JP7361727B2 - Ｐｓｍａ結合剤及びその使用 - Google Patents

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ケイ マトソン，ベサニー
マリー マクデヴィット，テレサ
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Description

（配列表）
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出済みであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれている配列表を含む。当該ＡＳＣＩＩのコピーは、２０１９年４月３０日に作成され、ファイル名はＪＢＩ５１５６ＷＯＰＣＴ１＿ＳＬ．ｔｘｔであり、そのサイズは２７２，４４３バイトである。
（発明の分野）
本明細書で提供される開示は、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に免疫特異的に結合するモノクローナル抗体、ＰＳＭＡ及びクラスター決定因子３（ＣＤ３）に免疫特異的に結合する多重特異性抗体、並びに当該抗体の産生及び使用方法に関する。
前立腺癌は、全世界の男性において２番目に多い癌であり、癌に関連する死因としては６番目に多い。世界的には、およそ１１０万人の新たな症例及び３０万人の死亡例が毎年報告されており、これは全癌死の４パーセントを構成する。男性の６人に１人が、この疾患を生涯に診断されるものと推定されている。米国では、前立腺癌の９０％以上が局所期又は限局期で発見されている。これらの早期のステージでは、５年生存率は１００％に近い。しかしながら、癌が転移した場合、５年生存率は２８％まで低下し、進行した前立腺癌に対する有効な治療の必要性が残っている。
前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）は、前立腺細胞の一部が異常に見え、異常に挙動し始めた状態である前立腺上皮内腫瘍（ＰＩＮ）、並びに原発性及び転移性前立腺癌においてで高度に発現するタイプＩＩ膜タンパク質である［Ｂｏｓｔｗｉｃｋ ＤＧ，Ｐａｃｅｌｌｉ Ａ，Ｂｌｕｔｅ Ｍ，Ｒｏｃｈｅ Ｐ，Ｍｕｒｐｈｙ ＧＰ．Ｐｒｏｓｔａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｎｅｏｐｌａｓｉａ ａｎｄ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ：Ａ ｓｔｕｄｙ ｏｆ １８４ ｃａｓｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ １９９８；８２（１１）：２２５６－２２６１．］。癌組織におけるＰＳＭＡの発現は、疾患のステージとグリソンスコアと相関する［Ｋａｗａｋａｍｉ Ｍ，Ｎａｋａｙａｍａ Ｊ．Ｅｎｈａｎｃｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｇｅｎｅ ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ａｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １９９７；５７（１２）：２３２１－２３２４．］。ＰＳＭＡ発現はまた、ホルモン抵抗性患者の前立腺癌細胞で高く［Ｗｒｉｇｈｔ ＧＬ Ｊｒ，Ｇｒｏｂ ＢＭ，Ｈａｌｅｙ Ｃ，Ｇｒｏｓｓｍａｎ Ｋ，Ｎｅｗｈａｌｌ Ｋ，Ｐｅｔｒｙｌａｋ Ｄ，Ｔｒｏｙｅｒ Ｊ，ＫｏｎｃｈｕｂａＡ，Ｓｃｈｅｌｌｈａｍｍｅｒ ＰＦ，Ｍｏｒｉａｒｔｙ Ｒ．Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｓｔａｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｔｉｇｅｎ ａｆｔｅｒ ａｎｄｒｏｇｅｎ－ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｕｒｏｌｏｇｙ １９９６；４８（２）：３２６－３３４．］、ＰＳＭＡ発現の上昇は、独立した病気の再発のマーカーであることが示されている［Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ ＣＳ，Ｌｅｍｂｅｓｓｉｓ Ｐ，Ｓｏｕｒｌａ Ａ，Ｍｉｌａｔｈｉａｎａｋｉｓ Ｃ，ＴｓｉｎｔａｖｉｓＡ，Ｋｏｕｔｓｉｌｉｅｒｉｓ Ｍ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｔａｇｉｎｇ ｂｙ ＲＴ－ｐＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｆｏｒ ＰＳＡ ａｎｄ ＰＳＭＡ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ａｎｄ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓａｍｐｌｅｓ ｉｓ ａｎ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ ｏｆ ｔｉｍｅ ｔｏ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｆａｉｌｕｒｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇｒａｄｉｃａｌ ｐｒｏｓｔａｔｅｃｔｏｍｙ ｆｏｒ ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ ｌｏｃａｌｉｚｅｄ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ２００４；２１（６）：４９５－５０５．］。高レベルのＰＳＭＡ発現は、外科的治療を受けた前立腺癌における早期前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）再発と相関する。ＰＳＭＡ発現レベルは、疾患の悪性度と相関し、そのため、前立腺癌の特性評価及び後続治療のための優れた標的としてのＰＳＭＡが強く支持される。
前立腺癌の現在の治療方法としては、手術、放射線療法、及びホルモン療法が挙げられる。ホルモン療法によってテストステロンレベルを下げたにもかかわらず前立腺癌が増殖する場合、治療選択肢が限定される。一般的には、癌ワクチンであるシプリューセルＴ（sipuleucel-T）、放射性治療剤（塩化ラジウム２２３など）、二次ホルモン療法（アビラテロン又はエンザルタミドなど）、及び／又は化学療法（ドセタキセル及びカバジタキセル）が、順番にホルモン療法に加えられる。これらの治療のそれぞれは、癌の増殖を数ヶ月遅らせ、疾患によりもたらされる症状を緩和することが可能であるが、疾患は最終的にはこれらの治療に対して耐性となる。
このことは、ＰＳＭＡ発現進行前立腺癌に対するより改善された治療及び有効な療法の必要性を明確に示す。
本明細書には、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ（チンパンジー、ｃｈｉｍｐ）、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル、ｍａｃａｑｕｅ、ｃｙｎｏ）及び／又はヒトのＰＳＭＡ、及びその抗原結合フラグメントに免疫特異的に結合する抗体が提供される。また、提供されたＰＳＭＡ特異的抗体及び抗原結合フラグメントをコード可能な関連するポリヌクレオチド、提供された抗体及び抗原結合フラグメントを発現している細胞及び関連するベクター、並びに検出可能に標識された抗体及び抗原結合フラグメントもまた記載されている。加えて、提供された抗体及び抗原結合フラグメントを使用する方法が記載されている。例えば、ＰＳＭＡ特異的抗体及び抗原結合フラグメントを使用することで、ＰＳＭＡ発現癌の進行、退縮、又は不変性を診断若しくはモニタすること、患者が癌を処置される必要があるかを判定すること、又は対象がＰＳＭＡ発現癌に苦しんでおり、かつＰＳＭＡ特異的抗癌治療剤、例えば、本明細書に記載されたＰＳＭＡ及びＣＤ３に対する多重特異性（二重特異性、三重特異性など）抗体による処置に適しているかを判定すること、を行うことができる。
本明細書において、ＰＳＭＡ及びＣＤ３に免疫特異的に結合する多重特異性抗体、並びにその多重特異性抗原結合フラグメントが更に提供される。提供されるＰＳＭＡ×ＣＤ３多重特異性抗体をコード可能な関連するポリヌクレオチド、提供される抗体を発現している細胞、並びに関連するベクター、並びに検出可能に標識された多重特異性抗体もまた記載されている。加えて、提供された多重特異的抗体を使用する方法が記載されている。例えば、ＰＳＭＡ×ＣＤ３多重特異性抗体を使用することで、ＰＳＭＡ発現癌の進行、退縮、又は不変性を診断若しくはモニタすること、患者が癌を処置される必要があるかを判定すること、又は対象がＰＳＭＡ発現癌に苦しんでおり、かつＰＳＭＡ特異的抗癌治療剤、例えば、本明細書に記載されたＰＳＭＡ×ＣＤ３多重特異性抗体による処置に適しているかを判定することができる。
ＰＳＭＡ特異性抗体
本発明は、それぞれ配列番号３１、４２及び４３の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル、ｍａｃａｑｕｅ、ｃｙｎｏ）及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号３１、４２、４３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号１１、１２及び１３の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号２５、２６及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号２５、２６、２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号２８、２９及び３０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号２０、２１及び２２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号２０、２１、及び２２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号２３、１２及び２４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号１４、１５、及び１６、又はそれぞれ配列番号１４、１５及び１６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号１４、１５、及び１６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号１７、１８及び１９のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号３６、３７及び３８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号３６、３７、及び３８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号３９、４０及び４１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号１２２、１２３及び１２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号１２２、１２３、及び１２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号２３、１２、及び２４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号３１、４４及び４５の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル、ｍａｃａｑｕｅ、ｃｙｎｏ）及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号３１、４４、及び４５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号４６、２９及び２７の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号３６、３７及び４８の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル、ｍａｃａｑｕｅ、ｃｙｎｏ）及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号３６、３７、及び４８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号４９、５０及び５１の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号３６、３７及び５２の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル、ｍａｃａｑｕｅ、ｃｙｎｏ）及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号３６、３７、及び５２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号４９、５０及び５１の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号８、９及び１０の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル、ｍａｃａｑｕｅ、ｃｙｎｏ）及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号８、９、及び１０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号１１、１２及び１３の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号３１、３２及び３３の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル、ｍａｃａｑｕｅ、ｃｙｎｏ）及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号３１、３２、及び３３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号３４、１２及び３５の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号５３、５４及び５５の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル、ｍａｃａｑｕｅ、ｃｙｎｏ）及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明は、それぞれ配列番号５３、５４、及び５５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号２３、１２及び３５の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片を提供する。
本発明はまた、本明細書に記載の特定のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、本明細書に記載の特定の可変重鎖領域（ＶＨ）及び可変軽鎖領域（ＶＬ）アミノ酸配列を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、本明細書に記載される特定のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ３、ＶＨ、ＶＬ、重鎖又は軽鎖アミノ酸配列を含む、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ及び／又はヒトＰＳＭＡに特異的に結合する、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号３１、４２、４３、１１、１２、及び１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号３６、３７、３８、３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号２０、２１、２２、２３、１２、及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号１２２、１２３、１２４、２３、１２、及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号３１、４４、４５、４６、２９、及び４７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号３６、３７、４８、４９、５０、及び５１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号３６、３７、５２、４９、５０、及び５１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号８、９、１０、１１、１２、及び１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号３１、３２、３３、３４、１２、及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号５３、５４、５５、２３、１２、及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号２５、１３０、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号２５、１３０、２７、１３１、２９、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号２５、１３０、２７、２８、１３３、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、２９、及び１３６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号２５、１３５、２７、１３１、２９、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、１３３、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、２９、及び１３６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号２５、１３４、２７、１３１、２９、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、１３３、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、それぞれ配列番号２５、１３７、２７、２８、１３３、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、配列番号７４の重鎖可変領域（ＶＨ）と配列番号６１の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、第２のドメインが、配列番号１０４のＶＨと配列番号１０５のＶＬを含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、配列番号７４の重鎖可変領域（ＶＨ）と配列番号６１の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、第２のドメインが、配列番号１５２のＶＨと配列番号１５３のＶＬを含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、配列番号６６の重鎖可変領域（ＶＨ）と配列番号６７の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、第２のドメインが、配列番号１０４のＶＨと配列番号１０５のＶＬを含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、配列番号６６の重鎖可変領域（ＶＨ）と配列番号６７の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、第２のドメインが、配列番号１５２のＶＨと配列番号１５３のＶＬを含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、配列番号６４の重鎖可変領域（ＶＨ）と配列番号６５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、第２のドメインが、配列番号１０４のＶＨと配列番号１０５のＶＬを含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、配列番号６４の重鎖可変領域（ＶＨ）と配列番号６５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、第２のドメインが、配列番号１５２のＶＨと配列番号１５３のＶＬを含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、配列番号６２の重鎖可変領域（ＶＨ）と配列番号６３の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、第２のドメインが、配列番号１０４のＶＨと配列番号１０５のＶＬを含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、配列番号６２の重鎖可変領域（ＶＨ）と配列番号６３の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、第２のドメインが、配列番号１５２のＶＨと配列番号１５３のＶＬを含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、配列番号７５の重鎖可変領域（ＶＨ）と配列番号７６の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、第２のドメインが、配列番号１０４のＶＨと配列番号１０５のＶＬを含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、配列番号７５の重鎖可変領域（ＶＨ）と配列番号７６の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、第２のドメインが、配列番号１５２のＶＨと配列番号１５３のＶＬを含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、配列番号１６０の重鎖可変領域（ＶＨ）と配列番号６５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、第２のドメインが、配列番号１０４のＶＨと配列番号１０５のＶＬを含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含み、第１のドメインが、配列番号１６０の重鎖可変領域（ＶＨ）と配列番号６５の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、第２のドメインが、配列番号１５２のＶＨと配列番号１５３のＶＬを含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体及びその断片も提供する。
本発明はまた、治療薬又は造影剤に結合させた本発明の抗体又はその抗原結合部分を含む、免疫複合体も提供する。
本発明はまた、本発明の抗体と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物も提供する。
本発明はまた、本発明の抗体ＶＨ、抗体ＶＬ、又は抗体ＶＨと抗体ＶＬとをコードしているポリヌクレオチドも提供する。
本発明はまた、本発明の抗体ＶＨ、抗体ＶＬ、又は抗体ＶＨとＶＬとをコードしているポリヌクレオチドを含む、ベクターも提供する。
また、本発明は、本発明のベクターを含む宿主細胞を提供する。
本発明はまた、抗体が発現される条件下で本発明の宿主細胞を培養することと、かかる宿主細胞より産生された抗体を回収することと、を含む、本発明の抗体の産生方法も提供する。
本発明はまた、治療有効量の本発明の単離された抗体を、癌の治療に十分な期間にわたって治療を必要とする対象に投与することを含む、対象におけるＰＳＭＡ過剰発現疾患及び／又は癌の治療方法も提供する。
本発明はまた、本発明の抗体を含むキットも提供する。
ＬＮＣａＰ細胞に結合する抗ＰＳＭＡファージパニングのヒットの滴定曲線を示す。 チンパンジーＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞に結合する抗ＰＳＭＡファージパニングのヒットの滴定曲線を示す。 カニクイザルＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞に結合する抗ＰＳＭＡファージパニングのヒットの滴定曲線を示す。 連番が振られているＳＰ３４のアミノ酸配列を示す。ＡｂＭの定義（Ｋ．Ｒ．Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ａ．Ｃ．Ｍａｒｔｉｎ，２００８．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４５，３８３２－３８３９）におけるＣＤＲを下線で示す。Ｓｅｒ２３０は、パパイン開裂Ｆａｂに存在する最後のＨＣ残基である。残基２３１～４５５は、ＩＧＨＧ３＿マウス（マウスＩｇＧ３、アイソフォーム２）からのものである。 ＶＨ（配列番号１０４、１０２、１１５、及び１１６、それぞれ表示順）及びＶＬ（配列番号１０３、１１７、及び１０５、それぞれ表示順）についての、ヒトフレームワーク適合（「ＨＦＡ」）変異体を示す。ナンバリングは、連番であり、ＡｂＭ定義におけるＣＤＲに下線を引いていて、ＳＰ３４とは異なる残基は太字で強調され、ＨＦＡ変異体における逆突然変異は、太字にし、下線を引いている。図には、それぞれ配列番号１２８及び１２９として、ｓｐ３４ ＶＨ及びＶＬ配列を開示する。 ＳＰ３４ ＨＦＡ変異体の初代ヒトＴ細胞への結合性を示す。 ＳＰ３４ ＨＦＡ変異体の初代カニクイザルＴ細胞への結合性を示す。 ＳＰ３４ ＨＦＡ変異体がｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて初代ヒトＴ細胞を活性化することを示す。ネガティブコントロールを、白色で示し、ポジティブコントロールを、黒色で示す。 ＳＰ３４ ＨＦＡ変異体がｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて初代カニクイザルＴ細胞を活性化することを示す。ネガティブコントロールを、白色で示し、ポジティブコントロールを、黒色で示す。非ＣＤ３ｅ交差反応性抗体Ｇ１１は、追加の陰性対照として使用した。 ＳＰ３４ ＨＦＡ変異体による結合性と活性化との相関を示す。ヒト（図１０Ａ）及びカニクイザル（図１０Ｂ）についての、平均結合性の値及びＣＤ６９の平均蛍光強度（「ＭＦＩ」）の値を互いに対してプロットした。 ＳＰ３４ ＨＦＡ変異体による結合性と活性化との相関を示す。ヒト（図１０Ａ）及びカニクイザル（図１０Ｂ）についての、平均結合性の値及びＣＤ６９の平均蛍光強度（「ＭＦＩ」）の値を互いに対してプロットした。 ＬＮＣａＰ細胞に結合するＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の滴定曲線を示す。 ＬＮＣａＰ細胞に結合するＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の滴定曲線を示す。 ＬＮＣａＰ細胞に結合するＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の滴定曲線を示す。 ＬＮＣａＰ細胞に結合するＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の滴定曲線を示す。 ＬＮＣａＰ細胞に結合するＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の滴定曲線を示す。 ＬＮＣａＰ細胞に結合するＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の滴定曲線を示す。 チンパンジーＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞に結合するＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の滴定曲線を示す。 カニクイザルＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞に結合するＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の滴定曲線を示す。 ヒトＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞に結合するＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の滴定曲線を示す。 Ｔ細胞媒介性クロム放出毒性アッセイにおける、ヒトＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞に対するＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の滴定曲線を示す。 ヒトＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞のＴ細胞媒介性クロム放出毒性アッセイにおける、ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体中高親和性ＣＤ３アームに対する培地との比較を示す。 Ｔ細胞媒介性クロム放出毒性アッセイにおける、ＬＮＣａＰ細胞に対するＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の滴定曲線を示す。 Ｔ細胞媒介性クロム放出毒性アッセイにおける、カニクイザルＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞に対するＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の滴定曲線を示す。 Ａ、Ｂ、及びＣは、Ｔ細胞媒介性カスパーゼ３／７毒性アッセイにおける、ヒト及びカニクイザルＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞並びにＬＮＣａＰ細胞に対する、ＰＳ３Ｂ２７及び対照二重特異性抗体の滴定曲線を示す。 ＰＳ３Ｂ２７によるＴ細胞活性化を示す。 ＰＢＭＣヒト化ＮＳＧマウスのＰＳ３Ｂ２７又は対照二重特異性抗体を用いて治療した、ＨＥＫ２９３－ＰＳＭＡ異種移植片の腫瘍化抑制を示す。 ＰＳ３Ｂ２７及び対照二重特異性抗体治療されたＨＥＫ２９３－ＰＳＭＡ異種移植片を有するＰＢＭＣヒト化ＮＳＧマウスの平均体重を示す。 雄性ＣＤ１ヌードマウスにおける混合ＨＥＫ２９３－ＰＳＭＡ／Ｔ細胞異種移植片の腫瘍化抑制における、ＰＳ３Ｂ２７及び対照二重特異性抗体の有効性を示す。 ＰＳ３Ｂ２７及び対照二重特異性抗体で治療された混合ＨＥＫ２９３－ＰＳＭＡ／Ｔ細胞異種移植片を有するＣＤ１雄性ヌードマウスの体重を示す。 ヒトＰＳＭＡ ＥＣＤホモ二量体に結合したＰＳＭＢ８３（別名「ＰＳＭＭ８４」）Ｆａｂの全体構造を示す。 ＰＳＭＡとＰＳＭＢ８３（別名「ＰＳＭＭ８４」）軽鎖との主な相互作用の近接図を示す。 ＰＳＭＡとＰＳＭＢ８３（別名「ＰＳＭＭ８４」）重鎖との主な相互作用の近接図を示す。 ヒト（配列番号３）、マウス（配列番号１５７）及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）（配列番号２）ＰＳＭＡの配列内のＰＳＭＢ８３（別名「ＰＳＭＭ８４」）のエピトープ残基の比較を示す。エピトープ残基を網掛けし、配列分散を下線で示す。 ＰＳＭＢ８３（別名「ＰＳＭＭ８４」）のパラトープ残基を示す。ＣＤＲに下線を付け、パラトープ残基を網掛けしている。図は、出現順に配列番号１５８及び１５９をそれぞれ開示する。 ＰＳＭＡとＰＳＭＢ８３（別名「ＰＳＭＭ８４」）との間に作られる直接接触の相互作用マップを示す。ファンデルワールス相互作用は破線で示し、Ｈ結合は実線であり、矢印は骨格原子を指す。 親ＰＳＭＢ８３の発現と比較した、ＰＳＭＢ８３由来の抗ＰＳＭＡ Ｆａｂクローンの発現レベルを示す。対数濃度に対して未加工発光数をプロットした。 親ＰＳＭＢ８３の結合と比較した、ＰＳＭＢ８３由来の抗ＰＳＭＡ ＦａｂクローンのヒトＰＳＭＡへの結合を示す。対数濃度に対して未加工発光数をプロットした。 親ＰＳＭＢ８３の結合と比較した、ＰＳＭＢ８３由来の抗ＰＳＭＡ Ｆａｂクローンのｃｙｎｏ ＰＳＭＡへの結合を示す。対数濃度に対して未加工発光数をプロットした。 親ＰＳＭＢ８３の結合と比較した、ＰＳＭＢ８３由来の抗ＰＳＭＡ ＦａｂクローンのヒトＰＳＭＡへの結合を示す。未加工発光数を、Ｆａｂ発現レベルによって補正した。 親ＰＳＭＢ８３の結合と比較した、ＰＳＭＢ８３由来の抗ＰＳＭＡ Ｆａｂクローンのｃｙｎｏ ＰＳＭＡへの結合を示す。未加工発光数を、Ｆａｂ発現レベルによって補正した。 親和性成熟したＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体のサブセットのＬＮＣＡＰ細胞結合を示す。 親和性成熟したＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体のサブセットのＬＮＣＡＰ細胞結合を示す。 親和性成熟したＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体のＰＳＭＡ陰性ＰＣ３細胞結合の結果を示す。 機能性細胞殺傷アッセイにおけるＰＳＭＡ×ＣＤ３親和性成熟二重特異性Ａｂの結果を示す。 Ｔ細胞ヒト化ＮＳＧマウスにおけるＬｎＣＡＰ ＡＲ．ＴＢヒト前立腺異種移植片中のＰＳ３Ｂ７９の抗腫瘍効果を示す。週に２度皮下のＬｎＣＡＰ ＡＲ．ＴＢ腫瘍を測定し、その結果を、平均腫瘍容積としてｍｍ３±（ＳＥＭ）（＊、ｐ＜０．０００１）で表した。 Ｔ細胞ヒト化ＮＳＧマウスにおけるＬｎＣＡＰ ＡＲ．ＴＢヒト前立腺異種移植片中のＰＳ３Ｂ９０の抗腫瘍効果を示す。週に２度皮下のＬｎＣＡＰ ＡＲ．ＴＢ腫瘍を測定し、その結果を、平均腫瘍容積としてｍｍ３±（ＳＥＭ）（＊、ｐ＜０．００１）で表した。 Ｔ細胞ヒト化ＮＳＧマウス中に定着させた患者由来異種移植片ＬｕＣａＰ８６．２前立腺腫瘍モデルに対するＰＳ３Ｂ７２（ＰＳＭＡ×ＣＤ３）の効果を示す。週に２度皮下のＬｕＣａＰ８６．２腫瘍を測定し、その結果を、平均腫瘍容積としてｍｍ３±（ＳＥＭ）（＊、ｐ＜０．０００１）で表した。
本明細書に引用されている特許及び特許出願を含む（但しそれらに限定されない）全ての刊行物は、完全に記載されているかのように参照により、本明細書に援用される。
本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を記載する目的でのみ使用され、限定を意図するものではないと理解すべきである。特に断らない限り、本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する当業者によって一般的に理解されているものと同じ意味を有する。
本明細書に記載されているものと同様又は同等の任意の方法及び材料を、本発明の試験を実施するために使用することができるが、例示となる材料及び方法を本明細書に記載する。本発明を説明及び特許請求する上で以下の用語が使用される。
本明細書及び添付の「特許請求の範囲」において使用されるとき、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という単数形は、その内容について別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を包含する。したがって、例えば、「細胞（a cell）」という言及には、２つ又は３つ以上の細胞の組み合わせ、及びこれに類するものなどが含まれる。
「特異的結合」又は「特異的に結合する」又は「結合する」とは、抗体が抗原又はかかる抗原内部のエピトープに、他の抗原に対するより高い親和性で結合することを指す。典型的には、抗体は、約５×１０－８Ｍ以下、例えば約１×１０－９Ｍ以下、約１×１０－１０Ｍ以下、約１×１０－１１Ｍ以下、又は約１×１０－１２Ｍ以下の平衡解離定数（ＫＤ）で抗原又はかかる抗原内部のエピトープに結合し、非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合に関しては、典型的には、そのＫＤより少なくとも１００倍小さいＫＤで結合する。解離定数は標準的手法を用いて測定することができる。しかし、抗原又は抗原内部のエピトープに特異的に結合する抗体は、他の関連抗原、例えば、ヒト又はサル、例えば、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル、ｃｙｎｏ）又はＰａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ（チンパンジー、ｃｈｉｍｐ）などの他の種由来の同じ抗原（ホモログ）に対して交差反応性を有する場合がある。単一特異性抗体は、１つの抗原又は１つのエピトープに特異的に結合するのに対し、二重特異性抗体は、２つの異なる抗原又は２つの異なるエピトープに特異的に結合する。
「抗体」は、広い意味を持ち、マウス、ヒト、ヒト化、及びキメラモノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体、抗体断片、二重特異性又は多重特異性抗体、二量体、四量体、又は多量体抗体、一本鎖抗体、ドメイン抗体、並びに、必要とされる特異性の抗原結合部位を含む免疫グロブリン分子の、任意の他の改変された構成を含む、免疫グロブリン分子を含む。「完全長抗体分子」は、ジスルフィド結合によって相互に接続されている２本の重鎖（heavy chain、ＨＣ）及び２本の軽鎖（light chain、ＬＣ）、並びにこれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）から構成される。各重鎖は、重鎖可変領域（heavy chain variable region、ＶＨ）、並びに重鎖定常領域（ドメインＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３からなる）から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（light chain variable region、ＶＬ）及び軽鎖定常領域（constant region、ＣＬ）から構成される。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）が散在しており相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼称される超可変領域に更に分類され得る。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４で配置された、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲセグメントで構成される。
「相補性決定領域（ＣＤＲ）」は、抗体における「抗原結合部位」である。ＣＤＲは、様々な用語を用いて定義され得る：（ｉ）ＶＨ内に３つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）及びＶＬ内に３つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）存在する配列多様性に基づく相補性決定領域（ＣＤＲ）（Ｗｕ ａｎｄ Ｋａｂａｔ，（１９７０）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １３２：２１１－５０；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１）。（ｉｉ）ＶＨ内に３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ内に３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）存在する「超可変性領域」、「ＨＶＲ」、又は「ＨＶ」は、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋによって定義されているとおり、構造が超可変性である抗体可変ドメインの領域を指す（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，（１９８７）Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－１７）。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ＿ｉｍｇｔ＿ｏｒｇ）は、抗原結合部位についての標準的番号及び定義を提供する。ＣＤＲ、ＨＶ、及びＩＭＧＴの表記間の対応関係については、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，（２００３）Ｄｅｖ Ｃｏｍｐａｒａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２７：５５－７７に記載されている。本明細書で使用されている「ＣＤＲ」、「ＨＣＤＲ１」、「ＨＣＤＲ２」、「ＨＣＤＲ３」、「ＬＣＤＲ１」、「ＬＣＤＲ２」、及び「ＬＣＤＲ３」という用語は、本明細書において別途記載のない限り、上掲のＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＩＭＧＴにより記載されている方法のいずれかにより定義されるＣＤＲを含む。
免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、５つの主要なクラス、すなわちＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭに割り当てられ得る。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプのＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４として更に細分類される。どのような脊椎動物種の抗体軽鎖も、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、２つの明確に異なるタイプ、すなわち、カッパ（κ）及びラムダ（λ）のうちの一方に割り当てることができる。
「抗体断片」又は「抗原結合フラグメント」は、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、２、及び３、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、２、及び３、重鎖可変領域（ＶＨ）、又は軽鎖可変領域（ＶＬ）などといった、重鎖及び／又は軽鎖抗原結合部位を保持する免疫グロブリン分子の部分を指す。抗体又は抗原結合フラグメントとしては、周知のＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ及びＦｖフラグメント、並びに１つのＶＨドメインからなるドメイン抗体（ｄＡｂ）が挙げられる。ＶＨ及びＶＬドメインは互いに、合成リンカーを介して結合し、様々なタイプの一本鎖抗体設計を形成することができ、ＶＨ及びＶＬドメインが、個別の一本鎖抗体構築物により発現される場合では、ＶＨ／ＶＬドメインが分子内、又は分子間で対形成し、一価の抗原結合部位、例えば一本鎖Ｆｖ（single chain Fv、ｓｃＦｖ）又は二重特異性抗体を形成することができ、これらは、例えば国際公開第１９９８／４４００１号、同第１９８８／０１６４９号、同第１９９４／１３８０４号、及び同第１９９２／０１０４７号に記載されている。
「モノクローナル抗体」は、抗体重鎖からＣ末端リジンを除去するなどの可能な周知の変更を除き、各重鎖及び各軽鎖において単一のアミノ酸組成を有する抗体集団を指す。モノクローナル抗体は、２つの異なる抗原エピトープに結合する二重特異性のモノクローナル抗体を除き、典型的には１つの抗原エピトープに結合する。モノクローナル抗体は、抗体集団内で不均一なグリコシル化を有し得る。モノクローナル抗体は、単一特異性若しくは多重特異性、又は一価、二価、若しくは多価であり得る。二重特異性抗体は、モノクローナル抗体という用語に含まれる。
「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体又は抗体断片を指す（例えば、ＰＳＭＡに特異的に結合する単離された抗体は、ＰＳＭＡ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体の場合、二重特異性抗体は、ＰＳＭＡ及びＣＤ３の両方に特異的に結合し、ＰＳＭＡ及びＣＤ３以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない。「単離された抗体」は、純度が８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の抗体など、高純度に単離された抗体を包含する。
「ヒト化抗体」とは、抗原結合部位が非ヒト種に由来し、可変領域フレームワークがヒト免疫グロブリン配列に由来する、抗体を指す。ヒト化抗体は、フレームワーク内に置換を含む可能性があることから、フレームワークは、発現したヒト免疫グロブリン又はヒト免疫グロブリン生殖系列遺伝子の配列の正確なコピーでなくてもよい。
「ヒト抗体」とは、フレームワーク及び抗原結合部位の両方がヒト起源の配列に由来する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を有する抗体を指す。抗体が定常領域又は定常領域の一部を含む場合、定常領域もヒト起源の配列に由来する。
ヒト抗体は、抗体の可変領域がヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子を使用する系から得られた場合のヒト起源の配列に「由来する」重鎖可変領域又は軽鎖可変領域を含む。そのような系の例示的なものには、ファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリ、及び本明細書に記載されるヒト免疫グロブリン遺伝子座を保有するマウス又はラットなどといった、ヒト以外の遺伝子導入動物を含む。「ヒト抗体」は、例えば天然に存在する体細胞突然変異、あるいはフレームワーク若しくは抗原結合部位、又はこれらの両方への意図的な置換の導入により、ヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子と比較したときにアミノ酸の相違を含み得る。典型的には、「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子によってコード化されているアミノ酸配列と、アミノ酸配列において少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である。場合によっては、「ヒト抗体」は、例えばＫｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９６：５７－８６に記載されるヒトフレームワーク配列分析から得られたコンセンサスフレームワーク配列、又は例えばＳｈｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｊ ＭｏｌＢｉｏｌ ３９７：３８５－９６及び国際公開第２００９／０８５４６２号に記載される、ファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリに組み込まれた合成ＨＣＤＲ３を含有し得る。
ヒト免疫グロブリン配列に由来するヒト抗体は、ファージディスプレイ組み込み合成ＣＤＲ及び／又は合成フレームワークなどの系を用いて生成することもでき、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの突然変異導入に供して抗体特性を改善した結果、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるヒト抗体生殖系列レパートリーでは発現されない抗体を得ることもできる。
抗原結合部位が非ヒト種に由来する抗体は、「ヒト抗体」の定義には含まれない。
「組み換え体」は、異なる由来源のセグメントが結合され組み換えＤＮＡ、抗体、又はタンパク質を産生するとき、組み換え手段によって調製、発現、作成、又は単離されるＤＮＡ、抗体、及び他のタンパク質を指す。
「エピトープ」は、抗体が特異的に結合する抗原の部分を指す。エピトープは典型的には、化学的に活性な（極性、非極性又は疎水性など）部分の表面集団、例えばアミノ酸又は多糖側鎖などの部分の表面集団からなり、特定の三次元構造特性並びに特定の電荷特性を有し得る。エピトープは、立体配座上の空間単位を形成する連続的な及び／又は不連続なアミノ酸によって構成され得る。不連続なエピトープでは、抗原の直鎖配列の異なる部分にあるアミノ酸が、タンパク質分子の折り畳みにより三次元空間でごく近接するようになる。抗体「エピトープ」は、エピトープを識別するために使用する方法論によって異なる。
「パラトープ」は、抗原に特異的に結合する抗体の部分を指す。パラトープは元々一つながりのものであってもよく、又は一つながりの連続するアミノ酸ではなく抗体のアミノ酸のうち隣接していないもの同士が空間的に関係することによって形成される非連続なものであってもよい。「軽鎖パラトープ」及び「重鎖パラトープ」又は「軽鎖パラトープのアミノ酸残基」及び「重鎖パラトープのアミノ酸残基」はそれぞれ、抗原と接触する抗体の軽鎖残基及び重鎖残基を指し、あるいは概して「抗体パラトープ残基」は、抗原と接触するこれらの抗体アミノ酸を指す。
「二重特異性」は、２つの異なる抗原、又は同じ抗原中の２つの異なるエピトープと特異的に結合する抗体を指す。二重特異性抗体は、他の関連抗原、例えば、ヒト又はサル、例えば、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル、ｃｙｎｏ）又はＰａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓなどの、他の種（ホモログ）からの同じ抗原に対し交差反応性を有し得る、あるいは、２つ以上の異なる抗原間で共有されるエピトープに結合し得る。
「多重特異性」とは、同じ抗原内の２つ以上の異なる抗原、又は２つ以上の異なるエピトープに特異的に結合する抗体を意味する。多重特異性抗体は、他の関連抗原、例えば、ヒト又はサル、例えば、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル、ｃｙｎｏ）又はＰａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓなどの、他の種（ホモログ）からの同じ抗原に対し交差反応性を有し得る、あるいは、２つ以上の異なる抗原間で共有されるエピトープに結合し得る。
「変異体」は、１つ以上の改変、例えば、１つ以上の置換、挿入、又は欠失によって参照ポリペプチド又は参照ポリヌクレオチドとは異なるポリペプチド又はポリヌクレオチドを指す。
「ベクター」は、生物系内で複製可能な、又はそのような系間を移動することができる、ポリヌクレオチドを指す。ベクターポリヌクレオチドは、典型的には、ベクターを複製することができる生物学的要素を利用して生物系（例えば、細胞、ウイルス、動物、植物）及び再構成された生物系におけるこれらポリヌクレオチドの複製又は維持を促進する機能を有する、複製起点、ポリアデニル化シグナル、又は選択マーカーなどの要素を含有する。ベクターポリヌクレオチドは、一本鎖又は二本鎖のＤＮＡ若しくはＲＮＡ分子、又はこれらのハイブリッドであり得る。
「発現ベクター」は、発現ベクター中に存在するポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドの翻訳を指令するために、生物系又は再構成された生物系において利用できるベクターを指す。
「ポリヌクレオチド」とは、糖－リン酸骨格又は他の等価な共有結合化学によって共有結合しているヌクレオチド鎖を含む分子を指す。二本鎖及び一本鎖のＤＮＡ及びＲＮＡが、ポリヌクレオチドの典型例である。
「ポリペプチド」又は「タンパク質」は、ペプチド結合によって連結されてポリペプチドを形成する少なくとも２つのアミノ酸残基を含む分子を指す。５０個未満のアミノ酸からなる小分子ポリペプチドは、「ペプチド」と称され得る。
「フローサイトメトリー」は、少なくとも１つのレーザーを通過する際の流体中の粒子の物理的及び化学的特性を分析するために使用される手法である。細胞成分は、蛍光標識された後にレーザーによって励起され、様々な波長で発光する（Ａｄａｎ，ｅｔ ａｌ，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２０１６）１５４９－７８０１）。
「抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体」は、抗体の抗原決定基（例えばパラトープ又はＣＤＲ）を認識する抗体である。抗イディオタイプ抗体を産生又は調製するプロセスは、当該技術分野において既知である。（Ｌａｔｈｅｙ，Ｊ．ｅｔ ａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １９８６ ５７（１）：２９－３５）。抗Ｉｄ抗体は、抗原をブロッキングするものであっても、しないものであってもよい。抗原をブロッキングする抗Ｉｄ抗体を使用して、サンプル中の遊離抗体（例えば、本明細書に記載される本発明の抗ＰＳＭＡ、抗ＣＤ３又は二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体）を検出することもできる。ブロッキングしない抗Ｉｄ抗体を使用して、サンプル中の全抗体（遊離しているもの、抗原に一部結合しているもの、又は抗原に完全に結合しているもの）を検出することができる。抗Ｉｄ抗体は、抗Ｉｄ抗体が調製されている抗体で動物を免疫することによって調製することができる。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体は、サンプル中の治療用抗体（例えば、本明細書に記載される本発明の抗ＰＳＭＡ、抗ＣＤ３又は二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体）の濃度を検出するために使用される。
また、更に別の動物で免疫応答を誘導する免疫原として抗Ｉｄ抗体を使用して、いわゆる抗－抗Ｉｄ抗体を生成することもできる。抗－抗Ｉｄは、抗Ｉｄ抗体を誘導した元のｍＡｂとエピトープが同一であり得る。したがって、ｍＡｂのイディオタイプ決定基に対する抗体を使用することによって、同一の特異性の抗体を発現する他のクローンを同定することが可能である。抗Ｉｄ抗体は様々であってよく（これにより抗Ｉｄ抗体変異体が産生される）、及び／又は、ＰＳＭＡ若しくはＣＤ３に特異的に結合する抗体、若しくは二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体を本明細書の他の箇所に記載のものなどの任意の好適な手法により誘導体化してもよい。
ＰＳＭＡは、前立腺特異的膜抗原を指す。Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ（チンパンジー又はｃｈｉｍｐとも呼ばれる）ＰＳＭＡのアミノ酸配列を配列番号１に示す。配列番号１のうち、細胞外ドメインは残基４４～７５０にわたり、膜貫通ドメインは残基２０～４３にわたり、細胞質ドメインは残基１～１９にわたる。Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル、ｍａｃａｑｕｅ又はｃｙｎｏとも呼ばれる）ＰＳＭＡのアミノ酸配列を配列番号２に示す。配列番号２のうち、細胞外ドメインは残基４４～７５０にわたり、膜貫通ドメインは残基２０～４３にわたり、細胞質ドメインは残基１～１９にわたる。ヒトＰＳＭＡのアミノ酸配列を配列番号３に示す。配列番号３のうち、細胞外ドメインは残基４４～７５０にわたり、膜貫通ドメインは残基２０～４３にわたり、細胞質ドメインは残基１～１９にわたる。
ＣＤ３は、Ｔ細胞抗原受容体を指す。本明細書全体を通して、「ＣＤ３特異的」は、Ｔ細胞受容体複合体に特異的に結合する抗体を指す。より具体的には、抗体は、ＣＤ３γ、δ及びζ、並びにＴ細胞受容体α／β及びγ／δヘテロ二量体と共にＴ細胞受容体－ＣＤ３複合体を形成する、ＣＤ３εポリペプチドに結合する。この複合体は、いくつかの細胞内シグナル伝達経路を認識する抗原結合において重要な役割を果たす。ＣＤ３複合体はシグナル伝達を媒介し、Ｔ細胞の活性化及び増殖をもたらす。ＣＤ３は、免疫応答に必要である。
「～と組み合わせて」とは、２つ以上の治療薬を、混合物の状態で一緒に、単剤として同時に、又は単剤として任意の順序で逐次、対象に投与することを意味する。
「過剰発現」、「過剰発現した」及び「過剰発現している」は、参照サンプルと比較したとき、ＰＳＭＡのレベルが測定可能に高いサンプル、例えば癌細胞、悪性細胞又は癌組織を互換的に指す。過剰発現は、遺伝子増幅、又は転写若しくは翻訳の増大によって引き起こされ得る。サンプル中のタンパク質の発現及び過剰発現は、例えば生細胞又は溶解した細胞でＥＬＩＳＡ、免疫蛍光法、フローサイトメトリー、又は放射免疫測定を用いた周知のアッセイを用いて測定することができる。サンプル中のポリヌクレオチドの発現及び過剰発現は、例えば、蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、サザンブロッティング、又はＰＣＲ方を用いて測定することができる。参照サンプルと比較し、サンプル中のタンパク質又はポリヌクレオチドのレベルが少なくとも１．５倍高いとき、タンパク質又はポリヌクレオチドは過剰発現している。参照サンプルの選択は周知である。
「試料」は、対象から単離された類似の流体、細胞、又は組織に加えて、対象の体内に存在する流体、細胞、又は組織の収集物を指す。代表的なサンプルは、血液、血清及び漿膜液、血漿、リンパ液、尿、唾液、嚢胞液、涙液、糞便、痰、分泌組織及び器官の粘膜分泌物、膣分泌物、腹水、例えば、非固形腫瘍と関連するもの、胸膜、心膜、腹膜、腹部及びその他体腔内の液、気管支洗浄によって回収された液、対象又は生物源と接触した液体、例えば、細胞又は器官馴化培地、洗浄液などを含む細胞及び器官用培地、組織生検、微小針吸引又は外科的に切除された腫瘍組織などの、体液である。
本明細書で使用されるとき、「癌細胞」又は「腫瘍細胞」は、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ又は組織培養のいずれかにおいて、自然発生的な又は導入された表現型の変化を有する癌性、前癌性、又は形質転換細胞を指す。これらの変化は、必ずしも新たな遺伝物質の取り込みを伴うものではない。形質転換は、形質転換ウイルスの感染及び新たなゲノム核酸の取り込み、又は外因性の核酸の取り込みにより発生し得るが、自然に又は発癌物質に対する暴露後にも発生して、それによって内因性の遺伝子を変異させ得る。形質転換／癌は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏ、及びｅｘ ｖｉｖｏにおける、形態学的変化、細胞の不死化、異常な増殖制御、病巣の形成、増殖、悪性度、腫瘍特異的マーカーレベルの変化、浸潤性、ヌードマウスなどの適した動物宿主における腫瘍の増殖などによって例示される（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ（３ｒｄ ｅｄ．１９９４））。特に明記しない限り、本明細書に記載される濃度又は濃度範囲などのあらゆる数値は、全ての場合において、「約」という用語によって修飾されているものとして理解されるべきである。したがって、数値は、典型的には、記載される値の±１０％を含む。例えば、１ｍｇ／ｍＬの濃度は０．９ｍｇ／ｍＬ～１．１ｍｇ／ｍＬを含む。同様に、１％～１０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲は０．９％（ｗ／ｖ）～１１％（ｗ／ｖ）を含む。本明細書で使用する場合、数値範囲の使用は、文脈上そうでない旨が明確に示されない限り、その範囲内の整数及び値の分数を含む、全ての可能な部分範囲、その範囲内の全ての個々の数値を明示的に含む。
「エフェクター抗原」は、細胞毒性、貪食作用、抗原提示、サイトカイン放出を刺激又は誘引することができる免疫系の細胞由来の抗原である。このようなエフェクター抗原は、例えば、限定するものではないが、Ｔ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞由来である。エフェクター抗原の好適な特異体の例としては、ＣＤ３、又はＴ細胞に対するＣＤ３ε及びＮＫ細胞に対するＣＤ１６などのＣＤ３サブユニットが挙げられるが、これらに限定されない。エフェクター細胞のこのような細胞表面分子は、細胞の殺傷を媒介するのに好適である。エフェクター細胞は、細胞毒性、貪食作用、抗原提示、サイトカイン放出を刺激又は誘引することができる免疫系の細胞である。このようなエフェクター細胞は、例えば、限定するものではないが、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、顆粒球、単球、マクロファージ、樹状細胞、及び抗原提示細胞である。エフェクター細胞の好適な特異体の例としては、Ｔ細胞に対するＣＤ２、ＣＤ３及びＣＤ３サブユニット、例えばＣＤ３ｅ、ＣＤ５、ＣＤ２８及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の他の構成要素；ＮＫ細胞に対するＣＤ１６、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ２５、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ６９、ＣＤ９４、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）、ＣＤ３３６、（ＮＫｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫｐ３０）、ＮＫｐ８０、ＮＫＧ２Ｃ及びＮＫＧ２Ｄ、ＤＮＡＭ、ＮＣＲ；顆粒球に対するＣＤ１８、ＣＤ６４及びＣＤ８９；単球及びマクロファージに対するＣＤ１８、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ８９及びマンノース受容体；樹状細胞に対するＣＤ６４及びマンノース受容体；並びにＣＤ３５が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の特定の実施形態では、エフェクター細胞の特異体、すなわち細胞表面分子は、そのような細胞表面分子への二重特異性又は多重特異性分子に結合すると細胞殺傷を媒介し、それによって、細胞溶解又はアポトーシスを誘導するのに好適である。
「二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体」、「ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体」、「二重特異性抗ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体」又は「抗ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体」は、ＰＳＭＡに特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメインと、を含む、分子を指す。ＰＳＭＡ及びＣＤ３に特異的に結合するドメインは、典型的にはＶＨ／ＶＬ対である。二重特異性抗ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体は、ＰＳＭＡ又はＣＤ３のいずれかに結合するという意味で一価であり得る。
「価数」とは、分子中の抗原に対して特異的な結合部位が明記された数で存在することを意味する。そのため、用語「１価」、「２価」、「４価」、及び「６価」はそれぞれ、抗原に対して特異的な結合部位が分子中に１個、２個、４個、及び６個存在することを指す。「多価」とは、分子中の抗原に対して２つ以上の結合部位が存在することを意味する。
「抗原特異的ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞」は、特異的抗原又はその免疫刺激性エピトープによって活性化された、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞を指す。
「対象」は、任意のヒト又は非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」は、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などの哺乳類及び非哺乳類などの全ての脊椎動物を包含する。記載されている場合を除き、「患者」及び「対象」という用語は、互換的に使用される。
本明細書全体を通して、抗体の定常領域におけるアミノ酸残基の番号は、特に明示的に指定しない限り、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）に記載されるＥＵインデックスに従っている。
従来の１文字及び３文字のアミノ酸コードを、表１に示すとおりに本明細書で使用する。
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物質の組成
本発明は、ＰＳＭＡに特異的に結合する抗体及びその断片、並びに、ＰＳＭＡ及びＣＤ３に特異的に結合する多重特異性抗体及びその断片を提供する。本発明は、本発明の抗体をコードしているポリペプチド及びポリヌクレオチド、又はその相補的核酸、ベクター、宿主細胞、並びにこれらを作製及び使用する方法を提供する。
ＰＳＭＡに結合する抗体及びその断片は、チンパンジー標的抗原に結合する。一実施形態では、抗体及びその断片は、互いに５倍以内の親和性を有するヒト及びｍａｃａｑｕｅ ＰＳＭＡ標的抗原に結合する。換言すれば、抗体結合の差は、５の倍数未満である。この場合、同一の抗体分子は、霊長類におけるＰＳＭＡの安全性、活性、及び／又は薬物動態プロファイルの前臨床評価、並びにヒトの医薬品の両方に使用することができる。換言すれば、同じＰＳＭＡ特異的分子は、前臨床動物試験及びヒトにおける臨床試験において使用することができる。これは、種特異的な代理分子と比較して、動物試験と極めて類似する結果が得られ、予測性が極めて増加することにつながる。ＰＳＭＡドメインは、異種特異的、すなわちヒト及びｍａｃａｑｕｅ抗原と反応するため、本発明の抗体又はその断片は、霊長類におけるこれらの結合ドメインの安全性、活性、及び／又は薬物動態プロファイルの前臨床評価、並びに同一形態においてヒトの医薬品の両方に使用することができる。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する多重特異性抗体も提供する。本発明によれば、二重特異性、すなわち二重機能性抗体を使用して、２つの異なる治療標的に係合し、又は２つの異なる機能を実行することができる。このような抗体は、例えば、免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞を特定の標的細胞に向けてリクルートすることができる。様々な抗体断片に基づく分子は既知であり、例えば癌治療のために検討されている。本発明の多重特異性抗体は、腫瘍細胞の二重標的化のため三重特異性抗体であってもよく、これらは、腫瘍細胞上の２つの異なる標的／エピトープを標的化し、第３の機能性部分がＴ細胞又はＮＫ細胞のいずれかに対して高い親和性で結合するように設計され得る三重機能性構造である。２つの異なる腫瘍エピトープを標的化し、Ｔ細胞又はＮＫ細胞に結合する三重特異性抗体は、両方の標的を発現する腫瘍細胞を溶解させる。かかる分子は、当該技術分野において既知の抗体フォーマットによって生成することができ、詳細に記載されている。（国際公開第２０１５１８４２０７１号、同第２０１５１５８６３６号、同第２０１０１３６１７２号、同第２０１３１７４８７３号）。本発明の三重特異性抗体の実施形態では、多重特異性抗体は、ＰＳＭＡ及び同じ又は別の腫瘍細胞上の第２の異なる抗原に特異的であり、更にエフェクター細胞、特にＴ細胞又はＮＫ細胞に特異的であってもよい。
本発明はまた、ＰＳＭＡ×「エフェクター抗原」二重特異性抗体も提供する。一実施形態では、ＰＳＭＡ×「エフェクター抗原」二重特異性抗体のエフェクター抗原は、ＣＤ３である。本発明では、同一の分子で前臨床動物試験、並びに臨床試験、更にはヒトにおける治療に使用することができる、ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体を生成することが可能であることが見出されている。これは、それぞれヒトＰＳＭＡ及びヒトＣＤ３への結合に加えて、チンパンジー及びｍａｃａｑｕｅの抗原のホモログにも結合するＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の同定によるものである。本発明のＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体は、癌を非限定的に含む様々な疾患に対する治療薬として使用することができる。上記を考慮すると、系統的に（ヒトから）離れた種において、試験用の代理標的ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体を構築する必要性がなくなる。結果として、同一の分子が、臨床試験並びに後続の市販承認及び治療薬としての投与においてヒトに投与されることが意図されているように、動物の前臨床試験において使用することができる。後続のヒトに投与するものと同じ前臨床動物試験用分子を使用できることで、前臨床動物試験で得られたデータのヒト症例への適用が限定される危険性を実質的に排除するか、又は少なくとも大幅に低減する。要するに、ヒトに実際に投与されるものと同じ分子を使用して動物で前臨床安全性データを得ることにより、ヒトに関する計画に対するデータの適用性を大いに確実にする。対照的に、代理分子を使用する従来の方法では、この代理分子は、前臨床的安全性評価に使用される動物試験系に分子的に適合されなければならない。したがって、ヒトの治療に使用される分子は、実際には、薬物動態パラメータ及び／又は生物活性において前臨床試験で使用される代理分子と配列が異なり、また構造が異なる可能性もあり、その結果、前臨床動物試験で得られたデータは、ヒトの症例への適用性／外挿性が限定される。代理分子の使用には、完全に新たな構築物の構築、作製、精製、及び特性評価が必要である。これは、分子を得るために必要な更なる開発コスト及び時間をもたらす。要するに、ヒトの治療で使用される実際の薬剤に加えて代理分子を別に開発しなくてはならず、２つの分子のための２つの開発行為がなされなければならない。したがって、本明細書に記載される異種特異性を示す本発明のＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の主な利点は、同一分子がヒトの治療薬として、かつ前臨床動物試験において使用できることである。
本発明の抗体及び多重特異性抗体の別の主な利点は、様々な霊長類での前臨床試験に対する適用性である。動物における薬物候補の挙動は、理想的には、ヒトへの投与時のこの薬物候補の予想される挙動を示すものであるべきである。その結果、このような前臨床試験から得られたデータは、そのため一般的には、ヒトでの場合の予測に非常に役に立つべきである。しかしながら、ＴＧＮ１４１２（ＣＤ２８モノクローナル抗体）の最近の第Ｉ相臨床試験の悲惨な結果から分かるように、この抗体の前臨床試験では、カニクイザルで実施された動物試験において有害事象が全く、又はわずかしか観察されなかったのに反して、抗体の投与により６例の患者が多臓器不全を発症し、薬物候補は、霊長類とヒトで異なる作用を示す場合がある（Ｌａｎｃｅｔ ３６８（２００６），２２０６－７）。これらの劇的で望まれないネガティブな事象の結果、前臨床試験を１種（チンパンジーではない霊長類）のみに限定するのは十分でない場合があることを示唆する。記載される抗体及び多重特異性抗体が、チンパンジー及びカニクイザルのＰＳＭＡに特異的に結合するという事実は、上記の場合に直面する問題を克服するのに役立つ場合がある。したがって、本発明は、ヒト治療用医薬品が開発され、試験される際に、効果の種差を最小限に抑えるための手段及び方法を提供する。
本発明の抗体及び多重特異性抗体では、例えば、トランスジェニック動物の作製など、ヒトへの投与を目的とした薬物候補に試験動物を適応させることも必要ではない。本発明のＰＳＭＡ抗体又は多重特異性抗体の異種特異性により、抗体が、動物に遺伝子操作をすることなく、非チンパンジー霊長類における前臨床試験で直接使用できるようになる。当業者には周知のように、試験動物を薬物候補に適合させる方法は、前臨床安全性試験で得られた結果が、動物の改変によってヒトでの典型性と予測性が低下するリスクを常に有する。例えば、トランスジェニック動物では、導入遺伝子によりコードされるタンパク質は、多くの場合、高度に過剰発現される。したがって、このタンパク質抗原に対する抗体の生物活性に関して得られるデータは、このタンパク質がはるかに低く、より生理学的レベルで発現されるヒトでの予測値を限定し得る。
異種特異性を示す本発明の抗体使用の更なる利点は、絶滅危惧種であるチンパンジーの動物試験での使用を回避できるという事実である。チンパンジーはヒトに最も近い種であり、ゲノム配列データに基づき、最近ヒト化に分類された（Ｗｉｌｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １００（２００３），７１８１）。したがって、チンパンジーで得られたデータは、一般に、ヒトでの予測性が高いと考えられる。しかしながら、絶滅危惧種としての状況により、医療用実験に使用できるチンパンジーの数は非常に制限される。したがって、上述のように、動物試験のためにチンパンジーを維持することは、費用がかかると共に、倫理的に問題となる。本発明の抗体の使用は、得られる動物試験データの品質、すなわち適用性を妨げることなく、前臨床試験中の倫理的反対意見及びコスト負担の両方を回避する。これに照らして、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体又は多重特異性抗体の使用は、チンパンジーでの試験に対する合理的な代替を提供する。
本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体又は多重特異性抗体のまた更なる利点は、例えば、薬物動態動物試験の過程で、動物前臨床試験の一部として使用するとき、複数の血液サンプルを抽出する能力である。複数の血液抽出物は、マウスなどの下等動物と比較して、非チンパンジー霊長類でははるかに容易に得ることができる。複数の血液サンプルの抽出により、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体又は多重特異性抗体によって誘導される生物学的効果を判定するための血液パラメータの連続試験を可能にする。更に、複数の血液サンプルの抽出により、研究者にとって、本明細書で定義される本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体又は多重特異性抗体の薬物動態プロファイルの評価が可能になる。加えて、血液パラメータに反映される本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体又は多重特異性抗体によって誘導され得る潜在的な副作用が、抗体の投与中に抽出された異なる血液サンプル中で測定することができる。
これにより、本明細書に定義される本発明のＰＳＭＡに結合する抗体又は多重特異性抗体の潜在的毒性プロファイルの決定を可能にする。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、ＰＳＭＡに特異的に結合する単離された抗体又はその抗体断片は、以下の特性：
ａ）２５ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）でＰａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ ＰＳＭＡ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に結合し、このときＫＤは、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システムを使用して＋２５℃で測定される、
ｂ）２０ｎＭ以下のＥＣ５０計算値でＬＮＣａＰ細胞と結合し、かつ、４０ｎＭ以下のＥＣ５０計算値でＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞に結合し、ＬＮＣａＰ細胞への結合と、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞への結合との間のＥＣ５０計算値の差は５倍未満であり、このときＥＣ５０計算値は、フローサイトメトリーを用いる０℃での全細胞結合アッセイで測定される、
ｃ）１２ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）で、ヒト（配列番号７）、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ（配列番号４）及びＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（配列番号５）由来の組み換えＰＳＭＡ ＥＣＤに結合し、このときＫＤは、Ｐｒｏｔｅｏｎ表面プラズモン共鳴アッセイＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システムを使用して＋２５℃で測定される、
ｄ）二重特異性抗体において抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ２１９と対を成すとき、ＬＮＣａＰ細胞、Ｃ４２細胞、ヒトＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞、又はＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞のＴ細胞媒介性殺傷を提示し、このときＴ細胞媒介性殺傷は、クロム－５１によって、若しくはカスパーゼ３／７活性化アッセイによって測定される、又は
ｅ）立体構造エピトープを認識し、このときエピトープは、ヒトＰＳＭＡ（配列番号３）の残基Ｉ１３８、Ｆ２３５、Ｐ２３７、Ｇ２３８、Ｄ２４４、Ｙ２９９、Ｙ３００、Ｑ３０３、Ｋ３０４、Ｅ３０７、及びＫ３２４～Ｐ３２６からなる、のうち、１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つを有する。
例示的なかかる抗体又はその断片は、本明細書に記載されるＰＳＭＡ抗体である、ＰＳＭＢ１１９、ＰＳＭＢ１２０、ＰＳＭＢ１２１、ＰＳＭＢ１２２、ＰＳＭＢ１２３、ＰＳＭＢ８７、ＰＳＭＢ１２６、ＰＳＭＢ１２７、ＰＳＭＢ１２８、ＰＳＭＢ１２９、ＰＳＭＢ１３０、ＰＳＭＢ１２０、ＰＳＭＢ１２１、ＰＳＭＢ１２２、ＰＳＭＢ１２３、ＰＳＭＢ１２７、ＰＳＭＢ１２８、ＰＳＭＢ１３０、ＰＳＭＢ３４４、ＰＳＭＢ３４５、ＰＳＭＢ３４６、ＰＳＭＢ３４７、ＰＳＭＢ３４９、ＰＳＭＢ３５８、ＰＳＭＢ３５９、ＰＳＭＢ３６０、ＰＳＭＢ３６１、ＰＳＭＢ３６２、ＰＳＭＢ３６３、及びＰＳＭＢ３６５である。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、ＰＳＭＡに特異的に結合する単離されたＰＳＭＡ抗体又はその抗体断片は、約３０ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）で、チンパンジーＰＳＭＡ ＥＣＤに結合し、このときこでＫＤは、実施例８に記載されるように、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システムを用いて＋２５℃で測定される。Ｐｒｏｔｅｏｎを使用してＳＰＲによる親和性を測定するためのアッセイとしては、アッセイが室温（例えば２５℃付近）で実施されるアッセイを含み、これは、ｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡ ＥＣＤに結合可能な抗体を、抗Ｆｃ抗体（例えば（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、カタログ＃１０９－００５－０９８）によって約１００ＲＵのレベルまでＰｒｏｔｅｏｎセンサチップ上に捕捉し、続いて組み換えＰＳＭＡ ＥＣＤを注入し、５０μＬ／分の流量での会合及び解離データを収集する。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、ＰＳＭＡに特異的に結合する単離されたＰＳＭＡ抗体又はその抗体結合フラグメントは、２０ｎＭ以下のＥＣ５０でＬＮＣａＰ細胞に結合し、かつ、４０ｎＭ以下のＥＣ５０でＨＥＫ細胞を発現するｃｙｎｏ ＰＳＭＡに結合し、このとき、ＬＮＣａＰ細胞への結合とｃｙｎｏ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞への結合との間のＥＣ５０計算値の差は５倍未満であり、このとき細胞結合は、実施例７に記載されるＦＡＣＳを使用して測定される。ＦＡＣＳによる全細胞結合を測定するアッセイは、氷上で１時間、ウェル当たり２００，０００個の細胞密度で実施される。全細胞に結合した抗体の量は、標識された二次抗体、例えば、マウス抗ヒトκ－ＲＰＥ抗体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ＃ＭＨ１０５１４）を用いて、ＦＡＣＳアレイフローサイトメーターによって検出される。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、ＰＳＭＡに特異的に結合する単離された抗体又はその抗体断片は、約１２ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）で、ヒト、ｃｈｉｐｍ及びｃｙｎｏ ＰＳＭＡ ＥＣＤに結合し、このときこでＫＤは、実施例８に記載されるように、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システムを用いて＋２５℃で測定される。Ｐｒｏｔｅｏｎを使用してＳＰＲによる親和性を測定するためのアッセイとしては、アッセイが室温（例えば２５℃付近）で実施されるアッセイを含み、これは、ｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡ ＥＣＤに結合可能な抗体を、抗Ｆｃ抗体（例えば（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、カタログ＃１０９－００５－０９８）によって約１００ＲＵのレベルまでＰｒｏｔｅｏｎセンサチップ上に捕捉し、続いて組み換えＰＳＭＡ ＥＣＤを注入し、５０μＬ／分の流量での会合及び解離データを収集する。
特定の抗体／ＰＳＭＡ相互作用の測定された親和性は、異なる条件下（例えば、浸透圧、ｐＨ）で測定された場合に異なり得る。したがって、親和性及びその他の結合パラメータ（例えば、ＫＤ、Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ）の測定は、典型的には、標準的な条件及び本明細書に記載される緩衝液などの標準化緩衝液を用いて行われる。例えばＢｉａｃｏｒｅ ３０００又はＰｒｏｔｅＯｎを用いた親和性測定での内部誤差（標準偏差（ＳＤ）として測定されるもの）は通常、典型的な検出範囲内で測定した場合、５～３３％の範囲内であり得ることが当業者には分かるであろう。したがって、ＫＤに関して用語「約」は、アッセイにおける一般的な標準偏差を反映する。例えば、ＫＤが１×１０－９Ｍの場合の典型的なＳＤは、最大＋０．３３×１０－９Ｍである。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、ＰＳＭＡに特異的に結合する単離された抗体又はその抗体断片は、二重特異性抗体において抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ２１９と対を成すとき、ヒトＰＳＭＡ発現ＬＮＣａＰ細胞、Ｃ４２細胞、ヒトＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞又はｃｙｎｏ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞のＴ細胞媒介性殺傷を示し、このときＴ細胞媒介性殺傷は、クロム－５１放出によって測定され、標的細胞は、事前に活性化したＴ細胞と５：１の比で１８～２４時間培養され、又は実施例６のようにカスパーゼ３／７活性化アッセイによって測定される。いくつかの実施形態では、ＰＳＭＡに特異的に結合する単離された抗体又はその抗体断片は、二重特異性抗体において抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ２１９と対を成すとき、約０．３～０．５ｎＭ以下、及び０．１２～０．０３ｎＭ以下のＥＣ５０でそれぞれヒトＰＳＭＡ発現ＬＮＣａＰ及びＣ４２細胞のＴ細胞媒介性殺傷を示し、このときＴ細胞媒介性殺傷は、実施例９のようにカスパーゼ３／７活性化アッセイによって測定される。標的ＰＳＭＡ発現細胞を、事前に活性化したＴ細胞と１：３の比で１８～２４時間培養し、添加されたカスパーゼ３／７基質の開裂によって、細胞核に限定して蛍光を発する、蛍光ＤＮＡ染色が得られる。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、ＰＳＭＡに特異的に結合する単離された抗体又はその抗体断片は、実施例１３に記載されるＸ線結晶解析によって決定するとき、エピトープが残基Ｉ１３８、Ｆ２３５、Ｐ２３７、Ｇ２３８、Ｄ２４４、Ｙ２９９、Ｙ３００、Ｑ３０３、Ｋ３０４、Ｅ３０７、及びＫ３２４～Ｐ３２６からなる、立体構造エピトープを認識する。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体又はその断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）である配列番号６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７５、７７、７９、１６０、１３８、１３９又は１４０内に含まれるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、このときＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３は、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ、又はＩＭＧＴによって定義される。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体又はその断片は、軽鎖可変領域（ＶＬ）である配列番号６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７６、７８、１４２、１４３又は１４４内に含まれるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、このときＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ、又はＩＭＧＴによって定義される。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、
配列番号８、１４、２０、２５、３１、３６、４６、５３又は１２２のＨＣＤＲ１と、
配列番号９、１５、２１、２６、３２、３７、４２、４４、５４、１２３、１３０、１３４、１３５、又は１３７のＨＣＤＲ２と、
配列番号１０、１６、２２、２７、３３、３８、４３、４５、４８、５２、５５、１２４のＨＣＤＲ３と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、
配列番号１１、１７、２３、２８、３４、３９、４６、４９又は１３１のＬＣＤＲ１と、
配列番号１２、１８、２９、４０、５０又は１３３のＬＣＤＲ２と、
配列番号１３、１９、２４、３０、３５、４１、４７、５１、１３２、又は１３６のＬＣＤＲ３と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、
配列番号８、１４、２０、２５、３１、３６、５３又は１２２のＨＣＤＲ１と、
配列番号９、１５、２１、２６、３２、３７、４２、４４、５４、１２３、１３０、１３４、１３５、又は１３７のＨＣＤＲ２と、
配列番号１０、１６、２２、２７、３３、３８、４３、４５、４８、５１、５２、５５、又は１２４のＨＣＤＲ３と、
配列番号１１、１７、２３、２８、３４、３９、４６、４９又は１３１のＬＣＤＲ１と、
配列番号１２、１８、２９、４０、５０又は１３３のＬＣＤＲ２と、
配列番号１３、１９、２４、３０、３５、４１、４７、５１、１３２、又は１３６のＬＣＤＲ３と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、
それぞれ配列番号８、９、及び１０、
それぞれ配列番号１４、１５、及び１６、
それぞれ配列番号２０、２１、及び２２、
それぞれ配列番号２５、２６、及び２７、
それぞれ配列番号２５、１３０、及び２７、
それぞれ配列番号２５、１３４、及び２７、
それぞれ配列番号２５、１３５、及び２７、
それぞれ配列番号２５、１３７、及び２７、
それぞれ配列番号３１、３２、及び３３、
それぞれ配列番号３６、３７、及び３８、
それぞれ配列番号３１、４２、及び４３、
それぞれ配列番号３１、４４、及び４５、
それぞれ配列番号３６、３７、及び４８、
それぞれ配列番号３６、３７、及び５２、
それぞれ配列番号５３、５４、及び５５、又は
それぞれ配列番号１２２、１２３、及び１２４の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、
それぞれ配列番号１１、１２、及び１３、
それぞれ配列番号１７、１８、及び１９、
それぞれ配列番号２３、１２、及び２４、
それぞれ配列番号２８、２９、及び３０、
それぞれ配列番号２８、２９、及び１３６、
それぞれ配列番号２８、１３３、及び１３２、
それぞれ配列番号３４、１２、及び３５、
それぞれ配列番号３９、４０、及び４１、
それぞれ配列番号４６、２９、及び４７、
それぞれ配列番号４９、５０、及び５１、
それぞれ配列番号２３、１２、及び３５、又は
それぞれ、配列番号１３１、２９及び１３２の、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号８、９、１０、１１、１２及び１３の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号１４、１５、１６、１７、１８及び１９の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２０、２１、２２、２３、１２及び２４の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号１２２、１２３、１２４、２３、１２及び２４の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、２６、２７、２８、２９及び３０の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号３１、３２、３３、３４、１２及び３５の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号３６、３７、３８、３９、４０及び４１の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号３６、３７、３８、４９、５０及び５１の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号３１、４２、４３、１１、１２及び１３の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号３１、４４、４５、４６、２９及び４７の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号３６、３７、５２、４９、５０及び５１の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号５３、５４、５５、２３、１２及び３５の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３０、２７、２８、２９及び３０の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３０、２７、１３１、２９及び１３２の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３０、２７、２８、１３３及び１３２の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３４、２７、２８、２９及び３０の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３５、２７、１３１、２９及び１３２の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３５、２７、２８、２９及び１３６の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３５、２７、２８、２９及び３０の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３５、２７、１３１、２９及び１３２の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３４、２７、２８、２９及び１３６の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３４、２７、１３１、２９及び１３２の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３４、２７、２８、１３３及び１３２の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３７、２７、２８、１３３及び１３２の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７５、７７、７９、１６０、１３８、１３９、又は１４０の、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７６、７８、１４２、１４３、又は１４４の、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
代表的な本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体のＶＨ、ＶＬ、ＨＣＤＲ及びＬＣＤＲ配列を、表２に示す。
表２に、本明細書に記載された一部のＰＳＭＡ特異性抗体の例の概要を提供する。
Figure 0007361727000002
Figure 0007361727000003
いくつかの実施形態では、表２に記載された抗体のうちいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖を含む、ＰＳＭＡ特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。いくつかの実施形態では、表２に記載された抗体のうちいずれか２つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖と、表１に記載された抗体のうちいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖と、を含む、ＰＳＭＡ特異性抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＰＳＭＡ特異性抗体又はその抗原結合フラグメントは、表２に記載された抗体のうちいずれか２つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖と、表１に記載された抗体のうちいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖と、を含む抗体又は抗原結合と、ＰＳＭＡに対する結合について競合する。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号１４、１５、１６、１７、１８及び１９の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号６２のＶＨと、配列番号６３のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８４を有する重鎖（ＨＣ）と、配列番号８５の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２０、２１、２２、２３、１２及び２４の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号６４のＶＨと、配列番号６５のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８６の重鎖（ＨＣ）と、配列番号８７の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号３１、４２、４３、１１、１２及び１３の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７４のＶＨと、配列番号６１のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９６の重鎖（ＨＣ）と、配列番号８３の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、２６、２７、２８、２９及び３０の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号６６のＶＨと、配列番号６７のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８８の重鎖（ＨＣ）と、配列番号８９の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号１２２、１２３、１２４、２３、１２及び２４の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１６０のＶＨと、配列番号６５のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１２５の重鎖（ＨＣ）と、配列番号９１の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号８、９、１０、１１、１２及び１３の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号６０のＶＨと、配列番号６１のＶと、Ｌを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８２の重鎖（ＨＣ）と、配列番号８３の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号３１、３２、３３、３４、１２及び３５の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７０のＶＨと、配列番号７１のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９２の重鎖（ＨＣ）と、配列番号９３の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号３６、３７、３８、３９、４０及び４１の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７２のＶＨと、配列番号７３のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９４の重鎖（ＨＣ）と、配列番号９５の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号３１、４４、４５、４６、２９及び４７の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７５のＶＨと、配列番号７６のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９７の重鎖（ＨＣ）と、配列番号９８の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号３６、３７、４８、４９、５０及び５１の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７７のＶＨと、配列番号７８のＶと、Ｌを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９９の重鎖（ＨＣ）と、配列番号１００の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号３６、３７、５２、４９、５０及び５１の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７９のＶＨと、配列番号７８のＶと、Ｌを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１０１の重鎖（ＨＣ）と、配列番号１００の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号５３、５４、５５、２３、１２及び３５の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号６８のＶＨと、配列番号６９のＶと、Ｌを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９０の重鎖（ＨＣ）と、配列番号９１の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３０、２７、２８、２９及び３０の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１３８のＶＨと、配列番号６７のＶと、Ｌを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１４５の重鎖（ＨＣ）と、配列番号８９の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３０、２７、１３１、２９及び１３２の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１３８のＶＨと、配列番号１４２のＶと、Ｌを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１４５の重鎖（ＨＣ）と、配列番号１４８の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３０、２７、２８、１３３及び１３２の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１３８のＶＨと、配列番号１４３のＶと、Ｌを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１４５の重鎖（ＨＣ）と、配列番号１４９の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３４、２７、２８、２９及び３０の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１３９のＶＨと、配列番号６７のＶと、Ｌを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１４６の重鎖（ＨＣ）と、配列番号８９の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３５、２７、２８、２９及び１３６の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１４０のＶＨと、配列番号１４４のＶと、Ｌを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１４７の重鎖（ＨＣ）と、配列番号１５０の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３５、２７、２８、２９及び３０の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１４０のＶＨと、配列番号６７のＶと、Ｌを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１４７の重鎖（ＨＣ）と、配列番号８９の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３５、２７、１３１、２９及び１３２の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１４０のＶＨと、配列番号１４３のＶと、Ｌを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１４７の重鎖（ＨＣ）と、配列番号１４８の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３５、２７、２８、１３３及び１３２の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１４０のＶＨと、配列番号６７のＶと、Ｌを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１４７の重鎖（ＨＣ）と、配列番号１４９の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３４、２７、２８、２９及び１３６の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１３９のＶＨと、配列番号１４４のＶと、Ｌを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１４６の重鎖（ＨＣ）と、配列番号１５０の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３４、２７、１３１、２９及び１３２の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１４０のＶＨと、配列番号６７のＶと、Ｌを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１３９の重鎖（ＨＣ）と、配列番号１４２の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３４、２７、２８、１３３及び１３２の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１３９のＶＨと、配列番号１４３のＶと、Ｌを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１４６の重鎖（ＨＣ）と、配列番号１４９の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３７、２７、２８、１３３及び１３２の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１４１のＶＨと、配列番号１４３のＶと、Ｌを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１５１の重鎖（ＨＣ）と、配列番号１４９の軽鎖（ＬＣ）と、を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＰＳＭＡ ＤＣＤに、約１００ｎＭ、任意に約５０ｎＭ未満、例えば約１２ｎＭ未満の平衡解離定数（ＫＤ）で結合し、このときＫＤは、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システムを用いて＋２５℃で測定される。
いくつかの実施形態では、抗体は、カニクイザルＰＳＭＡ ＤＣＤに、約１００ｎＭ、任意に約５０ｎＭ未満、例えば約１２ｎＭ未満の平衡解離定数（ＫＤ）で結合し、このときＫＤは、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システムを用いて＋２５℃で測定される。
いくつかの実施形態では、抗体は、野生型ＩｇＧ４と比較するとき、任意に重鎖置換Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａを含む、ＩｇＧ４アイソタイプである。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７４のＶＨと、配列番号６１のＶＬと、を含み、野生型ＩｇＧ４と比較するとき、任意に重鎖置換Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａを含む、ＩｇＧ４アイソタイプである。
いくつかの実施形態では、抗体は、二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体などの多重特異性抗体である。
抗体は、治療、例えば癌の治療に使用するのに適している。
抗体は、治療、例えば固形腫瘍の処置に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば前立腺癌又は去勢抵抗性前立腺癌の処置に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば前立腺上皮内腫瘍の治療に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば結腸直腸癌の治療に使用するのに適している。
抗体は、治療、例えば腎明細胞癌の治療に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば胃癌の治療に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば腎細胞癌（ＲＣＣ）（例えば、腎明細胞癌又は腎乳頭状細胞癌）、又はその転移巣の処置に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば膀胱癌の治療に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば乳癌の治療に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば腎臓癌（kidney cancer）の治療に使用するのに好適である。
抗体は、治療、例えば固形腫瘍増殖によって特徴付けられる癌などの、例えば血管新生疾患の治療に使用するのに好適である。
抗体は、例えば血管新生疾患の治療、例えば、腎明細胞癌（ＣＣＲＣＣ、結腸直腸癌、乳癌、膀胱癌、肺癌、及び膵臓癌、並びに、腎臓、尿路上皮、肺、結腸、***を非限定的に含む様々なその他非前立腺癌、並びに肝臓の腺癌（adenocarcinaoma）などの治療での使用に好適である。
ＩｇＧクラスは、ヒトにおいて、４つのアイソタイプ：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４に分割される。これらのアイソタイプは、Ｆｃ領域のアミノ酸配列において９５％超の相同性を共有するが、ヒンジ領域のアミノ酸組成及び構造において主な差異を示す。Ｆｃ領域は、エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介在する。ＡＤＣＣにおいて、抗体のＦｃ領域は、免疫エフェクター細胞、例えば、ナチュラルキラー及びマクロファージの表面上のＦｃ受容体（ＦｃｇＲ）に結合する。同免疫エフェクター細胞は、標的細胞の貪食又は溶解をもたらす。ＣＤＣにおいて、抗体は、標的細胞を、細胞表面における補体カスケードをトリガーすることにより殺傷する。本明細書に記載された抗体は、ＩｇＧアイソタイプのいずれかとの組み合わせで、可変ドメインの記載された特徴を有する抗体を含む。同ＩｇＧアイソタイプは、Ｆｃ配列が異なるエフェクター機能をもたらすために改変されている改変版を含む。
多くの治療用抗体の適用に関し、Ｆｃ介在性エフェクター機能は、作用機序を担わない。これらのＦｃ介在性エフェクター機能は、メカニズム外の毒性を引き起こすことにより有害であるおそれがあり、かつ安全性リスクを引き起こすおそれがある。エフェクター機能の改変は、Ｆｃ領域を遺伝子操作して、ＦｃｇＲ又は補体因子への結合性を低下させることにより達成され得る。活性化（ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａ、ＦｃｇＲＩＩＩａ、及びＦｃｇＲＩＩＩｂ）及び阻害性（ＦｃｇＲＩＩｂ）ＦｃｇＲ又は補体の第１成分（Ｃ１ｑ）へのＩｇＧの結合性は、ヒンジ領域及びＣＨ２ドメイン中に位置する残基により決まる。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４に変異が導入されると、Ｆｃ機能が低下又はサイレンシングする。本明細書に記載された抗体は、これらの改変を含んでもよい。
一実施形態では、抗体は、下記特性：（ａ）親Ｆｃと比較した場合、低下したエフェクター機能、（ｂ）ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａ、ＦｃｇＲＩＩｂ、ＦｃｇＲＩＩＩｂ、及び／又はＦｃｇＲＩＩＩａに対する低下した親和性、（ｃ）ＦｃｇＲＩに対する低下した親和性、（ｄ）ＦｃｇＲＩＩａに対する低下した親和性、（ｅ）ＦｃｇＲＩＩｂに対する低下した親和性、（ｆ）ＦｃｇＲＩＩＩｂに対する低下した親和性、又は（ｇ）ＦｃｇＲＩＩＩａに対する低下した親和性のうち１つ又は２つ以上を有するＦｃ領域を含む。
一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ又はその誘導体、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４のアイソタイプである。抗体がＩｇＧ４アイソタイプを有する一部の実施形態では、抗体は、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換を、そのＦｃ領域中に含有する。抗体がＩｇＧ１アイソタイプを有する一部の実施形態では、抗体は、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換を、そのＦｃ領域中に含有する。本明細書に記載された抗体は、これらの改変を含んでもよい。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。
いくつかの実施形態では、抗体は、野生型ＩｇＧ４と比較するとき、任意に重鎖置換Ｓ２２８Ｐを含む、ＩｇＧ４アイソタイプである。
いくつかの実施形態では、抗体はＩ、野生型ＩｇＧ１と比較するとき、任意に重鎖置換Ｌ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓを含む、ｇＧ１アイソタイプである。
記載されたＰＳＭＡ特異的抗体及び抗原結合フラグメントに加えて、記載された抗体及び抗原結合フラグメントをコード可能なポリヌクレオチド配列もまた提供される。記載されたポリヌクレオチドを含むベクターもまた提供される。同様に、本明細書で提供されたＰＳＭＡ特異的抗体及び抗原結合フラグメントを発現している細胞が提供される。また、開示されたベクターを発現可能な細胞も記載される。これらの細胞は、哺乳類細胞（例えば、２９３Ｆ細胞、ＣＨＯ細胞）、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ７細胞）、酵母細胞、植物細胞、又は細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）でもよい。記載された抗体はまた、ハイブリドーマ細胞により生成することができる。
相同抗体
以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、表３に示されるＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含む本明細書に記載される本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体の変異体は、本発明の範囲内である。例えば、変異体は、親抗体と比較したとき、相同抗体が機能特性を保持しているか又は改善された機能特性を有しているという条件で、ＶＨ及び／又はＶＬに１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を含み得る。いくつかの実施形態では、配列同一性は、本発明のＶＨ又はＶＬアミノ酸配列に対して、約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％であり得る。任意に、親抗体に対する変異体の任意の変化例は、変異体のＣＤＲの範囲内ではない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７５、７７、７９、１６０、１３８、１３９、又は１４０のＶＨを含み、ＶＨは、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を有する。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７６、７８、１４２、１４３、又は１４４のＶＬを含み、ＶＬは、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を有する。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号６０のＶＨと、配列番号６１のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号６２のＶＨと、配列番号６３のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号６４のＶＨと、配列番号６５のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号６６のＶＨと、配列番号６７のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号６８のＶＨと、配列番号６９のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号７０のＶＨと、配列番号７１のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号７２のＶＨと、配列番号７３のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号７４のＶＨと、配列番号６１のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号７５のＶＨと、配列番号７６のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号７７のＶＨと、配列番号７８のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号７９のＶＨと、配列番号７８のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１６０のＶＨと、配列番号６５のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１３８のＶＨと、配列番号６７のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１３８のＶＨと、配列番号１４２のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１３８のＶＨと、配列番号１４３のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１３９のＶＨと、配列番号６７のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１４０のＶＨと、配列番号１４４のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１４０のＶＨと、配列番号６７のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１４０のＶＨと、配列番号１４２のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１４０のＶＨと、配列番号１４３のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１３９のＶＨと、配列番号１４４のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１３９のＶＨと、配列番号１４２のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１３９のＶＨと、配列番号１４３のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１４１のＶＨと、配列番号１４３のＶＬと、を含み、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨ及びＶＬの両方は、任意に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸置換を含む。所望により、ＣＤＲ内に置換は全く存在しない。
以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する相同抗体は、以下の特性：
ａ）２５ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）でＰａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ ＰＳＭＡ ＥＣＤに結合し、このときＫＤは、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システムを使用して＋２５℃で測定される、
ｂ）２０ｎＭ以下のＥＣ５０計算値でＬＮＣａＰ細胞と結合し、かつ、４０ｎＭ以下のＥＣ５０計算値でＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞に結合し、ＬＮＣａＰ細胞への結合と、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞への結合との間のＥＣ５０計算値の差は５倍未満であり、このときＥＣ５０計算値は、フローサイトメトリーを用いる０℃での全細胞結合アッセイで測定される、
ｃ）１２ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）で、ヒト（配列番号７）、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ（配列番号４）及びＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（配列番号５）由来の組み換えＰＳＭＡ ＥＣＤに結合し、このときＫＤは、Ｐｒｏｔｅｏｎ表面プラズモン共鳴アッセイＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システムを使用して＋２５℃で測定される、
ｄ）二重特異性抗体において抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ２１９と対を成すとき、ＬＮＣａＰ細胞、Ｃ４２細胞、ヒトＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞、又はＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞のＴ細胞媒介性殺傷を提示し、このときＴ細胞媒介性殺傷は、クロム－５１によって、若しくはカスパーゼ３／７活性化アッセイによって測定される、又は
ｅ）立体構造エピトープを認識し、このときエピトープは、ヒトＰＳＭＡ（配列番号３）の残基Ｉ１３８、Ｆ２３５、Ｐ２３７、Ｇ２３８、Ｄ２４４、Ｙ２９９、Ｙ３００、Ｑ３０３、Ｋ３０４、Ｅ３０７、及びＫ３２４～Ｐ３２６からなる、のうち、１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つを有する。
保存的改変を有する抗体
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３配列を含むＶＨと、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３配列を含むＶＬとを含み、ＣＤＲ配列のうちの１つ以上が、本明細書に記載の抗体（例えば、表２に示される抗体に基づく指定のアミノ酸配列又はその保存的改変を含み、抗体は、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する親抗体の所望の機能特性を保持している。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号８、９、１０、１１、１２及び１３、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号１４、１５、１６、１７、１８及び１９、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２０、２１、２２、２３、１２及び２４、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、２６、２７、２８、２９及び３０、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号３１、３２、３３、３４、１２及び３５、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号３６、３７、３８、３９、４０及び４１、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号３１、４２、４３、１１、１２及び１３、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号３１、４４、４５、４６、２９及び４７、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号３６、３７、４８、４９、５０及び５１、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号３６、３７、５２、４９、５０及び５１、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号５３、５４、５５、２３、１２及び３５、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３０、２７、２８、２９及び３０、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３０、２７、１３１、２９及び１３２、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３０、２７、２８、１３３及び１３２、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３４、２７、２８、２９及び３０、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３５、２７、２８、２９及び１３６、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３５、２７、２８、２９及び３０、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３５、２７、１３１、２９及び１３２、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３５、２７、１３１、２９及び１３２、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３４、２７、２８、２９及び１３６、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３４、２７、１３１、２９及び１３２、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３４、２７、２８、１３３及び１３２、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号２５、１３７、２７、２８、１３３及び１３２、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、それぞれ、配列番号１２２、１２３、１２４、２３、１２及び２４、並びにその保存的改変のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。
以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の保存的改変を有する抗体は、以下の特性：
ａ）２５ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）でＰａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ ＰＳＭＡ ＥＣＤに結合し、このときＫＤは、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システムを使用して＋２５℃で測定される、
ｂ）２０ｎＭ以下のＥＣ５０計算値でＬＮＣａＰ細胞と結合し、かつ、４０ｎＭ以下のＥＣ５０計算値でＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞に結合し、ＬＮＣａＰ細胞への結合と、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞への結合との間のＥＣ５０計算値の差は５倍未満であり、このときＥＣ５０計算値は、フローサイトメトリーを用いる０℃での全細胞結合アッセイで測定される、
ｃ）１２ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）で、ヒト（配列番号７）、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ（配列番号４）及びＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（配列番号５）由来の組み換えＰＳＭＡ ＥＣＤに結合し、ＫＤは、Ｐｒｏｔｅｏｎ表面プラズモン共鳴アッセイＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システムを使用して＋２５℃で測定される、
ｄ）二重特異性抗体において抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ２１９と対を成すとき、ＬＮＣａＰ細胞、Ｃ４２細胞、ヒトＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞、又はＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞のＴ細胞媒介性殺傷を提示し、このときＴ細胞媒介性殺傷は、クロム－５１によって、若しくはカスパーゼ３／７活性化アッセイによって測定される、又は
ｅ）立体構造エピトープを認識し、このときエピトープは、ヒトＰＳＭＡ（配列番号３）の残基Ｉ１３８、Ｆ２３５、Ｐ２３７、Ｇ２３８、Ｄ２４４、Ｙ２９９、Ｙ３００、Ｑ３０３、Ｋ３０４、Ｅ３０７、及びＫ３２４～Ｐ３２６からなる、のうち、１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つを有する。
「保存的改変」とは、アミノ酸配列を含有する抗体の結合特性に有意に影響する又はこれを変えることのないアミノ酸の修飾のことを指す。保存的改変は、アミノ酸の置換、付加、及び欠失を含む。保存的置換は、アミノ酸が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられる置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、明確に定義されており、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン、トリプトファン）、芳香族側鎖（例えば、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン、チロシン）、脂肪族側鎖（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン）、アミド（例えば、アスパラギン、グルタミン）、β分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び含硫黄側鎖（システイン、メチオニン）を有するアミノ酸を含む。更に、アラニン・スキャニング変異導入法についてこれまでに述べられているように、ポリペプチド内の任意の天然残基をアラニンで置換することもできる（ＭａｃＬｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ａｃｔａ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｓｃａｎｄ Ｓｕｐｐｌ ６４３：５５－６７；Ｓａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ａｄｖ Ｂｉｏｐｈｙｓ ３５：１－２４）。本発明の抗体に対するアミノ酸置換は、例えばＰＣＲ突然変異誘発（米国特許第４，６８３，１９５号）などの既知の方法によって行うことができる。あるいは、変異体のライブラリは、例えば、ランダムコドン（ＮＮＫ）又は非ランダムコドン（例えば１１個のアミノ酸（Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）をコードするＤＶＫコドン）を用いて生成することもできる。結果として生じる抗体変異体は、それらの特性に関して、本明細書に記載のアッセイを用いて試験することができる。
免疫複合体（Immunoconjugates）
「免疫複合体」は、１つ又は２つ以上の異種分子（複数可）と融合させた本発明の抗体を指す。
いくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の抗体は、１種以上の細胞毒性剤に結合している。このような細胞毒性剤の例としては、化学療法剤又は薬剤、増殖阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、若しくは動物由来の酵素活性を有する毒素、又はそれらの断片）、及び放射性同位体が挙げられる。
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、抗体－薬剤複合体（ＡＤＣ）であり、ここで、本発明の抗体は、マイタンシノイド（例えば、米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６号を参照されたい）；モノメチルオーリスタチン薬剤部分ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）などのオーリスタチン（例えば、米国特許第５，６３５，４８３号、及び同第５，７８０，５８８号、及び同第７，４９８，２９８号を参照されたい）、ドラスタチン、カリチアマイシン、又はこれらの誘導体（例えば、米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、及び同第５，８７７，２９６号；Ｈｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５３：３３３６－３３４２；及びＬｏｄｅ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５８：２９２５－２９２８を参照されたい）；ダウノマイシン又はドキソルビシンなどのアントラサイクリン（例えば、Ｋｒａｔｚ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ １３：４７７－５２３；Ｊｅｆｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔｅｒｓ １６：３５８－３６２；Ｔｏｒｇｏｖ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｂｉｏｃｏｎｊ Ｃｈｅｍ １６：７１７－７２１；Ｎａｇｙ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９７：８２９－８３４；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｏｒｇ．＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：１５２９－１５３２（２００２）；Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ４５：４３３６－４３４３；及び米国特許第６，６３０，５７９号を参照されたい）、メトトレキサート、ビンデシン、タキサン、例えば、ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセルなどの１種以上の薬剤と結合される。
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の未結合活性断片、エキソトキシンＡ鎖（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α－サルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Phytolaca americana）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ－Ｓ）、ニガウリ阻害剤、クルシン、クロチン、サボン草（sapaonaria officinalis）阻害剤、ゲロニン、ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、並びにトリコテシンン（tricothecenes）などといった酵素活性を有する毒素又はそれらの断片と結合している本明細書に記載される本発明の抗体を含む。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、抗体は、放射性原子に結合して放射性複合体を形成する。放射性複合体の産生には様々な放射性同位体を使用することができる。例としては、Ａｔ２１１、１１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。検出に放射性複合体を使用する場合、シンチグラフ検査のため、例えば、ｔｃ９９ｍ若しくは１１２３の放射性原子、又は例えば、ヨウ素－１２３アゲイン（iodine-123 again）、ヨウ素－１３１、インジウム－Ｉ１、フッ素－１９、炭素－１３、窒素－１５、酸素－１７、ガドリニウム、マンガン、又は鉄などといった、核磁気共鳴（ＮＭＲ）イメージング（磁気共鳴画像としても既知、ｍｒｉ）用のスピン標識を含み得る。
本明細書に記載される本発明の抗体と、細胞毒性剤との複合体は、例えば、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミダートＨＱなど）、活性エステル（例えば、ジスクシンイミジル基質）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス－アジド化合物（例えば、ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス－ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン－２，６－ジイソシアネート）、及びビス活性（bis-active）フッ素化合物（例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン）などの様々な二官能性タンパク質カップリング剤を用い作製することができる。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８に記載のとおりに調製できる。炭素１４で標識した１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は放射性核種を抗体に融合させるにあたり例示的なキレート剤である。例えば、国際公開第９４／１１０２６号を参照されたい。リンカーは、細胞中で細胞毒性剤を放出するのを促進する「分解可能なリンカー（cleavable linker）」とすることができる。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカー、又はジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５２：１２７－１３１；米国特許第５，２０８，０２０号）を使用できる。
免疫複合体又はＡＤＣは、市販（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａ））のＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ、スルホ－ＭＢＳ、スルホ－ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣ、及びスルホ－ＳＭＰＢ、並びにＳＶＳＢ（スクシンイミジル－（４－ビニルスルホン）ベンゾアート）などの架橋剤により調製することができる。
以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明の一実施形態は、治療薬又は造影剤に結合させた本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体を含む、免疫複合体である。
以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明の別の実施形態は、治療薬又は造影剤に結合させた本発明のＣＤ３に特異的に結合する抗体を含む、免疫複合体である。
以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明の別の実施形態は、治療薬又は造影剤に結合させた本発明の二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体を含む、免疫複合体である。
本発明の単一特異性抗体の作製
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合するアンタゴニスト抗体は、ヒトである。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合するアンタゴニスト抗体は、ヒト化されている。
本明細書に記載される本発明の単一特異性抗体（例えば、ＰＳＭＡに特異的に結合する抗体）は、様々な手法を用いて作製できる。例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５，１９７５のハイブリドーマ法を使用してモノクローナル抗体を作製することができる。ハイブリドーマ法では、マウス又は他の宿主動物、例えばハムスター、ラット、若しくはサルなどを、ヒト、チンパンジー又はｍａｃａｑｕｅ ＰＳＭＡ又はＣＤ３、又はＰＳＭＡ若しくはＣＤ３の断片、例えばＰＳＭＡ又はＣＤ３の細胞外ドメインで免疫し、その後、標準的な方法を使用して、免疫した動物の脾臓細胞と骨髄腫細胞とを融合させてハイブリドーマ細胞を形成させる（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９－１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。１個の不死化したハイブリドーマ細胞から発生したコロニーを、結合特異性、交差反応性又はその欠如、及び抗原親和性などの所望の特性を有する抗体の生成についてスクリーニングする。
以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、様々な宿主動物を使用して、本明細書に記載される本発明のＰＳＭＡ抗体を産生できる。例えば、Ｂａｌｂ／ｃマウスを使用して、マウス抗ヒトＰＳＭＡ抗体を生成することができる。Ｂａｌｂ／ｃマウス及び他のヒト以外の動物において作製された抗体を、よりヒトに近い配列を生成するための様々な技術を使用してヒト化することもできる。
ヒト受容体フレームワークの選択を含む代表的なヒト化技術は既知であり、ＣＤＲ移植（米国特許第５，２２５，５３９号）、ＳＤＲ移植（米国特許第６，８１８，７４９号）、リサーフェシング（Ｐａｄｌａｎ，（１９９１）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２８：４８９－４９９）、特異性決定残基リサーフェシング（米国特許出願公開第２０１０／０２６１６２０号）、ヒトフレームワーク適合（米国特許第８，７４８，３５６号）又は超ヒト化（米国特許第７，７０９，２２６号）が挙げられる。これらの方法では、ＣＤＲの長さの類似性若しくはカノニカル構造の同一性、又はこれらの組み合わせに基づいて、親フレームワークに対する全体的な相同性に基づき選択され得るヒトフレームワークに親抗体のＣＤＲを移植する。
ヒト化抗体は、国際公開第１０９０／００７８６１号及び同第１９９２／２２６５３号に記載されているものなどの技術によって、結合親和性を保存するように変化させたフレームワーク支持残基を組み込むことによって（復帰変異）、又は任意のＣＤＲに変異を導入して、例えば抗体の親和性を改善することによって、所望の抗原に対するその選択性又は親和性を改善するように更に最適化させてもよい。
それらのゲノムにヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子座を保有するマウス又はラットなどのトランスジェニック動物を使用して、標的タンパク質に対するヒト抗体を作製することができ、例えば米国特許第６，１５０，５８４号、国際公開第９９／４５９６２号、同第２００２／０６６６３０号、同第２００２／４３４７８号、同第２００２／０４３４７８号、及び同第１９９０／０４０３６号、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－９；Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．７：１３－２１；Ｇｒｅｅｎ＆Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ（１９９８）Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３－９５；Ｌｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ（１９９５）Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３：６５－９３；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２１：１３２３－１３２６；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １４：８４５－８５１；Ｍｅｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ １５：１４６－１５６；Ｇｒｅｅｎ（１９９９）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１：１１－２３；Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５９：１２３６－１２４３；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ａｎｄ Ｔａｕｓｓｉｇ（１９９７）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ８：４５５－４５８に記載されている。そのような動物における内因性免疫グロブリン遺伝子座は、破壊又は欠失されてよく、相同又は非相同組み換え、導入染色体、又はミニ遺伝子を使用して、少なくとも１つの完全な又は部分的なヒト免疫グロブリン遺伝子座を動物のゲノム内に挿入することができる。Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ＿ｃｏｍ）、Ｈａｒｂｏｕｒ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ｈａｒｂｏｕｒａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ＿ｃｏｍ）、Ｏｐｅｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（ＯＭＴ）（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ｏｍｔｉｎｃ＿ｎｅｔ）、ＫｙＭａｂ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ｏｍｔｉｎｃ＿ｎｅｔ）、Ｔｒｉａｎｎｉ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ．ｔｒｉａｎｎｉ＿ｃｏｍ）、及びＡｂｌｅｘｉｓ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ａｂｌｅｘｉｓ＿ｃｏｍ）などの企業は、上記の技術を使用して、選択抗原を標的としたヒト抗体を提供するべく取り組んでいる場合がある。
ヒト抗体は、ファージがヒト免疫グロブリン又はその一部（Ｆａｂ、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、又は非対合若しくは対合抗体可変領域など）を発現するように操作されるファージ提示ライブラリから選択され得る（Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９６：５７－８６；Ｋｒｅｂｓ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ ２５４：６７－８４；Ｖａｕｇｈａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：３０９－３１４；Ｓｈｅｅｔｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）ＰＩＴＡＳ（ＵＳＡ）９５：６１５７－６１６２；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ（１９９１）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２７：３８１；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２２：５８１）。本発明の抗体は、例えば、Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９７：３８５－９６、及び国際公開第０９／０８５４６２号）に記載されるバクテリオファージｐＩＸ被覆タンパク質との融合タンパク質として抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を発現するファージディスプレイライブラリから単離され得る。ライブラリを、ヒト及び／又はｃｙｎｏ ＰＳＭＡ又はＣＤ３へのファージ結合についてスクリーニングして、得られた陽性クローンの特性評価を更に行い、Ｆａｂをクローンの溶解物から単離し、完全長のＩｇＧとして発現させることができる。ヒト抗体を単離するためのこのようなファージディスプレイ法は、例えば、米国特許第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５８０，７１７号、同第５，９６９，１０８号、同第６，１７２，１９７号、同第５，８８５，７９３号、同第６，５２１，４０４号、同第６，５４４，７３１号、同第６，５５５，３１３号、同第６，５８２，９１５号、及び同第６，５９３，０８１号に記載されている。
免疫原性抗原の調製及びモノクローナル抗体の生成は、組み換えタンパク質生成などの任意の好適な技術を使用して実施することができる。免疫原性抗原は、精製タンパク質、あるいは全細胞又は細胞若しくは組織抽出物を含むタンパク質混合物の形態で動物に投与されてもよく、抗原は、当該抗原又はその一部分をコードしている核酸から動物の体内で新規に（de novo）形成されてもよい。
本発明の多重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体の作製
本発明の多重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体（例えば、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインとＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインとを含む、二重特異性抗体）は、本明細書で単離され、特徴付けされるＰＳＭＡ結合ＶＨ／ＶＬドメインを、ＣＤ３結合ＶＨ／ＶＬドメインと組み合わせることによって作製できる。あるいは、二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体は、公開されている単一特異性抗ＰＳＭＡ及び抗ＣＤ３抗体由来のＶＨ／ＶＬドメインを用いて、及び／又は、本明細書で同定されるＰＳＭＡ又はＣＤ３に結合するＶＨ／ＶＬドメインを、公開されているＰＳＭＡ又はＣＤ３に結合するＶＨ／ＶＬドメインと組み合わせることによって、遺伝子操作されてよい。
二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３分子の遺伝子操作に使用され得る例示的な抗ＰＳＭＡ抗体は、例えば、本明細書及び表２にあるものである。例えば、本発明のＰＳＭＡ抗体のＶＨ／ＶＬドメインを、本明細書及び表５に記載されるＣＤ３に結合するＶＨ／ＶＬドメインを含む、二重特異性抗体内に組み合わせてよい。例えば、本明細書に記載されるＣＤ３抗体であるＣＤ３Ｂ２１７及びＣＤ３Ｂ２１９のＶＨ／ＶＬドメインを用いて、二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体を作製してもよい。本明細書で提供される抗体ＣＤ３Ｂ２１７及びＣＤ３Ｂ２１９の説明及び特徴に加えて、抗体のより詳細な説明は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１６－００６８６０５（Ａ１）号に見出すことができる。
同様に、二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３分子の遺伝子操作に使用され得る例示的な抗ＣＤ３抗体は、例えば、国際公開第２００５／０４８９３５号、同第２００４／１０６３８０号、及び同第２０１５０９５３９２号に記載されているものである。これらのＣＤ３ ＶＨ／ＶＬドメインを、本明細書及び表２に記載されるＰＳＭＡに結合するＶＨ／ＶＬドメインを含む、二重特異性抗体内に組み合わせてよい。例えば、本明細書に記載のＰＳＭＡ抗体であるＰＳＭＢ１１９、ＰＳＭＢ１２０、ＰＳＭＢ１２１、ＰＳＭＢ１２２、ＰＳＭＢ１２３、ＰＳＭＢ８７、ＰＳＭＢ１２６、ＰＳＭＢ１２７、ＰＳＭＢ１２８、ＰＳＭＢ１２９、ＰＳＭＢ１３０、ＰＳＭＢ１２０、ＰＳＭＢ１２１、ＰＳＭＢ１２２、ＰＳＭＢ１２３、ＰＳＭＢ１２７、ＰＳＭＢ１２８、ＰＳＭＢ１３０、ＰＳＭＢ３４４、ＰＳＭＢ３４５、ＰＳＭＢ３４６、ＰＳＭＢ３４７、ＰＳＭＢ３４９、ＰＳＭＢ３５８、ＰＳＭＢ３５９、ＰＳＭＢ３６０、ＰＳＭＢ３６１、ＰＳＭＢ３６２、ＰＳＭＢ３６３、及びＰＳＭＢ３６５のＶＨ／ＶＬドメインを用いて、二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体を作製してもよい。
生成された二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体を、ＰＳＭＡ及びＣＤ３への結合について、並びに、ＰＳＭＡ発現細胞（例えば、ＬＮＣａＰ）のＴ細胞媒介性殺傷などの所望の機能特性について試験してよい。
本発明の二重特異性抗体は、完全長抗体構造を有する抗体を含む。
「完全長の抗体」とは、２つの完全長抗体重鎖、及び２つの完全長抗体軽鎖を有する抗体を意味する。完全長抗体重鎖（ＨＣ）は、周知の重鎖可変ドメイン及び定常ドメインＶＨ、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３からなる。完全長抗体軽鎖（ＬＣ）は、周知の軽鎖可変ドメイン及び定常ドメインＶＬ及びＣＬからなる。完全長抗体は、一方又は両方の重鎖のいずれかにおいて、Ｃ末端リジン（Ｋ）を欠いていてもよい。
「Ｆａｂアーム」又は「半分子」とは、抗原に特異的に結合する、１つの重鎖－軽鎖対を意味する。
以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の完全長の二重特異性抗体は、例えば、２つの単一特異性二価抗体間でのＦａｂアーム交換（又は半分子交換）を用い、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、無細胞環境下又は共発現使用下のいずれかで、別個の特異性を有する２つの抗体半分子を好ましくヘテロ二量体形成させるべく各半分子における重鎖ＣＨ３界面に置換を導入することにより生成されてもよい。Ｆａｂアーム交換反応は、ジスルフィド結合異性化反応及びＣＨ３ドメインの解離－会合の結果である。親単一特異性抗体のヒンジ領域における重鎖ジスルフィド結合は減少する。親単一特異性抗体のうちの１つの得られた遊離システインは、第２の親単一特異性抗体分子のシステイン残基と重鎖内ジスルフィド結合を形成し、同時に、親抗体のＣＨ３ドメインは、解離－会合により解放及び再形成する。ＦａｂアームのＣＨ３ドメインは、ホモ二量体形成よりヘテロ二量体形成を好むように改変されてもよい。得られた生成物は、それぞれ異なるエピトープ、すなわち、ＰＳＭＡ上のエピトープ及びＣＤ３上のエピトープに結合する、２つのＦａｂアーム又は半分子を有する二重特異性抗体である。
「ホモ二量体化」とは、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。「ホモ二量体」とは、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
「ヘテロ二量体化」とは、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。「ヘテロ二量体」とは、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、Ｔｒｉｏｍａｂ／Ｑｕａｄｒｏｍａ（Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ／Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｋｎｏｂｓ－ｉｎ－Ｈｏｌｅｓ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＣｒｏｓｓＭＡｂｓ（Ｒｏｃｈｅ）及び静電的適合（Ｃｈｕｇａｉ，Ａｍｇｅｎ，ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋ，Ｏｎｃｏｍｅｄ）、ＬＵＺ－Ｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ストランド交換操作ドメインボディ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）（ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ）、Ｂｉｃｌｏｎｉｃ（Ｍｅｒｕｓ）、並びにＤｕｏＢｏｄｙ（Ｇｅｎｍａｂ Ａ／Ｓ）などの設計を含む。
Ｔｒｉｏｍａｂ ｑｕａｄｒｏｍａ技術を使用して、本発明の完全長二重特異性抗体を生成することができる。Ｔｒｉｏｍａｂ技術は、２つの親キメラ抗体、ＩｇＧ２ａを有する１つの親ｍＡｂと、ラットＩｇＧ２ｂ定常領域を有する第２の親ｍＡｂとの間のＦａｂアーム交換を促進し、キメラ二重特異性抗体をもたらす。
「ノブ－イン－ホール（knob-in-hole）」法（例えば、国際公開第２００６／０２８９３６号を参照）を使用して、本発明の完全長二重特異性抗体を作製することができる。簡潔に、ヒトＩｇＧにおけるＣＨ３ドメインの界面を形成する選択されたアミノ酸は、ヘテロ二量体形成を促進するために、ＣＨ３ドメイン相互作用に影響を及ぼす位置において変異され得る。小さな側鎖を有するアミノ酸（ホール）が、第１の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入され、大きな側鎖を有するアミノ酸（ノブ）が、第２の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖内に導入される。２つの抗体の共発現後に、ヘテロ二量体が、「ホール」を有する重鎖と「ノブ」を有する重鎖との優先的な相互作用の結果として形成される。ノブ及びホールを形成する例示的なＣＨ３置換ペアは、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖである（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける修飾位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける修飾位置として表現）。
ＣｒｏｓｓＭＡｂ技術を使用して、本発明の完全長二重特異性抗体を生成することができる。ＣｒｏｓｓＭＡｂは、「ノブ－イン－ホール」戦略を利用してＦａｂアーム交換を促進することに加えて、半アームのうちの１つに、得られる二重特異性抗体の正しい軽鎖対形成を保証するために交換されたＣＨ１及びＣＬドメインを有する（例えば、米国特許第８，２４２，２４７号を参照されたい）。
他の交差法を使用して、二重特異性抗体の重鎖と軽鎖の間又は重鎖内で、一方又は両方のアームにおいて、可変又は定常、又は両ドメインを交換することによって、本発明の完全長二重特異性抗体を作製してもよい。これらの交換としては、例えば、国際特許公開第２００９／０８０２５４号、同第２００９／０８０２５１号、同第２００９／０１８３８６号、及び同第２００９／０８０２５２号に記載されるＶＨ－ＣＨ１とＶＬ－ＣＬ、ＶＨとＶＬ、ＣＨ３とＣＬ、及びＣＨ３とＣＨ１が挙げられる。
他の戦略、例えば、あるＣＨ３表面における正に荷電した残基及び第２のＣＨ３表面における負に荷電した残基を置換することによる静電的相互作用を使用する重鎖ヘテロ二量体化の促進が、米国特許出願公開第２０１０／００１５１３３号、同第２００９／０１８２１２７号、同第２０１０／０２８６３７号、又は同第２０１１／０１２３５３２号に記載されるように使用されてもよい。他の戦略では、ヘテロ二量体化は、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号又は同第２０１３／０１９５８４９号に記載されるように、下記置換：Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３６６Ｉ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける修飾位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける修飾位置として表現）により促進されてもよい。
ＬＵＺ－Ｙ技術を利用して、本発明の二重特異性抗体を作製してもよい。この技術では、ロイシンジッパーをＣＨ３ドメインのＣ末端に付加して、Ｗｒａｎｉｋ ｅｔ ａｌ．，（２０１２）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８７（５２）：４２２２１－９に記載されるように、精製後に除去される親ｍＡｂからヘテロ二量体アセンブリを駆動する。
ＳＥＥＤｂｏｄｙ技術を利用して、本発明の二重特異性抗体を作製してもよい。ＳＥＥＤｂｏｄｙは、それらの定常ドメインにおいて、米国特許出願第２００７／０２８７１７０号に記載されるように、ヘテロ二量体化を促進するためにＩｇＡ残基で置換された選択ＩｇＧ残基を有する。
本発明はまた、ＰＳＭＡに特異的に結合する多重特異性多重機能性抗体も提供する。
本発明によれば、このようなＰＳＭＡに特異的に結合する多重特異性体重機能性抗体は、腫瘍細胞の二重標的化のため三重特異性抗体であってもよく、これらは、腫瘍細胞上の２つの異なる標的／エピトープを標的化し、第３の機能性部分がＴ細胞又はＮＫ細胞のいずれかに対して高い親和性で結合するように設計され得る三重機能性構造である。２つの異なる腫瘍エピトープを標的化し、Ｔ細胞又はＮＫ細胞に結合する三重特異性抗体は、両方の標的を発現する腫瘍細胞を溶解させる。かかる分子は、当該技術分野において既知の抗体フォーマットによって生成することができ、詳細に記載されている。（国際公開第２０１５１８４２０７１号、同第２０１５１５８６３６号、同第２０１０１３６１７２号、同第２０１３１７４８７３号）。本発明の三重特異性の実施形態では、抗原結合ポリペプチドは、ＰＳＭＡ及び腫瘍細胞上の第２の異なる抗原に二重特異的であり、更にエフェクター細胞、特にＴ細胞又はＮＫ細胞に特異的である。
以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、国際公開第２０１１／１３１７４６号（ＤｕｏＢｏｄｙ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）に記載の方法に従って、２つの単一特異性ホモ二量体抗体のＣＨ３領域に非対称な変異を導入し、ジスルフィド結合を異性化させる還元条件下で、２つの親単一特異性ホモ二量体抗体から二重特異性ヘテロ二量体抗体を形成することによって、セルフリー環境においてｉｎ ｖｉｔｒｏで生成されてもよい。この方法において、第１の単一特異性二価抗体（例えば、抗ＰＳＭＡ抗体）及び第２の単一特異性二価抗体（例えば、抗ＣＤ３抗体）は、ヘテロ二量体の安定性を促進するＣＨ３ドメインにおける特定の置換を有するように操作される。これらの抗体は、ヒンジ領域におけるシステインがジスルフィド結合を異性化させるのに十分な還元条件下において共にインキュベートされ、それにより、Ｆａｂアーム交換により二重特異性抗体が生成される。インキュベート条件は、最適には、非還元条件に戻され得る。使用され得る例示的な還元剤は、２－メルカプトエチルアミン（２－ＭＥＡ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、ジチオエリスリトール（ＤＴＥ）、グルタチオン、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、Ｌ－システイン、及びβ－メルカプトエタノールである。例えば、少なくとも２０℃の温度で、少なくとも２５ｍＭの２－ＭＥＡの存在下又は少なくとも０．５ｍＭのジチオスレイトールの存在下で、ｐＨ５～８、例えばｐＨ７．０又はｐＨ７．４で、少なくとも９０分間のインキュベートを用いることができる。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインとを含む単離された二重特異性抗体は、抗体ＣＨ３定常ドメイン中に少なくとも１つの置換を含む。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、抗体ＣＨ３定常ドメイン中の少なくとも１つの置換は、４０９Ｒ、Ｆ４０５Ｌ、又はＦ４０５Ｌ及びＲ４０９Ｋであり、ここで、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う。
抗体ドメイン及び番号は、周知である。「非対称」とは、抗体内の２本の別の重鎖の２つのＣＨ３ドメインにおける、同一でない置換を意味する。ＩｇＧ１ ＣＨ３領域は通常、ＩｇＧ１上の残基３４１～４４６（残基番号はＥＵインデックスに従う）からなる。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、単離された二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体は、抗体の第１の重鎖（ＨＣ１）中のＦ４０５Ｌ置換と、抗体の第２の重鎖（ＨＣ２）中の４０９Ｒ置換と、を含む。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、単離された二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体は、ＨＣ１中のＳ２２８Ｐ置換と、ＨＣ２中のＳ２２８Ｐ、Ｆ４０５Ｌ及びＲ４０９Ｋ置換と、を含み、抗体はＩｇＧ４アイソタイプである。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインを含み、ＨＣ２は、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインを含む。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、本発明の二重特異性抗体は、残基の付番がＥＵインデックスに従うとき、残基位置３５０、３６６、３６８、３７０、３９９、４０５、４０７又は４０９において、ＨＣ１及びＨＣ２中に少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、又は８つの非対称置換を含む。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、本発明の二重特異性抗体は、残基の付番がＥＵインデックスに従うとき、残基位置３５０、３７０、４０５又は４０９において、ＨＣ１及びＨＣ２中に少なくとも１つ、２つ、３つ、又は４つの非対称置換を含む。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、本発明の二重特異性抗体は、残基の付番がＥＵインデックスに従うとき、残基位置４０５又は４０９において、ＨＣ１及びＨＣ２中に少なくとも１つの非対称置換を含む。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、本発明の二重特異性抗体は、残基の付番がＥＵインデックスに従うとき、ＨＣ１中の４０９Ｒ又はＦ４０５Ｌ置換と、ＨＣ２中の４０９Ｒ又はＦ４０５Ｌ置換とを含む。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、本発明の二重特異性抗体は、ＨＣ１中のＦ４０５Ｌ置換と、ＨＣ２中の４０９Ｒ置換とを含む。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、本発明の二重特異性抗体は、残基の付番がＥＵインデックスに従うとき、残基位置３６６、３６８、３７０、３９９、４０５、４０７又は４０９において、ＨＣ１及びＨＣ２中に少なくとも１つの非対称置換を含む。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１位置４０９は、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸置換を有し、ＨＣ２位置４０５は、Ｐｈｅ以外のアミノ酸置換を有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１位置４０５は、Ｐｈｅ以外のアミノ酸置換を有し、ＨＣ２位置４０９は、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸置換を有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１位置４０９は、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸置換を有し、ＨＣ２位置４０５は、Ｐｈｅ、Ａｒｇ、又はＧｌｙ以外のアミノ酸置換を有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１位置４０５は、Ｐｈｅ、Ａｒｇ、又はＧｌｙ以外のアミノ酸置換を有し、ＨＣ２ ＣＨ３位置４０９は、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸置換を有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１ ＣＨ３は、位置４０５にＰｈｅ、及び位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有し、ＨＣ２は、位置４０５にＰｈｅ以外のアミノ酸、及び位置４０９にＬｙｓを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０５にＰｈｅ以外のアミノ酸、及び位置４０９にＬｙｓを有し、ＨＣ２は、位置４０５にＰｈｅ、及び位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０５にＰｈｅ、及び位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有し、ＨＣ２は、位置４０５にＰｈｅ、Ａｒｇ、又はＧｌｙ以外の置換、及び位置４０９にＬｙｓを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０５にＰｈｅ、Ａｒｇ、又はＧｌｙ以外の置換、及び位置４０９にＬｙｓを有し、ＨＣ２は、位置４０５にＰｈｅ、及び位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０５にＰｈｅ、及び位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有し、ＨＣ２は、位置４０５にＬｅｕ、及び位置４０９にＬｙｓを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０５にＬｅｕ、及び位置４０９にＬｙｓを有し、ＨＣ２は、位置４０５にＰｈｅ、及び位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０５にＰｈｅ、及び位置４０９にＡｒｇを有し、ＨＣ２は、位置４０５にＰｈｅ、Ａｒｇ、又はＧｌｙ以外のアミノ酸、及び位置４０９にＬｙｓを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０５にＰｈｅ、Ａｒｇ、又はＧｌｙ以外のアミノ酸、及び位置４０９にＬｙｓを有し、ＨＣ２は、位置４０５にＰｈｅ、及び位置４０９にＡｒｇを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０５にＰｈｅ、及び位置４０９にＡｒｇを有し、ＨＣ２は、位置４０５にＬｅｕ、及び位置４０９にＬｙｓを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０５にＬｅｕ、及び位置４０９にＬｙｓを有し、ＨＣ２は、位置４０５にＰｈｅ、及び位置４０９にＡｒｇを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０５にＰｈｅ、及び位置４０９にＬｙｓを有し、ＨＣ２は、位置４０５にＬｅｕ、及び位置４０９にＡｒｇを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０５にＬｅｕ、及び位置４０９にＡｒｇを有し、ＨＣ２は、位置４０５にＰｈｅ、及び位置４０９にＬｙｓを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有し、ＨＣ２は、位置４０９にＬｙｓ、位置３７０にＴｈｒ、及び位置４０５にＬｅｕを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０９にＬｙｓ、位置３７０にＴｈｒ、及び位置４０５にＬｅｕを有し、ＨＣ２は、位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０９にＡｒｇを有し、ＨＣ２は、位置４０９にＬｙｓ、位置３７０にＴｈｒ、及び位置４０５にＬｅｕを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０９にＬｙｓ、位置３７０にＴｈｒ、及び位置４０５にＬｅｕを有し、ＨＣ２は、位置４０９にＡｒｇを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置３７０にＬｙｓ、位置４０５にＰｈｅ、及び位置４０９にＡｒｇを有し、ＨＣ２は、位置４０９にＬｙｓ、位置３７０にＴｈｒ、及び位置４０５にＬｅｕを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０９にＬｙｓ、位置３７０にＴｈｒ、及び位置４０５にＬｅｕを有し、ＨＣ２は、位置３７０にＬｙｓ、位置４０５にＰｈｅ、及び位置４０９にＡｒｇを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有し、ＨＣ２は、位置４０７にＴｙｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ又はＴｈｒ以外のアミノ酸を有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０７にＴｙｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ又はＴｈｒ以外のアミノ酸を有し、ＨＣ２は、位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有し、ＨＣ２は、位置４０７にＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｖａｌ又はＴｒｐを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０７にＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｖａｌ、又はＴｒｐを有し、ＨＣ２は、位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有し、ＨＣ２は、位置４０７にＧｌｙ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、又はＴｒｐを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０７にＧｌｙ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、又はＴｒｐを有し、ＨＣ２は、位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０７にＴｙｒ、及び位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有し、ＨＣ２は、位置４０７にＴｙｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ又はＴｈｒ以外のアミノ酸、及び位置４０９にＬｙｓを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０７にＴｙｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ又はＴｈｒ以外のアミノ酸、及び位置４０９にＬｙｓを有し、ＨＣ２は、位置４０７にＴｙｒ、及び位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０７にＴｙｒ、及び位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有し、ＨＣ２は、位置４０７にＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｖａｌ又はＴｒｐ、及び位置４０９にＬｙｓを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０７にＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｖａｌ、又はＴｒｐ、及び位置４０９にＬｙｓを有し、ＨＣ２ ＣＨ３は、位置４０７にＴｙｒ、及び位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１ ＣＨ３は、位置４０７にＴｙｒ、及び位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有し、ＨＣ２は、位置４０７にＧｌｙ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ又はＴｒｐ、及び位置４０９にＬｙｓを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０７にＧｌｙ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ又はＴｒｐ、及び位置４０９にＬｙｓを有し、ＨＣ２は、位置４０７にＴｙｒ、及び位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０７にＴｙｒ、及び位置４０９にＡｒｇを有し、ＨＣ２は、位置４０７にＴｙｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ又はＴｈｒ以外のアミノ酸、及び位置４０９にＬｙｓを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０７にＴｙｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ又はＴｈｒ以外のアミノ酸、及び位置４０９にＬｙｓを有し、ＨＣ２は、位置４０７にＴｙｒ、及び位置４０９にＡｒｇを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０７にＴｙｒ、及び位置４０９にＡｒｇを有し、ＨＣ２は、位置４０７にＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｖａｌ又はＴｒｐ、及び位置４０９にＬｙｓを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０７にＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｖａｌ、又はＴｒｐ、及び位置４０９にＬｙｓを有し、ＨＣ２は、位置４０７にＴｙｒ、及び位置４０９にＡｒｇを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１ ＣＨ３は、位置４０７にＴｙｒ、及び位置４０９にＡｒｇを有し、ＨＣ２ ＣＨ３は、位置４０７にＧｌｙ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ又はＴｒｐ、及び位置４０９にＬｙｓを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０７にＧｌｙ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ又はＴｒｐ、及び位置４０９にＬｙｓを有し、ＨＣ２は、位置４０７にＴｙｒ、及び位置４０９にＡｒｇを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有し、ＨＣ２は、（ｉ）位置３６８にＰｈｅ、Ｌｅｕ、及びＭｅｔ以外のアミノ酸、又は（ｉｉ）位置３７０にＴｒｐ、又は（ｉｉｉ）位置３９９にＡｓｐ、Ｃｙｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｕ、又はＧｌｎ以外のアミノ酸を有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、（ｉ）位置３６８にＰｈｅ、Ｌｅｕ、及びＭｅｔ以外のアミノ酸、又は（ｉｉ）位置３７０にＴｒｐ、又は（ｉｉｉ）位置３９９にＡｓｐ、Ｃｙｓ、Ｐｒｏ、Ｇｌｕ、又はＧｌｎ以外のアミノ酸を有し、ＨＣ２は、位置４０９にＬｙｓ、Ｌｅｕ、又はＭｅｔ以外のアミノ酸を有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０９にＡｒｇ、Ａｌａ、Ｈｉｓ又はＧｌｙを有し、ＨＣ２は、（ｉ）位置３６８にＬｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、又はＴｒｐ、又は（ｉｉ）位置３７０にＴｒｐ、又は（ｉｉｉ）位置３９９にＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、又はＴｙｒを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、（ｉ）位置３６８にＬｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、又はＴｒｐ、又は（ｉｉ）位置３７０にＴｒｐ、又は（ｉｉｉ）位置３９９にＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、又はＴｙｒを有し、ＨＣ２は、位置４０９にＡｒｇ、Ａｌａ、Ｈｉｓ又はＧｌｙを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、位置４０９にＡｒｇを有し、ＨＣ２は、（ｉ）位置３６８にＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、又はＴｒｐ、又は（ｉｉ）位置３７０にＴｒｐ、又は（ｉｉｉ）位置３９９にＰｈｅ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、又はＴｙｒを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１は、（ｉ）位置３６８にＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、又はＴｒｐ、又は（ｉｉ）位置３７０にＴｒｐ、又は（ｉｉｉ）位置３９９にＰｈｅ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、又はＴｙｒを有し、ＨＣ２は、位置４０９にＡｒｇを有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、残基の付番がＥＵインデックスに従うとき、ＨＣ１は４０９Ｒ置換又はＦ４０５Ｌ置換を含み、ＨＣ２は４０９Ｒ置換又はＦ４０５Ｌ置換を含む。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＨＣ１はＦ４０５Ｌ置換を含み、ＨＣ２は４０９Ｒ置換を含む。
置換は、典型的には、標準方法を使用して抗体の定常ドメインなどの分子に対してＤＮＡレベルで行われる。
本発明の抗体は、様々な周知の抗体形態に改変されてもよい。
いくつかの実施形態では、本発明の二重特異性抗体は、ディアボディ又はクロスボディである。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗体としては、組み換えＩｇＧ様二重標的分子（分子の２つの側が各々、少なくとも２つの異なる抗体のＦａｂ断片又はＦａｂ断片の一部を含有する）、ＩｇＧ融合分子（完全長ＩｇＧ抗体が、余分のＦａｂ断片又はＦａｂ断片の一部に融合される）、Ｆｃ融合分子（一本鎖Ｆｖ分子又は安定化された二重特異性抗体が、重鎖定常ドメイン、Ｆｃ領域、又はその一部に融合される）、Ｆａｂ融合分子（異なるＦａｂ断片が１つに融合される）、ＳｃＦｖ及び二重特異性抗体に基づく抗体及び重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）（異なる一本鎖Ｆｖ分子又は異なる二重特異性抗体又は異なる重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）を互いに融合するか、又は別のタンパク質若しくは担体分子に融合する）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、組み換えＩｇＧ様デュアル標的分子には、Ｄｕａｌ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ（ＤＴ）－Ｉｇ（ＧＳＫ／Ｄｏｍａｎｔｉｓ）、Ｔｗｏ－ｉｎ－ｏｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、及びｍＡｂ２（Ｆ－Ｓｔａｒ）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、ＩｇＧ融合分子には、Ｄｕａｌ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎ（ＤＶＤ）－Ｉｇ（Ａｂｂｏｔｔ）、Ｔｓ２Ａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡＺ）、及びＢｓＡｂ（Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＨＥＲＣＵＬＥＳ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、並びにＴｖＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、Ｆｃ融合分子には、ＳｃＦｖ／Ｆｃ Ｆｕｓｉｏｎｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、ＳＣＯＲＰＩＯＮ（Ｅｍｅｒｇｅｎｔ ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ／Ｔｒｕｂｉｏｎ，Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ／ＢＭＳ）、及びＤｕａｌ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｆｃ－ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）が挙げられる。
一部の実施形態では、Ｆａｂ融合二重特異性抗体には、Ｆ（ａｂ）２（Ｍｅｄａｒｅｘ／ＡＭＧＥＮ）、Ｄｕａｌ－Ａｃｔｉｏｎ ｏｒ Ｂｉｓ－Ｆａｂ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｄｏｃｋ－ａｎｄ－Ｌｏｃｋ（ＤＮＬ）（ＩｍｍｕｎｏＭｅｄｉｃｓ）、Ｂｉｖａｌｅｎｔ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｂｉｏｔｅｃｎｏｌ）、及びＦａｂ－Ｆｖ（ＵＣＢ－Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）が挙げられる。ＳｃＦｖ－、ディアボディベース及びドメイン抗体には、Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｎｇａｇｅｒ（ＢＩＴＥ）（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ）、Ｔａｎｄｅｍ Ｄｉａｂｏｄｙ（Ｔａｎｄａｂ）（Ａｆｆｉｍｅｄ）、Ｄｕａｌ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、Ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎ Ｄｉａｂｏｄｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ）、ＴＣＲ－ｌｉｋｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（ＡＩＴ，ＲｅｃｅｐｔｏｒＬｏｇｉｃｓ）、Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ ＳｃＦｖ Ｆｕｓｉｏｎ（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ）、及びＣＯＭＢＯＤＹ（Ｅｐｉｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、二重標的指向性ナノボディ（dual targeting nanobody）（Ａｂｌｙｎｘ）、二重標的指向性の重鎖のみのドメイン抗体（dual targeting heavy chain only domain antibody）が挙げられる。様々な形式の二重特異性抗体は、例えば、Ｃｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｂａｔｙ（２００９）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ Ｄｅｖ １２：２７６及びＮｕｎｅｚ－Ｐｒａｄｏ ｅｔ ａｌ．，（２０１５）Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ ２０（５）：５８８－５９４に記載されている。
ポリヌクレオチド、ベクター、及び宿主細胞
ＰＳＭＡに免疫特異的に結合する抗体又は抗原結合フラグメントをコードする単離されたポリヌクレオチドもまた開示される。本明細書で提供された可変ドメインセグメントをコード可能な単離されたポリヌクレオチドは、抗体又は抗原結合フラグメントを生成する同一の又は異なるベクターに含まれてもよい。
組み換え抗原結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドもまた、本開示の範囲内である。一部の実施形態では、記載されたポリヌクレオチド（及びこのポリヌクレオチドがコードするペプチド）は、リーダー配列を含む。当技術分野において既知の任意のリーダー配列を利用することができる。リーダー配列は、制限部位又は翻訳開始部位を含み得るがこれらに限定されない。
本明細書に記載されたＰＳＭＡ特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、記載されるＰＳＭＡ特異性抗体又は抗原結合フラグメントの生物学的特性（例えば、結合親和性又は免疫エフェクター活性）を保持している、１つ又は複数のアミノ酸置換、欠失、又は付加を有する変異体を含む。本発明の文脈において、下記注釈は、別途記載のない限り、変異を説明するのに使用される。ｉ）所与の位置におけるアミノ酸の置換は、例えば、Ｋ４０９Ｒと記載される。Ｋ４０９Ｒは、４０９位におけるリジンのアルギニンによる置換を意味する。ｉｉ）特定の変異体について、特定の三文字又は一文字コードは、コードＸａａ及びＸを含めて、アミノ酸残基を示すのに使用される。このため、４０９位におけるリジンについてのアルギニンの置換は、Ｋ４０９Ｒと指定され、又は４０９位におけるリジンについての任意のアミノ酸残基の置換は、Ｋ４０９Ｘと指定される。４０９位におけるリジンの欠失の場合には、この欠失は、Ｋ４０９＊により示される。特定のアミノ酸残基が、ペプチドアイソタイプ又は変異体の間で変化してもよく、置換は、各アイソタイプ又は変異型又はアイソタイプ若しくは変異体のうち任意のものにおける残基に影響を及ぼし、置換は、例えば、位置４０９に対応するアミノ酸がアルギニンで置換されていることを意味する、４０９Ｒとして指定される。当業者であれば、１つ又は複数のアミノ酸置換、欠失、又は付加を有する多様体を生成することができる。
これらの多様体としては、（ａ）１つ又は２つ以上のアミノ酸残基が保存的又は非保存的アミノ酸により置換されている多様体、（ｂ）１つ又は２つ以上のアミノ酸がポリペプチドに付加され、又は同ポリペプチドから欠失している多様体、（ｃ）１つ又は２つ以上のアミノ酸が置換基を含む多様体、及び（ｄ）ポリペプチドが別のペプチド又はポリペプチド、例えば、融合パートナー、タンパク質タグ、又は他の化学部分と融合した多様体、を挙げることができる。これらは、ポリペプチドに有用な特性、例えば、抗体に対するエピトープ、ポリヒスチジン配列、ビオチン部分等を付与してもよい。本明細書に記載された抗体又は抗原結合フラグメントは、保存的又は非保存的位置のいずれかにおいてある種からのアミノ酸残基が別の種における対応する残基に置換されている多様体を含んでもよい。他の実施形態では、非保存的位置におけるアミノ酸残基は、保存的又は非保存的残基により置換される。これらの多様体を得るための手法は、遺伝的（欠失、変異等）、化学的、及び酵素的手法を含めて、当業者に既知である。
本明細書に記載されたＰＳＭＡ特異性抗体又は抗原結合フラグメントは、複数の抗体アイソタイプ、例えば、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを具現化することができる。一部の実施形態では、抗体アイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のアイソタイプ、好ましくは、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４のアイソタイプである。抗体又はその抗原結合フラグメントの特異性は、ＣＤＲのアミノ酸配列及び配置により主に決定される。したがって、あるアイソタイプのＣＤＲは、抗原特異性を変化させることなく、別のアイソタイプに変更することができる。あるいは、抗原特異性を変化させることなく、ハイブリドーマに、ある抗体アイソタイプを別のものにスイッチさせる技術（アイソタイプスイッチング）が確立されてきた。したがって、このような抗体アイソタイプは、記載された抗体又は抗原結合フラグメントの範囲内にある。
本明細書に記載されたポリヌクレオチドを含むベクターもまた提供される。ベクターは、発現ベクターであり得る。このため、対象となるポリペプチドをコードする配列を含有する組み換え発現ベクターは、本開示の範囲内であると想到される。発現ベクターは、１つ又は２つ以上の追加配列を含有してもよい。同追加配列には、例えば、制御配列（例えば、プロモータ、エンハンサー）、選択マーカー、及びポリアデニル化シグナルが挙げられるが、これらに限定されない。広い各種の宿主細胞を形質転換するためのベクターは公知であり、プラスミド、ファージミド、コスミド、バキュロウイルス、バクミド、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、並びに、他の細菌、酵母、及びウイルスのベクターが挙げられるが、これらに限定されない。
本説明の範囲内にある組み換え発現ベクターは、適切な調節エレメントに操作可能に連結することができる少なくとも１つの組み換えタンパク質をコードする、合成、ゲノム、又はｃＤＮＡ由来の核酸フラグメントを含む。このような調節エレメントには、転写プロモータ、適切なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列、並びに転写及び翻訳の終了を制御する配列を挙げることができる。発現ベクター、特に、哺乳類の発現ベクターはまた、１つ又は２つ以上の非転写エレメント、例えば、複製の起点、発現される遺伝子に連結された適切なプロモータ及びエンハンサー、他の５’又は３’フランキング非転写配列、５’又は３’非翻訳配列（例えば、必須リボソーム結合部位）、ポリアデニル化部位、スプライスドナー及びアクセプター部位、又は転写終了配列を含んでもよい。宿主において複製する能力を付与する複製の起点もまた包含されてもよい。
脊椎動物細胞を形質転換するのに使用される発現ベクター中の転写及び翻訳制御配列は、ウイルス資源により提供することができる。例示的なベクターは、Ｏｋａｙａｍａ ａｎｄ Ｂｅｒｇ，３ Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２８０（１９８３）に記載されたように構築されてもよい。
一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントのコード配列は、強力な構成的プロモータ、例えば、下記遺伝子：ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、ベータアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋クレアチン等のためのプロモータの制御下に置かれる。加えて、多くのウイルスプロモータが、真核細胞中で恒常的に機能し、記載された実施形態での使用に適している。このようなウイルスプロモータには、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）中間初期プロモータ、ＳＶ４０の初期及び後期プロモータ、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモータ、モロニー白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、及び他のレトロウイルスの長端末反復配列（ＬＴＲ）、並びに単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモータが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、ＰＳＭＡ特異性抗体又はその抗原結合フラグメントのコード配列は、誘引性プロモータ、例えば、メタロチオネインプロモータ、テトラサイクリン誘引性プロモータ、ドキシサイクリン誘引性プロモータ、１つ又は２つ以上のインターフェロン刺激応答エレメント（ＩＳＲＥ）、例えば、プロテインキナーゼＲ２’，５’－オリゴアデニレート合成酵素、ＭＸ遺伝子、ＡＤＡＲ１等を含有するプロモータの制御下に置かれる。
本明細書に記載されたベクターは、１つ又は２つ以上の配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含有してもよい。ＩＲＥＳ配列の融合ベクター内への包含は、一部のタンパク質の発現を増強させるのに有益であり得る。一部の実施形態では、ベクター系は、１つ又は２つ以上のポリアデニル化部位（例えば、ＳＶ４０）を含むこととなる。同部位は、前述の核酸配列のうちいずれかの上流又は下流にあってもよい。ベクターの成分は、近接して連結されてもよく、又は遺伝子産物を発現させるのに最適な間隔を提供するように（すなわち、ＯＲＦ間に「スペーサー」ヌクレオチドを導入することにより）配置されてもよく、若しくは別の方法で位置付けられてもよい。調節エレメント、例えば、ＩＲＥＳモチーフはまた、発現に最適な間隔を提供するように配置されてもよい。
ベクターは、当技術分野において既知の選択マーカーを含んでもよい。選択マーカーには、陽性及び陰性選択マーカー、例えば、抗生物質抵抗性遺伝子（例えば、ネオマイシン抵抗性遺伝子、ヒグロマイシン抵抗性遺伝子、カナマイシン抵抗性遺伝子、テトラサイクリン抵抗性遺伝子、ペニシリン抵抗性遺伝子）、グルタミン酸合成酵素遺伝子、ガンシクロビル選択用のＨＳＶ－ＴＫ、ＨＳＶ－ＴＫ誘導体、又は６－メチルプリン選択用の細菌のプリンヌクレオシドホスホリラーゼ遺伝子（Ｇａｄｉ ｅｔ ａｌ．，７ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１７３８－１７４３（２０００））が挙げられる。選択マーカーをコードする核酸配列又はクローニング部位は、対象となるポリペプチドをコードする核酸配列又はクローニング部位の上流又は下流にあってもよい。
本明細書に記載されたベクターを使用して、記載された抗体又は抗原結合フラグメントをコードする遺伝子により種々の細胞を形質転換することができる。例えば、ベクターを使用して、ＰＳＭＡ特異性抗体又は抗原結合フラグメントの生成細胞を生じさせることができる。このため、別の態様は、ＰＳＭＡに特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント、例えば、本明細書に記載され、例示された抗体又は抗原結合フラグメントをコードする核酸配列を含むベクターで形質転換された宿主細胞を特徴とする。
外来遺伝子を細胞内に導入するための数多くの手法が、当技術分野において既知であり、本明細書に記載され、例示された種々の実施形態に従って、記載された方法を行う目的で組み換え細胞を作成するのに使用することができる。使用される手法は、異種遺伝子配列が細胞の子孫により遺伝及び発現可能であり、かつレシピエント細胞に必須の成育及び生理学的機能を損なうことのないよう、異種遺伝子配列を宿主細胞に安定して導入するものでなければならない。使用することができる手法としては、染色体導入法（例えば、細胞融合、染色体媒介性遺伝子導入、マイクロ細胞媒介性遺伝子導入）、物理的方法（例えば、トランスフェクション、スフェロプラスト融合、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、リポソーム担体）、ウイルスベクター導入（例えば、組み換えＤＮＡウイルス、組み換えＲＮＡウイルス）などが挙げられる（Ｃｌｉｎｅ，２９ Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．６９－９２（１９８５）に記載）が、これらに限定されない。哺乳類細胞による細菌プロトプラストのリン酸カルシウム沈殿及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）誘導融合を使用しても、細胞を形質転換することができる。
本明細書に記載されたＰＳＭＡ特異性抗体又は抗原結合フラグメントの発現に使用するのに適した細胞は、好ましくは、真核細胞、より好ましくは、植物、げっ歯類、又はヒト起源の細胞である。これらの細胞には、とりわけ、例えば、ＮＳＯ、ＣＨＯ、ＣＨＯＫ１、ｐｅｒＣ．６、Ｔｋ－ｔｓ１３、ＢＨＫ、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ－７、Ｔ９８Ｇ、ＣＶ－１／ＥＢＮＡ、Ｌ細胞、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＮＳ１、Ｓｐ２／０骨髄腫細胞、及びＢＨＫ細胞株等が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、抗体の発現は、ハイブリドーマ細胞を使用して達成されてもよい。ハイブリドーマを生成するための方法は、当該技術分野において十分確立されている。
本明細書に記載された発現ベクターにより形質転換された細胞は、本明細書に記載された抗体又は抗原結合フラグメントの組み換え発現について選択され、又はスクリーニングされてもよい。組み換え陽性細胞は、タンパク質改変又は変化させた翻訳後修飾により、所望の表現型、例えば、高レベルの発現、向上した増殖特性、又は所望の生化学的特性を有するタンパク質を生成する能力を示すサブクローンについて、増殖され、スクリーニングされる。これらの表現型は、所与のサブクローンの本来の特性又は変異によるものであり得る。変異は、化学薬品、ＵＶ波長光、照射、ウイルス、挿入変異源、ＤＮＡミスマッチ修復の阻害、又はこのような方法の組み合わせにより生じ得る。
医薬組成物／投与
本発明は、本明細書に記載される本発明の抗体と、薬学的に許容できる担体とを含む、医薬組成物を提供する。治療用途では、本発明の抗体は、薬学的に許容できる担体中に活性成分として有効量の抗体を含有する医薬組成物として調製することができる。「担体」は、本発明の抗体と一緒に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、又はビヒクルを指す。このようなビヒクルは、水、及び石油、動物、植物、又は合成物由来のものを含む油、例えば、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの液体であってよい。例えば、０．４％生理食塩水及び０．３％グリシンを用いてよい。これらの溶液は滅菌され、一般には粒子状物質を含まない。これらは、従来周知の滅菌技術（例えば、濾過）によって滅菌することができる。組成物は、生理学的条件に近づけるために必要とされる薬学的に許容できる補助物質、例えば、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、安定剤、増粘剤、潤滑剤及び着色剤などを含有し得る。このような医薬製剤中の本発明の抗体の濃度は、約０．５重量％未満から通常少なくとも約１重量％まで、最大で１５又は２０重量％まで変動し得、また、選択される具体的な投与方法に従って、必要とされる用量、流体体積、粘度などに主に基づいて選択され得る。好適なビヒクル及び製剤（ヒトタンパク質、例えばヒト血清アルブミンを含む）は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔＥｄｉｔｉｏｎ，Ｔｒｏｙ，Ｄ．Ｂ．ｅｄ．，Ｌｉｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ ２００６，Ｐａｒｔ ５，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ ｐｐ６９１－１０９２に記載され、特にｐｐ．９５８－９８９を参照されたい。
本発明の抗体を治療的に使用するための投与方法は、例えば、錠剤、カプセル剤、液剤、粉剤、ゲル、粒子の、注射器、埋め込み式装置、浸透圧ポンプ、カートリッジ、マイクロポンプに入れられた製剤を使用する非経口投与、例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、又は皮下、肺内、経粘膜（経口、鼻腔内、膣内、直腸）投与；又は当該技術分野において周知の、当業者によって認識される他の手段に含まれ得る製剤を用いた、非経口投与、例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、又は皮下、肺、経粘膜投与（経口、鼻腔内、膣内、直腸）などの、抗体を宿主に送達する任意の好適な経路であり得る。部位特異的投与は、例えば、腫瘍内、関節内、気管支内、腹内、関節包内、軟骨内、洞内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑液嚢内、胸郭内、子宮内、血管内、膀胱内、病巣内、腟内、直腸内、口腔内、舌下、鼻腔内、又は経皮送達によって達成され得る。
以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の抗体は、任意の好適な経路によって、例えば、静脈内（ｉ．ｖ．）注入又はボーラス注射によって非経口的に、又は筋肉内に、又は皮下に、又は腹腔内に対象に投与されてもよい。静脈内注入は、例えば、１５、３０、６０、９０、１２０、１８０若しくは２４０分間、又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１若しくは１２時間にわたって投与されてもよい。
対象に投与される用量は、治療されている疾患を緩和する又は少なくとも部分的に停止させるために十分（「治療的有効量」）なものであり、時に、０．００５ｍｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．０５ｍｇ～約３０ｍｇ／ｋｇ若しくは約５ｍｇ～約２５ｍｇ／ｋｇ、又は約４ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ、若しくは約２４ｍｇ／ｋｇ、又は例えば約１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０ｍｇ／ｋｇであり得るが、更に多量、例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、若しくは１００ｍｇ／ｋｇであってもよい。
例えば、５０、１００、２００、５００、若しくは１０００ｍｇの一定の単位用量を与えてもよく、又は患者の表面積に基づいて、例えば、５００、４００、３００、２５０、２００、若しくは１００ｍｇ／ｍ２の用量を与えてもよい。通常、１～８用量（例えば、１、２、３、４、５、６、７、又は８）が患者を治療するために投与されるが、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又はそれよりも多い用量を与えてもよい。
以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本発明の抗体の投与は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、５週間、６週間、７週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、又はそれよりも長い期間の後に繰り返すことができる。治療コースを繰り返してもよく、長期にわたる投与も同様に可能である。繰り返し投与は、同一用量であっても異なる用量であってもよい。例えば、本明細書に記載される本発明の抗体は、静脈内注入によって、８週間にわたって１週間間隔で８ｍｇ／ｋｇ又は１６ｍｇ／ｋｇで投与し、続いて、更に１６週間にわたって２週間ごとに８ｍｇ／ｋｇ又は１６ｍｇ／ｋｇで投与し、続いて、４週間ごとに８ｍｇ／ｋｇ又は１６ｍｇ／ｋｇで投与してよい。
例えば、本明細書に記載の本発明の方法において、及び以下に列挙される番号付きの実施形態のうちの１つ１つのいくつかの実施形態において、抗体は、単回投与又は２４、１２、８、６、４、若しくは２時間毎の分割投与を用いて、あるいはこれらの任意の組み合わせを用いて、約０．１～１００ｍｇ／ｋｇの量の１日用量として、例えば、１日当たり０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０又は１００ｍｇ／ｋｇで、治療開始後、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０日目のうちの少なくとも１日に、あるいは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０週目のうちの少なくとも１週に、あるいはこれらの任意の組み合わせで提供されてもよい。
本明細書に記載の本発明の方法において、及び以下に列挙される番号付きの実施形態のうちの１つ１つのいくつかの実施形態において、抗体はまた、癌の発症のリスクを低減するために、癌進行の事象の発生の開始を遅延させるために、及び／又は癌が寛解状態にあるとき、再発のリスクを低減するために、予防的に投与されてもよい。
本発明の抗体を、保管のために凍結乾燥し、使用前に好適な担体に溶解させてもよい。この技術は、従来のタンパク質調製物に関して有効であることが示されており、周知の凍結乾燥及び再構成技術を用いることができる。
ＰＳＭＡ特異性抗体を使用する方法
ＰＳＭＡは、前立腺上皮内腫瘍（ＰＩＮ）内においてしばしば過剰発現する前立腺癌関連細胞膜抗原であり、一部の前立腺細胞が異常に見え始めたり異常にふるまい始めたりする状態であり、原発性及び転移性の前立腺癌であり、また、その他固形腫瘍（例えば、乳癌、肺癌、膀胱癌、腎臓癌）の新生血管系である。ＰＳＭＡの発現は、疾患の進行及びグリソンスコアと相関している。ＰＳＭＡの発現は、転移性疾患、ホルモン不応性患者、及びより悪性度の高い病変において増加し、アンドロゲン不応性腫瘍内において更に上方制御される。
ＰＳＭＡのブロックにより、対象におけるＰＳＭＡ発現癌細胞及び腫瘍の増殖を阻害又は減少させることができる。血管新生系腫瘍におけるＰＳＭＡの発現により、抗血管新生活性も有し得る（Ｍｉｌｏｗｓｋｙ，ｅｔ ａｌ．２００７）。ＰＳＭＡは、最も確立された前立腺癌の前駆体である、前立腺上皮内腫瘍において高度に発現されており、したがってＰＳＭＡをブロックすることで、ＰＩＮの前立腺癌への進行を調節できる。
以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の一実施形態は、治療有効量の本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体を対象に投与することを含む、対象における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法である。
以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の別の実施形態は、治療有効量の本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体を対象に投与することを含む、対象における腫瘍の新生される血管の形成又は増殖を阻害する方法である。
以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の別の実施形態は、治療有効量の本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体を対象に投与することを含む、対象における前癌状態の進行を阻害する方法である。
以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の一実施形態は、本明細書に記載される本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体を、癌の治療を必要とする対象に投与することによる、癌を治療する方法である。
以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の一実施形態は、治療有効量の本発明のＰＳＭＡ×ＣＤ３に特異的に結合する二重特異性抗体を対象に投与することを含む、対象における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法である。
以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の別の実施形態は、治療有効量の本発明のＰＳＭＡ×ＣＤ３に特異的に結合する二重特異性抗体を対象に投与することを含む、対象における腫瘍の新生される血管の形成又は増殖を阻害する方法である。
以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の別の実施形態は、治療有効量の本発明のＰＳＭＡ×ＣＤ３に特異的に結合する二重特異性抗体を対象に投与することを含む、対象における前癌状態の進行を阻害する方法である。
以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の一実施形態は、本発明のＰＳＭＡ×ＣＤ３に特異的に結合する二重特異性抗体を、癌の治療を必要とする対象に投与することによる、癌を治療する方法である。
本発明の方法において使用され得る例示的な抗体は、本明細書に記載される、ＰＳＭＡに特異的に結合する抗体及び二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体である。
単一特異性であり得る、又はＣＤ３二重特異性の一部であり得る例示的なＰＳＭＡ抗体は、本明細書に記載されるＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列と特徴を有する、抗体ＰＳＭＢ１１９、ＰＳＭＢ１２０、ＰＳＭＢ１２１、ＰＳＭＢ１２２、ＰＳＭＢ１２３、ＰＳＭＢ８７、ＰＳＭＢ１２６、ＰＳＭＢ１２７、ＰＳＭＢ１２８、ＰＳＭＢ１２９、ＰＳＭＢ１３０、ＰＳＭＢ１２０、ＰＳＭＢ１２１、ＰＳＭＢ１２２、ＰＳＭＢ１２３、ＰＳＭＢ１２７、ＰＳＭＢ１２８、ＰＳＭＢ１３０、ＰＳＭＢ３４４、ＰＳＭＢ３４５、ＰＳＭＢ３４６、ＰＳＭＢ３４７、ＰＳＭＢ３４９、ＰＳＭＢ３５８、ＰＳＭＢ３５９、ＰＳＭＢ３６０、ＰＳＭＢ３６１、ＰＳＭＢ３６２、ＰＳＭＢ３６３、及びＰＳＭＢ３６５である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、ＰＳＭＢ１１９、ＰＳＭＢ１２０、ＰＳＭＢ１２１、ＰＳＭＢ１２２、ＰＳＭＢ１２３、ＰＳＭＢ８７、ＰＳＭＢ１２６、ＰＳＭＢ１２７、ＰＳＭＢ１２８、ＰＳＭＢ１２９、ＰＳＭＢ１３０、ＰＳＭＢ１２０、ＰＳＭＢ１２１、ＰＳＭＢ１２２、ＰＳＭＢ１２３、ＰＳＭＢ１２７、ＰＳＭＢ１２８、ＰＳＭＢ１３０、ＰＳＭＢ３４４、ＰＳＭＢ３４５、ＰＳＭＢ３４６、ＰＳＭＢ３４７、ＰＳＭＢ３４９、ＰＳＭＢ３５８、ＰＳＭＢ３５９、ＰＳＭＢ３６０、ＰＳＭＢ３６１、ＰＳＭＢ３６２、ＰＳＭＢ３６３、及びＰＳＭＢ３６５である。これらの抗体のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を、表２に示す。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１６０のＶＨと、配列番号６５のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号７９のＶＨと、配列番号７８のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号７７のＶＨと、配列番号７８のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号７５のＶＨと、配列番号７６のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号７４のＶＨと、配列番号６１のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号７２のＶＨと、配列番号７３のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号６６のＶＨと、配列番号６７のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号６４のＶＨと、配列番号６５のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号６２のＶＨと、配列番号６３のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号６０のＶＨと、配列番号６１のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号６８のＶＨと、配列番号６９のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号７０のＶＨと、配列番号７１のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１３８のＶＨと、配列番号６７のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１３８のＶＨと、配列番号１４２のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１３８のＶＨと、配列番号１４３のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号６２のＶＨと、配列番号６３のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１３９のＶＨと、配列番号６７のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１４０のＶＨと、配列番号１４４のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１４０のＶＨと、配列番号６７のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１４０のＶＨと、配列番号１４２のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１４０のＶＨと、配列番号１４３のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１３９のＶＨと、配列番号１４４のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１３９のＶＨと、配列番号１４２のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１３９のＶＨと、配列番号１４３のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用されるＰＳＭＡに特異的に結合する抗体は、配列番号１４１のＶＨと、配列番号１４３のＶＬと、を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用される、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインとを含む、二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体は、第１のドメイン中の配列番号６２のＶＨ及び配列番号６３のＶＬと、第２のドメイン中の配列番号１０４のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用される、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインとを含む、二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体は、第１のドメイン中の配列番号６４のＶＨ及び配列番号６５のＶＬと、第２のドメイン中の配列番号１０４のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用される、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインとを含む、二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体は、第１のドメイン中の配列番号６６のＶＨ及び配列番号６７のＶＬと、第２のドメイン中の配列番号１０４のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用される、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインとを含む、二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体は、第１のドメイン中の配列番号７５のＶＨ及び配列番号７６のＶＬと、第２のドメイン中の配列番号１０４のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用される、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインとを含む、二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体は、第１のドメイン中の配列番号７４のＶＨ及び配列番号６１のＶＬと、第２のドメイン中の配列番号１０４のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される本発明の方法で使用される、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインとを含む、二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体は、第１のドメイン中の配列番号１６０のＶＨ及び配列番号６５のＶＬと、第２のドメイン中の配列番号１０４のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬと、を含む。
癌は、過剰増殖状態又は障害、固形腫瘍、血管新生、軟組織腫瘍、又は転移病変であってもよい。
「癌」は、病理学的な種類又は侵襲性の段階に関係なく、全ての種類の癌性成長又は発癌プロセス、転移組織又は悪性腫瘍形質転換細胞、組織、又は器官を含むことを意味する。癌の例としては、固形腫瘍、血液悪性腫瘍、軟組織腫瘍、及び転移性病変が挙げられる。例示的な固形腫瘍としては、前立腺、肝臓、肺、***、リンパ系、胃腸（例えば結腸）、生殖器系（例えば腎、尿上皮細胞）、前立腺及び咽頭に影響を及ぼすものなどの様々な臓器系の悪性腫瘍、例えば非上皮性悪性腫瘍、及び上皮性悪性腫瘍（腺癌及び扁平上皮癌を含む）、などの悪性腫瘍が挙げられる。腺癌には、最も結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺の非小細胞癌、小腸の癌、及び食道の癌などの悪性腫瘍が挙げられる。扁平上皮癌としては、例えば、肺、食道、皮膚、頭及び頸部領域、口腔、肛門、及び子宮頸部の悪性腫瘍が挙げられる。
一実施形態では、癌は前立腺癌である。
上記癌の転移巣も、本明細書に記載される本発明の方法及び抗体を用いて治療され、又は予防され得る。
本明細書に記載される本発明の抗体を使用して増殖が阻害又は低減され得る例示的な癌としては、ＰＳＭＡを過剰発現し得る癌が挙げられる。かかる癌の例としては、前立腺癌又は前立腺上皮内腫瘍、結腸直腸癌、胃癌、腎明細胞癌、膀胱癌、肺癌、扁平上皮癌、神経膠腫、乳癌、腎臓癌、血管新生疾患、腎明細胞癌（ＣＣＲＣＣ）、及び膵臓癌、並びに、腎臓癌（renal cancer）、尿路上皮癌、及び肝臓の腺癌を非限定的に含む、様々なその他非前立腺癌が挙げられる。難治性又は再発性悪性腫瘍は、本明細書に記載される本発明の抗体を使用して治療され得る。
本明細書に記載される本発明の抗体で治療され得る例示的な他の癌は、肛門癌、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳及びＣＮＳ癌、卵管の癌、膣癌、外陰部癌、皮膚又は眼内悪性黒色腫、経食道癌、精巣癌、卵巣癌、膵臓癌、直腸癌、子宮癌、原発性ＣＮＳリンパ腫；中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍、子宮頸癌、絨毛癌、直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、眼癌；上皮内腫瘍、腎臓癌、喉頭癌、肝癌；小細胞肺癌、神経芽腫、口腔癌（例えば、唇、舌、口、及び咽頭）、鼻咽頭癌、網膜芽腫、横紋筋肉腫、呼吸器系の癌、肉腫、甲状腺癌、泌尿器系の癌、肝癌、肛門領域の癌、肛門の癌、卵管の癌、膣癌、外陰部癌、小腸癌、内分泌系癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟組織の肉腫、尿道の癌、ペニスの癌、小児の固形腫瘍、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、メルケル細胞癌、上皮細胞癌、扁平上皮癌、アスベストによって誘導されるものを含む環境誘導性癌、並びに他の癌腫及び肉腫、並びに当該癌の組み合わせが挙げられる。
ＰＳＭＡを発現する転移性癌を含む癌を有する患者は、本明細書に記載される本発明の抗体で治療され得る。癌は、前立腺癌又は前立腺上皮内腫瘍、結腸直腸癌、胃癌、腎明細胞癌、膀胱癌、肺癌、扁平上皮癌、神経膠腫、乳癌、腎臓癌、血管新生疾患、腎明細胞癌（ＣＣＲＣＣ）、及び膵臓癌、並びに、腎臓癌、尿路上皮癌、及び肝臓の腺癌を非限定的に含む、様々なその他非前立腺癌であり得る。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、対象は固形腫瘍を有する。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、対象は前立腺腫瘍を有する。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、固形腫瘍は結腸直腸癌である。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、固形腫瘍は胃癌である。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、固形腫瘍は肺癌である。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、固形腫瘍は膀胱癌である。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、固形腫瘍は扁平上皮癌である。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、癌は腎明細胞癌（ＣＣＲＣＣ）である。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、固形腫瘍は乳癌である。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、固形腫瘍は神経膠腫である。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、固形腫瘍は前立腺癌又は去勢抵抗性前立腺癌である。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、固形腫瘍は腎臓癌である。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、固形腫瘍は膵臓癌である。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、固形腫瘍は肝臓の腺癌である。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、癌は血管新生系である。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、癌は腎臓癌である。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、固形腫瘍は尿路上皮癌である。
本明細書に記載される本発明のいくつかの実施形態では、及び以下に列挙される番号の実施形態の１つ１つのうちいくつかの実施形態では、固形腫瘍は脳癌である。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、対象は、ＰＳＭＡを発現する腫瘍を有する。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、対象は、腫瘍組織中に腫瘍浸潤Ｔリンパ球（ＴＩＬ）を有する。
「数の増加」は、対照と比較したとき、対象中での統計学的に有意な増加を指す。例えば、「数の増加」は、ＰＳＭＡ抗体又は他の治療剤での治療前及び治療後の、対象（例えば患者）におけるＴＩＬ数の統計学的に有意な増加を指す。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、対象は、インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）の発現又は活性が増加している。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、対象は、抗ＰＳＭＡ抗体で治療されたことがある。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、対象は、抗ＰＳＭＡ抗体での治療に抵抗性である。
本明細書に記載される本発明のＰＳＭＡ又は二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体のうちいずれかが、本発明の方法で使用されてよい。
本明細書に記載される抗体及びその断片はまた、組み合わせ治療において投与されてもよく、すなわち、処置される疾患又は状態に関連する他の治療剤と組み合わせられてもよい。したがって、一実施形態では、抗体含有医薬は、１種又は２種以上の他の治療剤、例えば、化学療法剤と組み合わせるためのものである。いくつかの実施形態では、他の治療剤は、放射性治療剤（塩化ラジウム２２３など）、二次ホルモン療法（アビラテロン又はエンザルタミドなど）、及び／又は化学療法（ドセタキセル及びカバジタキセル）である。このような組み合わせ投与は、同時、任意の順序において、別々又は連続的でもよい。同時投与には、薬剤は、１つの組成物として、又は別の組成物として適切に投与され得、化学療法剤（例えば、ドセタキセル、カルボプラチン、フルダラビン）、アビラテロン、ホルモン療法（例えば、フルタミド、ビカルタミド、ニルタミド、酢酸シプロテロン、ケトコナゾール、アミノグルテチミド、アバレリックス、デガレリクス、リュープロリド、ゴセレリン、トリプトレリン、ブセレリン、ＡＲＮ－５０９）、セリン又はチロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ＰＩ３キナーゼ阻害剤ＳＦ１１２６）（例えば、ラパタニブ）、多種キナーゼ阻害剤（例えば、ソラフェニブ、スニチニブ）、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ベバシズマブ）、ＴＡＫ－７００、癌ワクチン（例えば、ＢＰＸ－１０１、ＰＥＰ２２３）、リステリア系ワクチン、レナリドミド、ＴＯＫ－００１、ＩＧＦ－１受容体阻害剤（例えば、シクスツムマブ）、ＴＲＣ１０５、オーロラＡキナーゼ阻害剤（例えば、ＭＬＮ８２３７）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、ＯＧＸ－０１１、放射免疫療法（例えば、ＨｕＪ５９１－ＧＳ）、ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、バルプロ酸、ＳＢ９３９、ＬＢＨ５８９）、ヒドロキシクロロキン、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、エベロリムス）、乳酸ドビチニブ、ジインドリルメタン、エファビレンツ、ＯＧＸ－４２７、ゲニステイン、ＩＭＣ－３Ｇ３、バフェチニブ、ＣＰ－６７５，２０６、放射線療法、手術、又はこれらの組み合わせ。
一実施形態では、対象においてＰＳＭＡを発現している細胞が関与する障害を処置するための方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の、本明細書に記載された二重特異性抗体又は断片、例えば、ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体を投与し、かつ放射線治療を行うことを含む方法が提供される。一実施形態では、癌を治療又は予防するための方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の、本明細書に記載された二重特異性抗体又は断片、例えば、ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体を投与し、かつ放射線治療を行うことを含む方法が提供される。放射線治療としては、提供される患者に対する、放射線又は放射性医薬の関連する投与を含んでもよい。放射線源は、処置される患者の外側又は内側のいずれか一方であってもよい（放射線治療は、例えば、外照射療法（ＥＢＲＴ）又は小線源治療（ＢＴ）の形態でもよい）。このような方法を実施するのに使用することができる放射性元素には、例えば、ラジウム、セシウム－１３７、イリジウム－１９２、アメリシウム－２４１、金－１９８、コバルト－５７、銅－６７、テクネチウム－９９、ヨウ素－１２３、ヨウ素－１３１、及びインジウム－１１１が挙げられる。
本明細書に記載される本発明の抗体は、ワクチンと併用して投与されてよい。
代表的なワクチンは、免疫原性剤、例えば、癌性細胞、精製腫瘍抗原（組み換えタンパク質、抗原エピトープ、ペプチド及び炭水化物分子を含む）、遺伝子療法によって患者に送達された腫瘍抗原、細胞、及び、免疫刺激サイトカインをコードする遺伝子をトランスフェクトされた細胞である。使用し得る代表的なワクチンとして、黒色腫抗原のペプチド、例えば、ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、Ｔｒｐ－２、ＭＡＲＴ１及び／若しくはチロシナーゼのペプチド、又は、サイトカインＧＭ－ＣＳＦを発現するようトランスフェクトされた腫瘍細胞、ＤＮＡ系ワクチン、ＲＮＡ系ワクチン、リステリア系ワクチン及びウイルス形質導入系ワクチン、前立腺抗原（例えば、ＰＳＭＡ、ＳＴＥＡＰ１、ＰＳＣＡ）のペプチド、癌ワクチンであるシプリューセルＴ、又は肺癌抗原のペプチドが挙げられる。癌ワクチンは、予防剤又は治療剤で有り得る。
腫瘍に対するワクチン接種について多くの実験戦略が考案されている（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．，２０００，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｖａｃｃｉｎｅｓ，ＡＳＣＯ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ Ｂｏｏｋ Ｓｐｒｉｎｇ：６０－６２；Ｌｏｇｏｔｈｅｔｉｓ，Ｃ．，２０００，ＡＳＣＯ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ Ｂｏｏｋ Ｓｐｒｉｎｇ：３００－３０２；Ｋｈａｙａｔ，Ｄ．２０００，ＡＳＣＯ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ Ｂｏｏｋ Ｓｐｒｉｎｇ：４１４－４２８；Ｆｏｏｎ，Ｋ．２０００，ＡＳＣＯ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ Ｂｏｏｋ Ｓｐｒｉｎｇ：７３０－７３８参照；更に、Ｒｅｓｔｉｆｏ，Ｎ．ａｎｄ Ｓｚｎｏｌ，Ｍ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｖａｃｃｉｎｅｓ，Ｃｈ．６１，ｐｐ．３０２３－３０４３ ｉｎ ＤｅＶｉｔａ，Ｖ．ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），１９９７，Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ．Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ参照）。これらの戦略のうちの１つでは、ワクチンは自家又は同種腫瘍細胞を用いて調製される。これらの細胞性ワクチンは、腫瘍細胞がＧＭ－ＣＳＦを発現するように形質導入されるとき、最も効果的であることが示されている。ＧＭ－ＣＳＦは、腫瘍ワクチン接種での抗原提示の強力な活性剤であることが示されている（Ｄｒａｎｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：３５３９－４３）。
本明細書に記載される本発明の抗体は、腫瘍内又は腫瘍上で発現した組み換えタンパク質及び／又はペプチドに対する免疫応答を起こすため、腫瘍内又は腫瘍上で発現したこれらのタンパク質のうちの１つ又はこれらの集合と併用して投与されてよい。これらのタンパク質は、通常は免疫システムによって自己抗原として見なされるため、寛容性を示す。腫瘍抗原は、タンパク質テロメラーゼを含んでもよく、これは、染色体のテロメア合成に必要であり、８５％を超えるヒト癌と、限られた数の体細胞組織のみで発現している（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６６：２０１１－２０１３）。腫瘍抗原は、タンパク質配列を変える、若しくは、２つの無関係の配列間（例えば、フィラデルフィア染色体中のｂｃｒ－ａｂｌ）で融合タンパク質をもたらす体細胞突然変異の結果、癌細胞中若しくは癌細胞上で発現する「ネオ抗原」、又は、Ｂ細胞腫瘍由来のイディオタイプであってもよい。腫瘍抗原は、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、メソセリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、滑膜肉腫Ｘ２（ＳＳＸ２）、ＮＫＸ３．１、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）の抗原エピトープ、又は、上皮増殖因子受容体若しくはＥＧＦＲ変異体特有のペプチド、例えば、腫瘍細胞上に過剰発現した周知のＥＧＦＲｖＩＩＩであってよい。
その他腫瘍ワクチンとして、ヒト癌に関連するウイルス、例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、肝炎ウイルス（ＨＢＶ及びＨＣＶ）、及びカポジ肉腫ヘルペスウイルス（ＫＨＳＶ）、及びエプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）由来のタンパク質を挙げてよい。本明細書に記載される本発明の抗体と併用して使用され得る腫瘍特異的抗原の別の形態は、腫瘍組織自体から単離された精製熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）である。ＨＳＰは、腫瘍細胞由来のタンパク質の断片を含み、腫瘍免疫を誘発するため、抗原提示細胞への送達に非常に効率的である（Ｓｕｏｔ ａｎｄ Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６９：１５８５－１５８８；Ｔａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７８：１１７－１２０）。
樹状細胞（ＤＣ）は、抗原特異的応答を刺激するのに使用できる強力な抗原提示細胞である。ＤＣは、ｅｘ ｖｉｖｏで産生され、様々なタンパク質及びペプチド抗原、並びに腫瘍細胞抽出物を有し得る（Ｎｅｓｔｌｅ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ４：３２８－３３２）。ＤＣは、遺伝学的方法で形質導入され、これらの腫瘍抗原を発現することもできる。ＤＣはまた、免疫化目的で、腫瘍細胞に直接融合されている（Ｋｕｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ６：３３２－３３６）。ワクチン接種の方法として、ＤＣ接種は、本明細書に記載される本発明の抗体と効果的に組み合わせられ、より強力な抗腫瘍応答を活性化できる。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体、又は本発明の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体は、前立腺特異的抗原のペプチド断片、又は、前立腺特異的抗原のペプチド断片をコードするベクターを含む腫瘍ワクチンと併用して投与される。
本明細書に記載される本発明の抗体は、標準的な癌治療と併用して投与されてよい。
本明細書に記載される本発明の抗体は、標準的な癌の化学療法レジメンと併用して投与されてよい。これらの場合、投与される化学療法薬の用量の減少が可能であり得る（Ｍｏｋｙｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５８：５３０１－５３０４）。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、本発明の抗体は、他の抗体分子、化学療法、別の抗癌療法（例えば、標的化抗癌療法、又は腫瘍溶解性薬）、細胞毒性剤、サイトカイン、外科的及び／又は放射線治療のうち、１つ以上と併用して投与されてよい。
本明細書に記載される本発明の抗体と併用して投与され得る代表的な細胞毒性剤として、ホルモン阻害剤、微小管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、代謝拮抗剤、有糸***阻害剤、アルキル化剤、アントラサイクリン、ビンカアルカロイド、挿入剤、シグナル伝達経路の干渉能がある薬剤、アポトーシスを促進する薬剤、プロテオソーム阻害剤、及び放射線（例えば、局所又は全身照射）が挙げられる。
標準治療薬として、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））、硫酸ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、ブスルファン注（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、Ｎ４－ペントキシカルボニル－５－デオキシ－５－フルオロシチジン、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）又はＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ－Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ Ｄ、Ｃｏｓｍｅｇａｎ）、塩酸ダウノルビシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、クエン酸ダウノルビシンリポソーム注（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、塩酸ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、リン酸フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、５－フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン（tezacitibine）、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ－アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、６－メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））、メトトレキサート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、ｍｙｌｏｔａｒｇ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ｐｈｏｅｎｉｘ（Ｙｔｔｒｉｕｍ９０／ＭＸ－ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、ポリフェプロザン２０カルムスチンインプラント（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））、クエン酸タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６－チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、注射用塩酸トポテカン（Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、ビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））、イブルチニブ、イデラリシブ、及びブレンツキシマブベドチンが挙げられる。
代表的なアルキル化剤として、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、ニトロソ尿素及びトリアゼン：ウラシルマスタード（Ａｍｉｎｏｕｒａｃｉｌ Ｍｕｓｔａｒｄ（登録商標）、Ｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎａｃｉｌ（登録商標）、Ｄｅｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｈａｅｍａｎｔｈａｍｉｎｅ（登録商標）、Ｎｏｒｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌ Ｎｉｔｒｏｇｅｎ Ｍｕｓｔａｒｄ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｌｏｓｔ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｍｏｓｔａｚａ（登録商標）、Ｕｒａｍｕｓｔｉｎ（登録商標）、Ｕｒａｍｕｓｔｉｎｅ（登録商標））、クロルメチン（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｃｌａｆｅｎ（登録商標）、Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（商標））、イホスファミド（Ｍｉｔｏｘａｎａ（登録商標））、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、ピポブロマン（Ａｍｅｄｅｌ（登録商標）、Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））、トリエチレンメラミン（Ｈｅｍｅｌ（登録商標）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）、Ｈｅｘａｓｔａｔ（登録商標））、トリエチレンチオホスホラミン、テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標））、チオテパ（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））、ブスルファン（Ｂｕｓｉｌｖｅｘ（登録商標）、Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ロムスチン（ＣｅｅＮＵ（登録商標））、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））、及びダカルバジン（ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））が挙げられる。追加の代表的なアルキル化剤として、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））、テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標）及びＴｅｍｏｄａｌ（登録商標））、ダクチノマイシン（アクチノマイシン－Ｄとしても知られる、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））、メルファラン（Ｌ－ＰＡＭ、Ｌ－サルコリシン、及びフェニルアラニンマスタードとしても知られる、Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）としても知られる、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ベンダムスチン（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））、ブスルファン（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標）及びＭｙｌｅｒａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、ロムスチン（ＣＣＮＵとしても知られる、ＣｅｅＮＵ（登録商標））、シスプラチン（ＣＤＤＰとしても知られる、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）及びＰｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）－ＡＱ）、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）及びＮｅｏｓａｒ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ、ＤＩＣ及びイミダゾールカルボキサミドとしても知られる、ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））、アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）としても知られる、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））、イホスファミド（Ｉｆｅｘ（登録商標））、プレドニムスチン、プロカルバジン（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード、ムスチン、及び塩酸メクロレタミンとしても知られる、Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））、チオテパ（チオホスホアミド、ＴＥＳＰＡ及びＴＳＰＡとしても知られる、Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、及びベンダムスチンＨＣｌ（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））が挙げられる。
代表的なアントラサイクリンとして、例えば、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）及びＲｕｂｅｘ（登録商標））、ブレオマイシン（Ｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ダウノルビシン（塩酸ダウノルビシン、ダウノマイシン、及び塩酸ルビドマイシン、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、リポソーム化ダウノルビシン（クエン酸ダウノルビシンリポソーム、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、ミトキサントロン（ＤＨＡＤ、Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標））、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｉｄａｍｙｃｉｎ ＰＦＳ（登録商標））、マイトマイシンＣ（Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標））、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、ラビドマイシン、及びデスアセチルラビドマイシンが挙げられる。
本発明の抗体と併用して使用され得る代表的なビンカアルカロイドとして、酒石酸ビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、及びビンデシン（Ｅｌｄｉｓｉｎｅ（登録商標））、ビンブラスチン（硫酸ビンブラスチン、ビンカロイコブラスチン及びＶＬＢとしても知られる、Ａｌｋａｂａｎ－ＡＱ（登録商標）及びＶｅｌｂａｎ（登録商標））及びビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））が挙げられる。
本発明の抗体と、単独で又は別の免疫調節因子と組み合わせて、併用して使用され得る代表的なプロテオソーム阻害剤は、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、カーフィルゾミブ（ＰＸ－１７１－００７、（Ｓ）－４－メチル－Ｎ－（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－４－メチル－１－（（Ｒ）－２－メチルオキシラン－２－イル）－１－オキソペンタン－２－イル）アミノ）－１－オキソ－３－フェニルプロパン－２－イル）－２－（（Ｓ）－２－（２－モルホリノアセトアミド）－４－フェニルブタンアミド）－ペンタンアミド）、マリゾミブ（ＮＰＩ－００５２）、クエン酸イキサゾミブ（ＭＬＮ－９７０８）、デランゾミブ（ＣＥＰ－１８７７０）、及びＯ－メチル－Ｎ－［（２－メチル－５－チアゾリル）カルボニル］－Ｌ－セリル－Ｏ－メチル－Ｎ－［（１Ｓ）－２－［（２Ｒ）－２－メチル－２－オキシラニル］－２－オキソ－１－（フェニルメチル）エチル］－Ｌ－セリンアミド（ＯＮＸ－０９１２）である。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、本発明の抗体は、セリン又はチロシンキナーゼ阻害剤（例えば、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害剤）と併用して投与される。代表的なチロシンキナーゼ阻害剤として、上皮増殖因子（ＥＧＦ）経路阻害剤（例えば、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）経路阻害剤（例えば、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、ＶＥＧＦＲ－１阻害剤、ＶＥＧＦＲ－２阻害剤、ＶＥＧＦＲ－３阻害剤）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）経路阻害剤（例えば、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）阻害剤（例えば、ＰＤＧＦＲ－β阻害剤）、ＲＡＦ－１阻害剤、ＫＩＴ阻害剤及びＲＥＴ阻害剤が挙げられる。いくつかの実施形態では、第２の治療薬は、アキシチニブ（ＡＧ０１３７３６）、ボスチニブ（ＳＫＩ－６０６）、セジラニブ（ＲＥＣＥＮＴＩＮ（商標）、ＡＺＤ２１７１）、ダサチニブ（ＳＰＲＹＣＥＬ（登録商標）、ＢＭＳ－３５４８２５）、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標））、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標））、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）、ＣＧＰ５７１４８Ｂ、ＳＴＩ－５７１）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＴＹＶＥＲＢ（登録商標））、レスタウルチニブ（ＣＥＰ－７０１）、ネラチニブ（ＨＫＩ－２７２）、ニロチニブ（ＴＡＳＩＧＮＡ（登録商標））、セマクサニブ（セマキシニブ、ＳＵ５４１６）、スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、ＳＵ１１２４８）、トセラニブ（ＰＡＬＬＡＤＩＡ（登録商標））、バンデタニブ（ＺＡＣＴＩＭＡ（登録商標）、ＺＤ６４７４）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７、ＰＴＫ／ＺＫ）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、ニロチニブ（ＴＡＳＩＧＮＡ（登録商標））、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標））、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標））、ＥＮＭＤ－２０７６、ＰＣＩ－３２７６５、ＡＣ２２０、乳酸ドビチニブ（ＴＫＩ２５８、ＣＨＩＲ－２５８）、ＢＩＢＷ ２９９２（ＴＯＶＯＫ（商標））、ＳＧＸ５２３、ＰＦ－０４２１７９０３、ＰＦ－０２３４１０６６、ＰＦ－２９９８０４、ＢＭＳ－７７７６０７、ＡＢＴ－８６９、ＭＰ４７０、ＢＩＢＦ １１２０（ＶＡＲＧＡＴＥＦ（登録商標））、ＡＰ２４５３４、ＪＮＪ－２６４８３３２７、ＭＧＣＤ２６５、ＤＣＣ－２０３６、ＢＭＳ－６９０１５４、ＣＥＰ－１１９８１、チボザニブ（ＡＶ－９５１）、ＯＳＩ－９３０、ＭＭ－１２１、ＸＬ－１８４、ＸＬ－６４７、ＸＬ２２８、ＡＥＥ７８８、ＡＧ－４９０、ＡＳＴ－６、ＢＭＳ－５９９６２６、ＣＵＤＣ－１０１、ＰＤ１５３０３５、ペリチニブ（ＥＫＢ－５６９）、バンデタニブ（ｚａｃｔｉｍａ）、ＷＺ３１４６、ＷＺ４００２、ＷＺ８０４０、ＡＢＴ－８６９（リニファニブ）、ＡＥＥ７８８、ＡＰ２４５３４（ポナチニブ）、ＡＶ－９５１（チボザニブ）、アキシチニブ、ＢＡＹ ７３－４５０６（レゴラフェニブ）、ブリバニブアラニネート（ＢＭＳ－５８２６６４）、ブリバニブ（ＢＭＳ－５４０２１５）、セジラニブ（ＡＺＤ２１７１）、ＣＨＩＲ－２５８（ドビチニブ）、ＣＰ ６７３４５１、ＣＹＣ１１６、Ｅ７０８０、Ｋｉ８７５１、マシチニブ（ＡＢ１０１０）、ＭＧＣＤ－２６５、モテサニブ二リン酸塩（ＡＭＧ－７０６）、ＭＰ－４７０、ＯＳＩ－９３０、塩酸パゾパニブ、ＰＤ１７３０７４、トシル酸ソラフェニブ（Ｂａｙ ４３－９００６）、ＳＵ ５４０２、ＴＳＵ－６８（ＳＵ６６６８）、バタラニブ、ＸＬ８８０（ＧＳＫ１３６３０８９、ＥＸＥＬ－２８８０）である。選択されるチロシンキナーゼ阻害剤は、スニチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、又はソラフェニブから選ばれる。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤は、配列番号２４９、２５０、２５１及び２５２の重鎖及び軽鎖を含む、二重特異性ＥＧＦＲｃ－Ｍｅｔ抗体（ＥＭ－１ｍＡｂ）である（米国特許出願公開第２０１４／０１４１０００号）。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、アキシチニブ（Ｉｎｌｙｔａ（登録商標））、ブリバニブアラニネート（ＢＭＳ－５８２６６４、（Ｓ）－（（Ｒ）－１－（４－（４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－インドール－５－イルオキシ）－５－メチルピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－６－イルオキシ）プロパン－２－イル）２－アミノプロパノエート）などの血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体阻害剤、ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））、パゾパニブ（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標））、リンゴ酸スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））、セジラニブ（ＡＺＤ２１７１、ＣＡＳ２８８３８３－２０－１）、Ｖａｒｇａｔｅｆ（ＢＩＢＦ１１２０、ＣＡＳ９２８３２６－８３－４）、フォレチニブ（ＧＳＫ１３６３０８９）、テラチニブ（ＢＡＹ５７－９３５２、ＣＡＳ３３２０１２－４０－５）、アパチニブ（ＹＮ９６８Ｄ１、ＣＡＳ８１１８０３－０５－１）、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、ポナチニブ（ＡＰ２４５３４、ＣＡＳ９４３３１９－７０－８）、チボザニブ（ＡＶ９５１、ＣＡＳ４７５１０８－１８－０）、レゴラフェニブ（ＢＡＹ７３－４５０６、ＣＡＳ７５５０３７－０３－７）、バタラニブ二塩酸塩（ＰＴＫ７８７、ＣＡＳ２１２１４１－５１－０）、ブリバニブ（ＢＭＳ－５４０２１５、ＣＡＳ６４９７３５－４６－６）、バンデタニブ（Ｃａｐｒｅｌｓａ（登録商標）又はＡＺＤ６４７４）、モテサニブ二リン酸塩（ＡＭＧ７０６、ＣＡＳ８５７８７６－３０－３、Ｎ－（２，３－ジヒドロ－３，３－ジメチル－１Ｈ－インドール－６－イル）－２－［（４－ピリジニルメチル）アミノ］－３－ピリジンカルボキサミド、国際公開第０２／０６６４７０号に記載）、ドビチニブ二乳酸（ＴＫＩ２５８、ＣＡＳ８５２４３３－８４－２）、Ｌｉｎｆａｎｉｂ（ＡＢＴ８６９、ＣＡＳ７９６９６７－１６－３）、カボザンチニブ（ＸＬ１８４、ＣＡＳ８４９２１７－６８－１）、レスタウルチニブ（ＣＡＳ１１１３５８－８８－４）、Ｎ－［５－［［［５－（１，１－ジメチルエチル）－２－オキサゾリル］メチル］チオ］－２－チアゾリル］－４－ピペリジンカルボキサミド（ＢＭＳ３８７０３、ＣＡＳ３４５６２７－８０－７）、（３Ｒ，４Ｒ）－４－アミノ－１－（（４－（（３－メトキシフェニル）アミノ）ピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－５－イル）メチル）ピペリジン－３－オール（ＢＭＳ６９０５１４）、Ｎ－（３，４－ジクロロ－２－フルオロフェニル）－６－メトキシ－７－［［（３ａα，５β，６ａα）－オクタヒドロ－２－メチルシクロペンタ［ｃ］ピロール－５－イル］メトキシ］－４－キナゾリンアミン（ＸＬ６４７、ＣＡＳ７８１６１３－２３－８）、４－メチル－３－［［１－メチル－６－（３－ピリジニル）－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ］－Ｎ－［３－（トリフルオロメチル）フェニル］－ベンズアミド（ＢＨＧ７１２、ＣＡＳ９４０３１０－８５－０）、及びアフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））と併用して投与される。
代表的なＶＥＧＦ阻害剤としては、ハイブリドーマＡＴＣＣ ＨＢ１０７０９によって産生されるモノクローナル抗ＶＥＧＦ抗体Ａ４．６．１と同じエピトープに結合するモノクローナル抗体、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５７：４５９３－４５９９に従って生成される組み換えヒト化抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体が挙げられる。一実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ｒｈｕＭＡｂ ＶＥＧＦ又はＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）としても知られる、ベバシズマブ（ＢＶ）である。これは、ヒトＶＥＧＦの受容体への結合をブロックするマウス抗ｈＶＥＧＦモノクローナル抗体Ａ．４．６．１由来の、変異ヒトＩｇＧ１フレームワーク領域及び抗原結合相補性決定領域を含む。ベバシズマブ及び他のヒト化抗ＶＥＧＦ抗体は、米国特許第６，８８４，８７９号に更に記載されている。更なる抗ＶＥＧＦ抗体としては、国際公開第２００５／０１２３５９号及び同第２００５／０４４８５３号に記載されるような、Ｇ６又はＢ２０シリーズの抗体（例えば、Ｇ６－３１、Ｂ２０－４．１）が挙げられる。更なる抗体については、米国特許第７，０６０，２６９号、同第６，５８２，９５９号、同第６，７０３，０２０号、同第６，０５４，２９７号、国際公開第９８／４５３３２号、同第９６／３００４６号、同第９４／１０２０２号、欧州特許第０６６６８６８（Ｂ１）号、米国特許出願公開第２００６００９３６０号、同第２００５０１８６２０８号、同第２００３０２０６８９９号、同第２００３０１９０３１７号、同第２００３０２０３４０９号、及び同第２００５０１１２１２６号、並びに、Ｐｏｐｋｏｖ ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８８：１４９－１６４を参照されたい。他の抗体としては、残基Ｆ１７、Ｍ１８、Ｄ１９、Ｙ２１、Ｙ２５、Ｑ８９、１９１、Ｋ１０１、Ｅ１０３、及びＣ１０４を含む、あるいは残基Ｆ１７、Ｙ２１、Ｑ２２、Ｙ２５、Ｄ６３、１８３及びＱ８９を含む、ヒトＶＥＧＦ上の機能性エピトープに結合するものが挙げられる。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ＰＩ３Ｋ阻害剤と併用して投与される。一実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＰＩ３Ｋのδ及びγアイソフォームの阻害剤である。別の実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＰＩ３Ｋのβ（beat）アイソフォームの阻害剤である。使用され得る代表的なＰＩ３Ｋ阻害剤は、例えば、国際公開第２０１０／０３６３８０号、同第２０１０／００６０８６号、同第０９／１１４８７０号、同第０５／１１３５５６、ＧＳＫ ２１２６４５８、ＧＤＣ－０９８０、ＧＤＣ－０９４１、Ｓａｎｏｆｉ ＸＬ１４７、ＸＬ７５６、ＸＬ１４７、ＰＦ－４６９１５０３２、ＢＫＭ １２０、ＣＡＬ－１０１、ＣＡＬ ２６３、ＳＦ１１２６、ＰＸ－８８６、及び二重ＰＩ３Ｋ阻害剤（例えば、Ｎｏｖａｒｔｉｓ ＢＥＺ２３５）に記載されている。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ｍＴＯＲ阻害剤、例えば、ラパマイシン、テムシロリムス（ＴＯＲＩＳＥＬ（登録商標））、ＡＺＤ８０５５、ＢＥＺ２３５、ＢＧＴ２２６、ＸＬ７６５、ＰＦ－４６９１５０２、ＧＤＣ０９８０、ＳＦ１１２６、ＯＳＩ－０２７、ＧＳＫ１０５９６１５、ＫＵ－００６３７９４、ＷＹＥ－３５４、Ｐａｌｏｍｉｄ ５２９（Ｐ５２９）、ＰＦ－０４６９１５０２、又はＰＫＩ－５８７．リダフォロリムス（以前はデフェロリムスとして知られる、（１Ｒ，２Ｒ，４Ｓ）－４－［（２Ｒ）－２［（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ，２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｚ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）－１，１８－ジヒドロキシ－１９，３０－ジメトキシ－１５，１７，２１，２３，２９，３５－ヘキサメチル－２，３，１０，１４，２０－ペンタオキソ－１１，３６－ジオキサ－４－アザトリシクロ［３０．３．１．０４，９］ヘキサトリアコンタ－１６，２４，２６，２８－テトラエン－１２－イル］プロピル］－２－メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィナート、ＡＰ２３５７３及びＭＫ８６６９としても知られる、国際公開第０３／０６４３８３号に記載）；エベロリムス（Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標）又はＲＡＤ００１）；ラパマイシン（ＡＹ２２９８９、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ（登録商標））；セマピモド（ＣＡＳ１６４３０１－５１－３）；エムシロリムス、（５－｛２，４－ビス［（３Ｓ）－３－メチルモルホリン－４－イル］ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル｝－２－メトキシフェニル）メタノール（ＡＺＤ８０５５）；２－アミノ－８－［トランス－４－（２－ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］－６－（６－メトキシ－３－ピリジニル）－４－メチル－ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（ＰＦ０４６９１５０２、ＣＡＳ１０１３１０１－３６－４）；及び、Ｎ２－［１，４－ジオキソ－４－［［４－（４－オキソ－８－フェニル－４Ｈ－１－ベンゾピラン－２－イル）モルホリニウム－４－イル］メトキシ］ブチル］－Ｌ－アルギニルグリシル－Ｌ－α－アスパルチル－セリン－（配列番号２３７）、分子内塩（ＳＦ１１２６、ＣＡＳ９３６４８７－６７－１）、及びＸＬ７６５のうち１つ以上から選択される１つ以上のｍＴＯＲ阻害剤と併用して投与される。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ＢＲＡＦ阻害剤、例えば、ＧＳＫ２１１８４３６、ＲＧ７２０４、ＰＬＸ４０３２、ＧＤＣ－０８７９、ＰＬＸ４７２０、及びトシル酸ソラフェニブ（Ｂａｙ ４３－９００６）と併用して投与される。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、本発明の抗体は、免疫調節剤と併用して投与される。プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１）、プログラム細胞死１リガンド１（ＰＤＬ１）及び細胞毒性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ４）などの標的化免疫チェックポイントは、免疫抑制シグナルを遮断し、患者が有効な抗腫瘍応答を起こすことを可能にすることによって、複数の癌において注目すべき効果を達成している。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、抗ＰＤ１（例えば、ニボルマブ）、抗ＰＤＬ（例えば、ＭＤＸ－１１０５）又は抗ＣＴＬＡ４（例えば、イピリムマブ）と併用して投与される。免疫応答を刺激し、腫瘍を標的化するアゴニストＣＤ４０抗体（αＣＤ４０と呼ばれる）又はＣＤ４０リガンドの能力は、かかる試薬が癌免疫療法薬として有望であることを示唆している。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、抗ＣＤ４０（例えば、ＳＧＮ－４０、ＣＰ－８７０，８９３）又は抗ＣＤ４０Ｌ（例えば、ＢＧ９５８８）と併用して投与される。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ＭＥＫ阻害剤と併用して投与される。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、ＭＥＫ阻害剤と併用して投与される本発明の抗体は、前立腺癌、黒色腫、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、乳癌、前立腺癌、膵臓癌、血液悪性疾患、又は腎細胞癌の治療に使用される。特定の実施形態では、腫瘍組織又は癌細胞は、ＢＲＡＦ変異（例えば、ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ変異）、ＢＲＡＦ野生型、ＫＲＡＳ野生型、又は活性化ＫＲＡＳ変異を有する。癌は、早期、中間期、又は末期段階であってもよい。ＡＲＲＹ－１４２８８６、Ｇ０２４４２１０４（ＧＳＫ１１２０２１２としても知られる）、ＲＤＥＡ４３６、ＲＤＥＡ１１９／ＢＡＹ８６９７６６、ＡＳ７０３０２６、Ｇ０００３９８０５（ＡＺＤ－６２４４又はセルメチニブとしても知られる）、ＢＩＸ０２１８８、ＢＩＸ０２１８９、ＣＩ－１０４０（ＰＤ－１８４３５２）、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ９８０５９、Ｕ０１２６、ＧＤＣ－０９７３（メタノン、［３，４－ジフロロ－２－［（２－フルオロ－４－ヨードフェニル）アミノ］フェニル］［３－ヒドロキシ－３－（２５）－２－ピペリジニル－１－アゼチジニル］－）、Ｇ－３８９６３、Ｇ０２４４３７１４（ＡＳ７０３２０６としても知られる）、又はこれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物などの任意のＭＥＫ阻害剤が併用して使用され得る。ＭＥＫ阻害剤の更なる例は、国際公開第２０１３／０１９９０６号、同第０３／０７７９１４号、同第２００５／１２１１４２号、同第２００７／０４４１５号、同第２００８／０２４７２５号、及び同第２００９／０８５９８３号に開示されている。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ＪＡＫ２阻害剤、例えば、ＣＥＰ－７０１、ＩＮＣＢ１８４２４、ＣＰ－６９０５５０（タソシチニブ）と併用して投与される。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、本発明の抗体は、パクリタキセル又はパクリタキセル製剤、例えば、ＴＡＸＯＬ（登録商標）、タンパク質結合パクリタキセル（例えば、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））と併用して投与される。代表的なパクリタキセル製剤として、ナノ粒子アルブミン結合パクリタキセル（ＡＢＲＡＸＡＮＥ、販売Ａｂｒａｘｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ドコサヘキサエン酸結合パクリタキセル（ＤＨＡ－パクリタキセル、Ｔａｘｏｐｒｅｘｉｎ、販売Ｐｒｏｔａｒｇａ）、ポリグルタミン酸結合パクリタキセル（ＰＧ－パクリタキセル、ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ ｐｏｌｉｇｌｕｍｅｘ、ＣＴ－２１０３、ＸＹＯＴＡＸ、販売Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）、腫瘍活性化プロドラッグ（ＴＡＰ）、ＡＮＧ１０５（３分子のパクリタキセルに結合したＡｎｇｉｏｐｅｐ－２、販売ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ）、パクリタキセル－ＥＣ－１（ｅｒｂＢ２認識ペプチドＥＣ－１に結合したパクリタキセル；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ（２００７）８７：２２５－２３０参照）、及びグルコース結合型パクリタキセル（例えば、２’－パクリタキセルメチル２－グルコピラノシルスクシナート、Ｌｉｕｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ １７：６１７－６２０参照）が挙げられる。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、本発明の抗体は、細胞免疫療法（例えば、Ｐｒｏｖｅｎｇｅ（例えば、シプリューセル））と併用して、及び任意追加的にシクロホスファミドと併用して投与される。
前立腺癌の治療のため本発明の抗体と併用して使用され得る代表的な治療剤として、化学療法剤（例えば、ドセタキセル、カルボプラチン、フルダラビン）、アビラテロン、ホルモン療法（例えば、フルタミド、ビカルタミド、ニルタミド、酢酸シプロテロン、ケトコナゾール、アミノグルテチミド、アバレリックス、デガレリクス、リュープロリド、ゴセレリン、トリプトレリン、ブセレリン）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、二重キナーゼ阻害剤）（例えば、ラパタニブ）、多種キナーゼ阻害剤（例えば、ソラフェニブ、スニチニブ）、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ベバシズマブ）、ＴＡＫ－７００、癌ワクチン（例えば、ＢＰＸ－１０１、ＰＥＰ２２３）、レナリドミド、ＴＯＫ－００１、ＩＧＦ－１受容体阻害剤（例えば、シクスツムマブ）、ＴＲＣ１０５、オーロラＡキナーゼ阻害剤（例えば、ＭＬＮ８２３７）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、ＯＧＸ－０１１、放射免疫療法（例えば、ＨｕＪ５９１－ＧＳ）、ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、バルプロ酸、ＳＢ９３９、ＬＢＨ５８９）、ヒドロキシクロロキン、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、エベロリムス）、乳酸ドビチニブ、ジインドリルメタン、エファビレンツ、ＯＧＸ－４２７、ゲニステイン、ＩＭＣ－３Ｇ３、バフェチニブ、ＣＰ－６７５，２０６、ＡＲＮ－５０９、放射線療法、手術、又はこれらの組み合わせが挙げられる。
膵臓癌の治療のため本発明の抗体と併用して使用され得る代表的な治療薬として、化学療法剤、例えば、パクリタキセル又はパクリタキセル製剤（例えば、パクリタキセル製剤、例えば、ＴＡＸＯＬ、アルブミン－安定化ナノ粒子パクリタキセル製剤（例えば、ＡＢＲＡＸＡＮＥ）又はリポソーム化パクリタキセル製剤）；ゲムシタビン（例えば、ゲムシタビン単独又はＡＸＰ１０７－１１と併用）；その他化学療法剤、例えば、オキサリプラチン、５－フルオロウラシル、カペシタビン、ルビテカン、塩酸エピルビシン、ＮＣ－６００４、シスプラチン、ドセタキセル（例えば、ＴＡＸＯＴＥＲＥ）、マイトマイシンＣ、イホスファミド；インターフェロン；チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ、パニツムマブ、セツキシマブ、ニモツズマブ）；ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体阻害剤（例えば、トラスツズマブ）；二重キナーゼ阻害剤（例えば、ボスチニブ、サラカチニブ、ラパチニブ、バンデタニブ）；多種キナーゼ阻害剤（例えば、ソラフェニブ、スニチニブ、ＸＬ１８４、パゾパニブ）；ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ベバシズマブ、ＡＶ－９５１、ブリバニブ）；放射免疫療法（例えば、ＸＲ３０３）；癌ワクチン（例えば、ＧＶＡＸ、サバイビンペプチド）；ＣＯＸ－２阻害剤（例えば、セレコキシブ）；ＩＧＦ－１受容体阻害剤（例えば、ＡＭＧ ４７９、ＭＫ－０６４６）；ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、エベロリムス、テムシロリムス）；ＩＬ－６阻害剤（例えば、ＣＮＴＯ３２８）；サイクリン依存性キナーゼ阻害剤（例えば、Ｐ２７６－００、ＵＣＮ－０１）；エネルギー代謝を変化させる（ＡＥＭＤ）化合物（例えば、ＣＰＩ－６１３）；ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、ボリノスタット）；ＴＲＡＩＬ受容体２（ＴＲ－２）アゴニスト（例えば、コナツムマブ）；ＭＥＫ阻害剤（例えば、ＡＳ７０３０２６、セルメチニブ、ＧＳＫ１１２０２１２）；Ｒａｆ／ＭＥＫ二重キナーゼ阻害剤（例えば、ＲＯ５１２６７６６）；Ｎｏｔｃｈシグナル伝達阻害剤（例えば、ＭＫ０７５２）；モノクローナル抗体－抗体融合タンパク質（例えば、Ｌ１９ＩＬ２）；クルクミン；ＨＳＰ９０阻害剤（例えば、タネスピマイシン、ＳＴＡ－９０９０）；ｒＩＬ－２；デニロイキンジフチトクス；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、イリノテカン、ＰＥＰ０２）；スタチン（例えば、シムバスタチン）；第ＶＩＩａ因子阻害剤（例えば、ＰＣＩ－２７４８３）；ＡＫＴ阻害剤（例えば、ＲＸ－０２０１）；低酸素活性化プロドラッグ（例えば、ＴＨ－３０２）；塩酸メトホルミン、γ－セクレターゼ阻害剤（例えば、Ｒ０４９２９０９７）；リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤（例えば、３－ＡＰ）；免疫毒素（例えば、ＨｕＣ２４２－ＤＭ４）；ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、ＫＵ－００５９４３６、ベリパリブ）；ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、ＣＰ－６７５，２０６、イピリムマブ）；ＡｄＶ－ｔｋ療法；プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ）、ＮＰＩ－００５２）；チアゾリジンジオン（例えば、ピオグリタゾン）；ＮＰＣ－１Ｃ；オーロラキナーゼ阻害剤（例えば、Ｒ７６３／ＡＳ７０３５６９）、ＣＴＧＦ阻害剤（例えば、ＦＧ－３０１９）；ｓｉＧ１２Ｄ ＬＯＤＥＲ及び放射線療法（例えば、トモセラピー、定位放射、陽子線療法）、手術、及びこれらの組み合わせが挙げられる。特定の実施形態では、パクリタキセル又はパクリタキセル製剤とゲムシタビンの組み合わせが、本発明の抗体と使用できる。
小細胞肺癌の治療のため本発明の抗体と併用して使用され得る代表的な治療剤として、化学療法剤、例えば、エトポシド、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、イリノテカン、トポテカン、ゲムシタビン、リポソーム化ＳＮ－３８、ベンダムスチン、テモゾロミド、ベロテカン、ＮＫ０１２、ＦＲ９０１２２８、フラボピリドール）；チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブ、セツキシマブ、パニツムマブ）；多種キナーゼ阻害剤（例えば、ソラフェニブ、スニチニブ）；ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ベバシズマブ、バンデタニブ）；癌ワクチン（例えば、ＧＶＡＸ）；Ｂｃｌ－２阻害剤（例えば、オブリメルセンナトリウム、ＡＢＴ－２６３）；プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ）、ＮＰＩ－００５２）、パクリタキセル又はパクリタキセル剤；ドセタキセル；ＩＧＦ－１受容体阻害剤（例えば、ＡＭＧ ４７９）；ＨＧＦ／ＳＦ阻害剤（例えば、ＡＭＧ １０２、ＭＫ－０６４６）；クロロキン；オーロラキナーゼ阻害剤（例えば、ＭＬＮ８２３７）；放射免疫療法（例えば、ＴＦ２）；ＨＳＰ９０阻害剤（例えば、タネスピマイシン、ＳＴＡ－９０９０）；ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、エベロリムス）；Ｅｐ－ＣＡＭ／ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、ＭＴ１１０）；ＣＫ－２阻害剤（例えば、ＣＸ－４９４５）；ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、ベリノスタット）；ＳＭＯアンタゴニスト（例えば、ＢＭＳ８３３９２３）；ペプチド癌ワクチン、及び放射線療法（例えば、強度変調照射法（ＩＭＲＴ）、小分割照射法、低酸素誘導照射法）、手術、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
非小細胞肺癌の治療に本発明の抗体と併用して使用され得る代表的な治療薬として、化学療法剤、例えば、ビノレルビン、シスプラチン、ドセタキセル、ペメトレキセド二ナトリウム、エトポシド、ゲムシタビン、カルボプラチン、リポソーム化ＳＮ－３８、ＴＬＫ２８６、テモゾロミド、トポテカン、ペメトレキセド二ナトリウム、アザシチジン、イリノテカン、テガフール－ギメラシル－オテラシルカリウム、サパシタビン）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ネシツムマブ、ＰＦ－００２９９８０４、ニモツズマブ、ＲＯ５０８３９４５）、ＭＥＴ阻害剤（例えば、ＰＦ－０２３４１０６６、ＡＲＱ １９７）、ＰＩ３Ｋキナーゼ阻害剤（例えば、ＸＬ１４７、ＧＤＣ－０９４１）、Ｒａｆ／ＭＥＫ二重キナーゼ阻害剤（例えば、ＲＯ５１２６７６６）、ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ二重キナーゼ阻害剤（例えば、ＸＬ７６５）、ＳＲＣ阻害剤（例えば、ダサチニブ）、二重阻害剤（例えば、ＢＩＢＷ ２９９２、ＧＳＫ１３６３０８９、ＺＤ６４７４、ＡＺＤ０５３０、ＡＧ－０１３７３６、ラパチニブ、ＭＥＨＤ７９４５Ａ、リニファニブ）、多種キナーゼ阻害剤（例えば、ソラフェニブ、スニチニブ、パゾパニブ、ＡＭＧ ７０６、ＸＬ１８４、ＭＧＣＤ２６５、ＢＭＳ－６９０５１４、Ｒ９３５７８８）、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ｅｎｄｏｓｔａｒ、エンドスタチン、ベバシズマブ、セジラニブ、ＢＩＢＦ １１２０、アキシチニブ、チボザニブ、ＡＺＤ２１７１）、癌ワクチン（例えば、ＢＬＰ２５リポソームワクチン、ＧＶＡＸ、組み換えＤＮＡ及びＬ５２３Ｓタンパク質を発現しているアデノウイルス）、Ｂｃｌ－２阻害剤（例えば、オブリメルセンナトリウム）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ、カーフィルゾミブ、ＮＰＩ－００５２、ＭＬＮ９７０８）、パクリタキセル又はパクリタキセル製剤、ドセタキセル、ＩＧＦ－１受容体阻害剤（例えば、シクスツムマブ、ＭＫ－０６４６、ＯＳＩ ９０６、ＣＰ－７５１，８７１、ＢＩＩＢ０２２）、ヒドロキシクロロキン、ＨＳＰ９０阻害剤（例えば、タネスピマイシン、ＳＴＡ－９０９０、ＡＵＹ９２２、ＸＬ８８８）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、エベロリムス、テムシロリムス、リダフォロリムス）、Ｅｐ－ＣＡＭ／ＣＤ３－二重特異性抗体（例えば、ＭＴ１１０）、ＣＫ－２阻害剤（例えば、ＣＸ－４９４５）、ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、ＭＳ ２７５、ＬＢＨ５８９、ボリノスタット、バルプロ酸、ＦＲ９０１２２８）、ＤＨＦＲ阻害剤（例えば、プララトレキサート）、レチノイド（例えば、ベキサロテン、トレチノイン）、抗体－薬剤複合体（例えば、ＳＧＮ－１５）、ビスホスホネート（例えば、ゾレドロン酸）、癌ワクチン（例えば、ベラゲンプマツセル－Ｌ）、低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）（例えば、チンザパリン、エノキサパリン）、ＧＳＫ１５７２９３２Ａ、メラトニン、タラクトフェリン、ジメスナ、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、アムルビシン、エトポシド、カレニテシン）、ネルフィナビル、シレンジタイド、ＥｒｂＢ３阻害剤（例えば、ＭＭ－１２１、Ｕ３－１２８７）、サバイビン阻害剤（例えば、ＹＭ１５５、ＬＹ２１８１３０８）、エリブリンメシル酸塩、ＣＯＸ－２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、ペグフィルグラスチム、Ｐｏｌｏ様キナーゼ１阻害剤（例えば、ＢＩ ６７２７）、ＴＲＡＩＬ受容体２（ＴＲ－２）アゴニスト（例えば、ＣＳ－１００８）、ＣＮＧＲＣペプチド（配列番号２２５）－ＴＮＦα複合体、ジクロロ酢酸（ＤＣＡ）、ＨＧＦ阻害剤（例えば、ＳＣＨ ９００１０５）、ＳＡＲ２４０５５０、ＰＰＡＲ－γアゴニスト（例えば、ＣＳ－７０１７）、γ－セクレターゼ阻害剤（例えば、ＲＯ４９２９０９７）、エピジェネティック療法（例えば、５－アザシチジン）、ニトログリセリン、ＭＥＫ阻害剤（例えば、ＡＺＤ６２４４）、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤（例えば、ＵＣＮ－０１）、コレステロール－Ｆｕｓ１、抗チューブリン剤（例えば、Ｅ７３８９）、ファルネシル－ＯＨ－トランスフェラーゼ阻害剤（例えば、ロナファーニブ）、免疫毒素（例えば、ＢＢ－１０９０１、ＳＳ１（ｄｓＦｖ）ＰＥ３８）、フォンダパリヌクス、血管障害剤（例えば、ＡＶＥ８０６２）、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、ＭＤＸ－１１０５、ＭＤＸ－１１０６）、β－グルカン、ＮＧＲ－ｈＴＮＦ、ＥＭＤ ５２１８７３、ＭＥＫ阻害剤（例えば、ＧＳＫ１１２０２１２）、エポチロンアナログ（例えば、イクサベピロン）、キネシンモーター阻害剤（例えば、４ＳＣ－２０５）、テロメア標的剤（例えば、ＫＭＬ－００１）、Ｐ７０経路阻害剤（例えば、ＬＹ２５８４７０２）、ＡＫＴ阻害剤（例えば、ＭＫ－２２０６）、血管新生阻害剤（例えば、レナリドミド）、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達阻害剤（例えば、ＯＭＰ－２１Ｍ１８）、米国特許出願公開第２０１４／０１４１０００（Ａ１）号に記載されるＥＧＦＲ／ｃ－Ｍｅｔ二重特異性抗体ＥＭ－１、放射線療法、手術、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
卵巣癌の治療に本発明の抗体と併用して使用され得る代表的な治療薬として、化学療法剤（例えば、パクリタキセル又はパクリタキセル剤；ドセタキセル；カルボプラチン；ゲムシタビン；ドキソルビシン；トポテカン；シスプラチン；イリノテカン、ＴＬＫ２８６、イホスファミド、オラパリブ、オキサリプラチン、メルファラン、ペメトレキセド二ナトリウム、ＳＪＧ－１３６、シクロホスファミド、エトポシド、デシタビン）；グレリンアンタゴニスト（例えば、ＡＥＺＳ－１３０）、免疫療法（例えば、ＡＰＣ８０２４、オレゴボマブ、ＯＰＴ－８２１）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ）、二重阻害剤（例えば、Ｅ７０８０）、多種キナーゼ阻害剤（例えば、ＡＺＤ０５３０、ＪＩ－１０１、ソラフェニブ、スニチニブ、パゾパニブ）、ＯＮ ０１９１０．Ｎａ）、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ベバシズマブ、ＢＩＢＦ １１２０、セジラニブ、ＡＺＤ２１７１）、ＰＤＧＦＲ阻害剤（例えば、ＩＭＣ－３Ｇ３）、パクリタキセル、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、カレニテシン、イリノテカン）、ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、バルプロ酸、ボリノスタット）、葉酸受容体阻害剤（例えば、ファーレツズマブ）、アンジオポエチン阻害剤（例えば、ＡＭＧ ３８６）、エポチロンアナログ（例えば、イクサベピロン）、プロテアソーム阻害剤（例えば、カーフィルゾミブ）、ＩＧＦ－１受容体阻害剤（例えば、ＯＳＩ ９０６、ＡＭＧ ４７９）、ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、ベリパリブ、ＡＧ０１４６９９、イニパリブ、ＭＫ－４８２７）、オーロラキナーゼ阻害剤（例えば、ＭＬＮ８２３７、ＥＮＭＤ－２０７６）、血管新生阻害剤（例えば、レナリドミド）、ＤＨＦＲ阻害剤（例えば、プララトレキサート）、放射免疫治療薬（例えば、Ｈｕ３Ｓ１９３）、スタチン（例えば、ロバスタチン）、トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＮＫＴＲ－１０２）、癌ワクチン（例えば、ｐ５３合成長ペプチドワクチン、自家ＯＣ－ＤＣワクチン）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、テムシロリムス、エベロリムス）、ＢＣＲ／ＡＢＬ阻害剤（例えば、イマチニブ）、ＥＴ－Ａ受容体アンタゴニスト（例えば、ＺＤ４０５４）、ＴＲＡＩＬ受容体２（ＴＲ－２）アゴニスト（例えば、ＣＳ－１００８）、ＨＧＦ／ＳＦ阻害剤（例えば、ＡＭＧ １０２）、ＥＧＥＮ－００１、Ｐｏｌｏ様キナーゼ１阻害剤（例えば、ＢＩ ６７２７）、γ－セクレターゼ阻害剤（例えば、ＲＯ４９２９０９７）、Ｗｅｅ－１阻害剤（例えば、ＭＫ－１７７５）、抗チューブリン剤（例えば、ビノレルビン、Ｅ７３８９）、免疫毒素（例えば、デニロイキンジフチトクス）、ＳＢ－４８５２３２、血管障害剤（例えば、ＡＶＥ８０６２）、インテグリン阻害剤（例えば、ＥＭＤ ５２５７９７）、キネシンモーター阻害剤（例えば、４ＳＣ－２０５）、レブラミド、ＨＥＲ２阻害剤（例えば、ＭＧＡＨ２２）、ＥｒｒＢ３阻害剤（例えば、ＭＭ－１２１）、放射線療法、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
腎臓癌、例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ）又は転移性ＲＣＣの治療に本発明の抗体と併用して使用され得る代表的な治療薬として、免疫系戦略（例えば、インターロイキン２又はインターフェロンα）、標的剤（例えば、ＶＥＧＦに対するモノクローナル抗体などのＶＥＧＦ阻害剤、例えば、ベバシズマブ（Ｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２８（１３）：２１３７－２１４３））；ＶＥＧＦチロシンキナーゼ阻害剤、例えば、スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ及びパゾパニブ（Ｐａｌ ｅｔ ａｌ．の総説（２０１４）Ｃｌｉｎ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ＆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １２（２）：９０－９９）；ＲＮＡｉ阻害剤、又はＶＥＧＦシグナル伝達の下流メディエーターの阻害剤、例えば、ラパマイシンの哺乳類標的（ｍＴＯＲ）の阻害剤、例えば、エベロリムス及びテムシロリムス（Ｈｕｄｅｓ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３５６（２２）：２２７１－２２８１、Ｍｏｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｌａｎｃｅｔ ３７２：４４９－４５６）が挙げられる。
ＰＳＭＡ特異性抗体キット
開示されたＰＳＭＡ特異性抗体又はその抗原結合フラグメントを含むキットが本明細書において記載されている。記載されるキットを使用して、本明細書に提供されるＰＳＭＡ特異性抗体又は抗原結合フラグメントを使用する方法、又は当業者に既知の他の方法を行うことができる。いくつかの実施形態では、記載されるキットは、本明細書に記載される抗体又は抗原結合フラグメントと、生体サンプル中のＰＳＭＡの存在を検出する際に使用するための試薬と、を含んでもよい。したがって、記載されたキットは、本明細書に記載された抗体又はその抗原結合フラグメントのうち１つ又は２つ以上と、使用していないときに抗体又はフラグメントを収容するための容器と、抗体又はフラグメントを使用するための使用説明書と、本明細書に記載されたとおり、固体支持体に固定された抗体若しくはフラグメント及び／又は検出可能に標識された形態の抗体若しくはフラグメントと、を含んでもよい。
本発明の一実施形態は、本発明のＰＳＭＡに特異的に結合する抗体を含むキットである。
本発明の別の実施形態は、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインとＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインとを含む、二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体を含むキットである。
キットは、治療的使用のために、及び診断キットとして使用することができる。
キットを使用して、生体試料中のＰＳＭＡ、ＣＤ３、又はＰＳＭＡ及びＣＤ３の存在を検出することができる。
いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載される本発明の抗体と、抗体を検出するための試薬と、を含む。キットは、使用説明書；他の試薬、例えば、標識、治療薬、又はキレート化ないしは別の方法のカップリングに有用な剤、標識若しくは治療薬に対する抗体、又は放射線防護組成物；投与するために当該抗体を調製するための装置又は他の材料；医薬的に許容される担体、及び対象に投与するためのデバイス又は他の材料を含む、１つ以上の他の構成要素を含み得る。
いくつかの実施形態では、キットは、容器内の本発明の抗体と、キットの使用説明書とを含む。
いくつかの実施形態では、キットにおける抗体は標識されている。
いくつかの実施形態では、キットは、抗ＰＳＭＡ抗体である、ＰＳＭＢ１１９、ＰＳＭＢ１２０、ＰＳＭＢ１２１、ＰＳＭＢ１２２、ＰＳＭＢ１２３、ＰＳＭＢ８７、ＰＳＭＢ１２６、ＰＳＭＢ１２７、ＰＳＭＢ１２８、ＰＳＭＢ１２９、ＰＳＭＢ１３０、ＰＳＭＢ１２０、ＰＳＭＢ１２１、ＰＳＭＢ１２２、ＰＳＭＢ１２３、ＰＳＭＢ１２７、ＰＳＭＢ１２８、ＰＳＭＢ１３０、ＰＳＭＢ３４４、ＰＳＭＢ３４５、ＰＳＭＢ３４６、ＰＳＭＢ３４７、ＰＳＭＢ３４９、ＰＳＭＢ３５８、ＰＳＭＢ３５９、ＰＳＭＢ３６０、ＰＳＭＢ３６１、ＰＳＭＢ３６２、ＰＳＭＢ３６３、及びＰＳＭＢ３６５を含む。
いくつかの実施形態では、キットは、二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体である、ＰＳ３Ｂ２２、ＰＳ３Ｂ２３、ＰＳ３Ｂ２５、ＰＳ３Ｂ２７、ＰＳ３Ｂ２８、又はＰＳ３Ｂ３０を含む。
ＰＳＭＡ又はＰＳＭＡ及びＣＤ３を検出する方法
本明細書に記載される本発明の一実施形態は、サンプルを入手することと、サンプルを本発明のＰＳＭＡに特異的に結合するアンタゴニスト抗体と接触させることと、サンプル中のＰＳＭＡに結合した抗体を検出することと、を含む、サンプル中のＰＳＭＡを検出する方法である。
本明細書に記載される本発明の一実施形態は、サンプルを入手することと、サンプルを、ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインとＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインとを含む、本発明の二重特異性抗体と接触させることと、サンプル中のＰＳＭＡ及びＣＤ３に結合した抗体を検出することと、を含む、サンプル中のＰＳＭＡ及びＣＤ３を検出する方法である。
本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、サンプルは、尿、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環細胞、循環腫瘍細胞、組織会合していない細胞（すなわち、遊離細胞）、組織（例えば、外科手術的に切除された腫瘍組織、微細針吸引を含む生検）、組織学的調製物等から得ることができる。
ＰＳＭＡ又はＰＳＭＡ及びＣＤ３に結合した本明細書に記載される本発明の抗体は、既知の方法を用いて検出することができる。例示的な方法としては、蛍光若しくは化学発光標識、又は放射線標識を使用して抗体を直接標識すること、あるいは本発明の抗体に、ビオチン、酵素、又はエピトープタグなどの容易に検出可能な部分を結合させることが挙げられる。例示的な標識及び部分は、ルテニウム、１１１Ｉｎ－ＤＯＴＡ、１１１Ｉｎ－ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ及びベータガラクトシダーゼ、ポリ－ヒスチジン（ＨＩＳタグ）、アクリジン染料、シアニン染料、フルオロン染料、オキサジン染料、フェナントリジン染料、ローダミン染料、及びＡｌｅｘａｆｌｕｏｒ（登録商標）染料である。
本発明の抗体は、サンプル中のＰＳＭＡ又はＰＳＭＡ及びＣＤ３を検出するための様々なアッセイにおいて使用することができる。例示的なアッセイは、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴、免疫沈降、平衡透析、免疫拡散、電気化学発光（ＥＣＬ）イムノアッセイ、免疫組織化学的検査、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、又はＥＬＩＳＡアッセイである。
実施形態
１）単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメントであって、抗体又は抗原結合フラグメントが、（ｉ）組み換えＰａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ ＰＳＭＡを発現する細胞に結合し、細胞への結合はフローサイトメトリーによって測定され、かつ（ｉｉ）組み換えＰａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ ＰＳＭＡ細胞外ドメイン（配列番号４）に約３０ｎＭ以下の親和性で結合し、親和性はＰｒｏｔｅｏｎ ＸＰＲ３６表面プラズモン共鳴アッセイによって測定される、抗体又はその抗原結合フラグメント。
２）抗体が、以下の特性：
ａ）２０ｎＭ以下のＥＣ５０計算値でＬＮＣａＰ細胞と結合し、かつ、４０ｎＭ以下のＥＣ５０計算値でＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞に結合し、ＬＮＣａＰ細胞への結合と、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞への結合との間のＥＣ５０計算値の差は５倍未満であり、このときＥＣ５０計算値は、フローサイトメトリーを用いる０℃での全細胞結合アッセイで測定される、
ｂ）１２ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）で、ヒト（配列番号７）、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ（配列番号４）及びＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（配列番号５）由来の組み換えＰＳＭＡ ＥＣＤに結合し、このときＫＤは、Ｐｒｏｔｅｏｎ表面プラズモン共鳴アッセイＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システムを使用して＋２５℃で測定される、
ｃ）二重特異性抗体において抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ２１９と対を成すとき、ＬＮＣａＰ細胞、Ｃ４２細胞、ヒトＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞、又はＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞のＴ細胞媒介性殺傷を提示し、このときＴ細胞媒介性殺傷は、クロム－５１によって、若しくはカスパーゼ３／７活性化アッセイによって測定される、又は
ｄ）立体構造エピトープを認識し、エピトープは、ヒトＰＳＭＡ（配列番号３）の残基Ｉ１３８、Ｆ２３５、Ｐ２３７、Ｇ２３８、Ｄ２４４、Ｙ２９９、Ｙ３００、Ｑ３０３、Ｋ３０４、Ｅ３０７、及びＫ３２４～Ｐ３２６からなる、のうち、１つ、２つ、３つ、又は４つを有する、実施形態１に記載の抗体。
３）それぞれ配列番号１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態２に記載の抗体。
４）それぞれ配列番号２０、２１、２２、２３、１２、及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態２に記載の抗体。
５）それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態２に記載の抗体。
６）それぞれ配列番号３６、３７、３８、３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態２に記載の抗体。
７）それぞれ配列番号３１、４２、４３、１１、１２、及び１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態２に記載の抗体。
８）それぞれ配列番号３１、４４、４５、４６、２９、及び４７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態２に記載の抗体。
９）それぞれ配列番号３６、３７、４８、４９、５０、及び５１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態２に記載の抗体。
１０）それぞれ配列番号３６、３７、５２、４９、５０、及び５１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態２に記載の抗体。
１１）それぞれ配列番号８、９、１０、１１、１２、及び１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態２に記載の抗体。
１２）それぞれ配列番号３１、３２、３３、３４、１２、及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態２に記載の抗体。
１３）それぞれ配列番号５３、５４、５５、２３、１２、及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態２に記載の抗体。
１４）それぞれ配列番号１２２、１２３、１２４、２３、１２、及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態２に記載の抗体。
１５）配列番号６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７５、７７、７９、又は１６０の重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、実施形態２に記載の抗体。
１６）配列番号６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、６１、７６、又は７８の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態１５に記載の抗体。
１７）配列番号６２のＶＨ、及び配列番号６３のＶＬを含む、実施形態１５に記載の抗体。
１８）配列番号６４のＶＨ、及び配列番号６５のＶＬを含む、実施形態１５に記載の抗体。
１９）配列番号６６のＶＨ、及び配列番号６７のＶＬを含む、実施形態１５に記載の抗体。
２０）配列番号７２のＶＨ、及び配列番号７３のＶＬを含む、実施形態１５に記載の抗体。
２１）配列番号７４のＶＨ、及び配列番号６１のＶＬを含む、実施形態１５に記載の抗体。
２２）配列番号７５のＶＨ、及び配列番号７６のＶＬを含む、実施形態１５に記載の抗体。
２３）配列番号７７のＶＨ、及び配列番号７８のＶＬを含む、実施形態１５に記載の抗体。
２４）配列番号７９のＶＨ、及び配列番号７８のＶＬを含む、実施形態１５に記載の抗体。
２５）配列番号１６０のＶＨ、及び配列番号６５のＶＬを含む、実施形態１５に記載の抗体。
２６）配列番号６０のＶＨ、及び配列番号６１のＶＬを含む、実施形態１５に記載の抗体。
２７）配列番号６８のＶＨ、及び配列番号６９のＶＬを含む、実施形態１５に記載の抗体。
配列番号７０のＶＨ、及び配列番号７１のＶＬを含む、実施形態１５に記載の抗体。
２８）それぞれ配列番号３１、４２、４３、１１、１２及び１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
２９）抗体が、配列番号７４のＶＨ、及び配列番号６１のＶＬを含む、実施形態２８に記載の抗体。
３０）それぞれ配列番号１４、１５、１６、１７、１８及び１９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
３１）抗体が、配列番号６２のＶＨ、及び配列番号６３のＶＬを含む、実施形態３０に記載の抗体。
３２）それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
３３）抗体が、配列番号６６のＶＨ、及び配列番号６７のＶＬを含む、実施形態３２に記載の抗体。
３４）それぞれ配列番号３６、３７、３８、３９、４０及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
３５）抗体が、配列番号７２のＶＨ、及び配列番号７３のＶＬを含む、実施形態３４に記載の抗体。
３６）それぞれ配列番号１２２、１２３、１２４、２３、１２及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
３７）抗体が、配列番号１６０のＶＨ、及び配列番号６５のＶＬを含む、実施形態３６に記載の抗体。
３８）それぞれ配列番号８、９、１０、１１、１２及び１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
３９）抗体が、配列番号６０のＶＨ、及び配列番号６１のＶＬを含む、実施形態３８に記載の抗体。
４０）それぞれ配列番号２０、２１、２２、２３、１２及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
４１）抗体が、配列番号６４のＶＨ、及び配列番号６５のＶＬを含む、実施形態４０に記載の抗体。
４２）それぞれ配列番号３１、３２、３３、３４、１２及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
４３）抗体が、配列番号７０のＶＨ、及び配列番号７１のＶＬを含む、実施形態４２に記載の抗体。
４４）それぞれ配列番号３１、４４、４５、４６、２９及び４７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
４５）抗体が、配列番号７５のＶＨ、及び配列番号７６のＶＬを含む、実施形態４４に記載の抗体。
４６）それぞれ配列番号３６、３７、４８、４９、５０及び５１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
４７）抗体が、配列番号７７のＶＨ、及び配列番号７８のＶＬを含む、実施形態４６に記載の抗体。
４８）それぞれ配列番号３６、３７、５２、４９、５０及び５１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
４９）抗体が、配列番号７９のＶＨ、及び配列番号７８のＶＬを含む、実施形態４８に記載の抗体。
５０）それぞれ配列番号５３、５４、５５、２３、１２及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
５１）抗体が、配列番号６８のＶＨ、及び配列番号６９のＶＬを含む、実施形態５０に記載の抗体。
５２）それぞれ配列番号２５、１３０、２７、２８、２９及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
５３）抗体が、配列番号１３８のＶＨ、及び配列番号６７のＶＬを含む、実施形態５２に記載の抗体。
５４）それぞれ配列番号２５、１３０、２７、１３１、２９及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
５５）抗体が、配列番号１３８のＶＨ、及び配列番号１４２のＶＬを含む、実施形態５４に記載の抗体。
５６）それぞれ配列番号２５、１３０、２７、２８、１３３及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
５７）抗体が、配列番号１３８のＶＨ、及び配列番号１４３のＶＬを含む、実施形態５６に記載の抗体。
５８）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、２９及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
５９）抗体が、配列番号１３９のＶＨ、及び配列番号１６７のＶＬを含む、実施形態５８に記載の抗体。
６０）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、２９及び１３６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
６１）抗体が、配列番号１４０のＶＨ、及び配列番号１４４のＶＬを含む、実施形態６０に記載の抗体。
６２）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、２９及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
６３）抗体が、配列番号１４０のＶＨ、及び配列番号１６７のＶＬを含む、実施形態６２に記載の抗体。
６４）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、１３１、２９及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
６５）抗体が、配列番号１４０のＶＨ、及び配列番号１４２のＶＬを含む、実施形態６４に記載の抗体。
６６）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、１３３及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
６７）抗体が、配列番号１４０のＶＨ、及び配列番号１４３のＶＬを含む、実施形態６６に記載の抗体。
６８）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、２９及び１３６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
６９）抗体が、配列番号１３９のＶＨ、及び配列番号１４４のＶＬを含む、実施形態６８に記載の抗体。
７０）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、１３１、２９及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
７１）抗体が、配列番号１３９のＶＨ、及び配列番号１４２のＶＬを含む、実施形態７０に記載の抗体。
７２）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、１３３及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
７３）抗体が、配列番号１３９のＶＨ、及び配列番号１４３のＶＬを含む、実施形態７２に記載の抗体。
７４）それぞれ配列番号２５、１３７、２７、２８、１３３及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
７５）抗体が、配列番号１４１のＶＨ、及び配列番号１４３のＶＬを含む、実施形態７４に記載の抗体。
７６）抗体がヒト又はヒト化である、実施形態１～７５のいずれか１つに記載の抗体。
７７）抗体が、ＩｇＧ４又はＩｇＧ１アイソタイプである、実施形態７６に記載の抗体。
７８）抗体のＦｃ中に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の置換を含む、実施形態７７に記載の抗体。
７９）
ａ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓ置換、
ｂ）Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓ置換、
ｃ）Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、及びＱ２６８Ａ置換、
ｄ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、若しくはＬ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換、
ｅ）Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、若しくはＦ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換、又は
ｆ）Ｖ２３４Ａ置換を含み、ここで、残基の付番、ＥＵインデックスに従う、実施形態７７に記載の抗体。
８０）Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を含み、ここで、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態７９に記載の抗体。
８１）抗体が二重特異性である、実施形態１～８０のいずれか１つに記載の抗体。
８２）抗体が、ＰＳＭＡに特異的に結合し、かつ、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ２８、ＣＤ１６、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ２５、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ６９、ＣＤ９４、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）、ＣＤ３３６、（ＮＫｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫｐ３０）、ＮＫｐ８０、ＮＫＧ２Ｃ及びＮＫＧ２Ｄ、ＤＮＡＭ、ＮＣＲｓ、ＣＤ１８、ＣＤ８９、ＣＤ１８、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ６４及びＣＤ３５に特異的に結合する、実施形態７６に記載の抗体。
８３）実施形態１～８２のいずれか１つに記載の抗体と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
８４）実施形態１５の抗体ＶＨ、実施形態１６の抗体ＶＬ、又は、実施形態１５及び１６の抗体ＶＨ及び抗体ＶＬをコードする、ポリヌクレオチド。
８５）実施形態２８～７５のいずれか１つに記載の抗体ＶＨ、抗体ＶＬ、又は抗体ＶＨと抗体ＶＬとをコードしているポリヌクレオチド。
８６）実施形態８４に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
８７）実施形態８５に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
８８）実施形態８６に記載のベクターを含む宿主細胞。
８９）実施形態８７に記載のベクターを含む宿主細胞。
９０）実施形態１に記載の抗体を作製する方法であって、抗体が発現する条件で実施形態８９に記載の宿主細胞を培養することと、宿主細胞によって産生された抗体を回収することと、を含む、方法。
９１）対象において癌を治療する方法であって、治療有効量の実施形態１～８２のいずれか１つに記載の単離された抗体を、癌を治療するのに十分な時間にわたって、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
９２）癌が、固形腫瘍、悪性腫瘍又は血管新生系腫瘍である、実施形態９１に記載の方法。
９３）固形腫瘍が、前立腺癌又は結腸直腸癌、胃癌、腎明細胞癌、膀胱癌、肺癌、扁平上皮癌、神経膠腫、乳癌、腎臓癌、血管新生疾患、腎明細胞癌（ＣＣＲＣＣ）、膵臓癌、腎臓癌、尿路上皮癌、及び肝臓の腺癌である、実施形態９２に記載の方法。
９４）前立腺癌が、抵抗性前立腺癌、前立腺上皮内腫瘍、アンドロゲン非依存性前立腺癌、悪性前立腺癌である、実施形態９３に記載の方法。
９５）抗体が、第２の治療剤と組み合わせて投与される、実施形態９０～９４のいずれか１つに記載の方法。
９６）第２の治療剤が、固形腫瘍又は悪性腫瘍又は血管新生系腫瘍の治療に対する標準治療薬である、実施形態９５に記載の方法。
９７）第２の治療剤が、ホルモン阻害剤、微小管阻害剤、キナーゼ阻害剤、免疫調節剤、トポイソメラーゼ阻害剤、代謝拮抗薬、有糸***阻害剤、アルキル化剤、アントラサイクリン、ビンカアルカロイド、挿入剤、シグナル伝達経路に干渉可能な薬剤、アポトーシスを促進する薬剤、プロテオソーム阻害剤又は放射線である、実施形態９６に記載の方法。
９８）第２の治療剤がワクチンである、実施形態９６に記載の方法。
９９）ワクチンが、腫瘍細胞上で発現する、ポリペプチド若しくはその断片、又は、ポリペプチド若しくはそれらの断片をコードするＤＮＡ若しくはＲＮＡである、実施形態９８に記載の方法。
１００）ポリペプチドが、ＰＳＭＡ、メソセリン、ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩである、実施形態９９に記載の方法。
１０１）第２の治療剤が、同時に、順次に、又は別々に投与される、実施形態９５に記載の方法。
１０２）対象が放射線療法で治療されるか、又は現在治療されている、実施形態９１～１０１のいずれか１つに記載の方法。
１０３）対象が手術を受けたか、又は後に受ける、実施形態９１～１０１のいずれか１つに記載の方法。
１０４）単離された抗体が、配列番号６６のＶＨ、及び配列番号６７のＶＬを含む、実施形態４６～５８のいずれか１つに記載の方法。
１０５）治療に使用するための、実施形態１～８２のいずれか１つに記載の抗体。
１０６）実施形態１～８２のいずれか１つに記載の抗体に結合する抗イディオタイプ抗体。
１０７）ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含む、二重特異性抗体であって、第１のドメインが、
ａ）それぞれ配列番号３１、４２、４３、１１、１２、及び１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｂ）それぞれ配列番号１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｃ）それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｄ）それぞれ配列番号３６、３７、３８、３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｅ）それぞれ配列番号１２２、１２３、１２４、２３、１２、及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｆ）それぞれ配列番号８、９、１０、１１、１２、及び１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｇ）それぞれ配列番号１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｈ）それぞれ配列番号２０、２１、２２、２３、１２、及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｉ）それぞれ配列番号３１、３２、３３、３４、１２、及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｊ）それぞれ配列番号３１、４４、４５、４６、２９、及び４７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｋ）それぞれ配列番号３６、３７、４８、４９、５０、及び５１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｌ）それぞれ配列番号５３、５４、５５、２３、１２、及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｍ）それぞれ配列番号２５、１３０、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｎ）それぞれ配列番号２５、１３０、２７、１３１、２９、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｏ）それぞれ配列番号２５、１３０、２７、２８、１３３、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｐ）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｑ）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、２９、及び１３６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｒ）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｓ）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、１３１、２９、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｔ）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、１３３、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｕ）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、２９、及び１３６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｖ）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、１３１、２９、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｗ）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、１３３、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、又は
ｘ）それぞれ配列番号２５、１３７、２７、２８、１３３、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、を含む、二重特異性抗体。
１０８）第１のドメインが、
ａ）それぞれ配列番号３１、４２、４３、１１、１２及び１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号７４のＶＨ、及び配列番号６１のＶＬ、
ｂ）それぞれ配列番号１４、１５、１６、１７、１８及び１９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号６２のＶＨ、及び配列番号６３のＶＬ、
ｃ）それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号６６のＶＨ、及び配列番号６７のＶＬ、
ｄ）それぞれ配列番号３６、３７、３８、３９、４０及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号７２のＶＨ、及び配列番号７３のＶＬ、
ｅ）それぞれ配列番号１２２、１２３、１２４、２３、１２及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１６０のＶＨ、及び配列番号６５のＶＬ、
ｆ）それぞれ配列番号８、９、１０、１１、１２及び１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号６０のＶＨ、及び配列番号６１のＶＬ、
ｇ）それぞれ配列番号１４、１５、１６、１７、１８及び１９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号６２のＶＨ、及び配列番号６３のＶＬ、
ｈ）それぞれ配列番号２０、２１、２２、２３、１２及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号６４のＶＨ、及び配列番号６５のＶＬ、
ｉ）それぞれ配列番号３１、３２、３３、３４、１２及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号７０のＶＨ、及び配列番号７１のＶＬ、
ｊ）それぞれ配列番号３１、４４、４５、４６、２９及び４７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、配列番号７５のＶＨ、及び配列番号７６のＶＬ、
ｋ）それぞれ配列番号３６、３７、４８、４９、５０及び５１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号７７のＶＨ、及び配列番号７８のＶＬ、
ｌ）それぞれ配列番号５３、５４、５５、２３、１２及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号６８のＶＨ、及び配列番号６９のＶＬ、
ｍ）それぞれ配列番号２５、１３０、２７、２８、２９及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３８のＶＨ、及び配列番号６７のＶＬ、
ｎ）それぞれ配列番号２５、１３０、２７、１３１、２９及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３８のＶＨ、及び配列番号１４２のＶＬ、
ｏ）それぞれ配列番号２５、１３０、２７、２８、１３３及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３８のＶＨ、及び配列番号１４３のＶＬ、
ｐ）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、２９及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３９のＶＨ、及び配列番号１６７のＶＬ、
ｑ）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、２９及び１３６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１４０のＶＨ、及び配列番号１４４のＶＬ、
ｒ）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、２９及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１４０のＶＨ、及び配列番号１６７のＶＬ、
ｓ）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、１３１、２９及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１４０のＶＨ、及び配列番号１４２のＶＬ、
ｔ）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、１３３及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１４０のＶＨ、及び配列番号１４３のＶＬ、
ｕ）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、２９及び１３６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３９のＶＨ、及び配列番号１４４のＶＬ、
ｖ）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、１３１、２９及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３９のＶＨ、及び配列番号１４２のＶＬ、
ｗ）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、１３３及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３９のＶＨ、及び配列番号１４３のＶＬ、又は
ｘ）それぞれ配列番号２５、１３７、２７、２８、１３３及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１４１のＶＨ、及び配列番号１４３のＶＬ、を含む、実施形態１０７に記載の二重特異性抗体。
１０９）（ｉ）組み換えＰａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ ＰＳＭＡを発現する細胞に結合し、このとき細胞への結合はフローサイトメトリーによって測定され、かつ（ｉｉ）組み換えＰａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ ＰＳＭＡ細胞外ドメイン（配列番号４）に約３０ｎＭ以下の親和性で結合し、このとき親和性はＰｒｏｔｅｏｎ表面プラズモン共鳴アッセイによって測定される、第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体。
１１０）抗体が、
ａ）２０ｎＭ以下のＥＣ５０計算値でＬＮＣａＰ細胞と結合し、かつ、４０ｎＭ以下のＥＣ５０計算値でＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞に結合し、ＬＮＣａＰ細胞への結合と、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞への結合との間のＥＣ５０計算値の差は５倍未満であり、このときＥＣ５０計算値は、フローサイトメトリーを用いる０℃での全細胞結合アッセイで測定される、
ｂ）１２ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）で、ヒト（配列番号７）、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ（配列番号４）及びＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（配列番号５）由来の組み換えＰＳＭＡ ＥＣＤに結合し、ＫＤは、Ｐｒｏｔｅｏｎ表面プラズモン共鳴アッセイＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システムを使用して＋２５℃で測定される、
ｃ）ＬＮＣａＰ細胞、Ｃ４２細胞、ヒトＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞、又はＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞のＴ細胞媒介性殺傷を提示し、Ｔ細胞媒介性殺傷は、クロム－５１によって、若しくはカスパーゼ３／７活性化アッセイによって測定される、又は
ｄ）立体構造エピトープを認識し、エピトープは、ヒトＰＳＭＡ（配列番号３）の残基Ｉ１３８、Ｆ２３５、Ｐ２３７、Ｇ２３８、Ｄ２４４、Ｙ２９９、Ｙ３００、Ｑ３０３、Ｋ３０４、Ｅ３０７、及びＫ３２４～Ｐ３２６からなる、実施形態１０９に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
１１１）抗体がＴ細胞に結合する、実施形態１０９に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
１１２）第１のドメインが、
ａ）それぞれ配列番号１４、１５、及び１６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号１７、１８、及び１９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｂ）それぞれ配列番号２０、２１及び２２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号２３、１２及び２４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、
ｃ）それぞれ配列番号２５、２６及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号２８、２９及び３０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、
ｄ）それぞれ配列番号３１、４４及び４５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号４６、２９及び４７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、
ｅ）それぞれ配列番号３１、４２及び４３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号１１、１２及び１３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、又は
ｆ）それぞれ配列番号１２２、１２３及び１２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号２３、１２及び２４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、を含む、実施形態１０９に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
１１３）第１のドメインが、
ａ）それぞれ、配列番号１４、１５及び１６、
ｂ）それぞれ、配列番号２０、２１及び２２、
ｃ）それぞれ、配列番号２５、２６及び２７、
ｄ）それぞれ、配列番号３１、４４及び４５、
ｅ）それぞれ、配列番号３１、４２及び４３、又は
ｆ）それぞれ、配列番号１２２、１２３及び１２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む、実施形態１０９に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
１１４）第１のドメインが、
ａ）それぞれ、配列番号１７、１８及び１９、
ｂ）それぞれ、配列番号２３、１２及び２４、
ｃ）それぞれ、配列番号２８、２９及び３０、
ｄ）それぞれ、配列番号４６、２９及び４７、
ｅ）それぞれ、配列番号１１、１２及び１３、又は
ｆ）それぞれ、配列番号２３、１２及び２４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態１０９に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
１１５）
ａ）第１のドメインが、配列番号６２の重鎖可変領域（ＶＨ）と配列番号６３の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、第２のドメインが、配列番号１０４のＶＨと配列番号１０５のＶＬを含む、
ｂ）第１のドメインが、配列番号６４のＶＨと配列番号６５のＶＬを含み、第２のドメインが、配列番号１０４のＶＨと配列番号１０５のＶＬを含む、
ｃ）第１のドメインが、配列番号６６のＶＨと配列番号６７のＶＬを含み、第２のドメインが、配列番号１０４のＶＨと配列番号１０５のＶＬを含む、
ｄ）第１のドメインが、配列番号７５のＶＨと配列番号７６のＶＬを含み、第２のドメインが、配列番号１０４のＶＨと配列番号１０５のＶＬを含む、
ｅ）第１のドメインが、配列番号７４のＶＨと配列番号６１のＶＬを含み、第２のドメインが、配列番号１０４のＶＨと配列番号１０５のＶＬを含む、
ｆ）第１のドメインが、配列番号１６０のＶＨと配列番号６５のＶＬを含み、第２のドメインが、配列番号１０４のＶＨと配列番号１０５のＶＬを含む、実施形態１０９に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
１１６）第１の重鎖（ＨＣ１）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、ＨＣ１及びＬＣ１が、
ａ）それぞれ配列番号８４及び８５、
ｂ）それぞれ配列番号８６及び８７、
ｃ）それぞれ配列番号８８及び８９、
ｄ）それぞれ配列番号１２５及び９１、
ｅ）それぞれ配列番号９４及び９５、又は
ｆ）それぞれ配列番号９６及び８３のアミノ酸配列を含む、実施形態１０９に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
１１７）ＨＣ２及びＬＣ２が、それぞれ配列番号１１０及び１１１を含む、実施形態１１６に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
１１８）
ａ）それぞれ、配列番号８４、８５、１１０及び１１１、
ｂ）それぞれ、配列番号８６、８７、１１０及び１１１、
ｃ）それぞれ、配列番号８８、８９、１１０及び１１１、
ｄ）それぞれ、配列番号１２５、９１、１１０及び１１１、
ｅ）それぞれ、配列番号９４、９５、１１０及び１１１、
ｆ）それぞれ、配列番号９６、８３、１１０及び１１１の、ＨＣ１、ＬＣ１、ＨＣ２及びＬＣ２を含む、実施形態１０９に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
１１９）抗体がヒト又はヒト化である、実施形態１０９～１１８のいずれか１つに記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
１２０）抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態１１９に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
１２１）抗体が、ＩｇＧ１、又はＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態１２０に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
１２２）抗体のＦｃ中に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の置換を含む、実施形態１２０又は１２１に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
１２３）
ａ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓ置換、
ｂ）Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓ置換、
ｃ）Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、及びＱ２６８Ａ置換、
ｄ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、若しくはＬ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換、
ｅ）Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、若しくはＦ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換、
ｆ）Ｖ２３４Ａ置換、又は
ｇ）Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を含み、ここで、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態１２１に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
１２４）抗体ＣＨ３定常ドメインに少なくとも１つの置換を含む、実施形態１０９～１２３のいずれか１つに記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
１２５）抗体ＣＨ３定常ドメイン中の置換が、４０９Ｒ、Ｆ４０５Ｌ又はＦ４０５Ｌ／Ｒ４０９Ｋ置換であり、ここで、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、実施形態１２４に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
１２６）抗体が、
ａ）ＨＣ１中のＦ４０５Ｌ置換と、ＨＣ２中の４０９Ｒ置換と、を含み、抗体がＩｇＧ１アイソタイプである、ｂ）ＨＣ１中のＶ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＦ４０５Ｌ置換と、ＨＣ２中のＶ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及び４０９Ｒ置換と、を含み、抗体がＩｇＧ１アイソタイプである、又は
ｂ）ＨＣ１中のＳ２２８Ｐ置換と、ＨＣ２中のＳ２２８Ｐ、Ｆ４０５Ｌ及びＲ４０９Ｋ置換と、を含み、抗体がＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態１２４に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
１２７）実施形態１０９～１２６のいずれか１つに記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
１２８）実施形態１１８に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体のＨＣ１、ＬＣ１、ＨＣ２又はＬＣ２をコードする、ポリヌクレオチド。
１２９）実施形態１２８に記載のＨＣ１、ＬＣ１、ＨＣ２、ＬＣ２、ＨＣ１及びＬＣ１、又は、ＨＣ２及びＬＣ２をコードする、ポリヌクレオチドを含む、ベクター。
１３０）実施形態１２９に記載のベクターを含む、単離宿主細胞。
１３１）実施形態１１８に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体を作製する方法であって、抗体が発現する条件で実施形態１３０に記載の宿主細胞を培養することと、宿主細胞によって産生された二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体を回収し、精製することと、を含む、方法。
１３２）実施形態１１８に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体を作製する方法であって、
ａ）２つの同一のＨＣ１と２つの同一のＬＣ１を有する単一特異性二価ＰＳＭＡ抗体と、２つの同一のＨＣ２と２つの同一のＬＣ２を有する単一特異性二価ＣＤ３抗体と、を、モル比約１：１の混合物で混合することと、
ｂ）混合物中に還元剤を導入することと、
ｃ）混合物を約９０分～約６時間インキュベートすることと、
ｄ）還元剤を除去することと、
ｅ）ＨＣ１、ＬＣ１、ＨＣ２及びＬＣ２を含む二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体を精製することと、を含む、方法。
１３３）還元剤が、２－メルカプトエタノールアミン（２－ＭＥＡ）である、実施形態１３２に記載の方法。
１３４）
ｈ）２－ＭＥＡが、約２５ｍＭ～約７５ｍＭの濃度で存在し、
ｉ）培養工程が、約２５°℃～約３７°℃の温度で行われる、実施形態１３３に記載の方法。
１３５）対象において癌を治療する方法であって、治療有効量の実施形態１０９～１２６のいずれか１つに記載の単離されたＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体を、癌を治療するのに十分な時間にわたって、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
１３６）癌が、固形腫瘍、悪性腫瘍又は血管新生系腫瘍である、実施形態１３５に記載の方法。
１３７）固形腫瘍が、前立腺癌又は結腸直腸癌、胃癌、腎明細胞癌、膀胱癌、肺癌、扁平上皮癌、神経膠腫、乳癌、腎臓癌、血管新生疾患、腎明細胞癌（ＣＣＲＣＣ）、膵臓癌、腎臓癌、尿路上皮癌、及び肝臓の腺癌である、実施形態１３６に記載の方法。
１３８）前立腺癌が、抵抗性前立腺癌、前立腺上皮内腫瘍、アンドロゲン非依存性前立腺癌、悪性前立腺癌である、実施形態１３７に記載の方法。
１３９）抗体が、第２の治療剤と組み合わせて投与される、実施形態１３５～１３８のいずれか１つに記載の方法。
１４０）第２の治療剤が、固形腫瘍又は悪性腫瘍又は血管新生系腫瘍の治療に対する標準治療薬である、実施形態１３９に記載の方法。
１４１）第２の治療剤が、ホルモン阻害剤、微小管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、代謝拮抗薬、有糸***阻害剤、アルキル化剤、アントラサイクリン、ビンカアルカロイド、挿入剤、シグナル伝達経路に干渉可能な薬剤、アポトーシスを促進する薬剤、プロテオソーム阻害剤又は放射線である、実施形態１３９に記載の方法。
１４２）第２の治療剤がワクチンである、実施形態１３９に記載の方法。
１４３）ワクチンが、腫瘍細胞上で発現する、ポリペプチド若しくはその断片、又は、ポリペプチド若しくはそれらの断片をコードするＤＮＡ若しくはＲＮＡである、実施形態１４２に記載の方法。
１４４）ポリペプチドが、ＰＳＭＡ、メソセリン、ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩである、実施形態１４３に記載の方法。
１４５）第２の治療剤が、同時に、順次に、又は別々に投与される、実施形態１３９に記載の方法。
１４６）対象が放射線療法で治療されるか、又は現在治療されている、実施形態１３５～１４５のいずれか１つに記載の方法。
１４７）対象が手術を受けたか、又は後に受ける、実施形態１３５～１４５のいずれか１つに記載の方法。
１４８）二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体の第１のドメインが、配列番号６６のＶＨ及び配列番号６７のＶＬを含み、二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体の第２のドメインが、配列番号１０４のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬを含む、実施形態１３５～１４５のいずれか１つに記載の方法。
１４９）治療に使用するための、実施形態１０９～１２６のいずれか１つに記載の抗体。
１５０）実施形態１０９～１２６のいずれか１つに記載の抗体に結合する抗イディオタイプ抗体。
実施例１：材料
ＰＳＭＡ細胞株の生成
標準的な分子生物学的手法を使用する、ＣＭＶプロモータを有する自社製発現ベクターを用いて、完全長のチンパンジーＰＳＭＡ（Ｈ２Ｑ３Ｋ５＿ＰＡＮＴＲ、配列番号１）又は完全長のカニクイザルＰＳＭＡ（ＥＨＨ５６６４６．１、配列番号２）を提示する発現ベクターをスクリーニングツールとして使用するために作製し、抗ＰＳＭＡリード抗体を評価した。標準的な方法を使用して、ベクターを、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞懸濁液内に一過性にトランスフェクションした。トランスフェクトされた２９３Ｆ懸濁細胞を、血清を含む増殖培地中に播種して、付着細胞とし、安定したプラスミド組み込みのために選択した。単一細胞集団を連続希釈により選択し、ＰＳＭＡ表面受容体の発現を、（ＰＳＭＡＬ抗体（中央部）親和性精製ウサギポリクローナル抗体（カタログ＃ＯＡＡＢ０２４８３、Ａｖｉｖａ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ）を一次抗体として、Ｒ－ＰＥ抗ウサギ二次抗体（カタログ＃１１１－１１６－１４４、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）及びアイソタイプ対照としてのウサギポリクローナルＩｇＧ（カタログ＃ＳＣ－５３２、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）と共に）使用して、ＦＡＣＳにより定量した。
ヒトＰＳＭＡ発現細胞株を、完全長のヒトＰＳＭＡ（ＦＯＬＨ１＿ＨＵＭＡＮ、配列番号３）を含有するレンチウイルス（Ｇｅｎｅｃｏｐｏｅｉａ、ｃａｔ ＃ＥＸ－Ｇ００５０－Ｌｖ１０５－１０）、及びＰＳＭＡ陽性細胞を選択するためにピューロマイシンを使用して生成した。ＰＳＭＡ陰性のＨＥＫ２９３Ｆ細胞（ＡＴＣＣ）に、レンチウイルス粒子を形質導入し、ヒトＰＳＭＡを過剰発現させた。形質導入後、ＰＳＭＡ及び耐性マーカーを陽性発現する細胞は、様々な濃度のピューロマイシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を加えたＤＭＥＭ＋１０％ＨＩ ＦＢＳ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で増殖させたプールした細胞を処理することによって選択した。
ＨＥＫ生成細胞株に加えて、いくつかの市販の細胞株をファージパニング、並びに結合アッセイ及び細胞毒性アッセイに使用した。ＬＮＣａＰクローンＦＧＣ細胞（ＡＴＣＣ ｃａｔ＃ＣＲＬ－１７４０）は、市販のヒト前立腺癌細胞株である。Ｃ４－２Ｂ細胞は、元来ＭＤ Ａｎｄｅｒｓｏｎで開発されたものであり、ｉｎ ｖｉｖｏで増殖したＬＮＣａＰ ＦＧＣに由来し、骨髄に転移する（Ｔｈａｌｍａｎｎ，ｅｔ ａｌ １９９４，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５４，２５７７－８１）。
可溶性ＰＳＭＡ ＥＣＤタンパク質の生成
組み換えチンパンジーＰＳＭＡ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）タンパク質（Ｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡ ＥＣＤ、配列番号４）をパニング用に生成し、標準的な分子生物学的手法を用いてＣＭＶプロモータを有する自社製発現ベクターを使用して抗ＰＳＭＡリード抗体を評価した。ｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡ ＥＣＤ遺伝子断片（配列番号１のアミノ酸４４～７５０）を、Ｎ末端シグナル配列（配列番号５６）、Ｎ末端Ａｖｉｔａｇ（配列番号５７）及び６－Ｈｉｓタグ（配列番号５８）と共に、標準的な分子生物学的手法を用いてＣＭＶプロモータを有する自社製発現ベクターを使用してクローニングし、２９３Ｅｘｐｉ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）内に一過的に発現させた。遺伝子合成手法を用いてｃＤＮＡを調製した（米国特許第６，６７０，１２７号、同第６，５２１，４２７号）。上清を回収し、遠心して清澄化した。タンパク質を、１）ＨｉｓＴｒａｐ ＨＰカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いたＩＭＡＣ精製、及び２）サイズ排除精製（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００、Ｇｅ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の二段階の精製プロセスを用いて精製し、ここでの溶出緩衝液は、ＰＳＭＡの二量化を安定させるために０．５ｍＭのＺｎＣｌ２を含有するＤｕｌｂｅｃｃｏのリン酸緩衝生理食塩水、カルシウム、マグネシウム（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ、＃１４０４０）である。対象とするタンパク質を含む画分をプールし、タンパク質濃度をＡ２８０によって測定した。この材料を、結合性及び親和性の測定に使用し、ＰＳＭＧ８と称する。
Ｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡ ＥＣＤもパニングのためにビオチン化した。哺乳類細胞に同時導入され、Ａｖｉタグを含有するタンパク質をビオチン化したＢｉｒＡプラスミドを、自社で作製した。ＢｉｒＡコード領域（配列番号５９）を、マウスＩｇＧ重鎖由来のシグナルペプチド（配列番号８０）に融合し、ＥＲ保留シグナル（ＫＤＥＬ（「ＫＤＥＬ」、配列番号１５６として開示）をＣ末端に追加して、ＢｉｒＡ（配列番号１１２）を作製した。ＣＭＶプロモータの制御下で、構築した遺伝子を発現ベクターにクローニングした。ビオチン化ＰＳＭＡ抗原を産生するために、ＢｉｒＡプラスミドに対して４倍過剰（ｗ／ｗ）のＰＳＭＡプラスミドＤＮＡをトランスフェクション混合液に添加した。
Ｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡ ＥＣＤタンパク質のビオチン化を、ＢｉｒＡ発現構築物の同時導入によりＡｖｉタグを介して行い、得られた分泌タンパク質を、１）ＨｉｓＴｒａｐ ＨＰカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いたＩＭＡＣ精製、及び２）サイズ排除精製（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００、Ｇｅ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の二段階の精製プロセスを用いて精製し、ここでの溶出緩衝液は、ＰＳＭＡの二量化を安定させるために０．５ｍＭのＺｎＣｌ２を含有するＤｕｌｂｅｃｃｏのリン酸緩衝生理食塩水、カルシウム、マグネシウム（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ、＃１４０４０）である。このタンパク質を、ファージパニング試験で使用する前にエンドトキシンについて検査した。
Ｎ末端シグナル（配列番号５６）、Ｎ末端Ａｖｉ－（配列番号５７）及び６Ｈｉｓ（配列番号５８）タグを有する配列番号２のアミノ酸４４～７５０に対応する組み換えカニクイザルＰＳＭＡ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）タンパク質（ｃｙｎｏ ＰＳＭＡ ＥＣＤ、配列番号５）を、ｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡ ＥＣＤについて前述したように、クローニングし、発現させた。ｃｙｎｏ ＰＳＭＡ ＥＣＤタンパク質のビオチン化を、ＢｉｒＡ発現構築物の同時導入によりＡｖｉタグを介して行い、得られた分泌タンパク質を、ＩＭＡＣ ＨｉｓＴｒａｐ ＨＰカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）及びＭｏｎｏＡｖｉｄｉｎカラムを用いる二段階精製によって精製した。このタンパク質を、ファージパニング試験で使用する前にエンドトキシンについて検査した。この材料を、結合性及び親和性の測定にも使用し、ＰＳＭＧ１と称する。
ＩｇＧ１ Ｆｃ（配列番号８１）を有する第２の組み換えｃｙｎｏ ＰＳＭＡ ＥＣＤタンパク質（Ｃｙｎｏ ＰＳＭＡ Ｆｃ、配列番号６）をクローニングし、標準的な分子生物学的手法を用いて、ＣＭＶプロモータを有する自社製発現ベクターを用いて発現させた。ＣｙｎｏＰＳＭＡ Ｆｃタンパク質を、２９３ＨＥＫ－ｅｘｐｉ細胞内で一過性に発現させた。ＨＥＫ２９３ Ｅｘｐｉ細胞内のＰＳＭＧ３の一過性トランスフェクションを、トランスフェクション後５日で回収し、遠心（３０分間、６０００ｒｐｍ）によって清澄化し、濾過（０．２μＰＥＳ膜、Ｃｏｒｎｉｎｇ）した。馴化培地に分泌された精製された既知のＩｇＧ（同じアイソタイプ）を利用して標準曲線を作成し、Ｏｃｔｅｔ装置（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）でＩｇＧの相対量を求めた。
清澄化したＣｙｎｏ ＰＳＭＡ Ｆｃの上清を、平衡化した（ｄＰＢＳ、ｐＨ７．２）ＨｉＴｒａｐ ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に、樹脂１ｍＬ当たり～３０ｍｇのタンパク質という相対濃度でロードした。ローディング後、カラムをｄＰＢＳ、ｐＨ７．２にて洗浄し、０．１Ｍ酢酸ナトリウム、ｐＨ３．５の１０×カラム体積で溶出した。ピーク画分をプールし、２Ｍ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７で中和し、濾過した（０．２μ）。中和したタンパク質サンプルを、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、及び０．５ｍＭ ＺｎＣｌ２を含有するｄＰＢＳ ｐＨ７．２を３回交換し、４℃で一晩透析した。翌日、サンプルを透析液から取り出し、濾過し（０．２μ）、ＢｉｏＴｅｋ ＳｙｎｅｒｇｙＨＴＴＭ分光光度計で２８０ｎｍでの吸光度によってタンパク質濃度を測定した。精製したタンパク質の量を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、及び解析サイズ排除ＨＰＬＣ（Ｄｉｏｎｅｘ ＨＰＬＣシステム）によって査定した。内毒素レベルをＬＡＬアッセイ（Ｐｙｒｏｔｅｌｌ－Ｔ、Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ｏｆ Ｃａｐｅ Ｃｏｄ）を用いて測定した。精製したタンパク質を４℃で保存した。
ＮＮ末端Ａｖｉ－及び６Ｈｉｓ（配列番号５８）タグを有する配列番号３のアミノ酸４４～７５０に対応する組み換えヒトＰＳＭＡ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）タンパク質（ヒトＰＳＭＡ ＥＣＤ、配列番号７）を、ｃｈｉｍｐ及びｃｙｎｏ ＰＳＭＡ ＥＣＤタンパク質について前述したように、クローニングし、発現させ、精製した。
実施例２：抗ｃｈｉｍｐ及び抗ヒトＰＳＭＡ Ｆａｂの同定
組み換えタンパク質を用いるパニング。４種類のヒトＶＬ生殖系列遺伝子（Ａ２７、Ｂ３、Ｌ６、Ｏ１２）ライブラリと対を成すＶＨ１－６９、３－２３及び５－５１重鎖ライブラリからなる、ｄｅ ｎｏｖｏヒトＦａｂ－ｐＩＸライブラリ［Ｓｈｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２０１０．３９７（２）：ｐ．３８５－３９６．国際公開第２００９／０８５４６２号］の１回目の溶液パニングを、製造元のプロトコルに従ってビオチン化Ｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡ ＥＣＤでコーティングしたストレプトアビジンビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃａｔ＃１１２．０５Ｄ、Ｌｏｔ＃６２９９２９２０）へのファージ捕捉、続いて、製造元のプロトコルに従ってＣｙｎｏ－ＰＳＭＡ－ＦｃでコーティングしたＰｒｏｔＧビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｔ＃１０００３Ｄ）へのファージ捕捉、続いて、製造元のプロトコルに従ってビオチン化Ｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡ ＥＣＤでコーティングしたＳｅｒａ－ｍａｇ Ｄｏｕｂｌｅ Ｓｐｅｅｄ磁気ニュートラアビジンビーズ（Ｔｈｅｒｍｏ、Ｃａｔ ＃７８１５－２１０４－０１１１５０）へのファージ捕捉を１回行う、交互パニング法を用いて実施した。このパニングにより、２つのヒット：ＰＳＭＢ１８及びＰＳＭＢ２５が得られた。
抗ＰＳＭＡ Ｆａｂの全細胞パニング。上記のチンパンジーＥＣＤパニング実験、つまり新しいｄｅ ｎｏｖｏファージライブラリを用いて最初に得られたものを使用して、追加のパニング実験を全細胞に対して行った。簡潔に述べると、ファージをヘルパーファージ感染によって産生し、当該技術分野において既知の標準的なプロトコルに従ってＰＥＧ／ＮａＣｌ沈殿により濃縮した。ファージライブラリを、トランスフェクトされていない親ＨＥＫ２９３Ｆ細胞において、４℃で一晩、穏やかに揺らしながら予備清浄した。ＰＥＧ／ＮａＣｌ沈殿後、予備清浄したライブラリを、ｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ２９３細胞又はＬＮＣＡＰ細胞と、４℃で２時間静かに揺らしながらインキュベートした。結合していないファージの除去とファージ結合細胞の回収は、Ｆｉｃｏｌｌによる勾配によって行い、その後、結合ファージを保有する細胞を、１ｍＬのＴＧ－１ Ｅ．ｃｏｌｉ培養液と共に３７℃で３０分間撹拌せずに培養することによって、数回洗浄工程を行った。得られた混合物をＬＢ－カルベニシリン－１％グルコースプレート上にプレーティングし、３７℃で一晩増殖させた。次いで、後続するパニングのためにこのプロセスを繰り返した。
Ｅ．ｃｏｌｉ上清を生成するためのファージＦａｂ－ｐＩＸからＦａｂ－Ｈｉｓへの変換。得られたファージＦａｂ－ｐＩＸのヒットを、標準的な手順を用いてＦａｂ－Ｈｉｓに変換した。プラスミドＤＮＡをファージパニングしたＥ．ｃｏｌｉから単離し（Ｐｌａｓｍｉｄ Ｐｌｕｓ Ｍａｘｉ Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ ｃａｔ＃１２９６３）、ＮｈｅＩ／ＳｐｅＩ制限消化に供した。得られた５４００及び１００ｂｐ断片を０．８％アガロースゲル上で分離し、５４００ｂｐの断片をゲル精製した（ＭｉｎＥｌｕｔｅ ＰＣＲ精製キット、Ｑｉａｇｅｎ ｃａｔ＃２８００６）。精製した５４００ｂｐのバンドを、Ｔ４リガーゼを使用してセルフライゲーションし、得られた生成物（Ｆａｂ－ｈｉｓ融合体をコードしている）を、ＴＧ－１ Ｅ．ｃｏｌｉ株に戻し、クローン的に単離した。Ｆａｂ－Ｈｉｓ上清を、１ｍＭ ＩＰＴＧによる培養で一晩誘導することによってクローンから生成させた。一晩培養物を遠心分離した後、清澄化した上清を後続のアッセイでの使用のために準備した。異なるＦａｂ－ｈｉｓ上清の相対発現レベルを決定するために、段階希釈した上清の抗κ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ｃａｔ＃２０６１－０５）ＥＬＩＳＡを実施した。試験した全てのクローンは、同様のＦａｂ－ｈｉｓ発現を示した（データは示さず）。
Ｅ．ｃｏｌｉからのＦａｂ－ｈｉｓ融合体の細胞結合。ＰＳＭＡ発現細胞へのＥ．ｃｏｌｉ上清の個々のＦａｂ－ｈｉｓ融合体の結合能力を評価するために、細胞系結合アッセイを設計した。ｐＩＸ切断後の全てのパニング実験の３回目に得られたものから、個々のＦａｂクローンを単離した。Ｆａｂクローンを、ｃｈｉｐｍ及びｃｙｎｏ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞、並びにＬＮＣａＰ細胞上のヒトＰＳＭＡへの結合について試験した。簡潔に述べると、ＰＳＭＡ発現細胞を、ウェル当たり２００，０００個の密度でＶ底プレート（ＣｏＳｔａｒ ３３５７）に分注し、氷上で１時間、Ｆａｂ断片を発現する上清（１００μＬ）と共にインキュベートした。２％ＦＢＳを含有するＰＢＳで細胞を２回洗浄し、氷上で１時間、マウス抗ヒトκ－ＲＰＥ抗体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｃａｔ＃ＭＨ１０５１４）を用いて染色した。２％ＦＢＳを含有するＰＢＳで細胞を２回洗浄し、１００μＬの同じ洗浄緩衝液中に再懸濁した。ＢＤ ＦＡＣＳ Ａｒｒａｙフローサイトメーターでプレートを読み取った。ＦＡＣＳデータを、前方散乱及び側方散乱を使用して健康な細胞集団をライブゲートし、次いでこのゲート内の細胞を分析してＰＥ染色することによって、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアで分析した。平均蛍光強度（ＭＦＩ）を計算し、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌにエクスポートした。全ての３種のＰＳＭＡ（ｃｙｎｏ、ｃｈｉｍｐ及びヒト）に対してバックグラウンドの≧３倍の結合を示し、ＨＥＫ２９３細胞株に結合しなかったＦａｂクローンを、「予備陽性」とラベルした。Ｆａｂの配列を決定し、再スクリーニングのための哺乳類発現ベクターへのクローニングに進めた。真の陽性は、ＰＳＭＡ発現細胞株への哺乳類細胞で発現したＦａｂ上清の結合によって選択した。
哺乳類Ｆａｂの調製。Ｅ．ｃｏｌｉ Ｆａｂを哺乳類で発現したＦａｂに変換するために、製造元のプロトコルに従って、Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤクローニング（ＣｌｏｎＴｅｃｈ ｃａｔ＃６３８９１８）を使用した。簡潔に述べると、一次スクリーニングを通過し、哺乳類Ｆａｂ形式に移されるクローンのヌクレオチド配列を、ｈｕＫａｐｐａ＿ｍｕＩｇＧＳＰ及びｈｕＧ１ Ｆａｂ発現ベクターにＩｎ－ＦｕｓｉｏｎクローニングするためのＰＣＲ断片を生成するために使用されるアイソタイプ特異的ＰＣＲプライマーのリストを生成する「ＩｎＦｕ Ｐｒｉｍｅｒ Ｆｉｎｄｅｒ ｖ１．２．３」プログラム（自社開発したソフトウェア）にロードする。これらのベクターは、ｐｃＤＮＡ３．１に基づくＣＭＶプロモータを有する自社製ベクターである。Ｉｎ－ｆｕｓｉｏｎプロセスに続いて、Ｅ．ｃｏｌｉクローンを単離し、配列を検証し、標準的なプロトコルを用いてＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクションした。５日後、トランスフェクト液から２０ｍＬの上清を採取することにより、ＰＳＭＡ発現細胞株への結合を確認するための哺乳類ＰＳＭＡ Ｆａｂを調製した。
哺乳類上清形態での全細胞パニングからの再スクリーニングヒット。上記の全細胞結合アッセイを用いて、哺乳類で発現したＦａｂ上清の確認を行った。チンパンジー、カニクイザル及びヒトＰＳＭＡ（ＬＮＣａＰ細胞）へのＦａｂの結合について検査し、並びに、反対に親ＨＥＫ細胞株に結合しないことについてもスクリーニングを行った。表３は、ＰＳＭＡ発現細胞に結合する哺乳類Ｆａｂ上清のヒットプロファイルを示す。Ｅ．ｃｏｌｉ上清由来のヒットの多くは、哺乳類で発現するタンパク質として確認されなかった。ＰＳＭＢ４７は、ｃｙｎｏ ＰＳＭＡ発現細胞への高い結合、及びｃｈｉｍｐ－ＰＳＭＡ発現細胞へのある程度の結合を示したが、ヒトＰＳＭＡを発現するＬＮＣａＰ細胞への結合は示さなかった。ＰＳＭＢ５５は、同様のプロファイルを示したが、ＬＮＣａＰ細胞にある程度結合した。ＰＳＭＢ６８～ＰＳＭＢ７９は、ＬＮＣａＰ細胞に結合したが、ｃｈｉｍｐ又はｃｙｎｏ－ＰＳＭＡ発現細胞には結合しなかった。哺乳類Ｆａｂ上清のＰＳＭＢ５１、ＰＳＭＢ５５、及びＰＳＭＢ５６は、３つ全ての細胞株に結合した。ＰＳＭＢ４９、ＰＳＭＢ５０、及びＰＳＭＢ５３は、ｃｈｉｍｐ又はｃｙｎｏへの結合がより高い。Ｍ５８は、わずかなｃｈｉｍｐ及びｃｙｎｏへの結合を示した。
Figure 0007361727000004
Figure 0007361727000005
Figure 0007361727000006
Figure 0007361727000007
哺乳類の発現したＦａｂの用量反応曲線。哺乳類が発現したＦａｂクローンが、未希釈のＦａｂ上清の際にＰＳＭＡ発現細胞株に結合することを確認した後、上清をＯｃｔｅｔ又はタンパク質ゲルによるタンパク質濃度に対して補正し、用量反応曲線を完成させて、前述のプロトコルを用いてＰＳＭＡ結合を確認した。図１～３は、３つのＰＳＭＡ発現細胞の全てに対する結合を示したヒットの滴定曲線を示す。図１は、ＬＮＣａＰ細胞に対する抗ＰＳＭＡファージパニングのヒットの滴定曲線を示す。図２は、Ｃｈｉｍｐ－ＰＳＭＡ ＨＥＫ細胞に対する抗ＰＳＭＡファージパニングのヒットの滴定曲線を示す。図３は、Ｃｙｎｏ－ＰＳＭＡ ＨＥＫ細胞に対する抗ＰＳＭＡファージパニングのヒットの滴定曲線を示す。ＰＳＭＧ５（Ｃｙｎｏ ＰＳＭＡ、ＧｅｎＢａｎｋ：ＥＨＨ５６６４６．１）又はＰＳＭＧ９（Ｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡ、ＮＣＢＩ参照配列：ＸＰ＿０１６７７７２５３．１）を、細胞株生成のため、哺乳類発現ベクターに、ＣＭＶプロモータの制御下のＨｉｎｄＩＩ部位とＥｃｏＲＩ部位との間にクローニングした。遺伝子操作したＤＮＡを、リポフェクタミンＬＴＸ試薬を用いて２９３Ｆ細胞にトランスフェクトし、続いて、ＰＳＭＡ（ＰＳＭＧ５又はＰＳＭＧ９）陽性細胞を選択するジェネテシン選択を行った。選択後、ＦＡＣＳを用いて抗ＰＳＭＡ抗体（Ａｖｉｖａ Ｃａｔ＃ＯＡＡＢ０２４８３－ＰＳＭＧ９）又は抗ＰＳＭＡ Ｆａｂ（ＰＳＭＢ１８－Ｊａｎｓｓｅｎ Ｉｎｔｅｒｎａｌ）を用いて細胞をスクリーニングし、選別した。ＦＡＣＳで選別したＰＳＭＧ５クローン１１、２３、２５及び３２、並びにＰＳＭＧ９クローン２、１０、１１、１２、２０及び２４を選択し、スクリーニングのために扱った。ＰＳＭＧ５及びＰＳＭＧ９の配列を以下に提供する。ヒット間の結合プロファイルを、異なる種のＰＳＭＡを発現する細胞株にわたって比較した。実験全体で、ＰＳＭＢ５１上清を陽性対照として使用した。ＣＤＲ中のＮ－結合型グリコシル化部位、ＰＳＭＡ陰性親ＨＥＫ細胞株への結合、又はＰＳＭＡ陽性細胞株への結合の欠如があったため、いくつかのヒットは優先しなかった。１１個のＦａｂヒットが残り、１０個のヒットをヒトＩｇＧ４－ＰＡＡ重鎖構築物にクローニングし、ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の生成に使用した。これらのヒットは、互いに３倍以内の異種間結合を示し、ＰＳＭＡ陽性標的のＴ細胞リダイレクト殺傷について試験するため、二重特異性抗体形式に移行させた。各ヒットについてのパニング抗原を表４に示す。
ＰＳＭＧ５（配列番号１２６）
ＭＷＮＬＬＨＥＴＤＳＡＶＡＴＡＲＲＰＲＷＬＣＡＧＡＬＶＬＡＧＧＦＦＬＬＧＦＬＦＧＷＦＩＫＳＳＳＥＡＴＮＩＴＰＫＨＮＭＫＡＦＬＤＥＬＫＡＥＮＩＫＫＦＬＨＮＦＴＱＩＰＨＬＡＧＴＥＱＮＦＱＬＡＫＱＩＱＳＱＷＫＥＦＧＬＤＳＶＥＬＴＨＹＤＶＬＬＳＹＰＮＫＴＨＰＮＹＩＳＩＩＮＥＤＧＮＥＩＦＮＴＳＬＦＥＰＰＰＡＧＹＥＮＶＳＤＩＶＰＰＦＳＡＦＳＰＱＧＭＰＥＧＤＬＶＹＶＮＹＡＲＴＥＤＦＦＫＬＥＲＤＭＫＩＮＣＳＧＫＩＶＩＡＲＹＧＫＶＦＲＧＮＫＶＫＮＡＱＬＡＧＡＴＧＶＩＬＹＳＤＰＤＤＹＦＡＰＧＶＫＳＹＰＤＧＷＮＬＰＧＧＧＶＱＲＧＮＩＬＮＬＮＧＡＧＤＰＬＴＰＧＹＰＡＮＥＹＡＹＲＲＧＭＡＥＡＶＧＬＰＳＩＰＶＨＰＩＧＹＹＤＡＱＫＬＬＥＫＭＧＧＳＡＳＰＤＳＳＷＲＧＳＬＫＶＰＹＮＶＧＰＧＦＴＧＮＦＳＴＱＫＶＫＭＨＩＨＳＴＳＥＶＴＲＩＹＮＶＩＧＴＬＲＧＡＶＥＰＤＲＹＶＩＬＧＧＨＲＤＳＷＶＦＧＧＩＤＰＱＳＧＡＡＶＶＨＥＩＶＲＳＦＧＭＬＫＫＥＧＷＲＰＲＲＴＩＬＦＡＳＷＤＡＥＥＦＧＬＬＧＳＴＥＷＡＥＥＮＳＲＬＬＱＥＲＧＶＡＹＩＮＡＤＳＳＩＥＧＮＹＴＬＲＶＤＣＴＰＬＭＹＳＬＶＹＮＬＴＫＥＬＥＳＰＤＥＧＦＥＧＫＳＬＹＥＳＷＴＫＫＳＰＳＰＥＦＳＧＭＰＲＩＳＫＬＧＳＧＮＤＦＥＶＦＦＱＲＬＧＩＡＳＧＲＡＲＹＴＫＮＷＥＴＮＫＦＳＳＹＰＬＹＨＳＶＹＥＴＹＥＬＶＥＫＦＹＤＰＭＦＫＹＨＬＴＶＡＱＶＲＧＧＭＶＦＥＬＡＮＳＶＶＬＰＦＤＣＲＤＹＡＶＶＬＲＫＹＡＤＫＩＹＮＩＳＭＫＨＰＱＥＭＫＴＹＳＶＳＦＤＳＬＦＳＡＶＫＮＦＴＥＩＡＳＫＦＳＥＲＬＲＤＦＤＫＳＮＰＩＬＬＲＭＭＮＤＱＬＭＦＬＥＲＡＦＩＤＰＬＧＬＰＤＲＰＦＹＲＨＶＩＹＡＰＳＳＨＮＫＹＡＧＥＳＦＰＧＩＹＤＡＬＦＤＩＥＳＫＶＤＰＳＱＡＷＧＥＶＫＲＱＩＳＩＡＴＦＴＶＱＡＡＡＥＴＬＳＥＶＡ
ＰＳＭＧ９（配列番号１２７）
ＭＷＮＬＬＨＥＴＤＳＡＶＡＴＡＲＲＰＲＷＬＣＡＧＡＬＶＬＡＧＧＦＦＬＬＧＦＬＦＧＷＦＩＫＳＳＮＥＡＴＮＩＴＰＫＨＮＭＫＡＦＬＤＥＬＫＡＥＮＩＫＫＦＬＹＮＦＴＱＩＰＨＬＡＧＴＥＱＮＦＱＬＡＫＱＩＱＳＱＷＫＥＦＧＬＤＳＶＥＬＡＨＹＤＶＬＬＳＹＰＮＫＴＨＰＮＹＩＳＩＩＮＥＤＧＮＥＩＦＮＴＳＬＦＥＰＰＰＰＧＹＥＮＶＬＤＩＶＰＰＦＳＡＦＳＰＱＧＭＰＥＧＤＬＶＹＶＮＹＡＲＴＥＤＦＦＫＬＥＲＤＭＫＩＮＣＳＧＫＩＶＩＡＲＹＧＫＶＦＲＧＮＫＶＫＮＡＱＬＡＧＡＫＧＶＩＬＹＳＤＰＡＤＹＦＡＰＧＶＫＳＹＰＤＧＷＮＬＰＧＧＧＶＱＲＧＮＩＬＮＬＮＧＡＧＤＰＬＴＰＧＹＰＡＮＥＹＡＹＲＨＧＩＡＥＡＶＧＬＰＳＩＰＶＨＰＩＧＹＹＤＡＱＫＬＬＥＫＭＧＧＳＡＰＰＤＳＳＷＲＧＳＬＫＶＰＹＮＶＧＰＧＦＴＧＮＦＳＴＱＫＶＫＭＨＩＨＳＴＮＥＶＴＲＩＹＮＶＩＧＴＬＲＧＡＶＥＰＤＲＹＶＩＬＧＧＨＲＤＳＷＶＦＧＧＩＤＰＱＳＧＡＡＶＶＨＥＩＶＲＳＦＧＴＬＫＫＥＧＷＲＰＲＲＴＩＬＦＡＳＷＤＡＥＥＦＧＬＬＧＳＴＥＷＡＥＥＮＳＲＬＬＱＥＲＧＶＡＹＩＮＡＤＳＳＩＥＧＮＹＴＬＲＶＤＣＴＰＬＭＹＳＬＶＹＮＬＴＫＥＬＫＳＰＤＥＧＦＥＧＫＳＬＹＥＳＷＴＫＫＳＰＳＰＥＦＳＧＭＰＲＩＳＫＬＧＳＧＮＤＦＥＶＦＦＱＲＬＧＩＡＳＧＲＡＲＹＴＫＮＷＥＴＮＫＦＳＧＹＰＬＹＨＳＶＹＥＴＹＥＬＶＥＫＦＹＤＰＭＦＫＹＨＬＴＶＡＱＶＲＧＧＭＶＦＥＬＡＮＳＩＶＬＰＦＤＣＲＤＹＡＶＶＬＲＫＹＡＤＫＩＹＮＩＳＭＫＨＰＱＥＭＫＴＹＳＶＳＦＤＳＬＦＳＡＶＫＮＦＴＥＩＡＳＫＦＴＥＲＬＱＤＦＤＫＳＮＰＩＬＬＲＭＭＮＤＱＬＭＦＬＥＲＡＦＩＤＰＬＧＬＰＤＲＰＦＹＲＨＶＩＹＡＰＳＳＨＮＫＹＡＧＥＳＦＰＧＩＹＤＡＬＦＤＩＥＳＫＶＤＰＳＫＡＷＧＤＶＫＲＱＩＳＶＡＡＦＴＶＱＡＡＡＥＴＬＳＥＶＡ
Figure 0007361727000008
抗ＰＳＭＡ ｍＡｂの調製。全ての３つのＰＳＭＡ発現細胞への結合を示した合計１２個のクローンを、最終的には、制限クローニングによってＦｃ置換のＳ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ，及びＬ２３５Ａ（ＰＡＡ）アイソタイプを有するｍＡｂ ＩｇＧ４に変換した。簡潔に述べると、初期スクリーニングを通過したＦａｂクローンに対応する構築物をＨｉｎｄＩＩＩ及びＡｐａＩで消化した。ゲル精製フラグメントを、ヒトＩｇＧ４－ＰＡＡ発現の生成のため、ＣＭＶプロモータを有する自社製発現ベクターにライゲーションした。これにより、二重特異性抗体の迅速な生成が可能になった。前述の自社製発現ベクターを使用して、各ＰＳＭＡ ｍａｂの重鎖及び軽鎖を発現させ、ｍＡｂの発現には、両方のベクターを２９３Ｅｘｐｉ又はＣＨＯ細胞株に一時的に同時導入した。ファージパニングから生成された異種間陽性ＰＳＭＡ ＦａｂのＣＤＲ配列を以下の表５に示す。選択されたＦａｂのＶＨ及びＶＬ配列を以下の表６に示す。Ｆａｂから生成されたｍＡｂの重鎖及び軽鎖配列を表７に示す。
Figure 0007361727000009
配列番号７９のＶＨ及び配列番号７８のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域、並びに、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を有するＩｇＧ４定常領域を含む単一特異性抗ＰＳＭＡ抗体ＰＳＭＢ１１９を作製した。配列番号７７のＶＨ及び配列番号７８のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域、並びに、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を有するＩｇＧ４定常領域を含む単一特異性抗ＰＳＭＡ抗体ＰＳＭＢ１２０を作製した。配列番号７５のＶＨ及び配列番号７６のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域、並びに、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を有するＩｇＧ４定常領域を含む単一特異性抗ＰＳＭＡ抗体ＰＳＭＢ１２１を作製した。配列番号７４のＶＨ及び配列番号６１のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域、並びに、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を有するＩｇＧ４定常領域を含む単一特異性抗ＰＳＭＡ抗体ＰＳＭＢ１２２を作製した。配列番号７２のＶＨ及び配列番号７３のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域、並びに、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を有するＩｇＧ４定常領域を含む単一特異性抗ＰＳＭＡ抗体ＰＳＭＢ１２３を作製した。配列番号７０のＶＨ及び配列番号７１のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域、並びに、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を有するＩｇＧ４定常領域を含む単一特異性抗ＰＳＭＡ抗体ＰＳＭＢ１２４を作製した。配列番号６８のＶＨ及び配列番号６９のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域、並びに、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を有するＩｇＧ４定常領域を含む単一特異性抗ＰＳＭＡ抗体ＰＳＭＢ１２６を作製した。配列番号６６のＶＨ及び配列番号６７のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域、並びに、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を有するＩｇＧ４定常領域を含む単一特異性抗ＰＳＭＡ抗体ＰＳＭＢ１２７を作製した。配列番号６４のＶＨ及び配列番号６５のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域、並びに、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を有するＩｇＧ４定常領域を含む単一特異性抗ＰＳＭＡ抗体ＰＳＭＢ１２８（別のＦａｂ ＩＤ：ＰＳＭＢ８４）を作製した。配列番号６０のＶＨ及び配列番号６１のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域、並びに、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を有するＩｇＧ４定常領域を含む単一特異性抗ＰＳＭＡ抗体ＰＳＭＢ１２９を作製した。配列番号６２のＶＨ及び配列番号６３のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域、並びに、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を有するＩｇＧ４定常領域を含む単一特異性抗ＰＳＭＡ抗体ＰＳＭＢ１３０を作製した。
Figure 0007361727000010
Figure 0007361727000011
Figure 0007361727000012
Figure 0007361727000013
Figure 0007361727000014
Figure 0007361727000015
Figure 0007361727000016
Figure 0007361727000017
Figure 0007361727000018
親ＰＳＭＡｍＡｂであるＰＳＭＢ１２３（Ｆａｂ ＰＳＭＢ５５）、ＰＳＭＢ１２７（Ｆａｂ ＰＳＭＢ８３）、及びＰＳＭＢ１３０（Ｆａｂ ＰＳＭＢ８６）とヒト、ｃｈｉｍｐ、及びｃｙｎｏ ＰＳＭＡ ＥＣＤとの相互作用を、組み換えｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡ ＥＣＤについて前述したように、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システム（ＢｉｏＲａｄ）を使用して表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定した。ヒト、ｃｈｉｍｐ、及びｃｙｎｏ ＰＳＭＡ ＥＣＤに対するこれらの各ｍａｂの結合親和性の要約を表１８に示す。これらのｍＡｂは、二重特異性抗体に類似する親和性で標的に結合する。
Figure 0007361727000019
実施例３：抗ＣＤ３抗体ＳＰ３４のヒトフレームワーク適合
抗ＣＤ３マウス抗体ＳＰ３４を、ヒトフレームワーク適合法（Ｆｒａｎｓｓｏｎ，ｅｔ ａｌ，ＪＭＢ，２０１０ ３９８（２）：２１４－３１）によりヒト化した。ＳＰ３４のＶＨ及びＶＬ配列を以下の図４に示す。同配列は、電子密度マップから直接得られた軽鎖の残基１～２１５及び重鎖の残基１～２３０と、ＩＧＨＧ３＿ＭＯＵＳＥ（マウスＩｇＧ３、アイソフォーム２）から得られた残基２３１～４５５とを含む。
ＳＰ３４のＶＨ（配列番号１２８）
ＥＶＫＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＫＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＤＲＦＴＩＳＲＤＤＳＱＳＩＬＹＬＱＭＮＮＬＫＴＥＤＴＡＭＹＹＣＶＲＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ
ＳＰ３４のＶＬ（配列番号１２９）
ＱＡＶＶＴＱＥＳＡＬＴＴＳＰＧＥＴＶＴＬＴＣＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮＷＶＱＥＫＰＤＨＬＦＴＧＬＩＧＧＴＮＫＲＡＰＧＶＰＡＲＦＳＧＳＬＩＧＤＫＡＡＬＴＩＴＧＡＱＴＥＤＥＡＩＹＦＣＡＬＷＹＳＮＬＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
４種類の重鎖を、３種類の異なる軽鎖と組み合わせて、１２個のヒト化変異体を生成した。
ＳＰ３４のヒト化及び親和性成熟
ヒト生殖細胞系の選択
４つのヒト重可変領域及び３つの軽可変領域配列のマトリクスを、試験のために選択した。ヒト生殖細胞系の選択は、フレームワーク領域（ＦＲ）における、ＳＰ３４に対する全体的な配列類似性のみに基づいた。ＣＤＲ配列も、その長さ又は標準構造も、この選択には考慮しなかった。
重鎖について最も近いマッチは、ヒトＧＬ ＩＧＨＶ３－７２及びＩＧＨＶ３－７３である。ヒトＢ細胞レパートリーにおけるその高い発生頻度のために、別のＧＬであるＩＧＨＶ３－２３を選択した。
軽鎖について最も近いマッチは、ヒトラムダＧＬ ＩＧＬＶ７－４３（ａｋａ ７ａ）、ＩＧＬＶ７－４６（ａｋａ ７ｂ）、及びＩＧＬＶ１－５１（ａｋａ １ｂ）である。ＩＧＬＶ７－４６は、仮想的にＩＧＬＶ７－４３と同一であるが、２位におけるＡｌａの利点を有する、すなわち、ＳＰ３４におけるのと同様である。
選択されたＪ領域は、下記：重鎖に対してＩＧＨＪ１、ラムダ軽鎖に対してＩＧＬＪ３である。
逆突然変異
ＣＤＲ－Ｈ３の立体構造を保持するために、ＶＬ中の複数のフレームワーク位置における残基、とりわけ、Ｖａｌ３８、Ｇｌｙ４８、及びＧｌｙ５１位が保持されるべきである。これらの「逆突然変異」を、ヒト化計画に加えた。
重鎖の位置５７のＡｓｎを、必須のフレキシビリティを実現し（非グリシン関連位置構造歪みを減少させることにより）、安定性を潜在的に改善する一方で、結合性に影響を及ぼさないために、成熟計画において、Ｇｌｙにトランケートした。
ヒト化設計に行われる複数の他の考察が存在した。まず、ヒトＧＬ ＩＧＬＶ７－４６及びＩＧＬＶ７－４３は、望ましくない酸化電位を有する５９位にＴｒｐを導入する。２つの他のＧＬは、この位置にＧｌｙを有する。このＧｌｙは、マウス配列に対応する。したがって、Ｇｌｙ５９を、ＩＧＬＶ７－４６及びＩＧＬＶ７－４３の両方の変異体において保持した。最後に、ＶＨの４９位におけるＡｌａは必須であり得る。また、９９位における残基（ＳＰ３４ではＶａｌ）は、抗原結合性に影響を及ぼし得る。これらの位置を試験するために、逆突然変異を、一部の変異体に導入した（図５）。
ＨＦＡマトリクス
ＨＦＡマトリクス（表８）は、ＶＨの４つの変異体と、ＶＬの３つの変異体とから構成される（図５）。ＨＦＡの目的において、ＡｂＭ ＣＤＲの定義（Ｋ．Ｒ．Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ａ．Ｃ．Ｍａｒｔｉｎ，２００８．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４５，３８３２－３８３９）が使用される。
ＶＨについての変異体：
ＣＤ３Ｈ１４１（配列番号１０４）：マウスＣＤＲ＋Ｇｌｙ４９Ａｌａを有するＩＧＨＶ３－７２＊０１
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＣＤ３Ｈ１４２（配列番号１０２）：マウスＣＤＲ＋Ｓｅｒ４９Ａｌａを有するＩＧＨＶ３－２３＊０１
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＣＤ３Ｈ１４３（配列番号１１５）：マウスＣＤＲ＋Ｓｅｒ４９Ａｌａ、Ａｌａ９９Ｖａｌを有するＩＧＨＶ３－２３＊０１
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＫＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＣＤ３Ｈ１４４（配列番号１１６）：マウスＣＤＲ＋Ａｓｎ５７Ｇｌｙを有するＩＧＨＶ３－７３＊０１
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＲＳＫＹＮＧＹＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＶＬについての変異体：
ＣＤ３Ｌ６３（配列番号１０３）：マウスＣＤＲ＋Ｆ３８Ｖ、Ａ４８Ｇ、Ｙ５１Ｇ、Ｗ５９Ｇを有するＩＧＬＶ７－４６＊０１
ＱＡＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＮＫＲＡＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＡＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＡＬＷＹＳＮＬＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
ＣＤ３Ｌ６４（配列番号１１７）：マウスＣＤＲ＋Ｙ３８Ｖ、Ｌ４８Ｇ、Ｙ５１Ｇを有するＩＧＬＶ１－５１＊０１
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮＷＶＱＱＬＰＧＴＡＰＫＧＬＩＧＧＴＮＫＲＡＰＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＡＬＷＹＳＮＬＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
ＣＤ３Ｌ６６（配列番号１０５）：マウスＣＤＲ＋Ｆ３８Ｖ、Ａ４８Ｇ、Ｙ５１Ｇ、Ｗ５９Ｇを有するＩＧＬＶ７－４３＊０１
ＱＴＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＮＫＲＡＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＶＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＡＬＷＹＳＮＬＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
Figure 0007361727000020
アミノ酸配列を、ＤＮＡに逆翻訳させ、遺伝子合成手法（米国特許第６，６７０，１２７号、米国特許第６，５２１，４２７号）を使用して、ｃＤＮＡを調製した。ＣＭＶプロモータを有する我々が作製した発現ベクターを使用し、標準的な分子生物学的手法を使用して、重鎖（ＨＣ）可変領域を、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌ変異を含有するヒトＩｇＧ１－ＡＡ Ｆｃ上にサブクローニングした。ＣＭＶプロモータを含む自社製発現ベクターを使用し、標準的な分子生物学的手法を使用して、軽鎖（ＬＣ）可変領域を、ヒトラムダ（λ）定常領域上にサブクローニングした。得られたプラスミドを、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）内にトランスフェクションし、ｍＡｂを発現させた。プロテインＡカラム（ｈｉＴｒａｐ ＭＡｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅカラム）を使用する標準的な方法により精製した。溶出後、プールを、Ｄ－ＰＢＳ、ｐＨ７．２の中に透析した。抗体のＶＨ及びＶＬ配列を、表９に示す。
Figure 0007361727000021
Figure 0007361727000022
実施例４：初代Ｔ細胞に対するヒト化抗ＣＤ３ヒットの内因性細胞結合
抗ＣＤ３抗体の得られたパネルを、初代ヒトＴ細胞上の細胞表面ＣＤ３εに対する結合性について試験した。この試験を行うために、ポリクローナル抗ヒト二次抗体を使用して、発現上清からの抗体の結合を可視化し、フローサイトメトリーにより分析した。簡潔に、細胞表面ＣＤ３εに対する抗ＣＤ３抗体の結合性を、陰性選択により精製された初代ヒトＴリンパ球（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ，Ｃｏｌｍａｒ，ＵＳＡ）を使用するフローサイトメトリーにより評価した。発現上清又は精製抗体をそれぞれ培地又はＦＡＣＳ緩衝液（ＢＤ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）中において１０μｇ／ｍＬに正規化した。２×１０５個の細胞を、９６ウェル丸底プレート（ＣｏＳｔａｒ）のウェルに、標識化のためにアリコートした。発現上清中の抗体を細胞に添加し、４℃で４５分間インキュベートした。１３００ｒｐｍで３分間の遠心分離及び上清の除去後、５０μＬの抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７二次抗体（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．）を、終濃度１０μｇ／ｍＬで、４℃において、直接光を避けて、細胞と共に３０分間インキュベートした。続けて、洗浄し、３０μＬのＦＡＣｓ緩衝液（ＢＤ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）中に再懸濁させた。サンプル収集を、ＦｏｒｅＣｙｔソフトウェアを使用するＩｎｔｅｌｌｉｃｙｔ ＨＴＦＣシステムにおいて行った。結合分析の前に、緑色又は赤色のｆｉｘａｂｌｅ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ染料（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．）と、前方／側方散乱面積及び高さパラメータをそれぞれ使用して、生きた単一の細胞をゲーティングした。平均蛍光強度値を使用して、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖｅｒｓｉｏｎ ５においてグラフ化した。
滴定系列を実施したが、中間濃度を、明確性のために、図６に表わす。治療抗体として、同一のＦｃ領域を有する２つの自社製ファージ由来抗体；Ｇ１１（ＨＣ配列番号１１８、ＬＣ配列番号１１９）（非ｃｙｎｏ交差反応性、アゴニスト抗体を、陽性対照として使用した）、及びＣＤ３Ｂ９４（ＨＣ配列番号１２０、ＬＣ配列番号１２１）（非バインダー／非アゴニスト抗体を、非特異的結合を評価するのに使用した）を、対照として使用した。市販のＳＰ３４抗体を、このアッセイでは比較対象として使用しなかった。ＳＰ３４抗体は、マウス抗体であり、異なる二次検出試薬の使用は、試験された変異体との直接的な比較を妨げるであろうためである。
データから、ヒト化抗ＣＤ３ヒットのパネル内での結合可能性のアレイが証明される。ここで、２つの抗体（ＣＤ３Ｂ１４４、ＣＤ３Ｂ１５２）は、ヒトＴ細胞に対する結合性の完全な損失を示す。残りの抗体は、任意の閾値としてＧ１１結合を使用して強いバインダーと弱いバインダーとに広く分割され得る結合可能性の範囲を示した。これらのパラメータを使用して、７つの強いバインダーと、７つの弱いバインダーとを、変異体のパネルから特定した（図６）。
次いで、初代カニクイザルＣＤ４＋Ｔ細胞に対する抗ＣＤ３ヒットの結合分析を、交叉反応性の保持を評価するために試験した。カニクイザルの末梢血から精製されたＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｚｅｎ Ｂｉｏ，Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ，ＵＳＡを使用した）。アッセイプロトコルは、上記されたものと同様とした。Ｇ１１は、カニクイザルＣＤ３εと交叉反応しないため、マウスフレームワーク及びヒトＩｇＧ１ Ｆｃを有するＳＰ３４のＶＨ及びＶＬを有する自社製キメラＳＰ３４由来抗体であるＣＤ３Ｂ１２４を、このアッセイにおける陽性対照として使用した（図７）。興味深いことに、複数の変異体が、ヒト細胞について見られた結合可能性と比較して、低下した結合可能性を示した。これには、強いバインダーであるＣＤ３Ｂ１５０、ＣＤ３Ｂ１５１、及びＣＤ３Ｂ１５４が含まれ、結合性が低下した。複数の弱いバインダーは、もはや、バックグラウンドを上回って結合を検出することができなかった。結合性のこの損失は、特定の免疫グロブリン鎖に関係しなかった。このことは、重鎖と軽鎖との組み合わせが、交差反応性の損失において役割を果たすことを示唆している。まとめると、これらのアッセイにより、ヒトＣＤ３εとカニクイザルのＣＤ３εとの間での種間交差反応性を保持した変異体の特定が可能となった。
実施例５：初代Ｔ細胞におけるヒト化抗ＣＤ３ヒットの機能性分析
結合性分析により、ヒト化抗ＣＤ３ヒットのパネルが、ヒト及びカニクイザルＴ細胞に対する結合可能性の範囲を示したことが証明された。ＣＤ３ε架橋を介して活性化を誘引する各変異体の能力を調査するために、初代Ｔ細胞を、ビーズコンジュゲート抗体の存在下において、一晩培養した。翌日、細胞を回収し、抗ＣＤ６９抗体で標識し、活性化を測定した（図８）。ヒト化抗ＣＤ３抗体を、プロテインＡコート磁性ビーズ（ＳｐｈｅｒｏＴｅｃｈ，Ｌａｋｅ ｆｏｒｅｓｔ，ＵＳＡ）に、１０μｇ／ｍＬでの抗体と一晩インキュベートすることにより結合させた。翌日、２×１０５個の初代ヒトＴ細胞を、丸底細胞培養プレートに３連で播種し、２×１０５個のコートビーズを加えた。３７℃で一晩培養した後、細胞を収集し、抗ＣＤ６９ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８抗体（クローンＦＮ５０、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で標識して、この活性化マーカーのアップレギュレーションを評価した。サンプルの収集及び分析を、結合性について上記されたように行った。複数の陰性コントロールをランした。同コントロールには、Ｔ細胞単独、Ｔ細胞と非コートビーズ、及びＴ細胞とアイソタイプコントロール（ＣＤ３Ｂ９４）コートビーズが挙げられる。これらは全て、非染色Ｔ細胞と比較して、同様の平均蛍光強度値を示した。このことは、バックグラウンドがこのアッセイにおいて低かったことを示している。複数の陽性コントロールを、比較のためにランした。同コントロールには、ＯＫＴ３（米国特許第５９２９２１２号）及び市販のＳＰ３４－２抗体が挙げられる。
それから、ヒト化抗ＣＤ３ヒットを、同一のアッセイにおいて、初代カニクイザルＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｚｅｎ Ｂｉｏ，Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ，ＵＳＡ）を活性化するその能力について試験した（図９）。ＦＮ５０抗ＣＤ６９抗体は、非ヒトタンパク質と交差反応性であると説明されてきたため、これらの細胞の活性化を試験するために使用することができた。
ヒト及びカニクイザルでの活性化データは、ヒットのパネルが活性化の可能性の範囲を示した結合データと関連した。数多くの強いバインダーが、市販のＳＰ３４－２と比較して同等又は上回る程度に、ヒトＴ細胞を活性化する能力を示した。複数の変異体は、ＳＰ３４－２と比較して低い活性化可能性を示した。一方、一部のバインダーは、ＣＤ６９刺激の証拠を示さなかった。活性化能がないのは、結合性がないか又は弱い結合性を示した変異体においてのみ見られ、強いバインダーは全て、あるレベルの活性化を示した。このことは、ヒト（図１０Ａ）及びカニクイザル（図１０Ｂ）の両方についての、結合性と活性化との間の相関性を示唆している。
それぞれ高親和性及び中親和性を有する２つの抗ＣＤ３抗体、ＣＤ３Ｂ１４６及びＣＤ３Ｂ１４７を選択し、ＰＳＭＡ特異性抗体との二重特異性抗体を調製した。これら２つの抗ＣＤ３抗体は、ＩｇＧ４ ＰＡＡ ＧｅｎＭａｂ形式（Ｌａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ，２０１３）で調製され、標的親（ＰＳＭＡ）は、４０９Ｒ ＧｅｎＭａｂ変異（ＩｇＧ４の天然型アミノ酸）を含有し、一方、殺傷性親（ＣＤ３）はＦ４０５Ｌ ＧｅｎＭａｂ変異及びＲ４０９Ｋを含有する。単一特異性ＣＤ３抗体を、Ｆｃ領域内にＦｃ置換Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ及びＲ４０９Ｋ（ＣＤ３アーム）（付番はＥＵインデックスに従う）を有するＩｇＧ４として発現させた。ＣＭＶプロモータを有する自社製発現ベクターを使用し、標準的な分子生物学的手法を使用して、重鎖（ＨＣ）可変領域を、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ及びＲ４０９Ｋ変異を含有するヒトＩｇＧ４－ＰＡＡ Ｆｃ上にサブクローニングした。ＣＭＶプロモータを含む自社製発現ベクターを使用し、標準的な分子生物学的手法を使用して、軽鎖（ＬＣ）可変領域を、ヒトラムダ（λ）定常領域上にサブクローニングした。得られたプラスミドを、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）内にトランスフェクションし、ｍＡｂを発現させた。標準的な精製方法、つまり、１００ｍＭ ＮａＡｃ ｐＨ３．５の溶出緩衝液、並びに２Ｍ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）及び１５０ｍＭ ＮａＣｌの中和緩衝液を用いるプロテインＡカラムを使用して、抗ＣＤ３抗体を精製した。ＰＤ１０（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５Ｍ）カラムを用いてｍａｂを脱塩し、そのプールをＤ－ＰＢＳ、ｐＨ７．２中で透析した。
配列番号１０２のＶＨ及び配列番号１０３のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、及びＲ４０９Ｋ置換を有するＩｇＧ４定常領域とを含む単一特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ２１７を生成した。ＣＤ３Ｂ２１７は、配列番号１０８の重鎖及び配列番号１０９の軽鎖を含む。配列番号１０４のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、及びＲ４０９Ｋ置換を有するＩｇＧ４定常領域とを含む単一特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ２１９を生成した。ＣＤ３Ｂ２１９は、配列番号１１０の重鎖及び配列番号１１１の軽鎖を含む。
実施例６．ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の調製
ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の形成には、２つの親ｍＡｂが必要であり、１つは標的化アーム（例えば、ＰＳＭＡ）に特異的であり、１つはエフェクターアーム（例えばＣＤ３）に特異的である。ＰＳＭＡ ｍＡｂを、中親和性ＣＤ３Ｂ２１７（ＶＨ配列番号１０２、ＶＬ配列番号１０３）及び高親和性ＣＤ３Ｂ２１９（ＶＨ配列番号１０４、ＶＬ配列番号１０５）のＣＤ３アームで組み換えた。これらの親ｍＡｂは、ＧｅｎＭａｂ形式（Ｌａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ，２０１３）であり、標的親（ＰＳＭＡ）は、４０９Ｒ ＧｅｎＭａｂ変異（ＩｇＧ４の天然型アミノ酸）を含有し、一方、殺傷性親（ＣＤ３）はＦ４０５Ｌ ＧｅｎＭａｂ変異及びＲ４０９Ｋ変異を含有する。単一特異性ＣＤ３抗体を、Ｆｃ領域内にＦｃ置換Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ及びＲ４０９Ｋ（ＣＤ３アーム）（付番はＥＵインデックスに従う）を有するＩｇＧ４として発現させた。単一特異性抗体を、ＣＭＶプロモータ下において、ＨＥＫ細胞株中で発現させた。
１００ｍＭ ＮａＡｃ ｐＨ３．５の溶出緩衝液、並びに２Ｍ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）及び１５０ｍＭ ＮａＣｌの中和緩衝液を用いるプロテインＡカラムを使用して、親ＰＳＭＡ及びＣＤ３抗体を精製した。ＰＤ１０（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５Ｍ）カラムを用いてｍａｂを脱塩し、Ｄ－ＰＢＳ、ｐＨ７．２緩衝液中で透析した。
精製後、親ＰＳＭＡ抗体を、７５ｍＭシステアミン－ＨＣｌ中の還元条件下で所望の親ＣＤ３抗体と混合し、３１℃で４時間インキュベートした。組み換え反応はモル比ベースで行われ、一定のＰＳＭＡ量（例えば、１０ｍｇ又は～６７．８ナノモル）をＣＤ３抗体（例えば、～７１．８ナノモル）と組み合わせ、このときＣＤ３抗体はＰＳＭＡ抗体に対して６％過剰で添加した。ＰＳＭＡ抗体ストックの濃度を０．８～６ｍｇ／ｍＬで変化させ、組み換え反応液の量は、各対について変化させた。続いて、組み換え体をＰＢＳに対して透析して還元剤を除去した。過剰なＣＤ３抗体（比）を用いて二重特異性抗体反応を行って、組み換え後に残存する未反応のＰＳＭＡ親抗体の量を最小化した。親ｍＡｂの部分的還元に続いて、ＰＢＳ中に一晩透析することによって還元剤を除去した。
産生された最終二重特異性抗体を、組み換え反応で使用した親ｍＡｂ（すなわち、ＰＳＭＡ、ＣＤ３、又は無し）と共に、表１０に列挙し、配列を表１１及び１２に列挙する。
また、選択されたＰＳＭＡヒットを非殺傷アーム（無し）とも対にして、試験目的のために陰性対照を作成した。対照二重特異性抗体であるＢ２Ｍ１では、ＩｇＧ４ ＰＡＡ形式（ＶＨ配列番号１０６、ＶＬ配列番号１０７）のＲＳＶ抗体を生成し、精製し、ＣＤ３アームのＣＤ３Ｂ２１９－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９Ｋと組み合わせて、ＣＤ３Ｂ２８８（ＣＤ３×無し）を生成した、又は、ＰＳＭＡアームのＰＳＭＢ１６２、ＰＳＭＢ１２６、ＰＳＭＢ１３０と組み合わせて、それぞれＰＳ３Ｂ３７、ＰＳ３Ｂ３９及びＰＳ３Ｂ４０（ＰＳＭＡ×無し）を生成した。
Figure 0007361727000023
Figure 0007361727000024
配列番号１０２のＶＨ及び配列番号１０３のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、及びＲ４０９Ｋ置換を有するＩｇＧ４定常領域とを含む単一特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ２１７を生成した。ＣＤ３Ｂ２１７は、配列番号１０８の重鎖及び配列番号１０９の軽鎖を含む。配列番号１０４のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、及びＲ４０９Ｋ置換を有するＩｇＧ４定常領域とを含む単一特異性抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ２１９を生成した。ＣＤ３Ｂ２１９は、配列番号１１０の重鎖及び配列番号１１１の軽鎖を含む。対照として、二重特異性抗体のＣＤ３又はＰＳＭＡアームのいずれか一方を有するｎｕｌｌアームとしてのパートナーに対する、配列番号１０６のＶＨ及び配列番号１０７のＶＬを有するＶＨ及びＶＬ領域と、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ又はＦ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｒ４０９Ｋ、Ｆ４０５Ｌを有するＩｇＧ４定常領域とを含む、Ｂ２１Ｍから得られた単一特異性抗ＲＳＶ抗体を生成した。
二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ２は、ｍＡｂ ＣＤ３Ｂ２１７－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１２０のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ３は、ｍＡｂ ＣＤ３Ｂ２１７－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１２１－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ４は、ｍＡｂ ＣＤ３Ｂ２１７－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１２２－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ５は、ｍＡｂ ＣＤ３Ｂ２１７－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１２３－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ７は、ｍＡｂ ＣＤ３Ｂ２１７－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ５８－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ８は、ｍＡｂ ＣＤ３Ｂ２１７－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１２６－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ９は、ｍＡｂ ＣＤ３Ｂ２１７－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１２７－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ１０は、ｍＡｂ ＣＤ３Ｂ２１７－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１２８－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ１１は、ＣＤ３Ｂ２１７－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１２９－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ１２は、ＣＤ３Ｂ２１７－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１３０－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。
二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ１９は、ｍＡｂ ＣＤ３Ｂ２１９－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１１９－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ２０は、ｍＡｂ ＣＤ３Ｂ２１９－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１２０－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ２１は、ｍＡｂ ＣＤ３Ｂ２１９－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１２１－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ２２は、ｍＡｂ ＣＤ３Ｂ２１９－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１２２－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ２３は、ｍＡｂ ＣＤ３Ｂ２１９－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１２３－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ２４は、ｍＡｂ ＣＤ３Ｂ２１９－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１２４－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ２５は、ｍＡｂ ＣＤ３Ｂ２１９－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１６５－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ２６は、ｍＡｂ ＣＤ３Ｂ２１９－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１２６－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ２７は、ＣＤ３Ｂ２１９－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１２７－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ２８は、ＣＤ３Ｂ２１９－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１２８－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ２９は、ＣＤ３Ｂ２１９－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１２９－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ３０は、ＣＤ３Ｂ２１９－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９ＫのＣＤ３結合アームと、ｍＡｂ ＰＳＭＢ１３０－Ｒ４０９のＰＳＭＡ結合アームとを含む。
Figure 0007361727000025
Figure 0007361727000026
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実施例７．細胞結合による特性評価
ＰＳＭＡ陽性細胞株ＬＮＣＡＰ、ヒトＰＳＭＡ－ＨＥＫ、チンパンジー－ＰＳＭＡ－ＨＥＫ及びカニクイザルＰＳＭＡ－ＨＥＫへの結合について、ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体を試験した。ＰＳＭＡ二重特異性抗体の結合能力を評価するために、細胞結合アッセイを利用した（前述）。簡潔に述べると、ＰＳＭＡ発現腫瘍細胞は、既知の濃度で二重特異性抗体によって結合され、結合抗体は、抗ヒトκ軽鎖ＰＥコンジュゲート検出試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって検出される。平均蛍光強度（ＭＦＩ）は、結合した二重特異性抗体の測定値である。ＭＦＩは、相対ＥＣ５０に変換される。ＥＣ５０は、一般に使用される用量反応曲線であり、最大有効濃度の半分、つまりＥＣ５０の点は、曲線の屈曲点として定義される。ＥＣ５０は、細胞に結合した二重特異性と既知の濃度を測定することによって決定した。高濃度により、最大標的抗原結合、すなわち完全結合飽和をもたらした。次いで、用量応答曲線をバックグラウンド、すなわち二重特異性結合が見られないところまで希釈した。この曲線の屈曲点はＥＣ５０の点を反映する。算出されるＥＣ５０は、ＥＣ５０の点での二重特異性抗体のμｇ／ｍＬ量を取り、二重特異性抗体のＭＷに基づいてモル値に変換することによって決定される。二重特異性抗体をタンパク質濃度について補正した後、ヒト又はｃｙｎｏ ＰＳＭＡのいずれかを発現する同じ数の細胞と共にインキュベートした。各濃度のＭＦＩをフローサイトメトリーによって収集し、濃度に対してプロットした。データをｌｏｇ１０によって変換し、次いでプロットした。結合曲線の非線形回帰を行い、ＥＣ５０を決定した。これらの相対値を、標的細胞へのＰＳＭＡ結合をランク付けするために使用した。表１２は、ＬＮＣａＰ、ｃｙｎｏ及びｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡ発現細胞株を使用した全細胞結合試験に対する相対ＥＣ５０結合値を含む。
図１１は、調製された全ての二重特異性抗体のＬＮＣＡＰ結合を示す。結合データは、１）強い結合、２）中間の結合、及び３）弱い結合／結合せず、の結合について３つの集団が観察されることを示唆する。ＰＳＭＡ×無しアーム二重特異性抗体は、ＬＮＣＡＰ細胞への結合を維持する（図１１Ｅ）が、無し×ＣＤ３アーム二重特異性抗体では結合が観察されない（図１１Ｆ）。同じＰＳＭＡアームを有する中親和性及び高親和性ＣＤ３アーム二重特異性抗体は、同様に結合する。残りのアッセイでは、ＬＮＣａＰ結合が陽性であった二重特異性抗体のみを使用して、Ｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡ－ＨＥＫ（図１２）、Ｃｙｎｏ ＰＳＭＡ－ＨＥＫ（図１３）、ヒト－ＰＳＭＡ－ＨＥＫ（図１４）、又は親ＨＥＫ２９３（データは示されていない）に対する結合活性を評価した。各細胞株について、高親和性又は中親和性ＣＤ３結合抗体のいずれかを試験した。ｈＰＳＭＡ－ＨＥＫ結合データは、ＬＮＣａＰとこの細胞株との間に微妙な差が存在し得ることを示唆するが、結合の全体的な順序が同じであることは明らかである。ＬＮＣａＰパニングに由来するＰＳ３Ｂ１９は、ｈＰＳＭＡ－ＨＥＫ細胞に強く結合するように見える。二重特異性抗体は、Ｃｈｉｍｐ－ＰＳＭＡ ＨＥＫにおける広範な結合プロファイルを示す。興味深いことに、Ｃｈｉｍｐ－ＰＳＭＡ ＨＥＫ細胞株でパニングされたヒットは、より強い結合プロファイルを有する一方、ＬＮＣａＰでパニングされたヒットは、より弱い結合を示す。この実験では、親ＨＥＫ細胞への結合は観察されなかった（データは示さず）。
二重特異性抗体への組み換え後、いくつかのクローンは、一貫して他のクローンより性能が優れており、異種間に結合する。これらの二重特異性抗体は、ｍＡｂであるＰＳＭＢ１２１、ＰＳＭＢ１２２、ＰＳＭＢ１２６、ＰＳＭＢ１２７、ＰＳＭＢ１２８、及びＰＳＭＢ１３０に対応する、ＰＳ３Ｂ２１、ＰＳ３Ｂ２２、ＰＳ３Ｂ２６、ＰＳ３Ｂ２７、ＰＳ３Ｂ２８、及びＰＳ３Ｂ３０である。細胞系結合ＥＣ５０及び算出されたＥＣ５０を表１３に示す。
Figure 0007361727000048
全ての二重特異性抗体は、ＰＳＭＡ陽性細胞株に結合する能力を維持した。抗体のいくつかは、ｃｈｉｍｐ及びｃｙｎｏ ＰＳＭＡ発現細胞に十分に結合したが、ＬＮＣａＰ細胞には弱く結合したのみであった。ＬＮＣＡＰ結合ＥＣ５０は、０．５ｎＭ～８６４ｎＭの範囲であり、一方、Ｃｙｎｏ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ結合ＥＣ５０は、０．９～１２８ｎＭの範囲であり、Ｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡ ＨＥＫ結合は３６～０．３ｎＭの範囲であった（表１２）。細胞結合ＥＣ５０に基づいて、抗ＰＳＭＡ二重特異性抗体のいくつかは、ヒトＰＳＭＡに対する２０ｎＭ以上のタイトな結合、及びｃｙｎｏ ＰＳＭＡに対する５０ｎＭ以上のタイトな結合の基準を満たした。
実施例８．Ｐｒｏｔｅｏｎ及びＢｉａｃｏｒｅによる親和性特性
抗体を更に評価するために、ｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡ ＥＣＤの会合及び解離速度を、細胞結合アッセイから進めたヒットについて測定した。ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性ｍＡｂの標的（組み換えＣｈｉｍｐ、ＰＳＭＡ）との相互作用を、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システム（ＢｉｏＲａｄ）を使用する、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって試験した。アミンカップリング化学反応についての製造元の使用説明書を使用し、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ｃａｔ＃１０９－００５－０９８）を、ＧＬＣチップ（ＢｉｏＲａｄ、ｃａｔ＃１７６－５０１１）の加工アルギン酸ポリマー層にカップリングさせて、バイオセンサ表面を調製した。約４４００ＲＵ（反応単位）の抗－ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体を固定化した。動力学実験を、ランニング緩衝液（ＤＰＢＳ＋０．０３％Ｐ２０＋１００μｇ／ｍＬ ＢＳＡ）中、２５℃で実施した。動力学実験を実施するにあたり、３．７ｎＭ～３００ｎＭ（３倍段階希釈）の範囲の濃度の分析種（組み換えＣｈｉｍｐ ＰＳＭＡ ＥＣＤ）の注入後１００ＲＵの二重特異性抗体を捕捉した。５０μＬ／分で３分間会合段階をモニタリングした後、１５分間緩衝液を流した（解離段階）。１００μＬ／分で１００ｍＭリン酸（Ｈ３ＰＯ４、Ｓｉｇｍａ、ｃａｔ＃７９６１）を１８秒間ずつ２回流してチップ表面を再生した。
回収したデータをＰｒｏｔｅＯｎ Ｍａｎａｇｅｒソフトウェアを用いて処理した。まず、インタースポットを用いてバックグラウンドについてデータを補正した。次いで、分析物注入用の緩衝液注入を使用して、データのダブルリファレンスサブトラクション（double reference subtraction）を行った。ラングミュア型の１：１結合モデルを用い、データの速度論的分析を実施した。各二重特異性抗体の結果を、ｋａ（結合速度（On-rate））、ｋｄ（解離速度（Off-rate））、及びＫＤ（平衡解離定数）の形式で報告した。結果を表１４～１８に示す。
結果：
Figure 0007361727000049
 ｎ＝３ ２回繰り返した３回の独立した実験。結果を平均±標準偏差として列挙した。
Figure 0007361727000050
 ｎ＝３ ２回繰り返した３回の独立した実験。結果を平均±標準偏差として列挙した。
Figure 0007361727000051
 ｎ＝３ ２回繰り返した３回の独立した実験。結果を平均±標準偏差として列挙した。
Figure 0007361727000052
Figure 0007361727000053
ほとんどの部分では、Ｐｒｏｔｅｏｎでの結合は、細胞結合と同様である。しかしながら、二重特異性抗体のうちの１つは、組み換えｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡ ＥＣＤへの結合を示さなかったが、ＨＥＫ細胞の細胞表面上に発現されたｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡに結合していた。この抗体、ＰＳ３Ｂ２６は、細胞にのみ結合し、後続の結合実験から除外した。陽性結合を示した１つ、ＰＳ３Ｂ２３は、二相結合を示し、１：１結合モデルにはあまり適合しなかった。二重特異性抗体のうち１０個は、Ｐｒｏｔｅｏｎによる組み換えＣｈｉｍｐ ＰＳＭＡ ＥＣＤに対する結合が陽性であり、それらの親和性をＢＩＡＣＯＲＥによって更にプロファイリングした。
Ｂｉａｃｏｒｅによる組み換えＣｈｉｍｐ ＰＳＭＡへの結合。表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いる親和力測定を、Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００光バイオセンサ（Ｂｉａｃｏｒｅ－ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて実施した。アミンカップリング化学反応についての製造元の使用説明書を使用し、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ｃａｔ＃１０９－００５－０９８）を、ＣＭ－５チップ（Ｂｉａｃｏｒｅ、ｃａｔ＃ＢＲ－１０００－１２）カルボキシメチル化デキストラン表面にカップリングさせて、バイオセンサ表面を調製した。約１６，０００ＲＵ（反応単位）の抗－ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体を、４つのフローセルそれぞれに固定化した。動力学実験を、ランニング緩衝液（ＤＰＢＳ＋０．０３％Ｐ２０＋１００μｇ／ｍＬ ＢＳＡ）中、２５℃で実施した。抗原の希釈物（組み換えＣｈｉｍｐ ＰＳＭＡ、３倍段階希釈で１．２～３００ｎＭ又は３．７～９００ｎＭの濃度）を、ランニング緩衝液中で調製した。約１００ＲＵのＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性ｍＡｂを、センサチップのフローセル２～４の上に捕捉した。フローセル１は、参照表面として用いた。ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性ｍＡｂの捕捉後、５０μＬ／分にて、抗原（組み換えＣｈｉｍｐ ＰＳＭＡ）の３～５分間注入（会合相）と、１５又は２０分間の緩衝液フロー（解離相）を続けた。５０μＬ／分で１００ｍＭリン酸（Ｈ３ＰＯ４、Ｓｉｇｍａ、ｃａｔ＃７９６１）を１８秒間ずつ２回注入してチップ表面を再生した。
回収したデータを、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（Ｂｉａｃｏｒｅ）を用いて処理した。まず、アナライト注入の参照サブストラクション曲線からバッファ注入を減じることにより、データから参照の２倍を減じた。データの動力学的解析を、グローバルフィットでのＬａｎｇｍｕｉｒ型１：１結合モデルを用いて実施した。各ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性ｍＡｂの結果を、ｋａ（結合速度（On-rate））、ｋｄ（解離速度（Off-rate））、及びＫＤ（平衡解離定数）の形式で報告した。
Figure 0007361727000054
ＰｒｏｔｅｏｎによるＣｈｉｍｐ ＰＳＭＡ ＥＣＤに結合した全ての二重特異性抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅによっても結合していた。結合親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅによって幾分弱くなった。
実施例９．機能性細胞殺傷アッセイにおけるＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性Ａｂの評価
Ｔ細胞媒介性細胞傷害アッセイを、二重特異性抗体活性の機能性スクリーニングとして使用した。ヒトＰＳＭＡ過剰発現ＨＥＫ細胞、並びにヒト前立腺癌細胞株ＬＮＣＡＰを溶解する能力について、二重特異性抗体を試験した。加えて、種間交差反応性を確認するため、ｃｙｎｏ ＰＳＭＡ ＨＥＫ細胞を殺傷する能力について、二重特異性抗体を試験した。
クロム－５１放出アッセイを使用して、個々の二重特異性抗体の細胞毒性を測定した。活性化Ｔ細胞の存在下での細胞溶解の結果、細胞培地中へのクロムの放出量によって細胞毒性を測定する。放出量は、標的細胞のみのクロムの自発的放出と、Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘによる全標的細胞溶解を介した最大放出と比較される。
複数のドナー由来のヒト汎Ｔ細胞（ＣＤ３＋）を、ＯＫＴ３をコーティングしたフラスコ（１μｇ／ｍＬ）及び２０Ｕ／ｍＬのＩＬ－２で一晩予備活性化した。Ｔ細胞を２回洗浄した。標的細胞株を、クロム－５１で１時間標識した。Ｔ細胞及び標的細胞を、５：１比で１８～２４時間培養した後、培養上清を回収し、分析した。全ての点を３回実行し、３回の細胞毒性平均及びＳＥＭで報告した。１０μｇ／ｍＬ～０，００００１μｇ／ｍＬの二重特異性抗体の希釈液を使用した。
図１５は、ｈＰＳＭＡ－ＨＥＫ細胞に対する、全てのＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体のＴ細胞媒介性殺傷を示す。この実験では、中及び高親和性ＣＤ３アーム二重特異性抗体を試験した。細胞殺傷は、高親和性ＣＤ３アーム分子の大部分について明らかであり、二重特異性抗体のうちいくつかは、試験された最低濃度で殺傷を示す。ＰＳ３Ｂ９は、低濃度で有意な細胞殺傷を示した唯一の中親和性二重特異性抗体であった。図１６は、二重特異性抗体のいくつかの対についてのＴ細胞媒介性殺傷を示す。このデータから、高親和性ＣＤ３結合二重特異性抗体がほとんどの細胞を殺傷することが明らかであり、これらを更なる細胞殺傷実験の対象とした。
図１７は、ＬＮＣＡＰ細胞に対して生成された高親和性ＣＤ３アームを有するＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の細胞殺傷データを示す。ＰＳ３Ｂ２５、ＰＳ３Ｂ２７、ＰＳ３Ｂ２８、ＰＳ３Ｂ３０、ＰＳ３Ｂ２３、及びＰＳＢ２２は全て、Ｔ細胞リダイレクト活性を有した。ＰＳ３Ｂ２９は、最も高い濃度でｈＰＳＭＡ ＨＥＫ細胞に対する活性を示したが、ＬＮＣＡＰでは示さなかったことから、ＰＳＭＡへの結合が弱いため、ＰＳＭＡ発現レベルが低い場合には良好に結合できないことを示唆している。対照的に、ＰＳ３Ｂ２５、ＰＳ３Ｂ２７、及びＰＳ３Ｂ２８は、最も高いＬＮＣＡＰ腫瘍細胞溶解を示した。ＰＳＭＢ１２５及びＲＳＶタンパク質に対するアーム無しからなる二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ３８は、Ｔ細胞に結合できないことから予想されるように、細胞溶解活性を有さなかった。
ｃｙｎｏ ＰＳＭＡ Ｔ細胞リダイレクト機能を確認するため、二重特異性抗体を、図１８に示すｃｙｎｏ ＰＳＭＡ－ＨＥＫ細胞溶解について試験した。試験した全ての二重特異性抗体は、最も高い活性を有するＰＳ３Ｂ２７及びＰＳ３Ｂ２８を用いてｃｙｎｏ ＰＳＭＡを発現する細胞を殺傷することができた。これまでの細胞結合試験から、これらの抗ＰＳＭＡアームは、ヒトＰＳＭＡに対してｃｙｎｏで高い親和性を有し、この観察結果は、ｃｙｎｏ ＰＳＭＡ標的細胞殺傷においても反映された。ＰＳ３Ｂ２７及びＰＳ３Ｂ３０を親ＨＥＫ細胞株の殺傷について試験したところ、ＨＥＫ親細胞株を溶解させなかった（データは示さず）。
ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体、ＰＳ３Ｂ２７及びＰＳ３Ｂ３０をそれぞれ生成するＰＳＭＡ抗体ＰＳＭＢ１２７及びＰＳＭＢ１３０を、更なる分析のために選択した。ＰＳ３Ｂ２７及びＰＳ３Ｂ３０は、ヒト及びｃｙｎｏ ＰＳＭＡ標的の両方を殺傷し、高親和性ＣＤ３アームを有した。ＰＳ３Ｂ２７は、ｃｙｎｏが９．９ｎＭであるところ、～１４．６ｎＭと実質的に同じＥＣ５０でヒトＰＳＭＡ発現細胞株に結合した。ＰＳ３Ｂ３０は、ｃｙｎｏ ＰＳＭＡが～３７．８～５７ｎＭであるところ、～８～８．５ｎＭと約５～６倍の親和性差を有するＥＣ５０でヒトＰＳＭＡに結合した。ヒトとｃｙｎｏ結合との間の差は５倍超であり得るが、ＰＳ３Ｂ２７は、ヒト及びｃｙｎｏ標的の両方の機能的殺傷を示した。
ＰＳ３Ｂ２７の組み換えＣｈｉｍｐ ＰＳＭＡ ＥＣＤとの相互作用を繰り返し、組み換えｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡ ＥＣＤについて前述したように、組み換えＣｙｎｏ ＰＳＭＡ ＥＣＤ及びヒトＰＳＭＡ ＥＣＤとの相互作用について、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システム（ＢｉｏＲａｄ）を用いる表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって試験した。ｃｈｉｍｐ、ｃｙｎｏ、及びヒトＰＳＭＡ ＥＣＤへの結合に関する動力学及び親和性の要約を表２０に示す。この二重特異性抗体は、実質的に同じ親和性で全ての標的に結合する。
Figure 0007361727000055
カスパーゼアッセイにおける二重特異性抗体、ＰＳ３Ｂ２７の評価。ＰＳ３Ｂ２７のＴ細胞媒介性殺傷を、第２の細胞毒性アッセイを用いて測定した。カスパーゼ細胞傷害アッセイは、活性カスパーゼ３／７による蛍光基質の開裂による細胞殺傷を間接的に測定する。基質の開裂により、蛍光が細胞核に限定される蛍光ＤＮＡ染色が得られる。同じ座標でウェルを正確に撮像することができる電動式１０×対物レンズを使用して、アッセイの過程を通して各ウェルにおいて蛍光測定値を反復して取得する。標的細胞集団は、定義されたサイズ制限に基づいて、及び／又は二次ラベルの使用によって特定される。
凍結した汎ＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｃｏｌｍａｒ，ＰＡ）から購入）を、健常ドナーから陰性選択によって単離した。ＰＳＭＡを発現する前立腺癌細胞（ＬＮＣａＰ、Ｃ４２）を、１０％ＨＩ ＦＢＳ＋サプリメントを含むＲＰＭＩ １６４０（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから購入）中で培養した。
Ｔ細胞及び標的細胞を、３：１のエフェクター対標的比（Ｅ：Ｔ）で、選択試薬を含まずにフェノールレッドを含まないＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ及びサプリメント（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で組み合わせ、０．６μＬのＮｕｃＶｉｅｗカスパーゼ試薬（Ｅｓｓｅｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を、製造元のガイドラインに従って細胞１ｍＬごとに添加した。総体積０．１ｍＬの細胞を、透明な９６ウェル平底プレート（ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ）の適切なウェルに添加した。ＰＳ３Ｂ２７（ＣＤ３×ＰＳＭＡ）、ＣＤ３Ｂ２８８（ＣＤ３×無し）又はＰＳ３Ｂ４６（ＰＳＭＡ×無し）二重特異性抗体を、上記のように調製したフェノールレッドを含まないＲＰＭＩ中で２×最終濃度で調製し、０．１ｍＬの化合物を各ウェルに添加した。室温で３０分間インキュベートした後、ウェル縁部での細胞凝集を最小化するために、プレートをＺｏｏｍ Ｉｎｃｕｃｙｔｅ装置（Ｅｓｓｅｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に移した。Ｉｎｃｕｃｙｔｅ装置は、３７℃、５％ＣＯ２に設定された加湿インキュベーター内に存在する。
Ｉｎｃｕｃｙｔｅでの処理定義は、製造元のガイドラインに従って試験される各細胞株に対して設計した。カスパーゼ信号がプラトーになった後、最高濃度の試験化合物を含有するウェル中の最大信号から３回以上の連続的減少が観察されるまで、６時間ごとに測定を行った。
アッセイが完了した後、適切な処理定義を用いて各プレートを分析した。未処理蛍光データをＩｎｃｕｃｙｔｅ Ｚｏｏｍソフトウェアからエクスポートし、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．（Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ））にペーストした。カスパーゼ３／７活性は、ＧｒａｐｈＰａｄにおいて各ウェルの曲線下面積（ＡＵＣ）を計算することによって決定した。化合物ｎＭ濃度のＬｏｇ１０に対してＡＵＣ値をプロットした。ナノモル（ｎＭ）単位の各用量曲線のＥＣ５０は、非線形回帰分析（４パラメータフィット、最小二乗推定法）に従って報告した。各アッセイは、最低３回の生物学的複製物を含有し、各細胞株を５人の健康なドナーで試験した。非線形回帰モデルを使用して、非臨床統計によってデータを更に分析した。グラフの例を図１９に示す。算出した結果を表２１に示す。
Figure 0007361727000056
実施例１０．ＰＳＭＡ陽性細胞株におけるＰＳ３Ｂ２７によるＴ細胞活性化
精製した汎ＣＤ３＋Ｔ細胞を、白血球除去した白血球細胞の陰性選択することによって、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ＳｐｅｃｉａｌｔｙＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによる健常ドナーから得られ、使用準備が整うまで－８０℃又は液体窒素中で凍結保存した。ナイーブな非活性化Ｔ細胞を、標的細胞及びＣＤ３×ＰＳＭＡ二重特異性抗体又は無し対照（ＣＤ３×無し又はＰＳＭＡ×無し）と３：１のエフェクター：標的比で組み合わせた。４８時間のインキュベーション後、上清を、サンドイッチ酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によってサイトカイン分泌について分析した。Ｔ細胞活性化マーカーＣＤ２５の発現は、ＣＤ４５、ＣＤ８α、ＣＤ２５についてのＴ細胞の染色、及びｌｉｖｅ／ｄｅａｄ近ＩＲ染色によって、フローサイトメトリーで測定した。ＣＤ８＋／ＣＤ２５＋の集団は、最初に総細胞集団をゲーティングして（ＦＳＣ－Ａ対ＳＳＣ－Ａ）、細胞片及び細胞凝集体を除外することによって決定した。ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ染色を除外することにより、生細胞であると判定された細胞について、細胞ゲートのサブセットを更に狭めた。次に、生細胞をＣＤ４５＋／ＣＤ８＋細胞についてゲーティングした。最後に、ＣＤ８＋／ＣＤ２５＋陽性サブセットを同定した。ＰＳ３Ｂ２７又は対照のＥＣ５０は、ＣＤ８＋／ＣＤ２５＋の割合を二重特異性抗体又は対照のｎＭのＬｏｇ１０に対してプロットし、続いて非線形回帰（４パラメータフィット、最小二乗推定法）によって導き出した（図２０）。全てのデータ分析をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍで行った。
実施例１１．ＰＢＭＣヒト化ＮＳＧマウス中ＨＥＫ２９３－ＰＳＭＡ異種移植片の腫瘍化抑制における抗腫瘍効果
全てのｉｎ ｖｉｖｏ試験は、Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓに従って行い、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｊａｎｓｓｅｎ Ｒ ＆ Ｄ（Ｓｐｒｉｎｇ Ｈｏｕｓｅ，ＰＡ）により承認された。
ＰＳ３Ｂ２７（ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体）の有効性は、雄性ＮＳＧマウス（ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ ＩＬ２ｒｇｔｍｌＷｊｌ／ＳｚＪ又はＮＯＤ ＳＣＩＤ Ｇａｍｍａ、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に播種したヒトドナーの末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を用いたＨＥＫ２９３－ＰＳＭＡヒト異種移植片の腫瘍化抑制（予防モデル）により評価した。腫瘍細胞移植の７日前に、外側尾静脈から、１×１０７個のヒトＰＢＭＣをマウスに静注（ｉｖ）した。続いて、１×１０７個のＨＥＫ２９３－ＰＳＭＡ細胞をマウスの右後脇腹に皮下（ｓｃ）移植した。腫瘍移植日から始め、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）対照、ＰＳ３Ｂ２７、ＣＤ３Ｂ２８８（ＣＤ３×無し）又はＰＳ３Ｂ４６（ＰＳＭＡ×無し）を、０、３、５、７及び１０日目に合計５回、０．４ｍｇ／ｋｇ、ｑ２ｄ～ｑ３ｄでｉｖ投与した。
腫瘍容積を、次式：腫瘍容積（ｍｍ３）＝（ａ×ｂ２／２）（式中、「ａ」はノギス測定により求められた腫瘍の長さを表し、「ｂ」はノギス測定により求められた腫瘍の幅を表す）を用いて算出し、試験中、週２回モニタした。腫瘍増殖抑制率（ＴＧＩ）を、治療群の平均腫瘍容積と対照群（ＰＢＳ）の平均腫瘍容積との間の差と定義し、ＴＧＩ＝［（（ＴＶｃ－ＴＶｔ）／ＴＶｃ）＊１００］（式中、ＴＶｃは、任意の対照群における平均腫瘍容積であり、ＴＶｔは、治療群における平均腫瘍容積である）を用いて算出した。ＮＣＩ基準で定義されるように、≧６０％ＴＧＩは生物学的に有意と考えられている（Ｊｏｈｎｓｏｎ，ｅｔ ａｌ（２００１）Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ８４（１０）１４２４－３１）。最大腫瘍容積が１５００ｍｍ３に達したとき、動物を試験から除外した。
ヒトＰＢＭＣの移植は最終的に、マウスの移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）をもたらす。この場合、移植されたドナーＴ細胞は活性化され、宿主組織に浸潤し、体重減少及び臓器不全をもたらし、必然的に死亡する。ＧｖＨＤの発症及び重症度をモニタするために、体重を１週間に２回記録し、グラム（ｇ）単位で表した。体重変化率を、次式：体重変化＝［（（Ｂｔ－Ｂ０）／Ｂ０）＊１００］（式中、Ｂｔは、試験の任意の日における体重であり、Ｂ０は、治療開始時の体重である）を用いて算出した。当初の体重に対し２０％超の体重減少を維持した動物は瀕死であるとみなされ、試験から除外した。
Ｄｕｎｎｅｔｔ多重比較検定（Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（バージョン６）を使用）を利用した、多重比較１－ｗａｙ ＡＮＯＶＡを用いて、統計的有意性を評価した。ＰＳ３Ｂ２７治療により、ＨＥＫ２９３－ＰＳＭＡ腫瘍形成及び腫瘍増殖が効果的に遅延した（図２１）。小さいが触知可能なＨＥＫ２９３－ＰＳＭＡ腫瘍は、試験１６日目（最後の治療処置から６日後）のＰＢＳ治療群におけるマウスの８例中７例で検出可能であったが、それに対し、ＰＳ３Ｂ２７治療群のマウスは８例中１例のみが腫瘍を有していた。ＣＤ３Ｂ２８８治療群のマウスでは、８例中５例が触知可能な腫瘍を有し、ＰＳ３Ｂ４６群マウスでは、８例中２例が小さな腫瘍を有していた。各群が最低７例の動物を有していた治療終了から２７日後（腫瘍移植後３７日目）に、腫瘍増殖抑制を評価した。ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体（ＰＳ３Ｂ２７）治療群における腫瘍増殖は、ＰＢＳ治療対照と比較して９０％阻害された（ｎ＝８／群、ｐ＜０．００１）。ＰＳＭＡ×無し二重特異性抗体（ＰＳ３Ｂ４６）もまた、ＰＢＳ対照に対して統計的に有意に腫瘍形成及び増殖を阻害した（ＴＧＩ＝４２％、ｎ＝７）（ｐ＜０．０５）が、ＮＣＩ基準［１］に基づくと生物学的に有意な効果であるとは見なされなかった。
本試験においてＰＢＭＣを投与された動物群は結局、進行性ＧｖＨＤで死亡したが、体重減少はわずかであった。図２２に示すように、腫瘍移植後３７日目まで、ＰＢＳに対して、０．４ｍｇ／ｋｇのＰＳ３Ｂ２７で治療した動物間の平均体重に有意な差は見られなかった（ｐ＞０．０５）。したがって、ＰＳ３Ｂ２７媒介性Ｔ細胞リダイレクトは、ＧｖＨＤに関連する体重減少に更に寄与しなかった。
この試験における軽微な体重減少にもかかわらず、散発的なＧｖＨＤ関連死が認められた。ＰＳＭＡ×無し二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ４６群中のマウス１例は、腫瘍移植３０日目に、過剰なＧＶＨＤ関連（＞２０％）体重減少によって安楽死させた。腫瘍移植４２日目までに、ＰＢＳ（ｎ＝１）、及びＰＳＭＡ×無し二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ４６群（ｎ＝２）に更なるＧｖＨＤ関連死が記録されており、試験全体が終了した時点で、１５００ｍｍ３の腫瘍容積エンドポイントに到達したために数例の追加のマウスが試験から除去された。
実施例１２．雄性ＣＤ１ヌードマウスにおける混合ＨＥＫ２９３－ＰＳＭＡ／Ｔ細胞異種移植片の腫瘍化抑制におけるＰＳ３Ｂ２７の有効性
ＰＳ３Ｂ２７の有効性を、ヒトＣＤ３＋汎Ｔ細胞及び腫瘍細胞を雄性ＣＤ１ヌードマウス（ＮＵ－Ｆｏｘｎ１ｎｕ、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ））に混注する、混合異種移植モデルにおいて評価した。
ヒトＰＳＭＡ×ヒトＣＤ３二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ２７、又は対照二重特異性抗体を、示されるように合計５回、２～３日ごと（ｑ２ｄ又はｑ３ｄ）にｉｖ投与した。試験中、マウスを週２回モニタリングした（体重及び腫瘍のノギス測定）。μｇ／動物として示される薬物用量を、２５ｇの体重に基づいてｍｇ／ｋｇに変換した（例：１０μｇ／動物＝０．４ｍｇ／ｋｇ）。ｍｇ／ｋｇとして投与される薬物用量は、体重に基づいて１０ｍＬ／ｋｇで投与した（例：２５ｇのマウス＝０．２５ｍＬ）。
腫瘍容積を、次式：腫瘍容積（ｍｍ３）＝（ａ×ｂ２／２）（式中、「ａ」はノギス測定により求められた腫瘍の長さを表し、「ｂ」はノギス測定により求められた腫瘍の幅を表す）を用いて算出し、試験中、週２回モニタした。腫瘍増殖抑制率（ＴＧＩ）を、治療群の平均腫瘍容積とコントロール群（ＰＢＳ）の平均腫瘍容積との間の差と定義し、ＴＧＩ＝［（（ＴＶｃ－ＴＶｔ）／ＴＶｃ）＊１００］（式中、ＴＶｃは、任意のコントロール群における平均腫瘍容積であり、ＴＶｔは、治療群における平均腫瘍容積である）を用いて算出した。ＮＣＩ基準で定義されるように、≧６０％ＴＧＩは生物学的に有意と考えられている［１］。最大腫瘍容積が１５００ｍｍ３に達したとき、動物を試験から除外した。
ＰＳ３Ｂ２７の忍容性は、対応するマウス抗原に対するＣＤ３アームの交差反応性がないことから、宿主組織におけるＣＤ３結合に関して評価することができなかった。しかしながら、腫瘍細胞を注入したＴ細胞は、ヒトＣＤ３を発現し、ＰＳ３Ｂ２７及びＣＤ３×無し対照に結合することができる。体重変化率を、次式：体重変化＝［（（Ｂｔ Ｂ０）／Ｂ０）＊１００］（式中、Ｂｔは、試験の任意の日における体重であり、Ｂ０は、治療開始時の体重である）を用いて算出した。
Ｄｕｎｎｅｔｔ多重比較検定（Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（バージョン６）を使用）を利用した、多重比較１－ｗａｙ ＡＮＯＶＡを用いて、統計的有意性を評価した。
ＰＳ３Ｂ２７の有効性は、雄性ＣＤ１ヌードマウス（ＥＬＮ ｒｅｆ：ＣＤ３－ＰＳＭＡ－２０１３－００００３）において、ＨＥＫ２９３－ＰＳＭＡ細胞と、活性化して増殖させたＣＤ３陽性汎Ｔ細胞とを１：５のエフェクター対標的比で含有する混合異種移植片の腫瘍形成の予防によって評価した。ＩＬ－２含有培地中のＴ細胞活性化／増殖キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）、カタログ＃１３０－０９１－４４１、１３０－０９７－７４３）を使用して、Ｔ細胞を活性化し、ｉｎ ｖｉｔｒｏで１２日間増殖させた。マウス１例あたり、５０％Ｃｕｌｔｒｅｘ（Ｔｒｅｖｉｇｅｎ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）、カタログ＃３４３３－００５－０１）及び５０％無血清ＲＰＭＩ １６４０培地中の５×１０６個のＨＥＫ２９３－ＰＳＭＡ細胞及び１×１０６個の活性化し増殖したＴ細胞の混合物を、マウスの右後脇腹に皮下移植した。腫瘍移植と同日から始め、ＰＢＳ、０．００５～０．５ｍｇ／ｋｇのＰＳ３Ｂ２７、０．５ｍｇ／ｋｇのＣＤ３Ｂ２８８（ＣＤ３×無し二重特異性抗体）、又は０．５ｍｇ／ｋｇのＰＳ３Ｂ４６（ＰＳＭＡ×無し二重特異性抗体）を、０、２、４、７及び９日目に合計５回、ｑ２ｄ～ｑ３ｄで体重によってｉｖ投与した。（ｎ＝１０／群）。ＰＳ３Ｂ２７による治療もまた、ｉｐ投与で評価した（データは示さず）。ＰＢＳ対照群では、過剰な腫瘍量のために、４６日目及び４９日目にそれぞれ１例の動物を除外した。過剰な腫瘍量のために対照動物の半例を試験から除去した後、腫瘍容積データを６４日目までプロットした。
図２３に示すように、腫瘍形成及び成長は、治療中止後５５日間評価した（６４日目まで）。ＰＳ３Ｂ２７による治療は、全ての用量（０．００５、０．０５、又は０．５ｍｇ／ｋｇ）において、ＰＢＳ対照と比較して腫瘍形成を有意に阻害し、かつ増殖を有意に遅延し、６４日目にそれぞれ７３％、８１％及び８２％のＴＧＩが得られた（それぞれｐ＜０．００１、Ｐ＜０．０００１、Ｐ＜０．００１）。ｉｐ投与によるＰＳ３Ｂ２７の治療は、ｉｖ投与と同様の有効性を示した（データは示さず）。ＣＤ３Ｂ２８８（ＣＤ３×無し二重特異性抗体）又はＰＳ３Ｂ４６（ＰＳＭＡ×無し二重特異性抗体）で治療した動物は、６４日目に、５１％及び３８％のＴＧＩである程度の抗腫瘍活性を示した（それぞれｐ＜０．０５、ｐ＝ｎｓ）が、６０％ＴＧＩのＮＣＩ基準に基づく生物学的に有意な効果であるとは見なされず、有効性を達成するには、二重特異性抗体のＣＤ３及びＰＳＭＡの両方への結合が必要であることを示している。
しかしながら、本試験期間中、体重減少は見られず、０．５及び０．００５ｍｇ／ｋｇのＰＳ３Ｂ２７で治療された動物は、ＰＢＳと比較して有意に体重増加が少なかった（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＜０．０００１、図２４）が、これは、これらの動物における腫瘍量の低さに起因する可能性がある。
実施例１３．二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ２７の抗ＰＳＭＡ Ｆａｂアームに結合したヒトＰＳＭＡ ＥＣＤの結晶構造
ＰＳＭＡは、細胞表面上に発現するホモ二量体タンパク質である。ＰＳＭＡは、ペプチダーゼ活性を有する大きなＥＣＤドメイン（７０５残基）、一回膜貫通ドメイン、及び短い１９残基の細胞内ドメインから構成される、単量体当たり７５０残基のタイプＩＩ内在性糖タンパク質である。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ２７の抗ＰＳＭＡ Ｆａｂアームに結合したヒトＰＳＭＡの細胞外領域（ＥＣＤ）の結晶構造を、ＰＳＭＡと抗体との間の結合部位をより良く理解するために、３．１５Åの分解能で決定した。
ヒトＰＳＭＡの細胞外領域（残基４４～７５０）を、Ｎ末端ｇｐ６７シグナルペプチドと、後続する開裂可能なヘキサヒスチジンタグ（配列番号１５８）と共に、Ｈｉｇｈ Ｆｉｖｅ（商標）昆虫細胞で発現させた。分泌したタンパク質を、最初のＮｉ２＋－ＮＴＡ親和性捕捉、ヒスチジンタグのＴＥＶ媒介性開裂と後続の逆親和性クロマトグラフィー工程、及び最後のサイズ排除クロマトグラフィー工程を含む三段階の手順により、上清から精製した。精製したＰＳＭＡ－ＥＣＤを液体窒素中で瞬間凍結し、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＣａＣｌ２、０．１ｍＭ ＺｎＣｌ２中、－８０℃で保存した。
二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ２７中の親抗ＰＳＭＡ ＦａｂアームであるＰＳＭＢ８３のＦａｂを、ヘキサヒスチジンタグ（配列番号１５８）と共にＨＥＫ２９３ Ｅｘｐｉ細胞中で発現させ、親和性（ＨｉｓＴｒａｐ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）及びサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ－３００、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｙａｒｒａ）を用いて精製した。このＦａｂを、５０ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．４中、４℃で保存した。
三段階手順によって、ヒトＰＳＭＡ ＥＣＤ／ＰＳＭＢ８３ Ｆａｂ複合体を調製した。最初に、Ｆａｂの緩衝液を２０ｍＭ ＭＥＳ ｐＨ６．０、１５０ｍＭ ＮａＣｌに交換した。次に、Ｆａｂ及びＰＳＭＡを混合し（ＰＳＭＡモノマーに対し１．５モル過剰のＦａｂ）、４℃で一晩インキュベートし、２０ｍＭ ＭＥＳ ｐＨ６．０中で透析した。最後に、この複合体を２０ｍＭ ＭＥＳ ｐＨ６．０中のｍｏｎｏＳ ５／５０カラムに結合させ、ＮａＣｌ勾配で溶出した。
２０℃でのシッティングドロップ蒸気拡散法及びＭｏｓｑｕｉｔｏ ＬＣＰロボット（ＴＴＰ Ｌａｂｔｅｃｈ）を用いて、Ｘ線回折に好適な結晶を得た。ヒトＰＳＭＡ ＥＣＤに結合したＰＳＭＢ８３ Ｆａｂの結晶を、マイクロシードと最初は７．３ｍｇ／ｍＬであるＰＳＭＡ／Ｆａｂ複合体を含む１８％ ＰＥＧ ３ｋＤａ、０．２Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４、０．１Ｍ Ｔｒｉｓ ｐＨ８．５から成長させた。遊離ＰＳＭＢ８３ Ｆａｂの結晶は、最初は８．８ｍｇ／ｍＬであるＦａｂを含む２５％ ＰＥＧ ３ｋＤａ、０．２Ｍ ＬｉＣｌ、０．１Ｍ酢酸塩 ｐＨ４．５から得た。
構造は、Ｐｈａｓｅｒ（Ｐｈａｓｅｒ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ）を用いる分子置換（ＭＲ）によって解析した。ＰＳＭＢ８３ Ｆａｂ構造のＭＲ検索モデルは、ＰＤＢコード４Ｍ６Ｏであった。ＭＲ検索モデルとして、ＰＳＭＡ（ＰＤＢコード：２Ｃ６Ｇ）及びＰＳＭＢ８３ Ｆａｂ（１．９３Åの分解能での構造；データは示さず）の結晶構造を使用して、ＰＳＭＡ／Ｆａｂ複合体の構造を解析した。ＰＨＥＮＩＸにより構造を精密化し（Ａｄａｍｓ，ｅｔ ａｌ，２００４）、ＣＯＯＴを用いてモデル調整を行った（Ｅｍｓｌｅｙ ａｎｄ Ｃｏｗｔａｎ，２００４）。他の全ての結晶学的計算をＣＣＰ４プログラムスイートで行った（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｊｅｃｔ Ｎｕｍｂｅｒ ４，１９９４）。全ての分子図形は、ＰｙＭｏｌ（ＰｙＭＯＬ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒａｐｈｉｃｓ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｖｅｒｓｉｏｎ １．４．１，Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ，ＬＬＣ）で生成し、相補性決定領域（ＣＤＲ）はＫａｂａｔ定義を用いて決定した。
ＰＳＭＡ／Ｆａｂ構造は、Ｆａｂ軽鎖残基１～２１１、Ｆａｂ重鎖残基１～２２４（不規則な残基１３８～１４６を除く）、及びＰＳＭＡ残基５６～７５０を含み、これは、プロテアーゼ（残基５６～１１６及び３５２～５９０）、頂端ドメイン（残基１１７～３５１）及びらせんドメイン（残基５９～７５０）、及び、ＰＳＭＡ二量体サブユニット当たり１０個の可能性のあるＮ－結合グリカンのうち７つ（Ａｓｎ－７６、－１２１、－１４０、－１９５、－４５９、－４７６、及び－６３８中）に対応する。ＰＳＭＡ活性部位は、３つのドメイン間の界面に位置し、ヒスチジン（Ｈ３７７及びＨ５５３）により配位された２個の亜鉛原子、及びグルタミン酸／アスパラギン酸（Ｄ３８７、触媒活性を有するＥ４２４、Ｅ４２５、及びＤ４５３）残基、及び水分子を有している。結晶非対称単位は、同様にＰＳＭＢ８３ Ｆａｂに結合した各サブユニットを有する１つのＰＳＭＡ二量体を含有する。Ｆａｂ／ＰＳＭＡの結合部位は、結合残基の位置を高い信頼度で決定することができる電子密度マップによってよく定義されている。Ｆａｂ及びＰＳＭＡ分子は、図２５～３０中で順次番号付けされている。
ＰＤＭＢ８３のエピトープ、パラトープ、及び相互作用。二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ２７中の親抗ＰＳＭＡ ＦａｂアームであるＰＳＭＢ８３は、ＰＳＭＡの頂端ドメインにおける立体構造及び不連続エピトープを認識する（図２５）。Ｆａｂによって埋もれたＰＳＭＡ表面積は、約７００Å２である。具体的には、ＰＳＭＢ８３のエピトープ残基は、Ｉ１３８、Ｆ２３５、Ｐ２３７、Ｇ２３８、Ｄ２４４、Ｙ２９９、Ｙ３００、Ｑ３０３、Ｋ３０４、Ｅ３０７、及びＫ３２４～Ｐ３２６である。ヘリックスα７（残基Ｙ２９９～Ｅ３０７）はエピトープの一般的な領域であり、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖ＣＤＲにわたって結合する。ヘリックスの一端において、Ｙ２９９及びＹ３００は、Ｆａｂ残基Ｙ５７Ｈ、Ｗ９４Ｌ及びＰＳＭＡ残基Ｆ２３５及びＰ２３７と共に芳香族クラスターを形成し、一方、別のヘリックス端では、Ｅ３０７は、Ｒ９１Ｌ及び水素結合Ｙ３２Ｌと共に塩架橋を形成する。図２６及び２７は、ＰＳＭＡのＰＳＭＢ８３の軽鎖及び重鎖との主な相互作用を示す。ＰＳＭＢ８３エピトープ残基は、ヒトとカニクイザルとの間で保存され（図２８）、二重特異性抗体ＰＳ３Ｂ２７は、ヒト及びｃｙｎｏ ＰＳＭＡと同様の親和性で結合することが実証された。対照的に、ヒトからマウスへのＧ２３８Ａと、特にＹ３００Ｄのエピトープ変異により、ヒトと比較して、マウスＰＳＭＡに対するＰＳＭＢ８３の結合親和性が低下することが予想される。Ｙ３００Ｄ変異は、Ｎ５９Ｈとの水素結合接触と、Ｗ９４Ｌとのπスタッキング相互作用を妨害する。ＰＳＭＢ８３のパラトープは、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｈ１を除く全てのＣＤＲ由来の残基で構成されている（図２９）。具体的には、パラトープ残基は、軽鎖のＳ３０Ｌ、Ｙ３２Ｌ、Ｒ９１Ｌ、Ｓ９２Ｌ、Ｗ９４Ｌ、及び重鎖のＧ５６Ｈ～Ｎ５９Ｈ、Ｋ６５Ｈ、Ｇ６６Ｈ、Ｙ１０１Ｈ、Ｖ１０７Ｈ、及びＤ１０９Ｈである。図３０は、ＰＳＭＡとＰＳＭＢ８３との間の相互作用接触を示す。エピトープの接触可能位置は、ＰＳ３Ｂ２７二重特異性抗体中のＰＳＭＢ８３ Ｆａｂアームの膜結合型ＰＳＭＡへの結合を促進するが、他方のＦａｂアームは、依然としてＴ細胞膜内のＣＤ３に結合している。ＰＳＭＢ８３は、抗体が活性部位から離れて結合し、酵素機能に影響を及ぼし得るＰＳＭＡ中の顕著な構造変化、例えば活性部位を閉鎖するループの移動、又は触媒残基の置換を引き起こさない（Ｆａｂが結合した及び非結合した（Ｂａｒｉｎｋａ ｅｔ ａｌ，２００７）構造のＰＳＭＡ分子のＣα重ね合わせについて、０．３ÅのＲＭＳＤ）ため、ＰＳＭＡの酵素活性を阻害しないと考えられる。
実施例１４．抗ＰＳＭＡ親和性成熟
２種類のＰＳＭＡ親和性成熟ライブラリ由来の抗ＰＳＭＡ Ｆａｂファージクローンに対して親和性成熟を行い、親ＰＳＭＢ１２７（ｆａｂ ＩＤ＝ＰＳＭＢ８３）と比較して、結合親和性が増加した抗体を同定した。ＰＳＭＢ１２７の親和性成熟のために、２種類のＦａｂライブラリを作成した。第１のライブラリでは、重鎖ＣＤＲ１及びＣＤＲ２を、表２２（ＰＨ９Ｈ９Ｌ１）の設計に従ってランダム化した。Ｈ－ＣＤＲ３断片をｐＤＲ００００２４０３２からＰＣＲ増幅し、ＳａｃＩＩ＋ＸｈｏＩで消化した。この断片をＰＨ９Ｈ９Ｌ１／ＰＨ９Ｌ３ライブラリにクローニングした。これをＥ．ｃｏｌｉ ＭＣ１０６１Ｆ’細胞に形質転換し、このＦａｂライブラリを発現するファージを生成した。第２のライブラリでは、軽鎖ＣＤＲを、表２５（ＰＨ９Ｌ３Ｌ３）の設計に従ってランダム化した。ＰＳＭＢ８３（ＰＳＭＨ３６０）由来の重鎖をＰＣＲ増幅し、ＮｃｏＩ＋ＸｈｏＩで消化した。この断片をＰＨ９Ｌ３Ｌ３ライブラリＤＮＡ（ＥＬＮ：Ｄｅ Ｎｏｖｏ ２０１０ファージライブラリＳＲＩ－０２１）にクローニングした。これをＥ．ｃｏｌｉ ＭＣ１０６１Ｆ’細胞に形質転換し、このＦａｂライブラリを発現するファージを生成した。
Figure 0007361727000057
Figure 0007361727000058
ＰＳＭＡ親和性成熟Ｆａｂ－ｐＩＸライブラリの溶液パニングを、ビオチン化ヒトＰＳＭＡ ＥＣＤに対して３回行った。ファージが結合した抗原を、製造元のプロトコルに従ってニュートラアビジンビーズ（ＧＥ ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃａｔ＃７８１５２１０４０１１１５０）上に捕捉し、続いて、１×ＰＢＳＴ（０．０５％ ｔｗｅｅｎ ２０）で広範囲を洗浄し、ビオチン化抗原の５００倍モル過剰での非標識ＰＳＭＡ ＥＣＤとの１時間にわたるインキュベーションを行った。このパニングにより、クローンＰＳＭＸＰ４６Ｒ３＿５９Ｈ０９、ＰＳＭＸＰ４６Ｒ３＿５９Ｈ０６、ＰＳＭＸＰ４６Ｒ３＿５９Ｅ０３、ＰＳＭＸＰ４６Ｒ３＿５９Ｃ０９、ＰＳＭＸＰ４６Ｒ３＿５９Ｈ０１、ＰＳＭＸＰ４６Ｒ３＿５９Ｆ１１、及びＰＳＭＸＰ４６Ｒ３＿５９Ｆ０７を得た。
抗ＰＳＭＡ ｆａｂクローンの発現レベルを決定するために、９６ウェルのＭａｘｉｓｏｒｂプレートを、抗ヒトＦｄ ＩｇＧを用いて４℃で一晩コーティングし、洗浄し、３％ミルク－ＰＢＳ－０．０５％Ｔｗｅｅｎで１時間ブロッキングした。ファージ上清サンプルを、ブロッキング緩衝液で２倍連続希釈を行い１１の希釈液を作製し、最後のウェルはブランクとした。１００μＬのこれらの溶液を、コーティングされたプレート上で１時間捕捉した。プレートを洗浄し、１００μＬの抗Ｆ（ａｂ’）２－ＨＲＰ抗体を１時間添加した。プレートを洗浄し、１００μＬのペルオキシダーゼ試薬で現像し、Ｅｎｖｉｓｉｏｎで発光を読み取った（図３１）。
抗ＰＳＭＡ ｆａｂクローンのヒト及びカニクイザル組み換えタンパク質への結合を決定するために、９６ウェルＭａｘｉｓｏｒｂプレートを、１００μＬの５μｇ／ｍＬのニュートラアビジンを用いて４℃で一晩コーティングした。プレートを洗浄し、３％ミルク－ＰＢＳ－０．０５％Ｔｗｅｅｎで１時間ブロッキングした。組み換えビオチン化ヒト及びカニクイザルＰＳＭＡタンパク質を、２．５μｇ／ｍＬにて室温で１時間捕捉した。プレートを洗浄し、１００μＬの２倍連続希釈したｆａｂ上清を、ＲＴで１時間捕捉した。プレートを洗浄し、次いで、２００μＬのＰＢＳＴ中０．３％ミルクと共に２．５時間インキュベートして、弱い親和性のｆａｂの一部を洗い流した。次いで、新たな２００μＬのＰＢＳＴ中０．３％ミルクと更に３０分間インキュベーションし、より弱い親和性のｆａｂを除去した。プレートを洗浄し、１００μＬの抗Ｆ（ａｂ’）２－ＨＲＰ抗体を１時間添加した。プレートを洗浄し、１００μＬのペルオキシダーゼ試薬で現像し、Ｅｎｖｉｓｉｏｎで発光を読み取った（図３２及び図３３）。図３１は、親Ｆａｂ及び親和性成熟Ｆａｂのタンパク質発現が類似していることを示す。ｙ軸値は、希釈曲線にわたるｆａｂタンパク質の存在量に等しい検出試薬の発光を表し、発光の読み取り値が高いほどより多くのタンパク質がウェル中にあり、連続的な２倍希釈で減少した。親和性成熟ｆａｂを有するウェルには、より多くのタンパク質が存在したが、親を超える増加は、ＥＣ５０値（最大応答の半分を与えるタンパク質の濃度）によって示されるように、最大で５倍大きい。これらのデータは、図３２及び図３３のＰＳＭＡ結合プロファイルの差が、Ｆａｂ濃度の差によるものではないことを示す。
図３２は、ヒト組み換え抗原に対する結合が、親抗ＰＳＭＡ Ｆａｂ（ＰＳＭＢ８３）よりも親和性成熟したＦａｂにおいて改善されたことを示す。ここでも、グラフのｙ軸は発光値を表す。この場合、値が大きいほど、より多くのＦａｂがヒトＰＳＭＡタンパク質に結合したことを意味する。これは、（ｘ軸に沿って）Ｆａｂの濃度を増加させるとき、より高い発光値をもたらす結合の尺度である。高濃度（ｘ軸に沿った白丸）においてもシグナルが存在しないことによって実証されるように、これらの条件下では、親Ｆａｂの結合はごくわずかであった。親和性成熟したｆａｂの結合は、試験された濃度にわたって観察され、これは、ヒトＰＳＭＡタンパク質に対する結合能がより強いことに相当する。ヒトＰＳＭＡタンパク質に対する親Ｆａｂ結合がゼロであると仮定すると、ＥＣ５０を算出できなかった。
図３３は、カニクイザル組み換え抗原に対する結合が、親抗ＰＳＭＡ Ｆａｂ（ＰＳＭＢ８３）よりも親和性成熟したＦａｂにおいて改善されたことを示す。ここでも、グラフのｙ軸は発光値を表す。この場合、値が大きいほど、より多くのＦａｂがカニクイザルＰＳＭＡタンパク質に結合したことを意味する。これは、（ｘ軸に沿って）Ｆａｂの濃度を増加させるとき、より高い発光値をもたらす結合の尺度である。高濃度（ｘ軸に沿った白丸）においてもシグナルが存在しないことによって実証されるように、これらの条件下では、親Ｆａｂの結合はごくわずかであった。親和性成熟したＦａｂの結合は、試験された濃度にわたって観察され、これは、ヒトＰＳＭＡタンパク質に対する結合能がより強いことに相当する。ヒトＰＳＭＡタンパク質に対する親Ｆａｂ結合がゼロであると仮定すると、直接比較のためのＥＣ５０は算出できなかった。
全体として、ファージのＦａｂ結合プロファイルは、親抗ＰＳＭＡ ｍＡｂ（ＰＳＭＢ１２７）よりも、ヒト及びカニクイザル組み換え抗原に対する結合が改善されたことを示す。この改善は、Ｆａｂ発現レベルで補正された親和性成熟Ｆａｂの結合を示している図３４及び図３５によって実証されるように、Ｆａｂ発現プロファイルの違いの結果ではない。ＥＬＩＳＡスクリーニングから同定された上位５つのＦａｂ候補を、ＩｇＧ４ ＰＡＡ上のモノクローナル抗体形式で産生した。表２４は、後続のＭａｂのＩＤを列挙し、表２５及び２６は、配列情報を提供する。
Figure 0007361727000059
Figure 0007361727000060
Figure 0007361727000061
Figure 0007361727000062
Figure 0007361727000063
３つの異なるＨＣ及び４つの異なるＬＣをマトリクス形式で組み合わせて、ヒットの多様性を拡大した（表２６）。ＰＳＭＨ８６０のＣＤＲ２内のメチオニンが翻訳後リスクであると仮定し、Ｍ６４Ｌを有する新たな配列を生成して、ＰＳＭＨ８６５として同定した。ＰＳＭＨ８６５をＰＳＭＬ１６０と対にして、Ｍａｂ ＰＳＭＢ３６５を生成した。表２７及び２８は、配列情報を提供する。
Figure 0007361727000064
Figure 0007361727000065
Figure 0007361727000066
Figure 0007361727000067
Figure 0007361727000068
表２９は、全ての親和性成熟ヒットに関するＣＤＲを提供する。
Figure 0007361727000069
実施例１５．親和性成熟したＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性の生成
２種類の親和性成熟したＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体を生成した：高親和性ＣＤ３アーム［ＣＤ３Ｂ２１９（ＶＨ配列番号１０４、ＶＬ配列番号１０５、ＨＣ配列番号１１０、ＬＣ配列番号１１１）］、又はＣＤ３Ｂ３７６と呼ばれる低親和性ＣＤ３アーム［ＣＤ３Ｂ３７６（ＶＨ配列番号１５２、ＶＬ配列番号１５３、ＨＣ配列番号１５４、ＬＣ配列番号１５５）］と共に組み換えた、標的化アームに特異的なもの（例えば、親和性成熟した抗ＰＳＭＡ）である。
Figure 0007361727000070
これらの親ｍＡｂは、ＧｅｎＭａｂ形式（Ｌａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ，２０１３）であり、標的親（ＰＳＭＡ）は、４０９Ｒ ＧｅｎＭａｂ変異（ＩｇＧ４の天然型アミノ酸）を含有し、一方、殺傷性親（ＣＤ３）はＦ４０５Ｌ ＧｅｎＭａｂ変異及びＲ４０９Ｋ変異を含有する。単一特異性ＣＤ３抗体を、Ｆｃ領域内にＦｃ置換Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ及びＲ４０９Ｋ（ＣＤ３アーム）（付番はＥＵインデックスに従う）を有するＩｇＧ４として発現させた。標的化親（ＰＳＭＡ）は、Ｆｃ置換Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａを有するヒトＩｇＧ４上にある。単一特異性抗体を、ＣＭＶプロモータ下において、ＨＥＫ細胞株中で発現させた。
１００ｍＭ ＮａＡｃ ｐＨ３．５の溶出緩衝液、及び２．５Ｍ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．２の中和緩衝液を用いるプロテインＡカラムを使用して、親ＰＳＭＡ及びＣＤ３抗体を精製した。中和した親ｍＡｂを使用して、ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体を作製した。親ｍａｂの一部を、分析測定及びアッセイのために、Ｄ－ＰＢＳ、ｐＨ７．２緩衝液中に更に緩衝液交換した。
精製後、実施例６に記載のように二重特異性抗体を作製するため、制御されたＦａｂアーム交換を行った。
産生された最終二重特異性抗体を、組み換え反応で使用した親ｍＡｂ（すなわち、ＰＳＭＡ、ＣＤ３、又は無し）と共に、表２７及び２８に列挙する。
また、選択されたＰＳＭＡヒットを非殺傷アーム（無し）とも対にして、試験目的のために陰性対照を作成した。対照二重特異性抗体であるＢ２Ｍ１では、ＩｇＧ４ ＰＡＡ形式のＲＳＶ抗体を生成し、精製し、ＣＤ３アームのＣＤ３Ｂ２１９－Ｆ４０５Ｌ、Ｒ４０９Ｋと組み合わせて、ＣＤ３Ｂ２８８（ＣＤ３×無し）を生成した、又は、ＰＳＭＡアームのＰＳＭＢ１２２、ＰＳＭＢ１２６、ＰＳＭＢ１３０と組み合わせて、それぞれＰＳ３Ｂ３７、ＰＳ３Ｂ３９及びＰＳ３Ｂ４０（ＰＳＭＡ×無し）を生成した。これらのＰＳＭＡ特異的親和性成熟Ｍａｂを（上記方法のように）ＣＤ３Ｂ２１９及びＣＤ３Ｂ３７６と組み合わせ、表３１に示される二重特異性抗体を生成した。
Figure 0007361727000071
ＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体を、ＰＳＭＡ陽性細胞株であるＬＮＣＡＰ、ＰＳＭＡ陰性細胞株であるＰＣ３への結合について試験した。ＰＳＭＡ二重特異性抗体の結合能力を評価するために、細胞結合アッセイを利用した（前述）。二重特異性抗体をタンパク質濃度について補正した後、ヒト又はｃｙｎｏ ＰＳＭＡのいずれかを発現する同じ数の細胞と共にインキュベートした。各濃度のＭＦＩをフローサイトメトリーによって収集し、濃度に対してプロットした。データをｌｏｇ１０によって変換し、次いでプロットした。結合曲線の非線形回帰を行い、ＥＣ５０を決定した。
これらの相対値を、標的細胞へのＰＳＭＡ結合をランク付けするために使用した。図３６～図３８は、調製された全ての二重特異性抗体のＬＮＣＡＰ結合を示す。図３８では、構築物のいずれもＰＳＭＡ陰性細胞株への結合を示さなかった。図３６及び図３７では、親和性成熟ヒットの全ては、親ＭａｂであるＰＳ２Ｂ２７と比較して、左にシフトした曲線とｃＭａｘの増加によって、結合親和性の増加を示した。
組み換えｃｈｉｍｐ ＰＳＭＡ ＥＣＤについて前述したように、親和性成熟した二重特異性抗体の組み換えＣｙｎｏ ＰＳＭＡ ＥＣＤ及びヒトＰＳＭＡ ＥＣＤとの相互作用について、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システム（ＢｉｏＲａｄ）を用いる表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって試験した。二重特異性抗体の全ては、実質的に同じ親和性で両方の標的に結合し、ＫＤは、ヒトＰＳＭＡ ＥＣＤに対して０．０５ｎＭ～０．２７ｎＭ、ｃｙｎｏ ＰＳＭＡ ＥＣＤに対して０．０５ｎＭ～０．２３ｎＭの範囲であった。
実施例１６．機能性細胞殺傷アッセイにおけるＰＳＭＡ×ＣＤ３親和性成熟二重特異性Ａｂの評価
親和性測定及び配列同一性の上記データに基づき、ＣＤ３Ｂ２１９又はＣＤ３Ｂ３７６のいずれかとの二特異性抗体として、３種類のＰＳＭＡ抗体、ＰＳＭＢ３４７、ＰＳＭＢ３６０、及びＰＳＭＢ３６５について、ＰＳＭＡ特異的なリダイレクトされたＴ細胞毒性を媒介する能力の特徴を更に調べた。Ｔ細胞媒介性殺傷を、活性カスパーゼ３／７による蛍光基質の開裂による細胞殺傷を間接的に測定する、カスパーゼ細胞傷害アッセイを用いて測定した。基質の開裂により、蛍光が細胞核に限定される蛍光ＤＮＡ染色が得られる。同じ座標でウェルを正確に撮像することができる電動式１０×対物レンズを使用して、アッセイの過程を通して各ウェルにおいて蛍光測定値を反復して取得する。標的細胞集団は、定義されたサイズ制限に基づいて、及び／又は二次ラベルの使用によって特定される。凍結した汎ＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｃｏｌｍａｒ，ＰＡ）から購入）を、健常ドナーから陰性選択によって単離した。ＰＳＭＡを発現する前立腺癌細胞（ＬＮＣａＰ、Ｃ４２）を、１０％ＨＩ ＦＢＳ＋サプリメントを含むＲＰＭＩ １６４０（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから購入）中で培養した。
Ｔ細胞及び標的細胞を、３：１のエフェクター対標的比（Ｅ：Ｔ）で、選択試薬を含まずにフェノールレッドを含まないＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ及びサプリメント（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で組み合わせ、０．６μＬのＮｕｃＶｉｅｗカスパーゼ試薬（Ｅｓｓｅｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を、製造元のガイドラインに従って細胞１ｍＬごとに添加した。総体積０．１ｍＬの細胞を、透明な９６ウェル平底プレート（ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ）の適切なウェルに添加した。ＰＳ３Ｂ２７（ＣＤ３×ＰＳＭＡ）、ＣＤ３Ｂ２８８（ＣＤ３×無し）又はＰＳ３Ｂ４６（ＰＳＭＡ×無し）二重特異性抗体を、上記のように調製したフェノールレッドを含まないＲＰＭＩ中で２×最終濃度で調製し、０．１ｍＬの化合物を各ウェルに添加した。室温で３０分間インキュベートした後、ウェル縁部での細胞凝集を最小化するために、プレートをＺｏｏｍ Ｉｎｃｕｃｙｔｅ装置（Ｅｓｓｅｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に移した。Ｉｎｃｕｃｙｔｅ装置は、３７℃、５％ＣＯ２に設定された加湿インキュベーター内に存在する。
Ｉｎｃｕｃｙｔｅでの処理定義は、製造元のガイドラインに従って試験される各細胞株に対して設計した。カスパーゼ信号がプラトーになった後、最高濃度の試験化合物を含有するウェル中の最大信号から３回以上の連続的減少が観察されるまで、６時間ごとに測定を行った。図３９においてデータが示すように、ＰＳ３Ｂ８０、ＰＳ３Ｂ７９、ＰＳ３Ｂ８９、ＰＳ３Ｂ９０、ＰＳ３Ｂ６３、及びＰＳ３Ｂ７２の曲線は左にシフトし、ＰＳ３Ｂ２７を超える効力の増加を示す。無しアーム対照は、予想されるように細胞死を誘導しなかった。
実施例１７．ヒト化ＮＳＧマウス中ＬｎＣａｐ異種移植片の腫瘍化抑制における抗腫瘍効果
ヒトＴ細胞の腹腔内投与（ｉｐ）によりヒト化した、雄性ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウス中に定着させた３Ｄ ＬｎＣａＰ ＡＲ．ＴＢヒト前立腺癌異種移植片において、ＰＳ３Ｂ７９及びＰＳ３Ｂ９０の有効性を評価した。２．５及び５ｍｇ／ｋｇのＰＳ３Ｂ７９及びＰＳ３Ｂ９０、又は無し×ＣＤ３Ｂ３７６抗体対照を、３６、３９、４３、４７、５０、５３、５６、６０、及び６３日目に合計８回、ｑ３ｄ～ｑ４ｄで投与した。１群につき９例の動物が生き残っていた試験の最終日である、腫瘍移植後の５３日目に、腫瘍増殖抑制（％ＴＧＩ）を計算した。無し×ＣＤ３対照と比較して、５ｍｇ／ｋｇのＰＳ３Ｂ７９で４２％ＴＧＩ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ検定を伴う２－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ、＊ｐ＜０．０００１、図４０）、２．５及び５ｍｇ／ｋｇのＰＳ３Ｂ９０でそれぞれ５３％及び３３％（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ検定を伴う２－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ、＊ｐ＜０．００１、図４１）と、統計的に有意な腫瘍増殖阻害が観察された。したがって、ＣＤ３Ｂ３７６は、ｉｎ ｖｉｖｏでＴ細胞活性化及び細胞毒性を誘導し、高親和性ＰＳＭＡ結合アームであるＰＳＭＢ３６０及びＰＳＭＢ３６５を有する二重特異性形態において腫瘍増殖阻害をもたらすことができる。
実施例１８．Ｔ細胞ヒト化ＮＳＧマウス中に定着させた患者由来異種移植片ＬｕＣａＰ８６．２前立腺腫瘍モデルにおけるＰＳＭＡ×ＣＤ３の有効性
ヒト汎Ｔ細胞の腹腔内投与（ｉｐ）によりヒト化した、雄性ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウス中に定着させた患者由来異種移植片（ＰＤＸ）ＬｕＣａＰ８６．２前立腺腫瘍モデルにおいて、ＰＳ３Ｂ７２の抗腫瘍効果を評価した。０．５及び５ｍｇ／ｋｇのＰＳ３Ｂ７２、又は無し×ＮｕｌｌｘＣＤ３抗体対照を、腫瘍移植後４５、４９、５２、５６、５９、６３、６６、７０、７３、及び７７日目に合計１０回、ｑ３ｄ～ｑ４ｄで投与した。１群につき１０例の動物が生き残っていた試験の最終日である、腫瘍移植後の８３日目に、腫瘍増殖抑制（％ＴＧＩ）を計算した。無し×ＣＤ３対照と比較して、０．５及び５ｍｇ／ｋｇの両方のＰＳＭＡ×ＣＤ３で、それぞれ１０８％及び１０１％ΔＴＧＩ（ＦＤＲ調整を使用する線形混合効果解析、＊ｐ＜０．０００１、図４２）と、統計的に有意な腫瘍増殖阻害が観察された。５週間の投与期間終了までに、ＰＳＭＡ×ＣＤ３の０．５ｍｇ／ｋｇ群において１０例のうち９例の完全退縮（ＣＲ）が観察された。これら９例のマウスは、試験終了まで腫瘍がない状態のままであった。試験終了時、ＰＳ３Ｂ７２の５ｍｇ／ｋｇ群において、１０例のうち４例のＣＲが観察された。Ｔ細胞ヒト化をしない状態で５ｍｇ／ｋｇのＰＳ３Ｂ７２をマウスに投与した場合、抗腫瘍効果は観察されなかった。

以下の態様を包含し得る。
［１］ 単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメントであって、前記抗体又は抗原結合フラグメントが、（ｉ）組み換えＰａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ ＰＳＭＡを発現する細胞に結合し、前記細胞への結合はフローサイトメトリーによって測定され、かつ（ｉｉ）組み換えＰａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ ＰＳＭＡ細胞外ドメイン（配列番号４）に約３０ｎＭ以下の親和性で結合し、前記親和性はＰｒｏｔｅｏｎ ＸＰＲ３６表面プラズモン共鳴アッセイによって測定される、抗体又はその抗原結合フラグメント。
［２］ 前記抗体が、以下の特性：
ｅ）２０ｎＭ以下のＥＣ ５０ 計算値でＬＮＣａＰ細胞と結合し、かつ、４０ｎＭ以下のＥＣ ５０ 計算値でＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞に結合し、ＬＮＣａＰ細胞への結合と、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞への結合との間のＥＣ ５０ 計算値の差は５倍未満であり、前記ＥＣ ５０ 計算値は、フローサイトメトリーを用いる０℃での全細胞結合アッセイで測定される、
ｆ）１２ｎＭ以下の平衡解離定数（Ｋ Ｄ ）で、ヒト（配列番号７）、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ（配列番号４）及びＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（配列番号５）由来の組み換えＰＳＭＡ ＥＣＤに結合し、前記Ｋ Ｄ は、Ｐｒｏｔｅｏｎ表面プラズモン共鳴アッセイＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システムを使用して＋２５℃で測定される、
ｇ）二重特異性抗体において抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ２１９と対を成すとき、ＬＮＣａＰ細胞、Ｃ４２細胞、ヒトＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞、又はＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞のＴ細胞媒介性殺傷を提示し、前記Ｔ細胞媒介性殺傷は、クロム－５１によって、若しくはカスパーゼ３／７活性化アッセイによって測定される、又は
ｈ）立体構造エピトープを認識し、前記エピトープは、ヒトＰＳＭＡ（配列番号３）の残基Ｉ１３８、Ｆ２３５、Ｐ２３７、Ｇ２３８、Ｄ２４４、Ｙ２９９、Ｙ３００、Ｑ３０３、Ｋ３０４、Ｅ３０７、及びＫ３２４～Ｐ３２６からなる、のうち、１つ、２つ、３つ、又は４つを有する、上記［１］に記載の抗体。
［３］ それぞれ配列番号１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、上記［２］に記載の抗体。
［４］ それぞれ配列番号２０、２１、２２、２３、１２、及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、上記［２］に記載の抗体。
［５］ それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、上記［２］に記載の抗体。
［６］ それぞれ配列番号３６、３７、３８、３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、上記［２］に記載の抗体。
［７］ それぞれ配列番号３１、４２、４３、１１、１２、及び１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、上記［２］に記載の抗体。
［８］ それぞれ配列番号３１、４４、４５、４６、２９、及び４７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、上記［２］に記載の抗体。
［９］ それぞれ配列番号３６、３７、４８、４９、５０、及び５１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、上記［２］に記載の抗体。
［１０］ それぞれ配列番号３６、３７、５２、４９、５０、及び５１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、上記［２］に記載の抗体。
［１１］ それぞれ配列番号８、９、１０、１１、１２、及び１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、上記［２］に記載の抗体。
［１２］ それぞれ配列番号３１、３２、３３、３４、１２、及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、上記［２］に記載の抗体。
［１３］ それぞれ配列番号５３、５４、５５、２３、１２、及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、上記［２］に記載の抗体。
［１４］ それぞれ配列番号１２２、１２３、１２４、２３、１２、及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、上記［２］に記載の抗体。
［１５］ 配列番号６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７５、７７、７９、又は１６０の重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、上記［２］に記載の抗体。
［１６］ 配列番号６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、６１、７６、又は７８の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、上記［１５］に記載の抗体。
［１７］ 配列番号６２のＶＨ、及び配列番号６３のＶＬを含む、上記［１５］に記載の抗体。
［１８］ 配列番号６４のＶＨ、及び配列番号６５のＶＬを含む、上記［１５］に記載の抗体。
［１９］ 配列番号６６のＶＨ、及び配列番号６７のＶＬを含む、上記［１５］に記載の抗体。
［２０］ 配列番号７２のＶＨ、及び配列番号７３のＶＬを含む、上記［１５］に記載の抗体。
［２１］ 配列番号７４のＶＨ、及び配列番号６１のＶＬを含む、上記［１５］に記載の抗体。
［２２］ 配列番号７５のＶＨ、及び配列番号７６のＶＬを含む、上記［１５］に記載の抗体。
［２３］ 配列番号７７のＶＨ、及び配列番号７８のＶＬを含む、上記［１５］に記載の抗体。
［２４］ 配列番号７９のＶＨ、及び配列番号７８のＶＬを含む、上記［１５］に記載の抗体。
［２５］ 配列番号１６０のＶＨ、及び配列番号６５のＶＬを含む、上記［１５］に記載の抗体。
［２６］ 配列番号６０のＶＨ、及び配列番号６１のＶＬを含む、上記［１５］に記載の抗体。
［２７］ 配列番号６８のＶＨ、及び配列番号６９のＶＬを含む、上記［１５］に記載の抗体。
配列番号７０のＶＨ、及び配列番号７１のＶＬを含む、上記［１５］に記載の抗体。
［２８］ それぞれ配列番号３１、４２、４３、１１、１２及び１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［２９］ 前記抗体が、配列番号７４のＶＨ、及び配列番号６１のＶＬを含む、上記［２８］に記載の抗体。
［３０］ それぞれ配列番号１４、１５、１６、１７、１８及び１９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［３１］ 前記抗体が、配列番号６２のＶＨ、及び配列番号６３のＶＬを含む、上記［３０］に記載の抗体。
［３２］ それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［３３］ 前記抗体が、配列番号６６のＶＨ、及び配列番号６７のＶＬを含む、上記［３２］に記載の抗体。
［３４］ それぞれ配列番号３６、３７、３８、３９、４０及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［３５］ 前記抗体が、配列番号７２のＶＨ、及び配列番号７３のＶＬを含む、上記［３４］に記載の抗体。
［３６］ それぞれ配列番号１２２、１２３、１２４、２３、１２及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［３７］ 前記抗体が、配列番号１６０のＶＨ、及び配列番号６５のＶＬを含む、上記［３６］に記載の抗体。
［３８］ それぞれ配列番号８、９、１０、１１、１２及び１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［３９］ 前記抗体が、配列番号６０のＶＨ、及び配列番号６１のＶＬを含む、上記［３８］に記載の抗体。
［４０］ それぞれ配列番号２０、２１、２２、２３、１２及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［４１］ 前記抗体が、配列番号６４のＶＨ、及び配列番号６５のＶＬを含む、上記［４０］に記載の抗体。
［４２］ それぞれ配列番号３１、３２、３３、３４、１２及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［４３］ 前記抗体が、配列番号７０のＶＨ、及び配列番号７１のＶＬを含む、上記［４２］に記載の抗体。
［４４］ それぞれ配列番号３１、４４、４５、４６、２９及び４７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［４５］ 前記抗体が、配列番号７５のＶＨ、及び配列番号７６のＶＬを含む、上記［４４］に記載の抗体。
［４６］ それぞれ配列番号３６、３７、４８、４９、５０及び５１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［４７］ 前記抗体が、配列番号７７のＶＨ、及び配列番号７８のＶＬを含む、上記［４６］に記載の抗体。
［４８］ それぞれ配列番号３６、３７、５２、４９、５０及び５１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［４９］ 前記抗体が、配列番号７９のＶＨ、及び配列番号７８のＶＬを含む、上記［４８］に記載の抗体。
［５０］ それぞれ配列番号５３、５４、５５、２３、１２及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［５１］ 前記抗体が、配列番号６８のＶＨ、及び配列番号６９のＶＬを含む、上記［５０］に記載の抗体。
［５２］ それぞれ配列番号２５、１３０、２７、２８、２９及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［５３］ 前記抗体が、配列番号１３８のＶＨ、及び配列番号６７のＶＬを含む、上記［５２］に記載の抗体。
［５４］ それぞれ配列番号２５、１３０、２７、１３１、２９及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［５５］ 前記抗体が、配列番号１３８のＶＨ、及び配列番号１４２のＶＬを含む、上記［５４］に記載の抗体。
［５６］ それぞれ配列番号２５、１３０、２７、２８、１３３及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［５７］ 前記抗体が、配列番号１３８のＶＨ、及び配列番号１４３のＶＬを含む、上記［５６］に記載の抗体。
［５８］ それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、２９及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［５９］ 前記抗体が、配列番号１３９のＶＨ、及び配列番号１６７のＶＬを含む、上記［５８］に記載の抗体。
［６０］ それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、２９及び１３６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［６１］ 前記抗体が、配列番号１４０のＶＨ、及び配列番号１４４のＶＬを含む、上記［６０］に記載の抗体。
［６２］ それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、２９及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［６３］ 前記抗体が、配列番号１４０のＶＨ、及び配列番号１６７のＶＬを含む、上記［６２］に記載の抗体。
［６４］ それぞれ配列番号２５、１３５、２７、１３１、２９及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［６５］ 前記抗体が、配列番号１４０のＶＨ、及び配列番号１４２のＶＬを含む、上記［６４］に記載の抗体。
［６６］ それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、１３３及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［６７］ 前記抗体が、配列番号１４０のＶＨ、及び配列番号１４３のＶＬを含む、上記［６６］に記載の抗体。
［６８］ それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、２９及び１３６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［６９］ 前記抗体が、配列番号１３９のＶＨ、及び配列番号１４４のＶＬを含む、上記［６８］に記載の抗体。
［７０］ それぞれ配列番号２５、１３４、２７、１３１、２９及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［７１］ 前記抗体が、配列番号１３９のＶＨ、及び配列番号１４２のＶＬを含む、上記［７０］に記載の抗体。
［７２］ それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、１３３及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［７３］ 前記抗体が、配列番号１３９のＶＨ、及び配列番号１４３のＶＬを含む、上記［７２］に記載の抗体。
［７４］ それぞれ配列番号２５、１３７、２７、２８、１３３及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
［７５］ 前記抗体が、配列番号１４１のＶＨ、及び配列番号１４３のＶＬを含む、上記［７４］に記載の抗体。
［７６］ 前記抗体がヒト又はヒト化である、上記［１］～［７５］のいずれか一項に記載の抗体。
［７７］ 前記抗体が、ＩｇＧ４又はＩｇＧ１アイソタイプである、上記［７６］に記載の抗体。
［７８］ 前記抗体のＦｃ中に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の置換を含む、上記［７７］に記載の抗体。
［７９］ ａ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓ置換、
ｂ）Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓ置換、
ｃ）Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、及びＱ２６８Ａ置換、
ｄ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、若しくはＬ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換、
ｅ）Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、若しくはＦ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換、又は
ｆ）Ｖ２３４Ａ置換を含み、
ここで、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、上記［７７］に記載の抗体。
［８０］ Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を含み、ここで、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、上記［７９］に記載の抗体。
［８１］ 前記抗体が二重特異性である、上記［１］～［８０］のいずれか一項に記載の抗体。
［８２］ 前記抗体が、ＰＳＭＡに特異的に結合し、かつ、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ２８、ＣＤ１６、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ２５、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ６９、ＣＤ９４、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）、ＣＤ３３６、（ＮＫｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫｐ３０）、ＮＫｐ８０、ＮＫＧ２Ｃ及びＮＫＧ２Ｄ、ＤＮＡＭ、ＮＣＲｓ、ＣＤ１８、ＣＤ８９、ＣＤ１８、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ６４及びＣＤ３５に特異的に結合する、上記［７６］に記載の抗体。
［８３］ 上記［１］～［８２］のいずれか一項に記載の抗体と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
［８４］ 上記［１５］に記載の抗体ＶＨ、上記［１６］に記載の抗体ＶＬ、又は、上記［１５］と［１６］に記載の抗体ＶＨと抗体ＶＬをコードしている、ポリヌクレオチド。
［８５］ 上記［２８］～［７５］のいずれか一項に記載の抗体ＶＨ、抗体ＶＬ、又は抗体ＶＨと抗体ＶＬをコードしている、ポリヌクレオチド。
［８６］ 上記［８４］に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
［８７］ 上記［８５］に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
［８８］ 上記［８６］に記載のベクターを含む、宿主細胞。
［８９］ 上記［８７］に記載のベクターを含む、宿主細胞。
［９０］ 上記［１］に記載の抗体を作製する方法であって、前記抗体が発現する条件で上記［８９］に記載の宿主細胞を培養することと、前記宿主細胞によって産生された前記抗体を回収することと、を含む、方法。
［９１］ 対象において癌を治療する方法であって、治療有効量の上記［１］～［８２］のいずれか一項に記載の単離された抗体を、前記癌を治療するのに十分な時間にわたって、それを必要とする前記対象に投与することを含む、方法。
［９２］ 前記癌が、固形腫瘍、悪性腫瘍又は血管新生系腫瘍である、上記［９１］に記載の方法。
［９３］ 前記固形腫瘍が、前立腺癌又は結腸直腸癌、胃癌、腎明細胞癌、膀胱癌、肺癌、扁平上皮癌、神経膠腫、乳癌、腎臓癌、血管新生疾患、腎明細胞癌（ＣＣＲＣＣ）、膵臓癌、腎臓癌、尿路上皮癌、及び肝臓の腺癌である、上記［９２］に記載の方法。
［９４］ 前記前立腺癌が、抵抗性前立腺癌、前立腺上皮内腫瘍、アンドロゲン非依存性前立腺癌、悪性前立腺癌である、上記［９３］に記載の方法。
［９５］ 前記抗体が、第２の治療剤と組み合わせて投与される、上記［９０］～［９４］のいずれか一項に記載の方法。
［９６］ 前記第２の治療剤が、固形腫瘍又は悪性腫瘍又は血管新生系腫瘍の治療に対する標準治療薬である、上記［９５］に記載の方法。
［９７］ 前記第２の治療剤が、ホルモン阻害剤、微小管阻害剤、キナーゼ阻害剤、免疫調節剤、トポイソメラーゼ阻害剤、代謝拮抗薬、有糸***阻害剤、アルキル化剤、アントラサイクリン、ビンカアルカロイド、挿入剤、シグナル伝達経路に干渉可能な薬剤、アポトーシスを促進する薬剤、プロテオソーム阻害剤又は放射線である、上記［９６］に記載の方法。
［９８］ 前記第２の治療剤がワクチンである、上記［９６］に記載の方法。
［９９］ 前記ワクチンが、腫瘍細胞上で発現する、ポリペプチド若しくはその断片、又は、ポリペプチド若しくはそれらの断片をコードするＤＮＡ若しくはＲＮＡである、上記［９８］に記載の方法。
［１００］ 前記ポリペプチドが、ＰＳＭＡ、メソセリン、ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩである、上記［９９］に記載の方法。
［１０１］ 前記第２の治療剤が、同時に、順次に、又は別々に投与される、上記［９５］に記載の方法。
［１０２］ 前記対象が放射線療法で治療されるか、又は現在治療されている、上記［９１］～［１０１］のいずれか一項に記載の方法。
［１０３］ 前記対象が手術を受けたか、又は後に受ける、上記［９１］～［１０１］のいずれか一項に記載の方法。
［１０４］ 前記単離された抗体が、配列番号６６のＶＨ、及び配列番号６７のＶＬを含む、上記［４６］～［５８］のいずれか一項に記載の方法。
［１０５］ 治療に使用するための、上記［１］～［８２］のいずれか一項に記載の抗体。
［１０６］ 上記［１］～［８２］のいずれか一項に記載の抗体に結合する抗イディオタイプ抗体。
［１０７］ ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含む、二重特異性抗体であって、前記第１のドメインが、
ａ）それぞれ配列番号３１、４２、４３、１１、１２、及び１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｂ）それぞれ配列番号１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｃ）それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｄ）それぞれ配列番号３６、３７、３８、３９、４０、及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｅ）それぞれ配列番号１２２、１２３、１２４、２３、１２、及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｆ）それぞれ配列番号８、９、１０、１１、１２、及び１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｇ）それぞれ配列番号１４、１５、１６、１７、１８、及び１９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｈ）それぞれ配列番号２０、２１、２２、２３、１２、及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｉ）それぞれ配列番号３１、３２、３３、３４、１２、及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｊ）それぞれ配列番号３１、４４、４５、４６、２９、及び４７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｋ）それぞれ配列番号３６、３７、４８、４９、５０、及び５１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｌ）それぞれ配列番号５３、５４、５５、２３、１２、及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｍ）それぞれ配列番号２５、１３０、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｎ）それぞれ配列番号２５、１３０、２７、１３１、２９、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｏ）それぞれ配列番号２５、１３０、２７、２８、１３３、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｐ）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｑ）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、２９、及び１３６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｒ）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｓ）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、１３１、２９、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｔ）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、１３３、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｕ）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、２９、及び１３６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｖ）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、１３１、２９、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｗ）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、１３３、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、又は
ｘ）それぞれ配列番号２５、１３７、２７、２８、１３３、及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、を含む、二重特異性抗体。
［１０８］ 前記第１のドメインが、
ａ）それぞれ配列番号３１、４２、４３、１１、１２及び１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号７４のＶＨ、及び配列番号６１のＶＬ、
ｂ）それぞれ配列番号１４、１５、１６、１７、１８及び１９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号６２のＶＨ、及び配列番号６３のＶＬ、
ｃ）それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号６６のＶＨ、及び配列番号６７のＶＬ、
ｄ）それぞれ配列番号３６、３７、３８、３９、４０及び４１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号７２のＶＨ、及び配列番号７３のＶＬ、
ｅ）それぞれ配列番号１２２、１２３、１２４、２３、１２及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１６０のＶＨ、及び配列番号６５のＶＬ、
ｆ）それぞれ配列番号８、９、１０、１１、１２及び１３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号６０のＶＨ、及び配列番号６１のＶＬ、
ｇ）それぞれ配列番号１４、１５、１６、１７、１８及び１９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号６２のＶＨ、及び配列番号６３のＶＬ、
ｈ）それぞれ配列番号２０、２１、２２、２３、１２及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号６４のＶＨ、及び配列番号６５のＶＬ、
ｉ）それぞれ配列番号３１、３２、３３、３４、１２及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号７０のＶＨ、及び配列番号７１のＶＬ、
ｊ）それぞれ配列番号３１、４４、４５、４６、２９及び４７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、配列番号７５のＶＨ、及び配列番号７６のＶＬ、
ｋ）それぞれ配列番号３６、３７、４８、４９、５０及び５１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号７７のＶＨ、及び配列番号７８のＶＬ、
ｌ）それぞれ配列番号５３、５４、５５、２３、１２及び３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号６８のＶＨ、及び配列番号６９のＶＬ、
ｍ）それぞれ配列番号２５、１３０、２７、２８、２９及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３８のＶＨ、及び配列番号６７のＶＬ、
ｎ）それぞれ配列番号２５、１３０、２７、１３１、２９及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３８のＶＨ、及び配列番号１４２のＶＬ、
ｏ）それぞれ配列番号２５、１３０、２７、２８、１３３及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３８のＶＨ、及び配列番号１４３のＶＬ、
ｐ）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、２９及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３９のＶＨ、及び配列番号１６７のＶＬ、
ｑ）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、２９及び１３６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１４０のＶＨ、及び配列番号１４４のＶＬ、
ｒ）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、２９及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１４０のＶＨ、及び配列番号１６７のＶＬ、
ｓ）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、１３１、２９及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１４０のＶＨ、及び配列番号１４２のＶＬ、
ｔ）それぞれ配列番号２５、１３５、２７、２８、１３３及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１４０のＶＨ、及び配列番号１４３のＶＬ、
ｕ）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、２９及び１３６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３９のＶＨ、及び配列番号１４４のＶＬ、
ｖ）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、１３１、２９及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３９のＶＨ、及び配列番号１４２のＶＬ、
ｗ）それぞれ配列番号２５、１３４、２７、２８、１３３及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３９のＶＨ、及び配列番号１４３のＶＬ、又は
ｘ）それぞれ配列番号２５、１３７、２７、２８、１３３及び１３２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１４１のＶＨ、及び配列番号１４３のＶＬ、を含む、上記［１０７］に記載の二重特異性抗体。
［１０９］ （ｉ）組み換えＰａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ ＰＳＭＡを発現する細胞に結合し、前記細胞への結合はフローサイトメトリーによって測定され、かつ（ｉｉ）組み換えＰａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ ＰＳＭＡ細胞外ドメイン（配列番号４）に約３０ｎＭ以下の親和性で結合し、前記親和性はＰｒｏｔｅｏｎ表面プラズモン共鳴アッセイによって測定される、第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含む、単離された二重特異性ＰＳＭＡ／ＣＤ３抗体。
［１１０］ 前記抗体が、
ｅ）２０ｎＭ以下のＥＣ ５０ 計算値でＬＮＣａＰ細胞と結合し、かつ、４０ｎＭ以下のＥＣ ５０ 計算値でＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞に結合し、ＬＮＣａＰ細胞への結合と、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞への結合との間のＥＣ ５０ 計算値の差は５倍未満であり、前記ＥＣ ５０ 計算値は、フローサイトメトリーを用いる０℃での全細胞結合アッセイで測定される、
ｆ）１２ｎＭ以下の平衡解離定数（ＫＤ）で、ヒト（配列番号７）、Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ（配列番号４）及びＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（配列番号５）由来の組み換えＰＳＭＡ ＥＣＤに結合し、前記ＫＤは、Ｐｒｏｔｅｏｎ表面プラズモン共鳴アッセイＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システムを使用して＋２５℃で測定される、
ｇ）ＬＮＣａＰ細胞、Ｃ４２細胞、ヒトＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞、又はＭａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ ＰＳＭＡ発現ＨＥＫ細胞のＴ細胞媒介性殺傷を提示し、前記Ｔ細胞媒介性殺傷は、クロム－５１によって、若しくはカスパーゼ３／７活性化アッセイによって測定される、又は
ｈ）立体構造エピトープを認識し、前記エピトープは、ヒトＰＳＭＡ（配列番号３）の残基Ｉ１３８、Ｆ２３５、Ｐ２３７、Ｇ２３８、Ｄ２４４、Ｙ２９９、Ｙ３００、Ｑ３０３、Ｋ３０４、Ｅ３０７、及びＫ３２４～Ｐ３２６からなる、上記［１０９］に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
［１１１］ 前記抗体がＴ細胞に結合する、上記［１０９］に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
［１１２］ 前記第１のドメインが、
ｇ）それぞれ配列番号１４、１５、及び１６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号１７、１８、及び１９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
ｈ）それぞれ配列番号２０、２１及び２２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号２３、１２及び２４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、
ｉ）それぞれ配列番号２５、２６及び２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号２８、２９及び３０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、
ｊ）それぞれ配列番号３１、４４及び４５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号４６、２９及び４７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、
ｋ）それぞれ配列番号３１、４２及び４３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号１１、１２及び１３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、又は
ｌ）それぞれ配列番号１２２、１２３及び１２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びにそれぞれ配列番号２３、１２及び２４のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、を含む、上記［１０９］に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
［１１３］ 前記第１のドメインが、
ｇ）それぞれ配列番号１４、１５、及び１６、
ｈ）それぞれ配列番号２０、２１、及び２２、
ｉ）それぞれ配列番号２５、２６、及び２７、
ｊ）それぞれ配列番号３１、４４、及び４５、
ｋ）それぞれ配列番号３１、４２、及び４３、又は
ｌ）それぞれ配列番号１２２、１２３及び１２４の、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、上記［１０９］に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
［１１４］ 前記第１のドメインが、
ｇ）それぞれ配列番号１７、１８、及び１９、
ｈ）それぞれ配列番号２３、１２、及び２４、
ｉ）それぞれ配列番号２８、２９、及び３０、
ｊ）それぞれ配列番号４６、２９、及び４７、
ｋ）それぞれ配列番号１１、１２、及び１３、又は
ｌ）それぞれ配列番号２３、１２及び２４の、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、上記［１０９］に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
［１１５］ ｇ）前記第１のドメインが、配列番号６２の重鎖可変領域（ＶＨ）と配列番号６３の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記第２のドメインが、配列番号１０４のＶＨと配列番号１０５のＶＬを含む、
ｈ）前記第１ドメインが、配列番号６４のＶＨと配列番号６５のＶＬを含み、前記第２ドメインが、配列番号１０４のＶＨと配列番号１０５のＶＬを含む、
ｉ）前記第１ドメインが、配列番号６６のＶＨと配列番号６７のＶＬを含み、前記第２ドメインが、配列番号１０４のＶＨと配列番号１０５のＶＬを含む、
ｊ）前記第１ドメインが、配列番号７５のＶＨと配列番号７６のＶＬを含み、前記第２ドメインが、配列番号１０４のＶＨと配列番号１０５のＶＬを含む、
ｋ）前記第１ドメインが、配列番号７４のＶＨと配列番号６１のＶＬを含み、前記第２ドメインが、配列番号１０４のＶＨと配列番号１０５のＶＬを含む、
ｌ）前記第１ドメインが、配列番号１６０のＶＨと配列番号６５のＶＬを含み、前記第２ドメインが、配列番号１０４のＶＨと配列番号１０５のＶＬを含む、上記［１０９］に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
［１１６］ 第１の重鎖（ＨＣ１）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、ＨＣ１及びＬＣ１が、
ｇ）それぞれ配列番号８４及び８５、
ｈ）それぞれ配列番号８６及び８７、
ｉ）それぞれ配列番号８８及び８９、
ｊ）それぞれ配列番号１２５及び９１、
ｋ）それぞれ配列番号９４及び９５、又は
ｌ）それぞれ配列番号９６及び８３の、アミノ酸配列を含む、上記［１０９］に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
［１１７］ ＨＣ２及びＬＣ２が、それぞれ配列番号１１０及び１１１を含む、上記［１１６］に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
［１１８］ ｇ）それぞれ配列番号８４、８５、１１０、及び１１１、
ｈ）それぞれ配列番号８６、８７、１１０、及び１１１、
ｉ）それぞれ、配列番号８８、８９、１１０、及び１１１、
ｊ）それぞれ、配列番号１２５、９１、１１０、及び１１１、
ｋ）それぞれ配列番号９４、９５、１１０、及び１１１、
ｌ）それぞれ配列番号９６、８３、１１０、及び１１１の、ＨＣ１、ＬＣ１、ＨＣ２、及びＬＣ２を含む、上記［１０９］に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
［１１９］ 前記抗体がヒト又はヒト化である、上記［１０９］～［１１８］のいずれか一項に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
［１２０］ 前記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである、上記［１１９］に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
［１２１］ 前記抗体が、ＩｇＧ１、又はＩｇＧ４アイソタイプである、上記［１２０］に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
［１２２］ 抗体のＦｃ中に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の置換を含む、上記［１２０］又は［１２１］に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
［１２３］ ａ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓ置換、
ｂ）Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓ置換、
ｃ）Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、及びＱ２６８Ａ置換、
ｄ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、若しくはＬ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換、
ｅ）Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、若しくはＦ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換、
ｆ）Ｖ２３４Ａ置換、又は
ｇ）Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を含み、
ここで、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、上記［１２１］に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
［１２４］ 抗体ＣＨ３定常ドメインに少なくとも１つの置換を含む、上記［１０９］～１２３］のいずれか一項に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
［１２５］ 前記抗体ＣＨ３定常ドメイン中の置換が、４０９Ｒ、Ｆ４０５Ｌ又はＦ４０５Ｌ／Ｒ４０９Ｋ置換であり、ここで、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、上記［１２４］に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
［１２６］ 前記抗体が、
ａ）ＨＣ１中のＦ４０５Ｌ置換と、ＨＣ２中の４０９Ｒ置換と、を含み、抗体がＩｇＧ１アイソタイプである、
ｂ）ＨＣ１中のＶ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＦ４０５Ｌ置換と、ＨＣ２中のＶ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及び４０９Ｒ置換と、を含み、抗体がＩｇＧ１アイソタイプである、又は
ｃ）ＨＣ１中のＳ２２８Ｐ置換と、ＨＣ２中のＳ２２８Ｐ、Ｆ４０５Ｌ及びＲ４０９Ｋ置換と、を含み、抗体がＩｇＧ４アイソタイプである、上記［１２４］に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体。
［１２７］ 上記［１０９］～［１２６］のいずれか一項に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
［１２８］ 上記［１１８］に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体のＨＣ１、ＬＣ１、ＨＣ２又はＬＣ２をコードする、ポリヌクレオチド。
［１２９］ 上記［１２８］に記載のＨＣ１、ＬＣ１、ＨＣ２、ＬＣ２、ＨＣ１及びＬＣ１、又は、ＨＣ２及びＬＣ２をコードする、ポリヌクレオチドを含む、ベクター。
［１３０］ 上記［１２９］に記載のベクターを含む、単離宿主細胞。
［１３１］ 上記［１１８］に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体を作製する方法であって、前記抗体が発現する条件で上記［１３０］に記載の宿主細胞を培養することと、前記宿主細胞によって産生された前記二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体を回収し、精製することと、を含む、方法。
［１３２］ 上記［１１８］に記載の二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体を作製する方法であって、
ａ）２つの同一のＨＣ１と２つの同一のＬＣ１を有する単一特異性二価ＰＳＭＡ抗体と、２つの同一のＨＣ２と２つの同一のＬＣ２を有する単一特異性二価ＣＤ３抗体と、を、モル比約１：１の混合物で混合することと、
ｂ）混合物中に還元剤を導入することと、
ｃ）混合物を約９０分～約６時間インキュベートすることと、
ｄ）還元剤を除去することと、
ｅ）ＨＣ１、ＬＣ１、ＨＣ２及びＬＣ２を含む二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体を精製することと、を含む、方法。
［１３３］ 前記還元剤が、２－メルカプトエタノールアミン（２－ＭＥＡ）である、上記［１３２］に記載の方法。
［１３４］ ｈ）前記２－ＭＥＡが、約２５ｍＭ～約７５ｍＭの濃度で存在し、
ｉ）前記培養工程が、約２５℃～約３７℃の温度で行われる、上記［１３３］に記載の方法。
［１３５］ 対象において癌を治療する方法であって、治療有効量の上記［１０９］～［１２６］のいずれか一項に記載の単離されたＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体を、前記癌を治療するのに十分な時間にわたって、それを必要とする前記対象に投与することを含む、方法。
［１３６］ 前記癌が、固形腫瘍、悪性腫瘍又は血管新生系腫瘍である、上記［１３５］に記載の方法。
［１３７］ 前記固形腫瘍が、前立腺癌又は結腸直腸癌、胃癌、腎明細胞癌、膀胱癌、肺癌、扁平上皮癌、神経膠腫、乳癌、腎臓癌、血管新生疾患、腎明細胞癌（ＣＣＲＣＣ）、膵臓癌、腎臓癌、尿路上皮癌、及び肝臓の腺癌である、上記［１３６］に記載の方法。
［１３８］ 前記前立腺癌が、抵抗性前立腺癌、前立腺上皮内腫瘍、アンドロゲン非依存性前立腺癌、悪性前立腺癌である、上記［１３７］に記載の方法。
［１３９］ 前記抗体が、第２の治療剤と組み合わせて投与される、上記［１３５］～［１３８］のいずれか一項に記載の方法。
［１４０］ 前記第２の治療剤が、固形腫瘍又は悪性腫瘍又は血管新生系腫瘍の治療に対する標準治療薬である、上記［１３９］に記載の方法。
［１４１］ 前記第２の治療剤が、ホルモン阻害剤、微小管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、代謝拮抗薬、有糸***阻害剤、アルキル化剤、アントラサイクリン、ビンカアルカロイド、挿入剤、シグナル伝達経路に干渉可能な薬剤、アポトーシスを促進する薬剤、プロテオソーム阻害剤又は放射線である、上記［１３９］に記載の方法。
［１４２］ 前記第２の治療剤がワクチンである、上記［１３９］に記載の方法。
［１４３］ 前記ワクチンが、腫瘍細胞上で発現する、ポリペプチド若しくはその断片、又は、ポリペプチド若しくはそれらの断片をコードするＤＮＡ若しくはＲＮＡである、上記［１４２］に記載の方法。
［１４４］ 前記ポリペプチドが、ＰＳＭＡ、メソセリン、ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩである、上記［１４３］に記載の方法。
［１４５］ 前記第２の治療剤が、同時に、順次に、又は別々に投与される、上記［１３９］に記載の方法。
［１４６］ 前記対象が放射線療法で治療されるか、又は現在治療されている、上記［１３５］～［１４５］のいずれか一項に記載の方法。
［１４７］ 前記対象が手術を受けたか、又は後に受ける、上記［１３５］～［１４５］のいずれか一項に記載の方法。
［１４８］ 前記二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体の前記第１のドメインが、配列番号６６のＶＨ及び配列番号６７のＶＬを含み、前記二重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体の前記第２のドメインが、配列番号１０４のＶＨ及び配列番号１０５のＶＬを含む、上記［１３５］～１４５］のいずれか一項に記載の方法。
［１４９］ 治療に使用するための、上記［１０９］～［１２６］のいずれか一項に記載の抗体。
［１５０］ 上記［１０９］～［１２６］のいずれか一項に記載の抗体に結合する抗イディオタイプ抗体。

Claims (13)

  1. それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  2. 配列番号６６の重鎖可変領域（ＶＨ）と配列番号６７の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項１に記載の単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  3. 前記抗体が、ＩｇＧ４アイソタイプである、請求項１または２に記載の単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  4. Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を含み、ここで、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、請求項３に記載の単離された組み換え抗ＰＳＭＡ抗体又はその抗原結合フラグメント。
  5. ＰＳＭＡに特異的に結合する第１のドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する第２のドメインと、を含む、二重特異性抗体であって、前記第１のドメインが、
    それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、二重特異性抗体。
  6. 前記第１のドメインが、
    それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号６６のＶＨ、及び配列番号６７のＶＬを含む、請求項５に記載の二重特異性抗体。
  7. 前記第１のドメインが、配列番号６６のＶＨと配列番号６７のＶＬを含み、前記第２のドメインが、配列番号１０４のＶＨと配列番号１０５のＶＬを含む、請求項６に記載の二重特異性抗体。
  8. 第１の重鎖（ＨＣ１）、第１の軽鎖（ＬＣ１）、第２の重鎖（ＨＣ２）及び第２の軽鎖（ＬＣ２）を含み、ＨＣ１及びＬＣ１が、
    それぞれ配列番号８８及び８９のアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の二重特異性抗体。
  9. ＨＣ２及びＬＣ２が、それぞれ配列番号１１０及び１１１を含む、請求項８に記載の二重特異性抗体。
  10. それぞれ、配列番号８８、８９、１１０、及び１１１の、ＨＣ１、ＬＣ１、ＨＣ２、及びＬＣ２を含む、請求項９に記載の二重特異性抗体。
  11. 前記抗体が、ＩｇＧ４アイソタイプである、請求項５～１０のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  12. 抗体ＣＨ３定常ドメインに少なくとも１つの置換を含む、請求項１１に記載の二重特異性抗体。
  13. 前記抗体ＣＨ３定常ドメイン中の置換が、Ｒ４０９Ｋ、Ｆ４０５Ｌ、又はＦ４０５Ｌ及びＲ４０９Ｋ置換であり、ここで、残基の付番は、ＥＵインデックスに従う、請求項１２に記載の二重特異性抗体。
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Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2943511B1 (en) 2013-01-14 2019-08-07 Xencor, Inc. Novel heterodimeric proteins
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
EP3223845B1 (en) 2014-11-26 2021-05-19 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cd20
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
EA202092847A1 (ru) 2018-05-24 2021-04-20 Янссен Байотек, Инк. Антитела к cd3 и их применение
TW202104266A (zh) * 2019-04-19 2021-02-01 美商健生生物科技公司 使用抗ｐｓｍａ／ｃｄ３抗體來治療腎癌之方法
MX2021012767A (es) * 2019-04-19 2021-11-18 Janssen Biotech Inc Metodos para tratar el cancer de prostata con un anticuerpo anti-psma/cd3.
AU2020273654A1 (en) 2019-05-10 2021-11-25 Janssen Biotech, Inc. Macrocyclic chelators and methods of use thereof
US11919956B2 (en) * 2020-05-14 2024-03-05 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (PSMA) and CD3
AU2021275632A1 (en) 2020-05-20 2023-02-02 Janssen Biotech, Inc. Site-specific conjugation of glycosylated monoclonal antibodies with transglutaminase
AU2021329378A1 (en) 2020-08-19 2023-03-23 Xencor, Inc. Anti-CD28 compositions
MX2023003041A (es) 2020-09-16 2023-05-09 Amgen Inc Métodos para administrar dosis terapéuticas de moléculas de acoplamiento a células t biespecíficas para el tratamiento de cáncer.
AU2021379306A1 (en) 2020-11-10 2023-07-06 Janssen Biotech, Inc. Macrocyclic compounds and methods of use thereof
EP4284512A1 (en) * 2021-01-28 2023-12-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating cytokine release syndrome
EP4284838A2 (en) * 2021-01-28 2023-12-06 Janssen Biotech, Inc. Psma binding proteins and uses thereof
AU2022232375A1 (en) 2021-03-09 2023-09-21 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cldn6
US11859012B2 (en) 2021-03-10 2024-01-02 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and GPC3
JP2024517701A (ja) 2021-04-29 2024-04-23 アムジエン・インコーポレーテツド 組換え生産タンパク質の低分子量種を低減させる方法
US20230073821A1 (en) * 2021-08-27 2023-03-09 International Business Machines Corporation Antigen-binding proteins targeting coronavirus (cov) variants
CA3240194A1 (en) 2021-11-09 2023-05-19 Edward Cleator Macrocyclic compounds and methods of making the same
CA3236851A1 (en) 2021-11-09 2023-05-19 Janssen Biotech, Inc. Macrocyclic compounds and diagnostic uses thereof
WO2023152581A1 (en) 2022-02-09 2023-08-17 Janssen Biotech, Inc. Method of treating cancer with psmaxcd3 antibody
WO2023183231A1 (en) 2022-03-21 2023-09-28 Amgen Inc. Combination therapy methods with t-cell engaging molecules for treatment of prostate cancer
TW202405015A (zh) * 2022-04-11 2024-02-01 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 特異性結合ｐｓｍａ和ｃｄ２８的抗原結合分子及其醫藥用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012504403A (ja) 2008-10-01 2012-02-23 マイクロメット アーゲー 異種間特異的ｐｓｍａ×ｃｄ３二重特異性単鎖抗体
WO2016179518A2 (en) 2015-05-06 2016-11-10 Janssen Biotech, Inc. Prostate specific membrane antigen (psma) bispecific binding agents and uses thereof

Family Cites Families (93)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US541606A (en) 1895-06-25 Sealed package
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
WO1988001649A1 (en) 1986-09-02 1988-03-10 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
US6172197B1 (en) 1991-07-10 2001-01-09 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US20030206899A1 (en) 1991-03-29 2003-11-06 Genentech, Inc. Vascular endothelial cell growth factor antagonists
US6582959B2 (en) 1991-03-29 2003-06-24 Genentech, Inc. Antibodies to vascular endothelial cell growth factor
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
JP4124480B2 (ja) 1991-06-14 2008-07-23 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫グロブリン変異体
PT1696031E (pt) 1991-12-02 2010-06-25 Medical Res Council Produção de auto-anticorpos a partir de reportórios de segmentos de anticorpo e exibidos em fagos
DE69232539T3 (de) 1992-10-28 2007-01-04 Genentech, Inc., South San Francisco Verwendung von anti-VEGF Antikörpern zur Behandlung von Krebs
DE69329503T2 (de) 1992-11-13 2001-05-03 Idec Pharma Corp Therapeutische Verwendung von chimerischen und markierten Antikörpern, die gegen ein Differenzierung-Antigen gerichtet sind, dessen Expression auf menschliche B Lymphozyt beschränkt ist, für die Behandlung von B-Zell-Lymphoma
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5837242A (en) 1992-12-04 1998-11-17 Medical Research Council Multivalent and multispecific binding proteins, their manufacture and use
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
IL117645A (en) 1995-03-30 2005-08-31 Genentech Inc Vascular endothelial cell growth factor antagonists for use as medicaments in the treatment of age-related macular degeneration
AUPO591797A0 (en) 1997-03-27 1997-04-24 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation High avidity polyvalent and polyspecific reagents
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6884879B1 (en) 1997-04-07 2005-04-26 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
SI1325932T1 (ja) 1997-04-07 2005-08-31 Genentech Inc
DE69841815D1 (de) 1997-04-07 2010-09-16 Genentech Inc Anti-VEGF Antikörper
US20020032315A1 (en) 1997-08-06 2002-03-14 Manuel Baca Anti-vegf antibodies
US6670127B2 (en) 1997-09-16 2003-12-30 Egea Biosciences, Inc. Method for assembly of a polynucleotide encoding a target polypeptide
US6521427B1 (en) 1997-09-16 2003-02-18 Egea Biosciences, Inc. Method for the complete chemical synthesis and assembly of genes and genomes
US6818749B1 (en) 1998-10-31 2004-11-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Variants of humanized anti carcinoma monoclonal antibody cc49
US6703020B1 (en) 1999-04-28 2004-03-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Antibody conjugate methods for selectively inhibiting VEGF
JP2003531821A (ja) 1999-12-29 2003-10-28 イムノージェン インコーポレーテッド 改変型ドキソルビシンおよびダウノルビシンを含む細胞傷害性薬剤ならびにその治療上の使用
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
KR100857943B1 (ko) 2000-11-30 2008-09-09 메다렉스, 인코포레이티드 인간 항체의 제조를 위한 형질전환 트랜스염색체 설치류
US6995162B2 (en) 2001-01-12 2006-02-07 Amgen Inc. Substituted alkylamine derivatives and methods of use
EP2298809A3 (en) 2001-07-12 2012-02-15 FOOTE, Jefferson Super humanized antibodies
KR101004224B1 (ko) 2002-02-01 2010-12-27 어리어드 파마슈티칼스, 인코포레이티드 인 함유 화합물 및 이의 용도
HUE025767T2 (en) 2002-03-13 2016-05-30 Array Biopharma Inc N3-alkylated benzimidazole derivatives as MEK inhibitors
KR20060006975A (ko) 2003-05-30 2006-01-20 제넨테크, 인크. 항-ｖｅｇｆ 항체를 사용한 치료
AU2004242845B2 (en) 2003-05-31 2011-06-02 Amgen Research (Munich) Gmbh Human-anti-human CD3 binding molecules
WO2005044853A2 (en) 2003-11-01 2005-05-19 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
US20050106667A1 (en) 2003-08-01 2005-05-19 Genentech, Inc Binding polypeptides with restricted diversity sequences
KR101438983B1 (ko) 2003-11-06 2014-09-05 시애틀 지네틱스, 인크. 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물
DK1687066T3 (da) 2003-11-14 2012-11-26 Brigham & Womens Hospital Fremgangsmåder til immunmodulering
EP1761540B1 (en) 2004-05-13 2016-09-28 Icos Corporation Quinazolinones as inhibitors of human phosphatidylinositol 3-kinase delta
CN101006086B (zh) 2004-06-11 2010-09-29 日本烟草产业株式会社 用于治疗癌症的5-氨基-2,4,7-三氧代-3,4,7,8-四氢-2H-吡啶并[2,3-d]嘧啶衍生物和相关化合物
US20060009360A1 (en) 2004-06-25 2006-01-12 Robert Pifer New adjuvant composition
JP2008511337A (ja) 2004-09-02 2008-04-17 ジェネンテック・インコーポレーテッド ヘテロ多量体分子
ES2592271T3 (es) 2005-03-31 2016-11-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Métodos de producción de polipéptidos mediante la regulación de la asociación de los polipéptidos
DE102005028778A1 (de) 2005-06-22 2006-12-28 SUNJÜT Deutschland GmbH Mehrlagige Folie mit einer Barriere- und einer antistatischen Lage
WO2007004415A1 (ja) 2005-07-01 2007-01-11 Murata Manufacturing Co., Ltd. 多層セラミック基板およびその製造方法ならびに多層セラミック基板作製用複合グリーンシート
AR060070A1 (es) 2006-03-24 2008-05-21 Merck Patent Gmbh Dominios proteicos heterodimericos obtenidos por ingenieria
WO2007147901A1 (en) 2006-06-22 2007-12-27 Novo Nordisk A/S Production of bispecific antibodies
AU2007286808B2 (en) 2006-08-21 2012-12-06 Genentech, Inc. Aza-benzofuranyl compounds and methods of use
US20090155275A1 (en) 2007-07-31 2009-06-18 Medimmune, Llc Multispecific epitope binding proteins and uses thereof
US8748356B2 (en) 2007-10-19 2014-06-10 Janssen Biotech, Inc. Methods for use in human-adapting monoclonal antibodies
PL2690101T3 (pl) 2007-12-19 2015-12-31 Genentech Inc 5-anilinoimidazopirydyny i sposoby zastosowania
WO2009085462A1 (en) 2007-12-19 2009-07-09 Centocor, Inc. Design and generation of human de novo pix phage display libraries via fusion to pix or pvii, vectors, antibodies and methods
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
US8227577B2 (en) 2007-12-21 2012-07-24 Hoffman-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US8242247B2 (en) 2007-12-21 2012-08-14 Hoffmann-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
JP5547099B2 (ja) 2008-03-14 2014-07-09 インテリカイン， エルエルシー キナーゼ阻害剤および使用方法
CN102124009B (zh) 2008-07-08 2014-07-23 因特利凯公司 激酶抑制剂及其使用方法
JP5731978B2 (ja) 2008-09-26 2015-06-10 インテリカイン， エルエルシー 複素環キナーゼ阻害剤
US20100261620A1 (en) 2008-10-14 2010-10-14 Juan Carlos Almagro Methods of Humanizing and Affinity-Maturing Antibodies
EP2424567B1 (en) 2009-04-27 2018-11-21 OncoMed Pharmaceuticals, Inc. Method for making heteromultimeric molecules
EP2435473B1 (en) 2009-05-27 2013-10-02 F.Hoffmann-La Roche Ag Tri- or tetraspecific antibodies
KR101930964B1 (ko) 2010-04-20 2018-12-19 젠맵 에이/에스 이종이량체 항체 ｆｃ-함유 단백질 및 그의 생산 방법
BR112013011811A2 (pt) 2010-11-05 2023-02-23 Zymeworks Inc Modelo de anticorpo heterodimérico estável com mutações no domínio fc
CN103842030B (zh) 2011-08-01 2018-07-31 霍夫曼-拉罗奇有限公司 使用pd-1轴结合拮抗剂和mek抑制剂治疗癌症的方法
RS62689B1 (sr) 2011-11-04 2021-12-31 Zymeworks Inc Dizajn stabilnog heterodimernog antitela sa mutacijama u fc domenu
CA2869529A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Raffaella CASTOLDI Multispecific antibodies
US9593164B2 (en) 2012-11-21 2017-03-14 Janssen Biotech, Inc. Bispecific EGFR/c-Met antibodies
PE20210107A1 (es) 2013-12-17 2021-01-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-cd3 y metodos de uso
EP2930188A1 (en) 2014-04-13 2015-10-14 Affimed Therapeutics AG Trifunctional antigen-binding molecule
SG10201913324PA (en) 2014-05-29 2020-03-30 Macrogenics Inc Tri-specific binding molecules and methods of use thereof
MA53145A (fr) 2014-09-05 2021-05-19 Janssen Pharmaceutica Nv Agents de liaison cd123 et leurs utilisations
CN107849116A (zh) 2015-05-06 2018-03-27 詹森生物科技公司 ***特异性膜抗原结合iii型纤连蛋白结构域
JOP20160154B1 (ar) * 2015-07-31 2021-08-17 Regeneron Pharma أجسام ضادة مضاد لل psma، وجزيئات رابطة لمستضد ثنائي النوعية الذي يربط psma و cd3، واستخداماتها
UA126656C2 (uk) 2016-02-03 2023-01-11 Емджен Рісерч (Мюнік) Гмбх Біспецифічна конструкція антитіла до psma і cd3, яке залучають t-клітини
WO2018042071A1 (en) 2016-08-30 2018-03-08 Nokia Technologies Oy Controlling transmission of information on radio links used in aggregation
US20210017099A1 (en) 2017-12-18 2021-01-21 Janssen Biotech, Inc. Radiolabeling of polypeptides
MX2020012286A (es) * 2018-05-16 2021-04-28 Janssen Biotech Inc Metodos para tratar canceres y potenciar la eficacia de agentes terapeuticos para el redireccionamiento de celulas t.
EA202092847A1 (ru) 2018-05-24 2021-04-20 Янссен Байотек, Инк. Антитела к cd3 и их применение

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2012504403A (ja) 2008-10-01 2012-02-23 マイクロメット アーゲー 異種間特異的ｐｓｍａ×ｃｄ３二重特異性単鎖抗体
WO2016179518A2 (en) 2015-05-06 2016-11-10 Janssen Biotech, Inc. Prostate specific membrane antigen (psma) bispecific binding agents and uses thereof

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