JP2022513671A

JP2022513671A - Ｃｄ４０抗体医薬品組成物およびその使用

Info

Publication number: JP2022513671A
Application number: JP2021530920A
Authority: JP
Inventors: 健健 ▲楊▼; 皓李; 洵 ▲劉▼; 家▲ファ▼ ▲蒋▼
Original assignee: Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd; Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd; Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2018-11-30
Filing date: 2019-11-29
Publication date: 2022-02-09
Also published as: TW202021620A; KR20210097750A; AU2019388931A1; EP3939998A1; BR112021010414A2; CN112839961A; WO2020108621A1; MX2021006360A; CA3121291A1; CN112839961B; EP3939998A4

Abstract

本発明は、ＣＤ４０抗体とその抗原結合フラグメントと、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液とを含む医薬組成物、ならびにその使用を提供する。前記医薬組成物は、糖、非イオン性界面活性剤、およびその他の賦形剤をさらに含み得る。本発明の医薬組成物は、良好な抗体安定性を示す。

Description

本発明は、中国特許出願ＣＮ２０１８１８１１４４８２３８．５（２０１８年１１月３０日出願）の優先権を主張し、その内容は、その全体が本明細書に組み込まれる。

〔技術分野〕
本開示は、医薬調製物の分野に関し、具体的には、ＣＤ４０抗体とその抗原結合フラグメントとを含む医薬組成物、ならびにその医薬品としての使用に関する。

細胞表面に発現する糖タンパク質の一つであるＣＤ４０は、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーに属し、免疫系において重要な役割を果たす分子量４８ｋＤａのＩ型膜内在性糖タンパク質である。それは、Ｂ細胞、樹状細胞、単球、およびマクロファージなどの様々な免疫細胞で発現される。シグナル伝達がＣＤ４０により介在されると、特殊な抗原提示細胞が活性化される。ＣＤ４０の天然リガンドは、ＣＤ１５４またはＣＤ４０Ｌと呼ばれ、成熟Ｔリンパ球で主に発現されることが知られている。ＣＤ４０Ｌを介したシグナル伝達は、免疫細胞の活性化および増殖、ならびにサイトカインおよびケモカインの産生を含む、多くの細胞生物学的事象を誘発し得る。ＣＤ４０シグナル伝達は、特に腫瘍環境の状況において、Ｔ細胞依存性の免疫応答にとって極めて重要であり、ここで、ＣＤ４０刺激樹状細胞は、腫瘍細胞を根絶する能力を有する腫瘍特異的エフェクターＴ細胞を活性化できる。

ＣＤ４０の発現は、Ｂリンパ球を含む様々な正常細胞や腫瘍細胞で確認されている。例えば、黒色腫はＣＤ４０を発現する腫瘍の一つであり、固形腫瘍の３０％～７０％もＣＤ４０を発現する。ＣＤ４０の活性化は、腫瘍特異的Ｔ細胞応答の免疫活性化、ＣＤ４０陽性腫瘍の直接的なアポトーシス、および刺激によって引き起こされるＡＤＣＣの体液性反応を含む、抗腫瘍応答を効果的に誘発することが知られている（Ｔｏｎｇら，ＣａｎｃｅｒＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ，２００３，１０：１－１３）。さらに、観察された腫瘍根絶は、腫瘍特異的細胞傷害性Ｔリンパ球の発生と強く関連している。一方で、ＣＤ４０抗体の全身投与は、一般的にショック症候群およびサイトカイン放出症候群などの様々な副作用を伴うことも無視するべきではない（ｖａｎＭｉｅｒｌｏら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ１．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００２，９９：５５６１－５５６６）。

現在、多くの国際的な製薬会社が、免疫活性化を特異的に刺激し、腫瘍に対する患者自身の免疫系応答を最大化し、それによって腫瘍細胞を死滅させるという目的を達成する、ＣＤ４０に対するモノクローナル抗体を開発している。関連特許には、ＣＮ１１９８６４７、ＣＮ１３６９０１５、ＣＮ１５８２１６５、ＣＮ１００４３０４１９、ＣＮ１０１０１４３８６、ＣＮ１０１２３７８８２、ＣＮ１０１２８９５１０、ＣＮ１０１４９００８６、ＣＮ１０３８４２３８２、ＣＮ１０４９１８９５７、ＷＯ２００２０２８９０４、ＷＯ２０１１１２３４８９、ＷＯ２０１２１４９３５６、ＷＯ２０１３０３４９０４、ＷＯ２０１５０９１８５３、ＷＯ２０１６１９６３１４、ＷＯ２０１７０４０９３２、ＷＯ２０１７００４００６等がある。これまでに、Ｐｆｉｚｅｒ（関連製品はＲｏｃｈｅにライセンス供与されている）、Ａｌｌｉｇａｔｏｒおよびその他の会社の抗ＣＤ４０抗体では、前臨床動物モデルで良好な腫瘍死滅効果が観察されている。

ＷＯ２０１８２１９３２７（ＰＣＴ/ＣＮ２０１８/０８９２５２）には、ＣＤ４０抗体を刺激して使用するための、高親和性、高選択性、および高生物学的活性を有する抗ＣＤ４０抗体が記載されている。

しかし、分子量が大きく、複雑な構造を有する抗体製剤は、分解、重合、または望ましくない化学修飾を受ける傾向があるため、不安定になることがある。前記抗体を投与に適したものとし、保存中およびその後の使用中に安定性とより優れた性能とを前記抗体に維持させるためには、抗体製剤の安定した調製に関する研究が非常に重要である。ＣＤ４０抗体の調製に関する特許の一例として、ＷＯ２００５０６３２８９がある。

中国特許出願公開第１１９８６４７号中国特許出願公開第１３６９０１５号中国特許出願公開第１５８２１６５号中国特許出願公開第１００４３０４１９号中国特許出願公開第１０１０１４３８６号中国特許出願公開第１０１２３７８８２号中国特許出願公開第１０１２８９５１０号中国特許出願公開第１０１４９００８６号中国特許出願公開第１０３８４２３８２号中国特許出願公開第１０４９１８９５７号国際公開第２００２０２８９０４号国際公開第２０１１１２３４８９号国際公開第２０１２１４９３５６号国際公開第２０１３０３４９０４号国際公開第２０１５０９１８５３号国際公開第２０１６１９６３１４号国際公開第２０１７０４０９３２号国際公開第２０１７００４００６号国際公開第２０１８２１９３２７号国際公開第２００５０６３２８９号

Ｔｏｎｇら，ＣａｎｃｅｒＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ，２００３，１０：１－１３ｖａｎＭｉｅｒｌｏら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ１．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００２，９９：５５６１－５５６６

新規のＣＤ４０抗体については、より投与に適したＣＤ４０を含む医薬組成物（調製物）の開発が依然として求められている。

（本発明の内容）
本開示は、ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと、緩衝液とを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、前記緩衝液は、酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液およびコハク酸緩衝液から選択され、好ましくは酢酸緩衝液、より好ましくは酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液である。

別の実施形態において、前記医薬組成物におけるＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６、配列番号７および配列番号８でそれぞれ示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３、ならびに、配列番号３、配列番号４および配列番号５でそれぞれ示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。

別の実施形態において、前記医薬組成物におけるＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１ｍｇ／ｍｌ～１２０ｍｇ／ｍｌの濃度を有し、これは、約１ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１２ｍｇ／ｍｌ、１４ｍｇ／ｍｌ、１６ｍｇ／ｍｌ、１８ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２２ｍｇ／ｍｌ、２４ｍｇ／ｍｌ、２６ｍｇ／ｍｌ、２８ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍl、３５ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、４５ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、５５ｍｇ／ｍｌ、６０ｍｇ／ｍｌ、６５ｍｇ／ｍｌ、７０ｍｇ／ｍｌ、７５ｍｇ／ｍｌ、８０ｍｇ／ｍｌ、８５ｍｇ／ｍｌ、９０ｍｇ／ｍｌ、９５ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、１０５ｍｇ／ｍｌ、１１０ｍｇ／ｍｌ、１１５ｍｇ／ｍｌ、１２０ｍｇ／ｍｌ、または任意の２つの値の間の任意の値であり得、好ましくは１０ｍｇ／ｍｌ～４０ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約２５ｍｇ／ｍｌである。

別の実施形態において、前記緩衝液は、約５ｍＭから３０ｍＭ、好ましくは約１０ｍＭから２０ｍＭの濃度を有し、非限定的な例として、約１０ｍＭ、１２ｍＭ、１４ｍＭ、１６ｍＭ、１８ｍＭ、２０ｍＭ、または任意の２つの値の間の任意の値であり得、最も好ましくは約１０ｍＭである。

別の実施形態において、前記医薬組成物における前記緩衝液は、約４．５～６．５、好ましくは約５．０～６．０のｐＨを有し、非限定的な実施形態において、それは、約５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、または任意の２つの値の間の任意の値であり得、最も好ましくは約５．０または５．５である。

別の実施形態において、前記医薬組成物は、糖をさらに含む。本開示における「糖」は、単糖類、二糖類、三糖類、多糖類、糖アルコール、還元糖、非還元糖などを含む、従来の組成物（ＣＨ_２Ｏ）ｎおよびその誘導体を含む。本開示における「糖」は、グルコース、スクロース、トレハロース、ラクトース、フルクトース、マルトース、デキストラン、グリセリン、エリスリトール、グリセロール、アラビトール、シリトール、ソルビトール、マンニトール、メリビオース、メレジトース、ラフィノース、マンノトリオース、スタキオース、マルトース、ラクツロース、マルツロース、ソルビトール、マルチトール、ラクチトール、イソマルツロースなどから選択され得る。好ましい糖は、非還元二糖類であり、より好ましくはトレハロースおよびスクロースである。

別の実施形態において、前記医薬組成物における前記糖は、約４０ｍｇ／ｍｌ～９５ｍｇ／ｍｌ（例えば、５５ｍｇ／ｍｌ）、好ましくは約６０ｍｇ／ｍｌ～９０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。非限定的な例における糖の濃度は、６０ｍｇ／ｍｌ、６５ｍｇ／ｍｌ、７０ｍｇ／ｍｌ、７５ｍｇ／ｍｌ、８０ｍｇ／ｍｌ、８５ｍｇ／ｍｌ、９０ｍｇ／ｍｌ、または任意の２つの値の間の任意の値を含み、より好ましくは約８０ｍｇ／ｍｌである。

別の実施形態において、前記医薬組成物は、ポリソルベート２０；ポリソルベート８０；ポロキサマー；Ｔｒｉｔｏｎ；ドデシルスルホン酸ナトリウム；ラウリルスルホン酸ナトリウム；オクチルグリコシドナトリウム；ラウリル－、ミリスチル－、リノレイル－、ステアリル－スルホベタイン；ラウリル－、ミリスチル－、リノレイル－、ステアリル－サルコシン；リノレイル－、ミリスチル－、セチル－ベタイン；ラウロアミドプロピル－、コカミド（ｃｏｃａａｍｉｄｅ）プロピル－、リノールアミドプロピル－、ミリスタミドプロピルプロピル－、パームアミドプロピル－、イソステアラミドプロピル－ベタイン；ミリスタミドプロピル－、パームアミドプロピル－、イソステアラミドプロピル－ジメチルアミン；メチルココイルナトリウム；メチルオレイルタウリン酸ナトリウム；ポリエチレングリコールのコポリマー；ポリプロピレングリコールのコポリマー；エチレングリコールのコポリマーおよびプロピレングリコールのコポリマーなどから選択され得る界面活性剤を、さらに含む。好ましい界面活性剤は、ポリソルベート８０またはポリソルベート２０などのポリソルベート類であり、より好ましくはポリソルベート８０である。

別の実施形態において、前記医薬組成物における界面活性剤は、約０．０２ｍｇ／ｍｌ～０．８ｍｇ／ｍｌ（例えば、０．１ｍｇ／ｍｌ）、好ましくは約０．３ｍｇ／ｍｌ～０．６ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。非限定的な例における前記界面活性剤の濃度は、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．３５ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、０．４５ｍｇ／ｍｌ、０.５ｍｇ／ｍｌ、０．５５ｍｇ／ｍｌ、０．６ｍｇ／ｍｌ、または任意の２つの値の間の任意の値、より好ましくは約０．４ｍｇ／ｍｌを含む。

別の実施形態において、前記医薬組成物は、
（ａ）１～１２０ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号６、配列番号７および配列番号８でそれぞれ示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３、ならびに配列番号３、配列番号４および配列番号５でそれぞれ示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有する、ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと、
（ｂ）５～３０ｍＭの酢酸緩衝液と、を含む。

別の実施形態において、前記医薬組成物は、
（ａ）１～１２０ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号６、配列番号７および配列番号８でそれぞれ示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３、ならびに配列番号３、配列番号４および配列番号５でそれぞれ示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有する、ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと、
（ｂ）５～３０ｍＭの酢酸緩衝液と、
（ｃ）４０～９０ｍｇ／ｍｌのスクロースと、
（ｄ）０．０２～０．８ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０と、を含み、好ましくは、前記医薬組成物は、４．５～６．５のｐＨ、より好ましくは５．０～６．０のｐＨ、さらに好ましくは５．５のｐＨを有する。

別の実施形態において、前記医薬組成物は、
（ａ）１～１２０ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号６、配列番号７および配列番号８でそれぞれ示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３、ならびに配列番号３、配列番号４および配列番号５でそれぞれ示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有する、ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと、
（ｂ）５～３０ｍＭの酢酸緩衝液と、
（ｃ）４０～９５ｍｇ／ｍｌのトレハロースと、
（ｄ）０．０２～０．８ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０と、を含み、好ましくは、前記医薬組成物は、４．５～６．５のｐＨ、より好ましくは５．０～６．０のｐＨ、さらに好ましくは５．５のｐＨを有する。

医薬組成物は、
（ａ）１～１２０ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号６、配列番号７および配列番号８でそれぞれ示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３、ならびに配列番号３、配列番号４および配列番号５でそれぞれ示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有する、ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと、
（ｂ）１０～２０ｍＭの酢酸緩衝液と、を含み、前記医薬組成物は、５．０～５．５のｐＨを有する。

別の実施形態において、前記医薬組成物は、
（ａ）１０～４０ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号６、配列番号７および配列番号８でそれぞれ示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３、ならびに配列番号３、配列番号４および配列番号５でそれぞれ示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有する、ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと、
（ｂ）１０～２０ｍＭの酢酸緩衝液と、
（ｃ）６０～９０ｍｇ／ｍｌのスクロースと、
（ｄ）０．３～０．８ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０と、を含み、好ましくは、前記医薬組成物は、５．０～６．０のｐＨを有する。

別の実施形態において、前記医薬組成物は、
（ａ）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが、それぞれ配列番号６、配列番号７および配列番号８で示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を有し、それぞれ配列番号３、配列番号４および配列番号５で示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有する、ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと、
（ｂ）１０～２０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液と、
（ｃ）６０～９０ｍｇ／ｍｌのスクロースと、
（ｄ）０．３～０．８ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０と、を含み、好ましくは、前記医薬組成物は、５．０～６．０のｐＨを有する。

特定の実施形態において、前記医薬組成物は、
２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、および１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸（ｐＨ５．５）；
２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、および１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸（ｐＨ５．８）；
２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、および１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸（ｐＨ６．０）；
２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、および１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸（ｐＨ５．６）；
２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、および１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸（ｐＨ５．８）；
２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、および１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸（ｐＨ６．０）；
２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、および１０ｍＭのヒスチジン－酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）；
２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、および１０ｍＭのヒスチジン－酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）；
２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、および１０ｍＭのヒスチジン－酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）；
２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、および１０ｍＭのヒスチジン－酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）；
２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、および１０ｍＭのヒスチジン－酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）；
２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、および１０ｍＭのヒスチジン－酢酸緩衝液（ｐＨ５．８）；
２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、および１０ｍＭのヒスチジン－酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）；
２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、および１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）；または、
２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、および１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）、を含む。

上記の特定の実施形態において、前記ＣＤ４０抗体は、配列番号６、配列番号７および配列番号８でそれぞれ示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３と、配列番号３、配列番号４および配列番号５でそれぞれ示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３とを有する。

いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１に示される重鎖可変領域と、配列番号２に示される軽鎖可変領域とを有する。

ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＤＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＩＬＴＴＹＷＩＴＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＨＰＧＳＧＳＴＫＹＮＥＫＦＫＳＫＡＴＬＴＶＤＴＳＳＳＴＡＹＭＱＬＴＲＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号１

ＤＶＬＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＳＱＮＩＶＮＳＱＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＥＳＰＫＬＬＩＹＫＶＴＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＡＳＬＶＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号２

別の実施形態では、前記医薬組成物における抗原結合フラグメントの抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、およびヒト化抗体、好ましくはヒト化抗体から選択され得る。

別の実施形態では、前記医薬組成物におけるヒト化抗体の軽鎖可変領域上の軽鎖ＦＲおよび重鎖可変領域上の重鎖ＦＲはそれぞれ、ヒト生殖細胞の軽鎖および重鎖、またはそれらの突然変異配列に由来する。

また、ヒト化ＣＤ４０抗体の重鎖は、配列番号１７で示される配列またはその変異体を有し、その変異体は、好ましくは、重鎖可変領域に０～１０個のアミノ酸変異を有し、より好ましくは、アミノ酸の６位および８位に突然変異を有し、前記アミノ酸は、好ましくはＩ、ＡまたはＬに突然変異している。前記ヒト化抗体の軽鎖は、配列番号１８で示される配列またはその変異体を有し、その変異体は、好ましくは、軽鎖可変領域に０～１０個のアミノ酸変異を有し、より好ましくはアミノ酸位置２および３に突然変異を有し、前記アミノ酸は、好ましくはＩ、Ｖ、またはＬに突然変異している。

別の実施形態では、ヒト化ＣＤ４０抗体の重鎖可変領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４またはその変異体の重鎖ＦＲをさらに含み、好ましくはヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４の重鎖ＦＲを含み、より好ましくはヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ２の重鎖ＦＲを含む。

別の実施形態では、前記ＣＤ４０抗体の前記軽鎖のアミノ酸配列は、ｈｕ９Ｅ５抗体軽鎖のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。前記抗体の前記重鎖のアミノ酸配列は、ｈｕ９Ｅ５抗体重鎖のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有し、ｈｕ９Ｅ５抗体軽鎖の配列は、配列番号１８に示され、ｈｕ９Ｅ５抗体重鎖の配列は、配列番号１７に示されている。

ｈｕ９Ｅ５ＨＣ：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＩＬＴＴＹＷＩＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＤＩＨＰＧＳＧＳＴＫＹＮＥＫＦＫＳＲＶＴＬＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１７

ｈｕ９Ｅ５ＬＣ：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＮＩＶＮＳＱＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＴＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＡＳＬＶＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１８

本開示の医薬組成物は、十分な薬物安定性を有し、長期にわたって安定的に保存することができる。一方で、薬物輸送の利便性のために、本開示の医薬組成物は、さらに凍結乾燥調製物にすることができる。

また、本開示は、ＣＤ４０抗体を含む凍結乾燥調製物を調製する方法であって、上記で定義した医薬組成物を凍結乾燥するステップを含む方法を提供する。

別の実施形態では、ＣＤ４０抗体を含む調製物を調製する方法において、前記凍結乾燥は、順次、予備凍結乾燥、一次乾燥および二次乾燥するステップを含む。

本開示は、上記で定義されたＣＤ４０抗体を含む凍結乾燥調製物を調製する方法によって調製される、ＣＤ４０抗体を含む凍結乾燥調製物も提供する。

いくつかの実施形態では、前記凍結乾燥調製物は、２～８℃で少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、または少なくとも２４ヶ月間安定している。

いくつかの実施形態では、前記凍結乾燥調製物は、２５℃で少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、または少なくとも２４ヶ月安定している。

いくつかの実施形態では、前記凍結乾燥調製物は、４０℃で少なくとも７日間、少なくとも１４日間、または少なくとも２８日間安定である。

本開示はまた、ＣＤ４０抗体を含む凍結乾燥調製物の再構成（ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ）溶液を調製する方法であって、前記方法が、上記で定義された凍結乾燥調製物を再構成するステップを含み、再構成に使用される溶液が、注射用水、生理的食塩水またはグルコース溶液から選択されるがこれらに限定されない、方法を提供する。

本開示はまた、上記で定義したＣＤ４０抗体を含む凍結乾燥調製物の再構成溶液を調製する方法によって調製される、ＣＤ４０抗体を含む凍結乾燥調製物の再構成溶液を提供する。

本開示はさらに、本明細書に記載の任意の安定した医薬組成物を含む容器を含む製品またはキットを提供する。いくつかの実施形態では、ガラスボトルは、中性ホウケイ酸ガラス管で作られた注射用バイアルである。

本開示はまた、ＣＤ４０関連の疾患または症状の治療のための医薬品の調製における、上記で定義された医薬組成物、凍結乾燥調製物、または凍結乾燥調製物の再構成溶液の使用を提供し、ここで、前記疾患または症状は、好ましくは、癌であり、前記癌は、リンパ腫、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、胃癌、結腸直腸癌、膀胱癌、横紋筋肉腫、食道癌、子宮頸癌、多発性骨髄腫、白血病、胆嚢癌、神経膠芽腫および黒色腫から選択される。

本開示はまた、ＣＤ４０関連の疾患または症状を治療および予防するための方法であって、治療有効量の、上記で定義した医薬組成物、凍結乾燥調製物、または凍結乾燥調製物の再構成溶液を、治療を必要とする患者に投与することを含む、方法を提供する。ここで、前記疾患または症状は、好ましくは癌であり、前記癌は、リンパ腫、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、胃癌、結腸直腸癌、膀胱癌、横紋筋肉腫、食道癌、子宮頸癌、多発性骨髄腫、白血病、胆嚢癌、神経膠芽腫および黒色腫から選択される。

本開示はまた、容器を含む製品を提供し、前記容器は、上記で定義した医薬組成物、凍結乾燥調製物、または凍結乾燥調製物の再構成溶液を含む。

本明細書に記載された様々な実施形態の特徴の１つ、いくつか、またはすべてを組み合わせて、本開示の他の実施形態を形成することができることを理解されたい。本開示のこれらおよび他の態様は、当業者には明らかであろう。本開示のこれらのおよび他の実施形態は、以下の詳細な説明でさらに説明される。

（好ましい実施形態の詳細な説明）
１．定義

当業者が本開示を理解しやすくするために、特定の技術用語および科学用語を以下に具体的に定義する。本明細書の他の箇所で明確に定義されていない限り、本明細書で使用される他のすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。

「緩衝液」とは、その酸塩基共役成分の作用により、ｐＨの変化に抵抗できる緩衝液を指す。ｐＨを適切な範囲に制御する緩衝液の例としては、酢酸塩緩衝液、コハク酸塩緩衝液、グルコン酸塩緩衝液、ヒスチジン緩衝液、シュウ酸塩緩衝液、乳酸塩緩衝液、リン酸塩緩衝液、クエン酸塩緩衝液、酒石酸塩緩衝液、フマル酸塩緩衝液、グリシルグリシン緩衝液、およびその他の有機酸緩衝液などが挙げられる。

「ヒスチジン緩衝液」とは、ヒスチジンイオンを含む緩衝液のことである。ヒスチジン緩衝液の例としては、ヒスチジン塩酸緩衝液、ヒスチジン酢酸塩緩衝液、ヒスチジンリン酸塩緩衝液、ヒスチジン硫酸塩緩衝液等が挙げられ、好ましくはヒスチジン－塩酸緩衝液である。前記ヒスチジン－塩酸緩衝液は、ヒスチジンと塩酸とから、またはヒスチジンと塩酸ヒスチジンとから調製される。

「クエン酸緩衝液」とは、クエン酸イオンを含む緩衝液のことである。クエン酸緩衝液の例としては、クエン酸－クエン酸ナトリウム緩衝液、クエン酸－クエン酸カリウム、クエン酸－クエン酸カルシウム、クエン酸－クエン酸マグネシウムなどが挙げられる。好ましいクエン酸緩衝液は、クエン酸－クエン酸ナトリウム緩衝液である。

「コハク酸緩衝液」とは、コハク酸イオンを含む緩衝液のことである。前記コハク酸緩衝液の例としては、コハク酸－ナトリウム緩衝液、コハク酸－カリウム緩衝液、コハク酸－カルシウム緩衝液などが挙げられる。好ましいコハク酸緩衝液は、コハク酸－ナトリウム緩衝液である。

「リン酸緩衝液」とは、リン酸イオンを含む緩衝液のことである。前記リン酸塩緩衝液の例としては、リン酸水素二ナトリウム－リン酸二水素ナトリウム緩衝液、リン酸水素二ナトリウム－リン酸二水素カリウム緩衝液などが挙げられる。好ましいリン酸塩緩衝液は、リン酸水素二ナトリウム－リン酸二水素ナトリウム緩衝液である。

「酢酸緩衝液」とは、酢酸イオンを含む緩衝液のことである。酢酸緩衝液の例としては、酢酸-酢酸ナトリウム緩衝液、酢酸－ヒスチジン緩衝液、酢酸-酢酸カリウム緩衝液、酢酸－酢酸カルシウム緩衝液、酢酸－酢酸マグネシウム緩衝液などが挙げられる。好ましい酢酸緩衝液は、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液である。

「医薬組成物」とは、本明細書に記載されている１つ以上の化合物またはその生理学的／薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグと、生理学的／薬学的に許容される担体や賦形剤などの他の化学成分と、を含む混合物を意味する。前記医薬組成物の目的は、生体への投与を促進し、活性成分の吸収を容易にして、その生物学的活性を発揮させることにある。この文脈において、「医薬組成物」と「調製物」とは相互に排他的ではない。

本開示に記載された医薬組成物の溶液形態において、特に指定されない限り、そこに含まれる溶媒は水である。

「凍結乾燥調製物」とは、液状もしくは溶液状の医薬組成物または溶液調製物を真空凍結乾燥して得られる調製物または医薬組成物をいう。

本明細書で使用される「約」という用語は、指標値が当業者によって決定された特定の値の許容誤差範囲内にあることを意味し、その値は部分的に測定または決定の方法（すなわち、測定システムの限界）に依存する。例えば、「約」は、当技術分野のあらゆる実務において、１以内または１超の標準偏差を意味し得る。あるいは、「約」または「実質的に含む」は、２０％までの範囲を意味し得る。さらに、特に生物学的システムまたはプロセスの場合、この用語は、最大で１桁の値または最大で５倍の値を意味し得る。特に明記しない限り、本出願および特許請求の範囲に特定の値が記載される場合、「約」または「実質的に含む」の意味は、特定の値の許容誤差範囲内であると想定されるべきである。

本開示に記載の医薬組成物は、安定した効果を達成することができる。そこに含まれる抗体は、保存後にその物理的安定性および／または化学的安定性および／または生物学的活性を実質的に保持する。好ましくは、前記医薬組成物は、保存後にその物理的安定性、化学的安定性および生物学的活性を保持する。前記保存期間は、通常、前記医薬組成物の所定の保存期間に基づいて選択される。タンパク質の安定性を測定するために、選択された温度で、選択された期間保存した後の安定性を測定することができる様々な分析技術がある。

安定な医薬用抗体調製物とは、冷蔵保存温度（２～８℃）で少なくとも３ヶ月、好ましくは６ヶ月、より好ましくは１年、さらに好ましくは２年まで保存しても、著しい変化が認められない調製物をいう。さらに、安定な液体調製物には、２５℃で１ヶ月、３ヶ月または６ヶ月の保存、または４０℃で１ヶ月の保存を含む一定期間後に所望の特性を示す液体調製物が含まれる。安定性の典型的な許容基準は以下の通りである：通常は、ＳＥＣ－ＨＰＬＣで測定して約１０％以下、好ましくは約５％以下の抗体モノマーが分解される。視覚分析による判定では、前記医薬抗体調製物は無色または透明からわずかに乳白色である。前記調製物の濃度、ｐＨ、浸透圧は、±１０％以下の変動である。約１０％以下、好ましくは約５％以下のトランケーションが一般に観察され、約１０％以下、好ましくは約５％以下の凝集体が一般に形成される。

色および／または透明度の目視検査、あるいはＵＶ光散乱、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）および動的光散乱（ＤＬＳ）による測定の後、前記抗体が凝集、沈殿および／または変性の有意な増加を示さない場合、前記抗体は医薬調製物中で「その物理的安定性を維持」している。タンパク質のコンフォメーションの変化は、蛍光分光法（タンパク質の三次構造を決定する）およびＦＴＩＲ分光法（タンパク質の二次構造を決定する）によって評価することができる。

抗体が有意な化学変化を示さない場合、その抗体は医薬調製物中で「化学的安定性を保持」している。化学的安定性は、化学的に変化した形態のタンパク質を検出し定量することで評価することができる。タンパク質の化学構造をしばしば変化させる分解プロセスには、加水分解またはトランケーション（サイズ排除クロマトグラフィーおよびＳＤＳ－ＰＡＧＥなどの方法で評価）、酸化（質量分析またはＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ／ＭＳと組み合わせたペプチドマッピングなどの方法で評価）、脱アミド化（イオン交換クロマトグラフィー、キャピラリー等電点電気泳動、ペプチドマッピング、イソアスパラギン酸測定などの方法で評価）、および異性化（イソアスパラギン酸含量測定、ペプチドマッピングなどの測定によって評価）が挙げられる。

ある時点での前記抗体の生物学的活性が、前記医薬調製物が調製されるときに示される生物学的活性の所定の範囲内である場合、前記抗体は前記医薬調製物中に「その生物学的活性を保持している」。抗体の生物学的活性は、例えば、抗原結合アッセイによって決定され得る。

「ＣＤ４０」という用語は、ＴＮＦＲＳＦ５としても知られるＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである細胞表面受容体を指す。ＣＤ４０は、樹状細胞、Ｂ細胞、およびマクロファージの表面に遍在的に発現しており、Ｔ細胞免疫の生成および維持に必要な分子である。「ＣＤ４０」という用語は、細胞によって自然に発現されるＣＤ４０の任意の変異体またはアイソフォームを含む。本開示の抗体は、非ヒト種由来のＣＤ４０と交差反応し得る。あるいは、前記抗体は、ヒトＣＤ４０特異的であってもよく、他の種との交差反応性を示さなくてもよい。ＣＤ４０、またはその任意の変異体もしくはアイソフォームは、それらが天然に発現している細胞もしくは組織から単離され得るか、または当技術分野で一般的であり、本明細書に記載されている技術を使用する組換え技術によって産生され得る。好ましくは、前記抗ＣＤ４０抗体は、正常なグリコシル化パターンを有するヒトＣＤ４０を標的とする。

本開示で使用するアミノ酸の３文字コードおよび１文字コードは、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２４３，p３５５８（１９６８）に記載されている。

本開示において「抗体」とは、鎖間ジスルフィド結合によって連結される２つの同一の重鎖および２つの同一の軽鎖から構成されるテトラペプチド鎖構造である、免疫グロブリンを指す。

本開示では、前記抗体軽鎖は、ヒトまたはマウスのκ鎖、λ鎖またはそれらの変異体を含む軽鎖定常領域を、さらに含み得る。

本開示では、前記抗体重鎖は、ヒトまたはマウスのＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはそれらの変異体を含む重鎖定常領域を、さらに含み得る。

可変フラグメント（Ｆｖ領域）は、前記抗体の重鎖および軽鎖のＮ末端付近にある約１１０個のアミノ酸から構成されており、そのアミノ酸配列は大きく変化する。抗体のＣ末端付近の残りのアミノ酸配列からなる定常領域は、比較的安定している。前記可変領域は、３つの超可変領域（ＨＶＲ）と４つの比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）から構成されている。前記抗体の特異性を決定する３つの超可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも呼ばれる。前記軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および前記重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）はそれぞれ、３つのＣＤＲと４つのＦＲから構成されており、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、以下の順序で配置されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。前記軽鎖の３つのＣＤＲは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を指し、前記重鎖の３つのＣＤＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を指す。本開示の抗体または抗原結合フラグメントのＬＣＶＲおよびＨＣＶＲのＣＤＲアミノ酸残基の数および位置は、既知のＫａｂａｔ番号付け基準（ＬＣＤＲ１－３、ＨＣＤＲ２－３）に準拠し、またはＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステム（ＨＣＤＲ１）に準拠する。

本開示の抗体には、マウス抗体、キメラ抗体およびヒト化抗体が含まれ、好ましくはヒト化抗体である。

本開示における用語「マウス抗体」は、当技術分野の知識と技能に従って調製されたヒトＣＤ４０を標的とするモノクローナル抗体である。調製の際には、試験被験体にＣＤ４０抗原を注射し、その後、所望の配列または機能特性を有する抗体を発現するハイブリドーマを単離する。

用語「キメラ抗体」は、マウス抗体の可変領域とヒト抗体の定常領域とを融合して形成される抗体であり、これにより、マウス抗体によって引き起こされる免疫反応を緩和することができる。前記キメラ抗体を構築するには、まず、マウス特異的モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを構築し、次いで、マウスハイブリドーマ細胞から可変領域遺伝子をクローニングする。続いて、必要に応じてヒト抗体の定常領域遺伝子をクローニングする。マウス可変領域遺伝子およびヒト定常領域遺伝子は、キメラ遺伝子に連結され、次いでヒトベクターに挿入され、最後にキメラ抗体分子は、真核生物または原核生物工業システムにおいて発現させる。本開示の好ましい実施形態では、キメラＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖は、ヒトκ、λ鎖またはその変異体の軽鎖定常領域をさらに含み得る。キメラＣＤ４０抗体の重鎖は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４またはそれらの変異体の重鎖定常領域をさらに含む。

用語「ヒト化抗体」は、ＣＤＲグラフト抗体としても知られており、マウスのＣＤＲ配列をヒト抗体可変領域のフレームワーク、すなわち、異なるタイプのヒト生殖細胞系列の抗体のフレームワーク配列にグラフトすることにより産生される抗体を指す。これにより、多量のマウスタンパク質成分を保有するキメラ抗体によって誘導される強力な免疫反応を克服することができる。このようなフレームワーク配列は、生殖細胞系列の抗体遺伝子配列を含む公共のＤＮＡデータベースまたは公表された文献から入手できる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖の可変領域遺伝子の生殖細胞系ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖細胞系配列データベース（ウェブサイトｗｗｗ．ｍｒｃｃｐｅ．ｃｏｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅで入手可能）や、Ｋａｂａｔ，ＥＡなど、Ｈｕｍａｎ，１９９１ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ（第５版）において見出され得る。免疫原性を低下させることによる活性の低下を避けるために、ヒト抗体の可変領域に最小限の復帰突然変異を施して活性を維持することができる。また、本開示のヒト化抗体は、ファージディスプレイによるＣＤＲの親和性成熟をさらに行ったヒト化抗体も含む。

本開示における「ＣＤ４０への結合」という用語は、ヒトＣＤ４０と相互作用する能力を指す。

用語「特異的に結合する」とは、競合ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイまたはＫＩＮＥＸＡ（登録商標）アッセイなど、当技術分野で利用可能な技術によって決定されるものを指す。この用語は、例えば、本開示の抗体の抗原結合ドメインが、多くの抗原により担持される特定のエピトープに特異的である場合にも適用され、この場合、抗原結合ドメインを担持する抗体は、前記エピトープを担持する複数の抗原に特異的に結合することができる。

本開示における「抗原結合フラグメント」とは、ヒトＣＤ４０に結合するＦａｂフラグメント、Ｆａｂ‘フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、ならびにヒトＣＤ４０に結合できる抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域を利用して形成される、ヒトＣＤ４０に結合できるその他のフラグメントを指す。それは、配列番号７、１３、９、１０、１１および１２から選択される本開示に記載の抗体の、１つまたは複数のＣＤＲを含む。Ｆｖフラグメントは、前記抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むが、定常領域を含まず、すべての抗原結合部位を有する最小の抗体フラグメントである。一般的にＦｖ抗体は、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーも含み、これにより抗原結合に必要な構造を形成することができる。また、異なるリンカーを使用して、抗体の２つの可変領域をポリペプチド鎖に連結することもでき、これを一本鎖抗体または一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）と呼ぶ。

「エピトープ」とは、抗体の１つまたは複数の抗原結合領域で認識され、抗体に結合することができる分子の一部を指す。

「保存的修飾」または「保存的置換または置換」は、多くの場合、タンパク質中のアミノ酸を、タンパク質の生物学的活性を変えることなく変化できるように、類似の特徴（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、骨格コンフォメーションおよび剛性など）を有する他のアミノ酸で置換することを指す。一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一のアミノ酸置換は、その生物学的活性を実質的に変化させないことは、当業者に公知である（例えば、Ｗａｔｓｏｎら（１９８７）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅＧｅｎｅ、ＴｈｅＢｅｎｊａｍｉｎ／ＣｕｍｍｉｎｇｓＰｕｂ．Ｃｏ．、第２２４頁（第４版）を参照）。さらに、構造的または機能的に類似したアミノ酸の置換がその生物活性を破壊する可能性は低い。

アミノ酸配列の「同一性」または「相同性」とは、２つのポリペプチド配列間の配列類似性を指す。比較した２つの配列の両方の位置が同じアミノ酸残基によって占められている場合、例えば、２つのポリペプチドのそれぞれの同じ位置が同じアミノ酸によって占められている場合、分子はその位置で同一である。配列同一性のパーセントおよび配列類似性のパーセントを決定するのに適したアルゴリズムの例は、ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムであり、これらは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０およびＡｌｔｓｃｈｕｌら（１９７７）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃiｄｓＲｅｓ．２５：３３８９－３４０２に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ.ｎｉｈ．ｇｏｖ／）で公開されている。

抗体および抗原結合フラグメントを産生および精製する方法は、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ発行の、ＵｓｉｎｇＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌの第５章～第８章および第１５章などの先行技術で周知である。本開示で定義される抗体または抗原結合フラグメントは、１つまたは複数のヒトＦＲを非ヒトＣＤＲに加えるように遺伝子操作されている。ヒトＦＲ生殖細胞配列は、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）のウェブサイトｈｔｔｐ：//ｉｍｇｔ.ｃｉｎｅｓ.ｆｒ、またはＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ、２００１ＩＳＢＮ０１２４４１３５１からのＩＭＧＴヒト抗体可変領域生殖細胞遺伝子データベースおよびＭＯＥソフトウェアをアラインすることによって得ることができる。

本開示の人工抗体または抗原結合フラグメントは、通常の方法で調製および精製され得る。例えば、重鎖および軽鎖をコードするｃＤＮＡ配列をクローニングし、ＧＳ発現ベクターに組み換えることができる。ＣＨＯ細胞は、組換え免疫グロブリン発現ベクターによって安定的にトランスフェクトされ得る。当技術分野でよく知られているより推奨される方法として、哺乳類の発現系では、特にＦｃの高度に保存されたＮ末端において、抗体のグリコシル化が生じる。ヒトの抗原に特異的に結合する抗体を発現させることで、安定したクローンが得られる。陽性クローンは、バイオリアクター内の無血清培地で増殖され、抗体を産生する。抗体が分泌される培養液は、従来の方法で精製および回収され得る。精製には、例えば、緩衝液を調整したＡまたはＧセファロースＦＦカラムを用いて、非特異的に結合した成分を洗い流す。その後、結合した抗体をｐＨ勾配で溶出し、抗体フラグメントをＳＤＳ－ＰＡＧＥで検出した後、回収する。この抗体は、通常の方法でろ過して濃縮することができる。また、可溶性の混合物および多量体は、モレキュラーシーブおよびイオン交換などの通常の方法で除去することもできる。得られた生成物は、－７０℃などで直ちに凍結するか、凍結乾燥する必要がある。

動物、ヒト、実験被験体、細胞、組織、臓器または生体液に適用する場合、「投与」および「処置」は、外因性薬物、治療薬、診断薬または組成物を動物、ヒト、被験体、細胞、組織、臓器または生体液と接触させることを指す。「投与」および「処置」は、例えば、治療法、薬物動態法、診断法、研究法、実験方法などを指し得る。細胞の処置には、試薬を細胞と接触させること、ならびに試薬を流体と接触させることを含み、流体は細胞と接触している。「投与」および「処置」はまた、例えば、インビトロおよびエクスビボで細胞を、試薬、診断薬、結合組成物、または別のタイプの細胞によって処理することを意味する。「処置」は、ヒト、獣医、または研究被験体に適用される場合、治療的な処置、予防的または防止的な措置、研究および診断の応用を指す。

「治療」とは、例えば、本開示の化合物を結合することができる任意の組成物を含む内用または外用の治療剤を、前記治療剤が治療効果を有することが知られている疾患の１つまたは複数の症状を有する患者に投与することを意味する。一般的に、前記治療剤は、治療されるべき被験体または集団における１つまたは複数の疾患の症状を効果的に緩和し、そのような症状の退縮を誘導するか、または臨床的に測定不可能な程度までそのような症状の進行を抑制するための量で投与される。任意の特定の疾患の症状を緩和するのに有効な治療剤の量（「治療有効量」とも呼ばれる）は、疾患の状態、患者の年齢および体重、および患者に所望の効果を引き出す薬物の能力などの様々な要因に応じて変動し得る。疾患の症状が緩和されたかどうかは、症状の重症度または進行度を評価するために医師または他の医療専門家によって一般的に使用される任意の臨床試験方法によって評価することができる。本開示の実施形態（例えば、治療方法または調製物）は、各標的の疾患症状を緩和するのに有効ではないかもしれないが、スチューデントのt検定、カイ二乗検定、ＭａｎｎおよびＷｈｉｔｎｅｙに基づくＵ検定、Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ検定（Ｈ検定)、Ｊｏｎｃｋｈｅｅｒｅ－Ｔｅｒｐｓｔｒａ検定、Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定などの当技術分野で公知の任意の統計的試験方法によって決定されるように、統計的に有意な数の患者において標的の疾患症状を緩和するものとする。

「有効量」には、医学的疾患の症状や状態を改善または予防するのに十分な量が含まれる。有効量は、診断を可能にするまたは容易にするのに十分な量も意味する。特定の患者または獣医被験体に対する有効量は、例えば、治療すべき状態、患者の全体的な健康状態、投与経路および投与量、ならびに副作用の重症度などの要因に応じて変化し得る。有効量は、重大な副作用または毒性作用を回避する最大量または投与レジメンであり得る。

「Ｔｍ値」は、タンパク質の熱変性の温度、つまりタンパク質の空間構造が破壊されるときにタンパク質の半分がアンフォールディングされる温度を指す。したがって、Ｔｍ値が高いほど、前記タンパク質の熱安定性が高くなる。

２．実施例および試験例

本開示は、以下の実施例によってさらに詳細に説明される。これらの実施例は、例示のみを目的としており、本開示の範囲を限定することを意図するものではない。

本開示の実施例において特定の条件が示されていない実験方法は、通常、従来の条件に従うか、または原料もしくは商品の製造業者が提案する条件に従う。また、特定の入手先が示されていない試薬は、市販されている従来の試薬である。

本出願におけるＣＤ４０抗原および抗体の調製および精製方法は、出願番号ＷＯ２０１８２１９３２７の特許文書に記載されており、その内容は全体として本明細書に組み込まれ得る。

実施例１．免疫抗原、スクリーニング用抗原の配列およびその調製
Ｈｉｓタグ付きヒトＣＤ４０（ｈ－ＣＤ４０－ｈｉｓ）組換えタンパク質、Ｆｃタグ付きヒトＣＤ４０（ｈ－ＣＤ４０－Ｆｃ）組換えタンパク質、Ｈｉｓタグ付きマウスＣＤ４０（ｍ－ＣＤ４０－ｈｉｓ）組換えタンパク質、Ｈｉｓタグ付きアカゲザルＣＤ４０（ｒｈｅｓｕｓ－ＣＤ４０－ｈｉｓ）組換えタンパク質（♯ＣＤ０－Ｃ５２Ｈ７）は、Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社から購入した精製市販のタンパク質試薬であった。各配列のソースを表１に示す。前記タンパク質は、以下の実施例の各実験に用いられ得る。

実施例２．抗体ハイブリドーマの調製
抗ヒトＣＤ４０モノクローナル抗体は、実験用Ｃ５７ＢＬ／６マウス、雌、６～８週齢［ＺｈａｏＹａｎ（Ｓｕｚｈｏｕ）ＮｅｗＤｒｕｇＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒＣｏ．，Ｌｔｄ、動物生産ライセンス番号：２０１５０３２５９］であるマウスを免疫することによって産生した。給餌環境：ＳＰＦレベル。マウスを購入し、温度２０～２５℃、湿度４０～６０％で１２／１２時間の明／暗サイクル調整を伴う実験室環境で１週間試料を与えた。環境に順応したマウスを２つのケージに分け、各ケージに５匹のマウスを入れた。

免疫抗原は、Ｆｃタグ付きヒト修飾ＣＤ４０組換えタンパク質（ｈ－ＣＤ４０－Ｆｃ、濃度１μｇ／μｌまでリン酸緩衝液中で処方）を用いた。フロイントアジュバント（Ｓｉｇｍａ，ロット番号：Ｆ５８８１／Ｆ５５０６）を乳化に使用し、フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）を一次免疫に使用し、核酸アジュバント（ＣｐＧ，ＳａｎｇｏｎＢｉｏｔｅｃｈ）および注射用アルミニウム（ＩｍｊｅｃｔＡｌｕｍ，Ｔｈｅｒｍｏ，ロット番号：ＰＨ２０３８６６）を残りのブースト免疫に使用した。免疫化は、０日目、１４日目、２８日目、４２日目、５６日目、７０日目に実施した。血液検査は２１日目、３５日目、４９日目、６３日目、７７日目に採血し、ＥＬＩＳＡによりマウス血清を検出し、マウス血清中の抗体価を測定した。

４回目の免疫時に、抗体価が高く、血清中で安定する傾向があるマウスにおいて、脾臓細胞融合を行った。ブースト免疫を融合の３日前に行い、リン酸緩衝液で処方した抗原液１０μgを各マウスの腹腔内（ＩＰ）に注射した。脾臓リンパ球を、最適化されたＰＥＧ媒介融合ステップを用いて骨髄腫細胞Ｓｐ２／０細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－８２８７ＴＭ）と融合させて、ハイブリドーマ細胞を得て、良好なインビトロの活性を有するモノクローナルハイブリドーマ細胞ラインを選択した。

実施例３．抗ＣＤ４０抗体のクローニングおよび配列決定
上記でスクリーニングして同定された抗体のハイブリドーマサブクローンを選択し、対数増殖期のハイブリドーマ細胞を収集した。ＲＮＡを、Ｔｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，１５５９６－０１８）を用いてキットの説明書に従って抽出し、逆転写した（ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ，Ｔａｋａｒａ，ｃａｔ♯２６８０Ａ）。次いで、得られたｃＤＮＡを、マウスＩｇ－プライマーセット（Ｎｏｖａｇｅｎ、ＴＢ３２６Ｒｅｖ．Ｂ０５０３）を用いてＰＣＲにより増幅し、配列決定のために配列決定会社に送った。マウス抗体の配列が最終的に得られた。

９Ｅ５の重鎖可変領域および軽鎖可変領域配列は、以下の通りである。

９Ｅ５ＨＣＶＲ：
ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＤＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＩＬＴＴＹＷＩＴＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＤＩＨＰＧＳＧＳＴＫＹＮＥＫＦＫＳＫＡＴＬＴＶＤＴＳＳＳＴＡＹＭＱＬＴＲＬＳＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ
配列番号１

９Ｅ５ＬＣＶＲ：
ＤＶＬＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＳＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＳＱＮＩＶＮＳＱＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＥＳＰＫＬＬＩＹＫＶＴＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＹＣＦＱＡＳＬＶＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号２

９Ｅ５のＣＤＲ配列を、以下の表２に示す。

得られた可変領域配列をそれぞれヒト抗体ＩｇＧ１の定常領域配列にグラフトしてヒト－マウスキメラ抗体配列を得て、このキメラ抗体の配列を分子クローニング技術によりｐＣＰ発現ベクター（ＭａｂＳｐａｃｅｂｉｏｌｏｇｙＣｏ．Ｌｔｄ．より購入）に挿入した。これらの配列は、ＰＣＲによる増幅後に配列決定および同定され（分子クローニングなどの分子生物学的操作方法は、従来の操作条件に従って実施される。具体的には「ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ」を参照）、ＨＥＫ２９３細胞発現系を用いて、ヒト－マウスキメラ抗体９Ｅ５－Ｃを得ることができる。ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ（ＧＥＬｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ）アフィニティークロマトグラフィーによって精製されたキメラ抗体を特徴づけるために、様々なインビトロ活性アッセイを行った。そのデータを表３に示す。

実施例４．マウス抗体のヒト化実験
得られたマウス抗体９Ｅ５の典型的なＶＨ/ＶＬＣＤＲ構造に基づいて、重鎖および軽鎖可変領域の配列を抗体生殖細胞系列データベースと比較し、相同性の高いヒト生殖細胞系列テンプレートを得た。ここで、ヒト生殖細胞系列軽鎖フレームワーク領域は、ヒトκ軽鎖遺伝子に由来するものであり、本発明の抗体の軽鎖フレームワーク領域は、好ましくはヒト生殖細胞由来の軽鎖テンプレートＶｋ２－２８／ＪＫ４（９Ｅ５）である。また、ヒト生殖細胞系重鎖フレームワーク領域は、ヒト重鎖に由来するものであり、本発明の抗体の重鎖フレームワーク領域は、好ましくは、以下に示すようにヒト生殖細胞系列重鎖テンプレートＶＨ１－２／ＪＨ６（９Ｅ５）である。

９Ｅ５の重鎖フレームワーク領域は、好ましくはヒト生殖細胞系列重鎖テンプレートＩＧＨＶ１－２（配列番号：９）である。

ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲ

９Ｅ５の軽鎖フレームワーク領域は、好ましくはヒト生殖細胞系列軽鎖テンプレートＩＧｋＶ２－２８(配列番号：１０)である。

ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＬＱＴＰ

マウス抗体のＣＤＲを、選択したヒト化テンプレートにグラフトしてヒト化可変領域を置換し、次いで、対応するヒトＩｇＧ定常領域（好ましくは、前記重鎖はＩｇＧ１であり、前記軽鎖はκ）で組み換えた。次いで、前記マウス抗体の三次元構造に基づいて、組み込まれた（embedded）残基、ＣＤＲと直接相互作用する残基、およびＶＬとＶＨのコンフォメーションに重要な影響を及ぼす残基を復帰突然変異させ、ＣＤＲの化学的に不安定なアミノ酸残基を最適化して、最終的なヒト化分子を得た。

ｈｕ９Ｅ５－Ｈ１ａ（配列番号：１１）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＹＷＩＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＤＩＨＰＧＳＧＳＴＫＹＮＥＫＦＫＳＲＶＴＭＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ

ｈｕ９Ｅ５－Ｈ１ｂ（配列番号：１２）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＴＹＷＩＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＤＩＨＰＧＳＧＳＴＫＹＮＥＫＦＫＳＲＶＴＬＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ

ｈｕ９Ｅ５－Ｈ１ｃ（配列番号：１３）：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＩＬＴＴＹＷＩＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＤＩＨＰＧＳＧＳＴＫＹＮＥＫＦＫＳＲＶＴＬＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ

ｈｕ９Ｅ５－Ｌ１ａ(配列番号:１４):
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＮＩＶＮＳＱＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＴＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＡＳＬＶＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ

ｈｕ９Ｅ５－Ｌ１ｂ(配列番号:１５):
ＤＶＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＮＩＶＮＳＱＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＴＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＡＳＬＶＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ

ｈｕ９Ｅ５－Ｌ１ｃ(配列番号:１６):
ＤＶＬＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＮＩＶＮＳＱＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＴＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＡＳＬＶＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ

最終的なヒト化ｈｕ９Ｅ５抗体分子（Ｈ１ｃ重鎖およびＬ１ａ軽鎖を含む）を、上記の発現試験、および軽鎖と重鎖との組み合わせの復帰突然変異数の比較を経て選択し、その完全な軽鎖と重鎖の配列を、それぞれ配列番号１７～１８に示す。

ｈｕ９Ｅ５ＨＣ：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＩＬＴＴＹＷＩＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＤＩＨＰＧＳＧＳＴＫＹＮＥＫＦＫＳＲＶＴＬＴＶＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号：１７

ｈｕ９Ｅ５ＬＣ：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＮＩＶＮＳＱＧＮＴＹＬＥＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＫＶＴＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＦＱＡＳＬＶＰＷＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号：１８

実施例５．ヒト化抗体の試験データ
ヒトおよびアカゲザルＣＤ４０に対する本発明のヒト化抗体ｈｕ９Ｅ５の結合活性、ブロッキング活性などを、表４に示す。

実施例６．マウスにおける腫瘍増殖に対する抗ＣＤ４０抗体の阻害
正常なヒト末梢血を採取し、健康なヒトＰＢＭＣを密度勾配遠心分離により単離した。ＣＤ１４^＋マイクロビーズキットを使用して単球を選別し、キット付属のプロトコルに従ってＣＤ１４^＋単球を単離した。すなわち、１０^７細胞ごとに２０μlの抗ＣＤ１４マイクロビーズを加え、４℃で１５分間インキュベートした。次いで、細胞を磁気カラムに入れ、３回濯いだ。磁気カラム中の細胞、すなわちＣＤ１４^＋単球を収集した。１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ４および１００ｎｇ/ｍｌのＧＭ－ＣＳＦを含むＲＰＭＩ１６４０培地をＣＤ１４^＋単球に添加し、それによって単球を６日間培養し（培養方法は当該技術分野で一般的な方法である）、ＭｏＤＣ細胞の誘導培養を行った。残りの細胞にＩＬ－２を含むＲＰＭＩ１６４０を添加し、培養後に浮遊細胞を回収した（培養方法および細胞回収方法はいずれも当該技術分野における従来の方法である）。ＣＤ３^＋マイクロビーズキットを用いてＴ細胞を選別した。６日後、ＭｏＤＣ細胞およびＣＤ３^＋Ｔ細胞をそれぞれ回収し、Ｒａｊｉ細胞（上海バイオテクノロジーセルバンク研究所、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地で培養）と１：５：２０の比率で混合し、各ＮＯＧマウス（ＮａｎｊｉｎｇＧａｌａｘｙＢｉｏｐｈａｒｍａ、５日間の順応給餌）に皮下接種した。実験動物を、一定の温度および湿度を有する独立した換気ボックス中に保持した。飼育室の温度は１８．０～２６．０℃であり、湿度は４０～７０％であり、換気を１０～２０回／時間行い、昼夜は１２時間／１２時間で切り替えた。

実験群には、ヒトＩｇＧ１抗体対照群、ｈｕ９Ｅ５、および参照抗体Ｇ１２含まれ、全ての群の投与量は、３ｍｇ/ｋｇであった。各群５匹のマウスに、週１回、６週間、３回の連続投与を行った。全実験中、バーニアキャリパーを用いて週に２回腫瘍の長軸径と幅軸（broad-axis）径を測定し、腫瘍体積（ｍｍ^３）＝０．５×（腫瘍長軸径×腫瘍広軸径^２）を算出した。相対腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）は、ＴＧＩ％＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００％により算出した。Ｔ／Ｃ（％）は、相対腫瘍成長率、すなわち、ある時点での処置群および対照群の相対腫瘍体積または腫瘍重量のパーセンテージである。ＴおよびＣはそれぞれ、特定の時点における処置群およびＩｇＧ１対照群の腫瘍体積（ＴＶ）または腫瘍重量（ＴＷ）である。

結果は、ヒト化抗ＣＤ４０抗体ｈｕ９Ｅ５がＩｇＧ１対照と比較して非常に有意な抗腫瘍効果を有し、投与２１日後にほぼ完全に腫瘍が消失したことを示した。

抗体医薬組成物（調製物）の例示的な調製プロセス
第１段階：
ＣＤ４０抗体（ｈｕ９Ｅ５など）および安定した調製物を、ＣＤ４０抗体を含む調製物バルクに調製した。

濾過後、バルクを無菌試験のためにサンプリングした。その後、０．２２μｍのＰＶＤＦフィルターエレメントでバルクをろ過し、濾液を回収した。

第２段階：
充填量を１．１ｍｌに調整し、ストッパー付きの２ｍｌバイアルに濾液を充填した。充填開始時、中間時、終了時にサンプルを採取し、充填量の差を測定した。

第３段階：
キャッピング機の電源を入れ、アルミキャップでキャッピングを行った。

第４段階：
目視検査により、充填不良などの不具合がないことを確認。次いで、バイアルラベルを印刷して貼り付けた。次いで、カートンボックスを折りたたんだ状態でカートンラベルを印刷した。生成物を梱包した。最後に、箱に箱ラベルを貼り付けた。

実施例７．抗ＣＤ４０抗体調製用緩衝液系のｐＨ値のスクリーニング
抗ＣＤ４０抗体濃度が５０ｍｇ/ｍｌの抗体調製物を調製するために以下の緩衝液を調合し、高温（４０℃）での安定性試験のためにサンプルを採取した。

１）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０

２）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５

３）１０ｍＭのコハク酸－コハク酸ナトリウム、ｐＨ５．０

４）１０ｍＭのコハク酸－コハク酸ナトリウム、ｐＨ５．５

５）１０ｍＭのコハク酸－コハク酸ナトリウム、ｐＨ６．０

６）１０ｍＭのヒスチジン-ヒスチジン塩酸、ｐＨ５．５

７）１０ｍＭのヒスチジン-ヒスチジン塩酸、ｐＨ６．０

８）１０ｍＭのヒスチジン-ヒスチジン塩酸、ｐＨ６．５

注：Ｍは月を意味する。

結果は、抗ＣＤ４０抗体の最適なｐＨ範囲が５．０～６．０であることを示す。このｐＨ範囲では、３つの緩衝液系のＳＥＣとＣＥのそれぞれの差は大きくなく、ＩＣＥの変動は１４．０％～２４．１％の範囲内であり、ｐＨ６．５の緩衝液系（緩衝液）よりも安定していることがわかる。

実施例８．抗ＣＤ４０抗体調製物用界面活性剤のスクリーニング
１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸、ｐＨ５．５および１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５の緩衝液系を選択して、５０ｍｇ／ｍｌのタンパク質と、７５ｍｇ／ｍｌのスクロースと、さまざまなタイプの界面活性剤と、を含む抗ＣＤ４０抗体調製物を調製した。２５℃でのその外観の安定性を調査した。

１）０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０を含む、１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸、ｐＨ５．５。

２）０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０を含む、１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸、ｐＨ５．５。

３）０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０を含む、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５。

４）０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０を含む、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５。

その結果、ポリソルベート８０が好ましい界面活性剤であることが示される。

実施例９．抗ＣＤ４０抗体調製物の界面活性剤濃度のスクリーニング
１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５の緩衝液系を選択し、５０ｍｇ/ｍｌのタンパク質と、７５ｍｇ/ｍｌのスクロースと、異なる濃度のポリソルベート８０とを含む抗ＣＤ４０抗体調製物を調製した。

１）０．１ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０を含む、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５。

２）０．２ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０を含む、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５。

４）０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０を含む、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５。

５）０．８ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０を含む、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５。

試料をそれぞれ、０.９％塩化ナトリウム注射で希釈して、０．５ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度にした。不溶性粒子の結果（表３参照）から、ポリソルベート８０の濃度が０．１ｍｇ／ｍｌ～０．８ｍｇ／ｍｌの場合、抗ＣＤ４０抗体タンパク質は塩化ナトリウムと良好な適合性を示し、上記のポリソルベート８０濃度が良好な安定化効果を有することが示された。次いで、上記の試料を振とうインキュベーター（２５℃、３００ｒｐｍ）に５日間置いた。外観に応じて、ポリソルベート８０の濃度は、０．４～０．８ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．４ｍｇ／ｍｌとなるように選択される。

実施例１０．抗ＣＤ４０抗体調製物の糖濃度のスクリーニング
１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５の緩衝液系を選択して、５０ｍｇ／ｍｌのタンパク質と、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０と、様々な濃度のスクロースとを含む抗ＣＤ４０抗体調製物を調製した。

１）５５ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５。

２）６５ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５。

３）７０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５。

４）７５ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５。

５）８０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む、１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５。

各試料の浸透圧の結果（表８参照）は、スクロース濃度が８０ｍｇ／ｍｌの場合に前記調製物は等張であることを示す。

実施例１１．抗ＣＤ４０抗体のさまざまな緩衝液系の安定性

以下の緩衝液系を用いて、５０ｍｇ／ｍｌのタンパク質と、８０ｍｇ／ｍｌのスクロースと、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０とを含む抗ＣＤ４０調製物を調製し、２５℃および２～８℃での安定性を調査した。

１）１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５

２）１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸、ｐＨ５．５

３）１０ｍＭのヒスチジン－酢酸、ｐＨ５．５

その結果、２５℃で６ヵ月間保存した後、１０ｍＭ酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液系は他の緩衝液系に比べてわずかに優れていたが、１０ｍＭヒスチジン－ヒスチジン塩酸と１０ｍＭヒスチジン－酢酸緩衝液系との差は大きくなかった。また、２～８℃で６ヵ月間保存した後、３つの系の品質には有意差はなかった。

実施例１２．安定性に対する調製物のタンパク質濃度の影響

１０ｍＭのヒスチジン－塩酸、ｐＨ５．５を有する緩衝液系を選択し、８０ｍｇ／ｍｌのスクロースと、０.４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０と、５０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度を有するＣＤ４０抗体調製物を調製した。４０℃での高温安定性を調査した。

１）５０ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度を有する、１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸、ｐＨ５．５。

２）２５ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度を有する、１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸、ｐＨ５．５。

３）１ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度を有する、１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸、ｐＨ５．５。

その結果、調製物のタンパク質濃度は純度に影響を及ぼし、タンパク質濃度が５０ｍｇ／ｍｌおよび２５ｍｇ／ｍｌの場合は純度にほとんど影響を及ぼさず、タンパク質濃度が１ｍｇ／ｍｌの調製物の安定性は明らかに低いことが示される。

実施例１３．調製成分の総合的なスクリーニング

タンパク質濃度、ポリソルベート８０濃度、ｐＨをさらに最適化するために、ＪＭＰソフトウェアを用いてＤＯＥ設計を行い、ＲＳＭモデルを適用して一連の処方を得た（下記参照）。ヒスチジン－ヒスチジン塩酸（Ｈｉｓ－ＨＣｌ）とヒスチジン－酢酸（Ｈｉｓ－ＡＡ）の緩衝液系の安定性データ間には特に有意な差はなく、Ｈｉｓ－ＨＣｌのｐＨ緩衝範囲が５．５を超えることから、Ｈｉｓ－ＡＡをＤＯＥスクリーニング実験用緩衝液として選択した。１０ｍＭのヒスチジン－酢酸（Ｈｉｓ－ＡＡ）を有する緩衝液系において、異なるタンパク質濃度と、異なるポリソルベート８０濃度と、８０ｍｇ／ｍｌスクロースとを有する抗ＣＤ４０抗体調製物を調製し、試料を安定性分析のために４０℃で保存した。

（１）４０ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０を含む、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、ｐＨ５．０。

（２）１０ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０を含む、０．２ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、ｐＨ５．５。

（３）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０を含む、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、ｐＨ５．５。

（４）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０を含む、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、ｐＨ５．５。

（５）１０ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０を含む、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、ｐＨ５．０。

（６）４０ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０を含む、０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、ｐＨ６．０。

（７）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０を含む、０．２ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、ｐＨ５．０。

（８）４０ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０を含む、０．２ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、ｐＨ６．０。

（９）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０を含む、０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、ｐＨ５．０。

（１０）４０ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０を含む、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、ｐＨ５．５。

（１１）１０ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０を含む、０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、ｐＨ５．５。

（１２）１０ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０を含む、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、ｐＨ５．５。

その結果、ｐＨ値が５．０～６．０、ポリソルベート８０が０．２～０．６ｍｇ／ｍｌ、タンパク質濃度が１０～４０ｍｇ／ｍｌの場合、上記パラメータの変動は安定性に大きな影響を及ぼさなかったことがわかる。処方のｐＨ範囲は５．０～６．０であったため、中央値の５．５を最終的なｐＨ値とし、ポリソルベート８０の最終濃度は前回のスクリーニング結果を総合的に考慮して０．４ｍｇ／ｍｌとし、タンパク質濃度は２５ｍｇ／ｍｌとした。

実施例１４.異なる緩衝液系における抗ＣＤ４０抗体の凍結乾燥安定性
酢酸（酢酸ナトリウム）緩衝液系は、凍結乾燥時の揮発により再構成後のｐＨ値が変化する可能性があるため、凍結乾燥調製物用の緩衝液系としての使用には適していない。１０ｍＭヒスチジン－ヒスチジン塩酸（Ｈｉｓ－ＨＣｌ）、ｐＨ５．５と、１０ｍＭヒスチジン－酢酸（Ｈｉｓ－ＡＡ）、ｐＨ５．５との２種類の緩衝液を選択し、５０ｍｇ／ｍｌのタンパク質と、８０ｍｇ／ｍｌのスクロースと、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０とを含む抗ＣＤ４０抗体調製物を調製した。充填量は１．２ｍｌ／ボトルで、凍結乾燥工程は表１３の通りである。

１）１０ｍＭヒスチジン－ヒスチジン塩酸、ｐＨ５．５。

２）１０ｍＭヒスチジン－酢酸、ｐＨ５．５。

凍結乾燥製品は良好なケーキ形状を有し、再構成後の外観は透明であり、ｐＨおよび純度の明らかな変化は観察されず、凍結乾燥プロセスが良好であることが示される。この結果は、以下のことを示す：１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸などの２種類の緩衝液、ｐＨ５．５、および１０ｍＭのヒスチジン－酢酸、ｐＨ５．５は、いずれも抗ＣＤ４０抗体調製物用の緩衝液系として使用するのに適していた。

実施例１５．その他の代替調製物
さらに、本発明はまた、他の調製物を用いた抗ＣＤ４０抗体医薬調製物を提供するが、これらに限定されるものではない。

（１）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０および１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸、ｐＨ５．５。

（２）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０および１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸、ｐＨ５．８。

（３）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０および１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸、ｐＨ６．０。

（４）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０および１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸、ｐＨ５．６。

（５）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０および１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸、ｐＨ５．８。

（６）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０および１０ｍＭのヒスチジン－ヒスチジン塩酸、ｐＨ６．０。

（７）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０および１０ｍＭのヒスチジン－酢酸緩衝液、ｐＨ５．０。

（８）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０および１０ｍＭのヒスチジン－酢酸緩衝液、ｐＨ５．５。

（９）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０および１０ｍＭのヒスチジン－酢酸緩衝液、ｐＨ６．０。

（１０）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０および１０ｍＭのヒスチジン－酢酸緩衝液、ｐＨ５．０。

（１１）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０および１０ｍＭのヒスチジン－酢酸緩衝液、ｐＨ５．５。

（１２）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０および１０ｍＭのヒスチジン－酢酸緩衝液、ｐＨ５．８。

（１３）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０および１０ｍＭのヒスチジン－酢酸緩衝液、ｐＨ６．０。

（１４）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．４ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０および１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５．５。

（１５）２５ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体、８０ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．６ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０および１０ｍＭの酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５．５。

実験結果は、上記で定義された調製物を有するＣＤ４０抗体調製物が良好な安定性を有し、ＣＤ４０抗体医薬品の調製に適用できることを示している。

Claims

ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと、緩衝液と、を含む医薬組成物であって、前記ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号６、配列番号７および配列番号８でそれぞれ示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３、ならびに配列番号３、配列番号４および配列番号５でそれぞれ示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有し、前記緩衝液が、好ましくは、酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液およびコハク酸緩衝液、より好ましくは、酢酸緩衝液、最も好ましくは、酢酸－酢酸ナトリウム緩衝液から選択される、医薬組成物。
前記ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが、１ｍｇ／ｍｌ～１２０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１０ｍｇ／ｍｌ～４０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する、請求項１に記載の医薬組成物。
前記医薬組成物が、４．５～６．５、好ましくは５．０～６．０のｐＨを有する、請求項１または２に記載の医薬組成物。
前記緩衝液が、５ｍＭから３０ｍＭ、好ましくは１０ｍＭから２０ｍＭの濃度を有する、請求項１から３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
トレハロースおよびスクロースから選択される二糖類をさらに含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記二糖類が、４０ｍｇ／ｍｌ～９５ｍｇ／ｍｌ、好ましくは６０ｍｇ／ｍｌ～９０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する、請求項５に記載の医薬組成物。
ポリソルベートである、より好ましくはポリソルベート８０である界面活性剤をさらに含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記界面活性剤が、０．０２ｍｇ／ｍｌ～０．８ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．３ｍｇ／ｍｌ～０．８ｍｇ／ｍｌの濃度を有する、請求項７に記載の医薬組成物。
（ａ）１～１２０ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号６、配列番号７および配列番号８でそれぞれ示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３、ならびに配列番号３、配列番号４および配列番号５でそれぞれ示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有する、ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと、
（ｂ）５～３０ｍＭの酢酸緩衝液と、
（ｃ）４０～９０ｍｇ／ｍｌのスクロースと、
（ｄ）０．０２～０．８ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０と、を含む医薬組成物であって、好ましくは、前記医薬組成物が、４．５～６．５、より好ましくは５．０～６．０、さらに好ましくは５．５のｐＨを有する、医薬組成物。
（ａ）１～１２０ｍｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号６、配列番号７および配列番号８でそれぞれ示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３、ならびに配列番号３、配列番号４および配列番号５でそれぞれ示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有する、ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントと、
（ｂ）１０～２０ｍＭの酢酸緩衝液と、を含む医薬組成物であって、前記医薬組成物が、５．０～５．５のｐＨを有する、医薬組成物。
前記ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１に示される重鎖可変領域と、配列番号２に示される軽鎖可変領域とを有する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントが、ヒト化抗体である、請求項１１に記載の医薬組成物。
前記ヒト化抗体の、前記軽鎖可変領域上の軽鎖ＦＲ配列、および前記重鎖可変領域上の重鎖ＦＲ配列が、それぞれヒト生殖細胞の軽鎖および重鎖、またはそれらの突然変異配列に由来する、請求項１２に記載の医薬組成物。
前記ヒト化抗体の重鎖が、配列番号１７で示される配列またはその変異形を有し、前記変異形が、好ましくは、重鎖可変領域に０～１０個のアミノ酸変異を有し、より好ましくは、アミノ酸位置６および８に変異を有し、前記アミノ酸が、好ましくはＩ、ＡまたはＬに改変し、前記ヒト化抗体の軽鎖が、配列番号１８で示される配列またはその変異形を有し、前記変異形が、好ましくは軽鎖可変領域に０～１０個のアミノ酸変異を有し、より好ましくはアミノ酸位置２および３に変異を有し、前記アミノ酸が、好ましくはＩ、Ｖ、またはＬに改変している、請求項１２または１３に記載の医薬組成物。
前記ヒト化抗体の前記重鎖可変領域が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４またはその変異形の重鎖ＦＲをさらに含み、好ましくはヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４の重鎖ＦＲを含み、より好ましくはヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ２の重鎖ＦＲを含む、請求項１２から１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記ＣＤ４０抗体の軽鎖のアミノ酸配列が、配列番号１８で示される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有し、前記抗体の重鎖のアミノ酸配列が、配列番号１７で示される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
請求項１から１６のいずれか一項に記載の医薬組成物を凍結乾燥するステップを含む、ＣＤ４０抗体を含む凍結乾燥調製物を調製する方法。
請求項１７に記載の方法により調製されるＣＤ４０抗体を含む、凍結乾燥調製物。
ＣＤ４０関連の疾患または症状の治療のための医薬品の調製における、請求項１から１６のいずれか一項に記載の医薬組成物の、または、請求項１８に記載の凍結乾燥調製物の、使用であって、前記疾患または症状が、好ましくは癌であり、前記癌が、リンパ腫、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、腎臓癌、肺癌、肝臓癌、胃癌、結腸直腸癌、膀胱癌、横紋筋肉腫、食道癌、子宮頸癌、多発性骨髄腫、白血病、胆嚢癌、神経膠芽腫および黒色腫から選択される、使用。
容器を含む製品であって、前記容器が、請求項１から１６のいずれか一項に記載の医薬組成物、または、請求項１８に記載の凍結乾燥調製物を含む、製品。