JP5589254B2 - カダベリン塩の製造方法 - Google Patents
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Description
また、ポリアミド樹脂はその優れた性能を生かし、繊維やモノフィラメントの分野でも広く用いられている。これらの用途でも、上述のフィルム同様、フィッシュアイは成形時の延伸破断や表面外観の悪化を招くため、その低減が求められている。
即ち、本発明の目的は、カダベリン塩の製造方法を提供することにある。
本実施の形態におけるカダベリンは、例えば、リジン溶液に、同溶液のpHが酵素的脱炭酸反応に適したpHに維持されるように酸を加えながら、リジンの酵素的脱炭酸反応を行うことにより、製造することができる。
ここで用いる酸としては、塩酸、硫酸、リン酸等の無機酸や、酢酸等の有機酸が挙げられる。得られた反応生成液から、通常の分離精製方法を用いて遊離カダベリンを採取することができる。
更には、上記酸としてジカルボン酸を用いて、直接ポリアミドの製造原料となるカダベリン・ジカルボン酸塩を採取することも可能である。
以下に、酸としてアジピン酸を用いて、リジンの酵素的脱炭酸反応により、カダベリン・アジピン酸塩を製造する方法について詳細に説明する。
原料として用いるリジンは、通常、遊離塩基(リジンベース。即ち、遊離リジン。)であることが好ましいが、リジンのアジピン酸塩であってもよい。リジンは、酵素的脱炭酸反応によりカダベリンを生成するものであれば、L−リジン、D−リジンのいずれであってもよいが、通常は入手のしやすさからL−リジンが好ましい。
また、リジンは、精製されたリジンであってもよく、酵素的脱炭酸反応により生成するカダベリンがアジピン酸と塩を形成することが可能であれば、リジンを含む発酵液であってもよい。
このような緩衝液としては、酢酸ナトリウム緩衝液等が挙げられる。但し、カダベリンとアジピン酸との塩を形成させるという点からは、緩衝剤等は用いないか、用いる場合であっても低濃度に抑えることが好ましい。
尚、リジンとして、リジンのアジピン酸塩を用いる場合は、反応液調製時にアジピン酸を加える必要はない。以下、このように、反応液のpHを酵素的脱炭酸反応に適したpHに調整することを、「中和」と称す場合がある。
ビタミンB6を添加する方法には特に制限はない。反応中に適宜添加しても良い。
LDCとしては、リジンに作用してカダベリンを生成させるものであれば特に制限はない。LDCとしては、精製酵素を用いてもよいし、LDCを産生する微生物、植物細胞又は動物細胞等の細胞を用いてもよい。LDC又はそれを産生する細胞は、1種でもよく、2種以上の混合物であってもよい。
また、細胞をそのまま用いてもよく、LDCを含む細胞処理物を用いてもよい。細胞処理物としては、細胞破砕液及びその分画物が挙げられる。
反応温度は、LDCがリジンに作用してカダベリンを生成させる温度であれば特に制限はないが、温度は、通常20℃以上、好ましくは30℃以上で、通常60℃以下、好ましくは40℃以下で行う。
その場合は、反応系のpHが所定の範囲に維持されたまま反応が進行するように、リジン及びアジピン酸をカラムの適当な部位に注入すればよい。
脱色は、脱色剤を充填した塔にカダベリン・アジピン酸塩水溶液を通液する方法や、カダベリン・アジピン酸塩水溶液中に脱色剤を添加、撹拌する方法等が挙げられ、中でも前者が好ましい。
脱塩水量はwetケーキ(若干の水を含んだカダベリン・アジピン酸塩)に対して、通常1重量%以上、好ましくは5重量%以上である。また、通常40重量%以下、好ましくは30重量%以下である。脱塩水量が過度に少ないと洗浄効果が小さくなる傾向となるので好ましくない。脱塩水量が過度に多いと、収率が低下する傾向となるので好ましくない。このようにして得られた結晶を1番晶と称する。
本実施の形態における3官能以上の有機物の一例として、アミノ酸、オリゴ糖、リンゴ酸、クエン酸等が挙げられる。
カダベリン塩中のリジン含有量は常法により測定することができる。例えば、アミノ酸分析計等を用いて測定することができる。
染色体DNA上に多コピー存在する配列としては、レペティティブDNA、転移因子の端部に存在するインバーテッド・リピートが利用できる。或いは、特開平2−109985号公報に開示されているように、目的遺伝子をトランスポゾンに搭載してこれを転移させて染色体DNA上に多コピー導入することも可能である。
また、国際公開第00/18935号パンフレットに開示されているように、遺伝子のプロモーター領域に数塩基の塩基置換を導入し、より強力なものに改変することも可能である。これらのプロモーター置換又は改変によりLDC遺伝子の発現が強化され、LDC活性が上昇する。これら発現調節配列の改変は、遺伝子のコピー数を高めることと組み合わせてもよい。
E.coliのLDC遺伝子としては、cadA遺伝子及びldc遺伝子(米国特許第5,827,698号)が知られているが、これらの中ではcadA遺伝子が好ましい。
このようなプライマーとしては、配列番号1(配列;GTTGCGTGTTCTGCTTCATCGCGCTGATG)及び配列番号2(配列;ACCAAGCTGATGGGTGAGATAGAGAATGAGTAAG)に示す塩基配列を有するプライマーが挙げられる。
E.coli用のベクターとしては、pUC18、pUC19、pSTV29、pHSG299、pHSG399、pHSG398、RSF1010、pBR322、pACYC184、pMW219等が挙げられる。
ここで、「数個」とは、アミノ酸残基のタンパク質の立体構造における位置や種類によっても異なるが、具体的には2個〜50個、好ましくは2個〜30個、より好ましくは2個〜10個である。
また、上記のような改変されたDNAは、従来知られている変異処理によっても取得され得る。変異処理としては、変異処理前のDNAをヒドロキシルアミン等でインビトロ処理する方法、及び変異処理前のDNAを保持する微生物、例えばエシェリヒア属細菌を、紫外線又はN−メチル−N’−ニトロ−N−ニトロソグアニジン(NTG)もしくはエチルメタンスルホン酸(EMS)等の通常変異処理に用いられている変異剤によって処理する方法が挙げられる。
また、変異を有するLDCをコードするDNA又はこれを保持する細胞から、例えば、cadA遺伝子(GenBank accession M76411)のコード領域の配列、又は同配列の一部を有するプローブとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、LDCと同等の活性を有するタンパク質をコードするDNAが得られる。
例えば、培地は、炭素源、窒素源、無機イオン及び必要に応じその他の有機成分を含有する通常の培地でよい。炭素源としては、グルコース、ラクトース、ガラクトース、フラクトース、アラビノース、マルトース、キシロース、トレハロース、リボースや澱粉の加水分解物等の糖類;グリセロール、マンニトールやソルビトール等のアルコール類;グルコン酸、フマール酸、クエン酸やコハク酸等の有機酸類を用いることができる。
有機微量栄養素としては、ビタミンB1等のビタミン類、アデニンやRNA等の核酸類等の要求物質又は酵母エキス等を適量含有させることが望ましい。これらの他に、必要に応じて、リン酸カルシウム、硫酸マグネシウム、鉄イオン、マンガンイオン等が少量添加される。
尚、LDC遺伝子が、誘導可能なプロモーターによって発現が調節されている場合には、誘導剤を培地に添加する。
本実施の形態が適用されるポリアミド樹脂は、カダベリン単位、ジカルボン酸単位を構成成分として含み、本発明の効果を損なわない範囲において、それ以外の共重合成分が含有されていてもよい。
これらの共重合成分は1種を単独で用いてもよく、2種以上を併用してもよい。
本実施の形態が適用されるポリアミド樹脂の製造方法としては、公知の方法が使用でき、具体的には「ポリアミド樹脂ハンドブック」(日刊工業社出版:福本修編)等に開示されている。例えば、ポリアミド56の製造方法としては、カダベリン・アジピン酸塩を、水の共存下で混合し、加熱して脱水反応を進行させる方法(加熱重縮合)が好ましい。
相対粘度(ηr)が過度に低いと、実用的強度が不十分であり、一方、相対粘度(ηr)が過度に高いと、流動性が低下し、成形加工性が損なわれるので好ましくない。
相対粘度(ηr)は、成形性の観点から、フィルム、繊維、モノフィラメント等の押出成形では3.0〜5.5、射出成形では2.0〜3.5が特に好ましい。
このような他の成分としては、例えば、酸化防止剤や熱安定剤(ヒンダードフェノール系、ヒドロキノン系、ホスファイト系及びこれらの置換体、ハロゲン化銅、ヨウ素化合物等);耐候剤(レゾルシノール系、サリシレート系、ベンゾトリアゾール系、ベンゾフェノン系、ヒンダードアミン系等);離型剤及び滑剤(脂肪族アルコール、脂肪族アミド、脂肪族ビスアミド、ビス尿素及びポリエチレンワックス等);顔料(硫化カドミウム、フタロシアニン、カーボンブラック等);染料(ニグロシン、アニリンブラック等);可塑剤(p−オキシ安息香酸オクチル、N−ブチルベンゼンスルホンアミド等);
これらの他の成分は、ドライブレンド又は押出機を用いて溶融混練するのが好ましい。
無機フィラーの配合量としては、ポリアミド樹脂100重量部当り0.005重量部〜0.1重量部が好ましく用いられる。また、離型剤及び/または滑剤は、ポリアミド樹脂100重量部当り0.01重量部〜0.5重量部が好ましく用いられる。
本実施の形態におけるポリアミド樹脂フィルムは、公知の方法で成形することができる。例えば、ポリアミド樹脂に離型剤や滑剤等をドライブレンドしたポリアミド樹脂組成物の溶融体を連続的にT−ダイより押出し、キャスティングロールにて冷却しながらフィルム状に成形するT−ダイ法;環状のダイスより連続的に押出し、水を接触させて冷却する水冷インフレーション法;同じく環状のダイスより押出し、空気によって冷却する空冷インフレーション法等が用いられる。また、これらの成形法で他の材料を同時に押し出す共押出法で多層のフィルムを得ることもできる。
共押出しフィルムについても同様の方法で各層を同時に延伸(共延伸)することができる。尚、延伸倍率は縦方向、横方向とも2倍〜4倍、好ましくは2倍〜3.5倍である。
フィルムがポリアミド樹脂単層フィルムの場合、より好ましくは5μm〜50μm、更に好ましくは10μm〜30μmであり、多層フィルムの場合、ポリアミド樹脂層としての厚みは、より好ましくは2μm〜50μm、更に好ましくは5μm〜30μmである。
本実施の形態では、射出成形方法により、所望の形状に成形されたポリアミド樹脂の射出成形品を得ることができる。
[アミノ酸分析]
日立アミノ酸分析計L−8900を用いて、リジン、アルギニン等のアミノ酸分析を行った。先ず、試料溶液を限外濾過(MWCO 10,000)して、濾液を分析試料とした。分析条件は生体アミノ酸分離条件、分析法はニンヒドリン発色法(570nm、440nm)とした。標準品には和光アミノ酸混合液ANII型及びB型を希釈したものを用い、試料注入量は10μLとした。定量計算として、Proは440nm、他のアミノ酸は570nmのピーク面積から一点外部標準法にてアミノ酸含量を算出した。
試料を98%濃硫酸に溶解して濃度0.01g/mlとし、25℃でオストワルド式粘度計を用いて測定を行い、(試料溶液の落下時間)/(濃硫酸の落下時間)を相対粘度(ηr)とした。
セイコー電子工業製ロボットDSCを用い、窒素雰囲気下、試料約5mgを採取し、次の条件で測定した。
ポリアミド樹脂を完全に融解させて3分間保持した後、20℃/分の降温速度で、30℃まで降温したときに現れる発熱ピークの温度(降温結晶化温度Tc)と、これに続いて、30℃で3分間保持した後、30℃から20℃/分の昇温速度で昇温したときに観測される吸熱ピークの温度(融点Tm)を求めた。吸熱ピークが複数の場合は、最も高い温度を融点Tmとした。
相対湿度65%、温度23℃の条件下、平行移動式により静止摩擦係数を測定した。
ポリアミド樹脂原料を、押出機シリンダー径が30mmφのT−ダイ式製膜機を用いて40μm厚みのポリアミド樹脂フィルムを製膜する。製膜条件は、押出機のシリンダー設定温度が280℃、ポリアミド樹脂フィルムを巻き取る冷却ロール温度が90℃、吐出量が2kg/時である。
面積が900cm2中における、大きさが50μm以上の粒状欠陥をフィッシュアイとし、当該フィッシュアイの数を数えた(単位:個/900cm2)。
(1)末端アミノ基
ポリアミド樹脂の試料0.1g〜2gを正確に秤量し、フェノール50ml中に溶解した後、自動滴定装置(三菱化学株式会社製、GT−06)を用いて0.1N塩酸で滴定し、算出した(単位:eq/g)。
(2)末端カルボキシル基
ポリアミド樹脂の試料0.1g〜2gを正確に秤量し、ベンジルアルコール50ml中に溶解した後、自動滴定装置(三菱化学株式会社製、GT−06)または通常のビュレット型滴定装置を用いて0.1N水酸化ナトリウムで滴定し算出した(単位:eq/g)。
(3)数平均分子量
上記(1)、(2)の方法で求めた末端の総数から次式に従って算出した。
(スパイラルフロー試験片の成形)
日本製鋼所社製J75EII型射出成形機を使用し、樹脂温度265℃、金型温度75℃、射出圧力50MPa、スパイラルフロー試験片厚み3mmにて行った。スパイラルフロー試験片の長さを測定し、スパイラル流動長とした(単位:mm)。
(A)大腸菌DNA抽出
LB培地[組成:トリプトン10g、イーストエキストラクト5g、NaCl 5gを蒸留水1Lに溶解]10mLに、大腸菌(Eschericia coli)JM109株を対数増殖期後期まで培養し、得られた菌体を10mg/mLのリゾチームを含む10mM NaCl/20mM トリス緩衝液(pH8.0)/1mM EDTA・2Na溶液0.15mLに懸濁した。
大腸菌cadAの取得は、上記(A)で調製したDNAを鋳型とし、全ゲノム配列が報告されている大腸菌K12−MG1655株の該遺伝子の配列(GenBank Database Accession No.U00096)を基に設計した合成DNA(配列番号1(配列;GTTGCGTGTTCTGCTTCATCGCGCTGATG)及び配列番号2(配列;ACCAAGCTGATGGGTGAGATAGAGAATGAGTAAG))を用いたPCRによって行った。
鋳型DNA1μL、PfxDNAポリメラーゼ(インビトロジェン社製)0.2μL、1倍濃度添付バッファー、0.3μM各々プライマー、1mMMgSO4、0.25μMdNTPsを混合し、全量を20μLとした。
DNAサーマルサイクラー(MJResearch社製PTC−200)を用い、94℃で20秒間、60℃で20秒間、72℃で2.5分間からなるサイクルを35回繰り返した。但し、1サイクル目の94℃での保温は1分20秒間、最終サイクルの72℃での保温は10分間とした。
図1に示すように、PCR反応終了後、増幅産物をエタノール沈殿により精製した後、制限酵素KpnI及び制限酵素SphIで切断した。このDNA標品を、0.75%アガロース(SeaKem GTG agarose:FMCBioProducts製)ゲル電気泳動により分離後、臭化エチジウム染色により可視化することによりcadAを含む約2.6kbの断片を検出し、QIAQuick Gel Extraction Kit(QIAGEN製)を用いて目的DNA断片の回収を行った。
この様にして得られた組換え大腸菌を50μg/mL アンピシリン、0.2mM IPTG(イソプロピル−β−D−チオガラクトピラノシド)及び50μg/mL X−Galを含むLB寒天培地に塗抹した。
以下の実施例で使用した反応液(カダベリン・アジピン酸塩水溶液)は、cadA増幅株を用い、リジン・アジピン酸塩を原料とし、以下の方法で調製した。
E.coli JM109/pCAD1をLB培地入りフラスコ10本で前培養した後、1Lの培養液を99LのLB培地が入った200L容ジャーファーメンターに接種し、通気量0.5vvm、35℃、250rpmで通気撹拌培養を行った。
培養開始6時間後、この培養液全量を、3m3の2×LB培地が入った5m3容培養タンクに接種して更に培養を行った。5m3容培養タンクでの培養条件は、通気量0.5vvm、35℃であった。撹拌回転数は溶存酸素濃度が十分高い値になるように60rpm〜100rpmの範囲で調節した。培養4時間目に、滅菌したIPTG(イソプロピル−β−D−チオガラクトピラノシド)を終濃度で0.5mMになるように添加し、その後14時間培養を継続した。
6,400rpm、フィード速度750L/hrの条件下で、アルファラバル分離機により培養液からの菌体回収を行った。回収された菌体の湿重量は36.9kgであった。この湿菌体を10mMの酢酸ナトリウム溶液160Lに懸濁した後、15,000rpm、フィード速度1.0L/minの条件下でシャープレス遠心機により再度菌体回収を行い、18.7kgの湿菌体を取得した。
50%(w/v)リジンベース溶液(協和醗酵工業株式会社製)にpHが6.0となるようにアジピン酸を添加して、リジン・アジピン酸塩の濃厚溶液を調製した。リジン濃度で60g/Lとなるように基質溶液(3m3)を作成し、5m3容培養タンクにはり込んだ。ピリドキサルリン酸を0.1mMとなるように基質溶液に添加し、さらにE.coli JM109/pCAD1の菌体をOD660が0.5になるように添加して反応を開始した。
また、リジン濃度318g/Lの基質濃厚溶液(600L)を開始から約130L/hで連続的にフィードし、約4.5時間で全量を添加した。さらに反応を継続して計22時間反応させた。
反応後の溶液(約4m3)は、菌体の不活化処理(80℃、30min)を実施したのち、分子量13,000以上をカットするUF膜モジュールACP−3053(旭化成工業株式会社製)を通して高分子量体の不純物除去を行った。
UF処理による回収率は99.3%であった。以上のようにして、ほぼカダベリンとアジピン酸をほぼ等モル含むカダベリン・アジピン酸塩水溶液を取得した。
(1)活性炭による脱色
直径700mmの活性炭塔に三菱化学カルゴン株式会社製活性炭MM−11(105kg、約440L)を仕込み、2日間脱塩水を通水した。次に、前記カダベリン・アジピン酸塩水溶液(約4m3)を1.32m3/hの速度で通液し、最後に500Lの脱塩水を通水した。初期460Lをパージした後、活性炭処理したカダベリン・アジピン酸塩水溶液を採取した。
活性炭処理前はカダベリン・アジピン酸塩水溶液4076.5kg、含有するカダベリン・アジピン酸塩603.9kgであった。活性炭処理後はカダベリン・アジピン酸塩水溶液5029kg、含有するカダベリン・アジピン酸塩603.7kgであった。
PPプリーツカートリッジフィルターTCP−JXを通して、前記活性炭処理後のカダベリン・アジピン酸塩水溶液を2m3撹拌槽に仕込み、ジャケット温度110℃、内温57℃、真空度140Torr〜150Torrにて濃縮を開始し、適宜、活性炭処理後のカダベリン・アジピン酸塩水溶液を仕込みながら濃縮を行った。
濃縮液の重量は918.4kg、カダベリン・アジピン酸塩濃度は63.5重量%であった。
次に、同一の2m3撹拌槽にて晶析を行った。撹拌翼は3枚後退翼、撹拌速度は40rpm、降温速度は8℃/hである。
内温37.4℃のときに、予め作成したカダベリン・アジピン酸塩を種晶として1kg添加して結晶を析出させ、内温10.5℃で晶析終了として、カダベリン・アジピン酸塩スラリーを得た。尚、種晶としてのカダベリン・アジピン酸塩は、本実施例に準じてラボスケールにて準備した。
直径1.22mの遠心濾過器を用い、前記カダベリン・アジピン酸塩スラリーを3回に分けて遠心濾過した。回転数は980rpm、母液振り切り時間は15分、母液振り切り後に10℃の脱塩水約12kg(脱塩水約12kgは、予想wetケーキ重量の約20重量%分)をシャワー状に振りかけて洗浄し、その脱塩水の振り切り時間は15分間とした。
尚、上記カダベリン・アジピン酸塩重量は、wetケーキの水分量を水分計(三菱化学株式会社製、電量滴定式水分測定装置CA−06型、及び水分気化装置VA−06型)にて測定して算出した。
前記回収した1番母液と1番洗浄水とを2m3撹拌槽に仕込み、1番晶との相違点として以下に示した以外は、前述した(2)濃縮〜(4)遠心濾過と同様の操作により濃縮、晶析、遠心濾過を行った。
2番晶析品としてwetケーキ142.6kg(カダベリン・アジピン酸塩として121.4kg、晶析率30.6重量%)を得た。回収した2番母液は414kg、回収した2番洗浄水は76.3kgであった。
1番晶との相違点として、濃縮工程では、濃縮液の重量は610.5kg、カダベリン・アジピン酸塩濃度は65.0重量%であった。
晶析工程では、内温40℃において、予め作成したカダベリン・アジピン酸塩を種晶として1kg添加して結晶を析出させ、内温10.0℃で晶析を終了した。遠心濾過工程では、カダベリン・アジピン酸塩スラリーを2回に分けて遠心濾過を行い、母液振り切り後に10℃の脱塩水約16kgをシャワー状に振りかけて洗浄した。
前記回収した2番母液と2番洗浄水を、2m3撹拌槽に仕込み、1番晶との相違点として以下に示した以外は、前述した(2)〜(4)と同様の操作により濃縮、晶析、遠心濾過を行った。
3番晶析品としてwetケーキ80.4kg(カダベリン・アジピン酸塩として68.2kg、晶析率24.5重量%)を得た。回収した3番母液と3番洗浄水の合計は418kgであった。
遠心濾過工程では、カダベリン・アジピン酸塩スラリーを2回に分けて遠心濾過を行い、各々母液振り切り後に10℃の脱塩水約10kgをシャワー状に振りかけて洗浄した。
カダベリン・アジピン酸塩水溶液の調製(1)と同様の操作により、カダベリン・アジピン酸塩水溶液(約4m3)を取得した。
カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離(1)の1番晶を得るのと同様の操作を実施しており、相違点のみを以下に示す。
カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離(1)の1番晶を得るのと同様にして、活性炭処理後のカダベリン・アジピン酸塩水溶液5,001kg、含有するカダベリン・アジピン酸塩601.0kgを得た。
カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離(1)の1番晶を得るのと同様にして、濃縮液833.5kgを得た。カダベリン・アジピン酸塩濃度は70.0重量%であった。
カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離(1)の1番晶を得るのと同様にして、内温50℃において、予め作成したカダベリン・アジピン酸塩を種晶として1kg添加して結晶を析出させ、内温11.2℃で晶析終了として、カダベリン・アジピン酸塩スラリーを得た。
カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離(1)の1番晶を得るのと同様にして、前記カダベリン・アジピン酸塩スラリーを5回に分けて遠心濾過した。
1番晶として得られたwetケーキは330.2kg(カダベリン・アジピン酸塩として283.3kg、晶析率48.6重量%)であった。遠心濾過後に回収した1番母液は387.5kg、同じく回収した1番洗浄水は155.8kgであった。
前記回収した1番母液と1番洗浄水を、2m3撹拌槽に仕込み、1番晶との相違点として以下に示した以外は(2)〜(4)と同様にして濃縮、晶析、遠心濾過を行った。2番晶析品としてwetケーキ170.4kg(カダベリン・アジピン酸塩として145.8kg、晶析率45.5重量%)を得た。
<カダベリン・アジピン酸塩の主な晶析条件>
上記カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離(1)にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の1番晶において、晶析前のカダベリン・アジピン酸塩濃度(単位:wt%)、晶析率(単位:%)、晶析回数(単位:回)を表1に示す。
上記カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離(1)にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の1番晶のアミノ酸分析を行った。結果を表1に示す。
上記カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離(1)にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の1番晶25kgに水25kgを添加した後、亜燐酸1.25gを添加し、窒素雰囲気下で混合物を完全に溶解させ、原料水溶液を得た。
プランジャーポンプにて予め窒素置換したオートクレーブに、上記の原料水溶液を移送した。ジャケット温度を280℃に、オートクレーブの圧力を1.47MPaにそれぞれ調節し、内容物を270℃に昇温した。
得られたペレットは、120℃、1torr(0.13kPa)の条件で、水分量が0.1%以下となる迄乾燥を行い、ポリアミド樹脂を得た。相対粘度(ηr)は3.51であった。
得られたポリアミド樹脂100重量部に対し、平均粒子径が3.0μmのタルク0.03重量部、及びエチレンビスステアリン酸アマイド(花王株式会社製、カオーワックスEB−FF)0.1重量部をドライブレンドして得たポリアミド樹脂組成物を原料として、押出機シリンダ径40mmのT−ダイ式製膜機を用い、押出機シリンダ設定温度260℃、冷却ロール温度90℃にて、厚み25μmのフィルムを製膜した。
製膜開始後、1時間目のフィルムを用い、耐熱性(融点)、滑り性(静止摩擦係数)、F/E(フィッシュアイ)の評価を行った。結果を表1に示す。
実施例1において、カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離(1)にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の1番晶を、カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離(1)にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の2番晶に変更し、それ以外は実施例1と同様の操作により、アミノ酸分析、ポリアミド樹脂の取得(相対粘度(ηr)3.52)、フィルム成形、及びその評価を行った。
その結果とカダベリン・アジピン酸塩の主な晶析条件を表1に示す。
実施例1において、カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離(1)にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の1番晶を、カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離(1)にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の3番晶に変更し、それ以外は実施例1と同様の操作により、アミノ酸分析、ポリアミド樹脂の取得(相対粘度(ηr)3.52)、フィルム成形、及びその評価を行った。
その結果とカダベリン・アジピン酸塩の主な晶析条件を表1に示す。
<ポリアミド樹脂の製造>
重合終了時の撹拌動力を変更した以外は、実施例1と同様にしてポリアミド樹脂を取得(相対粘度(ηr)2.72)した。
得られたポリアミド樹脂を用いて、末端アミノ基、末端カルボキシル基を測定して数平均分子量を算出した。結果を表1に示す。
得られたポリアミド樹脂100重量部に対し、結晶核剤として平均粒子径3.0μmのタルク0.03重量部をドライブレンドして得たポリアミド樹脂組成物を原料として、スパイラルフロー試験片の成形を行った。
成形は、日本製鋼所社製J75EII型射出成形機を使用し、樹脂温度265℃、金型温度75℃、射出圧力50MPa、スパイラルフロー試験片厚み3mmにて行った。スパイラル流動長を表1に示す。
実施例1において、カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離(1)にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の1番晶を、カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離(2)にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の1番晶に変更し、それ以外は実施例1と同様にして、アミノ酸分析、ポリアミド樹脂の取得(相対粘度(ηr)3.54)、フィルム成形、及びその評価を行った。
その結果とカダベリン・アジピン酸塩の主な晶析条件を表1に示す。
実施例1において、カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離(1)にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の1番晶を、カダベリン・アジピン酸塩の精製・単離(2)にて調製したカダベリン・アジピン酸塩の2番晶に変更し、それ以外は実施例1と同様にして、アミノ酸分析、ポリアミド樹脂の取得(相対粘度(ηr)3.56)、フィルム成形、及びその評価を行った。
その結果とカダベリン・アジピン酸塩の主な晶析条件を表1に示す。
<ポリアミド樹脂の製造>
重合終了時の撹拌動力を変更した以外は、比較例1と同様にしてポリアミド樹脂を取得(相対粘度(ηr)2.82)した。得られたポリアミド樹脂を用いて、末端アミノ基、末端カルボキシル基を測定して数平均分子量を算出した。結果を表1に示す。
実施例4と同様にして、スパイラルフロー試験片の成形を行った。スパイラル流動長を表1に示す。
さらにバイオマス由来の原料を用いることが可能であるため、地球温暖化の防止や循環型社会を形成する上で極めて有効である。
Claims (3)
- カダベリン塩水溶液の晶析により得られ、カダベリン塩の晶析率が10重量%〜35重量%であり、前記カダベリン塩水溶液中の前記カダベリン塩の濃度が、50重量%〜67重量%であることを特徴とするカダベリン塩の製造方法。
- 前記カダベリン塩水溶液中の前記カダベリン塩が、カダベリン・アジピン酸であることを特徴とする請求項1に記載のカダベリン塩の製造方法。
- カダベリンが、リジンからリジン脱炭酸酵素、リジン脱炭酸酵素活性の向上した組み換え微生物又はリジン脱炭酸酵素を産生する細胞もしくは当該細胞の処理物を用いて得られたものであることを特徴とする請求項1又は2に記載のカダベリン塩の製造方法。
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