KR20010052703A

KR20010052703A - 신규한 안지오텐신 수용체, 이의 제조 방법 및 용도

Info

Publication number: KR20010052703A
Application number: KR1020007013967A
Authority: KR
Inventors: 하이츠홀거; 클라임외르그-페터; 리쓰귄터; 지벤호른게르트루트
Original assignee: 로버트 흐라이탁, 미쉘 베스트; 아벤티스 파마 도이칠란트 게엠베하
Priority date: 1998-06-08
Filing date: 1999-05-12
Publication date: 2001-06-25
Also published as: TR200003662T2; WO1999064585A3; CN1304449A; DE19825494A1; HUP0102540A3; AU4361699A; ID27566A; BR9912183A; AR020086A1; EP1086217A2; PL345949A1; JP2002517237A; CA2330229A1; WO1999064585A2; HUP0102540A2

Abstract

본 발명은 신규한 안지오텐신 수용체 및 이를 제조하는 방법 및 이의 용도에 관한 것이다. 신규한 안지오텐신 수용체는 서열 10의 아미노산 서열을 포함하는 서브유니트 하나 이상을 갖는다.

Description

신규한 안지오텐신 수용체, 이의 제조 방법 및 용도 {Novel angiotensin receptor, production and use thereof}

본 발명은 신규한 안지오텐신 수용체, 이의 제조 방법 및 용도에 관한 것이다.

레닌 안지오텐신 시스템은 심장혈관계의 조절 및 전해질과 유체 평형의 조절에서 중요한 역할을 수행한다. 생리학적으로 활성인 효과기 호르몬, 예를 들면, 안지오텐신 II(AngII) 및 안지오텐신 1-7(Ang1-7)은 각각, 간에서 합성되는 전구체 안지오텐시노겐의 단백질분해적 절단, 및 안지오텐시노겐으로부터 형성되는 안지오텐신 I의 단백질분해적 절단에 의해 생성된다. 수 많은 프로테아제가 상기 절단에 관여한다(예를 들면, 레닌 및 안지오텐신 전환 효소(ACE)).

AT1 및 AT2로 명명된 두 개의 사람 안지오텐신 수용체가 현재까지 기술되어 있다. 수용체 둘 모두는 안지오텐신 II(AngII) 수용체이며, 즉 이들 수용체는 바람직하게는 AngII에 결합한다. 상기 두 수용체의 cDNA 서열[참조: Takayanagi, R. et al., (1992), Biochemical and Biophysical Research Communications 183, 910-915; Tsuzuki, S. et al., (1994), Biochemical and Biophysical Research Communications 200, 1449-1454] 각각은 잠재적인 트랜스막 도메인을 구성하는 7개의 소수성 영역을 갖는다. 이의 특징적인 도메인 구조로 인해, 안지오텐신 수용체 AT1 및 AT2는 세포내 G 단백질-결합된 신호 전달 과정(signal transduction cascade)에 의해 리간드 안지오텐신 II의 효과를 중개하는 7-트랜스막 수용체 패밀리에 속하는 것으로 추정된다.

AngII와는 상이한 다른 안지오텐신 및/또는 각각, 안지오텐신 I 및 안지오텐신 II로부터 유도되는 펩타이드(AngI 및 AngII의 내인적으로 형성된 단편)에 의해 중개되는 약리학적 효과로 인해, 추가의 사람 안지오텐신 수용체가 존재함에 틀림없다고 추정되어져 왔다. 이와 관련하여, 최근에 헵타펩타이드 Ang1-7에 대한 수용체가 요구되어졌다[Ferrario, CM et al. (1997) Hypertension 30, 535-541].

본 발명은 서열 10의 아미노산 서열과 C-말단에서 추가의 아미노산을 포함할 수 있는 서브유니트 하나 이상을 갖는 신규한 안지오텐신 수용체에 관한 것이다.

안지오텐신 수용체는 트랜스막 수용체이다. 이전에 기술된 안지오텐신 수용체와는 다르게, 이는 바람직하게는 7개 미만의 트랜스막 도메인을 갖는다. 서열 10의 서열을 포함하는 서브유니트는 바람직하게는 하나의 트랜스막 도메인을 갖는다. 이러한 트랜스막 도메인은 바람직하게는 6개 이상, 바람직하게는 8 또는 9개, 특히 바람직하게는 7개의 아미노산 길이이다. 트랜스막 도메인은 바람직하게는 서열 "MSIVIPL"(아미노산에 대한 단일 문자 표기)을 갖는다.

안지오텐신 수용체는 하나 이상의 서브유니트를 가질 수 있다. 예를 들면, 수용체는, a) 단량체(서열 10의 서열을 포함하는 하나의 서브유니트), b) 동일한 서브유니트 또는 상이한 서브유니트를 포함하는 이량체, 또는 c) 세 개의 추가의 동일한 서브유니트를 포함하거나 하나의 동일한 서브유니트와 두 개의 상이한 서브유니트를 포함하는 사량체로서 존재할 수 있다.

그러나, 안지오텐신 수용체는 또한, 리간드가 결합하고, 리간드 결합의 결과로서 이량체 또는 사량체 형태로 변화될 때까지는 단량체(하나의 서브유니트) 또는 이량체(두 개의 상이한 서브유니트)로서 존재할 수 있다.

신규한 안지오텐신 수용체와 유사한 구조를 갖는 수용체는 특히, 인슐린 수용체, 성장 인자(예를 들면, 신경 성장 인자(NGF), 내피 성장 인자(EGF), 섬유아세포 성장 인자(FGF), 혈소판 성장 인자(PDGF)), T 세포 항원 수용체, 조혈성 사이토카인 수용체(예를 들면, IL1, IL5), 및 부착 분자(인테그린 및 셀렉틴)이 있다.

적합한 경우, 신규한 안지오텐신 수용체는 해독후 변형될 수 있으며; 예를 들면, 상기 수용체는 글리코실화 및/또는 인산화될 수 있다.

안지오텐신 수용체는 이의 리간드(들)와 결합할 수 있으며, 세포내에서 이러한 리간드(들)의 효과를 중개할 수 있다. 안지오텐신 수용체는 안지오텐신 1-7 및/또는 안지오텐신 1-7의 유도체에 결합할 수 있다. 안지오텐신 1-7의 유도체는 바람직하게는 Ang1-7로부터 유도된 말단 절단된 펩타이드, 예를 들면 Ang1-7의 분해 생성물이다. Ang1-7의 유도체의 예는 안지오텐신 III 및 안지오텐신 IV이다. 상기 수용체는 바람직하게는 Ang1-7에 결합한다.

본 발명은 표 2, 서열 10에 나타낸 아미노산 서열을 갖거나 포함하는 수용체에 관한 것이다. 서열 10의 서열을 포함하는 안지오텐신 수용체, 또는 서브유니트는 175개 이상의 아미노산 길이이다.

본 발명은 추가로 신규한 안지오텐신 수용체("수용체")를 암호화하는 서열을 갖는 핵산에 관한 것이다. 예를 들면, 상기 수용체는 서열 9의 서열을 갖는 핵산에 의해 전적으로 또는 부분적으로 암호화될 수 있다. 상기 수용체 또는 상기 수용체의 서브유니트를 암호화하는 핵산은 서열 9의 서열을 포함할 수 있으며, 가능하게는 3' 말단에 암호화 서열에 속하는 추가의 뉴클레오타이드를 가질 수 있다.

핵산은 예를 들면, DNA, cDNA 또는 RNA일 수 있다. 핵산은 비암호화 서열(인트론)에 의해 중절되는 것이 가능한 서열 9의 서열에 대한 유전자일 수 있다.

적합한 경우, 핵산은 유도체화될 수 있다. 핵산의 유도체는 예를 들면, 염, 또는 천연 뉴클레오타이드에 부가하여 변형된 뉴클레오타이드를 함유하거나 변형된 뉴클레오타이드로 완전히 구성되는 핵산일 수 있다.

본 발명은 또한 안지오텐신 수용체를 암호화하고 서열 9의 서열을 포함하는 핵산을 제조하는 방법에 관한 것이다. 예를 들면, 상기 핵산은 프라이머 같은 올리고뉴클레오타이드(이의 서열은 안지오텐신 수용체 AT1 및 AT2의 뉴클레오타이드 서열에서 상동성 영역(보존된 영역)에 상응한다), 및 바람직하게는 안지오텐신 1-7 또는 이의 유도체가 효과를 갖고/갖거나 AT1 및/또는 AT2가 발현되지 않는 조직(또는 세포)으로부터 제조된 cDNA를 사용한 PCR에서 증폭시킬 수 있다. 상기 방법의 특정 양태에서, 이의 서열이 AT1 및 AT2 서열의 상동성 영역으로부터 유도되는, 축퇴성 프라이머를 사용한다. 상기 목적을 위해서 프라이머 Ang3A 및 Ang3B를 사용하는 것이 바람직하다. 내피세포로부터 제조된 cDNA는 예를 들면, 주형으로서 사용할 수 있다. 예를 들면, HUVEC(사람 제정맥 내피세포)로부터 제조된 cDNA를 주형으로서 사용할 수 있다.

본 발명은 또한 신규한 수용체를 제조하는 방법에 관한 것이다. 예를 들면, 신규한 안지오텐신 수용체는 안지오텐신 수용체를 암호화하고 바람직하게는 서열 9의 서열을 포함하는 핵산을 적합한 벡터내로 통합시키고, 상기 재조합 벡터를 세포내로 도입하여 상기 세포내에서 안지오텐신 수용체를 발현시켜 제조할 수 있다.

본 발명은 추가로 예를 들면, 적합한 프로모터의 조절하에 있는 핵산을 사용하여 이를 세포내로 도입하여 세포내에서 발현시켜 재조합 안지오텐신 수용체를 제조하는 방법에서, 신규한 안지오텐신 수용체를 암호화하고 바람직하게는 서열 9의 서열을 포함하는 핵산의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 추가로 안지오텐신 수용체를 발현할 수 있는 재조합 세포를 제조하기 위한, 신규한 안지오텐신 수용체를 암호화하고 바람직하게는 서열 9의 서열을 포함하는 핵산의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 서열 10의 서열을 갖는 안지오텐신 수용체를 발현하는 재조합 세포에 관한 것이다. 본 발명은 또한 심장혈관계, 전해질 평형 또는 유체 평형의 불완전한 조절에 의해 야기되는 질환을 치료하고 예방하기 위한 약제의 생산을 위한, 안지오텐신 수용체를 암호화하고 바람직하게는 서열 9의 서열을 포함하는 핵산의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 서열 9의 서열을 갖는 핵산을 포함하는 약제에 관한 것이다.

본 발명은 또한 상응하는 안지오텐신 수용체 유전자를 함유하지 않는 형질전환 동물 또는 상응하는 안지오텐신 수용체 유전자를 과발현하는 형질전환 동물을 생산하기 위한, 안지오텐신 수용체를 암호화하고 바람직하게는 서열 9의 서열을 포함하는 핵산의 용도에 관한 것이다. 형질전환 동물은 예를 들면, 안지오텐신 수용체의 특이성 및 생화학적 기능을 특성화하기 위해서 사용할 수 있다. 본 발명은 안지오텐신 수용체를 발현하는 사람을 포함하지 않는 형질전환 동물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 안지오텐신 수용체의 길항제 또는 효능제로서 사용할 수 있는 물질을 확인하고 특성화하는 방법에서 및/또는 암호화된 안지오텐신 수용체의 기능성 발현을 억제하거나 활성화하는 물질을 확인하는 방법에서, 안지오텐신 수용체를 암호화하고 바람직하게는 서열 9의 서열을 포함하는 핵산의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 서열 9의 서열을 갖는 핵산을 세포내로 도입하고 세포내에서 안지오텐신 수용체를 발현시키며, 상기 세포를 조사하고자 하는 물질과 함께 항온 처리하고 안지오텐신 수용체에 대한 상기 물질의 효과를 측정하는, 안지오텐신 수용체의 효능제 또는 길항제를 확인하고 특성화하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 유전자 요법에서 또는 유전자 요법에서 사용할 수 있는 약제를 생산하기 위한, 안지오텐신 수용체를 암호화하고 바람직하게는 서열 9의 서열을 포함하는 핵산의 용도에 관한 것이다.

이에 부가하여, 본 발명은 분자생물학에서 도구(예를 들면, 프로브로서)로서 안지오텐신 수용체를 암호화하고 서열 9의 서열을 포함하는 핵산의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또한 신규한 안지오텐신 수용체의 용도에 관한 것이다. 예를 들면, 안지오텐신 수용체는 수용체의 효능제 또는 길항제로서 사용할 수 있는 물질을 확인하고 특성화하는 방법(예를 들면, 스크리닝을 위한 결합 분석법 및 기능 분석법)에서 사용할 수 있다.

또한, 안지오텐신 수용체, 이의 일부분, 예를 들면, 서열 10 또는 이의 일부분의 아미노산 서열에 의해 예비 결정된 에피토프를 공지된 방법[Harlow and Lane, "Antibodies-A Laboratory Manual", Cold Spring harbor Laboratory, ISBN-0-87969-314-2]에 따라 항체를 제조하는데 사용할 수 있다. 상기 방법으로 제조되고 신규한 안지오텐신 수용체에 특이적으로 결합하는 항체는 예를 들면, 진단 방법에서 신규한 수용체를 검출하고/하거나 추가의 특성화를 위해 수용체를 적용하는데 사용할 수 있다.

발명의 상세한 설명

신규한 수용체를 찾기 위해서, AT1/AT2 암호화 서열의 보존된 영역에 상응하는 올리고뉴클레오타이드를 합성하기 위해서 안지오텐신 II 수용체 AT1 및 AT2를 암호화하는 공지된 서열 또는 상기 보존된 영역(Ang3A 및 Ang3B)에 대해 지시되는 공지된 서열을 사용한다. 상기 올리고뉴클레오타이드를 주형으로서 사람 HUVEC(사람 제정맥 내피세포)로부터의 cDNA를 사용하여 PCR 반응에서 사용한다. 상기 세포주는 혈관을 따라 늘어선 내피세포로부터 유도된다. 상기 세포는 어떠한 AT1 또는 AT2 수용체도 발현하지 않는다.

개방 판독 프레임 및 이전에 기술된 바 없는 뉴클레오타이드 서열(서열 3)을 갖는 DNA 단편을 증폭시키고 확인한다. 상기 뉴클레오타이드 서열은 EMBL 또는 Genbank데이터베이스내에서 어떠한 일치하는 서열도 나타내지 않는다. 이의 서열과 "Blast" 및 "Assembly" 프로그램 모둘(GCG 프로그램 팩키지)을 사용한 Lifeseq데이터베이스내의 서열과의 비교는 서열 3이 Lifeseq클론 제1458429호, 제3341232호, 제3440195호, 제1250818호, 제2836520호, 제1310286호 및 제1362205호(기능이 미확인된 EST들)와 중복됨을 나타낸다. 상기 실질적인 (3) 콘티그로부터 유도될 수 있는 이론적인 0.5kbp DNA 단편을 실험적으로 확인한다(실시예 2, 프라이머쌍 Ang4A 및 Ang4B를 사용한 PCR). 내부에 함유된 개방 판독 프레임을 함께 갖는 DNA 단편의 서열은 벡터 서열내로의 5' 신장(실시예 3)에 의해 (서열 9의 서열로) 확인된다. 서열 9의 서열은 또한 5'-비해독 영역 또는 이의 일부분을 함유한다.

서열 9의 뉴클레오타이드 서열의 5' 영역에 대한 분석은 추정되는 출발 메티오닌 삼중체(ATG)의 상류에서, 퓨린 뉴클레오타이드가 -3번 위치에 존재하며 시토신 뉴클레오타이드가 -1 및 -4번 위치에 존재함을 나타낸다. -1, -3 및 -4번 위치에서의 이러한 뉴클레오타이드의 존재는 mRNA 해독을 개시하기 위한 출발점에 대한 진핵세포 컨센서스 서열에 상응한다.

서열 9에서 개방 판독 프레임은 175개 이상의 아미노산(서열 10)을 함유하는 단백질을 암호화한다. GCG 프로그램을 사용하여 수행한, 상기 아미노산 서열에 대한 소수성도 분석은 상기 서열이 N 말단에서 약 7개 아미노산 길이의 소수성 도메인을 갖는다는 것을 나타낸다. 상기 소수성 도메인은 상기 신규한 수용체를 막에 부착시키는데 사용하는 트랜스막 도메인을 나타낼 수 있다. 반대로, 상기 서열은 C 말단에서 다소 친수성인 도메인을 갖는다.

실시예 1

AT1/2 수용체 유전자를 기초로 0.19kbp DNA 단편을 갖는 올리고뉴클레오타이드 프라이머 Ang3A 및 Ang3B를 제1 PCR에 사용한다. 시판중인 HUVEC cDNA 라이브러리(Stratagene catalog No. 937223, 제조원: Stratagene GmbH, Heidelberg)로부터의 cDNA를 주형 DNA로서 사용한다.

Ang3A의 뉴클레오타이드 서열

서열 1: 5'-TTG TKC TKK YCT TYW TCW TTT SCT GGM TTC CC-3'

Ang3B의 뉴클레오타이드 서열

서열 2: 5'-TTY CCM ASA AAR CMA TAM ARA ARM GGA TT-3'

(여기서, M=(A/C), Y=(C/T), R=(A/G), S=(G/C), K=(G/T), W=(A/T)이다).

PCR 반응에서, HUVEC 라이브러리로부터의 cDNA 1㎍을 써모사이클러(Perkin Elmer 2400 써머사이클러, 제조원: Perkin Elmer Applied Biosystems, Weiterstadt)에서 50㎕ 반응 분석 당 재조합 써머스 아쿠아티쿠스(Thermus aquaticus, Taq) DNA 폴리머라제(제조원: Boehringer Mannheim, Germany) 및 프라이머 Ang3A 및 Ang3B 각각 10 pmol과 함께 항온 처리한다. PCR 반응은 하기 온도 특성을 사용하여 수행한다: 95℃에서 20초, 38℃에서 10초 및 72℃에서 20초(60 사이클). 130염기쌍(bp) 길이의 DNA 단편이 증폭된다.

상기 130bp DNA 단편을 벡터 pCR 2.1 TOPO(제조원: Invitrogen BV, NV Leek, Netherlands)내로 결합시키고 이. 콜라이 Top10F'내로 형질전환시킨다. pCR2.1내에 존재하는 130bp DNA 단편의 서열은 모세관 전기영동 서열분석기(ABI 310, 제조원: Applied Biosystems, Weiterstadt)를 사용하여 결정한다(서열 3).

실시예 2

서열 3의 서열을 프로그램 모둘 FASTA 및 TFASTA(University of Wisconsin Genetics Computer Group (GCG), USA, 소프트웨어 팩키지)를 사용하여 공개된 유용한 데이터베이스(예를 들면, EMBL 및 GenBank)의 서열과 비교한다. 또한, 상기 서열을 인사이트 컴파니(Incyte company, Palo Alto, USA) Lifeseq데이터베이스에 포함된 서열과 상응하는 상동성 비교용으로 사용한다.

서열 3과 중복되는 발현된 서열 태그(EST)의 서열을 Lifeseq데이터베이스에서 확인한다(Lifeseq클론 제1458429호, 제3341232호, 제3440195호, 제1250818호, 제2836520호, 제1310286호 및 제1362206호). 프라이머 Ang4A 및 Ang4B는 본 발명자들이 중복되는 발현된 서열 태그(EST)를 순서대로 정렬하여 조합한 서열에 기초하여 합성한다.

Ang4A의 뉴클레오타이드 서열:

서열 4: 5'-TGG GGG TTG ATA CAG CAG AGA C-3'

Ang4B의 뉴클레오타이드 서열:

서열 5: 5'-GCA CTG CCC TCT CTT TAT CCA AA-3'

PCR 반응은 각각의 경우에 50㎕ 반응 분석 당 주형으로서 HUVEC 라이브러리로부터의 cDNA 0.1㎍, 및 프라이머 Ang4A 및 Ang4B 각각 10pmol과 함께 Advantage cDNA 폴리머라제 혼합물(제조원: Clontech, Heidelberg)을 사용하여 수행한다. PCR 반응에 대해서 하기 온도 특성을 사용한다: 94℃에서 30초, 60℃에서 2분 30초(60 사이클). 500bp 길이의 DNA 단편이 수득된다. 이를 실시예 1에서 기술된 바와 같이 클로닝하고 서열 분석한다(서열 6). 상기 서열은 개방 판독 프레임(ORF)을 갖는다.

실시예 3

프라이머 Ang5A 및 Ang5B를 5' 영역에서 500bp DNA 단편의 서열을 확인하기 위해서 합성한다.

Ang5A의 뉴클레오타이드 서열

서열 7: 5'-TGG GGA TTG ATA GGC AG-3'

Ang5B의 뉴클레오타이드 서열

서열 8: 5'-ATA ACT GTT GGA TTT CTC AA-3'

각각의 경우에 Ang5A 및 Ang5B의 뉴클레오타이드 서열은 500bp DNA 단편의 서열의 일부와 상응한다. 상기 두 개의 프라이머는 각각, M13 역방향 및 M13 정방향(-20) 프라이머를 사용한 추가의 PCR에서 사용한다. M13 역방향 및 M13 정방향(-20) 프라이머는 HUVEC cDNA 라이브러리를 제조하는데 사용되는 Uni-ZAP박테리오파아지 벡터의 서열에 상응한다. 상기 PCR 반응은 각각의 경우에 주형으로서 HUVEC 라이브러리로부터의 cDNA 0.1㎍, 및 프라이머 Ang5A 또는 Ang5B 각각 10pmol, 및 각각 M13 역방향 또는 M13 정방향(-20)(Topo-TA 클로닝 키트(제조원: Clontech)로부터), Taq 폴리머라제(제조원: Boehringer Mannheim) 및 또한 Taq Start^TM항체(제조원: Clontech)을 사용하여 수행한다. PCR 반응은 하기 온도 특성을 사용하여 수행한다: 96℃에서 30초, 50℃에서 30초 및 72℃에서 45초(70 사이클).

이로써 전체 길이 660bp를 갖는 DNA 단편이 수득된다. 상기 단편을 실시예 1에서 기술된 바와 같이 클로닝하고 서열 분석한다. 상기 DNA 단편은 서열 9의 서열을 갖는다. 서열 9의 서열은 전체 5' 암호화 영역을 포함한다.

이미 언급된 소프트웨어 모둘 이외에, 컴퓨터-보조된 서열 분석을 수행하기위해서, GCG 모둘 Assemble, Map, Translate, Plotstructure 및 Pileup이 또한 사용된다.

＜110＞ Aventis Pharma Deutschland GmbH

＜120＞ Novel angiotensin receptor, production and use thereof

＜130＞ HMR 1998/L032 KR PCT

＜150＞ DE 198 25 494.6

＜151＞ 1998-06-08

＜160＞ 10

＜170＞ KoPatentIn Ver. 1.71

＜210＞ 1

＜211＞ 32

＜212＞ DNA

＜213＞ Artificial sequence, single, linear, genomic DNA

＜220＞

＜221＞ exon

＜222＞ (1)..(32)

＜223＞ misc_difference:/note ="M=(A/C); Y=(C/T); R=(A/G);

S=(G/C); K=(G/T); W=(A/T)"

＜400＞ 1

ttgtkctkky cttywtcwtt tsctggmttc cc 32

＜210＞ 2

＜211＞ 29

＜212＞ DNA

＜213＞ Artificial sequence, single, linear, genomic DNA

＜220＞

＜221＞ exon

＜222＞ (1)..(29)

＜223＞ misc_difference:/note ="M=(A/C); Y=(C/T); R=(A/G);

S=(G/C); K=(G/T); W=(A/T)"

＜400＞ 2

ttyccmasaa arcmatamar aarmggatt 29

＜210＞ 3

＜211＞ 94

＜212＞ DNA

＜213＞ Homo sapiens, single, linear, genomic DNA

＜220＞

＜221＞ exon

＜222＞ (1)..(94)

＜400＞ 3

ctcctccatc agtccttatt agcaaaaatg aagtaggcat atttaccact cctaattttg 60

atgaaacttc cagtgctact acaaccagag cgag 94

＜210＞ 4

＜211＞ 22

＜212＞ DNA

＜213＞ Artificial sequence, single, linear, genomic DNA

＜220＞

＜221＞ exon

＜222＞ (1)..(22)

＜400＞ 4

tgggggttga tacagcagag ac 22

＜210＞ 5

＜211＞ 23

＜212＞ DNA

＜213＞ Artificial sequence, single, linear, genomic DNA

＜220＞

＜221＞ exon

＜222＞ (1)..(23)

＜400＞ 5

gcactgccct ctctttatcc aaa 23

＜210＞ 6

＜211＞ 510

＜212＞ DNA

＜213＞ Homo sapiens, single, linear, genomic DNA

＜220＞

＜221＞ exon

＜222＞ (1)..(510)

＜400＞ 6

attgggggtt gatacagcag agacgtcata cttggaaatg gctgcaggtt cagaaccaga 60

atccgtagaa gctagccctg tggtagttga gaaatccaac agttatcccc accagttata 120

taccagcagc tcacatcatt cacacagtta cattggtttg ccctatgcgg accataatta 180

tggtgctcgt cctcctccga cacctccggc ttcccctcct ccatcagtcc ttattagcaa 240

aaatgaagta ggcatattta ccactcctaa ttttgatgaa acttccagtg ctactacaat 300

cagcacatct gaggatggaa gttatggtac tgatgtaacc aggtgcatat gtggttttac 360

acatgatgat ggatacatga tctgttgtga caaatgcagc gtttggcaac atattgactg 420

catggggatt gataggcagc atattcctga tacatatcta tgtgaacgtt gtcagcctag 480

gaatttggat aaagagaggg cagtgctact 510

＜210＞ 7

＜211＞ 17

＜212＞ DNA

＜213＞ Artificial sequence, single, linear, genomic DNA

＜220＞

＜221＞ exon

＜222＞ (1)..(17)

＜400＞ 7

tggggattga taggcag 17

＜210＞ 8

＜211＞ 20

＜212＞ DNA

＜213＞ Artificial sequence, single, linear, genomic DNA

＜220＞

＜221＞ exon

＜222＞ (1)..(20)

＜400＞ 8

ataactgttg gatttctcaa 20

＜210＞ 9

＜211＞ 660

＜212＞ DNA

＜213＞ Homo sapiens, single, linear, genomic DNA

＜220＞

＜221＞ exon

＜222＞ (1)..(660)

＜400＞ 9

tcgtgtgtga acatcacagg gtttgtggat gcacttagat gtttgcaatg agcactgtgg 60

ctggcatgcc ccagtgtttt ggataccaat gcataggact ccatagtaat cgaatttacc 120

agaggcgaac gtcatgagca tagtgatccc attgggggtt gatacagcag agacgtcata 180

cttggaaatg gctgcaggtt cagaaccaga atccgtagaa gctagccctg tggtagttga 240

gaaatccaac agttatcccc accagttata taccagcagc tcacatcatt cacacagtta 300

cattggtttg ccctatgcgg accataatta tggtgctcgt cctcctccga cacctccggc 360

ttcccctcct ccatcagtcc ttattagcaa aaatgaagta ggcatattta ccactcctaa 420

ttttgatgaa acttccagtg ctactacaat cagcacatct gaggatggaa gttatggtac 480

tgatgtaacc aggtgcatat gtggttttac acatgatgat ggatacatga tctgttgtga 540

caaatgcagc gtttggcaac atattgactg catggggatt gataggcagc atattcctga 600

tacatatcta tgtgaacgtt gtcagcctag gaatttggat aaagagaggg cagtgctact 660

＜210＞ 10

＜211＞ 175

＜212＞ PRT

＜213＞ Homo sapiens, single, linear

＜220＞

＜221＞ peptide

＜222＞ (1)..(175)

＜400＞ 10

Met Ser Ile Val Ile Pro Leu Gly Val Asp Thr Ala Glu Thr Ser Tyr

1 5 10 15

Leu Glu Met Ala Ala Gly Ser Glu Pro Glu Ser Val Glu Ala Ser Pro

20 25 30

Val Val Val Glu Lys Ser Asn Ser Tyr Pro His Gln Leu Tyr Thr Ser

35 40 45

Ser Ser His His Ser His Ser Tyr Ile Gly Leu Pro Tyr Ala Asp His

50 55 60

Asn Tyr Gly Ala Arg Pro Pro Pro Thr Pro Pro Ala Ser Pro Pro Pro

65 70 75 80

Ser Val Leu Ile Ser Lys Asn Glu Val Gly Ile Phe Thr Thr Pro Asn

85 90 95

Phe Asp Glu Thr Ser Ser Ala Thr Thr Ile Ser Thr Ser Glu Asp Gly

100 105 110

Ser Tyr Gly Thr Asp Val Thr Arg Cys Ile Cys Gly Phe Thr His Asp

115 120 125

Asp Gly Tyr Met Ile Cys Cys Asp Lys Cys Ser Val Trp Gln His Ile

130 135 140

Asp Cys Met Gly Ile Asp Arg Gln His Ile Pro Asp Thr Tyr Leu Cys

145 150 155 160

Glu Arg Cys Gln Pro Arg Asn Leu Asp Lys Glu Arg Ala Val Leu

165 170 175

Claims

서열 10의 아미노산 서열을 포함하는 서브유니트 하나 이상을 갖는 안지오텐신 수용체.
제1항에 있어서, 서열 10의 아미노산 서열이 C-말단에서 추가의 아미노산을 가질 수도 있는 안지오텐신 수용체.
제1항 또는 제2항에 있어서, 서열 10의 서열을 포함하는 서브유니트가 트랜스막 도메인을 갖는 안지오텐신 수용체.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 안지오텐신 1-7 또는 안지오텐신 1-7의 유도체에 결합하는 안지오텐신 수용체.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 수용체의 서브유니트 하나 이상이 서열 9의 서열을 갖는 핵산에 의해 암호화되며, 서열 9의 서열이 3' 말단에서 암호화 서열에 속하는 추가의 뉴클레오타이드를 포함할 수도 있는 안지오텐신 수용체.
PCR 반응에서, 안지오텐신 수용체 AT1 및 AT2의 뉴클레오타이드 서열에서 상동성 영역에 상응하는 올리고뉴클레오타이드를 프라이머로 사용하고, AT1 및 AT2 수용체가 발현되지 않는 세포로부터 제조된 cDNA를 주형으로 사용함을 특징으로 하는, 서열 9의 서열을 갖는 핵산을 제조하는 방법.
서열 9의 서열을 포함하는 핵산을 적합한 벡터내로 통합시키고 재조합 벡터를 세포내로 도입하고 세포내에서 안지오텐신 수용체를 발현시킴을 특징으로 하는, 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에서 청구되는 안지오텐신 수용체를 제조하는 방법.
적합한 프로모터의 조절하에 있는 핵산을 세포내로 도입하고 세포내에서 발현시켜 재조합 안지오텐신 수용체를 제조하는 방법에 있어서, 서열 9의 서열을 포함하는 핵산의 용도.
안지오텐신 수용체를 발현시킬 수 있는 재조합 세포를 제조하기 위한, 서열 9의 서열을 포함하는 핵산의 용도.
심장혈관계, 전해질 평형 및/또는 유체 평형의 불완전한 조절에 의해 야기되는 질환을 치료하고/하거나 예방하기 위한 약제를 제조하기 위한, 서열 9의 서열을 갖는 핵산의 용도.
유전자 요법에서 사용할 수 있는 약제를 생산하기 위한, 서열 9의 서열을 포함하는 핵산의 용도.
안지오텐신 수용체의 효능제 또는 길항제로서 사용할 수 있는 물질을 확인하고 특성화하는 방법에 있어서, 서열 9의 서열을 포함하는 핵산의 용도.
안지오텐신 수용체의 효능제 또는 길항제를 확인하고 특성화하는 방법에 있어서, 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에서 청구된 안지오텐신 수용체의 용도.
서열 9의 서열을 갖는 핵산을 세포내로 도입하고 안지오텐신 수용체를 세포내에서 발현시키고, 세포를 조사하고자 하는 물질과 항온 처리하고 안지오텐신 수용체에 대한 이러한 물질의 효과를 측정함을 특징으로 하는, 안지오텐신 수용체의 효능제 또는 길항제를 확인하고 특성화하는 방법.
서열 9의 서열을 갖는 핵산을 포함하는 약제.
세포내로 도입되어 세포내에서 발현되는 서열 9의 서열을 갖는 핵산으로 제조된 재조합 세포.