JP5589254B2 - Method for producing cadaverine salt - Google Patents

Description

本発明は、カダベリン塩等に関し、より詳しくは、３官能以上の有機物の含有量が少ないカダベリン塩等に関する。   The present invention relates to cadaverine salts and the like, and more particularly to cadaverine salts and the like having a low content of trifunctional or higher functional organic substances.

プラスチック原料として、その殆どがいわゆる化石原料が用いられている。再生利用する場合を除き、プラスチックを廃棄する場合、燃焼等による廃棄は炭酸ガスの放出を招くことから近年問題となりつつある。そこで、地球温暖化防止及び循環型社会の形成に向けて、プラスチックの製造原料をバイオマス由来の原料に置き換えることが嘱望されている。このようなニーズは、フィルム、自動車部品、電気・電子部品、機械部品等の射出成形品、繊維、モノフィラメント等、多岐にわたる。   Most of the plastic materials are so-called fossil materials. Except for the case of recycling, when plastic is discarded, disposal due to combustion or the like causes a release of carbon dioxide gas, which is becoming a problem in recent years. Therefore, in order to prevent global warming and form a recycling society, it is desired to replace the raw materials for plastic production with raw materials derived from biomass. Such needs are diverse such as films, automobile parts, electrical / electronic parts, injection molded products such as mechanical parts, fibers, monofilaments, and the like.

ところで、ポリアミド樹脂は、機械的強度、耐熱性、耐薬品性等に優れており、いわゆるエンジニアリングプラスチックスの１つとして多くの分野で用いられている。中でもフィルムは、二軸延伸ポリプロピレンフィルムや二軸延伸ポリエステルフィルム等に比べ、優れた機械的特性、耐熱性、透明性、ガスバリア性等の特徴を有しており、食品、医薬品、雑貨等の包装用フィルムとして広く利用されている。   By the way, the polyamide resin is excellent in mechanical strength, heat resistance, chemical resistance, etc., and is used in many fields as one of so-called engineering plastics. Above all, the film has excellent mechanical properties, heat resistance, transparency, gas barrier properties, etc. compared to biaxially stretched polypropylene film and biaxially stretched polyester film, etc. Widely used as an industrial film.

ポリアミド樹脂のフィルムは強度やガスバリア性を付与するため、二軸延伸等の延伸処理を施して使用される場合が多い。この際、フィッシュアイと称される粒状欠陥があると、それを起点に延伸破断を起こし生産性を損なうだけでなく、フィルムの外観を悪化させ商品価値を著しく損なう。このため、フィッシュアイを極力低減することが求められている。
また、ポリアミド樹脂はその優れた性能を生かし、繊維やモノフィラメントの分野でも広く用いられている。これらの用途でも、上述のフィルム同様、フィッシュアイは成形時の延伸破断や表面外観の悪化を招くため、その低減が求められている。 Polyamide resin films are often used after being subjected to stretching treatment such as biaxial stretching in order to impart strength and gas barrier properties. At this time, if there is a granular defect called “fish eye”, not only does it cause stretching and breakage, but the productivity is deteriorated, and the appearance of the film is deteriorated and the commercial value is remarkably impaired. For this reason, it is required to reduce fish eyes as much as possible.
Polyamide resins are also widely used in the field of fibers and monofilaments, taking advantage of their superior performance. Even in these applications, as with the above-described film, fish eyes are subject to stretch breakage during molding and deterioration of the surface appearance.

一方、ポリアミド樹脂からなる射出成形品には、自動車部品、電気・電子部品、機械部品等が挙げられる。いずれの場合も、部品のコンパクト化や軽量化を目的に薄肉化が望まれている。この場合、ポリアミド樹脂本来の物性を維持するため分子量（数平均分子量）を下げることなく、高い流動性を有するポリアミド樹脂が必要となる。   On the other hand, injection molded products made of polyamide resin include automobile parts, electrical / electronic parts, mechanical parts and the like. In either case, thinning is desired for the purpose of reducing the size and weight of parts. In this case, in order to maintain the original physical properties of the polyamide resin, a polyamide resin having high fluidity is required without lowering the molecular weight (number average molecular weight).

バイオマス由来の原料を使用して製造されるポリアミド樹脂としては、カダベリンを原料とするものが知られている。例えば、特許文献１、特許文献２にはその原料であるカダベリン・ジカルボン酸塩の製造方法、精製方法が提案されている。   As a polyamide resin manufactured using a raw material derived from biomass, one using cadaverine as a raw material is known. For example, Patent Literature 1 and Patent Literature 2 propose a method for producing and purifying cadaverine dicarboxylate, which is a raw material.

特開２００４−２０８６４６号公報JP 2004-208646 A 特開２００５−００６６５０号公報JP 2005-006650 A

ところが、前記特許文献には、３官能以上の有機物含有量とフィルムのフィッシュアイや射出成形時の流動性との関連性については何ら言及されていない。   However, the above-mentioned patent document does not mention any relation between the organic substance content of three or more functional groups and the fish eye of the film or the fluidity at the time of injection molding.

本発明は、上述したバイオマス由来の原料から得られたポリアミド樹脂における課題を解決するためになされたものである。
即ち、本発明の目的は、カダベリン塩の製造方法を提供することにある。 This invention is made | formed in order to solve the subject in the polyamide resin obtained from the raw material derived from biomass mentioned above.
That is, an object of the present invention is to provide a method for producing a cadaverine salt .

上記課題を解決するために、本発明者らは鋭意検討を行った結果、バイオマス由来の原料から得られたカダベリン塩中の３官能以上の有機物の含有量、或いはアミノ酸含有量、リジン含有量、アルギニン含有量を制御することにより、著しくフィッシュアイが少なく表面外観に優れたポリアミド樹脂フィルムを得ることが可能であり、且つ、著しく射出成形時の流動性が優れることを見出し、斯かる知見に基づき本発明を完成した。   In order to solve the above-mentioned problems, the present inventors have intensively studied. By controlling the arginine content, it has been found that it is possible to obtain a polyamide resin film with significantly less fish eyes and excellent surface appearance, and that the fluidity during injection molding is remarkably excellent. The present invention has been completed.

かくして本発明によれば、カダベリン塩水溶液の晶析により得られ、カダベリン塩の晶析率が１０重量％〜３５重量％であり、前記カダベリン塩水溶液中の前記カダベリン塩の濃度が、５０重量％〜６７重量％であることを特徴とするカダベリン塩の製造方法が提供される。 Thus, according to the present invention, it is obtained by crystallization of an aqueous solution of cadaverine salt, the crystallization rate of the cadaverine salt is 10% by weight to 35% by weight , and the concentration of the cadaverine salt in the aqueous solution of cadaverine salt is 50% by weight. A method for producing a cadaverine salt, characterized in that it is -67% by weight .

またカダベリン塩水溶液中のカダベリン塩が、カダベリン・アジピン酸であることが好ましい。The cadaverine salt in the aqueous cadaverine salt solution is preferably cadaverine / adipic acid.

さらに、カダベリンが、リジンからリジン脱炭酸酵素、リジン脱炭酸酵素活性の向上した組み換え微生物又はリジン脱炭酸酵素を産生する細胞もしくは細胞の処理物を用いて得られたものであることが好ましい。 Further, cadaverine is preferably obtained from lysine using lysine decarboxylase, a recombinant microorganism having improved lysine decarboxylase activity, or a cell producing lysine decarboxylase or a treated product of the cell .

本発明のカダベリン塩を用いて、フィッシュアイが少なく表面外観に優れたポリアミド樹脂のフィルムが得られる。   By using the cadaverine salt of the present invention, a polyamide resin film having less fish eyes and excellent surface appearance can be obtained.

以下、本発明を実施するための最良の形態（実施の形態）について詳細に説明する。尚、以下に記載する説明は、本発明の実施の形態の代表例であり、これらの内容に本発明は限定されるものではない。   Hereinafter, the best mode (embodiment) for carrying out the present invention will be described in detail. The following description is a representative example of the embodiment of the present invention, and the present invention is not limited to these contents.

（カダベリン）
本実施の形態におけるカダベリンは、例えば、リジン溶液に、同溶液のｐＨが酵素的脱炭酸反応に適したｐＨに維持されるように酸を加えながら、リジンの酵素的脱炭酸反応を行うことにより、製造することができる。
ここで用いる酸としては、塩酸、硫酸、リン酸等の無機酸や、酢酸等の有機酸が挙げられる。得られた反応生成液から、通常の分離精製方法を用いて遊離カダベリンを採取することができる。
更には、上記酸としてジカルボン酸を用いて、直接ポリアミドの製造原料となるカダベリン・ジカルボン酸塩を採取することも可能である。 (Cadaverine)
The cadaverine in the present embodiment is obtained by, for example, performing an enzymatic decarboxylation reaction of lysine while adding an acid to the lysine solution so that the pH of the solution is maintained at a pH suitable for the enzymatic decarboxylation reaction. Can be manufactured.
Examples of the acid used here include inorganic acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, and phosphoric acid, and organic acids such as acetic acid. Free cadaverine can be collected from the resulting reaction product solution using a conventional separation and purification method.
Furthermore, it is also possible to collect cadaverine dicarboxylate, which is a raw material for producing polyamide directly, using dicarboxylic acid as the acid.

（カダベリン・アジピン酸塩の製造方法）
以下に、酸としてアジピン酸を用いて、リジンの酵素的脱炭酸反応により、カダベリン・アジピン酸塩を製造する方法について詳細に説明する。
原料として用いるリジンは、通常、遊離塩基（リジンベース。即ち、遊離リジン。）であることが好ましいが、リジンのアジピン酸塩であってもよい。リジンは、酵素的脱炭酸反応によりカダベリンを生成するものであれば、Ｌ−リジン、Ｄ−リジンのいずれであってもよいが、通常は入手のしやすさからＬ−リジンが好ましい。
また、リジンは、精製されたリジンであってもよく、酵素的脱炭酸反応により生成するカダベリンがアジピン酸と塩を形成することが可能であれば、リジンを含む発酵液であってもよい。 (Method for producing cadaverine adipate)
Hereinafter, a method for producing cadaverine adipate by enzymatic decarboxylation of lysine using adipic acid as an acid will be described in detail.
The lysine used as a raw material is usually preferably a free base (lysine base, ie, free lysine), but may be an adipate of lysine. The lysine may be either L-lysine or D-lysine as long as it produces cadaverine by enzymatic decarboxylation, but L-lysine is usually preferred because of its availability.
The lysine may be a purified lysine, or a fermentation liquid containing lysine as long as cadaverine produced by enzymatic decarboxylation can form a salt with adipic acid.

リジン溶液を調製する溶媒としては、好適には水が用いられる。反応液のｐＨは、アジピン酸によって調整するため、他のｐＨ調整剤や緩衝剤を用いる必要はないが、前記溶媒として緩衝液を用いてもよい。
このような緩衝液としては、酢酸ナトリウム緩衝液等が挙げられる。但し、カダベリンとアジピン酸との塩を形成させるという点からは、緩衝剤等は用いないか、用いる場合であっても低濃度に抑えることが好ましい。 As a solvent for preparing the lysine solution, water is preferably used. Since the pH of the reaction solution is adjusted with adipic acid, it is not necessary to use other pH adjusting agents or buffers, but a buffer solution may be used as the solvent.
Examples of such a buffer include sodium acetate buffer. However, from the viewpoint of forming a salt of cadaverine and adipic acid, it is preferable not to use a buffering agent or the like, or to suppress it to a low concentration even if it is used.

リジンとして遊離リジンを用いる場合は、リジン溶液にアジピン酸を加えて酵素的脱炭酸反応に適したｐＨとなるように調整する。具体的には、ｐＨとしては、通常４．０以上、好ましくは５．０以上、より好ましくは５．５以上で、通常８．０以下、好ましくは７．０以下、より好ましくは６．５以下が挙げられる。
尚、リジンとして、リジンのアジピン酸塩を用いる場合は、反応液調製時にアジピン酸を加える必要はない。以下、このように、反応液のｐＨを酵素的脱炭酸反応に適したｐＨに調整することを、「中和」と称す場合がある。 When free lysine is used as lysine, adipic acid is added to the lysine solution to adjust to a pH suitable for enzymatic decarboxylation. Specifically, the pH is usually 4.0 or more, preferably 5.0 or more, more preferably 5.5 or more, and usually 8.0 or less, preferably 7.0 or less, more preferably 6.5. The following are mentioned.
When lysine adipate is used as lysine, it is not necessary to add adipic acid when preparing the reaction solution. Hereinafter, the adjustment of the pH of the reaction solution to a pH suitable for the enzymatic decarboxylation reaction may be referred to as “neutralization”.

リジンの酵素的脱炭酸反応の際には、生産速度及び反応収率向上のため、ピリドキシン、ピリドキサミン、ピリドキサル及びピリドキサルリン酸から選ばれる少なくとも１種のビタミンＢ６を配合することが好ましく、なかでもピリドキサルリン酸が特に好ましい。
ビタミンＢ６を添加する方法には特に制限はない。反応中に適宜添加しても良い。 In the enzymatic decarboxylation reaction of lysine, it is preferable to add at least one vitamin B6 selected from pyridoxine, pyridoxamine, pyridoxal and pyridoxal phosphate in order to improve the production rate and reaction yield, and in particular, pyridoxal phosphate Is particularly preferred.
There is no restriction | limiting in particular in the method of adding vitamin B6. You may add suitably during reaction.

リジンの酵素的脱炭酸反応は、例えば、上記のようにして中和されたリジン溶液にリジン脱炭酸酵素（ＬＤＣ）を添加することによって行うことができる。
ＬＤＣとしては、リジンに作用してカダベリンを生成させるものであれば特に制限はない。ＬＤＣとしては、精製酵素を用いてもよいし、ＬＤＣを産生する微生物、植物細胞又は動物細胞等の細胞を用いてもよい。ＬＤＣ又はそれを産生する細胞は、１種でもよく、２種以上の混合物であってもよい。
また、細胞をそのまま用いてもよく、ＬＤＣを含む細胞処理物を用いてもよい。細胞処理物としては、細胞破砕液及びその分画物が挙げられる。 The enzymatic decarboxylation reaction of lysine can be performed, for example, by adding lysine decarboxylase (LDC) to the lysine solution neutralized as described above.
The LDC is not particularly limited as long as it acts on lysine to produce cadaverine. As the LDC, a purified enzyme may be used, or a cell such as a microorganism, a plant cell, or an animal cell that produces LDC may be used. One type of LDC or a cell that produces it may be used, or a mixture of two or more types may be used.
Further, the cells may be used as they are, or a cell treatment product containing LDC may be used. Examples of the cell treatment product include a cell lysate and a fraction thereof.

前記微生物としては、Ｅ．ｃｏｌｉ等のエシェリヒア属細菌、ブレビバクテリウム・ラクトファーメンタム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｏｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）等のコリネ型細菌、バチルス・サチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）等のバチルス属細菌、セラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）等のセラチア属細菌等の細菌、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）等の真核細胞が挙げられる。これらの中では細菌、特にＥ．ｃｏｌｉが好ましい。   Examples of the microorganism include E. coli. Escherichia bacteria such as E. coli, coryneform bacteria such as Brevibacterium lactofermentum, Bacillus subtilis such as Bacillus subtilis, Serratia marcescens such as Serratia marcescens And eukaryotic cells such as Saccharomyces cerevisiae. Among these, bacteria, in particular E. coli. E. coli is preferred.

前記微生物は、ＬＤＣを産生する限り、野生株でもよく、変異株であってもよい。また、ＬＤＣ活性が上昇するように改変された組換え株であってもよい。植物細胞又は動物細胞も、ＬＤＣ活性が上昇するように改変された組換え細胞を用いることができる。組換え細胞については、後述する。   The microorganism may be a wild strain or a mutant strain as long as it produces LDC. Moreover, the recombinant strain modified so that LDC activity may increase may be sufficient. Plant cells or animal cells can also be recombinant cells that have been modified to increase LDC activity. The recombinant cell will be described later.

リジン溶液にＬＤＣを添加して反応を開始した後は、反応の進行に伴い、リジンから遊離される炭酸ガスが反応液から放出され、ｐＨが上昇する。従って、反応液のｐＨが前記範囲となるように、アジピン酸を反応液に添加する。アジピン酸は連続的に添加してもよく、ｐＨが前記範囲に維持される限り、分割して添加してもよい。
反応温度は、ＬＤＣがリジンに作用してカダベリンを生成させる温度であれば特に制限はないが、温度は、通常２０℃以上、好ましくは３０℃以上で、通常６０℃以下、好ましくは４０℃以下で行う。 After starting the reaction by adding LDC to the lysine solution, as the reaction proceeds, carbon dioxide released from the lysine is released from the reaction solution, and the pH rises. Therefore, adipic acid is added to the reaction solution so that the pH of the reaction solution is in the above range. Adipic acid may be added continuously, or may be added in portions as long as the pH is maintained in the above range.
The reaction temperature is not particularly limited as long as LDC acts on lysine to produce cadaverine, but the temperature is usually 20 ° C or higher, preferably 30 ° C or higher, and usually 60 ° C or lower, preferably 40 ° C or lower. To do.

原料のリジン又はリジン・アジピン酸塩は、反応開始時に反応液に全量添加してもよく、ＬＤＣ反応の進行に応じて、分割して添加してもよい。   The raw material lysine or lysine adipate may be added to the reaction solution in its entirety at the start of the reaction, or may be added in portions as the LDC reaction proceeds.

酵素反応は、バッチ式によって行うと、アジピン酸の添加を容易に行うことができる。また、ＬＤＣ、ＬＤＣを産生する細胞又はその処理物を固定化した担体を用いた移動床カラムクロマトグラフィーによって、反応を行うこともできる。
その場合は、反応系のｐＨが所定の範囲に維持されたまま反応が進行するように、リジン及びアジピン酸をカラムの適当な部位に注入すればよい。 When the enzyme reaction is carried out batchwise, adipic acid can be easily added. The reaction can also be carried out by moving bed column chromatography using a carrier on which LDC, LDC-producing cells or treatments thereof are immobilized.
In that case, lysine and adipic acid may be injected into an appropriate part of the column so that the reaction proceeds while the pH of the reaction system is maintained within a predetermined range.

上記のようにして、リジンの酵素的脱炭酸反応によるカダベリン生成に伴って上昇するｐＨを、アジピン酸を用いて逐次中和することにより、酵素反応が良好に進行する。このようにして生成するカダベリンは、アジピン酸塩として反応液中に蓄積する。   As described above, the enzymatic reaction proceeds favorably by sequentially neutralizing the pH, which increases with cadaverine production by enzymatic decarboxylation of lysine, using adipic acid. The cadaverine thus produced accumulates in the reaction solution as an adipate.

ＬＤＣ反応により得られたカダベリン・アジピン酸塩は、反応液から公知の方法を組み合わせることによって単離、精製することができる。カダベリン・アジピン酸塩は、使用態様に応じて、溶液のままであってもよく、結晶であってもよい。上記のようにして得られる結晶は、カダベリンとアジピン酸を等モルで含んでいるため、ポリアミド樹脂製造の原料として好適であり、必要に応じて乾燥して使用することができる。   Cadaverine adipate obtained by the LDC reaction can be isolated and purified from the reaction solution by combining known methods. Cadaverine adipate may remain in solution or may be crystalline, depending on the mode of use. Since the crystal obtained as described above contains cadaverine and adipic acid in equimolar amounts, it is suitable as a raw material for producing a polyamide resin, and can be used after drying as necessary.

次に、一例として晶析法にて、本実施の形態におけるカダベリン・アジピン酸塩水溶液からカダベリン・アジピン酸塩を得る方法を具体的に説明する。   Next, as an example, a method for obtaining cadaverine adipate from the cadaverine adipate aqueous solution in the present embodiment will be specifically described by crystallization.

バイオマス原料から得られたカダベリン・アジピン酸塩水溶液は着色しているため、晶析前に脱色することが好ましく、脱色剤としては活性炭、合成吸着剤、活性白土、シリカ、ゼオライト等が挙げられ、中でも活性炭が好ましい。
脱色は、脱色剤を充填した塔にカダベリン・アジピン酸塩水溶液を通液する方法や、カダベリン・アジピン酸塩水溶液中に脱色剤を添加、撹拌する方法等が挙げられ、中でも前者が好ましい。 Since the cadaverine / adipate aqueous solution obtained from the biomass raw material is colored, it is preferable to decolorize it before crystallization, and examples of the decolorizing agent include activated carbon, synthetic adsorbent, activated clay, silica, zeolite, etc. Of these, activated carbon is preferred.
Examples of decolorization include a method in which a cadaverine / adipate aqueous solution is passed through a tower packed with a decolorizer, a method in which a decolorizer is added to and stirred in a cadaverine / adipate aqueous solution, and the former is preferred.

脱色後のカダベリン・アジピン酸塩水溶液は、窒素バブリングにより溶存酸素を追い出した後、カダベリン・アジピン酸塩濃度が５０重量％〜６９重量％、好ましくは６０重量％〜６７重量％まで濃縮する。カダベリン・アジピン酸塩濃度が過度に小さい場合は晶析後の収率が低くなり、過度に大きいとカダベリン・アジピン酸塩に混入する不純物濃度が高くなるので好ましくない。具体的には、リジン、アルギニン等の３官能以上のアミノ酸等の含有量が高くなるので好ましくない。   The aqueous solution of cadaverine and adipate after decolorization expels dissolved oxygen by nitrogen bubbling, and then the cadaverine and adipate concentration is concentrated to 50% to 69% by weight, preferably 60% to 67% by weight. If the cadaverine / adipate concentration is excessively small, the yield after crystallization is low, and if it is excessively large, the concentration of impurities mixed in the cadaverine / adipate increases, which is not preferable. Specifically, it is not preferable because the content of trifunctional or higher functional amino acids such as lysine and arginine is increased.

濃縮は、カダベリン・アジピン酸塩水溶液の温度５０℃〜７０℃、減圧度１５０Ｔｏｒｒ以下で行うのが好ましい。温度が過度に低いと濃縮時間が長くなり、温度が過度に高いとカダベリン・アジピン酸塩が分解するので好ましくない。また、減圧度が１５０Ｔｏｒｒを超えると濃縮時間が長くなるので好ましくない。   Concentration is preferably carried out at a temperature of 50 ° C. to 70 ° C. and a reduced pressure of 150 Torr or less of the cadaverine / adipate aqueous solution. If the temperature is too low, the concentration time becomes long, and if the temperature is too high, cadaverine adipate is decomposed, which is not preferable. In addition, if the degree of vacuum exceeds 150 Torr, the concentration time becomes longer, which is not preferable.

晶析は、冷却してカダベリン・アジピン酸塩を析出させて行う。この場合、冷却している降温途中で種晶を添加することが好ましい。種晶は、種晶としての効果が得られるものであれば特に限定されない。中でも、析出するカダベリン・アジピン酸塩が好ましい。   Crystallization is performed by cooling to precipitate cadaverine adipate. In this case, it is preferable to add the seed crystal during cooling. A seed crystal will not be specifically limited if the effect as a seed crystal is acquired. Among them, cadaverine adipate that precipitates is preferable.

冷却時の降温速度は、通常１℃／ｈ以上、好ましくは２℃／ｈ以上、さらに好ましくは３℃／ｈ以上、又通常３０℃／ｈ以下、好ましくは２０℃／ｈ以下、さらに好ましくは１０℃／ｈ以下である。降温速度が過度に遅いと晶析に時間を要する傾向となるので好ましくない。降温速度が過度に早いと結晶サイズが小さくなる傾向となり、精製度合いが低下する傾向となるので好ましくない。   The cooling rate during cooling is usually 1 ° C / h or more, preferably 2 ° C / h or more, more preferably 3 ° C / h or more, and usually 30 ° C / h or less, preferably 20 ° C / h or less, more preferably 10 ° C./h or less. An excessively low temperature drop rate is not preferable because it tends to require time for crystallization. An excessively low rate of temperature decrease is not preferable because the crystal size tends to be small and the degree of purification tends to be low.

晶析終了温度は、通常１℃以上、好ましくは５℃以上、さらに好ましくは１０℃以上、又通常３０℃以下、好ましくは２５℃以下、さらに好ましくは２０℃以下である。晶析終了温度が過度に高いと収率が低くなる傾向となるので好ましくない。晶析終了温度が過度に低いと、カダベリン・アジピン酸塩スラリーを移送する際に、配管を閉塞しやすくなるので好ましくない。   The crystallization end temperature is usually 1 ° C. or higher, preferably 5 ° C. or higher, more preferably 10 ° C. or higher, and usually 30 ° C. or lower, preferably 25 ° C. or lower, more preferably 20 ° C. or lower. An excessively high crystallization end temperature is not preferable because the yield tends to be low. If the crystallization end temperature is excessively low, it is not preferable because the piping is easily blocked when the cadaverine / adipate slurry is transferred.

晶析率は、濃縮液のカダベリン・アジピン酸塩濃度と晶析終了温度により決められ特に限定されないが、通常１重量％以上、好ましくは５重量％以上、さらに好ましくは１０重量％以上である。また、通常４６重量％以下、好ましくは３９重量％以下、さらに好ましくは３５重量％以下に制御することが好ましい。晶析率が過度に低いと収率が低くなる傾向となるので好ましくない。晶析率が過度に高いとカダベリン・アジピン酸塩に混入するリジン、アルギニン等の３官能以上のアミノ酸等の不純物濃度が高くなるので好ましくない。   The crystallization rate is determined by the cadaverine / adipate concentration of the concentrate and the crystallization end temperature, and is not particularly limited, but is usually 1% by weight or more, preferably 5% by weight or more, and more preferably 10% by weight or more. Moreover, it is preferable to control to 46 weight% or less normally, Preferably it is 39 weight% or less, More preferably, it is 35 weight% or less. An excessively low crystallization rate is not preferable because the yield tends to be low. If the crystallization rate is excessively high, the concentration of impurities such as tri- or higher functional amino acids such as lysine and arginine mixed in cadaverine / adipate is not preferable.

晶析後のカダベリン・アジピン酸塩スラリーは、常法に従い固液分離して、結晶として得られる。例えば、遠心濾過を行う場合は、母液を振り切った後に、遠心濾過器が回転している状態で少量の脱塩水をシャワー状にふりかけ、カダベリン・アジピン酸塩に付着している母液をさらに洗い流すと精製度が上がり好ましい。
脱塩水量はｗｅｔケーキ（若干の水を含んだカダベリン・アジピン酸塩）に対して、通常１重量％以上、好ましくは５重量％以上である。また、通常４０重量％以下、好ましくは３０重量％以下である。脱塩水量が過度に少ないと洗浄効果が小さくなる傾向となるので好ましくない。脱塩水量が過度に多いと、収率が低下する傾向となるので好ましくない。このようにして得られた結晶を１番晶と称する。 The cadaverine adipate slurry after crystallization is obtained as crystals by solid-liquid separation according to a conventional method. For example, when performing centrifugal filtration, after shaking off the mother liquor, sprinkle a small amount of demineralized water in the form of a shower while the centrifugal filter is rotating, and further wash away the mother liquor adhering to cadaverine and adipate. The degree of purification increases, which is preferable.
The amount of demineralized water is usually 1% by weight or more, preferably 5% by weight or more with respect to the wet cake (cadaverine adipate containing some water). Moreover, it is 40 weight% or less normally, Preferably it is 30 weight% or less. An excessively small amount of desalted water is not preferable because the cleaning effect tends to be small. An excessively large amount of demineralized water is not preferable because the yield tends to decrease. The crystal thus obtained is referred to as the first crystal.

固液分離後の母液や洗浄液は回収して、再度、濃縮、晶析、固液分離を行い、２番晶を得る。同様にして、３番晶、４番晶等を得ることができる。   The mother liquor and the washing liquid after the solid-liquid separation are collected, and again concentrated, crystallized, and solid-liquid separated to obtain the second crystal. Similarly, the third crystal, the fourth crystal and the like can be obtained.

本実施の形態におけるカダベリン塩中の３官能以上の有機物の合計含有量は、９０ｐｐｍ以下であり、好ましくは６０ｐｐｍ以下、さらに好ましくは３０ｐｐｍ以下である。３官能以上の有機物の含有量が９０ｐｐｍを超えると、架橋してゲルの原因となり、射出成形品においては流動性や機械物性の低下、フィルム、繊維、モノフィラメントにおいてはＦ／Ｅ（フィッシュアイ）発生による表面外観の低下や延伸時の破断原因となるため好ましくない。   The total content of trifunctional or higher functional organic substances in the cadaverine salt in the present embodiment is 90 ppm or less, preferably 60 ppm or less, more preferably 30 ppm or less. If the content of trifunctional or higher organic substances exceeds 90 ppm, it will crosslink and cause gels, fluidity and mechanical properties will decrease in injection molded products, and F / E (fisheye) will occur in films, fibers and monofilaments. This is not preferable because it causes a decrease in surface appearance due to rupture and a cause of breakage during stretching.

ここで、３官能以上の有機物とは、架橋してゲルの原因となり得る官能基を３つ以上有する有機物が挙げられる。このような官能基としては、例えば、アミノ基、カルボキシル基、スルホン基、リン酸基、水酸基、ヒドラジド基、エポキシ基、メルカプト基、ニトロ基、アルコキシル基等が挙げられる。
本実施の形態における３官能以上の有機物の一例として、アミノ酸、オリゴ糖、リンゴ酸、クエン酸等が挙げられる。 Here, the organic substance having three or more functional groups includes an organic substance having three or more functional groups that can be crosslinked to cause gel. Examples of such functional groups include amino groups, carboxyl groups, sulfone groups, phosphate groups, hydroxyl groups, hydrazide groups, epoxy groups, mercapto groups, nitro groups, alkoxyl groups, and the like.
Examples of trifunctional or higher functional organic substances in this embodiment include amino acids, oligosaccharides, malic acid, and citric acid.

本実施の形態が適用されるカダベリン塩中の３官能以上のアミノ酸の合計含有量は、９０ｐｐｍ以下が好ましく、さらに好ましくは６０ｐｐｍ以下、特に好ましくは３０ｐｐｍ以下である。３官能以上のアミノ酸含有量が９０ｐｐｍを超えると、架橋してゲルの原因となり、射出成形品においては流動性や機械物性の低下、フィルム、繊維、モノフィラメントにおいてはＦ／Ｅ発生による表面外観の低下や延伸時の破断原因となるため好ましくない。   The total content of trifunctional or higher functional amino acids in the cadaverine salt to which this embodiment is applied is preferably 90 ppm or less, more preferably 60 ppm or less, and particularly preferably 30 ppm or less. If the content of trifunctional or higher amino acid exceeds 90 ppm, it crosslinks and causes gelation. In injection molded products, fluidity and mechanical properties are degraded. In films, fibers, and monofilaments, surface appearance is degraded due to F / E. It is not preferable because it causes breakage during stretching.

３官能以上のアミノ酸としては、例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン等のモノアミノジカルボン酸；リジン、オルニチン、ヒドロキシリジン、アルギニン、ヒスチジン等のジアミノモノカルボン酸が挙げられる。これらのアミノ酸はＬ体でもＤ体でも構わない。   Examples of the trifunctional or higher functional amino acid include monoaminodicarboxylic acids such as aspartic acid, glutamic acid, asparagine, and glutamine; and diaminomonocarboxylic acids such as lysine, ornithine, hydroxylysine, arginine, and histidine. These amino acids may be L-form or D-form.

本実施の形態が適用されるカダベリン塩中のリジンは、Ｌ−リジンでもＤ−リジンでも良く、その含有量は５０ｐｐｍ以下が好ましく、さらに好ましくは３０ｐｐｍ以下、特に好ましくは２０ｐｐｍ以下である。リジンが５０ｐｐｍを超えると、架橋してゲルの原因となり、射出成形品においては流動性や機械物性の低下、フィルム、繊維、モノフィラメントにおいてはＦ／Ｅ発生による表面外観の低下や延伸時の破断原因となるため好ましくない。
カダベリン塩中のリジン含有量は常法により測定することができる。例えば、アミノ酸分析計等を用いて測定することができる。 The lysine in the cadaverine salt to which this embodiment is applied may be L-lysine or D-lysine, and the content thereof is preferably 50 ppm or less, more preferably 30 ppm or less, and particularly preferably 20 ppm or less. If lysine exceeds 50 ppm, it causes cross-linking and causes gelation. In injection molded products, fluidity and mechanical properties deteriorate. In films, fibers and monofilaments, surface appearance decreases due to F / E generation and causes breakage during stretching. This is not preferable.
The lysine content in the cadaverine salt can be measured by a conventional method. For example, it can be measured using an amino acid analyzer or the like.

リジン脱炭酸酵素、リジン脱炭酸酵素活性の向上した組み換え微生物又はリジン脱炭酸酵素を産生する細胞もしくは該細胞の処理物を使用して、リジンからカダベリンを産出する場合には、リジンが残存しやすくなるが、できるだけ残存リジン量を低くすることが望ましい。残存リジン量が多いと、その後の精製工程への負荷が大きくなり、経済性が低下するので好ましくない。   When producing cadaverine from lysine using lysine decarboxylase, recombinant microorganisms with improved lysine decarboxylase activity, cells producing lysine decarboxylase, or processed products of the cells, lysine tends to remain. However, it is desirable to reduce the amount of residual lysine as much as possible. A large amount of residual lysine is not preferable because the load on the subsequent purification process increases and the economic efficiency decreases.

本実施の形態におけるカダベリン塩中のアルギニンは、Ｌ−アルギニンでもＤ−アルギニンでも良く、その含有量は４０ｐｐｍ以下が好ましく、さらに好ましくは２０ｐｐｍ以下、特に好ましくは１０ｐｐｍ以下である。アルギニンが４０ｐｐｍを超えると、架橋してゲルの原因となり、射出成形品においては流動性や機械物性の低下、フィルム、繊維、モノフィラメントにおいてはＦ／Ｅ発生による表面外観の低下や延伸時の破断原因となるため好ましくない。アルギニン含有量は常法により測定することができる。例えば、アミノ酸分析計等を用いて測定することができる。   Arginine in the cadaverine salt in the present embodiment may be L-arginine or D-arginine, and its content is preferably 40 ppm or less, more preferably 20 ppm or less, and particularly preferably 10 ppm or less. When arginine exceeds 40 ppm, it causes cross-linking and causes gel. In injection-molded products, fluidity and mechanical properties are deteriorated. In films, fibers and monofilaments, surface appearance is deteriorated due to F / E generation and causes of breakage during stretching. This is not preferable. Arginine content can be measured by a conventional method. For example, it can be measured using an amino acid analyzer or the like.

次に、微生物を、ＬＤＣ活性が上昇するように改質する方法について例示する。尚、他の細胞についても、それに適するように下記の方法を適宜改変することによって、同様にＬＤＣ活性を上昇させることができる。   Next, a method for modifying microorganisms so that LDC activity is increased will be exemplified. For other cells, LDC activity can be similarly increased by appropriately modifying the following method so as to be suitable for the other cells.

ＬＤＣ活性は、例えば、ＬＤＣをコードする遺伝子（ＬＤＣ遺伝子）の発現を増強することによって上昇する。ＬＤＣ遺伝子の発現の増強は、ＬＤＣ遺伝子のコピー数を高めることによって達成される。例えば、ＬＤＣ遺伝子断片を、微生物で機能するベクター、好ましくは、マルチコピー型のベクターと連結して組換えＤＮＡを作製し、これを適当な宿主に導入して形質変換すればよい。   The LDC activity is increased by, for example, enhancing the expression of a gene encoding LDC (LDC gene). Enhanced expression of the LDC gene is achieved by increasing the copy number of the LDC gene. For example, an LDC gene fragment may be ligated with a vector that functions in a microorganism, preferably a multicopy vector, to produce a recombinant DNA, which is introduced into a suitable host and transformed.

ＬＤＣ遺伝子のコピー数を高めることは、ＬＤＣ遺伝子を微生物の染色体ＤＮＡ上に多コピー存在させることによっても達成できる。微生物の染色体ＤＮＡ上に遺伝子を多コピーで導入するには、染色体ＤＮＡ上に多コピー存在する配列を標的に利用して相同組換えにより行う。
染色体ＤＮＡ上に多コピー存在する配列としては、レペティティブＤＮＡ、転移因子の端部に存在するインバーテッド・リピートが利用できる。或いは、特開平２−１０９９８５号公報に開示されているように、目的遺伝子をトランスポゾンに搭載してこれを転移させて染色体ＤＮＡ上に多コピー導入することも可能である。 Increasing the LDC gene copy number can also be achieved by having multiple copies of the LDC gene on the chromosomal DNA of the microorganism. In order to introduce a gene in multiple copies on the chromosomal DNA of a microorganism, homologous recombination is performed using a sequence present in multiple copies on the chromosomal DNA as a target.
As a sequence present in multiple copies on chromosomal DNA, repetitive DNA and inverted repeat present at the end of a transposable element can be used. Alternatively, as disclosed in JP-A-2-109985, a target gene can be mounted on a transposon and transferred to introduce multiple copies onto chromosomal DNA.

ＬＤＣ活性の上昇は、上記の遺伝子増幅による以外に、染色体ＤＮＡ上又はプラスミド上のＬＤＣ遺伝子のプロモーター等の発現調節配列を強力なものに置換することによっても達成される。例えば、ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプロモーター、ｔｒｃプロモーター等が強力なプロモーターとして知られている。
また、国際公開第００／１８９３５号パンフレットに開示されているように、遺伝子のプロモーター領域に数塩基の塩基置換を導入し、より強力なものに改変することも可能である。これらのプロモーター置換又は改変によりＬＤＣ遺伝子の発現が強化され、ＬＤＣ活性が上昇する。これら発現調節配列の改変は、遺伝子のコピー数を高めることと組み合わせてもよい。 In addition to the gene amplification described above, the increase in LDC activity can also be achieved by replacing an expression regulatory sequence such as a promoter of LDC gene on chromosomal DNA or plasmid with a strong one. For example, lac promoter, trp promoter, trc promoter and the like are known as strong promoters.
Further, as disclosed in International Publication No. 00/18935 pamphlet, it is possible to introduce a base substitution of several bases into the promoter region of a gene and modify it to be more powerful. These promoter substitutions or modifications enhance LDC gene expression and increase LDC activity. Modification of these expression regulatory sequences may be combined with increasing the copy number of the gene.

発現調節配列の置換は、例えば、温度感受性プラスミドを用いた遺伝子置換と同様にして行うことができる。Ｅ．ｃｏｌｉの温度感受性複製起点を有するベクターとしては、例えば、国際公開第９９／０３９８８号パンフレットに記載されたプラスミドｐＭＡＮ９９７等が挙げられる。また、λファージのレッド・リコンビナーゼ（Ｒｅｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｓｅ）を利用した方法（Ｄａｔｓｅｎｋｏ，Ｋ．Ａ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２０００）９７（１２），６６４０−６６４５）によっても、発現調節配列の置換を行うことができる。   The replacement of the expression regulatory sequence can be performed, for example, in the same manner as the gene replacement using a temperature sensitive plasmid. E. Examples of the vector having a temperature-sensitive replication origin of E. coli include plasmid pMAN997 described in International Publication No. 99/03988 pamphlet. In addition, expression control is also performed by a method using red recombinase of λ phage (Datsenko, KA, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2000) 97 (12), 6640-6645). Sequence substitutions can be made.

ＬＤＣ遺伝子としては、コードされるＬＤＣが、リジンの脱炭酸反応に有効利用できるものであれば特に制限されないが、例えば、バクテリウム カダベリス、Ｅ．ｃｏｌｉ等の細菌や、ガラス豆等の植物、さらには、特開２００２−２２３７７０号公報に記載の微生物のＬＤＣ遺伝子が挙げられる。   The LDC gene is not particularly limited as long as the encoded LDC can be effectively used for the lysine decarboxylation reaction. Examples thereof include bacteria such as E. coli, plants such as glass beans, and the LDC gene of microorganisms described in JP-A-2002-223770.

宿主微生物としてＥ．ｃｏｌｉを用いる場合は、Ｅ．ｃｏｌｉ由来のＬＤＣ遺伝子が好ましい。
Ｅ．ｃｏｌｉのＬＤＣ遺伝子としては、ｃａｄＡ遺伝子及びｌｄｃ遺伝子（米国特許第５，８２７，６９８号）が知られているが、これらの中ではｃａｄＡ遺伝子が好ましい。 E. as a host microorganism When using E. coli, E. coli is used. The LDC gene derived from E. coli is preferred.
E. As the LDC gene of E. coli, cadA gene and ldc gene (US Pat. No. 5,827,698) are known, and among these, cadA gene is preferable.

Ｅ．ｃｏｌｉのｃａｄＡ遺伝子は配列が知られており（Ｎ．Ｗａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ（１９９２）ｖｏｌ．１７４，ｐ．５３０−５４０；Ｓ．Ｙ．Ｍｅｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ（１９９２）ｖｏｌ．１７４，ｐ．２６５９−２６６８；ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｍ７６４１１）、その配列に基づいて作成したプライマーを用いたＰＣＲにより、Ｅ．ｃｏｌｉ染色体ＤＮＡから単離することができる。
このようなプライマーとしては、配列番号１（配列；ＧＴＴＧＣＧＴＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＴＣＧＣＧＣＴＧＡＴＧ）及び配列番号２（配列；ＡＣＣＡＡＧＣＴＧＡＴＧＧＧＴＧＡＧＡＴＡＧＡＧＡＡＴＧＡＧＴＡＡＧ）に示す塩基配列を有するプライマーが挙げられる。 E. The cadA gene of E. coli has a known sequence (N. Watson et al., Journal of Bacteriology (1992) vol. 174, p. 530-540; S. Y. Meng et al. Journal of Bacteriology (1992) vol. 174, p.2659-2668; GenBank accession M76411), by PCR using primers generated based on the sequence, E. coli. It can be isolated from E. coli chromosomal DNA.
Examples of such a primer include a primer having the base sequence shown in SEQ ID NO: 1 (sequence: GTTGCGGTTCTGCTTCCATCGCGCTGATG) and SEQ ID NO: 2 (sequence: ACCAAGCTGATGGGGTGAGAGAGAGAGATGAGAG).

取得されたＬＤＣ遺伝子とベクターを連結して組換えＤＮＡを調製するには、ＬＤＣ遺伝子の末端に合うような制限酵素でベクターを切断し、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼ等のリガーゼを用いて前記遺伝子とベクターを連結すればよい。
Ｅ．ｃｏｌｉ用のベクターとしては、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、ｐＳＴＶ２９、ｐＨＳＧ２９９、ｐＨＳＧ３９９、ｐＨＳＧ３９８、ＲＳＦ１０１０、ｐＢＲ３２２、ｐＡＣＹＣ１８４、ｐＭＷ２１９等が挙げられる。 In order to prepare a recombinant DNA by ligating the obtained LDC gene and the vector, the vector is cleaved with a restriction enzyme suitable for the end of the LDC gene, and the gene and the vector are used using a ligase such as T4 DNA ligase. What is necessary is just to connect.
E. Examples of the vector for E. coli include pUC18, pUC19, pSTV29, pHSG299, pHSG399, pHSG398, RSF1010, pBR322, pACYC184, pMW219 and the like.

ＬＤＣ遺伝子は、野生型であってもよいし、変異型であってもよい。例えばｃａｄＡ遺伝子は、コードされるＬＤＣの活性が損なわれない限り、１若しくは複数の位置での１若しくは数個のアミノ酸の置換、欠失、挿入、又は付加を含むＬＤＣをコードするものであってもよい。
ここで、「数個」とは、アミノ酸残基のタンパク質の立体構造における位置や種類によっても異なるが、具体的には２個〜５０個、好ましくは２個〜３０個、より好ましくは２個〜１０個である。 The LDC gene may be a wild type or a mutant type. For example, a cadA gene encodes an LDC that includes a substitution, deletion, insertion, or addition of one or several amino acids at one or more positions, as long as the activity of the encoded LDC is not impaired. Also good.
Here, “several” differs depending on the position and type of the amino acid residue in the three-dimensional structure of the protein, but specifically 2 to 50, preferably 2 to 30, more preferably 2 -10.

上記のようなＬＤＣと実質的に同一のタンパク質をコードするＤＮＡは、例えば部位特異的変異法によって、特定の部位のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入、付加又は逆位を含むようにｃａｄＡ遺伝子の塩基配列を改変することによって得られる。
また、上記のような改変されたＤＮＡは、従来知られている変異処理によっても取得され得る。変異処理としては、変異処理前のＤＮＡをヒドロキシルアミン等でインビトロ処理する方法、及び変異処理前のＤＮＡを保持する微生物、例えばエシェリヒア属細菌を、紫外線又はＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）もしくはエチルメタンスルホン酸（ＥＭＳ）等の通常変異処理に用いられている変異剤によって処理する方法が挙げられる。 DNA encoding a protein substantially identical to LDC as described above is cadA so that the amino acid residue at a specific site contains a substitution, deletion, insertion, addition or inversion, for example, by site-directed mutagenesis. It is obtained by modifying the base sequence of the gene.
The modified DNA as described above can also be obtained by a conventionally known mutation treatment. As the mutation treatment, a method for treating DNA before mutation treatment with hydroxylamine or the like in vitro, and a microorganism that retains the DNA before mutation treatment, for example, Escherichia bacterium, by ultraviolet light or N-methyl-N′-nitro-N— A method of treating with a mutagen that is usually used for mutagenesis treatment such as nitrosoguanidine (NTG) or ethylmethanesulfonic acid (EMS) is mentioned.

上記のような変異を有するＤＮＡを、適当な細胞で発現させ、発現産物の活性を調べることにより、ＬＤＣと実質的に同一のタンパク質をコードするＤＮＡが得られる。
また、変異を有するＬＤＣをコードするＤＮＡ又はこれを保持する細胞から、例えば、ｃａｄＡ遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｍ７６４１１）のコード領域の配列、又は同配列の一部を有するプローブとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、ＬＤＣと同等の活性を有するタンパク質をコードするＤＮＡが得られる。 By expressing the DNA having the mutation as described above in an appropriate cell and examining the activity of the expression product, DNA encoding a protein substantially identical to LDC can be obtained.
In addition, it hybridizes with a probe having a cadA gene (GenBank accession M76411) coding region or a part of the same from a DNA encoding a mutated LDC or a cell carrying the same under stringent conditions. A DNA encoding a protein that is soybean and has an activity equivalent to that of LDC is obtained.

ここで言う「ストリンジェントな条件」とは、いわゆる特異的なハイブリッドが形成され、非特異的なハイブリッドが形成されない条件をいう。この条件を明確に数値化することは困難であるが、一例を示せば、相同性が高いＤＮＡ同士、例えば７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上の相同性を有するＤＮＡ同士がハイブリダイズし、それにより相同性が低いＤＮＡ同士がハイブリダイズしない条件、或いは通常のサザンハイブリダイゼーションの洗いの条件である６０℃、１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、好ましくは、０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳに相当する塩濃度でハイブリダイズする条件が挙げられる。   The “stringent conditions” referred to herein are conditions under which so-called specific hybrids are formed and non-specific hybrids are not formed. Although it is difficult to quantify these conditions clearly, for example, DNAs having high homology, for example, DNAs having a homology of 70% or more, preferably 80% or more, more preferably 90% or more, are present. 60 ° C., 1 × SSC, 0.1% SDS, preferably 0.degree. Which is a condition in which the DNAs hybridize to each other, thereby preventing the low homology DNAs from hybridizing to each other, or normal Southern hybridization. Examples include conditions for hybridizing at a salt concentration corresponding to 1 × SSC and 0.1% SDS.

プローブとしてｃａｄＡ遺伝子の一部の配列を用いることもできる。そのようなプローブは、公知のｃａｄＡ遺伝子の塩基配列に基づいて作成したオリゴヌクレオチドをプライマーとし、ｃａｄＡ遺伝子を含むＤＮＡ断片を鋳型とするＰＣＲによって作製することができる。プローブとして、３００ｂｐ程度の長さのＤＮＡ断片を用いる場合には、ハイブリダイゼーションの洗いの条件は、５０℃、２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳが挙げられる。   A partial sequence of the cadA gene can also be used as a probe. Such a probe can be prepared by PCR using an oligonucleotide prepared based on a known cadA gene base sequence as a primer and a DNA fragment containing the cadA gene as a template. When a DNA fragment having a length of about 300 bp is used as a probe, hybridization washing conditions include 50 ° C., 2 × SSC, and 0.1% SDS.

ＬＤＣと実質的に同一のタンパク質をコードするＤＮＡとして具体的には、公知のｃａｄＡ遺伝子がコードするアミノ酸配列と、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９０％以上の相同性を有し、かつＬＤＣ活性を有するタンパク質をコードするＤＮＡが挙げられる。   Specifically, DNA encoding a protein substantially identical to LDC is preferably 70% or more, more preferably 80% or more, and still more preferably 90% or more homology with an amino acid sequence encoded by a known cadA gene. And a DNA encoding a protein having LDC activity.

組換えＤＮＡを微生物に導入するには、これまでに報告されている形質転換法に従って行えばよい。例えば、エシェリヒア・コリ Ｋ−１２について報告されているような、受容菌細胞を塩化カルシウムで処理してＤＮＡの透過性を増す方法（Ｍａｎｄｅｌ，Ｍ．ａｎｄ Ｈｉｇａ，Ａ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，５３，１５９（１９７０））があり、バチルス・サチリスについて報告されているような、増殖段階の細胞からコンピテントセルを調製してＤＮＡを導入する方法（Ｄｕｃａｎ，Ｃ．Ｈ．，Ｗｉｌｓｏｎ，Ｇ．Ａ．ａｎｄ Ｙｏｕｎｇ，Ｆ．Ｅ．，Ｇｅｎｅ，１，１５３（１９９７））がある。   In order to introduce the recombinant DNA into the microorganism, the transformation method reported so far may be performed. For example, as reported for Escherichia coli K-12, recipient cells are treated with calcium chloride to increase DNA permeability (Mandel, M. and Higa, A., J. Mol. Biol. , 53, 159 (1970)), and a method of introducing competent cells from proliferating cells and introducing DNA as reported for Bacillus subtilis (Ducan, CH, Wilson, G.). A. and Young, FE, Gene, 1, 153 (1997)).

或いは、バチルス・サチリス、放線菌類及び酵母について知られているような、ＤＮＡ受容菌の細胞を、組換えＤＮＡを容易に取り込むプロトプラスト又はスフェロプラストの状態にして組換えＤＮＡをＤＮＡ受容菌に導入する方法（Ｃｈａｎｇ，Ｓ．ａｎｄ Ｃｈｏｅｎ，Ｓ．Ｎ．，Ｍｏｌｅｃ，Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．，１６８，１１１（１９７９）；Ｂｉｂｂ，Ｍ．Ｊ．，Ｗａｒｄ，Ｊ．Ｍ．ａｎｄ Ｈｏｐｗｏｏｄ，Ｏ．Ａ．，Ｎａｔｕｒｅ，２７４，３９８（１９７８）；Ｈｉｎｎｅｎ，Ａ．，Ｈｉｃｋｓ，Ｊ．Ｂ．ａｎｄ Ｆｉｎｋ，Ｇ．Ｒ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７５ １９２９（１９７８））も応用できる。また、電気パルス法（特開平２−２０７７９１号公報）によっても、微生物の形質転換を行うことができる。   Alternatively, DNA-receptive cells, such as those known for Bacillus subtilis, actinomycetes, and yeast, are introduced into the DNA-receptor cells in the form of protoplasts or spheroplasts that readily take up recombinant DNA. (Chang, S. and Choen, SN, Molec, Gen. Genet., 168, 111 (1979); Bibb, MJ, Ward, JM and Hopwood, O.A.,). Nature, 274, 398 (1978); Hinnn, A., Hicks, JB and Fink, GR Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 75 1929 (1978)). Also, transformation of microorganisms can be performed by an electric pulse method (Japanese Patent Laid-Open No. 2-207791).

ＬＤＣを産生する微生物又は細胞を得るための培養は、用いる微生物又は細胞に応じて、ＬＤＣの産生に適した方法によって行えばよい。
例えば、培地は、炭素源、窒素源、無機イオン及び必要に応じその他の有機成分を含有する通常の培地でよい。炭素源としては、グルコース、ラクトース、ガラクトース、フラクトース、アラビノース、マルトース、キシロース、トレハロース、リボースや澱粉の加水分解物等の糖類；グリセロール、マンニトールやソルビトール等のアルコール類；グルコン酸、フマール酸、クエン酸やコハク酸等の有機酸類を用いることができる。 Culture for obtaining microorganisms or cells producing LDC may be performed by a method suitable for production of LDC depending on the microorganism or cells used.
For example, the medium may be a normal medium containing a carbon source, a nitrogen source, inorganic ions, and other organic components as required. Examples of carbon sources include glucose, lactose, galactose, fructose, arabinose, maltose, xylose, trehalose, ribose and starch hydrolysates; alcohols such as glycerol, mannitol and sorbitol; gluconic acid, fumaric acid, citric acid And organic acids such as succinic acid can be used.

窒素源としては、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機アンモニウム塩、大豆加水分解物等の有機窒素、アンモニアガス、アンモニア水等を用いることができる。
有機微量栄養素としては、ビタミンＢ１等のビタミン類、アデニンやＲＮＡ等の核酸類等の要求物質又は酵母エキス等を適量含有させることが望ましい。これらの他に、必要に応じて、リン酸カルシウム、硫酸マグネシウム、鉄イオン、マンガンイオン等が少量添加される。 As the nitrogen source, inorganic ammonium salts such as ammonium sulfate, ammonium chloride, and ammonium phosphate, organic nitrogen such as soybean hydrolysate, ammonia gas, aqueous ammonia, and the like can be used.
As organic micronutrients, it is desirable to contain an appropriate amount of required substances such as vitamins such as vitamin B1, nucleic acids such as adenine and RNA, or yeast extract. In addition to these, a small amount of calcium phosphate, magnesium sulfate, iron ion, manganese ion or the like is added as necessary.

培養は、エシェリヒア・コリの場合は、好気的条件下で１６時間〜７２時間程度実施するのがよく、培養温度は３０℃〜４５℃に、培養中のｐＨは５〜８に制御する。尚、ｐＨ調整には無機或いは有機の酸性又はアルカリ性物質、アンモニアガス等を使用することができる。
尚、ＬＤＣ遺伝子が、誘導可能なプロモーターによって発現が調節されている場合には、誘導剤を培地に添加する。 In the case of Escherichia coli, the culture is preferably carried out for about 16 to 72 hours under aerobic conditions. The culture temperature is controlled to 30 ° C. to 45 ° C., and the pH during the culture is controlled to 5 to 8. In addition, an inorganic or organic acidic or alkaline substance, ammonia gas, etc. can be used for pH adjustment.
When the expression of the LDC gene is regulated by an inducible promoter, an inducing agent is added to the medium.

培養後、細胞は、遠心分離機や膜により集めることにより、培養液から回収することができる。細胞は、そのまま用いてもよいが、ＬＤＣを含むそれらの処理物を用いる場合は、細胞を超音波、フレンチプレス、又は酵素的処理により破砕し酵素を抽出させ、無細胞抽出液とし、さらにそこからＬＤＣを精製する場合には、常法に従い、硫安塩折、各種クロマトグラフィーを使用することによって精製することができる。   After culturing, the cells can be recovered from the culture solution by collecting them with a centrifuge or a membrane. The cells may be used as they are, but when those treated products containing LDC are used, the cells are disrupted by ultrasonication, French press, or enzymatic treatment to extract the enzyme, and a cell-free extract is obtained. In the case of purifying LDC from, it can be purified by using ammonium sulfate or various chromatography according to a conventional method.

（ポリアミド樹脂）
本実施の形態が適用されるポリアミド樹脂は、カダベリン単位、ジカルボン酸単位を構成成分として含み、本発明の効果を損なわない範囲において、それ以外の共重合成分が含有されていてもよい。 (Polyamide resin)
The polyamide resin to which this embodiment is applied contains a cadaverine unit and a dicarboxylic acid unit as constituent components, and may contain other copolymerization components as long as the effects of the present invention are not impaired.

この場合、共重合成分としては、例えば、６−アミノカプロン酸、１１−アミノウンデカン酸、１２−アミノドデカン酸、パラアミノメチル安息香酸等のアミノ酸；ε−カプロラクタム、ω−ラウロラクタム等のラクタム；シュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、ウンデカン二酸、ドデカン二酸、ブラシリン酸、テトラデカン二酸、ペンタデカン二酸、オクタデカン二酸等の脂肪族ジカルボン酸；シクロヘキサンジカルボン酸等の脂環式ジカルボン酸；フタル酸、イソフタル酸、テレフタル酸、ナフタレンジカルボン酸等の芳香族ジカルボン酸；   In this case, examples of the copolymer component include amino acids such as 6-aminocaproic acid, 11-aminoundecanoic acid, 12-aminododecanoic acid and paraaminomethylbenzoic acid; lactams such as ε-caprolactam and ω-laurolactam; oxalic acid , Fats such as malonic acid, succinic acid, glutaric acid, adipic acid, pimelic acid, suberic acid, azelaic acid, sebacic acid, undecanedioic acid, dodecanedioic acid, brassic acid, tetradecanedioic acid, pentadecanedioic acid, octadecanedioic acid Aromatic dicarboxylic acids such as cyclohexanedicarboxylic acid; Aromatic dicarboxylic acids such as phthalic acid, isophthalic acid, terephthalic acid, naphthalenedicarboxylic acid;

エチレンジアミン、１，３−ジアミノプロパン、１，４−ジアミノブタン、１，６−ジアミノヘキサン、１，７−ジアミノヘプタン、１，８−ジアミノオクタン、１，９−ジアミノノナン、１，１０−ジアミノデカン、１，１１−ジアミノウンデカン、１，１２−ジアミノドデカン、１，１３−ジアミノトリデカン、１，１４−ジアミノテトラデカン、１，１５−ジアミノペンタデカン、１，１６−ジアミノヘキサデカン、１，１７−ジアミノヘプタデカン、１，１８−ジアミノオクタデカン、１，１９−ジアミノノナデカン、１，２０−ジアミノエイコサン、２−メチル−１，５−ジアミノペンタン等の脂肪族ジアミン；シクロヘキサンジアミン、ビス−（４−アミノヘキシル）メタン等の脂環式ジアミン；キシリレンジアミン等の芳香族ジアミンが挙げられる。 Ethylenediamine, 1,3-diaminopropane, 1,4-diaminobutane, 1,6-diaminohexane, 1,7-diaminoheptane, 1,8-diaminooctane, 1,9-diaminononane, 1,10-diaminodecane, 1,11-diaminoundecane, 1,12-diaminododecane, 1,13-diaminotridecane, 1,14-diaminotetradecane, 1,15-diaminopentadecane, 1,16-diaminohexadecane, 1,17-diaminoheptadecane Aliphatic diamines such as 1,18-diaminooctadecane, 1,19-diaminononadecane, 1,20-diaminoeicosane, 2-methyl-1,5-diaminopentane; cyclohexanediamine, bis- (4-aminohexyl) ) Alicyclic diamines such as methane; Aromatics such as xylylenediamine Amines.

また、本実施の形態で使用するジカルボン酸は、前述した芳香族ジカルボン酸、脂肪族ジカルボン酸、脂環式ジカルボン酸と同様の化合物を挙げることができる。
これらの共重合成分は１種を単独で用いてもよく、２種以上を併用してもよい。 Examples of the dicarboxylic acid used in the present embodiment include the same compounds as the above-mentioned aromatic dicarboxylic acid, aliphatic dicarboxylic acid, and alicyclic dicarboxylic acid.
These copolymerization components may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together.

（ポリアミド樹脂の製造方法）
本実施の形態が適用されるポリアミド樹脂の製造方法としては、公知の方法が使用でき、具体的には「ポリアミド樹脂ハンドブック」（日刊工業社出版：福本修編）等に開示されている。例えば、ポリアミド５６の製造方法としては、カダベリン・アジピン酸塩を、水の共存下で混合し、加熱して脱水反応を進行させる方法（加熱重縮合）が好ましい。 (Production method of polyamide resin)
As a method for producing a polyamide resin to which the present embodiment is applied, a known method can be used, and specifically disclosed in “Polyamide Resin Handbook” (published by Nikkan Kogyo Co., Ltd .: Osamu Fukumoto). For example, as a method for producing polyamide 56, a method in which cadaverine adipate is mixed in the presence of water and heated to proceed with a dehydration reaction (heat polycondensation) is preferable.

尚、本実施の形態における上記加熱重縮合とは、ポリアミド樹脂の製造における重合反応物の最高到達温度を２００℃以上に上昇させる製造プロセスである。最高到達反応温度の上限としては、重合反応時の熱安定性を考慮して、通常３００℃以下である。重合方式には特に制限は無く回分式、連続方式が採用できる。   In addition, the said heat polycondensation in this Embodiment is a manufacturing process which raises the highest ultimate temperature of the polymerization reaction material in manufacture of a polyamide resin to 200 degreeC or more. The upper limit of the maximum reaction temperature is usually 300 ° C. or lower in consideration of the thermal stability during the polymerization reaction. The polymerization method is not particularly limited, and a batch method or a continuous method can be adopted.

上記の方法で製造されたポリアミド樹脂は加熱重縮合後に更に固相重合することができる。これにより、ポリアミド樹脂の分子量を高くすることができる。固相重合は、例えば、１００℃以上融点以下の温度で真空中、或いは不活性ガス中で加熱することにより行うことができる。   The polyamide resin produced by the above method can be further subjected to solid phase polymerization after heat polycondensation. Thereby, the molecular weight of the polyamide resin can be increased. The solid phase polymerization can be performed, for example, by heating in a vacuum or an inert gas at a temperature of 100 ° C. or higher and a melting point or lower.

本実施の形態が適用されるポリアミド樹脂の重合度は特に制限がなく、濃度０．０１ｇ／ｍｌとした９８％硫酸溶液の２５℃における相対粘度（η_ｒ）が１．５〜８．０であることが好ましく、２．０〜５．５であることがさらに好ましい。
相対粘度（η_ｒ）が過度に低いと、実用的強度が不十分であり、一方、相対粘度（η_ｒ）が過度に高いと、流動性が低下し、成形加工性が損なわれるので好ましくない。
相対粘度（η_ｒ）は、成形性の観点から、フィルム、繊維、モノフィラメント等の押出成形では３．０〜５．５、射出成形では２．０〜３．５が特に好ましい。 The degree of polymerization of the polyamide resin to which the present embodiment is applied is not particularly limited, and the relative viscosity (η _r ) at 25 ° C. of a 98% sulfuric acid solution having a concentration of 0.01 g / ml is 1.5 to 8.0. It is preferable that it is 2.0 to 5.5.
If the relative viscosity (η _r ) is excessively low, the practical strength is insufficient. On the other hand, if the relative viscosity (η _r ) is excessively high, the fluidity is lowered and the molding processability is impaired. .
From the viewpoint of moldability, the relative viscosity (η _r ) is particularly preferably 3.0 to 5.5 for extrusion molding of films, fibers, monofilaments, and 2.0 to 3.5 for injection molding.

本実施の形態におけるポリアミド樹脂には、本発明の効果を損なわない範囲で他の成分を、ポリアミド樹脂の重合から成形までの任意の段階で配合することができる。
このような他の成分としては、例えば、酸化防止剤や熱安定剤（ヒンダードフェノール系、ヒドロキノン系、ホスファイト系及びこれらの置換体、ハロゲン化銅、ヨウ素化合物等）；耐候剤（レゾルシノール系、サリシレート系、ベンゾトリアゾール系、ベンゾフェノン系、ヒンダードアミン系等）；離型剤及び滑剤（脂肪族アルコール、脂肪族アミド、脂肪族ビスアミド、ビス尿素及びポリエチレンワックス等）；顔料（硫化カドミウム、フタロシアニン、カーボンブラック等）；染料（ニグロシン、アニリンブラック等）；可塑剤（ｐ−オキシ安息香酸オクチル、Ｎ−ブチルベンゼンスルホンアミド等）； In the polyamide resin in the present embodiment, other components can be blended at any stage from the polymerization of the polyamide resin to the molding as long as the effects of the present invention are not impaired.
Examples of such other components include antioxidants and heat stabilizers (hindered phenols, hydroquinones, phosphites and their substitutes, copper halides, iodine compounds, etc.); weathering agents (resorcinols) , Salicylates, benzotriazoles, benzophenones, hindered amines, etc.); mold release agents and lubricants (aliphatic alcohols, aliphatic amides, aliphatic bisamides, bisureas, polyethylene waxes, etc.); pigments (cadmium sulfide, phthalocyanine, carbon) Dye (Nigrosine, aniline black, etc.); Plasticizer (octyl p-oxybenzoate, N-butylbenzenesulfonamide, etc.);

帯電防止剤（アルキルサルフェート型アニオン系帯電防止剤、４級アンモニウム塩型カチオン系帯電防止剤、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート等の非イオン系帯電防止剤、ベタイン系両性帯電防止剤等）；難燃剤（メラミンシアヌレート、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム等の水酸化物、ポリリン酸アンモニウム、臭素化ポリスチレン、臭素化ポリフェニレンオキシド、臭素化ポリカーボネート、臭素化エポキシ樹脂又はこれらの臭素系難燃剤と三酸化アンチモンとの組み合わせ等）；他の重合体（他のポリアミド、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリフェニレンエーテル、ポリフェニレンスルフィド、液晶ポリマー、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、ＡＢＳ樹脂、ＳＡＮ樹脂、ポリスチレン等）が挙げられる。
これらの他の成分は、ドライブレンド又は押出機を用いて溶融混練するのが好ましい。 Antistatic agents (alkyl sulfate type anionic antistatic agents, quaternary ammonium salt type cationic antistatic agents, nonionic antistatic agents such as polyoxyethylene sorbitan monostearate, betaine amphoteric antistatic agents, etc.); difficult Flame retardant (hydramine such as melamine cyanurate, magnesium hydroxide, aluminum hydroxide, ammonium polyphosphate, brominated polystyrene, brominated polyphenylene oxide, brominated polycarbonate, brominated epoxy resin or brominated flame retardant and trioxide Combination with antimony); other polymers (other polyamides, polyethylene, polypropylene, polyester, polycarbonate, polyphenylene ether, polyphenylene sulfide, liquid crystal polymer, polysulfone, polyethersulfone, ABS resin, SAN Fat, polystyrene, etc.).
These other components are preferably melt kneaded using a dry blend or an extruder.

また、本実施の形態のポリアミド樹脂をフィルム用途に用いる場合には、滑り性向上のため、タルク、カオリン、焼成カオリン、シリカ、ゼオライト等の無機フィラー、特に微粒子状の無機フィラーを配合することが好ましい。更に好ましくは、無機フィラーと離型剤及び／または滑剤とを併用する態様が挙げられる。
無機フィラーの配合量としては、ポリアミド樹脂１００重量部当り０．００５重量部〜０．１重量部が好ましく用いられる。また、離型剤及び／または滑剤は、ポリアミド樹脂１００重量部当り０．０１重量部〜０．５重量部が好ましく用いられる。 In addition, when the polyamide resin of the present embodiment is used for a film, an inorganic filler such as talc, kaolin, calcined kaolin, silica, zeolite, etc., particularly a fine inorganic filler may be blended for improving the slipping property. preferable. More preferably, the aspect which uses together an inorganic filler, a mold release agent, and / or a lubricant is mentioned.
The blending amount of the inorganic filler is preferably 0.005 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the polyamide resin. The release agent and / or lubricant is preferably used in an amount of 0.01 to 0.5 parts by weight per 100 parts by weight of the polyamide resin.

また、本実施の形態のポリアミド樹脂は、射出成形、フィルム成形、溶融紡糸、ブロー成形、真空成形等の任意の成形方法により、所望の形状に成形することができる。成形品としては、例えば、射出成形品、フィルム、シート、フィラメント、テーパードフィラメント、繊維等が挙げられる。また、ポリアミド樹脂は、接着剤、塗料等にも使用することができる。   Further, the polyamide resin of the present embodiment can be molded into a desired shape by any molding method such as injection molding, film molding, melt spinning, blow molding, vacuum molding and the like. Examples of the molded product include injection molded products, films, sheets, filaments, tapered filaments, fibers, and the like. Polyamide resins can also be used for adhesives, paints, and the like.

また、本実施の形態のポリアミド樹脂の具体的な用途例としては、自動車・車両関連部品として、例えば、インテークマニホールド、ヒンジ付きクリップ（ヒンジ付き成形品）、結束バンド、レゾネーター、エアークリーナー、エンジンカバー、ロッカーカバー、シリンダーヘッドカバー、タイミングベルトカバー、ガソリンタンク、ガソリンサブタンク、ラジエータータンク、インタークーラータンク、オイルリザーバータンク、オイルパン、電動パワステギヤ、オイルストレーナー、キャニスター、エンジンマウント、ジャンクションブロック、リレーブロック、コネクター、コルゲートチューブ、プロテクター等の自動車用アンダーフード部品；ドアハンドル、フェンダー、フードバルジ、ルーフレールレグ、ドアミラーステー、バンパー、スポイラー、ホイールカバー等の自動車用外装部品；カップホルダー、コンソールボックス、アクセルペダル、クラッチペダル、シフトレバー台座、シフトレバーノブ等の自動車用内装部品が挙げられる。   Further, specific examples of applications of the polyamide resin of the present embodiment include, for example, an intake manifold, a clip with a hinge (molded product with a hinge), a binding band, a resonator, an air cleaner, and an engine cover as automobile / vehicle-related parts. , Rocker cover, cylinder head cover, timing belt cover, gasoline tank, gasoline sub tank, radiator tank, intercooler tank, oil reservoir tank, oil pan, electric power steering gear, oil strainer, canister, engine mount, junction block, relay block, connector, corrugated Automotive under hood parts such as tubes and protectors; door handles, fenders, hood bulges, roof rail legs, door mirror stays, vans Chromatography, spoilers, automobile exterior parts such as wheel covers, cup holders, console boxes, accelerator pedals, clutch pedals, shift lever pedestals, automobile interior parts such as a shift lever knob and the like.

さらに、本実施の形態のポリアミド樹脂は、釣り糸、漁網等の漁業関連資材、スイッチ類、超小型スライドスイッチ、ＤＩＰスイッチ、スイッチのハウジング、ランプソケット、結束バンド、コネクタ、コネクタのハウジング、コネクタのシェル、ＩＣソケット類、コイルボビン、ボビンカバー、リレー、リレーボックス、コンデンサーケース、モーターの内部部品、小型モーターケース、ギヤ・カム、ダンシングプーリー、スペーサー、インシュレーター、キャスター、端子台、電動工具のハウジング、スターターの絶縁部分、ヒューズボックス、ターミナルのハウジング、ベアリングリテーナー、スピーカー振動板、耐熱容器、電子レンジ部品、炊飯器部品、プリンタリボンガイド等に代表される電気・電子関連部品、家庭・事務電気製品部品、コンピューター関連部品、ファクシミリ・複写機関連部品、機械関連部品等各種用途に使用することができる。   Further, the polyamide resin of the present embodiment includes fishing line, fishing net and other fishery-related materials, switches, micro slide switches, DIP switches, switch housings, lamp sockets, cable ties, connectors, connector housings, connector shells. , IC sockets, coil bobbins, bobbin covers, relays, relay boxes, condenser cases, motor internal parts, small motor cases, gears / cams, dancing pulleys, spacers, insulators, casters, terminal blocks, power tool housings, starter Electrical / electronic parts such as insulation parts, fuse boxes, terminal housings, bearing retainers, speaker diaphragms, heat-resistant containers, microwave oven parts, rice cooker parts, printer ribbon guides, etc. Parts, computer-related parts, facsimile-copier-related parts, can be used in the machine-related parts such as various applications.

（ポリアミド樹脂フィルムの成形方法）
本実施の形態におけるポリアミド樹脂フィルムは、公知の方法で成形することができる。例えば、ポリアミド樹脂に離型剤や滑剤等をドライブレンドしたポリアミド樹脂組成物の溶融体を連続的にＴ−ダイより押出し、キャスティングロールにて冷却しながらフィルム状に成形するＴ−ダイ法；環状のダイスより連続的に押出し、水を接触させて冷却する水冷インフレーション法；同じく環状のダイスより押出し、空気によって冷却する空冷インフレーション法等が用いられる。また、これらの成形法で他の材料を同時に押し出す共押出法で多層のフィルムを得ることもできる。 (Polyamide resin film molding method)
The polyamide resin film in the present embodiment can be formed by a known method. For example, a T-die method in which a melt of a polyamide resin composition obtained by dry blending a release agent or a lubricant with a polyamide resin is continuously extruded from a T-die and cooled into a film by a casting roll; For example, a water-cooled inflation method in which water is extruded from a continuous die and cooled by contact with water; an air-cooled inflation method in which the material is extruded from an annular die and cooled by air is used. Moreover, a multilayer film can also be obtained by a coextrusion method in which other materials are simultaneously extruded by these molding methods.

必要に応じて一軸または二軸延伸フィルムとして使用することも可能である。延伸方法は公知の方法が応用できる。例えば、Ｔ−ダイ法にて成形したフィルムの場合、縦延伸（一軸延伸）はロール方式を用いる。さらに横方向に延伸する際には、テンター方式を使用した逐次二軸延伸法が挙げられる。環状ダイより成形したチューブ状フィルムについては、上記の逐次二軸延伸法以外に縦横同時に延伸できるチューブラー延伸法が用いられる。
共押出しフィルムについても同様の方法で各層を同時に延伸（共延伸）することができる。尚、延伸倍率は縦方向、横方向とも２倍〜４倍、好ましくは２倍〜３．５倍である。 If necessary, it can be used as a uniaxially or biaxially stretched film. A known method can be applied as the stretching method. For example, in the case of a film formed by the T-die method, the roll method is used for longitudinal stretching (uniaxial stretching). Furthermore, when extending | stretching to a horizontal direction, the sequential biaxial stretching method which uses a tenter system is mentioned. For the tubular film formed from an annular die, a tubular stretching method that can be simultaneously stretched in the vertical and horizontal directions is used in addition to the sequential biaxial stretching method.
Each layer can be stretched (co-stretched) at the same time by the same method for the coextruded film. The stretching ratio is 2 to 4 times, preferably 2 to 3.5 times in both the vertical and horizontal directions.

本実施の形態におけるポリアミド樹脂のフィルムの厚みは、好ましくは１μｍ〜７０μｍである。フィルムの厚みが過度に小さいと強度が不充分になりやすく、過度に大きいと繰り返し屈曲疲労性が低下しやすい。
フィルムがポリアミド樹脂単層フィルムの場合、より好ましくは５μｍ〜５０μｍ、更に好ましくは１０μｍ〜３０μｍであり、多層フィルムの場合、ポリアミド樹脂層としての厚みは、より好ましくは２μｍ〜５０μｍ、更に好ましくは５μｍ〜３０μｍである。 The thickness of the polyamide resin film in the present embodiment is preferably 1 μm to 70 μm. If the thickness of the film is excessively small, the strength tends to be insufficient, and if it is excessively large, the bending fatigue resistance tends to decrease.
When the film is a polyamide resin monolayer film, the thickness is more preferably 5 μm to 50 μm, still more preferably 10 μm to 30 μm. When the film is a multilayer film, the thickness as the polyamide resin layer is more preferably 2 μm to 50 μm, still more preferably 5 μm. ˜30 μm.

本実施の形態におけるポリアミド樹脂のフィルムは、印刷性の改良や、ラミネート性（接着性）の改良のために片面、または両面にコロナ処理した後使用することもできる。
本実施の形態では、射出成形方法により、所望の形状に成形されたポリアミド樹脂の射出成形品を得ることができる。 The polyamide resin film in the present embodiment can also be used after corona treatment on one side or both sides in order to improve printability or laminate properties (adhesiveness).
In the present embodiment, an injection molded product of polyamide resin molded into a desired shape can be obtained by an injection molding method.

以下に実施例を示し、本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例の記載に限定されるものではない。
［アミノ酸分析］
日立アミノ酸分析計Ｌ−８９００を用いて、リジン、アルギニン等のアミノ酸分析を行った。先ず、試料溶液を限外濾過（ＭＷＣＯ １０，０００）して、濾液を分析試料とした。分析条件は生体アミノ酸分離条件、分析法はニンヒドリン発色法（５７０ｎｍ、４４０ｎｍ）とした。標準品には和光アミノ酸混合液ＡＮＩＩ型及びＢ型を希釈したものを用い、試料注入量は１０μＬとした。定量計算として、Ｐｒｏは４４０ｎｍ、他のアミノ酸は５７０ｎｍのピーク面積から一点外部標準法にてアミノ酸含量を算出した。 EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to examples. However, the present invention is not limited to the description of these examples.
[Amino acid analysis]
Using Hitachi amino acid analyzer L-8900, amino acids such as lysine and arginine were analyzed. First, the sample solution was subjected to ultrafiltration (MWCO 10,000), and the filtrate was used as an analysis sample. The analysis conditions were biological amino acid separation conditions, and the analysis method was ninhydrin coloring method (570 nm, 440 nm). The standard product used was a diluted Wako amino acid mixture ANII type and B type, and the sample injection volume was 10 μL. For quantitative calculation, the amino acid content was calculated by a one-point external standard method from a peak area of 440 nm for Pro and 570 nm for other amino acids.

［相対粘度（η_ｒ）］
試料を９８％濃硫酸に溶解して濃度０．０１ｇ／ｍｌとし、２５℃でオストワルド式粘度計を用いて測定を行い、（試料溶液の落下時間）／（濃硫酸の落下時間）を相対粘度（η_ｒ）とした。 [Relative viscosity (η _r )]
The sample was dissolved in 98% concentrated sulfuric acid to a concentration of 0.01 g / ml, and measured at 25 ° C. using an Ostwald viscometer. The (sample solution falling time) / (concentrated sulfuric acid falling time) was the relative viscosity. (Η _r ).

［ＤＳＣ（示差走査熱量測定）］
セイコー電子工業製ロボットＤＳＣを用い、窒素雰囲気下、試料約５ｍｇを採取し、次の条件で測定した。
ポリアミド樹脂を完全に融解させて３分間保持した後、２０℃／分の降温速度で、３０℃まで降温したときに現れる発熱ピークの温度（降温結晶化温度Ｔｃ）と、これに続いて、３０℃で３分間保持した後、３０℃から２０℃／分の昇温速度で昇温したときに観測される吸熱ピークの温度（融点Ｔｍ）を求めた。吸熱ピークが複数の場合は、最も高い温度を融点Ｔｍとした。 [DSC (Differential Scanning Calorimetry)]
About 5 mg of a sample was collected under a nitrogen atmosphere using a Seiko Electronics robot DSC and measured under the following conditions.
After the polyamide resin is completely melted and held for 3 minutes, the temperature of the exothermic peak that appears when the temperature is lowered to 30 ° C. at a temperature lowering rate of 20 ° C./min (temperature-lowering crystallization temperature Tc), followed by 30 After holding at 3 ° C. for 3 minutes, an endothermic peak temperature (melting point Tm) observed when the temperature was raised from 30 ° C. at a rate of temperature increase of 20 ° C./min was determined. When there were a plurality of endothermic peaks, the highest temperature was defined as the melting point Tm.

［静止摩擦係数（滑り性）］
相対湿度６５％、温度２３℃の条件下、平行移動式により静止摩擦係数を測定した。 [Static friction coefficient (sliding property)]
The coefficient of static friction was measured by a parallel movement method under conditions of a relative humidity of 65% and a temperature of 23 ° C.

［Ｆ／Ｅ（フィッシュアイ）数］
ポリアミド樹脂原料を、押出機シリンダー径が３０ｍｍφのＴ−ダイ式製膜機を用いて４０μｍ厚みのポリアミド樹脂フィルムを製膜する。製膜条件は、押出機のシリンダー設定温度が２８０℃、ポリアミド樹脂フィルムを巻き取る冷却ロール温度が９０℃、吐出量が２ｋｇ／時である。
面積が９００ｃｍ^２中における、大きさが５０μｍ以上の粒状欠陥をフィッシュアイとし、当該フィッシュアイの数を数えた（単位：個／９００ｃｍ^２）。 [F / E (fisheye) number]
A polyamide resin film having a thickness of 40 μm is formed from the polyamide resin raw material using a T-die type film forming machine having an extruder cylinder diameter of 30 mmφ. The film forming conditions are: the cylinder set temperature of the extruder is 280 ° C., the cooling roll temperature for winding the polyamide resin film is 90 ° C., and the discharge amount is 2 kg / hour.
A granular defect having an area of 900 cm ² having a size of 50 μm or more was defined as a fish eye, and the number of the fish eye was counted (unit: piece / 900 cm ² ).

［数平均分子量］
（１）末端アミノ基
ポリアミド樹脂の試料０．１ｇ〜２ｇを正確に秤量し、フェノール５０ｍｌ中に溶解した後、自動滴定装置（三菱化学株式会社製、ＧＴ−０６）を用いて０．１Ｎ塩酸で滴定し、算出した（単位：ｅｑ／ｇ）。
（２）末端カルボキシル基
ポリアミド樹脂の試料０．１ｇ〜２ｇを正確に秤量し、ベンジルアルコール５０ｍｌ中に溶解した後、自動滴定装置（三菱化学株式会社製、ＧＴ−０６）または通常のビュレット型滴定装置を用いて０．１Ｎ水酸化ナトリウムで滴定し算出した（単位：ｅｑ／ｇ）。
（３）数平均分子量
上記（１）、（２）の方法で求めた末端の総数から次式に従って算出した。 [Number average molecular weight]
(1) Terminal amino group After 0.1 g to 2 g of a polyamide resin sample was accurately weighed and dissolved in 50 ml of phenol, 0.1N hydrochloric acid was used using an automatic titrator (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation, GT-06). And calculated (unit: eq / g).
(2) Terminal carboxyl group After 0.1 g to 2 g of a polyamide resin sample was accurately weighed and dissolved in 50 ml of benzyl alcohol, an automatic titrator (manufactured by Mitsubishi Chemical Co., Ltd., GT-06) or a normal burette type titration Titration with 0.1N sodium hydroxide was performed using an apparatus, and calculation was performed (unit: eq / g).
(3) Number average molecular weight The number average molecular weight was calculated according to the following formula from the total number of terminals determined by the methods (1) and (2).

［スパイラル流動長］
（スパイラルフロー試験片の成形）
日本製鋼所社製Ｊ７５ＥＩＩ型射出成形機を使用し、樹脂温度２６５℃、金型温度７５℃、射出圧力５０ＭＰａ、スパイラルフロー試験片厚み３ｍｍにて行った。スパイラルフロー試験片の長さを測定し、スパイラル流動長とした（単位：ｍｍ）。 [Spiral flow length]
(Molding of spiral flow test piece)
Using a J75EII type injection molding machine manufactured by Nippon Steel Co., Ltd., the resin temperature was 265 ° C., the mold temperature was 75 ° C., the injection pressure was 50 MPa, and the spiral flow test piece thickness was 3 mm. The length of the spiral flow test piece was measured and defined as the spiral flow length (unit: mm).

［リジン脱炭酸酵素遺伝子（ｃａｄＡ）増強株の作製］
（Ａ）大腸菌ＤＮＡ抽出
ＬＢ培地［組成：トリプトン１０ｇ、イーストエキストラクト５ｇ、ＮａＣｌ ５ｇを蒸留水１Ｌに溶解］１０ｍＬに、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｉａ ｃｏｌｉ）ＪＭ１０９株を対数増殖期後期まで培養し、得られた菌体を１０ｍｇ／ｍＬのリゾチームを含む１０ｍＭ ＮａＣｌ／２０ｍＭ トリス緩衝液（ｐＨ８．０）／１ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ溶液０．１５ｍＬに懸濁した。 [Preparation of lysine decarboxylase gene (cadA) -enhanced strain]
(A) Escherichia coli DNA extraction LB medium [composition: tryptone 10 g, yeast extract 5 g, NaCl 5 g dissolved in 1 L of distilled water] 10 mL was obtained by culturing Escherichia coli JM109 strain to the late logarithmic growth phase. The cells were suspended in 0.15 mL of a 10 mM NaCl / 20 mM Tris buffer solution (pH 8.0) / 1 mM EDTA · 2Na solution containing 10 mg / mL lysozyme.

次に、上記懸濁液にプロテナーゼＫを、最終濃度が１００μｇ／ｍＬになるように添加し、３７℃で１時間保温した。さらにドデシル硫酸ナトリウムを最終濃度が０．５％になるように添加し、５０℃で６時間保温して溶菌した。この溶菌液に、等量のフェノール／クロロフォルム溶液を添加し、室温で１０分間ゆるやかに振盪した後、全量を遠心分離（５，０００×ｇ、２０分間、１０℃〜１２℃）し、上清画分を分取し、酢酸ナトリウムを０．３Ｍとなるように添加した後、２倍量のエタノールを加え混合した。遠心分離（１５，０００×ｇ、２分間）により回収した沈殿物を７０％エタノールで洗浄した後、風乾した。得られたＤＮＡに１０ｍＭ トリス緩衝液（ｐＨ７．５）−１ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ溶液５ｍＬを加え、４℃で一晩静置し、以後のＰＣＲの鋳型ＤＮＡに使用した。   Next, proteinase K was added to the suspension so that the final concentration was 100 μg / mL, and the mixture was incubated at 37 ° C. for 1 hour. Further, sodium dodecyl sulfate was added to a final concentration of 0.5%, and the mixture was incubated at 50 ° C. for 6 hours for lysis. To this lysate, add an equal amount of phenol / chloroform solution, shake gently at room temperature for 10 minutes, and then centrifuge (5,000 × g, 20 minutes, 10 ° C. to 12 ° C.) to obtain the supernatant. Fractions were collected and sodium acetate was added to a concentration of 0.3 M, and then twice the amount of ethanol was added and mixed. The precipitate collected by centrifugation (15,000 × g, 2 minutes) was washed with 70% ethanol and then air-dried. To the obtained DNA, 5 mL of a 10 mM Tris buffer (pH 7.5) -1 mM EDTA · 2Na solution was added and allowed to stand at 4 ° C. overnight, and used as template DNA for subsequent PCR.

（Ｂ）ｃａｄＡのクローニング
大腸菌ｃａｄＡの取得は、上記（Ａ）で調製したＤＮＡを鋳型とし、全ゲノム配列が報告されている大腸菌Ｋ１２−ＭＧ１６５５株の該遺伝子の配列（ＧｅｎＢａｎｋ Ｄａｔａｂａｓｅ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｕ０００９６）を基に設計した合成ＤＮＡ（配列番号１（配列；ＧＴＴＧＣＧＴＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＴＣＧＣＧＣＴＧＡＴＧ）及び配列番号２（配列；ＡＣＣＡＡＧＣＴＧＡＴＧＧＧＴＧＡＧＡＴＡＧＡＧＡＡＴＧＡＧＴＡＡＧ））を用いたＰＣＲによって行った。 (B) Cloning of cadA E. coli cadA is obtained by using the DNA prepared in the above (A) as a template and the sequence of the gene of E. coli K12-MG1655 strain (GenBank Database Accession No. U00096) for which the entire genome sequence has been reported. PCR was carried out using synthetic DNAs (SEQ ID NO: 1 (sequence; GTTGCGGTTCTGCTTCCATCGCGCTGATG) and SEQ ID NO: 2 (sequence; ACCAAGCTGATGGGTGGAGAGAGAGATGAGTAAG)) designed based on the above.

（反応液組成）
鋳型ＤＮＡ１μＬ、ＰｆｘＤＮＡポリメラーゼ（インビトロジェン社製）０．２μＬ、１倍濃度添付バッファー、０．３μＭ各々プライマー、１ｍＭＭｇＳＯ_４、０．２５μＭｄＮＴＰｓを混合し、全量を２０μＬとした。 (Reaction solution composition)
Template DNA 1 μL, Pfx DNA polymerase (manufactured by Invitrogen) 0.2 μL, 1 × concentration attached buffer, 0.3 μM each primer, 1 mM MgSO ₄ , 0.25 μM dNTPs were mixed to make a total volume of 20 μL.

（反応温度条件）
ＤＮＡサーマルサイクラー（ＭＪＲｅｓｅａｒｃｈ社製ＰＴＣ−２００）を用い、９４℃で２０秒間、６０℃で２０秒間、７２℃で２．５分間からなるサイクルを３５回繰り返した。但し、１サイクル目の９４℃での保温は１分２０秒間、最終サイクルの７２℃での保温は１０分間とした。 (Reaction temperature conditions)
Using a DNA thermal cycler (PTJ-200 manufactured by MJ Research), a cycle consisting of 94 ° C. for 20 seconds, 60 ° C. for 20 seconds, and 72 ° C. for 2.5 minutes was repeated 35 times. However, the heat retention at 94 ° C. in the first cycle was 1 minute and 20 seconds, and the heat retention at 72 ° C. in the final cycle was 10 minutes.

図１は、ｃａｄＡのクローニングの手順を説明する図である。
図１に示すように、ＰＣＲ反応終了後、増幅産物をエタノール沈殿により精製した後、制限酵素ＫｐｎＩ及び制限酵素ＳｐｈＩで切断した。このＤＮＡ標品を、０．７５％アガロース（ＳｅａＫｅｍ ＧＴＧ ａｇａｒｏｓｅ：ＦＭＣＢｉｏＰｒｏｄｕｃｔｓ製）ゲル電気泳動により分離後、臭化エチジウム染色により可視化することによりｃａｄＡを含む約２．６ｋｂの断片を検出し、ＱＩＡＱｕｉｃｋ Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ製）を用いて目的ＤＮＡ断片の回収を行った。 FIG. 1 is a diagram for explaining the procedure for cloning cadA.
As shown in FIG. 1, after completion of the PCR reaction, the amplified product was purified by ethanol precipitation, and then cleaved with restriction enzyme KpnI and restriction enzyme SphI. This DNA preparation was separated by 0.75% agarose (SeaKem GTG agarose: manufactured by FMC BioProducts) gel electrophoresis, and visualized by ethidium bromide staining to detect a fragment of about 2.6 kb containing cadA, and QIAQuick Gel The DNA fragment of interest was recovered using an Extraction Kit (manufactured by QIAGEN).

回収したＤＮＡ断片を、大腸菌プラスミドベクターｐＵＣ１８（宝酒造製）を制限酵素ＫｐｎＩ及び制限酵素ＳｐｈＩで切断して調整したＤＮＡ断片と混合し、ライゲーションキットｖｅｒ．２（宝酒造製）を用いて連結後、得られたプラスミドＤＮＡを用いて大腸菌（ＪＭ１０９株）を形質転換した。
この様にして得られた組換え大腸菌を５０μｇ／ｍＬ アンピシリン、０．２ｍＭ ＩＰＴＧ（イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド）及び５０μｇ／ｍＬ Ｘ−Ｇａｌを含むＬＢ寒天培地に塗抹した。 The recovered DNA fragment was mixed with a DNA fragment prepared by cleaving E. coli plasmid vector pUC18 (Takara Shuzo) with restriction enzymes KpnI and restriction enzyme SphI, and ligation kit ver. After ligation using 2 (Takara Shuzo), Escherichia coli (JM109 strain) was transformed with the obtained plasmid DNA.
The recombinant Escherichia coli thus obtained was smeared on an LB agar medium containing 50 μg / mL ampicillin, 0.2 mM IPTG (isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) and 50 μg / mL X-Gal.

この培地上で白色のコロニーを形成したクローンを、常法により液体培養した後、プラスミドＤＮＡを精製した。得られたプラスミドＤＮＡを制限酵素ＫｐｎＩ及び制限酵素ＳｐｈＩで切断することにより、約２．５ｋｂの挿入断片が認められることを確認し、これをｐＣＡＤ１、ｐＣＡＤ１を含む大腸菌株をＪＭ１０９／ｐＣＡＤ１とそれぞれ命名した。   Clones that formed white colonies on this medium were subjected to liquid culture by a conventional method, and then plasmid DNA was purified. By cleaving the obtained plasmid DNA with restriction enzymes KpnI and restriction enzyme SphI, it was confirmed that an inserted fragment of about 2.5 kb was observed, and these E. coli strains containing pCAD1 and pCAD1 were named JM109 / pCAD1, respectively. did.

［カダベリン・アジピン酸塩水溶液の調製（１）］
以下の実施例で使用した反応液（カダベリン・アジピン酸塩水溶液）は、ｃａｄＡ増幅株を用い、リジン・アジピン酸塩を原料とし、以下の方法で調製した。 [Preparation of cadaverine / adipate aqueous solution (1)]
The reaction solution (cadaverine / adipate aqueous solution) used in the following examples was prepared by the following method using a cadA amplified strain and lysine / adipate as a raw material.

（１）ｃａｄＡ増幅株の培養
Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０９／ｐＣＡＤ１をＬＢ培地入りフラスコ１０本で前培養した後、１Ｌの培養液を９９ＬのＬＢ培地が入った２００Ｌ容ジャーファーメンターに接種し、通気量０．５ｖｖｍ、３５℃、２５０ｒｐｍで通気撹拌培養を行った。
培養開始６時間後、この培養液全量を、３ｍ^３の２×ＬＢ培地が入った５ｍ^３容培養タンクに接種して更に培養を行った。５ｍ^３容培養タンクでの培養条件は、通気量０．５ｖｖｍ、３５℃であった。撹拌回転数は溶存酸素濃度が十分高い値になるように６０ｒｐｍ〜１００ｒｐｍの範囲で調節した。培養４時間目に、滅菌したＩＰＴＧ（イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド）を終濃度で０．５ｍＭになるように添加し、その後１４時間培養を継続した。 (1) Culture of cadA amplified strain E. coli JM109 / pCAD1 was pre-cultured in 10 flasks containing LB medium, then 1 L of the culture solution was inoculated into a 200 L jar fermenter containing 99 L of LB medium, and aerated at 0.5 vvm, 35 ° C., 250 rpm. Stirring culture was performed.
Six hours after the start of the culture, the whole culture solution was inoculated into a 5 m ³ volume culture tank containing 3 m ³ of 2 × LB medium and further cultured. The culture conditions in a 5 m ³ volume culture tank were an aeration rate of 0.5 vvm and 35 ° C. The stirring rotation speed was adjusted in the range of 60 to 100 rpm so that the dissolved oxygen concentration had a sufficiently high value. At 4 hours of culture, sterilized IPTG (isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) was added to a final concentration of 0.5 mM, and then the culture was continued for 14 hours.

（２）菌体の分離
６,４００ｒｐｍ、フィード速度７５０Ｌ／ｈｒの条件下で、アルファラバル分離機により培養液からの菌体回収を行った。回収された菌体の湿重量は３６．９ｋｇであった。この湿菌体を１０ｍＭの酢酸ナトリウム溶液１６０Ｌに懸濁した後、１５,０００ｒｐｍ、フィード速度１．０Ｌ／ｍｉｎの条件下でシャープレス遠心機により再度菌体回収を行い、１８．７ｋｇの湿菌体を取得した。 (2) Separation of bacterial cells Under the conditions of 6,400 rpm and a feed rate of 750 L / hr, the bacterial cells were collected from the culture solution using an Alfa Laval separator. The wet weight of the collected cells was 36.9 kg. The wet cells were suspended in 160 L of a 10 mM sodium acetate solution, and then recovered again with a sharp press centrifuge at 15,000 rpm and a feed rate of 1.0 L / min. 18.7 kg of wet cells Acquired the body.

（３）カダベリン・アジピン酸塩の製造
５０％（ｗ／ｖ）リジンベース溶液（協和醗酵工業株式会社製）にｐＨが６．０となるようにアジピン酸を添加して、リジン・アジピン酸塩の濃厚溶液を調製した。リジン濃度で６０ｇ／Ｌとなるように基質溶液（３ｍ^３）を作成し、５ｍ^３容培養タンクにはり込んだ。ピリドキサルリン酸を０．１ｍＭとなるように基質溶液に添加し、さらにＥ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０９／ｐＣＡＤ１の菌体をＯＤ６６０が０．５になるように添加して反応を開始した。 (3) Manufacture of cadaverine and adipate Addition of adipic acid to 50% (w / v) lysine base solution (manufactured by Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd.) so that pH is 6.0, A concentrated solution of was prepared. A substrate solution (3 m ³ ) was prepared so as to have a lysine concentration of 60 g / L, and placed in a 5 m ³ culture tank. Pyridoxal phosphate was added to the substrate solution to 0.1 mM, and E. coli was further added. The reaction was started by adding E. coli JM109 / pCAD1 cells so that the OD660 was 0.5.

反応条件は、３７℃、０．５ｖｖｍ通気、７０ｒｐｍとした。反応中の溶液のｐＨは、２５０ｋｇのアジピン酸をイオン交換水４００Ｌに懸濁したスラリーを添加し、６．５になるように制御した。
また、リジン濃度３１８ｇ／Ｌの基質濃厚溶液（６００Ｌ）を開始から約１３０Ｌ／ｈで連続的にフィードし、約４．５時間で全量を添加した。さらに反応を継続して計２２時間反応させた。 The reaction conditions were 37 ° C., 0.5 vvm aeration, and 70 rpm. The pH of the solution during the reaction was controlled to be 6.5 by adding a slurry in which 250 kg of adipic acid was suspended in 400 L of ion-exchanged water.
Further, a substrate concentrated solution (600 L) having a lysine concentration of 318 g / L was continuously fed at about 130 L / h from the start, and the whole amount was added in about 4.5 hours. The reaction was further continued for a total of 22 hours.

反応終了時には、リジン残存濃度が０．０３ｇ／Ｌ以下であり、ほぼ１００％のリジンがカダベリンに変換されていた。
反応後の溶液（約４ｍ^３）は、菌体の不活化処理（８０℃、３０ｍｉｎ）を実施したのち、分子量１３，０００以上をカットするＵＦ膜モジュールＡＣＰ−３０５３（旭化成工業株式会社製）を通して高分子量体の不純物除去を行った。
ＵＦ処理による回収率は９９．３％であった。以上のようにして、ほぼカダベリンとアジピン酸をほぼ等モル含むカダベリン・アジピン酸塩水溶液を取得した。 At the end of the reaction, the residual concentration of lysine was 0.03 g / L or less, and almost 100% of lysine was converted to cadaverine.
The solution after the reaction (about 4 m ³ ) is passed through a UF membrane module ACP-3053 (manufactured by Asahi Kasei Kogyo Co., Ltd.) that cuts off a molecular weight of 13,000 or more after performing inactivation treatment (80 ° C., 30 min) of bacterial cells. High molecular weight impurities were removed.
The recovery rate by UF treatment was 99.3%. As described above, an aqueous cadaverine / adipate solution containing almost equimolar amounts of cadaverine and adipic acid was obtained.

［カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離（１）］
（１）活性炭による脱色
直径７００ｍｍの活性炭塔に三菱化学カルゴン株式会社製活性炭ＭＭ−１１（１０５ｋｇ、約４４０Ｌ）を仕込み、２日間脱塩水を通水した。次に、前記カダベリン・アジピン酸塩水溶液（約４ｍ^３）を１．３２ｍ^３／ｈの速度で通液し、最後に５００Ｌの脱塩水を通水した。初期４６０Ｌをパージした後、活性炭処理したカダベリン・アジピン酸塩水溶液を採取した。
活性炭処理前はカダベリン・アジピン酸塩水溶液４０７６．５ｋｇ、含有するカダベリン・アジピン酸塩６０３．９ｋｇであった。活性炭処理後はカダベリン・アジピン酸塩水溶液５０２９ｋｇ、含有するカダベリン・アジピン酸塩６０３．７ｋｇであった。 [Purification and isolation of cadaverine adipate (1)]
(1) Decolorization with activated carbon Activated carbon MM-11 (105 kg, approximately 440 L) manufactured by Mitsubishi Chemical Calgon Co., Ltd. was charged into an activated carbon tower having a diameter of 700 mm, and demineralized water was passed through for 2 days. Next, the cadaverine adipate aqueous solution (about 4 m ³ ) was passed at a rate of 1.32 m ³ / h, and finally 500 L of demineralized water was passed. After initially purging 460 L, an activated cadaverine / adipate aqueous solution treated with activated carbon was collected.
Before the activated carbon treatment, 4076.5 kg of the cadaverine / adipate aqueous solution and 603.9 kg of the cadaverine / adipate contained. After the activated carbon treatment, the solution was 5029 kg of cadaverine / adipate aqueous solution and 603.7 kg of cadaverine / adipate contained.

（２）濃縮
ＰＰプリーツカートリッジフィルターＴＣＰ−ＪＸを通して、前記活性炭処理後のカダベリン・アジピン酸塩水溶液を２ｍ^３撹拌槽に仕込み、ジャケット温度１１０℃、内温５７℃、真空度１４０Ｔｏｒｒ〜１５０Ｔｏｒｒにて濃縮を開始し、適宜、活性炭処理後のカダベリン・アジピン酸塩水溶液を仕込みながら濃縮を行った。
濃縮液の重量は９１８．４ｋｇ、カダベリン・アジピン酸塩濃度は６３．５重量％であった。 (2) Concentration Through a PP pleated cartridge filter TCP-JX, the cadaverine / adipate aqueous solution after the activated carbon treatment is charged into a 2 m ³ stirring tank, and concentrated at a jacket temperature of 110 ° C., an internal temperature of 57 ° C., and a vacuum of 140 Torr to 150 Torr. Then, the cadaverine / adipate aqueous solution after the activated carbon treatment was appropriately added and concentrated.
The weight of the concentrate was 918.4 kg, and the cadaverine adipate concentration was 63.5% by weight.

尚、上記濃縮液等のカダベリン・アジピン酸塩水溶液中のカダベリン濃度は、１Ｎ−ＨＣｌ水溶液にて滴定して、ｐＨの変曲点までの滴定量から算出した。同様に上記濃縮液等のカダベリン・アジピン酸塩水溶液中のアジピン酸濃度は、１Ｎ−ＮａＯＨ水溶液にて滴定して、ｐＨの変曲点までの滴定量から算出した。滴定には、自動滴定装置（三菱化学株式会社製ＧＴ−０６型）を使用した。   The cadaverine concentration in the cadaverine / adipate aqueous solution such as the above concentrated solution was titrated with a 1N-HCl aqueous solution and calculated from the titration amount up to the inflection point of pH. Similarly, the concentration of adipic acid in the cadaverine / adipate aqueous solution such as the above concentrated solution was titrated with a 1N-NaOH aqueous solution and calculated from the titration amount up to the inflection point of pH. For titration, an automatic titration apparatus (GT-06 model manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) was used.

（３）晶析
次に、同一の２ｍ^３撹拌槽にて晶析を行った。撹拌翼は３枚後退翼、撹拌速度は４０ｒｐｍ、降温速度は８℃／ｈである。
内温３７．４℃のときに、予め作成したカダベリン・アジピン酸塩を種晶として１ｋｇ添加して結晶を析出させ、内温１０．５℃で晶析終了として、カダベリン・アジピン酸塩スラリーを得た。尚、種晶としてのカダベリン・アジピン酸塩は、本実施例に準じてラボスケールにて準備した。 (3) Crystallization Next, crystallization was performed in the same 2 m ³ stirring tank. The stirring blades are three retreating blades, the stirring speed is 40 rpm, and the cooling rate is 8 ° C./h.
When the internal temperature is 37.4 ° C., 1 kg of cadaverine adipate prepared in advance is added as a seed crystal to precipitate crystals, and crystallization ends at an internal temperature of 10.5 ° C. Obtained. Cadaverine adipate as a seed crystal was prepared on a lab scale according to this example.

（４）遠心濾過
直径１．２２ｍの遠心濾過器を用い、前記カダベリン・アジピン酸塩スラリーを３回に分けて遠心濾過した。回転数は９８０ｒｐｍ、母液振り切り時間は１５分、母液振り切り後に１０℃の脱塩水約１２ｋｇ（脱塩水約１２ｋｇは、予想ｗｅｔケーキ重量の約２０重量％分）をシャワー状に振りかけて洗浄し、その脱塩水の振り切り時間は１５分間とした。 (4) Centrifugal filtration Using a centrifugal filter having a diameter of 1.22 m, the cadaverine / adipate slurry was centrifugally filtered in three portions. The rotation speed is 980 rpm, the mother liquor shake-off time is 15 minutes, and after the mother liquor has been shaken off, about 12 kg of demineralized water at 10 ° C. The demineralized water was shaken off for 15 minutes.

１番晶として得られたｗｅｔケーキは１９４．３ｋｇ（カダベリン・アジピン酸塩として１６５．２ｋｇ、濃縮液に対する晶析率は２８．３重量％）であった。遠心濾過後に回収した１番母液は６４４ｋｇ、同じく回収した１番洗浄水は９１．１ｋｇ（カダベリン・アジピン酸塩が溶けて量が増えた）であった。
尚、上記カダベリン・アジピン酸塩重量は、ｗｅｔケーキの水分量を水分計（三菱化学株式会社製、電量滴定式水分測定装置ＣＡ−０６型、及び水分気化装置ＶＡ−０６型）にて測定して算出した。 The wet cake obtained as the first crystal was 194.3 kg (165.2 kg as cadaverine adipate, and the crystallization rate with respect to the concentrated liquid was 28.3 wt%). The No. 1 mother liquor recovered after centrifugal filtration was 644 kg, and the No. 1 wash water also recovered was 91.1 kg (the amount of cadaverine / adipate was increased and increased).
The weight of the cadaverine adipate was measured with a moisture meter (manufactured by Mitsubishi Chemical Co., Ltd., coulometric titration moisture measuring device CA-06 and moisture vaporizer VA-06). Calculated.

（５）２番晶
前記回収した１番母液と１番洗浄水とを２ｍ^３撹拌槽に仕込み、１番晶との相違点として以下に示した以外は、前述した（２）濃縮〜（４）遠心濾過と同様の操作により濃縮、晶析、遠心濾過を行った。
２番晶析品としてｗｅｔケーキ１４２．６ｋｇ（カダベリン・アジピン酸塩として１２１．４ｋｇ、晶析率３０．６重量％）を得た。回収した２番母液は４１４ｋｇ、回収した２番洗浄水は７６．３ｋｇであった。
１番晶との相違点として、濃縮工程では、濃縮液の重量は６１０．５ｋｇ、カダベリン・アジピン酸塩濃度は６５．０重量％であった。
晶析工程では、内温４０℃において、予め作成したカダベリン・アジピン酸塩を種晶として１ｋｇ添加して結晶を析出させ、内温１０．０℃で晶析を終了した。遠心濾過工程では、カダベリン・アジピン酸塩スラリーを２回に分けて遠心濾過を行い、母液振り切り後に１０℃の脱塩水約１６ｋｇをシャワー状に振りかけて洗浄した。 (5) No. 2 crystal The collected No. 1 mother liquor and No. 1 washing water were charged into a 2 m ³ stirring tank, and the difference from the No. 1 crystal was shown below. ) Concentration, crystallization, and centrifugal filtration were performed in the same manner as centrifugal filtration.
As the second crystallized product, 142.6 kg of wet cake (121.4 kg as cadaverine adipate, crystallization rate of 30.6% by weight) was obtained. The recovered second mother liquor was 414 kg, and the recovered second wash water was 76.3 kg.
As a difference from the first crystal, in the concentration step, the weight of the concentrate was 610.5 kg, and the cadaverine adipate concentration was 65.0% by weight.
In the crystallization step, 1 kg of cadaverine adipate prepared in advance was added as a seed crystal at an internal temperature of 40 ° C. to precipitate crystals, and the crystallization was completed at an internal temperature of 10.0 ° C. In the centrifugal filtration step, the cadaverine / adipate slurry was subjected to centrifugal filtration in two portions, and after washing off the mother liquor, about 16 kg of 10 ° C. demineralized water was sprinkled into a shower to wash.

（６）３番晶析
前記回収した２番母液と２番洗浄水を、２ｍ^３撹拌槽に仕込み、１番晶との相違点として以下に示した以外は、前述した（２）〜（４）と同様の操作により濃縮、晶析、遠心濾過を行った。
３番晶析品としてｗｅｔケーキ８０．４ｋｇ（カダベリン・アジピン酸塩として６８．２ｋｇ、晶析率２４．５重量％）を得た。回収した３番母液と３番洗浄水の合計は４１８ｋｇであった。 (6) No. 3 crystallization The recovered No. 2 mother liquor and No. 2 washing water were charged into a 2 m ³ agitation tank, and the above-mentioned (2) to (4) except for the following differences from the No. 1 crystal. ), Concentration, crystallization, and centrifugal filtration were performed in the same manner.
As the third crystallization product, 80.4 kg of a wet cake (68.2 kg as cadaverine adipate, crystallization rate 24.5% by weight) was obtained. The total of the recovered No. 3 mother liquor and No. 3 washing water was 418 kg.

１番晶との相違点として、濃縮工程では、濃縮液の重量は４２１．５ｋｇ、カダベリン・アジピン酸塩濃度は６６．０重量％であった。晶析工程では、内温４０℃において、予め作成したカダベリン・アジピン酸塩を種晶として１ｋｇ添加して結晶を析出させ、内温１２．０℃で晶析を終了した。
遠心濾過工程では、カダベリン・アジピン酸塩スラリーを２回に分けて遠心濾過を行い、各々母液振り切り後に１０℃の脱塩水約１０ｋｇをシャワー状に振りかけて洗浄した。 As a difference from the first crystal, in the concentration step, the weight of the concentrate was 421.5 kg, and the cadaverine adipate concentration was 66.0% by weight. In the crystallization step, 1 kg of cadaverine adipate prepared in advance was added as a seed crystal at an internal temperature of 40 ° C. to precipitate crystals, and the crystallization was completed at an internal temperature of 12.0 ° C.
In the centrifugal filtration step, the cadaverine / adipate slurry was divided into two portions and subjected to centrifugal filtration. After each of the mother liquors was shaken off, about 10 kg of demineralized water at 10 ° C. was sprinkled into a shower to wash.

［カダベリン・アジピン酸塩水溶液の調製（２）］
カダベリン・アジピン酸塩水溶液の調製（１）と同様の操作により、カダベリン・アジピン酸塩水溶液（約４ｍ^３）を取得した。 [Preparation of cadaverine / adipate aqueous solution (2)]
Cadaverine / adipate aqueous solution Cadaverine / adipate aqueous solution (about 4 m ³ ) was obtained by the same operation as in preparation (1).

［カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離（２）］
カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離（１）の１番晶を得るのと同様の操作を実施しており、相違点のみを以下に示す。 [Purification and isolation of cadaverine adipate (2)]
Purification and isolation of cadaverine adipate The same operation as that for obtaining the first crystal of (1) is carried out, and only the differences are shown below.

（１）活性炭による脱色
カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離（１）の１番晶を得るのと同様にして、活性炭処理後のカダベリン・アジピン酸塩水溶液５，００１ｋｇ、含有するカダベリン・アジピン酸塩６０１．０ｋｇを得た。 (1) Decolorization with activated carbon Purification and isolation of cadaverine adipate In the same way as obtaining the first crystal of (1), 5,001 kg of cadaverine adipate aqueous solution after activated carbon treatment, cadaverine adipine contained 601.0 kg of acid salt was obtained.

（２）濃縮
カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離（１）の１番晶を得るのと同様にして、濃縮液８３３．５ｋｇを得た。カダベリン・アジピン酸塩濃度は７０．０重量％であった。 (2) Concentration Purification and isolation of cadaverine and adipate In the same manner as in obtaining the first crystal of (1), 833.5 kg of concentrated solution was obtained. The cadaverine adipate concentration was 70.0% by weight.

（３）晶析
カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離（１）の１番晶を得るのと同様にして、内温５０℃において、予め作成したカダベリン・アジピン酸塩を種晶として１ｋｇ添加して結晶を析出させ、内温１１．２℃で晶析終了として、カダベリン・アジピン酸塩スラリーを得た。 (3) Crystallization Purification and isolation of cadaverine adipate Addition of 1 kg of cadaverine adipate as a seed crystal at an internal temperature of 50 ° C in the same manner as the first crystal obtained in (1) Then, crystals were precipitated, and crystallization was completed at an internal temperature of 11.2 ° C. to obtain a cadaverine / adipate slurry.

（４）遠心濾過
カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離（１）の１番晶を得るのと同様にして、前記カダベリン・アジピン酸塩スラリーを５回に分けて遠心濾過した。
１番晶として得られたｗｅｔケーキは３３０．２ｋｇ（カダベリン・アジピン酸塩として２８３．３ｋｇ、晶析率４８．６重量％）であった。遠心濾過後に回収した１番母液は３８７．５ｋｇ、同じく回収した１番洗浄水は１５５．８ｋｇであった。 (4) Centrifugal filtration Purification and isolation of cadaverine adipate The cadaverine adipate slurry was subjected to centrifugal filtration in five steps in the same manner as in obtaining the first crystal of (1).
The wet cake obtained as the first crystal was 330.2 kg (283.3 kg as cadaverine adipate, crystallization rate 48.6 wt%). The first mother liquor recovered after centrifugal filtration was 387.5 kg, and the recovered first wash water was 155.8 kg.

（５）２番晶
前記回収した１番母液と１番洗浄水を、２ｍ^３撹拌槽に仕込み、１番晶との相違点として以下に示した以外は（２）〜（４）と同様にして濃縮、晶析、遠心濾過を行った。２番晶析品としてｗｅｔケーキ１７０．４ｋｇ（カダベリン・アジピン酸塩として１４５．８ｋｇ、晶析率４５．５重量％）を得た。 (5) No. 2 crystal The above collected No. 1 mother liquor and No. 1 washing water were charged into a 2 m ³ stirring tank, and the same as (2) to (4) except that the difference from No. 1 crystal was shown below. Then, concentration, crystallization, and centrifugal filtration were performed. As the second crystallized product, 170.4 kg of wet cake (145.8 kg as cadaverine adipate, 45.5 wt% of crystallization rate) was obtained.

１番晶との相違点として、濃縮工程では、濃縮液の重量は４５２．７ｋｇ、カダベリン・アジピン酸塩濃度は７０．８重量％であった。晶析工程では、内温５０．３℃において、予め作成したカダベリン・アジピン酸塩を種晶として１ｋｇ添加して結晶を析出させ、内温１０．４℃で晶析を終了した。遠心濾過工程では、カダベリン・アジピン酸塩スラリーを２回に分けて遠心濾過を行い、母液振り切り後に１０℃の脱塩水約１８ｋｇをシャワー状に振りかけて洗浄した。   As a difference from the first crystal, in the concentration step, the weight of the concentrate was 452.7 kg and the cadaverine adipate concentration was 70.8% by weight. In the crystallization step, 1 kg of cadaverine adipate prepared in advance was added as a seed crystal at an internal temperature of 50.3 ° C. to precipitate crystals, and the crystallization was completed at an internal temperature of 10.4 ° C. In the centrifugal filtration step, the cadaverine / adipate slurry was divided into two portions and subjected to centrifugal filtration. After the mother liquor was shaken off, about 18 kg of 10 ° C. demineralized water was sprinkled into a shower to wash.

［実施例１］
＜カダベリン・アジピン酸塩の主な晶析条件＞
上記カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離（１）にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の１番晶において、晶析前のカダベリン・アジピン酸塩濃度（単位：ｗｔ％）、晶析率（単位：％）、晶析回数（単位：回）を表１に示す。 [Example 1]
<Main crystallization conditions for cadaverine adipate>
In the first cadaverine adipate crystal prepared in the purification and isolation (1) of cadaverine adipate, cadaverine adipate concentration (unit: wt%) before crystallization, crystallization rate ( The unit (%) and the number of crystallizations (unit: times) are shown in Table 1.

＜カダベリン・アジピン酸塩のアミノ酸分析＞
上記カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離（１）にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の１番晶のアミノ酸分析を行った。結果を表１に示す。 <Amino acid analysis of cadaverine adipate>
Amino acid analysis of the first crystal of cadaverine adipate prepared in the purification and isolation (1) of cadaverine adipate was performed. The results are shown in Table 1.

＜ポリアミド樹脂の製造＞
上記カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離（１）にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の１番晶２５ｋｇに水２５ｋｇを添加した後、亜燐酸１．２５ｇを添加し、窒素雰囲気下で混合物を完全に溶解させ、原料水溶液を得た。
プランジャーポンプにて予め窒素置換したオートクレーブに、上記の原料水溶液を移送した。ジャケット温度を２８０℃に、オートクレーブの圧力を１．４７ＭＰａにそれぞれ調節し、内容物を２７０℃に昇温した。 <Manufacture of polyamide resin>
After adding 25 kg of water to 25 kg of cadaverine adipate prepared in the purification and isolation of cadaverine adipate (1) above, add 1.25 g of phosphorous acid and mix under nitrogen atmosphere Was completely dissolved to obtain a raw material aqueous solution.
The raw material aqueous solution was transferred to an autoclave which had been previously purged with nitrogen by a plunger pump. The jacket temperature was adjusted to 280 ° C., the autoclave pressure was adjusted to 1.47 MPa, and the contents were heated to 270 ° C.

次に、オートクレーブ内の圧力を除々に放圧した後、更に減圧して所定の撹拌動力に到達した時点で反応終了とした。反応終了後に窒素にて復圧し、内容物をストランド状に冷却水槽へ導入した後、回転式カッターでペレット化した。
得られたペレットは、１２０℃、１ｔｏｒｒ（０．１３ｋＰａ）の条件で、水分量が０．１％以下となる迄乾燥を行い、ポリアミド樹脂を得た。相対粘度（η_ｒ）は３．５１であった。 Next, after gradually releasing the pressure in the autoclave, the pressure was further reduced and the reaction was terminated when a predetermined stirring power was reached. After completion of the reaction, the pressure was restored with nitrogen, and the contents were introduced into a cooling water tank in the form of a strand and then pelletized with a rotary cutter.
The obtained pellets were dried under the conditions of 120 ° C. and 1 torr (0.13 kPa) until the water content became 0.1% or less to obtain a polyamide resin. The relative viscosity (η _r ) was 3.51.

＜フィルム成形＞
得られたポリアミド樹脂１００重量部に対し、平均粒子径が３．０μｍのタルク０．０３重量部、及びエチレンビスステアリン酸アマイド（花王株式会社製、カオーワックスＥＢ−ＦＦ）０．１重量部をドライブレンドして得たポリアミド樹脂組成物を原料として、押出機シリンダ径４０ｍｍのＴ−ダイ式製膜機を用い、押出機シリンダ設定温度２６０℃、冷却ロール温度９０℃にて、厚み２５μｍのフィルムを製膜した。
製膜開始後、１時間目のフィルムを用い、耐熱性（融点）、滑り性（静止摩擦係数）、Ｆ／Ｅ（フィッシュアイ）の評価を行った。結果を表１に示す。 <Film forming>
For 100 parts by weight of the obtained polyamide resin, 0.03 part by weight of talc having an average particle size of 3.0 μm and 0.1 part by weight of ethylenebisstearic acid amide (Kao Wax EB-FF, manufactured by Kao Corporation) Using a polyamide resin composition obtained by dry blending as a raw material, using a T-die film forming machine having an extruder cylinder diameter of 40 mm, an extruder cylinder set temperature of 260 ° C., a cooling roll temperature of 90 ° C., and a film having a thickness of 25 μm Was formed.
The heat resistance (melting point), slipperiness (coefficient of static friction), and F / E (fish eye) were evaluated using the film for 1 hour after the start of film formation. The results are shown in Table 1.

［実施例２］
実施例１において、カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離（１）にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の１番晶を、カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離（１）にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の２番晶に変更し、それ以外は実施例１と同様の操作により、アミノ酸分析、ポリアミド樹脂の取得（相対粘度（η_ｒ）３．５２）、フィルム成形、及びその評価を行った。
その結果とカダベリン・アジピン酸塩の主な晶析条件を表１に示す。 [Example 2]
In Example 1, the first crystal of cadaverine adipate prepared by purification and isolation (1) of cadaverine adipate was prepared by purification and isolation (1) of cadaverine adipate. By changing to the second crystal of cadaverine adipate, and otherwise performing the same operation as in Example 1, amino acid analysis, acquisition of polyamide resin (relative viscosity (η _r ) 3.52), film molding, and evaluation thereof Went.
The results and the main crystallization conditions of cadaverine adipate are shown in Table 1.

［実施例３］
実施例１において、カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離（１）にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の１番晶を、カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離（１）にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の３番晶に変更し、それ以外は実施例１と同様の操作により、アミノ酸分析、ポリアミド樹脂の取得（相対粘度（η_ｒ）３．５２）、フィルム成形、及びその評価を行った。
その結果とカダベリン・アジピン酸塩の主な晶析条件を表１に示す。 [Example 3]
In Example 1, the first crystal of cadaverine adipate prepared by purification and isolation (1) of cadaverine adipate was prepared by purification and isolation (1) of cadaverine adipate. By changing to the third crystal of cadaverine adipate, and otherwise performing the same operations as in Example 1, amino acid analysis, acquisition of polyamide resin (relative viscosity (η _r ) 3.52), film molding, and evaluation thereof Went.
The results and the main crystallization conditions of cadaverine adipate are shown in Table 1.

［実施例４］
＜ポリアミド樹脂の製造＞
重合終了時の撹拌動力を変更した以外は、実施例１と同様にしてポリアミド樹脂を取得（相対粘度（η_ｒ）２．７２）した。
得られたポリアミド樹脂を用いて、末端アミノ基、末端カルボキシル基を測定して数平均分子量を算出した。結果を表１に示す。 [Example 4]
<Manufacture of polyamide resin>
A polyamide resin was obtained (relative viscosity (η _r ) 2.72) in the same manner as in Example 1 except that the stirring power at the end of the polymerization was changed.
Using the obtained polyamide resin, the terminal amino group and terminal carboxyl group were measured, and the number average molecular weight was calculated. The results are shown in Table 1.

＜スパイラルフロー試験片の成形＞
得られたポリアミド樹脂１００重量部に対し、結晶核剤として平均粒子径３．０μｍのタルク０．０３重量部をドライブレンドして得たポリアミド樹脂組成物を原料として、スパイラルフロー試験片の成形を行った。
成形は、日本製鋼所社製Ｊ７５ＥＩＩ型射出成形機を使用し、樹脂温度２６５℃、金型温度７５℃、射出圧力５０ＭＰａ、スパイラルフロー試験片厚み３ｍｍにて行った。スパイラル流動長を表１に示す。 <Formation of spiral flow test piece>
Using a polyamide resin composition obtained by dry blending 0.03 part by weight of talc having an average particle size of 3.0 μm as a crystal nucleating agent for 100 parts by weight of the obtained polyamide resin, a spiral flow test piece was molded. went.
Molding was performed using a J75EII type injection molding machine manufactured by Nippon Steel, Ltd. at a resin temperature of 265 ° C., a mold temperature of 75 ° C., an injection pressure of 50 MPa, and a spiral flow test piece thickness of 3 mm. Table 1 shows the spiral flow length.

［比較例１］
実施例１において、カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離（１）にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の１番晶を、カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離（２）にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の１番晶に変更し、それ以外は実施例１と同様にして、アミノ酸分析、ポリアミド樹脂の取得（相対粘度（η_ｒ）３．５４）、フィルム成形、及びその評価を行った。
その結果とカダベリン・アジピン酸塩の主な晶析条件を表１に示す。 [Comparative Example 1]
In Example 1, the first crystal of cadaverine adipate prepared by purification and isolation (1) of cadaverine adipate was prepared by purification and isolation (2) of cadaverine adipate. Change to the first crystal of cadaverine adipate, otherwise the same as in Example 1, amino acid analysis, acquisition of polyamide resin (relative viscosity (η _r ) 3.54), film molding, and evaluation thereof went.
The results and the main crystallization conditions of cadaverine adipate are shown in Table 1.

［比較例２］
実施例１において、カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離（１）にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の１番晶を、カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離（２）にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の２番晶に変更し、それ以外は実施例１と同様にして、アミノ酸分析、ポリアミド樹脂の取得（相対粘度（η_ｒ）３．５６）、フィルム成形、及びその評価を行った。
その結果とカダベリン・アジピン酸塩の主な晶析条件を表１に示す。 [Comparative Example 2]
In Example 1, the first crystal of cadaverine adipate prepared by purification and isolation (1) of cadaverine adipate was prepared by purification and isolation (2) of cadaverine adipate. Change to the second crystal of cadaverine adipate, otherwise, in the same manner as in Example 1, amino acid analysis, acquisition of polyamide resin (relative viscosity (η _r ) 3.56), film molding, and evaluation thereof went.
The results and the main crystallization conditions of cadaverine adipate are shown in Table 1.

［比較例３］
＜ポリアミド樹脂の製造＞
重合終了時の撹拌動力を変更した以外は、比較例１と同様にしてポリアミド樹脂を取得（相対粘度（η_ｒ）２．８２）した。得られたポリアミド樹脂を用いて、末端アミノ基、末端カルボキシル基を測定して数平均分子量を算出した。結果を表１に示す。 [Comparative Example 3]
<Manufacture of polyamide resin>
A polyamide resin was obtained (relative viscosity (η _r ) 2.82) in the same manner as in Comparative Example 1 except that the stirring power at the end of the polymerization was changed. Using the obtained polyamide resin, the terminal amino group and terminal carboxyl group were measured, and the number average molecular weight was calculated. The results are shown in Table 1.

＜スパイラルフロー試験片の成形＞
実施例４と同様にして、スパイラルフロー試験片の成形を行った。スパイラル流動長を表１に示す。 <Formation of spiral flow test piece>
In the same manner as in Example 4, a spiral flow test piece was molded. Table 1 shows the spiral flow length.

以上、説明したように、本発明のカダベリン塩は、不純物であるリジン、アルギニン等の３官能以上の有機物含有量が少ない。そのため、これを原料にしてなるポリアミド樹脂は、架橋等によるゲルの発生が少なく、フィルム、射出成形品、繊維、モノフィラメント等に極めて好適に使用することが可能である。具体的には、著しくフィッシュアイが少なく表面外観に優れたポリアミド樹脂フィルム、繊維、モノフィラメントを得る事が可能であり、且つ、射出成形時の流動性が著しく優れるものである。
さらにバイオマス由来の原料を用いることが可能であるため、地球温暖化の防止や循環型社会を形成する上で極めて有効である。 As described above, the cadaverine salt of the present invention has a low content of trifunctional or higher functional organic substances such as lysine and arginine. For this reason, the polyamide resin made from this raw material is less likely to generate gel due to crosslinking or the like, and can be used very suitably for films, injection-molded articles, fibers, monofilaments, and the like. Specifically, it is possible to obtain a polyamide resin film, fibers, and monofilaments that are remarkably free of fish eyes and excellent in surface appearance, and have excellent fluidity during injection molding.
Furthermore, since biomass-derived raw materials can be used, it is extremely effective in preventing global warming and forming a recycling society.

ｃａｄＡのクローニングの手順を説明する図である。It is a figure explaining the procedure of cloning of cadA.

Claims (3)

カダベリン塩水溶液の晶析により得られ、カダベリン塩の晶析率が１０重量％〜３５重量％であり、前記カダベリン塩水溶液中の前記カダベリン塩の濃度が、５０重量％〜６７重量％であることを特徴とするカダベリン塩の製造方法。 Obtained by crystallization of an aqueous solution of cadaverine, the crystallization rate of cadaverine salt is 10% to 35% by weight , and the concentration of the cadaverine salt in the aqueous solution of cadaverine is 50% to 67% by weight A method for producing a cadaverine salt characterized by the above. 前記カダベリン塩水溶液中の前記カダベリン塩が、カダベリン・アジピン酸であることを特徴とする請求項１に記載のカダベリン塩の製造方法。 The method for producing a cadaverine salt according to claim 1 , wherein the cadaverine salt in the aqueous solution of cadaverine is cadaverine adipic acid. カダベリンが、リジンからリジン脱炭酸酵素、リジン脱炭酸酵素活性の向上した組み換え微生物又はリジン脱炭酸酵素を産生する細胞もしくは当該細胞の処理物を用いて得られたものであることを特徴とする請求項１又は２に記載のカダベリン塩の製造方法。 Cadaverine is obtained from lysine using lysine decarboxylase, a recombinant microorganism having improved lysine decarboxylase activity, a cell producing lysine decarboxylase, or a treated product of the cell. Item 3. A method for producing a cadaverine salt according to Item 1 or 2 .

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