JP2009536150A - 診断および治療適用のための異なる型の血液型抗原 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、概して、抗体媒介性移植片拒絶反応を治療または予防するための組成物および方法に関し、より詳細には、抗血液型抗原抗体を除去するのに有用な血液型決定基を含む組成物に関する。
既に移植の初期の頃に、ABOバリアを越えた腎移植の結果として、全く機能しない移植臓器の発生率が高いことが判明していたので、輸血に用いられる伝統的なLandsteinerの法則を遵守することが同種移植における必須条件とみなされていた。レシピエントの事前に形成された抗A/B同種凝集素は、ABO不適合移植片の超急性拒絶反応に関与している。この超急性拒絶反応は、ドナー反応性HLA抗体を有する、同種免疫を受けた患者において見られるものと同様である。移植におけるABOバリアを越える最初の試みは1970年代初頭に開始され、血液型A2の死体腎をO型のレシピエントに移植するものであった1。1980年代、Alexandreは、A1型およびB型のドナーを用いて、最初の一連のABO不適合生体ドナー(LD)の腎移植を行い、ABO適合例の場合と同様の移植片生存率を得た。免疫抑制プロトコルは、抗A/B抗体を除去するための前手術的な血漿分離交換法、ドナー血小板輸血、脾臓摘出および抗リンパ球/胸腺細胞グロブリンによる導入療法、ブタの胃から抽出された血液型AまたはB物質の注入、およびシクロスポリン−アザチオプリン−プレドニゾンを包含していた。それ以来、500例を超えるABO不適合LD腎移植が、世界各地、主に日本(1において検討)で報告されており、拒絶反応を回避するために、移植する前にレシピエントの抗A/B抗体レベルを低減することの重要性も十分に文書記録されている2,3。これらの系列における移植片生存率は良好である(A1型およびB型ドナーの場合に約85%の1年移植片生存率)が、深刻な抗A/B型抗体媒介型拒絶反応を伴う単独例のために、ABO適合移植片の生存率より僅かに劣る4,5。抗体の除去と組み合わせた、抗CD20抗体(リツキシマブ(Rituximab))を使用するABO不適合腎移植に関する最近のデータは、移植片生存率に関してはるかに良好であることが示された6,7(非特許文献1、非特許文献2)。
CJ Sonnenday,DS Warren,M Cooper,et al Am J Transplant 2004:4;1315−1322 G Tyden,G Kumlien,H Genberg,J Sandberg,T Lundgren,I Fehrman Am J Transplant 2005;5:145−148 DS Warren,AA Zachary,CJ Sonnenday,et al Am J Transplant 2004;4:561−568
本発明は、血漿から血液型抗原抗体を除去するための改良型組成物および方法、ならびに血液型判定方法に一部基づくものである。
本発明は、血液型エピトープが、任意の遊離糖としての、またはムチン型タンパク質骨格上の、異なるコア糖鎖(例えば、1型、2型、3型または4型)によって高密度で特異的に発現され得るという発見に一部基づくものである。異なるコア糖鎖によって保有された血液型抗原を組み合わせて用いることは、移植前に血液から抗血液型抗体を除去する上でより効果的であることが発見された。更に、本発明の組成物は、被験者における血液型反応性抗体の存在を決定する上で診断および予後診断に有用である。
ABH抗原は、人体のほぼ全ての細胞上において検出されるが、それらの生理的役割は、もしあるとすれば、依然として未解決の問題である。それらは糖質の性質を有し、異なるグリコシルトランスフェラーゼ、すなわち、成長するオリゴ糖鎖の非還元末端に単糖単位を順次付加する酵素により構築される。オリゴ糖は、タンパク質または脂質により保有され得るか9、または体液(例えば、母乳)中で遊離した状態で検出され得る9。
タンパク質−糖質相互作用は、一般には、低親和性結合を特徴とする。これは不合理に見えると思われるが、細胞受容体、抗体および他の糖質結合タンパク質およびそれらのグリコシル化リガンド間に迅速で非常に変わりやすい相互作用が起こるのを許容するので、生理学的条件下で必須である迅速なオン/オフ比の根拠となる。より高い親和性は、必要であるときには、本来、多価を用いることにより達成される。1つの生物学的実体上の幾つかの受容体が、別の実体上の幾つかの糖質リガンドに結合すると、親和性は10〜10000倍に増加し得る。多価相互作用の例としては、細胞表面への微生物(ウイルス、細菌または細菌毒素)の結合、細胞−細胞結合および細胞表面への多価分子(例えば、抗体)の結合が挙げられる13。一価インヒビターによる多価相互作用の阻害は、インヒビターの結合活性が構造的に最適化されていたとしても効果がない。したがって、多数の異なる分子(例えば、ポリアクリルアミド、ペプチド、ウシ胎仔血清アルブミン、デンドリマーおよびシクロデキストリン)は、対応する受容体の多価結合を形成しようとする単糖およびオリゴ糖の多数の提示のための骨格として使用されてきた13。代替手法としては、リポソーム、膜または他の表面における頭部基とリガンドとの非共有結合が含まれる13。これら複合糖質の達成は様々であるが、一般に、親和性は、一価相互作用と比較すると10倍〜1000倍向上される。ほとんどの場合に生理的タンパク質−糖質相互作用を特徴付けるナノモル活性は、少数の例において13、リガンド提示(すなわち、リガンド構造、価数、骨格構造およびリガンド内/間の距離)を最適化することによって達成されてきた。すなわち、糖質を提示する自然の方法が、可能な限り詳細に模倣された。
ムチン型タンパク質は、通常は粘膜表面に見られ、豊富なO−グリカン置換(2つ〜3つのアミノ酸につき1つ)を特徴とする。それらの分子量の最大50%は糖質の置換に起因する。ムチン−Igを有する様々なグリコシルトランスフェラーゼcDNAを共発現することにより、それらは、生物学的に有意な糖質決定基の数個のコピーを保有するように、そのO−グリカン構造を決定することができる。このように、血液型A決定基を保有するムチンが作製され、抗血液型A Absと高効率で結合することが示された1。実際、抗血液型A抗体のムチンをベースとする吸収体は、スペーサーを介してアガロースビーズに直接結合された血液型A三糖(これはGlucosorb(登録商標)の構成である)より、抗A抗体を結合する上で(血液型A決定基の数について計算すると)約100倍効果的であることが分かった。これは、A決定基の数個のコピーが、1つのムチン型担体タンパク質上のAb−結合に最適な間隔をもって発現されるという事実によって説明される1。同様に、糖質エピトープGalα1,3Gal(α−Gal)を保有する組換えムチンは、抗Gal抗体の非常に効果的な吸収体であることが分かった。主な障害は、ブタからヒトへの異種移植の成功を妨げることである15〜17。故に、ムチンは、生物活性糖質の最適な提示のための非常に効果的な骨格である。
上述のように、血液型ABH決定基は、異なるコア糖鎖によって保有され得る。これらは、人体において細胞特異的および組織特異的分布を有しており、抗血液型ABH抗体の標的分子としての個々のABH抗原の重要性は知られていない。同様に、抗血液型ABH抗体レパートリーが異種であるかどうか、すなわち、これら抗体の亜集団が、ABH抗原の異なるサブタイプを区別することができ、かつ、実際に末端三糖より多い数の糖質鎖を結合のために必要とするかどうかは知られていない。幾つかのデータは、血液型A抗原またはB抗原それぞれに特異的な全ての抗体を吸着するためにAまたはB三糖のみを使用することが十分であることを示唆しており、このことがこれら抗体の検出についても当てはまることを示している19〜20。しかしながら、本発明のデータは、ABH血液型抗原の異なるサブタイプ(すなわち、異なるコア糖鎖に保有されている)を用いてより効果的な抗体吸着および検出を行うことができることを示している。
先の検討に続いて、(構造異質性を得るために)異なるコア糖鎖上にABH決定基を保有するムチン型融合タンパク質またはオリゴ糖の混合物は、より広範な抗A/B抗体のレパートリーを吸着する。グリコシルトランスフェラーゼ遺伝子の異なる組合せを用いて、ムチン−免疫グロブリン融合タンパク質を、規定された内側および外側コア糖鎖を有するO−結合型グリカンの数個のコピーを保有するように設計することができる。これらは更に、ABH決定基を伴って伸長可能である。故に、組換え技術を使用して、構造的に様々な血液型AまたはBムチンを作製することができ、これらを使用して広範な抗A/B抗体のレパートリーを吸着することができる。
様々な態様において、本発明は、血液型抗原オリゴ糖を提供する。血液型抗原にはA、BおよびO(H)が含まれる。血液型抗原は、全ての血液型サブタイプに対して特異的である。血液型サブタイプとは、血液型抗原が異なるコア糖鎖型上で発現されることを意味する。コア糖鎖型としては、1型、2型、3型および4型グリカン前駆体が挙げられる。
様々な態様において、本発明は、糖タンパク質の少なくとも一部分を含有する第1ポリペプチド、例えば第2ポリペプチドに作用可能に結合したムチンポリペプチドを包含する融合タンパク質を提供する。本明細書中で使用するとき、「融合タンパク質」または「キメラタンパク質」は、非ムチンポリペプチドに作用可能に結合したムチンポリペプチドの少なくとも一部分を包含する。「ムチンポリペプチド」は、ムチンドメインを有するポリペプチドを指す。ムチンポリペプチドは、1つ、2つ、3つ、5つ、10、20またはそれを超えるムチンドメインを有する。ムチンポリペプチドは、O−グリカンで置換されたアミノ酸配列を特徴とする任意の糖タンパク質である。例えば、ムチンポリペプチドは、2つ〜3つのアミノ酸ごとにセリンまたはトレオニンである。ムチンポリペプチドは分泌タンパク質である。あるいは、ムチンポリペプチドは、細胞表面タンパク質である。
また、それぞれ異なるコア糖鎖型上で発現される少なくとも2つの血液型抗原を含有する組成物(例えば、ABOオリゴ糖)も本発明に包含される。血液型抗原は、A抗原、B抗原またはH抗原である。コア糖鎖型は、1型、2型、3型または4型である。組成物は、2つ、3つ、4つ、5つ、6つ、7つ、8つまたはそれを超える異なる血液型抗原を含有する。
抗体媒介性移植片拒絶反応(AMR)、例えば臓器移植の拒絶反応を治療または予防する方法も本発明に包含される。このような移植には、腎臓、肝臓、皮膚、膵臓、角膜または心臓が含まれるが、これらに限定されない。AMRは、レシピエントによる抗体媒介性移植片拒絶反応を包含することを意味する。この方法は、被験者からの生体サンプルを本発明のABOオリゴ糖またはABO融合ペプチドと接触させることを含む。生体サンプルは、例えば、血液、すなわち、全血または血漿である。サンプルは、抗体、例えば抗血液型抗体を含むことが知られているか、またはそのように考えられている。幾つかの態様では、生体サンプルは、このサンプルをABOオリゴ糖またはABO融合ポリペプチドと接触させる前に、被験者から抽出される。生体サンプルを、ABOオリゴ糖またはABO融合ペプチド−抗血液型抗体複合体の形成を許容するような条件下で、ABOオリゴ糖またはABO融合ペプチドと接触させる。ABOオリゴ糖またはABO融合ペプチド複合体は、存在する場合、抗血液型抗体を排除するために生体サンプルから分離され、生体サンプルは被験者に再び注入される。
サンプルから抗血液型抗体を除去するまたは枯渇させる方法も本発明に包含される。サンプルは、血液または血漿などの生体液である。あるいは、サンプルは、心臓組織、肝臓組織、皮膚または腎臓組織などの生体組織である。本方法は、本発明のABOオリゴ糖またはABO融合ペプチドとサンプルとを接触させることを含む。ABOオリゴ糖またはABO融合ペプチド−抗血液型抗体複合体の形成を許容するような条件下で、サンプルをABO融合ペプチドと接触させる。ABO融合ペプチド−抗体複合体は、存在する場合、抗血液型抗体を除去するまたは枯渇させるために生体サンプルから分離される。
被験者の血液型を判定する方法も本発明に包含される。被験者から採取した血漿または全血などのサンプルを、異なるサブタイプのマイクロビーズの集合体と接触させることによって被験者の血液型を判定する。各サブタイプは、異なる血液型抗原を含有する。血液型抗原は、異なるコア糖鎖型上で発現される。サンプル中に存在する抗血液型抗体が、マイクロビーズ上の血液型抗原に結合する、例えば、血液型抗原−抗体複合体を形成するのに十分な時間、マイクロビーズおよびサンプルを接触させる、例えば、インキュベートする。
発現ベクターの構築
P−セレクチン糖タンパク質リガンド−1/マウスIgG2b(PSGL−1/mIgG2b)cDNAを保有する発現ベクターを、エンテロキナーゼ(EK)開裂部位を含有するように改変した。この部位は、マウスIgG2b部分の下流放出のために使用することができる。
ウェスタンブロット法および間接的免疫蛍光法を用いたPSGL−1/mIgG2B発現の決定
細胞培養上澄み液中でのPSGL−1/mIgG2bの発現を、SDS−PAGEおよびウェスタンブロット法を用いて測定した。MES緩衝液(Invitrogen)中4%〜12%の勾配ゲル(Invitrogen)上にサンプルを載せ、分離したタンパク質をニトロセルロース膜(Invitrogen)上へ電気泳動的にブロットした。0.2%のTween 20を含むリン酸緩衝生理食塩水(PBS)中の3%ウシ胎仔血清アルブミン(BSA)において1時間ブロックした後、ブロッキング緩衝液で1:4000に希釈したペルオキシダーゼ結合ヤギ抗マウスIgG Fc抗体(Sigma)を用いて室温で1時間膜をプローブ処理した。0.2%のTween 20を含有するPBSで膜を3回洗浄し、製造業者の指示に従ってECLキット(Amerham Biosciences)を用いて化学発光法により結合抗体を視覚化した。
無血清培地へのCHO−K1細胞の適合
製造業者の指示に従って、無血清培地Ex−cell 302(JHR Bioscience,Inc.)に対してCHO−K1細胞系(ATCC CCL−61)を適合させた。
DNAトランスフェクションおよびクローン選択
無血清培地に適合させたCHO−K1細胞を75cm2のフラスコに播種し、製造業者の指示に従って、Lipofectamine 200 CD(Invitrogen)、動物由来でない処方物を用いて、PSGL−1/mIgG2b発現ベクターを前記細胞にトランスフェクトした。トランスフェクトしてから48時間後、ピューロマイシン含有選択培地(6μg/mL)において細胞をインキュベートした。選択培地は3日ごとに交換した。およそ2週間後、製造業者の指示に従って、Dead Cell Removal MicroBeads(Miltenyi Biotech)を用いて、死細胞を除去した。生細胞を96ウェルプレートにおいて単細胞クローニングし、およそ2週間、選択培地内で増殖させた。細胞培養上澄み液を採取し、酵素結合免疫測定法(ELISA)によって(下記のプロトコルを参照)、ヤギ抗マウスIgG Fc抗体(Sigma)を用いてhPSGL−1/mIgG2bの濃度を評価した。hPSGL−1/mIgG2bが最も高く発現した細胞クローンを選択して増殖させた。
上澄み液中のPSGL−1/mIgG2B濃度の、ELISAを用いた定量化
細胞を25cm2のフラスコに播種した(〜1×106細胞/mL)。細胞培養上澄み液を4日後に採取した。細胞クローンにより産生されたPSGL−1/mIgG2bの濃度を、酵素結合免疫測定法(ELISA)によって評価した。96ウェルのELISAプレート(Coster 3590、Corning)を、アフィニティー精製したヤギ抗mIgG Fc抗体(Sigma)で10μg/mLの濃度にて2時間被覆した。PBS中1%BSAで2時間、プレートをブロックした。PSGL−1/mIgG2bを含有する上澄み液をブロッキング緩衝液で連続希釈し、2時間インキュベートした。洗浄した後、ブロッキング緩衝液で1:4000に希釈したペルオキシダーゼ結合ヤギ抗マウスIgG Fc抗体(Sigma)を用いてプレートを2時間インキュベートした。3,3’,5,5’−テトラメチルベンジジンジヒドロクロリド(Sigma)により、結合したペルオキシダーゼ結合抗体を視覚化した。2M H2SO4で反応を停止し、自動マイクロプレートリーダー(Bio−Tek Instruments)において450nmでプレートを読み取った。精製したmIgG Fcフラグメント(Sigma)の希釈系を標準として使用して、PSGL−1/mIgG2b濃度を評価した。下記のように、最も多く産生している細胞クローン(〜25μg/mL)を選択し、更なるトランスフェクションを行った。
血液型A/B3型抗原で置換したPSGL−1/mIgG2Bの生成
上述のように、PSGL−1/mIgG2bが最も高く発現した安定なCHO−K1細胞系にFUT2(Se遺伝子)発現ベクターをトランスフェクトし、G418含有培地内で選択した(400μg/mL)。PSGL−1/mIgG2b上での血液型H3型抗原の相対数が最も高い細胞クローンに、GalNAcT(A遺伝子)またはGalT(B遺伝子)発現ベクターのいずれかをトランスフェクトし、ブラスチシジン含有培地内で選択することにより、PSGL−1/mIgG2b上に血液型AおよびBそれぞれの3型抗原を産生する細胞系が生成された(トランスフェクションスキームを参照)。
血液型A/B2型抗原で置換したPSGL−1/mIgG2Bの生成
PSGL−1/mIgG2bが最も高く発現した安定なCHO−K1細胞系にβ1,6GlcNAcT1(コア2酵素)およびFUT1(H遺伝子)発現ベクターをトランスフェクトし、G418含有培地内で選択した(400μg/mL)。PSGL−1/mIgG2b上でのH2型抗原の相対数が最も高い細胞クローンに、α1,3GalNAcT(A遺伝子)またはα1,3GalT(B遺伝子)発現ベクターのいずれかをトランスフェクトし、ブラスチシジン含有培地内で選択することにより、PSGL−1/mIgG2b上に血液型AおよびBそれぞれの2型抗原を産生する細胞系が生成された(トランスフェクションスキームを参照)。
血液型A/B1型抗原で置換したPSGL−1/mIgG2Bの生成
PSGL−1/mIgG2b上での血液型H3型抗原の相対数が最も高い細胞クローンに、β1,3GalNAcT(コア3酵素)およびGalT5発現ベクターをトランスフェクトし、ゼオシン含有培地内で選択した。PSGL−1/mIgG2b上での血液型H1型抗原の相対数が最も高いクローンに、α1,3GalNAcT(A遺伝子)またはα1,3GalT(B遺伝子)発現ベクターのいずれかをトランスフェクトし、ブラスチシジン含有培地内で選択することにより、PSGL−1/mIgG2b上に血液型AおよびBそれぞれの1型抗原を産生する細胞系が生成された(トランスフェクションスキームを参照)。
組換えhPSGL−1/EK/mIgG2Bの精製
遠心分離によって細胞培養上澄み液をデブリから回収し、ヤギ抗マウスIgG(全分子)アガロース(Sigma)を含有するカラムに通す。PBSでの洗浄後、結合したhPSGL−1/EK/mIgG2bを3M NaSCNで溶出し、蒸留水で透析分離する。低分子量の汚染物質を除去するために、HiPrep 16/60 Sephacryl S−200 HRカラム(Amersham Bioscience)上にてゲル濾過によりhPSGL−1/EK/mIgG2bを更に精製してもよい。
標準的なバイオコンジュゲーション化学を用いて、精製した血液型AおよびBムチンをセファロース高速流動(fast flow)ビーズに共有結合する。結合後、実際のカラムを構成するプラスチック容器にセファロースを充填する。
プールしていた血液型O血漿の吸着前後の抗血液型ABO抗体の力価を、赤血球凝集を含む標準的な血液貯蔵技法および間接的な抗グロブリンテストによって評価する。免疫グロブリン(IgG、IgMおよびIgA)、補体因子/フラグメント(C3、C3a、C3d、C4およびsC5b−9)、免疫複合体および凝固因子(FVIII、プロトロンビン、フィブリノーゲン、フィブリン分解産物)を含む血漿タンパク質全てを標準の技法により測定する。規定のコア糖鎖上に血液型A/B抗原を保有する組換えムチンを用いるELISAによって、または、精製され、かつ構造的に規定された血液型AおよびB糖脂質を使用する薄層クロマトグラフィーに基づくオーバーレイアッセイによって、吸着されかつ溶出したABO抗体と、吸着されていないABO抗体との特異性を決定する。
抗体力価を決定するための、大きさおよび色が異なるビーズの生成
大きさおよび色が異なるビーズを生成し(micromod Partikeltechnologie GmbH、Rostock、Germary)、異なる型の血液型抗原に結合させた。フローサイトメトリーによってビーズを分析すると、大きさおよび色のいずれに関しても良好な分解能を示した(表5を参照)。この方法を用いると、多数の結合ビーズの混合物を使用することが可能であり、各々の大きさ−色強度の組合せは、特定のコア構造上で発現された特定の血液型抗原を表している。
血液型抗体の検出
血清サンプルを、0.5%ヒトアルブミンを含むPBSで1:10に希釈し、血液型抗原オリゴ糖を保有するラテックスマイクロビーズ(4.6μm;18μg乾燥重量)と混合する。血清およびマイクロビーズを室温で30分間インキュベートし、次いで、0.5%HAS/PBSで洗浄する。FITC標識抗ヒトIgMおよびPE標識IgGを、洗浄したマイクロビーズに付加し、フローサイトメトリーによって分析する。
Claims (32)
- 少なくとも2つの血液型抗原を含む組成物であって、各血液型抗原が、異なるコア糖鎖型上で発現される、組成物。
- 前記血液型抗原が、A抗原、B抗原またはH抗原である、請求項1に記載の組成物。
- 前記血液型抗原が、固体支持体に結合されている、請求項1に記載の組成物。
- 前記コア糖鎖型が、1型、2型、3型または4型である、請求項1に記載の組成物。
- 請求項3に記載の組成物を構成する吸着体。
- 被験者の血清における血液型反応性抗体の存在を決定するための方法であって、
a)それぞれ異なる血液型抗原で被覆されている異なるサブタイプのマイクロビーズの集合体を用意する工程、
b)該マイクロビーズの集合体に、該被験者から得られた該血清を添加する工程、
c)該血清中の抗血液型抗体が該血液型抗原に結合するのに十分な時間、該血清および該マイクロビーズをインキュベートする工程、
d)該血液型抗原に結合した該抗血液型抗体と特異的に結合することができる少なくとも1つの標識リガンドと共に、該マイクロビーズをインキュベートする工程;
e)該抗血液型抗体に結合した標識リガンドの存在を検出して、該反応性抗体の存在または非存在を決定する工程、
を含む、方法。 - 前記血液型抗原が、異なるコア糖鎖型により保有されている、請求項6に記載の方法。
- 前記検出が、フローサイトメトリーまたはluminexによるものである、請求項7に記載の方法。
- 前記集合体が、8つの異なる血液型A/B抗原を含む、請求項7に記載の方法。
- 前記マイクロビーズがラテックスである、請求項7に記載の方法。
- 少なくとも1つの血液型抗原サブタイプのマイクロビーズが、異なる直径または異なる色を有するように選択されることによって、少なくとも1つの他の血液型サブタイプのマイクロビーズと異なっている、請求項7に記載の方法。
- 少なくとも1つの血液型サブタイプのマイクロビーズが、異なる標識を用いて標識されることによって、少なくとも1つの他の血液型サブタイプのマイクロビーズと異なっている、請求項7に記載の方法。
- 前記標識が蛍光標識である、請求項11に記載の方法。
- 前記マイクロビーズの直径がおよそ5μmである、請求項7に記載の方法。
- 前記マイクロビーズの直径が約2μm〜約15μmの範囲にある、請求項7に記載の方法。
- 工程(d)の前に、前記マイクロビーズ上に存在する前記血液型抗原と特異的に結合していない前記血清の成分を除去する工程を更に含む、請求項7に記載の方法。
- 工程(e)の前に、前記抗血液型抗体に結合していない標識リガンドを除去する工程を更に含む、請求項7に記載の方法。
- 前記リガンドが、抗体またはそのフラグメントである、請求項7に記載の方法。
- 前記抗体が、一価抗体フラグメントである、請求項18に記載の方法。
- 前記一価抗体フラグメントが、FabまたはFab’フラグメントである、請求項19に記載の方法。
- 前記FabまたはFab’フラグメントが、抗Fc抗体フラグメント、抗κ軽鎖抗体フラグメント、抗λ軽鎖抗体フラグメントおよび単鎖抗体フラグメントからなる群から選択される、請求項19に記載の方法。
- 前記鎖型が、1型、2型または3型前駆体である、請求項7に記載の組成物。
- 異なるサブタイプのマイクロビーズの集合体であって、各サブタイプが、異なる血液型抗原で被覆されている、集合体。
- 前記血液型抗原が異なるコア糖鎖型により保有されている、請求項23に記載の集合体。
- 前記血液型抗原が組換えムチン上で発現される、請求項23に記載の集合体。
- 前記血液型抗原の発現が多価である、請求項25に記載の集合体。
- 前記コア糖鎖型が、1型、2型、3型または4型前駆体である、請求項24に記載の組成物。
- 血清中の血液型反応性抗体を除去するための方法であって、
a)それぞれ異なる血液型抗原で被覆されている異なるサブタイプのマイクロビーズの集合体を用意する工程、
b)該マイクロビーズの集合体と該血清を接触させる工程、
c)該血清中の抗血液型抗体が該記血液型抗原に結合するのに十分な時間、該血清および該マイクロビーズをインキュベートする工程;
d)該血清から該マイクロビーズを分離することにより、該血清から該反応性抗体を除去する工程、とを含む方法。 - 前記血液型抗原が、異なるコア糖鎖型上で発現される、請求項28に記載の方法。
- 前記コア糖鎖型が、1型、2型、3型または4型である、請求項29に記載の方法。
- 前記血液型抗原が、組換えムチン上で発現される、請求項28に記載の方法。
- 前記血液型抗原の発現が多価である、請求項28に記載の方法。
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