JP2010518115A - 抗Robo4抗体およびそれらのための使用 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、2007年2月9日に出願された米国仮特許出願第60/889,214号、および2007年2月23日に出願された米国仮特許出願第60/891,475号の利益を主張し、これらの米国仮特許出願の開示は、あらゆる目的のためにそれらの全体が本明細書中に参考として援用される。
本発明は概して、血管形成、ならびに内皮細胞増殖および遊走の分野に関する。さらに詳細には、本発明は、Robo4の修飾因子およびこのような修飾因子の使用に関する。
ラウンドアバウト(Roundabout)ファミリーのレセプターは、分子ガイダンス分子であって、軸索の誘導、神経の遊走および白血球の走化性(Slitタンパク質との相互作用に応答する)を調節する。(Suchtingら、FASEB J.19:121−123(2005))。ラウンドアバウトレセプター分子は、5つの免疫グロブリンおよび3つのフィブロネクチンドメインをその細胞外領域に含む。マジック・ラウンドアバウト(Magic Roundabout)(すなわち、Robo4または内皮細胞特異的分子4(endothelial cell−specific molecule 4)(ESCSM4))は、他のラウンドアバウトファミリーのメンバーと構造的に異なる。ヒトのマジック・ラウンドアバウト(Robo4)は、2つの免疫グロブリンおよび主要組織適合性遺伝子複合体ドメイン(アミノ酸46〜116および151〜209)、2つのフィブロネクチンIII型ドメイン(アミノ酸252〜335および347〜432)、膜貫通領域(468〜490)、およびプロリンリッチ領域(アミノ酸715〜772)(Huminieckiら、Genomics 79(4):547−552(2002)、およびその図1を参照のこと)を含む。マウスおよびヒトのRobo4は、75%のヌクレオチド配列同一性を示す(Huminieckiら、上掲(2002))。
本発明は、Robo4(例えば、ヒトおよび/またはマウスのRobo4などの霊長類および/またはげっ歯類のRobo4を含む)に特異的に結合する抗体、ならびにこのような抗体を用いる診断および治療の方法を提供する。ある実施形態では、この抗体は、ヒト化されるか、またはヒトである。ある実施形態では、この抗体は以下からなる群より選択される:インタクトな抗体、抗体改変体、および抗体の誘導体、Fab、Fab’、(Fab’)2、およびFv。一実施形態では、本発明は、ヒトRobo4、および必要に応じてマウスRobo4に親和性および特異性を有する抗Robo4抗体を提供し、この抗体は、図1A、図1Bおよび図2Bに示されるような軽鎖および重鎖の可変領域ドメイン配列の超可変領域(HVRs)(配列番号1〜8、17〜71)を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。別の実施形態では、本発明は、ヒトRobo4、および必要に応じてマウスRobo4に親和性および特異性を有する抗Robo4抗体を提供し、この抗体は、図1A、図1B、図2A、図2B、図3A、図3B、図4Aおよび図4Bに示されるような軽鎖および重鎖の可変領域ドメイン配列(配列番号9〜16、配列番号12(ここでVはMで置換されている)、および配列番号99〜139)のフレームワーク領域(FRs)を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。別の実施形態では、本発明は、ヒトRobo4、および必要に応じてマウスRobo4に親和性および特異性を有する抗Robo4抗体を提供し、この抗体は、図1A、および図1B(配列番号72〜97)ならびに図2Aおよび図2B(配列番号140〜165)に示されるような軽鎖および重鎖の可変領域ドメイン配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなる。
以下:
(i)RASQDVSTAVA(配列番号1)である配列A1−A11を含む、HVR−L1と
(ii)SASFLYS(配列番号2)である配列B1−B7を含む、HVR−L2と
(iii)QQSYTTPPT(配列番号3)である配列C1−C9を含む、HVR−L3と、
(iv)GFTINGYYIH(配列番号17)である配列D1−D10を含むHVR−H1と、
(v)GFIYPAGGDTDYADSVKG(配列番号18)である配列E1−E18を含む、HVR−H2と;
(vi)ARLIGNKFGWSSYGMDY(配列番号19)である配列F1−F17を含むHVR−H3と;
(vii)配列番号1、2、3、17、18、または19において示された配列の少なくとも1つのアミノ酸残基の挿入、欠失または置換を含む少なくとも1つの改変体HVRと、
からなる群より選択される少なくとも1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、または6つの超可変領域(HVR)配列(単数または複数)を含む。
以下:
(i)RASQDVSTAVA(配列番号1)である配列A1−A11を含む、HVR−L1と
(ii)SASFLYS(配列番号2)である配列B1−B7を含む、HVR−L2と
(iii)QQSYTTPPT(配列番号3)である配列C1−C9を含む、HVR−L3と
(iv)GFTISGSWIH(配列番号4)である配列D1−D10を含むHVR−H1と
(v)AVITPAGGYTYYADSVKG(配列番号5)である配列E1−E18を含む、HVR−H2と;
(vi)SNRYSGQFVPAYAMDY(配列番号6)である配列F1−F16を含むHVR−H3と;
からなる群より選択される少なくとも1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、または6つの超可変領域(HVR)配列を含む。
ヒトVLκサブグループIコンセンサスフレームワーク1−4(配列番号9、10、99、100)
ヒトVLκサブグループI’コンセンサスフレームワーク1−4(配列番号9、101、99、100)
ヒトVLκサブグループIIコンセンサスフレームワーク1−4(配列番号102、103、104、100)
ヒトVLκサブグループIIIコンセンサスフレームワーク1−4(配列番号105、106、107、100)
ヒトVLκサブグループIVコンセンサスフレームワーク1−4(配列番号108、109、110、100)
フレームワーク配列内のKabatのHVRのL1、L2、およびL3の位置は、影付きのボックスとして示される。
I.序
本発明は、Robo4またはその一部に結合する組成物、このような組成物を備えるキットおよび製品、ならびにこのような組成物を用いる方法であって、例えば、Robo4レに結合するリガンドを調節するため、およびRobo4レセプターに対するリガンド結合と関連する生物学的/生理学的な活性を調節するための方法を包含する方法を提供する。本発明は、治療および診断(例えば、インビボ、インビトロ、またはエキソビボの画像化)の標的として有用なレセプターであるRobo4レセプターに結合する種々の抗Robo4抗体の特異性に一部は基づく。本発明の抗Robo4抗体は、異常または所望されない内皮細胞増殖、例えば、障害における異常または望ましくない血管細胞増殖に関連する生理学的状態を標的するのにおける使用のための治療剤および診断剤として都合よく用いられ得、この障害としては限定はしないが、ガン、血管形成の調節不全およびこの障害を経験している組織内の内皮細胞増殖と関連する(例えば、それによって、増強される)障害、固形腫瘍および転移、アテローム性動脈硬化症、水晶体後部線維増殖症、血管腫、慢性炎症、眼内新生血管疾患、例えば、増殖性網膜症、例えば、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性症(AMD)、血管新生緑内障、移植角膜組織および他の組織の免疫拒絶、関節リウマチ、および乾癬が挙げられる。本発明の抗Robo4抗体は、単独で、または追加の薬剤(抗悪性腫瘍組成物、化学療法剤、細胞傷害性剤、増殖阻害剤を含む)と組み合わせて用いられてもよい。ある実施形態では、本発明は、Robo4機能をブロックするためにRobo4標的化抗体を特定および/または用いるための方法を提供し、Robo4を発現する細胞に対して(例えば、その細胞表面に)細胞傷害性剤を送達し、および/またはその細胞表面上にRobo4を発現する細胞に対して造影剤を送達する。例えば、ある実施形態では、検出可能に標識された抗Robo4抗体は好都合には、血管形成の増大が有害である疾患状態(例えば、ガンおよび黄斑変性症)のための、あるいは内皮細胞増殖、血管細胞増殖および/または血管形成が望ましい状態である(例えば、創傷治癒などにおける)生理学的状態のための造影剤として用いられてもよい。
本明細書において用いる場合、以下の用語は、特記しない限り、下でそれらに関して考えられる意味を有する。
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(配列番号128)−H1−WVRQAPGKGLEWV(配列番号129)−H2−RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC(配列番号131)−H3−WGQGTLVTVSS(配列番号16)。別の実施形態では、VHサブグループIIIコンセンサスフレームワークアミノ酸配列は、以下の各々の配列のうちの少なくとも一部または全てを含む:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(配列番号128)−H1−WVRQAPGKGLEWV(配列番号129)−H2−RFTISADTSKNTAYLQMNSLRLRAEDTAVYYC(配列番号137)−H3−WGQGTLVTVSS(配列番号16)。
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(配列番号9)−L1−WYQQKPGKAPKLLIY(配列番号10)−L2−GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(配列番号99)−L3−FGQGTKVEIK(配列番号100)。
100×分数X/Y
ここで、XはAおよびBのプログラムアライメントにおいて配列アライメントプログラムALIGN−2により同一マッチとして採点されたアミノ酸残基の数であり、YはBにおけるアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Aの長さがアミノ酸配列Bの長さと等しくない場合は、Bに対するAのアミノ酸配列同一性%はAに対するBのアミノ酸配列同一性%と等しくならないことが理解される。
一局面では、本発明は、Robo4に結合する抗体を提供する。一実施形態では、抗Robo4抗体は、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗Robo4抗体は、抗体フラグメント、例えば、Fab、Fab’−SH、Fv、scFv、または(Fab’)2フラグメントである。一実施形態では、抗Robo4抗体はキメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体である。一実施形態では、抗Robo4抗体は精製されている。
それらの抗体は、親和性成熟されて、YW71.22.S1.2、YW71.22S1.8、YW71.22S1.16、YW71.22S1.23、YW71.22S1.24、YW71.22S1.27、YW71.22S1.31、YW71.22S1.38、YW71.22S1.77 YW71.22.S2.21、YW71.22.S2.79、YW71.22.H1.2、YW71.22.H1.9、YW71.22.H1.46、YW71.22.H1.77、YW71.22.H1.91、およびYW71.22.H2.31を生成する。この抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメインの配列は、図1および図2に示される。
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(配列番号13)を含むFR1、
WVRQAPGKGLEWV(配列番号14)を含むFR2、
RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYC(配列番号15)を含むFR3を含むFR3、
WGQGTLVTVSS(配列番号16)を含むFR4。
ヒトVHサブグループIコンセンサスフレームワーク1−4マイナスKabatCDRs(配列番号111、112、113、16);
ヒトVHサブグループIコンセンサスフレームワーク1−4マイナス伸長した超可変領域(配列番号114、115、113、16または配列番号114、115、116、16または配列番号114、115、117、16);
ヒトVHサブグループIIコンセンサスフレームワーク1−4マイナスKabatCDRs(配列番号118、119、120、16);
ヒトVHサブグループIIコンセンサスフレームワーク1−4マイナス伸長した超可変領域(配列番号121、122、120、16または配列番号121、122、123、16または配列番号121、122、124、16);
ヒトVHサブグループIIIコンセンサスフレームワーク1−4マイナスKabatCDRs(配列番号125、126、127、16);
ヒトVHサブグループIIIコンセンサスフレームワーク1−4マイナス伸長した超可変領域(配列番号128、129、127、16または配列番号128、129、130、16または配列番号128、129、131、16);
ヒトVHアクセプター1フレームワーク1−4マイナスKabatCDR(配列番号132、126、133、16);
ヒトVHアクセプター1フレームワーク1−4マイナス伸長した超可変領域(配列番号128、129、133、16または配列番号128、129、134、16);
ヒトVHアクセプター2フレームワーク1−4マイナスKabatCDRs(配列番号132、126、135、16);または
ヒトVHアクセプター2フレームワーク1−4マイナス伸長した超可変領域(配列番号128、126、135、16または配列番号128、126、136、16または配列番号128、126、137、16)。
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(配列番号9)を含むFR1、
WYQQKPGKAPKLLIY(配列番号10)を含むFR2、
GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(配列番号11)を含むFR3、
FGQGTKVEIKR(配列番号173)またはFGQGTKMEIKR(配列番号139)を含むFR4。
他の実施形態では、このVLコンセンサスフレームワークは以下を含む:
ヒトVLκサブグループIコンセンサスフレームワーク1−4(配列番号9、10、99、100);
ヒトVLκサブグループIコンセンサスフレームワーク1−4(配列番号9、101、99、100);
ヒトVLκサブグループIIコンセンサスフレームワーク1−4(配列番号102、103、104、100);
ヒトVLκサブグループIIIコンセンサスフレームワーク1−4(配列番号105、106、107、100);または
ヒトVLκサブグループIVコンセンサスフレームワーク1−4(配列番号108、109、110、100)
アクセプターは、ヒト免疫グロブリン由来であろうと、またはヒトコンセンサスフレームワーク由来であろうと、選択されたヒトフレームワーク配列に対して配列が同一であってもよいが、本発明は、このアクセプター配列がヒト免疫グロブリン配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列に対して既存のアミノ酸置換を含み得るということを考慮する。これらの既存の置換は好ましくは、最小;通常はヒトの免疫グロブリン配列またはコンセサスなフレームワーク配列に対して4、3、2または1個のアミノ酸の相違のみである。
本発明は抗体フラグメントを包含する。抗体フラグメントは、伝統的な手段、例えば、酵素消化によって、または組み換え技術によって生成されてもよい。特定の環境では、抗体まるごとではなく、抗体フラグメントを用いる利点がある。より小さいサイズのフラグメントによって、急速なクリアランスが可能になり、固形腫瘍への接近が改善され得る。特定の抗体フラグメントの概説については、Hudsonら(2003)Nat.Med.9:129〜134を参照のこと。
本発明はヒト化抗体を包含する。非ヒト抗体をヒト化するための種々の方法が当該分野で公知である。例えば、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源からその抗体に1つ以上のアミノ酸残基が導入されていてもよい。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、「輸入、インポート(import)」残基と称され、この残基は、代表的には「輸入、インポート」可変ドメインから取り入れられる。ヒト化は本質的に、ヒト抗体の対応配列を超可変領域配列に置換することによって、Winterおよび共同研究者らの方法(Jonesら、(1986)Nature,321:522〜525;Riechmannら、(1988)Nature,332:323〜327;Verhoeyenら、(1988)Science,239:1534〜1536)に従って行うことができる。したがって、このような「ヒト化」抗体とは、インタクトなヒト可変ドメインよりも実質的に小さな配列が非ヒト種由来の対応する配列に置換されているキメラ抗体(米国特許第4,816,567号)である。実際にはヒト化抗体は、代表的には一部の超可変部残基と、可能性があることには一部のFR残基とが、げっ歯動物抗体の類似部位由来の残基に置換されているヒト抗体である。
本発明のヒト抗体は上記したとおりヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択したFvクローン可変ドメイン配列(単数または複数)と公知のヒト定常ドメイン配列(単数または複数)とを組み合わせることにより構築できる。あるいは本発明のヒトモノクローナル抗体はハイブリドーマ法により作成できる。ヒトモノクローナル抗体の製造のためのヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株は例えばKozbor J.Immunol.,133:3001(1984);Brodeurら、Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,pp.51〜63(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)およびBoernerら、J.Immunol.,147:86(1991)に記載されている。
ある実施形態においては、本明細書に記載した抗体のアミノ酸配列の修飾(単数または複数)が意図される。例えば、抗体の結合親和性および/または他の生物学的特性を向上させることが望まれる場合がある。抗体のアミノ酸配列改変体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な変化を導入することによるか、または、ペプチド合成により調製され得る。このような修飾としては、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、および/または残基の挿入および/または置換が挙げられる。欠失、挿入および置換のいずれかの組み合わせを最終構築物に到達するまで行ってよいが、ただし最終構築物は所望の特性を保有しなければならない。アミノ酸の改変は配列が作成される時点で対象となる抗体のアミノ酸配列に導入されてもよい。
(1)非極性:Ala(A)、Val(V)、Leu(L)、Ile(I)、Pro(P)、Phe(F)、Trp(W)、Met(M)
(2)無電荷極性:Gly(G)、Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q)
(3)酸性:Asp(D)、Glu(E)
(4)塩基性:Lys(K)、Arg(R)、His(H)。
(1)疎水性:ノルロイシン、Met、Ala、Val、Leu、Ile;
(2)中性親水性:Cys、Ser、Thr、Asn、Gln;
(3)酸性:Asp、Glu;
(4)塩基性:His、Lys、Arg;
(5)鎖配向に影響する残基:Gly、Pro;
(6)芳香族:Trp、Tyr、Phe。
本発明の抗体は、さらに改変されて、当該分野で公知でありかつ容易に利用可能である、さらなる非タンパク質性部分を含んでもよい。好ましくは、抗体の誘導体化に適する部分は、水溶性ポリマーである。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、限定はしないが、ポリエチレングリコール(PEG)、エチレングリコール/プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−1,3−ジオキソラン、ポリ−1,3,6−トリオキサン、エチレン/無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸(ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか)およびデキストランまたはポリ(n−ビニルピロリドン)ポリエチレングリコール、プロプロピレン(propropylene)グリコールホモポリマー、プロリプロプレン(prolypropylene)オキシド/エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール(例えば、グリセロール)、ポリビニルアルコール、およびそれらの混合物が挙げられる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性に起因して製造の利点を有するだろう。ポリマーは、任意の分子量のポリマーであってもよく、分枝状であっても、非分枝状であってもよい。抗体に結合されるポリマーの数は、変動し得、2つ以上のポリマーが結合される場合、それらは同じであっても、または異なる分子であってよい。一般的に、誘導体化のために用いられるポリマーの数および/または型は、検討に基づいて決定することができ、その検討としては、抗体誘導体が定められた条件下での治療等に使用されるかどうかにかかわらず、改善されるべき抗体の特定の性質または機能を含むが、これらに限定されない。
A.ファージ由来の抗体を作製する工程
本発明の抗体は、Leeら、J.Mol.Biol.(2004),340(5):1073−93)に開示されるファージ(ミド)ディスプレイ技術によって調製されてもよい。ファージ(ミド)ディスプレイによって、標的分子に対して高い親和性で結合する配列について迅速に分類できる、タンパク質改変体の大きいライブラリーの作製が可能になる。改変体ポリペプチドをコードする核酸は一般には、ウイルスコートタンパク質、例えば、遺伝子IIIタンパク質または遺伝子VIIIタンパク質をコードしている核酸配列に融合される。タンパク質またはポリペプチドをコードしている核酸配列が、遺伝子IIIタンパク質の一部をコードする核酸配列に融合されている一価のファージミドディスプレイシステムが開発されている。(Bass,S.,Proteins,8:309(1990);LowmanおよびWells,Methods: A Companion to Methods in Enzymology,3:205(1991))。一価のファージミドディスプレイシステムでは、遺伝子融合物が低レベルで発現し、野生型遺伝子IIIタンパク質も粒子の感染性が維持されるように発現されている。ペプチドライブラリーを作製してそのライブラリーをスクリーニングする方法は多くの特許で開示されている(例えば、米国特許第5,723,286号、米国特許第5,432,018号、米国特許第5,580,717号、米国特許第5,427,908号および米国特許第5,498,530号を参照のこと)。
G グアニン
A アデニン
T チミン
C シトシン
R(AまたはG)
Y(CまたはT)
M(AまたはC)
K(GまたはT)
S(CまたはG)
W(AまたはT)
H(AまたはCまたはT)
B(CまたはGまたはT)
V(AまたはCまたはG)
D(AまたはGまたはT)H
N(AまたはCまたはGまたはT)
例えば、コドンのセットDVKでは、DはヌクレオチドAであっても、またはGであっても、またはTであってもよい;VはAであっても、またはGであっても、またはCであってもよい;そしてKはGであっても、またはTであってもよい。このコドンのセットは、18個の異なるコドンに相当し得、かつアミノ酸Ala、Trp、Tyr、Lys、Thr、Asn、Lys、Ser、Arg、Asp、Glu、Gly、およびCysをコードし得る。
(i)配列番号1の配列を含むHVR−L1配列
(ii)配列番号2の配列を含むHVR−L2配列
(iii)配列番号3の配列を含むHVR−L3配列。
(i)配列番号4の配列を含むHVR−H1配列
(ii)配列番号5の配列を含むHVR−H2配列
(iii)配列番号6の配列を含むHVR−H3配列。
本発明のモノクローナル抗体はまた、Kohlerら、Nature,256:495(1975)によって最初に記載され、さらに、例えば、Hongoら、Hybridoma,14(3):253−260(1995)、Harlowら、Antibodies:A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,第2版、1988);Hammerlingら、in:Monoclonal Antibodies and T−Cell Hybridomas 563−681(Elsevier,N.Y.,1981)、およびNi,Xiandai Mianyixue,26(4):265−268(2006)(ヒト−ヒトのハイブリドーマに関する)に記載されたハイブリドーマ法を用いて作製され得る。さらなる方法としては、ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒト天然IgM抗体の産生に関する、例えば、米国特許第7,189,826号に記載の方法が挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術(トリオーマ技術)は、VollmersおよびBrandlein,Histology and Histopathology,20(3):927−937(2005)、ならびにVollmersおよびBrandlein,Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3):185−91(2005)に記載される。他のハイブリドーマ技術は、例えば、米国特許出願公開第2006/258841号;米国特許出願公開第2006/183887号(完全ヒト抗体)、米国特許出願公開第2006/059575号;米国特許出願公開第2005/287149号;米国特許出願公開第2005/100546号;米国特許出願公開第2005/026229号;ならびに米国特許第7,078,492号および同第7,153,507号に記載されている。
抗体はまた、組み換え方法を用いて産生されてもよい。抗Robo4抗体の組み換え産生のためには、抗体をコードする核酸を単離して、さらなるクローニング(DNAの複製)のために、または発現のために複製ベクターに挿入する。抗体をコードするDNAは、従来の手順を用いて容易に単離および配列決定し得る(例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に対して特異的に結合し得るオリゴヌクレオチドプローブを用いることによって)。多くのベクターが利用可能である。このベクター成分は一般には、限定はしないが、以下の1つ以上を包含する:シグナル配列、複製起点、1つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列。
本発明の抗体は、直接だけでなく、異種ポリペプチド(好ましくは、成熟タンパク質またはポリペプチドのN末端に特定の切断部位を有するシグナル配列または他のポリペプチドである)との融合ポリペプチドとしても組み換え的に産生され得る。選択される異種シグナル配列は、好ましくは、宿主細胞によって認識およびプロセシングされる(すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される)配列である。天然の抗体のシグナル配列を認識およびプロセシングしない原核生物宿主細胞については、シグナル配列は、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、lppまたは熱安定なエンテロトキシンIIリーダーの群から例えば選択される原核生物シグナル配列によって置換される。酵母の分泌に関しては、天然のシグナル配列は、例えば、酵母インベルターゼリーダー、α因子リーダー(SaccharomycesおよびKluyveromycesのα因子リーダーを含む)、または酸ホスフォターゼリーダー、C.albicansのグルコアミラーゼリーダー、国際公開第90/13646号に記載されているシグナルによって置換されてもよい。哺乳動物細胞の発現においては、哺乳動物シグナル配列、およびウイルス分泌リーダー、例えば、単純ヘルペスgDシグナルが利用可能である。
発現ベクターおよびクローニングベクターは両方とも1つ以上の選択された宿主細胞においてベクターの複製を可能にする核酸配列を含む。一般には、クローニングベクターでは、この配列は、ベクターが宿主の染色体DNAと独立して複製できる配列であって、複製起点または自律的に複製する配列を包含する。このような配列は種々の細菌、酵母およびウイルスについて周知である。プラスミドpBR322に由来する複製起点は、大部分のグラム陰性細菌に好適であり、2μのプラスミドの起点は酵母に適しており、様々なウイルスの起点(SV40、ポリオーマ、アデノウイルス、VSVまたはBPV)は哺乳動物細胞におけるクローニングベクターに有用である。一般には、複製コンピテントの起点は、哺乳動物発現ベクターには必要がない(SV40起点は代表的には、それが初期プロモーターを含むという理由だけで用いられ得る)。
発現ベクターおよびクローニングベクターは、選択マーカーとも呼ばれる選択遺伝子を含んでもよい。代表的な選択遺伝子は、(a)抗生物質または他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサートもしくはテトラサイクリンに対する耐性を付与するタンパク質、(b)栄養要求性の欠損を補完するタンパク質、または(c)複合培地から利用できない重要な栄養素を供給するタンパク質(例えば、BacilliについてのD−アラニンラセマーゼをコードする遺伝子)をコードする。
発現ベクターおよびクローニングベクターは通常、宿主生物体によって認識され、かつ抗体をコードする核酸に作動可能に連結されるプロモーターを含む。原核生物宿主との使用に適切なプロモーターとしては、phoAプロモーター、β−ラクタマーゼおよびラクトースプロモーター系、アルカリホスファターゼプロモーター、トリプトファン(trp)プロモーター系、およびハイブリッドプロモーター、例えば、tacプロモーターが挙げられる。しかし、他の公知の細菌プロモーターが適切である。細菌の系での使用のためのプロモーターはまた、抗体をコードするDNAに対して作動可能に連結されたシャイン・ダルガーノ(Shine−Dalgarno)(S.D.)配列を含むであろう。
高等な真核生物による本発明の抗体をコードするDNAの転写はしばしば、ベクターへのエンハンサー配列の挿入によって増大される。多くのエンハンサー配列が現在、哺乳動物遺伝子から公知である(グロブリン、エラスターゼ、アルブミン、αフェトプロテインおよびインスリン)。しかし、代表的には、当業者は、原核生物細胞ウイルス由来のエンハンサーを用いている。例としては、複製起点の後期側のSV40エンハンサー(bp100〜270)、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。また、原核生物プロモーターの活性化についてのエレメントのエンハンサーに対しては、Yaniv,Nature 297:17〜18(1982)を参照のこと。このエンハンサーは、抗体コード配列に対して5’位置または3’位置でベクター中にスプライシングされてもよいが、好ましくはプロモーターから5’部位に位置する。
原核生物宿主細胞(酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒトまたは他の多細胞生物体由来の核形成細胞)において用いられる発現ベクターはまた、転写の終結のため、およびmRNAの安定化のために必要な配列を含む。このような配列は、真核生物またはウイルスのDNAもしくはcDNAの5’および時には3’非翻訳領域から商業的に入手可能である。これらの領域は、抗体をコードするmRNAの非翻訳部分におけるポリアデニル化フラグメントとして転写されたヌクレオチドセグメントを含む。1つの有用な転写終止成分は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。WO94/11026およびそこに記載される発現ベクターを参照のこと。
本明細書におけるベクターでDNAをクローニングまたは発現するための適切な宿主細胞は、上記される原核生物、酵母または高等な真核生物の細胞である。この目的のために適切な原核生物としては、真正細菌、例えば、グラム陰性またはグラム陽性の生物体、例えば、Enterobacteriaceae、例えば、Escherichia、例えば、E.coli、Enterobacter、Erwinia、Klebsiella、Proteus、Salmonella、例えば、Salmonella typhimurium、Serratia、例えば、Serratia marcescans、およびShigella、ならびにBacilli、例えば、B.subtilisおよびB.licheniformis(例えば、1989年4月12日公開、DD266,710に開示されるB.licheniformis 41P)、Pseudomonas、例えば、P.aeruginosaおよびStreptomycesが挙げられる。1つの好ましいE.coliクローニング宿主は、E.coli294(ATCC31,446)であるが、他の株、例えば、E.coli B、E.coli X1776(ATCC31,537)およびE.coli W3110(ATCC27,325)が適切である。これらの例は限定ではなく例示である。
本発明の抗体を生成するために用いられる宿主細胞は、種々の培地中で培養され得る。市販の培地、例えば、Ham’s F10(Sigma)、最少基本培地(Minimal Essential Medium)((MEM)、(Sigma)、RPMI−1640(Sigma)、およびダルベッコ改変イーグル培地(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium)((DMEM),Sigma)が宿主細胞を培養するのに適切である。さらに、Hamら、Meth.Em.58:44(1979),Barnesら、Anal.Biochem 102:255(1980)、米国特許第4,767,704号;同第4,657,866号;同第4,927,762号;同第4,560,655号;または同第5,122,469号;国際公開第90/03430号;国際公開第87/00195号;または米国再発行特許第30,985号に記載される任意の培地が、宿主細胞のための培養培地として用いられ得る。任意のこれらの培地には、ホルモンおよび/または他の増殖因子(例えば、インスリン、トランスフェリン、または上皮増殖因子)、塩(例えば、塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウムおよびリン酸塩)、緩衝液(例えばHEPES)、ヌクレオチド(例えば、アデノシンおよびチミジン)、抗生物質(例えば、GENTAMYCIN(商標)薬物)、微量元素(最終濃度でマイクロモル範囲で通常存在する無機化合物として規定される)、およびグルコースまたは等価なエネルギー供給源が必要に応じて補充されてもよい。任意の他の必要な補充物も、当業者に公知である適切な濃度で含まれてもよい。培養条件、例えば、温度、pHなどは、発現のために選択された宿主細胞とともに以前に用いられているものであって、当業者には明白である。
組み換え技術を用いる場合、この抗体は、細胞内で、細胞膜周辺腔で生成され得、または培地に直接分泌され得る。抗体が細胞内で生成される場合、第一工程として、微粒子細片が、宿主細胞または溶解されたセグメントから、例えば、超遠心または限外濾過によって除去される。Carterら、Bio/Technology 10:163〜167(1992)は、E.coliの細胞膜周辺腔に分泌される抗体を単離するための手順を記載している。要するに、細胞ペーストを酢酸ナトリウム(pH3.5)、EDTAおよびフェニルメチルスルホニルフッ化物(PMSF)の存在下で約30分以上にわたって解凍する。細胞細片は、遠心分離によって除去され得る。抗体が培地に分泌される場合、このような発現系からの上清は一般に、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、AmiconまたはMillipore Pellicon超遠心ユニットを用いて最初に濃縮される。プロテアーゼインヒビター、例えば。PMSFが、タンパク質分解を阻害するための任意の前述の工程に含まれてもよく、そして抗生物質が、アデノウイルス混入物の増殖を妨げるために含まれてもよい。
本発明はまた、免疫コンジュゲート(「抗体−薬物コンジュゲート」または「ADC」と交換可能に言及される)であって、1つ以上の細胞傷害性剤、例えば、化学療法剤、薬物、増殖阻害剤、毒素(例えば、細菌、真菌、植物または動物由来の酵素的に活性な毒素、またはそのフラグメント)、または放射性同位体(すなわち、放射性コンジュゲート)に対してコンジュゲートされた本発明の任意の抗Robo4抗体を含む免疫コンジュゲートを提供する。抗体および1つ以上の低分子の毒素、例えば、カリケアマイシン、メイタンシノイド、トリコテセンおよびCC1065、ならびに毒素活性を有するこれらの毒素の誘導体のコンジュゲートも本明細書で考慮される。
本発明の免疫コンジュゲート(または「抗体−薬物コンジュゲート」(「ADC」))は、下の式Iであってもよく、ここで抗Robo4抗体が、任意のリンカー(L)を通じて1つ以上の薬物部分(D)に対してコンジュゲート(すなわち、共有結合)されている。
従って、この抗Robo4抗体は、薬物に対して直接またはリンカーを介してコンジュゲートされ得る。式Iでは、pは1抗体あたりの薬物部分の平均数であって、これは1抗体あたり、例えば、約1〜約20個の薬物部分に及んでもよく、特定の実施形態では、1抗体あたり約1〜約8個の部分に及んでもよい。
例示的なリンカーおよび薬物部分は、本明細書において、ならびに米国特許出願公開第20050238649号A1;同第20050276812号A1;および同第20070092940号A1に開示される。リンカーは1つ以上のリンカー成分を含んでもよい。例示的なリンカー成分としては、6−マレイミドカプロイル(「MC」)、マレイミドプロパノイル(「MP」)、バリン−シトルリン(「val−cit」または「vc」)、アラニン−フェニルアラニン(「ala−phe」)、p−アミノベンジルオキシカルボニル(a「PAB」)、N−スクシンイミジル4−(2−ピリジルチオ)ペンタノエート(「SPP」),N−スクシンイミジル4−(N−マレイミドメチル)シクロヘキサン−1カルボキシレート(「SMCC」)、およびN−スクシンイミジル(4−ヨード−アセチル)アミノベンゾエート(「SIAB」)、N−スクシンイミジル3−(2−ピリジルジチオ)プロピオネート(SPDP)(例えば、Carlssonら、Biochem.J.,173,723−737(1978)を参照のこと)、N−スクシンイミジル4−(2−ピリジルジチオ)ブタノエート(SPDB)(例えば、米国特許第4,563,304号を参照のこと)、N−スクシンイミジル4−メチル−4−[2−(5−ニトロ−ピリジル)−ジチオ]ペンタノエート(SMNP)、およびポリエチレングリコール誘導体、メトキシ−ポリエチレンオキシド(mPEO)が挙げられる。種々のリンカー成分が当該分野で公知であって、そのいくつかは下に記載されている。
Ab−([Aa−Ww−Yy]-D)p 式II
ここでAは、ストレッチャー単位であり、そしてaは0〜1の整数である;Wはアミノ酸単位であって、かつwは0〜12の整数である;Yは、スペーサー単位であって、かつyは0、1、または2であり;かつAb、D、およびpは式Iについて上記されたとおりである。このようなリンカーの例示的な実施形態は、米国特許出願公開第20050238649号A1に記載されており、これは参照によって本明細書に明示的に援用される。
1.メイタンシンおよびメイタンシノイド
ある実施形態では、免疫コンジュゲートは、1つ以上のメイタンシノイド分子にコンジュゲートされた本発明の抗体を含む。メイタンシノイドは、チューブリン重合を阻害することによって作用する***抑制因子である。メイタンシンは、東アフリカの低木Maytenus serrataから始めて単離された(米国特許第3,896,111号)。続いて、特定の微生物がまた、メイタンシノールおよびC−3メイタンシノールエステルなどのメイタンシノイドを産生することも発見された(米国特許第4,151,042号)。合成メイタンシノールならびにその誘導体およびアナログは、例えば、米国特許第4,137,230号、同第4,248,870号、同第4,256,746号、同第4,260,608号、同第4,265,814号、同第4,294,757号、同第4,307,016号、同第4,308,268号、同第4,308,269号、同第4,309,428号、同第4,313,946号、同第4,315,929号、同第4,317,821号、同第4,322,348号、同第4,331,598号、同第4,361,650号、同第4,364,866号、同第4,424,219号、同第4,450,254号、同第4,362,663号および同第4,371,533号(これらの開示は、参考として本明細書に明確に援用される)に開示されている。
いくつかの実施形態では、免疫コンジュゲートは、ドラスタチンまたはドロスタチンペプチド性アナログまたは誘導体、例えば、アウリスタチン(auristatin)(米国特許第5635483号;同第5780588号)にコンジュゲートされた本発明の抗体を含む。ドラスタチンおよびアウリスタチンは、微小管動態、GTP加水分解、および核と細胞との分割を妨げて(Woykeら(2001)Antimicrob.Agents and Chemother.45(12):3580−3584)、抗癌活性(米国特許第5663149号)および抗真菌性活性(Pettitら(1998)Antimicrob.Agents Chemother.42:2961−2965)を有することが示されている。ドラスタチンまたはアウリスタチンの薬物部分は、ペプチド性薬物部分のN(アミノ)末端またはC(カルボキシル)末端を通じて抗体に結合され得る(国際公開第02/088172号)。
R2はHおよびC1−C8アルキルから選択され;
R3はH、C1−C8アルキル、C3−C8炭素環、アリール、C1−C8アルキル−アリール、C1−C8アルキル−(C3−C8炭素環)、C3−C8複素環およびC1−C8アルキル−(C3−C8複素環)から選択され;
R4はH、C1−C8アルキル、C3−C8炭素環、アリール、C1−C8アルキル−アリール、C1−C8アルキル−(C3−C8炭素環),C3−C8複素環およびC1−C8アルキル−(C3−C8複素環)から選択され;
R5はHおよびメチルから選択されるか;
あるいはR4およびR5は結合して、炭素環を形成して、式−(CRaRb)n−を有し、ここでRaおよびRbは独立してH、C1−C8アルキルおよびC3−C8炭素環から選択され、かつnは2、3、4、5および6から選択され;
R6はHおよびC1−C8アルキルから選択され;
R7はH、C1−C8アルキル、C3−C8炭素環、アリール、C1−C8アルキル−アリール、C1−C8アルキル−(C3−C8炭素環)、C3−C8複素環およびC1−C8アルキル−(C3−C8複素環)から選択され;
各々のR8は独立してH、OH、C1−C8アルキル、C3−C8炭素環およびO−(C1−C8アルキル)から選択され;
R9はHおよびC1−C8アルキルから選択され;
R10はアリールまたはC3−C8複素環から選択され;
ZはO、S、NH、またはNR12であって、R12はC1−C8アルキルであり;
R11はH、C1−C20アルキル、アリール、C3−C8複素環、−(R13O)m−R14、または−(R13O)m−CH(R15)2から選択され;
mは1〜1000の範囲の整数である;
R13はC2−C8アルキルである;
R14はHまたはC1−C8アルキルである;
R15の各々の出現は独立して、H、COOH、-(CH2)n−N(R16)2、-(CH2)n−SO3H、または−(CH2)n−SO3−C1−C8アルキルである;
R16の各々の出現は独立して、H、C1−C8アルキル、または-(CH2)n−COOHである;
R18は−C(R8)2−C(R8)2-アリール、-C(R8)2-C(R8)2-(C3−C8複素環)、および−C(R8)2−C(R8)2−(C3−C8炭素環)から選択され;そして
nは0〜6におよぶ整数である。
目的の別の免疫コンジュゲートは、1つ以上のカリケアマイシン分子とコンジュゲートした抗体を含む。抗生物質のカリケアマイシンファミリーは、ピコモル未満の濃度で二重鎖DNA破壊を生じることができる。カリケアマイシンファミリーのコンジュゲートの調製については、米国特許第5712374号、同5714586号、同5739116号、同5767285号、同5770701号、同5770710号、同5773001号、同5877296号(全て、American Cyanamid Company)を参照のこと。使用可能なカリケアマイシンの構造的アナログとしては、限定するものではないが、γ1 I、α2 I、α3 I、N−アセチル−γ1 I、PSAGおよびθI 1(Hinmanら、Cancer Research, 53:3336−3342(1993)、Lodeら、Cancer Research, 58:2925−2928(1998)および上述したAmerican Cyanamidの米国特許)が挙げられる。抗体が結合可能な別の抗癌剤は、葉酸代謝拮抗薬であるQFAである。カリケアマイシンおよびQFAは両方とも、細胞内の作用部位を有し、原形質膜を容易に通過しない。従って、抗体媒介性の内部移行を通じたこれらの薬剤の細胞への取込により、その細胞傷害性効果が大きく向上する。
本発明の抗体と結合可能な他の抗腫瘍剤としては、BCNU、ストレプトゾイシン、ビンクリスチンおよび5−フルオロウラシル、米国特許第5053394号、同第5770710号に記載されており、総称的にLL−E33288複合体として公知の薬剤のファミリー、並びにエスペラマイシン(esperamicine)(米国特許第5877296号)が挙げられる。
薬物充填(率)は、pによって提示され、式I、Ia、Ia’またはIIの分子における、1抗体あたりの薬物部分の平均数である。薬物充填率は、1抗体あたり1〜20個の薬物部分(D)の範囲であってもよい。式IのADCsは、1〜20個の薬物部分の範囲でコンジュゲートされた抗体のコレクションを包含する。コンジュゲーション反応からのADCの調製における1抗体あたりの薬物部分の平均数は、質量分析、ELISAアッセイ、およびHPLCなどの従来の集団によって特徴づけられ得る。pに関するADCの定量的分布も、決定され得る。ある場合には、均質なADCの分離、精製および特徴づけ(ここではpは他の薬物充填を有するADCからの特定の値である)は、逆相HPLCまたは電気泳動などの方法によって得てもよい。
本発明の範囲内には、本明細書に記載したADC化合物のインビボ代謝産物もまた、そのような代謝産物が先行技術に照らして新規かつ非自明である範囲で包含される。そのような代謝産物は、例えば、投与された化合物の酸化、還元、加水分解、アミド化、エステル化、酵素的開裂などの結果として生じ得る。したがって、本発明は、その代謝産物を産生するために十分な期間にわたって本発明の化合物を哺乳動物と接触させる工程を含むプロセスによって生成される、新規かつ非自明の化合物を包含する。
本発明の抗体薬物コンジュゲート(ADC)では、抗体(Ab)を、リンカー(L)を通じて、1つ以上の薬物部分(D)、例えば抗体につき約1〜約20の薬剤部分にコンジュゲートする。式I、Ia、Ia’、またはIIのADCは、以下を含む、当業者に公知の有機化学反応、状態および試薬を使用するいくつかの経路によって調製され得る:(1)二価のリンカー試薬との抗体の求核基の反応であって共有結合を介してAb−Lを形成する反応、続いて薬物部分Dとの反応;および(2)二価のリンカー試薬との薬物部分の求核基の反応であって共有結合を介してD−Lを形成する反応、続いて抗体の求核基との反応。後者の経路を介して式IのADCを調製するための例示的な方法は、参照によって本明細書に明示的に援用される、米国特許出願公開第20050238649号A1に開示される。
(a)親抗体の1つ以上のアミノ酸残基をシステインによって置換する工程と;
(b)システイン操作抗体とチオール反応性試薬とを反応させることによってシステイン操作抗体のチオール反応性を決定する工程と。
このシステイン操作抗体は、親抗体よりもチオール反応性試薬と反応性であってもよい。
(a)システイン操作抗体を生成するために親抗体に1つ以上のシステインアミノ酸を導入する工程と;
(b)システイン操作抗体とチオール反応性試薬とのチオール反応性を決定する工程と;
ここでこのシステイン操作抗体は、親抗体よりもチオール反応性試薬と反応性である。
(i)システイン操作抗体をコードする核酸配列を変異誘発する工程と;
(ii)システイン操作抗体を発現する工程と;
(iii)システイン操作抗体を単離して精製する工程と。
(i)システイン操作抗体と、チオール反応性親和性試薬とを反応させて、親和性標識された、システイン操作抗体を生成する工程と;
(ii)この親和性標識された、システイン操作抗体の、捕獲媒体に対する結合を測定する工程と。
(a)システイン操作抗体を生成するために親抗体に1つ以上のシステインアミノ酸を導入する工程と;
(b)システイン操作抗体とチオール反応性親和性試薬とを反応させて、親和性標識されたシステイン操作抗体を生成する工程と;
(c)この親和性標識された、システイン操作抗体の捕獲媒体に対する結合を測定する工程と;
(d)システイン操作抗体とチオール反応性親和性試薬とのチオール反応性を決定する工程と。
(i)システイン操作抗体をコードする核酸配列を変異誘発させる工程と;
(ii)システイン操作抗体を発現する工程と;
(iii)システイン操作抗体を単離および精製する工程と。
(i)システイン操作抗体と、チオール反応性親和性試薬とを反応させて、親和性標識された、システイン操作抗体を生成する工程と;
(ii)この親和性標識された、システイン操作抗体の、捕獲媒体に対する結合を測定する工程と。
システイン操作抗体は、検出可能な標識で標識されても、固相支持体上に固定されても、および/または薬物部分とコンジュゲートされてもよい。
Ab(LD)p Ia
ここでpは1、2、3または4であって;ここでシステイン操作抗体は、1つ以上の遊離のシステインアミノ酸によって親抗体の1つ以上のアミノ酸残基を置換する工程を包含するプロセスによって調製される。薬物部分としては限定はしないが、メイタンシノイド、アウリスタチン、ドラスタチン、トリコテセン、CC1065、カリケアマイシン、および他のエンジイン抗生物質、タキサン、アントラサイクリン、ならびにその立体異性体、アイソスター、アナログまたは誘導体が挙げられる。例示的な薬物部分としてはDM1、MMAE、およびMMAFが挙げられる。例示的な抗体−薬物コンジュゲートは、米国特許出願公開第20070092940号A1に示される。
ABPAb(LD)p Ia’
ABP配列との融合タンパク質を含む本発明の抗体は以下:(i)Dennisら、(2002)J Biol Chem.277:35035−35043の表IIIおよびIV,35038頁;(ii)米国特許出願公開第20040001827号の[0076]配列番号9−22;ならびに(iii)国際公開第01/45746号の12〜13頁,配列番号z1〜z14、によって教示されており、その全てが参照によって本明細書に援用される。
本発明の化合物は、野生型抗体もしくは親抗体の1つ以上のアミノ酸が、システインアミノ酸と置き換えられている、システイン操作抗体を含む。抗体の任意の形態は、このように操作され得る(すなわち、変異され得る)。例えば、親Fab抗体フラグメントは、システイン操作Fabを形成するように操作され得、本明細書中で「チオFab(ThioMab)」と呼ばれる。同様に、親モノクローナル抗体は、「チオMab」を形成するように操作され得る。一部位の変異は、チオFabにおいて単一の操作システイン残基を生じ、一方、一部位の変異は、チオMabにおいてはIgG抗体の二量体の性質に起因して2つの操作システイン残基を生じることに注意すべきである。置き換えられた(「操作された」)システイン(Cys)残基を有する変異体は、新規に導入された操作チオール基の反応性について評価される。チオール反応性値は、0から1.0の範囲の相対的な数値の項であり、任意のシステイン操作抗体について測定され得る。本発明のシステイン操作抗体のチオール反応性値は、0.6〜1.0;0.7〜1.0;もしくは0.8〜1.0の範囲内である。
本発明の抗Robo4抗体(裸の抗Robo4抗体およびADCを含む)が、腫瘍または血管形成関連抗原、例えばRobo4の過剰発現によって例えば特徴付けられる、種々の疾患または障害を処置するために用いられ得ることが考えられる。過剰増殖性障害の例示的な状態としては、異常または所望されない内皮細胞増殖、例えば、異常または望ましくない血管細胞増殖の障害に関連する生理学的状態が挙げられ、これには限定はしないが、ガン、血管形成、ならびに固形腫瘍および転移と関連している(例えば、障害を経験している組織内の内皮細胞増殖によって増強される)障害、アテローム性動脈硬化症、水晶体後部線維増殖症、血管腫、慢性炎症、眼内新生血管疾患、例えば、増殖性網膜症、例えば、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性症(AMD)、血管新生緑内障、移植角膜組織および他の組織の免疫拒絶、関節リウマチ、および乾癬が挙げられる。
本発明の抗Robo4抗体(および補助の治療剤)は、処置されるべき状態に適切な任意の経路(非経口、皮下、腹腔内、肺内および鼻腔内、ならびに局所処置について所望される場合は、病変内投与を含む)によって投与され得る。抗Robo4抗体は、代表的には、非経口的、すなわち、インフュージョン(注入)、皮下、筋肉内、静脈内、皮内、クモ膜下腔内、硬膜外、動脈内および腹腔内に投与される。さらにこの抗体は、パルスインフュージョンによって、特に漸減用量の抗体が適切に投与される。投薬は、任意の適切な経路によって、例えば、投与が短時間であるかまたは長期であるかに部分的には依存して、静脈内注射または皮下注射などの注射によってもよい。
一局面では、本発明はさらに、本発明の少なくとも1つの抗Robo4抗体、および/またはその少なくとも1つの免疫コンジュゲート、および/または本発明の少なくとも1つの抗Robo4抗体−薬物コンジュゲートを含む薬学的処方物を提供する。いくつかの実施形態では、薬学的処方物は、1)抗Robo4抗体および/または抗Robo4抗体−薬物コンジュゲート、および/またはその免疫コンジュゲート、ならびに薬学的に受容可能な担体を含む。ある実施形態では、薬学的処方物は、1)抗Robo4抗体および/またはその免疫コンジュゲート、ならびに少なくとも1つの追加の治療剤を含む。
本発明の抗Robo4抗体は、薬学的併用処方物または併用療法としての投薬レジメンにおいて、抗癌特性を有する少なくとも1つの追加の化合物と併用することができる。薬学的併用処方物または投薬レジメンの少なくとも1つの追加の化合物は好ましくは、お互いに有害に影響しないように抗Robo4抗体組成物生物に対して補完的な活性を有する。
本発明はまた、標識された抗Robo4抗体を提供する。標識された抗体は、診断アッセイにおいて、例えば、インビトロ、エキソビボ、またはインビボのアッセイにおいて、特異的な細胞または組織でのRobo4の発現を検出するために(例えば、血管形成、新血管新生および/または腫瘍脈管構造を画像化するために)有用であり得る。ある実施形態では、この標識された抗体は、インビボの画像化アッセイで用いられる。本発明の抗Robo4抗体は、抗体に対して共有結合し得る任意の標識部分とコンジュゲートされ得る。ある実施形態では、本発明の抗Robo4抗体(例えば、システイン操作抗Robo4抗体を含む)は、反応性のリジンまたはシステイン残基などの、抗体上の反応性基を通じて抗体に共有結合される。反応性のシステインチオール基を通じた共有結合は、Singhら、Anal.Biochem.304:147−15(2002);Harlow E.およびLane,D.(1999)Using Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Springs Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY;Lundblad R.L.(1991)Chemical Reagents for Protein Modification,第2版,CRC Press,Boca Raton,FL)に開示されている。
(a)ある実施形態では、抗Robo4抗体は、放射性同位体(放射性核種)例えば、3H、11C、14C、18F、19F、32P、35S、64Cu、68Ga、86Y、99Tc、111In、123I、124I、125I、131I、133Xe、177Lu、211Atまたは213Biで標識される。放射性同位体で標識された抗Robo4抗体は、Robo4を発現する細胞のレセプターを標的とした画像化に有用である(例えば、本発明の診断の使用、例えば、腫瘍内皮細胞、腫瘍の脈管構造、血管形成および新血管新生のインビボの画像化における使用のため)
(b)ある実施形態では、抗Robo4抗体は、Current Protocols in Immunology、1巻および2巻、Coligenら編,Wiley−Interscience、New York、NY、Pubs.(1991)に記載されている技術を用いて、結合するか、キレート化するか、またはさもなければ放射性同位体金属を錯体化するリガンド試薬(ここで、この試薬は、抗体の操作されたシステインチオールと反応性である)によって標識される。金属イオンを錯体化し得るキレート化リガンドとしては、DOTA、DOTP、DOTMA、DTPAおよびTETA(Macrocyclics,Dallas,TX)が挙げられる。DOTA−マレイミド(4−マレイミドブチルアミドベンジル−DOTA)のようなキレート化リンカー試薬は、Axworthyら(2000)PNAS USA 97(4):1802−1807の手順に従って、イソプロピルクロロホルメート(Aldrich)によって活性化された4−マレイミド酪酸(Fluka)とのアミノベンジル−DOTAの反応により調製され得る。DOTA−マレイミド試薬は、システイン操作抗体の遊離システインアミノ酸と反応し、そして抗体上に金属錯体形成リガンドを提供する(Lewisら、Bioconj.Chem.9:72−86(1998))。キレート化リンカー標識試薬(例えば、DOTA−NHS)(1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−四酢酸モノ(N−ヒドロキシスクシンイミドエステル)は、市販されている(Macrocyclics,Dallas,TX)。放射性核種は、本発明の抗体−薬物結合体との錯体形成を介して標的化され得る(Wuら、Nature Biotechnology 23(9):1137−1146(2005))。放射性核種で標識された抗体を用いたレセプター標的画像化は、腫瘍組織への抗体の進行性の蓄積の検出および定量によって、標的発現の増大のマーカーを提供し得る(Albertら、Bioorg.Med.Chem.Lett.8:1207−1210(1998))。コンジュゲートされた放射性金属は、リソソーム分解後、細胞内に維持され得る。
(i)西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)と、基質としての水素ペルオキシダーゼ(ここで、水素ペルオキシダーゼは、色素前駆体(例えば、オルトフェニレンジアミン(OPD)または3,3’,5,5’−テトラメチルベンジジン塩酸塩(TMB))を酸化する);
(ii)アルカリホスファターゼ(AP)と、色素形成性基質としてのパラ−ニトロフェニルホスフェート;および
(iii)−D−ガラクトシダーゼ(−D−Gal)と、色素形成性基質(例えば、p−ニトロフェニル−−D−ガラクトシダーゼ)または蛍光発生性基質4−メチルウンベリフェリル−−D−ガラクトシダーゼ。多数の他の酵素−基質の組み合わせが当業者に利用可能である。一般的な概説については、米国特許第4275149号および米国特許第4318980号を参照のこと。
本発明の別の局面では、上記の障害の処置、予防および/または診断のために有用な物質を含む製品が提供される。この製品は、容器、および表示または添付文書を、その容器上に、またはその容器に付随して備える。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどが挙げられる。この容器は、ガラスまたはプラスチックのような種々の物質から形成され得る。この容器は、この状態を処置、予防および/または診断するためにそれ自体でまたは別の組成物と組み合わされた場合有効である組成物を保持し、そして無菌のアクセスポートを有してもよい(例えば、容器は、静脈内溶液バッグであっても、または皮下注射針によって穿刺可能な栓を有するバイアルであってもよい)。この組成物における少なくとも1つの活性因子は、本発明の抗体である。この表示または添付文書は、この組成物が、選ばれた状態、例えば、ガンを処置するために用いられることを示している。さらに、この製品は、(a)その中に組成物を含む第一の容器であって、その組成物が本発明の抗体を含む第一の容器と;(b)その中に組成物を含む第二の容器であって、その組成物がさらなる細胞傷害性剤を含む第二の容器とを備える。本発明のこの実施形態の製品はさらに、この第一および第二の抗体組成物が、特定の状態、例えば、ガンを処置するために用いられ得ることを示している添付文書を備えてもよい。あるいは、またはさらに、この製品は、薬学的に受容可能な緩衝液、例えば、注射用静菌水(BWFI)、リン酸緩衝化生理食塩水、リンゲル溶液およびデキストロース溶液を含む第二(または第三)の容器を備えてもよい。これは、商業的見地および使用者の観点から所望される他の物質をさらに備えてもよく、これには他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針およびシリンジが挙げられる。
出発抗体の超可変領域をコードするファージ由来の抗体
HERCEPTIN(登録商標)抗HER2抗体であるrhuMAB 4D5−8(Genentech,Inc.)のVLおよびVHドメインの核酸配列を、HVRsの突然変異誘発のため、および図5Bに示されるヒトRobo4 His−タグ化抗原またはヒトRob4−Fc融合タンパク質に対する結合のためのファージ選択のための出発配列として用いた。抗体4D5は、Her−2(erbB2)として公知のガン関連抗原に特異的なヒト化抗体である。この抗体は、コンセンサスなフレームワーク領域を有する可変ドメインを含む;2〜3の位置は、ヒト化抗体の親和性増大のプロセスの間にマウス配列に戻った。ヒト化抗体4D5の配列および結晶構造は、米国特許第6,054,297号,Carterら、PNAS USA 89:4285(1992)に記載されており、その結晶構造は、J.Mol.Biol.229:969(1993)および、オンラインでwww/ncbi/nih/gov/structure/mmdb(MMDB#s−990−992)に示されている。The HERCEPTIN(登録商標)VLおよびVHドメインは、コンセンサスなヒトκIのVLドメインおよびヒトサブグループIIIコンセンサスVHドメインの改変体をそれぞれ含む。改変体のVHドメインは、ヒトのコンセンサスから3つの変化を有する:R71A,N73TおよびL78A。
重鎖HVRsの突然変異誘発によって生成される抗体
FabのクローンYW71.6,YW71.1,YW71.22、およびYW71.89は、huMAb 4D5−8(HERCEPTIN(登録商標)抗HER2抗体、Genentech,Inc.)重鎖のHVR−H1、H2、およびH3の突然変異誘発、ならびにヒトRobo4−Hisタグ化抗原融合タンパク質に対する選択によって生成した。HVR−H1では、Kabatの位置26(G)、27(F)、28(T)、29(I)、34(I)、および35(H)は一定に保持され、アミノ酸は位置30〜33で変化された。HVR−H2では、Kabatの位置51(I)、52a(P)、55(G)、57(T)、59(Y)、60(A)、61(D)、62(S)、63(V)、64(K)、および65(G)は一定に保持されて、位置49、50、52、53、54、56、および58が変化された。HVR−H3では、Kabatの位置93(A)および102(Y)は一定に保持されて、位置94〜100、100a〜h、および101が変化された。YW71.22の軽鎖は、改変huMAb 4D5−8配列(位置30、66および91で改変、配列番号168を生じ、これには配列番号1、2、および3を、それぞれHVR−L1、L2、およびL3として含む)、そのHVRsはファージ選択の間に変化されなかった。配列の多様性は、標準的な突然変異誘発技術を用いて選択されたアミノ酸位置の突然変異誘発によって各々の超可変領域に導入された。
HVRsのH1、H2、H3およびL3の改変によって作製した抗体
クローンYW79.1、YW79.8、およびYW79.11は、huMAb 4D5−8(HERCEPTIN(登録商標)抗HER2抗体、Genentech,Inc.)重鎖可変ドメインおよびhuMAb 4D5−8改変軽鎖可変ドメイン、配列番号168のHVR−H1、H2、H3およびL3の突然変異誘発によって作製した。HVR−H1では、Kabatの位置26(G)、28(T)、29(F)、30(S)、31(S)、および35(S)は一定に保持されており、アミノ酸は位置27、32−34で変化された。HVR−H2では、Kabatの位置49(S)、51(I)、55(G)、57(T)、59(Y)、60(A)、61(D)、62(S)、63(V)、64(K)、および65(G)は一定に保持されており、位置50、52、52a、53、54、56、および58が変化された。HVR−H3では、Kabatの位置93(A)、94(R)、100f〜g(欠失)は一定に保持されており、位置95〜100、100a〜e、100h、および102が変化された。HVR−L3では、Kabatの位置89(Q)、90(Q)、95(P)および97(T)は一定に保持されており、位置91〜94および96が変化された。HVR−L1の配列は、RASQSISSYLA(配列番号7)として一定に保持されており、HVR−L2の配列は、GASSRAS(配列番号8)として一定に保持された。配列の多様性は、標準的な突然変異誘発技術を用いて選択されたアミノ酸位置の突然変異誘発によって各々の超可変領域中に導入された。抗Robo4抗体クローンYW79.1、YW79.8、およびYW79.11を選択して、配列決定した。軽鎖および重鎖の可変領域の配列を図1Aおよび図1Bに示す。
可溶性のRobo4および抗Robo4抗体の精製
本実施例は、本発明のRobo4抗原および抗Robo4抗体の精製に有用な方法を記載する。Robo4抗原は、図5Bに示されるようなヒスチジンタグに融合された可溶性のRobo4細胞外ドメインとして精製した。
ヒトRobo4構築物(アミノ酸M1〜アミノ酸L461およびアミノ酸M1〜アミノ酸Y231)を、ヒトIgG1のFc部分に対する融合物として、またはC−末端ヒスチジンタグに対する融合物としてのいずれかで、真核生物発現ベクターpRK5にクローニングした。マウスRobo4(M1〜H232)を、C末端ヒスチジンタグのみに対する融合物としてpRK5中にクローニングした。全てのタンパク質は、CHO細胞の一過性のトランスフェクションによって産生した。Fc融合タンパク質については、プロテイン−A Sepharose(商標)(GE Healthcare)を、またはヒスチジンタグ融合物についてはNiNTA Superflow(商標)(Qiagen)のいずれかを用いてアフィニティークロマトグラフィーによって、タンパク質を90%を超える純度に精製した。必要に応じてイオン交換クロマトグラフィー工程(Q−またはSP−Sepharose(商標),GE Healthcare)および/またはサイズ排除クロマトグラフィー工程(Superdex(商標)75,GE Healthcare)を追加した。タンパク質の特定は、エドマン分解法を用いるN末端配列決定によって確認し、濃度はBCAアッセイによって、およびOD 280吸収測定によって決定して、純度はサイズ排除クロマトグラフィーおよびSDS−PAGEによって評価した。
全長Robo4抗体を、CHO細胞で一過性に発現して、プロテイン−A Sepharose(商標)GE Healthcare)を用いるアフィニティークロマトグラフィー、続いてSP−Sepharose(商標)GE Healthcare)を用いるイオン交換クロマトグラフィーによって95%を超える純度まで精製した。必要に応じて、さらなるサイズ排除クロマトグラフィー工程(Superdex(商標)200、GE Healthcare)を追加した。抗体濃度は、製造業者の指示(Pierce Chemical Co.)に従うBCAアッセイによって、およびOD 280吸収測定によって決定して、純度はサイズ排除クロマトグラフィーおよびSDS−PAGEによって評価した。全ての抗体精製については、レーザー光スキャッタリングによって決定した凝集の値は、5%未満であって、プロテインAのELISAで決定したプロテインAの値は50ppm未満であって、LAL(Limulus Amoebocyte Lysate)色素生産性内毒素アッセイによって決定した内毒素の値は0.5EU/mg未満であった。
YW71.22の親和性成熟
抗Robo4抗体YW71.22の親和性を改善するために、3つのファージ・ディスプレイ・ライブラリーをYW71.22のバックグラウンドで作製して、この各々がLeeら、J.Mol.Biol.340(5):1073−93(2004)に記載のようなソフト・ランダム化突然変異誘発の複数のHVRsを標的する。テンプレートの潜在的に高いバックグラウンドからのYW71.22が再選択されることを回避するために、終止コドンをHVRに導入して、各々のライブラリーを作製する前に突然変異させた。溶液ソーティング(solution sorting)法を用いて、親和性に基づく選択プロセスの有効性を向上した。ビオチン化標的濃度を操作すること、ファージ捕獲時間を減らしてバックグラウンドを下げること、および非ビオチン化標的の添加によって、より速い解離速度(off rate)を有するクローンを排除することにより、高い親和性のクローンをうまく選択することができる。Leeら、J.Mol.Biol.(2004),340(5):1073−93。初回の選択から、富化(標的依存性のファージ捕獲)が観察され、このことは多数のクローンが、ヒトRobo4に合理的に高い親和性で各々のライブラリーに存在することを示唆している。選択のストリンジェンシーは、その後の回で増大した。5回の選択後、各々のライブラリーからのクローンを分析した。新規の配列が6つのHVRsの各々の標的するライブラリーで観察された(図2Aおよび図2B)。選択されたクローンは、ファージELISAによってスクリーニングし、次いでIgGタンパク質として発現され、その親和性を、Biacore(商標)結合分析を用いて特徴付けた。
選択された抗Robo4抗体クローンの特徴づけ
ファージELISA−ファージ競合結合アッセイを行って、Robo4についてのファージ−ディスプレイのFabsの適切な結合親和性(ファージIC50として測定)を測定した。そのアッセイは以下のとおり行った。要するに、各々のクローンから精製されたファージ上清を上記のような改変PEG沈殿プロトコールを用いて産生した。精製したファージ上清をファージブロッキング緩衝液(Phage Blocking buffer)中で連続希釈し、次いで、Robo4−His(1μg/ml)でコーティングしたプレート上に15分間インキュベートした。このプレートを洗浄緩衝液(Wash Buffer)で洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼ/抗M13抗体コンジュゲート(PBS緩衝液中で1:5000希釈)(Amersham Pharmacia Biotech)とともに30分間インキュベートした。そのプレートを洗浄し、テトラメチルベンジジン(TMB)基質(KirkegaardおよびPerry Laboratories)で発色させ、0.1NのH2SO4でクエンチした。吸収を450nmで分光光度的に測定して、約50%の飽和シグナルを与えるファージ濃度を測定した。ファージの固定された飽和未満の濃度を、350nMのRobo4〜5nMのRobo4というRobo4−Hisタンパク質の2倍階段希釈を含むファージブロッキング(Phage Blocking)緩衝液中で希釈した。この混合物を室温で穏やかに振盪しながら1時間インキュベートして、Robo4−His(1μg/ml)でコーティングしたプレートに移し、そのプレートを20分間インキュベートした。そのプレートを上記のように洗浄して処理した。その結合親和性をIC50値(固定された抗原に対するファージ結合の50%を阻害する抗原の濃度として規定)として見積もった。7つのクローンのIC50の結果を表2に示す。
親和性成熟したRobo4抗体の結合分析
親和性成熟したYW71.22.S1.16を用いて、EUナンバリングによって、両方ともが重鎖Fc領域の118位置にCys位置を有する、全長IgG1およびFabフラグメントを作製した。Cysは、目的の標識または薬物に対する抗体の部位特異的なコンジュゲーションのために用いる。
抗Robo4抗体はHUVECの管の伸長を阻害する
抗Robo4抗体(YW71.22)は、ビーズ成長(outgrowth)アッセイでのHUVEC管伸長を有意に阻害する。管の総数および長さの両方とも、コントロールの抗体に比べて減少する(図20)。例えば、300μm以上の長さを有する管の数は60%まで減少する。
治療剤としての抗Robo4抗体および抗Robo4抗体薬物コンジュゲート
抗Robo4ADCsは、薬物−リンカー部分MCC−DM1、SPDB−DM4、およびmPEO−DM1に対して抗Robo4抗体をコンジュゲートすることによって産生された。コンジュゲーションの前に、抗体を国際公開第2004/010957号に記載の方法論に従って、標準的な方法を用いてTECPで部分的に還元した。この部分的に還元された抗体を、Doroninaら、Nat.Biotechnol.21:778−784(2003)および米国特許第出願公開第2005/0238649号に記載の方法論に従って標準的な方法を用いて上記の薬物−リンカー部分に対してコンジュゲートした。要するに、この部分的に還元された抗体を、薬物リンカー部分と組み合わせて、システイン残基(限定はしないが、本明細書に開示のチオMAbのシステイン操作残基を含む)に対するこの部分のコンジュゲーションを可能にした。このコンジュゲーション反応をクエンチして、ADCを精製した。各々のADCについての薬物負荷(1抗体あたりの薬物部分の平均数)は、HPLCで決定した。追加の抗Robo4 ADCは、spp−DM1、smcc−DM1、MC−vc−PAB−MMAE;MC−vc−PAB−MMAF;MC−MMAEおよびMC−MMAFを含む薬物リンカー部分を例えば用いて、作製する(例えば、国際公開第2004/010957、および国際公開第2006/034488を参照のこと(その各々はその全体が参照によって本明細書に援用される))。
インビボの腫瘍容積減少アッセイ
裸の抗Robo4抗体:腫瘍増殖は、ヒト非小細胞肺癌SK−MES−1のマウス異種移植片モデルにおいて、裸の抗Robo4抗体YW71.22(細胞傷害性剤にも他の薬剤にもコンジュゲートされていない抗体)によっては阻害されなかった。この研究のために、各々のHRLN雌性ヌードマウスには、わき腹に1mm3の腫瘍断片のs.c.移植片を与えた。腫瘍増殖は、キャリパーでの測定によって毎週2回モニターした。腫瘍が80〜120mm3という平均サイズに達したとき、平均腫瘍サイズがほぼ同一の群になるようにマウスをソートして、処置を開始した(1日目)。10mg/kgの抗Robo4および/または5mg/kgの抗VEGFまたはコントロールの抗体を用いて5週間、毎週2回動物にi.p.(腹腔内)投与した。全ての処置は、0.2mg/20gに体重調節した。この結果を図17に示す。さらに、MDA−MB−231乳癌異種移植片を有するFo5マウスモデルにおける腫瘍増殖の減少が観察された。
SCIDマウスには、ヒト腫瘍細胞をマウスの体重20gあたり0.2mlの容積でわき腹に皮下注射する。細胞は、HBSSに懸濁する。平均腫瘍サイズが約80〜200mm3に達するとき、マウスを無作為に群に分けて、メイタンシンまたはコントロールの抗体のいずれかに対してコンジュゲートされた抗Robo4ADCの単回または複数回のI.V.処置(尾静脈を介する)を与える。
検出可能なマーカーにコンジュゲートされた抗Robo4抗体
sDOTA−標識された抗Robo4抗体は以下のとおり調製する。DOTA−NHS−エステルをジメチルアセトアミド(DMA,Fluka Chemika,Switzerland)に溶解して、60〜100mg/mLの濃度に調製した。代表的な手順は、2mMのEDTA(pH7.2)を用いてPBS中にMAbを緩衝液交換する工程を包含する。反応は、1分子のMAb対4個のDOTA分子(1:4)の比で行い、かつThermomixerプレート(Eppendorf,Westbury,NY)で穏やかに攪拌しながら25℃で行った。DOTA−標識抗Robo4抗体は、非限定的な例としてはイットリウム、90Y、111In、177Luなどと会合されたとき、インビトロまたはインビボで検出マーカーとして有用である。このmAbコンジュゲートは、例えば、このコンジュゲートと0.25Mの酢酸アンモニウム中の111InCl3とを43℃で45分間インキュベートすることによって111Inで標識される。EDTAを1mMという最終濃度まで加え、その混合物を37℃で15分間インキュベートする。例えば、90Yでの標識は、43℃で1時間のインキュベーションを用いて行い、その後、DTPAを1mMという最終濃度まで添加し、その混合物を37℃でさらに15分間インキュベートする。この放射性金属で標識されたmAbコンジュゲートは、TosoHaas TSKgel G2000 SWカラムおよび生理食塩水の移動相を用いて、サイズ排除HPLCによって精製する。
Robo4および抗Robo4抗体のさらなる特徴づけ
Robo4は内皮細胞(EC)遊走をブロックしない。Robo4−FcおよびRobo4−Hisを、HUVEC遊走アッセイを用いて、VEGFの有無において、血管のECと接触させた。図8は、アッセイの結果を示す。Robo4−FcまたはRobo4−Hisは単独では、EC遊走を誘導せず、VEGF誘発性のEC遊走はRobo4によって増強されなかった。
Claims (27)
- 抗Robo4抗体であって:
(i)RASQDVSTAVA(配列番号1)である配列A1−A11を含む、HVR−L1
(ii)SASFLYS(配列番号2)である配列B1−B7を含む、HVR−L2
(iii)QQSYTTPPT(配列番号3)である配列C1−C9を含む、HVR−L3
(iv)GFTINGYYIH(配列番号17)である配列D1−D10を含むHVR−H1
(v)GFIYPAGGDTDYADSVKG(配列番号18)である配列E1−E18を含む、HVR−H2;
(vi)ARLIGNKFGWSSYGMDY(配列番号19)である配列F1−F17を含むHVR−H3;および
(vii)配列番号1、2、3、17、18、または19において示された配列の少なくとも1つのアミノ酸残基の挿入、欠失または置換を含む少なくとも1つの改変体HVR、
からなる群より選択される少なくとも1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、または6つの超可変領域(HVR)配列を含む、抗体。 - 図1Aおよび図2Aに示される配列番号72〜97からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項1に記載の抗体。
- 図1Bおよび図2Bに示される配列番号140〜165からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む、請求項1に記載の抗体。
- 請求項1に記載の抗体であって、
配列番号1を含むHVR−L1、
配列番号2を含むHVR−L2、および
配列番号20を含むHVR−L3、
を含む軽鎖可変ドメインを含む、抗体。 - 請求項1に記載の抗体であって、
配列番号17を含むHVR−H1、
配列番号18を含むHVR−H2、および
配列番号19を含むHVR−H3、
を含む重鎖可変ドメインを含む、抗体。 - 請求項1に記載の抗体であって、
(i)配列番号1を含むHVR−L1、
配列番号2を含むHVR−L2、および
QQSRSDHPT(配列番号20)を含むHVR−L3、
を含む軽鎖可変ドメインと
(ii)配列番号17を含むHVR−H1、
配列番号18を含むHVR−H2、および
配列番号19を含むHVR−H3、
を含む重鎖可変ドメインと、
を含む、抗体。 - 前記抗体がヒト化されている、請求項1に記載の抗体。
- 前記抗体がFab、Fab’、および(Fab’)2からなる群より選択される、請求項1に記載の抗体。
- 細胞傷害性剤をさらに含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記細胞傷害性剤が、N2’−デアセチル−N−2’(3−メルカプト−1−オキソプロピル)−メイタンシン(DM1)、モノメチルアウリスタチンE(MMAE)、モノメチルアウリスタチンF(MMAF)、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項9に記載の抗体。
- さらに検出可能な標識を含む、請求項10に記載の抗体。
- 前記検出可能な標識が:ビオチン、蛍光色素、放射性核種、キレート剤1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−N、N’、N’’、N’’’−四酢酸(DOTA)、マイクロバブル、ペルフルオロカーボンナノ粒子エマルジョン、金属粒子、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項11に記載の抗体。
- 前記検出可能な標識が、システイン残基で前記抗体に共有結合されている、請求項11に記載の抗体。
- 前記システイン残基が、EUナンバリングに従って重鎖Fc領域の118位である、請求項13に記載の抗体。
- 血管形成を調節する方法であって、細胞または組織と有効量の請求項1に記載の抗体とを接触させる工程を包含する、方法。
- 前記抗体がさらに細胞傷害性剤を含む、請求項15に記載の方法。
- 前記血管形成が阻害される、請求項15に記載の方法。
- 前記血管形成が:ガン、アテローム性動脈硬化症、水晶体後部線維増殖症、血管腫、慢性炎症、眼内新生血管疾患、増殖性網膜症、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性症(AMD)、血管新生緑内障、移植角膜組織および他の組織の免疫拒絶、関節リウマチ、乾癬およびそれらの組み合わせからなる群より選択される障害に関連する、請求項15に記載の方法。
- 前記血管形成がガンに関連する、請求項15に記載の方法。
- 前記ガンが、扁平上皮細胞癌、肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃腸の癌を含む胃癌、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿路の癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液線癌、腎臓癌または腎癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、多発性骨髄腫およびB細胞リンパ腫、脳腫瘍、頭頸部癌、骨肉腫および血管肉腫、ならびに関連する転移ならびにそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項19に記載の方法。
- 前記細胞または組織が哺乳動物である、請求項15に記載の方法。
- 前記哺乳動物がヒトである、請求項21に記載の方法。
- 前記細胞と、抗悪性腫瘍剤、化学療法剤、増殖阻害剤、細胞傷害性剤、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される薬剤とを接触させる工程をさらに包含する、請求項15に記載の方法。
- 前記薬剤が抗VEGF抗体である、請求項23に記載の方法。
- 哺乳動物に対して請求項11に記載の抗体を投与する工程を包含する、インビボの画像化の方法。
- 前記哺乳動物がヒトである、請求項25に記載の方法。
- 前記哺乳動物が、ガン、アテローム性動脈硬化症、水晶体後部線維増殖症、血管腫、慢性炎症、眼内新生血管疾患、増殖性網膜症、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性症(AMD)、血管新生緑内障、移植角膜組織の免疫拒絶、関節リウマチ、乾癬およびそれらの組み合わせからなる群より選択される疾患または障害を有すると疑われる、請求項25に記載の方法。
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Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015515490A (ja) * | 2012-04-27 | 2015-05-28 | 第一三共株式会社 | 抗robo4抗体 |
JP2016515092A (ja) * | 2012-11-08 | 2016-05-26 | アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル | 骨転移の治療のための方法及び医薬組成物 |
KR20160090171A (ko) * | 2015-01-21 | 2016-07-29 | 재단법인 아산사회복지재단 | 원발성 갑상선암 전이의 진단방법 및 이를 이용한 진단키트 |
US10363323B2 (en) | 2011-02-10 | 2019-07-30 | Ruprecht-Karls-Universitat Heidelberg | Hydrophobic modified peptides for liver specific diagnosis |
JP2020011969A (ja) * | 2013-10-14 | 2020-01-23 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | システイン改変フィブロネクチンiii型ドメイン結合分子 |
Families Citing this family (39)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7226594B2 (en) | 2001-11-07 | 2007-06-05 | Agensys, Inc. | Nucleic acid and corresponding protein entitled 161P2F10B useful in treatment and detection of cancer |
US20100111856A1 (en) | 2004-09-23 | 2010-05-06 | Herman Gill | Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates |
CA2676766A1 (en) * | 2007-02-09 | 2008-08-21 | Genentech, Inc. | Anti-robo4 antibodies and uses therefor |
AU2008312457B2 (en) * | 2007-10-19 | 2014-04-17 | Genentech, Inc. | Cysteine engineered anti-TENB2 antibodies and antibody drug conjugates |
ES2547552T3 (es) * | 2008-02-01 | 2015-10-07 | Genentech, Inc. | Metabolito de nemorrubicina y reactivos análogos, conjugados anticuerpo-fármaco y métodos |
US8790642B2 (en) * | 2008-08-29 | 2014-07-29 | Genentech, Inc. | Cross-reactive and bispecific anti-IL-17A/F antibodies |
AR074369A1 (es) * | 2008-11-20 | 2011-01-12 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-unc 5b (receptor de netrina) y metodos de uso |
SI2376535T1 (sl) | 2008-12-09 | 2017-07-31 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Protitelesa anti-pd-l1 in njihova uporaba za izboljšanje funkcije celic t |
JP5818688B2 (ja) * | 2009-01-08 | 2015-11-18 | バイオ−ラッド ラボラトリーズ インコーポレーティッド | 核酸増幅反応の効率を改善するための方法および組成物 |
WO2010128142A1 (en) | 2009-05-07 | 2010-11-11 | Novozymes Biopharma Dk A/S | Method for purifying albumin |
WO2010128145A1 (en) * | 2009-05-07 | 2010-11-11 | Novozymes Biopharma Dk A/S | Method of controlling o-linked glycosylation of antibodies |
KR20210019599A (ko) * | 2009-06-11 | 2021-02-22 | 미네르바 바이오테크놀로지 코포레이션 | 줄기세포 및 전구세포를 배양하는 방법 |
KR101510413B1 (ko) | 2010-02-08 | 2015-04-08 | 어젠시스 인코포레이티드 | 161p2f10b 단백질에 결합하는 항체 약물 컨쥬게이트 |
JP2013523153A (ja) * | 2010-04-07 | 2013-06-17 | アッヴィ・インコーポレイテッド | TNF−α結合タンパク質 |
CA3220104A1 (en) | 2010-06-08 | 2011-12-15 | Genentech, Inc. | Cysteine engineered antibodies and conjugates |
JP6055404B2 (ja) * | 2010-06-15 | 2016-12-27 | ゲンマブ エー/エス | 組織因子に対するヒト抗体薬物結合体 |
WO2012064836A1 (en) * | 2010-11-10 | 2012-05-18 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for neural disease immunotherapy |
BR112013017585A2 (pt) | 2011-01-10 | 2020-11-24 | The Regents Of The University Of Michigan | inibidor do fator de células-tronco |
WO2012097313A2 (en) | 2011-01-14 | 2012-07-19 | The Regents Of The University Of California | Therapeutic antibodies against ror-1 protein and methods for use of same |
WO2014028446A1 (en) | 2012-08-13 | 2014-02-20 | Genentech, Inc. | Anti-jagged anitbodies and methods of use |
US9353150B2 (en) | 2012-12-04 | 2016-05-31 | Massachusetts Institute Of Technology | Substituted pyrazino[1′,2′:1 ,5]pyrrolo[2,3-b]-indole-1,4-diones for cancer treatment |
CN105452293B (zh) | 2013-07-03 | 2021-03-16 | 首尔大学校产学协力团 | 转化为半胱氨酸的鸡抗体和使用其的位点特异性缀合 |
WO2015006554A1 (en) | 2013-07-10 | 2015-01-15 | The Regents Of The University Of Michigan | Therapeutic antibodies and uses thereof |
CN103389376B (zh) * | 2013-08-21 | 2015-08-19 | 中南大学湘雅医院 | 评估肝细胞癌临床分期和预后的试剂盒及ecscr的应用 |
CA2940242A1 (en) | 2014-02-20 | 2015-08-27 | Alder Biopharmaceuticals, Inc. | Anti-acth antibodies and use thereof |
CA2957354A1 (en) | 2014-09-12 | 2016-03-17 | Genentech, Inc. | Cysteine engineered antibodies and conjugates |
WO2016081639A1 (en) | 2014-11-19 | 2016-05-26 | Genentech, Inc. | Antibodies against bace1 and use thereof for neural disease immunotherapy |
US11008403B2 (en) | 2014-11-19 | 2021-05-18 | Genentech, Inc. | Anti-transferrin receptor / anti-BACE1 multispecific antibodies and methods of use |
WO2017055395A1 (en) * | 2015-10-02 | 2017-04-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-cd3xrob04 bispecific t cell activating antigen binding molecules |
US10918627B2 (en) | 2016-05-11 | 2021-02-16 | Massachusetts Institute Of Technology | Convergent and enantioselective total synthesis of Communesin analogs |
JPWO2018070390A1 (ja) * | 2016-10-12 | 2019-08-22 | 第一三共株式会社 | 抗robo4抗体と他剤を含む組成物 |
US11932650B2 (en) | 2017-05-11 | 2024-03-19 | Massachusetts Institute Of Technology | Potent agelastatin derivatives as modulators for cancer invasion and metastasis |
AU2018278809B2 (en) * | 2017-06-02 | 2022-03-31 | Boston Medical Center Corporation | Recombinant ROBO2 proteins, compositions, methods and uses thereof |
AU2018346264A1 (en) * | 2017-10-03 | 2020-04-23 | Merck Patent Gmbh | Cysteine engineered antigen-binding molecules |
US10640508B2 (en) | 2017-10-13 | 2020-05-05 | Massachusetts Institute Of Technology | Diazene directed modular synthesis of compounds with quaternary carbon centers |
CN109054863A (zh) * | 2018-09-03 | 2018-12-21 | 广州好立环保科技服务厂 | 环保新型阻燃剂 |
WO2020247054A1 (en) | 2019-06-05 | 2020-12-10 | Massachusetts Institute Of Technology | Compounds, conjugates, and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines and uses thereof |
CN111328333B (zh) * | 2019-09-29 | 2023-10-03 | 烟台迈百瑞国际生物医药股份有限公司 | 一种酸法制备抗体药物偶联物中间体的方法及其应用 |
WO2023156437A1 (en) | 2022-02-16 | 2023-08-24 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Anti-robo4 human monoclonal antibodies and uses thereof for the treatment of cancer |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004524821A (ja) * | 2000-11-06 | 2004-08-19 | キャンサー・リサーチ・テクノロジー・リミテッド | 疾患のイメージング、診断、及び治療 |
JP2006524485A (ja) * | 2002-11-20 | 2006-11-02 | キャンサー・リサーチ・テクノロジー・リミテッド | 抗体、ポリペプチドおよびその使用 |
Family Cites Families (198)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3773919A (en) | 1969-10-23 | 1973-11-20 | Du Pont | Polylactide-drug mixtures |
US3896111A (en) | 1973-02-20 | 1975-07-22 | Research Corp | Ansa macrolides |
US4151042A (en) | 1977-03-31 | 1979-04-24 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Method for producing maytansinol and its derivatives |
US4137230A (en) | 1977-11-14 | 1979-01-30 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Method for the production of maytansinoids |
USRE30985E (en) | 1978-01-01 | 1982-06-29 | Serum-free cell culture media | |
US4265814A (en) | 1978-03-24 | 1981-05-05 | Takeda Chemical Industries | Matansinol 3-n-hexadecanoate |
US4307016A (en) | 1978-03-24 | 1981-12-22 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Demethyl maytansinoids |
US4275149A (en) | 1978-11-24 | 1981-06-23 | Syva Company | Macromolecular environment control in specific receptor assays |
US4318980A (en) | 1978-04-10 | 1982-03-09 | Miles Laboratories, Inc. | Heterogenous specific binding assay employing a cycling reactant as label |
JPS5562090A (en) | 1978-10-27 | 1980-05-10 | Takeda Chem Ind Ltd | Novel maytansinoid compound and its preparation |
US4256746A (en) | 1978-11-14 | 1981-03-17 | Takeda Chemical Industries | Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use |
JPS5566585A (en) | 1978-11-14 | 1980-05-20 | Takeda Chem Ind Ltd | Novel maytansinoid compound and its preparation |
JPS55164687A (en) | 1979-06-11 | 1980-12-22 | Takeda Chem Ind Ltd | Novel maytansinoid compound and its preparation |
JPS55102583A (en) | 1979-01-31 | 1980-08-05 | Takeda Chem Ind Ltd | 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound |
JPS55162791A (en) | 1979-06-05 | 1980-12-18 | Takeda Chem Ind Ltd | Antibiotic c-15003pnd and its preparation |
JPS55164685A (en) | 1979-06-08 | 1980-12-22 | Takeda Chem Ind Ltd | Novel maytansinoid compound and its preparation |
JPS55164686A (en) | 1979-06-11 | 1980-12-22 | Takeda Chem Ind Ltd | Novel maytansinoid compound and its preparation |
US4309428A (en) | 1979-07-30 | 1982-01-05 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Maytansinoids |
JPS5645483A (en) | 1979-09-19 | 1981-04-25 | Takeda Chem Ind Ltd | C-15003phm and its preparation |
JPS5645485A (en) | 1979-09-21 | 1981-04-25 | Takeda Chem Ind Ltd | Production of c-15003pnd |
EP0028683A1 (en) | 1979-09-21 | 1981-05-20 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Antibiotic C-15003 PHO and production thereof |
WO1982001188A1 (en) | 1980-10-08 | 1982-04-15 | Takeda Chemical Industries Ltd | 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same |
US4450254A (en) | 1980-11-03 | 1984-05-22 | Standard Oil Company | Impact improvement of high nitrile resins |
US4419446A (en) | 1980-12-31 | 1983-12-06 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Recombinant DNA process utilizing a papilloma virus DNA as a vector |
US4313946A (en) | 1981-01-27 | 1982-02-02 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora |
US4315929A (en) | 1981-01-27 | 1982-02-16 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Method of controlling the European corn borer with trewiasine |
US4563304A (en) | 1981-02-27 | 1986-01-07 | Pharmacia Fine Chemicals Ab | Pyridine compounds modifying proteins, polypeptides or polysaccharides |
JPS57192389A (en) | 1981-05-20 | 1982-11-26 | Takeda Chem Ind Ltd | Novel maytansinoid |
US4601978A (en) | 1982-11-24 | 1986-07-22 | The Regents Of The University Of California | Mammalian metallothionein promoter system |
US4560655A (en) | 1982-12-16 | 1985-12-24 | Immunex Corporation | Serum-free cell culture medium and process for making same |
US4657866A (en) | 1982-12-21 | 1987-04-14 | Sudhir Kumar | Serum-free, synthetic, completely chemically defined tissue culture media |
DD266710A3 (de) | 1983-06-06 | 1989-04-12 | Ve Forschungszentrum Biotechnologie | Verfahren zur biotechnischen Herstellung van alkalischer Phosphatase |
US4767704A (en) | 1983-10-07 | 1988-08-30 | Columbia University In The City Of New York | Protein-free culture medium |
US4965199A (en) | 1984-04-20 | 1990-10-23 | Genentech, Inc. | Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection |
US5342606A (en) | 1984-10-18 | 1994-08-30 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Polyazamacrocyclic compounds for complexation of metal ions |
US5316757A (en) | 1984-10-18 | 1994-05-31 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Synthesis of polyazamacrocycles with more than one type of side-chain chelating groups |
US4970198A (en) | 1985-10-17 | 1990-11-13 | American Cyanamid Company | Antitumor antibiotics (LL-E33288 complex) |
US4737456A (en) | 1985-05-09 | 1988-04-12 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Reducing interference in ligand-receptor binding assays |
GB8516415D0 (en) | 1985-06-28 | 1985-07-31 | Celltech Ltd | Culture of animal cells |
US4927762A (en) | 1986-04-01 | 1990-05-22 | Cell Enterprises, Inc. | Cell culture medium with antioxidant |
IL85035A0 (en) | 1987-01-08 | 1988-06-30 | Int Genetic Eng | Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same |
US5079233A (en) | 1987-01-30 | 1992-01-07 | American Cyanamid Company | N-acyl derivatives of the LL-E33288 antitumor antibiotics, composition and methods for using the same |
EP0307434B2 (en) | 1987-03-18 | 1998-07-29 | Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. | Altered antibodies |
US4975278A (en) | 1988-02-26 | 1990-12-04 | Bristol-Myers Company | Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells |
US5606040A (en) | 1987-10-30 | 1997-02-25 | American Cyanamid Company | Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group |
US5770701A (en) | 1987-10-30 | 1998-06-23 | American Cyanamid Company | Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents |
US5053394A (en) | 1988-09-21 | 1991-10-01 | American Cyanamid Company | Targeted forms of methyltrithio antitumor agents |
DE68925971T2 (de) | 1988-09-23 | 1996-09-05 | Cetus Oncology Corp | Zellenzuchtmedium für erhöhtes zellenwachstum, zur erhöhung der langlebigkeit und expression der produkte |
GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
FR2646437B1 (fr) | 1989-04-28 | 1991-08-30 | Transgene Sa | Nouvelles sequences d'adn, leur application en tant que sequence codant pour un peptide signal pour la secretion de proteines matures par des levures recombinantes, cassettes d'expression, levures transformees et procede de preparation de proteines correspondant |
US6069007A (en) | 1989-06-21 | 2000-05-30 | City Of Hope | Ribozyme cleavage of HIV RNA |
DE3920358A1 (de) | 1989-06-22 | 1991-01-17 | Behringwerke Ag | Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung |
US5208020A (en) | 1989-10-25 | 1993-05-04 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
CA2026147C (en) | 1989-10-25 | 2006-02-07 | Ravi J. Chari | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
US5959177A (en) | 1989-10-27 | 1999-09-28 | The Scripps Research Institute | Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies |
US6075181A (en) | 1990-01-12 | 2000-06-13 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US6150584A (en) | 1990-01-12 | 2000-11-21 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
DE69120146T2 (de) | 1990-01-12 | 1996-12-12 | Cell Genesys Inc | Erzeugung xenogener antikörper |
US5427908A (en) | 1990-05-01 | 1995-06-27 | Affymax Technologies N.V. | Recombinant library screening methods |
US5723286A (en) | 1990-06-20 | 1998-03-03 | Affymax Technologies N.V. | Peptide library and screening systems |
US6172197B1 (en) | 1991-07-10 | 2001-01-09 | Medical Research Council | Methods for producing members of specific binding pairs |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5633425A (en) | 1990-08-29 | 1997-05-27 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
ES2246502T3 (es) | 1990-08-29 | 2006-02-16 | Genpharm International, Inc. | Animales no humanos transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos. |
US5625126A (en) | 1990-08-29 | 1997-04-29 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5661016A (en) | 1990-08-29 | 1997-08-26 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
US5122469A (en) | 1990-10-03 | 1992-06-16 | Genentech, Inc. | Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins |
ES2113940T3 (es) | 1990-12-03 | 1998-05-16 | Genentech Inc | Metodo de enriquecimiento para variantes de proteinas con propiedades de union alteradas. |
US5571894A (en) | 1991-02-05 | 1996-11-05 | Ciba-Geigy Corporation | Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor |
DE69233750D1 (de) | 1991-04-10 | 2009-01-02 | Scripps Research Inst | Bibliotheken heterodimerer Rezeptoren mittels Phagemiden |
WO1994004679A1 (en) | 1991-06-14 | 1994-03-03 | Genentech, Inc. | Method for making humanized antibodies |
ES2206447T3 (es) | 1991-06-14 | 2004-05-16 | Genentech, Inc. | Anticuerpo humanizado para heregulina. |
GB9114948D0 (en) | 1991-07-11 | 1991-08-28 | Pfizer Ltd | Process for preparing sertraline intermediates |
US7018809B1 (en) | 1991-09-19 | 2006-03-28 | Genentech, Inc. | Expression of functional antibody fragments |
DK0605522T3 (da) | 1991-09-23 | 2000-01-17 | Medical Res Council | Fremgangsmåde til fremstilling af humaniserede antistoffer |
US5362852A (en) | 1991-09-27 | 1994-11-08 | Pfizer Inc. | Modified peptide derivatives conjugated at 2-hydroxyethylamine moieties |
US5587458A (en) | 1991-10-07 | 1996-12-24 | Aronex Pharmaceuticals, Inc. | Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof |
US5270170A (en) | 1991-10-16 | 1993-12-14 | Affymax Technologies N.V. | Peptide library and screening method |
US5739294A (en) | 1991-12-10 | 1998-04-14 | The Dow Chemical Company | Bicyclopol yazamacrocyclophosphonic acid complexes for use as contrast agents |
US5480990A (en) | 1991-12-10 | 1996-01-02 | The Dow Chemical Company | Bicyclopolyazamacrocyclocarboxylic acid complexes for use as contrast agents |
US5428139A (en) | 1991-12-10 | 1995-06-27 | The Dow Chemical Company | Bicyclopolyazamacrocyclophosphonic acid complexes for use as radiopharmaceuticals |
AU675929B2 (en) | 1992-02-06 | 1997-02-27 | Curis, Inc. | Biosynthetic binding protein for cancer marker |
US5965132A (en) | 1992-03-05 | 1999-10-12 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions for targeting the vasculature of solid tumors |
US5733743A (en) | 1992-03-24 | 1998-03-31 | Cambridge Antibody Technology Limited | Methods for producing members of specific binding pairs |
ZA932522B (en) | 1992-04-10 | 1993-12-20 | Res Dev Foundation | Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens |
CA2149329C (en) | 1992-11-13 | 2008-07-15 | Darrell R. Anderson | Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human b lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of b cell lymphoma |
US5635483A (en) | 1992-12-03 | 1997-06-03 | Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University | Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides |
JP3720353B2 (ja) | 1992-12-04 | 2005-11-24 | メディカル リサーチ カウンシル | 多価および多重特異性の結合タンパク質、それらの製造および使用 |
US5780588A (en) | 1993-01-26 | 1998-07-14 | Arizona Board Of Regents | Elucidation and synthesis of selected pentapeptides |
US5462725A (en) | 1993-05-06 | 1995-10-31 | The Dow Chemical Company | 2-pyridylmethylenepolyazamacrocyclophosphonic acids, complexes and derivatives thereof, for use as contrast agents |
US5385893A (en) | 1993-05-06 | 1995-01-31 | The Dow Chemical Company | Tricyclopolyazamacrocyclophosphonic acids, complexes and derivatives thereof, for use as contrast agents |
JPH08511420A (ja) | 1993-06-16 | 1996-12-03 | セルテック・セラピューテイクス・リミテッド | 抗 体 |
DE69434136T2 (de) | 1993-10-01 | 2005-12-01 | Teikoku Hormone Mfg. Co., Ltd. | Dolastatin-derivate |
EP0682113A3 (en) | 1994-05-12 | 1996-12-18 | Ono Pharmaceutical Co | A polypeptide produced in an endothelial cell line and DNA encoding it. |
US5773001A (en) | 1994-06-03 | 1998-06-30 | American Cyanamid Company | Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis |
US5789199A (en) | 1994-11-03 | 1998-08-04 | Genentech, Inc. | Process for bacterial production of polypeptides |
US5663149A (en) | 1994-12-13 | 1997-09-02 | Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University | Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides |
US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
US5840523A (en) | 1995-03-01 | 1998-11-24 | Genetech, Inc. | Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides |
US5641870A (en) | 1995-04-20 | 1997-06-24 | Genentech, Inc. | Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification |
US5869046A (en) | 1995-04-14 | 1999-02-09 | Genentech, Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
ES2304786T3 (es) | 1995-04-27 | 2008-10-16 | Amgen Fremont Inc. | Anticuerpos anti-il-8 humanos, derivados a partir de xenoratones inmunizados. |
EP0823941A4 (en) | 1995-04-28 | 2001-09-19 | Abgenix Inc | HUMAN ANTIBODIES DERIVED FROM IMMUNIZED XENO MOUSES |
US5712374A (en) | 1995-06-07 | 1998-01-27 | American Cyanamid Company | Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates |
US5714586A (en) | 1995-06-07 | 1998-02-03 | American Cyanamid Company | Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates |
GB9603256D0 (en) | 1996-02-16 | 1996-04-17 | Wellcome Found | Antibodies |
US5834456A (en) | 1996-02-23 | 1998-11-10 | The Dow Chemical Company | Polyazamacrocyclofluoromonoalkylphosphonic acids, and their complexes, for use as contrast agents |
WO2000053756A2 (en) | 1999-03-08 | 2000-09-14 | Genentech, Inc. | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same |
DK1500329T3 (da) | 1996-12-03 | 2012-07-09 | Amgen Fremont Inc | Humane antistoffer, der specifikt binder TNF-alfa |
US20040002591A1 (en) | 1997-09-05 | 2004-01-01 | Human Genome Sciences, Inc. | 50 human secreted proteins |
US20080318254A9 (en) | 1997-03-10 | 2008-12-25 | The Regents Of The University Of California | PSCA antibodies and hybridomas producing them |
US20020032315A1 (en) | 1997-08-06 | 2002-03-14 | Manuel Baca | Anti-vegf antibodies |
EP0973804B1 (en) | 1997-04-07 | 2006-12-27 | Genentech, Inc. | Anti-vegf antibodies |
US6884879B1 (en) | 1997-04-07 | 2005-04-26 | Genentech, Inc. | Anti-VEGF antibodies |
US20020173629A1 (en) | 1997-05-05 | 2002-11-21 | Aya Jakobovits | Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor |
DE69830315T2 (de) | 1997-06-24 | 2006-02-02 | Genentech Inc., San Francisco | Galactosylierte glykoproteine enthaltende zusammensetzungen und verfahren zur deren herstellung |
JP2003521215A (ja) | 1997-07-30 | 2003-07-15 | ヒューマン ジノーム サイエンシーズ, インコーポレイテッド | 83個のヒト分泌タンパク質 |
US6040498A (en) | 1998-08-11 | 2000-03-21 | North Caroline State University | Genetically engineered duckweed |
CA2302808C (en) | 1997-09-05 | 2010-05-18 | Human Genome Sciences, Inc. | 50 human secreted proteins |
US6225118B1 (en) | 1997-10-01 | 2001-05-01 | Biocure Limited | Multicellular in vitro assay of angiogenesis |
ATE419009T1 (de) | 1997-10-31 | 2009-01-15 | Genentech Inc | Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen |
US6610833B1 (en) | 1997-11-24 | 2003-08-26 | The Institute For Human Genetics And Biochemistry | Monoclonal human natural antibodies |
PT1490386E (pt) | 1998-03-10 | 2008-11-24 | Genentech Inc | Novos polipéptidos e ácidos nucleicos que os codificam |
ATE375365T1 (de) | 1998-04-02 | 2007-10-15 | Genentech Inc | Antikörper varianten und fragmente davon |
US6528624B1 (en) | 1998-04-02 | 2003-03-04 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
US6194551B1 (en) | 1998-04-02 | 2001-02-27 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
EP1068312A2 (en) | 1998-04-09 | 2001-01-17 | Genset | 5' ests and encoded human proteins |
AU3657899A (en) | 1998-04-20 | 1999-11-08 | James E. Bailey | Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity |
US20060205034A1 (en) | 1998-10-30 | 2006-09-14 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Novel genes encoding proteins having prognostic, diagnostic, preventive, therapeutic, and other uses |
US20030190669A1 (en) | 1998-12-30 | 2003-10-09 | Genentech, Inc. | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same |
HUP0104865A3 (en) | 1999-01-15 | 2004-07-28 | Genentech Inc | Polypeptide variants with altered effector function |
DE60039596D1 (de) | 1999-03-30 | 2008-09-04 | Japan Tobacco Inc | Verfahren zur herstellung von monoklonalen antikörpern |
EP2275540B1 (en) | 1999-04-09 | 2016-03-23 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Method for controlling the activity of immunologically functional molecule |
US6949245B1 (en) | 1999-06-25 | 2005-09-27 | Genentech, Inc. | Humanized anti-ErbB2 antibodies and treatment with anti-ErbB2 antibodies |
EP1074617A3 (en) | 1999-07-29 | 2004-04-21 | Research Association for Biotechnology | Primers for synthesising full-length cDNA and their use |
CA2383691A1 (en) | 1999-08-12 | 2001-02-22 | Steven M. Ruben | Human tumor necrosis factor receptor tr16 |
AU1190801A (en) | 1999-09-30 | 2001-04-30 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Secreted proteins and uses thereof |
AU782626B2 (en) | 1999-10-04 | 2005-08-18 | Medicago Inc. | Method for regulating transcription of foreign genes |
US7125978B1 (en) | 1999-10-04 | 2006-10-24 | Medicago Inc. | Promoter for regulating expression of foreign genes |
EP1229125A4 (en) | 1999-10-19 | 2005-06-01 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | PROCESS FOR PRODUCING A POLYPEPTIDE |
US6372907B1 (en) | 1999-11-03 | 2002-04-16 | Apptera Corporation | Water-soluble rhodamine dye peptide conjugates |
US20040001827A1 (en) | 2002-06-28 | 2004-01-01 | Dennis Mark S. | Serum albumin binding peptides for tumor targeting |
ATE337403T1 (de) | 1999-12-24 | 2006-09-15 | Genentech Inc | Verfahren und verbindungen zur verlängerung der halbwertzeiten bei der ausscheidung von biowirksamen verbindungen |
AU2001290548A1 (en) | 2000-09-11 | 2002-03-26 | Hyseq, Inc. | Novel nucleic acids and polypeptides |
US7064191B2 (en) | 2000-10-06 | 2006-06-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for purifying antibody |
US6946292B2 (en) | 2000-10-06 | 2005-09-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity |
CA2424602C (en) | 2000-10-06 | 2012-09-18 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Antibody composition-producing cell |
US20040018194A1 (en) | 2000-11-28 | 2004-01-29 | Francisco Joseph A. | Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof |
US6884869B2 (en) | 2001-04-30 | 2005-04-26 | Seattle Genetics, Inc. | Pentapeptide compounds and uses related thereto |
WO2002092017A2 (en) | 2001-05-16 | 2002-11-21 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Human antipneumococcal antibodies from non-human animals |
NZ592087A (en) | 2001-08-03 | 2012-11-30 | Roche Glycart Ag | Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity |
JP4359503B2 (ja) | 2001-08-23 | 2009-11-04 | ゲンマブ エー/エス | インターロイキン15(il−15)に特異的なヒト抗体 |
ES2326964T3 (es) | 2001-10-25 | 2009-10-22 | Genentech, Inc. | Composiciones de glicoproteina. |
WO2003043583A2 (en) | 2001-11-20 | 2003-05-30 | Seattle Genetics, Inc. | Treatment of immunological disorders using anti-cd30 antibodies |
US20040093621A1 (en) | 2001-12-25 | 2004-05-13 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd | Antibody composition which specifically binds to CD20 |
ES2431040T3 (es) * | 2002-03-08 | 2013-11-22 | Shanghai Institutes For Biological Sciences, Cas | Detección y modulación de la angiogénesis mediada por Slit y Roundabout (Robo), y sus usos |
AU2003236019A1 (en) | 2002-04-09 | 2003-10-20 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Drug containing antibody composition appropriate for patient suffering from Fc Gamma RIIIa polymorphism |
US7691568B2 (en) | 2002-04-09 | 2010-04-06 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd | Antibody composition-containing medicament |
AU2003236018A1 (en) | 2002-04-09 | 2003-10-20 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | METHOD OF ENHANCING ACTIVITY OF ANTIBODY COMPOSITION OF BINDING TO FcGamma RECEPTOR IIIa |
ATE503829T1 (de) | 2002-04-09 | 2011-04-15 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | Zelle mit erniedrigter oder deletierter aktivität eines am gdp-fucosetransport beteiligten proteins |
CA2481837A1 (en) | 2002-04-09 | 2003-10-16 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Production process for antibody composition |
US20040110704A1 (en) | 2002-04-09 | 2004-06-10 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cells of which genome is modified |
EP1534318A4 (en) | 2002-06-27 | 2009-07-01 | Univ Utah Res Found | METHOD AND COMPOSITIONS FOR MANIPULATING GUIDED NAVIGATION OF ENDOTHONE TUBES IN THE ANGIOGENESIS |
US20050180972A1 (en) | 2002-07-31 | 2005-08-18 | Wahl Alan F. | Anti-CD20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders |
EP1545613B9 (en) | 2002-07-31 | 2012-01-25 | Seattle Genetics, Inc. | Auristatin conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease |
BRPI0314814C1 (pt) | 2002-09-27 | 2021-07-27 | Xencor Inc | anticorpo compreendendo uma variante de fc |
US7361740B2 (en) | 2002-10-15 | 2008-04-22 | Pdl Biopharma, Inc. | Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis |
DE60332957D1 (de) | 2002-12-16 | 2010-07-22 | Genentech Inc | Immunoglobulinvarianten und deren verwendungen |
CA2513308A1 (en) | 2003-01-17 | 2004-08-05 | Josef Michl | Pancreatic cancer associated antigen, antibody thereto, and diagnostic and treatment methods |
AU2004270103B2 (en) | 2003-05-21 | 2012-02-23 | E. R. Squibb & Sons, L.L.C. | Human monoclonal antibodies against Bacillusanthracis protective antigen |
US20050106667A1 (en) | 2003-08-01 | 2005-05-19 | Genentech, Inc | Binding polypeptides with restricted diversity sequences |
WO2005044853A2 (en) | 2003-11-01 | 2005-05-19 | Genentech, Inc. | Anti-vegf antibodies |
EP1651276A4 (en) | 2003-08-08 | 2009-05-06 | Barnes Jewish Hospital | EMULSION PARTICLES FOR IMAGING AND THERAPY AND USE METHOD THEREFOR |
US20080241884A1 (en) | 2003-10-08 | 2008-10-02 | Kenya Shitara | Fused Protein Composition |
AU2004280065A1 (en) | 2003-10-09 | 2005-04-21 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Process for producing antibody composition by using RNA inhibiting the function of alpha1,6-fucosyltransferase |
EA036531B1 (ru) | 2003-11-05 | 2020-11-19 | Роше Гликарт Аг | Гуманизированное антитело типа ii к cd20 (варианты), фармацевтическая композиция, содержащая эти варианты антитела, и их применение |
KR101520209B1 (ko) | 2003-11-06 | 2015-05-13 | 시애틀 지네틱스, 인크. | 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물 |
JPWO2005053742A1 (ja) | 2003-12-04 | 2007-06-28 | 協和醗酵工業株式会社 | 抗体組成物を含有する医薬 |
PT1718677E (pt) | 2003-12-19 | 2012-07-18 | Genentech Inc | Fragmentos de anticorpo monovalentes úteis como agentes terapêuticos |
EP1718667B1 (en) | 2004-02-23 | 2013-01-09 | Genentech, Inc. | Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates |
US7167079B2 (en) | 2004-03-24 | 2007-01-23 | Carrier Corporation | Method of setting the output power of a pager to aid in the installation of a wireless system |
NZ551180A (en) | 2004-06-01 | 2009-10-30 | Genentech Inc | Antibody drug conjugates and methods |
EP1791565B1 (en) | 2004-09-23 | 2016-04-20 | Genentech, Inc. | Cysteine engineered antibodies and conjugates |
ZA200701789B (en) | 2004-10-04 | 2008-11-26 | Genentech Inc | Modulators of hepatocyte growth factor activator |
JP2008526205A (ja) * | 2004-12-31 | 2008-07-24 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | Br3に結合するポリペプチド及びその使用 |
WO2007010586A1 (ja) * | 2005-07-14 | 2007-01-25 | The University Of Tokyo | 造血幹細胞同定剤 |
CA2629306A1 (en) * | 2005-11-23 | 2007-05-31 | Genentech, Inc. | Methods and compositions related to b cell assays |
RU2450020C2 (ru) * | 2006-01-05 | 2012-05-10 | Дженентек, Инк. | АНТИТЕЛА ПРОТИВ EphB4 И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ |
KR101617108B1 (ko) * | 2006-01-20 | 2016-04-29 | 제넨테크, 인크. | 항-ephrinb2 항체 및 그의 사용 방법 |
AR059900A1 (es) * | 2006-03-17 | 2008-05-07 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-tat226 e inmunoconjugados |
US7459931B1 (en) | 2006-04-05 | 2008-12-02 | Lattice Semiconductor Corporation | Programmable logic devices with transparent field reconfiguration |
AR060978A1 (es) * | 2006-05-30 | 2008-07-23 | Genentech Inc | Anticuerpos e inmunoconjugados y sus usos |
AU2007319672B2 (en) * | 2006-06-06 | 2011-06-30 | Genentech, Inc. | Anti-DLL4 antibodies and methods using same |
US20090068110A1 (en) * | 2006-12-22 | 2009-03-12 | Genentech, Inc. | Antibodies to insulin-like growth factor receptor |
CA2676766A1 (en) * | 2007-02-09 | 2008-08-21 | Genentech, Inc. | Anti-robo4 antibodies and uses therefor |
US8789159B2 (en) * | 2008-02-11 | 2014-07-22 | Microsoft Corporation | System for running potentially malicious code |
-
2008
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-
2009
- 2009-07-22 IL IL200012A patent/IL200012A0/en unknown
- 2009-08-06 CO CO09082361A patent/CO6220835A2/es not_active Application Discontinuation
- 2009-09-01 MA MA32194A patent/MA31231B1/fr unknown
- 2009-09-08 CR CR11017A patent/CR11017A/es unknown
- 2009-09-09 EC EC2009009619A patent/ECSP099619A/es unknown
-
2010
- 2010-09-22 US US12/888,316 patent/US20110059013A1/en not_active Abandoned
- 2010-09-22 US US12/888,312 patent/US20110059112A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004524821A (ja) * | 2000-11-06 | 2004-08-19 | キャンサー・リサーチ・テクノロジー・リミテッド | 疾患のイメージング、診断、及び治療 |
JP2006524485A (ja) * | 2002-11-20 | 2006-11-02 | キャンサー・リサーチ・テクノロジー・リミテッド | 抗体、ポリペプチドおよびその使用 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
J. MOL. BIOL., vol. 340, JPN6013004129, 2004, pages 1073 - 1093, ISSN: 0002445524 * |
Cited By (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10363323B2 (en) | 2011-02-10 | 2019-07-30 | Ruprecht-Karls-Universitat Heidelberg | Hydrophobic modified peptides for liver specific diagnosis |
JP2015515490A (ja) * | 2012-04-27 | 2015-05-28 | 第一三共株式会社 | 抗robo4抗体 |
JP2016175893A (ja) * | 2012-04-27 | 2016-10-06 | 第一三共株式会社 | 抗robo4抗体 |
US9562096B2 (en) | 2012-04-27 | 2017-02-07 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Anti-ROBO4 antibody |
US9683040B2 (en) | 2012-04-27 | 2017-06-20 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Anti-ROBO4 antibody |
JP2016515092A (ja) * | 2012-11-08 | 2016-05-26 | アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル | 骨転移の治療のための方法及び医薬組成物 |
JP2020011969A (ja) * | 2013-10-14 | 2020-01-23 | ヤンセン バイオテツク,インコーポレーテツド | システイン改変フィブロネクチンiii型ドメイン結合分子 |
US11072663B2 (en) | 2013-10-14 | 2021-07-27 | Janssen Biotech, Inc. | Cysteine engineered fibronectin type III domain binding molecules |
US11702475B2 (en) | 2013-10-14 | 2023-07-18 | Janssen Biotech, Inc. | Cysteine engineered fibronectin type III domain binding molecules |
KR20160090171A (ko) * | 2015-01-21 | 2016-07-29 | 재단법인 아산사회복지재단 | 원발성 갑상선암 전이의 진단방법 및 이를 이용한 진단키트 |
KR101897322B1 (ko) | 2015-01-21 | 2018-09-10 | 재단법인 아산사회복지재단 | 원발성 갑상선암 전이의 진단방법 및 이를 이용한 진단키트 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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