JP2007520559A - 治療薬としてのアミノベンゾオキサゾール類 - Google Patents

治療薬としてのアミノベンゾオキサゾール類 Download PDF

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Abstract

置換基が明細書で定義の通りであり、キナーゼ阻害薬として有用である式（Ｉ）の化合物。

Description

タンパク質キナーゼであることが確認されている酵素は少なくとも４００種類ある。これらの酵素は、標的タンパク質基質のリン酸化を触媒する。そのリン酸化は通常、ＡＴＰからタンパク質基質へのリン酸基の転移反応である。リン酸が転移される標的基質における具体的な構造は、チロシン、セリンまたはトレオニン残基である。これらのアミノ酸残基はリン酸転移の標的構造であることから、これらのタンパク質キナーゼ酵素は通常、チロシンキナーゼ類またはセリン／トレオニンキナーゼ類と称される。
チロシン、セリンおよびトレオニン残基でのリン酸化反応および相殺的なホスファターゼ反応は、多様な細胞内シグナルへの応答（代表的には細胞受容体を介したもの）、細胞機能の調節および細胞プロセスの活性化もしくは失活の基礎となる無数の細胞プロセスに関与している。一連のタンパク質キナーゼは多くの場合、細胞内信号伝達に関与し、これらの細胞プロセスの実現において必要である。これらのプロセスにおいて普遍的であることから、それらのタンパク質キナーゼは、原形質膜の非常に重要な部分としてまたは細胞質酵素として認めることができるか、多くの場合酵素複合体の構成要素として核で局在していることができる。多くの場合、これらのタンパク質キナーゼは、細胞プロセスが細胞内のどこで、何時起こるかを決定する酵素および構造タンパク質複合体の非常に重要な要素である。
従って、受容体および非受容体チロシンおよびセリン／トレオニンキナーゼの活性を調節して、異常もしくは不適切な細胞増速、分化もしくは代謝を調整する活性を調節することで、シグナル伝達および細胞増殖を特異的に阻害する有効な小型化合物を確認することが望ましい。特に、浮腫、腹水症、滲出、浸出および巨大分子遊出および基質沈着ならびに関連する障害に至る抗血管形成プロセスまたは血管透過性増大の形成において非常に重要なチロシンキナーゼの機能を特異的に阻害する方法および化合物を確認することは有用であると考えられる。
本発明は、１以上の受容体および非受容体およびセリン／トレオニンキナーゼを阻害する新規な化合物を提供する。
本発明は、グループＡと称される下記式（Ｉ）の化合物、その製薬上許容される塩、その代謝物、その異性体またはそのプロドラッグを提供する。
Figure 2007520559
 式中、
Ｘは、ＮまたはＣＨであり；
Ａは、置換されていても良いフェニルであるか、
またはＡは、
Figure 2007520559
 であり；
ｒは１であり；Ｄ１、Ｇ１、Ｊ１、Ｌ１およびＭ１はそれぞれ独立に、ＣＲａおよびＮからなる群から選択され、ただしＤ１、Ｇ１、Ｊ１、Ｌ１およびＭ１のうちの少なくとも２個がＣＲａであり；または
ｒは０であり；Ｄ１、Ｇ１、Ｌ１およびＭ１のうちの一つがＮＲａであり、Ｄ１、Ｇ１、Ｌ１およびＭ１のうちの一つがＣＲａであり、残りのものが独立にＣＲａおよびＮからなる群から選択され、Ｒａは下記で定義の通りであり；
Ｌは、ＮＨ、置換されていても良いアルキル、カルボニル、−Ｏ−置換されていても良いアルキル、ＮＨ（置換されていても良い脂肪族）またはＳであり；
Ｒ１は、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ１００）２であり；各場合でＲ１００は独立に水素またはアルキルであり；
またはＲ１は、
Figure 2007520559
 であるか、
または脂肪族基、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、シクロアルキル、２，３−ジヒドロベンゾフラニル、１，１−ジオキシベンゾイソチアゾリル、フラニル、１Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］イミダゾリル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリミジニル、イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３］チアゾリル、インダゾリル、インドリニル、インドリル、イソキノリニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、モルホリニル、ナフチル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、フェニルスルホニル、フタラジニル、ピペリジニル、ピラゾリル、Ｈ−ピリジノン、ピリジニル、ピリド−オキサゾリル、ピリド−チアゾリル、ピリミド−オキサゾリル、ピリミド−チアゾリル、ピロリジニル、ピロロピリジニル、ピロリル、キノリニル、キノキザリニル、キナゾリニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロナフチル、テトラヒドロピラニル、チアジアゾリル、チアゾリルチエニル、
Figure 2007520559
 からなる群から選択される置換されていても良い基であり；
前記置換されていても良い基は、１以上のＲｂによって置換されていても良く；
ｕは１であり；Ｄ２、Ｇ２、Ｊ２、Ｌ２およびＭ２はそれぞれ独立に、ＣＲａおよびＮからなる群から選択され；ただし、Ｄ２、Ｇ２、Ｊ２、Ｌ２およびＭ２のうちの少なくとも２個がＣＲａであり；または
ｕは０であり；Ｄ２、Ｇ２、Ｌ２およびＭ２のうちの１個がＮＲａであり、Ｄ２、Ｇ２、Ｌ２およびＭ２のうちの１個がＣＲａであり、残りのものが独立にＣＲａおよびＮからなる群から選択され；
ＲａおよびＲｂはそれぞれ１以上の置換基を表し、各場合で独立に脂肪族基、アルコキシ、アルキルアミノ、脂肪族−カルボニル、脂肪族−シクロアルキル、脂肪族−複素環、アルキル−Ｓ−、アルキル−Ｓ（Ｏ）ｐ−、アミド基、アミノ、アミノアルキル、カルボキサミド、−ＣＦ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）−脂肪族、−Ｃ（Ｏ）−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−複素環、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−脂肪族、Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−複素環、シクロアルキル、シクロアルキル−脂肪族、シクロアルキル−Ｓ、シクロアルキル−Ｓ（Ｏ）ｐ、シクロアルキルチオ、ジアルキルアミノアルコキシ、ハロ、複素環、複素環アルコキシ、複素環アルキル、複素環オキシ、複素環−Ｓ、複素環−Ｓ（Ｏ）ｐ、複素環チオ、複素環アルキル−Ｓ、水素、−ＮＯ２、−ＯＣＦ３、−ＯＨ、テトラゾリル、トリフルオロメチルカルボニルアミノ、トリフルオロメチルスルホンアミド、−Ｚ１０５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｚ１０５−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）−Ｚ２００、−Ｚ１０５−Ｎ（Ｒ）−Ｓ（Ｏ）２−Ｚ２００、−Ｚ１０５−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ）−Ｚ２００、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｏ−Ｒ−Ｃ（Ｏ）−複素環−ＯＲ、Ｒｃおよび−ＣＨ２ＯＲｃからなる置換されていても良い基から選択され；
Ｒｃは各場合で独立に、水素、置換されていても良い脂肪族、置換されていても良い複素環−（Ｃ１〜Ｃ６）−ＮＲｄＲｅ、−Ｗ−（ＣＨ２）ｔ−ＮＲｄＲｅ、−Ｗ−（ＣＨ２）ｔ−Ｏ−アルキル、−Ｗ−（ＣＨ２）ｔ−Ｓ−アルキルまたは−Ｗ−（ＣＨ２）ｔ−、ＯＨであり；
Ｚ１０５は各場合で独立に、共有結合または脂肪族基であり；
Ｚ２００は各場合で独立に、脂肪族基、脂肪族−フェニルおよびフェニルからなる群から選択される置換されていても良い基から選択され；
ＲｄおよびＲｅは各場合で独立に、Ｈ、脂肪族基、アルカノールまたはＳＯ２−アルキルであり；またはＲｄ、Ｒｅおよびそれらが結合している窒素原子が一体となって、５員もしくは６員の複素環を形成しており；
ｔは各場合で独立に、２〜６の整数であり；
Ｗは各場合で独立に、結合またはＯ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２もしくはＮＲｆであり；Ｒｆは各場合で独立にＨまたは脂肪族基であり；または
Ｒａは、置換されていても良いシクロアルキルまたはそれが結合している環と縮合した複素環であり；
Ｂは、結合またはａ）水素；ｂ）置換されていても良いトリチル；ｃ）置換されていても良いシクロアルキル；ｄ）置換されていても良い脂肪族基で置換されたアザ複素環；ｅ）−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル−ＯＲ、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル−Ｎ（Ｒ）２、−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル−Ｎ（Ｒ）２、−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル−シクロアルキル、テトラヒドロチエニルおよびテトラヒドロチオピラニルからなる置換されていても良い基から選択される１以上の置換基で置換されたアザシクロアルキル；ｆ）下記式：
Figure 2007520559
 の基
［Ｅ１は、アミド、アミノ、イミダゾリル、モルホリニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニルまたはテトラヒドロチアゾリルからなる置換されていても良い基から選択され；Ｅ１は、−（Ｃ０〜Ｃ６）−アルキル−ＯＲ、−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−複素環−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル−複素環アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル−Ｎ（Ｒ）２、シクロヘキサノン、アルコキシアルキルおよびピラニルから選択される１以上の置換基で置換されていても良い］、ｇ）置換されていても良い（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、ｈ）置換されていても良いシクロアルキル、ｉ）置換されていても良いアルコキシアルコキシ、ｊ）置換されていても良いアルキルアミノ、ｋ）置換されていても良いジアルキルアミノ、ｌ）アルキルエステル、ｍ）アルケニル、ｎ）置換されていても良いアルコキシ、ｏ）置換されていても良い複素環、ｐ）置換されていても良いフェニル、ｑ）置換されていても良い１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン、ｒ）置換されていても良い１−オキサ−２−アザ−スピロ［４．５］デカ−２−エン、ｓ）置換されていても良い［１，３］ジオキソラン、ｔ）−Ｒ２００−Ｏ−（Ｒ２００）２−Ｓｉ（Ｒ２００）３、ｕ）結合（ただし、Ｂ、ＺおよびＥはそれぞれ結合以外である。）、ｖ）アルコキシアルキルまたはｗ）フェニルアルキルであり；
Ｚは、結合、カルボニル、Ｒ２００−Ｏ−、アミノ、−Ｏ−、−Ｓ−またはＳＯ２であり；
Ｅは、結合もしくはＨであるか、またはアルコキシ、アルコキシ−脂肪族、アルコキシアミノ、アルコキシアルコキシ、アルコキシカルボニル−脂肪族、脂肪族基、脂肪族−アミノ脂肪族、脂肪族カルボニル、アルキルスルホニル、アミノ、アミノ−脂肪族、アミノ−脂肪族−カルボニル、アミノカルボニル、アミノカルボニル−脂肪族、アミノスルホニル−脂肪族、ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）２（ＯＨ）、−Ｃ（ＣＨ３）２Ｎ（ＣＨ３）（Ｈ）、シクロアルキル、ジ−脂肪族−アミノ、ジ−脂肪族−アミノ−脂肪族、ジ−脂肪族−アミノ−脂肪族−アミノ、ジ−脂肪族−アミノカルボニル、ジ−脂肪族−アミノカルボニル−脂肪族、複素環、複素環−脂肪族、モルホリノカルボニル−脂肪族、フェニル、ピペリジニルアルコキシ、テトラヒドロピラニル−脂肪族、チオピラニル、テトラヒドロチオピラン−１，１−ジオキシド、トリアゾリル−脂肪族および尿素からなる群から選択される置換されていても良い基であり；または
Ｅは、
−ＣＨ（Ｒ２００）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｃ１〜Ｃ６）−Ｎ（Ｒ２００）２、
−Ｎ（Ｒ２００）−（Ｃ１〜Ｃ６）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ２００）２、
−Ｎ（Ｒ２００）−（Ｃ１〜Ｃ６）−Ｃ（Ｏ）−ＯＨ、
−Ｎ（Ｒ２００）−（Ｃ１〜Ｃ６）−Ｃ（Ｏ）−モルホリニル、
−（Ｃ１〜Ｃ６）−Ｓ−ＣＨ３、
−Ｃ（Ｒ２００）（ＣＨ２ＯＨ）−（Ｃ１〜Ｃ６）−ＯＨ、
−Ｃ（Ｒ２００）２−Ｎ（Ｒ２００）２、
−Ｃ（Ｏ）−ＯＨ、
−Ｃ（Ｒ２００）２（ＯＨ）、
−Ｃ（Ｒ２００）２−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）−Ｃ（Ｒ２００）２（ＯＨ）、
−Ｃ（Ｒ２００）２Ｃ（Ｒ２００）２（ＯＨ）
であり；Ｒ２００は独立に水素またはアルキルであり；
Ｒ２は、Ｈ、−ＮＨ２、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−ＳＯ２（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、置換されていても良いアルキル、−ＯＲ７、−Ｎ（Ｈ）ＳＯ２Ｒ７、−Ｎ（Ｒ７）ＳＯ２Ｒ７、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｒ７、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７、Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、−Ｎ（Ｒ７）２、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ７または−ＮＨＲ７であり；
Ｒ７は、それぞれ独立に（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、複素環、ヒドロキシル、−ＮＲ５Ｒ６、置換されていても良いフェニル、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４および複素環からなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良い（Ｃ１〜Ｃ６）−脂肪族であり；
前記のアルコキシ、脂肪族および複素環のいずれも置換されていても良く；
Ｒ５およびＲ６は独立に、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４または−ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｒ４であり；
Ｒ４は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルおよびＨから選択され；
Ｙは、Ｈ、ＯＲ３またはＮ（Ｒ３）２であり；Ｒ３は独立に、Ｈまたは脂肪族、−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）−脂肪族、−Ｃ（Ｏ）−シクロアルキルおよび−Ｃ（Ｏ）−複素環からなる置換されていても良い基から選択され；
Ｒは各場合で独立に、Ｈであるか、脂肪族、複素環および複素環−脂肪族からなる置換されていても良い基から選択され；
ｎは１〜６の整数であり；
ｐは１または２であり；
ただし、
Ａ−Ｌ−Ｒ１が
Figure 2007520559
 または
Figure 2007520559
 である場合、
Ｂ−Ｚ−Ｅは、２−メトキシエチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ−１−オキソエチルもしくは２−（Ｎ−メチルアミノ）−１−オキソプロピルで置換されたピロリジニル以外であり；
ＸがＮであり；ＹがＮＨ２であり；Ｒ２がＨであり；ＬがＮＨであり；Ａがフルオロまたはメトキシで置換されていても良いフェニルであり；Ｂがシクロヘキシルであり；Ｚが結合であり；Ｅがメチルで置換されたピペラジニルである場合、Ｒ１は
Ｃ２Ｈ４ＯＨまたはクロロで置換されていても良いフェニル、
クロロで置換されていても良いベンゾフラニル、
メチルで置換されていても良いイミダゾリル、
１個もしくは２個のメチルで置換されていても良いベンゾオキサゾリル、
１個もしくは２個のクロロで置換されていても良いベンゾオキサゾリル、
メトキシで置換されていても良いベンゾオキサゾリル、
エチルで置換されていても良いベンゾオキサゾリル、
カルボニトリルで置換されていても良いベンゾオキサゾリル、
イソプロピルで置換されていても良いベンゾオキサゾリル、
１個もしくは２個のメチルで置換されていても良いベンゾチアゾリル、
プロピルで置換されていても良いベンゾチアゾリル、
イソプロピルで置換されていても良いベンゾチアゾリル、
エチルおよびフェニルで置換されていても良いベンゾチアゾリル、
エチルで置換されたチアゾリル、
フェニルで置換されていても良いチアゾリル、
フェニルメチルで置換されていても良いチアゾリル、
ニトロフェニルで置換されていても良いチアゾリル、
２個のメチルで置換されていても良いチアゾリル、
フェニルおよびメチルで置換されたチアゾリル、
フェニルおよびプロピルで置換されたチアゾリル、
フェニルおよびイソプロピルで置換されたチアゾリル、
エチルおよびメチルフェニルで置換されたチアゾリル、
ＣＦ３で置換されていても良いベンゾイソチアゾリル、
１個もしくは２個のオキソで置換されていても良いベンゾイソチアゾリル、
ＣＦ３で置換されたベンゾイソオキサゾリル、
インダゾリルおよびピリミジニル以外であり；または
ＸがＮであり；ＹがＮＨ２であり；Ｒ２がＨであり；ＬがＮＨであり；Ａがフルオロで置換されていても良いフェニルであり；Ｒ１が１個もしくは２個のメチルで置換されたベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリルもしくはエチルであり；Ｚが結合であり；ＥがＣＯＯＨ、メチルで置換されたピペラジニル、オキソで置換されたピペラジニルまたはオキソで置換されたエチルである場合、
Ｂは、エチル、シクロヘキシル、ピペリジニルで置換されたジメチルアミノおよびＣＮで置換されたフェニル以外であり；または
ＸがＮであり；ＹがＮＨ２であり；Ｒ２がＨであり；ＬがＮＨであり；Ａがフェニルであり；Ｂが結合であり；Ｚが結合であり；Ｒ１がベンゾフラニル、ベンゾイソオキサゾリル、ピペリジニル、ピロリル、フェニルで置換されたイソオキサゾリル、トリフルオロメチルで置換されたイソオキサゾリル、１個もしくは２個のメチルで置換されていても良いベンゾオキサゾリル、エチルで置換されていても良いベンゾオキサゾリル、クロロで置換されていても良いベンゾオキサゾリルもしくはイソプロピルで置換されていても良いベンゾオキサゾリルである場合、Ｅは
置換アルキルで置換されていても良いピペリジニル、
ピペラジニル、
メトキシエチルで置換されていても良いピロリジニル、
ジヒドロキシプロピルで置換されていても良いピペリジニル、
ヒドロキシエチルで置換されていても良いピペリジニル、
メトキシエチルで置換されていても良いピペリジニル、
メチルスルファニルエチルで置換されていても良いピペリジニル、
置換されていても良いエチルで置換されていても良いピペリジニル、
置換されていても良いプロピルで置換されていても良いピペリジニル、
メチルで置換されていても良いイミダゾリル、
アミノで置換されていても良いイミダゾリル、
アミノアルキルカルボニル、
シクロヘキサンカルボン酸エステルおよび
ＣＮで置換されたピリミジニル以外であり；または
ＸがＮであり；ＹがＮＨ２であり；Ｒ２がＨであり；Ａがフェニルであり；Ｒ１がフェニルであり；Ｂがシクロヘキシルであり；Ｚが結合であり；Ｅがメチルで置換されたピペラジニルである場合、Ｌは、＝Ｎ−ＯＣＨ３、＝Ｎ−ＯＨ、ＮＨ２またはＣＮによって置換されたメチル以外であり；または
ＸがＮであり；ＹがＮＨ２であり；Ｒ２がＨであり；ＬがＮＨであり；Ａがフェニルであり；Ｒ１が２個のメチルで置換されたベンゾオキサゾリルであり；Ｂがメチルアミノメチルおよびエチルで置換されていても良いピロリジニルもしくはジメチルアミノおよびエチルによって置換されていても良いピロリジニルであり；Ｚがカルボニルである場合、Ｅはジアルキルアミノ、結合およびメチルアミノで置換されたアルキル以外であり；または
ＸがＮであり；ＬがＮＨであり；Ａがフェニルであり；Ｒ１が２個のメチルで置換されていても良いベンゾオキサゾリルであり；Ｂがシクロヘキシルであり；Ｚが結合である場合、Ｅはジメチルアミノおよびモルホリノ以外であり；または
ＸがＮであり；ＬがＮＨであり；Ａがフェニルであり；Ｒ１が２個のメチルで置換されていても良いベンゾオキサゾリルであり；Ｂがシクロヘキシルであり；ＺがＮＨである場合、Ｅはメトキシエチルおよびメチル以外であり；または
ＸがＮであり；ＹがＮＨ２であり；Ｒ２がＨであり；ＬがＮＨであり；Ａがフェニルであり；Ｒ１が２個のメチルで置換されたベンゾオキサゾリルであり；Ｂがピペリジニルであり；Ｚが結合である場合、Ｅは結合以外であり；または
ＸがＮであり；ＬがＯ−アルキルであり；Ａがフェニルであり；Ｂがシクロヘキシルまたは結合であり；Ｚが結合であり；Ｅがシクロペンチルまたはメチルで置換されたピペラジニルである場合、Ｒ１はベンゼンスルホンアミドで置換されていても良いフェニルおよびベンジル尿素で置換されていても良いフェニル以外であり；または
ＸがＮであり、ＹがＮＨ２であり、Ｒ２がＨであり、ＬがＮＨであり、Ａがフルオロで置換されていても良いフェニルであり、Ｒ１がエチルで置換されたベンゾオキサゾリル、クロロで置換されたベンゾオキサゾリルまたは１個もしくは２個のメチルで置換されたベンゾオキサゾリルであり；Ｂがピペリジニル、アゼチジニル、ピロリルもしくはシクロヘキシルであり；Ｚが結合である場合、Ｅは、
メトキシエチル、
メトキシプロピル、
メチル、
ヒドロキシルで置換されていても良いエチル、
オキソで置換されたピペラジニルおよび
アミノで置換されていても良いイミダゾリル以外であり；または
ＸがＮであり；ＹがＮＨ２であり；Ｒ２がＨであり；ＬがＮＨであり；Ａがフェニルであり；Ｂがピペリジニルであり；Ｚがカルボニルであり；Ｒ１が２個のメチルで置換されていても良いベンゾオキサゾリルまたはクロロで置換されていても良いベンゾオキサゾリルである場合、Ｅは、
モルホリノアルキル、
ジメチルアミノメチル、
メチルで置換されていても良いピペリジニル、
メチルアミンで置換されたイソプロピル、
ピロリジニル、
メチルおよびメチルアミノで置換されていても良いエチルおよび
置換アルキルで置換されていても良いエチル以外であり；または
ＸがＮであり；ＹがＮＨ２であり；Ｒ２がＨであり；Ｌがカルボニルであり；Ａがフェニルであり；Ｚが結合であり；Ｅがピペリジニルまたはピリジニルであり；Ｂが結合である場合、Ｒ１は、
オキサゾリル、
メチルで置換されていても良いイソオキサゾリル、
フェニルで置換されていても良いイソオキサゾリル、
ベンジルで置換されていても良いピラゾリル、
ベンゾイルで置換されていても良いピラゾリル、
メチルで置換されていても良いピラゾリルおよび
エタノンで置換されていても良いピラゾリル以外であり；または
ＸがＮであり；ＹがＮＨ２であり；Ｒ２がＨであり；Ｌがカルボニルであり；Ａがフェニルであり；Ｚが結合であり；Ｒ１がフェニルであり；Ｂがシクロヘキシルである場合、Ｅはメチルで置換されたピペラジニル以外であり；または
ＸがＮであり；ＬがＯＨで置換されていても良いアルキルであり；Ａがメトキシで置換されていても良いフェニルであり；Ｒ１がベンゾオキサゾリルもしくはベンゾイミダゾリルであり；Ｂがシクロヘキシルであり；Ｚが結合である場合、Ｅはメチルで置換されたピペラジニル以外である。
式Ｉ、その製薬上許容される塩、その代謝物、その異性体またはそのプロドラッグの好ましい実施形態は、Ｙが−Ｎ（Ｒ３）２のものである。
前記発明のいずれかの化合物のより好ましい実施形態は、
Ｘが、Ｎであり；
Ａが、置換されていても良いフェニルであり；
Ｒ１が、置換されていても良いベンゾオキサゾリルまたは置換されていても良いベンゾチアゾリルであり；
Ｂが、結合であるか、置換されていても良いからなる群アルケニル、アルキル、アルコキシアルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルケニル、複素環、フェニル、１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−２−エン、２，２−ジプロピル［１，３］ジオキソラン、１−オキサ−２−アザ−スピロ［４．５］デカ−２−エン、１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカンおよび２，２−ジプロピル［１，３］ジオキソランから選択され；
Ｅが、Ｈであるか、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシアルコキシ、アルコキシアミノ、アルキル、アルキルアミノアルキル、アミノアルキル、アミノアルキルカルボニル、アミノカルボニル、アゼチジニル、ベンゾイミダゾリル、−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＯＨ）−ＣＨ２−ＯＨ、−Ｃ（ＣＨ３）２、−ＮＨ（ＣＨ３）、−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｏ−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）２（ＯＨ）、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）２（ＯＨ）、−（ＣＨ２）２−Ｓ−ＣＨ３、ＣＯＯＨ、シクロアルキル、ジアゼパニル、ジメチルアミノ、ジメチルアミノアルキル、ジメチルアミノアルキルアミノ、ジメチルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニルアルキル、フラニル、イミダゾリニル、イミダゾリル、イミダゾリルアルキル、イソオキサゾリル、モルホリニル、モルホリニルアルキル、−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−モルホリニル、−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ、オキソジアゾリル、オキサゾリル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、ピロリル、テトラヒドロピラニル、テトラゾリル、チアジアゾリル、チオピラニル、チエニル、トリアゾリルおよびトリアゾリルアルキルからなる置換されていても良い基から選択され；
Ｒ２が、Ｈ、ＳＣＨ３、ＮＨ２またはＳ（Ｏ）２−ＣＨ３であり；
Ｒ３が各場合で独立に、Ｈまたは−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２であるものである。
前記発明のいずれかの前記化合物、その製薬上許容される塩、その代謝物、その異性体またはそのプロドラッグのより好ましい実施形態は、
Ａが、アルキル、アルコキシ、クロロおよびフルオロからなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良く；
Ｒ１が、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アルコキシアルコキシ、アルコキシカルボニルピペリジニルアルコキシ、アルキルカルボニル、アミノカルボニル、ブロモ、ＣＦ３、クロロ、Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ（ＣＨ３）３、ジアルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニルアルコキシ、フルオロ、−ＯＨ、モルホリノアルコキシ、ＮＯ２、ＯＣＦ３、フェニル−Ｓ−アルコキシ、置換されていても良いピペリジニルアルコキシ、置換されていても良いピリジニルアルコキシ、置換されていても良いピロリジニルアルコキシおよび置換されていても良いチエニルアルコキシからなる群から選択される１以上の置換基で置換されていても良く；
Ｂが、結合であるか、アルコキシアルキル、アルキル、アゼチジニル、シクロアルケニル、シクロアルキル、イソオキサゾリル、フェニル、ピペリジニル、ピラニル、ピリジニル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、チオピラニル、１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−２−エン、［１，３］ジオキソラン，１−オキサ−２−アザ−スピロ［４．５］デカ−２−エンおよび１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカンからなる群から選択される置換されていても良い基であり；
Ｅが、Ｈ、ジメチルアミノアルキル、ジメチルアミノカルボニルまたはアルキル、アルコキシアルキル、アゼチジニル、ベンゾイミダゾリル、ジアゼパニル、フラニル、イミダゾリジニル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、モルホリニル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、フェニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、ピロリル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラン１，１−ジオキシド、テトラゾリル、チアジアゾリル、チエニル、チオピラニルおよびトリアゾリルからなる群から選択される置換されていても良い基であり；
前記基は、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルホニル、ジアルキルアミノスルホニル、フルオロ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトリル、オキソ、Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３およびＳ（Ｏ）２ＣＦ３からなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良いものである。
前記発明のいずれかの前記化合物、その製薬上許容される塩、その代謝物、その異性体またはそのプロドラッグのより好ましい実施形態は、
ＬがＮＨ、Ｃ（ＯＨ）Ｈまたはカルボニルであり；
Ｂが、結合であるか、アルキル、アゼチジニル、シクロアルキル、イソオキサゾリル、フェニル、ピペリジニル、ピラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−２−エン、［１，３］ジオキソラン、１−オキサ−２−アザ−スピロ［４．５］デカ−２−エンおよび１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカンからなる置換されていても良い基から選択され；
前記基は、アルコキシ、アルキル、ＣＦ３、Ｃ≡Ｎ、シクロアルキル、フルオロおよびヒドロキシルからなる群から選択される１以上の置換基によって置換されているものである。
前記発明のいずれかの前記化合物、その製薬上許容される塩、その代謝物、その異性体またはそのプロドラッグのより好ましい実施形態は、Ｒ２がＨであるものである。
前記発明のいずれかの前記化合物、その製薬上許容される塩、その代謝物、その異性体またはそのプロドラッグのより好ましい実施形態は、Ｒ３が各場合でＨであるものである。
前記発明のいずれかの前記化合物、その製薬上許容される塩、その代謝物、その異性体またはそのプロドラッグのさらに好ましい実施形態は、Ｒ１がベンゾオキサゾリルもしくはベンゾチアゾリルであり、それぞれがアルケニル、アルコキシ、アルキル、ブロモ、ＣＦ３、クロロ、ジメチルアミノカルボニル、フルオロ、ヒドロキシル、ＯＣＦ３およびニトリルからなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良いものである。
前記発明のいずれかの前記化合物、その製薬上許容される塩、その代謝物、その異性体またはそのプロドラッグの最も好ましい実施形態は、
Ａが、フルオロまたはアルコキシによって置換されていても良いフェニルであり；
ＬがＮＨであり；
Ｒ１が、ＣＦ３、ＣＨ３およびクロロからなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良いベンゾオキサゾリルであり；
Ｚが、結合、カルボニル、Ｒ２００−Ｏ−、−Ｏ−または−Ｓ−であり；
Ｅが、Ｈであるか、アルコキシアルキルアルコキシアミノ、アルキル、ＣＯＯＨ、シクロアルキル、ジアゼパニル、ジメチルアミノカルボニル、フラニル、イミダゾリルアルキル、イミダゾリジニル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、モルホリニル、−Ｎ（Ｒ２００）−Ｒ２００−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ２００）２、−Ｎ（Ｒ２００）−Ｒ２００−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ２００）−Ｒ２００−Ｃ（＝Ｏ）−モルホリニル、ＯＨ、オキサゾリル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラゾリル、チアジアゾリル、チエニルおよびトリアゾリルからなる置換されていても良い基から選択され；
Ｒ２００がアルキルであるものである。
化合物が、
３−［３−（フルオロ−４−（５−トリフルオロメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−［４−（２−メトキシ−エトキシ）−シクロヘキシル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン、
３−［４−（７−クロロ−５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ−フェニル］−１−［４−（２−メトキシ−エトキシ）−シクロヘキシル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン、または
１−（４−（４−アミノ−３−［４−（５−クロロ−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキシルオキシ）−２−メチル−プロパン−２−オールである、前記発明のいずれかの化合物。
グループＢと称される、グループＡの化合物、その製薬上許容される塩、その代謝物、その異性体またはそのプロドラッグは、
ＸがＣＨであり；
Ａが、置換されていても良いフェニルであり；
Ｒ１が、置換されていても良いベンゾオキサゾリルであり；
Ｂが、Ｈであるか、アルコキシアルキル、アルキル、シクロアルキルおよび複素環からなる置換されていても良い基から選択され；
Ｅが、Ｈであるか、アルコキシ、アルキル、アルキルスルホニル、アミノカルボニルアルキル、ジアゼパニル、ジメチルアミノ、モルホリニル、フェニル、ピペラジニル、テトラゾリルおよび尿素からなる置換されていても良い基から選択され；
Ｒ２がＨ、ＮＨ２、ＳＣＨ３またはＳＯ２ＣＨ３であり；
Ｒ３が各場合でＨであるものである。
グループＢの化合物、その製薬上許容される塩、その代謝物、その異性体またはそのプロドラッグの好ましい実施形態は、
Ａが、フルオロによって置換されていても良く；
Ｒ１が、アルコキシ、アルキル、ブロモ、クロロ、ＣＦ３、ジアルキルアミノエトキシ、フルオロ、モルホリニルアルコキシ、モルホリニルアルキルおよびニトリルからなる群から選択される１以上の置換基によって置換された置換されていても良いベンゾオキサゾリルであり；
Ｂが、Ｈであるか、シクロアルキル、アルキル、ピペリジニルおよびピロリジニルからなる置換されていても良い基から選択され；
前記置換基が、アルキル、ヒドロキシル、オキソ、ニトリルおよびニトロからなる群から選択され；
Ｅが、Ｈであるか、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキルスルホニル、アミノカルボニルアルキル、ジアゼパニル、ジメチルアミノ、モルホリニル、ピペラジニル、フェニル、テトラゾリルおよび尿素からなる置換されていても良い基から選択され；
前記基が、アルコキシ、アルキル、アルキルスルホニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、ニトリル、ニトロ、ＮＨ２およびオキソからなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良く；
Ｚが、結合、Ｒ２００−Ｏ−、ＮＨまたは−Ｏ−であるものである。
グループＢの前記発明のいずれか、その製薬上許容される塩、その代謝物、その異性体またはそのプロドラッグの好ましい実施形態は、ＬがＮＨまたはＮ（アルケニル）であるものである。
グループＢの前記発明のいずれか、その製薬上許容される塩、その代謝物、その異性体またはそのプロドラッグの好ましい実施形態は、Ｒ２がＨのものである。
グループＢの前記発明のいずれか、その製薬上許容される塩、その代謝物、その異性体またはそのプロドラッグの好ましい実施形態は、Ｒ１がアルキル、ブロモ、ＣＦ３、クロロ、フルオロおよびニトリルからなる群から選択される１以上の置換基によって置換された置換されていても良いベンゾオキサゾリルであるものである。
グループＢの前記発明のいずれか、その製薬上許容される塩、その代謝物、その異性体またはそのプロドラッグの好ましい実施形態は、
Ａが、フェニルまたはフルオロによって置換されたフェニルであり；
Ｌが、ＮＨであり；
Ｒ１が、アルキル、ブロモ、ＣＦ３およびクロロからなる群から選択される１以上の置換基によって置換されたベンゾオキサゾリルであり；
Ｚが、結合または−Ｏ−であり；
Ｅが、置換されていても良いアルキル、アルコキシアルキル、ジアゼパニル、ピペラジニルまたはテトラゾリルであるものである。
グループＢの前記発明のいずれか、その製薬上許容される塩、その代謝物、その異性体またはそのプロドラッグの好ましい実施形態は、
Ｘが、ＣＨであり；
Ａが、置換されていても良いフェニルであり；
Ｒ１が、置換されていても良いベンゾオキサゾリルであり；
Ｂが、Ｈもしくは結合であるか、アルキルおよびシクロアルキルからなる置換されていても良い基から選択され；
Ｚが、結合、−Ｒ２００−Ｏ−、アミノまたは−Ｏ−であり；
Ｅが、Ｈ、結合またはアルコキシ、アルキル、アルキルスルホニル、アミノカルボニルアルキル、ジアルキルアミノ、複素環、フェニルおよび尿素からなる群から選択される置換されていても良い基であり；
Ｒ２が、Ｈ、ＮＨ２、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは−ＳＯ２（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり；
Ｒ３が、各場合でＨであるものである。
グループＢの前記発明のいずれか、その製薬上許容される塩、その代謝物、その異性体またはそのプロドラッグのより好ましい実施形態は、
Ａが、１以上のフルオロによって置換されていても良く；
Ｒ１が、アルキル、アルコキシ、アミノアルコキシ、ブロモ、ＣＦ３、クロロ、フルオロ、モルホリノアルコキシ、モルホリノアルキルおよびニトリルからなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良く；
Ｅが、Ｈまたはアルコキシ、アルキル、アルキルスルホニル、アミノカルボニルアルキル、ジアザペニル、ジメチルアミノ、モルホリニル、フェニル、ピペラジニル、ピリジニル、ピロリジニル、テトラゾリルおよび尿素からなる群から選択される置換されていても良い基であり；
前記置換されていても良い基は、１以上のアルコキシ、アルキル、アミノ、ブロモ、シクロアルキル、ジメチルアミノ、ヒドロキシル、オキソ、ニトリル、ＮＯ２またはスルホニルによって置換されていても良く；
Ｒ２がＨであるものである。
グループＢの前記発明のいずれか、その製薬上許容される塩、その代謝物、その異性体またはそのプロドラッグのさらに好ましい実施形態は、
Ｌが、ＮＨまたはＮ−アルケニルであり；
Ｒ１が、１以上のアルキル、ブロモ、ＣＦ３、クロロ、フルオロまたはニトリルによって置換されており；
Ａが、フルオロによって置換されていても良いフェニルであり；
Ｂが、結合であるか、アルキル、シクロアルケニル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルからなる置換されていても良い基から選択され；
Ｚが、結合、−Ｏ−または−Ｒ２００−Ｏ−であり；
Ｅが、Ｈであるか、アルコキシ、アルケニル、アルキル、シクロアルキル、ジアザペニル、ピペラジニルおよびテトラゾリルからなる置換されていても良い基から選択されるものである。
グループＢの前記発明のいずれか、その製薬上許容される塩、その代謝物、その異性体またはそのプロドラッグの最も好ましい実施形態は、
Ｒ１が、アルキル、ブロモまたはクロロによって置換されており；ＬがＮＨであり；Ｂがシクロヘキシルであり；Ｚが結合または−Ｒ２００−Ｏ−であり；
Ｒ２００がアルキルであり；
Ｅが、アルコキシまたは置換されていても良いピペラジニルであり；ＹがＮＨであるものである。
化合物が、
４−（４−（４−アミノ−５−［４−（５−クロロ−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−ピロリル［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−シクロヘキシル−１−メチル−ピペラジン−２−オン、
５−［４−（５−クロロ−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−７−［４−（２−メトキシ−エトキシ）−シクロヘキシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン；または
５−［４−（５−ブロモ−７−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−７−［４−（２−メトキシエトキシ）−シクロヘキシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンである、グループＢの前記発明のいずれかの化合物。
本発明の化合物は、患者に対して式Ｉの化合物を投与する段階を有する、処置を必要とする患者での疾患または状態の治療において有用であり、その疾患または状態は、関節リウマチ、甲状腺炎、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、サルコイドーシス、炎症性腸疾患、クローン病、重症筋無力症、全身性紅斑性狼瘡、乾癬、移植臓器拒絶、良性および腫瘍性増殖性疾患、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、直腸癌、造血系悪性腫瘍、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、加齢関連黄斑変性による脈絡膜血管新生、小児性血管腫、浮腫、腹水症、滲出、浸出、脳浮腫、急性肺損傷、成人呼吸窮迫症候群、血管増殖性障害、線維症障害、メサンギウム細胞増殖障害、代謝疾患、アテローム性動脈硬化、再狭窄、乾癬、血管腫、心筋血管新生、冠動脈側枝、脳側枝、虚血性四肢血管新生、虚血／再潅流損傷、創傷治癒、消化性潰瘍、ヘリコバクター関連疾患、ウィルス誘発血管由来障害、骨折、クロウ-深瀬症候群（ＰＯＥＭＳ）、子癇前症、機能性子宮出血、猫引っかき熱、ルベオーシス、血管新生緑内障、網膜症、悪性腹水症、フォンヒッペル−リンダウ病、造血系癌、過形成性障害、火傷、慢性肺疾患、卒中、ポリープ、アナフィラキシー、慢性炎症、アレルギー性炎症、遅延型過敏症、卵巣過剰刺激症候群、アンギナ、強直性脊椎炎、喘息、鬱血性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、Ｃ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）、特発性肺線維症、心筋梗塞、乾癬性関節炎、再狭窄および坐骨神経痛からなる群から選択される。
式Ｉによる化合物および製薬上許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物。
さらに別の実施形態において本発明は、置換されていても良い２−アミノベンゾオキサゾールの製造方法であって、反応が実質的に完了するまで有毒金属を含まない酸化剤および塩基と置換されていても良いＮ−（２−ヒドロキシフェニル）チオ尿素を反応させる段階を有し；前記酸化剤が、過酸化水素、酸素、過酸、塩素、過ヨウ素酸ナトリウム、過ヨウ素酸カリウム、ｔｅｒｔ−ブチルペルオキシド、次亜塩素酸ｔｅｒｔ−ブチル、過ホウ酸ナトリウム、過炭酸ナトリウム、尿素・過酸化水素付加物、次亜塩素酸ナトリウム、次亜塩素酸カリウム、次亜臭素酸ナトリウム、次亜臭素酸カリウム、臭素酸ナトリウム、臭素酸カリウム、過マンガン酸カリウムおよびマンガン酸バリウムからなる群から選択され；前記塩基が、金属および水酸化テトラアルキルアンモニウム、金属および炭酸テトラアルキルアンモニウム、金属および重炭酸テトラアルキルアンモニウム、金属およびテトラアルキルアンモニウムアルコキシド、金属およびリン酸テトラアルキルアンモニウム、金属および第二リン酸テトラアルキルアンモニウムからなる群から選択される方法に関する。
[タンパク質チロシンキナーゼ]タンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）は、細胞タンパク質における特定のチロシン残基のリン酸化を触媒する酵素である。これらの基質タンパク質（多くの場合には酵素自体である）のこの翻訳後修飾は、細胞増殖、活性化または分化を調節する分子スイッチとして作用する（総説については、シュレジンガーらの報告（Schlessinger and Ulrich, 1992, Neuron 9: 383-391）参照。）。異常または過度なＰＴＫ活性が、良性および悪性の増殖性障害、ならびに、免疫系の不適切な活性化から生じる疾患（例えば、自己免疫障害）、同種移植片拒絶、および移植片対宿主病を含む多くの疾患状態で認められている。さらに、様々な内皮細胞特異的受容体ＰＴＫ、例えば、ＫＤＲおよびＴｉｅ−２などが血管形成プロセスを媒介しており、従って、これらは、不適切な血管形成を伴う癌および他の疾患（例えば、糖尿病網膜症、年齢に関連した黄斑変性による脈絡膜血管新生、乾癬、関節炎、未熟児網膜症および小児血管腫）の進行の支持に関与している。
チロシンキナーゼには、（細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを有する）受容体型、または（完全に細胞内型である）非受容体型が存在し得る。
[受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）]ＲＴＫは、それぞれ異なった生物学的活性を有する膜貫通受容体の大きなファミリーを構成している。現在、少なくとも１９の異なるＲＴＫサブファミリーが特定されている。受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）ファミリーには、様々な細胞タイプの成長および分化のために極めて重要である受容体が含まれる（Yarden and Ullrich, Ann. Rev. Biochem. 57: 433-478,1988; Ullrich and Schlessinger, Cell 61: 243-254,1990）。ＲＴＫの固有的機能は、リガンドが結合したときに活性化され、それにより、受容体および多数の細胞基質のリン酸化が生じ、続いて、様々な細胞応答が生じる（Ullrich & Schlessinger, 1990, Cell 61: 203-212）。従って、受容体チロシンキナーゼにより媒介されるシグナル伝達は、特異的な増殖因子（リガンド）との細胞外相互作用によって開始され、その後、代表的には、受容体の二量体化、固有的なタンパク質チロシンキナーゼ活性の刺激、および受容体のトランス−リン酸化が開始される。結合部位が、それによって細胞内シグナル伝達分子のために生じ、適切な細胞応答（例えば、細胞***、分化、代謝作用、細胞外微小環境の変化）を促進する様々な細胞質シグナル分子との複合体の形成をもたらす（シュレジンガーらの報告（Schlessinger and Ullrich, 1992, Neuron 9: 1-20）参照。）。
ＳＨ２（ｓｒｃ相同性−２）ドメインまたはホスホチロシン結合（ＰＴＢ）ドメインを有するタンパク質は、活性化されたチロシンキナーゼ受容体およびそれらの基質と大きい親和性で結合して、シグナルを細胞内に伝える。これらのドメインの両方により、ホスホチロシンが認識される（Fantl et al., 1992, Cell 69: 413-423; Songyang et al., 1994, Mol. Cell. Biol. 14: 2777-2785; Songyang et al., 1993, Cell 72: 767-778; and Koch et al., 1991, Science 252: 668-678; Shoelson, Curr. Opin. Chem. Biol. (1997), 1(2), 227-234; Cowburn, Curr. Opin. Struct. Biol. (1997), 7(6), 835-838）。受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）と会合するいくつかの細胞内基質タンパク質が特定されている。それらは、下記の２つの主要なグループに分けることができる：（１）触媒作用ドメインを有する基質、および（２）そのようなドメインを有さず、しかし、アダプターとして役立ち、触媒活性な分子と会合する基質（Songyang et al., 1993, Cell 72: 767-778）。受容体またはタンパク質と、それらの基質のＳＨ２ドメインまたはＰＴＢドメインとの相互作用の特異性が、リン酸化されたチロシン残基のすぐ周りのアミノ酸残基によって決定される。従って、リン酸化は、特異的な増殖因子受容体ならびに分化因子受容体によって強化されるシグナル変換経路の選択性を決定する重要な調節段階を提供している。
いくつかの受容体チロシンキナーゼ、例えば、ＦＧＦＲ−１、ＰＤＧＦＲ、ＴＩＥ−２およびｃ−Ｍｅｔなど、ならびに、それらに結合する増殖因子は、一部が血管形成を間接的に促進し得るが、血管形成における役割を果たすことが示唆されている（Mustonen and Alitalo, J. Cell Biol. 129: 895-898, 1995）。１つのそのような受容体チロシンキナーゼがウシ肝臓キナーゼ１（ＦＬＫ−１）として知られており、これはＲＴＫのＩＩＩ型サブクラスのメンバーである。ヒトＦＬＫ−１の別称がキナーゼインサートドメイン含有受容体（ＫＤＲ）である（Terman et al., Oncogene 6: 1677-83, 1991）。ＦＬＫ−１／ＫＤＲに対する別の代わり名称が、ＦＬＫ−１／ＫＤＲはＶＥＧＦと大きい親和性で結合するので、血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ−２）である。ＦＬＫ−１／ＶＥＧＦＲ−２のマウス型はまた、ＮＹＫと呼ばれている（Oehichs et al, Oncogene 8(1) :11-15, 1993）。数多くの研究、例えば、ミロアーらの報告（Millauer et al., Cell 72: 835-846, 1993）に報告される研究などでは、ＶＥＧＦおよびＦＬｋ−１／ＫＤＲ／ＶＥＧＦＲ−２が、血管内皮細胞の増殖ならびに血管の形成および芽形成（これらはそれぞれ脈管形成および血管形成と呼ばれている）における重要な役割を果たすリガンド−受容体の対であることが示唆されている。
ｆｍｓ様チロシンキナーゼ−１（Ｆｌｔ−１）と呼ばれる別のＩＩＩ型サブクラスＲＴＫがＦＬＫ−１／ＫＤＲに関係づけられている（DeVries et al. Science 255; 989-991, 1992; Shibuya et al., Oncogene 5: 519-524, 1990）。Ｆｌｔ−１に対する別称は血管内皮細胞増殖因子受容体１（ＶＥＧＦＲ−１）である。今日までに、ＦＬＫ−１／ＫＤＲ／ＶＥＧＦＲ−２サブファミリーおよびＦｌｔ−１／ＶＥＧＦＲ−１サブファミリーの様々なメンバーが主に内皮細胞表面に発現していることが見出されている。これらのサブクラスのメンバーは血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）ファミリーのリガンドのメンバーによって特異的に刺激される（Klagsburn and D′Amore, Cytokine & Growth Factor Reviews 7: 259- 270, 1996）。血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）は、ＦＬＫ−１／ＫＤＲに対するよりも大きい親和性でＦｌｔ−１に結合し、血管内皮細胞に対して細胞***促進性である（Terman et al., 1992, 上記; Mustonen et al., 上記; DeVries et al., 上記）。Ｆｌｔ−１は、血管発達時の内皮細胞の組織化のために必須であると考えられている。単球、破骨細胞および骨芽細胞におけるＦｌｔ−１の発現、ならびに、腎糸球体などの生体組織におけるＦｌｔ−１の発現は、細胞増殖に関係しないこの受容体に対するさらなる機能を示唆している（Mustonen and Alitalo、上記）。
以前に述べられたように、最近の証拠は、ＶＥＧＦが正常な血管形成および病理学的な血管形成の両方の刺激において役割を果たしていることを示唆している（Jakeman et al., Endocrinology 133: 848-859, 1993;Kolch et al., Breast Cancer Research and Treatment 36: 139-155, 1995; Ferrara et al., Endocrine Reviews 18(1); 4-25, 1997; Ferrara et al., Regulation of Angiogenesis (ed. L. D. Goldberg and E. M. Rosen), 209-232, 1997）。さらに、ＶＥＧＦは血管透過性の制御および強化に関係している（Connolly, et al., J. Biol. Chem. 264: 20017-20024, 1989; Brown et al., Regulation of Angiogenesis (ed.. L. D. Goldberg and E. M. Rosen), 233-269, 1997）。フェラーラらの報告（Ferrara et al., J. Cell. Biochem. 47: 211-218, 1991）に記載の４つの化学種を含めて、ｍＲＮＡの選択的スプライシングから生じる種々の形態のＶＥＧＦが報告されている。ＶＥＧＦのいくつかの関連したホモログが近年特定されている。胎盤増殖因子（ＰＩＧＦ）は、ＶＥＧＦ配列に対して著しい相同性を示すアミノ酸配列を有する（Park et al.,J. Biol. Chem. 269: 25646-54, 1994; Maglione et al. Oncogene 8: 925-31, 1993）。ＶＥＧＦの場合のように、ＰＩＧＦの種々の化学種がｍＲＮＡの選択的スプライシングから生じており、そのタンパク質は二量体の形態で存在している（Park et al., 上記）。ＰＩＧＦ−１およびＰＩＧＦ−２はＦｌｔ−１に大きい親和性で結合し、ＰＩＧＦ−２はまたニューロフィリン−１に強く結合し（Migdal et al, J. Biol. Chem. 273 (35): 22272-22278）、しかし、これらはいずれもＦＬＫ−１／ＫＤＲには結合しない（Park et al., 上記）。ＰＩＧＦは、ＶＥＧＦが（報告によれば、ヘテロ二量体形成のために）低濃度で存在するとき、内皮細胞に対するＶＥＧＦの血管透過性および***促進作用の両方を強化することが報告されている（Park et al., 上記）。
ＶＥＧＦ−Ｂは２つのイソ型（１６７残基および１８５残基）として産生され、これらはまた、Ｆｌｔ−１／ＶＥＧＦＲ−１と結合するように思われる（Pepper et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. (1998), 95 (20): 11709-11714）。
ＶＥＧＦ−Ｃはまた、その完全にプロセシングされた形態において、ＫＤＲ／ＶＥＧＦＲ−２と結合することができ、内皮細胞の増殖および遊走をインビトロで刺激し、血管形成をインビボモデルで刺激する（Lymboussaki et al, Am. J. Pathol. (1998), 153 (2): 395-403; Witzenbichler et al, Am. J. Pathol. (1998), 153 (2), 381-394）。ＶＥＧＦ−Ｃの遺伝子組換えによる過剰発現はリンパ管のみの増殖および拡大を生じさせ、一方、血管は影響を受けない。最も最近に発見されたＶＥＧＦ−Ｄは構造的にはＶＥＧＦ−Ｃと非常に類似している。ＶＥＧＦ−Ｄは、少なくとも２つのＶＥＧＦＲ、すなわち、ＶＥＧＦＲ−３／Ｆｌｔ−４およびＫＤＲ／ＶＥＧＦ−２と結合し、これらを活性化することが報告されている（Achen et al, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. (1998), 95 (2), 548-553およびそれにおける参考文献）。
最近、ウイルスにコードされた新規なタイプの血管内皮細胞増殖因子であるＶＥＧＦ−Ｅ（ＮＺ−７ＶＥＧＦ）が報告されている。これは、ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１受容体を優先的に利用し、ヘパリン結合ドメインを有することなく、強力な***促進活性を有している（Meyer et al, EMBO J. (1999), 18 (2), 363-374; Ogawa et al, J. Biol. Chem. (1998), 273 (47), 31273-31282.）。ＶＥＧＦ−Ｅの配列は、哺乳動物のＶＥＧＦに対して２５％の相同性を有し、パラポックスウイルスのＯｒｆウイルス（ＯＶ）によってコードされる。ＶＥＧＦ−Ａのイソ型であるＶＥＧＦ１６５と同様に、ＶＥＧＦ−Ｅは、大きい親和性でＶＥＧＦ受容体−２（ＫＤＲ）に結合し、これにより受容体の自己リン酸化および細胞内の遊離Ｃａ２＋濃度の二相性上昇を生じさせることが見出され、一方で、ＶＥＧＦ１６５とは異なり、ＶＥＧＦ−ＥはＶＥＧＦ受容体−１（Ｆｌｔ−１）に結合しなかった。
ＶＥＧＦおよびＶＥＧＦＲの他のホモログの明らかにされた発見、ならびに、リガンドおよび受容体のヘテロ二量体化に対する前例に基づいて、そのようなＶＥＧＦホモログの作用は、ＶＥＧＦリガンドヘテロ二量体の形成、および／または受容体のヘテロ二量体化、または未だ発見されていないＶＥＧＦＲに対する結合を伴い得る（Witzenbichler et al., 上記）。また、最近の報告では、ニューロフィリン−１（Migdal et al, 上記）またはＶＥＧＦＲ−３／Ｆｌｔ−４（Witzenbichler et al., 上記）、あるいはＫＤＲ／ＶＥＧＦＲ−２以外の受容体が血管透過性の誘導に関与し得ることが示唆される（Stacker, S. A., Vitali, A., Domagala, T., Nice, E., and Wilks, A. F., Angiogenesis and Cancer Conference, Amer. Assoc. Cancer Res., Jan. 1998, Orlando, FL; Williams, Diabetelogia 40:S 118-120 (1997)）。
Ｔｉｅ−２（ＴＥＫ）は、血管の枝分かれ、芽形成、再構成、成熟化および安定性などの重要な血管形成プロセスに関与する内皮細胞特異的受容体チロシンキナーゼの最近発見されたファミリーを構成する１つである。Ｔｉｅ−２は、アゴニストリガンド（例えば、アンギオポイエチン１（「Ａｎｇ１」）、これは受容体の自己リン酸化およびシグナル伝達を刺激する）およびアンタゴニストリガンド（例えば、アンギオポイエチン２（「Ａｎｇ２」））の両方が特定されている最初の哺乳動物受容体チロシンキナーゼ である。Ｔｉｅ−２およびそのリガンドの発現のノックアウト操作および遺伝子組換え操作により、Ｔｉｅ−２シグナル変換の厳密な空間的および時間的な制御が新しい脈管構造の適切な発達のために必須であることが示されている。現在のモデルでは、Ａｎｇ１リガンドによるＴｉｅ−２キナーゼの刺激が、枝分かれ、芽形成、および新しい血管の外方成長、ならびに、血管の一体性を維持すること、および、休止を誘導することにおいて重要である内皮周囲の支持体細胞の呼び寄せおよび相互作用に直接的に関与することが示唆されている。Ｔｉｅ−２のＡｎｇ１刺激の非存在、または、血管退行部位において高レベルで産生されるＡｎｇ２によるＴｉｅ−２自己リン酸化の阻害は、特に成長／生存刺激の非存在下では内皮細胞の死をもたらす、血管構造およびマトリックス接触の喪失を生じさせることがある。しかしながら、状況はより複雑である。少なくとも２つのさらなるＴｉｅ−２リガンド（Ａｎｇ３およびＡｎｇ４）が最近報告されており、そして、様々なアゴニスト性アンギオポイエチンおよび拮抗性アンギオポイエチンのヘテロオリゴマー化、それにより、それらの活性を変化させることに対する能力が明らかにされているからである。従って、Ｔｉｅ−２リガンド−受容体の相互作用を抗血管形成性の治療法として標的化することはあまり有利ではなく、キナーゼ阻害法が好ましい。
最近、Ｔｉｅ−２発現の著しい上昇が、不適切な血管新生における役割と一致して、ヒトの関節炎関節の血管の滑膜パンヌスにおいて見出されている。Ｔｉｅ−２の構成的に活性化された形態を産生する点変異が、ヒトの静脈奇形障害との関連で特定されている。
[非受容体チロシンキナーゼ]非受容体チロシンキナーゼは、細胞外配列および膜貫通配列を有しない細胞酵素の集まりを表す。現在、２４を超える個々の非受容体チロシンキナーゼが特定されており、これらは１１のサブファミリー（Ｓｒｃ、Ｆｒｋ、Ｂｔｋ、Ｃｓｋ、Ａｂｌ、Ｚａｐ７０、Ｆｅｓ／Ｆｐｓ、Ｆａｋ、Ｊａｋ、ＡｃｋおよびＬＩＭＫ）を構成している。現在、非受容体チロシンキナーゼのＳｒｃサブファミリーが最も多い数のＰＴＫから構成されており、これには、Ｓｒｃ、Ｙｅｓ、Ｆｙｎ、Ｌｙｎ、Ｌｃｋ、Ｂｌｋ、Ｈｃｋ、ＦｇｒおよびＹｒｋが含まれる。Ｓｒｃサブファミリーの酵素は癌形成および免疫応答に関連づけられている。非受容体チロシンキナーゼのより詳細な議論が、ボーレンの報告（Bohlen, 1993, Oncogene 8:2025-2031；参照によって本明細書に組み込まれる。）に示されている。
チロシンキナーゼの多くが、ＲＴＫまたは非受容体チロシンキナーゼのいずれかであっても、ガン、乾癬、および他の過増殖性障害または過免疫応答を含む数多くの病原性状態に関与する細胞のシグナル伝達経路に関与していることが見出されている。
Ｐｌｋ−１キナーゼの阻害剤
Ｐｌｋ−１は、細胞周期進行の重要な調節因子であるセリン／トレオニンキナーゼである。Ｐｌｋ−１は、有糸***紡錘体装置の組み立ておよび動的機能において重要な役割を果たしている。Ｐｌｋ−１および関連したキナーゼはまた、他の細胞周期調節因子（例えば、サイクリン依存性キナーゼなど）の活性化および不活性化に密接に関与していることも示されている。高レベルのＰｌｋ−１発現が細胞増殖活性と関連している。Ｐｌｋ−１は様々な起源の悪性腫瘍に見出されることが多い。
Ｃｄｃ２／サイクリンＢキナーゼ阻害剤（Ｃｄｃ２はまたｃｄｋ１として知られている）
Ｃｄｃ２／サイクリンＢは、サイクリン依存性キナーゼ（ｃｄｋ）ファミリーに属する別のセリン／トレオニンキナーゼ酵素である。これらの酵素は、細胞周期進行の様々な期の間での重要な移行に関与している。
これらの疾患状態を媒介または維持することに関与するキナーゼの阻害剤は、これらの障害に対する新規な治療法を表している。そのようなキナーゼの例には、下記が含まれるが、それらに限定されない：（１）癌におけるｃ−Ｓｒｃ（Brickell, Critical Reviews in Oncogenesis, 3: 401-406 (1992); Courtneidge, Seminars in Cancer Biology, 5: 236-246 (1994)）、ｒａｆ（Powis, Pharmacology & Therapeutics, 62: 57-95 (1994)）およびサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）１、２および４（Pines, Current Opinion in Cell Biology, 4: 144-148 (1992); Lees, Current Opinion in Cell Biology, 7: 773-780 (1995); Hunter and Pines, Cell, 79: 573-582 (1994)）の阻害、（２）再狭窄症におけるＣＤＫ２キナーゼまたはＰＤＧＦ−Ｒキナーゼの阻害（Buchdunger et al., Proceedings of the National Academy of Science USA, 92: 2258-2262 (1995)）、（３）アルツハイマーにおけるＣＤＫ５キナーゼおよびＧＳＫ３キナーゼの阻害（Hosoi et al., Journal of Biochemistry (Tokyo), 117: 741-749 (1995); Aplin et al., Journal of Neurochemistry, 67: 699-707 (1996)）、（４）骨粗鬆症におけるｃ−Ｓｒｃキナーゼの阻害（Tanaka et al., Nature, 383: 528-531 (1996)）、（５）２型糖尿病におけるＧＳＫ−３キナーゼの阻害（Borthwick et al., Biochemical & Biophysical Research Communications, 210: 738-745 (1995)）、（６）炎症におけるｐ３８キナーゼの阻害（Badger et al., The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 279: 1453-1461 (1996)）、（７）血管形成を伴う疾患におけるＶＥＧＦ−Ｒ１〜３キナーゼならびにＴＩＥ−１キナーゼおよびＴＩＥ−２キナーゼの阻害（Shawver et al., Drug Discovery Today, 2: 50-63 (1997)）、（８）ウイルス感染症におけるＵＬ９７キナーゼの阻害（He et al., Journal of Virology, 71: 405-411 (1997)）、（９）骨疾患および造血性疾患におけるＣＳＦ−１Ｒキナーゼの阻害（Myers et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 7: 421-424 (1997)）、および（１０）自己免疫疾患および移植拒絶におけるＬｃｋキナーゼの阻害（Myers et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 7: 417-420 (1997)）。
さらに、ある種のキナーゼの阻害剤は、そのキナーゼが誤って調節されず、しかし、それにもかかわらず、そのキナーゼが疾患状態の維持のためには不可欠である疾患の処置において有用性を有し得る可能性がある。この場合、キナーゼ活性の阻害は、これらの疾患に対する治療または一時的緩和のいずれかとして作用する。
ＶＥＧＦ類は、それらが、血管の過透過性および浮腫の形成に寄与することが知られている唯一の血管形成性増殖因子であるという点で特異である。従って、ＶＥＧＦにより媒介される過透過性は、これらの病因的特徴を有する障害に著しく寄与し得る。
胚盤胞着床、胎盤発達および胚発生は血管形成に依存しているので、本発明のいくつかの化合物は避妊剤および抗受精剤として有用である。
本発明の化合物は、本明細書に挙げた１以上のタンパク質キナーゼならびに具体的に挙げられていないそのファミリー構成員に対する阻害活性を有している。すなわち、本発明の化合物は、タンパク質キナーゼによるシグナル伝達を調節する。本発明の化合物は、セリン／トレオニンキナーゼクラスおよびチロシンキナーゼクラスに由来するタンパク質キナーゼを阻害する。特に、本発明の化合物は、Ｔｉｅ−２／Ｔｉｅ−１チロシンキナーゼの活性を選択的に阻害する。本発明のある種の化合物はまた、Ｆｌｔ−１／ＶＥＧＦＲ−１、Ｆｌｔ−４、Ｔｉｅ−１、Ｔｉｅ−２、ＦＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＩＧＦ−１Ｒ、ｃ−Ｍｅｔ、Ｓｒｃサブファミリーのキナーゼ（例えば、Ｌｃｋ、Ｓｒｃ、ｈｃｋ、ｆｇｒ、ｆｙｎ、ｙｅｓなど）などのさらなるチロシンキナーゼの活性を阻害する。さらに、本発明の一部の化合物は、細胞増殖および細胞周期進行において不可欠な役割を果たしているＰＫＣ、ＭＡＰキナーゼ、ｅｒｋ、ＣＤＫ、Ｐｌｋ−１またはＲａｆ−１などのセリン／トレオニンキナーゼを著しく阻害する。さらに、いくつかの化合物の代謝産物およびプロドラッグもまた、著しいタンパク質キナーゼ阻害活性を有する場合がある。
本発明の化合物は、そのような化合物を必要としている個体に投与されたとき、これらの個体における血管の過透過性および浮腫の形成を阻害する。
１実施形態において本発明は、治療有効量または予防有効量の１以上の式Ｉの化合物を患者に投与することを含む、患者におけるタンパク質キナーゼ媒介の状態を処置する方法を提供する。「タンパク質キナーゼ媒介の状態」または「タンパク質キナーゼ活性により媒介される状態」は、少なくとも部分的には、少なくとも一つのタンパク質キナーゼの活性にその発生または進行が依存している、疾患または他の望ましくない身体状態などの医学的状態である。そのようなタンパク質キナーゼは、例えば、タンパク質チロシンキナーゼまたはタンパク質セリン／トレオニンキナーゼであることができる。
治療される患者は、動物であることができるが、好ましくは哺乳動物であり、例えば、飼い慣らされた動物または家畜動物などである。より好ましくは、患者はヒトである。
本発明の方法は、上記に記載された状態のいずれかを処置することにおいて有用である。１実施形態において、前記状態は、望ましくない血管形成、浮腫、または間質沈着を特徴とする。例えば、そのような状態は、１以上の潰瘍、例えば、細菌または真菌の感染症によって引き起こされる潰瘍、モーレン潰瘍および潰瘍性大腸炎などであり得る。状態はまた、微生物感染症によるもの、例えば、ライム病、敗血症、敗血症性発作、あるいは、単純ヘルペスウイルス、帯状疱疹ウイルス、ヒト免疫不全症ウイルス、原生動物、トキソプラズマ症またはパラポックスウイルスによる感染症など；血管形成性障害、例えば、フォンリッペル・リンダウ病、腎多嚢胞性疾患、類天疱瘡、パジェット病および乾癬など；生殖性状態、例えば、子宮内膜症、卵巣過剰刺激症候群、子癇前症または月経性子宮出血など；線維症性および浮腫性の状態、例えば、類肉腫症、線維症、肝硬変、甲状腺炎、高粘稠血症候群、オスラー・ウィーバー・レンズ病、慢性閉塞性肺疾患、火傷、外傷、放射線、発作の後での喘息もしくは浮腫、低酸素症または虚血など；あるいは、炎症性／免疫学的状態、例えば、全身性狼瘡、慢性炎症、糸球体腎炎、滑膜炎、炎症性腸疾患、クローン病、慢性リウマチ関節、変形性関節症、多発性硬化症および移植片拒絶などであり得る。他の好適な状態にはまた、鎌状赤血球貧血、骨粗鬆症、大理石骨病、腫瘍誘導の高カルシウム血症および骨転移が含まれる。本発明の方法によって処置され得る別の状態には、眼の状態、例えば、眼および黄斑の浮腫、眼の血管新生疾患、強膜症、放射状角膜切開、ブドウ膜炎、硝子体炎、近視、視覚のくぼみ、慢性網膜剥離、レーザー処置後の合併症、結膜炎、シュタルガルト病およびイールズ病が、網膜障害および黄斑変性に加えて含まれる。
本発明の化合物はまた、アテローム性動脈硬化、再狭窄症、血管閉塞および冠状動脈閉塞性疾患などの心臓血管状態を処置することにおいて有用である。
本発明の化合物はまた、充実性腫瘍、肉腫（特に、ユーイング肉腫および骨肉腫）、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、神経芽細胞腫、造血系悪性腫瘍（白血病およびリンパ腫を含む）、腫瘍誘導による胸膜滲出または心膜滲出、ならびに悪性腹水症などの癌関連適応症を処置することにおいて有用である。
本発明の化合物はまた、クロウ・深瀬（ＰＯＥＭＳ）症候群、および糖尿病性状態（緑内障、糖尿病網膜症および細小血管障害など）を処置することにおいて有用である。
Ｓｒｃファミリー、Ｔｅｃファミリー、Ｊａｋファミリー、Ｍａｐファミリー、Ｃｓｋファミリー、ＮＦγＢファミリーおよびＳｙｋファミリーのキナーゼは、免疫機能の調節において極めて重要な役割を果たしている。Ｓｒｃファミリーには、現在、Ｆｙｎ、Ｌｃｋ、Ｆｇｒ、Ｆｅｓ、Ｌｙｎ、Ｓｒｃ、Ｙｒｋ、Ｆｙｋ、Ｙｅｓ、ＨｃｋおよびＢｌｋが含まれる。Ｓｙｋファミリーは、現在、ＺａｐおよびＳｙｋだけを含むことが理解されている。ＴＥＣファミリーには、Ｔｅｃ、Ｂｔｋ、ＲｌｋおよびＩｔｋが含まれる。Ｊａｎｕｓファミリーのキナーゼは、多数の受容体を介する増殖因子および前炎症性サイトカインのシグナルの伝達に関与している。Ｃｓｋファミリーは、現在、ＣｓｋおよびＣｈｋを含むことが理解されている。ＲＩＰ、ＩＲＡＫ−１、ＩＲＡＫ−２、ＮＩＫ、ｐ３８ＭＡＰキナーゼ、Ｊｎｋ、ＩＫＫ−１およびＩＫＫ−２のキナーゼは、ＴＮＦおよびＩＬ−１などの重要な前炎症性サイトカインに対するシグナル伝達経路に関与している。式Ｉの化合物は、同種移植片の維持、自己免疫障害の処置、ならびに、敗血症および敗血症性ショックの処置のために有用な免疫調節剤として機能し得る。Ｔ細胞、Ｂ細胞、マスト細胞、単球および好中球の遊走または活性化を調節するそれらの能力により、これらの化合物は、そのような自己免疫疾患および敗血症を処置するために使用することができる。移植拒絶の防止は、充実性器官についての宿主対移植片または骨髄についての移植片対宿主のいずれかであっても、現在利用可能な免疫抑制剤の毒性によって制限されており、改善された治療指数を有する効き目のある薬物からの利益を受けると考えられる。遺伝子標的化実験により、破骨細胞（骨吸収を担っている細胞）の生物学におけるＳｒｃの不可欠な役割が明らかにされている。式Ｉの化合物はまた、Ｓｒｃを調節するその機能により、骨粗鬆症、大理石骨病、パジェット病、腫瘍誘導による高カルシウム血症の処置、および骨転移物の処置において有用であり得る。
ｃ−ｋｉｔ、ｃ−ｍｅｔ、ｃ−ｆｍｓ、ｓｒｃファミリーのメンバー、ＥＧＦｒ、ｅｒｂＢ２、ｅｒｂＢ４、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＰＤＧＦｒ、ＦＧＦｒ、ＩＧＦ１−Ｒおよび他の受容体またはサイトゾルのチロシンキナーゼの正常型または異常なキナーゼ活性を阻害する式Ｉの化合物は、良性の増殖性疾患および新生物の増殖性疾患を処置することにおいて有益であり得る。
多くの病理学的状態（例えば、充実性原発腫瘍および転移物、カポジ肉腫、慢性関節リウマチ、眼の不適切な血管新生による失明、乾癬およびアテローム性動脈硬化）では、疾患の進行は、持続する血管形成を条件とする。内皮細胞特異的キナーゼのキナーゼ活性を阻止することができる式Ｉのある種の化合物は、疾患の進行を阻害することができる。
Ｔｉｅ−２の拮抗薬リガンド（Ａｎｇ２）の血管脱安定化は、内皮における不安定な「可塑的」状態を誘導すると考えられている。高レベルのＶＥＧＦが存在する場合、強固な血管形成性応答が生じ得る。しかしながら、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦに関連した刺激が存在しない場合、明らかな血管退行および内皮アポトーシスが生じ得る（Genes and Devel., 13: 1055-1066 (1999)）。類似する様式で、Ｔｉｅ−２キナーゼ阻害剤は、ＶＥＧＦに関連した刺激の存在下または非存在下ではそれぞれ前血管形成性または抗血管形成性であり得る。従って、ＶＥＧＦなどの適切な血管新生を促す刺激とともにＴｉｅ−２阻害薬を用いることで、創傷治癒、梗塞および虚血などの状況において治療的な血管新生を促進することができる。
式Ｉの化合物、その塩、そのプロドラッグまたはそれらの治療有効量を含有する医薬組成物は、上記で記載されたように、良性および新生物の増殖性疾患ならびに免疫系の障害などのタンパク質キナーゼ媒介の状態を処置する際に使用することができる。例えば、そのような疾患には、自己免疫疾患、例えば、慢性関節リウマチ、甲状腺炎、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、類肉腫症、炎症性腸疾患、クローン病、重症筋無力症および全身性エリテマトーデスなど；乾癬、臓器移植拒絶（例えば、腎臓拒絶、移植片対宿主病）、良性および新生物の増殖性疾患、ヒトの癌（例えば、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、結腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌および直腸癌など）および造血系悪性腫瘍（白血病およびリンパ腫）、ならびに、不適切な血管形成を伴う疾患、例えば、糖尿病網膜症、未熟児網膜症、年齢に関連した黄斑変性による脈絡膜の血管新生、およびヒトにおける乳児血管腫が含まれる。さらに、そのような阻害剤は、例えば、黄斑の浮腫、脳の浮腫、急性肺傷害および成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を含む、浮腫、腹水症、遊出および滲出などの障害を処置することにおいて有用であり得る。
式Ｉの化合物もしくはその塩または治療上有効量のそれらを含む医薬組成物は、血管の増殖性障害、繊維性障害、メサンギウム細胞の増殖性障害、および代謝性疾患の領域における細胞増殖を特徴とする、哺乳動物が罹患する１以上の疾患を処置することにおいても有用である。血管の増殖性障害には、関節炎および再狭窄症が含まれる。線維性障害には、肝硬変およびアテローム性動脈硬化が含まれる。メサンギウム細胞の増殖性障害には、糸球体腎炎、糖尿病性腎症、悪性の腎硬化症、血栓性細小血管症症候群、臓器移植拒絶および腎糸球体症が含まれる。代謝性疾患には、糖尿病、慢性的創傷治癒、炎症および神経変性疾患が含まれる。
本発明の化合物は抗血管形成性を有する。そのため、本発明の化合物は、関節炎、アテローム性動脈硬化、再狭窄症、乾癬、血管腫、心筋血管形成、冠状動脈および脳の側副枝、虚血性四肢血管形成、虚血／再潅流傷害、創傷治癒、消化性潰瘍、ヘリコバクター関連疾患、ウイルス誘導の血管形成性障害、骨折、クロウ・深瀬症候群（ＰＯＥＭＳ）、子癇前症、月経性子宮出血、ネコひっかき熱、ルベオーシス、血管新生緑内障および網膜障害（例えば、糖尿病網膜症、未熟児網膜症または年齢関連の黄斑変性に関連する網膜障害など）のような疾患状態に対する活性な薬剤として使用することができる。さらに、本発明の化合物の一部は、充実性腫瘍、悪性腹水症、フォンリッペル・リンダウ病、造血系の癌、および過増殖性障害（例えば、甲状腺過形成（特に、グレーヴズ病）、および嚢腫（多嚢胞性卵巣症候群（スタイン・レベンタール症候群）に特徴的な卵巣間質の血管過多および腎多嚢胞性疾患の血管過多など）など）などに対する活性な薬剤として使用することができる。これは、そのような疾患は成長および／または転移のために血管細胞の増殖を必要とするからである。
さらに、本発明の化合物の一部は、火傷、慢性的な肺疾患、発作、ポリープ、アナフィラキシー、慢性的およびアレルギー性の炎症、遅延型過敏症、卵巣過剰刺激症候群、脳腫瘍に伴う脳浮腫、高山病、外傷または低酸素症により誘導される脳または肺の浮腫、眼および黄斑の浮腫、腹水症、糸球体腎炎、および、血管過透過性、流出、滲出、タンパク質の管外遊出、または浮腫が疾患の症状発現である他の疾患に対する活性な薬剤として使用することができる。本発明の化合物はまた、タンパク質の管外遊出がフィブリンおよび細胞外マトリックスの沈着を生じさせ、間質増殖を促進させる障害（例えば、ケロイド、線維症、肝硬変および手根管症候群など）を処置することにおいて有用である。増大したＶＥＧＦ産生は、単球の呼び寄せおよび活性化などの炎症プロセスを強める。本発明の化合物はまた、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）およびクローン病などの炎症性障害をを処置することにおいて有用である。
さらに、ある種のキナーゼの阻害剤は、そのキナーゼが誤って調節されず、しかし、それにもかかわらず、そのキナーゼが疾患状態の維持のためには不可欠である疾患の処置において有用性を有し得る可能性がある。この場合、キナーゼ活性の阻害は、これらの疾患に対する治療または一時的緩和のいずれかとして作用する。例えば、多くのウイルス（例えば、ヒトパピローマウイルスなど）は細胞周期を乱し、細胞を細胞周期のＳ期に移行させる（Vousden, FASEB Journal, 7: 8720879 (1993)）。細胞がウイルス感染後にＤＮＡ合成に入ることを不可欠なＳ期開始活性（例えば、ＣＤＫ２など）の阻害によって防止することは、ウイルスの複製を妨げることによりウイルスの生活環を乱すことができる。この同じ原理を、身体の正常な細胞を周期特異的な化学療法剤の毒性から保護するために使用することができる（Stone et al., Cancer Research, 56: 3199-3202 (1996); Kohn et al., Journal of Cellular Biochemistry, 54: 44-452 (1994)）。ＣＤＫ２またはＣＤＫ４の阻害には、正常な細胞における周期への進行の阻止をもたらし、Ｓ期、Ｇ２または有糸***において作用する細胞毒剤の毒性を制限する。さらに、ＣＤＫ２／サイクリンＥの活性はまた、ＮＦ−ｋＢを調節することが示されている。ＣＤＫ２活性の阻害により、ＮＦ−ｋＢに依存した遺伝子発現、すなわち、ｐ３００共活性化因子との相互作用を介して媒介される事象が刺激される（Perkins et al., Science, 275: 523-527 (1997)）。ＮＦ−ｋＢは、様々な炎症応答に関与する遺伝子（例えば、造血性増殖因子、ケモカインおよび白血球接着分子など）を調節し（Baeuerle and Henkel, Annual Review of Immunology, 12: 141-179 (1994)）、細胞内でのアポトーシスシグナルの抑制に関与し得る（Beg and Baltimore, Science, 274: 782-784 (1996); Wang et al., Science, 274: 784-787 (1996); Van Antwerp et al., Science, 274: 787-789 (1996)）。従って、ＣＤＫ２の阻害は、ＮＦ−ｋＢを伴う機構を介して細胞傷害性薬物により誘導されるアポトーシスを抑制することができる。従って、このことは、ＣＤＫ２活性の阻害はまた、ＮＦ−ｋＢの調節が疾患の病因における役割を果たしている他の場合において有用性を有し得ることを示唆している。さらなる例を真菌感染症から見ることができる。例えば、アスペルギルス症は免疫低下患者における一般的な感染症である（Armstrong, Clinical Infectious Diseases, 16: 1-7 (1993)）。アスペルギルスのキナーゼのＣｄｃ２／ＣＤＣ２８またはＮｉｍＡ（Osmani et al., EMBO Journal, 10: 2669-2679(1991); Osmani et al., Cell, 67: 283-291 (1991)）の阻害は、真菌において抑止または死を生じさせることができ、これらの感染症を有する患者について治療結果を改善する。
本発明の化合物は、上記疾患の予防においても有用となり得る。
別の態様において本発明は、医薬として、特にはチロシンキナーゼ活性、セリンキナーゼ活性およびトレオニンキナーゼ活性などのタンパク質キナーゼ活性の阻害剤として使用される上記で最初に定義の式Ｉの化合物を提供する。さらに別の態様において本発明は、タンパク質キナーゼ活性阻害で使用される医薬の製造における上記で最初に定義の式Ｉの化合物の使用を提供する。
本発明において、以下の定義を適用することができる。
「治療上有効量」とは、前記状態の進行を完全または部分的に阻害するか、あるいは、前記状態の１以上の症状を少なくとも部分的に緩和する、式Ｉの化合物の量または２種類以上のそのような化合物の組合せの量である。治療上有効量はまた、予防的に有効である量であり得る。治療的に有効である量は、患者の大きさおよび性別、処置される状態、状態の重度、ならびに求められている結果によって決まる。所定の患者について、治療上有効量は、当業者に知られている方法によって決定することができる。
「生理的に許容される塩」は、遊離塩基の生物学的有効性および生物学的性質を保持し、かつ、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸、または、スルホン酸、カルボン酸、有機リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、安息香酸、サリチル酸、乳酸、酒石酸（例えば、（＋）または（−）−酒石酸、またはそれらの混合物）、アミノ酸（例：および、（＋）または（−）−アミノ酸またはそれらの混合物）などの有機酸との反応によって得られる塩を指す。これらの塩は、当業者に公知の方法によって製造することができる。
酸性置換基を有する式Ｉのある種の化合物は、製薬上許容される塩基との塩として存在する場合がある。本発明はそのような塩を包含する。そのような塩の例には、ナトリウム塩、カリウム塩、リシン塩およびアルギニン塩が含まれる。これらの塩は、当業者に知られている方法によって製造することができる。
式Ｉのある種の化合物およびその塩は２以上の結晶形で存在する場合がある。本発明はそれぞれの結晶形およびその混合物を包含する。
式Ｉのある種の化合物およびその塩はまた、溶媒和物（例えば、水和物）の形態で存在する場合がある。本発明はそれぞれの溶媒和物およびその混合物を包含する。
式Ｉのある種の化合物は２以上のキラル中心を含有する場合があり、従って、異なる光学活性形態で存在する場合がある。式Ｉの化合物が１個のキラル中心を含有するとき、化合物は２種類のエナンチオマー形態で存在する。本発明は両方のエナンチオマーおよびエナンチオマーの混合物（例えば、ラセミ混合物など）を包含する。エナンチオマーは、当業者に知られている方法によって、例えば、ジアステレオマー塩の形成、例えば、結晶化によって分離され得るジアステレオマー塩の形成によって；ジアステレオマーの誘導体または複合体の形成、例えば、結晶化、ガスクロマトグラフィーまたは液体クロマトグラフィーによって分離され得るジアステレオマーの誘導体または錯体の形成によって；一方のエナンチオマーをエナンチオマー特異的な試薬と選択的に反応すること（例えば、酵素によるエステル化）によって；あるいは、キラルな環境でのガスクロマトグラフィーまたは液体クロマトグラフィー、例えば、キラルな担体（例えば、キラル配位子を結合させたシリカ）またはキラルな溶媒の存在下でのガスクロマトグラフィーまたは液体クロマトグラフィーによって分割することができる。所望するエナンチオマーは、上記に記載された分離手順のいずれかによって別の化学成分に変換される場合、さらなる工程が、所望するエナンチオマー形態を遊離させるために必要とされることが理解される。あるいは、特定のエナンチオマーを、光学活性な試薬、基質、触媒もしくは溶媒を使用する不斉合成によって、または、一方のエナンチオマーを不斉変換によりもう一方のエナンチオマーに変換することによって合成することができる。
式Ｉの化合物が２以上のキラル中心を含有するとき、化合物はジアステレオマー形態で存在する場合がある。ジアステレオマー対は、当業者に知られている方法によって、例えば、クロマトグラフィーまたは結晶化によって分離することができ、そして、それぞれの対に含まれる個々のエナンチオマーを上記に記載されたように分離することができる。本発明は、式Ｉの化合物のそれぞれのジアステレオマー、およびその混合物を包含する。
式Ｉのある種の化合物は、異なる互変異型で、または、異なる幾何異性体として存在する場合がある。本発明は、式Ｉの化合物のそれぞれの互変異体および／または幾何異性体、ならびにそれらの混合物を包含する。
式Ｉのある種の化合物は、分離可能であり得る異なる安定な立体配座形態で存在する場合がある。非対称な単結合の周りでの回転が、例えば、立体障害または環の変形のために制限されたことによる回転非対称性は、異なる配座異性体の分離を可能にし得る。本発明は、式Ｉの化合物のそれぞれの立体配座異性体、およびその混合物を包含する。
式Ｉのある種の化合物は両性イオン形態で存在する場合がある。本発明は、式Ｉの化合物のそれぞれの両性イオン形態、およびその混合物を包含する。
本明細書で使用される場合、「プロドラッグ」という用語は、何らかの生理的化学プロセスによってイン・ビボで親薬剤に変換される薬剤を指す（例えば、プロドラッグは、生理的ｐＨにされると、所望の薬剤型に変換される。）。プロドラッグは、状況によっては、親薬剤より投与が容易である場合があることから有用であることが多い。それらは例えば、経口投与によって生理的に利用可能である場合があり、親薬剤はそうではない場合がある。プロドラッグは、親薬剤より薬理組成物での溶解度が改善されている場合もある。限定されるものではないが、プロドラッグの例としては、水溶解性が有利ではない細胞膜を通過しての送達を促進するためのエステル（「プロドラッグ」）として投与される本発明の化合物があると考えられるが、それは水溶解性が有利である細胞内に入ると代謝的に加水分解されてカルボン酸となる。
プロドラッグは多くの有用な特性を有する。例えば、プロドラッグは、最終的な薬剤より水溶性が高いものとすることで、薬剤の静脈投与を容易にすることができる。プロドラッグは、最終的な薬剤より経口での生物学的利用能レベルが高いものとすることもできる。投与後、プロドラッグは酵素的または化学的に開裂されて、血液または組織中で最終薬剤を送達する。
開裂時に本発明の化合物の相当する遊離酸およびそのような加水分解可能なエステル形成残基を放出するプロドラッグの例には、遊離水素が（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ１２）アルカノイルオキシメチル、（Ｃ４〜Ｃ９）１−（アルカノイルオキシ）エチル、５〜１０個の炭素原子を有する１−メチル−１−（アルカノイルオキシ）−エチル、３〜６個の炭素原子を有するアルコキシカルボニルオキシメチル、４〜７個の炭素原子を有する１−（アルコキシカルボニルオキシ）エチル、５〜８個の炭素原子を有する１−メチル−１−（アルコキシカルボニルオキシ）エチル、３〜９個の炭素原子を有するＮ−（アルコキシカルボニル）アミノメチル、４〜１０個の炭素原子を有する１−（Ｎ−（アルコキシカルボニル）アミノ）エチル、３−フタリジル、４−クロトノラクトニル、γ−ブチロラクトン−４−イル、ジ−Ｎ，Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ２）アルキルアミノ（Ｃ２〜Ｃ３）アルキル（β−ジメチルアミノエチルなど）、カルバモイル−（Ｃ１〜Ｃ２）アルキル、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１〜Ｃ２）−アルキルカルバモイル−（Ｃ１〜Ｃ２）アルキルおよびピペリジノ−、ピロリジノ−またはモルホリノ（Ｃ２〜Ｃ３）アルキルによって置き換わっているカルボン酸置換基（例：Ｒ１が−（ＣＨ２）ｑＣ（Ｏ）Ｘ６であり、Ｘ６が水素であるか、またはＲ２もしくはＡ１がカルボン酸を含む）などがあるが、これらに限定されるものではない。
他のプロドラッグの例は、ヒドロキシル置換基の遊離水素（例えば、Ｒ１がヒドロキシルを含む。）が（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシメチル、１−（（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ）エチル、１−メチル−１−（（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイルオキシ）エチル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニルオキシメチル、Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニルアミノ−メチル、スクシノイル、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル、α−アミノ（Ｃ１〜Ｃ４）アルカノイル、アリールアシルおよびα−アミノアシル、またはα−アミノアシル−α−アミノアシルによって置き換わっており；前記α−アミノアシル部分が独立に、タンパク質で認められる天然Ｌ−アミノ酸、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル）２またはグリコシル（炭水化物のヘミアセタールのヒドロキシルの脱離によって生じる基）のいずれかである式Ｉのアルコールを放出する。
本明細書で使用される「複素環式」または「複素環」という用語は、完全に飽和しているか、１以上の不飽和単位を有することができ、窒素、酸素もしくは硫黄などの少なくとも１個のヘテロ原子を含む３〜１２個の原子を有する単環式、二環式および三環式の環など（これらに限定されるものではない）の芳香族および非芳香族環系を含むものである。例（本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない）を挙げると、アザインドール、アゼチジニル類、ベンゾ（ｂ）チエニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、フラン類、イミダゾール類、イミダゾピリジン、インドール、インダゾール類、イソオキサゾール類、イソチアゾール類、オキサジアゾール類、オキサゾール類、ピペラジン類、ピペリジン類、プリン、ピラン類、ピラジン類、ピラゾール類、ピリジン類、ピリミジン類、ピロール類、ピロリジン類、ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン）、キノリン類、キナゾリン類、トリアゾール類、チアゾール類、テトラヒドロインドール、テトラゾール類、チアジアゾール類、チエニル類、チオモルホリノ類またはトリアゾール類（triazles）がある。
「置換複素環式」（または複素環）という用語を用いる場合、その複素環基が、当業者によって製造可能であって、キナーゼ阻害薬である分子を生じ得る１以上の置換基で置換されていることを意味する。例（本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない）を挙げると、本発明の複素環に好ましい置換基はそれぞれ独立に、アルケニル、アルコキシ、アルコキシアルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニル複素環アルコキシ、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルエステル、アルキル−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、アルキル−複素環、アルキル−シクロアルキル、アルキル−ニトリル、アルキニル、アミド基、アミノ、アミノアルキル、アミノカルボニル、カルボニトリル、カルボニルアルコキシ、カルボキサミド、ＣＦ３、ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−）（ＣＨ３）３、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−複素環、−Ｃ（Ｏ）−アルキル、−Ｃ（Ｏ）−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−複素環、シクロアルキル、ジアルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノカルボニルアルコキシ、ジアルキルアミノカルボニル、ハロゲン、複素環、複素環アルキル基、複素環オキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロ、ＮＯ２、ＯＣＦ３、オキソ、フェニル、−ＳＯ２ＣＨ３、−ＳＯ２ＣＲ３、テトラゾリル、チエニルアルコキシ、トリフルオロメチルカルボニルアミノ、トリフルオロメチルスルホンアミド、複素環アルコキシ、複素環−Ｓ（Ｏ）ｐ、シクロアルキル−Ｓ（Ｏ）ｐ、アルキル−Ｓ−、複素環−Ｓ、複素環アルキル、シクロアルキルアルキル、複素環チオ、シクロアルキルチオ、−Ｚ１０５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｚ１０５−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）−Ｚ２００、−Ｚ１０５−Ｎ（Ｒ）−Ｓ（Ｏ）２−Ｚ２００、−Ｚ１０５−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ）−Ｚ２００、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ＯＲ−Ｃ（Ｏ）−複素環−ＯＲ、Ｒｃおよび−ＣＨ２ＯＲｃからなる置換されていても良い基から選択され；
Ｒｃは各場合で独立に、水素、置換されていても良いアルキル、置換されていても良いアリール、−（Ｃ１〜Ｃ６）−ＮＲｄＲｅ、−Ｗ−（ＣＨ２）ｔ−ＮＲｄＲｅ、−Ｗ−（ＣＨ２）ｔ−Ｏ−アルキル、−Ｗ−（ＣＨ２）ｔ−Ｓ−アルキルまたは−Ｗ−（ＣＨ２）ｔ−ＯＨであり；
Ｚ１０５は各場合で独立に、共有結合、アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；
Ｚ２００は各場合で独立に、アルキル、アルケニル、アルキニル、フェニル、アルキル−フェニル、アルケニル−フェニルまたはアルキニル−フェニルからなる群から選択される置換されていても良い基から選択される。
本明細書で使用される「複素環アルキル」基は、１〜約８個の炭素原子を有する脂肪族基によって化合物に連結された複素環基である。例えば、好ましい複素環アルキル基はイミダゾリルエチル基である。
本明細書で使用される「脂肪族」もしくは「脂肪族基」または「（Ｃ０〜Ｃ８）」などの表示は、完全に飽和しているか、１以上の不飽和単位を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素を含むものであることから、アルキル、アルケニル、アルキニルおよび単結合、二重結合および三重結合の混在したものを含む炭化水素などがある。その基がＣ０である場合、それは、その部分が存在しないか、すなわちそれが結合であることを意味している。本明細書で使用される場合「アルキル」とはＣ１〜Ｃ８を意味し、完全に飽和した直鎖もしくは分岐の炭化水素を含むものである。好ましいアルキルは、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルおよびその異性体である。本明細書で使用される場合、「アルケニル」および「アルキニル」とはＣ２〜Ｃ８を意味し、１以上の不飽和単位、すなわちアルケニルでは１以上の二重結合およびアルキニルでは１以上の三重結合を有する直鎖もしくは分岐の炭化水素を含むものである。
本明細書で使用される場合、シクロアルキルは、完全に飽和しているか、１以上の不飽和結合を有するが芳香族までにはならないＣ３〜Ｃ１２単環式もしくは多環式（例：二環式、三環式など）の炭化水素を意味する。シクロアルキル基の好ましい例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシルおよびシクロヘキセニルがある。
本明細書で使用される場合、アミド基とは−ＮＨＣ（＝Ｏ）−を意味する。
本明細書で使用される場合、アシルオキシ基は−ＯＣ（Ｏ）Ｒである。
本明細書で使用される場合、多くの部分または置換基が、「置換された」または「置換されていても良い」と表現されている。ある部分がこれらの用語の一方で修飾されている場合、それは、置換に使用可能であることが当業者には公知であるその部分のいずれかの箇所が置換されていることが可能であることを示すものであり、それは１以上の置換基を含むものであって、複数の置換基がある場合は各置換基は独立に選択される。置換に関するそのような意味は、当業界においては公知であるか、ないしは本開示によって示されるものである。例（本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。）に関して、置換基である基の例をいくつか挙げると、アルケニル基、アルコキシ基（それ自体が置換されていても良く、例えば−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６−アルキル−ＯＲ、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６−アルキル−Ｎ（Ｒ）２およびＯＣＦ３がある。）、アルコキシアルコキシ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルピペリジニルアルコキシ、アルキル基（それ自体も置換されていても良く、例えば−Ｃ１〜Ｃ６−アルキル−ＯＲ、−Ｃ１〜Ｃ６−アルキル−Ｎ（Ｒ）２および−ＣＦ３がある）、アルキルアミノ、アルキルカルボニル、アルキルエステル、アルキルニトリル、アルキルスルホニル、アミノ、アミノアルコキシ、ＣＦ３、ＣＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＮ、シクロアルキル、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニルアルコキシ、ジアルキルアミノスルホニル、エステル類（−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ；Ｒは、アルキル、複素環アルキル（置換されていても良い）、複素環などの基であり、それは置換されていても良い。）、ハロゲンもしくはハロ基（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ヒドロキシ、モルホリノアルコキシ、モルホリノアルキル、ニトロ、オキソ、ＯＣＦ３、置換されていても良いフェニル、Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、Ｓ（Ｏ）２ＣＦ３およびスルホニル、Ｎ−アルキルアミノまたはＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ（そのアルキル基も置換されていても良い。）がある。
本明細書で使用される場合、有毒金属とは、ごく微量で動物に対して有毒であると考えられる金属を意味する。
医薬製剤
１以上の本発明の化合物は、単独で、または、本発明の化合物が、本明細書に記載の疾患または状態を処置または改善するための用量で生理的に好適な担体もしくは賦形剤と混合されている医薬組成物でヒト患者に投与することができる。本発明の化合物の混合物もまた、単純な混合物として、または好適な製剤された医薬組成物において患者に投与することができる。治療有効用量はさらに、本明細書に記載の疾患または状態の予防または軽減をもたらす上で十分な化合物（１つまたは複数）の量を示す。本出願の化合物の製剤および投与に関する様々な技術は、レミングトンの著作（Remington′s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA、最新版）に記載されている。
投与経路
好適な投与経路には、例えば、経口投与、点眼投与、直腸投与、経粘膜投与、局所投与または経腸投与；筋肉注射、皮下注射、髄内注射、ならびに、くも膜下注射、直接的な脳室（心室）内注射、静脈注射、腹腔内注射、鼻腔注射または眼内注射を含む非経口投与などがあり得る。
あるいは、本発明の化合物は、全身的様式ではなく、むしろ局所的様式で、例えば、デポ製剤または持続放出製剤においてであることが多いが、化合物を浮腫部位内に直接注入することによって投与することができる。
さらに、薬物を、標的化された薬物送達系で、例えば、内皮細胞特異的抗体で被覆されたリポソームで投与することができる。
組成物／製剤
本発明の医薬組成物は、それ自体が知られている様式で、例えば、混合、溶解、造粒、糖衣錠作製、研和、乳化、カプセル化、包括化または凍結乾燥の従来のプロセスによって製造することができる。
従って、本発明に従って使用される医薬組成物は、活性化合物を、製薬上使用され得る製剤に加工することを容易にする賦形剤および補助剤を含む１以上の生理的に許容され得る担体を使用して従来の様式で製剤することができる。適正な製剤は、選ばれた投与経路によって決まる。
注射の場合、本発明の薬剤は、水溶液剤において、好ましくは、生理的に適合し得る緩衝液（例えば、ハンクス溶液、リンゲル溶液、または生理的な生理的食塩水緩衝液など）において製剤され得る。経粘膜投与の場合、透過させられるバリアに対して適切な浸透剤が製剤において使用される。そのような浸透剤はこの分野では一般に知られている。
経口投与の場合、本発明の化合物は、活性化合物を、この分野で広く知られている製薬上許容される担体と組み合わせることによって容易に製剤され得る。そのような担体は、本発明の化合物が、処置される患者によって経口摂取される錠剤、丸薬、糖衣剤、カプセル、液剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして製剤されることを可能にする。経口使用される医薬製剤は、活性化合物を固体の賦形剤と一緒にし、得られた混合物を場合により粉砕し、その後、錠剤または糖衣剤コアを得るために、所望する場合には好適な補助剤を加えた後、顆粒の混合物を加工することによって得ることができる。好適な賦形剤は、具体的には、ラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールを含む糖；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボメチルセルロースなど；および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの充填剤である。所望する場合、架橋されたポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩（アルギン酸ナトリウムなど）などの崩壊剤を加えることができる。
糖衣剤コアには、好適なコーティングが施される。この目的のために、高濃度の糖溶液を使用することができ、この場合、糖溶液は、場合により、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに好適な有機溶媒または溶媒混合物を含有し得る。色素または顔料が、活性化合物の量を明らかにするために、または活性化合物の量の種々の組合せの特徴を示すために、錠剤または糖衣剤コーティングに添加され得る。
経口使用され得る医薬製剤には、ゼラチンから作製されたプッシュ・フィット型カプセル、ならびにゼラチンおよび可塑剤（グリセロールまたはソルビトールなど）から作製された柔らかい密閉カプセルが含まれる。プッシュ・フィット型カプセルは、充填剤（ラクトースなど）、結合剤（デンプンなど）、および／または滑剤（タルクまたはステアリン酸マグネシウムなど）、ならびに場合により安定化剤との混合で有効成分を含有し得る。軟カプセルでは、活性化合物を好適な液体（脂肪油、流動パラフィンまたは液状のポリエチレングリコールなど）に溶解または懸濁させることができる。さらに、安定化剤を加えることができる。経口投与される製剤はすべて、そのような投与のために好適な投薬形態でなければならない。
口内投与の場合、組成物は、従来の様式で製剤された錠剤またはトローチの形態を取ることができる。
吸入による投与の場合、本発明に従って使用される化合物は、好適な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の好適なガスの使用により加圧パックまたはネブライザーからのエアロゾルスプレーの形態で簡便に送達される。加圧されたエアロゾルの場合、用量単位は、計量された量を送達するためのバルブを備えることによって決定することができる。吸入器または通気装置において使用される、例えば、ゼラチン製のカプセルおよびカートリッジで、本発明の化合物および好適な粉末基剤（ラクトースまたはデンプンなど）の粉末混合物を含有するカプセルおよびカートリッジを製剤することができる。
本発明の化合物は、注射による非経口投与のために、例えば、ボーラス注射または連続注入による非経口投与のために製剤することができる。注射用製剤は、保存剤が添加された、例えば、アンプルまたは複数用量容器における単位投薬形態で提供され得る。組成物は、油性媒体または水性媒体における懸濁液または溶液または乳濁液のような形態を取ることができ、そして懸濁剤、安定剤および／または分散剤などの製剤を含有することができる。
非経口投与される医薬製剤には、水溶性形態での活性化合物の水溶液が含まれる。さらに、活性化合物の懸濁液を適切な油性の注射用懸濁液として調製することができる。好適な親油性の溶媒または媒体には、脂肪油（ゴマ油など）、または合成脂肪酸エステル（オレイン酸エチルなど）、またはトリグリセリド、またはリポソームが含まれる。水性の注射用懸濁液は、懸濁液の粘度を増大させる物質、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトールまたはデキストランなどを含有することができる。場合により、懸濁液はまた、高濃度溶液の調製を可能にするために化合物の溶解性を増大させる好適な安定化剤または薬剤を含有することができる。
あるいは、有効成分は、使用前に好適な媒体（例えば、滅菌された発熱物質を含まない水）を用いて構成される粉末形態にすることができる。
本発明の化合物はまた、例えば、従来の坐薬基剤（カカオ脂または他のグリセリドなど）を含有する坐薬または停留浣腸剤などの直腸用組成物に製剤することができる。
前記に記載された製剤に加えて、本発明の化合物はまた、デポ剤調製物として製剤することができる。そのような長期間作用する製剤は、（例えば、皮下または筋肉内に、あるいは筋肉注射による）埋め込みによって投与することができる。従って、例えば、本発明の化合物は、好適なポリマー物質または疎水性物質（例えば、許容され得るオイルにおける乳濁液として）またはイオン交換樹脂とともに、あるいは難溶性の誘導体として、例えば、難溶性の塩として製剤することができる。
本発明の疎水性化合物に対する医薬担体の例には、ベンジルアルコール、非極性界面活性剤、水混和性有機ポリマーおよび水相を含む共溶媒系がある。この共溶媒系はＶＰＤ共溶媒系であり得る。ＶＰＤは、無水エタノールにおいて所定体積にされた、３％（ｗ／ｖ）のベンジルアルコール、８％（ｗ／ｖ）の非極性界面活性剤ポリソルベート８０、および６５％（ｗ／ｖ）のポリエチレングリコール３００からなる溶液である。このＶＰＤ共溶媒系（ＶＰＤ：５Ｗ）は、５％デキストロース水溶液で１：１希釈されたＶＰＤからなる。この共溶媒系は疎水性化合物を十分に溶解し、自身は、全身投与時に低い毒性をもたらす。当然のことではあるが、共溶媒系の割合は、その溶解性特性および毒性特性を消失させない限りにおいて、かなりの範囲で変動させることができる。さらに、共溶媒の構成成分を変化させることができる。例えば、他の低毒性の非極性界面活性剤をポリソルベート８０の代わりに使用することができる；ポリエチレングリコールの分画サイズを変化させることができる；他の生体適合性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）がポリエチレングリコールの代わりになり得る；また、他の糖または多糖類がデキストロースの代用になり得る。
あるいは、疎水性の医薬化合物に対する他の送達システムを用いることができる。リポソームおよび乳濁液が、疎水性薬物に対する送達媒体または送達担体の広く知られている例である。毒性がより大きいという代償を通常の場合には払うが、ある種の有機溶媒（例えば、ジメチルスルホキシドなど）もまた用いることができる。さらに、本発明の化合物は、治療剤を含有する固体の疎水性ポリマーの半透過性マトリックスなどの持続放出システムを使用して送達することができる。様々な持続放出物質が当業者によって明らかにされ、かつ広く知られている。持続放出カプセルは、その化学的性質に応じて、１００日超までの数週間にわたって化合物を放出することができる。治療試薬の化学的性質および生物学的安定性に応じて、タンパク質安定化のためのさらなる方法を用いることができる。
医薬組成物はまた、好適な固相またはゲル相の担体または賦形剤を含むことができる。そのような担体または賦形剤の例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチンおよびポリマー（ポリエチレングリコールなど）が含まれるが、これらに限定されない。
本発明の化合物の多くは、製薬上適合し得る対イオンとの塩として提供され得る。製薬上適合し得る塩は、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸など（これらに限定されない）を含む多くの酸を用いて形成され得る。塩は、その対応する遊離塩基形態よりも、水性溶媒または他のプロトン性溶媒において大きな溶解性を有する傾向がある。
有効用量
本発明における使用のために好適な医薬組成物には、有効成分が、その所期の目的を達成するための効果的な量で含有される組成物が含まれる。より詳細には、治療有効量は、処置されている対象者にある症状の進行を予防するために、またはそのような症状を緩和するために効果的である量を意味する。有効量の決定は十分に当業者の能力の範囲内である。
本発明の方法において使用される化合物のいずれについても、治療有効用量は、最初に、細胞アッセイから推算することができる。例えば、用量は、細胞アッセイで決定されるようなＩＣ５０（すなわち、ある種のタンパク質キナーゼ活性の最大半量の阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む循環濃度範囲を達成するために、細胞モデルおよび動物モデルにおいて定めることができる。場合により、３％から５％の血清アルブミンの存在下でＩＣ５０を決定することは適切である。これは、そのような測定により、化合物に対する血漿タンパク質の結合効果が近似されるからである。そのような情報は、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定するために使用することができる。さらに、全身投与される最も好ましい化合物は、血漿中で安全に達成され得るレベルで無傷な細胞におけるタンパク質キナーゼのシグナル変換を効果的に阻害する。
治療有効用量は、患者における症状の改善をもたらす化合物のそのような量を示す。そのような化合物の毒性および治療効力は、例えば、最大耐容量（ＭＴＤ）およびＥＤ５０（５０％最大応答のための有効用量）を決定するための細胞培養または実験動物における標準的な製薬手順によって求めることができる。毒性作用と治療効果との間の用量比が治療指数であり、これはＭＴＤとＥＤ５０との間の比として表すことができる。大きい治療指数を示す化合物が好ましい。これらの細胞アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトにおいて使用される用量の範囲を定める際に使用することができる。そのような化合物の用量は、好ましくは、毒性をほとんど伴わないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。用量は、用いられる投薬形態および使用される投与経路に応じてこの範囲内で変動し得る。正確な製剤、投与経路および用量は、患者の状態を考慮して個々の医師が選ぶことができる（例えば、Fingl et al., 1975, ″The Pharmacological Basis of Therapeutics″, Ch.1pl参照）。危機的状況の処置では、ＭＴＤに近い急激なボーラス剤または注入剤の投与が、迅速な応答を得るために要求される場合がある。
用量および投薬間隔は、キナーゼ調節作用または最小有効濃度（ＭＥＣ）を維持するだけの血漿レベルの活性成分を提供するために個々に調節することができる。ＭＥＣは、それぞれの化合物について変化するが、インビトロデータから、例えば、本明細書中に記載されるアッセイを使用して５０％から９０％のタンパク質キナーゼ阻害を達成するために必要な濃度から推定することができる。ＭＥＣを達成するために必要な用量は個々の特性および投与経路によって決まる。しかしながら、ＨＰＬＣアッセイまたはバイオアッセイを使用して、血漿濃度を測定することができる。
投薬間隔もまた、ＭＥＣ値を使用して決定することができる。化合物は、症状の所望される改善が達成されるまで、時間の１０％から９０％について、好ましくは３０％から９０％の間について、最も好ましくは５０％から９０％の間についてＭＥＣを超える血漿レベルを維持する療法を使用して投与されなければならない。局所投与または選択的取り込みの場合、薬物の有効局所濃度は血漿濃度と関連づけられなくてもよい。
組成物の投与量は、当然のことではあるが、治療されている被験者、被験者の体重、病気の重度、投与様式、および処方医の判断によって決まる。
パッケージング
組成物は、所望される場合、有効成分を含有する単位投薬形態物を１以上含有するパックまたは投薬装置において提供され得る。パックは、例えば、ブリスターパックなどの金属ホイルまたはプラスチックホイルを含むことができる。パックまたは投薬装置には、投与のための説明書が添付されていても良い。適合し得る医薬担体に製剤された本発明の化合物を含む組成物はまた、製剤され、適切な容器に入れ、適応状態の処置に関してラベル表示することができる。
一部の製剤では、例えば、流体エネルギー粉砕によって得られるような非常に小さい粒径の粒子の形態で本発明の化合物を使用することが有益であり得る。
医薬組成物を製造する際の本発明の化合物の使用が下記の説明によって例示される。この説明において、用語「活性化合物」は、本発明の化合物を表しているが、具体的には、前記の実施例のいずれかの最終生成物である化合物を表している。
ａ）カプセル剤
カプセル剤の調製において、１０重量部の活性化合物および２４０重量部のラクトースを粉砕し、混合することができる。混合物は、活性化合物の単位用量または単位用量の一部を各カプセルが含有する硬ゼラチンカプセルに充填することができる。
ｂ）錠剤
錠剤を、下記の成分から調製することができる。
活性化合物：１０重量部
ラクトース：１９０重量部
トウモロコシデンプン：２２重量部
ポリビニルピロリドン：１０重量部
ステアリン酸マグネシウム：３重量部。
活性化合物、ラクトース、およびデンプンの一部を粉砕し、混合することができる。得られた混合物をポリビニルピロリドンのエタノール溶液とともに造粒することができる。乾燥顆粒を、ステアリン酸マグネシウムおよび残りのデンプンと混合することができる。次いで、混合物を打錠機で圧縮成形して、活性化合物の単位用量または単位用量の一部をそれぞれが含有する錠剤を得る。
ｃ）腸溶コーティング錠
錠剤は、上記の（ｂ）に記載される方法によって調製することができる。錠剤は、２０％酢酸フタル酸セルロースおよび３％フタル酸ジエチルをエタノール：ジクロロメタン（１：１）に含む溶液を使用して従来の様式で腸溶コーティングすることができる。
ｄ）坐薬
坐薬の調製において、１００重量部の活性化合物を１３００重量部のトリグリセリド坐薬基剤に組み込むことができる。この混合物は、治療有効量の活性化合物をそれぞれが含有する坐薬に成形することができる。
本発明の組成物において、活性化合物は、所望される場合、他の適合し得る薬理活性成分と組み合わせることができる。例えば、本発明の化合物は、本明細書に記載の疾患または状態を治療することが知られている別の治療薬との併用で投与することができる。例えば、ＶＥＧＦまたはアンギオポイエチン類の産生を阻害または防止するか、あるいは、ＶＥＧＦまたはアンギオポイエチン類に対する細胞内応答を弱めるか、あるいは、細胞内のシグナル伝達を阻止するか、あるいは、血管の過透過性を阻害するか、あるいは、炎症を軽減させるか、あるいは、浮腫または血管新生の形成を阻害または防止する１以上の別の医薬との併用である。本発明の化合物は、どの投与経過が適切であるとしても、別の医薬の前に、または別の医薬に続いて、または別の医薬と同時に投与することができる。さらなる医薬には、抗浮腫性ステロイド、ＮＳＡＩＤＳ、ｒａｓ阻害剤、抗ＴＮＦ剤、抗ＩＬ−１剤、抗ヒスタミン剤、ＰＡＦ拮抗剤、ＣＯＸ−１阻害剤、ＣＯＸ−２阻害剤、ＮＯ合成酵素阻害剤、Ａｋｔ／ＰＴＢ阻害剤、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤、ＰＫＣ阻害剤、ＰＩ３阻害剤、カルシノイリン阻害剤および免疫抑制剤などがあるが、これらに限定されない。本発明の化合物および別の医薬は相加的または相乗的のいずれかで作用する。従って、血管形成、血管過透過性を阻害し、および／または浮腫の形成を阻害する物質のそのような組合せを投与することにより、いずれかの物質を単独で投与するよりも大きな軽減が、過増殖性障害、血管形成、血管過透過性または浮腫の有害な作用からもたらされ得る。悪性障害の処置では、抗増殖性もしくは細胞傷害性の化学療法剤または放射線との組合せが、本発明の範囲に含まれる。
本発明はまた、医薬品としての式Ｉの化合物の使用を含む。
本発明のさらに別の態様により、哺乳動物（特にヒト）における血管過透過性、血管形成に依存した障害、増殖性疾患および／または免疫系の障害を処置するための医薬品を製造する際の式Ｉの化合物またはその塩の使用が提供される。
本発明はまた、式Ｉの化合物の治療有効量を哺乳動物（特にヒト）に投与することを含む、血管過透過性、不適切な血管新生、増殖性疾患および／または免疫系の障害を処置する方法を提供する。
生物アッセイ
本明細書に記載されているか、当業界で記載されている１以上のタンパク質キナーゼを阻害する上での化合物のインビトロでの能力は、下記に詳しく記載される手順によって測定することができる。
化合物の能力は、対照に対する試験化合物による外部基質（例えば、合成ペプチド（Z. Songyang et al., Nature. 373: 536-539））のリン酸化阻害量によって測定することができる。
バキュロウイルス系を使用するＫＤＲチロシンキナーゼの産生
ヒトＫＤＲの細胞内ドメインに対するコード配列（ａａ７８９〜１３５４）を、ＨＵＶＥＣ細胞から単離されたｃＤＮＡを使用してＰＣＲによって得た。ポリＨｉｓ６配列もまたこのタンパク質のＮ末端に導入した。このフラグメントをＸｂａＩ部位およびＮｏｔＩ部位においてトランスフェクションベクターｐＶＬ１３９３にクローニングした。組換えバキュロウイルス（ＢＶ）を、バキュロゴールド（BaculoGold）トランスフェクション試薬（PharMingen）を使用して同時トランスフェクションによって得た。組換えＢＶをプラーク精製し、ウエスタン分析によって確認した。タンパク質を産生させるために、ＳＦ−９細胞をＳＦ−９００−ＩＩ培地において２×１０６／ｍｌで増殖させ、０．５プラーク形成単位／細胞（ＭＯＩ）で感染させた。細胞を感染後４８時間で集めた。
ＫＤＲの精製
（Ｈｉｓ）６ＫＤＲ（ａａ７８９〜１３５４）を発現するＳＦ−９細胞を、１リットルの細胞培養から得られた細胞ペレットに５０ｍｌのトリトンＸ−１００溶解緩衝液（２０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ８．０）、１３７ｍＭＮａＣｌ、１０％グリセロール、１％トリトンＸ−１００、１ｍＭＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍｌアプロチニン、１μｇ／ｍｌロイペプチン）を加えることによって溶解した。溶解液を、ＳｏｒｖａｌＳＳ−３４ローターにおいて４℃で３０分間、１９，０００ｒｐｍで遠心分離した。細胞溶解液を、５０ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、０．３ＭＮａＣｌで平衡化された５ｍＬのＮｉＣｌ２キレート化セファロースカラムに加えた。ＫＤＲを、０．２５Ｍのイミダゾールを含有する同じ緩衝液を使用して溶出した。カラム画分を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、およびキナーゼ活性を測定するＥＬＩＳＡ分析（下記）を使用して分析した。精製されたＫＤＲは、２５ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、２５ｍＭＮａＣｌ、５ｍＭＤＴＴからなる緩衝液に交換し、−８０℃で保存した。
ヒトＴｉｅ−２キナーゼの産生および精製
ヒトＴｉｅ−２の細胞内ドメインに対するコード配列（ａａ７７５〜１１２４）を、ヒト胎盤から単離されたｃＤＮＡをテンプレートとして使用してＰＣＲによって得た。ポリＨｉｓ６配列をＮ末端に導入して、この構築物をＸｂａＩ部位およびＮｏｔＩ部位においてトランスフェクションベクターｐＶＬ１９３９にクローニングした。組換えＢＶを、ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄトランスフェクション試薬（PharMingen）を使用して同時トランスフェクションによって得た。組換えＢＶをプラーク精製し、ウエスタン分析によって確認した。タンパク質を産生させるために、ＳＦ−９昆虫細胞をＳＦ−９００−ＩＩ培地において２×１０６／ｍｌで増殖させ、０．５のＭＯＩで感染させた。スクリーニングにおいて使用されるＨｉｓ標識キナーゼの精製は、ＫＤＲについて記載された精製と同様であった。
ヒトＦｌｔ−１チロシンキナーゼの産生および精製
バキュロウイルス発現ベクターｐＶＬ１９３９（Pharmingen, Los Angeles, Ca.）を使用した。ポリＨｉｓ６をコードするヌクレオチド配列を、ヒトＦｌｔ−１の完全な細胞内キナーゼドメイン（アミノ酸７８６〜１３３８）をコードするヌクレオチド領域の５′に置いた。このキナーゼドメインをコードするヌクレオチド配列は、ＨＵＶＥＣ細胞から単離されたｃＤＮＡライブラリーを使用してＰＣＲによって得られた。ヒスチジン残基によって、ＫＤＲおよびＺＡＰ７０に対する精製と類似する様式でのタンパク質のアフィニティー精製が可能となった。ＳＦ−９昆虫細胞を０．５の感染多重度で感染させ、感染後４８時間で集めた。
ＥＧＦＲチロシンキナーゼの入手先
ＥＧＦＲをシグマ社（Sigma）（カタログ番号Ｅ−３６４１；５００ユニット／５０μｌ）から購入し、ＥＧＦリガンドをオンコジーン・リサーチ・プロダクツ／カルバイオケム社（Oncogene Research Products/Calbiochem）（カタログ番号ＰＦ０１１−１００）から得た。
ＺＡＰ７０の発現
使用したバキュロウイルス発現ベクターはｐＶＬ１９３９（Pharmingen, Los Angeles, Ca.）であった。アミノ酸Ｍ（Ｈ）６ＬＶＰＲ９Ｓをコードするヌクレオチド配列を、ＺＡＰ７０の全体（アミノ酸１〜６１９）をコードする領域の５′に置いた。ＺＡＰ７０のコード領域をコードするヌクレオチド配列は、ジャーカット不死化Ｔ細胞から単離されたｃＤＮＡライブラリーを使用してＰＣＲによって得られた。ヒスチジン残基によって、タンパク質のアフィニティー精製ができた（下記参照）。ＬＶＰＲ９Ｓ架橋は、酵素からのアフィニティータグの除去を可能にするトロンビンによるタンパク質分解的切断のための認識配列を構成する。ＳＦ−９昆虫細胞を０．５の感染多重度で感染させ、感染後４８時間で集めた。
ＺＡＰ７０の抽出および精製
ＳＦ−９細胞を、２０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ８．０）、１３７ｍＭＮａＣｌ、１０％グリセロール、１％トリトンＸ−１００、１ｍＭＰＭＳＦ、１μｇ／ｍｌロイペプチン、１０μｇ／ｍｌアプロチニン、および１ｍＭオルトバナジン酸ナトリウムからなる緩衝液において溶解した。可溶性溶解物を、５０ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、０．３ＭＮａＣｌで平衡化されたキレート化セファロースＨｉＴｒａｐカラム（Pharmacia）に加えた。融合タンパク質を２５０ｍＭのイミダゾールで溶出した。酵素は、５０ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、５０ｍＭＮａＣｌ、および５ｍＭＤＴＴを含有する緩衝液で保存した。
タンパク質キナーゼの入手先
Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、Ｓｒｃ、Ｂｌｋ、ＣｓｋおよびＬｙｎ、ならびにそれらの切断型を、（例えば、アップステート・テクノロジー社（Upstate Biotechnology Inc., Saranac Lake, N. Y.)およびサンタクルツ・バイオテクノロジー社（Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, Ca.）からの）市販品から入手することができ、あるいは、従来の方法を使用して、公知の天然源または組換え源から精製することができる。
ＰＴＫに対する酵素免疫抗体法アッセイ（ＥＬＩＳＡ）
酵素免疫抗体法アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を、チロシンキナーゼ活性の存在を検出および測定に使用した。ＥＬＩＳＡは、例えば、ボラーらの著作（Voller, et al., 1980, ″Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,″ In: Manual of Clinical Immunology, 2ded., edited by Rose and Friedman, pp 359-371 Am. Soc. of Microbiology, Washington, D. C.）に記載される公知のプロトコルに従って行った。
開示のプロトコルには、特定のＰＴＫに関する活性を測定するための変更を加えた。例えば、ＥＬＩＳＡ実験を行うための好ましいプロトコルを下記に示す。受容体ＰＴＫファミリーの他のメンバーならびに非受容体チロシンキナーゼについて化合物の活性を測定するためのこれらのプロトコルの変更は、十分に当業者の能力の範囲内である。阻害剤の選択性を測定するために、汎用ＰＴＫ基質（例えば、ポリ（Ｇｌｕ４Ｔｙｒ）のランダム共重合体、２００００から５００００のＭＷ）を、アッセイにおける見かけのＫｍの約２倍の濃度でＡＴＰ（代表的には、５μＭ）と一緒に用いた。
下記の手順を、ＫＤＲ、Ｆｌｔ−１、Ｆｌｔ−４／ＶＥＧＦＲ−３、Ｔｉｅ−１、Ｔｉｅ−２、ＥＧＦＲ、ＦＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＩＧＦ−１−Ｒ、ｃ−Ｍｅｔ、Ｌｃｋ、Ｂｌｋ、Ｃｓｋ、Ｓｒｃ、Ｌｙｎ、ｆｇｒ、ＦｙｎおよびＺＡＰ７０のチロシンキナーゼ活性に対する本発明の化合物の阻害作用をアッセイするために使用した。
緩衝液および溶液
ＰＧＴポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１
粉末を−２０℃で保存する。粉末をリン酸塩緩衝化生理的食塩水（ＰＢＳ）に溶解させて５０ｍｇ／ｍｌ溶液とする。１ｍＬずつに小分けして、−２０℃で保存する。プレートを作製するとき、ＧｉｂｃｏのＰＢＳで２５０μｇ／ｍｌに希釈する。
反応緩衝液：１００ｍＭＨｅｐｅｓ、２０ｍＭＭｇＣｌ２、４ｍＭＭｎＣｌ２、５ｍＭＤＴＴ、０．０２％ＢＳＡ、２００μＭＮａＶＯ４、ｐＨ７．１０
ＡＴＰ：１００ｍＭの溶液を−２０℃で保存する。水で２０μＭに希釈する。
洗浄緩衝液：０．１％のＴｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ
抗体希釈緩衝液：０．１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むＰＢＳ
ＴＭＢ基質：使用直前にＴＭＢ基質および過酸化物溶液を９：１で混合するか、またはＮｅｏｇｅｎから得られるＫ−Ｂｌｕｅ基質を使用する。
停止溶液：１Ｍリン酸
手順
１．プレート作製
ＰＧＴ原液（５０ｍｇ／ｍｌ、凍結）をＰＢＳで２５０μｇ／ｍｌの濃度に希釈する。コーニング（Corning）の変性平底高親和性ＥＬＩＳＡプレート（コーニング＃２５８０５−９６）のウエルあたり１２５μｌを加える。１２５μｌのＰＢＳをブランクウエルに加える。シール用テープで覆い、３７℃で一晩インキュベーションする。２５０μｌの洗浄緩衝液で１回洗浄し、３７℃の乾燥インキュベーターで約２時間乾燥する。
２．チロシンキナーゼ反応
・２０％のＤＭＳＯを含む水において４倍濃度で阻害剤溶液を調製する。
・反応緩衝液を調製する。
・所望するユニット数が５０μｌに存在するように酵素溶液を調製する。例えば、ＫＤＲの場合、反応におけるウエルあたり合計で５０ｎｇとするために１ｎｇ／μｌにする。氷上で貯蔵する。
・４倍ＡＴＰ溶液を１００ｍＭ原液から水で２０μＭにする。氷上で貯蔵する。
・ウエルあたり５０μｌの酵素溶液を加える（代表的には、キナーゼの比活性に応じてウエルあたり５ｎｇから５０ｎｇの酵素）。
・２５μｌの４倍阻害剤を加える。
・阻害剤アッセイのために２５μｌの４倍ＡＴＰを加える。
・室温で１０分間インキュベーションする。
・ウエルあたり５０μｌの０．０５ＮＨＣｌを加えることによって反応を停止させる。
・プレートを洗浄する。
＊＊反応のための最終濃度：５μＭＡＴＰ、５％ＤＭＳＯ。
３．抗体結合
・ＰＹ２０−ＨＲＰ（Pierce）抗体（ホスホチロシン抗体）の１ｍｇ／ｍｌ小分けサンプルを、０．１％のＢＳＡを含むＰＢＳで、２段階の希釈（１００倍、次いで２００倍）によって５０ｎｇ／ｍｌに希釈する。
・ウエルあたり１００μｌのＡｂを加える。室温で１時間インキュベーションする。４℃で１時間インキュベーションする。
・プレートを４回洗浄する。
４．発色反応
・ＴＭＢ基質を調製し、ウエルあたり１００μｌを加える。
・６５０ｎｍにおけるＯＤを、０．６に達するまでモニタリングする。
・１Ｍリン酸で停止させる。プレート読み取り機で振とうする。
・ＯＤを直ちに４５０ｎｍで読み取る。
最適なインキュベーション時間および酵素反応条件は、酵素調製物によりわずかに変化し、それぞれのロットについて経験的に決定される。
Ｌｃｋの場合、使用された反応緩衝液は、類似するアッセイ条件のもと、１００ｍＭＭＯＰＳＯ（ｐＨ６．５）、４ｍＭＭｎＣｌ２、２０ｍＭＭｇＣｌ２、５ｍＭＤＴＴ、０．２％ＢＳＡ、２００ｍＭＮａＶＯ４であった。
式Ｉの化合物は、式Ｉの化合物によって阻害される特定されたタンパク質チロシンキナーゼ（これには、本明細書中に述べられていないタンパク質チロシンキナーゼが含まれる）および未だ特定されていないタンパク質チロシンキナーゼの両方が関与する疾患を処置する上で治療上有用なものとなり得る。本明細書に例示のいずれの化合物も、５０μＭ以下の濃度でＦＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＫＤＲ、Ｔｉｅ−２、Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、Ｂｌｋ、ＬｙｎまたはＳｃｒを大きく阻害する。本発明の化合物の中には、５０μＭ以下の濃度でｃｄｃ２（ｃｄｋ１）などの他ののチロシンまたはセリン／トレオニンキナーゼを大きく阻害するものもある。
Ｃｄｃ２の入手先
ヒト組換え酵素およびアッセイ緩衝液は市販品（New England Biolabs, Beverly, M.A., USA）を入手することができ、あるいは、従来の方法を使用して知られている天然源または組換え源から精製することができる。
Ｃｄｃ２アッセイ
使用したプロトコルは、購入された試薬とともに提供されるプロトコルであるが、若干の変更を加えた。すなわち、反応は、新しく調製された３００μＭのＡＴＰ（３１μＣｉ／ｍｌ）および３０μｇ／ｍｌのＩＩＩｓｓ型ヒストンの最終濃度が補充された、５０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１００ｍＭＮａＣｌ、１ｍＭＥＧＴＡ、２ｍＭＤＴＴ、０．０１％Ｂｒｉｊ、５％ＤＭＳＯ、および１０ｍＭＭｇＣｌ２からなる緩衝液（市販の緩衝液）において行った。数ユニットの酵素を含有する８０μＬの反応体積を、阻害剤の存在下または非存在下に２５℃で２０分間処理した。反応は、１２０μＬの１０％酢酸を加えることによって停止した。混合物をホスホセルロース紙にスポットし、その後、５分間の洗浄を、それぞれが７５ｍＭのリン酸で３回行うことによって、取り込まれなかった標識から基質を分離した。カウント数を、液体シンチラントの存在下でベータカウンターによって測定した。
本発明のある種の化合物は、５０μＭ以下の濃度でｃｄｃ２を大きく阻害する。
ＰＫＣキナーゼの入手先
ＰＫＣの触媒活性サブユニットは市販品（Calbiochem）を入手することができる。
ＰＫＣキナーゼアッセイ
放射活性キナーゼアッセイを、発表された手順に従って用いた（Yasuda, I., Kirshimoto, A., Tanaka, S., Tominaga, M., Sakurai, A., Nishizuka, Y., Biochemical and Biophysical Research Communication 3: 166,1220-1227 (1990)）。すなわち、すべての反応を、５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭＭｇＣｌ２、２ｍＭＤＴＴ、１ｍＭＥＧＴＡ、１００μＭＡＴＰ、８μＭペプチド、５％ＤＭＳＯ、および３３Ｐ−ＡＴＰ（８Ｃｉ／ｍＭ）からなるキナーゼ緩衝液において行った。化合物および酵素を反応容器で混合し、ＡＴＰおよび基質の混合物の添加によって反応を開始した。１０μＬの停止緩衝液（５ｍＭＡＴＰを含む７５ｍＭリン酸）を加えることによって反応を停止させた後、混合物の一部をホスホセルロースフィルターにスポットした。スポットされたサンプルを、室温において５分間から１５分間、７５ｍＭリン酸で３回洗浄した。放射能の取り込みを液体シンチレーション計数によって定量した。
Ｅｒｋ２酵素の入手先
組み換えマウス酵素およびアッセイ緩衝液は市販品（New England Biolabs, Beverly MA. USA）を入手することができ、あるいは、従来の方法を使用して知られている天然源または組換え源から精製することができる。
Ｅｒｋ２酵素アッセイ
すなわち、反応は、供給者によって推奨される条件のもと、新しく調製された１００μＭのＡＴＰ（３１μＣｉ／ｍｌ）および３０μＭのミエリン塩基性タンパク質が補充された、５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１ｍＭＥＧＴＡ、２ｍＭＤＴＴ、０．０１％Ｂｒｉｊ、５％ＤＭＳＯ、および１０ｍＭＭｇＣｌ２からなる緩衝液（市販の緩衝液）において行った。反応体積、および取り込まれた放射能のアッセイ方法は、ＰＫＣアッセイ（上記）について記載される通りとした。
Ｔ細胞の活性化に関するインビトロモデル
***促進因子または抗原によって活性化されたとき、Ｔ細胞は、その後の増殖期を支持する増殖因子であるＩＬ−２を分泌するよう誘発される。従って、一次Ｔ細胞もしくは適切なＴ細胞株からのＩＬ−２の産生または一次Ｔ細胞もしくは適切なＴ細胞株の細胞増殖のいずれかをＴ細胞の活性化の代用として測定することができる。これらのアッセイはともに文献に詳しく記載されており、それらのパラメーターが（Current Protocols in Immunology, Vol 2, 7.10.1-7.11.2）詳しく報告されている。
すなわち、Ｔ細胞を、同種の刺激体細胞との同時培養によって、すなわち、一方向の混合リンパ球反応と呼ばれるプロセスによって活性化することができる。応答体および刺激体の末梢血単核細胞を、製造者の説明書に従ってＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ勾配（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）によって精製する。刺激体細胞は、マイトマイシンＣ（Ｓｉｇｍａ）またはγ線照射による処理によって***不活性化する。応答体および刺激体の細胞を、試験化合物の存在下または非存在下、２：１の比率で同時培養する。代表的には、１０５個の応答体細胞を５×１０４個の刺激体細胞と混合し、Ｕ字型底のマイクロタイタープレート（Costar Scientific）に置床する（２００μｌの体積）。細胞を、熱不活化ウシ胎児血清（Hyclone Laboratories）または男性ドナー由来のプールされたヒトＡＢ血清のいずれか、５×１０−５Ｍの２−メルカプトエタノール、および０．５％のＤＭＳＯが補充されたＲＰＭＩ１６４０で培養する。培養物は、回収の１日前（代表的には３日目）に、０．５μＣｉの３Ｈ−チミジン（Amersham）でパルス処理する。培養物を集め（ベータプレートハーベスタ、Wallac）、同位体の取り込みを液体シンチレーション（ベータプレート、Wallac）によって評価する。
同じ培養系を、ＩＬ−２の産生を測定することによりＴ細胞の活性化を評価するのに使用することができる。培養開始後１８時間から２４時間で、上清を取り出し、ＩＬ−２の濃度を製造者の説明書に従ってＥＬＩＳＡ（R and D Systems）によって測定する。
ＨＵＶＥＣ ＫＤＲ自己リン酸化アッセイプロトコール
凍結原液からのＨＵＶＥＣ細胞の培養
１．ＨＵＶＥＣ細胞のバイアル（クローンティクス（Clonetics）、ｃｃ−２５１９）１本を、完全（全ての補給成分が加えられた）ＥＢＭ培地（クローンティクス、ｃｃ−４１４３）１０ｍＬの入った１００ｍｍプレート１枚（組織培養用のファルコン）中に解凍した。これを継代１（Ｐ１）とする。
２．翌日、培地を交換する。
３．２〜３日後、プレートは９０〜１００％集密度となっているはずである。１００ｍｍプレートに分け入れる（Ｐ２）。分配には、クローンティクスのトリプシンまたは希釈した本発明者らのトリプシン／ＥＤＴＡ （ギブコ（Gibco）、２５５００−０５６） １： ５のＰＢＳ１Ｘ溶液のいずれかを用い、プレート当たり２ｍＬを加え、顕微鏡で細胞を観察する。ほとんどが１分以内に浮き上がる。
４．３〜４日後、３または４枚のプレートを、１２〜１４枚の１００ｍｍプレートに分ける（Ｐ３）。
５．このようにして細胞の継代培養をＰ８まで続ける。
ＨＵＶＥＣ ＶＥＧＦ誘発自己リン酸化
１．Ｐ３の平板培養から３〜４日後、プレートは９０〜１００％集密度となっているはずである。
２．アッセイに用いる２枚もしくは３枚のプレートを除き、全てを終夜にわたって血清飢餓状態とする（非飢餓プレートは次の継代培養に用いる）。
血清飢餓プレートについて、培地を吸引除去し；ＰＢＳ５〜１０ｍＬで洗い；ＥＢＭ基本培地（補充成分を添加せず）を加える。
３．アッセイ当日：使用直前に、全ての薬剤希釈液およびＲＩＰＡ緩衝液を調製する。
処理条件；
（ａ）０＝未処理、血清飢餓、
（ｂ）１０′ＶＥＧＦ（１×）−５０ｎｇ／ｍＬで２ｍＬ
＊ＶＥＧＦは、１倍ＶＥＧＦ用に１０μｇ／ｍＬＰＢＳ／１％ＢＳＡで、少量サンプル１００μＬ中にて−８０℃の冷凍庫で保存し；２倍ＶＥＧＦ用にＥＢＭ基本培地２０ｍＬに少量サンプル１００μＬを加え；ＥＢＭ基本培地１０ｍＬに１００μＬを加える。
（ｃ）阻害薬
（１）２５Ｍまたは５Ｍの薬剤希釈液２ｍＬを加えて３７℃で１時間経過させ、
（２）１時間後、２倍ＶＥＧＦ２ｍＬを加えて１０分間経過させる。
（ｄ）吸引除去し、ＰＢＳ＋１ｍＭオルトバナジウム酸Ｎａ５〜１０ｍＬで洗う。
（ｅ）プレートをＲＩＰＡ＊＊５００μＬ中で溶解させ、掻き取り、１５分間氷上に乗せる。
（ｆ）１５分後、ラベルを貼ったエッペンドルフ管に入れ、氷上での溶解を２〜４時間続ける。
（ｇ）１４０００ｒｐｍで３０分間遠心して、核をペレット化する。
（ｈ）溶解物を新鮮な管に注ぎ出す。
（ｉ）ＢＣＡプロテイン・デターミネーション（BCA Protein Determination；ピアス（Pierce）によるキット）用に１０μＬを取る。この時点で、（免役）沈澱またはウェスタンブロットの準備ができるまで、冷凍することができる。
（ｊ）（溶解物の）３倍容量氷冷エタノールを加えることで、タンパク質沈澱を行う。サンプルを冷凍庫に終夜入れる。サンプルは、使用準備が整うまでこのようにして保存することができる。
４．ゲルを調べる当日
（ａ）サンプルを１４０００ｒｐｍにて４℃で３０分間遠心する。
（ｂ）上清を注ぎ出す。ペレットを１〜２時間風乾する。
（ｃ）２倍サンプル緩衝液＋２Ｍｅ（シグマＭ７１５４）を加える。
（ｄ）サンプルを５分間沸騰させる。
（ｅ）ゲルを調べる。
＊＊調整ＲＩＰＡ緩衝液。
最終濃度
５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌｐＨ７．５
１５０ｍＭ ＮａＣｌ
１％ＮＰ−４０
０．２５％ＮａＤＯＣ （デオキシコリン酸）（シグマＤ４２９７）
１ｍＭ ＥＤＴＡ（シグマＥ１６４４）
１０００ｍＬとなるまでの量。
使用直前に加える。
Figure 2007520559
ＶＥＧＦ誘発細胞内カルシウムフラックスアッセイ
プロトコール（およびカウンタースクリーン（Counterscreen）刺激）
緩衝液
緩衝液Ａ：ハンクス液（フェノールレッドを含まないギブコ／ＢＲＬ＃１４１７５−０９５）＋１％Ｈｅｐｅｓ１Ｍ（最終濃度１０ｍＭ）（ギブコ／ＢＲＬ＃１５６３０−０８０）
緩衝液Ｂ：緩衝液Ａ＋５％ＢＳＡ（シグマ＃Ａ−７０３０）
緩衝液Ｃ：緩衝液Ｂ＋１０μｇ／ｍＬＤＮａｓｅ（シグマ＃Ｄ−４５２７）
ＦＡＣＳ緩衝液：０．１％ＢＳＡのＨＢＳＳ溶液（＋０．０１％アジ化ナトリウム（シグマＳ２００２））
ヴェルセン：ギブコ／ＢＲＬ＃１５０４０−０６６
Ｆｌｕｏ４／ＡＭ：５μＭ（モレキュラー・プローブス（Molecular Probes）＃Ｆ−１４２０１）の緩衝液Ａ＋０．０２５％Ｐ１２７（＃Ｐ−３０００モレキュラー・プローブス）
ＨＵＶＥＣ細胞：プールしたドナー（クローティクス＃ｃｃ−２５１９）
ＥＣ培地：ＥＢＭ培地（クローティクス＃ｃｃ−３１２１）＋補給成分（クローンティクス＃ｃｃ−４１３３）
ＶＥＧＦ：Ｒ＆Ｄシステムズ（＃２９３−ＶＥ０５０）１０μｇ／ｍＬ原液のＰＢＳ溶液
イオノマイシン：シグマ（＃１−０６３４）１０ｍＭ ＤＭＳＯ原液
ヒスタミン：シグマ（＃Ｈ−７１２５）１０ｍＭ ＤＭＳＯ原液
トロンビン：シグマ（＃Ｔ−６８８４）１０００単位／ｍＬ ＰＢＳ原液
ウシインシュリン：ギブコ／ＢＲＬ（＃１３００７−０１８）原液のｄＨ２Ｏ液
ＨＵＶＥＣ細胞培養
１．ＨＵＶＥＣ細胞のバイアル１本を、１００ｍｍ組織培養プレート（ファルコン＃３５−３００３）中の完全ＥＣ培地１０ｍＬ中に解凍する。
２．翌日、培地を吸引し、再度補給する。
３．３〜４日後、プレートが８０〜９０％集密度となったら、細胞を分配する。
４．トリプシン／ＥＤＴＡ（ギブコ／ＢＲＬ＃２５２０００−０５６）１：５を、カルシウムおよびマグネシウムを含まないＰＢＳ１Ｘ（ギブコ／ＢＲＬ＃１４１９０−１４４）で希釈する。
５．ＰＢＳで１回洗った細胞を１〜２分間放置する。プレートをフードの縁で叩いて、細胞を放出させる。
６．４１００ｍｍＴＣプレートに分配する。
７．３〜４日後、４〜６個のＴ１５０ｃｍ２フラスコ（コーニング＃４３０８２５）中に広げる。
８．３〜４日ごとに、１個のＴ１５０を５〜６個のＴ１５０ｃｍ２に分ける。
９．解凍から１０継代を経たもののみを用いる。
細胞のＦｌｕｏ４／ＡＭ標識
１．細胞をＰＢＳ１Ｘで洗う。
２．フラスコ当たりヴェルセン５ｍＬを加える。
３．細胞を室温で３〜５分間浮き上がらせる。
４．緩衝液Ａを加えて、細胞容量を倍化する。
５．トリパン・ブルー排除（Trypan Blue Exculsion）法 を用いて細胞をカウントし、細胞１×１０６個／ｍＬが望まれる。
６．染色に必要なミリリットル数を計算し、細胞を遠心によって沈澱させる。５μＭ Ｆｌｕｏ４／ＡＭ＋０．０２５％Ｐ１２７中で細胞１×１０６個／ｍＬまで再懸濁させる。
７．室温で２０分間放置する。
８．等容量の緩衝液Ｂを加え、室温で１０分間インキュベートする。
９．細胞を１０００ｒｐｍで５〜１０分間遠心沈降させる。
１０．吸引する。
１１．細胞は、ＦＡＣＳ緩衝液を加える前に緩衝液Ｃで１回洗浄することができる。ＨＵＶＥＣＳは、この追加段階に耐えられず、放置してもバックグラウンドの問題が大きくならずに済む。
１２．ＦＡＣＳ緩衝液中に細胞１×１０６個／ｍＬで再懸濁する。１ｍＬをファルコン＃３５−２０２５ ５ｍＬポリスチレン丸底管に入れ、ＦＡＣＳ装置で読み取る。
１３．細胞は「生存」しており、約１時間のみ続くことから、全てを調整しておき、細胞を標識する時間までにＦＡＣＳ走査装置を暖めておく。
１４．密度プロット−時間を用い、セルクエスト（Cellquest）ソフトウェアを搭載したベクトン・ディッキンソン（Becton Dickinson）ＦＡＣＳ走査装置を用いて読み取りを行う。
細胞内カルシウムフラックスアッセイ（ＦＡＣＳによる）
１．使用に先だって１０〜２０分間にわたり、ＦＡＣＳ走査装置（ベクトン・ディッキンソン）をオンにして、暖めなければならない。
２．開始前に緩衝液レベルを調べ、緩衝液貯留部は一杯であることが推奨され、廃液容器は空にする。
３．Ｆｌｕｏ４はＦＩＴＣに対して同様の発光を有することから、約３５０ｎｍでＦＬ１で読み取る。
４．Ｏnce ＦＡＣＳ装置が密度プロット（蛍光−時間）について準備できたら、対照の読み取りから開始する。
Figure 2007520559
５．化合物の試験を行うため、実験の直前に１０ｍＭ ＤＭＳＯ原液の緩衝液Ａへの希釈液を調製する。その化合物を管に加えて５分間の前インキュベーションを行ってから、１０〜１５秒間のバックグラウンド読み取りを行う。ＶＥＧＦを加え、３分間読み取る。化合物が阻害する場合は、ＶＥＧＦ単独の場合と同様にシフトは認められない。阻害が認められなくなるまで、用量の力価測定を行う。
６．各非特異的刺激剤と同時に、完全な阻害を与える濃度で化合物を加えることで、特異性試験を行う。ＶＥＧＦを加えることによる次の試験で、ピークフラックスが認められるまで２．５〜３分間読み取りを行い；完全阻害を与える濃度で化合物を加え；２分間読み取りを行ってから、イオノマイシンを加えて、細胞がなおカルシウムをフラックスさせることができるか否かを見る。
ＰＤＧＦ−β細胞アッセイプロトコール
培地：ｃＤＭＥＭ＝ＤＭＥＭ＋１０％ＨＩ−ＦＢＳ＋１％Ｈｅｐｅｓ＋１％Ｌ−グルタミン＋１％非必須アミノ酸＋１％ピルビン酸ナトリウム
・１２ウェルプレート（コスター＃３５１３）中細胞３×１０５／ウェルでＮＩＨ／３Ｔ３細胞を平板培養し、３７℃／５％ＣＯ２で終夜インキュベートする。
・翌日、培地をプレートから吸引し、それを予め加温しておいた（３７℃）ＦＢＳを含まないｃＤＭＥＭと交換することで細胞を血清飢餓状態とし、３７℃／５％ＣＯ２で１時間インキュベートする。
・ＤＭＥＭ＋１％ＤＭＳＯ中で所望の薬剤希釈液を調製して、細胞を覆うための各希釈液１ｍＬを確保する。
・血清飢餓後、各ウェルに連続希釈液を加え、細胞を薬剤とともに３７℃／５％ＣＯ２で３０分間インキュベートする。
・インキュベーション中に、溶解緩衝液を調製する。
ＲＩＰＡ基本（氷上にのせた状態とする）５０ｍＬ
１００ｍＭバナジウム酸塩５００μＬ
１００ｍＭ ＮａＦ ５００μＬ
１ｍｇ／ｍＬロイペプシン５０μＬ
１ｍｇ／ｍＬ Ａ−プロチニン５０μＬ
１ｍｇ／ｍＬペプスタチンＡ ５０μＬ
ＰＭＳＦ（溶解直前に加える）５００μＬ。
・ＰＤＧＦ−ＢＢ （ペプロテク（Peprotech）＃１００−１４Ｂ ２μｇ）を解凍する（これは、１０ｍＭ酢酸２００μＬ中にて１０μｇ／ｍＬとする）。各ウェルについて、１００ｎｇ／ｍＬが必要である（上記溶液５μＬ）。
・薬剤インキュベーション後、５μＬ／ウェルのＰＤＧＦ−ＢＢを加え、３７℃／５％ＣＯ２で１０分間インキュベートする。
・ウェルから注意深く培地を除去し、溶解緩衝液５００μＬを加える。氷上で３０分間混和する。
・溶解物をエッペンドルフ管に入れ、１４０００ｒｐｍで２０分間遠心する。
・ＢＣＡアッセイを行って、タンパク質濃度を測定する。
・タンパク質１５０μｇを新たなエッペンドルフ管に入れ、総容量を５００μＬとする（−２０℃で保存し、次に続けることができる）。
・事前に保証：各管にタンパク質Ｇ／アガロース３０μＬを加え、４℃で３０分間混合する。
・４℃にて１４０００ｒｐｍで２分間遠心する。上清を新たなエッペンドルフ管に入れ、ＩＰ抗体（サンタ・クルツＳＣ−４３２ＰＤＧＦＲ−βウサギポリクローナル）１０μＬを加え、４℃で２時間（または終夜）混合する。
・タンパク質Ｇ／アガロース５０μＬを各管に加え、２時間（または終夜）混合する。
・８００μＬのＰＢＳ＋１ｍＭバナジウム酸塩＋シグマＰＩカクテル（ＰＢＳ５０ｍＬ中、１００ｍＭバナジウム酸塩５００μＬおよびシグマＰＩカクテル５００μＬを加える）で、４℃で２分間にわたり、１４００ｒｐｍでビーズを３回洗浄する。
・最終洗浄後、５倍サンプル緩衝液５０μＬを加え、サンプルを９５℃で５分間加熱する。
・４℃にて２分間、１４０００ｒｐｍで遠心し、上清を新たなエッペンドルフ管に移す（これは、ゲルの試験を行う準備ができるまで−２０℃で保存することができる）。
・各サンプル１０μＬについて８〜１６％Ｔｒｉｓ−グリシンゲル（ノベックス（Novex）１．５ｍｍ、１５ウェル）で試験を行い、２連のゲルを行って等量負荷について調べる。ノベックス１×操作緩衝液を用いて、４０ｍＡ／ゲルで約１．５時間操作する。
・ゲルを移動緩衝液中で平衡とする。
ＭｅＯＨ １６００ｍＬ
１０×Ｔｒｉｓ−グリシン ８００ｍＬ
Ｈ２Ｏ ５６００ｍＬ
・１００ボルト／４℃で１時間にわたり、ＥＣＬハイボンド（hybond）ニトロセルロース膜上に移動させる。
・４℃で終夜ブロックする。
ＰＤＧＦ−βブロットは５％ミルク／ＰＢＳＴ中でブロックする。
ｐ−Ｔｙｒブロットは、３％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ中でブロックする。
・ブロットを、ＰＢＳ／０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０で２回迅速に、５回１時間かけて洗う。
・一次抗体
ｐ−Ｔｙｒブロット−４ｇ１０−ＨＲＰ（ＰＢＳＴ（アップステート・バイオテク（Upstate Biotech）＃１６−１０５）１０ｍＬ中のロット番号によって決まる量）
ＰＤＧＦ−βブロット−サンタ・クルツからのＰＤＧＦＲ−β（ＳＣ−４３２）を用いる−ブロット当たりＰＢＳＴ １０ｍＬ中１０μＬを用いる。
・ゆっくり揺らしながら、一次抗体中で室温にて１時間インキュベートする。
・ＰＢＳＴ中で１時間かけて５回洗浄する。
・二次抗体：
ＰＤＧＦ−βブロット−ブロット当たりＰＢＳＴ １０ｍＬ中アマシャム（Amersham）の抗ウサギＩｇＧ ＨＲＰ（ＮＡ＃９３４）を用いる。
ｐ−Ｔｙｒ−二次は必要ない−ＰＢＳＴ中での揺らしを維持する。
・ゆっくり揺らしながら、二次抗体中で１時間インキュベートする。
・ＰＢＳＴ中で１時間かけて５回洗浄する。
・ＥＣＬ検出キットを用いて現像する。
ＣＳＦ１−Ｒ細胞ＥＬＩＳＡプロトコール
１日目
細胞平板培養：コスター＃３７９９ ９６ウェル丸底プレートのウェル当たり２５０００個のクローン５．５細胞（Nature (1986) 320, 277-80参照）を、増殖培地１５０μＬ／ウェルで平板培養する。調べる化合物１セット当たり２つの細胞プレートが必要である。培地は、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋１％Ｌ−グルタミン＋１％ＨＥＰＥＳ＋５００μｇ／ｍＬＧ４１８である。
抗体平板培養：腫瘍遺伝子ＧＲ１２Ｌ（抗−ｃｆｍｓ／ＣＳＦ１Ｒラットモノクローナル抗体）１μｇ／ウェルをピアス（＃２８３８２）炭酸／重炭酸Ｎａ緩衝液ｐＨ９．０１５０μＬ中で平板培養する。
冷蔵庫中４℃で終夜、またはインキュベータで３７℃にて１時間コーティングすることができる。
２日目
抗体プレート：ＴＥＣＡＮプレート洗浄剤（２０４７中）のＰＢＳＴ（社内の培地調製室からのＰＢＳ＋Ｔｗｅｅｎ２０）溶液を用いて洗浄する。
５％ＮＦＤＭ（脱脂乾燥乳、Carnation）のＰＢＳ溶液２００μＬを加えてプレートをブロックし、溶解物を加える準備ができるまで室温でインキュベートする。
冷蔵庫で４℃にて終夜インキュベートすることができる。
２倍薬剤プレート： 各２つの細胞プレートについて１個の薬剤プレートを製造する。
化合物をＤＭＥＭ＋１％ＤＭＳＯ（媒体とも言う）で希釈する。
作業原液（ＷＳ）は２００μＭであり、それは１０ｍＭ ＤＭＳＯ原液の１：５希釈液である。
連続希釈法：
ＷＳ ２０μＬ＋媒体１８０μＬ＝２０μＭ
２０μＭ ２０μＬ＋媒体１８０μＬ＝２μＭ
２μＭ ２０μＬ＋媒体１８０μＬ＝０．２μＭ
０．２μＭ ２０μＬ＋媒体１８０μＬ＝０．０２μＭ
０．０２μＭ ２０μＬ＋媒体１８０μＬ＝０．００２μＭ。
２倍ＭＣＳＦ（Ｒ＆Ｄシステムズ２１６−ＭＣ）：２００ｎｇ／ｍＬが必要な濃度である。
２００ウェル×２５μＬ／ウェル＝５ｍＬ
５ｍＬ×２００ｎｇ／ｍＬ＝１０００ｎｇ＝１μｇ。
従って、ＭＣＳＦ １μｇの媒体（５ｍＬ）溶液を両方の細胞プレートに２５μＬ／ウェル加える。
アッセイプロトコール
プレート洗浄剤とともに吸引し、媒体をシンクに投げ出すことで、媒体をプレートから除去する。
２倍薬剤プレートから２５μＬ／ウェルを加える。インキュベータ中３７℃で２０分間インキュベートする。
２５μＬ／ウェルの２倍ＭＣＳＦを加え、３７℃で１０分間インキュベートする。
５０μＬ／ウェルの溶解緩衝液（下記参照）を加える。
室温で１０分間インキュベートする。
プレート洗浄剤のＰＢＳＴ溶液で抗体プレートを２回洗浄する。
洗浄した抗体プレートに、合わせた細胞溶解物１７０μＬ（各プレートからの１００μＬを細胞プレートのうちの１個に合わせる）を加える。
室温で２時間インキュベートする。
ＰＢＳＴでプレートを５回洗浄する。
ｐ−Ｔｒｙを検出するため
１５０μＬ／ウェルのＰＢＳで１：２０００希釈した４Ｇ１０−ビオチン抗体（アップステート＃１６−１０３） を加える。
室温で１．５時間インキュベートする。
ＰＢＳＴで５回洗浄する。
１５０μＬ／ウェルのＰＢＳで希釈したストレプトアビジン−ＨＲＰ（アップステート＃１８−１５２）を加える。
室温で１時間インキュベートする。
１００μＬ／ウェルの強化Ｋ−ブルー基質（ネオゲン（Neogen）＃３０８１７７）を加える。
呈色反応は青である。
（＋）対照ウェルの読みが０．６ＯＤとなるまで、６５０ｎｍでプレートを読み取る。
１Ｍリン酸（シグマ＃Ｐ６５６０）１００μＬを加える。
４５０ｎｍでプレートを読み取る。
溶解緩衝液
ピアス溶解緩衝液（Ｍ−ＰＥＲ哺乳動物タンパク質抽出試薬＃７８５０１）
使用直前に加える。
Figure 2007520559
ｃ−キット細胞アッセイ
１．２×１０７個のＨ５２６細胞（ＳＣＬＣ；ＡＴＣＣ）を、０．１％ウシ胎仔血清（プレミアム（Premium））中で終夜血清飢餓とした。
２． 化合物の希釈液とともに１時間インキュベートした（２つの対照を除く）。
３．１０分間にわたり２５０ｎｇ／ｍＬのＳＣＦ（幹細胞因子；Ｒ＆Ｄカタログ番号２５５−ＳＣ）で刺激した（１つの対照を含む）。
４．細胞溶解物を、１０μｇ／ｍｇタンパク質の１ＤＣ３で免疫沈殿した。
５．免疫複合体を、タンパク質Ｇ＋Ａアガロースビーズを用いて回収した（１００μＬ）。
６．タンパク質の分離に８％Ｔｒｉｓグリシンゲルを用いた。
７．４０ボルトを２時間用いて、（ＰＶＤＦまたはニトロセルロース）膜にタンパク質を移した。
８．その膜を３％ＢＳＡの１倍ＰＢＳ溶液でブロックした。
９．ｃ−キットタンパク質の検出用に一次抗体としての抗ｃ−キット（１：５００；Ｒ＆ＤシステムズからのＡＦ３３２抗ヒトＳＣＦＲ） および二次抗体としての抗ヤギ（１：２０００）を用いて、ウェスタンブロッティングを行った。
リン酸化検出用の、一次抗体としての抗ホスホチロシン（１：５０００）および二次抗体としての抗マウス（１：１００００）としての４Ｇ１０。
細胞シグナリングルミグロ（Lumiglo）化学発光キットを用いることによって、ブロットを現像した。
ＫＤＲ−キットキメラを用いるｃ−キットウェスタンブロット
ｃキット−ＫＤＲ細胞を、６ウェルプレートで０．５×１０６個で平板培養する。
翌日、０．１％ＦＣＳのＤＭＥＭ溶液中で終夜血清飢餓状態とする。
その翌日、化合物を加えて１時間経過させる。
５０ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦを加えて３０分間経過させる。
タンパク質溶解物を作る。
タンパク質アッセイを行う。
ウェスタンブロッティングで２０μｇ／列で行う。
使用される抗体
リン酸−キット（Ｔｙｒ７１９）（１：５００）
カタログ番号３３９１（Cell Signaling Technology）
マウス抗ヒトＦｌｋ−１／ＫＤＲ／／ＶＥＧＦＲ２（１：５００）
カタログ番号ＲＤＩ−ＦＬＫ１Ｅａｂｍｘ（Research Diagnostics, Inc）。
均質時間分割蛍光（ＨＴＲＦ）インビトロキナーゼアッセイ（Mathis, G., HTRF(R) Technology. J. Biomol. Screen, 1999, 4(6): p.309-314）
例えば、精製酵素を、反応緩衝液（５０ ｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、２ ｍＭ ＭｎＣｌ２、０．１％ＢＳＡおよび１ ｍＭ ＤＴＴ、４０Ｌ最終容量）中、４μＭ Ｎ−ビオチン化基質（例：ポリ（Ｇｌｕ４Ｔｙｒ））および各種濃度の阻害剤と混合した。黒色９６ウェルプレート（パッカード（Packard））中でＡＴＰ（最終濃度１ｍＭ）を加えることで、キナーゼ反応を開始した。室温で３０〜６０分間インキュベーションした後、 緩衝ＥＤＴＡ溶液（大体の最終濃度：３０ｍＭＥＤＴＡ、０．１％ＢＳＡ、０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００および０．２４Ｍ ＫＦ）を加えることで反応停止し、指示剤（revelation agent）の溶液（０．０８４ｎｇ／ウェルのストレプトアビジン−ＸＬ−６６５（Ｃｉｓ−Ｂｉｏ）および６．５ｎｇ／ウェル抗ホスホチロシンｍＡｂＰＴ６６−Ｋクリプトン酸ユーロピウムを得るため）を反応混合物に加えた。停止した反応を室温で３時間静置し、時間分割蛍光検出器（Discovery, Packard）で６２０ｎｍおよび６６５ｎｍにて同時に読み取った。３３７ｎｍ窒素レーザーを用いて励起した。６２０ｎｍおよび６６５ｎｍのシグナル間の比をＩＣ５０の計算に用いた。
各種酵素についてのより具体的な詳細には以下のものなどがある。
Figure 2007520559
緩衝液
ＭＯＰＳＯ緩衝液
５０ｍＭ ＭＯＰＳＯｐＨ６．５
２．５ｍＭＤＴＴ
１０ ｍＭＭｇＣｌ２
２ ｍＭ ＭｎＣｌ２
０．０１％ＢＳＡ
１００μＭ Ｎａ３ＶＯ４
ＨＥＰＥＳ緩衝液
５０ｍＭ ＨＥＰＥＳｐＨ７．１
２．５ｍＭ ＤＴＴ
１０ｍＭ ＭｇＣｌ２
２ｍＭ ＭｎＣｌ２
０．０１％ＢＳＡ
１００μＭ Ｎａ３ＶＯ４。
基質
Ｂｉｏ−ｆｇｆｒペプチド（ビオチン−Ａｈｘ−ＡＥＥＥＹＦＦＬＦＡ−アミド）
Ｂｉｏ−ｌｃｋペプチド（ビオチン−Ａｈｘ−ＧＡＥＥＥＩＹＡＡＦＦＡ−ＣＯＯＨ）
シス−バイオ（Cis-bio）から購入のＢｉｏ−ＰＧＴ。
ウェル１個は、試薬を合計４０μＬ含む。
ＰＤＧＦＲβ酵素ＥＬＩＳＡプロトコール
０．０６２５μｇ／ウェルの抗−ＰＤＧＦＲβ抗体（サンタ・クルツ＃ＳＣ−４３２）で予めコーティングされたＥＬＩＳＡプレート（コスター＃３３６９ＥＩＡ／ＲＩＡ９６ウェルの洗いやすい高結合プレート）を、ＴＰＢＳで４回洗浄し、次に２％乾燥乳のＰＢＳ溶液でブロックする。ブロック後、プレートをドライブロッティングする。 ０． ６６７ｎｇ／μＬ ＰＤＧＦＲ酵素３０μＬ（最終２０ｎｇ／ウェル）を、２００μＭ〜０．０１２８μＭの範囲の濃度での薬剤溶液２０μＬとともに加える。薬剤サンプルを、反応緩衝液（５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ ７．１、１００ ｍＭ ＭｇＣｌ２、２０ｍＭ ＭｎＣｌ２、２．５ｍＭ ＤＴＴ、０．０１％ＢＳＡ、０．１ｍＭバナジウム酸ナトリウム）を含む２０％ＤＭＳＯで希釈する。酵素および薬剤溶液を３０分間インキュベートする。２．６７ｍＭ ＡＴＰ ３０μＬ（最終１ｍＭ）を加えて反応を開始する。８分後、０．５Ｍ ＥＤＴＡ ｐＨ７．０ ２０μＬで反応停止し、プレートを室温でさらに１．５時間インキュベートする。それらのプレートをＴＰＢＳで４回洗浄する。２％ミルク／ＰＢＳで１／１０００希釈した抗ホスホチロシンＨＲＰ複合抗体１００μＬをウェルに加え、プレートを室温で１時間インキュベートする。プレートをＴＰＢＳで４回洗浄してから、Ｋ−ブルー基質１００μＬをウェルに加える。１０分後に２Ｎ硫酸１０μＬを加え、４５０〜５７０ｎｍでＯＤを測定する。マイナスＰＤＧＦＲβ対照からのバックグラウンドＯＤを全てのデータから引き、阻害薬を含まないＰＤＧＦＲβサンプルのＯＤで割ることで、データを活性パーセントに変換する。非線形最小二乗曲線適合により、活性パーセント−阻害剤濃度のデータ集合を活性パーセント＝１／（１＋［Ｉ］／ＩＣ５０）に適合させることによって、ＩＣ５０値を求める。
Ｔ細胞の活性化のインビボモデル
化合物のインビボ効力を、Ｔ細胞の活性化を直接測定するために知られている動物モデルで、または、Ｔ細胞がエフェクターであることが判明している動物モデルで試験することができる。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体の定常部分をモノクローナル抗ＣＤ３抗体（Ａｂ）と連結することによってインビボで活性化することができる。このモデルでは、ＢＡＬＢ／ｃマウスに、１０μｇの抗ＣＤ３Ａｂを腹腔内に投与してから、２時間後に放血によって屠殺する。試験薬物の投与を受ける動物は、抗ＣＤ３Ａｂの投与の１時間前に単回用量の化合物で前処理する。前炎症性サイトカインのインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）および腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）（これらはＴ細胞活性化の指標物質である）の血清レベルをＥＬＩＳＡによって測定する。類似するモデルでは、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）などの特異的な抗原によるインビボでのＴ細胞刺激と、それに続いて同じ抗原による排出リンパ節細胞のインビボでの二次的な抗原刺激を用いる。前記のように、サイトカイン産生の測定を、培養細胞の活性化状態を評価するために使用する。すなわち、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、０日目に、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）に乳濁させた１００μｇのＫＬＨで皮下に免疫化する。動物には、化合物を、免疫化の１日前に前投与し、続いて、免疫化後の１日目、２日目、３日目に投与する。排出リンパ節を４日目に回収し、その細胞を、組織培養培地（熱不活化ウシ胎児血清（Hyclone Laboratories）、５×１０−５Ｍの２−メルカプトエタノール、および０．５％のＤＭＳＯが補充されたＲＰＭＩ１６４０）において６×１０６個／ｍｌで２４時間および４８時間の両方について培養する。その後、培養上清について、オートクリンＴ細胞増殖因子のインターロイキン−２（ＩＬ−２）および／またはＩＦＮ−γのレベルをＥＬＩＳＡによって評価する。
化合物については、ヒト疾患の動物モデルで試験することもできる。その例としては、実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）およびコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）がある。ヒトの多発性硬化症の様々な態様を模倣するＥＡＥモデルが、ラットおよびマウスの両方で記載されている（FASEB J. 5: 2560-2566,1991 ; murine model: Lab. Invest. 4 (3): 278,1981 ; rodent model : J. Immunol 146 (4): 1163-8,1991に総説がある。）。すなわち、マウスまたはラットを、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）またはその神経原性ペプチド誘導体およびＣＦＡの乳濁液で免疫化する。急性疾患を、百日咳菌などの細菌毒素の添加により誘発することができる。再発性／緩解性の疾患を、ＭＢＰ／ペプチドで免疫化された動物から得られたＴ細胞の養子移入によって誘発する。
ＣＩＡは、ＩＩ型コラーゲンによる免疫化によってＤＢＡ／１マウスにおいて誘発することができる（J. Immunol: 142 (7): 2237-2243）。マウスは、抗原投与の１０日後の早期に関節炎の徴候を発症し、免疫化から９０日という長期間にわたって評点することができる。ＥＡＥモデルおよびＣＩＡモデルの両方において、化合物は予防的または疾患発症時のいずれかで投与することができる。有効な薬物は重度および／または発生率を低下させるはずである。
１以上の血管形成性受容体ＰＴＫを阻害し、および／または炎症性応答を媒介することに関与するｌｃｋなどのタンパク質キナーゼを阻害する本発明のある種の化合物は、これらのモデルにおいて関節炎の重度および／または発生率を低下させることができる。
化合物はまた、マウスの同種移植片モデルで、皮膚（Ann. Rev. Immunol., 10: 333-58, 1992; Transplantation: 57 (12): 1701-17D6, 1994に総説）または心臓（Am. J. Anat.: 113: 273, 1963）のいずれでも試験することができる。すなわち、全層皮膚移植片をＣ５７ＢＬ／６マウスからＢＡＬＢ／ｃマウスに移植する。移植片は、拒絶の証拠について、６日目から始まって毎日調べることができる。マウスの新生児心臓移植片モデルでは、新生児の心臓をＣ５７ＢＬ／６マウスから成体ＣＢＡ／Ｊマウスの耳介に異所的に移植する。心臓は移植後４日から７日で拍動を開始し、拒絶を、拍動の停止を調べるための解剖顕微鏡を使用して目視により評価することができる。
細胞受容体ＰＴＫアッセイ
下記の細胞アッセイを、ＫＤＲ／ＶＥＧＦＲ２に対する本発明の各種化合物の活性および効果のレベルを測定するために使用した。特異的リガンド刺激を用いる類似する受容体ＰＴＫアッセイを、この分野で広く知られている技術を使用して他のチロシンキナーゼについて同じ方向に沿って設計することができる。
ウエスタンブロットによって測定される、ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）でのＶＥＧＦ誘発ＫＤＲリン酸化
１．ＨＵＶＥＣ細胞（プールされたドナーに由来する）をクローンティクス（Clonetics, Sandiego, CA）から購入して、製造者の説明書に従って培養した。初期の継代物（３代から８代）のみをこのアッセイに使用した。細胞を、完全ＥＢＭ培地（クローンティクス）を使用して１００ｍｍディッシュ（組織培養用ファルコン；Becton Dickinson；Plymoouth, England）で培養した。
２．化合物の阻害活性を評価するために、細胞をトリプシン処理し、６ウエルのクラスタープレート（Costar, Cambridge, MA）の各ウエルに０．５〜１．０×１０５細胞／ウエルで播種した。
３．播種後３日から４日で、プレートは代表的には９０％から１００％の集密度になった。培地をすべてのウエルから除去し、細胞を５ｍＬ〜１０ｍＬのＰＢＳで洗浄し、補充物が加えられていない５ｍＬのＥＢＭ基礎培地（すなわち、血清飢餓）で１８時間から２４時間インキュベーションした。
４．阻害剤の連続希釈物を、１ｍＬのＥＢＭ培地（２５μＭ、５μＭまたは１μＭの最終濃度）で細胞に添加し、３７℃で１時間インキュベーションした。その後、ヒト組換えＶＥＧＦ１６５（R & D Systems）を、すべてのウエルに２ｍＬのＥＢＭ培地で、５０ｎｇ／ｍＬの最終濃度で添加し、３７℃で１０分間インキュベーションした。非処理またはＶＥＧＦのみで処理された対照細胞を、バックグランドのリン酸化およびＶＥＧＦによるリン酸化誘発を評価するために使用した。
その後、すべてのウエルを、１ｍＭのオルトバナジン酸ナトリウム（Sigma）を含有する５ｍＬ〜１０ｍＬの冷ＰＢＳで洗浄し、細胞を溶解し、プロテアーゼ阻害剤（１ｍＭＰＭＳＦ、１μｇ／ｍＬアプロチニン、１μｇ／ｍＬペプスタチン、１μｇ／ｍＬロイペプチン、１ｍＭバナジン酸Ｎａ、１ｍＭフッ化Ｎａ）および１μｇ／ｍＬのＤｎａｓｅを含有する２００μＬのＲＩＰＡ緩衝液（５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７）、１５０ｍＭＮａＣｌ、１％ＮＰ−４０、０．２５％デオキシコール酸ナトリウム、１ｍＭＥＤＴＡ）中で掻き取った（すべての化学物質はシグマ・ケミカル社（Sigma Chemical Company, St. Louis, MO）から入手可能）。溶解物を１４０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、核を除去した。
その後、等量のタンパク質を、冷（−２０℃）エタノール（２容量）を加えることによって、少なくとも１時間または最大で一晩、沈殿させた。ペレットを、５％メルカプトエタノールを含有するレムリ（Laemli）サンプル緩衝液（BioRad, Hercules, CA）中で再生し、５分間煮沸した。タンパク質を、ノベックス（Novex）システムを使用してポリアクリルアミドゲル電気泳動（６％、１．５ｍｍノベックス、SanDiego, CA）によって分離し、ニトロセルロース膜に転写した。ウシ血清アルブミン（３％）でブロッキング処理した後、タンパク質を、４℃で、抗ＫＤＲポリクローナル抗体（Ｃ２０、Santa Cruz Biotechnology; Santa Cruz, CA）または抗ホスホチロシンモノクローナル抗体（４Ｇ１０、Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY）で一晩プロービングした。洗浄し、ヤギ抗ウサギＩｇＧまたはヤギ抗マウスＩｇＧのＨＲＰコンジュゲート化Ｆ（ａｂ）２と１時間インキュベーションした後、帯域を、放射化学発光（ＥＣＬ）システム（Amersham Life Sciences, Arlington Height, IL）を使用して肉眼観察した。本発明のある種の化合物は、５０μＭ未満の濃度で細胞ＶＥＧＦ誘発ＫＤＲチロシンキナーゼリン酸化を大きく阻害する。
インビボ子宮浮腫モデル
このアッセイでは、エストロゲンを投与した後の最初の数時間後に生じるマウスにおける子宮重量の急性増大を阻害する化合物の能力を測定する。子宮重量増大のこの初期の開始は、子宮脈管構造の増大した透過性によって引き起こされる浮腫のためであることが知られている。クリナン−ボブら（Cullinan-Bove and Koss, Endocrinology (1993), 133: 829-837）は、エストロゲン刺激された子宮の浮腫と、子宮におけるＶＥＧＦｍＲＮＡの増大した発現との密接な時間的関係を明らかにしている。これらの結果は、エストロゲン刺激後の子宮重量の急性増大を著しく減少させた、ＶＥＧＦに対する中和モノクローナル抗体の使用によって確認されている（国際特許出願公開ＷＯ９７／４２１８７）。従って、この系は、ＶＥＧＦシグナル伝達ならびに関連する過透過性および浮腫のインビボ阻害に対するモデルとして役立ち得る。
材料
すべてのホルモンをシグマ（St. Louis, MO）またはカルバイオケム（LaJolla, CA）から凍結乾燥粉末として購入し、供給者の説明書に従って調製した。
媒体成分（ＤＭＳＯ、クレマホルＥＬ（Cremaphor EL））はシグマ（St. Louis, MO）から購入した。マウス（Ｂａｌｂ／ｃ、８週齢から１２週齢）をタコニック（Taconic, Germantown, NY）から購入して、動物の管理および使用に関する施設委員会の指針に従って無菌動物施設で飼育した。
方法
１日目：Ｂａｌｂ／ｃマウスに対して、１２．５ユニットの妊娠ウマ血清ゴナドトロピン（ＰＭＳＧ）の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射を施した。
３日目：マウスに、１５ユニットのヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）を腹腔内投与した。
４日目：マウスを５匹から１０匹の群に無作為に分けた。試験化合物を、１ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇの範囲にある用量での溶解性および媒体に応じて、腹腔内経路、静脈経路または経口経路によって投与した。媒体対照群には媒体のみを投与し、２つの群を非処置のままとした。
３０分後、実験群、媒体群および非処置群の１つの群に、１７−エストラジオール（５００ｇ／ｋｇ）の腹腔内注射を行った。２時間後から３時間後、動物をＣＯ２吸入によって屠殺した。正中切開後、それぞれの子宮を摘出し、頸部の直下部と、子宮および卵管の接合部とで切断することによって取り出した。脂肪組織および結合組織を、子宮の一体性を乱さないように注意して除去し、その後、重量（湿重量）を測定した。子宮を、水で満たされた１リットルのガラス瓶で２枚のろ紙の間に押しつけることによってブロット処理して、流体を除いた。子宮について、ブロット処理後の重量（ブロット処理重量）を測定した。湿重量とブロット処理重量との差を、子宮の流体含有量とした。処置群の平均流体含有量を、非処置群または媒体処置群と比較した。有意差をスチューデント検定によって求めた。非刺激の対照群を、エストラジオールの応答をモニタリングするために使用した。
結果から、本発明のある種の化合物が、各種経路によって全身投与した場合に、浮腫形成を阻害することが明らかである。
血管形成性受容体チロシンキナーゼの阻害剤である本発明のある種の化合物について、血管新生のマトリゲル（Matrigel）インプラントモデルで活性であることを示すことができる。マトリゲル血管新生モデルでは、前血管形成因子を産生する腫瘍細胞の存在下で誘発される、皮下移植された細胞外マトリックスの透明な大理石内における新しい血管の形成が起こる（例えば、Passaniti, A., et al, Lab. Investig. (1992), 67 (4), 519-528; Anat. Rec. (1997), 249(1), 63-73; Int. J. Cancer (1995), 63 (5), 694- 701; Vasc. Biol. (1995), 15(11), 1857-6参照）。このモデルは、好ましくは、３日間から４日間にわたって機能し、エンドポントには、阻害剤で処置されていない動物から得られる対照に対する、血管新生の巨視的な肉眼／画像評点、顕微鏡による微細血管密度測定、およびインプラント除去後のヘモグロビン定量（ドラブキン（Drabkin）法）などがある。あるいは、このモデルでは、ｂＦＧＦまたはＨＧＦを刺激剤として用いることができる。
１以上の発癌性、発癌促進性または増殖依存性のタンパク質キナーゼ、または血管形成受容体ＰＴＫを阻害する本発明のある種の化合物は、マウスでの原発性マウス、ラットもしくはヒト異種移植腫瘍の成長も阻害し、またはマウスモデルでの転移も阻害する。
略称
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ｄｂａ：ジベンジリデンアセトン
ＤＣＭ：塩化メチレン
ＤＥＡＤ：ジエチルアゾジカルボキシレート
ＤＩＡＤ：ジイソプロピルアゾジカルボキシレート
ＤＭＥ：１，２−ジメトキシエタン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
Ｍｓ：メタンスルホニル
ＮＭＰ：Ｎ−メチルピロリジン−２−オン
ｒ．ｔ．：室温
ＴＢＡＦ：フッ化ｔｅｒｔ−ブチルアンモニウム
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
Ｔｓ：パラ−トルエンスルホニル。
一般的手順および実施例
以下の実施例の大半は、その製造で用いられる最も最後の一般的手順に従って並べてある。いずれかの新規な中間体の合成経路は、それらの名称の後の括弧中に一般的手順を挙げることで（文字コード）、詳細に示してある。本プロトコールの作業例を以下に示す。分析データは、実験条件内または実施例の表内のいずれかで定義されている。別段の断りがない限り、全ての１Ｈまたは１３Ｃ ＮＭＲデータはバリアン・マーキュリー・プラス（Varian Mercury plus）４００ＭＨｚまたはブルカー（Bruker）ＤＲＸ４００ＭＨｚ装置で集めたものであり、化学シフトは百万分の部数（ｐｐｍ）で示してある。高速液体クロマトグラフィー分析データは、実験内に詳細に記載しているか、括弧中で小文字の方法を用いてＨＰＬＣ条件の表に言及している（表１）。
Figure 2007520559
一般的合成経路
本願に含まれる大半の化合物を構築するのに用いた一般的合成の図式を、以下に示してある（図式１〜３）。
図式１：最終段階のアミノ分解反応を介したピロロ［２，３−ｄ］ピリミジルアミノベンゾオキサゾールを得る一般的合成経路（一般的手順は括弧内に示してある）。
Figure 2007520559
図式２：最終段階のアミノベンゾオキサゾール形成を介したピロロ［２，３−ｄ］ピリミジルおよびピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジルアミノベンゾオキサゾールを得る一般的合成経路（一般的手順は括弧内に示してある）。
Figure 2007520559
図式３：最終段階のスズキカップリング反応を介したピロロ［２，３−ｄ］ピリミジルおよびピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジルアミノベンゾオキサゾールを得る一般的合成経路（一般的手順は括弧内に示してある）。
Figure 2007520559
一般的手順のリスト
一般的手順Ａ：ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンまたはピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンのアルコールとのミツノブカップリング
一般的手順Ｂ：クロロピリミジンのアミノ分解
一般的手順Ｃ：ハライドのボロン酸エステルまたはボロン酸とのスズキカップリング
一般的手順Ｄ：ブロマイドのボロン酸エステルへの変換
一般的手順Ｅ：アミノアルコールのベンゾオキサゾールへの環化
一般的手順Ｆ：フェノール類のニトロ化
一般的手順Ｇ：アニリンのアミノベンゾオキサゾールへの変換
一般的手順Ｈ：ニトロ芳香族化合物のアニリンへの還元
一般的手順Ｉ：窒素系求核剤のアルキル化
一般的手順Ｊ：アミンのケトンとの還元的カップリング
一般的手順Ｋ：ケトンのケタール化
一般的手順Ｌ：Ｂｏｃ−保護基の脱離
一般的手順Ｍ：ラクタムのＮ−アルキル化
一般的手順Ｎ：ベンジルエーテル化合物の脱ベンジル化
一般的手順Ｏ：樹脂結合ホスフィン源を用いる、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンまたはピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンのアルコールとのミツノブカップリング
一般的手順Ｐ：エステル加水分解
一般的手順Ｑ：酸のアミンとのＥＤＣ−カップリング
一般的手順Ｒ：アミンのＢｏｃ−保護
一般的手順Ｓ：ヒドロキシアルキルカルボン酸エステルのα−アルキル化
一般的手順Ｔ：保護シクロヘキサノンの脱ケタール化
一般的手順Ｕ：ケトンまたはエステルのアルコールへの還元
一般的手順Ｖ：アルコールのメシル化とそれに続くメシレート基の置き換え
一般的手順Ｗ：アミンの酸塩化物、スルホニルクロライドまたは無水物によるアシル化
一般的手順Ｘ：アルコールのＯ−アルキル化
一般的手順Ｙ：２，５−ジケトピペラジン合成
一般的手順Ｚ：ホモケトピペラジン合成
一般的手順ＡＡ：ジアミン類およびアミノアルコール類のカルボニル化的環化
一般的手順ＢＢ：ケトモルホリン合成
一般的手順ＣＣ：シリル保護アルコールの脱保護
一般的手順ＤＤ：トリフルオロメトキシエーテルの合成
一般的手順ＥＥ：スルフィドのスルホキシドまたはスルホンへの酸化
一般的手順ＦＦ：１段階プロトコールで置換アミノベンゾオキサゾールを形成する閉環。
一般的手順を用いた作業例
一般的手順の文字コードは、最終生成物に至る合成経路を構成するものである。その経路をどのように決定するかの作業例を、試験的な場合として実施例１を用いて下記に示す。実施例１の合成は、表２に詳細に示した一般的手順Ｂを用いて完了した。すなわち、
Figure 2007520559
 である。
この場合、クロロピリミジン原料である化合物Ａを、経路ＵＳ６００１８３９、Ｃ（Ｆ、Ｈ、Ｇ、Ｄ）（表２に詳細に記載）を用いて製造した。これはそれに続く手順に書き換えられており、そこでは一般的手順Ｃで使用した試薬が手順Ｆ、Ｈ、ＧおよびＤに従った生成物であることから、これらの段階は別の括弧内に示されている。
Figure 2007520559
一般的手順Ａ：ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンまたはピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンのアルコールとのミツノブカップリング
ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンもしくはピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（好ましくは１当量）、アルコール（１〜５当量、好ましくは３当量）、ホスフィン（例えば、トリフェニルホスフィン）（１〜５当量、好ましくは３当量）およびアゾジカルボキシレート（例えば、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート）（１〜５当量、好ましくは３当量）の混合物を、約０〜１００℃（好ましくは約２０℃）で約０．５〜２４時間（好ましくは約４時間）にわたり、不活性雰囲気下に脱水溶媒（好ましくはテトラヒドロフラン）で攪拌する。溶媒を減圧下に除去する。得られた残留物を有機溶媒と水溶液との間で分配する。有機層を分離し、水層をさらに有機溶媒で抽出する。合わせた有機抽出液を乾燥剤で脱水する。溶媒を減圧下に留去して生成物を得て、それを結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製することができる。
一般的手順Ａの例示
製造例１：シス−３−ヨード−１−［４−（２−メトキシエトキシ）−シクロヘキシル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
製造例２：トランス−３−ヨード−１−［４−（２−メトキシエトキシ）−シクロヘキシル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリミジン−４−イルアミン（０．６２６ｇ、２．４０ｍｍｏｌ）の脱水テトラヒドロフラン（２５ｍＬ）溶液に、トリフェニルホスフィン（１．５１ｇ、５．７６ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアゾジカルボキシレート（１．１６ｇ、５．７６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で窒素雰囲気下に約５分間攪拌し、４−（２−メトキシエトキシ）−シクロヘキサノール（ＪＰ６１２２９８６５、シス−およびトランス−異性体の混合物、１．０４ｇ、５．９８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で約３時間攪拌した。テトラヒドロフランを減圧下に除去し、粗混合物をアセトン（１５ｍＬ）および塩酸水溶液（２Ｎ、１５ｍＬ）の混合液中で室温にて２時間攪拌した。アセトンを減圧下に除去し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液を加えることで水系混合物をｐＨが約８となるように中和した。水系混合物を酢酸エチルで抽出し（２５ｍＬで３回）、合わせた有機分画を無水硫酸マグネシウムで脱水した。粗混合物を、酢酸エチル移動相としてを用いるシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、トランス−３−ヨード−１−［４−（２−メトキシエトキシ）−シクロヘキシル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（２００ｍｇ、０．４８０ｍｍｏｌ）；
Figure 2007520559
 およびシス−３−ヨード−１−［４−（２−メトキシエトキシ）−シクロヘキシル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（１２０ｍｇ、０．２８８ｍｍｏｌ）
Figure 2007520559
 の両方を純粋な白色固体として得た。
一般的手順Ｂ：クロロピリミジンのアミノ分解
４−クロロ−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（好ましくは１当量）および水酸化アンモニウム水溶液（２８重量％アンモニア）（１００〜３００当量、好ましくは３００当量）の混合物を、パールの小型リアクター中、約８０〜１５０℃（好ましくは約１２０℃）で約１〜４８時間（好ましくは約１２時間）にわたってジオキサン中で加熱する。混合物を放冷して室温とし、溶媒を減圧下に除去して生成物を得て、それを結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製することができる。
一般的手順Ｂの例示
製造例３：トランス−７−（４−シクロプロピルメトキシ−シクロヘキシル）−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
トランス−４−クロロ−７−（４−シクロプロピルメトキシ−シクロヘキシル）−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（一般的手順Ｘ、Ｔ、ＵおよびＡによって製造）（０．３５７ｇ、０．０００８３ｍｏｌ）の水酸化アンモニウム水溶液（２８重量％アンモニア、１５ｍＬ、０．２４７ｍｏｌ、２９８当量）中混合物をパールの小型リアクター中、約１２０℃で約１２時間にわたりジオキサン（１５ｍＬ）中で加熱した。混合物を放冷して室温とし、溶媒を減圧下に除去して、トランス−７−（４−シクロプロピルメトキシ−シクロヘキシル）−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンを白色固体として得た（０．５０９ｇ、０．０００８３ｍｏｌ、塩化アンモニウム含有）。ＬＣ／ＭＳ（０．８ｍＬ／分で４．５分間かけて３０％〜９５％アセトニトリル／０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液；λ＝１９０〜７００ｎｍ；ジェネシス（Genesis）Ｃ１８、１２０Å、３μｍ、３０×４．６ｍｍカラム；陽イオンおよび陰イオンの両方を観察するエレクトロスプレーイオン化法）Ｒｔ２．８０分；ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋４１３。
一般的手順Ｂを用いて得られる他の生成物を示した（表２）。ＨＰＬＣ保持時間を測定するのに用いた方法は、括弧中で小文字で示してある（表１参照）。
Figure 2007520559
一般的手順Ｃ：ハライドのボロン酸エステルまたはボロン酸とのスズキカップリング
ボロン酸エステルまたはボロン酸（１〜５当量、好ましくは１．５当量）、ハライド（例えばブロマイドまたはヨージド、好ましくはヨージド）（好ましくは１当量）および塩基（例えば、炭酸ナトリウムまたは炭酸セシウム、好ましくは炭酸ナトリウム）（１〜１０当量、好ましくは２当量）の混合物を、有機溶媒（例えば、エチレングリコールジメチルエーテル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはトルエン、好ましくはエチレングリコールジメチルエーテル）および水の混合液中、約２０〜１２０℃（好ましくは約８０℃）で加熱する。パラジウム触媒（例えば、酢酸パラジウム（ＩＩ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、好ましくはテトラキス（トリフェニルホスフィン）−パラジウム（０））（０．０１〜０．２当量、好ましくは０．０５当量）を加え、反応混合物を不活性雰囲気下に約１〜４８時間（好ましくは約１２時間）攪拌する。混合物を放冷して室温とし、溶媒を減圧下に除去する。残留物を水と有機溶媒との間で分配し、有機層を分離し、水層をさらに有機溶媒で抽出する。合わせた有機抽出液を乾燥剤で脱水する。溶媒を減圧下に留去して生成物を得て、それは結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製することができる。
一般的手順Ｃの例示
実施例３：シス−｛４−（４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキシル）｝−１−メチル−ピペラジン−２−オン
Figure 2007520559
シス−｛４−［４−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−シクロヘキシル］｝−１−メチル−ピペラジン−２−オン（一般的手順Ａ、ＴおよびＪを用いて製造（ＵＳ特許４２５１４３８に記載のケトピペラジンを使用））（８０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アミン（Ｇ、Ｄ）（８０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（４７ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）および水（２ｍＬ）中混合物に、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２０ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を、室温で窒素雰囲気下に加えた。反応混合物を約８０℃で約１６時間加熱した。混合物を放冷して室温とし、溶媒を減圧下に除去した。残留物を水（２５ｍＬ）と塩化メチレン（２５ｍＬ）との間で分配し、有機層を分離し、水層をさらに塩化メチレンで抽出した（２５ｍＬで２回）．。合わせた有機抽出液を硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下に留去した。残留物を、移動相として塩化メチレン／メタノール／水酸化アンモニウム（２８〜３０％溶液）（９５：４．９５：０．０５）混合物を用いるシリカでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、シス−（４−（４−／４−アミノ−３−（４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキシル）｝−１−メチル−ピペラジン−２−オンを白色固体（５６．０ｍｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）として得た。
Figure 2007520559
ＲＰ−ＨＰＬＣ（１ｍＬ／分で２０分間かけて５％〜８５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１６．７３分。
一般的手順Ｃを用いて得られる他の生成物を示した（表３）。ＨＰＬＣ保持時間を測定するのに用いた方法は、括弧中にて小文字で示してある（表１参照）。
Figure 2007520559
Figure 2007520559
Figure 2007520559
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Figure 2007520559
Figure 2007520559
Figure 2007520559
一般的手順Ｄ：ブロマイドのボロン酸エステルへの変換
ビス（ピナコラト）ジボロン（１〜１．５当量、好ましくは１．３当量）、アリールブロマイド（好ましくは１当量）、ジクロロ［１，１′−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］−パラジウム（ＩＩ）塩化メチレン付加物（０．０３〜０．１５当量、好ましくは０．１０当量）および塩基（例えば、酢酸ナトリウムまたは酢酸カリウム、好ましくは酢酸カリウム）（１．５〜３．０当量、好ましくは２．５当量）の混合物を、有機溶媒（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジオキサンまたはテトラヒドロフラン、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）中、約５０〜１００℃（好ましくは８０℃）で約１〜２４時間（好ましくは１５時間）にわたり、不活性雰囲気下に加熱する。混合物を放冷して室温とし、溶媒を減圧下に除去する。次に、固体残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーまたは結晶化によって精製することができる。
一般的手順Ｄの例示
製造例４：２−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニルアミン
Figure 2007520559
４−ブロモ−２−メチルアニリン（０．２５０ｇ、１．３４ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（０．４４２ｇ、１．７４７ｍｍｏｌ）、ジクロロ［１，１′−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン］パラジウム（ＩＩ）塩化メチレン付加物（０．１１０ｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）および酢酸カリウム（０．３２９ｇ、３．３５７ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中にて約８０℃で約１５時間にわたり、窒素雰囲気下に加熱した。混合物を放冷して室温とし、移動相として酢酸エチル／ヘプタン（３：７）を用いるシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、２−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−（１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニルアミンを黄色油状物として得た（０．２１３ｇ、０．９１４ｍｍｏｌ）；ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．０ｍＬ／分で１０分間かけて２５％〜１００％アセトニトリル／０．１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１１．０２分。
一般的手順Ｅ：アミノアルコールのベンゾオキサゾールへの環化
イソチオシアン酸アリール（１〜２当量、好ましくは１当量）の有機溶媒（例えば、テトラヒドロフランまたはピリジン）溶液に約−４０〜５０℃で、アミノフェノール（１〜２当量、好ましくは１当量）を加える。混合物を約０〜５０℃で約１〜２４時間攪拌する。１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）（１〜２当量、好ましくは１当量）を反応液に加え、混合物を約４０〜８０℃で約１〜２４時間（好ましくは１５時間）加熱する。混合物を放冷して室温とし、溶媒を減圧下に除去して生成物を得て、それを結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製することができる。
一般的経路Ｅの例示
製造例５：（４−ブロモ−フェニル）−（５−クロロ−ベンゾオキサゾール−２−イル）−アミン
Figure 2007520559
イソチオシアン酸４−ブロモフェニル（４６．２ｇ、０．２１６ｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（７５０ｍＬ）溶液に、室温で窒素雰囲気下に２−アミノ−４−クロロフェノール（３１．０ｇ、０．２１６ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で約２時間攪拌した。１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（４９．７ｇ、０．２５９ｍｏｌ）を反応混合物に加え、混合物を約５０℃で約１５時間攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物を０．１Ｎ塩酸水溶液（２５０ｍＬ）と塩化メチレン（３００ｍＬ）との間で分配した。得られた粗沈澱をろ過によって回収し、水（２００ｍＬ）で洗浄した。濾液の残った有機層を分離し、水層を追加の塩化メチレンで抽出した（２００ｍＬで２回）。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に除去した。粗生成物（３０ｇ）を、移動相としてヘプタン／酢酸エチル（９０：１０から７５：２５）を用いるシリカでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、（４−ブロモ−フェニル）−（５−クロロ−ベンゾオキサゾール−２−イル）−アミンをピンク固体として得た（１５．８ｇ、０．０４８ｍｏｌ）。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で１０分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１２．９８４分。
一般的手順Ｆ：フェノール類のニトロ化
置換フェノール（好ましくは１．０当量）を有機溶媒（例えば、ジエチルエーテルまたはエチレングリコールジメチルエーテル、好ましくはエチレングリコールジメチルエーテル）に溶かし、得られた溶液を冷却して約−６０℃（好ましくは、約−５０℃）とする。テトラフルオロホウ酸ニトロニウム（１〜２当量、好ましくは１．０２当量）を加え、反応混合物を、窒素雰囲気下に約２〜９６時間攪拌しながら、徐々に昇温させて室温とする。有機溶媒を減圧下に除去し、残留物をクロマトグラフィーまたは結晶化によってさらに精製することができる。
一般的手順Ｆの例示
製造例６：５−ブロモ−２−ヒドロキシ−３−ニトロベンゾニトリル
Figure 2007520559
５−ブロモ−２−ヒドロキシベンゾニトリル（５．０４ｇ、０．０２５４ｍｏｌ）をエチレングリコールジメチルエーテル（６０ｍＬ）に溶かし、得られた溶液を冷却して約−５５℃とした。テトラフルオロホウ酸ニトロニウム（３．５８ｇ、０．０２５９ｍｏｌ）を１回で加え、反応混合物を約２４時間にわたって連続窒素気流下に攪拌しながら、徐々に昇温させて室温とした。エチレングリコールジメチルエーテルを減圧下に除去し、残留物を、酢酸エチル（８００ｍＬ）で溶離しながら、シリカゲル層（４０ｇ）に通した。酢酸エチルを減圧下に除去し、残留物を冷エーテル（１５ｍＬ）で磨砕した。沈澱をろ過によって回収し、乾燥させて、５−ブロモ−２−ヒドロキシ−３−ニトロベンゾニトリル（３．３０ｇ、０．０１３６ｍｏｌ）を黄色固体として得た。ｍ／ｚ：（Ｍ−Ｈ）−２４１および２４３。
一般的手順Ｇ：アニリンのアミノベンゾオキサゾールへの変換
約０〜２５℃（好ましくは２５℃）の前記アニリン（好ましくは１当量）の有機溶媒（例えば、塩化メチレン、アセトニトリルまたはピリジン、好ましくはピリジン）溶液に、チオカルボニル（例えば、１，１′−チオカルボニルジ−２（１Ｈ）−ピリドンまたは１，１′−チオカルボニル−ジイミダゾール、好ましくは１，１′−チオカルボニルジイミダゾール）（１〜５当量、好ましくは１．０５当量）を加えて約０．５〜２時間（好ましくは約１時間）経過させ、混合物を約０〜５０℃（好ましくは約２５℃）で約１〜５時間（好ましくは約２時間）攪拌した。２−アミノフェノール（１〜２当量、好ましくは１当量）を反応混合物に加え、約０〜５０℃（好ましくは約２５℃）で約１〜１２時間（好ましくは２時間）攪拌する。カルボジイミド（好ましくは１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド）（１〜５当量、好ましくは１．２当量）を反応液に加え、混合物を約２５〜７０℃（好ましくは約５０℃）で約１〜４８時間（好ましくは約１２時間）攪拌する。混合物を放冷して室温とし、溶媒を減圧下に除去する。残留物を酸性水溶液と有機溶媒との間で分配し、有機層を分離し、水層を有機溶媒でさらに抽出する。合わせた有機抽出液を乾燥剤で脱水する。溶媒を減圧下に留去して生成物を得て、それを結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製することができる。
一般的手順Ｇの例示
製造例７：（４−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−アミン
Figure 2007520559
４−ブロモ−２−フルオロアニリン（５ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）のピリジン（１５０ｍＬ）溶液に室温で、１，１′−チオカルボニルジイミダゾール（４．９２ｇ、２７．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、窒素雰囲気下に約１時間攪拌する。２，４−ジメチル−６−アミノフェノール（３．６１ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、混合物を室温で窒素下に、さらに約４５分間攪拌した。ピリジンを反応混合物から減圧下に除去した。残留物をアセトニトリル（２００ｍＬ）に取り、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（６．０５ｇ、３１．６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で約２０時間攪拌してから、約６０℃でさらに約５時間加熱した。アセトニトリルを減圧下に除去し、残留物を酢酸エチル（１００ｍＬ）に取り、０．５Ｎ塩酸（１００ｍＬで４回）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、有機溶媒を減圧下に除去した。粗生成物を熱メタノール中で磨砕して、（４−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−アミンをピンク固体として得た（４．２４ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）。
Figure 2007520559
ＲＰ−ＨＰＬＣ（１ｍＬ／分で１０分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１０．３６分。
一般的手順Ｇを用いて得た他の生成物を示している（表４）。ＨＰＬＣ保持時間を測定するのに用いた方法は、括弧中にて小文字で示してある（表１参照）。
Figure 2007520559
Figure 2007520559
Figure 2007520559
Figure 2007520559
Figure 2007520559
Figure 2007520559
一般的手順Ｈ：ニトロ芳香族化合物のアニリンへの還元
ニトロ芳香族化合物（好ましくは１当量）、亜ジチオン酸ナトリウム（１〜１０当量、好ましくは４当量）、エチルビオロゲン・ジブロマイド（０〜１当量、好ましくは０．０４当量）および炭酸カリウム（０〜５当量、好ましくは５当量）の混合物を、有機溶媒（好ましくはエタノールまたは塩化メチレン）および水の混合液中にて約２０〜８０℃（好ましくは約６０℃）で約１〜１２０時間（好ましくは約２時間）、不活性雰囲気下に加熱する。混合物を放冷して室温とし、有機溶媒を減圧下に除去する。得られた水系混合物を有機溶媒で抽出する。有機層を分離し、飽和ブライン溶液で洗浄する。残った有機層を乾燥剤で脱水する。溶媒を減圧下に留去して生成物を得て、それを容易に用いることができるか、結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製することができる。
一般的手順Ｈの例示
製造例８：３−アミノ−５−ブロモ−２−ヒドロキシ−ベンゾニトリル
Figure 2007520559
５−ブロモ−２−ヒドロキシ−３−ニトロ−ベンゾニトリル（一般的手順Ｆを用いて製造）（４．０１ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）および亜ジチオン酸ナトリウム（１１．５ｇ、６６ｍｍｏｌ）の混合物を、エタノール（２００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）の混合液中にて、窒素雰囲気下に約６０℃で約２時間加熱した。混合物を放冷して室温とし、有機溶媒を減圧下に除去した。水系混合物を塩化メチレン（２００ｍＬ）で抽出した。有機抽出液を合わせ、飽和ブライン溶液（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、無水硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去して、３−アミノ−５−ブロモ−２−ヒドロキシ−ベンゾニトリルをくすんだピンク固体として得た（２．１４ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で１０分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ８．５分。
Figure 2007520559
一般的手順Ｉ：窒素系求核剤のアルキル化
メシレート、トシレート、クロライド、ヨージドまたはブロマイド、好ましくはメシレートなどのアルキル化剤（１〜１．５当量、好ましくは１当量）、窒素系求核剤（好ましくは１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンまたは７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン）および塩基（例えば、炭酸ナトリウム、水素化ナトリウム、炭酸カリウムまたは炭酸セシウム、好ましくは炭酸ナトリウム）（１〜１０当量、好ましくは１．５当量）の混合物を、有機溶媒（例えば、エチレングリコールジメチルエーテル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、１−メチル−２−ピロリジノンまたはジメチルスルホキシド、好ましくは，Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）中にて、２０〜１３０℃（好ましくは約１００℃）で１〜６０時間（好ましくは約３０時間）にわたり、不活性雰囲気下に加熱する。混合物を放冷して室温とし、内容物を氷水に投入する。有機層を分離し、水層を有機溶媒でさらに抽出する。合わせた有機抽出液を乾燥剤で脱水する。溶媒を減圧下に留去して生成物を得て、それを結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製することができる。
一般的手順Ｉの例示
製造例９：３−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−アゼチジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
Figure 2007520559
３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（２．６８ｇ、０．０１０３ｍｏｌ）、３−メタンスルホニルオキシ−アゼチジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（特許ＷＯ０２／０８０９２６Ａ１に記載）（２．５８ｇ、０．０１０３ｍｏｌ）および炭酸セシウム（４．３６ｇ、０．０１，３４ｍｏｌ）の混合物を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）中にて約９０℃で約４８時間にわたり窒素雰囲気下に加熱した。混合物を放冷して室温としてから、それを氷水（３０ｍＬ）に投入し、５％メタノール／塩化メチレンで抽出した（２００ｍＬで２回）。合わせた有機抽出液を硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去して、黄褐色固体を得た。固体を塩化メチレンに溶かし、溶液を冷却して約０℃とした。１６時間後、得られた沈澱を回収し、乾燥させて、３−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−アゼチジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを白色固体として得た（２．０２２ｇ、０．００４８６ｍｏｌ）；ＲＰ−ＨＰＬＣ（０．８ｍＬ／分で４．５分間かけて３０％〜９５％アセトニトリル／０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液；λ＝１９０〜７００ｎｍ；ジェネシスＣ１８、１２０Å、３μｍ、３０×４．６ｍｍカラム；陽イオンおよび陰イオンの両方を観察するエレクトロスプレーイオン化方法）Ｒｔ２．２８分；ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋４１７。
一般的手順Ｉを用いて得た他の生成物を示してある（表５）。ＨＰＬＣ保持時間を測定するのに用いた方法は、括弧中にて小文字で示してある（表１参照）。
Figure 2007520559
Figure 2007520559
一般的手順Ｊ：アミンのケトンとの還元的カップリング
ケトン（３〜２０当量、好ましくは１当量）、アミン（またはアミン塩）（１〜４当量、好ましくは３当量）および酢酸（好ましくは４当量）の混合物を、有機溶媒の混合液（好ましくは１，２−ジクロロエタンおよび１−メチル−２−ピロリジノン）中にて、室温で約２時間にわたり、窒素雰囲気下に攪拌する。次に、還元試薬（好ましくは水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム）（１．５〜１４当量、好ましくは１．５当量）を加え、混合物を室温で約１２時間〜７日間（好ましくは約１２時間）攪拌する。混合物を塩基性水溶液（例えば、飽和重炭酸ナトリウム水溶液）で反応停止し、有機溶媒で抽出する。合わせた有機抽出液を乾燥剤で脱水する。溶媒を減圧下に留去して生成物を得て、それを結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製する。
一般的手順Ｊの例示
製造例１０：トランス−｛４−［４−（４−アミノ−５−ヨード−ピロロ［２，３−ジピリミジン−７−イル）−シクロヘキシル］−１−メチル−ピペラジン−２−オン｝
Figure 2007520559
４−（４−アミノ−５−ヨード−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−シクロヘキサノン（一般的手順ＡおよびＴによって製造）（１７．６ｇ、４８．２ｍｍｏｌ）、４−メチル−３−オキソ−ピペラジン−１−イウム・モノトリフルオロ酢酸塩（４４．０３ｇ、１９３ｍｍｏｌ）および酢酸（１１．０５ｍＬ、１９３ｍｍｏｌ）の混合物を、１，２−ジクロロエタン（１０００ｍＬ）および１−メチル−２−ピロリジノン（５０ｍＬ）の混合液中にて室温で約２．５時間にわたり、窒素雰囲気下に攪拌した。次に、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム（１５．３３７ｇ、７２．４ｍｍｏｌ）を一気に加え、混合物を室温で約１２時間攪拌した。混合物を飽和炭酸ナトリウム水溶液でｐＨ≧７となるまで反応停止し、塩化メチレン／メタノール（９５：５、１０００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出液を硫酸マグネシウムで脱水した。塩化メチレンおよびメタノールを減圧下に留去して固体を得て、それをメタノール／酢酸エチル／トリエチルアミンの勾配（１：９８：１から７：９２：１）を移動相として用いるシリカでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、トランス−｛４−［４−（４−アミノ−５−ヨード−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−シクロヘキシル］−１−メチル−ピペラジン−２−オン｝を白色固体として得た（５．０７ｇ、１１ｍｍｏｌ）。
Figure 2007520559
ＲＰ−ＨＰＬＣ（０．８ｍＬ／分で４．５分間かけて３０％〜９５％アセトニトリル／０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液；λ＝１９０〜７００ｎｍ；ジェネシスＣ１８、１２０Å、３μｍ、３０×４．６ｍｍカラム；陽イオンおよび陰イオンの両方を観察するエレクトロスプレーイオン化方法）Ｒｔ１．３７分；ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋４５５。
一般的手順Ｊを用いて得た他の生成物を示してある（表６）。ＨＰＬＣ保持時間を測定するのに用いた方法は、括弧中にて小文字で示してある（表１参照）。
Figure 2007520559
Figure 2007520559
一般的手順Ｋ：ケトンのケタール化
ケトン（好ましくは１当量）、ブタンジオール（１〜５０当量、好ましくは２０当量）およびｐ−トルエンスルホン酸（０．０５〜１当量、好ましくは０．２当量）の混合物を、有機溶媒（好ましくはトルエン）中にて約５０〜１２０℃（好ましくは還流温度）で１〜１０日間（好ましくは５日間）にわたり、不活性雰囲気下に加熱する。副生成物の水を除去する（好ましくは、活性化モレキュラーシーブス（３Åビーズ、４〜８メッシュ）を充填したディーン−スタークトラップで）。混合物を放冷して室温とする。溶媒を減圧下に除去して粗生成物を得て、それを蒸留、クロマトグラフィーまたは結晶化によってさらに精製して、生成物を得ることができる。
一般的手順Ｋの例示
（実施例２６５）
Ｎ２−（４−｛４−アミノ−１−［（２Ｒ，３Ｒ）−２，３−ジメチル−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル｝フェニル）−５，７−ジメチル−１，３−ベンゾオキサゾール−２−アミン
Figure 2007520559
４−（４−アミノ−３−｛４−［（５，７−ジメチル−１，３−ベンゾオキサゾール−２−イル）アミノ］フェニル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−１−シクロヘキサノン（一般的手順Ａ、ＴおよびＣを用いて製造）（０．４０ｇ、０．８６ｍｍｏｌ）、（Ｒ，Ｒ）−１，２−ブタンジオール（０．２９ｇ、３．２２ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸・１水和物（０．０３ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の混合物を、モレキュラーシーブス（３Åビーズ、４〜８メッシュ）を充填したディーン−スタークトラップに水を集めながら、トルエン（３０ｍＬ）中にて５日間加熱還流した。反応を完結させるには、追加の（Ｒ，Ｒ）−１，２−ブタンジオール（０．８７ｇ、９．６６ｍｍｏｌ）が必要であった。反応液を放冷して室温とし、溶媒を減圧下に除去した。得られた粗生成物を、移動相として０％から３％メタノール（２８％アンモニア水２％含有）／塩化メチレンの勾配を用いるシリカでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ２−（４−｛４−アミノ−１−［（２Ｒ，３Ｒ）−２，３−ジメチル−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカ−８−イル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル｝フェニル）−５，７−ジメチル−１，３−ベンゾオキサゾール−２−アミン（０．２７６ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で１０分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１２．１３分；ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋５４０。
一般的手順Ｋを用いて得られる他の生成物を示した（表７）。ＨＰＬＣ保持時間を測定するのに用いた方法は、括弧中にて小文字で示してある（表１参照）。
Figure 2007520559
一般的手順Ｌ：Ｂｏｃ−保護基の脱離
ｔｅｒｔ−ブチルカーバメート（１〜１．５当量、好ましくは１当量）、有機溶媒（例えば１，４−ジオキサンまたは塩化メチレン、好ましくは塩化メチレン）および酸（５〜４０当量、好ましくは２０当量）（例えば塩酸またはトリフルオロ酢酸、好ましくはトリフルオロ酢酸）の混合物を、約０〜６０℃（好ましくは約２５℃）で約１〜２４時間（好ましくは約１４時間）にわたり、不活性雰囲気下に混合する。混合物を塩基水溶液（炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウムなど、好ましくは炭酸ナトリウム）で中和する。有機層を分離し、水層を有機溶媒でさらに抽出する。合わせた有機抽出液を乾燥剤で脱水する。溶媒を減圧下に留去して生成物を得て、それを結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製する。
一般的手順Ｌの例示
（実施例２６８）
７−アゼチジン−３−イル−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
３−｛４−アミノ−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−アゼチジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（一般的手順ＩおよびＣによって製造）（１．２３ｇ、０．００２３３６ｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸（１．８１ｍＬ、０．０２３ｍｏｌ）の混合物を、塩化メチレン（１８ｍＬ）中、室温で約２４時間にわたり、窒素雰囲気下に混合した。混合物を炭酸ナトリウム水溶液で希釈し、有機層を分離し、乾燥剤で脱水した。水層における沈澱を回収し、有機相と合わせた。溶媒を減圧下に除去して、７−アゼチジン−３−イル−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンを黄褐色固体（１．００ｇ、０．００２３４ｍｏｌ）として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（０．８ｍＬ／分で４．５分間かけて３０％〜９５％アセトニトリル／０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液；λ＝１９０〜７００ｎｍ；ジェネシスＣ１８、１２０Å、３μｍ、３０×４．６ｍｍカラム；陽イオンおよび陰イオンの両方を観察するエレクトロスプレーイオン化法）Ｒｔ２．１３分；ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋４２７。
一般的手順Ｌを用いて得られる他の生成物を示した（表８）。ＨＰＬＣ保持時間を測定するのに用いた方法は、括弧中で小文字で示してある（表１参照）。
Figure 2007520559
一般的手順Ｍ：ラクタムのＮ−アルキル化
ラクタムアミン（１〜２当量、好ましくは１当量）のアミン官能基を、適切な保護基（例えば、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート）（１〜２当量、好ましくは１．０５当量）のテトラヒドロフラン溶液で室温にて約１〜２４時間（好ましくは約１５時間）アシル化する。溶媒を減圧下に除去し、得られた残留物を有機溶媒（例えば、ヘプタンまたは酢酸エチル）で洗浄する。残留物を有機溶媒（例えば、テトラヒドロフランおよびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドの混合物）に溶かし、室温にて約０．５〜１２時間（好ましくは１時間）にわたり塩基（例えば、水素化ナトリウム）（１〜２当量、好ましくは１．５当量）で処理し、次にアルキルハライド（１〜４当量、好ましくは１．０５当量）（例えば、ヨウ化メチル）を加える。反応混合物を約０〜７５℃（好ましくは室温）で約１〜２４時間（好ましくは１５時間）攪拌する。溶媒を除去し、抽出後処理を行って生成物を得て、それをクロマトグラフィーによってさらに精製することができる。アミン官能基上の保護基を脱離させることで（例えば、Ｂｏｃ基の脱離については一般的手順Ｌに詳細に記載されている）生成物または生成物の塩を得て、それを結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製することができる。
一般的手順Ｍの例示
製造例１１：４−メチル−［１，４］ジアゼパン−５−オン・１トリフルオロ酢酸塩
Figure 2007520559
［１，４］ジアゼパン−２−オン（１．５６２ｇ、０．０１３３８ｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（９０ｍＬ）懸濁液にジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（３．１６２ｇ、０．０１４４７ｍｏｌ）を加え、混合物を室温で約１５時間攪拌した。溶媒を減圧下に除去した。残留物を酢酸エチルで洗浄して、５−オキソ−［１，４］ジアゼパン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを白色固体として得た（２．８６６ｇ、０．０１３３８ｍｏｌ）。固体をテトラヒドロフラン（８０ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）の混合液に溶かし、水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散品、０．８４９ｇ、０．０２１２ｍｏｌ）を加えた。約１時間後、ヨウ化メチル（０．９３ｍＬ、０．０１８３５ｍｏｌ）を、反応混合物にゆっくり加えた。混合物を室温で約１５時間攪拌し、溶媒を減圧下に除去した。残留物を飽和塩化アンモニウム水溶液（１００ｍＬ）と塩化メチレンとの間で分配した。有機層を分離し、水層を塩化メチレンでさらに抽出した。合わせた有機抽出液を硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に留去して暗褐色固体を得て、それを、移動相として酢酸エチルを用いるシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、４−メチル−５−オキソ［１，４］ジアゼパン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを白色固体として得た（２．７９０ｇ、０．０１２２ｍｏｌ）。その固体を塩化メチレン（２０ｍＬ）に溶かし、溶液を冷却して０℃とし、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ、０．１２９８ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を昇温させて室温とした。溶媒を減圧下に留去して、４−メチル−［１，４−］ジアゼパン−５−オン・１トリフルオロ酢酸塩を褐色油状物として得た（２．９６２ｇ、０．０１２２３ｍｏｌ）。
Figure 2007520559
一般的手順Ｎ：ベンジルエーテル化合物の脱ベンジル化
ベンジルエーテル（好ましくは１当量）およびパラジウム／炭素（１０重量％）（０．０１〜０．５０当量、好ましくは０．１０当量）の有機溶媒（例えば、エタノール、酢酸エチル、エチレングリコールジメチルエーテルまたはトルエン、好ましくはエタノール）中混合物を、水素雰囲気下に約２０〜１２０℃（好ましくは約２０℃）で約１〜４８時間（好ましくは１２時間）にわたって攪拌する。混合物をセライトカラムで濾過し、それを追加の有機溶媒で洗浄する。溶媒を減圧下に除去して所望の生成物を得て、それを結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製することができる。
一般的手順Ｎの例示
製造例１２：シス−４−（２−シクロプロポキシ−エトキシ）−シクロヘキサノール
Figure 2007520559
シス−［４−（２−シクロプロポキシ−エトキシ）−シクロヘキシルオキシメチル］−ベンゼン（一般的手順Ｘによって製造）（０．５８０ｇ、０．００２０ｍｏｌ）およびパラジウム／炭素（１０重量％）（０．２１２ｇ、０．１０当量）のエタノール（２５ｍＬ）中混合物を、水素雰囲気下に約２０℃で約１２時間攪拌し、セライトカラムで濾過した。溶媒を減圧下に除去して、シス−４−（２−シクロプロポキシ−エトキシ）−シクロヘキサノールを得た（０．４４１ｇ、０．００２０ｍｏｌ）。
Figure 2007520559
ＴＬＣ（塩化メチレン／酢酸エチル＝４：１）Ｒｆ０．１０。
一般的手順Ｏ：樹脂結合ホスフィン源を用いるピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンまたはピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンのアルコールとのミツノブカップリング
ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンまたはピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（好ましくは１当量）、アルコール（１〜５当量、好ましくは２当量）、樹脂結合ホスフィン（１〜５当量、好ましくは２．２当量）およびアゾジカルボキシレート（例えば、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート）（１〜５当量、好ましくは２．２当量）の混合物を脱水溶媒（例えば、テトラヒドロフラン）中にて、約０〜１００℃（好ましくは約２０℃）で約１〜４８時間（好ましくは約２時間）にわたり、不活性雰囲気下に攪拌する。粗混合物をセライト層で濾過して、樹脂結合ホスフィン試薬を除去する。濾液を回収し、溶媒を減圧下に除去して粗生成物を得て、それを結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製することができる。
一般的手順Ｏの例示
製造例１３：１−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−エチル）−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（０．２５０ｇ、０．９５８ｍｍｏｌ）およびポリスチレン結合トリフェニルホスフィン（０．７ｇ、３ｍｍｏｌホスフィン／ｇ樹脂、２．１０ｍｍｏｌ）の混合物を、磁気攪拌子の取りつけた反応容器に入れた。フラスコを窒素で流し、脱水テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）およびジイソプロピルアゾジカルボキシレート（０．４２４ｇ、２．１０ｍｍｏｌ）を加えた。１，３−ジフルオロ−２−プロパノール（０．１８２ｇ、１．８９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で約２時間攪拌した。粗混合物をセライト層で濾過し、固体をテトラヒドロフランで洗浄した（３ｍＬで３回）。濾液を減圧下に濃縮して、１−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−エチル）−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンを得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で１０分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、５μｍ、１００Å、２５０×４．６ｍｍ）Ｒｔ７．９２分；ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋３４０。
一般的手順Ｐ：エステル加水分解
エステル（好ましくは１当量）および塩基（水酸化リチウム、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウム、好ましくは水酸化リチウム）（１〜３当量、好ましくは１．２当量）を、水および有機溶媒（例えば、メタノールまたはジメチルスルホキシド、好ましくはメタノール）の混合液中にて約５０〜１００℃（好ましくは約６０℃）で約１〜２４時間（好ましくは約１２時間）加熱する。冷却して室温とした後、揮発性溶媒を減圧下に除去して生成物を得て、それを結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製することができる。
一般的手順Ｐの例示
（実施例２７２）
トランス−４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−１−エチル−シクロヘキサンカルボン酸
Figure 2007520559
トランス−４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−１−エチル−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（一般的手順Ｓ、ＡおよびＣによって製造）（３．９４ｇ、７．１，３ｍｍｏｌ）の水酸化カリウム水溶液（１Ｎ、１６．４ｍＬ、１６．４ｍｍｏｌ）およびジメチルスルホキシド（２０ｍＬ）中の溶液を、約１００℃で約１５時間加熱した。反応混合物を冷却して室温とし、塩酸水溶液（１Ｎ、２０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を加えて、沈澱を得た。固体を濾過し、水およびエーテルの順で洗い、真空乾燥して、トランス−４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−１−エチル−シクロヘキサンカルボン酸を橙赤色固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（０．８ｍＬ／分で４．５分間かけて３０％〜９５％アセトニトリル／０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液；λ＝１９０〜７００ｎｍ；ジェネシスＣ１８、１２０Å、３μｍ、３０×４．６ｍｍカラム；陽イオンおよび陰イオンの両方を観察するエレクトロスプレーイオン化法）Ｒｔ２．２８分；ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋５２６。
一般的手順Ｐを用いて得られる他の生成物を示した（表９）。ＨＰＬＣ保持時間を測定するのに用いた方法は、括弧中で小文字で示してある（表１参照）。
Figure 2007520559
一般的手順Ｑ：酸のアミンとのＥＤＣ−カップリング
カルボン酸（好ましくは１当量）、アミン（遊離または塩）（好ましくはアミン）（１〜５当量、好ましくは３当量）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１〜３当量、好ましくは１．３当量）およびヒドロキシベンゾトリアゾール（１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾールまたは１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、好ましくは１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール）（１〜１．５当量、好ましくは１当量）の混合物を、有機溶媒（塩化メチレンまたはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）中にて約２０℃〜６０℃（好ましくは室温）で約１５〜４８時間（好ましくは約１５時間）攪拌する。溶媒を減圧下に留去し、混合物を有機溶媒で水から抽出する。有機抽出液を乾燥剤で脱水し、溶媒留去し、生成物を、結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製することができる。
一般的手順Ｑの例示
（実施例２７５）
トランス−（４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−１−エチル−シクロヘキシル）−モルホリン−４−イル−メタノン
Figure 2007520559
トランス−４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−１−エチル−シクロヘキサンカルボン酸（実施例２７２、３．７４ｇ、７．１３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）溶液に、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１．８５ｇ、９．６５ｍｍｏｌ）、モルホリン（２．７９ｍＬ、３２．０ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（０．９７ｇ、７．１３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で約１５時間攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、生成物をメタノール／酢酸エチル（１：９）で水から抽出した。有機分画を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。生成物を、移動相としてメタノール／塩化メチレン（１：２４）を用いる、トリエチルアミンで前処理したシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、トランス−（４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−１−エチル−シクロヘキシル）−モルホリン−４−イル−メタノンを黄色固体として得た（１．２１ｇ、２．０４ｍｍｏｌ）。ＲＰ−ＨＰＬＣ（０．８ｍＬ／分で４．５分間かけて３０％〜９５％アセトニトリル／０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液；λ＝１９０〜７００ｎｍ；ジェネシスＣ１８、１２０Å、３μｍ、３０×４．６ｍｍカラム；陽イオンおよび陰イオンの両方を観察するエレクトロスプレーイオン化法）Ｒｔ３．０３分；ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋５９５。
一般的手順Ｑを用いて得られる他の生成物を示した（表１０）。ＨＰＬＣ保持時間を測定するのに用いた方法は、括弧中で小文字で示してある（表１参照）。
Figure 2007520559
Figure 2007520559
Figure 2007520559
一般的手順Ｒ：アミンのＢｏｃ−保護
アミン（好ましくは１当量）の有機溶媒（例えば、（ジオキサン／水またはテトラヒドロフラン）溶液に、塩基（例えば、炭酸ナトリウム、炭酸セシウム、好ましくは炭酸ナトリウム）（１〜５当量、好ましくは２．４当量）の非存在下または存在下で、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（１〜５当量、好ましくは１．２当量）を加える。反応混合物を約０〜５０℃（好ましくは約２５Ｃ）で約１〜４８時間（好ましくは約１２時間）攪拌する。有機溶媒を減圧下に除去する。残留物を水と適切な有機溶媒との間で分配し、有機層を分離し、水層を有機溶媒でさらに抽出する。合わせた有機抽出液を乾燥剤で脱水する。溶媒を減圧下に留去して生成物を得て、それをに結晶化またはクロマトグラフィーよってさらに精製することができる。
一般的手順Ｒの例示
製造例１４．（Ｒ）−３−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
Figure 2007520559
（Ｒ）−３−ヒドロキシピペリジン塩酸塩（１０．３ｇ、０．０７５ｍｏｌ）のジオキサン／水（それぞれ８０ｍＬ）溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（２０ｇ、０．０９１ｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（１９ｇ、０．１８２ｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で約１６時間攪拌した。有機溶媒を減圧下に除去し、水層をジエチルエーテルで抽出した（１００ｍＬで３回）。合わせた有機抽出液をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に除去して、（Ｒ）−３−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１５．１ｇ、０．０７５ｍｏｌ）を無色油状物として得た。ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋２０２。
一般的手順Ｓ：ヒドロキシアルキルカルボン酸エステルのα−アルキル化
ヒドロキシアルキルカルボン酸エステル（好ましくは１当量）、シリル化剤（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロライドまたはトリエチルシリルクロライド、好ましくはｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロライド）（１〜３当量、好ましくは１．１５当量）、塩基（イミダゾールまたはトリエチルアミン、好ましくはイミダゾール）および触媒（ピリジンまたは４−ジメチルアミノピリジン、好ましくは４−ジメチルアミノピリジン）（０．０１〜１．０当量、好ましくは０．０４当量）の混合物を、有機溶媒（塩化メチレンまたはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）中にて室温で約１〜２４時間（好ましくは約１５時間）にわたって攪拌する。溶媒を減圧下に除去し、生成物を有機溶媒で水から抽出する。有機抽出液を乾燥剤で脱水し、濃縮してシリルエーテルを得て、それを、クロマトグラフィーによってさらに精製することができる。得られたシリルエーテル（好ましくは１当量）を有機溶媒（エーテルまたはテトラヒドロフラン、好ましくはテトラヒドロフラン）に溶かし、約−７８〜２５℃（好ましくは約０℃）にて強塩基（好ましくはリチウムジイソプロピルアミド）（２〜４当量、好ましくは２．５当量）でエノール化する。アルキルハライド（好ましくはヨウ化メチルまたはヨウ化エチル）（１〜１０当量、好ましくは３．５当量）を加え、反応液を約−７〜２５℃（好ましくは約２５℃）で約２〜２４時間（好ましくは約４時間）で攪拌する。溶媒を減圧下に除去し、得られたアルキル化エステルを、クロマトグラフィーによってさらに精製することができる。アルキル化エステル（好ましくは１当量）を、有機溶媒（好ましくはテトラヒドロフラン）中にて約０〜５０℃（好ましくは約２５℃）で約１〜２４時間（好ましくは約１５時間）にわたり、フッ化物源（フッ化カリウムまたはフッ化テトラブチルアンモニウム、好ましくはフッ化テトラブチルアンモニウム）（１〜２当量、好ましくは１．２当量）と混合する。溶媒を減圧下に除去し、生成物を有機溶媒で水から抽出し、クロマトグラフィーまたは結晶化によってさらに精製することができる。
一般的手順Ｓの例示
製造例１５：トランス−１−エチル−４−ヒドロキシ−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル
Figure 2007520559
４−ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸エチル（１６．０ｇ、９２．９ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロライド（１６．１ｇ、１０６．８ｍｍｏｌ）、イミダゾール（８．４１ｇ、１２３．５ｍｍｏｌ）およびアミノピリジン（０．４５３ｇ、３．７１ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５０ｍＬ）中混合物を、室温で約１５時間攪拌した。溶媒を減圧下に留去し、生成物を塩化アンモニウム水溶液からエーテル／石油エーテル（１：１）を用いて抽出した。有機抽出液を硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮し、残留物を、移動相としてエーテル／石油エーテル（１：１４）を用いるシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シリルオキシ）シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（２５．８ｇ、９０．２ｍｍｏｌ）を無色油状物として得た。ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋２８７。上記化合物（２５．８ｇ、９０．２ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（５０ｍＬ）溶液を氷冷したものを、リチウムジイソプロピルアミド（２２５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）溶液に約−７８℃で加えた。混合物を約−７８℃で約１時間攪拌し、昇温させて約０℃として約５分間経過させ、再度冷却して約−７８℃とした。ヨウ化エチル（２５．２ｍＬ、３１６ｍｍｏｌ）を注射器によって加え、混合物を昇温させて室温とした。室温で１時間後、過剰の塩基を塩化アンモニウム水溶液で分解し、揮発性溶媒を減圧下に除去した。生成物をエーテルで水から抽出し、濃縮し、エーテル／石油エーテル（１：１５）を移動相として用いるシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シリルオキシ）−１−エチルシクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（２７．３ｇ、８６．９ｍｍｏｌ）を無色油状物として得た。上記の生成物（２７．３ｇ、８６．９ｍｍｏｌ）を、フッ化テトラブチルアンモニウムのテトラヒドロフラン溶液（１Ｍ、１４４ｍＬ、１４４ｍｍｏｌ）と約０℃で混合し、反応混合物を昇温させて室温として１５時間経過させた。テトラヒドロフランを減圧下に除去し、残留物をエーテルで水（５００ｍＬ）から抽出した（５００ｍＬで５回）。合わせた有機抽出液を硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮した。生成物を、エーテル／石油エーテル（４：１）を移動相として用いるシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、トランス−１−エチル−４−ヒドロキシ−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（１７．３９ｇ、８７．０ｍｍｏｌ）を無色油状物として得た。
Figure 2007520559
一般的手順Ｔ：保護シクロヘキサノンの脱ケタール化
８−置換１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン（好ましくは１当量）および酸（例えば、塩酸、硫酸、シュウ酸またはトリフルオロ酢酸、好ましくはシュウ酸）（１〜１０当量、好ましくは３当量）の混合物を、水および有機溶媒（例えば、アセトン、エタノール、酢酸エチル、エチレングリコールジメチルエーテル、テトラヒドロフラン、トルエンまたは上記溶媒の混合液、好ましくはテトラヒドロフラン／水２：１）の混合液中、約０℃〜１２０℃（好ましくは約７０℃）で約１〜４８時間（好ましくは６時間）にわたって加熱する。溶媒を減圧下に除去する。残留物を水溶液と有機溶媒との間で分配し、有機層を分離し、水層を有機溶媒でさらに抽出する。合わせた有機抽出液を乾燥剤で脱水する。溶媒を減圧下に留去して所望の生成物を得て、それを、結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製することができる。
一般的手順Ｔの例示
製造例１６：４−（４−クロロ−５−ヨード−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−シクロヘキサノン
Figure 2007520559
４−クロロ−７−（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イル）−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（一般的手順Ａを介して製造）（０．４２０ｇ、０．００１０ｍｏｌ）のアセトン（２０ｍＬ）懸濁液に約０℃で、塩酸（６．０Ｍ、０．５５ｍＬ、０．００３３ｍｏｌ）を滴下漏斗によってゆっくり加えた。反応混合物を約０℃で約１時間、室温で約２４時間攪拌した。追加の塩酸（６．０Ｎ、０．２５ｍＬ、０．００１５ｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温でさらに３日間攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物を水で洗浄した。得られた沈澱を濾過し、水（１００ｍＬ）で洗浄した。真空乾燥して、４−（４−クロロ−５−ヨード−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−シクロヘキサノン（０．３１９ｇ、０．００８５ｍｏｌ）を得た。
Figure 2007520559
ＲＰ−ＨＰＬＣ（０．８ｍＬ／分で４．５分間かけて３０％〜９５％アセトニトリル／０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液；λ＝１９０〜７００ｎｍ；ジェネシスＣ１８、１２０Å、３μｍ、３０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ２．８０分。
一般的手順Ｕ：ケトンまたはエステルのアルコールへの還元
還元剤（水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素トリ−ｓｅｃ−ブチルリチウム、水素化リチウムアルミニウムまたは水素化ホウ素トリエチルリチウム、好ましくはケトンの場合は水素化ホウ素ナトリウム、エステルの場合は水素化リチウムアルミニウム）（１〜１０当量、好ましくは２当量）を、ケトンまたはエステル（好ましくは１当量）の有機溶媒（メタノールまたはテトラヒドロフラン、好ましくはテトラヒドロフラン）溶液に、約−７８℃〜室温（好ましくは約−７０℃）で少量ずつ加える。反応が完結するまで、反応液を室温で約１〜７２時間（好ましくは約２時間）撹拌する。少量の水を加えることで、過剰の還元剤を分解する。得られた混合物を水層と有機溶媒との間で分配する。有機相を分離し、飽和ブライン溶液で洗浄し、乾燥剤で脱水する。溶媒を減圧下に除去して粗生成物を得て、それを、結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製することができる。
一般的手順Ｕの例示
（実施例３１０）
トランス−４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキサノール
（実施例３１１）
シス−４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキサノール
Figure 2007520559
４−（４−アミノ−３−｛４−［（５，７−ジメチル−１，３−ベンゾオキサゾール−２−イル）アミノ］フェニル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ジピリミジン−１−イル）−１−シクロヘキサノン（０．１５ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）および水素化ホウ素ナトリウム（０．０１５ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）の混合物を、メタノール（１０ｍＬ）中にて室温で約７２時間撹拌しながら、その間に追加の水素化ホウ素ナトリウム（０．０５５ｇ、１４５ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えて反応を完結させた。水（０．１ｍＬ）を加えることで反応を停止し、溶媒を減圧下に除去した。粗固体を、０％から６％メタノール（２８％アンモニア水２％含有）／塩化メチレンの勾配を移動相として用いるシリカでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、トランス−４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキサノール（０．０５３ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を含む相対的に遅れて溶出する分画を白色固体として得て［ＲＰ−ＨＰＬＣ（１ｍＬ／分で１０分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１０．０５分；ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋４７０．３］、シス−４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキサノール（０．０２３ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を含む相対的に先に溶出する分画を白色固体として［ＲＰ−ＨＰＬＣ（１ｍＬ／分で１０分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１０．２９分；ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋４７０．３］得た。
一般的手順Ｕを用いて得られる他の生成物を示した（表１１）。ＨＰＬＣ保持時間を測定するのに用いた方法は、括弧中で小文字で示してある（表１参照）。
Figure 2007520559
一般的手順Ｖ：アルコールのメシル化とそれに続くメシレート基の置き換え
アルコール（好ましくは１当量）を、有機溶媒（好ましくは塩化メチレン）および有機塩基（水素化ナトリウム、ピリジン、好ましくはピリジン）の混合物に溶かす。メタンスルホニルクロライド（１〜６当量、好ましくは１．６当量）を加え、反応混合物を約１０〜６０℃（好ましくは約２５℃）で連続窒素気流下に約１０〜８０時間（好ましくは約４０時間）攪拌する。溶媒を減圧下に除去し、残留物を水で磨砕する。沈澱を濾過によって回収し、水で洗浄する。沈澱を真空乾燥し、適宜に磨砕、結晶化またはクロマトグラフィーによって精製する。
メシレート（好ましくは１当量）を有機溶媒（Ｎ−メチルピロリジノン、ジメチルスルホキシドまたはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）に溶かし、無機塩基（炭酸セシウム、炭酸ナトリウムまたは水素化ナトリウム、好ましくは水素化ナトリウム）（１〜１０当量、好ましくは５当量）を加え、次に求核剤（１〜１０当量、好ましくは５当量）を加える。反応混合物を約３０〜７０℃（好ましくは約５５℃）で約１０〜１００時間（好ましくは２４時間）連続窒素気流下に加熱する。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を結晶化またはクロマトグラフィーによって精製する。
一般的手順Ｖの例示
製造例１７：トランス−３−ヨード−１−（４−ピラゾール−１−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
シス−４−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−シクロヘキサノール（２．００ｇ、０．００５５７ｍｏｌ）、塩化メチレン（２０ｍＬ）およびピリジン（２０ｍＬ）の混合物に、メタンスルホニルクロライド（０．７２ｍＬ、０．００９３０ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を約２５℃で連続窒素気流下に約３０時間攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物を水（２５ｍＬ）で磨砕した。沈澱をろ過によって回収し、水で洗浄し、２４時間真空乾燥し、ガラスフィルターに乗せ、酢酸エチルで洗浄し、２４時間真空乾燥して、メタンスルホン酸シス−４−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−シクロヘキシル（１，４６ｇ、０．００３ｍｏｌ）をオフホワイト固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で２０分間かけて５％〜８５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１２．１４分。メタンスルホン酸シス−４−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−シクロヘキシル（０．６８ｇ、０．００１５６ｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）に溶かし、水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散品、０．３１ｇ、０．００７６４ｍｏｌ）およびピラゾール（０．５３ｇ、０．００７７８ｍｏｌ）をその順に加えた。反応混合物を約５５℃で約２４時間にわたり連続窒素気流下に加熱した。反応混合物を減圧下に濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製して、トランス−３−ヨード−１−（４−ピラゾール−１−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（０．１５２ｇ、０．０００３７１ｍｏｌ）を白色固体として得た。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋４１０。
一般的手順Ｗ：アミンの酸クロライド、スルホニルクロライドまたは無水物によるアシル化
アミン（１〜１．２５当量、好ましくは１当量）、塩基（例えば、ピリジン、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン、好ましくはトリエチルアミン）（１〜５当量、好ましくは４当量）およびアシルクロライド、スルホニルクロライドもしくは酸無水物のいずれか（１〜１．２５当量、好ましくは１．０４当量）の混合物を、有機溶媒（例えば塩化メチレンまたはテトラヒドロフラン、好ましくは塩化メチレン）中、約−１０〜５０℃（好ましくは約０℃）で約２〜１０時間（好ましくは約５時間）攪拌する。アルコール（例えばメタノールまたはエタノール、好ましくはメタノール）または水で反応停止し、混合物をを昇温させて室温とする。溶媒を減圧下に除去し、残留物をクロマトグラフィーまたは結晶化によって精製しても良い。
一般的手順Ｗの例示
（実施例３１３）
１−（４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチルベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−ピペリジン−１−イル）−２−メチルプロパン−１−オン
Figure 2007520559
３−［４−（５，７−ジメチルベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−ピペリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（０．０５８５、０．１３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．０５４７、０．５４ｍｍｏｌ）の脱水塩化メチレン（２ｍＬ）混合物に約０℃で、イソブチリルクロライド（０．０１４４ｇ、０．１３５ｍｍｏｌ）の脱水塩化メチレン（２ｍＬ）溶液を加え、得られた混合物を約０℃で約５時間攪拌した。．メタノール（１ｍＬ）を加え、得られた混合物を１時間攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物を、質量動作分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（２５ｍＬ／分で７分間かけて２５％から７５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）、２分間の１００％アセトニトリル、１．５分間かけて１００％から２５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム；ハイパージルＢＤＳＣ１８、１００Å、５μｍ、１００×２１．２ｍｍカラム）によって精製して、１−（４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチルベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−ピペリジン−１−イル）−２−メチルプロパン−１−オン（０．０４３ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（２ｍＬ／分で３．５分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５０〜４７０ｎｍ；ペコスフィア（Pecosphere）Ｃ１８、３μｍ、３３×４．６ｍｍ；陽イオンおよび陰イオンの両方を観察するエレクトロスプレーイオン化法）Ｒｔ２．８分；ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋５２５。
一般的手順Ｗを用いて得られる他の生成物を示した（表１２）。ＨＰＬＣ保持時間を測定するのに用いた方法は、括弧中で小文字で示してある（表１参照）。
Figure 2007520559
Figure 2007520559
Figure 2007520559
Figure 2007520559
一般的手順Ｘ：アルコールのＯ−アルキル化
アルコール（好ましくは１当量）および塩基（例えば、水素化ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムまたはナトリウム、好ましくは水酸化カリウム）（１−１０当量、好ましくは４当量）の有機溶媒（例えば、アセトン、エタノール、酢酸エチル、エチレングリコールジメチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサンまたはジメチルスルホキシド、好ましくはジメチルスルホキシド）中混合物を、求電子化合物（例えば、アルキルブロマイド、アルキルヨージド、アルキルトシレートまたはエポキシド、好ましくはアルキルブロマイド）（１〜１０当量、好ましくは３当量）で約０〜１２０℃（好ましくは約２０℃）にて約１〜４８時間（好ましくは１８時間）処理する。反応混合物を、水溶液と有機溶媒との間で分配し、有機層を分離し、水層を有機溶媒でさらに抽出する。合わせた有機抽出液を乾燥剤で脱水する。溶媒を減圧下に留去して所望の生成物を得て、それを、結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製することができる。
一般的手順Ｘの例示
製造例１８：シス−４−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−シクロヘキサノール
Figure 2007520559
シス−シクロヘキサン−１，４−ジオール（J. Org. Chem., 1962, 27, 4708-4709）（５．５５ｇ、０．０４７８ｍｏｌ）および水酸化カリウム（３．２２ｇ、０．０５７３ｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（５０ｍＬ）中混合物に、２，２−ジメチル−オキシラン（４．６９ｍＬ、０．０５２６ｍｏｌ）をゆっくり加えた。反応混合物を約５０℃で約１８時間加熱した。溶媒を減圧下に除去した。水を加え（１００ｍＬ）、水層をジエチルエーテル（７５ｍＬで６回）、次に塩化メチレン（１００ｍＬで３回）で抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下に濃縮した。残留物を移動相として酢酸エチル／塩化メチレン（１：１）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、シス−４−（２−ヒドロキシ−２−メチル−プロポキシ）−シクロヘキサノール（３．５５ｇ、０．０１８９ｍｏｌ）を得た。ｍ／ｚ１８９（Ｍ＋Ｈ）＋。
一般的手順Ｙ：２，５−ジケトピペラジン合成
２−ハロ−アセチルアミノ酢酸エステル（好ましくは１当量）および１級アミン（例えば、メチルアミン、エチルアミン、２−プロピルアミン）（１〜１０当量、好ましくは４当量）の混合物を、有機溶媒（例えば、アセトン、エタノール、酢酸エチル、エチレングリコールジメチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、ジメチルスルホキシド、好ましくはテトラヒドロフラン）中にて約０〜１２０℃（好ましくは約２０℃）で約１４８時間（好ましくは１８時間）攪拌する。反応混合物からの沈澱を濾過し、水で洗浄する。固体を真空乾燥して所望の生成物を得て、それを結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製することができる。
一般的手順Ｙの例示
製造例１９：シス−１−［４−（４−クロロ−５−ヨード−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−シクロヘキシル］−４−メチル−ピペラジン−２，５−ジオン
Figure 2007520559
シス−｛（２−クロロ−アセチル）−［４−（４−クロロ−５−ヨード−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）シクロヘキシル］−アミノ酢酸メチル（０．２００ｇ、０．０００３８ｍｏｌ）およびメチルアミン（２．０Ｍテトラヒドロフラン溶液、０．７６ｍＬ、０．００１５ｍｏｌ）の混合物を、テトラヒドロフラン（８ｍＬ）中にて約２０℃で約１８時間攪拌した。沈澱を濾過し、水で洗浄した。固体を真空乾燥して、シス−１−（４−（４−クロロ−５−ヨード−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−シクロヘキシル］−４−メチル−ピペラジン−２，５−ジオン（０．１５２ｇ、０．０００３１ｍｏｌ）を得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（０．８ｍＬ／分で４．５分間かけて３０％〜９５％アセトニトリル／０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液；λ＝１９０〜７００ｎｍ；ジェネシスＣ１８、１２０Å、３μｍ、３０×４．６ｍｍカラム；陽イオンおよび陰イオンの両方を観察するエレクトロスプレーイオン化法）Ｒｔ２．１３分；ｍ／ｚ：４８８（Ｍ＋Ｈ）＋。
一般的手順Ｚ：ホモケトピペラジンの合成
ジアミン（２当量）およびハロ酢酸エステル（１当量）のエタノール中混合物を室温で終夜攪拌状態とし、得られた沈澱を濾過によって除去する。ナトリウムエトキシド（１当量）を濾液に加え、１〜４８時間（好ましくは１６時間）加熱還流する。混合物を放冷して室温とし、溶媒を減圧下に除去して生成物を得て、それを結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製することができる。
一般的手順Ｚの例示
製造例２０：［１，４］−ジアゼパン−２−オン
Figure 2007520559
プロパン−１，３−ジアミン（１０．００ｇ、０．１３５ｍｏｌ）およびブロモ酢酸エチルエステル（１１．２６０ｇ、０．０６７ｍｏｌ）のエタノール（１００ｍＬ）中混合物を、室温で窒素雰囲気下に終夜攪拌した。沈澱を濾過によって除去し、得られた濾液にナトリウムエトキシド（５．２００ｇ、０．０７６ｍｏｌ）を加えた。混合物を約１６時間加熱還流した。混合物を放冷して室温とし、溶媒を減圧下に除去して黒色油状物を得て、それを移動相として酢酸エチルと次に酢酸エチル／メタノール（７０：３０）を用いるシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、［１，４］−ジアゼパン−２−オンを白色固体として得た（２．０５１ｇ、０．０１８０ｍｏｌ）。
Figure 2007520559
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋１１５。
一般的手順ＡＡ：ジアミンおよびアミノアルコールのカルボニル化的環化
ジ−イミダゾール−１−イル−メタノン（１〜２当量、好ましくは１．５当量）を、アミノ−アルコールまたはジアミン（好ましくは１当量）のテトラヒドロフランまたはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの有機溶媒溶液に加える。混合物を約０〜５０℃で約１〜２４時間攪拌する。溶媒を減圧下に除去して生成物を得て、それをクロマトグラフィーまたは結晶化、によってさらに精製することができる。
一般的手順ＡＡの例示
製造例２１：３−［４−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−シクロヘキシル］−オキサゾリン−２−オン
Figure 2007520559
２−［４−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−シクロヘキシルアミノ］エタノール（２．１８８ｇ、５．４４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１５０ｍＬ）溶液に、カルボニルジイミダゾール（１，３２６ｇ、８．１６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で約１５時間攪拌した。溶媒を減圧下に除去して生成物を得て、それを移動相として塩化メチレン／メタノール／２８％アンモニア水（９８：１．９：０．１）を用いるシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、３−［４−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−シクロヘキシル］−オキサゾリジン−２−オンを白色固体として得た（０．８００ｇ、１．８７ｍｍｏｌ）。ＲＰ−ＨＰＬＣ（０．８ｍＬ／分で６分間かけて１０％〜８０％アセトニトリル／０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝１９０〜７００ｎｍ；ジェネシスＣ１８、１２０Å、３μｍ、３０×４．６ｍｍカラム；陽イオンおよび陰イオンの両方を観察するエレクトロスプレーイオン化法）Ｒｔ４．４２分；ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋４２９。
一般的手順ＢＢ：ケトモルホリン合成
置換アミノエタノール（１〜２当量、好ましくは１当量）の有機溶媒（好ましくはトルエン）溶液に室温デカ−ロロ酢酸メチルエステル（１〜２当量、好ましくは１当量）および水素化ナトリウム（１〜２当量、好ましくは１．１当量）を加えた。反応混合物を室温で約１０〜３０分間（好ましくは約１５分間）攪拌し、次に約８〜１６時間（好ましくは約８時間）還流させる。冷却して室温とした後、溶媒を減圧下に除去する。残留物を塩基性水溶液（例えば、飽和炭酸カリウム溶液）と有機溶媒との間で分配する。有機層を分離し、水層を有機溶媒でさらに抽出する。合わせた有機抽出液を乾燥剤で脱水し、溶媒を減圧下に除去して生成物を得て、それをクロマトグラフィーまたは結晶化によってさらに精製することができる。
一般的手順ＢＢの例示
製造例２２：４−（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イル）−モルホリン−３−オン
Figure 2007520559
２−（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イルアミノ）エタノール（６．４２ｇ、３２ｍｍｏｌ）のトルエン（１００ｍＬ）溶液に、室温で攪拌しながら、クロロ酢酸メチルエステル（２．８ｍＬ、３２ｍｍｏｌ）および水素化ナトリウム（６０％オイル中分散品、１４ｇ、３５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で約１５分間攪拌し、次に約８時間還流させた。冷却して室温とした後、トルエンを減圧下に除去した。残留物を飽和水溶液炭酸カリウム溶液（４０ｍＬ）と酢酸エチル（５０ｍＬ）との間で分配した。有機層を分離し、水層を酢酸エチルでさらに抽出した（５０ｍＬで３回）。合わせた有機抽出液を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に除去して、４−（１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イル）−モルホリン−３−オン（６．７ｇ、２７．８ｍｍｏｌ）を黄色油状物として得た。
Figure 2007520559
一般的手順ＣＣ：シリル保護アルコールの脱保護
シリル保護アルコールおよびフッ化物源（例えば、フッ化テトラブチルアンモニウム）（１０〜２０当量、好ましくは約１６当量）の混合物を、約２５〜６０℃（好ましくは約４０℃）で約２４〜７２時間（好ましくは約４８時間）攪拌する。溶媒を減圧下に除去し、残留物を塩基性水溶液（例えば、飽和炭酸ナトリウム溶液）と有機溶媒との間で分配する。有機層を分離し、水層を有機溶媒でさらに抽出する。合わせた有機抽出液を乾燥剤で脱水し、溶媒を減圧下に除去する。その化合物を、クロマトグラフィーまたは結晶化によってさらに精製することができる。
一般的手順ＣＣの例示
製造例２３：シス−｛２−（４−ベンジルオキシ−シクロヘキシルオキシ）−エタノール｝
Figure 2007520559
シス−｛［２−（４−ベンジルオキシ−シクロヘキシルオキシ）−エトキシ］−ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラン｝（３．４９ｇ、９．５８ｍｍｏｌ）およびフッ化テトラブチルアンモニウム（１Ｍテトラヒドロフラン溶液、１５３ｍＬ、１５３ｍｍｏｌ）の混合物を、約４０℃で約４８時間攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物を飽和炭酸ナトリウム水溶液（４０ｍＬ）と塩化メチレン（５０ｍＬ）との間で分配した。有機層を分離し、水層を塩化メチレンでさらに抽出した（５０ｍＬで３回）。合わせた有機抽出液を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に除去して黄色油状物を得た。化合物を、移動相として酢酸エチル／ヘプタン（１：１）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによってさらに精製して、シス−（２−（４−ベンジルオキシ−シクロヘキシルオキシ）エタノール（２．３ｇ、９．２ｍｍｏｌ）を得た。
Figure 2007520559
ＴＬＣ（酢酸エチル／ヘプタン１：１）Ｒｆ０．３０。
一般的手順ＤＤ：トリフルオロメトキシエーテルの合成
１級アルコール（好ましくは１当量）、水素化ナトリウム（１〜１０当量、好ましくは１．３当量）、イミダゾール（０．０２〜０．０４当量、好ましくは０．０３当量）および脱水有機溶媒（例えば、ジメチルスルホキシドまたはテトラヒドロフラン、好ましくはテトラヒドロフラン）の混合物を、窒素雰囲気下に約３〜５時間（好ましくは約３時間）還流させる。冷却して室温とした後、二硫化炭素（４〜１０当量、好ましくは５当量）を加え、反応液を約３０分間加熱還流する。反応混合物を再度冷却して室温とし、ヨウ化メチル（２〜７当量、好ましくは４．８当量）を加える。得られた混合物を約３０分間還流てから、酸（好ましくは酢酸）で中和し、水で洗浄し、有機溶媒で抽出する。合わせた有機抽出液を乾燥剤で脱水し、溶媒を減圧下に除去する。化合物を、フラッシュクロマトグラフィーによってさらに精製して、アルキルジチオカルボン酸Ｓ−メチルエステルを得る。
ポリプロピレン容器に、１，３−ジブロモ−５，５−ジメチルヒダントイン（２〜５当量、好ましくは３当量）および塩化メチレンを入れた。懸濁液を冷却して約−７８℃とし、フッ化水素（７０％フッ化水素のピリジン溶液、５０〜１００当量、好ましくは８０当量）を加える。得られた懸濁液を約−７８℃で攪拌する。ジチオカルボン酸Ｓ−メチルエステル（１当量）の塩化メチレン溶液を−７８℃で加える。添加完了後、アセトン−ドライアイス浴を氷−塩浴に交換する。得られた赤褐色反応混合物をその温度で約３０分間攪拌し、約０℃のエーテル（３０ｍＬ）で希釈し、赤褐色が消えるまで、亜硫酸水素ナトリウム水溶液／重炭酸ナトリウム／水酸化ナトリウム（ｐＨ１０）の氷***液を注意深く加えることで反応停止する。氷冷水酸化ナトリウム（３０％水溶液）をゆっくり加えることで、ｐＨ値を約０℃で１０に再調節し、得られた混合物をジエチルエーテルで希釈する。有機層を分離し、水層をジエチルエーテルで抽出する。合わせた有機相をブラインで洗浄し、乾燥剤で脱水し、溶媒を減圧下に除去し、クロマトグラフィーまたは結晶化によってさらに精製する。
一般的手順ＤＤの例示
製造例２４：シス−｛［４−（２−トリフルオロメトキシ−エトキシ）−シクロヘキシルオキシメチル］−ベンゼン｝
Figure 2007520559
シス−｛２−｛（４−ベンジルオキシ）シクロヘキシルオキシ）｝−エタノール］（１．１４ｇ、４．５６ｍｍｏｌ）、水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散品、２３７ｍｇ、５．９２ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（８．９ｍｇ、０．１３６ｍｍｏｌ）の脱水テトラヒドロフラン（１９ｍＬ）中混合物を、窒素雰囲気下に約３時間加熱還流した。冷却して室温とした後、二硫化炭素（１．３７ｍＬ、２，２．７９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を約３０分間加熱還流した。反応混合物を再度冷却して室温とし、ヨウ化メチル（１．３６ｍＬ、２１．８８ｍｍｏｌ）を滴下した。得られた混合物をさらに約３０分間加熱還流した。反応混合物を酢酸で中和した。水（１０ｍＬ）で洗浄し、塩化メチレンで抽出した（２０ｍＬで４回）。合わせた有機抽出液を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に除去して、橙赤色油状物を得た。化合物を、移動相として酢酸エチル／ヘプタン（９：９１）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、シス−｛ジチオカルボン酸Ｏ−［２−（４−ベンジルオキシ−シクロヘキシルオキシ）−エチル］エステルＳ−メチルエステル｝（１．０ｇ、２．９４ｍｍｏｌ）を得た。
Figure 2007520559
ＴＬＣ（酢酸エチル／ヘプタン３：７）Ｒｆ０．５７。
乾燥ポリプロピレン製丸底管を窒素で流し、１，３−ジブロモ−５，５−ジメチルヒダントイン（２．７６ｇ、９．４６ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（７０ｍＬ）を入れた。その懸濁液を冷却して−７８℃とし、約１０分間攪拌した。その混合物に、フッ化水素（７０％フッ化水素のピリジン溶液、６．３１ｍＬ、２５２．４ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。得られた懸濁液を約−７８℃で攪拌し、シス−｛ジチオカルボン酸Ｏ−［２−（４−ベンジルオキシ−シクロヘキシルオキシ）−エチル］エステルＳ−メチルエステル｝（１．０８ｇ、３．１６ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１０ｍＬ）溶液を約−７８℃としたものにカニューレによって滴下した。滴下完了後、反応液を昇温させて約−１０℃として３０分間経過させ、約０℃のエーテル（３０ｍＬ）で希釈し、混合物の赤褐色が約０℃で消えるまで、氷冷亜硫酸水素ナトリウム／重炭酸ナトリウム／水酸化ナトリウム（ｐＨ１０）溶液を加えることで反応停止した。氷冷水酸化ナトリウム（３０％水溶液）を加えることで、約０℃でｐＨ値を再調節して１０とし、混合物をエーテル（１００ｍＬ）で希釈した。有機層を分離し、水層をジエチルエーテルで抽出した（３０ｍＬで４回）。合わせた有機相をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に除去して、黄色油状物を得た。化合物を、移動相として酢酸エチル／ヘプタン（１：２０）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、シス−｛［４−（２−トリフルオロメトキシ−エトキシ）−シクロヘキシルオキシメチル］−ベンゼン｝（５７１ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ）を得た。
Figure 2007520559
ＴＬＣ（酢酸エチル／ヘプタン１：１０）Ｒｆ０．２１。
一般的手順ＥＥ：スルフィドのスルホキシドまたはスルホンへの酸化
スルフィド化合物（好ましくは１当量）、３−クロロ過安息香酸（１〜５当量、好ましくはスルホキシドへの酸化の場合は１当量、またはスルホンへの酸化では２当量）および炭酸カルシウム（１〜１０当量、好ましくは４当量）の混合物を、反応が完結するまで、有機溶媒（好ましくは塩化メチレン）中にて室温で約１〜２４時間（好ましくは約６時間）攪拌する。溶媒を減圧下に除去し、粗生成物を結晶化またはクロマトグラフィーによってさらに精製することができる。
一般的手順ＥＥの例示
（実施例３６０）
３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロ−１−チオピラン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（テトラヒドロ−チオピラン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（０．２ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）、３−クロロ過安息香酸（０．１８３ｇ、１．０６ｍｍｏｌ）および炭酸カルシウム（０．１７ｇ、１．７０ｍｍｏｌ）の混合物を、塩化メチレン（１５ｍＬ）中にて室温で不活性雰囲気下に約２時間攪拌した。追加の３−クロロ過安息香酸（０．１３５ｇ、０．７８ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で約２４時間攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、粗生成物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（２１ｍＬ／分で２５分間かけて１０％から６０％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）、次に５分間かけて６０％から１００％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパープレプ（Hyperprep；登録商標）ＨＳＣ１８、８μｍ、２５０×２１．２ｍｍカラム）によって精製して、３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロ−１−チオピラン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（０．０８０ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）をオフホワイト固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で２０分間かけて５％〜８５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１９．００分；ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋５０４．４。
（実施例３６１）
トランス−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−７−［４−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−シクロヘキシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
４−［４−アミノ−５−（４−アミノ−３−フルオロ−フェニル）−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル］−シクロヘキサノン（一般的手順Ａ、Ｂ、Ｔ、ＣおよびＬによって製造）（０．２００ｇ、０．５９０ｍｍｏｌ）およびトシルメチルイソシアニド（０．１２６ｇ、０．６４５ｍｍｏｌ）のエチレングリコールジメチルエーテル（６ｍＬ）およびｔｅｒｔ−ブチルアルコール（３ｍＬ）中混合物を冷却して約０℃とした。カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．１４８ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を昇温させて室温とし、その温度で約１５時間攪拌した。混合物を水（１０ｍＬ）で希釈し、生成物をメタノール／塩化メチレンで抽出した（１：９、１５ｍＬで３回）。有機分画を硫酸マグネシウムで脱水し、濃縮し、生成物を、移動相としてメタノール／酢酸エチル（１：２８）を用いるトリエチルアミン処理シリカでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、トランス−４−［４−アミノ−５−（４−アミノ−３−フルオロ−フェニル）−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル］−シクロヘキサンカルボニトリル（５５ｍｇ、０．１５７ｍｍｏｌ）を橙赤色固体として得た。ＲＰ−ＨＰ（１ｍＬ／分で１０分間かけて２５％から１００％アセトニトリル／０．１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液、ハイパージルＨＳＣ１８、２５０×４．６ｍｍカラム使用、λ＝２５４ｎｍ）Ｒｔ７．６７分。一般的手順Ｇを用い、上記化合物を用いてトランス−４−｛４−アミノ−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−シクロヘキサンカルボニトリルを形成した（０．０３８ｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）；ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．０ｍＬ／分で１０分間かけて２５％〜１００％アセトニトリル／緩衝してｐＨ４．５した０．１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１１．４３分。上記化合物（０．０３８ｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（３０．０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）および塩化アンモニウム（０．４５ｍｍｏｌ）を封管中１１５℃で４日間にわたり、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中で攪拌した。混合物を冷却して室温とし、濾過し、生成物を分取ＨＰＬＣ（２１ｍＬ／分で２０分間かけて２５％から１００％アセトニトリル／０．１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＨＳＣ１８、５μｍ、１００Å、２５０×２１ｍｍカラム）によって精製して、トランス−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３フルオロ−フェニル］−７−（４−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−シクロヘキシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（０．０１２ｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）を黄色粉末として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．０ｍＬ／分で１０分間かけて２５％〜１００％アセトニトリル／０．１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ８．８２分；ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋５３９。
Figure 2007520559
（実施例３６２）
３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（１０ｇ、３８．３１ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）およびジメチルスルホキシド（２９ｍＬ）溶液を、不活性雰囲気下に水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散品、２．４５ｇ、６１２９ｍｍｏｌ）で処理した。水素発生が停止した後、反応混合物を氷浴で冷却して約０℃とし、約３０分間かけて｛２−（クロロメトキシ）エチル｝トリメチルシラン（７．６６ｇ、４５．９７ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた。氷浴を外し、反応液を室温で約２０時間攪拌した。得られた混合物を氷水（４００ｍＬ）に投入し、沈澱を濾過し、真空乾燥して、３−ヨード−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（１４ｇ、３５．７８ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。ｍ／ｚ３９２．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
一般的手順Ｃを用い、３−ヨード−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（１ｇ、２．５６ｍｍｏｌ）を反応させて、３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（０．６０ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を明褐色固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で１０分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１２．６分；ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋５０２。
（実施例３６３）
３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
（実施例３６４）
３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−エトキシメチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−Ｉ−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ピリミジン−４−イルアミン（０．５５ｇ、１．１ｍｍｏｌ）の塩酸水溶液（６Ｎ、１２．５ｍＬ）およびエタノール（５ｍＬ）混合液中の懸濁液を、約５０℃で約２４時間加熱した。反応混合物を氷浴で冷却し、水酸化ナトリウム水溶液（５０重量％溶液）を滴下して、ｐＨを１４に調節した。得られた混合物を塩化メチレンで抽出した（２０ｍＬで２回）。合わせた有機層を飽和ブライン溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下に濃縮した。粗固体をＲＰクロマトグラフィー（２１ｍＬ／分で２５分間かけて１０％から６０％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）、次に５分間かけて６０％から１００％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパープレプＨＳＣ１８、８μｍ、２５０×２１．２ｍｍカラム）によって精製して、白色固体としての３−（４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（０．２２ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）［ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で１０分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ９．２分；ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）−３７０］およびオフホワイト固体としての３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−エトキシメチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（０．０２２ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）［ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で１０分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１０．９分；ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋４３０］を得た。
（実施例３６５）
シス−３−｛４−アミノ−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−シクロペタノール
Figure 2007520559
シス−４−｛４−アミノ−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−シクロペント−２−エンオール（０．１ｇ、０．２，２ｍｍｏｌ）のメタノール（１００ｍＬ）中冷懸濁液に、水酸化パラジウム（２０重量％Ｐｄ）／炭素（０．０８０ｇ）をゆっくり加えた。混合物を封管中で水素圧下（約０．３４ＭＰａ（５０ｐｓｉ））にて室温で約１８時間攪拌した。得られた混合物をセライトで濾過した。濾液を濃縮し、真空乾燥して、シス−３−｛４−アミノ−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−シクロペンタノール（０．１０１ｇ、０．２，２ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１ｍＬ／分で１０分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１０．８分；ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋４５５。
（実施例３６６）
シス−３−｛４−アミノ−５−［４−（５−クロロ−７−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−シクロペンタノール酢酸塩
Figure 2007520559
シス−４−｛４−アミノ−５−［４−（５−クロロ−７−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−シクロペント−２−エンオール（０．１ｇ、０．２１ｍｍｏｌ）のメタノール（１００ｍＬ）懸濁液を冷却したものに、水酸化パラジウム（２０重量％Ｐｄ）／炭素（０．０８０ｇ）をゆっくり加えた。混合物を、封管中にて水素圧下に（約０．３４ＭＰａ（５０ｐｓｉ））室温で約２時間攪拌した。得られた混合物をセライトで濾過し、濾液を減圧下に濃縮した。粗生成物をＲＰクロマトグラフィー（２１ｍＬ／分で２５分間かけて１０％から６０％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）、次に５分間かけて６０％から１００％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパープレプ（登録商標）ＨＳＣ１８、１００Å、８μｍ、２５０×２１．２ｍｍカラム）によって精製して、シス−３−｛４−アミノ−５−［４−（５−クロロ−７−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−シクロペンタノール・１酢酸塩（０．０４９ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１ｍＬ／分で１０分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１１．２分；ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋４７５。
（実施例３６７）
トランス−｛４−［４−アミノ−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル］−フェニル｝−ベンゾチアゾール−２−イル−メタノール
Figure 2007520559
ベンゾチアゾール（０．４１６ｇ、３．０８ｍｍｏｌ）および脱水テトラヒドロフラン（１５ｍＬ）を、磁気攪拌子を取りつけた反応容器に入れた。フラスコを窒素で流し、混合物を冷却して約−７８℃としてから、ｎ−ブチルリチウム（１．９５Ｍヘキサン溶液、１．５８ｍｏｌ、３．０９ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を約−７８℃で約３時間攪拌した。次に、４−［４−アミノ−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル］−ベンズアルデヒド（一般的手順Ａ、Ｔ、ＪおよびＣを用いて３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンから製造）（０．５０ｇ、１．２３ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を昇温させて室温とし、約１６時間攪拌した。反応混合物を、飽和塩化アンモニウム水溶液（４０ｍＬ）を加えることで反応停止した。テトラヒドロフランを減圧下に除去し、得られた水系混合物を酢酸エチルで抽出した（１５ｍＬで３回）。合わせた分画を無水硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下に濃縮した。粗生成物をＲＰ−ＨＰＬＣ（２１ｍＬ／分で２５分間かけて１０％から８０％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパープレプ（登録商標）Ｃ１８、１００Å、８μｍ、２５０×２１．２ｍｍ）によって精製して、トランス−｛４−［４−アミノ−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル］−フェニル｝−ベンゾチアゾール−２−イル−メタノールを白色固体として得た（０．０５７ｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．０ｍＬ／分で２０分間かけて５％〜８５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、５μｍ、１００Å、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１４．０６分；ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋５４２。
（実施例３６８）
トランス−｛４−［４−アミノ−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル］−フェニル｝−フェニル｝−ベンゾチアゾール−２−イル−メタノン
Figure 2007520559
トランス−｛４−［４−アミノ−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル］−フェニル｝−ベンゾチアゾール−２−イル−メタノール（実施例３６７）（０．０５０ｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）、二酸化マンガン（０．０４０ｇ、０．４６０ｍｍｏｌ）およびメタノール（１５ｍＬ）を反応フラスコに入れた。混合物を窒素雰囲気下に室温で約４８時間攪拌した。粗混合物をセライト層で濾過し、メタノールで洗浄した（５ｍＬで３回）。濾液を減圧下に濃縮し、粗生成物をＲＰ−ＨＰＬＣ（２１ｍＬ／分で２５分間かけて１０％から８０％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム；λ＝２５４ｎｍ；ハイパープレプ（登録商標）Ｃ１８、１００Å、８μｍ、２５０×２１．２ｍｍ）によって精製して、トランス−｛４−［４−アミノ−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル］−フェニル｝−ベンゾチアゾール−２−イル−メタノンを白色固体として得た（０．０３７ｇ、０．０６８６ｍｍｏｌ）；ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．０ｍＬ／分で１０分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、５μｍ、１００Å、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ９．６６分；ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋５４０。
（実施例３６９）
［４−（４−アミノ−１−シクロペンチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル）−フェニル］−ベンゾチアゾール−２−イル−メタノール
Figure 2007520559
ベンゾチアゾール（０．３５８ｇ、２．６５ｍｍｏｌ）および脱水テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）を、磁気攪拌子を取りつけた反応容器に入れた。フラスコに窒素を流し、混合物を冷却して約−７８℃としてから、ｎ−ブチルリチウム（１．９５Ｍヘキサン溶液、１，３６ｍＬ、２．６６ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を約−７８℃で約３時間攪拌した。次に、４−（４−アミノ−１−シクロペンチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル）−ベンズアルデヒド（一般的手順ＡおよびＣによって３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンから製造）（０．３２５ｇ、１．０６ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を昇温させて室温とし、約１６時間攪拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液（４０ｍＬ）を加えることで、反応混合物を反応停止した。テトラヒドロフランを減圧下に除去し、水系混合物を酢酸エチルで抽出した（１０ｍＬで３回）。合わせた有機分画を無水硫酸マグネシウムで脱水した。酢酸エチルを減圧下に除去し、粗生成物をＲＰ−ＨＰＬＣ（２１ｍＬ／分で２５分間かけて１０％から８０％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパープレプ（登録商標）Ｃ１８、１００Å、８μｍ、２５０×２１．２ｍｍカラム）によって精製して、［４−（４−アミノ−１−シクロペンチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル）−フェニル］−ベンゾチアゾール−２−イル−メタノールを白色固体として得た（０．０５８ｇ、０．１３１ｍｍｏｌ）。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．０ｍＬ／分で１０分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、５μｍ、１００Å、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１２．８４分；ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋４４３。
（実施例３７０）
［４−（４−アミノ−１−シクロペンチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル）−フェニル］−ベンゾチアゾール−２−イル−メタノン
Figure 2007520559
｛４−［４−アミノ−１−シクロペンチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル］−フェニル｝−ベンゾチアゾール−２−イルメタノール（実施例３６９）（０．０４０ｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）、二酸化マンガン（０．０３９３ｇ、０．４５２ｍｍｏｌ）およびメタノール（１０ｍＬ）を反応フラスコに入れた。混合物を窒素雰囲気下に室温で約４８時間攪拌した。粗混合物をセライト層で濾過し、メタノールで洗浄した（１０ｍＬで３回）。濾液を減圧下に濃縮し、粗生成物をＲＰ−ＨＰＬＣ（２１ｍＬ／分で２５分間かけて１０％から８０％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパープレプ（登録商標）Ｃ１８、１００Å、８μｍ、２５０×２１．２ｍｍカラム）によって精製して、［４−（４−アミノ−１−シクロペンチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル）−フェニル］−ベンゾチアゾール−２−イル−メタノンを白色固体として得た（０．００８６ｇ、０．０１９５ｍｍｏｌ）。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．０ｍＬ／分で２０分間かけて５％〜８５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；総操作時間３０分；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、５μｍ、１００Å、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ２７．９６分；ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋４４１。
（製造例２５）
トルエン−４−スルホン酸２−シクロプロポキシ−エチルエステル
Figure 2007520559
２−シクロプロポキシ−エタノール（０．１０２ｇ、０．００１０ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．１５３ｍＬ、０．００１１ｍｏｌ）の塩化メチレン（２ｍＬ）溶液を冷却して約０℃とし、４−メチル−ベンゼンスルホニルクロライド（０．２２８ｇ、０．００１２ｍｏｌ）の塩化メチレン（３ｍＬ）溶液でゆっくり処理した。反応混合物を約０℃で１時間、室温で約１８時間攪拌した。反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液（１０ｍＬ）で反応停止し、塩化メチレンで抽出した（３０ｍＬで３回）。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に除去した。残留物を酢酸エチル／ヘプタン（１：７）を用いるシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、トルエン−４−スルホン酸２−シクロプロポキシ−エチルエステル（０．１２９ｇ、０．０００５０ｍｏｌ）を明黄色油状物として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（０．８ｍＬ／分で４．５分間かけて３０％〜９５％アセトニトリル／０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液；λ＝１９０〜７００ｎｍ；ジェネシスＣ１８、１２０Å、３μｍ、３０×４．６ｍｍカラム；陽イオンおよび陰イオンの両方を観察するエレクトロスプレーイオン化法）Ｒｔ３．０２分。
製造例２６：３−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
５−アミノ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリル（８．６７ｇ、０．０５２８ｍｏｌ）のホルムアミド（１００ｍＬ）懸濁液を、１８０℃で約４時間加熱した。反応混合物を冷却し、氷水（２００ｍＬ）に投入し、生成物を酢酸エチルで抽出した（８０ｍＬで４回）。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に除去した。残留物をエーテル（３５ｍＬ）に取り、沈澱を濾過し、エーテル（５０ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥して、１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（３．２２ｇ、０．０１６９ｍｏｌ）を白色固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（０．８ｍＬ／分で４．５分間かけて３０％〜９５％アセトニトリル／０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝１９０〜７００ｎｍ；ジェネシスＣ１８、１２０Å、３μｍ、３０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１．３８分。
１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（０．２００ｇ、０．００１０ｍｏｌ）および臭素（０．１３４ｍＬ、０．００２６ｍｏｌ）のＨ２Ｏ（１０ｍＬ）中混合物を約９０℃で約２４時間加熱した。それを水酸化ナトリウム水溶液（２．０Ｎ）で中和した。得られた白色沈澱を濾過し、水で洗浄し、乾燥させて、３−ブロモ−１−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（０．１７７ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（０．８ｍＬ／分で４．５分間かけて３０％〜９５％アセトニトリル／０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝１９０〜７００ｎｍ；ジェネシスＣ１８、１２０Å、３μｍ、３０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ２．０５分。
（実施例３７１）
トランス−３−｛３−［４−（５−クロロ−７−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−プロピオンアミド酢酸塩
Figure 2007520559
トランス−３−ヨード−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（一般的手順Ａ、ＴおよびＪを用いて製造）（０．１ｇ、０．０００２３４ｍｏｌ）、炭酸セシウム（０．２９９ｇ、０．０００７０２ｍｏｌ）および３−クロロプロピオンアミド（０．０２５ｇ、０．０００２３４ｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）に溶かした。反応混合物を約４０時間攪拌し、不溶残留物を濾過によって除去し、濾液を濃縮し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（２１ｍＬ／分で２５分間かけて１０％〜６０％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、８μｍ、２５０×２１．２ｍｍカラム）によって精製して、トランス−３−［３−ヨード−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミノ］−プロピオンアミド（０．０７５ｇ、０．０００１５１ｍｏｌ）を白色固体として得た。ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋５００。
トランス−３−［３−ヨード−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミノ］−プロピオンアミド（０．０７５ｇ、０．０００１５ｍｏｌ）を、一般的手順Ｃを用いて（５−クロロ−７−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アミン（０．０７５ｇ、０．０００１９５ｍｏｌ）（一般的手順ＧおよびＤを用いて製造）とカップリングさせて、トランス−３−｛３−［４−（５−クロロ−７−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミノ｝−プロピオンアミド・１酢酸塩（０．０２０ｇ、０．００００２８９ｍｏｌ）を白色固体として得た。
Figure 2007520559
ｍ／ｚ（Ｍ−Ｈ）−６２９。
（実施例３７２）
トランス−４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−１−メチル−シクロヘキサノール
（実施例３７３）
シス−４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−１−メチル−シクロヘキサノール
Figure 2007520559
４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキサノン（一般的手順Ａ、ＴおよびＣ（Ｇ、Ｄ）を用いて製造）（５．００ｇ、０．０１０７ｍｏｌ）および臭化亜鉛（０．５０ｇ、０．００２，２ｍｏｌ）をトルエン（１００ｍＬ）に懸濁させ、室温で約１０分間連続窒素気流下に攪拌した。トリメチルアルミニウムのトルエン溶液（２Ｍ、１３．３８ｍＬ、０．０２６７ｍｏｌ）を加え、攪拌を約２時間続けた。トリメチルアルミニウム溶液（２Ｍ、１３．３８ｍＬ）の添加をさらに４回繰り返し、飽和塩化アンモニウム水溶液（１００ｍＬ）を滴下することで、反応混合物を反応停止した。得られた混合物を減圧下に溶媒留去して乾固させた。残留物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）に懸濁させ、セライト層で濾過した。濾液を濃縮し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（２１ｍＬ／分で３０分間かけて２０％〜８０％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、８μｍ、２５０×２１．２ｍｍカラム）によって精製して、白色固体としてのトランス−４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−１−メチル−シクロヘキサノール（０．０５２ｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）［ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で２０分間かけて５％〜８５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１９．６２分；
Figure 2007520559
 ］および白色固体としてのシス−４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−１−メチル−シクロヘキサノール（０．１０４ｇ、０．２０６ｍｍｏｌ）［ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で２０分間かけて５％〜８５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ２０．３３分；
Figure 2007520559
 ］を得た。
（実施例３７４）
４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル
Figure 2007520559
３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−ピペリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（一般的手順ＡおよびＣ（Ｇ、Ｄ）を用いて製造）（０．１０９ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（５ｍＬ）懸濁液に、トリエチルアミン（０．１ｍＬ、０．７２ｍｍｏｌ）を加え、連続窒素気流下に攪拌しながら、得られた混合物を冷却して０℃とした。クロルギ酸イソプロピルのトルエン（１Ｍ、０．２４ｍＬ、０．０００２４ｍｏｌ）溶液を滴下し、反応混合物を約０℃で約１時間攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（２１ｍＬ／分で３０分間かけて２０％〜９０％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、８μｍ、２５０×２１．２ｍｍカラム）によって精製して、４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピルエステル（０．０８０ｇ、０．１，４８ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で２０分間かけて５％〜８５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１５．５５分。
Figure 2007520559
（実施例３７５）
４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル
Figure 2007520559
３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−ピペリジン−４−イル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（一般的手順ＡおよびＣ（Ｇ、Ｄ）を用いて製造）（０．１１０ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（５ｍＬ）懸濁液に、トリエチルアミン（０．１ｍＬ、０．７２ｍｍｏｌ）を加え、連続窒素気流下に攪拌しながら、得られた混合物を冷却して約０℃とした。クロルギ酸メチル（０．０２０ｍＬ、０．２５４ｍｍｏｌ）を滴下し、反応混合物を約０℃で約１時間攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（２１ｍＬ／分で３０分間かけて２０％〜９０％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、８μｍ、２５０×２１．２ｍｍカラム）によって精製して、４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−ピペリジン−１−カルボン酸メチルエステル（０．０７７ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（０．８ｍＬ／分で４．５分間かけて３０％〜９５％アセトニトリル／０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝１９０〜７００ｎｍ；ジェネシスＣ１８、１２０Å、３μｍ、３０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ２．７７分；ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋５１３。
（実施例３７６）
トランス−４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキシルＮ，Ｎ−ジメチルカーバメート
Figure 2007520559
トランス−４−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−シクロヘキサノール（一般的手順Ａ、ＴおよびＵを用いて製造）（０．２０ｇ、０．０００５５７ｍｏｌ）のＮ−メチルピロリジノン（０．９ｍＬ）およびピリジン（０．１ｍＬ）中混合物に、Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルクロライド（０．６３ｇ、０．００５８５ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を約７５℃で約２４時間にわたり、連続窒素気流下に加熱した。追加のＮ，Ｎ−ジメチルカルバモイルクロライド（０．６３ｇ、０．００５８５ｍｏｌ）を加え、反応液を約７５℃でさらに約２４時間攪拌した。反応混合物を冷却して室温とし、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（２１ｍＬ／分で２５分間かけて１０％〜６０％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、８μｍ、２５０×２１．２ｍｍカラム）によって精製して、トランス−４−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−シクロヘキシルＮ，Ｎ−ジメチルカーバメート（０．０１９ｇ、０．０４４５ｍｍｏｌ）をオフホワイト固体として得た。ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋４３１。トランス−４−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−シクロヘキシルＮ，Ｎ−ジメチルカーバメート（０．０６ｇ、０．０００１４ｍｏｌ）を一般的手順Ｃを用いて（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−［２−フルオロ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アミン（０．０７ｇ、０．０００１８２ｍｏｌ）（一般的手順ＧおよびＤを用いて製造）と反応させて、トランス−４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキシルＮ，Ｎ−ジメチルカーバメート（０．０３４ｇ、０．００００６１ｍｏｌ）を白色固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で２０分間かけて５％〜８５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１６．４４分；
Figure 2007520559
（実施例３７７）
トランス−３−（４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキシル）−４Ｈ−［１，２，４］オキサジアゾール−５−オン
Figure 2007520559
４−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−シクロヘキサノン（一般的手順ＡおよびＴを用いて製造）（４．００ｇ、０．０１１２ｍｏｌ）を、エチレングリコールジメチルエーテル（６０ｍＬ）およびエタノール（２ｍＬ）の混合物に加えた。１−イソシアノ−メタンスルホニル−４−メチル−ベンゼン（２．１９ｇ、０．０１１２ｍｏｌ）を加え、連続窒素気流下に攪拌しながら、得られた混合物を冷却して約０℃とした。カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（２．５１ｇ、０．０２２４）を加え、反応混合物を約１６時間攪拌しながら、徐々に昇温させて室温とした。沈澱を濾過し、濾液を減圧下に濃縮した。残留物について、移動相として塩化メチレン／メタノール／トリエチルアミン（９８：１：１）を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーを行って、４−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−シクロヘキサンカルボニトリル（１．９ｇ、０．００５１６ｍｏｌ）を、シス−およびトランス−異性体の混合物としてのオフホワイト固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で２０分間かけて５％〜８５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１２．１６分および１２．５３分。
シス−およびトランス−４−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−シクロヘキサンカルボニトリル（１．５ｇ、０．００４０８ｍｏｌ）、ヒドロキシルアミン塩酸塩（１．４２ｇ、０．０２０４ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３．６ｍＬ、０．０２０４ｍｏｌ）の混合物を、連続窒素気流下に約７５℃でジメチルスルホキシド（１０ｍＬ）中にて約１６時間加熱した。反応混合物を氷冷水（１２０ｍＬ）に投入し、沈澱をろ過によって回収し、水で洗浄し、乾燥させて、４−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−Ｎ−ヒドロキシ−シクロヘキサンカルボキサミジン（１．２０ｇ、０．００３ｍｏｌ）を、シス−およびトランス−異性体の混合物としての黄色固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で２０分間かけて５％〜８５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ９．００分および９．０９分。
シス−およびトランス−４−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−Ｎ−ヒドロキシ−シクロヘキサンカルボキサミジン（０２１５ｇ、０．０００５３６ｍｏｌ）およびピリジン（０．０４８ｍＬ、０．０００５９ｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中混合物を、連続窒素気流下に冷却して約０℃とし、クロルギ酸２−エチルヘキシル（０．１０５ｍＬ、０．０００５３６ｍｏｌ）を滴下した。約０℃での攪拌をさらに約４０分間続け、反応混合物を氷冷水（２０ｍＬ）に投入した。沈澱をろ過によって回収し、乾燥させた。それをキシレン中で磨砕し、懸濁液を連続窒素気流下に約２時間加熱還流した。溶媒を減圧下に除去し、黄色残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（２１ｍＬ／分で２０分間かけて１０％〜５０％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、８μｍ、２５０×２１．２ｍｍカラム）によって精製して、トランス−３−［４−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−シクロヘキシル］−４Ｈ−［１，２，４］オキサジアゾール−５−オン（０．０１８ｇ、０．０４２３ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で２０分間かけて５％〜８５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１１．２７分。
一般的手順Ｃを用いて、トランス−３−［４−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−シクロヘキシル］−４Ｈ−［１，２，４］オキサジアゾール−５−オン（０．０３２ｇ、０．００００７５ｍｏｌ）を、（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−［４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アミン（０．０３２ｇ、０．００００９ｍｏｌ）（一般的手順ＧおよびＤを用いて製造）と反応させて、トランス−３−（４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキシル）−４Ｈ−［１，２，４］オキサジアゾール−５−オン（０．０２１ｇ、０．００００３８４ｍｏｌ）をオフホワイト固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で２０分間かけて５％〜８５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１６．６３分；
Figure 2007520559
（実施例３７８）
トランス−（４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキシルオキシ）−酢酸
（実施例３７９）
トランス−２−（４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキシルオキシ）−エタノール
Figure 2007520559
トランス−４−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−シクロヘキサノール（０．５０ｇ、０．００１３９ｍｏｌ）（一般的手順Ａ、ＴおよびＵを用いて製造）およびジメチルホルムアミド・ジメチルアセタール（０．２４ｍＬ、０．００１８１ｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中混合物を、約８５℃で連続窒素気流下に約１６時間加熱した。溶媒を減圧下に除去し、残留物を酢酸エチル（２０ｍＬ）で磨砕した。沈澱をろ過によって回収し、酢酸エチルで洗浄し、乾燥して、トランス−Ｎ′−［１−（４−ヒドロキシ−シクロヘキシル）−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン（０．３０ｇ、０．０００７５ｍｏｌ）を黄色固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で２０分間かけて５％〜８５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１１．９７分。
トランス−Ｎ′−［１−（４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミジン（０．２０ｇ、０．４８３ｍｍｏｌ）および酢酸ロジウム・２量体（０．０１ｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（５ｍＬ）中混合物にジアゾ酢酸エチル（０．０４７ｍＬ、０．０４６ｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で連続窒素気流下に約７８時間攪拌した。追加のジアゾ酢酸エチル（０．０４７ｍＬ、０．０４６ｍｏｌ）を、４、８、７２、７４および７６時間後に加えた。溶媒を減圧下に除去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（２１ｍＬ／分で２５分間かけて１０％〜６０％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝３０８ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、８μｍ、２５０×２１．２ｍｍカラム）によって精製して、トランス−｛４−［４−（ジメチルアミノメチレンアミノ）−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル］−シクロヘキシルオキシ｝−酢酸エチルエステル（０．０４４ｇ、０．０８８３ｍｍｏｌ）をオフホワイト固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で１０分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝３０８ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１０．６８分。
トランス−｛４−［４−（ジメチルアミノメチレンアミノ）−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル］−シクロヘキシルオキシ｝−酢酸エチルエステル（０．２７ｇ、０．０００５４ｍｏｌ）を、一般的手順Ｃを用いて（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−［２−フルオロ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アミン（０．２３６ｇ、０．６４８ｍｍｏｌ）（一般的手順ＧおよびＤを用いて製造）とカップリングさせて、トランス−（４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルメチル）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキシルオキシ）−酢酸（０．２０９ｇ、０．３９７ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（０．８ｍＬ／分で６分間かけて１０％〜８０％アセトニトリル／０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液；λ＝１９０〜７００ｎｍ；ジェネシスＣ１８、１２０Å、３μｍ、３０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ５．２７分；ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋５２８。
水素化リチウムアルミニウム溶液（１Ｍテトラヒドロフラン溶液、０．２６６ｍＬ、０．２６６ｍｍｏｌ）を、トランス−（４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルメチル）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキシルオキシ）−酢酸（０．０３５ｇ、０．０６４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（５ｍＬ）懸濁液に滴下し、反応混合物を室温で連続窒素気流下に約２４時間攪拌した。氷冷水（１ｍＬ）を滴下することで反応停止し、溶媒を減圧下に除去し、残留物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（２１ｍＬ／分で２５分間かけて１０％〜６０％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝３０８ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、８μｍ、２５０×２１．２ｍｍカラム）によって精製して、トランス−２−（４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルメチル）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキシルオキシ）−エタノール（０．０２６ｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（０．８ｍＬ／分で４．５分間かけて３０％〜９５％アセトニトリル／０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液；λ＝１９０〜７００ｎｍ；ジェネシスＣ１８、１２０Å、３μｍ、３０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ１．９９分；ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋５１４。
製造例２７：シス−｛５−（４−アミノ−３−フルオロ−フェニル）−６−ブロモ−７−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−シクロヘキシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン｝
Figure 2007520559
窒素導入管を取りつけた２５ｍＬ丸底フラスコに、シス−｛５−（４−アミノ−３−フルオロ−フェニル）−７−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−シクロヘキシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン｝（一般的手順Ａ、Ｂ、Ｔ、Ｊ、ＣおよびＬを用いて製造）（６００ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）を入れた。Ｎ−ブロモコハク酸イミド（２６４ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）を、反応混合物に約４５分間かけて少量ずつ加えた。反応混合物を室温で約２９時間攪拌した。追加のＮ−ブロモコハク酸イミド（２４０ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、混合物を室温で約３日間攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに取った。沈澱を濾過し、追加のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで洗浄した。合わせた有機洗浄液および濾液を濃縮して、粘稠橙赤色−褐色油状物を得て、それを質量作動分取ＲＰＬＣ（２４ｍＬ／分で６．５分間かけて２５％〜８５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１３０Å、５μｍ、１００×２１．２ｍｍカラム）によって精製して、シス−｛５−（４−アミノ−３−フルオロ−フェニル）−６−ブロモ−７−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−シクロヘキシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン｝を淡褐色固体として得た（２５ｍｇ、０．０４９８ｍｍｏｌ）。ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋５０２。
（実施例３８０）
シス−｛５−［４−（５−エチル−５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−７−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−シクロヘキシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン｝
Figure 2007520559
窒素導入管を取りつけた還流冷却管を取りつけた２５ｍＬ丸底フラスコに、シス−｛５−［４−（７−ブロモ−５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−７−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−シクロヘキシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン｝（一般的手順Ａ、Ｂ、Ｔ、Ｊ、Ｃ、ＬおよびＧ（Ｆ、Ｈ）を用いて製造）（１８８ｍｇ、０．２９７ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（３ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）、２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）ビフェニル（１１ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（７９ｍｇ、０．７４３ｍｍｏｌ）、エチレングリコールジメチルエーテル（２ｍＬ）および水（１ｍＬ）を入れた。トリエチルボラン（１．０Ｍテトラヒドロフラン溶液、０．６０ｍＬ、０．５９４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を約８０℃で約２時間加熱した。追加の酢酸パラジウム（ＩＩ）（３ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）、２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）ビフェニル（１１ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）およびトリエチルボラン（０．２５ｍＬ、０．２５ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、混合物を室温で約１７時間攪拌した。追加の酢酸パラジウム（ＩＩ）（３ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）、２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）ビフェニル（１１ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）およびトリエチルボラン（０．２５ｍＬ、０．２５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を約８０℃でさらに１時間攪拌した。反応混合物を冷却して室温とし、酢酸エチル（１０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）との間で分配した。水相を分離し、酢酸エチルでさらに抽出した（１０ｍＬで２回）。合わせた有機相をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、有機溶媒を減圧下に除去して、赤−褐色油状物を得た。生成物を分取逆相ＨＰＬＣ（２１ｍＬ／分で３０分間かけて１５％〜７５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、８μｍ、２５０×２１．２ｍｍカラム）によって精製して、シス−｛５−［４−（７−エチル−５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−７−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−シクロヘキシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン｝（８５ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）をオフホワイト固体として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（デルタパックＣ１８、５μｍ、３００Å、１５ｃｍ；１ｍＬ／分で２０分間かけて５％〜８５％アセトニトリル／緩衝してｐＨ４．５とした５０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液）Ｒｔ１３．８０分；ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋５８３。
（実施例３８１）
シス−｛７−［４−（４−シクロプロピル−ピペラジン−１−イル）−シクロヘキシル］−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン｝
Figure 2007520559
窒素導入管を取りつけた還流冷却管を取りつけた２５ｍＬ丸底フラスコに、シス−｛５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−７−（４−ピペラジン−１−イル−シクロヘキシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン｝（一般的手順Ａ、Ｂ、Ｔ、Ｊ、Ｃ、ＬおよびＧを用いて製造）（１００ｍｇ、０．１８０ｍｍｏｌ）、メタノール（３ｍＬ）、酢酸（１０８ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ）および水素化ホウ素シアノナトリウム（４５ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）のメタノール（３ｍＬ）溶液を入れた。［（１−エトキシシクロプロピル）オキシ］−トリメチルシラン（１５７ｍｇ、０．９０１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を約６４℃で約２１時間攪拌し、冷却して室温とした。反応混合物を濾過し、固体を酢酸エチルで洗浄した。合わせた有機洗浄液および濾液を濃縮して、粘稠黄色油状物を得た。生成物を分取逆相ＨＰＬＣ（２１ｍＬ／分で３０分間かけて１５％〜７５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、８μｍ、２５０×２１．２ｍｍカラム）によって精製して、シス−｛７−［４−（４−シクロプロピル−ピペラジン−１−イル）−シクロヘキシル］−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン｝をオフホワイト固体（１５ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）として得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（デルタパックＣ１８、５μｍ、３００Å、１５ｃｍ；１ｍＬ／分で２０分間かけて５％〜８５％アセトニトリル／５０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液）Ｒｔ１３．４９５分、ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋５９５。
（実施例３８２）
シス−｛６−ブロモ−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−７−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−シクロヘキシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン｝
Figure 2007520559
一般的手順Ｇを用いて、この化合物をシス−｛５−（４−アミノ−３−フルオロ−フェニル）−６−ブロモ−７−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−シクロヘキシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン｝（製造例２８）および２−アミノ−４，６−ジメチル−フェノールから製造して、シス−｛６−ブロモ−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−７−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−シクロヘキシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン｝をベージュ固体として得た（４ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ）；ＲＰ−ＨＰＬＣ（デルタパックＣ１８、５μｍ、３００Å、１５ｃｍ；１ｍＬ／分で２０分間かけて５％〜８５％アセトニトリル／５０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液）Ｒｔ１５．４５分、ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋６４７。
（実施例３８３）
シス−｛５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−７−［４−（４−メタン−スルホニル−ピペラジン−１−イル）−シクロヘキシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン｝
Figure 2007520559
シス−｛５−［４−（５，７ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−７−（４−ピペラジン−１−イル−シクロヘキシル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン｝（一般的手順Ａ、Ｂ、Ｔ、Ｊ、Ｃ、ＬおよびＧを用いて製造）（５１ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１３μＬ、０．０９３ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（７ｍＬ）溶液に、約０℃で不活性雰囲気下にメタンスルホニルクロライド（７μＬ、０．０９３ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を徐々に昇温させて室温とし、反応混合物を約３週間攪拌した。その間に、追加のメタンスルホニルクロライド（１４μＬ、０．１８６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２６μＬ、０．１８６ｍｍｏｌ）を反応混合物に加えた。反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１５ｍＬ）で反応停止し、粗生成物を塩化メチレンで抽出した（３０ｍＬで３回）。合わせた有機抽出液をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に除去した。粗混合物を分取逆相ＨＰＬＣ（デルタパックＣ１８、５μｍ、３００Å、１５ｃｍ；２０ｍＬ／分で２５分間かけて１０％〜６０％アセトニトリル／５０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液）によって精製して、シス−｛５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−７−［４−（４−メタン−スルホニル−ピペラジン−１−イル）−シクロヘキシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン｝をオフホワイト固体として得た（１２ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）。ＲＰ−ＨＰＬＣ（デルタパックＣ１８、５μｍ、３００Å、１５ｃｍ；１ｍＬ／分で１０分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／５０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液）Ｒｔ９．０６分、ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋６３３。
（実施例３８４）
３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（４−メチレン−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
メチルトリフェニルホスホニウムブロマイド（７．６４ｇ、２１．４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）懸濁液に約−７８℃で、ｎ−ブチルリチウム（０．６９Ｍテトラヒドロフラン溶液、３１ｍＬ、２１．４ｍｍｏｌ）を、反応温度が約−５０℃を超えないように加えた。反応混合物を徐々に昇温させて室温とし、約２時間攪拌した。混合物を再度冷却して約−２０℃とし、４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキサノン（一般的手順Ａ、ＴおよびＣによって製造）（５．０ｇ、１０．７ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（８０ｍＬ）溶液を加えた。反応混合物を約５０℃で約１６時間攪拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物を水（１００ｍＬ）と塩化メチレン（１５０ｍＬ）との間で分配した。有機層を抽出し、水層を追加の塩化メチレンで抽出した（１５０ｍＬで２回）。合わせた有機分画をブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に除去して、橙赤色シロップを得た。粗生成物を、移動相として塩化メチレン／アセトン（７５：２５）を用いるシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（４−メチレン−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンを白色固体として得た（４．０ｇ、８．５９ｍｍｏｌ）。ＲＰ−ＨＰＬＣ（デルタパックＣ１８、５μｍ、３００Å、１５ｃｍ；１．７ｍＬ／分で１０分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／５０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液）Ｒｔ１２．８２分、ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋４６６。
（実施例３８５）
シス−｛３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（３−メチル−１−オキサ−２−アザ−スピロ［４．５］デカ−２−エン−８−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン｝
Figure 2007520559
アセトアルドキシム（１０２ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．５ｍＬ）溶液に約０℃で、Ｎ−クロロコハク酸イミド（２３０ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を昇温させて室温とし、その温度で窒素雰囲気下に１時間攪拌した。３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（４−メチレン−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（実施例３８４）（１．００ｇ、２．１５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２ｍＬ）溶液を、室温で一気に反応混合物に加え、次にトリエチルアミン（２５０μＬ、１．８０ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）溶液を約２時間かけてゆっくり加えた。反応混合物を室温で約１５時間攪拌した。粗反応混合物を水（２５ｍＬ）と塩化メチレン（２５ｍＬ）との間で分配し、有機層を分離し、水層を追加の塩化メチレンで抽出した（２５ｍＬで２回）。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を減圧下に除去した。粗混合物を分取逆相ＨＰＬＣ（Ｃ１８、８μｍ、２５０×２１．２ｍｍ；２１ｍＬ／分で２０分間かけて７０％〜８０％アセトニトリル／５０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液）によって精製して、シス−｛３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（３−メチル−１−オキサ−２−アザ−スピロ［４．５］デカ−２−エン−８−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン｝を明黄色固体として得た（３１ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ）。ＲＰ−ＨＰＬＣ（デルタパックＣ１８、５μｍ、３００Å、１５ｃｍ；１．７ｍＬ／分で１０分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／５０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液）Ｒｔ１２．７２分；ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋５２３。
（実施例３８６）
トランス−３−（４−ベンゾオキサゾール−２−イルメチル−フェニル）−１−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−シクロヘキシル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
２−アミノフェノール（０．２５７ｇ、２．３６ｍｍｏｌ）および４−ブロモフェニル酢酸（０．５００ｇ、２．３６ｍｍｏｌ）をともに、開口試験管中、約２００℃で１時間にわたり加熱した。反応混合物を冷却して室温とし、メタノール−塩化メチレン（１：２０、５０ｍＬ）に溶かし、希炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）で抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を、移動相として酢酸エチル−ヘプタン（１５：８５）を用いるシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、２−（４−ブロモベンジル）−ベンゾオキサゾール（０．３４７ｇ、１．２０ｍｍｏｌ）を黄色フレークとして得た。ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋２８８、２９０。２−（４−ブロモ−ベンジル）−ベンゾオキサゾール（０．１００ｇ、０．３４７ｍｍｏｌ）を、一般的手順Ｄを用いて２−［４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−ベンジル］−ベンゾオキサゾールに変換し、粗生成物を、一般的手順Ｃを用いて、トランス−３−ヨード−１−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−シクロヘキシル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（一般的手順Ａ、ＴおよびＪを用いて製造）と反応させて、トランス−３−（４−ベンゾオキサゾール−２−イルメチル−フェニル）−１−［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−シクロヘキシル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンを白色粉末として得た（０．１０２ｇ、０．１９５ｍｍｏｌ）。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．０ｍＬ／分で１０分間かけて２５％〜１００％アセトニトリル／０．１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）Ｒｔ６．８３分；ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋５２３。
製造例２８：Ｎ−（３−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）−フェネチルアミン
Figure 2007520559
３−ブロモ−６−メタンスルホニル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（ＷＯ０３０２９２０９）（０．２８２ｇ、０．９６９ｍｍｏｌ）の１−メチル−２−ピロリジノン（１０ｍＬ）溶液に、フェネチルアミン（０．５８７ｇ、４．８５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を加熱して約５０℃とした。約１時間後、水（４０ｍＬ）を加え、次に酢酸エチル（４０ｍＬ）を加えた。層を分離した。水層部分を酢酸エチルで再抽出した（２０ｍＬで２回）。合わせた有機分画をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、溶媒留去した。粗黄色残留物を、移動相として酢酸エチル／ヘプタン（１：１）を用いるシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、純粋な（３−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）−フェネチル−アミンを白色固体として得た（０．２０５ｇ、０．６３６ｍｍｏｌ）。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で１０分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム；総操作時間１５分；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、５μｍ、１００Å、２５０×４．６ｍｍ）Ｒｔ１１．７８分；ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋３３２および３３４。
製造例２９：Ｎ−（４−ブロモ−フェニル）−［５−メチル−７−（３−モルホリン−４−イル−プロポキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イル］−アミン
Figure 2007520559
製造例２９．１：２−（３−ブロモ−プロポキシ）−１−メトキシ−４−メチル−ベンゼン
Figure 2007520559
２−メトキシ−５−メチル−フェノール（５．０ｇ、３６．２ｍｍｏｌ）、１，３−ジブロモプロパン（４０ｍＬ、３６０ｍｍｏｌ）、水酸化テトラブチルアンモニウム（１６ｍＬ、２４．２５ｍｍｏｌ）および４０重量％水酸化カリウム水溶液（１８０ｍｍｏｌ）の溶液を、５５℃で１時間撹拌した。溶液をエーテルで希釈し、水およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮した。得られた油状物について、ヘキサンおよび極性を徐々に１０％酢酸エチルまで高める溶離を行うフラッシュクロマトグラフィーを行って、２−（３−ブロモ−プロポキシ）−１−メトキシ−４−メチルベンゼンを得た（６．５ｇ、収率７０％）。
製造例２９．２：４−［３−（２−メトキシ−５−メチル−フェノキシ）−プロピル］−モルホリン
Figure 2007520559
２−（３−ブロモ−プロポキシ）−１−メトキシ−４−メチル−ベンゼン（３．０ｇ、１１．６ｍｍｏｌ）およびモルホリン（５．０５ｍＬ、５７．９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６０ｍＬ）溶液を、６５℃で２時間加熱した。溶液を冷却して室温とし、エーテルで希釈し、水およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濃縮して、４−［３−（２−メトキシ−５−メチル−フェノキシ）−プロピル］−モルホリン（３．０１ｇ、収率９７％）を得た。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋３１９、３２１。
製造例２９．３：４−メチル−２−（３−モルホリン−４−イル−プロポキシ）−フェノール
Figure 2007520559
４−［３−（２−メトキシ−５−メチル−フェノキシ）−プロピル］−モルホリン（３．０ｇ、１１．３１ｍｍｏｌ）の酢酸（２５ｍＬ）およびＨＢｒ（２５ｍＬ）溶液を、９０℃で４時間攪拌した。溶液を冷却して室温とし、濃縮した。得られた残留物を酢酸エチルに取り、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。水層を塩化ナトリウムで飽和させ、酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、溶媒を減圧下に除去して、４−メチル−２−（３−モルホリン−４−イル−プロポキシ）−フェノールを得た（２．３６ｇ）。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋２５１。
製造例２９．４：４−メチル−２−（３−モルホリン−４−イル−プロポキシ）−６−ニトロ−フェノール
Figure 2007520559
４−メチル−２−（３−モルホリン−４−イル−プロポキシ）−フェノール（２．３６ｇ、９．４ｍｏｌ）のＤＭＥ（６６ｍＬ）溶液を−７８℃とし、それをＮＯ２ＢＦ４（１１．２７ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（４４ｍＬ）溶液に−７８℃で加えた。溶液を攪拌し、昇温させて−１０℃とした。氷を加えて溶液を反応停止させた。溶液を濃縮してＤＭＥを除去した。残留物を氷浴で冷却し、重炭酸ナトリウム水溶液で中和し、塩化メチレンで抽出した。有機層を合わせ、濃縮し、残留物について、１％ＴＥＡ／１％ＭｅＯＨ／塩化メチレンを溶離液とするシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーを行った。第１の分画が所望の生成物である橙赤色半固体を含んでいた。この取得物について、５：５：１酢酸エチル：ヘキサン：メタノールを溶離液とする第２のフラッシュカラム処理を行って（トリエチルアミン塩を除去するため）、４−メチル−２−（３−モルホリン−４−イル−プロポキシ）−６−ニトロ−フェノールを得た（０．６８７ｇ、収率２５％）。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋２９７。
製造例２９．５：２−アミノ−４−メチル−６−（３−モルホリン−４−イル−プロポキシ）フェノール
Figure 2007520559
４−メチル−２−（３−モルホリン−４−イル−プロポキシ）−６−ニトロ−フェノール（０．６８７ｇ、２．３２ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（０．１１６ｍｍｏｌ）のメタノール（６５ｍＬ）溶液を、水素雰囲気下に４時間攪拌した。その系を窒素でパージし、セライトで濾過し、濃縮した。残留物をメタノールで磨砕して、２−アミノ−４−メチル−６−（３−モルホリン−４−イル−プロポキシ）−フェノールを得た（０．３１５ｇ、収率５１％）。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋２６７。
Figure 2007520559
２−アミノ−４−メチル−６−（３−モルホリン−４−イル−プロポキシ）−フェノール（０．３１５ｇ、１．１８ｍｍｏｌ）および１−ブロモ−４−イソチオシアナト−ベンゼン（０．２４５ｇ、１．１４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６ｍＬ）溶液を、室温で窒素雰囲気下に３．５時間攪拌した。ＥＤＣＩ（０．２６２ｇ、１，３６ｍｍｏｌ）を加え、溶液を５０℃で終夜攪拌し、冷却して室温として、生成物から油状物を得た。溶液を濃縮し、残留物をアセトニトリルに取り、加熱して均一溶液を得て、冷却して室温とした。得られた沈澱を減圧濾過によって除去した。濾液を濃縮し、残留物を酢酸エチルと水との間で分配した。有機層を濃縮し、残留物をアセトニトリルから磨砕して、（４−ブロモ−フェニル）−［５−メトキシ−７−（３−モルホリン−４−イル−プロポキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イル］−アミンを得た（０．３３５ｇ、収率６１％）。ｍ／ｚ（Ｍ＋）４４５、４４７。
製造例３０：（４−ブロモ−フェニル）−［５−メチル−７−（１−メチル−ピペリジン−４−イルメトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イル］−アミン
Figure 2007520559
製造例３０．１：４−（２−メトキシ−５−メチル−フェノキシメチル）−１−メチル−ピペリジン
Figure 2007520559
２−メトキシ−５−メチル−フェノール（３．４５ｇ、２５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１１０ｍＬ）溶液を０℃とし、それをトリフェニルホスフィン（７．８７ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）、次にＤＥＡＤ（４．７２ｍＬ、３０．０ｍｍｏｌ）で処理し、５分間撹拌し、次に（１−メチル−ピペリジン−４−イル）−メタノール（３．８８ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１４０ｍＬ）溶液で処理した。氷浴を外し、溶液を室温で終夜攪拌した。溶液を濃縮し、５％ＭｅＯＨ／塩化メチレンを溶離液とするシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーを行って、４−（２−メトキシ−５−メチル−フェノキシメチル）−１−メチル−ピペリジンを得た（３．５８ｇ、収率５７％）。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋２５０。
この合成の残りの部分を、製造例２９．２に代えて製造例３０．１を用いた以外は製造例２９について詳細に記載の経路を用いて完了することで、（４−ブロモ−フェニル）−［５−メチル−７−（１−メチル−ピペリジン−４−イルメトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イル］−アミンを得た。ｍ／ｚ（Ｍ＋）４２９、４３１。
製造例３１：（７−アリル−５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−（４−ブロモ−フェニル）−アミン
Figure 2007520559
製造例３１．１：２−アリル−４−メチル−フェノール
Figure 2007520559
アリルパラ−トリルエーテル（１ｇ）のＮ，Ｎ−ジエチルアニリン（５ｍＬ）溶液を、１８０℃で１８時間加熱し、放冷して室温とし、１Ｎ ＨＣｌとエーテルとの間で分配した（２回）。合わせたエーテル抽出液を脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮し、残留物を１５：１ヘキサン：ＥｔＯＡｃを溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、２−アリル−４−メチル−フェノールを得た（０．６７ｇ）。
この合成の残りの部分を、製造例２９．３に代えて製造例３０．１を用いた以外は製造例２９について詳細に記載の経路を用いて完了することで、（７−アリル−５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−（４−ブロモ−フェニル）−アミンを得た。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋３４２．９、３４４．９。
製造例３２：（４−ブロモ−フェニル）−［５−メチル−７−（３−モルホリン−４−イル−プロピル）−ベンゾオキサゾール−２−イル］−アミン
Figure 2007520559
製造例３２．１：３−［２−（４−ブロモ−フェニルアミノ）−５−メチル−ベンゾオキサゾール−７−イル］−プロパン−１−オール
Figure 2007520559
ボラン−ＴＨＦ（９８ｍＬ、１Ｍ ＴＨＦ溶液、９８ｍｍｏｌ）を、製造例３１（６．７４ｇ、１９．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３００ｍＬ）溶液を０℃としたものに滴下した。得られた混合物を０℃で３時間攪拌し、６Ｎ ＮａＯＨ（１３．５ｍＬ）、次に３０％Ｈ２Ｏ２（２７ｍＬ）で注意深く処理し、加熱して６０℃として１．２時間経過させ、次に飽和ＮａＨＳＯ３水溶液（滴下）によって反応停止した。得られた酸性混合物（ｐＨ１〜２）を、飽和水溶液ＮａＨＣＯ３で中和し、エーテルで抽出した（２回）。合わせたエーテル抽出液を脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮し、残留物を２：１ヘキサン：ＥｔＯＡｃを溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、次にＣＨ２Ｃｌ２で磨砕して、３−［２−（４−ブロモ−フェニルアミノ）−５−メチル−ベンゾオキサゾール−７−イル］−プロパン−１−オールを固体として得た（３．９８ｇ、収率５６％）。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋３６０．９、３６２．９。
製造例３２．２：メタンスルホン酸３−［２−（４−ブロモ−フェニルアミノ）−５−メチル−ベンゾオキサゾール−７−イル］−プロピルエステル
Figure 2007520559
３−［２−（４−ブロモ−フェニルアミノ）−５−メチル−ベンゾオキサゾール−７−イル］−プロパン−１−オール（０．３４ｇ、０．９４ｍｍｏｌ）のピリジン（１０ｍＬ）溶液を０℃にて、メタンスルホニルクロライド（０．０８ｍＬ）で処理し、０℃で１５分間、次に室温でさらに２時間撹拌し、追加のメタンスルホニルクロライド（０．１ｍＬ）で処理し、３時間撹拌した。混合物をエーテルと水との間で分配し、有機抽出液をブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮して、粗メタンスルホン酸３−［２−（４−ブロモ−フェニルアミノ）−５−メチル−ベンゾオキサゾール−７−イル］−プロピルエステルを得た（０．３６ｇ）。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋４３８．９、４４０．７。
Figure 2007520559
メタンスルホン酸３−［２−（４−ブロモ−フェニルアミノ）−５−メチル−ベンゾオキサゾール−７−イル］−プロピルエステル（０．０４７ｇ）およびモルホリン（１ｍＬ）のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液を８０℃で３時間加熱し、放冷して室温とし、水とエーテルとの間で分配した。有機抽出液をブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮し、残留物をエーテルで磨砕して、（４−ブロモ−フェニル）−［５−メチル−７−（３−モルホリン−４−イル−プロピル）−ベンゾオキサゾール−２−イル］−アミンを得た（０．０３ｇ）。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋４２９．８、４３１．８。
製造例３３：２−（４−ブロモ−フェニルアミノ）−５−メチル−ベンゾオキサゾール−７−オール
Figure 2007520559
製造例３３．１：（４−ブロモ−フェニル）−（７−メトキシ−５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−アミン
Figure 2007520559
製造例２９．３に代えて２−メトキシ−４−メチルフェノールを用い、製造例２９の合成を行う上で詳細に説明した段階に従って、（４−ブロモ−フェニル）−（７−メトキシ−５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−アミンを得た。
（４−ブロモ−フェニル）−（７−メトキシ−５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−アミン（４．４６ｇ）の酢酸（６０ｍＬ）および４８％ＨＢｒ（６０ｍＬ）溶液を６時間加熱還流し、室温で１０時間攪拌した。得られた沈澱を濾過によって回収して、２−（４−ブロモ−フェニルアミノ）−５−メチル−ベンゾオキサゾール−７−オールを得た（３．６６ｇ）。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋３１８．９、３２０．８。
製造例３４：（４−ブロモ−フェニル）−（５−メトキシ−ベンゾオキサゾール−２−イル）−アミン
Figure 2007520559
製造例２９．４に代えて２−ニトロ−４−メトキシフェノールを用い、製造例２９の合成を行う上で詳細に説明した段階に従って、（４−ブロモ−フェニル）−（５−メトキシ−ベンゾオキサゾール−２−イル）−アミンを得た。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋３１９、３２１。
製造例３５：（４−ブロモ−フェニル）−［５−メチル−７−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イル］−アミン
Figure 2007520559
１，３−ジブロモプロパンに代えて１，２−ジブロモエタンを用い、モルホリンに代えてピロリジンを用い、製造例２９．１〜製造例２９に記載の経路を用いて、（４−ブロモ−フェニル）−［５−メチル−７−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イル］−アミンを得た。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋４１６、４１８。
製造例３６：（４−ブロモ−フェニル）−［７−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イル］−アミン
Figure 2007520559
製造例３３（０．０９ｇ、０．２８ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（０．３７ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）および（２−クロロ−エチル）ジメチルアミン塩酸塩（０．０４４ｇ、０．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．５ｍＬ）中混合物を、８０℃で８時間加熱し、冷却して室温とし、水とエーテルとの間で分配した（２回）。合わせた抽出液を脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮し、５：４：１ヘキサン：ＥｔＯＡｃ：メタノールを溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって残留物を精製して、（４−ブロモ−フェニル）−［７−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イル］−アミンを得た（０．１０３ｇ、収率９４％）。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋３８９．９、３９１．８。
製造例３７：２−（４−ブロモ−フェニルアミノ）−５−クロロ−ベンゾオキサゾール−７−オール
Figure 2007520559
製造例３７．１：（４−ブロモ−フェニル）−（５−クロロ−７−メトキシ−ベンゾオキサゾール−２−イル）−アミン
Figure 2007520559
製造例２９．３に代えて４−クロロ−２−メトキシフェノールを用い、製造例２９の合成経路を行って、（４−ブロモ−フェニル）−（５−クロロ−７−メトキシ−ベンゾオキサゾール−２−イル）−アミンを得た。
Figure 2007520559
（４−ブロモ−フェニル）−（５−クロロ−７−メトキシ−ベンゾオキサゾール−２−イル）アミン（０．６８７ｇ、１．９ｍｍｏｌ）、２，４，６−コリジン（１０ｍＬ）およびＬｉＩ（１．０４ｇ、７．７ｍｍｏｌ）の混合物を終夜加熱還流し、冷却して室温とし、１Ｎ ＨＣｌで希釈し、エーテルで抽出した（４回）。合わせたエーテル抽出液を脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮して、２−（４−ブロモ−フェニルアミノ）−５−クロロ−ベンゾオキサゾール−７−オールを得た（０．５８ｇ、収率８８％）。ｍ／ｚ：（Ｍ−Ｈ）−３３６．８、３３８．８。
製造例３８：２−（４−ブロモ−２−フルオロ−フェニルアミノ）−５−クロロ−ベンゾオキサゾール−７−オール
Figure 2007520559
製造例２９．３に代えて４−クロロ−２−メトキシフェノールを用い、４−ブロモ−１−イソチオシアナト−ベンゼンに代えて４−ブロモ−２−フルオロ−１−イソチオシアナト−ベンゼンを用いて、製造例２９から製造例２９．４の段階に従って、２−（４−ブロモ−２−フルオロ−フェニルアミノ）−５−クロロ−ベンゾオキサゾール−７−オールを得た。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋３５６．８、３５８．８。
製造例３９：５−ヨード−７−（４−ニトロ−ベンジル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
製造例３９．１：４−クロロ−５−ヨード−７−（４−ニトロ−ベンジル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
Figure 2007520559
４−クロロ−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（３．０ｇ、１０．７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）溶液に、水素化ナトリウム（０．４７ｇ、オイル中６０％分散品、１１．８ｍｍｏｌ）を少量ずつ加え、得られた混合物を室温で４０分間攪拌し、４−ニトロベンジルブロマイド（２．５８ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）で処理し、さらに３時間攪拌した。混合物を水で希釈し、ＴＨＦ−エーテルで抽出した（２回）。抽出液を冷却して−２０℃として４時間経過させ、得られた沈澱を濾過によって回収して、４−クロロ−５−ヨード−７−（４−ニトロ−ベンジル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンを得た（３．８ｇ）。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋４１４．８。
Figure 2007520559
４−クロロ−５−ヨード−７−（４−ニトロ−ベンジル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１ｇ）および濃ＮＨ４ＯＨ（１５ｍＬ）のジオキサン（１５ｍＬ）中混合物を、封管中１２０℃で４時間加熱し、冷却して室温とし、水（３０ｍＬ）で処理し、１時間攪拌した。得られた沈澱を濾過によって回収して、５−ヨード−７−（４−ニトロ−ベンジル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンを得た（０．８３ｇ、収率８７％）。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋３９５．９。
製造例４０：５−ヨード−７−（３、４，５−トリメトキシベンジル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
製造例４０．１：４−クロロ−５−ヨード−７−（３、４，５−トリメトキシ−ベンジル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
Figure 2007520559
４−クロロ−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（２．０ｇ、７．１６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７５ｍＬ）溶液を、３，４，５−トリメトキシベンジルアルコール（１．３ｍＬ、７．８７ｍｍｏｌ）、Ｐｈ３Ｐ（３．８ｇ、１４．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＡＤ（２．９１ｍＬ、１４．３ｍｍｏｌ）の順で処理し、室温で１８時間攪拌し、水で希釈し、エーテルと次にＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合わせた抽出液を脱水し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残留物をエーテルと次にＣＨ２Ｃｌ２から磨砕して、４−クロロ−５−ヨード−７−（３，４，５−トリメトキシ−ベンジル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンを得た（１．３２ｇ）。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋４５９．９。
製造例３９．２の合成において詳細に説明したプロトコールを用いて４−クロロ−５−ヨード−７−（３，４，５−トリメトキシ−ベンジル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンを反応させて、５−ヨード−７−（３，４，５−トリメトキシ−ベンジル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンを得た。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋４４１．２。
製造例４１：３−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
製造例３９．１の合成において４−ニトロベンジルブロマイドおよび４−クロロ−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンに代えてそれぞれヨウ化メチルおよび３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンを用いて、３−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンを得た。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋２７５．９。
製造例４２：５−ヨード−７−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
製造例３９の合成において４−ニトロベンジルブロマイドに代えてヨウ化メチルを用いて、３−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンを得た。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋２７４．８。
製造例４３：Ｎ−［４−（４−アミノ−５−ヨード−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イルメチル）−フェニル］−メタンスルホンアミド
Figure 2007520559
製造例４３．１：７−（４−アミノ−ベンジル）−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
５−ヨード−７−（４−ニトロベンジル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（製造例３９、０．６６ｇ、１．６７ｍｍｏｌ）および鉄粉（０．２８ｇ）のエタノール（１０ｍＬ）および水（５ｍＬ）中混合物を、８０℃で１時間攪拌し、追加の鉄粉０．１ｇ、水（１ｍＬ）、ＴＨＦ（０．５ｍＬ）およびＮＨ４Ｃｌ（０．０９４ｇ）で処理し、さらに４時間攪拌した。得られた懸濁液をセライトで濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２およびメタノールで洗浄した。濾液を水で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮し、３％ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２を溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって残留物を精製して、７−（４−アミノ−ベンジル）−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンを得た（０．３３ｇ）。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋３６５．９。
７−（４−アミノ−ベンジル）−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（０．１５ｇ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）およびピリジン（６ｍＬ）溶液を０℃としたものに、メタンスルホニルクロライド（０．０３３ｍＬ）を滴下し、得られた懸濁液を室温で１９時間攪拌し、水で希釈した。沈澱を濾過によって回収し、ＴＨＦに溶かし、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮して、Ｎ−［４−（４−アミノ−５−ヨード−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イルメチル）−フェニル）−メタンスルホンアミドを得た（０．１３ｇ）。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋４４３．８。
製造例４４：１−［４−（４−アミノ−５−ヨード−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イルメチル）−フェニル］−３−（２−ヒドロキシエチル）尿素
Figure 2007520559
７−（４−アミノ−ベンジル）−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（０．１５４ｇ）およびトリエチルアミン（０．０６５ｍＬ）のＴＨＦ（８ｍＬ）中の濁った溶液を、クロルギ酸パラ−ニトロフェニル（０．０９７ｇ）で処理し、０℃で１．５時間攪拌した。反応液をエタノールアミン（０．０５１ｍＬ）およびトリエチルアミン（０．０６５ｍＬ）で処理し、室温で４時間攪拌した。混合物を水（２０ｍＬ）で希釈し、室温で１６時間攪拌し、得られた沈澱を濾過によって回収し、水で洗浄し、真空乾燥機で５０℃にて乾燥させて、１−［４−（４−アミノ−５−ヨード−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イルメチル）−フェニル］−３−（２−ヒドロキシ−エチル）−尿素を得た（０．１７ｇ）。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋４５２．９。
製造例４５：（４−アミノ−５−ヨード−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）アセトニトリル
Figure 2007520559
製造例３９の合成で４−ニトロベンジルブロマイドに代えてブロモアセトニトリルを用いて、（４−アミノ−５−ヨード−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−アセトニトリルを得た。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋２９９．０７。
製造例４６：３−ヨード−１−ピリジン−３−イルメチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
製造例３９の合成で４−ニトロベンジルブロマイドに代えて３−ブロモメチルピリジン・１臭化水素酸塩を用いて、３−ヨード−１−ピリジン−３−イルメチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンを得た。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋３５１．９。
一般的手順Ｄを用いてブロマイド（例えば、製造例２９〜３８）を相当するボロン酸エステルに変換し、一般的手順Ｃを用いてそのボロン酸エステルをヨージド（例えば、製造例３９〜４６）と反応させることで、以下の実施例（３８７〜４０５）を合成した。
（実施例３８７）
１−シクロペンチル−３−［４−（５−メトキシ−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例３８８）
３−［４−（５−メトキシ−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例３８９）
７−メチル−５−｛４−［５−メチル−７−（３−モルホリン−４−イル−プロポキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例３９０）
メチル−３−｛４−［５−メチル−７−（３−モルホリン−４−イル−プロポキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例３９１）
１−メチル−３−｛４−［５−メチル−７−（１−メチル−ピペリジン−４−イルメトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例３９２）
１−シクロペンチル−３−｛４−［５−メチル−７−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例３９３）
１−メチル−３−｛４−［５−メチル−７−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例３９４）
７−シクロペンチル−５−｛４−［５−メチル−７−（３−モルホリン−４−イル−プロピル）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例３９５）
７−メチル−５−｛４−［５−メチル−７−（３−モルホリン−４−イル−プロピル）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例３９６）
３−［４−（７−アリル−５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−シクロペンチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例３９７）
１−シクロペンチル−３−｛４−［７−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例３９８）
２−［４−（４−アミノ−１−シクロペンチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル）−フェニルアミノ］−５−メチル−ベンゾオキサゾール−７−オール。
（実施例３９９）
Ｎ−（４−｛４−アミノ−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イルメチル｝−フェニル）−メタンスルホンアミド。
（実施例４００）
１−（４−｛４−アミノ−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イルメチル｝−フェニル）−３−（２−ヒドロキシ−エチル）−尿素。
（実施例４０１）
５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−７−（３，４，５−トリメトキシ−ベンジル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４０２）
５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−７−（４−ニトロ−ベンジル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４０３）
｛４−アミノ−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−アセトニトリル。
（実施例４０４）
５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−７−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４０５）
５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−７−ピリジン−３−イルメチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
ＨＰＬＣ保持時間を測定するのに用いた方法は、括弧中に小文字で示してある（表１参照）。
Figure 2007520559
Figure 2007520559
Figure 2007520559
（実施例４０６）
７−（４−アミノベンジル）−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
一般的手順Ｈを用いた実施例４０２の還元によって、７−（４−アミノ−ベンジル）−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンを得た。
Figure 2007520559
ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋４７６．２。
製造例４７〜５４：アミノベンゾオキサゾールフェノール類縁体
Figure 2007520559
表１４に詳細に記載の反応物を用いて、実施例３８７の製造に詳細に記載の手順を用い、リストアップされたアミノベンゾオキサゾールフェノール類縁体（製造例４７〜５４）を合成した。ＨＰＬＣ保持時間を測定するのに用いた方法は、括弧中にて小文字で示してある（表１参照）。
Figure 2007520559
（実施例４０７）
１−シクロペンチル−３−｛４−［５−メチル−７−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
実施例３９８（０．１６ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）、４−（２−クロロエチル）モルホリン（０．０７５ｇ、０．４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．１０６ｍＬ、０．７６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５ｍＬ）溶液をＣｓ２ＣＯ３（１３０ｍｇ）で処理し、５０℃で３時間攪拌した。追加量のＣｓ２ＣＯ３（２６０ｍｇ）を加え、５０℃でさらに２．５時間攪拌した。反応混合物を冷却して室温とし、水で希釈し、エーテルで３回抽出した。合わせた抽出液を脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮し、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ：メタノール：ＣＨ２Ｃｌ２（５：４：１：１）を溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって残留物を精製して、１−シクロペンチル−３−｛４−［５−メチル−７−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンを得た（４５ｍｇ、収率２２％）。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．５ｍＬ／分で７分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．１％Ｈ３ＰＯ４（水溶液）；λ＝１９０〜７００ｎｍ；ゾルバックスＳＢ−Ｃ８ラピッド・レゾリューション（rapid resolution）、４．６ｍｍ×７５ｍｍ、３．５μｍカラム）Ｒｔ１．７６分；ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋５５５．２。
製造例２９．１に記載のアルキル化剤で相当するフェノールをアルキル化することで、実施例４０８〜４２８を製造した。
（実施例４０８）
１−シクロペンチル−３−（４−［５−メチル−７−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４０９）
４−｛２−［４−（４−アミノ−１−シクロペンチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル）−フェニルアミノ］−５−メチル−ベンゾオキサゾール−７−イルオキシメチル｝−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル・１トリフルオロ酢酸塩。
（実施例４１０）
７−メチル−５−｛４−［５−メチル−７−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４１１）
５−｛４−［７−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−７−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４１２）
３−｛４−［５−クロロ−７−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−１−シクロペンチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４１３）
３−｛４−［５−クロロ−７−（２−メトキシ−エトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−１−シクロペンチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４１４）
３−｛４−［５−クロロ−７−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−１−シクロペンチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４１５）
２−｛２−［４−（４−アミノ−１−シクロペンチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル）−フェニルアミノ］−５−クロロ−ベンゾオキサゾール−７−イルオキシ｝−Ｎ，Ｎ−ジエチル−アセトアミド。
（実施例４１６）
３−｛４−［５−クロロ−７−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ｝−フェニル｝−１−シクロペンチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４１７）
５−｛４−［５−クロロ−７−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−７−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４１８）
３−｛４−［５−クロロ−７−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４１９）
５−｛４−［５−クロロ−７−（５−クロロ−チオフェン−２−イルメトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−７−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４２０）
３−｛４−［５−クロロ−７−（２−フェニルスルファニル−エトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４２１）
３−｛４−［５−クロロ−７−（６−クロロ−ピリジン−３−イルメトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４２２）
５−（４−［５−クロロ−７−（３−モルホリン−４−イル−プロポキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−７−シクロペンチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４２３）
３−｛４−［５−クロロ−７−（３−モルホリン−４−イル−プロポキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−１−シクロペンチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４２４）
５−｛４−［５−クロロ−７−（３−モルホリン−４−イル−プロポキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−７−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４２５）
５−｛４−［５−クロロ−７−（３−モルホリン−４−イル−プロポキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−３−フルオロ−フェニル｝−７−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４２６）
５−｛４−［５−クロロ−７−（３−モルホリン−４−イル−プロポキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−３−フルオロ−フェニル｝−７−シクロペンチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４２７）
３−｛４−［５−クロロ−７−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４２８）
３−｛４−［５−クロロ−７−（３−モルホリン−４−イル−プロポキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
ＨＰＬＣ保持時間を測定するのに用いた方法は、括弧中にて小文字で示してある（表１参照）。
Figure 2007520559
Figure 2007520559
（実施例４２９）
１−シクロペンチル−３−｛４−［５−メチル−７−（ピペリジン−４−イルメトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
実施例４０９（０．０８ｇ）のＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）およびＴＦＡ（１ｍＬ）溶液を０℃としたものを、０℃で１時間、室温で４時間攪拌してから、濃縮した。残留物をエーテルで磨砕し、沈澱を回収し、２４時間真空乾燥して、１−シクロペンチル−３−｛４−［５−メチル−７−（ピペリジン−４−イルメトキシ）−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ］−フェニル｝−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン・２トリフルオロ酢酸塩（５２．７ｍｇ）を得た。ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．５ｍＬ／分で７分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．１％Ｈ３ＰＯ４（水溶液）；λ＝１９０〜７００ｎｍ；ゾルバックスＳＢ−Ｃ８ラピッドレゾリューション、４．６ｍｍ×７５ｍｍ、３．５μｍカラム）Ｒｔ１．７４分；ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋５３９．１。
（実施例４３０）
５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン
Figure 2007520559
３−ヨード−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（実施例３６２の合成において詳細に説明したもの）を、一般的手順Ｃを用いて（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−［２−エチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アミン（Ｇ、Ｄ）と反応させて、５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−７−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンを得た。この化合物（０．１２８ｇ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液をＴＢＡＦ（５ｍＬ、１Ｍ ＴＨＦ溶液）で処理し、１５時間還流し、冷却して室温とし、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液とエーテルとの間で分配した（２回）。合わせた有機抽出液を脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮し、５：４：１ヘキサン：ＥｔＯＡｃ：メタノールを溶離液とするシリカゲルクロマトグラフィーによって残留物を精製して、５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンを得た（９．３ｍｇ）。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋３７１．１；ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．５ｍＬ／分で７分間かけて５％〜９５％アセトニトリル／０．１％Ｈ３ＰＯ４（水溶液）；λ＝１９０〜７００ｎｍ；ゾルバックスＳＢ−Ｃ８ラピッドレゾリューション、４．６ｍｍ×７５ｍｍ、３．５μｍカラム）Ｒｔ１．７４分。
（実施例４３１）
５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−７−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン
Figure 2007520559
製造例３９．１において４−クロロ−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンおよび４−ニトロベンジルブロマイドに代えてそれぞれＮ−（４−クロロ−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）−２，２−ジメチル−プロピオンアミド（Nucleic Acids Res., 26, 3353, 1998）および硫酸ジメチルを用いて、メチル化生成物を得て、それを一般的手順Ｂに詳細に記載の方法に従って水酸化アンモニウムと反応させて、５−ヨード−７−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミンを得た。
Figure 2007520559
一般的手順Ｃを用いて５−ヨード−７−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミンを、（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−［２−フルオロ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アミン（Ｇ、Ｄ）と反応させて、５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−７−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミンを得た。ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋４１８．２；
Figure 2007520559
（実施例４３２）
シス−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−７−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン
Figure 2007520559
一般的手順Ａに詳細に記載の条件下にＮ−（４−クロロ−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）−２，２−ジメチル−プロピオンアミド（Nucleic Acids Res., 26, 3353, 1998）を４−モルホリン−４−イルシクロヘキサノールと反応させることでアルキル化生成物を得て、それについて一般的手順Ｂによるアミノ分解を行って、５−ヨード−７−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミンを得た。この生成物を次に、一般的手順Ｃを用いて（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−［２−フルオロ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アミン（Ｇ、Ｄ）と反応させて、ジアステレオマーの混合物を得て、それをクロマトグラフィーによって分離して、シス−５−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−７−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミンを得た。ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋５７１．３；
Figure 2007520559
一般的手順Ｇを用い、トランス−３−ヨード−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン（Ａ、Ｔ、Ｊ、Ｃ）を適切に置換された２−アミノフェノールと反応させることで、実施例４３３〜４４６を合成した。市販されていない２−アミノフェノール類は、一般的手順を用いて相当する２−ニトロフェノールから合成した。
Figure 2007520559
（実施例４３３）
トランス−３−［４−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−７−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４３４）
トランス−３−［４−（７−ｔｅｒｔ−ブチル−５−エチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４３５）
トランス−３−［４−（５−エチル−７−メトキシ−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４３６）
トランス−１−（２−｛４−［４−アミノ−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル］−フェニルアミノ｝−７−メチル−ベンゾオキサゾール−５−イル）−エタノン。
（実施例４３７）
トランス−１−（２−｛４−［４−アミノ−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル］−フェニルアミノ｝−５−フルオロ−ベンゾオキサゾール−７−イル）−エタノン。
（実施例４３８）
トランス−３−［４−（７−メトキシ−５−プロピル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４３９）
トランス−２−｛４−［４−アミノ−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル］−フェニルアミノ｝−５−ブロモ−ベンゾオキサゾール−７−カルボニトリル。
（実施例４４０）
トランス−（２−｛４−［４−アミノ−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル］−フェニルアミノ｝−７−エトキシ−ベンゾオキサゾール−５−イル）−アセトニトリル。
（実施例４４１）
トランス−３−［４−（７−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４４２）
トランス−３−［４−（５−クロロ−７−メトキシ−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４４３）
トランス−３−［４−（７−クロロ−５−メトキシ−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４４４）
トランス−３−［４−（５−フルオロ−７−メトキシ−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン。
（実施例４４５）
トランス−２−｛４−［４−アミノ−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル］−フェニルアミノ｝−５−クロロ−ベンゾオキサゾール−７−カルボン酸アミド。
（実施例４４６）
トランス−（２−｛４−［４−アミノ−１−（４−モルホリン−４−イル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３−イル］−フェニルアミノ｝−７−メトキシ−ベンゾオキサゾール−５−イル）−アセトニトリル。
ＨＰＬＣ保持時間を測定するのに用いた方法は、括弧中にて小文字で示してある（表１参照）。
Figure 2007520559
一般的手順ＦＦ：１段階プロトコールでの閉環による置換アミノベンゾオキサゾール類の形成
置換２−アミノフェノール（１〜５当量、好ましくは１．１５当量）および置換フェニルイソチオシアン酸エステル（１〜５当量、好ましくは１．０当量）および脱水有機溶媒（例えば、塩化メチレン、ジオキサン、ＤＭＥ、ＴＨＦまたはＭＴＢＥ、好ましくはＴＨＦ）の混合物を、室温で不活性雰囲気下に１〜４８時間（好ましくは１６時間）攪拌する。反応溶液を、循環浴で冷却して約０〜３０℃（好ましくは約−１５℃）とする。次に、固体水酸化リチウム・１水和物（１〜５当量、好ましくは２当量）を一気に加えた。反応懸濁液を再度冷却して約０〜−３０℃（好ましくは約−１５℃）とした。滴下漏斗から、３０％過酸化水素水（１〜１０当量、好ましくは５当量）を、温度が約１５〜２５℃（好ましくは約１５℃）に維持されるような速度で滴下した。
１０分〜３時間（好ましくは１０分）後、反応が完結し、攪拌反応混合物に亜硫酸ナトリウム溶液（Ｎａ２ＳＯ３、２リットル、１Ｍ）を加えた。反応混合物を、有機溶媒を用いて分液漏斗に移し入れた。層を分離し、有機層をブラインおよび水の溶液で洗浄した。合わせた水系洗浄液を有機溶媒で逆抽出した。合わせた有機抽出液を減圧下に濃縮した。残留物を結晶化させ、真空乾燥機で乾燥させた。
使用可能な他の酸化剤には、酸素（Ｏ２）、過酸（ＲＣＯ３Ｈ、Ｒ＝アリールもしくはアルキル、またはパーフルオロアルキル）、塩素（Ｃｌ２）、過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）、過ヨウ素酸カリウム（ＫＩＯ４）、ｔｅｒｔ−ブチルペルオキシド（ｔ−ＢｕＯＯＨ）、次亜塩素酸ｔｅｒｔ−ブチル（ｔ−ＢｕＯＣｌ）、過ホウ酸ナトリウム（ＮａＢＯ３・ｎＨ２Ｏ）、過炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３・１．５Ｈ２Ｏ２）、尿素−過酸化水素付加物（Ｈ２ＮＣＯＮＨ２・Ｈ２Ｏ２）、次亜塩素酸ナトリウム（ＮａＯＣｌ）、次亜塩素酸カリウム（ＫＯＣｌ）、次亜臭素酸ナトリウム（ＮａＢｒＯ）、次亜臭素酸カリウム（ＫＢｒＯ）、臭素酸ナトリウム（ＮａＢｒＯ３）、臭素酸カリウム（ＫＢｒＯ３）、過マンガン酸カリウム（ＫＭｎＯ４）およびマンガン酸バリウム（ＢａＭｎＯ４）などがある。
使用可能な他の塩基には、金属水酸化物（Ｎａ、ＫまたはＣｓＯＨ）、金属炭酸塩（Ｌｉ、Ｎａ、ＫまたはＣｓ２ＣＯ３）、金属重炭酸塩（Ｌｉ、Ｎａ、ＫまたはＣｓＨＣＯ３）、金属アルコキシド（ＭＯＲ、Ｒ＝Ｍｅ、Ｅｔなど）、金属リン酸塩（Ｌｉ、Ｎａ、ＫまたはＣｓ３ＰＯ４）、金属二リン酸塩（Ｌｉ、Ｎａ、ＫまたはＣｓ２ＨＰＯ４）および上記全てのテトラアルキルアンモニウム（Ｒ４Ｎ；Ｒ＝Ｍｅ、Ｅｔ、Ｂｕなど）などがある。
一般的手順ＦＦの例示
製造例５５：（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）（５−フルオロベンゾオキサゾール−２イル）アミン
窒素導入管、温度プローブおよび攪拌機を取りつけた５リットルのジャケットを施した三頸丸底フラスコに、２−アミノ−４−フルオロフェノール（６４．４ｇ、５０７ｍｍｏｌ、１．１５当量）、イソチオシアン酸２−フルオロ−４−ブロモフェニル（１０２．３ｇ、４４０．８ｍｍｏｌ、１．０当量）および脱水ＴＨＦ（１．５リットル）を入れた。反応混合物を室温で終夜攪拌した。ＨＰＬＣ分析によって、反応（チオ尿素形成）の完了が示された。
循環浴で反応溶液を冷却して約−１５℃とした。次に、固体水酸化リチウム・１水和物（ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ、３７．０ｇ、８８２ｍｍｏｌ、２当量）を一気に加えた。反応懸濁液を再度冷却して約−１５℃とした。滴下漏斗から、内部温度が約１５〜２５℃に維持される速度で、３０％過酸化水素水（Ｈ２Ｏ２、２６４ｍＬ、２．２ｍｏｌ、５当量）を滴下した。反応は添加の初期においては非常に発熱的で、添加終了に向かって静まる。添加完了後、サンプルをＨＰＬＣ分析用に取り、通常は反応は完結していた。
温度を３０℃以下に維持しながら、反応混合物を攪拌したものに、亜硫酸ナトリウム溶液（Ｎａ２ＳＯ３、２リトル、１Ｍ）を加えた。過酸化物試験片を用いて、溶液の過酸化物を調べたところ、過酸化物が残留していないことが示された。反応混合物を６リットル分析漏斗に移した。フラスコを水で洗い（５００ｍＬで３回）、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬで４回）、リンス液を前記分液漏斗に移した。層を分離し、有機層をブラインおよび水の溶液（１００＋４００ｍＬ、４回）、ブライン（５００ｍＬで１回）で洗浄した。合わせた水系洗浄液をＥｔＯＡｃ（２リットル）で逆抽出した。合わせた有機抽出液を減圧下に濃縮した。得られた残留物に、アセトニトリル（２５０ｍＬ）を加え、懸濁液をロータリーエバポレータで３０分間回転させ、冷蔵庫に終夜放置した。固体を回収し、ヘキサンで洗浄し（３００ｍＬで１回）、真空乾燥機で乾燥させた。生成物が得られた（１３１．５ｇ、収率９２％）、融点：１８８〜１８９℃。
Figure 2007520559
ＨＲＭＳ：Ｃ１３Ｈ８ ７９ＢｒＦ２Ｎ２Ｏの計算値３２４．９７８８、実測値３２４．９８０３（ＭＨ＋）。元素分析：Ｃ１３Ｈ７ＢｒＦ２Ｎ２Ｏの計算値：Ｃ、４８．０３；Ｈ、２．１７；Ｂｒ、２４．５８；Ｆ、１１．６９；Ｎ、８．６２；実測値：Ｃ、４７．８３；Ｈ、１．９５；Ｂｒ、２４．３２；Ｆ、１１．８０；Ｎ、８．４９。
一般的手順ＦＦを用いて、下記の実施例を合成した。
製造例５６：（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）（５−クロロベンゾオキサゾール−２−イル）アミン
収率９０％、融点１９４〜１９５℃。
Figure 2007520559
ＨＲＭＳ：Ｃ１３Ｈ８ ７９ＢｒＣｌＦＮ２Ｏの計算値３４０．９４９３、実測値３４０．９５０１（ＭＨ＋）；Ｃ１３Ｈ８ ８１ＢｒＣｌＦＮ２Ｏの計算値３４２．９４７２、実測値３４２．９４７０（ＭＨ＋）。元素分析：Ｃ１３Ｈ７ＢｒＣｌＦＮ２Ｏの計算値：Ｃ、４５．７１；Ｈ、２．０７；Ｂｒ、２３．３９；Ｃｌ、１０．３８；Ｆ、５．５６；Ｎ、８．２０；実測値：Ｃ、４５．７４；Ｈ、２．０５；Ｂｒ、２３．７１；Ｃｌ、１０．５１；Ｆ、５．５３；Ｎ、８．１６。
製造例５７：（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）（５−メチルベンゾオキサゾール−２−イル）アミン
収率８９％、融点：１８５〜１８６℃。
Figure 2007520559
ＨＲＭＳ：Ｃ１４Ｈ１１ ７９ＢｒＦＮ２Ｏの計算値３１９．９９６１、実測値３１９．９９５９（ＭＨ＋）；Ｃ１４Ｈ１１ ８１ＢｒＦＮ２Ｏの計算値３２１．９９４０、実測値３２１．９９４９（ＭＨ＋）。元素分析：Ｃ１４Ｈ１０ＢｒＦＮ２Ｏの計算値：Ｃ、５２．３６；Ｈ、３．１４；Ｂｒ、２４．８８；Ｆ、５．９２；Ｎ、８．７２；実測値：Ｃ、５２．１４；Ｈ、３．１５；Ｂｒ、２３．２１；Ｆ、５．９１；Ｎ、８．６２。
製造例５８：（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）［５−（トリフルオロメチル）ベンゾオキサゾール−２−イル］アミン
収率８８％、融点：１６０〜１６１℃。
Figure 2007520559
元素分析：Ｃ１４Ｈ７ＢｒＦ４Ｎ２Ｏの計算値：Ｃ、４４．８３；Ｈ、１．８８；Ｂｒ、２１．３０；Ｆ、２０．２６；Ｎ、７．４７；Ｏ、４．２７；実測値：Ｃ、４４．６５；Ｈ、１．７１；Ｂｒ、２１．１４；Ｆ、１９．４２；Ｎ、７．４４。
製造例５９：エチル（５−メチルベンゾオキサゾール−２−イル）アミン
収率８９％、融点：９０〜９１℃。
Figure 2007520559
ＨＲＭＳ：Ｃ１０Ｈ１２Ｎ２Ｏの計算値１７６．０９５０、実測値１７６．０９４８（Ｍ＋）；元素分析：Ｃ１０Ｈ１２Ｎ２Ｏの計算値：Ｃ、６８．１６；Ｈ、６．８６；Ｎ、１５．９０；実測値：Ｃ、６７．９７；Ｈ、６．８６；Ｎ、１５．８４。
（実施例４４７）
トランス−４−（４−｛４−アミノ−５−［３−フルオロ−４−（５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−シクロヘキシル）−ピペラジン−２−オン
２−ピペラジノン（５１．０６ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）および４−｛４−アミノ−５−［３−フルオロ−４−（５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−シクロヘキサノン（一般的手順Ａ、Ｃ、Ｂ、ＫおよびＧを用いて４−クロロ−３−ヨードピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンおよび１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカノールから製造）（８０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の氷酢酸（０．０３ｍＬ、０．５１ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（５ｍＬ）懸濁液に、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム（４６．８ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１８時間攪拌後、反応液はまだ不均一であったことから、ＮＭＰ（２ｍＬ）を加え、反応液をさらに約２４時間攪拌した。反応をＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／塩化メチレンを展開液として使用）によってモニタリングし、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）で反応停止した。生成物を塩化メチレンに抽出し（５０ｍＬで３回）、無水硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒留去して乾固させて黄色油状物を得て、それを０．１％ＮＨ４ＯＨおよび５％ＭｅＯＨ／塩化メチレンを溶離液として用いるシリカゲルでのクロマトグラフィーによってさらに精製した。分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（１ｍＬ／分で２０分間かけて５％〜８５％アセトニトリル／０．１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；デルタパックＣ１８、３００Å、５μｍ、１５０×３．９ｍｍカラム）を用いてさらに精製することで、トランス−４−（４−｛４−アミノ−５−［３−フルオロ−４−（５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−シクロヘキシル）−ピペラジン−２−オンを得た（２ｍｇ）。
Figure 2007520559
（実施例４４８）
トランス−４−（４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキシル）−ピペラジン−２−オン
４−［４−（４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−シクロヘキシル］−ピペラジン−２−オン（一般的手順Ａ、ＫおよびＪを用いて４−アミノ−３−ヨード−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンおよび１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカノールから製造）（４５ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−［２−フルオロ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アミン（一般的手順ＧおよびＤを用いて製造）（４９ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（２７ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）および水（２．５ｍＬ）溶液に、テトラキストリフェニルホスフィン（６ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）を加え、加熱して約８０℃として約１２時間経過させた。追加のテトラキストリフェニルホスフィン（０．０１５ｍｍｏｌ）、（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イル）−［２−フルオロ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−アミン（０．０６ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（０．２５ｍｍｏｌ）を加え、反応液を約８０℃でさらに約１６時間加熱した。溶媒を減圧下に除去し、残留物を塩化メチレン（１００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）との間で分配した。有機層を分離し、水層を塩化メチレンによってさらに抽出した（５０ｍＬで３回）。合わせた有機層を無水硫酸マグネシウムで脱水し、減圧下に濃縮した。生成物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（１．７ｍＬ／分で２０分間かけて５％〜８５％アセトニトリル／０．０５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（緩衝：ｐＨ４．５）；λ＝２５４ｎｍ；ハイパージルＣ１８、１００Å、５μｍ、２５０×４．６ｍｍカラム）によって精製し、酢酸エチルで磨砕して、トランス−４−（４−｛４−アミノ−３−［４−（５，７−ジメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキシル）−ピペラジン−２−オン（４．２ｍｇ）をオフホワイト固体として得た。ＬＣ／ＭＳ（０．８ｍＬ／分で４．５分間かけて３０％〜９５％アセトニトリル／０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液；λ＝１９０〜７００ｎｍ；ジェネシスＣ１８、１２０Å、３μｍ、３０×４．６ｍｍカラム；陽イオンと陰イオンの両用を観察するエレクトロスプレーイオン化方法）Ｒｔ２．３０分；ｍ／ｚ：（Ｍ＋Ｈ）＋５７０．４。
本願全体を通じて引用した全ての参考文献、特許および公開特許出願の内容は、その全体が、参照によって本明細書に組み込まれるものとする。

Claims (24)

  1. 下記式（Ｉ）の化合物、該化合物の製薬上許容される塩、該化合物の代謝物、該化合物の異性体または該化合物のプロドラッグ。
    Figure 2007520559
     ［式中、
    Ｘは、ＮまたはＣＨであり；
    Ａは、置換されていても良いフェニルであるか、
    またはＡは、
    Figure 2007520559
     であり；
    ｒは１であり；Ｄ１、Ｇ１、Ｊ１、Ｌ１およびＭ１はそれぞれ独立に、ＣＲａおよびＮからなる群から選択され、ただしＤ１、Ｇ１、Ｊ１、Ｌ１およびＭ１のうちの少なくとも２個がＣＲａであり；または
    ｒは０であり；Ｄ１、Ｇ１、Ｌ１およびＭ１のうちの一つがＮＲａであり、Ｄ１、Ｇ１、Ｌ１およびＭ１のうちの一つがＣＲａであり、残りのものが独立にＣＲａおよびＮからなる群から選択され、ここでＲａは下記で定義の通りであり；
    Ｌは、ＮＨ、置換されていても良いアルキル、カルボニル、−Ｏ−置換されていても良いアルキル、ＮＨ（置換されていても良い脂肪族）またはＳであり；
    Ｒ１は、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ１００）２であり；各場合でＲ１００は独立に水素またはアルキルであり；
    またはＲ１は、
    Figure 2007520559
     であるか、
    または脂肪族基、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、シクロアルキル、２，３−ジヒドロベンゾフラニル、１，１−ジオキシベンゾイソチアゾリル、フラニル、１Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］イミダゾリル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリミジニル、イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３］チアゾリル、インダゾリル、インドリニル、インドリル、イソキノリニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、モルホリニル、ナフチル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、フェニルスルホニル、フタラジニル、ピペリジニル、ピラゾリル、Ｈ−ピリジノン、ピリジニル、ピリド−オキサゾリル、ピリド−チアゾリル、ピリミド−オキサゾリル、ピリミド−チアゾリル、ピロリジニル、ピロロピリジニル、ピロリル、キノリニル、キノキザリニル、キナゾリニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロナフチル、テトラヒドロピラニル、チアジアゾリル、チアゾリルチエニル、
    Figure 2007520559
     からなる群から選択される置換されていても良い基であり；
    ここで前記置換されていても良い基は、１以上のＲｂによって置換されていても良く；
    ｕは１であり、Ｄ２、Ｇ２、Ｊ２、Ｌ２およびＭ２はそれぞれ独立に、ＣＲａおよびＮからなる群から選択され、ただし、Ｄ２、Ｇ２、Ｊ２、Ｌ２およびＭ２のうちの少なくとも２個がＣＲａであり；または
    ｕは０であり；Ｄ２、Ｇ２、Ｌ２およびＭ２のうちの１個がＮＲａであり、Ｄ２、Ｇ２、Ｌ２およびＭ２のうちの１個がＣＲａであり、残りのものが独立にＣＲａおよびＮからなる群から選択され；
    ＲａおよびＲｂはそれぞれ１以上の置換基を表し、各場合で独立に脂肪族基、アルコキシ、アルキルアミノ、脂肪族−カルボニル、脂肪族−シクロアルキル、脂肪族−複素環、アルキル−Ｓ−、アルキル−Ｓ（Ｏ）ｐ−、アミド基、アミノ、アミノアルキル、カルボキサミド、−ＣＦ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）−脂肪族、−Ｃ（Ｏ）−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−複素環、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−脂肪族、Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−複素環、シクロアルキル、シクロアルキル−脂肪族、シクロアルキル−Ｓ、シクロアルキル−Ｓ（Ｏ）ｐ、シクロアルキルチオ、ジアルキルアミノアルコキシ、ハロ、複素環、複素環アルコキシ、複素環アルキル、複素環オキシ、複素環−Ｓ、複素環−Ｓ（Ｏ）ｐ、複素環チオ、複素環アルキル−Ｓ、水素、−ＮＯ２、−ＯＣＦ３、−ＯＨ、テトラゾリル、トリフルオロメチルカルボニルアミノ、トリフルオロメチルスルホンアミド、−Ｚ１０５−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｚ１０５−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）−Ｚ２００、−Ｚ１０５−Ｎ（Ｒ）−Ｓ（Ｏ）２−Ｚ２００、−Ｚ１０５−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ）−Ｚ２００、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｏ−Ｒ−Ｃ（Ｏ）−複素環−ＯＲ、Ｒｃおよび−ＣＨ２ＯＲｃからなる置換されていても良い基から選択され；
    ここにＲｃは各場合で独立に、水素、置換されていても良い脂肪族、置換されていても良い複素環−（Ｃ１〜Ｃ６）−ＮＲｄＲｅ、−Ｗ−（ＣＨ２）ｔ−ＮＲｄＲｅ、−Ｗ−（ＣＨ２）ｔ−Ｏ−アルキル、−Ｗ−（ＣＨ２）ｔ−Ｓ−アルキルまたは−Ｗ−（ＣＨ２）ｔ−ＯＨであり；
    Ｚ１０５は各場合で独立に、共有結合または脂肪族基であり；
    Ｚ２００は各場合で独立に、脂肪族基、脂肪族−フェニルおよびフェニルからなる群から選択される置換されていても良い基から選択され；
    ＲｄおよびＲｅは各場合で独立に、Ｈ、脂肪族基、アルカノールまたはＳＯ２−アルキルであり；またはＲｄ、Ｒｅおよびそれらが結合している窒素原子が一体となって、５員もしくは６員の複素環を形成しており；
    ｔは各場合で独立に、２〜６の整数であり；
    Ｗは各場合で独立に、結合またはＯ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２もしくはＮＲｆであり、ここでＲｆは各場合で独立にＨまたは脂肪族基であり；または
    Ｒａは、置換されていても良いシクロアルキルまたはそれが結合している環と縮合した複素環であり；
    Ｂは、結合またはａ）水素；ｂ）置換されていても良いトリチル；ｃ）置換されていても良いシクロアルキル；ｄ）置換されていても良い脂肪族基で置換されたアザ複素環；ｅ）−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル−ＯＲ、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル−Ｎ（Ｒ）２、−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル−Ｎ（Ｒ）２、−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル−シクロアルキル、テトラヒドロチエニルおよびテトラヒドロチオピラニルからなる置換されていても良い基から選択される１以上の置換基で置換されたアザシクロアルキル；ｆ）下記式：
    Figure 2007520559
     の基
    ［ここでＥ１は、アミド、アミノ、イミダゾリル、モルホリニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニルまたはテトラヒドロチアゾリルからなる置換されていても良い基から選択され、およびＥ１は、−（Ｃ０〜Ｃ６）−アルキル−ＯＲ、−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−複素環−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル−複素環アルキル、−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル−Ｎ（Ｒ）２、シクロヘキサノン、アルコキシアルキルおよびピラニルから選択される１以上の置換基で置換されていても良い］、ｇ）置換されていても良い（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、ｈ）置換されていても良いシクロアルキル、ｉ）置換されていても良いアルコキシアルコキシ、ｊ）置換されていても良いアルキルアミノ、ｋ）置換されていても良いジアルキルアミノ、ｌ）アルキルエステル、ｍ）アルケニル、ｎ）置換されていても良いアルコキシ、ｏ）置換されていても良い複素環、ｐ）置換されていても良いフェニル、ｑ）置換されていても良い１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン、ｒ）置換されていても良い１−オキサ−２−アザ−スピロ［４．５］デカ−２−エン、ｓ）置換されていても良い［１，３］ジオキソラン、ｔ）−Ｒ２００−Ｏ−（Ｒ２００）２−Ｓｉ（Ｒ２００）３、ｕ）結合（ただし、Ｂ、ＺおよびＥはそれぞれ結合以外である。）、ｖ）アルコキシアルキルまたはｗ）フェニルアルキルであり；
    Ｚは、結合、カルボニル、Ｒ２００−Ｏ−、アミノ、−Ｏ−、−Ｓ−またはＳＯ２であり；
    Ｅは、結合もしくはＨであるか、またはアルコキシ、アルコキシ−脂肪族、アルコキシアミノ、アルコキシアルコキシ、アルコキシカルボニル−脂肪族、脂肪族基、脂肪族−アミノ脂肪族、脂肪族カルボニル、アルキルスルホニル、アミノ、アミノ−脂肪族、アミノ−脂肪族−カルボニル、アミノカルボニル、アミノカルボニル−脂肪族、アミノスルホニル−脂肪族、ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）２（ＯＨ）、−Ｃ（ＣＨ３）２Ｎ（ＣＨ３）（Ｈ）、シクロアルキル、ジ−脂肪族−アミノ、ジ−脂肪族−アミノ−脂肪族、ジ−脂肪族−アミノ−脂肪族−アミノ、ジ−脂肪族−アミノカルボニル、ジ−脂肪族−アミノカルボニル−脂肪族、複素環、複素環−脂肪族、モルホリノカルボニル−脂肪族、フェニル、ピペリジニルアルコキシ、テトラヒドロピラニル−脂肪族、チオピラニル、テトラヒドロチオピラン−１，１−ジオキシド、トリアゾリル−脂肪族および尿素からなる群から選択される置換されていても良い基であり；または
    Ｅは、
    −ＣＨ（Ｒ２００）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｃ１〜Ｃ６）−Ｎ（Ｒ２００）２、
    −Ｎ（Ｒ２００）−（Ｃ１〜Ｃ６）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ２００）２、
    −Ｎ（Ｒ２００）−（Ｃ１〜Ｃ６）−Ｃ（Ｏ）−ＯＨ、
    −Ｎ（Ｒ２００）−（Ｃ１〜Ｃ６）−Ｃ（Ｏ）−モルホリニル、
    −（Ｃ１〜Ｃ６）−Ｓ−ＣＨ３、
    −Ｃ（Ｒ２００）（ＣＨ２ＯＨ）−（Ｃ１〜Ｃ６）−ＯＨ、
    −Ｃ（Ｒ２００）２−Ｎ（Ｒ２００）２、
    −Ｃ（Ｏ）−ＯＨ、
    −Ｃ（Ｒ２００）２（ＯＨ）、
    −Ｃ（Ｒ２００）２−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）−Ｃ（Ｒ２００）２（ＯＨ）、
    −Ｃ（Ｒ２００）２Ｃ（Ｒ２００）２（ＯＨ）
    であり、ここでＲ２００は独立に水素またはアルキルであり；
    Ｒ２は、Ｈ、−ＮＨ２、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−ＳＯ２（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、置換されていても良いアルキル、−ＯＲ７、−Ｎ（Ｈ）ＳＯ２Ｒ７、−Ｎ（Ｒ７）ＳＯ２Ｒ７、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）Ｒ７、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）ＮＲ７、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、−Ｎ（Ｒ７）２、−Ｎ（Ｒ７）Ｃ（Ｏ）Ｒ７、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ７または−ＮＨＲ７であり；
    Ｒ７は、それぞれ独立に（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、複素環、ヒドロキシル、−ＮＲ５Ｒ６、置換されていても良いフェニル、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４および複素環からなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良い（Ｃ１〜Ｃ６）−脂肪族であり；
    ここで前記のアルコキシ、脂肪族および複素環のいずれも置換されていても良く、
    Ｒ５およびＲ６は独立に、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ４、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ４または−ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｒ４であり、
    Ｒ４は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルおよびＨから選択され；
    Ｙは、Ｈ、ＯＲ３またはＮ（Ｒ３）２であり、ここでＲ３は独立に、Ｈまたは脂肪族、−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）−脂肪族、−Ｃ（Ｏ）−シクロアルキルおよび−Ｃ（Ｏ）−複素環からなる置換されていても良い基から選択され；
    ここにＲは各場合で独立に、Ｈであるか、脂肪族、複素環および複素環−脂肪族からなる置換されていても良い基から選択され；
    ｎは１〜６の整数であり；および
    ｐは１または２であり；
    ただし、
    Ａ−Ｌ−Ｒ１が
    Figure 2007520559
     または
    Figure 2007520559
     である場合、
    Ｂ−Ｚ−Ｅは、２−メトキシエチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ−１−オキソエチルもしくは２−（Ｎ−メチルアミノ）−１−オキソプロピルで置換されたピロリジニル以外であり；
    ＸがＮであり；ＹがＮＨ２であり；Ｒ２がＨであり；ＬがＮＨであり；Ａがフルオロまたはメトキシで置換されていても良いフェニルであり；Ｂがシクロヘキシルであり；Ｚが結合であり；およびＥがメチルで置換されたピペラジニルである場合、Ｒ１は
    Ｃ２Ｈ４ＯＨまたはクロロで置換されていても良いフェニル、
    クロロで置換されていても良いベンゾフラニル、
    メチルで置換されていても良いイミダゾリル、
    １個もしくは２個のメチルで置換されていても良いベンゾオキサゾリル、
    １個もしくは２個のクロロで置換されていても良いベンゾオキサゾリル、
    メトキシで置換されていても良いベンゾオキサゾリル、
    エチルで置換されていても良いベンゾオキサゾリル、
    カルボニトリルで置換されていても良いベンゾオキサゾリル、
    イソプロピルで置換されていても良いベンゾオキサゾリル、
    １個もしくは２個のメチルで置換されていても良いベンゾチアゾリル、
    プロピルで置換されていても良いベンゾチアゾリル、
    イソプロピルで置換されていても良いベンゾチアゾリル、
    エチルおよびフェニルで置換されていても良いベンゾチアゾリル、
    エチルで置換されたチアゾリル、
    フェニルで置換されていても良いチアゾリル、
    フェニルメチルで置換されていても良いチアゾリル、
    ニトロフェニルで置換されていても良いチアゾリル、
    ２個のメチルで置換されていても良いチアゾリル、
    フェニルおよびメチルで置換されたチアゾリル、
    フェニルおよびプロピルで置換されたチアゾリル、
    フェニルおよびイソプロピルで置換されたチアゾリル、
    エチルおよびメチルフェニルで置換されたチアゾリル、
    ＣＦ３で置換されていても良いベンゾイソチアゾリル、
    １個もしくは２個のオキソで置換されていても良いベンゾイソチアゾリル、
    ＣＦ３で置換されたベンゾイソオキサゾリル、
    インダゾリルおよびピリミジニル以外であり；または
    ＸがＮであり；ＹがＮＨ２であり；Ｒ２がＨであり；ＬがＮＨであり；Ａがフルオロで置換されていても良いフェニルであり；Ｒ１が１個もしくは２個のメチルで置換されたベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリルもしくはエチルであり；Ｚが結合であり；およびＥがＣＯＯＨ、メチルで置換されたピペラジニル、オキソで置換されたピペラジニルまたはオキソで置換されたエチルである場合、
    Ｂは、エチル、シクロヘキシル、ピペリジニルで置換されたジメチルアミノおよびＣＮで置換されたフェニル以外であり；または
    ＸがＮであり；ＹがＮＨ２であり；Ｒ２がＨであり；ＬがＮＨであり；Ａがフェニルであり；Ｂが結合であり；Ｚが結合であり；およびＲ１がベンゾフラニル、ベンゾイソオキサゾリル、ピペリジニル、ピロリル、フェニルで置換されたイソオキサゾリル、トリフルオロメチルで置換されたイソオキサゾリル、１個もしくは２個のメチルで置換されていても良いベンゾオキサゾリル、エチルで置換されていても良いベンゾオキサゾリル、クロロで置換されていても良いベンゾオキサゾリルもしくはイソプロピルで置換されていても良いベンゾオキサゾリルである場合、
    Ｅは、
    置換アルキルで置換されていても良いピペリジニル、
    ピペラジニル、
    メトキシエチルで置換されていても良いピロリジニル、
    ジヒドロキシプロピルで置換されていても良いピペリジニル、
    ヒドロキシエチルで置換されていても良いピペリジニル、
    メトキシエチルで置換されていても良いピペリジニル、
    メチルスルファニルエチルで置換されていても良いピペリジニル、
    置換されていても良いエチルで置換されていても良いピペリジニル、
    置換されていても良いプロピルで置換されていても良いピペリジニル、
    メチルで置換されていても良いイミダゾリル、
    アミノで置換されていても良いイミダゾリル、
    アミノアルキルカルボニル、
    シクロヘキサンカルボン酸エステルおよび
    ＣＮで置換されたピリミジニル以外であり；または
    ＸがＮであり；ＹがＮＨ２であり；Ｒ２がＨであり；Ａがフェニルであり；Ｒ１がフェニルであり；Ｂがシクロヘキシルであり；Ｚが結合であり；およびＥがメチルで置換されたピペラジニルである場合、Ｌは、＝Ｎ−ＯＣＨ３、＝Ｎ−ＯＨ、ＮＨ２またはＣＮによって置換されたメチル以外であり；または
    ＸがＮであり；ＹがＮＨ２であり；Ｒ２がＨであり；ＬがＮＨであり；Ａがフェニルであり；Ｒ１が２個のメチルで置換されたベンゾオキサゾリルであり；Ｂがメチルアミノメチルおよびエチルで置換されていても良いピロリジニルもしくはジメチルアミノおよびエチルによって置換されていても良いピロリジニルであり；およびＺがカルボニルである場合、Ｅはジアルキルアミノ、結合およびメチルアミノで置換されたアルキル以外であり；または
    ＸがＮであり；ＬがＮＨであり；Ａがフェニルであり；Ｒ１が２個のメチルで置換されていても良いベンゾオキサゾリルであり；Ｂがシクロヘキシルであり；およびＺが結合である場合、Ｅはジメチルアミノおよびモルホリノ以外であり；または
    ＸがＮであり；ＬがＮＨであり；Ａがフェニルであり；Ｒ１が２個のメチルで置換されていても良いベンゾオキサゾリルであり；Ｂがシクロヘキシルであり；およびＺがＮＨである場合、Ｅはメトキシエチルおよびメチル以外であり；または
    ＸがＮであり；ＹがＮＨ２であり；Ｒ２がＨであり；ＬがＮＨであり；Ａがフェニルであり；Ｒ１が２個のメチルで置換されたベンゾオキサゾリルであり；Ｂがピペリジニルであり；およびＺが結合である場合、Ｅは結合以外であり；または
    ＸがＮであり；ＬがＯ−アルキルであり；Ａがフェニルであり；Ｂがシクロヘキシルまたは結合であり；Ｚが結合であり；およびＥがシクロペンチルまたはメチルで置換されたピペラジニルである場合、Ｒ１はベンゼンスルホンアミドで置換されていても良いフェニルおよびベンジル尿素で置換されていても良いフェニル以外であり；または
    ＸがＮであり、ＹがＮＨ２であり、Ｒ２がＨであり、ＬがＮＨであり、Ａがフルオロで置換されていても良いフェニルであり、Ｒ１がエチルで置換されたベンゾオキサゾリル、クロロで置換されたベンゾオキサゾリルまたは１個もしくは２個のメチルで置換されたベンゾオキサゾリルであり；Ｂがピペリジニル、アゼチジニル、ピロリルもしくはシクロヘキシルであり；およびＺが結合である場合、Ｅは、
    メトキシエチル、
    メトキシプロピル、
    メチル、
    ヒドロキシルで置換されていても良いエチル、
    オキソで置換されたピペラジニルおよび
    アミノで置換されていても良いイミダゾリル以外であり；
    または
    ＸがＮであり；ＹがＮＨ２であり；Ｒ２がＨであり；ＬがＮＨであり；Ａがフェニルであり；Ｂがピペリジニルであり；Ｚがカルボニルであり；およびＲ１が２個のメチルで置換されていても良いベンゾオキサゾリルまたはクロロで置換されていても良いベンゾオキサゾリルである場合、
    Ｅは、
    モルホリノアルキル、
    ジメチルアミノメチル、
    メチルで置換されていても良いピペリジニル、
    メチルアミンで置換されたイソプロピル、
    ピロリジニル、
    メチルおよびメチルアミノで置換されていても良いエチルおよび
    置換アルキルで置換されていても良いエチル以外であり；
    または
    ＸがＮであり；ＹがＮＨ２であり；Ｒ２がＨであり；Ｌがカルボニルであり；Ａがフェニルであり；Ｚが結合であり；Ｅがピペリジニルまたはピリジニルであり；およびＢが結合である場合、
    Ｒ１は、
    オキサゾリル、
    メチルで置換されていても良いイソオキサゾリル、
    フェニルで置換されていても良いイソオキサゾリル、
    ベンジルで置換されていても良いピラゾリル、
    ベンゾイルで置換されていても良いピラゾリル、
    メチルで置換されていても良いピラゾリルおよび
    エタノンで置換されていても良いピラゾリル以外であり；または
    ＸがＮであり；ＹがＮＨ２であり；Ｒ２がＨであり；Ｌがカルボニルであり；Ａがフェニルであり；Ｚが結合であり；Ｒ１がフェニルであり；およびＢがシクロヘキシルである場合、Ｅはメチルで置換されたピペラジニル以外であり；または
    ＸがＮであり；ＬがＯＨで置換されていても良いアルキルであり；Ａがメトキシで置換されていても良いフェニルであり；Ｒ１がベンゾオキサゾリルもしくはベンゾイミダゾリルであり；Ｂがシクロヘキシルであり；およびＺが結合である場合、Ｅはメチルで置換されたピペラジニル以外である。］
  2. Ｙが−Ｎ（Ｒ３）２である請求項１に記載の化合物、該化合物の製薬上許容される塩、該化合物の代謝物、該化合物の異性体または該化合物のプロドラッグ。
  3. Ｘが、Ｎであり；
    Ａが、置換されていても良いフェニルであり；
    Ｒ１が、置換されていても良いベンゾオキサゾリルまたは置換されていても良いベンゾチアゾリルであり；
    Ｂが、結合であるか、アルケニル、アルキル、アルコキシアルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルケニル、複素環、フェニル、１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−２−エン、２，２−ジプロピル［１，３］ジオキソラン、１−オキサ−２−アザ−スピロ［４．５］デカ−２−エン、１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカンおよび２，２−ジプロピル［１，３］ジオキソランからなる置換されていても良い基から選択され；
    Ｅが、Ｈであるか、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシアルコキシ、アルコキシアミノ、アルキル、アルキルアミノアルキル、アミノアルキル、アミノアルキルカルボニル、アミノカルボニル、アゼチジニル、ベンゾイミダゾリル、−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＯＨ）−ＣＨ２−ＯＨ、−Ｃ（ＣＨ３）２、−ＮＨ（ＣＨ３）、−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｏ−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）２（ＯＨ）、−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）２（ＯＨ）、−（ＣＨ２）２−Ｓ−ＣＨ３、ＣＯＯＨ、シクロアルキル、ジアゼパニル、ジメチルアミノ、ジメチルアミノアルキル、ジメチルアミノアルキルアミノ、ジメチルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニルアルキル、フラニル、イミダゾリニル、イミダゾリル、イミダゾリルアルキル、イソオキサゾリル、モルホリニル、モルホリニルアルキル、−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−モルホリニル、−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ、オキソジアゾリル、オキサゾリル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、ピロリル、テトラヒドロピラニル、テトラゾリル、チアジアゾリル、チオピラニル、チエニル、トリアゾリルおよびトリアゾリルアルキルからなる置換されていても良い基から選択され；
    Ｒ２が、Ｈ、ＳＣＨ３、ＮＨ２またはＳ（Ｏ）２−ＣＨ３であり；および
    Ｒ３が各場合で独立に、Ｈまたは−（ＣＨ２）２−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２である請求項２に記載の化合物、該化合物の製薬上許容される塩、該化合物の代謝物、該化合物の異性体または該化合物のプロドラッグ。
  4. Ａが、アルキル、アルコキシ、クロロおよびフルオロからなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良く；
    Ｒ１が、アルキル、アルケニル、アルコキシ、アルコキシアルコキシ、アルコキシカルボニルピペリジニルアルコキシ、アルキルカルボニル、アミノカルボニル、ブロモ、ＣＦ３、クロロ、Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ（ＣＨ３）３、ジアルキルアミノアルコキシ、ジアルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニルアルコキシ、フルオロ、−ＯＨ、モルホリノアルコキシ、ＮＯ２、ＯＣＦ３、フェニル−Ｓ−アルコキシ、置換されていても良いピペリジニルアルコキシ、置換されていても良いピリジニルアルコキシ、置換されていても良いピロリジニルアルコキシおよび置換されていても良いチエニルアルコキシからなる群から選択される１以上の置換基で置換されていても良く；
    Ｂが、結合であるか、アルコキシアルキル、アルキル、アゼチジニル、シクロアルケニル、シクロアルキル、イソオキサゾリル、フェニル、ピペリジニル、ピラニル、ピリジニル、ピロリジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、チオピラニル、１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−２−エン、［１，３］ジオキソラン，１−オキサ−２−アザ−スピロ［４．５］デカ−２−エンおよび１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカンからなる群から選択される置換されていても良い基であり；
    Ｅが、Ｈ、ジメチルアミノアルキル、ジメチルアミノカルボニルまたはアルキル、アルコキシアルキル、アゼチジニル、ベンゾイミダゾリル、ジアゼパニル、フラニル、イミダゾリジニル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、モルホリニル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、フェニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、ピロリル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラン１，１−ジオキシド、テトラゾリル、チアジアゾリル、チエニル、チオピラニルおよびトリアゾリルからなる群から選択される置換されていても良い基であり；
    ここで前記基は、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルホニル、ジアルキルアミノスルホニル、フルオロ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトリル、オキソ、Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３およびＳ（Ｏ）２ＣＦ３からなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良い、請求項３に記載の化合物、該化合物の製薬上許容される塩、該化合物の代謝物、該化合物の異性体または該化合物のプロドラッグ。
  5. ＬがＮＨ、Ｃ（ＯＨ）Ｈまたはカルボニルであり；
    Ｂが、結合であるか、アルキル、アゼチジニル、シクロアルキル、イソオキサゾリル、フェニル、ピペリジニル、ピラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−２−エン、［１，３］ジオキソラン、１−オキサ−２−アザ−スピロ［４．５］デカ−２−エンおよび１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカンからなる置換されていても良い基から選択され；
    ここで前記基は、アルコキシ、アルキル、ＣＦ３、Ｃ≡Ｎ、シクロアルキル、フルオロおよびヒドロキシルからなる群から選択される１以上の置換基によって置換されている請求項４に記載の化合物、該化合物の製薬上許容される塩、該化合物の代謝物、該化合物の異性体または該化合物のプロドラッグ。
  6. Ｒ２がＨである請求項５に記載の化合物、該化合物の製薬上許容される塩、該化合物の代謝物、該化合物の異性体または該化合物のプロドラッグ。
  7. Ｒ３が各場合でＨである請求項６に記載の化合物、該化合物の製薬上許容される塩、該化合物の代謝物、該化合物の異性体または該化合物のプロドラッグ。
  8. Ｒ１がベンゾオキサゾリルもしくはベンゾチアゾリルであり、それぞれがアルケニル、アルコキシ、アルキル、ブロモ、ＣＦ３、クロロ、ジメチルアミノカルボニル、フルオロ、ヒドロキシル、ＯＣＦ３およびニトリルからなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良い、請求項７に記載の化合物、該化合物の製薬上許容される塩、該化合物の代謝物、該化合物の異性体または該化合物のプロドラッグ。
  9. Ａが、フルオロまたはアルコキシによって置換されていても良いフェニルであり；
    ＬがＮＨであり；
    Ｒ１が、ＣＦ３、ＣＨ３およびクロロからなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良いベンゾオキサゾリルであり；
    Ｚが、結合、カルボニル、Ｒ２００−Ｏ−、−Ｏ−または−Ｓ−であり；および
    Ｅが、Ｈであるか、アルコキシアルキルアルコキシアミノ、アルキル、ＣＯＯＨ、シクロアルキル、ジアゼパニル、ジメチルアミノカルボニル、フラニル、イミダゾリルアルキル、イミダゾリジニル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、モルホリニル、−Ｎ（Ｒ２００）−Ｒ２００−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ２００）２、−Ｎ（Ｒ２００）−Ｒ２００−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ２００）−Ｒ２００−Ｃ（＝Ｏ）−モルホリニル、ＯＨ、オキサゾリル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラゾリル、チアジアゾリル、チエニルおよびトリアゾリルからなる置換されていても良い基から選択され；
    ここでＲ２００がアルキルである請求項８に記載の化合物、該化合物の製薬上許容される塩、該化合物の代謝物、該化合物の異性体または該化合物のプロドラッグ。
  10. 化合物が、
    ３−［３−（フルオロ−４−（５−トリフルオロメチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−１−［４−（２−メトキシ−エトキシ）−シクロヘキシル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン、
    ３−［４−（７−クロロ−５−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ−フェニル］−１−［４−（２−メトキシ−エトキシ）−シクロヘキシル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン、または
    １−（４−（４−アミノ−３−［４−（５−クロロ−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル｝−シクロヘキシルオキシ）−２−メチル−プロパン−２−オールである請求項９に記載の化合物。
  11. ＸがＣＨであり；
    Ａが、置換されていても良いフェニルであり；
    Ｒ１が、置換されていても良いベンゾオキサゾリルであり；
    Ｂが、Ｈであるか、アルコキシアルキル、アルキル、シクロアルキルおよび複素環からなる置換されていても良い基から選択され；
    Ｅが、Ｈであるか、アルコキシ、アルキル、アルキルスルホニル、アミノカルボニルアルキル、ジアゼパニル、ジメチルアミノ、モルホリニル、フェニル、ピペラジニル、テトラゾリルおよび尿素からなる置換されていても良い基から選択され；
    Ｒ２がＨ、ＮＨ２、ＳＣＨ３またはＳＯ２ＣＨ３であり；および
    Ｒ３が各場合でＨである請求項１に記載の化合物、該化合物の製薬上許容される塩、該化合物の代謝物、該化合物の異性体または該化合物のプロドラッグ。
  12. Ａが、フルオロによって置換されていても良く；
    Ｒ１が、アルコキシ、アルキル、ブロモ、クロロ、ＣＦ３、ジアルキルアミノエトキシ、フルオロ、モルホリニルアルコキシ、モルホリニルアルキルおよびニトリルからなる群から選択される１以上の置換基によって置換された置換されていても良いベンゾオキサゾリルであり；
    Ｂが、Ｈであるか、シクロアルキル、アルキル、ピペリジニルおよびピロリジニルからなる置換されていても良い基から選択され；
    ここで前記置換基が、アルキル、ヒドロキシル、オキソ、ニトリルおよびニトロからなる群から選択され；
    Ｅが、Ｈであるか、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキルスルホニル、アミノカルボニルアルキル、ジアゼパニル、ジメチルアミノ、モルホリニル、ピペラジニル、フェニル、テトラゾリルおよび尿素からなる置換されていても良い基から選択され；
    ここで前記基が、アルコキシ、アルキル、アルキルスルホニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、ニトリル、ニトロ、ＮＨ２およびオキソからなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良く；
    Ｚが、結合、Ｒ２００−Ｏ−、ＮＨまたは−Ｏ−である請求項１１に記載の化合物、該化合物の製薬上許容される塩、該化合物の代謝物、該化合物の異性体または該化合物のプロドラッグ。
  13. ＬがＮＨまたはＮ（アルケニル）である請求項１２に記載の化合物、該化合物の製薬上許容される塩、該化合物の代謝物、該化合物の異性体または該化合物のプロドラッグ。
  14. Ｒ２がＨである請求項１３に記載の化合物、該化合物の製薬上許容される塩、該化合物の代謝物、該化合物の異性体または該化合物のプロドラッグ。
  15. Ｒ１がアルキル、ブロモ、ＣＦ３、クロロ、フルオロおよびニトリルからなる群から選択される１以上の置換基によって置換された置換されていても良いベンゾオキサゾリルである請求項１４に記載の化合物、該化合物の製薬上許容される塩、該化合物の代謝物、該化合物の異性体または該化合物のプロドラッグ。
  16. Ａが、フェニルまたはフルオロによって置換されたフェニルであり；
    Ｌが、ＮＨであり；
    Ｒ１が、アルキル、ブロモ、ＣＦ３およびクロロからなる群から選択される１以上の置換基によって置換されたベンゾオキサゾリルであり；
    Ｚが、結合または−Ｏ−であり；および
    Ｅが、置換されていても良いアルキル、アルコキシアルキル、ジアゼパニル、ピペラジニルまたはテトラゾリルである請求項１５に記載の化合物、該化合物の製薬上許容される塩、該化合物の代謝物、該化合物の異性体または該化合物のプロドラッグ。
  17. Ｘが、ＣＨであり；
    Ａが、置換されていても良いフェニルであり；
    Ｒ１が、置換されていても良いベンゾオキサゾリルであり；
    Ｂが、Ｈもしくは結合であるか、アルキルおよびシクロアルキルからなる置換されていても良い基から選択され；
    Ｚが、結合、−Ｒ２００−Ｏ−、アミノまたは−Ｏ−であり；
    Ｅが、Ｈ、結合またはアルコキシ、アルキル、アルキルスルホニル、アミノカルボニルアルキル、ジアルキルアミノ、複素環、フェニルおよび尿素からなる群から選択される置換されていても良い基であり；
    Ｒ２が、Ｈ、ＮＨ２、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルまたは−ＳＯ２（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルであり；および
    Ｒ３が、各場合でＨである請求項２に記載の化合物、該化合物の製薬上許容される塩、該化合物の代謝物、該化合物の異性体または該化合物のプロドラッグ。
  18. Ａが、１以上のフルオロによって置換されていても良く；
    Ｒ１が、アルキル、アルコキシ、アミノアルコキシ、ブロモ、ＣＦ３、クロロ、フルオロ、モルホリノアルコキシ、モルホリノアルキルおよびニトリルからなる群から選択される１以上の置換基によって置換されていても良く；
    Ｅが、Ｈまたはアルコキシ、アルキル、アルキルスルホニル、アミノカルボニルアルキル、ジアザペニル、ジメチルアミノ、モルホリニル、フェニル、ピペラジニル、ピリジニル、ピロリジニル、テトラゾリルおよび尿素からなる群から選択される置換されていても良い基であり；
    ここで前記置換されていても良い基は、１以上のアルコキシ、アルキル、アミノ、ブロモ、シクロアルキル、ジメチルアミノ、ヒドロキシル、オキソ、ニトリル、ＮＯ２またはスルホニルによって置換されていても良く；および
    Ｒ２がＨである請求項１７に記載の化合物、該化合物の製薬上許容される塩、該化合物の代謝物、該化合物の異性体または該化合物のプロドラッグ。
  19. Ｌが、ＮＨまたはＮ−アルケニルであり；
    Ｒ１が、１以上のアルキル、ブロモ、ＣＦ３、クロロ、フルオロまたはニトリルによって置換されており；
    Ａが、フルオロによって置換されていても良いフェニルであり；
    Ｂが、結合であるか、アルキル、シクロアルケニル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルからなる置換されていても良い基から選択され；
    Ｚが、結合、−Ｏ−または−Ｒ２００−Ｏ−であり；および
    Ｅが、Ｈであるか、アルコキシ、アルケニル、アルキル、シクロアルキル、ジアザペニル、ピペラジニルおよびテトラゾリルからなる置換されていても良い基から選択される請求項１８に記載の化合物、該化合物の製薬上許容される塩、該化合物の代謝物、該化合物の異性体または該化合物のプロドラッグ。
  20. Ｒ１が、アルキル、ブロモまたはクロロによって置換されており；ＬがＮＨであり；Ｂがシクロヘキシルであり；Ｚが結合または−Ｒ２００−Ｏ−であり；
    ここでＲ２００がアルキルであり；
    Ｅが、アルコキシまたは置換されていても良いピペラジニルであり；およびＹがＮＨである請求項１９に記載の化合物、該化合物の製薬上許容される塩、該化合物の代謝物、該化合物の異性体または該化合物のプロドラッグ。
  21. 化合物が、
    ４−（４−（４−アミノ−５−［４−（５−クロロ−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−３−フルオロ−フェニル］−ピロリル［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル｝−シクロヘキシル−１−メチル−ピペラジン−２−オン、
    ５−［４−（５−クロロ−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−７−［４−（２−メトキシ−エトキシ）−シクロヘキシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミン；または
    ５−［４−（５−ブロモ−７−メチル−ベンゾオキサゾール−２−イルアミノ）−フェニル］−７−［４−（２−メトキシエトキシ）−シクロヘキシル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルアミンである請求項２０に記載の化合物。
  22. 疾患または状態が関節リウマチ、甲状腺炎、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、サルコイドーシス、炎症性腸疾患、クローン病、重症筋無力症、全身性紅斑性狼瘡、乾癬、移植臓器拒絶、良性および腫瘍性増殖性疾患、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、直腸癌、造血系悪性腫瘍、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、加齢関連黄斑変性による脈絡膜血管新生、小児性血管腫、浮腫、腹水症、滲出、浸出、脳浮腫、急性肺損傷、成人呼吸窮迫症候群、血管増殖性障害、線維症障害、メサンギウム細胞増殖障害、代謝疾患、アテローム性動脈硬化、再狭窄、乾癬、血管腫、心筋血管新生、冠動脈側枝、脳側枝、虚血性四肢血管新生、虚血／再潅流損傷、創傷治癒、消化性潰瘍ヘリコバクター関連疾患、ウィルス誘発血管由来障害、骨折、クロウ-深瀬症候群（ＰＯＥＭＳ）、子癇前症、機能性子宮出血、猫引っかき熱、ルベオーシス、血管新生緑内障、網膜症、悪性腹水症、フォンヒッペル−リンダウ病、造血系癌、過形成性障害、火傷、慢性肺疾患、卒中、ポリープ、アナフィラキシー、慢性炎症、アレルギー性炎症、遅延型過敏症、卵巣過剰刺激症候群、アンギナ、強直性脊椎炎、喘息、鬱血性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、Ｃ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）、特発性肺線維症、心筋梗塞、乾癬性関節炎、再狭窄および坐骨神経痛からなる群から選択される、患者に対して請求項１に記載の化合物を投与する段階を有する、処置を必要とする患者での疾患または状態の治療方法。
  23. 請求項１に記載の化合物および製薬上許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物。
  24. 置換されていても良い２−アミノベンゾオキサゾールの製造方法であって、
    反応が実質的に完了するまで有毒金属を含まない酸化剤および塩基と置換されていても良いＮ−（２−ヒドロキシフェニル）チオ尿素を反応させる段階を有し；
    ここで前記酸化剤が、過酸化水素、酸素、過酸、塩素、過ヨウ素酸ナトリウム、過ヨウ素酸カリウム、ｔｅｒｔ−ブチルペルオキシド、次亜塩素酸ｔｅｒｔ−ブチル、過ホウ酸ナトリウム、過炭酸ナトリウム、尿素・過酸化水素付加物、次亜塩素酸ナトリウム、次亜塩素酸カリウム、次亜臭素酸ナトリウム、次亜臭素酸カリウム、臭素酸ナトリウム、臭素酸カリウム、過マンガン酸カリウムおよびマンガン酸バリウムからなる群から選択され；前記塩基が、金属および水酸化テトラアルキルアンモニウム、金属および炭酸テトラアルキルアンモニウム、金属および重炭酸テトラアルキルアンモニウム、金属およびテトラアルキルアンモニウムアルコキシド、金属およびリン酸テトラアルキルアンモニウム、金属および第二リン酸テトラアルキルアンモニウムからなる群から選択される方法。
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