JPH0379986B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、バチルス・リケニホルミス
（Bacillus licheniformis）MN−001に関するも
のである。 更に詳細には、本発明は、プロテアーゼ、セル
ラーゼを菌体外に多量生成する飼料添加に好適な
バチルス・リケニホルミス MN−001に関する
ものである。 現在、配合飼料は、自家製飼料を主体とするも
のから、近代的工場で生産される配合飼料への転
換がすすみ、全飼料に占める配合飼料の比率は極
めて高い値となつている。 これらの配合飼料においては、主原料である穀
類、油粕類、魚類、油脂類の他に、栄養補給、消
化吸収改善、成長促進、疾病の防止等々の目的
で、アミノ酸類、ミネラル類、ビタミン類、抗生
物質、酵素類、生菌剤等が副原料として用いられ
ている。 しかしながらこのうち抗生物質についてはその
残留移行により、人間にアレルギーや、腸内細菌
の変化を引き起こす恐れがあるため使用上の規制
が強められ、使用範囲が限定、縮小される方向に
ある。また酵素類については、リパーゼ剤、アミ
ラーゼ剤、セルラーゼ剤、プロテアーゼ剤、混合
酵素剤等について、生菌剤については、納豆菌、
乳酸菌、酩酸菌、ビフイズス菌等について検討さ
れているが、その効果がまちまちであり常に一定
した効果は期待できないのが現状である。 本発明者らは、生体にきわめて安全なバチルス
属の菌のなかに酵素生産生のよりすぐれた変異株
が見出せるのではないかとの想定のもとに、自然
界から多くのバチルス属の菌を分離し、更に変異
操作を行つた結果、プロテアーゼ、セルラーゼの
菌体外生産能が著じるしくすぐれたバチルス・リ
ケニホルミス MN−001を単離獲得するに至つ
た。 ここに単離されたバチルス・リケニホルミス
MN−001は菌学的性質においてはバチルス・リ
ケニホルミスと嫌気的条件下で生育する点及びそ
の他の性質でよく一致しているが、プロテアー
ゼ、セルラーゼの生産性が顕著である点で全く相
違しており、バチルス・リケニホルミスの変異株
と認められたものである。 バチルス・リケニホルミス MN−001は微工
研にMN−001の表示の下にFERM BP−266とし
て寄託されている。 次に、バチルス・リケニホルミス MN−001
の菌学的性質を示す。 Ａ 形態 (1) 巾0.5〜0.8μｍ、長さ２〜3μｍの稈菌。 (2) グラム染色：陽性。 (3) 楕円状の内生胞子を形成。 (4) 運動性：有。 Ｂ 成育 (1) 普通寒天培地：非常に良く生育する。色素
の生成なし。 (2) 糖蜜、硫酸アンモニウムを主体とした培
地：非常に良く生育する。色素の生成なし。 (3) 食塩液体培地 ５％：生育する。 ７％：生育する。 10％：生育する。 Ｃ 生理学的性質 (1) カタラーゼ生成 ＋ (2) 嫌気的条件下での生育 ＋ (3) VP反応 ＋ (4) 高温での生育状態 50℃ ＋ 55℃ − (5) 糖類から酸生成の有無 グルコース ＋ Ｌ−アラビノース ＋ Ｄ−キシロース ＋ マンニツト ＋ Ｄ−タガトース ＋ (6) アルギニンジヒドロラーゼ ＋ (7) レシチナーゼ − (8) デンプンの加水分解性 ＋ (9) ゼラチンの加水分解性 ＋ (10) DNAの加水分解性 ＋ (11) クエン酸塩の利用性 ＋ (12) プロピオン酸塩の利用性 ＋ (13) 硝酸還元性 ＋ (14) インドール生成 − (15) フエニルアラニンの脱アミノ化 − (16) 特異的性質： プロテアーゼ（バチルス・リケニホルミス
IFO 12199に比較して約10倍菌体外に生産
する） セルラーゼ（バチルス・リケニホルミス
IFO 12199に比較して約15倍菌体外に生産す
る） の菌体外生産能が著じるしく高い。 本発明のバチルス・リケニホルミス MN−
001を培養するには、通常の醗酵法に準じて、液
体培養、又は固体培養する事によつて行なえばよ
い。 培地としては天然培地、半合成培地、合成培地
等いずれでも使用する事ができる。培地の組成
は、（）炭素源としては、グルコース、サツカ
ロース、デキストリン、グリセリン、デンプン、
糖蜜等を、（）窒素源としては、ペプトン、肉
エキス、酵母エキス、乾燥酵母、大豆粕、尿素、
チオ尿素、アンモニウム塩、硝酸塩、その他有機
あるいは無機窒素化合物を、（）無機塩として
は、マグネシウム、マンガン、カリウム、カルシ
ウム、鉄等の燐酸塩、硝酸塩、炭酸塩、塩化物な
どが用いられる。またアミノ酸類、ビタミン類、
核酸およびその関連化合物を添加してもよい。培
養温度は、通常の醗酵法に準ずるが、たとえば20
℃〜50℃で適当に培養できる。培養期間も通常の
醗酵法に準ずるがたとえば12時間〜５日で好適に
培養できる。 ここに得られた培養物は、そのままもしくは洗
滌をくりかえして菌体のみにして凍結乾燥、噴霧
乾燥するなどにより製剤化することができる。 動物用飼料又は飼料添加物とする場合は、たと
えば、培養液をそのまま、あるいは、小麦粉、デ
ンプン、デキストリン等や、飼料用原料の穀類、
脱脂米ぬか等の糟糖類、油粕等の適当な希釈剤を
用い、製剤化する事ができる。又培養液から菌体
のみを洗滌分離し、同様に製剤化して、用いても
よい。 このようにして得られたバチルス・リケニホル
ミス MN−001製剤は動物用飼料又は飼料添加
物として、肉用牛、乳用牛、子牛、豚、子豚、
羊、山羊、馬、ウサギ、犬、猫等の家畜類、およ
び肉用鶏、採卵鶏、雛、種鶏、アヒル、鵞鳥、七
面鳥、うずら、子鳥等の家禽類等に適宜与えて有
効である。また投与量は対象動物により又対象動
物の日令により、又飼料の他の成分により変わり
うるもので一概には規定できないが通常バチル
ス・リケニホルミス MN−001菌体が飼料１Kg
当り10²〜10¹⁵個、望ましくは10⁴〜10¹²個、最も
望ましくは10⁵〜10¹⁰個になるごとく添加すると
よい。 次に本発明の試験例、実施例、参考例を示す。 試験例 １ バチルス・リケニルホルミス IFO12199 ２ バチルス・リケニルホルミス MN−001、
FERM BP−266 上記１、２の各菌株を、500ml坂口フラスコに
糖蜜２ｇ、硫酸アンモニウム１ｇ、K₂HPO₁0.1
ｇ、酵母エキス0.05ｇを添加し、水道水を100ml
入れ、0.1N HClと0.1N NaOHでPHを８に調整
した後、121℃で15分間殺菌した培地に接種し、
37℃で24時間振とう培養し、それぞれの菌体外酵
素（プロテアーゼ、アミラーゼ、セルラーゼ）を
測定した。 測定方法は培養液を粗酵素液として用い、ア
ミラーゼ活性測定には、基質としてデンプンを用
いたジニトロサリチル酸法、セルラーゼ活性測定
には、基質としてカルボキシメチルセルロースを
用いたジニトロサリチル酸法、プロテアーゼ活性
測定には、基質としてミルクカゼインを用いた銅
Folin法を採用し、菌体外酵素産能を比較した。
なお、表中の数字はIFO 12199の値を１とした時
の相対値である。 結果は次の第１表に示される。

【表】 実施例 ジヤーフアーメンターに試験例と同じ組成の培
地１を入れ、殺菌後あらかじめ前培養した
Bacillus licheniformis MN−001、FERM BP
−226を接種し、24時間振とう培養した。遠心分
離により培養源から菌体を分離後、デンプン１Kg
を添加し乾燥させBacillus licheniformis MN−
001胞子製剤を作製した。この製剤の生菌数は10⁸
個／ｇであつた。 参考例 ブロイラー120羽を用い（雄雌各40羽）各群40
派（雄雌20羽）ずつの２区に分け、第２表に示し
た基本飼料に対照区（デンプン添加区）実施例で
得たMN−001製剤添加区（デンプン１ｇ当り10⁸
個の菌数を含有）を設け、８週間の飼養試験を実
施した。結果を第３表に示した。

【表】

【表】 以上のように、MN−001製剤は、動物に対し
て優れた効果を発揮する。 また菌体外酵素産生能の優れたMN−001製剤
は動物用飼料又は飼料添加物のみならず、魚類等
の飼料用、食品用、医薬品用、化粧品用、酵素製
造用等の用途にも有効である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 下記の菌学的性質を有するバチルス・リケニ
   ホルミス MN−001。 Ａ 形態 (1) 巾0.5〜0.8μｍ、長さ２〜3μｍの稈菌。 (2) グラム染色：陽性。 (3) 楕円状の内生胞子を形成。 (4) 運動性：有。 Ｂ 生育 (1) 普通寒天培地：非常に良く生育する。色素
   の生成なし。 (2) 糖蜜、硫酸アンモニウムを主体とした培
   地：非常に良く生育する。色素の生成なし。 (3) 食塩液体培地 ５％：生育する。 ７％：生育する。 10％：生育する。 Ｃ 生理学的性質 (1) カタラーゼ生成 ＋ (2) 嫌気的条件下での生育 ＋ (3) VP反応 ＋ (4) 高温での生育状態 50℃ ＋ 55℃ − (5) 糖類から酸生成の有無 グルコース ＋ Ｌ−アラビノース ＋ Ｄ−キシロース ＋ マンニツト ＋ Ｄ−タガトース ＋ (6) アルギニンジヒドロラーゼ ＋ (7) レシチナーゼ − (8) デンプンの加水分解性 ＋ (9) ゼラチンの加水分解性 ＋ (10) DNAの加水分解性 ＋ (11) クエン酸塩の利用性 ＋ (12) プロピオン酸塩の利用性 ＋ (13) 硝酸還元性 ＋ (14) インドール生成 − (15) フエニルアラニンの脱アミノ化 − (16) 特異的性質： プロテアーゼ、セルラーゼの菌体外生産能
   力が著じるしく高い。