JPS60237998A - α−アミラ−ゼ活性測定法 - Google Patents
α−アミラ−ゼ活性測定法Info
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- JPS60237998A JPS60237998A JP24289083A JP24289083A JPS60237998A JP S60237998 A JPS60237998 A JP S60237998A JP 24289083 A JP24289083 A JP 24289083A JP 24289083 A JP24289083 A JP 24289083A JP S60237998 A JPS60237998 A JP S60237998A
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- glucosidase
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規なα−アミラーゼ基質を用いたαアミラー
ゼ活性測定法に関するものである。最近、ヒト体液中の
アミラーゼ活性の測定用基質として、構造の明確なマル
トオリゴ糖、例えばマルトテトラオース、マルトペンタ
−オース、マルトヘキサオースなどが使用される様にな
りつつある。
ゼ活性測定法に関するものである。最近、ヒト体液中の
アミラーゼ活性の測定用基質として、構造の明確なマル
トオリゴ糖、例えばマルトテトラオース、マルトペンタ
−オース、マルトヘキサオースなどが使用される様にな
りつつある。
これらのうち代表例としてマルトペンタオースを基質と
して使用する場合をとりあげて説明すると、測定様式は
次の様に表わすことができる。
して使用する場合をとりあげて説明すると、測定様式は
次の様に表わすことができる。
(1) マルトペンタオースーーーーーーー1戸アミラ
ーゼ マ ル ト − ス + 1ワレトトリオース+21
マルトース+マルトトリオース一一]7ここに生成した
グルコースは、公知の方法、例えコムターゼ/グルコー
ス−6−ホスフz−)fヒロ ドへゲナーゼ/NADH系等で測定される。
ーゼ マ ル ト − ス + 1ワレトトリオース+21
マルトース+マルトトリオース一一]7ここに生成した
グルコースは、公知の方法、例えコムターゼ/グルコー
ス−6−ホスフz−)fヒロ ドへゲナーゼ/NADH系等で測定される。
ところがこの測定系には、基質(マルトオリゴ糖)に対
しわずかではあるが、α−グルコシダーゼが作用すると
いう欠点があり、ブランク値が上昇する。
しわずかではあるが、α−グルコシダーゼが作用すると
いう欠点があり、ブランク値が上昇する。
他方、マルトオリゴ糖の還元末端にフェニル基、ナフチ
ル基或はそれらの類似体を結合した基質が合成され、次
の様なものを基質とするアミラーゼ測定試薬が提案され
ている。
ル基或はそれらの類似体を結合した基質が合成され、次
の様なものを基質とするアミラーゼ測定試薬が提案され
ている。
p−ニトロフェニルマルトペンタオサイト(特公昭57
−53079号公報) p−ニトロフェニルマルトヘキサオサイド(特公昭57
−53079号公報) p−ニトロフェニルマルトへブタオサイド(特1:11
i1昭54−51892号公報)2.4−ジクロロフェ
ニルマルトペンタオサイト(特開昭56−35998号
公報) これらの化合物を基質とするアミラーゼ活性の測定様式
を例示すると、次の様になる。
−53079号公報) p−ニトロフェニルマルトヘキサオサイド(特公昭57
−53079号公報) p−ニトロフェニルマルトへブタオサイド(特1:11
i1昭54−51892号公報)2.4−ジクロロフェ
ニルマルトペンタオサイト(特開昭56−35998号
公報) これらの化合物を基質とするアミラーゼ活性の測定様式
を例示すると、次の様になる。
p−ニトロフェニル−α−マルトペンタサイトの場合
fil p−ニトロフェニル−α−マルトペンタオサイ
ド−LLムニヱ→p−ニトロフェニル−α−マルトサイ
ド+マルトトリオース トロフェノール+グルコース この系においても、基質のp−ニトロフェニル−a−マ
ルトペンタオサイドにα−グルコシダーゼが作用してブ
ランク値が上昇する。
ド−LLムニヱ→p−ニトロフェニル−α−マルトサイ
ド+マルトトリオース トロフェノール+グルコース この系においても、基質のp−ニトロフェニル−a−マ
ルトペンタオサイドにα−グルコシダーゼが作用してブ
ランク値が上昇する。
(112,4−ジクロロフェニル−β−マルトヘンタオ
サイド yst二二→2,4−ジシクロロフェニルーβ
−マルトサイド+マルトトリオース(2−a ) 2.
4−クシクロロフェニル−β−α−グルコシ マルトサイド+マルトトリオース□ ダーゼ 一一一→2.4−ジクロロフェニル−β−グルコサイド
+グルコース (2−b)2.4−ジlクロロフェニルーβ−β−グル
コシダーゼ グルコサイド 2.4−ジ クロロフェノール+グルコース この系においても、基質である2、4−ジクロロフェニ
ル−β−マルトペンタオサイトニα−クルコシダーゼが
作用してブランクが上昇する。
サイド yst二二→2,4−ジシクロロフェニルーβ
−マルトサイド+マルトトリオース(2−a ) 2.
4−クシクロロフェニル−β−α−グルコシ マルトサイド+マルトトリオース□ ダーゼ 一一一→2.4−ジクロロフェニル−β−グルコサイド
+グルコース (2−b)2.4−ジlクロロフェニルーβ−β−グル
コシダーゼ グルコサイド 2.4−ジ クロロフェノール+グルコース この系においても、基質である2、4−ジクロロフェニ
ル−β−マルトペンタオサイトニα−クルコシダーゼが
作用してブランクが上昇する。
結局、従来提供されてきた基質を使用する測定系では、
α−グルコシダーゼが基質に作用することから、試薬ブ
ランク値の上昇が著しいという問題点がある。さらにα
−グルコシダーゼ液と基質液の一液化は、α−グルコシ
ダーゼの基質分解により、試薬の安だ性を著しく損うと
いう共通の問題点があった。
α−グルコシダーゼが基質に作用することから、試薬ブ
ランク値の上昇が著しいという問題点がある。さらにα
−グルコシダーゼ液と基質液の一液化は、α−グルコシ
ダーゼの基質分解により、試薬の安だ性を著しく損うと
いう共通の問題点があった。
5−
そこで、本発明者等は種々研究した結果、非遣元末端に
置換基を導入することにより、これらの問題点が解決で
きることを知り、本発明を完成するに到った。
置換基を導入することにより、これらの問題点が解決で
きることを知り、本発明を完成するに到った。
すなわち本発明は、
(式中 R−はハロゲン原子または−X−R″ または
グルコビラノース残基を示す。
グルコビラノース残基を示す。
Xは0、ooc、oso、またはNHe示し、RsたR
2は置換または未置換のフェノール残基を示す。nは0
〜8の整数を示す。)で表わされる非還元性末端を修飾
したα−および/またはβ−フェニルマルトオリゴサイ
ドを基質として、α−グルコシダーゼおよび/またはグ
ルコアミラーゼお 6− よび必要によりβ−グルコシダーゼの共存下に、試料を
接触させ、遊離するフェノール系化合物を測定すること
により、試料中のα−アミラーゼ活性を?I1.lI定
することを特徴とするα−アミラーゼ活性測T法である
。
2は置換または未置換のフェノール残基を示す。nは0
〜8の整数を示す。)で表わされる非還元性末端を修飾
したα−および/またはβ−フェニルマルトオリゴサイ
ドを基質として、α−グルコシダーゼおよび/またはグ
ルコアミラーゼお 6− よび必要によりβ−グルコシダーゼの共存下に、試料を
接触させ、遊離するフェノール系化合物を測定すること
により、試料中のα−アミラーゼ活性を?I1.lI定
することを特徴とするα−アミラーゼ活性測T法である
。
本発明の基質はマルトオリゴ塩の非還元性末端が・・ロ
ゲン原子、−X −R’ またはグルコビラノース残基
により修飾されている。
ゲン原子、−X −R’ またはグルコビラノース残基
により修飾されている。
本発明に用いるマルトオリゴ塩は糖の数が2〜10であ
り、具体的にはマルトース、マルトトリオース、マルト
テトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオー
ス、マルトヘプタオース等がある。特にマルトテトラオ
ース、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マル
トヘプタオースが好ましい。
り、具体的にはマルトース、マルトトリオース、マルト
テトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオー
ス、マルトヘプタオース等がある。特にマルトテトラオ
ース、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マル
トヘプタオースが好ましい。
本発明の基質に修飾されるノ・ロゲン原子としては、喝
素、臭素、フッ素、沃素が挙げられる。
素、臭素、フッ素、沃素が挙げられる。
本発明の基質に修飾される一X −R”は、 Xが0、
OOC%O8O,またはNHを示し、R′は炭素原子数
1〜6のアルキル基、置換アルキル基、フェニル基マタ
はアルキル置換フェニル基、アルコキシ置換フェニル基
等の置換フェニル基またはピリジル基を示し、具体的に
はメトキシ、エトキシ等のアルコキシ基、フェノキシ基
、アルキル置換フェノキシ基、アルコキシ置換フェノキ
シ基、ピリジルオキシ基、アルキルカルボニルオキシ基
、ペンツイルオキシ基、アルキル置換ベンゾイルオキシ
基、アルコキシ置換ヘンジイルオキシ基、ピリジルカル
ボニルオキシ基、アルキルスルホニルオキシ基、フェニ
ルスルホニルオキシ基、トシルオキシなどのアルキル置
換フェニルスルホニルオキシ基、アルコキシ置換フェニ
ルスルホニルオキシ基、ヒリジルスルホニルオキシ基、
モノアルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アニリノ
基、トルイジノなどのアルキル核置換アニリノ基、アニ
シジンなどのアルコキシ置換アニリノ基、ピリジルアミ
ン基などが挙げられる。
OOC%O8O,またはNHを示し、R′は炭素原子数
1〜6のアルキル基、置換アルキル基、フェニル基マタ
はアルキル置換フェニル基、アルコキシ置換フェニル基
等の置換フェニル基またはピリジル基を示し、具体的に
はメトキシ、エトキシ等のアルコキシ基、フェノキシ基
、アルキル置換フェノキシ基、アルコキシ置換フェノキ
シ基、ピリジルオキシ基、アルキルカルボニルオキシ基
、ペンツイルオキシ基、アルキル置換ベンゾイルオキシ
基、アルコキシ置換ヘンジイルオキシ基、ピリジルカル
ボニルオキシ基、アルキルスルホニルオキシ基、フェニ
ルスルホニルオキシ基、トシルオキシなどのアルキル置
換フェニルスルホニルオキシ基、アルコキシ置換フェニ
ルスルホニルオキシ基、ヒリジルスルホニルオキシ基、
モノアルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アニリノ
基、トルイジノなどのアルキル核置換アニリノ基、アニ
シジンなどのアルコキシ置換アニリノ基、ピリジルアミ
ン基などが挙げられる。
本発明の基質に修飾されるグルコビラノース残基として
は、αおよびβ(l→6)のグルコビラノース残基など
が挙げられる。
は、αおよびβ(l→6)のグルコビラノース残基など
が挙げられる。
本発明の基質は還元性末端に置換または未置換のフェニ
ル基を有するα−および/またはβ−フェニルマルトオ
リゴサイドでもある。
ル基を有するα−および/またはβ−フェニルマルトオ
リゴサイドでもある。
本発明の基質にα−および/またはβ−結合により結合
した置換または未置換のフェノール類とコキシ基、アル
コキシカルボニル基またはニトロ基を有するフェノール
類であり、例えばクロロフェノール、ジクロロフェノー
ル、ヒドロキシフェノール1アルキルフエノール、アル
コキシフェノール、安息香酸またはニトロフェノール、
ハロゲン化ニトロフェノール、アルキル化ニトロフェノ
ール、アルコキシ化ニトロフェノール、ニトロ化安息香
酸、ジニトロフェノールなどが挙げられる。
した置換または未置換のフェノール類とコキシ基、アル
コキシカルボニル基またはニトロ基を有するフェノール
類であり、例えばクロロフェノール、ジクロロフェノー
ル、ヒドロキシフェノール1アルキルフエノール、アル
コキシフェノール、安息香酸またはニトロフェノール、
ハロゲン化ニトロフェノール、アルキル化ニトロフェノ
ール、アルコキシ化ニトロフェノール、ニトロ化安息香
酸、ジニトロフェノールなどが挙げられる。
特に少なくとも1つのニトロ基を有するフェノ−に類、
例工LI’ 4−ニトロフェノール、2−クロロ−4−
二トロフェノール、2.6−ジクロロ−4−二トロフェ
ノール、2.6−ジプロモー4−ニトロフェノール、2
−プロモー4−二トロフェノール、2−ニトロフェノー
ル、2−ヒドロキシ−9− 4−ニトロフェノール、3−ヒドロキシ−4−二トロフ
ェノールなどが好ましい。
例工LI’ 4−ニトロフェノール、2−クロロ−4−
二トロフェノール、2.6−ジクロロ−4−二トロフェ
ノール、2.6−ジプロモー4−ニトロフェノール、2
−プロモー4−二トロフェノール、2−ニトロフェノー
ル、2−ヒドロキシ−9− 4−ニトロフェノール、3−ヒドロキシ−4−二トロフ
ェノールなどが好ましい。
次に本発明の基質fi+を更に具体例によって説明4−
ニトロフェノール 0−6−泰40−6−デオキシーα
−D−グルコピラノシル−((i→4)−〇−σ−D−
グルコピラノシルー1−o−メトキシ−6−ジオキシ−
α−0−グルコピラノシル−((i→4)−〇−α−D
−グルコピラノーβ−マルトペンタオシド〕 4−ニトロフェノール α−D−グルコピラノミル−(
(1→4)−〇−σ−D−グルコピラノー l〇 − シルーに’−”−β−D−グルコピラノシド〔4−ニト
ロフェニル−β−マルトペンタオシグルコピラノシル−
((l→4)−〇−α−D−グルコピラノシルー)s
−o−β−D−グルコピラデオキシ−6−((2−ピリ
ジル)アミノ〕−α−D−グルコピラノシル−((l→
4)−〇−4ヒ0 −D−グルコ電シラノシル−、−〇−α−D−グルエニ
ルーα−マルトペンタオシド〕 4−ニトロフェノール 0−6−p−)ルエンスルホニ
ルオキシー〇−α−D−グルコピラノシル−((1→4
)−〇−α−D−グルコピラノシル)、−〇−α−D−
グルコピラノシド〔トシルオキシ 4−ニトロフェニル
−α−マルトヘプタオシド〕 本発明の基質fIlは新規な化合物であり、例えばfa
t非還元末端クロル置換の基質は、式flTlで表わさ
れる化合物とp−)ルエンスルホニルクロライドを反応
させ、生成した式(1)で表わされる化合物にテトラメ
チルアンモニウムクロライドと反応させて製造する。大
通らの研究報告L ?4−POMICHXrJ、旧oe
hem 6.84,835−841(197B))を参
照しくblメトキシ基置換の基質は、式(mlで表わさ
れる化合物とメタノールを反応させて製造する。G、
N。
ニトロフェノール 0−6−泰40−6−デオキシーα
−D−グルコピラノシル−((i→4)−〇−σ−D−
グルコピラノシルー1−o−メトキシ−6−ジオキシ−
α−0−グルコピラノシル−((i→4)−〇−α−D
−グルコピラノーβ−マルトペンタオシド〕 4−ニトロフェノール α−D−グルコピラノミル−(
(1→4)−〇−σ−D−グルコピラノー l〇 − シルーに’−”−β−D−グルコピラノシド〔4−ニト
ロフェニル−β−マルトペンタオシグルコピラノシル−
((l→4)−〇−α−D−グルコピラノシルー)s
−o−β−D−グルコピラデオキシ−6−((2−ピリ
ジル)アミノ〕−α−D−グルコピラノシル−((l→
4)−〇−4ヒ0 −D−グルコ電シラノシル−、−〇−α−D−グルエニ
ルーα−マルトペンタオシド〕 4−ニトロフェノール 0−6−p−)ルエンスルホニ
ルオキシー〇−α−D−グルコピラノシル−((1→4
)−〇−α−D−グルコピラノシル)、−〇−α−D−
グルコピラノシド〔トシルオキシ 4−ニトロフェニル
−α−マルトヘプタオシド〕 本発明の基質fIlは新規な化合物であり、例えばfa
t非還元末端クロル置換の基質は、式flTlで表わさ
れる化合物とp−)ルエンスルホニルクロライドを反応
させ、生成した式(1)で表わされる化合物にテトラメ
チルアンモニウムクロライドと反応させて製造する。大
通らの研究報告L ?4−POMICHXrJ、旧oe
hem 6.84,835−841(197B))を参
照しくblメトキシ基置換の基質は、式(mlで表わさ
れる化合物とメタノールを反応させて製造する。G、
N。
BOLLKNBACKの報告CMETHODS IN
CARBOHYDRATBCHEMISTRY vow
、 [326)を参照した。
CARBOHYDRATBCHEMISTRY vow
、 [326)を参照した。
(c)トシルオキシ基置換の基質は式titで表わされ
る化合物を意味する。
る化合物を意味する。
fdlピリジルアミノ基置換の基質は、式(川で表わさ
れる化合物とピリジルアミンを反応させて製造する。大
通らの研究報告 (K、OMICHI IJ、 Biochem、 93
.1055−1060(1983)〕を参照した。
れる化合物とピリジルアミンを反応させて製造する。大
通らの研究報告 (K、OMICHI IJ、 Biochem、 93
.1055−1060(1983)〕を参照した。
t、lアニリノ基、トルイジノ基またはアニシジノ基置
換の基質は、式+fi+で表わされる化合物とアニリン
、トルイジンまたはアニシジを反応させて製造する。t
dlの方法を参照した。
換の基質は、式+fi+で表わされる化合物とアニリン
、トルイジンまたはアニシジを反応させて製造する。t
dlの方法を参照した。
(flフェノキシ基置換の基質は、式(TIIで表わさ
れる化合物とフェノールを反応させて製造する。(bl
の方法を参照した。
れる化合物とフェノールを反応させて製造する。(bl
の方法を参照した。
Iglベンゾイルオキシ基置換の基質は式tutで表わ
される化合物とベンジルアルコールを反応させて 13
− 製造する。(blの方法を参照した。
される化合物とベンジルアルコールを反応させて 13
− 製造する。(blの方法を参照した。
また、式+ITIで表わされる化合物の代わりα、β(
、)テトラメチルアンモニウムクロライドtb+メタノ
ール lcl p −)ルエンスルホニルクロライト(d)ピ
リジルアミン +−)アニリン、トルイジンまたはアニシジンTflフ
ェノール (glベンジルアルコール とそれぞれ反応させて、 質 fcl非還元末端(C−6位)トシルオキシ基l置換の
基質 アニ f、l非還元末端(C−6位) 、ヤ+ リノ基、トル
イジノ基またはアニシジノ基置換の基質 14− ffl非還元末端(C−6位)フェノキシ基置換の基質 (gl非還元末端ベンジルオキシ基置換の基質を製造し
、さらにサイクロデキストリントランスフェラーゼを作
用させて、目的のマルトオリゴ糖を製造する方法とがあ
る。
、)テトラメチルアンモニウムクロライドtb+メタノ
ール lcl p −)ルエンスルホニルクロライト(d)ピ
リジルアミン +−)アニリン、トルイジンまたはアニシジンTflフ
ェノール (glベンジルアルコール とそれぞれ反応させて、 質 fcl非還元末端(C−6位)トシルオキシ基l置換の
基質 アニ f、l非還元末端(C−6位) 、ヤ+ リノ基、トル
イジノ基またはアニシジノ基置換の基質 14− ffl非還元末端(C−6位)フェノキシ基置換の基質 (gl非還元末端ベンジルオキシ基置換の基質を製造し
、さらにサイクロデキストリントランスフェラーゼを作
用させて、目的のマルトオリゴ糖を製造する方法とがあ
る。
本発明に使用するα−グルコシダーゼは動物、随物、微
生物など如何なる起源のものを用いてもよいが、特に酵
母から得たものが、その基質特異性の点で好ましい。す
なわち、酵母起源のα−グルコシダーゼはアグリコン特
異性が広く、さらにマルトトリオシト以下のグリコシド
にはよく作用するが、マルトテトラオシド以上のグリコ
シドには作用しない点で特に本発明の目的に適合してい
る。
生物など如何なる起源のものを用いてもよいが、特に酵
母から得たものが、その基質特異性の点で好ましい。す
なわち、酵母起源のα−グルコシダーゼはアグリコン特
異性が広く、さらにマルトトリオシト以下のグリコシド
にはよく作用するが、マルトテトラオシド以上のグリコ
シドには作用しない点で特に本発明の目的に適合してい
る。
β−グルコシダーゼも如何なる起源のものを用いてもよ
く、例えばアーモンドから得たものが使用できる。
く、例えばアーモンドから得たものが使用できる。
グルコアミラーゼに関しても如何なる起源のものを用い
てもよく、例えばリゾプスデレマーから得たものが使用
できる。
てもよく、例えばリゾプスデレマーから得たものが使用
できる。
α−グルコシダーゼ、β−グルコシダーゼ、グルコアミ
ラーゼの使用法は具体的には、(1)α−グルコシダー
ゼ (1)α−グルコシダーゼおヨヒβ−グルコシダ〜ゼ (+111グルコアミラーゼ (1v)グルコアミラーゼおよびα−グルコシダーゼf
Vlグルコアミラーゼおよびβ−グルコシダーゼ(vl
l グルコアミラーゼ、α−グルコシダーゼおよびβ−
グルコシダーゼ のいずれの使用法でもよく、特に、α−グルコシダーゼ
、グルコアミラーゼを共存した方法(1v)、(vl)
が好ましい。
ラーゼの使用法は具体的には、(1)α−グルコシダー
ゼ (1)α−グルコシダーゼおヨヒβ−グルコシダ〜ゼ (+111グルコアミラーゼ (1v)グルコアミラーゼおよびα−グルコシダーゼf
Vlグルコアミラーゼおよびβ−グルコシダーゼ(vl
l グルコアミラーゼ、α−グルコシダーゼおよびβ−
グルコシダーゼ のいずれの使用法でもよく、特に、α−グルコシダーゼ
、グルコアミラーゼを共存した方法(1v)、(vl)
が好ましい。
本発明の方法は、必要によりその他の添加物を添加して
もよい。
もよい。
本発明は上記基質に、追随酵素の共存下に、試料を接触
させ、遊離するフェノール系化合物を測定することによ
り、試料中のα−アミラーゼ活性を測定する。
させ、遊離するフェノール系化合物を測定することによ
り、試料中のα−アミラーゼ活性を測定する。
フェノール系化合物の測定法としては、基質から解離し
たフェノール系化合物が基質とは異なるスペクトル吸収
を示す場合には、反応生成物のスペクトル吸収を直接測
定する。
たフェノール系化合物が基質とは異なるスペクトル吸収
を示す場合には、反応生成物のスペクトル吸収を直接測
定する。
また基質から解離したフェノール系化合物が基質とほぼ
同じスペクトル吸収を示す場合には、呈色試薬、例えば
4−アミノアンチピリンなどの化合物と酸化縮合させ、
その発色強度を測定する。
同じスペクトル吸収を示す場合には、呈色試薬、例えば
4−アミノアンチピリンなどの化合物と酸化縮合させ、
その発色強度を測定する。
フェノール系化合物の測定方法としては、α−アミラー
ゼの反応を連続的に追跡するレート法あるいは一定時間
反応させた後、反応を止めて測定する法、いずれの方法
を用いてもよい。
ゼの反応を連続的に追跡するレート法あるいは一定時間
反応させた後、反応を止めて測定する法、いずれの方法
を用いてもよい。
本発明では上記基質ケ用いることにより、α−グルコシ
ダーゼの基質に対する作用を防ぎ、試薬ブランクの上昇
抑制に著しい効果があり、追随酵素液、基質液の一液化
が可能となった。
ダーゼの基質に対する作用を防ぎ、試薬ブランクの上昇
抑制に著しい効果があり、追随酵素液、基質液の一液化
が可能となった。
また、無置換非還元末端のマルトオリゴ糖基質において
、適用不可能だったグルコアミラーゼ(無置換還元末端
のマルトオリゴ糖はグルコアミラーゼの基質となる)の
使用も可能となった。
、適用不可能だったグルコアミラーゼ(無置換還元末端
のマルトオリゴ糖はグルコアミラーゼの基質となる)の
使用も可能となった。
17−
α−グルコシダーゼはマルトトリオシト以下の低分子グ
リコシドにはよく作用するが、マルトテトラオシド以上
のグリコシドには作用しない。
リコシドにはよく作用するが、マルトテトラオシド以上
のグリコシドには作用しない。
マルトヘプタオサイド以上の高分子グリコシドをアミラ
ーゼ基質とした場合、マルチトラシト以上のグリコシド
が生成する。d−グルコシダーゼを追随酵素として用い
た場合は、アミラーゼによる氷解生成物のマルトトリオ
シト以下の低分子グリコシドにのみ作用するJしかし、
グルコアミラーゼを用いた場合、マルチトラシト以上の
グリコシドにも作用し、測定系の感度が上昇するという
グルコシダーゼ使用の優位点がある。
ーゼ基質とした場合、マルチトラシト以上のグリコシド
が生成する。d−グルコシダーゼを追随酵素として用い
た場合は、アミラーゼによる氷解生成物のマルトトリオ
シト以下の低分子グリコシドにのみ作用するJしかし、
グルコアミラーゼを用いた場合、マルチトラシト以上の
グリコシドにも作用し、測定系の感度が上昇するという
グルコシダーゼ使用の優位点がある。
本発明の測定法は自動分析機にも容易にかけられる優れ
た方法である。
た方法である。
以下、本発明を実施例により説明する。
実施例1
下記の試薬を用い、下記方法によりブランク値を測定し
た。
た。
試薬:50mM グツドバッファーpH7,0α−グル
コシダーゼ 80 U / ml18− β−グルコシダーゼ IOU/耐 第1表に示される基質 2mM 第 1 表 測足法: 上記試薬3 wgを取り、試薬ブランクの経時変化を見
た。(測定波長400nrn、温度37℃)その結果を
!@2表に示す。
コシダーゼ 80 U / ml18− β−グルコシダーゼ IOU/耐 第1表に示される基質 2mM 第 1 表 測足法: 上記試薬3 wgを取り、試薬ブランクの経時変化を見
た。(測定波長400nrn、温度37℃)その結果を
!@2表に示す。
本発明の試薬A、Bは試薬C,Dと比較して、試薬ブラ
ンクの上昇が小さい。
ンクの上昇が小さい。
実施例2
試料中のび一アミラーゼ活性を、下記の試薬を用い、下
記方法により測定した。
記方法により測定した。
試薬A:50mM グツドバッファ −p I(7,0
ド 2mM 試薬B:50mM グツドバッファ −p H7,0−
マルトペンタオシド 2mM 測定法: 試薬AまたB各3 weを取り、37℃での試薬ブラン
ク経時変化を400nmで測定した。
ド 2mM 試薬B:50mM グツドバッファ −p H7,0−
マルトペンタオシド 2mM 測定法: 試薬AまたB各3 weを取り、37℃での試薬ブラン
ク経時変化を400nmで測定した。
試料(血清)50/’jに、試薬AまたはB各3−を添
加し、添加後5〜6分後の吸光度変化(α−アミラーゼ
活性)を測定した。(測定波長400 nm、反応温度
37℃) 試薬ブランクの経時変化を第3表に、血清の吸光度測定
を第4表に示す。
加し、添加後5〜6分後の吸光度変化(α−アミラーゼ
活性)を測定した。(測定波長400 nm、反応温度
37℃) 試薬ブランクの経時変化を第3表に、血清の吸光度測定
を第4表に示す。
第 4 表
本発明の試薬Aは試薬Bに比較して、試薬ブランクの上
昇は小さく、α−アミラーゼ活性値は試薬ASBともに
差はない。
昇は小さく、α−アミラーゼ活性値は試薬ASBともに
差はない。
実施例3
試料中のα−アミラーゼ活性を、下記の試薬を用い、下
記方法により測定した。
記方法により測定した。
試薬A:50mM グツドバッファー(p H7,02
1− α−グルコシダーゼ 80U/d グルコアミラーゼ 10 # トシルオキシ 4−ニトロフェニル− α−マルトヘプタオシド 2mM 試薬B:50mM グツドバッフy −(p H7,0
)α−グルコシダーゼ 80 U/l/ トシルオキシ 4−ニトロフェニル− α−マルトヘプタオシド 2mM 試薬C:50mM グツドバッフアー(pH7,すα−
グルコシダーゼ 80U/ag ゲルコアばラーゼ 10 U/d 4−ニトロフェニル−α−マルトヘプ タオシド 2mM 測定法: 試薬A、BまたはC各3 mlを取り、37℃での試薬
ブランク経時変化を400nmで測定した、試料血清5
01Ltに試薬A、BまたはC各3dを添加し、添加後
5〜6分後の吸光度変化(アミラーゼ活性)を測定した
。(測定波長400nm、反応温度37℃) 試薬ブランクの経時変化を第5表に血清の吸光度変化を
第6安に示す。
1− α−グルコシダーゼ 80U/d グルコアミラーゼ 10 # トシルオキシ 4−ニトロフェニル− α−マルトヘプタオシド 2mM 試薬B:50mM グツドバッフy −(p H7,0
)α−グルコシダーゼ 80 U/l/ トシルオキシ 4−ニトロフェニル− α−マルトヘプタオシド 2mM 試薬C:50mM グツドバッフアー(pH7,すα−
グルコシダーゼ 80U/ag ゲルコアばラーゼ 10 U/d 4−ニトロフェニル−α−マルトヘプ タオシド 2mM 測定法: 試薬A、BまたはC各3 mlを取り、37℃での試薬
ブランク経時変化を400nmで測定した、試料血清5
01Ltに試薬A、BまたはC各3dを添加し、添加後
5〜6分後の吸光度変化(アミラーゼ活性)を測定した
。(測定波長400nm、反応温度37℃) 試薬ブランクの経時変化を第5表に血清の吸光度変化を
第6安に示す。
22−
第 5 表
第6表
本発明の試薬AまたはBは試薬Cに比較して、試薬ブラ
ンクの上昇は小さい。αアミラーゼ活性値は試薬B、C
に差はない。試薬Aはグルコアミラーゼ添加により感度
が上昇した。
ンクの上昇は小さい。αアミラーゼ活性値は試薬B、C
に差はない。試薬Aはグルコアミラーゼ添加により感度
が上昇した。
特許出願人 東洋紡績株式会社
手続補正書(方式)
%式%
1 事件の表示
昭和58年特許願第242890号
a 発明の名称
a−アミラーゼ活性測定法
& 補正をする者
事件との関係 特許出願人
大阪市北区堂島浜二丁目2番8号
昭和60年5月8日
(発送日 昭和60年5月28日)
a 補正の内容
1 明細書第1頁第3行目
ra−ラミラーゼ活性測定法」を「α−アミラーゼ活性
測定法」に訂正する。
測定法」に訂正する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 C式中 いはノ・ロゲン原子または− −R1またはグ
ルコビラノース残基を示す。 Xは0.OOC,080,またはNUを示し、a Sは
、を換または未置換のアルキル基・置換または未置換の
フェニル基またはピリジル基を示す。またR′は置換ま
たは未置換の71ノール残基を示す。nは0〜8の整数
を示す。)で表わされる非還元性末端を修飾したα−お
よび/またはβ−フェニルマルトオリゴサイドを基質と
して、α−グルコシダーゼおよび/またはグルコアミラ
ーゼおよび必要によりβ−グルコシダーゼの共存下に、
試料を接触させ、遊離するフェノール系化合物を測定す
ることにより、試料中のα−アミラーゼ活性を測定する
ことを特徴とするσ−アミラーゼ活性測定法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP24289083A JPS60237998A (ja) | 1983-12-22 | 1983-12-22 | α−アミラ−ゼ活性測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP24289083A JPS60237998A (ja) | 1983-12-22 | 1983-12-22 | α−アミラ−ゼ活性測定法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS60237998A true JPS60237998A (ja) | 1985-11-26 |
JPH0424999B2 JPH0424999B2 (ja) | 1992-04-28 |
Family
ID=17095746
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP24289083A Granted JPS60237998A (ja) | 1983-12-22 | 1983-12-22 | α−アミラ−ゼ活性測定法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS60237998A (ja) |
Cited By (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS6163299A (ja) * | 1984-07-26 | 1986-04-01 | ジエンジム・コ−ポレ−シヨン | アルフア・アミラ−ゼの検出法 |
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JPS63170393A (ja) * | 1986-07-11 | 1988-07-14 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 非還元末端修飾オリゴサッカライド誘導体の新規な製造法 |
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WO2002053766A1 (fr) * | 2000-12-28 | 2002-07-11 | Japan Science And Technology Corporation | Procede permettant de determiner l'activite enzymatique des hydrolases du sucre |
US6420129B1 (en) | 1998-03-31 | 2002-07-16 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Reagent composition for determination of electrolytes |
-
1983
- 1983-12-22 JP JP24289083A patent/JPS60237998A/ja active Granted
Cited By (12)
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Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0424999B2 (ja) | 1992-04-28 |
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