CN102621340A - 一种全自动黄曲霉毒素分析*** - Google Patents

一种全自动黄曲霉毒素分析*** Download PDF

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张晓辉
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田春明
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Abstract

本发明提供一种全自动黄曲霉毒素分析***，其包括：一全自动固相萃取***，其用于进行固相萃取；一两位六通阀，其内设有一捕集柱，两位六通阀具有六个口，捕集柱连接在第三口及第六口之间，第五口连接所述的全自动固相萃取***的输出，第四口连接一废液瓶；一高效液相色谱***，其包括一液相色谱柱、一柱后衍生装置、一第一输液泵及一荧光检测器，液相色谱柱与两位六通阀的第一口相连，第一输液泵与所述的两位六通阀的第二口相连，所述的柱后衍生装置与所述的液相色谱柱相连，用于对色谱柱流出物进行柱后衍生，所述的荧光检测器与所述的柱后衍生装置相连，用于进行荧光检测。本发明可以完全在无人值守的条件下完成批量黄曲霉毒素的自动化分析。

Description

一种全自动黄曲霉毒素分析***
技术领域
本发明涉及一种全自动黄曲霉毒素分析***，本***可以自动的完成黄曲霉毒素分析的样品前处理以及分离分析。
背景技术
黄曲霉毒素(Aflatoxins)是黄曲霉(Aspergillus Flavus)和寄生曲霉(A.parasiticus)等的代谢产物，主要存在于霉变的花生、谷物、果仁和大米等食品中。1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WTO)的癌症研究机构划定为天然存在的一类致癌物质，是一种毒性极强的剧毒物质，对人体具有严重的威胁。黄曲霉毒素是一组化学结构类似、致毒基团相同的化合物，目前已经鉴定出1 8种，主要是黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2以及由B1、B2在体内经过羟基化而衍生成的代谢产物M1、M2。世界各国及地区都对黄曲霉毒素的限量标准做出格的规定，且限量要求日益严格。目前检测黄曲霉毒素的方法主要有薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、酶联免疫吸附法、放射免疫测定法、免疫亲和层析柱-高效液相色谱法、免疫层析柱-荧光光度法等。薄层色谱法，耗时且需要大量接触标准品，不利于操作者的健康以及环保、并且灵敏度较低。放射免疫测定法，存在放射线辐射和污染问题。酶联免疫吸附测定法重现性差、试剂寿命短。免疫亲和层析净化-高效液相色谱法，通过免疫亲和净化柱进行净化，采用高效液相色谱极性分离，在进行柱后衍生后采用荧光检测器进行检测，此方法分析时间短，灵敏度高，重现性好，已经被GB/T18979-2003、GB/T23212-2008采用。但是采用此方法进行黄曲霉毒素分析的过程中，仍然需要进行较为复杂的样品前处理操作，仍然会接触到标准品。虽然现在已经有自动的固相萃取设备可以自动的对样品进行净化，但净化后仍然需要人工进行定容以及后续分析仪器的进样工作。从而影响了整个分析过程的效率，并且增加了黄曲霉毒素对分析工作者危害的机会。最近也有报道采用在线免疫亲和固相萃取-高效液相色谱联机方法进行黄曲霉毒素。但是使用的免疫亲和固相萃取柱是特殊定制的，不能和现在广泛使用的针筒式固相萃取柱方法进行直接的方法嫁接；并且由于免疫亲和固相萃取柱寿命有限，在反复使用后萃取效果会明显下降，影响分析。并且在进行此类在线免疫亲和固相萃取-高效液相色谱联机分析时，还需要综合考虑固相萃取部分流速与高效液相色谱的适应性，从而使条件的选择受到很大的限制。
因此，如何将上述问题加以解决，而提供一种全自动黄曲霉毒素分析***，即为本领域技术人员的研究方向所在。
发明内容
本发明的主要目的是提供一种全自动黄曲霉毒素分析***，其通过采用切换阀和捕集柱把一个全自动固相萃取装置和一个配备自动柱后衍生装置和荧光检测器的高效液相色谱***进行联机，通过控制软件实现***的自动化分析运行，数据采集，数据处理等一系列的操作。
为了达到上述目的，本发明提供一种全自动黄曲霉毒素分析***，其包括：
一全自动固相萃取***，其用于进行固相萃取；
一两位六通阀，其内设有一捕集柱，所述的两位六通阀具有六个口，所述的捕集柱连接在第三口及第六口之间，第四口连接一废液瓶，第五口连接所述的全自动固相萃取***的输出；以及
一高效液相色谱***，其包括一液相色谱柱、一柱后衍生装置、一第一输液泵及一荧光检测器，所述的液相色谱柱与所述的两位六通阀的第一口相连，所述的第一输液泵与所述的两位六通阀的第二口相连，所述的柱后衍生装置与所述的液相色谱柱相连，用于对色谱流出物进行柱后衍生，所述的荧光检测器与所述的柱后衍生装置相连，用于进行荧光检测。
较佳的实施方式中，所述的全自动固相萃取***包括一注射泵、一多位选择阀、一萃取装置，所述的注射泵与所述的多位选择阀相连，用于控制流速及进行正压的固相萃取，所述萃取装置与所述的多位选择阀相连，用于实现多个固相萃取柱的自动切换。
较佳的实施方式中，所述的萃取装置使用针筒式固相萃取柱。
较佳的实施方式中，所述的萃取装置使用在线式免疫亲和固相萃取柱。
较佳的实施方式中，所述的捕集柱为一色谱柱。
较佳的实施方式中，所述的捕集柱为一个4.6mm×10mm，内装10微米粒径C18填料的色谱柱。
较佳的实施方式中，所述的全自动固相萃取***还包括一第二输液泵，其与所述的柱后衍生装置相连，用于输送衍生液。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：实现了***的自动化分析运行，数据采集，数据处理等一些列的操作，可以完全在无人值守的条件下完成批量黄曲霉毒素的自动化分析。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明一种全自动黄曲霉毒素分析***组成示意图。
附图标记说明：11-全自动固相萃取***；111-注射泵；112-多位选择阀；113-萃取装置；12-两位六通阀；121-捕集柱；13-高效液相色谱***；131-液相色谱柱；132-柱后衍生装置；133-荧光检测器；134-第一输出泵；135-第二输出泵。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
如图1所示，为本发明的一种全自动黄曲霉毒素分析***组成示意图，本发明的一种全自动黄曲霉毒素分析***，包括：一全自动固相萃取***11、一两位六通阀12，及一高效液相色谱***13，其中，
所述的全自动固相萃取***11主要包括一注射泵111、一多位选择阀112及一萃取装置113，固相萃取采用正压操作，通过所述注射泵111进行精确的样品及各种溶剂和气体的计量和输送等操作，所述的的注射泵111连接多位选择阀112，多位选择阀112用于实现自动溶剂选择以及样品加载。
萃取装置113部分可以使用常规1ml、3ml以及6ml等针筒式或者在线式免疫亲和固相萃取柱，并且此部分可以自动的实现多个固相萃取柱的自动切换。
所述的两位六通阀12，其内设有一捕集柱121，所述的两位六通阀12具有六个口，所述的捕集柱121连接在第三口及第六口之间，第五口与所述的萃取装置113部分的输出口相连，第四口连接一废液瓶，第一口及第二口均与所述的高效液相色谱***13相连；
所述的高效液相色谱***13包括一液相色谱柱131、一柱后衍生装置132、荧光检测器133、一第一输出泵134及一第二输出泵135，所述的液相色谱柱131与所述的两位六通阀12的第一口相连，所述的第一输液泵134与所述的两位六通阀的第二口相连，所述的柱后衍生装置132与所述的液相色谱柱131及所述的第二输液瓶135相连，用于对色谱流出物进行柱后衍生，并将衍生液通过所述第二输液瓶135排出，所述的荧光检测器133与所述的柱后衍生装置132相连，用于进行荧光检测。本发明的高效液相色谱***是采用一套常规的具有柱后衍生***和荧光检测器的***，最高耐压、流量精度、色谱柱、柱后衍生装置控制精度，荧光检测器精度等能满足黄曲霉毒素的分析要求即可。柱后衍生装置132采用过溴化钠为衍生试剂，在一定流速和温度下对色谱流出物进行柱后衍生。
上述的捕集柱可采用一个4.6mm×10mm，内装10微米粒径C18填料的色谱柱，也可以采用其它尺寸或者填料，只要能保证能在一定条件下能将固相萃取洗脱液从免疫亲和柱上洗脱下来的黄曲霉毒素捕集住；并且还能保证黄曲霉毒素被色谱流动相洗脱下来并且不影响色谱分离效果，亦或可以被另外一种溶剂洗脱下来并富集在液相色谱分离柱的柱头，并能进行有效的色谱分离。
本发明的全自动黄曲霉毒素分析***的详细工作过程如下：
1、通过全自动固相萃取装置11的自动固相萃取柱切换装置将固相萃取柱切入全自动固相萃取的流路***，同时高效液相色谱***开始对分离柱进行平衡；
2、全自动固相萃取***11的注射泵111吸取一定量的活化液并按照一定流速对免疫亲和固相萃取柱进行活化；
3、全自动固相萃取***11的注射泵111吸取一定量的提取好的黄曲霉毒素待分析样品，按照一定流速加载到免疫亲和固相萃取柱上。
4、全自动固相萃取***11的注射泵111吸取一定量的淋洗液，并按照一定的速度将杂质洗去。
5、全自动固相萃取***11的注射泵111吸取一定量的洗脱液，并按照一定的流速将黄曲霉毒素洗脱到捕集柱131上，捕集柱131同时将黄曲霉毒素捕集住。
6、两位六通阀12切换，将捕集柱131切入高效液相色谱分离流路，对黄曲霉毒素进行分离。
7、经分离的黄曲霉毒素在柱后衍生装置132中与衍生液进行反应，并进入荧光检测器133进行检测。
8、计算机记录数据，并进行计算。
9、全自动固相萃取***11将下一免疫亲和固相萃取柱切入全自动固相萃取的流路***，进行下一个样品的自动分析。
综上所述，本发明采用切换阀和捕集柱把一个全自动固相萃取装置和一个配备自动柱后衍生装置和荧光检测器的高效液相色谱***进行联机，实现了***的自动化分析运行，数据采集，数据处理等一些列的操作，可以完全在无人值守的条件下完成批量黄曲霉毒素的自动化分析。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。

Claims (7)

1.一种全自动黄曲霉毒素分析***，其特征在于，其包括：
一全自动固相萃取***，其用于进行固相萃取；
一两位六通阀，其内设有一捕集柱，所述的两位六通阀具有六个口，所述的捕集柱连接在第三口及第六口之间，第四口连接一废液瓶，第五口连接所述的全自动固相萃取***的输出；以及
一高效液相色谱***，其包括一液相色谱柱、一柱后衍生装置、一第一输液泵及一荧光检测器，所述的液相色谱柱与所述的两位六通阀的第一口相连，所述的第一输液泵与所述的两位六通阀的第二口相连，所述的柱后衍生装置与所述的液相色谱柱相连，用于对色谱柱流出物进行柱后衍生，所述的荧光检测器与所述的柱后衍生装置相连，用于进行荧光检测。
2.根据权利要求1所述的一种全自动黄曲霉毒素分析***，其特征在于，所述的全自动固相萃取***包括一注射泵、一多位选择阀、一萃取装置，所述的注射泵与所述的多位选择阀相连，用于控制流速及进行正压的固相萃取，所述萃取装置与所述的多位选择阀相连，用于实现多个固相萃取柱的自动切换。
3.根据权利要求2所述的一种全自动黄曲霉毒素分析***，其特征在于，所述的萃取装置使用针筒式固相萃取柱。
4.根据权利要求2所述的一种全自动黄曲霉毒素分析***，其特征在于，所述的萃取装置使用在线式免疫亲和固相萃取柱。
5.根据权利要求1至4任一项所述的一种全自动黄曲霉毒素分析***，其特征在于，所述的捕集柱为一色谱柱。
6.根据权利要求1至4任一项所述的一种全自动黄曲霉毒素分析***，其特征在于，所述的捕集柱为一个4.6mm×10mm，内装10微米粒径C18填料的色谱柱。
7.根据权利要求1所述的一种全自动黄曲霉毒素分析***，其特征在于，所述的全自动固相萃取***还包括一第二输液泵，其与所述的柱后衍生装置相连，用于输送衍生液。
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