KR101633722B1 - 4-(1-퍼롤-3,4-디카르복시아미드)피리미딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

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한국화학연구원
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Abstract

본 발명은 4-(1-퍼롤-3,4-디카르복시아미드)피리미딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 4-(1-퍼롤-3,4-디카르복시아미드)피리미딘 유도체, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 역형성 림프종 키나아제(ALK)를 억제하는 활성이 우수하므로, 이에 따른 EML4-ALK, NPM-ALK 등의 역형성 림프종 키나아제(ALK) 융합 단백질을 가진 암세포에 대한 치료효과가 우수하고, 암의 재발을 막는데 효과적일 것으로 예상되므로 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

4-(1-퍼롤-3,4-디카르복시아미드)피리미딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물{4-(1-pyrrole-3,4-dicarboxamide)pyrimidine derivatives, preparation method thereof, and pharmaceutical composition for use in preventing or treating cancer containing the same as an active ingredient}
본 발명은 4-(1-퍼롤-3,4-디카르복시아미드)피리미딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
암이란 개체의 필요에 따라 규칙적이고 절제 있는 증식과 억제를 할 수 있는 정상세포와 달리 조직 내에서 필요한 상태를 무시하고 무제한의 증식을 하는 미분화 세포로 구성된 세포덩어리로서 종양이라고도 한다. 이러한 무제한의 증식을 하는 암 세포는 주위의 조직으로 침투하고 더 심각한 경우는 신체의 다른 기관으로 전이가 되어 심각한 고통을 수반하고 결국 죽음을 초래하는 난치병이다.
미국암협회(American Cancer Society) 자료에 따르면 2007년 한해 세계적으로 새로이 암 진단을 받은 환자는 1200만 명 이상이며 사망자는 760만 명으로 매일 약 2만 명씩 암으로 사망하는 것으로 보고되었다. 우리나라의 경우 2006년 통계청 보고에 따르면 암으로 인한 사망이 사망원인 1위를 차지하였다. 따라서, 암 발생 및 투병으로 인한 정신적, 육체적 고통의 감소와 삶의 질 향상을 위해 치료 효과가 우수한 종양 치료제의 개발이 절실히 요구된다.
그러나 많은 노력에도 아직까지 정상세포가 어떠한 기전을 거쳐 암 세포로 형질전환이 되는지에 대해서는 정확하게 규명되지는 않았으나, 환경요인, 화학물질, 방사선, 바이러스 등 외적 요인 및 유전 인자, 면역학적 요인 등의 내적 요인 등이 복잡하게 얽혀 결과적으로 암이 발생한다. 암의 발생에 관련되는 유전자에는 종양형성 유전자(oncogenes)와 종양억제 유전자(tumor suppressor genes)가 있는데, 이들 사이의 균형이 위에서 설명한 내적 혹은 외적 요인들에 의해 무너질 때 암이 발생하게 된다.
암은 혈액암과 고형암으로 크게 분류되며, 폐암, 위암, 유방암, 구강암, 간암, 자궁암, 식도암, 피부암 등 신체의 거의 모든 부위에서 발생하며, 이들의 치료방법으로 최근 글리벡 또는 허셉틴과 같은 소수의 표적치료제가 특정암의 치료에 이용되고 있으나 현재까지는 수술이나 방사선 요법 및 세포증식을 억제하는 화학요법제를 이용한 항암제 치료가 주된 방법이다. 그러나 표적치료제가 아니기 때문에 기존 화학요법제의 가장 큰 문제는 세포독성으로 인한 부작용과 약제 내성으로써, 항암제에 의한 초기의 성공적인 반응에도 불구하고 결국에는 치료가 실패하게 되는 주요 요인이다. 따라서, 이러한 화학요법제의 한계를 극복하기 위해서는 항암작용 기전이 명확한 표적 치료제 개발이 지속적으로 필요하다.
이에, 표적 치료제를 개발하기 위한 종양 형성에 관여하는 특정 분자생물학적 인자들에 관한 많은 연구가 진행되고 있으며, 특히, 분자생물학적 인자들은 암의 예후예측이나 화학요법 및 방사선치료 여부를 결정하는데 다양하게 이용되고 있다.
특정 분자생물학적 인자의 타이로신 키나아제 수용체를 저해하는 가장 대표적인 약물로는 글리벡을 들 수 있다. 상기 글리벡은 만성골수성백혈병에서 관찰되는 필라델피아 염색체에서 염색체 전좌에 의해 형성되는 Bcr-Abl 융합유전자의 작용을 억제하여 항암 작용을 하며, 타이로신 키나아제 저해제로써, 만성골수성백혈병 환자에 투여 시 만족할 만한 성과를 거두고 있다. 이 후, 타이로신 키나아제 저해제로 항암 효과를 나타내는 약물로는 비소세포성 폐암 치료제로 사용되는 EGFR(epidermal growth factor receptor) 타이로신 키나아제 억제제인 게피티닙(gefitinib)와 엘로티닙(erlotinib)가 있고, 신장 세포암종 치료제로 소라페닙(sorafenib)과 수니티닙(sunitinib)이 사용되고 있으나, 출혈, 심장마비, 심부전, 간부전 등의 부작용이 있는 것으로 알려진바 있다.
최근에는 역형성 림프종 키나아제(ALK, Anaplastic lymphoma kinase)가 인체 여러 종양에서 발견되어 표적치료의 목표물로 연구되고 있다.
역형성 림프종 키나아제(ALK)의 발암과정은 주로 역형성 큰세포 림프종에서 관찰되는 ALK-NPM(Nucleophosmin, 뉴클레오포스민)의 융합유전자에 대한 연구로 알려져 있다. 유전자 융합에 의해 역형성 림프종 키나아제(ALK)가 활성화되면 역형성 림프종 키나아제(ALK)가 갖고 있는 타이로신 키나아제는 비정상적으로 행동하여 암을 유발하게 된다. 즉, 비정상적으로 활성화된 역형성 림프종 키나아제(ALK)는 세포의 증식을 유도하고 아포프토시스를 방해해 세포가 사멸되지 않게 하며 세포뼈대를 재배열시키며 세포 형태를 변형시킨다. 역형성 림프종 키나아제(ALK)의 암 유전자화는 역형성 림프종 키나아제(ALK)의 표적 물질인 하위 분자(downstream molecule)와의 상호작용에 의해 이루어지는데, 하위 분자는 세포내 신호전달을 매개하는 물질이다. 역형성 림프종 키나아제(ALK)는 정상이거나 암 유전자화한 다른 타이로신 키나아제와 연결되어 상호작용을 하거나 여러 종류의 다른 경로들을 활성화시킨다.
특히, 폐암 세포의 내부에서 역형성 림프종 키나아제(ALK) 유전자는 EML4(Echinoderm Microtubule-Associated Protein-Like 4) 유전자와 융합하여 활성형 티로신 인산화 효소(tyrosine kinase)인 EML4-ALK를 생산하고, 이때, EML4-역형성 림프종 키나아제(ALK)의 암화 능력이 효소활성에 의존적이라는 것이 알려진 바 있고, 또한, Mosse 등은 491개의 신경모세포종 검체에서 약 26 %의 역형성 림프종 키나아제(ALK) 유전자 증폭에 대하여 보고한 바 있다. 뿐만 아니라, 역형성 림프종 키나아제(ALK) 유전자는 대형 B-세포 림프종, 전신성 조식구증, 염증성 근섬유아세포성 육종, 식도 편평 세포암, 비소세포폐암, 횡문근육종, 근섬유모세포종, 유방암 및 흑색종 세포주 등 수많은 비조혈세포 종양에서 발현되는 것으로 밝혀졌고, 염증성 골수섬유모세포종양이라는 희귀한 질환의 경우 여러 종류의 역형성 림프종 키나아제(ALK) 융합 단백질이 흔히 발견되어 이러한 융합 단백질들이 종양의 발생에 깊이 관련된 것으로 여겨지고 있다.
이에, 역형성 림프종 키나아제(ALK)의 활성화 경로를 차단함으로써, 암 치료를 목적으로 하는 ALK-NPM를 대상으로 한 치료제가 개발되고 있다. 최근 화이자(Pfizer)에서 종양원성 변이에 대한 선택적 억제제로 개발한 약물로 소분자 타이로신 인산화효소 억제제의 하나인 크리조티닙(PF-02341066)이 ATP 경쟁성 c-Met/HGFR와 역형성 림프종 키나아제(ALK) 저해제로써, 비소세포폐암의 치료에 효과가 있는 것으로 알려져 있으며, 2011년 FDA에서 신약으로 허가를 받았다.
또한, 노바티스(Novartis)사의 NVP-TAE684, LDK-378과 쥬가이(Chugai)사의 CH5424802도 역형성 큰세포 림프종 세포주 이외에 신경모세포종 세포주에서도 종양의 크기를 감소시키는 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
특허문헌 1 내지 3에서는, 종래 역형성 림프종 키나아제(ALK) 활성을 저해하기 위한 용도로 다양한 골격을 가진 치료후보 물질이 개발되고 있고, 피리미딘 유도체가 림프종 키나아제(ALK)를 선택적으로 저해하여 항암제로 개발될 수 있음을 개시하고 있다.
이에, 본 발명자들은 역형성 역형성 림프종 키나아제(ALK, Anaplastic lymphoma kinase) 활성억제 효과를 나타내는 화합물을 개발하기 위해 노력하던 중, 본 발명에 따른 4-(1-퍼롤-3,4-디카르복시아미드)피리미딘 유도체, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 역형성 림프종 키나아제(ALK)의 활성 억제제로 작용함으로써, 암의 예방 또는 치료제로 사용될 수 있음을 밝히고 본 발명을 완성하였다.
WO 2009143389 A1 WO 2008051547 A1 WO 2004080980 A1
본 발명의 목적은 4-(1-퍼롤-3,4-디카르복시아미드)피리미딘 유도체, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 4-(1-퍼롤-3,4-디카르복시아미드)피리미딘 유도체의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 4-(1-퍼롤-3,4-디카르복시아미드)피리미딘 유도체, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여,
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112014096079987-pat00001
상기 화학식 1에서,
R1 및 R2 독립적으로 -H, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 비치환 또는 치환된 C6 -10의 아릴 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 비치환 또는 치환된 C6 -10의 아릴 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고,
상기 치환된 C6 -10의 아릴 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 치환된 C6 -10의 아릴 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시는 독립적으로 -OH, 할로겐, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 C6 -10의 아릴 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 C6 -10의 아릴 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고;
X는 -H, -OH, 할로겐, 비치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 비치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고;
Z1, Z2, Z3 및 Z4는 독립적으로 -H, -OH, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5-10원자 헤테로사이클로알킬이고,
상기 치환된 5-10원자 헤테로사이클로알킬은 -OH, 할로겐, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시 및 -C(=O)OR3로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 5-10원자 헤테로사이클로알킬이고,
상기 R3는 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고;
Z3 및 Z4는 이들이 연결된 탄소 원자들과 함께 연결되어 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5-10원자 헤테로사이클로알킬을 형성할 수 있고,
상기 치환된 5-10원자 헤테로사이클로알킬은 -OH, 할로겐, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시 및 -C(=O)OR4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 5-10원자 헤테로사이클로알킬이고,
상기 R4는 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이다.
또한, 본 발명은 하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,
화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 제조한 화학식 4로 표시되는 화합물과 화학식 5로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 6으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2); 및
상기 단계 2에서 제조한 화학식 6으로 표시되는 화합물과 화학식 7로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3);를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.
[반응식 1]
Figure 112014096079987-pat00002
상기 반응식 1에서,
R1, R2, X, Z1, Z2, Z3 및 Z4는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같다.
나아가, 본 발명은 하기 반응식 2에 나타난 바와 같이,
화학식 1a로 표시되는 화합물의 -Boc(
Figure 112014096079987-pat00003
)기를 제거하여 화학식 1b로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.
[반응식 2]
Figure 112014096079987-pat00004
상기 반응식 2에서,
R1, R2, X, Z1, Z2 및 Z4는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고,
화학식 1a 및 1b로 표시되는 화합물은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물에 포함된다.
또한, 본 발명은 하기 반응식 3에 나타난 바와 같이,
화학식 1c로 표시되는 화합물의 -Boc(
Figure 112014096079987-pat00005
)기를 제거하여 화학식 1d로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.
[반응식 3]
Figure 112014096079987-pat00006
상기 반응식 3에서,
R1, R2, X, Z1 및 Z2는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고,
화학식 1c 및 1d로 표시되는 화합물은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물에 포함된다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 4-(1-퍼롤-3,4-디카르복시아미드)피리미딘 유도체, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 역형성 림프종 키나아제(ALK)를 억제하는 활성이 우수하므로, 이에 따른 EML4-ALK, NPM-ALK 등의 역형성 림프종 키나아제(ALK) 융합 단백질을 가진 암세포에 대한 치료효과가 우수하고, 암의 재발을 막는데 효과적일 것으로 예상되므로 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112014096079987-pat00007
상기 화학식 1에서,
R1 및 R2 독립적으로 -H, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 비치환 또는 치환된 C6 -10의 아릴 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 비치환 또는 치환된 C6 -10의 아릴 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고,
상기 치환된 C6 -10의 아릴 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 치환된 C6 -10의 아릴 C1-5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시는 독립적으로 -OH, 할로겐, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 C6 -10의 아릴 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 C6 -10의 아릴 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고;
X는 -H, -OH, 할로겐, 비치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 비치환 또는 하나 이상의 할로겐이 치환된 C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고;
Z1, Z2, Z3 및 Z4는 독립적으로 -H, -OH, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5-10원자 헤테로사이클로알킬이고,
상기 치환된 5-10원자 헤테로사이클로알킬은 -OH, 할로겐, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시 및 -C(=O)OR3로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 5-10원자 헤테로사이클로알킬이고,
상기 R3는 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고;
Z3 및 Z4는 이들이 연결된 탄소 원자들과 함께 연결되어 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5-10원자 헤테로사이클로알킬을 형성할 수 있고,
상기 치환된 5-10원자 헤테로사이클로알킬은 -OH, 할로겐, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시 및 -C(=O)OR4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 5-10원자 헤테로사이클로알킬이고,
상기 R4는 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이다.
바람직하게는,
R1 및 R2는 독립적으로 -H, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 비치환 또는 치환된 C6 -8의 아릴 C1 -3의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 비치환 또는 치환된 C6 -8의 아릴 C1 -3의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고,
상기 치환된 C6 -8의 아릴 C1 -3의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 치환된 C6 -8의 아릴 C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알콕시는 독립적으로 할로겐, C1 -3의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 C1-3의 직쇄 또는 측쇄 알콕시로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 C6 -8의 아릴 C1 -3의 직쇄 또는 측쇄 알킬 및 C6 -8의 아릴 C1 -3의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고;
X는 -H, 할로겐, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, 또는 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고;
Z1, Z2, Z3 및 Z4는 독립적으로 -H, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, 또는 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5-8원자 헤테로사이클로알킬이고,
상기 치환된 5-8원자 헤테로사이클로알킬은 할로겐, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시 및 -C(=O)OR3로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 5-8원자 헤테로사이클로알킬이고,
상기 R3는 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고;
Z3 및 Z4는 이들이 연결된 탄소 원자들과 함께 연결되어 N, O 및 S로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 헤테로 원자를 포함하는 비치환 또는 치환된 5-8원자 헤테로사이클로알킬을 형성할 수 있고,
상기 치환된 5-8원자 헤테로사이클로알킬은 할로겐, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시 및 -C(=O)OR4로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치환기가 치환된 5-8원자 헤테로사이클로알킬이고,
상기 R4는 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이다.
더욱 바람직하게는,
R1은 n-프로필, 또는
Figure 112014096079987-pat00008
이고;
R2는 -H이고;
X는 -Cl이고;
Z1은 -H, 메톡시, 또는 이소프로폭시이고;
Z2는 -H, 또는 메톡시이고;
Z3은 메톡시,
Figure 112014096079987-pat00009
, 또는
Figure 112014096079987-pat00010
이고;
Z4는 -H, 메틸, 또는 메톡시이고;
Z3 및 Z4는 이들이 연결된 탄소 원자들과 함께 연결되어 비치환 또는 치환된 피페리딘을 형성할 수 있고,
상기 치환된 피페리딘은 N 원자에 -Boc(
Figure 112014096079987-pat00011
)가 치환된 피페리딘이다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 바람직한 예로는 하기의 화합물들을 들 수 있다.
(1) 1-(5-클로로-2-((2,3,4-트리메톡시페닐)아미노)피리미딘-4-일)-N3,N4-디프로필-1H-퍼롤-3,4-디카르복시아미드;
(2) 1-(5-클로로-2-((3,4,5-트리메톡시페닐)아미노)피리미딘-4-일)-N3,N4-디프로필-1H-퍼롤-3,4-디카르복시아미드;
(3) tert-부틸 4-(4-((4-(3,4-비스(프로필카바모일)-1H-퍼롤-1-일)-5-클로로피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-카복시레이트;
(4) 1-(5-클로로-2-((2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-N3,N4-디프로필-1H-퍼롤-3,4-디카르복시아미드;
(5) tert-부틸 6-((4-(3,4-비스(프로필카바모일)-1H-퍼롤-1-일)-5-클로로피리미딘-2-일)아미노)-7-메톡시-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-카복시레이트;
(6) 1-(5-클로로-2-((7-메톡시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-일)아미노)피리미딘-4-일)-N3,N4-디프로필-1H-퍼롤-3,4-디카르복시아미드;
(7) 1-(5-클로로-2-((2,3,4-트리메톡시페닐)아미노)피리미딘-4-일)-N3,N4-비스(4-메틸벤질)-1H-퍼롤-3,4-디카르복시아미드;
(8) 1-(5-클로로-2-((3,4,5-트리메톡시페닐)아미노)피리미딘-4-일)-N3,N4-비스(4-메틸벤질)-1H-퍼롤-3,4-디카르복시아미드;
(9) tert-부틸 6-((4-(3,4-비스((4-메틸벤질)카바모일)-1H-퍼롤-1-일)-5-클로로피리미딘-2-일)아미노)-7-메톡시-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-카복시레이트;
(10) 1-(5-클로로-2-((7-메톡시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-일)아미노)피리미딘-4-일)-N3,N4-비스(4-메틸벤질)-1H-퍼롤-3,4-디카르복시아미드;
(11) tert-부틸 4-(4-((4-(3,4-비스((4-메틸벤질)카바모일)-1H-퍼롤-1-일)-5-클로로피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-2-메틸페닐)피페리딘-1-카복시레이트; 및
(12) 1-(5-클로로-2-((2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-N3,N4-비스(4-메틸벤질)-1H-퍼롤-3,4-디카르복시아미드.
본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산, 아인산 등과 같은 무기산류, 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류 등과 같은 무독성 유기산, 아세트산, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산등과 같은 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염의 종류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, -하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등을 포함한다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 화학식 1의 유도체를 메탄올, 에탄올, 아세톤, 메틸렌클로라이드, 아세토니트릴 등과 같은 유기용매에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조시켜 제조하거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조시켜 유기용매 하에서 결정화시켜셔 제조할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 용매화물, 광학 이성질체, 수화물 등을 모두 포함한다.
나아가, 본 발명은 하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,
화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 제조한 화학식 4로 표시되는 화합물과 화학식 5로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 6으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2); 및
상기 단계 2에서 제조한 화학식 6으로 표시되는 화합물과 화학식 7로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3);를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.
[반응식 1]
Figure 112014096079987-pat00012
상기 반응식 1에서,
R1, R2, X, Z1, Z2, Z3 및 Z4는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같다.
이하, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 단계별로 상세히 설명한다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 1은 화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이며, 보다 구체적으로는, 화학식 2로 표시되는 화합물과, 과량의 화학식 3으로 표시되는 화합물을 혼합한 후, 마이크로파를 조사하며 반응시켜 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 반응온도는 100-200℃ 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 마이크로파의 조사시간은 특별한 제약은 없으나, 50-150분 동안 조사하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 2는 상기 단계 1에서 제조한 화학식 4로 표시되는 화합물과 화학식 5로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 6으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이며, 보다 구체적으로는, 화학식 4로 표시되는 화합물에 용매에 용해된 염기를 첨가하여 교반한 후, 화학식 5로 표시되는 화합물을 첨가하고 교반하여 화학식 6으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 상기 용매로는 테트라하이드로퓨란(THF); 디옥산; 에틸에테르, 1,2-다이메톡시에탄 등을 포함하는 에테르용매; 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올을 포함하는 저급 알코올; 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 디클로로메탄(DCM), 디클로로에탄, 물, 아세토나젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시크레이트, 락테이트, 하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등을 사용할 수 있으며, 디메틸포름아미드(DMF)를 사용하는 것이 바람직하다.
또한, 상기 염기로는 피리딘, 트리에틸아민, N,N-다이이소프로필에틸아민(DIPEA), 1,8-디아자비사이클로[5.4.0]-7-운테센(DBU) 등의 유기염기; 또는 소듐하이드록사이드, 소듐카보네이트, 포타슘카보네이트, 세슘카보네이트, 소듐하이드라이드 등의 무기염기를 사용할 수 있으며, 세슘카보네이트(Cs2CO3)를 사용하는 것이 바람직하다.
나아가, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-90시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 3은 상기 단계 2에서 제조한 화학식 6으로 표시되는 화합물과 화학식 7로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이며, 보다 구체적으로는, 화학식 6으로 표시되는 화합물에 용매에 용해된 산을 첨가하고 교반한 후, 화학식 7로 표시되는 화합물을 첨가하고 교반하여 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 상기 용매로는 테트라하이드로퓨란(THF); 디옥산; 에틸에테르, 1,2-다이메톡시에탄 등을 포함하는 에테르용매; 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올을 포함하는 저급 알코올; 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 디클로로메탄(DCM), 디클로로에탄, 물, 아세토나젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시크레이트, 락테이트, 하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등을 사용할 수 있으며, 디옥산을 사용하는 것이 바람직하다.
또한, 상기 산으로는 아세트산, 트리플루오로아세트산, 염산, 황산, 톨루엔 술폰산 등을 사용할 수 있으며, 톨루엔 술폰산을 사용하는 것이 바람직하다.
나아가, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-40시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명은 하기 반응식 2에 나타난 바와 같이,
화학식 1a로 표시되는 화합물의 -Boc(
Figure 112014096079987-pat00013
)기를 제거하여 화학식 1b로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.
[반응식 2]
Figure 112014096079987-pat00014
상기 반응식 2에서,
R1, R2, X, Z1, Z2 및 Z4는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고,
화학식 1a 및 1b로 표시되는 화합물은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물에 포함된다.
이하, 본 발명에 따른 상기 화학식 1b로 표시되는 화합물의 제조방법을 단계별로 상세히 설명한다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1b로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 1은 화학식 1a로 표시되는 화합물의 -Boc(
Figure 112014096079987-pat00015
)기를 제거하여 화학식 1b로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이며, 보다 구체적으로는, 화학식 1a로 표시되는 화합물에 산을 첨가하고 교반하여 화학식 1b로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 상기 산으로는 아세트산, 트리플루오로아세트산, 염산, 황산, 톨루엔술폰산 등을 사용할 수 있으며, 트리플루오로아세트산을 사용하는 것이 바람직하다.
또한, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-40시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
나아가, 본 발명은 하기 반응식 3에 나타난 바와 같이,
화학식 1c로 표시되는 화합물의 -Boc(
Figure 112014096079987-pat00016
)기를 제거하여 화학식 1d로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.
[반응식 3]
Figure 112014096079987-pat00017
상기 반응식 3에서,
R1, R2, X, Z1 및 Z2는 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고,
화학식 1c 및 1d로 표시되는 화합물은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물에 포함된다.
이하, 본 발명에 따른 상기 화학식 1d로 표시되는 화합물의 제조방법을 단계별로 상세히 설명한다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1d로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 1은 화학식 1c로 표시되는 화합물의 -Boc(
Figure 112014096079987-pat00018
)기를 제거하여 화학식 1d로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이며, 보다 구체적으로는, 화학식 1c로 표시되는 화합물에 산을 첨가하고 교반하여 화학식 1d로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 상기 산으로는 아세트산, 트리플루오로아세트산, 염산, 황산, 톨루엔술폰산 등을 사용할 수 있으며, 트리플루오로아세트산을 사용하는 것이 바람직하다.
또한, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-40시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. 이때, 상기 약학적 조성물은 역형성 림프종 키나아제(ALK, Anaplastic Lymphoma Kinase) 활성을 억제하여 암세포의 발현 및 성장을 억제하는 것을 특징으로 하며, 상기 암으로는 비소세포폐암, 신경모세포종, 염증성 골수섬유모세포종양, 종횡문근육종, 근섬유모세포종, 유방암, 위암, 폐암, 흑색종 등이 있다.
역형성 림프종 키나아제(ALK)는 암세포에 존재하는 암의 세포증식을 유도하는 유전자로써, 유전자 융합 과정에 의해 역형성 림프종 키나아제(ALK)가 활성화되고, 이때, 역형성 림프종 키나아제(ALK)가 가지고 있는 타이로신 키나아제가 비정상적으로 행동하여 세포의 증식을 유도하고, 아포프토시스를 방해해 세포가 사멸되지 않게 하며 세포뼈대를 재배열시키며 세포 형태를 변형시킬 뿐만 아니라, 역형성 림프종 키나아제(ALK)는 정상이거나 암 유전자화한 다른 타이로신 키나아제와 연결되어 상호작용을 하거나 여러 종류의 다른 경로들을 활성화시킨다.
이에, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 4-(1-퍼롤-3,4-디카르복시아미드)피리미딘 유도체의 역형성 림프종 키나아제(ALK) 활성을 효소단계에서 측정하기 위해 실험을 수행한 결과, 본 발명에 따른 실시예 2, 4, 6, 8 및 12에서 제조한 화합물은 낮은 농도에서(10 μM) 역형성 림프종 키나아제(ALK) 효소활성을 유효하게 감소시키는 것으로 나타났으며, 특히 실시예 8에서 제조한 화합물은 역형성 림프종 키나아제(ALK) 효소활성을 74% 억제하는 것으로 나타나 우수한 억제활성을 갖는 것을 확인하였다(실험예 1의 표 2 참조).
또한, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 4-(1-퍼롤-3,4-디카르복사아미드)피리미딘 유도체의 역형성 림프종 키나아제(ALK) 억제 활성을 세포단계에서 측정하기 위해 실험을 수행한 결과, 본 발명에 따른 실시예 2, 4, 6 및 11에서 제조한 화합물은 낮은 농도에서(<10 μM) 역형성 림프종 키나아제(ALK) 효소를 포함하고 있는 비소세포폐암세포인 H3122 CP의 세포활성을 50%로 감소(IC50)시키는 것으로 나타났다. 특히, 실시예 11에서 제조한 화합물은 2.3 μM의 매우 낮은 농도에서 H3122 CP의 세포활성을 50%로 감소시키는 것으로 확인하였다(실험예 2의 표 3 참조).
따라서, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 4-(1-퍼롤-3,4-디카르복사아미드)피리미딘 유도체는 역형성 림프종 키나아제(ALK) 활성을 억제하는 효과가 우수하므로 비소세포폐암, 신경모세포종, 염증성 골수섬유모세포종양, 종횡문근육종, 근섬유모세포종, 유방암, 위암, 폐암, 흑색종 등의 암의 예방 또는 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있으며, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.
경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발명의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용 액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁 용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물의 인체에 대한 효과적인 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로 약 0.001-100 mg/kg/일이며, 바람직하게는 0.01-35 mg/kg/일이다. 몸무게가 70 인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.07-7000 mg/일이며, 바람직하게는 0.7-2500 /일이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의하여 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 이에 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> 1-(5- 클로로 -2-((2,3,4- 트리메톡시페닐 )아미노)피리미딘-4-일)- N3,N4 -디프로필-1 H - 퍼롤 -3,4- 디카르복시아미드의 제조
단계 1 : N3 , N4 - 디프로필 -1H- 퍼롤 -3,4- 디카르복시아미드의 제조
Figure 112014096079987-pat00019
디에틸 1H-퍼롤-3,4-디카르복시레이트 (400 mg, 1.89 mmol) 및 과량의 n-프로필 아민을 함께 혼합하였다. 상기 반응 혼합물을 180℃에서 100분 동안 마이크로파(microwave)로 조사하였다. 반응이 완료되면, EtOAc 및 포화 NaHCO3 용액을 사용하여 층 분리를 수행하였다. 수용액 층은 EtOAc를 사용하여 세 번 추출하였다. 수집된 유기층은 브라인 및 물로 세척하고, 무수 MgSO4로 건조하였다. 상기 용매는 진공 하에서 제거하였다. 조 생성물(crude product)은 디클로로메탄/아세톤 (5:1)과 실리카 겔을 사용한 중압액체크로마토그래피(Medium Pressure Liquid Chromatography, MPLC)로 정제하여 목적 화합물을 67% 수율로 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 11.04 (s, 1 H), 8.42 (br, 2 H), 7.23 (br, 1 H), 3.33 (q, J = 6.7 Hz, 4 H), 1.87 (s, 1 H), 1.62 (sextet, J =.7.3 Hz, 4 H), 0.96 (t, J =.7.9 Hz, 6 H);
13C NMR (125 MHz, CDCl3), 165.8, 123.7, 118.3, 41.5, 22.8, 11.5;
LC-MS (EI) for C12H19N3O2 (M + H+): m/z = 238.12, Exact Mass: 237.1477.
단계 2 : 1-(2,5- 디클로로피리미딘 -4-일)- N3 , N4 - 디프로필 -1H- 퍼롤 -3,4- 디카르복시아미드의 제조
Figure 112014096079987-pat00020
반응 플라스크에 상기 단계 1에서 제조한 N3 , N4-디프로필-1H-퍼롤-3,4-디카르복시아미드 (140 mg, 0.59 mmol) 및 건조 DMF (4.0 mL)에 용해된 무수 Cs2CO3 (480 mg, 1.5 mmol)를 첨가한 후, 5분 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물에 2,4,5-트리클로로피리미딘 (216 mg, 1.18 mmol)을 첨가하고, 35℃에서 90시간 동안 교반하였다. 반응은 LC-MS를 통하여 모니터링 하였다. 반응이 완료되면, EtOAc 및 포화 NaHCO3 용액을 사용하여 층 분리를 수행하였다. 수용액 층은 EtOAc를 사용하여 세 번 추출하였다. 수집된 유기층은 브라인으로 세척하고, Na2SO4로 건조한 후, 필터하고, 용매는 진공 하에서 제거하였다. 조 생성물(crude product)은 헥산/에틸 아세테이트 (2:1)과 실리카 겔을 사용한 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적 화합물을 무색의 고체 형태로 얻었다(205 mg, 90%).
1H NMR (300 MHz, acetone-d 6 ) δ 9.30 (br, 1 H), 8.95 (s, 1 H), 8.32 (s, 2 H), 3.33 (q, J = 6.0 Hz, 4 H), 2.82 (br, 1 H), 1.62 (sextet, J = 7.2 Hz, 4 H), 0.98 (t, J = 7.2 Hz, 6 H);
13C NMR (75 MHz, Acetone-d 6 ) δ 163.4, 162.5, 157.7, 153.6, 125.8, 121.7, 119.5, 41.0, 22.5, 10.9;
LC-MS (EI) for C16H19N5O2 (M + H+): m/z = 384.36, Exact Mass: 383.0915.
단계 3 : 1-(5- 클로로 -2-((2,3,4-트리메톡시페닐)아미노)피리미딘-4- 일 )- N3,N4 -디프로필-1 H - 퍼롤 -3,4- 디카르복시아미드의 제조
Figure 112014096079987-pat00021
반응 플라스크에 상기 단계 2에서 제조한 1-(2,5-디클로로피리미딘-4-일)-N3,N4-디프로필-1H-퍼롤-3,4-디카르복시아미드 (2.0 g, 5.20 mmol) 및 1,4-디옥산 (15 mL)에 용해된 p-톨루엔술폰산 일수화물 (791 mg, 4.16 mmol)을 첨가하고, 상온에서 5분 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물에 2,3,4-트리메톡시아닐린 (1.05 g, 5.73 mmol)을 첨가하고, 24시간 동안 50℃로 가열하였다. 반응은 LC-MS를 통하여 모니터링 하였다. 반응이 완료되면, 포화 NaHCO3 용액을 첨가하여 반응을 종결시켰다. 유기 용매를 진공 하에서 제거한 후, 포화 NaHCO3 용액을 첨가하였다. 수용액 층은 EtOAc를 사용하여 세 번 추출하였다. 유기층을 수집한 후, 브라인으로 세척하고, Na2SO4로 건조한 후, 필터하고, 진공 하에서 농축하였다. 조 생성물(crude product)은 헥산/에틸 아세테이트 (4:1)과 실리카 겔을 사용한 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적 화합물을 무색의 고체 형태로 얻었다(2.50 g, 90%).
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.44 (br, 2 H), 8.26 (br, 2 H), 7.86 (d, J = 8.9 Hz, 1 H), 7.80 (s, 1 H), 6.69 (d, J = 9.1 Hz, 1 H), 3.97 (s, 3 H), 3.90 (s, 3 H), 3.87 (s, 3 H), 3.40 (q, J = 6.4 Hz, 4 H), 2.70 (s, 1 H), 1.66 (sextet, J = 9.1 Hz, 4 H), 1.01 (t, J = 7.1 Hz, 6 H);
LC-MS (EI) for C25H31ClN6O5 (M + H+): m/z = 531.31, Exact Mass: 530.2044.
< 실시예 2> 1-(5- 클로로 -2-((3,4,5-트리메톡시페닐)아미노)피리미딘-4- 일 )- N3,N4- 디프로필-1 H - 퍼롤 -3,4- 디카르복시아미드의 제조
Figure 112014096079987-pat00022
2,3,4-트리메톡시아닐린을 사용하는 대신에, 3,4,5-트리메톡시벤젠아민을 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 수행하여 목적 화합물을 무색의 고체 형태로 얻었다(525 mg, 86%).
1H NMR (CDCl3 300 MHz) δ 8.44 (br, 2 H), 8.26 (br, 2 H), 7.88 (d, J = 8.7 Hz, 1 H), 7.80 (s, 1 H), 6.65 (d, J = 9.5 Hz, 1 H), 3.95 (s, 3 H), 3.86 (s, 6 H), 3.45 (q, J= 6.5 Hz, 4 H), 2.72 (s, 1 H), 1.64 (sextet, J = 9.2 Hz, 4 H), 1.05 (t, J = 7.2 Hz, 6 H);
LC-MS (EI) for C25H31ClN6O5 (M + H+): m/z = 531.19, Exact Mass: 530.2044.
< 실시예 3> tert -부틸 4-(4-((4-(3,4- 비스 ( 프로필카바모일 )-1 H - 퍼롤 -1-일)-5-클 로로피리미 딘-2-일)아미노)-5- 이소프로폭시 -2- 메틸페닐 )피페리딘-1- 카복시레이트의 제조
Figure 112014096079987-pat00023
2,3,4-트리메톡시아닐린을 사용하는 대신에, tert-부틸 4-(4-아미노-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-카복시레이트를 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 수행하여 목적 화합물을 얻었다(24 mg, 55%).
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.45 (s, 1 H), 8.23 (s, 2 H), 8.12 (s, 1 H), 8.05 (br, 2 H), 7.74 (s, 1 H), 6.73 (s, 1 H), 4.58 (quintet, J = 7.5 Hz 1 H), 4.25-4.29 (br, 1 H), 3.59-3.64 (m, 1 H), 3.38 (q, J = 6.6 Hz, 4 H), 2.82 (t, J = 1.9 Hz, 3 H), 2.35 (s, 3 H), 1.59-1.77 (m, 8 H), 1.49 (s, 9 H), 1.38 (d, J = 5.7 Hz, 6 H) 0.99 (t, J = 7.8 Hz, 6 H);
LC-MS (EI) for C36H50ClN7O5 (M + H+): m/z = 696.25, Exact Mass: 695.3562.
< 실시예 4> 1-(5- 클로로 -2-((2- 이소프로폭시 -5- 메틸 -4-(피페리딘-4-일) 페닐 )아미노)피리미딘-4-일)- N 3 , N 4 - 디프로필 -1 H - 퍼롤 -3,4- 디카르복시아미드의 제조
Figure 112014096079987-pat00024
CH2Cl2에 용해된, 상기 실시예 3에서 제조한 tert-부틸 4-(4-((4-(3,4-비스(프로필카바모일)-1H-퍼롤-1-일)-5-클로로피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-카복시레이트 (5 mg, 0.007 mmol)가 들어있는 바이알(vial)에 트리플루오로아세트산(TFA) (1.0 mL)를 0℃에서 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 3시간 동안 상온에서 교반하고, 진공 하에서 농축한 후, C18 컬럼을 사용한 고성능 액체 크로마토그래피(High-performance liquid chromatography, HPLC)를 통해 정제하여 목적 화합물을 2 트리플루오로아세트산 염(Trifluoroacetic acid salt, TFA 염) 형태로 얻었다(5.3 mg, 90%).
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8.35 (s, 1 H), 8.20 (s, 2 H), 8.12 (s, 1 H), 8.05 (br, 2 H), 7.74 (s, 1 H), 6.73 (s, 1 H), 4.58 (m, 2 H), 4.21-4.34 (br, 1 H), 3.55-3.62 (m, 1 H), 3.40 (q, J = 6.5 Hz, 4 H), 2.82 (t, J = 2.0 Hz, 3 H), 2.35 (s, 3 H), 1.59-1.77 (m, 8 H), 1.33 (d, J = 6.5 Hz, 6 H) 0.92 (t, J = 7.5 Hz, 6 H);
LC-MS (EI) for C31H42ClN7O3 (M + H+): m/z = 596.19, Exact Mass: 595.3038.
< 실시예 5> tert -부틸 6-((4-(3,4- 비스 ( 프로필카바모일 )-1 H - 퍼롤 -1-일)-5- 클로로피리미딘 -2-일)아미노)-7- 메톡시 -3,4- 디하이드로이소퀴놀린 -2(1 H )- 카복시레이 트의 제조
Figure 112014096079987-pat00025
2,3,4-트리메톡시아닐린을 사용하는 대신에, tert-부틸 6-아미노-7-메톡시-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-카복시레이트를 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 수행하여 목적 화합물을 얻었다(15 mg, 28%).
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.43 (s,1 H), 8.20 (s, 2 H), 8.05 (s, 1 H), 7.79 (s, 1 H), 6.58 (s, 1 H), 4.51 (s, 2 H), 3.88 (s, 3 H), 3.59-3.64 (m, 2 H), 3.38 (q, J = 6.7 Hz, 4 H), 2.82 (t, J = 2.0 Hz, 2 H), 1.59-1.71 (sextet, J = 6.3 Hz, 6 H), 1.49 (s, 9 H), 1.01 (t, J = 7.3 Hz, 6 H);
LC-MS (EI) for C31H40ClN7O5 (M + H+): m/z = 626.17, Exact Mass: 625.2779.
< 실시예 6> 1-(5- 클로로 -2-((7- 메톡시 -1,2,3,4- 테트라하이드로이소퀴놀린 -6-일)아미노)피리미딘-4-일)- N3 , N4 - 디프로필 -1 H - 퍼롤 -3,4- 디카르복시아미드의 제조
Figure 112014096079987-pat00026
상기 실시예 3에서 제조한 tert-부틸 4-(4-((4-(3,4-비스(프로필카바모일)-1H-퍼롤-1-일)-5-클로로피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-카복시레이트를 사용하는 대신에, 상기 실시예 5에서 제조한 tert-부틸 6-((4-(3,4-비스(프로필카바모일)-1H-퍼롤-1-일)-5-클로로피리미딘-2-일)아미노)-7-메톡시-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-카복시레이트를 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 4와 동일한 방법으로 수행하여 목적 화합물을 2 트리플루오로아세트산 염(Trifluoroacetic acid salt, TFA 염) 형태로 얻었다(4.3 mg, 92%).
LC-MS (EI) for C26H32ClN7O3 (M + H+): m/z = 526.32, Exact Mass: 525.2255.
< 실시예 7> 1-(5- 클로로 -2-((2,3,4- 트리메톡시페닐 )아미노)피리미딘-4-일)- N3,N4 -비스(4- 메틸벤질 )-1 H - 퍼롤 -3,4- 디카르복시아미드의 제조
단계 1 : N3 , N4 - 비스 (4- 메틸벤질 )-1 H - 퍼롤 -3,4- 디카르복시아미드의 제조
Figure 112014096079987-pat00027
디에틸 1H-퍼롤-3,4-디카르복시레이트 (400 mg, 1.89 mmol) 및 과량의 4-메틸 벤질아민을 함께 혼합하였다. 상기 반응 혼합물을 180℃에서 100분 동안 마이크로파(microwave)로 조사하였다. 반응이 완료되면, EtOAc 및 포화 NaHCO3 용액을 사용하여 층 분리를 수행하였다. 수용액 층은 EtOAc를 사용하여 세 번 추출하였다. 수집된 유기층은 브라인 및 물로 세척하고, 무수 MgSO4로 건조하였다. 상기 용매는 진공 하에서 제거하였다. 조 생성물(crude product)은 디클로로메탄/아세톤 (5:1)과 실리카 겔을 사용한 중압액체크로마토그래피(Medium Pressure Liquid Chromatography, MPLC)로 정제하여 목적 화합물을 40% 수율로 얻었다.
1H NMR (300 MHz, acetone-d 6 ) δ 10.84 (s, 1 H), 9.51 (br, 2 H), 7.55 (d, J = 1.5 Hz, 2 H), 7.21 (d, J = 7.4 Hz, 4 H), 7.09 (d, J = 7.5 Hz, 4 H), 4.47 (d, J = 5.6 Hz, 4 H), 2.27 (s, 6 H);
13C NMR (75 MHz, Acetone-d 6 ) 205.6, 164.9, 136.9, 136.1, 128.9, 127.5, 124.5, 118.2, 42.4, 20.2;
LC-MS (EI) for C22H23N3O2 (M + H+): m/z = 362.16, Exact Mass: 361.1790.
단계 2 : 1-(2,5- 디클로로피리미딘 -4-일)- N3 , N4 - 비스 (4- 메틸벤질 )-1 H - 퍼롤 -3,4- 디 카르복시아미드의 제조
Figure 112014096079987-pat00028
반응 플라스크에 상기 단계 1에서 제조한 N3 , N4-비스(4-메틸벤질)-1H-퍼롤-3,4-디카르복시아미드 (100 mg, 0.28 mmol) 및 건조 DMF (4.0 mL)에 용해된 무수 Cs2CO3 (228 mg, 0.70 mmol)를 첨가한 후, 5분 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물에 2,4,5-트리클로로피리미딘 (102 mg, 0.55 mmol)을 첨가하고, 35℃에서 90시간 동안 교반하였다. 반응은 LC-MS를 통하여 모니터링 하였다. 반응이 완료되면, EtOAc 및 포화 NaHCO3 용액을 사용하여 층 분리를 수행하였다. 수용액 층은 EtOAc를 사용하여 세 번 추출하였다. 수집된 유기층은 브라인으로 세척하고, Na2SO4로 건조한 후, 필터하고, 용매는 진공 하에서 제거하였다. 조 생성물(crude product)은 헥산/에틸 아세테이트 (5:1)과 실리카 겔을 사용한 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적 화합물을 무색의 고체 형태로 얻었다(109 mg, 78%).
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.64 (s, 1 H), 8.49-8.40 (m, 2 H), 8.27 (s, 2 H), 7.25-7.23 (m, 4 H), 7.15-7.12 (m, 4 H), 4.55 (d, J = 8.5 Hz, 4 H), 2.33 (s, 6 H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3), 163.6, 162.2, 158.5, 152.9, 137.1, 135.1, 129.4, 127.8, 125.4, 121.8, 118.5, 43.6, 21.3;
LC-MS (EI) for C26H23Cl2N5O2 (M + H+): m/z = 508.19 Exact Mass: 507.1229.
단계 3 : 1-(5- 클로로 -2-((2,3,4- 트리메톡시페닐 )아미노)피리미딘-4-일)- N3,N4 -비스(4- 메틸벤질 )-1 H - 퍼롤 -3,4- 디카르복시아미드의 제조
Figure 112014096079987-pat00029
반응 플라스크에 상기 단계 2에서 제조한 1-(2,5-디클로로피리미딘-4-일)-N3,N4-비스(4-메틸벤질)-1H-퍼롤-3,4-디카르복시아미드 (60 mg, 0.12 mmol) 및 1,4-디옥산 (4 mL)에 용해된 p-톨루엔술폰산 일수화물 (18 mg, 0.09 mmol)을 첨가하고, 상온에서 5분 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물에 2,3,4-트리메톡시아닐린 (33 mg, 0.18 mmol)을 첨가하고, 24시간 동안 80℃로 가열하였다. 반응은 LC-MS를 통하여 모니터링 하였다. 반응이 완료되면, 포화 NaHCO3 용액을 첨가하여 반응을 종결시켰다. 유기 용매를 진공 하에서 제거한 후, 포화 NaHCO3 용액을 첨가하였다. 수용액 층은 EtOAc를 사용하여 세 번 추출하였다. 유기층을 수집한 후, 브라인으로 세척하고, Na2SO4로 건조한 후, 필터하고, 진공 하에서 농축하였다. 조 생성물(crude product)은 헥산/에틸 아세테이트 (5:1)과 실리카 겔을 사용한 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적 화합물을 무색의 고체 형태로 얻었다(2.50 g, 90%).
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.42 (s, 1 H), 8.35-8.40 (br, 2 H), 8.20 (s, 2 H), 7.91 (d, J = 9.0 Hz, 1 H), 7.63 (br, 1 H), 7.24-7.25 (m, 4 H), 7.12-7.15 (m, 4 H), 6.65 (d, J = 9.1 Hz, 1 H), 4.57 (d, J = 5.6 Hz, 4 H), 3.95 (s, 3 H), 3.88 (s, 3 H), 3.83 (s, 3 H), 2.33 ( s, 6 H);
LC-MS (EI) for C35H35ClN6O5 (M + H+): m/z = 655.30, Exact Mass: 654.2357.
< 실시예 8> 1-(5- 클로로 -2-((3,4,5- 트리메톡시페닐 )아미노)피리미딘-4-일)- N3,N4 -비스(4- 메틸벤질 )-1 H - 퍼롤 -3,4- 디카르복시아미드의 제조
Figure 112014096079987-pat00030
2,3,4-트리메톡시아닐린을 사용하는 대신에, 3,4,5-트리메톡시벤젠아민을 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 7과 동일한 방법으로 수행하여 목적 화합물을 얻었다(205 mg, 72%).
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.45 (s, 1 H), 8.37-8.44 (br, 2 H), 8.22 (s, 2 H), 7.93 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 7.62 (br, 1 H), 7.23-7.26 (m, 4 H), 7.11-7.16 (m, 4 H), 6.66 (d, J = 9.5 Hz, 1 H), 4.56 (d, J = 6.5 Hz, 4 H), 3.97 (s, 3 H), 3.90 (s, 3 H), 3.88 (s, 3 H), 2.35 ( s, 6 H);
LC-MS (EI) for C35H35ClN6O5 (M + H+): m/z = 655.27, Exact Mass: 654.2357.
< 실시예 9> tert -부틸 6-((4-(3,4- 비스 ((4- 메틸벤질 ) 카바모일 )-1 H - 퍼롤 -1-일)-5- 클로로피리미딘 -2-일)아미노)-7- 메톡시 -3,4- 디하이드로이소퀴놀린 -2(1 H )-카복시레이트의 제조
Figure 112014096079987-pat00031
2,3,4-트리메톡시아닐린을 사용하는 대신에, tert-부틸 6-아미노-7-메톡시-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-카복시레이트를 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 7과 동일한 방법으로 수행하여 목적 화합물을 얻었다(18 mg, 32%).
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.42 (s, 1 H), 8.350-8.38 (br, 2 H), 8.23 (s, 2 H), 8.06 (s, 1 H), 7.75 (br, 1 H), 7.24-7.27 (m, 4 H), 7.13-7.15 (m, 4 H), 6.60 (s, 1 H), 4.57 (d, J =5.9 Hz, 4 H), 3.88 (s, 3 H), 3.59-3.63 (m, 4 H), 2.75 (t, J = 5.5 Hz, 2 H), 2.33 (s, 6 H), 1.49 (s, 9 H);
LC-MS (EI) for C41H44ClN7O5 (M + H+): m/z = 750.15, Exact Mass: 749.3092.
< 실시예 10> 1-(5- 클로로 -2-((7- 메톡시 -1,2,3,4- 테트라하이드로이소퀴놀린 -6-일)아미노)피리미딘-4-일)- N3 , N4 - 비스 (4- 메틸벤질 )-1 H - 퍼롤 -3,4- 디카르복시아미 드의 제조
Figure 112014096079987-pat00032
상기 실시예 3에서 제조한 tert-부틸 4-(4-((4-(3,4-비스(프로필카바모일)-1H-퍼롤-1-일)-5-클로로피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-카복시레이트를 사용하는 대신에, 상기 실시예 9에서 제조한 tert-부틸 6-((4-(3,4-비스((4-메틸벤질)카바모일)-1H-퍼롤-1-일)-5-클로로피리미딘-2-일)아미노)-7-메톡시-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-카복시레이트를 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 4와 동일한 방법으로 수행하여 목적 화합물을 2 트리플루오로아세트산 염(Trifluoroacetic acid salt, TFA 염) 형태로 얻었다(6.1 mg, 87%).
LC-MS (EI) for C36H36ClN7O3 (M + H+): m/z = 650.15, Exact Mass: 650.2568.
< 실시예 11> tert -부틸 4-(4-((4-(3,4-비스((4-메틸벤질)카바모일)-1 H -퍼롤-1-일)-5-클로로피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-2-메틸페닐)피페리딘-1-카복시레이트의 제조
Figure 112014096079987-pat00033
2,3,4-트리메톡시아닐린을 사용하는 대신에, tert-부틸 4-(4-아미노-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-카복시레이트를 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 7과 동일한 방법으로 수행하여 목적 화합물을 얻었다(37 mg, 49%).
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.44 (s, 1 H), 8.33 (br, 1 H), 8.31 (s, 2 H), 8.24 (s, 1 H), 8.08 (br, 1 H), 7.71 (s, 1 H), 7.24-7.25 (m, 4 H), 7.12-7.15 (m, 2 H), 6.71 (s, 1 H), 4.57 (m, 2 H), 4.40-4.44 ( m, 2 H), 3.58-3.64 (br, 2 H), 2.79-2.83 (m, 2 H), 2.34 (s, 6 H), 2.23 (s, 3 H), 1.64-1.71 (m, 8 H), 1.49 (s, 9 H), 1.25 (m, 6 H);
LC-MS (EI) for C46H54ClN7O5 (M + H+): m/z = 820.35, Exact Mass: 819.3875.
< 실시예 12> 1-(5- 클로로 -2-((2- 이소프로폭시 -5- 메틸 -4-(피페리딘-4-일) 페닐 )아미노)피리미딘-4-일)- N3 , N4 - 비스 (4- 메틸벤질 )-1 H - 퍼롤 -3,4- 디카르복시아미드 의 제조
Figure 112014096079987-pat00034
상기 실시예 3에서 제조한 tert-부틸 4-(4-((4-(3,4-비스(프로필카바모일)-1H-퍼롤-1-일)-5-클로로피리미딘-2-일)아미노)-5-이소프로폭시-2-메틸페닐)피페리딘-1-카복시레이트를 사용하는 대신에, 상기 실시예 11에서 제조한 tert-부틸 4-(4-((4-(3,4-비스((4-메틸벤질)카바모일)-1H-퍼롤-1-일)-5-클로로피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-2-메틸페닐)피페리딘-1-카복시레이트를 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 4와 동일한 방법으로 수행하여 목적 화합물을 2 트리플루오로아세트산 염(Trifluoroacetic acid salt, TFA 염) 형태로 얻었다(7.2 mg, 78%).
하기 표 1에 실시예 1-12에서 제조한 화합물의 화학구조식을 정리하여 나타내었다.
실시예 화학구조식 실시예 화학구조식
1
Figure 112014096079987-pat00035
 7
Figure 112014096079987-pat00036
2
Figure 112014096079987-pat00037
 8
Figure 112014096079987-pat00038
3
Figure 112014096079987-pat00039
 9
Figure 112014096079987-pat00040
4
Figure 112014096079987-pat00041
 10
Figure 112014096079987-pat00042
5
Figure 112014096079987-pat00043
 11
Figure 112014096079987-pat00044
6
Figure 112014096079987-pat00045
 12
Figure 112014096079987-pat00046
< 실험예 1> 역형성 림프종 키나아제 ( ALK ) 억제활성 평가 1
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 4-(1-퍼롤-3,4-디카르복사아미드)피리미딘 유도체의 역형성 림프종 키나아제(Anaplastic Lymphoma Kinase, ALK) 억제 활성을 효소단계에서 측정하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.
구체적으로, 역형성 림프종 키나아제(ALK)에 대한 저해활성을 측정하기 위하여 그레이너 96 웰 라운드 형 바닥 플레이트에 실시예 1-12에서 제조된 화합물을 10 μM 농도로 가하고, 역형성 림프종 키나아제(ALK) 효소(1 ㎕)와 바이오틴이 붙은 펩타이드 기질(2 ㎕)을 15분 동안 혼합하여 배양하였다. 여기에 ATP 용액(5 ㎕)을 가하여 상온에서 30분 동안 키나아제 반응을 수행하였다. 에틸렌다이아민테트라아세트산 용액에 용해된, 스트렙트아비딘이 붙은 엑스엘(XL 665)(5 ㎕)와 유로피움(Eu3 +)이 붙은 항-포스포타이로신 항체(5 ㎕)를 반응액에 첨가하여 반응을 중지시키고 1시간 동안 배양한 후, 시간분해형광도(Homogeneous Time-resolved fluorescence, HTRF, Cisbio)를 이용하여 분석하였다. 왈락 인비전 2103(Wallac Envision 2103) 기기로 615/665 nm의 파장 범위에서 판독하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
실시예 ALK
wt. %inh @
10 μM
1 8.1
2 29
3 0
4 29
5 14
6 32
7 0
8 74
9 4.4
10 17
11 10
12 47
상기 표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 2, 4, 6, 8 및 12에서 제조한 화합물은 낮은 농도에서(10 μM) 역형성 림프종 키나아제(ALK) 효소활성을 유효하게 감소시키는 것으로 나타났으며, 특히 실시예 8에서 제조한 화합물은 역형성 림프종 키나아제(ALK) 효소활성을 74% 억제하는 것으로 나타나 우수한 억제활성을 갖는 것을 확인하였다.
따라서, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 4-(1-퍼롤-3,4-디카르복사아미드)피리미딘 유도체는 역형성 림프종 키나아제(ALK) 활성을 억제하는 효과가 우수하므로 비소세포폐암, 신경모세포종, 염증성 골수섬유모세포종양, 종횡문근육종, 근섬유모세포종, 유방암, 위암, 폐암, 흑색종 등의 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
< 실험예 2> 역형성 림프종 키나아제 ( ALK ) 억제활성 평가 2
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 4-(1-퍼롤-3,4-디카르복사아미드)피리미딘 유도체의 역형성 림프종 키나아제(Anaplastic Lymphoma Kinase, ALK) 억제 활성을 세포단계에서 측정하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.
구체적으로, 비소세포폐암세포인 H3122 4,000개를 96 웰 플레이트의 각 웰에 100 ㎕의 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지와 함께 분주하였다. 하루 뒤, 세포가 있는 각 웰에 10 μM, 2 μM, 0.4 μM, 0.08 μM, 0.0016 μM, 0.00032 μM이 되도록 각 화합물을 첨가하였다. 화합물을 넣지 않은 웰에는 DMSO(디메틸 설폭사이드)를 화합물과 동일한 양만큼 첨가하였다. 화합물을 첨가하고 3일이 지난 후, DMEM 배지를 제거하고, 10% TCA(트리클로로아세트산)를 첨가하여 세포를 고정시킨 후, 흐르는 물에 웰을 세 차례에 걸쳐 세척하고, SRB 용액(1× 설포로다민 B)을 첨가하여 살아있는 세포를 염색한 후, 흡광도를 측정함으로써 살아있는 세포의 양을 계산하였다. 상기 실험을 수행한 시험화합물의 IC50은 프리즘(버전 5.01, 그래프패드) 소프트웨어를 이용하여 구현하였다. 역형성 림프종 키나아제(ALK) 효소를 포함하고 있는 비소세포폐암세포인 H3122 CP의 세포활성을 50%로 감소시키는 상기 화합물의 IC50을 하기 표 3에 나타내었다.
실시예 H3122 CP
IC50 (μM)
1 >10
2 3.2
3 >10
4 4.4
5 >10
6 5.2
7 >10
8 >10
9 >10
10 >10
11 2.3
12 >10
상기 표 3에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 2, 4, 6 및 11에서 제조한 화합물은 낮은 농도에서(<10 μM) 역형성 림프종 키나아제(ALK) 효소를 포함하고 있는 비소세포폐암세포인 H3122 CP의 세포활성을 50%로 감소(IC50)시키는 것으로 나타났다. 특히, 실시예 11에서 제조한 화합물은 2.3 μM의 매우 낮은 농도에서 H3122 CP의 세포활성을 50%로 감소시키는 것으로 확인하였다.
따라서, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 4-(1-퍼롤-3,4-디카르복사아미드)피리미딘 유도체는 역형성 림프종 키나아제(ALK) 활성을 억제하는 효과가 우수하므로 비소세포폐암, 신경모세포종, 염증성 골수섬유모세포종양, 종횡문근육종, 근섬유모세포종, 유방암, 위암, 폐암, 흑색종 등의 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
< 제제예 1> 약학적 제제의 제조
1-1. 산제의 제조
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
1-2. 정제의 제조
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물 100 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
1-3. 캡슐제의 제조
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물 100 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
1-4. 과립의 제조
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물 150 mg
대두추출물 50 mg
포도당 200 mg
전분 600 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎕을 첨가하여 섭씨 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.

Claims (10)

  1. 하기 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    (2) 1-(5-클로로-2-((3,4,5-트리메톡시페닐)아미노)피리미딘-4-일)-N3,N4-디프로필-1H-피롤-3,4-디카르복시아미드;
    (4) 1-(5-클로로-2-((2-이소프로폭시-5-메틸-4-(피페리딘-4-일)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-N3,N4-디프로필-1H-피롤-3,4-디카르복시아미드;
    (6) 1-(5-클로로-2-((7-메톡시-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-일)아미노)피리미딘-4-일)-N3,N4-디프로필-1H-피롤-3,4-디카르복시아미드; 및
    (11) tert-부틸 4-(4-((4-(3,4-비스((4-메틸벤질)카바모일)-1H-피롤-1-일)-5-클로로피리미딘-2-일)아미노)-5-메톡시-2-메틸페닐)피페리딘-1-카복시레이트.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,
    화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
    상기 단계 1에서 제조한 화학식 4로 표시되는 화합물과 화학식 5로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 6으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2); 및
    상기 단계 2에서 제조한 화학식 6으로 표시되는 화합물과 화학식 7로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3);를 포함하는 제1항의 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물의 제조방법:
    [반응식 1]
    Figure 112016007361277-pat00052

    (상기 반응식 1에서,
    R1, R2, X, Z1, Z2, Z3 및 Z4는 제1항의 화합물 명에서 정의된 바와 같다).
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 제1항의 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 비소세포 폐암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 역형성 림프종 키나아제(Anaplastic Lymphoma Kinase, ALK) 활성을 억제하여 비소세포 폐암세포의 발현 및 성장을 억제하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  10. 삭제
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