CN1304449A - 新血管紧张肽受体,其制备和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种新血管紧张肽受体,以及其制备和用途。新血管紧张肽受体具有至少一个含有SEQ IDNO.10氨基酸序列的亚基。
Description
本发明涉及新血管紧张肽受体,其制备和用途。
肾素血管紧张肽***在心血管***调控和电解质及体液平衡调节中起重要作用。生理活性效应物激素如血管紧张肽Ⅱ(AngⅡ)和血管紧张肽1-7(Ang1-7)分别通过蛋白裂解由裂解肝脏中合成的前体血管紧张肽原或从血管紧张肽原形成的血管紧张肽Ⅰ获得。大量蛋白酶参与这些裂解(如肾素和血管紧张肽转化酶(ACE))。
目前已描述了被称为AT1和AT2的两种人血管紧张肽受体。两种受体均为血管紧张肽Ⅱ(AngⅡ)受体,即这些受体优选结合AngⅡ。这两个受体的cDNA序列(Takayanagi,R等,(1992),生物化学和生物物理学研究通讯(Biochemical and Biophysical Research Communications),183,910-915;Tsuzuki,S.等,(1994),生物化学和生物物理学研究通讯,200,1449-1454)各含有七个构成潜在跨膜结构域的疏水性区域。因为此特征性结构域结构,可假定血管紧张肽受体AT1和AT2属于七跨膜受体家族,其通过胞内G蛋白偶联的信号传导级联反应介导配体血管紧张肽Ⅱ的作用。
因为由其它血管紧张肽介导的药理学作用与AngⅡ和/或分别来自血管紧张肽Ⅰ和血管紧张肽Ⅱ的肽(AngⅠ和AngⅡ的内源性形成片段)不同,因此怀疑一定存在其它人血管紧张肽受体。在此方面,最近证明了一种受体七肽Ang1-7(Ferrario,CM等(1997),高血压(Hypertension)30,535-541)。
本发明涉及一种新血管紧张肽受体,其具有至少一个含有SEQ IDNO.10氨基酸序列的亚基,此氨基酸序列在C-末端可能还含有其它氨基酸。
血管紧张肽受体是跨膜受体。与先前已描述的血管紧张肽受体不同,它优选地拥有少于7跨膜结构域。含有SEQ ID NO.10序列的亚基优选地拥有一个跨膜结构域。此跨膜结构域的长度优选地多于6个,优选8个或9个,特别优选7个氨基酸。跨膜结构域优选地具有序列“MSIVIPL”(以氨基酸单字符表示)。
血管紧张肽受体可拥有一个或多个亚基。例如,受体可以下列形式存在:a)单体(一个含有SEQ ID NO.10序列的亚基),或为b)二聚体,含有相同或不同的亚基,或为c)四聚体,其中含有三个相同的亚基或含有一个相同亚基和两个不同亚基。
然而,血管紧张肽受体也可以单体(一个亚基)或二聚体(两个不同亚基)的形式存在直到结合配体,且作为结合配体的结果仅仅分别改变为二聚体或四聚体的形式。
具有与该新血管紧张肽受体相似结构的受体尤其是胰岛素受体、生长因子如神经生长因子(NGF)、内皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、血小板衍生的生长因子(PDGF)、T细胞抗原受体、造血细胞因子受体(如IL1、IL15)和粘附分子(整合素和选择蛋白)。
如适当,新血管紧张肽受体可被翻译后修饰,例如,受体可被糖基化和/或磷酸化。
血管紧张肽受体可结合其配体,可细胞内介导这种(些)配体的作用。血管紧张肽受体可结合血管紧张肽1-7和/或血管紧张肽1-7衍生物。血管紧张肽1-7衍生物优选为来自Ang1-7截短的肽,如Ang1-7的降解产物。Ang1-7衍生物的例子有血管紧张肽Ⅲ和血管紧张肽Ⅳ。受体优选结合Ang1-7。
本发明涉及具有或含有示于表2 SEQ ID NO.10的氨基酸序列之受体。血管紧张肽受体或含有SEQ ID NO.10的亚基是长度至少为175个氨基酸。
本发明还涉及具有编码新血管紧张肽受体(“受体”)之序列的核酸。例如,受体可部分或全部由具有SEQ ID NO.9序列的核酸编码。编码受体或其亚基的核酸可含有SEQ ID NO.9的序列,且可能进一步在3’端拥有属于编码序列的核苷酸。
核酸可为例如DNA、cDNA或RNA。核酸可为一种基因,其可以是被非编码序列(内含子)间隔的SEQ ID NO.9的序列。
如适当,核酸可为衍生的。核酸衍生物可例如为一种盐,或者是除了天然核苷酸之外含有修饰的核苷酸之核酸衍生物,或是完全由修饰的核苷酸组成的核酸衍生物。
本发明还涉及制备编码血管紧张肽受体及含有SEQ ID NO.9的序列的核酸的方法。例如,该核酸可利用寡核苷酸作为引物通过PCR扩增,其中所述引物的序列相应于血管紧张肽受体AT1和AT2之核苷酸序列的同源区(保守区),以及这样的cDNA,其优选地从血管紧张肽1-7或其衍生物具有作用的组织(或细胞)制备,和/或从其中AT1和/或AT2不表达的组织(或细胞)制备。在本发明方法的一个特定实施方案中,使用了其序列来自AT1和AT2序列同源区的简并性引物。优选使用引物Ang3A和Ang3B用于此目的。从内皮细胞制备的cDNA可例如用作模板。例如,从HUVEC(人脐静脉内皮细胞)制备的cDNA可用做模板。
本发明还涉及制备新受体的方法。例如,新血管紧张肽受体可这样制备,通过将核酸整合入适当的载体,其中核酸序列编码血管紧张肽受体且优选地含有SEQ ID NO.9的序列,将所得重组载体导入细胞,血管紧张肽受体在该细胞中表达。
本发明还涉及编码血管紧张肽受体且优选地含有SEQ ID NO.9的序列的核酸的如下用途,例如用于制备重组血管紧张肽受体的方法中,包括将在适当启动子控制下的核酸导入细胞,并在该细胞中表达。
本发明还涉及编码血管紧张肽受体且优选地含有SEQ ID NO.9序列的核酸用于制备重组细胞的用途,在所述重组细胞中血管紧张肽受体可表达。本发明涉及表达具有SEQ ID NO.10序列的血管紧张肽受体之重组细胞。本发明还涉及编码血管紧张肽受体且优选地含有SEQ ID NO.9序列的核酸的用途,其用于制备治疗和预防与心血管***、电解质平衡或体液平衡的调节紊乱相关的疾病之药物。本发明涉及含有带SEQ IDNO.9序列之核酸的药物。
本发明还涉及编码血管紧张肽受体且优选地含有SEQ ID NO.9序列的核酸用于制备转基因动物的用途,所述动物不含有相应地血管紧张肽受体基因,或者用于制备过量表达相应的血管紧张肽受体基因的转基因动物。转基因动物可用于例如表征血管紧张肽的特异性和生物化学功能。本发明涉及表达血管紧张肽受体之非人转基因动物。
本发明还涉及编码血管紧张肽受体且优选地含有SEQ ID NO.9序列的核酸的这种用途,其用于鉴定和表征可用作血管紧张肽受体的拮抗剂和激动剂之物质的方法中,和/或用于鉴定可抑制或激活所编码之血管紧张肽受体的功能性表达的物质的方法中。本发明涉及鉴定和表征血管紧张肽受体的拮抗剂或激动剂之方法,包括将含有SEQ ID NO.9序列的核酸导入细胞且血管紧张肽受体在该细胞中表达,该细胞与待研究的物质一起温育,测定此物质对血管紧张肽受体的作用。
本发明也涉及编码血管紧张肽受体且优选地含有SEQ ID NO.9序列的核酸的用途,其用于基因治疗或用于制备可用于基因治疗的药物。
此外,本发明涉及编码血管紧张肽受体且优选地含有SEQ ID NO.9序列的核酸的用途,其用作分子生物学的工具(如,用作探针)。
本发明还涉及新血管紧张肽受体的用途。例如,所述血管紧张肽受体可用于鉴定和表征物质的方法(如,筛选中的功能性鉴定和结合鉴定)中,所述物质可用作受体的拮抗剂或激动剂。
此外,血管紧张肽受体或其部分(例如,一种由例如SEQ ID NO.1O或其部分预先决定的表位)可用于依照周知的方法制备抗体(Harlow和Lane,“抗体:实验室手册”,Cold Spring Harbor Laboratory,ISBN-O-87969-314-2)。由此种方法制备的特异性结合新血管紧张肽受体之抗体可在例如诊断方法和/或将受体进行进一步表征的过程中,用来检测新受体。发明详述
为找到新受体,使用编码血管紧张肽Ⅱ受体AT1和AT2的已知序列来合成寡核苷酸,所述寡核苷酸的序列相应于AT1/AT2编码序列的保守区或其针对所述保守区(Ang3A和Ang3B)。这些寡核苷酸可用于以来自人HUVEC(人脐静脉内皮细胞)的cDNA为模板之PCR反应。该细胞系来自血管衬里的内皮细胞。这些细胞不表达任何AT1或AT2受体。
扩增且鉴定了一种具有开放阅读框且核苷酸序列(SEQ ID NO.3)此前未被描述的DNA片段。该核苷酸序列与EMBL或Genbank数据库中现有的序列不一致。将该序列与Lifeseq数据库中的序列利用“Blast”和“Assembly”程序模块(GCG软件包)进行比较,显示SEQ ID NO.3与Lifeseq克隆号1458429,3341232,3440195,1250818,2836520,1310286和1362205(未知功能的EST)有重叠。可从该实际(3)重叠群中衍生的理论上0.5kbp DNA片段通过了实验证实(实施例2,利用引物对Ang4A和Ang4B的PCR)。通过5’延伸入载体序列(实施例3)阐明了DNA片段的序列以及其中所含的开放阅读框(SEQ ID NO.9)。SEQ ID NO.9序列也含有5’非翻译区或其部分。
SEQ ID NO.9核苷酸序列的5’区域分析显示,在推定起始甲硫氨酸三联密码子(ATG)上游,一个嘌呤核苷酸位于-3位,胞嘧啶核苷酸位于-1和-4位。在-1、-3和-4位的这些核苷酸位置相应于起始mRNA翻译的起始位点知真核共有序列。
SEQ ID NO.9的开放阅读框编码含有至少175个氨基酸(SEQ IDNO.10)的蛋白质。利用GCG程序进行的该氨基酸序列疏水性分析显示,该序列在N-末端拥有长度约7个氨基酸的疏水性结构域。此结构域可代表用于在膜上锚定所述新受体的跨膜结构域。相反,在C-末端拥有结构域的序列或多或少具有亲水性。
实施例
实施例1:
基于AT1/2受体基因的寡核苷酸引物Ang3A和Ang3B包括一个0.19kbp DNA片段,其用于第一个PCR。商品化HUVEC cDNA文库(Strataene目录号937223,Stratagene GmbH,Heidelberg)用作模板DNA。
Ang3A的核苷酸序列SEQ ID NO.1:5’-TTG TKC TKK YCT TYW TCW TTT SCT GGM TTC CC-3′Ang3B的核苷酸序列SEQ ID NO.2:5’-TTY CCM ASA AAR CMA TAM ARA ARM GGA TT-3′其中M=(A/C)Y=(C/T)R=(A/G)S=(G/C)K=(G/T)W=(A/T).
PCR反应中,HUVEC文库中的1微克cDNA与重组水生嗜热菌(Thermus aquaticus)(Taq)DNA聚合酶(Boehringer Mannheim,德国)以及每50微升反应体积中引物Ang3A和Ang3B各10pmol一起在热循环仪(Perkin Elmer 2400热循环仪,Perkin Elmer applied Biosystems,Weiterstadt)中温育。利用如下温度循环进行PCR反应:95℃ 20秒,38℃ 10秒及72℃ 20秒(60个循环)。扩增了一个长度为130碱基对(bp)的DNA片段。
将此130bp DNA片段连接入载体pCR 2.1 TOPO(Invitrogen BV,NV Leek,荷兰),转化至大肠杆菌Top10F’。利用毛细管电泳测序仪测定130bp DNA片段的序列存在于pCR 2.1中(ABI 310,appliedBiosystems,Weiterstadt)(SEQ ID NO.3)。
实施例2:
利用程序模块FASTA和TFASTA(University of Wisconsin GeneticsComputer Group(GCG),美国,软件包)将SEQ ID NO.3序列与含于公众可得数据库(如,EMBL和GenBank)的序列进行比较。此外,将该序列用于同包括在Incyte公司(Palo Alto,美国)Lifeseq数据库的序列进行相应的同源性比较。
与SEQ ID NO.3重叠的表达序列标记(EST)序列在Lifeseq数据库中得到鉴定(Lifeseq克隆号1458429,3341232,3440195,1250818,2836520,1310286和1362205)。基于由发明人订购重叠表达序列标记(EST)装配的序列合成了引物Ang4A和Ang4B。
Ang4A的核苷酸序列:SEQ ID NO.4:5’-TGG GGG TTG ATA CAG CAG AGA C-3′Ang4B的核苷酸序列:SEQ ID NO.5:5’-GCA CTG CCC TCT CTT TAT CCA AA-3’
每个PCR反应利用HUVEC文库中的0.1微克cDNA作为模板,每50微升反应体积中引物Ang4A和Ang4B各10pmol,以及AdvantagecDNA聚合酶混合物(Clontech,Heidelberg)进行。利用如下温度循环进行PCR反应:94℃ 30秒,60℃ 2分30秒(60个循环)。获得了一个长度为500bp的DNA片段。如实施例1所述将此片段克隆并测序。此序列拥有一个开放阅读框(ORF)。
实施例3:
合成了引物Ang5A和Ang5B用于阐明5’区的500bp的DNA片段。
Ang5A的核苷酸序列:
SEQ ID NO.7:5’-TGG GGA TTG ATA GGC AG-3’Ang5B的核苷酸序列:SEQ ID NO.8:5’-ATA ACT GTT GGA TTT CTC AA-3’
在每个情况中,Ang5A和Ang5B的核苷酸序列相应于500bpDNA片段的序列之一部分。在分别用M13反向和M13正向(-20)引物的进一步的PCR中使用了这两个引物。M13反向和M13正向(-20)引物相应于用来制备HUVEC cDNA文库的Uni-ZAP噬菌体载体之序列。这些PCR反应这样进行:每个情况中利用HUVEC文库中的0.1微克cDNA作为模板,引物Ang5A和Ang5B各10pmol,以及分别地,M13反向或M13正向(-20)引物(来自Topo-TA克隆试剂盒(Clontech))和Taq聚合酶(boehringer Mannheim)还有Taq StartTM抗体(Clontech)。利用如下温度循环进行PCR反应:96℃ 30秒,50℃ 30秒及72℃ 45秒(70个循环)。
由此得到了一个长度为660bp的DNA片段。如实施例1所述将此片段克隆并测序。此DNA片段拥有SEQ ID NO.9。SEQ ID NO.9序列含有完整的5’编码区。
除了前面已经描述的软件模块之外,GCG模块中的装配(Assemble)、绘图(Map)、翻译(Translate)、结构绘制(Plotstructure)、和比较(Pileup)均用于进行计算机辅助序列分析。
表1 SEQ ID NO.9
血管紧张肽受体核苷酸序列(部分)1 TCGTGTGTGA ACATCACAGG GTTTGTGGAT GCACTTAGAT GTTTGCAATG51 AGCACTGTGG CTGGCATGCC CCAGTGTTTT GGATACCAAT GCATAGGACT101 CCATAGTAAT CGAATTTACC AGAGGCGAAC GTCATGAGCA TAGTGATCCC151 ATTGGGGGTT GATACAGCAG AGACGTCATA CTTGGAAATG GCTGCAGGTT201 CAGAACCAGA ATCCGTAGAA GCTAGCCCTG TGGTAGTTGA GAAATCCAAC251 AGTTATCCCC ACCAGTTATA TACCAGCAGC TCACATCATT CACACAGTTA301 CATTGGTTTG CCCTATGCGG ACCATAATTA TGGTGCTCGT CCTCCTCCGA351 CACCTCCGGC TTCCCCTCCT CCATCAGTCC TTATTAGCAA AAATGAAGTA401 GGCATATTTA CCACTCCTAA TTTTGATGAA ACTTCCAGTG CTACTACAAT451 CAGCACATCT GAGGATGGAA GTTATGGTAC TGATGTAACC AGGTGCATAT501 GTGGTTTTAC ACATGATGAT GGATACATGA TCTGTTGTGA CAAATGCAGC551 GTTTGGCAAC ATATTGACTG CATGGGGATT GATAGGCAGC ATATTCCTGA601 TACATATCTA TGTGAACGTT GTCAGCCTAG GAATTTGGAT AAAGAGAGGG651 CAGTGCTACT表2 SEQ ID NO.10新受体氨基酸序列(部分)1 MSIVIPLGVDTAETSYLEMAAGSEPESVEASPVVVEKSNSYPHQLYTSSS51 HHSHSYIGLPYADHNYGARPPPTPPASPPPSVLISKNEVGIFTTPNFDET101 SSATTISTSEDGSYGTDVTRCICGFTHDDGYMICCDKCSVWQHIDCMGID151 RQHIPDTYLCERCQPRNLDKERAVL表3 SEQ ID NO.31 CTCCTCCATC AGTCCTTATT AGCAAAAATG AAGTAGGCAT ATTTACCACT51 CCTAATTTTG ATGAAACTTC CAGTGCTACT ACAACCAGAG CGAG表4 SEQ ID NO.61 ATTGGGGGTT GATACAGCAG AGACGTCATA CTTGGAAATG GCTGCAGGTT51 CAGAACCAGA ATCCGTAGAA GCTAGCCCTG TGGTAGTTGA GAAATCCAAC101 AGTTATCCCC ACCAGTTATA TACCAGCAGC TCACATCATT CACACAGTTA151 CATTGGTTTG cCCTATGCGG ACCATAATTA TGGTGCTCGT CCTCCTCCGA201 CACCTCCGGC TTCCCCTCCT CCATCAGTCC TTATTAGCAA AAATGAAGTA251 GGCATATTTA CCACTCCTAA TTTTGATGAA ACTTCCAGTG CTACTACAAT301 CAGCACATCT GAGGATGGAA GTTATGGTAC TGATGTAACC AGGTGCATAT351 GTGGTTTTAC ACATGATGAT GGATACATGA TCTGTTGTGA CAAATGCAGC401 GTTTGGCAAC ATATTGACTG CATGGGGATT GATAGGCAGC ATATTCCTGA451 TACATATCTA TGTGAACGTT GTCAGCCTAG GAATTTGGAT AAAGAGAGGG501 CAGTGCTACT
序列表(1)一般信息:(ⅰ)申请人:
(A)姓名:Hoechst Marion Roussel Deutschland GmbH
(B)街道:
(C)城市:Frankfurt
(D)联邦州:
(E)国家:德国
(F)邮政编码:65926
(G)电话:069-305-7072
(H)传真:069-35-7175
(I)电传:(ⅱ)发明题目:新血管紧张肽受体,其制备和用途(ⅲ)序列数目:10(ⅳ)计算机可读形式:
(A)介质类型:软盘
(B)计算机:IBM PC兼容机
(C)操作***:PC-DOS/MS-DOS
(D)软件:PatentIn Release#1.0,版本#1.30(EPO)(2)SEQ ID NO:1的信息:(ⅰ)序列特征:
(A)长度:32个碱基对
(B)类型:核苷酸
(C)链型:单链
(D)拓扑:线性(ⅱ)分子类型:基因组DNA(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:外显子(B)位置:1..32(D)其它信息:/注=“M=(A/C);Y=(C/T);R=(A/G);S=(G/C);K=(G/T);W=(A/T)”(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:1:TTGTKCTKKY CTTYWTCWTT TSCTGGMTTC CC 32(2)SEQ ID NO:2的信息:(ⅰ)序列特征:
(A)长度:29个碱基对
(B)类型:核苷酸
(C)链型:单链
(D)拓扑:线性(ⅱ)分子类型:基因组DNA(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:外显子
(B)位置:1..29
(D)其它信息:/注=“M=(A/C);Y=(C/T);R=(A/G);S=(G/C);K=(G/T);W=(A/T)”(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:2:TTYCCMASAA ARCMATAMAR AARMGGATT 29(2)SEQ ID NO:3的信息:(ⅰ)序列特征:
(A)长度:94个碱基对
(B)类型:核苷酸
(C)链型:单链 (D)拓扑:线性(ⅱ)分子类型:基因组DNA(ⅸ)特征:(A)名称/关键词:外显子(B)位置:1..94(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:3:CTCCTCCATC AGTCCTTATT AGCAAAAATG 30AAGTAGGCAT ATTTACCACT CCTAATTTTG 60ATGAAACTTC CAGTGCTACT ACAACCAGAG CGAG 94(2)SEQ ID NO:4的信息:(ⅰ)序列特征:
(A)长度:22个碱基对
(B)类型:核苷酸
(C)链型:单链
(D)拓扑:线性(ⅱ)分子类型:基因组DNA(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:外显子
(B)位置:1..22(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:4:TGGGGGTTGA TACAGCAGAG AC 22(2)SEQ ID NO:5的信息:(ⅰ)序列特征:
(A)长度:23个碱基对
(B)类型:核苷酸
(C)链型:单链
(D)拓扑:线性(ⅱ)分子类型:基因组DNA(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:外显子
(B)位置:1..23(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:5:GCACTGCCCT CTCTTTATCC AAA 23(2)SEQ ID NO:6的信息:(ⅰ)序列特征:
(A)长度:510个碱基对
(B)类型:核苷酸
(C)链型:单链
(D)拓扑:线性(ⅱ)分子类型:基因组DNA(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:外显子
(B)位置:1..510(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:6:ATTGGGGGTT GATACAGCAG AGACGTCATA CTTGGAAATG GCTGCAGGTT CAGAACCAGA 60ATCCGTAGAA GCTAGCCCTG TGGTAGTTGA GAAATCCAAC AGTTATCCCC ACCAGTTATA 120TACCAGCAGC TCACATCATT CACACAGTTA CATTGGTTTG CCCTATGCGG ACCATAATTA 180TGGTGCTCGT CCTCCTCCGA CACCTCCGGC TTCCCCTCCT CCATCAGTCC TTATTAGCAA 240AAATGAAGTA GGCATATTTA CCACTCCTAA TTTTGATGAA ACTTCCAGTG CTACTACAAT 300CAGCACATCT GAGGATGGAA GTTATGGTAC TGATGTAACC AGGTGCATAT GTGGTTTTAC 360ACATGATGAT GGATACATGA TCTGTTGTGA CAAATGCAGC GTTTGGCAAC ATATTGACTG 420CATGGGGATT GATAGGCAGC ATATTCCTGA TACATATCTA TGTGAACGTT GTCAGCCTAG 480GAATTTGGAT AAAGAGAGGG CAGTGCTACT 510(2)SEQ ID NO:7的信息:(ⅰ)序列特征:
(A)长度:17个碱基对
(B)类型:核苷酸
(C)链型:单链
(D)拓扑:线性(ⅱ)分子类型:基因组DNA(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:外显子
(B)位置:1..17(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:7:
TCGGGGATTGA TAGGCAG 17(2)SEQ ID NO:8的信息:(ⅰ)序列特征:
(A)长度:20个碱基对
(B)类型:核苷酸
(C)链型:单链
(D)拓扑:线性(ⅱ)分子类型:基因组DNA(ⅸ)特征:
(A)名称/关键词:外显子
(B)位置:1..20(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:8:
ATAACTGTTG GATTTCTCAA 20(2)SEQ ID NO:9的信息:(ⅰ)序列特征:
(A)长度:660个碱基对
(B)类型:核苷酸
(C)链型:单链
(D)拓扑:线性(ⅱ)分子类型:基因组DNA(ⅸ)特征:(A)名称/关键词:外显子(B)位置:1..660(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:9:TCGTGTGTGA ACATCACAGG GTTTGTGGAT GCACTTAGAT GTTTGCAATG AGCACTGTGG 60CTGGCATGCC CCAGTGTTTT GGATACCAAT GCATAGGACT CCATAGTAAT CGAATTTACC 120AGAGGCGAAC GTCATGAGCA TAGTGATCCC ATTGGGGGTT GATACAGCAG AGACGTCATA 180CTTGGAAATG GCTGCAGGTT CAGAACCAGA ATCCGTAGAA GCTAGCCCTG TGGTAGTTGA 240GAAATCCAAC AGTTATCCCC ACCAGTTATA TACCAGCAGC TCACATCATT CACACAGTTA 300CATTGGTTTG CCCTATGCGG ACCATAATTA TGGTGCTCGT CCTCCTCCGA CACCTCCGGC 360TTCCCCTCCT CCATCAGTCC TTATTAGCAA AAATGAAGTA GGCATATTTA CCACTCCTAA 420TTTTGATGAA ACTTCCAGTG CTACTACAAT CAGCACATCT GAGAATGGAA GTTATGGTAC 480TGATGTAACC AGGTGCATAT GTGGTTTTAC ACATGATGAT GGATACATGA TCTGTTGTGA 540CAAATGCAGC GTTTGGCAAC ATATTGACTG CATGGGGATT GATAGGCAGC ATATTCCTGA 600TACATATCTA TGTGAACGTT GTCAGCCTAG GAATTTGGAT AAAGAGAGGG CAGTGCTACT 660(2)SEQ ID NO:10的信息:(ⅰ)序列特征:
(A)长度:175个氨基酸
(B)类型:氨基酸
(C)链型:单链
(D)拓扑:线性(ⅱ)分子类型:蛋白质(ⅸ)特征:(A)名称/关键词:肽(B)位置:1..175(ⅹⅰ)序列描述:SEQ ID NO:10:Met Ser Ile Val Ile Pro Leu Gly Val Asp Thr Ala Glu Thr Ser Tyr1 5 10 15Leu Glu Met Ala Ala Gly Ser Glu Pro Glu Ser Val Glu Ala Ser Pro
20 25 30Val Val Val Glu Lys Ser Asn Ser Tyr Pro His Gln Leu Tyr Thr Ser
35 40 45Ser Ser His His Ser His Ser Tyr Ile Gly Leu Pro Tyr Ala Asp His
50 55 60Asn Tyr Gly Ala Arg Pro Pro Pro Thr Pro Pro Ala Ser Pro Pro Pro65 70 75 80Ser Val Leu Ile Ser Lys Asn Glu Val Gly Ile PheThr Thr Pro Asn
85 90 95Phe Asp Glu Thr Ser Ser Ala Thr Thr Ile Ser Thr Ser Glu Asp Gly
100 105 110Ser Tyr Gly Thr Asp Val Thr Arg Cys Ile Cys Gly Phe Thr His Asp
115 120 125Asp Gly Tyr Met Ile Cys Cys Asp Lys Cys Ser Val Trp Gln His Ile
130 135 140Asp Cys Met Gly Ile Asp Arg Gln His Ile Pro Asp Thr Tyr Leu Cys145 150 155 160Glu Arg Cys Gln Pro Arg Asn Leu Asp Lys Glu Arg Ala Val Leu
165 170 175
Claims (16)
1.一种拥有至少一个含有SEQ ID NO.10氨基酸序列之亚基的血管紧张肽受体。
2.权利要求1的血管紧张肽受体,其中SEQ ID NO.10氨基酸序列在C-末端可能进一步拥有其它氨基酸。
3.权利要求1和2中一项或多项的血管紧张肽受体,其中含有SEQ IDNO.10序列的亚基拥有跨膜结构域。
4.权利要求1-3中一项或多项的血管紧张肽受体,其中受体结合血管紧张肽1-7或血管紧张肽1-7的衍生物。
5.权利要求1-4中一项或多项的血管紧张肽受体,其中受体的至少一个亚基由带有SEQ ID NO.9序列的核酸编码,其中SEQ ID NO.9序列在3’末端可能含有属于编码序列的其它核苷酸。
6.一种制备拥有SEQ ID NO.9序列的核酸的方法,其中,在PCR反应中利用其序列相应于血管紧张肽受体AT1和AT2的核苷酸序列中同源性区之寡核苷酸为引物,利用从其中不表达AT1和AT2受体的细胞中制备的cDNA为模板。
7.一种制备权利要求1-5中一项或多项的血管紧张肽受体的方法,其中,将含有SEQ ID NO.9序列的核酸整合入适当的载体,将重组载体导入细胞,血管紧张肽受体表达在该细胞中。
8.含有SEQ ID NO.9序列的核酸在制备重组血管紧张肽受体的方法中的用途,所述方法中将在适当启动子控制下的核酸导入细胞并在该细胞中表达。
9.含有SEQ ID NO.9序列的核酸在制备重组细胞的方法中的用途,所述方法中血管紧张肽受体可被表达。
10.含有SEQ ID NO.9序列的核酸在制备药物中的用途,所述药物用于制备治疗和/或预防与心血管***、电解质平衡和/或体液平衡的调节紊乱相关的疾病。
11.含有SEQ ID NO.9序列的核酸在制备可用于基因治疗的药物中的用途。
12.含有SEQ ID NO.9序列的核酸在鉴定和表征可用作血管紧张肽受体的拮抗剂或激动剂之物质的方法中的用途。
13.如权利要求1-5中一项或多项的血管紧张肽受体在鉴定和表征血管紧张肽受体的拮抗剂或激动剂之方法中的用途。
14.一种鉴定和表征血管紧张肽受体的拮抗剂或激动剂之方法,其中将含有SEQ ID NO.9序列的核酸导入细胞且血管紧张肽受体在该细胞中表达,将该细胞与待研究的物质一起温育,测定此物质对血管紧张肽受体的作用。
15.一种包含带有SEQ ID NO.9序列的核酸之药物。
16.一种重组细胞,其通过将带有SEQ ID NO.9序列的核酸导入此细胞并在细胞中表达制备。
Applications Claiming Priority (2)
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Publications (1)
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