KR20020039375A

KR20020039375A - Ｐ38 단백질 키나제의 억제제로서의 알킬아미노 치환된이중고리 질소 헤테로고리 화합물

Info

Publication number: KR20020039375A
Application number: KR1020027005056A
Authority: KR
Inventors: 던제임스패트릭; 골드슈타인데이비드마이클; 해리스윌리암; 스미쓰아이언에드워드데이비드; 웰츠테레사로산느
Original assignee: 프리돌린 클라우스너, 롤란드 비. 보레르; 에프. 호프만-라 로슈 아게
Priority date: 1999-10-21
Filing date: 2000-10-13
Publication date: 2002-05-25
Also published as: US6642241B1; YU29202A; WO2001029041A1; AU1137501A; ATE349447T1; CZ20021743A3; DE60032623T2; CN1382142A; HK1051040A1; MXPA02003841A; EP1226144A1; BR0014973A; ES2277858T3; EP1226144B1; JP4028236B2; NO20021783L; HUP0203477A2; PE20010760A1; KR100537241B1; TR200201058T2

Abstract

p38의 억제제로 유용한 하기 화학식 I의 알킬아미노-치환된 디하이드로피리미도[4,5-d]피리미디논 유도체, 그의 제조 방법 및 그를 함유하는 약학 제제가 제공된다:

화학식 I

상기 식에서,

R¹내지 R³는 명세서에 정의된 바와 같다.

Description

Ｐ38 단백질 키나제의 억제제로서의 알킬아미노 치환된 이중고리 질소 헤테로고리 화합물{ALKYLAMINO SUBSTITUTED BICYCLIC NITROGEN HETEROCYCLES AS INHIBITORS OF P38 PROTEIN KINASE}

미토겐-활성화된 단백질 키나제(MAP)는 이중 포스포릴화에 의해 그의 기질을 활성화시키는 프롤린 관련 세린/트레오닌 키나제의 한 부류이다. 키나제는 영양성 및 삼투성 스트레스, 자외선, 성장 인자, 내독소 및 염증성 사이토카인을 포함한 다양한 신호들에 의해 활성화된다. MAP 키나제의 한 그룹은 다양한 이형체(예를 들면, p38α, p38β 및 p38γ)를 포함하는 p38 키나제 그룹이다. p38 키나제는 전사 인자들 및 기타 키나제들을 포스포릴화시키고 활성화시키며, 그 자체는 물리적 및 화학적 스트레스, 전구-염증성 사이토카인 및 세균성 지질다당류에 의해 활성화된다.

보다 중요하게는, p38 포스포릴화의 생성물은 TNF 및 IL-1을 비롯한 염증성 사이토카인, 및 사이클로옥시게나제-2의 생성을 매개하는 것으로 밝혀졌다. 상기 사이토카인들은 각각 많은 질병 상태 및 증상에 관여되어 있다. 예를 들면, TNF-α는 활성화된 단핵세포 및 대식세포에 의해 주로 생성되는 사이토카인이다. TNF-α의 과도하거나 제어되지 않은 생성은 류마티스성 관절염의 발병에 원인적 역할을 하는 것으로서 관련되었다. 보다 최근에, TNF 생성을 억제하면 염증, 염증성 장 질환, 다발성 경화증 및 천식의 치료에 광범위한 용도를 갖는 것으로 밝혀졌다.

TNF는 또한 특히, HIV, 인플루엔자 바이러스, 및 단순 포진 바이러스 타입-1(HSV-1), 단순 포진 바이러스 타입-2(HSV-2), 사이토메갈로바이러스(CMV), 수두-대상포진 바이러스(VZV), 엡스타인-바르(Epstein-Barr) 바이러스, 인간 헤르페스 바이러스-6(HHV-6), 인간 헤르페스 바이러스-7(HHV-7), 인간 헤르페스 바이러스-8(HHV-8)를 비롯한 헤르페스 바이러스와 같은 바이러스 감염, 가성광견병 및 비기관염에 관여되었다.

유사하게, IL-1은 활성화된 단핵세포 및 대식세포에 의해 생성되고, 류마티스성 관절염, 발열 및 골 재흡수의 감소를 비롯한 많은 병리학적 반응에 관여한다. p38 키나제의 억제에 의한 상기 사이토카인들의 억제는 상기 질병 상태의 대부분을 억제하고, 경감시키고, 완화시키는데 유리하다.

화학식 I의 화합물 및 그의 전술함 염들은 단백질 키나제의 억제제이며, 생체내에서 p38에 대해 현저하게 효과적인 활성을 나타낸다. 화학식 I의 화합물은약 10 μM 미만의 수준에서 T-세포 티로신 키나제 p56^lck에 대한 활성을 나타내지 않는다. 상기 화합물들은 TNF 및 IL-1과 같은 전구-염증성 사이토카인에 의해 매개된 질병의 치료에 사용될 수 있다.

본 발명은 이중고리 질소 헤테로고리 화합물에 관한 것이다. 보다 특히, 본 발명은 알킬아미노-치환된 디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미디논 유도체, 그의 제조 방법, 그의 용도, 그를 함유하는 약학 제제 및 약학 제제의 제조 방법에 관한 것이다.

본원에서 다음과 같이 사용된다:

"알킬"은 탄소원자수 1 내지 6개의 선형 포화 1가 탄화수소 라디칼 또는 탄소원자수 3 내지 6개의 분지된 포화 1가 탄화수소 라디칼, 예를 들면, 메틸, 에틸, n-프로필, 2-프로필, 3급-부틸, 펜틸 등을 의미한다.

"알킬렌"은 탄소원자수 1 내지 6개의 선형 포화 2가 탄화수소 라디칼 또는 탄소원자수 3 내지 6개의 분지된 포화 2가 탄화수소 라디칼, 예를 들면, 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌, 2-메틸프로필렌, 펜틸렌 등을 의미한다.

"알케닐"은 하나 이상의 이중 결합을 함유하는, 탄소원자수 2 내지 6개의 선형 1가 탄화수소 라디칼 또는 탄소원자수 3 내지 6개의 분지된 1가 탄화수소 라디칼, 예를 들면, 에테닐, 프로페닐 등을 의미한다.

"알키닐"은 하나 이상의 삼중 결합을 함유하는, 탄소원자수 2 내지 6개의 선형 1가 탄화수소 라디칼 또는 탄소원자수 3 내지 6개의 분지된 1가 탄화수소 라디칼, 예를 들면, 에티닐, 프로피닐 등을 의미한다.

"사이클로알킬"은 3 내지 7개의 고리 탄소를 갖는 포화 1가 환상 탄화수소라디칼을 말한다. 사이클로알킬은 임의로, 알킬, 임의로 치환된 페닐 또는 -C(O)R(여기서, R은 수소, 알킬, 할로알킬, 아미노, 일치환된 아미노, 이치환된 아미노, 하이드록시, 알콕시 또는 임의로 치환된 페닐이다) 중에서 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 독립적으로 치환될 수 있다. 보다 특히, 사이클로알킬이란 용어는, 예를 들면, 사이클로프로필, 사이클로헥실, 페닐사이클로헥실, 4-카복시사이클로헥실, 2-카복스아미도-사이클로헥실, 2-디메틸아미노카보닐-사이클로헥실 등을 포함한다.

"사이클로알케닐"은 3 내지 7개의 고리 탄소를 갖는 불포화 비-방향족 1가 환상 탄화수소 라디칼을 의미한다. 대표적인 예로는 사이클로헥세닐 및 사이클로펜테닐이 포함된다.

"사이클로알킬알킬"은 라디칼 -R^aR^b(여기서, R^a는 본원에서 정의한 바와 같이, 알킬렌 그룹이고, R^b는 사이클로알킬 그룹이다), 예를 들면, 사이클로프로필메틸, 사이클로헥실프로필, 3-사이클로헥실-2-메틸프로필 등을 의미한다.

"아실"은 그룹 -C(O)R'(여기서, R'는 알킬, 할로알킬, 헤테로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬 또는 헤테로아르알킬이다)를 의미한다.

"알콕시", "아릴옥시", "아르알킬옥시" 또는 "헤테로아르알킬옥시"는 라디칼 -OR(여기서, R은 각각 본원에서 정의한 바와 같은 알킬, 아릴, 아르알킬 또는 헤테로아르알킬이다), 예를 들면, 메톡시, 페녹시, 피리딘-2-일메틸옥시, 벤질옥시 등을 의미한다.

"할로" 또는 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도, 바람직하게는 플루오로 또는 클로로를 의미한다.

"할로알킬"은 하나 이상의 동일하거나 다른 할로 원자로 치환된 알킬, 예를 들면, -CH₂Cl, -CF₃, -CH₂CF₃, -CH₂CCl₃등을 의미하며, 수소 원자가 모두 플루오르 원자로 치환된 퍼플루오로알킬과 같은 알킬 그룹도 또한 포함한다.

"하이드록시알킬"은 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 하이드록시 그룹으로 치환되지만, 단, 동일한 탄소원자는 하나보다 많은 하이드록시 그룹을 갖지 않는, 본원에서 정의한 바와 같은 알킬 라디칼을 의미한다. 대표적인 예로는 2-하이드록시에틸, 2-하이드록시프로필, 3-하이드록시프로필, 1-(하이드록시메틸)-2-메틸프로필, 2-하이드록시부틸, 3-하이드록시부틸, 4-하이드록시부틸, 2,3-디하이드록시프로필, 1-(하이드록시메틸)-2-하이드록시에틸, 2,3-디하이드록시부틸, 3,4-디하이드록시부틸 및 2-(하이드록시메틸)-3-하이드록시프로필, 바람직하게는 2-하이드록시에틸, 2,3-디하이드록시프로필 및 1-(하이드록시메틸)-2-하이드록시에틸이 포함되나 이로 한정되지는 않는다. 따라서, 본원에서 사용된 바와 같이, "하이드록시알킬"이란 용어는 헤테로알킬 그룹의 부분집합을 정의하기 위해 사용된다.

"일치환된 아미노"는 라디칼 -NHR(여기서, R은 알킬, 헤테로알킬, 할로알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아르알킬, 아르알케닐, 헤테로아릴, 헤테로아르알킬, 헤테로아르알케닐, 헤테로사이클릴 또는 헤테로사이클릴알킬이다), 예를 들면, 메틸아미노, 에틸아미노, 페닐아미노, 벤질아미노 등을 의미한다.

"이치환된 아미노"는 라디칼 -NRR'(여기서, R 및 R'는 서로 독립적으로 알킬, 헤테로알킬, 할로알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아르알킬, 아르알케닐, 헤테로아릴, 헤테로아르알킬, 헤테로아르알케닐, 헤테로사이클릴 또는 헤테로사이클릴알킬이거나, 또는 R과 R'는 그들이 결합된 질소원자와 함께 헤테로사이클릴 고리를 형성한다)를 의미한다. 대표적인 예로는 디메틸아미노, 메틸에틸아미노, 디(1-메틸-에틸)아미노, 피페라진-1-일 등이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다.

"아릴"은, 알킬, 할로알킬, 헤테로알킬, 할로, 니트로, 시아노, 메틸렌디옥시, 에틸렌디옥시, 사이클로알킬, 임의로 치환된 페닐, 헤테로아릴, 할로알콕시, 임의로 치환된 페녹시, 헤테로아릴옥시, -COR(여기서, R은 알킬 또는 임의로 치환된 페닐이다), -(CR'R")_n-COOR(여기서, n은 0 내지 5의 정수이고, R' 및 R"는 독립적으로 수소 또는 알킬이고, R은 수소, 알킬, 사이클로알킬 또는 사이클로알킬알킬이다) 또는 -(CR'R")_n-CONR^aR^b(여기서, n은 0 내지 5의 정수이고, R' 및 R"는 독립적으로 수소 또는 알킬이고, R^a및 R^b는 서로 독립적으로 수소, 알킬, 사이클로알킬 또는 사이클로알킬알킬이거나, 또는 R^a와 R^b는 그들이 결합된 질소원자와 함께 헤테로사이클릴 고리를 형성한다) 중에서 선택된 하나 이상의 치환체, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 치환체로 독립적으로 치환된, 6 내지 10개의 고리 원자를 갖는 1가 단일고리 또는 이중고리 방향족 탄화수소 라디칼을 의미한다. 보다 특히, 아릴이란 용어에는 페닐, 1-나프틸 및 2-나프틸, 및 이들의 유도체가 포함되나 이로 한정되지는 않는다.

"아르알킬"은 라디칼 -R^aR^b(여기서, R^a는 본원에서 정의한 바와 같이, 알킬렌 그룹이고, R^b는 아릴 그룹이다), 예를 들면, 벤질, 페닐에틸, 3-(3-클로로페닐)-2-메틸펜틸 등을 의미한다.

"아르알케닐"은 라디칼 -R^aR^b(여기서, R^a는 본원에서 정의한 바와 같이, 알케닐렌 그룹이고, R^b는 아릴 그룹이다), 예를 들면, 3-페닐-2-프로페닐 등을 의미한다.

"아릴헤테로알킬"은 라디칼 -R^aR^b(여기서, R^a는 본원에서 정의한 바와 같이, 헤테로알킬렌 그룹이고, R^b는 아릴 그룹이다), 예를 들면, 2-하이드록시-2-페닐에틸, 2-하이드록시-1-하이드록시메틸-2-페닐에틸 등을 의미한다.

"임의로 치환된 페닐"은, 알킬, 할로알킬, 헤테로알킬, 할로, 니트로, 시아노, 메틸렌디옥시, 에틸렌디옥시, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, -COR(여기서, R은 알킬 또는 임의로 치환된 페닐이다), -(CR'R")_n-COOR(여기서, n은 0 내지 5의 정수이고, R' 및 R"는 독립적으로 수소 또는 알킬이고, R은 수소, 알킬, 사이클로알킬 또는 사이클로알킬알킬이다), 또는 -(CR'R")_n-CONR^aR^b(여기서, n은 0 내지 5의정수이고, R' 및 R"는 독립적으로 수소 또는 알킬이고, R^a및 R^b는 서로 독립적으로 수소, 알킬, 사이클로알킬 또는 사이클로알킬알킬이거나, 또는 R^a와 R^b는 그들이 결합된 질소원자와 함께 헤테로사이클릴 고리를 형성한다) 중에서 선택된 하나 이상의 치환체, 바람직하게는 1 또는 2개의 치환체로 임의로 독립적으로 치환된 페닐 고리를 의미한다.

"헤테로아릴"은 N, O 또는 S에서 선택된 1, 2 또는 3개의 고리 헤테로 원자를 함유하는 방향족 고리(나머지 고리 원자는 C이다)를 하나 이상 갖는, 5 내지 12개의 고리 원자로 된 1가 단일고리 또는 이중고리 라디칼(헤테로아릴 라디칼의 결합 부위는 방향족 고리 상에 존재할 것임을 주지해야 한다)을 의미한다. 헤테로아릴 고리는, 알킬, 할로알킬, 헤테로알킬, 할로, 니트로, 시아노, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, -COR(여기서, R은 알킬 또는 임의로 치환된 페닐이다), -(CR'R")_n-COOR(여기서, n은 0 내지 5의 정수이고, R' 및 R"는 독립적으로 수소 또는 알킬이고, R은 수소, 알킬, 사이클로알킬 또는 사이클로알킬알킬이다), 또는 -(CR'R")_n-CONR^aR^b(여기서, n은 0 내지 5의 정수이고, R' 및 R"는 독립적으로 수소 또는 알킬이고, R^a및 R^b는 서로 독립적으로 수소, 알킬, 사이클로알킬 또는 사이클로알킬알킬이거나, 또는 R^a와 R^b는 그들이 결합된 질소원자와 함께 헤테로사이클릴 고리를 형성한다) 중에서 선택된 하나 이상의 치환체, 바람직하게는 1 또는 2개의 치환체로 임의로 독립적으로 치환된다. 보다 특히, 헤테로아릴이란 용어에는 피리딜, 푸라닐, 티에닐, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 트리아졸릴, 이미다졸릴, 이속사졸릴, 피롤릴, 피라졸릴, 피리미디닐, 벤조푸라닐, 테트라하이드로벤조푸라닐, 이소벤조푸라닐, 벤조티아졸릴, 벤조이소티아졸릴, 벤조트리아졸릴, 인돌릴, 이소인돌릴, 벤족사졸릴, 퀴놀릴, 테트라하이드로퀴놀리닐, 이소퀴놀릴, 벤즈이미다졸릴, 벤즈이속사졸릴 또는 벤조티에닐, 및 이들의 유도체가 포함되나 이로 한정되지는 않는다.

"헤테로아르알킬"은 라디칼 -R^aR^b(여기서, R^a는 본원에서 정의한 바와 같이, 알킬렌 그룹이고, R^b는 헤테로아릴 그룹이다), 예를 들면, 피리딘-3-일메틸, 3-(벤조푸란-2-일)프로필 등을 의미한다.

"헤테로아르알케닐"은 라디칼 -R^aR^b(여기서, R^a는 본원에서 정의한 바와 같이, 알케닐렌 그룹이고, R^b는 헤테로아릴 그룹이다), 예를 들면, 3-(피리딘-3-일)프로펜-2-일 등을 의미한다.

"헤테로사이클릴"은 1 또는 2개의 고리 원자가 NR(여기서, R은 독립적으로 수소 또는 알킬이다), O 또는 S(O)_n(여기서, n은 0 내지 2의 정수이다) 중에서 선택된 헤테로 원자이고, 나머지 고리 원자는 C인(이때, 1 또는 2개의 C 원자는 임의로 카보닐 그룹으로 대체될 수 있다), 3 내지 8개의 고리 원자를 갖는 포화 또는 불포화 비-방향족 환상 라디칼을 의미한다. 헤테로사이클릴 고리는, 알킬, 할로알킬, 헤테로알킬, 할로, 니트로, 시아노, 하이드록시, 알콕시, 아미노, 일치환된 아미노, 이치환된 아미노, -COR(여기서, R은 알킬 또는 임의로 치환된 페닐이다), -(CR'R")_n-COOR(여기서, n은 0 내지 5의 정수이고, R' 및 R"는 독립적으로 수소 또는 알킬이고, R은 수소, 알킬, 사이클로알킬 또는 사이클로알킬알킬이다), 또는 -(CR'R")_n-CONR^aR^b(여기서, n은 0 내지 5의 정수이고, R' 및 R"는 독립적으로 수소 또는 알킬이고, R^a및 R^b는 서로 독립적으로 수소, 알킬, 사이클로알킬 또는 사이클로알킬알킬이거나, 또는 R^a와 R^b는 그들이 결합된 질소원자와 함께 헤테로사이클릴 고리를 형성한다) 중에서 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 독립적으로 치환될 수 있다. 보다 특히, 헤테로사이클릴이란 용어에는 테트라하이드로피라닐, 피페리디노, N-메틸피페리딘-3-일, 피페라지노, N-메틸피롤리딘-3-일, 3-피롤리디노, 모르폴리노, 티오모르폴리노, 티오모르폴리노-1-옥사이드, 티오모르폴리노-1,1-디옥사이드, 피롤리닐, 이미다졸리닐, 및 이들의 유도체가 포함되나 이로 한정되지는 않는다.

"헤테로사이클릴알킬"은 라디칼 -R^aR^b(여기서, R^a는 본원에서 정의한 바와 같이, 알킬렌 그룹이고, R^b는 헤테로사이클릴 그룹이다), 예를 들면, 테트라하이드로피란-2-일메틸, 4-메틸피페라진-1-일에틸, 3-피페리디닐메틸 등을 의미한다.

"헤테로알킬"은 -OR^a, -NR^bR^c, 및 -S(O)_nR^d(여기서, n은 0 내지 2의 정수이다) 중에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체를 갖는, 본원에서 정의한 바와같은 알킬 라디칼을 의미한다. R^a는 수소, 알킬, 할로알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로아릴, 헤테로아르알킬, 알콕시카보닐, 아릴옥시카보닐, 카복스아미도, 또는 모노- 또는 디-알킬카바모일이다. R^b는 수소, 알킬, 할로알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로아릴 또는 헤테로아르알킬이다. R^c는 수소, 알킬, 할로알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴, 아르알킬, 알킬설포닐, 알콕시카보닐, 아릴옥시카보닐, 카복스아미도, 또는 모노- 또는 디-알킬카바모일이다. R^d는 수소(단, n은 0이다), 알킬, 할로알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로아릴, 헤테로아르알킬, 아미노, 일치환된 아미노, 이치환된 아미노 또는 하이드록시알킬이다. 대표적인 예로는, 예를 들면, 2-메톡시에틸, 벤질옥시메틸, 티오펜-2-일티오메틸, 2-하이드록시에틸 및 2,3-디하이드록시프로필이 포함된다.

"헤테로알킬렌"은 -OR^a, -NR^bR^c, 및 -S(O)_nR^d(여기서, n은 0 내지 2의 정수이고, R^a, R^b, R^c및 R^d는 헤테로알킬 라디칼에 대해 본원에서 정의한 바와 같다) 중에서 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체를 갖는, 탄소수 1 내지 6개의 선형 포화 2가 탄화수소 라디칼 또는 탄소원자수 3 내지 6개의 분지된 포화 탄화수소 라디칼을 의미한다. 예로는 2-하이드록시에탄-1,1-디일, 2-하이드록시프로판-1,1-디일 등이 포함된다.

"헤테로치환된 사이클로알킬"은 1, 2 또는 3개의 수소 원자가 하이드록시, 알콕시, 아미노, 일치환된 아미노, 이치환된 아미노 또는 -SO_nR(여기서, n은 0 내지 2의 정수이고, R은 수소(단, n은 0이다), 알킬, 할로알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로아릴, 헤테로아르알킬, 아미노, 일치환된 아미노, 이치환된 아미노 또는 하이드록시알킬이다)로 이루어진 그룹에서 독립적으로 선택된 치환체로 치환된 사이클로알킬 그룹을 의미한다. 예로는 4-하이드록시사이클로헥실, 2-아미노-사이클로헥실이 포함된다.

"헤테로알킬치환된 사이클로알킬"은 1, 2 또는 3개의 수소 원자가 헤테로알킬 그룹으로 독립적으로 치환된 사이클로알킬 그룹을 의미한다. 예로는 1-하이드록시메틸-사이클로펜트-1-일, 2-하이드록시메틸-사이클로헥스-2-일 등이 포함된다.

"이탈 그룹"은 합성 유기 화학 분야에서 그에 관한 통상적인 의미를 갖는다, 즉, 친핵체로 치환될 수 있는 원자 또는 그룹을 말하며, 할로(예를 들면, 클로로, 브로모, 요오도), 알칸설포닐옥시, 아렌설포닐옥시, 알킬카보닐옥시(예, 아세톡시), 아릴카보닐옥시, 메실옥시, 토실옥시, 트리플루오로메탄설포닐옥시, 아릴옥시(예, 2,4-디니트로페녹시), 메톡시, N,O-디메틸하이드록실아미노 등이 포함된다.

"약학적으로 허용가능한 부형제"는 일반적으로 안전하고, 무독성이며, 생물학적으로든 다르게든 비바람직하지 않은 약학 조성물을 제조하는데 유용한 부형제를 의미하며, 척추동물 뿐만 아니라 인간의 약학적 용도로 허용가능한 부형제를 포함한다. 명세서 및 청구의 범위에 사용된 바와 같은 "약학적으로 허용가능한 부형제"는 하나 및 하나보다 많은 상기 부형제를 모두 포함한다.

화합물의 "약학적으로 허용가능한 염"은 약학적으로 허용되며, 모 화합물의 바람직한 약리 활성을 갖는 염을 의미한다. 상기 염으로는 다음이 포함된다:

(1) 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등과 같은 무기 산에 의해 생성된 산 부가염; 또는 아세트산, 프로피온산, 헥사노산, 사이클로펜탄프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 락트산, 말론산, 숙신산, 말산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 3-(4-하이드록시벤조일)벤조산, 신남산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 1,2-에탄-디설폰산, 2-하이드록시에탄설폰산, 벤젠설폰산, 4-클로로벤젠설폰산, 2-나프탈렌설폰산, 4-톨루엔설폰산, 캄포설폰산, 4-메틸비사이클로[2,2,2]-옥트-2-엔-1-카복실산, 글루코헵톤산, 4,4'-메틸렌비스-(3-하이드록시-2-엔-1-카복실산), 3-페닐프로피온산, 트리메틸아세트산, 3급 부틸아세트산, 라우릴 황산, 글루콘산, 글루탐산, 하이드록시나프토산, 살리실산, 스테아르산, 뮤콘산 등과 같은 유기 산에 의해 생성된 산 부가염; 또는 (2) 모 화합물에 존재하는 산성 양성자가 금속 이온, 예를 들어, 알칼리 금속 이온, 알칼리 토금속 이온 또는 알루미늄 이온에 의해 치환되거나; 또는 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 트로메타민, N-메틸글루카민 등과 같은 유기 염기로 배위되는 경우에 생성되는 염.

"전구약물"은 상기 전구약물을 포유동물 대상에게 투여하는 경우, 생체내에서 화학식 I에 따른 활성 모 약물을 방출시키는 임의의 화합물을 의미한다. 화학식 I 화합물의 전구약물은, 변형부가 생체내에서 분열되어 모 화합물을 방출할 수 있도록 하는 방식으로 화학식 I의 화합물에 존재하는 작용기를 변형시킴으로써 제조된다. 전구약물은, 화학식 I 화합물의 하이드록시, 아미노 또는 설파이드릴 그룹이 생체내에서 분열되어 각각 유리 하이드록실, 아미노 또는 설파이드릴 그룹을 다시 생성할 수 있는 임의의 그룹에 결합된 화학식 I의 화합물을 포함한다. 전구약물의 예로는 화학식 I의 화합물의 하이드록시 작용기의 에스테르(예를 들면, 아세테이트, 포르메이트 및 벤조에이트 유도체), 카바메이트(예를 들면, N,N-디메틸아미노카보닐) 등이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다.

"보호 그룹"은 분자 중의 반응성 그룹에 결합될 때 상기 반응성을 차단하거나 감소시키거나 방해하는 원자의 집단을 말한다. 보호 그룹의 예는 문헌 [T.W. Greene and P.G. Futs,Protective Groups in Organic Chemistry, (Wiley, 2nd ed., 1991); and Harrison and Harrison et al.,Compendium of Synthetic Organic Methods,Vols. 1-8(John Wiley and Sons., 1971-1996)]에서 찾아볼 수 있다. 대표적인 아미노 보호 그룹으로는 포르밀, 아세틸, 트리플루오로아세틸, 벤질, 벤질옥시카보닐(CBZ), 3급-부톡시카보닐(Boc), 트리메틸 실릴(TMS), 2-트리메틸실릴-에탄설포닐(SES), 트리틸 및 치환된 트리틸 그룹, 알릴옥시카보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(FMOC), 니트로-베라트릴옥시카보닐(NVOC) 등이 포함된다. 대표적인 하이드록시 보호 그룹으로는 하이드록시 그룹이 아실화되거나 알킬화된 것들, 예를들면, 벤질 및 트리틸 에테르, 및 알킬 에테르, 테트라하이드로피라닐 에테르, 트리알킬실릴 에테르 및 알릴 에테르가 포함된다.

질환을 "치료하는" 또는 질환의 "치료"는, (1) 질환을 예방함, 즉, 질환에 노출되거나 질환에 걸리기 쉽지만 질환의 증상을 아직 경험하거나 나타내지 않은 포유동물에서 질환의 임상적 증상이 발병하지 않도록 하거나, (2) 질환을 억제함, 즉, 질환 또는 그의 임상적 증상의 진전을 저지 또는 감소시키거나, 또는 (3) 질환을 완화시킴, 즉, 질환 또는 그의 임상적 증상을 퇴보시킴을 포함한다.

"치료 효과량"이란 질환을 치료하기 위해 포유동물에게 투여될 때 질환에 대해 상기 치료를 수행하기에 충분한 화합물의 양을 의미한다. "치료 효과량"은 화합물, 질환 및 그 중증도, 및 치료될 포유동물의 연령, 체중 등에 따라 달라질 것이다.

한 태양에서, 본 발명은 하기 화학식 I로 나타내는 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:

상기 식에서,

아래 첨자 n은 0 내지 3의 정수이고;

R¹은 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬카보닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알킬알킬, 사이클로알킬알케닐, 사이클로알킬알키닐 및 아르알킬이고;

R²는 각각 독립적으로 알킬, 할로, 헤테로알킬 및 비닐로 이루어진 그룹에서 선택되고;

R³는 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 헤테로알킬카보닐, 헤테로치환된 사이클로알킬, 헤테로치환된 사이클로알킬알킬, 헤테로치환된 사이클로알킬알케닐, 헤테로치환된 사이클로알킬알키닐, 헤테로알킬치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴헤테로알킬, 헤테로아릴헤테로알킬, -(알킬렌)-C(O)R³¹및 -(헤테로알킬렌)-C(O)R³¹이며; 여기서, R³¹은 알킬, 할로알킬, 하이드록시, 알콕시, 아미노, 일치환된 아미노, 이치환된 아미노, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로아릴 및 헤테로아르알킬이다.

화학식 I에서, 기호 R¹은 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬카보닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알킬알킬, 사이클로알킬알케닐, 사이클로알킬알키닐 또는 아르알킬 그룹을 나타낸다.

보다 바람직하게, R¹은 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬카보닐, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알킬알케닐, 사이클로알킬알키닐 또는 아르알킬 그룹을 나타낸다.

더욱 바람직한 태양에서, R¹은 수소, 알킬, 사이클로알킬 또는 아르알킬이다. 보다 바람직하게, R¹은 알킬 또는 사이클로알킬이다. R¹이 알킬인 바람직한 태양에서, R¹은 질소 원자에 결합된 탄소 원자가 바람직하게는 0 또는 1개의 결합 수소 원자를 갖는 사면체 탄소 원자인 분지된 알킬 그룹이다. 보다 바람직하게, R¹은 2-프로필, 사이클로헥실 또는 1-메틸-사이클로헥실, 가장 바람직하게는 2-메틸-2-프로필이다.

화학식 I에서, 기호 R²는 알킬, 할로, 헤테로알킬 또는 비닐을 나타낸다. R²는 달리 수소에 의해 확보될 나머지 5개 원자가 중 임의의 위치의 페닐 고리에 결합될 수 있다. 아래 첨자 n은 0 내지 3의 정수로서, 페닐 고리가 0 내지 3개의 R²그룹, 바람직하게는 1 또는 2개의 R²그룹으로 치환됨을 나타낸다. 2 또는 3개의 R²그룹이 존재하는 태양에 있어, R²그룹 각각은 서로(들)에 독립적일 수 있다. 화학식 I의 화합물 중 R²의 바람직한 태양에서, n은 1 또는 2이고, R²는 각각 할로 또는 알킬이고, 보다 바람직하게는 R²는 할로이다. -(R²)_n이 2-할로 또는 2,6-디할로, 보다 바람직하게는 2-클로로 또는 2,6-디클로로를 나타내는 태양이 더욱 바람직하다.

상기에서 언급한 바와 같이, 기호 R³는 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 헤테로알킬카보닐, 헤테로치환된 사이클로알킬, 헤테로치환된 사이클로알킬알킬, 헤테로치환된 사이클로알킬알케닐, 헤테로치환된 사이클로알킬알키닐, 헤테로알킬 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴헤테로알킬, 헤테로아릴헤테로알킬, -(알킬렌)-C(O)R³¹또는 -(헤테로알킬렌)-C(O)R³¹을 나타내며; 여기서, R³¹은 알킬, 할로알킬, 하이드록시, 알콕시, 아미노, 일치환된 아미노, 이치환된 아미노, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로아릴 또는 헤테로아르알킬을 나타낸다.

화학식 I의 화합물 중 R³의 바람직한 태양에서, R³는 헤테로알킬, 헤테로사이클릴 및 헤테로치환된 사이클로알킬 중에서 선택된다. 특히 바람직한 R³태양 중 한 그룹에서, R³는 헤테로알킬, 보다 바람직하게는 하이드록시알킬 또는 알콕시알킬이다. 특정 하이드록시알킬 및 알콕시알킬 그룹은 2-메톡시에틸, 2-하이드록시에틸, 1-하이드록시-2-프로필, 2-하이드록시-1-프로필, 1-하이드록시-2-(하이드록시메틸)-3-프로필, 1,3-디하이드록시-2-프로필, 1,3-디메톡시-2-프로필, 1-메톡시-2-(메톡시메틸)-3-프로필, 3,4-디하이드록시-1-사이클로펜틸이다. 보다 특히는, 2,3-디하이드록시-1-프로필 및 2-메톡시에틸이다.

특히 바람직한 R³태양의 또 다른 그룹에서, R³는 헤테로사이클릴알킬이다.특정 헤테로사이클릴알킬 그룹으로는 2-(N-피페리디닐)에틸 또는 2-(N-(2-피롤리디노닐))에틸이 포함된다.

특히 바람직한 태양의 또 다른 그룹에서, R³는 -(알킬렌)-C(O)R³¹이고, R³¹은 하이드록시, 아미노, 메틸아미노, 디메틸아미노, 메틸 및 에틸이다. 보다 바람직하게, 알킬렌 부분은 메틸렌, 에틸렌 또는 프로필렌이다.

전술한 화합물들 이외에, 본 발명은 상기 화합물들의 전구약물 형태 및 순수한 키랄 형태든 또는 라세미체 혼합물이든 또는 다른 형태의 혼합물이든 이성체들 모두와 함께 상기 화합물들의 약학적으로 허용가능한 염 모두를 포함한다.

또한, 화학식 I의 화합물에 대해 전술한 바람직한 그룹들의 조합은 다른 바람직한 태양을 구성할 것이다. 특히 바람직한 태양의 한 그룹에서, R¹은 알킬 또는 사이클로알킬이고, R²는 할로이고, R³는 헤테로알킬 또는 -(알킬렌)-C(O)R³¹이며, n은 1 또는 2이다. 또 다른 그룹에서, R¹은 알킬 또는 사이클로알킬이고, R²는 할로이고, R³는 헤테로알킬이며, n은 1 또는 2이거나; 또는 R¹은 알킬 또는 사이클로알킬이고, R²는 할로이고, R³는 헤테로사이클릴이며, n은 1 또는 2이거나; 또는 R¹은 알킬 또는 사이클로알킬이고, R²는 할로이고, R³는 헤테로치환된 사이클로알킬이며, n은 1 또는 2이거나; 또는 R¹은 이소프로필이고, R²는 할로이고, n은 1 또는 2이다.

특히, 화학식 I의 화합물은 다음으로 이루어진 그룹에서 선택된다:

3-(2-클로로-페닐)-1-에톡시카보닐메틸-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온,

3-(2-클로로-페닐)-1-카복시메틸-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온,

3-(2-클로로-페닐)-1-(2-메톡시에틸)-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온,

3-(2-클로로-페닐)-7-이소프로필아미노-1-(2-메틸설포닐에틸)-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온,

3-(2-클로로-페닐)-1-(2-하이드록시에틸)-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온,

3-(2-클로로페닐)-1-[(2S)-2,3-디하이드록시에틸]-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온,

3-(2-클로로페닐)-1-[(2R)-2,3-디하이드록시에틸]-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온,

7-이소프로필아미노-3-(2-클로로페닐)-1-(2-피페리디닐-에틸)-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온, 및

이들의 약학적으로 허용가능한 염.

또 다른 태양에서, 본 발명은 전술한 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법을 제공한다. 간략하게, 상기 방법은 하기 (a) 또는 (b)를 포함한다:

(a) 하기 화학식 II의 화합물을 하기 화학식 III의 아민으로 처리하고, 필요한 경우, 임의의 보호된 반응성 그룹을 탈보호시키거나:

R¹-NH₂

(상기 식에서, n, R¹, R²및 R³는 상기 화학식 I에 대해 나타낸 의미를 가지나, 단, 존재하는 임의의 간섭 반응성 그룹은 임의로 보호된 형태이며, L은 이탈 그룹이다); 또는

(b) 하기 화학식 IV의 화합물을 하기 화학식 V의 알킬화제로 처리하고, 필요한 경우, 임의의 보호된 반응성 그룹을 탈보호하고, 임의로 화학식 I의 화합물을 약학적으로 허용가능한 염으로 전환시킨다:

R³-X

(상기 식에서, n, R¹, R²및 R³는 화학식 I에 대해 나타낸 의미를 가지고, X는 반응 중에 활성화되는 이탈 그룹 또는 하이드록시 그룹이나, 단, 존재하는 임의의 간섭 반응성 그룹은 임의로 보호된 형태이다).

본 발명의 화합물은 당해 분야의 기술을 가진 자에게 공지된 절차를 이용하여, 다양한 방법에 의해 제조할 수 있다. 예를 들면, 한 태양에서, 화합물을 하기 반응식 1에 개략한 바와 유사한 방법을 이용하여 제조할 수 있다.

화학식 Ia의 화합물을 1급 아민(R³-NH₂)으로 처리하여 화학식 Ib의 화합물을수득한다. 상기 반응은 반응 조건하에서 불활성인 용매, 바람직하게는 열린-쇄 또는 환상 에테르(예, 테트로하이드로푸란), 할로겐화 지방족 탄화수소, 특히 디클로로메탄, 임의로 할로겐화된 방향족 탄화수소, 포름아미드 또는 저급 알칸올 중에서 수행하는 것이 편리하다. 반응은 약 -20 내지 약 120 ℃에서 수행하는 것이 적절하다.

화학식 Ib의 화합물을 환원시켜 화학식 Ic의 알콜을 수득한다. 상기 환원은 전형적으로 당해 분야의 기술을 가진 자에게 공지된 방법으로(예를 들면, 약 -20 내지 약 70 ℃, 바람직하게는 약 0 ℃ 내지 대략 실온에서, 환원 조건하에서 불활성인 용매, 바람직하게는 열린-쇄 또는 환상 에테르, 특히 테트라하이드로푸란 중에서) 수소화 리튬 알루미늄을 사용하여 수행한다.

다음 단계로 화학식 Ic의 알콜을 산화시키면 화학식 Id의 카복스알데하이드가 수득된다. 상기 산화는 전형적으로 이산화 망간을 사용하여 수행하지만, 많은 다른 방법들도 또한 이용할 수 있다(예를 들면, 문헌 [Advanced Organic Chemistry, 4^thed., March, John Wiley & Sons, New York(1992)] 참조). 사용된 산화제에 따라, 반응은 특정 산화 조건하에서 불활성인 용매, 바람직하게는 할로겐화 지방족 탄화수소, 특히 디클로로메탄 또는 임의로 할로겐화된 방향족 탄화수소 중에서 편리하게 수행된다. 산화는 약 0 내지 약 60 ℃에서 수행하는 것이 적합하다.

화학식 Id의 카복스알데하이드와 치환된 아닐린을 반응시켜 화학식 Ie의 화합물을 수득한다. 상기 반응은 반응중 생성된 물을 공비 제거하면서, 산, 예를 들면, 방향족 설폰산, 바람직하게는 4-톨루엔설폰산의 존재하에 수행할 수 있다. 편리하게는, 상기 반응은 반응 조건하에서 불활성인 용매, 바람직하게는 방향족 탄화수소, 특히 톨루엔, 또는 임의로 할로겐화된 방향족 탄화수소 중에서, 및 약 70 내지 약 150 ℃, 특히는 언급한 물의 공비 제거를 용이하게 하기 위해 용매의 환류 온도에서 수행한다.

화학식 Ie의 화합물을 환원시켜 화학식 If의 화합물을 수득하는 반응은 당해 분야의 기술을 가진 자에게 공지된 조건하에서, 예를 들면, 붕수소화 나트륨, 수소화 리튬 알루미늄 또는 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드를 사용하여 수행할 수 있다. 바람직하게는, 화학식 Ie의 화합물은 정제하지 않고, 오히려 상기 화합물이 제조된 반응 혼합물을 농축하고 수득된 농축물을 환원 조건하에서 불활성인 용매, 바람직하게는 열린-쇄 또는 환상 에테르, 특히는 테트라하이드로푸란 또는 임의로 할로겐화된 방향족 탄화수소 또는 저급 알칸올에 용해시킨 다음 전술한 환원제로 처리한다. 환원은 약 0 내지 약 100 ℃, 바람직하게는 약 0 내지 25 ℃에서 수행하는 것이 적합하다.

화학식 If의 화합물을 환화시키면 화학식 Ig의 이중고리 질소 헤테로고리 화합물이 수득된다. 환화는 화합물(If)를 편리하게는 3급 유기 염기, 바람직하게는 트리(저급 알킬)아민, 특히 트리에틸아민의 존재하에 포스겐 또는 트리클로로메틸 클로로포르메이트(또는 포스겐 등가물)과 반응시킴으로써 수행될 수 있다. 보다 특히, 환화는 반응 조건하에서 불활성인 용매, 바람직하게는 열린-쇄 또는 환상 에테르, 특히 테트라하이드로푸란, 임의로 할로겐화된 방향족 탄화수소 또는 할로겐화 지방족 탄화수소 중에서 수행한다. 편리하게는, 상기 반응은 약 -20 내지 약 50 ℃, 바람직하게는 약 0 ℃ 내지 대략 실온에서 수행한다.

화합물(Ig)를 3-클로로퍼벤조산으로 산화시키면 설폰(Ih)이 수득되고 상기 설폰은 다양한 목표 화합물들로 전환시킬 수 있다. 전형적으로, 화합물(Ig)의 산화는 산화 조건하에서 불활성인 용매, 바람직하게는 할로겐화 지방족 탄화수소, 특히 클로로포름 또는 디클로로메탄 중에서, 및 약 -20 내지 약 50 ℃, 바람직하게는 약 0 ℃ 내지 대략 실온에서 수행한다.

최종적으로, 화합물(Ih)를 아민(R¹-NH₂)으로 처리하면 화학식 I의 목표 화합물이 수득된다. 상기 반응은 용매의 존재 또는 부재하에 수행할 수 있다. 편리하게는, 상기 반응은 약 0 내지 약 200 ℃, 보다 바람직하게는 대략 실온 내지 약 150 ℃의 온도에서 수행한다.

따라서, 본 발명은 하기 화학식 Ii의 화합물을 아민(R¹-NH₂)으로 처리하여 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법을 제공한다.

화합물(Ii)에서, 기호 R², R³및 아래 첨자 n은 화학식 I에 대해 상기에서 나타낸 의미를 갖는다. 문자 L은 이탈 그룹을 나타내며, 상기 그룹은 할로겐, 저급 알칸설포닐 그룹(예를 들면, 메탄설포닐 또는 트리플루오로메탄설포닐) 또는 방향족 설포닐 그룹(예를 들면, 벤젠설포닐 또는 4-톨루엔설포닐)일 수 있다. 다른 적합한 이탈 그룹은 당해 분야의 기술을 가진 자에게 공지되어 있으며, 예를 들면, 문헌 [Advanced Organic Chemistry, 4^thed., March, John Wiley & Sons, New York(1992)]에서 찾아볼 수 있다. 적합한 아민(R¹-NH₂)은 R¹이 화학식 I에 대해 언급한 R¹그룹 중 어느 하나를 나타내는 아민이다.

바람직한 태양에서, 이중고리 질소 헤테로고리 화합물은 하기 반응식 2에 나타낸 바와 같이 제조할 수 있으며 합성의 후반 단계에서 R³를 도입할 수 있다.

반응식 2에서 출발 물질인 화합물(IIa)는 상업적으로 시판하는 에틸 4-아미노-2-머캅토-피리미딘-5-카복실레이트로부터 제조할 수 있다. 간략하게, 상기 머캅토 화합물을 적합한 알킬화제(R-X)로 처리하면 화학식 Ib(R³=H)의 화합물이 수득된다. 반응식 1에 나타낸 단계에 따라 화합물(Ib)(R³=H)를 화합물(IIa)로 전환시킬 수 있다.

화합물(IIa)의 환화는 화학식 IIb의 이중고리 질소 헤테로고리 화합물을 제공한다. 상기 환화는 화합물(IIa)를 전형적으로 3급 유기 염기, 바람직하게는 트리(저급 알킬)아민, 특히 트리에틸아민의 존재하에 포스겐 또는 트리클로로메틸 클로로포르메이트(또는 포스겐 등가물)과 반응시킴으로써 수행할 수 있다. 보다 특히, 환화는 반응 조건하에서 불활성인 용매, 바람직하게는 열린-쇄 또는 환상 에테르, 특히 테트라하이드로푸란, 임의로 할로겐화된 방향족 탄화수소 또는 할로겐화 지방족 탄화수소 중에서 수행한다. 편리하게는, 상기 반응은 약 -20 내지 약 50 ℃, 바람직하게는 약 0 ℃ 내지 대략 실온에서 수행한다.

R³그룹을 도입하여 화학식 IIc의 화합물을 수득하는 반응은 다양한 조건하에서 수행할 수 있다. 예를 들면, 화합물(IIb)를 수소화 알칼리 금속, 특히 수소화 나트륨으로 처리하고, 이어서 화학식 R³-L(여기서, R³는 수소, 아릴 또는 헤테로아릴을 제외하고 상기에 나타낸 R³에 따른 의미 중 어느 하나를 가지며, L은 이탈 그룹, 예를 들면, 할로, 메탄설포네이트, 톨루엔설포네이트, 트리플루오로메탄설포네이트 등을 나타낸다)의 화합물과 반응시킨다. N-치환은 편리하게는 반응 조건하에서 불활성인 용매, 바람직하게는 포름아미드, 특히 N-메틸피롤리디논 또는 디메틸포름아미드, 열린-쇄 또는 환상 에테르 또는 임의로 할로겐화된 방향족 탄화수소 중에서 수행한다. 상기 반응은 약 50 내지 약 200 ℃, 바람직하게는 약 50 내지 약 150 ℃에서 수행하는 것이 적합하다. 또는, 알킬화는 약 0 내지 약 25 ℃의 온도에서 N-메틸피롤리디논과 같은 포름아미드 용매 중에서 탄산 칼륨과 같은 무기염기를 사용하여 수행할 수 있다.

R³를 도입하기 위한 대안적이고 바람직한 방법은 미초노부(Mitsonobu) 조건하에서 피리미디논 질소의 알킬화를 포함한다. 상기 방법에서는, 화학식 R³-OH의 알콜을, 예를 들면, 트리페닐포스핀 및 디에틸 아조디카복실레이트 또는 디페닐피리딜 포스핀 및 t-부틸아조디카복실레이트의 존재하에서 화학식 IIb의 화합물과 결합시킨다(문헌 [Tetrahedron Lett.,40:4497-4500, 1999] 참조). 알킬화는 편리하게는 약 -20 내지 약 100 ℃, 바람직하게는 약 0 내지 약 30 ℃(또는 실온)의 온도에서, 반응 조건하에서 불활성인 용매, 바람직하게는 열린-쇄 또는 환상 에테르 중에서 수행한다. 다른 알킬화 방법에서와 같이, 1급 및 2급 알콜이 상기 조건하에서의 반응에 가장 안정하다.

R³의 도입 후에, 산화 및 치환 단계(R¹-NH-를 도입하기 위해)를 화학식 I의 목표 화합물을 수득하기 위해 상기에서 개략한 바와 같이 수행할 수 있다.

대안적 경로에서는, 화합물(IIb)를 먼저 미츠노부 조건하에서 알킬화시켜 R³를 도입한 후에, 설파이드를 상응하는 설폰(IId)으로 산화시켜 화합물(IIb)를 화합물(IId)로 전환시킬 수 있다.

또 다른 태양에서, 상기 화합물들은 알킬화 및 치환 단계의 순서를 역전시킴으로써 하기 반응식 3에 도시된 바와 같이 -R³및 -NH-R¹도입 순서를 역전시켜 제조할 수 있다.

따라서, 화학식 IIa의 화합물은 (반응식 2에서 초기 단계에 도시된 바와 같이) 화합물(IIb)로 환화될 수 있다. 화합물(IIb)를 화합물(IIIa)로 산화시키면 후속의 치환 및 알킬화 단계를 위한 주형을 제공한다. 따라서, 화합물(IIIa)를 전술한 바와 같은 조건하에서 R¹-NH₂로 처리하면 화합물(IIIb)가 제공되며, 이것은 미츠노부 조건하에서 R³-L(여기서, L은 상기에 언급한 의미를 갖는다) 또는 R³-OH를 사용하여 알킬화시켜 화학식 I의 목표 화합물을 제공할 수 있다.

당해 분야에 기술을 가진 자라면 본 발명의 범위 내에서 상기 반응식에 특정 변형이 예상됨을 주지할 것이다. 예를 들면, 특정 단계는 특정 반응 조건과 상용될 수 없는 반응성 작용기의 보호 및 탈보호를 포함할 것이다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 약학적으로 허용가능한 부형제 및 전술한 바와 같은 화학식 I의 화합물을 포함하는 조성물을 제공한다.

화학식 I의 화합물 및 화학식 I의 염기성 화합물과 산과의 약학적으로 허용가능한 염은, 예를 들면, 약학 제제의 형태로 약제로서 사용될 수 있다. 약학 제제는, 예를 들면, 정제, 피복정, 당의정, 경질 및 연질 젤라틴 캡슐, 용액, 유화액 또는 현탁액의 형태로 경구 투여되는 것과 같이, 장내 투여되거나, 예를 들면, 비강 분무제의 형태로 코에 투여되거나, 또는, 예를 들면, 좌약의 형태로 직장내 투여될 수 있다. 그러나, 이들은 또한, 예를 들면, 주사액의 형태로 비경구 투여될 수도 있다.

화학식 I의 화합물 및 그의 전술한 약학적으로 허용가능한 염은 약학 제제를 생성하기 위해 약학적으로 불활성인 유기 또는 무기 담체와 함께 가공될 수 있다. 락토즈, 옥수수 전분 또는 이들의 유도체, 활석, 스테아르산 또는 그의 염 등을, 예를 들면, 정제, 피복정, 당의정 및 경질 젤라틴 캡슐용 담체로서 사용할 수 있다. 연질 젤라틴 캡슐에 적합한 담체는, 예를 들면, 식물성유, 왁스, 지방, 반고체 및 액체 폴리올 등이나; 활성 성분의 특성에 따라, 연질 젤라틴 캡슐의 경우 통상적으로 담체가 필요하지 않다. 용액 및 시럽의 제조에 적합한 담체는, 예를 들면, 물, 폴리올, 슈크로즈, 전화당, 글루코즈 등이다. 좌약에 적합한 담체로는, 예를 들면, 천연유 또는 경화유, 왁스, 지방, 반고체 또는 액체 폴리올 등이다.

약학 제제는 또한 방부제, 가용화제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 감미제, 착색제, 향료, 삼투압 조절용 염, 완충제, 차폐제 또는 산화방지제를 함유할 수 있다. 이들은 또한 화학식 I의 화합물 및 그의 전술한 약학적으로 허용가능한 염 이외의 다른 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있다.

상용가능한 약학적 담체 물질과 함께 화학식 I의 화합물 또는 화학식 I의 염기성 화합물과 산과의 약학적으로 허용가능한 염을 함유하는 약제도 또한 본 발명의 목적이다. 또 다른 태양에서, 본 발명은 p38 매개 질환 및 증상을 치료하는데 유용한 약제의 제조 방법을 제공한다. 상기 방법은 하나 이상의 상기 화합물 또는 염, 및 경우에 따라, 하나 이상의 다른 치료적으로 유용한 물질을 상용가능한 약학적 담체와 함께 갈레누스 투여형으로 제조함을 포함한다.

앞에서 언급한 바와 같이, 화학식 I의 화합물 및 그의 전술한 약학적으로 허용가능한 염은 본 발명에 따라 약학적으로 활성인 물질로서, 특히 소염제로서 또는 이식 수술후 이식편 거부반응의 예방을 위해 사용할 수 있다. 투여량은 광범위한 한계 내에서 변할 수 있으며, 각각의 특정 경우에 개별적인 필요조건에 맞춰질 것임은 물론이다. 일반적으로, 성인에게 투여하는 경우, 편리한 일일 투여량은 약 0.1 내지 약 100 ㎎/㎏, 바람직하게는 약 0.5 내지 약 5 ㎎/㎏이어야 한다. 일일 투여량은 단일 용량 또는 분할 용량으로 투여될 수 있으며, 또한, 앞에서 언급한 투여량 상한치는 지시가 있는 경우에는 초과될 수 있다.

최종적으로, 특히 염증 질환, 면역 질환, 종양 질환, 기관지폐 질환, 피부 질환 및 심혈관 질환의 치료 또는 예방, 천식, 중추 신경계 질환 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 이식 수술후 이식편 거부반응의 방지를 위한 약제를 제조하기 위한 화학식 I의 화합물 및 그의 전술한 약학적으로 허용가능한 염의 용도도 또한 본 발명의 목적이다.

화학식 I의 화합물은 인간 또는 기타 포유동물에서, 상기 동물에 의한 과도하거나 제어되지 않은 TNF 및/또는 IL-1 또는 p38 키나제 생성에 의해 악화되거나 야기되는 임의의 질환 또는 질병 상태의 치료에 유용할 것이나, 이로 한정되지는 않는다. 따라서, 본 발명은 효과적인 사이토카인-억제량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 토토머를 투여함을 포함하는, 사이토카인-매개 질환의 치료 방법을 제공한다.

화학식 I의 화합물은 대상의 염증의 치료에 유용하고 발열의 치료에 해열제로서 사용하기에 유용하나, 이로 한정되지는 않는다. 본 발명의 화합물은 류마티스성 관절염, 척추관절증, 통풍성 관절염, 골관절염, 전신성 홍반성 루푸스, 및 소아 관절염, 골관절염, 통풍성 관절염 및 기타 관절염 증상을 포함하지만 이로 한정되지는 않는 관절염을 치료하는데 유용할 것이다. 상기 화합물은 성인 호흡 장애 증후군, 폐 사르코이드증, 천식, 규폐증 및 만성 폐렴 질환을 비롯한 폐 질환 또는 폐렴의 치료에 유용할 것이다. 상기 화합물은 또한 패혈증, 패혈성 쇼크, 그램 음성 패혈증, 말라리아, 뇌막염, 감염 또는 악성종양에 따른 악액질, 후천성 면역 결핍 증후군(AIDS)에 따른 악액질, AIDS, ARC(AIDS related complex, 에이즈 관련 복합반응), 폐렴 및 헤르페스 바이러스를 비롯한 바이러스 및 세균 감염의 치료에 유용하다. 상기 화합물들은 또한 골다공증과 같은 골 재흡수 질환, 내독성 쇼크, 독성 쇼크 증후군, 재관류 손상, 이식편 대 숙주 반응 및 타가이식 거부반응을 비롯한 자가면역 질환, 죽상경화증, 혈전증, 울혈성 심부전 및 심장 재관류 손상을 비롯한 심혈관 질환, 신장 재관류 손상, 간 질환 및 신장염, 및 감염으로 인한 근육통의 치료에 유용하다.

상기 화합물들은 또한 인플루엔자, 다발성 경화증, 암, 당뇨, 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 피부-관련 증상, 예를 들면, 건선, 습진, 화상, 피부염, 켈로이드 형성 및 반흔 형성의 치료에 유용하다. 본 발명의 화합물은 또한 염증성 장 질환, 크론병, 위염, 과민성 장 증후군 및 궤양성 대장염과 같은 위장관 질환을 치료하는데 유용할 것이다. 상기 화합물은 또한 망막염, 망막병증, 포도막염, 눈부심과 같은 안 질환, 및 안 조직에 대한 급성 손상의 치료에 유용할 것이다. 본 발명의 화합물은 또한 종양; 전이; 각막 이식편 거부반응, 눈의 신혈관형성, 손상 또는 감염후 신혈관형성을 포함한 망막 신혈관형성, 당뇨성 망막병증, 수정체후부 섬유증식증 및 신혈관성 녹내장과 같은 안과학적 증상들; 위궤양과 같은 궤양성 질환; 악성이 아닌 병리학적 증상들, 예를 들면, 소아 혈관종, 비강인두의 혈관섬유종 및 뼈의 허혈성 괴사를 비롯한 혈관종; 당뇨성 신장병 및 심근병증; 및 자궁내막증과 같은 여성 생식계 질환을 비롯하여, 혈관형성의 치료에 유용할 것이다. 본 발명의 화합물은 또한 사이클로옥시게나제-2의 생성을 방지하는데 유용할 수 있으며, 본 발명의 화합물은 또한 암, 특히 결장암의 예방 및 치료에 유용할 것으로 예상된다.본 발명의 화합물은 또한 알츠하이머병의 예방 및 치료에 유용할 것으로 예상된다.

인간의 치료에 유용한 것 이외에, 본 발명 화합물은 또한 포유동물, 설치류 등을 포함하여 애완 동물, 외래 동물 및 가축의 수의학적 치료에 유용하다. 보다 바람직한 동물로는 말, 개 및 고양이가 포함된다.

본 발명 화합물은 또한, 예를 들면, 스테로이드, 사이클로옥시게나제-2 억제제, NSAID, DMARDS, 면역억제제, 5-리폭시게나제 억제제, LTB₄길항물질 및 LTA₄가수분해효소 억제제와 함께, 다른 통상적인 소염제 대신에, 부분적으로 또는 완전히 공동-치료법에 사용될 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이, "TNF 매개 질환"이란 용어는, TNF 자체의 제어에 의해, 또는 IL-1, IL-6 또는 IL-8(이로 한정되지는 않는다)과 같은 다른 모노카인의 방출을 야기하는 TNF에 의해 TNF가 관여하는 임의 및 모든 질환 또는 질병 상태를 말한다. 그러므로, 예를 들어, IL-1이 주 원인성분이고 그의 생성 또는 작용이 TNF에 반응하여 심화되거나 분비되는 질병 상태를 TNF에 의해 매개된 질환으로 간주할 것이다.

본원에서 사용된 바와 같이, "p38 매개 질환"이란 용어는, p38 자체의 제어에 의해, 또는 IL-1, IL-6 또는 IL-8(이로 한정되지는 않는다)과 같은 다른 인자의 방출을 야기하는 p38에 의해, p38이 관여하는 임의 및 모든 질환 또는 질병 상태를 말한다. 그러므로, 예를 들어, IL-1이 주 원인성분이고 그의 생성 또는 작용이 p38에 반응하여 심화되거나 분비되는 질병 상태를 p38에 의해 매개된 질환으로 간주할 것이다.

TNF-β는 TNF-α(카섹틴(cachectin)으로도 알려져 있음)과 근접한 구조적 상동성을 가지고, 이들 각각이 유사한 생물 반응을 유도하고 동일한 세포 수용체에 결합하기 때문에, TNF-α와 TNF-β 둘 다의 합성이 본 발명의 화합물에 의해 억제되므로, 본원에서는 달리 특별히 언급하지 않는 한 총칭하여 "TNF"로 칭한다.

하기 실시예에서, 달리 언급하지 않는 한, 온도는 섭씨(℃)로 나타내며; 공정은 실온 또는 주위온도(전형적으로, 약 18 내지 25 ℃ 범위)에서 수행하였으며; 용매의 증발은 60 ℃ 이하의 욕조 온도하에 감압(전형적으로, 4.5 내지 30 mmHg)하에서 회전 증발기를 사용하여 수행하였고; 반응 과정은 전형적으로 TLC로 추적하였고 반응 시간은 단지 예시를 위해 나타내며; 융점은 보정하지 않았고; 생성물은 만족스러운¹H-NMR 및/또는 미량분석 데이터를 나타내었으며; 수율은 단지 예시를 위해 나타낸 것이고; 하기의 통상적인 약어들을 또한 사용한다: mp(융점), L(리터(들)), mL(밀리리터), mmol(밀리몰), g(그램), mg(밀리그램), min(분) 및 h(시간). DEAD는 디에틸 아조디카복실레이트를 나타내고, DIAD는 디이소프로필 아조디카복실레이트를 나타낸다.

실시예 1

본 실시예는 7-벤질티오-3-(2-클로로-페닐)-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온으로 출발하여 3-(2-클로로-페닐)-1-에톡시카보닐메틸-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온 및 3-(2-클로로-페닐)-1-카복시메틸-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온의 제조를 예시한다.

1.1 피리디미논의 알킬화

설파이드(1a), 7-벤질티오-3-(2-클로로페닐)-3,4-디하이드로-피리미도-[4,5- d]-피리미딘-2(1H)-온(1.5 g, 3.92 밀리몰, 실시예 6에 기술된 바와 같이 제조)을 디메틸포름아미드(15 mL)에 용해시키고, 수소화 나트륨(60%, 0.172 g, 4.31 밀리몰)을 가하였다. 생성된 혼합물을 20 분간 교반한 다음, 에틸 브로모아세테이트(0.87 mL, 7.84 밀리몰)를 가하였다. 3 시간후에, 반응을 물로 중단시키고 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 추출물을 합하여 물로 5회 세척하고 MgSO₄상에서 건조시키고 진공하에 농축하였다. 잔사를 30:70 아세톤/헥산을 사용하여 실리카겔 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 1.283 g의 에스테르(1b)를 수득하였다.

1.2 벤질 설파이드의 산화

에스테르(1b)(0.600 g, 1.28 밀리몰)를 클로로포름(15 mL)에 용해시키고 실온에서 3-클로로퍼옥시벤조산(50%, 0.883 g, 2.56 밀리몰)을 가하였다. 혼합물을 2 시간동안 교반한 다음, 10%(w/w) 수성 아황산 나트륨으로 3회, 포화 수성 중탄산 나트륨으로 1회 및 물로 1회 세척하였다. 유기 층을 MgSO₄상에서 건조하고 진공하에 농축하여 0.670 g의 벤질 설폰(1c)을 수득하였다.

1.3 설폰의 치환

벤질 설폰(1c)(0.520 g, 1.04 밀리몰) 및 이소프로필아민(0.18 mL, 2.08 밀리몰)을 합하고 1 시간동안 90 내지 100 ℃로 가열하였다. 반응을 실온으로 냉각하고 혼합물을 18:1 CH₂Cl₂/MeOH를 사용하여 실리카겔 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고 농축하여 0.366 g의화합물(1d), 3-(2-클로로-페닐)-1-에톡시카보닐메틸-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온(질량 스펙트럼: MH^＋=404. 융점: 188.8-191.4 ℃)을 수득하였다.

1.4 에틸 에스테르의 비누화

MeOH(10 mL) 중의 화합물(1d)(0.266 g, 0.66 밀리몰)의 용액에 수산화 나트륨(0.026 g, 0.66 밀리몰) 및 물(3 mL)을 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12 시간동안 교반하였다. 혼합물을 진공하에 농축하고 에틸 아세테이트에서 연화시킨 다음, MeOH에 재용해시키고 진공하에 농축하였다. 잔사를 에테르에서 연화시키고 여과하고 건조하여 0.225 g의 화합물(1e), 3-(2-클로로-페닐)-1-카복시메틸-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온(질량 스펙트럼: MH^＋=376. 융점: 172.0-188.0 ℃)을 수득하였다.

실시예 2

본 실시예는 미츠노부 조건을 이용하여 알킬화를 수행하여 3-(2-클로로-페닐)-1-(2-메톡시에틸)-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온을 제조하는 것을 예시한다.

TFH(20 mL) 중의 피리미디논(2a)(0.500 g, 1.57 밀리몰, 7-벤질설포닐-3-(2-클로로-페닐)-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온을 상기 1.3에서와 같은 조건하에서 이소프로필아민으로 처리하여 제조)의 용액에 트리페닐 포스핀(0.413 g, 1.57 몰) 및 2-메톡시에탄올(0.12 mL, 1.57 밀리몰)을 가하였다. 혼합물을 0 ℃로 냉각하고 DIAD(0.31 mL, 1.57 밀리몰)를 가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고 12 시간동안 교반하였다. 추가 분량의 2-메톡시에탄올(0.12 mL, 1.57 밀리몰), 트리페닐포스핀(0.413 g, 1.57 밀리몰) 및 DIAD(0.31 mL, 1.57 밀리몰)를 가하고 혼합물을 실온에서 12 시간동안 더 교반한 다음 55 내지 60 ℃로 가열하였다. 2 시간후에, 혼합물을 진공하에 농축하고 잔사를 1:1 헥산/에틸 아세테이트를 용리액으로 사용하여 실리카겔 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고 농축하여 오일을 수득하고 상기 오일을 에틸 아세테이트에 재용해시켰다. 염산(1.0 M/Et₂O, 0.6 mL)을 가하여 염을 생성시켰다. 혼합물을 12 시간동안 교반한 후 진공하에 농축하였다. 잔사를 드라이 아이스 상의 에테르 중에서 연화시키고 혼합물을 12 시간동안 교반하면서 서서히 실온으로 가온시켰다. 고체를 여과하여 표제 화합물(2b)의 하이드로클로라이드 염(질량 스펙트럼: MH^＋=376. 융점: 126.0-131.6 ℃) 0.139 g을 수득하였다.

실시예 3

본 실시예는 3-(2-클로로-페닐)-7-이소프로필아미노-1-(2-메틸설포닐에틸)-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온의 제조를 예시한다.

3.1 피리미디논의 "미츠노부(Mitsunobu)" 알킬화

벤질 설파이드(1a)(500 ㎎, 1.31 밀리몰)를 2-(메틸티오)에탄올(114 μL, 1.31 밀리몰), 트리페닐포스핀(343 ㎎, 1.31 밀리몰) 및 DEAD(0.21 mL, 1.31 밀리몰)과 함께 2 mL의 THF에 용해시켰다. 혼합물을 실온에서 4 일간 교반하고 진공하에 증발시키고 용리액으로 5 내지 20% 아세톤/헥산을 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피로 정제하여 화합물(3a)(529 ㎎, 1.16 밀리몰, 88%)를 수득하였다.

3.2 벤질 설파이드의 산화

화합물(3a)의 산화는 실온에서 5 시간동안 교반하면서 CH₂Cl₂중의 m-CPBA(1.19 g, 5.8 밀리몰)를 사용하여 수행하였다. 반응을 10% Na₂SO₃(수성, 50 mL)로 중단시키고 CH₂Cl₂로 3회 추출하였다. 추출물을 합하여 포화 NaHCO₃로 세척하고 진공하에 농축하여 화합물(3b)를 수득하고, 이것을 정제하지 않고 사용하였다.

3.3 설폰의 치환

조생성물(3b)를 이소프로필아민(5 mL, 58 밀리몰)에 용해시키고 실온에서 2 일간 적절히 교반하였다. 혼합물을 진공하에 농축하고 용리액으로 10 내지 50% 아세톤/헥산을 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피로 정제하여 화합물(3c)(287 ㎎, 0.732 밀리몰, 화합물(3a)로부터 63%, 화합물(1a)로부터 56%)를 수득하였다. 정제된 생성물을 에틸 아세테이트에 용해시키고 1 당량의 HCl/Et₂O로 처리하여 화합물(3c)의 HCl 염(질량 스펙트럼: MH^＋=424)을 침전시켰다.

실시예 4

본 실시예는 3-(2-클로로-페닐)-1-(2-하이드록시에틸)-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온의 제조를 예시한다.

4.1 피리미디논의 "미츠노부" 알킬화

벤질 설파이드(1a)(500 ㎎, 1.31 밀리몰)를 7 mL의 DMF에 용해시키고 트리-이소프로필실릴 보호된 요오도에탄올(555 ㎎, 1.57 밀리몰, 문헌[J. Am. Chem. Soc.,112(10), 4078-4079, 1990; andJ. Chem. Soc. Perkin Trans.,1(6), 1417-1423, 1998]에 기술된 절차에 따라 제조)로 처리하고 0 ℃로 냉각하였다. 수소화 나트륨(오일 중 60%, 63 ㎎, 1.57 밀리몰)을 가하고 반응 혼합물을 0 ℃에서 30 ℃로 가온시키고 30 ℃에서 밤새 교반하였다. 63 ㎎의 60% 수소화 나트륨을 더 가하였다. 6 시간이 더 지난 후에, 10 mL의 물을 가하여 반응을 중단시켰다. 생성된 혼합물을 EtOAc 및 CH₂Cl₂로 추출하고, 추출물을 합하여 MgSO₄상에서 건조하고 진공하에 농축하고 용리액으로 10 내지 20% 아세톤/헥산을 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피로 정제하여 화합물(4a)(430 ㎎, 0.738 밀리몰, 56%)를 수득하였다.

4.2 벤질 설파이드의 산화

화합물(4a)의 산화는 CH₂Cl₂중의 m-CPBA(500 ㎎, 2.46 밀리몰)를 사용하여 수행하였다. 반응을 Na₂SO₃(수성)로 중단시킨 후에, 조생성물(4b)를 CH₂Cl₂로 추출하고, 포화 NaHCO₃로 세척하고 진공하에 농축하여 더 정제하지 않고 사용하였다.

4.3 설폰의 치환

조 벤질 설폰(4b)을 이소프로필아민(1 mL, 11.7 밀리몰)을 함유하는 3 mL의 CH₂Cl₂에 용해시키고, 80 ℃에서 밤새 교반하고, 진공하에 농축하고, 용리액으로 5 내지 20% 아세톤/헥산을 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피로 정제하여 화합물(4c)(281 ㎎, 0.542 밀리몰, 화합물(4a)로부터 73%)를 수득하였다.

4.4 하이드록시 그룹의 탈보호

화합물(4c)의 탈보호는 실온에서 4 시간동안 교반하면서 THF 중의 테트라부틸암모늄 플루오라이드(0.54 mL 1M/THF, 0.542 밀리몰)를 사용하여 수행하였다. 혼합물을 진공하에 증발시키고 용리액으로 10 내지 40% 아세톤/헥산을 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피로 정제하여 화합물(4d)(179 ㎎, 0.495 밀리몰)를 수득하였다. 정제된 생성물을 에틸 아세테이트에 용해시키고 1 당량의 HCl/Et₂O로 처리하여 화합물(4d)의 HCl 염을 침전시켰다(질량 스펙트럼: MH^＋=362).

실시예 5

4-아미노-2-벤질티오피리미딘-5-카복스알데하이드

(a) 272 g(4.0 몰)의 나트륨 에톡사이드(랜카스터(Lancaster))를 1 L의 에탄올 중에서 교반하고 304 g(4.0 몰)의 티오우레아(아보카도(Avocado))로 처리하였다. 676 g(4.0 몰)의 에틸 에톡시메틸렌 시아노아세테이트(아보카도)를 가하고 혼합물을 8 시간동안 가열환류시켰다. 밤새 실온으로 냉각시킨 후에, 반응 혼합물을 2 L의 물 및 400 mL의 아세트산으로 차례로 처리하였다. 반응 혼합물을 30 분간 가열 환류시키고 실온으로 냉각하고 현탁액을 여과하였다. 고체를 500 mL씩 세 분량의 물, 500 mL씩 두 분량의 아세톤 및 500 mL의 디에틸 에테르로 세척하였다. 생성물을 건조시켜 473.3 g(60%)의 4-아미노-5-카브에톡시-피리미딘-2-티올을 250 ℃보다 높은 융점을 갖는 크림색 고체로 수득하였다.

(b) 3.5 L의 에탄올 중의 4-아미노-5-카브에톡시-피리미딘-2-티올 473 g(2.377 몰)의 교반된 현탁액을 180.4 g(1.307 몰)의 탄산 칼륨 및 447.1 g(2.615 몰)의 벤질 브로마이드로 처리하였다. 혼합물을 2 시간동안 가열 환류시킨 다음 밤새 실온으로 냉각시켰다. 현탁액을 여과하고 고체를 500 mL씩 두 분량의 에탄올, 2 L의 물 및 500 mL씩 두 분량의 물로 세척하였다. 생성물을 50 ℃에서 진공하에 오산화 인 상에서 건조시켜 416 g(61%)의 에틸 4-아미노-2-벤질-티오피리미딘-5-카복실레이트를 117 내지 118 ℃의 융점을 갖는 크림색 고체로 수득하였다.

(c) 2.3 L의 체-건조된 테트라하이드로푸란 중의 에틸 4-아미노-2-벤질티오피리미딘-5-카복실레이트 462.4 g(1.6 몰)의 용액을 빙냉하에 질소 대기하에서 테트라하이드로푸란 중의 수소화 리튬 알루미늄의 1M 용액 1.6 L(1.6 몰)에 교반하면서 서서히 가하였다. 용액을 18 내지 20 ℃의 온도를 유지하는 속도로 가하였다. 첨가가 완료되면, 혼합물을 60 ℃로 가열하고 1.5 시간동안 60.8 mL의 물로 조심스럽게 처리하였다. 60.8 mL의 15% 수성 수산화 나트륨을 30 분간 가한 후에 182.5mL의 물을 30 분동안 가하였다. 현탁액을 60 ℃에서 밤새 교반한 후 여전히 뜨거운 동안 하이플로(Hyflo) 여과 보조제를 통해 여과시키고, 고체를 1 L씩 두 분량의 테트라하이드로푸란으로 세척하였다. 여액을 증발 건고시켜 392.5 g(99%)의 4-아미노-2-벤질티오피리미딘-5-메탄올을 회색 고체로 수득하고, 이것을 더 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.

(d) 질소 대기하에서 7.75 L의 디클로로메탄 중의 4-아미노-2-벤질티오피리미딘-5-메탄올 392.5 g(1.59 몰)의 현탁액을 1.382 ㎏(15.9 몰)의 활성화된 이산화 망간(애크로스(Acros))으로 처리하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 밤새 교반한 다음 하이플로 여과 보조제를 통해 여과시켰다. 고체를 1 L씩 세 분량의 디클로로메탄으로 세척하고, 여액을 합하여 증발시켜 340.5 g(88%)의 4-아미노-2-벤질티오피리미딘-5-카복스알데하이드를 융점 136 내지 139 ℃의 담황색 고체로 수득하였다.

실시예 6

7-벤질티오-3-(2-클로로페닐)-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온

6.1 5-(2-클로로페닐)아미노메틸-4-아미노-2-벤질티오피리미딘의 제조

60 mL 톨루엔 중의 5 g(20.4 밀리몰)의 4-아미노-2-벤질티오피리미딘-5-카복스알데하이드, 2.25 mL(21.4 밀리몰)의 2-클로로아닐린 및 0.1 g(0.5 밀리몰)의 4-톨루엔-설폰산 모노하이드레이트의 혼합물을 3 시간동안 물을 공비 제거하면서 가열 환류시켰다. 혼합물을 0 ℃로 냉각하고 침전물을 진공 여과시켜 수거하고 헥산으로 세척하고 공기 건조시켰다. 이어서, 상기 고체를 100 mL의 THF에 용해시키고 반응물을 0 ℃로 냉각하였다. 수소화 리튬 알루미늄(0.735 g, 18.8 밀리몰)을 45 분에 걸쳐 소량으로 가하였다. 일단 첨가가 완료되면, 혼합물을 15 분간 더 교반하고 0.8 mL의 H₂O, 0.8 mL의 15% 수성 NaOH 및 이어서 2.4 mL의 H₂O로 차례로 조심스럽게 처리하였다. 혼합물을 30 분간 교반하고 셀라이트를 통해 여과시키고 여액을 진공하에 농축하였다. 고체를 디에틸 에테르와 함께 교반하고 여과시키고 공기 건조하여 6.1 g의 5-(2-클로로페닐)아미노메틸-4-아미노-2-벤질티오피리미딘을 백색 고체로 수득하였다.

6.2 3-(2-클로로페닐)-7-벤질티오-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온의 제조

-10 ℃로 냉각시킨, 100 mL 테트라하이드로푸란 중의 5-(2-클로로페닐)아미노메틸-4-아미노-2-벤질티오피리미딘 4.3 g(12.1 밀리몰)의 교반된 용액에 3.1 mL(22.2 밀리몰)의 트리에틸아민을 가하였다. 이어서, 상기 용액을 6.15 mL의 포스겐의 용액(톨루엔 중 20% 용액; 11.8 밀리몰)을 적가하여 처리하였다. 30 분간 교반한 후에, 추가의 1.0 mL의 트리에틸아민(7.1 밀리몰)을 가한 다음 2.0 mL의 포스겐(톨루엔 중 20% 용액; 3.8 밀리몰)을 가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고 0.5 mL의 H₂O로 처리하고 30 분간 교반하였다. 이어서, 반응물을 여과하고 모액을 농축하고 디클로로메탄과 함께 교반하였다. 그 다음, 생성물을 진공 여과에 의해 수거하고 진공하에 건조시켜 3.83 g의 7-벤질티오-3-(2-클로로페닐)-3,4-디하이드로-피리미도-[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온을 백색 고체로서 수득하였다.

실시예 7

7-벤질설포닐-3-(2-클로로페닐)-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온

10 mL 디클로로메탄 중의 7-벤질티오-3-(2-클로로페닐)-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온 1 g(2.61 밀리몰)의 현탁액을 얼음 중에서 냉각시키고 1.29 g(5.23 밀리몰)의 70% 3-클로로퍼벤조산으로 처리하였다. 혼합물을 실온에서 2 시간동안 교반한 다음 25 mL의 10% 수성 Na₂S₂O₃로 처리하고 30 분간 교반시켰다. 반응물을 100 mL의 디클로로메탄으로 희석하고 상을 분리하였다. 유기상을 10% 수성 K₂CO₃, 염수로 세척한 다음 황산 마그네슘 상에서 건조하고 여과하였다. 감압하에 여액을 농축하여 0.73 g의 7-벤질설포닐-3-(2-클로로페닐)-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온을 백색 고체로서 수득하였다.

실시예 8

3-(2-클로로페닐)-1-[(2S)-2,3-디하이드록시에틸]-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온

단계 1

1.0 g(2.6 밀리몰)의 7-벤질티오-3-(2-클로로페닐)-3,4-디하이드로-피리미 도-[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온, 1.5 g(5.2 밀리몰)의 L-α,β-이소프로필리덴 글리세롤-γ-토실레이트 및 1.44 g(10.4 밀리몰)의 탄산 칼륨을 DMF(20 mL) 중에서 교반하고 질소 대기하에 80 ℃에서 가열하였다. 16 시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 염수액에 붓고 에틸 아세테이트로 추출하고 황산 나트륨 상에서 건조하였다. 용액을 진공하에 농축하고 플래시 크로마토그래피(40% EtOAc/헥산으로 용출)로 정제하여 1.1 g의 이소프로필리덴 케탈 부가물을 오일로서 수득하였다(질량 스펙트럼: MH^＋=496).

단계 2

질소 대기하에서 습식 얼음 욕조에서 냉각시킨, 메틸렌 클로라이드(25 mL) 중의 상기 제조된 이소프로필리덴 케탈 부가물 1.2 g(2.4 밀리몰)의 용액에 1.8 g(9.6 밀리몰)의 m-클로로퍼벤조산을 조금씩 가하였다. 생성된 현탁액을 교반하고 실온으로 가온시켰다. 16 시간후에, 반응 혼합물을 습식 얼음 욕조에서 냉각시키고 중아황산 나트륨의 10% 수용액(50 mL)을 적가하였다. 혼합물을 30 분간 교반하고 층을 분리하였다. 수성층을 메틸렌 클로라이드로 추출하고 유기 분획을 합하여 염수로 세척하고 황산 나트륨 상에서 건조하고 농축 건고시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피(구배 용출: 60 내지 100% 에틸 아세테이트/헥산)로 정제하였다. 설폰 생성물(0.73 g)을 발포체로 단리하였다(질량 스펙트럼: MH^＋=529).

단계 3

10 mL 이소프로필아민 중의 상기 제조된 설폰 0.7 g(1.3 밀리몰)의 용액을질소 대기하에 40 ℃에서 가열하였다. 3 시간후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 농축 건고시키고 플래시 크로마토그래피(60% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출)로 정제하여 0.42 g의 이소프로필 아민 부가물을 발포체로 수득하였다.

단계 4

메탄올(15 mL) 및 물(7 mL) 중의 상기 제조된 이소프로필 아민 부가물 0.4 g(0.93 밀리몰)의 용액에 0.05 g의 p-톨루엔 설폰산을 가하고 혼합물을 50 ℃로 가열하였다. 16 시간후에, 메탄올을 감압하에 제거하고 생성된 수용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 분획을 5% 중탄산 나트륨 수용액 및 염수로 세척한 다음 황산 나트륨 상에서 건조하고 농축하고 플래시 크로마토그래피(구배 용출: 40 내지 100% 에틸 아세테이트/헥산)로 정제하여 0.2 g의 생성물, 3-(2-클로로페닐)-1-[(2S)-2,3-디하이드록시에틸]-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온(질량 스펙트럼: M^＋=391. 융점: 130.8-134.7)을 수득하였다.

실시예 9

3-(2-클로로페닐)-1-[(2R)-2,3-디하이드록시에틸]-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온

단계 1

1.0 g(2.6 밀리몰)의 7-벤질티오-3-(2-클로로페닐)-3,4-디하이드로-피리미 도-[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온, 1.5 g(5.2 밀리몰)의 D-α,β-이소프로필리덴 글리세롤-γ-토실레이트 및 1.44 g(10.4 밀리몰)의 탄산 칼륨을 DMF(25 mL) 중에서 교반하고 질소 대기하에 80 ℃에서 가열하였다. 16 시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 염수액에 붓고 에틸 아세테이트로 추출하고 황산 나트륨 상에서 건조하였다. 용액을 진공하에 농축하고 플래시 크로마토그래피(40% EtOAc/헥산으로 용출)로 정제하여 1.2 g의 이소프로필리덴 케탈 부가물을 오일로서 수득하였다.

단계 2

질소 대기하에 습식 얼음 욕조에서 냉각시킨, 메틸렌 클로라이드(30 mL) 중의 상기 제조된 이소프로필리덴 케탈 부가물 1.2 g(2.4 밀리몰)의 용액에 1.1 g(5.6 밀리몰)의 m-클로로퍼벤조산을 조금씩 가하였다. 생성된 현탁액을 교반하고 실온으로 가온시켰다. 6 시간후에, 반응 혼합물을 습식 얼음 욕조에서 냉각시키고중아황산 나트륨의 10% 수용액(50 mL)을 적가하였다. 혼합물을 30 분간 교반하고 층을 분리하였다. 수성층을 메틸렌 클로라이드로 추출하고 유기 분획을 합하여 염수로 세척하고 황산 나트륨 상에서 건조하고 농축 건고시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피(구배 용출: 에틸 아세테이트 - 10% 메탄올/에틸 아세테이트)로 정제하였다. 설폰 생성물(1.1 g)을 발포체로 단리하였다(질량 스펙트럼: MH^＋=529).

단계 3

5 mL 이소프로필아민 중의 상기 제조된 설폰 0.22 g(0.42 밀리몰)의 용액을 질소 대기하에 40 ℃에서 가열하였다. 3 시간후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고 농축 건고시키고 플래시 크로마토그래피(에틸 아세테이트로 용출)로 정제하여 0.088 g의 생성물, 3-(2-클로로페닐)-1-[(2R)-2,3-디하이드록시에틸]-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온(질량 스펙트럼: M^＋=392)을 발포체로 수득하였다.

실시예 10

7-이소프로필아미노-3-(2-클로로페닐)-1-(2-피페리디닐-에틸)-3,4-디하이드로-피리미도-[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온

7-벤질티오-3-(2-클로로페닐)-3,4-디하이드로-피리미도-[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온(500 ㎎, 1.31 밀리몰)을 1-피페리딘에탄올(0.173 mL, 1.31 밀리몰), 트리페닐포스핀(343 ㎎, 1.31 밀리몰) 및 DEAD(0.21 mL, 1.31 밀리몰)과 함께 2 mL의 THF에 용해시키고 실온에서 4 일간 교반한 다음 용리액으로 2 내지 5% 메탄올/디클로로메탄을 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피로 정제하여 350 ㎎의 N-(2-피페리디닐에틸) 부가물을 수득하였다.

설파이드의 산화는 실온에서 1 시간동안 교반하면서 디클로로메탄 중의 m-CPBA(0.201 g, 0.708 밀리몰)를 사용하여 수행하였다. 반응을 0.5 mL의 25% 수성 아황산 나트륨으로 중단시키고 디클로로메탄으로 추출하였다. 추출물을 황산 마그네슘으로 건조시키고 진공하에 농축하여 설폭사이드를 수득하고, 이것을 정제하지않고 사용하였다.

조 설폭사이드를 5 mL의 이소프로필아민에 용해시키고 40 ℃에서 밤새 교반한 다음 80 ℃에서 4 일간 교반하였다. 혼합물을 용리액으로 1 내지 10% 메탄올/디클로로메탄을 사용하여 실리카겔 상에서 크로마토그래피로 정제하여 아민(48 ㎎, 0.112 밀리몰)을 수득하였다. 정제된 생성물을 에틸 아세테이트에 용해시키고 1 당량의 HCl/Et₂O로 처리하여 7-이소프로필아미노-3-(2-클로로페닐)-1-(2-피페리디 닐-에틸)-3,4-디하이드로-피리미도-[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온의 HCl 염을 침전시켰다.

실시예 11

시험관내 p38 MAP 키나제 억제 분석

본 실시예는 본 발명의 화합물을 평가하는데 유용한 시험관내 p38(MAP) 키나제 분석법을 설명한다.

본 발명 화합물의 시험관내 p-38 MAP 키나제 억제 활성은 문헌 [Ahn, et al.,J. Biol. Chem.,266:4200-4227, 1991]에 기술된 방법을 약간 변형시킨 방법을 이용하여, γ-포스페이트를 p-38 키나제에 의해 γ-³³P-ATP로부터마이엘린(Myelin) 염기 단백질(MBP)로 전이시키는 것을 측정함으로써 평가하였다.

재조합 p38 MAP 키나제의 포스포릴화 형태는이. 콜라이(E. Coli)에서 SEK-1 및 MEKK를 이용하여 동시 발현시킨(문헌 [Khokhlatchev, et al.,J. Biol. Chem.,272:11057-11062, 1997] 참조) 다음, 니켈 컬럼을 사용하여 친화성 크로마토그래피로 정제하였다.

포스포릴화된 p38 MAP 키나제를 키나제 완충액(20 mM 3-(N-모르폴리노)프로판설폰산, pH 7.2, 25 mM β-글리세롤 포스페이트, 5 mM 에틸렌 글리콜-비스(베타-아미노에틸 에테르)-N,N,N',N'-테트라아세트산, 1 mM 나트륨 오르토-바나데이트, 1 mM 디티오트레이톨, 40 mM 염화 마그네슘)에 희석하였다. DMSO에 용해시킨 시험 화합물 또는 DMSO 만을(대조용) 가하고 샘플을 30 ℃에서 10 분간 배양하였다. MBP 및 γ-³³P-ATP를 함유하는 기질 칵테일을 첨가하여 키나제 반응을 개시하였다. 30 ℃에서 20 분간 더 배양한 후, 0.75% 인산을 가하여 반응을 종료하였다. 이어서, 포스포릴화 MBP를 포스포셀룰로즈 막(메사추세츠주 베드프로드 소재의 밀리포어(Millipore))을 사용하여, 잔류 γ-³³P-ATP로부터 포스포릴화 MBP를 분리하고, 섬광 계수기(코넥티컷주 메리덴 소재의 패커드(Packard))를 이용하여 정량하였다.

실시예 1 내지 4에 기술된 본 발명 화합물의 p38 억제 활성(IC₅₀으로 나타냄, 분석된 p38 효소를 50% 억제하는 농도)은 10 μM 미만이었다.

실시예 12

시험관내 TNF 억제 분석

본 실시예는 THP1 세포에서 LPS-유도된 TNF-α 생성의 억제를 평가하기 위한 시험관내 분석법을 설명한다.

TNF-α 방출을 억제하는 본 발명 화합물의 능력은 문헌 [Blifeld, et al.,Transplantation,51:498-503, 1991]에 기술된 방법을 약간 변형한 방법을 이용하여 측정하였다.

(a)TNF 생합성의 유도

THP-1 세포를 2.5 x 10⁶세포/mL의 농도로 배지[15% 소 태아 혈청, 0.02 mM 2-머캅토-에탄올을 함유하는 RPMI(미들랜드주 게일터스버그 소재의 깁코(Gibco)-BRL)]에 현탁한 다음 96 웰 플레이트(각 웰에 0.2 mL의 분취량)에 평판하였다. 시험 화합물을 DMSO에 용해시킨 다음 최종 DMSO 농도가 5%가 되도록 배지로 희석하였다. 25 μL 분취량의 시험 용액, 또는 DMSO만을 함유한 배지를(대조용) 각 웰에 가하였다. 세포를 37 ℃에서 30 분간 배양하였다. LPS(미저리주 세인트 루이스 소재의 시그마(Sigma))를 0.5 ㎍/mL의 최종 농도로 웰에 가하고 세포를 2 시간동안 추가로 배양하였다. 배양 시간의 종료시, 배양물 상등액을 수거하고 존재하는 TNF-α의 양을 하기에 기술하는 바와 같은 ELISA 분석법을 이용하여 측정하였다.

(b)ELISA 분석법

문헌 [Reimund, J.M. et al.,GUT.Vol. 39(5), 684-689, 1996]에 기술된 2개의 항-TNF-α 항체(2TNF-H12 및 2TNF-H34)를 이용하여, 특이적 포획 ELISA 분석에 의해 존재하는 인간 TNF-α의 양을 측정하였다.

폴리스티렌 96-웰 플레이트를 PBS(10 ㎍/mL) 중, 웰 당 50 μL의 항체 2TNF-H12로 코팅하고 4 ℃에서 가습 챔버에서 밤새 배양하였다. 플레이트를 PBS로 세척한 다음 실온에서 1 시간동안 PBS 중 5% 무지 분유로 봉쇄하고 PBS 중 0.1% BSA(소 혈청 알부민)로 세척하였다.

인간 재조합 TNF-α의 원액(미네소타주 미네아폴리스 소재의 알 앤 디 시스템즈(R&D Systems))으로부터 TNF 표준물을 제조하였다. 분석에서 표준물의 농도는 10 ng/mL에서 출발한 후 6회의 1/2 로그로 단계적으로 희석하였다.

25 μL 분취량의 상기 배양물 상등액 또는 TNF 표준물 또는 배지만(대조용)을 25 μL 분취량의 바이오티닐화 단일클론 항체 2TNF-H34(0.1% BSA를 함유하는 PBS 중 2 ㎍/mL)와 혼합한 다음 각 웰에 첨가하였다. 샘플을 실온에서 약하게 진탕시키면서 2 시간동안 배양한 다음 PBS 중 0.1% BSA로 3회 세척하였다. 0.416 ㎍/mL의 퍼옥시다제-스트렙타비딘 및 PBS 중 0.1% BSA를 함유하는 퍼옥시다제-스트렙타비딘(캘리포니아주 샌프란시스코 소재의 지메드(Zymed)) 용액 50 μL를 각 웰에 가하였다. 샘플을 실온에서 1 시간동안 더 배양한 후 PBS 중 0.1% BSA로 4회 세척하였다. 50 μL의 O-페닐렌디아민 용액(0.2M 시트레이트 완충액(pH 4.5) 중 1 ㎍/mL O-페닐렌-디아민 및 0.03% 과산화 수소)을 각 웰에 가하고 샘플을 실온에서 어두운 상태로 30 분간 배양하였다. 샘플의 흡광도 및 기준치를 각각 450 nm 및 650 nm에서 판독하였다. 450 nm에서의 흡광도 대 사용된 농도에 관한 그래프로부터 TNF-α 수준을 측정하였다.

IC₅₀값은 450 nm 흡광도의 최대값이 절반으로 감소하는 시험 화합물의 농도로 정의하였다.

실시예 13

본 실시예는 마우스(또는 래트)에서 LPS-유도된 TNF-α 생성의 억제를 평가하기 위한 생체내 분석법을 예시한다.

생체내에서 TNF-α 방출을 억제하는 본 발명 화합물의 능력은, 문헌 [Zanetti, et al.,J. Immunol.,148:1890, 1992; and Sekut, et al.,J. Lab. Clin. Med.,124:813, 1994]에 기술된 방법을 약간 변형한 방법을 이용하여 측정하였다.

18 내지 21 g으로 계량된 암컷 BALB/c 마우스(캘리포니아주 홀리스터 소재의 찰스 리버(Charles River))를 1 주일간 적응시켰다. 각각 8마리의 마우스를 함유하는 그룹들에 0.9% 염화 나트륨, 0.5% 나트륨 카복시메틸-셀룰로즈, 0.4% 폴리소르베이트 80, 0.9% 벤질 알콜을 함유하는 수성 비히클(CMC 비히클)에 현탁시키거나 용해시킨 시험 화합물 또는 비히클만을(대조군) 경구 투여하였다. 30 분후에, 마우스에게 20 ㎍의 LPS(미저리주 세인트 루이스 소재의 시그마)를 복강내 주입하였다. 1.5 시간후에, 마우스를 CO₂흡입에 의해 죽이고 심장천자로 혈액을 수거하였다. 혈액을 15,600 x g에서 5 분간 원심분리하여 정화시키고 혈청을 깨끗한 튜브로 옮기고, 제조업자의 프로토콜에 따라 ELISA 분석법(캘리포니아주 카마릴로 소재의 바이오소스 인터내셔날(Biosource International))으로 TNF-α에 대해 분석할때까지 -20 ℃에서 냉동시켰다.

본원에 기술된 실시예 및 태양들은 단지 예시의 목적으로 나타낸 것이고, 그에 비추어 다양한 변형 또는 변화가 당해 분야에 숙련된 자에게 제시될 것이며 본 출원의 진의 및 범위 및 첨부한 청구의 범위의 범주에 속할 것임을 주지해야 한다.

Claims

하기 화학식 I로 표시되는 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염의 그룹에서 선택된 화합물:

화학식 I

상기 식에서,

아래 첨자 n은 0 내지 3의 정수이고;

R¹은 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬카보닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 사이클로알킬알킬, 사이클로알킬알케닐, 사이클로알킬알키닐 및 아르알킬이고;

R²는 각각 독립적으로 알킬, 할로, 헤테로알킬 및 비닐로 이루어진 그룹에서 선택되고;

R³는 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 헤테로알킬카보닐, 헤테로치환된 사이클로알킬, 헤테로치환된 사이클로알킬알킬, 헤테로치환된 사이클로알킬알케닐, 헤테로치환된 사이클로알킬알키닐, 헤테로알킬치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 아릴헤테로알킬, 헤테로아릴헤테로알킬, -(알킬렌)-C(O)R³¹및 -(헤테로알킬렌)-C(O)R³¹이며; 여기서, R³¹은 알킬, 할로알킬, 하이드록시, 알콕시, 아미노, 일치환된 아미노, 이치환된 아미노, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로아릴 및 헤테로아르알킬이다.
제 1 항에 있어서,

R¹이 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬카보닐, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 사이클로알킬알케닐, 사이클로알킬알키닐 및 아르알킬로 이루어진 그룹에서 선택된 것인 화합물.
제 1 항에 있어서,

R¹이 수소, 알킬, 사이클로알킬 및 아르알킬로 이루어진 그룹에서 선택된 것인 화합물.
제 3 항에 있어서,

R¹이 알킬인 화합물.
제 3 항에 있어서,

R¹이 사이클로알킬인 화합물.
제 1 항에 있어서,

n이 1 내지 2의 정수이고, R²가 각각 독립적으로 할로 및 알킬로 이루어진 그룹에서 선택되는 화합물.
제 6 항에 있어서,

n이 1 내지 2의 정수이고, R²가 각각 독립적으로 할로겐인 화합물.
제 7 항에 있어서,

-(R²)_n이 2-할로 또는 2,6-디할로인 화합물.
제 1 항에 있어서,

R³가 헤테로알킬인 화합물.
제 1 항에 있어서,

R³가 헤테로사이클릴알킬인 화합물.
제 7 항에 있어서,

R¹이 알킬 또는 사이클로알킬이고, R²가 할로이고, R³가 헤테로알킬이며, n이 1 또는 2인 화합물.
제 7 항에 있어서,

R¹이 알킬 또는 사이클로알킬이고, R²가 할로이고, R³가 헤테로사이클릴이며, n이 1 또는 2인 화합물.
제 7 항에 있어서,

R¹이 알킬 또는 사이클로알킬이고, R²가 할로이고, R³가 헤테로치환된 사이클로알킬이며, n이 1 또는 2인 화합물.
제 1 항에 있어서,

R¹이 이소프로필이고, R²가 할로이고, n이 1 또는 2인 화합물.
제 1 항에 있어서,

3-(2-클로로-페닐)-1-에톡시카보닐메틸-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온,

3-(2-클로로-페닐)-1-카복시메틸-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온,

3-(2-클로로-페닐)-1-(2-메톡시에틸)-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온,

3-(2-클로로-페닐)-7-이소프로필아미노-1-(2-메틸설포닐에틸)-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온,

3-(2-클로로-페닐)-1-(2-하이드록시에틸)-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온,

3-(2-클로로페닐)-1-[(2S)-2,3-디하이드록시에틸]-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온,

3-(2-클로로페닐)-1-[(2R)-2,3-디하이드록시에틸]-7-이소프로필아미노-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온,

7-이소프로필아미노-3-(2-클로로페닐)-1-(2-피페리디닐-에틸)-3,4-디하이드로-피리미도[4,5-d]피리미딘-2(1H)-온, 및

이들의 약학적으로 허용가능한 염으로 이루어진 그룹에서 선택된 화합물.
하기 화학식 II의 화합물을 하기 화학식 III의 아민으로 처리하고, 필요한 경우, 반응 생성물에 존재하는 보호된 반응성 그룹을 탈보호시키고, 임의로, 화학식 I의 화합물을 약학적으로 허용가능한 염으로 전환시킴을 포함하는, 제 1 항의 화합물의 제조 방법:

화학식 II

화학식 III

R¹-NH₂

상기 식에서,

n, R¹, R²및 R³는 제 1 항에 기재된 의미를 가지나, 단, 존재하는 임의의 간섭 반응성 그룹은 임의로 보호된 형태이며, L은 이탈 그룹이다.
제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 및 상용가능한 약학적 담체를 포함하는 약학 조성물.
제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,

치료제로서 사용하기 위한 화합물.
제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,

p38 매개 질환의 치료 또는 예방에 치료제로서 사용하기 위한 화합물.
제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,

관절염, 크론병, 과민성 장 증후군, 성인 호흡 장애 증후군 및 만성 폐쇄성 폐 질환의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 화합물.
p38 매개 질환의 치료 또는 예방, 특히 관절염, 크론병, 과민성 장 증후군, 성인 호흡 장애 증후군 및 만성 폐쇄성 폐 질환의 치료 또는 예방에 사용되는 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 따른 하나 이상의 화합물 또는 그의 염, 및 경우에 따라, 하나 이상의 다른 치료적으로 유용한 물질을 상용가능한 약학적 담체와 함께 갈레누스 투여형으로 제조함을 포함하는, 약학 제제의 제조 방법.
관절염, 크론병, 과민성 장 증후군, 성인 호흡 장애 증후군 및 만성 폐쇄성 폐 질환의 치료 또는 예방을 위한 약학 조성물의 제조에 사용되는 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
제 1 항에 있어서,

제 16 항의 방법에 따라 제조된 화합물.
특히 신규 화합물, 방법, 약학 제제 및 그의 용도에 관하여, 실질적으로 전술한 바와 같은 발명.