JP2008543813A - ５−ｈｔ６−受容体阻害剤としてのベンゾフラニル誘導体 - Google Patents

Abstract

本発明は式（Ｉ）：

（Ｉ）
［式中、Ｒ¹およびＲ²は明細書で定義したとおりである］
の化合物、これらの化合物を含有する医薬製剤、ならびに体重および体重増加の減少を成し遂げるための、肥満、２型糖尿病および／またはＣＮＳ障害に関連する病状の予防および処置のための該化合物の使用に関する。

Description

本発明は、置換スルホンアミド化合物、これらの化合物を含有する医薬製剤、および体重および体重増加の減少を成し遂げるための、肥満、２型糖尿病および／または中枢神経系の障害（ＣＮＳ）に関連する病状の予防および処置のための該化合物の使用、ならびに化粧品用途のための該化合物の使用に関する。

肥満は、一般に認められた基準を超える過剰体重をもたらす、身体の脂肪量の増加により特徴付けられる状態である。肥満は、西欧諸国における最も重大な栄養障害であり、全ての産業国における主要な健康問題である。この障害は、心血管疾患、消化器疾患、呼吸器疾患、癌および２型糖尿病のごとき疾患の発生率を増大することにより、死亡率の増大をもたらす。数十年の間、体重を減少する化合物の探索が続けられてきた。ある一連の研究は、セロトニン受容体サブタイプを直接活性化すること、またはセロトニン再取り込みを阻害することのいずれかにより、セロトニン作動系を活性化することである。しかし、必要とされる正確な受容体サブタイプ特性は知られていない。

末梢および中枢神経系の主要な伝達物質であるセロトニン（５−ヒドロキシトリプタミンまたは５−ＨＴ）は、不安、睡眠調節、攻撃性、摂食行動および鬱を含む広範囲の生理的および病理学的機能を調節する。複数のセロトニン受容体サブタイプが同定され、クローン化されている。これらの１つである５−ＨＴ₆受容体は、１９９３年に幾つかのグループによりクローン化された（Ｒｕａｔ，Ｍ．ら．（１９９３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９３：２６８−２７６；Ｓｅｂｂｅｎ，Ｍ．ら．（１９９４）ＮｅｕｒｏＲｅｐｏｒｔ ５：２５５３−２５５７）。この受容体は、アデニリルシクラーゼに積極的に結合し、クロザピンのごとき抗鬱剤に対して親和性を示す。最近では、ラットにおける食飼摂取量を減少させるという、５−ＨＴ₆アンタゴニストおよび５−ＨＴ₆アンチセンスオリゴヌクレオチドの効果が報告されている（Ｂｅｎｔｌｅｙ，Ｊ．Ｃ．ら．（１９９９）Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃ．Ｓｕｐｐｌ．１２６，Ｐ６６；Ｂｅｎｔｌｅｙ，Ｊ．Ｃ．ら．（１９９７）Ｊ．Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｕｐｐｌ．Ａ６４，２５５；Ｗｏｏｌｌｅｙ Ｍ．Ｌ．ら．（２００１）Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）。

例えば、ＷＯ ００／３４２４２およびＩｓａａｃ，Ｍ．ら．（２０００）６−Ｂｉｃｙｃｌｏｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ−１−ａｒｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌｉｎｄｏｌｅｓ ａｎｄ ６−Ｂｉｃｙｃｌｏｐｉｐｅｒｉｄｉｎｙｌ−１−ａｒｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌｉｎｄｏｌｅｓ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ａｓ ｎｏｖｅｌ，ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ５−ＨＴ₆ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ．Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ １０：１７１９−１７２１（２０００）において、５−ＨＴ₆受容体に対して増強した親和性および選択性を有する化合物が同定されている。

ＷＯ ２００４／０００８２８およびＷＯ ０２／１００８２２（共にＢｉｏｖｉｔｒｕｍ ＡＢの名義）は、５−ＨＴ₆受容体に結合し、肥満、２型糖尿病および／またはＣＮＳ障害に関連する病状の処置用に用いられ得るスルホンアミド誘導体を開示している。

しかし、本発明によるスルホンアミド誘導体はこれまでに開示されていない。

驚くべきことに、式（Ｉ）の化合物が、低いナノモル範囲において、アンタゴニストとして５−ＨＴ₆受容体に対して親和性および選択性を示し、その親和性および選択性は、先行技術に含まれる化合物と比較して予想外に高いことが見出された。本発明に記載の化合物およびそれらの医薬上許容される塩は、５−ＨＴ₆受容体アンタゴニスト、アゴニストおよび部分アゴニスト活性を有し、体重および体重増加の減少を成し遂げるための、肥満および２型糖尿病の処置または予防における使用可能性、ならびに、不安、鬱、パニック発作、記憶障害、認知障害、睡眠障害、片頭痛、拒食症、過食症、過剰摂取（Ｂｉｎｇｅ）障害、強迫性障害、精神病、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病および／または統合失調症、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、薬物乱用のごとき中枢神経系の障害の処置または予防における使用可能性を有すると考えられている。体重および体重増加の減少（例えば、体重障害の処置）は、特に、食物摂取量の減少により成し遂げられる。本明細書で用いられる「体重障害」なる用語は、エネルギー摂取とエネルギー消費との間の不均衡により惹起され、異常な（例えば、過剰な）体重に至る障害を言う。かかる体重障害は肥満を含む。

式（Ｉ）の化合物
本発明の１つの目的は、式（Ｉ）：

（Ｉ）
［式中、
Ｒ¹がメトキシであり、かつＲ²がメチルであるか；または
Ｒ¹がメトキシであり、かつＲ²がヒドロキシメチルであるか；または
Ｒ¹がヒドロキシルであり、かつＲ²がメチルである］
の化合物またはその医薬上許容される塩である。

式（Ｉ）の化合物はそれ自体として用いられてもよく、適切な場合には、その薬理学上許容される塩（酸または塩基付加塩）として用いられてもよい。上記した薬理学上許容される付加塩は、化合物が形成し得る、治療活性のある非毒性の酸および塩基付加塩形態を含むことが意図される。塩基性特性を有する化合物は、塩基形態を適切な酸で処理することにより、それらの医薬上許容される酸付加塩に変換され得る。酸の例としては、無機酸、例えば、塩化水素、臭化水素、ヨウ化水素、硫酸、リン酸；および有機酸、例えば、酢酸、プロパン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、ピルビン酸、グリコール酸、マレイン酸、マロン酸、シュウ酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、フマル酸、コハク酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、パモ酸、安息香酸、アスコルビン酸等が挙げられる。塩基付加塩形態の例としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム塩、ならびに例えばアンモニア、アルキルアミン、ベンザチンのごとき医薬上許容されるアミンとの塩、ならびに例えばアルギニンおよびリジンのごときアミノ酸との塩が挙げられる。本明細書で用いられる付加塩なる用語は、化合物およびその塩が形成し得る溶媒和物も含み、例えば、水和物、アルコラート等が挙げられる。

臨床用途のために、本発明の化合物は、経口、直腸、非経口および他の投与様式のための医薬製剤に処方される。医薬製剤は、通常、活性物質またはその医薬上許容される塩を慣用的な医薬賦形剤と混合することにより調製される。さらに、製剤は、既知の方法、例えば、造粒、圧縮、マイクロカプセル封入、スプレーコーティング等により調製され得る。製剤は、慣用的方法により、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ、懸濁液、坐剤または注射の投与形態で調製されてもよい。液体製剤は、活性物質を水または他の適当なビヒクル中に溶解または懸濁させることにより調製されてもよい。錠剤および顆粒剤は、慣用的な様式でコーティングされてもよい。

本発明の別の目的は、治療に用いるための上記化合物である。

本発明の別の目的は、体重および体重増加の減少を成し遂げるために、肥満、２型糖尿病および／またはＣＮＳ障害のごとき５−ＨＴ₆受容体関連障害の処置または予防に用いるための上記化合物である。

本発明の別の目的は、医薬上許容される希釈剤または担体と組み合わせて、活性成分として上記化合物を含有する医薬製剤である。

本発明の別の目的は、体重および体重増加の減少を成し遂げるために、肥満、２型糖尿病および／または中枢神経系の障害のごとき５−ＨＴ₆受容体関連障害の処置または予防に用いるための、上記化合物を含有する医薬製剤である。

本発明の別の目的は、体重および体重増加の減少を成し遂げるための、肥満、２型糖尿病および／または中枢神経系の障害のごとき５−ＨＴ₆受容体関連障害の処置または予防方法であって、かかる処置の必要な対象へ有効量の上記化合物を投与することを含む方法である。

本発明の別の目的は、５−ＨＴ₆受容体活性の調節方法であって、その必要のある対象へ有効量の上記化合物を投与することを含む方法である。

本発明の別の目的は、体重および体重増加の減少を成し遂げるために、肥満、２型糖尿病および／または中枢神経系の障害のごとき５−ＨＴ₆受容体関連障害の処置または予防に用いるための医薬の製造のための、上記化合物の使用である。

中枢神経系の障害の例としては、アルツハイマー病および統合失調症に関連する認識機能障害を含む認知障害が挙げられる。

本明細書で示される方法は、対象が、肥満、２型糖尿病もしくは中枢神経系の障害の処置を必要とするか、または体重および体重増加の減少を必要とするかを同定する工程も含み得る。

さらに、本発明は、体重減少を惹起するための、本明細書で示される任意の式の１つまたはそれ以上の化合物の化粧品用途、ならびに該化合物を含有する化粧品製剤に関する。

さらに、本発明は、ヒトを含む哺乳類の身体の外観を改善するための非治療的方法であって、本明細書で示される任意の式の１つまたはそれ以上の化合物を該哺乳類へ経口投与することを含む方法に関する。

「有効量」は、処置された対象に治療効果を与える化合物の量を言う。治療効果は、客観的（すなわち、ある種の試験もしくはマーカーにより測定可能なもの）または主観的（すなわち、対象が効果の兆候を示すか、または効果を感じる）であってもよい。

臨床用途のために、本発明の化合物は、経口、直腸、非経口または他の投与様式のための医薬製剤に処方される。通常、活性化合物の量は、調製物の０．１〜９５重量％であり、好ましくは、非経口用の場合には、調製物の０．２〜２０重量％であり、好ましくは、経口投与の場合には、調製物の１〜５０重量％である。

活性物質の典型的な１日用量は、広い範囲内で変動し、例えば、各患者の個々の必要性および投与経路のごとき様々な因子に依存し得る。一般的に、経口および非経口用量は、１日あたり５０〜３００ｍｇの範囲の活性物質であり得、好ましくは、１日あたり５０〜１５０ｍｇであり得る。

調製方法
さらなる一の態様において、本発明は、本明細書で示される任意の式の化合物の製造方法であって、本明細書で示される式の任意の１つまたはそれ以上の化合物を反応させることを含み、本明細書で示される任意の過程を含む方法に関する。上記式の化合物は、慣用的方法またはそれに類似する方法、特に、以下の方法またはそれに類似する方法により調製されてもよい。

上記した合成経路で用いられる化学物質は、例えば、溶媒、試薬、触媒、保護基および脱保護基試薬を含んでもよい。上記した方法は、さらに、本明細書に明記された工程の前または後に、適当な保護基を付加または除去して、最終的に任意の上記式の化合物、それらの塩形態、または化合物もしくはその塩形態を含む製剤の合成を可能とする工程を含んでいてもよい。加えて、所望の化合物を得るために、様々な合成工程が代替的な順序で行われてもよい。適切な化合物の合成において有用な合成化学の変換および保護基の方法論（保護および脱保護）は当該分野において知られており、例えば、Ｒ．Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８９）；Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２^nd Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ（１９９１）；Ｌ．ＦｉｅｓｅｒおよびＭ．Ｆｉｅｓｅｒ，Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ （１９９４）；ならびにＬ．Ｐａｑｕｅｔｔｅ，ｅｄ．，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９５）およびその続版に記載されたものを含む。

以下の特定の実施例は、単なる例示と見なされるべきであり、残りの開示内容を限定するものでは決してない。さらなる詳述がなくても、当業者であれば、本明細書の記載に基づいて、本発明を最大限に利用できるものと考えられる。本明細書で引用される全ての文献は、出典明示により、その全てが本明細書の一部となる。

実施例１

Ｎ−［７−（４−ピペリジニル）オキシ−１−ベンゾフラン−５−イル］−２−メトキシ−５−メチルベンゼンスルホンアミド

実施例１を以下のように調製した：
２，３−ジヒドロベンゾフランから出発して、７−ヨード−Ｎ−（２−メトキシ−５−メチルフェニル）−１−ベンゾフラン−５−スルホンアミドを調製する。クロロスルホン酸での処理により、対応する塩化スルホニルを得、一塩化ヨウ素を用いてこれをヨウ化する。ＮＢＳを用いて芳香族化し、クレシジンで処理した後、７−ヨード−Ｎ−（２−メトキシ−５−メチルフェニル）−１−ベンゾフラン−５−スルホンアミドを得る。

銅を触媒として用いる、アルカリ溶液中での７−ヨード−Ｎ−（２−メトキシ−５−メチルフェニル）−１−ベンゾフラン−５−スルホンアミドの加水分解により、７−ヒドロキシ−Ｎ−（２−メトキシ−５−メチルフェニル）−１−ベンゾフラン−５−スルホンアミドを得る。カルバミン酸メチルで保護した４−ヒドロキシピペリジンのメシラートとの反応により、４−［（５−｛［（２−メトキシ−５−メチルフェニル）アミノ］スルホニル｝−１−ベンゾフラン−７−イル）オキシ］ピペリジン−１−カルボン酸メチルを得、これをアルカリ溶液中で加水分解し、標記化合物を得る。

実施例２（実施例１の代謝産物）

Ｎ−［７−（４−ピペリジニル）オキシ−１−ベンゾフラン−５−イル］−５−ヒドロキシメチル−２−メトキシベンゼンスルホンアミド

実施例３（実施例１の代謝産物）

Ｎ−［７−（４−ピペリジニル）オキシ−１−ベンゾフラン−５−イル］−２−ヒドロキシ−５−メチルベンゼンスルホンアミド

生物学的試験
本発明による化合物の５−ＨＴ₆受容体に結合する能力および医薬上有用である能力は、当該分野において知られているインビボおよびインビトロアッセイを用いて決定され得る。

（ａ）５−ＨＴ ₆ 結合アッセイ
５−ＨＴ₆受容体についての結合親和性実験を、Ｂｏｅｓｓ Ｆ．Ｇら．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．３６（４／５）７１３−７２０，１９９７により記載された一般的方法に従って、標識リガンドとして（３Ｈ）−ＬＳＤを用いて、５−ＨＴ₆受容体でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞において行う。

材料
細胞培養
５−ＨＴ₆受容体でトランスフェクトしたＨＥＫ−２９３細胞株を、５％ 透析ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ １０１０６−１６９）、０．５ｍＭ ピルビン酸ナトリウムおよび４００μｇ／ｍｌ ジェネテシン（Ｇ−４１８）（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ１０１３１−０１９）を含有するダルベッコ変法イーグル培地中で培養した。週２回、細胞を１：１０で継代した。

化学物質
Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ）から入手した放射性リガンド［³Ｈ］ＬＳＤ６０−２４０Ｃｉ／ｍｍｏｌをエタノール中とし、−２０℃で貯蔵した。化合物を１００％ ＤＭＳＯ中で溶解し、結合バッファーで希釈した。

ディスポーザブル
Ｃｏｓｔａｒ９６穴Ｖ底ポリプロピレンプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ．Ｃｏｓｔａｒ，ＮＹ，ＵＳＡ）中で化合物を希釈した。Ｐａｃｋａｒｄ Ｏｐｔｉｐｌａｔｅ（Ｐａｃｋａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｂ．Ｖ．，Ｇｒｏｎｉｎｇｅｎ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）中で試料をインキュベートした。添加した放射性リガンドの総量を、Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ（登録商標）２０シンチレーション用流体（Ｐａｃｋａｒｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ，ＵＳＡ）の存在下、Ｐａｃｋａｒｄ２４穴Ｂａｒｅｘプレート（Ｐａｃｋａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｂ．Ｖ．，Ｇｒｏｎｉｎｇｅｎ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）中で測定した。

バッファー
結合バッファーは、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ_2、および１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４から構成されるものであった。

方法
膜の調製
２４．５×２４．５のＮＵＮＣ培養ディッシュ上で、細胞を約９０％の集密度まで成長させた。培地を吸引し、氷冷ＰＢＳでリンスした後、２５ｍｌトリスバッファー（５０ｍＭ トリス−ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、ｐＨ７．４）および窓用スクレーパーを用いて細胞をこすり取った。次いで、Ｐｏｌｙｔｒｏｎホモジナイザーを用いて細胞を破壊し、１０００×ｇ、５分間の低速遠心分離により、残りの粒子状物質を除去した。最後に、高速遠心分離（２００００×ｇ）により膜を集め、結合バッファー中に懸濁させ、アリコートに分けて−７０℃で凍結した。

放射性リガンド結合
凍結した細胞膜を解凍し、直ちにＰｏｌｙｔｒｏｎホモジナイザーを用いて再度ホモジナイズし、チューブを連続振盪させながら、ＳＰＡコムギ胚芽凝集素ビーズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃａｒｄｉｆｆ，Ｅｎｇｌａｎｄ）に３０分間カップリングさせた。カップリング後、ビーズを１０００ｇで１０分間遠心分離し、その後、９６穴プレートあたり２０ｍｌの結合バッファー中に懸濁させた。次いで、放射性リガンドおよび試験化合物をビーズ−膜懸濁液に添加することによって、結合反応を開始した。室温でのインキュベーション後、アッセイプレートをシンチレーション計測に付した。

ＨｅＬａ細胞から調製する代わりに、ヒト５−ＨＴ₆受容体を発現するＨＥＫ２９３細胞から膜を調製したこと以外は、元々のＳＰＡ法に従った（Ｄｉｎｈ ＤＭ，Ｚａｗｏｒｓｋｉ ＰＧ，Ｇｉｌｌ ＧＳ，Ｓｃｈｌａｃｈｔｅｒ ＳＫ，Ｌａｗｓｏｎ ＣＦ，Ｓｍｉｔｈ ＭＷ．Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ５−ＨＴ₆ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ＨｅＬａ ｃｅｌｌ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ：ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｔｕｄｉｅｓ，ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｏｆ ｓｔａｎｄａｒｄ ＣＮＳ ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ ＳＰＡ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｔｈｅ Ｕｐｊｏｈｎ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｒｅｐｏｒｔ ７２９５−９５−０６４ １９９５；２７ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ）。［³Ｈ］ＬＳＤの特異的結合が飽和性であったのに対して、非特異的結合は添加した放射性リガンドの濃度に対して直線的に増加した。［³Ｈ］ＬＳＤは、高い親和性をもって５−ＨＴ₆受容体に結合した。４回の別々の実験に基づいて、Ｋ_d値を２．６±０．２ｎＭと推定した。

競合実験で用いた放射性リガンド濃度である３ｎＭの［³Ｈ］ＬＳＤでの総結合量は、典型的に６０００ｄｐｍであり、特異的結合は７０％を超えた。５−ＨＴは、［³Ｈ］ＬＳＤ結合の濃度依存性阻害を惹起し、２つの異なる膜調製物に対して試験した場合、２３６ｎＭの全体平均Ｋｉ値を伴った。３回の実験にわたるアッセイ間変動はＣＶ １０％を示し、平均Ｋ_i値 １７３ｎＭ（ＳＤ３０）およびヒル係数 ０．９４（ＳＤ０．０９）を伴うものであった。アッセイ内変動は３％（ｎ＝４）だった。実施例１についてのＫｉ値を表３に示す。異なる効力ではあるが、全ての非標識リガンドは濃度依存的な様式で［³Ｈ］ＬＳＤの特異的結合を置換した。化合物についての効力の順位は、メチオテピン（２ｎＭ）＞ミアンセリン（１９０ｎＭ）≒５−ＨＴ（２３６ｎＭ）＞メチセルギド（４８２ｎＭ）＞メスレルギド（１９７０ｎＭ）だった。

蛋白質測定
ＢｉｏＲａｄ蛋白質アッセイ（Ｂｒａｄｆｏｒｄ ＭＭ．Ａ ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏｇｒａｍ ｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ ｔｈｅ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ−ｄｙｅ ｂｉｎｄｉｎｇ．Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ １９７６；７２：２４８−５４）を用いて蛋白質濃度を測定した。ウシ血清アルブミンを標準として用いた。

シンチレーション計測
Ｐａｃｋａｒｄ ＴｏｐＣｏｕｎｔ（登録商標）シンチレーションカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ，ＵＳＡ）で、約２０％の計測効率にて放射能を測定した。計測効率は、別の一連の実験において決定した。

飽和実験
飽和実験では、少なくとも６種の濃度の放射性リガンド（０．１〜２０ｎＭの［³Ｈ］ＬＳＤ）を二つ組で用いた。総結合と、５μＭ リスリドの存在下での放射性リガンドの結合として定めた非特異的結合との間の差異として、特異的結合を算出した。Ｂ_maxおよび解離定数Ｋ_dは、方程式１を用いる非線形回帰分析から決定した。Ｌ_uは結合しなかった放射性リガンドの濃度であり、ｙは結合量である。

（方程式１）

競合実験
放射性リガンドの総結合および非特異的結合を、それぞれ８回繰り返して定義した。試験化合物を含む試料を１１種の濃度において二つ組で実施した。室温で３時間インキュベーションを行った。ＩＣ₅₀値、すなわち、放射性リガンドの特異的結合の５０％を阻害した試験化合物の濃度を非線形回帰分析によって決定し、［Ｃｈｅｎｇ Ｙ．Ｃ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２，３０９９−３１０８，１９７３Ｓ］の方程式２の方法を用いてＫ_i値を算出した。

（方程式２）
Ｌ＝放射性リガンドの濃度
Ｋ_d＝放射性リガンドの親和性

（ｂ）５−ＨＴ ₆ 固有活性アッセイ
ヒト５−ＨＴ₆受容体を発現するＨＥＫ２９３細胞において５−ＨＴが誘導するｃＡＭＰの増加の阻害を測定することにより、５−ＨＴ₆受容体に対するアンタゴニストを特徴付けた（Ｂｏｅｓｓら．（１９９７）Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ３６：７１３−７２０を参照のこと）。簡単に言うと、ＨＥＫ２９３／５−ＨＴ₆細胞をポリリジンコーティング９６穴プレートに２５，０００／穴の密度で播種し、５％ 透析ウシ胎児血清を含有するＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地）（フェノールレッド不含）にて４８時間、３７℃、５％ ＣＯ₂インキュベーター内で成長させた。次いで、培地を吸引し、０．１ｍｌのアッセイ培地（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ，１．５ｍＭ イソブチルメチルキサンチンおよび１ｍｇ／ｍｌ ウシ血清アルブミンを含有するハンクス平衡塩溶液）に置き換えた。アッセイ培地中に溶解した試験物質 ５０μｌを添加した後、細胞を１０分間、３７℃、５％ＣＯ₂インキュベーター内でインキュベートした。培地を再度吸引し、放射性ｃＡＭＰキット（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ＢＩＯＴＲＡＫ ＲＰＡ５５９）を用いて、ｃＡＭＰ含有量を測定した。ｃＡＭＰの増加を引き起こす５−ＨＴ（［５−ＨＴ］＝ＥＣ₅₀の８倍）の５０％阻害を惹起する濃度を式ＩＣ_50,corr＝ＩＣ₅₀／（１＋［５ＨＴ］／ＥＣ₅₀）を用いて決定することにより、アンタゴニストの効力を定量した。

実施例１は、０．５ｎＭと５μＭの間のＫｉおよびＩＣ_50,corr値を伴った、５−ＨＴ₆受容体に対する選択的な親和性を有するか、または５０ｎＭにおいて［³Ｈ］ＬＳＤ≧２０％の％阻害を示し、５−ＨＴ₆のアンタゴニスト、アゴニストまたは部分アゴニストである。実施例１は、５−ＨＴ_1a、５−ＨＴ_2a、５−ＨＴ_2a、５−ＨＴ_2bおよび５−ＨＴ_2cにわたって良好な選択性を示す（値については表３を参照のこと）。

追加アッセイを実施例１について用いた。表１を参照のこと。

表１−実施例１について用いた追加アッセイ

表１中の参考文献
ＬＥＶＩＮ，Ｍ．Ｃ．，ＭＡＲＵＬＬＯ，Ｓ．，ＭＵＮＴＡＮＥＲ，Ｏ．，ＡＮＤＥＲＳＯＮ，Ｂ．およびＭＡＧＮＵＳＳＯＮ，Ｙ．（２００２）Ｔｈｅ ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ−ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｌｙ−４９ ｖａｒｉａｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｂｅｔａ １−ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｅｘｈｉｂｉｔｓ ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｄｅｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｏｗｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：３０４２９−３０４３５
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（ｃ）体重および食飼摂取に対する効果
材料および方法
試験化合物
実施例１を、５％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ４００、０．２％ Ｔｗｅｅｎ８０＋１０ｍＭ 酢酸ナトリウムバッファー、ｐＨ６中に溶解した。対応する溶液をビヒクルとして用いた。１４日間の貯蔵において溶液の安定性を調べた。週に２回、溶液を処方し、フリーザーで貯蔵した。実際の濃度について溶液を分析し、２つの場合において同様であることが分かった。

動物
１００匹の雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットは、Ｓｃａｎｂｕｒ ＢＫ ＡＢ（Ｓｏｌｌｅｎｔｕｎａ，Ｓｗｅｄｅｎ）において高脂肪食飼で育てられ、Ｂｉｏｖｉｔｒｕｍの動物飼育施設に到着時に、約７００ｇの重量（１７週齢）だった。ラットを順応させ、到着から約３週間後に計量した。一定の室内条件（温度２２＋／−１℃、湿度４０〜６０％、１２時間の明／暗サイクル、午前１０時に消灯）下の標準的なケージ内でラットを１匹ずつ飼育した。Ｓｃａｎｂｕｒで摂取していたものと同じ高脂肪食飼（４５ｋｃａｌ％脂肪，４．７ｋｃａｌ／ｇ；Ｄ１２４５１）をラットに摂取させた。食飼はＲｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，ＵＳＡから購入されたものであり、ペレットから構成され、乾燥および低温条件下で貯蔵された。

実験セッション
最も重量が増加した高脂肪摂取動物を選択した。この集団は７９９±６０ｇの重量だった。選択した４８匹のラットを無作為化し、重量に従ってできる限り均一な群となるように、５つの処置群に分けた。各処置群は１２匹のラットから構成された：群１−ビヒクル、群２−実施例１−５ｍｇ／ｋｇ（１１μｍｏｌ／ｋｇ）、群３−実施例１−１５ｍｇ／ｋｇ（３３μｍｏｌ／ｋｇ）、群４−実施例１−３０ｍｇ／ｋｇ（６６μｍｏｌ／ｋｇ）。各投与群における化合物曝露および薬物動態を７日目および２９日目について並行して測定するために、さらに９匹のラットを割り当てた。手順および実験者にラットを順応させるために、５日間のベースライン測定により、研究を開始した。１日１回午前９〜１０時に、２．５ｍｌ／ｋｇの容量、すなわち、ラット（８００ｇ）１匹あたり平均２ｍｌの容量で、試験化合物を経口投与した。注入に関連して、ペレットの重さおよび体重を毎日量った。水のボトルの重さを週に１回量った。秤量は、コンピューター支援のＭｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＰＲ ５００２天秤を用いて行った。全データをＥｘｃｅｌテンプレートに転送した。

血清グルコース、インスリン、レプチン、遊離脂肪酸、トリグリセリド、コレステロール、ＨＤＬ、ＬＤＬ、ＡＬＡＴ、ＡＳＡＴおよび尿素の測定のために、２８日目に、体幹の血液を採取した。ヘマトクリット値も測定した。精巣上体白色脂肪組織、肝臓および腓腹筋を解剖し、計量した。

薬物動態解析
上記のように、血漿曝露用のサテライト動物（３匹の動物／投与）を５、１５および３０ｍｇ／ｋｇ／日の実施例１で経口的に処置した。７日目に、投与前、投与から１０分後、３０分後、１時間後、２時間後、３時間後、４時間後、６時間後、８時間後および２４時間後の時間ポイントで、血液試料を尾静脈から採取する。１５ｍｇ／ｋｇ／日の処置群における動物から、２８日目に、７日目についてのものと対応する時間ポイントで、新しい血液試料を採取した。血液試料（約１５０μＬ）をヘパリン化チューブ中に採取し、遠心分離（４０００ｒｐｍ、５分間、＋４℃）まで氷上に置いた。分析まで血漿を−２０℃で貯蔵した。ＨＰＬＣおよびエレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析により、血液試料を分析した。

統計
食飼および水の摂取、ならびに体重データをグラム単位および基礎の％として算出し、平均＋／−ＳＤおよび／または＋／−ＳＥＭとして示す。処置前の全ての日にわたって値を平均化することにより結果は変化しなかったので、処置開始の前日（０日目）における基礎値を代表値と見なした。

選択した時間ポイントにおける処置群間の比較のために、繰り返し測定した（ｘ回の処理）二元配置一変量ＡＮＯＶＡ、次いで、一元配置ＡＮＯＶＡにより、体重および食飼摂取のデータを統計的に分析した。ビヒクル対照に対する処置群の有意性を調べるために、一元配置ＡＮＯＶＡ、次いで、Ｄｕｎｎｅｔｔのｔ−検定により、臨床化学測定値を分析した。Ｐ＜０．０５ならば、２群間の差異は有意であると見なした。Ｗｉｎｄｏｗｓ用のＳＰＳＳを用いて統計的評価を行った。

結果
体重に対する効果
長期間研究の目的は、４週間の長期にわたる処置期間が持続的な体重減少をもたらし得るかどうかを研究することであり、さらに、最小有効量が決定できる。実施例１を用いる初期急性および長期間研究に基づいて、用量を選択した。全処置期間にわたって、実施例１により体重は有意に減少した（繰り返しＡＮＯＶＡ 群Ｆ（３，４２）＝１２．６；Ｐ＜０．００１）（図１）。体重の減少は、５、１５および１５ｍｇ／ｋｇの用量について、各々、３．９、３．７および６．９％だった（全群についてビヒクルに対してＤｕｎｎｅｔｔのｔ−検定Ｐ＜０．００１）（表２を参照のこと）。

食飼摂取量に対する効果
図２に示すように、実施例１は、始めの７日間に食飼摂取量を有意に減少した（繰り返しＡＮＯＶＡ 群Ｆ（３，４２）＝９．８８７；Ｐ＜０．００１）。Ｄｕｎｎｅｔのｔ−検定は、１５および３０ｍｇ／ｋｇの用量がビヒクルと有意に異なり（Ｐ＜０．００１）、一方で、５ｍｇ／ｋｇの用量は有意に異ならないことを示した。故に、最小有効量は１５ｍｇ／ｋｇである。食飼摂取量への効果は８日目〜１４日目の間に弱まったが、統計的に有意ではないものの（群Ｆ（３，４２）＝２．４５９；Ｐ＜０．０７６）、残りの処置期間中も減少したままであった。１５日目〜２８日目にわたる減少の平均は７〜１２％であったが、最大用量のみが統計的有意性に達した（Ｐ＜０．０３５）。

表４〜６において、実施例１について表３で得られた幾つかの値は、先行技術に含まれる化合物について得られたものである：

表４−ＷＯ０２／１００８２２の実施例１４８（Ｎ−（７−ピペラジン−１−イル−ベンゾフラン−５−イル）−１−ナフチルスルホンアミド，塩酸塩）について得られた値。実施例１４８について、スルホンアミド基のＮＨ−部分はベンゾフラン環に結合している。

表４は、ＷＯ０２／１００８２２で開示された実施例１４８と比較して、実施例１が、５−ＨＴ２ａ、５−ＨＴ２ｂおよび５−ＨＴ２ｃよりも５−ＨＴ₆について優れた選択性を有することを示す。

５−ＨＴ２ａ、５−ＨＴ２ｂおよび５−ＨＴ２ｃよりも５−ＨＴ₆についての良好な選択性を成し遂げるために、前者の受容体についてのＫｉ−結合は、５−ＨＴ₆結合に対して少なくとも１００倍である必要がある。

表５−ＷＯ２００４／０００８２８に含まれるが具体的には開示されていない化合物Ａ（５−クロロチオフェン−２−スルホン酸、［７−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゾフラン−５−イル］アミド，塩酸塩）および化合物Ｂ（Ｎ−［７−（４−ピペリジニルオキシ）−１−ベンゾフラン−５−イル］−２−トリフルオロメチルベンゼンスルホンアミド）について得られた値。化合物ＡおよびＢの両方について、スルホンアミド基のＮＨ−部分はベンゾフラン環に結合している。

表５はＷＯ２００４／０００８２８に含まれる化合物ＡおよびＢと比較して、実施例１が、５−ＨＴ１ａ、５−ＨＴ１ｂ、５−ＨＴ２ａ、５−ＨＴ２ｂおよび５−ＨＴ２ｃよりも５−ＨＴ₆について優れた選択性を有し、ならびに優れたβ１、β２、κ（ＫＯＰ）および５−ＨＴ３阻害値を有することを示す。

β１、β２、κ（ＫＯＰ）および５−ＨＴ３よりも５−ＨＴ₆について良好な選択性を成し遂げるために、前者の阻害％は１μＭにおいて≦７０％である必要がある。

表６−ＷＯ２００４／０００８２８に含まれるが具体的には開示されていない化合物Ｃ（Ｎ−［７−（４−ピペリジニル）オキシ−１−ベンゾフラン−５−イル］−２−メトキシ−６−メチルベンゼンスルホンアミド）および化合物Ｄ（Ｎ−［７−（３−ピペリジニル）オキシ−１−ベンゾフラン−５−イル］−２−メトキシ−５−メチルベンゼンスルホンアミド）について得られた値。化合物ＣおよびＤの両方について、スルホンアミド基のＳＯ₂−部分はベンゾフラン環に結合している。

表４は、ＷＯ２００４／０００８２８に含まれる化合物ＡおよびＢと比較して、実施例１が、５−ＨＴ２ａ、５−ＨＴ２ｂおよび５−ＨＴ２ｃよりも５−ＨＴ₆について優れた選択性を有することを示す。

実施例１での処置の体重に対する効果を示す。 実施例１での処置の食飼摂取に対する効果を示す。

Claims (16)

1. 式（Ｉ）：
   

   

   （Ｉ）
   ［式中：
   Ｒ¹がメトキシであり、かつＲ²がメチルであるか；または
   Ｒ¹がメトキシであり、かつＲ²がヒドロキシメチルであるか；または
   Ｒ¹がヒドロキシルであり、かつＲ²がメチルである］
   の化合物またはその医薬上許容される塩。
2. 治療に用いるための請求項１記載の化合物。
3. 体重および体重増加の減少を成し遂げるために、肥満、２型糖尿病のごとき５−ＨＴ₆受容体関連障害の処置または予防に用いるための、請求項１記載の化合物。
4. 中枢神経系の障害から選択される５−ＨＴ₆受容体関連障害の処置または予防に用いるための請求項１記載の化合物。
5. 中枢神経系の障害がアルツハイマー病および統合失調症に関連する認識機能障害を含む認知障害である、請求項４記載の化合物。
6. 医薬上許容される希釈剤または担体と組み合わせて、活性成分として請求項１記載の化合物を含有する医薬製剤。
7. 体重および体重増加の減少を成し遂げるために、肥満、２型糖尿病のごとき５−ＨＴ₆受容体関連障害の処置または予防に用いるための、請求項１記載の化合物を含有する医薬製剤。
8. 中枢神経系の障害から選択される５−ＨＴ₆受容体関連障害の処置または予防に用いるための、請求項１記載の化合物を含有する医薬製剤。
9. 中枢神経系の障害がアルツハイマー病および統合失調症に関連する認識機能障害を含む認知障害である、請求項８記載の医薬製剤。
10. 体重および体重増加の減少を成し遂げるための、肥満、２型糖尿病のごとき５−ＨＴ₆受容体関連障害の処置または予防方法であって、かかる処置の必要な対象へ有効量の請求項１記載の化合物を投与することを含む、方法。
11. 中枢神経系の障害から選択される５−ＨＴ₆受容体関連障害の処置または予防方法であって、かかる処置の必要な対象へ有効量の請求項１記載の化合物を投与することを含む、方法。
12. 中枢神経系の障害がアルツハイマー病および統合失調症に関連する認識機能障害を含む認知障害である、請求項１１記載の方法。
13. ５−ＨＴ₆受容体活性の調節方法であって、その必要のある対象へ有効量の請求項１記載の化合物を投与することを含む、方法。
14. 体重および体重増加の減少を成し遂げるために、肥満、２型糖尿病のごとき５−ＨＴ₆受容体関連障害の処置または予防に用いるための医薬の製造のための、請求項１記載の化合物の使用。
15. 中枢神経系の障害から選択される５−ＨＴ₆受容体関連障害の処置または予防に用いるための医薬の製造のための、請求項１記載の化合物の使用。
16. 中枢神経系の障害がアルツハイマー病および統合失調症に関連する認識機能障害を含む認知障害である、請求項１５記載の使用。

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