KR20210015902A - Psma 결합제 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 PSMA 또는 PSMA 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항체, 그러한 항체 또는 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 이들의 제조 및 사용 방법에 관한 것이다.
Description
서열 목록
본 출원은 ASCII 서식으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함하며, 이는 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다. 2019년 4월 30일자로 생성된 상기 ASCII 사본은 파일명이 JBI5156WOPCT1_SL.txt이며, 크기가 272,443 바이트이다.
기술분야
본 명세서에 제공된 본 발명은 전립선 특이적 막 항원(PSMA)에 면역특이적으로 결합하는 단일클론 항체, PSMA 및 분화 클러스터 3(CD3)에 면역특이적으로 결합하는 다중특이성 항체, 및 기재된 항체의 생성 및 사용 방법에 관한 것이다.
전립선암은 전세계적으로 남성에 있어 두 번째로 가장 일반적인 암이고, 암-관련 사망의 여섯 번째 주요 원인이다. 전세계적으로, 매해마다 대략 1,100,000건의 새로운 사례 및 300,000건의 사망이 있으며, 이는 모든 암 사망의 4%를 차지한다. 6명의 남성마다 1명은 그의 생애 동안 이 질병으로 진단될 것으로 추정된다. 미국에서는, 전립선암의 90% 초과가 국소 병기(local stage) 또는 국한 병기(regional stage)에서 발견된다. 이들 초기 병기에서, 5년 생존율은 100%에 가깝다. 그러나, 이 암이 전이되었을 경우, 5년 생존율은 28%로 떨어지고, 진행 병기(advanced-stage) 전립선암에 대한 효과적인 치료에 대한 필요성이 남아 있다.
전립선 특이적 막 항원(PSMA)은 일부 전립선 세포가 비정상적으로 보이고 거동하기 시작하는 질환인 전립선 상피내 신생종(PIN)에서, 그리고 원발성 및 전이성 전립선 암에서 고도로 발현되는 II형 막 단백질이다(문헌[Bostwick DG, Pacelli A, Blute M, Roche P, Murphy GP. Prostate specific membrane antigen expression in prostatic intraepithelial neoplasia and adenocarcinoma: A study of 184 cases. Cancer 1998;82 (11):2256-2261]). 암 조직에서의 PSMA의 발현은 질병의 병기 및 글리슨 점수(Gleason score)와 상관관계가 있다(문헌[Kawakami M, Nakayama J. Enhanced expression of prostate-specific membrane antigen gene in prostate cancer as revealed by in situ hybridization. Cancer Res 1997;57(12):2321-2324]). PSMA 발현은 또한 호르몬-불응성 환자로부터의 전립선암 세포에서 더 높고(문헌[Wright GL Jr, Grob BM, Haley C, Grossman K, Newhall K, Petrylak D, Troyer J, KonchubaA, Schellhammer PF, Moriarty R. Upregulation of prostate-specific membrane antigen after androgen- deprivation therapy. Urology 1996;48(2):326-334]), 증가된 PSMA 발현은 질병 재발의 독립적인 마커인 것으로 밝혀져 있다(문헌[Mitsiades CS, Lembessis P, Sourla A, Milathianakis C, TsintavisA, Koutsilieris M. Molecular staging by RT-pCR analysis for PSA and PSMA in peripheral blood and bone marrow samples is an independent predictor of time to biochemical failure followingradical prostatectomy for clinically localized prostate cancer. Clin Exp Metastasis 2004;21(6):495-505]). 고수준 PSMA 발현은 외과적으로 치료된 전립선암에서 초기 전립선-특이적 항원(PSA) 재발과 상관관계가 있다. PSMA 발현 수준은 이 질병의 공격성과 상관관계가 있으며, 그럼으로써 전립선암 특징규명 및 후속 요법을 위한 탁월한 표적으로서 PSMA를 강하게 뒷받침한다.
전립선암에 대한 현재의 치료는 수술, 방사선 및 호르몬 요법을 포함한다. 호르몬 요법에 의해 테스토스테론 수준을 낮춤에도 불구하고 전립선암이 성장하는 경우에는, 치료 선택지가 제한된다. 전형적으로, 방사성 약제학적 작용제인 암 백신 시풀류셀(sipuleucel)-T(예컨대, 라듐-223 클로라이드), 2차 호르몬 요법(예컨대, 아비라테론 또는 엔잘루타미드), 및/또는 화학요법(도세탁셀 및 카바지탁셀)이 순차적으로 호르몬 요법에 추가된다. 이들 치료 각각은 수개월 동안 암의 성장을 지연시키고 이 질병에 의해 야기된 증상을 고식시킬 수 있지만, 이 질병은 궁극적으로 그들에 저항성을 갖게 된다. 이는 PSMA-발현 진행성 전립선암에 대한 더 개선된 치료 및 효과적인 요법에 대한 필요성을 강조한다.
판 트로글로디테스(Pan troglodytes)(침팬지, 침프(chimp)), 마카카 파시쿨라리스(Macaca fascicularis)(사이노몰거스(cynomolgus) 원숭이, 마카크(macaque), 사이노(cyno)) 및/또는 인간, PSMA에 면역특이적으로 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편이 본 명세서에 제공된다. 또한, 제공된 PSMA-특이적 항체 및 항원-결합 단편을 인코딩할 수 있는 관련 폴리뉴클레오티드, 제공된 항체 및 항원-결합 단편을 발현하는 세포, 이뿐만 아니라 관련 벡터 및 검출가능하게 표지화된 항체 및 항원-결합 단편도 기재된다. 게다가, 제공된 항체 및 항원-결합 단편의 사용 방법이 기재된다. 예를 들어, PSMA-특이적 항체 및 항원-결합 단편은 PSMA-발현 암을 진단하거나 이의 진행, 퇴행, 또는 안정성을 모니터링하기 위해 사용되거나; 환자가 암에 대해 치료되어야 하는지의 여부를 결정하기 위해 사용되거나; 또는 대상체가 PSMA-발현 암을 앓고 있고 이에 따라 PSMA-특이적 항암 치료제, 예컨대 본 명세서에 기재된 PSMA 및 CD3에 대한 다중특이성(이중특이성, 삼중특이성 등) 항체에 의한 치료에 적합할 수 있는지의 여부를 결정하기 위해 사용될 수 있다.
PSMA 및 CD3에 면역특이적으로 결합하는 다중특이성 항체 및 이의 다중특이성 항원-결합 단편이 본 명세서에 추가로 제공된다. 또한, 제공된 PSMA × CD3 다중특이성 항체를 인코딩할 수 있는 관련 폴리뉴클레오티드, 제공된 항체를 발현하는 세포, 이뿐만 아니라 관련 벡터 및 검출가능하게 표지화된 다중특이성 항체도 기재된다. 게다가, 제공된 다중특이성 항체의 사용 방법이 기재된다. 예를 들어, PSMA × CD3 다중특이성 항체는 PSMA-발현 암을 진단하거나 이의 진행, 퇴행, 또는 안정성을 모니터링하기 위해 사용되거나; 환자가 암에 대해 치료되어야 하는지의 여부를 결정하기 위해 사용되거나; 또는 대상체가 PSMA-발현 암을 앓고 있고 이에 따라 PSMA-특이적 항암 치료제, 예컨대 본 명세서에 기재된 PSMA × CD3 다중특이성 항체에 의한 치료에 적합할 수 있는지의 여부를 결정하기 위해 사용될 수 있다.
PSMA-특이적 항체
본 발명은, 각각 서열 번호 31, 42 및 43의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2 및 HCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스(사이노몰거스 원숭이, 마카크, 사이노) 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 31, 42, 43의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 11, 12 및 13의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 25, 26 및 27의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 25, 26, 27의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 28, 29 및 30의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 20, 21 및 22의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 20, 21, 및 22의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 23, 12 및 24의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 14, 15, 및 16의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 또는 각각 서열 번호 14, 15 및 16을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 14, 15, 및 16의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 17, 18 및 19의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 36, 37 및 38의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 36, 37, 및 38의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 39, 40 및 41의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 122, 123 및 124의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 122, 123, 및 124의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 23, 12, 및 24의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 31, 44 및 45의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2 및 HCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스(사이노몰거스 원숭이, 마카크, 사이노) 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 31, 44, 및 45의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 46, 29 및 27의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 36, 37 및 48의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2 및 HCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스(사이노몰거스 원숭이, 마카크, 사이노) 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 36, 37, 및 48의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 49, 50 및 51의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 36, 37 및 52의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2 및 HCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스(사이노몰거스 원숭이, 마카크, 사이노) 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 36, 37, 및 52의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 49, 50 및 51의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 8, 9 및 10의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2 및 HCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스(사이노몰거스 원숭이, 마카크, 사이노) 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 8, 9, 및 10의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 11, 12 및 13의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 31, 32 및 33의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2 및 HCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스(사이노몰거스 원숭이, 마카크, 사이노) 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 31, 32, 및 33의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 34, 12 및 35의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 53, 54 및 55의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2 및 HCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스(사이노몰거스 원숭이, 마카크, 사이노) 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은, 각각 서열 번호 53, 54, 및 55의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 23, 12 및 35의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은 또한, 본 명세서에 기재된 바와 같은 소정의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은 또한, 본 명세서에 기재된 바와 같은 소정의 가변 중쇄 영역(VH) 및 가변 경쇄 영역(VL) 아미노산 서열을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은 또한, 본 명세서에 기재된 바와 같은 소정의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, LCDR3, VH, VL, 중쇄 또는 경쇄 아미노산 서열을 포함하는, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는, 판 트로글로디테스, 마카카 파시쿨라리스 및/또는 인간 PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 31, 42, 43, 11, 12 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 25, 26, 27, 28, 29 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 36, 37, 38, 39, 40 및 41의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 20, 21, 22, 23, 12 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 14, 15, 16, 17, 18 및 19의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 122, 123, 124, 23, 12, 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 31, 44, 45, 46, 29 및 47의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 36, 37, 48, 49, 50, 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 36, 37, 52, 49, 50, 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 8, 9, 10, 11, 12, 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 31, 32, 33, 34, 12, 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 53, 54, 55, 23, 12, 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 25, 130, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 25, 135, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 25, 134, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 각각 서열 번호 25, 137, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 서열 번호 74의 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호 61의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 서열 번호 74의 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호 61의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 152의 VH 및 서열 번호 153의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 서열 번호 66의 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호 67의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 서열 번호 66의 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호 67의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 152의 VH 및 서열 번호 153의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 서열 번호 64의 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호 65의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 서열 번호 64의 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호 65의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 152의 VH 및 서열 번호 153의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 서열 번호 62의 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호 63의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 서열 번호 62의 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호 63의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 152의 VH 및 서열 번호 153의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 서열 번호 75의 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호 76의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 서열 번호 75의 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호 76의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 152의 VH 및 서열 번호 153의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 서열 번호 160의 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호 65의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체 및 이의 단편을 제공하며, 상기 제1 도메인은 서열 번호 160의 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호 65의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 152의 VH 및 서열 번호 153의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한 치료제 또는 조영제에 연결된 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하는 면역접합체를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 항체 VH, 항체 VL, 또는 항체 VH 및 항체 VL을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 항체 VH, 항체 VL, 또는 항체 VH 및 VL을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 항체를 생성하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 항체가 발현되는 조건에서 본 발명의 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 상기 숙주 세포에 의해 생성되는 상기 항체를 회수하는 단계를 포함한다.
본 발명은 또한 대상체에서 PSMA-과발현 질병 및/또는 암을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 단리된 항체의 치료적 유효량을 상기 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 상기 PSMA-과발현 질병 및/또는 암의 치료를 필요로 하는 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명은 또한 본 발명의 항체를 포함하는 키트를 제공한다.
도 1은 LNCaP 세포에 결합하는 항-PSMA 파지 패닝 히트(hit)에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 2는 침팬지 PSMA-발현 HEK 세포에 결합하는 항-PSMA 파지 패닝 히트에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 3은 사이노몰거스 원숭이 PSMA-발현 HEK 세포에 결합하는 항-PSMA 파지 패닝 히트에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 4는 순차적 넘버링을 갖는 SP34의 아미노산 서열을 나타낸다. AbM 정의에서의 CDR(문헌[K.R. Abhinandan and A. C. Martin, 2008. Mol. Immunol. 45, 3832-3839])은 밑줄 쳐져 있다. Ser230이 파파인-절단된 Fab에 존재하는 마지막 HC 잔기이다. 잔기 231 내지 455는 IGHG3_MOUSE(마우스 IgG3, 아이소형(isoform) 2)로부터 유래된다.
도 5는 VH에 대한 인간 프레임워크 적응화("HFA") 변이체(보이는 순서대로 각각 서열 번호 104, 102, 115, 및 116) 및 VL에 대한 인간 프레임워크 적응화 변이체(보이는 순서대로 각각 서열 번호 103, 117, 및 105)를 나타낸다. 넘버링은 순차적이며; AbM 정의에서의 CDR은 밑줄 그어져 있고; SP34와 상이한 잔기는 볼드체로 강조되어 있고; HFA 변이체에서의 복귀 돌연변이는 볼드체이고 밑줄 쳐져 있다. 도면은, 각각 서열 번호 128 및 129로서의 sp34 VH 및 VL 서열을 개시한다.
도 6은 1차 인간 T 세포에 대한 SP34 HFA 변이체의 결합을 나타낸다.
도 7은 사이노몰거스 1차 T 세포에 대한 SP34 HFA 변이체의 결합을 나타낸다.
도 8은 SP34 HFA 변이체가 1차 인간 T 세포를 시험관내(in vitro)에서 활성화함을 나타낸다. 음성 대조군은 백색으로 나타나 있고 양성 대조군은 흑색으로 나타나 있다.
도 9는 SP34 HFA 변이체가 1차 사이노몰거스 T 세포를 시험관내에서 활성화함을 나타낸다. 음성 대조군은 백색으로 나타나 있고 양성 대조군은 흑색으로 나타나 있다. 비-CD3e-교차-반응성 항체 G11은 추가의 음성 대조군으로의 역할을 하였다.
도 10a 및 도 10b는 SP34 HFA 변이체에 의한 결합 및 활성화의 상관관계를 나타낸다. 인간(도 10a) 및 사이노몰거스(도 10b)에 대한 평균 결합 및 CD69 평균 형광 강도("MFI") 값이 서로에 대해 도표로 나타나 있다.
도 11a 내지 도 11f는 LNCaP 세포에 결합하는 PSMA × CD3 이중특이성 항체에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 12는 침팬지 PSMA-발현 HEK 세포에 결합하는 PSMA × CD3 이중특이성 항체에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 13은 사이노몰거스 원숭이 PSMA-발현 HEK 세포에 결합하는 PSMA × CD3 이중특이성 항체에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 14는 인간 PSMA-발현 HEK 세포에 결합하는 PSMA × CD3 이중특이성 항체에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 15는 T-세포-매개 크롬 방출 독성 검정에서 인간 PSMA-발현 HEK 세포에 대한 PSMA × CD3 이중특이성 항체에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 16은 인간 PSMA-발현 HEK 세포에 대한 T-세포-매개 크롬 방출 독성 검정에서 PSMA × CD3 이중특이성 항체 내의 중간 친화도 vs. 고친화도 CD3 아암의 비교를 나타낸다.
도 17은 T-세포-매개 크롬 방출 독성 검정에서 LNCaP 세포에 대한 PSMA × CD3 이중특이성 항체에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 18은 T-세포-매개 크롬 방출 독성 검정에서 사이노몰거스 원숭이 PSMA-발현 HEK 세포에 대한 PSMA × CD3 이중특이성 항체에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 19a, 도 19b, 및 도 19c는 T-세포-매개 카스파제 3/7 독성 검정에서 인간 및 사이노몰거스 원숭이 PSMA-발현 HEK 세포 및 LNCaP 세포에 대한 PS3B27 및 대조 이중특이성 항체에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 20은 PS3B27에 의한 T-세포 활성화를 나타낸다.
도 21은 PBMC 인간화 NSG 마우스에서 PS3B27 또는 대조 이중특이성 항체로 처리된 HEK293-PSMA 이종이식편의 종양발생의 예방을 나타낸다.
도 22는 PS3B27 및 대조 이중특이성 항체 처리를 갖는 HEK293-PSMA 이종이식편을 보유하는 PBMC-인간화 NSG 마우스의 평균 체중을 나타낸다.
도 23은 수컷 CD1 누드 마우스에서 혼합물 HEK293-PSMA/T 세포 이종이식편의 종양발생 예방에 있어서의 PS3B27 및 대조 이중특이성 항체의 효능을 나타낸다.
도 24는 PS3B27 및 대조 이중특이성 항체로 처리된 혼합물 HEK293-PSMA/T 세포 이종이식편을 보유하는 CD1 수컷 누드 마우스의 체중을 나타낸다.
도 25는 인간 PSMA ECD 동종이량체에 결합된 PSMB83(별칭 "PSMM84") Fab의 전체 구조를 나타낸다.
도 26은 PSMB83(별칭 "PSMM84") 경쇄와의 PSMA 주요 상호작용의 확대도를 나타낸다.
도 27은 PSMB83(별칭 "PSMM84") 중쇄와의 PSMA 주요 상호작용의 확대도를 나타낸다.
도 28은 인간(서열 번호 3), 마우스(서열 번호 157) 및 사이노몰거스 원숭이(사이노) (서열 번호 2) PSMA의 서열 내의 PSMB83(별칭 "PSMM84")의 에피토프 잔기의 비교를 나타낸다. 에피토프 잔기가 음영처리되어 있으며, 서열 다양성이 밑줄로 나타나 있다.
도 29는 PSMB83(별칭 "PSMM84")의 파라토프 잔기를 나타낸다. CDR은 밑줄 쳐져 있고 파라토프 잔기는 음영처리되어 있다. 도면은 보이는 순서대로 각각 서열 번호 158 및 159를 개시한다.
도 30은 PSMA와 PSMB83(별칭 "PSMM84") 사이에 이루어진 직접 접촉을 갖는 상호작용 맵을 나타낸다. 반데르발스 상호작용은 파선으로 나타나 있고, H 결합은 실선이며, 화살표는 골격 원자를 가리킨다.
도 31은 모 PSMB83의 발현과 비교하여 PSMB83으로부터 유래된 항-PSMA Fab 클론의 발현 수준을 나타낸다. 원시 발광수(raw luminescence number)를 로그 농도에 대해 도표로 나타내었다.
도 32는 모 PSMB83의 결합과 비교하여 PSMB83으로부터 유래된 항-PSMA Fab 클론의 인간 PSMA에 대한 결합을 나타낸다. 원시 발광수를 로그 농도에 대해 도표로 나타내었다.
도 33은 모 PSMB83의 결합과 비교하여 PSMB83으로부터 유래된 항-PSMA Fab 클론의 사이노 PSMA에 대한 결합을 나타낸다. 원시 발광수를 로그 농도에 대해 도표로 나타내었다.
도 34는 모 PSMB83의 결합과 비교하여 PSMB83으로부터 유래된 항-PSMA Fab 클론의 인간 PSMA에 대한 결합을 나타낸다. 원시 발광수를 Fab 발현 수준에 의해 정규화하였다.
도 35는 모 PSMB83의 결합과 비교하여 PSMB83으로부터 유래된 항-PSMA Fab 클론의 사이노 PSMA에 대한 결합을 나타낸다. 원시 발광수를 Fab 발현 수준에 의해 정규화하였다.
도 36은 친화성 성숙된 PSMAxCD3 이중특이성 항체의 하위세트의 LNCaP 세포 결합을 나타낸다.
도 37은 친화성 성숙된 PSMAxCD3 이중특이성 항체의 하위세트의 LNCaP 세포 결합을 나타낸다.
도 38은 친화성 성숙된 PSMAxCD3 이중특이성 항체의 PSMA-음성 PC3 세포 결합 결과를 나타낸다.
도 39는 기능적 세포 사멸 검정에서의 PSMAxCD3 친화성 성숙된 이중특이성 Ab의 결과를 나타낸다.
도 40은 T 세포 인간화 NSG 마우스에서 LnCAP AR.TB 인간 전립선 이종이식편에서의 PS3B79의 항-종양 효능을 나타낸다. 피하 LnCAP AR.TB 종양을 주 2회 측정하였으며, 결과는 ㎣ ± SEM(*, p<0.0001)으로 표현된 평균 종양 부피로서 제시되어 있다.
도 41은 T 세포 인간화 NSG 마우스에서 LnCAP AR.TB 인간 전립선 이종이식편에서의 PS3B90의 항-종양 효능을 나타낸다. 피하 LnCAP AR.TB 종양을 주 2회 측정하였으며, 결과는 ㎣ ± SEM(*, p<0.001)으로 표현된 평균 종양 부피로서 제시되어 있다.
도 42는 T-세포 인간화 NSG 마우스에서 확립된 환자-유래 이종이식편 LuCaP 86.2 전립선 종양 모델에 대한 PS3B72(PSMA × CD3)의 효과를 나타낸다. 피하 LuCaP 86.2 종양을 주 2회 측정하였으며, 결과는 ㎣ ± SEM(*, p<0.0001)으로 표현된 평균 종양 부피로서 제시되어 있다.
도 2는 침팬지 PSMA-발현 HEK 세포에 결합하는 항-PSMA 파지 패닝 히트에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 3은 사이노몰거스 원숭이 PSMA-발현 HEK 세포에 결합하는 항-PSMA 파지 패닝 히트에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 4는 순차적 넘버링을 갖는 SP34의 아미노산 서열을 나타낸다. AbM 정의에서의 CDR(문헌[K.R. Abhinandan and A. C. Martin, 2008. Mol. Immunol. 45, 3832-3839])은 밑줄 쳐져 있다. Ser230이 파파인-절단된 Fab에 존재하는 마지막 HC 잔기이다. 잔기 231 내지 455는 IGHG3_MOUSE(마우스 IgG3, 아이소형(isoform) 2)로부터 유래된다.
도 5는 VH에 대한 인간 프레임워크 적응화("HFA") 변이체(보이는 순서대로 각각 서열 번호 104, 102, 115, 및 116) 및 VL에 대한 인간 프레임워크 적응화 변이체(보이는 순서대로 각각 서열 번호 103, 117, 및 105)를 나타낸다. 넘버링은 순차적이며; AbM 정의에서의 CDR은 밑줄 그어져 있고; SP34와 상이한 잔기는 볼드체로 강조되어 있고; HFA 변이체에서의 복귀 돌연변이는 볼드체이고 밑줄 쳐져 있다. 도면은, 각각 서열 번호 128 및 129로서의 sp34 VH 및 VL 서열을 개시한다.
도 6은 1차 인간 T 세포에 대한 SP34 HFA 변이체의 결합을 나타낸다.
도 7은 사이노몰거스 1차 T 세포에 대한 SP34 HFA 변이체의 결합을 나타낸다.
도 8은 SP34 HFA 변이체가 1차 인간 T 세포를 시험관내(in vitro)에서 활성화함을 나타낸다. 음성 대조군은 백색으로 나타나 있고 양성 대조군은 흑색으로 나타나 있다.
도 9는 SP34 HFA 변이체가 1차 사이노몰거스 T 세포를 시험관내에서 활성화함을 나타낸다. 음성 대조군은 백색으로 나타나 있고 양성 대조군은 흑색으로 나타나 있다. 비-CD3e-교차-반응성 항체 G11은 추가의 음성 대조군으로의 역할을 하였다.
도 10a 및 도 10b는 SP34 HFA 변이체에 의한 결합 및 활성화의 상관관계를 나타낸다. 인간(도 10a) 및 사이노몰거스(도 10b)에 대한 평균 결합 및 CD69 평균 형광 강도("MFI") 값이 서로에 대해 도표로 나타나 있다.
도 11a 내지 도 11f는 LNCaP 세포에 결합하는 PSMA × CD3 이중특이성 항체에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 12는 침팬지 PSMA-발현 HEK 세포에 결합하는 PSMA × CD3 이중특이성 항체에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 13은 사이노몰거스 원숭이 PSMA-발현 HEK 세포에 결합하는 PSMA × CD3 이중특이성 항체에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 14는 인간 PSMA-발현 HEK 세포에 결합하는 PSMA × CD3 이중특이성 항체에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 15는 T-세포-매개 크롬 방출 독성 검정에서 인간 PSMA-발현 HEK 세포에 대한 PSMA × CD3 이중특이성 항체에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 16은 인간 PSMA-발현 HEK 세포에 대한 T-세포-매개 크롬 방출 독성 검정에서 PSMA × CD3 이중특이성 항체 내의 중간 친화도 vs. 고친화도 CD3 아암의 비교를 나타낸다.
도 17은 T-세포-매개 크롬 방출 독성 검정에서 LNCaP 세포에 대한 PSMA × CD3 이중특이성 항체에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 18은 T-세포-매개 크롬 방출 독성 검정에서 사이노몰거스 원숭이 PSMA-발현 HEK 세포에 대한 PSMA × CD3 이중특이성 항체에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 19a, 도 19b, 및 도 19c는 T-세포-매개 카스파제 3/7 독성 검정에서 인간 및 사이노몰거스 원숭이 PSMA-발현 HEK 세포 및 LNCaP 세포에 대한 PS3B27 및 대조 이중특이성 항체에 대한 적정 곡선을 나타낸다.
도 20은 PS3B27에 의한 T-세포 활성화를 나타낸다.
도 21은 PBMC 인간화 NSG 마우스에서 PS3B27 또는 대조 이중특이성 항체로 처리된 HEK293-PSMA 이종이식편의 종양발생의 예방을 나타낸다.
도 22는 PS3B27 및 대조 이중특이성 항체 처리를 갖는 HEK293-PSMA 이종이식편을 보유하는 PBMC-인간화 NSG 마우스의 평균 체중을 나타낸다.
도 23은 수컷 CD1 누드 마우스에서 혼합물 HEK293-PSMA/T 세포 이종이식편의 종양발생 예방에 있어서의 PS3B27 및 대조 이중특이성 항체의 효능을 나타낸다.
도 24는 PS3B27 및 대조 이중특이성 항체로 처리된 혼합물 HEK293-PSMA/T 세포 이종이식편을 보유하는 CD1 수컷 누드 마우스의 체중을 나타낸다.
도 25는 인간 PSMA ECD 동종이량체에 결합된 PSMB83(별칭 "PSMM84") Fab의 전체 구조를 나타낸다.
도 26은 PSMB83(별칭 "PSMM84") 경쇄와의 PSMA 주요 상호작용의 확대도를 나타낸다.
도 27은 PSMB83(별칭 "PSMM84") 중쇄와의 PSMA 주요 상호작용의 확대도를 나타낸다.
도 28은 인간(서열 번호 3), 마우스(서열 번호 157) 및 사이노몰거스 원숭이(사이노) (서열 번호 2) PSMA의 서열 내의 PSMB83(별칭 "PSMM84")의 에피토프 잔기의 비교를 나타낸다. 에피토프 잔기가 음영처리되어 있으며, 서열 다양성이 밑줄로 나타나 있다.
도 29는 PSMB83(별칭 "PSMM84")의 파라토프 잔기를 나타낸다. CDR은 밑줄 쳐져 있고 파라토프 잔기는 음영처리되어 있다. 도면은 보이는 순서대로 각각 서열 번호 158 및 159를 개시한다.
도 30은 PSMA와 PSMB83(별칭 "PSMM84") 사이에 이루어진 직접 접촉을 갖는 상호작용 맵을 나타낸다. 반데르발스 상호작용은 파선으로 나타나 있고, H 결합은 실선이며, 화살표는 골격 원자를 가리킨다.
도 31은 모 PSMB83의 발현과 비교하여 PSMB83으로부터 유래된 항-PSMA Fab 클론의 발현 수준을 나타낸다. 원시 발광수(raw luminescence number)를 로그 농도에 대해 도표로 나타내었다.
도 32는 모 PSMB83의 결합과 비교하여 PSMB83으로부터 유래된 항-PSMA Fab 클론의 인간 PSMA에 대한 결합을 나타낸다. 원시 발광수를 로그 농도에 대해 도표로 나타내었다.
도 33은 모 PSMB83의 결합과 비교하여 PSMB83으로부터 유래된 항-PSMA Fab 클론의 사이노 PSMA에 대한 결합을 나타낸다. 원시 발광수를 로그 농도에 대해 도표로 나타내었다.
도 34는 모 PSMB83의 결합과 비교하여 PSMB83으로부터 유래된 항-PSMA Fab 클론의 인간 PSMA에 대한 결합을 나타낸다. 원시 발광수를 Fab 발현 수준에 의해 정규화하였다.
도 35는 모 PSMB83의 결합과 비교하여 PSMB83으로부터 유래된 항-PSMA Fab 클론의 사이노 PSMA에 대한 결합을 나타낸다. 원시 발광수를 Fab 발현 수준에 의해 정규화하였다.
도 36은 친화성 성숙된 PSMAxCD3 이중특이성 항체의 하위세트의 LNCaP 세포 결합을 나타낸다.
도 37은 친화성 성숙된 PSMAxCD3 이중특이성 항체의 하위세트의 LNCaP 세포 결합을 나타낸다.
도 38은 친화성 성숙된 PSMAxCD3 이중특이성 항체의 PSMA-음성 PC3 세포 결합 결과를 나타낸다.
도 39는 기능적 세포 사멸 검정에서의 PSMAxCD3 친화성 성숙된 이중특이성 Ab의 결과를 나타낸다.
도 40은 T 세포 인간화 NSG 마우스에서 LnCAP AR.TB 인간 전립선 이종이식편에서의 PS3B79의 항-종양 효능을 나타낸다. 피하 LnCAP AR.TB 종양을 주 2회 측정하였으며, 결과는 ㎣ ± SEM(*, p<0.0001)으로 표현된 평균 종양 부피로서 제시되어 있다.
도 41은 T 세포 인간화 NSG 마우스에서 LnCAP AR.TB 인간 전립선 이종이식편에서의 PS3B90의 항-종양 효능을 나타낸다. 피하 LnCAP AR.TB 종양을 주 2회 측정하였으며, 결과는 ㎣ ± SEM(*, p<0.001)으로 표현된 평균 종양 부피로서 제시되어 있다.
도 42는 T-세포 인간화 NSG 마우스에서 확립된 환자-유래 이종이식편 LuCaP 86.2 전립선 종양 모델에 대한 PS3B72(PSMA × CD3)의 효과를 나타낸다. 피하 LuCaP 86.2 종양을 주 2회 측정하였으며, 결과는 ㎣ ± SEM(*, p<0.0001)으로 표현된 평균 종양 부피로서 제시되어 있다.
본 명세서에 인용된, 특허 및 특허 출원을 포함하지만 이에 한정되지 않는 모든 간행물은 마치 완전히 기재된 것처럼 본 명세서에 참고로 포함된다.
본 명세서에서 사용되는 용어는 단지 특정 실시 형태들을 설명하기 위한 것이며, 한정하는 것으로 의도되지 않음을 이해해야 한다. 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술 용어 및 과학 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다.
본 명세서에 기재된 것과 유사하거나 또는 동등한 임의의 방법 및 재료가 본 발명의 시험 실시에 사용될 수 있지만, 예시적인 방법 및 재료가 본 명세서에 기재되어 있다. 본 발명을 설명하고 청구함에 있어서, 하기 용어가 사용될 것이다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수형("a", "an" 및 "the")은 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않으면, 복수의 지시 대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "세포"에 대한 언급은 2개 이상의 세포의 조합 등을 포함한다.
"특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합한다" 또는 "결합한다"는 항체가 항원 또는 항원 내의 에피토프에 대해 다른 항원들에 대한 친화성보다 더 큰 친화성으로 결합하는 것을 지칭한다. 전형적으로, 항체는 약 5x10-8 M 이하, 예를 들어 약 1x10-9 M 이하, 약 1x10-10 M 이하, 약 1x10-11 M 이하, 또는 약 1x10-12 M 이하의 평형 해리 상수(KD)로 항원 또는 항원 내의 에피토프에 결합하며, 이때 전형적으로 KD는 비특이적 항원(예를 들어, BSA, 카세인)에 결합하기 위한 그의 KD보다 적어도 100배 더 적다. 해리 상수는 표준 절차를 사용하여 측정될 수 있다. 그러나, 항원 또는 항원 내의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체는 다른 관련 항원들과의, 예를 들어 다른 종(상동체), 예컨대 인간 또는 원숭이, 예를 들어 마카카 파시쿨라리스(사이노몰거스, 사이노) 또는 판 트로글로디테스(침팬지, 침프)로부터의 동일한 항원과의 교차-반응성을 가질 수 있다. 단일특이성 항체는 하나의 항원 또는 하나의 에피토프에 특이적으로 결합하지만, 이중특이성 항체는 2개의 별개의 항원 또는 2개의 별개의 에피토프에 특이적으로 결합한다.
"항체"는 광의를 의미하며, 뮤린, 인간, 인간화 및 키메라 단일클론 항체를 포함한 단일클론 항체, 항체 단편, 이중특이성 또는 다중특이성 항체, 이량체성, 사량체성, 또는 다량체성 항체, 단일쇄 항체, 도메인 항체를 포함하는 면역글로불린 분자, 및 필요한 특이성의 항원 결합 부위를 포함하는 면역글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 구성을 포함한다. "전장(full length) 항체 분자"는 이황화물 결합에 의해 상호연결된 2개의 중쇄(HC) 및 2개의 경쇄(LC)뿐만 아니라 이의 다량체(예를 들어, IgM)로 구성된다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(VH) 및 중쇄 불변 영역(도메인 CH1, 힌지, CH2 및 CH3으로 구성됨)으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(VL) 및 경쇄 불변 영역(CL)으로 구성된다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)이 산재된, 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 초가변성의 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR 및 4개의 FR 세그먼트로 구성되며, 아미노-말단부터 카르복시-말단까지 하기의 순서대로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4.
"상보성 결정 영역(CDR)"은 항체 내의 "항원 결합 부위"이다. CDR은 다양한 용어를 사용하여 정의될 수 있다: (i) 상보성 결정 영역(CDR) - VH 내의 3개(HCDR1, HCDR2, HCDR3), 및 VL 내의 3개(LCDR1, LCDR2, LCDR3) - 은 서열 가변성에 기초한다(문헌[Wu and Kabat, (1970) J Exp Med 132:211-50]; 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991]). (ii) "초가변 영역", "HVR", 또는 "HV" - VH 내의 3개(H1, H2, H3) 및 VL 내의 3개(L1, L2, L3) - 는 초티아(Chothia) 및 레스크(Lesk)에 의해 정의된 바와 같이 구조 내에서 초가변성인 항체 가변 도메인의 영역을 지칭한다(문헌[Chothia and Lesk, (1987) Mol Biol 196:901-17]). IMGT(International ImMunoGeneTics) 데이터베이스(http://www_imgt_org)는 항원-결합 부위의 표준화된 넘버링과 정의를 제공한다. CDR, HV, 및 IMGT 도해 사이의 관련성은 문헌[Lefranc et al., (2003) Dev Comparat Immunol 27:55-77]에 기재되어 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "CDR", "HCDR1", "HCDR2", "HCDR3", "LCDR1", "LCDR2" 및 "LCDR3"은 본 명세서에 달리 명시적으로 기재되어 있지 않는 한, 상기에 기재된 방법들인 카바트(Kabat), 초티아(Chothia) 또는 IMGT 중 임의의 것에 의해 정의된 CDR을 포함한다.
면역글로불린은 중쇄 불변 도메인 아미노산 서열에 따라, 5개의 주요 분류, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM으로 정해질 수 있다. IgA 및 IgG는 동종형(isotype) IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로 추가로 하위-분류된다. 임의의 척추동물 종의 항체 경쇄는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 명확하게 별개인 2개의 유형, 즉 카파(κ) 및 람다(λ) 중 하나로 정해질 수 있다.
"항체 단편" 또는 "항원-결합 단편"은 중쇄 및/또는 경쇄 항원 결합 부위, 예컨대 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, 2 및 3, 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, 2 및 3, 중쇄 가변 영역(VH), 또는 경쇄 가변 영역(VL)을 보유하는 면역글로불린 분자의 일부분을 지칭한다. 항체 단편 또는 항원-결합 단편은 잘 알려진 Fab, F(ab')2, Fd, 및 Fv 단편뿐만 아니라, 하나의 VH 도메인으로 이루어진 도메인 항체(dAb)도 포함한다. VH 및 VL 도메인은 합성 링커를 통해 함께 연결되어 다양한 유형의 단일쇄 항체 설계를 형성할 수 있으며, 여기서 VH/VL 도메인은 VH 및 VL 도메인이 별도의 단일쇄 항체 작제물에 의해 발현되는 경우에 분자내에서, 또는 분자간에 쌍을 이루어서 1가 항원 결합 부위, 예컨대 단일쇄 Fv(scFv) 또는 다이아바디(diabody)를 형성할 수 있으며, 이는, 예를 들어 국제 특허 출원 공개 WO1998/44001호, WO1988/01649호, WO1994/13804호, 및 WO1992/01047호에 기재되어 있다.
"단일클론 항체"는, 항체 중쇄로부터의 C-말단 라이신의 제거와 같은 가능한 잘 알려진 변경을 제외하고는, 각각의 중쇄 및 각각의 경쇄 내에 단일 아미노산 조성을 갖는 항체 집단을 지칭한다. 단일클론 항체는, 이중특이성 단일클론 항체가 2개의 별개의 항원 에피토프에 결합하는 것을 제외하고는, 전형적으로 하나의 항원 에피토프에 결합한다. 단일클론 항체는 항체 집단 내에 불균질한 글리코실화를 가질 수 있다. 단일클론 항체는 단일특이성 또는 다중특이성, 또는 1가, 2가 또는 다가일 수 있다. 이중특이성 항체가 용어 단일클론 항체 내에 포함된다.
"단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체들이 실질적으로 없는 항체 또는 항체 단편을 지칭한다(예를 들어, PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체에는 PSMA 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없다). 이중특이성 PSMA × CD3 항체의 경우, 이중특이성 항체는 PSMA 및 CD3 둘 모두에 특이적으로 결합하고, PSMA 및 CD3 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없다. "단리된 항체"는 더 높은 순도로 단리된 항체, 예컨대 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 순도인 항체를 포함한다.
"인간화 항체"는 항원 결합 부위가 인간 이외의 종으로부터 유래되고 가변 영역 프레임워크가 인간 면역글로불린 서열로부터 유래되는 항체를 지칭한다. 인간화 항체는 프레임워크 내에 치환을 포함할 수 있으므로, 프레임워크는 발현된 인간 면역글로불린 또는 인간 면역글로불린 생식세포계열(germline) 유전자 서열의 정확한 카피가 아닐 수 있다.
"인간 항체"는 프레임워크 및 항원 결합 부위 둘 모두가 인간 기원의 서열로부터 유래되는, 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 갖는 항체를 지칭한다. 이 항체가 불변 영역 또는 불변 영역의 일부분을 포함하는 경우, 불변 영역은 또한 인간 기원의 서열로부터 유래된다.
인간 항체는, 항체의 가변 영역이 인간 생식세포계열 면역글로불린 또는 재배열된 면역글로불린 유전자를 사용하는 시스템으로부터 얻어지는 경우, 인간 기원의 서열"로부터 유래되는" 중쇄 또는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 그러한 예시적인 시스템은, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 파지 상에 디스플레이된 인간 면역글로불린 유전자 라이브러리, 및 인간 면역글로불린 유전자좌를 담지하는 유전자도입 비인간 동물, 예컨대 마우스 또는 래트이다. "인간 항체"는 인간 생식세포계열 면역글로불린 또는 재배열된 면역글로불린 유전자와 비교할 때 아미노산 차이를 포함할 수 있는데, 이는, 예를 들어 천연 발생 체세포 돌연변이 또는 프레임워크 또는 항원 결합 부위 내로의 치환의 의도적 도입, 또는 둘 모두에 기인한다. 전형적으로, 인간 항체는 인간 생식세포계열 면역글로불린 또는 재배열된 면역글로불린 유전자에 의해 인코딩된 아미노산 서열과 아미노산 서열이 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다. 일부 경우에, "인간 항체"는, 예를 들어 문헌[Knappik et al., (2000) J Mol Biol 296:57-86]에 기재된 바와 같이 인간 프레임워크 서열 분석으로부터 유래되는 공통 프레임워크 서열을 함유하거나, 또는, 예를 들어 문헌[Shi et al., (2010) J Mol Biol 397:385-96] 및 국제 특허 출원 공개 WO2009/085462호에 기재된 바와 같이 파지 상에 디스플레이된 인간 면역글로불린 유전자 라이브러리 내로 도입된 합성 HCDR3을 함유할 수 있다.
인간 면역글로불린 서열로부터 유래되는 인간 항체는, 합성 CDR 및/또는 합성 프레임워크를 도입시킨 파지 디스플레이와 같은 시스템을 사용하여 생성될 수 있거나, 또는 시험관내 돌연변이생성(in vitro mutagenesis)을 거쳐서 항체 특성을 개선하여, 그 결과 생체내(in vivo)에서 인간 항체 생식세포계열 레퍼토리에 의해 발현되지 않는 항체를 생성할 수 있다.
항원 결합 부위가 비인간 종으로부터 유래되는 항체는 "인간 항체"의 정의에 포함되지 않는다.
"재조합체"는, 상이한 공급원으로부터의 세그먼트들이 결합되어 재조합 DNA, 항체 또는 단백질을 생성할 때 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 DNA, 항체 및 다른 단백질을 지칭한다.
"에피토프"는 항체가 특이적으로 결합하는 항원의 부분을 지칭한다. 에피토프는 전형적으로 아미노산 또는 다당류 측쇄와 같은 모이어티(moiety)의 화학적으로 활성(예컨대, 극성, 비극성 또는 소수성)인 표면 그룹화(grouping)로 이루어지며, 특이적인 3차원 구조 특징뿐만 아니라 특이적인 전하 특징을 가질 수 있다. 에피토프는 입체구조 공간 단위(conformational spatial unit)를 형성하는 연속 및/또는 불연속 아미노산으로 구성될 수 있다. 불연속 에피토프의 경우, 항원의 선형 서열의 상이한 부분으로부터의 아미노산이 단백질 분자의 접힘을 통해 3차원 공간에서 아주 근접하게 된다. 항체 "에피토프"는 에피토프를 확인하기 위해 사용되는 방법에 따라 달라진다.
"파라토프"는 항원이 특이적으로 결합하는 항체의 부분을 지칭한다. 파라토프는 천연에서 선형일 수 있거나, 선형의 일련의 아미노산보다는 항체의 비-연속 아미노산들 사이의 공간 관계에 의해 형성되어 불연속일 수 있다. "경쇄 파라토프" 및 "중쇄 파라토프" 또는 "경쇄 파라토프 아미노산 잔기" 및 "중쇄 파라토프 아미노산 잔기"는 항원과 접촉하는 항체 경쇄 및 중쇄 잔기 각각을 지칭하거나, 또는 일반적으로 "항체 파라토프 잔기"는 항원과 접촉하는 항체 아미노산을 지칭한다.
"이중특이성"은 2개의 별개의 항원 또는 동일한 항원 내의 2개의 별개의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체를 지칭한다. 이중특이성 항체는 다른 관련 항원들에 대한, 예를 들어 다른 종(상동체), 예컨대 인간 또는 원숭이, 예를 들어 마카카 파시쿨라리스(사이노몰거스, 사이노), 또는 판 트로글로디테스로부터의 동일한 항원에 대한 교차-반응성을 가질 수 있거나, 2개 이상의 별개의 항원 사이에 공유되는 에피토프에 결합할 수 있다.
"다중특이성"은 2개 이상의 별개의 항원 또는 동일한 항원 내의 2개 이상의 별개의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체를 지칭한다. 다중특이성 항체는 다른 관련 항원들에 대한, 예를 들어 다른 종(상동체), 예컨대 인간 또는 원숭이, 예를 들어 마카카 파시쿨라리스(사이노몰거스, 사이노), 또는 판 트로글로디테스로부터의 동일한 항원에 대한 교차-반응성을 가질 수 있거나, 2개 이상의 별개의 항원 사이에 공유되는 에피토프에 결합할 수 있다.
"변이체"는 하나 이상의 변형, 예를 들어 하나 이상의 치환, 삽입, 또는 결실에 의해 참조 폴리펩티드 또는 참조 폴리뉴클레오티드와 상이한 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다.
"벡터"는 생물 시스템 내에서 복제가 가능하거나, 이러한 시스템 사이에서 이동할 수 있는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 벡터 폴리뉴클레오티드는 전형적으로 생물 시스템, 예컨대 세포, 바이러스, 동물, 식물 및 벡터를 복제할 수 있는 생물 성분을 이용하는 재구성된 생물 시스템에서 이러한 폴리뉴클레오티드의 복제 또는 유지를 용이하게 하는 기능을 하는 요소, 예컨대 복제 기점, 폴리아데닐화 신호 또는 선택 마커를 함유한다. 벡터 폴리뉴클레오티드는 단일 가닥 또는 이중 가닥인 DNA 또는 RNA 분자 또는 이들의 하이브리드일 수 있다.
"발현 벡터"는 발현 벡터 내에 존재하는 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩되는 폴리펩티드의 번역을 유도하기 위하여 생물 시스템 또는 재구성된 생물 시스템에서 이용될 수 있는 벡터를 지칭한다.
"폴리뉴클레오티드"는 당-인산 골격 또는 다른 등가의 공유결합적 화학적 특성에 의해 공유 결합된 뉴클레오티드의 사슬을 포함하는 분자를 지칭한다. 이중 가닥 및 단일 가닥 DNA 및 RNA가 폴리뉴클레오티드의 전형적인 예이다.
"폴리펩티드" 또는 "단백질"은 폴리펩티드를 형성하도록 펩티드 결합으로 결합된 적어도 2개의 아미노산 잔기를 포함하는 분자를 지칭한다. 50개 미만의 아미노산의 작은 폴리펩티드는 "펩티드"로 지칭될 수 있다.
"유세포측정(flow cytometry)"은 적어도 하나의 레이저를 통과함에 따라 유체 중의 입자의 물리적 및 화학적 특성을 분석하는 데 사용되는 기술이다. 세포 성분은 형광 표지화되고, 이어서 레이저에 의해 여기되어 다양한 파장의 광을 방출한다(문헌[Adan, et al, Critical Reviews in Biotechnology (2016) 1549-7801]).
"항-이디오타입(항-Id) 항체"는 항체의 항원 결정기(예를 들어, 파라토프 또는 CDR)를 인식하는 항체이다. 항-이디오타입 항체의 생성 또는 제조 방법은 당업계에 일반적으로 알려져 있다(문헌[Lathey, J. et al Immunology 1986 57(1):29-35]). 항-Id 항체는 항원-차단성 또는 비차단성일 수 있다. 항원-차단성 항-Id 항체는 샘플 내의 유리 항체(예를 들어 항-PSMA, 항-CD3, 또는 본 명세서에 기재된 본 발명의 이중특이성 PSMA × CD3 항체)를 검출하는 데 사용될 수 있다. 비차단성 항-Id 항체는 샘플 내의 총 항체(유리 항체, 항원에 부분 결합된 항체, 또는 항원에 완전 결합된 항체)를 검출하는 데 사용될 수 있다. 항-Id 항체는 항-Id 항체가 준비되어 있는 항체로 동물을 면역화함으로써 제조될 수 있다. 본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 항-이디오타입 항체는 샘플 내의 치료 항체(예를 들어 항-PSMA, 항-CD3, 또는 본 명세서에 기재된 본 발명의 이중특이성 PSMA × CD3 항체)의 수준을 검출하는 데 사용된다.
항-Id 항체는 또한 면역원으로서 사용되어 또 다른 동물에서 면역 반응을 유도하여, 이른바 항-항-Id 항체를 생성할 수 있다. 항-항-Id는 항-Id 항체를 유도한 원래의 mAb와 에피토프적으로(epitopically) 동일할 수 있다. 따라서, mAb의 이디오타입 결정기에 대한 항체를 사용함으로써, 동일한 특이성의 항체를 발현하는 다른 클론들을 확인할 수 있다. 항-Id 항체는 임의의 적합한 기법, 예컨대 PSMA 또는 CD3, 또는 이중특이성 PSMA × CD3 항체에 특이적으로 결합하는 항체에 관하여 본 명세서의 어딘가 다른 곳에 기재된 것들에 의해 유도체화되고/되거나 변이될(그럼으로써, 항-Id 항체 변이체를 생성할) 수 있다.
PSMA는 전립선 특이적 막 항원을 지칭한다. 판 트로글로디테스(침팬지 또는 침프로도 지칭됨) PSMA의 아미노산 서열은 서열 번호 1에 제시되어 있다. 세포외 도메인은 서열 번호 1의 잔기 44 내지 750에 걸쳐 이어져 있고, 막관통 도메인은 잔기 20 내지 43에 걸쳐 이어져 있고, 세포질 도메인은 잔기 1 내지 19에 걸쳐 이어져 있다. 마카카 파시쿨라리스(사이노몰거스 원숭이, 마카크 또는 사이노로도 지칭됨) PSMA의 아미노산 서열은 서열 번호 2에 제시되어 있다. 세포외 도메인은 서열 번호 2의 잔기 44 내지 750에 걸쳐 이어져 있고, 막관통 도메인은 잔기 20 내지 43에 걸쳐 이어져 있고, 세포질 도메인은 잔기 1 내지 19에 걸쳐 이어져 있다. 인간 PSMA의 아미노산 서열은 서열 번호 3에 제시되어 있다. 세포외 도메인은 서열 번호 3의 잔기 44 내지 750에 걸쳐 이어져 있고, 막관통 도메인은 잔기 20 내지 43에 걸쳐 이어져 있고, 세포질 도메인은 잔기 1 내지 19에 걸쳐 이어져 있다.
CD3은 T-세포 항원 수용체를 지칭한다. 본 명세서 전체에 걸쳐, "CD3-특이적"은 T-세포 수용체 복합체에 특이적으로 결합하는 항체를 지칭한다. 더 구체적으로는, 이러한 항체는 CD3-엡실론 폴리펩티드에 결합하며, 이는 CD3-감마, -델타 및 -제타, 및 T-세포 수용체 알파/베타 및 감마/델타 이종이량체와 함께, T-세포 수용체-CD3 복합체를 형성한다. 이러한 복합체는 항원 인식을 몇몇 세포내 신호-전달 경로에 커플링하는 데 있어서 중요한 역할을 한다. CD3 복합체는 신호 전달을 매개하여, T 세포 활성화 및 증식을 가져온다. CD3은 면역 반응에 필요하다.
"와 병용하여"는 둘 이상의 치료제가 대상체에게 혼합물 상태로 함께 투여되거나, 단제(single agent)로서 동시에 투여되거나, 또는 단제로서 임의의 순서로 순차적으로 투여됨을 의미한다.
"과발현하다", "과발현된", 및 "과발현하는"은 참조 샘플과 비교할 때 측정가능하게 더 높은 수준의 PSMA를 갖는 암 세포, 악성 세포, 또는 암 조직과 같은 샘플을 상호교환 가능하게 지칭한다. 과발현은 유전자 증폭에 의해 또는 증가된 전사 또는 번역에 의해 야기될 수 있다. 샘플 내의 단백질의 발현 및 과발현은, 예를 들어 살아 있거나 용해된 세포 상에서 ELISA, 면역형광, 유세포측정, 또는 방사면역검정을 사용하는 잘 알려진 검정을 사용하여 측정할 수 있다. 샘플 내의 폴리뉴클레오티드의 발현 및 과발현은, 예를 들어 형광 동소 혼성화(fluorescent in situ hybridization), 서던 블로팅(Southern blotting), 또는 PCR 기법을 사용하여 측정할 수 있다. 샘플 내의 단백질 또는 폴리뉴클레오티드의 수준이 참조 샘플과 비교할 때 적어도 1.5배 더 높은 경우, 단백질 또는 폴리뉴클레오티드는 과발현된다. 참조 샘플의 선택은 잘 알려져 있다.
"샘플"은 대상체 내에 존재하는 유체, 세포 또는 조직뿐만 아니라, 대상체로부터 단리된 유사한 유체, 세포, 또는 조직의 집합을 지칭한다. 예시적인 샘플은 생물학적 유체, 예컨대 혈액, 혈청 및 장막 유체, 혈장, 림프, 소변, 타액, 낭액, 눈물 방울, 배설물, 객담, 분비 조직 및 장기의 점막 분비물, 질 분비물, 복수액, 예컨대 비고형 종양과 관련된 것들, 흉강, 심낭, 복막강, 복강 및 다른 체강의 유체, 기관지 세척에 의해 수집된 유체, 대상체 또는 생물학적 공급원과 접촉된 액체 용액, 예를 들어, 세포 또는 장기 컨디셔닝된 배지를 포함하는 세포 및 장기 배양 배지, 세척액 등, 조직 생검물, 세침 흡인물, 또는 외과적으로 절제된 종양 조직의 것이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "암 세포" 또는 "종양 세포"는 생체내, 생체외(ex vivo), 또는 조직 배양에서의 암성, 전암성, 또는 형질전환 세포를 지칭하며, 이는 자발적이거나 유도된 표현형 변화를 갖는다. 이러한 변화가 반드시 새로운 유전 물질의 흡수를 수반하지는 않는다. 형질전환이 형질전환 바이러스에 의한 감염 및 새로운 게놈 핵산의 도입, 또는 외인성 핵산의 흡수로부터 일어날 수 있기는 하지만, 이는 또한 자발적으로 또는 발암물질에 대한 노출 후에 일어날 수 있으며, 그럼으로써 내인성 유전자를 돌연변이화할 수 있다. 형질전환/암은 시험관내에서, 생체내에서, 그리고 생체외에서 누드 마우스 등과 같은 적합한 동물 숙주에서 형태학적 변화, 세포의 불멸화, 비정상 성장 제어, 병소 형성, 증식, 악성종양, 종양 특이적 마커 수준의 조절, 침습성, 종양 성장에 의해 예시된다(문헌[Freshney, Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique (3rd ed. 1994)]). 달리 언급되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 농도 또는 농도 범위와 같은 임의의 수치 값은 모든 경우에 용어 "약"에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 수치 값은 전형적으로 인용된 값의 ±10%를 포함한다. 예를 들어, 1 mg/mL의 농도는 0.9 mg/mL 내지 1.1 mg/mL를 포함한다. 마찬가지로, 1% 내지 10% (w/v)의 농도 범위는 0.9% (w/v) 내지 11% (w/v)를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 문맥이 명백히 달리 지시하지 않는 한, 수치 범위의 사용은 모든 가능한 하위범위, 그 범위 내의 모든 개별 수치 값, 예를 들어 그러한 범위 내의 정수 및 값의 분율을 명시적으로 포함한다.
"이펙터 항원"은 세포독성, 식세포작용, 항원 제시, 사이토카인 방출을 자극하거나 촉발할 수 있는 면역 시스템의 세포로부터의 항원이다. 그러한 이펙터 항원은, 예를 들어 T 세포 및 자연 살해(NK) 세포로부터 유래되지만 이로 한정되지 않는다. 이펙터 항원에 적합한 특이성의 예에는, T 세포의 경우에는 CD3 또는 CD3 하위단위, 예컨대 CD3ε, 그리고 NK 세포의 경우에는 CD16이 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 이펙터 세포의 그러한 세포 표면 분자는 세포 사멸을 매개하는 데 적합하다. 이펙터 세포는 세포독성, 식세포작용, 항원 제시, 사이토카인 방출을 자극하거나 촉발할 수 있는 면역 시스템의 세포이다. 그러한 이펙터 세포에는, 예를 들어 T-세포, 자연 살해(NK) 세포, 과립구, 단핵구, 대식세포, 수지상 세포, 및 항원-제시 세포가 있지만 이로 한정되지 않는다. 이펙터 세포에 적합한 특이성의 예에는, T 세포의 경우에는 CD2, CD3 및 CD3 하위단위, 예컨대 CD3e, CD5, CD28 및 T-세포 수용체(TCR)의 다른 성분; NK 세포의 경우에는 CD16, CD16A, CD25, CD38, CD44, CD56, CD69, CD94, CD335(NKp46), CD336(NKp44), CD337(NKp30), NKp80, NKG2C 및 NKG2D, DNAM, NCR; 과립구의 경우에는 CD18, CD64 및 CD89; 단핵구 및 대식세포의 경우에는 CD18, CD32, CD64, CD89 및 만노스 수용체; 수지상 세포의 경우에는 CD64 및 만노스 수용체; 이뿐만 아니라 CD35가 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 본 발명의 소정 실시 형태에서, 이펙터 세포의 그러한 특이성, 즉 세포 표면 분자는 그러한 세포 표면 분자에 이중특이성 또는 다중특이성 분자가 결합 시에 세포 사멸을 매개하고, 그럼으로써 세포용해 또는 아폽토시스를 유도하는 데 적합하다.
"이중특이성 PSMA × CD3 항체", "PSMA/CD3 항체", "이중특이성 항-PSMA × CD3 항체", 또는 "항-PSMA/CD3 항체"는 PSMA에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 결합 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 결합 도메인을 포함하는 분자를 지칭한다. PSMA 및 CD3에 특이적으로 결합하는 도메인은 전형적으로 VH/VL 쌍이다. 이중특이성 항-PSMA × CD3 항체는 PSMA 또는 CD3에 대한 그의 결합의 관점에서 1가일 수 있다.
"결합가(valent)"는 분자 내의 항원에 특이적인 명시된 수의 결합 부위의 존재를 지칭한다. 그렇기 때문에, 용어 "1가", "2가", "4가", 및 "6가"는 분자 내의 항원에 특이적인 각각 1개, 2개, 4개, 및 6개의 결합 부위의 존재를 지칭한다. "다가"는 분자 내의 항원에 특이적인 2개 이상의 결합 부위의 존재를 지칭한다.
"항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포"는 특이적 항원, 또는 그의 면역자극성 에피토프에 의해 활성화되는 CD4+ 또는 CD8+ T 세포를 지칭한다.
"대상체"는 임의의 인간 또는 비인간 동물을 포함한다. "비인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어 포유동물 및 비포유동물, 예컨대 비인간 영장류, 양, 개, 고양이, 말, 소, 닭, 양서류, 파충류 등을 포함한다. 언급된 경우를 제외하고는, 용어 "환자" 또는 "대상체"는 상호교환 가능하게 사용된다.
달리 명백하게 언급되지 않는 한, 본 명세서 전체에 걸쳐 항체 불변 영역 내의 아미노산 잔기의 넘버링은 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)]에 기재된 바와 같이 EU 인덱스에 따른다.
표 1에 나타낸 바와 같은 통상적인 1-문자 및 3-문자 아미노산 코드가 본 명세서에 사용된다.
[표 1]
조성물
본 발명은 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 단편, 및 PSMA 및 CD3에 특이적으로 결합하는 다중특이성 항체 및 이의 단편을 제공한다. 본 발명은 폴리펩티드 및 본 발명의 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적 핵산, 벡터, 숙주 세포, 및 이들의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
PSMA에 결합하는 항체 및 이의 단편은 침팬지 표적 항원에 결합한다. 일 실시 형태에서, 항체 및 이의 단편은 인간 및 마카크 PSMA 표적 항원에 대해 서로 5배 이내의 친화도로 결합한다. 다시 말하면, 항체 결합의 차이가 5의 배수보다 작다. 이러한 경우에, 동일한 항체 분자는 영장류에서의 PSMA의 안전성, 활성 및/또는 약동학적 프로파일의 전임상 평가에 사용되고 또한 인간에서의 약물로서 사용될 수 있다. 다시 말하면, 동일한 PSMA-특이적 분자는 전임상 동물 연구에서뿐만 아니라 인간에서의 임상 연구에서도 사용될 수 있다. 이는, 종-특이적 대리 분자와 비교하여, 동물 연구의 매우 비견되는 결과 및 훨씬 증가된 예측력으로 이어진다. PSMA 도메인은 이종간(cross-species) 특이적이기 때문에, 즉 인간 및 마카크 항원과 반응성이기 때문에, 본 발명의 항체 또는 이의 단편은 영장류에서의 이들 결합 도메인의 안전성, 활성 및/또는 약동학적 프로파일의 전임상 평가에 사용되고 또한 동일한 형태로 인간에서의 약물로서 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 PSMA에 특이적으로 결합하는 다중특이성 항체를 제공한다. 본 발명에 따르면, 이중특이성, 즉 이중기능성 항체는 2개의 상이한 치료 표적에 결합하거나 2개의 별개의 기능을 수행하는 데 사용될 수 있다. 그러한 항체는, 예를 들어 면역 이펙터 세포, 예를 들어 T- 또는 NK-세포를 특정 표적 세포를 향해 동원하는 데 사용될 수 있다. 다양한 항체-단편 기반 분자가 알려져 있으며, 예를 들어 암 요법을 위한 연구 중에 있다. 본 발명의 다중특이성 항체는 종양 세포의 이중 표적화를 위한 삼중특이성 항체일 수 있다 - 이들은 종양 세포 상의 2개의 상이한 표적/에피토프를 표적화하도록 설계될 수 있는 삼중기능성 구조이고, 제3 기능체는 T-세포 또는 NK-세포 중 어느 하나에 대해 높은 친화도로 결합한다. 2개의 별개의 종양 에피토프를 표적화하고 T- 또는 NK-세포에 결합하는 삼중특이성 항체는 양쪽 표적을 발현하는 종양 세포를 용해시킨다. 그러한 분자는 당업계에 알려진 항체 포맷에 의해 생성될 수 있으며 충분히 기재되어 있다(국제 특허 출원 공개 WO20151842071호, WO2015158636호, WO2010136172호, WO2013174873호). 본 발명의 삼중특이성 항체의 실시 형태에서, 다중특이성 항체는 PSMA 및 동일하거나 다른 종양 세포 상의 제2 별개의 항원에 특이적일 수 있고, 추가로 이펙터 세포, 특히 T 세포 또는 NK 세포에 특이적일 수 있다.
본 발명은 또한 PSMA × "이펙터 항원" 이중특이성 항체를 제공한다. 일 실시 형태에서, PSMA × "이펙터 항원" 이중특이성 항체의 이펙터 항원은 CD3이다. 본 발명에서는, PSMA × CD3 이중특이성 항체를 생성하는 것이 가능한 것으로 밝혀졌는데, 이 경우에는 동일한 분자가 전임상 동물 시험에 사용될 뿐만 아니라 인간에서의 임상 연구 및 심지어 요법에도 사용될 수 있다. 이는, 인간 PSMA 및 인간 CD3에 각각 결합하는 것에 더하여, 침팬지 및 마카크의 항원의 상동체에도 결합하는 PSMA × CD3 이중특이성 항체의 확인에 기인한다. 본 발명의 PSMA × CD3 이중특이성 항체는 암을 포함하지만 이로 한정되지 않는 다양한 질병에 대한 치료제로서 사용될 수 있다. 상기 관점에서, (인간과) 계통발생학적으로 떨어진 종에서 시험하기 위한 대리 표적 PSMA × CD3 이중특이성 항체를 작제할 필요성이 사라진다. 그 결과, 동일한 분자는 임상 시험에서 인간에게 투여되도록 의도된 바와 같이 동물 전임상 시험에 사용될 수 있을 뿐만 아니라 시장 승인 및 치료용 약물 투여를 따를 수 있다. 전임상 동물 시험을 위하여 추후의 인간에게의 투여에서와 동일한 분자를 사용하는 능력은 전임상 동물 시험에서 획득된 데이터가 인간 사례에 대한 제한된 적용가능성을 가진다는 위험을 사실상 제거하거나 적어도 대폭 감소시킨다. 간단히 말하면, 인간에게 실제로 투여될 것과 동일한 분자를 사용하여 동물에서 전임상 안전성 데이터를 획득하는 것은 인간-관련 시나리오에 대한 그러한 데이터의 적용가능성을 크게 보장한다. 대조적으로, 대리 분자를 사용하는 통상적인 접근법에서, 상기 대리 분자는 전임상 안전성 평가에 사용되는 동물 시험 시스템에 맞게 분자적으로 조정되어야 한다. 따라서, 인간 요법에 사용될 분자는 약동학적 파라미터 및/또는 생물학적 활성에 있어서의 전임상 시험에서 사용되는 대리 분자와 서열이 실제로 상이하고 또한 그와 구조가 상이할 가능성이 높은데, 그 결과, 전임상 동물 시험에서 획득된 데이터는 인간 사례에 대한 제한된 적용가능성/전달성을 갖는다. 대리 분자의 사용은 전혀 새로운 작제물의 작제, 생성, 정제 및 특성화를 필요로 한다. 이는 그러한 분자를 얻는 데 필요한 추가적인 개발 비용 및 시간으로 이어진다. 요컨대, 대리물은 인간 요법에 사용되는 실제 약물에 더하여 별도로 개발되어야 하며, 이에 따라 2개의 분자에 대한 2개의 개발 라인이 수행되어야 한다. 따라서, 본 명세서에 기재된 이종간 특이성을 나타내는 본 발명의 PSMA × CD3 이중특이성 항체의 주요 이점은 동일한 분자가 인간에서의 치료제에 그리고 전임상 동물 시험에 사용될 수 있다는 것이다.
본 발명의 항체 및 다중특이성 항체의 다른 주요 이점은 다양한 영장류에서의 전임상 시험에 대한 그의 적용가능성이다. 동물에서의 약물 후보물질의 거동은 이상적으로는 인간에게 투여 시 이러한 약물 후보물질의 예상되는 거동의 지표가 되어야 한다. 그 결과, 그러한 전임상 시험으로부터 획득된 데이터는 일반적으로 인간 사례에 대한 높은 예측력을 가져야 한다. 그러나, TGN1412(CD28 단일클론 항체)에 대한 최근의 I상 임상 시험의 비극적 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 약물 후보물질은 영장류 종에서는 인간에서와 상이하게 작용할 수 있다: 상기 항체의 투여 시에, 상기 항체의 전임상 시험에서, 사이노몰거스 원숭이에 대해 수행된 동물 연구에서는 유해 효과가 전혀 관찰되지 않았거나 단지 제한된 유해 효과만이 관찰된 반면, 6명의 인간 환자에게서 다장기 부전이 발생되었다(문헌[Lancet 368 (2006), 2206-7]). 이러한 극적인, 원치 않는 부정적인 사건의 결과는 전임상 시험을 단지 하나의(비-침팬지 영장류) 종으로만 제한하는 것으로는 충분하지 않을 수 있음을 시사한다. 기재된 항체 및 다중특이성 항체가 침팬지 및 사이노몰거스 원숭이의 PSMA에 특이적으로 결합한다는 사실은 상기 언급된 경우에 직면한 문제를 극복하는 데 도움이 될 수 있다. 따라서, 본 발명은 인간 요법을 위한 약물이 개발되고 시험되는 중일 때 효과에 있어서의 종의 차이를 최소화하기 위한 수단 및 방법을 제공한다.
본 발명의 항체 및 다중특이성 항체의 경우, 예를 들어 유전자도입 동물의 생성과 같이, 인간에게 투여하도록 의도된 약물 후보물질에 맞게 시험 동물을 조정하는 것이 또한 더 이상 필요하지 않다. 본 발명의 PSMA 항체 또는 다중특이성 항체의 이종간 특이성은 항체가 비-침팬지 영장류에서 그러한 동물의 어떠한 유전자적 조작 없이도 전임상 시험에 직접 사용될 수 있게 한다. 당업자에게 잘 알려진 바와 같이, 시험 동물이 약물 후보물질에 맞게 조정되는 접근법은 전임상 안전성 시험에서 획득된 결과가 동물의 변형으로 인해 인간에 대해 덜 대표적이고 예측적이라는 위험을 항상 지닌다. 예를 들어, 유전자도입 동물에서, 도입유전자에 의해 인코딩된 단백질은 종종 고도로 과발현된다. 따라서, 이러한 단백질 항원에 대한 항체의 생물학적 활성에 대해 획득된 데이터는 그러한 단백질이 훨씬 더 낮은, 더 생리학적인 수준으로 발현되는 인간에 대한 그들의 예측값에 있어서 제한될 수 있다.
이종간 특이성을 나타내는 본 발명의 항체의 사용의 추가의 이점은 멸종위기종인 침팬지의 사용을 동물 시험에서 피할 수 있다는 사실이다. 침팬지는 인간과 가장 가까운 근연종이며, 최근에 게놈 서열분석 데이터에 기초하여 원시인류(hominid)의 패밀리로 그룹화되었다(문헌[Wildman et al., PNAS 100 (2003), 7181]). 따라서, 침팬지를 사용하여 획득된 데이터는 일반적으로 인간에게 고도로 예측적인 것으로 간주된다. 그러나, 멸종위기종으로서의 이들의 상태로 인해, 의학적 실험에 사용될 수 있는 침팬지의 수는 매우 제한되어 있다. 따라서, 상기에 언급된 바와 같이, 동물 시험을 위한 침팬지의 유지는 비용이 많이 들고 또한 윤리적으로 문제가 된다. 본 발명의 항체의 사용은 획득된 동물 시험 데이터의 품질, 즉 적용가능성에 해를 끼치지 않으면서 전임상 시험 동안 윤리적 반대 및 경제적 부담 둘 모두를 피한다. 이에 비추어, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 다중특이성 항체의 사용은 침팬지에서의 연구에 대한 합리적인 대안을 제공한다.
본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 다중특이성 항체의 또 다른 추가의 이점은, 예를 들어 약동학적 동물 연구 과정에서 동물 전임상 시험의 일부로서 그것을 사용할 때 다수의 혈액 샘플을 추출하는 능력이다. 더 하등인 동물, 예를 들어 마우스보다 비-침팬지 영장류에 의해 다회의 혈액 추출이 훨씬 더 용이하게 얻어질 수 있다. 다수의 혈액 샘플의 추출은 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 다중특이성 항체에 의해 유도되는 생물학적 효과의 결정을 위한 혈액 파라미터의 연속 시험을 가능하게 한다. 더욱이, 다수의 혈액 샘플의 추출은 연구자가 본 명세서에 정의된 바와 같은 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 다중특이성 항체의 약동학적 프로파일을 평가할 수 있게 한다. 게다가, 혈액 파라미터에 반영된 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 다중특이성 항체에 의해 유도될 수 있는 잠재적인 부작용이 상기 항체의 투여 과정 동안 추출된 상이한 혈액 샘플에서 측정될 수 있다.
이는 본 명세서에 정의된 바와 같은 본 발명의 PSMA에 결합하는 항체 또는 다중특이성 항체의 잠재적인 독성 프로파일의 결정을 가능하게 한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항체 단편은 하기 특성들 중 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개를 갖는다:
a)
25 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 판 트로글로디테스 PSMA 세포외 도메인(ECD)에 결합하며, 여기서 상기 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨,
b)
20 nM 이하의 계산된 EC50으로 LNCaP 세포에 결합하고, 40 nM 이하의 계산된 EC50으로 마카카 파시쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포에 결합하며, 여기서 LNCaP 세포에 대한 결합과 마카카 파시쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포에 대한 결합 사이의 계산된 EC50의 차이는 5배 미만이고, 상기 계산된 EC50은 유세포측정을 사용하여 0℃에서 전세포(whole cell) 결합 검정에서 측정됨,
c)
12 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간(서열 번호 7), 판 트로글로디테스(서열 번호 4) 및 마카카 파시쿨라리스(서열 번호 5)로부터의 재조합 PSMA ECD에 결합하며, 여기서 상기 KD는 +25℃에서의 ProteOn 표면 플라즈몬 공명 검정 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨,
d)
항-CD3 항체 CD3B219와 이중특이성 항체로 쌍을 이룰 때, LNCaP 세포, C42 세포, 인간 PSMA-발현 HEK 세포 또는 마카카 파시쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포의 T-세포 매개 사멸을 디스플레이하며, 여기서 상기 T-세포 매개 사멸은 크롬-51에 의해 또는 카스파제 3/7 활성화 검정에 의해 측정됨, 또는
e)
인간 PSMA(서열 번호 3)의 잔기 I138, F235, P237, G238, D244, Y299, Y300, Q303, K304, E307, 및 K324-P326으로 구성되는 입체구조 에피토프(conformational epitope)를 인식함.
예시적인 그러한 항체 또는 이의 단편은 본 명세서에 기재된 PSMA 항체 PSMB119, PSMB120, PSMB121, PSMB122, PSMB123, PSMB87, PSMB126, PSMB127, PSMB128, PSMB129, PSMB130, PSMB120, PSMB121, PSMB122, PSMB123, PSMB127, PSMB128, PSMB130, PSMB344, PSMB345, PSMB346, PSMB347, PSMB349, PSMB358, PSMB359, PSMB360, PSMB361, PSMB362, PSMB363, 및 PSMB365이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 PSMA 항체 또는 이의 항체 단편은 약 30 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 침팬지 PSMA ECD에 결합하며, 여기서 상기 KD는 실시예 8에 기재된 바와 같이 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다. ProteOn을 사용하여 SPR에 의해 친화도를 측정하기 위한 검정은 실온에서(예를 들어, 25℃ 부근에서) 수행되는 검정을 포함하는데, 여기서는 침프 PSMA ECD에 결합할 수 있는 항체를 항-Fc 항체(예를 들어, Jackson ImmunoResearch Laboratory, cat#109-005-098)에 의해 약 100 RU의 수준으로 ProteOn 센서 칩 상에 포획시킨 후, 재조합 PSMA ECD를 주입하고, 회합 및 해리 데이터를 50 μl/min의 유량으로 보정한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 PSMA 항체 또는 이의 항체 결합 단편은 20 nM 이하의 EC50으로 LNCaP 세포에 결합하고, 40 nM 이하의 EC50으로 사이노 PSMA-발현 HEK 세포에 결합하며, 여기서 LNCaP 세포에 대한 결합과 사이노 PSMA-발현 HEK 세포에 대한 결합 사이의 계산된 EC50의 차이는 5배 미만이고, 상기 세포 결합은 실시예 7에 기재된 바와 같이 FACS를 사용하여 측정된다. FACS에 의한 전세포 결합을 측정하기 위한 검정은 얼음 상에서 1시간 동안 웰당 200,000개의 세포의 밀도로 수행된다. 전세포에 결합된 항체의 양은 FACS 어레이(Array) 유세포측정기에 의해, 표지화된 2차 항체를 사용하여, 예를 들어 마우스 항-인간 카파-RPE 항체(Life Technologies cat# MH10514)를 사용하여 검출된다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항체 단편은 12 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간, 침프 및 사이노 PSMA ECD에 결합하며, 여기서 상기 KD는 실시예 8에 기재된 바와 같이 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다. ProteOn을 사용하여 SPR에 의해 친화도를 측정하기 위한 검정은 실온에서(예를 들어, 25℃ 부근에서) 수행되는 검정을 포함하는데, 여기서는 침프 PSMA ECD에 결합할 수 있는 항체를 항-Fc 항체(예를 들어, Jackson ImmunoResearch Laboratory, cat#109-005-098)에 의해 약 100 RU의 수준으로 ProteOn 센서 칩 상에 포획시킨 후, 재조합 PSMA ECD를 주입하고, 회합 및 해리 데이터를 50 μl/min의 유량으로 보정한다.
특정 항체/PSMA 상호작용의 측정된 친화도는 상이한 조건(예를 들어, 오스몰 농도(osmolarity), pH) 하에서 측정된다면 변동될 수 있다. 따라서, 친화도 및 기타 결합 파라미터(예를 들어, KD, Kon, Koff)의 측정은 전형적으로 표준화된 조건, 및 표준화된 완충액, 예컨대 본 명세서에 기재된 완충액을 사용하여 행해진다. 예를 들어, Biacore 3000 또는 ProteOn을 사용하는 친화도 측정에 대한 내부 오차(표준 편차, SD로서 측정됨)는 전형적인 검출 한계 내에서의 측정에 대해 전형적으로 5 내지 33% 이내일 수 있음을 당업자는 이해할 것이다. 따라서, KD와 관련하여 용어 "약"은 검정에서의 전형적인 표준 편차를 반영한다. 예를 들어, 1x10-9 M의 KD에 대한 전형적인 SD는 최대 +0.33x10-9 M이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항체 단편은 항-CD3 항체 CD3B219와 이중특이성 항체로 쌍을 이룰 때, 인간 PSMA-발현 LNCaP 세포, C42 세포, 인간 PSMA-발현 HEK 세포 또는 사이노 PSMA-발현 HEK 세포의 T-세포 매개 사멸을 나타내며, 여기서 상기 T-세포 매개 사멸은 실시예 6에서와 같이 크롬-51 방출에 의해 측정되고, 표적 세포를 18 내지 24시간 동안 5:1 비로 사전활성화된 T-세포와 함께 배양하거나, 또는 카스파제 3/7 활성화 검정에 의해 측정된다. 일부 실시 형태에서, PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항체 단편은 항-CD3 항체 CD3B219와 이중특이성 항체로 쌍을 이룰 때, 각각 약 0.3 내지 0.5 nM 이하 및 0.12 내지 0.03 nM 이하의 EC50으로 인간 PSMA-발현 LNCaP 및 C42 세포의 T-세포 매개 사멸을 나타내며, 여기서 상기 T-세포 매개 사멸은 실시예 9에서와 같이 카스파제 3/7 활성화 검정에 의해 측정된다. 표적 PSMA-발현 세포를 18 내지 24시간 동안 1:3 비로 사전활성화된 T-세포와 함께 배양하고, 첨가된 카스파제 3/7 기질의 절단은 형광 DNA 염료를 생성하며, 이때 형광은 세포 핵으로 제한된다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, PSMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항체 단편은 실시예 13에 기재된 바와 같이 X-선 결정구조해석에 의해 결정될 때, 잔기 I138, F235, P237, G238, D244, Y299, Y300, Q303, K304, E307, 및 K324-P326으로 구성되는 입체구조 에피토프를 인식한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편은 서열 번호 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 75, 77, 79,160, 138, 139, 또는 140의 중쇄 가변 영역(VH) 내에 함유된 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하며, 여기서 상기 HCDR1, 상기 HCDR2 및 상기 HCDR3은 초티아, 카바트, 또는 IMGT에 의해 정의되어 있다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편은 서열 번호 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 76, 78, 142, 143, 또는 144의 경쇄 가변 영역(VL) 내에 함유된 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며, 여기서 상기 LCDR1, 상기 LCDR2 및 상기 LCDR3은 초티아, 카바트, 또는 IMGT에 의해 정의되어 있다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는
서열 번호 8, 14, 20, 25, 31, 36, 46, 53, 또는 122의 HCDR1;
서열 번호 9, 15, 21, 26, 32, 37, 42, 44, 54,123, 130, 134, 135, 또는 137의 HCDR2; 및
서열 번호 10, 16, 22, 27, 33, 38, 43, 45, 48, 52, 55, 124의 HCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는
서열 번호 11, 17, 23, 28, 34, 39, 46, 49, 또는 131의 LCDR1;
서열 번호 12, 18, 29, 40, 50, 또는 133의 LCDR2; 및
서열 번호 13, 19, 24, 30, 35, 41, 47, 51, 132, 또는 136의 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는
서열 번호 8, 14, 20, 25, 31, 36, 53, 또는 122의 HCDR1;
서열 번호 9, 15, 21, 26, 32, 37, 42, 44, 54, 123, 130, 134, 135, 또는 137의 HCDR2;
서열 번호 10, 16, 22, 27, 33, 38, 43, 45, 48 51, 52, 55, 또는 124의 HCDR3;
서열 번호 111, 17, 23, 28, 34, 39, 46, 49, 또는 131의 LCDR1;
서열 번호 12, 18, 29, 40, 50, 또는 133의 LCDR2; 및
서열 번호 13, 19, 24, 30, 35, 41, 47, 51, 132, 또는 136의 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는
각각 서열 번호 8, 9 및 10;
각각 서열 번호 14, 15 및 16;
각각 서열 번호 20, 21 및 22;
각각 서열 번호 25, 26 및 27;
각각 서열 번호 25, 130 및 27;
각각 서열 번호 25, 134 및 27;
각각 서열 번호 25, 135 및 27;
각각 서열 번호 25, 137 및 27;
각각 서열 번호 31, 32 및 33;
각각 서열 번호 36, 37 및 38;
각각 서열 번호 31, 42 및 43;
각각 서열 번호 31, 44 및 45;
각각 서열 번호 36, 37 및 48;
각각 서열 번호 36, 37 및 52;
각각 서열 번호 53, 54 및 55; 또는
각각 서열 번호 122, 123, 및 124의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는
각각 서열 번호 11, 12 및 13;
각각 서열 번호 17, 18 및 19;
각각 서열 번호 23, 12 및 24;
각각 서열 번호 28, 29 및 30;
각각 서열 번호 28, 29 및 136;
각각 서열 번호 28, 133 및 132;
각각 서열 번호 34, 12 및 35;
각각 서열 번호 39, 40 및 41;
각각 서열 번호 46, 29 및 47;
각각 서열 번호 49, 50 및 51;
각각 서열 번호 23, 12 및 35; 또는
각각 서열 번호 131, 29 및 132의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 8, 9, 10, 11, 12 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 14, 15, 16, 17, 18 및 19의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 20, 21, 22, 23, 12 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 122, 123, 124, 23, 12, 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 26, 27, 28, 29 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 31, 32, 33, 34, 12 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 36, 37, 38, 39, 40 및 41의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 36, 37, 38, 49, 50 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 31, 42, 43, 11, 12 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 31, 44, 45, 46, 29 및 47의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 36, 37, 52, 49, 50 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 53, 54, 55, 23, 12 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 130, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 135, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 135, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 134, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 137, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 75, 77, 79, 160, 138, 139, 또는 140의 중쇄 가변 영역(VH)을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 76, 78, 142, 143, 또는 144의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 예시적인 항체의 VH, VL, HCDR 및 LCDR 서열이 표 2에 제시되어 있다.
표 2는 본 명세서에 기재된 일부 PSMA-특이적 항체의 예에 대한 요약을 제공한다:
[표 2]
일부 실시 형태에서는, 표 2에 기재된 항체들 중 어느 하나의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄를 포함하는 PSMA-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공된다. 일부 실시 형태에서는, 표 2에 기재된 항체들 중 어느 하나의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄 및 표 2에 기재된 항체들 중 어느 하나의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄를 포함하는 PSMA-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공된다. 본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, PSMA-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 PSMA에 결합하기 위하여, 표 2에 기재된 항체들 중 어느 하나의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄 및 표 2에 기재된 항체들 중 어느 하나의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 항원-결합과 경쟁한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 14, 15, 16, 17, 18 및 19의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 62의 VH 및 서열 번호 63의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 84의 중쇄(HC) 및 서열 번호 85의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 20, 21, 22, 23, 12 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 86의 중쇄(HC) 및 서열 번호 87의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 31, 42, 43, 11, 12 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 74의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 96의 중쇄(HC) 및 서열 번호 83의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 26, 27, 28, 29 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 66의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 88의 중쇄(HC) 및 서열 번호 89의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 122, 123, 124, 23, 12, 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 160의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 125의 중쇄(HC) 및 서열 번호 91의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 8, 9, 10, 11, 12, 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 60의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 82의 중쇄(HC) 및 서열 번호 83의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 31, 32, 33, 34, 12, 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 70의 VH 및 서열 번호 71의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 92의 중쇄(HC) 및 서열 번호 93의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 36, 37, 38, 39, 40, 및 41의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 72의 VH 및 서열 번호 73의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 94의 중쇄(HC) 및 서열 번호 95의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 31, 44, 45, 46, 29, 및 47의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 75의 VH 및 서열 번호 76의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 97의 중쇄(HC) 및 서열 번호 98의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 36, 37, 48, 49, 50, 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 77의 VH 및 서열 번호 78의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 99의 중쇄(HC) 및 서열 번호 100의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 36, 37, 52, 49, 50, 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 79의 VH 및 서열 번호 78의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 101의 중쇄(HC) 및 서열 번호 100의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 53, 54, 55, 23, 12, 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 68의 VH 및 서열 번호 69의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 90의 중쇄(HC) 및 서열 번호 91의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 145의 중쇄(HC) 및 서열 번호 89의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 130, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 142의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 145의 중쇄(HC) 및 서열 번호 148의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 145의 중쇄(HC) 및 서열 번호 149의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 146의 중쇄(HC) 및 서열 번호 89의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 144의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 147의 중쇄(HC) 및 서열 번호 150의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 147의 중쇄(HC) 및 서열 번호 89의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 135, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 147의 중쇄(HC) 및 서열 번호 148의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 147의 중쇄(HC) 및 서열 번호 149의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 144의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 146의 중쇄(HC) 및 서열 번호 150의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 134, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 139의 중쇄(HC) 및 서열 번호 142의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 146의 중쇄(HC) 및 서열 번호 149의 경쇄(LC)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 137, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 141의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 151의 중쇄(HC) 및 서열 번호 149의 경쇄(LC)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 약 100 nM 미만, 선택적으로 약 50 nM 미만, 예를 들어 약 12 nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 인간 PSMA ECD에 결합하며, 여기서 상기 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체는 약 100 nM 미만, 선택적으로 약 50 nM 미만, 예를 들어 약 12 nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 사이노몰거스 PSMA ECD에 결합하며, 여기서 상기 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형을 가지며, 이는 선택적으로, 야생형 IgG4와 비교할 때 중쇄 치환 S228P, F234A, 및 L235A를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 74의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함하고, IgG4 동종형을 가지며, 이는 선택적으로, 야생형 IgG4와 비교할 때 중쇄 치환 S228P, F234A, 및 L235A를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 다중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PSMA/CD3 항체이다.
항체는 요법에, 예를 들어 암을 치료하는 데 사용하기에 적합하다.
항체는 요법에, 예를 들어 고형 종양을 치료하는 데 사용하기에 적합하다.
항체는 요법에, 예를 들어 전립선암 또는 거세저항성 전립선암을 치료하는 데 사용하기에 적합하다.
항체는 요법에, 예를 들어 전립선 상피내 신생종을 치료하는 데 사용하기에 적합하다.
항체는 요법에, 예를 들어 결직장암을 치료하는 데 사용하기에 적합하다.
항체는 요법에, 예를 들어 투명 세포 신장 암종을 치료하는 데 사용하기에 적합하다.
항체는 요법에, 예를 들어 위암을 치료하는 데 사용하기에 적합하다.
항체는 요법에, 예를 들어 신장 세포 암종(RCC)(예를 들어, 신장 투명 세포 암종 또는 신장 유두상 세포 암종) 또는 이의 전이성 병변을 치료하는 데 사용하기에 적합하다.
항체는 요법에, 예를 들어 방광암을 치료하는 데 사용하기에 적합하다.
항체는 요법에, 예를 들어 유방암을 치료하는 데 사용하기에 적합하다.
항체는 요법에, 예를 들어 신장암(kidney cancer)을 치료하는 데 사용하기에 적합하다.
항체는 요법에, 예를 들어 신생혈관성 장애, 예컨대 고형 종양 성장을 특징으로 하는 암을 치료하는 데 사용하기에 적합하다.
항체는 요법에, 예를 들어 신생혈관성 장애, 예컨대 투명 세포 신장 암종(CCRCC), 결직장암, 유방암, 방광암, 폐암, 및 췌장암; 및 신세포암(renal caner), 요로상피암, 폐암, 결장암, 유방암, 및 간에 대한 선암종을 포함하지만 이로 한정되지 않는 다양한 기타 비전립선암을 치료하는 데 사용하기에 적합하다.
IgG 부류는 인간에서 하기의 4가지 동종형으로 분류된다: IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4. 이들은 Fc 영역의 아미노산 서열에서 95% 초과의 상동성을 공유하지만, 힌지 영역의 아미노산 조성 및 구조에서 큰 차이를 나타낸다. Fc 영역은 이펙터 기능, 예컨대 항체-의존성 세포성 세포독성(ADCC) 및 보체-의존성 세포독성(CDC)을 매개한다. ADCC에서는, 항체의 Fc 영역이 자연 살해세포 및 대식세포와 같은 면역 이펙터 세포의 표면 상의 Fc 수용체(FcgR)에 결합하여, 표적화된 세포의 식세포작용 또는 용해로 이어진다. CDC에서는, 항체가 세포 표면에서 보체 캐스케이드를 촉발시킴으로써 표적화된 세포를 사멸시킨다. 본 명세서에 기재된 항체는, 상이한 이펙터 기능들을 달성하도록 Fc 서열이 변형되어 있는 변형된 버전을 포함한, IgG 동종형들 중 임의의 것과 조합된 가변 도메인의 기재된 특징을 갖는 항체를 포함한다.
치료적 항체의 많은 응용에 있어서, Fc-매개 이펙터 기능은 작용 기전의 일부가 아니다. 이들 Fc-매개 이펙터 기능은 탈기전 독성을 야기함으로써 유해할 수 있고 잠재적으로 안전성 위험을 제기할 수 있다. Fc 영역을 조작하여 FcgR 또는 보체 인자에 대한 그의 결합을 감소시킴으로써 이펙터 기능의 변형이 달성될 수 있다. 활성화 FcgR(FcgRI, FcgRIIa, FcgRIIIa 및 FcgRIIIb) 및 억제성 FcgR(FcgRIIb) 또는 제1 보체 성분(C1q)에 대한 IgG의 결합은 힌지 영역 및 CH2 도메인에 위치된 잔기에 의존한다. Fc 기능성을 감소 또는 침묵시키기 위해 돌연변이가 IgG1, IgG2 및 IgG4에 도입되어 왔다. 본 명세서에 기재된 항체는 이들 변형을 포함할 수 있다.
일 실시 형태에서, 항체는 하기 특성들 중 하나 이상을 갖는 Fc 영역을 포함한다: (a) 모 Fc와 비교할 때 감소된 이펙터 기능; (b) Fcg RI, Fcg RIIa, Fcg RIIb, Fcg RIIIb 및/또는 Fcg RIIIa에 대한 감소된 친화성; (c) FcgRI에 대한 감소된 친화성; (d) FcgRIIa에 대한 감소된 친화성; (e) FcgRIIb에 대한 감소된 친화성; (f) Fcg RIIIb에 대한 감소된 친화성; 또는 (g) FcgRIIIa에 대한 감소된 친화성.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 IgG 또는 이의 유도체, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4 동종형이다. 항체가 IgG4 동종형을 갖는 일부 실시 형태에서, 항체는 이의 Fc 영역 내에 S228P, L234A, 및 L235A 치환을 함유한다. 항체가 IgG1 동종형을 갖는 일부 실시 형태에서, 항체는 이의 Fc 영역 내에 S228P, L234A, 및 L235A 치환을 함유한다.본 명세서에 기재된 항체는 이들 변형을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형을 갖는다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형을 가지며, 이는 선택적으로, 야생형 IgG4와 비교할 때 중쇄 치환 S228P를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형을 가지며, 이는 선택적으로, 야생형 IgG1과 비교할 때 중쇄 치환 L234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S 및 P331S를 포함한다.
기재된 PSMA-특이적 항체 및 항원-결합 단편에 더하여, 기재된 항체 및 항원-결합 단편을 인코딩할 수 있는 폴리뉴클레오티드 서열이 또한 제공된다. 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 또한 제공되며, 마찬가지로 PSMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편을 발현하는 세포도 본 명세서에 제공된다. 개시된 벡터를 발현할 수 있는 세포가 또한 기재된다. 이들 세포는 포유류 세포(예컨대, 293F 세포, CHO 세포), 곤충 세포(예컨대, Sf7 세포), 효모 세포, 식물 세포, 또는 세균 세포(예컨대, E. 콜라이(E. coli))일 수 있다. 기재된 항체는 또한 하이브리도마 세포에 의해 생성될 수 있다.
상동 항체
표 3에 제시된 VH, VL 또는 VH 및 VL 아미노산 서열을 포함하는, 본 명세서에 기재된, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에 있어서의 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체의 변이체는 본 발명의 범주 내에 있다. 예를 들어, 변이체는, 상동 항체가 모 항체와 비교할 때 개선된 기능적 특성을 보유하거나 갖는 한, VH 및/또는 VL 내에 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 서열 동일성은 본 발명의 VH 또는 VL 아미노산 서열에 대해 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%일 수 있다. 선택적으로, 모 항체와 비교하여 변이체의 어떠한 변이도 변이체의 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 75, 77, 79, 160, 138, 139, 또는 140의 VH를 포함하며, 상기 VH는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 갖는다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 76, 78, 142, 143, 또는 144의 VL을 포함하며, 상기 VL은 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 갖는다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 60의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 62의 VH 및 서열 번호 63의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 66의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 68의 VH 및 서열 번호 69의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 70의 VH 및 서열 번호 71의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 72의 VH 및 서열 번호 73의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 74의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 75의 VH 및 서열 번호 76의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 77의 VH 및 서열 번호 78의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 79의 VH 및 서열 번호 78의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 160의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 142의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 144의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 142의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 144의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 142의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 141의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함하며, 여기서 상기 VH, 상기 VL 또는 상기 VH 및 상기 VL 둘 모두는 선택적으로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산 치환을 포함한다. 선택적으로, 어떠한 치환도 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에 있어서의 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 상동 항체는 하기 특성들 중 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개를 갖는다:
a)
25 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 판 트로글로디테스 PSMA ECD에 결합하며, 여기서 상기 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨,
b)
20 nM 이하의 계산된 EC50으로 LNCaP 세포에 결합하고, 40 nM 이하의 계산된 EC50으로 마카카 파시쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포에 결합하며, 여기서 LNCaP 세포에 대한 결합과 마카카 파시쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포에 대한 결합 사이의 계산된 EC50의 차이는 5배 미만이고, 상기 계산된 EC50은 유세포측정을 사용하여 0℃에서 전세포 결합 검정에서 측정됨,
c)
12 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간(서열 번호 7), 판 트로글로디테스(서열 번호 4) 및 마카카 파시쿨라리스(서열 번호 5)로부터의 재조합 PSMA ECD에 결합하며, 여기서 상기 KD는 +25℃에서의 ProteOn 표면 플라즈몬 공명 검정 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨,
d)
항-CD3 항체 CD3B219와 이중특이성 항체로 쌍을 이룰 때, LNCaP 세포, C42 세포, 인간 PSMA-발현 HEK 세포 또는 마카카 파시쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포의 T-세포 매개 사멸을 디스플레이하며, 여기서 상기 T-세포 매개 사멸은 크롬-51에 의해 또는 카스파제 3/7 활성화 검정에 의해 측정됨, 또는
e)
인간 PSMA(서열 번호 3)의 잔기 I138, F235, P237, G238, D244, Y299, Y300, Q303, K304, E307, 및 K324-P326으로 구성되는 입체구조 에피토프를 인식함.
보존적 변형을 갖는 항체
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 서열을 포함하는 VH 및 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 서열을 포함하는 VL을 포함하며, 여기서 상기 CDR 서열들 중 하나 이상은 본 명세서에 기재된 항체(예를 들어, 표 2에 제시된 항체)에 기초하여 명시된 아미노산 서열들, 또는 이들의 보존적 변형을 포함하고, 상기 항체는 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 모 항체의 원하는 기능적 특성을 보유한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 8, 9, 10, 11, 12 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 14, 15, 16, 17, 18 및 19의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 20, 21, 22, 23, 12 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 26, 27, 28, 29 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 31, 32, 33, 34, 12 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 36, 37, 38, 39, 40 및 41의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 31, 42, 43, 11, 12 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 31, 44, 45, 46, 29 및 47의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 36, 37, 48, 49, 50 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 36, 37, 52, 49, 50 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 53, 54, 55, 23, 12 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 130, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 135, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 135, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 134, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 25, 137, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는, 각각 서열 번호 122, 123, 124, 23, 12 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 이들의 보존적 변형을 포함한다.
본 명세서에 기재된, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에 있어서의 본 발명의 보존적 변형을 갖는 항체는 하기 특성들 중 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개를 갖는다:
a)
25 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 판 트로글로디테스 PSMA ECD에 결합하며, 여기서 상기 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨,
b)
20 nM 이하의 계산된 EC50으로 LNCaP 세포에 결합하고, 40 nM 이하의 계산된 EC50으로 마카카 파스쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포에 결합하며, 여기서 LNCaP 세포에 대한 결합과 마카카 파시쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포에 대한 결합 사이의 계산된 EC50의 차이는 5배 미만이고, 상기 계산된 EC50은 유세포측정을 사용하여 0℃에서 전세포 결합 검정에서 측정됨,
c)
12 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간(서열 번호 7), 판 트로글로디테스(서열 번호 4) 및 마카카 파시쿨라리스(서열 번호 5)로부터의 재조합 PSMA ECD에 결합하며, 여기서 상기 KD는 +25℃에서의 ProteOn 표면 플라즈몬 공명 검정 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨,
d)
항-CD3 항체 CD3B219와 이중특이성 항체로 쌍을 이룰 때, LNCaP 세포, C42 세포, 인간 PSMA-발현 HEK 세포 또는 마카카 파시쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포의 T-세포 매개 사멸을 디스플레이하며, 여기서 상기 T-세포 매개 사멸은 크롬-51에 의해 또는 카스파제 3/7 활성화 검정에 의해 측정됨, 또는
e)
인간 PSMA(서열 번호 3)의 잔기 I138, F235, P237, G238, D244, Y299, Y300, Q303, K304, E307, 및 K324-P326으로 구성되는 입체구조 에피토프를 인식함.
"보존적 변형"은 아미노산 서열을 함유하는 항체의 결합 특성에 유의한 영향을 주지 않거나 그를 변경시키지 않는 아미노산 변형을 지칭한다. 보존적 변형은 아미노산 치환, 부가 및 결실을 포함한다. 보존적 치환은 아미노산이 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것들이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기들의 패밀리는 잘 규정되어 있고, 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 염기성 측쇄(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 비하전된 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 세린, 트레오닌, 티로신, 트립토판), 방향족 측쇄(예를 들어, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘, 티로신), 지방족 측쇄(예를 들어, 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 세린, 트레오닌), 아미드(예를 들어, 아스파라긴, 글루타민), 베타-분지형 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 아이소류신) 및 황-함유 측쇄 (시스테인, 메티오닌)를 갖는 아미노산을 포함한다. 더욱이, 폴리펩티드 내의 임의의 천연 잔기는 또한 알라닌으로 치환될 수 있는데, 이는 알라닌 스캐닝 돌연변이생성(alanine scanning mutagenesis)에 대해 이전에 기재된 바와 같다(문헌[MacLennan et al., (1988) Acta Physiol Scand Suppl 643:55-67]; 문헌[Sasaki et al., (1988) Adv Biophys 35:1-24]). 본 발명의 항체에 대한 아미노산 치환은 알려진 방법에 의해, 예를 들어 PCR 돌연변이생성(미국 특허 제4,683,195호)에 의해 이루어질 수 있다. 대안적으로, 변이체의 라이브러리를 생성할 수 있는데, 예를 들어 무작위 (NNK) 또는 비무작위 코돈, 예를 들어 DVK 코돈 - 이는 11개의 아미노산 (Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Asn, Arg, Ser, Tyr, Trp)을 인코딩함 - 을 사용하여 생성할 수 있다. 생성되는 항체 변이체들은 본 명세서에 기재된 검정을 사용하여 그들의 특성에 대해 시험될 수 있다.
면역접합체
"면역접합체"는 하나 이상의 이종성 분자(들)에 접합된 본 발명의 항체를 지칭한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에 있어서의 본 발명의 항체는 하나 이상의 세포독성제에 접합된다. 예시적인 그러한 세포독성제는 화학요법제 또는 화학요법 약물, 성장 억제제, 독소(예를 들어, 단백질 독소, 세균, 진균, 식물, 또는 동물 기원의 효소적으로 활성인 독소, 또는 이들의 단편), 및 방사성 동위원소를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 면역접합체는 항체-약물 접합체(ADC)이며, 여기서는 본 발명의 항체가 하나 이상의 약물에, 예컨대 메이탄시노이드(예를 들어, 미국 특허 제5,208,020호, 제5,416,06호 참조); 오리스타틴, 예컨대 모노메틸오리스타틴 약물 모이어티 DE 및 DF(MMAE 및 MMAF)(예를 들어, 미국 특허 제5,635,483호 및 제5,780,588호, 및 제7,498,298호 참조), 돌라스타틴, 칼리케아미신 또는 이들의 유도체(예를 들어, 미국 특허 제5,712,374호, 제5,714,586호, 제5,739,116호, 제5,767,285호, 제5,770,701호, 제5,770,710호, 제5,773,001호, 및 제5,877,296호; 문헌[Hinman et al., (1993) Cancer Res 53:3336-3342]; 및 문헌[Lode et al.,(1998) Cancer Res 58:2925-2928] 참조); 안트라사이클린, 예컨대 다우노마이신 또는 독소루비신(예를 들어, 문헌[Kratz et al., (2006) Current Med. Chem 13:477-523]; 문헌[Jeffrey et al., (2006) Bioorganic & Med Chem Letters 16:358-362]; 문헌[Torgov et al., (2005) Bioconj Chem 16:717-721]; 문헌[Nagy et al., (2000) Proc Natl Acad Sci USA 97:829-834]; 문헌[Dubowchik et al, Bioorg. & Med. Chem. Letters 12: 1529-1532 (2002)]; 문헌[King et al., (2002) J Med Chem 45:4336-4343]; 및 미국 특허 제6,630,579호 참조), 메토트렉세이트, 빈데신, 탁산, 예컨대 도세탁셀, 파클리탁셀, 라로탁셀, 테세탁셀, 및 오르타탁셀에 접합된다.
일부 실시 형태에서, 면역접합체는 효소적으로 활성인 독소 또는 이의 단편, 예컨대 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합성 활성 단편, 외독소 A 쇄(슈도모나스 아이루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 유래), 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 피토라카 아메리카나(Phytolaca americana) 단백질(PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(Momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오프피시날리스(Sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 및 트리코테센에 접합된 본 명세서에 기재된 본 발명의 항체를 포함한다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 항체는 방사성 원자에 접합되어 방사성 접합체를 형성한다. 다양한 방사성 동위원소가 방사성 접합체의 생성에 이용가능하다. 예에는 At211, 1131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소가 포함된다. 방사성 접합체가 검출에 사용되는 경우, 그것은 섬광조영술 연구용 방사성 원자, 예를 들어 tc99m 또는 1123, 또는 핵 자기 공명(NMR) 이미징(자기 공명 이미징, mri로도 알려짐)을 위한 스핀 라벨, 예컨대 다시 요오드-123, 요오드-131, 인듐-111, 불소-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망간 또는 철을 포함할 수 있다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 항체와 세포독성제의 접합체는 다양한 이중기능성 단백질-커플링제, 예컨대 N-석신이미딜-3-(2-피리딜다이티오) 프로피오네이트(SPDP), 석신이미딜-4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1-카르복실레이트(SMCC), 이미노티올란(IT), 이미도에스테르의 이중기능성 유도체(예컨대, 다이메틸 아디피미데이트 HQ), 활성 에스테르(예컨대, 다이석신이미딜 수베레이트), 알데하이드(예컨대, 글루타르알데하이드), 비스-아지도 화합물(예컨대, 비스(p-아지도벤조일)헥산다이아민), 비스-다이아조늄 유도체(예컨대, 비스-(p-다이아조늄벤조일)-에틸렌다이아민), 다이아이소시아네이트(예컨대, 톨루엔 2,6-다이아이소시아네이트), 및 비스-활성 불소 화합물(예컨대, 1,5-다이플루오로-2,4-다이니트로벤젠)을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 리신 면역독소가 문헌[Vitetta et al., (1987) Science 238: 1098]에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 탄소-14-표지 1-아이소티오시아네이토벤질-3-메틸다이에틸렌 트라이아민펜타아세트산(MX-DTPA)은 항체에 대한 방사성 핵종의 접합을 위한 예시적인 킬레이트제이다. 예를 들어, 국제 특허 출원 공개 W094/11026호를 참조한다. 링커는 세포 내에서 세포독성 약물의 방출을 촉진시키는 "절단가능한 링커"일 수 있다. 예를 들어, 산-불안정성 링커, 펩티다제-감수성 링커, 광불안정성 링커, 다이메틸 링커 또는 이황화물-함유 링커(문헌[Chari et al., (1992) Cancer Res 52: 127-131]; 미국 특허 제5,208,020호)가 사용될 수 있다.
면역접합체 또는 ADC는 가교결합 시약, 예컨대 BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 및 설포-SMPB, 및 SVSB(석신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트)를 사용하여 제조될 수 있으며, 이들은 (예를 들어, 미국 일리노이주 록포드 소재의 Pierce Biotechnology, Inc.로부터) 구매가능하다.
본 발명의, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태 중 일 실시 형태는 치료제 또는 조영제에 연결된 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 면역접합체이다.
본 발명의, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태 중 다른 실시 형태는 치료제 또는 조영제에 연결된 본 발명의 CD3에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 면역접합체이다.
본 발명의, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태 중 다른 실시 형태는 치료제 또는 조영제에 연결된 본 발명의 이중특이성 PSMA/CD3 항체를 포함하는 면역접합체이다.
본 발명의 단일특이성 항체의 생성
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 길항적 항체는 인간 항체이다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 길항적 항체는 인간화 항체이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 단일특이성 항체(예를 들어, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체)는 다양한 기법을 사용하여 생성될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Kohler and Milstein, Nature 256:495, 1975]의 하이브리도마 방법이 단일클론 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. 하이브리도마 방법에서는, 마우스 또는 다른 숙주 동물, 예컨대 햄스터, 래트 또는 원숭이를 인간, 침팬지 또는 마카크 PSMA 또는 CD3 또는 PSMA 또는 CD3의 단편, 예컨대 PSMA 또는 CD3의 세포외 도메인으로 면역화한 후, 면역화된 동물로부터의 비장 세포를 표준 방법을 사용하여 골수종 세포와 융합시켜 하이브리도마 세포를 형성한다(문헌[Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)]). 단일 불멸화(immortalized) 하이브리도마 세포로부터 발생되는 콜로니를 원하는 특성, 예컨대 항원에 대한 결합의 특이성, 교차-반응성 또는 그의 결여, 및 친화성을 갖는 항체의 생성에 대해 스크리닝한다.
다양한 숙주 동물이 본 명세서에 기재된, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에 있어서의 본 발명의 PSMA 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 마우스 항-인간 PSMA 항체를 생성하기 위해 Balb/c 마우스가 사용될 수 있다. Balb/c 마우스 및 다른 인간 이외의 동물에서 제조된 항체는 더 인간-유사한 서열을 생성하기 위하여 다양한 기술을 사용하여 인간화될 수 있다.
인간 수용자 프레임워크의 선택을 포함한 예시적인 인간화 기법이 알려져 있으며, CDR 이식(미국 특허 제5,225,539호), SDR 이식(미국 특허 제6,818,749호), 재표면화(Resurfacing)(문헌[Padlan, (1991) Mol Immunol 28:489-499]), 특이성 결정 잔기 재표면화(미국 특허 출원 공개 제2010/0261620호), 인간 프레임워크 적응화(미국 특허 제8,748,356호), 또는 초인간화(미국 특허 제7,709, 226호)를 포함한다. 이들 방법에서는, 모 항체의 CDR을 인간 프레임워크 상에 전달하는데, 이러한 인간 프레임워크는 모 프레임워크에 대한 그의 전체 상동성에 기초하여, CDR 길이의 유사성에 기초하여, 또는 표준 구조 동일성에 기초하여, 또는 이들의 조합에 기초하여 선택될 수 있다.
인간화 항체는, 국제 특허 출원 공개 WO1090/007861호 및 WO1992/22653호에 기재된 것들과 같은 기법들에 의해, 변경된 프레임워크 지지 잔기를 도입시켜 결합 친화도를 보존함으로써(복귀 돌연변이(backmutation)), 또는 CDR들 중 임의의 것에서 변이를 도입하여, 예를 들어 항체의 친화성을 개선함으로써 원하는 항원에 대한 그의 선택성 또는 친화성을 개선하도록 추가로 최적화될 수 있다.
게놈 내에 인간 면역글로불린(Ig) 유전자좌를 보유하는 유전자도입 동물, 예컨대 마우스 또는 래트가 표적 단백질에 대한 인간 항체를 생성하는 데 사용될 수 있고, 이는, 예를 들어 미국 특허 제6,150,584호, 국제 특허 출원 공개 WO99/45962호, 국제 특허 출원 공개 WO2002/066630호, WO2002/43478호, WO2002/043478호 및 WO1990/04036호, 문헌[Lonberg et al (1994) Nature 368:856-9]; 문헌[Green et al (1994) Nature Genet. 7:13-21]; 문헌[Green & Jakobovits (1998) Exp. Med. 188:483-95]; 문헌[Lonberg and Huszar (1995) Int Rev Immunol 13:65-93]; 문헌[Bruggemann et al., (1991) Eur J Immunol 21:1323- 1326]; 문헌[Fishwild et al., (1996) Nat Biotechnol 14:845-851]; 문헌[Mendez et al., (1997) Nat Genet 15:146-156]; 문헌[Green (1999) J Immunol Methods 231:11-23]; 문헌[Yang et al., (1999) Cancer Res 59:1236-1243]; 문헌[
and Taussig (1997) Curr Opin Biotechnol 8:455-458]에 기재되어 있다. 그러한 동물 내의 내인성 면역글로불린 유전자좌는 파괴 또는 결실될 수 있고, 적어도 하나의 완전한 또는 부분적인 인간 면역글로불린 유전자좌가 상동적 또는 비상동적 재조합을 사용하거나, 도입염색체(transchromosome)를 사용하거나, 또는 미니유전자(minigene)를 사용하여 동물의 게놈 내로 삽입될 수 있다. Regeneron(http://_www_regeneron_com), Harbour Antibodies(http://_www_harbourantibodies_com), Open Monoclonal Technology, Inc., OMT(http://_www_omtinc_net), KyMab(http://_www_kymab_com), Trianni(http://_www.trianni_com) 및 Ablexis(http://_www_ablexis_com)와 같은 회사와 제휴하여, 전술된 바와 같은 기술을 사용하여, 선택된 항원에 대해 유도된 인간 항체를 제공할 수 있다.
인간 항체는 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택될 수 있으며, 여기서 파지는 인간 면역글로불린 또는 그의 일부분, 예컨대 Fab, 단일쇄 항체(scFv), 또는 쌍을 이루지 않거나 쌍을 이룬 항체 가변 영역들을 발현하도록 조작된다(문헌[Knappik et al., (2000) J Mol Biol 296:57-86]; 문헌[Krebs et al., (2001) J Immunol Meth 254:67-84]; 문헌[Vaughan et al., (1996) Nature Biotechnology 14:309-314]; 문헌[Sheets et al., (1998) PITAS (USA) 95:6157-6162]; 문헌[Hoogenboom and Winter (1991) J Mol Biol 227:381]; 문헌[Marks et al., (1991) J Mol Biol 222:581]). 본 발명의 항체는, 예를 들어 문헌[Shi et al., (2010) J Mol Biol 397:385-96] 및 국제 특허 출원 공개 WO09/085462호에 기재된 바와 같이 박테리오파지 pIX 외피 단백질과의 융합 단백질로서 항체 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 발현하는 파지 디스플레이 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 이러한 라이브러리는 인간 및/또는 사이노 PSMA 또는 CD3에 결합하는 파지에 대해 스크리닝될 수 있고, 획득된 양성 클론은 추가로 특성화될 수 있고, Fab가 클론 용해물로부터 단리되어 전장 IgG로서 발현될 수 있다. 인간 항체를 단리하기 위한 그러한 파지 디스플레이 방법은, 예를 들어 미국 특허 제5,223,409호, 제5,403,484호, 제5,571,698호, 제5,427,908호, 제5,580,717호, 제5,969,108호, 제6,172,197호, 제5,885,793호; 제6,521,404호; 제6,544,731호; 제6,555,313호; 제6,582,915호 및 제6,593,081호에 기재되어 있다.
면역원성 항원의 제조 및 단일클론 항체 생성은 임의의 적합한 기법, 예컨대 재조합 단백질 생성을 사용하여 수행될 수 있다. 면역원성 항원은 정제된 단백질, 또는 전세포 또는 세포 또는 조직 추출물을 포함하는 단백질 혼합물의 형태로 동물에게 투여될 수 있거나, 또는 항원은 상기 항원 또는 이의 일부분을 인코딩하는 핵산으로부터 동물의 체내에서 드 노보(de novo)로 형성될 수 있다.
본 발명의 다중특이성 PSMA × CD3 항체의 생성
본 발명의 다중특이성 PSMA × CD3 항체(예를 들어, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 항체)는 PSMA 결합 VH/VL 도메인을 CD3 결합 VH/VL 도메인과 조합함으로써 생성될 수 있다(본 명세서에서 단리되고 특성화됨). 대안적으로, 이중특이성 PSMA × CD3 항체는 공개적으로 입수가능한 단일특이성 항-PSMA 및 항-CD3 항체로부터의 VH/VL 도메인을 사용하여 조작되고/되거나, 본 명세서에서 확인된 PSMA 또는 CD3 결합 VH/VL 도메인을 공개적으로 입수가능한 PSMA 또는 CD3 결합 VH/VL 도메인과 믹스-매칭(mix-matching)시킴으로써 얻어질 수 있다.
이중특이성 PSMA × CD3 분자를 조작하는 데 사용될 수 있는 예시적인 항-PSMA 항체는, 예를 들어 본 명세서에 그리고 표 2에 있는 것들이다. 예를 들어, 본 발명의 PSMA 항체의 VH/VL 도메인은 본 명세서에 그리고 표 5에 기재된 CD3 결합 VH/VL 도메인을 포함하는 이중특이성 항체 내로 도입될 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 CD3 항체 CD3B217 및 CD3B219의 VH/VL 도메인이 이중특이성 PSMA × CD3 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. 본 명세서에 제공된 항체 CD3B217 및 CD3B219에 대한 설명 및 특성화에 더하여, 이들 항체의 더 상세한 설명을 본 명세서에 참고로 포함된 미국 특허 출원 공개 제2016-0068605 A1호에서 찾아볼 수 있다.
유사하게, 이중특이성 PSMA × CD3 분자를 조작하기 위해 사용될 수 있는 예시적인 항-CD3 항체는, 예를 들어 국제 특허 출원 공개 WO2005/048935호, WO2004/106380호, 및 WO2015095392호에 기재된 것들이다. 이들 CD3 VH/VL 도메인은 본 명세서에 그리고 표 2에 기재된 PSMA 결합 VH/VL 도메인을 포함하는 이중특이성 항체 내로 도입될 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 PSMA 항체 PSMB119, PSMB120, PSMB121, PSMB122, PSMB123, PSMB87, PSMB126, PSMB127, PSMB128, PSMB129, PSMB130, PSMB120, PSMB121, PSMB122, PSMB123, PSMB127, PSMB128, PSMB130, PSMB344, PSMB345, PSMB346, PSMB347, PSMB349, PSMB358, PSMB359, PSMB360, PSMB361, PSMB362, PSMB363, 및 PSMB365의 VH/VL 도메인이 이중특이성 PSMA × CD3 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다.
생성된 이중특이성 PSMA × CD3 항체는 PSMA 및 CD3에 대한 그들의 결합에 대해, 그리고 PSMA-발현 세포(예를 들어, LNCaP)의 T-세포 매개 사멸과 같은 그들의 원하는 기능적 특성에 대해 시험될 수 있다.
본 발명의 이중특이성 항체는 전장 항체 구조를 갖는 항체를 포함한다.
"전장 항체"는 2개의 전장 항체 중쇄 및 2개의 전장 항체 경쇄를 갖는 항체를 지칭한다. 전장 항체 중쇄(HC)는 잘 알려진 중쇄 가변 및 불변 도메인 VH, CH1, 힌지, CH2, 및 CH3으로 이루어진다. 전장 항체 경쇄(LC)는 잘 알려진 경쇄 가변 및 불변 도메인 VL 및 CL로 이루어진다. 전장 항체는 어느 하나 또는 둘 모두의 중쇄에 C-말단 라이신(K)이 결여되어 있을 수 있다.
"Fab-아암" 또는 "하프 분자(half molecule)"는 항원에 특이적으로 결합하는 하나의 중쇄-경쇄 쌍을 지칭한다.
본 명세서에 기재된, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에 있어서의 본 발명의 전장 이중특이성 항체는, 예를 들어 2개의 단일특이성 2가 항체들 사이에서의 Fab 아암 교환(또는 하프 분자 교환)을 사용하여 생성될 수 있는데, 이는 공발현을 사용하거나 또는 무세포 환경에서의 시험관내에서, 각각의 하프 분자 내의 중쇄 CH3 계면에 치환을 도입하여 별개의 특이성을 갖는 2개의 항체 하프 분자의 이종이량체 형성을 유리하게 함으로써 행해진다. Fab 아암 교환 반응은 이황화-결합 이성질화 반응 및 CH3 도메인의 해리-회합의 결과이다. 모 단일특이성 항체의 힌지 영역 내의 중쇄 이황화물 결합은 환원된다. 모 단일특이성 항체들 중 하나의, 생성된 유리 시스테인은, 제2 모 단일특이성 항체 분자의 시스테인 잔기와 중쇄간 이황화물 결합을 형성하고, 동시에 모 항체의 CH3 도메인이 해리-회합에 의해 방출 및 재형성된다. Fab 아암의 CH3 도메인은 동종이량체화에 비하여 이종이량체화에 유리하도록 조작될 수 있다. 생성된 산물은, 각각이 별개의 에피토프, 즉 PSMA 상의 에피토프 및 CD3 상의 에피토프와 결합하는 2개의 Fab 아암 또는 하프 분자를 갖는 이중특이성 항체이다.
"동종이량체화"는 동일한 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄의 상호작용을 지칭한다. "동종이량체"는 동일한 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.
"이종이량체화"는 동일하지 않은 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄의 상호작용을 지칭한다. "이종이량체"는 동일하지 않은 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 Triomab/Quadroma (Trion Pharma/Fresenius Biotech), 노브-인-홀(Knob-in-Hole) (Genentech), CrossMAb (Roche) 및 정전기적 매칭(electrostatically-matched) (Chugai, Amgen, NovoNordisk, Oncomed), LUZ-Y (Genentech), 가닥 교환 조작된 도메인 바디(Strand Exchange Engineered Domain body, SEEDbody) (EMD Serono), Biclonic (Merus) 및 DuoBody (Genmab A/S)와 같은 설계를 포함한다.
Triomab quadroma 기술은 본 발명의 전장 이중특이성 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. Triomab 기술은 2개의 모 키메라 항체들 사이의 Fab 아암 교환을 촉진시키는데, 이때 하나의 모 mAb는 IgG2a를 갖고, 제2 모 mAb는 래트 IgG2b 불변 영역을 가져서, 키메라 이중특이성 항체를 생성한다.
"노브-인-홀" 전략(예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO 2006/028936호 참조)이 본 발명의 전장 이중특이성 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. 간략하게 말해서, 인간 IgG 내에 CH3 도메인의 계면을 형성하는 선택된 아미노산이 CH3 도메인 상호작용에 영향을 주는 위치에서 돌연변이화되어 이종이량체 형성을 촉진할 수 있다. 작은 측쇄(홀)를 갖는 아미노산이 제1 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 내로 도입되고, 큰 측쇄(노브)를 갖는 아미노산이 제2 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 내로 도입된다. 2개의 항체의 공발현 후에, "홀"을 갖는 중쇄와 "노브"를 갖는 중쇄의 우선적인 상호작용의 결과로서 이종이량체가 형성된다. 노브와 홀을 형성하는 예시적인 CH3 치환 쌍은 다음과 같다(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨): T366Y/F405A, T366W/F405W, F405W/Y407A, T394W/Y407T, T394S/Y407A, T366W/T394S, F405W/T394S 및 T366W/T366S_L368A_Y407V.
CrossMAb 기술은 본 발명의 전장 이중특이성 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. Fab 아암 교환을 촉진하기 위하여 "노브-인-홀" 전략을 이용하는 것에 더하여, CrossMAb는 하프 아암들 중 하나에서, CH1 및 CL 도메인이 교환되어 있어서, 생성된 이중특이성 항체의 올바른 경쇄 쌍형성을 보장한다(예를 들어, 미국 특허 제8,242,247호 참조).
한쪽 또는 양쪽 아암에서, 중쇄와 경쇄 사이에서 또는 이중특이성 항체 내의 중쇄 내에서 가변 또는 불변 도메인, 또는 두 도메인 모두를 교환함으로써 본 발명의 전장 이중특이성 항체를 생성하기 위하여 다른 크로스-오버 전략이 사용될 수 있다. 이들 교환은, 예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO2009/080254호, WO2009/080251호, WO2009/018386호 및 WO2009/080252호에 기재된 바와 같이 VH-CH1을 VL-CL로, VH를 VL로, CH3을 CL로 그리고 CH3을 CH1로 교환하는 것을 포함한다.
하나의 CH3 표면에서 양으로 하전된 잔기를, 그리고 제2 CH3 표면에서 음으로 하전된 잔기를 치환함으로써 정전기 상호작용을 사용하여 중쇄 이종이량체화를 촉진하는 것과 같은 다른 전략이 사용될 수 있으며, 이는 미국 특허 출원 공개 제2010/0015133호; 미국 특허 출원 공개 제2009/0182127호; 미국 특허 출원 공개 제2010/028637호 또는 미국 특허 출원 공개 제2011/0123532호에 기재된 바와 같다. 다른 전략에서는, 미국 특허 출원 공개 제2012/0149876호 또는 미국 특허 출원 공개 제2013/0195849호에 기재된 바와 같이 하기의 치환(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨)에 의해 이종이량체화가 촉진될 수 있다: L351Y_F405A_Y407V/T394W, T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V, T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V, L351Y_Y407A/T366A_K409F, L351Y_Y407A/T366V_K409F, Y407A/T366A_K409F, 또는 T350V_L351Y_F405A_Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W.
본 발명의 이중특이성 항체를 생성하기 위하여 LUZ-Y 기술이 이용될 수 있다. 이 기술에서는, 류신 지퍼가 CH3 도메인의 C 말단 내로 첨가되어 모 mAb로부터 이종이량체 조립을 유도하고, 이것을 정제 후에 제거하는데, 이는 문헌[Wranik et al., (2012) J Biol Chem 287(52): 42221-9]에 기재된 바와 같다.
본 발명의 이중특이성 항체를 생성하기 위하여 SEEDbody 기술이 이용될 수 있다. SEEDbody는, 그의 불변 도메인에서, 선택된 IgG 잔기가 IgA 잔기로 치환되어 있어서, 이종이량체화를 촉진시키는데, 이는 미국 특허 출원 공개 제20070287170호에 기재된 바와 같다.
본 발명은 또한 PSMA에 특이적으로 결합하는 다중특이성 다중기능성 항체를 제공한다.
본 발명에 따르면, PSMA에 특이적으로 결합하는 그러한 다중특이성 다중기능성 항체는 종양 세포의 이중 표적화를 위한 삼중특이성 항체일 수 있다 - 이들은 종양 세포 상의 2개의 상이한 표적/에피토프를 표적화하도록 설계될 수 있는 삼중기능성 구조이고, 제3 기능체는 T-세포 또는 NK-세포 중 어느 하나에 대해 높은 친화도로 결합한다. 2개의 별개의 종양 에피토프를 표적화하고 T- 또는 NK-세포에 결합하는 삼중특이성 항체는 양쪽 표적을 발현하는 종양 세포를 용해시킨다. 그러한 분자는 당업계에 알려진 항체 포맷에 의해 생성될 수 있으며 충분히 기재되어 있다(국제 특허 출원 공개 WO20151842071호, WO2015158636호, WO2010136172호, WO2013174873호). 본 발명의 삼중특이성 실시 형태에서, 항원-결합 폴리펩티드는 PSMA 및 종양 세포 상의 제2 별개의 항원에 이중특이적이고, 추가로 이펙터 세포, 특히 T 세포 또는 NK 세포에 특이적이다.
본 명세서에 기재된, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에 있어서의 본 발명의 이중특이성 항체는, 2개의 단일특이성 동종이량체성 항체의 CH3 영역 내에 비대칭 돌연변이를 도입시키고, 이황화물 결합 이성질화를 가능하게 하는 환원성 조건에서 2개의 모 단일특이성 동종이량체성 항체로부터 이중특이성 이종이량체성 항체를 형성함으로써 무세포 환경에서 시험관내에서 생성될 수 있는데, 이는 국제 특허 출원 공개 WO2011/131746호(DuoBody technology)에 기재된 방법에 따른 것이다. 이들 방법에서, 제1 단일특이성 2가 항체(예를 들어, 항-PSMA 항체) 및 제2 단일특이성 2가 항체(예를 들어, 항-CD3 항체)는 CH3 도메인에서 이종이량체 안정성을 촉진하는 소정의 치환을 갖도록 조작되며; 이들 항체는 힌지 영역 내의 시스테인이 이황화물 결합 이성질화를 거칠 수 있게 하기에 충분한 환원성 조건 하에서 함께 인큐베이션되고; 그럼으로써 Fab 아암 교환에 의해 이중특이성 항체를 생성한다. 인큐베이션 조건은 비환원성 상태로 최적으로 회복될 수 있다. 사용될 수 있는 예시적인 환원제는 2-메르캅토에틸아민(2-MEA), 다이티오트레이톨(DTT), 다이티오에리트리톨(DTE), 글루타티온, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP), L-시스테인 및 베타-메르캅토에탄올이다. 예를 들어, pH 5 내지 8에서, 예를 들어 pH 7.0에서 또는 pH 7.4에서 적어도 25 mM 2-MEA의 존재 하에서 또는 적어도 0.5 mM 다이티오트레이톨의 존재 하에서 20℃ 이상의 온도에서 90분 이상 동안의 인큐베이션이 사용될 수 있다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 항체는 항체 CH3 불변 도메인 내에 적어도 하나의 치환을 포함한다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 항체 CH3 불변 도메인 내의 적어도 하나의 치환은 409R, F405L 또는 F405L 및 R409K 치환이며, 여기서 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따른다.
항체 도메인 및 넘버링은 잘 알려져 있다. "비대칭"은 항체 내의 2개의 별개의 중쇄에서 2개의 CH3 도메인 내의 동일하지 않은 치환을 지칭한다. IgG1 CH3 영역은 전형적으로 IgG1 상의 잔기 341-446으로 이루어진다(잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따름).
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 단리된 이중특이성 PSMA × CD3 항체는 항체 제1 중쇄(HC1) 내의 F405L 치환 및 항체 제2 중쇄(HC2) 내의 409R 치환을 포함한다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 단리된 이중특이성 PSMA × CD3 항체는 HC1 내의 S228P 치환 및 HC2 내의 S228P, F405L 및 R409K 치환을 포함하며, 여기서 상기 항체는 IgG4 동종형을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, HC1은 PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인을 함유하고, HC2는 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 함유한다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 항체는 HC1 및 HC2 내의 잔기 위치 350, 366, 368, 370, 399, 405, 407 또는 409에서 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개 또는 8개의 비대칭 치환을 포함하며, 이때 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따른다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 항체는 HC1 및 HC2 내의 잔기 위치 350, 370, 405 또는 409에서 적어도 1개, 2개, 3개 또는 4개의 비대칭 치환을 포함하며, 이때 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따른다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 항체는 HC1 및 HC2 내의 잔기 위치 405 또는 409에서 적어도 1개의 비대칭 치환을 포함하며, 이때 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따른다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 항체는 HC1 내의 409R 또는 F405L 치환 및 HC2 내의 409R 또는 F405L 치환을 포함하며, 여기서 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따른다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 항체는 HC1 내의 F405L 치환 및 HC2 내의 409R 치환을 포함한다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 항체는 HC1 및 HC2 내의 잔기 위치 366, 368, 370, 399, 405, 407 또는 409에서 적어도 1개의 비대칭 치환을 포함하며, 여기서 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따른다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1 위치 409는 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산 치환을 갖고, HC2 위치 405는 Phe 이외의 아미노산 치환을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1 위치 405는 Phe 이외의 아미노산 치환을 갖고, HC2 위치 409는 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산 치환을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1 위치 409는 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산 치환을 갖고, HC2 위치 405는 Phe, Arg 또는 Gly 이외의 아미노산 치환을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1 위치 405는 Phe, Arg 또는 Gly 이외의 아미노산 치환을 갖고, HC2 CH3 위치 409는 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산 치환을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1 CH3은 위치 405에서 Phe를 그리고 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖고, HC2는 위치 405에서 Phe 이외의 아미노산을 그리고 위치 409에서 Lys를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 405에서 Phe 이외의 아미노산을 그리고 위치 409에서 Lys를 갖고, HC2는 위치 405에서 Phe를 그리고 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 405에서 Phe를 그리고 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖고, HC2는 위치 405에서 Phe, Arg 또는 Gly 이외의 치환을 그리고 위치 409에서 Lys를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 405에서 Phe, Arg 또는 Gly 이외의 치환을 그리고 위치 409에서 Lys를 갖고, HC2는 위치 405에서 Phe를 그리고 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 405에서 Phe를 그리고 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖고, HC2는 위치 405에서 Leu를 그리고 위치 409에서 Lys를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 405에서 Leu를 그리고 위치 409에서 Lys를 갖고, HC2는 위치 405에서 Phe를 그리고 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 405에서 Phe를 그리고 위치 409에서 Arg를 갖고, HC2는 위치 405에서 Phe, Arg 또는 Gly 이외의 아미노산을 그리고 위치 409에서 Lys를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 405에서 Phe, Arg 또는 Gly 이외의 아미노산을 그리고 위치 409에서 Lys를 갖고, HC2는 위치 405에서 Phe를 그리고 위치 409에서 Arg를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 405에서 Phe를 그리고 위치 409에서 Arg를 갖고, HC2는 위치 405에서 Leu를 그리고 위치 409에서 Lys를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 405에서 Leu를 그리고 위치 409에서 Lys를 갖고, HC2는 위치 405에서 Phe를 그리고 위치 409에서 Arg를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 405에서 Phe를 그리고 위치 409에서 Lys를 갖고, HC2는 위치 405에서 Leu를 그리고 위치 409에서 Arg를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 405에서 Leu를 그리고 위치 409에서 Arg를 갖고, HC2는 위치 405에서 Phe를 그리고 위치 409에서 Lys를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖고, HC2는 위치 409에서 Lys를, 위치 370에서 Thr을, 그리고 위치 405에서 Leu를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 409에서 Lys를, 위치 370에서 Thr을, 그리고 위치 405에서 Lue를 갖고, HC2는 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 409에서 Arg를 갖고, HC2는 위치 409에서 Lys를, 위치 370에서 Thr을, 그리고 위치 405에서 Leu를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 409에서 Lys를, 위치 370에서 Thr을, 그리고 위치 405에서 Lue를 갖고, HC2는 위치 409에서 Arg를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 370에서 Lys를, 위치 405에서 Phe를, 그리고 위치 409에서 Arg를 갖고, HC2는 위치 409에서 Lys를, 위치 370에서 Thr을, 그리고 위치 405에서 Leu를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 409에서 Lys를, 위치 370에서 Thr을, 그리고 위치 405에서 Leu를 갖고, HC2는 위치 370에서 Lys를, 위치 405에서 Phe를, 그리고 위치 409에서 Arg를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖고, HC2는 위치 407에서 Tyr, Asp, Glu, Phe, Lys, Gln, Arg, Ser 또는 Thr 이외의 아미노산을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 407에서 Tyr, Asp, Glu, Phe, Lys, Gln, Arg, Ser 또는 Thr 이외의 아미노산을 갖고, HC2는 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖고, HC2는 위치 407에서 Ala, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Val 또는 Trp를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 407에서 Ala, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Val 또는 Trp를 갖고, HC2는 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖고, HC2는 위치 407에서 Gly, Leu, Met, Asn 또는 Trp를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 407에서 Gly, Leu, Met, Asn 또는 Trp를 갖고, HC2는 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 407에서 Tyr을 그리고 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖고, HC2는 위치 407에서 Tyr, Asp, Glu, Phe, Lys, Gln, Arg, Ser 또는 Thr 이외의 아미노산을 그리고 위치 409에서 Lys를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 407에서 Tyr, Asp, Glu, Phe, Lys, Gln, Arg, Ser 또는 Thr 이외의 아미노산을 그리고 위치 409에서 Lys를 갖고, HC2는 위치 407에서 Tyr을 그리고 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 407에서 Tyr을 그리고 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖고, HC2는 위치 407에서 Ala, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Val 또는 Trp를 갖고 위치 409에서 Lys를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 407에서 Ala, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Val 또는 Trp를 그리고 위치 409에서 Lys를 갖고, HC2 CH3은 위치 407에서 Tyr을 그리고 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1 CH3은 위치 407에서 Tyr을 그리고 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖고, HC2는 위치 407에서 Gly, Leu, Met, Asn 또는 Trp를 그리고 위치 409에서 Lys를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 407에서 Gly, Leu, Met, Asn 또는 Trp를 그리고 위치 409에서 Lys를 갖고, HC2는 위치 407에서 Tyr을 그리고 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 407에서 Tyr을 그리고 위치 409에서 Arg를 갖고, HC2는 위치 407에서 Tyr, Asp, Glu, Phe, Lys, Gln, Arg, Ser 또는 Thr 이외의 아미노산을 그리고 위치 409에서 Lys를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 407에서 Tyr, Asp, Glu, Phe, Lys, Gln, Arg, Ser 또는 Thr 이외의 아미노산을 그리고 위치 409에서 Lys를 갖고, HC2는 위치 407에서 Tyr을 그리고 위치 409에서 Arg를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 407에서 Tyr을 그리고 위치 409에서 Arg를 갖고, HC2는 위치 407에서 Ala, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Val 또는 Trp를 그리고 위치 409에서 Lys를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 407에서 Ala, Gly, His, Ile, Leu, Met, Asn, Val 또는 Trp를 그리고 위치 409에서 Lys를 갖고, HC2는 위치 407에서 Tyr을 그리고 위치 409에서 Arg를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1 CH3은 위치 407에서 Tyr을 그리고 위치 409에서 Arg를 갖고, HC2 CH3은 위치 407에서 Gly, Leu, Met, Asn 또는 Trp를 그리고 위치 409에서 Lys를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 407에서 Gly, Leu, Met, Asn 또는 Trp를 그리고 위치 409에서 Lys를 갖고, HC2는 위치 407에서 Tyr을 그리고 위치 409에서 Arg를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖고, HC2는 (i) 위치 368에서 Phe, Leu 및 Met 이외의 아미노산을 갖거나, (ii) 위치 370에서 Trp를 갖거나, 또는 (iii) 위치 399에서 Asp, Cys, Pro, Glu 또는 Gln 이외의 아미노산을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1 은 (i) 위치 368에서 Phe, Leu 및 Met 이외의 아미노산을 갖거나, (ii) 위치 370에서 Trp를 갖거나, 또는 (iii) 위치 399에서 Asp, Cys, Pro, Glu 또는 Gln 이외의 아미노산을 갖고, HC2는 위치 409에서 Lys, Leu 또는 Met 이외의 아미노산을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 409에서 Arg, Ala, His 또는 Gly를 갖고, HC2는 (i) 위치 368에서 Lys, Gln, Ala, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Asn, Arg, Ser, Thr, Val 또는 Trp를 갖거나, (ii) 위치 370에서 Trp를 갖거나, 또는 (iii) 위치 399에서 Ala, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Ser, Thr, Trp, Phe, His, Lys, Arg 또는 Tyr을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 (i) 위치 368에서 Lys, Gln, Ala, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Asn, Arg, Ser, Thr, Val, 또는 Trp를 갖거나, (ii) 위치 370에서 Trp를 갖거나, 또는 (iii) 위치 399에서 Ala, Gly, Ile, Leu, Met, Asn, Ser, Thr, Trp, Phe, His, Lys, Arg 또는 Tyr을 갖고, HC2는 위치 409에서 Arg, Ala, His 또는 Gly를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 위치 409에서 Arg를 갖고, HC2는 (i) 위치 368에서 Asp, Glu, Gly, Asn, Arg, Ser, Thr, Val 또는 Trp를 갖거나, (ii) 위치 370에서 Trp를 갖거나, 또는 (iii) 위치 399에서 Phe, His, Lys, Arg 또는 Tyr을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 (i) 위치 368에서 Asp, Glu, Gly, Asn, Arg, Ser, Thr, Val 또는 Trp를 갖거나, (ii) 위치 370에서 Trp를 갖거나, 또는 (iii) 위치 399에서 Phe, His, Lys, Arg 또는 Tyr을 갖고, HC2는 위치 409에서 Arg를 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 409R 치환 또는 F405L 치환을 포함하고, HC2는 409R 치환 또는 F405L 치환을 포함하며, 여기서 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따른다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, HC1은 F405L 치환을 포함하고, HC2는 409R 치환을 포함한다.
치환은 전형적으로 표준 방법을 사용하여 항체의 불변 도메인과 같은 분자에 대해 DNA 수준에서 이루어진다.
본 발명의 항체는 다양한 잘 알려진 항체 형태로 조작될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 항체는 다이아바디 또는 크로스-바디(cross-body)이다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 재조합 IgG-유사 이중 표적화 분자 - 여기서는, 분자의 2개의 측 각각이 적어도 2개의 상이한 항체의 Fab 단편 또는 Fab 단편의 일부를 함유함 -; IgG 융합 분자 - 여기서는, 전장 IgG 항체가 추가 Fab 단편 또는 Fab 단편의 일부에 융합됨 -; Fc 융합 분자 - 여기서는, 단일쇄 Fv 분자 또는 안정화된 다이아바디가 중쇄 불변-도메인, Fc-영역 또는 이들의 일부에 융합됨 -; Fab 융합 분자 - 여기서는, 상이한 Fab-단편들이 함께 융합됨 -; ScFv- 및 다이아바디-기반 및 중쇄 항체(예를 들어, 도메인 항체, 나노바디) - 여기서는, 상이한 단일쇄 Fv 분자들 또는 상이한 다이아바디들 또는 상이한 중쇄 항체들(예를 들어, 도메인 항체, 나노바디)이 서로 또는 다른 단백질 또는 담체 분자에 융합됨 - 를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 재조합 IgG-유사 이중 표적화 분자는 이중 표적화(Dual Targeting, DT)-Ig (GSK/Domantis), 투-인-원 항체(Two-in-one Antibody) (Genentech) 및 mAb2 (F-Star)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, IgG 융합 분자는 이중 가변 도메인(Dual Variable Domain, DVD)-Ig (Abbott), Ts2Ab (MedImmune/AZ) 및 BsAb (Zymogenetics), HERCULES (Biogen Idec) 및 TvAb (Roche)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, Fc 융합 분자는 ScFv/Fc 융합체(Fusion) (Academic Institution), SCORPION (Emergent BioSolutions/Trubion, Zymogenetics/BMS) 및 이중 친화성 재표적화 기술(Dual Affinity Retargeting Technology)(Fc-DART) (MacroGenics)을 포함한다.
일부 실시 형태에서, Fab 융합 이중특이성 항체는 F(ab)2 (Medarex/AMGEN), 이중-작용체(Dual-Action) 또는 Bis-Fab (Genentech), 독-앤드-록(Dock-and-Lock, DNL) (ImmunoMedics), 2가 이중특이체(Bivalent Bispecific) (Biotecnol) 및 Fab-Fv (UCB-Celltech)를 포함한다. ScFv-, 다이아바디-기반 및 도메인 항체는 이중특이성 T 세포 인게이저(BiTE) (Micromet), 탠덤 다이아바디(Tandab) (Affimed), 이중 친화성 재표적화 기술(DART) (MacroGenics), 단일쇄 다이아바디(Academic), TCR-유사 항체(AIT, ReceptorLogics), 인간 혈청 알부민 ScFv 융합체(Merrimack) 및 COMBODY(Epigen Biotech), 이중 표적화 나노바디(Ablynx), 이중 표적화 중쇄 단독 도메인 항체를 포함한다. 다양한 포맷의 이중특이성 항체가, 예를 들어 문헌[Chames and Baty (2009) Curr Opin Drug Disc Dev 12: 276] 및 문헌[Nunez-Prado et al., (2015) Drug Discovery Today 20(5):588-594]에 기재되어 있다.
폴리뉴클레오티드, 벡터 및 숙주 세포
PSMA에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드가 또한 개시된다. 본 명세서에 제공된 가변 도메인 절편을 인코딩할 수 있는 단리된 폴리뉴클레오티드는 동일한 또는 상이한 벡터 상에 포함되어 항체 또는 항원-결합 단편을 생성할 수 있다.
재조합 항원-결합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 또한 본 발명의 범주 내에 있다. 일부 실시 형태에서, 기재된 폴리뉴클레오티드(및 이것이 인코딩하는 펩티드)는 리더(leader) 서열을 포함한다. 당업계에 알려진 임의의 리더 서열이 사용될 수 있다. 리더 서열은 제한 부위 또는 번역 개시 부위를 포함할 수 있지만 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에 기재된 PSMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 기재된 PSMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편의 생물학적 특성(예를 들어, 결합 친화성 또는 면역 이펙터 활성)을 보유하는 단일 또는 다수의 아미노산 치환, 결실, 또는 부가를 갖는 변이체를 포함한다. 본 발명과 관련하여, 달리 지시되지 않는 한, 돌연변이를 기재하기 위해 하기의 표기법이 사용된다: i) 주어진 위치에서의 아미노산의 치환은, 예를 들어 K409R로 표기되는데, 이는 위치 409에서의 라이신의 아르기닌으로의 치환을 의미하고; ii) 특정 변이체의 경우, 임의의 아미노산 잔기를 나타내기 위해 코드 Xaa 및 X를 포함한, 특정 3-문자 또는 1-문자 코드가 사용된다. 따라서, 위치 409에서의 라이신 대신 아르기닌의 치환은 K409R로 표기되거나, 또는 위치 409에서의 라이신 대신 임의의 아미노산 잔기의 치환은 K409X로 표시된다. 위치 409에서 라이신이 결실된 경우에, 그것은 K409*로 나타낸다. 특정 아미노산 잔기가 펩티드 동종형 또는 변이체 중에서 달라질 수 있고, 치환이 각각의 동종형 또는 변이체 내의 또는 동종형 또는 변이체 중 임의의 것 내의 그러한 잔기에 영향을 주는 경우, 치환은, 예를 들어 409R로 표기되는데, 이는 위치 409에 상응하는 아미노산이 아르기닌으로 치환됨을 의미한다. 당업자는 단일 또는 다수의 아미노산 치환, 결실, 또는 부가를 갖는 변이체를 생성할 수 있다.
이들 변이체는 하기를 포함할 수 있다: (a) 하나 이상의 아미노산 잔기가 보존적 또는 비보존적 아미노산으로 치환된 변이체, (b) 하나 이상의 아미노산이 폴리펩티드에 부가되거나 그로부터 결실된 변이체, (c) 하나 이상의 아미노산이 치환기를 포함하는 변이체, 및 (d) 폴리펩티드가, 그 폴리펩티드에 유용한 특성을 부여할 수 있는 다른 펩티드 또는 폴리펩티드, 예컨대 융합 파트너, 단백질 태그 또는 다른 화학적 모이어티, 예컨대 항체에 대한 에피토프, 폴리히스티딘 서열, 비오틴 모이어티 등과 융합된 변이체. 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원-결합 단편은, 하나의 종으로부터의 아미노산 잔기가, 보존 또는 비보존된 위치에서, 다른 종에서의 상응하는 잔기 대신 치환된 변이체를 포함할 수 있다. 다른 실시 형태에서, 비보존된 위치에서의 아미노산 잔기가 보존 또는 비보존된 잔기로 치환된다. 유전자적(결실, 돌연변이 등), 화학적, 및 효소적 기법을 포함한 이들 변이체를 얻기 위한 기법은 당업자에게 알려져 있다.
본 명세서에 기재된 PSMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 몇몇 항체 동종형, 예컨대 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE를 구현할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 항체 동종형은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형, 바람직하게는 IgG1 또는 IgG4 동종형이다. 항체 또는 이의 항원-결합 단편 특이성은 CDR의 아미노산 서열, 및 배열에 의해 대체로 결정된다. 따라서, 하나의 동종형의 CDR은 항원 특이성을 변경시키지 않고서 다른 동종형으로 전달될 수 있다. 대안적으로, 하이브리도마가 항원 특이성을 변경시키지 않고서 하나의 항체 동종형을 생성하는 것으로부터 다른 항체 동종형으로 전환(동종형 전환)되게 하기 위한 기법이 확립되어 왔다. 따라서, 그러한 항체 동종형들은 기재된 항체 또는 항원-결합 단편의 범주 내에 있다.
본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 또한 제공된다. 벡터는 발현 벡터일 수 있다. 따라서, 관심 폴리펩티드를 인코딩하는 서열을 함유하는 재조합 발현 벡터는 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 고려된다. 발현 벡터는 조절 서열(예를 들어, 프로모터, 인핸서), 선택 마커, 및 폴리아데닐화 신호와 같은 그러나 이로 한정되지 않는 하나 이상의 추가의 서열을 함유할 수 있다. 매우 다양한 숙주 세포를 형질전환시키기 위한 벡터는 잘 알려져 있으며, 플라스미드, 파지미드, 코스미드, 배큘로바이러스, 박미드(bacmid), 세균 인공 염색체(BAC), 효모 인공 염색체(YAC)뿐만 아니라, 다른 세균, 효모 및 바이러스 벡터를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
본 발명의 범주 내의 재조합 발현 벡터는 적합한 조절 요소에 작동가능하게 연결될 수 있는 적어도 하나의 재조합 단백질을 인코딩하는 합성, 게놈, 또는 cDNA-유래 핵산 단편을 포함한다. 그러한 조절 요소는 전사 프로모터, 적합한 mRNA 리보솜 결합 부위를 인코딩하는 서열, 및 전사 및 번역의 종결을 제어하는 서열을 포함할 수 있다. 발현 벡터, 특히 포유류 발현 벡터는 또한 하나 이상의 비전사 요소, 예컨대 복제 기점, 발현시키고자 하는 유전자에 연결된 적합한 프로모터 및 인핸서, 다른 5' 또는 3' 플랭킹(flanking) 비전사 서열, 5' 또는 3' 비번역 서열(예컨대, 필요한 리보솜 결합 부위), 폴리아데닐화 부위, 스플라이스 도너 및 억셉터 부위, 또는 전사 종결 서열을 포함할 수 있다. 숙주에서 복제하는 능력을 부여하는 복제 기점이 또한 포함될 수 있다.
척추동물 세포를 형질전환시키는 데 사용되는 발현 벡터에서의 전사 및 번역 제어 서열은 바이러스 공급원에 의해 제공될 수 있다. 예시적인 벡터가 문헌[Okayama and Berg, 3 Mol. Cell. Biol. 280 (1983)]에 의해 기재된 바와 같이 작제될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 항체- 또는 항원-결합 단편-코딩 서열은 강력한 구성적 프로모터, 예컨대 하기 유전자에 대한 프로모터의 제어 하에 놓여 있다: 하이포잔틴 포스포리보실 트랜스퍼라제(HPRT), 아데노신 데아미나제, 피루베이트 키나제, 베타-액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴, 및 기타. 게다가, 많은 바이러스성 프로모터가 진핵 세포에서 구성적으로 기능하고, 기재된 실시 형태와 함께 사용하기에 적합하다. 그러한 바이러스성 프로모터는, 제한 없이, 거대세포바이러스(CMV) 극초기 프로모터, SV40의 초기 및 후기 프로모터, 마우스 유선 종양 바이러스(MMTV) 프로모터, 말로니(Maloney) 백혈병 바이러스의 긴 말단 반복부(LTR), 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 엡스타인 바 바이러스(Epstein Barr Virus, EBV), 라우스 육종 바이러스(Rous Sarcoma Virus, RSV), 및 다른 레트로바이러스, 및 단순 헤르페스 바이러스의 티미딘 키나제 프로모터를 포함한다. 일 실시 형태에서, PSMA-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편 코딩 서열은 유도성 프로모터, 예컨대 메탈로티오네인 프로모터, 테트라사이클린-유도성 프로모터, 독시사이클린-유도성 프로모터, 하나 이상의 인터페론-자극 반응 요소(ISRE)를 함유하는 프로모터, 예컨대 단백질 키나제 R 2',5'-올리고아데닐레이트 신테타제, Mx 유전자, ADAR1 등의 제어 하에 놓여 있다.
본 명세서에 기재된 벡터는 하나 이상의 내부 리보솜 침입 부위(들)(IRES)를 함유할 수 있다. 융합 벡터 내로의 IRES 서열의 포함은 일부 단백질의 발현을 향상시키는 데 유익할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 벡터 시스템은 하나 이상의 폴리아데닐화 부위(예를 들어, SV40)를 포함할 것이며, 이는 상기 언급된 핵산 서열들 중 임의의 것의 상류 또는 하류에 있을 수 있다. 벡터 성분들은 (즉, ORF들 사이에의 "스페이서" 뉴클레오티드의 도입에 의해) 유전자 산물을 발현시키기 위한 최적의 간격을 제공하는 방식으로 인접하게 연결 또는 배열될 수 있거나, 또는 다른 방식으로 위치될 수 있다. 조절 요소, 예컨대 IRES 모티프는 또한 발현을 위한 최적의 간격을 제공하도록 배열될 수 있다.
벡터는 선택 마커를 포함할 수 있으며, 선택 마커는 당업계에 잘 알려져 있다. 선택 마커는 양성 및 음성 선택 마커, 예를 들어 항생제 저항성 유전자(예를 들어, 네오마이신 저항성 유전자, 하이그로마이신 저항성 유전자, 카나마이신 저항성 유전자, 테트라사이클린 저항성 유전자, 페니실린 저항성 유전자), 글루타메이트 신타제 유전자, 간시클로비르 선택을 위한 HSV-TK, HSV-TK 유도체, 또는 6-메틸푸린 선택을 위한 세균성 푸린 뉴클레오시드 포스포릴라제 유전자를 포함한다(문헌[Gadi et al., 7 Gene Ther. 1738-1743 (2000)]). 선택 마커 또는 클로닝 부위를 인코딩하는 핵산 서열은 관심 폴리펩티드 또는 클로닝 부위를 인코딩하는 핵산 서열의 상류 또는 하류에 있을 수 있다.
본 명세서에 기재된 벡터는 다양한 세포를 기재된 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 유전자로 형질전환시키는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 벡터는 PSMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편-생성 세포를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 따라서, 다른 태양은 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 예컨대 본 명세서에 기재되고 예시된 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 제공한다.
세포 내로의 외래 유전자의 도입을 위한 다수의 기법이 당업계에 알려져 있고, 본 명세서에 기재되고 예시된 다양한 실시 형태에 따라, 기재된 방법을 수행하려는 목적을 위하여 재조합 세포를 작제하는 데 사용될 수 있다. 사용되는 기법은 숙주 세포로의 이종 유전자 서열의 안정한 전달을 제공하여, 이종 유전자 서열이 세포의 자손에 의해 상속가능하고 발현가능하도록, 그리고 수령 세포의 필요한 발달 및 생리학적 기능이 파괴되지 않도록 해야 한다. 사용될 수 있는 기법은 염색체 전달(예를 들어, 세포 융합, 염색체 매개 유전자 전달, 마이크로 세포 매개 유전자 전달), 물리적 방법(예를 들어, 형질감염, 스페로플라스트 융합, 현미주사(microinjection), 전기천공, 리포좀 담체), 바이러스성 벡터 전달(예를 들어, 재조합 DNA 바이러스, 재조합 RNA 바이러스) 등(문헌[Cline, 29 Pharmac. Ther. 69-92 (1985)]에 기재됨)을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 인산칼슘 침전 및 세균 프로토플라스트(bacterial protoplast)와 포유류 세포의 폴리에틸렌 글리콜(PEG)-유도 융합이 또한 세포를 형질전환시키는 데 사용될 수 있다.
본 명세서에 기재된 PSMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편의 발현에 사용하기에 적합한 세포는 바람직하게는 진핵 세포, 더 바람직하게는 식물, 설치류, 또는 인간 기원의 세포, 예를 들어, 그러나 제한 없이, 특히 NSO, CHO, CHOK1, perC.6, Tk-ts13, BHK, HEK293 세포, COS-7, T98G, CV-1/EBNA, L 세포, C127, 3T3, HeLa, NS1, Sp2/0 골수종 세포, 및 BHK 세포주이다. 게다가, 항체의 발현은 하이브리도마 세포를 사용하여 달성될 수 있다. 하이브리도마를 생성하기 위한 방법이 당업계에 잘 확립되어 있다.
본 명세서에 기재된 발현 벡터로 형질전환된 세포는 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원-결합 단편의 재조합 발현을 위해 선택되거나 스크리닝될 수 있다. 재조합-양성 세포는 원하는 표현형, 예컨대 고수준 발현, 향상된 성장 특성, 또는, 예를 들어 단백질 변형 또는 변경된 번역 후 변형으로 인해 원하는 생화학적 특성을 갖는 단백질을 산출하는 능력을 나타내는 하위클론을 위해 증폭 및 스크리닝된다. 이들 표현형은 주어진 하위클론의 고유 특성에 기인하거나 돌연변이에 기인할 수 있다. 돌연변이는 화학물질, UV-파장 광, 방사선, 바이러스, 삽입 돌연변이원, DNA 불일치 수복의 억제, 또는 그러한 방법들의 조합의 사용을 통해 달성될 수 있다.
약제학적 조성물/투여
본 발명은 본 명세서에 기재된 본 발명의 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 치료적 용도를 위하여, 본 발명의 항체는 약제학적으로 허용되는 담체 중에 활성 성분으로서 항체의 유효량을 함유하는 약제학적 조성물로서 제조될 수 있다. "담체"는 본 발명의 항체와 함께 투여되는 희석제, 애쥬번트(adjuvant), 부형제 또는 비히클을 지칭한다. 그러한 비히클은 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것들, 예컨대 낙화생유, 대두유, 광유, 참기름 등을 포함하는, 물 및 오일과 같은 액체일 수 있다. 예를 들어, 0.4% 염수 및 0.3% 글리신이 사용될 수 있다. 이들 용액은 무균성이고 일반적으로 미립자 물질이 없다. 이들은 통상적인 잘 알려진 멸균 기법(예를 들어, 여과)에 의해 멸균될 수 있다. 조성물은 pH 조정제 및 완충제, 안정제, 증점제, 윤활제 및 착색제 등과 같은 생리학적 조건에 근접시키기 위하여 필요한 약제학적으로 허용되는 보조 물질을 함유할 수 있다. 그러한 약제학적 제형에서 본 발명의 항체의 농도는 약 0.5 중량% 미만부터, 통상 적어도 약 1 중량%까지, 많게는 15 또는 20 중량%까지 변동될 수 있으며, 선택된 특정 투여 방식에 따라, 필요 용량, 유체 부피, 점도 등에 기초하여 주로 선택될 수 있다. 다른 인간 단백질, 예를 들어 인간 혈청 알부민을 포함하는 적합한 비히클 및 제형이, 예를 들어 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Troy, D.B. ed., Lipincott Williams and Wilkins, Philadelphia, PA 2006, Part 5, Pharmaceutical Manufacturing pp 691-1092, 특히 pp. 958-989 참조]에 기재되어 있다.
본 발명의 항체의 치료적 용도를 위한 투여 방식은 이러한 항체를 숙주에게 전달하는 임의의 적합한 경로일 수 있으며, 예컨대 비경구 투여, 예를 들어 진피내, 근육내, 복막내, 정맥내 또는 피하, 폐, 경점막(구강, 비강내, 질내, 직장) 투여로서, 이러한 투여에서는 정제, 캡슐, 용액, 분말, 겔, 입자 형태이고, 주사기, 이식 장치, 삼투압 펌프, 카트리지, 마이크로펌프 내에 담긴 제형; 또는 당업자에 의해 인식되는 다른 수단을 사용하는데, 이는 당업계에 잘 알려진 바와 같다. 부위 특이적 투여는, 예를 들어, 종양내, 관절내, 기관지내, 복강내, 관절낭내, 연골내, 강내, 체강내, 소뇌내, 뇌실내, 결장내, 자궁경부내, 위내, 간내, 심근내, 골내, 골반내, 심장주위내, 복막내, 흉막내, 전립선내, 폐내, 직장내, 신장내, 망막내, 척수내, 활막내, 흉부내, 자궁내, 혈관내, 방광내, 병변내, 질, 직장, 협측, 설하, 비강내, 또는 경피 전달에 의해 달성될 수 있다.
본 명세서에 기재된, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에 있어서의 본 발명의 항체는 임의의 적합한 경로에 의해, 예를 들어 정맥내(i.v.) 주입 또는 볼루스 주사에 의해 비경구로, 근육내로 또는 피하로 또는 복막내로 대상체에게 투여될 수 있다. i.v. 주입은, 예를 들어 15, 30, 60, 90, 120, 180, 또는 240분, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12시간에 걸쳐 제공될 수 있다.
대상체에게 제공되는 용량은 치료되는 질병을 경감시키거나 또는 적어도 부분적으로 정지시키기에 충분하고("치료적 유효량"), 때때로 0.005 mg 내지 약 100 mg/㎏, 예를 들어 약 0.05 mg 내지 약 30 mg/㎏ 또는 약 5 mg 내지 약 25 mg/㎏, 또는 약 4 mg/㎏, 약 8 mg/㎏, 약 16 mg/㎏ 또는 약 24 mg/㎏, 또는, 예를 들어 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 mg/㎏일 수 있지만, 더욱 더 높을 수 있으며, 예를 들어 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100 mg/㎏일 수 있다.
고정 단위 용량, 예를 들어 50, 100, 200, 500 또는 1000 mg이 또한 제공될 수 있거나, 또는 이러한 용량은 환자의 표면적에 기초해서, 예를 들어 500, 400, 300, 250, 200, 또는 100 mg/m2일 수 있다. 환자를 치료하기 위해 통상 1 내지 8회(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8회)의 용량이 투여될 수 있지만, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20회 또는 그 횟수 이상의 용량이 제공될 수 있다.
본 명세서에 기재된, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에 있어서의 항체의 투여는 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 1주, 2주, 3주, 1개월, 5주, 6주, 7주, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 또는 그 이상 후에 반복될 수 있다. 만성 투여인 바와 같이, 반복된 치료 과정이 또한 가능하다. 반복 투여는 동일한 용량으로 또는 상이한 용량으로 행해질 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 본 발명의 항체는 정맥내 주입에 의해 8주 동안 매주 간격으로 8 mg/㎏으로 또는 16 mg/㎏으로 투여된 후, 추가 16주 동안 매 2주마다 8 mg/㎏으로 또는 16 mg/㎏으로 투여된 후, 매 4주마다 8 mg/㎏으로 또는 16 mg/㎏으로 투여될 수 있다.
예를 들어, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 있어서의, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에 있어서의 항체는 일일 투여량으로서, 치료 개시 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40일 중 적어도 하나에 대해, 또는 대안적으로, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20주 중 적어도 하나에 대해, 매 24, 12, 8, 6, 4, 또는 2시간마다의 단회 또는 분할 용량, 또는 이들의 임의의 조합을 사용하여, 1일당 약 0.1 내지 100 mg/㎏, 예컨대 0.5, 0.9, 1.0, 1.1, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100 mg/㎏의 양으로, 또는 이들의 임의의 조합으로 제공될 수 있다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 있어서의, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에 있어서의 항체는 또한 암 발생 위험을 감소시키고/시키거나, 암 진행에서의 사건의 발생의 개시를 지연시키고/시키거나, 암이 관해기에 있을 때 재발 위험을 감소시키기 위하여 예방적으로 투여될 수 있다.
본 발명의 항체는 저장을 위해 동결건조되고, 사용 전에 적합한 담체 중에 재구성될 수 있다. 이 기법은 종래의 단백질 제제에 유효한 것으로 밝혀져 있으며, 잘 알려진 동결건조 및 재구성 기법이 사용될 수 있다.
PSMA-특이적 항체의 사용 방법
PSMA는, 일부 전립선 세포가 비정상적으로 보이고 거동하기 시작한 질환인 전립선 상피내 신생종(PIN); 원발성 및 전이성 전립선암; 및 다른 고형 종양(예를 들어, 유방, 폐, 방광, 신장)의 신생혈관계에서 빈번하게 과발현되는 전립선암 관련 세포막 항원이다. PSMA 발현은 질병 진행 및 글리슨 점수와 상관관계가 있다. PSMA 발현은 전이성 질병, 호르몬 불응성 사례, 및 더 높은 분화도의 병변에서 증가되고, 그것은 안드로겐-불감성 종양에서 추가로 상향조절된다.
PSMA의 차단은 대상체에서 PSMA-발현 암성 세포 및 종양의 성장을 억제하거나 감소시킬 수 있다. 이는 또한 종양 신생혈관계에서의 PSMA의 발현으로 인해 항혈관생성 활성을 가질 수 있다(문헌[Milowsky, et al. 2007]). PSMA는 전립선 암종의 가장 확립된 전구체인 전립선 상피내 신생종에서 고도로 발현되며, 이에 따라 PSMA의 차단은 전립선암으로의 PIN의 진행을 조절할 수 있다.
본 명세서에 기재된, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에 있어서의 본 발명의 일 실시 형태는 대상체에서 종양 세포의 성장을 억제하는 방법으로서, 상기 방법은 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 명세서에 기재된, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에 있어서의 본 발명의 다른 실시 형태는 대상체에서 종양의 신생혈관계의 형성 또는 성장을 억제하는 방법으로서, 상기 방법은 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 명세서에 기재된, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에 있어서의 본 발명의 다른 실시 형태는 대상체에서 전암성 상태의 진행을 억제하는 방법으로서, 상기 방법은 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 명세서에 기재된, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에 있어서의 본 발명의 일 실시 형태는 본 명세서에 기재된 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체를 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법이다.
본 명세서에 기재된, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에 있어서의 본 발명의 일 실시 형태는 대상체에서 종양 세포의 성장을 억제하는 방법으로서, 상기 방법은 본 발명의 PSMA × CD3에 특이적으로 결합하는 이중특이성 항체의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 명세서에 기재된, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에 있어서의 본 발명의 다른 실시 형태는 대상체에서 종양의 신생혈관계의 형성 또는 성장을 억제하는 방법으로서, 상기 방법은 본 발명의 PSMA × CD3에 특이적으로 결합하는 이중특이성 항체의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 명세서에 기재된, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에 있어서의 본 발명의 다른 실시 형태는 대상체에서 전암성 상태의 진행을 억제하는 방법으로서, 상기 방법은 본 발명의 PSMA × CD3에 특이적으로 결합하는 이중특이성 항체의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 명세서에 기재된, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에 있어서의 본 발명의 일 실시 형태는 본 발명의 PSMA × CD3에 특이적으로 결합하는 이중특이성 항체를 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여함으로써 암을 치료하는 방법이다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 항체는 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체 및 본 명세서에 기재된 바와 같은 이중특이성 PSMA × CD3 항체이다.
단일특이성일 수 있거나 CD3 이중특이체의 일부일 수 있는 예시적인 PSMA 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 VH 및 VL 아미노산 서열 및 특성을 갖는 항체 PSMB119, PSMB120, PSMB121, PSMB122, PSMB123, PSMB87, PSMB126, PSMB127, PSMB128, PSMB129, PSMB130, PSMB120, PSMB121, PSMB122, PSMB123, PSMB127, PSMB128, PSMB130, PSMB344, PSMB345, PSMB346, PSMB347, PSMB349, PSMB358, PSMB359, PSMB360, PSMB361, PSMB362, PSMB363, 및 PSMB365이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 PSMB119, PSMB120, PSMB121, PSMB122, PSMB123, PSMB87, PSMB126, PSMB127, PSMB128, PSMB129, PSMB130, PSMB120, PSMB121, PSMB122, PSMB123, PSMB127, PSMB128, PSMB130, PSMB344, PSMB345, PSMB346, PSMB347, PSMB349, PSMB358, PSMB359, PSMB360, PSMB361, PSMB362, PSMB363, 및 PSMB365이다. 이들 항체의 VH 및 VL 아미노산 서열이 표 2에 제시되어 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 160의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 79의 VH 및 서열 번호 78의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 77의 VH 및 서열 번호 78의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 75의 VH 및 서열 번호 76의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 74의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 72의 VH 및 서열 번호 73의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 66의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 62의 VH 및 서열 번호 63의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 60의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 68의 VH 및 서열 번호 69의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 70의 VH 및 서열 번호 71의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 142의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 62의 VH 및 서열 번호 63의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 144의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 142의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 144의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 142의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 항체는 서열 번호 141의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함한다.일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 PSMA/CD3 항체는 제1 도메인 내의 서열 번호 62의 VH 및 서열 번호 63의 VL, 및 제2 도메인 내의 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 PSMA/CD3 항체는 제1 도메인 내의 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL, 및 제2 도메인 내의 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 PSMA/CD3 항체는 제1 도메인 내의 서열 번호 66의 VH 및 서열 번호 67의 VL, 및 제2 도메인 내의 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 PSMA/CD3 항체는 제1 도메인 내의 서열 번호 75의 VH 및 서열 번호 76의 VL, 및 제2 도메인 내의 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 PSMA/CD3 항체는 제1 도메인 내의 서열 번호 74의 VH 및 서열 번호 61의 VL, 및 제2 도메인 내의 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 PSMA/CD3 항체는 제1 도메인 내의 서열 번호 160의 VH 및 서열 번호 65의 VL, 및 제2 도메인 내의 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함한다.
암은 과증식성 질환 또는 장애, 고형 종양, 신생혈관계, 연조직 종양, 또는 전이성 병변일 수 있다.
"암"은 조직병리학적 유형 또는 침습성의 병기와 무관하게 모든 유형의 암성 성장 또는 발암성 과정, 전이성 조직 또는 악성종양으로 변환된 세포, 조직, 또는 기관을 포함하는 것으로 의미된다. 암의 예에는 고형 종양, 혈액학적 악성종양, 연조직 종양, 및 전이성 병변이 포함된다. 예시적인 고형 종양은 다양한 기관계(organ system)의 악성종양, 예를 들어 육종, 및 암종(선암종 및 편평 세포 암종을 포함함), 예컨대 전립선, 간, 폐, 유방, 림프계, 위장(예를 들어, 결장), 비뇨생식관(예를 들어, 신세포, 요로상피 세포), 전립선 및 인두를 침범한 것들을 포함한다. 선암종은 악성종양, 예컨대 대부분의 결장암, 직장암, 신세포 암종, 간암, 폐의 비소세포 암종, 소장의 암, 및 식도의 암을 포함한다. 편평 세포 암종은, 예를 들어 폐, 식도, 피부, 두경부 영역, 구강, 항문, 및 자궁경부 내의 악성종양을 포함한다.
일 실시 형태에서, 암은 전립선암이다.
상기 언급된 암의 전이성 병변이 또한 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법 및 항체를 사용하여 치료 또는 예방될 수 있다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 항체를 사용하여 성장이 억제 또는 감소될 수 있는 예시적인 암은 PSMA를 과발현시킬 수 있는 암을 포함한다. 예시적인 그러한 암은 전립선암 또는 전립선 상피내 신생종, 결직장암, 위암, 투명 세포 신장 암종, 방광암, 폐암, 편평 세포 암종, 신경교종, 유방암, 신장암, 신생혈관성 장애, 투명 세포 신장 암종(CCRCC), 및 췌장암; 및 신세포암, 요로상피암 및 간에 대한 선암종을 포함하지만 이로 한정되지 않는 다양한 다른 비전립선암을 포함한다. 본 명세서에 기재된 본 발명의 항체를 사용하여 불응성 또는 재발성 악성종양이 치료될 수 있다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 항체로 치료될 수 있는 예시적인 다른 암은 항문암, 기저 세포 암종, 담도암, 방광암, 골암, 뇌 및 CNS 암, 나팔관의 암종, 질의 암종, 외음부의 암종, 피부 또는 안내(intraocular)의 악성 흑색종, 위-식도암, 고환암, 난소암, 췌장암, 직장암, 자궁암, 원발성 CNS 림프종; 중추신경계(CNS)의 신생물, 자궁경부암, 융모막암종, 결장암, 결합조직암, 소화계의 암, 자궁내막암, 안암; 상피내 신생물, 신장암, 후두암, 간암; 소세포 폐암, 신경모세포종, 구강암(예를 들어, 입술, 혀, 입, 및 인두), 비인두암, 망막모세포종, 횡문근육종, 호흡계의 암, 육종, 갑상선암, 비뇨계의 암, 간암종, 항문 영역의 암, 나팔관의 암종, 질의 암종, 음문의 암종, 소장의 암, 내분비계의 암, 부갑상선의 암, 부신의 암, 연조직의 육종, 요도의 암, 음경의 암, 유년기의 고형 종양, 종양 혈관신생, 척추 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 머켈 세포암, 유표피암, 편평 세포암, 석면에 의해 유도되는 것들을 포함한 환경적으로 유도된 암뿐만 아니라 다른 암종 및 육종, 및 상기 암의 조합이다.
PSMA를 발현시키는 전이성 암을 포함한 암을 갖는 환자가 본 명세서에 기재된 본 발명의 항체로 치료될 수 있다. 암은 전립선암 또는 전립선 상피내 신생종, 결직장암, 위암, 투명 세포 신장 암종, 방광암, 폐암, 편평 세포 암종, 신경교종, 유방암, 신장암, 신생혈관성 장애, 투명 세포 신장 암종(CCRCC), 및 췌장암; 및 신세포암, 요로상피암 및 간에 대한 선암종을 포함하지만 이로 한정되지 않는 다양한 다른 비전립선암일 수 있다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 대상체는 고형 종양을 갖는다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 대상체는 전립선 종양을 갖는다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 고형 종양은 결직장암이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 고형 종양은 위암이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 고형 종양은 폐암이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 고형 종양은 방광암이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 고형 종양은 편평 세포 암종이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 암은 투명 세포 신장 암종(CCRCC)이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 고형 종양은 유방암이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 고형 종양은 신경교종이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 고형 종양은 전립선암 또는 거세저항성 전립선암이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 고형 종양은 신장암이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 고형 종양은 췌장암이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 고형 종양은 간에 대한 선암종이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 암은 신생혈관계이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 암은 신세포암이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 고형 종양은 요로상피암이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일부 실시 형태에서, 그리고 하기에 열거된 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나의 일부 실시 형태에서, 고형 종양은 뇌암이다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 대상체는 PSMA를 발현시키는 종양을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 대상체는 종양 조직 내에 종양-침윤 T 림프구(TIL)를 갖는다.
"증가된 수"는 대조군과 비교할 때 대상체에서의 통계학적으로 유의한 증가를 지칭한다. "증가된 수"는, 예를 들어 PSMA 항체 또는 다른 치료제에 의한 치료 전과 치료 후의 대상체(예를 들어, 환자)의 TIL의 수에 있어서의 통계학적으로 유의한 증가를 지칭한다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 대상체는 인터페론-감마(IFN-γ)의 증가된 발현 또는 활성을 갖는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 대상체는 항-PSMA 항체로 치료되어 왔다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 대상체는 항-PSMA 항체에 의한 치료에 대해 불응성이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 PSMA 또는 이중특이성 PSMA × CD3 항체 중 임의의 것이 본 발명의 방법에 사용될 수 있다.
본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 및 이의 단편은 또한 병용 요법으로 투여될 수 있는데, 즉 치료하고자 하는 질병 또는 질환에 대해 관련된 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있다. 따라서, 일 실시 형태에서, 본 항체-함유 약제는 하나 이상의 추가의 치료제, 예컨대 화학요법제와의 병용을 위한 것이다. 일부 실시 형태에서, 다른 치료제는 방사성 약제학적 작용제(예컨대, 라듐-223 클로라이드), 2차 호르몬 요법(예컨대, 아비라테론 또는 엔잘루타미드), 및/또는 화학요법(도세탁셀 및 카바지탁셀)이다. 그러한 병용 투여는 동시적, 개별적 또는 순차적 - 임의의 순서임 - 일 수 있다. 동시 투여를 위하여, 하기와 같은 작용제가 경우에 따라 하나의 조성물로서 또는 별개의 조성물로서 투여될 수 있다: 화학요법제(예를 들어, 도세탁셀, 카르보플라틴, 플루다라빈), 아비라테론, 호르몬 요법(예를 들어, 플루타미드, 비칼루타미드, 닐루타미드, 사이프로테론 아세테이트, 케토코나졸, 아미노글루테티미드, 아바렐릭스, 데가렐릭스, 류프롤리드, 고세렐린, 트립토렐린, 부세렐린, ARN-509), 세린 또는 티로신 키나제 억제제(예를 들어, PI3 키나제 억제제 SF1126) (예를 들어, 라파타닙), 멀티키나제 억제제(예를 들어, 소라페닙, 수니티닙), VEGF 억제제(예를 들어, 베바시주맙), TAK-700, 암 백신(예를 들어, BPX-101, PEP223), 리스테리아(Listeria)-기반 백신, 레날리도미드, TOK-001, IGF-1 수용체 억제제(예를 들어, 식수투무맙), TRC105, 오로라 A 키나제 억제제(예를 들어, MLN8237), 프로테아좀 억제제(예를 들어, 보르테조밉), OGX-011, 방사면역요법(예를 들어, HuJ591-GS), HDAC 억제제(예를 들어, 발프로산, SB939, LBH589), 하이드록시클로로퀸, mTOR 억제제(예를 들어, 에베롤리무스), 도비티닙 락테이트, 다이인돌릴메탄, 에파비렌즈, OGX-427, 제니스타인, IMC-3G3, 바페티닙, CP-675,206, 방사선 요법, 수술, 또는 이들의 조합.
일 실시 형태에서, 대상체에서 PSMA를 발현하는 세포를 수반하는 장애를 치료하기 위한 방법이 제공되며, 상기 방법은 PSMA를 발현하는 세포를 수반하는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에 대한 이중특이성 항체 또는 단편, 예컨대 본 명세서에 기재된 PSMA × CD3 이중특이성 항체의 치료적 유효량의 투여, 및 방사선요법을 포함한다. 일 실시 형태에서, 암을 치료 또는 예방하기 위한 방법이 제공되며, 상기 방법은 암의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 대한 이중특이성 항체 또는 단편, 예컨대 본 명세서에 기재된 PSMA × CD3 항체의 치료적 유효량의 투여, 및 방사선요법을 포함한다. 방사선요법은 방사선을 포함할 수 있거나, 또는 환자에 대한 방사성 의약품의 관련 투여가 제공된다. 방사선의 공급원은 치료되는 환자에 대해 외부 또는 내부에 있을 수 있다(방사선 치료는, 예를 들어 외부 빔 방사선 요법(EBRT) 또는 근접방사선요법(brachytherapy, BT)의 형태일 수 있다). 그러한 방법을 실시하는 데 사용될 수 있는 방사성 원소는, 예를 들어 라듐, 세슘-137, 이리듐-192, 아메리슘-241, 금-198, 코발트-57, 구리-67, 테크네튬-99, 요오다이드-123, 요오다이드-131, 및 이리듐-111을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 항체는 백신과 병용하여 투여될 수 있다.
예시적인 백신은 면역원성 작용제(immunogenic agent), 예컨대 암성 세포, 정제된 종양 항원(재조합 단백질, 항원 에피토프, 펩티드, 및 탄수화물 분자를 포함함), 유전자 요법을 통해 환자에게 전달된 종양 항원, 세포, 및 면역 자극 사이토카인을 인코딩하는 유전자로 형질감염된 세포이다. 사용될 수 있는 예시적인 백신은 흑색종 항원의 펩티드, 예컨대 gp100, MAGE 항원, Trp-2, MART1, 및/또는 티로시나제의 펩티드, 또는 사이토카인 GM-CSF를 발현시키도록 형질감염된 종양 세포, DNA-기반 백신, RNA-기반 백신, 리스테리아-기반 백신 및 바이러스 형질도입-기반 백신, 전립선 항원의 펩티드(예를 들어, PSMA, STEAP1, PSCA), 암 백신 시풀류셀-T 또는 폐암 항원의 펩티드를 포함한다. 암 백신은 예방적이거나 치료적일 수 있다.
종양에 대한 백신화를 위한 다수의 실험 전략이 설계되어 있다(문헌[Rosenberg, S., 2000, Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62]; 문헌[Logothetis, C., 2000, ASCO Educational Book Spring: 300-302]; 문헌[Khayat, D. 2000, ASCO Educational Book Spring: 414-428]; 문헌[Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738] 참조; 또한 문헌[Restifo, N. and Sznol, M., Cancer Vaccines, Ch. 61, pp. 3023-3043 in DeVita, V. et al. (eds.), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology. Fifth Edition] 참조). 이들 전략 중 하나에서는, 백신이 자가(autologous) 또는 동종이계(allogeneic) 종양 세포를 사용하여 제조된다. 이들 세포 백신은 종양 세포가 GM-CSF를 발현시키도록 형질도입된 경우에 가장 효과적인 것으로 밝혀져 있다. GM-CSF는 종양 백신화를 위한 항원 제시의 강력한 활성화제인 것으로 밝혀져 있다(문헌[Dranoff et al., (1993) Proc Natl Acad Sci U.S.A. 90: 3539-43]).
본 명세서에 기재된 본 발명의 항체는 종양 내에서 또는 종양 상에서 발현되는 재조합 단백질 및/또는 펩티드 중 하나 또는 집합과 병용하여 투여되어 이들 단백질에 대한 면역 반응을 생성할 수 있다. 이들 단백질은 통상적으로 면역 시스템에 의해 자가-항원으로서 간주되며, 이에 따라 이들에 대해 관용적이다. 종양 항원은 또한, 염색체의 텔로미어의 합성에 필요하며 인간 암의 85% 초과에서 발현되고 제한된 수의 체조직에서만 발현되는 단백질 텔로머라제를 포함할 수 있다(문헌[Kim et al., (1994) Science 266: 2011-2013]). 종양 항원은 또한, 단백질 서열을 변경하거나 2개의 무관한 서열 사이의 융합 단백질(예를 들어, 필라델피아 염색체(Philadelphia chromosome) 내의 bcr-abl)을 생성하는 체세포 돌연변이, 또는 B 세포 종양으로부터의 이디오타입의 결과로서 암 세포 내에 또는 암 세포 상에 발현되는"신생-항원"일 수 있다. 종양 항원은 전립선 특이적 항원(PSA), 메소텔린, 전립선-특이적 막 항원(PSMA), 활막 육종 X2(SSX2), NKX3.1, 전립선 산성 포스파타제(PAP), 또는 표피 성장 인자 수용체, 또는 종양 세포 상에서 과발현되는 잘 알려진 EGFRvIII과 같은 EGFR의 변이체에 대해 특이적인 펩티드의 항원 에피토프일 수 있다.
다른 종양 백신은 인간 암에 연루된 바이러스, 예컨대 인간 파필로마 바이러스(HPV), 간염 바이러스(HBV 및 HCV), 및 카포시 헤르페스 육종 바이러스(KHSV), 및 엡스타인-바 바이러스(EBV)로부터의 단백질을 포함할 수 있다. 본 명세서에 기재된 본 발명의 항체와 병용하여 사용될 수 있는 종양 특이적 항원의 다른 형태는 종양 조직 자체로부터 단리된 정제된 열충격 단백질(HSP)이다. HSP는 종양 세포로부터의 단백질의 단편을 함유하며 종양 면역력을 유도하기 위한 항원 제시 세포로의 전달에 고도로 효율적이다(문헌[Suot and Srivastava (1995) Science 269:1585-1588]; 문헌[Tamura et al., (1997) Science 278:117-120]).
수지상 세포(DC)는 항원-특이적 반응을 프라이밍하기 위해 사용될 수 있는 강력한 항원 제시 세포이다. DC는 생체외에서 생성되고 다양한 단백질 및 펩티드 항원뿐만 아니라 종양 세포 추출물이 로딩될 수 있다(문헌[Nestle et al., (1998) Nature Medicine 4: 328-332]). DC는 또한 이러한 종양 항원을 발현시키도록 유전적 수단에 의해 형질도입될 수 있다. DC는 또한 면역화의 목적으로 종양 세포에 직접 융합되어 왔다(문헌[Kugler et al., (2000) Nature Medicine 6:332-336]). 백신화의 방법으로서, DC 면역화는 본 명세서에 기재된 본 발명의 항체와 효과적으로 조합되어 더 강력한 항-종양 반응을 활성화할 수 있다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 본 발명의 이중특이성 PSMA × CD3 항체는 전립선 특이적 항원의 펩티드 단편, 또는 전립선 특이적 항원의 펩티드 단편을 인코딩하는 벡터를 포함하는 종양 백신과 병용하여 투여된다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 항체는 표준 치료(standard of care)의 암 치료와 병용하여 투여될 수 있다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 항체는 표준 치료의 암 화학요법 계획(chemotherapeutic regime)과 병용하여 투여될 수 있다. 이러한 경우에, 투여되는 화학요법 계획의 용량을 감소시키는 것이 가능할 수 있다(문헌[Mokyr et al., (1998) Cancer Research 58: 5301-5304]).
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 다른 항체 분자, 화학요법, 다른 항암 요법(예를 들어, 표적화 항암 요법, 또는 암용해 약물), 세포독성제, 사이토카인, 수술 및/또는 방사선 절차 중 하나 이상과 병용하여 투여될 수 있다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 항체와 병용하여 투여될 수 있는 예시적인 세포독성제는 호르몬 억제제, 항미세소관제, 토포아이소머라제 억제제, 항대사제, 유사분열 억제제, 알킬화제, 안트라사이클린, 빈카 알칼로이드, 삽입제(intercalating agent), 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 작용제, 아폽토시스를 촉진시키는 작용제, 프로테오좀 억제제, 및 방사선(예를 들어, 국소 또는 전신 조사)을 포함한다.
표준 치료 치료제는 아나스트로졸(Arimidex®), 비칼루타미드(Casodex®), 블레오마이신 설페이트(Blenoxane®), 부설판(Myleran®), 부설판 주사제(Busulfex®), 카페시타빈(Xeloda®), N4-펜톡시카르보닐-5-데옥시-5-플루오로시티딘, 카르보플라틴(Paraplatin®), 카르무스틴(BiCNU®), 클로람부실(Leukeran®), 시스플라틴(Platinol®), 클라드리빈(Leustatin®), 사이클로포스파미드(Cytoxan® 또는 Neosar®), 사이타라빈, 사이토신 아라비노사이드(Cytosar-U®), 사이타라빈 리포좀 주사제(DepoCyt®), 다카르바진(DTIC-Dome®), 닥티노마이신(악티노마이신 D, Cosmegan), 다우노루비신 하이드로클로라이드(Cerubidine®), 다우노루비신 시트레이트 리포좀 주사제(DaunoXome®), 덱사메타손, 도세탁셀(Taxotere®), 독소루비신 하이드로클로라이드(Adriamycin®, Rubex®), 에토포시드(Vepesid®), 플루다라빈 포스페이트(Fludara®), 5-플루오로우라실(Adrucil®, Efudex®), 플루타미드(Eulexin®), 테자시티빈, 젬시타빈(다이플루오로데옥시시티딘), 하이드록시우레아(Hydrea®), 이다루비신(Idamycin®), 이포스파미드(IFEX®), 이리노테칸(Camptosar®), L-아스파라기나제(ELSPAR®), 류코보린 칼슘, 멜팔란(Alkeran®), 6-메르캅토퓨린(Purinethol®), 메토트렉세이트(Folex®), 미톡산트론(Novantrone®), 밀로타르그, 파클리탁셀(Taxol®), 피닉스(이트륨90/MX-DTPA), 펜토스타틴, 카르무스틴 이식을 가진 폴리페프로산 20(Gliadel®), 타목시펜 시트레이트(Nolvadex®), 테니포사이드(Vumon®), 6-티오구아닌, 티오테파, 티라파자민(Tirazone®), 주사용 토포테칸 하이드로클로라이드(Hycamptin®), 빈블라스틴(Velban®), 빈크리스틴(Oncovin®), 비노렐빈(Navelbine®), 이브루티닙, 이델랄리십, 및 브렌툭시맙 베도틴을 포함한다.
예시적인 알킬화제는, 질소 머스타드, 에틸렌이민 유도체, 알킬 설포네이트, 니트로소우레아 및 트라이아젠: 우라실 머스타드(Aminouracil Mustard®, Chlorethaminacil®, Demethyldopan®, Desmethyldopan®, Haemanthamine®, Nordopan®, Uracil Nitrogen Mustard®, Uracillost®, Uracilmostaza®, Uramustin®, Uramustine®), 클로르메틴(Mustargen®), 사이클로포스파미드(Cytoxan®, Neosar®, Clafen®, Endoxan®, Procytox®, Revimmune™), 이포스파미드(Mitoxana®), 멜팔란(Alkeran®), 클로람부실(Leukeran®), 피포브로만(Amedel®, Vercyte®), 트라이에틸렌멜라민(Hemel®, Hexalen®, Hexastat®), 트라이에틸렌티오포스포라민, 테모졸로미드(Temodar®), 티오테파(Thioplex®), 부설판(Busilvex®, Myleran®), 카르무스틴(BiCNU®), 로무스틴(CeeNU®), 스트렙토조신(Zanosar®), 및 다카르바진(DTIC-Dome®)을 포함한다. 추가의 예시적인 알킬화제는 옥살리플라틴(Eloxatin®); 테모졸로미드(Temodar® 및 Temodal®); 닥티노마이신(악티노마이신-D로도 알려짐, Cosmegen®); 멜팔란(L-PAM, L-사르콜리신, 및 페닐알라닌 머스타드로도 알려짐, Alkeran®); 알트레타민(헥사메틸멜라민(HMM)으로도 알려짐, Hexalen®); 카르무스틴(BiCNU®); 벤다무스틴(Treanda®); 부설판(Busulfex® 및 Myleran®); 카르보플라틴(Paraplatin®); 로무스틴(CCNU로도 알려짐, CeeNU®); 시스플라틴(CDDP로도 알려짐, Platinol® 및 Platinol®-AQ); 클로람부실(Leukeran®); 사이클로포스파미드(Cytoxan® 및 Neosar®); 다카르바진(DTIC, DIC 및 이미다졸 카르복스아미드로도 알려짐, DTIC-Dome®); 알트레타민(헥사메틸멜라민(HMM)으로도 알려짐, Hexalen®); 이포스파미드(Ifex®); 프레드누무스틴; 프로카르바진(Matulane®); 메클로레타민(질소 머스타드, 무스틴 및 메클로로에타민 하이드로클로라이드로도 알려짐, Mustargen®); 스트렙토조신(Zanosar®); 티오테파(티오포스포아미드, TESPA 및 TSPA로도 알려짐, Thioplex®); 사이클로포스파미드(Endoxan®, Cytoxan®, Neosar®, Procytox®, Revimmune®); 및 벤다무스틴 HCl(Treanda®)을 포함한다.
예시적인 안트라사이클린은, 예를 들어 독소루비신(Adriamycin® 및 Rubex®); 블레오마이신(Lenoxane®); 다우노루비신(다우노루비신 하이드로클로라이드, 다우노마이신, 및 루비도마이신 하이드로클로라이드, Cerubidine®); 다우노루비신 리포조멀(다우노루비신 시트레이트 리포좀, DaunoXome®); 미톡산트론(DHAD, Novantrone®); 에피루비신(Ellence™); 이다루비신(Idamycin®, Idamycin PFS®); 미토마이신 C(Mutamycin®); 겔다나마이신; 헤르비마이신; 라비도마이신; 및 데스아세틸라비도마이신을 포함한다.
본 발명의 항체와 병용하여 사용될 수 있는 예시적인 빈카 알칼로이드는 비노렐빈 타르트레이트(Navelbine®), 빈크리스틴(Oncovin®), 및 빈데신(Eldisine®); 빈블라스틴(빈블라스틴 설페이트, 빈칼류코블라스틴 및 VLB로도 알려짐, Alkaban-AQ® 및 Velban®); 및 비노렐빈(Navelbine®)을 포함한다.
본 발명의 항체와 병용하여 사용되거나, 단독으로 사용되거나, 다른 면역조절제와 병용하여 사용될 수 있는 예시적인 프로테오좀 억제제는 보르테조밉(Velcade®); 카르필조밉(PX-171-007, (S)-4-메틸-N-((S)-1-(((S)-4-메틸-1-((R)-2-메틸옥시란-2-일)-1-옥소펜탄-2-일)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)-2-((S)-2-(2-모르폴리노아세트아미도)-4-페닐부탄아미도)-펜탄아미드); 마리조밉(NPI-0052); 익사조밉 시트레이트(MLN-9708); 델란조밉(CEP-18770); 및 O-메틸-N-[(2-메틸-5-티아졸릴)카르보닐]-L-세릴-O-메틸-N-[(1S)-2-[(2R)-2-메틸-2-옥시라닐]-2-옥소-1-(페닐메틸)에틸]-L-세린아미드(ONX-0912)이다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 세린 또는 티로신 키나제 억제제(예를 들어, 수용체 티로신 키나제(RTK) 억제제)와 병용하여 투여된다. 예시적인 티로신 키나제 억제제는 표피 성장 인자(EGF) 경로 억제제(예를 들어, 표피 성장 인자 수용체(EGFR) 억제제), 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 경로 억제제(예를 들어, 혈관 내피 성장 인자 수용체(VEGFR) 억제제(예를 들어, VEGFR-1 억제제, VEGFR-2 억제제, VEGFR-3 억제제), 혈소판 유래 성장 인자(PDGF) 경로 억제제(예를 들어, 혈소판 유래 성장 인자 수용체(PDGFR) 억제제(예를 들어, PDGFR-β 억제제), RAF-1 억제제, KIT 억제제, 및 RET 억제제를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 치료제는 악시티닙(AG013736), 보수티닙(SKI-606), 세디라닙(RECENTIN™, AZD2171), 다사티닙(SPRYCEL®, BMS-354825), 에를로티닙(TARCEVA®), 게피티닙(IRESSA®), 이마티닙(Gleevec®, CGP57148B, STI-571), 라파티닙(TYKERB®, TYVERB®), 레스타우르티닙(CEP-701), 네라티닙(HKI-272), 닐로티닙(TASIGNA®), 세막사닙(세막시닙, SU5416), 수니티닙(SUTENT®, SU11248), 토세라닙(PALLADIA®), 반데타닙(ZACTIMA®, ZD6474), 바탈라닙(PTK787, PTK/ZK), 트라스투주맙(HERCEPTIN®), 베바시주맙(AVASTIN®), 리툭시맙(RITUXAN®), 세툭시맙(ERBITUX®), 파니투무맙(VECTIBIX®), 라니비주맙(Lucentis®), 닐로티닙(TASIGNA®), 소라페닙(NEXAVAR®), 알렘투주맙(CAMPATH®), 겜투주맙 오조가미신(MYLOTARG®), ENMD-2076, PCI-32765, AC220, 도비티닙 락테이트(TKI258, CHIR-258), BIBW 2992(TOVOK™), SGX523, PF-04217903, PF-02341066, PF-299804, BMS-777607, ABT-869, MP470, BIBF 1120(VARGATEF®), AP24534, JNJ-26483327, MGCD265, DCC-2036, BMS-690154, CEP-11981, 티보자닙(AV-951), OSI-930, MM-121, XL-184, XL-647, XL228, AEE788, AG-490, AST-6, BMS-599626, CUDC-101, PD153035, 펠리티닙(EKB-569), 반데타닙(zactima), WZ3146, WZ4002, WZ8040, ABT-869(리니파닙), AEE788, AP24534(포나티닙), AV-951(티보자닙), 악시티닙, BAY 73-4506(레고라페닙), 브리바닙 알라니네이트(BMS-582664), 브리바닙(BMS-540215), 세디라닙(AZD2171), CHIR-258(도비티닙), CP 673451, CYC116, E7080, Ki8751, 마시티닙(AB1010), MGCD-265, 모테사닙 다이포스페이트(AMG-706), MP-470, OSI-930, 파조파닙 하이드로클로라이드, PD173074, 소라페닙 토실레이트(Bay 43-9006), SU 5402, TSU-68(SU6668), 바탈라닙, XL880(GSK1363089, EXEL-2880)이다. 선택된 티로신 키나제 억제제는 수니티닙, 에를로티닙, 게피티닙, 또는 소라페닙으로부터 선정된다. 일부 실시 형태에서, EGFR 억제제는 서열 번호 249, 250, 251, 및 252의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 이중특이성 EGFRc-Met 항체(EM-1 mAb)이다(미국 특허 출원 공개 US2014/0141000호).
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 베바시주맙(Avastin®), 악시티닙(Inlyta®); 브리바닙 알라니네이트(BMS-582664, (S)-((R)-1-(4-(4-플루오로-2-메틸-1H-인돌-5-일옥시)-5-메틸피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-6-일옥시)프로판-2-일)2-아미노프로파노에이트); 소라페닙(Nexavar®); 파조파닙(Votrient®); 수니티닙 말레이트(Sutent®); 세디라닙(AZD2171, CAS 288383-20-1); 바르가테프(BIBF1120, CAS 928326-83-4); 포레티닙(GSK1363089); 텔라티닙(BAY57-9352, CAS 332012-40-5); 아파티닙(YN968D1, CAS 811803-05-1); 이마티닙(Gleevec®); 포나티닙(AP24534, CAS 943319-70-8); 티보자닙(AV951, CAS 475108-18-0); 레고라페닙(BAY73-4506, CAS 755037-03-7); 바탈라닙 다이하이드로클로라이드(PTK787, CAS 212141-51-0); 브리바닙(BMS-540215, CAS 649735-46-6); 반데타닙(Caprelsa® 또는 AZD6474); 모테사닙 다이포스페이트(AMG706, CAS 857876-30-3, N-(2,3-다이하이드로-3,3-다이메틸-1H-인돌-6-일)-2-[(4-피리디닐메틸)아미노]-3-피리딘카르복스아미드, 국제 특허 출원 공개 WO 02/066470호에 기재됨); 도비티닙 다이락트산(TKI258, CAS 852433-84-2); 린파닙(ABT869, CAS 796967-16-3); 카보잔티닙(XL184, CAS 849217-68-1); 레스타우르티닙(CAS 111358-88-4); N-[5-[[[5-(1,1-다이메틸에틸)-2-옥사졸릴]메틸]티오]-2-티아졸릴]-4-피페리딘카르복사미드(BMS38703, CAS 345627-80-7); (3R,4R)-4-아미노-1-((4-((3-메톡시페닐)아미노)피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-5-일)메틸)피페리딘-3-올(BMS690514); N-(3,4-다이클로로-2-플루오로페닐)-6-메톡시-7-[[(3aα,5β,6aα)-옥타하이드로-2-메틸사이클로펜타[c]피롤-5-일]메톡시]-4-퀴나졸린아민(XL647, CAS 781613-23-8); 4-메틸-3-[[1-메틸-6-(3-피리디닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]아미노]-N-[3-(트라이플루오로메틸)페닐]-벤자미드(BHG712, CAS 940310-85-0); 및 아플리베르셉트(Eylea®)를 포함하는 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 수용체 억제제와 병용하여 투여된다.
예시적인 VEGF 억제제는 하이브리도마 ATCC HB 10709에 의해 생성된 단일클론 항-VEGF 항체 A4.6.1과 동일한 에피토프에 결합하는 단일클론 항체; 문헌[Presta et al., (1997) Cancer Res 57:4593-4599]에 따라 생성된 재조합 인간화 항-VEGF 단일클론 항체를 포함한다. 일 실시 형태에서, 항-VEGF 항체는 베바시주맙(BV)이며, 이는 rhuMAb VEGF 또는 AVASTIN®으로도 알려져 있다. 이는 돌연변이된 인간 IgG1 프레임워크 영역, 및 인간 VEGF가 그의 수용체에 결합하는 것을 차단하는 뮤린 항-hVEGF 단일클론 항체 A.4.6.1로부터의 항원-결합 상보성 결정 영역을 포함한다. 베바시주맙 및 다른 인간화된 항-VEGF 항체가 미국 특허 제6,884,879호에 추가로 기재되어 있다. 추가의 항-VEGF 항체는 국제 특허 출원 공개 WO2005/012359호 및 WO2005/044853호에 기재된 바와 같은 G6 또는 B20 시리즈 항체(예를 들어, G6-31, B20-4.1)를 포함한다. 추가의 항체의 경우, 미국 특허 제7,060,269호, 제6,582,959호, 제6,703,020호, 제6,054,297호, 국제 특허 출원 공개 WO98/45332호, WO 96/30046호, WO94/10202호, EP 0666868B1호, 미국 특허 출원 공개 제2006009360호, 미국 특허 출원 공개 제20050186208호, 미국 특허 출원 공개 제20030206899호, 미국 특허 출원 공개 제20030190317호, 미국 특허 출원 공개 제20030203409호, 및 미국 특허 출원 공개 제20050112126호; 및 문헌[Popkov et al.,(2004)Journal of Immunological Methods 28:149-164]을 참조한다. 다른 항체는 잔기 F17, M18, D19, Y21, Y25, Q89, 191, K101, E103, 및 C104를 포함하거나, 대안적으로 잔기 F17, Y21, Q22, Y25, D63, 183 및 Q89를 포함하는, 인간 VEGF 상의 기능적 에피토프에 결합하는 것들을 포함한다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 PI3K 억제제와 병용하여 투여된다. 일 실시 형태에서, PI3K 억제제는 PI3K의 델타 및 감마 아이소형의 억제제이다. 다른 실시 형태에서, PI3K 억제제는 PI3K의 베타 아이소형의 억제제이다. 사용될 수 있는 예시적인 PI3K 억제제는, 예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO 2010/036380호, WO 2010/006086호, WO 09/114870호, WO 05/113556호에 기재된 GSK 2126458, GDC-0980, GDC-0941, Sanofi XL147, XL756, XL147, PF-46915032, BKM 120, CAL-101, CAL 263, SF1126, PX-886, 및 이중 PI3K 억제제(예를 들어, Novartis BEZ235)이다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 mTOR 억제제, 예를 들어, 라파마이신, 템시롤리무스(TORISEL®), AZD8055, BEZ235, BGT226, XL765, PF-4691502, GDC0980, SF1126, OSI-027, GSK1059615, KU-0063794, WYE-354, Palomid 529(P529), PF-04691502, 또는 PKI-587, 리다포롤리무스(이전에 데페롤리무스로 알려짐, (1R,2R,4S)-4-[(2R)-2 [(1R,9S,12S,15R,16E,18R,19R,21R,23S,24E,26E,28Z,30S,32S,35R)-1,18-다이하이드록시-19,30-다이메톡시-15,17,21,23,29,35-헥사메틸-2,3,10,14,20-펜타옥소-11,36-다이옥사-4-아자트라이사이클로[30.3.1.04,9] 헥사트라이아콘타-16,24,26,28-테트라엔-12-일]프로필]-2-메톡시사이클로헥실 다이메틸포스피네이트, AP23573 및 MK8669로도 알려져 있으며, 국제 특허 출원 공개 WO 03/064383호에 기재됨); 에베롤리무스(Afinitor® 또는 RAD001); 라파마이신(AY22989, Sirolimus®); 시마피모드(CAS 164301-51-3); 엠시롤리무스, (5-{2,4-비스[(3S)-3-메틸모폴린-4-일]피리도[2,3-d]피리미딘-7-일}-2-메톡시페닐)메탄올(AZD8055); 2-아미노-8-[트랜스-4-(2-하이드록시에톡시)사이클로헥실]-6-(6-메톡시-3-피리디닐)-4-메틸-피리도[2,3-d]피리미딘-7(8H)-온(PF04691502, CAS 1013101-36-4); 및 N2-[1,4-다이옥소-4-[[4-(4-옥소-8-페닐-4H-1-벤조피란-2-일)모폴리늄-4-일]메톡시]부틸]-L-아르기닐글리실-L-α-아스파르틸L-세린-(서열 번호 237), 내염(inner salt)(SF1126, CAS 936487-67-1), 및 XL765 중 하나 이상으로부터 선택되는 하나 이상의 mTOR 억제제와 병용하여 투여된다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 BRAF 억제제, 예를 들어, GSK2118436, RG7204, PLX4032, GDC-0879, PLX4720, 및 소라페닙 토실레이트(Bay 43-9006)와 병용하여 투여된다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 면역조절제와 병용하여 투여된다. 프로그래밍된 세포사 단백질 1(PD1), 프로그래밍된 세포사 1 리간드 1(PDL1) 및 세포독성 T 림프구 항원 4(CTLA4)와 같은 면역 관문(immune checkpoint)을 표적화하는 것은, 면역억제 신호를 차단하고 환자가 효과적인 항종양 반응을 생성할 수 있게 함으로써 다수의 암에서 주목할 만한 이점을 달성해 왔다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 항-PD1(예를 들어, 니볼루맙), 항-PDL(예를 들어, MDX-1105) 또는 항-CTLA4(예를 들어, 이필리무맙)와 병용하여 투여된다. 효능(agonistic) CD40 항체(αCD40으로 지칭됨) 또는 CD40 리간드가 면역 반응을 자극하고 종양을 표적화하는 능력은 그러한 시약이 암 면역요법제로서 유망함을 시사한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 항-CD40(예를 들어, SGN-40, CP-870,893) 또는 항-CD40L(예를 들어, BG9588)과 병용하여 투여된다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 MEK 억제제와 병용하여 투여된다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, MEK 억제제와 병용하여 투여되는 본 발명의 항체는 전립선암, 흑색종, 결직장암, 비소세포 폐암, 난소암, 유방암, 전립선암, 췌장암, 혈액학적 악성종양 또는 신장 세포 암종의 치료에 사용된다. 소정 실시 형태에서, 종양 조직 또는 암 세포는 BRAF 돌연변이(예를 들어, BRAF V600E 돌연변이), BRAF 야생형, KRAS 야생형 또는 활성화 KRAS 돌연변이를 갖는다. 암은 초기, 중기 또는 후기 병기에 있을 수 있다. 임의의 MEK 억제제가 병용하여 사용될 수 있으며, 이에는 ARRY-142886, G02442104(GSK1120212로도 알려짐), RDEA436, RDEA119/BAY 869766, AS703026, G00039805(AZD-6244 또는 셀루메티닙으로도 알려짐), BIX 02188, BIX 02189, CI-1040(PD-184352), PD0325901, PD98059, U0126, GDC-0973(메타논, [3,4-다이플루오로-2-[(2-플루오로-4-요오도페닐)아미노]페닐][3-하이드록시-3-(25)-2-피페리디닐-1-아제티디닐]-), G-38963, G02443714(AS703206으로도 알려짐), 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이 포함된다. MEK 억제제의 추가의 예가 국제 특허 출원 공개 WO 2013/019906호, WO 03/077914호, WO 2005/121142호, WO 2007/04415호, WO 2008/024725호 및 WO 2009/085983호에 개시되어 있다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 JAK2 억제제, 예를 들어 CEP-701, INCB18424, CP-690550(타소시티닙)과 병용하여 투여된다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 파클리탁셀 또는 파클리탁셀 약제(paclitaxel agent), 예를 들어 TAXOL®, 단백질-결합된 파클리탁셀(예를 들어, ABRAXANE®)과 병용하여 투여된다. 예시적인 파클리탁셀 약제는 나노입자 알부민-결합된 파클리탁셀(ABRAXANE, Abraxis Bioscience에 의해 시판됨), 도코사헥사에노산 결합된-파클리탁셀(DHA-파클리탁셀, 탁소프렉신, Protarga에 의해 시판됨), 폴리글루타메이트 결합된-파클리탁셀(PG-파클리탁셀, 파클리탁셀 폴리글루멕스, CT-2103, XYOTAX, Cell Therapeutic에 의해 시판됨), 종양-활성화 전구약물(TAP), ANG105(3개 분자의 파클리탁셀에 결합된 안지오펩-2, ImmunoGen에 의해 시판됨), 파클리탁셀-EC-1(erbB2-인식 펩티드 EC-1에 결합된 파클리탁셀; 문헌[Li et al., Biopolymers (2007) 87:225-230] 참조), 및 글루코스-접합된 파클리탁셀(예를 들어, 2′-파클리탁셀 메틸 2-글루코피라노실 석시네이트, 문헌[Liu et al., (2007) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 17:617-620] 참조)을 포함한다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 세포 면역요법(예를 들어, Provenge(예를 들어, 시풀류셀))과 병용하여, 그리고 선택적으로 사이클로포스파미드와 병용하여 투여된다.
전립선암의 치료를 위하여 본 발명의 항체와 병용하여 사용될 수 있는 예시적인 치료제는 화학요법제(예를 들어, 도세탁셀, 카르보플라틴, 플루다라빈), 아비라테론, 호르몬 요법(예를 들어, 플루타미드, 비칼루타미드, 닐루타미드, 사이프로테론 아세테이트, 케토코나졸, 아미노글루테티미드, 아바렐릭스, 데가렐릭스, 류프롤리드, 고세렐린, 트립토렐린, 부세렐린), 티로신 키나제 억제제(예를 들어, 이중 키나제 억제제) (예를 들어, 라파타닙), 멀티키나제 억제제(예를 들어, 소라페닙, 수니티닙), VEGF 억제제(예를 들어, 베바시주맙), TAK-700, 암 백신(예를 들어, BPX-101, PEP223), 레날리도미드, TOK-001, IGF-1 수용체 억제제(예를 들어, 식수투무맙), TRC105, 오로라 A 키나제 억제제(예를 들어, MLN8237), 프로테아좀 억제제(예를 들어, 보르테조밉), OGX-011, 방사면역요법(예를 들어, HuJ591-GS), HDAC 억제제(예를 들어, 발프로산, SB939, LBH589), 하이드록시클로로퀸, mTOR 억제제(예를 들어, 에베롤리무스), 도비티닙 락테이트, 다이인돌릴메탄, 에파비렌즈, OGX-427, 제니스타인, IMC-3G3, 바페티닙, CP-675,206, ARN-509, 방사선 요법, 수술, 또는 이들의 조합을 포함한다.
본 발명의 항체와 병용하여 췌장암의 치료에 사용될 수 있는 예시적인 치료제는 화학요법제, 예를 들어, 파클리탁셀 또는 파클리탁셀 약제(예를 들어, 파클리탁셀 제형, 예컨대 TAXOL, 알부민-안정화된 나노입자 파클리탁셀 제형(예를 들어, ABRAXANE), 또는 리포좀 파클리탁셀 제형); 젬시타빈(예를 들어, 단독으로의 또는 AXP107-11과 병용된 젬시타빈); 다른 화학요법제, 예컨대 옥살리플라틴, 5-플루오로우라실, 카페시타빈, 루비테칸, 에피루비신 하이드로클로라이드, NC-6004, 시스플라틴, 도세탁셀(예를 들어, TAXOTERE), 미토마이신 C, 이포스파미드; 인터페론; 티로신 키나제 억제제(예를 들어, EGFR 억제제(예를 들어, 에를로티닙, 파니투무맙, 세툭시맙, 니모투주맙); HER2/neu 수용체 억제제(예를 들어, 트라스투주맙); 이중 키나제 억제제(예를 들어, 보수티닙, 사라카티닙, 라파티닙, 반데타닙); 멀티키나제 억제제(예를 들어, 소라페닙, 수니티닙, XL184, 파조파닙); VEGF 억제제(예를 들어, 베바시주맙, AV-951, 브리바닙); 방사면역요법(예를 들어, XR303); 암 백신(예를 들어, GVAX, 수르비빈 펩티드); COX-2 억제제(예를 들어, 셀레콕십); IGF-1 수용체 억제제(예를 들어, AMG 479, MK-0646); mTOR 억제제(예를 들어, 에베롤리무스, 템시롤리무스); IL-6 억제제(예를 들어, CNTO 328); 사이클린-의존성 키나제 억제제(예를 들어, P276-00, UCN-01); 변경된 에너지 대사작용-유도(Altered Energy Metabolism-Directed, AEMD) 화합물(예를 들어, CPI-613); HDAC 억제제(예를 들어, 보리노스타트); TRAIL 수용체 2(TR-2) 효능제(예를 들어, 코나투무맙); MEK 억제제(예를 들어, AS703026, 셀루메티닙, GSK1120212); Raf/MEK 이중 키나제 억제제(예를 들어, RO5126766); 노치(Notch) 신호전달 억제제(예컨대, MK0752); 단일클론 항체-항체 융합 단백질(예를 들어, L19IL2); 쿠르쿠민; HSP90 억제제(예를 들어, 타네스피마이신, STA-9090); rIL-2; 데니류킨 디프티톡스; 토포아이소머라제 1 억제제(예를 들어, 이리노테칸, PEP02); 스타틴(예를 들어, 심바스타틴); 인자 VIIa 억제제(예를 들어, PCI-27483); AKT 억제제(예를 들어, RX-0201); 저산소증-활성화형 전구약물(예를 들어, TH-302); 메트포르민 하이드로클로라이드, 감마-세크레타제 억제제(예를 들어, R04929097); 리보뉴클레오티드 리덕타제 억제제(예를 들어, 3-AP); 면역독소(예를 들어, HuC242-DM4); PARP 억제제(예를 들어, KU-0059436, 벨리파립); CTLA-4 억제제(예를 들어, CP-675,206, 이필리무맙); ADV-tk 요법; 프로테아좀 억제제(예를 들어, 보르테조밉(Velcade), NPI-0052); 티아졸리딘다이온(예를 들어, 피오글리타존); NPC-1C; 오로라 키나제 억제제(예를 들어, R763/AS703569), CTGF 억제제(예를 들어, FG-3019); siG12D LODER; 및 방사선 요법(예를 들어, 토모테라피, 정위적 방사선, 양성자 요법), 수술, 및 이들의 조합을 포함한다. 소정의 실시 형태에서, 파클리탁셀 또는 파클리탁셀 약제와 젬시타빈의 병용물이 본 발명의 항체와 함께 사용할 수 있다.
소세포 폐암의 치료를 위하여 본 발명의 항체와 병용하여 사용될 수 있는 예시적인 치료제는 화학요법제, 예를 들어 에토포시드, 카르보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 이리노테칸, 토포테칸, 젬시타빈, 리포좀 SN-38, 벤다무스틴, 테모졸로미드, 벨로테칸, NK012, FR901228, 플라보피리돌); 티로신 키나제 억제제(예를 들어, EGFR 억제제(예를 들어, 에를로티닙, 게피티닙, 세툭시맙, 파니투무맙); 멀티키나제 억제제(예를 들어, 소라페닙, 수니티닙); VEGF 억제제(예를 들어, 베바시주맙, 반데타닙); 암 백신(예를 들어, GVAX); Bcl-2 억제제(예를 들어, 오블리메르센 소듐, ABT-263); 프로테아좀 억제제(예를 들어, 보르테조밉(Velcade), NPI-0052), 파클리탁셀 또는 파클리탁셀 약제; 도세탁셀; IGF-1 수용체 억제제(예를 들어, AMG 479); HGF/SF 억제제(예를 들어, AMG 102, MK-0646); 클로로퀸; 오로라 키나제 억제제(예를 들어, MLN8237); 방사면역요법(예를 들어, TF2); HSP90 억제제(예를 들어, 타네스피마이신, STA-9090); mTOR 억제제(예를 들어, everolimus); Ep-CAM/CD3-이중특이성 항체(예를 들어, MT110); CK-2 억제제(예를 들어, CX-4945); HDAC 억제제(예를 들어, 보리노스타트); SMO 길항제(예를 들어, BMS 833923); 펩티드 암 백신, 및 방사선 요법(예를 들어, 강도-조절 방사선 요법(IMRT), 저분할 방사선 요법, 저산소증-유도 방사선요법), 수술, 및 이들의 조합을 포함한다.
비소세포 폐암의 치료를 위하여 본 발명의 항체와 병용하여 사용될 수 있는 예시적인 치료제는 화학요법제, 예를 들어 비노렐빈, 시스플라틴, 도세탁셀, 페메트렉세드 다이소듐, 에토포시드, 젬시타빈, 카르보플라틴, 리포좀 SN-38, TLK286, 테모졸로미드, 토포테칸, 페메트렉세드 다이소듐, 아자시티딘, 이리노테칸, 테가푸르-기메라실-오테라실 포타슘, 사파시타빈); 티로신 키나제 억제제(예를 들어, EGFR 억제제(예를 들어, 에를로티닙, 게피티닙, 세툭시맙, 파니투무맙, 네시투무맙, PF-00299804, 니모투주맙, RO5083945), MET 억제제(예를 들어, PF-02341066, ARQ 197), PI3K 키나제 억제제(예를 들어, XL147, GDC-0941), Raf/MEK 이중 키나제 억제제(예를 들어, RO5126766), PI3K/mTOR 이중 키나제 억제제(예를 들어, XL765), SRC 억제제(예를 들어, 다사티닙), 이중 억제제(예를 들어, BIBW 2992, GSK1363089, ZD6474, AZD0530, AG-013736, 라파티닙, MEHD7945A, 리니파닙), 멀티키나제 억제제(예를 들어, 소라페닙, 수니티닙, 파조파닙, AMG 706, XL184, MGCD265, BMS-690514, R935788), VEGF 억제제(예를 들어, 엔도스타, 엔도스타틴, 베바시주맙, 세디라닙, BIBF 1120, 악시티닙, 티보자닙, AZD2171), 암 백신(예를 들어, BLP25 리포좀 백신, GVAX, 재조합 DNA, 및 L523S 단백질을 발현시키는 아데노바이러스), Bcl-2 억제제(예를 들어, 오블리메르센 소듐), 프로테아좀 억제제(예를 들어, 보르테조밉, 카르필조밉, NPI-0052, MLN9708), 파클리탁셀 또는 파클리탁셀 약제, 도세탁셀, IGF-1 수용체 억제제(예를 들어, 식수투무맙, MK-0646, OSI 906, CP-751,871, BIIB022), 하이드록시클로로퀸, HSP90 억제제(예를 들어, 타네스피마이신, STA-9090, AUY922, XL888), mTOR 억제제(예를 들어, 에베롤리무스, 템시롤리무스, 리다포롤리무스), Ep-CAM/CD3-이중특이성 항체(예를 들어, MT110), CK-2 억제제(예를 들어, CX-4945), HDAC 억제제(예를 들어, MS 275, LBH589, 보리노스타트, 발프로산, FR901228), DHFR 억제제(예를 들어, 프랄라트렉세이트), 레티노이드(예를 들어, 벡사로텐, 트레티노인), 항체-약물 접합체(예를 들어, SGN-15), 비스포스포네이트(예를 들어, 졸레드론산), 암 백신(예를 들어, 벨라겐푸마투셀-L), 저분자량 헤파린(LMWH)(예를 들어, 틴자파린, 에녹사파린), GSK1572932A, 멜라토닌, 탈락토페린, 디메스나, 토포아이소머라제 억제제(예를 들어, 암루비신, 에토포시드, 카레니테신), 넬피나비르, 실렌기티드, ErbB3 억제제(예를 들어, MM-121, U3-1287), 서르비빈 억제제(예를 들어, YM155, LY2181308), 에리불린 메실레이트, COX-2 억제제(예를 들어, 셀레콕십), 페그필그라스팀, 폴로-유사 키나제 1 억제제(예를 들어, BI 6727), TRAIL 수용체 2(TR-2) 효능제(예를 들어, CS-1008), CNGRC 펩티드(서열 번호 225)-TNF 알파 접합체, 다이클로로아세테이트(DCA), HGF 억제제(예를 들어, SCH 900105), SAR240550, PPAR-감마 효능제(예를 들어, CS-7017), 감마-세크레타제 억제제(예를 들어, RO4929097), 후성유전 요법(예를 들어, 5-아자시티딘), 니트로글리세린, MEK 억제제(예를 들어, AZD6244), 사이클린-의존성 키나제 억제제(예를 들어, UCN-01), 콜레스테롤-Fus1, 항튜불린제(예를 들어, E7389), 파르네실-OH-트랜스페라제 억제제(예를 들어, 로나파르닙), 면역독소(예를 들어, BB-10901, SS1(dsFv) PE38), 폰다파리눅스, 혈관 차단제(예를 들어, AVE8062), PD-L1 억제제(예를 들어, MDX-1105, MDX-1106), 베타-글루칸, NGR-hTNF, EMD 521873, MEK 억제제(예를 들어, GSK1120212), 에포틸론 유사체(예를 들어, 익사베필론), 키네신-스핀들 억제제(예를 들어, 4SC-205), 텔로미어 표적화제(예를 들어, KML-001), P70 경로 억제제(예를 들어, LY2584702), AKT 억제제(예를 들어, MK-2206), 혈관신생 억제제(예를 들어, 레날리도미드), 노치 신호전달 억제제(예를 들어, OMP-21M18), US2014/0141000A1호에 기재된 바와 같은 EGFR/c-Met 이중특이성 항체 EM-1, 방사선 요법, 수술, 및 이들의 조합을 포함한다.
난소암의 치료를 위하여 본 발명의 항체와 병용하여 사용될 수 있는 예시적인 치료제는 화학요법제(예를 들어, 파클리탁셀 또는 파클리탁셀 약제; 도세탁셀; 카르보플라틴; 젬시타빈; 독소루비신; 토포테칸; 시스플라틴; 이리노테칸, TLK286, 이포스파미드, 올라파립, 옥살리플라틴, 멜팔란, 페메트렉세드 다이소듐, SJG-136, 사이클로포스파미드, 에토포시드, 데시타빈); 그렐린 길항제(예를 들어, AEZS-130), 면역요법(예를 들어, APC8024, 오레고보맙, OPT-821), 티로신 키나제 억제제(예를 들어, EGFR 억제제(예를 들어, 에를로티닙), 이중 억제제(예를 들어, E7080), 멀티키나제 억제제(예를 들어, AZD0530, JI-101, 소라페닙, 수니티닙, 파조파닙, ON 01910.Na), VEGF 억제제(예를 들어, 베바시주맙, BIBF 1120, 세디라닙, AZD2171), PDGFR 억제제(예를 들어, IMC-3G3), 파클리탁셀, 토포아이소머라제 억제제(예를 들어, 카레니테신, 이리노테칸), HDAC 억제제(예를 들어, 발프로에이트, 보리노스타트), 폴레이트 수용체 억제제(예를 들어, 팔레투주맙), 안지오포이에틴 억제제(예를 들어, AMG 386), 에포틸론 유사체(예를 들어, 익사베필론), 프로테아좀 억제제(예를 들어, 카르필조밉), IGF-1 수용체 억제제(예를 들어, OSI 906, AMG 479), PARP 억제제(예를 들어, 벨리파립, AG014699, 이니파립, MK-4827), 오로라 키나제 억제제(예를 들어, MLN8237, ENMD-2076), 혈관신생 억제제(예를 들어, 레날리도미드), DHFR 억제제(예를 들어, 프랄라트렉세이트), 방사면역요법제(예를 들어, Hu3S193), 스타틴(예를 들어, 로바스타틴), 토포아이소머라제 1 억제제(예를 들어, NKTR-102), 암 백신(예를 들어, p53 합성 긴 펩티드 백신(p53 synthetic long peptides vaccine), 자가 OC-DC 백신), mTOR 억제제(예를 들어, 템시롤리무스, 에베롤리무스), BCR/ABL 억제제(예를 들어, 이마티닙), ET-A 수용체 길항제(예를 들어, ZD4054), TRAIL 수용체 2(TR-2) 효능제(예를 들어, CS-1008), HGF/SF 억제제(예를 들어, AMG 102), EGEN-001, 폴로-유사 키나제 1 억제제(예를 들어, BI 6727), 감마-세크레타제 억제제(예를 들어, RO4929097), Wee-1 억제제(예를 들어, MK-1775), 항튜불린제(예를 들어, 비노렐빈, E7389), 면역독소(예를 들어, 데니류킨 디프티톡스), SB-485232, 혈관 차단제(예를 들어, AVE8062), 인테그린 억제제(예를 들어, EMD 525797), 키네신-스핀들 억제제(예를 들어, 4SC-205), 레블리미드, HER2 억제제(예를 들어, MGAH22), ErrB3 억제제(예를 들어, MM-121), 방사선 요법, 및 이들의 조합을 포함한다.
신세포암, 예를 들어 신장 세포 암종(RCC) 또는 전이성 RCC의 치료를 위하여 본 발명의 항체와 병용하여 사용될 수 있는 예시적인 치료제는 면역-기반 전략(예를 들어, 인터류킨-2 또는 인터페론-α), 표적화제(예를 들어, VEGF 억제제, 예컨대 VEGF에 대한 단일클론 항체, 예를 들어 베바시주맙(문헌[Rini et al., (2010) J Clin Oncol 28(13):2137-2143])); VEGF 티로신 키나제 억제제, 예컨대 수니티닙, 소라페닙, 악시티닙 및 파조파닙(문헌[Pal et al., (2014) Clin Advances in Hematology & Oncology 12(2):90-99]에 검토되어 있음); RNAi 억제제, 또는 VEGF 신호전달의 하류 매개체의 억제제, 예를 들어 포유류 라파마이신 표적(mTOR)의 억제제, 예를 들어 에베롤리무스 및 템시롤리무스(문헌[Hudes et al., (2007) N Engl J Med 356(22):2271-2281], 문헌[Motzer et al., (2008) Lancet 372: 449-456])를 포함한다.
PSMA-특이적 항체 키트
개시된 PSMA-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 키트가 본 명세서에 기재된다. 기재된 키트는 본 명세서에 제공된 PSMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편을 사용하는 방법, 또는 당업자에게 알려진 다른 방법을 수행하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 기재된 키트는 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원-결합 단편 및 생물학적 샘플에서 PSMA의 존재를 검출하는 데 사용하기 위한 시약을 포함할 수 있다. 따라서, 기재된 키트는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 항체 또는 이의 항원-결합 단편(들), 및 사용 중이 아닐 때 항체 또는 단편을 담기 위한 용기, 항체 또는 단편, 고체 지지체에 부착된 항체 또는 단편, 및/또는 항체 또는 단편의 검출가능하게 표지화된 형태의 사용에 대한 설명서를 포함할 수 있으며, 이는 본 명세서에 기재된 바와 같다.
본 발명의 일 실시 형태는 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 키트이다.
본 발명의 다른 실시 형태는 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 PSMA × CD3 항체를 포함하는 키트이다.
키트는 치료적 용도에 그리고 진단 키트로서 사용될 수 있다.
키트는 생물학적 샘플 내의 PSMA, CD3, 또는 PSMA 및 CD3의 존재를 검출하기 위해 사용될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 키트는 본 명세서에 기재된 본 발명의 항체 및 항체를 검출하기 위한 시약을 포함한다. 키트는 하기를 포함한 하나 이상의 다른 요소들을 포함할 수 있다: 사용 설명서; 다른 시약, 예를 들어 표지, 치료제, 또는 항체를 표지 또는 치료제에 킬레이팅하거나 달리 커플링하기에 유용한 작용제, 또는 방사성 방호 조성물; 투여를 위하여 항체를 준비하기 위한 장치 또는 다른 재료; 약제학적으로 허용되는 담체; 및 대상체에게 투여하기 위한 장치 또는 다른 재료.
일부 실시 형태에서, 키트는 용기 내의 본 발명의 항체 및 키트의 사용 설명서를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 키트 내의 항체는 표지화되어 있다.
일부 실시 형태에서, 키트는 항-PSMA 항체 PSMB119, PSMB120, PSMB121, PSMB122, PSMB123, PSMB87, PSMB126, PSMB127, PSMB128, PSMB129, PSMB130, PSMB120, PSMB121, PSMB122, PSMB123, PSMB127, PSMB128, PSMB130, PSMB344, PSMB345, PSMB346, PSMB347, PSMB349, PSMB358, PSMB359, PSMB360, PSMB361, PSMB362, PSMB363, 및 PSMB365를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 키트는 이중특이성 PSMA × CD3 항체, PS3B22, PS3B23, PS3B25, PS3B27, PS3B28, 또는 PS3B30을 포함한다.
PSMA 또는 PSMA 및 CD3을 검출하는 방법
본 명세서에 기재된 본 발명의 일 실시 형태는 샘플 내의 PSMA를 검출하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 샘플을 얻는 단계, 상기 샘플을 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 길항 항체와 접촉시키는 단계, 및 상기 샘플 내의 PSMA에 결합된 상기 항체를 검출하는 단계를 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 일 실시 형태는 샘플 내의 PSMA 및 CD3을 검출하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 샘플을 얻는 단계, 상기 샘플을 본 발명의 PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 항체와 접촉시키는 단계, 및 상기 샘플 내의 PSMA 및 CD3에 결합된 상기 항체를 검출하는 단계를 포함한다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 샘플은 소변, 혈액, 혈청, 혈장, 타액, 복수, 순환 세포, 순환 종양 세포, 조직과 회합되지 않은 세포(즉, 유리 세포), 조직(예를 들어, 외과적으로 절제된 종양 조직, 생검 - 미세 바늘 흡인물을 포함함), 조직 프레파라트 등으로부터 유래될 수 있다.
PSMA, 또는 PSMA 및 CD3에 결합된 본 명세서에 기재된 본 발명의 항체는 알려진 방법을 사용하여 검출될 수 있다. 예시적인 방법은 형광 또는 화학발광 표지, 또는 방사성 표지를 사용한 항체의 직접 표지화, 또는 용이하게 검출가능한 모이어티, 예컨대 비오틴, 효소 또는 에피토프 태그의 본 발명의 항체에 대한 부착을 포함한다. 예시적인 표지 및 모이어티는 루테늄, 111In-DOTA, 111In-다이에틸렌트라이아민펜타아세트산(DTPA), 고추냉이 퍼옥사이드, 알칼리성 포스파타제 및 베타-갈락토시다제, 폴리-히스티딘(HIS 태그), 아크리딘 염료, 시아닌 염료, 플루오론 염료, 옥사진 염료, 페난트리딘 염료, 로다민 염료 및 Alexafluor® 염료이다.
본 발명의 항체는 샘플 내의 PSMA, 또는 PSMA 및 CD3을 검출하기 위한 다양한 검정에 사용될 수 있다. 예시적인 검정은 웨스턴 블롯(Western blot) 분석, 방사면역검정, 표면 플라즈몬 공명, 면역침전, 평형 투석, 면역확산, 전기화학발광(ECL) 면역검정, 면역조직화학, 형광-활성화 세포 분류(FACS) 또는 ELISA 검정이다.
실시 형태
1)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 (i) 재조합 판 트로글로디테스 PSMA를 발현하는 세포에 결합하며, 여기서 상기 세포에 대한 결합은 유세포측정에 의해 측정되고, (ii) 약 30 nM 이하의 친화도로 재조합 판 트로글로디테스 PSMA 세포외 도메인(서열 번호 4)에 결합하며, 여기서 상기 친화도는 ProteOn XPR36 표면 플라즈몬 공명 검정에 의해 측정되는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
2)
실시 형태 1에 있어서, 하기 특성들 중 1개, 2개, 3개 또는 4개를 갖는, 항체:
a)
20 nM 이하의 계산된 EC50으로 LNCaP 세포에 결합하고, 40 nM 이하의 계산된 EC50으로 마카카 파시쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포에 결합하며, 여기서 LNCaP 세포에 대한 결합과 마카카 파시쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포에 대한 결합 사이의 계산된 EC50의 차이는 5배 미만이고, 상기 계산된 EC50은 유세포측정을 사용하여 0℃에서 전세포 결합 검정에서 측정됨,
b)
12 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간(서열 번호 7), 판 트로글로디테스(서열 번호 4) 및 마카카 파시쿨라리스(서열 번호 5)로부터의 재조합 PSMA ECD에 결합하며, 여기서 상기 KD는 +25℃에서의 ProteOn 표면 플라즈몬 공명 검정 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨,
c)
항-CD3 항체 CD3B219와 이중특이성 항체로 쌍을 이룰 때, LNCaP 세포, C42 세포, 인간 PSMA-발현 HEK 세포 또는 마카카 파시쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포의 T-세포 매개 사멸을 디스플레이하며, 여기서 상기 T-세포 매개 사멸은 크롬-51에 의해 또는 카스파제 3/7 활성화 검정에 의해 측정됨, 또는
d)
인간 PSMA(서열 번호 3)의 잔기 I138, F235, P237, G238, D244, Y299, Y300, Q303, K304, E307, 및 K324-P326으로 구성되는 입체구조 에피토프를 인식함.
3)
실시 형태 2에 있어서, 각각 서열 번호 14, 15, 16, 17, 18 및 19의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
4)
실시 형태 2에 있어서, 각각 서열 번호 20, 21, 22, 23, 12 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
5)
실시 형태 2에 있어서, 각각 서열 번호 25, 26, 27, 28, 29 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
6)
실시 형태 2에 있어서, 각각 서열 번호 36, 37, 38, 39, 40 및 41의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
7)
실시 형태 2에 있어서, 각각 서열 번호 31, 42, 43, 11, 12 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
8)
실시 형태 2에 있어서, 각각 서열 번호 31, 44, 45, 46, 29 및 47의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
9)
실시 형태 2에 있어서, 각각 서열 번호 36, 37, 48, 49, 50 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
10)
실시 형태 2에 있어서, 각각 서열 번호 36, 37, 52, 49, 50 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
11)
실시 형태 2에 있어서, 각각 서열 번호 8, 9, 10, 11, 12 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
12)
실시 형태 2에 있어서, 각각 서열 번호 31, 32, 33, 34, 12 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
13)
실시 형태 2에 있어서, 각각 서열 번호 53, 54, 55, 23, 12 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
14)
실시 형태 2에 있어서, 각각 서열 번호 122, 123, 124, 23, 12 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
15)
실시 형태 2에 있어서, 서열 번호 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 75, 77, 79, 또는 160의 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하는, 항체.
16)
실시 형태 15에 있어서, 서열 번호 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 61, 76, 또는 78의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 항체.
17)
실시 형태 15에 있어서, 서열 번호 62의 VH 및 서열 번호 63의 VL을 포함하는, 항체.
18)
실시 형태 15에 있어서, 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하는, 항체.
19)
실시 형태 15에 있어서, 서열 번호 66의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함하는, 항체.
20)
실시 형태 15에 있어서, 서열 번호 72의 VH 및 서열 번호 73의 VL을 포함하는, 항체.
21)
실시 형태 15에 있어서, 서열 번호 74의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함하는, 항체.
22)
실시 형태 15에 있어서, 서열 번호 75의 VH 및 서열 번호 76의 VL을 포함하는, 항체.
23)
실시 형태 15에 있어서, 서열 번호 77의 VH 및 서열 번호 78의 VL을 포함하는, 항체.
24)
실시 형태 15에 있어서, 서열 번호 79의 VH 및 서열 번호 78의 VL을 포함하는, 항체.
25)
실시 형태 15에 있어서, 서열 번호 160의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하는, 항체.
26)
실시 형태 15에 있어서, 서열 번호 60의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함하는, 항체.
27)
실시 형태 15에 있어서, 서열 번호 68의 VH 및 서열 번호 69의 VL을 포함하는, 항체.
실시 형태 15에 있어서, 서열 번호 70의 VH 및 서열 번호 71의 VL을 포함하는, 항체.
28)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 31, 42, 43, 11, 12 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
29)
실시 형태 28에 있어서, 서열 번호 74의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함하는, 항체.
30)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 14, 15, 16, 17, 18 및 19의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
31)
실시 형태 30에 있어서, 서열 번호 62의 VH 및 서열 번호 63의 VL을 포함하는, 항체.
32)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 25, 26, 27, 28, 29 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
33)
실시 형태 32에 있어서, 서열 번호 66의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함하는, 항체.
34)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 36, 37, 38, 39, 40 및 41의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
35)
실시 형태 34에 있어서, 서열 번호 72의 VH 및 서열 번호 73의 VL을 포함하는, 항체.
36)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 122, 123, 124, 23, 12, 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
37)
실시 형태 36에 있어서, 서열 번호 160의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하는, 항체.
38)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 8, 9, 10, 11, 12, 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
39)
실시 형태 38에 있어서, 서열 번호 60의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함하는, 항체.
40)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 20, 21, 22, 23, 12, 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
41)
실시 형태 40에 있어서, 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하는, 항체.
42)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 31, 32, 33, 34, 12, 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
43)
실시 형태 42에 있어서, 서열 번호 70의 VH 및 서열 번호 71의 VL을 포함하는, 항체.
44)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 31, 44, 45, 46, 29, 및 47의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
45)
실시 형태 44에 있어서, 서열 번호 75의 VH 및 서열 번호 76의 VL을 포함하는, 항체.
46)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 36, 37, 48, 49, 50, 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
47)
실시 형태 46에 있어서, 서열 번호 77의 VH 및 서열 번호 78의 VL을 포함하는, 항체.
48)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 36, 37, 52, 49, 50, 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
49)
실시 형태 48에 있어서, 서열 번호 79의 VH 및 서열 번호 78의 VL을 포함하는, 항체.
50)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 53, 54, 55, 23, 12, 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
51)
실시 형태 50에 있어서, 서열 번호 68의 VH 및 서열 번호 69의 VL을 포함하는, 항체.
52)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
53)
실시 형태 52에 있어서, 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함하는, 항체.
54)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 25, 130, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
55)
실시 형태 54에 있어서, 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 142의 VL을 포함하는, 항체.
56)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
57)
실시 형태 56에 있어서, 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함하는, 항체.
58)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
59)
실시 형태 58에 있어서, 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 167의 VL을 포함하는, 항체.
60)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
61)
실시 형태 60에 있어서, 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 144의 VL을 포함하는, 항체.
62)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
63)
실시 형태 62에 있어서, 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 167의 VL을 포함하는, 항체.
64)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 25, 135, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
65)
실시 형태 64에 있어서, 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 142의 VL을 포함하는, 항체.
66)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
67)
실시 형태 66에 있어서, 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함하는, 항체.
68)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
69)
실시 형태 68에 있어서, 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 144의 VL을 포함하는, 항체.
70)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 25, 134, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
71)
실시 형태 70에 있어서, 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 142의 VL을 포함하는, 항체.
72)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
73)
실시 형태 72에 있어서, 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함하는, 항체.
74)
단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 각각 서열 번호 25, 137, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
75)
실시 형태 74에 있어서, 서열 번호 141의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함하는, 항체.
76)
실시 형태 1 내지 실시 형태 75 중 어느 하나에 있어서, 인간 항체 또는 인간화 항체인, 항체.
77)
실시 형태 76에 있어서, IgG4 또는 IgG1 동종형을 갖는, 항체.
78)
실시 형태 77에 있어서, 항체 Fc 내에 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개의 치환을 포함하는, 항체.
79)
실시 형태 77에 있어서,
a)
L234A, L235A, G237A, P238S, H268A, A330S 및 P331S 치환;
b)
V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S 및 P331S 치환;
c)
F234A, L235A, G237A, P238S 및 Q268A 치환;
d)
L234A, L235A 또는 L234A 및 L235A 치환;
e)
F234A, L235A 또는 F234A 및 L235A 치환; 또는
f)
V234A 치환을 포함하며, 여기서 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따르는, 항체.
80)
실시 형태 79에 있어서, S228P, F234A 및 L235A 치환을 포함하며, 여기서 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따르는, 항체.
81)
실시 형태 1 내지 실시 형태 80 중 어느 하나에 있어서, 이중특이성인, 항체.
82)
실시 형태 76에 있어서, PSMA에 특이적으로 결합하고, CD3, CD5, CD28, CD16, CD16A, CD25, CD38, CD44, CD56, CD69, CD94, CD335(NKp46), CD336,(NKp44), CD337(NKp30), NKp80, NKG2C 및 NKG2D, DNAM, NCRs, CD18, CD89, CD18, CD32, CD64, CD64 및 CD35에 특이적으로 결합하는, 항체.
83)
실시 형태 1 내지 실시 형태 82 중 어느 하나의 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
84)
실시 형태 15의 항체 VH, 실시 형태16의 항체 VL, 또는 실시 형태 15 및 실시 형태 16의 항체 VH 및 항체 VL을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.
85)
실시 형태 28 내지 실시 형태 75 중 어느 하나의 항체 VH, 항체 VL, 또는 항체 VH 및 항체 VL을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.
86)
실시 형태 84의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
87)
실시 형태 85의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
88)
실시 형태 86의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
89)
실시 형태 87의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
90)
실시 형태 1의 항체를 생성하는 방법으로서, 상기 항체가 발현되는 조건에서 실시 형태 89의 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 상기 숙주 세포에 의해 생성되는 상기 항체를 회수하는 단계를 포함하는, 방법.
91)
대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 실시 형태 1 내지 실시 형태 82 중 어느 하나의 단리된 항체의 치료적 유효량을 상기 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 상기 암의 치료를 필요로 하는 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
92)
실시 형태 91에 있어서, 상기 암은 고형 종양, 악성종양 또는 종양 신생혈관계인, 방법.
93)
실시 형태 92에 있어서, 상기 고형 종양은 전립선암 또는 결직장암, 위암, 투명 세포 신장 암종, 방광암, 폐암, 편평 세포 암종, 신경교종, 유방암, 신장암, 신생혈관성 장애, 투명 세포 신장 암종(CCRCC), 췌장암, 신세포암, 요로상피암 및 간에 대한 선암종인, 방법.
94)
실시 형태 93에 있어서, 상기 전립선암은 불응성 전립선암, 전립선 상피내 신생종, 안드로겐 비의존성 전립선암, 악성 전립선암인, 방법.
95)
실시 형태 90 내지 실시 형태 94 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체는 제2 치료제와 병용하여 투여되는, 방법.
96)
실시 형태 95에 있어서, 상기 제2 치료제는 상기 고형 종양 또는 악성종양 또는 종양 신생혈관계의 치료를 위한 표준 치료 약물인, 방법.
97)
실시 형태 96에 있어서, 상기 제2 치료제는 호르몬 억제제, 항미세소관제, 키나제 억제제, 면역조절제, 토포아이소머라제 억제제, 항대사제, 유사분열 억제제, 알킬화제, 안트라사이클린, 빈카 알칼로이드, 삽입제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 작용제, 아폽토시스를 촉진시키는 작용제, 프로테오좀 억제제 또는 방사선인, 방법.
98)
실시 형태 96에 있어서, 상기 제2 치료제는 백신인, 방법.
99)
실시 형태 98에 있어서, 상기 백신은 종양 세포 상에서 발현되는 폴리펩티드 또는 이의 단편, 또는 상기 폴리펩티드 또는 이의 단편을 인코딩하는 DNA 또는 RNA인, 방법.
100)
실시 형태 99에 있어서, 상기 폴리펩티드는 PSMA, 메소텔린, EGFR 또는 EGFRvIII인, 방법.
101)
실시 형태 95에 있어서, 상기 제2 치료제는 동시에, 순차적으로 또는 개별적으로 투여되는, 방법.
102)
실시 형태 91 내지 실시 형태 101 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체는 방사선 요법으로 치료되거나 치료 중인, 방법.
103)
실시 형태 91 내지 실시 형태 101 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체는 수술을 받았거나 받게 될, 방법.
104)
실시 형태 46 내지 실시 형태 58 중 어느 하나에 있어서, 상기 단리된 항체는 서열 번호 66의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함하는, 방법.
105)
실시 형태 1 내지 실시 형태 82 중 어느 하나에 있어서, 요법에 사용하기 위한, 항체.
106)
실시 형태 1 내지 실시 형태 82 중 어느 하나의 항체에 결합하는 항-이디오타입 항체.
107)
PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 항체로서, 상기 제1 도메인은
a)
각각 서열 번호 31, 42, 43, 11, 12 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
b)
각각 서열 번호 14, 15, 16, 17, 18 및 19의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
c)
각각 서열 번호 25, 26, 27, 28, 29 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
d)
각각 서열 번호 36, 37, 38, 39, 40 및 41의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
e)
각각 서열 번호 122, 123, 124, 23, 12, 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
f)
각각 서열 번호 8, 9, 10, 11, 12, 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
g)
각각 서열 번호 14, 15, 16, 17, 18, 및 19의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
h)
각각 서열 번호 20, 21, 22, 23, 12, 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
i)
각각 서열 번호 31, 32, 33, 34, 12, 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
j)
각각 서열 번호 31, 44, 45, 46, 29, 및 47의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
k)
각각 서열 번호 36, 37, 48, 49, 50, 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
l)
각각 서열 번호 53, 54, 55, 23, 12, 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
m)
각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
n)
각각 서열 번호 25, 130, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
o)
각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
p)
각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
q)
각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
r)
각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
s)
각각 서열 번호 25, 135, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
t)
각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
u)
각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
v)
각각 서열 번호 25, 134, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
w)
각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
x)
각각 서열 번호 25, 137, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 이중특이성 항체.
108)
실시 형태 107에 있어서, 상기 제1 도메인은
a)
각각 서열 번호 31, 42, 43, 11, 12 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 74의 VH 및 서열 번호 61의 VL;
b)
각각 서열 번호 14, 15, 16, 17, 18 및 19의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 62의 VH 및 서열 번호 63의 VL;
c)
각각 서열 번호 25, 26, 27, 28, 29 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 66의 VH 및 서열 번호 67의 VL;
d)
각각 서열 번호 36, 37, 38, 39, 40 및 41의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 72의 VH 및 서열 번호 73의 VL;
e)
각각 서열 번호 122, 123, 124, 23, 12, 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 160의 VH 및 서열 번호 65의 VL;
f)
각각 서열 번호 8, 9, 10, 11, 12, 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 60의 VH 및 서열 번호 61의 VL;
g)
각각 서열 번호 14, 15, 16, 17, 18, 및 19의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 62의 VH 및 서열 번호 63의 VL;
h)
각각 서열 번호 20, 21, 22, 23, 12, 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL;
i)
각각 서열 번호 31, 32, 33, 34, 12, 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 70의 VH 및 서열 번호 71의 VL;
j)
각각 서열 번호 31, 44, 45, 46, 29, 및 47의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 서열 번호 75의 VH 및 서열 번호 76의 VL;
k)
각각 서열 번호 36, 37, 48, 49, 50, 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 77의 VH 및 서열 번호 78의 VL;
l)
각각 서열 번호 53, 54, 55, 23, 12, 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 68의 VH 및 서열 번호 69의 VL;
m)
각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 67의 VL;
n)
각각 서열 번호 25, 130, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 142의 VL;
o)
각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 143의 VL;
p)
각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 167의 VL;
q)
각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 144의 VL;
r)
각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 167의 VL;
s)
각각 서열 번호 25, 135, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 142의 VL;
t)
각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 143의 VL;
u)
각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 144의 VL;
v)
각각 서열 번호 25, 134, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 142의 VL;
w)
각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 143의 VL; 또는
x)
각각 서열 번호 25, 137, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 141의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함하는, 이중특이성 항체.
109)
단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체로서, 제1 도메인 및 제2 도메인을 포함하며, 상기 제1 도메인은 (i) 재조합 판 트로글로디테스 PSMA를 발현하는 세포에 결합하며, 여기서 상기 세포에 대한 결합은 유세포측정에 의해 측정되고, (ii) 약 30 nM 이하의 친화도로 재조합 판 트로글로디테스 PSMA 세포외 도메인(서열 번호 4)에 결합하며, 여기서 상기 친화도는 PSMA에 특이적으로 결합하는 ProteOn 표면 플라즈몬 공명 검정에 의해 측정되고, 상기 제2 도메인은 CD3에 특이적으로 결합하는, 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체.
110)
실시 형태 109에 있어서,
a)
20 nM 이하의 계산된 EC50으로 LNCaP 세포에 결합하고, 40 nM 이하의 계산된 EC50으로 마카카 파시쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포에 결합하며, 여기서 LNCaP 세포에 대한 결합과 마카카 파시쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포에 대한 결합 사이의 계산된 EC50의 차이는 5배 미만이고, 상기 계산된 EC50은 유세포측정을 사용하여 0℃에서 전세포 결합 검정에서 측정되거나,
b)
12 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간(서열 번호 7), 판 트로글로디테스(서열 번호 4) 및 마카카 파시쿨라리스(서열 번호 5)로부터의 재조합 PSMA ECD에 결합하며, 여기서 상기 KD는 +25℃에서의 ProteOn 표면 플라즈몬 공명 검정 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정되거나,
c)
LNCaP 세포, C42 세포, 인간 PSMA-발현 HEK 세포 또는 마카카 파시쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포의 T-세포 매개 사멸을 디스플레이하며, 여기서 상기 T-세포 매개 사멸은 크롬-51에 의해 또는 카스파제 3/7 활성화 검정에 의해 측정되거나,
d)
인간 PSMA(서열 번호 3)의 잔기 I138, F235, P237, G238, D244, Y299, Y300, Q303, K304, E307, 및 K324-P326으로 구성되는 입체구조 에피토프를 인식하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
111)
실시 형태 109에 있어서, T-세포에 결합하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
112)
실시 형태 109에 있어서, 상기 제1 도메인은
a)
각각 서열 번호 14, 15 및 16의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 17, 18 및 19의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2 및 LCDR3;
b)
각각 서열 번호 20, 21 및 22의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 23, 12 및 24의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
c)
각각 서열 번호 25, 26 및 27의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 28, 29 및 30의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
d)
각각 서열 번호 31, 44 및 45의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 46, 29 및 47의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
e)
각각 서열 번호 31, 42 및 43의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 11, 12 및 13의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
f)
각각 서열 번호 122, 123 및 124의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 23, 12 및 24의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
113)
실시 형태 109에 있어서, 상기 제1 도메인은
a)
각각 서열 번호 14, 15 및 16;
b)
각각 서열 번호 20, 21 및 22;
c)
각각 서열 번호 25, 26 및 27;
d)
각각 서열 번호 31, 44 및 45;
e)
각각 서열 번호 31, 42 및 43; 또는
f)
각각 서열 번호 122, 123 및 124의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
114)
실시 형태 109에 있어서, 상기 제1 도메인은
a)
각각 서열 번호 17, 18 및 19;
b)
각각 서열 번호 23, 12 및 24;
c)
각각 서열 번호 28, 29 및 30;
d)
각각 서열 번호 46, 29 및 47;
e)
각각 서열 번호 11, 12 및 13; 또는
f)
각각 서열 번호 23, 12 및 24의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
115)
실시 형태 109에 있어서,
a)
상기 제1 도메인은 서열 번호 62의 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호 63의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함하거나;
b)
상기 제1 도메인은 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함하거나;
c)
상기 제1 도메인은 서열 번호 66의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함하거나;
d)
상기 제1 도메인은 서열 번호 75의 VH 및 서열 번호 76의 VL을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함하거나;
e)
상기 제1 도메인은 서열 번호 74의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함하거나;
f)
상기 제1 도메인은 서열 번호 160의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
116)
실시 형태 109에 있어서, 제1 중쇄(HC1), 제1 경쇄(LC1), 제2 중쇄(HC2) 및 제2 경쇄(LC2)를 포함하며, 상기 HC1 및 상기 LC1은
a)
각각 서열 번호 84 및 85;
b)
각각 서열 번호 86 및 87;
c)
각각 서열 번호 38, 88 및 89;
d)
각각 서열 번호 125 및 91;
e)
각각 서열 번호 94 및 95; 또는
f)
각각 서열 번호 96 및 83의 아미노산 서열을 포함하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
117)
실시 형태 116에 있어서, 상기 HC2 및 상기 LC2는 각각 서열 번호 110 및 111을 포함하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
118)
실시 형태 109에 있어서,
a)
각각 서열 번호 84, 85, 110 및 111;
b)
각각 서열 번호 86, 87, 110 및 111;
c)
각각 서열 번호 88, 89, 110, 111;
d)
각각 서열 번호 125, 91, 110 및 111;
e)
각각 서열 번호 94, 95, 110 및 111;
f)
각각 서열 번호 96, 83, 110 및 111의 HC1, LC1, HC2 및 LC2를 포함하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
119)
실시 형태 109 내지 실시 형태 118 중 어느 하나에 있어서, 인간 항체 또는 인간화 항체인, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
120)
실시 형태 119에 있어서, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 동종형을 갖는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
121)
실시 형태 120에 있어서, IgG1 또는 IgG4 동종형을 갖는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
122)
실시 형태 120 또는 실시 형태 121에 있어서, 항체 Fc 내에 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개의 치환을 갖는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
123)
실시 형태 121에 있어서,
a)
L234A, L235A, G237A, P238S, H268A, A330S 및 P331S 치환;
b)
V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S 및 P331S 치환;
c)
F234A, L235A, G237A, P238S 및 Q268A 치환;
d)
L234A, L235A 또는 L234A 및 L235A 치환;
e)
F234A, L235A 또는 F234A 및 L235A 치환;
f)
V234A 치환; 또는
g)
S228P, F234A 및 L235A 치환을 포함하며, 여기서 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따르는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
124)
실시 형태 109 내지 실시 형태 123 중 어느 하나에 있어서, 항체 CH3 불변 도메인 내에 적어도 하나의 치환을 포함하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
125)
실시 형태 124에 있어서, 상기 항체 CH3 불변 도메인 내의 상기 치환은 409R, F405L 또는 F405L/R409K 치환이며, 여기서 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따르는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
126)
실시 형태 124에 있어서,
a) 상기 HC1에서의 F405L 치환 및 상기 HC2에서의 409R 치환 - 여기서, 상기 항체는 IgG1 동종형을 가짐 -;b) 상기 HC1에서의 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, P331S 및 F405L 치환 및 상기 HC2에서의 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, P331S 및 409R 치환 - 여기서, 상기 항체는 IgG1 동종형을 가짐 -; 또는
b) 상기 HC1에서의 S228P 치환 및 상기 HC2에서의 S228P, F405L 및 R409K 치환 - 여기서, 상기 항체는 IgG4 동종형을 가짐 - 을 포함하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
127)
실시 형태 109 내지 실시 형태 126 중 어느 하나의 이중특이성 PSMA × CD3 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
128)
실시 형태 118의 이중특이성 PSMA × CD3 항체 HC1, LC1, HC2 또는 LC2를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.
129)
실시 형태 128의 HC1, LC1, HC2, LC2, HC1 및 LC1 또는 HC2 및 LC2를 인코딩하는 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
130)
실시 형태 129의 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포.
131)
실시 형태 118의 이중특이성 PSMA × CD3 항체를 생성하는 방법으로서, 상기 항체가 발현되는 조건에서 실시 형태 130의 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 상기 숙주 세포에 의해 생성되는 상기 이중특이성 PSMA × CD3 항체를 회수하고 정제하는 단계를 포함하는, 방법.
132)
실시 형태 118의 이중특이성 PSMA × CD3 항체를 생성하는 방법으로서,
a) 2개의 동일한 HC1 및 2개의 동일한 LC1을 갖는 단일특이성 2가 PSMA 항체와 2개의 동일한 HC2 및 2개의 동일한 LC2를 갖는 단일특이성 2가 CD3 항체를 약 1:1 몰비의 혼합물로 배합하는 단계;
b) 상기 혼합물 내로 환원제를 도입하는 단계;
c) 상기 혼합물을 약 90분 내지 약 6시간 동안 인큐베이션하는 단계;
d) 상기 환원제를 제거하는 단계; 및
e) 상기 HC1, 상기 LC1, 상기 HC2 및 상기 LC2를 포함하는 상기 이중특이성 PSMA × CD3 항체를 정제하는 단계를 포함하는, 방법.
133)
실시 형태 132에 있어서, 상기 환원제는 2-메르캅토에탄올아민(2-MEA)인, 방법.
134)
실시 형태 133에 있어서,
h)
상기 2-MEA는 약 25 mM 내지 약 75 mM의 농도로 존재하고;
i)
상기 인큐베이션하는 단계는 약 25 ℃ 내지 약 37℃의 온도에서 수행되는, 방법.
135)
대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 실시 형태 109 내지 실시 형태 126 중 어느 하나의 단리된 PSMA × CD3 이중특이성 항체의 치료적 유효량을 상기 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 상기 암의 치료를 필요로 하는 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
136)
실시 형태 135에 있어서, 상기 암은 고형 종양, 악성종양 또는 종양 신생혈관계인, 방법.
137)
실시 형태 136에 있어서, 상기 고형 종양은 전립선암 또는 결직장암, 위암, 투명 세포 신장 암종, 방광암, 폐암, 편평 세포 암종, 신경교종, 유방암, 신장암, 신생혈관성 장애, 투명 세포 신장 암종(CCRCC), 췌장암, 신세포암, 요로상피암 및 간에 대한 선암종인, 방법.
138)
실시 형태 137에 있어서, 상기 전립선암은 불응성 전립선암, 전립선 상피내 신생종, 안드로겐 비의존성 전립선암, 악성 전립선암인, 방법.
139)
실시 형태 135 내지 실시 형태 138 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체는 제2 치료제와 병용하여 투여되는, 방법.
140)
실시 형태 139에 있어서, 상기 제2 치료제는 상기 고형 종양 또는 악성종양 또는 종양 신생혈관계의 치료를 위한 표준 치료 약물(standard of care drug)인, 방법.
141)
실시 형태 139에 있어서, 상기 제2 치료제는 호르몬 억제제, 항미세소관제, 토포아이소머라제 억제제, 항대사제, 유사분열 억제제, 알킬화제, 안트라사이클린, 빈카 알칼로이드, 삽입제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 작용제, 아폽토시스를 촉진시키는 작용제, 프로테오좀 억제제 또는 방사선인, 방법.
142)
실시 형태 139에 있어서, 상기 제2 치료제는 백신인, 방법.
143)
실시 형태 142에 있어서, 상기 백신은 종양 세포 상에서 발현되는 폴리펩티드 또는 이의 단편, 또는 상기 폴리펩티드 또는 이의 단편을 인코딩하는 DNA 또는 RNA인, 방법.
144)
실시 형태 143에 있어서, 상기 폴리펩티드는 PSMA, 메소텔린, EGFR 또는 EGFRvIII인, 방법.
145)
실시 형태 139에 있어서, 상기 제2 치료제는 동시에, 순차적으로 또는 개별적으로 투여되는, 방법.
146)
실시 형태 135 내지 실시 형태 145 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체는 방사선 요법으로 치료되거나 치료 중인, 방법.
147)
실시 형태 135 내지 실시 형태 145 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체는 수술을 받았거나 받게 될, 방법.
148)
실시 형태 135 내지 실시 형태 145 중 어느 하나에 있어서, 상기 이중특이성 PSMA × CD3 항체의 제1 도메인은 서열 번호 66의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함하고, 상기 이중특이성 PSMA × CD3 항체의 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함하는, 방법.
149)
실시 형태 109 내지 실시 형태 126 중 어느 하나에 있어서, 요법에 사용하기 위한, 항체.
150)
실시 형태 109 내지 실시 형태 126 중 어느 하나의 항체에 결합하는 항-이디오타입 항체.
실시예 1: 재료
PSMA 세포주의 생성
표준 분자 생물학 기법을 사용하여 CMV 프로모터를 갖는 사내 발현 벡터를 사용하여 항-PSMA 선도항체(lead)를 평가하기 위한 스크리닝 툴로서 사용하기 위하여, 전장 침팬지 PSMA(H2Q3K5_PANTR, 서열 번호 1) 또는 전장 사이노몰거스 원숭이 PSMA(EHH56646.1, 서열 번호 2)를 제시하는 발현 벡터를 생성하였다. 표준 방법을 사용하여 벡터를 현탁 상태의 HEK293F 세포 내로 일시적으로 형질감염시켰다. 형질감염된 293F 현탁 세포를 성장 배지+ 혈청 중에서 플레이팅하여 부착성이 되게 하고 안정한 플라스미드 통합을 위하여 선택하였다. 단일 세포 집단을 연속 희석에 의해 선택하고, (1차 항체로서 PSMAL 항체(Center) 친화성 정제된 토끼 다중클론 항체(카탈로그 # OAAB02483, Aviva Systems Biology)와 함께, R-PE 항-토끼 2차 항체(카탈로그 # 111-116-144, Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.) 및 동종형 대조군으로서의 토끼 다중클론 IgG(카탈로그 # SC-532, Santa Cruz Biotechnology))를 사용하여 FACS에 의해 PSMA 표면 수용체 발현을 정량화하였다.
PSMA 양성 세포의 선택을 위하여 전장 인간 PSMA(FOLH1_HUMAN, 서열 번호 3) 및 푸로마이신을 함유하는 렌티바이러스(Genecopoeia, cat # EX-G0050-Lv105-10)를 사용하여 인간 PSMA-발현 세포주를 생성하였다. PSMA에 대해 음성인 HEK293F 세포(ATCC)에 렌티바이러스 입자를 형질도입하고 인간 PSMA를 과발현시켰다. 형질도입 후에, PSMA 및 저항성 마커를 양성으로 발현하는 세포를, 변동하는 농도의 푸로마이신(Life Technologies)이 보충된 DMEM + 10% HI FBS(Life Technologies) 중에서 성장된, 풀링된 세포를 처리함으로써 선택하였다.
HEK 생성된 세포주에 더하여, 파지 패닝(phage panning) 및 결합 및 세포 독성 검정을 위하여 몇몇 시판 세포주를 사용하였다. LNCaP 클론 FGC 세포(ATCC cat#CRL-1740)는 구매가능한 인간 전립선암 세포주이다. C4-2B 세포는 원래 MD Anderson에서 개발하였으며, 생체내에서 성장된 LNCaP FGC로부터 유래되고 골수로 전이된다(문헌[Thalmann, et al 1994, Cancer Research 54, 2577-81]).
가용성 PSMA ECD 단백질의 생성
표준 분자 생물학 기법을 사용하여 CMV 프로모터를 갖는 사내 발현 벡터를 사용하여 항-PSMA 선도항체를 패닝하고 평가하기 위하여, 재조합 침팬지 PSMA 세포외 도메인(ECD) 단백질(침프 PSMA ECD, 서열 번호 4)을 생성하였다. N-말단 신호 서열(서열 번호 56), N-말단 Avitag(서열 번호 57) 및 6-His 태그(서열 번호 58)를 갖는 침프 PSMA ECD 유전자 단편(서열 번호 1의 아미노산 44 내지 750)을 표준 분자 생물학 기법을 사용하여 CMV 프로모터를 갖는 사내 발현 벡터를 사용하여 클로닝하고, 293Expi 세포(Invitrogen) 중에서 일시적으로 발현시켰다. cDNA를 유전자 합성 기법을 사용하여 제조하였다(미국 특허 제6,670,127호; 미국 특허 제6,521,427호). 상층액을 수거하고 원심분리에 의해 청징화하였다. 단백질을 2-단계 정제 공정을 사용하여 정제하였다: 1) HisTrap HP 컬럼(GE Healthcare)에 의한 IMAC 정제, 및 2) 크기 배제 정제(Superdex 200, Ge Healthcare) - 여기서, 용리 완충액은 PSMA 이량체화를 안정화하기 위하여 0.5 mM ZnCl2를 함유하는 둘베코 인산염-완충 식염수, 칼슘, 마그네슘(Thermofisher, #14040)임. 관심 단백질을 함유하는 분획들을 풀링하고, 단백질 농도를 A280에 의해 결정하였다. 이 물질을 결합 및 친화도 측정에 사용하였으며, 이는 PSMG8로 지칭된다.
침프 PSMA ECD를 또한 패닝을 위해 비오티닐화하였다. 포유류 세포 내로 공동형질감염시켜 Avi 태그를 함유하는 단백질을 비오티닐화한 BirA 플라스미드를 사내에서 생성하였다. BirA 코딩 영역(서열 번호 59)을 마우스 IgG 중쇄(서열 번호 80)로부터의 신호 펩티드에 융합시키고, ER 보유 신호(KDEL(서열 번호 156으로 개시된 "KDEL"))를 C-말단에 부가하여 BirA(서열 번호 112)를 생성하였다. 작제된 유전자를 CMV 프로모터의 제어 하에서 발현 벡터 내로 클로닝하였다. 비오티닐화된 PSMA 항원을 생성하기 위하여, PSMA 플라스미드 DNA를 BirA 플라스미드에 4배 과량(w/w)으로 첨가하여 형질감염 믹스를 생성하였다.
침프 PSMA ECD 단백질의 비오티닐화를 BirA 발현 작제물의 공동형질감염에 의해 Avi 태그를 통해 수행하였으며, 생성된 분비 단백질을 2-단계 정제 공정을 사용하여 정제하였다: 1) HisTrap HP 컬럼(GE Healthcare)에 의한 IMAC 정제, 및 2) 크기 배제 정제(Superdex 200, Ge Healthcare) - 여기서, 용리 완충액은 PSMA 이량체화를 안정화하기 위하여 0.5 mM ZnCl2를 함유하는 둘베코 인산염-완충 식염수, 칼슘, 마그네슘(Thermofisher, #14040)임. 이 단백질을 파지 패닝 연구에 사용하기 전에 내독소에 대해 시험하였다.
N-말단 신호(서열 번호 56), N-말단 Avi-(서열 번호 57) 및 6His(서열 번호 58) 태그를 갖는 서열 번호 2의 아미노산 44 내지 750에 상응하는, 재조합 사이노몰거스 원숭이 PSMA 세포외 도메인(ECD) 단백질(사이노 PSMA ECD, 서열 번호 5)을 침프 PSMA ECD에 대해 앞서 기재된 바와 같이 클로닝하고 발현시켰다. 사이노 PSMA ECD 단백질의 비오티닐화를 BirA 발현 작제물의 공동형질감염에 의해 Avi 태그를 통해 수행하고, 생성된 분비 단백질을 IMAC HisTrap HP 컬럼(GE Healthcare) 및 MonoAvidin 컬럼을 사용하여 2-단계 정제로 정제하였다. 이 단백질을 파지 패닝 연구에 사용하기 전에 내독소에 대해 시험하였다. 이 물질을 또한 결합 및 친화도 측정에 사용하였으며, 이는 PSMG1로 지칭된다.
IgG1 Fc(서열 번호 81)를 갖는 제2 재조합 사이노 PSMA ECD 단백질(사이노 PSMA Fc, 서열 번호 6)을 표준 분자 생물학 기법을 사용하여 CMV 프로모터를 갖는 사내 발현 벡터를 사용하여 클로닝하고 발현시켰다. 사이노PSMA Fc 단백질을 293HEK-Expi 세포 중에서 일시적으로 발현시켰다. HEK293 Expi 세포 중에서의 PSMG3의 일시적 형질감염물을 형질감염 후 5일째에 수거하고, 원심분리(30분, 6000 rpm)에 의해 청징화하고, 여과하였다(0.2 μ PES 막, Corning). 폐배지(spent medium) 내로 스파이킹되는 정제된 기지의 IgG(동일한 동종형)를 사용하여 Octet 기기(ForteBio)에 의해 IgG의 상대량을 결정하여 표준 곡선을 작성하였다.
청징화된 사이노 PSMA Fc 상층액을 수지 ml당 약 30 mg 단백질의 상대 농도로, 평형화된(dPBS(pH 7.2)) HiTrap MabSelect Sure 단백질 A 컬럼(GE Healthcare) 상에 로딩하였다. 로딩 후에, 컬럼을 dPBS(pH 7.2)로 세척하고, 단백질을 0.1 M 소듐 아세테이트(pH 3.5)의 10 컬럼 부피로 용리시켰다. 피크 분획을 풀링하고, 2 M Tris(pH 7)로 중화시키고, 여과하였다(0.2 μ). 중화된 단백질 샘플을 4℃에서 하룻밤 Ca2+, Mg2+, 및 0.5 mM ZnCl2를 함유하는 dPBS(pH 7.2)의 3가지 변경에 대해 투석하였다. 다음날, 샘플을 투석으로부터 취출하고, 여과하고(0.2 μ), BioTek SynergyHTTM 분광광도계 상에서 280 nm에서의 흡광도에 의해 단백질 농도를 결정하였다. 정제된 단백질의 품질을 SDS-PAGE 및 분석용 크기 배제 HPLC(Dionex HPLC 시스템)에 의해 평가하였다. LAL 검정(Pyrotell-T, Associates of Cape Cod)을 사용하여 내독소 수준을 측정하였다. 정제된 단백질을 4℃에서 저장하였다.
N-말단 Avi- 및 6His(서열 번호 58) 태그를 갖는 서열 번호 3의 아미노산 44 내지 750에 상응하는, 재조합 인간 PSMA 세포외 도메인(ECD) 단백질(인간 PSMA ECD, 서열 번호 7)을 침프 및 사이노 PSMA ECD 단백질에 대해 앞서 기재된 바와 같이 클로닝하고, 발현시키고, 정제하였다.
실시예 2: 항-침프 및 항-인간 PSMA Fab의 확인
재조합 단백질에 의한 패닝. 4개의 인간 VL 생식세포계열 유전자(A27, B3, L6, O12) 라이브러리와 쌍을 이룬 VH1-69, 3-23 및 5-51 중쇄 라이브러리로 이루어진, 드 노보 인간 Fab-pIX 라이브러리(문헌[Shi, L., et al J Mol Biol, 2010. 397(2): p. 385-396]. 국제 특허 출원 공개 WO 2009/085462)의 제1 용액 패닝을, 제조자의 프로토콜에 따라 비오티닐화된 침프 PSMA ECD로 코팅된 스트렙타비딘 비드(Invitrogen Cat# 112.05D, Lot# 62992920) 상에의 1 라운드의 파지 포획과 함께 교대 패닝 접근법을 사용하여 수행한 후, 제조자의 프로토콜에 따라 사이노-PSMA-Fc로 코팅된 ProtG 비드(Invitrogen, Cat#10003D) 상에 파지 포획하고, 이어서 제조자의 프로토콜에 따라 비오티닐화된 침프 PSMA ECD로 코팅된 Sera-mag Double Speed 자성 뉴트라비딘 비드(Thermo, Cat #7815-2104-011150) 상에 파지 포획하였다. 이러한 패닝은 다음 2개의 히트를 산출하였다: PSMB18 및 PSMB25.
항-PSMA Fab에 대한 전세포 패닝. 전술된 침팬지 ECD 패닝 실험으로부터의 라운드 #1 산출물 또는 신선한 드 노보 파지 라이브러리를 투입물로서 사용하여 전세포에 대해 추가적인 패닝 실험을 수행하였다. 간략하게 말하면, 헬퍼 파지 감염에 의해 파지를 생성하고, 당업계에 알려진 표준 프로토콜에 따라 PEG/NaCl 침전에 의해 농축시켰다. 파지 라이브러리를 온화하게 흔들면서 4 ℃에서 하룻밤 형질감염되지 않은 모 HEK293F 세포 상에서 미리 클리어하였다(pre-cleared). PEG/NaCl 침전 후에, 미리 클리어된 라이브러리를 4 ℃에서 2시간 동안 온화하게 흔들면서 HEK293 세포 또는 LNCaP 세포를 발현하는 침프 PSMA와 함께 인큐베이션하였다. 결합되지 않은 파지의 제거 및 파지-결합된 세포의 회수를 피콜(Ficoll) 구배에 의해 수행하고, 수 회의 세척 단계 후에, 결합된 파지를 지닌 세포를 교반 없이 37 ℃에서 30분 동안 1 mL의 TG-1 E. 콜라이 배양물과 함께 인큐베이션하였다. 생성된 혼합물을 LB-카르베니실린-1% 글루코스 플레이트 상에서 플레이팅하고, 37 ℃에서 하룻밤 성장시켰다. 이어서, 이 과정을 후속 패닝 라운드에 대해 반복하였다.
E. 콜라이 상층액을 생성하기 위하여 파지 Fab-pIX의 Fab-His로의 전환 생성된 파지 Fab-pIX 히트를 표준 절차를 사용하여 Fab-His로 전환시켰다. 플라스미드 DNA를 파지 패닝된 E. 콜라이(Plasmid Plus Maxi Kit, Qiagen cat#12963)로부터 단리하고, NheI/SpeI 제한 분해를 거쳤다. 생성된 5400 bp 및 100 bp 단편을 0.8% 아가로스 겔 상에서 분리하고, 5400 bp 단편을 겔 정제하였다(MinElute PCR 정제 키트, Qiagen cat#28006). 정제된 5400 bp 밴드를 T4 리가제를 사용하여 자가-라이게이션하고, (Fab-His 융합체를 인코딩하는) 얻어진 생성물을 다시 TG-1 E. 콜라이 균주 내로 형질전환시키고 클론 단리하였다. 1 mM IPTG를 사용하여 배양물을 하룻밤 유도함으로써 클론으로부터 Fab-His 상층액을 생성하였다. 하룻밤 배양물의 원심분리 후에, 청징화된 상층액은 하류 검정에서 사용할 준비가 되었다. 상이한 Fab-His 상층액들의 상대 발현 수준을 결정하기 위하여, 연속 희석된 상층액에 대한 항-카파(Southern Biotech cat# 2061-05) ELISA를 수행하였다. 시험된 클론 모두는 유사한 Fab-His 발현을 나타내었다(데이터는 나타내지 않음).
E. 콜라이로부터의 Fab-His 융합체의 세포 결합. 세포-기반 결합 검정을 설계하여, E. 콜라이 상층액으로부터의 개별 Fab-His 융합체의 PSMA-발현 세포에 대한 결합 능력을 평가하였다. 개별 Fab 클론을 pIX 절제 후 모든 패닝 실험의 라운드 3 산출물로부터 단리하였다. Fab 클론을 침프 및 사이노 PSMA-발현 HEK 세포에 대한 결합뿐만 아니라 LNCaP 세포 상의 인간 PSMA에 대한 결합에 대해서도 시험하였다. 간략하게 말하면, PSMA-발현 세포를 웰당 200,000개의 밀도로 V자형 바닥 플레이트(CoStar 3357) 내로 분취하고, Fab 단편을 발현하는 (100 μl) 상층액과 함께 얼음 상에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 2% FBS를 함유하는 PBS로 2회 세척하고, 마우스 항-인간 카파-RPE 항체(Life Technologies cat# MH10514)로 얼음 상에서 1시간 동안 염색하였다. 세포를 2% FBS를 함유하는 PBS로 2회 세척하고, 100 μL의 동일한 세척 완충액 중에 재현탁하였다. 플레이트를 BD FACS 어레이 유세포측정기 상에서 판독하였다. 전방 산란 및 측방 산란을 사용하여 건강한 세포 집단을 라이브 게이팅(live gating)하고, 이어서 PE 염색에 대해 이 게이트 내의 세포를 분석함으로써, FACS 데이터를 FlowJo 소프트웨어로 분석하였다. 평균 형광 강도(MFI)를 계산하고 Microsoft Excel로 내보내기하였다. PSMA의 3가지 종 모두(사이노, 침프 및 인간)에 대해 백그라운드의 3배 이상의 결합을 나타내고, HEK293 세포주에 대해 결합을 나타내지 않은 Fab 클론을 "예비 양성"으로 표기하였다. Fab를 서열분석하고, 재스크리닝을 위하여 포유류 발현 벡터 내로의 클로닝을 위해 전진시켰다. 진정한 양성물을 포유류 세포-발현된 Fab 상층액의 PSMA-발현 세포주에 대한 결합으로부터 선택하였다.
포유류 Fab의 제조. E. 콜라이 Fab의 포유류-발현된 Fab로의 전환을 위하여, In-Fusion HD 클로닝(ClonTech cat#638918)을 제조자의 프로토콜에 따라 이용하였다. 간략하게 말하면, 1차 스크리닝을 통과하였고 포유류 Fab 포맷 내로 이동시키고자 하는 클론의 뉴클레오티드 서열을 "InFu Primer Finder v1.2.3" 프로그램(사내 개발된 소프트웨어) 내로 로딩하는데, 이 프로그램은 huKappa_muIgGSP 및 huG1 Fab 발현 벡터 내로의 In-Fusion 클로닝을 위한 PCR 단편을 생성하는 데 사용되는 동종형-특이적 PCR 프라이머의 목록을 생성한다. 이들 벡터는 pcDNA3.1에 기반한 CMV 프로모터를 갖는 사내 벡터이다. In-Fusion 과정 후에, E. 콜라이 클론을 단리하고, 서열을 검증하고 표준 프로토콜을 사용하여 HEK293 세포 내로 형질감염시켰다. PSMA-발현 세포주에 대한 결합을 확인하기 위한 포유류 PSMA Fab를 형질감염으로부터 5일 후에 20 ml의 상층액을 수거함으로써 준비하였다.
포유류 상층액 포맷에서의 전세포 패닝으로부터의 히트의 재스크리닝. 포유류-발현된 Fab 상층액의 확인을 앞서 기재된 전세포 결합 검정을 사용하여 수행하였다. 침팬지, 사이노몰거스 원숭이 및 인간 PSMA(LNCaP 세포)에 대한 Fab의 결합을 시험하였으며, 이뿐만 아니라 모 HEK 세포주에 대한 무결합에 대한 역스크리닝(counter screening)도 시험하였다. 표 3은 PSMA-발현 세포에 대한 포유류 Fab 상층액 결합의 히트 프로파일을 나타낸다. E. 콜라이 상층액으로부터의 다수의 히트는 포유류-발현된 단백질에 대해서는 확인되지 않았다. PSMB47은 사이노 PSMA-발현 세포에 대해서는 높은 결합을 그리고 침프 PSMA-발현 세포에 대해서는 약간의 결합을 나타내었지만, 인간 PSMA를 발현하는 LNCaP 세포에는 결합하지 않았다. PSMB55는 유사한 프로파일을 나타내었지만, LNCaP 세포에 대한 약간의 결합을 나타내었다. PSMB68 내지 PSMB79는 LNCaP 세포에는 결합되었지만, 침프 또는 사이노 PSMA-발현 세포에는 결합되지 않았다. 포유류 Fab 상층액 PSMB51, PSMB55 및 PSMB56은 3개의 세포주 모두에 결합하였다. PSMB49, PSMB50, 및 PSMB53은 더 많은 침프 또는 사이노 결합을 나타낸다. M58은 약간의 침프 및 사이노 결합을 나타내었다.
[표 3]
포유류-발현된 Fab의 용량 반응 곡선 일단 포유류-발현된 Fab 클론이 원상태의(neat) Fab 상층액으로서 PSMA-발현 세포주에 대한 양성 결합에 대해 확인되었다면, 상층액을 단백질 농도에 대해 Octet 또는 단백질 겔에 의해 정규화하고, 용량-반응 곡선을 완성하여, 앞서 기재된 프로토콜을 사용하여 PSMA 결합을 확인하였다. 도 1 내지 도 3은 히트에 대한 적정 곡선을 나타내는데, 이들은 3개의 PSMA-발현 세포 모두에 대한 결합을 입증하였다. 도 1은 LNCaP 세포에 대한 항-PSMA 패닝 히트에 대한 적정 곡선을 나타낸다. 도 2는 침프-PSMA HEK 세포에 대한 항-PSMA 패닝 히트에 대한 적정 곡선을 나타낸다. 도 3은 사이노-PSMA HEK 세포에 대한 항-PSMA 패닝 히트에 대한 적정 곡선을 나타낸다. PSMG5(사이노 PSMA, GenBank: EHH56646.1) 또는 PSMG9(침프 PSMA, NCBI 참조 서열: XP_016777253.1)를 세포주 생성을 위하여 CMV 프로모터의 제어 하에서 포유류 발현 벡터 내로 HindII 부위와 EcoRI 부위 사이에 클로닝하였다. 조작된 DNA를 리포펙타민 LTX 시약을 사용하여 293F 세포 내로 형질감염시킨 후, 게네티신 선택을 수행하여 PSMA(PSMG5 또는 PSMG9) 양성 세포를 선택하였다. 선택 후에, FACS를 사용하여 항-PSMA 항체(Aviva Cat # OAAB02483-PSMG9) 또는 항-PSMA Fab(PSMB18-Janssen Internal)를 사용하여 세포를 스크리닝하고 분류하였다. FACS 분류된 PSMG5 클론 11, 23, 25 및 32, 및 PSMG9 클론 2, 10, 11, 12, 20 및 24를 선택하고 스크리닝을 위해 핸드오프하였다. PSMG5 및 PSMG9 서열이 하기에 제공되어 있다. 히트들 사이의 결합 프로파일을 상이한 종의 PSMA를 발현하는 세포주에 걸쳐 비교하였다. PSMB51 상층액을 실험에 걸쳐 양성 대조군으로서 사용하였다. CDR 내의 N-연결 글리코실화 부위, PSMA 음성 모 HEK 세포주에 대한 결합, 또는 PSMA 양성 세포주에 대한 결합의 결여로 인해 몇몇 히트의 우선순위를 낮추었다. 11개의 Fab 히트를 유지하고, 10개의 히트를 인간 IgG4-PAA 중쇄 작제물 내로 클로닝하고, 이를 사용하여 PSMAxCD3 이중특이성 항체를 생성하였다. 이들 히트는 서로 3배 이내의 이종간 결합을 나타내었으며, PSMA 양성 표적의 T 세포 재유도 사멸에 대해 시험하려는 이중특이성 항체 포맷 내로 이동시켰다. 각각의 히트에 대한 패닝 항원이 표 4에 나타나 있다.
PSMG5 (서열 번호 126)
MWNLLHETDSAVATARRPRWLCAGALVLAGGFFLLGFLFGWFIKSSSEATNITPKHNMKAFLDELKAENIKKFLHNFTQIPHLAGTEQNFQLAKQIQSQWKEFGLDSVELTHYDVLLSYPNKTHPNYISIINEDGNEIFNTSLFEPPPAGYENVSDIVPPFSAFSPQGMPEGDLVYVNYARTEDFFKLERDMKINCSGKIVIARYGKVFRGNKVKNAQLAGATGVILYSDPDDYFAPGVKSYPDGWNLPGGGVQRGNILNLNGAGDPLTPGYPANEYAYRRGMAEAVGLPSIPVHPIGYYDAQKLLEKMGGSASPDSSWRGSLKVPYNVGPGFTGNFSTQKVKMHIHSTSEVTRIYNVIGTLRGAVEPDRYVILGGHRDSWVFGGIDPQSGAAVVHEIVRSFGMLKKEGWRPRRTILFASWDAEEFGLLGSTEWAEENSRLLQERGVAYINADSSIEGNYTLRVDCTPLMYSLVYNLTKELESPDEGFEGKSLYESWTKKSPSPEFSGMPRISKLGSGNDFEVFFQRLGIASGRARYTKNWETNKFSSYPLYHSVYETYELVEKFYDPMFKYHLTVAQVRGGMVFELANSVVLPFDCRDYAVVLRKYADKIYNISMKHPQEMKTYSVSFDSLFSAVKNFTEIASKFSERLRDFDKSNPILLRMMNDQLMFLERAFIDPLGLPDRPFYRHVIYAPSSHNKYAGESFPGIYDALFDIESKVDPSQAWGEVKRQISIATFTVQAAAETLSEVA
PSMG9 (서열 번호 127)
MWNLLHETDSAVATARRPRWLCAGALVLAGGFFLLGFLFGWFIKSSNEATNITPKHNMKAFLDELKAENIKKFLYNFTQIPHLAGTEQNFQLAKQIQSQWKEFGLDSVELAHYDVLLSYPNKTHPNYISIINEDGNEIFNTSLFEPPPPGYENVLDIVPPFSAFSPQGMPEGDLVYVNYARTEDFFKLERDMKINCSGKIVIARYGKVFRGNKVKNAQLAGAKGVILYSDPADYFAPGVKSYPDGWNLPGGGVQRGNILNLNGAGDPLTPGYPANEYAYRHGIAEAVGLPSIPVHPIGYYDAQKLLEKMGGSAPPDSSWRGSLKVPYNVGPGFTGNFSTQKVKMHIHSTNEVTRIYNVIGTLRGAVEPDRYVILGGHRDSWVFGGIDPQSGAAVVHEIVRSFGTLKKEGWRPRRTILFASWDAEEFGLLGSTEWAEENSRLLQERGVAYINADSSIEGNYTLRVDCTPLMYSLVYNLTKELKSPDEGFEGKSLYESWTKKSPSPEFSGMPRISKLGSGNDFEVFFQRLGIASGRARYTKNWETNKFSGYPLYHSVYETYELVEKFYDPMFKYHLTVAQVRGGMVFELANSIVLPFDCRDYAVVLRKYADKIYNISMKHPQEMKTYSVSFDSLFSAVKNFTEIASKFTERLQDFDKSNPILLRMMNDQLMFLERAFIDPLGLPDRPFYRHVIYAPSSHNKYAGESFPGIYDALFDIESKVDPSKAWGDVKRQISVAAFTVQAAAETLSEVA
[표 4]
항-PSMA mAb의 제조. 3개의 모든 PSMA-발현 세포에 대한 결합을 입증한 총 12개의 클론을 제한 클로닝에 의해 Fc 치환 S228P, F234A, 및 L235A(PAA) 동종형을 갖는 mAb IgG4로 궁극적으로 전환시켰다. 간략하게 말하면, 초기 스크리닝을 통과한 Fab 클론에 상응하는 작제물을 HindIII 및 ApaI를 사용하여 분해하였다. 겔 정제된 단편을 인간 IgG4-PAA 발현의 생성을 위하여 CMV 프로모터를 갖는 사내 발현 벡터 내로 라이게이션하였다. 이는 이중특이성 항체의 신속한 생성을 가능하게 하였다.앞서 기재된 사내 발현 벡터를 사용하여 각각의 PSMA mAb에 대한 중쇄 및 경쇄를 발현시켰는데, 여기서는 두 벡터 모두를 mAb의 발현을 위하여 293Expi 또는 CHO 세포주 내로 일시적으로 공동형질감염시켰다. 파지 패닝으로부터 생성된 이종간 양성 PSMA Fab의 CDR 서열이 하기 표 5에 나타나 있다. 선택된 Fab들의 VH 및 VL 서열이 하기 표 6에 나타나 있다. 이들 Fab로부터 생성된 mAb의 중쇄 및 경쇄 서열이 표 7에 나타나 있다.
[표 5]
서열 번호 79의 VH 및 서열 번호 78의 VL을 갖는 VH 및 VL 영역 및 S228P, F234A 및 L235A 치환을 갖는 IgG4 불변 영역을 포함하는 단일특이성 항-PSMA 항체 PSMB119를 생성하였다. 서열 번호 77의 VH 및 서열 번호 78의 VL을 갖는 VH 및 VL 영역 및 S228P, F234A 및 L235A 치환을 갖는 IgG4 불변 영역을 포함하는 단일특이성 항-PSMA 항체 PSMB120을 생성하였다. 서열 번호 75의 VH 및 서열 번호 76의 VL을 갖는 VH 및 VL 영역 및 S228P, F234A 및 L235A 치환을 갖는 IgG4 불변 영역을 포함하는 단일특이성 항-PSMA 항체 PSMB121을 생성하였다. 서열 번호 74의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 갖는 VH 및 VL 영역 및 S228P, F234A 및 L235A 치환을 갖는 IgG4 불변 영역을 포함하는 단일특이성 항-PSMA 항체 PSMB122를 생성하였다. 서열 번호 72의 VH 및 서열 번호 73의 VL을 갖는 VH 및 VL 영역 및 S228P, F234A 및 L235A 치환을 갖는 IgG4 불변 영역을 포함하는 단일특이성 항-PSMA 항체 PSMB123을 생성하였다. 서열 번호 70의 VH 및 서열 번호 71의 VL을 갖는 VH 및 VL 영역 및 S228P, F234A 및 L235A 치환을 갖는 IgG4 불변 영역을 포함하는 단일특이성 항-PSMA 항체 PSMB124를 생성하였다. 서열 번호 68의 VH 및 서열 번호 69의 VL을 갖는 VH 및 VL 영역 및 S228P, F234A 및 L235A 치환을 갖는 IgG4 불변 영역을 포함하는 단일특이성 항-PSMA 항체 PSMB126을 생성하였다. 서열 번호 66의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 갖는 VH 및 VL 영역 및 S228P, F234A 및 L235A 치환을 갖는 IgG4 불변 영역을 포함하는 단일특이성 항-PSMA 항체 PSMB127을 생성하였다. 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 갖는 VH 및 VL 영역 및 S228P, F234A 및 L235A 치환을 갖는 IgG4 불변 영역을 포함하는 단일특이성 항-PSMA 항체 PSMB128(Alt. Fab ID: PSMB84)을 생성하였다. 서열 번호 60의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 갖는 VH 및 VL 영역 및 S228P, F234A 및 L235A 치환을 갖는 IgG4 불변 영역을 포함하는 단일특이성 항-PSMA 항체 PSMB129를 생성하였다. 서열 번호 62의 VH 및 서열 번호 63의 VL을 갖는 VH 및 VL 영역 및 S228P, F234A 및 L235A 치환을 갖는 IgG4 불변 영역을 포함하는 단일특이성 항-PSMA 항체 PSMB130을 생성하였다.
[표 6]
[표 7]
모 PSMA mAb PSMB123(Fab PSMB55), PSMB127(Fab PSMB83), 및 PSMB130(Fab PSMB86)과 인간, 침프, 및 사이노 PSMA ECD의 상호작용을 재조합 침프 PSMA ECD에 대해 앞서 기재된 바와 같이 ProteOn XPR36 시스템(BioRad)을 사용하여 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 측정하였다. 인간, 침프, 및 사이노 PSMA ECD에 대한 이들 각각의 mAb에 대한 결합 친화도의 요약이 표 18에 나타나 있다. 이들 mAb는 이중특이성 항체와 유사한 친화도로 표적에 결합한다.
[표 18]
실시예 3: 항-CD3 항체 SP34의 인간 프레임워크 적응화
항-CD3 뮤린 항체 SP34를 인간 프레임워크 적응화 방법에 의해 인간화하였다(문헌[Fransson, et al, JMB, 2010 398(2):214-31]). SP34의 VH 및 VH 서열이 하기 및 도 4에 나타나 있으며, 여기서 경쇄의 잔기 1 내지 215 및 중쇄의 잔기 1 내지 230은 전자 밀도 맵으로부터 직접 도출되고, 잔기 231 내지 455는 IGHG3_MOUSE(마우스 IgG3, 아이소형 2)로부터 도출되었다.
SP34의 VH (서열 번호 128)
EVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA
SP34의 VL (서열 번호 129)
QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL
4개의 상이한 중쇄를 3개의 상이한 경쇄와 조합하여 12개의 인간화 변이체를 생성하였다.
SP34 인간화 및 친화성 성숙
인간 생식세포계열의 선택
4개의 인간 중쇄 및 3개의 경쇄 가변 영역 서열의 매트릭스를 시험을 위하여 선택하였다. 인간 생식세포계열의 선택은 프레임워크 영역(FR)에서의 SP34와의 전체 서열 유사성에만 오로지 기초하였다. CDR 서열도, 그의 길이 또는 표준 구조도 이들 어느 것도 이 선택에서는 고려하지 않았다.
중쇄에 대한 가장 근접한 매치는 인간 GL IGHV3-72 및 IGHV3-73이다. 다른 GL, IGHV3-23을, 인간 B-세포 레퍼토리에서의 그의 높은 발생 빈도로 인해 선택하였다.
경쇄에 대한 가장 근접한 매치는 인간 람다 GL IGLV7-43(별칭 7a), IGLV7-46(별칭 7b) 및 IGLV1-51(별칭 1b)이다. IGLV7-46은 IGLV7-43과 실질적으로 동일하지만, 위치 2에 있는 Ala의 이점을 갖는데, 즉 이는 SP34에서와 같다.
선택된 J-영역은 하기와 같다: 중쇄에 대해서는 IGHJ1; 람다 경쇄에 대해서는 IGLJ3.
복귀 돌연변이
CDR-H3의 입체구조를 보존하기 위하여, VL 내의 몇몇 프레임워크 위치, 가장 특히는 위치 Val38, Gly48 및 Gly51에서의 잔기는 유지되어야 한다. 이러한 '복귀 돌연변이'를 인간화 계획에 추가하였다.
중쇄의 위치 57의 Asn을 돌연변이 계획에서 Gly까지 절두하여, 필요한 융통성을 가능하게 하고, 결합에 영향을 미치지 않으면서 (비-글리신 관련 국소 구조적 변형을 감소시킴으로써) 안정성을 잠재적으로 개선하였다.
인간화 설계에서는 고려해야 할 몇몇 다른 사항이 있었다. 먼저, 인간 GL IGLV7-46 및 IGLV7-43은 원치 않는 산화 잠재성을 가지면서 위치 59에 Trp을 도입한다. 2개의 다른 GL들은 이 위치에 Gly를 갖는데, 이는 마우스 서열에 상응한다. 따라서, Gly59를 IGLV7-46 및 IGLV7-43 변이체 둘 모두에서 보존하였다. 마지막으로, VH의 위치 49에 있는 Ala은 본질적일 수 있다. 또한, 위치 99에 있는 잔기(SP34에서의 Val)는 항원 결합에 영향을 미칠 수 있다. 이들 위치를 시험하기 위하여, 일부 변이체에 복귀 돌연변이를 도입하였다(도 5).
HFA 매트릭스
HFA 매트릭스(표 8)는 4개의 VH 변이체 및 3개의 VL 변이체로 구성된다(도 5). HFA의 목적을 위하여, AbM CDR 정의(문헌[K.R. Abhinandan and A. C. Martin, 2008. Mol. Immunol. 45, 3832-3839])가 사용된다.
VH에 대한 변이체:
CD3H141(서열 번호 104): 마우스 CDR + Gly49Ala을 갖는 IGHV3-72*01
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYAASVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCARHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
CD3H142(서열 번호 102): 마우스 CDR + Ser49Ala을 갖는 IGHV3-23*01
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
CD3H143(서열 번호 115): 마우스 CDR + Ser49Ala, Ala99Val을 갖는 IGHV3-23*01
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
CD3H144(서열 번호 116): 마우스 CDR + Asn57Gly를 갖는 IGHV3-73*01
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQASGKGLEWVGRIRSKYNGYATYYAASVKGRFTISRDDSKNTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
VL에 대한 변이체:
CD3L63(서열 번호 103): 마우스 CDR + F38V, A48G, Y51G, W59G를 갖는 IGLV7-46*01
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGAQPEDEAEYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVL
CD3L64(서열 번호 117): 마우스 CDR + Y38V, L48G, Y51G를 갖는 IGLV1-51*01
QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCRSSTGAVTTSNYANWVQQLPGTAPKGLIGGTNKRAPGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVL
CD3L66(서열 번호 105): 마우스 CDR + F38V, A48G, Y51G, W59G를 갖는 IGLV7-43*01
QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVL
[표 8]
(모두 L234A, L235A, 및 F405L을 함유하는 IgG1-AA Fc를 사용하여 제조함)
아미노산 서열을 DNA로 역번역하고, cDNA를 유전자 합성 기법을 사용하여 제조하였다(미국 특허 제6,670,127호; 미국 특허 제6,521,427호). 표준 분자 생물학 기법을 사용하여 CMV 프로모터를 갖는 사내 발현 벡터를 사용하여 L234A, L235A, 및 F405L 돌연변이를 함유하는 인간 IgG1-AA Fc 상에 중쇄(HC) 가변 영역을 하위클로닝하였다. 표준 분자 생물학 기법을 사용하여 CMV 프로모터를 갖는 사내 발현 벡터를 사용하여 인간 람다(λ) 불변 영역 상에 경쇄(LC) 가변 영역을 하위클로닝하였다. 생성된 플라스미드를 Expi293F 세포(Invitrogen) 내로 형질감염시키고, mAb를 발현시켰다. 단백질 A 컬럼(HiTrap MabSelect SuRe 컬럼)을 사용하여 표준 방법에 의해 정제하였다. 용출 후, 풀들을 D-PBS(pH 7.2) 내로 투석하였다. 항체의 VH 및 VL 서열이 표 9에 나타나 있다.
[표 9]
실시예 4: 1차 T 세포에 대한 인간화 항-CD3 히트들의 내인성 세포 결합
항-CD3 항체들의 생성된 패널을 1차 인간 T 세포 상의 세포-표면 CD3ε에 대한 결합에 대해 시험하였다. 이렇게 하기 위하여, 발현 상층액으로부터의 항체의 결합을 다중클론 항-인간 2차 항체를 사용하여 시각화하고 유세포측정에 의해 분석하였다. 간략하게 말하면, 음성 선택에 의해 정제된 1차 인간 T 림프구(미국 콜마 소재의 Biological Specialty)를 사용하여 유세포측정에 의해 세포-표면 CD3ε에 대한 항-CD3 항체의 결합을 평가하였다. 발현 상층액 또는 정제된 항체를 각각 배지 또는 FACS 완충액(BD BioSciences) 중에 10 ㎍/ml로 정규화하였다. 2x105개 세포를 표지화를 위하여 96웰 둥근바닥 플레이트(CoStar)의 웰 내로 분취하였다. 발현 상층액 중의 항체를 세포에 첨가하고, 4℃에서 45분 동안 인큐베이션하였다. 3분 동안 1300 rpm으로 원심분리하고 상층액을 제거한 후에, 50 μL의 항-인간 IgG (H+L) Alexa Fluor 647 2차 항체(Life technologies Inc.)를 직사광선을 피해서 4℃에서 30분 동안 10 ㎍/mL의 최종 농도로 세포와 인큐베이션하였다. 세척 후에, 30 μL의 FACS 완충액(BD BioSciences) 중에 재현탁하였다. ForeCyt 소프트웨어를 사용하여 Intellicyt HTFC 시스템 상에서 샘플 수집을 수행하였다. 녹색 또는 적색 고정가능 Llive/Dead 염료(Life Technologies Inc.) 및 전방/측방 산란(forward/side scatter) 면적 및 높이 파라미터를 각각 사용하여, 결합의 분석 전에 생존 단세포를 게이팅하였다. 평균 형광 강도 값을 사용하여 GraphPad Prism 버전 5에서 그래프를 생성하였다.
적정 시리즈를 실시하였지만, 명확함을 위하여 중간 농도가 도 6에 제시되어 있다. 치료적 항체와 동일한 Fc 영역을 갖는 하기의 2개의 사내 파지-유래 항체를 대조군으로서 사용하였다: 비-사이노 교차-반응성, 효능 항체인 G11(HC 서열 번호 118, LC 서열 번호 119)을 양성 대조군으로서 사용하고, 비-결합제/비-효능 항체인 CD3B94(HC - 서열 번호 120, LC - 서열 번호 121)를 비특이적 결합을 평가하기 위해 사용하였다. 시판 SP34 항체는 이 검정에서 비교물로서 사용하지 않았는데, 이것은 마우스 항체이고 상이한 2차 검출 시약의 사용은 시험되는 변이체들과의 직접 비교를 불가능하게 할 것이기 때문이다.
데이터는 인간화 항-CD3 히트들의 패널에서의 다수의 결합능을 입증하는데, 이때 2개의 항체(CD3B144, CD3B152)는 인간 T 세포에 대한 결합의 완전한 손실을 보여준다. 나머지 항체들은 임의적인 역치로서의 G11 결합을 사용하여 강한 결합제 및 약한 결합제로 광범위하게 분리될 수 있는 일정 범위의 결합능을 보여주었다. 이들 파라미터를 사용하여, 7개의 강한 결합제 및 7개의 약한 결합제를 변이체들의 패널로부터 확인하였다(도 6).
이어서, 교차-반응성의 보유를 평가하기 위해 1차 사이노몰거스 CD4+ T 세포에 대한 항-CD3 히트들의 결합 분석을 시험하였다. 사이노몰거스 원숭이(미국 트라이앵글 리서치 파크 소재의 Zen Bio)의 말초 혈액으로부터의 정제된 CD4+ T 세포를 사용하였다. 검정 프로토콜은 전술된 것들과 유사하였다. G11은 사이노몰거스 CD3ε과 교차-반응하지 않기 때문에, 인간 IgG1 Fc 및 뮤린 프레임워크와 함께 SP34의 VH 및 VL을 갖는, 사내 키메라 SP34-유래 항체인 CD3B124를 이 검정에서 양성 대조군으로서 사용하였다(도 7). 흥미롭게도, 몇몇 변이체는 인간 세포에 대해 관찰된 것과 비교하여 감소된 결합능을 보여주었다. 이는 강한 결합제 CD3B150, CD3B151 및 CD3B154 - 여기서는, 결합이 감소되었음 - 및 몇몇 약한 결합제 - 여기서는, 백그라운드에 비하여 결합이 더 이상 검출될 수 없었음 - 를 포함하였다. 이러한 결합 손실은 특정 면역글로불린 쇄에 관련되지 않았는데, 이는 중쇄 및 경쇄의 조합이 교차-반응성의 손실에서 역할을 하였음을 시사한다. 이와 함께, 이들 검정은 인간 CD3ε과 사이노몰거스 CD3ε 사이에 종 교차-반응성이 유지된 변이체의 확인을 가능하게 하였다.
실시예 5: 1차 T 세포에서의 인간화 항-CD3 히트들의 기능 분석
결합 분석은 인간화 항-CD3 히트들의 패널이 인간 및 사이노몰거스 T-세포에 대한 광범위한 결합능을 보여줌을 입증하였다. 각각의 변이체가 CD3ε 가교결합을 통해 활성화를 유도하는 능력을 조사하기 위하여, 1차 T-세포를 비드-접합된 항체의 존재 하에서 하룻밤 배양하였다. 다음날, 세포를 수거하고 항-CD69 항체로 표지화하여 활성화를 측정하였다(도 8). 인간화 항-CD3 항체를, 10 ㎍/m의 항체와 함께 하룻밤 인큐베이션에 의해 단백질 A 코팅된 자성 비드(미국 레이크 포레스트 소재의 SpheroTech)에 결합시켰다. 다음날, 2x105개의 1차 인간 T 세포를 둥근바닥 세포 배양 플레이트에서 3회 반복하여 플레이팅하고, 2x105개의 코팅 비드를 첨가하였다. 37℃에서 하룻밤 배양 후에, 세포를 수거하고, 항-CD69 Alexa Fluor® 488 항체(클론 FN50; Biolegend)로 표지화하여 이 활성화 마커의 상향조절을 평가하였다. 결합에 대해 전술된 바와 같이 샘플 수집 및 분석을 수행하였다. 몇몇 음성 대조군에 대해 실시하였는데, 이에는 T-세포 단독, 코팅되지 않은 비드를 갖는 T-세포, 및 동종형 대조군(CD3B94)-코팅된 비드를 갖는 T-세포가 포함되었다. 이들 모두는 무염색 T-세포에 비견되는 유사한 평균 형광 강도 값을 보여주었으며, 이는 백그라운드가 이 검정에서 낮았음을 나타낸다. 비교를 위해 몇몇 양성 대조군에 대해 실시하였는데, 이에는 OKT3(미국 특허 제5929212호) 및 구매가능한 SP34-2 항체가 포함되었다.
이어서, 인간화 항-CD3 히트들을 동일한 검정에서 1차 사이노몰거스 CD4+ T 세포(Zen Bio, 미국 트라이앵글 리서치 파크 소재)를 활성화하는 그들의 능력에 대해 시험하였다(도 9). FN50 항-CD69 항체는 비인간 단백질과 교차-반응하는 것으로 기재되어 왔으며, 이에 따라 이들 세포의 활성화를 시험하는 데 사용될 수 있었다.
인간 및 사이노몰거스 활성화 데이터는, 히트들의 패널이 광범위한 활성화능(activation potential)을 나타내었다는 점에서 결합 데이터와 상관되었다. 다수의 강한 결합제는 구매가능한 SP34-2와 비교할 때 동등하거나 더 큰 정도로 인간 T-세포를 활성화하는 능력을 보여주었다. 몇몇 변이체는 SP34-2와 비교하여 더 낮은 활성화능을 보여주었으며, 한편 일부 결합제는 CD69 자극의 증거를 보여주지 않았다. 활성화 불능은, 약한 결합을 보여주거나 결합을 전혀 보여주지 않은 변이체에서만 관찰되었고, 모든 강한 결합제는 어떤 수준의 활성화를 보여주었는데, 이는 인간(도 10a) 및 사이노몰거스(도 10b) 둘 모두에 대한 결합능과 활성화능 사이의 상관관계를 시사한다.
PSMA 특이적 항체와 함께 이중특이성 항체를 제조하기 위하여, 각각 고친화도 및 중간 친화도를 갖는 2개의 항-CD3 항체, CD3B146 및 CD3B147을 선택하였다. 이들 2개의 항-CD3 항체는 IgG4 PAA GenMab 포맷(문헌[Labrijn et al, 2013])으로 제조하였는데, 여기서 표적화 모체(parent)(PSMA)는 409R GenMab 돌연변이(IgG4에 대한 천연 아미노산)를 함유하는 반면, 사멸 모체(CD3)는 F405L GenMab 돌연변이 및 R409K를 함유한다. 단일특이성 항-CD3 항체는, 그의 Fc 영역 내에 Fc 치환 S228P, F234A, L235A, F405L, 및 R409K(CD3 아암)(넘버링은 EU 인덱스에 따름)를 갖는 IgG4로서 발현시켰다. 표준 분자 생물학 기법을 사용하여 CMV 프로모터를 갖는 사내 발현 벡터를 사용하여 S228P, F234A, L235A, F405L, 및 R409K 돌연변이를 함유하는 인간 IgG4-PAA Fc 상에 중쇄(HC) 가변 영역을 하위클로닝하였다. 표준 분자 생물학 기법을 사용하여 CMV 프로모터를 갖는 사내 발현 벡터를 사용하여 인간 람다(λ) 불변 영역 상에 경쇄(LC) 가변 영역을 하위클로닝하였다. 생성된 플라스미드를 Expi293F 세포(Invitrogen) 내로 형질감염시키고, mAb를 발현시켰다. 항-CD3 항체를 표준 정제 방법을 사용하여 정제하였다: 100 mM NaAc(pH 3.5)의 용리 완충액 및 2 M Tris(pH 7.5) 및 150 mM NaCl의 중화 완충액을 사용하는 단백질 A 컬럼. mAb를 PD10(Sephadex G25M) 컬럼을 사용하여 탈염하고, 풀을 D-PBS(pH 7.2) 내로 투석시켰다.
서열 번호 102의 VH 및 서열 번호 103의 VL을 갖는 VH 및 VL 영역 및 S228P, F234A, L235A, F405L, 및 R409K 치환을 갖는 IgG4 불변 영역을 포함하는 단일특이성 항-CD3 항체 CD3B217을 생성하였다. CD3B217은 서열 번호 108의 중쇄 및 서열 번호 109의 경쇄를 포함한다. 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 갖는 VH 및 VL 영역 및 S228P, F234A, L235A, F405L, 및 R409K 치환을 갖는 IgG4 불변 영역을 포함하는 단일특이성 항-CD3 항체 CD3B219를 생성하였다. CD3B219는 서열 번호 110의 중쇄 및 서열 번호 111의 경쇄를 포함한다.
실시예 6. PSMA × CD3 이중특이성 항체의 제조
PSMAxCD3 이중특이성 항체의 형성은 2개의 모 mAb를 필요로 하는데, 이때 하나는 표적화 아암(예를 들어, PSMA)에 특이적이고 하나는 이펙터 아암(예를 들어, CD3)에 특이적이다. PSMA mAb를 중간 친화도 CD3B217(VH 서열 번호 102, VL 서열 번호 103) 및 고친화도 CD3B219(VH 서열 번호 104, VL 서열 번호 105) CD3 아암과 재조합하였다. 이들 모 mAb는 GenMab 포맷(문헌[Labrijn et al, 2013])인데, 여기서 표적화 모체(PSMA)는 409R GenMab 돌연변이(IgG4에 대한 천연 아미노산)를 함유하는 반면, 사멸 모체(CD3)는 F405L GenMab 돌연변이 및 R409K 돌연변이를 함유한다. 단일특이성 항-CD3 항체는, 그의 Fc 영역 내에 Fc 치환 S228P, F234A, L235A, F405L, 및 R409K(CD3 아암)(넘버링은 EU 인덱스에 따름)를 갖는 IgG4로서 발현시켰다. 단일특이성 항체들을 CMV 프로모터 하에서 HEK 세포주 내에서 발현시켰다.
모 PSMA 및 CD3 항체를 100 mM NaAc(pH 3.5)의 용리 완충액 및 2 M Tris(pH 7.5) 및 150 mM NaCl의 중화 완충액을 사용하는 단백질 A 컬럼을 사용하여 정제하였다. mAb를 PD10(Sephadex G25M) 컬럼을 사용하여 탈염하고, D-PBS(pH 7.2) 완충액 내로 투석시켰다.
정제 후, 모 PSMA 항체를 75 mM 시스테아민-HCl의 환원성 조건 하에서 원하는 모 CD3 항체와 혼합하고, 31℃에서 4시간 동안 인큐베이션하였다. 재조합 반응은 몰비에 기초하였으며, 여기서는 PSMA의 설정량(예를 들어, 10 mg, 또는 약 67.8 나노몰)을 CD3 항체(예를 들어, 약 71.8 나노몰)와 배합하였는데, 이때 CD3 항체를 6% 과량의 PSMA 항체에 첨가하였다. PSMA 항체 스톡의 농도는 0.8 mg/mL부터 6 mg/mL까지 변동되었으며, 재조합 반응의 부피는 각각의 쌍에 대해 변동되었다. 후속으로, 재조합체를 PBS에 대해 투석시켜 환원제를 제거하였다. 재조합 후에 잔존하는 미반응 PSMA 모 항체의 양을 최소화하기 위하여, 과량의 CD3 항체(비)를 사용하여 이중특이성 항체 반응을 수행하였다. 모 mAb의 부분 환원 후에, 환원제를 하룻밤 투석을 통해 PBS 내로 제거하였다.
재조합 반응에 사용된 모 mAb(즉, PSMA, CD3 또는 널(Null))와 함께, 생성된 최종 이중특이성 항체가 표 10에 열거되어 있으며, 서열은 표 11 및 표 12에 열거되어 있다.
선택된 PSMA 히트를 또한 비-사멸 아암(널)과 쌍을 이루어서 시험 목적을 위한 음성 대조군을 생성하였다. 대조 이중특이성 항체의 경우, IgG4 PAA 포맷의 RSV 항체(VH 서열 번호 106, VL 서열 번호 107)인 B2M1을 생성하고, 정제하고, CD3 아암 CD3B219-F405L, R409K와 조합하여 CD3B288(CD3 × 널)을 생성하거나, PSMA 아암, PSMB162, PSMB126, PSMB130과 조합하여 각각 PS3B37, PS3B39 및 PS3B40(PSMA X 널)을 생성하였다.
[표 10]
서열 번호 102의 VH 및 서열 번호 103의 VL을 갖는 VH 및 VL 영역 및 S228P, F234A, L235A, F405L, 및 R409K 치환을 갖는 IgG4 불변 영역을 포함하는 단일특이성 항-CD3 항체 CD3B217을 생성하였다. CD3B217은 서열 번호 108의 중쇄 및 서열 번호 109의 경쇄를 포함한다. 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 갖는 VH 및 VL 영역 및 S228P, F234A, L235A, F405L, 및 R409K 치환을 갖는 IgG4 불변 영역을 포함하는 단일특이성 항-CD3 항체 CD3B219를 생성하였다. CD3B219는 서열 번호 110의 중쇄 및 서열 번호 111의 경쇄를 포함한다. 대조군으로서, 널 아암으로서 이중특이성 항체의 CD3 또는 PSMA 아암과 파트너가 되기 위하여 서열 번호 106의 VH 및 서열 번호 107의 VL을 갖는 VH 및 VL 영역 및 S228P, F234A, L235A, 또는 F234A, L235A, R409K, F405L을 갖는 IgG4 불변 영역을 포함하는, B21M으로부터 유래된 단일특이성 항-RSV 항체를 생성하였다.
이중특이성 항체 PS3B2는 mAb CD3B217 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB120의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B3은 mAb CD3B217 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB121 -R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B4는 mAb CD3B217 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB122 -R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B5는 mAb CD3B217 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB123 -R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B7은 mAb CD3B217 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB58 -R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B8은 mAb CD3B217 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB126 -R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B9는 mAb CD3B217 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB127 -R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B10은 mAb CD3B217 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB128 -R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B11은 CD3B217 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB129 -R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B12는 CD3B217 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB130 -R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다.
이중특이성 항체 PS3B19는 mAb CD3B219 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB119-R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B20은 mAb CD3B219 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB120-R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B21은 mAb CD3B219 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB121-R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B22는 mAb CD3B219 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB122-R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B23은 mAb CD3B219 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB123-R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B24는 mAb CD3B219 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB124-R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B25는 mAb CD3B219 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB165-R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B26은 mAb CD3B219 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB126-R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B27은 CD3B219 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB127-R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B28은 CD3B219 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB128-R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B29는 CD3B219 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB129-R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다. 이중특이성 항체 PS3B30은 CD3B219 -F405L, R409K의 CD3 결합 아암 및 mAb PSMB130-R409의 PSMA 결합 아암을 포함한다.
[표 11]
[표 12]
실시예 7. 세포-결합에 의한 특성화
PSMA × CD3 이중특이성 항체를 PSMA 양성 세포주 LNCaP, 인간 PSMA-HEK, 침팬지 PSMA-HEK 및 사이노몰거스 원숭이 PSMA-HEK에 대한 결합에 대해 시험하였다. PSMA 이중특이성 항체의 결합 능력을 평가하기 위하여, 세포-결합 검정을 이용하였다(앞서 기재됨). 간략하게 말하면, PSMA-발현 종양 세포를 기지 농도의 이중특이성 항체에 의해 결합시키고, 결합된 항체를 항-인간 카파 경쇄 PE-접합된 검출 시약(Invitrogen)에 의해 검출한다. 평균 형광 강도(MFI)는 결합된 이중특이성 항체의 척도이다. MFI는 상대 EC50으로 전환된다. EC50은 일반적으로 사용되는 용량-반응 곡선이며, 여기서 반수 최대 유효 농도 또는 EC50 점은 이 곡선의 변곡점으로서 정의된다. EC50은 세포 결합된 이중특이체 및 기지 농도를 측정함으로써 결정하였다. 높은 농도는 최대 표적 항원 결합, 즉 완전 결합 포화를 가져왔다. 이어서, 용량 반응 곡선을 백그라운드 또는 이중특이체 무결합의 용량 반응 곡선에 이르기까지 희석시켰다. 이 곡선의 변곡점은 EC50 점을 반영한다. 계산된 EC50은, EC50 점에서의 이중특이성 항체의 ug/ml 양을 취하고 그것을 이중특이성 항체의 MW에 기초하여 몰농도 값으로 전환시킴으로써 결정된다. 이중특이성 항체를 단백질 농도에 대해 정규화하고, 이어서 인간 또는 사이노 PSMA를 발현하는 동일한 수의 세포와 함께 인큐베이션하였다. 각각의 농도에서의 MFI를 유세포측정에 의해 수집하고, 농도의 함수로서 도표로 나타내었다. 데이터를 log10을 통해 변환시키고, 이어서 도표로 나타내었다. 결합 곡선의 비선형 회귀를 행하여 EC50을 결정하였다. 이들 상대값을 표적 세포에 대한 PSMA 결합의 순위를 매기는 데 사용하였다. 표 12는 LNCaP, 사이노 및 침프 PSMA-발현 세포주를 사용한 전세포 결합 연구에 대한 상대 EC50 결합 값을 포함한다.
도 11은 제조된 모든 이중특이성 항체의 LNCaP 결합을 보여준다. 결합 데이터는 3가지의 결합 집단이 관찰됨을 시사한다: 1) 강한 결합, 2) 중간 결합, 및 3) 약한 결합/무결합. PSMA × 널 아암 이중특이성 항체는 LNCaP 세포에 대해서는 결합을 유지하지만(도 11e), 널 × CD3 아암 이중특이성 항체에 대해서는 결합이 관찰되지 않는다(도 11f). 동일한 PSMA 아암을 갖는 중간 친화도 및 고친화도 CD3 아암 이중특이성 항체는 유사하게 결합한다. 나머지 검정에 대해서는, 양성 LNCaP 결합제인 이중특이성 항체만을 사용하여 침프 PSMA-HEK(도 12), 사이노 PSMA-HEK(도 13), 인간 PSMA-HEK(도 14), 또는 모 HEK293에 대한 결합 활성을 평가하였다(데이터는 나타내지 않음). 각각의 세포주에 대해, 고친화도 또는 중간 친화도 CD3 결합제를 시험하였다. hPSMA-HEK 결합 데이터는 LNCaP와 이 세포주 사이에 미세한 차이가 있을 수 있음을 시사하지만; 동일한 전체 결합 순서는 명백하다. LNCaP 패닝으로부터 유래된 PS3B19는 hPSMA-HEK 세포에 강하게 결합하는 것으로 나타난다. 이중특이성 항체는 침프-PSMA HEK에 대해 광범위한 결합 프로파일을 나타낸다. 흥미롭게도, 침프-PSMA HEK 세포주 상에서 패닝된 히트들은 더 강한 결합 프로파일을 갖는 반면, LNCaP 상에서 패닝된 것들은 더 약한 결합을 나타낸다. 이 실험에서 모 HEK 세포에 대해서는 어떠한 결합도 관찰되지 않았다(데이터는 나타내지 않음).
이중특이성 항체 내로의 재조합 후에, 몇몇 클론은 다른 클론들을 일관되게 능가하고, 이종간 결합한다. 이들 이중특이성 항체는 PS3B21, PS3B22, PS3B26, PS3B27, PS3B28 및 PS3B30이며, 이들은 mAb PSMB121, PSMB122, PSMB126, PSMB127, PSMB128 및 PSMB130에 상응한다. 세포 기반 결합 EC50 및 계산된 EC50이 표 13에 나타나 있다.
[표 13]
모든 이중특이성 항체는 PSMA 양성 세포주에 결합하는 능력을 유지하였다. 이들 항체 중 몇몇은 침프 및 사이노 PSMA-발현 세포에 잘 결합하였지만, LNCaP 세포에는 단지 약하게 결합하였다. LNCaP 결합 EC50은 0.5 nM 내지 864 nM의 범위인 반면, 사이노 PSMA 발현 HEK 결합 EC50은 0.9 내지 128 nM의 범위이고, 침프 PSMA HEK 결합은 36 내지 0.3 nM의 범위였다(표 12). 세포 결합 EC50에 기초하여, 항-PSMA 이중특이성 항체들 중 몇몇은 인간 PSMA에 대한 20 nM 또는 더 엄격한 결합, 및 사이노 PSMA에 대한 50 nM 또는 더 엄격한 결합의 기준을 충족시켰다.
실시예 8. ProteOn 및 Biacore에 의거한 친화도 특성화
항체를 추가로 평가하기 위하여, 세포-결합 검정으로부터 이월된 히트들에 대하여 침프 PSMA ECD 회합 및 해리의 속도를 측정하였다. PSMAxCD3 이중특이성 mAb와 표적(재조합 침프, PSMA)의 상호작용을 ProteOn XPR36 시스템(BioRad)을 사용하여 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 연구하였다. 아민-커플링 화학에 대한 제조자의 설명서를 사용하여, 항-인간 IgG Fc(Jackson ImmunoResearch Laboratory, cat#109-005-098)를 GLC 칩(BioRad, cat#176-5011)의 변형된 알기네이트 중합체 층 표면에 커플링함으로써 바이오센서 표면을 제조하였다. 대략 4400 RU(반응 유닛)의 항-인간 IgG Fc 항체를 고정화하였다. 속도론 실험(kinetic experiment)을 전개 완충액(running buffer)(DPBS + 0.03% P20 + 100 ㎍/ml BSA) 중에서 25℃에서 수행하였다. 속도론 실험을 수행하기 위하여, 100 RU의 이중특이성 항체를 포획한 후, (3배 연속 희석으로) 3.7 nM 내지 300 nM 범위의 농도로 분석물(재조합 침프 PSMA ECD)을 주입하였다. 회합 단계를 50 μL/min으로 3분 동안 모니터링한 후, 이어서 15분간 완충액 유동을 행하였다(해리 단계). 100 μL/min으로 18초 펄스의 100 mM 인산(H3PO4, Sigma, cat#7961)을 2회 사용하여 칩 표면을 재생시켰다.
수집된 데이터를 ProteOn Manager 소프트웨어를 사용하여 처리하였다. 먼저, 데이터를 인터-스폿(inter-spot)들을 사용하여 백그라운드에 대해 보정하였다. 이어서, 분석물 주입에 대하여 완충액 주입을 사용함으로써 데이터의 이중 참조 감산을 수행하였다. 랭뮤어(Langmuir) 1:1 결합 모델을 사용하여 데이터의 속도론 분석을 수행하였다. 각각의 이중특이성 항체에 대한 결과를 ka(결합 속도(On-rate)), kd(해리 속도(Off-rate)) 및 KD(평형 해리 상수)의 형식으로 기록하였다. 결과가 표 14 내지 표 18에 나타나 있다.
결과:
[표 14]
[표 15]
[표 16]
[표 17]
[표 18]
대부분의 경우, ProteOn 결합은 세포 결합과 유사하다. 그러나, 이들 이중특이성 항체 중 하나는 재조합 침프 PSMA ECD에 대해서는 무결합을 나타내었지만, 그것은 HEK 세포의 세포 표면 상에 발현된 침프 PSMA에는 결합하였다. 이 항체, PS3B26은 세포 단독 결합제이며, 후속 결합 실험으로부터 제외되었다. 양성 결합제들 중 하나인 PS3B23은 2상(biphasic) 결합을 나타내었으며, 1:1 결합 모델에 잘 적합화되지 않았다. 이들 이중특이성 항체 중 10개는 ProteOn에 의거하여 재조합 침프 PSMA ECD에 대한 양성 결합제였으며, 이들의 친화도는 Biacore에 의거하여 추가로 프로파일링하였다.
Biacore에 의거한 재조합 침프 PSMA에 대한 결합. 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 사용한 친화도 측정을 Biacore 3000 광학 바이오센서(Biacore-GE Healthcare)를 사용하여 수행하였다. 아민-커플링 화학에 대한 제조자의 설명서를 사용하여, 항-인간 IgG Fc(Jackson ImmunoResearch Laboratory, cat#109-005-098)를 CM-5 칩(Biacore, cat#BR-1000-12)의 카르복시메틸화 덱스트란 표면에 커플링함으로써 바이오센서 표면을 제조하였다. 대략 16,000 RU(반응 유닛)의 항-인간 IgG Fc 항체를 4개의 플로우 셀 내에 각각 고정화하였다. 속도론 실험을 전개 완충액(DPBS + 0.03% P20 + 100 ㎍/ml BSA) 중에서 25℃에서 수행하였다. 항원 희석물(재조합 침프 PSMA, 3배 연속 희석으로의 1.2 내지 300 nM 또는 3.7 내지 900 nM 중 어느 하나의 농도)을 전개 완충액 중에 제조하였다. 약 100 RU의 PSMAxCD3 이중특이성 mAb를 센서 칩의 플로우 셀 2 내지 4 상에 포획하였다. 플로우 셀 1을 참조 표면으로서 사용하였다. PSMAxCD3 이중특이성 mAb를 포획한 후, 50 μl/min으로 항원(재조합 침프 PSMA)을 3분간 또는 5분간 주입하고(회합 단계), 이후에 15분간 또는 20분간 완충액을 유동시켰다(해리 단계). 50 μl/min으로 100 mM 인산(H3PO4, Sigma, cat#7961)의 18초 주입을 2회 수행함으로써 칩 표면을 재생시켰다.
수집된 데이터를 BIAevaluation 소프트웨어(Biacore)를 사용하여 처리하였다. 먼저, 분석물 주입에 대한 참조물질-감산된 곡선으로부터 완충액 주입에 의해 생성된 곡선을 감산함으로써, 데이터의 이중 참조 감산을 수행하였다. 이어서, 전역 적합도(global fit)와 함께 랭뮤어 1:1 결합 모델을 사용하여 데이터의 속도론 분석을 수행하였다. 각각의 PSMAxCD3 이중특이성 mAb에 대한 결과를 ka(결합 속도), kd(해리 속도) 및 KD(평형 해리 상수)의 형식으로 기록하였다.
[표 19]
ProteOn에 의거하여 침프 PSMA ECD에 결합된 모든 이중특이성 항체는 또한 Biacore를 통해 결합되었다. 결합 친화도는 Biacore에 의거하면 다소 더 약하였다.
실시예 9. 기능적 세포 사멸 검정에서의 PSMA × CD3 이중특이성 Ab의 평가
T 세포 매개 세포독성 검정을 이중특이성 항체 활성의 기능적 스크리닝으로서 사용하였다. 인간 PSMA 과발현 HEK 세포뿐만 아니라 인간 전립선암 세포주 LNCaP를 용해시키는 능력에 대해 이중특이체를 시험하였다. 게다가, 사이노 PSMA HEK 세포를 사멸시키는 능력에 대해 이종특이체를 시험하여 이종간 교차 반응성을 확인하였다.
개별 이중특이성 항체의 세포독성을 측정하기 위해 크롬-51 방출 검정을 사용하였다. 세포독성은 활성화된 T-세포의 존재 하에서의 세포 용해의 결과로서 배양 배지 중으로 방출된 크롬의 양에 의해 측정된다. 방출량은 단독으로의 표적 세포에서의 크롬의 자발적인 방출 및 Triton-X를 사용한 총 표적 세포 용해를 통한 최대 방출과 대비하여 나타낸다.
다수의 공여자로부터의 인간 Pan T-세포(CD3+)를 OKT3 코팅된 플라스크(1 ug/ml) 및 20 U/ml의 IL-2에 의해 하룻밤 사전활성화하였다. T-세포를 2회 세척하였다. 표적 세포주를 1시간 동안 크롬-51로 표지화하였다. T-세포 및 표적 세포를 18 내지 24시간 동안 5:1 비로 배양한 후, 배양 상층액을 수거하고 분석하였다. 모든 점을 3회 반복하여 실시하고, 3개의 반복시험물의 세포독성 평균과 SEM으로서 기록하였다. 10 ug/ml 내지 0,00001 ug/ml의 이중특이성 항체의 희석물을 사용하였다.
도 15는 hPSMA-HEK 세포에 대한 모든 PSMAxCD3 이중특이성 항체에 대한 T 세포 매개 사멸을 나타낸다. 이 실험을 위하여, 중간 친화도 및 고친화도 CD3 아암 이중특이성 항체를 시험하였다. 세포 사멸은 대부분의 고친화도 CD3 아암 분자에 대해 명백하며, 이중특이성 항체들 중 몇몇은 시험되는 최저 농도에서 사멸을 나타낸다. PS3B9는 더 낮은 농도에서 유의한 세포 사멸을 나타낸 유일한 중간 친화도 이중특이성 항체였다. 도 16은 여러 쌍의 이중특이성 항체에 대한 T 세포 매개 사멸을 나타낸다. 이 데이터로부터, 고친화도 CD3 결합 이중특이성 항체는 대부분의 세포 사멸을 발생시킴이 명백하며, 이들은 추가의 세포 사멸 실험의 대상이었다.
도 17은 LNCaP 세포에 대해 생성된 고친화도 CD3 아암을 갖는 PSMAxCD3 이중특이성 항체에 대한 세포 사멸 데이터를 나타낸다. PS3B25, PS3B27, PS3B28, PS3B30, PS3B23 및 PSB22는 모두 T 세포 재유도 활성을 가졌다. PS3B29는 최고 농도에서 hPSMA-HEK 세포에 대해 활성을 나타내었지만, LNCaP에 대해서는 그렇지 않았는데, 이는, 그것이 약한 PSMA 결합제이기 때문에, PSMA 발현 수준이 낮을 때 그것이 잘 결합할 수 없음을 시사한다. 대조적으로, PS3B25, PS3B27 및 PS3B28은 최고의 LNCaP 종양 세포 용해를 나타내었다. PSMB125 및 RSV 단백질에 대한 널 아암으로 이루어진 이중특이성 항체 PS3B38은 T 세포에 결합하는 능력이 없기 때문에 예상되는 바와 같이 세포용해 활성을 갖지 않았다.
사이노 PSMA T 세포 재유도 기능을 확인하기 위하여, 이중특이성 항체를 사이노 PSMA-HEK 세포 용해에 대해 시험하였으며, 이는 도 18에 나타나 있다. 시험된 모든 이중특이성 항체는 사이노 PSMA를 발현하는 세포를 사멸시킬 수 있었으며, PS3B27 및 PS3B28이 최고 활성을 가졌다. 앞서의 세포 결합 연구로부터, 이들 항-PSMA 아암은 인간 PSMA에 비하여 사이노 PSMA에 대해 더 높은 친화도를 가졌으며, 이러한 관찰은 사이노 PSMA 표적 세포 사멸에 또한 반영되었다. PS3B27 및 PS3B30을 모 HEK 세포주의 사멸에 대해 시험하였으며, HEK 모 세포주를 용해시키지 않았다(데이터는 나타내지 않음).
PSMAxCD3 이중특이성 항체 PS3B27 및 PS3B30을 각각 생성하는 PSMA 항체 PSMB127 및 PSMB130을 추가의 분석을 위해 선택하였다. PS3B27 및 PS3B30은 인간 PSMA 표적 및 사이노 PSMA 표적 둘 모두를 사멸시켰으며, 고친화도 CD3 아암을 가졌다. PS3B27은 실질적으로 동일하게 인간 PSMA 발현 세포주에 결합하였는데, 이의 EC50은 약 14.6 nM이고, 사이노는 약 9.9 nM이었다. PS3B30은 대략 5 내지 6배의 친화도 차이로 인간 PSMA에 결합하였는데, 이의 EC50은 약 8 내지 8.5 nM이고, 사이노 PSMA에 대해서는 약 37.8 내지 57 nM이었다. 인간 결합과 사이노 결합 사이의 차이가 5배를 초과할 수 있기는 하지만, PS3B27은 인간 표적 및 사이노 표적 둘 모두의 기능적 사멸을 나타내었다.
PS3B27과 재조합 침프 PSMA ECD의 상호작용을 반복하였으며, 재조합 사이노 PSMA ECD 및 인간 PSMA ECD와의 상호작용을 재조합 침프 PSMA ECD에 대해 앞서 기재된 바와 같이 ProteOn XPR36 시스템(BioRad)을 사용하여 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 연구하였다. 침프, 사이노 및 인간 PSMA ECD에 결합하기 위한 속도론 및 친화도의 요약이 표 20에 나타나 있다. 이러한 이중특이성 항체는 실질적으로 동일한 친화도로 모든 표적에 결합한다.
[표 20]
카스파제 검정에서 이중특이성 항체, PS3B27의 평가. 제2 세포 독성 검정을 사용하여 PS3B27의 T-세포 매개 사멸을 측정하였다. 카스파제 세포독성 검정은 활성 카스파제 3/7에 의한 형광 기질의 절단을 통해 세포 사멸을 간접적으로 측정한다. 기질의 절단은 형광 DNA 염료를 발생시키며, 이때 형광은 세포핵으로 제한된다. 동일한 좌표에서 웰(들)을 정밀하게 이미징할 수 있는 전동식 10X 대물렌즈를 사용하여, 검정 과정 전체에 걸쳐 각각의 웰에서 반복된 형광 측정을 실시한다. 표적 세포 집단이 규정된 크기 제한에 기초하여 그리고/또는 2차 표지의 사용을 통해 확인된다.
동결된 Pan CD3+ T-세포(미국 펜실베이니아주 콜마 소재의 Biological Specialty Corporation으로부터 구매됨)를 정상적인 건강한 공여자로부터의 음성 선택에 의해 단리하였다. PSMA를 발현하는 전립선암 세포(LNCaP, C42)를 10% HI FBS + 보충제를 함유하는 RPMI 1640(Life Technologies로부터 구매됨) 중에서 배양하였다.
T-세포와 표적 세포를, 선택 시약을 함유하지 않은 상태에서의 페놀 레드 무함유 RPMI + 10% FBS 및 보충제(Life Technologies) 중에서 3:1의 이펙터 대 표적 비(E:T)로 배합하고, 0.6 uL의 NucView 카스파제 시약(Essen Bioscience)을 제조자 가이드라인에 따라 매 1 mL마다의 세포에 대해 첨가하였다. 0.1 mL의 총 부피의 세포를 투명한 96웰 편평바닥 플레이트(BD Falcon)의 적절한 웰에 첨가하였다. PS3B27(CD3xPSMA), CD3B288(CD3x널) 또는 PS3B46(PSMAx널) 이중특이성 항체를 상기에 지시된 바와 같이 제조된 페놀 레드 무함유 RPMI 중에서 2X 최종 농도로 제조하고, 0.1 mL의 화합물을 각각의 웰에 첨가하였다. 웰의 에지에서의 세포 응집을 최소화하기 위하여 실온에서 30분간 인큐베이션한 후에, 플레이트를 Zoom Incucyte 기기(Essen Bioscience)에 옮겼다. Incucyte 기기는 37℃, 5% CO2로 설정된 가습된 인큐베이터 내에 둔다.
제조 가이드라인에 따라, 시험되는 각각의 세포주에 대해 Incucyte 상에서의 처리 규정을 설계하였다. 카스파제 신호에서 평탄역(plateau)이 관찰된 후, 최고 농도의 시험 화합물(들)이 담긴 웰(들)에서의 최대 신호로부터의 3회 이상의 연속 감소가 관찰될 때까지 매 6시간마다 측정을 실시하였다.
검정이 완료된 후, 각각의 플레이트를 적절한 처리 규정을 사용하여 분석하였다. 원시 형광 데이터를 Incucyte Zoom 소프트웨어로부터 내보내기하고, GraphPad Prism(미국 캘리포니아주 라호이아 소재의 GraphPad Software, Inc.)에 붙여넣기하였다. GraphPad에서 각각의 웰에 대해 곡선 아래 면적(AUC)을 계산함으로써 카스파제 3/7 활성을 결정하였다. AUC 값을 Log10 nM 화합물의 함수로서 도표로 나타내었다. 나노몰(nM) 단위의, 각각의 용량 곡선에 대한 EC50을 비선형 회귀 분석(4-파라미터 적합, 정규 최소 제곱)에 따라 기록하였다. 각각의 검정은 최소 3개의 생물학적 반복시험물을 포함하였으며, 각각의 세포주를 5명의 건강한 공여자에 대해 시험하였다. 비선형 회귀 모델을 사용하여 비임상 통계량에 의해 데이터를 추가로 분석하였다. 그래프의 예가 도 19에 나타나 있다. 계산된 결과는 표 21에서 확인된다.
[표 21]
실시예 10. PSMA 양성 세포주에서의 PS3B27에 의한 T-세포 활성화
정제된 Pan CD3+ T-세포를 백혈구제거수혈된(leukapheresed) 백혈구의 음성 선택에 의해 Biological Specialty Corporation에 의해 정상적인 건강한 공여자로부터 획득하고, 사용할 준비가 될 때까지 -80℃에서 또는 액체 질소 중에 동결 저장하였다. 미감작 상태의 비활성화된 T-세포를 표적 세포 및 CD3xPSMA 이중특이성 항체 또는 널 대조군(CD3x널 또는 PSMAx널)과 3:1 이펙터:표적 비로 배합하였다. 48시간 인큐베이션 후에, 샌드위치 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA)(Meso Scale Discovery)에 의해 사이토카인 분비에 대해 상층액을 분석하였다. CD45, CD8, CD25, 및 생/사 근적외선 염색제(live/dead near-IR stain)에 대해 T-세포를 염색함으로써 유세포측정에 의해 T-세포 활성화 마커 CD25의 발현을 측정하였다. 먼저 총 세포 집단 상에서 게이팅하여(FSC-A vs. SSC-A), 잔사 및 세포 응집체를 배제시킴으로써 CD8+/CD25+의 집단을 결정하였다. 세포 게이트 하위세트를, 생/사 염색제의 배제에 의거하여, 살아있는 것으로 결정된 세포에 대한 것으로 추가로 좁혔다. 이어서, 살아있는 세포를 CD45+/CD8+ 세포에 대하여 게이팅하였다. 마지막으로, CD8+/CD25+ 양성 하위세트를 확인하였다. PS3B27 또는 대조군의 EC50은 Log10 nM 이중특이성 항체 또는 대조군에 대한 CD8+/CD25+의 백분율을 도표로 나타낸 후, 비선형 회귀(4-파라미터 적합, 최소 제곱법)를 수행함으로써 도출되었다(도 20). 모든 데이터 분석은 GraphPad Prism에서 수행하였다.
실시예 11. PBMC-인간화 NSG 마우스에서 HEK293-PSMA 이종이식편의 종양발생 예방에 있어서의 항-종양 효능
모든 생체내 실험은 문헌[The Guide for the Care and Use of Laboratory Animals]에 따라 수행하였으며, 미국 펜실베이니아주 스프링 하우스 소재의 Institutional Animal Care and Use Committee of Janssen R & D에 의해 승인받았다.
수컷 NSG 마우스(NOD.Cg-Prkdc scid IL2rg tmlWjl /SzJ 또는 NOD SCID Gamma, 미국 메인주 바 하버 소재의 Jackson Laboratories) 내의 접종된 인간 공여자 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 사용하여 HEK293-PSMA 인간 이종이식편의 종양발생의 예방에 의해 PS3B27(PSMA × CD3 이중특이성 항체)의 효능을 평가하였다(예방적 모델). 마우스의 외측 꼬리 정맥에 종양 세포 이식 7일 전에 1 × 107개의 인간 PBMC를 정맥내(iv) 주사하였다. 후속으로, 마우스의 우측 뒷 옆구리에 1 × 107개의 HEK293-PSMA 세포를 피하(sc) 이식하였다. 종양 이식 당일에 시작하여, PBS(인산염 완충 식염수) 대조군, PS3B27, CD3B288(CD3 × 널) 또는 PS3B46(PSMA × 널)을 일수 0, 3, 5, 7 및 10에서 총 5회 용량으로 0.4 mg/㎏ q2d 내지 q3d로 iv 투여하였다.
하기 식을 사용하여 종양 부피를 계산하였으며: 종양 부피(㎣) = (a × b2/2) (여기서, 'a'는 종양의 길이를 나타내고, 'b'는 종양의 폭을 나타내며, 이들은 캘리퍼 측정에 결정된 바와 같음); 연구 과정 전체에 걸쳐 주 2회 모니터링하였다. % 종양 성장 억제(TGI)를 처리군 및 대조군(PBS)의 평균 종양 부피들 사이의 차이로서 정의하였으며, TGI = [((TVc - TVt) / TVc) * 100]으로 계산되며, 여기서 TVc는 주어진 대조군의 평균 종양 부피이고, TVt는 처리군의 평균 종양 부피이다. NCI 기준에 의해 규정된 바와 같이, 60% 이상의 TGI가 생물학적으로 유의한 것으로 간주된다(문헌[Johnson, et al (2001) Br J Cancer 84(10) 1424-31]). 최대 종양 부피가 1500 ㎣에 도달하였을 때 동물들을 연구로부터 제거하였다.
인간 PBMC의 생착은 궁극적으로 마우스에서 이식편-대-숙주 질병(GvHD)으로 이어지는데, 여기서는 생착된 공여자 T 세포가 활성화되게 되고 숙주 조직을 침윤시켜, 체중 손실, 기관 부전, 및 필연적으로, 사망으로 이어진다. GvHD의 개시 및 중증도를 모니터링하기 위하여, 체중을 매주 2회 기록하고 그램(g)으로 표현하였다. 하기 식을 사용하여 % 체중 변화를 계산하였다: 체중 변화 = [((Bt - B0) / B0) * 100] (여기서, Bt는 주어진 연구 날짜의 체중이고, B0은 치료 개시 시의 체중임). 초기 체중의 20% 초과의 체중 손실을 지속한 동물은 빈사 상태인 것으로 간주하고 연구로부터 제거하였다.
Graph Pad Prism 소프트웨어(버전 6)를 사용하여 던넷 다중 비교 검정(Dunnett's multiple comparison test)을 사용한 다중 비교와 함께 일원분산분석(1-way ANOVA)을 사용하여 통계학적 유의성을 평가하였다. PS3B27 처리는 HEK293-PSMA 종양발생 및 종양 성장을 효과적으로 지연시켰다(도 21). 작지만 촉진가능한 HEK293-PSMA 종양이 연구 일수 16(마지막 치료적 처리 후 6일째)에 PBS 처리군에서 8 마리의 마우스 중 7 마리에서 검출가능한 반면, PS3B27 처리군에서는 8 마리의 마우스 중 1 마리만이 종양을 가졌다. 8 마리의 마우스 중 5 마리가 CD3B288 처리군에서 촉진가능한 종양을 가졌고, 8 마리의 마우스 중 2 마리가 PS3B46 군에서 작은 종양을 가졌다. 종양 성장 억제를 처리 중단 후 27일째(종양 이식 후 일수 37)에 평가하였는데, 이 시점에서 각각의 군은 최소 7 마리의 동물을 가졌다. PSMA × CD3 이중특이성 항체(PS3B27) 처리군에서의 종양 성장은 PBS-처리 대조군 대비 90%만큼 억제되었다(n=8/군, p<0.001). PSMA × 널 이중특이성 항체(PS3B46)가 또한 PBS 대조군과 대비하여 통계학적으로 유의한 방식(TGI=42%, n=7)으로 종양발생 및 성장을 억제하였지만(p<0.05), 이는 NCI 기준 [1]에 기초하여 생물학적으로 유의한 효과인 것으로 간주되지 않았다.
PBMC를 제공받은 동물군은 진행성 GVHD에 결국 굴복하지만, 체중 손실은 본 연구에서 약간 일어났다. 도 22에 나타낸 바와 같이 종양 이식 후 일수 37까지, PBS 대비 0.4 mg/㎏ PS3B27로 처리된 동물의 평균 체중 사이에 유의한 차이가 관찰되지 않았다(p>0.05). 따라서, PS3B27-매개 T 세포 재유도는 GvHD-관련 체중 손실에 추가로 기여하지 않았다.
현재 연구에서의 경미한 체중 손실에도 불구하고, 산발적인 GvHD-관련 사망이 기록되었다. PSMA × 널 이중특이성 항체 PS3B46 군 내의 1 마리의 마우스를 종양 이식 후 일수 30에 과도한 GvHD-관련(20% 초과) 체중 손실로 인해 안락사시켰다. 종양 이식 후 일수 42까지, 추가의 GvHD-관련 사망이 PBS 군(n=1), 및 PSMA × 널 이중특이성 항체 PS3B46 군(n=2)에서 기록되었으며, 1500 ㎣ 종양 부피 종점에의 도달로 인해 본 연구로부터 몇몇 추가의 마우스를 제거하였으며, 이 시점에서 전체 연구를 종결하였다.
실시예 12. 수컷 CD1 누드 마우스에서 혼합물 HEK293-PSMA/T 세포 이종이식편의 종양발생 예방에 있어서의 PS3B27의 효능
PS3B27의 효능을 혼합물 이종이식편 모델에서 평가하였는데, 여기서는 인간 CD3+ Pan T 세포 및 종양 세포를 수컷 CD1 누드 마우스(NU-Foxn1nu, 미국 매사추세츠주 윌밍턴 소재의 Charles River Laboratories) 내로 동시주사하였다.
인간 PSMA × 인간 CD3 이중특이성 항체 PS3B27, 또는 대조 이중특이성 항체를 지시된 바와 같이 총 5회 용량에 대해 매 2 내지 3일마다(q2d 또는 q3d) iv 투여하였다. 마우스를 연구 내내 매주 2회 모니터링하였다(체중 및 종양 캘리퍼 측정). ㎍/동물로서 표현된 약물 용량을 25 g 체중을 기준으로 mg/㎏으로 환산하였다(예: 10 ㎍/동물 = 0.4 mg/㎏). mg/㎏으로 투여된 약물 용량을 체중을 기준으로 10 mL/㎏으로 투여하였다(실시예: 25 g 마우스 = 0.25 mL).
하기 식을 사용하여 종양 부피를 계산하였으며: 종양 부피(㎣) = (a × b2/2) (여기서, 'a'는 종양의 길이를 나타내고, 'b'는 종양의 폭을 나타내며, 이들은 캘리퍼 측정에 결정된 바와 같음); 연구 과정 전체에 걸쳐 주 2회 모니터링하였다. % 종양 성장 억제(TGI)를 처리군 및 대조군(PBS)의 평균 종양 부피들 사이의 차이로서 정의하였으며, TGI = [((TVc - TVt) / TVc) * 100]으로 계산되며, 여기서 TVc는 주어진 대조군의 평균 종양 부피이고, TVt는 처리군의 평균 종양 부피이다. NCI 기준에 의거하여 규정된 바와 같이, 60% 이상의 TGI는 생물학적으로 유의한 것으로 간주된다[1]. 최대 종양 부피가 1500 ㎣에 도달하였을 때 동물들을 연구로부터 제거하였다.
상응하는 마우스 항원에 대한 CD3 아암의 교차-반응성의 결여로 인해 숙주 조직에서의 CD3 결합에 대해 PS3B27의 내약성을 평가할 수 없었다. 그러나, 종양 세포와 함께 주사된 T 세포는 인간 CD3을 발현시키고, PS3B27 및 CD3X 널 대조군에 결합할 수 있다. 하기 식을 사용하여 % 체중 변화를 계산하였다: 체중 변화 = [((Bt - B0) / B0) * 100] (여기서, Bt는 주어진 연구 날짜의 체중이고, B0은 치료 개시 시의 체중임).
Graph Pad Prism 소프트웨어(버전 6)를 사용하여 던넷 다중 비교 검정을 사용한 다중 비교와 함께 일원분산분석을 사용하여 통계학적 유의성을 평가하였다.
수컷 CD1 누드 마우스(ELN ref: CD3-PSMA-2013-00003)에서 1:5 이펙터 대 표적 비로 존재하는, HEK293-PSMA 세포 및 활성화되고 증폭된 CD3 양성 Pan T-세포를 함유하는 혼합물 이종이식편의 종양발생의 예방에 의해 PS3B27의 효능을 평가하였다. IL-2 함유 배지(미국 캘리포니아주 어번 소재의 Miltenyi Biotech, 카탈로그 # 130-091-441, 130-097-743) 중에서 T-세포 활성화/증폭 키트를 사용하여 시험관내에서 12일 동안 T-세포를 활성화하고 증폭시켰다. 마우스당 50% Cultrex(미국 메릴랜드주 게이더스버그 소재의 Trevigen, 카탈로그 #3433-005-01) 및 50% 무혈청 RPMI 1640 배지 중의 5 × 106개의 HEK293-PSMA 세포 및 1 × 106개의 활성화되고 증폭된 T-세포의 혼합물을 마우스의 우측 뒷 옆구리에 sc 이식하였다. 종양 이식날과 동일한 날에 시작하여, PBS, 0.005 내지 0.5 mg/㎏의 PS3B27, 0.5 mg/㎏의 CD3B288(CD3 × 널 이중특이성 항체) 또는 0.5 mg/㎏의 PS3B46(PSMA × 널 이중특이성 항체)을 일수 0, 2, 4, 7 및 9에 총 5회 용량으로 체중에 따라 q2d 내지 q3d로 iv 투여하였다. (n=10/군). PS3B27에 의한 처리를 또한 ip 투여로 평가하였다(데이터는 나타내지 않음). PBS 대조군에서 과도한 종양 부하 때문에 일수 46 및 49에서 각각 동물을 1 마리씩 제거하였다. 종양 부피 데이터를 일수 64까지 도표로 나타내었으며, 이후에는 대조군 동물의 절반을 과도한 종양 부피로 인해 연구로부터 제거하였다.
도 23에 나타낸 바와 같이, 종양발생 및 성장을 처리 중단 후 55일 동안 평가하였다(일수 64까지). PS3B27에 의한 처리는 모든 용량(0.005, 0.05 또는 0.5 mg/㎏)에서 PBS 대조군과 대비하여 종양발생을 유의하게 억제하고 성장을 지연시켰으며, 그 결과 일수 64에서 TGI가 각각 73%, 81% 및 82%(각각 p<0.001, p<0.0001, p<0.001)가 되었다. ip 투여에 의한 PS3B27의 처리는 iv 투여와 유사한 효능을 나타내었다(데이터는 나타내지 않음). CD3B288(CD3 × 널 이중특이성 항체) 또는 PS3B46(PSMA × 널 이중특이성 항체)으로 처리된 동물은 일수 64에서 각각 51% 및 38% TGI로 약간의 항-종양 활성을 나타내었지만(각각 p<0.05, p=ns), 이는 60% TGI의 NCI 기준에 기초하여 생물학적으로 유의한 것으로 간주되지 않는데, 이는, 효능을 달성하기 위해서는 이중특이성 항체의 CD3 및 PSMA 둘 모두의 결합에 대한 요건을 입증한다.
본 연구 과정에 걸쳐 체중 손실은 없었지만, 0.5 및 0.005 mg/㎏의 PS3B27로 처리된 동물은 PBS와 대비하여 체중 증가가 유의하게 더 적었는데(각각 p<0.001, p<0.0001, 도 24), 그러나 이는 이들 동물에서의 더 낮은 종양 부담으로 인한 것일 수 있다.
실시예 13. 이중특이성 항체 PS3B27의 항-PSMA Fab 아암에 결합되는 인간 PSMA ECD의 결정 구조
PSMA는 세포 표면 상에서 발현되는 동종이량체성 단백질이다. PSMA는 단량체당 750개의 잔기로 된 II형 통합 당단백질로서, 이는 펩티다제 활성을 갖는 큰 ECD 도메인(705개의 잔기), 단회 통과 TM 도메인, 및 짧은 19-잔기 세포내 도메인으로 구성된다. 이중특이성 항체 PS3B27의 항-PSMA Fab 아암에 결합되는 인간 PSMA의 세포외 영역(ECD)의 결정 구조를 3.15 Å 분해능으로 결정하여 PSMA와 항체 사이의 결합 부위를 더 잘 이해하였다.
인간 PSMA(잔기 44 내지 750)의 세포외 영역을, N-말단 gp67 신호 펩티드에 뒤이어 절단가능한 헥사히스티딘 태그(서열 번호 158)를 갖는 High Five™ 곤충 세포 내에서 발현시켰다. 초기 Ni2+-NTA 친화성 포획, 히스티딘 태그의 TEV-매개 절단, 이어지는 역친화성 크로마토그래피 단계, 및 최종 크기-배제 크로마토그래피 단계로 구성된 3-단계 절차에 의해 상층액으로부터 분비 단백질을 정제하였다. 정제된 PSMA-ECD를 액체 질소 중에서 급속-동결시키고, 10 mM HEPES(pH 7.4), 150 mM NaCl, 2 mM CaCl2, 0.1 mM ZnCl2 중에서 -80℃에서 저장하였다.
이중특이성 항체 PS3B27에서의 모 항-PSMA Fab 아암인 PSMB83의 Fab를 헥사히스티딘 태그(서열 번호 158)를 갖는 HEK293 Expi 세포 내에서 발현시키고, 친화성 크로마토그래피(HisTrap, GE Healthcare) 및 크기-배제 크로마토그래피(SEC-300, Phenomenex Yarra)를 사용하여 정제하였다. Fab를 50 mM NaCl, 20 mM Tris(pH 7.4) 중에서 4℃에서 저장하였다.
인간 PSMA ECD/PSMB83 Fab 복합체를 3-단계 절차에 의해 제조하였다. 먼저, Fab를 20 mM MES(pH 6.0), 150 mM NaCl 중으로 완충액 교환하였다. 이어서, Fab와 PSMA를 혼합하고(PSMA 단량체에 비하여 1.5 몰 과량의 Fab), 20 mM MES(pH 6.0) 내로 투석시키면서 4℃에서 하룻밤 인큐베이션하였다. 마지막으로, 20 mM MES(pH 6.0) 중의 복합체를 monoS 5/50 컬럼에 결합시키고 NaCl 구배로 용리시켰다.
20℃에서의 시팅 드롭 증기-확산법(sitting drop vapor-diffusion method) 및 Mosquito LCP 로봇(TTP Labtech)을 사용하여 X-선 회절에 적합한 결정을 얻었다. 마이크로-시드를 사용하여 18% PEG(3 kDa), 0.2 M (NH4)2SO4, 0.1 M Tris(pH 8.5)로부터 인간 PSMA ECD에 결합된 PSMB83 Fab의 결정을 성장시켰으며, PSMA/Fab 복합체는 초기에 7.3 mg/mL였다. 유리 PSMB83 Fab의 결정을 25% PEG(3 kDa), 0.2 M LiCl, 0.1 M 아세테이트(pH 4.5)로부터 얻었으며, 이때 Fab는 초기에 8.8 mg/mL였다.
이 구조를 Phaser(Phaser Crystallographic Software, University of Cambridge)를 사용하여 분자 대체(molecular replacement, MR)에 의해 해석하였다. PSMB83 Fab 구조에 대한 MR 검색 모델은 PDB 코드 4M6O였다. PSMA/Fab 복합체 구조는 MR 검색 모델로서 PSMA(PDB 코드: 2C6G) 및 PSMB83 Fab(1.93 Å 분해능에서의 구조; 데이터는 나타내지 않음)의 결정 구조를 사용하여 해석하였다. PHENIX(문헌[Adams et al, 2004])를 사용하여 구조를 정밀화하고, COOT(문헌[Emsley and Cowtan, 2004])를 사용하여 모델 조정을 수행하였다. 모든 다른 결정학적 계산은 CCP4 프로그램 제품군(suite)을 사용하여 수행하였다(문헌[Collaborative Computational Project Number 4, 1994]). 모든 분자 그래픽은 PyMol(문헌[PyMOL Molecular Graphics System, Version 1.4.1, 
, LLC.])을 사용하여 생성하였고, 상보성 결정 영역(CDR)은 카바트 정의를 사용하여 결정하였다.
PSMA/Fab 구조는 Fab 경쇄 잔기 1 내지 211, Fab 중쇄 잔기 1 내지 224(무질서한 잔기 138 내지 146은 제외함) 및 PSMA 잔기 56 내지 750을 포함하며, 이는 프로테아제 도메인(잔기 56 내지 116 및 352 내지 590), 정점 도메인(잔기 117 내지 351) 및 나선 도메인(잔기 591 내지 750), 및 PSMA 이량체 하위단위당 10개의 가능한 N-연결 글리칸 중 7개(Asn-76, -121, -140, -195, -459, -476, 및 -638에서)에 상응한다. PSMA 활성 부위는 3개의 도메인들 사이의 계면에 위치해 있고, 그것은 히스티딘(H377 및 H553) 및 글루타메이트/아스파르테이트(D387, 촉매적 E424, E425, 및 D453) 잔기 및 물 분자에 의해 배위된 2개의 아연 원자를 함유한다. 이러한 결정 비대칭 단위는 하나의 PSMA 이량체를 함유하며, 이때 각각의 하위단위는 PSMB83 Fab와 유사한 방식으로 결합된다. Fab/PSMA 결합 부위는 전자 밀도 맵에 의해 명확한데, 이는 결합 잔기들의 신뢰성 있는 위치결정을 가능하게 한다. 이들 Fab 및 PSMA 분자는 도 25 내지 도 30에 순차적으로 넘버링되어 있다.
PSMB83 에피토프, 파라토프 및 상호작용. 이중특이성 항체 PS3B27에서의 모 항-PSMA Fab 아암인 PSMB83은 PSMA의 정점 도메인 내의 입체구조 및 불연속 에피토프를 인식한다(도 25). Fab에 의해 매립되는 PSMA 표면적은 약 700 Å2이다. 구체적으로, PSMB83 에피토프 잔기는 I138, F235, P237, G238, D244, Y299, Y300, Q303, K304, E307, 및 K324-P326이다. 나선 α7(잔기 Y299 내지 E307)은 에피토프의 우세한 영역이며, Fab 중쇄 및 경쇄 CDR에 걸쳐 결합한다. 이 나선의 한쪽 말단에서는, Y299와 Y300이 Fab 잔기 Y57H, W94L 및 PSMA 잔기 F235 및 P237과 함께 방향족 클러스터를 형성하는 반면, 다른 한쪽 나선 말단에서의 E307은 R91L 및 수소 결합 Y32L과 함께 염 가교를 형성한다. 도 26 및 도 27은 PSMA와 PSMB83 경쇄 및 중쇄와의 주요 상호작용을 나타낸다. PSMB83 에피토프 잔기는 인간과 사이노몰거스 원숭이 사이에서 보존되고(도 28), 이중특이성 항체 PS3B27은 인간 및 사이노 PSMA와 유사한 친화성으로 결합하는 것으로 입증되었다. 대조적으로, 인간 대 마우스 G238A, 특히 Y300D 에피토프 돌연변이는 인간과 비교하여 마우스 PSMA에 대한 PSMB83 결합 친화도를 저하시킬 것으로 예상된다. Y300D 돌연변이는 N59H와의 수소 결합 접촉 및 W94L과의 π 스태킹 상호작용을 방해한다.PSMB83 파라토프는 CDR-L2 및 CDR-H1을 제외한 모든 CDR로부터의 잔기들로 구성된다(도 29). 구체적으로, 파라토프 잔기는 경쇄 S30L, Y32L, R91L, S92L, W94L, 및 중쇄 G56H-N59H, K65H, G66H, Y101H, V107H, 및 D109H이다. 도 30은 PSMA와 PSMB83 사이의 상호작용 접촉을 나타낸다.에피토프의 접근가능한 위치는 PS3B27 이중특이성 항체 내의 PSMB83 Fab 아암의 막-결합된 PSMA에 대한 결합을 용이하게 하는 반면, 다른 하나의 Fab 아암은 T-세포 막 내의 CD3에 여전히 결합된다. PSMB83은 PSMA 효소 활성을 억제할 것으로 예상되지 않는데, 그 이유는, 이 항체는 활성 부위로부터 떨어져서 결합하고, 효소 기능에 영향을 줄 수 있는 PSMA에 있어서의 어떠한 유의한 구조적 변화도 야기하지 않기 때문으로, 이때 이러한 구조적 변화에는, 예를 들어 활성 부위를 폐쇄하는 루프 이동 또는 촉매 잔기의 변위(Fab 결합 및 비결합(문헌[Barinka et al, 2007]) 구조에서의 PSMA 분자의 Cα 중첩의 경우 0.3 Å의 RMSD)가 있다.
실시예 14. 항-PSMA 친화성 성숙
친화성 성숙을 2개의 PSMA 친화성 성숙 라이브러리로부터의 항-PSMA Fab 파지 클론에 대해 수행하여, 모 PSMB127(Fab ID = PSMB83)과 비교하여 증가된 결합 친화도를 갖는 항체를 확인하였다. PSMB127의 친화성 성숙을 위해 2개의 라이브러리를 생성하였다. 제1 라이브러리에서는, 중쇄 CDR1 및 CDR2를 표 22에서의 설계(PH9H9L1)에 따라 무작위화하였다. H-CDR3 단편을 pDR000024032로부터 PCR 증폭시키고, SacII + XhoI로 분해하였다. 이 단편을 PH9H9L1/PH9L3 라이브러리 내로 클로닝하였다. 이것을 E. 콜라이 MC1061F' 세포 내로 형질전환시키고, 이러한 Fab 라이브러리를 디스플레이하는 파지를 생성하였다. 제2 라이브러리에서는, 경쇄 CDR을 표 25에서의 설계(PH9L3L3)에 따라 무작위화하였다. PSMB83으로부터의 중쇄(PSMH360)를 PCR 증폭시키고, NcoI + XhoI로 분해하였다. 이 단편을 PH9L3L3 라이브러리 DNA(ELN: 드 노보 2010 파지 라이브러리 SRI-021) 내로 클로닝하였다. 이것을 E. 콜라이 MC1061F' 세포 내로 형질전환시키고, 이러한 Fab 라이브러리를 디스플레이하는 파지를 생성하였다.
[표 22]
[표 23]
PSMA 친화성 성숙 Fab-pIX 라이브러리의 용액 패닝을 3회 라운드 동안 비오티닐화 인간 PSMA ECD에 대해 수행하였다. 파지-결합된 항원을 제조자의 프로토콜에 따라 뉴트라비딘 비드(GE HealthCare Life Science Cat# 78152104011150) 상에 포획한 후, 1x PBST(0.05% Tween 20) 중에서 광범위한 세척을 수행하고, 500배 몰 과량의 비오티닐화된 항원 중에서 비표지화된 PSMA ECD와 함께 장시간 인큐베이션을 수행하였다. 이러한 패닝은 클론, PSMXP46R3_59H09, PSMXP46R3_59H06, PSMXP46R3_59E03, PSMXP46R3_59C09, PSMXP46R3_59H01, PSMXP46R3_59F11, 및 PSMXP46R3_59F07을 산출하였다.
항-PSMA Fab 클론의 발현 수준을 결정하기 위하여, 96웰 Maxisorb 플레이트를 항-인간 Fd IgG로 4℃에서 하룻밤 코팅하고, 세척하고, 3% 우유-PBS-0.05% Tween으로 1시간 동안 블로킹하였다. 파지 상층액 샘플을, 마지막의 웰 블랭크와 함께 11개의 희석물을 위하여, 블로킹 완충액 중에 2배 연속 희석시켰다. 100 ul의 이들 용액을 코팅된 플레이트 상에 1시간 동안 포획하였다. 플레이트를 세척하고, 100 ul의 항-F(ab')2-HRP 항체를 1시간 동안 첨가하였다. 플레이트를 세척하고, 100 ul의 퍼옥시다제 시약으로 발현시키고, Envision 상에서 발광을 판독하였다(도 31).
인간 및 사이노몰거스 재조합 단백질에 대한 항-PSMA Fab 클론의 결합을 결정하기 위하여, 96웰 Maxisorb 플레이트를 4℃에서 하룻밤 100 ul의 5 ug/ml 뉴트라비딘으로 코팅하였다. 플레이트를 세척하고, 3% 우유-PBS-0.05% Tween으로 1시간 동안 블로킹하였다. 재조합 비오티닐화 인간 및 사이노몰거스 PSMA 단백질을 실온에서 1시간 동안 2.5 ug/ml로 포획하였다. 플레이트를 세척하고, 100 ul의 2배 연속 희석된 Fab 상층액을 실온에서 1시간 동안 포획하였다. 플레이트를 세척하고, 이어서 PBST 중 0.3% 우유 200 ul와 2.5시간 인큐베이션하여 약친화도 Fab들 중 일부를 씻어내었다. 이어서, 신선한 PBST 중 0.3% 우유 200 ul와 함께 추가 30분 인큐베이션하여 더 약한 친화도의 Fab를 제거하였다. 플레이트를 세척하고, 100 ul의 항-F(ab')2-HRP 항체를 1시간 동안 첨가하였다. 플레이트를 세척하고, 100 ul의 퍼옥시다제 시약으로 발현시키고, Envision 상에서 발광을 판독하였다(도 32 및 도 33). 도 31은 모 Fab와 친화성 성숙된 Fab의 단백질 발현이 유사하였음을 입증한다. y축 값은 희석 곡선에 걸쳐 Fab 단백질의 풍부도와 동등한 검출 시약의 발광을 나타내며; 발광 판독치가 더 높을수록, 웰 내의 단백질은 더 많으며, 이는 연속 2배 희석으로 감소하였다. 친화성 성숙 Fab를 갖는 웰 내에 더 많은 단백질이 존재하였지만, 모체 대비 증가는 EC50 값(이는 최대 반응의 절반을 제공하는 단백질의 농도임)에 의해 입증되는 바와 같이 기껏해야 5배 더 크다. 이들 데이터는 도 32 및 도 33에서의 PSMA 결합 프로파일의 차이가 Fab 농도의 차이로 인한 것이 아님을 입증한다.
도 32는 모 항-PSMA Fab(PSMB83)에 비하여 인간 재조합 항원에 대한 친화성 성숙된 Fab의 개선된 결합을 입증한다. 역시, 그래프의 y 축은 발광 값을 나타낸다. 이 경우에는, 그 값이 더 클수록 인간 PSMA 단백질에 결합된 Fab가 더 많다는 것을 의미한다. 이는 결합의 척도인데, 그 이유는, (x 축을 따른) Fab의 증가된 농도가 더 높은 발광 값을 생성하기 때문이다. 고농도에서도 신호의 부재에 의해 입증되는 바와 같이(x 축을 따른 채워지지 않은 원), 이들 조건 하에서 모 Fab의 결합은 무시될 수 있었다. 친화성 성숙된 Fab의 결합을 시험된 농도에 걸쳐 관찰하였는데, 이는 인간 PSMA 단백질에 대한 더 강한 결합 용량과 동등하다. 인간 PSMA 단백질에 대한 모 Fab 결합이 0임을 고려하면, EC50은 생성되지 않을 수 있다.
도 33은 모 항-PSMA Fab(PSMB83)에 비하여 사이노몰거스 재조합 항원에 대한 친화성 성숙된 Fab의 개선된 결합을 입증한다. 역시, 그래프의 y 축은 발광 값을 나타낸다. 이 경우에는, 그 값이 더 클수록 사이노몰거스 PSMA 단백질에 결합된 Fab가 더 많다는 것을 의미한다. 이는 결합의 척도인데, 그 이유는, (x 축을 따른) Fab의 증가된 농도가 더 높은 발광 값을 생성하기 때문이다. 고농도에서도 신호의 부재에 의해 입증되는 바와 같이(x 축을 따른 채워지지 않은 원), 이들 조건 하에서 모 Fab의 결합은 무시될 수 있었다. 친화성 성숙된 Fab의 결합을 시험된 농도에 걸쳐 관찰하였는데, 이는 인간 PSMA 단백질에 대한 더 강한 결합 용량과 동등하다. 인간 PSMA 단백질에 대한 모 Fab 결합이 0임을 고려하면, 직접 비교를 위한 EC50은 생성되지 않을 수 있다.
전체적으로, 파지의 Fab 결합 프로파일은 모 항-PSMA mAb(PSMB127)에 비하여 인간 및 사이노몰거스 재조합 항원에 대한 개선된 결합을 입증한다. 이러한 개선은, Fab 발현 수준에 대해 정규화된 친화성 성숙 Fab의 결합을 보여주는 도 34 및 도 35에 의해 입증되는 바와 같이, Fab 발현 프로파일의 차이의 결과가 아니다. ELISA 스크리닝으로부터 확인된 상위 5개의 Fab 후보를 IgG4 PAA 상에서 단일클론 항체 포맷으로 생성하였다. 표 24는 후속 mAb 식별자를 열거하고, 표 25 및 표 26은 서열 정보를 제공한다.
[표 24]
[표 25]
[표 26]
3개의 상이한 HC와 4개의 상이한 LC를 매트릭스 형식으로 조합하여 히트의 다양성을 확장시켰다(표 26). PSMH860의 CDR2 내의 메티오닌이 번역후 위험(posttranslational risk)인 것을 고려하여, M64L을 사용하여 새로운 서열을 생성하였으며, 이는 PSMH865로 식별되었다. PSMH865를 PSML160과 쌍을 이루어서 Mab PSMB365를 생성하였다. 표 27 및 표 28은 서열 정보를 제공한다.
[표 26]
[표 27]
[표 28]
표 29는 친화성 성숙된 히트 모두에 대한 CDR을 제공한다.
[표 29]
실시예 15. 친화성 성숙된 PSMAxCD3 이중특이체의 생성
2가지 유형의 친화성 성숙된 PSMAxCD3 이중특이성 항체를 생성하였다: 고친화도 CD3 아암[CD3B219(VH 서열 번호 104, VL 서열 번호 105; HC 서열 번호 110, LC 서열 번호 111)] 또는 CD3B376으로 불리는 저친화도 CD3 아암[CD3B376(VH 서열 번호 152, VL 서열 번호 153; HC 서열 번호 154, LC 서열 번호 155)]과 재조합된 표적화 아암(예를 들어, 친화성 성숙된 항-PSMA)에 특이적인 것.
[표 30]
이들 모 mAb는 IgG4 PAA GenMab 포맷(문헌[Labrijn et al, 2013])인데, 여기서 표적화 모체(PSMA)는 409R GenMab 돌연변이(IgG4에 대한 천연 아미노산)를 함유하는 반면, 사멸 모체(CD3)는 F405L GenMab 돌연변이 및 R409K 돌연변이를 함유한다. 단일특이성 항-CD3 항체는, 그의 Fc 영역 내에 Fc 치환 S228P, F234A, L235A, F405L, 및 R409K(CD3 아암)(넘버링은 EU 인덱스에 따름)를 갖는 IgG4로서 발현시켰다. 표적화 모체(PSMA)는 Fc 치환 S228P, F234A, L235A를 갖는 인간 IgG4 상에 있다. 단일특이성 항체들을 CMV 프로모터 하에서 HEK 세포주 내에서 발현시켰다.
모 PSMA 및 CD3 항체를 100 mM NaAc(pH 3.5)의 용리 완충액 및 2.5 M Tris(pH 7.2)의 중화 완충액을 사용하는 단백질 A 컬럼을 사용하여 정제하였다. 중화된 모 mAb를 사용하여 PSMAxCD3 이중특이성 항체를 제조하였다. 모 mAb의 일부분을 분석적 측정 및 검정을 위하여 D-PBS(pH 7.2) 완충액 중으로 추가로 완충액 교환하였다.
정제 후, 실시예 6에 기재된 바와 같이, 제어된 Fab-아암 교환을 수행하여 이중특이성 항체를 제조하였다.
재조합 반응에 사용된 모 mAb(즉, PSMA, CD3 또는 널)와 함께, 생성된 최종 이중특이성 항체가 표 27 및 표 28에 열거되어 있다.
선택된 PSMA 히트를 또한 비-사멸 아암(널)과 쌍을 이루어서 시험 목적을 위한 음성 대조군을 생성하였다. 대조 이중특이성 항체의 경우, IgG4 PAA 포맷의 RSV 항체인 B2M1을 생성하고, 정제하고, CD3 아암 CD3B219-F405L, R409K와 조합하여 CD3B288(CD3 × 널)을 생성하거나, PSMA 아암, PSMB122, PSMB126, PSMB130과 조합하여 각각 PS3B37, PS3B39 및 PS3B40(PSMA × 널)을 생성하였다.이들 PSMA 특이적 친화성 성숙된 mAb를 (상기 방법에서와 같이) CD3B219 및 CD3B376과 교차시켜, 표 31에 나타낸 이중특이성 항체를 생성하였다.
[표 31]
PSMAxCD3 이중특이성 항체를 PSMA 양성 세포주, LNCaP에 대한 결합, PSMA 음성 세포주, PC3에 대한 결합에 대해 시험하였다. PSMA 이중특이성 항체의 결합 능력을 평가하기 위하여, 세포-결합 검정을 이용하였다(앞서 기재됨). 이중특이성 항체를 단백질 농도에 대해 정규화하고, 이어서 인간 또는 사이노 PSMA를 발현하는 동일한 수의 세포와 함께 인큐베이션하였다. 각각의 농도에서의 MFI를 유세포측정에 의해 수집하고, 농도의 함수로서 도표로 나타내었다. 데이터를 log10을 통해 변환시키고, 이어서 도표로 나타내었다. 결합 곡선의 비선형 회귀를 행하여 EC50을 결정하였다.
이들 상대값을 표적 세포에 대한 PSMA 결합의 순위를 매기는 데 사용하였다. 도 36 내지 도 38은 제조된 모든 이중특이성 항체의 LNCaP 결합을 보여준다. 도 38에서, 작제물 중 어느 것도 PSMA 음성 세포주에 대한 결합을 나타내지 않았다. 도 36 및 도 37에서, 모든 친화성 성숙된 히트는 모 Mab, PS2B27과 비교하여, 좌측으로 이동된 곡선 및 증가된 cMax를 통한 증가된 결합 친화도를 입증하였다.
친화성 성숙된 이중특이성 항체와 재조합 사이노 PSMA ECD 및 인간 PSMA ECD와의 상호작용을 재조합 침프 PSMA ECD에 대해 앞서 기재된 바와 같이 ProteOn XPR36 시스템(BioRad)을 사용하여 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 연구하였다. 모든 이중특이성 항체는 실질적으로 동일한 친화도로 두 표적 모두에 결합하는데, KD는 인간 PSMA ECD에 대해서는 0.05 nM 내지 0.27 nM의 범위이고, 사이노 PSMA ECD에 대해서는 0.05 nM 내지 0.23 nM의 범위이다.
실시예 16. 기능적 세포 사멸 검정에서의 PSMA × CD3 친화성 성숙된 이중특이성 Ab의 평가
상기 데이터, 친화도 측정치 및 서열 동일성에 기초하여, CD3B219 또는 CD3B376과의 이중특이체로서의 3개의 PSMA 항체, PSMB347, PSMB360 및 PSMB365를 PSMA 특이적, 재유도된 T 세포 세포독성을 매개하는 능력에 대해 추가로 특성화하였다. T-세포 매개 사멸은 카스파제 세포독성 검정을 사용하여 측정하였는데, 이 검정은 활성 카스파제 3/7에 의한 형광 기질의 절단을 통해 세포 사멸을 간접적으로 측정한다. 기질의 절단은 형광 DNA 염료를 발생시키며, 이때 형광은 세포핵으로 제한된다. 동일한 좌표에서 웰(들)을 정밀하게 이미징할 수 있는 전동식 10X 대물렌즈를 사용하여, 검정 과정 전체에 걸쳐 각각의 웰에서 반복된 형광 측정을 실시한다. 표적 세포 집단이 규정된 크기 제한에 기초하여 그리고/또는 2차 표지의 사용을 통해 확인된다. 동결된 Pan CD3+ T-세포(미국 펜실베이니아주 콜마 소재의 Biological Specialty Corporation으로부터 구매됨)를 정상적인 건강한 공여자로부터의 음성 선택에 의해 단리하였다. PSMA를 발현하는 전립선암 세포(LNCaP, C42)를 10% HI FBS + 보충제를 함유하는 RPMI 1640(Life Technologies로부터 구매됨) 중에서 배양하였다.
T-세포와 표적 세포를, 선택 시약을 함유하지 않은 상태에서의 페놀 레드 무함유 RPMI + 10% FBS 및 보충제(Life Technologies) 중에서 3:1의 이펙터 대 표적 비(E:T)로 배합하고, 0.6 uL의 NucView 카스파제 시약(Essen Bioscience)을 제조자 가이드라인에 따라 매 1 mL마다의 세포에 대해 첨가하였다. 0.1 mL의 총 부피의 세포를 투명한 96웰 편평바닥 플레이트(BD Falcon)의 적절한 웰에 첨가하였다. PS3B27(CD3xPSMA), CD3B288(CD3x널) 또는 PS3B46(PSMAx널) 이중특이성 항체를 상기에 지시된 바와 같이 제조된 페놀 레드 무함유 RPMI 중에서 2X 최종 농도로 제조하고, 0.1 mL의 화합물을 각각의 웰에 첨가하였다. 웰의 에지에서의 세포 응집을 최소화하기 위하여 실온에서 30분간 인큐베이션한 후에, 플레이트를 Zoom Incucyte 기기(Essen Bioscience)에 옮겼다. Incucyte 기기는 37℃, 5% CO2로 설정된 가습된 인큐베이터 내에 둔다.
제조 가이드라인에 따라, 시험되는 각각의 세포주에 대해 Incucyte 상에서의 처리 규정을 설계하였다. 카스파제 신호에서 평탄역(plateau)이 관찰된 후, 최고 농도의 시험 화합물(들)이 담긴 웰(들)에서의 최대 신호로부터의 3회 이상의 연속 감소가 관찰될 때까지 매 6시간마다 측정을 실시하였다. 데이터가 도 39에 나타나 있는 바와 같이, PS3B80, PS3B79, PS3B89, PS3B90, PS3B63, 및 PS3B72에 대한 곡선은 좌측으로 이동되어 있는데, 이는 PS3B27에 비하여 증가된 효력을 나타낸다. 널 아암 대조군은 예상되는 바와 같이 세포사를 유도하지 않았다.
실시예 17. 인간화 NSG 마우스에서 LNCaP 이종이식편의 종양발생 예방에 있어서의 항-종양 효능
인간 T 세포로 복막내(ip)로 인간화된 수컷 NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) 마우스에서 확립된 3D LnCaP AR.TB 인간 전립선암 이종이식편에서의 PS3B79 및 PS3B90의 효능을 평가하였다. 2.5 및 5 mg/㎏의 PS3B79 및 PS3B90 또는 널xCD3B376 항체 대조군에 총 8회의 용량을 위하여 일수 36, 39, 43, 47, 50, 53, 56, 60, 및 63에서 q3d 내지 q4d로 투여하였다. 군당 9 마리의 동물이 남아 있을 때의 본 연구의 마지막 날짜인 종양 이식 후 일수 53에서, 종양 성장 억제(% TGI)를 계산하였다. 통계학적으로 유의한 종양 성장 억제가, 널xCD3 대조군(본페로니(Bonferroni) 검정을 동반하는 이원분산분석, *p<0.001, 도 41)과 대비하여, 5 mg/㎏의 PS3B79에 대해서는 42% TGI(본페로니 검정을 동반하는 이원분산분석, *p<0.0001, 도 40)로, 그리고 2.5 및 5 mg/㎏의 PS3B90에 대해서는 각각 53% 및 33%로 관찰되었다. 따라서, CD3B376은 생체내에서 T 세포 활성화 및 세포독성을 유도하고, 그 결과 고친화도 PSMA 결합 아암, PSMB360 및 PSMB365와의 이중특이성 포맷에서 종양 성장 억제를 가져올 수 있다.
실시예 18. T-세포 인간화 NSG 마우스에서 확립된 환자-유래 이종이식편 LuCaP 86.2 전립선 종양 모델에서의 PSMAxCD3의 효능
인간 Pan-T 세포로 복막내(ip)로 인간화된 수컷 NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) 마우스에서 확립된 환자-유래 이종이식편(PDX) LuCaP 86.2 전립선 종양 모델에서의 PS3B72의 항종양 효능을 평가하였다. 0.5 및 5 mg/㎏의 PS3B72 또는 널xCD3 항체 대조군을 총 10회의 용량을 위하여 종양 이식 후 일수 45, 49, 52, 56, 59, 63, 66, 70, 73, 및 77에서 q3d 내지 q4d로 투여하였다. 군당 10 마리의 동물 전부가 남아 있을 때의 본 연구의 마지막날인 종양 이식 후 일수 83에서, 종양 성장 억제(% TGI)를 계산하였다. 통계학적으로 유의한 종양 성장 억제가, 널xCD3 대조군과 대비하여, 0.5 및 5 mg/㎏의 PSMAxCD3 둘 모두에 대해 각각 108% 및 101% ΔTGI(FDR 조정을 사용한 선형 혼합-효과 분석, *p<0.0001, 도 42)로 관찰되었다. 5주 투여 기간의 종료 시점까지, 10건의 완전 퇴행(complete regression, CR) 중 9건이 0.5 mg/㎏ 군의 PSMAxCD3에서 관찰되었다. 이들 9 마리의 마우스는 연구 종료까지 무종양(tumor-free) 상태로 유지되었다. 연구 종료 시점에서, 10건의 CR 중 4건이 5 mg/㎏ 군의 PS3B72에서 관찰되었다. T 세포 인간화의 부재 하에서 5 mg/㎏으로 PS3B72를 마우스에 투여하였을 때, 항종양 효능은 관찰되지 않았다.
SEQUENCE LISTING
<110> ANDERSON, GLENN MARK
BUSH, TAMMY
CARDOSO, ROSA MARIA
CHI, ELLEN
CONNOR, JUDITH ANN
DINH, THAI QUANG
DOMINGO, DERRICK LEMON
JONES, JOHN MICHAEL
KANE, COLLEEN
MATTSON, BETHANY KAY
MCDEVITT, THERESA MARIE
MOONEY, JILL MARIE
TAWADROS, RICHARD STEPHEN
ZHOU, HONG MIMI
<120> PSMA BINDING AGENTS AND USES THEREOF
<130> JBI5156WOPCT1
<140>
<141>
<150> 62/676,099
<151> 2018-05-24
<160> 162
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 750
<212> PRT
<213> Pan troglodytes
<400> 1
Met Trp Asn Leu Leu His Glu Thr Asp Ser Ala Val Ala Thr Ala Arg
1 5 10 15
Arg Pro Arg Trp Leu Cys Ala Gly Ala Leu Val Leu Ala Gly Gly Phe
20 25 30
Phe Leu Leu Gly Phe Leu Phe Gly Trp Phe Ile Lys Ser Ser Asn Glu
35 40 45
Ala Thr Asn Ile Thr Pro Lys His Asn Met Lys Ala Phe Leu Asp Glu
50 55 60
Leu Lys Ala Glu Asn Ile Lys Lys Phe Leu Tyr Asn Phe Thr Gln Ile
65 70 75 80
Pro His Leu Ala Gly Thr Glu Gln Asn Phe Gln Leu Ala Lys Gln Ile
85 90 95
Gln Ser Gln Trp Lys Glu Phe Gly Leu Asp Ser Val Glu Leu Ala His
100 105 110
Tyr Asp Val Leu Leu Ser Tyr Pro Asn Lys Thr His Pro Asn Tyr Ile
115 120 125
Ser Ile Ile Asn Glu Asp Gly Asn Glu Ile Phe Asn Thr Ser Leu Phe
130 135 140
Glu Pro Pro Pro Pro Gly Tyr Glu Asn Val Leu Asp Ile Val Pro Pro
145 150 155 160
Phe Ser Ala Phe Ser Pro Gln Gly Met Pro Glu Gly Asp Leu Val Tyr
165 170 175
Val Asn Tyr Ala Arg Thr Glu Asp Phe Phe Lys Leu Glu Arg Asp Met
180 185 190
Lys Ile Asn Cys Ser Gly Lys Ile Val Ile Ala Arg Tyr Gly Lys Val
195 200 205
Phe Arg Gly Asn Lys Val Lys Asn Ala Gln Leu Ala Gly Ala Lys Gly
210 215 220
Val Ile Leu Tyr Ser Asp Pro Ala Asp Tyr Phe Ala Pro Gly Val Lys
225 230 235 240
Ser Tyr Pro Asp Gly Trp Asn Leu Pro Gly Gly Gly Val Gln Arg Gly
245 250 255
Asn Ile Leu Asn Leu Asn Gly Ala Gly Asp Pro Leu Thr Pro Gly Tyr
260 265 270
Pro Ala Asn Glu Tyr Ala Tyr Arg His Gly Ile Ala Glu Ala Val Gly
275 280 285
Leu Pro Ser Ile Pro Val His Pro Ile Gly Tyr Tyr Asp Ala Gln Lys
290 295 300
Leu Leu Glu Lys Met Gly Gly Ser Ala Pro Pro Asp Ser Ser Trp Arg
305 310 315 320
Gly Ser Leu Lys Val Pro Tyr Asn Val Gly Pro Gly Phe Thr Gly Asn
325 330 335
Phe Ser Thr Gln Lys Val Lys Met His Ile His Ser Thr Asn Glu Val
340 345 350
Thr Arg Ile Tyr Asn Val Ile Gly Thr Leu Arg Gly Ala Val Glu Pro
355 360 365
Asp Arg Tyr Val Ile Leu Gly Gly His Arg Asp Ser Trp Val Phe Gly
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<213> Homo sapiens
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Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
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Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
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Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Leu Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
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Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
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Gly
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Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
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50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
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Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
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Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
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Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
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Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
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Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440 445
Lys
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<212> PRT
<213> Macaca fascicularis
<400> 126
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1 5 10 15
Arg Pro Arg Trp Leu Cys Ala Gly Ala Leu Val Leu Ala Gly Gly Phe
20 25 30
Phe Leu Leu Gly Phe Leu Phe Gly Trp Phe Ile Lys Ser Ser Ser Glu
35 40 45
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Phe Arg Gly Asn Lys Val Lys Asn Ala Gln Leu Ala Gly Ala Thr Gly
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Val Ile Leu Tyr Ser Asp Pro Asp Asp Tyr Phe Ala Pro Gly Val Lys
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<213> Pan troglodytes
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Val Asn Tyr Ala Arg Thr Glu Asp Phe Phe Lys Leu Glu Arg Asp Met
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Phe Arg Gly Asn Lys Val Lys Asn Ala Gln Leu Ala Gly Ala Lys Gly
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Val Ile Leu Tyr Ser Asp Pro Ala Asp Tyr Phe Ala Pro Gly Val Lys
225 230 235 240
Ser Tyr Pro Asp Gly Trp Asn Leu Pro Gly Gly Gly Val Gln Arg Gly
245 250 255
Asn Ile Leu Asn Leu Asn Gly Ala Gly Asp Pro Leu Thr Pro Gly Tyr
260 265 270
Pro Ala Asn Glu Tyr Ala Tyr Arg His Gly Ile Ala Glu Ala Val Gly
275 280 285
Leu Pro Ser Ile Pro Val His Pro Ile Gly Tyr Tyr Asp Ala Gln Lys
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Gly Ser Leu Lys Val Pro Tyr Asn Val Gly Pro Gly Phe Thr Gly Asn
325 330 335
Phe Ser Thr Gln Lys Val Lys Met His Ile His Ser Thr Asn Glu Val
340 345 350
Thr Arg Ile Tyr Asn Val Ile Gly Thr Leu Arg Gly Ala Val Glu Pro
355 360 365
Asp Arg Tyr Val Ile Leu Gly Gly His Arg Asp Ser Trp Val Phe Gly
370 375 380
Gly Ile Asp Pro Gln Ser Gly Ala Ala Val Val His Glu Ile Val Arg
385 390 395 400
Ser Phe Gly Thr Leu Lys Lys Glu Gly Trp Arg Pro Arg Arg Thr Ile
405 410 415
Leu Phe Ala Ser Trp Asp Ala Glu Glu Phe Gly Leu Leu Gly Ser Thr
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Glu Trp Ala Glu Glu Asn Ser Arg Leu Leu Gln Glu Arg Gly Val Ala
435 440 445
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Leu Lys Ser Pro Asp Glu Gly Phe Glu Gly Lys Ser Leu Tyr Glu Ser
485 490 495
Trp Thr Lys Lys Ser Pro Ser Pro Glu Phe Ser Gly Met Pro Arg Ile
500 505 510
Ser Lys Leu Gly Ser Gly Asn Asp Phe Glu Val Phe Phe Gln Arg Leu
515 520 525
Gly Ile Ala Ser Gly Arg Ala Arg Tyr Thr Lys Asn Trp Glu Thr Asn
530 535 540
Lys Phe Ser Gly Tyr Pro Leu Tyr His Ser Val Tyr Glu Thr Tyr Glu
545 550 555 560
Leu Val Glu Lys Phe Tyr Asp Pro Met Phe Lys Tyr His Leu Thr Val
565 570 575
Ala Gln Val Arg Gly Gly Met Val Phe Glu Leu Ala Asn Ser Ile Val
580 585 590
Leu Pro Phe Asp Cys Arg Asp Tyr Ala Val Val Leu Arg Lys Tyr Ala
595 600 605
Asp Lys Ile Tyr Asn Ile Ser Met Lys His Pro Gln Glu Met Lys Thr
610 615 620
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Glu Ile Ala Ser Lys Phe Thr Glu Arg Leu Gln Asp Phe Asp Lys Ser
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Arg Ala Phe Ile Asp Pro Leu Gly Leu Pro Asp Arg Pro Phe Tyr Arg
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Phe Pro Gly Ile Tyr Asp Ala Leu Phe Asp Ile Glu Ser Lys Val Asp
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Pro Ser Lys Ala Trp Gly Asp Val Lys Arg Gln Ile Ser Val Ala Ala
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Ser
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Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu
275 280 285
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
290 295 300
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg
305 310 315 320
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
325 330 335
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu
340 345 350
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
355 360 365
Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
370 375 380
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
385 390 395 400
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
405 410 415
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Leu Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
420 425 430
Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
435 440 445
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu
450 455 460
Gly Lys
465
<210> 155
<211> 239
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 155
Met Ala Arg Ser Ala Leu Leu Ile Leu Ala Leu Leu Leu Leu Gly Leu
1 5 10 15
Phe Ser Pro Gly Ala Trp Gly Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser
20 25 30
Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr
35 40 45
Ser Ser Asn Ile Gly Thr Tyr Lys Phe Val Ser Trp Tyr Gln Gln His
50 55 60
Pro Asp Lys Ala Pro Lys Val Leu Leu Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro
65 70 75 80
Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala
85 90 95
Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Gln Ala Asp Tyr His
100 105 110
Cys Val Ser Tyr Ala Gly Ser Gly Thr Leu Leu Phe Gly Gly Gly Thr
115 120 125
Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu
130 135 140
Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val
145 150 155 160
Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys
165 170 175
Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser
180 185 190
Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr
195 200 205
Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His
210 215 220
Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
225 230 235
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<213> Unknown
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Unknown:
'KDEL' family motif peptide"
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Lys Asp Glu Leu
1
<210> 157
<211> 752
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 157
Met Trp Asn Ala Leu Gln Asp Arg Asp Ser Ala Glu Val Leu Gly His
1 5 10 15
Arg Gln Arg Trp Leu Arg Val Gly Thr Leu Val Leu Ala Leu Thr Gly
20 25 30
Thr Phe Leu Ile Gly Phe Leu Phe Gly Trp Phe Ile Lys Pro Ser Asn
35 40 45
Glu Ala Thr Gly Asn Val Ser His Ser Gly Met Lys Lys Glu Phe Leu
50 55 60
His Glu Leu Lys Ala Glu Asn Ile Lys Lys Phe Leu Tyr Asn Phe Thr
65 70 75 80
Arg Thr Pro His Leu Ala Gly Thr Gln Asn Asn Phe Glu Leu Ala Lys
85 90 95
Gln Ile His Asp Gln Trp Lys Glu Phe Gly Leu Asp Leu Val Glu Leu
100 105 110
Ser His Tyr Asp Val Leu Leu Ser Tyr Pro Asn Lys Thr His Pro Asn
115 120 125
Tyr Ile Ser Ile Ile Asn Glu Asp Gly Asn Glu Ile Phe Lys Thr Ser
130 135 140
Leu Ser Glu Gln Pro Pro Pro Gly Tyr Glu Asn Ile Ser Asp Val Val
145 150 155 160
Pro Pro Tyr Ser Ala Phe Ser Pro Gln Gly Thr Pro Glu Gly Asp Leu
165 170 175
Val Tyr Val Asn Tyr Ala Arg Thr Glu Asp Phe Phe Lys Leu Glu Arg
180 185 190
Glu Met Lys Ile Ser Cys Ser Gly Lys Ile Val Ile Ala Arg Tyr Gly
195 200 205
Lys Val Phe Arg Gly Asn Met Val Lys Asn Ala Gln Leu Ala Gly Ala
210 215 220
Lys Gly Met Ile Leu Tyr Ser Asp Pro Ala Asp Tyr Phe Val Pro Ala
225 230 235 240
Val Lys Ser Tyr Pro Asp Gly Trp Asn Leu Pro Gly Gly Gly Val Gln
245 250 255
Arg Gly Asn Val Leu Asn Leu Asn Gly Ala Gly Asp Pro Leu Thr Pro
260 265 270
Gly Tyr Pro Ala Asn Glu His Ala Tyr Arg His Glu Leu Thr Asn Ala
275 280 285
Val Gly Leu Pro Ser Ile Pro Val His Pro Ile Gly Tyr Asp Asp Ala
290 295 300
Gln Lys Leu Leu Glu His Met Gly Gly Pro Ala Pro Pro Asp Ser Ser
305 310 315 320
Trp Lys Gly Gly Leu Lys Val Pro Tyr Asn Val Gly Pro Gly Phe Ala
325 330 335
Gly Asn Phe Ser Thr Gln Lys Val Lys Met His Ile His Ser Tyr Thr
340 345 350
Lys Val Thr Arg Ile Tyr Asn Val Ile Gly Thr Leu Lys Gly Ala Leu
355 360 365
Glu Pro Asp Arg Tyr Val Ile Leu Gly Gly His Arg Asp Ala Trp Val
370 375 380
Phe Gly Gly Ile Asp Pro Gln Ser Gly Ala Ala Val Val His Glu Ile
385 390 395 400
Val Arg Ser Phe Gly Thr Leu Lys Lys Lys Gly Arg Arg Pro Arg Arg
405 410 415
Thr Ile Leu Phe Ala Ser Trp Asp Ala Glu Glu Phe Gly Leu Leu Gly
420 425 430
Ser Thr Glu Trp Ala Glu Glu His Ser Arg Leu Leu Gln Glu Arg Gly
435 440 445
Val Ala Tyr Ile Asn Ala Asp Ser Ser Ile Glu Gly Asn Tyr Thr Leu
450 455 460
Arg Val Asp Cys Thr Pro Leu Met Tyr Ser Leu Val Tyr Asn Leu Thr
465 470 475 480
Lys Glu Leu Gln Ser Pro Asp Glu Gly Phe Glu Gly Lys Ser Leu Tyr
485 490 495
Asp Ser Trp Lys Glu Lys Ser Pro Ser Pro Glu Phe Ile Gly Met Pro
500 505 510
Arg Ile Ser Lys Leu Gly Ser Gly Asn Asp Phe Glu Val Phe Phe Gln
515 520 525
Arg Leu Gly Ile Ala Ser Gly Arg Ala Arg Tyr Thr Lys Asn Trp Lys
530 535 540
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545 550 555 560
Tyr Glu Leu Val Val Lys Phe Tyr Asp Pro Thr Phe Lys Tyr His Leu
565 570 575
Thr Val Ala Gln Val Arg Gly Ala Met Val Phe Glu Leu Ala Asn Ser
580 585 590
Ile Val Leu Pro Phe Asp Cys Gln Ser Tyr Ala Val Ala Leu Lys Lys
595 600 605
Tyr Ala Asp Thr Ile Tyr Asn Ile Ser Met Lys His Pro Gln Glu Met
610 615 620
Lys Ala Tyr Met Ile Ser Phe Asp Ser Leu Phe Ser Ala Val Asn Asn
625 630 635 640
Phe Thr Asp Val Ala Ser Lys Phe Asn Gln Arg Leu Gln Glu Leu Asp
645 650 655
Lys Ser Asn Pro Ile Leu Leu Arg Ile Met Asn Asp Gln Leu Met Tyr
660 665 670
Leu Glu Arg Ala Phe Ile Asp Pro Leu Gly Leu Pro Gly Arg Pro Phe
675 680 685
Tyr Arg His Ile Ile Tyr Ala Pro Ser Ser His Asn Lys Tyr Ala Gly
690 695 700
Glu Ser Phe Pro Gly Ile Tyr Asp Ala Leu Phe Asp Ile Ser Ser Lys
705 710 715 720
Val Asn Ala Ser Lys Ala Trp Asn Glu Val Lys Arg Gln Ile Ser Ile
725 730 735
Ala Thr Phe Thr Val Gln Ala Ala Ala Glu Thr Leu Arg Glu Val Ala
740 745 750
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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polypeptide"
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Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Lys Ser Asp
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Glu Ile Ser Gly Ser Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Tyr Val Gly Asp Tyr Phe Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys
225
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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polypeptide"
<400> 159
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 160
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 160
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Glu Trp Glu Leu Phe Asp Ser Arg Leu Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 161
<211> 1410
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
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polynucleotide"
<400> 161
atggcttggg tgtggacctt gctattcctg atggcagctg cccaaagtat acaggccgag 60
gttcagctgc tggaatctgg cggaggattg gttcagcctg gcggctctct gagactgtct 120
tgtgccgctt ctggcttcac cttcaagtcc gacgctatgc actgggtccg acaggcccct 180
ggaaaaggac tggaatgggt gtccgagatc tctggctctg gcggctacac caactacgcc 240
gactccatga agtcccggtt caccatctct cgggacaact ccaagaacac cctgtacctg 300
cagatgaact ccctgagagc cgaggacacc gccgtgtact actgcgccag agactcctac 360
gactccagcc tgtacgtggg cgactacttc gattattggg gccagggcac cctggtcacc 420
gtttcttctg cttccaccaa gggcccatcc gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc 480
acctccgaga gcacagccgc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 540
acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta 600
cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc 660
acgaaaacct acacctgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga 720
gttgagtcca aatatggtcc cccatgccca ccatgcccag cacctgaggc cgccggggga 780
ccatcagtct tcctgttccc cccaaaaccc aaggacactc tcatgatctc ccggacccct 840
gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc caggaagacc ccgaggtcca gttcaactgg 900
tacgtggatg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagttcaac 960
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaacggcaag 1020
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc ctcccgtcct ccatcgagaa aaccatctcc 1080
aaagccaaag ggcagccccg agagccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccaggaggag 1140
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc 1200
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1260
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaggctaa ccgtggacaa gagcaggtgg 1320
caggagggga atgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacaca 1380
cagaagagcc tctccctgtc tctgggtaaa 1410
<210> 162
<211> 699
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 162
atggcctggg tgtggaccct gctgttcctg atggccgccg cccagagcat ccaggccgag 60
atcgtgctga cccagagccc cgccaccctg agcctgagcc ccggcgagcg ggccaccctg 120
agctgccggg ccagccagag cgtgagcagc tacctggcct ggtaccagca gaagcccggc 180
caggcccccc ggctgctgat ctacgacgcc agcaaccggg ccaccggcat ccccgcccgg 240
ttcagcggca gcggcagcgg caccgacttc accctgacca tcagcagcct ggagcccgag 300
gacttcgccg tgtactactg ccagcagcgg agcaactggc ccctgacctt cggccagggc 360
accaaggtgg agatcaagcg tacggtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 420
gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 480
agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 540
agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 600
agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 660
agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt 699
Claims (150)
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
상기 항체 또는 항원-결합 단편은 (i) 재조합 판 트로글로디테스(Pan troglodytes) PSMA를 발현하는 세포에 결합하며, 여기서 상기 세포에 대한 결합은 유세포측정(flow cytometry)에 의해 측정되고, (ii) 약 30 nM 이하의 친화도로 재조합 판 트로글로디테스 PSMA 세포외 도메인(서열 번호 4)에 결합하며, 여기서 상기 친화도는 ProteOn XPR36 표면 플라즈몬 공명 검정에 의해 측정되는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제1항에 있어서, 하기 특성들 중 1개, 2개, 3개 또는 4개를 갖는, 항체:
e) 20 nM 이하의 계산된 EC50으로 LNCaP 세포에 결합하고, 40 nM 이하의 계산된 EC50으로 마카카 파시쿨라리스(Macaca fascicularis) PSMA-발현 HEK 세포에 결합하며, 여기서 LNCaP 세포에 대한 결합과 마카카 파시쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포에 대한 결합 사이의 계산된 EC50의 차이는 5배 미만이고, 상기 계산된 EC50은 유세포측정을 사용하여 0℃에서 전세포 결합 검정에서 측정됨,
f) 12 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간(서열 번호 7), 판 트로글로디테스(서열 번호 4) 및 마카카 파시쿨라리스(서열 번호 5)로부터의 재조합 PSMA ECD에 결합하며, 여기서 상기 KD는 +25℃에서의 ProteOn 표면 플라즈몬 공명 검정 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨,
g) 항-CD3 항체 CD3B219와 이중특이성 항체로 쌍을 이룰 때, LNCaP 세포, C42 세포, 인간 PSMA-발현 HEK 세포 또는 마카카 파시쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포의 T-세포 매개 사멸을 디스플레이하며, 여기서 상기 T-세포 매개 사멸은 크롬-51에 의해 또는 카스파제 3/7 활성화 검정에 의해 측정됨, 또는
h) 인간 PSMA(서열 번호 3)의 잔기 I138, F235, P237, G238, D244, Y299, Y300, Q303, K304, E307, 및 K324-P326으로 구성되는 입체구조 에피토프(conformational epitope)를 인식함. - 제2항에 있어서, 각각 서열 번호 14, 15, 16, 17, 18 및 19의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
- 제2항에 있어서, 각각 서열 번호 20, 21, 22, 23, 12 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
- 제2항에 있어서, 각각 서열 번호 25, 26, 27, 28, 29 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
- 제2항에 있어서, 각각 서열 번호 36, 37, 38, 39, 40 및 41의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
- 제2항에 있어서, 각각 서열 번호 31, 42, 43, 11, 12 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
- 제2항에 있어서, 각각 서열 번호 31, 44, 45, 46, 29 및 47의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
- 제2항에 있어서, 각각 서열 번호 36, 37, 48, 49, 50 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
- 제2항에 있어서, 각각 서열 번호 36, 37, 52, 49, 50 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
- 제2항에 있어서, 각각 서열 번호 8, 9, 10, 11, 12 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
- 제2항에 있어서, 각각 서열 번호 31, 32, 33, 34, 12 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
- 제2항에 있어서, 각각 서열 번호 53, 54, 55, 23, 12 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
- 제2항에 있어서, 각각 서열 번호 122, 123, 124, 23, 12 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 항체.
- 제2항에 있어서, 서열 번호 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 75, 77, 79, 또는 160의 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하는, 항체.
- 제15항에 있어서, 서열 번호 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 61, 76, 또는 78의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는, 항체.
- 제15항에 있어서, 서열 번호 62의 VH 및 서열 번호 63의 VL을 포함하는, 항체.
- 제15항에 있어서, 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하는, 항체.
- 제15항에 있어서, 서열 번호 66의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함하는, 항체.
- 제15항에 있어서, 서열 번호 72의 VH 및 서열 번호 73의 VL을 포함하는, 항체.
- 제15항에 있어서, 서열 번호 74의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함하는, 항체.
- 제15항에 있어서, 서열 번호 75의 VH 및 서열 번호 76의 VL을 포함하는, 항체.
- 제15항에 있어서, 서열 번호 77의 VH 및 서열 번호 78의 VL을 포함하는, 항체.
- 제15항에 있어서, 서열 번호 79의 VH 및 서열 번호 78의 VL을 포함하는, 항체.
- 제15항에 있어서, 서열 번호 160의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하는, 항체.
- 제15항에 있어서, 서열 번호 60의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함하는, 항체.
- 제15항에 있어서, 서열 번호 68의 VH 및 서열 번호 69의 VL을 포함하는, 항체.
제15항에 있어서, 서열 번호 70의 VH 및 서열 번호 71의 VL을 포함하는, 항체. - 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 31, 42, 43, 11, 12 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제28항에 있어서, 서열 번호 74의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 14, 15, 16, 17, 18 및 19의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제30항에 있어서, 서열 번호 62의 VH 및 서열 번호 63의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 25, 26, 27, 28, 29 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제32항에 있어서, 서열 번호 66의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 36, 37, 38, 39, 40 및 41의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제34항에 있어서, 서열 번호 72의 VH 및 서열 번호 73의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 122, 123, 124, 23, 12, 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제36항에 있어서, 서열 번호 160의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 8, 9, 10, 11, 12, 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제38항에 있어서, 서열 번호 60의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 20, 21, 22, 23, 12, 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제40항에 있어서, 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 31, 32, 33, 34, 12, 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제42항에 있어서, 서열 번호 70의 VH 및 서열 번호 71의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 31, 44, 45, 46, 29, 및 47의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제44항에 있어서, 서열 번호 75의 VH 및 서열 번호 76의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 36, 37, 48, 49, 50, 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제46항에 있어서, 서열 번호 77의 VH 및 서열 번호 78의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 36, 37, 52, 49, 50, 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제48항에 있어서, 서열 번호 79의 VH 및 서열 번호 78의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 53, 54, 55, 23, 12, 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제50항에 있어서, 서열 번호 68의 VH 및 서열 번호 69의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제52항에 있어서, 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 25, 130, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제54항에 있어서, 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 142의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제56항에 있어서, 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제58항에 있어서, 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 167의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제60항에 있어서, 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 144의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제62항에 있어서, 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 167의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 25, 135, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제64항에 있어서, 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 142의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제66항에 있어서, 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제68항에 있어서, 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 144의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 25, 134, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제70항에 있어서, 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 142의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제72항에 있어서, 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함하는, 항체.
- 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서,
각각 서열 번호 25, 137, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 재조합 항-PSMA 항체 또는 이의 항원-결합 단편. - 제74항에 있어서, 서열 번호 141의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함하는, 항체.
- 제1항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 항체 또는 인간화 항체인, 항체.
- 제76항에 있어서, IgG4 또는 IgG1 동종형(isotype)을 갖는, 항체.
- 제77항에 있어서, 항체 Fc 내에 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개의 치환을 포함하는, 항체.
- 제77항에 있어서,
a) L234A, L235A, G237A, P238S, H268A, A330S 및 P331S 치환;
b) V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S 및 P331S 치환;
c) F234A, L235A, G237A, P238S 및 Q268A 치환;
d) L234A, L235A 또는 L234A 및 L235A 치환;
e) F234A, L235A 또는 F234A 및 L235A 치환; 또는
f) V234A 치환을 포함하며, 여기서 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따르는, 항체. - 제79항에 있어서, S228P, F234A 및 L235A 치환을 포함하며, 여기서 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따르는, 항체.
- 제1항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 이중특이성인, 항체.
- 제76항에 있어서, PSMA에 특이적으로 결합하고, CD3, CD5, CD28, CD16, CD16A, CD25, CD38, CD44, CD56, CD69, CD94, CD335(NKp46), CD336,(NKp44), CD337(NKp30), NKp80, NKG2C 및 NKG2D, DNAM, NCRs, CD18, CD89, CD18, CD32, CD64, CD64 및 CD35에 특이적으로 결합하는, 항체.
- 제1항 내지 제82항 중 어느 한 항의 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
- 제15항의 항체 VH, 제16항의 항체 VL, 또는 제15항 및 제16항의 항체 VH 및 항체 VL을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.
- 제28항 내지 제75항 중 어느 한 항의 항체 VH, 항체 VL, 또는 항체 VH 및 항체 VL을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.
- 제84항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
- 제85항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
- 제86항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
- 제87항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
- 제1항의 항체를 생성하는 방법으로서,
상기 항체가 발현되는 조건에서 제89항의 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 상기 숙주 세포에 의해 생성되는 상기 항체를 회수하는 단계를 포함하는, 방법. - 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서,
제1항 내지 제82항 중 어느 한 항의 단리된 항체의 치료적 유효량을 상기 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 상기 암의 치료를 필요로 하는 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법. - 제91항에 있어서, 상기 암은 고형 종양, 악성종양 또는 종양 신생혈관계(neovasculature)인, 방법.
- 제92항에 있어서, 상기 고형 종양은 전립선암 또는 결직장암, 위암, 투명 세포 신장 암종, 방광암, 폐암, 편평 세포 암종, 신경교종, 유방암, 신장암(kidney cancer), 신생혈관성 장애, 투명 세포 신장 암종(CCRCC), 췌장암, 신세포암(renal cancer), 요로상피암 및 간에 대한 선암종인, 방법.
- 제93항에 있어서, 상기 전립선암은 불응성 전립선암, 전립선 상피내 신생종, 안드로겐 비의존성 전립선암, 악성 전립선암인, 방법.
- 제90항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 제2 치료제와 병용하여 투여되는, 방법.
- 제95항에 있어서, 상기 제2 치료제는 상기 고형 종양 또는 악성종양 또는 종양 신생혈관계의 치료를 위한 표준 치료 약물(standard of care drug)인, 방법.
- 제96항에 있어서, 상기 제2 치료제는 호르몬 억제제, 항미세소관제, 키나제 억제제, 면역조절제, 토포아이소머라제 억제제, 항대사제, 유사분열 억제제, 알킬화제, 안트라사이클린, 빈카 알칼로이드, 삽입제(intercalating agent), 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 작용제, 아폽토시스를 촉진시키는 작용제, 프로테오좀 억제제 또는 방사선인, 방법.
- 제96항에 있어서, 상기 제2 치료제는 백신인, 방법.
- 제98항에 있어서, 상기 백신은 종양 세포 상에서 발현되는 폴리펩티드 또는 이의 단편, 또는 상기 폴리펩티드 또는 이의 단편을 인코딩하는 DNA 또는 RNA인, 방법.
- 제99항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 PSMA, 메소텔린, EGFR 또는 EGFRvIII인, 방법.
- 제95항에 있어서, 상기 제2 치료제는 동시에, 순차적으로 또는 개별적으로 투여되는, 방법.
- 제91항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 방사선 요법으로 치료되거나 치료 중인, 방법.
- 제91항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 수술을 받았거나 받게 될, 방법.
- 제46항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 항체는 서열 번호 66의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함하는, 방법.
- 제1항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에 사용하기 위한, 항체.
- 제1항 내지 제82항 중 어느 한 항의 항체에 결합하는 항-이디오타입(anti-idiotypic) 항체.
- PSMA에 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 항체로서,
상기 제1 도메인은
a) 각각 서열 번호 31, 42, 43, 11, 12 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
b) 각각 서열 번호 14, 15, 16, 17, 18 및 19의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
c) 각각 서열 번호 25, 26, 27, 28, 29 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
d) 각각 서열 번호 36, 37, 38, 39, 40 및 41의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
e) 각각 서열 번호 122, 123, 124, 23, 12, 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
f) 각각 서열 번호 8, 9, 10, 11, 12, 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
g) 각각 서열 번호 14, 15, 16, 17, 18, 및 19의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
h) 각각 서열 번호 20, 21, 22, 23, 12, 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
i) 각각 서열 번호 31, 32, 33, 34, 12, 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
j) 각각 서열 번호 31, 44, 45, 46, 29, 및 47의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
k) 각각 서열 번호 36, 37, 48, 49, 50, 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
l) 각각 서열 번호 53, 54, 55, 23, 12, 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
m) 각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
n) 각각 서열 번호 25, 130, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
o) 각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
p) 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
q) 각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
r) 각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
s) 각각 서열 번호 25, 135, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
t) 각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
u) 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
v) 각각 서열 번호 25, 134, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
w) 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
x) 각각 서열 번호 25, 137, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 이중특이성 항체. - 제107항에 있어서, 상기 제1 도메인은
a) 각각 서열 번호 31, 42, 43, 11, 12 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 74의 VH 및 서열 번호 61의 VL;
b) 각각 서열 번호 14, 15, 16, 17, 18 및 19의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 62의 VH 및 서열 번호 63의 VL;
c) 각각 서열 번호 25, 26, 27, 28, 29 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 66의 VH 및 서열 번호 67의 VL;
d) 각각 서열 번호 36, 37, 38, 39, 40 및 41의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 72의 VH 및 서열 번호 73의 VL;
e) 각각 서열 번호 122, 123, 124, 23, 12, 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 160의 VH 및 서열 번호 65의 VL;
f) 각각 서열 번호 8, 9, 10, 11, 12, 및 13의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 60의 VH 및 서열 번호 61의 VL;
g) 각각 서열 번호 14, 15, 16, 17, 18, 및 19의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 62의 VH 및 서열 번호 63의 VL;
h) 각각 서열 번호 20, 21, 22, 23, 12, 및 24의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL;
i) 각각 서열 번호 31, 32, 33, 34, 12, 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 70의 VH 및 서열 번호 71의 VL;
j) 각각 서열 번호 31, 44, 45, 46, 29, 및 47의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 서열 번호 75의 VH 및 서열 번호 76의 VL;
k) 각각 서열 번호 36, 37, 48, 49, 50, 및 51의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 77의 VH 및 서열 번호 78의 VL;
l) 각각 서열 번호 53, 54, 55, 23, 12, 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 68의 VH 및 서열 번호 69의 VL;
m) 각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 67의 VL;
n) 각각 서열 번호 25, 130, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 142의 VL;
o) 각각 서열 번호 25, 130, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 138의 VH 및 서열 번호 143의 VL;
p) 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 167의 VL;
q) 각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 144의 VL;
r) 각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 29, 및 30의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 167의 VL;
s) 각각 서열 번호 25, 135, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 142의 VL;
t) 각각 서열 번호 25, 135, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 140의 VH 및 서열 번호 143의 VL;
u) 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 29, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 144의 VL;
v) 각각 서열 번호 25, 134, 27, 131, 29, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 142의 VL;
w) 각각 서열 번호 25, 134, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 139의 VH 및 서열 번호 143의 VL; 또는
x) 각각 서열 번호 25, 137, 27, 28, 133, 및 132의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 서열 번호 141의 VH 및 서열 번호 143의 VL을 포함하는, 이중특이성 항체. - 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체로서,
제1 도메인 및 제2 도메인을 포함하며, 상기 제1 도메인은 (i) 재조합 판 트로글로디테스 PSMA를 발현하는 세포에 결합하며, 여기서 상기 세포에 대한 결합은 유세포측정에 의해 측정되고, (ii) 약 30 nM 이하의 친화도로 재조합 판 트로글로디테스 PSMA 세포외 도메인(서열 번호 4)에 결합하며, 여기서 상기 친화도는 PSMA에 특이적으로 결합하는 ProteOn 표면 플라즈몬 공명 검정에 의해 측정되고, 상기 제2 도메인은 CD3에 특이적으로 결합하는, 단리된 이중특이성 PSMA/CD3 항체. - 제109항에 있어서,
e) 20 nM 이하의 계산된 EC50으로 LNCaP 세포에 결합하고, 40 nM 이하의 계산된 EC50으로 마카카 파시쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포에 결합하며, 여기서 LNCaP 세포에 대한 결합과 마카카 파시쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포에 대한 결합 사이의 계산된 EC50의 차이는 5배 미만이고, 상기 계산된 EC50은 유세포측정을 사용하여 0℃에서 전세포 결합 검정에서 측정되거나,
f) 12 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간(서열 번호 7), 판 트로글로디테스(서열 번호 4) 및 마카카 파시쿨라리스(서열 번호 5)로부터의 재조합 PSMA ECD에 결합하며, 여기서 상기 KD는 +25℃에서의 ProteOn 표면 플라즈몬 공명 검정 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정되거나,
g) LNCaP 세포, C42 세포, 인간 PSMA-발현 HEK 세포 또는 마카카 파시쿨라리스 PSMA-발현 HEK 세포의 T-세포 매개 사멸을 디스플레이하며, 여기서 상기 T-세포 매개 사멸은 크롬-51에 의해 또는 카스파제 3/7 활성화 검정에 의해 측정되거나,
h) 인간 PSMA(서열 번호 3)의 잔기 I138, F235, P237, G238, D244, Y299, Y300, Q303, K304, E307, 및 K324-P326으로 구성되는 입체구조 에피토프를 인식하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체. - 제109항에 있어서, T-세포에 결합하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
- 제109항에 있어서, 상기 제1 도메인은
g) 각각 서열 번호 14, 15 및 16의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 17, 18 및 19의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2 및 LCDR3;
h) 각각 서열 번호 20, 21 및 22의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 23, 12 및 24의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
i) 각각 서열 번호 25, 26 및 27의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 28, 29 및 30의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
j) 각각 서열 번호 31, 44 및 45의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 46, 29 및 47의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
k) 각각 서열 번호 31, 42 및 43의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 11, 12 및 13의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
l) 각각 서열 번호 122, 123 및 124의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 23, 12 및 24의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체. - 제109항에 있어서, 상기 제1 도메인은
g) 각각 서열 번호 14, 15 및 16;
h) 각각 서열 번호 20, 21 및 22;
i) 각각 서열 번호 25, 26 및 27;
j) 각각 서열 번호 31, 44 및 45;
k) 각각 서열 번호 31, 42 및 43; 또는
l) 각각 서열 번호 122, 123 및 124의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체. - 제109항에 있어서, 상기 제1 도메인은
g) 각각 서열 번호 17, 18 및 19;
h) 각각 서열 번호 23, 12 및 24;
i) 각각 서열 번호 28, 29 및 30;
j) 각각 서열 번호 46, 29 및 47;
k) 각각 서열 번호 11, 12 및 13; 또는
l) 각각 서열 번호 23, 12 및 24의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체. - 제109항에 있어서,
g) 상기 제1 도메인은 서열 번호 62의 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호 63의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함하거나;
h) 상기 제1 도메인은 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함하거나;
i) 상기 제1 도메인은 서열 번호 66의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함하거나;
j) 상기 제1 도메인은 서열 번호 75의 VH 및 서열 번호 76의 VL을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함하거나;
k) 상기 제1 도메인은 서열 번호 74의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함하거나;
l) 상기 제1 도메인은 서열 번호 160의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하고, 상기 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체. - 제109항에 있어서, 제1 중쇄(HC1), 제1 경쇄(LC1), 제2 중쇄(HC2) 및 제2 경쇄(LC2)를 포함하며, 상기 HC1 및 상기 LC1은
g) 각각 서열 번호 84 및 85;
h) 각각 서열 번호 86 및 87;
i) 각각 서열 번호 88 및 89;
j) 각각 서열 번호 125 및 91;
k) 각각 서열 번호 94 및 95; 또는
l) 각각 서열 번호 96 및 83의 아미노산 서열을 포함하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체. - 제116항에 있어서, 상기 HC2 및 상기 LC2는 각각 서열 번호 110 및 111을 포함하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
- 제109항에 있어서,
g) 각각 서열 번호 84, 85, 110 및 111;
h) 각각 서열 번호 86, 87, 110 및 111;
i) 각각 서열 번호 88, 89, 110, 111;
j) 각각 서열 번호 125, 91, 110 및 111;
k) 각각 서열 번호 94, 95, 110 및 111;
l) 각각 서열 번호 96, 83, 110 및 111의 HC1, LC1, HC2 및 LC2를 포함하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체. - 제109항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 항체 또는 인간화 항체인, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
- 제119항에 있어서, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 동종형을 갖는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
- 제120항에 있어서, IgG1 또는 IgG4 동종형을 갖는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
- 제120항 또는 제121항에 있어서, 항체 Fc 내에 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개의 치환을 갖는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
- 제121항에 있어서,
a) L234A, L235A, G237A, P238S, H268A, A330S 및 P331S 치환;
b) V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S 및 P331S 치환;
c) F234A, L235A, G237A, P238S 및 Q268A 치환;
d) L234A, L235A 또는 L234A 및 L235A 치환;
e) F234A, L235A 또는 F234A 및 L235A 치환;
f) V234A 치환; 또는
g) S228P, F234A 및 L235A 치환을 포함하며, 여기서 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따르는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체. - 제109항 내지 제123항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 CH3 불변 도메인 내에 적어도 하나의 치환을 포함하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
- 제124항에 있어서, 상기 항체 CH3 불변 도메인 내의 상기 치환은 409R, F405L 또는 F405L/R409K 치환이며, 여기서 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따르는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체.
- 제124항에 있어서,
a) 상기 HC1에서의 F405L 치환 및 상기 HC2에서의 409R 치환 - 여기서, 상기 항체는 IgG1 동종형을 가짐 -;
b) 상기 HC1에서의 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, P331S 및 F405L 치환 및 상기 HC2에서의 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, P331S 및 409R 치환 - 여기서, 상기 항체는 IgG1 동종형을 가짐 -; 또는
b) 상기 HC1에서의 S228P 치환 및 상기 HC2에서의 S228P, F405L 및 R409K 치환 - 여기서, 상기 항체는 IgG4 동종형을 가짐 - 을 포함하는, 이중특이성 PSMA × CD3 항체. - 제109항 내지 제126항 중 어느 한 항의 이중특이성 PSMA × CD3 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
- 제118항의 이중특이성 PSMA × CD3 항체 HC1, LC1, HC2 또는 LC2를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.
- 제128항의 HC1, LC1, HC2, LC2, HC1 및 LC1 또는 HC2 및 LC2를 인코딩하는 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
- 제129항의 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포.
- 제118항의 이중특이성 PSMA × CD3 항체를 생성하는 방법으로서,
상기 항체가 발현되는 조건에서 제130항의 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 상기 숙주 세포에 의해 생성되는 상기 이중특이성 PSMA × CD3 항체를 회수하고 정제하는 단계를 포함하는, 방법. - 제118항의 이중특이성 PSMA × CD3 항체를 생성하는 방법으로서,
a) 2개의 동일한 HC1 및 2개의 동일한 LC1을 갖는 단일특이성 2가 PSMA 항체와 2개의 동일한 HC2 및 2개의 동일한 LC2를 갖는 단일특이성 2가 CD3 항체를 약 1:1 몰비의 혼합물로 배합하는 단계;
b) 상기 혼합물 내로 환원제를 도입하는 단계;
c) 상기 혼합물을 약 90분 내지 약 6시간 동안 인큐베이션하는 단계;
d) 상기 환원제를 제거하는 단계; 및
e) 상기 HC1, 상기 LC1, 상기 HC2 및 상기 LC2를 포함하는 상기 이중특이성 PSMA × CD3 항체를 정제하는 단계를 포함하는, 방법. - 제132항에 있어서, 상기 환원제는 2-메르캅토에탄올아민(2-MEA)인, 방법.
- 제133항에 있어서,
h) 상기 2-MEA는 약 25 mM 내지 약 75 mM의 농도로 존재하고;
i) 상기 인큐베이션하는 단계는 약 25℃ 내지 약 37℃의 온도에서 수행되는, 방법. - 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서,
제109항 내지 제126항 중 어느 한 항의 단리된 PSMA × CD3 이중특이성 항체의 치료적 유효량을 상기 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 상기 암의 치료를 필요로 하는 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법. - 제135항에 있어서, 상기 암은 고형 종양, 악성종양 또는 종양 신생혈관계인, 방법.
- 제136항에 있어서, 상기 고형 종양은 전립선암 또는 결직장암, 위암, 투명 세포 신장 암종, 방광암, 폐암, 편평 세포 암종, 신경교종, 유방암, 신장암, 신생혈관성 장애, 투명 세포 신장 암종(CCRCC), 췌장암, 신세포암, 요로상피암 및 간에 대한 선암종인, 방법.
- 제137항에 있어서, 상기 전립선암은 불응성 전립선암, 전립선 상피내 신생종, 안드로겐 비의존성 전립선암, 악성 전립선암인, 방법.
- 제135항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 제2 치료제와 병용하여 투여되는, 방법.
- 제139항에 있어서, 상기 제2 치료제는 상기 고형 종양 또는 악성종양 또는 종양 신생혈관계의 치료를 위한 표준 치료 약물인, 방법.
- 제139항에 있어서, 상기 제2 치료제는 호르몬 억제제, 항미세소관제, 토포아이소머라제 억제제, 항대사제, 유사분열 억제제, 알킬화제, 안트라사이클린, 빈카 알칼로이드, 삽입제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 작용제, 아폽토시스를 촉진시키는 작용제, 프로테오좀 억제제 또는 방사선인, 방법.
- 제139항에 있어서, 상기 제2 치료제는 백신인, 방법.
- 제142항에 있어서, 상기 백신은 종양 세포 상에서 발현되는 폴리펩티드 또는 이의 단편, 또는 상기 폴리펩티드 또는 이의 단편을 인코딩하는 DNA 또는 RNA인, 방법.
- 제143항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 PSMA, 메소텔린, EGFR 또는 EGFRvIII인, 방법.
- 제139항에 있어서, 상기 제2 치료제는 동시에, 순차적으로 또는 개별적으로 투여되는, 방법.
- 제135항 내지 제145항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 방사선 요법으로 치료되거나 치료 중인, 방법.
- 제135항 내지 제145항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 수술을 받았거나 받게 될, 방법.
- 제135항 내지 제145항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이중특이성 PSMA × CD3 항체의 제1 도메인은 서열 번호 66의 VH 및 서열 번호 67의 VL을 포함하고, 상기 이중특이성 PSMA × CD3 항체의 제2 도메인은 서열 번호 104의 VH 및 서열 번호 105의 VL을 포함하는, 방법.
- 제109항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에 사용하기 위한, 항체.
- 제109항 내지 제126항 중 어느 한 항의 항체에 결합하는 항-이디오타입 항체.
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