JPS602199A - α−アミラ−ゼ活性測定法 - Google Patents
α−アミラ−ゼ活性測定法Info
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- JPS602199A JPS602199A JP11129683A JP11129683A JPS602199A JP S602199 A JPS602199 A JP S602199A JP 11129683 A JP11129683 A JP 11129683A JP 11129683 A JP11129683 A JP 11129683A JP S602199 A JPS602199 A JP S602199A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、共役酵素法を利用するα−アミラーゼ活性測
定試薬に関するものである。
定試薬に関するものである。
血清、尿、悴液等の体液を対象とするα−アミラーゼ活
性の測定は臨床診断上重要な意義を有しており、特に急
性或は慢性の膵炎、悴臓癌−更には流行性耳下腺炎等の
鑑別診断に当っては必須の測定項目となっている。
性の測定は臨床診断上重要な意義を有しており、特に急
性或は慢性の膵炎、悴臓癌−更には流行性耳下腺炎等の
鑑別診断に当っては必須の測定項目となっている。
従来提供されているα−アミラーゼ活性の測定試薬は〜
次に示す様な測定原理を利用するものとして分類するこ
とができる。
次に示す様な測定原理を利用するものとして分類するこ
とができる。
（１）ヨードデンプン反応を利用するアミロクラスツカ
ロジエニツク法 （８）色素結合デンプンからの遊離色素を測定するクロ
モジェニック法 （４）デンプンによる濁りを測定するタービドメトリッ
ク法 これらの方法における使用基質は、デンプン１その修飾
体−或はデンプンから誘導されるアミロースやアミロペ
クチン等であり、いずれの場合も天然のデンプンに頼る
ものである。しかし天然デンプンの場合はその品質・性
状が一定せず一α−アミラーゼ活性測定値に対する信頼
性が低くならざるを得ないという欠点があると共に、α
−アミラーゼによる鎖切断と測定される特性値との間の
凰的関係が不明確であり、更には測定操作が繁雑である
という問題もあった。
ロジエニツク法 （８）色素結合デンプンからの遊離色素を測定するクロ
モジェニック法 （４）デンプンによる濁りを測定するタービドメトリッ
ク法 これらの方法における使用基質は、デンプン１その修飾
体−或はデンプンから誘導されるアミロースやアミロペ
クチン等であり、いずれの場合も天然のデンプンに頼る
ものである。しかし天然デンプンの場合はその品質・性
状が一定せず一α−アミラーゼ活性測定値に対する信頼
性が低くならざるを得ないという欠点があると共に、α
−アミラーゼによる鎖切断と測定される特性値との間の
凰的関係が不明確であり、更には測定操作が繁雑である
という問題もあった。
そこでこれらの欠点を伴わない方法として・共役酵素法
が注目され、次に述べる様な測定方法が考えられている
。
が注目され、次に述べる様な測定方法が考えられている
。
（Ａ）デンプンＮデキストリン或はオリゴ糖を基質とし
、α−アミラーゼによる罐切断を行なった後１追随酵素
系としてα−グルコシダーゼを作用させることによって
７ラグメントからグルコースを遊離させ１このグルコー
スを公知の手段によって測定する方法。
、α−アミラーゼによる罐切断を行なった後１追随酵素
系としてα−グルコシダーゼを作用させることによって
７ラグメントからグルコースを遊離させ１このグルコー
スを公知の手段によって測定する方法。
（Ｂ）デンプンＮデキストリン或はオリゴ糖を基質とし
１α−アミラーゼによる鎖切断で生成するマルトースを
、追随酵素（マルトースホスホリラーゼ）の作用によっ
て分解し、生成したグルコース−１−％酸を更にホスホ
グルコシダーゼの作用によって分解し、ここに生成した
グルコース−６−燐酸の量を、グルコース−６−燐酸脱
水素酵素及び補酵素の存在下、紫外部吸光度測定法によ
って測定する方法。
１α−アミラーゼによる鎖切断で生成するマルトースを
、追随酵素（マルトースホスホリラーゼ）の作用によっ
て分解し、生成したグルコース−１−％酸を更にホスホ
グルコシダーゼの作用によって分解し、ここに生成した
グルコース−６−燐酸の量を、グルコース−６−燐酸脱
水素酵素及び補酵素の存在下、紫外部吸光度測定法によ
って測定する方法。
（０）ホスホリラーゼ及びβ−アミラーゼを用いて調製
したリミットデキストリンを基質とし、α−アミラーゼ
の作用で生成したフラグメントにマルトデキストリンホ
スホリラーゼを作用させてグルコース−１−燐酸を遊離
せしめ・これを上記（Ｂ）の方法で測定する方法。
したリミットデキストリンを基質とし、α−アミラーゼ
の作用で生成したフラグメントにマルトデキストリンホ
スホリラーゼを作用させてグルコース−１−燐酸を遊離
せしめ・これを上記（Ｂ）の方法で測定する方法。
（Ｄ）カルボキシメチル化等の修飾を施したデンプンを
基質とし％α−アミラーゼの作用で生成したフラグメン
トにグルコアミラーゼを作用させ、ここに生成したグル
コースを公知の手段によって測定する方法。
基質とし％α−アミラーゼの作用で生成したフラグメン
トにグルコアミラーゼを作用させ、ここに生成したグル
コースを公知の手段によって測定する方法。
（匂Ｐ−ニトロフェニル基を還元末端にグルコシド結合
させたマルトオリゴ糖を基質とし、α−アミラーゼによ
る鎖切断の後１追随酵素としてグルコシダーゼを作用さ
せ、ここに生成したＰ−二）ロフェノールを比色定量す
る方法（特開昭５７−５３０７９号公報）。
させたマルトオリゴ糖を基質とし、α−アミラーゼによ
る鎖切断の後１追随酵素としてグルコシダーゼを作用さ
せ、ここに生成したＰ−二）ロフェノールを比色定量す
る方法（特開昭５７−５３０７９号公報）。
（Ｆ）置換或は非置換フェニル基を還元末端にグルコシ
ド結合させたマルトオリゴ糖を基質とし１α−アミラー
ゼによる鎖切断の後、追随酵素としてグルコシダーゼを
作用させ−ここに遊離したフェノール類に４−アミノア
ンチピリン等の色原体を酸化縮合させ、生成した色素を
比色定量する方法。
ド結合させたマルトオリゴ糖を基質とし１α−アミラー
ゼによる鎖切断の後、追随酵素としてグルコシダーゼを
作用させ−ここに遊離したフェノール類に４−アミノア
ンチピリン等の色原体を酸化縮合させ、生成した色素を
比色定量する方法。
上記（Ａ）〜（Ｆ）の共役酵素法においても、天然デン
プンを利用するもの（デキストリン１リミツトデキスト
リン或は修飾デンプン等を基質とする場合を含む）では
Ｎ前記（１）〜（４）において述べたのと同様の欠陥が
ある。しかしオリゴ糖自体、若しくはこれの末端基に発
色基（アグリコン）をグルコシド結合させたものを基質
とする場合は、構造式が明確に把握され且つ高度に精製
されたものを使用するので、天然デンプンの場合に述べ
た様な変動がなく１α−アミラーゼによる鎖切断回数と
計測特性値との間の化学量論的な関係も明確となり、高
精度で信頼性の高い結果を得ることができる。
プンを利用するもの（デキストリン１リミツトデキスト
リン或は修飾デンプン等を基質とする場合を含む）では
Ｎ前記（１）〜（４）において述べたのと同様の欠陥が
ある。しかしオリゴ糖自体、若しくはこれの末端基に発
色基（アグリコン）をグルコシド結合させたものを基質
とする場合は、構造式が明確に把握され且つ高度に精製
されたものを使用するので、天然デンプンの場合に述べ
た様な変動がなく１α−アミラーゼによる鎖切断回数と
計測特性値との間の化学量論的な関係も明確となり、高
精度で信頼性の高い結果を得ることができる。
この様な観点からすると、（Ａ）、（Ｂ） 、（Ｂ）及
び（Ｅ）法が良いことになるが１体液特に血清及び尿中
にはグルコースやマルトースが存在する為１これらを反
応中間体として経由する方法（（Ａ） 、 （Ｅ）及び
ＣＤ）〕では、計測特性値が高めにあられれ、レート法
（ＲａｔｅＡｓｓａｙ ）等の特殊な消去法を用いても
それらの影響を完全に解消することは困難である。
び（Ｅ）法が良いことになるが１体液特に血清及び尿中
にはグルコースやマルトースが存在する為１これらを反
応中間体として経由する方法（（Ａ） 、 （Ｅ）及び
ＣＤ）〕では、計測特性値が高めにあられれ、レート法
（ＲａｔｅＡｓｓａｙ ）等の特殊な消去法を用いても
それらの影響を完全に解消することは困難である。
以上の如き観点からα−アミラーゼ測定に使用する基質
としてはオリゴ糖の還元性末端に発色基（解裂して基質
とは異なったスペクトル吸収を示す置換芳香族基）をグ
ルコシド結合させたものがよい。ところが４−ニトロフ
ェニル基を還元性末端にグルコシド結合させたマルトオ
リゴ糖を基質とした場合、いろいろな問題点が明確にな
ってきた。その１つは血中又は尿中のαアミラーゼは至
適用が６．６〜７．０にあるのに対し、４−二）四ツ最
大である。また温度上昇で、ε上昇塩化す） ＩＪウム
景上昇でε上昇、アルブミン量上昇でε上昇するという
ような問題点−更に４−ニトロフェノールを用いたアミ
ラーゼ活性測定試薬での感度が不足するという問題点な
どがあげられる。
としてはオリゴ糖の還元性末端に発色基（解裂して基質
とは異なったスペクトル吸収を示す置換芳香族基）をグ
ルコシド結合させたものがよい。ところが４−ニトロフ
ェニル基を還元性末端にグルコシド結合させたマルトオ
リゴ糖を基質とした場合、いろいろな問題点が明確にな
ってきた。その１つは血中又は尿中のαアミラーゼは至
適用が６．６〜７．０にあるのに対し、４−二）四ツ最
大である。また温度上昇で、ε上昇塩化す） ＩＪウム
景上昇でε上昇、アルブミン量上昇でε上昇するという
ような問題点−更に４−ニトロフェノールを用いたアミ
ラーゼ活性測定試薬での感度が不足するという問題点な
どがあげられる。
本発明者らはこれらの状況を考慮して種々研究（Ｘおよ
びＹは個々にＨ，ハロゲンより選ばれ１同時にＨではな
い）よりなる群から選ばれた置換芳香族基が１還元性末
端に結合したマルトオリゴ糖を基質として使用すれば−
これらの欠点が解決できることを知り、本発明を完成す
るに到った。
びＹは個々にＨ，ハロゲンより選ばれ１同時にＨではな
い）よりなる群から選ばれた置換芳香族基が１還元性末
端に結合したマルトオリゴ糖を基質として使用すれば−
これらの欠点が解決できることを知り、本発明を完成す
るに到った。
すなわち本発明は次式：
で表わされる基質にａ−グルコシダーゼまたはα−グル
コシダーゼおよびβ−グルコシダーゼおよび試料を添加
し、遊離するアグリコンの可視部の吸収を測定すること
により１試料中のアミラーゼ活性を測定することを特徴
とするアミラーゼ活性測定法である。
コシダーゼおよびβ−グルコシダーゼおよび試料を添加
し、遊離するアグリコンの可視部の吸収を測定すること
により１試料中のアミラーゼ活性を測定することを特徴
とするアミラーゼ活性測定法である。
測定方法としてはα−アミラーゼの反応を連続的に追跡
するレート法（Ｒａｔｅ Ａｓ５ａｙ）、一定時間反応
させた後、反応を止めて測定するエンド法＼いずれの方
法を用いてもよい。
するレート法（Ｒａｔｅ Ａｓ５ａｙ）、一定時間反応
させた後、反応を止めて測定するエンド法＼いずれの方
法を用いてもよい。
本発明におけるマルトオリゴ糖は、マルトペンタオース
、マルトヘキサオース、マルトヘプタオマルトオリゴ糖
とその還元性末端にαまたはβ結合し、グルコシダーゼ
により容易に遊離し、定量が容易なものであればいずれ
でもよい。遊離する化合物としては、たとえば２−クロ
ロ−４−二トロフェノール−２，６−シクロロー４−二
トロフェノール、Ｊ６−ジプロモー４−二トロフェノー
ル１２−ブロモ−４−二トロフェノールなどがアル。
、マルトヘキサオース、マルトヘプタオマルトオリゴ糖
とその還元性末端にαまたはβ結合し、グルコシダーゼ
により容易に遊離し、定量が容易なものであればいずれ
でもよい。遊離する化合物としては、たとえば２−クロ
ロ−４−二トロフェノール−２，６−シクロロー４−二
トロフェノール、Ｊ６−ジプロモー４−二トロフェノー
ル１２−ブロモ−４−二トロフェノールなどがアル。
還元性末端にα結合したものは溶解性が悪いのに対しβ
結合したものは溶解性がよいので特に好ましい。
結合したものは溶解性がよいので特に好ましい。
本発明に用いる試薬の安定化のため塩化カルシウム等を
添加することが好ましい。また１血清中の抗凝固剤とし
てしばしば用いられるＥＤＴＡが存２＋ 在するとアミラーゼは不安定となるが、ｏａ イオンが
存在することによってアミラーゼは安定化される。
添加することが好ましい。また１血清中の抗凝固剤とし
てしばしば用いられるＥＤＴＡが存２＋ 在するとアミラーゼは不安定となるが、ｏａ イオンが
存在することによってアミラーゼは安定化される。
本発明では血清または尿のような試料中のアミラーゼ活
性を次の反応によって測定する。
性を次の反応によって測定する。
（２−クロロ−４−ニトロフェニル）マルトペンタオサ
イド↓α−アミラーゼ ゼ ク）レコース ＋ ２−クロロ−４−二トロフェノール
↓ ０Ｈ− ２−クロロ−４−二トロフエノ−ルアニオンχｍａＸ４
００ｎｍ 通常すべての酵素反応におけるように反応溶液を一定の
田、一定の濃度に保持する。
イド↓α−アミラーゼ ゼ ク）レコース ＋ ２−クロロ−４−二トロフェノール
↓ ０Ｈ− ２−クロロ−４−二トロフエノ−ルアニオンχｍａＸ４
００ｎｍ 通常すべての酵素反応におけるように反応溶液を一定の
田、一定の濃度に保持する。
光性末端に結合したマルトオリゴ糖は１上記置換芳香族
とマルトオリゴ糖を通常の方法に従って合成する。化学
的にはマルトオリゴ糖をアセチル化し〜このアセチル化
マルトオリゴ糖と置換芳香族を結合させた後〜脱アセチ
ルすることにより合成できる（実験化学購座第２４巻第
３０４頁、１９５８年参照）。生化学的にはサイクロデ
キストリングリコジルトランスフェラーゼと置換芳香族
と可溶性デンプン（またはα−サイクロデキストリンま
たは白色デキストリン）を反応させて、合成できる。本
発明に使用するα−グリコシダーゼは動物、植物、微生
物など如何なる起源のものを用いてもよいが、特に酵母
から得たものがその基質特異性の点で好ましい。すなわ
ち、酵母起源のび一グルコシダーゼはアグリコン特異性
が広く、さらにマルトトリオシト以下のグリコシドには
よく作用するが％マルトテトラオシド以上のグリコシド
には作用しない点で特に本発明の目的に適合している。
とマルトオリゴ糖を通常の方法に従って合成する。化学
的にはマルトオリゴ糖をアセチル化し〜このアセチル化
マルトオリゴ糖と置換芳香族を結合させた後〜脱アセチ
ルすることにより合成できる（実験化学購座第２４巻第
３０４頁、１９５８年参照）。生化学的にはサイクロデ
キストリングリコジルトランスフェラーゼと置換芳香族
と可溶性デンプン（またはα−サイクロデキストリンま
たは白色デキストリン）を反応させて、合成できる。本
発明に使用するα−グリコシダーゼは動物、植物、微生
物など如何なる起源のものを用いてもよいが、特に酵母
から得たものがその基質特異性の点で好ましい。すなわ
ち、酵母起源のび一グルコシダーゼはアグリコン特異性
が広く、さらにマルトトリオシト以下のグリコシドには
よく作用するが％マルトテトラオシド以上のグリコシド
には作用しない点で特に本発明の目的に適合している。
β−グルコシダーゼも如何なる起源のものを用いてもよ
く、例えばアーモンドから得たものが使用できる。
く、例えばアーモンドから得たものが使用できる。
本発明は、自動分析機にも容易にかけられる優れた方法
である。
である。
以下、本発明を実施例により詳細に説明する。
実施例 Ｌ
２−りｏｏ−４−ニトロフェニルマルトペンタオシド（
α体／β体＝５０１５０ ）を５０ ｍＭＭＥ８バッフ
ァー（Ｉｌｌ−１７）に溶解させて４ｍＭの基質溶液を
作り、０．５−をとった。３０単位／−のα−グルコシ
ダーゼ、０．００５単位／−のβ−グルコシダーゼとな
るように５０ｍＭＭＥＳバッファー（ｐｌ−１７）に溶
解させた酵素溶液０．５−をとった。上記測定試薬に各
種濃度（０〜５００ソモギ一単位／６１）に希釈した血
清０．０２−を加え３７℃においてＳ３分後から４分間
の吸光度上昇を測定し、１分間の吸光度変化をめた。そ
の結果を第１図に示す。
α体／β体＝５０１５０ ）を５０ ｍＭＭＥ８バッフ
ァー（Ｉｌｌ−１７）に溶解させて４ｍＭの基質溶液を
作り、０．５−をとった。３０単位／−のα−グルコシ
ダーゼ、０．００５単位／−のβ−グルコシダーゼとな
るように５０ｍＭＭＥＳバッファー（ｐｌ−１７）に溶
解させた酵素溶液０．５−をとった。上記測定試薬に各
種濃度（０〜５００ソモギ一単位／６１）に希釈した血
清０．０２−を加え３７℃においてＳ３分後から４分間
の吸光度上昇を測定し、１分間の吸光度変化をめた。そ
の結果を第１図に示す。
実施例 ２
実施例１とほとんど同様であるが、基質に４ｍＭ２−ク
ロロ−４−二トロフェニルマルトペンタオシド（α体／
β体＝５０１５０）と血清のかわりに各種濃度（０〜５
００ソモギ一単位／６１）に希釈した絆液を用いた点が
異なった。実施例１と同様にして測定した結果を第２図
に示す。
ロロ−４−二トロフェニルマルトペンタオシド（α体／
β体＝５０１５０）と血清のかわりに各種濃度（０〜５
００ソモギ一単位／６１）に希釈した絆液を用いた点が
異なった。実施例１と同様にして測定した結果を第２図
に示す。
比較例 Ｌ
実施例１とほとんど同様であるが基質に４ｍＭ２−クロ
ロ−４−ニトロフェニルマルトペンタオシドの代ワリに
一４ｍＭ ４−二トロフェニルマルトペンタオシド（α
体／β体＝５０１５０ ）を用いた点が異なった。実施
例１と同様にして測定した結果を第３図に示す。
ロ−４−ニトロフェニルマルトペンタオシドの代ワリに
一４ｍＭ ４−二トロフェニルマルトペンタオシド（α
体／β体＝５０１５０ ）を用いた点が異なった。実施
例１と同様にして測定した結果を第３図に示す。
比較例 ２
実施例２とほとんど同様であるが、基質に４ｍＭ２−ク
ロロ−４−ニトロフェニルマルトペンタオシドの代ワリ
に４ｍＭ ４−二トロフェニルマルトペンタオシド（α
体／β体＝ ５０７５０）を用いた点が異なった。実施
例１と同様にして測定した結果を第４図に示す。
ロロ−４−ニトロフェニルマルトペンタオシドの代ワリ
に４ｍＭ ４−二トロフェニルマルトペンタオシド（α
体／β体＝ ５０７５０）を用いた点が異なった。実施
例１と同様にして測定した結果を第４図に示す。
実施例 ＆
２−クロロ−４−ニトロフェニルマルトペンタオシド（
α体／β体；５０１５０ ）を５０ｍＭ ＭＫＳバッフ
ァー（ｐＨ７）に溶解させた。この基質溶液に塩化カル
シウム（０〜５ｏｏｍｆ／ｌ）を加えた。
α体／β体；５０１５０ ）を５０ｍＭ ＭＫＳバッフ
ァー（ｐＨ７）に溶解させた。この基質溶液に塩化カル
シウム（０〜５ｏｏｍｆ／ｌ）を加えた。
実施例１で用いた酵素溶液、１５００ソモギ一単位／ｄ
／ にＫＭした唾液を加え・３７℃において３分後から
４分間の吸光度変化をめ１ソモギ一単位に直した。その
結果を第５図に示す。
／ にＫＭした唾液を加え・３７℃において３分後から
４分間の吸光度変化をめ１ソモギ一単位に直した。その
結果を第５図に示す。
実施例 本
実施例１とほとんど同様であるが基質に４ｍＭ２．６−
−）クロロ−４−ニトロフェニルマルトペンタオシド（
α体／β体＝ ５０１５０ ）を用いた点が異なった。
−）クロロ−４−ニトロフェニルマルトペンタオシド（
α体／β体＝ ５０１５０ ）を用いた点が異なった。
実施例１と同様にして測定した結果を第６図に示す。
実施例 ５゜
実施例１とほとんど同様であるが基質に４ｍＭ２−クロ
ロ−４−ニトロフェニルマルトペンタオ−サイド（β体
）を用い、β−グルコシダーゼを０．０１単位／−とし
たところが異なった。実施例１と同様にして測定した結
果を第７図に示す。
ロ−４−ニトロフェニルマルトペンタオ−サイド（β体
）を用い、β−グルコシダーゼを０．０１単位／−とし
たところが異なった。実施例１と同様にして測定した結
果を第７図に示す。
目
第１ ＩＩは基質が２−クロロ−４−ニトロ７エ二ルマ
ルトペンタオシド（α体／β体＝５ｏ／ａｏ）の場合の
各種濃度の血清と１分間の吸光度変化との関係を示す。 各種濃度の悴臓と１分間の吸光度変化との関係を示す。 第３［Ｎは基質が４−ニトロフェニルマルトペンタオシ
ドの場合の各種濃度の血清と１分間の吸光度変化との関
係を示す。 光度変化との関係を示す。 第５図は反応液中の塩化カルシウム濃度とアミラーゼ活
性との関係を示す。 第６図は基質が２．６−ジクロロ−４−： ）０フエニ
ルマルトシド（α体／β体＝ ５０１５０ ）（Ｄ場合
の各種濃度の血清と、１分間の吸光度変化との関係を示
す。 第７図は基質が２−クロロ−４−二トロフェニルマルト
ペンタオサイド（β体）の場合の各種外匣の血清と１分
間の吸光度変化との関係を示す。 ＄１図 第２１！１ 第３面 第４白 メモキー坪スた１０Ｊ！−ソ壬Ａ゛二申立／ｄｌ糸５１
！′１ Ｃａｃ１２ 埒吻０（ 第６曲 第７図 舟 手 続 補 正 書（自発） Ｌ 事件の表示 昭和５８年特許願第１１１．１！９６号区 発明の名称 α−アミラーゼ活性測定法 ８ 補正をする者 事件との関係 特許出願人 大阪市北区堂島浜二丁目２番８号 ４、 補正の対象 「最大である。また温度上昇で、ε上昇、」を「は大き
い。さらに中性付近において温度変化によるε変化が非
常に大きいこと、」に訂正する。 （２） 同第７頁第９行目 「不足するという問題点などがあげられる。」の次に、
「特に温度変化によるε変化が大きいことと、感度不足
の二点は４−ニトロフェノールの重大な問題である。」
を挿入する。 （３）同第１４頁第１７行目と第１８行目との間に、次
の比較例３および実施例６を挿入する。 「比較例３ ４−ニトロフェノールを５０ ｍＭ ＭＩＩＥＳバッフ
ァー（ｐ＋（７）にｌ ×ｌ Ｏ−２岬／−になるよう
に溶解させた。２−クロロ−４−二トロフェノールを５
０ｍＭＭＫＳバッファー（ｐＨ７）に５×ｌ〇−岬／ｄ
になるように溶解させた。この両液の液温を変化させて
吸光度の変化を調べた。その結果を第８図に示す。 実施例６ 実施例１とほとんど同様であるが・基質に４１１１’Ｍ
ｇ−り１ｆｆＯ−４−ニトロフェニルマルトへブタオシ
ド（α体）を用いた点が異なった。実施例１と同様にし
て測定した結果を第９図に示す０」（４） 同第１５頁
末行に次の文を挿入するＯｒ Ｍｓ ’Ａ ＋；］：
４− Ａ ）ロフェノールと２−クロロ−４−＝）ｏフ
ェノールの温度と吸光度の関係ヲ示ス。図中、■は４−
ニトロフェノール、■は２−クロロ−４−二トロフェノ
ールを示す０第９図は基質が２−クロロ−４−ニトロフ
ェニルマルトへブタオシド（α体）の場合の各種濃度の
血清と１分間の吸光度変化との関係を示す０」（５）
図 面 第８図および第９因を挿入する。 第８Ｉ２ 謔９図
ルトペンタオシド（α体／β体＝５ｏ／ａｏ）の場合の
各種濃度の血清と１分間の吸光度変化との関係を示す。 各種濃度の悴臓と１分間の吸光度変化との関係を示す。 第３［Ｎは基質が４−ニトロフェニルマルトペンタオシ
ドの場合の各種濃度の血清と１分間の吸光度変化との関
係を示す。 光度変化との関係を示す。 第５図は反応液中の塩化カルシウム濃度とアミラーゼ活
性との関係を示す。 第６図は基質が２．６−ジクロロ−４−： ）０フエニ
ルマルトシド（α体／β体＝ ５０１５０ ）（Ｄ場合
の各種濃度の血清と、１分間の吸光度変化との関係を示
す。 第７図は基質が２−クロロ−４−二トロフェニルマルト
ペンタオサイド（β体）の場合の各種外匣の血清と１分
間の吸光度変化との関係を示す。 ＄１図 第２１！１ 第３面 第４白 メモキー坪スた１０Ｊ！−ソ壬Ａ゛二申立／ｄｌ糸５１
！′１ Ｃａｃ１２ 埒吻０（ 第６曲 第７図 舟 手 続 補 正 書（自発） Ｌ 事件の表示 昭和５８年特許願第１１１．１！９６号区 発明の名称 α−アミラーゼ活性測定法 ８ 補正をする者 事件との関係 特許出願人 大阪市北区堂島浜二丁目２番８号 ４、 補正の対象 「最大である。また温度上昇で、ε上昇、」を「は大き
い。さらに中性付近において温度変化によるε変化が非
常に大きいこと、」に訂正する。 （２） 同第７頁第９行目 「不足するという問題点などがあげられる。」の次に、
「特に温度変化によるε変化が大きいことと、感度不足
の二点は４−ニトロフェノールの重大な問題である。」
を挿入する。 （３）同第１４頁第１７行目と第１８行目との間に、次
の比較例３および実施例６を挿入する。 「比較例３ ４−ニトロフェノールを５０ ｍＭ ＭＩＩＥＳバッフ
ァー（ｐ＋（７）にｌ ×ｌ Ｏ−２岬／−になるよう
に溶解させた。２−クロロ−４−二トロフェノールを５
０ｍＭＭＫＳバッファー（ｐＨ７）に５×ｌ〇−岬／ｄ
になるように溶解させた。この両液の液温を変化させて
吸光度の変化を調べた。その結果を第８図に示す。 実施例６ 実施例１とほとんど同様であるが・基質に４１１１’Ｍ
ｇ−り１ｆｆＯ−４−ニトロフェニルマルトへブタオシ
ド（α体）を用いた点が異なった。実施例１と同様にし
て測定した結果を第９図に示す０」（４） 同第１５頁
末行に次の文を挿入するＯｒ Ｍｓ ’Ａ ＋；］：
４− Ａ ）ロフェノールと２−クロロ−４−＝）ｏフ
ェノールの温度と吸光度の関係ヲ示ス。図中、■は４−
ニトロフェノール、■は２−クロロ−４−二トロフェノ
ールを示す０第９図は基質が２−クロロ−４−ニトロフ
ェニルマルトへブタオシド（α体）の場合の各種濃度の
血清と１分間の吸光度変化との関係を示す０」（５）
図 面 第８図および第９因を挿入する。 第８Ｉ２ 謔９図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 次式 で表わされ、る基質に１α−グルコシダーゼまたはα−
グ屹フコシダーゼよびβ−グルコシダーゼおよび既知量
の試料を添加し、遊離するアグリコンの可視部の吸収を
測定することにより、試料中のアミラーゼ活性を測定す
ることを特徴とするアミラーゼ活性測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11129683A JPS602199A (ja) | 1983-06-21 | 1983-06-21 | α−アミラ−ゼ活性測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11129683A JPS602199A (ja) | 1983-06-21 | 1983-06-21 | α−アミラ−ゼ活性測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS602199A true JPS602199A (ja) | 1985-01-08 |
| JPH0113840B2 JPH0113840B2 (ja) | 1989-03-08 |
Family
ID=14557620
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11129683A Granted JPS602199A (ja) | 1983-06-21 | 1983-06-21 | α−アミラ−ゼ活性測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS602199A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62278998A (ja) * | 1986-05-28 | 1987-12-03 | Toyobo Co Ltd | グリコシル化合物加水分解酵素活性測定試薬 |
| EP0263435A2 (en) * | 1986-10-07 | 1988-04-13 | Hoechst Celanese Corporation | An aromatic substituted glycoside |
| US5158872A (en) * | 1986-10-07 | 1992-10-27 | Hoechst Celanese Corporation | Aromatic substituted glycoside |
| JPH04305594A (ja) * | 1991-01-04 | 1992-10-28 | Seishin Seiyaku Kk | β−（２−クロロ−４−ニトロフェニル）−マルトペンタオシド |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| JPS5312831A (en) * | 1976-07-13 | 1978-02-04 | Du Pont | Nitro aromatic glycoside and process for preparation thereof |
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| US4145527A (en) * | 1976-07-13 | 1979-03-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Nitro aromatic glycosides |
| JPS5753079A (en) * | 1980-09-17 | 1982-03-29 | Toshiba Electric Equip | Table tap |
-
1983
- 1983-06-21 JP JP11129683A patent/JPS602199A/ja active Granted
Patent Citations (4)
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| US4963479A (en) * | 1986-10-07 | 1990-10-16 | Hoechst Celanese Corporation | Reagent system for an alpha-amylase assay containing aromatic substituted glycoside |
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| JPH0672149B2 (ja) * | 1986-10-07 | 1994-09-14 | ヘキスト・セラニーズ・コーポレイシヨン | 芳香族置換グリコシド |
| JPH04305594A (ja) * | 1991-01-04 | 1992-10-28 | Seishin Seiyaku Kk | β−（２−クロロ−４−ニトロフェニル）−マルトペンタオシド |
| JPH0541636B2 (ja) * | 1991-01-04 | 1993-06-24 | Seishin Seiyaku Kk |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0113840B2 (ja) | 1989-03-08 |
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