JP6442409B2 - 多孔質セルロースビーズの製造方法 - Google Patents
多孔質セルロースビーズの製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6442409B2 JP6442409B2 JP2015542619A JP2015542619A JP6442409B2 JP 6442409 B2 JP6442409 B2 JP 6442409B2 JP 2015542619 A JP2015542619 A JP 2015542619A JP 2015542619 A JP2015542619 A JP 2015542619A JP 6442409 B2 JP6442409 B2 JP 6442409B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- adsorbent
- beads
- cellulose
- porous cellulose
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
- B01J20/24—Naturally occurring macromolecular compounds, e.g. humic acids or their derivatives
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 - B01D15/36
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 - B01D15/36
- B01D15/3804—Affinity chromatography
- B01D15/3828—Ligand exchange chromatography, e.g. complexation, chelation or metal interaction chromatography
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
- B01J20/282—Porous sorbents
- B01J20/285—Porous sorbents based on polymers
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/3085—Chemical treatments not covered by groups B01J20/3007 - B01J20/3078
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B1/00—Preparatory treatment of cellulose for making derivatives thereof, e.g. pre-treatment, pre-soaking, activation
- C08B1/003—Preparation of cellulose solutions, i.e. dopes, with different possible solvents, e.g. ionic liquids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B1/00—Preparatory treatment of cellulose for making derivatives thereof, e.g. pre-treatment, pre-soaking, activation
- C08B1/08—Alkali cellulose
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J9/00—Working-up of macromolecular substances to porous or cellular articles or materials; After-treatment thereof
- C08J9/16—Making expandable particles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J9/00—Working-up of macromolecular substances to porous or cellular articles or materials; After-treatment thereof
- C08J9/28—Working-up of macromolecular substances to porous or cellular articles or materials; After-treatment thereof by elimination of a liquid phase from a macromolecular composition or article, e.g. drying of coagulum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L1/00—Compositions of cellulose, modified cellulose or cellulose derivatives
- C08L1/02—Cellulose; Modified cellulose
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
- B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
- B01J20/265—Synthetic macromolecular compounds modified or post-treated polymers
- B01J20/267—Cross-linked polymers
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
- B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
- B01J20/28078—Pore diameter
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J2201/00—Foams characterised by the foaming process
- C08J2201/04—Foams characterised by the foaming process characterised by the elimination of a liquid or solid component, e.g. precipitation, leaching out, evaporation
- C08J2201/054—Precipitating the polymer by adding a non-solvent or a different solvent
- C08J2201/0542—Precipitating the polymer by adding a non-solvent or a different solvent from an organic solvent-based polymer composition
- C08J2201/0543—Precipitating the polymer by adding a non-solvent or a different solvent from an organic solvent-based polymer composition the non-solvent being organic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J2301/00—Characterised by the use of cellulose, modified cellulose or cellulose derivatives
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/50—Conditioning of the sorbent material or stationary liquid
- G01N30/52—Physical parameters
- G01N2030/524—Physical parameters structural properties
- G01N2030/525—Physical parameters structural properties surface properties, e.g. porosity
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Manufacture Of Porous Articles, And Recovery And Treatment Of Waste Products (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
b)前記セルロース微分散液に水溶性低分子有機化合物を加え混合液を作製する工程、
c)前記混合液を分散媒に分散させてエマルションを作製する工程、
d)前記エマルションを凝固溶媒に接触させる工程を含むことを特徴とする、多孔質セルロースビーズの製造方法。
本工程では、低温のアルカリ水溶液とセルロースとを混合してセルロース微分散液を作製する。
次に、前記セルロース微分散液に水溶性低分子有機化合物を加え混合液を作製する。
本工程では、前記混合液を分散媒に分散させてエマルションを作製する。
次に、前記エマルションを凝固溶媒に接触させることによりセルロース微分散液の液滴から溶媒を抽出し、多孔質セルロースビーズを得る。
以上で得られた多孔質セルロースビーズは、強度を高めるために、架橋剤により架橋して架橋多孔質セルロースビーズとすることが好ましい。
本発明に係る多孔質セルロースビーズは、目的物と相互作用するリガンドを固定化することにより、吸着体とすることができる。本発明で得ることができる吸着体は非特異吸着が少ないといった特性を有していることから、安全性が高い薬や治療の提供が可能で、さらには精製や治療時に中間洗浄工程等を省力化することが可能となる。
各製造例、参考例で得られた多孔質セルロースビーズ、または吸着体を5倍体積量の30%エタノールで洗浄し、多孔質セルロースビーズに含まれる液体部分を30%エタノールで置換した。次いで、50%エタノール、70%エタノール、90%エタノール、特級エタノール、特級エタノール、特級エタノールを順に用いて多孔質セルロースビーズを同様に処理し、液体部分をエタノールで置換した。さらにt−ブチルアルコール/エタノールが3/7の混合液を用いて多孔質セルロースビーズを同様に処理した。次いで、t−ブチルアルコール/エタノール=5/5、7/7、9/1、10/0、10/0、10/0の混合液を用いて多孔質セルロースビーズを処理し、液体部分をt−ブチルアルコールで置換した後、凍結乾燥した。凍結乾燥を行なった多孔質セルロースビーズに蒸着処理を行い、SEM像を撮影した。
(1) 溶液調製
以下の溶液を調製した。
B液:pH3.5Mの35mM酢酸ナトリウム(ナカライテスク社製の酢酸、酢酸ナトリウム、RO水で調製)
C液:1M酢酸(ナカライテスク社製の酢酸とRO水で調製)
D液:1mg/mLのヒトポリクローナルIgG溶液(ニチヤク社製「ガンマグロブリンニチヤク」1500mg/10mLとA液で調製)
E液:6M尿素(関東化学社製の尿素とRO水で調製)
各溶液は、使用前に脱気した。
カラムクロマトグラフィー用装置として、AKTAexplorer 100(GEヘルスケアバイオサイエンス社製)を用い、直径0.5cm、高さ15cmのカラムに22μmのメッシュを取り付け、本発明の吸着体をそれぞれ3mL入れ、線速450cm/hで20%エタノール水溶液(和光純薬工業社製エタノールとRO水で調製)を1時間通液して充填した。フラクションコレクターに15mLの採取用チューブをセットした。この溶出液の採取用チューブについては、あらかじめ中和液を入れておいた。
A液を線速300cm/hで9mL通液し、次いでD液を、UVをモニターしながら、IgGが10%破過するまで線速300cm/hで通液した。ここで、5%破過した時のIgG負荷量をRT3分での5%DBCとした。次いで、A液を線速300cm/hで30mL通液し、B液を線速300cm/hで30mL通液してIgGを溶出させた。次にC液を線速300cm/hで9mL、E液を線速300cm/hで9mL通液し、再生処理を行った。
エポキシ化多孔質セルロースビーズを、グラスフィルター(TOP社製「3G−2」)上で15分間吸引ろ過(サクションドライ)し、サクションドライ後の多孔質担体1.5gをスクリュー管(マルエム社製)に秤量し、1.3Mチオ硫酸ナトリウム水溶液(和光純薬工業社製チオ硫酸ナトリウムとRO水で調製)4.5mLを加えた。45℃で30分間加温した後、RO水を加えて液量を50mLとし、100mLのガラス製ビーカーに移し、1%フェノールフタレイン溶液(和光純薬工業社製フェノールフタレインとエタノールで調製)を数滴添加した。0.01N塩酸(和光純薬工業社製、容量分析用)で滴定し、エポキシ基含量を求めた。
健常人新鮮血100mLにヘパリン500μLを添加し、穏やかに混和することにより、抗凝固処理を行った。抗凝固処理した健常人新鮮血を3000rpmで15分間遠心処理を行い、LDLコレステロール濃度が70mg/dLの血漿を得た。この血漿3mLを生理食塩水で洗浄した吸着体0.5mLに加えて、37℃で2時間振盪した。振盪後の上清のLDLコレステロール量をLDLコレステロールキット(積水メディカル社製「コレステストLDL」)を用いて測定し、吸着体に吸着されたLDLコレステロール量を求めた。また比較のため、吸着体の代わりに生理食塩水を同量用いた以外、前記と同様の操作を行った溶液のLDLコレステロール量を求めた。
[式中、C0は生理食塩水を用いた吸着操作におけるLDLコレステロールの濃度を示し、C1は吸着体を用いた吸着操作におけるLDLコレステロールの濃度を示す]
製造例1 プロテインAの調製
本発明で使用した無配向型プロテインAは、配列番号1で示されるアミノ酸配列を有する。これは、Staphylococcus aureus由来プロテインAからシグナルシーケンス(Sドメイン)及び細胞壁結合ドメイン(Xドメイン)を除いた部分にあたり、WO2006/004067においてSPA’として記載されているものである。当該プロテインAを、WO2006/004067の実施例に記載の方法に準じて調製した。なおこのWO2006/004067の全内容が、本願に参考のため援用される。
(1) アルカリ水溶液の作製
和光純薬社製の水酸化ナトリウムと蒸留水を用いて、33wt%の水酸化ナトリウム水溶液を作製し、その温度を4℃に調整した。
セパラブルフラスコに70gの蒸留水と9.3gのセルロースを投入し、二段ディスクタービン(rushton turbine)翼を用いてスラリーの温度が4℃になるまで、150〜200rpmで30分間攪拌した。次いで、4℃に冷却した33wt%の水酸化ナトリウム水溶液を41g添加し、500rpmの速度で攪拌しながら30分間保持した。その後、作製したセルロース分散液に水溶性低分子有機化合物として6wt%グリシン水溶液33gを添加し、600rpmの速度で15分間撹拌を行った。
上記セルロース分散液に、1wt%のソルビタンモノオレエートが溶解した788gのo−ジクロロベンゼン溶液を投入し、4℃で600rpm、15分間撹拌することでセルロース液滴を分散させた。凝固溶剤としてメタノールを74mL添加し、4℃で600rpm、30分間攪拌した。その後、ガラスフィルター(TOP社製「26G−3」)で溶液を濾過し、次いで5倍体積量のメタノール、5倍体積量の蒸留水の順に洗浄を行ない、セルロースビーズを回収した。
得られた多孔質セルロースビーズを、38μmと90μmの篩を用いて湿式分級した。
分級後の上記多孔質セルロースビーズ20mLに蒸留水を加えて30mLとし、反応容器に移した。ここに架橋剤としてグリセロールポリグリシジルエーテルを含有するデナコールEX−314(ナガセケムテックス社製)を2.3g投入し、40℃に調整しながら攪拌を続けた。40℃に調整後、30分間攪拌した。次いで、2N NaOH水溶液(ナカライテスク社製水酸化ナトリウムと蒸留水で調製)7.1mLを用意し、1時間に1/4ずつ加えた。この間、温度を40℃に維持し、攪拌も継続した。最後の1/4量を添加後、同温度で1時間攪拌した。反応終了後、吸引濾過をしながら、ビーズの20倍体積量以上の蒸留水で洗浄し、架橋1回ビーズを得た。さらに同じ架橋反応をもう1回実施し、架橋2回ビーズを得た。
下記手順に従って、プロテインAを固定化した吸着体を作製した。上記(5)で得られた架橋多孔質セルロースビーズ11.0mLに、RO水を加えて全量を17.0mLとし、50mLの遠沈管に入れ、これを25℃にてミックスローター(アズワン社製「ミックスローターMR−3」)上に取り付けた後、攪拌した。次に、過ヨウ素酸ナトリウム(和光純薬工業社製)をRO水に溶解させた、8.64mg/mLの過ヨウ素酸ナトリウム水溶液を6.0mL調製し、先程の架橋多孔質セルロースビーズを入れた遠沈管に加え、25℃で1時間攪拌した。反応後、グラスフィルター(シバタ社製「11GP100」)上で、濾液の電気伝導度が1μS/cm以下となるまでRO水で洗浄し、ホルミル基含有架橋多孔質セルロースビーズを得た。洗浄濾液の電気伝導度は、導電率計(EUTECH INSTRUMENTS社製「ECTester10 Pure+」)で測定した。得られたホルミル基含有架橋多孔質セルロースビーズ9.0mLをグラスフィルター(シバタ社製「11GP100」)上で0.5Mクエン酸三ナトリウム二水和物(関東化学社製)+0.15M塩化ナトリウム(関東化学社製)バッファー30mLで置換した。pH8の0.5Mクエン酸三ナトリウム二水和物+0.15M塩化ナトリウムバッファーを用い、置換後のホルミル基含有架橋多孔質セルロースビーズを、遠沈管に入れ、総体積量14.0mLとなるように液量を調整した。
セルロース分散液作製時に水溶性低分子有機化合物としてグリシン水溶液を添加しないこと以外は、実施例1と同様に吸着体を作製した。得られた吸着体の物性評価を行った結果、プロテインA導入量:35g/L(吸着体体積)で、RT3分での5%DBCが31g/L(吸着体充填体積)であった。また、このビーズ表面のSEM観察像を図2に示した。
(1)エポキシ化
実施例1の(3)と同様に作製した未架橋セルロースビーズを、38μmと150μmの篩を用いて湿式分級した。この分級後のビーズ1体積部にRO水1体積部を加え、さらに2N水酸化ナトリウム水溶液を1.06体積部加えて45℃で30分間加温した。次にエピクロロヒドリンを0.36体積部加えて45℃2時間攪拌した。グラスフィルター上で濾過を行い、大量のRO水でビーズを洗浄し、エポキシ基含有多孔質セルロースビーズを得た。エポキシ含有量は湿潤重量1gあたり34μmolであった。
エポキシ基含有多孔質セルロースビーズ0.7体積部に26wt/vol%のデキストラン硫酸(硫黄含量約18%、分子量約4000)水溶液を添加して、液量を1.0体積部とした。次いで2N水酸化ナトリウム水溶液を添加し、pHを9.5に調整した。その後、40℃16時間攪拌した。グラスフィルター上で濾過を行い、大量のRO水でビーズを洗浄し、デキストラン硫酸が固定化されたビーズを得た。
デキストラン硫酸固定化ビーズ1体積部にRO水1体積部とモノエタノールアミン0.25体積部を添加し、45℃で2時間攪拌し、残存エポキシ基の封止反応を行った。グラスフィルター上で濾過を行い、大量のRO水でビーズを洗浄し、目的とする吸着体を得た。
セルロース分散液作製時に水溶性低分子有機化合物としてグリシン水溶液を添加しないこと以外は、実施例2と同様に吸着体を作製した。得られた吸着体のLDLコレステロールの吸着率は91.9%で、吸着量は3.4g/L(吸着体体積)であった。
吸着型血漿浄化器「リポソーバー LA−15」(カネカ社製)に充填されている吸着体を用いた以外は、実施例3と同様にLDLコレステロール吸着試験を行った。その結果、LDLコレステロールの吸着率は93.5%で、吸着量は3.5g/L(吸着体体積)であった。
(1) 多孔質セルロースビーズの作製
上記実施例1(1)〜(3)と同様にして、多孔質セルロースビーズを作製した。得られた多孔質セルロースビーズを篩い分けし、粒子径38μmから150μmの多孔質セルロースビーズを集めた。集めた多孔質セルロースビーズ100mLに含まれる液体部分をエタノールで置換した後、反応容器に移し、セルロースビーズとエタノールの合計量が97gとなるようにした。そこに蒸留水28gとエピクロロヒドリン80mLを添加した。溶液温度を40℃に調整し、1.8N NaOH水溶液(ナカライテスク社製水酸化ナトリウムと蒸留水で調製)を96mL添加し、架橋反応を開始させた。反応開始から1.5時間後に17.0N NaOH水溶液を9.6mL添加し、反応開始から3時間後と4.5時間後にも17.0N NaOH水溶液を9.6mL添加した。反応開始から6時間後にゲルを回収し、ビーズの20倍体積量以上の蒸留水で洗浄した。
上記多孔質セルロースビーズ22.8mLを蒸留水に分散させ、30分間脱気した。脱気した多孔質セルロースビーズをカラム(GEヘルスケア・ジャパン社製「Tricorn 10/300」)に充填した。島津製作所社製のサイズ排除クロマトグラフィーシステム(「DGU−20A3」、「RID−10A」、「LC−20AD」、「SIL−20AC」、「CTO−20AC」を含み、ソフトウェアとしては「LCSolution」を使用)を用いて測定を行った。
[式中、VRは各マーカー溶液を注入してからピークが観測されるまでの通液量(mL)を示し、V0は分子量4×107のデキストラン溶液を注入してからピークが観測されるまでの通液量(mL)を示し、Vtはカラム内のビーズの体積(mL)を示す]
結果を表2に示す。
(3) 細孔径分布の計算
各マーカーの粘度半径と上記で求めたKavの値を下記式に代入し、各マーカーが多孔質セルロースビーズに侵入する細孔の半径を求めた。
[式中、rmは各マーカーの粘度半径(nm)を示し、rpは各マーカーが多孔質セルロースビーズに侵入する細孔の半径(nm)を示す]
算出された多孔質セルロースビーズの細孔半径を横軸に、分子量180のマーカーがビーズ内に侵入した細孔体積(VR−V0)を100%とした場合の細孔径分布を縦軸にプロットしたグラフを図3に示す。
(1) セルロース分散液の作製
セパラブルフラスコに103gの蒸留水と9.3gのセルロースを投入し、二段ディスクタービン(rushton turbine)翼を用いてスラリーの温度が4℃になるまで、150〜200rpmで30分間攪拌した。次いで、4℃に冷却した33wt%の水酸化ナトリウム水溶液を41g添加し、500rpmの速度で攪拌しながら30分間保持した。
上記セルロース分散液に、1wt%のソルビタンモノオレエートが溶解した788gのo−ジクロロベンゼン溶液を投入し、4℃で600rpm、15分間撹拌することでセルロース液滴を分散させた。凝固溶剤としてメタノールを74mL添加し、4℃で600rpm、30分間攪拌した。その後、ガラスフィルター(TOP社製「26G−3」)で溶液を濾過し、次いで5倍体積量のメタノール、5倍体積量の蒸留水の順に洗浄を行ない、セルロースビーズを回収した。
得られた多孔質セルロースビーズを上記実施例3(1)と同様の条件で架橋した後、上記実施例3(2)と同様にゲル分配係数を測定し、また、上記実施例3(3)と同様に細孔径分布を計算した。ゲル分配係数Kavの測定結果を表3に示す。
上記実施例3において、6wt%グリシン水溶液の代わりに6wt%アラニン水溶液を用いた以外は同様にして、多孔質セルロースビーズを作製した。
上記実施例3において、6wt%グリシン水溶液の代わりに9wt%グリシン水溶液を用いた以外は同様にして、多孔質セルロースビーズを作製した。
上記実施例3において、セルロースの使用量を9.4gから7.7gに変更した以外は同様にして、多孔質セルロースビーズを作製した。
Claims (7)
- a)低温のアルカリ水溶液とセルロースとを混合してセルロース微分散液を作製する工程、
b)前記セルロース微分散液にアミノ酸を加え混合液を作製する工程、
c)前記混合液を分散媒に分散させてエマルションを作製する工程、
d)前記エマルションを凝固溶媒に接触させる工程を含むことを特徴とする、多孔質セルロースビーズの製造方法。 - 前記a)の工程における前記アルカリ水溶液の液温が0〜25℃であることを特徴とする請求項1に記載の方法。
- 前記アミノ酸が、グリシン、アラニン、セリン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニンおよびヒスチジンからなる群から選択される1以上のアミノ酸であることを特徴とする請求項1または2に記載の多孔質セルロースビーズの製造方法。
- 前記分散媒が、動植物油脂、水素添加動植物油脂、脂肪酸トリグリセリド、脂肪族炭化水素系溶媒および芳香族炭化水素系溶媒からなる群から選択される1以上の油溶性溶媒であることを特徴とする請求項1〜3のいずれか一項に記載の多孔質セルロースビーズの製造方法。
- 前記凝固溶媒が、アルコール系溶媒、または水とアルコール系溶媒との混合溶媒であることを特徴とする請求項1〜4のいずれか一項に記載の多孔質セルロースビーズの製造方法。
- 請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法で多孔質セルロースビーズを製造する工程、および、当該多孔質セルロースビーズに目的物と相互作用するリガンドを固定化することにより吸着体を得る工程を含むことを特徴とする吸着体の製造方法。
- 請求項6に記載の方法で吸着体を製造する工程、および、当該吸着体を用いて当該吸着体に吸着される目的物を精製する工程を含むことを特徴とする精製方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2013215120 | 2013-10-15 | ||
JP2013215120 | 2013-10-15 | ||
PCT/JP2014/077361 WO2015056680A1 (ja) | 2013-10-15 | 2014-10-14 | 多孔質セルロースビーズの製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2015056680A1 JPWO2015056680A1 (ja) | 2017-03-09 |
JP6442409B2 true JP6442409B2 (ja) | 2018-12-19 |
Family
ID=52828123
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015542619A Active JP6442409B2 (ja) | 2013-10-15 | 2014-10-14 | 多孔質セルロースビーズの製造方法 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20160236171A1 (ja) |
EP (1) | EP3059251B1 (ja) |
JP (1) | JP6442409B2 (ja) |
WO (1) | WO2015056680A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3473116A4 (en) | 2016-07-04 | 2020-02-26 | Japan Tobacco Inc. | ADSORBENT, FILTER FOR SMOKING PRODUCT PROVIDED WITH SUCH ADSORBENT, AND SMOKING PRODUCT PROVIDED WITH SUCH FILTER FOR SMOKING PRODUCTS |
CN114405483B (zh) * | 2021-12-13 | 2024-03-26 | 健帆生物科技集团股份有限公司 | 具有核壳结构的多孔纤维素微球吸附剂及制备方法和应用 |
Family Cites Families (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5151350A (en) | 1982-10-27 | 1992-09-29 | Repligen Corporation | Cloned genes encoding recombinant protein a |
JPS60139873A (ja) | 1983-12-26 | 1985-07-24 | 旭化成株式会社 | 繊維材料の改質方法 |
US5410034A (en) | 1994-02-24 | 1995-04-25 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Alkaline method for dissolving cellulose |
JPH09132601A (ja) * | 1995-09-06 | 1997-05-20 | Bio Polymer Res:Kk | 多孔性セルロース粒子の製造方法 |
JPH09124702A (ja) | 1995-11-02 | 1997-05-13 | Nisshinbo Ind Inc | アルカリに溶解するセルロースの製造法 |
JP3601229B2 (ja) * | 1997-01-14 | 2004-12-15 | チッソ株式会社 | 多孔性球状セルロース粒子 |
SE0200943D0 (sv) | 2002-03-25 | 2002-03-25 | Amersham Biosciences Ab | Mutant protein |
US8597908B2 (en) | 2004-07-06 | 2013-12-03 | Kaneka Corporation | Process for producing protein A-like protein with use of Brevibacillus genus bacterium |
JP4925829B2 (ja) | 2004-08-30 | 2012-05-09 | 株式会社カネカ | 顆粒球吸着材 |
JP2006304633A (ja) | 2005-04-26 | 2006-11-09 | Apro Life Science Institute Inc | イムノグロブリン結合タンパク質 |
US8828905B2 (en) | 2007-05-30 | 2014-09-09 | Kaneka Corporation | Porous base matrix having formyl group, adsorbent using the porous base matrix, method for production of the porous base matrix, and method for production of the adsorbent |
JP5504596B2 (ja) | 2007-08-31 | 2014-05-28 | Jnc株式会社 | 多孔性セルロースゲル、その製造方法及びその用途 |
CN101274985B (zh) * | 2008-05-12 | 2011-04-20 | 武汉大学 | 一种磁性纤维素微球及其制备方法和用途 |
JPWO2010110288A1 (ja) | 2009-03-24 | 2012-09-27 | 株式会社カネカ | 免疫グロブリンに親和性を有するタンパク質および免疫グロブリン結合性アフィニティーリガンド |
JP5261262B2 (ja) | 2009-03-31 | 2013-08-14 | 東ソー株式会社 | 細孔を有する微生物セルロース粒子の製造方法 |
JP5691233B2 (ja) * | 2010-04-23 | 2015-04-01 | Jnc株式会社 | 結晶性セルロースの溶解方法及び多孔性セルロースの製造方法 |
WO2012033223A1 (ja) * | 2010-09-10 | 2012-03-15 | 株式会社カネカ | 多孔質粒子の製造方法、多孔質粒子、吸着体、およびタンパク質の精製方法 |
WO2012121258A1 (ja) | 2011-03-08 | 2012-09-13 | 株式会社カネカ | 多孔質セルロースビーズの製造方法 |
JP6184088B2 (ja) | 2012-01-27 | 2017-08-23 | ローム株式会社 | チップ抵抗器の製造方法 |
JP2013215120A (ja) | 2012-04-06 | 2013-10-24 | Shimano Inc | クーラーボックス |
-
2014
- 2014-10-14 JP JP2015542619A patent/JP6442409B2/ja active Active
- 2014-10-14 WO PCT/JP2014/077361 patent/WO2015056680A1/ja active Application Filing
- 2014-10-14 US US15/028,632 patent/US20160236171A1/en not_active Abandoned
- 2014-10-14 EP EP14854425.7A patent/EP3059251B1/en not_active Not-in-force
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3059251A1 (en) | 2016-08-24 |
US20160236171A1 (en) | 2016-08-18 |
EP3059251A4 (en) | 2017-07-19 |
WO2015056680A1 (ja) | 2015-04-23 |
EP3059251B1 (en) | 2019-04-03 |
JPWO2015056680A1 (ja) | 2017-03-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US10457705B2 (en) | Carrier for ligand immobilization | |
JP6506554B2 (ja) | 吸着体、及びそれを用いた精製方法 | |
JP5785553B2 (ja) | 多孔質粒子の製造方法、多孔質粒子、吸着体、およびタンパク質の精製方法 | |
WO2016167268A1 (ja) | 多孔質セルロースビーズの製造方法およびそれを用いた吸着体 | |
JP6440320B2 (ja) | 多孔質セルロースビーズの製造方法およびそれを用いた吸着体 | |
Li et al. | Biosorption of chitin and chitosan | |
JP2016153449A (ja) | 多孔質セルロース粒子の製造方法 | |
JP7002445B2 (ja) | ユニバーサル血液製剤並びにそれを調製及び使用する方法 | |
JP6442409B2 (ja) | 多孔質セルロースビーズの製造方法 | |
WO2019220866A1 (ja) | 多孔質セルロースビーズおよび吸着体の製造方法 | |
JP6517145B2 (ja) | 多孔質セルロースビーズの製造方法及びそれを用いた吸着体 | |
WO2018186222A1 (ja) | 多孔質セルロースビーズおよび吸着体 | |
JP2021161246A (ja) | 多孔質セルロースビーズの製造方法 | |
JP2015202232A (ja) | 血液浄化カラム用担体並びに当該担体を用いた血液浄化カラムおよび血液浄化方法 | |
JP6064402B2 (ja) | 抗体単量体の分離用分離剤及び分離方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170825 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180807 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180906 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20180906 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20181030 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20181126 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6442409 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |