KR20040086422A

KR20040086422A - 항-Αβ 항체 및 이의 용도

Info

Publication number: KR20040086422A
Application number: KR10-2004-7013038A
Authority: KR
Inventors: 바르드로프미셸; 보어만베른드; 브록하우스만프레드; 후버발터; 크레츠쉬마르티투스; 뢰닝코린나; 로에처한스루에디; 노르드스테트크리스터; 로테크리스틴
Original assignee: 에프. 호프만-라 로슈 아게; 모르포시스 아게
Priority date: 2002-02-20
Filing date: 2003-02-20
Publication date: 2004-10-08
Also published as: BRPI0307837B1; US8329886B2; ZA200406604B; EP2368907B1; RU2004128259A; AU2003218995A1; JP4383888B2; HRP20040712B1; US20050169925A1; AR038568A1; IL163563A; IL163563A0; ES2590684T3; PL372269A1; NO336112B1; KR101038828B1; JP2009171972A; EP2368907A3; HUE030591T2; EP2368907A2

Abstract

본 발명은 β-A4 펩티드의 2개의 영역들을 특이적으로 인식할 수 있는 항체 분자들, 본 발명의 항체 분자들을 코딩하는 핵산 분자들 및 이 핵산 분자들을 포함하는 벡터와 숙주, 및 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물, 바람직하게는 약학 조성물 또는 진단 조성물 뿐만 아니라, 본 발명의 항체 분자들, 핵산 분자들, 벡터 또는 숙주들의 특이적 용도에 관한 것으로서, 상기 2개의 영역들중 제1 영역은 서열 번호 1로 표시되는 아미노산 서열 AEFRHDSGY 또는 이의 단편을 포함하며, 제2 영역은 서열 번호 2로 표시되는 아미노산 서열 VHHQKLVFFAEDVG 또는 이의 단편을 포함하는 것을 특징으로 한다.

Description

항-Αβ 항체 및 이의 용도{ANTI-Αβ ANTIBODIES AND THEIR USE}

본 발명은 β-A4 펩티드의 2개 영역을 특이적으로 인식할 수 있는 항체 분자들에 관한 것이며, 제1 영역은 서열 번호 1로 표시되는 아미노산 서열 AEFRHDSGY 또는 이의 단편을 포함하며, 제2 영역은 서열 번호 2로 표시되는 아미노산 서열 VHHQKLVFFAEDVG 또는 이의 단편을 포함한다. 또한, 본 발명의 항체 분자들을 코딩하는 핵산 분자들과 상기 핵산 분자들을 포함하는 벡터와 숙주를 기재하고 있다. 또한, 본 발명은 본 발명의 항체 분자들, 핵산 분자들, 벡터 또는 숙주의 특별한 용도 뿐만 아니라 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물, 바람직하게는 약학 조성물 또는 진단 조성물을 제공한다.

본 명세서의 원문 도처에서 몇몇 문헌들을 인용하였다. 여기서 인용되는 각각의 문헌들(특정 제조업자 명세서, 설명 등을 포함함)은 참고문헌으로서 여기에 통합하였다.

모든 치매의 경우 약 70 %는 인식에 결정적인 신경 회로와 뇌 영역의 선택적 손상과 관련되는 알츠하이머 질환이 원인이다. 알츠하이머 질환은 특히 아밀로이드 침착(amyloid deposit)과 약해진 후광(defused halo)의 밀집 코어(dense core)를 주로 함유하는 다수의 아밀로이드 플라크(amyloid plaque)과 해마회(hippocampus)의 추체세포(pyramidal neuron)에서의 신경원섬유 변화(neurofibrillary tangle)에 의해 특성을 나타낸다.

세포외 축색반(extracellular neuritic plaque)은 대량의 우세한 섬유질화 펩티드("아밀로이드 β(amyloid β)","A-베타(A-beta), "Aβ4", "β-A4" 또는 "Aβ"라고 말함)를 함유한다: Selkoe (1994), Ann. Rev. Cell Biol. 10, 373-403, Koo(1999), PNAS Vol. 96, pp. 9989-9990, US 4,666,829 or Glenner (1984), BBRC 12, 1131 참조. 상기 아밀로이드 β는 "알츠하이머 전구체 단백질/β-아밀로이드 전구체 단백질(Alzheimer precursor protein/β-amyloid precursor protein)"(APP)로부터 유도된다. APP는 내재성 막 당단백질(integral membrane glycoprotein)이며(Sisodia (1992), PNAS Vol. 89, pp. 6075 참조), 플라즈마 막 단백질분해효소, α-세크라타제(secretase)에 의해 Aβ 서열 내에서 내부 단백질 가수 분해로 분열된다(Sisodia (1992), loc. cit. 참조). 또한, 추가의 세크라타제 활성, 특히 β-세크라타제와 γ-세크라타제 활성은 39개의 아미노산(Aβ39), 40개의 아미노산(Aβ40), 42개의 아미노산(Aβ42) 또는 43개의 아미노산(Aβ43)중에 하나를 포함하는 아밀로이드-β(Aβ)의 세포외 분비를 유도한다: Sinha (1999), PNAS 96, 11094-1053; Price (1998), Science 282, 1078 to 1083; WO 00/72880 or Hardy (1997), TINS 20, 154 참조.

Aβ는 몇 개의 자연적으로 발생하는 형태를 가지는 것이 알려져 있고, 인간 형태는 상기에서 언급된 Aβ39, Aβ40, Aβ41, Aβ42 및 Aβ43를 나타낸다. 가장 우세한 형태인, Aβ42는 (N-말단으로부터 개시되는) 아미노산 서열: DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA(서열 번호 27)을 가진다. Aβ41, Aβ40 및 Aβ39에서, C-말단 아미노산 A, IA 및 VIA는 각각 손실되었다. Aβ43-형태에서 추가의 트레오닌 잔기는 상기에서 기술한 서열(서열 번호 27)의 C-말단에서 포함된다.

Aβ40 원섬유를 핵화하는데 요구되는 시간은 Aβ42 원섬유를 핵화하는데 요구되는 시간 보다 현저하게 더 길게 나타난다: Koo, loc. cit. and Harper (1997), Ann, Rev. Biochem. 66, 385-407 참조. Wagner (1999), J. Clin. Invest. 104, 1239-1332에서 검토된 것과 같이, Aβ42는 축색반과 관련되어 보다 자주 발견되며, 시험관내보다 더 원섬유발생적이라고 사료된다. Aβ42는 배향된 비결정성 Aβ 펩티드의 핵 의존성 중합화에서 "시드(seed)"로서 제공된다는 것이 또한 제안되었다; Jarrett (1993), Cell 93, 1055-1058.

변형된 APP 방법 및/또는 단백질 침전물을 함유하는 세포외 반의 발생은 알츠하이머의 병변으로부터 공지된 것일 뿐만 아니라 다른 신경계 질환 및/또는 퇴행성 신경질환으로부터 고통받는 피험자로 알려져 있는 것이 강조되어야 한다. 상기 질환은 특히 다운 증후군, 아밀로이드증 더치 타입(amyloidosis Dutch type)을 갖는 유전성 뇌졸증(Hereditary cerebral hemorrhage), 파킨슨 병, ALS(amyotrophic lateral sclerosis), 크롭츠펠트 야콥 병(Creutzfeld Jacob disease), HIV-관련 치매 및 운동신경병증(motor neuropathy)을 포함한다.

아밀로이드 플라크의 병리학적 침착과 관련된 질환 및/또는 질병의 예방, 치료 및/또는 개선을 위해서, Aβ응집을 예방할 수 있으며 및/또는 이미 형성된 아밀로이드 침착 또는 아밀로이드-β 응집체의 해중합화에 유용한 β-아밀로이드 플라크 형성을 방해하는 수단과 방법이 개발되어야 한다.

따라서, 변형된 및/또는 병리학적 아밀로이드 생물의 심각한 결함을 고려하여, 아밀로이드 관련 질환을 치료하기 위한 수단과 방법이 가장 바람직한다. 특히, 병리학적 아밀로이드 응집을 방해하거나, 또는 응집된 Aβ의 해중합화를 가능하게 하는 효과적인 약물이 요구된다. 또한, 특히 아밀로이드 플라크를 검출하기 위한 진단 수단이 요망된다.

따라서, 본 발명의 기술적 문제점은 상기에서 기재된 필요에 따라야 하는 것이다.

따라서, 본 발명은 β-A4/Aβ4 펩티드의 2개 영역을 특이적으로 인식할 수 있는 항체 분자에 관한 것이며, 제1 영역은 아미노산 서열 AEFRHDSGY(서열 번호 1) 또는 이의 단편을 포함하며, 제2 영역은 아미노산 서열 VHHQKLVFFAEDVG(서열 번호 2) 또는 이의 단편을 포함한다.

본 발명의 내용에, "항체 분자(Antibody molecule)"라는 용어는 완전한 면역 글로불린 분자, 바람직하게는 IgMs, IgDs, IgEs, IgAs 또는 IgGs, 보다 바람직하게는 IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3 또는 IgG4 뿐만 아니라 상기 면역 글로불린 분자의 일부, 예컨대 Fab-단편 또는 V_L-영역, V_H-영역 또는 CDR-영역을 나타낸다. 또한, 상기 용어는 키메라 항체(chimeric antibody) 및 인간 항체(humanized antibody)들과 같은 변형된(modified) 항체 분자들 및/또는 변경된(altered) 항체 분자들을 나타낸다. 상기 용어는 또한 변형된 또한 변경된 모노클로날 또는 폴리클로날 항체뿐만 아니라 재조합으로 또는 합성으로 발생된/합성된 항체를 나타낸다. 상기 용어는 또한 온전한 항체들 뿐만 아니라 항체 단편들/이것의 일부, 예컨대 분리된 경쇄 및 중쇄, Fab, Fab/c, Fv, Fab', F(ab')₂를 나타낸다. "항체 분자(Antibody molecule)"라는 용어는 또한 항체 유도체, 양작용성(bifunctional) 항체 및 항체 구조, 예컨대 단일 사슬 Fvs(scFv), 양특이적(bispecific) scFvs 또는 항체-융합(antibody-fusion) 단백질을 포함한다. 본 발명의 "항체 분자"라는 용어의 추가의 상세한 설명은 하기에 나타내었다.

본 발명에 따르면 "특이적인 인식(specifically recognizing)"이라는 용어는 항체 분자가 여기서 규정한 β-A4의 2개 영역 각각의 2개 이상의 아미노산과 특이적으로 상호 작용하거나 및/또는 결합할 수 있다는 것을 의미한다. 상기 용어는 항체 분자의 특이성, 즉 여기서 규정한 β-A4 펩티드의 특이 영역과 또 다른 것 사이를 구별하는 능력에 관한 것이며, β-A4 펩티드 영역 또는 또 다른 것에 관한 것이 아니며, APP-관련 단백질/펩티드/(비관련) 시험-펩티드에 관한 것이 아니다. 따라서, 특이성은 당분야 및 여기서 기재하고 설명하는 방법에 의해 실험적으로 결정될 수 있다. 상기 방법은 웨스턴 블롯(Western blot), ELISA-시험, RIA-시험, ECL-시험, IRMA-시험 및 펩티드 스캔을 포함하지만 이에 제한하지는 않는다. 상기 방법은 또한 특히 첨부된 실시예에서 설명하고 있는 K_D-값의 측정을 포함한다. 상기 펩티드 스캔(펩스팟 분석(pepspot assay))은 폴리펩티드 항원에 직쇄형 에피토프를 조사하는데 일상적으로 이용된다. 폴리펩티드의 1차 서열은 또 다른 것과 겹치는 펩티드로 활성화 셀룰로오스에서 연속적으로 합성된다. 특이 항체/에피토프를 인식하거나 또는 탐지하기 위한 능력을 시험하는 항체에 의한 특정 펩티드의 인식은 당분야에 공지된 화학발광 검출 반응(chemoluminescence reaction) 또는 유사한 수단에 의해서 일정한 색상 발색(호스라디쉬(horseradish) 퍼옥시다제 및 4-클로로나프톨 및 히드로겐퍼옥시드를 갖는 2차 항체)에 의해서 점수가 기록된다. 특히, 화학 발광 검출 반응의 경우에, 반응은 정량화될 수 있다. 항체가 오버랩핑된 펩티드의 특정 세트와 반응하면 반응에 필수적인 아미노산의 최소 서열을 추론할 수 있다; 첨부된 표 2와 실시예 6의 설명 참조.

동일한 분석은 반응성 펩티드의 2개의 별개 클러스터(two distant cluster)를 나타낼 수 있으며, 상기 반응성 펩티드는 항원 폴리펩티드 내의 불연속, 즉 규칙적 입체 배열을 갖는 에피토프의 인식을 나타낸다(Geysen(1986), Mol. Immunol. 23, 709-715).

펩스팟 분석에 더하여, 표준 ELISA 분석을 실행할 수 있다. 첨부된 실시예에서 설명하는 것과 같이 작은 헥사펩티드는 단백질과 결합하여, 면역 플레이트(immunoplate)에 코팅되고, 시험할 항체와 반응시킬 것이다. 표준 색 발색(standard colour development)으로 스코어링(scoring)을 실행할 수 있다(예를 들어 호스라디쉬 퍼옥시다제를 갖는 2차 항체 및 히드로겐퍼옥시드를 갖는 테트라메틸 벤지딘). 특정 웰(well)에서의 반응은 예를 들어 450 nm의 광학밀도(optical density)에 의해 점수를 준다. 통상적인 배경(=음성 반응)은 0.1 OD이며, 통상적인 양성 반응은 1 OD일 것이다. 상기는 양성/음성의 차이(비율)가 10배 이상일 수있다는 것을 의미한다. 추가의 상세한 설명은 첨부된 실시예에서 나타내었다. 또한, β-A4 펩티드의 여기서 규정한 2개 영역의 "특이적인 인식(specifically recognizing)"하는 능력과 특이성을 측정하기 위한 정량 방법은 이하에 나타내었다.

"β-A4 펩티드의 2개 영역(two regions of the β-A4 peptide)"이라는 용어는 β-A4 펩티드의 N-말단 아미노산 2 내지 10 및 중심 아미노산 12 내지 25와 관련되는, 서열 번호 1 및 서열 번호 2에 나타나 있는 이것의 아미노산 서열로 규정된 2개 영역을 나타낸다. 본 발명의 내용에서 "β-A4 펩티드(β-A4 peptide)"라는 용어는 상기에서 기술된 Aβ39, Aβ41, Aβ43, 바람직하게는 Aβ40 및 Aβ42를 나타낸다. Aβ42는 또한 첨부된 서열 번호 27에 기술되어 있다. "β-A4 펩티드의 2개 영역(two regions of the β-A4 peptide)"이라는 용어는 또한 "에피토프(epitope)" 및/또는 "항원 결정기(antigenic determinant)"를 나타내며, 상기는 규정된 β-A4 펩티드의 2개 영역 또는 이것의 일부를 여기에 포함한다. 본 발명에 따른, 상기 β-A4 펩티드의 2개 영역은 1개 이상의 아미노산, 바람직하게는 2개 이상의 아미노산, 보다 바람직하게는 3개 이상의 아미노산, 보다 바람직하게는 4개 이상의 아미노산, 보다 바람직하게는 5개 이상의 아미노산, 보다 바람직하게는 6개 이상의 아미노산, 보다 바람직하게는 9개 이상의 아미노산 및 가장 바람직하게는 12개 이상의 아미노산에 의해서 β-A4 펩티드의 1차 구조 내에서 (아미노산 서열 수준으로) 분리된다. 첨부된 실시예에서 설명하고 여기서 나타내는 것과 같이, 본 발명의 항체들/항체 분자들은 여기서 규정하는 β-A4 펩티드의 2개 영역에 결합하거나 및/또는 탐지/반응하여, 상기 2개 영역은 1개 이상의 아미노산에 의해서 (아미노산 서열의 1차 구조 수준으로) 분리되며, 상기 2개 영역/"에피토프"를 분리하는 서열은 10개 이상의 아미노산, 바람직하게는 14개 이상의 아미노산, 보다 바람직하게는 15개 이상의 아미노산 또는 16개의 아미노산을 포함할 것이다. 예를 들어, (본 발명의 항체 분자와 같은) MSR-3 Fab는 β-A4 펩티드에서 2개 영역과 반응/탐지를 인식하며, 상기 제1 영역은 아미노산 3과 4(EF)개를 포함하며, 상기 제2 영역은 아미노산 18 내지 23(VFFAED)개를 포함한다. 따라서, 탐지되고/인식되는 영역/에피토프 사이의 분리 서열은 1차 아미노산 서열 구조에 13개의 아미노산 길이를 가진다. 유사하게, MSR-3으로부터 유도되며, IgG1-프레임워크 내에 포함된 최적화 및 성숙한 항체 분자인 MSR #3.4H7 IgG1은 여기서 규정하는 β-A4 의 제1 영역 위치 1 내지 4(DAEF)개와 제2 영역 위치 19 내지 24(FFAEDV)개 내에 포함되는 β-A4 의 2개의 에피토프/영역과 탐지/상호작용/결합한다. 따라서, MSR #3.4H7 IgG1는 1차 아미노산 서열 수준으로 14개 아미노산으로 분리된 2개의 에피토프/영역을 인식/탐지/상호작용/결합한다. 첨부된 실시예에서 상세하게 설명하고 있는 것과 같이, 전 길이 IgG1 항체로의 1가 발명적 Fab 단편의 전환 및 친화성 증강은 펩스팟, ELISA 분석 등으로 탐지되는 에피토프/영역의 특정한 넓힘(broadening)을 가져온다. 따라서, 본 발명의 항체 분자는 β-A4 펩티드/Aβ4의 2개 영역을 동시에 및 독립적으로 인식할 수 있는 능력을 가지며, 상기 영역은 서열 번호 1(또는 이의 일부)에 나타나 있는 아미노산 서열 및 서열 번호 2(또는 이의 일부(들))에 나타나 있는 아미노산 서열을 포함한다. 그러나 여기서 상세하게 설명하는 에피토프의 잠재적인 넓힘 때문에, 또한 서열 번호 1 및 2의 서열과 아주 근접하는 아미노산이 탐지되고/인식되는 것, 즉 추가의 아미노산이 탐지되고/인식되는 2개 영역의 일부인 것이 관찰되었다. 따라서, 예를 들어 상기에서 규정한 Aβ(1-42)의 제1 아미노산, 다시 말해 탐지되고/인식되는 1개의 에피토프의 일부에서 D(아스파르트산) 또는 서열 번호 2에 규정된 Aβ(1-42)의 영역이 탐지되고/인식된 이후에 위치되는 아미노산이 또한 관찰되었다. 상기 추가의 아미노산은 예를 들어 서열 번호 27(βA4/Aβ(1-42)), 즉 S(세린)의 위치 26에서의 아미노산일 것이다.

상기 용어는 또한 상기 2개 영역 또는 이것의 일부로 구성되는 규칙적 입체 배열을 갖는 에피토프(conformational epitope), 구조 에피토프 또는 불연속 에피토프를 나타낸다; 또한 Geysen(1986), loc. cit. 참조. 본 발명의 내용에서, 규칙적 입체 배열을 갖는 에피토프는 폴리펩티드가 네이티브 단백질(native protein)에 포개지는 경우에 표면에서 모이는 1차 서열에서 분리된 2개 이상의 분리된 아미노산 서열에 의해서 규정된다(Sela, (1969) Science 166, 1365 and Laver, (1990) Cell 61, 553-6). 본 발명의 항체 분자는 여기서 기재된 β-A4의 2개 영역을 포함하고 및/또는 2개 영역으로 구성되는 배좌/구조 에피토프(들)과 특이적으로 결합/상호 작용하는 것이 관찰되었다. 본 발명의 "항체 분자(antibody molecules)"는 (a) β-A4의 아미노산 2 내지 10(또는 이의 일부(들))을 포함하는 아미노산 스트레치(stretch), 및 (b) β-A4의 아미노산 12 내지 25(또는 이의 일부(들))을 포함하는 아미노산 스트레치에 동시에 및 독립적인 이중 특이성(dual specificity)을 포함하는 것으로 사료된다(서열 번호 27). 상기 스트레치의 일부 또는 단편들은 2개이상, 보다 바람직하게는 3개 이상의 아미노산을 포함한다. 바람직한 단편 또는 일부는 서열 번호 27의 제1 영역/스트레치 내에 아미노산 서열 AEFRHD, EF, EFR, FR, EFRHDSG, EFRHD 또는 HDSG가 있고, 서열 번호 27의 제2 영역/스트레치 내에 아미노산 서열 HHQKL, LV, LVFFAE, VFFAED VFFA, 또는 FFAEDV가 있다. 상기에서 언급한 것과 같이, 상기 단편들은 또한 추가의 아미노산을 포함할 것이며, 또는 여기서 규정된 단편들의 일부일 것이다. 특정 예로는 DAE, DAEF, FRH or RHDSG가 있다.

Aβ 펩티드를 특이적으로 인식하는 다수의 항체는 당분야에 공지되어 있다. 상기 항체들은 표준 기술을 사용하여 Aβ1-40 또는 Aβ1-42 또는 이들의 단편들로 동물들을 면역화시킴에 의해서 주로 수득되었다. 공개 데이터에 따르면, 완전한 Aβ펩티드(1-40 또는 1-42)로 면화화함으로써 생성되는 모노클로날 항체는 Aβ의 N-말단과 근접한 에피토프를 독점적으로 인식한다. 또한, 예로는 항체 BAP-1 및 BAP-2 (Brockhaus, 공고되지 않음)가 있고, 상기는 큰 Aβ펩티드의 안에 아미노산 4-6을 인식하며, Aβ1-40으로 쥐를 면역화함으로써 생성된다; 실시예 7의 표 2 및 실시예 12의 표 7 참조. Aβ의 중간 부분을 인식하는 항체는 아주 작은 펩티드로 면역화하여 유도된다. 예를 들어, 항체 4G8은 Aβ펩티드 1-24로 면역화함으로써 생성되며, 서열 17-24를 독점적으로 인식한다(Kim, (1988) Neuroscience Research Communications 2, 121-130). 많은 다른 모노클로날 항체들은 Aβ-유도 단편으로 쥐를 면역화함으로써 생성시키며, Aβ1-40 및 Aβ1-42의 C-말단을 인식하는 항체는 ELISA, 웨스턴 블롯 및 면역 화학 분석에 의해서 생물학적 유동체 및 조직에서 대응하는 Aβ펩티드를 정량하고 구별하기 위해 광범위하게 사용된다(Ida et al, (1996) J. Biol. Chem. 271, 22908-22914; Johnson-Wood et al., (1997), Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1994), 1550-1555; Suzuki et al., (1994), Science 264, 1336-1340; Brockhaus (1998), Neuro Rep. 9, 1481-1486). BAP-17은 Aβ단편 35-40으로 쥐를 면역화함으로써 생성된 쥐의 모노클로날 항체이다. 상기는 특이적으로 Aβ1-40의 C-말단을 인식한다(Brockhaus (1998) Neuroreport 9, 1481-1486).

T-세포 의존성 항원(T-cell dependent antigen)에 의한 면역화(immunization)는 항원 제공 세포(antigen presenting cell)의 엔도좀 내의 항원의 단백질용해성 분열(proteolytic cleavage)이 요구된다고 알려져 있다. 면역화 이후에 고 친화성 항체의 생체내 선별은 항원 제공 세포에 헬퍼 T 세포의 접촉에 의해서 진행된다. 항원 제공 세포는 단지 짧은 펩티드를 나타내며, 큰 크기의 폴리펩티드는 아니다. 따라서 상기 세포는 복잡한(그러나 잘 공지되어 있는) 기작을 가지고 있으며, 이는 항원(들)을 엔도사이토스(endocytose)하고, 엔도좀 내에 항원(들)을 분해하고, 선별된 펩티드와 적당한 MHC 클래스 II 분자를 결합하고, 및 세포 표면에 펩티드-MHC 복합체를 운반한다. 상기는 B 세포의 성숙에 도움을 제공하기 위한 목적을 가지고 T-세포에 의한 항원 특이적 인식이 발생된다. 대부분의 T 세포 도움을 받는 B 세포는 가장 좋은 기회를 가지고 항체 분비 세포로 개발되며, 증식한다. 상기는 단백질 분해에 의한 항원 처리 과정은 생체내에서 높은 친화성 항체 반응의 발생을 위한 중요한 단계이며, 종래 문헌에서 면역화에 의해 유도된 모노클로날 및 폴리클로날 항체에서 우세한 N-말단 Aβ에피토프를 설명하게 할 것이다.

대조적으로, 본 발명의 항체들/항체 분자의 선별은 항원에 Fab 발현 파아지의 물리적인 부착에 의해 유도된다. 시험관내 선별 과정과 관련한 항원의 분해는 없다. 항원을 향한 가장 높은 친화도를 갖는 Fab가 발현되는 파아지가 선별되며, 번식된다. 본 발명에 따른 특이 항체 분자를 선별하기 위해 첨부된 실시예에서 이용하는 합성 라이브러리(synthetic library)는 면역화 B 세포로부터 유도되는 라이브러리에서 종종 발견되는 단독, 연속 에피토프를 위한 특정 바이어스를 피하기 위해서 특히 적합하다.

종래 문헌은 (a) 불연속/구조/규칙적 입체 배열을 갖는 에피토프(들)를 특이적으로 인식하며 및/또는 Aβ4의 2개 영역/에피토프를 동시에 및 독립적으로 인식할 수 있는 Aβ4의 2개의 독립 영역을 인식하는 항체 분자를 기재하지 않고 있다는 것이 중요하다.

Aβ1-42로 돌연변이 인간 APP_V717F(PDAPP 쥐)를 과발현하는 형질전환 마우스의 백신화(vaccination)는 어린 동물에게 치료를 하는 경우, 즉 신경병리학의 발병 전에 뇌에 아밀로이드 침착(deposition)의 거의 완벽한 예방이 되며, 반면에 나이가 있는 동물에서는 이미 형성된 플라크(plaque)의 감소가 플라크의 항체-매개 제거(antibody-mediated clearance)의 제안이 관찰된다(Schenk et al., (1999), Nature 400, 173-177). 상기 면역화 절차에 의해 발생되는 항체들은 아미노산 3-7 주위의 에피토프를 덥는 Aβ4의 N-말단에 대항하여 반응한다(Schenk et al.,(1999), loc. cit.; WO 00/72880). Aβ1-42에 의한 활성 면역화는 또한 알츠하이머 질환에 대한 다른 형질전환 모델에서 기억 손실과 행동 손상을 감소시킨다(Janus et al., (2000) Nature 408, 979-982; Morgan et al., (2000) Nature 408, 982-985). 말초 투여된 항체들(peripherally administered antibody), 즉 수동 면역화(passive immunization) 이후의 연구들은 항체가 중추 신경계로 들어갈 수 있으며, 플라크를 장식하며, APP 형질전환 마우스(PDAPP 쥐)에서 이미 존재하는 아밀로이드 플라크의 제거를 유도한다는 것을 확인하였다(Bard et al., (2000) Nat. Med. 6, 916-919; WO 00/72880). 상기 연구들에서, 대부분의 효험이 있는 생체외와 생체내의 잠재 효능(외인성 미세아교 세포(exogenous microglial cell) 내의 식균작용(phagocytosis)의 유발)을 갖는 모노클로날 항체들은 Aβ4 N-말단 에피토프 1-5(mab 3D6, IgG2b) 또는 3-6(mab 10D5, IgG1)을 인식하는 것이다. 게다가, 쥐, 토끼 또는 원숭이에서 Aβ1-42에 의한 면역화 이후에 분리되는 폴리클로날 항체들은 유사한 N-말단 에피토프 특이성을 보이며, 또한 생체내 플라크 제거와 식균 작용 유발에 효율적이다. 대조적으로, 높은 친화도로 Aβ1-40 또는 Aβ1-42와 결합하는 C-말단 특이 항체들은 생체외 분석에서 식균작용을 유도하지 않았으며, 생체내에서 효율적이지 않았다(WO 00/72880). 모노클로날 항체 m266(WO 00/72880)은 Aβ13-28(Aβ의 중간 영역)에 대항하여 발생하며, 에피토프 맵핑으로 Aβ서열 내의 아미노산 16-24를 커버하는 항체 특이성을 확인했다. 상기 항체는 응집 Aβ와 아밀로이드 침착에 잘 결합하지 않으며 주로 가용성(단량체) Aβ, 즉 또 다른 잘 공지되며 상업적으로 이용가능한 모노클로날 항체(동일한 에피토프를 인식함)와 유사한 특성들과 주로 반응한다(4G8; Kim, (1988) Neuroscience Research Communications 2, 121-130; Signet Laboratories Inc. Dedham, MA USA에서 상업적으로 이용가능함).

생체 내, m266 항체는 말초 투여 이후에 PDAPP 마우스에 Aβ침착을 현저하게 줄이는 것을 최근에 발견하였다(DeMattos, (2001) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98, 8850-8855). 그러나, N-말단 특이성 항체와 대조적으로, m266은 생체내에서 아밀로이드 플라크를 데코레이트하지 않으며, 따라서 뇌 Aβ존재량은 (주변에 단단하게 화합된 m266에서 뇌 유도 Aβ의 축적을 야기하는) CNS와 플라즈마 Aβ사이의 평형에서 항체 유도 이동(shift)에 의해서 감소한다(DeMattos, (2001) loc. cit.).

N-말단 및 중추 에피토프에 동시에(예를 들어 여기서 기재한 것과 같이 βA4의 N-말단 및 중추 영역에 의해서 형성되는 구조/규칙적 입체 배열을 갖는 에피토프) 및 독립적으로(예를 들어 첨부된 실험 부분에서 설명하는 것과 같은 펩스팟 분석) 결합함으로써 본 발명의 항체들/항체 분자들은 단일 분자 내의 중추 에피토프-특이성 항체와 N-말단-특이성 항체의 특성들을 결합한다. 본 발명에 기재된 것과 같은 이중 에피토프 특이성을 갖는 항체들은 예를 들어 아밀로이드 플라크 존재량 또는 아밀로이드 합성 반응을 감소시키거나 또는 아밀로이드 침착과 플라크의 탐지를 위한 생체내, 특히 의학 및 진단 셋팅에 보다 더 효율적인 것으로 생각된다. Aβ4 응집 및 아밀로이드 침착의 과정에서 배좌 변화가 일어나며, 동시에 중심 에피토프는 가용성 Aβ4로 쉽게 접근하며 이는 응집되거나 또는 섬유질화(fibrillar) Aβ4에 숨거나 덜 반응성인 것을 볼 수 있다. 중심/중간 에피토프-특이성 항체m266은 가용성 Aβ4 의 중성화가 또한 중요한 파라미터가 될 수 있는 것을 생체 내에서 효과적으로 지적하는 것이 사실이다. 본 발명의 항체들/항체 분자들은 이중 에피토프 특이성 때문에 유사한 효율성을 가지는 가용성 Aβ4 와 섬유질화 Aβ4 둘 다와 결합할 수 있으며, 따라서 가용성 Aβ4 의 중성화 뿐만 아니라 아밀로이드 플라크과 상호작용하도록 한다. 본 발명의 항체 분자의 내용 안에 여기서 이용하는 "β-A4의 N-말단 및 중심/중간 에피토프와 동시에 및 독립적으로 결합함(simultaneously and independently binding to the N-terminal and central/middle epitopes of β-A4"이라는 용어는 여기에 기재되어 있는 항체들/항체 분자들이 동시에, 즉 동일한 시점(예를 들어 여기서 규정된 βA4의 중심 에피토프(또는 이의 일부(들))와 N-말단 에피토프(또는 이의 일부(들))에 의해서 형성된 규칙적 입체 배열을 갖는 에피토프/구조 에피토프에서)에 두개의 에피토프를 탐지 및/또는 결합할 수 있으나, 동일한 항체 분자는 또한 독립적인 형태, 특히 실시예에서 나타내는 펩스팟 분석에서 설명하고 있는 각각의 규정된 에피토프와 탐지/결합할 수 있다는 사실에 관한 것이다. 뇌에 항체의 직접적인 적용 이후에 PDAPP 마우스에 생체 내 아밀로이드 플라크의 제거는 IgG 서브타입에 따라서 달라지지 않으며, 또한 Fc-매개가 아닌, 즉 플라크 제거에서 활성화 미세아교세포와 관련이 없는 기작과 관련이 있을 것이다(Bacskai, (2001), Abstract Society for Neuroscience 31^stAnnual Meeting, November 10-15, 2001, San Diego). 상기 관찰은 Bard (2000), loc. cit에 의한 초기 연구에서 가정한 것과 대조적이다.

또다른 연구에서 Aβ1-28과 Aβ1-16 펩티드에 대해서 발생된 항체들은 시험관 내의 Aβ원 섬유를 분해(disaggregating)하는데 효과적인 것으로 발견되었으며, 반면에 Aβ13-28에 대한 특이적인 항체는 상기 분석에서 활성이 아주 적었다는 것이 발견되었다(Solomon, (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94, 4109-4112). 항-Aβ1-28 항체에 의한 Aβ응집의 방지도 또한 보고되어 있다(Solomon, (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93, 452-455). 동일한 연구에서, Aβ단편 8-17에 대항하여 발생된 항체 6F/3D는 Zn-유도 Aβ응집을 약간 방해하지만, 다른 응집-유도제에 의해 유도되는 자가 응집(self aggregation)에는 영향을 주지 않는다.

상기 시험관 내 분석에서 다양한 항체들의 효능은 Aβ4 응집체에 이들의 에피토프의 접근성과 관련이 있다. N-말단이 노출되고, N-말단 특이성 항체들은 명확하게 해중합을 유도하지만, 반면에 중심 영역과 C-말단은 보이지 않으며, 쉽게 접근이 용이하지 않으며, 따라서 이러한 에피토프에 대항하는 항체들은 매우 덜 효과적이다.

항체들에 대한 에피토프 접근성에 관한 연구는 응집된 Aβ에서 N-말단 에피토프는 노출되며, BAP-1 항체와 반응하지만, 반면에 중간 또는 중심 에피토프는 실제로 숨겨져있으며, 즉 4G8 항체의 결합이 관찰되지 않는다. 그러나, 단량체 Aβ에서 두개의 에피토프는 공개되어 있으며, 두개의 종래 항체들에 의해서 균일하게 인식된다.

대조적으로, 본 발명에서, 여기서 기재된 항체 분자들은 두개의 불연속 아미노산 서열, 예를 들어 Aβ펩티드상에 규칙적 입체배열을 갖는 에피토프/구조 에피토프를 인식하는 것이 놀랍게도 발견되었다. 본 발명에 따른 두개의 "불연속 아미노산 서열(discontinuous amino acid sequences)"은 각각 N-말단과 중심/중간 에피토프를 형성하는 상기 두개의 아미노산 서열이 어느 에피토프의 일부는 아니지만 두개 이상의 아미노산에 의해서 이들의 1차 구조로 β-A4에서 분리되는 것을 의미한다.

항체 Fab(=파라토프(paratope))의 결합 영역은 크기가 대략 30×30Å의 분자 표면을 차지한다(Laver, Cell 61 (1990), 553-556). 상기는 몇몇 표면 루프에 존재할 수 있는 15 내지 22 개의 아미노산 잔기와 접촉하기에 충분한다. 본 발명의 항체 분자에 의해 인식되는 불연속 에피토프는 N-말단(2 내지 10 잔기 또는 이의 일부)과 중간 Aβ펩티드 서열(12 내지 25 잔기 또는 이의 일부)은 아주 근접하여 위치하고 있는 구조와 닮았다. 상기 구조 내에는 단지, 최대수의 항체-항원이 접촉하고, 가장 낮은 자유 에너지 상태가 수득된다.

강력한 추정을 기본으로 하여, 아주 작은 서프셋 5-6 잔기(상기는 직쇄 서열로 배열되지 않고, 에피토프 표면 전반에 분산되어 배열됨)는 대부분의 결합 에너지에 기여하며, 반면에 주변 잔기는 주로 상보적 배열을 구성하는 것이 제안되었다(Laver (1990) loc. cit.).

본 발명의 항체들/항체 분자들은 응집된 Aβ와 결합할 수 있으며, AD 환자의뇌에 아밀로이드 플라크와 강하게 반응한다(첨부된 실시예에서 설명한 것과 같음). 또한, 상기는 아밀로이드 응집체를 해중합/분해할 수 있다.

이론에 의해 한정되지 않고, 규칙적 입체 배열을 갖는 에피토프/구조 에피토프(여기서 기재된 것과 같이 상기 영역의 일부(들) 또는 Aβ4의 두개의 영역에 의해서 구성됨)는 응집된 Aβ에 부분적으로 노출된다고 알려져 있다. 그러나, 중간/제2 에피토프/영역의 주요한 부분은 단독으로 상기 Aβ응집체에 쉽게 접근할 수 없다는 것이 공지되어 있다(중간 에피토프-특이성 항체들 4G8과 m266의 불량한 반응성을 기초로 함). 다른 한편으로, 상기에서 언급된 연구의 관점에서, 중간 영역의 하나 또는 몇개의 잔기는 규칙적 입체 배열을 갖는 에피토프의 성분이며, N-말단 영역으로부터의 잔기와 관련하여 본 발명의 항체에 접근가능하며, 따라서 항체-Aβ4 상호작용의 결합 에너지에 크게 기여한다. 따라서 응집된 Aβ에서 규칙적 입체 배열을 갖는 에피토프와 본 발명의 항체 분자들의 반응성은 독특하고 명백하게 당분야에서 기재되어 있는 α-Aβ4 항체들과 다르다. 상기에서 지적한 바와 같이, 본 발명의 항체들/항체 분자들의 추가의 독특한 특성은 여기서 기재된 것과 같은, 첨부된 실시예에서 β-A4의 두개의 분리 에피토프와 동시에, 및 독립적으로 결합/인식하는 이들의 능력이다.

본 발명의 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 항체 분자는 상기 항체에 의해서 특이적으로 인식되는 β-A4의 2개 이상의 영역은 배좌/구조 에피토프 또는 불연속 에피토프를 형성하는 항체 분자이다; Geysen (1986), loc. cit.; Ghoshal (2001), J. Neurochem. 77, 1372-1385; Hochleitner (2000), J. Imm. 164, 4156-4161; Laver (1990), Ioc. cit. 참조. 본 발명의 내용 안에서 "불연속 에피토프(discontinuous epitope)"라는 용어는 폴리펩티드 사슬의 구별되는 위치로부터의 잔기로부터 조립된 비직쇄형 에피토프를 의미한다. 상기 잔기들은 폴리펩티드 사슬이 3차원 구조로 포개져서, 규칙적 입체 배열을 갖는 에피토프/구조 에피토프를 구성하는 경우에 표면에 함께 모인다. 본 발명은 β-A4 내에 바람직하며 예기치 않는 에피토프를 제공하며, 결과적으로 상기 에피토프와 특이적으로 작용할 수 있는, 특이성 항체 분자가 생성된다. 상기 본 발명의 항체들/항체 분자들은 증가된 효능을 기본으로 제공하고, 부작용에 대한 가능성을 감소시킨다. 그러나, 상기에서 지적한 것과 같이, 본 발명의 항체들은 또한 예를 들어 첨부된 실시예에서 설명하는 펩스팟 분석으로 β-A4의 규정된 2개 영역/에피토프 각각과 독립적으로 작용할 수도 있다.

따라서 본 발명은 생체 내 및 시험관 내의 응집된 Aβ-원섬유를 해중합하는데 사용할 수 있으며, 및/또는 단량체 Aβ의 규칙적 입체 배열을 갖는 에피토프를 안정화 및/또는 중성화할 수 있으므로 병리학적 Aβ응집을 방지할 수 있는 독특한 수단을 제공한다.

본 발명의 항체들은 특히 알츠하이머 질환의 뇌에서 아밀로이드 플라크의 가장자리에서 Aβ침착물과 결합하며, 병리학적 프로토 원섬유(proto fibril) 및 원섬유를 효과적으로 용해시킬 수 있다는 것을 추가로 발견하였다.

바람직한 실시형태에서, 본 발명의 항체 분자는 여기서 규정된 Aβ4의 2개 영역 내에서 두개 이상의 연속적인 아미노산을 인식하며, 보다 바람직하게는 상기 항체 분자는 제1 영역에서 아미노산: AEFRHD, EF, EFR, FR, EFRHDSG, EFRHD 또는 HDSG를 포함하는 아미노산 서열과 제2 영역에서 아미노산: HHQKL, LV, LVFFAE, VFFAED, VFFA 또는 FFAEDV를 포함하는 아미노산 서열을 인식한다. 추가로 단편들또는 넓은 부분들은 DAE, DAEF, FRH 또는 RHDSG를 포함한다.

본 발명의 항체 분자는 서열 번호 3, 서열 번호 5 또는 서열 번호 7로 표시되는 핵산 분자에 의해서 코딩되는 가변 V_H-영역, 또는 서열 번호 4, 서열 번호 6 또는 서열 번호 8로 표시되는 아미노산 서열에서 나타내는 가변 V_H-영역을 포함하는 것이 특히 바람직하다. 서열 번호 3과 서열 번호 4로 표시되는 서열들은 본 발명, 모(parental) 항체 MSR-3(MS-Roche 3)의 V_H-영역의 각각 코딩 영역과 아미노산 서열을 나타내고, 서열 번호 5와 서열 번호 6의 서열들은 본 발명, 모 항체 MSR-7(MS-Roche 7)의 V_H-영역의 각각의 코딩 영역과 아미노산 서열을 나타내며, 서열 번호 7과 서열 번호 8은 본 발명, 모 항체 MSR-8(MS-Roche 8)의 V_H-영역의 각각의 코딩 영역과 아미노산 서열을 나타낸다. 따라서, 본 발명은 서열 번호 9, 서열 번호 11 또는 서열 번호 13으로 구성되는 군으로부터 선택되는 서열 번호로 표시되는 핵산 분자에 의해서 코딩되는 가변 V_L-영역, 또는 서열 번호 10, 서열 번호 12 또는 서열 번호 14로 표시되는 아미노산 서열에서 나타내는 가변 V_L-영역을 포함하는 항체 분자를 제공한다. 서열 번호 9와 서열 번호 10은 MSR-3의 V_L-영역에 대응하고, 서열 번호 11과 서열 번호 12는 MSR-7의 V_L-영역에 대응하며, 및 서열 번호 13과 서열 번호 14는 MSR-8의 V_L-영역에 대응한다. 첨부된 실시예에서 설명하는 것과 같이, 모 항체 MSR-3, MSR-7 및 MSR-8은 보다 더 나은 특성들 및/또는 결합 친화도를 갖는최적의 항체 분자를 추가로 생성시키기 위해서 이용한다. 몇몇 가능한 대응 전략을 예증하고, 첨부된 실시예에 나타내었다.

첨부된 실시예에서 설명하는 최적의 전략은 다수의 독창적이며 최적의 항체들을 유도한다. 상기 최적의 항체들은 V_H-영역의 CDR-3 영역을 이들의 모 항체들과 공유한다. 반면에 최초의 프레임워크 영역(original framework region)(첨부된 도 1에 나타나 있음)은 동일하게 유지되고, 성숙/최적의 항체 분자에서 CDR 1, CDR 2 및/또는 V_LCDR3-영역은 변화한다. 최적의 항체 분자에 대한 예증이 되는 변형된 서열 모티브는 첨부된 표 1에 나타나 있다. 따라서, 본 발명의 범주 안에 여기에 개시된 MSR-3, MSR-7 및 MSR-8로부터 유도되며, 여기서 규정된 β-A4 펩티드의 2개 영역을 특이적으로 인식하거나/2개 영역과 특이적으로 반응할 수 있는 최적의 항체 분자가 또한 있다. 특히, 여기서 규정하는 CDR-영역, 바람직하게는 CDR1들, 보다 바람직하게는 CDR1들 및 CDR2들, 가장 바람직하게는 CDR1들, CDR2들 및 CDR3들은 특히 당분야에 공지된 CDR-그래프팅 방법에 의해 추가의 독창적인 항체들/항체 분자를 생성시키는데 이용될 수 있다: Jones (1986), Nature 321, 522-515 or Riechmann (1988), Nature 332, 323-327 참조. 가장 바람직하게 독창적인 항체들/항체 분자들 뿐만 아니라 항체 단편 또는 유도체는 여기에 기재되어 있는 근원 항체들로부터 유도되며, 상기에서 기재된 것과 같이 상기 모 항체들 중 1개 이상과 V_H-영역의 CDR-3 영역을 공유한다. 하기에 설명하고 있는 것과 같이, 본 발명의 최적/성숙한 항체들/항체 분자들이라고 생각되는 교차 클로닝된(cross-cloned) 항체들이 생성된다는 것이 또한 관찰되었다. 따라서, 바람직한 항체 분자들은 서열 번호 32 내지 서열 번호 45 중 어느 것으로 표시되는 V_H-영역, 또는 서열 번호 46 내지 서열 번호 59으로 표시되는 V_L-영역으로 특징화되거나, 또는 서열 번호 60 내지 서열 번호 87 중 어느 것으로 규정된 CDR-3 영역을 포함할 수 있는 항체들/항체 분자들로부터 유도될 수도 있으며, 또는 항체들/항체 분자들을 포함할 수도 있다. 특히 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 최적 항체 분자는 각각 서열 번호 88/89 및 서열 번호 90/91, 또는 이것의 일부에 서술되어 있는 V_H-영역 및 V_L-영역을 포함한다. 이것의 일부는 (a) CDR3-영역(들), 바람직하게는 (a) CDR-영역(들)일 것이다. 최적 타입의 특히 바람직한 항체 분자는 서열 번호 94 또는 서열 번호 95로 특징화된 L-CDR3, 및/또는 서열 번호 92 또는 서열 번호 93으로 특징화된 H-CDR3를 포함한다. 본 발명의 항체들/항체 분자들은 상기 β-A4로부터 유도된 펩티드, 및/또는 β-A4와 이들의 특이적 반응성에 의해 특징을 나타내는 것이 바람직하다. 예를 들어 첨부된 실시예에서 설명하는 것과 같이 ELISA-시험에서 광학 밀도가 흡광 설정될 수 있으며, 광학 밀도의 비율은 모 항체와 최적 항체의 특이 반응성을 규정하기 위해 사용될 수 있을 것이다. 따라서, 본 발명의 바람직한 항체는 450 nm에서 측정한 광학 밀도에서 β-A4 없이 측정한 광학 밀도보다 10 배 높은, 즉 백그라운드 10 배 이상에 도달시키기 위해서 β-A4로 ELISA-시험에서 반응하는 항체이다. 바람직하게, 광학 밀도의 측정은 백그라운드 비율에 시그널을 최적화시키기 위해서 색 발생 반응의 개시 이후에 몇 분(예를 들어 1 분, 2 분, 3 분, 4 분, 5 분, 6 분또는 7 분) 실행하였다.

특히 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 항체 분자는 서열 번호 15, 서열 번호 17 또는 서열 번호 19로 표시되는 핵산 분자에 의해서 코딩된 V_L-영역의 1개 이상의 CDR3, 또는 서열 번호 16, 서열 번호 18 또는 서열 번호 20로 표시되는 V_L-영역의 1개 이상의 CDR3 아미노산 서열를 포함하며/포함하거나, 상기 항체 분자는 서열 번호 21, 서열 번호 23 또는 서열 번호 25로 표시되는 핵산 분자에 의해서 코딩된 V_H-영역의 1개 이상의 CDR3, 또는 서열 번호 22, 서열 번호 24 또는 서열 번호 26로 표시되는 V_H-영역의 1개 이상의 CDR3 아미노산 서열을 포함한다. 여기서 규정하는 V_H-영역의 1개 이상의 CDR3를 포함하는 항체가 가장 바람직하다. 상기에서 언급된 CDR3-영역은 독창적이며, 예증된 모 항체 분자 MSR-3, MSR-7 또는 MSR-8과 관련이 있다. 그러나, 첨부된 표 1, 8 또는 10에 설명되어 있는 것과 같이, 첨부된 실시예에서 개시하고 있는 방법에 의해서 수득 가능한 성숙 및/또는 최적의 항체 분자는 변형된 V_H-영역, V_L-영역, CDR1 영역, CDR2 영역 및 CDR3 영역을 포함할 것이다. 따라서, 본 발명의 항체 분자는 MSR-3, MSR-7 및 MSR-8, 또는 MSR-3, MSR-7 또는 MSR-8의 친화-성숙 버젼으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다. MSR-3, MSR-7 및 MSR-8의 교차 크론된 버젼 뿐만 아니라 친화-성숙한 것은 특히 서열 번호 15 내지 서열 번호 20, 서열 번호 21 내지 서열 번호 26, 서열 번호 60 내지 서열 번호 74, 서열 번호 75 내지 서열 번호 87, 서열 번호 92 및 서열 번호 93또는 서열 번호 94 및 서열 번호 95 뿐만 아니라 서열 번호 354 내지 서열 번호 413 중 어느 것에 의해 특성을 나타내거나 또는 표 1 또는 8에 나타나 있는 CDR1 영역, CDR2 영역 및/또는 CDR3 영역으로 이루어진 항체 분자를 포함한다. 가장 바람직하게, 본 발명의 항체는 첨부된 표 1, 8에 나타나 있으며, 또는 첨부된 표 10에서 설명하고 있는 CDR, 바람직하게는 CDR1, 보다 바람직하게는 CDR2, 가장 바람직하게는 CDR3를 1 이상 포함한다.

친화-성숙 기술은 첨부된 실시예에 기재된, 당분야 특히 Knappik (2000), J. Mol. Biol. 295, 55; Krebs (2000), J. Imm. Meth. 254, 67-84; WO 01/87337; WO 01/87338; US 6,300,064; EP 96 92 92 78.8에 공지되어 있으며, 추가로 이하에 참고문헌으로 인용한다.

본 발명의 보다 바람직한 실시형태에서, 항체 분자는 완전한 항체(면역글로불린, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG2b, IgG3, IgG4, IgA, IgM, IgD 또는 IgE), F(ab)-단편, Fabc-단편, Fv-단편, Fab'-단편, F(ab')₂-단편, 단일-사슬 항체, 키메라 항체, CDR-이식된 항체, 2가 항체-구조물, 항체-융합 단백질, 교차 클로닝된 항체 또는 합성 항체이다. 또한 면역글로불린 유전자의 유전적 변이체가 관찰되었다. 예를 들어 면역글로불린 중쇄 G 서브클라스 1(IgG1)의 유전적 변이체는 CH1 영역의 G1m(17) 또는 G1m(3) 알로타입 마커(allotypic markers), 또는 CH3 영역의 G1m(1) 또는 G1m(non-1) 알로타입 마커를 포함할 것이다. 본 발명의 항체 분자는 강화 또는 약화된 Fc-수용체 결합 또는 보체 활성을 갖는 돌연변이 IgG와 같이 변형된 항체 또는 돌연변이된 항체를 또한 포함한다. 본 발명의 항체는 종래의 방법, 예를 들어 포유동물, 바람직하게는 마우스를 여기서 규정하고 있는 βA4의 2개 영역, 예를 들어 (a) β-A4의 2개 내지 10개의 아미노산(또는 이의 일부(들)), 및 (b) β-A4의 12 내지 25개의 아미노산(이의 일부(들))(서열 번호 27)를 포함하는 아미노산 스트레치를 포함하는 N-말단 및 중심 영역/에피토프를 포함하는 펩티드로 면역화함으로써 발생되는 특이적 모노클로날 항체들의 생성에 의해서 생성되는 것이 또한 관찰되었다. 따라서, 당분야에 숙련된 자는 상기 펩티드에 대항하는 모노클로날 항체들을 발생시킬 것이며, 여기서 규정한 βA4의 N-말단 및 중심 영역/에피토프와 동시에 및 독립적으로 결합하고/반응하는 능력이 획득된 항체들을 선별할 것이다. 상응하는 선별 방법이 첨부된 실시예에 기술되어 있다.

첨부된 실시예에서 설명하는 것과 같이, 본 발명의 항체들/항체 분자들은 쉽게 및 바람직하게 재조합적으로 형성되고 발현될 수 있다. 바람직하게, 본 발명의 항체 분자는 1개 이상, 바람직하게는 2개 이상, 바람직하게는 3개 이상, 보다 바람직하게는 4개 이상, 보다 바람직하게는 5개 이상 및 가장 바람직하게는 6개의, 여기서 규정한 MSR-3, MSR-7 또는 MSR-8 모 항체 또는 상기 모 항체들로부터 유도된 친화-성숙/최적 항체들의 CDR을 포함한다. 또한 6개 이상의 CDR은 본 발명의 재조합적으로 생성된 항체들에 포함되는 것이 중요하다. 당분야에 숙련된 자는 근원 뿐만 아니라 친화 최적 항체들의 상응하는 CDR을 추론하기 위해 첨부된 실시예에서 나타내는 정보를 용이하게 이용할 수 있다. 모 항체들의 성숙/최적화에 의해 수득될 수 있는 최적의 항체들의 실시예는 특히 첨부된 표 1에 나타내었다. 본 발명의성숙/최적 항체 분자는 예를 들어 서열 번호 88 내지 서열 번호 95를 포함하며, MSR 7.9H7의 V_H-영역(서열 번호 88 및 서열 번호 89), MSR 7.9H7의 V_L-영역(서열 번호 90 및 서열 번호 91), MSR 7.9H7의 H-CDR3(서열 번호 92 및 서열 번호 93) 뿐만 아니라 MSR 7.9H7의 L-CDR3(서열 번호 94 및 서열 번호 95)을 나타내고, 하기에 첨부된 서열에 의해 또한 특성을 나타내는 MSR 7.9H7이다. 설명된 항체 분자 7.9H7은 모 항체 MSR7으로부터 유도되며, 본 발명의 최적/성숙 항체 분자의 특히 바람직한 본 발명의 예이다. 상기 항체 분자는 본 발명에 따라, 예를 들어 교차-클로닝의 형태(여기에서 하기와 첨부된 실시예 참조)로 추가로 변형될 수 있다.

첨부된 실시예에서 설명하는 것과 같이, 본 발명의 항체는 또한 교차-클로닝된 항체, 즉 여기서 기재된 1개 이상의 모 항체 또는 친화-최적 항체(들)로부터 다른 항체 영역(예를 들어 CDR-영역)을 포함하는 항체들을 또한 포함한다. 상기 교차-클로닝된 항체는 몇가지의 다른 프레임워크의 항체일 수 있으며, 따라서 가장 바람직한 프레임워크는 IgG 프레임워크, 보다 더 바람직하게는 IgG1-프레임워크, IgG2a-프레임워크, 또는 IgG2b-프레임워크가다. 상기 항체 프레임워크는 포유동물, 가장 바람직하게는 인간 프레임워크가 특히 바람직하다. 경쇄 및 중쇄상에 영역은 동일한 일반 구조를 가지며, 각 영역은 4개의 프레임워크 영역(서열은 보체 결정 영역(CDR1-3)으로 공지된 3개의 고가변성 영역에 의해 결합되어 비교적 보존됨)을 포함한다.

여기서 사용하는, "인간 프레임워크 영역(human framework region)"은 자연적으로 발생하는 인간 면역글로불린의 프레임워크 영역과 거의 동일한 프레임워크 영역(약 85 % 이상, 일반적으로 90% 내지 95 % 이상)을 나타낸다. 구성요소 경쇄 및 중쇄의 결합된 프레임워크 영역인 항체의 프레임워크 영역은 CDR을 위치시키고 정렬시키기 위해서 제공된다. CDR은 항원 에피토프에 결합하기에 근본적으로 적합하다. 여기서 기재한 교차 클로닝된 항체는 바람직한 (인간) 항체 프레임워크에 나타날 수 있을 뿐만 아니라, 특히 여기서 기재된 모 항체 MSR-3, MSR-7 또는 MSR-8 또는 상기 모 항체들로부터 유도된 성숙한 항체들로부터 CDR을 포함하는 항체 분자는 면역 글로불린 프레임워크에 도입될 수 있다는 것이 중요하다. 바람직한 프레임워크는 IgG1, IgG2a 및 IgG2b이다. 가장 바람직한 것은 인간 프레임워크 및 인간 IgG1 프레임워크가다.

첨부된 실시예에서 나타내는 것과 같이, 당 분야에 공지된 유전 공학 기술에 의해서 전체 경쇄를 최적의 공여체 클론으로부터 최적의 수용체 클론까지 이동시킬 수 있다. 최적의 공여체 클론의 예로는 예를 들어 L-CDR1(L1)이며, 최적의 수용체 클론의 예로는 H-CDR2(H2)이 있다. 에피토프 특이성은 동일한 H-CDR-3 영역을 보유하는 클론을 조합시킴으로써 보존될 수 있다. 추가로 상세한 설명은 실시예 13에 나타내었다.

본 발명의 바람직한 교차-클로닝된 항체 분자는 MS-R #3.3H1x3.4L9, MS-R #3.4H1x3.4L9, MS-R #3.4H3x3.4L7, MS-R #3.4H3x3.4L9, MS-R #3.4H7x3.4L9, MS-R #3.4H7x3.4L7, MS-R #3.6H5x3.6L1, MS-R #3.6H5x3.6L2, MS-R #3.6.H8x3.6.L2, MS-R #7.2H2x7.2L1, MS-R #7.4H2x7.2L1, MS-R #7.4H2x7.12L2, MS-R #7.9H2x7.2L1(L1),MS-R #7.9H2x7.12L1, MS-R #7.9H2x7.12L2, MS-R #7.9H2x7.12L2(L1+2), MS-R #7.9H4x7.12.L2, MS-R #7.11H1x7.2L1, MS-R #7.11H1x7.11L1, MS-R #7.11H2x7.2L1(L1), MS-R #7.11H2x7.9L1 (L1), MS-R #7.11H2x7.12L1 또는 MS-R #8.1H1x8.2L1로 구성되는 군으로부터 선택된다.

교차-클로닝된 항체들의 생성은 또한 첨부된 실시예에서 설명하였다. 상기에서 언급된 바람직한 교차-클로닝된 항체들/항체 분자는 여기서 기재된 모 항체, 특히 MSR-3 및 MSR-7으로부터 유도된 최적/성숙 항체 분자이다. 또한, 추가의 교차-클로닝된 항체 분자들/항체들의 CDR-서열 및 V-영역을 특징화하는 것은 첨부된 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 46 및 서열 번호 47 (MSR 3.6H5x3.6.L2; V_H-영역, V_L-영역); 서열 번호 34, 서열 번호 35, 서열 번호 48 및 서열 번호 49 (MSR 3.6H8x3.6.L2; V_H-영역, V_L-영역); 서열 번호 36, 서열 번호 37, 서열 번호 50 및 서열 번호 51 (MSR 7.4H2x7.2.L1; V_H-영역, V_L-영역); 서열 번호 38, 서열 번호 39, 서열 번호 52 및 서열 번호 53 (MSR 7.9H2x7.12.L2; V_H-영역, V_L-영역); 서열 번호 40, 서열 번호 41, 서열 번호 54 및 서열 번호 55 (MSR # 7.9H4x7.12.L2; V_H-영역, V_L-영역); 서열 번호 42, 서열 번호 43, 서열 번호 56 및 서열 번호 57 (MSR #7.11H1x7.11.L1; V_H-영역, V_L-영역); 및 서열 번호 44, 서열 번호 45, 서열 번호 58 및 서열 번호 59 (MSR # 7.11H1x7.2.L1; V_H-영역, V_L-영역)에 나타나 있다. 상기 특히 바람직한 교차-클로닝된 항체 분자의 상응하는 CDR3 영역은 서열 번호 60내지 서열 번호 87에 나타나 있다. 추가의 MSR 항체 분자에 있어서, V_H-영역, V_L-영역, CDR-영역은 첨부된 표 8 또는 10, 및 첨부된 서열 목록, 특히 MS-R 항체들/항체 분자들 #3.6H5 x 3.6L2, #3.6H8 x 3.6L2, #7.4H2 x 7.2L1, #7.9H2 x 7.12L2, #7.9H4 x 7.12L2, #7.11H1 x 7.11L1, #7.11H1 x 7.2L1 및 #7.9H7에 있어서 서열 번호 32 내지 서열 번호 95, 또는 MSR-R 항체들/항체 분자들 MS-R #3.3H1 x 3.4L9, #3.4H1 x 3.4L9, #3.4H3 x 3.4L7, #3.4H3 x 3.4L9, #3.4H7 x 3.4L9, #3.4H7 x 3.4L7, #3.6H5 x 3.6L1, #7.2H2 x 7.2L1, #7.4H2 x 7.12L2, #7.9H2 x 7.2L1, #7.9H2 x 7.12L1, #7.11H2 x 7.2L1, #7.11H2 x 7.9L1, #7.11H2 x 7.12L1 or #8.1H1 x 8.2L1에 있어서 서열 번호 294 내지 서열 번호 413에서 추론될 수 있다. 따라서, 상기에서 규정한 V_H-영역 이외에, 본 발명의 바람직한 항체 분자들은 서열 번호 294 내지 서열 번호 323 중 어느 하나에서 규정하는 V_H-영역을 포함할 수 있다. 유사하게, 본 발명의 항체 분자에 포함될 수 있는 상기에서 규정한 V_L-영역이외에, 서열 번호 324 내지 서열 번호 353는 바람직한 V_L-영역을 나타낸다. 상응하는 CDR-3 영역은 서열 번호 354 내지 서열 번호 413에서 나타내는 추가의 서열 뿐만 아니라 상기에서 규정한다.

본 발명의 항체 분자들은 특히 당분야(Bentley, Hybridoma 17 (1998), 559-567; Racher, Appl. Microbiol. Biotechnol. 40 (1994), 851-856; Samuelsson, Eur. J. Immunol. 26 (1996), 3029-3034 참조)에 공지된 재조합 방법에 의해 효과적인 양으로 용이하게 생성될 수 있다.

이론적으로 가용성 β-A4(단량체/올리고머)에서 N-말단 및 중간 에피토프 둘 다는 항체 상호작용에 접근가능하며, 본 발명의 항체 분자들은 개별적으로 N-말단 또는 중간 에피토프와 결합할 수 있으나, 상기 조건하에서 최대의 친화도는 수득가능하지 않다. 그러나, 항체 파라토프(paratope)에 최적의 접촉은 둘 다의 에피토프에 동시에 결합, 즉 응집된 β-A4와 상호작용하는 것과 유사하게 함으로써 이루어질 것이다. 따라서, 본 발명의 항체들은 독특한 항-Aβ항체들이며, 상기는 응집된 β-A4와(N-말단 및 중간 에피토프와 상호작용을 통하여) 결합하며, 동시에 또한 가용성 β-A4내 규칙적 입체 배열을 갖는 에피토프를 안정화 및 중성화시킬 수 있다. 상기 항체들은 종래의 항체들과 구별된다.

Aβ에 대한 친화도를 갖는 본 발명의 항체 분자 또는 2000 nM 이하, 바람직하게는 100 nM 이하, 보다더 바람직하게는 10 nM 이하, 가장 바람직하게는 1 nM 이하의 K_D값을 갖는 상기의 한정된 단편들이 가장 바람직하다. 상기 친화도/친화도들의 측정은 실시예에 설명된 방법 및 당 분야에 알려져 있는 방법들에 의해 실시될 수 있다. 상기 방법들은 BIACORE(상표명)-분석법(www.biacore.com; Malmquist(1999), Biochem.Soc. Trans 27, 335-340) 및 표식 항체 또는 표식 Aβ를 사용한 고체상 분석법을 포함하며, 이에 제한되지는 않는다.

바람직하게는, 본 발명의 항체 분자는 알츠하이머 병과 같은 아밀로이드-관련 질병들을 앓고 있는 환자들로부터 시험관내(사후 분석) 뇌 부분중 아밀로이드플라크에 데코레이팅/반응/결합할 수 있다. 또한, 실시예에 설명되어 있는 바와 같이, 본 발명의 항체/항체 분자들은 시험관내 분석 뿐만 아니라 생체내 Aβ-응집을 방지하는 것이 바람직하다. 이와 유사하게, 본 발명의 항체 분자들은 실시예에 설명된 생체내 및/또는 시험관내 분석에서 Aβ-응집체를 해중합시키는 것이 바람직하다. 본 발명의 항체들/항체 분자들의 상기 능력은 특히 의료 용도, 특히 이하에 기술된 약학 조성물에 사용된다.

본 발명은 또한, 본 발명의 항체 분자를 코딩하는 핵산 분자를 제공한다.

상기 핵산 분자는 재조합 핵산 분자 뿐만 아니라 천연 핵산 분자일 수 있다. 그러므로, 본 발명의 핵산 분자는 천연, 합성 또는 반-합성이다. 상기 핵산 분자는 DNA, RNA 뿐만 아니라 PNA를 포함하며, 이의 혼성체일 수 있다.

본 발명의 핵산 분자에 조절 서열이 첨가될 수 있다는 것은 당업자에게 입증되어 있다. 예를 들면, 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 유도 발현시키는 프로모터, 전사 증폭제 및/또는 서열이 사용될 수 있다. 적당한 유도 시스템은 Gossen 및 Bujard의 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 (1992), 5547-5551) 및 Gossen 외 다수의 (Trends Biotech. 12 (1994), 58-62)에 기술되어 있는 테트라사이클린-조절된 유전자 발현, 또는 Crook (1989) EMBO J. 8, 513-519에 기술된 덱사메타손-유도성 유전자 발현 시스템이다.

게다가, 핵산 분자가 티오에스테르 결합 및/또는 뉴클레오티드 유사체를 함유할 수도 있다. 상기 변형은 세포내에서 엔도뉴클라아제 및/또는 엑소뉴클라아제에 대항하는 핵산 분자를 안정화시키기 위해 사용될 수 있다. 상기 핵산 분자들은세포에서 상기 핵산 분자를 전사시키는 키메라 유전자를 함유하는 적당한 벡터에 의해 전사될 수 있다. 이런 관점에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 "유전자 표적화(gene targeting)" 또는 "유전자 치료(gene therapeutic)" 접근법에 사용될 수 있다고 이해되고 있다. 다른 구체예에서, 상기 핵산 분자들은 표지된다. 핵산들의 검출 방법들은 예를 들어, 서던 블롯팅(Southern blotting) 및 노던 블롯팅(Northern blotting), PCR 또는 프라이머 확장법으로 당 분야에 잘 알려져 있다. 상기 실시형태는 유전자 치료 접근법중에 본 발명의 핵산 분자들의 성공적인 도입을 확인하기 위한 선별 방법으로 사용가능하다.

본 발명의 핵산 분자(들)은 상기 핵산 분자들을 단독으로 또는 배합하여 포함하는 재조합 생성된 키메라 핵산 분자이다. 바람직하게는, 본 발명의 핵산 분자는 벡터의 일부이다.

그러므로 본 발명은 본 발명의 핵산 분자를 포함하는 벡터에 관한 것이다.

본 발명의 벡터는 유전 공학에서 종래부터 사용된 플라스미드, 코스미드, 바이러스, 박테리오파아지 또는 다른 벡터이며, 적당한 숙주 세포내에서 및 적당한 조건하에서 상기 벡터를 선택시키는 마커 유전자(marker gene)와 같은 추가의 유전자들을 포함할 수 있다.

게다가, 본 발명의 벡터는 본 발명의 핵산 서열들 외에 적당한 숙주내 코딩 영역을 적당히 발현시키는 발현 조절 요소들을 포함한다. 상기 조절 요소들은 당업자에게 알려져 있으며, 프로모터, 스플라이스 카세트(splice cassette), 해독 개시 코돈, 벡터내에 삽입물을 도입하기 위한 해독 및 삽입 부위를 포함할 수 있다.바람직하게는, 본 발명의 핵산 분자는 진핵세포 또는 원핵세포에서 발현시키는 상기 발현 조절 서열들에 유효하게 결합된다.

진핵세포 및 원핵세포에서 발현을 보증하는 조절 요소들은 당업자에게 잘 알려져 있다. 상기 언급한 바와 같이, 이들은 보통 전사 개시를 보증하는 조절 서열들 및, 선택적으로 전사물의 전사 종결 및 안정화를 보증하는 폴리-A 시그널을 포함한다. 추가의 조절 요소들은 전사 뿐만 아니라 해독 증폭제 및/또는 천연-조합 또는 이종성 프로모터 영역을 포함할 수 있다. 예를 들어 포유류 숙주 세포에서 발현을 가능하게 하는 가능한 조절 요소들은 CMV-HSV 티미딘 키나아제 프로모터, SV40, RSV-프로모터(로우스 육종 바이러스), 인간 신장 요소 1α-프로모터, 글루코코르티코이드-유도성 MMTV-프로모터(몰로니 마우스 종양 바이러스), 메탈로티오네인-유도성 또는 테트라사이클린-유도성 프로모터 또는, CMV 증폭제 또는 SV40-증폭제와 같은 증폭제를 포함한다. 신경 세포내 발현을 위해, 신경미세섬유-프로모터(neurofilament-promoter), PGDF-프로모터, NSE-프로모터, PrP-프로모터 또는 thy-1-프로모터들이 사용될 수 있다는 것이 고려되고 있다. 상기 프로모터들은 당 분야에 알려져 있으며, Charron (1995), J. Biol. Chem. 270, 25739-25745에 기술되어 있다. 원핵세포내 발현을 위해, tac-lac-프로모터 또는 trp 프로모터를 포함하는 다수의 프로모터들이 개시되어 있다. 전사를 개시할 수 있는 요소들 외에, 상기 조절 요소들은 폴리뉴클레오티드의 다운스트림에 SV40-폴리-A 부위 또는 tk-폴리-A 부위와 같은 전사 종결 신호를 포함할 수도 있다. 본 명세서에서, 적당한 발현 벡터들은 당 분야에 알려져 있으며, 그 예로는 오카야마-베르그(Okayama-Berg)cDNA 발현 벡터 pcDV1(Parmacia), pRc/CMV, pcDNA1, pcDNA3(In-vitrogene), pSPORT1(GIBCO BRL), pX(Pagano (1992) Science 255, 1144-1147), 효모 2-혼성(two-hybrid) 벡터, 가령 pEG202 및 dpJG4-5(Gyuris (1995) Cell 75, 791-803) 또는 원핵 발현 벡터, 가령 람다 gt11 또는 pGEX(Amersham-Pharmacia)가 있다. 본 발명의 핵산 분자들 외에, 벡터는 분비 시그널을 코딩하는 핵산 서열을 추가로 포함할 수 있다. 상기 서열들은 당업자에게 잘 알려져 있다. 그리고, 사용된 발현 시스템에 따라, 본 발명의 펩티드를 세포 구획으로 이끌 수 있는 리더 서열(leader sequence)이 본 발명의 핵산 분자의 코딩 서열에 첨가될 수 있으며, 당 분야에 잘 알려져 있다. 리더 서열(들)은 해독, 개시 및 종결 서열들과 적당한 상태로 조합되며, 바람직하게는 해독된 단백질 또는 이의 단백질을 세포질 주변 또는 세포외 매질로 직접 분비할 수 있는 리더 서열이다. 선택적으로, 이종 서열은 발현된 재조합 생성물의 안정화 또는 간단한 정제와 같은 목적하는 특성들을 부여하는 C-말단 또는 N-말단 확인(identification) 펩티드를 포함하는 융합 단백질(fusion protein)을 코딩할 수 있다. 벡터가 적당한 숙주에 혼입되면, 숙주는 뉴클레오티드 서열의 고수준 발현에 적당한 조건하에서 유지되며, 목적에 따라 본 발명의 항체 분자 또는 이의 단편들의 수집 및 정제가 뒤따른다. 따라서, 본 발명은 또한 본 명세서에서 정의된 벡터를 포함하는 숙주/숙주 세포에 관한 것이다. 상기 숙주들은 본 발명의 항체/항체 분자들을 수득하는 방법 뿐만 아니라 의료적/약학적 환경에서 유용할 수 있다. 상기 숙주 세포들은 또한 신경 줄기 세포, 바람직하게는 성인 신경 줄기 세포와 같은 형질도입되거나 또는 형질감염된 신경 세포들을 포함할 수도 있다. 상기 숙주 세포들은 이식 치료법(transplantation therapy)에 사용할 수 있다.

게다가, 본 발명의 벡터는 발현, 유전자 이입 또는 유전자 표적 벡터일 수도 있다. 생체외 또는 생체내 기술에 의해 세포내에 치료용 유전자를 도입하는데 기초한 유전자 치료법은 유전자 이입중 가장 중요한 용도들중 하나이다. 신경 성장 인자에 대항하는 중화 항체를 발현하는 형질전환 마우스는 Capsoni, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97 (2000), 6826-6831 and Biocca, Embo J. 9 (1990), 101-108의 "신경항체(neuroantibody)" 기술을 사용하여 생성되었다. 시험관내 또는 생체내 유전자 치료법을 위한 적당한 벡터, 방법들 또는 유전자-전달 시스템은 당업자에게 알려져 있으며; 예를 들어, Giordano, Nature Medicine 2 (1996), 534-539; Schaper, Circ. Res. 79 (1996), 911-919; Anderson, Science 256 (1992), 808-813, Isner, Lancet 348 (1996), 370-374; Muhlhauser, Circ. Res. 77 (1995), 1077-1086; Onodua, Blood 91 (1998), 30-36; Verzeletti, Hum. Gene Ther. 9 (1998), 2243-2251; Verma, Nature 389 (1997), 239-242; Anderson, Nature 392 (Supp. 1998), 25-30; Wang, Gene Therapy 4 (1997), 393-400; Wang, Nature Medicine 2 (1996), 714-716; WO 94/29469; WO 97/00957; US 5,580,859; US 5,589,466; US 4,394,448 or Schaper, Current Opinion in Biotechnology 7 (1996), 635-640 및 이들의 인용 문헌을 참고한다. 특히, 상기 벡터들 및/또는 유전자 전달 시스템은 또한 신경세포조직/세포(특히, Bloemer, J. Virology 71 (1997) 6641-6649 참조) 또는 시상하부(특히, Geddes, Front Neuroendocrinol. 20(1999), 296-316 or Geddes, Nat. Med. 3 (1997), 1402-1404 참조)에 있어서 유전자 치료 접근법에 기술되어 있다. 또한, 신경계 세포/조직에서 추가의 적당한 유전자 치료 구조물이 Meier (1999), J. Neuropathol. Exp. Neurol. 58, 1099-1110과 같이 당 분야에 알려져 있다. 본 발명의 핵산 분자 및 벡터들은 직접적인 도입 또는 리포좀, 바이러스 벡터(예를 들면, 아데노바이러스, 레트로바이러스)를 통한 도입, 전기천공법(electroporation), 발리스틱(ballistic, 예를 들면, 유전자 건) 또는 세포로의 다른 전달 시스템을 위해 고안될 수 있다. 또한, 배큘로바이러스(baculoviral) 시스템이 본 발명의 핵산 분자를 위한 진핵 발현 시스템으로서 사용될 수 있다. 도입 및 유전자 치료법 접근은 본 발명의 기능성 항체 분자를 발현시켜야 하며, 그럼으로써 상기 발현된 항체 분자가 알츠하이머 병 등과 같은 비정상적인 아밀로이드 합성, 조립 및/또는 응집과 연관된 신경병 질환의 치료, 개선 및/또는 예방에 특히 유용하다.

따라서, 본 발명의 핵산 분자 및/또는 본 발명의 상기 벡터들/숙주들은 약학 조성물로서 특히 유용하다. 상기 약학 조성물은 유전자 치료법 접근에 사용될 수 있다. 본 명세서에서, 본 발명의 핵산 분자들 및/또는 벡터들은 본 발명의 항체 분자들 또는 이들의 단편(들)의 (세포) 발현 및/또는 농도를 조절, 변경 및/또는 변형시키기 위해 사용될 수 있다.

유전자 치료법 용도를 위해, 본 발명의 펩티드 또는 이들의 단편들을 코딩하는 핵산은 유전자 전달 시스템, 가령 바이러스, 또는 감염 세포 또는 유기체내에서 감염 및 부여 질병(conferring disease) 개선 또는 치료 효과를 위해 사용되는 바이러스로 클론될 수 있다.

본 발명은 또한, 본 발명의 벡터에 의해 형질감염 또는 형질전환된 숙주 세포 또는 본 발명의 벡터를 운반하는 비-인간 숙주, 즉 본 발명에 따른 핵산 분자 또는 상기 핵산 분자를 포함하는 벡터에 의해 유전적으로 변형된 숙주 세포 또는 숙주에 관한 것이다. "유전적으로 변형된(genetically modified)"이라는 용어는 세포 또는 숙주, 또는 선행종(predecessors)/모종(parents)중 하나로 도입된 본 발명에 따른 핵산 분자 또는 벡터를 숙주 세포 또는 숙주가 그의 천연 게놈외에 포함하는 것을 의미한다. 핵산 분자 또는 벡터는 게놈 외부의 독립적 분자, 바람직하게는 복제할 수 있는 분자로서 유전적으로 변형된 숙주 세포 또는 숙주내에 존재할 수 있거나, 또는 숙주 세포 또는 숙주의 게놈으로 안정적으로 삽입될 수 있다.

본 발명의 숙주 세포는 원핵 또는 진핵 세포이다. 적당한 원핵 세포들은 E.coli 또는 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis)와 같이 클로닝에 보통 사용되는 세포들이다. 그리고, 진핵 세포들은 균류(fungal) 세포 또는 동물 세포들을 포함한다. 적당한 균류 세포들의 예로는 효모 세포, 바람직하게는 사카로마이세스속 중의 세포 및 가장 바람직하게는 사카로마이세스 세레비지애종 중의 세포가 있다. 적당한 동물 세포들의 예로는 곤충 세포들, 식물 세포들, 바람직하게는 포유류 세포들, 가령 HEK293, NSO, CHO, MDCK, U2-OSHela, NIH3T3, MOLT-4, Jurkat, PC-12, PC-3, IMR, NT2N, Sk-n-sh, CaSki, C33A가 있다. 상기 숙주 세포들, 가령 CHO-세포들은 리더 펩티드 제거, H(중)쇄 및 L(경)쇄의 중첩 및 조립, 정확한 위치에서의 분자의 당화(glycosylation) 및 기능 분자의 분비를 포함하는, 본 발명의항체 분자에 대한 해독후 변형(post-translational modification)을 제공할 수 있다. 또한, 당 분야에 알려져 있는 적당한 세포주들은 American Type Culture Collection (ATCC)와 같은 세포주 기탁물로부터 수득할 수 있다. 본 발명에 따라, 1차 세포/세포 배양액들은 숙주 세포들로서 기능할 수 있다고 고려되고 있다. 상기 세포들은 특히 곤충들(드로소필라(Drosophila) 또는 블라타(Blatta)종의 곤충) 또는 포유류들(인간, 돼지, 마우스 또는 쥐)로부터 유도된다. 상기 숙주 세포들은 또한 신경아세포종 세포주와 같은 세포주로부터 유도된 세포들을 포함할 수도 있다. 상기 1차 세포들은 당 분야에 잘 알려져 있으며, 특히 1차 성상세포, (혼합된) 척수 배양액 또는 해마 배양액들을 포함한다.

보다 바람직한 구체예에서, 본 발명의 벡터에 의해 형질전환된 숙주 세포는 신경 세포, 신경 줄기 세포(예를 들면, 성체 신경 줄기 세포), 두뇌 세포 또는 이로부터 유도된 세포(주)이다. 또한, 본 발명의 핵산 분자를 포함하는 CHO-세포는 숙주로서 특히 유용하다. 상기 세포들은 본 발명의 항체 분자들과 같은 발현된 분자상에서 정확한 2차 변형을 제공할 수 있다. 상기 변형은 당화(glycosylation) 및 인산화(phophorylations)를 포함한다.

숙주는 비-인간 포유류, 가장 바람직하게는 마우스, 쥐, 양, 송아지, 개, 원숭이 또는 꼬리없는 원숭이이다. 상기 포유류들은 치료법, 바람직하게는 본 명세서에 언급된 신경병 및/또는 퇴행성 신경질환에 대한 치료법을 개발하기 위해서는 절대 필요하다. 게다가, 본 발명의 숙주는 본 발명의 항체 분자 (또는 이의 단편들)를 제조하는데 특히 유용하다. 상기 항체 분자들 (또는 이들의 단편들)은 상기숙주로부터 분리된다고 직시된다. 특히, 본 명세서에 기술된 핵산 분자들 또는 벡터들은 형질전환 발현을 위한 서열들에 이입된다고 직시된다. 비-인간 숙주에 형질전환 유전자(transgene)로서 본 발명의 핵산 분자를 이입하는 것과 이들의 이후 발현은 본 발명의 항체를 제조하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들면, 형질전환 동물의 우유내 상기 형질전환 유전자의 발현은 정량의 항체 분자를 수득하기 위한 수단으로 제공하며; 특히 미국 특허 제5,741,957호, 미국 특허 제5,304,489호 또는 미국 특허 제5,849,992호를 참고한다. 상기 관점에서 유용한 형질전환 유전자는 본 발명의 핵산 분자들, 예를 들면 카제인 또는 β-락토글로불린과 같은 포유류 유선 특이적 유전자로부터의 프로모터 및/또는 증폭제에 능동결합되는 본 명세서에 기술된 항체 분자들의 경쇄 및 중쇄에 대한 코딩 서열을 포함한다.

본 발명은 또한, 상기 항체 분자를 합성시키는 조건하에서 상기 기술된 숙주 세포를 배양하는 단계 및 상기 배양액으로부터 상기 항체 분자를 회수하는 단계를 포함하는 본 발명의 항체 분자의 제조 방법을 제공한다.

본 발명은 또한, 본 발명의 항체 분자 또는 상기 기술된 방법에 의해 제조된 항체 분자, 본 발명의 항체 분자를 코딩하는 핵산 분자, 상기 정의된 상기 핵산 분자 또는 숙주 세포를 포함하는 벡터, 및 선택적으로 아밀로이드 플라크 형성을 방해할 수 있거나, 또는 이미 형성된 아밀로이드 플라크를 해중합시킬 수 있는 분자들과 같이 단독 또는 배합한 추가의 분자들을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 명세서에서 "조성물(composition)"이라는 용어는 본 발명의 화합물을 1개 이상 포함한다. 바람직하게는, 상기 조성물은 약학적 또는 진단 조성물이다.

조성물은 고체 또는 액체 형태로 되어 있으며, 특히 분말(들), 정제(들), 용액(들) 또는 에어로졸(들)의 형태로 되어 있다. 상기 조성물은 1개 이상의 본 발명의 항체/항체 분자들 또는 핵산 분자, 본 발명의 벡터 또는 숙주를 포함한다. 또한, 상기 조성물은 상기 항체 분자(들)을 코딩하는 2개 이상, 바람직하게는 3개 이상, 보다 바람직하게는 4개 이상, 가장 바람직하게는 5개의 항체 분자들 또는 상기 항체 분자(들)을 코딩하는 핵산 분자(들)을 포함한다. 상기 조성물은 이하 및 실시예에 기술된 방법에 의해 수득가능한 최적화된 본 발명의 항체/항체 분자들을 포함할 수도 있다.

상기 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체 및/또는 희석제를 선택적으로 포함하는 것이 바람직하다. 본 명세서에 개시된 약학 조성물은 신경질환 및/또는 퇴행성 신경질환의 치료에 특히 유용하다. 상기 질환들은 알츠하이머 병, 근위축성 측상 경화증(ALS), 네덜란드형 아밀로이드증에 의한 유전적 뇌졸중(hereditary cerebral hemorrhage), 다운증후군, HIV-치매, 파킨슨 병 및 노화와 연관된 신경 질환을 포함하며, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 약학 조성물은 아밀로이드 플라크 형성의 잠재적 억제인자로서 또는 아밀로이드 플라크를 해중합시키기 위한 잠재적 자극제로서 고려된다. 그러므로, 본 발명은 병적 APP 단백질분해 및/또는 아밀로이드 플라크 형성과 연관된 질병/질환의 치료에 사용되는 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.

적당한 약학적 담체, 부형제 및/또는 희석제의 예들은 당 분야에 잘 알려져 있으며, 인산완충 식염수, 물, 유탁액, 가령 유성/수성 유탁액, 여러 종류의 습윤제들, 멸균용액 등을 포함한다. 상기 담체들을 포함하는 조성물은 잘 알려진 종래 방법에 의해 배합될 수 있다. 상기 약학 조성물들은 적당한 투여량으로 피험체에 투여될 수 있다. 적당한 조성물의 투여는 다른 방법들, 예를 들면 정맥내, 복막내, 피하내(subcutaneous), 근육내, 국소적, 피하내(intradermal), 코내 또는 기관지내 투여에 의해 실시될 수 있다. 상기 투여는 뇌동맥내 부위에 또는 뇌조직에 직접 주사 및/또는 전달에 의해 실시되는 것이 특히 바람직하다. 본 발명의 조성물은 뇌와 같은 외부 또는 내부 표적 부위에 바이오리스틱 전달법(biolistic delivery)과 같은 표적 부위에 직접 투여될 수 있다. 투약 방법은 주치의 및 임상 인자들에 의해 결정될 것이다. 의료 분야에 잘 알려져 있는 바와 같이, 환자에 대한 투약량은 환자의 신장, 체표면적, 연령, 투여되는 특정 화합물, 성별, 투여 시간 및 경로, 일반적인 건강, 및 동시에 투여되는 다른 약물들을 포함하는 많은 요소들에 따라 다르다. 약학적으로 활성인 단백질 물질은 투여마다 1 ng - 10 ㎎/체중(㎏)의 양으로 존재할 수 있지만; 상기 예시 범위 이하 또는 이상의 투여도 특히 상기 요소들을 고려하여 고려된다. 투여법이 연속 주입이면, 1분당 체중 1 ㎏ 당 1 ㎍ - 10 ㎎ 단위의 범위내에 있어야 한다.

진행은 주기적 평가에 의해 모니터될 수 있다. 본 발명의 조성물은 국소적으로 또는 전신적으로 투여될 수 있다. 말초적으로 투여되는 항체들은 중추 신경계에 들어갈 수 있다는 것을 주의하며, 이는 Bard (2000), Nature Med. 6, 916-919를 참조한다. 비경구 투여를 위한 제조법은 멸균 수용액 또는 비수용액, 현탁액 및 유탁액을 포함한다. 비수성 용매들의 예로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일, 가령 올리브유, 및 주입가능한 유기 에스테르, 가령 에틸 올레이트가 있다. 수성 담체들은 식염수 및 완충매질을 포함하는, 물, 알콜성/수성 용액, 유탁액들 또는 현탁액들이다. 비경구 부형제들은 염화나트륨 용액, 링거 덱스트로스, 덱스트로스 및 염화 나트륨, 락테이트 링거액 또는 고정유를 포함한다. 정맥내 부형제들은 유액 및 영양액 보충물, 전해질 보충물(가령, 링거 덱스트로스계 보충물) 등을 포함한다. 항생제, 산화방지제, 킬레이트제 및 비활성 가스 등과 같은 방부제 및 다른 첨가제들도 또한 존재할 수 있다. 그리고, 본 발명의 약학 조성물은 약학 조성물의 목적하는 용도에 따라 추가의 제제(agent)들을 포함할 수 있다. 상기 제제들은 신경보호인자들, 콜린에스테라아제 억제제, M1 무스카린 수용체의 작용제, 호르몬, 산화방지제, 염증 억제제 등과 같은 중추 신경계에 작용하는 약물일 수 있다. 상기 약학 조성물은 신경전달물질 및/또는 신경전달물질에 대한 대체 분자들, 비타민 E 또는 α-리포산과 같은 추가의 제제들을 포함하는 것이 특히 바람직하다.

본 발명의 약학 조성물 뿐만 아니라 방법 또는 본 명세서에 기술된 용도들은 병리상 APP 응집 또는 병리상 APP 처리에 따라 의존하거나 이와 연관되거나 알려지지 않은 본 명세서에 개시된 모든 종류의 질병들을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 이들은 특히, 알츠하이머 병 및, 아밀로이드-β의 세포외 축적이 주요 역할을 하는 다른 질병들을 치료하기 위해 사용가능하다. 본 명세서에 개시된 방법, 용도 및 조성물에 의해 동물 치료가 포함되지만, 이들은 인간에게 사용하는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 바람직한 구체예에서, 본 발명의 상세한 설명에 개시된 본 발명의 조성물은 검출을 위한 적당한 수단을 선택적으로 포함하는 진단 조성물이다. 상기 진단 조성물은 본 발명의 상기 화합물들을 1개 이상 포함한다.

상기 진단 조성물은 본 발명의 화합물, 특히 가용성 형태/액체상의 본 발명의 항체 분자들을 포함하지만, 상기 화합물들은 고체 지지체에 결합/부착및/또는/링크되는 것으로 고려된다.

고체 지지체들은 본 명세서의 진단 조성물과 배합하여 사용될 수 있거나, 또는 본 발명의 화합물들은 상기 고체 지지체들에 직접 결합될 수 있다. 상기 지지체들은 당 분야에 잘 알려져 있으며, 그중에서도 상업적으로 사용가능한 컬럼 재료들, 폴리스티렌 비드, 라텍스 비드, 자성 미드, 콜로이드 금속 입자들, 유리 및/또는 실리콘 칩 및 표면들, 니트로셀룰로스 스트립, 멤브레인, 시트, 듀라사이트, 웰 및 반응 트레이의 월, 플라스틱 튜브 등을 포함한다. 본 발명의 화합물(들)은 특히 본 발명의 항체들은 많은 다른 담체들에 결합될 수 있다. 잘 알려진 담체들의 예로는 유리, 폴리스티렌, 폴리비닐 클로라이드, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 폴리카르보네이트, 덱스트란, 나일론, 아밀로스, 천연 셀룰로스 및 변형 셀룰로스, 폴리아크릴아미드, 아가로스 및 마그네타이트가 포함된다. 담체의 성질은 본 발명의 목적을 위해 가용성 또는 불용성일 수 있다. 적당한 표식 및 표식 방법들은 상기 확인되어 있으며, 이하에 추가로 언급되어 있다. 본 발명의 상기 화합물(들)을 고정/부동화시키는 적당한 방법은 잘 알려져 있으며, 이온성, 소수성, 공유 상호반응 등을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.

본 발명의 진단 조성물은 아밀로이드-β와 같은 APP 및/또는 APP-처리 생성물의 검출 및/또는 정량화 또는 병리상 및/또는 (유전적으로) 변형된 APP-제거 부위의 검출 및/또는 정량화를 위해 사용되는 것이 특히 바람직하다.

실시예에서 설명되는 바와 같이, 본 발명의 화합물, 특히 본 발명의 항체 분자들은 간접 면역형광법에 의해 알츠하이버 병의 뇌 부위내 순수한 인간 아밀로이드 플라크를 검출하는데 있어서 진단 시약으로서 특히 유용하다.

진단 조성물에 사용되는 본 발명의 상기 화합물들은 검출가능하게 표식되는 것이 바람직하다. 생분자들을 표식시키는데 사용가능한 다양한 방법들이 당업자에게 잘 알려져 있고, 본 발명의 범주내에서 고려된다. 상기 방법들은 Tijssen, "Practice and theory of enzyme immuno assays", Burden, RH and von Knippenburg (Eds), Volume 15 (1985), "Basic methods in molecular biology"; Davis LG, Dibmer MD; Battey Elsevier (1990), Mayer et al., (Eds) "Immunochemical methods in cell and molecular biology" Academic Press, London (1987), or in the series "Methods in Enzymology", Academic Press, Inc에 기술되어 있다.

당업자에게 공지되어 있는 표식 방법과 많은 다른 표식들이 있다. 본 발명에서 사용될 수 있는 표식 종류의 예로는 효소, 방사성 동위원소, 콜로이드 금속, 형광 화합물, 화학발광 화합물 및 생발광 화합물이 있다.

통상적으로 사용되는 표식들은 형광물질(가령, 플루레신, 로다민, 텍사스 레드 등), 효소(가령, 고추냉이 퍼옥시다아제, β-갈락토시다아제, 알칼리 포스파타아제), 방사성 동위원소(가령,³²P 또는¹²⁵I), 바이오틴, 디곡시게닌, 콜로이드 금속, 화학발광 또는 생발광 화합물(가령, 디옥세탄, 루미놀 또는 아크리디늄)을 포함한다. 효소 또는 바이오티닐기의 공유 결합법, 요오드화법, 인산화법, 바이오틴화법 등과 같은 표식 방법들이 당 분야에 잘 알려져 있다.

검출 방법들로는 오토라디오그래피, 형광 현미경, 직접 및 간접 효소반응 등이 있으며, 이에 제한되지는 않는다. 통상적으로 사용되는 검출 분석법으로는 방사성 동위원소 또는 비-방사성 동위원소 방법이 있다. 이들은 그중에서도 웨스턴블롯팅, 오버레이-분석법, RIA(Radioimmuno Assay) 및 IRMA(Immune Radioimmunometric Assay), EIA(Enzyme Immuno Assay), ELISA(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay), FIA(Fluorescent Immuno Assay) 및 CLIA(Chemioluminescent Immune Assay)이 있다.

그리고, 본 발명은 아밀로이드신생 및/또는 아밀로이드 플라크 형성과 연관된 질병의 예방, 치료 및/또는 진단을 위한 약학적 또는 진단 조성물을 제조하기 위해 사용되는, 본 발명의 항체 분자, 또는 본 발명의 방법에 의해 제조된 항체 분자, 본 발명의 핵산 분자, 벡터 또는 숙주의 용도를 제공한다. 화합물, 특히 본 발명의 항체 분자들이 변형된 또는 비정상적 APP-처리 및/또는 아밀로이드신생과 연관된 신경병리들을 예방 및/또는 치료하는데 사용되는 것이 바람직하다. IgG 프레임워크, 특히 IgG1 프레임워크내 항체와 같은 (처리된) 면역글로불린 형태, 또는 키메라 항체, 양특이적 항체, 단쇄 Fvs(scFvs) 또는 양특이적 scFvs 등의 형태의항체 분자들은 본 발명의 약학 조성물을 제조하는데 사용된다. 본 발명의 항체 분자들은 Aβ4 및/또는 아밀로이드 부착물/플라크와 특이적으로 상호작용하고/검출하기 때문에, 항체 분자들은 또한 실시예에 기술된 진단 장치들에 사용할 수도 있다.

그러므로, 본 발명의 화합물들의 개선된 용도는 β-아밀로이드 플라크의 분해, 아밀로이드(플라크) 제거 또는 β-아밀로이드 플라크 형성에 대한 수동 면역에 의해 개선시키는 신경과 질병용 약학 조성물을 제조하는데 사용하는 것이다. 실시예에 설명된 바와 같이, 본 발명의 항체 분자들은 Aβ 응집을 억제하고, 이미 형성된 아밀로이드 응집물의 해중합에 특히 유용하다. 따라서, 본 발명의 항체들은 신경 보호 뿐만 아니라 병리학적 아밀로이드 부착물/플라크의 감소, 아밀로이드 플라크/플라크 전구물질 제거에 사용된다. 본 발명의 항체 분자들은 기존의 아밀로이드 플라크/부착물의 생체내 제거 뿐만 아니라 아밀로이드 플라크의 생체내 예방에 사용되는 것이 특히 고려된다. 게다가, 본 발명의 항체 분자들은 Aβ4에 대항하는 수동 면역 접근법에 사용될 수 있다. Aβ4/Aβ4 부착물의 제거는 즉 Fc-부분을 포함하는 본 발명의 항체를 의료적으로 사용함으로써 이루어진다. 항체의 상기 Fc-부분은 마크로파지(식세포 및/또는 미세아교세포) 및/또는 헬퍼 세포들의 부착과 같은 Fc-수용체 매개 면역 반응에 특히 유용할 수 있다. Fc-부분-관련 면역반응을 매개하기 위해, 본 발명의 항체 분자는 (인간) IgG1-프레임워크인 것이 바람직하다. 본 명세서에서와 같이, 본 발명의 항체 분자들, 이 분자들 또는 일부를 코딩하는 핵산 분자들, 본 발명의 벡터들 또는 본 발명의 숙주 세포들에 의해 치료되는 바람직한 피험체는 인간이다. 다른 프레임워크, 가령 본 발명의 항체 분자들에 대한 IgG2a-프레임워크 또는 IgG2b-프레임워크가 또한 고려된다. IgG2a 및 IgG2b 형태에서 면역글로불린 프레임워크는 마우스 장비, 예를 들면, 본 발명의 항체 분자들의 과학적 용도, 예를 들면 (인간) 야생형 또는 돌연변이형 APP, APP-단편들 및/또는 Aβ4를 발견하는 형질전환 마우스에서의 시험에 있어서 특히 고려된다.

아밀로이드신생 및/또는 아밀로이드 플라크 형성과 연관된 상기 인용된 질병들은 치매, 알츠하이머 병, 운동 신경병, 파킨슨 병, ALS(근위축성 축삭 경화증), 이질, HIV-관련 치매 뿐만 아니라 크로이츠휄트-야콥 병, 유전성 뇌졸중, 아밀로이디스 네덜란드형, 다운증후군 및 노화와 연간된 신경질병을 포함하며, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 항체 분자들 및 본 명세서에서 제공된 조성물들은 아밀로이드신생 및/또는 아밀로이드 플라크 형성과 연관된 염증성 과정들을 예방하거나 개선시키는데 사용될 수도 있다.

따라서, 본 발명은 또한 상기 신경성 및/또는 신경퇴행성 질병으로 고통받는 피험자 및/또는 상기 신경성 및/또는 신경퇴행성 질병에 걸리기 쉬운 피험자들에게 본 발명의 항체 분자, 본 발명의 핵산 분자 및/또는 본 명세서에 정의된 조성물들을 유효량 투여하는 단계를 포함하는, 신경성 및/또는 신경퇴행성 질병들을 치료, 예방 및/또는 지연시키는 방법을 제공한다.

다른 구체예에서, 본 발명은 본 발명의 1개 이상의 항체 분자, 1개 이상의 핵산 분자, 1개 이상의 벡터 또는 1개 이상의 숙주 세포를 포함하는 키트(kit)를 제공한다. 유리하게는, 본 발명의 키트는 의료적, 과학적 또는 진단적 분석법 및 목적을 위해 요구되는 물질들 또는 남은 반응물질들, 완충액(들) 및/또는 저장액을임의로 추가로 포함한다. 게다가, 본 발명의 키트의 일부는 바이알 또는 병, 또는 용기 또는 다중용기 유닛과 조합하여 포장될 수 있다.

본 발명의 키트는 본 발명의 방법을 실시하기 위해 유리하게 사용될 수 있으며, 진단 키트, 연구 도구 또는 의료 도구로서 본 명세서에 언급된 여러 용도들에 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 키트는 과학적, 의료적 및/또는 진단적 목적에 적당한 검출 수단을 포함할 수 있다. 상기 키트의 제조는 당업자에게 공지되어 있는 표준 방법들에 따른다.

본 발명은 또한, 하기 단계들을 포함하는 상기 항체 분자의 최적화 방법을 제공한다:

(a) 서열 번호 21, 서열 번호 23 또는 서열 번호 25로 표시되는 핵산 분자에 의해 코딩된 V_H-영역의 1개 이상의 CDR3 또는 서열 번호 22, 서열 번호 24 또는 서열 번호 26로 표시되는 V_H-영역의 CDR3 아미노산 서열을 포함하는 항체로부터 유도된 다양화된 Fab 항체 단편들의 라이브러리를 제조하는 단계;

(b) Aβ/Aβ4에 대항하는 패닝(panning)에 의해 상기 Fab 최적화 라이브러리를 시험하는 단계;

(c) 최적화된 클론들을 확인하는 단계; 및

(d) 선택된 최적화된 클론들을 발현시키는 단계.

본 발명의 항체/항체 분자들의 최적화는 실시예에 기술되어 있으며, 본 명세서에 정의된 바와 같은 β-A4의 영역/에피토프중 하나 또는 둘다에 대한 높은 친화도를 위한 선택 또는 개선된 발현을 위한 선택 등을 포함할 수 있다. 한 구체예에서, β-A4의 영역/에피토프중 하나 또는 둘다에 대한 높은 친화도를 위한 상기 선택은 (a) β-A4의 아미노산 2 내지 10을 포함하는 아미노산 스트레치(또는 이들의 일부(들)) 및/또는 β-A4의 아미노산 12 내지 25를 포함하는 아미노산 스트레치(또는 이들의 일부(들))에 대한 높은 친화도를 위한 선택을 포함한다(서열 번호 27).

당업자는 본 발명의 교시를 사용하여 방법을 쉽게 실시할 수 있다. 항체를 위한 최적화 프로토콜은 당 분야에 공지되어 있다. 상기 최적화 프로토콜은 Yang (1995), J. Mol. Biol. 25, 392-403; Schier (1996), J. Mol. Biol. 263, 551-567; Barbas (1996), Trends. Biotech 14, 230-34 or Wu (1998), PNAS 95, 6037-6042; Schier (1996), Human Antibodies Hybridomas 7, 97; Moore (1997), J. Mol. Biol. 272, 336에 개시 및 설명되어 있는 CDR 워킹 돌연변이 신생(walking mutagenesis)을 포함한다.

"패닝(panning)"-기술은 또한 당 분야에 공지되어 있는데, 예를 들면, Kay (1993), Gene 128, 59-65를 참조한다. 그리고, 공보 Borrebaeck (1995), "Antibody Engineering", Oxford University, 229-266; McCafferty (1996), "Antibody Engineering", Oxford University Press; Kay (1996), A Laboratory Manual, Academic Press는 본 발명에 따라 변형될 수 있는 최적화 프로토콜을 제공한다.

최적화 방법은 단계 (ca)를 추가로 포함함으로써 최적화 클론들이 실시예에 설명된 바와 같이 카세트 돌연변이신생에 의해 추가로 최적화된다.

본 명세서에 기술된 항체 분자의 최적화 방법은 실시예에 추가로 설명되어 있는 바와 같이, β-A4 펩티드/Aβ4/Aβ/Aβ4/βA4의 2개의 영역들을 특이적으로 인식할 수 있는 모 항체/항체 분자들의 친화도 성숙법이다.

바람직하게는, 본 발명의 방법중 (b)단계에서 상기 Aβ/Aβ4(본 명세서에서 βA4라고도 함)는 응집된 Aβ/Aβ4이다. 상기 패닝은 증가된 단단한 결합력(stringency of binding)으로 실시될 수 있다(실시예에 기술되어 있음). 결합력(stringency)은 Aβ/Aβ4 농도를 감소시키거나, 또는 (분석)온도를 높임으로써 증가될 수 있다. 패닝에 의한 최적화 라이브러리의 시험은 당업자에게 공지되어 있으며, Kay (1993)의 인용문헌에 기술되어 있다. 바람직하게는, 단계 (c)에서의 확인은 최저 K_D-값에 따라 등급매김으로써 실시된다.

가장 바람직하게는, 단계 (c)에서의 상기 확인은 코프-등급화(koff-ranking)에 의해 실시된다. 코프-등급화는 당업자에게 공지되어 있으며, Schier (1996)의 인용문헌; Schier (1996), J. Mol. Biol. 255, 28-43 or Duenas (1996), Mol. Immunol. 33, 279-286에 기술되어 있다. 게다가, 코프-등급화는 실시예에 설명되어 있다. 오프-속도 상수(off-rate constant)는 실시예에 기술된 바에 따라 측정할 수 있다.

상기 언급한 바와 같이, 확인된 클론들은 추가의 평가를 위해 발현될 수 있다. 발현은 실시예에 설명된 공지 방법에 의해 실시될 수 있다. 즉, Fab-단편, scFvs, 양특이적 면역글로불린, 양특이적 항체 분자들, Fab-융합 및/또는 Fv 융합단백질 또는 전체 항체, 가령 IgG, 특히 IgG1으로 발현시킬 수 있다.

최적화 항체들, 특히 최적화 Fab 또는 최적화 IgG, 바람직하게는 IgG1은 실시예에 설명된 방법에 의해 시험될 수 있다. 상기 방법들은 결합 친화도 시험, K_D값의 측정, 펩스팟(pepspot) 분석, ELISA-분석, RIA-분석, CLIA-분석, (면역)조직학 연구(아밀로이드 플라크 염색), 해중합 분석 또는 항체-의존성 β-A4 식세포를 포함하며, 이에 제한되지는 않는다.

본 발명의 추가의 구체예에서, 최적화 항체들이 교차-클로닝에 의해 생성되는 방법이 제공된다. 상기 방법은 실시예에 설명되어 있으며, 최적화 CDR-영역을 결합시키는 단계, 예를 들면 최적화 H-CDR2 및, H-CDR3에 의해 성숙 클론으로부터의 L-CDR2, 바람직하게는 같은 H-CDR3을 결합시키는 단계를 포함한다.

바람직한 구체예에서, 본 발명은 하기 단계들을 포함하는 약학 조성물의 제조 방법에 관한 것이다:

(a) 본 명세서에 기술되고, 실시예에 설명된 방법에 따른 항체의 최적화 단계; 및

(b) 위에 설명된 바와 같이, 상기 최적화된 항체/항체 분자를 생리적으로 허용가능한 담체와 배합시키는 단계.

따라서, 본 발명은 위에 설명된 바와 같이, β-A4 펩티드/Aβ4/Aβ/A4β/βA4의 2개의 영역들을 특이적으로 인식할 수 있는 최적화 항체 분자들을 추가로 포함한다.

본 발명의 상세한 설명의 예시 서열들:

추가로 서열들은 설명하기 위해서 첨부된 서열목록에 기술되어 있으며, 하기 표 1, 8 및 10에도 나타나 있다.

도 1 HuCAL(상표명)-Fab1 라이브러리의 서열 요약

번호매김(numbering)은 VLλ 위치 9내 갭(gap)을 제외한 VBASE에 따른다. VBASE에서, 갭은 위치 10에 설정되어 있다(Chothia et al., 1992). 서열 요약에서, 일정하게 유지되는 모든 CDR3 잔기들이 나타나 있다. HuCAL-Fab1 라이브러리에 사용되는 대응 서열들은 첨부된 서열 목록에서 확인될 수 있다.

A: 아미노산 서열

B: DNA 서열

도 2 Fab 표시 벡터 pMORPH(상표명)18_Fab

제한 부위들을 포함하는 벡터 맵 및 DNA 서열

도 3 Fab 발현 벡터 pMORPH(상표명)x9_Fab

제한 부위들을 포함하는 벡터 맵 및 DNA 서열

도 4 모 Fab 단편들 MS-Roche-3, MS-Roche-7 및 MS-Roche 8의 서열

A: 아미노산 서열

B: DNA 서열

도 5 인간 측두엽 피질의 저온유지 부위로부터 아밀로이드-플라크의 간접 면역형광법. 상기 플라크들은 엄격한 차단 조건(blocking conditions)하에서 MS-R # 3.2 Fab (상부 패널) 및 MS-R # 7.4 Fab (하부 패널)에 의해 20㎍/㎖(좌측 패널)및 5㎍/㎖(우측 패널)로 표식시켰다. 결합된 MS-R Fab는 염소 항-인간-Cy3에 의해 보여졌다.

도 6 인간 측두엽 피질의 저온유지 부위로부터 아밀로이드-플라크의 간접 면역형광법. 상기 플라크들은 엄격한 차단 조건하에서 MS-R # 3.3 IgG1 (상부 패널) 및 MS-R # 7.12 IgG1 (하부 패널)에 의해 0.05㎍/㎖(좌측 패널) 및 0.01㎍/㎖(우측 패널)로 표식시켰다. 결합된 MS-R IgG1은 염소 항-인간 (H+L)-Cy3에 의해 보여졌다.

도 7 최종 친화성 증강후 항체를 사용한 인간 측두엽 피질의 저온유지 부위로부터 아밀로이드-플라크의 간접 면역형광법. 상기 플라크들은 MS-R # 7.9.H7 IgG1 (MAB 31, 상부 패널), MS-R # 7.11.H1x7.2.L1 IgG1 (MAB 11, 중간 패널) 및 MS-R # 3.4.H7, 하부 패널)에 의해 표식시켰다. 항체들은 엄격한 차단 조건하에서 0.05㎍/㎖(좌측 패널) 및 0.01㎍/㎖(우측 패널)로 사용하였다. 결합된 MS-R IgG1은 염소 항-인간-(H+L)-Cy3에 의해 보여졌다.

스케일: 8.5 ㎜ = 150 ㎛

도 8 중합 분석. 항-Aβ 항체들은 미리형성된 Aβ 응집체에 바이오티닐화 Aβ의 삽입을 억제한다.

도 9 해중합 분석. 항-Aβ 항체들은 응집된 Aβ로부터 바이오티닐화 Aβ의 방출을 유도한다.

도 10 1㎎의 MS-Roche IgG #7.9.H2 x 7.12.L2를 정맥내 주사한 후 APP/PS2 이중 형질전환 마우스내 아밀로이드 플라크의 생체내 데코레이션. 3일후,상기 마우스에 인산완충 식염수를 관류시키고, 희생시켰다. 염소 항-인간 IgG-Cy3 콘쥬게이트(패널 B)에 의해 전두엽으로부터의 저온유지 부분들을 표식시킨후 공초점(confocal) 현미경법에 의해 아밀로이드 플라크에 결합된 인간 IgG의 존재를 확인하였다. 같은 부분을 항-Aβ 마우스 모노클로날 항체(BAP-2-Alexa488 콘쥬게이트, 패널 A)에 의해 대조염색시켜서 아밀로이드 플라크의 위치를 시각화하였다. 각각의 적색(패널 B) 및 녹색(패널 A) 채널들, 병합된 영상(패널 D) 및 코로칼라이즈(corocalized, 패널 C) 신호들이 도시되어 있다.

스케일: 1 ㎝ = 50 ㎛

도 11: 1㎎의 MS-Roche IgG #7.9.H4 x 7.12.L2을 정맥내 주사한 후 APP/PS2 이중 형질전환 마우스내 아밀로이드 플라크의 생체내 데코레이션. 실험 조건들 및 염색 과정은 도 10의 일람에 기술된 내용과 동일했다.

스케일: 1.6 ㎝ = 50 ㎛

도 12: 1㎎의 MS-Roche IgG #7.11.H1 x 7.2.L1 (MAB 11)을 정맥내 주사한 후 APP/PS2 이중 형질전환 마우스내 아밀로이드 플라크의 생체내 데코레이션. 실험 조건들 및 염색 과정은 도 10의 일람에 기술된 내용과 동일했다.

스케일: 1.4 ㎝ = 70 ㎛

도 13: 0일, 3일 및 6일후 2㎎의 MS-Roche IgG #7.9.H7 (MAB 31)을 정맥내 주사한 후 APP/PS2 이중 형질전환 마우스내 아밀로이드 플라크의 생체내 데코레이션. 9일후, 상기 마우스에 인산완충 식염수를 관류시키고, 희생시켰다. 염소 항-인간 IgG-Cy3 콘쥬게이트(패널 B)에 의해 전두엽으로부터의 저온유지 부분들을표식시킨후 공초점 현미경법에 의해 아밀로이드 플라크에 결합된 인간 IgG의 존재를 확인하였다. 같은 부분을 항-Aβ 마우스 모노클로날 항체(BAP-2-Alexa488 콘쥬게이트, 패널 A)에 의해 대조염색시켜서 아밀로이드 플라크의 위치를 시각화하였다. 각각의 적색(패널 B) 및 녹색(패널 A) 채널들, 병합된 영상(패널 D) 및 코로칼라이즈(패널 C) 신호들이 도시되어 있다.

스케일: 1.6 ㎝ = 80 ㎛(패널 A, B, C); 1.0 ㎝ = 50 ㎛(패널 D)

도 14: 0일, 3일 및 6일후 2㎎의 MS-Roche IgG #7.11.H1 x 7.2.L1 (MAB 11)을 정맥내 주사한 후 APP/PS2 이중 형질전환 마우스내 아밀로이드 플라크의 생체내 데코레이션. 실험 조건들 및 염색 과정은 도 13의 일람에 기술된 내용과 동일했다.

스케일: 1.6 ㎝ = 80 ㎛

도 15: 세포 표면 APP에 대한 항-Aβ항체의 결합 분석. 인간 APP-형질감염된 HEK293 세포들 및 형질감염되지 않은 대조군 세포들에 대한 항체 결합을 유세포 분석법(flow cytometry)으로 분석하였다.

실시예는 본 발명은 설명한다.

실시예 1: 인간 조합 항체 라이브러리(HuCAL(상표명)-Fab 1)의 구조(construction) 및 선별(screening)

HuCAL(상표명)-Fab 1의 클로닝

HuCAL(상표명)-Fab 1은 Fab 항체 단편 포맷의 완전 합성 모듈 인간 항체 라이브러리이다.

단쇄 형태의 항체 라이브러리로부터 출발하여 HuCAL(상표명)-Fab 1을 조립하였다(HuCAL(상표명)-scFv; Knappik,(2000), J. Mol. Biol. 296, 57-86).

Vλ 위치 1 및 2. 실제 N-말단: VLλ1: QS (CAGAGC), VLλ2: QS (CAGAGC) 및 VLλ3: SY (AGCTAT)를 갖는 원형(original)의 HuCAL(상표명) 마스터 유전자들이 구성되었다. 상기 아미노산들을 함유하는 서열들은 WO 97/08320에 개시되어 있다. HuCAL(상표명) 라이브러리 구조화동안, 첫번째 2개의 아미노산들은 DI로 변형되어 라이브러리 클로닝(EcoRI 부위)을 용이하게 하였다. 모든 HuCAL(상표명) 라이브러리들은 5'-말단에서 EcoRV 부위 GATATC (DI)를 갖는 VLλ 유전자들을 함유한다. 모든 HuCAL(상표명) 카파 유전자들(라이브러리내 마스터 유전자들과 모든 유전자들)은 5'-말단에 DI를 함유한다(도 1A 및 B).

VH 위치 1. 실제 N-말단: 첫번째 아미노산으로서 Q (=CAG)를 갖는 VH1A, VH1B, VH2, VH4 및 VH6, 첫번째 아미노산으로서 E (=GAA)를 갖는 VH3 및 VH5를 갖는 원형의 HuCAL(상표명) 마스터 유전자들이 구성되었다. 상기 아미노산들을 함유하는 서열들은 WO 97/08320에 개시되어 있다. HuCAL(상표명)-Fab1 라이브러리의 클로닝동안, VH의 위치 1에서의 아미노산이 모든 VH 유전자들에서 Q(CAG)로 변형되었다(도 1A 및 B).

CDR 라이브러리의 설계

Vκ1/Vκ3 위치 85. CDR3 라이브러리를 삽입시키기 위해 사용된 카세트 돌연변이 과정(인용된 Knappik, (2000))때문에, Vκ1 및 Vκ3의 위치 85는 T 또는 V일 수 있다. 따라서, HuCAL(상표명)-scFv1 라이브러리 구조화동안 Vκ1 및 Vκ3의위치 85는 이하와 같이 변형되었다: Vκ1 원형, 85T(코돈 ACC); Vκ1 라이브러리, 85T 또는 85V (TRIM 코돈 ACT 또는 GTT); Vκ3 기원, 85V (코돈 GTG); Vκ3 라이브러리, 85T 또는 85V (TRIM 코돈 ACT 또는 GTT); HuCAL(상표명)-Fab1에도 동일하게 적용된다.

CDR3 설계. 일정하게 유지되는 모든 CDR3 잔기들은 도 1A 및 B에 개시되어 있다.

CDR3 길이. 설계된 CDR3 길이 분포는 이하와 같다. 다양한 잔기들은 도 1에서 괄호(x)안에 표시되어 있다. V 카파 CDR3, 8개의 아미노산 잔기들(위치 89 - 96)(때로는 7-10개의 잔기들), Q89, S90 및 D92는 고정되어 있으며, VH CDR3, 5 내지 28개의 아미노산 잔기들(위치 95 - 102)(때로는 4-28개의 잔기들), D101이 고정되어 있다.

HuCAL(상표명)-Fab 1은 파지미드(phagemid) 발현 벡터 pMORPH(상표명)18_Fab1로 클론되었다(도 2). 상기 벡터는 필라멘트 파지의 절단된 유전자 Ⅲ 단백질에 C-말단에서 융합된 phoA 신호 서열을 갖는 Fd 단편을 포함하며, ompA 신호 서열을 갖는 경쇄 VL-CL을 추가로 포함한다. 두 사슬 모두 lac 오페론의 조절하에 있다. 일정한 영역 Cλ, Cκ 및 CH1은 HuCAL(상표명)의 모듈 시스템과 완전히 화합하는 합성 유전자이다(Knappik, (2000) 인용 문헌).

β-락타마제 전사 유닛(bla)을 함유하는 1205bp 견본(dummy) 단편으로 전체 VH-쇄(MunI/StyI-단편)를 치환시켜서, 벡터 단편 제조를 위한 이후의 단계들을 용이하게 하였으며, 완전한 VH 제거를 선택하였다.

VH-치환후, EcoRI/DraIII로 VL_λ를 제거하고, EcoRI/BslWI 로 VL_κ를 제거하였으며, 세균성 알칼리 포스파타아제(bap) 유전자 단편(1420bp)으로 치환하였다.

경쇄의 가변성이 중쇄의 가변성보다 낮기 때문에, 클로닝은 경쇄 라이브러리로 개시하였다. HuCAL(상표명)-scFv 라이브러리 (Knappik, (2000), 인용 문헌)에 대해 발생되었던, L-CDR3에서 다양화된 VL_λ및 VL_κ경쇄 라이브러리들은 HuCAL(상표명)-Fab1을 클로닝하는데 사용되었다. λ의 경우에, 이들은 λ1-HuCAL(상표명), λ2-HuCAL(상표명) 및 λ3-HuCAL(상표명)-프레임워크로 구성되었으며, 5.7×10⁶의 전체 가변성을 가졌다. VL_λ단편들을 프라이머 5'-GTGGTGGTTCCGATATC-3´ (서열 번호 28) 및 5´- AGCGTCACACTCGGTGCGGCTTTCGGCTGGCCAAGAACGGTTA-3´ (서열 번호 29)를 갖는 15번의 PCR 주기(Pwo-폴리머라아제)에 의해 증폭시켰다. PCR-생성물들을 EcoRV/DraIII로 소화시키고, 겔-정제하였다. VL_λ-라이브러리의 경우에, EcoRV/DraIII에 의해 bap-견본(bap-dummy)을 라이브러리 벡터로부터 제거하였다. 겔정제된 벡터 2㎍을 3배 몰과량의 VL_λ-쇄와 16℃에서 16h동안 결찰(ligate)시키고, 결찰 혼합물을 E. coli TOP10F 세포 800㎕(Invitrogen)에서 전기천공하여, 4.1×10⁸개의 독립적 콜로니를 수득하였다. 형질전환체를 2×YT/1% 글루코스/34㎍/㎖ 클로람페니콜/100㎍/㎖ 암피실린내에서 약 2000배로 증폭시키고, 수확하고, -80℃에서 20%(w/v) 글리세롤에 저장하였다.

κ 라이브러리는 5.7×10⁶의 전체 가변성을 갖는 κ1-, κ2-, κ3- 및 κ4-HuCAL(상표명) 마스터 유전자들을 포함한다. EcoRV/BsiWI에 의한 제한 소화에 의해 VLκ-쇄를 수득하고, 겔-정제하였다. VLκ-라이브러리의 경우에, bap-견본을 라이브러리 벡터로부터 EcoRV/BsiWI에 의해 제거하였다. 겔-정제된 벡터 2㎍를 5배 몰과량의 VL_κ-쇄와 혼합하였다. 결찰 및 E. coli TOP10F 세포(Invitrogen)로의 형질전환을 VL_λ-쇄에 대한 방법대로 수행하여 1.6×10⁸개의 독립적 콜로니를 수득하였다.

2개의 경쇄 라이브러리의 DNA를 제조하고, MunI/StyI에 의해 bla-견본을 제거하고, 그럼으로써 VH 서브-라이브러리의 삽입을 위해 2개의 벡터들을 생성시켰다. HuCAL(상표명)-scFv의 VH 라이브러리는 HuCAL(상표명)-Fab1의 생성에 사용되었다. HuCAL(상표명)-scFv의 VH 라이브러리는 CDR3 길이가 각각 다른 2개의 VH-CDR3 트리뉴클레오티드 라이브러리 카세트에 의해 분화된 마스터 유전자 VH1A/B-6으로 구성되어 있으며, 각 VH-라이브러리는 VL_κ-라이브러리 및 VL_λ-라이브러리와 조합하였다. HuCAL(상표명)-Fab1을 생성시키기 위해, 상기 VH-라이브러리로부터 원래의 가변성을 유지하는 DNA를 제조하였다. 상기 DNA를 MunI/StyI로 소화시키고, 겔정제하였다. 22℃에서 4시간동안 5배 몰과량의 VH-쇄를 VL_λ-라이브러리 벡터 3㎍ 및 VLκ-라이브러리 벡터 3㎍로 결찰시켰다. E. coli TOP10F 세포들(Invitrogen) 1200㎕내에서 각 벡터에 대해 상기 결찰 혼합물을 전기천공시켜서, 2.1×10¹⁰개의 독립적 콜로니를 수득하였다. 형질전환체를 2 x YT/1% 글루코스/34 ㎍/클로람페니콜(㎖)/10 ㎍/테트라사이클린(㎖) 내에서 약 4000배 증폭시키고, 수확하여 -80℃에서 20%(w/v) 글리세롤에 저장하였다.

품질 대조군으로서, 단일 클론의 경쇄 및 중쇄를 각각 5´-CAGGAAACAGCTATGAC-3´ (서열 번호 30) 및 5´-TACCGTTGCTCTTCACCCC-3´ (서열 번호 31)로 서열화하였다.

파지미드 추출, 파지 증폭 및 정제

클로람페니콜 34㎍/㎖, 테트라사이클린 10㎍/㎖ 및 1% 글루코스를 함유하는 2×TY 배지(2×TY-CG)내에서 HuCAL(상표명)-Fab 1을 증폭시켰다. 37℃ 및 약 0.5의 OD₆₀₀에서 헬퍼 파지 감염(VCSM13), 원심 분리 및 2×TY/34㎍/㎖의 클로람페니콜/50㎍/㎖의 카나마이신 세포 내에서의 재현탁하여 30℃에서 밤새 배양하였다. 파지는 상층액으로부터 PEG-침전되었으며(Ausubel, (1998), Current protocols in molecular biology. John Wiley & Sons, Inc., New York, USA), PBS/20% 글리세롤내에 재현탁시키고, -80℃에서 저장하였다. 2개의 패닝 라운드(panning round)사이의 파지 증폭은 이하와 같이 진행하였다: mid-log 파지 TG1-세포들을 용출된 파지로 감염시키고, 글루코스 1% 및 클로람페니콜 34㎍/㎖가 보충된 LB-한천 위에 심었다. 30℃에서 밤새 배양한 후, 콜로니를 조각하고, 0.5의 OD₆₀₀으로 조정하고, 위에 기술된 바와 같이 헬퍼(helper) 파지를 첨가하였다.

실시예 2: 고체상 패닝(Solid phase panning)

NaN₃(0.05% v/v)을 함유하는 TBS내에 용해된 100㎕의 2.5 μM 인간 Aβ(1-40) 펩티드(Bachem)에 의해 MaxiSorp^TM마이크로적정판 F96 (Nunc)의 웰들을 코팅하고, 밀봉된 상기 판을 37℃에서 3일간 배양하고, 여기에서 펩티드는 판위에서 응집하려는 경향이 있다. TBS중의 5% 탈지 건조유에 의해 차단시킨후, 상기 정제된 1-5×10¹²개의 HuCAL(상표명)-Fab 파지를 20℃에서 1시간동안 첨가하였다. 여러번의 세척 단계들 후, 결합된 파지들을 500mM NaCl에 의한 pH-용출, 100mM 글리신으로 pH 2.2하고, 및 1M TRIS-Cl로 pH 7로 중화시킴에 의해 용출시켰다. 3개의 패닝 라운드들을 상기와 같은 각 라운드 사이에서 진행된 파지 증폭에 의해 수행하고, 라운드에서 라운드로 세척의 엄격함을 증가시켰다.

실시예 3: 발현을 위해 선택된 Fab 단편들의 서브클로닝

선택된 HuCAL(상표명)-Fab 단편들의 Fab-코딩 삽입물들을 발현 벡터 pMORPH(상표명)x7_FS로 서브클로닝하여 가용성 Fab의 신속 발현을 용이하게 하였다. 선택된 HuCAL(상표명)-Fab 클론의 DNA 제조물을 XbaI/EcoRI로 소화시킨후, Fab 코딩 삽입물(ompA-VL 및 phoA-Fd)을 절단하였다. 정제된 삽입물을 XbaI/EcoRI 절단 벡터 pMORPH(상표명)x7로 서브클로닝하고, scFv 삽입물을 옮겨서 Fab 발현 벡터로 설계된 pMORPH(상표명)x9_Fab1이 생성되었다(도 3). 상기 벡터내에서 발현된 Fab들은 검출 및 정제를 위한 2개의 C-말단 태그(FLAG 및 Strep)를 옮긴다.

실시예 4: ELISA에 의한 Aβ-결합 Fab 단편들의 확인

NaN₃(0.05% v/v)을 함유하는 TBS내에 용해된 20㎕의 2.5 μM 인간 Aβ(1-40) 펩티드(Bachem)로 Maxisorp(상표명) 미세적정판 F384 (Nunc)의 웰들을 코팅하고, 밀봉된 판을 37℃에서 3일간 배양하였으며, 여기에서 펩티드는 판위에 응집하려는 경향이 있다. 각 Fab의 발현은 22℃에서 16시간동안 1mM IPTG에 의해 유도되었다. BEL 분해(붕산, NaCl, EDTA 및 리소자임함유 완충액 pH 8)에 의해 E.coli로부터 가용성 Fab를 추출하고, ELISA에 사용하였다. 알칼리 포스파타아제-콘쥬게이트된 염소 항-Fab 항체에 의해 Fab 단편을 검출하였다(Dianova/Jackson Immuno Research). 340㎚에서 여기(excitation)후, AttoPhos 형광 기질 첨가후 535㎚에서의 방출을 판독하였다(Roche Diagnostics).

실시예 5: 항체 단편의 최적화

선택된 Aβ 결합 항체 단편들의 결합 친화성을 최적화하기 위해, HuCAL(상표명) 라이브러리로부터 CDR3에서 다양화된 모든 카파 사슬(κ1-3)의 풀(pool)로 모 VL κ3쇄를 치환함으로써, Fab 단편들중 일부, MS-Roche-3 (MSR-3), MS-Roche-7 (MSR-7) 및 MS-Roche-8 (MSR-8) (도 4)를 Fab 항체 단편들의 라이브러리를 구조화하는데 사용하였다(Knappik et al., 2000).

XbaI/EcoRI를 통해 Fab 단편 MS-Roche-3, 7 및 8을 pMORPH(상표명)x9 _FS로부터 Fab 단편들의 파지 표시를 위한 파지미드계 벡터인 pMORPH(상표명)18로 클로닝하여, pMORPH(상표명)18_Fab1을 생성시켰다(도 2). XbaI/SphI 제한 부위들을 통해 카파쇄 풀을 pMORPH(상표명)18_Fab1로 클로닝하였다.

실시예 2에 기술된 바와 같은 고체 지지체로 코팅된 응집된 인간 Aβ(1-40) 펩티드에 대항하여 패닝함으로써 상기 수득된 Fab 최적화 라이브러리를 선별하였다.

실시예 8에 기술된 Biacore 분석에서 코프-등급화에 의해 최적화된 클론을 확인하였다. 상기 최적화된 클론들 MS-Roche-3.2, 3.3, 3.4, 3.6, 7.2, 7.3, 7.4, 7.9, 7.11, 7.12, 8.1, 8.2를 추가로 특징화하여 개시 단편 MS-Roche-3, MS-Roche-7 및 MS-Roche-8에 비해 개선된 친화도 및 생물학적 활성을 나타냈다(도 4). 기술된 CDR은 HuCAL(상표명) 컨센서스계 항체 유전자 VH3kappa3을 가리킨다. Fab 단편 MS-Roche-7.12는 모 클론 MS-R 7의 HCDR3을 HuCAL(상표명)-Fab 라이브러리로 클로닝하여, Knappik et al., 2000에 기술된 CDR3 카세트에 대한 방법과 동일한 디자인 과정을 사용하여 모두 6개의 CDR 영역들내에서 다양성을 운반함으로써 수득하였다. 상기 라이브러리 카세트는 아미노산의 알려져 있는 자연적 분포 및 Allazikani (Allazikani et al., 1997)에 의해 성립된 표준적인 CDR 구조들의 개념에 따라 강하게 편향되어 설계되었다. 그러나, HuCAL(상표명) 마스터 유전자와 대조적으로, 클론 MS-Roche-7.12는 VL쇄의 위치 49에 아미노산 S를 함유한다(표 1 참조).

첫번째 친화도 증가후 상기 최적화된 Fab는 개시 MS-Roche-3, MS-Roche-7 및 MS-Roche-8 클론에 대해 개선된 특성들을 나타냈다 (도 4). Aβ1-40 및 Aβ-42에 대한 성숙된 Fab의 결합 친화도는 크게 증가하여 모 클론들의 850-1714 nM에 비해22-240 nM의 범위내에서 K_D값을 수득하였다.(표 3). 인간 AD 뇌조직내 아밀로이드 플라크의 면역조직화학 분석법은 또한, 성숙된 클론들의 매우 증가된 염색 프로필을 나타냈으며, 즉 보다 나은 신호 대 배경 비율을 수득하고, 비교적 낮은 농도의 성숙 Fab에서 양성의 플라크 염색이 검출되었다(도 5).

추가의 최적화를 위해, L-CDR3 최적화된 MS-Roche-3, -7 및 -8 (표 1; 도 4)로부터 유도된 항체 단편 세트의 VL CDR1 영역들 및 VH CDR2 영역들을 트리뉴클레오티드-지향 돌연변이화를 사용하는 카세트 돌연변이화에 의해 최적화하였다(Virnekas et al., 1994). 그러므로, Knappik et al., 2000에 기술된 CDR3 카세트에 대한 방법과 동일한 설계 방법을 사용하여 트리뉴클레오티드계 HCDR2 카세트 및 트리뉴클레오티드계 LCDR1 카세트를 구조화하였다. 라이브러리 카세트는 아미노산의 공지된 자연 분포에 대해 크게 편향되게 설계되었으며, 다음으로 Allazikani (Allazikani et al., 1997)에 의해 성립된 표준 CDR 구조의 개념에 따른다. 초기에 선택된 항체 단편들을 최적화하기 위해 사용된 프로토콜은 자연 면역 반응중에 관찰된 체세포 돌연변이에 의한 친화성 증강 방법과 유사하다.

수득된 라이브러리를 상기 기술된 바대로 각각 선별하여, H-CDR2 또는 L-CDR1 영역내에서 클론들을 최적화시켰다. Biacore내 코프-등급화후 Aβ1-40-섬유들에 대한 개선된 코프(koff)에 의해 모든 클론들을 상기와 같이 확인하고, 대응하는 모 클론과 비교했을때 Aβ1-40 또는 Aβ-42 또는 모두에 대해 개선된 친화성을 나타냈다(표 3). 표 1은 최적화된 클론들의 서열 뿐만 아니라 모 클론의 서열특성들을 포함한다. CDR은 HuCAL(상표명) 컨센서스계 항체 유전자 VH3kappa3을 가리킨다.

예를 들어, 표 3에 개시되어 있는 바와 같이 Ab1-40에 대한 MS-Roche-7 모 Fab의 친화성은 L-CDR3 최적화(MS-Roche-7.9)후 1100 nM에서 31 nM의 35배 이상 개선되었으며, H-CDR2 최적화후(MS-Roche-7.9H2)후에 5 nM으로 추가로 개선되었다.

H-CDR2 및 L-CDR1 최적화 방법은 MS-Roche 7.9H2 및 7.9H3에 의해 특별히 보여지는 바와 같이 친화성을 증강시켰을 뿐만 아니라 클론중 일부가 AD 뇌부위내 아밀로이드 플라크의 염색을 크게 개선시켰다.

실시예 6

HuCAL(상표명) 면역글로불린 발현 벡터의 구조

중쇄 클로닝. pcDNA3.1+ (invitrogen)의 다중 클로닝 부위를 제거하고(NheI/ApaI), 리더 서열(NheI/EcoRI), VH-영역(MunI/) 및 면역글로불린 일정 영역(BlpI/ApaI)의 결찰을 위해 HuCAL(상표명) 설계에 사용된 제한 부위들과 화합되는 스터퍼를 삽입하였다. 리더 서열(EMBL 83133)은 Kozak 서열 (Kozak, 1987)을 포함했다. 약 70개의 염기 길이를 갖는 중첩된 올리고뉴클레오티드로 인간 IgG(PIR A02146), IgG4 (EMBL K01316), 및 혈청 IgA1 (EMBL J00220)의 일정 영역을 절단하였다. HuCAL(상표명) 설계와 화합되지 않은 제한 부위들을 제거하기 위해 사일런트 돌연변이(silent mutation)를 도입하였다. 확장-PCR을 중첩시킴으로써 올리고뉴클레오티드를 스플라이싱(splice)하였다.

Fab를 IgG로 서브클로닝하는 중에, Mfe I / Blp I를 통해 Fab의 VH DNA 서열을 절단하고, EcoR I / Blp I를 통해 개방된 IgG 벡터로 결찰시켰다. IgG 발현 벡터로 결찰한후 EcoR I (g/aattc) 및 Mfe I (c/aattg)는 화합가능한 응집성 말단(aatt)과 c/aattg에서 g/aattg로의 Fab 변화에서 원래의 Mfe I 부위의 DNA 서열로 나누어지며, 그럼으로써 Mfe I 및 EcoR I 부위 모두를 파괴시켜서 아미노산을 Q(코돈: caa)에서 E(코돈: gaa)로 변화시켰다.

경쇄 클로닝: pcDNA3.1/Zeo+ (Invitrogen)의 다중 클로닝 부위를 2개의 다른 스터퍼들로 치환시켰다. κ-스터퍼는 κ-리더(NheI/EcoRV), HuCAL(상표명)-scFv Vκ-영역 (EcoRV/BsiWI), 및 κ-쇄 일정 영역 (BsiWI/ApaI)을 삽입하기 위한 제한부위들을 제공하였다. λ-스터퍼내 대응 제한 부위들은 NheI/EcoRV (λ-리더), EcoRV/HpaI (Vλ-영역) 및 HpaI/ApaI (λ-사슬 일정 영역)이었다. λ-리더(EMBL J00241) 뿐만 아니라 κ-리더(EMBL Z00022)는 모두 Kozak 서열을 포함하였다. 인간 κ-(EMBL L00241) 및 λ-쇄(EMBL M18645)의 일정 영역을 상기와 같이 확장-PCR을 중첩시킴에 의해 조립하였다.

IgG-발현 CHO-세포들의 생성. CHO-K1 세포를 IgG 중쇄 및 경쇄 발현 벡터의 동등몰량 혼합물로 동시 형질감염(co-transfect)시켰다. 이중-내성(double-resistant) 형질감염체를 600 ㎍/㎖ G418 및 300 ㎍/㎖ Zeocin (Invitrogen)에 의해 선택하고, 희석을 제한시켰다. 단일 클론들의 상청액을 캡쳐-ELISA에 의해 IgG 발현 평가하였다. 10% 극저 IgG-FCS(Life Technologies)가 보충된 RPMI-1640 배지내에서 양성 클론들을 팽창시켰다. 상청액의 pH를 8.0으로 조정하고, 멸균 여과 한후, 그 용액을 표준 단백질 A 컬럼 크로마토그래피(Poros 20 A, PE Biosystems)에 적용시켰다.

실시예 7: 데카펩티드에 의한 펩스팟(Pepspot) 분석

Aβ(1-42)를 포함하는 이하의 아미노산 서열은 1개의 아미노산의 격자이동(frameshift)에 의해 43개의 중첩 데카펩티드로 분화되었다.

ISEVKM¹DAEF RHDSGYEVHH QKLVFFAEDV GSNKGAIIGL MVGGVVI⁴²ATV IV (서열 번호 414). 따라서, DAEF RHDSGYEVHH QKLVFFAEDV GSNKGAIIGL MVGGVVIA (서열 번호 27)은 Aβ4/β-A4 펩티드의 1개 내지 42개의 아미노산을 나타낸다.

43개의 데카펩티드는 상업적 공급사(Jerini BioTools, 베를린)제 셀룰로스 시트("펩스팟")에 C-말단 공유 부착 및 N-말단 아세틸화에 의해 합성되었다. 상기 셀룰로스 시트를 블로킹(bloking) 버퍼(50 mM Tris.HCl, 140 mM NaCl, 5 mM NaEDTA, 0.05% NP40 (Fluka), 0.25% 젤라틴 (Sigma), 1% 소혈청 알부민 프랙션 V (Sigma), pH 7.4)내에서 모노클로날 항체(2 ㎍/㎖)와 함께 로킹 플랫폼(rocking platform)위에서 2시간동안 배양하였다. 상기 시트를 로킹 플랫폼 위에서 TBS (10 mM Tris.HCl, 150 mM NaCl, pH 7.5)에 의해 3회 3분 세척하였다. 그후, 음극 버퍼(25 mM Tris 염기, 40 mM 6-아미노헥산산, 0.01% SDS, 20% 메탄올)에 의해 습윤시키고, 같은 크기의 PVDF 막(Biorad)과 직면하는 펩티드쪽을 갖는 반-건조 블롯팅 스택에 옮겼다.

반-건조 블롯팅 스택은 펩티드 시트보다 약간 큰 새로 습윤된 필터지(Whatman No.3)로 구성되어 있다:

음극 버퍼에 의해 습윤된 3개의 용지

펩티드 시트

메탄올에 의해 습윤된 PVDF 막 시트

양극 버퍼 1 (30mM Tris 염기, 20% 메탄올)에 의해 습윤된 3개의 용지

양극 버퍼 2 (0.3 mM Tris 염기, 20% 메탄올)에 의해 습윤된 3개의 용지

셀룰로스 시트로부터 항체의 대부분을 용출시키고, 그를 PVDF 막위에 부착시키기에 충분한 40분동안 0.8 mA/㎠의 음극 및 양극 사이의 전류 밀도에서 전이(transfer)를 진행하였다. 그후, PVDF 막을 제2 PVDF 막으로 교환하고, 40분 더전이시켜서 셀룰로스 시트로부터 완전히 용출되도록 하였다.

PVDF 막을 블로킹 버퍼에 10분간 침지시켰다. 그후, HRP-표식된 항-인간 Ig H+L(Pierce)을 1:1000 희석으로 첨가하고, 상기 막을 로킹 플랫폼위에서 1시간동안 배양하였다. TBST(0.005% Tween20을 갖는 TBS)에 의해 3×10분 세척했다. 41㎖의 PBS (20 mM Na-포스페이트, 150 mM NaCl, pH 7.2) 및 10㎕의 30% 과산화수소 (Merck)와 함께 9㎖의 메탄올내에 용해된 4-클로로나프톨 3㎎으로 조성된 용액으로 상기 막을 침지시켜서 색상을 발색시켰다. 청-흑색 스폿이 발색된 후, 상기 막을 물로 광범위하게 세척하고 건조시켰다.

항체-반응성 펩스팟의 임무는 투명한 스폿 매트릭스를 통한 육안 조사에 의해 실시된다. 항체의 에피토프는 반응성 펩티드내 최소 아미노산 서열로서 정의된다. 이와 대조적으로, 마우스 모노클로날 항체(BAP-2, BAP-1, BAP-17 BAP-21, BAP-24, 및 4G8)는 항-인간 Ig 대신에 HRP-표식된 항-마우스 Ig을 사용한 것 외에는 같은 방법으로 분석하였다.

펩스팟 및 ELISA 분석에 의해 나타낸 바와 같이, 1가 Fab 단편들의 친화성 증강 및 전체-길이 IgG1 항체들로의 전환에 의해, 에피토프 인식 서열의 일부 확장이 일어난다는 것을 주목한다. 이는 친화성 증강의 결과로서 항체-항원 상호반응 영역내 보다 접촉성인 지점의 점증, 또는 인접 아미노산과의 약한 상호반응이 검출될 수 있도록 하는 최소 에피토프에 대한 강한 결합과 연관되어 있다. 후자는 Aβ-유도된 펩티드가 전체 길이 IgG 항체들에 의해 정밀조사될 때의 경우이다. 펩스팟 분석에 대해 표 2에 설명되어 있는 바와 같이, N-말단의 인식 서열들 및 중간에피토프들은 모 Fab 및 대응하는 전체 성숙한 IgG 항체들이 비교될 때 3개 이하의 아미노산까지 확장된다. 그러나, C-말단 아미노산에서 공유 부착에 대해 데카펩티드가 변성되며, 따라서 이들 아미노산은 입체적 장해(steric hindrance)로 인해 전체-길이 항체와 쉽게 접속할 수 없다는 것을 유념한다. C-말단 끝에서 1개의 아미노산에 의한 최소 인식 서열의 잠재적 감소 및 에피토프 인식 서열에 최종 C-말단 아미노산이 크게 기여하지 않는 경우라면, 본 발명에 사용된 펩스팟 분석으로 고려되어야 한다.

셀룰로스 시트위에서 데카펩티드에 대한 Fab 및 전체-길이 IgG 항체들의 결합 펩스팟 분석. 숫자들은 항체의 최적 결합을 위해 데카펩티드내에 존재해야 하는 Aβ1-40 서열로부터의 필수 아미노산을 가리킨다. 약한 펩티드 반응성 및 에피토프에 대한 약한 기여는 괄호로 표시되어 있다.

실시예 8:

표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 시험관내 Aβ1-40 및 Aβ1-42 섬유에 결합하는 MS-R Fab 및 MS-R IgG1 항체에 대한 K_D값의 측정

원섬유질화(fibrillar) Aβ에 항-Aβ항체(Fab 및 IgG1)의 결합은 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 온라인 측정하고, 분자 상호작용의 친화성은 Johnson, Anal. Biochem. 1991, 198, 268 - 277, 및 Richalet-Secordel, Anal.Biochem. 1997, 249, 165 - 173에 기술된 바에 따라 측정하였다. Biacore2000 및 Biacore3000 장비들은 상기 측정들을 위해 사용하였다. Aβ1-40 및 Aβ1-42 섬유들은 37℃에서 3일간 10mM Na-아세타트 버퍼(pH 4.0)내 200 ㎍/㎖의 농도로 합성 펩티드를 배양함으로써 시험관내에서 생성되었다. 전기 현미경 분석은 두 펩티드에 대해 원섬유 구조를 확인하였으며, Aβ1-40은 우세하게 짧은 섬유(<1마이크론) 및 Aβ1-42는 우세하게 긴 섬유(>1마이크론)를 나타냈다. 상기 섬유들은 비결정질 응집체와 비구조적 침전체의 불명확한 혼합물보다 더 밀접하게 인간 AD 뇌안에서 응집된 Aβ 펩티드를 나타내는 것으로 고려된다. 섬유들을 1:10으로 희석하고, the Instruction Manual of the manufacturer (BIAapplication Handbook, version AB, Biacore AB, Uppsala, 1998)에 기술된 바와 같이 "Pioneer Sensor Chip F1"에 직접 결합시킨다. 초기 실험예에서, 선택된 MS-Roche Fab들은 그들의 반응 역학에있어서 실질적으로 다르고, 따라서 데이터 분석 방법이 그에 따라 선택되어야 한다는 것을 발견하였다. 느린 역학을 갖는 결합제에 대해, k_off/k_on의 비율로부터의 시간-의존성 센서 반응의 곡선에서 K_D값을 계산하였다. 평형에서 농도-의존성 센서 반응(흡수-등온)으로 핏팅하여 빠른 역학을 갖는 결합제를 분석하였다. 단백질 분석에 의해 측정된 전체 Fab 농도에 기초하여 Biacore 센소그램으로부터 K_D값을 계산하였다. 제1 및 제2 친화성 증강 주기로부터 도출된 클론에 대해, 각 제조시에 활성 Fab의 함량을 Christensen, Analytical Biochemistry (1997) 249, 153 -164에 기술된 방법에 따른 Biacore에서 측정하였다. 즉, Biacore 칩위에서 부동화된 Aβ1-40 섬유들에 결합하는 시간-의존성 단백질을 분석액의 다른 유속에서 질량-제한된 조건하에 관련 단계중에 측정하였다. 측정 채널의 칩 표면위에서 다량의 Aβ 섬유들(2300개의 반응 단위들)을 부동화시키고, (전체 Fab 단백질 농도에 기초하여) 160 nM의 비교적 낮은 분석물 농도에서 실험하여, 질량 제한의 조건들을 실현하였다.

제1 및 제2 친화성 증강 주기후 HuCAL 라이브러리 및 이들의 대응 증가된 유도체들의 1차 선별시에 확인된 선택된 MS-Roche 클론들의 K_D값의 요약은 표 3에 개시되어 있다. 제1 친화성 증강 주기에서, 중쇄 CDR3(VH-CDR3)를 일정하게 유지하고, 경쇄 CDR3(VL-CDR3)의 이분화에 최적화를 집중시켰다. 제2 친화성 주기에서, VL-CDR1 및 VH-CDR2의 이분화를 수행하였다. 제1 증가 주기로부터의 결합제들중 일부는 실시예 6에 기술된 MorphoSys에 의해 개발된 기술에 따른 전체-길이 인간IgG1 항체들로 전환되고, K_D값은 상기 Biacore로 측정하였다. Aβ1-40 및 Aβ1-42 섬유들에 결합하는 전체-길이 IgG1에 대한 K_D값은 표 4에 개시되어 있다.

제2 증가 주기후 H-CDR2 라이브러리 뿐만 아니라 L-CDR1 모두로부터의 성숙한 유도체들을 확인하고, 경쇄 및 중쇄를 조합하였다. 교차-클로닝 계획은 실시예 13에 기술되어 있다. 전체 경쇄들, LCDR1 또는 L-CDR1+2를 교환하였다. 선택된 교차-클로닝된 Fab의 K_D값은 표 8에 개시되어 있다.

제1 및 제2 성숙 주기 및 교차-클로닝된 결합제로부터의 Fab중 일부는 실시예 6에 기술된 MorphoSys에 의해 개발된 기술에 따라 전체-길이 인간 IgG1 항체들로 전환하였다. Aβ1-40 및 Aβ1-42 섬유들에 결합하는 IgG의 K_D값을 Biacore에서 측정하였다. 즉, 2가 착체의 점차적인 형성을 위한 역학 모델을 사용하고, 평형 결합의 Scatchard 형 분석에 의해 K_D값들을 계산하였다. 낮은 항체 농도에서 매우 느린 조합 공정으로 인해(평형에 도달하기 까지 수시간이 걸림), 조합 곡선을 장시간 간격으로 외삽하여 평형 결합 데이터를 수득하였다. 1가 및 2가 착체의 형성을 위한 온(on) 비율 및 오프(off) 비율은 곡선 피트 과정(curve fit procedure)을 통해 측정하고, 외삽에 사용되었다. 상기 R_eq값에 기초하여, Scatchard 분석을 수행하고, 1가 및 2가 착체의 형성을 위한 K_D값을 측정하였다. 데이터는 표 5에 요약되어 있다. 곡선형 Scatchard 플롯으로부터, 높은(2가) 및 낮은(1가) 친화성 상호작용이 제2 친화성 증강 주기로부터 유도된 MS-R IgG 및 교차 클론에 대해 얻어졌다. 상기 2개의 친화성은 표 5에 개시된 범위의 하한 및 상한 K_D값을 나타낸다.

Biacore에서 측정된 Aβ1-40 및 Aβ1-42 섬유들에 결합하는 MS-R Fab에 대한 K_D값. 제1 및 제2 친화성 증강 주기로부터 유도된 클론들에 대해, 값들은 본 명세서에 기술된 각 시료들내에 존재하는 활성 Fab의 함량에 대해 보정된다.^a값은 평형시 농도-의존성 센서 반응에서 계산되었으며; n.d.는 측정되지 않았음을 의미한다.

Biacore에서 측정된 Aβ1-40 및 Aβ1-42 섬유에 결합하는 MS-R IgG1에 대한 K_D값. IgG는 제1 친화성 증강 주기후 선택된 MS-R Fab로부터 유도되었다. 값들은 본 명세서에 기술된 각 시료내에 존재하는 활성 MS-R IgG의 함량에 대해 보정된다.

Biacore에서 측정된 Aβ1-40 및 Aβ1-42 섬유에 결합하는 MS-R IgG1에 대한 K_D값. IgG는 제1 및 제2 친화성 증강 주기후 선택된 MS-R Fab로부터, 및 교차-클로닝된 Fab로부터 유도되었다. 상기 값들은 본 명세서에 기술된 각 시료내에 존재하는 활성 MS-R IgG의 함량에 대해 보정하였다. 제2 친화성 증강 단계에서 유도된 MS-R IgG 및 교차-클로닝된 결합제에 대해 주어진 2개의 K_D값들은 곡선형 Scatchard 플롯으로부터 계산된 높은 및 낮은 친화성 상호작용을 나타낸다. 추가의 다수의 MS-R IgG(예를 들면, MS-R IgG 7.9.H2x7.12.L2 및 MS-R IgG 7.9.H4x7.12.L2)에 의해, 복합 곡선형 Scatchard 블롯들을 수득하고, 따라서 K_D-값들을 측정할 수가 없었다.

실시예 9: 간접 면역형광법에 의한 알츠하이머 병 환자의 뇌 조직내 순수 인간 아밀로이드 플라크의 염색

선택된 MS-Roche Fab 및 전체-길이 IgG1을 면역조직화학 분석법에 의해 β-아밀로이드 플라크에 대한 결합에 대해 시험하였다. 다양한 농도에서 MS-Roche Fab 또는 전체-길이 인간 IgG1 항체들을 사용한 간접 면역형광법으로 (알츠하이머 병으로 양성 진단된 환자의 사후 수득한) 인간 측두엽 피질로부터의 고정되지않은 조직의 냉각(cryostat) 부위들을 표식하였다. Fab 및 IgG1 항체들은 Cy3에 콘쥬게이트된 염소 항-인간 친화성-정제된 F(ab')₂단편 및 Cy3에 콘쥬게이트된 염소 항-인간 (H+L)에 의해 나타났다. 2차 제제들 모두 Jackson Immuno Research로부터 수득하였다. 대조군은 비관련 Fab와 2차 항체를 단독으로 포함했으며, 이들 모두 음성 결과를 나타냈다. 선택된 MS-Roche Fab 및 MS-Roche IgG1 항체들에 의한 플라크 염색의 전형적인 실시예는 도 5 - 7에 도시되어 있다.

실시예 10: 중합화 분석: Aβ 응집의 억제

수성 버퍼에서 수일동안 배양될때 합성 Aβ는 자발적으로 응집하여 알츠하이머 병 환자들의 뇌속 아밀로이드 축적에서 보여지는 것과 유사한 원섬유 구조를 형성한다. 본 발명자들은 알부민과 같은 다른 Aβ-결합 단백질 및 항-Aβ 항체들의 Aβ-중화 포텐셜을 분석하기 위해 미리형성된 Aβ 응집체로의 바이오틴화 Aβ의 도입을 측정하기 위한 시험관내 분석을 개발하였다(Bohrmann et al., 1999, J. Biol.Chem. 274, 15990-15995). Aβ응집에 미치는 소분자들의 영향도 또한 상기 분석법으로 분석될 수 있다.

실험 과정:

NUNC Maxisorb 마이크로적정 판(MTP)을 Aβ1-40과 Aβ1-42(각각 2μM, 100㎕/웰)의 1:1 혼합물로 37℃에서 3일간 코팅한다. 상기 조건하에서 크게 응집된 원섬유 Aβ를 웰 표면위에서 흡착시키고, 부동화시킨다. 그후, 코팅액을 제거하고, 실온에서 2-4시간동안 플레이트를 건조시킨다. (건조된 플레이트는 -20℃에서 저장될 수 있다). 0.05 % Tween 20 (T-PBS) 및 1 % 소혈청 알부민 (BSA)을 함유하는 300㎕/웰 인산염-완충 식염수를 첨가하여 잔류 결합 부위들을 차단한다. 실온에서 1-2시간 배양한 후, 플레이트를 300㎕ T-PBS에 의해 1회 세척하였다. 20 mM Tris-HCl중의 20 nM 바이오틴화 Aβ1-40, 0.05 % NaN₃을 함유하는 150 mM NaCl pH 7.2 (TBS) 및 연속 희석된 항체의 용액을 첨가하고(100㎕/웰), 37℃에서 상기 플레이트를 밤새 배양하였다. 300㎕ T-PBS에 의해 3회 세척한후, 1% BSA를 함유하는 T-PBS에서 1:1000 희석된 스트렙타비딘(streptavidin)-POD 콘쥬게이트(Roche Molecular Biochemicals)를 첨가하고(100㎕/웰), 실온에서 2시간동안 배양하였다. 상기 웰을 T-PBS로 3회 세척하고, 새로 제조된 테트라메틸-벤지딘(TMB) 용액 100㎕/웰을 첨가했다. [TMB 용액의 제조: 30mM 시트르산 10㎖ pH 4.1(KOH로 조정)+ TMB 0.5㎖(1㎖ 아세톤내 TMB 12㎎+메탄올 9㎖)+35% H₂O₂0.01㎖]. 1N H₂SO₄100㎕/웰을 첨가하여 반응을 정지시키고, 미세적정판 판독기에서 450㎚에서 흡광도를 읽었다.

결과:

도 8은 미리 형성된 Aβ1-40/Aβ1-42 응집체에 바이오티닐화 Aβ1-40이 혼입되는 것을 MS-Roche IgG1 항체들이 방해한다는 것을 보여준다. 상기 전체-길이 인간 IgG의 Aβ-중화 능력은 표준 면역화 방법에 의해 발생되고, 실시예 7에 기술된 펩스팟 기술에 의해 분석될 때 Aβ펩티드중 아미노산 잔기 4-6을 특이적으로 인식하는 마우스 모노클로날 항체 BAP-1과 유사하다. 아미노산 4-6과 배제적으로 반응하는 마우스 모노클로날 항체 BAP-2(Brockhaus, 미공고)는 상기 분석에서 상당히 덜 반응적이었다. Aβ1-40 C-말단 특이 항체 BAP-17(Brockhaus, Neuroreport 9 (1998), 1481-1486) 및 Aβ 서열의 위치 17 및 24사이의 에피토프를 인식하는 모노클로날 항체 4G8(Kim, 1988, Neuroscience Research Communication Vol. 2, 121-130)에 의해 낮은 활성이 발견되었다. 10㎍/㎖ 이하의 농도에서 BSA는 바이오티닐화 Aβ의 혼입에 영향을 미치지 않았고, 음성 대조군으로 제공하였다. 그러나, 100㎍/㎖ 초과의 높은 농도에서, BSA는 미리 형성된 Aβ 섬유에 바이오티닐화 Aβ가 결합하는 것을 억제한다고 보고되어 있으며(Bohrmann, (1999) J Biol Chem 274 (23), 15990-5), 이는 BSA와 Aβ의 상호 작용이 높은 친화도를 갖지 않는다는 것을 가리킨다.

실시예 11: 해중합화 분석: 응집된 Aβ로부터 바이오티닐화 Aβ의 방출

유사한 실험 장치에서, 본 발명자들은 응집된 Aβ의 해중합을 유도하기 위하 MS-Roche IgG 항체의 잠재성을 시험하였다. 여러 항-Aβ 항체에 의해 처리하기 전에 미리 형성된 Aβ1-40/Aβ1-42 섬유에 먼저 바이오티닐화 Aβ1-40을 혼입시켰다.바이오티닐화 Aβ의 유리는 중합화 분석에 기술된 것과 같은 분석을 사용하여 측정하였다.

실험 과정:

중합화 분석에 기술된 바와 같이 Aβ1-40과 Aβ1-42의 1:1 혼합물로 NUNC Maxisorb 미세적정판(MTP)을 코팅하였다. 바이오티닐화 Aβ를 혼입하기 위해, 상기 코팅된 플레이트들을 0.05% NaN₃을 함유하는 TBS내 20nM 바이오티닐화 Aβ1-40 200㎕/웰과 함께 37℃에서 밤새 배양한다. T-PBS 300㎕/웰로 상기 플레이트를 3회 세척한 후, 0.05% NaN₃을 함유하는 TBS내에서 연속 희석된 항체들을 첨가하고, 37℃에서 3시간동안 배양한다. 상기 플레이트를 세척하고, 상기와 같이 바이오티닐화 Aβ1-40의 존재에 대해 분석하였다.

결과:

도 9A 내지 9D는 혼입된 바이오티닐화 Aβ1-40의 방출에 의해 측정된 바와 같이 본 발명의 항체가 응집된 Aβ의 해중합을 유도한다는 것을 보여준다. MS-R 항체 및 마우스 모노클로날 항체 BAP-1은 유사하게 작용한 반면, BAP-2, BAP-17 및 4GB 항체들은 부동화 Aβ 응집체의 벌크로부터 바이오티닐화 Aβ를 유리시키는데 있어서 거의 유효하지 않았다. BAP-1은 세포 표면 전체-길이 APP와의 반응성에 의해 MS-R 항체로부터 명확하게 분화될 수 있으며(도 15 참조), 상기 특성들을 갖는 항체들은 잠재 자동면역 반응이 유도될 수 있으므로 치료적 용도에 대해 유용하지 않다. 응집된 Aβ에 노출된 아미노산 잔기 4-6에 대한 특이성에도 불구하고, BAP-2는 모든 N-말단 특이 항체들이 미리 형성된 응집체로부터 Aβ를 방출시키는데 동등하게 유효한 것은 아니라는 것을 보여주는 분석에서 명확하게 낮은 활성을 가진다는 것을 주목한다. MS-Roche IgG는 해중합 활성과 관련하여 BAP-2보다 우수하다. 상기 분석에서 BAP-17 (C-말단-특이적) 및 4G8 (아미노산 잔기 16-24-특이적)의 비교적 낮은 효능은 응집된 Aβ내 2개의 에피토프의 신비로운 성질로 인한 것이다. 중합화 분석에서 언급한 바와 같이, 본 발명에서 사용된 농도에서 BSA는 응집된 Aβ에 아무런 효과도 미치지 않았다.

제2 친화성 증가 주기 및 교차-클로닝된 결합제로부터 유도된 MS-R 항체들은 보통 해중합화 분석(도 9A와 도 9B 및 C의 비교)에서의 높은 효능을 나타내며, 이는 상기 항체들의 증가된 결합 친화성과 일관된다(표 3-5 참조). 모노클로날 항체들 AMY-33 및 6F/3D은 특정의 실험 조건들에서 시험관내 Aβ 응집을 억제한다는 것이 보고되어 있다(각각, Solomon, (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93, 452-455; AMY-33 및 6F/3D 항체들을 Zymed Laboratories Inc., San Francisco (Order No. 13-0100) 및 Dako Diagnostics AG, Zug, Switzerland (Order No. M087201)로부터 수득함). 도 9D에 입증되어 있는 바와 같이, 상기 항체들 모두 해중합화 분석에 있어서 완전히 불활성이었다.

실시예 12: 펩티드 콘쥬게이트 상에서 ELISA에 의한 에피토프 분석

이하의 헵타펩티드(단일 문자 코드)들은 고체-상 합성법에 의해 수득하고, 당 분야에 공지된 기술들을 사용한 액체 크로마토그래피에 의해 정제하였다.

AEFRHDC

EFRHDSC

FRHDSGC

RHDSGYC

HDSGYEC

DSGYEVC

SGYEVHC

YEVHHQC

EVHHQKC

VHHQKLC

HHQKLVC

HQKLVFC

QKLVFFC

KLVFFAC

LVFFAEC

VFFAEDC

FFAEDVC

FAEDVGC

AEDVGSC

EDVGSNC

DVGSNKC

VGSNKGC

GSNKGAC

CSNKGAI

CNKGAII

CKGAIIG

CGLMVGG

CMVGGVV

CGGVVIA

상기 펩티드를 DMSO에 용해하여, 10 mM 농도에 도달하도록 하였다.

소 알부민(필수 지방산 유리 BSA , Sigma Lot 112F-9390)을 0.1M 중탄산나트륨 10 ㎎/㎖에 용해하고, DMSO중의 N-숙신미딜-말레인이미도 프로피오네이트(NSMP, Pierce) 용액 26㎎/㎖중 50㎕의 1㎖당 첨가에 의해 활성화되었다. 실온에서 15분 반응후, 활성화된 BSA를 용매로서 0.1% 소듐 아지드로 PBS중의 겔 여과(NAP-10, Pharmacia)에 의해 정제하였다. BSA로 활성화된 NSMP 50㎕ ( 6.7 ㎎/㎖)를 PBS 50㎕에 의해 희석하고, 0.1% 소듐 아지드 및 펩티드 용액(DMSO중의 1 mM) 10㎕을 첨가했다. 음성 대조군으로서, 펩티드 첨가없이 활성화된 BSA를 머크(mock)-처리하였다. 실온에서 4시간 후, 10mM 시스테인 10㎕을 첨가하여, 반응을 정지시켰다. 분취량의 콘쥬게이트 반응혼합물을 0.1M 중탄산나트륨 버퍼에 의해 1:100 희석시키고, ELISA 플레이트(Nunc Immuno-Plate)의 웰(100 ㎕)에 즉시 채웠다. 4℃에서 16시간동안 방치한 후, (상기와 같은) 차단 버퍼 100㎕을 각 웰에 첨가하고, 30분 더 배양했다. 상기 플레이트를 (상기와 같은) 300 ㎕/well TBST로 2회 세척하고, 차단 버퍼에 10㎍/㎖ 또는 2㎍/㎖로 항체 100㎕을 채웠다. 상기 플레이트를 4℃에서 16시간 유지하고, 300 ㎕ TBST로 2회 세척하였다. HRP-콘쥬게이트 항-인간 Ig H+L (Pierce, 차단 버퍼로 1:1000 희석) 100 ㎕/웰을 첨가하고, 주변 온도에서 1시간 배양하였다. 상기 플레이트를 TBST 300㎕/웰로 3회 세척하였다. 테트라-메틸 벤지딘/과산화 수소 시약 100 ㎕ 첨가에 의해 색상 발색이 개시되었다. 1M 황산 100 ㎕/웰을 첨가하고 5분후 반응을 멈추고, 광학 판독기(Microplate Reader 3550, BioRad)에 의해 450㎚에서 광학 밀도를 측정하였다. 비교를 위해, 마우스 모노클로날 항체들은 항-인간 Ig 대신에 리빌링제(revealing agent)로서 HRP-표식된 항-마우스 Ig를 사용한 것 외에는 같은 방법으로 분석하였다.

Aβ로부터 유도된 상기 헵타펩티드의 특이성을 사용하여, 본 명세서에 기술된 특정 ELISA-시험을 실시하였다. 바람직하게는, 본 발명의 항체는 광학 밀도에 의해 측정된 바와 같이 A-β 유도된 펩티드(AEFRHD; Aβ의 아미노산 2 - 7)와의 반응성이 BSA와 같은 비-관련 단백질/펩티드와 비교될때 "10" 이상의 신호 대 배경 비율을 나타내는(광학 밀도로 측정됨) 항체들을 포함한다. 가장 바람직하게는, 광학 밀도의 비율은 이하의 3개의 Aβ 유도된 펩티드중 1개 이상과의 대응 반응에 대해 "5" 이상이다: (VFFAED; Aβ의 아미노산 18 - 23) 또는 (FFAEDV; Aβ의 아미노산 19 - 24) 또는 (LVFFAE; Aβ의 아미노산 17 - 22).

본 발명의 모 항체 및/또는 성숙 항체들의 대응 결과들은 하기 2개의 표들에개시되어 있다:

MS-R Fabs와 BSA-콘쥬게이트 Aβ 헵타펩티드 2-7 (AEFRHD), 17-22 (LVFFAE), 18-23 (VFFAED) 및 19-24 (FFAEDV)의 반응성. 펩티드-콘쥬게이트 및 비-콘쥬게이트 BSA에 의해 수득된 ELISA 판독값의 비율 (광학 밀도)이 개시되어 있다. 2-7개의 펩티드와 관련하여 17-22, 18-23 및 19-24 펩티드에 의해 수득된 신호 세기도 또한 개시되어 있다.

MS-R IgGs 및 마우스 모노클로날 항체 BAP-1, BAP-2, 4G8, 6E10 Amy-33 및 6F/3D와 BSA-콘쥬게이트 Aβ 헵타펩티드 2-7 (AEFRHD), 17-22 (LVFFAE), 18-23 (VFFAED) 및 19-24 (FFAEDV)의 반응성. 펩티드-콘쥬게이트 및 비-콘쥬게이트 BSA에 의해 수득된 ELISA 판독값의 비율 (광학 밀도)이 개시되어 있다. 2-7개의 펩티드와 관련하여 17-22, 18-23 및 19-24 펩티드에 의해 수득된 신호 세기도 또한 개시되어 있다. * 이 항체는 서열 8-17에 대해 특이적이며, N-말단 또는 중간 에피토프 서열을 인식하지 않는다.

실시예 13: 교차 클론에 의한 최적화 H-CDR2 및 L-CDR1의 배합

HuCAL 라이브러리의 모듈러 설계는 간단한 클로닝 단계에서 2개의 다른 Fab 코딩 유전자의 상보성 결정 영역(CDR)을 교환시킨다. 친화성을 추가로 증강시키기 위해, 성숙된 클론으로부터 독립적으로 최적화된 H-CDR2 및 L-CDR1을 같은 H-CDR3과 배합하는데, 그 이유는 상기 배합에 의해 친화성을 추가로 얻을 수 있는 가능성이 높아지기 때문이다(Yang et al., 1995, J.Mol.Biol. 254, 392-403; Schier et al., 1996b, J.Mol.Biol. 263, 551-567; Chen et al., 1999, J.Mol.Biol. 293, 865-881). 전체 경쇄들 또는 이들의 단편들을 L-CDR1 최적화 주개 클론으로부터 H-CDR2 최적화 수용체 클론으로 전이시켰다. 주개와 수용체 클론들은 단지 동일한 H-CDR3 서열들을 운반할 경우에만 배합되었다. 모든 주개와 수용체 클론들은 VH3-V_κ프레임워크를 운반했다.

이는 L-CDR1-최적화 주개 클론에서 H-CDR2-최적화 수용체 클론으로 전체 경쇄들을 전이시킴으로써 수행되었다. 에피토프 특이성은 클론들을 같은 H-CDR3과 배합함에 의해서만 보존되었다. 경쇄 교환이 클론들과 같은 L-CDR3 사이에서 일어난다면, 이 교환에 의해 H-CDR2-최적화 클론들은 최적화 L-CDR1에 의해서만 수득되었다. 배합되는 클론들의 L-CDR3이 다르다면, H-CDR2-최적화 클론은 최적화 L-CDR1에 더해 다른 L-CDR3(HuCAL 컨센서스 서열에 남은 L-CDR2(Knappik et al., 2000))을 얻으며, MS-Roche #7.12의 유도체가 경쇄의 주개로서 사용된 경우에는 L-CDR1, 2 및 3이 H-CDR2-최적화 수용체 클론으로 교환되었다. 3개의 다른 클로닝 계획들을 사용하였다:

1)제한 엔도뉴클라아제 XbaI 및 SphI를 사용하여, 플라스미드 1(예를 들면, pMx9_Fab_MS-Roche#7.11.H1_FS)로부터 전체 항체 경쇄 단편을 잘라내고, 여기서 수득된 벡터 백본을 XbaI 및 SphI 소화에 의해 생성된 플라스미드 2(예를 들면, pMx9_Fab_MS-Roche#7.2.L1_FS)의 경쇄 단편에 결찰시켰다. 그럼으로써, 모 클론 #7.2.L1의 L-CDR1,2,3 및 모 클론 #7.11.H1의 H-CDR1,2,3을 코딩하여 새로운 플라스미드(학명: pMx9_Fab_MS-Roche#7.11.H1x7.2.L1_FS)가 형성되었다.

2) 제한 엔도뉴클라아제 XbaI 및 Acc65를 사용하여, 플라스미드 1(예를 들면, pMx9_Fab_MS-Roche#7.11.H2_FS)로부터 L-CDR1 코딩 단편을 잘라내고, 여기서 수득된 벡터 백본을 XbaI 및 Acc65I 소화에 의해 생성된 플라스미드 2(예를 들면, pMx9_Fab_MS-Roche#7.12.L1_FS)의 L-CDR1 단편에 결찰시켰다. 그럼으로써, 모 클론 #7.12.L1의 L-CDR1 코딩하여 새로운 플라스미드(학명: pMx9_Fab_MS-Roche#7.11.H2x7.12.L1(L-CDR1)_FS)가 형성된 반면, L-CDR2,3과 H-CDR1,2,3이 모 클론 #7.11.H2로부터 유도되었다.

3) 제한 엔도뉴클라아제 XbaI 및 BamHI를 사용하여, 플라스미드 1(예를 들면, pMx9_Fab_MS-Roche#7.11.H2_FS)로부터 L-CDR1 및 L-CDR2 코딩 단편을 잘라내고, 여기서 수득된 벡터 백본을 XbaI 및 BamHI 소화에 의해 생성된 플라스미드 2(예를 들면, pMx9_Fab_MS-Roche#7.12.L1_FS)의 L-CDR1 및 L-CDR2 단편에 결찰시켰다. 그럼으로써, 모 클론 #7.12.L1의 L-CDR1 및 L-CDR2를 코딩하여 새로운 플라스미드(학명: pMx9_Fab_MS-Roche#7.11.H2x7.12.L1(L-CDR1+2)_FS)가 형성된 반면, L-CDR3 및 H-CDR1,2,3이 모 클론 #7.11.H2로부터 유도되었다.

서열 주개 및 수용체 클론 뿐만 아니라 다른 클로닝 계획에 대한 설명적인 실시예도 표 8에 개시되어 있다.

대규모 발현 및 정제후에, 이들의 친화성을 Aβ(1-40) 섬유들위에서 측정하였다. 그리고, 선택된 교차-클로닝된 MS-R Fab/항체들의 K_D값들은 표 9에 개시되어 있다.

표 8에서 화살표는 대응 플라스미드를 소화시키는데 사용되는 제한 효소 부위들의 위치를 나타낸다.

Biacore에서 측정된 Aβ1-40 및 Aβ1-42 섬유들에 결합하는 교차클로닝된 MS-R Fab에 대한 K_D값. 교차클로닝된 Fab의 제조예는 실시예 13에 설명되어 있다. K_D값들은 역학 곡선 피팅에 의해 측정하고, 본 명세서에 기술된 바와 같이 각 시료내에 존재하는 활성 Fab의 함량에 대해 보정했다. Fab중 일부는 크기 배제 크로마토그래피 또는 제조적 초원심분리에 의해 추가로 정제되어 응집된 물질들을 제거하였다. (L1) L-CDR1 개선된 주개 클론으로부터 L-CDR1만 수용한 H-CDR2-성숙 수용체 클론; (L1+2) L-CDR1 개선된 주개 클론으로부터 L-CDR1+2를 수용한 H-CDR2-성숙 수용체 클론.

실시예 14: 공초점 레이저 주사 현미경 및 코로칼화(colocalization) 분석에 의해 나타나는 알츠하이머 병의 마우스 모델에서의 생체내 아밀로이드 플라크 데코레이션.

APP/PS2 이중 형질전환 마우스에서 아밀로이드 플라크 생체내 데코레이션에 대해, 선택된 MS-R IgG1 항체들을 시험하였다(참조: Richards et al., Soc. Neurosci. Abstr., Vol. 27, Program No. 5467, 2001). 항체(1㎎/마우스)를 정맥내 투여하고, 3일후 뇌에 식염수를 가득 채우고, 동결 단편을 준비하였다. 다른 연구에서는 마우스를 고농도의 항체에 노출시키고, 즉 0일, 3일 및 6일에 2㎎을 정맥내 주사하고, 9일째에 희생시켰다. 아밀로이드 플라크에 결합된 항체들의 존재는 Cy3(#109-165-003, Jackson Immuno Research) 이후 BAP-2-Alexa488 면역 콘쥬게이트(immunoconjugate)에 콘쥬게이트된 염소 항-인간 IgG (H+L)을 사용하여 이중-표식 간접 면역형광법(immunofluorescence)에 의해 고정되지않은 극저온 영역위에서 평가하였다. 영상화는 공초점 레이저 현미경으로 실시하고, 코로칼화를 정량적 검출하기 위한 영상 처리는 IMARIS 및 COLOCALIZATION 소프트웨어 (Bitplane, Switzerland)에 의해 실시하였다. 전형적인 실시예는 도 10-14에 도시되어 있다. 시험된 MS-R 항체들 모두 생체내 아밀로이드 플라크의 면역 데코레이션(immunodecoration)에 있어서 양성이었지만, 일부 다양성이 관찰되었다.

실시예 15: HEK293 세포의 표면위 아밀로이드 전구체 단백질(APP)에 대한 다른 모노클로날 항체들의 결합 조사:

APP는 중추신경계에서 광범위하게 발현된다. 세포 표면 APP에 대한 항체의 결합은 건강한 뇌영역내 활성화 및 세포 파괴를 보충시킨다. 그러므로, APP에 대한 반응성이 없는 치료적 A-β 항체에 대해서 강제적이다. A-β의 N-말단 영역에 대한 고친화성 항체(예를 들면, BAP-1, BAP-2)들은 APP의 프레임워크에서도 각 에피토프를 인식한다. 대조적으로, 중간 에피토프(예를 들면, 4G8)에 대한 항체들 및 본 발명의 항체들은 세포 표면 APP에서 인식할 수 없다. 따라서, A-β를 데코레이트하지만, 생체내 APP가 아닌 본 발명의 항체들은 비-선택적 항체들보다 우수하다.

흐름 세포 측정법(flow cytometry)은 당 분야에 잘 알려져 있다. 흐름 세포 측정법에 의해 측정된 형광의 상대 단위들(FL1-H)은 각 항체의 세포 표면 결합을 나타낸다. 형질감염되지 않은 HEK293 세포들과 비교해 APP 형질감염된 HEK293에서 형광 전이는 세포표면 APP와의 원치않는 반응을 나타낸다. 예로서, N-말단 영역에 대항하는 항체 BAP-1 및 BAP-2는 형질감염되지 않은 HEK293 세포들(점선)과 비교해 HEK293/APP(실선)내 FL-1 신호의 상당한 전이를 나타낸다. (중간 A-β 에피토프에 대해 특이적인) 4G8 항체 및 (N-말단 및 중간 A-β 에피토프에 대해 특이적인) 본 발명의 모든 항체들은 상당한 형광 전이를 나타내지 않는다. HE293/APP 및 HEK293 세포들 사이의 기본적인 형광 차이는 다른 세포 크기에 의해 기인한다. FACScan 장비는 Cellquest Pro 소프트웨어 패키지와 조합하여 사용하였다(둘다 BectonDickinson).

실시예 16: 본 발명의 항체 분자에 관한 확인된 서열 목록

하기 표 10은 특정 본 발명의 항체 분자들에 대해 정의된 서열에 관한 것이다.

SEQUENCE LISTING <110> F. Hoffmann-La Roche AG MorphoSys AG <120> Anti A-beta antibodies and their use <130> F 2842 PCT <140> EP 02003844.4 <141> 2002-02-20 <150> EP 02003844.4 <151> 2002-02-20 <160> 414 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; first region of beta-A4 peptide <400> 1 Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr 1 5 <210> 2 <211> 14 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; second region of beta-A4 peptide <400> 2 Val His His Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly 1 5 10 <210> 3 <211> 368 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH-region of MS-Roche#3 <400> 3 caggtgcaat tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcaac cgggcggcag cctgcgtctg 60 agctgcgcgg cctccggatt tacctttagc agctatgcga tgagctgggt gcgccaagcc 120 cctgggaagg gtctcgagtg ggtgagcgcg attagcggta gcggcggcag cacctattat 180 gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tcacgtgata attcgaaaaa caccctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgcg tgcggaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtcttact 300 cattatgctc gttattatcg ttattttgat gtttggggcc aaggcaccct ggtgacggtt 360 agctcagc 368 <210> 4 <211> 122 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH-region of MS-Roche#3 <400> 4 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 5 <211> 379 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH-region of MS-Roche#7 <400> 5 caggtgcaat tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcaac cgggcggcag cctgcgtctg 60 agctgcgcgg cctccggatt tacctttagc agctatgcga tgagctgggt gcgccaagcc 120 cctgggaagg gtctcgagtg ggtgagcgcg attagcggta gcggcggcag cacctattat 180 gcggatagcg tgaaaggccg tttaccattt cacgtgataa ttcgaaaaac accctgtatc 240 tgcaaatgaa cagcctgcgt gcggaagata cggccgtgta ttattgcgcg cgtggtaagg 300 gtaatactca taagccttat ggttatgttc gttattttga tgtttggggc caaggcaccc 360 tggtgacggt tagctcagc 379 <210> 6 <211> 126 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH-region of MS-Roche#7 <400> 6 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr 100 105 110 Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 7 <211> 374 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH-region of MS-Roche#8 <400> 7 caggtgcaat tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcaac cgggcggcag cctgcgtctg 60 agctgcgcgg cctccggatt tacctttagc agctatgcga tgagctgggt gcgccaagcc 120 cctgggaagg gtctcgagtg ggtgagcgcg attagcggta gcggcggcag cacctattat 180 gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tcacgtgata attcgaaaaa caccctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgcg tgcggaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtcttctt 300 tctcgtggtt ataatggtta ttatcataag tttgatgttt ggggccaagg caccctggtg 360 acggttagct cagc 374 <210> 8 <211> 124 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH-region of MS-Roche#8 <400> 8 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Leu Ser Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Tyr His Lys Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 9 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL-region of MS-Roche#3 <400> 9 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gagcgtgagc agcagctatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcggttta ttattgccag caggtttata atcctcctgt tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 10 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL-region of MS-Roche#3 <400> 10 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asn Pro Pro 85 90 95 Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 11 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL-region of MS-Roche#7 <400> 11 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gagcgtgagc agcagctatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcgactta ttattgcttt cagctttatt ctgatccttt tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 12 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL-region of MS-Roche#7 <400> 12 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Leu Tyr Ser Asp Pro 85 90 95 Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 13 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL-region of MS-Roche#8 <400> 13 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gagcgtgagc agcagctatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcgactta ttattgccag cagctttctt cttttcctcc tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 14 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL-region of MS-Roche#8 <400> 14 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Ser Ser Phe Pro 85 90 95 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 15 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; CDR3 of VL-region of MS-Roche#3 <400> 15 cagcaggttt ataatcctcc tgtt 24 <210> 16 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; CDR3 of VL-region of MS-Roche#3 <400> 16 Gln Gln Val Tyr Asn Pro Pro Val 1 5 <210> 17 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; CDR3 of VL-region of MS-Roche#7 <400> 17 tttcagcttt attctgatcc tttt 24 <210> 18 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; CDR3 of VL-region of MS-Roche#7 <400> 18 Phe Gln Leu Tyr Ser Asp Pro Phe 1 5 <210> 19 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; CDR3 of VL-region of MS-Roche#8 <400> 19 cagcagcttt cttcttttcc tcct 24 <210> 20 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; CDR3 of VL-region of MS-Roche#8 <400> 20 Gln Gln Leu Ser Ser Phe Pro Pro 1 5 <210> 21 <211> 39 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; CDR3 of VH-region of MS-Roche#3 <400> 21 cttactcatt atgctcgtta ttatcgttat tttgatgtt 39 <210> 22 <211> 13 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; CDR3 of VH-region of MS-Roche#3 <400> 22 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 23 <211> 51 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; CDR3 of VH-region of MS-Roche#7 <400> 23 ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 51 <210> 24 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; CDR3 of VH-region of MS-Roche#7 <400> 24 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 25 <211> 45 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; CDR3 of VH-region of MS-Roche#8 <400> 25 cttctttctc gtggttataa tggttattat cataagtttg atgtt 45 <210> 26 <211> 15 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; CDR3 of VH-region of MS-Roche#8 <400> 26 Leu Leu Ser Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Tyr His Lys Phe Asp Val 1 5 10 15 <210> 27 <211> 42 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; beta-A4 peptide <400> 27 Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys 1 5 10 15 Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile 20 25 30 Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala 35 40 <210> 28 <211> 17 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL-primer for <400> 28 gtggtggttc cgatatc 17 <210> 29 <211> 43 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL-primer back <400> 29 agcgtcacac tcggtgcggc tttcggctgg ccaagaacgg tta 43 <210> 30 <211> 17 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; control primer for <400> 30 caggaaacag ctatgac 17 <210> 31 <211> 19 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; control primer back <400> 31 taccgttgct cttcacccc 19 <210> 32 <211> 360 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH MS-Roche#3.6H5 x 3.6L2 <400> 32 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgctatttct gagtctggta agactaagta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtct tactcattat 300 gctcgttatt atcgttattt tgatgtttgg ggccaaggca ccctggtgac ggttagctca 360 <210> 33 <211> 120 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH MS-Roche#3.6H5 x 3.6L2 <400> 33 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala 35 40 45 Ile Ser Glu Ser Gly Lys Thr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 34 <211> 360 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH MS-Roche#3.6H8 x 3.6L2 <400> 34 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgctatttct gagtattcta agtttaagta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtct tactcattat 300 gctcgttatt atcgttattt tgatgtttgg ggccaaggca ccctggtgac ggttagctca 360 <210> 35 <211> 120 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH MS-Roche#3.6H8 x 3.6L2 <400> 35 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala 35 40 45 Ile Ser Glu Tyr Ser Lys Phe Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 36 <211> 372 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH MS-Roche#7.4H2 x 7.2L1 <400> 36 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgctattaat tataatggtg ctcgtattta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtgg taagggtaat 300 actcataagc cttatggtta tgttcgttat tttgatgttt ggggccaagg caccctggtg 360 acggttagct ca 372 <210> 37 <211> 124 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH MS-Roche#7.4H2 x 7.2L1 <400> 37 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala 35 40 45 Ile Asn Tyr Asn Gly Ala Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 38 <211> 372 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH MS-Roche#7.9H2 x 7.12L2 <400> 38 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgctattaat gctgatggta atcgtaagta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtgg taagggtaat 300 actcataagc cttatggtta tgttcgttat tttgatgttt ggggccaagg caccctggtg 360 acggttagct ca 372 <210> 39 <211> 124 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH MS-Roche#7.9H2 x 7.12L2 <400> 39 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala 35 40 45 Ile Asn Ala Asp Gly Asn Arg Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 40 <211> 372 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH MS-Roche#7.9H4 x 7.12L2 <400> 40 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgctattaat gctgttggta tgaagaagtt ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtgg taagggtaat 300 actcataagc cttatggtta tgttcgttat tttgatgttt ggggccaagg caccctggtg 360 acggttagct ca 372 <210> 41 <211> 124 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH MS-Roche#7.9H4 x 7.12L2 <400> 41 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala 35 40 45 Ile Asn Ala Val Gly Met Lys Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 42 <211> 372 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH MS-Roche#7.11H1 x 7.11L1 <400> 42 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cggtattaat gctgctggtt ttcgtactta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtgg taagggtaat 300 actcataagc cttatggtta tgttcgttat tttgatgttt ggggccaagg caccctggtg 360 acggttagct ca 372 <210> 43 <211> 124 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH MS-Roche#7.11H1 x 7.11L1 <400> 43 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly 35 40 45 Ile Asn Ala Ala Gly Phe Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 44 <211> 372 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH MS-Roche#7.11H1 x 7.2L1 <400> 44 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cggtattaat gctgctggtt ttcgtactta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtgg taagggtaat 300 actcataagc cttatggtta tgttcgttat tttgatgttt ggggccaagg caccctggtg 360 acggttagct ca 372 <210> 45 <211> 124 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH MS-Roche#7.11H1 x 7.2L1 <400> 45 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly 35 40 45 Ile Asn Ala Ala Gly Phe Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 46 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL MS-Roche#3.6H5 x 3.6L2 <400> 46 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gtttctttct cgttattatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcggttta ttattgccag cagacttata attatcctcc tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 47 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL MS-Roche#3.6H5 x 3.6L2 <400> 47 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Phe Leu Ser Arg Tyr 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Asn Tyr Pro 85 90 95 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 48 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL MS-Roche#3.6H8 x 3.6L2 <400> 48 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gtttctttct cgttattatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcggttta ttattgccag cagacttata attatcctcc tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 49 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL MS-Roche#3.6H8 x 3.6L2 <400> 49 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Phe Leu Ser Arg Tyr 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Asn Tyr Pro 85 90 95 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 50 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL MS-Roche#7.4H2 x 7.2L1 <400> 50 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gtatgttgat cgtacttatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcgactta ttattgccag cagatttatt cttttcctca tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 51 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL MS-Roche#7.4H2 x 7.2L1 <400> 51 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Val Asp Arg Thr 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Ser Phe Pro 85 90 95 His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 52 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL MS-Roche#7.9H2 x 7.12L2 <400> 52 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gcgttttttt tataagtatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttct ggttcttcta accgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcggttta ttattgcctt cagctttata atattcctaa tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 53 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL MS-Roche#7.9H2 x 7.12L2 <400> 53 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Phe Phe Tyr Lys 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Ser Gly Ser Ser Asn Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro 85 90 95 Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 54 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL MS-Roche#7.9H4 x 7.12L2 <400> 54 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gcgttttttt tataagtatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttct ggttcttcta accgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcggttta ttattgcctt cagctttata atattcctaa tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 55 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL MS-Roche#7.9H4 x 7.12L2 <400> 55 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Phe Phe Tyr Lys 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Ser Gly Ser Ser Asn Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro 85 90 95 Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 56 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL MS-Roche#7.11H1 x 7.11L1 <400> 56 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gcgtattctt cgtatttatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcgactta ttattgccag caggtttatt ctcctcctca tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 57 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL MS-Roche#7.11H1 x 7.11L1 <400> 57 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Ile Leu Arg Ile 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Ser Pro Pro 85 90 95 His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 58 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL MS-Roche#7.11H1 x 7.2L1 <400> 58 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gtatgttgat cgtacttatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcgactta ttattgccag cagatttatt cttttcctca tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 59 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL MS-Roche#7.11H1 x 7.2L1 <400> 59 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Val Asp Arg Thr 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Ser Phe Pro 85 90 95 His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 60 <211> 39 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> HCDR3 MS-Roche#3.6H5 x 3.6L2 <400> 60 cttactcatt atgctcgtta ttatcgttat tttgatgtt 39 <210> 61 <211> 13 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> HCDR3 MS-Roche#3.6H5 x 3.6L2 <400> 61 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 62 <211> 39 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> HCDR3 MS-Roche#3.6H8 x 3.6L2 <400> 62 cttactcatt atgctcgtta ttatcgttat tttgatgtt 39 <210> 63 <211> 13 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> HCDR3 MS-Roche#3.6H8 x 3.6L2 <400> 63 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 64 <211> 51 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> HCDR3 MS-Roche#7.4H2x7.2L1 <400> 64 ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 51 <210> 65 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> HCDR3 MS-Roche#7.4H2x7.2L1 <400> 65 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 66 <211> 51 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> HCDR3 MS-Roche#7.9H2x7.12L2 <400> 66 ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 51 <210> 67 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> HCDR3 MS-Roche#7.9H2x7.12L2 <400> 67 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 68 <211> 51 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> HCDR3 MS-Roche#7.9H4x7.12L2 <400> 68 ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 51 <210> 69 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> HCDR3 MS-Roche#7.9H4x7.12L2 <400> 69 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 70 <211> 51 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> HCDR3 MS-Roche#7.11H1x7.11L1 <400> 70 ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 51 <210> 71 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> HCDR3 MS-Roche#7.11H1x7.11L1 <400> 71 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 72 <211> 51 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> HCDR3 MS-Roche#7.11H1x7.2L1 <400> 72 ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 51 <210> 73 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> HCDR3 MS-Roche#7.11H1x7.2L1 <400> 73 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 74 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> LCDR3 MS-Roche#3.6H5 x 3.6L2 <400> 74 cagcagactt ataattatcc tcct 24 <210> 75 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> LCDR3 MS-Roche#3.6H5 x 3.6L2 <400> 75 Gln Gln Thr Tyr Asn Tyr Pro Pro 1 5 <210> 76 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> LCDR3 MS-Roche#3.6H8 x 3.6L2 <400> 76 cagcagactt ataattatcc tcct 24 <210> 77 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> LCDR3 MS-Roche#3.6H8 x 3.6L2 <400> 77 Gln Gln Thr Tyr Asn Tyr Pro Pro 1 5 <210> 78 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> LCDR3 MS-Roche#7.4H2x7.2L1 <400> 78 cagcagattt attcttttcc tcat 24 <210> 79 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> LCDR3 MS-Roche#7.4H2x7.2L1 <400> 79 Gln Gln Ile Tyr Ser Phe Pro His 1 5 <210> 80 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> LCDR3 MS-Roche#7.9H2x7.12L2 <400> 80 cttcagcttt ataatattcc taat 24 <210> 81 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> LCDR3 MS-Roche#7.9H2x7.12L2 <400> 81 Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro Asn 1 5 <210> 82 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> LCDR3 MS-Roche#7.9H4x7.12L2 <400> 82 cttcagcttt ataatattcc taat 24 <210> 83 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> LCDR3 MS-Roche#7.9H4x7.12L2 <400> 83 Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro Asn 1 5 <210> 84 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> LCDR3 MS-Roche#7.11H1x7.11L1 <400> 84 cagcaggttt attctcctcc tcat 24 <210> 85 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> LCDR3 MS-Roche#7.11H1x7.11L1 <400> 85 Gln Gln Val Tyr Ser Pro Pro His 1 5 <210> 86 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> LCDR3 MS-Roche#7.11H1x7.2L1 <400> 86 cagcagattt attcttttcc tcat 24 <210> 87 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> LCDR3 MS-Roche#7.11H1x7.2L1 <400> 87 Gln Gln Ile Tyr Ser Phe Pro His 1 5 <210> 88 <211> 378 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH MS-Roche#7.9H7 <400> 88 caggtgcaat tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcaac cgggcggcag cctgcgtctg 60 agctgcgcgg cctccggatt tacctttagc agctatgcga tgagctgggt gcgccaagcc 120 cctgggaagg gtctcgagtg ggtgagcgct attaatgctt ctggtactcg tacttattat 180 gctgattctg ttaagggtcg ttttaccatt tcacgtgata attcgaaaaa caccctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgcg tgcggaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtggtaag 300 ggtaatactc ataagcctta tggttatgtt cgttattttg atgtttgggg ccaaggcacc 360 ctggtgacgg ttagctca 378 <210> 89 <211> 126 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH MS-Roche#7.9H7 <400> 89 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asn Ala Ser Gly Thr Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr 100 105 110 Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 90 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL MS-Roche#7.9H7 <400> 90 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gagcgtgagc agcagctatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcgactta ttattgcctt cagatttata atatgcctat tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 91 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL MS-Roche#7.9H7 <400> 91 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro 85 90 95 Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 92 <211> 51 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR3 MS-Roche#7.9H7 <400> 92 ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 51 <210> 93 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR3 MS-Roche#7.9H7 <400> 93 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 94 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 MS-Roche#7.9H7 <400> 94 cttcagattt ataatatgcc tatt 24 <210> 95 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 MS-Roche#7.9H7 <400> 95 Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro Ile 1 5 <210> 96 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#3 <400> 96 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 97 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR2 of MS-Roche#3 <400> 97 Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 98 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#3 <400> 98 Gln Gln Val Tyr Asn Pro Pro Val 1 5 <210> 99 <211> 10 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR1 of MS-Roche#3 <400> 99 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser 1 5 10 <210> 100 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3 <400> 100 Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 101 <211> 13 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR3 of MS-Roche#3 <400> 101 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 102 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#3.1 <400> 102 Gln Gln Val Tyr Ser Val Pro Pro 1 5 <210> 103 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#3.2 <400> 103 Gln Gln Ile Tyr Ser Tyr Pro Pro 1 5 <210> 104 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#3.3 <400> 104 His Gln Met Ser Ser Tyr Pro Pro 1 5 <210> 105 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#3.4 <400> 105 Gln Gln Thr Tyr Asp Tyr Pro Pro 1 5 <210> 106 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#3.5 <400> 106 Gln Gln Ile Tyr Asp Tyr Pro Pro 1 5 <210> 107 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#3.6 <400> 107 Gln Gln Thr Tyr Asn Tyr Pro Pro 1 5 <210> 108 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.2H1 <400> 108 Ala Ile Ser Glu His Gly Leu Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 109 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.2H2 <400> 109 Ala Ile Ser Gln Arg Gly Gln Phe Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 110 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.3H1 <400> 110 Val Ile Ser Glu Lys Ser Arg Phe Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 111 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.3H2 <400> 111 Val Ile Ser Gln Glu Ser Gln Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 112 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.3H3 <400> 112 Ala Ile Ser Gln Asn Gly Phe His Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 113 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.4H1 <400> 113 Ala Ile Ser Glu Thr Ser Ile Arg Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 114 <211> 16 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.4H2 <400> 114 Val Ile Asp Met Val Gly His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 115 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.4H3 <400> 115 Val Ile Ser Gln Thr Gly Arg Lys Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 116 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.4H4 <400> 116 Ala Ile Ser Glu Thr Gly Met His Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 117 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.4H5 <400> 117 Val Ile Ser Gln Val Gly Ala His Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 118 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.4H6 <400> 118 Ala Ile Ser Glu Ser Gly Trp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 119 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.4H7 <400> 119 Val Ile Ser Glu Thr Gly Lys Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 120 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.4H8 <400> 120 Ala Ile Ser Glu His Gly Arg Phe Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 121 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.4H9 <400> 121 Ala Ile Ser Glu Ser Ser Lys Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 122 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.4H10 <400> 122 Ala Ile Ser Glu Ser Gly Arg Gly Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 123 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.4H11 <400> 123 Ala Ile Ser Glu Phe Gly Lys Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 124 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.4H12 <400> 124 Val Ile Ser Gln Thr Gly Gln Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 125 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.4H13 <400> 125 Ala Ile Ser Glu Gln Gly Arg Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 126 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.4H14 <400> 126 Ala Ile Ser Glu Ser Gly Gln Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 127 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.4H16 <400> 127 Ala Ile Ser Glu Ser Gly Val Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 128 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.4H17 <400> 128 Ala Ile Ser Glu Phe Gly Gln Phe Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 129 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.4H18 <400> 129 Ala Ile Ser Gln Gln Ser Asn Phe Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 130 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#3.4L7 <400> 130 Arg Ala Ser Gln Arg Leu Gly Arg Leu Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 131 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#3.4L8 <400> 131 Arg Ala Ser Gln Trp Ile Thr Lys Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 132 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#3.4L9 <400> 132 Arg Ala Ser Arg Arg Ile His Val Tyr Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 133 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#3.4L11 <400> 133 Arg Ala Ser Gln Leu Val Gly Arg Ala Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 134 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.6H1 <400> 134 Val Ile Ser Glu Ser Gly Gln Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 135 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.6H2 <400> 135 Val Ile Ser Glu Arg Gly Ile Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 136 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.6H3 <400> 136 Val Ile Ser Glu Thr Gly Lys Phe Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 137 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.6H4 <400> 137 Ala Ile Ser Glu Arg Gly Arg His Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 138 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.6H5 <400> 138 Ala Ile Ser Glu Ser Gly Lys Thr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 139 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.6H6 <400> 139 Ala Ile Ser Glu His Gly Thr Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 140 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#3.6H8 <400> 140 Ala Ile Ser Glu Tyr Ser Lys Phe Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 141 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#3.6L1 <400> 141 Arg Ala Ser Gln Phe Ile Gln Arg Phe Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 142 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#3.6L2 <400> 142 Arg Ala Ser Gln Phe Leu Ser Arg Tyr Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 143 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#7 <400> 143 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 144 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR2 of MS-Roche#7 <400> 144 Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 145 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#7 <400> 145 Phe Gln Leu Tyr Ser Asp Pro Phe 1 5 <210> 146 <211> 10 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR1 of MS-Roche#7 <400> 146 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser 1 5 10 <210> 147 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7 <400> 147 Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 148 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR3 of MS-Roche#7 <400> 148 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 149 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#7.1 <400> 149 His Gln Leu Tyr Ser Ser Pro Tyr 1 5 <210> 150 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3of MS-Roche#7.2 <400> 150 Gln Gln Ile Tyr Ser Phe Pro His 1 5 <210> 151 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#7.3 <400> 151 His Gln Val Tyr Ser His Pro Phe 1 5 <210> 152 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#7.4 <400> 152 Gln Gln Ile Tyr Asn Phe Pro His 1 5 <210> 153 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#7.5 <400> 153 His Gln Val Tyr Ser Ser Pro Phe 1 5 <210> 154 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#7.6 <400> 154 His Gln Leu Tyr Ser Pro Pro Tyr 1 5 <210> 155 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#7.7 <400> 155 His Gln Val Tyr Ser Ala Pro Phe 1 5 <210> 156 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#7.8 <400> 156 His Gln Val Tyr Ser Phe Pro Ile 1 5 <210> 157 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#7.9 <400> 157 Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro Ile 1 5 <210> 158 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#7.10 <400> 158 Gln Gln Val Tyr Asn Pro Pro His 1 5 <210> 159 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#7.11 <400> 159 Gln Gln Val Tyr Ser Pro Pro His 1 5 <210> 160 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#7.12 <400> 160 Arg Ala Ser Gln Tyr Val Ser Ser Pro Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 161 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR2 of MS-Roche#7.12 <400> 161 Gly Ser Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 162 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#7.12 <400> 162 Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro Asn 1 5 <210> 163 <211> 10 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR1 of MS-Roche#7.12 <400> 163 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met Ser 1 5 10 <210> 164 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.12 <400> 164 Asn Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 165 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR3 of MS-Roche#7.12 <400> 165 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 166 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#7.13 <400> 166 His Gln Val Tyr Ser Pro Pro Phe 1 5 <210> 167 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.2H1 <400> 167 Ala Ile Asn Ala Asn Gly Leu Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 168 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.2H2 <400> 168 Ala Ile Asn Gly Thr Gly Met Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 169 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.2H3 <400> 169 Ala Ile Asn Ala Asn Gly Tyr Lys Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 170 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.2H4 <400> 170 Ala Ile Asn Ser Lys Gly Ser Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 171 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.2H5 <400> 171 Ala Ile Asn Ala Thr Gly Arg Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 172 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.2H6 <400> 172 Ala Ile Asn Ala Arg Gly Asn Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 173 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.2H7 <400> 173 Ala Ile Asn Ser Arg Gly Ser Asp Thr His Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 174 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.2H8 <400> 174 Ala Ile Asn Ala Ser Gly His Lys Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 175 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#7.2L1 <400> 175 Arg Ala Ser Gln Tyr Val Asp Arg Thr Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 176 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#7.2L2 <400> 176 Arg Ala Ser Gln Tyr Ile Ser Phe Arg Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 177 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#7.2L4 <400> 177 Arg Ala Ser Gln Phe Ile Arg Arg Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 178 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#7.3H1 <400> 178 His Gln Val Tyr Ser His Pro Phe 1 5 <210> 179 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.3H1 <400> 179 Ala Ile Ser Ala Ile Ser Asn Lys Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 180 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#7.3L1 <400> 180 Arg Ala Ser Gln Tyr Leu His Tyr Gly Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 181 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.4H1 <400> 181 Ala Ile Asn Ala Thr Gly Tyr Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 182 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.4H2 <400> 182 Ala Ile Asn Tyr Asn Gly Ala Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 183 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#7.9H1 <400> 183 Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro Ile 1 5 <210> 184 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.9H1 <400> 184 Ala Ile Asn Ala Asn Gly Gln Arg Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 185 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.9H2 <400> 185 Ala Ile Asn Ala Asp Gly Asn Arg Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 186 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.9H3 <400> 186 Ala Ile Asn Tyr Gln Gly Asn Arg Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 187 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.9H4 <400> 187 Ala Ile Asn Ala Val Gly Met Lys Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 188 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.9H5 <400> 188 Ala Ile Asn His Ala Gly Asn Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 189 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#7.9L1 <400> 189 Arg Ala Ser Gln Arg Leu Ser Pro Arg Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 190 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#7.9L2 <400> 190 Arg Ala Ser Gln Tyr Leu His Lys Arg Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 191 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.9H6 <400> 191 Ala Ile Asn Ala Ser Gly Arg Leu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 192 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.9H7 <400> 192 Ala Ile Asn Ala Ser Gly Thr Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 193 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.9H8 <400> 193 Ala Ile Asn Ala Ser Gly Ser Lys Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 194 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.9H9 <400> 194 Ala Ile Asn Gly Lys Gly Asn Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 195 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.11H1 <400> 195 Gly Ile Asn Ala Ala Gly Phe Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 196 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.11H2 <400> 196 Ala Ile Asn Ala Asn Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 197 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.11H3 <400> 197 Gly Ile Asn Ala Asn Gly Asn Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 198 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.11H4 <400> 198 Ala Ile Asn Ala Asn Gly Tyr Lys Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 199 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.11H5 <400> 199 Ala Ile Asn Ala His Gly Gln Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 200 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#7.11L1 <400> 200 Arg Ala Ser Gln Arg Ile Leu Arg Ile Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 201 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#7.12H1 <400> 201 Arg Ala Ser Gln Tyr Val Phe Arg Arg Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 202 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#7.12H1 <400> 202 Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro Asn 1 5 <210> 203 <211> 10 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR1 of MS-Roche#7.12H1 <400> 203 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met Ser 1 5 10 <210> 204 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.12H1 <400> 204 Asn Ile Asn Gly Asn Gly Asn Arg Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 205 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#7.12L1 <400> 205 Asn Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 206 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#7.12L2 <400> 206 Arg Ala Ser Gln Arg Phe Phe Tyr Lys Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 207 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#7.12L3 <400> 207 Arg Ala Ser Gln Phe Val Arg Arg Gly Phe Leu Ala 1 5 10 <210> 208 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#7.12L4 <400> 208 Arg Ala Ser Gln Arg Leu Lys Arg Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 209 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#7.12L6 <400> 209 Arg Ala Ser Gln Tyr Leu Trp Tyr Arg Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 210 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#7.12L7 <400> 210 Arg Ala Ser Gln Trp Ile Arg Lys Thr Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 211 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#8 <400> 211 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 212 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR2 of MS-Roche#8 <400> 212 Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 213 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#8 <400> 213 Gln Gln Leu Ser Ser Phe Pro Pro 1 5 <210> 214 <211> 10 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR1 of MS-Roche#8 <400> 214 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser 1 5 10 <210> 215 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#8 <400> 215 Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 216 <211> 15 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR3 of MS-Roche#8 <400> 216 Leu Leu Ser Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Tyr His Lys Phe Asp Val 1 5 10 15 <210> 217 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#8.1 <400> 217 Gln Gln Leu Ser Asn Tyr Pro Pro 1 5 <210> 218 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#8.2 <400> 218 Gln Gln Leu Ser Ser Tyr Pro Pro 1 5 <210> 219 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#8.1H1 <400> 219 Ala Ile Ser Arg Ser Gly Ser Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 220 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR3 of MS-Roche#8.2H1 <400> 220 Gln Gln Leu Ser Ser Tyr Pro Pro 1 5 <210> 221 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#8.2H1 <400> 221 Ala Ile Ser Ile Thr Gly Arg Arg Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 222 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#8.2H2 <400> 222 Ala Ile Ser Arg Thr Gly Ser Lys Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 223 <211> 16 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; HCDR2 of MS-Roche#8.2H4 <400> 223 Ala Thr Ser Val Lys Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 224 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; LCDR1 of MS-Roche#8.2L1 <400> 224 Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Gly Arg Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 225 <211> 109 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL kappa1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (96)..(96) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His , Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (93)..(93) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Ala, Asp, Gly, His, Leu, Asn or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (92)..(92) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Asp, Gly, Asn, Ser or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (91)..(91) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His , Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (89)..(89) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Phe, His, Ile, Leu, Met or G ln, <220> <221> MISC_FEATURE <222> (85)..(85) <223> Xaa = can be Thr or Val <220> <221> MISC_FEATURE <222> (94)..(94) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His , Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (95)..(95) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Leu, Pro or Ser <400> 225 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Xaa Tyr Tyr Cys Xaa Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 <210> 226 <211> 114 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL kappa2 <220> <221> misc_feature <222> (101)..(101) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His , Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, or Tyr <220> <221> misc_feature <222> (94)..(94) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Phe, His, Ile, Leu, Met or G ln, <220> <221> misc_feature <222> (96)..(96) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His , Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp or Tyr <220> <221> misc_feature <222> (97)..(97) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Asp, Gly, Asn, Ser or Tyr <220> <221> misc_feature <222> (98)..(98) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Ala, Asp, Gly, His, Leu, Asn or Ser <220> <221> misc_feature <222> (99)..(99) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His , Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, or Tyr <220> <221> misc_feature <222> (100)..(100) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Leu, Pro or Ser <400> 226 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Xaa Gln Xaa 85 90 95 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr <210> 227 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL kappa3 <220> <221> misc_feature <222> (97)..(97) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His , Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, or Tyr <220> <221> misc_feature <222> (90)..(90) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Phe, His, Ile, Leu, Met or G ln, <220> <221> misc_feature <222> (86)..(86) <223> Xaa = Thr or Val <220> <221> misc_feature <222> (92)..(92) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His , Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp or Tyr <220> <221> misc_feature <222> (93)..(93) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Asp, Gly, Asn, Ser or Tyr <220> <221> misc_feature <222> (94)..(94) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Ala, Asp, Gly, His, Leu, Asn or Ser <220> <221> misc_feature <222> (95)..(95) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His , Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, or Tyr <220> <221> misc_feature <222> (96)..(96) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Leu, Pro or Ser <400> 227 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Xaa Tyr Tyr Cys Xaa Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 85 90 95 Xaa Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 228 <211> 115 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL kappa4 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (102)..(102) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His , Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (95)..(95) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Phe, His, Ile, Leu, Met or G ln, <220> <221> MISC_FEATURE <222> (97)..(97) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His , Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (98)..(98) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Asp, Gly, Asn, Ser or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (99)..(99) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Ala, Asp, Gly, His, Leu, Asn or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (100)..(100) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His , Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (101)..(101) <223> Xaa = any amino acid of a mixture of Leu, Pro or Ser <400> 228 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Xaa Gln 85 90 95 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr 115 <210> 229 <211> 111 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL lambda1 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (99)..(99) <223> Xaa = any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (97)..(98) <223> Xaa = any amino acid except a Cys or a deletion <220> <221> MISC_FEATURE <222> (94)..(96) <223> Xaa = any amino acid except a Cys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (92)..(92) <223> Xaa = any amino acid of Cys, Phe, His, Arg, Trp or Tyr <400> 229 Asp Ile Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Xaa Asp Xaa Xaa Xaa 85 90 95 Xaa Xaa Xaa Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 230 <211> 112 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL lambda2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (100)..(100) <223> Xaa = any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (93)..(93) <223> Xaa = any amino acid of Cys, Phe, His, Arg, Trp or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (95)..(97) <223> Xaa = any amino acid except a Cys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (98)..(99) <223> Xaa = any amino acid except a Cys or a deletion <400> 230 Asp Ile Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Xaa Asp Xaa Xaa 85 90 95 Xaa Xaa Xaa Xaa Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 231 <211> 109 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL lambda3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (97)..(97) <223> Xaa = any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (90)..(90) <223> Xaa = any amino acid of Cys, Phe, His, Arg, Trp or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (92)..(94) <223> Xaa = any amino acid except a Cys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (95)..(96) <223> Xaa = any amino acid except a Cys or a deletion <400> 231 Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Ser Cys Ser Gly Asp Ala Leu Gly Asp Lys Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 85 90 95 Xaa Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 <210> 232 <211> 127 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH1A <220> <221> MISC_FEATURE <222> (99)..(112) <223> Xaa = any amino acid or a deletion <220> <221> MISC_FEATURE <222> (116)..(116) <223> Xaa = any amino acid out of a mixture of Phe, His, Ile, Leu, Asn, Pro, Ser, Val, Trp or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (114)..(114) <223> Xaa = any amino acid out of a mixture of Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Leu, Met, Pro, Gln, Ser, Thr, Val or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (113)..(113) <223> Xaa = any amino acid <400> 232 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 100 105 110 Xaa Xaa Asp Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 233 <211> 127 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH1B <220> <221> MISC_FEATURE <222> (99)..(112) <223> Xaa = any amino acid or a deletion <220> <221> MISC_FEATURE <222> (113)..(113) <223> Xaa = any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (114)..(114) <223> Xaa = any amino acid out of a mixture of Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Leu, Met, Pro, Gln, Ser, Thr, Val or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (116)..(116) <223> Xaa = any amino acid out of a mixture of Phe, His, Ile, Leu, Asn, Pro, Ser, Val, Trp or Tyr <400> 233 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 100 105 110 Xaa Xaa Asp Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 234 <211> 128 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH2 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (100)..(113) <223> Xaa = any amino acid or a deletion <220> <221> MISC_FEATURE <222> (114)..(114) <223> Xaa = any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (117)..(117) <223> Xaa = any amino acid out of a mixture of Phe, His, Ile, Leu, Asn, Pro, Ser, Val, Trp or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (115)..(115) <223> Xaa = any amino acid out of a mixture of Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Leu, Met, Pro, Gln, Ser, Thr, Val or Tyr <400> 234 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Leu Ile Asp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Thr Ser 50 55 60 Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 100 105 110 Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 235 <211> 127 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (99)..(112) <223> Xaa = any amino acid or a deletion <220> <221> MISC_FEATURE <222> (113)..(113) <223> Xaa = any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (116)..(116) <223> Xaa = any amino acid out of a mixture of Phe, His, Ile, Leu, Asn, Pro, Ser, Val, Trp or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (114)..(114) <223> Xaa = any amino acid out of a mixture of Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Leu, Met, Pro, Gln, Ser, Thr, Val or Tyr <400> 235 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 100 105 110 Xaa Xaa Asp Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 236 <211> 126 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH4 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (98)..(111) <223> Xaa = any amino acid or a deletion <220> <221> MISC_FEATURE <222> (112)..(112) <223> Xaa = any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (113)..(113) <223> Xaa = any amino acid out of a mixture of Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Leu, Met, Pro, Gln, Ser, Thr, Val or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (115)..(115) <223> Xaa = any amino acid out of a mixture of Phe, His, Ile, Leu, Asn, Pro, Ser, Val, Trp or Tyr <400> 236 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 100 105 110 Xaa Asp Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 237 <211> 127 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH5 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (99)..(112) <223> Xaa = any amino acid or a deletion <220> <221> MISC_FEATURE <222> (113)..(113) <223> Xaa = any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (116)..(116) <223> Xaa = any amino acid out of a mixture of Phe, His, Ile, Leu, Asn, Pro, Ser, Val, Trp or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (114)..(114) <223> Xaa = any amino acid out of a mixture of Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Leu, Met, Pro, Gln, Ser, Thr, Val or Tyr <400> 237 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 100 105 110 Xaa Xaa Asp Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 238 <211> 130 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH6 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (102)..(115) <223> Xaa = any amino acid or a deletion <220> <221> MISC_FEATURE <222> (116)..(116) <223> Xaa = any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (119)..(119) <223> Xaa = any amino acid out of a mixture of Phe, His, Ile, Leu, Asn, Pro, Ser, Val, Trp or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (117)..(117) <223> Xaa = any amino acid out of a mixture of Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, Ile, Leu, Met, Pro, Gln, Ser, Thr, Val or Tyr <400> 238 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Arg Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala 50 55 60 Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn 65 70 75 80 Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val 85 90 95 Tyr Tyr Cys Ala Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 100 105 110 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val 115 120 125 Ser Ser 130 <210> 239 <211> 327 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL kappa1 <220> <221> misc_feature <222> (286)..(288) <223> nnn = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (271)..(273) <223> nnn = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (265)..(267) <223> nnn = TTT, CAT, CTT, ATG or CAG <220> <221> misc_feature <222> (253)..(256) <223> nnn = can be ACT or GTT <220> <221> misc_feature <222> (283)..(285) <223> nnn = CTT, CCT or TCT <220> <221> misc_feature <222> (280)..(282) <223> nnn = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (277)..(279) <223> nnn = GCT, GAT, GGT, CAT, CTT, AAT or TCT <220> <221> misc_feature <222> (274)..(276) <223> nnn = GAT, GGT, AAT, TCT or TAT <400> 239 gatatccaga tgacccagag cccgtctagc ctgagcgcga gcgtgggtga tcgtgtgacc 60 attacctgca gagcgagcca gggcattagc agctatctgg cgtggtacca gcagaaacca 120 ggtaaagcac cgaaactatt aatttatgca gccagcagct tgcaaagcgg ggtcccgtcc 180 cgttttagcg gctctggatc cggcactgat tttaccctga ccattagcag cctgcaacct 240 gaagactttg cgnnntatta ttgcnnncag nnnnnnnnnn nnnnnnnnac ctttggccag 300 ggtacgaaag ttgaaattaa acgtacg 327 <210> 240 <211> 328 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL kappa2 <220> <221> misc_feature <222> (289)..(289) <223> n = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, C AG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (280)..(280) <223> n = TTT, CAT, CTT, ATG or CAG <220> <221> misc_feature <222> (284)..(284) <223> n = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CAG, C GT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (285)..(285) <223> n = GAT, GGT, AAT, TCT or TAT <220> <221> misc_feature <222> (286)..(289) <223> n = GCT, GAT, GGT, CAT, CTT, AAT or TCT <220> <221> misc_feature <222> (287)..(287) <223> n = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, C AG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (288)..(288) <223> n = CTT, CCT or TCT <400> 240 gatatcgtga tgacccagag cccactgagc ctgccagtga ctccgggcga gcctgcgagc 60 attagctgca gaagcagcca aagcctgctg catagcaacg gctataacta tctggattgg 120 taccttcaaa aaccaggtca aagcccgcag ctattaattt atctgggcag caaccgtgcc 180 agtggggtcc cggatcgttt tagcggctct ggatccggca ccgattttac cctgaaaatt 240 agccgtgtgg aagctgaaga cgtgggcgtg tattattgcn cagnnnnnna cctttggcca 300 gggtacgaaa gttgaaatta aacgtacg 328 <210> 241 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL kappa3 <220> <221> misc_feature <222> (289)..(291) <223> nnn = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (256)..(258) <223> nnn = can be ACT or GTT <220> <221> misc_feature <222> (265)..(276) <223> nnn = TTT, CAT, CTT, ATG or CAG <220> <221> misc_feature <222> (274)..(276) <223> nnn = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (277)..(279) <223> nnn = GAT, GGT, AAT, TCT or TAT <220> <221> misc_feature <222> (280)..(282) <223> nnn = GCT, GAT, GGT, CAT, CTT, AAT or TCT <220> <221> misc_feature <222> (283)..(285) <223> nnn = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (286)..(288) <223> nnn = CTT, CCT or TCT <400> 241 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gagcgtgagc agcagctatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcgnnnta ttattgcnnn cagnnnnnnn nnnnnnnnnn nacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 242 <211> 345 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL kappa4 <220> <221> misc_feature <222> (304)..(306) <223> nnn = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (283)..(285) <223> nnn = TTT, CAT, CTT, ATG or CAG <220> <221> misc_feature <222> (289)..(291) <223> nnn = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (292)..(294) <223> nnn = GAT, GGT, AAT, TCT or TAT <220> <221> misc_feature <222> (295)..(297) <223> nnn = GCT, GAT, GGT, CAT, CTT, AAT or TCT <220> <221> misc_feature <222> (298)..(300) <223> nnn = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (301)..(303) <223> nnn = CTT, CCT or TCT <400> 242 gatatcgtga tgacccagag cccggatagc ctggcggtga gcctgggcga acgtgcgacc 60 attaactgca gaagcagcca gagcgtgctg tatagcagca acaacaaaaa ctatctggcg 120 tggtaccagc agaaaccagg tcagccgccg aaactattaa tttattgggc atccacccgt 180 gaaagcgggg tcccggatcg ttttagcggc tctggatccg gcactgattt taccctgacc 240 atttcgtccc tgcaagctga agacgtggcg gtgtattatt gcnnncagnn nnnnnnnnnn 300 nnnnnnacct ttggccaggg tacgaaagtt gaaattaaac gtacg 345 <210> 243 <211> 322 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL lambda1 <220> <221> misc_feature <222> (274)..(274) <223> n = TGT, TTT, CAT, CGT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (278)..(280) <223> n = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, C AG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (281)..(282) <223> n = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, C AG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT or a deletion <220> <221> misc_feature <222> (283)..(283) <223> n = GCT, TGT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, C CT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <400> 243 gatatcgtgc tgacccagcc gccttcagtg agtggcgcac caggtcagcg tgtgaccatc 60 tcgtgtagcg gcagcagcag caacattggc agcaactatg tgagctggta ccagcagttg 120 cccgggacgg cgccgaaact gctgatttat gataacaacc agcgtccctc aggcgtgccg 180 gatcgtttta gcggatccaa aagcggcacc agcgcgagcc ttgcgattac gggcctgcaa 240 agcgaagacg aagcggatta ttattgccag tctngatnnn nnngtgtttg gcggcggcac 300 gaagttaacc gttcttggcc ag 322 <210> 244 <211> 336 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL lambda2 <220> <221> misc_feature <222> (274)..(276) <223> nnn = TGT, TTT, CAT, CGT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (290)..(295) <223> nnn = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT or a deletion <220> <221> misc_feature <222> (296)..(298) <223> nnn = GCT, TGT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (280)..(289) <223> nnn = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <400> 244 gatatcgcac tgacccagcc agcttcagtg agcggctcac caggtcagag cattaccatc 60 tcgtgtacgg gtactagcag cgatgtgggc ggctataact atgtgagctg gtaccagcag 120 catcccggga aggcgccgaa actgatgatt tatgatgtga gcaaccgtcc ctcaggcgtg 180 agcaaccgtt ttagcggatc caaaagcggc aacaccgcga gcctgaccat tagcggcctg 240 caagcggaag acgaagcgga ttattattgc cagnnngatn nnnnnnnnnn nnnnnnngtg 300 tttggcggcg gcacgaagtt aaccgttctt ggccag 336 <210> 245 <211> 327 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VL lambda3 <220> <221> misc_feature <222> (265)..(267) <223> nnn = TGT, TTT, CAT, CGT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (286)..(288) <223> nnn = GCT, TGT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (280)..(285) <223> nnn = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT or a deletion <220> <221> misc_feature <222> (271)..(279) <223> nnn = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <400> 245 gatatcgaac tgacccagcc gccttcagtg agcgttgcac caggtcagac cgcgcgtatc 60 tcgtgtagcg gcgatgcgct gggcgataaa tacgcgagct ggtaccagca gaaacccggg 120 caggcgccag ttctggtgat ttatgatgat tctgaccgtc cctcaggcat cccggaacgc 180 tttagcggat ccaacagcgg caacaccgcg accctgacca ttagcggcac tcaggcggaa 240 gacgaagcgg attattattg ccagnnngat nnnnnnnnnn nnnnnnnngt gtttggcggc 300 ggcacgaagt taaccgttct tggccag 327 <210> 246 <211> 382 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH1A <220> <221> misc_feature <222> (345)..(347) <223> nnn = TTT, CAT, ATT, CTT, AAT, CCT, TCT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (339)..(341) <223> nnn = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, ATT, CTT, ATG, CCT, CAG, TCT, ACT, GTT or TAT <220> <221> misc_feature <222> (336)..(338) <223> nnn = GCT, TGT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (295)..(335) <223> nnn = GCT, TGT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT or a deletion <400> 246 caggtgcaat tggttcagtc tggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtg 60 agctgcaaag cctccggagg cacttttagc agctatgcga ttagctgggt gcgccaagcc 120 cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcggc attattccga tttttggcac ggcgaactac 180 gcgcagaagt ttcagggccg ggtgaccatt accgcggatg aaagcaccag caccgcgtat 240 atggaactga gcagcctgcg tagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtnnnnnn 300 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn ngatnnntgg ggccaaggca 360 ccctggtgac ggttagctca gc 382 <210> 247 <211> 383 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH1B <220> <221> misc_feature <222> (346)..(348) <223> nnn = TTT, CAT, ATT, CTT, AAT, CCT, TCT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (295)..(336) <223> nnn = GCT, TGT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT or a deletion <220> <221> misc_feature <222> (337)..(339) <223> nnn = GCT, TGT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (340)..(342) <223> nnn = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, ATT, CTT, ATG, CCT, CAG, TCT, ACT, GTT or TAT <400> 247 caggtgcaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg 60 agctgcaaag cctccggata tacctttacc agctattata tgcactgggt ccgccaagcc 120 cctgggcagg gtctcgagtg gatgggctgg attaacccga atagcggcgg cacgaactac 180 gcgcagaagt ttcagggccg ggtgaccatg acccgtgata ccagcattag caccgcgtat 240 atggaactga gcagcctgcg tagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtnnnnnn 300 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nngatnnntg gggccaaggc 360 accctggtga cggttagctc agc 383 <210> 248 <211> 386 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH2 <220> <221> misc_feature <222> (349)..(351) <223> nnn = TTT, CAT, ATT, CTT, AAT, CCT, TCT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (298)..(339) <223> nnn = GCT, TGT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT or a deletion <220> <221> misc_feature <222> (340)..(342) <223> nnn = GCT, TGT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (343)..(345) <223> nnn = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, ATT, CTT, ATG, CCT, CAG, TCT, ACT, GTT or TAT <400> 248 caggtgcaat tgaaagaaag cggcccggcc ctggtgaaac cgacccaaac cctgaccctg 60 acctgtacct tttccggatt tagcctgtcc acgtctggcg ttggcgtggg ctggattcgc 120 cagccgcctg ggaaagccct cgagtggctg gctctgattg attgggatga tgataagtat 180 tatagcacca gcctgaaaac gcgtctgacc attagcaaag atacttcgaa aaatcaggtg 240 gtgctgacta tgaccaacat ggacccggtg gatacggcca cctattattg cgcgcgtnnn 300 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnngatnn ntggggccaa 360 ggcaccctgg tgacggttag ctcagc 386 <210> 249 <211> 349 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH3 <220> <221> misc_feature <222> (314)..(314) <223> n = TTT, CAT, ATT, CTT, AAT, CCT, TCT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (295)..(308) <223> n = GCT, TGT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, C CT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT or a deletion <220> <221> misc_feature <222> (309)..(309) <223> n = GCT, TGT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, C CT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (310)..(310) <223> n = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, ATT, CTT, ATG, CCT, CAG, TCT, ACT, G TT or TAT <400> 249 caggtgcaat tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcaac cgggcggcag cctgcgtctg 60 agctgcgcgg cctccggatt tacctttagc agctatgcga tgagctgggt gcgccaagcc 120 cctgggaagg gtctcgagtg ggtgagcgcg attagcggta gcggcggcag cacctattat 180 gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tcacgtgata attcgaaaaa caccctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgcg tgcggaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtnnnnnn 300 nnnnnnnnnn gatntggggc caaggcaccc tggtgacggt tagctcagc 349 <210> 250 <211> 346 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH4 <220> <221> misc_feature <222> (311)..(311) <223> n = TTT, CAT, ATT, CTT, AAT, CCT, TCT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (292)..(305) <223> n = GCT, TGT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, C CT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT or a deletion <220> <221> misc_feature <222> (306)..(306) <223> n = GCT, TGT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, C CT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (307)..(307) <223> n = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, ATT, CTT, ATG, CCT, CAG, TCT, ACT, G TT or TAT <400> 250 caggtgcaat tgcaagaaag tggtccgggc ctggtgaaac cgagcgaaac cctgagcctg 60 acctgcaccg tttccggagg cagcattagc agctattatt ggagctggat tcgccagccg 120 cctgggaagg gtctcgagtg gattggctat atttattata gcggcagcac caactataat 180 ccgagcctga aaagccgggt gaccattagc gttgatactt cgaaaaacca gtttagcctg 240 aaactgagca gcgtgacggc ggcggatacg gccgtgtatt attgcgcgcg tnnnnnnnnn 300 nnnnnnngat ntggggccaa ggcaccctgg tgacggttag ctcagc 346 <210> 251 <211> 349 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH5 <220> <221> misc_feature <222> (314)..(314) <223> n = TTT, CAT, ATT, CTT, AAT, CCT, TCT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (295)..(304) <223> n = GCT, TGT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, C CT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT or a deletion <220> <221> misc_feature <222> (305)..(307) <223> n = GCT, TGT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, C CT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (308)..(310) <223> n = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, ATT, CTT, ATG, CCT, CAG, TCT, ACT, G TT or TAT <400> 251 caggtgcaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgaaag cctgaaaatt 60 agctgcaaag gttccggata ttcctttacg agctattgga ttggctgggt gcgccagatg 120 cctgggaagg gtctcgagtg gatgggcatt atttatccgg gcgatagcga tacccgttat 180 tctccgagct ttcagggcca ggtgaccatt agcgcggata aaagcattag caccgcgtat 240 cttcaatgga gcagcctgaa agcgagcgat acggccatgt attattgcgc gcgtnnnnnn 300 nnnnnnnnnn gatntggggc caaggcaccc tggtgacggt tagctcagc 349 <210> 252 <211> 392 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; VH6 <220> <221> misc_feature <222> (355)..(357) <223> nnn = TTT, CAT, ATT, CTT, AAT, CCT, TCT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (304)..(345) <223> nnn = GCT, TGT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT or a deletion <220> <221> misc_feature <222> (346)..(348) <223> nnn = GCT, TGT, GAT, GAG, TTT, GGT, CAT, ATT, AAG, CTT, ATG, AAT, CCT, CAG, CGT, TCT, ACT, GTT, TGG or TAT <220> <221> misc_feature <222> (349)..(351) <223> nnn = GCT, GAT, GAG, TTT, GGT, ATT, CTT, ATG, CCT, CAG, TCT, ACT, GTT or TAT <400> 252 caggtgcaat tgcaacagtc tggtccgggc ctggtgaaac cgagccaaac cctgagcctg 60 acctgtgcga tttccggaga tagcgtgagc agcaacagcg cggcgtggaa ctggattcgc 120 cagtctcctg ggcgtggcct cgagtggctg ggccgtacct attatcgtag caaatggtat 180 aacgattatg cggtgagcgt gaaaagccgg attaccatca acccggatac ttcgaaaaac 240 cagtttagcc tgcaactgaa cagcgtgacc ccggaagata cggccgtgta ttattgcgcg 300 cgtnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn ngatnnntgg 360 ggccaaggca ccctggtgac ggttagctca gc 392 <210> 253 <211> 4151 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; pMORPH 18 Fab_5' <400> 253 tctagataac gagggcaaaa aatgaaaaag acagctatcg cgattgcagt ggcactggct 60 ggtttcgcta ccgtagcgca ggccgatatc gtgctgaccc agagcccggc gaccctgagc 120 ctgtctccgg gcgaacgtgc gaccctgagc tgcagagcga gccagagcgt gagcagcagc 180 tatctggcgt ggtaccagca gaaaccaggt caagcaccgc gtctattaat ttatggcgcg 240 agcagccgtg caactggggt cccggcgcgt tttagcggct ctggatccgg cacggatttt 300 accctgacca ttagcagcct ggaacctgaa gactttgcgg tgtattattg ccagcagcat 360 tataccaccc cgccgacctt tggccagggt acgaaagttg aaattaaacg tacggtggct 420 gctccgagcg tgtttatttt tccgccgagc gatgaacaac tgaaaagcgg cacggcgagc 480 gtggtgtgcc tgctgaacaa cttttatccg cgtgaagcga aagttcagtg gaaagtagac 540 aacgcgctgc aaagcggcaa cagccaggaa agcgtgaccg aacaggatag caaagatagc 600 acctattctc tgagcagcac cctgaccctg agcaaagcgg attatgaaaa acataaagtg 660 tatgcgtgcg aagtgaccca tcaaggtctg agcagcccgg tgactaaatc ttttaatcgt 720 ggcgaggcct gataagcatg cgtaggagaa aataaaatga aacaaagcac tattgcactg 780 gcactcttac cgttgctctt cacccctgtt accaaagccg aagtgcaatt ggtggaaagc 840 ggcggcggcc tggtgcaacc gggcggcagc ctgcgtctga gctgcgcggc ctccggattt 900 acctttagca gctatgcgat gagctgggtg cgccaagccc ctgggaaggg tctcgagtgg 960 gtgagcgcga ttagcggtag cggcggcagc acctattatg cggatagcgt gaaaggccgt 1020 tttaccattt cacgtgataa ttcgaaaaac accctgtatc tgcaaatgaa cagcctgcgt 1080 gcggaagata cggccgtgta ttattgcgcg cgttggggcg gcgatggctt ttatgcgatg 1140 gattattggg gccaaggcac cctggtgacg gttagctcag cgtcgaccaa aggtccaagc 1200 gtgtttccgc tggctccgag cagcaaaagc accagcggcg gcacggctgc cctgggctgc 1260 ctggttaaag attatttccc ggaaccagtc accgtgagct ggaacagcgg ggcgctgacc 1320 agcggcgtgc atacctttcc ggcggtgctg caaagcagcg gcctgtatag cctgagcagc 1380 gttgtgaccg tgccgagcag cagcttaggc actcagacct atatttgcaa cgtgaaccat 1440 aaaccgagca acaccaaagt ggataaaaaa gtggaaccga aaagcgaatt cgggggaggg 1500 agcgggagcg gtgattttga ttatgaaaag atggcaaacg ctaataaggg ggctatgacc 1560 gaaaatgccg atgaaaacgc gctacagtct gacgctaaag gcaaacttga ttctgtcgct 1620 actgattacg gtgctgctat cgatggtttc attggtgacg tttccggcct tgctaatggt 1680 aatggtgcta ctggtgattt tgctggctct aattcccaaa tggctcaagt cggtgacggt 1740 gataattcac ctttaatgaa taatttccgt caatatttac cttccctccc tcaatcggtt 1800 gaatgtcgcc cttttgtctt tggcgctggt aaaccatatg aattttctat tgattgtgac 1860 aaaataaact tattccgtgg tgtctttgcg tttcttttat atgttgccac ctttatgtat 1920 gtattttcta cgtttgctaa catactgcgt aataaggagt cttgataagc ttgacctgtg 1980 aagtgaaaaa tggcgcagat tgtgcgacat tttttttgtc tgccgtttaa tgaaattgta 2040 aacgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac 2100 caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg 2160 agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa 2220 gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgag aaccatcacc ctaatcaagt 2280 tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt 2340 agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga 2400 gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc 2460 gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtgc tagccatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg 2520 ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg 2580 agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat 2640 accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta 2700 ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct 2760 gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc 2820 ccgttcagtc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa 2880 gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg 2940 taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaagaacag 3000 tatttggtat ctgcgctctg ctgtagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt 3060 gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta 3120 cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc 3180 agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcagatc tagcaccagg cgtttaaggg 3240 caccaataac tgccttaaaa aaattacgcc ccgccctgcc actcatcgca gtactgttgt 3300 aattcattaa gcattctgcc gacatggaag ccatcacaaa cggcatgatg aacctgaatc 3360 gccagcggca tcagcacctt gtcgccttgc gtataatatt tgcccatagt gaaaacgggg 3420 gcgaagaagt tgtccatatt ggctacgttt aaatcaaaac tggtgaaact cacccaggga 3480 ttggctgaga cgaaaaacat attctcaata aaccctttag ggaaataggc caggttttca 3540 ccgtaacacg ccacatcttg cgaatatatg tgtagaaact gccggaaatc gtcgtggtat 3600 tcactccaga gcgatgaaaa cgtttcagtt tgctcatgga aaacggtgta acaagggtga 3660 acactatccc atatcaccag ctcaccgtct ttcattgcca tacggaactc cgggtgagca 3720 ttcatcaggc gggcaagaat gtgaataaag gccggataaa acttgtgctt atttttcttt 3780 acggtcttta aaaaggccgt aatatccagc tgaacggtct ggttataggt acattgagca 3840 actgactgaa atgcctcaaa atgttcttta cgatgccatt gggatatatc aacggtggta 3900 tatccagtga tttttttctc cattttagct tccttagctc ctgaaaatct cgataactca 3960 aaaaatacgc ccggtagtga tcttatttca ttatggtgaa agttggaacc tcacccgacg 4020 tctaatgtga gttagctcac tcattaggca ccccaggctt tacactttat gcttccggct 4080 cgtatgttgt gtggaattgt gagcggataa caatttcaca caggaaacag ctatgaccat 4140 gattacgaat t 4151 <210> 254 <211> 638 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; pMORPH18_Fab protein <400> 254 Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala 1 5 10 15 Thr Val Ala Gln Ala Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu 20 25 30 Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln 35 40 45 Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val 65 70 75 80 Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 100 105 110 His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 115 120 125 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 165 170 175 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 180 185 190 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 210 215 220 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Ala Met Lys Gln Ser 225 230 235 240 Thr Ile Ala Leu Ala Leu Leu Pro Leu Leu Phe Thr Pro Val Thr Lys 245 250 255 Ala Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 260 265 270 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser 275 280 285 Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 290 295 300 Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser 305 310 315 320 Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu 325 330 335 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 340 345 350 Cys Ala Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 355 360 365 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 370 375 380 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 385 390 395 400 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 405 410 415 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 420 425 430 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 435 440 445 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 450 455 460 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Glu 465 470 475 480 Phe Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Asp Phe Asp Tyr Glu Lys Met Ala 485 490 495 Asn Ala Asn Lys Gly Ala Met Thr Glu Asn Ala Asp Glu Asn Ala Leu 500 505 510 Gln Ser Asp Ala Lys Gly Lys Leu Asp Ser Val Ala Thr Asp Tyr Gly 515 520 525 Ala Ala Ile Asp Gly Phe Ile Gly Asp Val Ser Gly Leu Ala Asn Gly 530 535 540 Asn Gly Ala Thr Gly Asp Phe Ala Gly Ser Asn Ser Gln Met Ala Gln 545 550 555 560 Val Gly Asp Gly Asp Asn Ser Pro Leu Met Asn Asn Phe Arg Gln Tyr 565 570 575 Leu Pro Ser Leu Pro Gln Ser Val Glu Cys Arg Pro Phe Val Phe Gly 580 585 590 Ala Gly Lys Pro Tyr Glu Phe Ser Ile Asp Cys Asp Lys Ile Asn Leu 595 600 605 Phe Arg Gly Val Phe Ala Phe Leu Leu Tyr Val Ala Thr Phe Met Tyr 610 615 620 Val Phe Ser Thr Phe Ala Asn Ile Leu Arg Asn Lys Glu Ser 625 630 635 <210> 255 <211> 5020 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; pMORPH x9 <400> 255 atcgtgctga cccagccgcc ttcagtgagt ggcgcaccag gtcagcgtgt gaccatctcg 60 tgtagcggca gcagcagcaa cattggcagc aactatgtga gctggtacca gcagttgccc 120 gggacggcgc cgaaactgct gatttatgat aacaaccagc gtccctcagg cgtgccggat 180 cgttttagcg gatccaaaag cggcaccagc gcgagccttg cgattacggg cctgcaaagc 240 gaagacgaag cggattatta ttgccagagc tatgacatgc ctcaggctgt gtttggcggc 300 ggcacgaagt ttaaccgttc ttggccagcc gaaagccgca ccgagtgtga cgctgtttcc 360 gccgagcagc gaagaattgc aggcgaacaa agcgaccctg gtgtgcctga ttagcgactt 420 ttatccggga gccgtgacag tggcctggaa ggcagatagc agccccgtca aggcgggagt 480 ggagaccacc acaccctcca aacaaagcaa caacaagtac gcggccagca gctatctgag 540 cctgacgcct gagcagtgga agtcccacag aagctacagc tgccaggtca cgcatgaggg 600 gagcaccgtg gaaaaaaccg ttgcgccgac tgaggcctga taagcatgcg taggagaaaa 660 taaaatgaaa caaagcacta ttgcactggc actcttaccg ttgctcttca cccctgttac 720 caaagcccag gtgcaattga aagaaagcgg cccggccctg gtgaaaccga cccaaaccct 780 gaccctgacc tgtacctttt ccggatttag cctgtccacg tctggcgttg gcgtgggctg 840 gattcgccag ccgcctggga aagccctcga gtggctggct ctgattgatt gggatgatga 900 taagtattat agcaccagcc tgaaaacgcg tctgaccatt agcaaagata cttcgaaaaa 960 tcaggtggtg ctgactatga ccaacatgga cccggtggat acggccacct attattgcgc 1020 gcgttctcct cgttatcgtg gtgcttttga ttattggggc caaggcaccc tggtgacggt 1080 tagctcagcg tcgaccaaag gtccaagcgt gtttccgctg gctccgagca gcaaaagcac 1140 cagcggcggc acggctgccc tgggctgcct ggttaaagat tatttcccgg aaccagtcac 1200 cgtgagctgg aacagcgggg cgctgaccag cggcgtgcat acctttccgg cggtgctgca 1260 aagcagcggc ctgtatagcc tgagcagcgt tgtgaccgtg ccgagcagca gcttaggcac 1320 tcagacctat atttgcaacg tgaaccataa accgagcaac accaaagtgg ataaaaaagt 1380 ggaaccgaaa agcgaattcg actataaaga tgacgatgac aaaggcgcgc cgtggagcca 1440 cccgcagttt gaaaaatgat aagcttgacc tgtgaagtga aaaatggcgc agattgtgcg 1500 acattttttt tgtctgccgt ttaattaaag gggggggggg gccggcctgg gggggggtgt 1560 acatgaaatt gtaaacgtta atattttgtt aaaattcgcg ttaaattttt gttaaatcag 1620 ctcatttttt aaccaatagg ccgaaatcgg caaaatccct tataaatcaa aagaatagac 1680 cgagataggg ttgagtgttg ttccagtttg gaacaagagt ccactattaa agaacgtgga 1740 ctccaacgtc aaagggcgaa aaaccgtcta tcagggcgat ggcccactac gagaaccatc 1800 accctaatca agttttttgg ggtcgaggtg ccgtaaagca ctaaatcgga accctaaagg 1860 gagcccccga tttagagctt gacggggaaa gccggcgaac gtggcgagaa aggaagggaa 1920 gaaagcgaaa ggagcgggcg ctagggcgct ggcaagtgta gcggtcacgc tgcgcgtaac 1980 caccacaccc gccgcgctta atgcgccgct acagggcgcg tgctagacta gtgtttaaac 2040 cggaccgggg gggggcttaa gtgggctgca aaacaaaacg gcctcctgtc aggaagccgc 2100 ttttatcggg tagcctcact gcccgctttc cagtcgggaa acctgtcgtg ccagctgcat 2160 cagtgaatcg gccaacgcgc ggggagaggc ggtttgcgta ttgggagcca gggtggtttt 2220 tcttttcacc agtgagacgg gcaacagctg attgcccttc accgcctggc cctgagagag 2280 ttgcagcaag cggtccacgc tggtttgccc cagcaggcga aaatcctgtt tgatggtggt 2340 cagcggcggg atataacatg agctgtcctc ggtatcgtcg tatcccacta ccgagatgtc 2400 cgcaccaacg cgcagcccgg actcggtaat ggcacgcatt gcgcccagcg ccatctgatc 2460 gttggcaacc agcatcgcag tgggaacgat gccctcattc agcatttgca tggtttgttg 2520 aaaaccggac atggcactcc agtcgccttc ccgttccgct atcggctgaa tttgattgcg 2580 agtgagatat ttatgccagc cagccagacg cagacgcgcc gagacagaac ttaatgggcc 2640 agctaacagc gcgatttgct ggtggcccaa tgcgaccaga tgctccacgc ccagtcgcgt 2700 accgtcctca tgggagaaaa taatactgtt gatgggtgtc tggtcagaga catcaagaaa 2760 taacgccgga acattagtgc aggcagcttc cacagcaata gcatcctggt catccagcgg 2820 atagttaata atcagcccac tgacacgttg cgcgagaaga ttgtgcaccg ccgctttaca 2880 ggcttcgacg ccgcttcgtt ctaccatcga cacgaccacg ctggcaccca gttgatcggc 2940 gcgagattta atcgccgcga caatttgcga cggcgcgtgc agggccagac tggaggtggc 3000 aacgccaatc agcaacgact gtttgcccgc cagttgttgt gccacgcggt taggaatgta 3060 attcagctcc gccatcgccg cttccacttt ttcccgcgtt ttcgcagaaa cgtggctggc 3120 ctggttcacc acgcgggaaa cggtctgata agagacaccg gcatactctg cgacatcgta 3180 taacgttact ggtttcacat tcaccaccct gaattgactc tcttccgggc gctatcatgc 3240 cataccgcga aaggttttgc gccattcgat gctagccatg tgagcaaaag gccagcaaaa 3300 ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga 3360 cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag 3420 ataccaggcg tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct 3480 taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg 3540 ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc 3600 ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt 3660 aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta 3720 tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca ctagaagaac 3780 agtatttggt atctgcgctc tgctgtagcc agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc 3840 ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat 3900 tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc 3960 tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat tttggtcaga tctagcacca ggcgtttaag 4020 ggcaccaata actgccttaa aaaaattacg ccccgccctg ccactcatcg cagtactgtt 4080 gtaattcatt aagcattctg ccgacatgga agccatcaca aacggcatga tgaacctgaa 4140 tcgccagcgg catcagcacc ttgtcgcctt gcgtataata tttgcccata gtgaaaacgg 4200 gggcgaagaa gttgtccata ttggctacgt ttaaatcaaa actggtgaaa ctcacccagg 4260 gattggctga gacgaaaaac atattctcaa taaacccttt agggaaatag gccaggtttt 4320 caccgtaaca cgccacatct tgcgaatata tgtgtagaaa ctgccggaaa tcgtcgtggt 4380 attcactcca gagcgatgaa aacgtttcag tttgctcatg gaaaacggtg taacaagggt 4440 gaacactatc ccatatcacc agctcaccgt ctttcattgc catacggaac tccgggtgag 4500 cattcatcag gcgggcaaga atgtgaataa aggccggata aaacttgtgc ttatttttct 4560 ttacggtctt taaaaaggcc gtaatatcca gctgaacggt ctggttatag gtacattgag 4620 caactgactg aaatgcctca aaatgttctt tacgatgcca ttgggatata tcaacggtgg 4680 tatatccagt gatttttttc tccattttag cttccttagc tcctgaaaat ctcgataact 4740 caaaaaatac gcccggtagt gatcttattt cattatggtg aaagttggaa cctcacccga 4800 cgtctaatgt gagttagctc actcattagg caccccaggc tttacacttt atgcttccgg 4860 ctcgtatgtt gtgtggaatt gtgagcggat aacaatttca cacaggaaac agctatgacc 4920 atgattacga atttctagat aacgagggca aaaaatgaaa aagacagcta tcgcgattgc 4980 agtggcactg gctggtttcg ctaccgtagc gcaggccgat 5020 <210> 256 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 256 Ala Glu Phe Arg His Asp Cys 1 5 <210> 257 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 257 Glu Phe Arg His Asp Ser Cys 1 5 <210> 258 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 258 Phe Arg His Asp Ser Gly Cys 1 5 <210> 259 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 259 Arg His Asp Ser Gly Tyr Cys 1 5 <210> 260 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 260 His Asp Ser Gly Tyr Glu Cys 1 5 <210> 261 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 261 Asp Ser Gly Tyr Glu Val Cys 1 5 <210> 262 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 262 Ser Gly Tyr Glu Val His Cys 1 5 <210> 263 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 263 Tyr Glu Val His His Gln Cys 1 5 <210> 264 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 264 Glu Val His His Gln Lys Cys 1 5 <210> 265 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 265 Val His His Gln Lys Leu Cys 1 5 <210> 266 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 266 His His Gln Lys Leu Val Cys 1 5 <210> 267 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 267 His Gln Lys Leu Val Phe Cys 1 5 <210> 268 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 268 Gln Lys Leu Val Phe Phe Cys 1 5 <210> 269 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 269 Lys Leu Val Phe Phe Ala Cys 1 5 <210> 270 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 270 Leu Val Phe Phe Ala Glu Cys 1 5 <210> 271 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 271 Val Phe Phe Ala Glu Asp Cys 1 5 <210> 272 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 272 Phe Phe Ala Glu Asp Val Cys 1 5 <210> 273 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 273 Phe Ala Glu Asp Val Gly Cys 1 5 <210> 274 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 274 Ala Glu Asp Val Gly Ser Cys 1 5 <210> 275 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 275 Glu Asp Val Gly Ser Asn Cys 1 5 <210> 276 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 276 Asp Val Gly Ser Asn Lys Cys 1 5 <210> 277 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 277 Val Gly Ser Asn Lys Gly Cys 1 5 <210> 278 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 278 Gly Ser Asn Lys Gly Ala Cys 1 5 <210> 279 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 279 Cys Ser Asn Lys Gly Ala Ile 1 5 <210> 280 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 280 Cys Asn Lys Gly Ala Ile Ile 1 5 <210> 281 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 281 Cys Lys Gly Ala Ile Ile Gly 1 5 <210> 282 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 282 Cys Gly Leu Met Val Gly Gly 1 5 <210> 283 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 283 Cys Met Val Gly Gly Val Val 1 5 <210> 284 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 284 Cys Gly Gly Val Val Ile Ala 1 5 <210> 285 <211> 6 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; peptide 1 A beta <400> 285 Ala Glu Phe Arg His Asp 1 5 <210> 286 <211> 7 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; peptide 2 A beta <400> 286 Glu Phe Arg His Asp Ser Gly 1 5 <210> 287 <211> 5 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; peptide 3 A beta <400> 287 Glu Phe Arg His Asp 1 5 <210> 288 <211> 4 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; peptide 4 A beta <400> 288 His Asp Ser Gly 1 <210> 289 <211> 5 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; peptide 5 A beta <400> 289 His His Gln Lys Leu 1 5 <210> 290 <211> 6 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; peptide 6 A beta <400> 290 Leu Val Phe Phe Ala Glu 1 5 <210> 291 <211> 6 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; peptide 7 A beta <400> 291 Val Phe Phe Ala Glu Asp 1 5 <210> 292 <211> 4 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; peptide 8 A beta <400> 292 Val Phe Phe Ala 1 <210> 293 <211> 6 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct; peptide 9 A beta <400> 293 Phe Phe Ala Glu Asp Val 1 5 <210> 294 <211> 360 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 294 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgttatttct gagaagtctc gttttattta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtct tactcattat 300 gctcgttatt atcgttattt tgatgtttgg ggccaaggca ccctggtgac ggttagctca 360 <210> 295 <211> 120 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 295 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Val 35 40 45 Ile Ser Glu Lys Ser Arg Phe Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 296 <211> 360 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 296 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgctatttct gagacttcta ttcgtaagta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtct tactcattat 300 gctcgttatt atcgttattt tgatgtttgg ggccaaggca ccctggtgac ggttagctca 360 <210> 297 <211> 120 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 297 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala 35 40 45 Ile Ser Glu Thr Ser Ile Arg Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 298 <211> 360 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 298 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgttatttct cagactggtc gtaagattta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtct tactcattat 300 gctcgttatt atcgttattt tgatgtttgg ggccaaggca ccctggtgac ggttagctca 360 <210> 299 <211> 120 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 299 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Val 35 40 45 Ile Ser Gln Thr Gly Arg Lys Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 300 <211> 360 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 300 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgttatttct cagactggtc gtaagattta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtct tactcattat 300 gctcgttatt atcgttattt tgatgtttgg ggccaaggca ccctggtgac ggttagctca 360 <210> 301 <211> 120 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 301 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Val 35 40 45 Ile Ser Gln Thr Gly Arg Lys Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 302 <211> 360 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 302 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgttatttct gagactggta agaatattta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtct tactcattat 300 gctcgttatt atcgttattt tgatgtttgg ggccaaggca ccctggtgac ggttagctca 360 <210> 303 <211> 120 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 303 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Val 35 40 45 Ile Ser Glu Thr Gly Lys Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 304 <211> 360 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 304 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgttatttct gagactggta agaatattta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtct tactcattat 300 gctcgttatt atcgttattt tgatgtttgg ggccaaggca ccctggtgac ggttagctca 360 <210> 305 <211> 120 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 305 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Val 35 40 45 Ile Ser Glu Thr Gly Lys Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 306 <211> 360 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 306 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgctatttct gagtctggta agactaagta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtct tactcattat 300 gctcgttatt atcgttattt tgatgtttgg ggccaaggca ccctggtgac ggttagctca 360 <210> 307 <211> 120 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 307 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala 35 40 45 Ile Ser Glu Ser Gly Lys Thr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 308 <211> 372 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 308 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgctattaat ggtactggta tgaagaagta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtgg taagggtaat 300 actcataagc cttatggtta tgttcgttat tttgatgttt ggggccaagg caccctggtg 360 acggttagct ca 372 <210> 309 <211> 124 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 309 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala 35 40 45 Ile Asn Gly Thr Gly Met Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 310 <211> 372 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 310 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgctattaat tataatggtg ctcgtattta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtgg taagggtaat 300 actcataagc cttatggtta tgttcgttat tttgatgttt ggggccaagg caccctggtg 360 acggttagct ca 372 <210> 311 <211> 124 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 311 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala 35 40 45 Ile Asn Tyr Asn Gly Ala Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 312 <211> 372 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 312 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgctattaat gctgatggta atcgtaagta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtgg taagggtaat 300 actcataagc cttatggtta tgttcgttat tttgatgttt ggggccaagg caccctggtg 360 acggttagct ca 372 <210> 313 <211> 124 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 313 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala 35 40 45 Ile Asn Ala Asp Gly Asn Arg Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 314 <211> 372 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 314 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgctattaat gctgatggta atcgtaagta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtgg taagggtaat 300 actcataagc cttatggtta tgttcgttat tttgatgttt ggggccaagg caccctggtg 360 acggttagct ca 372 <210> 315 <211> 124 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 315 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala 35 40 45 Ile Asn Ala Asp Gly Asn Arg Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 316 <211> 372 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 316 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgctattaat gctaatggtt ataagaagta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtgg taagggtaat 300 actcataagc cttatggtta tgttcgttat tttgatgttt ggggccaagg caccctggtg 360 acggttagct ca 372 <210> 317 <211> 124 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 317 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala 35 40 45 Ile Asn Ala Asn Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 318 <211> 372 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 318 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgctattaat gctaatggtt ataagaagta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtgg taagggtaat 300 actcataagc cttatggtta tgttcgttat tttgatgttt ggggccaagg caccctggtg 360 acggttagct ca 372 <210> 319 <211> 124 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 319 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala 35 40 45 Ile Asn Ala Asn Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 320 <211> 372 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 320 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgctattaat gctaatggtt ataagaagta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtgg taagggtaat 300 actcataagc cttatggtta tgttcgttat tttgatgttt ggggccaagg caccctggtg 360 acggttagct ca 372 <210> 321 <211> 124 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 321 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala 35 40 45 Ile Asn Ala Asn Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 322 <211> 366 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 322 caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc 60 gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg 120 aagggtctcg agtgggtgag cgctatttct cgttctggtt ctaatattta ttatgctgat 180 tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa 240 atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtct tctttctcgt 300 ggttataatg gttattatca taagtttgat gtttggggcc aaggcaccct ggtgacggtt 360 agctca 366 <210> 323 <211> 122 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 323 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 1 5 10 15 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 20 25 30 Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala 35 40 45 Ile Ser Arg Ser Gly Ser Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 85 90 95 Leu Leu Ser Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Tyr His Lys Phe Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 324 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 324 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagccg gcgtattcat gtttattatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcgactta ttattgccag cagacttatg attatcctcc tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 325 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 325 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Arg Arg Ile His Val Tyr 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Asp Tyr Pro 85 90 95 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 326 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 326 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagccg gcgtattcat gtttattatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcgactta ttattgccag cagacttatg attatcctcc tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 327 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 327 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Arg Arg Ile His Val Tyr 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Asp Tyr Pro 85 90 95 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 328 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 328 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gcgtcttggt cgtctttatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcgactta ttattgccag cagacttatg attatcctcc tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 329 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 329 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Leu Gly Arg Leu 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Asp Tyr Pro 85 90 95 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 330 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 330 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagccg gcgtattcat gtttattatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcgactta ttattgccag cagacttatg attatcctcc tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 331 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 331 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Arg Arg Ile His Val Tyr 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Asp Tyr Pro 85 90 95 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 332 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 332 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagccg gcgtattcat gtttattatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcgactta ttattgccag cagacttatg attatcctcc tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 333 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 333 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Arg Arg Ile His Val Tyr 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Asp Tyr Pro 85 90 95 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 334 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 334 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gcgtcttggt cgtctttatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcgactta ttattgccag cagacttatg attatcctcc tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 335 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 335 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Leu Gly Arg Leu 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Asp Tyr Pro 85 90 95 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 336 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 336 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gtttattcag cgtttttatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcggttta ttattgccag cagacttata attatcctcc tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 337 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 337 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Phe Ile Gln Arg Phe 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Asn Tyr Pro 85 90 95 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 338 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 338 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gtatgttgat cgtacttatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcgactta ttattgccag cagatttatt cttttcctca tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 339 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 339 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Val Asp Arg Thr 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Ser Phe Pro 85 90 95 His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 340 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 340 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gcgttttttt tataagtatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttct ggttcttcta accgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcggttta ttattgcctt cagctttata atattcctaa tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 341 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 341 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Phe Phe Tyr Lys 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Ser Gly Ser Ser Asn Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro 85 90 95 Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 342 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 342 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gtatgttgat cgtacttatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcgactta ttattgccag cagatttatt cttttcctca tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 343 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 343 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Val Asp Arg Thr 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Ser Phe Pro 85 90 95 His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 344 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 344 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gtatgttttt cgtcgttatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttct ggttcttcta accgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcggttta ttattgcctt cagctttata atattcctaa tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 345 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 345 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Val Phe Arg Arg 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Ser Gly Ser Ser Asn Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro 85 90 95 Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 346 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 346 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gtatgttgat cgtacttatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcgactta ttattgccag cagatttatt cttttcctca tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 347 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 347 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Val Asp Arg Thr 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Ser Phe Pro 85 90 95 His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 348 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 348 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gcgtctttct cctcgttatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcgactta ttattgcctt cagatttata atatgcctat tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 349 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 349 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Leu Ser Pro Arg 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro 85 90 95 Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 350 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 350 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gtatgttttt cgtcgttatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttct ggttcttcta accgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcggttta ttattgcctt cagctttata atattcctaa tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 351 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 351 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Val Phe Arg Arg 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Ser Gly Ser Ser Asn Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro 85 90 95 Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 352 <211> 330 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 352 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gcgtgtttct ggtcgttatc tggcgtggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcgactta ttattgccag cagctttctt cttatcctcc tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 353 <211> 110 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 353 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Gly Arg 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Ser Ser Tyr Pro 85 90 95 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 354 <211> 39 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 354 cttactcatt atgctcgtta ttatcgttat tttgatgtt 39 <210> 355 <211> 13 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 355 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 356 <211> 39 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 356 cttactcatt atgctcgtta ttatcgttat tttgatgtt 39 <210> 357 <211> 13 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 357 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 358 <211> 39 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 358 cttactcatt atgctcgtta ttatcgttat tttgatgtt 39 <210> 359 <211> 13 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 359 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 360 <211> 39 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 360 cttactcatt atgctcgtta ttatcgttat tttgatgtt 39 <210> 361 <211> 13 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 361 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 362 <211> 39 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 362 cttactcatt atgctcgtta ttatcgttat tttgatgtt 39 <210> 363 <211> 13 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 363 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 364 <211> 39 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 364 cttactcatt atgctcgtta ttatcgttat tttgatgtt 39 <210> 365 <211> 13 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 365 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 366 <211> 39 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 366 cttactcatt atgctcgtta ttatcgttat tttgatgtt 39 <210> 367 <211> 13 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 367 Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 368 <211> 51 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 368 ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 51 <210> 369 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 369 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 370 <211> 51 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 370 ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 51 <210> 371 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 371 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 372 <211> 51 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 372 ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 51 <210> 373 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 373 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 374 <211> 51 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 374 ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 51 <210> 375 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 375 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 376 <211> 51 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 376 ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 51 <210> 377 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 377 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 378 <211> 51 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 378 ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 51 <210> 379 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 379 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 380 <211> 51 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 380 ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 51 <210> 381 <211> 17 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 381 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val <210> 382 <211> 45 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 382 cttctttctc gtggttataa tggttattat cataagtttg atgtt 45 <210> 383 <211> 15 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 383 Leu Leu Ser Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Tyr His Lys Phe Asp Val 1 5 10 15 <210> 384 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 384 cagcagactt atgattatcc tcct 24 <210> 385 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 385 Gln Gln Thr Tyr Asp Tyr Pro Pro 1 5 <210> 386 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 386 cagcagactt atgattatcc tcct 24 <210> 387 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 387 Gln Gln Thr Tyr Asp Tyr Pro Pro 1 5 <210> 388 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 388 cagcagactt atgattatcc tcct 24 <210> 389 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 389 Gln Gln Thr Tyr Asp Tyr Pro Pro 1 5 <210> 390 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 390 cagcagactt atgattatcc tcct 24 <210> 391 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 391 Gln Gln Thr Tyr Asp Tyr Pro Pro 1 5 <210> 392 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 392 cagcagactt atgattatcc tcct 24 <210> 393 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 393 Gln Gln Thr Tyr Asp Tyr Pro Pro 1 5 <210> 394 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 394 cagcagactt atgattatcc tcct 24 <210> 395 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 395 Gln Gln Thr Tyr Asp Tyr Pro Pro 1 5 <210> 396 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 396 cagcagactt ataattatcc tcct 24 <210> 397 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 397 Gln Gln Thr Tyr Asn Tyr Pro Pro 1 5 <210> 398 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 398 cagcagattt attcttttcc tcat 24 <210> 399 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 399 Gln Gln Ile Tyr Ser Phe Pro His 1 5 <210> 400 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 400 cttcagcttt ataatattcc taat 24 <210> 401 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 401 Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro Asn 1 5 <210> 402 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 402 cagcagattt attcttttcc tcat 24 <210> 403 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 403 Gln Gln Ile Tyr Ser Phe Pro His 1 5 <210> 404 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 404 cttcagcttt ataatattcc taat 24 <210> 405 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 405 Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro Asn 1 5 <210> 406 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 406 cagcagattt attcttttcc tcat 24 <210> 407 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 407 Gln Gln Ile Tyr Ser Phe Pro His 1 5 <210> 408 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 408 cagcagattt attcttttcc tcat 24 <210> 409 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 409 Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro Ile 1 5 <210> 410 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 410 cttcagcttt ataatattcc taat 24 <210> 411 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 411 Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro Asn 1 5 <210> 412 <211> 24 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 412 cagcagcttt cttcttatcc tcct 24 <210> 413 <211> 8 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 413 Gln Gln Leu Ser Ser Tyr Pro Pro 1 5 <210> 414 <211> 52 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> synthetic construct <400> 414 Ile Ser Glu Val Lys Met Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr 1 5 10 15 Glu Val His His Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser 20 25 30 Asn Lys Gly Ala Ile Ile Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala 35 40 45 Thr Val Ile Val 50 164/165 165/165

Claims

β-A4 펩티드/Aβ4의 2개의 영역들을 특이적으로 인식할 수 있는 항체 분자로서,

제1 영역은 서열 번호 1로 표시되는 아미노산 서열 AEFRHDSGY 또는 이의 단편을 포함하며, 제2 영역은 서열 번호 2로 표시되는 아미노산 서열 VHHQKLVFFAEDVG 또는 이의 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 분자.
제 1 항에 있어서,

상기 항체 분자는 β-A4의 2개의 영역들내의 2개 이상의 연속 아미노산을 인식하는 것을 특징으로 하는 항체 분자.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

상기 항체 분자는 AEFRHD, EF, EFR, FR, EFRHDSG, EFRHD 또는 HDSG를 포함하는 아미노산 서열을 제1 영역에서 인식하고, HHQKL, LV, LVFFAE, VFFAED 또는 VFFA, FFAEDV를 포함하는 아미노산 서열을 제2 영역에서 인식하는 것을 특징으로 하는 항체 분자.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 항체 분자는 서열 번호 3, 서열 번호 5 및 서열 번호 7로 구성된 그룹에서 선택되는 서열 번호로 표시되는 핵산 분자에 의해 코딩되는 가변 V_H-영역 또는 서열 번호 4, 서열 번호 6 및 서열 번호 8로 구성된 그룹에서 선택되는 서열 번호로 표시되는 가변 V_H-영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 분자.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 항체 분자는 서열 번호 9, 서열 번호 11 및 서열 번호 13으로 구성된 그룹에서 선택되는 서열 번호로 표시되는 핵산 분자에 의해 코딩되는 가변 V_L-영역 또는 서열 번호 10, 서열 번호 12 및 서열 번호 14로 구성된 그룹에서 선택되는 서열 번호로 표시되는 가변 V_L-영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 분자.
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 항체 분자는 서열 번호 15, 서열 번호 17 또는 서열 번호 19로 표시되는 핵산 분자에 의해 코딩되는 V_L-영역의 1개 이상의 CDR3 또는 서열 번호 16, 서열 번호 18 또는 서열 번호 20으로 표시되는 V_L-영역의 1개 이상의 CDR3 아미노산 서열을 포함하며/포함하거나, 상기 항체 분자는 서열 번호 21, 서열 번호 23 또는 서열 번호 25로 표시되는 핵산 분자에 의해 코딩되는 V_H-영역의 1개 이상의 CDR3 또는 서열 번호 22, 서열 번호 24 또는 서열 번호 26으로 표시되는 V_H-영역의 1개 이상의 CDR3 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 분자.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 항체는 MSR-3, MSR-7, MSR-8 및 이들의 친화성이 증강된(affinity-matured) 버전으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 항체 분자.
제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 항체 분자는 완전 항체(full antibody)(면역글로불린), F(ab)-단편, F(ab)₂-단편, 단쇄 항체, 키메라 항체(chimeric antibody), CDR-이식된 항체, 이가 항체-구조물, 합성 항체 또는 교차-클로닝된 항체인 것을 특징으로 하는 항체 분자.
제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,

β-A4의 2개 이상의 영역들은 규칙적 입체 배열을 갖는 에피토프(conformational epitope) 또는 불연속적 에피토프(discontinuous epitope)를 형성하는 것을 특징으로 하는 항체 분자.
제 8 항 또는 제 9 항에 있어서,

상기 교차-클로닝된 항체는 하기로 구성된 그룹에서 선택되는 것을 특징으로하는 항체 분자:

MS-R #3.3H1 x 3.4L9;

MS-R #3.6H5 x 3.6L2;

MS-R #3.6H8 x 3.6L2;

MS-R #7.4H2 x 7.2L1;

MS-R #7.9H2 x 7.12L2;

MS-R #7.9H4 x 7.12L2;

MS-R #7.11H1 x 7.11L1;

MS-R #7.11H1 x 7.2L1;

MS-R #3.4H1 x 3.4L9;

MS-R #3.4H3 x 3.4L7;

MS-R #3.4H3 x 3.4L9;

MS-R #3.4H7 x 3.4L9;

MS-R #3.4H7 x 3.4L7;

MS-R #3.6H5 x 3.6L1;

MS-R #7.2H2 x 7.2L1;

MS-R #7.4H2 x 7.12L2;

MS-R #7.9H2 x 7.2L1;

MS-R #7.9H2 x 7.12L1;

MS-R #7.11H2 x 7.2L1;

MS-R #7.11H2 x 7.9L1;

MS-R #7.11H2 x 7.12L1; 및

MS-R #8.1H1 x 8.2L1.
제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항의 항체 분자를 코딩하는 핵산 분자.
제 11 항의 핵산 분자를 포함하는 벡터.
제 12 항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항의 항체 분자를 제조하는 방법으로서,

상기 항체 분자를 합성하는 조건하에서 제 13 항의 숙주 세포를 배양하는 단계 및 상기 배양액으로부터 상기 항체 분자를 회수하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항의 항체 분자 또는 제 14 항의 방법에 의해 제조된 항체 분자를 포함하는 조성물.
제 15 항에 있어서,

상기 조성물은 약학 조성물 또는 진단 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
아밀로이드신생 및/또는 아밀로이드 플라크(amyloid plaque) 형성과 연관된 질병의 예방 및/또는 치료용 약학 조성물을 제조하는데 사용되는 것을 특징으로 하는, 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항의 항체 분자 또는 제 14 항의 방법에 의해 제조된 항체 분자, 제 11 항의 핵산 분자, 제 12 항의 벡터 또는 제 13 항의 숙주의 용도.
아밀로이드신생 및/또는 아밀로이드 플라크 형성과 연관된 질병의 검출용 진단 조성물을 제조하는데 사용되는 것을 특징으로 하는, 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항의 항체 분자 또는 제 14 항의 방법에 의해 제조된 항체 분자의 용도.
β-아밀로이드 플라크를 붕해시키기 위한 약학 조성물을 제조하는데 사용되는 것을 특징으로 하는, 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항의 항체 분자 또는 제 14 항의 방법에 의해 제조된 항체 분자의 용도.
β-아밀로이드 플라크 형성에 대한 수동 면역화를 위한 약학 조성물을 제조하는데 사용되는 것을 특징으로 하는, 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항의 항체 분자 또는 제 14 항의 방법에 의해 제조된 항체 분자의 용도.
제 17 항 또는 제 18 항에 있어서,

상기 질병은 치매, 알츠하이버 병, 운동 신경병, 다운 증후군, 크로이츠휄트-야콥 병, 아밀로이디스 네덜란드형 유전성 뇌졸중, 파킨슨병, HIV-관련 치매, ALS 또는 노화와 연간된 신경질환을 포함하는 것을 특징으로 하는 용도.
제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항의 항체 분자, 제 16 항의 핵산 분자, 제 17 항의 벡터 또는 제 18 항의 숙주 세포를 포함하는 키트(kit).
제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 정의된 항체 분자의 최적화 방법으로서,

(a) 서열 번호 21, 서열 번호 23 또는 서열 번호 25로 표시되는 핵산 분자에 의해 코딩된 V_H-영역의 1개 이상의 CDR3 또는 서열 번호 22, 서열 번호 24 또는 서열 번호 26로 표시되는 V_H-영역의 1개 이상의 CDR3 아미노산 서열을 포함하는 항체로부터 유도된 다양화된 Fab 항체 단편들의 라이브러리를 제조하는 단계;

(b) Aβ/Aβ4에 대한 패닝(panning)에 의해 상기 Fab 최적화 라이브러리를 시험하는 단계;

(c) 최적화된 클론들을 확인하는 단계; 및

(d) 선택된 최적화된 클론들을 발현시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로하는 방법.
제 23 항에 있어서,

최적화된 클론들이 카세트 돌연변이신생(cassette mutagenesis)에 의해 추가로 최적화되는 단계(ca)를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 23 항 또는 제 24 항에 있어서,

단계 (b)에서 상기 Aβ/Aβ4는 응집된 Aβ/Aβ4인 것을 특징으로 하는 방법.
제 23 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서,

단계 (c)에서 확인은 코프-등급화(koff-ranking)에 의해 실시되는 것을 특징으로 하는 방법.
약학 조성물을 제조하는 방법으로서,

(a) 제 23 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항의 방법에 따라 항체를 최적화하는 단계; 및

(b) 상기 최적화된 항체/항체 분자를 생리적으로 허용가능한 담체와 배합하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 27 항의 방법에 의해 제조된 약학 조성물.