴을 도시한다.
도 4는 화합물 1의 자유 염기 다형체 형태 B의 탄소 CPMAS 스펙트럼을 도시한다. 별표로 표시된 피크는 스피닝 측파대이다.
도 5는 40% n-BuOH/아니솔로 재결정화된 다형체 형태 A인 화합물 1의 자유 염기 API(활성 약학 성분)의 주사 전자 현미경기법(200x 배율) 이미지를 도시한다.
도 6은 표준 자유 염기화 공정으로 단리된 다형체 형태 A인 화합물 1의 자유 염기 API의 주사 전자 현미경기법(1500x 배율) 이미지를 도시한다.
도 7은 40% n-BuOH/아니솔로 재결정화된 다형체 형태 A인 화합물 1의 자유 염기 API의 입자 크기 분포를 도시한다.
도 8은 표준 자유 염기화 공정으로 단리된 다형체 형태 A인 화합물 1의 자유 염기 API의 입자 크기 분포를 도시한다.
도 9는 40% n-BuOH/아니솔로 재결정화된 다형체 형태 A인 화합물 1의 자유 염기 API의 편광 현미경기법(PLM) 이미지(200x)를 도시한다.

본 발명은 본원에 포함된 하기 상세한 설명 및 실시예를 참조하여 더욱 용이하게 이해될 수 있다. 본원에 사용된 전문 용어는 단지 특정한 실시양태를 설명하기 위한 목적이고 이를 제한하려는 것으로 의도되지 않음이 이해되어야 한다. 또한, 본원에서 달리 명시적으로 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 전문 용어는 관련 분야에 공지된 바와 같은 이의 통상적인 의미를 제공하는 것으로 이해되어야 한다.

본원에 사용된 단수 형태는 달리 언급되지 않는 한 복수 형태를 포함한다. 예를 들면, 치환기는 하나 이상의 치환기를 포함한다.

본원에 사용된 용어 "약"은 값, 예컨대 명시된 농도 범위, 기간, 분자량, 입자 크기, 온도 또는 pH의 통계적으로 의미있는 범위 내를 의미한다. 상기 범위는 제시된 값 또는 범위의 전형적으로 20% 이내, 더욱 전형적으로 10% 이내, 더욱더 전형적으로 5% 이내의 정도일 수 있다. 종종, 상기 범위는 주어진 값 또는 범위의 측정 및/또는 결정을 위해 사용된 표준 방법에 전형적인 실험 오차 이내일 수 있다. 용어 "약"에 의해 포괄된 허용가능한 편차는 연구 중 특정 시스템에 따라 다를 것이고, 당업자에 의해 용이하게 이해될 수 있다. 범위가 본원에서 언급될 때마다, 범위 내의 모든 정수가 또한 본 발명의 실시양태로서 고려된다.

달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 용어 "비정상적인 세포 성장"은 정상적인 조절 메카니즘(예를 들면, 접촉 억제의 손실)과 독립적인 세포 성장을 지칭한다. "비정상적인 세포 증식성 질환"은 비정상적인 세포 성장을 특징으로 하는 질병, 예컨대 암이다.

용어 "암"은 고형 종양 및 혈액성 악성 종양을 둘다 포함한다. 암은 비제한적으로, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 자궁내막암, 전립선암, 고환암, 췌장암, 식도암, 두경부암, 위암, 방광암, 폐암(예를 들면, 선암종, NSCLC 및 SCLC), 골암(예를 들면, 골육종), 결장암, 직장암, 갑상선암, 뇌암 및 중추신경계암, 교아세포종, 신경아세포종, 신경내분비암, 육종양, 각질극세포종, 상피성세포암, 정상피종, 흑색종, 육종(예를 들면, 지방육종), 간암(예를 들면, 간세포암), 신장암(예를 들면, 신세포암), 골수성 질환(예를 들면, AML, CML, 골수형성이상 증후군 및 전골수성 백혈병), 및 림프성 질환(예를 들면, 백혈병, 다발성 골수종, 외투 세포 림프종, ALL, CLL, B-세포 림프종, T-세포 림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 모발 세포 림프종)을 포함한다.

어구 "약학적으로 허용되는"은 타당한 의학적 판단의 범위 내에 있고, 과도한 독성, 자극, 알러지 반응 등이 없이 환자의 조직과 접촉하여 사용하기에 적당하고, 합리적인 이익/위험 비에 적합하고, 의도된 용도에 효과적인 물질을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "포유동물"은 인간 또는 비인간 포유동물(예를 들면, 개, 고양이, 토끼, 래트, 마우스, 말, 원숭이, 다른 하위 영장류 등)일 수 있다. 바람직하게는 포유동물은 인간이다.

달리 언급되지 않는 한, 본원에 사용된 용어 "치료하는"은 상기 용어를 적용하는 질환 또는 상태, 또는 상기 질환 또는 상태의 하나 이상의 증상을 역전시키거나 완화하거나 진행 억제하거나 예방하는 것을 의미한다. 달리 언급되지 않는 한, 본원에 사용된 용어 "치료"는 바로 위에 정의된 "치료하는"과 같이 치료하는 작용을 지칭한다.

본원에 사용된 "효과"량은 질환 증상의 중증도의 감소, 질환 무증상 기간의 지속 및 빈도의 증가, 또는 질환의 고통으로 인한 손상 또는 장애의 예방을 야기하기에 충분한 양의 화합물, 약제, 물질, 제형 또는 조성물의 양을 지칭한다. 상기 양은 단독으로 또는 다른 화합물, 약제 또는 물질과 조합하여 단일 복용 또는 다중 복용 양생법에 따를 수 있다. 당업자는 대상체의 크기, 대상체의 증상의 중증도, 및 선택된 특정 조성물 또는 투여 경로와 같은 인자에 기초하여 상기 양을 결정할 수 있다.

본원에 사용된 "단위 투여 형태"는 치료될 대상체에 적절한 본 발명의 제형의 물리적으로 별개의 단위를 지칭한다. 그러나, 본 발명의 조성물의 총 일일 사용은 타당한 의학적 판단의 범위 내에서 주치의에 의해 결정됨이 이해될 것이다. 임의의 특정 대상체에 대한 구체적인 유효량 수준은 치료될 질환 및 질환의 중증도; 이용된 특정한 조성물; 대상체의 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별 및 식습관; 투여 시간, 치료 기간; 본 발명의 조성물과 함께 또는 동시에 사용된 약물 및/또는 추가 치료제를 비롯하여 다수의 인자, 및 의학 분야에 널리 공지된 유사한 인자에 따라 다를 것이다.

X-선 회절 피크 위치와 관련하여 본원에 사용된 용어 "본질적으로 동일한"은 전형적인 피크 위치 및 강도 편차가 고려되는 것을 의미한다. 예를 들면, 당업자는 피크 위치(2θ)가 전형적으로 0.2° 또는 0.1°정도 일부 장치간 편차를 나타냄을 이해할 것이다. 또한, 당업자는 관련 피크 강도가 장치간 편차뿐만 아니라 결정화도, 우선적 배향, 제조된 샘플 표면 및 당업자에게 공지된 다른 인자로 인한 편차를 나타낼 것이고, 정성적 척도로서만 간주되어야 함이 이해될 것이다.

본원에 사용된 용어 "용매화물"은 용매를 함유하는 물질의 결정형을 지칭한다. 용어 "수화물"은 용매가 물인 용매화물을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "시딩(seeding)"은 핵생성을 개시하거나 강화하거나, 추가 결정화를 위한 물질로서 작용하는 목적을 위해 결정화 시스템에 결정을 첨가하는 것을 의미한다.

본원에 사용된 용어 "API" 또는 "활성 약학 성분"은 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 자유 염기를 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "1차 입자"는 개별적인 API 결정을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "응집물"은 가공 및 입자 크기 분석 동안 1차 입자 내에 분산시키기 어려운 단단히 결합된 API 결정을 지칭한다.

본 발명은 통상적인 염 파괴 방법에 의해 제공된 자유 염기보다 큰 1차 입자 크기, 크게 감소된 비표면적, 및 낮은 표면 에너지 측정값을 갖는 화합물 1의 자유 염기를 제공한다. 편의상, 본 발명에 의해 제공된 화합물 1의 자유 염기를 "큰 (1차) 입자 크기" 자유 염기로서 본원에서 종종 지칭할 수 있다. 이에 반해, 통상적인 염 파괴 방법을 통해 제조된 화합물 1의 자유 염기를 "작은 (1차) 입자 크기" 자유 염기로서 종종 지칭한다. 이 경우 "작은 입자 크기"에 대한 언급은 개별적인 API 결정의 입자 크기를 지칭하고, 큰 응집물을 형성하는 "작은" 입자의 성향을 고려하지 않음이 당업자에 의해 이해될 것이다.

본원에 기재된 본 발명의 일부 실시양태에서, 화합물 1의 결정형 자유 염기는 비표면적(SSA)에 의해 구별된다. 따라서, 일 양상에서, 본 발명은 2 m²/g 이하의 비표면적(SSA)을 갖는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 결정형 자유 염기를 제공한다. 일부 실시양태에서, 자유 염기는 1 m²/g 이하의 비표면적(SSA)을 갖는다. 다른 실시양태에서, 화합물 1의 자유 염기는 0.9 m²/g 이하, 0.8 m²/g 이하 또는 0.7 m²/g 이하의 SAA를 갖는다. 추가 실시양태에서, 화합물 1의 자유 염기는 0.2 m²/g 내지 2 m²/g, 0.5 m²/g 내지 1.5 m²/g 또는 0.5 m²/g 내지 1 m²/g의 SAA를 갖는다.

본원에 기재된 일부 실시양태에서, 화합물 1의 결정형 자유 염기는 분산성 표면 에너지에 의해 구별된다. 따라서, 일 양상에서, 본 발명은 60 mJ/m² 이하의 분산성 표면 에너지를 갖는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 결정형 자유 염기를 제공한다. 일부 실시양태에서, 자유 염기는 55 mJ/m² 이하, 50 mJ/m² 이하, 45 mJ/m² 이하 또는 40 mJ/m² 이하의 분산성 표면 에너지를 갖는다. 추가 실시양태에서, 화합물 1의 자유 염기는 20 mJ/m² 내지 60 mJ/m², 25 mJ/m² 내지 50 mJ/m² 또는 30 mJ/m² 내지 50 mJ/m²의 분산성 표면 에너지를 갖는다.

바람직한 실시양태에서, 화합물 1의 결정형 자유 염기는 자유 염기 다형체 형태 A이다. 일부 이러한 실시양태에서, 결정형은 10.1 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 다른 이러한 실시양태에서, 결정형은 8.0 ± 0.2 및 10.1 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 결정형은 8.0 ± 0.2, 10.1 ± 0.2 및 11.5 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 추가 실시양태에서, 결정형은 8.0 ± 0.2, 10.1 ± 0.2, 10.3 ± 0.2 및 11.5 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 다른 실시양태에서, 결정형은 5.1 ± 0.2, 8.0 ± 0.2, 10.1 ± 0.2 및 11.5 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 추가 실시양태에서, 결정형은 8.0 ± 0.2, 10.1 ± 0.2, 11.5 ± 0.2 및 19.7 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 다른 추가 실시양태에서, 결정형은 8.0 ± 0.2, 10.1 ± 0.2, 11.5 ± 0.2 및 22.5 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 추가 실시양태에서, 결정형은 도 1에 도시된 바와 본질적으로 동일한 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다.

일부 실시양태에서, 화합물 1의 결정형 자유 염기(형태 A)는 12.5 ppm ± 0.2 ppm의 공명(ppm) 값을 포함하는 ¹³C 고체 상태 NMR 스펙트럼을 갖는다. 다른 실시양태에서, 결정형은 12.5 ppm 및 112.4 ppm ± 0.2 ppm의 공명(ppm) 값을 포함하는 ¹³C 고체 상태 NMR 스펙트럼을 갖는다. 추가 실시양태에서, 결정형은 12.5 ppm, 112.4 ppm 및 143.2 ppm ± 0.2 ppm의 공명(ppm) 값을 포함하는 ¹³C 고체 상태 NMR 스펙트럼을 갖는다.

본원에 기재된 일부 실시양태에서, 화합물 1의 결정형 자유 염기는 입자 크기 분석에 의해 구별된다. 일부 이러한 실시양태에서, 자유 염기는 약 5 ㎛ 내지 약 150 ㎛, 바람직하게는 약 10 ㎛ 내지 약 100 ㎛, 더욱 바람직하게는 약 15 ㎛ 내지 약 80 ㎛의 1차 입자 크기를 갖는다.

다른 이러한 실시양태에서, 자유 염기는 (i) 약 5 ㎛ 내지 약 10 ㎛의 D10 값; (ii) 약 10 ㎛ 내지 약 45 ㎛의 D50 값; (iii) 약 30 ㎛ 내지 약 125 ㎛의 D90 값; 또는 상기 (i), (ii) 및 (iii)의 조합을 특징으로 하는 1차 입자 크기 분포를 갖는다. 추가 실시양태에서, 자유 염기는 약 2 내지 약 3의 (D90-D10)/D50의 1차 입자 크기 분포 비를 갖는다. 추가 실시양태에서, 자유 염기는 약 15 ㎛ 내지 약 125 ㎛의 부피 평균 직경(D[4,3])을 갖는다.

일 양상에서, 본 발명은 약 5 ㎛ 초과의 1차 입자 크기를 갖는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 결정형 자유 염기를 제공한다. 일부 실시양태에서, 자유 염기는 약 7.5 ㎛ 초과의 1차 입자 크기를 갖는다. 다른 실시양태에서, 자유 염기는 약 10 ㎛ 초과의 1차 입자 크기를 갖는다. 다른 이러한 실시양태에서, 자유 염기는 약 12.5 ㎛ 초과의 1차 입자 크기를 갖는다. 다른 이러한 실시양태에서, 자유 염기는 약 15 ㎛ 초과의 1차 입자 크기를 갖는다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 약 5 ㎛ 내지 약 200 ㎛의 1차 입자 크기를 갖는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 결정형 자유 염기를 제공한다. 일부 실시양태에서, 자유 염기는 약 5 ㎛ 내지 약 175 ㎛, 약 5 ㎛ 내지 약 150 ㎛, 약 5 ㎛ 내지 약 125 ㎛, 약 5 ㎛ 내지 약 100 ㎛, 약 5 ㎛ 내지 약 75 ㎛, 약 10 ㎛ 내지 약 200 ㎛, 약 10 ㎛ 내지 약 175 ㎛, 약 10 ㎛ 내지 약 150 ㎛, 약 10 ㎛ 내지 약 125 ㎛, 약 10 ㎛ 내지 약 100 ㎛, 약 10 ㎛ 내지 약 75 ㎛, 약 15 ㎛ 내지 약 200 ㎛, 약 15 ㎛ 내지 약 175 ㎛, 약 15 ㎛ 내지 약 150 ㎛, 약 15 ㎛ 내지 약 125 ㎛, 약 15 ㎛ 내지 약 100 ㎛ 또는 약 15 ㎛ 내지 약 75 ㎛의 1차 입자 크기를 갖는다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 하기 중 하나 이상을 갖는 1차 입자 크기 분포를 갖는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 결정형 자유 염기를 제공한다:

(a) 약 5 ㎛ 내지 약 10 ㎛의 D10 값;

(b) 약 10 ㎛ 내지 약 45 ㎛의 D50 값; 및

(c) 약 30 ㎛ 내지 약 125 ㎛의 D90 값.

일부 이러한 실시양태에서, 자유 염기는 약 5 ㎛ 내지 약 10 ㎛의 D10 값을 갖는다. 다른 이러한 실시양태에서, 자유 염기는 약 30 ㎛ 내지 약 125 ㎛의 D90 값을 갖는다. 다른 이러한 실시양태에서, 자유 염기는 약 10 ㎛ 내지 약 45 ㎛의 D50 값을 갖는다. 일부 이러한 실시양태에서, 자유 염기는 약 5 ㎛ 내지 약 10 ㎛의 D10 값 및 약 30 ㎛ 내지 약 125 ㎛의 D90 값을 갖는다. 추가 실시양태에서, 자유 염기는 약 5 ㎛ 내지 약 10 ㎛의 D10 값, 약 30 ㎛ 내지 약 125 ㎛의 D90 값 및 약 10 ㎛ 내지 약 45 ㎛의 D50 값을 갖는다.

(d) 약 5 ㎛ 내지 약 10 ㎛의 D10 값;

(e) 약 10 ㎛ 내지 약 25 ㎛의 D50 값; 및

(f) 약 30 ㎛ 내지 약 75 ㎛의 D90 값.

일부 이러한 실시양태에서, 자유 염기는 약 5 ㎛ 내지 약 10 ㎛의 D10 값을 갖는다. 다른 이러한 실시양태에서, 자유 염기는 약 30 ㎛ 내지 약 75 ㎛의 D90 값을 갖는다. 다른 이러한 실시양태에서, 자유 염기는 약 10 ㎛ 내지 약 25 ㎛의 D50 값을 갖는다. 일부 이러한 실시양태에서, 자유 염기는 약 5 ㎛ 내지 약 10 ㎛의 D10 값 및 약 30 ㎛ 내지 약 75 ㎛의 D90 값을 갖는다. 추가 실시양태에서, 자유 염기는 약 5 ㎛ 내지 약 10 ㎛의 D10 값, 약 30 ㎛ 내지 약 75 ㎛의 D90 값 및 약 10 ㎛ 내지 약 25 ㎛의 D50 값을 갖는다.

다른 실시양태에서, 자유 염기는 약 5 ㎛ 내지 약 7.5 ㎛, 약 5 ㎛ 내지 약 10 ㎛, 약 5 ㎛ 내지 약 12.5 ㎛ 또는 약 5 ㎛ 내지 약 15 ㎛의 D10 값을 갖는 1차 입자 크기 분포를 갖는다.

다른 실시양태에서, 자유 염기는 약 10 ㎛ 내지 약 50 ㎛, 약 10 ㎛ 내지 약 45 ㎛, 약 10 ㎛ 내지 약 40 ㎛, 약 10 ㎛ 내지 약 35 ㎛, 약 10 ㎛ 내지 약 30 ㎛, 약 10 ㎛ 내지 약 25 ㎛ 또는 약 10 ㎛ 내지 약 20 ㎛의 D50 값을 갖는 1차 입자 크기 분포를 갖는다.

또 다른 실시양태에서, 자유 염기는 약 30 ㎛ 내지 약 175 ㎛, 약 30 ㎛ 내지 약 160 ㎛, 약 30 ㎛ 내지 약 150 ㎛, 약 30 ㎛ 내지 약 140 ㎛, 약 30 ㎛ 내지 약 130 ㎛, 약 30 ㎛ 내지 약 125 ㎛, 약 30 ㎛ 내지 약 120 ㎛, 약 30 ㎛ 내지 약 115 ㎛, 약 30 ㎛ 내지 약 110 ㎛, 약 30 ㎛ 내지 약 100 ㎛, 약 30 ㎛ 내지 약 75 ㎛, 약 30 ㎛ 내지 약 70 ㎛, 약 30 ㎛ 내지 약 65 ㎛, 약 30 ㎛ 내지 약 60 ㎛, 약 30 ㎛ 내지 약 55 ㎛, 약 30 ㎛ 내지 약 50 ㎛ 또는 약 30 ㎛ 내지 약 45 ㎛의 D90 값을 갖는 1차 입자 크기 분포를 갖는다.

D10에 대한 실시양태의 각각의 상기한 값은 이와 상반되지 않는 D50 및/또는 D90 값에 대한 임의의 값과 조합될 수 있다. D50에 대한 실시양태의 각각의 상기한 값은 이와 상반되지 않는 D10 및/또는 D90 값에 대한 임의의 값과 조합될 수 있다. D90에 대한 실시양태의 각각의 상기한 값은 이와 상반되지 않는 D10 및/또는 D50 값에 대한 임의의 값과 조합될 수 있다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 약 2 내지 약 3의 (D90-D10)/D50의 1차 입자 크기 분포 비를 갖는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 결정형 자유 염기를 제공한다. 일부 이러한 실시양태에서, 자유 염기는 약 5 ㎛ 내지 약 150 ㎛의 1차 입자 크기 분포를 갖는다.

이 양상의 일부 실시양태에서, 자유 염기는 약 2 내지 약 2.75, 약 2 내지 약 2.5, 약 2 내지 약 2.25의 (D90-D10)/D50의 1차 입자 크기 분포 비를 갖는다. 다른 실시양태에서, 상기 비는 약 2.0, 약 2.1, 약 2.2, 약 2.3, 약 2.4, 약 2.5, 약 2.6, 약 2.7, 약 2.8, 약 2.9 또는 약 3.0이다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 약 15 ㎛ 내지 약 125 ㎛의 부피 평균 직경(D[4,3])을 갖는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 결정형 자유 염기를 제공한다. 일부 실시양태에서, 자유 염기는 약 50 ㎛ 내지 약 100 ㎛의 D[4,3]을 갖는다. 다른 실시양태에서, 자유 염기는 약 15 ㎛ 내지 약 30 ㎛의 D[4,3]을 갖는다.

또 다른 실시양태에서, 자유 염기는 약 15 ㎛ 내지 약 100 ㎛, 약 15 ㎛ 내지 약 90 ㎛, 약 15 ㎛ 내지 약 80 ㎛, 약 15 ㎛ 내지 약 70 ㎛, 약 15 ㎛ 내지 약 60 ㎛, 약 15 ㎛ 내지 약 50 ㎛, 약 15 ㎛ 내지 약 40 ㎛, 약 25 ㎛ 내지 약 120 ㎛, 약 25 ㎛ 내지 약 100 ㎛, 약 25 ㎛ 내지 약 90 ㎛, 약 25 ㎛ 내지 약 80 ㎛, 약 25 ㎛ 내지 약 70 ㎛, 약 25 ㎛ 내지 약 60 ㎛, 약 25 ㎛ 내지 약 50 ㎛, 약 25 ㎛ 내지 약 40 ㎛, 약 25 ㎛, 약 30 ㎛, 약 35 ㎛, 약 40 ㎛, 약 45 ㎛, 약 50 ㎛, 약 55 ㎛, 약 60 ㎛, 약 65 ㎛, 약 70 ㎛, 약 75 ㎛, 약 80 ㎛, 약 90 ㎛, 약 100 ㎛, 약 105 ㎛, 약 110 ㎛, 약 115 ㎛ 또는 약 120 ㎛의 D[4,3]을 갖는다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 본 발명의 자유 염기, 및 약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 본 발명은 본 발명의 상기 약학 조성물을 포함하는 캡슐을 추가로 제공한다.

일부 실시양태에서, 캡슐은 0.1 내지 200 mg의 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 다형체 형태 A를 포함한다. 다른 실시양태에서, 캡슐은 25 내지 150 mg의 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 다형체 형태 A를 포함한다. 다른 실시양태에서, 캡슐은 50 내지 150 mg의 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 다형체 형태 A를 포함한다. 다른 실시양태에서, 캡슐은 50 내지 100 mg의 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 다형체 형태 A를 포함한다. 다른 실시양태에서, 캡슐은 75 내지 150 mg의 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 다형체 형태 A를 포함한다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 본 발명의 약학 조성물 치료 효과량을 인간을 비롯한 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 포유동물에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 이러한 실시양태에서, 약학 조성물은 캡슐로 투여된다. 캡슐은 0.1 내지 200 mg의 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온 자유 염기 다형체 형태 A를 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 캡슐은 25 내지 150 mg의 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온 자유 염기 다형체 형태 A를 포함할 수 있다. 추가 실시양태에서, 캡슐은 50 내지 150 mg의 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온 자유 염기 다형체 형태 A를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 화합물 1의 결정형 자유 염기를 특징화하기 위한 기법은, 비제한적으로 분말 X-선 회절분석법(PXRD), 고체 상태 NMR(ssNMR), 시차 주사 열량계법(DSC), 진동 분광법(예를 들면, IR 및 라만 분광법), 편광 현미경기법(PLM), 주사 전자 현미경기법(SEM), 고열 광학 현미경기법, 전자 결정학, 단일 결정 X-선 회절분석법, 정량 분석, 입자 크기 분석(PSA)(예를 들면, 입자 크기, 입자 크기 분포(PSD), 및 입자 형태), 비표면적(SSA) 분석, 표면 에너지 분석(예를 들면, 역 가스 크로마토그래피 또는 IGC), 용해도 연구 및 용해 연구, 또는 이러한 기법의 조합을 포함한다.

추가 양상에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같이 큰 1차 입자 크기를 갖는 화합물 1의 자유 염기를 제조하는 방법을 제공한다. 하나의 방법은 화합물 1의 작은 입자 크기 자유 염기를 제 1 용매 및 제 2 용매의 혼합물에 용해하고 가열하여 용해를 수행하는 단계, 적절한 온도로 냉각하여 화합물 1의 자유 염기(형태 A)의 시드 결정을 제공하는 단계, 이어서 결정화하여 화합물 1의 큰 입자 크기 자유 염기를 제공하는 단계를 수반한다. 이 공정에 사용된 작은 입자 크기 자유 염기는 통상적인 염 파괴 과정, 예를 들면, 중간체 비닐 에터를 산성 가수분해하여 산 부가염을 수득한 후, 실시예 5에 기재된 바와 같이 염기성화하여 단리될 수 있다.

일 실시양태에서, 본 발명은 (a) 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온 자유 염기를 제 1 용매 및 제 2 용매의 혼합물에 현탁하고 가열하여 용해를 수행하는 단계; (b) 적절한 온도로 냉각하고 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온 자유 염기(형태 A)의 시드 결정을 제공하는 단계; (c) 상기 혼합물을 서서히 냉각하여 결정화를 수행하는 단계; 및 (d) 큰 입자 크기를 갖는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(형태 A)의 자유 염기를 단리하는 단계를 포함하는, 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(형태 A)의 큰 입자 크기 자유 염기를 제조하는 방법을 제공한다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 (a) 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온 자유 염기를 n-부탄올 및 아니솔의 혼합물에 현탁하고 약 95 내지 100℃로 가열하여 용해를 수행하는 단계; (b) 약 80℃로 냉각하고 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온 자유 염기(형태 A)의 시드 결정을 제공하는 단계; (c) 상기 혼합물을 약 80℃에서 약 3 시간 동안 유지한 후 약 10℃로 서서히 냉각하여 결정화를 수행하는 단계; 및 (d) 여과하여 큰 입자 크기를 갖는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(형태 A)의 자유 염기를 단리하는 단계를 포함하는, 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(형태 A)의 큰 입자 크기 자유 염기를 제조하는 방법을 제공한다.

또 다른 방법은, 중간체 비닐 에터를 물 및 제 1 용매의 혼합물에서 산성 가수분해(이는 용해를 수득하기 위해 가열을 필요로 할 수 있다)하는 단계, 제 2 용매를 첨가하고 염기성화하여 동일반응계에서 생성된 자유 염기를 포함하는 제 2 혼합물을 수득하는 단계, 필요한 경우 가열하여 용해하고 물을 증류 제거하는 단계, 적절한 온도로 냉각하여 화합물 1의 자유 염기(형태 A)의 시드 결정을 수득한 후 결정화하여 큰 1차 입자 크기를 갖는 화합물 1의 자유 염기를 수득하는 단계를 수반한다.

일 실시양태에서, 본 발명은 (a) 4-{6-[6-(1-부톡실-비닐)-8-사이클로펜틸-5-메틸-7-옥소-7,8-다이하이드로피리도[2,3-d]피리미딘-2-일아미노]-피리딘-3-일}-피페라진-1-카복실산 3급-부틸 에스터를 물 및 제 1 용매의 혼합물에 현탁하고 가열하여 용해를 수행하는 단계; (b) 산 및 반응 생성물을 첨가하여 동일반응계에서 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]-피리미딘-7-온의 산 부가염을 수득하는 단계; (c) pH가 10 이상이도록 제 2 용매 및 수성 염기를 첨가하는 단계; (d) 유기 층을 분리하고 가열하여 물을 증류 제거하는 단계; (e) 적절한 온도로 냉각하여 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온 자유 염기(형태 A)의 시드 결정을 수득하는 단계; (f) 상기 혼합물을 서서히 냉각하여 결정화를 수행하는 단계; 및 (g) 큰 입자 크기를 갖는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(형태 A)의 자유 염기를 단리하는 단계를 포함하는, 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(형태 A)의 큰 입자 크기 자유 염기를 제조하는 방법을 제공한다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 (a) 4-{6-[6-(1-부톡실-비닐)-8-사이클로펜틸-5-메틸-7-옥소-7,8-다이하이드로피리도[2,3-d]피리미딘-2-일아미노]-피리딘-3-일}-피페라진-1-카복실산 3급-부틸 에스터를 물 및 n-부탄올의 혼합물에 현탁하고, 약 70℃로 가열하여 용해를 수행하는 단계; (b) 농축 HCl을 첨가하고 약 70℃에서 4 내지 6 시간 동안 가열하는 단계; (c) 아니솔 및 수성 NaOH를 첨가하여 10 초과의 pH를 갖는 2상 혼합물을 달성하는 단계; (d) 층을 분리하고 유기 층을 약 120℃로 가열하여 물을 증류 제거하는 단계; (e) 약 80℃로 냉각하여 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온 자유 염기(형태 A)의 시드 결정을 수득하는 단계; (f) 상기 혼합물을 약 80℃에서 약 3 시간 동안 유지한 후 약 10℃로 서서히 냉각하여 결정화를 수행하는 단계; 및 (g) 여과하여 큰 입자 크기를 갖는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(형태 A)의 자유 염기를 단리하는 단계를 포함하는, 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(형태 A)의 큰 입자 크기 자유 염기를 제조하는 방법을 제공한다.

상기한 방법의 각각의 일부 실시양태에서, 방법은 2 m²/g 이하의 비표면적을 갖는 화합물 1의 자유 염기를 제공한다. 상기한 방법의 각각의 다른 실시양태에서, 방법은 1 m²/g 이하의 비표면적을 갖는 화합물 1의 자유 염기를 제공한다. 상기한 방법의 각각의 다른 실시양태에서, 방법은 약 5 ㎛ 내지 약 150 ㎛, 바람직하게는 약 10 ㎛ 내지 약 100 ㎛, 더욱 바람직하게는 약 15 ㎛ 내지 약 80 ㎛의 1차 입자 크기를 갖는 화합물 1의 자유 염기를 제공한다. 상기한 방법의 각각의 다른 실시양태에서, 방법은 (i) 약 5 ㎛ 내지 약 10 ㎛의 D10 값; (ii) 약 30 ㎛ 내지 약 125 ㎛의 D90 값; (iii) 약 10 ㎛ 내지 약 45 ㎛의 D50 값; 또는 상기 (i), (ii) 및 (iii)의 조합을 특징으로 하는 1차 입자 크기 분포를 갖는 화합물 1의 자유 염기를 제공한다. 상기한 방법의 각각의 추가 실시양태에서, 방법은 약 2 내지 약 3의 (D90-D10)/D50의 1차 입자 크기 분포 비를 갖는 화합물 1의 자유 염기를 제공한다. 상기한 방법의 각각의 추가 실시양태에서, 방법은 약 15 ㎛ 내지 약 125 ㎛의 부피 평균 직경(D[4,3])을 갖는 화합물 1의 자유 염기를 제공한다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 상기 방법 중 하나에 따라 제조된 본원에 기재된 바와 같은 화합물 1의 자유 염기를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 방법에 따라 제조된, 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(형태 A)의 결정형 자유 염기를 제공한다. 일부 이러한 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 의해 제조된 자유 염기는 이의 SSA, PSA, 표면 에너지, 또는 이러한 방법의 조합에 의해 단독으로 또는 PXRD 또는 ssNMR과 추가 조합으로 특징화될 수 있다. 일부 이러한 실시양태에서, 결정형 자유 염기는 0.05 내지 0.25 중량%의 아니솔 및/또는 0.05 내지 0.25 중량%의 n-부탄올의 잔여 용매 함량을 갖는다. 다른 이러한 실시양태에서, 결정형 자유 염기는 0.5 중량% 이하의 아니솔 및 0.5 중량% 이하의 n-부탄올, 바람직하게는 0.25 중량% 이하의 아니솔 및 0.25 중량% 이하의 n-부탄올의 잔여 용매 함량을 갖는다.

상기 각각의 방법에서, 제 1 용매는 알코올이고, 제 2 용매는 방향족 용매이다. 적합한 알코올은 비제한적으로 비교적 고비점 알코올, 예컨대 n-부탄올, t-부탄올, n-프로판올, 펜탄올, 1,4-부탄다이올 또는 프로필렌 글리콜 등을 포함한다. 적합한 방향족 용매는 비제한적으로 아니솔, 메시틸렌, m-자일렌, 클로로벤젠, 피리딘 등을 포함한다.

일부 이러한 실시양태에서, 용매 혼합물은 10% 알코올, 15% 알코올, 20% 알코올, 25% 알코올, 30% 알코올, 35% 알코올, 40% 알코올, 45% 알코올, 50% 알코올, 60% 알코올, 70% 알코올 또는 70% 초과의 알코올을 포함하고 나머지는 방향족 용매이다. 다른 이러한 실시양태에서, 용매 혼합물은 90% 방향족, 85% 방향족, 80% 방향족, 75% 방향족, 70% 방향족, 65% 방향족, 60% 방향족, 55% 방향족, 50% 방향족, 40% 방향족, 30% 방향족, 또는 30% 미만의 방향족을 포함하고 나머지는 알코올 용매이다.

일 바람직한 실시양태에서, 제 1 용매는 n-부탄올이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 제 2 용매는 아니솔이다. 특히 바람직한 실시양태에서, 제 1 용매는 n-부탄올이고, 제 2 용매는 아니솔이다. 일부 이러한 실시양태에서, 용매 혼합물은 10% n-부탄올/아니솔, 15% n-부탄올/아니솔, 20% n-부탄올/아니솔, 25% n-부탄올/아니솔, 30% n-부탄올/아니솔, 35% n-부탄올/아니솔, 40% n-부탄올/아니솔, 45% n-부탄올/아니솔, 50% n-부탄올/아니솔, 60% n-부탄올/아니솔, 70% n-부탄올/아니솔, 또는 70% 초과의 n-부탄올/아니솔을 포함한다. 일부 바람직한 실시양태에서, 용매 혼합물은 약 20 내지 약 50%의 n-부탄올/아니솔을 포함한다. 특히 바람직한 실시양태에서, 용매 혼합물은 약 40%의 n-부탄올/아니솔을 포함한다.

수율을 개선하기 위해, 상기 방법은 실온 초과 또는 미만의 온도로 가열 또는 냉각을 포함할 수 있다. 종종, 반응 혼합물을 약 30℃ 내지 약 150℃, 더욱 종종 약 50℃ 내지 약 120℃의 온도로 가열하여 용해할 수 있다. 결정화 동안, 반응 혼합물을 실온 이하, 예를 들면 약 0℃ 내지 약 30℃, 바람직하게는 약 5℃, 약 10℃, 약 15℃ 또는 약 20℃ 온도로 냉각하는 것이 바람직할 수 있다.

추가 실시양태에서, 화합물 1의 자유 염기는 10.1 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 다형체 형태 A이다. 다른 실시양태에서, 결정형은 10.1 ± 0.2 및 22.5 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다. 이 양상의 추가 실시양태에서, 결정형은 5.1 ± 0.2, 10.1 ± 0.2 및 22.5 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다. 추가 실시양태에서, 결정형은 5.1 ± 0.2, 10.1 ± 0.2, 19.7 ± 0.2 및 22.5 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 결정형은 5.1 ± 0.2, 10.1 ± 0.2, 17.1 ± 0.2, 19.7 ± 0.2 및 22.5 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다. 추가 실시양태에서, 결정형은 5.1 ± 0.2, 10.1 ± 0.2, 11.5 ± 0.2, 17.1 ± 0.2, 19.7 ± 0.2 및 22.5 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 결정형은 5.1 ± 0.2, 10.1 ± 0.2, 11.5 ± 0.2, 17.1 ± 0.2, 18.7 ± 0.2, 19.7 ± 0.2 및 22.5 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다. 이 양상의 일부 실시양태에서, 결정형은 도 1에 도시된 바와 본질적으로 동일한 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절(PXRD) 패턴을 갖는다.

자유 염기 다형체 형태 A의 분말 X-선 회절(PXRD) 패턴을 도 1에 도시하고, 상응하는 데이터를 하기 표 1에 제시하였다.

화합물 1의 다형체 형태 A에 대한 PXRD 데이터

2θ(°) ± 0.2	피크 강도(%)
5.1	63
8.0	18
10.1	100
10.3	70
11.5	42
14.0	20
15.1	14
16.0	16
17.1	47
18.7	33
19.7	51
20.2	30
21.2	22
22.5	87
23.0	31

화합물 1의 결정형 자유 염기 형태 A에 대한 고체 상태 핵 자기 공명(ssNMR)을 도 2에 도시하고, 상응하는 데이터를 하기 표 2에 제시하였다.

화합물 1의 다형체 형태 A에 대한 ¹³C 화학 이동(ppm)

¹³C 화학 이동 [ppm]^a± 0.2
12.50
25.40
26.54
29.04
32.03
46.15
51.01
55.66
107.34
112.44
125.94
131.14
140.15
143.15
144.85
156.32
157.35
158.06
161.88
201.94
(a) 29.5 ppm에서 고체 상 아다만탄의 외부 샘플 기준

또 다른 양상에서, 본 발명은 화합물 1의 자유 염기 다형체 형태 B인, 화합물 1의 결정형 자유 염기를 제공한다. 이 양상의 일부 실시양태에서, 결정형은 6.0 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다. 이 양상의 다른 실시양태에서, 결정형은 6.0 ± 0.2 및 19.8 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다. 이 양상의 추가 실시양태에서, 결정형은 6.0 ± 0.2, 19.8 ± 0.2 및 26.7 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다. 추가 실시양태에서, 결정형은 6.0 ± 0.2, 16.4 ± 0.2, 19.8 ± 0.2 및 26.7 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 결정형은 6.0 ± 0.2, 12.8 ± 0.2, 16.4 ± 0.2, 19.8 ± 0.2 및 26.7 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다. 추가 실시양태에서, 결정형은 6.0 ± 0.2, 12.8 ± 0.2, 16.4 ± 0.2, 19.8 ± 0.2, 22.6 ± 0.2 및 26.7 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 결정형은 6.0 ± 0.2, 10.9 ± 0.2, 12.8 ± 0.2, 16.4 ± 0.2, 19.8 ± 0.2, 22.6 ± 0.2 및 26.7 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는다. 이 양상의 일부 실시양태에서, 결정형은 도 3에 도시된 바와 본질적으로 동일한 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는다. 자유 염기 다형체 형태 B의 분말 X-선 회절(PXRD) 패턴을 도 3에 도시하고, 상응하는 데이터를 하기 표 3에 제시하였다.

화합물 1의 다형체 형태 B에 대한 PXRD 데이터

2θ(°) ± 0.2	피크 강도(%)
6.0	100
10.9	39
12.8	40
16.4	41
19.8	50
18.1	24
12.1	23
22.6	40
26.7	48
28.2	20

6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 결정형 자유 염기 형태 B에 대한 고체 상태 핵 자기 공명(ssNMR)은 도 4에 도시하고, 상응하는 데이터를 하기 표 4에 제시하였다.

화합물 1의 다형체 형태 B에 대한 ¹³C 화학 이동(ppm)

¹³C 화학 이동 [ppm]^a± 0.2
13.06
27.10
28.04
30.23
46.90 ^b
52.32 ^b
54.63
107.28
113.35
125.67
127.04
140.40
145.21
146.37
147.34
155.57
157.59
159.18
161.29
201.35
(a) 29.5 ppm에서 고체 상 아다만탄의 외부 샘플 기준 (b) 광역 피크

각각의 분말 X-선 회절 측정을 위해, 자유 염기의 샘플을 홀더의 평면 표면에 위치된 캐비티(cavity)에 넣고, 유리 슬라이드를 사용하여 샘플의 표면을 평평하게 하였다. 샘플을 함유하는 홀더를 회절계에 넣고, 먼저 홀더의 평면 표면에 비해 작은 각에서 X-선 빔의 공급원으로 샘플을 조사하였다. 이후 X-선 빔을 단계적인 방식으로 아크를 통해 이동시키고, 연속하여 입사 빔과 홀더의 평면 사이의 각을 증가시켰다. 스캔의 각각의 단계에서, 섬광 계수기는 회절된 방사선의 양을 검출하고, 이를 2θ(°)의 함수로서 기록하였다. 계측기 소프트웨어는 2θ(°)에 대한 강도로서 스캔의 회절된 방사선 결과를 나타낸다.

표 1 및 3은 각각 다형체 형태 A 또는 형태 B를 갖는 화합물 1의 자유 염기에 대한 유의한 PXRD 피크(즉, 3.5 초과의 잡음비에 대한 피크 높이를 보여주는 것)를 열거한다. 제공된 특징적인 피크의 목록은 특징적인 피크의 오직 가능한 목록이 아니다. 다형체 식별 분야의 숙련자는 또한 하나의 다형체를 다른 것과 구별하는 특징적인 피크의 다른 세트를 선택할 수 있다.

동일한 다형체의 개별적인 측정 중 PXRD 패턴의 차이는 많은 이유로 생겨날 수 있다. 오차의 원인은 샘플 제조시 편차(예를 들면, 샘플 높이), 계측기 오차, 교정 오차, 및 작동기 오차(예컨대 피크 위치의 측정시 오차)를 포함한다. 우선적 배향, 즉, PXRD 샘플에서 결정의 랜덤 배향의 결핍은 상대적인 피크 높이에서 유의한 차이를 야기할 수 있다. 교정 오차 및 샘플 높이 오차는 종종 동일한 방향에서 동일한 양에 의해 디프렉토그램(diffractogram)의 모든 피크의 이동을 야기한다. 평평한 홀더에서 샘플 높이의 작은 차이는 PXRD 피크 위치에서 큰 변위를 야기할 수 있다. 계통적 연구는, 1 mm의 샘플 높이 차이는 1°2θ만큼 높은 피크 이동을 야기할 수 있음을 보여준다(문헌[Chen et al., J. Pharmaceutical and Biomedical Analysis (2001) 26:63] 참조).

많은 예에서, 계통적 오차로 인한 회절 패턴 사이의 피크 이동은 이동을 보완하거나(예를 들면, 보정 계수를 모든 피크 위치 값에 적용하거나), 회절계를 재조정하여 제거될 수 있다. 일반적으로, 동일한 기법이 2개의 상이한 계측기로부터 수득된 PXRD 피크 위치가 합의될 수 있도록 회절계 사이의 차이를 보완하기 위해 사용될 수 있다. 또한, 이러한 기법이 동일하거나 상이한 회절계로부터의 PXRD 측정에 적용되는 경우, 특정 다형체에 대한 피크 위치는 일반적으로 약 ± 0.2°2θ 이내로 합의될 것이다.

개시된 화합물은 모든 약학적으로 허용되는 동위원소 변이를 포괄한다. 동위원소 변이는 하나 이상의 원자가 원자번호는 동일하지만 원자질량이 천연에서 일반적으로 발견되는 원자질량과 상이한 원자로 대체된 화합물이다. 유용한 동위원소는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 불소 및 염소의 동위원소를 포함한다. 따라서 동위원소의 예는 비제한적으로 ²H, ³H, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁷O, ¹⁸O, ³²P, ³⁵S, ¹⁸F 및 ³⁶Cl을 포함한다.

개시된 화합물을 동위원소, 예컨대 중수소, 즉 ²H로 치환하여 대사 안정성의 증가로 인한 특정 치료적 이점, 예를 들면, 증가된 생체 내 반감기 또는 감소된 투여량 요건을 수득할 수 있고, 이로 인해 일부 환경에서 더욱 유용할 수 있다. 또한, 특정 동위원소 변이, 예를 들면 방사성 동위원소를 혼입한 것은 약물 및/또는 기질 조직 분포 연구에 유용하다. 방사성 동위원소 삼중수소, 즉 ³H, 및 탄소-14, 즉 ¹⁴C는 혼입의 용이성 및 검출의 준비된 수단이라는 점에서 상기 목적에 특히 유용하다.

개시된 화합물의 동위원소 변이는 일반적으로, 당업자에게 공지된 통상적인 기법에 의해 또는 적합한 시약의 적절한 동위원소 변이를 사용하여 수반하는 실시예에 기재된 것과 유사한 방법에 의해 제조될 수 있다. 개시된 화합물의 약학적으로 허용되는 용매화물은, 결정화의 용매가 동위원소로 치환된, 예를 들면, D₂O, d₆-아세톤, d₆-DMSO일 수 있는 것을 포함한다.

용해도 실험

US 7,345,171은 통상적인 염 파괴 과정에 의해 제조된 화합물 1의 자유 염기가 pH 7.9에서 불량한 수 용해도(9 ㎍/mL)를 갖고 동물 연구에서 낮은 생체이용률을 나타냄을 보고하고 있다. 자유 염기는 슬러리 실험에 따라 이의 가장 안정한 결정 상(즉, 형태 A)으로 존재하는 것으로 보고되었다. US 7,345,171의 도 17은 형태 A의 자유 염기에 대한 물 흡착/탈착 등온선을 제공하고 있다. 이전에 언급한 바와 같이, 이 물질은 본원에 기재된 화합물 1의 작은 입자 크기 자유 염기에 상응한다.

화합물 1의 자유 염기(형태 A)는 약물 입자 제조 공정에서 펀치 점착(punch sticking)에 대한 높은 성향을 갖는다. 펀치 점착이 API 표면적에 관련되므로, API 입자 크기 조절은 약품 제조 동안 점착성을 최소화하는데 중요하다. 펀치 점착에 대한 문제 이외에, 표준 염 파괴 공정으로부터 직접 단리된 화합물 1의 자유 염기는 매우 정적인 성향으로 밝혀졌고, 체질에 의해 분산되지 않는 큰(약 500 ㎛) 경질 응집물을 형성하는 것으로 밝혀졌다. 유사한 불량한 물리적 특성을 갖는 자유 염기 API는 종래 이세티오네이트 염 API의 자유 염기화 또는 API 합성의 최종 단계에서 형성된 동일반응계 염의 중성화에 의해 생성된다. 어느 공정이든, 작은 API 1차 입자는 pH의 조절과 함께 용해도에서 극적인 변화에 의해 야기된 신속한 결정화로 인해 생성된다. 모든 경우에 자유 염기는 형태 A의 더욱 안정한 다형체로서 단리된다.

도 6은 상기 기재된 자유 염기화 및 중화 실험에 의해 형성된 전형적인 작은 1차 입자의 주사 전자 현미경기법(SEM) 이미지를 도시한다. 이 자유 염기 단리 공정에 의해 생성된 화합물 1(형태 A)의 배치(batch)에 대한 입자 크기 분포 측정은 도 8에 도시된다. 입자 크기 분포에서 제 2 모드는 큰 응집물의 존재에 의해 야기되고, 이는 또한 도 6에서 SEM 이미지로 보여진다. 자유 염기화 공정을 변형시키기 위한 시도는 생성된 API의 물리적 특성을 개선하는데 성공하지 못했다. 자유 염기의 제조 방법은 불량한 물리적 특성을 갖는 API의 단리를 야기하였으므로, API 물리적 특성을 개선시킬 수 있는 재결정화 공정을 확인하고자 작업하였다.

화합물 1의 자유 염기에 대한 초기 결정화 스크리닝 실험을 완료하여 개선된 물리적 특성을 갖는 입자를 단리시킬 수 있는 용매 시스템을 확인하였다. 용해도 스크리닝 및 소규모 재결정화 연구의 조합으로 여러 잠재적인 용매 시스템을 검사하였다.

소규모 결정화 연구

일련의 소규모 결정화 실험을 수행하여 잠재적인 재결정화 용매 시스템을 확인할 뿐만 아니라 단리된 자유 염기 1차 입자의 형태에 대한 용매의 영향을 평가하였다. 밀봉된 바이알 및 외부 열원을 사용하여 14 스크리닝 연구의 초기 설정을 10 mg 규모로 수행하고 50 mg/mL 샘플을 환류 온도 이하로 가온시켰다. 용액으로 들어가는 샘플을 시각적 관찰로 확인하고, 광현미경기법을 사용하여 생성된 입자를 특징화하였다. 이러한 초기 결정화 스크리닝 실험의 결과를 하기 표 5에 요약하였다.

초기 소규모 결정화 연구 결과의 요약

용매 시스템	재결정화 결과
사이클로펜틸메틸 에터	용해되지 않음
n-부틸 아세테이트	용해되지 않음
n-부탄올	용해되지 않음
트라이플루오로톨루엔	용해되지 않음
톨루엔	용해되지 않음
클로로벤젠	작은 불규칙한 형태 입자
DMF	작은 바늘 형태 입자
NMP	작은 불규칙한 형태 입자
프로필렌 글리콜	작은 불규칙한 형태 입자
아니솔	큰 입자(선반 형태 또는 도끼 형태)
피리딘	작은 선반 형태 입자
설폴란	작은 불규칙한 형태 입자
m-자일렌	작은/중간 도끼 형태 입자
메시틸렌	작은 바늘 형태 입자

상기 소규모 결정화 연구에 기초하여, 생성된 입자가 크고 아니솔이 ICH 부류 III 용매이므로, 아니솔은 추가 결정화 및 용해도 연구의 초점이 되었다. 또한, 이 스크리닝 연구는, 이러한 용매 중 어느 것도 아니솔과 유사하게 열거된 ICH 부류 III을 갖지 않을지라도, 생성된 입자에 기초하여 잠재적인 용매 시스템으로서 피리딘, m-자일렌 및 메시틸렌을 확인하였다.

하기 용매는 또한 고체의 재결정화를 위해 사용되었다: 이소프로판올, 이소부탄올, 에탄올, 에틸 아세테이트, 톨루엔, 테트라하이드로푸란 및 다이옥산. 각각의 용매는 다이클로로메탄으로부터 수득된 원래 결정형과 같은 화합물 1의 다형체 형태 A 결정형 고체를 생성하였다.

용해도 연구

초기 소규모 결정화 연구와 병행하여, 화합물 1의 자유 염기에 대한 일련의 용해도 연구를 수행하여 가능한 재결정화 시스템을 확인하였다. 초기 실온 용해도 스크리닝 연구에서, 총 23개의 용매를 스크리닝하였다. 이 연구는, 화합물 1 자유 염기가 유기 용매의 범위에서 낮은 용해도를 가짐을 시사하고, 메틸렌 클로라이드만이 1 mg/mL(3.0 mg/mL) 초과의 용해도를 보였다. 후속 표적화 고온 용해도 연구를 수행하였다. 후속 연구에서, 일련의 16개 용매 시스템을 25 mg/mL의 고정된 농도에서 조사하고, 동적 용해도 방법을 사용하여 용해 온도를 110℃의 최대 온도까지 측정하였다.

화합물 1의 코스모썸(COSMOtherm) 용해도 모델에 의해 예상된 상승적인 용해도 거동을 사용하여 이 스크리닝 연구에 포함된 이원 및 삼원 용매 시스템을 선택하였다. 이러한 연구의 결과를 하기 표 6에 열거하였다. 표에서 110℃ 초과로서 열거된 실험에 대하여, 화합물은 1은 110℃로 가열시 용매에 용해되지 않았는 바, 이는 용해도가 이 용매에서 110℃에서 25 mg/mL 미만임을 시사한다.

25 mg/mL 화합물 1 자유 염기 용액에 대한 동적 용해도 측정

실험 번호	용매	용해 온도(℃)
1	n-BuOH	110℃ 초과
2	DMF	110℃ 초과
3	NMP	97.9℃
4	DMSO	110℃ 초과
5	DMAc	110℃ 초과
6	n-부틸 아세테이트	110℃ 초과
7	아니솔	110℃ 초과
8	10% n-BuOH/아니솔(v/v)	110℃ 초과
9	20% n-BuOH/아니솔(v/v)	109.7℃
10	40% n-BuOH/아니솔(v/v)	101.4℃
11	10% n-BuOH/NMP(v/v)	103.7℃
12	25% n-BuOH/NMP(v/v)	110℃ 초과
13	10% 1,4-부탄다이올/아니솔(v/v)	109.8℃
14	25% 1,4-부탄다이올/아니솔(v/v)	104.8℃
15	1:1:8 프로필렌 글리콜/n-BuOH/아니솔(v/v)	91.2℃
16	2:1:7 프로필렌 글리콜/n-BuOH/아니솔(v/v)	84.1℃

상기 표 6에서 실험 번호 3 및 11로부터의 포화된 용액의 후속 UPLC/MS 시험은 이전에 보이지 않은 불순물 피크의 존재를 나타내었는 바, 이는 이러한 실험에서 분해가 발생하였음을 시사한다.

프로필렌 글리콜/n-BuOH/아니솔 혼합물이 n-BuOH/아니솔 혼합물에 비해 개선된 용해도를 나타내었지만, 전자의 용매 시스템은 규모 문제를 야기할 수 있는 이의 높은 점도 및 비점으로 인해 프로필렌 글리콜을 사용한 작업에 있어서 잠재적인 도전이 되므로 추진되지 않았다.

이러한 스크니링 연구에 기초하여, 40% n-부탄올 및 아니솔의 혼합물은 비교적 높은 용해도, API의 화학적 안정성 및 재결정화된 화합물 1 API의 입자 특성에 비추어 추가 작업을 위한 결정화 용매 시스템으로서 선택되었다. 이 용매 시스템은 후속 제조에 사용되어 점착성이 감소된 더 큰 1차 입자 크기 API를 수득하고, 정적 성향이 아니고, 응집물이 없었다.

이 용매 혼합물을 사용하여, 화합물 1을 95 내지 100℃로 가열하여 40 mL/g의 용매(25 mg/mL의 농도)로 용해한 후, 제어된 냉각 프로필을 사용하여 결정화하고 시딩하여 핵생성을 유도하였다. 도 9는 이 재결정화 과정을 사용하여 재결정화된 화합물 1의 실험실 규모 군의 PLM 이미지인 반면, 도 7은 재결정화된 API의 3개의 군에 대한 입자 크기 분포를 보여준다. 이 재결정화 공정은 더 큰 1차 입자 크기를 갖는 화합물 1 API 입자의 단리를 야기하여, 약품 제조 공정에서 점착 성향의 감소를 야기한다. 이 재결정화된 화합물 1 API는 응집물을 형성하지 않고 또한 정적 성향이 아닌 양성(positive) 속성을 갖는다.

용해도 스크리닝 및 소규모 재결정화 연구의 조합으로 화합물 1의 자유 염기의 재결정화에 대한 여러 잠재적인 용매 시스템을 검사하였다. 이러한 스크리닝 연구로부터의 결과에 기초하여, 40% n-부탄올/아니솔의 혼합물을 비교적 높은 용해도, API의 화학적 안정성 및 재결정화된 화합물 1의 입자 특성에 기초하여 바람직한 결정화 용매 시스템으로서 선택하였다. 이 재결정화 공정으로부터 단리된 API의 큰 입자 크기 및 개선된 입자 특성은 화합물 1의 자유 염기에 대한 약품 제조 공정의 개발을 촉진하였다.

입자 크기 평가

재결정화된 물질에 대한 입자 크기를 레이저 회절 방법을 사용하여 평가하였다. 레이저 회절은 ISO 및 ASTM을 비롯하여 표준 및 안내 지침에 의해 인지되고, 입자 크기 분포를 측정하기 위해 광범위하게 사용된다. 평가의 실행시, 샘플을 다양한 각에서 산란된 레이저 광을 야기하는 레이저 빔을 통해 통과시켰다. 고정된 각에 위치된 검출기로 그 위치에서 산란된 광의 강도를 측정하였다. 이어서, 수학적 모델[미에 또는 프라운호퍼 이론(Mie or Fraunhoffer Theory)]을 적용하여 입자 크기 분포를 생성하였다.

레이저 회절(또는 작은 각 광 산란) 기법을 사용하여 건조 샘플 분말을 압축된 공기로 분산시켜 입자 크기를 분석하였다. 구체적으로, 바이브리(Vibri) 건조 분말 공급기가 장착된 심파텍 헬로스 로도스(Sympatec HELOS RODOS) 시스템을 사용하여 입자 크기 분포를 분석하였다. 분말 샘플을 0.5 바의 분산 압력으로 분산시켰다. 일부 경우에서, 아스피로스(Aspiros) 미량 투약 장치를 사용하고, 분말 샘플을 0.2 바의 분산 압력으로 분산시켰다. 각각의 샘플의 입자 크기 범위를 포괄하도록 적합한 렌즈를 선택하였다.

입자 크기 측정시, 개체군의 절반이 이 지점 위에 존재하고, 나머지 절반이 이 지점 아래에 존재하는 값으로서 중간값을 정의하였다. 입자 크기 분포를 위해, 중간을 D50이라 칭하였다. D50은, 분포를 이 직경 위의 절반 및 아래의 절반으로 분할하는 크기(단위: ㎛)이다. Dv50 또는 D[v,0.5]라는 표현은 때때로 부피 분포의 중간값으로 사용된다.

모드는 빈도 분포의 피크이다. 입자 분포는 하나 초과의 모드를 포함할 수 있고, 예를 들면 입자는 1차 입차 및 응집물로서 존재한다.

스팬은 때때로 분포 너비의 척도로서 사용되고, (D[v,0.9]-D[v,0.1])/D[v,0.5] 또는 (D90-D10)/D50의 비로서 정의된다.

분포 너비는 또한 x-축에 1, 2 또는 바람직하게는 3개의 값을 인용함으로써, 전형적으로 D10, D50 및 D90의 일부 조합에 의해 특징화될 수 있다. 중간값인 D50은 개체군의 절반이 이 값 아래에 놓인 직경으로서 상기 정의되었다. 유사하게, 분포의 90%는 D90 아래에 놓여있고, 개체군의 10%는 D10 아래에 놓여있다.

용어 D[4,3]은 부피 평균 또는 질량 모멘트 평균을 지칭한다. 레이저 회절 결과는 부피 단위로 기록되고, 부피 평균을 사용하여 분포의 중심 점을 정의할 수 있다. D[4,3] 값은 분포시 큰 입자의 존재에 민감하다.

제형

본 발명은 또한 본원에 기재된 화합물 1의 자유 염기 다형체 형태 A를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 약학 조성물은, 예를 들면 정제, 캡슐, 알약, 분말, 지속 방출 제형, 용액, 현탁액으로서 경구 투여에 적합한 형태, 멸균 용액, 현탁액 또는 유화액으로서 비경구 주사에 적합한 형태, 연고 또는 크림으로서 국소 투여에 적합한 형태 또는 좌제로서 직장 투여에 적합한 형태일 수 있다. 약학 조성물은 정확한 투여량의 단일 투여에 적합한 단위 투여 형태일 수 있다. 약학 조성물은 통상적인 약학적 담체 또는 부형제 및 활성 성분으로서 본 발명에 따른 화합물을 포함할 것이다. 또한, 약학 조성물은 다른 의학 제제 또는 약학 제제, 담체, 어쥬번트 등을 포함할 수 있다.

적합한 약학적 담체는 불활성 희석제 또는 충전제, 물 및 다양한 유기 용매를 포함한다. 약학 조성물은 필요에 따라 추가 성분, 예컨대 향미제, 결합제, 부형제 등을 함유할 수 있다. 따라서, 경구 투여를 위해, 다양한 부형제, 예컨대 시트르산을 함유하는 정제가 다양한 붕해제, 예컨대 전분, 알긴산 및 특정 착체 실리케이트, 및 결합제, 예컨대 수크로스, 젤라틴 및 아카시아와 함께 이용될 수 있다. 추가적으로, 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트, 나트륨 라우릴 설페이트 및 활석이 종종 정제화 목적에 유용하다. 유사한 유형의 고체 조성물이 또한 연질 및 경질 충전된 젤라틴 캡슐에 이용될 수 있다. 바람직한 물질은 락토스 또는 유당 및 고분자량 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 수성 현탁액 또는 엘릭시르가 경구 투여에 필요한 경우, 이의 활성 화합물은 다양한 감미료 또는 향미제, 착색 물질 또는 염료, 및 필요에 따라 유화제 또는 현탁제와, 희석제, 예컨대 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 글리세린 또는 이들의 조합과 함께 조합될 수 있다.

특정 양의 활성 화합물을 사용하여 다양한 약학 조성물을 제조하는 방법은 당업자에게 공지되어 있거나 명백할 것이다. 예를 들면, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easter, Pa., 15th Edition (1975)]을 참조한다.

개시된 화합물은 단독으로 또는 다른 약물과 조합하여 투여될 수 있고, 일반적으로, 하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제와 관련하여 제형으로 투여될 것이다. 용어 "부형제"는 화합물 1 및 이의 염 이외의 임의의 성분을 칭한다. 부형제의 선택은 특정한 투여 모드에 따라 매우 달라질 것이다.

개시된 화합물은 경구로 투여될 수 있다. 경구 투여는, 화합물이 위장관에 들어가도록 연하를 수반할 수 있거나, 구강 또는 설하 투여는 화합물이 입으로부터 직접 혈류로 들어가게 함으로써 이용될 수 있다.

경구 투여에 적합한 제형은 고체 제형, 예컨대 정제, 미립자를 함유하는 캡슐, 액체 또는 분말, 로젠지(액체 충전물 포함), 츄잉, 다중입자 및 나노입자, 겔, 고용체, 리포솜, 필름(점막 접착제 포함), 배주(ovules), 분무 및 액체 제형을 포함한다. 액체 제형은 현탁액, 용액, 시럽 및 엘릭시르를 포함한다. 상기 제형은 연질 또는 경질 캡슐에서 충전제로서 이용될 수 있고, 전형적으로, 담체, 예를 들면 물, EtOH, 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 메틸셀룰로스, 또는 적합한 오일, 및 하나 이상의 유화제 및/또는 현탁제를 포함한다. 액체 제형은 또한 고체의 재구성에 의해, 예를 들면, 사쉐로부터 제조될 수 있다.

개시된 화합물은 또한 문헌[Liang and Chen, Expert Opinion in Therapeutic Patents (2001) 11(6):981-986]에 기재된 바와 같이 신속-용해, 신속-붕해 투여 형태로 사용될 수 있다.

정제 투여 형태의 경우, 투여량에 따라, 약물은 투여 형태의 1 중량% 내지 80 중량%, 더욱 전형적으로 5 중량% 내지 60 중량%를 구성할 수 있다. 약물 이외에, 정제는 일반적으로 붕해제를 함유한다. 붕해제의 예는 나트륨 전분 글리콜레이트, 나트륨 카복시메틸 셀룰로스, 칼슘 카복시메틸 셀룰로스, 크로스카멜로스 나트륨, 크로스포비돈, 폴리비닐피롤리돈, 메틸셀룰로스, 미세결정형 셀룰로스, 저급 알킬-치환된 하이드록시프로필 셀룰로스, 전분, 예비겔화된 전분, 및 나트륨 알기네이트를 포함한다. 일반적으로, 붕해제는 투여 형태의 1 중량% 내지 25 중량%, 바람직하게는 5 중량% 내지 20 중량%를 차지할 것이다.

결합제는 일반적으로, 정제 제형에 응집성을 부여하기 위해 사용된다. 적합한 결합제는 미세결정형 셀룰로스, 젤라틴, 당, 폴리에틸렌 글리콜, 천연 및 합성 검, 폴리비닐피롤리돈, 예비겔화된 전분, 하이드록시프로필 셀룰로스, 및 하이드록시프로필 메틸셀룰로스를 포함한다. 정제는 또한 희석제, 예컨대 락토스(일수화물, 분무-건조된 일수화물, 무수물 등), 만니톨, 자일리톨, 덱스트로스, 수크로스, 소르비톨, 미세결정형 셀룰로스, 전분, 및 2염기성 칼슘 포스페이트 이수화물을 포함한다.

정제는 또한 임의적으로 표면 활성제, 예컨대 나트륨 라우릴 설페이트 및 폴리소르베이트 80, 및 활주제, 예컨대 이산화 규소 및 활석을 포함할 수 있다. 존재하는 경우, 표면 활성제는 정제의 0.2 중량% 내지 5 중량%를 차지할 수 있고, 활주제는 정제의 0.2 중량% 내지 1 중량%를 차지할 수 있다.

정제는 또한 일반적으로, 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테아레이트, 아연 스테아레이트, 나트륨 스테아릴 푸마레이트, 및 마그네슘 스테아레이트와 나트륨 라우릴 설페이트의 혼합물을 함유한다. 윤활제는 일반적으로 정제의 0.25 중량% 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.5 중량% 내지 3 중량%를 차지한다. 다른 성분은 보존제, 산화방지제, 향미제 및 착색제를 포함할 수 있다.

정제 배합물은 직접 압축되어 정제를 형성할 수 있다. 정제 배합물 또는 배합물의 일부는 다르게는 정제화 전에 습식-, 건식- 또는 용융-과립화, 용융 응결 또는 압출될 수 있다. 최종 제형은 하나 이상의 층을 포함할 수 있고, 코팅되거나 코팅되지 않을 수 있다. 예시적 정제는 약 80% 이하의 약물, 약 10 중량% 내지 약 10 중량%의 결합제, 약 0 중량% 내지 약 85 중량%의 희석제, 약 2 중량% 내지 약 10 중량%의 붕해제, 및 약 0.25 중량% 내지 약 10 중량%의 윤활제를 함유한다. 정제의 제형에 관한 추가 상세한 설명은 문헌[H. Lieberman and L. Lachman, Pharmaceurical Dosage Forms: Tablets, Vol. 1 (1980)]을 참조한다.

경구 투여용 고체 제형은 즉시 방출 및/또는 변형 방출되도록 제형화될 수 있다. 변형 방출 제형은 지연 방출, 지속 방출, 펄스 방출, 제어 방출, 표적 방출 및 프로그램화 방출을 포함한다. 적합한 변형 방출 제형의 일반적인 설명은 US 6,106,864를 참조한다. 다른 유용한 방출 기법, 예컨대 고에너지 분산 및 삼투성 및 코팅된 입자의 상세한 설명은 문헌[Verma et al, Pharmaceutical Technology On-line(2001) 25(2):114]을 참조한다. 제어 방출을 달성하기 위한 츄잉 검의 사용에 대한 논의는 WO 00/35298을 참조한다.

개시된 화합물은 또한 혈류내로, 근육내로, 또는 내부 장기내로 직접 투여될 수 있다. 비경구 투여에 적합한 수단은 정맥내, 동맥내, 복강내, 척추강내, 심실내, 요도내, 흉골내, 두개강내, 근육내 및 피하를 포함한다. 비경구 투여에 적합한 장치는 바늘(미세바늘 포함) 주사기, 무바늘 주사기 및 투입 기법을 포함한다.

비경구 제형은 전형적으로, 부형제, 예컨대 염, 탄수화물, 및 완충제(바람직하게는 3 내지 9의 pH)를 함유할 수 있는 수용액이지만, 일부 경우, 이들은 멸균 비수성 용액으로서, 또는 적합한 비히클, 예컨대 멸균 주사용 증류수와 함께 사용되는 건조된 형태로서 더욱 적합하게 제형화될 수 있다. 멸균 조건하에, 예를 들면 동결건조에 의한 비경구 제형의 제조는 당업자에게 널리 공지된 표준 약학 기법을 사용하여 용이하게 수행될 수 있다. 비경구 투여 형태의 예는 멸균 수용액 중 활성 화합물의 용액 또는 현탁액, 예를 들면, 수성 프로필렌 글리콜 또는 덱스트로스 용액을 포함한다. 상기 투여 형태는 필요에 따라 적합하게 완충될 수 있다.

비경구 용액의 제조에 사용된 개시된 화합물의 용해도는 적절한 제형 기법의 사용, 예컨대 용해도-강화제의 혼입에 의해 증가될 수 있다. 비경구 투여용 제형은 상기한 바와 같이 즉시 방출 및/또는 변형 방출되도록 제형화될 수 있다. 따라서, 개시된 화합물은 활성 화합물의 장기 방출을 제공하는 이식된 보급창으로서 투여하기 위한 더욱 고체의 형태로 제형화될 수 있다.

본 발명의 화합물은 또한 피부 또는 점막에 국소적으로, 진피로 또는 경피로 투여될 수 있다. 상기 목적을 위한 전형적인 제형은 겔, 하이드로겔, 로션, 용액, 크림, 연고, 분진 분말, 드레싱, 포말, 필름, 피부 패치, 웨이퍼, 이식물, 스폰지, 섬유, 밴드 및 마이크로에멀젼을 포함한다. 리포솜이 또한 사용될 수 있다. 전형적인 담체는 알코올, 물, 광유, 액체 석유, 백색 석유, 글리세린, 폴리에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜을 포함한다. 전형적인 제형은 또한 침투 강화제를 포함할 수 있다. 예를 들면, 문헌[Finnin and Morgan, J Pharm Sci (1999) 88(10):955-958]을 참조한다.

국소 투여의 다른 수단은 이온도입, 전기천공, 음파영동, 초음파영동 및 무바늘(예를 들면, 파우더젝트(PODWERJECT)) 또는 미세바늘 주사를 포함한다. 국소 투여용 제형은 상기한 바와 같이 즉시 방출 및/또는 변형 방출되도록 제형화될 수 있다.

개시된 화합물은 또한 비강내로 또는 흡입에 의해, 전형적으로 건조 분말 흡입기로부터 건조 분말(단독으로, 혼합물로서, 예를 들면, 락토스와의 건조 배합물로서, 또는 예를 들면 인지질과 혼합된, 혼합된 성분 입자로서)의 형태로, 또는 가압 용기, 펌프, 분무, 애토마이저(atomizer)(바람직하게는 박무를 생성하기 위해 전기수력학을 사용하는 애토마이저), 또는 네뷸라이저(nebulizer)로부터 에어로졸 분무로서 적합한 추진제, 예컨대 다이클로로플루오로메탄을 사용하거나 사용하지 않고 투여될 수 있다. 가압 용기, 펌프, 분무, 애토마이저 또는 네뷸라이저는 활성 화합물, 상기 활성 화합물의 방출을 분산시키거나 가용화시키거나 연장시키기 위한 약제(예를 들면, EtOH 또는 수성 EtOH), 추진제로서 작용하는 하나 이상의 용매, 및 임의적인 계면활성제, 예컨대 소르비탄 트라이올레에이트 또는 올리고락트산을 포함하는 용액 또는 현탁액을 함유한다.

건조 분말 또는 현탁액 제형에 사용하기 전에, 약품을 흡입에 의해 전달하기에 적합한 크기로 미분화한다(전형적으로 5 ㎛ 미만). 이는 임의의 적절한 분쇄 방법, 예컨대 나선 제트 밀링, 유체 베드 제트 밀링, 나노 입자를 형성하기 위한 초임계 유체 가공, 고압 균질화 또는 분무 건조에 의해 달성될 수 있다.

흡입기 또는 취입기에 사용하기 위한 캡슐, 블리스터 및 카트리지(예를 들면, 젤라틴 또는 하이드록시프로필메틸 셀룰로스로부터 제조됨)는 활성 화합물, 적합한 분말 기제, 예컨대 락토스 또는 전분, 및 성능 개질제, 예컨대 L-류신, 만니톨 또는 마그네슘 스테아레이트의 분말 믹스를 함유하도록 제형화될 수 있다. 락토스는 무수물일 수 있거나, 바람직하게는 일수화물일 수 있다. 다른 적합한 부형제는 덱스트란, 글루코스, 말토스, 소르비톨, 자일리톨, 프룩토스, 수크로스 및 트레할로스를 포함한다.

박무를 생성하기 위해 전기수력학을 사용하는 애토마이저에 사용하기에 적합한 용액 제형은 작동당 1 μg 내지 20 mg의 본 발명의 화합물을 함유할 수 있고, 작동 용량은 1 μl 내지 100 μl로 달라질 수 있다. 전형적인 제형은 화합물 1, 프로필렌 글리콜, 멸균수, EtOH 및 NaCl을 포함할 수 있다. 프로필렌 글리콜 대신에 사용될 수 있는 다른 용매는 글리세롤 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다.

흡입/비강내 투여용 제형은 예를 들면 폴리(DL-락트산-코글리콜산)(PGLA)을 사용하여 즉시 방출 및/또는 변형 방출되도록 제형화될 수 있다. 적합한 향미제, 예컨대 멘톨 및 레보멘톨, 또는 감미료, 예컨대 사카린 또는 사카린 나트륨이 흡입/비강내 투여용으로 의도된 제형에 첨가될 수 있다.

건조 분말 흡입기 및 에어로졸의 경우, 투여 단위는 계량된 양을 전달하는 밸브에 의해 측정된다. 본 발명에 따른 단위는 전형적으로 계량된 투여량 또는 100 내지 1000 μg의 활성 약학 성분을 함유하는 "퍼프"를 투여하도록 배열된다. 전체 일일 투여량은 전형적으로, 단일 용량으로, 또는 더욱 일반적으로 하루를 통틀어 분할 용량으로 투여될 수 있는 100 μg 내지 10 mg일 것이다.

활성 화합물은 직장으로 또는 질로, 예를 들면 좌제, 페서리 또는 관장제의 형태로 투여될 수 있다. 코코아 버터가 통상적인 좌제 기제이지만, 적합하다면 다양한 대체제가 사용될 수도 있다. 직장/질 투여용 제형은 상기한 바와 같이 즉시 방출 및/또는 변형 방출되도록 제형화될 수 있다.

개시된 화합물은 또한 눈 또는 귀에, 전형적으로 등장성 pH-조절된 멸균 염수 중 미분된 현탁액 또는 용액의 방울 형태로, 직접 투여될 수 있다. 눈 또는 귀 투여에 적합한 다른 제형은 연고, 생분해성(예를 들면, 흡수성 겔 스폰지, 콜라겐) 및 비-생분해성(예를 들면, 실리콘) 이식물, 웨이퍼, 렌즈 및 미립자 또는 소포성 시스템, 예컨대 니오솜 또는 리포솜을 포함한다. 중합체, 예컨대 교차결합된 폴리아크릴산, 폴리비닐알코올, 히알루론산, 셀룰로성 중합체(예를 들면, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스, 또는 메틸셀룰로스), 또는 이종다당류 중합체(예를 들면, 젤란 검)는 보존제, 예컨대 벤즈알코늄 클로라이드와 함께 혼입될 수 있다. 상기 제형은 또한 이온도입법에 의해 전달될 수 있다. 눈/귀 투여용 제형은 상기한 바와 같이 즉시 방출 및/또는 변형 방출되도록 제형화될 수 있다.

개시된 화합물은 가용성 고분자 개체, 예컨대 사이클로덱스트린 또는 폴리에틸렌 글리콜-함유 중합체와 조합되어 이의 용해도, 용해 속도, 맛 차폐, 생체이용률 및/또는 안정성을 개선시킬 수 있다. 예를 들면, 약물-사이클로덱스트렌 복합체는 일반적으로, 대부분의 투여 형태 및 투여 경로에 유용한 것으로 밝혀졌다. 개재 및 비개재 복합체가 둘다 사용될 수 있다. 약물과 직접 복합체화하는 대체제로서, 사이클로덱스트린은 보조 첨가제, 즉, 담체, 희석제 또는 용해제로서 사용될 수 있다. 알파-, 베타- 및 감마-사이클로덱스트린은 이러한 목적을 위해 통상적으로 사용된다. 예를 들면, 국제특허출원공개 WO 91/11172, WO 94/02518 및 WO 98/55148을 참조한다.

화합물 1의 치료 효과량은 약 0.01 mg/체중 kg/일 내지 약 100 mg/체중 kg/일로 달라진다. 전형적인 성인 투여량은 약 0.1 mg/일 내지 약 3000 mg/일이다. 단위 투여 제형 중 활성 성분의 양은 활성 성분의 특정 적용 및 효능에 따라 약 0.1 mg 내지 약 500 mg, 바람직하게는 약 0.6 mg 내지 100 mg으로 달라지거나 조정될 수 있다. 조성물은 필요에 따라 또한 다른 호환성 치료 약제를 함유할 수 있다. 치료를 필요로 하는 대상체에는 24 시간의 기간에 걸쳐서 단일 용량 또는 다중 용량으로 약 0.6 내지 약 500 mg/일의 투여량이 투여된다. 상기 처리는 필요한 만큼 오랫동안 연속적인 간격으로 반복될 수 있다.

비정상적인 세포 증식에 의해 야기된 질환 또는 상태는 암 및 아테롬성 동맥 경화증, 수술후 혈관 협착증 및 재협착증과 관련된 혈관 평활근 증식, 및 자궁내막증을 포함한다. 자가면역 질환은 건선, 염증형 류마티스 관절염, 낭창, 1형 당뇨병, 당뇨병성 신장병, 다발성 경화증, 사구체신염, 및 숙주편대이식질환을 비롯하여 장기 이식 거부를 포함한다.

일 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 본 발명에 따른 화합물 1의 결정형 자유 염기의 치료 효과량을 치료를 필요로 하는 인간을 비롯한 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 포유동물에서 비정상적인 세포 성장을 치료하는 방법을 제공한다. 빈번한 실시양태에서, 자유 염기는 형태 A의 다형체이다.

또 다른 실시양태에서, 비정상적인 세포 성장은 고형 종양 및 혈액성 악성종양 둘다를 포함하는 암이다. 일부 이러한 실시양태에서, 암은 유방암, 난소암, 자궁경부암, 자궁내막암, 전립선암, 고환암, 췌장암, 식도암, 두경부암, 위암, 방광암, 폐암(예를 들면, 선암종, NSCLC 및 SCLC), 골암(예를 들면, 골육종), 결장암, 직장암, 갑상선암, 뇌암 및 중추신경계암, 교아세포종, 신경아세포종, 신경내분비암, 육종양, 각질극세포종, 상피성세포암, 정상피종, 흑색종, 육종(예를 들면, 지방육종), 간암(예를 들면, 간세포암), 신장암(예를 들면, 신세포암), 골수성 질환(예를 들면, AML, CML, 골수형성이상 증후군 및 전골수성 백혈병), 및 림프성 질환(예를 들면, 백혈병, 다발성 골수종, 외투 세포 림프종, ALL, CLL, B-세포 림프종, T-세포 림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 모발 세포 림프종)으로부터 선택된다.

일반적인 합성 반응식

하기 제공된 실시예 및 제조예는 본 발명의 실시양태의 특정한 양상을 추가로 예시하고 설명한다. 본 발명의 범주는 하기 실시예의 범주에 의해 어떠한 방식으로도 한정되지 않음이 이해되어야 한다.

실시예

일반적인 방법 및 재료

분말 X-선 회절( PXRD )

PXRD 데이터를 하기 프로토콜에 따라 수집하였다. 샘플(2 mg)을 제로 배경을 갖는 현미경 슬라이드 위에 놓았다. 이어서, 샘플을 GADDS 검출기가 장착된 디스커버(Discover) D8(브루커(Bruker) AXS 계측기)에 넣었다. 구리 X-선 공급원을 사용한 시스템을 40kV 및 40 mA에서 유지하여 1.5406 옹스트롬(Å)에서 CUα1 방출을 수득하였다. 0.02°의 단계 스캔과 함께 60.1 초의 단계 시간을 사용하여 4 내지 40°2θ로 데이터를 수집하였다. 회절 피크를 전형적으로, ± 0.2 °(2θ)의 오차로 측정하였다.

SSNMR 계측 및 방법

SSNMR 데이터를 하기 프로토콜에 따라 수집하였다. 대구경 브루커-바이오스핀 어밴스(Bruker-Biospin Avance) III 500 MHz NMR 분광기 내에 위치된 브루커-바이오스핀 4 mm 및 7 mm BL CPMAS 프로브로 스펙트럼을 수집하였다. 4 mm 회전자를 매직 각에서 배향하고 15.0 kHz에서 회전시켰다. 7 mm 회전자를 매직 각에서 배향하고 7.0 kHz에서 회전시켰다. 모든 스펙트럼을 주위 조건(제어되지 않은 온도)에서 수득하였다.

양성자 탈커플링된 교차 편광 매직 각 스피닝(CPMAS) 실험을 사용하여 ¹³C 고체상 스펙트럼을 수집하였다. 피크 공명을 ± 0.2 ppm으로 기록하였다.

시차 주사 열량법( DSC )

Q1000, 열 분석 계측기를 사용하여 DSC 측정을 수행하였다. 샘플을 핀홀을 갖는 밀폐 알루미늄 팬에 넣었다. 전형적인 샘플 중량은 1.6 mg이다. 샘플을 25℃로 평형시키고, 이어서 10℃/분의 스캔 속도로 250℃로 증가시켰다. 무수 질소를 퍼지 가스로서 사용하였다.

브루나우어 - 에멧 - 텔러 ( BET ) 비표면적 ( SSA ) 측정

SSA 측정을 하기 프로토콜에 따라 수집하였다. 결정 표면에서 가스 분자의 단층 형성을 사용하여 활성 약학 성분의 건조 분말의 비표면적을 측정하였다. 열을 적용하고 질소 가스로 퍼징하여 샘플을 수분 및 대기 증기가 없도록 만들었다. 이어서, 샘플 온도를 흡착질 가스(질소)가 흡착되게 하기 위한 액체 질소의 온도로 감소시켰다. 흡착된 가스의 양 및 압력 데이터를 사용하여 흡착 등온선 플롯을 생성하였다. 이어서, 소위 BET 이론에 기초한 수학적 알고리즘을 사용하여 비표면적값으로 전환하였다(예를 들면, 문헌[J. Am. Chem. Soc., 1938, 60:309] 참조). ISO 9277:2010 및 하기 실험에 충분히 기재된 바와 같이 정적 다중-점 또는 단일-점 가스 흡착 방법을 사용하여 비표면적을 측정하였다.

역상 가스 크로마토그래피( IGC ) 표면 에너지 측정

표면 에너지 측정을 하기 프로토콜에 따라 IGC를 사용하여 수집하였다. 충분한 양의 샘플을 양쪽 끝에 삽입된 유리 울 플러그에 의해 컬럼 내에 고정된 분말 덩어리를 갖는 실레인화 유리 컬럼 내에 포장하였다. 제거될 임의의 표면 흡착질에 대하여 충분한 시간 동안 분말 덩어리를 통해 무수 질소의 스트림을 흘려 컬럼을 조절하였다. 질소 스트림에서 알칸 증기의 무한 희석을 보장하기에 충분히 낮은 농도에서 일련의 알칸 증기 프로브(노난, 옥탄, 헵탄 및 헥산)를 담체 가스 스트림에 주입하고, 각각의 증기가 컬럼을 통해 용출하는데 걸리는 시간을 기록하여 측정하였다. 체류 시간(포장된 컬럼 내의 공간 사이의 "불용 체적"에 대하여 수정됨) 대 사용된 알칸 증기 프로브 분자의 단면적 및 표면 장력의 함수의 플롯으로 실험하에 고체 분말의 표면 에너지를 나타내는 기울기를 갖는 선을 수득하였다.

합성 실시예

실시예 1: 4-(6-아미노-피리딘-3-일)피페라진-1- 카복실산 3급-부틸 에스터의 제조

단계 A. 4-(6-니트로-피리딘-3-일)-피페라진-1- 카복실산 3급-부틸 에스터의 제조

용기에 DMSO(25 mL, 2.5 부피)를 5-브로모-2-니트로피리딘(10.0 g, 1.0 당량)과 함께 첨가하였다. N-Boc 피페라진(13.8 g, 1.5 당량)을 첨가한 후, 트라이에틸아민(7.5 g, 1.5 당량) 및 LiCl(2.1 g, 1.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 최소 12 시간 동안 60 내지 65℃로 가온시켰다.

60 내지 65℃에서 물(5 mL, 0.5 부피)을 용기에 서서히 첨가하였다. 혼합물을 60 내지 65℃에서 1 시간 동안 유지하고, 이어서 실온으로 냉각하였다. 슬러리를 20 내지 25℃에서 1 시간 동안 유지하고, 이어서 #2 와트만(Whatman: 상표명) 종이 필터로 여과하였다. 케익을 물(50 mL, 5 부피)로 헹궜다. 조질 고체를 수집하고, 깨끗한 용기로 다시 옮겼다.

고체를 함유하는 용기에 물(100 mL, 10 부피)을 첨가하고, 혼합물을 35 내지 40℃로 2 시간 동안 가온시키고, 이어서 가온시키면서 #2 와트만 종이(상표) 필터로 여과하였다. 고체를 물(40 mL, 4 부피)로 헹구고, 진공 오븐에서 50 내지 55℃에서 밤새 건조하였다. 4-(6-니트로-피리딘-3-일)-피페라진-1-카복실산 3급-부틸 에스터(14.1 g 수집됨; 약 93% 수율)를 황색 고체로서 단리하였다.

단계 B. 4-(6-아미노-피리딘-3-일)-피페라진-1- 카복실산 3급-부틸 에스터의 제조

용기에 에틸 아세테이트(48 mL, 4.0 부피)를 4-(6-니트로-피리딘-3-일)-피페라진-1-카복실산 3급-부틸 에스터(12.0 g, 1.0 당량)와 함께 첨가하였다. 슬러리에 50% 물 습윤 5% Pd/C(480 mg, 4% w/w)를 첨가하고, 용기를 질소로 3회 퍼징하였다. 용기를 수소로 3회 퍼징하고, 이어서 50 psi 수소로 가압하였다. 혼합물을 42 내지 47℃로 가열하고, 수소 흡수가 중단될 때까지(8 시간 이상) 교반시켰다.

생성물 혼합물을 여과하고, 에틸 아세테이트(2 x 1.5 mL)로 세척하였다. 합한 여액을 감압하에 6 mL(2 부피)의 부피까지 농축하였다. 용액에 n-헵탄(54 mL, 4.5 부피)을 첨가하고, 혼합물을 감압하에 6 mL(2 부피)의 부피까지 증류시켰다. 용액에 n-헵탄(54 mL, 4.5 부피)을 첨가하였다. 생성된 농후한 슬러리를 20 내지 25℃로 냉각하고, 2 시간 동안 교반시켰다. 슬러리를 여과하고, 필터 케익을 n-헵탄(36 mL, 3 부피)으로 세척하였다. 고체를 진공 오븐에서 50 내지 55℃에서 밤새 건조하였다. 4-(6-아미노-피리딘-3-일)-피페라진-1-카복실산 3급-부틸 에스터(10.4 g 수집됨; 약 96% 수율)를 담주황색 고체로서 단리하였다. ¹H NMR(500 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 7.62(dd, J = 2.99, 0.60 Hz, 1H), 7.17(dd, J = 8.85, 2.99 Hz, 1H), 6.40(dd, J = 8.85, 0.60 Hz, 1H), 5.45(bs, 2H), 3.43(m, 2H), 2.85(m, 2H), 1.41(s, 9H); ¹³C NMR(125 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 154.8, 153.8, 138.7, 136.8, 125.9, 108.3, 78.9, 50.5, 43.8, 43.0, 28.0; HRMS: C₁₄H₂₃N₄O₂(M+H)⁺에 대한 계산치: 279.18155, 측정치: 279.18173.

실시예 2: 6- 브로모 -2- 클로로 -8- 사이클로펜틸 -5- 메틸 -8 H - 피리도[2,3- d ]피리미딘 -7-온의 제조

단계 A. 5- 브로모 -2- 클로로 -6- 사이클로펜틸아미노 -피리미딘의 제조

용기에 무수 에탄올(3000 mL, 3.0 부피)을 첨가한 후 5-브로모-2,4-다이클로로피리미딘(분자량 227.87; 1000 g, 1.0 당량)을 첨가하였다. 트라이에틸아민(612 mL, 1.0 당량)을 첨가하고, 이어서 사이클로펜틸아민(분자량 85.15; 520 mL, 1.2 당량)을 2 시간에 걸쳐서 서서히 첨가하여 약간의 발열을 제어하였다. 사이클로펜틸아민 첨가를 완료한 후, 반응 생성물을 5-브로모-2-클로로-6-사이클로펜틸아미노-피리미딘(5 g, 0.5 중량%)으로 시딩하여 필요에 따라 결정화를 유도하였다. 반응 생성물을 25℃에서 2 시간 동안 교반하였다.

20 내지 25℃에서 30 mL/분의 속도로 물(2500 mL, 2.5 부피)을 용기에 첨가하였다. 혼합물을 8 내지 12℃로 2℃/분의 속도로 냉각하였다. 슬러리를 8 내지 12℃에서 1 시간 동안 유지하고, 이어서 #2 와트만(상표) 종이 필터로 여과하였다. 케익을 n-헵탄(2000 mL)으로 헹궜다. 케익을 필터 건조기 위에서 n-헵탄으로 재슬러리화하였다(2000 mL). 물질을 진공 오븐에서 50 내지 55℃에서 밤새 건조하여 5-브로모-2-클로로-6-사이클로펜틸아미노-피리미딘(1020 g, 84%)을 백색 고체로서 수득하였다.

단계 B. 2- 클로로 -8- 사이클로펜틸 -5- 메틸 -8 H - 피리도[2,3- d ]피리미딘 -7-온의 제조

용기에 N-메틸피롤리돈(NMP)(50 mL, 5.0 부피)을 5-브로모-2-클로로-6-사이클로펜틸아미노-피리디미딘(10.0 g, 1.0 당량)과 함께 상온에서 첨가하였다. 반응 혼합물에 크로톤산(4.7 g, 1.5 당량) 및 트라이에틸아민(20.2 mL, 4.0 당량)을 첨가하였다. 용기를 탈기하고 질소로 3회 퍼징하였다. 탈기된 반응 혼합물에 Pd(OAc)₂(0.25 g, 0.03 당량)를 첨가하였다. 용기를 탈기하고 단계 3과 동일한 방법을 사용하여 질소로 3회 퍼징하였다. 혼합물을 65℃로 가열하고, 출발 물질이 소비될 때까지(6 시간 이상) 교반시켰다.

무수 아세트산(6.8 mL, 2.0 당량)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 생성물을, 출발 물질이 소비될 때까지(일반적으로 1 내지 2 시간) 65℃에서 반응시켰다.

반응 혼합물을 20℃로 냉각하고, H₂O(100 mL, 10 부피)를 첨가하여 트라이에틸아민ㆍHBr 염을 용해하고, 2-클로로-8-사이클로펜틸-5-메틸-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온을 침전시켰다. 물질을 20℃에서 1 시간 동안 과립화하였다. 고체를 여과하고, H₂O(20 mL, 2.0 부피) 및 이소프로판올/H₂O(50 mL, 5.0 부피)의 4:1 혼합물로 세척하였다. 조질 생성물을 진공하에 55 내지 70℃에서 건조하여 2-클로로-8-사이클로펜틸-5-메틸-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(7.8 g, 81%)을 황갈색 내지 회색 고체로서 수득하였다.

단계 C. 6- 브로모 -2- 클로로 -8- 사이클로펜틸 -5- 메틸 -8 H - 피리도[2,3- d ]피리미딘 -7-온의 제조

유리 피복 용기에 아세토니트릴(65 mL, 7.0 부피)을 2-클로로-8-사이클로펜틸-5-메틸-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(9.35 g, 1.0 당량)과 함께 첨가하였다. N-브로모숙신이미드(9.67 g, 1.5 당량) 및 옥살산(0.65 g, 0.2 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60 ± 5℃로 가열하였다. 반응 생성물을, 출발 물질이 소비될 때까지(6 시간 이상) 60℃에서 교반하였다. 슬러리를 20℃로 냉각하고, H₂O(9 mL, 1 부피)를 첨가하였다. 슬러리에 H₂O(38 mL, 4 부피) 중 나트륨 바이설파이트(3.88 g, 1.0 당량)의 용액을 첨가하였다. 슬러리를 1 시간 동안 과립화하고, 이어서 #2 와트만 종이 필터로 직접 여과하였다. 반응 용기를 물(19 mL, 2 부피)로 세척한 후 메탄올/아세토니트릴(28 mL, 3 부피)의 7:3 믹스로 세척하고, 세척액을 필터 케익으로 옮겼다. 생성물을 진공 오븐에서 50 내지 55℃로 건조하였다. 6-브로모-2-클로로-8-사이클로펜틸-5-메틸-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(10.52 g, 87%)을 담황색 고체로서 단리하였다.

생성물을 톨루엔 및 n-헵탄으로부터 재결정화하여 추가 정제하였다. 톨루엔(60 mL, 6 부피) 및 6-브로모-2-클로로-8-사이클로펜틸-5-메틸-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(10.00 g, 1 당량)을 반응 용기에 첨가하고, 80℃로 가열하였다. 가온 반응 혼합물을 적절한 카트리지를 통해 여과하여 불용성 Pd 및 다른 불용성 오염물의 제거를 확실히 하였다. 필터 카트리지를 80℃의 톨루엔(5 mL, 0.5 부피)으로 세척하였다. 슬러리를 25℃로 1℃/분으로 냉각하였다. n-헵탄(70 mL, 7 부피)을 반응 슬러리에 1 mL/분으로 첨가하였다. 슬러리를 0℃로 1℃/분으로 추가 냉각하였다. 슬러리를 0℃에서 1 시간 이상 동안 과립화하였다.

슬러리를 #2 와트만 종이 필터로 직접 여과하였다. n-헵탄(30 mL, 3 부피)을 반응 용기에 충전하고, 세척물을 필터 케익으로 옮기고, 생성물을 진공 오븐에서 50 내지 55℃에서 건조하였다. 6-브로모-2-클로로-8-사이클로펜틸-5-메틸-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(8.73 g, 87%)을 크림색 고체로서 단리하였다. ¹H NMR(500 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 9.20(s, 1H), 5.82(m, 1H), 2.65(s, 3H), 2.11(m, 2H), 2.04(m, 2H), 1.86(m, 2H), 1.64(m, 2H); ¹³C NMR(125 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 158.2, 158.2, 157.6, 154.1, 144.0, 120.9, 113.0, 54.4, 28.3, 25.7, 18.3; HRMS: C₁₃H₁₄N₃O₁Br₁Cl₁(M+H)⁺에 대한 계산치: 342.00033, 측정치: 342.00037.

실시예 3: 4-{6-[6- 브로모 -8- 사이클로펜틸 -5- 메틸 -7-옥소-7,8- 다이하이드로 -피리도[ 2,3- d ]피리미딘 -2- 일아미노 ]피리딘-3-일}-피페라진-1- 카복실산 3급-부틸 에스터의 제조

무수 질소가 퍼지된 반응기를 테트라하이드로푸란(900 mL, 15 mL/g)으로 충전하였다. 배치 온도를 20℃로 설정하고 250 RPM에서 교반을 시작하였다. 반응기를 4-(6-아미노-피리딘-3-일)-피페라진-1-카복실산 3급-부틸 에스터(63.4g, 0.2278 몰, 1.3 당량)로 충전하고, 혼합물을 20℃에서 30 분 동안 유지하여 출발 물질을 용해하였다. 반응기를 30 분간에 걸쳐서 펌프에 의해 이소프로필마그네슘 클로라이드(93.9 g, 0.193 몰, 제 1 전하, 1.1 당량)(THF 중 2.0 M, 1.1 당량)로 충전하였다. 배치를 20℃에서 40 분 동안 유지하였다. 반응기를 6-브로모-2-클로로-8-사이클로펜틸-5-메틸-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(60.1g, 0.1755 몰, 1 당량)으로 한꺼번에 충전하고 THF(50 mL 헹굼액)로 헹궜다. 이소프로필마그네슘 클로라이드(93.9g, 0.193 몰, 1.1 당량, 제 2 전하)(THF 중 2.0 M, 1.1 당량)의 추가 충전물을 30 분간에 걸쳐서 펌프에 의해 첨가하였다. 배치를 20℃에서 90 분 동안 유지하고, 이어서 20℃ 내지 60℃로 가열하였다.

반응 후, THF(2.86 부피) 및 HOAc(1 당량)의 혼합물을 사용하여 반응 생성물을 급랭하였다. 이어서, 배치를 0.5 중량%의 4-{6-[6-브로모-8-사이클로펜틸-5-메틸-7-옥소-7,8-다이하이드로-피리도[2,3-d]피리미딘-2-일아미노]-피리딘-3-일}-피페라진-1-카복실산 3급-부틸 에스터로 시딩하고, THF(1.14 부피) 및 HOAc(0.4 당량)의 혼합물을 충전하여 침전을 완료하였다. 20℃로 냉각한 후, 배치를 여과하고, 아세톤(4 부피), 물(6 부피) 및 아세톤(4 부피)으로 세척하였다.

습식 케익을 진공하에 65℃에서 항량으로 건조하여 4-{6-[6-브로모-8-사이클로펜틸-5-메틸-7-옥소-7,8-다이하이드로-피리도[2,3-d]피리미딘-2-일아미노]-피리딘-3-일}-피페라진-1-카복실산 3급-부틸 에스터를 93% 수율로 수득하였다. ¹H NMR(600 MHz, THF-d ₈ ): δ 9.36(s, 1H), 8.87(s, 1H), 8.22(d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.04(d, J = 2.9 Hz, 1H), 7.39(dd, J = 8.8, 2.9 Hz, 1H), 6.10(m, 1H), 3.55(광역, 4H), 3.09(광역, 4H), 2.60(s, 3H), 2.30(m, 2H), 2.09(m, 2H), 1.85(m, 2H), 1.66(m, 2H), 1.46(s, 9H); ¹³C NMR(150 MHz, THF-d ₈ ): δ 159.5, 158.9, 157.7, 156.0, 155.0, 147.2, 144.62, 144.56, 138.0, 126.7, 117.6, 114.2, 108.4, 79.9, 55.5, 50.6, 44.7, 29.0, 28.7, 26.9, 18.1; HRMS: C₂₇H₃₅N₇O₃Br₁(M+H)⁺에 대한 계산치: 584.19797, 측정치: 584.19811.

실시예 4: 4-{6-[6-(1- 부톡실 -비닐)-8- 사이클로펜틸 -5- 메틸 -7-옥소-7,8- 다이하이드로피리도[2,3- d ]피리미딘 -2- 일아미노 ]-피리딘-3-일}-피페라진-1- 카복실산 3급-부틸 에스터의 제조

무수 질소 퍼지된 반응기를 1-부탄올(60 mL, 6 mL/g)로 충전하고, 4-{6-[6-브로모-8-사이클로펜틸-5-메틸-7-옥소-7,8-다이하이드로-피리도[2,3-d]피리미딘-2-일아미노]-피리딘-3-일}-피페라진-1-카복실산 3급-부틸 에스터(10 g, 0.017 몰) 및 부틸 비닐 에터(5.1 g, 0.051 몰, 3.0 당량)를 첨가하였다. 다이이소프로필에틸아민(5.3 g, 0.041 몰, 2.4 당량)을 첨가하고, 혼합물을 살포관을 통해 30 분 동안 질소로 살포하였다. 팔라듐 아세테이트(0.16 g, 0.00068 몰, 0.0400 당량) 및 비스(2-다이페닐포스피노페닐)에터(0.45 g, 0.00082 몰, 0.04800 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 95℃로 30 분간에 걸쳐서 가열하고, 배치를 95℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 80℃로 냉각하고 샘플링하여 반응 완료를 모니터하였다. 완료 후, 물(15 mL, 1.5 mL/g) 및 1-부탄올(30 mL, 3 mL/g)을 첨가하였다.

용액을 0.45 ㎛ 필터를 통해 여과하여 침전된 팔라듐을 제거하였다. 물(35 mL, 3.5 mL/g)을 첨가한 후,1,2-다이아미노프로판(6.3 g, 0.085 몰, 5.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 30 분 이상 동안 교반하였다. 교반을 멈추고, 혼합물을 15 분 동안 침강시켰다. 바닥 수성 상을 분리제거하고, 혼합물을 60℃로 30 분간에 걸쳐서 냉각하였다. 혼합물을 4-{6-[6-(1-부톡실-비닐)-8-사이클로펜틸-5-메틸-7-옥소-7,8-다이하이드로피리도[2,3-d]피리미딘-2-일아미노]피리딘-3-일}-피페라진-1-카복실산 3급-부틸 에스터(형태 C)(50 mg, 0.005 g/g)로 시딩하고 60℃에서 90 분 동안 유지하였다.

결정화가 관찰되자마자, 혼합물을 50℃로 1 시간에 걸쳐서 냉각하고 50℃에서 3 시간 동안 유지하였다. 혼합물을 30℃로 3 시간에 걸쳐서 냉각하고 30℃에서 2 시간 동안 유지하고, 이어서 20℃로 4 시간에 걸쳐서 냉각하고 20℃에서 4 시간 동안 유지하였다. 슬러리를 여과하고, 1-부탄올(10 mL, 1 mL/g)로 세척하였다. 필터 케익을 취입 배출하고, 혼합물을 1-부탄올(10 mL, 1 mL/g)로 충전하고, 슬러리를 20℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 필터 케익을 취입 배출하였다. 혼합물을 메틸 t-부틸 에터(20 mL, 2 mL/g)로 세척하고, 케익을 2 시간 이상 동안 연장된 취입을 사용하여 완전히 배출하였다. 케익을 70℃에서 건조하였다. 수율은 75 내지 80%이었다. ¹H NMR(600 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 10.0(s, 1H), 8.87(s, 1H), 8.07(d, J = 2.9 Hz, 1H), 7.91(d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.48(dd, J = 9.0, 2.9 Hz, 1H), 5.83(m, 1H), 4.47(d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.05(d, J = 1.6 Hz, 1H), 3.77(t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.48(광역, 4H), 3.11(광역, 4H), 2.37(s, 3H), 2.22(m, 2H), 1.89(m, 2H), 1.75(m, 2H), 1.61(m, 2H), 1.58(m, 2H), 1.43(s, 9H), 1.38(m, 2H), 0.90(t, J = 7.39 Hz, 3H); ¹³C NMR(150 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 160.9, 158.2, 157.3, 155.2, 154.6, 153.7, 145.0, 143.0, 142.6, 136.0, 125.8, 125.5, 114.6, 106.6, 87.8, 78.9, 66.8, 52.8, 48.5, 43.4, 42.5, 30.3, 28.0, 27.4, 25.1, 18.8, 14.4, 13.6; HRMS: C₃₃H₄₆N₇O₄(M+H)⁺에 대한 계산치: 604.36058, 측정치: 604.36049.

중간체 부톡실-비닐 에터를 여러 다형체 형태 중 하나로 단리하였다. 형태 A는 시딩없이 동적 생성물로서 단리된 반면, 형태 B는 일부 경우에 단리되었지만 거의 관찰되지 않았다. 반응 혼합물을 형태 C 결정으로 시딩하여 부톡실-비닐 에터의 가장 안정한 결정형인 형태 C를 수득하였다. 이러한 다형체 형태 중 임의의 것이 화합물 1의 자유 염기의 제조에 이용될 수 있지만, 부톡실-비닐 에터의 다형체 형태 C가 여과성의 용이성을 위해 바람직하다.

중간체 부톡실-비닐 에터의 다형체 형태 A, B 및 C에 대한 PXRD 데이터를 각각 하기 표 7, 8 및 9에 제시하였다.

중간체 부톡실-비닐 에터의 다형체 형태 A에 대한 PXRD 데이터

2θ(°) ± 0.2	피크 강도(%)
4.3	100
4.8	85
6.2	39

중간체 부톡실-비닐 에터의 다형체 형태 B에 대한 PXRD 데이터

2θ(°) ± 0.2	피크 강도(%)
5.5	100
7.5	3
9.7	3
11.1	4
14.8	3
16.7	4
17.5	5
20.1	4

중간체 부톡실-비닐 에터의 다형체 형태 C에 대한 PXRD 데이터

2θ(°) ± 0.2	피크 강도(%)
5.4	100
9.7	11
10.8	58
12.7	10
13.3	24
13.5	27
16.1	12
16.6	8
17.0	14
17.5	22
18.1	8
18.8	8
19.6	16
20.6	16
21.7	17
22.9	8
23.8	8
24.4	8
25.0	8

실시예 5: 염 파괴 방법에 의한 화합물 1의 작은 입자 크기 자유 염기의 제조

반응기에 4-{6-[6-(1-부톡실-비닐)-8-사이클로펜틸-5-메틸-7-옥소-7,8-다이하이드로피리도[2,3-d]피리미딘-2-일아미노]-피리딘-3-일}-피페라진-1-카복실산 3급-부틸 에스터(2.70 kg, 4.47 mol, 1.0 당량)를 첨가한 후, 물(27.00 L, 10 L/kg) 및 아세톤(13.50 L, 5 L/kg)의 혼합물을 첨가하였다. 황색 슬러리를 50 내지 55℃로 가온하였다. 물(5.40 L, 2 L/kg의 출발 물질) 및 아세톤(5.40 L, 2 L/kg의 출발 물질)으로 희석된 메탄설폰산(2.15 kg, 22.36 mol, 5.0 당량)의 용액을 반응기에 약 10 분간에 걸쳐서 첨가하였다. 반응 혼합물을 45 내지 55℃로 12 시간 이상 동안 유지하였다. 반응 동안 투명한 황색 용액을 수득하였다.

반응 혼합물을 35℃로 냉각하고, 5 중량% 나트륨 하이드록사이드 용액의 혼합물을 반응기에 나눠서 첨가하여 반응 혼합물의 pH를 9 초과로 올렸다. 반응기를 20 내지 25℃로 냉각하고, 과립화하고, 여과하였다. 케익을 물로 세척한 후 아세톤으로 세척하고, 진공에서 건조하였다.

이 방법은 화합물 1의 작은 1차 입자 크기 자유 염기를 생성하였고, 이는 WO 2005/005426의 실시예 4에서 화합물 1 하이드로클로라이드 염을 수성 NaOH로 처리하여 제조된 물질과 동등하다.

상기 제시된 대표적인 과정(표 10의 실험 S에 상응함) 이외에, 다양한 산 및 수성 용매 시스템을 스크리닝하여 반응에 대한 영향을 측정하고, 이후 급랭하고 화합물 1의 자유 염기를 단리하였다. 실험실-규모 스크리닝 실험을 실행하여 중간체 비닐 에터를 자유 염기 화합물 1로 전환하는 반응 조건을 확인하였다. 이러한 반응 스크리닝 실험의 결과를 하기 표 10에 요약하는 바, 이는 방법의 일반성을 시사한다.

반응 스크리닝 실험으로부터의 결과의 요약

실험	산	용매 시스템	수율	순도
A	이세티온산	물	99	99.93
B	이세티온산	16% THF/물	>100	98.77
C	이세티온산	28% THF/물	95	97.95
D	HCl	물	>100	99.59
E	H₂SO₄	물	98	98.6
F	MSA	물	98	99.42
G	MSA	16% THF/물	>100	97.86
H	이세티온산	15% NMP/물	88	97.7
I	이세티온산	15% DMF/물	90	98.94
J	TFA(8 당량)	물	100	99.14
K	이세티온산	15% CH₃CN/물	>100	99.56
L	이세티온산	15% 아세톤/물	92	99.54
M	이세티온산	15% DMAC/물	>100	98.91
N	이세티온산	15% 설폴란/물	92	98.67
O	MSA	15% CH₃CN/물	100	99.52
P	MSA	15% 아세톤/물	97	99.54
Q	CF₃SO₃H(불완전)	물	N/A	N/A
R	MSA	33% CH₃CN/물	99	99.7
S	MSA	33% 아세톤/물	98	99.74
T	MSA	33% MeOH/물	98	99.74
U	MSA	33% THF/물	96	99.76

실시예 6: 화합물 1의 작은 입자 크기 자유 염기의 큰 입자 크기 자유 염기로의 전환

반응기에 실시예 5에 따라 제조된 화합물 1의 자유 염기(20g, 44.69 mmol, 1.0 당량)를 첨가한 후, 1-부탄올(320 ml, 16 ml/g) 및 아니솔(480 ml, 24 ml/g)을 첨가하였다. 황색 슬러리를 95 내지 100℃로 가온하여 용해하였다. 반응기를 80℃로 냉각하였다. 반응기 내 용액에 1-부탄올(5 mL, 0.25 mL/g의 출발 물질)에 현탁된 화합물 1의 자유 염기(형태 A) 시드 결정(0.1 g, 0.2 mmol, 0.005 당량)을 함유하는 시드 슬러리를 충전하여 결정화를 유도하였다. 생성된 슬러리를 80℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 슬러리를 10℃로 0.2℃/분으로 350 분간에 걸쳐서 냉각하고, 과립화하고, 여과하였다. 케익을 아니솔로 세척한 후 헵탄으로 세척하고, 진공에서 건조하였다.

이 방법은 화합물 1의 자유 염기의 큰 1차 입자 크기 결정을 생성하였고, 이는 하기 실시예 7에 기재된 원-포트 방법을 사용하여 제조된 자유 염기와 동등하다.

실시예 7: 화합물 1의 큰 입자 크기 자유 염기의 제조를 위한 원-포트 방법

반응기에 물(200 mL, 10 mL/g) 및 4-{6-[6-(1-부톡실-비닐)-8-사이클로펜틸-5-메틸-7-옥소-7,8-다이하이드로피리도[2,3-d]피리미딘-2-일아미노]-피리딘-3-일}-피페라진-1-카복실산 3급-부틸 에스터(20 g, 33.1 mmol, 1.0 당량)를 첨가한 후, 1-BuOH(232 mL, 11.6 mL/g)를 첨가하여 반응기 내에 가라앉은 임의의 고체를 헹궜다. 황색 슬러리를 70℃로 가온하였다. 2액상 혼합물이 형성되었다. 농축 HCl 용액(16.3 g, 165.5 mmol, 5.0 당량)을 약 10 분간에 걸쳐서 반응기에 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 4 내지 6 시간 동안 유지하였다. 3 시간 후, 투명한 황색 2상 용액을 수득하였다.

반응 혼합물에 아니솔(356 mL, 17.8 mL/g)을 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 유지하면서, 수성 NaOH(17.2 g, 172.1 mmol, 5.2 당량)의 용액(40 중량% 용액)을 20 분간에 걸쳐서 반응기에 첨가하여 반응 혼합물의 pH를 10 초과로 올렸다. NaOH 첨가를 완료한 후 2상 혼합물을 30 분 동안 교반하였다.

상을 분리하고, 유기 상을 물로 2회 세척하였다. 이어서, 배치를 80℃로 가열하고, 결정화 용기 내에서 무-얼룩 여과하고, 필터를 부탄올로 헹궜다. 이어서, 배치를 증류시켜 물을 제거하고, 120℃의 온도를 달성하였다. 이어서, 배치를 80℃로 냉각하고, 화합물 1의 자유 염기(형태 A) 시드 결정(0.015 g, 0.033 mmol, 0.1 중량% 화합물 1) 및 1-BuOH(10 mL, 0.5 mL/g)의 시드 슬러리로 시딩하였다. 이어서, 배치를 30℃로 0.2℃/분으로 냉각하고, 이어서 3회 주기로 숙성시켰고, 이때 온도를 매회 10℃만큼 단계적으로 낮췄다. 최종 주기에서, 배치를 10℃로 냉각하고, 과립화하고 여과하였다. 케익을 헵탄으로 2회 세척하고, 진공하에 건조하였다. 건조한 후, 샘플을 단일 결정형 다형체 형태 A로 확인하였다.

¹H NMR(600 MHz, DMSO-d ₆ /TFA): δ 10.41(s, 0.75H), 9.03(s, 0.25H), 8.98(s, 2H), 8.12(d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.90(d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.63(dd, J = 9.1, 3.0 Hz, 1H), 5.84(m, 1H), 3.40(광역, 4H), 3.29(광역, 4H), 2.43(s, 3H), 2.33(s, 3H), 2.21(m, 2H), 1.91(m, 2H), 1.79(m, 2H), 1.59(m, 2H); ¹³C NMR(150 MHz, DMSO-d ₆ /TFA): δ 202.4, 160.7, 154.8, 158.3, 158.0, 144.9, 142.3, 142.0, 134.6, 129.7, 126.7, 115.3, 107.0, 53.0, 45.6, 42.6, 31.3, 27.6, 25.2, 13.7; HRMS: C₂₄H₃₀N₇O₂ ₍M+H)⁺에 대한 계산치: 448.24555, 측정치: 448.24540.

화합물 1의 자유 염기의 작은 1차 입자 크기 및 큰 1차 입자 크기 제형에 대한 PSA, SSA 및 표면 에너지 데이터의 비교를 이하에 제공하였다. 모든 경우, 자유 염기는 다형체 형태 A로서 단리되었다.

분말 X-선 회절 (PXRD )

실험:

분말 회절 분석을 Cu 방사선원, 고정된 슬릿(발산 = 1.0 mm, 반-산란 = 0.6 mm, 및 수신 = 0.6 mm) 및 섬광 계수 검출기가 장착된 브루커(Bruker) D8 회절계를 사용하여 수행하였다. 0.040 °의 단계 크기 및 2.0 초의 단계 시간을 사용하여 3.0 내지 40.0 ° 2θ의 Cu 파장 Kα₁= 1.54056 Å에서 θ-θ 각도계로 데이터를 수집하였다. X-선 관 전압 및 암페어를 각각 40 kV 및 40 mA로 설정하였다. 샘플 을 니켈 디스크(Nickel Disk)[가서 앤드 선즈 인코포레이티드(Gasser & Sons, Inc.), 미국 뉴욕주 코맥 소재]에 설치하여 제조하고 데이터 수집 동안 회전시켰다. 브루커 DIFFRAC 플러스 소프트웨어(버전 2.6)를 사용하여 데이터를 수집하고 분석하였다. PXRD 데이터 파일(.raw)을 피크 검색 전에 진행하지 않았다. 일반적으로, 역치 값 1 및 너비 값 0.3을 사용하여 예비 피크 배정을 만들었다. 자동화된 배정의 출력을 시각적으로 확인하여 유효성을 보장하고, 필요한 경우 수동으로 조정하였다. 또한, 적절한 경우 피크를 수동으로 스펙트럼 내에 배정하였다.

SSNMR 실험

25 초의 재생 지연 및 2 ms의 교차 편광을 갖는 2048 스캔용 4 mm 회전자에서 형태 A에 대한 탄소 스펙트럼을 획득하였다. 획득하는 동안 100 kHz의 양성자 탈커플링을 적용하였다. 형태 B에 대한 탄소 스펙트럼을 2048 스캔에 대하여 4 mm 회전자에서 획득하고, 4.5 초의 재생 지연 및 2 ms의 교차 편광을 갖는 128 스캔에 대하여 수집하였다. 획득하는 동안 70 kHz의 양성자 탈커플링 및 스피닝 측파대의 전체 억제(TOSS)를 적용하였다.

계측 방법

약 80 mg의 샘플을 4 mm ZrO₂ 회전자로 포장하였다. 스펙트럼을 상온에서 수집하고, 대구경 브루커-바이오스핀 어밴스 III 500 MHz(¹H 주파수) NMR 분광기에 위치된 브루커-바이오스핀 4 mm CPMAS 프로브에서 가압하였다. 포장된 회전자를 매직 각에서 배향하고 15.0 kHz로 회전시켰다. 양성자 상 조절된 탈커플링된 교차 편광 매직 각 스피닝(CPMAS) 실험을 사용하여 ¹³C 고체상 스펙트럼을 수집하였다. 교차 편광 접촉 시간을 2.0 ms로 설정하였다. 획득하는 동안 약 100 kHz의 양성자 탈커플링 장을 적용하였다. 25 초 재생 지연을 갖는 512 스캔에 대하여 화합물 1 형태 A의 탄소 스펙트럼을 획득하였다. 스펙트럼을 도 2 에 도시하고, 데이터를 표 2에 제시하였다. 화합물 1 형태 B의 탄소 스펙트럼을 4.5 초 재생 지연을 갖는 2048 스캔에 대하여 획득하였다. 탄소 스펙트럼을 결정형 아다만탄의 외부 표준을 사용하고 이의 높은장 공명을 29.5 ppm으로 설정하여 참조하였다. 스펙트럼을 도 4에 도시하고 데이터를 표 4에 제시하였다.

입자 크기 분석

레이저 회절(또는 작은 각 광 산란) 기법을 사용하여 건조 샘플 분말을 압축된 공기로 분산시켜 입자 크기를 분석하였다. 구체적으로, 바이브리 건조 분말 공급기가 장착된 심파텍 헬로스 로도스 시스템을 사용하여 입자 크기 분포를 분석하였다. 분말 샘플을 0.5 바의 분산 압력으로 분산시켰다. 일부 경우에, 아스피로스 미량 투약 장치를 사용하고, 분말 샘플을 0.2 바의 분산 압력으로 분산시켰다. 각각의 샘플의 입자 크기 범위를 포괄하도록 적합한 렌즈를 선택하였다.

결과

샘플을 분산시키기 위해 바이브리 또는 아스피로스 장치를 사용하여, API의 4개의 배치에 대한 비교 데이터를 하기 표 11에 제공하였다. 배치 번호 4는 약 75㎛의 D90을 갖는 반면, 배치 번호 1 및 2는 모두 약 45 ㎛의 D90을 가졌다. 레이저 회절 입자 크기 데이터는 상기 배치에 대하여 SEM 관찰을 확인하였다.

크기 분포 데이터 비교

PSD 데이터의 요약		입자 크기(㎛)
배치 번호	분산 방법	D[v,0.1]	D[v,0.5]	D[v,0.9]	D[4,3]
1	0.2 바 아스피로스	5.21	17.00	43.59	21.33
2	0.2 바 아스피로스	6.20	20.83	46.15	23.87
3	0.2 바 아스피로스	11.64	46.08	130.26	59.07
3	0.5 바 바이브리	9.96	41.23	116.43	53.02
4	0.2 바 아스피로스	7.41	24.97	76.56	35.06
4	0.5 바 바이브리	6.33	23.19	69.20	32.16

주사 전자 현미경기법( SEM )

표준 조건하에 주사 전자 현미경기법을 수행하였다. 도 5는 40% BuOH/아니솔로부터 재결정화된 화합물 1의 자유 염기 형태 A의 SEM(200x 배율) 이미지를 제공한다. 도 6은 표준 자유 염기화 공정으로부터 단리된 화합물 1의 자유 염기 형태 A의 SEM(1500x 배율) 이미지를 제공한다.

점착 분석

MASS(점착용 재료 접착 스크린) 펀치를 제작 개발하여 일련의 압축 후 제거가능한 펀치 팁에 접착된 분말의 양을 측량하여 정제 제형의 점착 성향을 정량적으로 평가하였다. 이 시험은 제조자가 약품 개발 동안 펀치 점착의 위험을 객관적이고 신속하게 평가하고 임상 정제 제조 동안 관찰된 점착 문제를 조정할 수 있도록 한다.

MASS 펀치 시험용 샘플을 제조하기 위해, API(10 g)를 가볍게 윤활된 표준 블렌드(10% API, 89.75% 아비셀 PH102 및 0.25% 마그네슘 스테아레이트)에 희석하고 병을 500 회전 동안 블렌딩하였다(500 mL 앰버 유리 병). 제거가능한 펀치 팁(1/2" 둥근 평평한 면)에 접착된 분말의 중량을 0.85의 표적 고체 분율에서 약 250 mgW 정제의 주기적으로 100 이하의 압축으로 미량천칭을 사용하여 평가하였다.

표준 블렌드에 혼합된 화합물 1의 자유 염기에 대한 MASS 펀치 프로필은 양성 반응을 나타냈다. 압축 실행의 종료시 펀치 팁의 사진으로 분말이 팁에 접착되었음을 확인하였다(도시되지 않은 데이터). 참고로, 표준 블렌드의 대조군 샘플은 점착성이 아니고, 접착된 분말을 10 ㎍ 미만으로 갖게 된다. 시험 방법은 신규한 API 로트의 점착 성향을 공지된 물질의 것과 비교하여 평가하는 것으로 밝혀졌다.

비표면적 ( SSA ) 측정( BET 질소)

장치

마이크로메리틱스 트라이스타(Micromeritics TriStar) II 3020 비표면적 분석기와 함께 마이크로메리틱스 스마트프렙(Micromeritics SmartPrep) 스테이션[마이크로메리틱스 유나이티드 킹덤 리미티드(Micromeritics U.K. Ltd.), 영국 하트퍼드셔 에스지5 3제이에이치 헥스톤 더 스테이블즈 헥스톤 마노 세인트 2 소재]을 사용하여 비표면적(SSA) 측정(BET 질소)을 결정하였다. 샘플을 BET-질소 흡착 분석하여 샘플의 비표면적을 결정하였다.

설정

소프트웨어 버전: 트라이스타 II 컨펌(1.03 또는 등가물)

흡착질: 질소

샘플관: 유리 충전 막대를 갖는 3/8" mm 평저 셀

샘플 질량*: 약 ¾ 완전 셀

샘플 제제: 스마트프렙(SmartPrep)(질소를 사용하여 유동 탈기화)

가스 배출 조건: 가스 유동 하에 25℃에서 16 시간(10℃/분으로 램핑)

등온 자켓: 사용됨

등온 수집 점: 0.05 내지 0.30 P/Po 범위에서 11 점 BET

등온 데이터 분석 범위: 0.05 내지 0.20 P/Po 범위에서 7 점 BET

누출 시험: 120 초

자유 공간: 측정됨

평가 시간: 1 시간

가스 배출 시험 기간: 180 초

평형 간격: 10 초

평형 중단: 600 초

*샘플의 질량은 시험 샘플의 입자 크기에 따라 다르다. 입자 크기가 비교적 작은 샘플의 경우, 셀 벌브를 ¾ 충전하기 위해 약 0.50 g의 물질이 필요하고, 입자 크기가 비교적 큰 샘플의 경우 셀 벌브를 ¾ 충전하기 위해 0.75 g의 물질이 필요하였다.

산출 및 보고

3중 측정으로부터 7 점 BET를 사용하여 0.05 내지 0.20 P/Po의 비표면적을 기록하였다. 각각의 실험에 대하여 샘플 질량, 비표면적, BET 상수(C 값) 및 상관 계수를 측정하였다.

결과

표 12는 화합물 1의 자유 염기 API의 4개 배치, 즉, 통상적인 염 파괴 방법에 의해 제조된 작은 1차 입자 크기 API를 포함하는 1개 배치(배치 5) 및 본 발명에 따라 제조된 큰 입자 크기 API를 포함하는 3개 배치에 대하여 BET-N2 SSA를 제공한다. 배치 5는 작은 1차 입자 및 큰 응집물을 갖는 화합물 1의 자유 염기를 함유하고, 이는 매우 정적인 성향이 있고 점착성이 있었다. 온도 사이클링을 사용하여 배치 6을 제조하였고, 이는 약 17 ㎛의 VMD을 갖는 화합물 1의 큰 입자 크기 자유 염기에 대하여 전형적인 입자 크기 분포(PSD)를 가졌다. 배치 7은 배치 6과 유사한 PSD를 보여주었다. 배치 8은 또한 온도 사이클링에 의해 제조된 화합물 1의 큰 입자 크기 자유 염기의 대표적인 ICH 배치이다. 동일한 배치를 하기 표면 에너지 측정에 사용하였다.

N₂에 의한 BET SSA

배치 번호	N₂에 의한 BET SSA
5	6.6
6	0.62
7	0.69
8	0.67

역상 가스 크로마토그래피( IGC ) 표면 에너지 측정:

충분한 양의 샘플을 양쪽 끝에 삽입된 유리 울 플러그에 의해 컬럼 내에 고정된 분말 덩어리를 갖는 실란화된 유리 컬럼으로 포장하였다. 제거될 임의의 표면 흡착질에 대하여 충분한 시간 동안 분말 덩어리를 통해 무수 질소의 스트림을 유동시켜 컬럼을 조절하였다. 질소 스트림에서 알칸 증기의 무한 희석을 보장하기에 충분히 낮은 농도에서 일련의 알칸 증기 프로브(노난, 옥탄, 헵탄 및 헥산)를 담체 가스 스트림에 주입하고, 각각의 증기가 컬럼을 통해 용출하는데 걸리는 시간을 기록하여 측정하였다. 체류 시간(포장된 컬럼 내의 공간 사이의 "불용 체적"에 대하여 수정됨) 대 사용된 알칸 증기 프로브 분자의 단면적 및 표면 장력의 함수의 플롯으로 실험하에 고체 분말의 표면 에너지를 나타내는 기울기를 갖는 선을 수득하였다.

결과

표 13은 화합물 1의 자유 염기의 4개 배치, 즉, SSA 데이터에 관해 상기한 배치 5 내지 8에 대하여 생성된 분산성 표면 에너지(mJ/m²) 데이터를 제공한다. 배치 5는 작은 입자 크기 자유 염기이고, 배치 6 내지 8은 자유 염기 API의 큰 입자 크기를 포함한다.

분산성 표면 에너지(mJ/m²)

배치 번호	분산성 표면 에너지(mJ/m²)
5	61.63
6	49.42
7	35.75
8	42.27

본원에 인용된 모든 출판물 및 특허출원 및 이에 인용된 모든 참조문헌은, 각각의 개별적인 출판물, 특허출원 또는 참조문헌이 구체적이고 개별적으로 본원에 참고로 혼입된 것처럼 본원에 참고로 혼입된다. 전술한 발명이 명확한 이해를 목적으로 예시 및 실시예에 의해 다소 상세하게 설명되었지만, 특정 변화 및 변형이 첨부된 청구범위의 취지 또는 범주를 벗어나지 않고 이루질 수 있음은 본 발명의 교시에 비추어 당업자에게 용이하게 이해될 것이다.

Claims

2 m²/g 이하의 비표면적을 갖는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온의 결정형 자유 염기.
제 1 항에 있어서,
1 m²/g 이하의 비표면적을 갖는 자유 염기.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
결정형 자유 염기가 자유 염기 다형체 형태 A인 자유 염기.
제 3 항에 있어서,
10.1 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 자유 염기.
제 3 항에 있어서,
8.0 ± 0.2 및 10.1 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 자유 염기.
제 3 항에 있어서,
8.0 ± 0.2, 10.1 ± 0.2 및 11.5 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 자유 염기.
제 3 항에 있어서,
8.0 ± 0.2, 10.1 ± 0.2, 10.3 ± 0.2 및 11.5 ± 0.2의 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 자유 염기.
제 3 항에 있어서,
도 1에 도시된 바와 본질적으로 동일한 회절 각(2θ)에서 피크를 포함하는 분말 X-선 회절 패턴을 갖는 자유 염기.
제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
12.5 ppm ± 0.2 ppm의 공명(ppm) 값을 포함하는 ¹³C 고체 상태 NMR 스펙트럼을 갖는 자유 염기.
제 9 항에 있어서,
12.5 ppm 및 112.4 ppm ± 0.2 ppm의 공명(ppm) 값을 포함하는 ¹³C 고체 상태 NMR 스펙트럼을 갖는 자유 염기.
제 9 항 또는 제 10 항에 있어서,
12.5 ppm, 112.4 ppm 및 143.2 ppm ± 0.2 ppm의 공명(ppm) 값을 포함하는 ¹³C 고체 상태 NMR 스펙트럼을 갖는 자유 염기.
제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
약 5 ㎛ 내지 약 150 ㎛의 1차 입자 크기를 갖는 자유 염기.
제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) 약 5 ㎛ 내지 약 10 ㎛의 D10 값;
(ii) 약 30 ㎛ 내지 약 125 ㎛의 D90 값;
(iii) 약 10 ㎛ 내지 약 45 ㎛의 D50 값; 또는
상기 (i), (ii) 및 (iii)의 조합
을 특징으로 하는 1차 입자 크기 분포를 갖는 자유 염기.
제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
약 2 내지 약 3의 (D90-D10)/D50의 1차 입자 크기 분포 비를 갖는 자유 염기.
제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 따른 자유 염기 및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
0.1 내지 200 mg의 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온 자유 염기 다형체 형태 A를 함유하는 제 15 항의 약학 조성물을 포함하는 캡슐.
제 15 항의 약학 조성물 치료 효과량을 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 암을 치료하는 방법.
(a) 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온 자유 염기를 n-부탄올 및 아니솔의 혼합물에 현탁하고 약 95 내지 100℃로 가열하여 용해하는 단계;
(b) 약 80℃로 냉각하여 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온 자유 염기(형태 A)의 시드 결정을 제공하는 단계;
(c) 상기 혼합물을 약 80℃에서 약 3 시간 동안 유지한 후 약 10℃로 서서히 냉각하여 결정화하는 단계; 및
(d) 여과하여 2 m²/g 이하의 비표면적을 갖는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(형태 A)의 자유 염기를 단리하는 단계
를 포함하는, 2 m²/g 이하의 비표면적을 갖는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(형태 A)의 자유 염기를 제조하는 방법.
(a) 4-{6-[6-(1-부톡실-비닐)-8-사이클로펜틸-5-메틸-7-옥소-7,8-다이하이드로피리도-[2,3-d]피리미딘-2-일아미노]-피리딘-3-일}-피페라진-1-카복실산 3급-부틸 에스터를 물 및 n-부탄올의 혼합물에 현탁하고 약 70℃로 가열하여 용해하는 단계;
(b) 농축 HCl을 첨가하고 약 70℃에서 4 내지 6 시간 동안 가열하는 단계;
(c) 아니솔 및 수성 NaOH를 첨가하여 10 초과의 pH를 갖는 2상 혼합물을 수득하는 단계;
(d) 층을 분리하고 유기 층을 약 120℃로 가열하여 물을 증류 제거하는 단계;
(e) 약 80℃로 냉각하여 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온 자유 염기(형태 A)의 시드 결정을 수득하는 단계;
(g) 상기 혼합물을 약 80℃에서 약 3 시간 동안 유지한 후 약 10℃로 서서히 냉각하여 결정화하는 단계; 및
(g) 여과하여 2 m²/g 이하의 비표면적을 갖는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(형태 A)의 자유 염기를 단리하는 단계
를 포함하는, 2 m²/g 이하의 비표면적을 갖는 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(형태 A)의 자유 염기를 제조하는 방법.
제 18 항 또는 제 19 항의 방법에 따라 제조된 6-아세틸-8-사이클로펜틸-5-메틸-2-(5-피페라진-1-일-피리딘-2-일아미노)-8H-피리도[2,3-d]피리미딘-7-온(형태 A)의 자유 염기.