JP6440320B2 - 多孔質セルロースビーズの製造方法およびそれを用いた吸着体 - Google Patents
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Description
b)前記セルロース微分散液に架橋剤を加え混合液を作製する工程、
c)前記混合液を分散媒に分散させてエマルションを作製する工程、
d)前記エマルションを凝固溶媒に接触させる工程を含むことを特徴とする、多孔質セルロースビーズの製造方法。
本工程では、低温のアルカリ水溶液とセルロースとを混合してセルロース微分散液を作製する。
本工程では、前記セルロース微分散液に架橋剤を加え混合液を作製する。
本工程では、前記混合液を分散媒に分散させてエマルションを作製する。
次に、前記エマルションを凝固溶媒に接触させることによりセルロース微分散液の液滴から溶媒を抽出し、多孔質セルロースビーズを得る。
以上で得られた多孔質セルロースビーズは、強度を高めるために、前記セルロースと架橋剤を含む混合液の作製工程bにおける架橋剤の添加以外に、架橋剤により架橋して架橋多孔質セルロースビーズとすることが好ましい。
本発明に係る多孔質セルロースビーズは、目的物と相互作用するリガンドを固定化することにより、吸着体とすることができる。本発明で得ることができる吸着体は非特異吸着が少ないといった特性を有していることから、安全性が高い薬や治療の提供が可能で、さらには精製や治療時に中間洗浄工程等を省力化することが可能となる。
各製造例、実施例で得られたビーズを5倍体積量の30%エタノールで洗浄し、ビーズに含まれる液体部分を30%エタノールで置換した。次いで、50%エタノール、70%エタノール、90%エタノール、特級エタノール、特級エタノール、特級エタノールを順に用いてビーズを同様に処理し、液体部分をエタノールで置換した。さらにt−ブチルアルコール/エタノールが3/7の混合液を用いてビーズを同様に処理した。次いで、t−ブチルアルコール/エタノール=5/5、7/7、9/1、10/0、10/0、10/0の混合液を順に用いてビーズを処理し、液体部分をt−ブチルアルコールで置換した後、凍結乾燥した。凍結乾燥を行なったビーズに金/パラジウムを蒸着源とした蒸着処理を行い、SEM観察像を撮影した。
(1) 溶液作成
以下の溶液を調製した。
B液:pH3.5Mの35mM酢酸ナトリウム(ナカライテスク社製の酢酸、酢酸ナトリウム、RO水で調製)
C液:1M酢酸(ナカライテスク社製の酢酸とRO水で調製)
D液:1mg/mLのヒトポリクローナルIgG溶液(ニチヤク社製「ガンマグロブリンニチヤク」1500mg/10mLとA液で調製)
E液:6M尿素(関東化学社製の尿素とRO水で調製)
各溶液は、使用前に脱気した。
カラムクロマトグラフィー用装置として、AKTAexplorer 100(GEヘルスケア社製)を用い、直径0.5cm、高さ15cmのカラムに22μmのメッシュを取り付け、本発明の吸着体をそれぞれ3mL入れ、線速450cm/hで20%エタノール水溶液(和光純薬工業社製エタノールとRO水で調整)を1時間通液して充填した。フラクションコレクターに15mLの採取用チューブをセットした。この溶出液の採取用チューブについては、あらかじめ中和液を入れておいた。
A液を線速300cm/hで9mL通液し、次いでD液を、UVをモニターしながら、IgGが10%破過するまで線速300cm/hで通液した。ここで、5%破過した時のIgG負荷量をRT3分での5%DBCとした。次いで、A液を線速300cm/hで30mL通液し、B液を線速300cm/hで30mL通液してIgGを溶出させた。次にC液を線速300cm/hで9mL,E液を線速300cm/hで9mL通液し、再生処理を行った。
(1) 溶液調製
下記A〜E液及び中和液を調製し、使用前に脱泡した。
カラムクロマトグラフィー用装置として、AKTAexplorer100(GEヘルスケア社製)を用い、直径0.5cm、高さ15cmのカラムに、吸着体試料を3mL入れ、線速230cm/hで0.2MのNaCl水溶液(RO水使用)を15分通液して充填した。フラクションコレクターに15mLの採取用チューブをセットし、溶出液の採取用チューブについては、あらかじめ中和液を入れておいた。
前記カラムにA液を15mL通液し、次いでD液を必要量通液した。次いで、A液を21mL通液後、B液を12mL通液してIgGを溶出させた。次にC液を6mL、E液を6mL、A液を15mL通液した。なお各液の流速は0.5mL/分または1mL/分とし、吸着体との接触時間が6分または3分となるようにした。
IgGが5%破過するまでに吸着体に吸着したIgG量と吸着体体積からIgGの動的吸着量を求めた。当該動的吸着量を5%DBCという。
(1) 試料調製
試料ビーズに純水を加え、濃度約50体積%のスラリーを調製した。このスラリーの攪拌による均質化と、それに続く30分以上の減圧による脱泡とからなる均質・脱泡操作を3回繰り返して実施し、脱泡スラリーを得た。この操作とは別に、処理対象を純水に変えて、前記均質・脱法操作を90分以上実施し、脱泡水を得た。
2.5mLのHANKE SASS WOLF社製ルアロック付ディスポーザブルシリンジ(商標名:NORM−JECT)の先端にディスポーザブルフィルター(孔径5.00μm、親水性)を取り付けた。シリンジのピストンを外し、シリンジ後端側から脱泡水を約2mL投入し、この脱泡水が0mLの標線を下回らないうちに、脱泡スラリーを投入した。ディスポーザブルフィルターの2次側にアスピレーターを接続し、液面がビーズ面を下まわらない様に注意しながら、前記脱泡スラリーを吸引した。ビーズ面の約0.5mL上まで液面が下がったところで吸引を停止した。以降の作業は、液面がビーズ面を下回らないよう、前記脱泡水を適宜追加しながら実施した。振動を与えながら前記脱泡スラリーを追加またはビーズを除去し、ビーズ面を1.5mLの標線に合わせ、振動を与えてもビーズ面が低下しないことを確認した。ビーズが舞わないようゆっくり脱泡水を溢れるまで追加し、気泡が入らないように注意しながらピストンを挿入した。以下、このシリンジを「ビーズ充填シリンジ」という。
レオテック社のFUDOH RHEO METERに10Kのロードセルを取り付け、変位速度のダイヤルを2cm/MINに合わせ、前記ビーズ充填シリンジをセットし、ピストンの変位を開始した。変位と応力との関係を記録し、下記式に基づき、20%圧縮応力を求めた。
試験例5 Kav:ゲル相分配係数の測定
多孔質セルロースビーズ22.8mLを蒸留水に分散させ、30分間脱気した。脱気した多孔質セルロースビーズをカラム(GEヘルスケア・ジャパン社製「Tricorn 10/300」)に充填した。島津製作所社製のサイズ排除クロマトグラフィーシステム(「DGU−20A3」、「RID−10A」、「LC−20AD」、「SIL−20AC」、「CTO−20AC」を含み、ソフトウェアとしては「LCSolution」を使用)を用いて測定を行った。
[式中、VRは各マーカー溶液を注入してからピークが観測されるまでの通液量(mL)を示し、V0は分子量4×107のデキストラン溶液を注入してからピークが観測されるまでの通液量(mL)を示し、Vtはカラム内のビーズの体積(mL)を示す]
試験例6 細孔径分布の計算
各マーカーの粘度半径と上記で求めたKavの値を下記式に代入し、各マーカーが多孔質セルロースビーズに侵入する細孔の半径を求めた。
[式中、rmは各マーカーの粘度半径(nm)を示し、rpは各マーカーが多孔質セルロースビーズに侵入する細孔の半径(nm)を示す]
算出された多孔質セルロースビーズの細孔半径を横軸に、分子量180のマーカーがビーズ内に侵入した細孔体積(VR−V0)を100%とした場合の細孔径分布を縦軸にプロットした。
試験例6で作成したグラフから累積細孔体積が50%の時の細孔径を求めた。
本発明で使用した無配向制御型プロテインAは、配列番号1で示されるアミノ酸配列を有する。これは、Staphylococcus aureus由来プロテインAからシグナルシーケンス(Sドメイン)及び細胞壁結合ドメイン(Xドメイン)を除いた部分にあたり、WO2006/004067においてSPA’として記載されているものである。当該プロテインAを、WO2006/004067の実施例に記載の方法に準じて調製した。なおこのWO2006/004067の全内容が、本願に参考のため援用される。
WO2012/133349を参照して、配向制御型アルカリ耐性プロテインAとして、WO2012/133349に記載の改変Cドメイン5連結体を調製した。配向制御型アルカリ耐性プロテインAは、配列番号2で示されるアミノ酸配列を有する。なお、このWO2012/133349の全内容が、本願に参考のため援用される。
(1) アルカリ水溶液の作製
和光純薬社製の水酸化ナトリウムと蒸留水を用いて、28.4wt%の水酸化ナトリウム水溶液を作製し、その温度を4℃に調整した。
セパラブルフラスコに79gの蒸留水と5.9gのセルロースを投入し、二段ディスクタービン(rushton turbine)翼を用いてスラリーの温度が4℃になるまで、150〜200rpmで30分間攪拌した。次いで、4℃に冷却した28wt%の水酸化ナトリウム水溶液を36g添加し、500rpmの速度で攪拌しながら30分間保持した。その後、作製したセルロース分散液に架橋剤として12gのグリセロールポリグリシジルエーテル(ナガセケムテックス社製「デナコールEX-314」)を添加し、500rpmの速度で15分間撹拌を行った。
上記セルロース分散液に、1wt%のソルビタンモノオレエートが溶解した833gのo−ジクロロベンゼン溶液を投入し、4℃で600rpm、15分間撹拌することでセルロース液滴を分散させた。凝固溶剤としてメタノールを74mL添加し、4℃で600rpm、30分間攪拌した。その後、ガラスフィルター(TOP社製「26G−3」)で溶液を濾過し、次いでビーズの5倍体積量のメタノール、5倍体積量の蒸留水の順に洗浄を行ない、多孔質セルロースビーズを回収した。
得られた多孔質セルロースビーズを、38μmと90μmの篩を用いて湿式分級した。
分級後の多孔質セルロースビーズ20mLに蒸留水を加えて30mLとし、反応容器に移した。ここに架橋剤としてグリセロールポリグリシジルエーテルを含有するグリセロールポリグリシジルエーテル(ナガセケムテックス社製「デナコールEX-314」)を2.3g投入し、40℃に調整しながら攪拌を続けた。40℃に調整後、30分間攪拌した。次いで、2N NaOH水溶液(ナカライテスク社製水酸化ナトリウムと蒸留水で調製)7.1mLを用意し、1時間に1/4ずつ加えた。この間、温度を40℃に維持し、攪拌も継続した。最後の1/4量を添加後、同温度で1時間攪拌した。反応終了後、吸引濾過をしながら、ビーズの20倍体積量以上の蒸留水で洗浄し、架橋1回ビーズを得た。さらに得られた架橋1回ビーズに同じ架橋反応をもう1回実施し、架橋2回ビーズを得た。
下記手順に従って、プロテインAを固定化した吸着体を作製した。上記(5)で得られた架橋多孔質セルロースビーズ11.0mLに、RO水を加えて全量を17.0mLとし、50mLの遠沈管に入れ、これを25℃にてミックスローター(アズワン社製「ミックスローターMR−3」)上に取り付けた後、攪拌した。次に過ヨウ素酸ナトリウム水溶液(過ヨウ素酸ナトリウムをRO水に溶解したもの、濃度:8.64mg/mL)6.0mLを加え、25℃で1時間攪拌した。反応後、グラスフィルター(シバタ社製「11GP100」)上で、濾液の電気伝導度が1μS/cm以下となるまでRO水で洗浄し、ホルミル基含有架橋多孔質セルロースビーズを得た。洗浄濾液の電気伝導度は、導電率計(EUTECH INSTRUMENTS社製「ECTester10 Pure+」)で測定した。得られたホルミル基含有架橋多孔質セルロースビーズ9.0mLをグラスフィルター(シバタ社製「11GP100」)上に移し、0.5Mクエン酸三ナトリウム二水和物(関東化学社製)+0.15M塩化ナトリウム(関東化学社製)バッファー30mLを通液してビーズ内の液体を前記クエン酸三ナトリウム水溶液に置換した。前記バッファーを用い、置換後のホルミル基含有架橋多孔質セルロースビーズを、遠沈管に入れた。ホルミル基含有多孔質セルロースビーズを沈降させた後、総体積量14mLとなるように上清を除去して調整した。
セルロース分散液作製時に架橋剤としてグリセロールポリグリシジルエーテル(ナガセケムテックス社製「デナコールEX-314」)を添加しないこと以外は、実施例1と同様に吸着体を作製した。得られた吸着体の物性評価を行った結果、プロテインA導入量:35g/L(吸着体体積)で、RT3分での5%DBCが49g/L(吸着体充填体積)であった。
(1) 多孔質セルロースビーズの作製
実施例1と同様に多孔質セルロースビーズの作製を行った。得られた多孔質セルロースビーズのメジアン粒径は64μmであった。
実施例1と同様に分級を行った。分級後の多孔質セルロースビーズに含まれる液体部分を100mLをエタノールで置換した後、反応容器に移し、セルロースビーズとエタノールの合計量が97gとなるようにした。そこに蒸留水28gとエピクロロヒドリン80mLを添加した。溶液温度を40℃に調整し、1.8N NaOH水溶液(ナカライテスク社製水酸化ナトリウムと蒸留水で調製)を96mL添加し、架橋反応を開始させた。反応開始から1.5時間後に17.0N NaOH水溶液を9.6mL添加し、反応開始から3時間後と4.5時間後にも17.0N NaOH水溶液を9.6mL添加した。反応開始から6時間後にゲルを回収し、ビーズの20倍体積量以上の蒸留水で洗浄した。
セルロース分散液作製時に架橋剤としてグリセロールポリグリシジルエーテル(ナガセケムテックス社製「デナコールEX-314」)の代わりに、グリセロールポリグリシジルエーテル(ナガセケムテックス社製「デナコールEX-313」)を添加したこと以外は、実施例2と同様に多孔質セルロースビーズを得た。得られた多孔質セルロースビーズのメジアン粒径は98μmであった。次いで、38μmと150μmの篩を用いたこと以外は、実施例2と同様に分級と架橋を行い、架橋多孔質セルロースビーズを得た。架橋後の多孔質セルロースビーズのKav値を表3に、マーカーの粘度半径とKav値との関係を図4に、架橋剤の水溶率とKav値との関係を図5に、細孔径分布と平均細孔径を表4に、細孔径分布を図6に、架橋剤の水溶率と平均細孔径との関係を図7に示す。
セルロース分散液作製時に架橋剤としてグリセロールポリグリシジルエーテル(ナガセケムテックス社製「デナコールEX-314」)の代わりに、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル(ナガセケムテックス社製「デナコールEX-521」)を添加したこと以外は、実施例2と同様に多孔質セルロースビーズを得た。得られた多孔質セルロースビーズのメジアン粒径は65μmであった。次いで、実施例3と同様に分級と架橋を行い、架橋多孔質セルロースビーズを得た。架橋後の多孔質セルロースビーズのKav値を表3に、マーカーの粘度半径とKav値との関係を図4に、架橋剤の水溶率とKav値との関係を図5に、細孔径分布と平均細孔径を表4に、細孔径分布を図6に、架橋剤の水溶率と平均細孔径との関係を図7に示す。
セルロース分散液作製時に架橋剤としてグリセロールポリグリシジルエーテル(ナガセケムテックス社製「デナコールEX-314」)の代わりに、ソルビトールポリグリシジルエーテル(ナガセケムテックス社製「デナコールEX-614」)を添加したこと以外は、実施例2と同様に多孔質セルロースビーズを得た。得られた多孔質セルロースビーズのメジアン粒径は63μmであった。次いで、実施例3と同様に分級と架橋を行い、架橋多孔質セルロースビーズを得た。架橋後の多孔質セルロースビーズのKav値を表3に、マーカーの粘度半径とKav値との関係を図4に、架橋剤の水溶率とKav値との関係を図5に、細孔径分布と平均細孔径を表4に、細孔径分布を図6に、架橋剤の水溶率と平均細孔径との関係を図7に示す。
セルロース分散液作製時に架橋剤としてグリセロールポリグリシジルエーテル(ナガセケムテックス社製「デナコールEX-314」)の代わりに、ポリプロピレングリコールジグリシジルエーテル(ナガセケムテックス社製「デナコールEX-920」)を添加したこと以外は、実施例2と同様に多孔質セルロースビーズを得た。得られた多孔質セルロースビーズのメジアン粒径は244μmであった。
セルロース分散液作製時に架橋剤としてグリセロールポリグリシジルエーテル(ナガセケムテックス社製「デナコールEX-314」)の添加量を6gとし、水を6g増量した以外は、実施例2と同様に多孔質セルロースビーズを得た。次いで、実施例3と同様に分級と架橋を行い、架橋多孔質セルロースビーズを得た。セルロース微分散液への架橋剤の添加量とKav値を表5と図9に、細孔径分布を図10に、セルロース微分散液への架橋剤の添加量と平均細孔径を表6と図11に示す。
セルロース分散液作製時に架橋剤としてグリセロールポリグリシジルエーテル(ナガセケムテックス社製「デナコールEX-314」)の添加量を18gとし、水を6g減量した以外は、実施例2と同様に多孔質セルロースビーズを得た。次いで、実施例3と同様に分級と架橋を行い、架橋多孔質セルロースビーズを得た。セルロース微分散液への架橋剤の添加量とKav値を表5と図9に、細孔径分布を図10に、セルロース微分散液への架橋剤の添加量と平均細孔径を表6と図11に示す。
セルロース分散液作製時に架橋剤としてグリセロールポリグリシジルエーテル(ナガセケムテックス社製「デナコールEX-314」)を加えず、水を12g増量した以外は、実施例2と同様に多孔質セルロースビーズを得た。次いで、実施例3と同様に分級と架橋を行い、架橋多孔質セルロースビーズを得た。架橋後の多孔質セルロースビーズのKav値を表3に、マーカーの粘度半径とKav値との関係を図4と図8に、架橋剤の水溶率とKav値との関係を図5に、細孔径分布と平均細孔径を表4に、細孔径分布を図6と図10に、架橋剤の水溶率と平均細孔径との関係を図7に、セルロース微分散液への架橋剤の添加量とKav値を表5と図9に、セルロース微分散液への架橋剤の添加量と平均細孔径を表6と図11に示す。
実施例2と同様に架橋多孔質ビーズを得た後、架橋後の多孔質セルロースビーズを38μmと90μmの篩を用いて湿式分級を行ない、メジアン粒径が65μmの架橋多孔質セルロースビーズを得た。
配向制御型アルカリ耐性プロテインAの入った水溶液の添加量を1.10gに変更した以外は実施例9と同様に吸着体を得た。
配向制御型アルカリ耐性プロテインAの入った水溶液の添加量を0.82gに変更した以外は実施例9と同様に吸着体を得た。
架橋後の多孔質セルロースビーズを38μmと63μmの篩を用いて湿式分級を行なって得られたメジアン粒径52μmの架橋多孔質セルロースビーズを用いた以外は、実施例10と同様に吸着体を得た。
架橋後の多孔質セルロースビーズを63μmと75μmの篩を用いて湿式分級を行なって得られたメジアン粒径71μmの架橋多孔質セルロースビーズを用いた以外は、実施例10と同様に吸着体を得た。
アルカリ耐性のあるプロテインAを固定化した高性能な抗体医薬品精製用吸着体として知られているGEヘルスケア社製「MabSelect SuRe LX」の吸着性能を試験例3に従って測定し、また、20%圧縮応力を試験例4に従って測定した。吸着性能を表7に、実施例12との吸着性能の比較結果を図12に示す。
Claims (7)
- a)低温のアルカリ水溶液とセルロースとを混合してセルロース微分散液を作製する工程、
b)前記セルロース微分散液に架橋剤であるエポキシ基含有化合物を加え混合液を作製する工程、
c)前記混合液を分散媒に分散させてエマルションを作製する工程、
d)前記エマルションを凝固溶媒に接触させる工程を含むことを特徴とする、多孔質セルロースビーズの製造方法。 - 前記a)の工程における前記アルカリ水溶液の液温が0〜25℃であることを特徴とする請求項1に記載の製造方法。
- 前記エポキシ基含有化合物がグリシジルエーテル系化合物であることを特徴とする請求項1または2に記載の多孔質セルロースビーズの製造方法。
- 前記架橋剤の水溶率が50%以上であることを特徴とする請求項1〜3のいずれか一項に記載の多孔質セルロースビーズの製造方法。
- 前記架橋剤の粘度が100mPa・s以上50000mPa・s以下であることを特徴とする、請求項1〜4のいずれか一項に記載の多孔質セルロースビーズの製造方法。
- 請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法で多孔質セルロースビーズを製造する工程、および、当該多孔質セルロースビーズに目的物と相互作用するリガンドを固定化することにより吸着体を得る工程を含むことを特徴とする吸着体の製造方法。
- 請求項6に記載の方法で吸着体を製造する工程、および、当該吸着体を用いて当該吸着体に吸着される目的物を精製する工程を含むことを特徴とする精製方法。
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---|---|---|---|---|
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Families Citing this family (3)
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---|---|---|---|---|
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Family Cites Families (25)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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JPH0682435A (ja) | 1992-09-04 | 1994-03-22 | Kanebo Ltd | セルロース系ゲル濾過充填剤及びその製造方法 |
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JP5666310B2 (ja) | 2008-12-03 | 2015-02-12 | 株式会社カネカ | ホルミル基含有多孔質担体、それを用いた吸着体、およびそれらの製造方法 |
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPWO2016167268A1 (ja) * | 2015-04-15 | 2018-02-08 | 株式会社カネカ | 多孔質セルロースビーズの製造方法およびそれを用いた吸着体 |
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