KR20070037511A - 장치 부재 및 분석물의 존재를 검출하기 위한 장치 부재의사용방법 - Google Patents

장치 부재 및 분석물의 존재를 검출하기 위한 장치 부재의사용방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20070037511A
KR20070037511A KR1020077003777A KR20077003777A KR20070037511A KR 20070037511 A KR20070037511 A KR 20070037511A KR 1020077003777 A KR1020077003777 A KR 1020077003777A KR 20077003777 A KR20077003777 A KR 20077003777A KR 20070037511 A KR20070037511 A KR 20070037511A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
monoclonal anti
antibody
sample
aflatoxin
column
Prior art date
Application number
KR1020077003777A
Other languages
English (en)
Inventor
패트릭 마르셀-죠셉 브렘스
에쉬 곤다 반
마리아 마르타 렘레브-붐
Original Assignee
그라세 게엠베하 운트 캄파니 카게
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 그라세 게엠베하 운트 캄파니 카게 filed Critical 그라세 게엠베하 운트 캄파니 카게
Publication of KR20070037511A publication Critical patent/KR20070037511A/ko

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
    • B01D15/18—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to flow patterns
    • B01D15/1864—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to flow patterns using two or more columns
    • B01D15/1871—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to flow patterns using two or more columns placed in series
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 - B01D15/36
    • B01D15/3804—Affinity chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3214—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the method for obtaining this coating or impregnating
    • B01J20/3217—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond
    • B01J20/3219—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond involving a particular spacer or linking group, e.g. for attaching an active group
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/60—Construction of the column
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/54—Sorbents specially adapted for analytical or investigative chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/58—Use in a single column
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/38—Flow patterns
    • G01N30/46—Flow patterns using more than one column
    • G01N30/461—Flow patterns using more than one column with serial coupling of separation columns

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)

Abstract

본 발명은 친화성 칼럼에 사용하기에 적합한 경질 지지체, 친화성 칼럼, 및 고압 액체 크로마토그래피(HPLC)와 같은 분석 칼럼과 유체 연통되는 친화성 칼럼을 포함하는 장치를 비롯한 장치 부재에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 하나 이상의 분석물의 존재 여부를 검출하기 위한 장치 부재의 사용방법에 관한 것이다.

Description

장치 부재 및 분석물의 존재를 검출하기 위한 장치 부재의 사용방법{APPARATUS COMPONENTS AND METHODS OF USING APPARATUS COMPONENTS TO DETECT THE PRESENCE OF ANALYTE}
본 발명은 친화성 칼럼에 사용하기에 적합한 경질 지지체, 친화성 칼럼, 및 고압 액체 크로마토그래피(HPLC)와 같은 분석 칼럼과 유체 연통되는 친화성 칼럼을 포함하는 장치를 비롯한 장치 부재에 관한 것이다. 또한 본 발명은 하나 이상의 분석물의 존재 여부를 검출하기 위한 장치 부재의 사용방법에 관한 것이다.
하나 이상의 분석물을 잠재적으로 함유하는 시료의 분석방법 및 장치 부재는 공지되어 있다. 그러나, 하나 이상의 다음의 이점을 갖는 시험분석법이 해당 기술분야에서 요구되었다:
(1) 시료 제조 단계 및 시료 취급 단계를 줄일 수 있는 것과 결합하여 사용되거나 단독으로 사용되는 장치 부재;
(2) 시료 제조 단계 및 시료 취급 단계를 줄일 수 있는 방법;
(3) (i) 착체 시료 내의 비-분석물 성분(즉, 장치에 사용된 하나 이상의 리간드에 목적 분석물 이외의 물질의 바람직하지 않은 결합; 및 (ii) 장치에 사용된 리간드 이외의 반응성 사이트에 목적 분석물의 바람직하지 않은 결합으로부터 최소 간섭으로 주어진 분석물에 대해 착체 시료를 고정밀 분석할 수 있는 것과 조합하여 사용하거나 단독으로 사용되는 장치 부재;
(4) (i) 착체 시료 내의 비-분석물 성분(즉, 장치에 사용된 하나 이상의 리간드에 목적 분석물 이외의 물질의 바람직하지 않은 결합); 및 (ii) 장치에 사용된 리간드 이외의 반응성 사이트에 목적 분석물의 바람직하지 않은 결합으로부터 최소 간섭으로 특정 분석물(예: 에스트로겐 작용을 갖는 분석물)에 대해 착체 시료의 고정밀 분석을 할 수 있는 것과 결합하거나 단독으로 사용되는 장치 부재; 및
(5) 분석 칼럼과 온라인(on-line) 또는 유체 연통되는 친화성 칼럼을 이용하는 능력.
발명의 개요
본 발명은 친화성 칼럼에 사용하기에 적합한 경질 지지체, 경질 지지체를 함유하는 친화성 칼럼, 및 고압 액체 크로마토그래피(HPLC)와 같은 분석 칼럼과 유체 연통되는 친화성 칼럼을 포함하는 장치를 비롯한 장치 부재에 관한 것이다. 또한 본 발명은 하나 이상의 분석물의 존재 여부를 검출하기 위한 장치 부재의 사용방법에 관한 것이다.
본 발명의 하나의 실시태양에서, 상기 장치 부재는 친화성 칼럼의 사용에 적합한 경질 지지체를 포함한다. 일례로, 본 발명의 경질 지지체는 다수의 무기 입 자를 포함하며, 상기 각 입자는 (i) 무기 기질; (ii) 무기 기질에 비-분석물질(즉, 목표 분석물 이외의 물질의 비특이적 결합) 및 리간드-특이적 분석물질(즉, 하나 이상의 리간드에 의해 제공되는 반응부위에 목표 분석물의 비특이적 결합)의 비특이적 결합을 감소시키는 변성 기질 표면; 및 (iii) 무기 기질에 결합된 하나 이상의 리간드를 포함하며, 상기 하나 이상의 리간드는 단일클론 항-아플라톡신 B1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 Q1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 B2 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G2 항체, 단일클론 항-비스페놀 A 항체, 단일클론 항-2,4-다이클로로페녹시 아세트산 항체, 단일클론 항-2,4,5-트라이클로로페녹시 아세트산 항체, 단일클론 항-4-클로로-2-메틸 아세트산 항체, 단일클론 항-4-(2,4-다이클로로페녹시)부티르산 항체, 단일클론 항-에스트론 항체, 단일클론 항-17-β-에스트라디올 항체, 단일클론 항-17-α-에티닐에스트라디올 항체, 단일클론 항-락토페린 항체, 단일클론 항-테스토스테론 항체, 단일클론 항-노르테스토스테론 항체, 단일클론 항-페닐유레아 항체, 단일클론 항-빈클로졸린 항체, 단일클론 항-엽산 항체, 단일클론 항-비타민 B12(사이아노코발라민) 항체, 단일클론 항-페니트로티온 항체, 단일클론 항-클로피리포스 항체, 단일클론 항-피리미포스 항체, 단일클론 항-카테콜 아민 항체, 재조합 인간 에스트로겐 수용체(hER) 또는 이들의 조합을 포함한다. 본 발명의 실시태양에서, 무기입자는 실리카 또는 실리카겔 입자와 같은 무기 금속산화물 입자를 포함한다.
또한, 본 발명은 경질 지지체를 함유하는 친화성 칼럼에 관한 것이다. 본 발명의 실시태양에서, 친화성 칼럼은 칼럼 용적을 갖는 칼럼 구조; 및 칼럼구조의 칼럼 용적에 위치한 경질 지지체를 포함하며, 상기 경질 지지체는 다수의 무기 입자를 함유하며, 상기 각 입자는 (i) 무기 기질; (ii) 무기 기질에 비-분석물질 및 리간드-특이적 분석물질의 비특이적 결합을 감소시키는 변성 기질 표면; 및 (iii) 무기 기질에 결합된 하나 이상의 리간드를 포함하며, 상기 하나 이상의 리간드는 단일클론 항-아플라톡신 B1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 Q1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 B2 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G2 항체, 단일클론 항-비스페놀 A 항체, 단일클론 항-2,4-다이클로로페녹시 아세트산 항체, 단일클론 항-2,4,5-트라이클로로페녹시 아세트산 항체, 단일클론 항-4-클로로-2-메틸 아세트산 항체, 단일클론 항-4-(2,4-다이클로로페녹시)부티르산 항체, 단일클론 항-에스트론 항체, 단일클론 항-17-β-에스트라디올 항체, 단일클론 항-17-α-에티닐에스트라디올 항체, 단일클론 항-락토페린 항체, 단일클론 항-테스토스테론 항체, 단일클론 항-노르테스토스테론 항체, 단일클론 항-페닐유레아 항체, 단일클론 항-빈클로졸린 항체, 단일클론 항-엽산 항체, 단일클론 항-비타민 B12(사이아노코발라민) 항체, 단일클론 항-페니트로티온 항체, 단일클론 항-클로피리포스 항체, 단일클론 항-피리미포스 항체, 단일클론 항-카테콜 아민 항체, 재조합 인간 에스트로겐 수용체(hER) 또는 이들의 조합을 포함한다.
본 발명은 또한 분석 칼럼과 유체 연통되는 친화성 칼럼을 포함하는 장치에 관한 것으로, 상기 친화성 칼럼은 (i) 약 200bar까지의 칼럼 압력에 견딜 수 있고, (ii) 소정의 시료 용액 내의 하나 이상의 분석물에 선택적으로 결합할 수 있는 하나 이상의 리간드가 결합되어 있는 경질 지지체를 함유한다. 하나의 실시태양에서, 본 장치의 친화성 칼럼은 본 발명의 경질 지지체를 함유한다.
또한, 본 발명은 경질 지지체, 면역친화성 칼럼, 및 면역친화성 칼럼을 함유하는 장치의 제조방법뿐만 아니라 주어진 시료에서 하나 이상의 분석물의 존재 여부를 검출하기 위한 경질 지지체, 면역친화성 칼럼 및 장치의 사용방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법은 하나 이상의 분석물을 잠재적으로 함유하는 시료를 분석하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 하나의 실시태양에서, 본 발명은 무기 기질을 포함하는 경질 지지체의 제조방법에 관한 것이다. 하나의 실시방법에서, 상기 방법은 다음의 단계를 포함한다: (i) 무기 기질의 적어도 제 1 부분에, 부착 단계 이전의 무기 기질 표면 상의 어떤 작용기보다 반응성이 적은 R기를 부착하는 단계; (2) 무기 기질의 적어도 제 2 부분에, 알데하이드 작용기를 포함하는 하나 이상의 링커(linker)를 부착하는 단계; 및 (3) 하나 이상의 링커에 하나 이상의 리간드를 선택적으로 결합하는 단계.
본 발명의 하나의 실시태양에서, 본 발명은 하나 이상의 분석물을 잠재적으로 함유하는 시료의 분석방법에 관한 것이다. 하나의 실시태양에서, 하나 이상의 분석물을 잠재적으로 함유하는 시료의 분석방법은 (a) 경질 지지체를 함유하는 친화성 칼럼에 시료를 도입하는 단계를 포함하며, 상기 경질 지지체는 다수의 무기 입자를 포함하며, 상기 각 입자는 (i) 무기 기질; (ii) 무기 기질에 비-분석물질 및 리간드-특이적 분석물질의 비특이적 결합을 감소시키는 변성 기질 표면; 및 (iii) 무기 기질에 결합된 하나 이상의 리간드를 포함하며, 상기 하나 이상의 리간드는 단일클론 항-아플라톡신 B1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 Q1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 B2 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G2 항체, 단일클론 항-비스페놀 A 항체, 단일클론 항-2,4-다이클로로페녹시 아세트산 항체, 단일클론 항-2,4,5-트라이클로로페녹시 아세트산 항체, 단일클론 항-4-클로로-2-메틸 아세트산 항체, 단일클론 항-4-(2,4-다이클로로페녹시)부티르산 항체, 단일클론 항-에스트론 항체, 단일클론 항-17-β-에스트라디올 항체, 단일클론 항-17-α-에티닐에스트라디올 항체, 단일클론 항-락토페린 항체, 단일클론 항-테스토스테론 항체, 단일클론 항-노르테스토스테론 항체, 단일클론 항-페닐유레아 항체, 단일클론 항-빈클로졸린 항체, 단일클론 항-엽산 항체, 단일클론 항-비타민 B12(사이아노코발라민) 항체, 단일클론 항-페니트로티온 항체, 단일클론 항-클로피리포스 항체, 단일클론 항-피리미포스 항체, 단일클론 항-카테콜 아민 항체, 재조합 인간 에스트로겐 수용체(hER) 또는 이들의 조합을 포함한다.
하나 이상의 분석물을 잠재적으로 함유하는 예시적인 시료의 분석방법은 다음 단계를 추가로 포함한다: (a) 시료를 경질 지지체 및 그 위의 리간드와 접촉시키는 단계; (b) 리간드와 결합하지 않는 어떤 시료 성분을 씻어 버리기 위해 상기 경질 지지체를 세척하는 단계; (c) 용출액이 경질 지지체 상의 리간드에 결합한 하나 이상의 분석물과 접촉하도록 용출액을 친화성 칼럼 내로 도입하는 단계;
(d) 하나 이상의 분석물을 잠재적으로 함유하는 용출 시료를 생성하는 시간 동안 상기 용출액을 경질 지지체와 접촉시키는 단계; (e) 시료 중의 하나 이상의 분석물의 존재 여부를 측정하기 위해 분석 칼럼의 내용물을 분석하는 단계.
또 다른 실시태양에서, 본 발명은 에스트로겐 활성을 갖는 하나 이상의 화합물을 잠재적으로 함유하는 시료의 분석방법에 관한 것으로, 상기 방법은 에스트로겐 활성을 갖는 하나 이상의 화합물에 선택적으로 결합할 수 있는 하나 이상의 리간드가 결합되어 있는 경질 지지체를 함유하는 친화성 칼럼에 시료를 도입하는 단계를 포함한다.
본 발명은 또한 용출 시료의 분석방법에 관한 것으로 상기 방법은 분석 칼럼과 유체 연통되는 친화성 칼럼으로부터 나온 용출 시료를 분석 칼럼으로 전달하고, 용출 시료 중의 하나 이상의 분석물의 존재 여부를 측정하기 위해 분석 칼럼의 내용물을 분석하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 용출 시료는 미코톡신, 엽산, 비타민 B12(사이아노코발라민) 또는 이들의 조합을 함유할 수 있다.
하나의 실시태양에서, 용출 시료의 분석방법은 하나 이상의 미코톡신을 잠재적으로 함유하는 용출 시료를 분석하는 것을 포함하며, 상기 방법은 분석 칼럼과 유체 연통되는 친화성 칼럼으로부터 나온 용출 시료를 분석 칼럼으로 전달하고, 용출 시료 중의 하나 이상의 미코톡신의 존재 여부를 측정하기 위해 분석 칼럼의 내용물을 분석하는 단계를 포함한다.
또 다른 실시태양에서, 엽산, 비타민 B12(사이아노코발라민), 또는 이들의 조합을 잠재적으로 함유하는 용출 시료를 분석하는 것을 포함하며, 상기 방법은 분석 칼럼과 유체 연통되는 친화성 칼럼으로부터 나온 용출 시료를 분석 칼럼으로 전달하고, 용출 시료 중에 엽산, 비타민 B12(사이아노코발라민), 또는 이들의 조합의 존재 여부를 측정하기 위해 분석 칼럼의 내용물을 분석하는 단계를 포함한다.
본 발명의 이러한 특징 및 이점은 다음의 발명의 상세한 설명 및 첨부된 청구범위를 검토함으로써 명백해질 것이다.
도 1은 본 발명의 예시적인 장치를 나타낸 개략도이고;
도 2는 본 발명의 예시적인 친화성 칼럼을 나타낸 개략도이고;
도 3은 시료 루프(loop) 내로 시료를 적재하는 동안 장치를 통하는 유체 흐름을 나타내는 본 발명의 다른 예시적인 장치이고;
도 4는 친화성 칼럼으로 시료를 주입하는 동안 도 3의 예시적인 장치를 나타낸 개략도이고;
도 5는 친화성 칼럼으로 시료가 용출되는 동안 도 3의 예시적인 장치를 나타낸 개략도이고;
도 6은 시료 검출기간 동안 도 3의 예시적인 장치를 나타낸 개략도이다.
본 발명은 (i) 친화성 칼럼에 사용하기에 적합한 경질 지지체, (ii) 경질 지지체를 함유하는 친화성 칼럼, (iii) 고압 액체 크로마토그래피(HPLC)와 같은 분석 칼럼과 결합하여 본 발명의 경질 지지체 및/또는 친화성 칼럼을 포함하는 장치, 및 (iv) 고압 액체 크로마토그래피(HPLC)와 같은 분석 칼럼과 유체 연통되는 친화성 칼럼을 포함하는 장치를 비롯한 장치 부재에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 하나 이상의 장치 부재의 제조방법뿐만 아니라 하나 이상의 분석물을 잠재적으로 함유하는 착체 혼합물을 포함하는 시료를 분석하기 위한 하나 이상의 장치 부재의 사용방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 다양한 착체 혼합물로부터 하나 이상의 분석물을 포획하고 정량하기 위한 하나 이상의 장치 부재의 사용방법에 관한 것이다.
본 발명의 하나의 예시적인 장치(10)가 도 1에 도시되어 있다. 예시적인 장치(10)는 친화성 칼럼(11), 분석 칼럼(12), 검출기(13), 제 1 펌프(14), 제 2 펌프(15), 제 1 밸브(16), 제 2 밸브(17), 시료 입구(20), 제 1 완충액 밸브(21), 용출 완충액 밸브(22), 제 1 폐기액 출구(23), 및 친화성 칼럼 폐기액 출구(24)를 포함한다. 본 발명의 하나의 바람직한 실시태양에서, 친화성 칼럼(11) 및 분석 칼럼(12)은 커플링(도시하지 않음)을 통해 서로 연결되어 있어 친화성 칼럼(11)은 분석 칼럼(12)과 유체 전달한다. 본원에서 사용된 용어 "유체 전달(in fluid communication with)하는"이란 말은 친화성 칼럼을 떠난 용출 시료가 친화성 칼럼과 분석 칼럼 사이의 커플링을 경유하여 분석 칼럼으로 직접 유동하는 것을 의미한다. 이러한 배열("온-라인 형태"로도 언급됨)은 친화성 칼럼과 분석 칼럼 사이의 용출 시료를 취급하거나 저장할 필요성을 제거한다.
본 발명의 다른 실시태양에서, 친화성 칼럼(11) 및 분석 칼럼(12)은 유체 전달하지 않는다. 이러한 실시태양에서, 친화성 칼럼을 떠난 용출 시료는 장래에 사용할 목적(즉, 장래에 분석 칼럼(12)으로 도입하려고)으로 회수하거나 저장할 수 있다. 이러한 배열은 본원에서 "오프-라인 형태"로 언급되기도 한다.
상기에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 예시적인 장치(10)는 많은 부재를 포함할 수 있다. 각 부재에 대한 설명과 각 부재를 단독 또는 결합하여 사용하는 방법에 대해서는 이하에서 제공된다.
1. 장치 부재
본 발명의 장치는 하나 이상의 다음 부재를 포함하나 이에 한정하지 않는다.
A. 친화성 칼럼
본 발명은 하나 이상의 다음 부재를 포함하는 도 1에 나타낸 예시적인 친화성 칼럼(11)과 같은 친화성 칼럼에 관한 것이다. 본원에서 사용된 용어 "친화성 칼럼"은 면역친화성 칼럼과 같은 친화성 칼럼을 포함하는 하나 이상의 다음 부재를 갖는 칼럼을 포함한다.
1. 칼럼 구조
본 발명의 친화성 칼럼은 바람직한 치수, 칼럼 용적, 및 구조적 완전함을 갖는 칼럼 구조를 포함한다. 전형적으로, 칼럼 구조는 관상 구조의 양단부에 제거가능한 단부 캡(end cap)을 갖는 관상 구조를 포함한다. 단부 캡은 관상 구조로부터 물질이 빠져나가는 것을 막기 위해 관상 구조에 누출방지 실링을 형성한다. 본 발명의 예시적인 친화성 칼럼(11)은 도 2에 나타내었다.
도 2에 도시한 것처럼, 예시적인 친화성 칼럼(11)은 제 1 단부(111) 및 제 2 단부(112)를 갖는 관상 구조(110)를 포함한다. 단부 캡(113) 및 (114)은 제 1 단부(111) 및 제 2 단부(112)에 각각 누출방지 실링을 형성한다. 단부 캡(113) 및 (114)은 (i) 예시적인 친화성 칼럼(11) 내에서 물질의 누출방지 및/또는 (ii) 예시적인 친화성 칼럼(11) 내에서 물질의 건조를 막기 위해 예시적인 친화성 칼럼(11)의 저장기간 동안 특히 유용하다. 예시적인 친화성 칼럼(11)은 칼럼(11)의 칼럼 공동(cavity) 내에 위치한 경질의 지지체(30) 및 제 1 완충액(31)(후술함)을 추가로 포함한다.
관상 구조(110)는 다양한 물질로 제조되며, 관상 주조(110) 내의 비교적 높은 압력에 견딜 수 있는 벽 구조로 되어 있다. 바람직하게는, 관상 구조(110)는 약 6000psi(400bar)까지의 압력, 더욱 바람직하게는 약 3000psi(200bar) 내지 약 4500psi(300bar)의 일정한 압력에 견딜 수 있는 구조적 완전함을 갖는다. 관상 구조(110)의 성형에 적합한 물질로는 폴리에테르에테르케톤(PEEK) 및 폴리프로필렌과 같은 중합체; 스틸 강과 같은 금속류; 및 유리와 같은 무기 재료를 포함하나 이에 한정하지는 않는다. 본 발명의 하나의 바람직한 실시태양에서, 관상 구조(110)는 폴리에테르에테르케톤(PEEK)을 포함한다.
관상 구조(110)는 입도 및 기하학, 유량, 사출 용적, 필요한 플레이트 수를 포함하나 이에 한정하지 않는 많은 변수에 따라 변하는 치수를 가질 수 있다. 전형적으로, 관상 구조(110)는 외부 직경이 약 2mm 내지 약 20mm이고, 내부 직경이 약 1mm 내지 약 10mm이고, 총 길이가 약 2mm 내지 약 250mm인 환상(環狀) 단면적을 가지고 있다. 본 발명의 하나의 바람직한 실시태양에서, 관상 구조(110)는 외부 직경이 약 11mm이고, 내부 직경이 약 4.6m이고, 총 길이가 약 50mm인 환상 단면적을 가지고 있다.
환상 구조(110)를 갖는 단부 캡 (113) 및 (114)는 전형적으로 PEEK로 성형되며, 관상 구조(110)의 양단부에 누출 방지 실링을 형성하기 위한 치수를 갖고 있다.
단면적을 갖는 관상구조가 바람직하더라도 다른 단면적을 갖는 관상구조 역시 본 발명의 범위에 속한다는 것을 주지하여야 한다. 다양한 관상 구조에 적합한 단면적 형상은 정사각형, 직사각형, 삼각형, 타원형, 5각형 및 6각형의 단면적 형상을 포함하나 이에 한정하지는 않는다.
2. 경질 지지체
본 발명은 또한 도 2에 도시한 것과 같은 예시적인 경질 지지체(30)과 같은 친화성 칼럼에 사용하기에 적합한 경질 지지체에 관한 것이다. 본 발명의 경질 지지체는 하나 이상의 다음 부재를 포함한다.
a. 무기 기질
본 발명에 사용하기에 적합한 무기 기질로는 크로마토그래피 매개물로서 상업적으로 이용가능한 제품을 포함한다. 무기 기질은 기술분야에서 공지된 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 무기 기질은 무기 기질의 표면에 적용된 하나 이상의 추가 부재를 위한 지지체를 제공한다. 일반적으로, 무기 기질은 무기산화물이며, 더욱 적합하게는 무기 금속산화물, 실리케이트 또는 알루미노실리케이트 또는 제어된 기공유리(pore glass)이다. 무기산화물이 더욱 바람직하다. 본 발명에 사용하기에 적합한 무기 산화물은 전형적으로 다른 화학 작용기와 결합 또는 반응할 수 있는 유리 히드록실기를 갖는다. 바람직하게는 무기산화물은 고체 무기산화물 1nm2당 약 1 내지 약 10개의 히드록실기를 갖는다.
적합한 무기 금속산화물로는 크로마토그라프 등급 실리카 또는 실리카겔, 알루미나, 실리카-알루미나, 지르코니아, 지르코네이트, 제어된 기공 유리 또는 티타니아를 포함하나 이에 한정하지 않는다. 본 발명의 바람직한 실시태양에서, 무기 금속산화물은 실리카이며, 좀더 바람직하게는 크로마토그래피 등급 실리카 또는 실리카겔이다. 국제공개 제 WO98/31461호에 기술된 규산질 산화물을 코팅한 자기 입자와 같은 자기에 응답하는 무기 금속산화물도 본 발명에 사용될 수 있다. 혼합 무기 금속산화물 예를 들어, 실리카와 알루미나의 공-겔, 또는 공-침전물이 사용될 수 있다.
고체 무기 금속산화물은 물리적인 입자 형태, 섬유 플레이트, 또는 이의 결합형태일 수 있다. 바람직하게는, 고체 무기 금속산화물은 실질적으로 구형 형상을 갖는 미립자 또는 입자의 물리적 형태이다. 물리적 형태와 무관하게 고체 무기 산화물은 전형적으로 약 100㎛까지의 가장 긴 치수(즉, 길이, 폭, 또는 직경)을 갖는다. 고체 무기 금속산화물이 실질적으로 구형의 형상을 갖는 다수의 입자를 포함할 때, 다수의 입자는 바람직하게는 약 1㎛ 내지 약 100㎛의 평균 입경을 갖는다. 본 발명의 하나의 바람직한 실시태양에서, 고체 무기 금속산화물은 다수의 실리카 또는 실리카겔 입자가 약 15㎛ 내지 약 20㎛의 평균 입경을 갖는 실질적으로 구형 형상을 갖는 다수의 실리카 또는 실리카겔 입자를 포함한다.
상업적으로 이용가능한 다양한 고체 무기 금속산화물을 본 발명에 사용할 수 있다. 적당한 고체 무기 금속산화물은 불규칙 형상을 가지며, 평균 기공 크기가 약 500Å 내지 약 3000Å, 바람직하게는 약 500Å 내지 약 1500Å인 DAVISIL®XWP(여분의 넓은 기공)와 같은 DAVISIL® 또는 구형 형상을 가지며, 평균 기공 크기가 약 300Å인 YDAC® 실리카와 같이 DAVISIL®라는 상표명으로 'Grace Vydac(Columbia, MD)'로부터 상업적으로 이용가능한 실리카 입자를 포함하나 이에 한정하지 않는다. 본 발명의 하나의 바람직한 실시태양에서, 구형 형상을 가지며 초기 평균 기공 크기가 약 300Å인 YDAC® 실리카가 변성된 이후 평균 기공 크기를 800Å로 증가시키기 위해 사용되었다.
b. 변성된 무기 기질 표면
상술한 무기 기질의 표면은 무기 기질상에 비-분석물질의 비-특이적, 비-선택적 결합 및/또는 흡착(예; 목표 분석물 이외의 물질의 비-특이적 결합) 및 리간드-특이적 분석물질(예; 하나 이상의 리간드에 의해 제공된 반응부위 이외의 반응부위에 목표 분석물의 비-특이적 결합)을 감소시키기 위해 처리 또는 변성된다. 결과의 변성 기질 표면은 (i) 무기 표면 상의 비교적 불활성인 R기의 존재로 인한 비-분석물질에 대한 낮은 친화성도, 및 (ii) 직접 또는 링커를 통하여 무기 기질 표면에 하나 이상의 리간드(후술함)에 선택적으로 결합하기 위한 반응부위의 제어된 양을 갖는다. 하나 이상의 리간드에 선택적으로 결합하기 위한 반응부위의 양은 무기 기질 표면에 부착된 하나 이상의 리간드에 관심있는 하나 이상의 분석물의 선택적, 제어된 결합을 가져온다.
변성 기질 표면은 무기 표면의 적어도 한 부분에 부착된 비교적 불활성 R기를 포함한다본원에서 사용된 용어 "비교적 불활성인 R기"란 최초의(즉, 변성전) 무기 기질 표면보다 적은 반응성을 갖는 무기 기질의 표면에 부착된 R기를 설명하는데 사용된다. 예를 들어, 무기 기질이 실리카 입자를 포함할 때, 무기 표면의 적어도 일부분의 표면에 부착된 비교적 불활성인 R기는 최초 또는 변성되지않은 실리카 표면에 존재하는 히드록실기보다 적은 반응성을 갖는다.
비교적 불활성인 R기는 본원에 기술된 기술뿐만 아니라 본원에서 참고로 주제를 포함시킨 2001년 8월 14일자로 출원된 "SOLID COMPOSITION FOR SELECTIVE ADSORPTION FROM COMPLEX MIXTURES"라는 명칭의 미국 특허출원 제09/929,621호에 기술된 기술을 포함하나 이에 한정하지 않는 기술을 포함하는 다양한 기술을 사용하여 무기 표면의 적어도 일부분의 표면에 부착될 수 있다.
본 발명의 하나의 예시적인 실시태양에서, R10 표면 부분(moieties)을 포함하는 비교적 불활성인 R기는 무기 표면의 적어도 일부분의 표면에 부착된다. 적당한 R10 표면 부분으로는 -CH2OH, -CH(OH)2, -CH(OH)CH3, -CH2CH2OH, -C(OH)2CH3, CH2CH(OH)2 및 -CH(OH)CH2(OH)를 포함하나 이에 한정하지 않는다. 본 발명의 하나의 바람직한 실시태양에서, R10 표면 부분은 -CH2OH, -CH(OH)CH3, 또는 -CH2CH2OH, 더욱 바람직하게는 R10 표면 부분은 -CH2OH을 포함한다.
R10 부분은 무기 기질의 적어도 하나의 표면에 위치한다. "위치한"이란 R10가 출발 무기 기질의 표면 상의 작용기에 직접 부착될 수 있음을 의미한다. R10은 무기 기질주위에 존재하는 표면적에 위치하거나, 무기 기질의 내부로 침투하여 기질 주위에 기공(개구부)를 갖는 기공 내에 존재하는 표면적에 위치할 수 있다.
R10는 또한 -X-R10 화학식을 갖는 기를 생성하기 위해 2가 잔기 또는 원자(-X-)에 의하여 무기 기질 표면에 부착됨으로써 무기 기질의 표면에 "위치"할 수 있다. 본 실시태양에서 R10을 연결하는 2가 잔기 또는 원자는 기질과 반응물이 반응하기 전에 출발 무기 기질의 조성물에 존재하지 않는다. 부분 또는 원자는 실레인 반응물로부터 유래되는 잔기 금속 원자(예; 실리콘 원자)와 같은 R10을 생성하기 위해 도입되는 반응물로부터 얻을 수 있다. 잔기 부분 또는 원자는 무기 기질에 직접 부착되며, 바람직하게는 무기 기질의 표면 상의 히드록실기를 통하여 부착된다. 이러한 반응물 중에 -X-기는 반응물부터 반응물까지 달라지며, 금속원자 또는 다른 화학 부분이 될 수 있다. 예를 들어, X는 실리콘, 알루미늄, 지르코늄 등과 같은 금속 원자로부터 유도될 수 있다. 선택된 무기 기질은 -X- 및 이와 관련된 반응물의 선택을 결정할 수 있다. 일반적으로, -X-를 함유하는 반응물은 무기 기질 상의 반응성 작용기와 반응할 수 있는 것이다. 무기 산화물의 경우, 적당한 반응물로는 전형적으로 히드록실기와 반응할 수 있는 것들이다.
무기 기질상에 R10을 생성할 수 있는 반응화합물의 화학은 해당 기술분야 예를 들어 Smith, Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 1994; March, Advanced Organic Chemistry, John Wiley & Sons, Forth Edition, 1992; Larock, Comprehensive Organic Transformation, John Wiley & Sons, Second Edition, 1999; Greene et al, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, Third Edition, 1999; Brook, Silicone in Organic, Organometallic, 및 Polymer Chemistry, John Wiley & Sons, 2000; Hermanson et al, Immobilized Affinity Ligand Techniques, 1992; Weetall, "Covalent Coupling Method for Inorganic Support Materials", in Methods in Enzymology, vol. XLIV, edited by K. Mosbach, pp. 134-148, 1976; Abbott, U.S. 특허 제4,298,500호; 및 Arkles, U.S. 특허 제5,371262호 등에 공지되어 있으며, 이들 각각의 문헌의 공개문은 본원에서 그대로 인용하였다. 예를 들어, 무기 기질의 표면에 위치한 R10 기를 포함하는 경질 지지체는 R10 의 전구체 기를 갖는 알콕시실레인, 다이알콕시실레인 또는 트라이알콕시실레인과 같은 반응물 또는 코팅제로부터 제조될 수 있다. 예를 들어, 아세톡시메틸은 히드록시메틸의 전구체 기일 수 있다. 이어서, 코팅제를 무기 기질의 표면과 반응시키고, 전구체를 가수분해하여 R10 기가 부착된 무기 기질을 제조하였다.
변성 기질 표면은 하나 이상의 리간드(후술함)에 선택적으로 결합하기 위한 반응 부위의 제어된 양을 포함한다. 반응 부위는 무기 기질의 표면에 직접 생성되거나 무기 기질의 표면에 부착된 링커를 경유하여 생성될 수 있다. 리간드는 기술분야에서 공지된 방법(예: Hermanson 등의 Immobilized Affinity Ligand Techniques, Academic Press, 1992 및 부착하는 R10 부분에 관해 초기에 인용된 기타 문헌)을 사용하여 무기 기질의 표면에 직접 부착될 수 있다. 예를 들어, 리간드는 출발 무기 산화물상에 표면 히드록실과 같은 표면 작용기와 반응(예: 반응부위)에 의하여 부착될 수 있다.
양자택일하여, 리간드는 무기 기질의 표면(예; 대안의 반응 부위)에 부착된 링커에 의해 무기 기질에 부착될 수 있다. 링커는 임의로 치환되는 2가 화학기일 수 있다. 임의로 치환된 2가 화학기는 n이 -R-기의 수이고, n이 1 이상, 바람직하게는 30 보다 크지 않는, 더욱 바람직하게는 15를 넘지 않는 n-R-기를 포함할 수 있다. 보다 전형적으로는, 2가 화학기는 리간드로부터 무기 기질까지 측정시 길이로, 약 1 내지 30개의 원자, 바람직하게는 약 1 내지 20개 원자, 더욱 바람직하게는 약 5 내지 약 15개 원자이다. 화학기 -R-은 -C(R1)H-, -C(R2)=C(R3)- 및 -C≡C-으로 구성되는 군으로부터 선택되며, 상기 식에서 R1, R2 및 R3는 각각 H, 알킬, 치환된 알킬, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 사이클로알키닐, 치환된 사이클로알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 아랄킬 또는 치환된 아랄킬이며, 상기 -R-기는 임의로 -O-, -S-, 카르보닐 티오카르보닐, -OC(O)-, -C(O)O-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(S)-, -C(S)O-, -C(S)S-, -SC(S)-, -N(R4)-, -N(R4)C(O)-, -C(O)N(R4)-, -C(R5)=N-, -N=C(R5)-, -C(R5)=NO-, -ON=C(R5)-, -P-, -P(OH)O-, 아릴렌, 치환된 아릴렌, 사이클로알킬렌, 치환된 사이클로알킬렌, 사이클로알케닐렌, 치환된 사이클로알케닐렌, 2가 헤테로사이클 또는 2가 치환된 헤테로사이클이며, 상기 R4 및 R5는 각각 독립적으로 H, 알킬, 치환된 알킬, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 사이클로알키닐, 치환된 사이클로알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 아랄킬 또는 치환된 아랄킬이다. 화학기의 예로는 "히드로카르빌"을 포함하는 n-R-기이며, 상기 식에서 n은 상기에서 기술한 바와 같고, 하나 이상의 -R-기는 -CH2-이고, (n-1)-R-기는 상기에서 언급한 -O-, -S-등과 같은 R기로 임의 대체된다.
무기 기질과 링커의 반응화학은 문헌(참조 Hermanson et al, Immobilized Affinity Ligand Techniques, 1992; Weetall, Methods in Enzymology, vol. XLIV, pp. 134-148, 1976)에 잘 기술되어 있다. 링커와 무기 기질의 구체적인 반응화학은 사용되는 무기 기질과 링커에 따라 달라진다. 마찬가지로, 링커와 리간드의 반응화학은 사용되는 링커와 리간드에 따라 달라진다. 적합한 링커/리간드 커플링 화학의 구체적인 예는 2001년 8월 14일자로 출원된 "SOLID COMPOSITION FOR SELECTIVE ADSORPTION FROM COMPLEX MIXTURES"라는 명칭의 미국 특허출원 제09/929,621호에 기술되어 있으며, 이 특허의 주제는 그대로 참고로 본원에 포함되었다. 미국 특허출원 제09/929,621호에 기술된 바와 같이, 리간드는 아미노, 설프히드릴, 카르보닐 또는 히드록시기 또는 리간드 및/또는 링커 상의 활성 수소 원자에 커플링될 수 있다.
본 발명의 하나의 예시적인 실시태양에서, 하나 이상의 리간드는 하나 이상의 알데하이드 작용기를 갖는 링커를 통하여 무기 기질에 커플링된다. 알데하이드 작용기는 리간드, 무기 기질에 부착된 첫 번째 링커, 또는 양쪽에 결합하기 위해 사용될 수 있다. 본 발명의 하나의 바람직한 실시태양에서, 하나 이상의 리간드는 첫 번째 및 두 번째 링커를 경유하여 무기 기질에 커플링되며, 상기 첫 번째 링커는 무기 기질과 결합하고, 두 번째 링커는 첫 번째 링커와 결합한다. 본 발명의 하나의 바람직한 실시태양에서, 첫 번째 링커는 아미노프로필트라이메톡시실레인과 같은 아미노-기능성 실록산을 포함하며, 두 번째 링커는 글루타르알데하이드와 같은 다이알데하이드를 포함한다. 이 실시태양에서, 유리 알데하이드 부분이 사용되어 리간드와 무기 기질을 결합한다. 본 발명의 하나의 예시적인 실시태양은 하기 실시예 1에 기술되었다.
변성 기질 표면을 갖는 본 발명의 경질 지지체의 제조에 있어, 상기 경질 지지체는 링커 기를 포함하며, R10기를 무기 기질에 첨가하여 링커 기를 생성하는 순서는 달라질 수 있다. R10기는 링커를 부착한 후에 무기 표면상에서 생성되거나 또는 무기 기질과 링커가 반응하기 전에 생성될 수 있다. 양자택일하여, R10 또는 링커 또는 양자에 대한 전구체는 나중에 반응한 전구체와 함께 생성 및/또는 부착되어 최종 R10 및/또는 링커가 생성된다.
변성 무기 표면 상의 링커 기의 농도는 달라질 수 있다. 본 발명의 특정 실시태양에서, 리간드는 경질 지지체의 표면적의 커다란 영역을 "쉐도우(shadow)"할 수 있는 거대한 단백질 분자를 포함한다. 결과로서, 경질 지지체의 표면 상의 링커 부위의 농도는 비교적 높을 필요가 없다. 농도는 고려된 리간드/분석물 착체의 크기를 기준으로 극대화할 수 있다. R10 및 리간드의 농도를 결정하는 요인은 R10 기 및 리간드의 동일성, 무기 기질 상의 반응 부위의 농도, 링커 기의 농도, 및 분석물의 동일성을 포함하나 이에 한정하지 않는다.
일반적으로 R10 의 농도는 BET로 측정한 표면적을 기준으로 1nm2의 경질 표면적당 약 1 내지 약 10기의 범위에 있다. 특정 실시태양에서, 리간드 농도는 주로 조성물을 사용시 회수되는 분석물에 따라 달라진다. 상기에서 나타내었듯이, 리간드 농도는 또한 사용된 임의의 링커의 농도에 따라 달라질 수 있다. 그러나 일반적으로 리간드 농도는 1nm2 당 약 0.04 내지 약 4 기의 범위에 있는다. 더욱이, 주어진 리간드는 1:1 화학양론적으로 링커에 항상 부착되지 않는다. 특정의 실시태양에서 엘르 들어 리간드가 커다란 단백질 분자로부터 제조될 때, 리간드는 여러 개의 링커 기로 부착될 수 있다. 보다 적은 리간드를 사용하는 다른 구체예에서, 화학양론적 함량보다 적은 리간드가 사용되며, 미반응 링커기는 분리작업시, 간섭을 피하기 위해 '캡핑'된다,
R10 및 리간드 또는 임의의 링커의 함량은 출발 무기 기질 상의 얼마나 많은 작용기가 (i) R10 기 및 (ii) 리간드 및/또는 임의의 링커에 의해 "커버(covered)"되는지 제시할 수 있다. 예를 들어, 무기 기질상에 표면 히드록시기와 같이 약 50% 내지 약 99%의 반응부위가 R10 표면 부분으로 커버되며, 약 50% 내지 약 1%의 반응부위가 리간드 및/또는 임의의 링커로 커버될 수 있다.
본 발명의 특정 실시태양에서, 무기 기질의 표면 상의 약 70% 내지 약 95%의 반응부위가 R10 표면 부분으로 커버되며, 약 30% 내지 약 5%의 반응부위가 리간드 및/또는 임의의 링커로 커버된다.
c. 리간드
본 발명의 경질 지지체는 상기 기술한 무기 기질에 결합된 하나 이상의 리간드를 추가로 포함한다. 하나 이상의 리간드는 무기 기질상에 반응부위에 직접 부착되거나 상술한 바와 같이 무기 기질에 부착된 링커를 통하여 임의로 부착될 수 있다. 리간드는 다른 부분 또는 분자 베이스의 분석물, 예를 들어 소수성 상호작용, 공유결합 또는 콜럼빅 상호작용(Columbic interaction) 을 통해 결합할 수 있는 분자 또는 분자 분획일 수 있다. 이러한 리간드는 분리 산업의 숙련자에게 공지되어 있다. 바이오분리 산업에서 전형적으로 사용되는 리간드는 바이오틴, 아비딘, 스트렙타비딘, 천연 또는 비천연 단백질, 펩타이드, 하원 및 핵산을 포함하나 이에 한정하지 않는다. 본 발명에서, 리간드는 바람직하게는 수용체 또는 항체이다.
본 발명에 사용하기 적합한 리간드로는 주어진 분석물에 선택적으로 결합하는 리간드를 포함한다. 본 발명에 사용하기 적합한 리간드의 비제한적인 예로는 단일클론 항-아플라톡신 B1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 Q1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 B2 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G2 항체, 단일클론 항-비스페놀 A 항체, 단일클론 항-2,4-다이클로로페녹시 아세트산 항체, 단일클론 항-2,4,5-트라이클로로페녹시 아세트산 항체, 단일클론 항-4-클로로-2-메틸 아세트산 항체, 단일클론 항-4-(2,4-다이클로로페녹시)부티르산 항체, 단일클론 항-에스트론 항체, 단일클론 항-17-β-에스트라디올 항체, 단일클론 항-17-α-에티닐에스트라디올 항체, 단일클론 항-락토페린 항체, 단일클론 항-테스토스테론 항체, 단일클론 항-노르테스토스테론 항체, 단일클론 항-페닐유레아 제초제 항체(예: 메토브로무론, 시노설푸론, 트리아설푸론 및/또는 프로설푸론의 단일클론 항테), 단일클론 항-빈클로졸린 항체, 단일클론 항-엽산 항체, 단일클론 항-비타민 B12(사이아노코발라민) 항체, 단일클론 항-오르가노포스포르 살충제 항체(예: 페니트로티온 항체, 클로피리포스 및/또는 피리미포스의 단일클론 항체), 단일클론 항-카테콜 아민 항체(예: 아드레날린, 노르아드레날린 및/또는 도파민의 단일클론 항체), 재조합 인간 에스트로겐 수용체(hER) 및 이들의 조합을 포함한다.
하기 표 1에 나타냈듯이, 주어진 분석물을 포획하는데 다양한 리간드가 사용될 수 있다.
Figure 112007014513128-PCT00001
상기 예시적인 리간드는 많은 구입처로부터 상업적으로 이용가능하다. 본 발명에 사용하기에 적합한 상업적으로 이용가능한 리간드는 하기 표 2에 나타내었다.
Figure 112007014513128-PCT00002
본 발명의 하나의 바람직한 실시태양에서, 리간드는 착체 혼합물로부터 미코톡신을 선택적으로 결합할 수 있는 항체를 포함한다. 본 실시태양에서, 리간드는 바람직하게는 단일클론 항-아플라톡신 B1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 Q1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 B2 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G2 항체, 또는 이들의 조합을 포함한다. 또한, 본 실시태양에서, 착체 혼합물은 견과류 및 견과제품, 곡류, 건조과일, 허브, 향신료, 코코아, 코코넛, 동물사료, 식물유, 맥주, 물, 생물학적 유체를 포함하나 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 다른 바람직한 실시태양에서, 리간드는 착체 혼합물로부터 엽산, 비타민 B12(사이아노코발라민), 또는 양쪽을 선택적으로 결합할 수 있는 항체를 포함한다. 본 실시태양에서, 리간드는 바람직하게는 단일클론 항-엽산 항체, 단일클론 항-비타민 B12(사이아노코발라민) 항체, 또는 이들의 조합을 포함한다. 또한, 본 실시태양에서, 착체 혼합물은 음식 시료(예: 유아식, 동물 먹이, 스포츠 음료, 및 비타민 정제), 생물학적 시료(예: 동물 조직, 생물학적 시료 등)을 포함하나, 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시태양에서, 리간드는 천연 에스트로겐 수용체, 재조합 인간 수용체 또는 이의 유도체, 재조합 단백질 및/또는 착체 혼합물로 부터 하나 이상의 내분비계 교란물질을 선택적으로 결합할 수 있는 수용체의 생물학적 활성부분을 모방한 기타 리간드를 포함한다. 용어 "내분비계 교란물질"은 사람 및 야생동물의 내분비계를 방해하는 것으로 의심되는 화합물의 종류를 확인하는데 사용된다. "내분비계 교란물질("제노 에스트로겐"이라고도 함)은 호르몬 균형을 교란하고, 사람, 동물 및 그들의 자손에 나쁜 영향을 끼칠 수 있다. 알려진 내분비계 교란물질로는 비스페놀 A, 에스트론, 17-α-에스트라디올, 17-β-에스트라디올, 17-α-에티닐에스트라디올, 알킬페놀, 디에틸스틸베스톨, 메톡시클로, 제아라레논, 제니스테인, o,p'-DDT, p,p'-DDT 및 부틸벤질 프탈레이트를 포함하나 이에 한정하지 않는다. 그러나 사람 및 동물의 정상적인 내분비계의 기능을 잠재적으로 방해하는 알려 지지않은 많은 내분비계 교란물질이 있을 것으로 생각된다. 그러므로, 본 발명의 실시태양은 착체 혼합물에서 하나 이상의 공지 또는 미지의 내분비계 교란물질을 확인하는데 유용할 수 있다. 본 실시태양에서, 착체 혼합물은 사람 및 소의 생물학적 체액(혈청 및 오줌), 수돗물, 지하수, 공정용수, 토양, 슬러지, 지표수 및 일어남직한 약품 오염물 특히, 산업용 화학 제제, 포장재료, 및 포장재료들부터 화학물질의 누출로 인한 오염된 음식을 함유하는 지표수와 같은 환경 시료, 및 포장재료를 포함하나 이에 한정하지 않는다.
본 실시태양에서, 리간드는 바람직하게는 에스트로겐 수용체를 포함한다. 에스트로겐 수용체 리간드는 착체 혼합물로부터 에스트로겐 활성을 가지면서, 에스트로겐 활성이 없는 혼합물 중의 화합물에 대해 친화성성이 거의 없는 화합물을 추출한다. 본원에서 사용한 용어 "에스트로겐 활성을 갖는 화합물"이란 내분비계 교란물질(예: 항상성의 유지와 발달과정의 조절을 담당하는 체내의 자연 호르몬의 생산, 방출, 이동, 대사, 결합, 작용, 혹은 배설을 간섭하는 체외물질, Kavlock 외 "Research needs for the risk assessment of health and environment effects of endocrine disruptors : U.S. EPA의 지원을 받은 워크샵 보고서" Environ. health Perspect . 104 Suppl 4:717-740(1996))로 정의되고, FDA의 공공 웹사이트인 http://edkb.fda.gov로부터 접근가능한 Endocrine Disruptor Knowledge base(EDKB)에 기술된 화합물을 칭한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 에스트로겐 수용체 리간드는 천연 인간 에스트로겐 수용체, 재조합 인간 에스트로겐 수용체(hER) 또는 그 유도체, 에스트로겐 수용체 또는 그 유도체의 생물학적 활성부분을 모방한 재조합 단백질, 또는 내분비계 교란물질로서 생물학적 활성을 갖는 화합물을 선택적으로 인식하는 어떤 리간드를 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시태양에서, 리간드는 착체 혼합물로부터 하나 이상의 스테로이드 호르몬을 선택적으로 결합할 수 있는 항체를 포함한다. 스테로이드 호르몬으로 에스트라디올, 에스트론, 에티닐에스트라디올, 테스토스테론 및 노르테스토스테론을 포함하나 이에 한정하지 않는다. 본 실시태양에서, 착체 화합물은 수돗물, 지하수, 공정용수, 토양, 슬러지, 지표수 및 일어남직한 약품 오염물 특히, 약품 제제, 사람 및 소의 생물학적 체액(혈청 및 오줌)를 함유하는 지표수와 같은 환경 시료, 및 기타 생물학적 시료(동물 조식, 생물학적 시료 등)를 포함하나 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 친화성 칼럼은 바람직하게는 최소 분석물 포획 능력을 갖고 있다. 주어진 친화성 칼럼에 대한 바람직한 분석물 포획 능력은 분석물의 내용 및 형태, 이용가능한 시료 크기, 측정장치의 검출 감도 및 한계를 포함하는 많은 요소에 의해 달라질 수 있다. 전형적으로, 본 발명의 친화성 칼럼은 주어진 분석물을 약 500피코몰(pMol)까지 포획할 수 있다. 바람직하게는 친화성 칼럼은 주어진 분석물을 약 50pMol 내지 약 1000pMol 포획할 수 있다.
3. 완충액
본 발명의 친화성 칼럼은 도 2에 도시한 예시적인 제 1 완충액(31)과 같은 완충액을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 제 1 완충액은 친화성 칼럼의 보관 및/또는 상요기간 동안 친화성 칼럼 내의 경질 지지체에 대해 비반응성 보호 매개물을 제공한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 제 1 완충액은 인산완충식염수(PBS) 완충액 또는 약 0.02wt%의 아지드화나트륨을 함유하는 PBS 완충액을 포함하나 이에 한정하지 않는다. 구체적인 완충액은 pH가 약 7.0인 0.01M 인산염 + 0.15M NaCl 완충액을 포함하나 이에 한정하지 않는다.
전형적으로 제 1 완충액은 약 6.0 내지 약 8.0의 pH를 갖는다. 제 1 완충액은 바람직하게는 약 6.8 내지 약 7.4, 바람직하게는 약 7.0 내지 약 7.4, 가장 바람직하게는 약 7.0의 pH를 갖는다.
바람직하게는 제 1 완충액은 상술한 경질 지지체를 함유한 친화성 칼럼의 보존기간 동안 약 0.02 wt%의 아지드화나트륨을 함유하는 PBS 완충액을 포함한다. 친화성 칼럼은 바람직하게는 PBS 완충액에 약 +4℃ 내지 약 +8℃의 온도범위로 보존된다. 또한, 제 1 완충액은 바람직하게는 경질 지지체를 함유한 친화성 칼럼의 사용기간 동안 약 7.0의 pH를 갖는 PBS 완충액을 포함한다.
B. 분석 칼럼
본 발명의 장치는 도 1에 도시한 예시적인 분석 칼럼(12)과 같은 하나 이상의 분석 칼럼을 추가로 포함할 수 있다. 각 분석 칼럼은 용출 시료 중에 존재하는 하나 이상의 분석물을 포획하는데 사용될 수 있다. 상업적으로 이용가능한 분석 칼럼은 상기에서 기술한 장치 부재와 결합하여 본 발명에 사용될 수 있다.
상업적으로 이용가능한 적합한 분석 칼럼으로는 5㎛, 4.6 x 250nm; 및 5㎛, 4.6 x 150nm를 포함하는 다양한 크기를 갖는 GENESIS® C8 e/c, 4㎛, 4.6 x 250nm를 포함하는 다양한 크기를 갖는 GENESIS® C8; 및 5㎛, 4.6 x 150nm를 포함하는 다양한 크기를 갖는 DENALTTM C18과 같은 GENESIS® 및 DENALTTM라는 상표명으로 Grace GmbH & Co.KG(Worms, Germany)에서 상업적으로 이용가능한 분석 칼럼; 5㎛, 4.6 x 150nm를 포함하는 다양한 크기를 갖는 GROM-Sil ODS형 칼럼과 같은 GROM-Sil이라는 상표명으로 Grom Analytik + HPLC GmbH(Rottenburg-Hailfingen, Germany)에서 상업적으로 이용가능한 분석 칼럼; 10㎛, 1ml를 포함하는 다양한 크기를 갖는 Mono S hr5/5와 같은 Mono S라는 상표명으로 Amersham Biosciences(Uppsala, Sweden)로부터 상업적으로 이용가능한 양이온 교환 칼럼을 포함하나 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 하나의 바람직한 실시태양에서, 분석 칼럼은 친화성 칼럼이 분석 칼럼과 유체 전달하도록 친화성 칼럼에 연결된다. 본 실시태양에서, 분석 칼럼의 관상 구조는 관상 구조 내에서 비교적 높은 압력(즉, 약 6000psi(400bar)까지의 압력, 좀더 바람직하게는 약 3000psi(200bar) 내지 약 4500psi(300bar)의 압력)에 충분히 견딜 수 있는 벽 구조를 갖는 재료로 제조되는 것이 바람직하다. 적합한 관상 재료로는 본 발명의 친화성 칼럼을 갖는 관상 구조를 형성하기에 적합한 상기에서 기술한 재료를 포함한다.
전형적으로, 분석 칼럼은 고압 액체 크로마토그래피(HPLC)와 같은 액체 크로마토그래피 장치의 부분을 형성한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 액체 크로마토그래피 장치는 Shimadzu(Columbia, MD), Agilent Technologies(Wilmington, DE), Applied Biosystem(Fostercity, CA), Dionex Corporation(Sunnyvale, CA), Varian Inc.(palo Alto, CA) 및 Waters Inc.(Milford, MA)와 같은 회사로부터 상업적으로 이용가능한 액체 크로마토그래피 장치를 포함하나 이에 한정하지 않는다.
C. 검출기
본 발명의 장치는 도 1에 도시한 예시적인 검출기(13)와 같은 하나 이상의 검출기를 추가로 포함한다. 검출기는 유동상 시료에 존재하는 분석물을 검출하고 정량하는데 사용될 수 있다. 상업적으로 이용가능한 검출기이라면 상기에서 기술한 장치 부재와 결합하여 본 발명에 사용될 수 있다.
상업적으로 이용가능한 적합한 검출기는 SPD10UV/Vis 시리즈 검출기와 같은 Shimadzu,Inc.(Columbia, MD)로부터 상업적으로 이용가능한 UV-VIS, 또는 Agilent Technologies(Wilmington, DE), Applied Biosystem(Fostercity, CA), Dionex Corporation(Sunnyvale, CA), Varian Inc.(palo Alto, CA) 및 Waters Inc.(Milford, MA)와 같은 회사로부터 상업적으로 이용가능한 형광 검출기, 굴절률 검출기, 질량 검출기 및 전기화학 검출기와 같은 기타 형태의 검출기를 포함하나 이에 한정하지 않는다. 바람직하게는, 검출기는 약 230nm 내지 약 400nm의 파장에서 운전되는 UV-VIS 검출기를 포함한다. 예를 들어, 다음의 예시적인 파장이 본 발명에 유용하다: 230nm에서 UV-VIS; 240nm에서 UV-VIS(빈클로졸린); 및 361nm에서 UV-VIS(비타민 B12).
D. 커플링
본 발명의 장치는 친화성 칼럼과 하나 이상의 분석 칼럼 사이에 커플링을 추가로 포함할 수 있다. 크로마토그래피 공정에서 종래에 사용된 어떠한 커플링 재료라도 본 발명에 사용될 수 있다. 전형적으로 커플링은 플라스틱, 금속 또는 유리 튜브로부터 낮은 사장 용적(low dead volume)을 포함한다. 친화성 칼럼이 분석 칼럼과 유체 전달되는 본 발명의 실시태양에서, 커플링은 커플링 내에서 비교적 높은 압력(즉, 약 6000psi(400bar)까지의 압력, 좀더 바람직하게는 약 3000psi(200bar) 내지 약 4500psi(300bar)의 압력)에 충분히 견딜 수 있는 벽 구조를 갖는 재료로부터 제조된다.
E. 펌프
본 발명의 장치는 도 1에 도시한 예시적인 제 1 펌프(14) 및 제 2 펌프(15)와 같은 하나 이상의 펌프를 추가로 포함할 수 있다. 각 펌프는 상술한 장치 부재를 통해 유체 흐름을 제공한다. 상업적으로 이용가능한 펌프라면 상술한 장치 부재와 결합하여 본 발명에 사용될 수 있다.
상업적으로 이용가능한 적합한 펌프로는 Shimadzu(Columbia, MD), Agilent Technologies(Wilmington, DE), Applied Biosystem(Fostercity, CA), Dionex Corporation(Sunnyvale, CA), Varian Inc.(palo Alto, CA) 및 Waters Inc.(Milford, MA)와 같은 회사로부터 상업적으로 이용가능한 펌프를 포함하나 이에 한정하지 않는다.
바람직하게는 펌프는 4기 모델 1100 펌프와 같은 1100 시리즈라는 상표명으로Agilent Technologies(Wilmington, DE)로 부터 상업적으로 이용가능한 3개 이상의 채널을 갖는 프로그래밍가능한 저압 또는 고압 구배 펌프(gradient pump)를 포함한다.
본 발명의 하나의 바람직한 실시태양에서, 제 1 펌프는 친화성 칼럼을 통해 제 1 완충액과 사료의 유체 흐름을 제공하는데 사용되며, 제 2 펌프는 분석 칼럼을 통하여 용출 완충액과 용출 시료의 유체 흐름을 제공하는데 사용된다.
F. 밸브
본 발명의 장치는 도 1에 도시한 예시적인 제 1 밸브(16) 및 제 2 밸브(17)와 같은 하나 이상의 펌프를 추가로 포함할 수 있다. 각 밸브는 상술한 장치 부재의 유체 흐름을 제어한다. 상업적으로 이용가능한 밸브라면 상술한 장치 부재와 결합하여 본 발명에 사용될 수 있다.
상업적으로 이용가능한 적합한 밸브는 VICI valco Instruments Co., Inc.(Houston, TX) 또는 VWR International Ltd.(Dorset UK)로부터 이용가능한 밸브를 포함하나 이에 한정하지 않는다. 바람직하게는 밸브는 모델 7725 시료 인젝터와 같은 RHEODYNE라는 상표명으로 VWR International Ltd.(Dorset UK)로부터 상업적으로 이용가능한 프로그래밍가능한 2축 6방향 밸브(본원에서 프로그래밍가능한 6방향 밸브로 언급됨)를 포함한다.
본 발명의 하나의 바람직한 실시태양에서, 제 1 프로그래밍가능한 6방향 밸브는 친화성 칼럼을 통하여 제 1 완충액 및/또는 시료의 유속을 제어하는데 사용되는 반면, 제 2 프로그래밍가능한 6방향 밸브는 분석 칼럼을 통하여 용출 완충액과 용출 시료의 유속을 제어하는데 사용된다.
II. 장치 부재의 제조방법
본 발명은 또한 상술한 장치 부재의 제조방법에 관한 것이다. 예를 들어 경질지지체는 상술한 내용 및 이하에 기술되는 실시예에 따라 만들 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 경질 지지체의 제조방법은 다음 단계를 포함한다:
(1) 무기 기질 상의 비분석물의 비특이적, 비선택적 결합 및또는 흡착을 감솟기키기 위해 무기 기질의 외부 표면을 변성화하는 단계; 및
(2) 무기 기질 표면에 하나 이상의 리간드를 선택적으로 결합하는 단계.
상술한 바와 같이, 무기 기질 표면의 변성화 단계는 (i) 무기 기질 표면의 적어도 일부분에 비교적 불황성인 R기를 부착하고, (ii) 무기 기질 표면의 적어도 일부분에 하나 이상의 링커를 부착하는 단계를 포함한다. 무기 기질 표면의 적어도 일부분에 비교적 불황성인 R기를 부착하는 단계는 무기 기질 표면의 적어도 일부분에 하나 이상의 링커를 부착하는 임의의 단계 이전 또는 이후에 일어난다. 무기 기질 표면에 하나 이상의 리간드를 선택적으로 결합하는 단계는 (i) 무기 기질 상의 반응 부위에 제어된 함량의 하나 이상의 리간드를 직접 결합하거나, (ii) 무기 기질 표면으로부터 나온 하나 이상의 링커에 제어된 함량의 하나 이상의 리간드를 결합하는 단계를 포함한다. 무기 기질 표면상에 반응 부위에 제어된 함량의 하나 이상의 리간드를 직접 결합하는 경우, 무기 기질 표면에 하나 이상의 리간드를 선택적으로 결합하는 단계는 무기 기질 표면의 적어도 일부분에 비교적 불활성인 R기를 부착하는 단계 이전 또는 이후에 일어날 수 있다.
본 발명의 하나의 바람직한 실시태양에서, 경질 지지체의 제조방법은 다음 단계를 포함한다:
(1) 무기 기질 표면의 적어도 제 1 부분에, 부착 단계 이전의 무기 기질 표면 상의 어떤 작용기보다 반응성이 적은 R기를 부착하는 단계;
(2) 무기 기질 표면의 적어도 제 2 부분에, 하나 이상의 링커를 부착하는 단계; 및
(3) 하나 이상의 링커에 하나 이상의 리간드를 선택적으로 결합하는 단계.
단계 (1) 및 92)는 어떤 순서로 실시될 수 있다. 바람직하게는 하나 이상의 링커는 다이알데하이드와 조합된 아미노-치환된 실록산을 포함한다. 좀더 바람직하게는, 하나 이상의 링커는 글루타르알데하이드와 결합하는 아미노프로필트라이메톡시실레인을 포함한다.
본 발명의 친화성 칼럼은 다음 단계를 사용하여 제조될 수 있다:
(1) 관상 구조의 제 1 단부를 실링하는 단계;
(2) 관상 구조의 칼럼 공동을 상술한 어떤 경질 지지체와 같은 경질 지지체로 적어도 부분적으로 충전하는 단계;
(3) 관상 구조의 칼럼 공동을 제 1 완충액으로 적어도 부분적으로 충전하여 상기 경질 지지체를 캡슐화하는 단계; 및 임의적으로
(4) 관상 구조의 반대편 단부(즉, 제 2 단부)를 실링하는 단계.
III. 시료 분석방법
본 발명은 또한 하나 이상의 관심있는 분석물을 잠재적으로 함유하는 시료의 분석방법에 관한 것이다. 본 발명의 하나의 예시적인 실시태양에서, 상기 방법은 (a) 경질 지지체를 함유하는 친화성 칼럼에 시료를 도입하는 단계를 포함하며, 상기 경질 지지체는 다수의 무기 금속 산화물 입자를 포함하며, 상기 각 입자는 (i) 무기 기질; (ii) 무기 기질에 비-분석물질(즉, 목표 분석물 이외의 물질의 비특이적 결합) 및 리간드-특이적 분석물질(즉, 하나 이상의 리간드에 의해 제공되는 반응부위에 목표 분석물의 비특이적 결합)의 비특이적 결합을 감소시키는 변성 기질 표면; 및 (iii) 무기 기질에 결합된 하나 이상의 리간드를 포함한다.
본 발명의 시료 분석방법은 단일클론 항-아플라톡신 B1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 Q1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 B2 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G2 항체, 단일클론 항-비스페놀 A 항체, 단일클론 항-2,4-다이클로로페녹시 아세트산 항체, 단일클론 항-2,4,5-트라이클로로페녹시 아세트산 항체, 단일클론 항-4-클로로-2-메틸 아세트산 항체, 단일클론 항-4-(2,4-다이클로로페녹시)부티르산 항체, 단일클론 항-에스트론 항체, 단일클론 항-17-β-에스트라디올 항체, 단일클론 항-17-α-에티닐에스트라디올 항체, 단일클론 항-락토페린 항체, 단일클론 항-테스토스테론 항체, 단일클론 항-노르테스토스테론 항체, 단일클론 항-페닐유레아 항체, 단일클론 항-빈클로졸린 항체, 단일클론 항-엽산 항체, 단일클론 항-비타민 B12(사이아노코발라민) 항체, 단일클론 항-페니트로티온 항체, 단일클론 항-클로피리포스 항체, 단일클론 항-피리미포스 항체, 단일클론 항-카테콜 아민 항체, 재조합 인간 에스트로겐 수용체(hER) 및 이들의 조합을 포함하나 이에 한정하지 않는 다양한 리간드를 사용할 수 있다.
시료 분석방법은 (b) 시료를 경질 지지체 및 그 위의 리간드와 접촉시키는 단계; (c) 리간드와 결합하지 않는 어떤 시료 성분을 씻어 버리기 위해 상기 경질 지지체를 세척하는 단계; (d) 용출액이 경질 지지체 상의 리간드에 결합한 하나 이상의 분석물과 접촉하도록 용출액을 친화성 칼럼 내로 도입하는 단계; (e) 하나 이상의 분석물을 잠재적으로 함유하는 용출 시료를 생성하는 시간 동안 용출액을 경질 지지체와 접촉시키는 단계; (f) 시료 중의 하나 이상의 분석물의 존재 여부를 측정하기 위해 분석 칼럼의 내용물을 분석하는 단계를 추가로 포함한다.
도 3 내지 6은 하나 이상의 상술한 장치 부재를 사용하여 예시적인 시료분석법의 여러 단계를 도시한다, 도 3 내지 6에 나타낸 바와 같이, 예시적인 장치(40)는 친화성 칼럼(41), 분석 칼럼(42), 검출기(43), 제 1 펌프(44), 제 2 펌프(45), 제 1 밸브(46), 제 2 밸브(47), 시료 루프(48), 시료 입구(50), 제 1 완충액 입구(51), 용출 완충액 입구(52), 제 1 폐기액 출구(53), 및 친화성 칼럼 페기액 출구(54 )를 포함한다. 본 발명의 실시태양에서, 친화성 칼럼(41) 및 분석 칼럼(42)은 서로 유체 전달된다. 또한, 친화성 칼럼(41)을 통하여 흐르는 제 1 완충액과 시료를 합치기 전에 시료를 일시적으로 보관하기 위해 시료 루프(48)가 사용된다.
도 3은 시료 적재(loading)단계 동안 예시적인 장치(40)를 나타낸다. 시료는 시료 입구(50)로 적재된다. 도 3에 도시하였듯이, 이 단계 동안 프로그래밍가능한 6방향 제 1 밸브(46)는 "A 위치"에 존재하며, 프로그래밍가능한 6방향 제 2 밸브(47)는 "B 위치"에 존재하여 (i) 시료가 시료 입구(50)에서 시료 루프(48)로 흐르게 하고, (ii) 제 1 완충액이 친화성 칼럼(41)을 통해 흐르도록 한다. 시료는 착체 혼합물 중에 상기에서 언급한 어떤 분석물을 함유할 수 있다. 예시적인 장치(40)에 사용될 수 있는 적합한 제 1 완충액은 상기에서 기술한 어떤 제 1 완충액을 포함한다.
별개의 단계에서, 시료는 도 4에 나타낸 것처럼 친화성 칼럼(41)을 통하여 유동한다. 이 단계 동안, 프로그래밍가능한 6방향 제 1 밸브(46)는 "B 위치"에 존재하며, 프로그래밍가능한 6방향 제 2 밸브(47)는 "A 위치"에 존재하여(i) 제 1 완충액을 지닌 시료가 시료 루프(48)로부터 친화성 칼럼(41)으로 흐르게 하고, (ii) 시료 입구(50)를 나온 유체가 제 1 폐기액 출구(53)로 흐르게 하고, 및 (iii) 용출 완충액이 친화성 칼럼(41)을 통하지 않고 분석 칼럼(42)을 통해 용출 완충액 입구(52)로 흐르도록 한다.
이 단계 동안 다양한 용출 완충액이 사용될 수 있다. 적합한 용출 완충액은 용출 완충액이 친화성 칼럼(41)을 통해 이동할 때, 경질 지지체에 결합된 분석물을 효과적으로 방출한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 용출 완충액은 0.1M 글리신 pH 2.5, 5M NaCl, 10mM 인산염, pH 7.2, 3.5M MgCl2, 10mM 인산염, pH 7.2, 2 내지 8M 요소, 2M 구아니딘 HCl, 3 내지 5M 티오시안산염, 10% 디옥산, 50% 에틸렌 글리콜, 아세토나이트릴-함유 수용액, 및 이들의 조합을 포함하나 이에 한정하지 않는다. 구체적인 용출 완충액은 35%v/v 아세토나이트릴/65%v/v 물 용출 완충액(예: 비스페놀 A, 17-α-에스트라디올, 17-α-에티닐에스트라디올, 테스토스테론, 노르테스토스테론에 대해); 10%v/v 아세토나이트릴/90%v/v 물 용출 완충액(예: 클로로페녹시 아세트산 제초제에 대해); 0.01M HCl + 0.15M NaCl 완충액(예: 락토페린 및 비타민 B12에 대해); 및 0.01M HCl + 0.15M NaCl 중의 10%v/v 용출 완충액(예: 빈클로졸린에 대해)을 포함하나 이에 한정하지 않는다.
도 5에 도시된 또 다른 별개의 단계에서, 용출 완충액은 친화성 칼럼(41) 및 분석 칼럼(42)을 통하여 흐른다. 이 단계 동안, 프로그래밍가능한 6방향 제 1 밸브(46)는 "B 위치"에 존재하며, 프로그래밍가능한 6방향 제 2 밸브(47)는 "A 위치"에 존재하여(i) 제 1 완충액 입구(51)로부터 나온 유체가 친화성 칼럼 폐기액 출구(54)로 흐르게 하고, (ii) 시료 입구(50)를 나온 유체가 제 1 폐기액 출구(53)로 흐르게 하고, 및 (iii) 용출 완충액 입구(52)를 나온 용출 완충액이 친화성 칼럼(41)을 통해 분석 칼럼(42)을 통과한 후, 분석 칼럼(22)으로 직접 흐르도록 한다.
도 6에 도시된 다른 별개의 단계에서, 유동상 액은 분석 칼럼(42)을 통하여 흐른다. 이 단계 동안, 프로그래밍가능한 6방향 제 1 밸브(46)는 "B 위치"에 존재하며, 프로그래밍가능한 6방향 제 2 밸브(47)는 "A 위치"에 존재하여(i) 제 1 완충액 입구(51)를 나온 유체가 친화성 칼럼(41)을 통하여 친화성 칼럼 폐기액 출구(54)로 흐르게 하고, (ii) 용출 완충액 입구(52)를 나온유동상액이 분석 칼럼(42)을 통해 검출기(43)로 흐르도록 한다.
다양한 유동상액이 본 발명에 사용될 수 있다. 적합한 유동상액은 유동상액이 분석 칼럼(42)을 통해 이동할 때, 분석 칼럼(42)에 있는 경질 지지체에 결합된 분석물을 효과적으로 방출한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 유동상액은 메탄올 또는 아세토나이트릴-함유 수용액, HCl 용액, 메탄올/HCl 용액, 인산염/NaCl 용액, 아세트산나트륨 용액, 메탄올/아세트산나트륨, 아세토나이트릴/HCl 용액, 및 메탄올/HCl/NaCl 용액, 및 이들의 조합을 포함하나 이에 한정하지 않는다.
본 발명에 사용하기에 적합한 유동상액은 45%v/v 아세토나이트릴/55%v/v 물 유동상액(예: 비스페놀 A 목적물에 대해); 0.001M HCl 유동상액(예:크로마토그래피 아세트산 제초제 분석물에 대해); 0.01M HCl 중의 60%v/v 메탄올 유동상액(예: 크로마토그래피 아세트산 제초제 분석물에 대해); 70%v/v 아세토나이트릴/30%v/v 물(예: 17-α-에스트라디올, 17-α-에티닐에스트라디올, 테스토스테론, 노르테스토스테론에 대해); 0.1M 인산염 + 1.5M NaCl(pH 7.0) 유동상액(예: 락토페린에 대해); 50mM 아세트산나트륨(pH 6.0) 유동상액(예: 페닐유레아 제초제에 대해); 50mM 아세트산나트륨 중의 55%v/v 메탄올(pH 6.0) 유동상액(예: 페닐유레아 제초제에 대해); 0.01M HCl 중의 64%v/v 아세토나이트릴 유동상액(예: 빈클로졸린에 대해); 및 30%v/v 메탄올/70%v/v 0.01M HCl + 0.15M NaCl 유동상액(예: 비타민 B12에 대해)을 포함하나 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 하나의 바람직한 실시태양에서, 시료의 분석방법은 용출 시료의 분석방법을 포함하며, 상기 방법은 분석 칼럼과 유체 연통되는 친화성 칼럼으로부터 나온 용출 시료를 분석 칼럼으로 이송하고, 및 용출 시료 중의 하나 이상의 분석물의 존재 여부를 측정하기 위해 분석 칼럼의 내용물을 분석하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 상기 시료의 분서방법은 아플라톡신 B1, 아플라톡신 G1 , 아플라톡신 Q1, 아플라톡신 B2, 아플라톡신 G2, 비스페놀 A, 2,4-다이클로로페녹시 아세트산, 2,4,5-트라이클로로페녹시 아세트산, 4-클로로-2-메틸 아세트산, 4-(2,4-다이클로로페녹시)부티르산, 에스트론, 17-β-에스트라디올, 17-α-에티닐에스트라디올, 락토페린, 테스토스테론, 노르테스토스테론, 메토브로무론, 시노설푸론, 트리아설푸론 및 프로설푸론, 빈클로졸린, 엽산, 비타민 B12(사이아노코발라민), 페니트로티온, 클로피리포스, 피리미포스, 아드레날린, 노르아드레날린, 도파민, 내분비계 교란물질(에스트로겐 활성을 갖는 화합물), 및 이들의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 분석물을 잠재적으로 함유하는 시료를 분석하는데 사용될 수 있다.
본 실시태양에서, 친화성 칼럼이 분석 칼럼과 유체 연통되는 용출 시료의 분석방법은 하나 이상의 다음 단계를 추가로 포함할 수 있다.
(1) 약 200bar까지의 칼럼 압력에 견딜 수 있으며, 하나 이상의 분석물에 선택적으로 결합할 수 있는 하나 이상의 리간드가 결합되어 있는 경질 지지체를 함유하는 친화성 칼럼에 시료를 도입하는 단계;
(2) 시료를 경질 지지체 및 그 위의 리간드와 접촉시키는 단계;
(3) 리간드와 결합하지 않는 어떤 시료 성분을 씻어 버리기 위해 상기 경질 지지체를 세척하는 단계;
(4) 용출액이 경질 지지체 상의 리간드에 결합한 하나 이상의 분석물과 접촉하도록 용출액을 친화성 칼럼 내로 도입하는 단계; 및
(5) 용출액을 생성하는 시간 동안 상기 용출액을 경질 지지체와 접촉시키는 단계. 전형적으로 용출액은 약 4분 내지 약 15분간 경질 지지체와 접촉한다.
하나의 예시적인 용출 시료의 분석방법에서, 상기 방법은 미코톡신을 잠재적으로 함유하는 용출 시료의 분석방법을 포함한다. 본 예시적인 방법에서, 상기 방법은 친화성 칼럼으로부터 나온 용출 시료를 분석 칼럼으로 이송하고, 및 용출 시료 중에 존재하는 하나 이상의 미코톡신의 존재를 측정하기 위해 분석 칼럼의 함량을 분석하는 단계를 포함한다. 용출 시료 중의 아플라톡신 B1, 아플라톡신 G1 , 아플라톡신 Q1, 아플라톡신 B2, 아플라톡신 G2, 또는 이들의 조합의 존재 여부를 분석할 수 있다.
용출 시료 분석법에 대한 또 다른 예시에서, 이 방법은 엽산, 비타민 B12(사이아노코발라민), 또는 이들의 조합을 잠재적으로 함유하는 용출 시료의 분석방법을 포함하며, 상기 방법은 친화성 칼럼이 분석 칼럼과 유체 전달 상태에 있는 친화성 칼럼으로부터 나온 용출 시료를 분석 칼럼으로 이송하고, 용출 시료 중에 존재하는 엽산, 비타민 B12(사이아노코발라민), 또는 이들의 조합의 존재를 측정하기 위해 분석 칼럼의 함량을 분석하는 단계를 포함한다.
본 발명은 또한 에스트로겐 활성을 갖는 하나 이상의 화합물을 잠재적으로 함유하는 시료의 분석방법에 관한 것이다. 본 실시태양에서, 상기 방법은 하나 이상의 리간드가 결합되어 있는 경질 지지체를 함유하는 친화성 칼럼에 시료를 도입하는 단계를 포함하며, 상기 하나 이상의 리간드는 천연 인간 에스트로겐 수용체, 재조합 인간 에스트로겐 수용체(hER) 또는 이의 유도체, 에스트로겐 수용체 또는 이의 유도체의 생물학적 활성 부분을 모방한 재조합 단백질 또는 내분비계 교란물질로서 생물학적 활성 부분 상의 화합물을 선택적으로 인식할 수 있는 리간드와 같은 에스트로겐 활성을 갖는 하나 이상의 화합물에 선택적으로 결합할 수 있다. 바람직한 실시태양에서, 하나 이상의 리간드는 재조합 인간 에스트로겐 수용체(hER)를 포함한다.
에스트로겐 활성을 갖는 하나 이상의 화합물을 잠재적으로 함유하는 시료의 예시적인 분석방법은 하나 이상의 다음 단계를 추가로 포함할 수 있다:
(1) 시료를 경질 지지체 및 그 위의 리간드와 접촉시키는 단계;
(2) 에스트로겐 활성을 나타내지 않는 어떤 시료 성분을 씻어 버리기 위해 상기 경질 지지체를 세척하는 단계;
(3) 용출액이 경질 지지체 상의 리간드에 결합한 하나 이상의 화합물과 접촉하도록 상기 용출액을 친화성 칼럼 내로 도입하는 단계;
(4) 에스트로겐 활성을 갖는 화합물을 함유하는 용출 시료를 생성할 수 있는 시간 동안 용출액을 경질 지지체와 접촉시키는 단계; 및
(5) 용출 시료 중에 에스트로겐 활성을 갖는 하나 이상의 화합물의 존재 여부를 측정하기 위해 분석 칼럼의 내용물을 분석하는 단계. 본 실시태양의 하나의 바람직한 변화로서, 상기 경질 지지체는 약 200bar까지의 칼럼 압력에 견딜 수 있으며, 상기 친화성 칼럼은 분석 칼럼과 유체 전달 상태에 있다.
본 발명의 친화성 칼럼은 재사용가능하다. 그러므로 상술한 어떤 예시적인 방법은 하나 이상의 다음 단계를 추가로 포함할 수 있다:
(1) 제 1 완충액으로 친화성 칼럼을 세척하는 단계; 및
(2) 제 1 시료를 친화성 칼럼에 도입하는 단계.
본 발명은 본 발명의 범위를 제한하는 것이 아닌 상술한 내용 및 하기 실시예에 의해 추가로 설명된다. 정반대로, 본원에 기술 내용을 읽은 후에 다양한 다른 실시태양, 변경 및 이의 균등물이 본 발명의 정신 및/또는 첨부된 청구범위의 권리범위를 벗어나지 않고 해당 기술분야의 당업자에 의해 제안될 수 있음은 명백하다.
실시예 1
단일클론 항-비타민 B 12 항체를 포함하는 경질 지지체의 제조
예시적인 경질 지지체를 다음과 같이 제조하였다. 500g의 톨루엔 및 1.52g의 3-아미노프로필트라이에톡시실레인 용액을 1,000ml의 환저 플라스크에 투입하였다. 200℃에서 2시간 동안 미리 하소시킨 800Å의 확대된 평균 기공 크기(약 15 내지 20μ의 평균 입도)를 갖는 100g의 그레이스 비닥(Grace Vidac) 실리카를 환저 플라스크에 투입하였다. 환저 플라스크를 히팅 맨틀(heating mantle)에 놓고 응축기를 부착하였다. 히팅 맨틀을 115rpm의 속도로 작동되는 오비탈 진탕기(orbital shaker)의 상부에 부착하였다. 환저 플라스크 및 응축기에 N2 가스를 통과시켜 전 반응동안 공기를 제거하였다.
환저 플라스크의 내용물을 비점(~110℃)으로 4시간 가열하였다. 시료를 여과하고, 2 x 100ml 톨루엔으로 세척하고, 115℃에서 건조한 후, 150℃에서 2시간 하소하였다. 결과의 시료에 중간체 A라는 라벨을 붙었다.
실리카 상의 -C3H6NH2의 농도는 0.54로 계산되었으며, 실리카 담체(43m2/g)의 표면적(BET), 중간체(0.41%)의 탄소 함량(LECO)을 기준으로 하였다. ASTM D5373(석탄) 및 ASTM 5291을 참조하시오.
비커에서 400ml의 1M NaCl을 중간체 A와 혼합한 후, 자석교반기로 교반하였다. 초기 PH는 4.79이었다. pH가 2.0에 이를 때까지 1M의 HCl을 적하하였다. pH를 2.0으로 15분간 유지하였다. 시료를 여과하고, 5 x 100ml DI H2O로 세척하고 115℃에서 건조한 후, 200℃에서 2시간 하소하였다. 이 시료에 중간체 A라는 라벨을 붙었다.
환저 플라스크에서 400g의 톨루엔 및 48.78g의 아세톡시메틸트라이에톡시실레인을 중간체 B와 혼합하였다. 환저 플라스크를 히팅 맨틀에 올려놓고 응축기를 부착하였다. 히팅 맨틀을 115rpm으로 작동되는 오비탈 진탕기(orbital shaker)의 상부에 부착하였다. 환저 플라스크 및 응축기에 N2 가스를 통과시켜 전반응 동안 공기를 제거하였다. 시료를 비점(~110℃)으로 24시간 가열한 후, 여과하고, 3 x 100ml 톨루엔으로 세척하고, 115℃에서 건조한 후, 150℃에서 2시간 하소하였다. 이 시료에 중간체 C라는 라벨을 붙었다.
다음 반응단계로, 20g의 중간체 C를 80ml의 0.1M 염산에 가한 후, 4시간 끓였다. 실리카를 여과하고, 60ml의 탈이온수로 4회 세척하였다. 이 시료에 중간체 D라는 라벨을 붙었다.
20g의 중간체 D와 300ml의 커플링 완충액(0.1M Na2PO4 + 0.15M NaCl:pH = 7.0)을 1,000ml 비커에서 혼합하고, 5분간 교반하였다. 이 시료를 여과하여 습윤상 케이크를 얻었다. 이어서, 57.53g의 50wt% 글루타르알데하이드 및 2.89의 NaCNBH3를 비커에 넣고, 중간체 D의 습윤상 필터 케이크를 투입하였다. 시료를 4시간 교반하고, 여과하고, 400ml의 커플링 완충액으로 세척하고, 400ml의 커플링 완충액으로 재슬러리화하여 신규 시료를 얻었으며, 이를 여과, 200ml의 커플링 완충액으로 세척하고, 200ml의 커플링 완충액으로 2회 이상 재슬러리화하였다. 재세척 및 재슬러리화한 시료를 여과하고, 400ml의 커플링 완충액으로 세척하였다. 이 시료에 중간체 E라는 라벨을 붙었다.
1.5g의 커플링 완충액 및 250 ㎕의 단일클론 항-비타민 B12 항체(1ml 당 약 10 내지 15mg의 항체 농도를 갖는 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO)로부터 상업적으로 이용가능한 제품번호. V9505)를 10ml 환저 플라스크에 투입하였다. 160mg의 NaCNBH3 및 1g의 중간체 E를 플라스크에 투입하고 진탕기에서 4시간 혼합하였다. 시료를 여과하고, 10ml의 커플링 완충액으로 4회 세척하였다. 이어서, 1.5g의 커플링 완충액, 160mg의 NaCNBH3 및 50mg의 에탄올아민을 10ml의 환저 플라스크에 투 입하고, 진탕기에서 4시간 혼합하였다. 시료를 여과하고, 10ml의 커플링 완충액으로 4회 세척하였다. 결과의 경질 지지체를 0.02% 아지드화나트륨을 함유하는 PBS 완충액에 넣고 4℃에서 보관하였다.
실시예 2
비타민 B 12 검출용 친화성 칼럼의 제조
예시적인 친화성 칼럼은 4.6 x 50mm I.D. 친화성 칼럼을 실시예 1에서 제조한 경질 지지체로 패킹(packing)하여 제조하였다. 패킹된 칼럼을 0.02 wt% 아지드화나트륨을 함유하는 인산염 완충액(pH 7.4)으로 충전하였다. 결과의 예시적인 친화성 칼럼을 4℃에서 보관하였다.
실시예 3
비타민 B 12 -함유 조성물의 분석
실시예 2의 예시적인 친화성 칼럼을 도 3에 도시한 예시적인 장치(40)와 유사한 장치에 커플링 하였다. 장치는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)(모델 1100 시리즈, Agilent Technologies, Wilmington, DE)를 포함하였다. 200㎕의 시료 루프가 장착된 모델 RHEODYEN 7725i 시료 사출기(VWR International Ltd., Dorset, UK)로 사출을 실시하였다. 모델 RHEODYEN 7725i 시료 사출기에 의하여, 온라인 형태(즉, HPLC와 유체 전달중인 친화성 칼럼)를 HPLC를 지닌 오프라인 형태(즉, HPLC와 유체 전달상태가 아닌)로 변경하는 것이 가능하다. 모델 LC10AD 고압 액상 펌프(Shimadzu, Columbia,MD)에 의하여, 시료를 시료 사출기에서 친화성 칼럼으로 이 송하였다. 모델 1100 UV-VIS 검출기(Agilent Technologies, Wilmington, DE)로 361nm에서 피크를 검출하였다.
칼럼의 평형을 유지하기 위해, 결합 완충액(0.1M Na2PO4 + 0.15M NaCl:pH = 7.0)을 친화성 칼럼을 통하여 펌핑하였다. 결합 완충액의 총 10 칼럼 용적이 사용되었다.
비타민 B12 를 함유하는 시료를 다음과 같이 제조하였다. 약 1mg/g 비타민 B12 를 함유하고, 시료의 중량이 0.1g인 고형분을 100ml의 결합 완충액에 용해시켜 혼합물을 생성하였다. 혼합물을 0.22㎛ 필터를 사용하여 여과하였다.
시료를 적재하기 전, 다음의 단계를 조치하였다.
(1) RP-HPLC를 하기에 명기한 대로 프로그래밍하였다.
(2) 모든 완충액을 탈기(degass)하고 0.45㎛ 필터를 사용하여 여과하였다.
(3) 공기가 칼럼(들)으로 유입되는 것을 방지하기 위해 친화성 칼럼과 분석 칼럼(들)을 연결하기 전에 펌프 튜브를 적절한 완충액으로 충전하였다.
(4) 칼럼에서 단부-캡을 제거하고, 칼럼을 장치에 연결하였다.
(5) 각각의 칼럼을 적어도 10 칼럼 용적을 갖는 결합 완충액으로 평형을 유지하거나 용출액에 신호가 검출되지 않을 때까지 평형을 유지하였다.
(6) 시료를 시료 루프에 적재하였다.
다음과 같은 크로마토그래피 조건이 사용되었다.
칼럼 1 : 항-비타민 B12 면역친화성 칼럼
칼럼 2 : GENESIS® C18, 4㎛, 4.6 x 250nm
유속 : 1ml/min
검출 : 361nm에서 UV-VIS
결합 완충액 : 0.01M 인산염 + 0.15M NaCl, pH 7.0
유동상 : 30%v/v 메탄올/70%v/v 0.01M HCl + 0.15M NaCl
다음 시간을 장치 세팅시 프로그램화하였다.
Figure 112007014513128-PCT00003
실시예 4
단일클론 항- 아플라톡신 B1 항체를 포함하는 경질 지지체의 제조
예시적인 경질 지지체를 다음과 같이 제조하였다. 1.5g의 커플링 완충액 및 250 ㎕의 단일클론 항-아플라톡신 B1 항체를(1ml 당 약 7.6mg의 항체 농도를 갖는 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO)로부터 상업적으로 이용가능한 제품번호. VA9555)를 10ml 환저 플라스크에 투입하였다. 160mg의 NaCNBH3 및 1g의 중간체 E를 플라스크에 투입하고 진탕기에서 4시간 혼합하였다. 시료를 여과하고, 10ml의 커플링 완충액으로 4회 세척하였다. 이어서, 1.5g의 커플링 완충액, 160mg의 NaCNBH3 및 50mg의 에탄올아민을 10ml의 환저 플라스크에 투입하고, 진탕기에서 4시간 혼합하였다. 시료를 여과하고, 10ml의 커플링 완충액으로 4회 세척하였다. 결과의 경질 지지체를 0.02% 아지드화나트륨을 함유하는 PBS 완충액에 넣고 4℃에서 보관하였다.
실시예 5
아플라톡신 B1 검출용 친화성 칼럼의 제조
예시적인 친화성 칼럼은 4.6 x 50mm I.D. 친화성 칼럼을 실시예 4에서 제조한 경질 지지체로 패킹하여 제조하였다. 패킹된 칼럼을 0.02 wt% 아지드화나트륨을 함유하는 인산염 완충액, pH 7.4로 충전하였다. 결과의 예시적인 친화성 칼럼을 4℃의 온도로 보관하였다.
실시예 6
아플라톡신을 함유하는 조성물의 분석
실시예 5의 예시적인 친화성 칼럼을 도 3에 도시한 예시적인 장치(40)와 유사한 장치에 커플링하였다. 장치는 후-칼럼 모델 Cobra cell(Lamers & Pleuger's, hertogenboach, NL)이 장착된 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)(모델 1100 시리즈, Agilent Technologies, Wilmington, DE)를 포함하였다. 500㎕의 시료 루프가 장착된 모델 RHEODYEN 7725i 시료 사출기(VWR International Ltd., Dorset, UK)로 사출을 실시하였다. 모델 RHEODYEN 7725i 시료 사출기에 의하여, HPLC를 지닌 온라인 및 오프라인 으로 변경하는 것이 가능하다. 모델 LC10AD 고압 액상 펌프(Shimadzu, Columbia, MD)에 의하여, 시료를 시료 사출기에서 친화성 칼럼으로 이송하였다. 모델 1100 UV-VIS 검출기(Agilent Technologies, Wilmington, DE)로 365nm에서, 및 모델 1046A 프로그램화 가능한 형광 검출기(Agilent Technologies, Wilmington, DE)로 365/430nm에서 피크를 검출하였다.
칼럼의 평형을 유지하기 위해, 결합 완충액(0.1M Na2PO4 + 0.15M NaCl: pH = 7.0)을 친화성 칼럼을 통하여 펌핑하였다. 결합 완충액의 총 10 칼럼 용적이 사용되었다.
아플라톡신 B1, B2, G1 및 G2를 함유하는 시료를 다음과 같이 제조하였다. 약 10 내지 100 ng/g 아플라톡신을 함유하고, 중량이 25g인 고형분을 100ml의 아세토나이트릴에 현탁하였다. 시료를 15분간 초음파로 추출하였다. 액체 분획을 6,000 rpm으로 10분간 원심분리하였다. 100 ㎕의 상등액을 900 ㎕의 결합 완충액으로 희석하였다.
시료를 적재하기 전, 다음의 단계를 조치하였다.
(1) RP-HPLC를 하기에 명기한 대로 프로그래밍하였다.
(2) 모든 완충액을 탈기(degass)하고 0.45㎛ 필터를 사용하여 여과하였다.
(3) 공기가 칼럼(들)으로 유입되는 것을 방지하기 위해 친화성 칼럼과 분석 칼럼(들)을 연결하기 전에 펌프 튜브를 적절한 완충액으로 충전하였다.
(4) 칼럼에서 단부-캡을 제거하고, 칼럼을 장치에 연결하였다.
(5) 각각의 칼럼을 적어도 10 칼럼 용적을 갖는 결합 완충액으로 평형을 유지하거나 용출액에 신호가 검출되지 않을 때까지 평형을 유지하였다.
(6) 시료를 시료 루프에 적재하였다.
다음과 같은 크로마토그래피 조건이 사용되었다.
칼럼 1 : 항-아플라톡신 B 1 면역친화성 칼럼
칼럼 2 : GENESIS® C18, 4㎛, 4.6 x 250nm
검출 1 : 365nm에서 UV-VIS
검출 2 : 형광 검출 (365/430nm)
결합 완충액 : 0.01M 인산염 + 0.15M NaCl, pH 7.0
유속 : 0.5ml/min
용출 완충액 : 20%v/v 수중 아세토나이트릴
유동상 : 600ml 메탄올 + 80ml 아세토나이트릴 + 200 ㎕의 진한 질산 +
50mg의 브롬화칼슘 및 물로 1,000ml가 되도록 조절함.
유속 : 0.8ml/min
다음 시간을 장치 세팅시 프로그램화하였다.
Figure 112007014513128-PCT00004
실시예 7
활성 리간드로서 재조합 인간 에스트로겐 수용체( hER )를 포함하는 경질 지지체의 제조
예시적인 경질 지지체를 다음과 같이 제조하였다. 1.5g의 커플링 완충액 및 50 ㎍의 재조합 인간 에스트로겐 수용체(10P's(Breda, NL)로부터 상업적으로 이용가능한 제품번호. AB RP-310)를 10ml의 환저 플라스크에 투입하였다. 실시예 1의 160mg의 NaCNBH3 및 1g의 중간체 E를 플라스크에 투입하고 진탕기에서 4시간 혼합하였다. 시료를 여과하고, 10ml의 커플링 완충액으로 4회 세척하였다. 이어서, 1.5g의 커플링 완충액, 160mg의 NaCNBH3 및 50mg의 에탄올아민을 10ml의 환저 플라스크에 투입하고, 진탕기에서 4시간 혼합하였다. 시료를 여과하고, 10ml의 커플링 완충액으로 4회 세척하였다. 결과의 경질 지지체를 0.02% 아지드화나트륨을 함유하는 PBS 완충액에 넣고 4℃에서 보관하였다.
실시예 8
내분비계 교란물질 검출용 친화성 칼럼의 제조
예시적인 친화성 칼럼은 4.6 x 50mm I.D. 친화성 칼럼을 실시예 7에서 제조한 경질 지지체로 패킹(packing)하여 제조하였다. 패킹된 칼럼을 0.02 wt% 아지드화나트륨을 함유하는 pH 7.4의 인산염 완충액으로 충전하였다. 결과의 예시적인 친화성 칼럼을 4℃에서 보관하였다.
실시예 9
내분비계 교란물질을 함유하는 조성물의 분석
실시예 8의 예시적인 친화성 칼럼을 실시예 3과 유사한 장치에 커플링하였다. 칼럼의 평형을 유지하기 위해, 결합 완충액(0.1M Na2PO4 + 0.15M NaCl: pH 7.0)을 친화성 칼럼을 통하여 펌핑하였다. 결합 완충액의 총 10 칼럼 용적이 사용되었 다.
17-β-에스트라디올, 17-α-에스트라디올, 17-α-에티닐에스트라디올, 에스트로겐, 비스페놀 A, 노닐페놀 및 부틸벤질 프탈레이트의 혼합물을 함유하는 시료를 다음과 같이 제조하였다. 250 내지 1,000mg/l의 17-β-에스트라디올, 17-α-에스트라디올, 17-α-에티닐에스트라디올, 에스트로겐, 비스페놀 A, 노닐페놀 및 부틸벤질 프탈레이트를 함유하는 표준 용액(stock solution)을 100ml의 결합 완충액 중에 1000의 배율로 희석하여 혼합물을 생성하였다.
시료를 적재하기 전, 다음의 단계를 조치하였다.
(1) RP-HPLC를 하기에 명기한 대로 프로그래밍하였다.
(2) 모든 완충액을 탈기하고 0.45㎛ 필터를 사용하여 여과하였다.
(3) 공기가 칼럼(들)으로 유입되는 것을 방지하기 위해 친화성 칼럼과 분석 칼럼(들)을 연결하기 전에 펌프 튜브를 적절한 완충액으로 충전하였다.
(4) 칼럼에서 단부-캡을 제거하고, 칼럼을 장치에 연결하였다.
(5) 각각의 칼럼을 적어도 10 칼럼 용적을 갖는 결합 완충액으로 평형을 유지하거나 용출액에 신호가 검출되지 않을 때까지 평형을 유지하였다.
(6) 시료를 시료 루프에 적재하였다.
다음과 같은 크로마토그래피 조건이 사용되었다.
칼럼 1 : 재조합 인간 에스트로겐 수용체(hER) 친화성 칼럼
칼럼 2 : GENESIS® C18, 4㎛, 4.6 x 250nm
유속 : 0.8ml/min
검출 : 230nm에서 UV-VIS
결합 완충액 : 0.01M 인산염 + 0.15M NaCl, pH 7.0
용출 완충액 : 20%v/v 6M 포타슘티오시아네이트, 50%v/v 결합 완충액,
25%v/v 메탄올
유동상 A : 수중 0.01 N HCl
유동상 B : 아세토나이트릴
다음 시간을 장치 세팅시 프로그램화하였다.
Figure 112007014513128-PCT00005
본 명세서가 본 발명의 구체적인 실시태양에 대해 상세히 기술하는 동안, 해당 기술분야의 당업자라면 전술한 내용을 이해하면 이들 실시태양에 대해 변경, 변화 및 균등물을 쉽게 이해할 수 있을 것이다. 따라서, 본 발명의 범위는 첨부된 청구범위 및 그것의 균등물의 범위로서 평가되어야 한다.

Claims (98)

  1. 분석 칼럼과 유체 연통되는 친화성 칼럼을 포함하는 장치로서, 상기 친화성 칼럼은, 약 200bar까지의 칼럼 압력에 견딜 수 있고, 소정의 시료 용액 내의 하나 이상의 분석물에 선택적으로 결합할 수 있는 하나 이상의 리간드가 결합되어 있는 경질 지지체를 함유하는 장치.
  2. 제 1 항에 있어서,
    경질 지지체가 다수의 무기 입자를 포함하는 장치.
  3. 제 2 항에 있어서,
    각 무기 입자가 (i) 무기 기질 및 (ii) 무기 기질에 대한 원하지 않는 물질의 비특이적 결합을 감소시키는 변성 기질 표면을 포함하는 장치.
  4. 제 3 항에 있어서,
    변성 기질 표면이 무기 기질에 부착된 하나 이상의 R10기를 포함하며, 각 R10기가 -CH2OH, -CH(OH)2, -CH(OH)CH3, -CH2CH2OH, -C(OH)2CH3, CH2CH(OH)2 및 -CH(OH)CH2(OH)로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되는 장치.
  5. 제 4 항에 있어서,
    각 R10기가 -CH2OH를 포함하는 장치.
  6. 제 1 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가 단일클론 항-아플라톡신 B1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 Q1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 B2 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G2 항체, 단일클론 항-비스페놀 A 항체, 단일클론 항-2,4-다이클로로페녹시 아세트산 항체, 단일클론 항-2,4,5-트라이클로로페녹시 아세트산 항체, 단일클론 항-4-클로로-2-메틸 아세트산 항체, 단일클론 항-4-(2,4-다이클로로페녹시)부티르산 항체, 단일클론 항-에스트론 항체, 단일클론 항-17-β-에스트라디올 항체, 단일클론 항-17-α-에티닐에스트라디올 항체, 단일클론 항-락토페린 항체, 단일클론 항-테스토스테론 항체, 단일클론 항-노르테스토스테론 항체, 단일클론 항-페닐유레아 항체, 단일클론 항-빈클로졸린 항체, 단일클론 항-엽산 항체, 단일클론 항-비타민 B12(사이아노코발라민) 항체, 단일클론 항-페니트로티온 항체, 단일클론 항-클로피리포스 항체, 단일클론 항-피리미포스 항체, 단일클론 항-카테콜 아민 항체, 재조합 인간 에스트로겐 수용체(hER), 또는 이들의 조합을 포함하는 장치.
  7. 제 1 항에 있어서,
    하나 이상의 분석물이 아플라톡신 B1, 아플라톡신 G1 , 아플라톡신 Q1, 아플라톡신 B2, 아플라톡신 G2, 비스페놀 A, 2,4-다이클로로페녹시 아세트산, 2,4,5-트라이클로로페녹시 아세트산, 4-클로로-2-메틸 아세트산, 4-(2,4-다이클로로페녹시)부티르산, 에스트론, 17-β-에스트라디올, 17-α-에티닐에스트라디올, 락토페린, 테스토스테론, 노르테스토스테론, 메토브로무론, 시노설푸론, 트리아설푸론 및 프로설푸론, 빈클로졸린, 엽산, 비타민 B12(사이아노코발라민), 페니트로티온, 클로피리포스, 피리미포스, 아드레날린, 노르아드레날린, 도파민, 에스트로겐 활성을 갖는 화합물, 또는 이들의 조합을 포함하는 장치.
  8. 제 1 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가 단일클론 항-아플라톡신 B1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 Q1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 B2 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G2 항체, 또는 이들의 조합을 포함하는 장치.
  9. 제 1 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가 단일클론 항-엽산 항체, 단일클론 항-비타민 B12(사이아노코발라민) 항체, 또는 이들의 조합을 포함하는 장치.
  10. 제 1 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가 재조합 인간 에스트로겐 수용체(hER)를 포함하는 장치.
  11. 제 1 항에 있어서,
    친화성 칼럼이 관상 커플링을 통하여 분석 칼럼에 연결되는 장치.
  12. 제 1 항에 있어서,
    분석 칼럼이 가역상 고성능 액체 크로마토그래피(RP-HPLC) 장치의 부분을 형성하는 장치.
  13. 제 12 항에 있어서,
    형광 검출기를 추가로 포함하는 장치.
  14. 제 1 항에 있어서,
    경질 지지체가 다수의 실리카겔 입자를 포함하는 장치.
  15. 제 14 항에 있어서,
    실리카겔 입자가 구형 형상을 가지며, 약 500Å 내지 약 800Å의 평균 기공 크기를 갖는 장치.
  16. 친화성 칼럼에 사용하기에 적합하고, 다수의 무기 입자를 포함하는 경질 지지체로서, 상기 각 입자는
    무기 기질;
    상기 무기 기질에 대한 비-분석물질 및 리간드-특이적 분석물질의 비특이적 결합을 감소시키는 변성 기질 표면; 및
    상기 무기 기질에 결합되고, 단일클론 항-아플라톡신 B1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 Q1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 B2 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G2 항체, 단일클론 항-비스페놀 A 항체, 단일클론 항-2,4-다이클로로페녹시 아세트산 항체, 단일클론 항-2,4,5-트라이클로로페녹시 아세트산 항체, 단일클론 항-4-클로로-2-메틸 아세트산 항체, 단일클론 항-4-(2,4-다이클로로페녹시)부티르산 항체, 단일클론 항-에스트론 항체, 단일클론 항-17-β-에스트라디올 항체, 단일클론 항-17-α-에티닐에스트라디올 항체, 단일클론 항-락토페린 항체, 단일클론 항-테스토스테론 항체, 단일클론 항-노르테스토스테론 항체, 단일클론 항-페닐유레아 항체, 단일클론 항-빈클로졸린 항체, 단일클론 항-엽산 항체, 단일클론 항-비타민 B12(사이아노코발라민) 항체, 단일클론 항-페니트로티온 항체, 단일클론 항-클로피리포스 항체, 단일클론 항-피리미포스 항체, 단일클론 항-카테콜 아민 항체, 재조합 인간 에스트로겐 수용체(hER), 또는 이들의 조합을 포함하는 하나 이상의 리간드
    를 포함하는 경질 지지체.
  17. 제 16 항에 있어서,
    변성 기질 표면이 무기 기질에 부착된 하나 이상의 R10기를 포함하며, 각 R10기가 -CH2OH, -CH(OH)2, -CH(OH)CH3, -CH2CH2OH, -C(OH)2CH3, CH2CH(OH)2 및 -CH(OH)CH2(OH)로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되는 경질 지지체.
  18. 제 17 항에 있어서,
    하나 이상의 R10기가 2가 잔기인 -X-를 통하여 무기 기질에 부착되는 경질 지지체.
  19. 제 16 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가, 무기 기질 상의 반응 부위와 하나 이상의 리간드 상의 작용기 사이에 링크를 형성하는 하나 이상의 링커(linker)를 통하여 무기 기질에 부착되는 경질 지지체.
  20. 제 19 항에 있어서,
    하나 이상의 링커가, 다이알데하이드와 조합된 아미노-치환된 실록산을 포함하는 경질 지지체.
  21. 제 20 항에 있어서,
    아미노-치환된 실록산이 아미노프로필트라이메톡시실레인을 포함하며, 다이알데하이드가 글루타르알데하이드를 포함하는 경질 지지체.
  22. 제 16 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가 무기 기질 상의 반응 부위에 직접 부착되는 경질 지지체.
  23. 제 16 항에 있어서,
    변성 기질 표면이 반응 부위를 포함하며, 이때 약 50% 내지 약 99%의 반응 부위가 변성화 전에 기질 표면 상의 작용기보다 적은 반응성을 갖는 R기로 커버되며, 약 1% 내지 약 50%의 반응 부위가 하나 이상의 리간드 또는 임의의 링커로 커버되는 경질 지지체.
  24. 제 23 항에 있어서,
    약 70% 내지 약 95%의 반응 부위가 변성화 전에 기질 표면 상의 작용기보다 적은 반응성을 갖는 R기로 커버되며, 약 5% 내지 약 30%의 반응 부위가 하나 이상의 리간드 또는 임의의 링커로 커버되는 경질 지지체.
  25. 제 16 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가 단일클론 항-아플라톡신 B1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 Q1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 B2 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G2 항체, 또는 이들의 조합을 포함하는 경질 지지체.
  26. 제 16 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가 단일클론 항-엽산 항체, 단일클론 항-비타민 B12(사이아노코발라민) 항체, 또는 이들의 조합을 포함하는 경질 지지체.
  27. 제 16 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가 재조합 인간 에스트로겐 수용체(hER)를 포함하는 경질 지지체.
  28. 제 16 항에 있어서,
    경질 지지체가 다수의 실리카겔 입자를 포함하는 경질 지지체.
  29. 제 28 항에 있어서,
    실리카겔 입자가 구형 형상을 가지며, 약 500Å 내지 약 800Å의 평균 기공 크기를 갖는 경질 지지체.
  30. 제 16 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항의 경질 지지체를 포함하는 친화성 칼럼.
  31. 분석 칼럼과 유체 연통되는 친화성 칼럼을 포함하는 장치로서, 상기 친화성 칼럼은 제 30 항의 친화성 칼럼을 포함하는 장치.
  32. 칼럼 용적을 갖는 칼럼 구조체; 및
    상기 칼럼 구조체의 칼럼 용적 내에 위치한, 다수의 무기 입자를 포함하는 경질 지지체로서, 상기 각 입자는
    무기 기질;
    상기 무기 기질에 대한 비-분석물질 및 리간드-특이적 분석물질의 비특이적 결합을 감소시키는 변성 기질 표면; 및
    상기 무기 기질에 결합되고, 상기 하나 이상의 리간드가 단일클론 항-아플라톡신 B1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 Q1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 B2 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G2 항체, 단일클론 항-비스페놀 A 항체, 단일클론 항-2,4-다이클로로페녹시 아세트산 항체, 단일클론 항-2,4,5-트라이클로로페녹시 아세트산 항체, 단일클론 항-4-클로로-2-메틸 아세트산 항체, 단일클론 항-4-(2,4-다이클로로페녹시)부티르산 항체, 단일클론 항-에스트론 항체, 단일클론 항-17-β-에스트라디올 항체, 단일클론 항-17-α-에티닐에스트라디올 항체, 단일클론 항-락토페린 항체, 단일클론 항-테스토스테론 항체, 단일클론 항-노르테스토스테론 항체, 단일클론 항-페닐유레아 항체, 단일클론 항-빈클로졸린 항체, 단일클론 항-엽산 항체, 단일클론 항-비타민 B12(사이아노코발라민) 항체, 단일클론 항-페니트로티온 항체, 단일클론 항-클로피리포스 항체, 단일클론 항-피리미포스 항체, 단일클론 항-카테콜 아민 항체, 재조합 인간 에스트로겐 수용체(hER), 또는 이들의 조합을 포함하는 하나 이상의 리간드
    를 포함하는 친화성 칼럼.
  33. 제 32 항에 있어서,
    변성 기질 표면이 무기 기질에 부착된 하나 이상의 R10기를 포함하며, 각 R10기가 -CH2OH, -CH(OH)2, -CH(OH)CH3, -CH2CH2OH, -C(OH)2CH3, CH2CH(OH)2 및 -CH(OH)CH2(OH)로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되는 친화성 칼럼.
  34. 제 33 항에 있어서,
    하나 이상의 R10기가 2가 잔기인 -X-를 통하여 무기 기질에 부착되는 친화성 칼럼.
  35. 제 32 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가, 무기 기질 상의 반응 부위와 하나 이상의 리간드 상의 작용기 사이에 링크를 형성하는 하나 이상의 링커를 통하여 무기 기질에 부착되는 친화성 칼럼.
  36. 제 35 항에 있어서,
    하나 이상의 링커가, 다이알데하이드와 조합된 아미노-치환된 실록산을 포함하는 친화성 칼럼.
  37. 제 36 항에 있어서,
    아미노-치환된 실록산이 아미노프로필트라이메톡시실레인을 포함하며, 다이알데하이드가 글루타르알데하이드를 포함하는 친화성 칼럼.
  38. 제 32 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가 무기 기질 상의 반응 부위에 직접 부착되는 친화성 칼럼.
  39. 제 32 항에 있어서,
    변성 기질 표면이 반응 부위를 포함하며, 이때 약 50% 내지 약 99%의 반응 부위가 변성화 전에 기질 표면 상의 작용기보다 적은 반응성을 갖는 R기로 커버되며, 약 50% 내지 약 1%의 반응 부위가 하나 이상의 리간드 또는 임의의 링커로 커버되는 친화성 칼럼.
  40. 제 39 항에 있어서,
    약 70% 내지 약 95%의 반응 부위가 변성화 전에 기질 표면 상의 작용기보다 적은 반응성을 갖는 R기로 커버되며, 약 30% 내지 약 5%의 반응 부위가 하나 이상의 리간드 또는 임의의 링커로 커버되는 친화성 칼럼.
  41. 제 32 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가 단일클론 항-아플라톡신 B1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 Q1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 B2 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G2 항체, 또는 이들의 조합을 포함하는 친화성 칼럼.
  42. 제 32 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가 단일클론 항-엽산 항체, 단일클론 항-비타민 B12(사이아노코발라민) 항체, 또는 이들의 조합을 포함하는 친화성 칼럼.
  43. 제 32 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가 재조합 인간 에스트로겐 수용체(hER)를 포함하는 친화성 칼럼.
  44. 제 32 항에 있어서,
    경질 지지체가 다수의 실리카겔 입자를 포함하는 친화성 칼럼.
  45. 제 44 항에 있어서,
    실리카겔 입자가 구형 형상을 가지며, 약 500Å 내지 약 800Å의 평균 기공 크기를 갖는 친화성 칼럼.
  46. 분석 칼럼과 유체 연통되는 친화성 칼럼을 포함하는 장치로서, 상기 친화성 칼럼은 제 30항 및 제 32 항 내지 제 45 항 중 어느 한 항의 친화성 칼럼을 포함하는 장치.
  47. 시료를 제 1 항 내지 제 46 항 중 어느 한 항의 장치, 경질 지지체 또는 친화성 칼럼과 접촉시키는 단계를 포함하는 시료의 분석방법.
  48. 분석 칼럼과 유체 연통되는 친화성 칼럼으로부터 나온 용출 시료를 분석 칼럼으로 전달하는 단계;
    용출 시료 중의 하나 이상의 분석물의 존재 여부를 측정하기 위해 분석 칼럼의 내용물을 분석하는 단계
    를 포함하는 용출 시료의 분석방법.
  49. 제 48 항에 있어서,
    용출 시료가 용매 중의 하나 이상의 분석물을 포함하며, 상기 하나 이상의 분석물 이 아플라톡신 B1, 아플라톡신 G1 , 아플라톡신 Q1, 아플라톡신 B2, 아플라톡신 G2, 비스페놀 A, 2,4-다이클로로페녹시 아세트산, 2,4,5-트라이클로로페녹시 아세트산, 4-클로로-2-메틸 아세트산, 4-(2,4-다이클로로페녹시)부티르산, 에스트론, 17-β-에스트라디올, 17-α-에티닐에스트라디올, 락토페린, 테스토스테론, 노르테스토스테론, 메토브로무론, 시노설푸론, 트리아설푸론 및 프로설푸론, 빈클로졸린, 엽산, 비타민 B12(사이아노코발라민), 페니트로티온, 클로피리포스, 피리미포스, 아드레날린, 노르아드레날린, 도파민, 에스트로겐 활성을 갖는 화합물, 또는 이들의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택되는 용출 시료의 분석방법.
  50. 제 49 항에 있어서,
    용출 시료가 검출가능한 양의 하나 이상의 미코톡신을 포함하는 용출 시료의 분석방법.
  51. 제 49 항에 있어서,
    용출 시료가 검출가능한 양의 아플라톡신 B1, 아플라톡신 G1, 아플라톡신 Q1, 아플라톡신 B2, 아플라톡신 G2, 또는 이들의 조합을 포함하는 용출 시료의 분석방법.
  52. 제 49 항에 있어서,
    용출 시료가 검출가능한 양의 엽산, 비타민 B12(사이아노코발라민), 또는 이들의 조 합을 포함하는 용출 시료의 분석방법.
  53. 제 49 항에 있어서,
    용출 시료가 검출가능한 양의 에스트로겐 활성을 갖는 하나 이상의 화합물을 포함하는 용출 시료의 분석방법.
  54. 제 48 항에 있어서,
    전달 단계가 용출 시료에 유체 압력을 가하여 친화성 칼럼으로부터 분석 칼럼으로 용출 시료를 운송하는 단계를 포함하는 용출 시료의 분석방법.
  55. 제 54 항에 있어서,
    유체 압력이 펌프를 통하여 가해지는 용출 시료의 분석방법.
  56. 제 48 항에 있어서,
    분석 단계가 용출 시료 중의 하나 이상의 분석물의 존재 여부를 검출하는 단계, 하나 이상의 분석물을 서로 분리하는 단계, 용출 시료 중의 하나 이상의 분석물을 정량하는 단계 또는 이들의 조합을 포함하는 용출 시료의 분석방법.
  57. 제 56 항에 있어서,
    분석 단계가 용출 시료를 가역상 고성능 액체 크로마토그래피(RP-HPLC), 형광 검출 기, 또는 이들 양쪽을 통과시키는 단계를 포함하는 용출 시료의 분석방법.
  58. 제 48 항 내지 제 57 항 중 어느 한 항에 있어서,
    친화성 칼럼이 약 300bar까지의 칼럼 압력에 견딜 수 있는 경질 지지체를 함유하고, 상기 경질 지지체는 시료 내의 하나 이상의 분석물에 선택적으로 결합할 수 있는 하나 이상의 리간드가 결합되어 있는 것인 용출 시료의 분석방법.
  59. 제 58 항에 있어서,
    경질 지지체가 다수의 무기 입자를 포함하는 용출 시료의 분석방법.
  60. 제 59 항에 있어서,
    각 무기 입자가 무기 기질; 및 상기 무기 기질에 대한 비-분석물질 및 리간드-특이적 분석물질의 비특이적 결합을 감소시키는 변성 기질 표면을 포함하는 용출 시료의 분석방법.
  61. 제 60 항에 있어서,
    변성 기질 표면이 무기 기질에 부착된 하나 이상의 R10기를 포함하며, 이때 각 R10기가 -CH2OH, -CH(OH)2, -CH(OH)CH3, -CH2CH2OH, -C(OH)2CH3, CH2CH(OH)2 및 -CH(OH)CH2(OH)로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되는 용출 시료의 분석방법.
  62. 제 61 항에 있어서,
    각 R10기가 -CH2OH를 포함하는 용출 시료의 분석방법.
  63. 제 61 항에 있어서,
    하나 이상의 R10기가 2가 잔기인 -X-를 통하여 무기 기질에 부착되는 용출 시료의 분석방법.
  64. 제 58 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가, 무기 기질 상의 반응 부위와 하나 이상의 리간드 상의 작용기 사이에 링크를 형성하는 하나 이상의 링커를 통하여 무기 기질에 부착되는 용출 시료의 분석방법.
  65. 제 64 항에 있어서,
    하나 이상의 링커가, 다이알데하이드와 조합된 아미노-치환된 실록산을 포함하는 용출 시료의 분석방법.
  66. 제 65 항에 있어서,
    아미노-치환된 실록산이 아미노프로필트라이메톡시실레인을 포함하며, 다이알데하 이드가 글루타르알데하이드를 포함하는 용출 시료의 분석방법.
  67. 제 58 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가 무기 기질 상의 반응 부위에 직접 부착되는 용출 시료의 분석방법.
  68. 제 60 항에 있어서,
    변성 기질 표면이 반응 부위를 포함하며, 이때 약 50% 내지 약 99%의 반응 부위가 변성화 전에 기질 표면 상의 작용기보다 적은 반응성을 갖는 R기로 커버되며, 약 50% 내지 약 1%의 반응 부위가 하나 이상의 리간드 또는 임의의 링커로 커버되는 용출 시료의 분석방법.
  69. 제 68 항에 있어서,
    약 70% 내지 약 95%의 반응 부위가 변성화 전에 기질 표면 상의 작용기보다 적은 반응성을 갖는 R기로 커버되며, 약 30% 내지 약 5%의 반응 부위가 하나 이상의 리간드 또는 임의의 링커로 커버되는 용출 시료의 분석방법.
  70. 제 59 항에 있어서,
    무기 입자가 다수의 실리카겔 입자를 포함하는 용출 시료의 분석방법.
  71. 제 70 항에 있어서,
    실리카겔 입자가 구형 형상을 가지며, 약 500Å 내지 약 800Å의 평균 기공 크기를 갖는 용출 시료의 분석방법.
  72. 제 48 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 있어서,
    약 200bar까지의 칼럼 압력에 견딜 수 있고, 하나 이상의 분석물에 선택적으로 결합할 수 있는 하나 이상의 리간드가 결합되어 있는 경질 지지체를 함유하는 친화성 칼럼에 시료를 도입하는 단계;
    시료를 경질 지지체 및 그 위의 리간드와 접촉시키는 단계;
    하나 이상의 분석물 이외의 어떤 시료 성분을 씻어 버리기 위해 상기 경질 지지체를 세척하는 단계;
    용출액이 경질 지지체 상의 리간드에 결합한 하나 이상의 분석물과 접촉하도록 용출액을 친화성 칼럼 내로 도입하는 단계; 및
    용출 시료를 생성하는 시간 동안 상기 용출액을 경질 지지체와 접촉시키는 단계
    를 추가로 포함하는 용출 시료의 분석방법.
  73. 제 72 항에 있어서,
    시간의 범위가 약 5분 내지 약 15분인 용출 시료의 분석방법.
  74. 제 72 항에 있어서,
    제 1 완충액으로 친화성 칼럼을 세척하는 단계; 및
    제 1 시료를 친화성 칼럼에 도입하는 단계
    를 추가로 포함하는 용출 시료의 분석방법.
  75. 분석 칼럼과 유체 연통되는 친화성 칼럼으로부터 나온 용출 시료를 분석 칼럼으로 전달하는 단계; 및
    용출 시료 중의 하나 이상의 미코톡신의 존재 여부를 측정하기 위해 분석 칼럼의 내용물을 분석하는 단계
    를 포함하는, 하나 이상의 미코톡신을 잠재적으로 함유하는 용출 시료의 분석방법.
  76. 제 75 항에 있어서,
    용출 시료가 검출가능한 양의 아플라톡신 B1, 아플라톡신 G1 , 아플라톡신 Q1, 아플라톡신 B2, 아플라톡신 G2, 또는 이들의 조합을 포함하는 용출 시료의 분석방법.
  77. 분석 칼럼과 유체 연통되는 친화성 칼럼으로부터 나온 용출 시료를 분석 칼럼으로 전달하는 단계; 및
    용출 시료 중의 엽산, 비타민 B12(사이아노코발라민), 또는 이들의 조합의 존재 여 부를 측정하기 위해 분석 칼럼의 내용물을 분석하는 단계
    를 포함하는, 엽산, 비타민 B12(사이아노코발라민), 또는 이들의 조합을 잠재적으로 함유하는 용출 시료의 분석방법.
  78. 에스트로겐 활성을 갖는 하나 이상의 화합물에 선택적으로 결합할 수 있는 하나 이상의 리간드가 결합되어 있는 경질 지지체를 함유하는 친화성 칼럼에 시료를 도입하는 단계
    를 포함하는, 에스트로겐 활성을 갖는 하나 이상의 화합물을 잠재적으로 함유하는 시료의 분석방법.
  79. 제 78 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가 천연 인간 에스트로겐 수용체, 재조합 인간 에스트로겐 수용체(hER) 또는 이의 유도체, 에스트로겐 수용체 또는 이의 유도체의 생물학적 활성 부분을 모방한 재조합 단백질, 또는 내분비계 교란물질로서 생물학적 활성 부분 상의 화합물을 선택적으로 인식하는 임의의 다른 리간드를 포함하는 시료의 분석방법.
  80. 제 78 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가 재조합 인간 에스트로겐 수용체(hER)를 포함하는 시료의 분 석방법.
  81. 제 78 항에 있어서,
    시료를 경질 지지체 및 그 위의 리간드와 접촉시키는 단계;
    에스트로겐 활성을 나타내지 않는 어떤 시료 성분을 씻어 버리기 위해 상기 경질 지지체를 세척하는 단계;
    용출액이 경질 지지체 상의 리간드에 결합한 에스트로겐 활성을 갖는 하나 이상의 화합물과 접촉하도록 용출액을 친화성 칼럼 내로 도입하는 단계;
    에스트로겐 활성을 갖는 화합물을 함유하는 용출 시료를 생성하는 시간 동안 상기 용출액을 경질 지지체와 접촉시키는 단계; 및
    용출 시료 중의 에스트로겐 활성을 갖는 하나 이상의 화합물의 존재 여부를 측정하기 위해 분석 칼럼의 내용물을 분석하는 단계
    를 추가로 포함하는 시료의 분석방법.
  82. 제 81 항에 있어서,
    경질 지지체가 약 200bar까지의 칼럼 압력에 견딜 수 있으며, 친화성 칼럼이 분석 칼럼과 유체 연통되는 시료의 분석방법.
  83. 하나 이상의 분석물을 잠재적으로 함유하는 시료의 분석방법으로서,
    상기 방법은 경질 지지체를 함유하는 친화성 칼럼에 시료를 도입하는 단계를 포함 하고, 이때 상기 경질 지지체는 다수의 무기 입자를 포함하며, 상기 각 입자는 무기 기질; 무기 기질에 비-분석물질 및 리간드-특이적 분석물질의 비특이적 결합을 감소시키는 변성 기질 표면; 및 무기 기질에 결합된 하나 이상의 리간드를 포함하며, 상기 하나 이상의 리간드는 단일클론 항-아플라톡신 B1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 Q1 항체, 단일클론 항-아플라톡신 B2 항체, 단일클론 항-아플라톡신 G2 항체, 단일클론 항-비스페놀 A 항체, 단일클론 항-2,4-다이클로로페녹시 아세트산 항체, 단일클론 항-2,4,5-트라이클로로페녹시 아세트산 항체, 단일클론 항-4-클로로-2-메틸 아세트산 항체, 단일클론 항-4-(2,4-다이클로로페녹시)부티르산 항체, 단일클론 항-에스트론 항체, 단일클론 항-17-β-에스트라디올 항체, 단일클론 항-17-α-에티닐에스트라디올 항체, 단일클론 항-락토페린 항체, 단일클론 항-테스토스테론 항체, 단일클론 항-노르테스토스테론 항체, 단일클론 항-페닐유레아 항체, 단일클론 항-빈클로졸린 항체, 단일클론 항-엽산 항체, 단일클론 항-비타민 B12(사이아노코발라민) 항체, 단일클론 항-페니트로티온 항체, 단일클론 항-클로피리포스 항체, 단일클론 항-피리미포스 항체, 단일클론 항-카테콜 아민 항체, 재조합 인간 에스트로겐 수용체(hER), 또는 이들의 조합을 포함하며;
    시료를 경질 지지체 및 그 위의 리간드와 접촉시키는 단계;
    리간드에 결합하지 않는 어떤 시료 성분을 씻어 버리기 위해 상기 경질 지지체를 세척하는 단계;
    용출액이 경질 지지체 상의 리간드에 결합한 하나 이상의 리간드와 접촉하도록 용출액을 친화성 칼럼 내로 도입하는 단계;
    하나 이상의 분석물을 잠재적으로 함유하는 용출 시료를 생성하는 시간 동안 상기 용출액을 경질 지지체와 접촉시키는 단계; 및
    시료 중의 하나 이상의 분석물의 존재 여부를 측정하기 위해 분석 칼럼의 내용물을 분석하는 단계
    를 포함하는 시료의 분석방법.
  84. 제 83 항에 있어서,
    변성 기질 표면이 무기 기질에 부착된 하나 이상의 R10기를 포함하며, 각 R10기가 -CH2OH, -CH(OH)2, -CH(OH)CH3, -CH2CH2OH, -C(OH)2CH3, CH2CH(OH)2 및 -CH(OH)CH2(OH)로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되는 시료의 분석방법.
  85. 제 84 항에 있어서,
    하나 이상의 R10기가 2가 잔기인 -X-를 통하여 무기 기질에 부착되는 시료의 분석방법.
  86. 제 83 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가, 무기 기질 상의 반응 부위와 하나 이상의 리간드 상의 작용 기 사이에 링크를 형성하는 하나 이상의 링커를 통하여 무기 기질에 부착되는 시료의 분석방법.
  87. 제 86 항에 있어서,
    하나 이상의 링커가, 다이알데하이드와 조합된 아미노-치환된 실록산을 포함하는 시료의 분석방법.
  88. 제 87 항에 있어서,
    아미노-치환된 실록산이 아미노프로필트라이메톡시실레인을 포함하며, 다이알데하이드가 글루타르알데하이드를 포함하는 시료의 분석방법.
  89. 제 83 항에 있어서,
    하나 이상의 리간드가 무기 기질 상의 반응 부위에 직접 부착되는 시료의 분석방법.
  90. 제 83 항에 있어서,
    변성 기질 표면이 반응 부위를 포함하며, 이때 약 50% 내지 약 99%의 반응 부위가 변성화 전에 기질 표면 상의 작용기보다 적은 반응성을 갖는 R기로 커버되며, 약 50% 내지 약 1%의 반응 부위가 하나 이상의 리간드 또는 임의의 링커로 커버되는 시료의 분석방법.
  91. 제 90 항에 있어서,
    약 70% 내지 약 95%의 반응 부위가 변성화 전에 기질 표면 상의 작용기보다 적은 반응성을 갖는 R기로 커버되며, 약 30% 내지 약 5%의 반응 부위가 하나 이상의 리간드 또는 임의의 링커로 커버되는 시료의 분석방법.
  92. 제 83 항에 있어서,
    경질 지지체가 다수의 실리카겔 입자를 포함하는 시료의 분석방법.
  93. 제 92 항에 있어서,
    실리카겔 입자가 구형 형상을 가지며, 약 500Å 내지 약 800Å의 평균 기공 크기를 갖는 시료의 분석방법.
  94. (1) 무기 기질 표면의 적어도 제 1 부분에, 부착 단계 이전의 무기 기질 표면 상의 어떤 작용기보다 반응성이 적은 R기를 부착하는 단계;
    (2) 무기 기질 표면의 적어도 제 2 부분에, 알데하이드 작용기를 포함하는 하나 이상의 링커를 부착하는 단계; 및
    (3) 하나 이상의 링커에 하나 이상의 리간드를 선택적으로 결합하는 단계
    를 포함하는, 무기 기질을 포함하는 경질 지지체의 제조방법.
  95. 제 94 항에 있어서,
    (2) 단계가 (1) 단계 이전에 실시되는 경질 지지체의 제조방법.
  96. 제 94 항에 있어서,
    하나 이상의 링커가, 다이알데하이드와 조합된 아미노-치환된 실록산을 포함하는 경질 지지체의 제조방법.
  97. 제 96 항에 있어서,
    아미노-치환된 실록산이 아미노프로필트라이메톡시실레인을 포함하며, 다이알데하이드가 글루타르알데하이드를 포함하는 경질 지지체의 제조방법.
  98. (1) 관상 구조의 제 1 단부를 실링하는 단계;
    (2) 관상 구조의 칼럼 공동(cavity)을 제 16 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항의 경질 지지체 또는 제 94 항 내지 제 97 항 중 어느 한 항의 방법으로 제조된 경질 지지체로 적어도 부분적으로 충전하는 단계;
    (3) 관상 구조의 칼럼 공동을 제 1 완충액으로 적어도 부분적으로 충전하여 경질 지지체를 캡슐화하는 단계; 및 임의적으로
    (4) 관상 구조의 반대편 단부를 실링하는 단계
    를 포함하는 친화성 칼럼의 제조방법.
KR1020077003777A 2004-07-19 2005-07-19 장치 부재 및 분석물의 존재를 검출하기 위한 장치 부재의사용방법 KR20070037511A (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US58907404P 2004-07-19 2004-07-19
US60/589,074 2004-07-19

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20070037511A true KR20070037511A (ko) 2007-04-04

Family

ID=35262130

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020077003777A KR20070037511A (ko) 2004-07-19 2005-07-19 장치 부재 및 분석물의 존재를 검출하기 위한 장치 부재의사용방법

Country Status (14)

Country Link
US (1) US20080261330A1 (ko)
EP (1) EP1778377A2 (ko)
JP (1) JP2008506961A (ko)
KR (1) KR20070037511A (ko)
CN (1) CN101031344A (ko)
AU (1) AU2005263602A1 (ko)
BR (1) BRPI0513526A (ko)
CA (1) CA2574634A1 (ko)
IL (1) IL180800A0 (ko)
MX (1) MX2007000775A (ko)
NO (1) NO20070875L (ko)
RU (1) RU2007105877A (ko)
WO (1) WO2006008143A2 (ko)
ZA (1) ZA200701429B (ko)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2090361A1 (en) * 2008-02-14 2009-08-19 RESQ Lab B.V. Improved chromatography resin, and methods and devices related thereto.
CN102621340A (zh) * 2012-04-16 2012-08-01 北京莱伯泰科仪器有限公司 一种全自动黄曲霉毒素分析***
CN103743913B (zh) * 2014-01-23 2015-07-08 福建农林大学 快速鉴定与黄曲霉毒素b1互作的宿主蛋白的方法
JP6331485B2 (ja) * 2014-03-04 2018-05-30 株式会社島津製作所 液体クロマトグラフ及び液体クロマトグラフ分析方法
CN104784973A (zh) * 2015-04-24 2015-07-22 重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心 净化***和莱克多巴胺复合免疫亲和柱及其制备方法与应用
CN104931571A (zh) * 2015-06-15 2015-09-23 中国电子工程设计院 一种免疫传感器及其制备方法和2,4-d的检测方法
CN106731007A (zh) * 2017-01-23 2017-05-31 北京美正生物科技有限公司 一种双酚a适配体亲和柱及其制备方法和用途
CN106693443A (zh) * 2017-01-23 2017-05-24 北京美正生物科技有限公司 一种维生素b12适配体亲和柱及其制备方法和用途
CN114041052A (zh) * 2019-06-26 2022-02-11 沃特世科技公司 具有固定的亲和配体和酶的涂层及其在液相色谱测定中的用途
CN112946153B (zh) * 2021-02-03 2022-10-21 仲恺农业工程学院 一种同时测定塑料桶装植物油中多种污染物的方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4298500A (en) * 1980-05-05 1981-11-03 Varian Associates, Inc. Mixed phase chromatographic compositions
EP0064833B1 (en) * 1981-04-27 1986-06-25 The Public Health Laboratory Service Board High pressure liquid affinity chromatography
US4818687A (en) * 1985-02-28 1989-04-04 Massachusetts Institute Of Technology Affinity column and process for detection of low molecular weight toxic substances
AU4800090A (en) * 1988-12-05 1990-06-26 Primus Corporation Method for determination of glycated proteinaceous species
US5371262A (en) * 1993-03-10 1994-12-06 Gelest, Inc. Hydroxymethyltrialkoxysilanes and methods of making and using the same
JP3737516B2 (ja) * 1995-06-26 2006-01-18 パーセプティブ バイオシステムズ，インコーポレーテッド 高速自動化連続流、多次元分子選別および分析
EP1255603A1 (en) 2000-02-09 2002-11-13 RESQ Lab B.V. Packing materials for separation of biomolecules
US7691645B2 (en) * 2001-01-09 2010-04-06 Agilent Technologies, Inc. Immunosubtraction method
US6802966B2 (en) * 2001-08-14 2004-10-12 W. R. Grace & Co. Conn. Solid compositions for selective adsorption from complex mixtures

Also Published As

Publication number Publication date
ZA200701429B (en) 2008-07-30
NO20070875L (no) 2007-04-19
IL180800A0 (en) 2007-07-04
WO2006008143A3 (en) 2006-09-14
JP2008506961A (ja) 2008-03-06
CA2574634A1 (en) 2006-01-26
MX2007000775A (es) 2007-04-02
BRPI0513526A (pt) 2008-05-06
RU2007105877A (ru) 2008-08-27
CN101031344A (zh) 2007-09-05
WO2006008143A2 (en) 2006-01-26
AU2005263602A1 (en) 2006-01-26
US20080261330A1 (en) 2008-10-23
EP1778377A2 (en) 2007-05-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20070037511A (ko) 장치 부재 및 분석물의 존재를 검출하기 위한 장치 부재의사용방법
Schiel et al. Applications of silica supports in affinity chromatography
Křenková et al. Immobilized microfluidic enzymatic reactors
Jiang et al. Affinity monoliths for ultrafast immunoextraction
Van Emon et al. Bioseparation and bioanalytical techniques in environmental monitoring
Moser et al. Immunoaffinity chromatography: an introduction to applications and recent developments
AU709290B2 (en) IgG separation medium and novel protein A variant
US7166213B2 (en) Solid compositions for selective adsorption from complex mixtures
US5545317A (en) Liquid column packing materials and method for making the same
WO2000070012A1 (en) Metal chelating filters and metal chelate filters
US20050029196A1 (en) Packing materials for separation of biomolecules
US10866235B2 (en) Methods for binding biologically active molecules to surfaces
EP0394398A1 (en) NANOPARTICLES WITH BONDED ENZYME AND LIGAND FOR USE IN ANALYZES.
Pichon et al. Immunosorbents in microextraction
AU2002355940A1 (en) Solid compositions for selective adsorption from complex mixtures
US8053565B2 (en) Multi-media affinity column to prevent leaching of ligands
WO2004100887A2 (en) Three-dimensional solid phase extraction surfaces
Pichon et al. Immunosorbents in sample preparation
EP1255603A1 (en) Packing materials for separation of biomolecules
CN112114074A (zh) 乳铁蛋白适配体亲和柱及其制备方法与应用
Jackson et al. Principles and applications of immunoaffinity chromatography
US7589183B2 (en) Prevention of leaching of ligands from affinity-based purification systems
Turkova Affinity chromatography
WO2002018564A1 (en) Derivatized potassium silicate supports
Liebenberg Non-covalent immobilisation of a ligand system: a new approach to affinity separation

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid