KR102476641B1 - 알츠하이머병의 치료 방법 - Google Patents

알츠하이머병의 치료 방법 Download PDF

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Abstract

ApoE4 양성 환자 및 경도 알츠하이머병 (AD)을 앓고 있는 환자를 비롯하여, 경도 내지 중등도 AD를 앓고 있는 환자에서 AD를 치료하는 방법이 제공된다. 또한, 항-A베타 항체를 사용한 치료를 위한 환자를 선택 또는 확인하는 방법이 제공된다. 방법은 예후 및/또는 예측 바이오마커의 사용을 포함한다.

Description

알츠하이머병의 치료 방법 {METHODS OF TREATING ALZHEIMER'S DISEASE}
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2014년 2월 8일에 출원된 미국 가출원 번호 61/937,472, 2014년 3월 27일에 출원된 미국 가출원 번호 61/971,499, 2014년 6월 10일에 출원된 미국 가출원 번호 62/010,265, 및 2014년 11월 19일에 출원된 미국 가출원 번호 62/082,013의 이익을 주장하며, 상기 출원의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
기술분야
아밀로이드 β를 표적화하는 항체를 사용하여 경도 내지 중등도 알츠하이머병을 앓고 있는 환자를 치료하는 방법이 제공된다. 또한, 아밀로이드 β를 표적화하는 항체를 사용한 치료를 위한 환자를 선택 또는 확인하는 방법이 제공된다. 방법은 예후 및/또는 예측 바이오마커의 사용을 포함한다.
알츠하이머병 (AD)은 미국에서 추정 4.5 백만명의 개체 및 세계적으로 26.6 백만명에게 영향을 미친, 치매의 가장 흔한 원인이다 (Hebert et al., Arch. Neurol. 2003; 60:1119-22; Brookmeyer et al., Alzheimers Dement. 2007; 3:186-91). 상기 질환은 병리학적으로 뇌에서의 세포외 β-아밀로이드 ("Aβ") 플라크의 축적 및 세포내 신경원섬유 엉킴을 특징으로 한다. 진단은 AD의 신경 및 신경정신 징후 및 증상의 임상 평가 및 치매의 다른 원인의 제외를 통해 이루어진다. AD는 통상적으로 간단한 인지 스크리닝 검사, 간이-정신 상태 검사 ("MMSE")에 의해 경도, 중등도 및 중증 병기로 분류된다. 뇌 내에서 아세틸콜린에스테라제 ("AChE") 활성을 억제하거나 N-메틸-D-아스파르테이트 수용체에 길항작용하는 승인된 의료 요법은 일부 환자에서 AD의 증상을 일시적으로 개선시킬 수 있지만, 질환의 진행을 변형시키지는 못한다 (Cummings, N. Engl. J. Med. 2004; 351:56-67).
초기- 및 후기-발병 가족성 AD에서의 유전 인자는 현재 널리 문서화되어있다. ApoE4 대립유전자는 후기-발병 가족성 및 산발성 AD와 강력하게 연관되고, 보고된 대립유전자 빈도가 AD에 걸린 환자에서 50%-65%로, 이는 일반 집단 및 다른 신경계 장애에 대한 것의 대략 3배이다 (Saunders et al., Neurology 1993; 43:1467-72,; Prekumar et al., Am. J. Pathol. 1996; 148:2083-95). AD에 더하여, ApoE4 대립유전자는 뇌 아밀로이드 혈관병증 ("CAA")을 비롯한 다른 아밀로이드-형성 장애에 연루되어 왔다 (Prekumar et al., Am. J. Pathol. 1996; 148:2083-95). 따라서, ApoE4 대립유전자를 보유하는 환자는 병인적으로 별개의 AD에 걸린 환자 집단을 나타낼 수 있다.
뇌내 세포외 아밀로이드 플라크의 침착은 AD에서의 특징적인 병리학적 발견으로, 1906년에 알로이스 알츠하이머(Alois Alzheimer)에 의해 처음 보고되었다. 이들 아밀로이드 플라크는 β 및 γ-세크레타제 활성을 통한 아밀로이드 전구체 단백질 ("APP")의 순차적 절단에 의해 생성되는 A베타 펩티드로 주로 구성된다 (Haass and Selkoe, Nature 2007; 8:656-67). A베타는, 특히 그의 올리고머화 형태에서, 뉴런에 독성이고, AD의 원인인 것으로 여겨진다. 뇌내 A베타 수준을 감소시키는 요법은 인지 기능장애를 완화시키고, 추가의 시냅스 상실, 축삭 변성 및 뉴런 세포 사멸을 차단할 수 있다. A베타는 혈액-뇌 장벽을 가로질러 능동 수송될 수 있다 (Deane et al., Stroke 2004; 35(Suppl I):2628-31). AD의 뮤린 모델에서, A베타에 대한 항체의 전신 전달은, 뇌 A베타 플라크의 용해, 옵소닌화 A베타의 식세포 제거, 및 최종적으로 순환 항체로부터 생성된 A베타의 평형 이동의 결과로서 뇌로부터 A베타의 유출을 통하는 것을 비롯한 여러 제안되는 메카니즘을 통해, 중추 신경계 (CNS)에서 A베타 수준을 감소시키는 한편 혈장에서 그의 수준을 증가시킨다 (Morgan, Neurodegener. Dis. 2005; 2:261-6).
유의한 실패는 AD의 치료를 위한 치료 항체의 개발에 오점을 남겼다. A베타의 N-말단 부분에 특이적으로 결합하는 항체인 바피뉴주맙의 대규모 3상 임상 시험은 약물의 투여가 치료된 환자에서 인지 저하를 정지시키는데 실패했을때 중단되었다 (Miles et al., Scientific Reports 2013; 3:1-4 Johnston & Johnson press release dated August 6, 2012, entitled "Johnson & Johnson Announces Discontinuation of Phase 3 Development of Bapineuzumab Intravenous (IV) in Mild-To-Moderate Alzheimer's Disease"). 주목할 것으로, 바피뉴주맙은 플라크 수준을 안정화시키는 것으로 보이지 않았고, 뇌척수액 내 인산화 타우 수준을 감소시켰고 - 이는 이들 바이오마커 단독의 변형이 반드시 임상 효능을 예측하게 하지 않음을 시사한다 (Miles et al., Scientific Reports 2013; 3:1-4). 유사하게, 펩티드의 중간 부분에 결합하는 단량체 A베타에 대한 특이적 항체인 솔라네주맙의 3상 임상 시험에서, 1차 인지 및 기능 종점이 충족되지 않았다 (Eli Lilly and Company press release dated August 24, 2012, "Eli Lilly and Company Aanounces Top-Line Results on Solanezumab Phase 3 Clinical Trials in Patients with Alzheimer's Disease"). AD에 대한 특정 면역요법의 조사 동안 안전성 우려가 또한 발생되었다; 예를 들어, 바피뉴주맙의 2상 임상 시험에서 아밀로이드-관련 영상화 이상 (ARIA-E 및 ARIA-H)의 발생률이 약물-치료된 환자 중 20%를 초과하였다 (Sperling et al., The Lancet 2012; 11:241-249). 65세 초과에서 9명의 사람 중 1명이 AD에 걸린 것으로 추정되고 -- AD를 앓는 개체에 의한 및 그를 대신한 건강 관리, 장기간 관리 및 호스피스 관리를 위한 총합 연간 비용은 2013년에 $2000억을 초과하였고, (이환된 개체에 의해 및 그를 대신하여) 2050년까지 $1.2조로 상승할 것으로 추정된다 (Alzheimer's Association 2013 Alzheimer's Disease Facts and Figures, Alzheimer's and Dementia 9:2). AD는 2013년 현재 미국에서 6번째 주요 사망 원인이다 (id.). 현행의 승인된 요법은 AD의 증상 중 단지 일부 만을 다루고, 기저 변성은 다루지 않는다. AD에 대한 질환-조절 요법 및 AD에 대한 질환-조절 요법에 반응할 가능성이 있는 환자의 확인에 도움이 되는 도구에 대한 큰 미충족 필요가 존재한다.
크레네주맙 (MABT5102A로도 공지됨)은 시험관내에서 A베타의 단량체 및 올리고머 형태 둘 다에 결합하는 그의 능력으로 인해 선택된, A베타에 대한 전장 인간화 IgG4 모노클로날 항체이다. 크레네주맙은 A베타1-40 및 A베타 1-42 둘 다에 결합하고, A베타 응집을 억제하고, A베타 분해를 촉진한다. 크레네주맙이 인간 IgG4 백본 항체이기 때문에, 이는 인간 IgG1 또는 IgG2와 비교하여 감소된 Fcγ 수용체 ("FcλR") 결합 친화도를 갖고, 이는 감소된 면역 이펙터 반응을 예측하게 한다. 이들 특성은, 전신 전달된 크레네주맙이 AD의 뮤린 모델에서 A베타 CNS 수준을 감소시키는 능력과 조합되어, 이러한 항-A베타 치료 접근법이 독성 위험을 감소시키는 한편 임상 효능을 제공할 수 있음을 시사하고, 이전에 다른 A베타 항체 요법의 임상 시험에서 관찰된 바 있는 잠재적으로 유해한 부작용, 예컨대 뇌 혈관성 부종 또는 출혈의 보다 낮은 위험과 함께 AD의 질환 진행을 잠재적으로 조절할 수 있다.
본원에 기재된 AD에 걸린 환자에서의 2상 임상 연구의 결과는 크레네주맙이 실제로 경도 내지 중등도 AD에서 질환의 진행을 감속시키고, ApoE4 양성 환자 및 경도 AD를 앓고 있는 환자에서 보다 더 강력한 효과를 갖고, 가장 경도의 AD에 걸린 환자에서 최대 치료 이익을 나타냄을 입증한다. 게다가, AD로 진단된 환자에서 전형적으로 관찰되는 뇌 아밀로이드 로드를 갖는 환자에서 효과가 관찰된다. 추가적으로, 결과는 이들 효과가 ARIA-E 및 ARIA-H와 같은 유해 사건의 유의한 발생률의 부재 하에 일어남을 입증한다. 본 출원은 따라서 경도 내지 중등도 AD, 특히 경도 AD로 진단된 환자, 및 ApoE4 양성 환자, 뿐만 아니라 AD로 진단된 환자에서 전형적으로 관찰되는 뇌 아밀로이드 축적을 갖는 환자를 치료 및 모니터링하는 방법을 제공한다. 본원에 예시된 바와 같이, 아밀로이드 베타 (Aβ) 펩티드의 중간 영역에 특이적인 입체형태적 에피토프와의 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 항체 (즉, 아미노산 13-24 내, 예컨대 크레네주맙)가 경도 내지 중등도 AD, 특히 ApoE4 양성 환자 및 보다 경도의 형태의 AD, 예컨대 비제한적으로 경도 AD에 걸린 환자를, ARIA-E 또는 ARIA-H의 증가된 발생률 없이 치료하는데 유효하다는 것이 본 발명에 이르러 밝혀졌다. 따라서, 본 출원은 AD의 중증도를 조정하기 위한 치료제 및 그를 사용하는 개선된 방법을 제공한다.
따라서, 본 출원은 아밀로이드 β (1-42) (서열식별번호(SEQ ID NO): 1)의 잔기 13과 24 내에 결합하는 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ 또는 A베타) 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함하는, AD 및 다른 아밀로이드증을 앓고 있는 환자를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 A베타의 원섬유, 올리고머, 및 단량체 형태에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 IgG4 항체이다. 특정한 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 6개의 초가변 영역 (HVR)을 포함하며, 여기서 HVR-H1은 서열식별번호: 2이고, HVR-H2는 서열식별번호: 3이고, HVR-H3은 서열식별번호: 4이고, HVR-L1은 서열식별번호: 6이고, HVR-L2는 서열식별번호: 7이고, HVR-L3은 서열식별번호: 8이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 중쇄 가변 영역을 포함하는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄, 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다. 구체적 예에서, 항체는 크레네주맙이다.
본원에 제공된 치료 방법은 AD 또는 본원에 추가로 기재된 바와 같은 다른 아밀로이드증을 앓고 있는 환자에게 적용될 수 있다. 적합한 환자는 경도 내지 중등도 AD를 앓고 있는 환자, MMSE 스코어 18 내지 26을 갖는 환자, 경도 AD를 앓고 있는 환자, MMSE 스코어 20 이상 (예를 들어, 20-30, 20-26, 24-30, 21-26, 22-26, 22-28, 23-26, 24-26, 또는 25-26)을 갖는 환자, 초기 AD를 앓고 있는 환자 (AD로 인한 경도 인지 장애를 갖는 환자 및 전임상 AD에 걸린 환자 포함), 아밀로이드 양성 환자 (또는 AD로 진단된 환자에서 관찰되는 것과 일치하는 뇌 아밀로이드 로드를 갖는 환자), 및 경도 내지 중등도 또는 경도 AD를 앓고 있는 ApoE4 양성 환자를 포함한다.
일부 측면에서, 본원에 제공된 방법은 초기, 경도, 또는 경도 내지 중등도 AD를 앓고 있는 환자에서 AD로 인한 저하를 감소시키는 방법이다. 일부 실시양태에서, 저하는 임상 저하, 인지 저하, 및 기능 저하 중 1종 이상이다. 일부 실시양태에서, 저하는 임상 저하이다. 일부 실시양태에서, 저하는 인지 능력의 저하 또는 인지 저하이다. 일부 실시양태에서, 저하는 기능 능력에서의 저하 또는 기능 저하를 포함한다. 인지 능력 (기억 포함) 및/또는 기능을 측정하기 위한 다양한 시험 및 척도가 개발되어 있다. 다양한 실시양태에서, 1종 이상의 시험을 사용하여 임상, 기능 또는 인지 저하를 측정한다. 인지 능력의 표준 측정은 알츠하이머병 평가 척도 인지 (ADAS-Cog) 시험, 예를 들어 12-항목 ADAS-Cog 또는 ADAS-Cog12이다. 따라서, 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체로 치료된 환자에서 인지 능력의 저하 (또는 인지 저하)의 감소 또는 감속은 ADAS-Cog12 시험을 사용하여 결정된다. ADAS-Cog12 스코어의 증가는 환자의 상태의 악화를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체로 치료된 환자에서 인지 저하 (또는 인지 능력의 저하)의 감소 또는 감속은 임상 치매 등급화 척도 / 박스의 합 (CDR-SOB) 스코어에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체로 치료된 환자에서 기능 저하 (또는 기능 능력의 저하)의 감소 또는 감속은 수단적 일상 생활 활동 (또는 iADL) 척도를 사용하여 결정된다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 유형의 저하가 평가되고, 상기 시험 또는 척도 중 1종 이상이 저하의 감소 또는 감속을 측정하기 위해 사용된다.
본 발명의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 AD 또는 본원에 기재된 바와 같은 다른 아밀로이드증을 치료하는데 유효한 용량으로 투여된다. 적합한 투여량이 본원에 기재되어 있고, 약 0.3 mg/kg 내지 100 mg/kg의 범위일 수 있다. 예시적 실시양태에서, 투여량은 15 mg/kg이다. 추가의 예시적 실시양태에서, 투여량은 30 mg/kg이다. 추가의 예시적 실시양태에서, 투여량은 45 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 투여량은 500 mg 내지 1000mg, 예를 들어 500 mg, 700 mg, 720 mg, 750 mg, 800 mg, 820 mg, 900 mg, 또는 1000 mg 내지 2500 mg, 예를 들어 1050 mg, 1500 mg, 또는 2100 mg이다. 본원에 제공된 방법에서, 항체가 연장된 시간 기간, 예를 들어 수개월 내지 수년에 걸쳐 반복적으로, 예를 들어 매주 또는 매월 스케줄로 투여되는 투여 요법을 비롯하여, 다양한 투여 요법이 고려된다.
본 개시내용의 인간화 모노클로날 항-A베타 항체는 ARIA-E 및 ARIA-H와 같은 유해 사건의 발생률을 증가시키지 않는다는 점에서 추가의 이익을 제공한다. 본원에 제시된 바와 같이, 위약 부문 대비 치료 부문에서 이들 유해 사건의 어떠한 증가도 존재하지 않았다. 따라서, 본 개시내용은 ARIA-E 및/또는 ARIA-H와 같은 유해 사건의 발생률을 증가시키지 않으면서 경도 내지 중등도 AD 또는 경도 AD를 앓고 있는 환자를 치료하는 방법을 추가로 제공한다.
유전자 변이체의 탐색적 분석은 클루스테린 (CLU 또는 클루스테린(CLUSTERIN)) 유전자 내 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP)과 치료 효과 사이의 연관성을 밝혀내었다. 본원에 제시된 바와 같이, 크레네주맙은 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T를 갖는 CLU 대립유전자가 없는 환자 대비 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T를 갖는 적어도 1개의 CLU 대립유전자를 보유하는 환자에서 위약 대비 더 큰 치료 효과를 가졌다. 효과는 경도 AD에 걸린 환자에서 뿐만 아니라 ApoE4 양성 환자에서 관찰되었다.
따라서, 한 측면에서, 본 출원은 초기 AD, 경도 AD, 또는 경도 내지 중등도 AD를 앓고 있는 환자에게 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 AD를 치료하는데 유효한 양으로 투여하는 것을 포함하는, 초기, 경도 내지 중등도, 또는 경도 AD에 걸린 환자를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 환자는 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T를 포함하는 적어도 1개의 클루스테린 대립유전자 또는 그의 등가 대립유전자를 갖는다. 일부 실시양태에서, 클루스테린 대립유전자는 등가 대립유전자이다.
일부 실시양태에서, 클루스테린 대립유전자는 rs1532278과 연관 불평형이다. 일부 실시양태에서, 등가 대립유전자는 rs1532278과 연관 불평형인 SNP를 포함한다. 일부 실시양태에서, 연관 불평형은 D' 척도 또는 r2 척도이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 D' 척도는 ≥ 0.60이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 D' 척도는 ≥ 0.70, 0.80 또는 0.90이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 D' 척도는 1.0이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 r2 척도는 ≥ 0.60이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 r2 척도는 ≥ 0.70, 0.80 또는 0.90이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 r2 척도는 1.0이다.
본원에 제공된 바와 같이, AD 및 다른 아밀로이드증을 앓고 있는 환자를 치료하는 방법은 아밀로이드 β (1-42) (서열식별번호: 1)의 잔기 13과 24 내에 결합하는 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ 또는 A베타) 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 A베타의 원섬유, 올리고머, 및 단량체 형태에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 IgG4 항체이다. 특정한 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 6개의 초가변 영역 (HVR)을 포함하며, 여기서 HVR-H1은 서열식별번호: 2이고, HVR-H2는 서열식별번호: 3이고, HVR-H3은 서열식별번호: 4이고, HVR-L1은 서열식별번호: 6이고, HVR-L2는 서열식별번호: 7이고, HVR-L3은 서열식별번호: 8이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 중쇄 가변 영역을 포함하는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄, 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다. 구체적 예에서, 항체는 크레네주맙이다.
본 발명의 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 AD 또는 본원에 기재된 바와 같은 다른 아밀로이드증을 치료하는데 유효한 용량으로 투여된다. 적합한 투여량은 본원에 기재되어 있고, 약 0.3 mg/kg 내지 100 mg/kg의 범위일 수 있다. 예시적 실시양태에서, 투여량은 15 mg/kg이다. 추가의 예시적 실시양태에서, 투여량은 30 mg/kg이다. 추가의 예시적 실시양태에서, 투여량은 45 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 투여량은 500 mg 내지 1000mg, 예를 들어 500 mg, 700 mg, 720 mg, 750 mg, 800 mg, 820 mg, 900 mg, 또는 1000 mg 내지 2500 mg, 예를 들어 1050 mg, 1500 mg, 또는 2100 mg이다. 본원에 제공된 방법에서, 항체가 연장된 시간 기간, 예를 들어 수개월 내지 수년에 걸쳐 반복적으로, 예를 들어 매주 또는 매월 스케줄로 투여되는 투여 요법을 비롯하여, 다양한 투여 요법이 고려된다.
본원에 제공된 치료 방법은 AD 또는 본원에 추가로 기재된 바와 같은 다른 아밀로이드증을 앓고 있는 환자에게 적용될 수 있다. 적합한 환자는 경도 내지 중등도 AD를 앓고 있는 환자, MMSE 스코어 18 내지 26을 갖는 환자, 경도 AD를 앓고 있는 환자, MMSE 스코어 20 이상 (예를 들어, 20-30, 20-26, 24-30, 21-26, 22-26, 22-28, 23-26, 24-26, 또는 25-26)을 갖는 환자, 초기 AD를 앓고 있는 환자 (AD로 인한 경도 인지 장애를 갖는 환자 및 전임상 AD에 걸린 환자 포함), 아밀로이드 양성 환자 (또는 AD로 진단된 환자에서 관찰되는 것과 일치하는 뇌 아밀로이드 로드를 갖는 환자), 및 경도 내지 중등도 또는 경도 AD를 앓고 있는 ApoE4 양성 환자를 포함한다.
또한, 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 사용한 치료로부터 이익을 얻을 가능성이 있는 환자를 확인하는 방법 뿐만 아니라 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 사용한 치료를 위한 환자를 선택하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 환자로부터의 샘플에서 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T를 갖는 클루스테린 대립유전자 또는 그의 등가 대립유전자의 존재 또는 부재를 검출하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 환자를 확인하는 방법은 환자로부터의 샘플에서 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 사용한 치료에 대한 반응을 예측하게 하는 다형성을 포함하는 클루스테린 대립유전자의 존재를 검출하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T가 환자로부터의 샘플에 존재하는 경우에, 환자를 상기 치료에 반응할 가능성이 더 큰 것으로서 선택하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 클루스테린 대립유전자는 등가 대립유전자이다. 일부 실시양태에서, 클루스테린 대립유전자는 rs1532278과 연관 불평형이다. 일부 실시양태에서, 등가 대립유전자는 rs1532278과 연관 불평형인 SNP를 포함한다. 일부 실시양태에서, 연관 불평형은 D' 척도 또는 r2 척도이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 D' 척도는 ≥ 0.60이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 D' 척도는 ≥ 0.70, 0.80 또는 0.90이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 D' 척도는 1.0이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 r2 척도는 ≥ 0.60이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 r2 척도는 ≥ 0.70, 0.80 또는 0.90이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 r2 척도는 1.0이다.
일부 실시양태에서, 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ 또는 A베타) 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 아밀로이드 β (1-42) (서열식별번호: 1)의 잔기 13과 24 내에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 A베타의 원섬유, 올리고머, 및 단량체 형태에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 IgG4 항체이다. 특정한 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 6개의 초가변 영역 (HVR)을 포함하며, 여기서 HVR-H1은 서열식별번호: 2이고, HVR-H2는 서열식별번호: 3이고, HVR-H3은 서열식별번호: 4이고, HVR-L1은 서열식별번호: 6이고, HVR-L2는 서열식별번호: 7이고, HVR-L3은 서열식별번호: 8이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 중쇄 가변 영역을 포함하는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄, 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다. 구체적 예에서, 항체는 크레네주맙이다. 일부 실시양태에서, 항체는 솔라네주맙, 바피뉴주맙, 아두카누맙 및 간테네루맙으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
한 측면에서, 본 개시내용은 AD를 앓고 있는 개체가 항-A베타 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 치료에 반응할 가능성이 있는지 여부를 예측하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체로부터의 샘플에서 SNP rs1532278에서의 뉴클레오티드의 정체를 결정하는 단계, 및 샘플이 SNP rs1532278에서 T 뉴클레오티드를 갖는 적어도 1개의 대립유전자 또는 그의 등가 대립유전자를 함유하는 경우에, 항-A베타 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 치료에 반응할 증가된 가능성을 예측하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 등가 대립유전자는 rs1532278과 연관 불평형인 SNP를 포함한다. 일부 실시양태에서, 연관 불평형은 D' 척도 또는 r2 척도이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 D' 척도는 ≥ 0.60이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 D' 척도는 ≥ 0.70, 0.80 또는 0.90이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 D' 척도는 1.0이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 r2 척도는 ≥ 0.60이다. 일부 실시양태에서 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 r2 척도는 ≥ 0.70, 0.80 또는 0.90이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 r2 척도는 1.0이다.
일부 실시양태에서, 항-A베타 항체는 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ 또는 A베타) 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ 또는 A베타) 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 아밀로이드 β (1-42) (서열식별번호: 1)의 잔기 13과 24 내에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 A베타의 원섬유, 올리고머, 및 단량체 형태에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 IgG4 항체이다. 특정한 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 6개의 초가변 영역 (HVR)을 포함하며, 여기서 HVR-H1은 서열식별번호: 2이고, HVR-H2는 서열식별번호: 3이고, HVR-H3은 서열식별번호: 4이고, HVR-L1은 서열식별번호: 6이고, HVR-L2는 서열식별번호: 7이고, HVR-L3은 서열식별번호: 8이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 중쇄 가변 영역을 포함하는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄, 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다. 구체적 예에서, 항체는 크레네주맙이다. 일부 실시양태에서, 항체는 솔라네주맙, 바피뉴주맙, 아두카누맙 및 간테네루맙으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
한 측면에서, 본 개시내용은 환자의 유전자형을 결정하는 것을 포함하는 AD의 치료에 대한 치료 효능을 최적화하는 방법을 제공하며, 여기서 SNP rs1532278에서 T 뉴클레오티드를 갖는 적어도 1개의 클루스테린 대립유전자 또는 그의 등가 대립유전자를 보유하는 것으로 결정된 환자는 항-A베타 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 사용한 치료에 반응할 가능성이 더 크다. 일부 실시양태에서, 클루스테린 대립유전자는 등가 대립유전자이다. 일부 실시양태에서, 클루스테린 대립유전자는 rs1532278과 연관 불평형이다. 일부 실시양태에서, 등가 대립유전자는 rs1532278과 연관 불평형인 SNP를 포함한다. 일부 실시양태에서, 연관 불평형은 D' 척도 또는 r2 척도이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 D' 척도는 ≥ 0.60이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 D' 척도는 ≥ 0.70, 0.80 또는 0.90이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 D' 척도는 1.0이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 r2 척도는 ≥ 0.60이다. 일부 실시양태에서 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 r2 척도는 ≥ 0.70, 0.80 또는 0.90이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 r2 척도는 1.0이다.
일부 실시양태에서, 항-A베타 항체는 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ 또는 A베타) 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 일부 실시양태에서, 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ 또는 A베타) 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 아밀로이드 β (1-42) (서열식별번호: 1)의 잔기 13과 24 내에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 A베타의 원섬유, 올리고머, 및 단량체 형태에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 IgG4 항체이다. 특정한 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 6개의 초가변 영역 (HVR)을 포함하며, 여기서 HVR-H1은 서열식별번호: 2이고, HVR-H2는 서열식별번호: 3이고, HVR-H3은 서열식별번호: 4이고, HVR-L1은 서열식별번호: 6이고, HVR-L2는 서열식별번호: 7이고, HVR-L3은 서열식별번호: 8이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 중쇄 가변 영역을 포함하는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄, 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다. 구체적 예에서, 항체는 크레네주맙이다. 일부 실시양태에서, 항체는 솔라네주맙, 바피뉴주맙, 아두카누맙 및 간테네루맙으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본원에 제공된 방법은 클루스테린 대립유전자 또는 그의 등가 대립유전자의 존재를 검출하는 단계 및/또는 그의 정체를 결정하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 개체에서 클루스테린 대립유전자의 존재는 개체로부터의 샘플로부터 제공된 핵산으로부터의 다형성에서 뉴클레오티드의 정체를 결정하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산 샘플은 DNA를 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산 샘플은 RNA를 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산 샘플은 증폭된다. 일부 실시양태에서, 핵산 샘플은 폴리머라제 연쇄 반응에 의해 증폭된다. 일부 실시양태에서, 다형성은 폴리머라제 연쇄 반응 또는 서열분석에 의해 검출된다. 일부 실시양태에서, 다형성은 적어도 1개의 다형성을 함유하는 표적 영역의 증폭, 및 엄격한 조건 하에 적어도 1개의 다형성에 혼성화하는 적어도 1개의 서열-특이적 올리고뉴클레오티드와의 혼성화, 및 혼성화의 검출에 의해 검출된다. 일부 실시양태에서, 다형성은 스캐닝 프로브 및 나노포어 DNA 서열분석, 파이로시퀀싱, 변성 구배 겔 전기영동 (DGGE), 시간 온도 구배 전기영동 (TTGE), Zn(II)-사이클렌 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 균질 형광 PCR-기반 단일 뉴클레오티드 다형성 분석, 포스페이트-친화도 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 고처리량 SNP 유전자형 결정 플랫폼, 분자 비콘, 5' 뉴클레아제 반응, 택맨 검정, 매스어레이 (매트릭스-보조 레이저 탈착/이온화 비행 시간 질량 분광측정법과 커플링된 단일 염기 프라이머 연장), 트리틸 질량 태그, 유전자형 결정 플랫폼 (예컨대, 인베이더 어세이(Invader Assay)®), 단일 염기 프라이머 연장 (SBE) 검정, PCR 증폭 (예를 들어, 자기 나노입자 (MNP) 상에서의 PCR 증폭, PCR 산물의 제한 효소 분석 (RFLP 방법), 대립유전자-특이적 PCR, 다중 프라이머 연장 (MPEX), 및 등온 smart 증폭으로 이루어진 군으로부터 선택된 기술에 의해 검출된다. 일부 실시양태에서, 환자에서 다형성에서의 뉴클레오티드의 정체는 유전자형 결정을 통해 결정된다. 일부 실시양태에서 유전자형 결정은 PCR 분석, 서열 분석 또는 LCR 분석에 의해 수행된다.
본원에 개시된 방법을 수행하는데 적합한 샘플이 제공된다. 따라서, 일부 실시양태에서, 샘플은 게놈 DNA가 단리될 수 있는 임의의 생물학적 샘플, 예를 들어 비제한적으로 조직 샘플, 타액 샘플, 협부 스왑 샘플, 혈액, 또는 게놈 DNA를 함유하는 다른 생물학적 유체이다. 일부 실시양태에서, 샘플은 DNA를 포함한다. 일부 실시양태에서, 샘플은 RNA를 포함한다.
본 개시내용은 추가로 본원에 개시된 치료 방법에 사용하기에 적합한 제약 제제를 제공한다. 제약 제제는 임의의 편리한 투여 경로, 예를 들어 비경구 또는 정맥내 주사를 위해 제제화될 수 있고, 전형적으로 본 개시내용의 항-A베타에 더하여, 목적하는 투여 방식에 적합한 1종 이상의 허용되는 담체, 부형제 및/또는 희석제를 포함할 것이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 정맥내 투여를 위해 제제화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 아르기닌 완충제, 예를 들어 아르기닌 숙시네이트 완충제 중에 제제화될 수 있다. 완충제는 1종 이상의 계면활성제, 예를 들어 폴리소르베이트를 함유할 수 있다. 특정 실시양태에서, 완충제 농도는 50 mM 이상이다. 일부 실시양태에서, pH는 4.5 내지 7.0, 예를 들어, pH 5.5이다. 추가 실시양태가 본원에 기재되어 있다. 제약 제제는 사용이 용이하도록 단위 투여 형태로 포장될 수 있다.
AD 또는 본원에 기재된 바와 같은 다른 아밀로이드증의 치료를 위한 항-A베타 항체를 사용한 치료는 크레네주맙 이외의 1종 이상의 항-A베타 항체를 비롯한 다른 요법과 조합될 수 있다. 다른 요법의 비제한적 예는 신경계 약물, 코르티코스테로이드, 항생제 및 항바이러스제를 포함한다. 크레네주맙 이외의 항-A베타 항체의 비제한적 예는 솔라네주맙, 바피뉴주맙, 아두카누맙 및 간테네루맙을 포함한다.
또한, 클루스테린 대립유전자의 존재를 결정하기 위한 키트가 본원에 제공된다. 한 측면에서, 본 개시내용은 클루스테린에서 적어도 1개의 다형성의 존재를 검출하기 위한 시약 및 지침서를 포함하는, 생물학적 샘플에서 적어도 1개의 다형성의 존재를 결정하기 위한 키트를 제공하며, 여기서 다형성은 SNP rs1532278을 포함하는 대립유전자 또는 등가 대립유전자이다. 시약 및 키트의 사용 방법은 본원에 추가로 기재되어 있다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 작용제, 및 항-A베타 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 요법에 반응할 가능성이 있는 초기 또는 경도 내지 중등도 AD에 걸린 환자를 확인하기 위한 이러한 작용제의 시험관내 용도를 제공하며, 여기서 예를 들어 클루스테린에서의 상기 다형성의 존재는 환자가 요법에 반응할 가능성이 더 크다는 것을 확인시켜 준다. 따라서, 이러한 방법에 사용하기 위한 작용제는 SNP rs1532278에서 T 뉴클레오티드를 갖는 클루스테린 대립유전자 또는 그의 등가 대립유전자를 검출할 수 있는 작용제를 포함한다.
도 1은 아미노산 13 내지 24가 밑줄로 표시된 A베타(1-42) (서열식별번호: 1)의 아미노산 서열을 제공한다.
도 2는 3개의 중쇄 초가변 영역 (각각 HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H3)의 아미노산 서열 및 3개의 경쇄 영역 (각각 HVR-L1, HVR-L2, HVR-L3)의 아미노산 서열을 제공한다.
도 3은 크레네주맙의 서열식별번호: 5의 아미노산 1 내지 112에 걸친 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 (서열식별번호: 5), 및 서열식별번호: 9의 아미노산 1 내지 112에 걸친 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄 (서열식별번호: 9)의 아미노산 서열을 제공한다. 서열식별번호: 5 및 9에서 밑줄은 각각 서열식별번호: 2-4에 상응하는 3개의 중쇄 HVR 및 서열식별번호: 6-8에 상응하는 3개의 경쇄 HVR의 아미노산 서열을 나타낸다.
도 4a-b는 각각의 부문 (치료 대 위약)에 등록된 환자의 수, ApoE4 상태 (ApoE4 음성/ ApoE4 양성), AD의 병기 (경도 또는 중등도), 및 스크리닝 시 MMSE 스코어, AD 증상에 대한 병행 요법의 존재 및 유형 (콘메드 사용)을 표로 제시한, 실시예 1에 기재된 임상 시험에 등록된 환자의 요약을 제공한다.
도 5는 투여 스케줄, 양 및 경로를 보여주는, 실시예 1에 기재된 임상 시험의 개략도를 제공한다.
도 6a-b는 치료 부문 및 위약 부문에서의 기준선 대비 73주에 ADAS-Cog12 스코어에서의 변화를 보여주는 데이터 표를 제공한다. 도 6a는 경도 내지 중등도 AD, 경도 AD, 중등도 AD에 걸린 환자, 및 ApoE4 양성 및 음성 환자에 대한 데이터를 제공한다. 도 6b는 MMSE 스코어에 따른 환자에 대한 데이터를 제공한다.
도 7은 크레네주맙 (진한 실선) 또는 위약 (연한 실선)으로 치료된, MMSE 스코어 20 내지 26을 갖는 경도 AD에 걸린 환자에 대한 ADAS-Cog12 스코어에서의 변화의 차트를 제공한다.
도 8은 크레네주맙 (진한 실선) 또는 위약 (연한 실선)으로 치료된, MMSE 스코어 18 내지 26을 갖는 경도 내지 중등도 AD에 걸린 환자에 대한 ADAS-Cog12 스코어에서의 변화의 차트를 제공한다.
도 9는 크레네주맙 (진한 실선) 또는 위약 (연한 실선)으로 치료된, 경도-내지-중등도 AD에 걸린 ApoE4 양성 환자에 대한 ADAS-Cog12 스코어에서의 변화의 차트를 제공한다.
도 10은 크레네주맙 (진한 실선) 또는 위약 (연한 실선)으로 치료된, 모든 ApoE4 양성 환자 및 경도 AD에 걸린 환자에 걸친 ADAS-Cog12 스코어에서의 변화의 차트를 제공한다.
도 11은 크레네주맙 또는 위약으로 치료된, MMSE 스코어 22 내지 26을 갖는 경도 AD에 걸린 환자에 대한 ADAS-Cog12 스코어에서의 변화의 차트를 제공한다.
도 12a-b는 치료 부문 및 위약 부문에서의 기준선 대비 73주에 CDR-SOB 스코어에서의 변화를 보여주는 데이터 표를 제공한다. 도 12a는 MMSE 스코어에 따른 환자에 대한 CDR-SOB 스코어에서의 변화에 대한 데이터를 제공한다. 도 12b는 18-26, 20-26, 및 22-26 범위의 MMSE 스코어를 갖는 환자에 대한 CDR-SOB 스코어 뿐만 아니라 CDR 판단 및 문제 해결 스코어 및 CDR 기억 스코어에 대한 데이터를 제공한다.
도 13은 표시된 바와 같이 크레네주맙 또는 위약으로 치료된, 25 또는 26의 MMSE 스코어를 갖는 경도 AD에 걸린 환자에 대한 CDR-SOB 스코어에서의 변화의 차트를 제공한다.
도 14a-b는 기준선에서의 및 치료 후의 실시예 2에 기재된 임상 시험에 등록된 환자의, 유해 사건 데이터를 비롯한 요약 (a), 및 임상 시험에서 PET 스캔, MRI 스캔, 및 CSF 샘플링이 수행된 때를 보여주는 시간선 (b)을 제공한다.
도 15a-b는 PET 분석에 의한 플로르베타피르의 영상화에 의해 측정된 바와 같은 위약 (파선) 또는 크레네주맙 (실선)을 제공받은 환자에서의 아밀로이드 수준 (a) 및 위약 또는 크레네주맙을 제공받은 환자에서의 CSF A베타 수준 (b)을 보여주는 차트를 제공한다.
도 16a-b는 치료 부문 또는 위약 부문에서 경도 내지 중등도 AD에 걸린 환자의 ADAS-Cog12 스코어에서의 변화를 보여주는 병렬 차트를 제공한다. 차트 (a)는 SNP 음성인 환자 (즉, 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T를 보유하는 클루스테린 유전자의 어떠한 대립유전자도 없는 환자)를 보여주고, 차트 (b)는 SNP 양성인 환자 (즉, 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T를 보유하는 클루스테린 유전자의 적어도 1개의 대립유전자가 있는 환자)를 보여준다.
도 17a-b는 치료 부문 또는 위약 부문에서 경도 내지 중등도 AD에 걸린 ApoE4 양성 환자의 ADAS-Cog12 스코어에서의 변화를 보여주는 병렬 차트를 제공한다. 차트 (a)는 SNP 음성인 환자 (즉, 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T를 보유하는 클루스테린 유전자의 어떠한 대립유전자도 없는 환자)를 보여주고, 차트 (b)는 SNP 양성인 환자 (즉, 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T를 보유하는 클루스테린 유전자의 적어도 1개의 대립유전자가 있는 환자)를 보여준다.
도 18a-b는 치료 부문 또는 위약 부문에서 경도 AD에 걸린 환자의 ADAS-Cog12 스코어에서의 변화를 보여주는 병렬 차트를 제공한다. 차트 (a)는 SNP 음성인 환자 (즉, 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T를 보유하는 클루스테린 유전자의 어떠한 대립유전자도 없는 환자)를 보여주고, 차트 (b)는 SNP 양성인 환자 (즉, 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T를 보유하는 클루스테린 유전자의 적어도 1개의 대립유전자가 있는 환자)를 보여준다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 기술 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 문헌 [Singleton et al.et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 2nd ed., J. Wiley & Sons (New York, N.Y. 1994), 및 March, Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure 4th ed., John Wiley & Sons (New York, N.Y. 1992)]은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 본 출원에 사용된 많은 용어에 대한 일반적 안내를 제공한다.
특정 정의 및 약어
본 명세서를 해석하고자 하는 목적상, 하기 정의가 적용될 것이고, 적절한 경우에는 언제라도 단수형으로 사용된 용어는 복수형을 또한 포함할 것이고, 그 반대의 경우도 마찬가지이다. 하기 제시된 임의의 정의가 본원에 참조로 포함된 임의의 문헌과 상충되는 경우에, 하기 제시된 정의가 우선할 것이다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 단수 형태는 문맥상 달리 명백하게 표시되지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어 "단백질" 또는 "항체"에 대한 언급은 각각 복수의 단백질 또는 항체를 포함하고; "세포"에 대한 언급은 세포의 혼합물 등을 포함한다.
명세서 및 첨부된 청구범위에 제공된 범위는 종점 둘 다와, 종점 사이의 모든 점을 포함한다. 따라서, 예를 들어 2.0 내지 3.0의 범위는 2.0, 3.0, 및 2.0과 3.0 사이의 모든 점을 포함한다.
본원에 사용된 어구 "실질적으로 유사한" 또는 "실질적으로 동일한"은 관련 기술분야의 통상의 기술자가 2개의 수치 값 (일반적으로, 하나는 본 발명의 항체와 연관된 것이고, 다른 것은 참조/비교 항체와 연관된 것임) 사이의 차이가 이러한 값 (예를 들어, Kd 값)에 의해 측정된 생물학적 특징의 맥락 내에서 생물학적 및/또는 통계적 유의성이 거의 또는 전혀 없다고 간주할 수 있을 정도로 2개의 값 사이의 충분히 높은 정도의 유사성을 의미한다. 상기 2개의 값 사이의 차이는 참조/비교 항체에 대한 값의 함수로서 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 약 10% 미만이다.
본원에 사용된 용어 "샘플" 또는 "시험 샘플"은 예를 들어 물리적, 생화학적, 화학적 및/또는 생리학적 특징에 기초하여 특징화 및/또는 확인되는, 세포 및/또는 다른 분자 엔티티를 함유하는 관심 대상체로부터 수득되거나 유래된 조성물을 지칭한다. 한 실시양태에서, 상기 정의는 생물학적 기원의 혈액 및 다른 액체 샘플 및 조직 샘플, 예컨대 생검 시편 또는 조직 배양물 또는 그로부터 유래된 세포를 포괄한다. 조직 샘플의 공급원은 새로운, 동결 및/또는 보존된 기관 또는 조직 샘플 또는 생검 또는 흡인물로부터의 고체 조직; 혈액 또는 임의의 혈액 구성성분; 체액; 및 대상체의 임신 또는 발생 중 임의의 시점으로부터의 세포 또는 혈장일 수 있다. 본원에 사용된 용어 "생물학적 샘플"은 혈액, 혈청, 혈장, 객담, 조직 생검 (예를 들어, 폐 샘플), 및 비강 스왑 또는 비강 폴립을 비롯한 비강 샘플을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
용어 "샘플", "생물학적 샘플" 또는 "시험 샘플"은 공급 후에 시약으로 처리하거나, 가용화하거나, 또는 특정 성분, 예컨대 단백질 또는 폴리뉴클레오티드를 풍부하게 하거나, 또는 절편화를 목적으로 반-고체 또는 고체 매트릭스 중에 포매시키는 것과 같은 임의의 방식으로 조작된 생물학적 샘플을 포함한다. 본원에서의 목적상, 조직 샘플의 "절편"은 조직 샘플의 단일 부분 또는 조각, 예를 들어 조직 샘플로부터 절단한 조직의 박편 또는 세포를 의미한다. 샘플은 전혈, 혈액-유래 세포, 혈청, 혈장, 림프액, 활액, 세포 추출물 및 그의 조합을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 한 실시양태에서, 샘플은 임상 샘플이다. 또 다른 실시양태에서, 샘플은 진단 검정에 사용된다.
한 실시양태에서, 샘플은 항-A베타 항체를 사용한 치료 전에 대상체 또는 환자로부터 수득된다. 또 다른 실시양태에서, 샘플은 항-A베타 항체를 사용한 적어도 1회의 치료 후에 대상체 또는 환자로부터 수득된다.
본원에 사용된 "참조 샘플"은 비교 목적으로 사용되는 임의의 샘플, 표준물 또는 수준을 지칭한다. 한 실시양태에서, 참조 샘플은 동일한 대상체 또는 환자의 신체의 건강한 및/또는 비-이환 부분 (예를 들어, 조직 또는 세포)으로부터 수득된다. 또 다른 실시양태에서, 참조 샘플은 동일한 대상체 또는 환자의 신체의 비치료 조직 및/또는 세포로부터 수득된다. 또 다른 실시양태에서, 참조 샘플은 대상체 또는 환자가 아닌 개체의 신체의 건강한 및/또는 비-이환 부분 (예를 들어, 조직 또는 세포)으로부터 수득된다. 또 다른 실시양태에서, 참조 샘플은 대상체 또는 환자가 아닌 개체의 신체의 비치료 조직 및/또는 세포 부분으로부터 수득된다.
특정 실시양태에서, 참조 샘플은 시험 샘플이 수득된 때와 상이한 하나 이상의 시점에서 수득된 동일한 대상체 또는 환자로부터의 단일 샘플 또는 조합된 다중 샘플이다. 예를 들어, 참조 샘플은 시험 샘플이 수득된 때보다 더 이른 시점에 동일한 대상체 또는 환자로부터 수득된다. 특정 실시양태에서, 참조 샘플은 대상체 또는 환자가 아닌 1종 이상의 개체로부터 수득된, 용어 "샘플" 하에 상기 정의된 바와 같은 생물학적 샘플의 모든 유형을 포함한다. 특정 실시양태에서, 참조 샘플은 대상체 또는 환자가 아닌 아밀로이드증, 예를 들어 알츠하이머병에 걸린 1종 이상의 개체로부터 수득된다.
특정 실시양태에서, 참조 샘플은 대상체 또는 환자가 아닌 1종 이상의 건강한 개체로부터의 조합된 다중 샘플이다. 특정 실시양태에서, 참조 샘플은 대상체 또는 환자가 아닌 질환 또는 장애 (예를 들어, 아밀로이드증, 예컨대 예를 들어 알츠하이머병)에 걸린 1종 이상의 개체로부터의 조합된 다중 샘플이다. 특정 실시양태에서, 참조 샘플은 정상 조직으로부터 풀링된 RNA 샘플, 또는 대상체 또는 환자가 아닌 1종 이상의 개체로부터 풀링된 혈장 또는 혈청 샘플이다.
핵산 샘플은 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플로부터 단리된다. 핵산 샘플은 표준 기술을 사용하여 생물학적 샘플로부터 단리될 수 있다. 핵산 샘플은 다형성 변이체의 존재를 결정하는 방법에 사용될 수 있다. 다형성 변이체의 존재 또는 부재는 핵산 샘플에서 나타내어지는 1개 또는 둘 다의 염색체 보체를 사용하여 결정될 수 있다. 핵산 샘플에서 나타내어지는 둘 다의 염색체 보체에서 다형성 변이체의 존재 또는 부재를 결정하는 것은 다형성 변이체에 대한 개체의 접합성을 결정하는데 유용하다.
용어 "소분자"는 50 달톤 내지 2500 달톤의 분자량을 갖는 유기 분자를 지칭한다.
용어 "항체" 및 "이뮤노글로불린" ("Ig")은 가장 넓은 의미에서 상호교환가능하게 사용되고, 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 모노클로날 항체 (예를 들어, 전장 또는 무손상 모노클로날 항체), 폴리클로날 항체, 다가 항체, 폴리에피토프 특이성을 갖는 항체, 단일 쇄 항체, 다중-특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체, 삼중특이적 항체, 사중특이적 항체) 및 항체의 단편을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 이러한 항체는 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 합성 항체 및/또는 친화도 성숙 항체일 수 있다. 이러한 항체 및 이를 생성하는 방법은 본원에 보다 상세하게 기재되어 있다.
"항체 단편"은 무손상 항체의 단지 일부만을 포함하며, 여기서 일부는 바람직하게는, 무손상 항체 내에 존재하는 경우에 이러한 일부와 통상적으로 연관된 기능 중 적어도 하나, 전형적으로 대부분 또는 모든 기능을 보유한다. 한 실시양태에서, 항체 단편은 무손상 항체의 항원 결합 부위를 포함하고, 따라서 항원에 결합하는 능력을 보유한다. 또 다른 실시양태에서, 항체 단편, 예를 들어 Fc 영역을 포함하는 항체 단편은, 무손상 항체 내에 존재하는 경우에 Fc 영역과 통상적으로 연관된 생물학적 기능, 예컨대 FcRn 결합, 항체 반감기 조정, ADCC 기능 및 보체 결합 중 적어도 하나를 보유한다. 한 실시양태에서, 항체 단편은 무손상 항체와 실질적으로 유사한 생체내 반감기를 갖는 1가 항체이다. 예를 들어, 이러한 항체 단편은 단편에 생체내 안정성을 부여할 수 있는 Fc 서열에 연결된 항원 결합 아암을 포함할 수 있다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 디아바디; 선형 항체; 단일-쇄 항체 분자 (예를 들어, scFv); 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "표적"은, 달리 나타내지 않는 한, 영장류 (예를 들어, 인간) 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트)와 같은 포유동물을 비롯한 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 천연 분자를 지칭한다. 상기 용어는 "전장" 비프로세싱된 표적 뿐만 아니라 세포에서의 프로세싱으로부터 생성된 임의의 형태의 표적을 포괄한다. 상기 용어는 또한 표적의 자연 발생 변이체, 예를 들어 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체를 포괄한다.
본원에 상호교환가능하게 사용된 용어 "아밀로이드 베타," "베타-아밀로이드," "A베타," "아밀로이드β," 및 "Aβ"는 아밀로이드 전구체 단백질 ("APP")의 β-세크레타제 1 ("BACE1") 절단 시 생산되는 APP의 단편, 뿐만 아니라 Aβ1-40 및 Aβ1-42를 포함하나 이에 제한되지는 않는 그의 변형, 단편 및 임의의 기능적 등가물을 지칭한다. Aβ는 단량체 형태로 존재할 뿐만 아니라, 회합되어 올리고머 및 피브릴 구조를 형성하는 것으로 공지되어 있고, 이는 아밀로이드 플라크의 구성성분원으로서 발견될 수 있다. 이러한 Aβ 펩티드의 구조 및 서열은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있고, 이러한 펩티드를 생산하는 방법 또는 뇌 및 다른 조직으로부터 이를 추출하는 방법은 예를 들어 문헌 [Glenner and Wong, Biochem Biophys Res. Comm. 129: 885-890 (1984)]에 기재되어 있다. 또한, Aβ 펩티드는 또한 다양한 형태로 상업적으로 입수가능하다. 인간 Aβ1-42의 예시적인 아미노산 서열은 DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAED VGSNKGAIIGLMVGGVVIA (서열식별번호: 1)이다.
용어 "항-표적 항체" 및 "표적에 결합하는 항체"는 항체가 표적을 표적화함에 있어서 진단제 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도로 표적에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 한 실시양태에서, 비관련, 비-표적 단백질에 대한 항-표적 항체의 결합의 정도는, 예를 들어 방사선면역검정 (RIA) 또는 비아코어 검정에 의한 측정 시, 표적에 대한 항체의 결합의 약 10% 미만이다. 특정 실시양태에서, 표적에 결합하는 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들어, 10-8 M 이하, 예를 들어 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들어 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 특정 실시양태에서, 항-표적 항체는 상이한 종 사이에 보존된 표적의 에피토프에 결합한다.
"항-A베타 이뮤노글로불린," "항-A베타 항체," 및 "A베타에 결합하는 항체"는 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 인간 A베타에 특이적으로 결합하는 항체를 지칭한다. 항-A베타 항체의 비제한적 예는 크레네주맙이다. 항-A베타 항체의 다른 비제한적 예는 솔라네주맙, 바피뉴주맙, 아두카누맙 및 간테네루맙이다.
용어 "크레네주맙" 및 "MABT5102A"는 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, A베타의 단량체, 올리고머 및 피브릴 형태에 결합하고 CAS 등록 번호 1095207과 연관된 특정 항-A베타 항체를 지칭한다. 한 실시양태에서, 이러한 항체는 도 2에 제시된 HVR 영역 서열을 포함한다. 또 다른 이러한 실시양태에서, 이러한 항체는: (1) 아미노산 서열 서열식별번호: 2를 포함하는 HVR-H1; (2) 아미노산 서열 서열식별번호: 3을 포함하는 HVR-H2 서열; (3) 아미노산 서열 서열식별번호: 4를 포함하는 HVR-H3 서열; (4) 아미노산 서열 서열식별번호: 6을 포함하는 HVR-L1 서열; (5) 아미노산 서열 서열식별번호: 7을 포함하는 HVR-L2 서열; 및 (6) 아미노산 서열 서열식별번호: 8을 포함하는 HVR-L3 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 특정 항-A베타 항체는 도 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 및 VL 도메인을 포함한다. 또 다른 이러한 실시양태에서, 이러한 특정 항-A베타 항체는 아미노산 서열 서열식별번호: 5를 포함하는 VH 도메인 및 아미노산 서열 서열식별번호: 9를 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 IgG4 항체이다. 또 다른 이러한 실시양태에서, IgG4 항체는 그의 불변 도메인에서 프롤린 대신 세린 228이도록 하는 돌연변이를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "아밀로이드증"은 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질에 의해 유발되거나 그와 연관된 질환 및 장애 군을 지칭하고, 아밀로이드 플라크에 의한 것을 비롯하여, 단량체, 피브릴, 또는 중합체 상태 또는 3개의 임의의 조합으로의 아밀로이드-유사 단백질의 존재 또는 활성에 의해 유발된 질환 및 장애를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 이러한 질환은 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증, 예컨대 알츠하이머병 ("AD")과 같은 신경계 장애를 포함하나 이에 제한되지는 않는 질환, 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 상태, 예컨대 예를 들어 경도 인지 장애 (MCI), 루이 소체 치매, 다운 증후군, 아밀로이드증에 의한 유전성 뇌출혈 (네덜란드 유형), 괌 파킨슨-치매 복합증 및 아밀로이드-유사 단백질에 기초하거나 그와 연관된 다른 질환, 예컨대 진행성 핵상 마비, 다발성 경화증, 크로이츠펠트 야콥병, 파킨슨병, HIV-관련 치매, ALS (근위축성 측삭 경화증), 봉입체 근염 (IBM), 성인 발병 당뇨병, 내분비 종양 및 노인성 심장 아밀로이드증, 및 베타-아밀로이드 침착으로 인한 황반 변성, 드루젠-관련 시신경병증, 녹내장 및 백내장을 비롯한 다양한 안질환을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
녹내장은 시신경병증의 특징적 패턴으로 망막 신경절 세포 (RGC)의 상실을 수반하는 시신경의 질환 군이다. RGC는 눈에서 뇌로 시각적 신호를 전송하는 신경 세포이다. 아폽토시스 과정에서 2종의 주요 효소, 카스파제-3 및 카스파제-8은 상기 과정에서 활성화되어 RGC의 아폽토시스를 야기한다. 카스파제-3은 아밀로이드 전구체 단백질 (APP)을 절단하여 A베타를 비롯한 신경독성 단편을 생성한다. APP의 보호 효과 없이, 망막 신경절 세포 층에서의 A베타 축적은 RGC의 사멸 및 비가역적 시각 상실을 야기한다.
녹내장은 종종, 수성 순환 또는 그의 배액의 차단의 결과일 수 있는 증가된 눈 압력을 동반하나 항상 그렇지는 않다. 상승된 안내압이 녹내장 발생의 유의한 위험 인자이기는 하지만, 녹내장을 유발하는 것으로 결정될 안내압의 역치는 전혀 정의될 수 없다. 손상은 또한 생체 시신경 섬유에의 불량한 혈액 공급, 신경 구조의 약화, 및/또는 신경 섬유 그 자체의 건강상 문제에 의해 유발될 수 있다. 비치료 녹내장은 시신경의 영구적 손상 및 결과적인 시야 상실로 이어지고, 이는 실명으로 진행될 수 있다.
녹내장의 상이한 유형은 상태가 만성인 경우에 개방각 녹내장, 또는 급성 녹내장이 갑자기 발생한 경우에 폐쇄각 녹내장으로 분류된다. 녹내장은 통상적으로 양쪽 눈에 영향을 미지치만, 질환은 한쪽 눈에서 다른 눈보다 더 신속하게 진행될 수 있다.
원발성 개방각 녹내장 (POAG)으로도 공지된 만성 개방각 녹내장 (COAG)은 가장 흔한 유형의 녹내장이다. COAG는 수성 유출물의 슐렘관으로의 배액을 감소시키고 안내압 (IOP)을 상승시키는 섬유주에서의 현미경적 차단에 의해 유발된다. POAG는 통상적으로 양쪽 눈에 영향을 미치고, 연령 및 양성 가족력과 강하게 연관된다. 눈 배액 메카니즘은 노화와 함께 점진적으로 둔화될 수 있기 때문에 그의 빈도는 노인에서 증가한다. 만성 개방각 녹내장에 걸린 대상체에서의 안내압의 증가는 중심 시각 구역에서 상실이 느껴질 때까지 어떠한 증상도 동반하지 않는다.
급성 폐쇄각 녹내장 (AACG) 또는 폐쇄각 녹내장은 안내압의 35 내지 80 mmHg로의 갑작스러운 증가를 특징으로 하는 상대적으로 드문 유형의 녹내장으로, 이는 중증 통증 및 비가역적 시각 상실로 이어진다. 갑작스러운 압력 증가는 여과 각의 폐쇄 및 배액 채널의 차단에 의해 유발된다. 좁은 각을 갖는 개체는 각이 갑작스럽게 닫힐 증가된 위험을 갖는다. AACG는 통상적으로 단안에서 발생하지만, 위험은 양쪽 눈에 존재한다. 연령, 백내장 및 슈도박탈은 그것이 수정체의 확대 및 각의 밀집 또는 협소와 연관되기 때문에 또한 위험 인자이다. 갑작스러운 녹내장 침범은 중증 눈 통증 및 두통, 염증발생된 눈, 오심, 구토, 및 흐린 시각과 연관될 수 있다.
혼합 또는 조합 메카니즘 녹내장은 개방각 및 폐쇄각 녹내장의 혼합 또는 조합이다. 이는 레이저 홍채절개 후에 각이 개방되었지만 IOP 제어를 위한 의약을 계속해서 필요로 하는 급성 ACG에 걸린 환자, 뿐만 아니라 점진적으로 각의 협소가 발생하고 있는 POAG 또는 슈도박탈 녹내장에 걸린 환자에게 영향을 미친다,
저안압 녹내장 (LTG)으로도 공지되어 있는 정상안압 녹내장 (NTG)은 다른 유형의 녹내장에서 관찰되는 것과 유사한 진행성 시신경 손상 및 말초 시각의 상실을 특징으로 하지만; 안내압은 정상 범위이거나 또는 심지어 정상 미만이다.
선천성 (영아) 녹내장은 상대적으로 드문, 유전성 유형의 개방각 녹내장이다. 배액 구역의 불충분한 발생은 눈에서 증가된 압력을 발생시키고, 이는 시신경 손상으로 인한 시각 상실 및 눈 비대로 이어질 수 있다. 질환에 걸린 영아 및 소아에서 시각을 보존하기 위해서는 초기 진단 및 치료가 중요하다.
속발성 녹내장은 안구 손상, 눈의 홍채 내 염증 (홍채염), 당뇨병, 백내장, 또는 스테로이드-감수성 개체에서의 스테로이드의 사용으로부터 발생할 수 있다. 속발성 녹내장은 또한 망막 박리 또는 망막 정맥 폐쇄 또는 차단과 연관될 수 있다.
색소성 녹내장은 홍채로부터 색소 과립의 박리를 특징으로 한다. 과립은 눈의 배액 시스템의 차단을 유발하고, 이는 상승된 안내압 및 시신경 손상으로 이어진다. 박탈성 녹내장 (슈도박탈)은 전낭 상 및 눈의 각 내 박편상 물질의 침착물을 특징으로 한다. 박편상 물질의 축적은 배액 시스템을 차단하고 눈 압력을 상승시킨다.
녹내장의 진단은 다양한 시험을 사용하여 이루어질 수 있다. 안압측정법은 눈의 표면의 색조 또는 경도를 측정함으로써 눈 내의 압력을 결정한다. 여러 유형의 안압측정법이 본 시험에서 이용가능하고, 가장 통상적인 것은 압평 안압측정계이다. 각막두께측정법은 각막의 두께를 결정하고, 차례로 안내압을 측정한다. 전방각경검사는 눈의 여과 각 및 배액 구역의 검사를 가능하게 한다. 전방각경검사는 또한 비정상적 혈관이 눈 밖으로의 수성 유체의 배액을 차단할 수 있는지 여부를 결정할 수 있다. 검안경검사는 시신경의 검사를 가능하게 하고, 증가된 안내압 또는 축삭 드롭 아웃에 의해 유발될 수 있는 신경 섬유 층 드롭 또는 시신경 유두에서의 변화, 또는 이러한 구조의 압입 (커핑)을 검출할 수 있다. 전방각경검사는 또한 불량한 혈류 또는 증가된 안내압으로부터의 신경 손상을 평가하는데 유용하다. 시야 시험은 시각의 범위를 주관적으로 맵핑하고, 이는 시신경에 대한 녹내장성 손상의 징후를 검출할 수 있다. 이는 특정 패턴의 시야 상실에 의해 나타내어진다. 신경 섬유 층 상실의 객관적 측정인 안구 일관성 단층촬영은 손상된 축삭 조직을 통한 광 투과에서의 차등을 통해 시신경 섬유 층의 두께 (녹내장에서 변경됨)를 관찰함으로써 수행된다.
참조 항체와 "동일한 에피토프에 결합하는 항체"는 경쟁 검정에서 참조 항체의 그의 항원에 대한 결합을 50% 이상 차단하는 항체를 지칭하고, 반대로 참조 항체는 경쟁 검정에서 항체의 그의 항원에 대한 결합을 50% 이상 차단한다. 예시적인 경쟁 검정이 본원에 제공된다.
본원에 사용된 용어 "바이오마커"는 일반적으로 포유동물 조직 또는 세포 내 또는 그 상에서의 발현이 표준 방법 (또는 본원에 개시된 방법)에 의해 검출될 수 있고, 보체, 예를 들어 보체의 대체 경로의 억제를 기초로 하여 치료 요법에 대한 포유동물 세포 또는 조직의 감수성을 예측, 진단 및/또는 예후하는 것인, 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP), 단백질, 탄수화물 구조체, 또는 당지질을 비롯한 분자를 지칭한다. 임의로, SNP 바이오마커는 SNP (2원 엔티티)가 개체의 군을 반응자 및 비-반응자로 계층화하는 경우에 결정된다. 예를 들어, 2개의 뉴클레오티드, G 및 A를 갖고 여기서 A가 위험 대립유전자인 SNP가 주어지면, A 대립유전자의 보인자 (예를 들어, AA 또는 GA 개체)는 치료에 반응하는 반면에 A 대립유전자가 없는 개체 (예를 들어, GG 개체)는 반응하지 않는다.
본원에 사용된 "예측 바이오마커"는 주어진 치료에 반응할 가능성이 가장 큰 환자의 하위집단을 확인시켜준다.
본원에 사용된 "예후 바이오마커"는 비치료 개체에서 있을 법한 질환 과정을 나타내는 마커이다.
본원에서 "SNP"로도 지칭되는 본원에 사용된 용어 "단일 뉴클레오티드 다형성"은 유전적 가변성으로 이어지는 DNA 서열 내의 단일 염기 치환을 지칭한다. 집단에서 1개 초과의 염기 유형이 가능한 게놈 내 뉴클레오티드 위치는 본원에서 "다형성 부위" 또는 "다형성"으로 지칭된다. 다형성 부위는 예를 들어 1개 이상의 뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열, 삽입된 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 서열, 결실된 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 서열, 또는 마이크로위성일 수 있다. 길이가 2개 이상의 뉴클레오티드인 다형성 부위는 길이가 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14개, 15개 이상, 20개 이상, 30개 이상, 50개 이상, 75개 이상, 100개 이상, 500개 이상, 또는 약 1000개 뉴클레오티드일 수 있고, 여기서 뉴클레오티드 서열의 전부 또는 일부는 영역 내에서 상이하다. 길이가 단일 뉴클레오티드인 다형성 부위는 본원에서 SNP로 지칭된다. 다형성 부위에 2, 3, 또는 4개의 대안적 뉴클레오티드 서열이 존재하는 경우에, 각각의 뉴클레오티드 서열은 "다형성 변이체" 또는 "핵산 변이체"로 지칭된다. DNA 서열에서 각각의 가능한 변이체는 "대립유전자"로 지칭된다. 2개의 다형성 변이체가 존재하는 경우에, 집단으로부터의 대부분의 샘플에서 나타내어지는 다형성 변이체는 "보편적 대립유전자" 또는 "주요 대립유전자"로 지칭되고, 집단에서 덜 보편적인 다형성 변이체는 "비통상 대립유전자" 또는 "부차 대립유전자"로 지칭된다. 2개의 보편적 대립유전자 또는 2개의 비통상 대립유전자를 보유하는 개체는 다형성과 관련하여 "동형접합"이다. 1개의 보편적 대립유전자 및 1개의 비통상 대립유전자를 보유하는 개체는 다형성과 관련하여 "이형접합"이다. C/G 또는 A/T SNP에 의하면, 대립유전자는 다의적이고, 유전자형 결정 플랫폼으로부터 데이터를 추출하는데 사용된 가닥에 따라 달라진다. 이들 C/G 또는 A/T SNP에 의하면, C 또는 G 뉴클레오티드 또는 A 또는 T 뉴클레오티드 각각이 위험 대립유전자 또는 보호 대립유전자일 수 있고, 이는 대립유전자 빈도의 상관관계에 의해 결정된다. 질환의 증가된 위험과 상관되거나 > 1의 오즈비 또는 상대 위험과 연관된 대립유전자는 "위험 대립유전자" 또는 "영향 대립유전자"로 지칭된다. 위험 대립유전자 또는 영향 대립유전자는 부차 대립유전자 또는 주요 대립유전자일 수 있다. 감소된 위험 (또는 요법으로부터의 이익의 증가된 가능성)과 상관되거나 < 1의 오즈비와 연관된 대립유전자는 "보호 대립유전자"로 지칭된다. 보호 대립유전자는 부차 또는 주요 대립유전자일 수 있다.
본원에 사용된 "등가 대립유전자" 또는 "대용물 대립유전자"는 공개된 대립유전자와 유사하게 거동할 것으로 예상되고, 공개된 대립유전자 및/또는 본원에 정의된 바와 같은 선택된 SNP와의 대립유전자 빈도 및 높은 r2 (≥ 0.6) 및/또는 높은 D' (≥ 0.6)에 기초하여 선택된 대립유전자를 지칭한다. 한 실시양태에서, 높은 r2는 ≥ 0.6, 0.7, 0.8, 0.9 또는 1.0이다. 한 실시양태에서, 높은 D'는 ≥ 0.6, 0.7, 0.8, 0.9 또는 1.0이다.
본원에 사용된 "연관 불평형" 또는 "LD"는 무작위로 연관되지 않은, 즉 그의 빈도와 비례하여 연관되지 않은 상이한 유전자좌의 대립유전자를 지칭한다. 대립유전자가 양성 연관 불평형인 경우에, 대립유전자는 통계적 독립을 가정하여 예상되는 것보다 더 종종 함께 발생한다. 대조적으로, 대립유전자가 음성 연관 불평형인 경우에, 대립유전자는 통계적 독립을 가정하여 예상되는 것보다 덜 종종 함께 발생한다. 본원에 사용된 "오즈비" 또는 "OR"은 마커 (대립유전자 또는 다형성)의 부재 하의 개체에서의 질환의 오즈 대비 마커 (대립유전자 또는 다형성)의 존재 하의 개체에 대한 질환의 오즈의 비를 지칭한다. 본원에 사용된 "반수체형"은 통상적으로 단위로서 유전되기에 충분히 밀접하게 연결된 단일 염색체 상의 대립유전자 군을 지칭한다.
다형성 변이체는 이중-가닥 핵산의 어느 한쪽 또는 둘 다의 가닥 상에서 검출될 수 있다. 또한, 다형성 변이체는 유전자의 인트론 또는 엑손 내, 또는 조절 영역, 예컨대 프로모터, 5' 비번역 영역 (UTR), 3'UTR의 부분 내, 및 DNA (예를 들어, 게놈 DNA (gDNA) 및 상보적 DNA (cDNA)), RNA (예를 들어, mRNA, tRNA, 및 RRNA), 또는 폴리펩티드에 위치할 수 있다. 다형성 변이는 유전자 발현, 폴리펩티드 구조 또는 폴리펩티드 기능에서 검출가능한 차이를 야기할 수 있거나, 또는 그렇지 않을 수 있다.
본원에 사용된 용어 "대안적 SNP"는 선택된 SNP와 유사하게 거동할 것으로 예상되고, 유사한 대립유전자 빈도에 기초하여 선택되고, r2 ≥ 0.6 및/또는 D' ≥ 0.6에 의해 측정된 바와 같이 선택된 SNP와 연관 불평형을 갖는 SNP를 지칭한다.
용어 "치료제"는 질환의 증상을 치료하는 작용제를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 질환을 치료하는데 사용되는 임의의 작용제를 지칭한다.
본원에 사용된 "치료" (및 "치료하다" 또는 "치료하는"과 같은 그의 문법적 변형)는 치료되는 개체의 자연적 과정을 변경시키기 위한 시도로의 임상 개입을 지칭하고, 임상 병리상태의 과정 동안 수행될 수 있다. 바람직한 치료 효과는 1종 이상의 증상의 완화 또는 개선, 질환의 임의의 직접적 또는 간접적 병리학적 결과의 출현 또는 악화의 감소 또는 지연, 질환 진행 속도의 감소, 및 질환 상태의 개선 또는 완화를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 항체는 질환의 발생을 지연시키거나 또는 질환의 진행을 감속시키기 위해 사용된다.
본원에 사용된 용어 "치료 발현성"은 제1 용량의 치료제가 투여된 후에 발생하는 사건을 지칭한다. 예를 들어, "치료 발현성 유해 사건"은 임상 연구에서 제1 용량의 치료 시 또는 그 후에 확인되는 사건이다.
"치료 요법"은 제2 의약의 첨가의 존재 또는 부재 하의, 투여량, 투여 빈도, 또는 치료의 지속기간의 조합을 지칭한다.
"유효 치료 요법"은 치료를 받고 있는 환자에게 유익한 반응을 제공하게 될 치료 요법을 지칭한다.
"치료를 변형시키는 것"은 투여량, 투여 빈도, 또는 치료의 지속기간, 및/또는 제2 의약의 첨가를 변화시키는 것을 비롯하여, 치료 요법을 변화시키는 것을 지칭한다.
작용제의 "유효량" 또는 "유효 용량"은 목적하는 결과를 달성하는데 필요한 기간 동안의 유효한 양 또는 용량을 지칭한다. 예를 들어, "치료 유효량"은 제시된 질환, 상태, 임상 병리상태, 또는 증상을 치료하는데, 즉 AD의 진행 과정을 변형시키는데 및/또는 AD의 1종 이상의 증상을 완화 및/또는 예방하는데 필요한 시간의 기간 동안의 유효한 양이다.
본 발명은 치료에 대한 반응을 예측하기 위한 예측 바이오마커로서 및 AD의 진행을 평가하기 위한 예후 바이오마커로서 SNP 또는 다른 유전자 기반 메카니즘을 사용하는 방법, 치료 전략을 선택하기 위해 SNP 또는 다른 유전자 기반 메카니즘을 사용하는 방법, 및 임상 연구를 위한 환자를 선택하는 것을 포함하나 이에 제한되지는 않는 환자 계층화 및 임상 치료 결정을 내리기 위해 SNP 또는 다른 유전자 기반 메카니즘을 사용하는 방법을 제공한다. 본원에 사용된 "환자 계층화"는 치료에 대한 반응 가능성을 결정하기 위한 개체의 유전자형 결정을 지칭한다. 유전자형 결정은 개체가 SNP를 보유하는지 여부를 확인하기 위해 수행된다. 특정 SNP 유전자형의 측정을 위한 많은 방법이 존재한다. 1개 이상의 SNP에서 돌연변이를 보유하는 개체는 SNP 어레이, 택맨, 형광 편광, 시쿼놈 (또는 본원에 기재된 바와 같은 SNP의 분석을 위한 다른 방법)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 기술에 의해 DNA 수준에서 검출될 수 있다. 진단을 위한 핵산은 예컨대 혈액, 소변, 타액, 조직 생검 및 부검 물질로부터의 환자의 세포로부터 수득될 수 있다.
게놈 DNA는 검출을 위해 직접 사용될 수 있거나, 또는 게놈 DNA 또는 전사체의 분석 전에 PCR을 사용하여 증폭될 수 있다. 예를 들어, 개체로부터의 단편화된 단일-가닥 DNA를 수백 내지 수천개의 고정된 고유 뉴클레오티드 프로브 서열을 함유하는 어레이에 혼성화시킨다. 뉴클레오티드 프로브 서열은 표적 DNA 서열에 결합하도록 설계된다 (예를 들어 SNP의 경우에, SNP의 존재 또는 부재를 확인 및 분석하기 위해 대립유전자-특이적 프로브가 사용됨). 검출 시스템을 사용하여 고정된 프로브와 개체로부터의 DNA 사이의 혼성화 신호를 기록 및 해석한다 (프로브 또는 DNA는 검출 및 측정되는 형광단에 의해 표지됨). 특정 DNA 서열의 검출은 혼성화, RNAse 보호, 화학적 절단, 직접 DNA 서열분석 또는 제한 효소의 사용, 게놈 DNA의 서던 블롯팅, 계내 분석, 수백 또는 수천개의 올리고뉴클레오티드 프로브를 함유하는 고밀도 어레이에의 샘플 및 대조군 핵산 혼성화 (Cronin et al., Hum Mutat, 7(3): 244-55 (1996) (또는 본원에 기재된 바와 같은 SNP의 분석을 위한 다른 방법)를 포함하나 이에 제한되지는 않는 방법에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 유전자 돌연변이는 마이크로어레이를 사용하여 확인될 수 있다 (Shen et al., Mutat Res,573(1-2): 70-82 (2005)). 이들 유전자 시험은 개체 집단을 항-A베타의 치료에 대해 상이한 반응성을 갖는 하위집단으로 계층화하는데 유용하다.
본원에 사용된 용어 "유전자형 결정"은 DNA 삽입 또는 결실의 존재, 다형성 (SNP 또는 기타), 대립유전자 (분석 또는 생물학적 검정 (또는 본원에 기재된 바와 같은 SNP의 분석을 위한 다른 방법)을 사용하여 개체의 DNA 서열을 검사하는 것에 의한 SNP 형태의 부차 또는 주요 또는 위험 대립유전자 포함)의 검출을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 개체의 유전자 구성 ("유전자형")에서의 차이를 결정하는 방법을 지칭한다. 예를 들어, 서열분석 또는 다른 방법론 (예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 SNP의 분석을 위한 다른 방법)의 의해 결정된 개체의 DNA 서열은 또 다른 개체의 서열 또는 참조 서열과 비교될 수 있다. 유전자형 결정 방법은 일반적으로 관련 기술분야에 공지되어 있고 (예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 SNP의 분석을 위한 다른 방법), 게놈 DNA의 제한 단편 길이 다형성 식별 (RFLP), 게놈 DNA의 무작위 증폭 다형성 검출 (RAPD), 증폭된 단편 길이 다형성 검출 (AFLPD), 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR), DNA 서열분석, 대립유전자 특이적 올리고뉴클레오티드 (ASO) 프로브, 및 DNA 마이크로어레이 또는 비드에의 혼성화를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 유사하게, 이들 기술은 SNP 또는 다른 유전 인자를 코딩하는 전사체의 분석에 적용될 수 있다. 샘플은 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR) 분석, 어레이 혼성화를 사용하거나, 또는 DNA 마이크로어레이 스냅샷을 비롯하여 상업적으로 입수가능한 DNA SNP 칩 마이크로어레이를 사용하여 SNP에 대해 편리하게 검정될 수 있다. 마이크로어레이는 핵산 샘플 내에 SNP가 존재하는지 또는 부재하는지 여부를 결정하는데 사용될 수 있다. 마이크로어레이는 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있고, 진단 용도에 적합한 올리고뉴클레오티드 마이크로어레이를 제조 및 사용하는 방법은 미국 특허 번호 5,492,806; 5,525,464; 5,589, 330; 5,695,940; 5,849,483; 6,018,041; 6,045,996; 6,136,541; 6,152,681; 6,156, 501; 6,197,506; 6,223,127; 6,225,625; 6,229, 911; 6,239,273; WO 00/52625; WO 01/25485; 및 WO 01/29259에 개시되어 있다.
일부 실시양태에서, 유전자형 결정은 적절한 치료 절차를 가장 필요로 하는 개체에게 이를 지시하기 위해 임상의에 의해 사용될 수 있다. 예를 들어, 연구에서 대상체는 유전자형 결정되어 (1) 치료에 바람직하게 반응하는 집단 및 (2)치료에 유의하게 반응하지 않는 집단, 및 (3) 치료에 유해하게 반응하는 집단으로 카테고리화된다. 결과에 기초하여, 대상체는 유전자형 결정되어 대상체가 치료에 바람직하게 반응할 가능성이 있는지 또는 그렇지 않은지 예측된다. 치료 임상 시험의 잠재적 참가자는 치료에 바람직하게 반응할 가능성이 가장 큰 자를 확인하기 위해 스크리닝될 수 있다. 따라서, 약물 치료의 유효성은 약물에 긍정적으로 반응하는 개체에서 측정될 수 있다. 따라서, 한 실시양태는 (a) 개체로부터 핵산 샘플을 수득하는 단계, (b) 치료에 대한 긍정적 반응과 연관된 다형성 변이체 또는 치료에 대한 반응의 결실 또는 감소와 연관된 다형성 변이체의 존재를 결정하는 단계를 포함하는, 치료 임상 시험에 포함시키기 위한 개체를 선택하는 방법이다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 (a) 개체로부터 핵산 샘플을 수득하는 단계, (b) 치료에 대한 긍정적 반응과 연관된 다형성 변이체의 존재를 결정하는 단계 및 (c) 치료를 투여함으로써 개체를 치료하는 단계를 포함하는, 치료를 위한 개체를 선택하는 방법을 포함한다.
용어 "대립유전자-특이적 프라이머" 또는 "AS 프라이머"는 표적 서열의 1개 초과의 변이체에 혼성화하지만, 변이체 중 1개에서만 프라이머가 적합한 조건 하에서 핵산 폴리머라제에 의해 효율적으로 연장된다는 점에서 표적 서열의 변이체들 사이를 구별할 수 있는 프라이머를 지칭한다. 표적 서열의 다른 변이체에서, 연장은 덜 효율적이거나 비효율적이다. 연장이 덜 효율적이거나 비효율적인 경우에, 신호는 강도가 실질적으로 더 낮거나, 또는 바람직하게는 검출 한계 아래로 떨어진다.
용어 "대립유전자-특이적 프로브" 또는 "AS 프로브"는 표적 서열의 1개 초과의 변이체에 혼성화하지만, 변이체 중 1개에서만 검출가능한 신호가 생성된다는 점에서 표적 서열의 변이체들 사이를 구별할 수 있는 프로브를 지칭한다. 표적 서열의 다른 변이체에서, 신호는 강도가 실질적으로 더 낮거나, 또는 바람직하게는 검출 한계 아래로 떨어진다.
용어 "1차 서열"은 폴리뉴클레오티드 또는 올리고뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열을 지칭한다. 뉴클레오티드 변형, 예컨대 질소함유 염기 변형, 당 변형 또는 다른 백본 변형은 1차 서열 부분이 아니다. 올리고뉴클레오티드에 접합된 표지, 예컨대 발색단도 또한 1차 서열 부분이 아니다. 따라서, 2개의 올리고뉴클레오티드는 동일한 1차 서열을 공유할 수 있지만, 변형 및 표지와 관련하여 상이할 수 있다.
혼성화 반응의 "엄격도"는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있고, 일반적으로 프로브 길이, 세척 온도 및 염 농도에 따라 실험적으로 계산된다. 일반적으로, 프로브가 길수록 적절한 어닐링을 위해 보다 높은 온도가 필요하고, 프로브가 짧을수록 보다 낮은 온도가 필요하다. 혼성화는 일반적으로 상보적 가닥이 그의 용융 온도 미만의 환경에 존재할 때 변성 DNA가 재어닐링되는 능력에 의존한다. 프로브 및 혼성화가능한 서열 사이의 목적하는 상동성 정도가 클수록 사용될 수 있는 상대 온도가 더 높다. 그 결과, 보다 높은 상대 온도는 반응 조건을 보다 엄격하게 만들고, 보다 낮은 온도는 덜 엄격하게 만드는 경향이 있다. 혼성화 반응의 엄격도에 대한 추가의 세부사항 및 설명에 대해 문헌 [Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience Publishers, (1995)]을 참조한다.
본원에 정의된 바와 같은 "엄격한 조건" 또는 "고 엄격도 조건"은 (1) 세척을 위해 낮은 이온 강도 및 고온, 예를 들어 50℃에서 0.015 M 염화나트륨/0.0015 M 시트르산나트륨/0.1% 소듐 도데실 술페이트를 사용하는 것; (2) 혼성화 동안 42℃에서 변성제, 예컨대 포름아미드, 예를 들어 50% (v/v) 포름아미드 + 0.1% 소 혈청 알부민/0.1% 피콜/0.1% 폴리비닐피롤리돈/50mM 인산나트륨 완충제 (pH 6.5) + 750 mM 염화나트륨, 75 mM 시트르산나트륨을 사용하는 것; 또는 (3) 42℃에서 50% 포름아미드, 5 x SSC (0.75 M NaCl, 0.075 M 시트르산나트륨), 50 mM 인산나트륨 (pH 6.8), 0.1% 피로인산나트륨, 5 x 덴하르트 용액, 초음파처리된 연어 정자 DNA (50 μg/ml), 0.1% SDS, 및 10% 덱스트란 술페이트를 사용한 용액 중 밤샘 혼성화 + 42℃에서 0.2 x SSC (염화나트륨/시트르산나트륨) 중에서 10분 세척, 이어서 55℃에서 EDTA를 함유하는 0.1 x SSC로 이루어진 10분 고-엄격도 세척에 의해 확인될 수 있다.
"중간 정도의 엄격한 조건"은 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, 1989]에 기재된 바와 같이 확인될 수 있고, 상기 기재된 것보다 덜 엄격한 세척 용액 및 혼성화 조건 (예를 들어, 온도, 이온 강도 및 %SDS)을 사용하는 것을 포함한다. 중간 정도의 엄격한 조건의 예는 20% 포름아미드, 5 x SSC (150 mM NaCl, 15 mM 시트르산삼나트륨), 50 mM 인산나트륨 (pH 7.6), 5 x 덴하르트 용액, 10% 덱스트란 술페이트, 및 20 mg/ml 변성 전단된 연어 정자 DNA를 포함하는 용액 중에서의 37℃에서의 밤샘 인큐베이션, 이어서 1 x SSC 중에서 약 37-50℃에서의 필터 세척이다. 통상의 기술자는 프로브 길이 등과 같은 인자를 조절하기 위해 필요한 온도, 이온 강도 등을 조정하는 방법을 인식할 것이다.
"친화도" 또는 "결합 친화도"는 분자 (예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너 (예를 들어, 항원) 사이의 비공유 상호작용의 총합의 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 "결합 친화도"는 결합 쌍의 구성원들 (예를 들어, 항체 및 항원 결합 아암) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 내재적 결합 친화도를 지칭한다. 분자 X의 그의 파트너 Y에 대한 친화도는 일반적으로 해리 상수 (Kd)로 나타내어질 수 있다. 친화도는 본원에 기재된 것을 비롯하여 관련 기술분야에 공지된 통상의 방법에 의해 측정될 수 있고, 이 중 임의의 것은 본 발명의 목적상 사용될 수 있다. 결합 친화도를 측정하기 위한 구체적인 설명적 및 예시적 실시양태가 본원에 기재되어 있다.
"친화도 성숙" 항체는 항원에 대한 항체의 친화도에서의 개선을 생성하는 변경을 보유하지 않는 모 항체와 비교하여 1개 이상의 초가변 영역 (HVR)에서 1개 이상의 변경을 갖는 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "환자"는 치료가 바람직한 임의의 단일 대상체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 본원에서의 환자는 인간이다.
본원에서의 "대상체"는 전형적으로 인간이다. 특정 실시양태에서, 대상체는 비-인간 포유동물이다. 예시적인 비-인간 포유동물은 실험실 동물, 가축, 애완동물, 스포츠 동물 및 농장 동물, 예를 들어 마우스, 고양이, 개, 말 및 소를 포함한다. 전형적으로, 대상체는 치료에 적격이고, 예를 들어 1종 이상의 질환 지표를 나타낸다. 일반적으로, 이러한 대상체 또는 환자는 아밀로이드증, 예를 들어 AD의 치료에 적격이다. 한 실시양태에서, 이러한 적격인 대상체 또는 환자는 AD의 1종 이상의 징후, 증상, 또는 다른 적응증을 경험하고 있거나 경험한 바 있거나, 또는 예를 들어 새롭게 진단되거나, 이전에 진단되었거나, 또는 AD가 발생할 위험이 있는지 관계 없이 AD로 진단된 자이다. AD의 진단은 임상 병력, 임상 검사, 및 확립된 영상화 양식에 기초하여 내려질 수 있다. 본원의 "환자" 또는 "대상체"는 AD의 1종 이상의 징후, 증상 또는 다른 적응증을 경험하고 있거나 경험한 바 있는, 치료에 적격인 임의의 단일 인간 대상체를 포함한다. 임상 연구 시험에 수반된 임의의 대상체, 또는 역학적 연구에 수반된 대상체, 또는 대조군으로서 한번 사용되었던 대상체가 대상체로서 포함되는 것으로 의도된다. 대상체는 이전에 항-A베타 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 또 다른 약물로 치료받았을 수 있거나, 또는 그렇게 치료받지 않았을 수 있다. 대상체는 본원의 치료의 시작 시 사용되는 추가의 약물(들)에 대해 나이브일 수 있고, 즉 대상체는 "기준선"에서 (즉, 본원의 치료 방법에서 항-A베타의 제1 용량을 투여하기 전의 설정 시점, 예컨대 치료를 개시하기 전 대상체를 스크리닝한 날에서), 예를 들어 항-A베타 이외의 요법에 의해 이전에 치료된 적이 없을 수 있다. 이러한 "나이브" 대상체는 일반적으로 이러한 추가의 약물(들)에 의한 치료 후보인 것으로 간주된다.
본원에 사용된 바와 같이, 대상체의 "평생"은 치료를 시작한 후에 대상체의 삶의 나머지를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 동종인 항체 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하고, 즉 이러한 집단을 포함하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 고도로 특이적이고, 단일 항원에 대해 지시된다. 추가로, 전형적으로 상이한 결정기 (에피토프)에 대해 지시된 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와는 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대해 지시된다.
본원에서 모노클로날 항체는 구체적으로 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정한 종으로부터 유래되거나 특정한 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성이고, 쇄(들)의 나머지는 또 다른 종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 "키메라" 항체, 뿐만 아니라 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한 이러한 항체의 단편을 포함한다 (미국 특허 번호 4,816,567; 및 문헌 [Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1984)]).
항체의 "부류"는 그의 중쇄가 보유하는 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 지칭한다. 5종의 항체의 주요 부류: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM가 존재하고, 이들 중 몇몇은 하위부류 (또는 "이소형"), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2로 추가로 나뉠 수 있다. 상이한 부류의 이뮤노글로불린에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 불린다.
비-인간 (예를 들어, 뮤린) 항체의 "인간화" 형태는 비-인간 이뮤노글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 대개, 인간화 항체는 인간 이뮤노글로불린 (수용자 항체)이고, 여기서 수용자의 초가변 영역으로부터의 잔기는 목적하는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 마우스, 래트, 토끼 또는 비인간 영장류와 같은 비-인간 종 (공여자 항체)의 초가변 영역으로부터의 잔기에 의해 대체된다. 일부 경우에, 인간 이뮤노글로불린의 프레임워크 영역 (FR) 잔기는 상응하는 비-인간 잔기에 의해 대체된다. 추가로, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 항체 성능을 추가로 정밀화하기 위해 이루어진다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이고, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비-인간 이뮤노글로불린의 그것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 이뮤노글로불린 서열의 것이다. 인간화 항체는 임의로 또한 이뮤노글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 이뮤노글로불린의 적어도 일부를 포함할 것이다. 추가의 상세내용에 대해서는, 문헌 [Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)]을 참조한다. 또한, 하기 종설 논문 및 그에 인용된 참고문헌을 참조한다: 문헌 [Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1: 105-115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995); Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994)].
"인간 항체"는 인간 또는 인간 세포에 의해 생산된 항체의 그것에 상응하는 아미노산 서열을 포함하고/거나, 예를 들어 본원에 개시된 바와 같은 인간 항체를 제조하는 임의의 기술을 사용하여 제조된, 인간 항체 레퍼토리 또는 다른 인간 항체-코딩 서열을 사용한 비-인간 공급원으로부터 유래된 것이다. 이러한 기술은 인간-유래 조합 라이브러리, 예컨대 파지 디스플레이 라이브러리를 스크리닝하는 것 (예를 들어, 문헌 [Marks et al., J. Mol. Biol., 222: 581-597 (1991) 및 Hoogenboom et al., Nucl. Acids Res., 19: 4133-4137 (1991)] 참조); 인간 모노클로날 항체의 생산을 위해 인간 골수종 및 마우스-인간 헤테로골수종 세포주를 사용하는 것 (예를 들어, 문헌 [Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 55-93 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 및 Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)] 참조); 및 내인성 이뮤노글로불린 생산의 부재 하에 인간 항체의 전체 레퍼토리를 생산할 수 있는 트랜스제닉 동물 (예를 들어, 마우스)에서 모노클로날 항체를 생성하는 것 (예를 들어, 문헌 [Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA, 90: 2551 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362: 255 (1993); Bruggermann et al.,Year in Immunol., 7: 33 (1993)] 참조)을 포함한다. 인간 항체의 이러한 정의는 비-인간 동물로부터의 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체는 구체적으로 제외한다.
"단리된" 항체는 그의 자연 환경의 성분으로부터 확인되고 분리 및/또는 회수된 것이다. 그의 자연 환경의 오염 성분은 항체의 진단 또는 치료 용도를 방해할 물질이고, 효소, 호르몬 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 예를 들어, 전기영동 (예를 들어, SDS-PAGE, 등전 포커싱 (IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피 (예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC)에 의한 결정 시 95% 또는 99% 초과의 순도로 정제된다. 항체 순도의 평가 방법의 검토를 위해, 예를 들어 문헌 [Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)]을 참조한다.
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항원에 대한 항체의 결합에 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 (각각 VH 및 VL)은 일반적으로 유사한 구조를 갖고, 각각의 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역 (FR) 및 3개의 초가변 영역 (HVR)을 포함한다. (예를 들어, 문헌 [Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)]을 참조한다.) 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원-결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 게다가, 특정한 항원에 결합하는 항체는 각각 상보적 VL 또는 VH 도메인의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터의 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)]을 참조한다.
본원에 사용된 용어 "초가변 영역," "HVR," 또는 "HV"는 서열 내에서 초가변적이고/거나 구조적으로 한정된 루프를 형성하는 항체 가변 도메인의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 6개의 초가변 영역; VH에서 3개 (H1, H2, H3), 및 VL에서 3개 (L1, L2, L3)를 포함한다. 다수의 초가변 영역 묘사가 사용되고 있고 본원에 포괄된다. 카바트(Kabat) 상보성 결정 영역 (CDR)은 서열 가변성을 기초로 하고, 가장 통상적으로 사용된다 (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). 코티아(Chothia)는 그 대신 구조적 루프의 위치를 지칭한다 (Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). AbM 초가변 영역은 카바트 CDR과 코티아 구조적 루프 사이의 절충을 나타내고, 이는 옥스포드 몰레큘라(Oxford Molecular)의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용되고 있다. "접촉" 초가변 영역은 이용가능한 복합체 결정 구조의 분석을 기초로 한다. 각각의 이들 HVR로부터의 잔기를 하기에 나타낸다.
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초가변 영역은 하기와 같은 "확장된 초가변 영역"을 포함할 수 있다: VL 내의 24-36 또는 24-34 (L1), 46-56 또는 49-56 또는 50-56 또는 52-56 (L2) 및 89-97 (L3), 및 VH 내의 26-35 (H1), 50-65 또는 49-65 (H2) 및 93-102, 94-102 또는 95-102 (H3). 가변 도메인 잔기는 각각의 이들 정의에 대해 상기 문헌 [Kabat et al.]에 따라 넘버링된다.
"프레임워크" 또는 "FR" 잔기는 본원에 정의된 바와 같은 초가변 영역 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다. 가변 도메인의 FR은 일반적으로 4개의 FR 도메인: FR1, FR2, FR3, 및 FR4로 이루어진다. 따라서, HVR 및 FR 서열은 일반적으로 VH (또는 VL)에서 하기 서열로 나타난다: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
본원의 목적상 "수용자 인간 프레임워크"는 하기 정의되는 바와 같은, 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크로부터 유래된 경쇄 가변 도메인 (VL) 프레임워크 또는 중쇄 가변 도메인 (VH) 프레임워크의 아미노산 서열을 포함하는 프레임워크이다. 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크"로부터 유래된" 수용자 인간 프레임워크는 그의 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있거나, 또는 아미노산 서열 변화를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 아미노산 변화의 수는 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 또는 2개 이하이다. 일부 실시양태에서, VL 수용자 인간 프레임워크는 VL 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 서열 또는 인간 컨센서스 프레임워크 서열과 서열이 동일하다.
"인간 컨센서스 프레임워크"는 인간 이뮤노글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택 시 가장 흔히 발생하는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 일반적으로, 인간 이뮤노글로불린 VL 또는 VH 서열의 선택은 가변 도메인 서열의 하위군으로부터 행한다. 일반적으로, 서열의 하위군은 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3]에서와 같은 하위군이다.
용어 "아밀로이드-관련 영상화 이상 - 부종" 또는 "ARIA-E"는 뇌 혈관성 부종 및 고랑 삼출액을 포괄한다.
용어 "아밀로이드-관련 영상화 이상 - 출혈" 또는 "ARIA-H"는 중추 신경계의 미세출혈 및 표재성 철침착증을 포괄한다.
"아포지단백질 E4 양성" 또는 "ApoE4 양성"과 함께 본원에서 상호교환가능하게 사용되는 "아포지단백질 E4 보인자" 또는 "ApoE4 보인자"는 적어도 1개의 아포지단백질 E4 (또는 "ApoE4") 대립유전자를 갖는 개체를 지칭한다. 0개의 ApoE4 대립유전자를 갖는 개체는 본원에서 "ApoE4 음성" 또는 "ApoE4 비-보인자"로 지칭된다. 또한, 문헌 [Prekumar, et al., 1996, Am. J Pathol. 148:2083-95]을 참조한다.
용어 "뇌 혈관성 부종"은 뇌의 세포내 또는 세포외 공간에의 혈관내 유체 또는 단백질의 과다 축적을 지칭한다. 뇌 혈관성 부종은 FLAIR MRI를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 예를 들어 뇌 MRI에 의해 검출될 수 있고, 무증상일 수 있거나 ("무증상 혈관성 부종") 또는 신경계 증상, 예컨대 혼란, 어지럼증, 구토, 및 기면과 연관될 수 있다 ("증후성 혈관성 부종") (문헌 [Sperling et al. Alzheimer's & Dementia, 7:367, 2011] 참조).
용어 "뇌 거대출혈"은 두개내 출혈, 또는 뇌내 직경 약 1 cm 초과인 구역의 블리딩을 지칭한다. 뇌 거대출혈은 T2*-가중 GRE MRI를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 예를 들어 뇌 MRI에 의해 검출될 수 있고, 무증상일 수 있거나 ("무증상 거대출혈") 또는 일시적 또는 영구적 초점성 운동 또는 감각 장애, 운동실조, 실어증 및 구음장애와 같은 증상과 연관될 수 있다 ("증후성 거대출혈") (예를 들어, 문헌 [Chalela JA, Gomes J. Expert Rev. Neurother. 2004 4:267, 2004 및 Sperling et al. Alzheimer's & Dementia, 7:367, 2011] 참조).
용어 "뇌 미세출혈"은 두개내 출혈, 또는 뇌내 직경 약 1 cm 미만인 구역의 블리딩을 지칭한다. 뇌 미세출혈은 T2*-가중 GRE MRI를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 예를 들어 뇌 MRI에 의해 검출될 수 있고, 무증상일 수 있거나 ("무증상 미세출혈") 또는 일시적 또는 영구적 초점성 운동 또는 감각 장애, 운동실조, 실어증 및 구음장애와 같은 증상과 잠재적으로 연관될 수 있다 ("증후성 미세출혈"). 예를 들어, 문헌 [Greenberg, et al., 2009, Lancet Neurol. 8:165-74]을 참조한다.
용어 "고랑 삼출액"은 뇌의 구 또는 고랑 내 유체의 삼출액을 지칭한다. 고랑 삼출액은 FLAIR MRI를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 예를 들어 뇌 MRI에 의해 검출될 수 있다. 문헌 [Sperling et al. Alzheimer's & Dementia, 7:367, 2011]을 참조한다.
용어 "중추 신경계의 표재성 철침착증"은 뇌의 지주막하 공간 내로의 블리딩 또는 출혈을 지칭하고, T2*-가중 GRE MRI를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 예를 들어 뇌 MRI에 의해 검출될 수 있다. 중추 신경계의 표재성 철침착증을 나타내는 증상은 감각신경성 난청, 소뇌성 운동실조, 및 추체로 징후를 포함한다. 문헌 [Kumara-N, Am J Neuroradiol. 31:5, 2010]을 참조한다.
본원에 사용된 용어 "진행"은 시간의 경과에 따른 질환의 악화를 지칭한다. 질환의 "진행 속도" 또는 "진행의 속도"는 질환에 걸린 것으로 진단된 환자에서 시간의 경과에 따라 질환이 얼마나 빨리 또는 느리게 발달되는지를 지칭한다. 질환의 진행 속도는 질환의 특정한 특징의 시간의 경과에 따른 측정가능한 변화에 의해 나타내어질 수 있다. 특정한 유전자 형질을 보유하는 환자는 그의 질환 상태가 이러한 유전자 형질이 없는 환자보다 더 빨리 진행되는 경우에, "증가된 진행 속도"를 갖는다 또는 "증가된 진행 속도"를 가질 가능성이 더 크다고 언급된다. 다른 한편으로, 요법에 반응하는 환자는 그의 질환 진행이 치료 전의 그의 질환 상태 또는 치료의 부재 하의 다른 환자와 비교하여 요법 후에 감속되는 경우에, "감소된 진행 속도"를 갖는다 또는 "감소된 진행 속도"를 가질 가능성이 더 크다고 언급된다.
본원에 사용된 "반응할 가능성이 더 큰"은 아밀로이드증, 예를 들어, AD의 진행의 감속 또는 방지를 입증할 가능성이 가장 큰 환자를 지칭한다. AD와 관련하여, "반응할 가능성이 더 큰"은 치료에 의해 기능 또는 인지의 상실에서 감소를 입증할 가능성이 가장 큰 환자를 지칭한다. 본 발명의 문맥에서 어구 "에 반응하는"은 본원에 기재된 바와 같은 장애를 앓고 있거나, 앓는 것으로 의심되거나, 앓을 경향이 있거나, 또는 걸린 것으로 진단된 환자가 항-A베타 치료에 대해 반응을 보인다는 것을 나타낸다.
본원에 사용된 어구 "환자를 선택하는 것" 또는 "환자를 확인하는 것"은 환자의 샘플에서 대립유전자의 존재와 관련하여 생성된 정보 또는 데이터를 사용하여 항-A베타 항체를 포함하는 치료로부터 이익을 얻을 가능성이 큰 환자를 확인 또는 선택하는 것을 지칭한다. 사용되거나 생성된 정보 또는 데이터는 서면, 구술 또는 전자의 임의의 형태일 수 있다. 일부 실시양태에서, 생성된 정보 또는 데이터를 사용하는 것은 소통, 제시, 보고, 저장, 송신, 전달, 공급, 전송, 분배 또는 그의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 소통, 제시, 보고, 저장, 송신, 전달, 공급, 전송, 분배 또는 그의 조합은 컴퓨터 장치, 분석기 유닛 또는 그의 조합에 의해 수행된다. 일부 추가 실시양태에서, 소통, 제시, 보고, 저장, 송신, 전달, 공급, 전송, 분배 또는 그의 조합은 실험실 또는 의학 전문가에 의해 수행된다. 일부 실시양태에서, 정보 또는 데이터는 특정 대립유전자가 샘플에 존재하는지 또는 부재하는지의 표시를 포함한다. 일부 실시양태에서, 정보 또는 데이터는 환자가 항-A베타를 포함하는 요법에 반응할 가능성이 더 크다는 표시를 포함한다.
"이펙터 기능"은 항체 이소형에 따라 달라지는, 항체의 Fc 영역에서 기인하는 생물학적 활성을 지칭한다. 항체 이펙터 기능의 예는 C1q 결합 및 보체 의존성 세포독성 (CDC); Fc 수용체 결합; 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC); 식세포작용; 세포 표면 수용체 (예를 들어, B 세포 수용체)의 하향 조절; 및 B-세포 활성화를 포함한다. 야생형 IgG4 항체가 야생형 IgG1 항체보다 더 낮은 이펙터 기능을 갖는 것으로 관련 기술분야에 공지되어 있다.
본원에서 용어 "Fc 영역"은 불변 영역의 적어도 일부를 함유하는 이뮤노글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하기 위해 사용된다. 상기 용어는 천연 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 Cys226 또는 Pro230으로부터 중쇄의 카르복실-말단까지 연장된다. 그러나, Fc 영역의 C-말단 리신 (Lys447)은 존재할 수 있거나 또는 존재하지 않을 수 있다. 본원에 달리 명시되지 않는 한, Fc 영역 또는 불변 영역에서 아미노산 잔기의 넘버링은 문헌 [Kabat et al.et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991]에 기재된 바와 같은, EU 인덱스로도 불리는 EU 넘버링 시스템에 따른다.
용어 "전장 항체", "무손상 항체" 및 "전체 항체"는 천연 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖거나 또는 본원에 정의된 바와 같은 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭하는 것으로 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.
용어 "숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양물"은 상호교환가능하게 사용되고, 외인성 핵산이 도입된 세포 (이러한 세포의 자손 포함)를 지칭한다. 숙주 세포는 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"를 포함하며, 이는 1차 형질전환된 세포 및 계대의 횟수와 관계없이 그로부터 유래된 자손을 포함한다. 자손은 모 세포와 핵산 내용물이 완전히 동일하지 않을 수 있지만, 돌연변이를 함유할 수 있다. 원래 형질전환된 세포에 대해 스크리닝되거나 선택된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이체 자손이 본원에 포함된다.
"면역접합체"는 추가의 치료제를 포함하나 이에 제한되지는 않는 1종 이상의 이종 분자(들)에 접합된 항체이다.
"단리된" 핵산은 그의 자연 환경의 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산은 핵산 분자를 통상적으로 함유하는 세포 내에 함유된 핵산 분자를 포함하지만, 핵산 분자는 염색체외에 또는 그의 천연 염색체 위치와 상이한 염색체 위치에 존재한다.
"항-A베타 항체를 코딩하는 단리된 핵산"은 항체 중쇄 및 경쇄 (또는 그의 단편)를 코딩하는 하나 이상의 핵산 분자 (단일 벡터 또는 개별 벡터 내의 이러한 분자(들) 및 숙주 세포에서 하나 이상의 위치에 존재하는 이러한 핵산 분자(들) 포함)를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "초기 알츠하이머병" 또는 "초기 AD" (예를 들어, "초기 AD로 진단된 환자" 또는 "초기 AD를 앓고 있는 환자")는 AD로 인한 경도 인지 장애, 예컨대 기억 결손을 갖는 환자 및 AD 바이오마커를 갖는 환자, 예를 들어 아밀로이드 양성 환자를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "경도 알츠하이머병" 또는 "경도 AD" (예를 들어, "경도 AD로 진단된 환자")는 MMSE 스코어 20 내지 26을 특징으로 하는 AD 병기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "경도 내지 중등도 알츠하이머병" 또는 "경도 내지 중등도 AD"는 경도 및 중등도 AD 둘 다를 포괄하고, MMSE 스코어 18 내지 26을 특징으로 한다.
본원에 사용된 용어 "중등도 알츠하이머병" 또는 "증등도 AD" (예를 들어, ("중등도 AD로 진단된 환자")는 MMSE 스코어 18 내지 19를 특징으로 하는 AD 병기를 지칭한다.
"네이키드 항체"는 이종 모이어티 (예를 들어, 추가의 치료 모이어티) 또는 방사성표지에 접합되지 않은 항체를 지칭한다. 네이키드 항체는 제약 제제에 존재할 수 있다.
"천연 항체"는 다양한 구조를 갖는 자연 발생 이뮤노글로불린 분자를 지칭한다. 예를 들어, 천연 IgG 항체는 디술피드-결합된 2개의 동일한 경쇄 및 2개의 동일한 중쇄로 구성된 약 150,000 달톤의 이종사량체 당단백질이다. N-말단에서 C-말단으로, 각각의 중쇄는 가변 중쇄 도메인 또는 중쇄 가변 도메인으로도 불리는 가변 영역 (VH)에 이어서 3개의 불변 도메인 (CH1, CH2 및 CH3)을 갖는다. 유사하게, N-말단에서 C-말단으로, 각각의 경쇄는 가변 경쇄 도메인 또는 경쇄 가변 도메인으로도 불리는 가변 영역 (VL)에 이어서 불변 경쇄 (CL) 도메인을 갖는다. 항체의 경쇄는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 카파 (κ) 및 람다 (λ)로 불리는 2가지 유형 중 1가지로 할당될 수 있다.
용어 "패키지 삽입물"은 치료 제품의 사용에 관한 적응증, 용법, 투여량, 투여, 조합 요법, 금기 및/또는 경고에 대한 정보가 담긴, 이러한 치료 제품의 상업용 패키지에 통상적으로 포함되는 지침을 지칭하는 것으로 사용된다. 용어 "패키지 삽입물"은 또한 의도되는 용도, 시험 원리, 시약의 제조 및 취급, 시편 수집 및 제조, 검정 및 검정 절차의 보정, 성능 및 정밀도 데이터, 예컨대 검정의 감도 및 특이성에 대한 정보가 담긴, 진단 제품의 상업용 패키지에 통상적으로 포함되는 지침서를 지칭하는 것으로 사용된다.
참조 폴리펩티드 서열에 대한 "퍼센트 (%) 아미노산 서열 동일성"은 서열을 정렬시키고 필요한 경우에 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하기 위해 갭을 도입한 후 임의의 보존적 치환은 서열 동일성 부분으로 간주하지 않으면서 참조 폴리펩티드 서열 내의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 내의 아미노산 잔기의 백분율로서 정의된다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 결정하기 위한 정렬은 관련 기술분야 기술 내의 다양한 방식으로, 예를 들어 공개적으로 입수가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 메갈라인(Megalign) (DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여 달성할 수 있다. 통상의 기술자는 비교할 전장 서열에 대한 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 비롯하여 서열 정렬을 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 그러나, 본원의 목적상, % 아미노산 서열 동일성 값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 사용하여 생성된다. ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 제넨테크, 인크.(Genentech, Inc.) 소유로서, 소스 코드는 미국 저작권청 (20559 워싱턴 디.씨.)에 사용자 문서로 제출되어 있고, 미국 저작권 등록 번호 TXU510087 하에 등록되어 있다. ALIGN-2 프로그램은 제넨테크, 인크. (캘리포니아주 사우스 샌프란시스코)로부터 공개적으로 입수가능하거나, 소스 코드로부터 컴파일링될 수 있다. ALIGN-2 프로그램은 디지털 UNIX V4.0D를 비롯한 UNIX 운영 시스템에서의 사용을 위해 컴파일링되어야 한다. 모든 서열 비교 파라미터는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되어 있으며 변하지 않는다.
ALIGN-2가 아미노산 서열 비교를 위해 사용되는 경우에, 주어진 아미노산 서열 B에 대한, 주어진 아미노산 서열 B와의, 또는 주어진 아미노산 서열 B 대비 주어진 아미노산 서열 A의 % 아미노산 서열 동일성 (대안적으로, 주어진 아미노산 서열 B에 대한, 주어진 아미노산 서열 B와의, 또는 주어진 아미노산 서열 B 대비 특정 % 아미노산 서열 동일성을 갖거나 또는 이를 포함하는 주어진 아미노산 서열 A라는 어구로 기재될 수 있음)은 하기와 같이 계산되며:
(X/Y) 분율 x 100
여기서 X는 A 및 B의 프로그램 정렬 시 서열 정렬 프로그램 ALIGN-2에 의해 동일한 매치로 스코어링된 아미노산 잔기의 수이고, Y는 B의 아미노산 잔기의 총 수이다. 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 동일하지 않은 경우에는 B에 대한 A의 % 아미노산 서열 동일성이 A에 대한 B의 % 아미노산 서열 동일성과 동일하지 않을 것임을 인식할 것이다. 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 % 아미노산 서열 동일성 값은 ALIGN-2 컴퓨터 프로그램을 사용하여 직전 단락에 기재된 바와 같이 수득한다.
용어 "제약 제제" 또는 "제약 조성물"은 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록 하는 형태로 존재하며 제제가 투여될 대상체에게 허용되지 않는 독성인 추가의 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다.
"제약상 허용되는 담체"는 대상체에게 비독성인, 활성 성분 이외의 제약 제제 내의 성분을 지칭한다. 제약상 허용되는 담체는 완충제, 부형제, 안정화제 또는 보존제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "벡터"는 연결된 또 다른 핵산을 증식시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 상기 용어는 자기-복제 핵산 구조로서의 벡터 뿐만 아니라, 도입된 숙주 세포의 게놈 내로 혼입되는 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 작동가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "발현 벡터"로 지칭된다.
"영상화제"는 그의 존재 및/또는 위치가 직접적으로 또는 간접적으로 검출되게 하는 1종 이상의 특성을 갖는 화합물이다. 이러한 영상화제의 예는 검출을 허용하는 표지된 모이어티가 혼입되어 있는 단백질 및 소분자 화합물을 포함한다.
"표지"는 검출 또는 영상화에 사용될 분자와 커플링되는 마커이다. 이러한 표지의 예는 방사성표지, 형광단, 발색단, 또는 친화성 태그를 포함한다. 한 실시양태에서, 표지는 의학적 영상화에 사용되는 방사성표지, 예를 들어 tc99m 또는 I123, 또는 핵 자기 공명 (NMR) 영상화 (자기 공명 영상화, mri로도 공지됨)를 위한 스핀 표지, 예컨대 마찬가지로 아이오딘-123, 아이오딘-131, 인듐-111, 플루오린-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망가니즈, 철 등이다.
방법 및 조성물
본 개시내용은 항-A베타 항체를 사용한 치료를 위한 우수한 후보일, AD를 비롯한 아밀로이드증의 위험이 있거나 이에 걸린 환자의 치료, 예후, 선택 및/또는 확인을 위한 조성물 및 방법을 제공한다. 한 측면에서, 본 발명은 부분적으로 개선된 치료 방법을 기초로 한다.
특정 실시양태에서, A베타에 결합하는 항체가 제공된다. 본 발명의 항체는, 예를 들어 알츠하이머병 ("AD") 및 다른 질환의 진단 또는 치료에 유용하다.
예시적인 항체
한 측면에서, 본 발명은 A베타에 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 인간 A베타의 단량체, 올리고머 및 피브릴 형태에 양호한 친화도로 결합할 수 있는 항-A베타 항체를 제공한다. 한 실시양태에서, 항-A베타 항체는 A베타의 잔기 13-24 내의 A베타의 에피토프에 결합하는 항체이다. 하나의 이러한 실시양태에서, 항체는 크레네주맙이다.
한 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 5에 제시된 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 9에 제시된 경쇄 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 5에 제시된 아미노산 서열의 아미노산 1 내지 112의 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 9에 제시된 아미노산 서열의 아미노산 1 내지 112의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 5 및 서열식별번호: 9의 HVR 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 5 및 서열식별번호: 9의 HVR 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 또는 그 초과로 동일한 HVR 서열을 포함한다.
임의의 상기 실시양태에서, 항-A베타 항체는 인간화된다. 한 실시양태에서, 항-A베타 항체는 임의의 상기 실시양태에서와 같은 HVR을 포함하고, 추가로 수용자 인간 프레임워크, 예를 들어 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크를 포함한다.
또 다른 측면에서, 항-A베타 항체는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열의 아미노산 1 내지 112와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열과 비교하여 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 그러한 서열을 포함하는 항-A베타 항체는 A베타에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 5에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다. 임의로, 항-A베타 항체는 서열식별번호: 5의 VH 서열을 포함한다 (그러한 서열의 번역후 변형 포함).
또 다른 측면에서, 서열식별번호: 9의 아미노산 서열의 아미노산 1 내지 112와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하는 항-A베타 항체가 제공된다. 특정 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열과 비교하여 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 그러한 서열을 포함하는 항-A베타 항체는 A베타에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산이 서열식별번호: 9에서 치환, 삽입 및/또는 결실된다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입 또는 결실은 HVR 밖의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다. 임의로, 항-A베타 항체는 서열식별번호: 9의 VL 서열을 포함한다 (그러한 서열의 번역후 변형 포함).
또 다른 측면에서, 상기 제공된 임의의 실시양태에서와 같은 VH 및 상기 제공된 임의의 실시양태에서와 같은 VL을 포함하는 항-A베타 항체가 제공된다.
추가 측면에서, 본 발명은 본원에 제공된 항-A베타 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 5의 VH 서열 및 서열식별번호: 9의 VL 서열을 포함하는 항-A베타 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다.
본 발명의 추가 측면에서, 임의의 상기 실시양태에 따른 항-A베타 항체는 키메라, 인간화 또는 인간 항체를 비롯한 모노클로날 항체이다. 한 실시양태에서, 항-A베타 항체는 항체 단편, 예를 들어 Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 전장 항체, 예를 들어 무손상 IgG4 항체, 또는 본원에 정의된 바와 같은 다른 항체 부류 또는 이소형이다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 이중특이적 항체이다.
추가 측면에서, 임의의 상기 실시양태에 따른 항-A베타 항체는 하기 섹션 1-7에 기재된 바와 같은 임의의 특색을 단독으로 또는 조합하여 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 항-A베타 항체는 아미노산 서열 서열식별번호: 6을 포함하는 HVR-L1; 아미노산 서열 서열식별번호: 7을 포함하는 HVR-L2; 아미노산 서열 서열식별번호: 8을 포함하는 HVR-L3; 아미노산 서열 서열식별번호: 2를 포함하는 HVR-H1; 아미노산 서열 서열식별번호: 3을 포함하는 HVR-H2; 및 아미노산 서열 서열식별번호: 4를 포함하는 HVR-H3을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 항체는 중쇄 및 경쇄 서열 서열식별번호: 5 및 서열식별번호: 9를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 5 및 서열식별번호: 9 내의 가변 영역 서열을 포함한다.
임의의 상기 실시양태에서, 항-A베타 항체는 인간화될 수 있다. 한 실시양태에서, 항-A베타 항체는 임의의 상기 실시양태에서와 같은 HVR을 포함하고, 추가로 수용자 인간 프레임워크, 예를 들어 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크를 포함한다.
1. 항체 친화도
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0.1 nM, ≤ 0.01 nM, 또는 ≤ 0.001 nM (예를 들어, 10-8 M 이하, 예를 들어, 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들어, 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (Kd)를 갖는다.
한 실시양태에서, Kd는 하기 검정에 의해 기재된 바와 같은, 관심 항체의 Fab 버전 및 그의 항원을 사용하여 수행되는 방사성표지된 항원 결합 검정 (RIA)에 의해 측정된다. 항원에 대한 Fab의 용액 결합 친화도는 비표지된 항원의 적정 시리즈의 존재 하에 최소 농도의 (125I)-표지된 항원으로 Fab를 평형화시킨 후, 항-Fab 항체-코팅된 플레이트를 사용하여 결합된 항원을 포획함으로써 측정한다 (예를 들어, 문헌 [Chen et al.et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)] 참조). 검정 조건을 확립하기 위해, 마이크로타이터(MICROTITER)® 멀티-웰 플레이트 (써모 사이언티픽(Thermo Scientific))를 50 mM 탄산나트륨 (pH 9.6) 중의 5 μg/ml 포획 항-Fab 항체 (카펠 랩스(Cappel Labs))로 밤새 코팅한 후, PBS 중의 2% (w/v) 소 혈청 알부민으로 2 내지 5시간 동안 실온 (대략 23℃)에서 차단한다. 비-흡착 플레이트 (눈크(Nunc) #269620)에서는 100 pM 또는 26 pM [125I]-항원을 관심 Fab의 연속 희석물과 혼합한다 (예를 들어, 문헌 [Presta et al., Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)]의 항-VEGF 항체, Fab-12의 평가와 일치함). 이어서, 관심 Fab를 밤새 인큐베이션하지만; 평형에 도달하는 것을 확실하게 하기 위해 더 오랜 기간 (예를 들어, 약 65시간) 동안 계속 인큐베이션할 수 있다. 이후에, 혼합물을 포획 플레이트로 옮겨 실온에서 (예를 들어, 1시간 동안) 인큐베이션한다. 이어서, 용액을 제거하고, 플레이트를 PBS 중의 0.1% 폴리소르베이트 20 (트윈-20®)으로 8회 세척한다. 플레이트가 건조된 경우에, 150 μl/웰의 섬광제 (마이크로신트(MICROSCINT)-20™; 팩커드(Packard))를 첨가하고, 플레이트를 탑카운트(TOPCOUNT)™ 감마 계수기 (팩커드) 상에서 10분 동안 계수한다. 최대 결합의 20% 이하를 제공하는 각 Fab의 농도를 선택하여 경쟁적 결합 검정에 사용한다.
또 다른 실시양태에 따르면, Kd는 ~10 반응 단위 (RU)로 고정된 항원 CM5 칩을 사용하여 25℃에서 비아코어®-2000 또는 비아코어®-3000 (비아코어, 인크.(BIAcore, Inc.), 뉴저지주 피스카타웨이)를 사용하는 표면 플라즈몬 공명 검정을 사용하여 측정된다. 간략하게, 카르복시메틸화 덱스트란 바이오센서 칩 (CM5, 비아코어, 인크.)을 공급업체의 지침에 따라 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDC) 및 N-히드록시숙신이미드 (NHS)로 활성화시킨다. 항원을 10 mM 아세트산나트륨, pH 4.8을 사용하여 5 μg/ml (~0.2 μM)로 희석한 후에 커플링된 단백질의 대략 10 반응 단위 (RU)가 달성되도록 5 μl/분의 유량으로 주입한다. 항원의 주입 후, 1 M 에탄올아민을 주입하여 미반응기를 차단한다. 동역학적 측정을 위해, Fab의 2-배 연속 희석물 (0.78 nM 내지 500 nM)을 대략 25 μl/분의 유량으로 25℃에서 0.05% 폴리소르베이트 20 (트윈-20™) 계면활성제를 갖는 PBS (PBST) 내에 주입한다. 간단한 일-대-일 랭뮤어 결합 모델 (비아코어® 평가 소프트웨어 버전 3.2)을 사용하여 회합 및 해리 센소그램을 동시에 피팅시켜 회합률 (kon) 및 해리율 (koff)을 계산한다. 평형 해리 상수 (Kd)는 koff/kon의 비로 계산한다. 예를 들어, 문헌 [Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)]을 참조한다. 온-레이트가 상기 표면 플라즈몬 공명 검정에 의해 106 M- 1 s-1을 초과하는 경우에, 온-레이트는 분광계, 예컨대 정지-유동 설비 분광광도계 (아비브 인스트루먼츠) 또는 교반 큐벳이 장착된 8000-시리즈 SLM-아민코™ 분광광도계 (써모스펙트로닉)에서 측정되는 바와 같은, 증가하는 농도의 항원의 존재 하에 PBS, pH 7.2 중 20 nM의 항원 항체 (Fab 형태)의 25℃에서의 형광 방출 강도 (여기 = 295 nm; 방출 = 340 nm, 16 nm 대역-통과)의 증가 또는 감소를 측정하는 형광 켄칭 기술을 사용하는 것에 의해 결정될 수 있다.
2. 항체 단편
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 항체 단편이다. 항체 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, 및 scFv 단편, 및 하기 기재된 다른 단편을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 항체 단편의 검토를 위해, 문헌 [Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)]을 참조한다. scFv 단편의 검토를 위해, 예를 들어 문헌 [Pluckthuen, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)]을 참조하고; 또한 WO 93/16185; 및 미국 특허 번호 5,571,894 및 5,587,458을 참조한다. 샐비지 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하고 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')2 단편의 논의에 대해서는, 미국 특허 번호 5,869,046을 참조한다.
디아바디는 2가 또는 이중특이적일 수 있는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 항체 단편이다. 예를 들어, EP 404,097; WO 1993/01161; 문헌 [Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); 및 Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)]을 참조한다. 트리아바디 및 테트라바디는 또한 문헌 [Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)]에 기재되어 있다.
단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 실시양태에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체이다 (도만티스, 인크.(Domantis, Inc.), 매사추세츠주 월섬; 예를 들어 미국 특허 번호 6,248,516 B1 참조). 특정 실시양태에서, 2종 이상의 단일-도메인 항체는 함께 연결되어 다가 친화도를 갖는 이뮤노글로불린 구축물을 형성할 수 있다 (즉, 제1 단일-도메인 항체의 N- 또는 C-말단은 제2 단일-도메인 항체의 N- 또는 C-말단에 융합되거나 달리 연결될 수 있음).
항체 단편은 본원에 기재된 바와 같이, 무손상 항체의 단백질분해적 소화 뿐만 아니라 재조합 숙주 세포 (예를 들어, 이. 콜라이(E. coli) 또는 파지)에 의한 생산을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.
3. 키메라 및 인간화 항체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 키메라 항체이다. 특정 키메라 항체는 예를 들어 미국 특허 번호 4,816,567; 및 문헌 [Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)]에 기재되어 있다. 한 예에서, 키메라 항체는 비-인간 가변 영역 (예를 들어, 마우스, 래트, 햄스터, 토끼 또는 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이로부터 유래된 가변 영역) 및 인간 불변 영역을 포함한다. 추가의 예에서, 키메라 항체는 부류 또는 하위부류가 모 항체의 것으로부터 변화된 "부류 교체된" 항체이다. 키메라 항체는 그의 항원-결합 단편을 포함한다.
특정 실시양태에서, 키메라 항체는 인간화 항체이다. 전형적으로, 비-인간 항체는 모 비-인간 항체의 특이성 및 친화도를 보유하면서 인간에 대한 면역원성이 감소되도록 인간화된다. 일반적으로, 인간화 항체는 HVR, 예를 들어 CDR (또는 그의 일부)이 비-인간 항체로부터 유래되고, FR (또는 그의 일부)이 인간 항체 서열로부터 유래된 1개 이상의 가변 도메인을 포함한다. 인간화 항체는 또한 임의로 인간 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체 내의 일부 FR 잔기는, 예를 들어 항체 특이성 또는 친화도를 복원하거나 또는 개선시키기 위해, 비-인간 항체 (예를 들어, HVR 잔기가 유래된 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환된다.
인간화 항체 및 그의 제조 방법은 예를 들어 문헌 [Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)]에서 검토되었고, 예를 들어 문헌 [Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989)]; 미국 특허 번호 5,821,337, 7,527,791, 6,982,321, 및 7,087,409; 문헌 [Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) (SDR (a-CDR) 그라프팅 기재); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) ("재표면화" 기재); Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) ("FR 셔플링" 기재); 및 Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) 및 Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (FR 셔플링에 대한 "유도 선택" 접근법 기재)]에 추가로 기재되어 있다.
인간화에 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은, "최적-피트" 방법을 사용하여 선택된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Sims et al. J. Immunol. 151: 2296 (1993)] 참조); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정한 하위군의 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); 및 Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)] 참조); 인간 성숙 (체세포 성숙) 프레임워크 영역 또는 인간 배선 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)] 참조); 및 FR 라이브러리 스크리닝으로부터 유래된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) 및 Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)] 참조)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
4. 인간 항체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 관련 기술분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 인간 항체는 일반적으로 문헌 [van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) 및 Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)]에 기재되어 있다.
인간 항체는 항원 챌린지에 반응하여 인간 가변 영역을 갖는 무손상 인간 항체 또는 무손상 항체를 생산하도록 변형된 트랜스제닉 동물에게 면역원을 투여하는 것에 의해 제조할 수 있다. 이러한 동물은 전형적으로 내인성 이뮤노글로불린 유전자좌를 대체하거나 또는 염색체외에 존재하거나 동물의 염색체로 무작위적으로 통합된 인간 이뮤노글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 함유한다. 이러한 트랜스제닉 마우스에서, 내인성 이뮤노글로불린 유전자좌는 일반적으로 불활성화된다. 트랜스제닉 동물로부터 인간 항체를 수득하는 방법의 검토를 위해, 문헌 [Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)]을 참조한다. 또한, 예를 들어 제노마우스(XENOMOUSE)™ 기술을 기재하는 미국 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584; 휴맙(HUMAB)® 기술을 기재하는 미국 특허 번호 5,770,429; K-M 마우스(K-M MOUSE)® 기술을 기재하는 미국 특허 번호 7,041,870, 및 벨로시마우스(VELOCIMOUSE)® 기술을 기재하는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2007/0061900을 참조한다. 이러한 동물에 의해 생성된 무손상 항체로부터의 인간 가변 영역은 예를 들어 상이한 인간 불변 영역과 조합시키는 것에 의해 추가로 변형될 수 있다.
인간 항체는 또한 하이브리도마-기반 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 모노클로날 항체의 생산을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주가 기재되어 있다. (예를 들어, 문헌 [Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 및 Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)] 참조.) 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체는 또한 문헌 [Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)]에 기재되어 있다. 추가의 방법은, 예를 들어 미국 특허 번호 7,189,826 (하이브리도마 세포주로부터의 모노클로날 인간 IgM 항체의 생산 기재) 및 문헌 [Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)] (인간-인간 하이브리도마 기재)에 기재된 것을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술 (트리오마(Trioma) 기술)은 또한 문헌 [Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 및 Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)]에 기재되어 있다.
인간 항체는 또한 인간-유래 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열을 단리하는 것에 의해 생성될 수 있다. 이어서, 이러한 가변 도메인 서열은 목적하는 인간 불변 도메인과 조합될 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하는 기술은 하기 기재된다.
5. 라이브러리-유래 항체
본 발명의 항체는 목적 활성 또는 활성들을 갖는 항체에 대해 조합 라이브러리를 스크리닝하는 것에 의해 단리될 수 있다. 예를 들어, 파지 디스플레이 라이브러리를 생성하고, 목적하는 결합 특성을 보유하는 항체에 대해 이러한 라이브러리를 스크리닝하는 다양한 방법이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 이러한 방법은 예를 들어 문헌 [Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)]에 검토되어 있고, 예를 들어 문헌 [McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)]에 추가로 기재되어 있다.
특정 파지 디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는 개별적으로 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR)에 의해 클로닝되고, 파지 라이브러리에 무작위 재조합되며, 이는 이어서 문헌 [Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)]에 기재된 바와 같이 항원-결합 파지에 대해 스크리닝될 수 있다. 파지는 전형적으로 항체 단편을 단일-쇄 Fv (scFv) 단편 또는 Fab 단편으로 디스플레이한다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 구축할 필요없이 면역원에 대한 고-친화도 항체를 제공한다. 대안적으로, 나이브 레퍼토리를 클로닝 (예를 들어, 인간으로부터)하여, 문헌 [Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)]에 기재된 바와 같이 어떠한 면역화도 없이 광범위한 비-자기 및 또한 자기 항원에 대한 항체의 단일 공급원을 제공할 수 있다. 마지막으로, 문헌 [Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)]에 기재된 바와 같이, 줄기 세포로부터의 비재배열 V-유전자 절편을 클로닝하고, 고도의 가변 CDR3 영역을 코딩하고 시험관내 재배열이 달성되도록 무작위 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용함으로써, 나이브 라이브러리를 또한 합성적으로 제조할 수 있다. 인간 항체 파지 라이브러리를 기재하고 있는 특허 공개는, 예를 들어 미국 특허 번호 5,750,373, 및 미국 특허 공개 번호 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936, 및 2009/0002360을 포함한다.
인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체 또는 항체 단편은 본원에서 인간 항체 또는 인간 항체 단편으로 간주된다.
6. 다중특이적 항체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 다중특이적 항체, 예를 들어 이중특이적 항체이다. 다중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 부위에 대해 결합 특이성을 갖는 모노클로날 항체이다. 특정 실시양태에서, 결합 특이성 중 하나는 A베타에 대한 것이고, 다른 것은 임의의 다른 항원에 대한 것이다. 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 A베타의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 이중특이적 항체는 또한 세포독성제를 세포에 국재화시키는데 사용될 수 있다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로서 제조될 수 있다.
다중특이적 항체를 제조하는 기술은 상이한 특이성을 갖는 2개의 이뮤노글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 공-발현 (문헌 [Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)], WO 93/08829, 및 [Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)] 참조), 및 "노브-인-홀" 조작 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,731,168 참조)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 다중-특이적 항체는 또한 항체 Fc-이종이량체 분자를 제조하기 위한 정전기적 스티어링 효과를 조작하는 것 (WO 2009/089004A1); 2개 이상의 항체 또는 단편을 가교하는 것 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,676,980, 및 문헌 [Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)] 참조); 이중특이적 항체를 생성하기 위해 류신 지퍼를 사용하는 것 (예를 들어, 문헌 [Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)] 참조); 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위한 "디아바디" 기술을 사용하는 것 (예를 들어, 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)] 참조); 및 단일-쇄 Fv (sFv) 이량체를 사용하는 것 (예를 들어, 문헌 [Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)] 참조); 및 예를 들어 문헌 [Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)]에 기재된 바와 같이 삼중특이적 항체를 제조하는 것에 의해 제조될 수 있다.
"옥토퍼스 항체"를 비롯하여, 3개 이상의 기능적 항원 결합 부위를 갖는 조작된 항체가 또한 본원에 포함된다 (예를 들어, US 2006/0025576A1 참조).
본원의 항체 또는 단편은 또한 A베타 뿐만 아니라 또 다른, 상이한 항원에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 "이중 작용 FAb" 또는 "DAF"를 포함한다 (예를 들어, US 2008/0069820 참조).
7. 항체 변이체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체의 아미노산 서열 변이체가 고려된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화도 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선시키는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체는 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 적절한 변형을 도입하는 것에 의해 또는 펩티드 합성에 의해 제조할 수 있다. 이러한 변형은 예를 들어 항체의 아미노산 서열 내 잔기의 결실 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 최종 구축물에 도달하기 위해 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합이 이루어질 수 있고, 단 최종 구축물은 목적하는 특성, 예를 들어 항원-결합을 보유한다.
치환, 삽입 및 결실 변이체
특정 실시양태에서, 1개 이상의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체가 제공된다. 치환 돌연변이유발을 위한 관심 부위는 HVR 및 FR을 포함한다. 보존적 치환은 표 1에서 "보존적 치환"의 표제 하에 제시된다. 보다 실질적인 변화는 표 1에서 "예시적인 치환"의 표제 하에 제공되고, 아미노산 측쇄 부류에 관하여 하기에 추가로 기재된다. 아미노산 치환은 관심 항체에 도입될 수 있고, 산물은 목적 활성, 예를 들어 보유/개선된 항원 결합, 감소된 면역원성 또는 개선된 ADCC 또는 CDC에 대해 스크리닝될 수 있다.
<표 1>
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아미노산은 공통적인 측쇄 특성에 따라 그룹화될 수 있다:
(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비-보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원을 또 다른 부류로 교환하는 것을 수반할 것이다.
치환 변이체의 한 유형은 모 항체 (예를 들어, 인간화 또는 인간 항체)의 1개 이상의 초가변 영역 잔기를 치환하는 것을 수반한다. 일반적으로, 추가의 연구를 위해 선택된 생성된 변이체(들)는 모 항체에 비해 특정 생물학적 특성 (예를 들어, 증가된 친화도, 감소된 면역원성)에서 변형 (예를 들어, 개선)을 가질 것이고/거나 모 항체의 특정 생물학적 특성을 실질적으로 보유할 것이다. 예시적인 치환 변이체는 친화도 성숙 항체이다. 특정 실시양태에서, 친화도 성숙 항체는 표적 항원에 대해 나노몰 또는 심지어 피코몰 친화도를 가질 것이다. 친화도 성숙 항체는, 예를 들어 본원에 기재된 것과 같은 파지 디스플레이-기반 친화도 성숙 기술을 사용하는 것을 비롯하여, 관련 기술분야에 공지된 절차에 의해 생산된다. 간략하게, 1개 이상의 HVR 잔기가 돌연변이되고, 변이체 항체가 파지 상에 디스플레이되고, 특정한 생물학적 활성 (예를 들어, 결합 친화도)에 대해 스크리닝된다. 다른 절차가 또한 공지되어 있다. 문헌 [Marks et al. Bio/Technology 10:779-783 (1992)]은 VH 및 VL 도메인 셔플링에 의한 친화도 성숙을 기재한다. HVR 및/또는 프레임워크 잔기의 무작위 돌연변이유발은 문헌 [Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1996); Yelton et al. J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); 및 Hawkins et al. J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)]에 기재되어 있다.
변경 (예를 들어, 치환)은 예를 들어 항체 친화도를 개선시키기 위해 HVR에서 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 HVR "핫스팟", 즉 체세포 성숙 과정 동안 높은 빈도로 돌연변이를 겪는 코돈에 의해 코딩된 잔기 (예를 들어, 문헌 [Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)] 참조), 및/또는 SDR (a-CDR)에서 이루어질 수 있으며, 생성된 변이체 VH 또는 VL는 결합 친화도에 대해 시험된다. 2차 라이브러리로부터 구축 및 재선택하는 것에 의한 친화도 성숙은 예를 들어 문헌 [Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)]에 기재되어 있다. 친화도 성숙의 일부 실시양태에서, 다양성은 임의의 다양한 방법 (예를 들어, 오류-유발 PCR, 쇄 셔플링, 또는 올리고뉴클레오티드-지시된 돌연변이유발)에 의한 성숙을 위해 선택된 가변 유전자로 도입된다. 이어서, 2차 라이브러리가 생성된다. 이어서, 라이브러리를 스크리닝하여 목적 친화도를 갖는 임의의 항체 변이체를 확인한다. 다양성을 도입하는 또 다른 방법은 HVR-지시된 접근법을 수반하며, 여기서 여러 HVR 잔기 (예를 들어, 한 번에 4-6개 잔기)가 무작위화된다. 항원 결합에 수반되는 HVR 잔기는 예를 들어 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 또는 모델링을 사용하여 구체적으로 확인될 수 있다. 특히, CDR-H3 및 CDR-L3이 종종 표적화된다.
특정 실시양태에서, 치환, 삽입 또는 결실은 이러한 변경이 항체가 항원에 결합하는 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한, 1개 이상의 HVR 내에서 일어날 수 있다. 예를 들어, 결합 친화도를 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경 (예를 들어, 본원에 제공된 바와 같은 보존적 치환)이 HVR에서 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 HVR "핫스팟" 또는 SDR의 외부일 수 있다. 상기 제공된 변이체 VH 및 VL 서열의 특정 실시양태에서, 각각의 HVR은 변경되지 않거나, 또는 1, 2 또는 3개 이하의 아미노산 치환을 함유한다.
문헌 [Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085]에 기재된 바와 같이, 돌연변이유발을 위해 표적화될 수 있는 항체의 잔기 또는 영역의 확인에 유용한 방법은 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"로 불린다. 이 방법에서, 잔기 또는 표적 잔기의 군 (예를 들어, 하전된 잔기, 예컨대 arg, asp, his, lys, 및 glu)이 확인되고, 중성 또는 음으로 하전된 아미노산 (예를 들어, 알라닌 또는 폴리알라닌)에 의해 대체되어 항체와 항원의 상호작용에 영향을 미치는지 여부를 결정한다. 추가의 치환은 초기 치환에 대한 기능적 감수성이 입증된 아미노산 위치에 도입될 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 항체와 항원 사이의 접촉점을 확인하기 위해 항원-항체 복합체의 결정 구조가 사용된다. 이러한 접촉 잔기 및 이웃 잔기는 치환을 위한 후보로 표적화되거나 또는 제거될 수 있다. 변이체는 그들이 목적하는 특성을 함유하는지 여부를 결정하기 위해 스크리닝될 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 길이 범위가 1개의 잔기 내지 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드에 이르는 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합, 뿐만 아니라 단일 또는 다수 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 항체의 N- 또는 C-말단에 대한 효소 (예를 들어, ADEPT의 경우) 또는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드의 융합을 포함한다.
글리코실화 변이체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 항체가 글리코실화되는 정도를 증가시키거나 감소시키도록 변경된다. 항체에 대한 글리코실화 부위의 부가 또는 결실은 1개 이상의 글리코실화 부위가 생성되거나 제거되도록 아미노산 서열을 변경함으로써 편리하게 달성될 수 있다.
항체가 Fc 영역을 포함하는 경우에, 이에 부착된 탄수화물이 변경될 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생산된 천연 항체는 전형적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에의 N-연결에 의해 일반적으로 부착되는 분지형, 이중안테나 올리고사카라이드를 포함한다. 예를 들어 문헌 [Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)]을 참조한다. 올리고사카라이드는 다양한 탄수화물, 예를 들어 만노스, N-아세틸 글루코사민 (GlcNAc), 갈락토스 및 시알산 뿐만 아니라 이중안테나 올리고사카라이드 구조의 "줄기" 내의 GlcNAc에 부착된 푸코스를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 내의 올리고사카라이드의 변형은 특정 개선된 특성을 갖는 항체 변이체를 생성하기 위해 이루어질 수 있다.
한 실시양태에서, Fc 영역에 (직접적 또는 간접적으로) 부착된 푸코스가 결여된 탄수화물 구조를 갖는 항체 변이체가 제공된다. 예를 들어, 이러한 항체에서 푸코스의 양은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40%일 수 있다. 푸코스의 양은 예를 들어 WO 2008/077546에 기재된 바와 같이 MALDI-TOF 질량 분광측정법에 의한 측정 시, Asn297에 부착된 모든 당구조물 (예를 들어, 복합체, 하이브리드 및 높은 만노스 구조물)의 합계에 관하여 Asn297에서 당 쇄 내의 푸코스의 평균 양을 계산하는 것에 의해 결정된다. Asn297은 Fc 영역 내의 약 위치 297 (Fc 영역 잔기의 Eu 넘버링)에 위치한 아스파라긴 잔기를 지칭하지만; Asn297은 또한 항체에서의 부차적 서열 변이로 인해 위치 297의 약 ± 3 아미노산 상류 또는 하류, 즉 위치 294 및 300 사이에 위치할 수 있다. 이러한 푸코실화 변이체는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 공개 번호 US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (교와 핫코 고교 캄파니 리미티드(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd))을 참조한다. "탈푸코실화" 또는 "푸코스-결핍" 항체 변이체와 관련된 공개 문헌의 예는 US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; 문헌 [Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)]을 포함한다. 탈푸코실화 항체를 생산할 수 있는 세포주의 예는 단백질 푸코실화가 결핍된 Lec13 CHO 세포 (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); 미국 특허 출원 번호 US 2003/0157108 A1, Presta, L; 및 WO 2004/056312 A1, Adams et al., 특히 실시예 11에서), 및 녹아웃 세포주, 예컨대 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제 유전자, FUT8, 녹아웃 CHO 세포 (예를 들어, 문헌 [Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)]; 및 WO2003/085107 참조)를 포함한다.
이등분된 올리고사카라이드를 갖는 항체 변이체가 추가로 제공되며, 예를 들어 여기서 항체의 Fc 영역에 부착된 이중안테나 올리고사카라이드는 GlcNAc에 의해 이등분된다. 이러한 항체 변이체는 감소된 푸코실화 및/또는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체의 예가, 예를 들어 WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); 미국 특허 번호 6,602,684 (Umana et al.); 및 US 2005/0123546 (Umana et al.)에 기재되어 있다. Fc 영역에 부착된 올리고사카라이드 내에 적어도 1개의 갈락토스 잔기를 갖는 항체 변이체가 또한 제공된다. 이러한 항체 변이체는 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이체는, 예를 들어 WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); 및 WO 1999/22764 (Raju, S.)에 기재되어 있다.
Fc 영역 변이체
특정 실시양태에서, 1개 이상의 아미노산 변형이 본원에 제공된 항체의 Fc 영역에 도입되어, 그에 의해 Fc 영역 변이체가 생성될 수 있다. Fc 영역 변이체는 1개 이상의 아미노산 위치에서 아미노산 변형 (예를 들어, 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열 (예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 생체내에서 항체의 반감기가 중요하지만 특정의 이펙터 기능 (예컨대 보체 및 ADCC)은 불필요하거나 해로운 적용에 대해 바람직한 후보가 되게 하는, 모든 이펙터 기능은 아니지만 일부 이펙터 기능을 보유하는 항체 변이체를 고려한다. CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인하기 위해 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 검정을 수행할 수 있다. 예를 들어, 항체에 FcγR 결합이 결여되어 있지만 (따라서 ADCC 활성이 결여될 수 있음), FcRn 결합 능력은 보유함을 확실하게 하기 위해 Fc 수용체 (FcR) 결합 검정을 수행할 수 있다. ADCC를 매개하는 1차 세포인 NK 세포는 FcλRIII만을 발현하는 반면에, 단핵구는 FcλRI, FcλRII 및 FcλRIII을 발현한다. 조혈 세포 상에서의 FcR 발현은 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)]의 페이지 464, 표 3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 검정의 비제한적 예가 미국 특허 번호 5,500,362 (예를 들어, 문헌 [Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)] 참조) 및 문헌 [Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)]; 5,821,337 (문헌 [Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)] 참조)에 기재되어 있다. 대안적으로, 비-방사성 검정 방법을 사용할 수 있다 (예를 들어, 유동 세포측정법을 위한 악티(ACTI)™ 비-방사성 세포독성 검정 (셀테크놀로지, 인크.(CellTechnology, Inc.), 캘리포니아주 마운틴 뷰); 및 사이토톡스(CytoTox) 96® 비-방사성 세포독성 검정 (프로메가(Promega), 위스콘신주 매디슨) 참조). 이러한 검정에 유용한 이펙터 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 자연 킬러 (NK) 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 추가로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체내에서, 예를 들어 문헌 [Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)]에 기재된 바와 같이 동물 모델에서 평가될 수 있다. 또한, C1q 결합 검정을 수행하여, 항체가 C1q에 결합할 수 없고 따라서 CDC 활성이 결여되어 있음을 확인할 수 있다. 예를 들어, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402에서 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참조한다. 보체 활성화를 평가하기 위해 CDC 검정을 수행할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); 및 Cragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)] 참조). FcRn 결합 및 생체내 클리어런스/반감기 결정은 또한 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Petkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)] 참조).
감소된 이펙터 기능을 갖는 항체는 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 1개 이상의 치환을 갖는 것을 포함한다 (미국 특허 번호 6,737,056). 이러한 Fc 돌연변이체는, 잔기 265 및 297이 알라닌으로 치환된 소위 "DANA" Fc 돌연변이체를 비롯하여, 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2개 이상에서 치환을 갖는 Fc 돌연변이체를 포함한다 (미국 특허 번호 7,332,581).
FcR에 대해 개선되거나 감소된 결합을 갖는 특정 항체 변이체가 기재되어 있다. (예를 들어, 미국 특허 번호 6,737,056; WO 2004/056312, 및 문헌 [Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)] 참조.)
특정 실시양태에서, 항체 변이체는 ADCC를 개선시키는 1개 이상의 아미노산 치환, 예를 들어 Fc 영역의 위치 298, 333 및/또는 334 (잔기의 EU 넘버링)에서 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 예를 들어 미국 특허 번호 6,194,551, WO 99/51642, 및 문헌 [Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)]에 기재된 바와 같이, 변경된 (즉, 개선된 또는 감소된) C1q 결합 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 생성하는 변경이 Fc 영역에서 이루어진다.
증가된 반감기, 및 모체 IgG를 태아에게 전달하는 것을 담당하는 신생아 Fc 수용체 (FcRn)에 대한 개선된 결합을 갖는 항체 (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 및 Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994))가 US2005/0014934A1 (Hinton et al.)에 기재되어 있다. 이들 항체는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 개선시키는 1개 이상의 치환을 그 내부에 갖는 Fc 영역을 포함한다. 이러한 Fc 변이체는 Fc 영역 잔기: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434 중 1개 이상에서 치환, 예를 들어 Fc 영역 잔기 434의 치환을 갖는 것을 포함한다 (미국 특허 번호 7,371,826). Fc 영역 변이체의 다른 예에 관하여 또한 문헌 [Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988)]; 미국 특허 번호 5,648,260; 미국 특허 번호 5,624,821; 및 WO 94/29351을 참조한다.
시스테인 조작된 항체 변이체
특정 실시양태에서, 항체의 1개 이상의 잔기를 시스테인 잔기로 치환시킨 시스테인 조작된 항체, 예를 들어 "티오MAb"를 생성하는 것이 바람직할 수 있다. 특정한 실시양태에서, 치환된 잔기는 항체의 접근가능한 부위에서 생성된다. 이들 잔기를 시스테인으로 치환함으로써 그에 의해 반응성 티올 기가 항체의 접근가능한 부위에 위치하게 되고, 이것을 사용하여 항체를 다른 모이어티, 예컨대 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티에 접합시켜 본원에 추가로 기재되는 바와 같은 면역접합체를 생성할 수 있다. 특정 실시양태에서, 하기 잔기 중 어느 1개 이상이 시스테인으로 치환될 수 있다: 경쇄의 V205 (카바트 넘버링); 중쇄의 A118 (EU 넘버링); 및 중쇄 Fc 영역의 S400 (EU 넘버링). 시스테인 조작된 항체는, 예를 들어 미국 특허 번호 7,521,541에 기재된 바와 같이 생성될 수 있다.
항체 유도체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 관련 기술분야에 공지되고 용이하게 입수가능한 추가의 비단백질성 모이어티를 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는 수용성 중합체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 수용성 중합체의 비제한적 예는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카르복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산 (단독중합체 또는 랜덤 공중합체), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 옥시드/에틸렌 옥시드 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올 (예를 들어, 글리세롤), 폴리비닐 알콜, 및 그의 혼합물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드가 물에서의 안정성으로 인해 제조에 이점을 가질 수 있다. 중합체는 임의의 분자량을 가질 수 있고, 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항체에 부착되는 중합체의 수는 달라질 수 있고, 1개 초과의 중합체가 부착되는 경우에 이들은 동일하거나 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 중합체의 수 및/또는 유형은 개선시킬 항체의 특정한 특성 또는 기능, 항체 유도체가 요법에서 규정된 조건 하에 사용될 것인지 여부 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 고려사항을 기초로 하여 결정될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 항체, 및 방사선 노출에 의해 선택적으로 가열될 수 있는 비단백질성 모이어티의 접합체가 제공된다. 한 실시양태에서, 비단백질성 모이어티는 탄소 나노튜브이다 (Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)). 방사선은 임의의 파장의 것일 수 있고, 통상적인 세포에는 해를 끼치지 않지만 항체-비단백질성 모이어티에 근접한 세포는 사멸시키는 온도로 비단백질성 모이어티를 가열하는 파장을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
재조합 방법 및 조성물
항체는, 예를 들어 미국 특허 번호 4,816,567에 기재된 바와 같이 재조합 방법 및 조성물을 사용하여 생산할 수 있다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 항-A베타 항체를 코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 이러한 핵산은 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VH를 포함하는 아미노산 서열 (예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 코딩할 수 있다. 추가 실시양태에서, 이러한 핵산을 포함하는 1개 이상의 벡터 (예를 들어, 발현 벡터)가 제공된다. 추가 실시양태에서, 이러한 핵산을 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 하나의 이러한 실시양태에서, 숙주 세포는 (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제2 벡터를 포함한다 (예를 들어, 이들로 형질감염된다). 한 실시양태에서, 숙주 세포는 진핵, 예를 들어 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 림프성 세포 (예를 들어, Y0, NS0, Sp20 세포)이다. 한 실시양태에서, 항-A베타 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 항체의 발현에 적합한 조건 하에 배양하는 것 및 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 상기 항체를 임의로 회수하는 것을 포함하는, 상기에 제공된 바와 같은 항체를 제조하는 방법이 제공된다.
항-A베타 항체의 재조합 생산을 위해, 예를 들어 상기 기재된 바와 같은 항체를 코딩하는 핵산을 단리하고, 추가의 클로닝 및/또는 숙주 세포에서의 발현을 위해 1개 이상의 벡터에 삽입한다. 이러한 핵산은 통상의 절차를 사용하여 용이하게 단리되고 서열분석될 수 있다 (예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하는 것에 의함).
항체-코딩 벡터의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주 세포는 본원에 기재된 원핵 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요하지 않은 경우에, 항체를 박테리아에서 생산할 수 있다. 박테리아에서의 항체 단편 및 폴리펩티드의 발현에 대해서는, 예를 들어 미국 특허 번호 5,648,237, 5,789,199 및 5,840,523을 참조한다. (또한, 이. 콜라이에서 항체 단편의 발현을 기재하는 문헌 [Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254] 참조.) 발현 후에, 가용성 분획에서 박테리아 세포 페이스트로부터 항체를 단리할 수 있고, 추가로 정제할 수 있다.
원핵생물에 더하여, 진핵 미생물, 예컨대 글리코실화 경로가 "인간화"되어 부분 또는 완전 인간 글리코실화 패턴을 갖는 항체가 생산되게 하는 진균 및 효모 균주를 비롯한 사상 진균 또는 효모가 항체-코딩 벡터의 클로닝 또는 숙주 발현에 적합하다. 문헌 [Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004), 및 Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)]을 참조한다.
글리코실화 항체의 발현에 적합한 숙주 세포는 또한 다세포 유기체 (무척추동물 및 척추동물)로부터 유래된다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 다수의 바큘로바이러스 균주가 곤충 세포와 함께, 특히 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포를 형질감염시키는데 사용될 수 있는 것으로 확인되어 있다.
식물 세포 배양물을 또한 숙주로서 사용할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,959,177, 6,040,498, 6,420,548, 7,125,978, 및 6,417,429 (트랜스제닉 식물에서 항체를 생산하기 위한 플랜티바디스(PLANTIBODIES)™ 기술을 기재함)를 참조한다.
척추동물 세포를 또한 숙주로서 사용할 수 있다. 예를 들어, 현탁액 중에서 성장시키는데 적합화된 포유동물 세포주가 유용할 수 있다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주 (COS-7); 인간 배아 신장 세포주 (예를 들어, 문헌 [Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)]에 기재된 바와 같은 293 또는 293 세포); 새끼 햄스터 신장 세포 (BHK); 마우스 세르톨리 세포 (예를 들어, 문헌 [Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980))]에 기재된 바와 같은 TM4 세포); 원숭이 신장 세포 (CV1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (VERO-76); 인간 자궁경부 암종 세포 (HELA); 개 신장 세포 (MDCK); 버팔로 래트 간 세포 (BRL 3A); 인간 폐 세포 (W138); 인간 간 세포 (Hep G2); 마우스 유방 종양 (MMT 060562); 예를 들어 문헌 [Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)]에 기재된 바와 같은 TRI 세포; MRC 5 세포; 및 FS4 세포이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 DHFR- CHO 세포를 비롯한 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 (Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); 및 골수종 세포주, 예컨대 Y0, NS0 및 Sp2/0을 포함한다. 항체 생산에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 검토를 위해, 예를 들어 문헌 [Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)]을 참조한다.
검정
본원에 제공된 항-A베타 항체는 관련 기술분야에 공지된 다양한 검정에 의해 확인되거나, 그의 물리적/화학적 특성 및/또는 생물학적 활성에 대해 스크리닝되거나 특징화될 수 있다.
결합 검정 및 다른 검정
한 측면에서, 본 발명의 항체는 예를 들어 ELISA, 웨스턴 블롯 등과 같은 공지된 방법에 의해 그의 항원 결합 활성에 대해 시험된다.
또 다른 측면에서, 경쟁 검정은 A베타에의 결합에 대해 본 발명의 항-A베타 항체와 경쟁하는 항체를 확인하는데 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 이러한 경쟁 항체는 크레네주맙 또는 본원에 명시된 또 다른 항-A베타 항체가 결합하는 동일한 에피토프 (예를 들어, 선형 또는 입체형태적 에피토프)에 결합한다. 항체가 결합하는 에피토프를 맵핑하는 상세한 예시적인 방법이 문헌 [Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols," in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)]에 제공되어 있다.
예시적인 경쟁 검정에서, 고정된 목적하는 형태 (예를 들어, 단량체, 올리고머, 또는 피브릴)의 A베타는 A베타 (예를 들어, 크레네주맙)에 결합하는 제1 표지된 항체 및 A베타에의 결합에 대해 제1 항체와 경쟁하는 그의 능력에 대해 시험될 제2 비표지된 항체를 포함하는 용액 중에서 인큐베이션된다. 제2 항체는 하이브리도마 상청액 중에 존재할 수 있다. 대조군으로서, 고정된 A베타는 제1 표지된 항체를 포함하나 제2 비표지된 항체는 포함하지 않는 용액 중에서 인큐베이션된다. A베타에 대한 제1 항체의 결합을 허용하는 조건 하에 인큐베이션한 후에, 잉여량의 미결합 항체를 제거하고, 고정된 A베타와 회합된 표지의 양을 측정한다. 고정된 A베타와 회합된 표지의 양이 대조군 샘플에 비해 시험 샘플에서 실질적으로 감소된 경우에, 이는 제2 항체가 A베타에의 결합에 대해 제1 항체와 경쟁한다는 것을 나타낸다. 문헌 [Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)]을 참조한다.
활성 검정
한 측면에서, 생물학적 활성, 예를 들어 크레네주맙의 생물학적 활성을 갖는 그의 항-A베타 항체를 확인하기 위한 검정이 제공된다. 생물학적 활성은, 예를 들어 단량체 A베타의 올리고머 A베타로의 응집의 방지, 또는 올리고머 A베타의 단량체 A베타로의 분해를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 생체내 및/또는 시험관내에서 이러한 생물학적 활성을 갖는 항체가 또한 제공된다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 항체는 이러한 생물학적 활성에 대해 시험된다.
클루스테린을 사용한 환자 확인 및 선택을 위한 방법 및 조성물
본 개시내용은 유전자, 클루스테린 (아포지단백질 J 또는 ApoJ로도 공지됨, GenPept 수탁 번호 NP_001822) 내의 다형성이 항-A베타 항체 치료 (예를 들어, 항-A베타 항체 또는 그의 항원-결합 단편)의 효능과 상관된다는 발견을 기초로 한다. 본원의 실시예에서 입증된 바와 같이, 클루스테린 유전자 내 SNP인 SNP rs1532278에서의 T 뉴클레오티드의 존재는 경도-내지-중등도 AD에 걸린 환자 및 그의 특정한 하위집단에서 바람직한 결과와 연관된다. 따라서, 본 개시내용은 항-A베타 항체를 포함하는 AD에 대한 치료로부터 이익을 얻거나 이에 반응할 가능성이 있는 환자를 확인 및 선택하기 위한 방법 및 도구를 포함하나 이에 제한되지는 않는 방법 및 도구를 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 항-A베타 항체를 사용한 치료를 위한, 초기 또는 경도 내지 중등도 AD를 앓고 있는 환자를 선택하는 방법을 제공한다. 방법은 환자로부터의 샘플에서 클루스테린 대립유전자의 존재 또는 부재, 특히 SNP rs1532278에서 T 뉴클레오티드를 갖는 클루스테린 대립유전자 또는 그의 등가 대립유전자의 존재를 검출하는 것을 포함한다. 방법은 추가로, SNP rs1532278에서 T 뉴클레오티드를 갖는 클루스테린 대립유전자 또는 그의 등가 대립유전자가 검출된 환자를 항-A베타 항체를 사용한 치료에 반응할 가능성이 더 큰 것으로서 선택하는 것을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 초기 또는 경도 내지 중등도 AD를 앓고 있는 개체가 항-A베타 항체를 포함하는 AD를 위한 치료에 반응할 가능성이 있는지 여부를 예측하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체로부터의 샘플에서 SNP rs1532278에서의 뉴클레오티드의 정체를 결정하는 것을 포함하며, 여기서 SNP rs1532278에서 T 뉴클레오티드를 갖는 개체는 항-A베타 항체를 포함하는 치료에 반응할 증가된 가능성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 방법은 환자로부터의 샘플에서 클루스테린 대립유전자의 존재 또는 부재, 특히 SNP rs1532278에서 T 뉴클레오티드를 갖는 클루스테린 대립유전자 또는 그의 등가 대립유전자의 존재를 검출하는 것을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 환자의 유전자형을 결정하는 것을 포함하는, AD를 위한 치료의 치료 효능을 최적화하는 방법을 제공하며, 여기서 적어도 1개의 클루스테린 대립유전자를 보유하는 것, 특히 SNP rs1532278에서 T 뉴클레오티드를 갖는 클루스테린 대립유전자 또는 그의 등가 대립유전자의 존재가 결정된 환자는 항-A베타 항체를 사용한 치료에 반응할 가능성이 더 크다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 AD를 앓고 있는 환자가 항-A베타 항체를 포함한 AD를 위한 치료로부터 이익을 얻을 가능성을 결정하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 환자가 클루스테린 SNP rs1532278에서 T 뉴클레오티드를 보유하는 경우에, 환자는 항-A베타 항체 (예를 들어, 크레네주맙 또는 그의 항원-결합 단편)를 포함하는 요법을 사용한 치료로부터 이익을 얻을 가능성이 있다.
개시된 방법은 환자를 확인, 선택, 및/또는 치료하기 위한 적절하거나 유효한 요법을 평가하는데 유용한 데이터 및 정보를 수득하기 위한, 편리하고, 효과적이고, 잠재적으로 비용-효과적인 수단을 제공한다. 일부 실시양태에서, 샘플은 환자로부터 수득될 수 있고, 항-A베타 항체를 사용하여 치료된 AD를 앓고 있는 환자에서 치료 효과와 연관된 대립유전자의 존재 또는 부재를 결정하기 위한 다양한 시험관내 검정에 의해 검사될 수 있다. 적합한 샘플이 본원에서 하기 기재되고, 혈액, 타액, 협부 스왑, 신체 조직으로부터의 것 또는 체액으로부터의 것일 수 있다.
바이오마커 또는 SNP의 존재는 mRNA, cDNA, 단백질, 단백질 단편 및/또는 유전자 카피수를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 관련 기술분야에 공지되어 있는 임의의 적합한 기준에 기초하여 결정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 클루스테린 대립유전자는 rs1532278:T 대립유전자 또는 그의 등가 대립유전자이거나, SNP rs1532278에서 T를 포함한다. rs1532278과 연관 불평형인 대안적 SNP도 또한 본 개시내용의 방법에서 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 연관 불평형은 D' 척도 또는 r2 척도이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 D' 척도는 ≥ 0.60이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 D' 척도는 ≥ 0.70, 0.80 또는 0.90이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 D' 척도는 1.0이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 r2 척도는 ≥ 0.60이다. 일부 실시양태에서 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 r2 척도는 ≥ 0.70, 0.80 또는 0.90이다. 일부 실시양태에서, 선택된 SNP와 대안적 SNP 사이의 r2 척도는 1.0이다. 일부 실시양태에서, 대안적 SNP는 선택된 SNP의 상류 또는 하류의 500,000 염기 쌍 내에 위치한다.
샘플에서 SNP의 분석은 혈액, 조직 또는 다른 체액에서 DNA 서열분석, RNA 서열분석, DNA의 폴리머라제 연쇄 반응 분석, RNA의 폴리머라제 연쇄 반응 분석, 올리고뉴클레오티드 기반 혼성화, 계내 혼성화, 올리고뉴클레오티드 기반 프라이머 연장, 전기영동 및 HPLC를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 많은 것이 관련 기술분야에 공지되어 있고 통상의 기술자에 의해 이해되는 다수의 방법론에 의해 분석될 수 있다. SNP를 검출하기 위한 추가의 기술은 하기 기술: 스캐닝 프로브 및 나노포어 DNA 서열분석, 파이로시퀀싱, 변성 구배 겔 전기영동 (DGGE), 시간 온도 구배 전기영동 (TTGE), Zn(II)-사이클렌 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 균질 형광 PCR-기반 단일 뉴클레오티드 다형성 분석, 포스페이트-친화도 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 고처리량 SNP 유전자형 결정 플랫폼, 분자 비콘, 5' 뉴클레아제 반응, 택맨 검정, 매스어레이 (매트릭스-보조 레이저 탈착/이온화 비행 시간 질량 분광측정법과 커플링된 단일 염기 프라이머 연장), 트리틸 질량 태그, 유전자형 결정 플랫폼 (예컨대, 인베이더 어세이®), 단일 염기 프라이머 연장 (SBE) 검정, PCR 증폭 (예를 들어, 자기 나노입자 (MNP) 상에서의 PCR 증폭, PCR 산물의 제한 효소 분석 (RFLP 방법), 대립유전자-특이적 PCR, 다중 프라이머 연장 (MPEX), 등온 smart 증폭 (Methods in Molecular Biology, Single Nucleotide Polymorphisms, 2nd edition, editor Anton Komar, Humana Press 2009; Chapters 7-28), 단순 서열 길이 다형성 (SSLP)의 PCR 증폭, 리가제 연쇄 반응 (LCR), RNase A 절단, 헤테로듀플렉스 DNA의 화학적 절단, 단일-가닥 입체형태 다형성 (SSCP) 분석 (Warren et al., Current Protocol in Human Genetics, Supp 15: 7.4.1-7.4.23 (2001), 비드-칩 마이크로어레이 (Lambert et al., Current Protocol in Human Genetics, Supp 78: 2.9.1-2.9.3(2013)), 단일-가닥 입체형태 다형성 (SSCP) 분석, 프라이머 단일-염기 연장 (SBE) (Deshpande et al., Current Protocol in Human Genetics, Supp 34: 13.4.1-13.4.11 (2005)), 프라이머 연장 검정 (Kwok et al., Current Protocol in Human Genetics, Supp 39: 2.11.1-2.11.10 (2003)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. SNP의 존재는 또한 면역검정 (예를 들어, ELISA, ELIFA, 면역조직화학 및/또는 웨스턴 블롯 분석, 면역침전, 분자 결합 검정, 형광 활성화 세포 분류 (FACS) 등), 정량적 혈액 기반 검정 (예로서 혈청 ELISA) 계내 혼성화, 또는 생화학적 효소적 활성 검정 또는 세포 기반 시스템을 비롯한 기능 검정, 뿐만 아니라 유전자 및/또는 조직 어레이 분석에 의해 수행될 수 있는 매우 다양한 검정 중 어느 하나를 비롯한 단백질 기반 기술 (예를 들어, 단백질 발현 수준 또는 기능을 검사하기 위함)의 분석으로부터 추론될 수 있다. 유전자 상태 및 유전자 산물을 평가하기 위한 전형적인 프로토콜은, 예를 들어 문헌 [Ausubel et al. eds., 1995, Current Protocols In Molecular Biology, Units 2 (노던 블롯팅), 4 (서던 블롯팅), 15 (이뮤노블롯팅) 및 18 (PCR 분석)]에서 확인된다. 멀티플렉스화 면역검정, 예컨대 룰즈 베이스드 메디신(Rules Based Medicine)으로부터 입수가능한 것, 비드 기반 면역검정, 예를 들어 루미넥스(Luminex), ELISA 또는 메조 스케일 디스커버리(Meso Scale Discovery) (MSD)가 또한 사용될 수 있다.
본 발명의 SNP 분석을 위해 감수성이고 받아들여질 수 있는 한 기술은, 예를 들어 미국 특허 번호 6,627,402에 기재되어 있는 대립유전자-특이적 PCR (AS-PCR)이다. 이러한 기술은 서열의 야생형 변이체의 존재 하에서 핵산 서열 내 돌연변이 또는 다형성을 검출한다. 성공적인 대립유전자-특이적 PCR에서 표적 핵산의 목적하는 변이체는 증폭되지만, 다른 변이체는 증폭되지 않거나 적어도 검출가능한 수준으로 증폭되지 않는다.
대립유전자-특이적 PCR의 구별의 한 척도는 2개의 대립유전자를 수반하는 증폭 반응에서 Ct 값 사이의 차이 (ΔCt)이다. 각각의 증폭 반응은 핵산 증폭 검정과 관련된 함수 그래프인 "성장 곡선" 또는 "증폭 곡선"을 특징으로 하며, 여기서 독립 변수는 증폭 사이클의 수이고, 종속 변수는 각각의 증폭 사이클에서 측정되는 증폭-의존 측정가능한 파라미터, 예컨대 형광단에 의해 방출된 형광이다. 전형적으로, 증폭-의존 측정가능한 파라미터는 혼성화 시 또는 핵산 폴리머라제의 뉴클레아제 활성에 의한 프로브의 가수분해 시 프로브에 의해 방출된 형광의 양이고, 문헌 [Holland et al., (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. 88:7276-7280] 및 미국 특허 번호 5,210,015를 참조한다. 성장 곡선은 측정가능한 파라미터의 미리 결정된 크기가 달성된 사이클의 수인 "역치 값" (또는 Ct 값)을 특징으로 한다. Ct 값이 낮을수록 보다 신속한 증폭을 나타내고, 반면에 Ct 값이 높을수록 보다 느린 증폭을 나타낸다. 대립유전자-특이적 반응과 관련하여 2개의 주형의 Ct 값 사이의 차이는 반응에서 대립유전자 구별을 나타낸다.
대립유전자-특이적 PCR에서, 적어도 1개의 프라이머는 프라이머 연장이 특정 서열 변이체가 존재하는 경우에만 (또는 우선적으로) 일어나게 하고 또 다른 변이체가 존재하는 경우에는 일어나지 않게 하는 (또는 덜 효율적으로, 즉 실질적 ΔCt로 일어나게 하는) 대립유전자-특이적이다. 전형적으로, 프라이머에서 구별 뉴클레오티드, 즉 표적 서열의 단지 하나의 변이체와 매칭하는 뉴클레오티드는 3'-말단 뉴클레오티드이다. 그러나, 프라이머의 3' 말단은 특이성의 많은 결정기 중 단지 하나이다. 예를 들어, 추가의 미스매치가 구별에 또한 영향을 미칠 수 있다. 2009년 10월 20일에 출원된 미국 특허 출원 일련 번호 12/582,068 (US20100099110으로서 공개됨)을 참조한다. 또 다른 접근법은 프라이머와 표적 서열 사이의 염기 쌍형성을 변경시키는 비-천연 또는 변형된 뉴클레오티드를 포함시키는 것이다 (미국 특허 번호 6,001,611, 그 전문이 본원에 참조로 포함됨.) 감소된 연장 동역학 및 그에 따른 프라이머의 특이성은 반응에 존재하는 미스매치 및 다른 핵산의 전체 서열 문맥을 비롯한 많은 인자에 의해 영향을 받는다. 각각의 추가의 미스매치에 대한 이들 외부 인자의 효과 뿐만 아니라 각각의 추가의 비-천연 뉴클레오티드의 단독 또는 조합 효과는 예측될 수 없다. 한 실시양태에서, 본 개시내용은 클루스테린에서 다형성을 결정하는데 특이적인 올리고뉴클레오티드, 특히 클루스테린에서 rs1532278에 특이적인 올리고뉴클레오티드를 제공한다.
한 실시양태에서 다형성의 존재는 프로브에 의해 검출된다. 프로브는 방사성 또는 발색단 (형광단) 표지, 예를 들어 FAM, JA270, CY5 패밀리 염료, 또는 HEX 염료를 혼입시키는 표지로 표지될 수 있다. 형광 표지된 프로브를 사용하는 검출의 한 예로서, 돌연변이는 프로브의 혼성화가 프로브의 효소적 소화 및 생성된 형광의 검출의 발생시키는 실시간 폴리머라제 연쇄 반응 (rt-PCR)에 의해 검출될 수 있다 (택맨™ 프로브 방법, 문헌 [Holland et al. (1991) P.N.A.S. USA 88:7276-7280]). 대안적으로, 다형성 및 증폭 산물의 존재는 예를 들어 문헌 [Sambrook, J. and Russell, D.W. (2001) Molecular Cloning, 3rd ed. CSHL Press, Chapters 5 and 9]에 기재된 바와 같은 겔 전기영동에 이은 염색 또는 블롯팅 및 혼성화에 의해 검출될 수 있다.
"형광 염료" 또는 "형광단"은 적합한 파장의 광에 의해 여기된 경우에 광 방사선을 방출할 수 있는, 예를 들어 핵산에 부착된 화합물 또는 모이어티이다. 전형적인 형광 염료는 로다민 염료, 시아닌 염료, 플루오레세인 염료 및 바디피(BODIPY)® 염료를 포함한다. 형광단은 형광 발색단이다. "FRET" 또는 "형광 공명 에너지 전달" 또는 "푀르스터 공명 에너지 전달"은 적어도 2개의 발색단, 공여자 발색단과 수용자 발색단 (켄처로 지칭됨) 사이의 에너지의 전달이다. 공여자는 전형적으로 공여자가 적합한 파장을 갖는 광 방사선에 의해 여기된 경우에 수용자에게 에너지를 전달한다. 수용자가 "암" 켄처인 경우에, 이는 전달된 에너지를 광 이외의 형태로 분산시킨다. 통상적으로 사용되는 암 켄처는 블랙홀 켄처(BlackHole Quencher)™ (BHQ), 바이오서치 테크놀로지스, 인크. (캘리포니아주 노바토), 아이오와 블랙(Iowa Black)™, 인테그레이티드 DNA 테크., 인크.(Integrated DNA Tech., Inc.) (아이오와주 코랄빌), 블랙베리(BlackBerry)™ 켄처 650 (BBQ-650), 베리 & 어소시에이트(Berry & Assoc.), (미시간주 덱스터)이다. 통상적으로 사용되는 공여자-켄처 쌍은 FAM-BHQ 쌍, CY5-BHQ 쌍 및 HEX-BHQ 쌍을 포함한다.
바이오마커 또는 SNP를 포함하는 샘플은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있는 방법에 의해 수득될 수 있다. 정의 이하를 참조한다. 또한, 요법의 진행은 이러한 신체 샘플을 SNP에 대해 시험함으로써 보다 용이하게 모니터링될 수 있다.
유전자형 결정 어레이는 DNA 또는 RNA를 분석하여 SNP의 존재를 검출하는데 사용될 수 있다. 하나의 이러한 예는 > 700K 유전자좌를 포함하는 상업적으로 입수가능한 마이크로어레이 시스템으로 (Oliphant et al., Biotechniques, Supp: 56-8, 60-1 (2002)), DNA 및 RNA 분석 (예를 들어, 핵산 샘플 내 SNP의 확인)에 사용되는 통상적 방법인 일루미나 기반 어레이 기술이다. 일루미나 마이크로어레이 기술은 2종의 기질: 광섬유 다발 또는 평판 실리카 슬라이드 중 어느 하나 상의 마이크로웰 내에서 자가 조립하는 3-마이크로미터 실리카 비드를 사용한다. 각각의 비드는 포획 서열로서 작용하는 수백 또는 수천 카피의 특이적 올리고뉴클레오티드로 덮인다.
조직 또는 세포 샘플에서 선택된 유전자 또는 바이오마커의 발현은 또한 기능 또는 활성-기반 검정에 의해 검사될 수 있다. 예를 들어, 바이오마커가 효소인 경우에, 관련 기술분야에 공지된 검정을 수행하여 조직 또는 세포 샘플에서 주어진 효소적 활성의 존재를 결정 또는 검출할 수 있다.
시험 결과에 기초한 환자의 SNP 상태는 보고로 제공될 수 있다. 보고는 임의의 형태의 서면 자료 (예를 들어, 종이 또는 디지털 형태, 또는 인터넷 상) 또는 구두 발표(들) (예를 들어, 사람 (육성) 또는 녹음으로서)일 수 있다. 추가로 보고는 건강 전문가 (예를 들어, 의사)에게 환자가 항-A베타 치료로부터 이익을 얻을 수 있거나 또는 그에 반응할 가능성이 있음을 보여줄 수 있다.
또한, 샘플로부터 다형성의 존재를 검출하거나 또는 환자의 유전자형을 결정하기 위한 키트가 본원에 제공된다. 본 발명의 키트는 다수의 실시양태를 갖는다. 특정 실시양태에서, 키트는 용기, 상기 용기 상의 라벨, 및 상기 용기 내에 함유된 조성물을 포함하고; 여기서 조성물은 SNP에 대한 자가항체에 상응하는 1개 이상의 표적 폴리펩티드 서열에 결합하는 1종 이상의 1차 항체, 조성물이 적어도 1종의 유형의 포유동물 세포에서 1종 이상의 표적 단백질의 존재를 평가하는데 사용될 수 있음을 나타내는 용기 상의 라벨, 및 적어도 1종의 유형의 포유동물 세포에서 1종 이상의 표적 단백질의 존재를 평가하는데 항체를 사용하기 위한 지침서를 포함한다. 키트는 조직 샘플을 제조하고 항체 및 프로브를 조직 샘플의 동일한 절편에 적용하는 것에 대한 지침서 및 물질의 세트를 추가로 포함할 수 있다. 키트는 1차 및 2차 항체 둘 다를 포함할 수 있고, 여기서 2차 항체는 표지, 예를 들어 효소적 표지에 접합된다.
진단 및 검출을 위한 방법 및 조성물
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 임의의 항-A베타 항체는 생물학적 샘플에서 A베타의 존재를 검출하는데 유용하다. 본원에 사용된 용어 "검출하는"은 정량적 또는 정성적 검출을 포괄한다. 특정 실시양태에서, 생물학적 샘플은 세포 또는 조직, 예컨대 혈청, 혈장, 비강 스왑, 객담, 뇌척수액, 눈의 방수 등, 또는 유기체로부터 수득된 조직 또는 세포 샘플, 예컨대 신경 또는 뇌 조직을 함유하는 샘플을 포함한다.
한 실시양태에서, 진단 또는 검출 방법에 사용하기 위한 항-A베타 항체가 제공된다. 추가 측면에서, 생물학적 샘플에서 A베타의 존재를 검출하는 방법이 제공된다. 특정 실시양태에서, 방법은 A베타에 대한 본원에 기재된 바와 같은 항-A베타 항체의 결합을 허용하는 조건 하에 생물학적 샘플을 항-A베타 항체와 접촉시키는 단계, 및 항-A베타 항체와 A베타 사이에 복합체가 형성되는지 여부를 검출하는 단계를 포함한다. 이러한 방법은 시험관내 또는 생체내 방법일 수 있다.
본 발명의 항체를 사용하여 진단될 수 있는 예시적인 장애는 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질에 의해 유발되거나 또는 그와 연관된 질환 및 장애이다. 이는 아밀로이드 플라크에 의한 것을 비롯하여 단량체, 피브릴 또는 중합체 상태, 또는 3종의 임의의 조합의 아밀로이드-유사 단백질의 존재 또는 활성에 의해 유발되는 질환 및 장애를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 질환은 속발성 아밀로이드증 및 연령-관련 아밀로이드증, 예컨대 알츠하이머병 ("AD")과 같은 신경계 장애를 포함하나 이에 제한되지는 않는 질환, 인지 기억 능력의 상실을 특징으로 하는 질환 또는 상태, 예컨대 예를 들어 경도 인지 장애 (MCI), 루이 소체 치매, 다운 증후군, 아밀로이드증에 의한 유전성 뇌출혈 (네덜란드 유형), 괌 파킨슨-치매 복합증 및 아밀로이드-유사 단백질에 기초하거나 그와 연관된 다른 질환, 예컨대 진행성 핵상 마비, 다발성 경화증, 크로이츠펠트 야콥병, 파킨슨병, HIV-관련 치매, ALS (근위축성 측삭 경화증), 봉입체 근염 (IBM), 성인 발병 당뇨병, 내분비 종양 및 노인성 심장 아밀로이드증, 및 베타-아밀로이드 침착으로 인한 황반 변성, 드루젠-관련 시신경병증, 녹내장 및 백내장을 비롯한 다양한 안질환을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
특정 실시양태에서, 표지된 항-A베타 항체가 제공된다. 표지는 직접적으로 검출되는 표지 또는 모이어티 (예컨대, 형광, 발색, 전자-밀집, 화학발광 및 방사성 표지), 뿐만 아니라 간접적으로, 예를 들어 효소적 반응 또는 분자 상호작용을 통해 검출되는 모이어티, 예컨대 효소 또는 리간드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 표지는 방사성동위원소 32P, 14C, 125I, 3H, 및 131I, 형광단, 예컨대 희토류 킬레이트 또는 플루오레세인 및 그의 유도체, 로다민 및 그의 유도체, 단실, 움벨리페론, 루시페라제, 예를 들어 반딧불이 루시페라제 및 박테리아 루시페라제 (미국 특허 번호 4,737,456), 루시페린, 2,3-디히드로프탈라진디온, 양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP), 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다제, 글루코아밀라제, 리소자임, 사카라이드 옥시다제, 예를 들어 글루코스 옥시다제, 갈락토스 옥시다제 및 글루코스-6-포스페이트 데히드로게나제, 염료 전구체를 산화시키기 위해 과산화수소를 사용하는 효소, 예컨대 HRP, 락토퍼옥시다제 또는 마이크로퍼옥시다제와 커플링된 헤테로시클릭 옥시다제, 예컨대 우리카제 및 크산틴 옥시다제, 비오틴/아비딘, 스핀 표지, 박테리오파지 표지, 안정한 자유 라디칼 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본 개시내용은 추가로 클루스테린 대립유전자에서 다형성을 검출하기 위한 작용제의 시험관내 용도를 제공한다. 일부 실시양태에서, 항-A베타 항체를 포함하는 치료에 반응할 가능성이 있는 초기, 경도, 또는 경도 내지 중등도 AD에 걸린 환자의 확인을 위한, 클루스테린 대립유전자를 검출하기 위한 작용제가 제공된다. 일부 실시양태에서, 작용제는 SNP rs1532278에서 T 뉴클레오티드를 갖는 클루스테린 대립유전자 또는 그의 등가 대립유전자의 존재를 검출할 수 있다.
제약 제제
본원에 기재된 바와 같은 항-A베타 항체의 제약 제제는 목적하는 정도의 순도를 갖는 이러한 항체 또는 분자를 1종 이상의 임의적인 제약상 허용되는 담체와 동결건조 제제 또는 수용액의 형태로 혼합하는 것에 의해 제조된다 (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)). 제약상 허용되는 담체는 일반적으로 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기 산; 아스코르브산 및 메티오닌을 비롯한 항산화제; 보존제 (예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드, 및 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 비롯한 다른 탄수화물; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예컨대 나트륨; 금속 착물 (예를 들어, Zn-단백질 착물); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본원에서 예시적인 제약상 허용되는 담체는 간질성 약물 분산액 작용제, 예컨대 가용성 중성-활성 히알루로니다제 당단백질 (sHASEGP), 예를 들어 인간 가용성 PH-20 히알루로니다제 당단백질, 예컨대 rHuPH20 (힐레넥스(HYLENEX)®, 백스터 인터내셔널, 인크.(Baxter International, Inc.))을 추가로 포함한다. rHuPH20을 비롯한, 특정의 예시적인 sHASEGP 및 사용 방법은 미국 특허 공개 번호 2005/0260186 및 2006/0104968에 기재되어 있다. 한 측면에서, sHASEGP는 1개 이상의 추가의 글리코사미노글리카나제, 예컨대 콘드로이티나제와 조합된다.
한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 아르기닌 완충제 중에 제제화될 수 이다. 한 측면에서, 아르기닌 완충제는 아르기닌 숙시네이트 완충제일 수 있다. 하나의 이러한 측면에서, 아르기닌 숙시네이트 완충제의 농도는 50 mM 이상일 수 있다. 또 다른 이러한 측면에서, 아르기닌 숙시네이트 완충제의 농도는 100 mM 이상일 수 있다. 또 다른 이러한 측면에서, 아르기닌 숙시네이트 완충제의 농도는 150 mM 이상일 수 있다. 또 다른 이러한 측면에서, 아르기닌 숙시네이트 완충제의 농도는 200 mM 이상일 수 있다. 또 다른 측면에서, 아르기닌 숙시네이트 완충제는 계면활성제를 추가로 함유할 수 있다. 또 다른 이러한 측면에서, 계면활성제는 폴리소르베이트이다. 또 다른 이러한 측면에서, 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20이다. 또 다른 이러한 측면에서, 제제 중 폴리소르베이트 20의 농도는 0.1% 이하이다. 또 다른 이러한 측면에서, 제제 중 폴리소르베이트 20의 농도는 0.05% 이하이다. 또 다른 측면에서, 아르기닌 완충제 제제의 pH는 4.5 내지 7.0이다. 또 다른 측면에서, 아르기닌 완충제 제제의 pH는 5.0 내지 6.5이다. 또 다른 측면에서, 아르기닌 완충제 제제의 pH는 5.0 내지 6.0이다. 또 다른 측면에서, 아르기닌 완충제 제제의 pH는 5.5이다. 임의의 상기 실시양태 및 측면에서, 본 발명의 항체는 크레네주맙일 수 있다.
예시적인 동결건조 항체 제제는 미국 특허 번호 6,267,958에 기재되어 있다. 수성 항체 제제는 미국 특허 번호 6,171,586 및 WO2006/044908에 기재된 것을 포함하고, 후자의 제제는 히스티딘-아세테이트 완충제를 포함한다.
본원의 제제는 또한 치료되는 특정한 적응증에의 필요에 따라 1종 초과의 활성 성분, 바람직하게는 서로 유해한 영향을 미치지 않는 보완적 활성을 갖는 것을 함유할 수 있다. 예를 들어, 알츠하이머병의 증상을 예방 또는 치료하기 위한 1종 이상의 화합물을 추가로 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 활성 성분은 의도된 목적에 유효한 양으로 조합되어 적합하게 존재한다.
활성 성분은 예를 들어 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조되는 마이크로캡슐, 예를 들어 각각 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐 내에, 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로구체, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 내에, 또는 마크로에멀젼 내에 포획될 수 있다. 이러한 기술은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 개시되어 있다.
지속-방출 제제가 제조될 수 있다. 지속-방출 제제의 적합한 예는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 이 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다.
생체내 투여에 사용되는 제제는 일반적으로 멸균성이다. 멸균은 예를 들어 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성될 수 있다.
치료 방법 및 조성물
본원에 제시된 바와 같이, 크레네주맙의 정맥내 투여는 AD를 앓고 있는 환자에서 질환 진행을 감소시켰다. 특히, 경도 AD에 걸린 환자 및 ApoE4 양성 환자를 비롯한 경도 내지 중등도 AD에 걸린 환자, 뿐만 아니라 AD로 진단된 환자에서 전형적으로 관찰되는 뇌 아밀로이드 로드를 갖는 환자는 크레네주맙을 사용하여 치료한 경우에 위약과 비교하여 인지 저하의 속도에서 감소를 나타내었다. MMSE 스코어의 증가에 기초하여 보다 경도의 질환일수록, 위약 부문과 비교하여 치료 부문에서 저하의 감소가 더 컸다. 이들 결과는 뇌척수액에서 검출된 A베타의 수준에서의 증가 및 뇌내 아밀로이드 축적에서의 감소를 비롯하여, 크레네주맙에 의한 표적 맞물림의 다른 지표에 의해 추가로 확증되었다. 추가로, 비교적 높은 용량의 항체 - 15 mg/kg -는 다른 항-A베타 항체의 시험에서 관찰된 바 있는 ARIA-유형 유해 사건의 발생률을 증가시키지 않았다.
따라서, 한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 경도 내지 중등도 AD, 경도 AD, 및 초기 AD를 비롯한 AD를 치료하는데 사용된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항체는 아밀로이드증을 치료하는데 사용된다. 하나의 이러한 실시양태에서, 아밀로이드증는 경도 인지 장애이다. 또 다른 이러한 실시양태에서, 아밀로이드증은 다운 증후군이다. 또 다른 이러한 실시양태에서, 아밀로이드증은 아밀로이드증에 의한 유전성 뇌출혈 (네덜란드 유형)이다. 또 다른 이러한 실시양태에서, 아밀로이드증은 괌 파킨슨-치매 복합증이다. 또 다른 이러한 실시양태에서, 아밀로이드증은 눈 내 드루젠 또는 다른 아밀로이드 침착물과 관련된 안구 질환이다. 한 측면에서, 안구 질환은 황반 변성이다. 또 다른 측면에서, 안구 질환은 드루젠-관련 시신경병증이다. 또 다른 측면에서, 안구 질환은 녹내장이다. 또 다른 측면에서, 안구 질환은 백내장이다. 임의의 상기 실시양태 및 측면에서, 본 발명의 항체는 크레네주맙일 수 있다.
환자는 전형적으로 이러한 환자를 치료하기 위한 본 발명의 항체의 적합성을 결정하기 전에 1종 이상의 아밀로이드증의 존재에 대해 먼저 평가된다. 하나의 비제한적 예로서, AD는 환자에서 "NINCDS-ADRDA" (신경계 및 의사소통 장애 및 졸중-알츠하이머병 관련 장애 평가) 기준을 사용하여 진단될 수 있다. 문헌 [McKhann, et al., 1984, Neurology 34:939-44]을 참조한다. 본 발명의 1종 이상의 항체가 투여될 잠재적인 환자는 또한 이러한 환자에게 (i) 1종 이상의 아밀로이드증을 겪을 이러한 환자의 보다 높은 또는 보다 낮은 가능성, 또는 (ii) 본 발명의 항체의 투여 과정 동안 1종 이상의 유해 사건 또는 부작용을 겪을 이러한 환자의 보다 높은 또는 보다 낮은 가능성을 갖게 할 수 있는 1종 이상의 유전자 마커의 존재 또는 부재에 대해 시험될 수 있다. 하나의 비제한적 예로서, ApoE4 대립유전자를 보유하는 환자는 대립유전자가 결여된 환자보다 AD가 발생할 실질적으로 더 높은 위험을 갖고 (Saunders et al., Neurology 1993; 43:1467-72; Prekumar et al., Am. J. Pathol. 1996; 148:2083-95), 이러한 환자는 또 다른 항-A베타 항체인 바피뉴주맙의 임상 시험에서 관찰된 ARIA-유형 유해 사건을 불균형적으로 나타낸다는 것 (Sperling et al., Alzheimer's & Dementia 2011, 7:367-385; Salloway et al., N. Engl. J. Med. 2014, 370:322-333)이 공지되어 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 환자에서 경도 내지 중등도 AD를 치료하기 위해 사용된다. 환자는 ApoE4 양성 또는 ApoE4 음성일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 경도 AD를 치료하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 경도 내지 중등도 AD 또는 경도 AD를 앓고 있는 ApoE4 양성 환자를 치료하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 경도 AD를 앓고 있는 환자를 치료하기 위해 사용된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 MMSE 스코어 20 내지 30, 20 내지 26, 24 내지 30, 21 내지 26, 22 내지 26, 22 내지 28, 23 내지 26, 24 내지 26, 또는 25 내지 26을 갖는 환자를 치료하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 환자는 MMSE 스코어 22 내지 26을 갖는다. 본원에 사용된 바와 같은 2개의 수 사이의 MMSE 스코어는 범위의 각 끝의 수를 포함한다. 예를 들어, MMSE 스코어 22 내지 26은 MMSE 스코어 22 및 26을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 '아밀로이드 양성'인 환자, 예를 들어 AD로 진단된 환자 또는 양성 플로르베타피르 PET 스캠을 갖는 환자에서 전형적인 뇌 아밀로이드 침착물을 갖는 환자를 치료하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 뇌 아밀로이드 침착물 또는 신경염성 플라크의 축적을 감소시키기 위해 (즉, 뇌 아밀로이드 부담 또는 로드에서의 증가를 감소시키기 위해) 사용된다.
또한, 본 발명의 항체는 ARIA-E 또는 ARIA-H의 발생률을 증가시키지 않으면서 경도 내지 중등도 AD를 치료하는데 유용하다. 일부 실시양태에서, 환자는 경도 AD를 앓고 있다. 일부 실시양태에서, 환자는 ApoE4 양성이다. 일부 실시양태에서, 환자는 ApoE4 양성이고 경도 AD를 앓고 있다.
본원의 실시예에서 입증된 바와 같이, 치료 효과는 보다 경도의 형태의 AD에 걸린 환자에서 증가된다. 따라서, 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 초기 AD에 걸린 환자를 치료하는데 사용된다. 특정 실시양태에서, 치료될 환자는 하기 특징 중 1개 이상을 갖는다: (a) AD로 인한 경도 인지 장애 (MCI); (b) 임상적으로 검출가능한 결손 없이 알츠하이머병을 나타내는 1종 이상의 바이오마커; (c) 자유 및 단서 선택 기억 시험(Free and Cued Selective Reminding Test) (FCSRT)을 사용하여 27 이상의 스코어로서 정량화된 객관적 기억 상실; MMSE 24-30; (d) 전반적 임상 치매 등급화 (CDR) 0.5; 및 (e) 양성 아밀로이드 PET 스캔 (적임 판독자에 의해 결정된 바와 같음).
또 다른 측면에서, 초기, 경도, 또는 경도 내지 중등도 AD를 앓고 있는 환자에게 항-A베타 항체를 AD를 치료하는데 유효한 양으로 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서 AD를 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 환자는 SNP rs1532278에서 T를 포함하는 적어도 1개의 클루스테린 대립유전자 또는 그의 등가 대립유전자를 갖는다. 특정 SNP의 존재 또는 부재를 검출 또는 결정하기 위한 방법, 조성물 및 도구가 본원에 제공되며, 이하를 참조한다.
본 발명의 항체는 우수한 의료 행위에 부합하는 방식으로 제제화, 투약 및 투여된다. 이와 관련하여 고려할 인자는 치료할 특정한 장애, 치료할 특정한 포유동물, 개개의 대상체의 임상 상태, 장애의 원인, 작용제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄링, 및 의료 진료의에게 공지된 다른 인자를 포함한다.
투여 경로
본 발명의 항체 (및 임의의 추가의 치료제)는 비경구, 폐내 및 비강내를 비롯한 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있고, 원하는 경우에 국부 치료를 위해 병변내 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 투여는 임의의 적합한 경로에 의해, 예를 들어 부분적으로 투여가 단기적 또는 만성인지에 따라 정맥내 또는 피하 주사와 같은 주사에 의해 이루어질 수 있다. 한 실시양태에서, 항체는 피하로 주입된다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 정맥내로 주입된다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 시린지 (예를 들어, 사전충전되거나 그렇지 않음) 또는 자가주사기를 사용하여 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 흡입된다.
투여
아밀로이드증의 치료를 위해, 본 발명의 항체 (단독으로 또는 1종 이상의 다른 추가의 치료제와 조합되어 사용되는 경우)의 적절한 투여량은 치료될 질환의 구체적 유형, 항체의 유형, 질환의 중증도 및 경과, 선행 요법, 환자의 임상 병력 및 항체에 대한 반응, 및 담당 의사의 판단에 의존할 것이다. 항체는 한번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에게 적합하게 투여된다. 단일 투여 또는 다양한 시점에 걸친 다중 투여, 볼루스 투여 및 펄스 주입을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 투여 스케줄이 본원에서 고려된다.
질환의 유형 및 중증도에 따라, 항체의 약 0.3 mg/kg 내지 100 mg/kg (예를 들어, 15 mg/kg-100 mg/kg, 또는 그러한 범위 내의 임의의 투여량)이, 예를 들어 1회 이상의 개별 투여에 의해서든 또는 연속 주입에 의해서든 관계없이, 환자에게 투여하기 위한 초기 후보 투여량일 수 있다. 하나의 전형적인 1일 투여량은, 상기 언급된 인자에 따라 약 15 mg/kg 내지 100 mg/kg 또는 그 초과의 범위일 수 있다. 투여량은 단일 용량으로 또는 세분된 용량으로 (예를 들어, 30 mg/kg의 총 용량의 경우에 15 mg/kg의 2회 용량) 투여될 수 있다. 수주 이상에 걸친 반복 투여의 경우에, 상태에 따라 치료는 일반적으로 질환 증상의 목적하는 억제가 발생할 때까지 지속될 것이다. 하나의 예시적인 항체의 투여량은 약 10 mg/kg 내지 약 50 mg/kg 범위 내일 것이다. 따라서, 약 0.5 mg/kg, 1 mg/kg, 1.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 3 mg/kg, 4.0 mg/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 mg/kg, 50 mg/ kg, 60 mg/ kg, 70 mg/kg, 80 mg/kg, 90 mg/kg, 또는 100 mg/kg (또는 그의 임의의 조합)의 1회 이상의 용량이 환자에게 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여되는 총 용량은 50 mg 내지 2500 mg 범위 내이다. 약 50 mg, 약 100 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 약 500 mg, 약 600 mg, 약 700 mg, 약 720 mg, 약 1000 mg, 약 1050 mg, 약 1100 mg, 약 1200 mg, 약 1300 mg, 약 1400 mg, 약 1500 mg, 약 1600 mg, 약 1700 mg, 약 1800 mg, 약 1900 mg, 약 2000 mg, 약 2050 mg, 약 2100 mg, 약 2200 mg, 약 2300 mg, 약 2400 mg, 또는 약 2500 mg (또는 그의 임의의 조합)의 예시적인 용량이 환자에게 투여될 수 있다. 이러한 용량은 간헐적으로, 예를 들어 매주, 2주마다, 3주마다, 4주마다, 매월, 2개월마다, 3개월마다, 또는 6개월마다 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 환자는 1 내지 35회 용량 (예를 들어, 약 18회 용량의 항체)을 제공받는다. 그러나, 다른 투여량 요법이 유용할 수 있다. 이러한 요법의 진행은 통상적인 기술 및 검정에 의해 모니터링될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 항체는 15 mg/kg, 30 mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg, 60 mg/kg의 용량, 또는 균일 용량, 예를 들어, 300 mg, 500 mg, 700 mg, 800 mg, 또는 그 초과로 투여된다. 일부 실시양태에서, 용량은 시간 기간 동안 2주마다 또는 4주마다 정맥내 주사에 의해 투여된다. 일부 실시양태에서, 용량은 시간 기간 동안 2주마다 또는 4주마다 피하 주사에 의해 투여된다. 특정 실시양태에서, 기간은 6개월, 1년, 18개월, 2년, 5년, 10년, 15년, 20년, 또는 환자의 평생이다.
치유적 치료에 대한 반응의 모니터링/평가
본 개시내용의 방법에 사용된 바와 같은 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 환자에게 치료 효과 또는 이익을 제공한다. 특정 실시양태에서, 치료 효과는 AD의 진행에서의 지연 또는 그의 억제, 또는 임상, 기능, 또는 인지 저하에서의 감소이다. 일부 실시양태에서, 치료 효과 또는 이익은 "환자 반응" 또는 "반응" (및 그의 문법적 변형)에 반영된다. 환자 반응은 비제한적으로 하기를 비롯한 환자에의 이익을 나타내는 임의의 종점을 사용하여 평가될 수 있다: (1) 감속 및 완전한 정지를 비롯한 질환 진행의 어느 정도까지의 억제; (2) 플라크의 양에서의 감소 또는 뇌 아밀로이드 축적에서의 감소; (3) ADAS-Cog, iADL, 및 CDR-SOB 척도를 포함하나 이에 제한되지는 않는 1종 이상의 평가 측정 기준에서의 개선; (4) 환자의 매일 기능에서의 개선; (5) 뇌척수액 내 1종 이상의 바이오마커, 예를 들어 A베타의 농도의 증가; 및 (6) AD의 존재를 나타내는 1종 이상의 바이오마커의 감소. 환자 반응의 평가는 또한 치료와 상관될 수 있는, 발생할 수 있는 임의의 유해 사건의 평가를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 환자의 인지 능력 및 매일 기능은 본 발명의 항체를 사용한 요법 과정 전, 그 동안, 및/또는 그 후에 평가된다. 정신 기능, 인지, 및 신경계 결손을 평가하고, 진단하고, 스코어링하는데 사용하기 위한 다수의 인지 및 기능 평가 도구가 개발되어 있다. 이들 도구는 12 항목 ADAS-Cog (ADAS-Cog12), 13-항목 ADAS-Cog (ADAS-Cog13), 14-항목 ADAS-Cog (ADAS-Cog14)를 비롯한 ADAS-Cog; CDR 판단 및 문제 해결 및 CDR 기억 성분을 비롯한 CDR-SOB; 수단적 일상 생활 활동 (iADL); 및 MMSE를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
"ADAS-Cog"는 알츠하이머병 평가 척도 인지 하위척도, 다중부 인지 평가를 지칭한다. 문헌 [Rosen et al., 1984, Amer. J. Psych. 141:1356-1364; Mohs et al., 1997, Alzheimer's Disease Assoc. Disorders 11(2):S13-S21]을 참조한다. ADAS-Cog에서 수치 스코어가 더 높을수록, 보다 낮은 스코어를 받은 또 다른 개체 대비 시험된 환자의 결손 또는 장애는 더 크다. ADAS-Cog는 AD를 위한 치료가 치료상 유효한지 여부를 평가하기 위한 한 척도로서 사용될 수 있다. ADAS-Cog 스코어에서의 증가는 환자 상태의 악화를 나타내고, 반면에 ADAS-Cog 스코어에서의 감소는 환자 상태의 개선을 나타낸다. 본원에 사용된 "ADAS-Cog 수행에서의 저하" 또는 "ADAS-Cog 스코어에서의 증가"는 환자 상태의 악화를 나타내고, AD의 진행을 반영할 수 있다. ADAS-Cog는 기억, 이해, 응용, 정위력, 및 스스로 말하기를 비롯한 다중 인지 도메인을 평가하는 검사자-실시 배터리이다 (Rosen et al. 1984, Am J Psychiatr 141:1356-64; Mohs et al. 1997, Alzheimer Dis Assoc Disord 11(S2):S13-S21). ADAS-Cog는 AD 치료 시험에서의 표준 1차 종점이다 (Mani 2004, Stat Med 23:305-14). ADAS-Cog12는 ADAS-Cog의 70-포인트 버전 플러스 학습된 단어 목록의 회상을 평가하는 10-포인트 지연된 단어 회상 항목이다. 다른 ADAS-Cog 척도는 ADAS-Cog13 및 ADAS-Cog14를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 치료 방법은 위약 대비 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 또는 적어도 약 45%보다 낮은 ADAS-Cog 스코어에 의해 측정된 바와 같은 인지 저하에서의 감소를 제공한다.
"MMSE"는 간이 정신 상태 검사를 지칭하며, 이는 스코어 1 내지 30을 제공한다. 문헌 [Folstein, et al., 1975, J. Psychiatr. Res. 12:189-98]을 참조한다. 26 이하의 스코어는 일반적으로 결손을 나타내는 것으로 간주된다. MMSE 상 수치 스코어가 낮을수록, 보다 낮은 스코어를 받은 또 다른 개체 대비 시험된 환자의 결손 또는 장애는 더 크다. MMSE 스코어에서의 증가는 환자 상태의 개선을 나타낼 수 있고, 반면에 MMSE 스코어에서의 감소는 환자 상태의 악화를 나타낼 수 있다.
"CDR-SOB"는 임상 치매 등급화 척도/박스의 합을 지칭한다. 문헌 [Hughes et al., 1982. CDR-assesses 6 components: memory, orientation, judgment/problem solving, community affairs, home and hobbies, and personal care]을 참조한다. 시험은 환자 및 보호자 둘 다에 대해 실시되고, 각각의 성분 (또는 각각의 "박스")은 0 내지 3의 척도로 스코어링된다. 전체 CDR-SOB 스코어는 모든 6개의 박스에 걸친 스코어의 합계에 기초한다. 하위스코어는 또한 각각의 박스 또는 성분, 예를 들어 CDR/ 기억 또는 CDR/ 판단 및 문제 해결에 대해 개별적으로 수득될 수 있다. 본원에 사용된 "CDR-SOB 수행에서의 저하" 또는 "CDR-SOB 스코어에서의 증가"는 환자 상태의 악화를 나타내고, AD의 진행을 반영할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 치료 방법은 위약 대비 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 또는 적어도 약 40%의 CDR-SOB 수행에서의 저하의 감소를 제공한다.
"iADL"은 수단적 일상 생활 활동 척도를 지칭한다. 문헌 [Lawton, M.P., and Brody, E.M., 1969, Gerontologist 9:179-186]을 참조한다. 이러한 척도는 전형적인 일상 활동, 예컨대 가사, 세탁, 전화기 사용, 쇼핑, 식사 준비 등을 수행하는 능력을 측정한다. 스코어가 낮을수록, 개체가 일상 생활 활동을 수행하는데 장애가 더 크다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 치료 방법은 위약 대비 iADL 척도에서 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 또는 적어도 약 20%의 저하의 감소를 제공한다.
뇌 아밀로이드 로드 또는 부담은 신경계 영상화 기술 및 도구를 사용하여, 예를 들어 PET (양전자 방출 단층촬영) 스캐닝을 사용하여 결정될 수 있다. 시간의 경과에 따라, 예를 들어 치료의 투여 전 및 후에 (또는 치료 요법의 과정에 걸쳐 1회 이상의 구간에서) 채취한 환자의 연속 PET 스캔은 뇌내 증가, 감소, 또는 비변화된 아밀로이드 부담의 검출을 가능하게 할 수 있다. 이러한 기술은 추가로 아밀로이드 축적이 증가하고 있는지 또는 감소하고 있는지 여부를 결정하는데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 뇌내 아밀로이드 침착물의 검출은 플로르베타피르 18F을 사용하여 수행된다. 일부 실시양태에서, 플로르베타피르 PET 스캔은, 스캔의 집중화된 시각 판독에 기초하여 그것이 중등도-내지-빈번한 신경염성 플라크의 존재를 확립하는 경우에, 양성으로 간주된다.
공투여
항체는, 그러할 필요는 없지만, 해당 장애 또는 그의 증상 중 1종 이상을 예방 또는 치료하기 위해 현재 사용되는 1종 이상의 작용제와 임의로 제제화된다. 이러한 다른 작용제의 유효량은 제제 내에 존재하는 항체의 양, 장애 또는 치료의 유형, 및 상기 논의된 다른 인자에 의존한다. 이는 일반적으로 상기 기재된 바와 동일한 투여량 및 투여 경로로, 또는 본원에 기재된 투여량의 약 1 내지 99%로, 또는 실험적으로/임상적으로 적절한 것으로 결정된 임의의 투여량으로 및 임의의 경로에 의해 사용된다. 본 발명의 항체는 임의의 상기 화합물과 동시에 공투여될 수 있거나, 또는 임의의 상기 화합물의 투여 전 또는 그에 이어 투여될 수 있음이 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해될 것이다.
본 발명의 항체를 사용하여 아밀로이드증을 치료하는 경우에, 신경계 약물이 공투여될 수 있다. 이러한 신경계 약물은 베타 세크레타제, 타우, 프레세닐린, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 그의 부분, 아밀로이드 베타 펩티드 또는 그의 올리고머 또는 피브릴, 사멸 수용체 6 (DR6), 진행성 당화 최종 산물에 대한 수용체 (RAGE), 파킨, 및 헌팅틴으로부터 선택된 표적에 특이적으로 결합하는 항체 또는 다른 결합 분자 (소분자, 펩티드, 압타머 또는 다른 단백질 결합제를 포함하나 이에 제한되지는 않음); 콜린에스테라제 억제제 (즉, 갈란타민, 도네페질, 리바스티그민 및 타크린); NMDA 수용체 길항제 (즉, 메만틴), 모노아민 고갈제 (즉, 테트라베나진); 에르골로이드 메실레이트; 항콜린성 항파킨슨병제 (즉, 프로시클리딘, 디펜히드라민, 트리헥실페니딜, 벤즈트로핀, 비페리덴 및 트리헥시페니딜); 도파민성 항파킨슨병제 (즉, 엔타카폰, 셀레길린, 프라미펙솔, 브로모크립틴, 로티고틴, 셀레길린, 로피니롤, 라사길린, 아포모르핀, 카르비도파, 레보도파, 페르골리드, 톨카폰 및 아만타딘); 테트라베나진; 항염증 (비스테로이드성 항염증 약물 (즉, 인도메티신 및 상기 열거된 다른 화합물)을 포함하나 이에 제한되지는 않음); 호르몬 (즉, 에스트로겐, 프로게스테론 및 류프롤리드); 비타민 (즉, 폴레이트 및 니코틴아미드); 디메볼린; 호모타우린 (즉, 3-아미노프로판술폰산; 3APS); 세로토닌 수용체 활성 조정제 (즉, 크살리프로덴); 인터페론 및 글루코코르티코이드 또는 코르티코스테로이드를 포함하나 이에 제한되지는 않는 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 크레네주맙 이외의 1종 이상의 항-A베타 항체가 공투여된다. 이러한 항-A베타 항체의 비제한적 예는 솔라네주맙, 바피뉴주맙, 아두카누맙 및 간테네루맙을 포함한다. 용어 "코르티코스테로이드"는 플루티카손 (플루티카손 프로피오네이트 (FP) 포함), 베클로메타손, 부데소니드, 시클레소니드, 모메타손, 플루니솔리드, 베타메타손 및 트리암시놀론을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. "흡입성 코르티코스테로이드"는 흡입에 의해 전달하는데 적합한 코르티코스테로이드를 의미한다. 예시적인 흡입성 코르티코스테로이드는 플루티카손, 베클로메타손 디프로피오네이트, 부데소니드, 모메타손 푸로에이트, 시클레소니드, 플루니솔리드 및 트리암시놀론 아세토니드이다.
본 발명의 항체를 사용하여 안구 질환 또는 장애인 아밀로이드증을 치료하는 경우에, 항혈관신생 안과용 작용제 (즉, 베바시주맙, 라니비주맙 및 페갑타닙), 안과용 녹내장 작용제 (즉, 카르바콜, 에피네프린, 데메카륨 브로마이드, 아프라클로니딘, 브리모니딘, 브린졸라미드, 레보부놀롤, 티몰롤, 베탁솔롤, 도르졸아미드, 비마토프로스트, 카르테올롤, 메티프라놀롤, 디피베프린, 트라보프로스트 및 라타노프로스트), 탄산 안히드라제 억제제 (즉, 메타졸아미드 및 아세타졸아미드), 안과용 항히스타민제 (즉, 나파졸린, 페닐에프린 및 테트라히드로졸린), 안구 윤활제, 안과용 스테로이드 (즉, 플루오로메톨론, 프레드니솔론, 로테프레드놀, 덱사메타손, 디플루프레드네이트, 리멕솔론, 플루오시놀론, 메드리손 및 트리암시놀론), 안과용 마취제 (즉, 리도카인, 프로파라카인 및 테트라카인), 안과용 항감염제 (즉, 레보플록사신, 가티플록사신, 시프로플록사신, 목시플록사신, 클로람페니콜, 바시트라신/폴리믹신 b, 술프아세트아미드, 토브라마이신, 아지트로마이신, 베시플록사신, 노르플록사신, 술프이속사졸, 겐타미신, 이독수리딘, 에리트로마이신, 나타마이신, 그라미시딘, 네오마이신, 오플록사신, 트리플루리딘, 간시클로비르, 비다라빈), 안과용 항염증제 (즉, 네파페낙, 케토롤락, 플루르비프로펜, 수프로펜, 시클로스포린, 트리암시놀론, 디클로페낙 및 브롬페낙), 및 안과용 항히스타민제 또는 충혈제거제 (즉, 케토티펜, 올로파타딘, 에피나스틴, 나파졸린, 크로몰린, 테트라히드로졸린, 페미로라스트, 베포타스틴, 나파졸린, 페닐에프린, 네도크로밀, 로독사미드, 페닐에프린, 에메다스틴 및 아젤라스틴)인 신경계 약물이 선택될 수 있다. 임의의 상기 제제 또는 치료 방법은 항-A베타 항체를 대신하여 또는 그에 더하여 본 발명의 면역접합체를 사용하여 수행될 수 있음이 이해된다.
제조 물품
본 발명의 또 다른 측면에서, 상기 기재된 장애의 치료, 예방 및/또는 진단에 유용한 물질이 담긴 제조 물품이 제공된다. 제조 물품은 용기, 및 용기 상에 있거나 용기와 회합된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기는, 예를 들어 병, 바이알, 시린지, IV 용액 백 등을 포함한다. 용기는 다양한 물질, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로 형성될 수 있다. 용기는 조성물을 그 자체로 수용하거나 또는 상태의 치료, 예방 및/또는 진단에 유효한 또 다른 조성물과 조합하여 수용하며, 멸균 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들어, 용기는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있음). 조성물 중 적어도 1종의 활성제는 본 발명의 항체이다. 라벨 또는 패키지 삽입물은 조성물이 선택된 상태를 치료하는데 사용된다는 것을 나타낸다. 또한, 제조 물품은 (a) 내부에 본 발명의 항체를 포함하는 조성물이 담긴 제1 용기; 및 (b) 내부에 추가의 세포독성제 또는 다른 치료제를 포함하는 조성물이 담긴 제2 용기를 포함할 수 있다. 본 발명의 이러한 실시양태에서 제조 물품은 조성물이 특정한 상태를 치료하는데 사용될 수 있음을 나타내는 패키지 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 제조 물품은 제약상-허용되는 완충제, 예컨대 정박테리아 주사용수 (BWFI), 포스페이트-완충 염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2 (또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 시린지를 비롯한, 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
임의의 상기 제조 물품은 항-A베타 항체를 대신하여 또는 이에 더하여 본 발명의 면역접합체를 포함할 수 있음이 이해된다.
예시적 실시양태
예시를 위한 예시적 실시양태가 본원에 제공된다.
1. 초기 또는 경도 내지 중등도 알츠하이머병 (AD)을 앓고 있는 환자에게 아밀로이드 β (1-42) (서열식별번호: 1)의 잔기 13과 24 내에 결합하는 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 환자에서 기능 또는 인지 능력의 저하를 감속시키는데 유효한 양으로 투여하는 것을 포함하는, 초기 또는 경도 내지 중등도 AD로 진단된 환자에서 기능 또는 인지 능력의 저하를 감소시키는 방법.
2. 실시양태 1에 있어서, 항체가 아밀로이드 β의 올리고머 및 단량체 형태에 결합할 수 있는 것인 방법.
3. 실시양태 1에 있어서, 항체가 IgG4 항체인 방법.
4. 실시양태 2 또는 3에 있어서, 항체가 6개의 초가변 영역 (HVR)을 포함하며, 여기서
(i) HVR-H1은 서열식별번호: 2이고;
(ii) HVR-H2는 서열식별번호: 3이고;
(iii) HVR-H3은 서열식별번호: 4이고;
(iv) HVR-L1은 서열식별번호: 6이고;
(v) HVR-L2는 서열식별번호: 7이고;
(vi) HVR-L3은 서열식별번호: 8인
방법.
5. 실시양태 4에 있어서, 항체가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인 방법.
6. 실시양태 5에 있어서, 항체가 크레네주맙인 방법.
7. 실시양태 1 내지 6 중 어느 한 실시양태에 있어서, 인지 능력의 저하가 상기 항체의 투여 전 및 후에 12-항목 알츠하이머병 평가 척도 - 인지 (ADAS-Cog12), 13-항목 알츠하이머병 평가 척도 - 인지 (ADAS-Cog13), 또는 14-항목 알츠하이머병 평가 척도 - 인지 (ADAS-Cog12) 시험을 사용하여 환자의 스코어를 결정함으로써 평가되고, 임의로 여기서 ADAS-Cog에 의해 측정된 바와 같은 인지 저하에서의 감소가 위약에 비해 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 45%인 방법.
8. 실시양태 7에 있어서, 환자가 ApoE4 양성인 방법.
9. 실시양태 7에 있어서, 환자가 경도 AD를 앓고 있는 것인 방법.
10. 실시양태 7에 있어서, 환자가 초기 AD를 앓고 있는 것인 방법.
11. 실시양태 1 내지 8 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자가 치료 개시 전에 적어도 20, 20 내지 30, 20 내지 26, 24 내지 30, 21 내지 26, 22 내지 26, 22 내지 28, 23 내지 26, 24 내지 26, 또는 25 내지 26의 MMSE 스코어를 갖는 것인 방법.
12. 실시양태 11에 있어서, 환자가 MMSE 22 내지 26을 갖는 것인 방법.
13. 실시양태 1 내지 12 중 어느 한 실시양태에 있어서, 항체를 환자 체중의 10 mg/kg 내지 100 mg/kg의 용량으로 투여하는 것인 방법.
14. 실시양태 13에 있어서, 항체를 적어도 15 mg/kg의 용량으로 투여하는 것인 방법.
15. 실시양태 14에 있어서, 항체를 15 mg/kg, 30 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg 또는 60 mg/kg의 용량으로 투여하는 것인 방법.
16. 실시양태 13 또는 14에 있어서, 항체를 정맥내 주사를 통해 투여하는 것인 방법.
17. 실시양태 13 내지 16 중 어느 한 실시양태에 있어서, 항체를 2주마다, 4주마다, 매월, 2개월마다, 또는 6개월마다 투여하는 것인 방법.
18. 초기 또는 경도 내지 중등도 AD로 진단된 환자에게 치료 발현성 유해 사건의 위험을 증가시키지 않으면서 AD를 치료하는데 유효한 양의 아밀로이드 β (1-42) (서열식별번호: 1)의 잔기 13과 24 내에 결합하는 인간화 모노클로날 항-Aβ 항체를 투여하는 것을 포함하는, 유해 사건의 위험을 증가시키지 않으면서 초기 또는 경도 내지 중등도 AD를 치료하는 방법이며, 여기서 유해 사건은: (i) 아밀로이드-관련 영상화 이상-부종 (ARIA-E) 및 (ii) 아밀로이드-관련 영상화 이상-출혈 (ARIA-H)로부터 선택된 것인 방법.
19. 실시양태 18에 있어서, 항체가 아밀로이드 β의 올리고머 및 단량체 형태에 결합할 수 있는 것인 방법.
20. 실시양태 18에 있어서, 항체가 IgG4 항체인 방법.
21. 실시양태 19에 있어서, 항체가 6개의 초가변 영역 (HVR)을 포함하며, 여기서
(i) HVR-H1은 서열식별번호: 2이고;
(ii) HVR-H2는 서열식별번호: 3이고;
(iii) HVR-H3은 서열식별번호: 4이고;
(iv) HVR-L1은 서열식별번호: 6이고;
(v) HVR-L2는 서열식별번호: 7이고;
(vi) HVR-L3은 서열식별번호: 8인
방법.
22. 실시양태 21에 있어서, 항체가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인 방법.
23. 실시양태 22에 있어서, 항체가 크레네주맙인 방법.
24. 실시양태 18 내지 23 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자가 ApoE4 양성인 방법.
25. 실시양태 18 내지 23 중 어느 한 실시양태에 있어서, 유해 사건이 ARIA-E인 방법.
26. 실시양태 25에 있어서, 치료 발현성 ARIA-E가 검출된 경우에, 항체의 투여를 중단하고, 임의로 ARIA-E에 대한 치료를 투여하는 것인 방법.
27. 실시양태 26에 있어서, ARIA-E가 해소된 후에 상기 항체의 투여를 재개하는 것을 추가로 포함하며, 여기서 항체는 투여를 중단하기 전보다 낮은 용량으로 투여하는 것인 방법.
28. 실시양태 18에 있어서, 1종 이상의 새로운 ARIA-E가 상기 항체를 사용한 치료 동안 환자에서 검출된 경우에, 더 이상 항체를 투여하지 않고, 임의로 코르티코스테로이드를 환자에게 투여하는 것인 방법.
29. 실시양태 28에 있어서, 환자가 ApoE4 양성인 방법.
30. 초기 또는 경도 내지 중등도 알츠하이머병 (AD)을 앓고 있는 ApoE4 양성 환자에게 아밀로이드 β (1-42) (서열식별번호: 1)의 잔기 13과 24 내에 결합하는 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 환자에서 기능 또는 인지 능력의 저하를 감속시키는데 유효한 양으로 투여하는 것을 포함하는, 초기 또는 경도 내지 중등도 AD로 진단된 환자에서 기능 또는 인지 능력의 저하를 감소시키는 방법.
31. 실시양태 30에 있어서, 항체가 아밀로이드 β의 올리고머 및 단량체 형태에 결합할 수 있는 것인 방법.
32. 실시양태 30에 있어서, 항체가 IgG4 항체인 방법.
33. 실시양태 31 또는 32에 있어서, 항체가 6개의 초가변 영역 (HVR)을 포함하며, 여기서
(i) HVR-H1은 서열식별번호: 2이고;
(ii) HVR-H2는 서열식별번호: 3이고;
(iii) HVR-H3은 서열식별번호: 4이고;
(iv) HVR-L1은 서열식별번호: 6이고;
(v) HVR-L2는 서열식별번호: 7이고;
(vi) HVR-L3은 서열식별번호: 8인
방법.
34. 실시양태 33에 있어서, 항체가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인 방법.
35. 실시양태 34에 있어서, 항체가 크레네주맙인 방법.
36. 실시양태 30 내지 35 중 어느 한 실시양태에 있어서, 인지 능력의 저하가 상기 항체의 투여 전 및 후에 ADAS-Cog12, ADAS-Cog13, 또는 ADAS-Cog14 시험을 사용하여 환자의 스코어를 결정함으로써 평가되고, 임의로 여기서 ADAS-Cog에 의해 측정된 바와 같은 인지 저하에서의 감소가 위약에 비해 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 45%인 방법.
37. 실시양태 36에 있어서, 환자가 경도 AD에 걸린 것인 방법.
38. 실시양태 36에 있어서, 환자가 초기 AD에 걸린 것인 방법.
39. 실시양태 30 내지 37 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자가 치료 개시 전에 적어도 20, 20 내지 30, 20 내지 26, 24 내지 30, 21 내지 26, 22 내지 26, 22 내지 28, 23 내지 26, 24 내지 26, 또는 25 내지 26의 MMSE 스코어를 갖는 것인 방법.
40. 실시양태 39에 있어서, 환자가 MMSE 스코어 22 내지 26을 갖는 것인 방법.
41. 실시양태 30 내지 39 중 어느 한 실시양태에 있어서, 항체를 환자 체중의 10 mg/kg 내지 100 mg/kg의 용량으로 투여하는 것인 방법.
42. 실시양태 41에 있어서, 항체를 적어도 15 mg/kg의 용량으로 투여하는 것인 방법.
43. 실시양태 42에 있어서, 항체를 15 mg/kg, 30 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg 또는 60 mg/kg의 용량으로 투여하는 것인 방법.
44. 실시양태 41 또는 42에 있어서, 항체를 정맥내 주사를 통해 투여하는 것인 방법.
45. 실시양태 41 내지 44 중 어느 한 실시양태에 있어서, 항체를 2주마다, 4주마다, 매월, 2개월마다, 또는 6개월마다 투여하는 것인 방법.
46. 초기 또는 경도 내지 중등도 AD로 진단된 ApoE4 양성 환자에게 치료 발현성 유해 사건의 위험을 증가시키지 않으면서 AD를 치료하는데 유효한 양의 아밀로이드 β (1-42) (서열식별번호: 1)의 잔기 13과 24 내에 결합하는 인간화 모노클로날 항-Aβ 항체를 투여하는 것을 포함하는, 유해 사건의 위험을 증가시키지 않으면서 초기 또는 경도 내지 중등도 AD를 치료하는 방법이며, 여기서 유해 사건은: (i) 아밀로이드-관련 영상화 이상-부종 (ARIA-E) 및 (ii) 아밀로이드-관련 영상화 이상-출혈 (ARIA-H)로부터 선택된 것인 방법.
47. 실시양태 46에 있어서, 항체가 아밀로이드 β의 올리고머 및 단량체 형태에 결합할 수 있는 것인 방법.
48. 실시양태 46에 있어서, 항체가 IgG4 항체인 방법.
49. 실시양태 47에 있어서, 항체가 6개의 초가변 영역 (HVR)을 포함하며, 여기서
(i) HVR-H1은 서열식별번호: 2이고;
(ii) HVR-H2는 서열식별번호: 3이고;
(iii) HVR-H3은 서열식별번호: 4이고;
(iv) HVR-L1은 서열식별번호: 6이고;
(v) HVR-L2는 서열식별번호: 7이고;
(vi) HVR-L3은 서열식별번호: 8인
방법.
50. 실시양태 49에 있어서, 항체가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인 방법.
51. 실시양태 50에 있어서, 항체가 크레네주맙인 방법.
52. 실시양태 46 내지 51 중 어느 한 실시양태에 있어서, 유해 사건이 ARIA-E인 방법.
53. 실시양태 52에 있어서, 치료 발현성 ARIA-E가 검출된 경우에, 항체의 투여를 중단하고, 임의로 ARIA-E에 대한 치료를 투여하는 것인 방법.
54. 실시양태 53에 있어서, ARIA-E가 해소된 후에 상기 항체의 투여를 재개하는 것을 추가로 포함하며, 임의로 투여를 중단하기 전보다 낮은 용량으로 상기 항체의 투여를 재개하는 것을 포함하는 방법.
55. 실시양태 46에 있어서, 1종 이상의 새로운 ARIA-E가 상기 항체를 사용한 치료 동안 환자에서 검출된 경우에, 더 이상 항체를 투여하지 않고, 임의로 코르티코스테로이드를 환자에게 투여하는 것인 방법.
56. 실시양태 1 내지 55 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자를 표적에 특이적으로 결합하는 치료제; 콜린에스테라제 억제제; NMDA 수용체 길항제; 모노아민 고갈제; 에르골로이드 메실레이트; 항콜린성 항파킨슨병제; 도파민성 항파킨슨병제; 테트라베나진; 항염증제; 호르몬; 비타민; 디메볼린; 호모타우린; 세로토닌 수용체 활성 조정제; 인터페론 및 글루코코르티코이드; 크레네주맙 이외의 항-A베타 항체; 항생제; 항바이러스제로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 작용제와 함께 병행 치료하는 것인 방법.
57. 실시양태 56에 있어서, 작용제가 콜린에스테라제 억제제인 방법.
58. 실시양태 57에 있어서, 콜린에스테라제 억제제가 갈란타민, 도네페질, 리바스티그민 및 타크린으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
59. 실시양태 56에 있어서, 작용제가 NMDA 수용체 길항제인 방법.
60. 실시양태 59에 있어서, NMDA 수용체 길항제가 메만틴 또는 그의 염인 방법.
61. 실시양태 56에 있어서, 작용제가 표적에 특이적으로 결합하는 치료제이고, 표적이 베타 세크레타제, 타우, 프레세닐린, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 그의 부분, 아밀로이드 베타 펩티드 또는 그의 올리고머 또는 피브릴, 사멸 수용체 6 (DR6), 진행성 당화 최종 산물에 대한 수용체 (RAGE), 파킨, 및 헌팅틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
62. 실시양태 56에 있어서, 작용제가 모노아민 고갈제, 임의로 테트라베나진인 방법.
63. 실시양태 56에 있어서, 작용제가 프로시클리딘, 디펜히드라민, 트리헥실페니딜, 벤즈트로핀, 비페리덴 및 트리헥시페니딜로 이루어진 군으로부터 선택된 항콜린성 항파킨슨병제인 방법.
64. 실시양태 56에 있어서, 작용제가 엔타카폰, 셀레길린, 프라미펙솔, 브로모크립틴, 로티고틴, 셀레길린, 로피니롤, 라사길린, 아포모르핀, 카르비도파, 레보도파, 페르골리드, 톨카폰 및 아만타딘으로 이루어진 군으로부터 선택된 도파민성 항파킨슨병제인 방법.
65. 실시양태 56에 있어서, 작용제가 비스테로이드성 항염증 약물 및 인도메타신으로 이루어진 군으로부터 선택된 항염증제인 방법.
66. 실시양태 56에 있어서, 작용제가 에스트로겐, 프로게스테론 및 류프롤리드로 이루어진 군으로부터 선택된 호르몬인 방법.
67. 실시양태 56에 있어서, 작용제가 폴레이트 및 니코틴아미드로 이루어진 군으로부터 선택된 비타민인 방법.
68. 실시양태 56에 있어서, 작용제가 3-아미노프로판술폰산 또는 3APS인 호모타우린인 방법.
69. 실시양태 56에 있어서, 작용제가 크살리프로덴인 방법.
70. 초기 또는 경도 내지 중등도 알츠하이머병 (AD)을 앓고 있는 환자에게 아밀로이드 β (1-42) (서열식별번호: 1)의 잔기 13과 24 내에 결합하는 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 환자에서 임상 저하를 감속시키는데 유효한 양으로 투여하는 것을 포함하는, 초기 또는 경도 내지 중등도 AD로 진단된 환자에서 임상 저하를 감속시키는 방법.
71. 실시양태 70에 있어서, 항체가 아밀로이드 β의 올리고머 및 단량체 형태에 결합할 수 있는 것인 방법.
72. 실시양태 70에 있어서, 항체가 IgG4 항체인 방법.
73. 실시양태 71 또는 72에 있어서, 항체가 6개의 초가변 영역 (HVR)을 포함하며, 여기서
(i) HVR-H1은 서열식별번호: 2이고;
(ii) HVR-H2는 서열식별번호: 3이고;
(iii) HVR-H3은 서열식별번호: 4이고;
(iv) HVR-L1은 서열식별번호: 6이고;
(v) HVR-L2는 서열식별번호: 7이고;
(vi) HVR-L3은 서열식별번호: 8인
방법.
74. 실시양태 73에 있어서, 항체가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인 방법.
75. 실시양태 74에 있어서, 항체가 크레네주맙인 방법.
76. 실시양태 70 내지 75 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항체의 투여 전 및 후에 12-항목 알츠하이머병 평가 척도 - 인지 (ADAS-Cog12), 13-항목 알츠하이머병 평가 척도 - 인지 (ADAS-Cog13), 또는 14-항목 알츠하이머병 평가 척도 - 인지 (ADAS-Cog12) 시험을 사용하여 환자의 스코어를 결정함으로써 평가되는 인지 능력의 저하를 추가로 포함하고, 임의로 여기서 ADAS-Cog에 의해 측정된 바와 같은 인지 저하에서의 감소가 위약에 비해 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 45%인 방법.
77. 실시양태 76에 있어서, 환자가 ApoE4 양성인 방법.
78. 실시양태 76에 있어서, 환자가 경도 AD를 앓고 있는 것인 방법.
79. 실시양태 76에 있어서, 환자가 초기 AD를 앓고 있는 것인 방법.
80. 실시양태 70 내지 78 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자가 치료 개시 전에 적어도 20, 20 내지 30, 20 내지 26, 24 내지 30, 21 내지 26, 22 내지 26, 22 내지 28, 23 내지 26, 24 내지 26, 또는 25 내지 26의 MMSE 스코어를 갖는 것인 방법.
81. 실시양태 80에 있어서, 환자가 MMSE 스코어 22 내지 26을 갖는 것인 방법.
82. 실시양태 70 내지 80 중 어느 한 실시양태에 있어서, 항체를 환자 체중의 10 mg/kg 내지 100 mg/kg의 용량으로 투여하는 것인 방법.
83. 실시양태 82에 있어서, 항체를 적어도 15 mg/kg의 용량으로 투여하는 것인 방법.
84. 실시양태 83에 있어서, 항체를 15 mg/kg, 30 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg 또는 60 mg/kg의 용량으로 투여하는 것인 방법.
85. 실시양태 82 또는 83에 있어서, 항체를 정맥내 주사를 통해 투여하는 것인 방법.
86. 실시양태 82 내지 85 중 어느 한 실시양태에 있어서, 항체를 2주마다, 4주마다, 매월, 2개월마다, 또는 6개월마다 투여하는 것인 방법.
87. 초기 또는 경도 AD를 앓고 있는 환자에게 아밀로이드 β (1-42) (서열식별번호: 1)의 잔기 13과 24 내에 결합하는 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 AD를 치료하는데 유효한 양으로 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 초기 또는 경도 AD를 치료하는 방법.
88. 실시양태 87에 있어서, 항체가 아밀로이드 β의 올리고머 및 단량체 형태에 결합할 수 있는 것인 방법.
89. 실시양태 87에 있어서, 항체가 IgG4 항체인 방법.
90. 실시양태 88 또는 89에 있어서, 항체가 6개의 초가변 영역 (HVR)을 포함하며, 여기서
(i) HVR-H1은 서열식별번호: 2이고;
(ii) HVR-H2는 서열식별번호: 3이고;
(iii) HVR-H3은 서열식별번호: 4이고;
(iv) HVR-L1은 서열식별번호: 6이고;
(v) HVR-L2는 서열식별번호: 7이고;
(vi) HVR-L3은 서열식별번호: 8인
방법.
91. 실시양태 90에 있어서, 항체가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인 방법.
92. 실시양태 91에 있어서, 항체가 크레네주맙인 방법.
93. 실시양태 87 내지 92 중 어느 한 실시양태에 있어서, 양이 인지 능력의 저하를 감소시키는데 유효하고, 인지 능력의 저하는 상기 항체의 투여 전 및 후에 12-항목 알츠하이머병 평가 척도 - 인지 (ADAS-Cog12), 13-항목 알츠하이머병 평가 척도 - 인지 (ADAS-Cog13), 또는 14-항목 알츠하이머병 평가 척도 - 인지 (ADAS-Cog12) 시험을 사용하여 환자의 스코어를 결정함으로써 평가되고, 임의로 여기서 ADAS-Cog에 의해 측정된 바와 같은 인지 저하에서의 감소는 위약에 비해 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 45%인 방법.
94. 실시양태 93에 있어서, 환자가 ApoE4 양성인 방법.
95. 실시양태 87 내지 94 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자가 치료 개시 전에 적어도 20, 20 내지 30, 20 내지 26, 24 내지 30, 21 내지 26, 22 내지 26, 22 내지 28, 23 내지 26, 24 내지 26, 또는 25 내지 26의 MMSE 스코어를 갖는 것인 방법.
96. 실시양태 95에 있어서, 환자가 MMSE 스코어 22 내지 26을 갖는 것인 방법.
97. 실시양태 87 내지 95 중 어느 한 실시양태에 있어서, 항체를 환자 체중의 10 mg/kg 내지 100 mg/kg의 용량으로 투여하는 것인 방법.
98. 실시양태 97에 있어서, 항체를 적어도 15 mg/kg의 용량으로 투여하는 것인 방법.
99. 실시양태 98에 있어서, 항체를 15 mg/kg, 30 mg/kg, 45 mg/kg, 50 mg/kg 또는 60 mg/kg의 용량으로 투여하는 것인 방법.
100. 실시양태 97 또는 98에 있어서, 항체를 정맥내 주사를 통해 투여하는 것인 방법.
101. 실시양태 97 내지 100 중 어느 한 실시양태에 있어서, 항체를 2주마다, 4주마다, 매월, 2개월마다, 또는 6개월마다 투여하는 것인 방법.
102. 실시양태 70 내지 101 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자를 표적에 특이적으로 결합하는 치료제; 콜린에스테라제 억제제; NMDA 수용체 길항제; 모노아민 고갈제; 에르골로이드 메실레이트; 항콜린성 항파킨슨병제; 도파민성 항파킨슨병제; 테트라베나진; 항염증제; 호르몬; 비타민; 디메볼린; 호모타우린; 세로토닌 수용체 활성 조정제; 인터페론 및 글루코코르티코이드; 항-A베타 항체; 항생제; 항바이러스제로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 작용제와 함께 병행 치료하는 것인 방법.
103. 실시양태 102에 있어서, 작용제가 콜린에스테라제 억제제인 방법.
104. 실시양태 103에 있어서, 콜린에스테라제 억제제가 갈란타민, 도네페질, 리바스티그민 및 타크린으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
105. 실시양태 102에 있어서, 작용제가 NMDA 수용체 길항제인 방법.
106. 실시양태 105에 있어서, NMDA 수용체 길항제가 메만틴 또는 그의 염인 방법.
107. 실시양태 102에 있어서, 작용제가 표적에 특이적으로 결합하는 치료제이고, 표적이 베타 세크레타제, 타우, 프레세닐린, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 그의 부분, 아밀로이드 베타 펩티드 또는 그의 올리고머 또는 피브릴, 사멸 수용체 6 (DR6), 진행성 당화 최종 산물에 대한 수용체 (RAGE), 파킨, 및 헌팅틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
108. 실시양태 102에 있어서, 작용제가 모노아민 고갈제, 임의로 테트라베나진인 방법.
109. 실시양태 102에 있어서, 작용제가 프로시클리딘, 디펜히드라민, 트리헥실페니딜, 벤즈트로핀, 비페리덴 및 트리헥시페니딜로 이루어진 군으로부터 선택된 항콜린성 항파킨슨병제인 방법.
110. 실시양태 102에 있어서, 작용제가 엔타카폰, 셀레길린, 프라미펙솔, 브로모크립틴, 로티고틴, 셀레길린, 로피니롤, 라사길린, 아포모르핀, 카르비도파, 레보도파, 페르골리드, 톨카폰 및 아만타딘으로 이루어진 군으로부터 선택된 도파민성 항파킨슨병제인 방법.
111. 실시양태 102에 있어서, 작용제가 비스테로이드성 항염증 약물 및 인도메타신으로 이루어진 군으로부터 선택된 항염증제인 방법.
112. 실시양태 102에 있어서, 작용제가 에스트로겐, 프로게스테론 및 류프롤리드로 이루어진 군으로부터 선택된 호르몬인 방법.
113. 실시양태 102에 있어서, 작용제가 폴레이트 및 니코틴아미드로 이루어진 군으로부터 선택된 비타민인 방법.
114. 실시양태 102에 있어서, 작용제가 3-아미노프로판술폰산 또는 3APS인 호모타우린인 방법.
115. 실시양태 102에 있어서, 작용제가 크살리프로덴인 방법.
116. 실시양태 102에 있어서, 작용제가 크레네주맙 이외의 항-A베타 항체인 방법.
117. 초기 또는 경도 내지 중등도 알츠하이머병 (AD)을 앓고 있는 환자에게 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 AD를 치료하는데 유효한 양으로 투여하는 것을 포함하는, 초기 또는 경도 내지 중등도 AD를 앓고 있는 환자에서 AD를 치료하는 방법이며, 여기서 환자는 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T를 포함하는 적어도 1개의 클루스테린 대립유전자를 갖는 것인 방법.
118. 실시양태 117에 있어서, 클루스테린 대립유전자가 그의 등가 대립유전자인 방법.
119. 실시양태 117에 있어서, 환자로부터의 샘플에서 다형성을 검출하는 것을 포함하며, 여기서 검출된 다형성이 SNP rs1532278과 연관 불평형인 방법.
120. 실시양태 119에 있어서, 샘플이 혈액 샘플, 타액, 협부 스왑, 조직 샘플 또는 체액 샘플인 방법.
121. 실시양태 117 내지 120 중 어느 한 실시양태에 있어서, 다형성이 폴리머라제 연쇄 반응에 의해 검출되는 것인 방법.
122. 실시양태 117 내지 120 중 어느 한 실시양태에 있어서, 다형성이 서열분석에 의해 검출되는 것인 방법.
123. 실시양태 121 또는 122에 있어서, 다형성이 스캐닝 프로브 및 나노포어 DNA 서열분석, 파이로시퀀싱, 변성 구배 겔 전기영동 (DGGE), 시간 온도 구배 전기영동 (TTGE), Zn(II)-사이클렌 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 균질 형광 PCR-기반 단일 뉴클레오티드 다형성 분석, 포스페이트-친화도 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 고처리량 SNP 유전자형 결정 플랫폼, 분자 비콘, 5' 뉴클레아제 반응, 택맨 검정, 매스어레이 (매트릭스-보조 레이저 탈착/이온화 비행 시간 질량 분광측정법과 커플링된 단일 염기 프라이머 연장), 트리틸 질량 태그, 유전자형 결정 플랫폼 (예컨대 인베이더 어세이®), 단일 염기 프라이머 연장 (SBE) 검정, PCR 증폭 (예를 들어, 자기 나노입자 (MNP) 상에서의 PCR 증폭, PCR 산물의 제한 효소 분석 (RFLP 방법), 대립유전자-특이적 PCR, 다중 프라이머 연장 (MPEX), 및 등온 smart 증폭으로 이루어진 군으로부터 선택된 기술에 의해 검출되는 것인 방법.
124. 실시양태 117 내지 120 중 어느 한 실시양태에 있어서, 다형성이 적어도 1개의 다형성을 함유하는 표적 영역의 증폭, 및 엄격한 조건 하에 적어도 1개의 다형성에 혼성화하는 적어도 1개의 서열-특이적 올리고뉴클레오티드와의 혼성화, 및 혼성화의 검출에 의해 검출되는 것인 방법.
125. 실시양태 117에 있어서, 환자가 경도 AD를 앓고 있는 것인 방법.
126. 실시양태 117에 있어서, 환자가 초기 AD를 앓고 있는 것인 방법.
127. 실시양태 125 또는 126에 있어서, 환자가 적어도 20, 20 내지 30, 20 내지 26, 24 내지 30, 21 내지 26, 22 내지 26, 22 내지 28, 23 내지 26, 24 내지 26, 또는 25 내지 26의 MMSE 스코어를 갖는 것인 방법.
128. 실시양태 127에 있어서, 환자가 MMSE 스코어 22 내지 26을 갖는 것인 방법.
129. 실시양태 117 내지 128 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자가 ApoE4 양성인 방법.
130. 실시양태 117에 있어서, 항-아밀로이드 베타 항체가 아밀로이드 β (1-42) (서열식별번호: 1)의 잔기 13과 24 내에 결합하는 것인 방법.
131. 실시양태 130에 있어서, 항체가 아밀로이드 β의 올리고머 및 단량체 형태에 결합할 수 있는 것인 방법.
132. 실시양태 131에 있어서, 항체가 IgG4 항체인 방법.
133. 실시양태 131 또는 132에 있어서, 항체가 6개의 초가변 영역 (HVR)을 포함하며, 여기서
(i) HVR-H1은 서열식별번호: 2이고;
(ii) HVR-H2는 서열식별번호: 3이고;
(iii) HVR-H3은 서열식별번호: 4이고;
(iv) HVR-L1은 서열식별번호: 6이고;
(v) HVR-L2는 서열식별번호: 7이고;
(vi) HVR-L3은 서열식별번호: 8인
방법.
134. 실시양태 133에 있어서, 항체가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인 방법.
135. 실시양태 133에 있어서, 항체가 크레네주맙인 방법.
136. 실시양태 117에 있어서, 항-아밀로이드 베타 항체가 솔라네주맙, 바피뉴주맙, 아두카누맙 및 간테네루맙으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
137. (a) 초기 또는 경도 내지 중등도 AD를 앓고 있는 환자로부터의 샘플에서 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T를 갖는 클루스테린 대립유전자의 존재 또는 부재를 검출하는 단계, 및
(b) 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T가 샘플에 존재하는 경우에, 환자를 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 사용한 치료에 반응할 가능성이 더 큰 것으로서 선택하는 단계
를 포함하는, 인간화 모노클로날 항-Aβ 항체를 사용한 치료를 위한 초기 또는 경도 내지 중등도 AD를 앓고 있는 환자를 선택하는 방법.
138. 실시양태 137에 있어서, 클루스테린 대립유전자가 그의 등가 대립유전자인 방법.
139. 실시양태 138에 있어서, 등가 대립유전자가 SNP rs1532278과 연관 불평형인 방법.
140. 실시양태 137 또는 138에 있어서, 샘플이 혈액 샘플, 타액, 협부 스왑, 조직 샘플 또는 체액의 샘플인 방법.
141. 실시양태 137 내지 140 중 어느 한 실시양태에 있어서, 다형성이 폴리머라제 연쇄 반응에 의해 검출되는 것인 방법.
142. 실시양태 137 내지 140 중 어느 한 실시양태에 있어서, 다형성이 서열분석에 의해 검출되는 것인 방법.
143. 실시양태 141 또는 142에 있어서, 다형성이 스캐닝 프로브 및 나노포어 DNA 서열분석, 파이로시퀀싱, 변성 구배 겔 전기영동 (DGGE), 시간 온도 구배 전기영동 (TTGE), Zn(II)-사이클렌 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 균질 형광 PCR-기반 단일 뉴클레오티드 다형성 분석, 포스페이트-친화도 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 고처리량 SNP 유전자형 결정 플랫폼, 분자 비콘, 5' 뉴클레아제 반응, 택맨 검정, 매스어레이 (매트릭스-보조 레이저 탈착/이온화 비행 시간 질량 분광측정법과 커플링된 단일 염기 프라이머 연장), 트리틸 질량 태그, 유전자형 결정 플랫폼 (예컨대, 인베이더 어세이®), 단일 염기 프라이머 연장 (SBE) 검정, PCR 증폭 (예를 들어, 자기 나노입자 (MNP) 상에서의 PCR 증폭, PCR 산물의 제한 효소 분석 (RFLP 방법), 대립유전자-특이적 PCR, 다중 프라이머 연장 (MPEX), 및 등온 smart 증폭으로 이루어진 군으로부터 선택된 기술에 의해 검출되는 것인 방법.
144. 실시양태 137 내지 140 중 어느 한 실시양태에 있어서, 다형성이 적어도 1개의 다형성을 함유하는 표적 영역의 증폭, 및 엄격한 조건 하에 적어도 1개의 다형성에 혼성화하는 적어도 1개의 서열-특이적 올리고뉴클레오티드와의 혼성화, 및 혼성화의 검출에 의해 검출되는 것인 방법.
145. 실시양태 137에 있어서, 환자가 경도 AD를 앓고 있는 것인 방법.
146. 실시양태 137에 있어서, 환자가 초기 AD를 앓고 있는 것인 방법.
147. 실시양태 138에 있어서, 환자가 적어도 20, 20 내지 30, 20 내지 26, 24 내지 30, 21 내지 26, 22 내지 26, 22 내지 28, 23 내지 26, 24 내지 26, 또는 25 내지 26의 MMSE 스코어를 갖는 것인 방법.
148. 실시양태 147에 있어서, 환자가 MMSE 스코어 22 내지 26을 갖는 것인 방법.
149. 실시양태 137 내지 147 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자가 ApoE4 양성인 방법.
150. 실시양태 137에 있어서, 항-아밀로이드 베타 항체가 아밀로이드 β (1-42) (서열식별번호: 1)의 잔기 13과 24 내에 결합하는 것인 방법.
151. 실시양태 150에 있어서, 항체가 아밀로이드 β의 올리고머 및 단량체 형태에 결합할 수 있는 것인 방법.
152. 실시양태 151에 있어서, 항체가 IgG4 항체인 방법.
153. 실시양태 150 또는 151에 있어서, 항체가 6개의 초가변 영역 (HVR)을 포함하며, 여기서
(i) HVR-H1은 서열식별번호: 2이고;
(ii) HVR-H2는 서열식별번호: 3이고;
(iii) HVR-H3은 서열식별번호: 4이고;
(iv) HVR-L1은 서열식별번호: 6이고;
(v) HVR-L2는 서열식별번호: 7이고;
(vi) HVR-L3은 서열식별번호: 8인
방법.
154. 실시양태 153에 있어서, 항체가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인 방법.
155. 실시양태 153에 있어서, 항체가 크레네주맙인 방법.
156. 실시양태 137에 있어서, 항-아밀로이드 베타 항체가 솔라네주맙, 바피뉴주맙, 아두카누맙 및 간테네루맙으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
157. 초기 또는 경도 내지 중등도 AD를 앓고 있는 환자로부터의 샘플에서 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 사용한 치료에 반응할 것으로 예측되는 다형성을 포함하는 클루스테린 대립유전자의 존재를 검출하는 것을 포함하는, 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 사용한 치료에 반응할 가능성이 더 큰 초기 또는 경도 내지 중등도 AD를 앓고 있는 환자를 확인하는 방법.
158. 실시양태 157에 있어서, 다형성이 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T인 방법.
159. 실시양태 157에 있어서, 클루스테린 대립유전자가 SNP rs1532278을 포함하는 대립유전자의 등가 대립유전자인 방법.
160. 실시양태 159에 있어서, 등가 대립유전자가 SNP rs1532278과 연관 불평형인 방법.
161. 실시양태 157 또는 158에 있어서, 샘플이 혈액 샘플, 타액, 협부 스왑, 조직 샘플 또는 체액의 샘플인 방법.
162. 실시양태 157 내지 161 중 어느 한 실시양태에 있어서, 다형성이 폴리머라제 연쇄 반응에 의해 검출되는 것인 방법.
163. 실시양태 157 내지 161 중 어느 한 실시양태에 있어서, 다형성이 서열분석에 의해 검출되는 것인 방법.
164. 실시양태 162 또는 163에 있어서, 다형성이 스캐닝 프로브 및 나노포어 DNA 서열분석, 파이로시퀀싱, 변성 구배 겔 전기영동 (DGGE), 시간 온도 구배 전기영동 (TTGE), Zn(II)-사이클렌 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 균질 형광 PCR-기반 단일 뉴클레오티드 다형성 분석, 포스페이트-친화도 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 고처리량 SNP 유전자형 결정 플랫폼, 분자 비콘, 5' 뉴클레아제 반응, 택맨 검정, 매스어레이 (매트릭스-보조 레이저 탈착/이온화 비행 시간 질량 분광측정법과 커플링된 단일 염기 프라이머 연장), 트리틸 질량 태그, 유전자형 결정 플랫폼 (예컨대, 인베이더 어세이®), 단일 염기 프라이머 연장 (SBE) 검정, PCR 증폭 (예를 들어, 자기 나노입자 (MNP) 상에서의 PCR 증폭, PCR 산물의 제한 효소 분석 (RFLP 방법), 대립유전자-특이적 PCR, 다중 프라이머 연장 (MPEX), 및 등온 smart 증폭으로 이루어진 군으로부터 선택된 기술에 의해 검출되는 것인 방법.
165. 실시양태 157 내지 161 중 어느 한 실시양태에 있어서, 다형성이 적어도 1개의 다형성을 함유하는 표적 영역의 증폭, 및 엄격한 조건 하에 적어도 1개의 다형성에 혼성화하는 적어도 1개의 서열-특이적 올리고뉴클레오티드와의 혼성화, 및 혼성화의 검출에 의해 검출되는 것인 방법.
166. 실시양태 157에 있어서, 환자가 경도 AD를 앓고 있는 것인 방법.
167. 실시양태 157에 있어서, 환자가 초기 AD를 앓고 있는 것인 방법.
168. 실시양태 166에 있어서, 환자가 적어도 20, 20 내지 30, 20 내지 26, 24 내지 30, 21 내지 26, 22 내지 26, 22 내지 28, 23 내지 26, 24 내지 26, 또는 25 내지 26의 MMSE 스코어를 갖는 것인 방법.
169. 실시양태 168에 있어서, 환자가 MMSE 스코어 22 내지 26을 갖는 것인 방법.
170. 실시양태 157 내지 168 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자가 ApoE4 양성인 방법.
171. 실시양태 157에 있어서, 항-아밀로이드 베타 항체가 아밀로이드 β (1-42) (서열식별번호: 1)의 잔기 13과 24 내에 결합하는 것인 방법.
172. 실시양태 171에 있어서, 항체가 아밀로이드 β의 올리고머 및 단량체 형태에 결합할 수 있는 것인 방법.
173. 실시양태 172에 있어서, 항체가 IgG4 항체인 방법.
174. 실시양태 172 또는 173에 있어서, 항체가 6개의 초가변 영역 (HVR)을 포함하며, 여기서
(i) HVR-H1은 서열식별번호: 2이고;
(ii) HVR-H2는 서열식별번호: 3이고;
(iii) HVR-H3은 서열식별번호: 4이고;
(iv) HVR-L1은 서열식별번호: 6이고;
(v) HVR-L2는 서열식별번호: 7이고;
(vi) HVR-L3은 서열식별번호: 8인
방법.
175. 실시양태 174에 있어서, 항체가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인 방법.
176. 실시양태 175에 있어서, 항체가 크레네주맙인 방법.
177. 실시양태 157에 있어서, 항-아밀로이드 베타 항체가 솔라네주맙, 바피뉴주맙, 아두카누맙 및 간테네루맙으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
178. (a) AD를 앓고 있는 개체로부터의 샘플에서 SNP rs1532278에서의 뉴클레오티드의 정체를 결정하는 단계 및
(b) 샘플이 SNP rs1532278에서 T 뉴클레오티드를 갖는 적어도 1개의 대립유전자를 함유하는 경우에, 항-A베타 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 치료에 반응할 증가된 가능성을 예측하는 단계
를 포함하는, AD를 앓고 있는 개체가 항-A베타 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 치료에 반응할 가능성이 있는지 여부를 예측하는 방법.
179. 실시양태 178에 있어서, 환자가 경도 AD를 앓고 있는 것인 방법.
180. 실시양태 178에 있어서, 환자가 초기 AD를 앓고 있는 것인 방법.
181. 실시양태 178에 있어서, 환자가 20 내지 26, 21 내지 26, 22 내지 26, 23 내지 26, 24 내지 26, 또는 25 내지 26 범위의 MMSE를 갖는 것인 방법.
182. 실시양태 178 내지 181 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자가 ApoE4 양성인 방법.
183. 실시양태 178에 있어서, 항-아밀로이드 베타 항체가 아밀로이드 β (1-42) (서열식별번호: 1)의 잔기 13과 24 내에 결합하는 것인 방법.
184. 실시양태 183에 있어서, 항체가 아밀로이드 β의 올리고머 및 단량체 형태에 결합할 수 있는 것인 방법.
185. 실시양태 184에 있어서, 항체가 IgG4 항체인 방법.
186. 실시양태 184 또는 185에 있어서, 항체가 6개의 초가변 영역 (HVR)을 포함하며, 여기서
(i) HVR-H1은 서열식별번호: 2이고;
(ii) HVR-H2는 서열식별번호: 3이고;
(iii) HVR-H3은 서열식별번호: 4이고;
(iv) HVR-L1은 서열식별번호: 6이고;
(v) HVR-L2는 서열식별번호: 7이고;
(vi) HVR-L3은 서열식별번호: 8인
방법.
187. 실시양태 186에 있어서, 항체가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인 방법.
188. 실시양태 187에 있어서, 항체가 크레네주맙인 방법.
189. 실시양태 178에 있어서, 항-아밀로이드 베타 항체가 솔라네주맙, 바피뉴주맙, 아두카누맙 및 간테네루맙으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
190. 환자의 유전자형을 결정하는 것을 포함하는 AD의 치료에 대한 치료 효능을 최적화하는 방법이며, 여기서 SNP rs1532278에서 T 뉴클레오티드를 갖는 적어도 1개의 클루스테린 대립유전자를 보유하는 것으로 결정된 환자가 항-A베타 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 사용한 치료에 반응할 가능성이 더 큰 것인 방법.
191. 실시양태 190에 있어서, 환자가 초기 또는 경도 AD를 앓고 있는 것인 방법.
192. 실시양태 190에 있어서, 환자가 적어도 20, 20 내지 30, 20 내지 26, 24 내지 30, 21 내지 26, 22 내지 26, 22 내지 28, 23 내지 26, 24 내지 26, 또는 25 내지 26의 MMSE 스코어를 갖는 것인 방법.
193. 실시양태 192에 있어서, 환자가 MMSE 스코어 22 내지 26을 갖는 것인 방법.
194. 실시양태 190 내지 192 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자가 ApoE4 양성인 방법.
195. 실시양태 190에 있어서, 항-아밀로이드 베타 항체가 아밀로이드 β (1-42) (서열식별번호: 1)의 잔기 13과 24 내에 결합하는 것인 방법.
196. 실시양태 195에 있어서, 항체가 아밀로이드 β의 올리고머 및 단량체 형태에 결합할 수 있는 것인 방법.
197. 실시양태 196에 있어서, 항체가 IgG4 항체인 방법.
198. 실시양태 196 또는 197에 있어서, 항체가 6개의 초가변 영역 (HVR)을 포함하며, 여기서
(i) HVR-H1은 서열식별번호: 2이고;
(ii) HVR-H2는 서열식별번호: 3이고;
(iii) HVR-H3은 서열식별번호: 4이고;
(iv) HVR-L1은 서열식별번호: 6이고;
(v) HVR-L2는 서열식별번호: 7이고;
(vi) HVR-L3은 서열식별번호: 8인
방법.
199. 실시양태 198에 있어서, 항체가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인 방법.
200. 실시양태 199에 있어서, 항체가 크레네주맙인 방법.
201. 실시양태 190에 있어서, 항-아밀로이드 베타 항체가 솔라네주맙, 바피뉴주맙, 아두카누맙 및 간테네루맙으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
202. AD를 앓고 있는 환자의 유전자형을 결정하는 것을 포함하는, AD를 앓고 있는 환자가 항-A베타 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 치료로부터 이익을 얻을 가능성을 결정하는 방법이며, 여기서 SNP rs1532278에서 T 뉴클레오티드를 갖는 적어도 1개의 클루스테린 대립유전자를 갖는 환자가 SNP rs1532278에서 T 뉴클레오티드를 갖는 대립유전자가 없는 환자보다 항-A베타 항체를 사용한 치료에 반응할 가능성이 더 큰 것인 방법.
203. 실시양태 202에 있어서, 환자가 초기 또는 경도 AD를 앓고 있는 것인 방법.
204. 실시양태 202에 있어서, 환자가 적어도 20, 20 내지 30, 20 내지 26, 24 내지 30, 21 내지 26, 22 내지 26, 22 내지 28, 23 내지 26, 24 내지 26, 또는 25 내지 26의 MMSE 스코어를 갖는 것인 방법.
205. 실시양태 202 내지 204 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자가 ApoE4 양성인 방법.
206. 실시양태 202에 있어서, 항-아밀로이드 베타 항체가 아밀로이드 β (1-42) (서열식별번호: 1)의 잔기 13과 24 내에 결합하는 것인 방법.
207. 실시양태 206에 있어서, 항체가 아밀로이드 β의 올리고머 및 단량체 형태에 결합할 수 있는 것인 방법.
208. 실시양태 207에 있어서, 항체가 IgG4 항체인 방법.
209. 실시양태 207 또는 208에 있어서, 항체가 6개의 초가변 영역 (HVR)을 포함하며, 여기서
(i) HVR-H1은 서열식별번호: 2이고;
(ii) HVR-H2는 서열식별번호: 3이고;
(iii) HVR-H3은 서열식별번호: 4이고;
(iv) HVR-L1은 서열식별번호: 6이고;
(v) HVR-L2는 서열식별번호: 7이고;
(vi) HVR-L3은 서열식별번호: 8인
방법.
210. 실시양태 209에 있어서, 항체가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 및 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 것인 방법.
211. 실시양태 210에 있어서, 항체가 크레네주맙인 방법.
212. 실시양태 202에 있어서, 항-아밀로이드 베타 항체가 솔라네주맙, 바피뉴주맙, 아두카누맙 및 간테네루맙으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
213. 실시양태 190 내지 212 중 어느 한 실시양태에 있어서, 클루스테린 대립유전자가 SNP rs1532278을 포함하는 대립유전자의 등가 대립유전자인 방법.
214. 실시양태 213에 있어서, 등가 대립유전자가 SNP rs1532278과 연관 불평형인 방법.
215. 실시양태 213 또는 214에 있어서, 샘플이 혈액 샘플, 타액, 협부 스왑, 조직 샘플 또는 체액의 샘플인 방법.
216. 실시양태 213 내지 215 중 어느 한 실시양태에 있어서, 다형성이 폴리머라제 연쇄 반응에 의해 검출되는 것인 방법.
217. 실시양태 213 내지 215 중 어느 한 실시양태에 있어서, 다형성이 서열분석에 의해 검출되는 것인 방법.
218. 실시양태 216 또는 217에 있어서, 다형성이 스캐닝 프로브 및 나노포어 DNA 서열분석, 파이로시퀀싱, 변성 구배 겔 전기영동 (DGGE), 시간 온도 구배 전기영동 (TTGE), Zn(II)-사이클렌 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 균질 형광 PCR-기반 단일 뉴클레오티드 다형성 분석, 포스페이트-친화도 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 고처리량 SNP 유전자형 결정 플랫폼, 분자 비콘, 5' 뉴클레아제 반응, 택맨 검정, 매스어레이 (매트릭스-보조 레이저 탈착/이온화 비행 시간 질량 분광측정법과 커플링된 단일 염기 프라이머 연장), 트리틸 질량 태그, 유전자형 결정 플랫폼 (예컨대, 인베이더 어세이®), 단일 염기 프라이머 연장 (SBE) 검정, PCR 증폭 (예를 들어, 자기 나노입자 (MNP) 상에서의 PCR 증폭, PCR 산물의 제한 효소 분석 (RFLP 방법), 대립유전자-특이적 PCR, 다중 프라이머 연장 (MPEX), 및 등온 smart 증폭으로 이루어진 군으로부터 선택된 기술에 의해 검출되는 것인 방법.
219. 실시양태 213 내지 215 중 어느 한 실시양태에 있어서, 다형성이 적어도 1개의 다형성을 함유하는 표적 영역의 증폭, 및 엄격한 조건 하에 적어도 1개의 다형성에 혼성화하는 적어도 1개의 서열-특이적 올리고뉴클레오티드와의 혼성화, 및 혼성화의 검출에 의해 검출되는 것인 방법.
220. 클루스테린에서 적어도 1개의 다형성의 존재를 검출하기 위한 시약 및 지침서를 포함하는, 생물학적 샘플에서 적어도 1개의 다형성의 존재를 결정하기 위한 키트이며, 여기서 다형성은 SNP rs1532278을 포함하는 대립유전자 또는 등가 대립유전자인 키트.
221. 실시양태 220에 있어서, SNP rs1532278에서 T의 존재를 검출하기 위해 사용되는 것인 키트.
222. 실시양태 220에 있어서, 시약이 클루스테린에서 다형성을 검출하는데 특이적인 올리고뉴클레오티드 세트를 포함하는 것인 키트.
223. 항-A베타 항체를 사용한 요법으로부터 이익을 얻을 가능성이 있는 환자를 선택하기 위한 진단제의 제조를 위한 클루스테린 내 다형성에 특이적으로 결합하는 작용제의 용도이며, 여기서 다형성은 SNP rs1532278에서 T를 포함하는 대립유전자인 용도.
224. 실시양태 223에 있어서, 적어도 1개의 다형성이 스캐닝 프로브 및 나노포어 DNA 서열분석, 파이로시퀀싱, 변성 구배 겔 전기영동 (DGGE), 시간 온도 구배 전기영동 (TTGE), Zn(II)-사이클렌 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 균질 형광 PCR-기반 단일 뉴클레오티드 다형성 분석, 포스페이트-친화도 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 고처리량 SNP 유전자형 결정 플랫폼, 분자 비콘, 5' 뉴클레아제 반응, 택맨 검정, 매스어레이 (매트릭스-보조 레이저 탈착/이온화 비행 시간 질량 분광측정법과 커플링된 단일 염기 프라이머 연장), 트리틸 질량 태그, 유전자형 결정 플랫폼 (예컨대, 인베이더 어세이®), 단일 염기 프라이머 연장 (SBE) 검정, PCR 증폭 (예를 들어, 자기 나노입자 (MNP) 상에서의 PCR 증폭, PCR 산물의 제한 효소 분석 (RFLP 방법), 대립유전자-특이적 PCR, 다중 프라이머 연장 (MPEX), 및 등온 smart 증폭으로 이루어진 군으로부터 선택된 기술에 의해 검출되는 것인 용도.
225. 실시양태 223에 있어서, 적어도 1개의 다형성이 적어도 1개의 다형성을 함유하는 표적 영역의 증폭, 및 엄격한 조건 하에 적어도 1개의 다형성에 혼성화하는 적어도 1개의 서열-특이적 올리고뉴클레오티드와의 혼성화, 및 혼성화의 검출에 의해 검출되는 것인 용도.
226. 실시양태 223에 있어서, SNP rs1532278에서의 T의 존재가 항-A베타 항체를 사용한 요법으로부터 초기 또는 경도 AD를 앓고 있는 환자가 이익을 얻을 증가된 가능성을 나타내는 것인 용도.
227. 항-A베타 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 요법에 반응할 가능성이 있는 초기 또는 경도 내지 중등도 AD에 걸린 환자를 확인하기 위한 적어도 1개의 다형성에 결합하는 작용제의 시험관내 용도이며, 여기서 다형성은 클루스테린 대립유전자이고, 상기 다형성의 존재가 환자가 요법에 반응할 가능성이 더 크다는 것을 확인시켜주는 것인 용도.
228. 실시양태 227에 있어서, 클루스테린 대립유전자가 SNP rs1532278을 포함하는 대립유전자 또는 그의 등가 대립유전자인 용도.
229. 실시양태 228에 있어서, 환자가 경도 AD에 걸린 것인 용도.
230. 실시양태 228에 있어서, 환자가 초기 AD에 걸린 것인 용도.
231. 실시양태 228에 있어서, 환자가 적어도 20, 20 내지 30, 20 내지 26, 24 내지 30, 21 내지 26, 22 내지 26, 22 내지 28, 23 내지 26, 24 내지 26, 또는 25 내지 26의 MMSE 스코어를 갖는 것인 용도.
232. 실시양태 228에 있어서, 적어도 1개의 다형성이 스캐닝 프로브 및 나노포어 DNA 서열분석, 파이로시퀀싱, 변성 구배 겔 전기영동 (DGGE), 시간 온도 구배 전기영동 (TTGE), Zn(II)-사이클렌 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 균질 형광 PCR-기반 단일 뉴클레오티드 다형성 분석, 포스페이트-친화도 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 고처리량 SNP 유전자형 결정 플랫폼, 분자 비콘, 5' 뉴클레아제 반응, 택맨 검정, 매스어레이 (매트릭스-보조 레이저 탈착/이온화 비행 시간 질량 분광측정법과 커플링된 단일 염기 프라이머 연장), 트리틸 질량 태그, 유전자형 결정 플랫폼 (예컨대, 인베이더 어세이®), 단일 염기 프라이머 연장 (SBE) 검정, PCR 증폭 (예를 들어, 자기 나노입자 (MNP) 상에서의 PCR 증폭, PCR 산물의 제한 효소 분석 (RFLP 방법), 대립유전자-특이적 PCR, 다중 프라이머 연장 (MPEX), 및 등온 smart 증폭으로 이루어진 군으로부터 선택된 기술에 의해 검출되는 것인 용도.
233. 실시양태 228에 있어서, 적어도 1개의 다형성이 적어도 1개의 다형성을 함유하는 표적 영역의 증폭, 및 엄격한 조건 하에 적어도 1개의 다형성에 혼성화하는 적어도 1개의 서열-특이적 올리고뉴클레오티드와의 혼성화, 및 혼성화의 검출에 의해 검출되는 것인 용도.
실시예
실시예 1 -- 경도 내지 중등도 알츠하이머병의 치료에서의 크레네주맙, 인간화 항-Aβ 모노클로날 항체의 임상 연구
연구 설계 및 목적
경도 내지 중등도 알츠하이머병 (AD)으로 진단된 환자에서 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 ("Aβ") 항체 크레네주맙의 영향을 평가하기 위해 위약 대조군을 사용하여 무작위화, 이중 맹검 II상 시험을 수행하였다. 연구에 포함된 환자는 스크리닝 시점에 50 내지 80세였고, 간이-정신 상태 검사 (MMSE) 스코어 18 내지 26점, 노인성 우울증 척도 (GDS-15) 스코어 6 미만, 6세 교육의 완료 (또는 정신 지체 또는 다른 전반적 발달 장애를 제외한 것과 일치하는 양호한 작업 이력)에 더하여 NINCDS-ADRDA 기준에 따라 가능성 있는 AD 진단을 받았다. 추가적으로, 병행 AD 치료 (예컨대 아세틸콜린에스테라제 억제제 또는 메만틴)를 받은 환자의 경우에, 환자에게 무작위화 전 적어도 3개월 동안 투약받고 있고, 적어도 2개월 동안 안정한 용량임을 확인받았다. 등록된 환자의 적어도 50%는 ApoE4 양성이었다 (적어도 1개의 ApoE4 대립유전자를 보유함). 1종 이상의 처방전이 필요한 또는 처방전이 필요없는 의약, 예컨대 비-항콜린성 항우울제(들), 비정형 항정신병제(들), 비-벤조디아제핀 불안완화제(들), 최면제(들), 중추 작용 항콜린성 항히스타민제(들), 및 중추 작용 항콜린성 항연축제(들)를 병행 제공받고 있는 환자는 또한, 무작위화 전 적어도 1개월 동안 투여된 용량이 일정하였고, 연구 지속기간 동안 동일하게 유지될 것을 단서로 등록이 허용되었다.
개체가 조사자 또는 스폰서의 견해상 연구 평가를 완료할 환자의 능력을 방해하거나 또는 기관 또는 병원 관리에 상당한 것을 필요로 할 중증 또는 불안정한 정신 상태를 앓고 있거나; 뇌에 잠재적으로 영향을 미칠 임상적으로 명백한 혈관 질환의 병력이 있었거나 또는 존재하거나; 중증의, 임상적으로 유의한 중추 신경계 외상의 병력 (예컨대 지속적 신경계 결손 또는 구조적 뇌 손상)이 존재하거나; 스크리닝 전 4주 내에 입원한 적이 있거나; 이전에 크레네주맙 또는 Aβ를 표적화하는 임의의 다른 작용제로 치료된 바 있는 경우; 또는 스크리닝 전 생물학적 요법의 치료제의 5 반감기 초과 이내 또는 3개월 이내에 임의의 생물학적 요법 (상용 백신접종 외)을 사용한 치료를 받은 바 있는 경우에 그러한 개체는 시험에서 제외되었다.
연구에는 3종의 기간이 존재하였다 - 35일까지 지속되는 스크리닝 기간, 68주 지속되는 치료 기간 (본원에서 제1주, 제2주 등으로, 제69주까지 언급됨), 및 추가 16주 지속되는 안전성 추적 기간 (본원에서 제70주 등으로, 제85주까지 언급됨). 치료 (또는 위약)는 정맥내 주입을 통해 투여되었다.
환자가 시험에 등록되었고, 2종의 부문, 치료 (즉, 크레네주맙) 부문 및 위약 부문 중 1종에 2:1 (치료 부문:위약 부문) 무작위화로 무작위화되었다. MMSE 스코어 18 내지 26 (경도 내지 중등도 AD로 카테고리화됨)을 갖는 249명의 환자가 시험에 등록되었고, 이중 165명은 치료를 제공받고 84명은 위약을 제공받았다. 치료 부문의 121명의 환자 및 위약 부문의 61명의 환자는 MMSE 스코어 20 내지 26을 가졌다 (경도 AD로 카테고리화됨). 치료 부문에서 117명 (또는 70.9%)은 ApoE4 양성이었다. 위약 부문에서, 60명의 환자 (또는 71.4%)가 ApoE4 양성이었다. 도 4a-b (환자 배치를 표로 제시함)를 참조한다.
43일의 안전성 준비 평가를 수행하여 15 mg/kg 정맥내 용량 대 10 mg/kg 정맥내 용량의 안전성 및 내약성을 결정하고, 15 mg/kg의 용량을 선택하였다. 시험의 둘 다의 부문의 환자에게 68주 동안 4주마다 맹검 정맥내 주사를 제공하고; 안전성 준비의 결과에 기초하여, 치료 부문의 환자에게 15 mg/kg을 제공하는 한편 위약 부문의 환자에게 위약의 정맥내 주사를 제공하였다. 도 5 (프로토콜 개략도)를 참조한다.
72주 후에 (a) 질환 진행의 억제를 평가하기 위해 시험 시작 시 기준선 스코어로부터 제25주, 제49주, 및 제73주의 ADAS-Cog12 스코어 및 CDR-SOB 스코어에서의 변화 및 (b) 위약과 비교하여 크레네주맙의 안전성 및 내약성에 대해 환자를 평가하였다. 임의의 측정된 변화의 통계적 유의성을 추정하기 위해, 공분산 분석, 신뢰 구간, 및 기준선으로부터 평균 변화에서의 차이의 최소 제곱 추정치를 계산하였다.
크레네주맙의 안전성 및 내약성은 시험 동안의 치료 발현성 유해 사건의 빈도 및 중증도, 특히 증후성 또는 무증상 ARIA-E (뇌 혈관성 부종 포함), 증후성 또는 무증상 ARIA-H (뇌 미세출혈 포함), 및 뇌 거대출혈의 예를 측정함으로써 평가하였다. 스크리닝 기간 동안 (투여 시작 전) 또는 치료 기간 동안 (위약 또는 크레네주맙의 투여 시작 후)의 뇌 혈관성 부종 사례의 존재 및/또는 수는 유체 감쇠 역전 회복 자기 공명 영상화 (FLAIR MRI)에 의해 평가하였다. 예를 들어, 문헌 [Sperling et al., 2011, Alzheimer's & Dementia 7:367-385]을 참조한다. 스크리닝 기간 동안 (투여 시작 전) 또는 치료 기간 동안 (위약 또는 크레네주맙의 투여 시작 후)의 뇌 미세출혈(들)의 존재 및/또는 수는 횡단 자화 이완 시간과 함께 추가의 불균질 탈위상화 경사 회복 에코 자기 공명 영상화 (T2*-가중 GRE MRI)에 의해 평가하였다.
결과
73주에서의 ADAS-Cog12 측정은 크레네주맙을 제공받은 환자가 위약을 제공받은 환자보다 덜한 질환 진행을 나타냄을 입증하였다. 도 6a-b에 제시된 표 및 도 7-8에 제시된 차트에 요약된 바와 같이, ADAS-Cog12 스코어에서의 변화는 경도 AD에 걸린 환자의 경우에 위약 부문에서보다 치료 부문에서 약 24% (p=0.12) 덜 하였고, 경도 내지 중등도 AD에 걸린 환자의 경우에 위약 부문에서보다 치료 부문에서 약 16% (p=0.19) 덜하였다. 이러한 효과는 치료 부문 대 위약 부문의 ApoE4 양성 환자 사이에서도 또한 관찰되었고: 위약을 제공받은 환자 대비 크레네주맙을 제공받은 환자에서 ADAS-Cog12 스코어 (여기서 ADAS-Cog12 스코어에서의 증가는 질환 진행을 나타냄)에서의 증가가 24.4% (p=0.08, 다중도에 대해 조정되지 않음) 덜하였다. 도 6a 및 도 9를 참조한다. ApoE4 양성 환자는 경도 및 중등도 AD 둘 다에 걸린 환자를 포함하였다. 효과는 경도 및 ApoE4 양성 환자 둘 다에 대한 결과를 풀링한 경우에 보다 더 현저하였고: 위약 부문 대비 치료 부문에서 32.4%의 감소 (p=0.05, 다중도에 대해 조정되지 않음)가 관찰되었다. 도 6a 및 도 10을 참조한다. 치료 효과는 등록 시 MMSE 스코어가 증가할수록 증가하였다. 도 6b에 제시된 바와 같이, MMSE 스코어가 높을수록 치료 부문 대 위약 부문에서 ADAS-Cog12에서의 퍼센트 감소가 더 컸고, MMSE 18-26인 환자의 경우에 약 16%에서 MMSE 25 내지 26인 환자에서 49% 감소까지의 범위였다. 또한 도 11을 참조한다. MMSE 스코어 22 내지 26을 갖는 환자의 경우에, 위약 부문과 비교하여 치료 부문에서 ADAS-Cog12에서의 퍼센트 감소는 약 35%였다.
CDR-SOB에서의 변화는 치료 효과에서 유사한 경향을 나타내었다. 도 12a에 제시된 바와 같이, CDR-SOB 스코어의 변화에서의 19% 감소가 MMSE 22-26을 갖는 환자에 대한 치료 부문 대 위약에서 관찰되었고, 이러한 효과는 MMSE 스코어 25-26을 갖는 환자에서 보다 더 현저하여, 퍼센트 감소가 약 63%였다 (또한 도 13 참조). 도 12b는 MMSE 22-26을 갖는 환자에 대한 기억 또는 판단 및 문제 해결 성분 스코어 관찰 시, 퍼센트 감소가 각각 약 42% 및 30%임을 보여준다.
연구는 크레네주맙이 15 mg/kg로 투여되었을 때 ARIA-유형 사건의 발생률을 증가시키지 않음을 추가로 입증하였다. 단일의, 무증상 ARIA-E 사건이 연구 중, 크레네주맙을 제공받은 환자에서 관찰되었다. ARIA-H 발생의 수는 치료 및 위약 부문 사이에 균형을 이루었다.
이들 데이터는 크레네주맙이 경도 내지 중등도 AD를 앓고 있는 환자에서, 특히 경도 AD에 걸리고/거나 ApoE4 양성인 환자에서 15 mg/kg의 용량으로의 투여 시 ARIA-E 또는 ARIA-H와 같은 치료 발현성 유해 사건의 발생률을 증가시키지 않으면서 질환 진행을 억제함을 입증하였다.
실시예 2 -- 경도 내지 중등도 알츠하이머병의 치료에서의 및 아밀로이드 로드에 대한 영향을 평가하기 위한 크레네주맙, 인간화 항-Aβ 모노클로날 항체의 임상 연구
연구 설계 및 목적
경도 내지 중등도 알츠하이머병 (AD)으로 진단된 환자에서 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 ("Aβ") 항체 크레네주맙의 영향을 평가하기 위해 위약 대조군을 사용하여 무작위화, 이중 맹검 II상 시험을 수행하였다. 연구에 포함된 환자는 스크리닝 시점에 50 내지 80세였고, 간이-정신 상태 검사 (MMSE) 스코어 18 내지 26점, 노인성 우울증 척도 (GDS-15) 스코어 6 미만, 6세 교육의 완료 (또는 정신 지체 또는 다른 전반적 발달 장애를 제외한 것과 일치하는 양호한 작업 이력)에 더하여 NINCDS-ADRDA 기준에 따라 가능성 있는 AD 진단을 받았다. 플로르베타피르-PET 스캔에 의해 평가된 바와 같은 AD로 진단된 환자에 대해 예상되는 범위의 증가된 뇌 아밀로이드 로드를 나타내는, 스크리닝시 양성 플로르베타피르 PET ("아밀로이드 양성") 스캔을 갖는 환자 만을 등록시켰다. 추가적으로, 등록된 환자의 적어도 50%는 ApoE4 양성이었다.
환자가 시험에 등록되었고, 2종의 부문, 치료 (즉, 크레네주맙) 부문 및 위약 부문 중 1종에 2:1 (치료 부문:위약 부문) 무작위화로 무작위화되었다. 시험의 둘 다의 부문에 걸쳐 52명의 환자에게 73주 동안 4주마다 맹검 정맥내 주사를 제공하였다. 치료 부문에서, 환자에게 15 mg/kg 용량의 크레네주맙을 제공하였다. 환자를 ApoE4 상태 (보인자 대 비-보인자) 및 MMSE 스코어에 따라 계층화하였다.
ADAS-Cog12, 플로르베타피르-PET를 사용하여 측정된 바와 같은 아밀로이드 부담, 및 뇌척수액 (CSF) 내 A베타 수준에서의 변화에 대한 데이터를 수집하였다. 플로르베타피르 PET 스캔은 플로르베타피르 10 mCi를 50-분 흡수 기간 및 30분 방출 스캔으로 사용하여, 스크리닝 시, 제12개월, 및 제18개월 방문 시 획득하였다. 6X5분 프레임 (또는 동적 능력 없이 스캐너 상에서의 1X15분 프레임)으로부터의 영상을 여러 관심 영역 (ROI)으로부터 평균 신호를 추출하기 위해 템플릿이 사용된 표준 공간에 대해 정규화하였다. 기준선 T1-가중 MRI 스캔을 사용하여 템플릿 ROI의 부피를 정밀화하였다. 참고 영역으로서 소뇌 피질 또는 피질하 백질을 사용하여 분석을 수행하였다. 스크리닝 시 및 제18개월 투여 전에 CSF를 수집하였다. CSF A베타, 타우 및 p-타우(181)를 측정하였다. 연구 종점에서 치료 차이의 통계적 분석을 위해 반복 측정의 경우에 ANCOVA 또는 혼합 모델을 사용하였다.
환자 특징, 유해 사건, 및 PET 스캔, MRI스캔, 및 CSF 샘플링 시기를 도 14a-b에 제시한다.
결과. 치료 기간의 말미에서의 ADAS-Cog12 측정은 크레네주맙을 제공받은 환자가 위약을 제공받은 환자보다 덜한 질환 진행을 나타냄을 입증하였다. 인지 저하에서의 54.3% 감소가 초기 MMSE 스코어 20 내지 26인 환자에서 관찰되었다 (p=0.2). 질환 진행에서의 이러한 관찰된 감속과 일치하게, 아밀로이드 침착물의 축적에서의 감소가 또한 크레네주맙으로 치료된 환자 대 위약을 제공받은 환자에서의 PET 분석 (피질하 백질 참조 영역과 함께)에 의해 관찰되었다. 도 15a를 참조한다. 게다가, 크레네주맙에 의한 표적의 맞물림과 일치하게 A베타의 뇌척수액 농도에서의 증가가 치료 부문에서 검출되었다. 도 15b를 참조한다. A베타의 뇌척수액 농도에서의 유사한 증가가 위약을 제공받은 환자 대비 2주마다 크레네주맙의 300 mg 피하 투여로 치료된 환자에서 검출되었다.
이들 데이터는 AD로 진단된 환자에서 관찰되는 것으로서 전형적인 뇌 아밀로이드 부담을 갖는 환자를 비롯하여 경도 내지 중등도 AD를 앓고 있는 환자에서, 특히 경도 AD에 걸린 환자에서, 크레네주맙이 15 mg/kg의 용량으로의 투여 시 그의 표적, 아밀로이드 베타와 맞물리고 질환 진행을 억제함을 입증하였다.
실시예 3 -- 경도 내지 중등도 알츠하이머병의 치료에서의 치료 반응과 연관된, 크레네주맙, 인간화 항-Aβ 모노클로날 항체의 임상 연구에서의 단일 뉴클레오티드 다형성의 연구
연구 설계 및 목적
경도 내지 중등도 알츠하이머병 (AD)으로 진단된 환자에서 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 ("Aβ") 항체 크레네주맙의 영향을 평가하기 위해 위약 대조군을 사용하여 무작위화, 이중 맹검 II상 시험을 수행하였다. 연구에 포함된 환자는 스크리닝 시점에 50 내지 80세였고, 간이-정신 상태 검사 (MMSE) 스코어 18 내지 26점, 노인성 우울증 척도 (GDS-15) 스코어 6 미만, 6세 교육의 완료 (또는 정신 지체 또는 다른 전반적 발달 장애를 제외한 것과 일치하는 양호한 작업 이력)에 더하여 NINCDS-ADRDA 기준에 따라 가능성 있는 AD 진단을 받았다. 추가적으로, 병행 AD 치료 (예컨대 아세틸콜린에스테라제 억제제 또는 메만틴)를 받은 환자의 경우에, 환자에게 무작위화 전 적어도 3개월 동안 투약받고 있고, 적어도 2개월 동안 안정한 용량임을 확인받았다. 등록된 환자의 적어도 50%는 ApoE4 양성이었다 (적어도 1개의 ApoE4 대립유전자를 보유함). 1종 이상의 처방전이 필요한 또는 처방전이 필요없는 의약, 예컨대 비-항콜린성 항우울제(들), 비정형 항정신병제(들), 비-벤조디아제핀 불안완화제(들), 최면제(들), 중추 작용 항콜린성 항히스타민제(들), 및 중추 작용 항콜린성 항연축제(들)를 병행 제공받고 있는 환자는 또한, 무작위화 전 적어도 1개월 동안 투여된 용량이 일정하였고, 연구 지속기간 동안 동일하게 유지될 것을 단서로 등록이 허용되었다.
연구에는 3종의 기간이 존재하였다 - 35일까지 지속되는 스크리닝 기간, 68주 지속되는 치료 기간 (본원에서 제1주, 제2주 등으로, 제69주까지 언급됨), 및 추가 16주 지속되는 안전성 추적 기간 (본원에서 제70주 등으로, 제85주까지 언급됨). 치료 (또는 위약)는 정맥내 주입을 통해 투여되었다.
환자가 시험에 등록되었고, 2종의 부문, 치료 (즉, 크레네주맙) 부문 및 위약 부문 중 1종에 2:1 (치료 부문:위약 부문) 무작위화로 무작위화되었다. MMSE 스코어 18 내지 26 (경도 내지 중등도 AD로 카테고리화됨)을 갖는 249명의 환자가 시험에 등록되었고, 이중 165명은 치료를 제공받고 84명은 위약을 제공받았다. 치료 부문의 121명의 환자 및 위약 부문의 61명의 환자는 MMSE 스코어 20 내지 26을 가졌다 (경도 AD로 카테고리화됨). 치료 부문에서 117명 (또는 70.9%)은 ApoE4 양성이었다. 위약 부문에서, 60명의 환자 (또는 71.4%)가 ApoE4 양성이었다. 도 4a-b (환자 배치를 표로 제시함)를 참조한다.
시험의 둘 다의 부문의 환자에게 68주 동안 4주마다 맹검 정맥내 주사를 제공하고; 치료 부문의 환자에게 15 mg/kg을 제공하는 한편 위약 부문의 환자에게 위약의 정맥내 주사를 제공하였다.
72주 후에 (a) 위약과 비교하여 질환 진행의 억제를 평가하기 위해 시험 시작 시 기준선 스코어로부터 제25주, 제49주, 및 제73주의 ADAS-Cog12 스코어에서의 변화에 대해 환자를 평가하였다. 임의의 측정된 변화의 통계적 유의성을 추정하기 위해, 공분산 분석, 신뢰 구간, 및 기준선으로부터 평균 변화에서의 차이의 최소 제곱 추정치를 계산하였다.
기준선 및 제73주에 적격 ADAS-Cog12 측정치를 갖는 시험에 등록된 224명의 개체 중, 156명의 개체가 유전자 연관 연구에 대한 사전 동의를 제공하였다. 55명의 개체는 위약 부문이었고, 101명의 개체는 치료 부문이었다. 이들 개체로부터 DNA 샘플을 수집하고, 유전자형 결정 및 품질 관리 시험에 적용하였다. 일루미나 휴먼옴니(Illumina HumanOmni) 2.5-8 비드칩 (http://support.illumina.com/array/array_kits/humanomni2_5-8_beadchip_kit.ilmn)을 표준 프로토콜에 따라 사용하여 유전자형 결정을 수행하였다.
유전자형 데이터를 분석하여 다음과 같이 유전자형 결정 오류 및 품질을 관리하였다. ≥ 50% 유전자형 결정률을 갖는 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP)은 추가의 분석을 위해 유지시켰다. 하기 기재된 검정 품질 관리 표준을 충족시키지 못하는 SNP는 SNP 결과에 의해 연구 집단의 25% 내지 75%를 대표하지 않는 하위군이기 때문에 고려대상에서 제거하였다. 품질 관리 목적상, >10% 전체 누락 데이터를 갖는 샘플은 제외하였다. >5% 누락 데이터를 갖는 개별 변이체를 추가의 분석에서 제외하였다. 나머지 변이체를 잠재 관련성 (IBD 추정을 통함) (Laurie et al., 2010, Genet Epidemiology 34(6):591-602) 및 문헌 [Turner et al., 2011, Curr Protoc Hum Genet Chapter 1:Unit1.19]에 기재된 바와 같은 샘플 오염 (변이체의 대표적인 하위세트에서의 과다 이형접합성 시험을 통함)에 대해 시험하였다.
21종의 사전-명시된 유전자 변이체의 탐색적 분석을 수행하여 항-아밀로이드 베타 ("Aβ") 항체 요법과 연관된 잠재적으로 증진된 치료 이익의 증거가 존재하는지 여부를 결정하였다. AD 게놈-전반 스크리닝에서 보고되었거나 (문헌 [Lambert et al., 2013] 참조) 또는 다발성 질환과 연관된 후보 유전자좌로부터 변이체를 선택하였다. 변이체가 일루미나 휴먼옴니 2.5-8 비드칩 상에서 유형화되지 않는 경우에, 500kb 거리 (r2를 사용하여 계산된 쌍별 연관 불평형) 내에서 고도로 상관된 변이체를 발견함으로써 대리 변이체를 확인하였다. 사전-명시된 21종의 변이체에 대해 r2 ≥ 0.80을 갖는 대리 변이체를 계산하는데 사용된 참고 데이터는 1000 게놈스 파일럿(Genomes Pilot) 1, HapMap3 (제2판)을 포함하였다. 2종의 관심 사전-명시된 변이체는 r2 기준을 충족시키는 대리를 갖지 않았고, 추가의 분석에서 빠졌다. 19종의 사전-명시된 또는 대리 변이체가 연관 분석을 위해 유지되었다.
선택된 변이체와 치료 효과 사이의 연관성의 존재를 시험하기 위해, 유전의 2종의 유전 모델을 사용하여 치료 부문 vs 위약 부문에서 제73주의 ADAS-Cog12에서의 평균 변화를 평가하였다. 제1 모델에서, 시간의 경과에 따른 ADAS-Cog12 평균 변화는 선형 회귀 모델 (문헌 [Lynch, et al., Genetics and Analysis of Quantitative Traits (Sunderland, MA, Sinauer, 1998)]에 기재된 바와 같음) 사용 시, 치료 부문의 위험 대립유전자 동형접합 및 이형접합 보인자로 이루어진 군 vs 위약 부문의 모든 개체 사이에 대조적이었다. 제2 모델에서, 시간의 경과에 따른 ADAS-Cog12 평균 변화는 동일한 선형 회귀 모델 사용 시, 치료 부문의 보호 대립유전자 동형접합 및 이형접합 보인자로 이루어진 군 vs 위약의 모든 개체 사이에 대조적이었다. 둘 다의 유전 모델에 대해, 시간의 경과에 따른 ADAS-Cog12 변화가 예측 변수로서 관심 결과 및 군 상태로 나타내어졌다. 예측 변수로서 군 상태의 유의성은 t-통계량 및 양측 p-값을 사용하여 평가하였다.
보호 대립유전자 보인자 집단 뿐만 아니라 비-보인자 집단에 대해 SAS™ 버전 9.2를 사용하여 혼합 모델 반복 측정 (MMRM) 분석을 수행하여, ADAS-Cog12에 대한 종축 데이터를 분석하였다. 모델은 비구조화 분산-공분산 행렬의 사용 시, 결과 측정, MMSE 층 (<22 vs >22), ApoE4 상태, ApoE4 상태 상호작용에 의한 MMSE 층, 방문, 치료 및 치료 상호작용에 의한 방문의 기준선 값에 대해 고정된 효과를 가졌다.
결과. 이전에 AD 발생 위험과 연관되었던 총 19종의 변이체를 크레네주맙 치료에 대한 반응의 예측 효과에 대해 시험하였다. 치료 부문과 위약 부문 사이의 제73주의 ADAS-Cog12에서의 추정되는 치료 델타에 기초하여, 여러 SNP가 치료 효과와 위험 대립유전자 또는 보호 대립유전자의 연관성에 대해 0.06 이하의 p 값을 갖는 것으로 확인되었다. 확인된 SNP 중 1개는 클루스테린 (CLU, ApoJ로도 공지됨) 유전자로부터의 rs1532278로, 여기서 보호 대립유전자, T에 대한 보인자는 잠재적으로 증진된 치료 효과를 가졌다. MMRM 분석에 기초하여, 제73주에 ADAS-Cog12에서 추정되는 치료 델타는 SNP 양성 집단 (적어도 1개의 보호 대립유전자를 갖는 개체)에서 3.45 대 SNP 음성 집단 (보호 대립유전자를 갖지 않는 개체)에서 -0.78이었다. 이들은 위약 부문 대비 크레네주맙 부문에서 SNP 양성의 경우에 35.9% vs SNP 음성 환자의 경우에 -7.4%의 퍼센트 감소를 나타내었다. 도 16a-b를 참조한다. ApoE4 양성 집단 (도 17a-b) 및 경도 (MMSE 20-26) 집단 (도 18a-b) 내에서의 클루스테린 SNP의 추가의 분석은 유사한 결과를 나타내었다.
상기 본 발명은 이해의 명료함을 위해 예시 및 예의 방식으로 어느 정도 상세하게 기재되었지만, 상기 설명 및 예는 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 본원에 인용된 모든 특허 출원 및 공개 및 과학 문헌의 개시내용은 임의의 목적상 그 전문이 명백하게 참조로 포함된다.
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His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215

Claims (117)

  1. MMSE 스코어 18 내지 26을 갖는 것을 특징으로 하는 경도 내지 중등도 알츠하이머병(AD)을 앓고 있는 환자에서 AD를 치료하는 방법에 사용하기 위한 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 포함하는 제약 조성물이며, 여기서 방법은 환자로부터의 샘플에서 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T를 갖는 클루스테린(CLUSTERIN) 대립유전자의 존재 또는 부재를 검출하고, 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T를 포함하는 적어도 1개의 클루스테린(CLUSTERIN) 대립유전자를 갖는 환자에게 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 AD를 치료하는데 유효한 양으로 투여하는 것을 포함하고, 여기서 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체는 크레네주맙인 제약 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 샘플이 체액의 샘플인 제약 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 체액은 혈액 샘플, 타액, 협부 스왑, 또는 조직 샘플인 제약 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 다형성이 폴리머라제 연쇄 반응에 의해 검출되는 것인 제약 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 다형성이 서열분석에 의해 검출되는 것인 제약 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 다형성이 스캐닝 프로브 및 나노포어 DNA 서열분석, 파이로시퀀싱, 변성 구배 겔 전기영동 (DGGE), 시간 온도 구배 전기영동 (TTGE), Zn(II)-사이클렌 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 균질 형광 PCR-기반 단일 뉴클레오티드 다형성 분석, 포스페이트-친화도 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 고처리량 SNP 유전자형 결정 플랫폼, 분자 비콘, 5' 뉴클레아제 반응, 택맨 검정, 매스어레이 (매트릭스-보조 레이저 탈착/이온화 비행 시간 질량 분광측정법과 커플링된 단일 염기 프라이머 연장), 트리틸 질량 태그, 유전자형 결정 플랫폼 (예컨대, 인베이더 어세이®), 단일 염기 프라이머 연장 (SBE) 검정, PCR 증폭 (예를 들어, 자기 나노입자 (MNP) 상에서의 PCR 증폭, PCR 산물의 제한 효소 분석 (RFLP 방법), 대립유전자-특이적 PCR, 다중 프라이머 연장 (MPEX), 및 등온 smart 증폭으로 이루어진 군으로부터 선택된 기술에 의해 검출되는 것인 제약 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 다형성이 적어도 1개의 다형성을 함유하는 표적 영역의 증폭, 및 엄격한 조건 하에 적어도 1개의 다형성에 혼성화하는 적어도 1개의 서열-특이적 올리고뉴클레오티드와의 혼성화, 및 혼성화의 검출에 의해 검출되는 것인 제약 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 환자가 MMSE 스코어 22 내지 26을 갖는 것인 제약 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 환자가 ApoE4 양성인 제약 조성물.
  10. (a) 환자로부터의 샘플에서 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T를 갖는 클루스테린 대립유전자의 존재 또는 부재를 검출하는 단계, 및
    (b) 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T가 샘플에 존재하는 경우에, 환자를 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 사용한 치료에 반응할 가능성이 더 큰 것으로서 선택하는 단계를 포함하고,
    여기서 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체는 크레네주맙인
    인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 사용한 치료를 위한 MMSE 스코어 18 내지 26을 갖는 것을 특징으로 하는 경도 내지 중등도 AD를 앓고 있는 환자를 선택하는 방법.
  11. 환자로부터의 샘플에서 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 사용한 치료에 반응할 것으로 예측되는 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP) rs1532278에서 T를 갖는 다형성을 포함하는 클루스테린 대립유전자의 존재를 검출하는 것을 포함하고, 여기서 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체는 크레네주맙인 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 사용한 치료에 반응할 가능성이 더 큰 MMSE 스코어 18 내지 26을 갖는 것을 특징으로 하는 경도 내지 중등도 AD를 앓고 있는 환자를 확인하는 방법.
  12. (a) 개체로부터의 샘플에서 SNP rs1532278에서의 뉴클레오티드의 정체를 결정하는 단계, 및
    (b) 샘플이 SNP rs1532278에서 T 뉴클레오티드를 갖는 적어도 1개의 대립유전자를 함유하는 경우에, 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 포함하는 치료에 반응할 증가된 가능성을 예측하는 단계를 포함하고,
    여기서 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체는 크레네주맙인
    MMSE 스코어 18 내지 26을 갖는 것을 특징으로 하는 경도 내지 중등도 AD를 앓고 있는 개체가 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 포함하는 치료에 반응할 가능성이 있는지 여부를 예측하는 방법.
  13. MMSE 스코어 18 내지 26을 갖는 것을 특징으로 하는 경도 내지 중등도 AD를 앓고 있는 환자가 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 포함하는 치료로부터 이익을 얻을 가능성을 결정하는 방법이며, 방법은 환자로부터 얻은 샘플에서 환자의 유전자형을 결정하는 것을 포함하고, 여기서 SNP rs1532278에서 T 뉴클레오티드를 갖는 적어도 1개의 클루스테린 대립유전자를 갖는 환자는 SNP rs1532278에서 T 뉴클레오티드를 갖는 대립유전자가 없는 환자보다 인간화 모노클로날 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체를 사용한 치료에 반응할 가능성이 더 크고, 항-아밀로이드 베타 (Aβ) 항체는 크레네주맙인 방법.
  14. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플이 체액의 샘플인 방법.
  15. 제14항에 있어서, 체액은 혈액 샘플, 타액, 협부 스왑, 또는 조직 샘플인 방법.
  16. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 다형성이 폴리머라제 연쇄 반응에 의해 검출되는 것인 방법.
  17. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 다형성이 서열분석에 의해 검출되는 것인 방법.
  18. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 다형성이 스캐닝 프로브 및 나노포어 DNA 서열분석, 파이로시퀀싱, 변성 구배 겔 전기영동 (DGGE), 시간 온도 구배 전기영동 (TTGE), Zn(II)-사이클렌 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 균질 형광 PCR-기반 단일 뉴클레오티드 다형성 분석, 포스페이트-친화도 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 고처리량 SNP 유전자형 결정 플랫폼, 분자 비콘, 5' 뉴클레아제 반응, 택맨 검정, 매스어레이 (매트릭스-보조 레이저 탈착/이온화 비행 시간 질량 분광측정법과 커플링된 단일 염기 프라이머 연장), 트리틸 질량 태그, 유전자형 결정 플랫폼 (예컨대, 인베이더 어세이®), 단일 염기 프라이머 연장 (SBE) 검정, PCR 증폭 (예를 들어, 자기 나노입자 (MNP) 상에서의 PCR 증폭, PCR 산물의 제한 효소 분석 (RFLP 방법), 대립유전자-특이적 PCR, 다중 프라이머 연장 (MPEX), 및 등온 smart 증폭으로 이루어진 군으로부터 선택된 기술에 의해 검출되는 것인 방법.
  19. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 다형성이 적어도 1개의 다형성을 함유하는 표적 영역의 증폭, 및 엄격한 조건 하에 적어도 1개의 다형성에 혼성화하는 적어도 1개의 서열-특이적 올리고뉴클레오티드와의 혼성화, 및 혼성화의 검출에 의해 검출되는 것인 방법.
  20. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 MMSE 스코어 22 내지 26을 갖는 것인 방법.
  21. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 ApoE4 양성인 방법.
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