JP2002540096A - キナーゼ阻害剤としてのインドリノン化合物 - Google Patents

キナーゼ阻害剤としてのインドリノン化合物

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ウェイ，チャン・チェン
ジー．・ディビス ハリス
シャオユアン，リ
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Abstract

(57)【要約】 本発明は，ある種のインドリノン化合物，その合成方法，および本発明のインドリノン化合物からなるコンビナトリアルライブラリに関する。本発明はまた，本発明のインドリノン化合物を用いて蛋白質キナーゼの機能を調節する方法，および蛋白質キナーゼの機能および関連するシグナル伝達経路を調節することにより疾病を治療する方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】発明の背景 以下の発明の背景の記載は，本発明の理解を助けるために提供されるものであ
り，本発明に対する先行技術を記述するかまたは構成すると認めるものではない
。
【０００２】 蛋白質キナーゼ（ＰＫ）は，蛋白質のチロシン，セリンおよびトレオニン残基
上のヒドロキシ基のリン酸化を触媒する酵素である。この外観上は単純な活性の
結果は圧倒的である。細胞成長，分化および増殖，すなわち，細胞生命のほぼす
べての観点が種々の仕方でＰＫ活性に依存する。さらに，異常なＰＫ活性は，比
較的生命を脅かさない疾患（例えば乾癬）から，非常に悪性の疾患（例えば神経
膠細胞腫（脳癌））までの範囲の疾患の宿主と関連づけられてきた。
【０００３】 ＰＫは，慣用的に２種類に分類することができる：蛋白質チロシンキナーゼ（
ＰＴＫ）およびセリン−トレオニンキナーゼ（ＳＴＫ）。
【０００４】 ＰＫ活性の主な観点は，成長因子レセプターに対するその関与である。成長因
子レセプターは細胞表面蛋白質である。成長因子リガンドが結合すると，成長因
子レセプターは活性型に変換され，これが細胞膜の内表面上の蛋白質と相互作用
する。この相互作用は，レセプター上のチロシン残基および他のアミノ酸のリン
酸化を引き起こし，細胞内部で種々の細胞質シグナリング分子との複合体を形成
する。次にこれらの複合体は多くの細胞性応答，例えば，細胞***（増殖），細
胞分化，細胞成長，細胞外微細環境への代謝的効果の発現等を行う。さらに詳し
い議論については，Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ ａｎｄ Ｕｌｌｒｉｃｈ，Ｎｅ
ｕｒｏｎ，１９９２，９：３０３−３９１（本明細書において完全に記載されて
いるように，図面を含め本明細書の一部としてここに引用する）を参照されたい
。
【０００５】 レセプターチロシンキナーゼ（"ＲＴＫ"）は，ＰＫ活性を有する成長因子レセ
プターである。これらは，多様な生物学的活性を有する膜貫通レセプターの大き
なファミリーを含む。現在のところ，ＲＴＫの少なくとも１９個の異なるサブフ
ァミリーが同定されている。これらのサブファミリーの例は，"ＨＥＲ"ＲＴＫと
称されるサブファミリーであり，これにはＥＧＦＲ（上皮成長因子レセプター）
，ＨＥＲ２，ＨＥＲ３およびＨＥＲ４が含まれる。これらのＲＴＫは，細胞外グ
リコシル化リガンド結合ドメイン，膜貫通ドメイン，および蛋白質上のチロシン
残基をリン酸化しうる細胞内細胞質触媒ドメインから構成される。
【０００６】 別のＲＴＫサブファミリーは，インスリンレセプター（ＩＲ），インスリン様
成長因子Ｉレセプター（ＩＧＦ−１Ｒ）およびインスリンレセプター関連レセプ
ター（ＩＲＲ）を含む。ＩＲおよびＩＧＦ−１Ｒはインスリン，ＩＧＦ−Ｉおよ
びＩＧＦ−ＩＩと相互作用して，２つの完全に細胞外グリコシル化されたαサブ
ユニットとチロシンキナーゼドメインを含有する２つのβサブユニットのヘテロ
４量体を形成する。
【０００７】 第３のＲＴＫサブファミリーは，血小板由来成長因子レセプター（"ＰＤＧＦ
Ｒ"）群と称され，これにはＰＤＧＦＲα，ＰＤＧＦＲβ，ＣＳＦＩＲ，ｃ−ｋ
ｉｔおよびｃ−ｆｍｓが含まれる。これらのレセプターは，グリコシル化された
細胞外ドメインからなる可変数のイムノグロビン様ループ，膜貫通ドメイン，お
よび関連のないアミノ酸配列により分断されているチロシンキナーゼドメインを
有する細胞内ドメインから構成される。
【０００８】 別の群は，そのＰＤＧＦＲサブファミリーとの類似性のため，しばしばＰＤＧ
ＦＲサブファミリーに包摂される，胎児肝キナーゼ（"ｆｌｋ"）レセプターサブ
ファミリーである。この群は，キナーゼ挿入ドメイン−レセプター胎児肝キナー
ゼ−１（ＫＤＲ／ＦＬＫ−１），ｆｌｋ−１Ｒ，ｆｌｋ−４およびｆｍｓ様チロ
シンキナーゼ１（ｆｌｔ−１）からなると考えられている。
【０００９】 チロシンキナーゼ成長因子レセプターファミリーの別の１つのメンバーは，繊
維芽細胞成長因子（"ＦＧＦ"）レセプター群である。この群は，４つのレセプタ
ー，ＦＧＦＲ１−４，および７つのリガンド，ＦＧＦ１−７から構成される。ま
だあまり明確にされていないが，レセプターは，可変数のイムノグロビン様ルー
プを含有するグリコシル化された細胞外ドメイン，貫膜ドメインおよびチロシン
キナーゼ配列が関係のないアミノ酸配列の領域により分断されている細胞内ドメ
インから構成されるようである。
【００１０】 既知のＲＴＫサブファミリーのより完全なリストは，Ｐｌｏｗｍａｎ ｅｔ
ａｌ．，ＤＮ＆Ｐ，１９９４，７（６）：３３４−３３９（本明細書において完
全に記載されているように，図面を含め本明細書の一部としてここに引用する）
に記載されている。
【００１１】 ＲＴＫに加え，"非レセプターチロシンキナーゼ"または"細胞性チロシンキナ
ーゼ（"ＣＴＫ"）"と称される，完全に細胞内のＰＴＫのファミリーが存在する
。ＣＴＫは細胞外および膜貫通ドメインを含有しない。現在のところ，１１個の
サブファミリー（Ｓｒｃ，Ｆｒｋ，Ｂｔｋ，Ｃｓｋ，Ａｂｌ，Ｚａｐ７０，Ｆｅ
ｓ，Ｆｐｓ，Ｆａｋ，ＪａｋおよびＡｃｋ）の２４個を越えるＣＴＫが同定され
ている。Ｓｒｃサブファミリーは，これまでのところ，ＣＴＫのもっとも大きい
群であるようであり，Ｓｒｃ，Ｙｅｓ，Ｆｙｎ，Ｌｙｎ，Ｌｃｋ，Ｂｌｋ，Ｈｃ
ｋ，ＦｇｒおよびＹｒｋを含む。ＣＴＫのより詳細な議論については，Ｂｏｌｅ
ｎ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９９３，８：２０２３−２０３１（本明細書において
完全に記載されているように，図面を含め本明細書の一部としてここに引用する
）を参照されたい。
【００１２】 セリン−トレオニンキナーゼもしくはＳＴＫは，ＣＴＫと同様に，主として細
胞内にあるが，ＳＴＫタイプのレセプターキナーゼは少ない。ＳＴＫはもっとも
一般的なサイトゾルキナーゼである。すなわち，細胞質オルガネラおよび細胞骨
格以外の，細胞質のその部分でその機能を行うキナーゼである。サイトゾルは，
細胞の中間代謝および生合成活性のほとんどが生ずる細胞中の領域である。例え
ば，蛋白質がリボソーム上で合成されるのはサイトゾル内である。
【００１３】 ＲＴＫ，ＣＴＫおよびＳＴＫはすべて，病原性状態，特に癌を含む状態の宿主
であることが示唆されてきた。ＰＴＫと関連づけられてきた他の病原性状態には
，限定されないが，乾癬，肝硬変，糖尿病，動脈硬化，新脈管形成，再狭窄，眼
性疾患，慢性関節リウマチおよび他の炎症性疾患，自己免疫疾患等の免疫疾患，
アテローム性動脈硬化等の心血管疾患，および種々の腎臓疾患が含まれる。
【００１４】 癌に関しては，腫瘍の発達を推進する過剰な細胞増殖を説明する主要な仮説の
２つは，ＰＫにより制御されることが知られている機能に関連する。すなわち，
悪性細胞成長は細胞***および／または分化を調節するメカニズムの故障に起因
することが示唆されている。多数のプロトオンコジンの蛋白質産物は，細胞成長
および分化を制御するシグナル伝達経路に関与することが示されている。これら
のプロトオンコジンの蛋白質産物には，上で議論した，細胞外成長因子，膜貫通
成長因子ＰＴＫレセプター（ＲＴＫ），細胞質ＰＴＫ（ＣＴＫ）およびサイトゾ
ルＳＴＫが含まれる。
【００１５】 ＰＫに関連する細胞活性と広範な種類のヒト疾患との間の見かけ上の連結の観
点から，ＰＫ活性を調節する方法を同定しようとする試みに多大な努力が払われ
ていることは驚くべきことではない。これらのいくつかには，実際の細胞プロセ
スに関与する分子を模倣する大きな分子を用いるバイオミメティック方法が含ま
れる（例えば，変異体リガンド（米国特許４，９６６，８４９）；可溶性レセプ
ターおよび抗体（ＷＯ９４／１０２０２，Ｋｅｎｄａｌｌ ａｎｄ Ｔｈｏｍａ
ｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ'ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９４，９０：１０７０５
−０９，Ｋｉｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９３，３６２：８４１−８
４４）；ＲＮＡリガンド（Ｊｅｌｉｎｅｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ，３３：１０４５０−５６）；Ｔａｋａｎｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂ
ｉｏ．Ｃｅｌｌ，１９９３，４：３５８Ａ；Ｋｉｎｓｅｌｌａ，ｅｔａｌ．，Ｅ
ｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．１９９２，１９９：５６６−６２；Ｗｒｉｇｈｔ，ｅ
ｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｈｙｓ．，１５２：４４８−５７）およ
びチロシンキナーゼ阻害剤（ＷＯ９４／０３４２７；ＷＯ９２／２１６６０；Ｗ
Ｏ９１／１５４９５；ＷＯ９４／１４８０８；米国特許５，３３０，９９２；Ｍ
ａｒｉａｎｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒ
ｅｓ．，１９９４，３５：２２６８）。
【００１６】 最近，ＰＫ阻害剤として作用する小分子を同定する試みがなされている。例え
ば，ビス単環，二環およびヘテロ環アリール化合物（ＰＣＴ ＷＯ９２／２０６
４２），ビニレンアザインドール誘導体（ＰＣＴ ＷＯ９４／１４８０８）およ
び１−シクロプロピル−４−ピリジルキノロン類（米国特許５，３３０，９９２
）が，ＰＴＫ阻害剤として記載されている。スチリル化合物（米国特許５，２１
７，９９９），スチリル置換ピリジル化合物（米国特許５，３０２，６０６），
キナゾリン誘導体（欧州特許出願０５６６２６６Ａ１），セレナインドール類お
よびセレニド類（ＰＣＴ ＷＯ９４／０３４２７），三環ポリヒドロキシル化合
物（ＰＣＴ ＷＯ９２／２１６６０）およびベンジルホスホン酸化合物（ＰＣＴ
ＷＯ９１／１５４９５）はすべて，癌の治療において有用なＰＴＫ阻害剤とし
て記載されている。
【００１７】 発明の概要 本発明は，部分的には，インドリノン化合物およびこれらの化合物を用いて蛋
白質キナーゼの機能を調節する方法に関する。本発明の方法は，蛋白質キナーゼ
を発現する細胞を組み込む。さらに，本発明は，本明細書に記載される方法によ
り同定される化合物を用いて，生物において蛋白質キナーゼに関連する異常な状
態を予防および治療する方法を記述する。さらに，本発明は，本発明の方法によ
り同定される化合物を含む医薬組成物に関連する。
【００１８】 本発明は，蛋白質キナーゼを阻害する可能性のあるインドリノン化合物および
関連する生成物および方法を特徴とする。蛋白質キナーゼの阻害剤は，インドリ
ノン化合物に化学置換基を付加することにより得ることができる。本発明の化合
物は，１またはそれ以上の機能的または非機能的蛋白質キナーゼに関連する疾病
の新世代の治療である。神経変性性疾病およびある種の癌が，この疾病の範囲に
含まれる。他の疾病または疾患には，皮膚，眼，神経，心臓血管，および免疫疾
患，ならびに異常な新脈管形成および／または脈管形成に関連する疾患が含まれ
る。化合物は，その標的に特異的であるように改変することができ，このためわ
ずかの副作用しか引き起こさず，したがって，可能性のある癌治療の新世代であ
る。これらの特性は，現在用いられている，多くの副作用を引き起こし，患者を
衰弱させる有害な癌治療に対する著しい改良である。
【００１９】 本発明の化合物は，蛋白質キナーゼの活性を阻害することにより，固形腫瘍を
最小化または除去し，または少なくとも腫瘍成長および／または転移を調節また
は阻害するであろうと考えられる。蛋白質キナーゼは，他の機能の中でも特に，
新脈管形成の間の血管の増殖を制御する。癌腫瘍は成長の間酸化された血液によ
り滋養を与えられなければならないため，新脈管形成の速度の増加は，細胞にお
ける癌腫瘍成長を伴う。したがって，蛋白質キナーゼの阻害およびこれに対応す
る新脈管形成の減少は，腫瘍を栄養飢餓とさせ，おそらくはこれを除去するであ
ろう。
【００２０】 化合物がＰＴＫ（例えば，繊維芽細胞成長因子レセプター１［ＦＧＦＲ１］）
を阻害するメカニズムについての正確な理解は，本発明の実施のためには必要で
はないが，化合物はＰＴＫの触媒領域のアミノ酸と相互作用すると考えられてい
る。ＰＴＫは典型的には２葉構造を有しており，ＰＴＫの間でアミノ酸が保存さ
れている領域内の，２つの葉の間の裂け目にＡＴＰが結合するように見える。Ｐ
ＴＫの阻害剤は，前記のＡＴＰがＰＴＫに結合するのと同じ普遍領域において，
水素結合，ファン−デル−ワールス力，およびイオン相互作用等の非共有結合的
相互作用によって結合すると考えられている。より詳細には，本発明の化合物の
オキシインドール成分が，ＡＴＰのアデニン環によって占められるものと同じ一
般的空間に結合すると考えられている。特定のＰＴＫに対するＰＴＫ阻害剤の特
異性は，オキシインドールコアのまわりの構成物と個々のＰＫに特異的なアミノ
酸ドメインとの間の相互作用により与えられるのであろう。すなわち，異なる置
換基は，特定のＰＫへの優先的結合に寄与するであろう。異なるＡＴＰ結合部位
に対して活性な化合物を選択することが可能であれば，そのような化合物は，そ
のような部位を有する任意の蛋白質，例えば蛋白質チロシンキナーゼのみならず
，セリン／トレオニンキナーゼのターゲティングに有用であろう。すなわち，こ
のような化合物は，そのような蛋白質のインビトロアッセイに，およびそのよう
な蛋白質によるインビボでの治療効果において有用性を有する。
【００２１】 通常，オキシインドール化合物とケトン化合物との縮合により合成されるイン
ドリノン化合物は，可能なＥ異性体およびＺ異性体の混合物を示し，このため，
目的とする異性体の単離は困難である。本発明の化合物は，オキシインドール化
合物のカルボニルとケトン化合物のピロール成分の１位の水素との間の分子間水
素結合を特徴とする。かかる水素結合は，インドリノン化合物の合成における中
間体を好ましいコンフォメーションに固定することにより，異性体の混合物を有
することに伴う問題を排除する。
【００２２】 Ｉ．定義 "化合物"との用語は，化合物またはその薬学的に許容しうる塩，エステル，アミ
ド，プロドラッグ，異性体，または代謝産物を表す。
【００２３】 "薬学的に許容しうる塩"との用語は，化合物の生物学的活性および特性を排除
しない化合物の製剤を表す。薬学的塩は，本発明の化合物を無機または有機酸，
例えば塩酸，シュウ酸，硫酸，硝酸，リン酸，メタンスルホン酸，エタンスルホ
ン酸，ｐ−トルエンスルホン酸，サリチル酸等と反応させることにより得ること
ができる。
【００２４】 "プロドラッグ"とは，インビボで親薬剤に転換される薬剤を表す。プロドラッ
グは，場合により，親薬剤より投与が容易であるかもしれないため，しばしば有
用である。例えば，プロドラッグは経口投与により生物学的に利用可能であるが
，親薬剤はそうではないかもしれない。プロドラッグはまた，親薬剤よりも医薬
組成物中で改良された溶解性を有するかもしれない。プロドラッグの例は，限定
されるものではないが，エステル（"プロドラッグ"）として投与されて，水溶性
であることが移動に不利である細胞膜の通過を容易にし，次に，水溶性であるこ
とが有利である細胞内に入った後，代謝的に加水分解されて活性種のカルボン酸
となるような，本発明の化合物であろう。プロドラッグのさらに別の例は，酸基
に結合した短いポリペプチド（ポリアミノ酸）であろう。このペプチドは，代謝
されて活性分子を放出する。
【００２５】 "インドリノン"との用語は，この用語が当該技術分野において一般に理解され
ているように用いられ，アルデヒド成分とオキシインドール成分から合成するこ
とができる置換または非置換化合物の大きなサブクラスを含む。
【００２６】 "オキシインドール"との用語は，化学置換基で置換されたオキシインドール化
合物を表す。オキシインドール化合物は次の一般構造：
【化７】 のものである。
【００２７】 本明細書において用いられる場合，"縮合ピロロ"基とは，括弧内の構造を表す
：
【化８】
【００２８】 本発明に関して，"置換された"との用語は，任意の数の化学置換基で誘導化さ
れたオキシインドール化合物を表す。
【００２９】 本明細書において用いられる場合，"アルキル"との用語は，脂肪族炭化水素基
を表す。アルキル成分は，"飽和アルキル"基（すなわち，アルケンまたはアルキ
ン成分を含まない）でありうる。アルキル成分はまた，"不飽和アルキル"成分（
少なくとも１つのアルケンまたはアルキン成分を含む）であってもよい。"アル
ケン"成分とは，少なくとも２つの炭素原子および少なくとも１つの炭素−炭素
二重結合からなる基を表し，"アルキン"成分とは，少なくとも２つの炭素原子お
よび少なくとも１つの炭素−炭素三重結合からなる基を表す。アルキル成分は，
飽和であっても不飽和であってもよく，分枝鎖，非分枝鎖，または環状であって
もよい。
【００３０】 好ましくは，アルキル基は，１−２０個の炭素原子を有する（数値範囲，例え
ば"１−２０"は，本明細書において記載される場合には常に，所定の範囲内の各
整数を表す。例えば，"１−２０個の炭素原子"とは，アルキル基が１個の炭素原
子，２個の炭素原子，３個の炭素原子，以下同様にして，２０個までの炭素原子
からなっていてもよいことを意味する。ただし，この定義はまた，"アルキル"と
の用語が数値範囲が示されずに用いられることもカバーする）。より好ましくは
，これは１−１０個の炭素原子を有する中程度の大きさのアルキルである。最も
好ましくは，これは１−４個の炭素原子を有する低級アルキルである。アルキル
基は，置換されていても置換されていなくてもよい。置換されている場合，置換
基は，好ましくは，それぞれ独立して，シクロアルキル，アリール，ヘテロアリ
ール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，
アルキルチオ，アリールチオ，シアノ，ハロ，カルボニル，チオカルボニル，Ｏ
−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｏ−チオカルバミル，Ｎ−チオカルバミル，Ｃ
−アミド，Ｎ−アミド，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，Ｃ−カルボ
キシ，Ｏ−カルボキシ，イソシアナト，チオシアナト，イソチオシアナト，ニト
ロ，シリルおよびアミノ（一置換および二置換アミノ基を含む）から選択される
１またはそれ以上の基である。
【００３１】 "芳香族"との用語は，共役したパイ電子系を有する少なくとも１つの環を有す
る芳香族基を表し，炭素環式アリール（例えばフェニル）および複素環式アリー
ル基（例えばピリジン）の両方を含む。この用語は，単環式または縮合多環式（
すなわち隣接する炭素原子の対を共有する環）基を含む。"炭素環式"との用語は
，１またはそれ以上の閉環構造を含み，環の骨格を形成する原子がすべて炭素原
子である化合物を表す。すなわち，この用語は，環骨格が少なくとも１つの炭素
以外の原子を含む複素環から炭素環式を区別する。"ヘテロ芳香族"との用語は，
少なくとも１つの複素環を含有する芳香族基を表す。
【００３２】 "脂肪族環"との用語は，１またはそれ以上の閉環構造を含み，骨格を形成する
原子の少なくとも１つは飽和炭素原子である化合物を表す（例えばシクロヘキサ
ン）。"ヘテロ脂肪族環"との用語は，骨格を形成する原子の少なくとも１つはヘ
テロ原子である環系を表す（例えばテトラヒドロピラン）。
【００３３】 "アミン"との用語は，式−ＮＲ1Ｒ2の化学成分を表す（式中，Ｒ1およびＲ2は
，独立して，水素，飽和または不飽和のアルキル，および５員環または６員環の
アリールまたはヘテロアリール環成分からなる群より選択され，ここで，環は，
アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，ニトロ，およびエス
テル成分からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に
置換されていてもよい。
【００３４】 "イミン"との用語は，式−Ｎ＝Ｒ1の化学成分を意味する（式中，Ｒ1は，水素
，飽和または不飽和のアルキル，およびアリールまたはヘテロアリール環成分（
単環式または二環式）からなる群より選択され，ここで，環は，アルキル，ハロ
ゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，ニトロ，およびエステル成分からな
る群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていて
もよい）。
【００３５】 "ハロゲン"または"ハロ"との用語は，フッ素，塩素，臭素およびヨウ素からな
る群より選択される原子を表す。"トリハロメチル"との用語は，−ＣＸ3基を表
す（式中，Ｘはハロゲンである）。
【００３６】 "カルボン酸"との用語は，式−（Ｒ）n−ＣＯＯＨを有する化学成分を表す（
式中，Ｒは，アルキル，シクロアルキル，アリール，ヘテロアリール（環炭素を
介して結合）およびヘテロ脂環式（環炭素を介して結合）からなる群より選択さ
れ，これらの用語は本明細書において定義されるとおりであり，ｎは０または１
である）。
【００３７】 "エステル"との用語は，式−（Ｒ）n−ＣＯＯＲ’を有する化学成分を表す（
式中，ＲおよびＲ’は，独立して，アルキル，シクロアルキル，アリール，ヘテ
ロアリール（環炭素を介して結合）およびヘテロ脂環式（環炭素を介して結合）
からなる群より選択され，これらの用語は本明細書において定義されるとおりで
あり，ｎは０または１である）。本明細書において用いられる場合，"カルボキ
シアルキル"との用語もまたこの定義に含まれる。
【００３８】 "アルデヒド"との用語は，式−（Ｒ）n−ＣＨＯを有する化学成分を表す（式
中，Ｒは本明細書において定義されるとおりであり，ｎは０または１である）。
【００３９】 "スルホン"との用語は，式−ＳＯ2−Ｒを有する化学成分を表す（式中，Ｒは
本明細書において定義されるとおりである）。
【００４０】 "アシル"との用語は，一般式−Ｃ（Ｏ）Ｒの化学成分を表す。Ｒが水素である
とき，アシル基を含有する分子はアルデヒドである。Ｒが，アルキル，シクロア
ルキル，アリール，ヘテロアリール（環炭素を介して結合）およびヘテロ脂環式
（環炭素を介して結合）（これらの用語は本明細書において定義されるとおりで
ある）からなる群より選択される場合，アシル基を含有する分子はケトンである
。
【００４１】 "チオカルボニル"基は，−Ｃ（＝Ｓ）−Ｒ基を表す（式中，Ｒは本明細書にお
いて定義されるとおりである）。
【００４２】 "Ｏ−カルボキシ"基は，ＲＣ（＝Ｏ）Ｏ−基を表す（式中，Ｒは本明細書にお
いて定義されるとおりである）。
【００４３】 "Ｃ−カルボキシ"基は，−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ基を表す（式中，Ｒは本明細書にお
いて定義されるとおりである）。
【００４４】 "アセチル"基は，−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ3基を表す。
【００４５】 "トリハロメタンスルホニル"基は，Ｘ3ＣＳ（＝Ｏ）2−基を表す（式中，Ｘは
ハロゲンである）。
【００４６】 "シアノ"基は，−Ｃ≡Ｎ基を表す。
【００４７】 "イソシアナト"基は，−ＮＣＯ基を表す。
【００４８】 "チオシアナト"基は，−ＣＮＳ基を表す。
【００４９】 "イソチオシアナト"基は，−ＮＣＳ基を表す。
【００５０】 "スルフィニル"基は，−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ基を表し，ここで，Ｒは本明細書にお
いて定義されるとおりである。
【００５１】 "Ｓ−スルホンアミド"基は，−Ｓ（＝Ｏ）2ＮＲ2基を表し，ここで，Ｒは，本
明細書において定義されるとおりである。
【００５２】 "Ｎ−スルホンアミド"基は，ＲＳ（＝Ｏ）2ＮＨ−基を表し，ここで，Ｒは本
明細書において定義されるとおりである。
【００５３】 "トリハロメタンスルホンアミド"基は，Ｘ3ＣＳ（＝Ｏ）2ＮＲ−基を表し，こ
こで，ＸおよびＲは本明細書において定義されるとおりである。
【００５４】 "Ｏ−カルバミル"基は，−ＯＣ（＝Ｏ）−ＮＲ2基を表し，ここで，Ｒは本明
細書において定義されるとおりである。
【００５５】 "Ｎ−カルバミル"基は，ＲＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−基を表し，ここで，Ｒは本明細
書において定義されるとおりである。
【００５６】 "Ｏ−チオカルバミル"基は，−ＯＣ（＝Ｓ）−ＮＲ2基を表し，ここで，Ｒは
本明細書において定義されるとおりである。
【００５７】 "Ｎ−チオカルバミル"基は，ＲＯＣ（＝Ｓ）ＮＨ−基を表し，ここで，Ｒは本
明細書において定義されるとおりである。
【００５８】 "Ｃ−アミド"基は，−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ2基を表し，ここで，Ｒは本明細書に
おいて定義されるとおりである。
【００５９】 "Ｎ−アミド"基は，ＲＣ（＝Ｏ）ＮＨ−基を表し，ここでＲは本明細書におい
て定義されるとおりである。
【００６０】 本明細書において，２つの隣接する"Ｒ"基に関して"一緒になって"とは，２つ
の"Ｒ"基が環系を形成するように互いに共有結合していることを表す。環系は，
シクロアルキル，アリール，ヘテロアリールまたはヘテロ脂環式でありうる。
【００６１】 "コンビナトリアルライブラリ"とは，化合物の多次元アレイにおいて，１つの
次元の各化合物を他の次元の各化合物と反応させることにより形成されるすべて
の化合物を表す。本発明の文脈においては，アレイは２次元であり，一方の次元
は本発明の全オキシインドールであり，他方の次元は本発明の全アルデヒドであ
る。インドリノン化合物を形成するために，各オキシインドールを各アルデヒド
と反応させることができる。このようにして形成されるすべてのインドリノン化
合物は，本発明の範囲内である。また，本発明のオキシインドールのいくつかと
本発明のすべてのアルデヒド，またはすべてのオキシインドールとアルデヒドの
いくつかと，またはオキシインドールのいくつかとアルデヒドのいくつかとを反
応させることにより形成される，より小さいコンビナトリアルライブラリも，本
発明の範囲内である。
【００６２】 "医薬組成物"との用語は，本発明の化合物と他の化学成分，例えば希釈剤，賦
形剤，または担体との混合物を表す。医薬組成物は，化合物の生物への投与を容
易にする。当該技術分野においては化合物を投与する多くの技術が存在し，例え
ば，限定されないが，経口，エアロゾル，非経口，および局所投与が含まれる。
医薬組成物は，化合物を無機酸，例えば塩酸，シュウ酸，硫酸，硝酸，リン酸，
メタンスルホン酸，エタンスルホン酸，ｐ−トルエンスルホン酸，サリチル酸等
と反応させることによっても得ることができる。
【００６３】 "生理学的に許容しうる"との用語は，化合物の生物学的活性および特性を排除
しない担体または希釈剤を規定する。
【００６４】 "担体"との用語は，化合物の細胞または組織への取り込みを容易にする化学化
合物を規定する。例えば，ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は，多くの有機化
合物を生物の細胞または組織に取り込ませることを容易にするため，慣用的に用
いられている担体である。
【００６５】 "希釈剤"との用語は，目的とする化合物を溶解し，ならびに化合物の生物学的
に活性な形を安定化させる，水中に希釈された化学化合物を規定する。当該技術
分野においては，緩衝化溶液中に溶解された塩が希釈剤として用いられる。１つ
の慣用的に用いられている緩衝化溶液は，リン酸緩衝化食塩水である。これは，
これがヒトの血液の塩条件を模倣するためである。緩衝化塩は，低濃度で溶液の
ｐＨを調節しうるため，緩衝化希釈剤は化合物の生物学的活性をほとんど変更さ
せない。
【００６６】 "医薬組成物"との用語は，本発明の化合物と他の化学成分，例えば希釈剤，賦
形剤または担体との混合物を表す。医薬組成物は，化合物の生物への投与を容易
にする。当該技術分野においては化合物を投与する多くの技術が存在し，例えば
，限定されないが，経口，エアロゾル，非経口，および局所投与が含まれる。医
薬組成物は，化合物を無機酸，例えば塩酸，シュウ酸，硫酸，硝酸，リン酸，メ
タンスルホン酸，エタンスルホン酸，ｐ−トルエンスルホン酸，サリチル酸等と
反応させることによっても得ることができる。
【００６７】 "生理学的に許容しうる"との用語は，化合物の生物学的活性および特性を排除
しない担体または希釈剤を規定する。
【００６８】 "機能"との用語は，蛋白質キナーゼの細胞における役割を表す。蛋白質キナー
ゼのファミリーには，シグナリングカスケードの多くの段階，例えば，細胞成長
，移動，分化，遺伝子発現，筋肉構築，グルコース代謝，細胞性蛋白質合成およ
び細胞サイクルの制御を制御するカスケードを制御するメンバーが含まれる。
【００６９】 本発明の文脈においては，"触媒活性"との用語は，蛋白質キナーゼが基質をリ
ン酸化する速度を規定する。触媒活性は，例えば，生成物に変換される基質の量
を時間の関数として決定することにより測定することができる。基質のリン酸化
は，蛋白質キナーゼの活性部位において生ずる。活性部位は，通常は，基質が蛋
白質キナーゼに結合し，リン酸化される空洞である。
【００７０】 本明細書において用いられる場合，"基質"との用語は，蛋白質キナーゼにより
リン酸化される分子を表す。基質は，好ましくはペプチドであり，より好ましく
は蛋白質である。
【００７１】 "活性化する"との用語は，蛋白質キナーゼの細胞性機能を増加させることを表
す。蛋白質キナーゼ機能は，好ましくは，天然の結合パートナーとの相互作用で
あり，最も好ましくは，触媒活性である。
【００７２】 "阻害する"との用語は，蛋白質キナーゼの細胞性機能を減少させることを表す
。蛋白質キナーゼ機能は，好ましくは，天然の結合パートナーとの相互作用であ
り，最も好ましくは，触媒活性である。
【００７３】 "調節する"との用語は，蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの間に複合
体が形成される確率を増加または減少させることにより，蛋白質キナーゼの機能
を変化させることを表す。調節剤は，好ましくは，蛋白質キナーゼと天然の結合
パートナーとの間にそのような複合体が形成される確率を増加させ，より好まし
くは，蛋白質キナーゼに暴露される化合物の濃度に依存して，蛋白質キナーゼと
天然の結合パートナーとの間に複合体が形成される確率を増加または減少させ，
最も好ましくは，蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの間に複合体が形成
される確率を減少させる。調節剤は，好ましくは，蛋白質キナーゼの触媒活性を
活性化し，より好ましくは，蛋白質キナーゼに暴露される化合物の濃度に依存し
て，蛋白質キナーゼの触媒活性を活性化または阻害し，または最も好ましくは，
蛋白質キナーゼの触媒活性を阻害する。
【００７４】 "複合体"との用語は，互いに結合する少なくとも２つの分子の組み合わせを表
す。シグナル伝達複合体はしばしば，互いに結合する少なくとも２つの蛋白質分
子を含む。
【００７５】 "天然の結合パートナー"との用語は，細胞において蛋白質キナーゼに結合する
ポリペプチドを表す。天然の結合パートナーは，蛋白質キナーゼシグナル伝達プ
ロセスにおいてシグナルを伝播する役割を果たすことができる。蛋白質キナーゼ
と天然の結合パートナーとの間の相互作用の変化は，相互作用が形成される可能
性の増加または減少，または蛋白質キナーゼ／天然の結合パートナー複合体の濃
度の増加または減少した濃度として現れることができる。
【００７６】 本明細書において用いられる場合，"接触させる"との用語は，本発明の化合物
を含む溶液をこの方法の細胞を浸す液体培地と混合することを表す。化合物を含
む溶液はまた，化合物のこの方法の細胞内への取り込みを容易にする他の成分，
例えばジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含んでいてもよい。本発明の化合物
を含む溶液は，輸送装置，例えばピペットに基づく装置またはシリンジに基づく
装置を用いることにより，細胞を浸す培地に加えることができる。
【００７７】 "モニターする"との用語は，化合物をこの方法の細胞に加える影響を観察する
ことを表す。影響は，細胞表現型，細胞増殖，蛋白質キナーゼ触媒活性，または
蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの間の相互作用の変化として現れるこ
とができる。
【００７８】 "影響"との用語は，細胞表現型または細胞増殖の変化または無変化を記述する
。"影響"はまた，蛋白質キナーゼの触媒活性の変化または無変化を記述しうる。
"影響"はまた，蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの間の相互作用の変化
または無変化を記述しうる。
【００７９】 "細胞表現型"との用語は，細胞または組織の外見，または細胞または組織の機
能を表す。細胞表現型の例は，細胞の大きさ（縮小または拡大），細胞増殖（細
胞の数の増加または減少），細胞分化（細胞の形の変化または無変化），細胞生
存，アポトーシス（細胞死），代謝栄養物の利用（例えばグルコース取り込み）
である。細胞表現型の変化または無変化は，当該技術分野において知られる技術
により容易に測定される。
【００８０】 "抗体"との用語は，蛋白質キナーゼまたはそのフラグメントに特異的結合親和
性を有する抗体（例えばモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体），また
は抗体フラグメントを表す。
【００８１】 "特異的結合親和性"とは，抗体が，特定の条件下において，他のポリペプチド
に結合するより高い親和性をもって標的（蛋白質キナーゼ）ポリペプチドに結合
することを意味する。蛋白質キナーゼに対して特異的結合親和性を有する抗体は
，免疫複合体が形成するような条件下で試料を抗体と接触させ，蛋白質キナーゼ
に結合した抗体の存在および／または量を検出することにより，試料中の蛋白質
キナーゼの存在および／または量を検出するための方法において用いることがで
きる。そのような方法を実施するための診断キットは，抗体を含む第１の容器，
および抗体の結合パートナーと標識，例えば放射性同位体とのコンジュゲートを
有する第２の容器を含むように構築することができる。診断キットはまた，ＦＤ
Ａに認可された用途の通知およびその指針を含んでいてもよい。
【００８２】 "ポリクローナル"との用語は，抗原またはその抗原性機能的誘導体で免疫した
動物の血清から誘導される抗体分子の異成分集団である抗体を表す。ポリクロー
ナル抗体の製造のためには，種々の宿主動物に抗原を注射することにより免疫す
ることができる。宿主の種により，種々のアジュバントを用いて免疫学的応答を
増加させることができる。
【００８３】 "モノクローナル抗体"は，特定の抗原に対する抗体の実質的に均一な集団であ
る。モノクローナル抗体は，連続細胞株の培養物による抗体分子の生成を与える
任意の技術により得ることができる。モノクローナル抗体は，当業者に知られる
方法により得ることができる。例えば，Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒ
ｅ ２５６：４９５−４９７（１９７５），および米国特許．４，３７６，１１
０を参照されたい。
【００８４】 "抗体フラグメント"との用語は，特定の分子に対して特異的結合親和性を表示
する抗体の一部，しばしば超可変領域および周囲の重鎖および軽鎖の一部を表す
。超可変領域は，物理的にポリペプチド標的に結合する抗体の部分である。
【００８５】 シグナル伝達プロセスに関して，"異常"との用語は，生物において過剰発現ま
たは過小発現されているか，その触媒活性が野生型蛋白質キナーゼ活性より低い
かまたは高いように変異しているか，天然の結合パートナーともはや相互作用す
ることができないように変異しているか，もはや別の蛋白質キナーゼまたは蛋白
質ホスファターゼにより修飾されることができないか，またはもはや天然の結合
パートナーと結合することができない蛋白質キナーゼを表す。
【００８６】 "異常な相互作用を促進または破壊する"との用語は，本発明の化合物を生物の
細胞または組織に投与することにより達成することができる方法を表す。化合物
は，複合体界面において多数の原子と望ましい相互作用を形成することにより，
蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの間の相互作用を促進することができ
る。あるいは，化合物は，複合体界面において原子間に形成される望ましい相互
作用を妨害することにより，蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの間の相
互作用を阻害することができる。
【００８７】 "インビトロ"とは，人工的環境，例えば，限定されないが，試験管，細胞，ま
たは培養物中で実施される方法を表す。本明細書において用いられる場合，"イ
ンビボ"とは，生きている生物，例えば限定されないが，マウス，ラットまたは
ウサギにおいて実施される方法を表す。
【００８８】ＩＩ．本発明の化合物 Ａ．３−アリーリデニル−６−ヘテロシクリル−２−インドリノン誘導体 １つの観点においては，本発明は，式Ｉ
【化９】 ［式中，ｎおよびｍは，独立して，０または１である］ に記載される化学構造を有する３−アリーリデニル−６−ヘテロシクリル−２−
インドリノン誘導体またはその塩またはプロドラッグに関する。
【００８９】 ｎが１であるとき，Ａ，Ｂ，Ｄ，ＥおよびＦは，独立して，炭素および窒素か
らなる群より選択され；ただし，Ａ，Ｂ，Ｄ，ＥおよびＦの３個以下が同時に窒
素であり，かつ，Ａ，Ｂ，Ｄ，Ｅ，またはＦが窒素であるとき，Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6
，Ｒ7またはＲ8は，それぞれ存在しない。
【００９０】 ｍが１であるとき，Ｇ，Ｈ，Ｊ，ＫおよびＬは，独立して，炭素および窒素か
らなる群より選択され；ただし，Ｇ，Ｈ，Ｊ，ＫおよびＬの少なくとも１個かつ
３個以下が同時に窒素であり，かつ，Ｇ，Ｈ，Ｊ，ＫまたはＬが窒素であるとき
，Ｒ9，Ｒ10，Ｒ11，Ｒ12またはＲ13はそれぞれ存在しない。
【００９１】 ｎが０であるとき，Ａは，炭素および窒素からなる群より選択され，Ｂおよび
Ｆは，炭素，窒素，ＮＨ，酸素およびイオウからなる群より選択され，ただし，
ＢまたはＦがＮＨであるとき，他方はＮＨではありえず，および，Ｅは，炭素，
窒素，酸素およびイオウからなる群より選択され，ただし，Ｂ，ＥまたはＦの１
個以下が酸素またはイオウであり，かつ，Ａ，Ｂ，ＥまたはＦの少なくとも１つ
はヘテロ原子である（すなわち炭素ではない）。
【００９２】 ｍが０であるとき，Ｇは，炭素および窒素からなる群より選択され，Ｈ，Ｋお
よびＬは，炭素，窒素，ＮＨ，酸素およびイオウからなる群より選択され，ただ
し，ＨまたはＬがＮＨであるとき，他方はＮＨではありえず，および，Ｋは，炭
素，窒素，酸素およびイオウからなる群より選択され，ただし，Ｈ，ＫまたはＬ
の１個以下が酸素またはイオウであり，かつ，Ｇ，Ｈ，ＫまたはＬの少なくとも
１つはヘテロ原子である（すなわち炭素ではない）。
【００９３】 Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，Ｒ7，Ｒ8，Ｒ9，Ｒ10，Ｒ11，Ｒ12およびＲ1 3 は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケ
ニル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，ア
ルコキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールオキシ，アリールチオ，スルフ
ィニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，
Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，カルボキシアルキル，シアノ，ニトロ，ハロ
，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミドおよび−ＮＲ14Ｒ 15 からなる群より選択される。
【００９４】 Ｒ4およびＲ5またはＲ5およびＲ6またはＲ6およびＲ7またはＲ7およびＲ8は，
一緒になって，５員環または６員環のアリールまたはヘテロアリール環を形成し
てもよい。
【００９５】 Ｒ14およびＲ15は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル
，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，カルボニル，スルホニルからなる群
より選択されるか，または一緒になって，５員環または６員環のヘテロ脂環式環
を形成してもよい。
【００９６】 本発明の現在好ましい態様は，式Ｉの化合物であって，式中，Ｒ1，Ｒ2および
Ｒ3は，独立して，（ｉ）水素，（ｉｉ）１またはそれ以上のハロ基で任意に置
換されていてもよい低級アルキル，（ｉｉｉ）１またはそれ以上のハロ基で任意
に置換されていてもよい低級アルコキシ，（ｉｖ）（低級アルキル）−Ｓ−スル
ホンアミド，（ｖ）アリール−Ｓ−スルホンアミド，（ｖｉ）ハロ，および（ｖ
ｉｉ）−ＮＲ14Ｒ15；からなる群より選択され，および Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，Ｒ7，Ｒ8，Ｒ9，Ｒ10，Ｒ11，Ｒ12，およびＲ13は，独立して，
（ｉ）水素；（ｉｉ）アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ハロ，ヒドロ
キシ，低級アルコキシ，メルカプト，低級アルキルチオ，Ｃ−カルボキシおよび
−ＮＲ14Ｒ15からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換され
ていてもよい低級アルキル；（ｉｉｉ）シクロアルキル；（ｉｖ）ヒドロキシ；
（ｖ）１またはそれ以上のハロ基，アリール，ヘテロアリールおよびヘテロ脂環
式からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよ
い低級アルコキシ；（ｖｉ）ハロ；（ｖｉｉ）カルボキシアルキル；（ｖｉｉｉ
）１またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アルキル，ハロ
，ヒドロキシ，１またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級ア
ルコキシ，アリールオキシおよび−ＮＲ14Ｒ15からなる群より選択される１また
はそれ以上の基で任意に置換されていてもよいアリール；（ｉｘ）１またはそれ
以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アルキル，ハロ，ヒドロキシ，
１またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アルコキシ，アリ
ールオキシおよび−ＮＲ14Ｒ15からなる群より選択される１またはそれ以上の基
で任意に置換されていてもよいアリールオキシ；（ｘ）１またはそれ以上のハロ
基で任意に置換されていてもよい低級アルキル，ハロ，ヒドロキシ，１またはそ
れ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アルコキシおよび−ＮＲ14Ｒ 15 からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよ
いヘテロアリール；（ｘｉ）ヘテロ脂環式；（ｘｉｉ）（低級アルキル）−Ｃ−
カルボキシ；（ｘｉｉｉ）（低級アルキル）カルボニル；（ｘｉｖ）アリールカ
ルボニル；（ｘｖ）（低級アルキル）−Ｓ−スルホンアミド；（ｘｖｉ）アリー
ル−Ｓ−スルホンアミド；（ｘｖｉｉ）（低級アルキル）−Ｎ−スルホンアミド
；（ｘｖｉｉｉ）アリール−Ｎ−スルホンアミド；（ｘｉｘ）（低級アルキル）
−Ｎ−カルバモイル；（ｘｘ）（低級アルキル）−Ｃ−アミド；（ｘｘｉ）（低
級アルキル）−Ｎ−アミド；（ｘｘｉｉ）（シクロアルキル）−Ｎ−アミド；お
よび（ｘｘｉｉｉ）−ＮＲ14Ｒ15；からなる群より選択され，および Ｒ14およびＲ15は，独立して，水素および低級アルキルからなる群より選択され
る。
【００９７】 本発明の別の現在好ましい態様は，ｎが１であり，Ａ，Ｂ，Ｄ，ＥおよびＦが
炭素であり，ｍが１であり，Ｇ，Ｈ，Ｊ，ＫおよびＬの１つが窒素である，式Ｉ
の化合物である。
【００９８】 式Ｉの化合物において，ｎが１であり，Ａ，Ｂ，Ｄ，ＥおよびＦが炭素であり
，ｍが０であり，Ｇ，ＨおよびＫが炭素であり，およびＬがＮＨ，酸素またはイ
オウであることも，本発明の現在好ましい態様である。
【００９９】 本発明のさらに別の好ましい態様は，式Ｉの化合物であって，式中，ｎは０で
あり；Ａ，ＢおよびＥは炭素であり；ＦはＮＨであり；Ｒ4およびＲ7は，独立し
て，水素および低級アルキルからなる群より選択され；Ｒ5は，（ｉ）ヒドロキ
シ，環中にＮＨ基を含むヘテロ芳香族，環中に少なくとも１つのＮＨ基を含むヘ
テロ脂環式，Ｃ−カルボキシ，および，−ＮＲ14Ｒ15からなる群より選択される
１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい低級アルキル；（ｉｉ）カ
ルボキシアルキル；（ｉｉｉ）Ｃ−カルボキシ；および（ｉｖ）−ＮＲ14Ｒ15（
式中，Ｒ14およびＲ15は，独立して，水素，低級アルキルおよびカルボニルから
なる群より選択される）；からなる群より選択され；ｍは１であり；およびＧ，
Ｈ，Ｉ，Ｊ，ＫまたはＬの１つは窒素である。
【０１００】 同様に，本発明の現在好ましい態様は，式Ｉの化合物において，ｎは０であり
；Ａ，ＢおよびＥは炭素であり；ＦはＮＨであり；Ｒ4およびＲ7は，独立して，
水素および低級アルキルからなる群より選択され；Ｒ5は，（ｉ）ヒドロキシ，
環中にＮＨを含有するヘテロ芳香族，環中に少なくとも１つのＮＨを含有するヘ
テロ脂環式，Ｃ−カルボキシ，および，−ＮＲ14Ｒ15からなる群より選択される
１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい低級アルキル；（ｉｉ）カ
ルボキシアルキル；（ｉｉｉ）Ｃ−カルボキシ；および（ｉｖ）−ＮＲ14Ｒ15（
式中，Ｒ14およびＲ15は，独立して，水素，低級アルキルおよびカルボニルから
なる群より選択される）；からなる群より選択され；ｍは０であり；Ｇ，Ｈおよ
びＫは炭素であり；およびＬはＮＨ，酸素またはイオウである。
【０１０１】 Ｂ．３−アラルキル−２−インドリノン誘導体 別の観点においては，本発明は，式ＩＩ：
【化１０】 ［式中，ｎは０または１である］ に記載される化学構造を有する３−アラルキル−２−インドリノン誘導体，また
はその生理学的に許容しうる塩またはプロドラッグに関する。
【０１０２】 ｐが１であるとき，Ｍ，Ｑ，Ｔ，ＵおよびＶは，独立して，炭素および窒素か
らなる群より選択される。Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｕ，またはＶが窒素であるとき，Ｒ20，
Ｒ21，Ｒ22，Ｒ23またはＲ24はそれぞれ存在しないことが理解される。
【０１０３】 ｐが０であるとき，Ｍ，Ｑ，Ｕ，およびＶは，独立して，炭素，窒素，酸素お
よびイオウからなる群より選択される。Ｍ，Ｑ，Ｕ，またはＶが酸素またはイオ
ウまたは窒素（ここで，前記窒素は二重結合に関与する）であるとき，Ｒ20，Ｒ 21 ，Ｒ22，Ｒ23，またはＲ24は，それぞれ存在しないことが理解される。
【０１０４】 Ｒ16，Ｒ17，Ｒ18，Ｒ19，Ｒ20，Ｒ21，Ｒ22，Ｒ23またはＲ24は，独立して，
水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル
，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，メルカ
プト，アルキルチオ，アリールオキシ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホ
ンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ
，カルボキシアルキル，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミ
ル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミドおよび−ＮＲ25Ｒ26からなる群より選択される。
【０１０５】 Ｒ20およびＲ21またはＲ21およびＲ22またはＲ22およびＲ23またはＲ23および
Ｒ24は，一緒になって，５員環または６員環のアリールまたはヘテロアリール環
を形成してもよい。
【０１０６】 Ｒ25およびＲ26は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル
，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，カルボニル，スルホニルからなる群
より選択され，または一緒になって，５員環または６員環のヘテロ脂環式環を形
成する。
【０１０７】 本発明の現在好ましい態様は，Ｒ16，Ｒ17，Ｒ18，Ｒ19，Ｒ20，Ｒ21，Ｒ22，
Ｒ23およびＲ24が，独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）シクロアルキル，アリール
，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ハロ，ヒドロキシ，Ｃ−カルボキシおよび−
ＮＲ25Ｒ26からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されて
いてもよい低級アルキル；（ｉｉｉ）シクロアルキル；（ｉｖ）ヒドロキシ；（
ｖ）１またはそれ以上のハロ基，アリール，ヘテロアリールおよびヘテロ脂環式
からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
低級アルコキシ；（ｖｉ）トリハロメチル；（ｖｉｉ）トリハロメトキシ；（ｖ
ｉｉｉ）ハロ；（ｉｘ）カルボキシアルキル；（ｘ）低級アルキル，１またはそ
れ以上のハロ基，トリハロメチル，トリハロメトキシ，ハロ，ヒドロキシ，低級
アルコキシ，アリールオキシおよび−ＮＲ25＜Ｒ26で置換されている低級アルキ
ルからなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよ
いアリール；（ｘｉ）アリールオキシ；低級アルキル，トリハロメチル，ハロ，
ヒドロキシ，（低級アルキル）アルコキシ，アミノおよび−ＮＲ25Ｒ26からなる
群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよいヘテロア
リール；（ｘｉｉ）ヘテロ脂環式；（ｘｉｉｉ）（低級アルキル）カルボキシ；
（ｘｉｖ）（低級アルキル）カルボニル；（ｘｖ）アリールカルボニル；（ｘｖ
ｉ）（低級アルキル）−Ｓ−スルホンアミド；（ｘｖｉｉ）アリール−Ｓ−スル
ホンアミド；（ｘｖｉｉｉ）（低級アルキル）−Ｎ−スルホンアミド；（ｘｉｘ
）アリール−Ｎ−スルホンアミド；（ｘｘ）（低級アルキル）−Ｎ−カルバモイ
ル；（ｘｘｉ）（低級アルキル）−Ｃ−アミド；（ｘｘｉｉ）（低級アルキル）
−Ｎ−アミド；（ｘｘｉｉｉ）（シクロアルキル）−Ｎ−アミド；および（ｘｘ
ｉｖ）−ＮＲ25Ｒ26；からなる群より選択される化合物である。
【０１０８】 本発明の別の現在好ましい態様は，ｐが１であり，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｕ，およびＶ
が炭素である化合物である。
【０１０９】 本発明のさらに別の好ましい態様においては，ｐが１であるとき，Ｍ，Ｑ，Ｔ
，Ｕ，およびＶは炭素であり；Ｒ16，Ｒ17，Ｒ18，およびＲ19は，独立して，（
ｉ）水素；（ｉｉ）ハロ；（ｉｉｉ）ヒドロキシ；（ｉｖ）−ＮＲ25Ｒ26；（ｖ
）水素，低級アルキルおよびアリールからなる群より選択される１またはそれ以
上の基で任意に置換されていてもよいＳ−スルホンアミド；（ｖｉ）ヒドロキシ
，１またはそれ以上のハロ基，Ｃ−カルボキシ，Ｃ−アミド，ヘテロ脂環式，お
よび−ＮＲ25Ｒ26からなる群より選択される基で任意に置換されていてもよい低
級アルキル；（ｖｉｉ）１またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよ
い低級アルコキシ；（ｖｉｉｉ）低級アルキル，低級アルコキシ，ハロ，ヒドロ
キシおよび−ＮＲ25Ｒ26からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意
に置換されていてもよいアリール；（ｉｘ）水素，低級アルキル，シクロアルキ
ルおよびアリールからなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換
されていてもよいＮ−アミド；からなる群より選択され；および Ｒ20，Ｒ21，Ｒ22，Ｒ23およびＲ24は，独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）ハロ；
（ｉｉｉ）ヒドロキシ；（ｉｖ）−ＮＲ25Ｒ26；（ｖ）ヒドロキシ，１またはそ
れ以上のハロ基，Ｃ−カルボキシ，Ｃ−アミド，ヘテロ脂環式，および−ＮＲ25 Ｒ26からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていても
よい低級アルキル；（ｖｉ）シクロアルキル；（ｖｉｉ）１またはそれ以上のハ
ロ基，アリール，−ＮＲ25Ｒ26，およびヘテロアリールからなる群より選択され
る１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい低級アルコキシ；（ｖｉ
ｉｉ）ハロ，ヒドロキシ，低級アルコキシ，−ＮＲ25Ｒ26，およびＣ−カルボキ
シからなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよ
いアリール；からなる群より選択される。
【０１１０】 ｐが１であり，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｕ，またはＶの１個または２個が窒素であること
は，本発明のさらに別の現在好ましい態様である。
【０１１１】 また現在好ましいものは，ｐが１でありＱ，Ｔ，Ｕ，およびＶの１つまたは２
つが窒素であるとき，Ｒ16，Ｒ17，Ｒ18およびＲ19は，独立して，（ｉ）水素；
（ｉｉ）ハロ；（ｉｉｉ）ヒドロキシ；（ｉｖ）−ＮＲ25Ｒ26；（ｖ）水素，低
級アルキルおよびアリールからなる群より選択される１またはそれ以上の基で任
意に置換されていてもよいＳ−スルホンアミド；（ｖｉ）ヒドロキシ，１または
それ以上のハロ基，Ｃ−カルボキシ，Ｃ−アミド，ヘテロ脂環式，および−ＮＲ 25 Ｒ26からなる群より選択される基で任意に置換されていてもよい低級アルキル
；（ｖｉｉ）１またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アル
コキシ；（ｖｉｉｉ）低級アルキル，低級アルコキシ，ハロ，ヒドロキシおよび
−ＮＲ25Ｒ26からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換され
ていてもよいアリール；（ｉｘ）水素，低級アルキル，シクロアルキルおよびア
リールからなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていて
もよいＮ−アミド；からなる群より選択され；および Ｒ20，Ｒ21，Ｒ22，Ｒ23およびＲ24の窒素でないいずれかの基は，独立して，（
ｉ）水素；（ｉｉ）ハロ；（ｉｎ）ヒドロキシ；（ｉｖ）−ＮＲ25Ｒ26；（ｖ）
ヒドロキシ，１またはそれ以上のハロ基，Ｃ−カルボキシ，Ｃ−アミド，ヘテロ
脂環式，および−ＮＲ25Ｒ26からなる群より選択される１またはそれ以上の基で
任意に置換されていてもよい低級アルキル；（ｖｉ）シクロアルキル；（ｖｉｉ
）１またはそれ以上のハロ基，アリール，−ＮＲ25Ｒ26およびヘテロアリールか
らなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい低
級アルコキシ；および（ｖｉｉｉ）ハロ，ヒドロキシ，低級アルコキシ，−ＮＲ 25 Ｒ26，およびＣ−カルボキシからなる群より選択される１またはそれ以上の基
で任意に置換されていてもよいアリール；からなる群より選択される。
【０１１２】 ｐが１であり，Ｒ21およびＲ22が一緒になって縮合ピロロ基を形成することが
，本発明の現在好ましい態様である。
【０１１３】 本発明のさらに別の好ましい態様においては，Ｒ16，Ｒ17，Ｒ18およびＲ19は
，独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）ハロ；（ｉｉｉ）ヒドロキシ；（ｉｖ）−Ｎ
Ｒ25Ｒ26；（ｖ）水素，低級アルキルおよびアリールからなる群より選択される
１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよいＳ−スルホンアミド；（ｖ
ｉ）ヒドロキシ，１またはそれ以上のハロ基，Ｃ−カルボキシ，Ｃ−アミド，ヘ
テロ脂環式および，−ＮＲ25Ｒ26からなる群より選択される基で任意に置換され
ていてもよい低級アルキル；（ｖｉｉ）１またはそれ以上のハロ基で任意に置換
されていてもよい低級アルコキシ；（ｖｉｉｉ）低級アルキル，低級アルコキシ
，ハロ，ヒドロキシおよび−ＮＲ25Ｒ26からなる群より選択される１またはそれ
以上の基で任意に置換されていてもよいアリール；（ｉｘ）水素，低級アルキル
，シクロアルキルおよびアリールからなる群より選択される１またはそれ以上の
基で任意に置換されていてもよいＮ−アミド；からなる群より選択される。
【０１１４】 同様に，Ｒ20，Ｒ23およびＲ24は，独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）ハロ；（
ｉｉｉ）ヒドロキシ；（ｉｖ）−ＮＲ25Ｒ26；（ｖ）ヒドロキシ，１またはそれ
以上のハロ基，Ｃ−カルボキシ，Ｃ−アミド，ヘテロ脂環式および，−ＮＲ25Ｒ 26 からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよ
い低級アルキル；（ｖｉ）シクロアルキル；（ｖｉｉ）１またはそれ以上のハロ
基，アリール，−ＮＲ25Ｒ26およびヘテロアリールからなる群より選択される１
またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい低級アルコキシ；（ｖｉｉｉ
）ハロ，ヒドロキシ，低級アルコキシ，−ＮＲ25Ｒ26および，Ｃ−カルボキシか
らなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよいア
リール；からなる群より選択されることが好ましい。
【０１１５】 別の好ましい態様においては，ｐは０であり，ＭまたはＱは−ＮＨ，酸素また
はイオウであり；および，ＭまたはＱのいずれかは−ＮＨ，酸素またはイオウで
はなく，およびＵおよびＶは炭素である。
【０１１６】 別の好ましい態様には，Ｒ16，Ｒ17，Ｒ18およびＲ19が，独立して，（ｉ）水
素；（ｉｉ）ハロ；（ｉｉｉ）ヒドロキシ；（ｉｖ）−ＮＲ25Ｒ26；（ｖ）水素
，低級アルキルおよびアリールからなる群より選択される１またはそれ以上の基
で任意に置換されていてもよいＳ−スルホンアミド；（ｖｉ）ヒドロキシ，１ま
たはそれ以上のハロ基，Ｃ−カルボキシ，Ｃ−アミド，ヘテロ脂環式および，−
ＮＲ25Ｒ26からなる群より選択される基で任意に置換されていてもよい低級アル
キル；（ｖｉｉ）１またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級
アルコキシ；（ｖｉｉｉ）低級アルキル，低級アルコキシ，ハロ，ヒドロキシお
よび−ＮＲ25Ｒ26からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換
されていてもよいアリール；（ｉｘ）水素，低級アルキル，シクロアルキルおよ
びアリールから選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
Ｎ−アミド；からなる群より選択される化合物が含まれる。
【０１１７】 これらの好ましい化合物においては，Ｒ20，Ｒ21，Ｒ23およびＲ24は，独立し
て，（ｉ）水素；（ｉｉ）ハロ；（ｉｉｉ）ヒドロキシ；（ｉｖ）−ＮＲ25Ｒ26 ；（ｖ）ヒドロキシ，１またはそれ以上のハロ基，Ｃ−カルボキシ，Ｃ−アミド
，ヘテロ脂環式および，−ＮＲ25Ｒ26からなる群より選択される１またはそれ以
上の基で任意に置換されていてもよい低級アルキル；（ｖｉ）シクロアルキル；
（ｖｉｉ）１またはそれ以上のハロ基，アリール，−ＮＲ25Ｒ26，および，ヘテ
ロアリールからなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されて
いてもよい低級アルコキシ；からなる群より選択される。
【０１１８】 さらに別の好ましい態様においては，Ｒ16，Ｒ17，Ｒ18およびＲ19は，独立し
て，（ｉ）水素；（ｉｉ）ハロ；（ｉｉｉ）ヒドロキシ；（ｉｖ）−ＮＲ25Ｒ26 ；（ｖ）水素，低級アルキルおよびアリールからなる群より選択される１または
それ以上の基で任意に置換されていてもよいＳ−スルホンアミド；（ｖｉ）ヒド
ロキシ，１またはそれ以上のハロ基，Ｃ−カルボキシ，Ｃ−アミド，ヘテロ脂環
式および−ＮＲ25Ｒ26からなる群より選択される基で任意に置換されていてもよ
い低級アルキル；（ｖｉｉ）１またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていて
もよい低級アルコキシ；（ｖｉｉｉ）低級アルキル，低級アルコキシ，ハロ，ヒ
ドロキシおよび−ＮＲ25Ｒ26からなる群より選択される１またはそれ以上の基で
任意に置換されていてもよいアリール；（ｉｘ）水素，低級アルキル，シクロア
ルキルおよびアリールから選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されて
いてもよいＮ−アミド；からなる群より選択される。
【０１１９】 好ましくは，Ｒ20，Ｒ23およびＲ24は，独立して，（ｉ）水素；（ｉｉ）ハロ
；（ｉｉｉ）ヒドロキシ；（ｉｖ）−ＮＲ25Ｒ26；（ｖ）ヒドロキシ，１または
それ以上のハロ基，Ｃ−カルボキシ，Ｃ−アミド，ヘテロ脂環式および，−ＮＲ 25 Ｒ26からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていて
もよい低級アルキル；（ｖｉ）シクロアルキル；（ｖｉｉ）１またはそれ以上の
ハロ基，アリール，−ＮＲ25Ｒ26および，ヘテロアリールからなる群より選択さ
れる１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい低級アルコキシ；（ｖ
ｉｉｉ）ハロ，ヒドロキシ，低級アルコキシ，−ＮＲ25Ｒ26および，Ｃ−カルボ
キシからなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていても
よいアリール；からなる群より選択される。
【０１２０】 Ｃ．ジアリールインドリノン化合物 別の観点においては，本発明は式ＩＩＩに記載される構造を有する化合物を提
供する：
【化１１】 ［式中， （ａ）は， （ｉ）ハロゲン，トリハロメチル，アルコキシ，カルボキシレート，アミノ，ニ
トロ，エステルおよび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，ま
たはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択される置換基で任意に置換されてい
てもよい飽和または不飽和のアルキル， ここで，環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，
アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１，２
または３個の置換基で任意に置換されていてもよく；および （ｉｉ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート
，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１，
２または３個の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香族
環； （ｉｉｉ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレー
ト，アミノ，ニトロ，エステルからなる群より独立して選択される１またはそれ
以上の置換基で任意に置換されていてもよい脂肪族またはヘテロ脂肪族環，およ
びアルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミ
ノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１またはそ
れ以上の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香族環； からなる群より選択され； （ｂ）Ｒ32，Ｒ33およびＲ34は，それぞれ独立して， （ｉ）水素； （ｉｉ）ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，エス
テルおよび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ
脂肪族環成分からなる群より選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換
されていてもよい飽和または不飽和のアルキル， ここで環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，ア
ミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１または
それ以上の置換基で任意に置換されていてもよく； （ｉｉｉ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレー
ト，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１
またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香
族環； （ｉｖ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート
，アミノ，ニトロ，エステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以
上の置換基で任意に置換されていてもよい脂肪族またはヘテロ脂肪族環，および
アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ
，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１またはそれ
以上の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香族環； （ｖ）式−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン（式中，Ｘ1は，飽和または不飽和のア
ルキル，および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，または脂肪族環成
分からなる群より選択され，ｎ1は０または１であり，Ｘ2およびＸ3は，独立し
て，水素，飽和または不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳香族，
ヘテロ芳香族，または脂肪族環成分からなる群より選択される）； （ｖｉ）式−ＮＯ2のニトロ； （ｖｉｉ）ハロゲンまたはトリハロメチル； （ｖｉｉｉ）式−（Ｘ4）n4−ＣＯ−Ｘ5のケトン（式中，Ｘ4およびＸ5は，独立
して，アルキルおよび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，ま
たはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成分は，ア
ルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およ
びエステル成分からなる群より独立して選択される１，２または３個の置換基で
任意に置換されていてもよく，ｎ4は０または１である）； （ｉｘ）式−（Ｘ6）n6−ＣＯＯＨのカルボン酸または式−（Ｘ7）n7−ＣＯＯ−
Ｘ8のエステル（式中，Ｘ6，Ｘ7およびＸ8は，独立して，アルキルおよび５員環
または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分から
なる群より選択され，ｎ6およびｎ7は，独立して，０または１である）； （ｘ）式−（Ｘ9）n9−ＯＨのアルコールまたは式−（Ｘ10）n10−Ｏ−Ｘ11のア
ルコキシアルキル成分（式中，Ｘ9，Ｘ10およびＸ11は，独立して，飽和または
不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族
，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成分は
，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，
およびエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で
任意に置換されていてもよく，およびｎ9およびｎ10は，独立して，０または１
である）； （ｘｉ）式−（Ｘ12）n12−ＮＨＣＯＸ13または式−（Ｘ14）n14−ＣＯＮＸ15Ｘ 16 のアミド（式中，Ｘ12およびＸ14は，それぞれ独立して，アルキル，ヒドロキ
シル，および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテ
ロ脂肪族環成分からなる群より選択され，環は，アルキル，ハロゲン，トリハロ
メチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独
立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，お
よびｎ12およびｎ14は，独立して，０または１であり，Ｘ13，Ｘ15およびＸ16は
，それぞれ独立して，水素，アルキル，ヒドロキシル，および５員環または６員
環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より
選択され，環は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，ア
ミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ
以上の置換基で任意に置換されていてもよい）； （ｘｉｉ）式−（Ｘ17）n17−ＳＯ2ＮＸ18Ｘ19のスルホンアミド（式中，Ｘ17は
，アルキル，および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，また
はヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成分は，アル
キル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，および
エステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に
置換されていてもよく，ｎ17は０，１または２であり，Ｘ18およびＸ19は，独立
して，水素，アルキル，および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂
肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成
分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニト
ロ，およびエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換
基で任意に置換されていてもよく，またはＸ18およびＸ19は，一緒になって，ア
ルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およ
びエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意
に置換されていてもよい５員環または６員環の脂肪族またはヘテロ脂肪族環を形
成してもよい）； （ｘｉｉｉ）式−（Ｘ20）n20−ＣＯ−Ｈのアルデヒド（式中，Ｘ20は，飽和ま
たは不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂
肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成
分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニト
ロ，およびエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換
基で任意に置換されていてもよく，およびｎ20は０または１である）； （ｘｉｖ）式−（Ｘ21）n21−ＳＯ2−Ｘ22のスルホン（式中，Ｘ21およびＸ22は
，独立して，飽和または不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳香族
，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され，
アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレ
ート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される１ま
たはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，ｎ21は０または１である
）；および （ｘｖ）式−（Ｘ23）n23−ＳＨのチオールまたは式（Ｘ24）n24−Ｓ−Ｘ25のチ
オエーテル（式中，Ｘ23，Ｘ24およびＸ25は，独立して，飽和または不飽和のア
ルキル，および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘ
テロ脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成分は，アルキル
，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエス
テルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換
されていてもよく，およびｎ23およびｎ24は，独立して，０または１である）； からなる群より選択され； またはＲ33およびＲ34は，一緒になって，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル
，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して
選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよい６員環脂肪
族または芳香族環を形成してもよく；および （ｃ）Ｒ28，Ｒ29，Ｒ30およびＲ31は，それぞれ独立して （ｉ）水素； （ｉｉ）ヒドロキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，
ニトロ，エステルおよび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，
またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択される１またはそれ以上の置換基
で任意に置換されていてもよい飽和または不飽和のアルキル， ここで，環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，
アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１また
はそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく； （ｉｉｉ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレー
ト，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１
またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香
族環； （ｉｖ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート
，アミノ，ニトロ，エステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以
上の置換基で任意に置換されていてもよい脂肪族またはヘテロ脂肪族環，および
アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ
，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１またはそれ
以上の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香族環； （ｖ）式−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン（式中，Ｘ1は，飽和または不飽和のア
ルキル，および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，または脂肪族環成
分からなる群より選択され，ｎ1は０または１であり，およびＸ2およびＸ3は，
独立して，水素，飽和または不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳
香族，ヘテロ芳香族，または脂肪族環成分からなる群より選択される）； （ｖｉ）式−ＮＯ2のニトロ； （ｖｉｉ）ハロゲンまたはトリハロメチル； （ｖｉｉｉ）式−（Ｘ4）n4−ＣＯ−Ｘ5のケトン（式中，Ｘ4およびＸ5は，独立
して，アルキルおよび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，ま
たはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成分は，ア
ルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およ
びエステル成分からなる群より独立して選択される１，２または３個の置換基で
任意に置換されていてもよく，およびｎ4は０または１である）； （ｉｘ）式−（Ｘ6）n6−ＣＯＯＨのカルボン酸または式−（Ｘ7）n7−ＣＯＯ−
Ｘ8のエステル（式中，Ｘ6，Ｘ7およびＸ8は，独立して，アルキルおよび５員環
または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分から
なる群より選択され，ｎ6およびｎ7は，独立して，０または１である）； （ｘ）式−（Ｘ9）n9−ＯＨのアルコールまたは式−（Ｘ10）n10−Ｏ−Ｘ11のア
ルコキシアルキル成分（式中，Ｘ9，Ｘ10およびＸ11は，独立して，飽和または
不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族
，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成分は
，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，
およびエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で
任意に置換されていてもよく，ｎ9およびｎ10は，独立して，０または１である
）； （ｘｉ）式−（Ｘ12）n12−ＮＨＣＯＸ13または式−（Ｘ14）n14−ＣＯＮＸ15Ｘ 16 のアミド（式中，Ｘ12およびＸ14は，それぞれ独立して，アルキル，ヒドロキ
シル，および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテ
ロ脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成分は，アルキル，
ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエステ
ルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換さ
れていてもよく，ｎ12およびｎ14は，独立して，０または１であり，およびＸ13 ，Ｘ15およびＸ16は，それぞれ独立して，水素，アルキル，ヒドロキシル，およ
び５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環
成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，
トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる
群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていても
よい）； （ｘｉｉ）式−（Ｘ17）n17−ＳＯ2Ｘ18Ｘ19のスルホンアミド（式中，Ｘ17は，
アルキル，５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ
脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成分は，アルキル，ハ
ロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエステル
からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換され
ていてもよく，およびｎ17は０，１，または２であり，およびＸ18およびＸ19は
，独立して，水素，アルキル，５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂
肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成
分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニト
ロ，およびエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換
基で任意に置換されていてもよく，またはＸ18およびＸ19は，一緒になって，ア
ルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およ
びエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意
に置換されていてもよい５員環または６員環の脂肪族またはヘテロ脂肪族環を形
成してもよい）； （ｘｉｉｉ）式−（Ｘ20）n20−ＣＯ−Ｈのアルデヒド（式中，Ｘ20は，飽和ま
たは不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂
肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成
分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニト
ロ，およびエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換
基で任意に置換されていてもよく，およびｎ20は０または１である）； （ｘｉｖ）式−（Ｘ21）n21−ＳＯ2−Ｘ22のスルホン（式中，Ｘ21およびＸ22は
，独立して，飽和または不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳香族
，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され，
アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレ
ート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される１ま
たはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，およびｎ21は０または１
である）；および （ｘｖ）式−（Ｘ23）n23−ＳＨのチオールまたは式−（Ｘ24）n24−Ｓ−Ｘ25の
チオエーテル（式中，Ｘ23，Ｘ24およびＸ25は，独立して，飽和または不飽和の
アルキル，および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，または
ヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成分は，アルキ
ル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエ
ステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置
換されていてもよく，およびｎ23およびｎ24は，独立して，０または１である）
； からなる群より選択される。
【０１２１】 好ましい態様においては，本発明は，式ＩＩＩの化合物に関し， 式中， （ａ）Ｒ31は水素であり； （ｂ）Ｒ32，Ｒ33およびＲ34は，それぞれ独立して， （ｉ）水素； （ｉｉ）６員環ヘテロ脂肪族環成分で任意に置換されていてもよい飽和アルキル
； （ｉｉｉ）式−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン（式中，Ｘ1は飽和アルキルであり
，ｎ1は０または１であり，およびＸ2およびＸ3は，独立して，水素および飽和
アルキルからなる群より選択される）； （ｉｖ）式−（Ｘ6）n6−ＣＯＯＨのカルボン酸または式−（Ｘ7）n7−ＣＯＯ−
Ｘ8のエステル（式中，Ｘ6，Ｘ7およびＸ8はアルキルであり，およびｎ6および
ｎ7は，独立して，０または１である）；および （ｖ）式−（Ｘ14）n14−ＣＯＮＸ15Ｘ16のアミド（式中，Ｘ14はアルキルであ
り，ｎ12およびｎ14は，独立して，０または１であり，およびＸ15およびＸ16は
，それぞれ独立して，水素およびアルキルからなる群より選択される）； からなる群より選択され； またはＲ7は本明細書に記載されるとおりであり，かつＲ8およびＲ9は，一緒に
なって，任意に置換されていてもよい６員環脂肪族または芳香族環を形成しても
よく；および （ｃ）Ｒ28，Ｒ29およびＲ30は，それぞれ独立して， （ｉ）水素； （ｉｉ）飽和アルキル； （ｉｉｉ）ハロゲンまたはトリハロメチル； （ｉｖ）式−（Ｘ6）n6−ＣＯＯＨのカルボン酸または式−（Ｘ7）n7−ＣＯＯ−
Ｘ8のエステル（式中，Ｘ6，Ｘ7およびＸ8はアルキルであり，およびｎ6および
ｎ7は，独立して，０または１である）； （ｖ）式−（Ｘ9）n9−ＯＨのアルコールまたは式−（Ｘ10）n10−Ｏ−Ｘ11のア
ルコキシアルキル成分（式中，Ｘ9，Ｘ10およびＸ11はアルキルであり，および
ｎ9およびｎ10は，独立して，０または１である）； （ｖｉ）式−（Ｘ12）n12−ＮＨＣＯＸ13または式−（Ｘ14）n14−ＣＯＮＸ15Ｘ 16 のアミド（式中，Ｘ12およびＸ14はアルキルであり，ｎ12およびｎ14は，独立
して，０または１であり，およびＸ13，Ｘ15およびＸ16は，それぞれ独立して，
水素およびアルキルからなる群より選択される）；および （ｖｉｉ）式−（Ｘ17）n17−ＳＯ2ＮＸ18Ｘ19のスルホンアミド（式中，Ｘ17は
アルキルであり，およびｎ17は０，１，または２であり，およびＸ18およびＸ19 は，独立して，水素およびアルキルからなる群より選択される） からなる群より選択される。
【０１２２】 より好ましくは，式ＩＩＩの化合物において， （ａ）Ｒ28は，水素，メチル，および２−ヒドロキシエチルからなる群より選択
され； （ｂ）Ｒ29は，水素，メチル，クロロ，ブロモ，カルボキシ，メトキシ，−ＮＨ
Ｃ（Ｏ）−ＣＨ3および−ＳＯ2Ｎ（ＣＨ3）2からなる群より選択され； （ｃ）Ｒ30は，水素，クロロ，メトキシ，および−ＮＨＣ（Ｏ）−ＣＨ3からな
る群より選択され； （ｄ）Ｒ31は水素であり； （ｅ）Ｒ32は，水素，メチル，−ＣＨ2ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＨ，−ＣＨ2ＣＨ2Ｃ（Ｏ
）ＮＨ2，−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2Ｎ（ＣＨ3）2および３−モルホリノプロピルからな
る群より選択され； および （ｆ）Ｒ33およびＲ34は，それぞれ独立して，水素，メチル，−ＣＨ2ＣＨ2Ｃ（
Ｏ）ＯＨ，−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2Ｎ（ＣＨ3）2および３−モルホリノプロピルから
なる群より選択されるか，またはＲ8およびＲ9は，一緒になって，６員環芳香族
または脂肪族環を形成してもよい。
【０１２３】 本発明の好ましいジアリールインドリノン化合物は，好ましくは，ケトン化合
物とオキシインドール化合物との反応により形成される化合物である。ケトン化
合物は，好ましくは，
【０１２４】
【化１２】
【化１３】 からなる群より選択される。
【０１２５】 上述の構造において，Ｒ27は， （ｉ）ハロゲン，トリハロメチル，アルコキシ，カルボキシレート，アミノ，ニ
トロ，エステルおよび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，ま
たはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択される置換基で任意に置換されてい
てもよい飽和または不飽和のアルキル， ここで前記環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート
，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１，
２または３個の置換基で任意に置換されていてもよく；および （ｉｉ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート
，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１，
２または３個の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香族
環； （ｉｉｉ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレー
ト，アミノ，ニトロ，エステルからなる群より独立して選択される１またはそれ
以上の置換基で任意に置換されていてもよい脂肪族またはヘテロ脂肪族環，およ
びアルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミ
ノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１またはそ
れ以上の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香族環 からなる群より選択される。
【０１２６】 オキシインドール化合物は，好ましくは，１，３−ジヒドロ−インドール−２
−オン，４−メチル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−（２−ヒ
ドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，５−クロロ−
１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，５−ブロモ−１，３−ジヒドロ−イ
ンドール−２−オン，５−メトキシ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸，２−オ
キソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ジメチルアミド，
Ｎ−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル）−アセト
アミド，６−クロロ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，６−メトキシ
−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，およびＮ−（５−メチル−２−オ
キソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−イル）−アセトアミドからな
る群より選択される。
【０１２７】 Ｄ．４−置換インドリノン化合物 別の観点においては，本発明は，式ＩＶまたは式Ｖに記載される構造を有する
化合物を提供する：
【化１４】 ［式中， （ａ）Ｒ35，Ｒ36およびＲ41は，それぞれ独立して， （ｉ）水素； （ｉｉ）ハロゲン，トリハロメチル，アルコキシ，カルボキシレート，アミノ，
ニトロ，エステルおよび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，
またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択される置換基で任意に置換されて
いてもよい飽和または不飽和のアルキル， ここで，環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，
アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１，２
または３個の置換基で任意に置換されていてもよく；および （ｉｉｉ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレー
ト，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１
，２または３個の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香
族環； からなる群より選択され； （ｂ）Ｒ37は，式−ＣＨ2ＣＨ2−Ｏ−Ｒのエチル−２−オキシ基であり，式中，
Ｒは， （ｉ）水素； （ｉｉ）ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，エス
テルおよび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ
脂肪族環成分からなる群より選択される置換基で任意に置換されていてもよい飽
和または不飽和のアルキル， ここで，環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，
アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１，２
または３個の置換基で任意に置換されていてもよく； （ｉｉｉ）アルキル，アリール，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カル
ボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選
択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族または
ヘテロ芳香族環； （ｉｖ）式−Ｃ（Ｅ）ＮＸ15Ｘ16の置換基（式中，Ｘ15およびＸ16は，それぞれ
独立して，水素，アルキル，ヒドロキシル，式−ＳＯ2−Ｘ22のスルホン，およ
び５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環
成分からなる群より選択され，環は，アルキル，アリール，ハロゲン，トリハロ
メチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独
立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく； Ｘ22は，飽和または不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳香族，ヘ
テロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され，環は
，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，
およびエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で
任意に置換されていてもよく，Ｅは，酸素およびイオウからなる群より選択され
る； からなる群より選択され；および （ｃ）Ｒ38，Ｒ39およびＲ40はそれぞれ水素であり； （ｄ）Ｚは，５，６，７，８，９，または１０員環の，単環式または二環式の芳
香族またはヘテロ芳香族環成分であって， （ｉ）水素； （ｉｉ）ヒドロキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，
ニトロ，エステルおよび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，
またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択される１またはそれ以上の置換基
で任意に置換されていてもよい飽和または不飽和のアルキル， ここで，環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，
アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１また
はそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく； （ｉｉｉ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレー
ト，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１
またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香
族環； （ｉｖ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート
，アミノ，ニトロ，エステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以
上の置換基で任意に置換されていてもよい脂肪族またはヘテロ脂肪族環，および
アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ
，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１またはそれ
以上の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香族環； （ｖ）式−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン（式中，Ｘ1は，飽和または不飽和のア
ルキル，および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，または脂肪族環成
分からなる群より選択され，ｎ1は０または１であり，およびＸ2およびＸ3は，
独立して，水素，飽和または不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳
香族，ヘテロ芳香族，または脂肪族環成分からなる群より選択される）； （ｖｉ）式−ＮＯ2のニトロ； （ｖｉｉ）ハロゲンまたはトリハロメチル； （ｖｉｉｉ）式−（Ｘ4）n4−ＣＯ−Ｘ5のケトン（式中，Ｘ4およびＸ5は，独立
して，アルキルおよび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，ま
たはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成分は，ア
ルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およ
びエステル成分からなる群より独立して選択される１，２または３個の置換基で
任意に置換されていてもよく，およびｎ4は０または１である）； （ｉｘ）式−（Ｘ6）n6−ＣＯＯＨのカルボン酸または式（Ｘ7）n7−ＣＯＯ−Ｘ 8 のエステル（式中，Ｘ6，Ｘ7およびＸ8は，独立して，アルキルおよび５員環ま
たは６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からな
る群より選択され，ｎ6およびｎ7は，独立して，０または１である）； （ｘ）式−（Ｘ9）n9−ＯＨのアルコールまたは式−（Ｘ10）n10−Ｏ−Ｘ11のア
ルコキシアルキル成分（式中，Ｘ9，Ｘ10およびＸ11は，独立して，飽和または
不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族
，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成分は
，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，
およびエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で
任意に置換されていてもよく，およびｎ9およびｎ10は，独立して，０または１
である）； （ｘｉ）式−（Ｘ12）n12−ＮＨＣＯＸ13または式−（Ｘ14）n14−ＣＯＮＸ15Ｘ 16 のアミド（式中，Ｘ12およびＸ14は，それぞれ独立して，アルキル，ヒドロキ
シル，および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテ
ロ脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成分は，アルキル，
ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエステ
ルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換さ
れていてもよく，ｎ12およびｎ14は，独立して，０または１であり，およびＸ13 ，Ｘ15およびＸ16は，それぞれ独立して，水素，アルキル，ヒドロキシル，およ
び５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環
成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，
トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる
群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていても
よい）； （ｘｉｉ）式−（Ｘ17）n17−ＳＯ2ＮＸ18Ｘ19のスルホンアミド（式中，Ｘ17は
，アルキル，５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテ
ロ脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成分は，アルキル，
ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，またはエステ
ルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換さ
れていてもよく，およびｎ17は０，１，または２であり，およびＸ18およびＸ19 は，独立して，水素，アルキル，５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，
脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環
成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニ
トロ，またはエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置
換基で任意に置換されていてもよく，またはＸ18およびＸ19は，一緒になって，
アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，お
よびエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任
意に置換されていてもよい５員環または６員環の脂肪族またはヘテロ脂肪族環を
形成してもよい）； （ｘｉｉｉ）式−（Ｘ20）n20−ＣＯ−Ｈのアルデヒド（式中，Ｘ20は，飽和ま
たは不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂
肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成
分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニト
ロ，およびエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換
基で任意に置換されていてもよく，およびｎ20は０または１である）； （ｘｉｖ）式−（Ｘ21）n21−ＳＯ2−Ｘ22のスルホン（式中，Ｘ21およびＸ22は
，独立して，飽和または不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳香族
，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され，
アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレ
ート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される１ま
たはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもく，およびｎ21は０または１で
ある）；および （ｘｖ）式−（Ｘ23）n23−ＳＨのチオールおよび式−（Ｘ24）n24−Ｓ−Ｘ25の
チオエーテル（式中，Ｘ23，Ｘ24およびＸ25は，独立して，飽和または不飽和の
アルキル，および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，または
ヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され，アルキルおよび環成分は，アルキ
ル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエ
ステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置
換されていてもよく，およびｎ23およびｎ24は，独立して，０または１である）
からなる群より選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていても
よい。
【０１２８】 好ましい態様においては，本発明は，式ＩＶまたは式Ｖの化合物に関し，式中
， （ａ）Ｒ35，Ｒ36およびＲ41は水素であり； （ｂ）Ｒ37は式−ＣＨ2ＣＨ2−Ｏ−Ｒのエチル−２−オキシ基（式中，Ｒは，水
素，飽和アルキル，および，アルキル，アリール，およびアルコキシ成分からな
る群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていて
もよい芳香族環，および式−Ｃ（Ｅ）ＮＨＸ15の置換基（式中，Ｘ15は，アルキ
ル，式−ＳＯ2−Ｘ22のスルホンおよび６員環芳香族または脂肪族環成分からな
る群より選択され，環は，アルキルおよびアリールからなる群より独立して選択
される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，Ｘ22は，飽和
アルキル，および任意に置換されていてもよい６員環芳香族環成分からなる群よ
り選択され，およびＥは，酸素およびイオウからなる群より選択される）；から
なる群より選択され，および （ｃ）Ｚは，５，６，または９員環の単環式または二環式の芳香族またはヘテロ
芳香族であり，環成分は， （ｉ）水素； （ｉｉ）飽和アルキル； （ｉｉｉ）任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香族環； （ｉｖ）式−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン（式中，Ｘ1はアルキルであり，ｎ1
は０または１であり，およびＸ2およびＸ3は，独立して，水素および飽和アルキ
ルからなる群より選択される）； （ｖ）ハロゲンまたはトリハロメチル； （ｖｉ）−（Ｘ6）n6−ＣＯＯＨのカルボン酸（式中，Ｘ6はアルキルであり，ｎ 6 は０または１である）；および （ｖｉｉ）式−（Ｘ9）n9−ＯＨのアルコールまたは式−（Ｘ10）n10−Ｏ−Ｘ11 のアルコキシアルキル成分（式中，Ｘ9，Ｘ10およびＸ11はアルキルであり，ｎ9 およびｎ10は，独立して，０または１である） からなる群より選択される，１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていて
もよい。
【０１２９】 より好ましくは，式ＩＶまたは式Ｖの化合物において，Ｒ37は，式−ＣＨ2Ｃ
Ｈ2−Ｏ−Ｒのエチル−２−オキシ基（式中，Ｒは，水素，メチル，エチル，２
−イソプロピルフェニル，３−イソプロピルフェニル，４−イソプロピルフェニ
ル，４−メトキシフェニル，ビフェン−３−イル，５−クロロピリジン−３−イ
ル，エチルカルバミル，ｔｅｒｔ−ブチルカルバミル，シクロヘキシルカルバミ
ル，フェニルカルバミル，ベンゼンスルホニルカルバミル，ビフェン−２−イル
−カルバミル，およびフェニルチオカルバミルからなる群より選択され，および
Ｚは，４−ブロモフェニル，２−ピリジル，６−メチル−２−ピリジル，１Ｈ−
インドール−５−イル，４−メトキシ−３−チオフェンフェニル，４−（３−ジ
メチルアミノ）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル，３−ヒドロキ
シ−６−メチル−ピリジン−２−イル，４−（３−ジメチルアミノプロピル）−
３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル，３−カルボキシ−２，４−ジメ
チル−１Ｈ−ピロール−２−イル，およびイソプロピルカルバミルからなる群よ
り選択される）である。
【０１３０】 本発明の好ましい化合物を表１に挙げる。 表１
【表１】
【表２】
【０１３１】 上述の化合物のいくつかは，式ＶＩ：
【化１５】 の構造を有し，ここで，Ｒ置換基は表２に記載される。 表２
【表３】
【表４】
【０１３２】 本発明の別の化合物は，式ＶＩＩ：
【化１６】 に記載される構造を有し，ここで，置換基は表３に記載される。 表３
【表５】
【０１３３】ＩＩＩ．コンビナトリアルライブラリおよび合成方法 Ａ．合成方法の一般的注意 本発明の化合物を合成するためには，塩基を用いることができる。塩基は，好
ましくは，窒素塩基または無機塩基である。"窒素塩基"は，当該技術分野におい
て一般に用いられ，非環状および環状アミンから選択される。窒素塩基の例には
，限定されないが，アンモニア，メチルアミン，トリメチルアミン，トリエチル
アミン，アニリン，１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデセ−７−エン
，ジイソプロピルエチルアミン，ピロリジン，ピペリジン，およびピリジンまた
は置換ピリジン（例えば，２，６−ジ−ｔｅｒｔブチルピリジン）が含まれる。
"無機塩基"とは，炭素原子を含まない塩基である。無機塩基の例には，限定され
ないが，水酸化物，リン酸塩，亜硫酸塩，水硫化物，およびアミドアニオンが含
まれる。当業者には，いずれの窒素塩基または無機塩基が所望の反応条件の要求
に適合するかが明らかである。本発明のある態様においては，用いる塩基は，ピ
ロリジンまたはピペリジンでありうる。別の態様においては，塩基は水酸アニオ
ンであってもよく，好ましくは，そのナトリウムまたはカリウム塩として用いら
れる。
【０１３４】 本発明の化合物の合成は，溶媒中で実施することができる。反応の溶媒は，好
ましくは，プロトン性溶媒または非プロトン性溶媒である。"プロトン性溶媒"と
は，溶質にプロトンを与えることができる溶媒である。プロトン性溶媒の例には
，限定されないが，アルコールおよび水が含まれる。"非プロトン性溶媒"とは，
通常の反応条件下で，溶質にプロトンを与えない溶媒である。典型的な有機溶媒
，例えば，ヘキサン，トルエン，ベンゼン，塩化メチレン，ジメチルホルムアミ
ド，クロロホルム，テトラヒドロフランは，プロトン性溶媒のいくつかの例であ
る。他の非プロトン性溶媒もまた，本発明において用いられる範囲に含まれる。
ある好ましい態様においては，反応の溶媒はアルコールであり，これは好ましく
は，イソプロパノールであってもよく，最も好ましくはエタノールである。水は
別の好ましいプロトン性溶媒である。化学の技術分野においてＤＭＦとして知ら
れるジメチルホルムアミドは，好ましい非プロトン性溶媒である。
【０１３５】 本発明の合成方法では，反応が高温，すなわち室温より高い温度で行われるこ
とが必要である。より好ましくは，高温は好ましくは約３０−１５０℃であり，
より好ましくは約８０−１００℃であり，最も好ましくはエタノールが沸騰する
温度である約８０−９０℃である（すなわち，エタノールの沸点）。ある温度に
ついて"約"とは，温度範囲が，好ましくは挙げられる温度の１０℃の範囲内，よ
り好ましくは，挙げられる温度の５℃の範囲内，最も好ましくは，挙げられる温
度の２℃の範囲内であることを意味する。したがって，例として，"約８０℃"と
は，温度範囲が好ましくは，８０±１０℃，より好ましくは，８０±５℃，最も
好ましくは，８０±２℃であることを意味する。
【０１３６】 本発明の合成方法には，所望の活性および構造の化合物についてライブラリを
スクリーニングする工程が付随することができる。すなわち，最初に所望の特性
を有する化合物をスクリーニングし，次に化学的にその化合物を合成することに
より，化合物を合成する方法を提供する。
【０１３７】 Ｂ．３−アリーリデニル−６−ヘテロシクリル−２−インドリノン誘導体 本発明の別の観点は，構造２のオキシインドールを構造３のアルデヒドと縮合
させることにより形成することができる，少なくとも１０個の３−アリーリデニ
ル−６−ヘテロシクリル−２−インドリノン化合物のコンビナトリアルライブラ
リである。
【０１３８】 本明細書において用いられる場合，"縮合する"または"縮合"とは，２つの分子
が一緒になって１つの分子を与える反応を表す。特に，本発明に関しては，縮合
とは，スキームＩに示される反応を表す。 スキームＩ
【化１７】
【０１３９】 上述のコンビナトリアルライブラリ中のオキシインドールは，好ましくは，６
−（ピリジン−２−イル）−２−オキシインドール，６−（ピリジン−３−イル
）−２−オキシインドール，６−（ピリジン−４−イル）−２−オキシインドー
ル，６−（ピリミジン−２−イル）−２−オキシインドール，６−（ピリミジン
−４−イル）−２−オキシインドール，６−（ピリミジン−５−イル）−２−オ
キシインドール，６−（トリアジニル）−２−オキシインドール，６−（ピロー
ル−２−イル）−２−オキシインドール，６−（ピロール−３−イル）−２−オ
キシインドール，６−（チオフェン−２−イル）−２−オキシインドール，６−
（チオフェン−３−イル）−２−オキシインドール，６−（フラン−２−イル）
−２−オキシインドール，６−（フラン−３−イル）−２−オキシインドール，
６−（イミダゾール−２−イル）−２−オキシインドール，６−（イミダゾール
−４−イル）−２−オキシインドール，６−（チアゾール−２−イル）−２−オ
キシインドール，６−（チアゾール−４−イル）−２−オキシインドール，６−
（オキサゾール−２−イル）−２−オキシインドール，６−（オキサゾール−４
−イル）−２−オキシインドール，６−（チアジアゾール−２−イル）−２−オ
キシインドール，６−（オキサジアゾリル）−２−オキシインドールおよび６−
（トリアゾール−２−イル）−２−オキシインドール，６−（３−メチルイソオ
キサゾール−５−イル）−２−オキシインドール，６−（３−メチルイソチアゾ
ール−５−イル）−２−オキシインドール，６−（３，５−ジメチル−イソオキ
サゾール−４−イル）−２−オキシインドール，６−（チアゾール−２−イル）
−２−オキシインドール，６−（チアゾール−４−イル）−２−オキシインドー
ル，６−（チアゾール−５−イル）−２−オキシインドール，６−（３−メチル
チオフェン−２−イル）−２−オキシインドール，６−（４−メチルチオフェン
−２−イル）−２−オキシインドール，６−（５−メチルチオフェン−２−イル
）−２−オキシインドール，６−（５−クロロチオフェン−２−イル）−２−オ
キシインドール，６−（４−メチルフラン−２−イル）−２−オキシインドール
からなる群より選択される。
【０１４０】 上述のコンビナトリアルライブラリ中のアルデヒドは，好ましくは，限定され
るものではないが，ベンズアルデヒド，３−イソプロピル−ｐ−アニスアルデヒ
ド，２−メチル−５−イソプロピル−ｐ−アニスアルデヒド，３，５−ジイソプ
ロピル−ｐ−アニスアルデヒド，３−シクロペンチル−ｐ−アニスアルデヒド，
３−シクロヘキシル−ｐ−アニスアルデヒド，３−フェニル−ｐ−アニスアルデ
ヒド，３，５−ジメチル−ｐ−アニスアルデヒド，２−ヒドロキシ−３，５−ジ
クロロベンズアルデヒド，２−ヒドロキシ−５−クロロベンズアルデヒド，２−
ヒドロキシ−４−メトキシ−５−（４−メトキシフェニル）ベンズアルデヒド，
３−シクロペンチル−４−メトキシベンズアルデヒド，３−シクロペンチル−４
−ヒドロキシベンズアルデヒド，３−（２−チエニル）−４−メトキシベンズア
ルデヒド，２−ヒドロキシベンズアルデヒド，２−ヒドロキシ−４−メトキシベ
ンズアルデヒド，２−ヒドロキシ−５−ブロモベンズアルデヒド，２−メチルピ
リジン−６−カルボキシアルデヒド，３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−
５−ブロモベンズアルデヒド，３−ブロモベンズアルデヒド，３，５−ジイソプ
ロピル−４−［２−（Ｎ−モルホリノ）エチル］ベンズアルデヒド，インドール
−５−カルボキシアルデヒド，２−ヒドロキシ−３−フルオロベンズアルデヒド
，３−シクロヘキシル−４−［２−（Ｎ−モルホリノ）エチル］ベンズアルデヒ
ド，３−（３−チエニル）−４−メトキシベンズアルデヒド，２−メチル−５−
イソプロピル−４−メトキシ−ベンズアルデヒド，２，３−ジヒドロベンゾフラ
ン−５−カルボキシアルデヒド，２，２−ジメチルクロマン−６−カルボキシア
ルデヒド，３−（チオフェン−３−イル）−４−メトキシベンズアルデヒド，３
−（３−アセチルアミノフェニル）−４−メトキシ−ベンズアルデヒド，２−ナ
フチル−４，５−ジメトキシベンズアルデヒド，２−（３−メトキシフェニル）
−４，５−ジメトキシベンズアルデヒド，３−（ピリジン−３−イル）−ｐ−ア
ニスアルデヒド，２−（３−エトキシフェニル）−４，５−ジメトキシベンズア
ルデヒド，３−イソプロピル−４−［２−（Ｎ−モルホリノ）エトキシ］ベンズ
アルデヒド，３，５−ジイソプロピル−４−［２−（Ｎ−モルホリノ）エトキシ
］ベンズアルデヒド，２−（２−メトキシフェニル）−４，５−ジメトキシベン
ズアルデヒド，３−（３−エトキシフェニル）−ｐ−アニスアルデヒド，３−（
チオフェン−２−イル）−４−［２−（Ｎ−モルホリノ）エトキシ］−ベンズア
ルデヒド，２−（チオフェン−２−イル）−４，５−ジメトキシベンズアルデヒ
ド，２，４−ジメチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］−ピロール−５−
カルボキシアルデヒド，２，４−ジメチル−３−［３−カルボキシプロピル］−
ピロール−５−カルボキシアルデヒド，２，４−ジメチル−３−［３−（Ｎ−モ
ルホリノ）プロポ−１−イル］−ピロール−５−カルボキシアルデヒド，２，４
−ジメチル−３−［２−ジメチルアミノエチル］−ピロール−５−カルボキシア
ルデヒド，２，４−ジメチル−３−［２−カルボキシエチル］−ピロール−５−
カルボキシアルデヒドおよび２，４−ジメチル−３−［２−（Ｎ−モルホリノ）
プロピル］−ピロール−５−カルボキシアルデヒド，３−イソプロピル−４−［
２−（Ｎ−モルホリノ）プロポキシ］ベンズアルデヒド，３，５−ジイソプロピ
ル−４−［２−（Ｎ−モルホリノ）プロポキシ］ベンズアルデヒド，３−（チオ
フェン−２−イル）−４−［２−Ｎ−モルホリノ）プロポキシ］ベンズアルデヒ
ドからなる群より選択される。
【０１４１】 本発明の別の観点は，溶媒中で，好ましくは塩基の存在下で，式２のオキシイ
ンドールを式３のアルデヒドと縮合させることを含む，式Ｉの３−アリーリデニ
ル−６−ヘテロシクリル−２−インドリノンを合成する方法を提供する。
【０１４２】 式３のアルデヒドと縮合させて式Ｉの３−アリーリデニル−６−ヘテロシクリ
ル−２−インドリノンを得ることができる式２のオキシインドールの例は，６−
（ピリジン−２−イル）−２−オキシインドール，６−（ピリジン−３−イル）
−２−オキシインドール，６−（ピリジン−４−イル）−２−オキシインドール
，６−（ピリミジン−２−イル）−２−オキシインドール，６−（ピリミジン−
４−イル）−２−オキシインドール，６−（ピリミジン−５−イル）−２−オキ
シインドール，６−（トリアジニル）−２−オキシインドール，６−（ピロール
−２−イル）−２−オキシインドール，６−（ピロール−３−イル）−２−オキ
シインドール，６−（チオフェン−２−ｙｌ）−２−オキシインドール，６−（
チオフェン−３−イル）−２−オキシインドール，６−（フラン−２−イル）−
２−オキシインドール，６−（フラン−３−イル）−２−オキシインドール，６
−（イミダゾール−２−イル）−２−オキシインドール，６−（イミダゾール−
４−イル）−２−オキシインドール，６−（チアゾール−２−イル）−２−オキ
シインドール，６−（チアゾール−４−イル）−２−オキシインドール，６−（
オキサゾール−２−イル）−２−オキシインドール，６−（オキサゾール−４−
イル）−２−オキシインドール，６−（チアジアゾール−２−イル）−２−オキ
シインドール，６−（オキサジアゾール−２−イル）−２−オキシインドールお
よび６−（トリアゾール−２−イル）−２−オキシインドール，６−（３−メチ
ルイソオキサゾール−５−イル）−２−オキシインドール，６−（３−メチルイ
ソチアゾール−５−イル）−２−オキシインドール，６−（３，５−ジメチル−
イソオキサゾール−４−イル）−２−オキシインドール，６−（チアゾール−２
−イル）−２−オキシインドール，６−（チアゾール−４−イル）−２−オキシ
インドール，６−（チアゾール−５−イル）−２−オキシインドール，６−（３
−メチルチオフェン−２−イル）−２−オキシインドール，６−（４−メチルチ
オフェン−２−イル）−２−オキシインドール，６−（５−メチルチオフェン−
２−イル）−２−オキシインドール，６−（５−クロロチオフェン−２−イル）
−２−オキシインドール，６−（４−メチルフラン−２−イル）−２−オキシイ
ンドールである。
【０１４３】 構造２のオキシインドールと縮合させて本発明の化合物を得ることができる構
造３のアルデヒドの例は，限定されるものではないが，ベンズアルデヒド，３−
イソプロピル−ｐ−アニスアルデヒド，２−メチル−５−イソプロピル−ｐ−ア
ニスアルデヒド，３，５−ジイソプロピル−ｐ−アニスアルデヒド，３−シクロ
ペンチル−ｐ−アニスアルデヒド，３−シクロヘキシル−ｐ−アニスアルデヒド
，３−フェニル−ｐ−アニスアルデヒド，３，５−ジメチル−ｐ−アニスアルデ
ヒド，２−ヒドロキシ−３，５−ジクロロベンズアルデヒド，２−ヒドロキシ−
５−クロロベンズアルデヒド，２−ヒドロキシ−４−メトキシ−５−（４−メト
キシフェニル）ベンズアルデヒド，３−シクロペンチル−４−メトキシベンズア
ルデヒド，３−シクロペンチル−４−ヒドロキシベンズアルデヒド，３−（２−
チエニル）−４−メトキシベンズアルデヒド，２−ヒドロキシベンズアルデヒド
，２−ヒドロキシ−４−メトキシベンズアルデヒド，２−ヒドロキシ−５−ブロ
モベンズアルデヒド，２−メチルピリジン−６−カルボキシアルデヒド，３−ｔ
ｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−５−ブロモベンズアルデヒド，３−ブロモベ
ンズアルデヒド，３，５−ジイソプロピル−４−［２−（Ｎ−モルホリノ）エチ
ル］ベンズアルデヒド，インドール−５−カルボキシアルデヒド，２−ヒドロキ
シ−３−フルオロベンズアルデヒド，３−シクロヘキシル−４−［２−（Ｎ−モ
ルホリノ）エチル］ベンズアルデヒド，３−（３−チエニル）−４−メトキシベ
ンズアルデヒド，２−メチル−５−イソプロピル−４−メトキシ−ベンズアルデ
ヒド，２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−カルボキシアルデヒド，２，２−ジ
メチルクロマン−６−カルボキシアルデヒド，３−（チオフェン−３−イル）−
４−メトキシベンズアルデヒド，３−（３−アセチルアミノフェニル）−４−メ
トキシ−ベンズアルデヒド，２−ナフチル−４，５−ジメトキシベンズアルデヒ
ド，２−（３−メトキシフェニル）−４，５−ジメトキシベンズアルデヒド，３
−（ピリジン−３−イル）−ｐ−アニスアルデヒド，２−（３−エトキシフェニ
ル）−４，５−ジメトキシベンズアルデヒド，３−イソプロピル−４−［２−（
Ｎ−モルホリノ）エトキシ］ベンズアルデヒド，３，５−ジイソプロピル−４−
［２−（Ｎ−モルホリノ）エトキシ］ベンズアルデヒド，２−（２−メトキシフ
ェニル）−４，５−ジメトキシベンズアルデヒド，３−（３−エトキシフェニル
）−ｐ−アニスアルデヒド，３−（チオフェン−２−イル）−４−［２−（Ｎ−
モルホリノ）エトキシ］−ベンズアルデヒド，２−（チオフェン−２−イル）−
４，５−ジメトキシベンズアルデヒド，２，４−ジメチル−３−［３−ジメチル
アミノプロピル］−ピロール−５−カルボキシアルデヒド，２，４−ジメチル−
３−［３−カルボキシプロピル］−ピロール−５−カルボキシアルデヒド，２，
４−ジメチル−３−［３−（Ｎ−モルホリノ）プロピル］−ピロール−５−カル
ボキシアルデヒド，２，４−ジメチル−３−［２−ジメチルアミノエチル］−ピ
ロール−５−カルボキシアルデヒド，２，４−ジメチル−３−［２−カルボキシ
エチル］−ピロール−５−カルボキシアルデヒドおよび２，４−ジメチル−３−
［２−（Ｎ−モルホリノ）エチル］プロピル−１−イル］−ピロール−５−カル
ボキシアルデヒド，３−イソプロピル−４−［２−（Ｎ−モルホリノ）プロポキ
シ］ベンズアルデヒド，３，５−ジイソプロピル−４−［２−（Ｎ−モルホリノ
）プロポキシ］ベンズアルデヒド，３−（チオフェン−２−イル）−４−［２−
Ｎ−モルホリノ）プロポキシ］ベンズアルデヒドである。
【０１４４】 Ｃ．３−アラルキル−２−インドリノン誘導体 本発明の別の観点は，構造４のオキシインドールを構造５のアルデヒドと縮合
させ，次に得られる３−アリーリデン−２−オキシインドールの３位の二重結合
を還元することにより形成することができる，少なくとも１０個の３−アラルキ
ル−２−インドリノン化合物のコンビナトリアルライブラリである。特に，縮合
とは，スキームＩＩ中の反応"Ａ"を表す。化合物４は，上述の"３−アリーリデ
ン−２−オキシインドール"である。
【０１４５】 本明細書において用いられる場合，"還元する"とは，化合物６の３位の二重結
合に水素を付加して（反応"Ｂ"），スキームＩＩ中の化合物ＩＩを得ることを表
す。 スキームＩＩ
【化１８】
【０１４６】 上述のコンビナトリアルライブラリ中のオキシインドールは，好ましくは，オ
キシインドールそれ自体，および置換オキシインドール，例えば，限定されない
が，５−フルオロオキシインドール，６−フルオロオキシインドール，７−フル
オロオキシインドール，６−トリフルオロメチルオキシインドール，５−クロロ
オキシインドール，６−クロロオキシインドール，インドール−４−カルボン酸
，５−ブロモオキシインドール，６−（アセトアミド）−オキシインドール，４
−メチルオキシインドール，５−メチルオキシインドール，４−メチル−５−ク
ロロオキシインドール，５−エチルオキシインドール，６−ヒドロキシオキシイ
ンドール，６−（シクロペンチルカルボキシアミド）オキシインドール，５−ア
セチルオキシインドール，オキシインドール−５−カルボン酸，５−メトキシオ
キシインドール，６−メトキシオキシインドール，５−アミノオキシインドール
，６−アミノオキシインドール，４−［２−（Ｎ−モルホリノ）エチル］−オキ
シインドール，７−アザオキシインドール，オキシインドール−４−カルバミン
酸ｔ−ブチルエステル，オキシインドール−６−カルバミン酸ｔ−ブチルエステ
ル，４−（２−カルボキシエチル）オキシインドール，４−ｎ−ブチルオキシイ
ンドール，４，５−ジメトキシオキシインドール，６−（メタンスルホンアミド
）オキシインドール，６−（ベンズアミド）オキシインドール，５−エトキシオ
キシインドール，６−フェニルオキシインドール，４−（２−ヒドロキシエト−
１−イル）オキシインドール，６−（２−メトキシフェン−１−イル）オキシイ
ンドール，６−（３−メトキシフェン−１−イル）オキシインドールおよび６−
（４−メトキシフェン−１−イル）オキシインドールからなる群より選択される
。
【０１４７】 上述のコンビナトリアルライブラリにおけるアルデヒドは，好ましくは，限定
されないが，ベンズアルデヒドそれ自体，ならびに，３−イソプロピル−ｐ−ア
ニスアルデヒド，２−メチル−５−イソプロピル−ｐ−アニスアルデヒド，３，
５−ジイソプロピル−ｐ−アニスアルデヒド，３−シクロペンチル−ｐ−アニス
アルデヒド，３−シクロヘキシル−ｐ−アニスアルデヒド，３−フェニル−ｐ−
アニスアルデヒド，３，５−ジメチル−ｐ−アニスアルデヒド，２−ヒドロキシ
−３，５−ジクロロベンズアルデヒド，２−ヒドロキシ−５−クロロベンズアル
デヒド，２−ヒドロキシ−４−メトキシ−５−（４−メトキシフェニル）ベンズ
アルデヒド，３−シクロペンチル−４−メトキシベンズアルデヒド，３−シクロ
ペンチル−４−ヒドロキシベンズアルデヒド，３−（２−チエニル）−４−メト
キシベンズアルデヒド，２−ヒドロキシベンズアルデヒド，２−ヒドロキシ−４
−メトキシベンズアルデヒド，２−ヒドロキシ−５−ブロモベンズアルデヒド，
２−メチルピリジン−６−カルボキシアルデヒド，３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−
ヒドロキシ−５−ブロモベンズアルデヒド，３−ブロモベンズアルデヒド，３，
５−ジイソプロピル−４−［２−（Ｎ−モルホリノ）エチル］ベンズアルデヒド
，インドール−５−カルボキシアルデヒド，２−ヒドロキシ−３−フルオロベン
ズアルデヒド，３−シクロヘキシル−４−［２−（Ｎ−モルホリノ）エチル］ベ
ンズアルデヒド，３−（３−チエニル）−４−メトキシベンズアルデヒド，２−
メチル−５−イソプロピル−４−メトキシ−ベンズアルデヒド，２，３−ジヒド
ロベンゾフラン−５−カルボキシアルデヒド，２，２−ジメチルクロマン−６−
カルボキシアルデヒド，３−（チオフェン−３−イル）−４−メトキシベンズア
ルデヒド，３−（３−アセチルアミノフェニル）−４−メトキシ−ベンズアルデ
ヒド，２−ナフチル−４，５−ジメトキシベンズアルデヒド，２−（３−メトキ
シフェニル）−４，５−ジメトキシベンズアルデヒド，３−（ピリド−３−イル
）−ｐ−アニスアルデヒド，２−（３−エトキシフェニル）−４，５−ジメトキ
シベンズアルデヒド，３−イソプロピル−４−［２−（Ｎ−モルホリノ）エトキ
シ］ベンズアルデヒド，３，５−ジイソプロピル−４−［２−（Ｎ−モルホリノ
）エトキシ］ベンズアルデヒド，２−（２−メトキシフェニル）−４，５−ジメ
トキシベンズアルデヒド，３−（３−エトキシフェニル）−ｐ−アニスアルデヒ
ド，３−（チオフェン−２−イル）−４−［２−（Ｎ−モルホリノ）エトキシ］
−ベンズアルデヒド，２−（チオフェン−２−イル）−４，５−ジメトキシベン
ズアルデヒド，２，４−ジメチル−３−［３−ジメチルアミノプロポ−１−イル
］−ピロール−５−カルボキシアルデヒド，２，４−ジメチル−３−［３−カル
ボキシプロポ−１−イル］−ピロール−５−カルボキシアルデヒド，２，４−ジ
メチル−３−［３−（Ｎ−モルホリノ）プロポ−１−イル］−ピロール−５−カ
ルボキシアルデヒド，２，４−ジメチル−３−［２−ジメチルアミノエチル］−
ピロール−５−カルボキシアルデヒド，２，４−ジメチル−３−［２−カルボキ
シエチル］−ピロール−５−カルボキシアルデヒドおよび２，４−ジメチル−３
−［２−（Ｎ−モルホリノ）エチル］プロポ−１−イル］−ピロール−５−カル
ボキシアルデヒドからなる群より選択される。
【０１４８】 本発明の別の観点は，式ＩＩの３−アラルキル−２−インドリノンを合成する
方法を提供する。該方法は，式４のオキシインドールを，溶媒中で，好ましくは
，塩基の存在下で式５のアルデヒドと縮合させ，得られた３−アリーリデン−２
−オキシインドールを任意に単離し，次に３−アリーリデン−２−オキシインド
ールを還元することを含む。
【０１４９】 式５のアルデヒドと縮合し，生成物を還元して式ＩＩの３−アラルキル−２−
インドリノンを得ることができる式４のオキシインドールの例には，オキシイン
ドールそれ自体および置換オキシインドール，例えば，限定されないが，５−フ
ルオロオキシインドール，６−フルオロオキシインドール，７−フルオロオキシ
インドール，６−トリフルオロメチルオキシインドール，５−クロロオキシイン
ドール，６−クロロオキシインドール，インドール−４−カルボン酸，５−ブロ
モオキシインドール，６−（アセトアミド）−オキシインドール，４−メチルオ
キシインドール，５−メチルオキシインドール，４−メチル−５−クロロオキシ
インドール，５−エチルオキシインドール，６−ヒドロキシオキシインドール，
６−（シクロペンチルカルボキシアミド）オキシインドール，５−アセチルオキ
シインドール，オキシインドール−５−カルボン酸，５−メトキシオキシインド
ール，６−メトキシオキシインドール，５−アミノオキシインドール，６−アミ
ノオキシインドール，４−［２−（Ｎ−モルホリノ）エチル］−オキシインドー
ル，７−アザオキシインドール，オキシインドール−４−カルバミン酸ｔ−ブチ
ルエステル，オキシインドール−６−カルバミン酸ｔ−ブチルエステル，４−（
２−カルボキシエチル）オキシインドール，４−ｎ−ブチルオキシインドール，
４，５−ジメトキシオキシインドール，６−（メタンスルホンアミド）オキシイ
ンドール，６−（ベンズアミド）オキシインドール，５−エトキシオキシインド
ール，６−フェニルオキシインドール，４−（２−ヒドロキシエト−１−イル）
オキシインドール，６−（２−メトキシフェン−１−イル）オキシインドール，
６−（３−メトキシフェン−１−イル）オキシインドールおよび６−（４−メト
キシフェン−１−イル）オキシインドールが含まれる。
【０１５０】 構造４のオキシインドールと縮合して，その生成物を還元して本発明の化合物
を得ることができる構造３のアルデヒドの例には，限定されないが，ベンズアル
デヒドそれ自体，ならびに，３−イソプロピル−ｐ−アニスアルデヒド，２−メ
チル−５−イソプロピル−ｐ−アニスアルデヒド，３，５−ジイソプロピル−ｐ
−アニスアルデヒド，３−シクロペンチル−ｐ−アニスアルデヒド，３−シクロ
ヘキシル−ｐ−アニスアルデヒド，３−フェニル−ｐ−アニスアルデヒド，３，
５−ジメチル−ｐ−アニスアルデヒド，２−ヒドロキシ−３，５−ジクロロベン
ズアルデヒド，２−ヒドロキシ−５−クロロベンズアルデヒド，２−ヒドロキシ
−４−メトキシ−５−（４−メトキシフェニル）ベンズアルデヒド，３−シクロ
ペンチル−４−メトキシベンズアルデヒド，３−シクロペンチル−４−ヒドロキ
シベンズアルデヒド，３−（２−チエニル）−４−メトキシベンズアルデヒド，
２−ヒドロキシベンズアルデヒド，２−ヒドロキシ−４−メトキシベンズアルデ
ヒド，２−ヒドロキシ−５−ブロモベンズアルデヒド，２−メチルピリジン−６
−カルボキシアルデヒド，３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−５−ブロモ
ベンズアルデヒド，３−ブロモベンズアルデヒド，３，５−ジイソプロピル−４
−［２−（Ｎ−モルホリノ）エチル］ベンズアルデヒド，インドール−５−カル
ボキシアルデヒド，２−ヒドロキシ−３−フルオロベンズアルデヒド，３−シク
ロヘキシル−４−［２−（Ｎ−モルホリノ）エチル］ベンズアルデヒド，３−（
３−チエニル）−４−メトキシベンズアルデヒド，２−メチル−５−イソプロピ
ル−４−メトキシ−ベンズアルデヒド，２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−カ
ルボキシアルデヒド，２，２−ジメチルクロマン−６−カルボキシアルデヒド，
３−（チオフェン−３−イル）−４−メトキシベンズアルデヒド，３−（３−ア
セチルアミノフェニル）−４−メトキシ−ベンズアルデヒド，２−ナフチル−４
，５−ジメトキシベンズアルデヒド，２−（３−メトキシフェニル）−４，５−
ジメトキシベンズアルデヒド，３−（ピリド−３−イル）−ｐ−アニスアルデヒ
ド，２−（３−エトキシフェニル）−４，５−ジメトキシベンズアルデヒド，３
−イソプロピル−４−［２−（Ｎ−モルホリノ）エトキシ］ベンズアルデヒド，
３，５−ジイソプロピル−４−［２−（Ｎ−モルホリノ）エトキシ］ベンズアル
デヒド，２−（２−メトキシフェニル）−４，５−ジメトキシベンズアルデヒド
，３−（３−エトキシフェニル）−ｐ−アニスアルデヒド，３−（チオフェン−
２−イル）−４−［２−（Ｎ−モルホリノ）エトキシ］−ベンズアルデヒド，２
−（チオフェン−２−イル）−４，５−ジメトキシベンズアルデヒド，２，４−
ジメチル−３−［３−ジメチルアミノプロポ−１−イル］−ピロール−５−カル
ボキシアルデヒド，２，４−ジメチル−３−［３−カルボキシプロポ−１−イル
］−ピロール−５−カルボキシアルデヒド，２，４−ジメチル−３−［３−（Ｎ
−モルホリノ）プロポ−１−イル３−ピロール−５−カルボキシアルデヒド，２
，４−ジメチル−３−［２−ジメチルアミノエチル］−ピロール−５−カルボキ
シアルデヒド，２，４−ジメチル−３−［２−カルボキシエチル］−ピロール−
５−カルボキシアルデヒドおよび２，４−ジメチル−３−［２−（Ｎ−モルホリ
ノ）エチル］プロポ−１−イル］−ピロール−５−カルボキシアルデヒドが含ま
れる。
【０１５１】 Ｄ．ジアリールインドリノン化合物 別の観点においては，本発明は，オキシインドールをケトンと反応させること
により形成することができる，少なくとも１０個のインドリノン化合物のコンビ
ナトリアルライブラリを提供する。ここで，オキシインドールは，次の構造：
【化１９】 を有し，ケトンは，次の構造：
【化２０】 を有し，Ｒ27，Ｒ28，Ｒ29，Ｒ30，Ｒ32，Ｒ33およびＲ34は，本明細書において
記載されるとおりである。
【０１５２】 上述のコンビナトリアルライブラリのオキシインドールは，好ましくは，１，
３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−メチル−１，３−ジヒドロ−インド
ール−２−オン，４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インド
ール−２−オン，５−クロロ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，５−
ブロモ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，５−メトキシ−１，３−ジ
ヒドロ−インドール−２−オン，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インド
ール−５−カルボン酸，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５
−硫酸ジメチルアミド，Ｎ−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドー
ル−５−イル）−アセトアミド，６−クロロ−１，３−ジヒドロ−インドール−
２−オン，６−メトキシ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，およびＮ
−（５−メチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−イル
）−アセトアミドからなる群より選択される。
【０１５３】 ケトンは，好ましくは，
【化２１】
【化２２】 からなる群より選択される。
【０１５４】 本発明の別の観点は，式ＩＩＩ（本明細書に記載されるとおりである）の化合
物を合成する方法を提供する。該方法は，第１の反応体を，溶媒中で，塩基の存
在下で，高温で，第２の反応体と反応させる工程を含む。ここで，第１の反応体
は，以下の構造：
【化２３】 を有するオキシインドールであり，第２の反応体は，以下の構造：
【化２４】 を有するケトンであり，Ｒ27，Ｒ28，Ｒ29，Ｒ30，Ｒ31，Ｒ32，Ｒ33およびＲ34 は，本明細書に記載されるとおりである。
【０１５５】 第１の反応体は，好ましくは，１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４
−メチル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−（２−ヒドロキシ−
エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，５−クロロ−１，３−ジ
ヒドロ−インドール−２−オン，５−ブロモ−１，３−ジヒドロ−インドール−
２−オン，５−メトキシ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，５−カル
ボキシ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，５−ジメチルスルホンアミ
ド−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，５−ホルムアミド−１，３−ジ
ヒドロ−インドール−２−オン，６−クロロ−１，３−ジヒドロ−インドール−
２−オン，６−メトキシ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，および５
−メチル−６−ホルムアミド−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンからな
る群より選択されるオキシインドールである。
【０１５６】 第２の反応体は，好ましくは，
【化２５】
【化２６】 からなる群より選択されるケトンである。
【０１５７】 Ｅ．４−置換インドリノン化合物 別の観点においては，本発明は，オキシインドールをアルデヒドと反応させる
ことにより形成することができる，少なくとも１０種類のインドリノン化合物の
コンビナトリアルライブラリを提供する。ここで，オキシインドールは，式Ｉ（
本明細書において定義されるとおりである）に記載される構造を有し，アルデヒ
ドは，式Ｚ−Ｃ（Ｏ）−Ｈ（式中，Ｚは，本明細書において定義されるとおりで
ある）を有する。
【０１５８】 上述のコンビナトリアルライブラリ中のオキシインドールは，好ましくは，４
−［２−（３−イソプロピル−フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−イ
ンドール−２−オン，４−［２−（２−イソプロピル−フェノキシ）−エチル］
−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−［２−（ビフェニル−３−イ
ルオキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−（２−
ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，フェニル−
チオカルバミン酸Ｏ−［２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドー
ル−４−イル）−エチル］エステル，フェニル−カルバミン酸２−（２−オキソ
−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステル，ｔｅｒ
ｔ−ブチル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インド
ール−４−イル）−エチルエステル，シクロヘキシル−カルバミン酸２−（２−
オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステル，
ベンゼンスルホニル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ
−インドール−４−イル）−エチルエステル，ビフェニル−２−イル−カルバミ
ン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エ
チルエステル，エチル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１
Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステル，４−［２−（４−メトキシ−フ
ェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−（２−
メトキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−（２−エ
トキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−［２−（４
−イソプロピル−フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２
−オン，４−［２−（５−クロロ−ピリジン−３−イルオキシ）−エチル］−１
，３−ジヒドロ−インドール−２−オンおよびイソプロピル−カルバミン酸２−
（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエス
テルからなる群より選択される。
【０１５９】 アルデヒドは，好ましくは，
【化２７】
【化２８】 からなる群より選択される。
【０１６０】 本発明の別の観点は，式ＩＶまたは式Ｖ（本明細書において記載されるとおり
である）の化合物を合成する方法を提供する。式ＩＶの化合物を合成する方法は
，第１の反応体を，溶媒中で，他の試薬の混合物の存在下で，第２の反応体と反
応させる工程を含む。反応は，室温で行っても高温で行ってもよい。
【０１６１】 第１の反応体は，好ましくは，オキシインドールであり，より好ましくは，４
−（２−ヒドロキシエチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンである
。第２の反応体は，好ましくは，アルコール，ヨードアルキル，アルキルまたは
アリールイソシアネート，およびアルキルまたはアリールイソチオシアネートか
らなる群より選択され，およびより好ましくは，３−イソプロピルフェノール，
２−イソプロピルフェノール，３−フェニルフェノール，４−メトキシフェノー
ル，５−クロロ−３−ピリジノール，ヨウ化メチル，ヨウ化エチル，フェニルイ
ソシアネート，ｔｅｒｔ−ブチルイソシアネート，シクロヘキシルイソシアネー
ト，ベンゼンスルホニルイソシアネート，２−ビフェニリルイソシアネート，エ
チルイソシアネート，イソプロピルイソシアネート，およびフェニルイソチオシ
アネートからなる群より選択される。
【０１６２】 "他の試薬の混合物"とは，一般に，本発明の化合物の合成を容易にするであろ
う合成試薬または溶媒の混合物を表し，溶媒中のジエチルアゾジカルボキシレー
トとトリフェニルホスフィンの混合物，または溶媒中の，または溶媒の混合物中
の銀トリフルオロメタンスルホネートそれ自体，または塩基を含む混合物が含ま
れる。
【０１６３】 式Ｖの化合物を合成する方法は，第１の反応体を，溶媒中で，塩基の存在下で
，高温で第２の反応体と反応させる工程を含む。ここで，第１の反応体は，式Ｉ
（本明細書において定義されるとおりである）に記載される構造を有するオキシ
インドールであり，第２の反応体は，式Ｚ−Ｃ（Ｏ）−Ｈ（式中，Ｚは，本明細
書において定義されるとおりである）を有するアルデヒドである。
【０１６４】 第１の反応体は，好ましくは，４−［２−（３−イソプロピル−フェノキシ）
−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−［２−（２−イソ
プロピル−フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
，４−［２−（ビフェニル−３−イルオキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−
インドール−２−オン，４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−
インドール−２−オン，フェニル−チオカルバミン酸Ｏ−［２−（２−オキソ−
２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチル］エステル，フェニ
ル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４
−イル）−エチルエステル，ｔｅｒｔ−ブチル−カルバミン酸２−（２−オキソ
−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステル，シクロ
ヘキシル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドー
ル−４−イル）−エチルエステル，ベンゼンスルホニル−カルバミン酸２−（２
−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステル
，ビフェニル−２−イル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−
１Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステル，エチル−カルバミン酸２−（
２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステ
ル，４−［２−（４−メトキシ−フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−
インドール−２−オン，４−（２−メトキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−イ
ンドール−２−オン，４−（２−エトキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−イン
ドール−２−オン，４−［２−（４−イソプロピル−フェノキシ）−エチル］−
１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−［２−（５−クロロ−ピリジン
−３−イルオキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，お
よびイソプロピル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−
インドール−４−イル）−エチルエステルからなる群より選択されるオキシイン
ドールである。
【０１６５】 第２の反応体は，好ましくは，４−ブロモベンズアルデヒド，２−ピリジンカ
ルボキシアルデヒド，６−メチル−２−ピリジン−カルボアルデヒド，１Ｈ−イ
ンドール−５−カルボアルデヒド，４−メトキシ−３−チオフェン−２−イル−
ベンズアルデヒド，４−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−３，５−ジメチル
−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド，３−ヒドロキシ−６−メチル−ピリ
ジン−２−カルボアルデヒド，４−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−３，５
−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド，および４−カルボキシエ
チル−３，５−ジメチル−２−ホルミルピロールからなる群より選択されるアル
デヒドである。
【０１６６】 ＩＶ．生物学的活性および医薬組成物 別の観点においては，本発明は，（ｉ）生理学的に許容しうる担体，希釈剤，
または賦形剤；および（ｉｉ）本明細書に記載される化合物を含む医薬組成物を
特徴とする。
【０１６７】 本発明はまた，本発明の化合物を用いて蛋白質キナーゼの機能を調節する方法
を特徴とする。該方法は，蛋白質キナーゼを発現する細胞を化合物と接触させる
ことを含む。
【０１６８】 本発明のさらに別の観点においては，その触媒活性が本発明の化合物により調
節される蛋白質キナーゼは，レセプター蛋白質チロシンキナーゼ，細胞性チロシ
ンキナーゼおよびセリン−トレオニンキナーゼからなる群より選択される。
【０１６９】 本発明の１つの観点においては，その触媒活性が本発明の化合物により調節さ
れるレセプター蛋白質キナーゼは，ＥＧＦ，ＨＥＲ２，ＨＥＲ３，ＨＥＲ４，Ｉ
Ｒ，ＩＧＦ−１Ｒ，ＩＲＲ，ＰＤＧＦＲα，ＰＤＧＦＲβ，ＣＳＦＩＲ，Ｃ−Ｋ
ｉｔ，Ｃ−ｆｍｓ，Ｆｌｋ−１Ｒ，Ｆｌｋ４，ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１，Ｆｌｔ−１
，ＦＧＦＲ−１Ｒ，ＦＧＦＲ−２Ｒ，ＦＧＦＲ−３ＲおよびＦＧＦＲ−４Ｒから
なる群より選択される。さらに，本発明の１つの観点においては，その触媒活性
が本発明の化合物により調節される細胞性チロシンキナーゼは，Ｓｒｃ，Ｆｒｋ
，Ｂｔｋ，Ｃｓｋ，Ａｂｌ，ＺＡＰ７０，Ｆｅｓ／Ｆｐｓ，Ｆａｋ，Ｊａｋ，Ａ
ｃｋ，Ｙｅｓ，Ｆｙｎ，Ｌｙｎ，Ｌｃｋ，Ｂｌｋ，Ｈｃｋ，ＦｇｒおｙびＹｒｋ
からなる群より選択される。本発明の別の観点においては，その触媒活性が本発
明の化合物により調節されるセリン−トレオニン蛋白質キナーゼは，ＣＤＫ２お
よびＲａｆからなる群より選択される。
【０１７０】 蛋白質キナーゼの天然の結合パートナーは，高親和性をもって蛋白質キナーゼ
の細胞内領域に結合することができる。高親和性とは，１０-6Ｍまたはそれより
低いオーダーの平衡結合定数を表す。さらに，天然の結合パートナーはまた，蛋
白質キナーゼの細胞内領域と過渡的に相互作用して，それを化学的に改変させる
ことができる。蛋白質キナーゼの天然の結合パートナーは，限定されないが，Ｓ
ＲＣホモロジー２（ＳＨ２）または３（ＳＨ３）ドメイン，他のホスホリルチロ
シン結合（ＰＴＢ）ドメイン，グアニンヌクレオチド交換因子，蛋白質ホスファ
ターゼ，および他の蛋白質キナーゼからなる群より選択される。蛋白質キナーゼ
とその天然の結合パートナーとの間の相互作用の変化を検出する方法は，当該技
術分野において容易に利用可能である。
【０１７１】 本発明の化合物は，好ましくは，インビトロで蛋白質チロシンキナーゼの活性
を調節する。これらの化合物は，好ましくは，問題とする疾病または疾患の治療
に対応する活性についての１またはそれ以上のインビトロアッセイ（例えば，以
下の実施例に記載されるアッセイ）において陽性の結果を示す。
【０１７２】 本発明はまた，蛋白質キナーゼの機能を調節する化合物を同定する方法を特徴
とする。該方法は，以下の工程を含む：（ａ）蛋白質チロシンキナーゼを発現す
る細胞を化合物と接触させ；そして（ｂ）細胞に及ぼす影響をモニターする。細
胞に及ぼす影響は，好ましくは，細胞表現型の変化または無変化であり，より好
ましくは，これは細胞増殖の変化または無変化であり，さらに好ましくは，これ
は蛋白質キナーゼの触媒活性の変化または無変化であり，最も好ましくは，これ
は本明細書に記載されるような蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの間の
相互作用の変化または無変化である
【０１７３】 好ましい態様においては，本発明は，本発明の化合物を同定する方法を特徴とす
る。該方法は，以下の各工程を含む：（ａ）細胞を溶解して蛋白質チロシンキナ
ーゼを含む溶解物を得；（ｂ）蛋白質チロシンキナーゼを抗体に吸着させ；（ｃ
）吸着された蛋白質チロシンキナーゼを基質とともにインキュベートし；そして
（ｄ）基質を固体支持体または抗体に吸着させ，ここで，細胞に及ぼす効果をモ
ニターする工程は，基質のリン酸濃度を測定することを含む。
【０１７４】 さらに別の観点においては，本発明は，制御されないキナーゼシグナル伝達に
関連する疾病を治療する方法を特徴とする。該方法は，治療を必要とする被検者
に，治療上有効量の本明細書に記載される本発明の化合物を投与する工程を含む
。
【０１７５】 本発明はまた，キナーゼシグナル伝達を制御する方法を特徴とする。該方法は
，被験者に，治療上有効量の本明細書に記載される本発明の化合物を投与するこ
とを含む。
【０１７６】 さらに，本発明は，生物において異常な状態を予防または治療する方法を特徴
とし，ここで，異常な状態は，蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの間の
相互作用により特徴づけられるシグナル伝達経路の異常に関連する。該方法は，
以下の各工程を含む：（ａ）本明細書に記載される本発明の化合物を投与し；そ
して（ｂ）異常な相互作用を促進または中断させる。生物は，好ましくは哺乳動
物であり，異常な状態は好ましくは癌である。異常な状態はまた，好ましくは，
高血圧，鬱病，一般的不安症，恐怖症，外傷後ストレス症候群，思春期人格障害
，性的不全，摂取疾患，肥満，化学物質依存症，群発性頭痛，片頭痛，疼痛，ア
ルツハイマー病，強迫性障害，恐慌性障害，記憶障害，パーキンソン病，内分泌
疾患，血管痙攣，小脳性運動失調，および胃腸管疾患からなる群より選択される
。
【０１７７】 本明細書において用いられる場合，"ＰＫ関連疾患"，"ＰＫ推進性疾患"，およ
び"異常なＰＫ活性"は，すべて不適切な，すなわち不完全な，あるいはより一般
的には過剰な，ＰＫ触媒活性によって特徴づけられる状態を表し，ここで，特定
のＰＫはＲＴＫ，ＣＴＫ，またはＳＴＫでありうる。不適切な触媒活性は；（１
）正常にはＰＫを発現しない細胞におけるＰＫの発現，（２）望ましくない細胞
増殖，分化および／または成長に導くＰＫ発現の増加，または（３）細胞増殖，
分化および／または成長の望ましくない減少に導くＰＫ発現の減少，のいずれか
の結果として生じうる。ＰＫの過剰な活性は，特定のＰＫをコードする遺伝子の
増幅か，または細胞増殖，分化および／または成長の障害と相関しうるレベルの
ＰＫ活性の産生を表す（すなわち，ＰＫのレベルが増加すると，細胞性疾患の１
またはそれ以上の症状の激しさが増す）。不完全な活性は，もちろんその逆であ
り，ＰＫのレベルが低下すると，１またはそれ以上の細胞性疾患の症状の激しさ
が増加する。
【０１７８】 本明細書において用いられる場合，"治療上有効量"との用語は，治療される障
害の一つまたはそれより多い症状をある程度緩和するであろう，投与される化合
物の量を表す。癌の治療に関しては，治療上有効量は，（１）腫瘍の大きさを減
少させる，（２）腫瘍の転移を阻害する（すなわち速度をある程度減じる，好ま
しくは停止する），（３）腫瘍の成長をある程度阻害する（すなわち速度をある
程度減じる，好ましくは停止する），および／または（４）癌に関連した１また
はそれ以上の症状をある程度緩和する（または，好ましくは除去する）という効
果を有する量を表す。
【０１７９】 本発明の１つの観点においては，上述の蛋白質キナーゼ関連疾患は，レセプタ
ー蛋白質チロシンキナーゼ関連疾患，細胞性チロシンキナーゼ関連疾患およびセ
リン−トレオニンキナーゼ関連疾患からなる群より選択される。
【０１８０】 本発明のさらに別の観点においては，上述の蛋白質キナーゼ関連疾患は，ＥＧ
ＦＲ関連疾患，ＰＤＧＦＲ関連疾患，ＩＧＦＲ関連疾患およびｆｌｋ関連疾患か
らなる群より選択される。
【０１８１】 本発明の別の観点においては，上述の蛋白質キナーゼ関連疾患は，扁平上皮細
胞癌腫，星状細胞腫，神経膠芽細胞腫，肺癌，膀胱癌，頭頚部癌，黒色腫，卵巣
癌，前立腺癌，乳癌，小細胞肺癌および神経膠腫からなる群より選択される癌で
ある。
【０１８２】 上述の蛋白質キナーゼ関連疾患は，糖尿病，免疫疾患，例えば自己免疫疾患，
過増殖疾患，再狭窄，繊維症，乾癬，変形性関節症，慢性関節リウマチ，炎症性
疾患，新脈管形成，心臓血管疾病，例えば動脈硬化症，および腎臓疾病からなる
群より選択され，これらも本発明の別の観点である。
【０１８３】 ＰＫ活性を調節することに加えて，本発明の化合物は，リン酸化された蛋白質
からリン酸基を除去する酵素である蛋白質ホスファターゼの活性を阻害すること
ができる。すなわち，本明細書に開示される化合物はまた，異常なホスファター
ゼ活性に関連する疾病および疾患（例えば，限定されないが，糖尿病，細胞増殖
疾患および炎症性疾患）のための新世代の治療化合物である。当業者は，ＰＫに
関連して本明細書において定義された用語が，ホスファターゼに関しても同じま
たは同様の意味を有することを理解するであろう。
【０１８４】 上述の発明の概要は非限定的なものであり，本発明の他の特徴および利点は，
以下の好ましい態様の説明および特許請求の範囲から明らかであろう。
【０１８５】 発明の詳細な説明 本発明は，細胞性シグナル伝達，好ましい態様においてはレセプターおよび非
レセプターチロシンキナーゼシグナル伝達を制御および／または調節することが
できる化合物に関する。
【０１８６】 レセプターキナーゼ媒介性シグナル伝達は，特定の成長因子（リガンド）との
細胞外相互作用により開始され，続いて，レセプターの二量化，固有の蛋白質キ
ナーゼ活性の過渡的刺激およびリン酸化が生ずる。このようにして形成された細
胞内シグナル伝達分子用の結合部位は，適切な細胞性応答（例えば，細胞***，
細胞外微小環境に対する代謝的効果）を容易にする一連の細胞質シグナリング分
子との複合体の形成につながる。Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ ａｎｄ Ｕｌｌｒ
ｉｃｈ，１９９２，Ｎｅｕｒｏｎ ９：３０３−３９１を参照されたい。
【０１８７】 成長因子レセプターのチロシンリン酸化部位は，シグナリング分子のＳＨ２（
ｓｒｃホモロジー）ドメインの高親和性結合部位として機能することが示されて
いる（Ｆａｎｔｌ ｅｔ ａｌ．１９９２，Ｃｅｌｌ ６９：４１３−４２３；
Ｓｏｎｇｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１
４：２７７７−２７８５）；Ｓｏｎｇｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｅ
ｌｌ ７２：７６７−７７８；およびＫｏｃｈ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ ２５２：６６８−６７８）。レセプターキナーゼに付随するいくつ
かの細胞内基質蛋白質が同定されている。これらは２つの主要な群に分けること
ができる：（１）触媒ドメインを有する基質；および（２）そのようなドメイン
を有しないがアダプターとして作用し，触媒的に活性な分子と会合する基質（Ｓ
ｏｎｇｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ ７２：７６７−７７８）
。レセプターとその基質のＳＨ２ドメインとの間の相互作用の特異性は，リン酸
化されるチロシン残基のすぐ近傍のアミノ酸残基により決定される。特定のレセ
プター上におけるＳＨ２ドメインとホスホチロシン残基の周りのアミノ酸配列と
の間の結合親和性の相違は，基質のリン酸化プロファイルにおいて観察される相
違と一致する（Ｓｏｎｇｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ ７２：
７６７−７７８）。これらの知見は，各レセプターキナーゼの機能が，その発現
のパターンおよびリガンド利用性のみならず，特定のレセプターにより活性化さ
れる下流のシグナル伝達経路のアレイによっても決まることを示唆する。すなわ
ち，リン酸化は，特定の成長因子レセプターならびに分化因子レセプターにより
リクルートされるシグナリング経路の選択性を決定する重要な制御工程を提供す
る。
【０１８８】 キナーゼシグナル伝達により，他の応答の中でも特に，細胞増殖，分化および
代謝が生ずる。異常な細胞増殖により，新生物の発達を含む広範な疾患および疾
病，例えば癌腫，肉腫，白血病，神経膠芽細胞腫，血管腫，乾癬，アテローム性
動脈硬化症，関節炎および糖尿病性網膜症（または制御されない新脈管形成およ
び／または脈管形成に関連する他の疾患）が生ずる。
【０１８９】 したがって，本発明は，レセプターキナーゼ（ＲＫ）および／または非レセプ
ターキナーゼの酵素活性に影響を与え，そのような蛋白質により伝達されるシグ
ナルに干渉することにより，キナーゼシグナル伝達を制御，調節および／または
阻害する化合物に関する。より詳細には，本発明は，多くの種類の固形腫瘍，例
えば，限定されないが，癌腫，肉腫，赤芽球腫，神経膠芽細胞腫，髄膜腫，星状
細胞腫，黒色腫および筋原細胞腫を治癒するための治療的方法として，ＲＫおよ
び／または非レセプターキナーゼ媒介性シグナル伝達経路を制御，調節および／
または阻害する化合物に関する。摘要には，限定されないが，脳癌，膀胱癌，卵
巣癌，胃癌，膵臓癌，結腸癌，血液癌，肺癌および骨癌が含まれる。
【０１９０】 Ｉ．本発明の化合物により治療すべき標的疾病 本明細書に記載される化合物は，制御されないキナーゼシグナル伝達に関連す
る疾患，例えば細胞増殖性疾患，繊維性疾患および代謝性疾患の治療に有用であ
る。本発明により治療することができるかまたはさらに研究することができる細
胞増殖性疾患には，癌，血管増殖性疾患およびメサンギウム細胞増殖性疾患が含
まれる。
【０１９１】 血管増殖性疾患とは，一般に血管の異常な増殖を引き起こす新脈管形成性およ
び脈管形成性疾患を表す。血管の形成および広がり，またはそれぞれ脈管形成お
よび新脈管形成は，種々の生理学的プロセス，例えば，胚発生，黄体形成，創傷
治癒および臓器再生において重要な役割を果たす。これらはまた，癌の発達にお
いても中枢的役割を果たす。血管増殖疾患の他の例には，新たな毛細血管が関節
に侵入して，軟骨を破壊する関節炎，および眼性疾病，例えば網膜中の新たな毛
細血管が硝子体に侵入し，出血し，失明を引き起こす糖尿病性網膜症が含まれる
。逆に，血管の収縮，攣縮または閉塞に関連する疾患，例えば再狭窄における関
与も示唆されている。
【０１９２】 繊維性疾患とは，細胞外マトリックスの異常な形成を表す。繊維性疾患の例に
は，肝硬変およびメサンギウム細胞増殖性疾患が含まれる。肝硬変は，肝臓瘢痕
の形成を引き起こす細胞外マトリックスの組成の増加を特徴とする。肝硬変は，
肝臓の硬変等の疾病を引き起こしうる。肝臓瘢痕を引き起こす細胞外マトリック
スの増加はまた，肝炎ウイルス等のウイルス感染に起因する。脂肪細胞は，肝硬
変において主要な役割を果たすようである。示唆されている他の繊維性疾患には
，アテローム性動脈硬化症（以下を参照）が含まれる。
【０１９３】 メサンギウム細胞増殖疾患とは，メサンギウム細胞の異常な増殖により引き起
こされる疾患を表す。メサンギウム増殖疾患には，種々のヒト腎臓疾病，例えば
，糸球体腎炎，糖尿病性腎症，悪性腎硬化症，血栓性細小血管症候群，移植拒絶
，および糸球体症が含まれる。ＰＤＧＦ−Ｒは，メサンギウム細胞増殖の維持に
関与することが示唆されている（Ｆｌｏｅｇｅ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｋｉ
ｄｎｅｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ４３：４７Ｓ−５４Ｓ）。
【０１９４】 ＰＫはそのような細胞増殖性疾患に関連づけられてきた。例えば，レセプター
チロシンキナーゼファミリーのいくつかのメンバーが癌の発生と関連づけられて
いる。ＥＧＦＲ（Ｔｕｚｉ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ
６３：２２７−２３３，Ｔｏｒｐ ｅｔ ａｌ．，１９９２，ＡＰＭＩＳ １
００：７１３−７１９），ＨＥＲ２／ｎｅｕ（Ｓｌａｍｏｎ ｅｔ ａｌ．，１
９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：７０７−７１２），およびＰＤＧＦ−Ｒ（Ｋ
ｕｍａｂｅ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，７：６２７−６３３
）等のこれらのレセプターのいくつかは多くの腫瘍において過剰発現され，およ
び／またはオートクリンループにより持続的に活性化される。事実，ほとんどの
一般的かつ重症の癌においては，これらのレセプターの過剰発現（Ａｋｂａｓａ
ｋ ａｎｄ Ｓｕｎｅｒ−Ａｋｂａｓａｋ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｎｅ
ｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．，１１１：１１９−１３３，Ｄｉｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．
，１９９２，Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｒｅｓ．６１：２４９−２７
３，Ｋｏｒｃ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９０，
１３５２−１３６０），およびオートクリンループ（Ｌｅｅ ａｎｄ Ｄｏｎｏ
ｇｈｕｅ，１９９２，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１８：１０５７−１０７０
，Ｋｏｒｃ ｅｔ ａｌ．，前出，Ａｋｂａｓａｋ ａｎｄ Ｓｕｎｅｒ−Ａｋ
ｂａｓａｋ ｅｔ ａｌ．，前出）が示されている。例えば，ＥＧＦＲは扁平上
皮癌，星状細胞腫，神経芽細胞腫，頭頚部癌，肺癌，および膀胱癌と関連づけら
れている。ＨＥＲ２は乳，卵巣，胃，肺，膵臓，および膀胱の癌と関連づけられ
ている。ＰＤＧＦ−Ｒは神経芽細胞腫，ならびに肺，卵巣，黒色腫および前立腺
の癌と関連づけられている。ＲＫ ｃ−ｍｅｔは一般に肝臓腫瘍発生に，したが
って肝細胞腫瘍に関連づけられている。さらに，ｃ−ｍｅｔは悪性腫瘍形成に関
連づけられている。より詳細には，ＲＫ ｃ−ｍｅｔは，他の癌の中でも特に，
結腸直腸，甲状腺，膵臓，および胃の癌腫，および白血病およびリンパ腫と関連
づけられている。さらに，ｃ−ｍｅｔ遺伝子の過剰発現はまたホジキン病および
バーキット病の患者およびリンパ種細胞株で検出されている。Ｆｌｋも同様に，
広いスペクトルの腫瘍と関連づけられてきており，これらには，限定されないが
，乳癌，卵巣癌，肺腫瘍，ならびに神経膠芽細胞種等の神経膠腫が含まれる。
【０１９５】 ＩＧＦ−ＩＲは，栄養上の支持およびＩＩ型糖尿病に関係づけられていること
に加えて，いくつかの型の癌に関係づけられている。例えば，ＩＧＦ−Ｉはいく
つかの型の腫瘍，例えばヒト乳癌の癌腫細胞（Ａｒｔｅａｇａ ｅｔ ａｌ．，
１９８９，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８４：１４１８−１４２３），および
小細胞肺腫瘍（Ｍａｃａｕｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｃａｎｃｅｒ Ｒ
ｅｓ．，５０：２５１１−２５１７）のオートクリン成長刺激因子として示唆さ
れている。さらに，ＩＧＦ−Ｉは神経系の正常な成長および分化に完全に関与し
ており，ヒトの神経膠腫のオートクリン刺激因子であるように見える。Ｓａｎｄ
ｂｅｒｇ−Ｎｏｒｄｑｖｉｓｔ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓ．５３：２４７５−２４７８。細胞増殖におけるＩＧＦ−ＩＲとそのリガンド
の重要性は，培養されている多くの細胞型（線維芽細胞，上皮細胞，平滑筋細胞
，Ｔリンパ球，骨髄性細胞，軟骨細胞，および骨芽細胞（骨髄の幹細胞）がＩＧ
Ｆ−Ｉによって成長するよう刺激されるという事実によってさらに支持される。
Ｇｏｌｄｒｉｎｇ ａｎｄ Ｇｏｌｄｒｉｎｇ，１９９１，Ｅｕｋａｒｙｏｔｉ
ｃ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，１：３０１−３２６。最近の一連の発表
においてＢａｓｅｒｇａは，ＩＧＦ−ＩＲが形質転換の機構において中心的な役
割を果たしていること，またそれ自体がヒトの広範囲の悪性腫瘍に対する治療的
介入のための好ましい標的となり得ることを示唆している。Ｂａｓｅｒｇａ，１
９９５，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５５：２４９−２５２，Ｂａｓｅｒｇａ，１
９９４，Ｃｅｌｌ ７９：９２７−９３９，Ｃｏｐｐｏｌａ ｅｔ ａｌ．，１
９９４，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１４：４５８８−４５９５。
【０１９６】 ある種の蛋白質キナーゼ（ＰＫ）は，特に乳癌を含む多くの型の癌に関与する
ことが示唆されている（Ｃａｎｃｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ
，５４：５７１−７７（１９９３））。
【０１９７】 しかし，ＲＫの異常と疾病との間の関連性は，癌に限られない。例えば，ＲＫ
は，乾癬，真性糖尿病，創傷治癒，炎症，および神経変性性疾病等の代謝性疾病
に関連づけられている。これらの疾病には，限定されないが，高血圧，鬱病，一
般的不安症，恐怖症，外傷後ストレス症候群，思春期人格障害，性的不全，摂取
疾患，肥満，化学物質依存症，群発性頭痛，片頭痛，疼痛，アルツハイマー病，
強迫性障害，恐慌性障害，記憶障害，パーキンソン病，内分泌疾患，血管痙攣，
小脳性運動失調，および胃腸管疾患が含まれる。例えば，ＥＧＦ−Ｒは角膜およ
び皮膚の創傷治癒と関連づけられている。ＩＩ型の真性糖尿病においてインスリ
ン−ＲおよびＩＧＦ−１Ｒの欠陥が示されている。特定のＲＫとそれらの治療上
の摘要との間のさらに完全な相関関係は，Ｐｌｏｗｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９
９４，ＤＮ＆Ｐ７：３３４−３３９に記載されている。
【０１９８】 レセプタータイプのキナーゼのみならず，多くの細胞性キナーゼ（ＣＫ），例
えばｓｒｃ，ａｂｌ，ｆｐｓ，ｙｅｓ，ｆｙｎ，ｌｙｎ，ｌｃｋ，ｂｌｋ，ｈｃ
ｋ，ｆｇｒ，ｙｒｋ（Ｂｏｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２，ＦＡＳＥＢ Ｊ．
６：３４０３−３４０９により概説されている）が，増殖および代謝シグナル伝
達経路に，したがって本発明の摘要に関与している。例えば，変異体ｓｒｃ（ｖ
−ｓｒｃ）は，ニワトリにおける腫瘍蛋白質（ｐｐ６０v-src）であることが示
されている。さらに，その細胞性相同体であるプロトオンコジンｐｐ６０c-src
は，多くのレセプターの発癌シグナルを伝達する。例えば，腫瘍におけるＥＧＦ
−ＲまたはＨＥＲ２／ｎｅｕの過剰発現は，ｐｐ６０c-srcの構成的活性化につ
ながり，これは悪性腫瘍細胞に特徴的であるが正常細胞にはない。一方，ｃ−ｓ
ｒｃの発現を欠如しているマウスは大理石骨病の表現型を示し，破骨細胞機能に
おけるｃ−ｓｒｃの重要な関与と，関連する疾患における関与の可能性を暗示し
ている。
【０１９９】 同様に，Ｚａｐ７０はＴ細胞シグナリングに関与することが示唆されている。
【０２００】 さらに，ＣＴＫ調節化合物を同定して，ＲＫを目標とするブロッカーを増大さ
せるか，相乗効果を得ることは，本発明の１つの観点である。
【０２０１】 さらに，ＲＫおよび非レセプタータイプのキナーゼの両方が，過免疫疾患に関
連づけられている。
【０２０２】 さらに，本発明の化合物はまた，ＰＹＫ−２蛋白質に関連する疾病の治療にも
有効である。この蛋白質，その細胞性機能，およびこれに関連する疾病は，Ｌｅ
ｖ ｅｔ ａｌ．，"ＰＹＫ２ ＲＥＬＡＴＥＤ ＰＲＯＤＵＣＴＳ ＡＮＤ
ＭＥＴＨＯＤＳ"と題する米国特許出願０８／３５７，６４２（１９９４年１２
月１５日出願）（Ｌｙｏｎ＆Ｌｙｏｎ Ｄｏｃｋｅｔ Ｎｏ．２０９／０７０）
およびＬｅｖ ｅｔ ａｌ．，"ＰＹＫ２ ＲＥＬＡＴＥＤ ＰＲＯＤＵＣＴＳ
ＡＮＤ ＭＥＴＨＯＤＳ"と題する米国特許出願０８／４６０，６２６（１９
９５年６月２日出願）（Ｌｙｏｎ＆ＬｙｏｎＤｏｃｋｅｔＮｏ．２１１／１２１
）に詳細に記載されている（これらの両方は，図面を含めその全体を本明細書の
一部としてここに引用する）。
【０２０３】 最後に，本発明は，オキシインドールおよびインドリノン化合物，および蛋白
質ホスファターゼの機能を調節する方法，ならびに上で同定された方法の化合物
を用いて生物において蛋白質ホスファターゼに関連する異常な状態を予防および
治療する方法に関する。本発明の化合物，ならびに化学置換基を付加することに
より得られる化合物は，ホスファターゼの作用を阻害する可能性があり，前記ホ
スファターゼの欠陥に関連する疾病の新世代の治療であるかもしれない。当業者
には，キナーゼに関して上で定義された用語は，ホスファターゼに関しても，同
様の意味を有する。ＲＫおよび非レセプタータイプのキナーゼの両方とも，過剰
免疫疾患に関連づけられている。
【０２０４】 さらに，本発明の化合物はまた，ＰＹＫ−２蛋白質に関連する疾病の治療にも
有効である。この蛋白質，その細胞性機能，およびこれに関連する疾病は，Ｌｅ
ｖ ｅｔ ａｌ．，"ＰＹＫ２ ＲＥＬＡＴＥＤ ＰＲＯＤＵＣＴＳ ＡＮＤ
ＭＥＴＨＯＤＳ"と題する米国特許５，８３７，５２４（１９９８年１１月１７
日発行）および，Ｌｅｖ ｅｔ ａｌ．，"ＰＹＫ２ ＲＥＬＡＴＥＤ ＰＲＯ
ＤＵＣＴＳ ＡＮＤ ＭＥＴＨＯＤＳ"と題する米国特許５，８３７，８１５（
１９９８年１１月１７日発行）に詳細に記載されている（これらの両方は，図面
を含めその全体を本明細書の一部としてここに引用する）。
【０２０５】 ＩＩ．ＫＤＲ／ＦＬＫ−１ ａ．ＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプターおよびＶＥＧＦ 正常な脈管形成および新脈管形成は，胚発生，損傷治癒，臓器再生等の種々の
生理学的過程，および***期の黄体における濾胞形成と妊娠後の胎盤の成長等の
女性の生殖過程において，重要な役割を果たす。Ｆｏｌｋｍａｎ ａｎｄ Ｓｈ
ｉｎｇ，１９９２，Ｊ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍ．２６７：１０９３１
−３４。しかし，多くの疾病が，制御されないまたは不適切な新脈管形成の持続
により推進される。例えば，関節炎においては，新たな毛細血管が関節に侵入し
，軟骨を破壊する。糖尿病においては，網膜中の新たな毛細血管が硝子体に侵入
し，出血して失明を引き起こす（Ｆｏｌｋｍａｎ，１９８７：Ｃｏｎｇｒｅｓｓ
ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ（Ｖｅｒｓｔ
ｒａｅｔｅ，ｅｔ．ａｌ，ｅｄｓ．），Ｌｅｕｖｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｐｒｅｓｓ，Ｌｅｕｖｅｎ，ｐｐ．５８３−５９６）。眼性新生血管形成は，失
明の最も一般的な原因であり，ほぼ２０種の眼性疾病において支配的である。
【０２０６】 さらに，脈管形成および／または新脈管形成は，悪性固形腫瘍の成長および転
移に関連づけられている。腫瘍は，腫瘍それ自体が成長するために，新たな毛細
血管の増殖を刺激しつづけなければならない。さらに，腫瘍中に埋め込まれた新
たな血管は，腫瘍細胞が循環中に入り，身体の遠い部位に転移するための道を提
供する（Ｆｏｌｋｍａｎ，１９９０，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．
８２：４−６；Ｋｌａｇｓｂｒｕｎｎ ａｎｄ Ｓｏｋｅｒ，１９９３，Ｃｕｒ
ｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３：６９９−７０２；Ｆｏｌｋｍａｎ，１９９１，
Ｊ．Ｎａｔｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８２：４−６；Ｗｅｉｄｎｅｒ ｅ
ｔ ａｌ，１９９１，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２４：１−５）。
【０２０７】 インビトロ内皮細胞成長促進活性を有するいくつかのポリペプチドが同定され
ている。例としては，酸性および塩基性繊維芽細胞成長因子（ａＦＧＦ，ｂＦＧ
Ｆ），血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）および胎盤成長因子が挙げられる。ａＦＧ
ＦおよびｂＦＧＦとは異なり，ＶＥＧＦは内皮細胞特異的な細胞***促進物質で
あることが最近報告された（Ｆｅｒｒａｒａ ａｎｄ Ｈｅｎｚｅｌ，１９８９
，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１６１：８５１−８５
８；Ｖａｉｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６
．５：１９４６１−１９５６６）。
【０２０８】 すなわち，ＶＥＧＦが結合する特異的レセプターの同定は，内皮細胞増殖の制
御の理解の重要な進歩である。高親和性をもってＶＥＧＦに結合する２つの構造
的に密接に関連するＲＫが同定されている：ｆｌｔ−１レセプター（Ｓｈｉｂｕ
ｙａ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ５：５１９−５２４；Ｄｅ
Ｖｒｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５５：９８９−９９
１）およびＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプター（米国特許出願０８／１９３，８２９
において議論されている）。したがって，これらのＲＫが内皮細胞増殖の調節お
よび制御において役割を果たすであろうと推定されている。
【０２０９】 同時係属中のの米国特許出願０８／１９３，８２９に記載される開示等の証拠
は，ＶＥＧＦが内皮細胞増殖の原因であるのみならず，正常なおよび病的な新脈
管形成の主要な制御因子であることを強く示唆する。一般に，Ｋｌａｇｓｂｕｍ
ａｎｄ Ｓｏｋｅｒ，１９９３，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３：６９
９−７０２；Ｈｏｕｃｋ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
２６７：２６０３１−２６０３７を参照されたい。さらに，ＫＤＲ／ＦＬＫ−１
およびｆｌｔ−１は，成長している腫瘍の増殖しつつある内皮細胞において大量
に発現されているが，周囲の静止内皮細胞においては発現されていないことが示
されている（Ｐｌａｔｅ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｎａｔｕｒｅ ３５９：８
４５−８４８；Ｓｈｗｅｉｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｎａｔｕｒｅ ３５
９：８４３−８４５）。
【０２１０】 ｂ．ＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプターに対するアゴニストおよびアンタゴニスト の同定 内皮細胞増殖，および潜在的には脈管形成および／または新脈管形成の管理，
制御および調節におけるＲＫの推定される重要性の観点から，種々の方法を用い
てＲＫ"阻害剤"を同定するための多くの試みが行われてきた。これらには，変異
体リガンド（米国特許４，９６６，８４９）；可溶性レセプターおよび抗体（Ｗ
Ｏ９４／１０２０２；Ｋｅｎｄａｌｌ ａｎｄ Ｔｈｏｍａｓ，１９９４，Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１０７０５−１０７０９；
Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：８４１−８４４）；
およびＲＮＡリガンド（Ｊｅｌｌｉｎｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ ３３：１０４５０−１０４５６）の使用が含まれる。
【０２１１】 さらに，キナーゼ阻害剤（ＷＯ９４／０３４２７；ＷＯ９２／２１６６０；Ｗ
Ｏ９１／１５４９５；ＷＯ９４／１４８０８；米国特許５，３３０，９９２；Ｍ
ａｒｉａｎｉ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎ
ｃｅｒ Ｒｅｓ．３５：２２６８），およびレセプターキナーゼシグナル伝達経
路に作用する阻害剤，例えば蛋白質キナーゼＣ阻害剤が同定されている（Ｓｃｈ
ｕｃｈｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：６８２
−６８７）；Ｔａｋａｎｏ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．Ｃｅｌ
ｌ ４：３５８Ａ，Ｋｉｎｓｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｅｘｐ．Ｃｅ
ｌｌ Ｒｅｓ．１９９：５６−６２；Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．，１９９２，
Ｊ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｈｙｓ．７５２：４４８−５７）。
【０２１２】 最近，癌の治療において用いるために，キナーゼ阻害剤として作用する小分子
を同定する試みが行われている。したがって，脈管形成を有効にかつ特異的に抑
制するためにＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプターのシグナル伝達を選択的に阻害する
有効な小さい化合物を同定し生成することについての満たされていない要求が存
在する。
【０２１３】 本発明のある化合物は，生物学的アッセイにおいて優れた活性を示し，したが
って，これらの化合物および関連する化合物は，Ｆｌｋ関連疾患，例えば持続す
る制御されないまたは不適切な新脈管形成により推進される疾患の治療に有効で
あることが予測される。
【０２１４】 ＩＩＩ．医薬製剤および投与経路 本明細書に記載される化合物は，そのままヒトの患者に投与するか，または組
み合わせ治療におけるように，これを他の活性成分とともに適当な担体または賦
形剤と混合した医薬組成物中で投与することができる。本明細書に記載される化
合物の製剤および投与の技術は，"Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍｃｏｌ
ｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ"（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．
，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）の最新版に見いだされる。
【０２１５】 ａ）投与経路 適当な投与経路は，例えば，経口，直腸，経粘膜，または腸管投与，あるいは
筋肉内，皮下，静脈内，骨髄内等の非経口輸送，ならびに髄内，直接心室内，腹
腔内，鼻腔内，または眼内の注射を含む。
【０２１６】 あるいは，化合物は，全身的方法ではなく局所に，例えば化合物を固形腫瘍内
に直接，しばしばデポ剤または持続放出製剤中で注射することにより投与しても
よい。
【０２１７】 さらに，薬物はターゲティングされたドラッグデリバリーシステムにおいて，
例えば腫瘍特異的抗体により被覆されたリポソーム中で投与してもよい。リポソ
ームは腫瘍にターゲティングされ，選択的に取り込まれるであろう。
【０２１８】 ｂ）組成物／製剤 本発明の医薬組成物は，それ自体知られる方法，例えば慣用の混合，溶解，顆
粒化，糖衣作成，研和，乳化，カプセル封入，捕捉，または凍結乾燥により製造
することができる。
【０２１９】 すなわち，本発明にしたがって使用するための医薬組成物は，活性物質を薬剤
として使用することができる製品に加工することを容易にする賦形剤および補助
剤を含む，１またはそれ以上の生理学的に許容しうる担体を用いて，慣用の方法
で製剤することができる。適切な製剤は，選択される投与経路に依存する。
【０２２０】 注射用には，本発明の薬剤を水溶性溶液，好ましくはハンクス溶液，リンゲル
溶液，または生理的食塩緩衝液等の生理学的に適合性の緩衝液中で製剤すること
ができる。経粘膜投与用には，浸透すべき障壁に適した浸透剤が製剤に用いられ
る。そのような浸透剤は当該技術分野において一般に知られている。
【０２２１】 経口投与のためには，化合物を当該技術分野においてよく知られる薬学的に許
容しうる担体と混合することにより化合物を容易に製剤することができる。その
ような担体は，本発明の化合物を，治療すべき患者による経口摂取のための錠剤
，丸薬，糖衣剤，カプセル，液体，ゲル，シロップ，スラリー，懸濁液等として
製剤することを可能とする。
【０２２２】 経口で使用するための医薬製剤は，１またはそれ以上の固体賦形剤を１または
それ以上の本発明の化合物と混合し，得られた混合物を任意にすりつぶし，所望
の場合には適当な助剤を加えた後に，顆粒の混合物を加工して，錠剤または糖衣
錠コアを得ることができる。適当な担体には，特に，ラクトース，ショ糖，マン
ニトール，またはソルビトール等の糖類；トウモロコシデンプン，小麦デンプン
，米デンプン，およびジャガイモデンプン等のセルロース製品，ゼラチン，トラ
ガカントゴム，メチルセルロース，ヒドロキシプロピルメチルセルロース，カル
ボキシメチルセルロースナトリウム，および／またはポリビニルピロリドン（Ｐ
ＶＰ）等の増量剤などの賦形剤が含まれる。所望の場合には，架橋されたポリビ
ニルピロリドン，寒天，またはアルギン酸またはその塩，例えばアルギン酸ナト
リウム等の崩壊剤を加えてもよい。
【０２２３】 糖衣剤のコアは，適当なコーティングとともに供給される。この目的のために
は，濃縮された糖溶液を用いることができる。これは，アラビアゴム，タルク，
ポリビニルピロリドン，カルボポールゲル，ポリエチレングリコール，および／
または二酸化チタン，ラッカー溶液，および適当な有機溶媒または溶媒混合物を
任意に含むことができる。識別のため，あるいは活性成分の用量の異なる組合せ
を特徴づけるため，染料または色素を錠剤または糖衣剤コーティングに添加して
もよい。
【０２２４】 経口で使用することができる医薬製剤は，ゼラチンから作成されるプッシュフ
ィットカプセル，ならびにゼラチンおよびグリセロール，ソルビトール等の可塑
剤から作成される密封軟カプセルを含む。プッシュフィットカプセルは，活性成
分を，ラクトース等の増量剤，デンプン等の結合剤，および／またはタルクおよ
びステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤，さらに任意に安定剤との混合物中に含
むことができる。軟カプセルにおいては，活性化合物は脂肪油，流動パラフィン
，または液体ポリエチレングリコール等の適当な液体中に溶解または懸濁するこ
とができる。さらに安定剤を添加してもよい。経口投与用のすべての製剤は，そ
のような投与に適当な用量で調製すべきである。
【０２２５】 口内投与のためには，組成物は，慣用的な方法で錠剤またはトローチ剤の形に
することができる。
【０２２６】 吸入による投与用には，本発明に従って用いられる物質は，噴射剤，例えば，
ジクロロジフルオロメタン，トリクロロフルオロメタン，ジクロロテトラフルオ
ロエタン，二酸化炭素または他の適当な気体を用いて，加圧されたパックまたは
ネブライザーからエアーゾルスプレイの形状で便利に輸送される。加圧されたエ
アーゾルの場合，用量単位は計量された量を送達するべく備えられたバルブによ
り調節することができる。例えば吸入器または注入器において使用するためのゼ
ラチン製のカプセルおよびカートリッジは，化合物の粉末混合物と，ラクトース
またはデンプン等の適当な粉末基剤とを含むよう製剤することができる。
【０２２７】 化合物は，例えばボーラス注射または連続注入による非経口投与用に製剤する
ことができる。注射用の製剤は，単位用量にて，例えばアンプルにて，あるいは
添加された保存料と共に多用量容器中で提供することができる。組成物は油性ま
たは水性のベヒクル中で，懸濁液，溶液，または乳濁液等の形状をとることがで
き，懸濁剤，安定剤および／または分散剤等の製剤物質を含んでいてもよい。
【０２２８】 非経口投与用の薬剤組成物は，水溶性の形態の活性化合物の水性溶液を含む。
さらに，活性化合物の懸濁液は，適当な油性の注入用懸濁液として調製すること
ができる。適切な親油性溶媒またはベヒクルには，ゴマ油等の脂肪油，オレイン
酸エチルまたはトリグリセリド等の合成脂肪酸エステル，またはリポソーム等を
含む。水性の注射用懸濁液は，カルボキシメチルセルロースナトリウム，ソルビ
トール，またはデキストラン等の，懸濁液の粘度を増加させる物質を含んでいて
もよい。任意に，懸濁液はまた，高度に濃縮された溶液の調製を可能にする，当
該化合物の溶解性を増加させる適当な安定剤または薬剤を含んでいてもよい。
【０２２９】 あるいは，活性成分は粉体の形態であって，使用前に適当なベヒクル，例えば
発熱物質を含まない滅菌水を用いて構成することができる。
【０２３０】 化合物はまた，例えばカカオバターまたは他のグリセリド等の慣用の坐剤基剤
を用いて，坐剤または停留浣腸等の直腸用組成物に製剤することができる。
【０２３１】 上述した製剤に加えて，化合物はまたデポ製剤として製剤することができる。
そのような長時間作用性の製剤は，埋込み（例えば皮下または筋肉内への）によ
るか，または筋肉内注射により投与することができる。すなわち，化合物は，適
当な高分子性または疎水性物質と共に（例えば薬理学的に許容される油剤中の乳
濁液として），イオン交換樹脂と共に，溶けにくい塩等の溶けにくい誘導体とし
て，製剤することができる。
【０２３２】 本発明の疎水性化合物のための薬学的担体は，ベンジルアルコール，非極性界
面活性剤，水混和性有機ポリマーおよび水性相を含む共溶媒系である。共溶媒系
はＶＰＤ共溶媒系であってもよい。ＶＰＤは，３％（ｗ／ｖ）ベンジルアルコー
ル，８％（ｗ／ｖ）非極性界面活性剤ポリソルベート８０，および６５％（ｗ／
ｖ）ポリエチレングリコール３００を純粋エタノール中に作成した溶液である。
ＶＰＤ共溶媒系（ＶＰＤ：Ｄ５Ｗ）は，ＶＰＤを５％デキストロースの水溶液中
に１：１で希釈したものである。この共溶媒系は疎水性化合物をよく溶解し，そ
れ自体，全身投与に際して低い毒性を示す。本来，共溶媒系の比率は，その溶解
性および毒性特性を破壊することなく相当変化させることができる。さらに，共
溶媒成分の同一性も変化させることができる。例えば，他の低毒性非極性界面活
性剤をポリソルベート８０の代わりに用いることができ，ポリエチレングリコー
ルの分画サイズは様々でありうる。他の生体適合性ポリマー，例えばポリビニル
ピロリドンをポリエチレングリコールの代わりに用いることができ，他の糖また
は多糖類をデキストロースの代わりに用いることができる。
【０２３３】 あるいは，疎水的医薬化合物のための他の輸送系を用いてもよい。リポソーム
および乳剤は，疎水的薬剤のための輸送用ベヒクルまたは担体の例としてよく知
られている。さらに，ある種の有機溶媒，例えばジメチルスルホキシドもまた用
いることができるが，しばしば毒性がより高くなる。さらに，化合物は，持続放
出系，例えば治療薬剤を含む固体疎水性ポリマーの準透過性マトリックスを用い
て輸送することができる。種々の持続放出材料が確立されており，当業者にはよ
く知られている。持続放出カプセルはその化学的性質に応じて，数週間から１０
０日を越える期間，化合物を放出する。治療薬剤の化学的性質および生物学的安
定性に応じて，さらに別の蛋白質安定化戦略を用いてもよい。
【０２３４】 本発明のＰＴＫ調節物質の多くは，薬学的に適合性のカウンターイオンとの塩
として提供することができる。薬学的に適合性の塩は，多くの酸，例えば，限定
されないが，塩酸，硫酸，酢酸，乳酸，酒石酸，マレイン酸，コハク酸等を用い
て形成することができる。塩は，対応する遊離塩基の形に比べて，水性または他
のプロトン性溶媒においてより溶解性が高い傾向にある。
【０２３５】 ｃ）有効用量 本発明において用いるのに適した医薬組成物には，活性成分がその意図する目
的を達成するのに有効な量で含まれる組成物が含まれる。より詳細には，治療上
有効量とは，疾病の症状を予防，緩和，または改善するか，または治療中の患者
の生存を延長するのに有効な化合物の量を意味する。治療上有効量の決定は，特
に本明細書において提供された詳細な開示を考慮すれば，十分に当業者の能力の
範囲内である。
【０２３６】 本発明の方法において用いられる任意の化合物について，治療上有効な用量は
，最初は細胞培養アッセイから見積もることができる。例えば，動物モデルにお
いて，培養細胞において決定されたＩＣ50（すなわちＰＫ活性の最大阻害の半分
を達成する試験化合物の濃度）を含む循環濃度範囲を達成するような用量を処方
することができる。そのような情報は，ヒトにおける有用な用量のさらに正確な
決定のために用いることができる。
【０２３７】 本明細書に記載される化合物の毒性および治療上有効性は，培養細胞または実
験動物における標準的な薬学的方法，例えば，ＬＤ50（集団の５０％に致死的な
用量）およびＥＤ50（集団の５０％において治療上有効な用量）を決定するため
の方法により決定することができる。毒性と治療的効果との間の用量の比は治療
指数であり，これはＬＤ50とＥＤ50との間の比率として表すことができる。高い
治療指数を示す化合物が好ましい。これらの培養細胞アッセイおよび動物研究か
ら得られるデータは，ヒトにおいて用いるための投与量の範囲を定式化するため
に用いることができる。そのような化合物の投与量は，好ましくは，ＥＤ50を含
み毒性がほとんどまたは全くない循環濃度の範囲内にある。投与量は，用いる投
与形態および用いる投与経路により，この範囲内で様々でありうる。正確な製剤
，投与経路，および投与量は，個々の医師が，患者の状態を考慮して選択するこ
とができる（例えば，Ｆｉｎｇｌ ｅｔ ａｌ．１９７５，"Ｔｈｅ Ｐｈａｒ
ｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ"，Ｃ
ｈ．１，ｐ．１を参照）。
【０２３８】 投与量および間隔は，個々に，活性成分がキナーゼ調節効果を維持するのに十
分な血漿レベル，すなわち最小有効濃度（ＭＥＣ）を与えるよう調節することが
できる。ＭＥＣは，各化合物について異なるが，インビトロのデータ，例えば，
本明細書に記載されるアッセイを用いて，キナーゼの５０−９０％の阻害を達成
するのに必要な濃度から見積もることができる。ＭＥＣを達成するのに必要な投
与量は，個々の特性および投与経路に依存するであろう。しかし，ＨＰＬＣアッ
セイまたはバイオアッセイを用いて血漿濃度を決定することができる。
【０２３９】 投与間隔もまた，ＭＥＣ値を用いて決定することができる。化合物は，１０−
９０％の時間，好ましくは３０−９０％の時間，最も好ましくは５０−９０％の
時間，ＭＥＣより高い血漿レベルを維持する投与計画を用いて投与すべきである
。
【０２４０】 局所投与または選択的取り込みの場合には，薬剤の有効な局所濃度は血漿濃度
とは関係ないであろう。
【０２４１】 投与される組成物の量は，もちろん，治療中の患者，患者の体重，苦痛の激し
さ，投与方法，および担当医師の判断に依存するであろう。
【０２４２】 ｄ）包装 組成物は，所望の場合には，活性成分を含む１またはそれ以上の単位用量形を
含んでいてもよいパックまたはディスペンサー装置中で提供することができる。
パックは，例えば，ブリスターパックなどの金属またはプラスチック箔を含むこ
とができる。パックまたはディスペンサー装置には，投与の指示が添付されてい
てもよい。
【０２４３】 パックまたはディスペンサー装置はまた，薬剤の製造，用途，または販売を規
制する政府機関によって規定された形式の，容器に付随した注意書が添付されて
いてもよく，その注意書は当該組成物の形状について，あるいはヒトまたは獣医
学的投与についての当該機関による承認を反映するものである。かかる注意書は
，例えば米国食品医薬品局により処方箋調剤薬として承認されたラベルによるも
のか，または承認された製品に差込まれたものでもよい。適合した製剤学的担体
中で製剤された，本発明の化合物を含む組成物もまた調製され，適当な容器内に
配置され，さらに指示された条件による処置のためにラベルを付すことができる
。ラベル上に示される適切な状態としては，腫瘍の治療，新脈管形成の阻害，線
維症，糖尿病等の治療が挙げられる。
【０２４４】 ＩＶ．本発明の化合物の生物学的活性 本発明の化合物を，ほとんどの蛋白質キナーゼ活性を阻害するその能力につい
て試験した。生物学的アッセイおよびこれらの阻害研究の結果は本明細書に記載
される。蛋白質キナーゼ機能の調節を測定するために用いる方法は，方法のハイ
スループットの観点に関する，Ｔａｎｇらの，"Ｉｎｄｏｌｉｎｏｎｅ Ｃｏｍ
ｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｒｏ
ｄｕｃｔｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ｏｆ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ"と題する国際公開ＷＯ９８／０７６９５（１９９８
年３月２６日公開）と同様である。刊行物ＷＯ９８／０７６９５は，図面を含め
その全体を本明細書の一部としてここに引用する。
【０２４５】 Ｖ．本発明の化合物の医薬組成物および投与 化合物の医薬製剤を製造する方法，患者に投与すべき化合物の量を決定する方
法，および化合物を生物に投与するモードは，ＷＯ９８／０７６９５およびＢｕ
ｚｚｅｔｔｉらによる"Ｈｙｄｒｏｓｏｌｕｂｌｅ ３−Ａｒｙｌｉｄｅｎｅ−
２−Ｏｘｉｎｄｏｌｅ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ａｓ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ Ｋ
ｉｎａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ"と題する国際公開ＷＯ９６／２２９７６（
１９９６年８月１日公開）に記載されており，これらの両方とも，図面を含めそ
の全体を本明細書の一部としてここに引用する。当業者は，そのような記載が本
発明に適用可能であり，これに容易に適合しうることを理解するであろう。
【０２４６】 実施例 以下の実施例は非限定的なものであり，本発明の種々の観点および特徴の代表
的なものにすぎない。実施例は，本発明の化合物を合成する方法および化合物が
蛋白質キナーゼの機能に及ぼす影響を測定する方法を記載する。
【０２４７】 方法において用いられる細胞は市販されている。細胞が有する核酸ベクターも
また市販されており，種々の蛋白質キナーゼの遺伝子の配列は配列データバンク
において容易にアクセス可能である。すなわち，当業者は，市販の細胞，市販の
核酸ベクターおよび蛋白質キナーゼ遺伝子を，当業者には容易に利用可能な技術
を用いて組み合わせることにより，適切な時期に細胞株を容易に再構築すること
ができる。
【０２４８】 合成方法 実施例１：本発明の化合物を合成する方法 本発明の化合物，ならびに前駆体である２−オキシインドールおよびアルデヒ
ドは，化学の分野においてよく知られる技術を用いて容易に合成することができ
る。当業者は，本発明の化合物を形成するための他の合成経路が利用可能であり
，以下は例示のために提供され，限定ではないことを理解するであろう。さらに
，同様に，以下にその合成が記載される化合物も，いかなる意味においても本発
明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。
【０２４９】 Ａ．３−アリーリデニル−６−ヘテロシクリル−２−インドリノン誘導体 化合物ＡＨＩ−１： ３−（４−メトキシ−３−チオフェン−２−イル−ベンジリデン）−６−ピリジ
ン−３−イル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン ６０ｍＬトルエンおよび６０ｍＬエタノール中の６−ブロモ−２−オキシインド
ール（４ｇ，２６．３ｍｍｏｌ）の暖めた撹拌溶液に，テトラキス（トリフェニ
ルホスフィン）パラジウム（０）（２．３ｇ，１．９ｍｍｏｌ）を，次に２Ｍ水
性炭酸ナトリウム（５０ｍＬ，１００ｍｍｏｌ）およびピリジン−３−ボロン酸
，プロパンジオールエステル（５ｇ，３０．７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を油
浴中で１００℃で１２時間撹拌した。反応混合物を冷却し，酢酸エチル（５００
ｍＬ）で希釈し，飽和炭酸水素ナトリウム（２００ｍＬ），水（２００ｍＬ）お
よびブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し，無水硫酸マグネシウ
ムで乾燥し，濃縮して，褐色固体を得た。この固体を塩化メチレン／ジエチルエ
ーテル中で砕いて，２．３２ｇ（４２％）の６−ピリジン−３−イル−１，３−
ジヒドロ−インドール−２−オンを褐色固体として得た。
【化２９】
【０２５０】 ６−ピリジン−３−イル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（１００ｍ
ｇ，０．５ｍｍｏｌ），４−メトキシ−３−チオフェン−２−イル−ベンズアル
デヒド（１１０ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．２３ｍＬ）のエ
タノール（４ｍＬ）中の混合物を加熱還流して一夜撹拌した。次に反応混合物を
冷却し，エーテルで希釈して，沈殿物を得，これを濾過により除去した。濾液を
カラムクロマトグラフィー（溶出液−イソプロパノール／ジクロロメタン）を行
い，３０ｍｇ（１５％）の３−（４−メトキシ−３−チオフェン−２−イル−ベ
ンジリデン）−６−ピリジン−３−イル−１，３−ジヒドロインドール−２−オ
ンを黄色固体として得た。
【化３０】
【０２５１】 化合物ＡＨＩ−２： ３−（２−ヒドロキシベンジリデン）−６−ピリジン−３−イル−１，３−ジヒ
ドロインドール−２−オン ６−ピリジン−３−イル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１００ｍｇ
，０．５ｍｍｏｌ），２−ヒドロキシベンズアルデヒド（６０ｍｇ，０．５ｍｍ
ｏｌ）およびピペリジン（０．２３ｍＬ）のエタノール（４ｍＬ）中の混合物を
加熱還流し，一夜撹拌した。反応混合物を濃縮し，カラムクロマトグラフィー（
溶出液−イソプロパノール／ジクロロメタン）を行って，１００ｍｇ（６４％）
の３−（２−ヒドロキシベンジリデン）−６−ピリジン−３−イル−１，３−ジ
ヒドロインドール−２−オンを黄色固体として得た。
【化３１】
【化３２】
【０２５２】 化合物ＡＨＩ−３： ３−（４−メトキシ−３−チオフェン−２−イル−ベンジリデン）−６−チオフ
ェン−２−イル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン ６０ｍＬトルエンおよび６０ｍＬエタノール中に溶解した６−ブロモ−２−オキ
シインドール（４ｇ，２６．３ｍｍｏｌ）の暖めた撹拌溶液に，テトラキス（ト
リフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２．３ｇ，１．９ｍｍｏｌ）を，次
に２Ｍ水性炭酸ナトリウム（５０ｍＬ，１００ｍｍｏｌ）およびチオフェン−２
−ボロン酸（４．３８ｇ，３４．２ｍｍｏｌ）を１．５時間かけて３部に分けて
加えた。混合物を油浴中で１００℃で１２時間撹拌した。次に混合物を酢酸エチ
ル（４００ｍＬ）で希釈し，飽和炭酸水素ナトリウム（２００ｍＬ），水（２０
０ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し，無水硫酸
マグネシウムで乾燥し，濃縮して，２．５３ｇ（４２％）の６−チオフェン−２
−イル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを黄褐色固体として得た。
【化３３】
【０２５３】 ６−チオフェン−２−イル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１００ｍ
ｇ，０．５ｍｍｏｌ），４−メトキシ−３−チオフェン−２−ベンズアルデヒド
（１１０ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．２３ｍＬ）のエタノー
ル（４ｍＬ）中の混合物を一夜撹拌還流した。反応混合物を濃縮し，カラムクロ
マトグラフィー（溶出液−イソプロパノール／ジクロロメタン）を行って，１０
０ｍｇ（４８％）の３−（４−メトキシ−３−チオフェン−２−イルベンジリデ
ン）−６−チオフェン−２−イル−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを黄
褐色固体として得た。
【化３４】
【化３５】
【０２５４】 化合物ＡＨＩ−４： ３−（２−ヒドロキシベンジリデン）−６−チオフェン−２−イル−１，３−ジ
ヒドロインドール−２−オン ６−チオフェン−２−イル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１００ｍ
ｇ，０．５ｍｍｏｌ），２−ヒドロキシベンズアルデヒド（６０ｍｇ，０．５ｍ
ｍｏｌ）およびピペリジン（０．２３ｍＬ）のエタノール（４ｍＬ）中の混合物
を一夜撹拌還流した。反応混合物を濃縮し，カラムクロマトグラフィー（溶出液
−イソプロパノール／ジクロロメタン）を行って，８０ｍｇ（５０％）の３−（
２−ヒドロキシベンジリデン）−６−チオフェン−２−イル−１，３−ジヒドロ
インドール−２−オンを黄橙色固体として得た。
【化３６】
【０２５５】 化合物ＡＨＩ−５： ３−（４−メトキシ−３−チオフェン−２−イル−ベンジリデン）−６−チオフ
ェン−３−イル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン ６０ｍＬトルエンおよび６０ｍＬエタノール中に溶解した６−ブロモ−２−オキ
シインドール（４ｇ，２６．３ｍｍｏｌ）の暖めた撹拌溶液に，テトラキス（ト
リフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２．３ｇ，１．９ｍｍｏｌ）を，次
に２Ｍ水性炭酸ナトリウム（５０ｍＬ，１００ｍｍｏｌ）およびチオフェン−３
−ボロン酸（４．３ｇ，３３．６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を油浴中で１００
℃で１２時間撹拌した。反応混合物を冷却し，酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈
し，１Ｎ塩酸（２００ｍＬ），水（２００ｍＬ），飽和炭酸水素ナトリウム（２
００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し，無水硫
酸マグネシウムで乾燥し，濃縮して黒色固体を得た。固体を塩化メチレン中で砕
いて，２．０２ｇ（３６％）の６−チオフェン−３−イル−１，３−ジヒドロイ
ンドール−２−オンを灰紫色固体として得た。
【化３７】
【化３８】
【０２５６】 ６−チオフェン−３−イル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１００ｍ
ｇ，０．５ｍｍｏｌ），４−メトキシ−３−チオフェン−２−ベンズアルデヒド
（１１０ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．２３ｍＬ）のエタノー
ル（４ｍＬ）中の混合物を一夜撹拌還流した。沈殿物を真空濾過により回収し，
エタノールで洗浄し，乾燥して，１００ｍｇ（４８％）の３−（４−メトキシ−
３−チオフェン−２−イル−ベンジリデン）−６−チオフェン−３−イル−１，
３−ジヒドロインドール−２−オンを黄褐色固体として得た。
【化３９】
【０２５７】 化合物ＡＨＩ−６： ３−（２−ヒドロキシベンジリデン）−６−チオフェン−３−イル−１，３−ジ
ヒドロインドール−２−オン ６−チオフェン−３−イル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１００ｍ
ｇ，０．５ｍｍｏｌ），２−ヒドロキシ−ベンズアルデヒド（６０ｍｇ，０．５
ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．２３ｍＬ）のエタノール（４ｍＬ）中の混合
物を一夜撹拌還流した。沈殿物を真空濾過により回収し，エタノールで洗浄し，
乾燥して，１１０ｍｇ（６９％）の３−（２−ヒドロキシベンジリデン）−６−
チオフェン−３−イル−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを黄赤色結晶と
して得た。
【化４０】
【０２５８】 化合物ＡＨＩ−７： ３−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロー
ル−２−イルメチレン］−６−ピリジン−３−イル−１，３−ジヒドロインドー
ル−２−オン ６−ピリジン−３−イル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１００ｍｇ
，０．４８ｍｍｏｌ），４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチ
ル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシアルデヒド（１００ｍｇ，０．４８ｍｍｏ
ｌ）およびピペリジン（１滴）のエタノール（２ｍＬ）中の混合物を一夜撹拌還
流した。沈殿物を真空濾過により回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，３−
［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−
２−イルメチレン］−６−ピリジン−３−イル−１，３−ジヒドロインドール−
２−オンを得た。
【化４１】
【０２５９】 化合物ＡＨＩ−８： ３−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロー
ル−２−イルメチレン］−６−チオフェン−２−イル−１，３−ジヒドロインド
ール−２−オン ６−チオフェン−２−イル−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１００ｍ
ｇ，０．４６ｍｍｏｌ），４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメ
チル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキシアルデヒド（１００ｍｇ，０．４８ｍｍ
ｏｌ）およびピペリジン（１滴）のエタノール（２ｍＬ）中の混合物を一夜撹拌
還流した。沈殿物を真空濾過により回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，３
−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール
−２−イルメチレン］−６−チオフェン−２−イル−１，３−ジヒドロ−インド
ール−２−オンを得た。
【化４２】
【０２６０】Ｂ．３−アラルキル−２−インドリノン誘導体 一般合成 方法Ａ：スズキカップリング テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３％当量），臭化
アリール（１当量），２Ｍ水性炭酸ナトリウム（２．５当量）およびボロン酸（
１．２当量）の，等量のトルエンとエタノール中の混合物を１２時間還流する。
反応液を水に注加し，酢酸エチルで抽出する。有機層を塩基およびブラインで洗
浄し，乾燥し，濃縮する。残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製して，生
成物を得る。
【０２６１】 方法Ｂ：オキシインドールとアルデヒドの縮合 十分なエタノール中に，１当量のオキシインドール，１当量のアルデヒドおよ
び１−５当量のピペリジン（またはピロリジン）を加えて，０．５−１．０Ｍオ
キシインドールの溶液を作成し，９０−１００℃で１−１８時間撹拌する。混合
物を室温に冷却し，沈殿物が形成される場合には，これを真空濾過により回収し
，エタノールで洗浄し，乾燥して，生成物を得る。反応混合物を冷却したときに
沈殿物が形成されない場合には，混合物を濃縮し，残渣をカラムクロマトグラフ
ィーにより精製する。
【０２６２】 方法Ｃ：パラジウム担持炭素を用いる還元 数滴の酢酸を含むメタノール中のインドリノンの溶液を，パラジウム担持炭素
を用いて室温で一夜水素化する。触媒を濾過により除去し，メタノールですすぎ
，濾液を濃縮して，還元生成物を得る。
【０２６３】 方法Ｄ：ホウ化水素ナトリウムを用いる還元 メタノール中のインドリノン（１当量）およびジメチルホルムアミドの混合物
に，ホウ化水素ナトリウム（１０当量）を加える。混合物を室温で１／２−３時
間撹拌する。次に反応液を水に注加し，酢酸エチルで抽出し，ブラインで洗浄し
，乾燥し，濃縮して，還元生成物を得る。
【０２６４】 方法Ｅ：パールマン触媒を用いる還元 インドリノンのメタノール中の溶液を，パールマン触媒を用いて，室温で１／
２−１０時間水素化する。触媒を濾過により除去し，メタノールですすぎ，濾液
を濃縮して，還元生成物を得る。
【０２６５】 ｂ．特定の化合物の合成 以下の本発明の化合物の特定の合成は，例示のためにのみ示され，いかなる意
味においても本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。
【０２６６】 化合物ＡＡＩ−１： ６−メトキシ−３−（４−メトキシ−３−チオフェン−３−イルベンジル）−１
，３−ジヒドロインドール−２−オン テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１．３５ｇ，１．１
７ｍｍｏｌ）を，トルエン（４５ｍＬ）およびエタノール（４５ｍＬ）中に溶解
した４−メトキシ−３−ブロモベンズアルデヒド（６．７２ｇ，３１．２６ｍｍ
ｏｌ）の溶液に加えた。この溶液に２Ｍ水性炭酸ナトリウム（８０ｍＬ，７８ｍ
ｍｏｌ）を加え，次にチオフェン−３−ボロン酸（５ｇ，３９．０７ｍｍｏｌ）
を混合物に加えた。混合物を１２時間還流し，その後に水（２００ｍＬ）に注加
し，酢酸エチル（２ｘ１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和水性炭酸水素ナト
リウム（１５０ｍＬ）およびブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し，無水硫酸マグネ
シウムで乾燥し，濃縮した。クロマトグラフィー（シリカ，２０％酢酸エチル／
ヘキサン）により，６ｇ（８８％）の３−（３−チオフェン）−４−メトキシベ
ンズアルデヒドを黄色油状物として得た。
【化４３】
【０２６７】 ３−（３−チオフェン）−４−メトキシベンズアルデヒド（０．５３ｇ，２．４
５ｍｍｏｌ），６−メトキシ−２−オキシインドール（０．４ｇ，２．４５ｍｍ
ｏｌ）およびピペリジン（１．２ｍＬ，１２．２５ｍｍｏｌ）の５ｍＬのエタノ
ール中の混合物を密封管中で１００℃で１２時間保持した。反応液を冷却し，ジ
エチルエーテル（１５０ｍＬ）およびヘキサン（１５０ｍＬ）に加えた。形成し
た固体を濾過により除去し，ジエチルエーテルで，次にヘキサンで洗浄し，乾燥
して，０．５７ｇ（６４％）の６−メトキシ−３−（４−メトキシ−３−チオフ
ェン−３−イルベンジリデン）−１，３−ジヒドロインドール−２−オンをから
し色固体として得た。
【化４４】
【０２６８】 ６−メトキシ−３−（４−メトキシ−３−チオフェン−３−イルベンジリデン）
−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（３６３ｍｇ，１ｍｍｏｌ）のメタノ
ール（１０ｍＬ）およびジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中の混合物に，ホウ化
水素ナトリウム（３８０ｍｇ，１０ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。反応液を室温
で３時間撹拌した。反応混合物を水（１００ｍＬ）で急冷し，酢酸エチル（２０
０ｍＬ）中に抽出した。有機層をブラインで洗浄し，無水硫酸ナトリウムで乾燥
し，濃縮した。残渣をシリカゲル（酢酸エチル：ヘキサン２：３，次に１：１）
でクロマトグラフィーを行い，２１５ｍｇ（５９％）の表題化合物をかすかに橙
色の結晶固体として得た。
【化４５】
【０２６９】 化合物ＡＡＩ−２： シクロペンタンカルボン酸［３−（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシベンジル
）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−イル］−アミド シクロペンタンカルボン酸（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール
−６−イル）−アミドを方法Ｂを用いて３，５−ジクロロサリチルアルデヒドと
縮合させて，シクロペンタンカルボン酸［３−（３，５−ジクロロ−２−ヒドロ
キシ−ベンジリデン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６
−イル］−アミドの異性体の混合物を橙色固体として得た。これを方法Ｄを用い
て還元して，１０ｍｇ（４０％）のシクロペンタンカルボン酸［３−（３，５−
ジクロロ−２−ヒドロキシベンジル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−
インドール−６−イル］−アミドを灰白色結晶固体として得た。
【化４６】
【０２７０】 化合物ＡＡＩ−３： シクロペンタンカルボン酸［３−［５−クロロ−２−ヒドロキシベンジル）−２
−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−イル］−アミド シクロペンタンカルボン酸（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール
−６−イル）−アミドを方法Ｂを用いて５−クロロサリチルアルデヒドと縮合し
て，シクロペンタンカルボン酸［３−（５−クロロ−２−ヒドロキシ−ベンジリ
デン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−イル］−アミ
ドを得た。これを方法Ｄを用いて還元して，３４．４ｍｇ（６８％）のシクロペ
ンタンカルボン酸［３−（５−クロロ−２−ヒドロキシベンジル）−２−オキソ
−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−イル］−アミドを灰白色結晶固体
として得た。
【化４７】
【０２７１】 化合物ＡＡＩ−４： ３−（４−ヒドロキシ−６，４’−ジメトキシビフェニル−３−イルメチル）−
１，３−ジヒドロインドール−２−オン ２−ヒドロキシ−４−メトキシベンズアルデヒド（２０ｇ，１３１．４ｍｍｏｌ
）を臭化して，５−ブロモ−２−ヒドロキシ−４−メトキシベンズアルデヒドを
淡黄色固体として得た。次に方法Ａを用いて４−メトキシフェニルボロン酸（７
５０ｍｇ，４．９４ｍｍｏｌ）と結合させて，８００ｍｇ（７５％）の４−ヒド
ロキシ−６，４’−ジメトキシビフェニル−３−カルボアルデヒドを淡黄色固体
として得た。
【化４８】
【０２７２】 ２−オキシインドールを方法Ｂを用いて４−ヒドロキシ−６，４’−ジメトキシ
ビフェニル−３−カルボアルデヒドと縮合させて，３−（４−ヒドロキシ−６，
４’−ジメトキシビフェニル−３−イルメチレン）−１，３−ジヒドロインドー
ル−２−オンの異性体の混合物を得た。次に方法Ｅを用いて還元して，４．５ｍ
ｇ（７５％）の３−（４−ヒドロキシ−６，４’−ジメトキシビフェニル−３−
イルメチル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを白色固体として得た。
【化４９】
【０２７３】 化合物ＡＡＩ−５： ３−（３−シクロペンチル−４−メトキシベンジル）−５−フルオロ−１，３−
ジヒドロインドール−２−オン ５−フルオロ−２−オキシインドールを方法Ｂを用いて３−シクロペンチル−４
−メトキシベンズアルデヒドと縮合させて，３−（３−シクロペンチル−４−メ
トキシベンジリデン）−５−フルオロ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オ
ンを黄橙色固体として得た。次に方法Ｅを用いて還元して，０．７８ｇ（７８％
）の３−（３−シクロペンチル−４−メトキシベンジル）−５−フルオロ−１，
３−ジヒドロインドール−２−オンを白色固体として得た。
【化５０】
【０２７４】 化合物ＡＡＩ−６： Ｎ−［３−（４−メトキシ−３−チオフェン−２−イルベンジル）−２−オキソ
−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−イル］−アセトアミド ４−メトキシ−３−ブロモベンズアルデヒド（１．５ｇ）を方法Ａを用いてチオ
フェン−２−ボロン酸（０．９８ｇ）と結合させて，１．３ｇ（８７％）の３−
（２−チオフェン）−４−メトキシベンズアルデヒドを黄色油状物として得た。
【化５１】
【０２７５】 ６−アセトアミド−２−オキシインドールを３−（２−チオフェン）−４−メト
キシベンズアルデヒドと縮合させて，Ｎ−［３−（４−メトキシ−３−チオフェ
ン−２−イルベンジリデン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドー
ル−６−イル］−アセトアミドを黄色固体として得た。これを方法Ｅを用いて還
元して，０．０４ｇ（８０％）のＮ−［３−（４−メトキシ−３−チオフェン−
２−イルベンジル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−
イル］−アセトアミドを白色固体として得た。
【化５２】
【０２７６】 化合物ＡＡＩ−７： Ｎ−｛３−［３−シクロヘキシル−４−（２−モルホリン−４−イルエトキシ）
−ベンジル］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−イル｝
−アセトアミド ６−アセトアミド−２−オキシインドールを方法Ｂを用いて３−シクロヘキシル
−４−モルホリノエトキシベンズアルデヒドと縮合させて，Ｎ−｛３−［３−シ
クロヘキシル−４−（２−モルホリン−４−イルエトキシ）−ベンジリデン］−
２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−イル｝−アセトアミド
の異性体の混合物をからし色固体として得た。これを方法Ｅを用いて還元して，
０．０４ｇ（８０％）のＮ−｛３−［３−シクロヘキシル−４−（２−モルホリ
ン−４−イルエトキシ）−ベンジル］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−
インドール−６−イル｝−アセトアミドを白色固体として得た。
【化５３】
【０２７７】 化合物ＡＡＩ−８： ３−（４−メトキシ−３−チオフェン−３−イルベンジル）−５−（２−モルホ
リン−４−イルエチル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン ５−（２−クロロエチル）−２−オキシインドール（２．３ｇ），モルホリン（
１．２ｍＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（１．２ｍＬ）のジメチルスル
ホキシド（１０ｍＬ）中の溶液を１００℃で一夜撹拌した。混合物を冷却し，水
に注加し，酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し，乾燥し，蒸発さ
せた。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル，クロロホルム中５％メタノール
）を行って，０．９ｇ（３１％）の５−（２−モルホリン−４−イルエチル）−
２−オキシインドールを白色固体として得た。
【化５４】
【０２７８】 ５−（２−モルホリン−４−イルエチル）−２−オキシインドールを方法Ｂを用
いて３−（３−チオフェン）−４−メトキシベンズアルデヒドと縮合させて，３
−（４−メトキシ−３−チオフェン−３−イル−ベンジリデン）−５−（２−モ
ルホリン−４−イルエチル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを橙黄色
固体として得た。これを方法Ｅを用いて還元して，０．０３ｇ（６０％）の３−
（４−メトキシ−３−チオフェン−３−イル−ベンジル）−５−（２−モルホリ
ン−４−イルエチル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを白色固体とし
て得た。
【化５５】
【０２７９】 化合物ＡＡＩ−９： ３−（５−イソプロピル−４−メトキシ−２−メチルベンジル−１，３−ジヒド
ロインドール−２−オン ２−オキシインドールを方法Ｂを用いて５−イソプロピル−４−メトキシ−２−
メチルベンズアルデヒドと縮合させて，０．２５ｇの３−（５−イソプロピル−
４−メトキシ−２−メチルベンジリデン）−１，３−ジヒドロインドール−２−
オンを黄橙色固体として得た。これを方法Ｅを用いて還元して，２ｇ（１００％
）の３−（５−イソプロピル−メトキシ−２−メチルベンジル）−１，３−ジヒ
ドロインドール−２−オンを白色固体として得た。
【化５６】
【化５７】
【０２８０】 化合物ＡＡＩ−１０： ３−（３，５−ジイソプロピル−４−メトキシベンジル）−１，３−ジヒドロイ
ンドール−２−オン ２−オキシインドールを方法Ｂを用いて３，５−ジイソプロピル−４−メトキシ
ベンズアルデヒドと縮合させて，３−（３，５−ジイソプロピル−４−メトキシ
−ベンジリデン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを黄橙色固体とし
て得た。これを方法Ｅを用いて還元して，２ｇ（１００％）の３−（３，５−ジ
イソプロピル−４−メトキシベンジル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オ
ンを白色固体として得た。
【化５８】
【０２８１】 化合物ＡＡＩ−１１： ３−（３−シクロペンチル−４−ヒドロキシベンジル）−５−フルオロ−１，３
−ジヒドロインドール−２−オン ３−（３−シクロペンチル−４−ヒドロキシベンジリデン）−５−フルオロ−１
，３−ジヒドロインドール−２−オン（０．０４５ｇ）を方法Ｅを用いて還元し
て，０．０２５ｇ（５６％）の３−（３−シクロペンチル−４−ヒドロキシ−ベ
ンジル）−５−フルオロ−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを黄褐色泡状
物として得た。
【化５９】
【０２８２】 化合物ＡＡＩ−１２： ３−ベンジル−４−（２−ヒドロキシエチル−１，３−ジヒドロインドール−２
−オン ４−（２−ヒドロキシエチル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを方法
Ｂを用いて４−ブロモベンズアルデヒドと縮合させて，３−（４−ブロモベンジ
リデン）−４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロインドール−２
−オンを黄色固体として得た。これを方法Ｅを用いて還元して，０．２ｇ（９１
％）の３−ベンジル−４−（２−ヒドロキシエチル）−１，３−ジヒドロインド
ール−２−オンを黄色／橙色泡状物として得た。
【化６０】
【０２８３】 化合物ＡＡＩ−１３： ３−（２−ヒドロキシベンジル）−６−（３−メトキシフェニル）−１，３−ジ
ヒドロインドール−２−オン ６−（３−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを方法
Ｂを用いてサリチルアルデヒドと縮合させて，３−（２−ヒドロキシベンジリデ
ン）−６−（３−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オ
ンを黄色固体として得た。これを方法Ｅを用いて還元して，０．０３ｇ（６６％
）の３−（２−ヒドロキシ−ベンジル）−６−（３−メトキシ−フェニル）−１
，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを白色固体として得た。
【０２８４】 化合物ＡＡＩ−１４： ３−（４−ブロモベンジル）−４−（２−ヒドロキシエチル）−１，３−ジヒド
ロインドール−２−オン ３−（４−ブロモベンジリデン）−４−（２−ヒドロキシエチル）−１，３−ジ
ヒドロインドール−２−オン（０．１８ｇ，０．５２ｍｍｏｌ）を方法Ｄを用い
て還元して，０．１７ｇ（９５％）の３−（４−ブロモベンジル）−４−（２−
ヒドロキシエチル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを白色固体として
得た。
【化６１】
【０２８５】 化合物ＡＡＩ−１５： ５−クロロ−３−［３，５−ジイソプロピル−４−（２−モルホリン−４−イル
エトキシ）−ベンジル］−１，３−ジヒドロインドール−２−オン ５−クロロ−２−オキシインドールを方法Ｂを用いて３，５−ジイソプロピル−
４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−ベンズアルデヒドと縮合させて
，５−クロロ−３−［３，５−ジイソプロピル−４−（２−モルホリン−４−イ
ルエトキシ）−ベンジリデン］−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを褐色
がかった橙色固体として得た。これを方法Ｅを用いて還元して，１．３ｇ（１０
０％）の５−クロロ−３−［３，５−ジイソプロピル−４−（２−モルホリン−
４−イルエトキシ）−ベンジル］−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを黄
色／橙色泡状物として得た。
【化６２】
【０２８６】 化合物ＡＡＩ−１６： ３−（１Ｈ−インドール−５−イルメチル）−４−メチル−１，３−ジヒドロイ
ンドール−２−オン ４−メチル−２−オキシインドールを方法Ｂを用いて１Ｈ−インドール−５−カ
ルボアルデヒドと縮合させて，３−（１Ｈ−インドール−５−イルメチレン）−
４−メチル−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを白色固体として得た。こ
れを方法Ｃを用いて還元して，２０ｍｇ（４０％）の３−（１Ｈ−インドール−
５−イルメチル）−４−メチル−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを得た
。
【化６３】
【０２８７】 化合物ＡＡＩ−１７： ３−（１Ｈ−インドール−５−イルメチル）−１，３−ジヒドロインドール−２
−オン ２−オキシインドール（１３３ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を方法Ｂを用いて１Ｈ−イン
ドール−５−カルボアルデヒド（１４５ｍｇ，１ｍｍｏｌ）と縮合させて，１５
５ｍｇ（６０％）の３−（１Ｈ−インドール−５−イルメチレン）−１，３−ジ
ヒドロインドール−２−オンを白色固体として得た。
【化６４】
【０２８８】 ３−（１Ｈ−インドール−５−イルメチレン）−１，３−ジヒドロインドール−
２−オン（８０ｍｇ，０．３１ｍｍｏｌ）を方法Ｃを用いて還元して，７６ｍｇ
（９５％）の３−（１Ｈ−インドール−５−イルメチル）−１，３−ジヒドロ−
インドール−２−オンを得た。
【化６５】
【０２８９】 化合物ＡＡＩ−１８： ３−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロー
ル−２−イルメチル］−１，３−ジヒドロインドール−２−オン ２−オキシインドール（１３３ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）を方法Ｂを用いて４−（
３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−カル
ボアルデヒド（２０８ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）と縮合させて，１６８．３ｍｇ（
５２％）の３−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１
Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
を黄色固体として得た。
【化６６】
【化６７】
【０２９０】 ３−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロー
ル−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（１３ｍｇ
，０．０４ｍｍｏｌ）を方法Ｃを用いて還元して，６ｍｇ（４６％）の３−［４
−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−
イルメチル］−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを得た。
【化６８】
【０２９１】 化合物ＡＡＩ−１９： ５−ブロモ−３−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−
１Ｈ−ピロール−２−イルメチル］−１，３−ジヒドロインドール−２−オン ５−ブロモ−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを方法Ｂを用いて４−（３
−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボ
アルデヒド（２０８ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）と縮合させて，２８４．９ｍｇ（７
１％）の５−ブロモ−３−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジ
メチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロインドール−
２−オンを赤色固体として得た。
【化６９】
【０２９２】 ５−ブロモ−３−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−
１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロインドール−２−オン
（５０ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ）を方法Ｄを用いて還元して，５−ブロモ−３−
［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−
２−イルメチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを得た。
【化７０】
【０２９３】 化合物ＡＡＩ−２０： ３−［４−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロ
ール−２−イルメチル］−６−（２−メトキシ−フェニル）−１，３−ジヒドロ
−インドール−２−オン ６−（２−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（２３
９ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）を方法Ｂを用いて４−（３−ジメチルアミノプロピル
）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（２０８ｍｇ，
１．０ｍｍｏｌ）と縮合させて，３３３ｍｇ（８３％）の３−［４−（３−ジメ
チルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン
］−６−（２−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを
黄色固体として得た。
【化７１】
【０２９４】 ３−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロー
ル−２−イルメチレン］−６−（２−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロイ
ンドール−２−オン（５４ｍｇ，０．１２６ｍｍｏｌ）を方法Ｃを用いて還元し
て，４５ｍｇ（８６％）の３−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５
−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチル］−６−（２−メトキシフェニル
）−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを得た。
【化７２】
【０２９５】 化合物ＡＡＩ−２１： ３−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロー
ル−２−イルメチル］−６−（３−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロイン
ドール−２−オン ６−（３−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（２３
９ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）を方法Ｂを用いて４−（３−ジメチルアミノプロピル
）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（２０８ｍｇ，
１．０ｍｍｏｌ）と縮合させて，３３３ｍｇ（８３％）の３−［４−（３−ジメ
チルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン
］−６−（３−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを
赤色固体として得た。
【化７３】
【化７４】
【０２９６】 ３−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロー
ル−２−イルメチレン］−６−（３−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロイ
ンドール−２−オン（５０ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ）を方法Ｃを用いて還元して
，４０ｍｇ（７７％）の３−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−
ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチル］−６−（３−メトキシフェニル）
−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを得た。
【化７５】
【０２９７】 化合物ＡＡＩ−２２： ３−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロー
ル−２−イルメチル］−６−（４−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロイン
ドール−２−オン ６−（４−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（２３
９ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）を方法Ｂを用いて４−（３−ジメチルアミノプロピル
）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（２０８ｍｇ，
１．０ｍｍｏｌ）と縮合させて，３３３ｍｇ（８３％）の３−［４−（３−ジメ
チルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン
］−６−（４−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを
褐色固体として得た。
【化７６】
【０２９８】 ３−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロー
ル−２−イルメチレン］−６−（４−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロイ
ンドール−２−オン（６９ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）を方法Ｃを用いて還元して
，６５ｍｇ（９４％）の３−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−
ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチル］−６−（４−メトキシフェニル）
−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを得た。
【化７７】
【０２９９】 化合物ＡＡＩ−２３： ５−クロロ−３−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−
１Ｈ−ピロール−２−イルメチル］−１，３−ジヒドロインドール−２−オン ５−クロロ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１６７ｍｇ，１．０ｍｍ
ｏｌ）を方法Ｂを用いて４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチ
ル−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（２０８ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）と
縮合させて，１８８．７ｍｇ（５３％）の５−クロロ−３−［４−（３−ジメチ
ルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］
−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを褐色固体として得た。
【化７８】
【０３００】 ５−クロロ−３−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチル−
１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロインドール−２−オン
（６３ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）を方法Ｃを用いて還元して，１５ｍｇ（２４％
）の５−クロロ−３−［４−（３−ジメチルアミノプロピル）−３，５−ジメチ
ル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチル］−１，３−ジヒドロインドール−２−オ
ンを得た。
【化７９】
【０３０１】 化合物ＡＡＩ−２４： ３−（３−フルオロ−２−ヒドロキシベンジル）−６−フェニル−１，３−ジヒ
ドロインドール−２−オン ６−フェニル−２−オキシインドール（５０ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）を方法Ｂを
用いて３−フルオロ−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（５０ｍｇ，０．３６ｍ
ｍｏｌ）と縮合させて，５２ｍｇ（５３％）の３−（３−フルオロ−２−ヒドロ
キシベンジリデン）−６−フェニル−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを
黄色／橙色固体として得た。
【化８０】
【０３０２】 ３−（３−フルオロ−２−ヒドロキシベンジリデン）−６−フェニル−１，３−
ジヒドロインドール−２−オン（２６ｍｇ，０．０８ｍｍｏｌ）を方法Ｅを用い
て還元して，２６ｍｇ（１００％）の３−（３−フルオロ−２−ヒドロキシ−ベ
ンジル）−６−フェニル−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを得た。
【化８１】
【０３０３】 化合物ＡＡＩ−２５： ３−（２−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−６−フェニル−１，３−ジヒ
ドロインドール−２−オン ６−フェニル−２−オキシインドール（５０ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）を方法Ｂを
用いて２−ヒドロキシ−４−メトキシベンズアルデヒド（５０ｍｇ，０．３３ｍ
ｍｏｌ）と縮合させて，７０ｍｇ（６８％）の３−（２−ヒドロキシ−４−メト
キシベンジリデン）−６−フェニル−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを
黄色／橙色固体として得た。
【化８２】
【０３０４】 ３−（２−ヒドロキシ−４−メトキシベンジリデン）−６−フェニル−１，３−
ジヒドロインドール−２−オン（８０ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ）を方法Ｅを用い
て還元して，８０ｍｇ（１００％）の３−（２−ヒドロキシ−４−メトキシベン
ジル）−６−フェニル−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを得た。
【化８３】
【０３０５】 化合物ＡＡＩ−２６： ３−（５−ブロモ−２−ヒドロキシベンジル）−６−フェニル−１，３−ジヒド
ロインドール−２−オン ６−フェニル−２−オキシインドール（５０ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）を方法Ｂを
用いて５−ブロモサリチルアルデヒド（５０ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）と縮合さ
せて，８０ｍｇ（８２％）の３−（５−ブロモ−２−ヒドロキシベンジリデン）
−６−フェニル−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを黄色／橙色固体とし
て得た。
【化８４】
【０３０６】 ３−（５−ブロモ−２−ヒドロキシベンジリデン）−６−フェニル−１，３−ジ
ヒドロインドール−２−オン（２３ｍｇ，０．０６ｍｍｏｌ）を方法Ｅを用いて
還元して，２３ｍｇ（１００％）の３−（５−ブロモ−２−ヒドロキシ−ベンジ
ル）−６−フェニル−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを得た。
【化８５】
【０３０７】 化合物ＡＡＩ−２７： ４−（２−ヒドロキシエチル）−３−（６−メチルピリジン−２−イルメチル）
−１，３−ジヒドロインドール−２−オン ４−（２−ヒドロキシエチル）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（８９
ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）を，方法Ｂを用いて６−メチル−２−ピリジンカルボア
ルデヒド（６１ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）と縮合させて，４−（２−ヒドロキシエ
チル）−３−（６−メチルピリジン−２−イルメチレン）−１，３−ジヒドロイ
ンドール−２−オンを黄色固体として得た。
【化８６】
【０３０８】 ４−（２−ヒドロキシエチル）−３−（６−メチルピリジン−２−イルメチレン
）−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１６ｍｇ，０．０６ｍｍｏｌ）を
方法Ｅを用いて還元して，１６ｍｇ（１００％）の４−（２−ヒドロキシ−エチ
ル）−３−（６−メチルピリジン−２−イルメチル）−１，３−ジヒドロインド
ール−２−オンを得た。
【化８７】
【０３０９】 化合物ＡＡＩ−２８： ３−（３−ブロモ−５−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシベンジル）−５−ク
ロロ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン ５−クロロ−２−オキシインドール（１６７ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を方法Ｂを用い
て３−ブロモ−５−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシベンズアルデヒド（３０
８．５ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）と縮合させて，３２９ｍｇ（８１％）の３−（３
−ブロモ−５−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシベンジリデン）−５−クロロ
−１，３−ジヒドロインドール−２−オンを異性体の混合物として得た。
【化８８】
【０３１０】 ３−（３−ブロモ−５−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシベンジリデン）−５
−クロロ−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（１ｇ，２．４６ｍｍｏｌ）
を方法Ｃを用いて還元して，１．００５ｇ（１００％）の３−（３−ブロモ−５
−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシベンジル）−５−クロロ−１，３−ジヒド
ロインドール−２−オンを異性体の混合物として得た。
【化８９】
【０３１１】Ｃ．ジアリールインドリノン化合物 一般合成 ケトンとオキシインドールの縮合： 適当なインドリン−２−オン（１．０当量），適当なケトン（１．２当量），
およびピペリジンまたはピロリジン（０．１当量）の，エタノール（１−２ｍＬ
／１．０ｍｍｏｌオキシインドール）中の反応混合物を９０℃で３−５時間加熱
する。冷却した後，沈殿物を濾過し，冷エタノールで洗浄し，乾燥して，目的と
する化合物を得る。
【０３１２】 ４−（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−４−オキソ−酪酸
【化９０】 ジクロロメタン（１５０ｍＬ）中の１３．３ｇ（０．１ｍｏｌ）の塩化アルミニ
ウムの混合物に，１０ｇ（０．１０５ｍｏｌ）の２，４−ジメチルピロールを室
温で加えた。得られた溶液を室温で１５分間撹拌し，１６．４ｇ（０．１ｍｏｌ
）の塩化コハク酸エチルを加えた。反応混合物を室温で２日間撹拌し，飽和炭酸
ナトリウムで急冷した。次に，混合物を水（１００ｍＬ）およびジクロロメタン
（３００ｍＬ）で希釈した。有機層を分離し，濃縮した。残渣をエタノール（３
０ｍＬ）および１Ｎ水酸化カリウム（３０ｍＬ）中に取り出し，９０℃で２時間
加熱した。次に冷却した混合物を水で希釈し，酢酸エチルで抽出した。塩基性水
性層を６Ｎ塩酸でｐＨ３となるまで酸性にした。次に混合物を酢酸エチルで抽出
した（３ｘ）。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し，硫酸ナトリウムで乾燥
し，濃縮した。残渣を酢酸エチル（２０ｍＬ）とともに撹拌し，固体を濾過によ
り回収して，８２０ｍｇの４−（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル
）−４−オキソ−酪酸を暗色固体として得た。
【化９１】
【化９２】 次に，これをオキシインドールと縮合した。
【０３１３】 ３−［３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−（４−メトキシ−フ
ェニル）−メチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（ＤＡＩ−Ｉ
）
【化９３】 ジクロロメタン中の塩化アルミニウム（１．３当量）を，室温で塩化ベンゾイル
（１当量）に加え，次にジクロロメタン中の２，４−ジメチルピロール（１．６
当量）の溶液を加えた。次に，混合物を室温で一夜撹拌した。反応液を酢酸エチ
ルで希釈し，ブラインで洗浄し，乾燥し，濃縮した。残渣をクロマトグラフィー
を行い，酢酸エチルおよびヘキサンで溶出して，ケトンを得た。
【０３１４】 ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中の，（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール
−２−イル）−（４−メトキシ−フェニル）−メタノン（５０ｍｇ，０．２２ｍ
ｍｏｌ），オキシインドール（５０ｍｇ，０．３７ｍｍｏｌ），ピロリジン（０
．３ｍＬ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデセ−７−エン（
０．１ｍＬ）を，１５０−１６０℃で１日間加熱した。水素化ナトリウム（１２
ｍｇ）を反応混合物に加え，加熱を３日間続けた。反応液を水に注加し，酢酸エ
チルで抽出した。有機層を水で洗浄し，乾燥し，濃縮した。残渣をクロマトグラ
フィーを行い，酢酸エチルおよびジクロロメタンで溶出して，６ｍｇの３−［（
３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−（４−メトキシ−フェニル）
−メチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを黄色固体として得た
。
【化９４】
【化９５】
【０３１５】 ３−［（３，４−ジメトキシ−フェニル）−（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロー
ル−２−イル）−メチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（ＤＡ
Ｉ−ＩＩ）
【化９６】
【化９７】 ジクロロメタン（１００ｍＬ）中の塩化アルミニウム（１．７ｇ，１２．７５ｍ
ｍｏｌ）を塩化３，４−ジメトキシベンゾイル（２．０ｇ，１０ｍｍｏｌ）に室
温で加え，次にジクロロメタン（５ｍＬ）中の２，４−ジメチルピロール（１．
５ｇ，１５．８ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。次に，混合物を室温で一夜撹拌した
。反応液を酢酸エチルで希釈し，ブラインで洗浄し，乾燥し，濃縮した。残渣を
クロマトグラフィーを行い，酢酸エチルおよびヘキサンで溶出して，１ｇ（３９
％）の（３，４−ジメトキシ−フェニル）−（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロー
ル−２−イル）−メタノンを固体として得た。
【化９８】
【０３１６】 ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）中の（３，４−ジメトキシ−フェニル）−
（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−メタノン（１００ｍｇ，０
．４ｍｍｏｌ），オキシインドール（１００ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ），ピロリジ
ン（０．２ｍＬ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデセ−７−
エン（数滴）を１６０℃で２時間加熱した。水素化ナトリウム（１８ｍｇ）を反
応混合物に加え，１６０℃で３日間加熱を続けた。反応液を水に注加し，酢酸エ
チルで抽出した。有機層を水で洗浄し，乾燥し，濃縮した。残渣をクロマトグラ
フィーを行い，酢酸エチルおよびヘキサンで溶出して，５ｍｇの３−［（３，４
−ジメトキシ−フェニル）−（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）
−メチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを得た。ＭＳ ＥＩ
３７４［Ｍ］+
【０３１７】Ｄ．４−置換インドリノン化合物 化合物ＩＮ−００１： ４−［２−（３−イソプロピル｝−フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ
−インドール−２−オン
【化９９】 ジエチルアゾジカルボキシレート（０．４７ｍＬ，３ｍｍｏｌ）を，窒素雰囲気
下で，トリフェニルホスフィン（０．７８６ｇ，３ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフ
ラン（１０ｍＬ）中の溶液に加えた。混合物を１５分間撹拌した。次にこれに４
−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（０
．５３ｇ，３ｍｍｏｌ）（Ｈａｙｌｅｒ，Ｊ．Ｄ．；Ｈｏｗｉｅ，Ｓ．Ｌ．Ｂ．
；Ｇｉｌｅｓ，Ｒ．Ｇ．；Ｎｅｇｕｓ，Ａ．；Ｏｘｌｅｙ，Ｐ．Ｗ．；ｅｔ ａ
ｌ；Ｊ．Ｈｅｔｅｏｃｙｃｌ．Ｃｈｅｍ．；３２；３；１９９５；８７５−８８
２）を，次に３−イソプロピルフェノール（０．４１ｍＬ，３ｍｍｏｌ）を加え
た。混合物を室温で１日間撹拌し，溶媒を蒸発させた。残渣をシリカゲルでクロ
マトグラフィーを行い，酢酸エチル：ヘキサン１：９で溶出して，１２０ｍｇ（
１４％）の４−［２−（３−イソプロピル−フェノキシ）−エチル］−１，３−
ジヒドロ−インドール−２−オンを得た。
【化１００】
【０３１８】 化合物ＩＮ−００２ ４−［２−（２−イソプロピル−フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−
インドール−２−オン
【化１０１】 ジエチルアゾジカルボキシレート（１．５８ｍＬ，１０ｍｍｏｌ）を，窒素雰囲
気下で，トリフェニルホスフィン（２．６２ｇ，１０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロ
フラン（２０ｍＬ）中の溶液に加えた。混合物を１５分間撹拌した。次にこれに
４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（
１．７７ｇ，１０ｍｍｏｌ）を，次に２−イソプロピルフェノール（１．３６ｍ
Ｌ，１０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１８時間撹拌し，溶媒を蒸発させ
た。残渣をシリカゲルでクロマトグラフィーを行い，酢酸エチル：ヘキサン２：
８で溶出して，０．２６ｇ（９％）の４−［２−（２−イソプロピル−フェノキ
シ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを淡黄色固体として
得た。
【化１０２】
【０３１９】 化合物ＩＮ−００３ ４−［２−（ビフェニル−３−イルオキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−イ
ンドール−２−オン
【化１０３】 ジエチルアゾジカルボキシレート（１．５８ｍＬ，１０ｍｍｏｌ）を，窒素雰囲
気下で，トリフェニルホスフィン（２．６２ｇ，１０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロ
フラン（２０ｍＬ）中の溶液に加えた。混合物を１５分間撹拌した。次にこれに
４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（
１．７７ｇ，１０ｍｍｏｌ）を，次に３−フェニルフェノール（１．７ｇ，１０
ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１日間撹拌し，溶媒を蒸発させた。残渣を
酢酸エチル（１５０ｍＬ）に溶解し，有機溶媒を２Ｎ塩酸（３ｘ５０ｍＬ），飽
和炭酸水素ナトリウム溶液およびブラインで洗浄した。残渣をシリカゲルでクロ
マトグラフィーを行い，酢酸エチル：ヘキサン２：８で溶出して，１．１９ｇ（
３６％）の４−［２−（ビフェニル−３−イルオキシ）−エチル］−１，３−ジ
ヒドロ−インドール−２−オンを得た。
【化１０４】
【０３２０】 化合物ＩＮ−００４ ３−（４−ブロモ−ベンジリデン）−４−（２−ヒドロキシ−エチル−１，３−
ジヒドロ−インドール−２−オン
【化１０５】 ４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（
３．０ｇ，１７ｍｍｏｌ），４−ブロモベンズアルデヒド（３．１ｇ，１７ｍｍ
ｏｌ）およびピペリジン（８．４ｍＬ，８５ｍｍｏｌ）のエタノール（１１３ｍ
Ｌ）中の混合物を９０℃で一夜加熱した。反応混合物を濃縮し，残渣をシリカゲ
ルのカラムでクロマトグラフィーを行って，２．４ｇ（４１％）の３−（４−ブ
ロモ−ベンジリデン）−４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−
インドール−２−オンを黄橙色固体として得た。
【化１０６】
【０３２１】 化合物ＩＮ−００５ ４−（２−ヒドロキシ−エチル）−３−ピリジン−２−イルメチレン−１，３−
ジヒドロ−インドール−２−オン
【化１０７】 ４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（
８０ｍｇ，０．４５ｍｍｏｌ）および２−ピリジンカルボキシアルデヒド（６０
ｍｇ，０．５６ｍｍｏｌ）のエタノール（５ｍＬ）中１％ピペリジン中の混合物
を９０℃で８時間加熱した。反応混合物を濃縮し，残渣をシリカゲルのカラムで
クロマトグラフィーを行った。次にこれを酢酸エチルおよびヘキサン中で砕いて
，５５ｍｇ（４６％）の４−（２−ヒドロキシ−エチル）−３−ピリジン−２−
イルメチレン−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを得た。
【化１０８】
【０３２２】 化合物ＩＮ−００６ ４−（２−ヒドロキシ−エチル）−３−（６−メチル−ピリジン−２−イルメチ
レン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
【化１０９】 ４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（
８９ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ），６−メチル−２−ピリジン−カルボアルデヒド（
６１ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）の１．０ｍＬのエ
タノール中の混合物を１００℃で１時間加熱し，室温に冷却した。沈殿物を濾過
し，酢酸エチルおよびヘキサンから再結晶して，４−（２−ヒドロキシ−エチル
）−３−（６−メチル−ピリジン−２−イルメチレン）−１，３−ジヒドロ−イ
ンドール−２−オンを黄色固体として得た。
【化１１０】
【０３２３】 化合物ＩＮ−００７ ４−（２−ヒドロキシ−エチル−３−（１Ｈ−インドール−５−イルメチレン）
−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
【化１１１】 テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）中のインドール−５−カルボン酸（５．０２ｇ
，３１３ｍｍｏｌ）を，テトラヒドロフラン（１２５ｍＬ）中で撹拌した水素化
リチウムアルミニウム（１．８８ｇ，４９．５ｍｍｏｌ）に，窒素下で外部から
加熱して穏やかに還流しながらゆっくり加えた。混合物を２時間加熱還流し，室
温に冷却した。次に２Ｎ水酸化ナトリウム（１０ｍＬ）を反応混合物に滴加した
。沈殿物を濾過により除去し，濾液を濃縮した。これをジクロロメタン（８０ｍ
Ｌ）に溶解し，２Ｎ水酸化ナトリウム（１０ｍＬ），水（２０ｍＬ）およびブラ
イン（２０ｍＬ）で洗浄し，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，濃縮して，約５ｇの
（１Ｈ−インドール−５−イル）−メタノールを得た。
【０３２４】 （１Ｈ−インドール−５−イル）−メタノール（３．８ｇ，２５．８ｍｍｏｌ
）および酸化マンガン（５ｇ，５７．５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５０ｍＬ
）中の混合物を室温で６０時間撹拌した。通常の後処理およびクロマトグラフィ
ーの後，１．５ｇ（４０％）の１Ｈ−インドール−５−カルボアルデヒドを得た
。
【０３２５】 ４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
（３９ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ），１Ｈ−インドール−５−カルボアルデヒド（
３２ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）および１滴のピペリジンのエタノール中の混合物
を９０℃で一夜加熱し，室温に冷却した。反応混合物を濃縮し，残渣をシリカゲ
ルカラムで精製して，４８ｍｇ（７２％）の４−（２−ヒドロキシ−エチル）−
３−（１Ｈ−インドール−５−イルメチレン）−１，３−ジヒドロ−インドール
−２−オンを黄色固体として得た。
【化１１２】
【０３２６】 化合物ＩＮ−００８ ４−（２−ヒドロキシ−エチル）−３−（４−メトキシ−３−チオフェン−２−
イル−ベンジリデン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
【化１１３】 テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．２４ｇ，０．２
１ｍｍｏｌ）を，４−メトキシ−３−ブロモベンズアルデヒド（１．５ｇ，６．
９８ｍｍｏｌ）のトルエン（１５ｍＬ）およびエタノール（１５ｍＬ）中の溶液
に加え，次に炭酸ナトリウム（１４ｍＬ，２８ｍｍｏｌ）の２Ｍ水性溶液を加え
た。この混合物に，チオフェン−２−ボロン酸（０．９８ｇ，７．６８ｍｍｏｌ
）を加え，混合物を加熱還流した。３時間後，反応液を水（１００ｍＬ）と酢酸
エチル（２５０ｍＬ）との間に分配した。有機層を飽和水性炭酸水素ナトリウム
（７５ｍＬ）およびブライン（７５ｍＬ）で洗浄し，硫酸マグネシウムで乾燥し
，濃縮した。クロマトグラフィー（シリカ，２０％酢酸エチル／ヘキサン）によ
り，１．３ｇ（８７％）の４−メトキシ−３−チオフェン−２−イル−ベンズア
ルデヒドを黄色油状物として得た。
【化１１４】
【化１１５】
【０３２７】 ４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（
１．６ｇ，９．２ｍｍｏｌ），４−メトキシ−３−チオフェン−２−イル−ベン
ズアルデヒド（２ｇ，９．２ｍｍｏｌ）およびピペリジン（４．５ｍＬ，８５ｍ
ｍｏｌ）のエタノール（４６ｍＬ）中の混合物を一夜還流した。反応混合物を濃
縮し，残渣をシリカゲルのカラムでクロマトグラフィーを行って，１．６３ｇ（
４７％）の４−（２−ヒドロキシ−エチル）−３−（４−メトキシ−３−チオフ
ェン−２−イル−ベンジリデン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを
黄橙色固体として得た。
【化１１６】
【０３２８】 化合物ＩＮ−００９ ３−［４−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロ
ール−２−イルメチレン］−４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒド
ロ−インドール−２−オン
【化１１７】 ３−（２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−プロピオン酸（１０ｇ
，６０．８ｍｍｏｌ）の６０ｍＬのジクロロメタン中の懸濁液に，１，１’−カ
ルボニルジイミダゾール（１１．６ｇ，７１．８ｍｍｏｌ）を加え，次にテトラ
ヒドロフラン（３０ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（Ｈｕｎ
ｉｇ塩基，１０ｍＬ，６０．８ｍｍｏｌ）中の２Ｍジメチルアミン溶液を加えた
。暗赤色反応混合物を室温で一夜撹拌し，氷水に注加した。有機層をブラインで
ｐＨが６となるまで洗浄し，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，濃縮した。粗生成物
をシリカゲルカラムで精製し，ジクロロメタン−メタノール（９８：２）で溶出
して，９．８ｇ（８３％）の３−（２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−イ
ル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−プロピオンアミドを黄色油状物として得た。
【０３２９】 水素化リチウムアルミニウム（２．３ｇ，６０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラ
ン（５０ｍＬ）中の懸濁液に，３−（２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−
イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−プロピオンアミド（９．８１ｇ，５０ｍｍｏｌ）の
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の溶液を滴加した。反応混合物を８０℃で１時間撹拌し，
氷浴で冷却した。ガスが発生しなくなるまで角氷を反応混合物にゆっくり加えた
。数滴の２Ｎ水酸化ナトリウムを加え，反応混合物を室温で３０分間撹拌し，酢
酸エチルで抽出し，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，濃縮して，６．８ｇ（７５％
）の［３−（２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−プロピル］−ジ
メチル−アミンを橙色油状物として得，これをさらに精製することなく用いた。
【０３３０】 Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６．０ｍＬ，７６ｍｍｏｌ）のジクロロメタ
ン（３０ｍＬ）中の氷***液に，オキシ塩化リン（７．０ｍＬ，７６ｍｍｏｌ）
を滴加した。オキシ塩化リンを加えた後，反応混合物を室温で１５分間撹拌し，
［３−（２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−プロピル］−ジメチ
ル−アミン（６．８ｇ，３８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中の溶液
を０℃で滴加した。最終反応混合物を６０℃で４時間還流し，氷浴で冷却した。
角氷を反応混合物にゆっくり加え，次に２Ｎ水酸化ナトリウムを加えてｐＨを１
２に調節した。反応混合物を室温で３０分間撹拌し，酢酸エチルで抽出した。有
機層をブラインで洗浄し，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，濃縮して，粗生成物を
得た。これをシリカゲルカラムで精製し，ジクロロメタン−メタノール−水酸化
アンモニウム（９：１：０．０１）で溶出して，５ｇ（６３％）の４−（３−ジ
メチルアミノ−プロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボア
ルデヒドを暗赤色油状物として得た。
【化１１８】
【化１１９】
【０３３１】 ４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（
１７７ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ），４−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−３，
５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒド（２０８ｍｇ，１．０ｍ
ｍｏｌ）および３滴のピロリジンの，２．０ｍＬのエタノール中の混合物を９０
℃で４時間還流し，室温に冷却した。沈殿物を濾過し，冷エタノールおよびヘキ
サンで洗浄し，真空オーブン中で一夜乾燥して，３６０．６ｍｇ（９８％）の３
−［４−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロー
ル−２−イルメチレン］−４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ
−インドール−２−オンを得た。
【化１２０】
【０３３２】 化合物ＩＮ−０１０ フェニル−チオカルバミン酸Ｏ−［２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ
−インドール−４−イル）−エチル］エステル
【化１２１】 フェニルイソチオシアネート（０．４５ｍＬ，３．７５ｍｍｏｌ）を，４−（２
−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（４４３ｍ
ｇ，２．５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（５ｍＬ）中の撹拌混合物に滴加し
た。混合物を室温で２０時間，次に７０℃で８時間撹拌した。１ｍＬのジメチル
ホルムアミドを混合物に加えて均一にし，さらに４２時間加熱を続けた。反応液
を冷却し，１Ｎ水酸化ナトリウム溶液（１００ｍＬ）に注加し，酢酸エチル（２
００ｍＬ）で抽出した。有機層を１Ｎ塩酸（１００ｍＬ）およびブラインで洗浄
し，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，濃縮した。残渣をメタノール／酢酸エチル／
ヘキサンから再結晶して，４５２ｍｇ（５８％）のフェニル−チオカルバミン酸
Ｏ−［２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−
エチル］エステルを白色固体として得た。
【化１２２】
【０３３３】 化合物ＩＮ−０１１ フェニル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドー
ル−４−イル）−エチルエステル
【化１２３】 フェニルイソシアネート（０．６５２ｍＬ，６ｍｍｏｌ）を，４−（２−ヒドロ
キシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（７０９ｍｇ，４ｍ
ｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（８ｍＬ），ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）お
よびピリジン（３滴）中の撹拌混合物に滴加した。混合物を７０℃で１５時間加
熱した。反応液を冷却し，１Ｎ水酸化ナトリウム溶液（１００ｍＬ）に注加し，
酢酸エチル（２００ｍＬ）で抽出した。有機層を１Ｎ塩酸（１００ｍＬ）および
ブラインで洗浄し，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，濃縮した。残渣をメタノール
／酢酸エチル／ヘキサンから再結晶して，９５３ｍｇ（８０％）のフェニル−カ
ルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル
）−エチルエステルを灰白色粉体として得た。
【化１２４】
【０３３４】 化合物ＩＮ−０１２ ｔｅｒｔ−ブチル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−
インドール−４−イル）−エチルエステル
【化１２５】 Ｔｅｒｔ−ブチルイソシアネート（０．６８５ｍＬ，６ｍｍｏｌ）を，４−（２
−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（７０９ｍ
ｇ，４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（８ｍＬ），ジメチルホルムアミド（２
ｍＬ）およびピリジン（３滴）中の撹拌混合物に滴加した。混合物を７０℃で１
５時間，８０℃で３９時間加熱した。０．４５７ｍＬのｔｅｒｔ−ブチルイソシ
アネートを反応液に加え，９０℃で２４時間加熱を続けた。さらにｔｅｒｔ−ブ
チルイソシアネート（０．４５７ｍＬ）を加え，９０℃で３７時間加熱を続けた
。反応液を冷却し，１Ｎ水酸化ナトリウム溶液（１００ｍＬ）に注加し，酢酸エ
チル（２００ｍＬ）で抽出した。有機層を１Ｎ塩酸（１００ｍＬ）およびブライ
ンで洗浄し，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，濃縮した。残渣をメタノール／酢酸
エチル／ヘキサンから再結晶して，１３０ｍｇ（１２％）のｔｅｒｔ−ブチル−
カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イ
ル）−エチルエステルを得た。
【化１２６】
【０３３５】 化合物ＩＮ−０１３ シクロヘキシル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イ
ンドール−４−イル）−エチルエステル
【化１２７】 シクロヘキシルイソシアネート（０．７６６ｍＬ，６ｍｍｏｌ）を，４−（２−
ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（７０９ｍｇ
，４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（８ｍＬ），ジメチルホルムアミド（２ｍ
Ｌ）およびピリジン（３滴）中の撹拌混合物に滴加した。混合物を７０℃で１６
時間加熱した。０．５１１ｍＬのシクロヘキシルイソシアネートを反応液に加え
，８０℃で２４時間加熱を続けた。さらにシクロヘキシルイソシアネート（０．
２５５ｍＬ）を加え，８５℃で２４時間加熱を続けた。反応液を冷却し，１Ｎ水
酸化ナトリウム溶液（１００ｍＬ）に注加し，酢酸エチル（２００ｍＬ）で抽出
した。有機層を１Ｎ塩酸（１００ｍＬ）およびブラインで洗浄し，無水硫酸ナト
リウムで乾燥し，濃縮した。残渣をメタノール／酢酸エチル／ヘキサンから再結
晶して，３１７ｍｇの生成物を得た。カラムクロマトグラフィー（１：１酢酸エ
チル：ヘキサン）により，母液から生成物の第２収穫物（３２ｍｇ）を得た。合
計で３４９ｍｇ（２９％）のシクロヘキシル−カルバミン酸２−（２−オキソ−
２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステルを白色粉体
として得た。
【化１２８】
【０３３６】 化合物ＩＮ−０１４ ベンゼンスルホニル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ
−インドール−４−イル）−エチルエステル
【化１２９】 ベンゼンスルホニルイソシアネート（１．０７ｍＬ，８ｍｍｏｌ）を，窒素雰囲
気下で，４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２
−オン（７０９ｍｇ，４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（８ｍＬ），ジメチル
ホルムアミド（２ｍＬ）およびピリジン（３滴）中の撹拌混合物に滴加した。混
合物を８０℃で１５時間加熱した。反応液を冷却し，１Ｎ水酸化ナトリウム溶液
（１００ｍＬ）に注加し，酢酸エチル（２００ｍＬ）で抽出した。有機層を廃棄
し，塩基性水性層を６Ｎ塩酸（１８ｍＬ）で酸性にし，酢酸エチル中に抽出した
。有機層をブラインで洗浄し，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，濃縮した。残渣を
メタノール／酢酸エチル／ヘキサンから再結晶して，３９０ｍｇ（２７％）のベ
ンゼンスルホニル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−
インドール−４−イル）−エチルエステルを灰白色粉体として得た。
【化１３０】
【０３３７】 化合物ＩＮ−０１５ ビフェニル−２−イル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１
Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステル
【化１３１】 ２−ビフェニリルイソシアネート（１．１５ｍＬ，６．７ｍｍｏｌ）を，窒素雰
囲気下で，４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−
２−オン（７０９ｍｇ，４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（８ｍＬ），ジメチ
ルホルムアミド（２ｍＬ）およびピリジン（３滴）中の撹拌混合物に滴加した。
混合物を８０℃で１５時間化へ加熱した。反応液を冷却し，１Ｎ水酸化ナトリウ
ム溶液（１００ｍＬ）で急冷し，酢酸エチル（２００ｍＬ）で抽出した。有機層
をブラインで洗浄し，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，濃縮した。残渣をシリカゲ
ルでクロマトグラフィーを行い，酢酸エチル：ヘキサン３：２で溶出して，１．
１８８ｇ（８０％）のビフェニル−２−イル−カルバミン酸２−（２−オキソ−
２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステルを白色のふ
わふわとした固体として得た。
【化１３２】
【０３３８】 化合物ＩＮ−０１６ エチル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール
−４−イル）−エチルエステル
【化１３３】 エチルイソシアネート（０．６３３ｍＬ，８ｍｍｏｌ）を，窒素雰囲気で，４−
（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（７０
９ｍｇ，４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（８ｍＬ）およびジメチルホルムア
ミド（２ｍＬ）中の撹拌混合物に滴加した。混合物を８０℃で４８時間加熱した
。反応液を冷却し，水（１００ｍＬ）に注加し，酢酸エチル（２００ｍＬ）で抽
出した。有機層をブラインで洗浄し，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，濃縮した。
残渣をシリカゲルでクロマトグラフィーを行い，酢酸エチル／ヘキサンで溶出し
て，１５８ｍｇ（１６％）のエチル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−
ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステルを白色粉体として得
た。
【化１３４】
【化１３５】
【０３３９】 化合物ＩＮ−０１７ ４−［２−（４−メトキシ−フェノキシ）エチル］−１Ｈ−ジヒドロ−インドー
ル−２−オン
【化１３６】 ジエチルアゾジカルボキシレート（０．４７ｍＬ，３ｍｍｏｌ）を，窒素雰囲気
下で，トリフェニルホスフィン（０．７８６ｇ，３ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフ
ラン（１０ｍＬ）中の溶液に加えた。混合物を１５分間撹拌した。次にこれに４
−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（０
．５３ｇ，３ｍｍｏｌ）を，次に４−メトキシフェノール（０．３７２ｇ，３ｍ
ｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１８時間撹拌し，溶媒を蒸発させた。残渣を
酢酸エチル（１５０ｍＬ）に溶解し，有機溶媒を２Ｎ塩酸（３ｘ３０ｍＬ），飽
和炭酸水素ナトリウム溶液およびブラインで洗浄した。残渣をシリカゲルでクロ
マトグラフィーを行い，酢酸エチル：ヘキサン２：８で溶出して，０．１４ｇ（
１６％）の４−［２−（４−メトキシ−フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒ
ドロ−インドール−２−オンを得た。
【化１３７】
【０３４０】 化合物ＩＮ−０１８ ４−（２−メトキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
【化１３８】 ヨウ化メチル（１．４１ｇ，１０ｍｍｏｌ）を，０℃で，銀トリフルオロメタン
スルホネート（２．５６ｇ，１０ｍｍｏｌ）および４−（２−ヒドロキシ−エチ
ル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（０．８８ｇ，５ｍｍｏｌ）の
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中の撹拌混合物に加えた。５−１０分後に形成した
沈殿物は，黄色から灰色に，次に暗紫色に色が変化した。混合物を室温で２時間
撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈し，セライトを通して濾過した。
濾液を濃縮し，シリカゲルでクロマトグラフィーを行って，４−（２−メトキシ
−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを得た。
【化１３９】
【０３４１】 化合物ＩＮ−０１９ ４−（２−エトキシ−エチル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
【化１４０】 ヨウ化エチル（０．４７ｍＬ，６ｍｍｏｌ）を，０℃で，銀トリフルオロメタン
スルホネート（１．３５ｇ，５．２ｍｍｏｌ），２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル
ピリジン（１ｇ，５．２ｍｍｏｌ）および４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１
，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（０．５３ｇ，３ｍｍｏｌ）のジクロロ
メタン（１０ｍＬ）中の撹拌混合物に加えた。混合物を室温まで暖め，２時間撹
拌した。５−１０分後に形成した沈澱物は，黄色から褐色に色が変化した。反応
混合物をジクロロメタン（１００ｍＬ）で希釈し，１Ｎ塩酸，飽和炭酸水素ナト
リウムおよびブラインで洗浄し，乾燥し，濃縮した。残渣をシリカゲルでクロマ
トグラフィーを行い，１８０ｍｇ（２９％）の４−（２−エトキシ−エチル）−
１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを紫色油状物として得た。
【化１４１】
【０３４２】 化合物ＩＮ−０２０ ４−［２−（４−イソプロピル−フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−
インドール−２−オン
【化１４２】 ジエチルアゾジカルボキシレート（１．５８ｍＬ，１０ｍｍｏｌ）を，窒素雰囲
気下で，トリフェニルホスフィン（２．６２ｇ，１０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロ
フラン（２０ｍＬ）中の溶液に加えた。混合物を１５分間撹拌した。次に，これ
に４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
（１．７７ｇ，１０ｍｍｏｌ）を加え，次に４−イソプロピルフェノール（１．
３６ｇ，１０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１日間撹拌し，溶媒を蒸発さ
せた。残渣をシリカゲルでクロマトグラフィーを行い，酢酸エチル：ヘキサン２
：８で溶出して，１．１ｇ（３７％）の４−［２−（４−イソプロピル−フェノ
キシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを淡黄色固体とし
て得た。
【化１４３】
【０３４３】 化合物ＩＮ−０２１ ４−［２−（５−クロロ−ピリジン−３−イルオキシ）−エチル］−１，３−ジ
ヒドロ−インドール−２−オン
【化１４４】 ジエチルアゾジカルボキシレート（１．７４ｇ，１０ｍｍｏｌ）を，窒素雰囲気
下で，トリフェニルホスフィン（２．６２ｇ，１０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフ
ラン（２０ｍＬ）中の溶液に加えた。混合物を１５分間撹拌した。次に，これに
，４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
（１．７７ｇ，１０ｍｍｏｌ）を加え，次に５−クロロ−３−ピリジノール（１
．２９ｇ，１０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２日間撹拌した。沈殿物を
真空濾過により回収し，酢酸エチルで洗浄し，乾燥して，１．０５ｇ（３６％）
の４−［２−（５−クロロ−ピリジン−３−イルオキシ）−エチル］−１，３−
ジヒドロ−インドール−２−オンを淡褐色固体として得た。
【化１４５】
【０３４４】 化合物ＩＮ−０２２ ４−（２−ヒドロキシ−エチル）−３−（３−ヒドロキシ−６−メチル−ピリジ
ン−２−イルメチレン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
【化１４６】 ４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（
５１ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ），３−ヒドロキシ−６−メチル−ピリジン−２−カ
ルボアルデヒド（４５ｍｇ，０．３３ｍｍｏｌ）および１滴のピロリジンの２．
０ｍＬのエタノール中の混合物を９０℃で４時間加熱し，室温に冷却した。沈殿
物を濾過し，冷エタノールおよびヘキサンで洗浄し，真空オーブン中で一夜乾燥
して，４−（２−ヒドロキシ−エチル）−３−（３−ヒドロキシ−６−メチル−
ピリジン−２−イルメチレン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンの異
性体の混合物を得た。
【化１４７】
【０３４５】 化合物ＩＮ−０２３ ３−［４−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロ
ール−２−イルメチレン］−４−［２−（３−イソプロピル−フェノキシ）−エ
チル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
【化１４８】 ４−［２−（３−イソプロピル−フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−
インドール−２−オン（２８ｍｇ，０．０９５ｍｍｏｌ），４−（３−ジメチル
アミノ−プロピル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボアルデヒ
ド（２０ｍｇ，０．０９５ｍｍｏｌ）および１滴のピロリジンの１．０ｍＬのエ
タノール中の混合物を９０℃で４時間加熱し，室温に冷却した。沈殿物を濾過し
，冷エタノールおよびヘキサンで洗浄し，真空オーブン中で一夜乾燥して，４０
ｍｇ（８７％）の３−［４−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−３，５−ジメ
チル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−４−［２−（３−イソプロピル−
フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを得た。
【化１４９】
【０３４６】 化合物ＩＮ−０２４ ３−［５−｛４−［２−（４−イソプロピル−フェノキシ）−エチル］−２−オ
キソ−１，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル｝−２，４−ジメチ
ル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−プロピオン酸
【化１５０】 ２−ベンジルオキシカルボニル−３，５−ジメチル−４−（２−メトキシカルボ
ニルエチル）ピロール（Ａｌｄｒｉｃｈ，２．０ｇ）を，４０ｍＬのメタノール
中で，０．２ｇの１０％パラジウム担持炭素で室温で２時間水素化した。触媒を
濾過により除去し，４０ｍＬのメタノールで洗浄した。濾液を蒸発乾固させ，真
空オーブン中で一夜乾燥して，１．３ｇ（９２％収率）の２−カルボキシ−３，
５−ジメチル−４−（２−メトキシカルボニルエチル）ピロールを得た。
【０３４７】 ２−カルボキシ−３，５−ジメチル−４−（２−メトキシカルボニルエチル）
ピロール（１．３ｇ）を０．５ｇの無水酢酸ナトリウムとともにすりつぶし，次
に１００℃で３日間加熱した。混合物を水に溶解し，酢酸エチルで抽出し，シリ
カゲルのカラムで酢酸エチル：ヘキサン１：３中でクロマトグラフィーを行って
，０．４ｇ（３８％収率）の２，４−ジメチル−３−（２−メトキシカルボニル
エチル）ピロールを粘稠な淡黄色油状物として得た。
【０３４８】 １０ｍＬのジクロロエタン中の２，４−ジメチル−３−（２−メトキシカルボ
ニルエチル）ピロール（０．３５ｇ）および０．５ｇのビルスマイヤー試薬（Ａ
ｌｄｒｉｃｈ）を，窒素下で室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し，１０
ｍＬの６Ｍ水酸化ナトリウム溶液で処理し，次に１０ｍＬの酢酸エチルで３回抽
出した。酢酸エチル抽出物を合わせ，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，蒸発乾固さ
せて，０．２４ｇ（６０％収率）の２，４−ジメチル−５−ホルミル−３−（２
−メトキシカルボニルエチル）ピロールを褐色油状物として得た。
【０３４９】 ６Ｎ水酸化ナトリウム（１０ｍＬ）中の２，４−ジメチル−５−ホルミル−３
−（２−メトキシカルボニルエチル）ピロール（０．２３ｇ，１．２ｍｍｏｌ）
を１００℃で２時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し，６Ｎ塩酸で酸性にし
，１０ｍＬの酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層を１０ｍＬの水および
５ｍＬのブラインで洗浄し，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，蒸発乾固させて，２
３０ｍｇ（１０６％収率）の粗４−カルボキシエチル−３，５−ジメチル−２−
ホルミルピロールを褐色油状物として得た。
【０３５０】 ４−［２−（４−イソプロピル−フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ
−インドール−２−オン（１１８ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ），４−カルボキシエチ
ル−３，５−ジメチル−２−ホルミルピロール（７８ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）お
よびピペリジン（０．３ｍＬ）の１．０ｍＬのエタノール中の混合物を密封管中
で９０℃で１８時間加熱し，室温に冷却した。反応混合物を濃縮し，残渣を塩化
メチレンに溶解し，次にジエチルエーテルを加えた。沈殿物を濾過し，酢酸エチ
ルで洗浄して，１１０ｍｇ（５８％）の３−（５−｛４−［２−（４−イソプロ
ピル−フェノキシ）−エチル］−２−オキソ−ｌ，２−ジヒドロ−インドール−
３−イリデンメチル｝−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−プロ
ピオン酸（ピペリジン塩）を得た。
【化１５１】
【０３５１】 化合物ＩＮ−０２５ イソプロピル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イン
ドール−４−イル）エチルエステル
【化１５２】 ４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン（
３ｇ，１６．９３ｍｍｏｌ）およびイソプロピルイソシアネート（２．４９ｍＬ
，２５．４０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１６ｍＬ）およびジメチルホル
ムアミド（６ｍＬ）中の混合物を８０℃で６４時間加熱した。反応混合物を水に
注加し，酢酸エチル（４００ｍＬ）で抽出し，ブラインで洗浄し，乾燥し（硫酸
ナトリウム），濃縮した。残渣をメタノール，酢酸エチルおよびヘキサンから再
結晶して，１．１３６ｇ（２６％）のイソプロピル−カルバミン酸２−（２−オ
キソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステルを結
晶固体として得た。
【０３５２】 アッセイ方法 以下のインビトロアッセイを用いて，本発明の種々の化合物の，１つまたはそ
れ以上のＰＫに対する活性および効果のレベルを決定することができる。同様に
して，当該技術分野においてよく知られる技術を用いて，任意のＰＫについて類
似のアッセイを設計することができる。
【０３５３】 本明細書に記載される細胞／触媒アッセイは，ＥＬＩＳＡフォーマットで実
施する。一般的方法は以下のとおりである：天然にまたは組換え的に試験キナー
ゼを発現する細胞に化合物を導入する。ある時間が経過した後，試験キナーゼが
レセプターである場合には，レセプターを活性化することが知られているリガン
ドを加える。細胞を溶解し，酵素的リン酸化反応の基質を認識する特異的抗体で
あらかじめコーティングしたＥＬＩＳＡプレートのウエルに溶解物を移す。細胞
溶解物の非基質成分を洗い流し，ホスホチロシンを特異的に認識する抗体で基質
のリン酸化の量を検出し，試験化合物と接触させていない対照細胞と比較する。
【０３５４】 本明細書に記載される細胞／生物学的アッセイは，試験キナーゼの活性化に
応答して生成したＤＮＡの量を測定し，これは一般的な増殖性応答の測定である
。このアッセイの一般的方法は次のとおりである：天然にまたは組換え的に試験
キナーゼを発現する細胞に化合物を導入する。ある時間が経過した後，試験キナ
ーゼがレセプターである場合にはレセプターを活性化することが知られているリ
ガンドを加える。少なくとも一夜インキュベーションした後，ＤＮＡ標識試薬，
例えばブロモデオキシ−ウリジン（ＢｒｄＵ）または３Ｈ−チミジンを加える。
抗ＢｒｄＵ抗体でまたは放射活性を測定することにより標識されたＤＮＡの量を
検出し，試験化合物と接触させていない対照細胞と比較する。
【０３５５】 細胞／触媒アッセイ 酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて，ＰＫ活性の存在
を検出し測定することができる。ＥＬＩＳＡは，例えば，Ｖｏｌｌｅｒ，ｅｔ
ａｌ．，１９８０（"Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎ
ｔ Ａｓｓａｙ，" Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ，第２版，Ｒｏｓｅ ａｎｄ Ｆｒｉｅｄｍａｎ編，ｐｐ３５９−３７１
Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ
．Ｃ．）に記載の既知のプロトコルに従って実施することができる。
【０３５６】 開示されるプロトコルを，特定のＰＫに関する活性を検出するように適合さ
せることができる。例えば，特定のＰＫに関するＥＬＩＳＡ実験を実施するため
の好ましいプロトコルは以下に記載される。しかし，ＲＴＫファミリーの他のメ
ンバー，ならびにＣＴＫおよびＳＴＫに対する化合物の活性を検出するためにこ
れらのプロトコルを適合させることは，当業者の知識の範囲内である。
【０３５７】実施例２：ＦＬＫ−１ ＥＬＩＳＡアッセイを実施して，ＦＬＫ−１レセプターのキナーゼ活性，より
詳細にはＦＬＫ−１レセプター上のＴＫ活性の阻害または活性化を測定した。詳
細には，以下のアッセイを実施して，Ｆｌｋ−１を発現するように遺伝子工学処
理された細胞において，ＦＬＫ−１レセプターのキナーゼ活性を測定した。
【０３５８】材料および方法 材料 以下の試薬および供給物を用いた。 ａ． Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ
Ｎｏ．２５８０５−９６）； ｂ． Ｃａｐｐｅｌヤギ抗ウサギＩｇＧ（カタログＮｏ．５５６４１）； ｃ． ＰＢＳ（ＧｉｂｃｏカタログＮｏ．４５０−１３００ＥＢ）； ｄ． ＴＢＳＷ緩衝液（５０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ７．２），１５０ｍＭＮａＣｌ
および０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０）； ｅ． エタノールアミン保存液（１０％エタノールアミン（ｐＨ７．０），４℃
で保存）； ｆ． ＨＮＴＧ緩衝液（２０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５），１５０ｍＭ
ＮａＣｌ，０．２％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００，および１０％グリセロール）； ｇ． ＥＤＴＡ（０．５Ｍ（ｐＨ７．０）１００Ｘ保存液として）； ｈ． オルトバナジウム酸ナトリウム（０．５Ｍ，１００Ｘ保存液として）； ｉ． ピロリン酸ナトリウム（０．２Ｍ，１００Ｘ保存液として）； ｊ． ＮＵＮＣ９６ウエルＶ底ポリプロピレンプレート（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃ
ｉｅｎｔｉｆｉｃカタログＮｏ．ＡＳ−７２０９２）； ｋ． ＮＩＨ３Ｔ３ Ｃ７＃３細胞（ＦＬＫ−１発現細胞）； ｌ． ＤＭＥＭ，１Ｘ高グルコースＬ−グルタミン含有（カタログＮｏ．１１９
６５−０５０）； ｍ． ＦＢＳ，Ｇｉｂｃｏ（カタログＮｏ．１６０００−０２８）； ｎ． Ｌ−グルタミン，Ｇｉｂｃｏ（カタログＮｏ．２５０３０−０１６）； ｏ． ＶＥＧＦ，ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｉｎｃ．（カタログＮｏ．１００−２０
）Ｍｉｌｌｉ−ＱｄＨ2Ｏ中１μｇ／１００μｌ保存液として保持し，−２０℃
で保存； ｐ． アフィニティー精製抗ＦＬＫ−１抗血清； ｑ． ホスホチロシン特異的ＵＢ４０モノクローナル抗体（Ｆｅｎｄｌｅｙ，ｅ
ｔ ａｌ．，１９９０，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５０：１５５０−１
５５８を参照）； ｒ． ＥＩＡ等級ヤギ抗マウスＩｇＧ−ＰＯＤ（ＢｉｏＲａｄカタログＮｏ．１
７２−１０１１）； ｓ． ２，２−アジノ−ビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−硫酸（ＡＢＴ
Ｓ）溶液（１００ｍＭクエン酸（無水），２５０ｍＭＮａ2ＨＰＯ4（ｐＨ４．０
），０．５ｍｇ／ｍｌＡＢＴＳ（ＳｉｇｍａカタログＮｏ．Ａ−１８８８）），
溶液は，使用まで暗所で４℃で保存しなければならない； ｔ． Ｈ2Ｏ2（３０％溶液）（ＦｉｓｈｅｒカタログＮｏ．Ｈ３２５）； ｕ． ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2（１５ｍｌＡＢＴＳ溶液，２μｌＨ2Ｏ2）使用の５分間
に調製，室温に保持； ｖ． ０．２ＭＨＣｌ保存液，Ｈ2Ｏ中； ｗ． ジメチルスルホキシド（１００％）（ＳｉｇｍａカタログＮｏ．Ｄ−８４
１８）；および ｙ． トリプシン−ＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬカタログＮｏ．２５２００−
０４９）
【０３５９】プロトコル 以下のプロトコルを用いてアッセイを実施した： １． Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを，ウエルあたり１．０μ
ｇの，０．１ＭＮａ2ＣＯ3（ｐＨ９．６）中Ｃａｐｐｅｌ抗ウサギＩｇＧ抗体，
でコーティングする。最終容量をウエルあたり１５０μｌとする。プレートを４
℃で一夜コーティングする。プレートは，４℃で保存したとき，２週間まで保存
することができる。 ２． 細胞を適当な培養皿中で成長培地（ＤＭＥＭ，２．０ｍＭＬ−グルタミン
，１０％ＦＢＳを補充）中で，コンフルエントとなるまで３７℃，５％ＣＯ2で
成長させる。 ３． トリプシン処理により細胞を回収し，Ｃｏｒｎｉｎｇ２５８５０ポリスチ
レン９６ウエル丸底細胞プレートに，２００μｌの成長培地中２５，０００細胞
／ウエルで播種する。 ４． 細胞を３７℃，５％ＣＯ2で少なくとも１日成長させる。 ５． 細胞をＤ−ＰＢＳ １Ｘで洗浄する。 ６． ２００μｌ／ウエルの飢餓培地（ＤＭＥＭ，２．０ｍＭ ｌ−グルタミン
，０．１％ＦＢＳ）を加える。３７℃，５％ＣＯ2で一夜インキュベートする。
７． 化合物をポリプロピレン９６ウエルプレート中で飢餓培地を用いて１：２
０に希釈する。対照ウエルで使用するために，ジメチルスルホキシドを１：２０
に希釈する。 ８． ９６ウエル細胞培養プレートから飢餓培地を除去し，１６２μｌの新たに
調製した飢餓培地を各ウエルに加える。 ９． １：２０に希釈された化合物希釈物１８μｌ（工程７より）を各ウエルに
加え，１：２０ジメチルスルホキシド希釈物を対照ウエルに加え（＋／−ＶＥＧ
Ｆ），細胞刺激の後，１：２００の最終希釈とする。最終ジメチルスルホキシド
は０．５％である。プレートを３７℃，５％ＣＯ2で２時間インキュベートする
。 １０． プレートを逆さにして液体を除去することにより，未結合抗体をＥＬＩ
ＳＡプレートから除去する。ＴＢＳＷ＋０．５％エタノールアミン，ｐＨ７．０
で３回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて，過剰の液体およ
び気泡を除去する。 １１． ウエルあたり１５０μｌのＴＢＳＷ＋０．５％エタノールアミン，ｐＨ
７．０でプレートをブロッキングする。プレートをマイクロタイタープレート振
盪器で振盪しながら，３０分間インキュベートする。 １２． プレートを工程１０で記載したように３回洗浄する。 １３． ０．５μｇ／ウエルのアフィニティー精製抗ＦＬＵ−１ポリクローナル
ウサギ抗血清を加える。ＴＢＳＷ＋０．５％エタノールアミンｐＨ７．０で最終
容量を１５０μｌ／ウエルとする。プレートを振盪しながら３０分間インキュベ
ートする。 １４． 細胞に１８０μｌの飢餓培地を加え，２０μｌ／ウエルの１０．０ｍＭ
オルトバナジウム酸ナトリウムおよび５００ｎｇ／ｍｌＶＥＧＦ（最終濃度；ウ
エルあたり１．０ｍＭオルトバナジウム酸ナトリウムおよび５０ｎｇ／ｍｌＶＥ
ＧＦ）で３７℃，５％ＣＯ2で８分間細胞を刺激する。陰性対照ウエルには飢餓
培地のみを加える。 １５． ８分後，培地を細胞から除去し，２００μｌ／ウエルのＰＢＳで１回洗
浄しなければならない。 １６． １５０μｌ／ウエルのＨＮＴＧ中で室温で５分間振盪しながら細胞を溶
解させる。ＨＮＴＧ配合物はオルトバナジウム酸ナトリウム，ピロリン酸ナトリ
ウムおよびＥＤＴＡを含む。 １７． ＥＬＩＳＡプレートを工程１０に記載したように３回洗浄する。 １８． 細胞溶解物を細胞プレートからＥＬＩＳＡプレートに移し，振盪しなが
ら２時間インキュベートする。細胞溶解物を移すには，ウエルを掻きながらピペ
ットアップおよびダウンを行う。 １９． プレートを工程１０に記載したように３回洗浄する。 ２０． ＥＬＩＳＡプレートを０．０２μｇ／ウエルのＴＢＳＷ＋０５％エタノ
ールアミン中のＵＢ４０とともにインキュベートする。最終容量を１５０μｌ／
ウエルとする。振盪しながら３０分間インキュベートする。 ２１． プレートを工程１０に記載したように３回洗浄する。 ２２． ＥＬＩＳＡプレートを，ＴＢＳＷ＋０．５％エタノールアミン，ｐＨ７
．０中で１：１０，０００に希釈したＥＩＡ等級ヤギ抗マウスＩｇＧコンジュゲ
ート西洋ワサビペルオキシダーゼとともにインキュベートする。最終容量を１５
０μｌ／ウエルとする。振盪しながら３０分間インキュベートする。 ２３． 工程１０で記載したようにプレートを洗浄する。 ２４． １００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液をウエルに加える。振盪しながら１
０分間インキュベートする。 ２５． １００μｌの０．２ＭＨＣｌを０．１ＭＨＣｌ最終濃度となるように加
えて，発色反応を停止する。室温で１分間振盪する。ゆっくりした空気の流れで
気泡を除去し，ＥＬＩＳＡプレートをＥＬＩＳＡプレートリーダーで４１０ｎｍ
で読む。
【０３６０】実施例３：ＨＥＲ２−ＥＬＩＳＡ アッセイ１ 全細胞におけるＥＧＦレセプター−ＨＥＲ２キメラレセプターアッセイ ＥＧＦＲ−ＮＩＨ３Ｔ３全細胞中のＨＥＲ２キナーゼ活性を以下に記載するよ
うにして測定した。
【０３６１】材料および試薬 以下の材料および試薬を用いてアッセイを実施した： ａ． ＥＧＦ：保存液濃度：１６．５ＩＬＭ；ＥＧＦ２０１，ＴＯＹＯＢＯ，Ｃ
ｏ．，Ｌｔｄ．Ｊａｐａｎ ｂ． ０５−１０１（ＵＢＩ）（ＥＧＦＲ細胞外ドメインを認識するモノクロー
ナル抗体） ｃ． 抗ホスホチロシン抗体（抗Ｐｔｙｒ）（ポリクローナル）（Ｆｅｎｄｌｅ
ｙ，ｅｔ ａｌ．，（上掲）を参照） ｄ． 検出抗体：ヤギ抗ウサギｌｇＧ西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲー
ト，ＴＡＧＯ，Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ ｅ． ＴＢＳＴ緩衝液： Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．２ ５０ｍＭ ＮａＣｌ １５０ｍＭ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ０．１ ｆ． ＨＮＴＧ ５Ｘ保存液： ＨＥＰＥＳ ０．１Ｍ ＮａＣｌ ０．７５Ｍ グリセロール ５０％ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ １．０％ ｇ． ＡＢＴＳ保存液： クエン酸 １００ｍＭ Ｎａ2ＨＰＯ4 ２５０ｍＭ ＨＣｌ（濃） ０．５ｍＭ ＡＢＴＳ* ０．５ｍｇ／ｍｌ ＊（２，２'−アジノビス（３−エチルベンズチアゾリンスルホン酸）） 溶液は使用するまで暗所で４℃で保存する。 ｈ． 試薬保存液： ＥＤＴＡ １００ｍＭ ｐＨ７．０ Ｎａ3ＶＯ4 ０．５Ｍ Ｎａ4（Ｐ2Ｏ7） ０．２Ｍ
【０３６２】方法 以下のプロトコルを用いた：Ａ．ＥＬＩＳＡプレートのプレコート １． ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，９６ウエル，Ｃａｔ．＃２５８０
５−９６）をウエルあたりＰＢＳ中０．５μｇの０５−１０１抗体で１００μｌ
の最終容量／ウエルでコーティングし，４℃で一夜保存する。コーティングした
プレートは４℃で保存した場合，１０日間まで良好である。 ２． 使用の日，コーティング緩衝液を除去し，１００μｌのブロッキング緩衝
液（ＰＢＳ中５％Ｃａｒｎａｔｉｏｎインスタント脱脂乾燥ミルク）で置き換え
る。プレートを室温で（約２３℃から２５℃）振盪しながら３０分間インキュベ
ートする。使用の直前に，ブロッキング緩衝液を除去し，プレートをＴＢＳＴ緩
衝液で４回洗浄する。
【０３６３】Ｂ．細胞播種 １． このアッセイには，ＥＧＦＲ細胞外ドメインおよび細胞内ＨＥＲ2キナー
ゼドメインを含有するキメラレセプターを過剰発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞株を用
いることができる。 ２． ８０−９０％コンフルエントの培養皿を実験用に選択する。細胞をトリプ
シン処理し，１０％ウシ胎児血清を加えることにより反応を停止させる。細胞を
ＤＭＥＭ培地（１０％ＣＳ ＤＭＥＭ培地）中に懸濁し，１５００ｒｐｍで室温
で５分間１回遠心分離する。 ３． 細胞を播種培地（ＤＭＥＭ，０．５％ウシ血清）に再懸濁し，トリパンブ
ルーを用いて細胞を計数する。９０％より高い生存性が許容される。細胞をＤＭ
ＥＭ培地（０．５％ウシ血清）中で，ウエルあたり１０，０００細胞の密度で，
ウエルあたり１００μｌで，９６ウエルマイクロタイタープレートに播種する。
播種した細胞を５％ＣＯ2中で３７℃で約４０時間インキュベートする。
【０３６４】Ｃ．アッセイ方法 １． 播種した細胞を，倒立顕微鏡を用いてコンタミネーションについて検査す
る。薬剤保存液（ＤＭＳＯ中１０ｍｇ／ｍｌ）をＤＭＥＭ培地で１：１０に希釈
し，次に５μｌを，最終薬剤希釈１：２００および最終ＤＭＳＯ濃度１％となる
ように，ＴＢＳＴウエルに移す。対照ウエルにはＤＭＳＯのみを加える。５％Ｃ
Ｏ2中で３７℃で２時間インキュベートする。 ２． ＥＧＦリガンドの調製：保存液ＥＧＦを，１０μｌ希釈ＥＧＦ（１：１２
希釈）を移したときに１００ｎＭの最終濃度が得られるように，ＤＭＥＭ中で希
釈する。 ３． ウエルあたり１００μｌに十分なように新たにＨＮＴＧ*を調製し，氷上
に置く。 ＨＮＴＧ*（１０ｍｌ）： ＨＮＴＧ保存液 ２．０ｍｌ ｍｉｌｌｉ−ＱＨ2Ｏ ７．３ｍｌ ＥＤＴＡ，１００ｍＭ，ｐＨ７．０ ０．５ｍｌ Ｎａ3ＶＯ4，０．５Ｍ ０．１ｍｌ Ｎａ4（Ｐ2Ｏ7），０．２Ｍ ０．１ｍｌ ４． 薬剤とともに１２０分間インキュベーションした後，調製したＳＧＦリガ
ンドを，ウエルあたり１０μｌ，最終濃度１００ｎＭとなるように細胞に加える
。対照ウエルにはＤＭＥＭのみを加える。室温で５分間振盪しながらインキュベ
ートする。 ５． 薬剤，ＥＧＦ，およびＤＭＥＭを除去する。細胞をＰＢＳで２回洗浄する
。ウエルあたり１００μｌのＨＮＴＧ*を細胞に移す。氷上に５分間放置する。
この間に，ブロッキング緩衝液を他のＥＬＩＳＡプレートから除去し，上述した
ようにＴＢＳＴで洗浄する。 ６． マイクロピペッターにぴったりと固定したピペットチップを用いて，細胞
をプレートからはがし，ＨＮＴＧ*溶解緩衝液を繰り返し吸引および分配するこ
とにより，細胞物質をホモジナイズする。コーティングし，ブロッキングし，洗
浄したＥＬＩＳＡプレートに溶解物を移す。振盪しながら室温で１時間インキュ
ベートする。 ７． 溶解物を除去し，ＴＢＳＴで４回洗浄する。新たに希釈した抗Ｐｔｙｒ抗
体をウエルあたり１００μｌでＥＬＩＳＡプレートに移す。抗Ｐｔｙｒ抗血清（
ＴＢＳＴ中１：３０００希釈）の存在下で，振盪しながら室温で３０分間インキ
ュベートする。 ８． 抗Ｐｔｙｒ抗体を除去し，ＴＢＳＴで４回洗浄する。新たに希釈したＴＡ
ＧＯ抗ウサギＩｇＧ抗体をＥＬＩＳＡプレートにウエルあたり１００μｌで移す
。振盪しながら室温で３０分間インキュベートする（抗ウサギＩｇＧ抗体：ＴＢ
ＳＴ中１：３０００希釈）。 ９． ＴＡＧＯ検出抗体を除去し，ＴＢＳＴで４回洗浄する。新たに調製したＡ
ＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液をウエルあたり１００μｌでＥＬＩＳＡプレートに移す。振
盪しながら室温で２０分間インキュベートする（ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液：１０ｍ
ｌＡＢＴＳ保存液中１．０μｌの３０％Ｈ2Ｏ2）。 １０． ５０μｌの５Ｎ Ｈ2ＳＯ4を加えることにより反応を停止し（任意），
４１０ｎｍでＯ．Ｄ．を測定する。 １１． 最大ホスホチロシンシグナルは，陰性対照の値を陽性対照の値から差し
引くことにより決定する。次に，抽出物含有ウエルについて，陰性対照を差し引
いた後にホスホチロシン含有量のパーセント阻害を計算する。
【０３６５】実施例４：ＰＤＧＦ−Ｒアッセイ すべての細胞培養培地，グルタミンおよびウシ胎児血清は，特に記載しないか
ぎり，Ｇｉｂｃｏ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌ
ａｎｄ，ＮＹ）から購入した。すべての細胞は，９０−９５％空気および５−１
０％ＣＯ2の湿潤雰囲気下で３７℃で成長させた。すべての細胞株は，日常的に
１週間に２回サブカルチャーし，Ｍｙｃｏｔｅｃｔ法（Ｇｉｂｃｏ）によりマイ
コプラズマがないことを確認した。 ＥＬＩＳＡアッセイのためには，細胞（Ｕ１２４２，Ｊｏｓｅｐｈ Ｓｃｈｌ
ｅｓｓｉｎｇｅｒ，ＮＹＵから入手）を成長培地（ＭＥＭ，１０％ＦＢＳ，ＮＥ
ＡＡ，１ｍＭ ＮａＰｙｒおよび２ｍＭＧＬＮ含有）で８０−９０％コンフルエ
ントまで成長させ，９６ウエル組織培養プレートに０．５％血清中で，ウエルあ
たり２５，０００−３０，０００細胞を播種した。０．５％血清含有培地で一夜
インキュベーションした後，細胞を無血清培地に移し，５％ＣＯ2，３７℃イン
キュベーター中で試験化合物で２時間処理した。次に細胞をリガンドで５−１０
分間刺激し，ＨＮＴＧ（２０ｍＭＨｅｐｅｓ，１５０ｍＭＮａＣｌ，１０％グリ
セロール，５ｍＭＥＤＴＡ，５ｍＭＮａ3ＶＯ4，０．２％ＴｒｉｔｏｎＸ−１０
０，および２ｍＭＮａＰｙｒ）で溶解した。細胞溶解物（ＰＢＳ中０．５ｍｇ／
ウエル）をレセプター特異的抗体であらかじめ被覆し，ＴＢＳＴ（５０ｍＭＴｒ
ｉｓ−ＨＣｌｐＨ７．２，１５０ｍＭＮａＣｌおよび０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−
１００）中５％ミルクで室温で３０分間ブロッキングしたＥＬＩＳＡプレートに
移した。溶解物を振盪しながら室温で１時間インキュベートした。プレートをＴ
ＢＳＴで４回洗浄し，次にポリクローナル抗ホスホチロシン抗体とともに室温で
３０分間インキュベートした。プレートをＴＢＳＴで４回すすぐことにより過剰
の抗ホスホチロシン抗体を除去した。ＥＬＩＳＡプレートにヤギ抗ウサギＩｇＧ
抗体を室温で３０分間加え，次にＴＢＳＴでさらに４回すすいだ。ＡＢＴＳ（１
００ｍＭクエン酸，２５０ｍＭＮａ2ＨＰＯ4および０．５ｍｇ／ｍＬ２，２'−
アジノ−ビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−硫酸）），およびＨ2Ｏ2（１
．２ｍＬ３０％Ｈ2Ｏ2を１０ｍｌＡＢＴＳに加える）をＥＬＩＳＡプレートに加
えて発色を開始させた。ＡＢＴＳ添加の約１５から３０分後，４１０ｎｍおよび
６３０ｎｍの参照波長における吸光度を記録した。
【０３６６】実施例５：ＩＧＦ−Ｉレセプター−ＥＬＩＳＡ 以下のプロトコルを用いて，ＩＧＦ−Ｉレセプター上のホスホチロシンレベル
を測定することができ，これはＩＧＦ−Ｉレセプターチロシンキナーゼ活性を示
す。材料および試薬 以下の材料および試薬を用いた： ａ． このアッセイにおいて用いる細胞株は，ＩＧＦ−１レセプターを過剰発現
するように遺伝子工学処理された細胞株３Ｔ３／ＩＧＦ−１Ｒである。 ｂ． ＮＩＨ３Ｔ３／ＩＧＦ−１Ｒを，５％ＣＯ2，３７℃のインキュベーター
で成長させる。成長培地はＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ（熱不活性化）＋２ｍＭＬ−
グルタミンである。 ｃ． アフィニティー精製抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体１７−６９ ｄ． Ｄ−ＰＢＳ： ＫＨ2ＰＯ4 ０．２０ｇ／ｌ Ｋ2ＨＰＯ4 ２．１６ｇ／ｌ ＫＣｌ ０．２０ｇ／ｌ ＮａＣｌ ８．００ｇ／ｌ（ｐＨ７．２） ｅ． ブロッキング緩衝液：ＴＢＳＴプラス５％ミルク（Ｃａｒｎａｔｉｏｎイ
ンスタント脱脂乾燥ミルク） ｆ． ＴＢＳＴ緩衝液： Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ５０ｍＭ ＮａＣｌ １５０ｍＭ（ｐＨ７．２／ＨＣｌ １０Ｎ） ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ０．１％ ＴＢＳ（１０Ｘ）の保存溶液を調製し，希釈の間に緩衝液にＴｒｉｔｏｎＸ−１
００を加える。 ｇ． ＨＮＴＧ緩衝液： ＨＥＰＥＳ ２０ｍＭ ＮａＣｌ １５０ｍＭ（ｐＨ７．２／ＨＣｌ １Ｎ） グリセロール １０％ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ０．２％ 保存溶液（５Ｘ）を調製し，４℃で保存する。 ｈ． ＥＤＴＡ／ＨＣｌ：０．５ＭｐＨ７．０（ＮａＯＨ），１００Ｘ保存液と
して ｉ． Ｎａ3ＶＯ4：１００Ｘ保存液として０．５Ｍ，アリコートは−８０℃で保
存する。 ｊ． Ｎａ4Ｐ2Ｏ7：１００Ｘ保存液として０．２Ｍ ｋ． インスリン様成長因子−１，Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｃａｔ＃Ｇ５１１１） ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン抗血清 ｍ． ヤギ抗ウサギＩｇＧ，ＰＯＤコンジュゲート（検出抗体），Ｔａｇｏ（Ｃ
ａｔ．Ｎｏ．４５２０，ＬｏｔＮｏ．１８０２）：Ｔａｇｏ，Ｉｎｃ．，Ｂｕｒ
ｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ ｎ． ＡＢＴＳ（２，２'−アジノビス（３−エチルベンズチアゾリン硫酸）） 溶液： クエン酸 １００ｍＭ Ｎａ2ＨＰＯ4 ２５０ｍＭ（ｐＨ４．０／１ＮＨＣｌ） ＡＢＴＳ ０．５ｍｇ／ｍｌ ＡＢＴＳ溶液は暗所で４℃で保存しなければならない。溶液は緑色に変色したと
きは廃棄しなければならない。 ｏ． 過酸化水素：３０％溶液を暗所で４℃で保存する。
【０３６７】方法 以下のすべての工程は，特に記載しないかぎり，室温で実施する。すべてのＥ
ＬＩＳＡプレート洗浄は，プレートを水道水で３回すすぎ，ＴＢＳＴで１回すす
ぐことにより実施する。プレートを軽くたたいてペーパータオルで乾燥させる。 Ａ．細胞播種 ： １． 組織培養皿（Ｃｏｒｎｉｎｇ２５０２０−１００）で８０−９０％コンフ
ルエントまで成長させた細胞を，トリプシン−ＥＤＴＡ（０．２５％，０．５ｍ
ｌ／Ｄ−１００，ＧＩＢＣＯ）で回収する。 ２． 細胞を新鮮なＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋２ｍＭＬ−グルタミン中に再懸濁
し，９６ウエル組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，２５８０６−９６）に２０
，０００細胞／ウエル（１００μｌ／ウエル）で移す。１日インキュベートし，
次に培地を無血清培地（９０／μｌ）で置き換え，５％ＣＯ2，３７℃で一夜イ
ンキュベートする。
【０３６８】Ｂ．ＥＬＩＳＡプレートコーティングおよびブロッキング ： １． ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ２５８０５−９６）を，１００μｌ
ＰＢＳ中の抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体で０．５μｇ／ウエルで少なくとも２時間コーテ
ィングする。 ２． コーティング溶液を除去し，１００μｌのブロッキング緩衝液で置き換え
，３０分間振盪する。ブロッキング緩衝液を除去し，溶解物を加える直前にプレ
ートを洗浄する。
【０３６９】Ｃ．アッセイ方法 ： １． 薬剤は，無血清条件で試験する。 ２． 薬剤保存液（１００％ＤＭＳＯ中）を９６ウエルポリプロピレンプレート
中でＤＭＥＭで１：１０に希釈し，１０μｌ／ウエルのこの溶液を細胞に移して
，最終薬剤希釈１：１００，最終ＤＭＳＯ濃度１．０％とする。細胞を５％ＣＯ 2 中で３７℃で２時間インキュベートする。 ３． 新鮮な細胞溶解緩衝液（ＨＮＴＧ＊）を調製する。 ＨＮＴＧ ２ｍｌ ＥＤＴＡ ０．１ｍｌ Ｎａ3ＶＯ4 ０．１ｍｌ Ｎａ4（Ｐ2Ｏ7） ０．１ｍｌ Ｈ2Ｏ ７．３ｍｌ ４． 薬剤を２時間インキュベートした後，１０μｌ／ウエルのＰＢＳ中２００
ｎＭＩＧＦ−１リガンドを細胞に移し（最終濃度２０ｎＭ），５％ＣＯ2で３７
℃で１０分間インキュベートする。 ５． 培地を除去し，１００μｌ／ウエルのＨＮＴＧ＊を加え，１０分間振盪す
る。細胞を顕微鏡下で観察して，これらが適切に溶解したか否かを見る。 ６． １２チャネルピペットを用いて細胞をプレートから掻き取り，吸引と分配
を繰り返すことにより溶解物をホモジナイズする。すべての溶解物を抗体コーテ
ィングＥＬＩＳＡプレートに移し，１時間振盪する。 ７． 溶解物を除去し，プレートを洗浄し，抗ｐＴｙｒ（ＴＢＳＴ中１：３，０
００）を１００μｌ／ウエルで移し，３０分間振盪する。 ８． 抗ｐＴｙｒを除去し，プレートを洗浄し，ＴＡＧＯ（ＴＢＳＴ中１：３，
０００）を１００μｌ／ウエルで移し，３０分間振盪する。 ９． 検出抗体を除去し，プレートを洗浄し，新鮮なＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2（１．２
μｌＨ2Ｏ2を１０ｍｌＡＢＴＳに加える）を１００μｌ／ウエルでプレートに移
して，発色を開始させる。 １０． ＤｙｎａｔｅｃＭＲ50００で参照波長６３０ｎｍで４１０ｎｍのＯＤを
測定する。
【０３７０】実施例６：ＥＧＦレセプター−ＥＬＩＳＡ ヒトＥＧＦ−Ｒを発現するよう遺伝子工学処理された細胞中のＥＧＦレセプタ
ーキナーゼ活性を以下に記載するように測定した。材料および試薬 以下の材料および試薬を用いた： ａ． ＥＧＦリガンド：保存液濃度＝１６．５μＭ；ＥＧＦ２０１，ＴＯＹＯＢ
Ｏ，Ｃｏ．，Ｌｔｄ．Ｊａｐａｎ ｂ． ０５−１０１（ＵＢＩ）（ＥＧＦＲ細胞外ドメインを認識するモノクロー
ナル抗体） ｃ． 抗ホスホチロシン抗体（抗Ｐｔｙｒ）（ポリクローナル） ｄ． 検出抗体：ヤギ抗ウサギｌｇＧ西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲー
ト，ＴＡＧＯ，Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ ｅ． ＴＢＳＴ緩衝液： Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７ ５０ｍＭ ＮａＣｌ １５０ｍＭ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ０．１ ｆ． ＨＮＴＧ ５Ｘ保存液： ＨＥＰＥＳ ０．１Ｍ ＮａＣｌ ０．７５Ｍ グリセロール ５０ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ １．０％ ｇ． ＡＢＴＳ保存液： クエン酸 １００ｍＭ ＮａＶＯ4 ２５０ｍＭ ＨＣｌ（濃） ４．０ｐＨ ＡＢＴＳ* ０．５ｍｇ／ｍｌ 溶液は使用するまで暗所で４℃で保存する。 ｈ． 試薬保存液： ＥＤＴＡ １００ｍＭ ｐＨ７．０ Ｎａ3ＶＯ4 ０．５Ｍ Ｎａ4（Ｐ2０7） ０．２Ｍ
【０３７１】方法 以下のプロトコルを用いた：Ａ．ＥＬＩＳＡプレートのプレコート １． ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，９６ウエル，Ｃａｔ．＃２５８０
５−９６）をウエルあたりＰＢＳ中０．５μｇ，１５０μｌ最終容量／ウエルの
０５−１０１抗体でコーティングし，４℃で一夜保存する。コーティングしたプ
レートは４℃で保存した場合１０日間まで良好に使用しうる。 ２． 使用の日，コーティング緩衝液を除去し，ブロッキング緩衝液（ＰＢＳ中
５％Ｃａｒｎａｔｉｏｎインスタント脱脂乾燥ミルク）で置き換える。プレート
を振盪しながら室温（約２３℃−２５℃）で３０分間インキュベートする。使用
の直前に，ブロッキング緩衝液を除去し，プレートをＴＢＳＴ緩衝液で４回洗浄
する。
【０３７２】Ｂ．細胞播種 １． このアッセイにはＮＩＨ３Ｔ３／Ｃ７細胞株（Ｈｏｎｅｇｇｅｒ，ｅｔ
ａｌ．，Ｃｅｌｌ５１：１９９−２０９，１９８７）を用いることができる。 ２． ８０−９０％コンフルエントの皿を実験用に選択する。細胞をトリプシン
処理し，１０％ＣＳ ＤＭＥＭ培地を加えることにより反応を停止させる。細胞
をＤＭＥＭ培地（１０％ＣＳ ＤＭＥＭ培地）中に懸濁し，１０００ｒｐｍで室
温で５分間，１回遠心分離する。 ３． 細胞を播種培地（ＤＭＥＭ，０．５％ウシ血清）に再懸濁し，トリパンブ
ルーを用いて細胞を計数する。９０％を越える生存率が許容範囲である。細胞を
９６ウエルマイクロタイタープレート上で，ＤＭＥＭ培地（０．５％ウシ血清）
中に，ウエルあたり１０，０００細胞の密度でウエルあたり１００μｌで播種す
る。播種した細胞を５％ＣＯ2，３７℃で約４０時間インキュベートする。
【０３７３】Ｃ．アッセイ方法 １． 倒立顕微鏡を用いて，播種した細胞のコンタミネーションを調べる。試験
化合物保存液（ＤＭＳＯ中１０ｍｇ／ｍｌ）をＤＭＥＭ培地中で１：１０に希釈
し，次に５μｌを試験ウエルに移して，１：２００の最終薬剤希釈および１％の
最終ＤＭＳＯ濃度とする。対照ウエルにはＤＭＳＯのみを加える。５％ＣＯ2，
３７℃で１時間インキュベートする。 ２． ＥＧＦリガンドの調製：保存液ＥＧＦを，１０μｌの希釈ＥＧＦ（１：１
２希釈）を移したときに２５ｎＭの最終濃度が得られるように，ＤＭＥＭ中で希
釈する。 ３． ウエルあたり１００μｌに十分なように新鮮なＨＮＴＧ*１０ｍｌを調製
する。ＨＮＴＧ＊は以下のものを含む：ＨＮＴＧ保存液（２．０ｍｌ），ｍｉｌ
ｌｉ−ＱＨ2Ｏ（７．３ｍｌ），ＥＤＴＡ，１００ｍＭ，ｐＨ７．０（０．５ｍ
ｌ），Ｎａ3ＶＯ4０．５Ｍ（０．１ｍｌ）およびＮａ4（Ｐ2Ｏ7），０．２Ｍ（
０．１ｍｌ） ４． 氷上に置く。 ５． 薬剤とともに２時間インキュベーションした後，調製したＥＧＦリガンド
を，ウエルあたり１０μｌで，２５ｎＭの最終濃度となるように細胞に加える。
対照ウエルにはＤＭＥＭのみを加える。振盪しながら室温で５分間インキュベー
トする。 ６． 試験化合物，ＥＧＦおよびＤＭＥＭを除去する。細胞をＰＢＳで２回洗浄
する。ＨＮＴＧ*をウエルあたり１００μｌで細胞に移す。氷上に５分間置く。
その間に，他のＥＬＩＳＡプレートからブロッキング緩衝液を除去し，上述した
ようにＴＢＳＴで洗浄する。 ７. マイクロピペッターにぴったりと固定したピペットチップを用いて，細胞
をプレートからはがし，ＨＮＴＧ*溶解緩衝液を繰り返し吸引および分配するこ
とにより，細胞物質をホモジナイズする。コーティングし，ブロッキングし，洗
浄したＥＬＩＳＡプレートに溶解物を移す。振盪しながら室温で１時間インキュ
ベートする。 ８． 溶解物を除去し，ＴＢＳＴで４回洗浄する。新たに希釈した抗Ｐｔｙｒ抗
体をウエルあたり１００μｌでＥＬＩＳＡプレートに移す。抗Ｐｔｙｒ抗血清（
ＴＢＳＴ中１：３０００希釈）の存在下で，振盪しながら室温で３０分間インキ
ュベートする。 ９． 抗Ｐｔｙｒ抗体を除去し，ＴＢＳＴで４回洗浄する。新たに希釈したＴＡ
ＧＯ３０抗ウサギＩｇＧ抗体をＥＬＩＳＡプレートにウエルあたり１００μｌで
移す。振盪しながら室温で３０分間インキュベートする（抗ウサギＩｇＧ抗体：
ＴＢＳＴ中１：３０００希釈）。 １０． 検出抗体を除去し，ＴＢＳＴで４回洗浄する。新たに調製したＡＢＴＳ
／Ｈ2Ｏ2溶液をウエルあたり１００μｌでＥＬＩＳＡプレートに移す。室温で２
０分間インキュベートする（ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液：１０ｍｌＡＢＴＳ保存液中
１．２μｌの３０％Ｈ2Ｏ2）。 １１． ５０μｌの５ＮＨ2ＳＯ4を加えることにより反応を停止し（任意），４
１０ｎｍでＯ．Ｄ．を測定する。 １２． 最大ホスホチロシンシグナルは，陰性対照の値を陽性対照の値から差し
引くことにより決定する。次に，陰性対照を差し引いた後，抽出物含有ウエルに
ついてのホスホチロシン含有量のパーセント阻害を計算する。
【０３７４】実施例７：Ｍｅｔ自己リン酸化アッセイ−ＥＬＩＳＡ このアッセイは，Ｍｅｔレセプター上のＭｅｔ蛋白質チロシンキナーゼレベル
を分析することにより，Ｍｅｔチロシンキナーゼ活性を決定する材料および試薬 以下の材料および試薬を用いた： ａ． ＨＮＴＧ（５Ｘ保存溶液）：２３．８３ｇＨＥＰＥＳおよび４３．８３ｇ
ＮａＣｌを約３５０ｍｌｄＨ2Ｏに溶解する。ＨＣｌまたはＮａＯＨでｐＨを７
．２に調節し，５００ｍｌグリセロールおよび１０ｍｌＴｒｉｔｏｎＸ−１００
を加え，混合し，ｄＨ2Ｏを加えて総容量を１Ｌとする。１Ｘ作業溶液１Ｌを作
成するためには，２００ｍｌの５Ｘ保存溶液を８００ｍｌｄＨ2Ｏに加え，必要
に応じてｐＨを調べて調節し，４℃で保存する。 ｂ． ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食塩水），Ｇｉｂｃｏ Ｃａｔ．＃４５
０−１３００ＥＢ（１Ｘ溶液） ｃ． ブロッキング緩衝液：５００ｍｌｄＨ2Ｏ中に，１００ｇＢＳＡ，１２．
１ｇＴｒｉｓ−ｐＨ７．５，５８．４４ｇＮａＣｌおよび１０ｍｌＴｗｅｅｎ−
２０を加え，希釈して総容量１Ｌとする。 ｄ． キナーゼ緩衝液：５００ｍｌｄＨ2Ｏに，１２．１ｇＴＲＩＳ（ｐＨ７．
２），５８．４ｇＮａＣｌ，４０．７ｇＭｇＣｌ2および１．９ｇＥＧＴＡを加
え，ｄＨ2Ｏで総容量１Ｌとする。 ｅ． ＰＭＳＦ（フッ化フェニルメチルスルホニル），Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．＃
Ｐ−７６２６，４３５．５ｍｇに１００％エタノールを総容量２５ｍｌとなるよ
うに加え，ボルテックスする。 ｆ． ＡＴＰ（細菌起源），Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．＃Ａ−７６９９，粉末を−２
０℃で保存する；作業溶液を作成するためには，３．３１ｍｇを１ｍｌｄＨ2Ｏ
中に溶解する。 ｇ． ＲＣ−２０Ｈ ＨＲＰＯコンジュゲート化抗ホスホチロシン，Ｔｒａｎｓ
ｄｕｃｔｉｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｃａｔ．＃Ｅ１２０Ｈ ｈ． Ｐｉｅｒｃｅ １−Ｓｔｅｐ（商標）Ｔｕｒｂｏ−ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ（
３，３'，５，５'−テトラメチルベンジジン），Ｐｉｅｒｃｅ Ｃａｔ．＃３４
０２２ ｉ． Ｈ2ＳＯ4，濃硫酸１ｍｌ（１８Ｎ）を３５ｍｌｄＨ2Ｏに加える。 ｊ． ＴＲＩＳ ＨＣＬ，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ１５２−５；材料１
２１．１４ｇに６００ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏを加え，ＨＣｌでｐＨを７．
５（または７．２）に調節し，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで容量を１Ｌとする。 ｋ． ＮａＣｌ，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ２７１−１０，５Ｍ溶液を作成
する。 ｌ． Ｔｗｅｅｎ−２０，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ３３７−５００ ｍ． Ｎａ3ＶＯ4，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ４５４−５０，材料１．８ｇ
に８０ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏを加え，ＨＣｌまたはＮａＯＨでｐＨを１０
．０に調節し，電子レンジで沸騰させ，冷却し，ｐＨを調べ，ｐＨが１０．０で
安定となるまでこの工程を繰り返し，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏを加えて総容量１０
０ｍｌとし，１ｍｌアリコートを作成し，−８０℃で保存する。 ｎ． ＭｇＣｌ2，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｍ３３−５００，１Ｍ溶液を作
成する。 ｏ． ＨＥＰＥＳ，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ３１０−５００，２００ｍ
ｌＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，材料５９．６ｇを加え，ｐＨを７．５に調節し，総
容量２５０ｍｌとし，濾過滅菌する。 ｐ． アルブミン，ウシ（ＢＳＡ），Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．＃Ａ−４５０３，材
料３０ｇに滅菌蒸留水を加えて総容量３００ｍｌとし，４℃で保存する。 ｑ． ＴＢＳＴ緩衝液：１Ｌの目盛り付きシリンダー中の約９００ｍｌのｄＨ2
Ｏに６．０５７ｇＴＲＩＳおよび８．７６６ｇＮａＣｌを加え，溶解したとき，
ＨＣｌでｐＨを７．２に調節し，１．０ｍｌＴｒｉｔｏｎＸ−１００を加え，ｄ
Ｈ2Ｏで総容量１Ｌとする。 ｒ． ヤギアフィニティー精製抗体ウサギＩｇＧ（全分子），Ｃａｐｐｅｌ Ｃ
ａｔ．＃５５６４１ ｓ． 抗ｈ−Ｍｅｔ（Ｃ−２８）ウサギポリクローナルＩｇＧ抗体，Ｓａｎｔａ
Ｃｒｕｚ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃａｔ．＃ＳＣ−１６１ ｔ． 過渡的にトランスフェクションされたＥＧＦＲ／Ｍｅｔキメラ細胞（ＥＭ
Ｒ）（Ｋｏｍａｄａ，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，８：２３８１−２３９
０（１９９３） ｕ． 炭酸ナトリウム緩衝液，（Ｎａ2ＣＯ4，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ４
９５）：材料１０．６ｇに８００ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏを加え，溶解した
とき，ＮａＯＨでｐＨを９．６に調節し，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１Ｌと
し，濾過し，４℃で保存する。
【０３７５】方法 以下の工程は，特に記載のない限り，全て室温で実施する。ＥＬＩＳＡプレー
ト洗浄は全てＴＢＳＴで４回すすぐことにより行う。Ａ．ＥＭＲ溶解 この方法は，レセプター捕捉の開始の前夜または直前に実施することができる
。 １． 溶解物を３７℃の水浴中で渦巻き動作により最後の結晶が消失するまで急
速に溶解する。 ２． 細胞ペレットを１ｍＭＰＭＳＦを含有する１Ｘ ＨＮＴＧ中で溶解する。
１５ｃｍ皿の細胞あたり３ｍｌのＨＮＴＧを用いる。計算したＨＮＴＧ容量の１
／２を加え，管を１分間ボルテックスし，残量のＨＮＴＧを加え，さらに１分間
ボルテックスする。 ３． 管の釣り合いをとり，１０，０００ｘｇ，１０分間，４℃で遠心分離する
。 ４． 上清をプールし，アリコートを除去して蛋白質測定を行う。 ５． プールしたサンプルをドライアイス／エタノール浴中で急速凍結する。こ
の工程は，溶解物を一夜保存するか蛋白質測定後に直ちに使用するかにかかわら
ず実施する。 ６． 標準的ビシンコニン酸（ＢＣＡ）法を用いて蛋白質測定を実施する（ＢＣ
Ａアッセイ試薬キット，Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃａｔ．＃２３２２
５）。
【０３７６】Ｂ．ＥＬＩＳＡ法 １． Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを，総ウエル容量５０μｌ
，ウエルあたり５μｇの炭酸塩緩衝液中のヤギ抗ウサギ抗体でコーティングする
。４℃で一夜保存する。 ２． プレートを逆さにして液体を除去することにより，未結合ヤギ抗ウサギ抗
体を除去する。 ３． １５０μｌのブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。振盪しながら３０
分間インキュベートする。 ４． ＴＢＳＴで４回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて過
剰の液体および気泡を除去する。 ５． ウエル総容量１００μｌに対して，ＴＢＳＴ中で希釈したウサギ抗Ｍｅｔ
抗体をウエルあたり１μｇ加える。 ６． 溶解物をＨＮＴＧで希釈する（９０μｇ溶解物／１００μｌ）。 ７． 希釈した溶解物１００μｌを各ウエルに加える。６０分間振盪する。 ８． ＴＢＳＴで４回洗浄する。ペーパータオル上で軽くたたいて過剰の液体お
よび気泡を除去する。 ９． ウエルあたり５０μｌの１Ｘ溶解物緩衝液を加える。 １０． 化合物／抽出物をポリプロピレン９６ウエルプレート中で１Ｘキナーゼ
緩衝液中で１：１０に希釈する。 １１． 希釈した化合物５．５μｌをＥＬＩＳＡプレートウエルに移す。振盪し
ながら室温で２０分間インキュベートする。 １２． ウエルあたり５．５μｌの６０μＭＡＴＰ溶液を加える。陰性対照には
ＡＴＰを加えない。振盪しながら９０分間インキュベートする。 １３． ＴＢＳＴで４回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて
過剰の液体および気泡を除去する。 １４． ウエルあたり１００μｌのＲＣ２０（ブロッキング緩衝液中１：３００
０希釈）を加える。振盪しながら３０分間インキュベートする。 １５． ＴＢＳＴで４回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて
過剰の液体および気泡を除去する。 １６． ウエルあたり１００μｌのＴｕｒｂｏ−ＴＭＢを加える。振盪しながら
３０−６０分間インキュベートする。 １７． ウエルあたり１００μｌの１ＭＨ2ＳＯ4を加えて反応を停止させる。 １８． Ｄｙｎａｔｅｃｈ ＭＲ70００ ＥＬＩＳＡリーダーでアッセイを読む
。試験フィルター＝４５０ｎｍ，参照フィルター＝４１０ｎｍ。
【０３７７】実施例８：生化学的ｓｒｃアッセイ−ＥＬＩＳＡ このアッセイを用いて，ビオチニル化ペプチドのリン酸化を読出しとして測定
することにより，ｓｒｃ蛋白質キナーゼ活性を決定する。材料および試薬： 以下の材料および試薬を用いた： ａ． ｓｒｃでトランスフォームした酵母（Ｓｕｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｒｅｄｗｏ
ｏｄＣｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ） ｂ． 細胞溶解物：ｓｒｃを発現する酵母細胞をペレット化し，水で１回洗浄し
，再びペレット化して，使用するまで−８０℃で保存する。 ｃ． Ｎ−末端ビオチニル化ＥＥＥＹＥＥＹＥＥＥＹＥＥＥＹＥＥＥＹは，当業
者に周知の標準的な方法により調製する。 ｄ． ＤＭＳＯ：Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ ｅ． ９６ウエルＥＬＩＳＡプレート：Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥａｓｙ Ｗ
ａｓｈ，改変平底プレート，Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃａｔ．＃２５８０５−９６ ｆ． ＮＵＮＣ９６ウエルＶ−底ポリプロピレンプレート，化合物の希釈用：Ａ
ｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃａｔ．＃Ａ−７２０９２ ｇ． Ｖｅｃａｓｔａｉｎ ＥＬＩＴＥ ＡＢＣ試薬：Ｖｅｃｔｏｒ，Ｂｕｒｌ
ｉｎｇａｍｅ，ＣＡ ｈ． 抗ｓｒｃ（３２７）ｍａｂ：Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
Ｐｏｍｂｅを用いて組換えＳｒｃを発現させる（Ｓｕｐｅｒｔｉ−Ｆｕｒｇａ，
ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１２：２６２５−２６３４；Ｓｕｐｅｒｔｉ−
Ｆｕｒｇａ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１４：６００−
６０５）。Ｓ．Ｐｏｍｂｅ ＳＰ２００株（ｈ−ｓ ｌｅｕｌ．３２ ｕｒａ４
ａｄｅ２１０）を記載されたように増殖させ，酢酸リチウム法（Ｓｕｐｅｒｔ
ｉ−Ｆｕｒｇａ，（上掲））によりｐＲＳＰ発現プラスミドでトランスフォーム
する。細胞は１μＭチアミンの存在下で増殖させてｎｍｔｌプロモーターの発現
を抑制するか，またはチアミンの非存在下で増殖させて発現を誘導する。 ｉ． モノクローナル抗ホスホチロシン，ＵＢＩ０５−３２１（代わりにＵＢ４
０を用いることができる） ｊ． Ｔｕｒｂｏ ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡペルオキシダーゼ基質：Ｐｉｅｒｃｅ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ
【０３７８】緩衝溶液： ａ． ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食塩水）：ＧＩＢＣＯ ＰＢＳ，ＧＩＢ
ＣＯ Ｃａｔ．＃４５０−１３００ＥＢ ｂ． ブロッキング緩衝液：５％無脂乳（Ｃａｒｎａｔｉｏｎ），ＰＢＳ中 ｃ 炭酸塩緩衝液：Ｎａ2ＣＯ4，Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｃａｔ．＃Ｓ４９５，１００
ｍＭ保存溶液を作成する。 ｄ． キナーゼ緩衝液：１．０ｍｌ（１Ｍ保存溶液から）ＭｇＣｌ2；０．２ｍ
ｌ（１Ｍ保存溶液から）ＭｎＣｌ2；０．２ｍｌ（１Ｍ保存溶液から）ＤＴＴ；
５．０ｍｌ（１Ｍ保存溶液から）ＨＥＰＥＳ；０．１ｍｌＴＸ−１００；Ｍｉｌ
ｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１０ｍｌとする。 ｅ． 溶解緩衝液：５．０ＨＥＰＥＳ（１Ｍ保存溶液から）；２．７４ｍｌＮａ
Ｃｌ（５Ｍ保存溶液から）；１０ｍｌグリセロール；１．０ｍｌＴＸ−１００；
０．４ｍｌＥＤＴＡ（１００ｍＭ保存溶液から）；１．０ｍｌＰＭＳＦ（１００
ｍＭ保存溶液から）；０．１ｍｌＮａ3ＶＯ4（０．１Ｍ保存溶液から）；Ｍｉｌ
ｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１００ｍｌとする。 ｆ． ＡＴＰ：Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．＃Ａ−７６９９，１０ｍＭ保存溶液（５．
５１ｍｇ／ｍｌ）を作成する。 ｇ ＴＲＩＳ−ＨＣｌ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ１５２−５，６００ｍ
ｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに１２１．１４ｇの物質を加え，ＨＣｌでｐＨを７．
５に調節し，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１Ｌとする。 ｈ． ＮａＣｌ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ２７１−１０，ＭｉｌｌｉＱ
Ｈ2Ｏで５Ｍ保存溶液を作成する。 ｉ． Ｎａ3ＶＯ4：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ４５４−５０；８０ｍｌのＭ
ｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，１．８ｇの物質を加える；ＨＣｌまたはＮａＯＨでｐＨ
を１０．０に調節する；電子レンジ中で沸騰させる；冷却する；ｐＨを調べ，加
熱／冷却サイクルの後にｐＨが安定に維持されるまでｐＨ調節を繰り返す；Ｍｉ
ｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１００ｍｌとする；１ｍｌのアリコートを作成し，−
８０℃で保存する。 ｊ． ＭｇＣｌ2：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｍ３３−５００，ＭｉｌｌｉＱ
Ｈ2Ｏで１Ｍ保存溶液を作成する。 ｋ． ＨＥＰＥＳ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ３１０−５００；２００ｍ
ｌＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，５９．６ｇの物質を加え，ｐＨを７．５に調節し，
ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量２５０ｍｌとし，濾過滅菌する（１Ｍ保存溶液）
。 ｌ． ＴＢＳＴ緩衝液：ＴＢＳＴ緩衝液：９００ｍｌのｄＨ2Ｏに，６．０５７
ｇＴＲＩＳおよび８．７６６ｇＮａＣｌを加える；ＨＣｌでｐＨを７．２に調節
し，１．０ｍｌＴｒｉｔｏｎ−Ｘ10０を加える；ｄＨ2Ｏで総容量１Ｌとする。 ｍ． ＭｎＣｌ2：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｍ８７−１００，ＭｉｌｌｉＱ
Ｈ2Ｏで１Ｍ保存溶液とする。 ｎ． ＤＴＴ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ１７２−５ ｏ． ＴＢＳ（ＴＲＩＳ緩衝化食塩水）：９００ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに
，６．０５７ｇＴＲＩＳおよび８．７７７ｇＮａＣｌを加える；ＭｉｌｌｉＱ
Ｈ2Ｏで総容量を１Ｌとする。 ｐ． キナーゼ反応混合物：アッセイプレート（１００ウエル）１枚あたりの量
：１．０ｍｌキナーゼ緩衝液，２００μｇＧＳＴ−ζ，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで
最終容量８．０ｍｌとする。 ｑ． ビオチン標識ＥＥＥＹＥＥＹＥＥＥＹＥＥＥＹＥＥＥＹ：水中のペプチド
保存溶液（１ｍＭ，２．９８ｍｇ／ｍｌ）を使用の直前に新たに作成する。 ｒ． Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ ＥＬＩＴＥ ＡＢＣ試薬：１４ｍｌの作業用試薬
を調製するためには，１滴の試薬Ａを１５ｍｌＴＢＳＴに加え，管を数回逆さに
して混合する。次に１滴の試薬Ｂを加える。管を室温で環状振盪器に入れ，３０
分間混合する。
【０３７９】方法 ａ．ｓｒｃでコーティングしたＥＬＩＳＡプレートの調製 １． ＥＬＩＳＡプレートを１００μｌの炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．６）
中の０．５μｇ／ウエルの抗ｓｒｃモノクローナル抗体で，４℃で一夜コーティ
ングする。 ２． ウエルをＰＢＳで１回洗浄する。 ３． プレートをＰＢＳ中５％ミルク０．１５ｍｌで，室温で３０分間ブロッキ
ングする。 ４． プレートをＰＢＳで５回洗浄する。 ５． 溶解緩衝液中で希釈した，ｓｒｃでトランスフォームした酵母の溶解物を
１０μｇ／ウエルで加える（ウエルあたり総容量０．１ｍｌ）。（溶解物の量は
，バッチにより異なるであろう）。プレートを室温で２０分間振盪する。ｂ．ホスホチロシン抗体でコーティングしたＥＬＩＳＡプレートの調製 １． ４Ｇ１０プレート：１００μｌＰＢＳ中の０．５μｇ／ウエルの４Ｇ１０
で４℃で一夜コーティングし，１５０μｌのＰＢＳ中５％ミルクで室温で３０分
間ブロッキングする。ｃ．キナーゼアッセイ法 １． 未結合蛋白質をプレートから除去し，プレートをＰＢＳで５回洗浄する。
２． ウエルあたり０．０８ｍｌのキナーゼ反応混合物（ウエルあたり１０μｌ
の１０Ｘキナーゼ緩衝液および１０μＭ（最終濃度）のビオチン−ＥＥＥＹＥＥ
ＹＥＥＥＹＥＥＥＹＥＥＥＹ，水中に希釈）を加える。 ３． １０％ＤＭＳＯを含有する水中に希釈した１０μｌの化合物を加え，室温
で１５分間プレインキュベートする。 ４． １０μｌ／ウエルの水中０．０５ｍＭＡＴＰ（最終５μＭＡＴＰ）を加え
ることにより，キナーゼ反応を開始させる。 ５． ＥＬＩＳＡプレートを室温で１５分間振盪する。 ６． ウエルあたり１０μｌの０．５ＭＥＤＴＡを加えることによりキナーゼ反
応を停止させる。 ７． ９０μｌの上清を，ブロッキングした４Ｇ１０コーティングＥＬＩＳＡプ
レートに移す。 ８． 振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。 ９． プレートをＴＢＳＴで５回洗浄する。 １０． Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ ＥＬＩＴＥ ＡＢＣ試薬（１００μｌ／ウエル
）とともに室温で３０分間インキュベートする。 １１． ウエルをＴＢＳＴで５回洗浄する。 １２． Ｔｕｒｂｏ ＴＭＢで発色させる。
【０３８０】実施例９：生化学的ｌｃｋアッセイ−ＥＬＩＳＡ このアッセイを用いて，ＧＳＴ−ζのリン酸化を読出しとして測定することに
より，ｌｃｋ蛋白質キナーゼ活性を決定する。材料および試薬： 以下の材料および試薬を用いた： ａ． ｌｃｋでトランスフォームした酵母：Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙ
ｃｅｓ Ｐｏｍｂｅを用いて組換えＬｃｋを発現させる（Ｓｕｐｅｒｔｉ−Ｆｕ
ｒｇａ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：２６２５−２６３４；Ｓｕｐｅｒ
ｔｉ−Ｆｕｒｇａ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１４：６
００−６０５）。Ｓ．Ｐｏｍｂｅ ＳＰ２００株（ｈ−ｓ ｌｅｕｌ．３２ ｕ
ｒａ４ ａｄｅ２１０）を記載されたように増殖させ，ｐＲＳＰ発現プラスミド
で酢酸リチウム法によりトランスフォームする（Ｓｕｐｅｒｔｉ−Ｆｕｒｇａ，
（上掲））。細胞を１μＭチアミンの存在下で増殖させ，発現を誘導する。 ｂ． 細胞溶解物：ｌｃｋを発現する酵母細胞をペレット化し，水で１回洗浄し
，再ペレット化し，使用するまで−８０℃で凍結保存する。 ｃ． ＧＳＴ−ζ：細菌中で発現させるためのＧＳＴ−ζ融合蛋白質をコードす
るＤＮＡは，Ｈｏｗａｒｄ Ｈｕｇｈｅｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔ
ｅ，ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｓａｎ Ｆ
ｒａｎｃｉｓｃｏのＡｒｔｈｕｒ Ｗｅｉｓｓから入手する。トランスフォーム
した細菌を振盪しながら２５℃で一夜増殖させる。ＧＳＴ−ζは，グルタチオン
アフィニティークロマトグラフィー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ａｌａｍｅｄａ，Ｃ
Ａ）により精製する。 ｄ． ＤＭＳＯ：Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ ｅ． ９６ウエルＥＬＩＳＡプレート：Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥａｓｙ Ｗ
ａｓｈ，改変平底プレート，Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃａｔ．＃２５８０５−９６ ｆ． ＮＵＮＣ９６ウエルＶ−底ポリプロピレンプレート，化合物希釈用：Ａｐ
ｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃａｔ．＃ＡＳ−７２０９２ ｇ． 精製ウサギ抗ＧＳＴ抗血清：Ａｍｒａｄ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ａｕ
ｓｔｒａｌｉａ）Ｃａｔ．＃９０００１６０５ ｈ． ヤギ抗ウサギ−ＩｇＧ−ＨＲＰ：Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｃａｔ．＃Ｖ０１０
３０１ ｉ． ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）：Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ Ｃａｔ．＃
５２１５−００５−００３ ｊ． 抗Ｌｃｋ（３Ａ５）モノクローナル抗体：Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣａｔ＃ｓｃ−４３３ ｋ． 抗ホスホチロシンモノクローナル抗体ＵＢＩ０５−３２１（代わりにＵＢ
４０を用いてもよい）
【０３８１】緩衝溶液： ａ． ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食塩水）１Ｘ溶液：ＧＩＢＣＯＰＢＳ，
ＧＩＢＣＯ Ｃａｔ．＃４５０−１３００ＥＢ ｂ． ブロッキング緩衝液：１００ｇＢＳＡ，１２．１ｇＴＲＩＳ−ｐＨ７．５
，５８．４４ｇＮａＣｌ，１０ｍｌＴｗｅｅｎ−２０，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで
総容量１Ｌとする。 ｃ． 炭酸緩衝液：Ｎａ2ＣＯ4，Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｃａｔ．＃Ｓ４９５；Ｍｉｌ
ｌｉＱ Ｈ2Ｏで１００ｍＭ溶液とする。 ｄ． キナーゼ緩衝液：１．０ｍｌ（１Ｍ保存溶液より）ＭｇＣｌ2；０．２ｍ
ｌ（１Ｍ保存溶液より）ＭｎＣｌ2；０．２ｍｌ（１Ｍ保存溶液より）ＤＴＴ；
５．０ｍｌ（１Ｍ保存溶液より）ＨＥＰＥＳ；０．１ｍｌＴＸ−１００；Ｍｉｌ
ｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１０ｍｌとする。 ｅ． 溶解緩衝液：５．０ＨＥＰＥＳ（１Ｍ保存溶液より）；２．７４ｍｌＮａ
Ｃｌ（５Ｍ保存溶液より）；１０ｍｌグリセロール；１．０ｍｌＴＸ−１００；
０．４ｍｌＥＤＴＡ（１００ｍＭ保存溶液より）；１．０ｍｌＰＭＳＦ（１００
ｍＭ保存溶液より）；０．１ｍｌＮａ3ＶＯ4（０．１Ｍ保存溶液より）；Ｍｉｌ
ｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１００ｍｌとする。 ｆ． ＡＴＰ：Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．＃Ａ−７６９９，１０ｍＭ保存溶液（５．
５１ｍｇ／ｍｌ）を作成する。 ｇ ＴＲＩＳ−ＨＣｌ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ１５２−５，６００ｍ
ｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，１２１．１４ｇの物質を加え，ＨＣｌでｐＨを７
．５に調節し，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１Ｌとする。 ｈ． ＮａＣｌ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ２７１−１０，ＭｉｌｌｉＱ
Ｈ2Ｏで５Ｍ保存溶液を作成する。 ｉ Ｎａ3ＶＯ4：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ４５４−５０；８０ｍｌのＭｉ
ｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，１．８ｇの物質を加える；ＨＣｌまたはＮａＯＨでｐＨを
１０．０に調節する；電子レンジ中で沸騰させる；冷却する；ｐＨを調べ，加熱
／冷却サイクルの後にｐＨが安定となるまでｐＨ調節を繰り返す；ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１００ｍｌとする；１ｍｌのアリコートを作成し，−８０℃で
保存する。 ｊ． ＭｇＣｌ2：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｍ３３−５００，ＭｉｌｌｉＱ
Ｈ2Ｏで１Ｍ保存溶液を作成する。 ｋ． ＨＥＰＥＳ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ３１０−５００；２００ｍ
ｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，５９．６ｇの物質を加え，ｐＨを７．５に調節し
，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量２５０ｍｌとし，濾過滅菌する（１Ｍ保存溶液
）。 ｌ． アルブミン，ウシ（ＢＳＡ），Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．＃Ａ４５０３；１５
０ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，３０ｇの物質を加え，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで
総容量３００ｍｌとし，０．２２μｍフィルターを通して濾過し，４℃で保存す
る。 ｍ． ＴＢＳＴ緩衝液：９００ｍｌのｄＨ2Ｏに，６．０５７ｇＴＲＩＳおよび
８．７６６ｇＮａＣｌを加える；ＨＣｌでｐＨを７．２に調節する；１．０ｍｌ
Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ10０を加える；ｄＨ2Ｏで総容量１Ｌとする。 ｎ． ＭｎＣｌ2：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｍ８７−１００，ＭｉｌｌｉＱ
Ｈ2Ｏで１Ｍ保存溶液を作成する。 ｏ． ＤＴＴ；Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ１７２−５ ｐ． ＴＢＳ（ＴＲＩＳ緩衝化食塩水）：９００ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに
，６．０５７ｇＴＲＩＳおよび８．７７７ｇＮａＣｌを加える；ＭｉｌｌｉＱ
Ｈ2Ｏで総容量１Ｌとする。 ｑ キナーゼ反応混合物：アッセイプレート（１００ウエル）１枚あたりの量：
１．０ｍｌキナーゼ緩衝液，２００μｇＧＳＴ−ζ，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで最
終容量８．０ｍｌとする。
【０３８２】方法： ａ．ＬｃｋでコーティングしたＥＬＩＳＡプレートの調製 １． １００μｌの炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．６）中のヤギ抗マウスＩｇ
Ｇ２．０μｇ／ウエルで，４℃で一夜コーティングする。 ２． ウエルをＰＢＳで１回洗浄する。 ３． プレートを０．１５ｍｌのブロッキング緩衝液で室温で３０分間ブロッキ
ングする。 ４． プレートをＰＢＳで５回洗浄する。 ５． ０．１ｍｌＰＢＳ中の抗ｌｃｋ（モノクローナル抗体３Ａ５）を０．５μ
ｇ／ウエルで室温で１−２時間加える。 ６． プレートをＰＢＳで５回洗浄する。 ７． 溶解緩衝液中に希釈した，ｌｃｋでトランスフォームした酵母の溶解物を
２０μｇ／ウエルで加える（ウエルあたり総容量０．１ｍｌ）。プレートを４℃
で一夜振盪して活性の喪失を防止する。ｂ．ホスホチロシン抗体でコーティングしたＥＬＩＳＡプレートの調製 １． ＵＢ４０プレート：１００μｌＰＢＳ中の１．０μｇ／ウエルＵＢ４０を
４℃で一夜加え，１５０μｌのブロッキング緩衝液で少なくとも１時間ブロッキ
ングする。ｃ．キナーゼアッセイ法 １． 未結合蛋白質をプレートから除去し，プレートをＰＢＳで５回洗浄する。 ２． ウエルあたり０．０８ｍｌのキナーゼ反応混合物（ウエルあたり，水で希
釈した１０μｌの１０Ｘキナーゼ緩衝液および２μｇＧＳＴ−ζを含む）を加え
る。 ３． １０％ＤＭＳＯを含有する水中で希釈した化合物１０μｌを加え，室温で
１５分間プレインキュベートする。 ４． 水中０．１ｍＭＡＴＰ（最終濃度１０μＭＡＴＰ）を１０μｌ／ウエルで
加えることによりキナーゼ反応を開始させる。 ５． ＥＬＩＳＡプレートを室温で６０分間振盪する。 ６． ウエルあたり１０μｌの０．５ＭＥＤＴＡを加えることによりキナーゼ反
応を停止させる。 ７． ９０μｌの上清を，上述のＢ節からのブロッキングした４Ｇ１０コーティ
ングＥＬＩＳＡプレートに移す。 ８． 振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。 ９． プレートをＴＢＳＴで５回洗浄する。 １０． １００μｌＴＢＳＴ中１：５０００に希釈したウサギ抗ＧＳＴ抗体とと
もに室温で３０分間インキュベートする。 １１． ウエルをＴＢＳＴで５回洗浄する。 １２． １００μｌのＴＢＳＴ中１：２０，０００に希釈したヤギ抗ウサギ−Ｉ
ｇＧ−ＨＲＰとともに室温で３０分間インキュベートする。 １３． ウエルをＴＢＳＴで５回洗浄する。 １４． Ｔｕｒｂｏ ＴＭＢで発色させる。
【０３８３】実施例１０：ＲＡＦのリン酸化機能を測定するアッセイ 以下のアッセイは，ＲＡＦにより触媒される，その標的蛋白質ＭＥＫならびに
ＭＥＫの標的であるＭＡＰＫのリン酸化の量を測定する。ＲＡＦ遺伝子配列は，
Ｂｏｎｎｅｒら（１９８５，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：１４００−
１４０７）に記載されており，多くの遺伝子配列データバンクにおいて容易にア
クセス可能である。核酸ベクターの構築および本発明のこの部分において用いら
れる細胞株は，Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：８８５５−８８５９）にすべて記載されている。材料および試薬 １． Ｓｆ９（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞；ＧＩＢＣ
Ｏ−ＢＲＬ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ ２． ＲＩＰＡ緩衝液：２０ｍＭＴｒｉｓ／ＨＣ１ｐＨ７．４，１３７ｍＭＮａ
Ｃｌ，１０％グリセロール，１ｍＭＰＭＳＦ，５ｍｇ／Ｌアプロテニン，０．５
％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００； ３． チオレドキシン−ＭＥＫ融合蛋白質（Ｔ−ＭＥＫ）：Ｔ−ＭＥＫ 発現およびアフィニティークロマトグラフィーによる精製は，製造元の方法に従
って実施する。カタログ＃Ｋ３５０−０１およびＲ35０−４０，Ｉｎｖｉｔｒｏ
ｇｅｎＣｏｒｐ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ ４． Ｈｉｓ−ＭＡＰＫ（ＥＲＫ２）；Ｈｉｓ−タグＭＡＰＫは，Ｈｉｓ−ＭＡ
ＰＫをコードするｐＵＣ１８ベクターによりトランスフォームしたＸＬ１ Ｂｌ
ｕｅ細胞中で発現させる。Ｈｉｓ−ＭＡＰＫはＮｉ−アフィニティークロマトグ
ラフィーにより精製する。Ｃａｔ＃２７−４９４９−０１，Ｐｈａｒｍａｃｉａ
，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ，本明細書に記載されたとおり。 ５． ヤギ抗マウスＩｇＧ：Ｊａｃｋｓｏｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅ
ｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ．カタログ，＃５１５−００６−００８，Ｌｏｔ＃２８
５６３ ６． ＲＡＦ−１蛋白質キナーゼ特異的抗体：ＵＲＰ２６５３，ＵＢＩ ７． コーティング緩衝液：ＰＢＳ；リン酸緩衝化食塩水，ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ
，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ ８． 洗浄緩衝液：ＴＢＳＴ−５０ｍＭＴｒｉｓ／ＨＣＬｐＨ７．２，１５０ｍ
ＭＮａＣｌ，０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ９． ブロッキング緩衝液：ＴＢＳＴ，０．１％エタノールアミンｐＨ７．４ １０． ＤＭＳＯ，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ １１． キナーゼ緩衝液（ＫＢ）：２０ｍＭＨＥＰＥＳ／ＨＣｌ（ｐＨ７．２）
，１５０ｍＭＮａＣｌ，０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００，１ｍＭＰＭＳＦ，５
ｍｇ／Ｌアプロテニン，７５ｍＭオルトバナジウム酸ナトリウム，０．５ＭＭＤ
ＴＴおよび１０ｍＭＭｇＣｌ2 １２． ＡＴＰ混合物：ｌ００ｍＭＭｇＣｌ2，３００ｍＭＡＴＰ，１０ｍＣｉ
γ33ＰＡＴＰ（ＤｕＰｏｎｔ−ＮＥＮ）／ｍＬ １３ 停止溶液：１％リン酸；Ｆｉｓｈｅｒ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ １４． Ｗａｌｌａｃリン酸セルロースフィルターマット；Ｗａｌｌａｃ，Ｔｕ
ｒｋｕ，Ｆｉｎｎｌａｎｄ １５． フィルター洗浄溶液：１％リン酸，Ｆｉｓｈｅｒ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇ
ｈ，ＰＡ １６． Ｔｏｍｔｅｃプレート回収機，Ｗａｌｌａｃ，Ｔｕｒｋｕ，Ｆｉｎｎｌ
ａｎｄ １７． Ｗａｌｌａｃベータプレートリーダー＃１２０５，Ｗａｌｌａｃ，Ｔｕ
ｒｋｕ，Ｆｉｎｎｌａｎｄ １８． 化合物用に，ＮＵＮＣ９６ウエルＶ底ポリプロピレンプレート，Ａｐｐ
ｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ＃ＡＳ−７２０９２
【０３８４】方法 以下のすべての工程は，特に指示しないかぎり，室温で実施した。 １． ＥＬＩＳＡプレートコーティング：ＥＬＩＳＡウエルを１００ｍｌのヤギ
抗マウスアフィニティー精製抗血清（１ｍｇ／ｌ００ｍＬコーティング緩衝液）
で４℃で一夜コーティングする。ＥＬＩＳＡプレートは，４℃で保存したとき，
２週間使用することができる。 ２． プレートを逆さにして液体を除去する。１００ｍＬのブロッキング溶液を
加え，３０分間インキュベートする。 ３． ブロッキング溶液を除去し，洗浄緩衝液で４回洗浄する。プレートをペー
パータオル上で軽くたたいて過剰の液体を除去する。 ４． 各ウエルに１ｍｇのＲＡＦ−１特異的抗体を加え，１時間インキュベート
する。工程３に記載したように洗浄する。 ５． ＲＡＳ／ＲＡＦで感染させたＳｆ９細胞からの溶解物を解凍し，ＴＢＳＴ
で１０ｍｇ／１００ｍＬに希釈する。１０ｍｇの希釈溶解物をウエルに加え，１
時間インキュベートする。インキュベーションの間，プレートを振盪する。陰性
対照には溶解物を加えない。各ウイルスにつきＭＯＩ５で細胞を組換えバキュロ
ウイルスで感染させた後，ＲＡＳ／ＲＡＦで感染させたＳｆ９昆虫細胞からの溶
解物を調製し，４８時間後に回収する。細胞をＰＢＳで１回洗浄し，ＲＩＰＡ緩
衝液中で溶解する。不溶物質を遠心分離（５分間，１００００ｘｇ）により除去
する。溶解物のアリコートをドライアイス／エタノール中で凍結し，使用まで−
８０℃で保存する。 ６． 非結合物質を除去し，上に簡単に述べたように洗浄する（工程３）。 ７． ウエルあたり２ｍｇのＴ−ＭＥＫおよび２ｍｇのＨｉｓ−ＭＡＥＰＫを加
え，キナーゼ緩衝液で容量を４０ｍＬに調節する。細胞抽出物からＴ−ＭＥＫお
よびＭＡＰＫを精製する方法は，本明細書の実施例に記載される。 ８． 化合物（保存溶液１０ｍｇ／ｍＬＤＭＳＯ）または抽出物をＴＢＳＴプラ
ス１％ＤＭＳＯ中であらかじめ２０倍に希釈する。５ｍＬのあらかじめ希釈した
化合物／抽出物を工程６に記載したウエルに加える。２０分間インキュベートす
る。対照には薬剤を加えない。 ９． ５ｍＬＡＴＰミックスを加えることによりキナーゼ反応を開始する。イン
キュベーションの間，ＥＬＩＳＡプレート振盪器でプレートを振盪する。 １０． ６０分後，３０ｍＬの停止溶液を各ウエルに加えることによりキナーゼ
反応を停止する。 １１． ホスホセルロースマットおよびＥＬＩＳＡプレートをＴｏｍｔｅｃプレ
ート回収機中に置く。フィルターを回収し，フィルター洗浄溶液で製造元の推奨
にしたがってこれを洗浄する。フィルターマットを乾燥する。フィルターマット
を密封し，ケース中に置く。ケースを放射活性検出装置に入れ，フィルターマッ
ト上の放射活性リンを定量する。 あるいは，アッセイプレートの個々のウエルからの４０ｍＬのアリコートを，
ホスホセルロースフィルターマットの対応する位置に移すことができる。フィル
ターを風乾した後，フィルターをトレイ中に置く。トレイを穏やかにロックし，
洗浄溶液を１５分間ごとに１時間交換する。フィルターマットを風乾する。フィ
ルターマットを密封し，サンプル中の放射活性リンを測定するのに適当なケース
中に入れる。ケースを検出装置に入れ，フィルターマット上の放射活性リンを定
量する。
【０３８５】実施例１１：ＣＤＫ２／サイクリンＡ−阻害アッセイ このアッセイは，外部基質中のＣＤＫ２の蛋白質キナーゼ活性を測定する。材料および試薬： Ａ． 緩衝液Ａ（８０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ７．２），４０ｍＭＭｇＣｌ2）：４
．８４ｇＴｒｉｓ（Ｆ．Ｗ．＝１２１．１ｇ／ｍｏｌ），４．０７ｇＭｇＣｌ2
（Ｆ．Ｗ．＝２０３．３１ｇ／ｍｏｌ），５００ｍｌＨ2Ｏ中に溶解。ＨＣｌで
ｐＨを７．２に調節する。 Ｂ． ヒストンＨ１溶液（０．４５ｍｇ／ｍｌヒストンＨ１および２０ｍＭＨＥ
ＰＥＳ（ｐＨ７．２）：１１．１１１ｍｌの２０ｍＭＨＥＰＥＳｐＨ７．２（４
７７ｍｇＨＥＰＥＳ（Ｆ．Ｗ．＝２３８．３ｇ／ｍｏｌ））中の５ｍｇヒストン
Ｈ１（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ），１００ｍｌｄｄＨ2Ｏ中に
溶解する。１ｍｌアリコートとして−８０℃で保存する。 Ｃ． ＡＴＰ溶液（６０μＭＡＴＰ，３００μｇ／ｍｌＢＳＡ，３ｍＭＤＴＴ）
：１２０μｌの１０ｍＭＡＴＰ，６００μｌの１０ｍｇ／ｍｌＢＳＡで２０ｍｌ
とし，１ｍｌアリコートとして−８０℃で保存する。 Ｄ． ＣＤＫ２溶液：ｃｄｋ２／サイクリンＡ，１０ｍＭＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．
２，２５ｍＭＮａＣｌ，０．５ｍＭＤＴＴ，１０％グリセロール中。９μｌアリ
コートとして−８０℃で保存する。
【０３８６】アッセイの説明 １． 阻害剤の溶液を，ｄｄＨ2Ｏ／１５％ＤＭＳＯ（ｖ／ｖ）で所望の最終ア
ッセイ濃度の３倍で調製する。 ２． ２０μｌの阻害剤をポリプロピレンの９６ウエルプレートのウエルに加え
る（または陽性および陰性対照については２０μｌの１５％ＤＭＳＯ）。 ３． ヒストンＨ１溶液（１ｍｌ／プレート），ＡＴＰ溶液（１ｍｌ／プレート
プラス陰性対照について１アリコート），およびＣＤＫ２溶液（９μｌ／プレー
ト）を解凍する。ＣＤＫ２は使用まで氷上に保存する。ＣＤＫ２溶液を適当にア
リコートに分けて，凍結解凍サイクルの繰り返しを避ける。 ４． ９μｌＣＤＫ２溶液を２．１ｍｌ緩衝液Ａ（プレートあたり）で希釈し，
混合し，２０μｌを各ウエルに加える。 ５． １ｍｌヒストンＨ１溶液を１ｍｌＡＴＰ溶液（プレートあたり）と混合し
て，１０ｍｌねじ蓋管に入れる。γ33Ｐ ＡＴＰを０．１５μＣｉ／２０μｌ（
アッセイ中，０．１５μＣｉ／ウエル）の濃度となるよう加える。ＢＳＡの泡を
避けるよう注意深く混合する。２０μｌを適当なウエルに加える。プレートをプ
レート振盪器上で混合する。陰性対照については，等量の２０ｍＭＨＥＰＥＳ（
ｐＨ７．２）とＡＴＰ溶液とを混合し，γ33Ｐ ＡＴＰを０．１５μＣｉ／２０
μｌ溶液の濃度となるように加える。２０μｌを適当なウエルに加える。 ６． 反応を６０分間進行させる。 ７． ３５μｌの１０％ＴＣＡを各ウエルに加える。プレートをプレート振盪器
上で混合する。 ８． ４０μｌの各サンプルをＰ３０フィルターマットの升目上にスポットする
。マットを乾燥させる（約１０−２０分間）。 ９． フィルターマットを２５０ｍｌの１％リン酸（ｄｄＨ2Ｏ １ｌあたり１
０ｍｌリン酸）で４Ｘ10分間洗浄する。 １０． フィルターマットをベータプレートリーダーで計数する。
【０３８７】細胞／生物学的アッセイ 実施例１２：ＰＤＧＦ−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ 材料および試薬 ： （１） ＰＤＧＦ：ヒトＰＤＧＦ Ｂ／Ｂ；１２７６−９５６，Ｂｏｅｈｒｉｎ
ｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ （２） ＢｒｄＵ標識試薬：１０ｍＭ，ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中，Ｃａｔ．Ｎｏ
．１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ （３） ＦｉｘＤｅｎａｔ：固定溶液（即使用可），Ｃａｔ．Ｎｏ．１６４７２
２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ （４） 抗ＢｒｄＵ−ＰＯＤ：ペルオキシダーゼとコンジュゲート化したマウス
モノクローナル抗体，Ｃａｔ．Ｎｏ．１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ （５） ＴＭＢ基質溶液：テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ），即使用可，Ｃａ
ｔ．Ｎｏ．１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒ
ｍａｎｙ （６） ＰＢＳ洗浄溶液：１ＸＰＢＳ，ｐＨ７．４（Ｓｕｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｒ
ｅｄｗｏｏｄ Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ） （７） アルブミン，ウシ（ＢＳＡ）：画分Ｖ粉末；Ａ−８５５１，Ｓｉｇｍａ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，ＵＳＡ （８）ヒトＰＤＧＦ−Ｒを発現するよう遺伝子工学処理された３Ｔ３細胞株
【０３８８】プロトコル （１） 細胞をＤＭＥＭ，１０％ＣＳ，２ｍＭＧｌｎ中で，９６ウエルプレート
に８０００細胞／ウエルで播種する。細胞を５％ＣＯ2中で３７℃で一夜インキ
ュベートする。 （２） ２４時間後，細胞をＰＢＳで洗浄し，次に無血清培地（０％ＣＳ ＤＭ
ＥＭ，０．１％ＢＳＡ）中で２４時間血清飢餓とする。 （３） 第３日に，リガンド（ＰＤＧＦ，３．８ｎＭ，ＤＭＥＭ，０．１％ＢＳ
Ａ中で調製）および試験化合物を細胞に同時に加える。陰性対照ウエルには，無
血清ＤＭＥＭおよび０．１％ＢＳＡのみを加える；陽性対照細胞には，リガンド
（ＰＤＧＦ）を加えるが試験化合物を加えない。試験化合物は，９６ウエルプレ
ート中で無血清ＤＭＥＭ中でリガンドとともに調製し，連続希釈して７種類の試
験濃度とする。 （４） リガンド活性化の２０時間後，希釈ＢｒｄＵ標識試薬（ＤＭＥＭ，０．
１％ＢＳＡ中１：１００）を加え，細胞をＢｒｄＵ（最終濃度＝１０μＭ）とと
もに１．５時間インキュベートする。 （５） 標識試薬とともにインキュベーションした後，デカントし，逆さにした
プレートをペーパータオル上で軽くたたくことにより，培地を除去する。Ｆｉｘ
Ｄｅｎａｔ溶液を加え（５０μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪器上で室
温で４５分間インキュベートする。 （６） デカントし，逆さにしたプレートをペーパータオル上で軽くたたくこと
により，ＦｉｘＤｅｎａｔ溶液をよく除去する。ブロッキング溶液としてミルク
を加え（ＰＢＳ中５％脱水ミルク，２００μｌ／ウエル），プレートをプレート
振盪器上で室温で３０分間インキュベートする。 （７） デカントによりブロッキング溶液を除去し，ウエルをＰＢＳで１回洗浄
する。抗ＢｒｄＵ−ＰＯＤ溶液（ＰＢＳ，１％ＢＳＡ中１：１００希釈）を加え
（１００μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪器上で室温で９０分間インキ
ュベートする。 （８） デカントし，ウエルをＰＢＳで５回すすぐことにより抗体コンジュゲー
トをよく除去し，プレートを逆さにしてペーパータオル上で軽くたたくことによ
り乾燥させる。 （９） ＴＭＢ基質溶液を加え（１００μｌ／ウエル），プレート振盪器で室温
で２０分間，発色が光度計による検出に十分となるまでインキュベートする。 （１０） サンプルの吸光度は，Ｄｙｎａｔｅｃｈ ＥＬＩＳＡプレートリーダ
ーで４１０ｎｍで測定する（参照波長として４９０ｎｍで読みとるフィルターを
用いる"二波長"モード）。
【０３８９】実施例１３：ＥＧＦ−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ 材料および試薬 （１） ＥＧＦ：マウスＥＧＦ，２０１；Ｔｏｙｏｂｏ，Ｃｏ．，Ｌｔｄ．Ｊａ
ｐａｎ （２） ＢｒｄＵ標識試薬：１０ｍＭ，ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中，Ｃａｔ．Ｎｏ
．１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ （３） ＦｉｘＤｅｎａｔ：固定溶液（即使用可），Ｃａｔ．Ｎｏ．１６４７２
２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ （４） 抗ＢｒｄＵ−ＰＯＤ：ペルオキシダーゼとコンジュゲート化したマウス
モノクローナル抗体，Ｃａｔ．Ｎｏ．１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ （５） ＴＭＢ基質溶液：テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ），即使用可，Ｃａ
ｔ．Ｎｏ．１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒ
ｍａｎｙ （６） ＰＢＳ洗浄溶液：１ＸＰＢＳ，ｐＨ７．４（Ｓｕｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｒ
ｅｄｗｏｏｄＣｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ） （７） アルブミン，ウシ（ＢＳＡ）：画分Ｖ粉末；Ａ−８５５１，Ｓｉｇｍａ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，ＵＳＡ （８） ヒトＥＧＦ−Ｒを発現するよう遺伝子工学処理された３Ｔ３細胞株
【０３９０】プロトコル （１） 細胞をＤＭＥＭ中１０％ＣＳ，２ｍＭＧｌｎで，９６ウエルプレート中
で８０００細胞／ウエルで播種する。細胞を５％ＣＯ2中で３７℃で一夜インキ
ュベートする。 （２） ２４時間後，細胞をＰＢＳで洗浄し，次に無血清培地（０％ＣＳ ＤＭ
ＥＭ，０．１％ＢＳＡ）中で２４時間血清飢餓とする。 （３） 第３日に，リガンド（ＥＧＦ，２ｎＭ，ＤＭＥＭ，０．１％ＢＳＡ中で
調製）および試験化合物を細胞に同時に加える。陰性対照ウエルには０．１％Ｂ
ＳＡを含む無血清ＤＭＥＭのみを加える。陽性対照細胞には，リガンド（ＥＧＦ
）を加えるが試験化合物を加えない。試験化合物は，９６ウエルプレート中で，
無血清ＤＭＥＭ中でリガンドとともに調製し，連続希釈して７種類の試験濃度と
する。 （４） リガンド活性化の２０時間後，希釈したＢｒｄＵ標識試薬（ＤＭＥＭ中
１：１００，０．１％ＢＳＡ）を加え，細胞をＢｒｄＵ（最終濃度＝１０μＭ）
とともに１．５時間インキュベートする。 （５） 標識試薬とともにインキュベートした後，デカントして逆さにしたプレ
ートをペーパータオル上で軽くたたくことにより培地を除去する。ＦｉｘＤｅｎ
ａｔ溶液を加え（５０μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪器で室温で４５
分間インキュベートする。 （６） デカントして逆さにしたプレートをペーパータオル上で軽くたたくこと
によりＦｉｘＤｅｎａｔ溶液をよく除去する。ブロッキング溶液としてミルクを
加え（ＰＢＳ中５％脱水ミルク，２００μｌ／ウエル），プレートをプレート振
盪器で室温で３０分間インキュベートする。 （７） デカントによりブロッキング溶液を除去し，ウエルをＰＢＳで１回洗浄
する。抗ＢｒｄＵ−ＰＯＤ溶液（ＰＢＳ中１：１００希釈，１％ＢＳＡ）を加え
（１００μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪器で室温で９０分間インキュ
ベートする。 （８） デカントし，ウエルをＰＢＳで５回すすぐことにより抗体コンジュゲー
トをよく除去し，プレートを逆さにしてペーパータオル上で軽くたたくことによ
り乾燥させる。 （９） ＴＭＢ基質溶液を加え（１００μｌ／ウエル），プレート振盪器で室温
で２０分間，発色が高度計検出に十分となるまでインキュベートする。 （１０） サンプルの吸光度は，Ｄｙｎａｔｅｃｈ ＥＬＩＳＡプレートリーダ
ーで，４１０ｎｍ（参照波長として４９０ｎｍを読むフィルターを用いる"二波
長"モード”で）測定する。
【０３９１】実施例１４：ＥＧＦ−誘導性Ｈｅｒ２−推進ＢｒｄＵ取り込み 材料および試薬 ： （１） ＥＧＦ：マウスＥＧＦ，２０１；Ｔｏｙｏｂｏ，Ｃｏ．，Ｌｔｄ．Ｊａ
ｐａｎ （２）ＢｒｄＵ標識試薬：１０ｍＭ，ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中，Ｃａｔ．Ｎｏ．
１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ （３） ＦｉｘＤｅｎａｔ：固定溶液（即使用可），Ｃａｔ．Ｎｏ．１６４７２
２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ （４） 抗ＢｒｄＵ−ＰＯＤ：ペルオキシダーゼとコンジュゲート化したマウス
モノクローナル抗体，Ｃａｔ．Ｎｏ．１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ （５） ＴＭＢ基質溶液：テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ），即使用可，Ｃａ
ｔ．Ｎｏ．１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒ
ｍａｎｙ （６） ＰＢＳ洗浄溶液：１ＸＰＢＳ，ｐＨ７．４，自社製。 （７） アルブミン，ウシ（ＢＳＡ）：画分Ｖ粉末；Ａ−８５５１，Ｓｉｇｍａ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，ＵＳＡ （８） ＥＧＦ−Ｒの細胞外ドメインおよびＨｅｒ２の細胞内ドメインを有する
キメラレセプターを発現するよう遺伝子工学処理された３Ｔ３細胞株
【０３９２】プロトコル ： （１） 細胞をＤＭＥＭ，１０％ＣＳ，２ｍＭＧｌｎ中で９６−ウエルプレート
に８０００細胞／ウエルで播種する。細胞を３７℃で５％ＣＯ2中で一夜インキ
ュベートする。 （２） ２４時間後，細胞をＰＢＳで洗浄し，次に無血清培地（０％ＣＳ ＤＭ
ＥＭ，０．１％ＢＳＡを含む）中で２４時間血清飢餓とする。 （３） 第３日に，リガンド（ＥＧＦ＝２ｎＭ，０．１％ＢＳＡを含むＤＭＥＭ
中で調製）および試験化合物を細胞に同時に加える。陰性対照ウエルには無血清
ＤＭＥＭ，０．１％ＢＳＡのみを加える；陽性対照細胞にはリガンド（ＥＧＦ）
を加えるが試験化合物は加えない。試験化合物は，無血清ＤＭＥＭ中でリガンド
とともに９６ウエルプレート中で調製し，連続希釈して７種類の試験濃度とする
。 （４） リガンド活性化の２０時間後，希釈ＢｒｄＵ標識試薬（ＤＭＥＭ中１：
１００，０．１％ＢＳＡ）を加え，細胞をＢｒｄＵ（最終濃度＝１０μＭ）とと
もに１．５時間インキュベートする。 （５） 標識試薬とともにインキュベートした後，デカントして逆さにしたプレ
ートをペーパータオル上で軽くたたくことにより培地を除去する。ＦｉｘＤｅｎ
ａｔ溶液を加え（５０μｌ／ウエル），プレートを室温でプレート振盪器で４５
分間インキュベートする。 （６） デカントし，逆さにしたプレートをペーパータオル上で軽くたたくこと
により，ＦｉｘＤｅｎａｔ溶液をよく除去する。ブロッキング溶液としてミルク
を加え（ＰＢＳ中５％脱水ミルク，２００μｌ／ウエル），プレートをプレート
振盪器上で室温で３０分間インキュベートする。 （７） デカントによりブロッキング溶液を除去し，ウエルをＰＢＳで１回洗浄
する。抗ＢｒｄＵ−ＰＯＤ溶液（ＰＢＳ，１％ＢＳＡ中１：１００希釈）を加え
（１００μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪器上で９０分間室温でインキ
ュベートする。 （８） デカントし，ウエルをＰＢＳで５回すすぐことにより抗体コンジュゲー
トをよく除去し，プレートを逆さにしてペーパータオル上で軽くたたくことによ
り乾燥させる。 （９） ＴＭＢ基質溶液を加え（１００μｌ／ウエル），プレート振盪器で室温
で２０分間，発色が光度計検出に十分となるまでインキュベートする。 （１０） サンプルの吸光度を，Ｄｙｎａｔｅｃｈ ＥＬＩＳＡプレートリーダ
ーで，４１０ｎｍで（参照波長として４９０ｎｍで読むフィルターを用いる"二
波長"モードで）測定する。
【０３９３】実施例１５：ＩＧＦ１−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ 材料および試薬 ： （１） ＩＧＦ１リガンド：ヒト，組換え；Ｇ５１１，Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒ
ｐ，ＵＳＡ （２） ＢｒｄＵ標識試薬：１０ｍＭ，ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中，Ｃａｔ．Ｎｏ
．１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ （３） ＦｉｘＤｅｎａｔ：固定溶液（即使用可），Ｃａｔ．Ｎｏ．１６４７２
２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ （４） 抗ＢｒｄＵ−ＰＯＤ：ペルオキシダーゼとコンジュゲート化したマウス
モノクローナル抗体，Ｃａｔ．Ｎｏ．１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ （５） ＴＭＢ基質溶液：テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ），即使用可，Ｃａ
ｔ．Ｎｏ．１６４７２２９，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒ
ｍａｎｙ （６） ＰＢＳ洗浄溶液：１ＸＰＢＳ，ｐＨ７．４（Ｓｕｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｒ
ｅｄｗｏｏｄ Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ） （７） アルブミン，ウシ（ＢＳＡ）：画分Ｖ粉末；Ａ−８５５１，Ｓｉｇｍａ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，ＵＳＡ （８） ヒトＩＧＦ−１レセプターを発現するよう遺伝子工学処理された３Ｔ３
細胞株
【０３９４】プロトコル ： （１） 細胞をＤＭＥＭ，１０％ＣＳ，２ｍＭＧｌｎ中で９６−ウエルプレート
に８０００細胞／ウエルで播種する。細胞を５％ＣＯ2中，３７℃で一夜インキ
ュベートする。 （２） ２４時間後，細胞をＰＢＳで洗浄し，次に無血清培地（０％ＣＳ ＤＭ
ＥＭ，０．１％ＢＳＡ）中で２４時間血清飢餓とする （３） 第３日に，リガンド（ＩＧＦ１＝３．３ｎＭ，０．１％ＢＳＡを含むＤ
ＭＥＭ中で調製）および試験化合物を細胞に同時に加える。陰性対照ウエルには
０．１％ＢＳＡを含む無血清ＤＭＥＭのみを加える。陽性対照細胞にはリガンド
（ＩＧＦ１）を加えるが試験化合物を加えない。試験化合物は，９６ウエルプレ
ートで無血清ＤＭＥＭ中でリガンドとともに調製し，連続希釈して７種類の試験
濃度とする。 （４） リガンド活性化の１６時間後，希釈ＢｒｄＵ標識試薬（ＤＭＥＭ，０．
１％ＢＳＡ中１：１００）を加え，細胞をＢｒｄＵ（最終濃度＝１０μＭ）とと
もに１．５時間インキュベートする。 （５） 標識試薬とともにインキュベーションした後，デカントし，逆さにした
プレートをペーパータオル上で軽くたたくことにより培地を除去する。ＦｉｘＤ
ｅｎａｔ溶液を加え（５０μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪器上で室温
で４５分間インキュベートする。 （６） デカントし，逆さにしたプレートをペーパータオル上で軽くたたくこと
によりＦｉｘＤｅｎａｔ溶液をよく除去する。ブロッキング溶液としてミルクを
加え（ＰＢＳ中５％脱水ミルク，２００μｌ／ウエル），プレートをプレート振
盪器上で室温で３０分間インキュベートする。 （７） ブロッキング溶液をデカントにより除去し，ウエルをＰＢＳで１回洗浄
する。抗ＢｒｄＵ−ＰＯＤ溶液（ＰＢＳ，１％ＢＳＡ中１：１００希釈）を加え
（１００μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪器上で室温で９０分間インキ
ュベートする。 （８） デカントし，ウエルをＰＢＳで５回すすぐことにより抗体コンジュゲー
トをよく除去し，プレートを逆さにしペーパータオル上で軽くたたくことにより
乾燥する。 （９） ＴＭＢ基質溶液を加え（１００μｌ／ウエル），プレート振盪器上で室
温で２０分間，発色が光度計検出に十分となるまでインキュベートする。 （１０） サンプルの吸光度は，Ｄｙｎａｔｅｃｈ ＥＬＩＳＡプレートリーダ
ーで，４１０ｎｍ（参照波長として４９０ｎｍで読むフィルターを用いる"二波
長"モード）で測定する。
【０３９５】実施例１６：ＨＵＶ−ＥＣ−Ｃアッセイ また，以下のプロトコルを用いて，ＰＤＧＦ−Ｒ，ＦＧＦ−Ｒ，ＶＥＧＦ，ａ
ＦＧＦまたはＦｌｋ−１／ＫＤＲ（これらはすべてＨＵＶ−ＥＣ細胞により天然
に発現されている）に対する化合物の活性を測定することができる。第０日 １． ＨＵＶ−ＥＣ−Ｃ細胞（ヒト臍静脈内皮細胞，（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙ
ｐｅ Ｃｕｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ；カタログＮｏ．１７３０ＣＲＬ）
を洗浄し，トリプシン処理する。ダルベッコリン酸緩衝化食塩水（Ｄ−ＰＢＳ；
Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ；カタログＮｏ．１４１９０−０２９から入手）で２回，約
１ｍｌ／１０ｃｍ2組織培養フラスコで洗浄する。非酵素細胞解離溶液（Ｓｉｇ
ｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ；カタログＮｏ．Ｃ−１５４４）中で
０．０５％トリプシン−ＥＤＴＡでトリプシン処理する。０．０５％トリプシン
は，０．２５％トリプシン／１ｍＭＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ；カタログＮｏ．２５
２００−０４９）を細胞解離溶液中で希釈することにより作成する。約１ｍｌ／
２５−３０ｃｍ2組織培養フラスコで３７℃で約５分間トリプシン処理する。細
胞をフラスコからはがした後，等量のアッセイ培地を加え，５０ｍｌ滅菌遠心分
離管（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；カタログＮｏ．０５−５３９−６
）に移す。 ２． ５０ｍｌ滅菌遠心分離管中にアッセイ培地を加えることにより，細胞を約
３５ｍｌのアッセイ培地で洗浄し，約２００ｇで１０分間遠心分離し，上清を吸
引し，３５ｍｌのＤ−ＰＢＳに再懸濁する。Ｄ−ＰＢＳでさらに２回洗浄し，細
胞を約１ｍｌ／組織培養フラスコ１５ｃｍ2のアッセイ培地に再懸濁する。アッ
セイ培地は，Ｆ１２Ｋ培地（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ；カタログＮｏ．２１１２７−
０１４）＋０．５％熱不活性化ウシ胎児血清からなる。Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕ
ｎｔｅｒ（商標）（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．）で細
胞を計数し，アッセイ培地を細胞に加えて０．８−１．０ｘ１０5細胞／ｍｌの
濃度とする。 ３． 細胞を９６ウエル平底プレートに１００μｌ／ウエルまたは０．８−１．
０ｘ１０4細胞／ウエルで加える；３７℃，５％ＣＯ2で約２４時間インキュベー
トする。
【０３９６】第１日 １． 試験化合物の２倍滴定を別々の９６ウエルプレート中に作成する。一般に
，５０μＭから０μＭまで。上述の第０日，工程２と同じアッセイ培地を用いる
。滴定は，９０μｌ／ウエルの試験化合物を２００μＭ（４Ｘ最終ウエル濃度）
で特定のプレートカラムの最上のウエルに加えることにより行う。試験化合物保
存液濃度は通常ＤＭＳＯ中２０ｍＭであるため，２００μＭの薬剤濃度は２％Ｄ
ＭＳＯを含む。 したがって，ＤＭＳＯ濃度を一定に保持しながら薬剤を希釈するために，アッ
セイ培地中（Ｆ１２Ｋ＋０．５％ウシ胎児血清）２％ＤＭＳＯとした希釈剤を，
試験化合物滴定の希釈剤として用いる。この希釈物をカラム中の残りのウエルに
６０μｌ／ウエルで加える。カラムの最上ウエル中の１２０μｌの２００μＭ試
験化合物希釈物から６０μｌを採取し，カラムの第２のウエル中の６０μｌと混
合する。このウエルから６０μｌを採取し，カラム中の第３のウエル中の６０μ
ｌと混合し，２倍滴定が完了するまでこれを続ける。最後から２番目のウエルが
混合されたとき，このウエル中の１２０μｌの６０μｌを採取し，これを廃棄す
る。最後のウエルには薬剤非含有対照として６０μｌのＤＭＳＯ／培地希釈物を
加える。以下のアッセイの，滴定する試験化合物の三重のウエルに十分な９つの
カラムを作成する：（１）ＶＥＧＦ（Ｐｅｐｒｏ Ｔｅｃｈ Ｉｎｃ．，から入
手，カタログＮｏ．１００−２００，（２）内皮細胞成長因子（ＥＣＧＦ）（酸
性繊維芽細胞成長因子またはａＦＧＦとしても知られる）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅ
ｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａから入手，カタログＮｏ．１４３
９６００）；または（３）ヒトＰＤＧＦ Ｂ／Ｂ（１２７６−９５６，Ｂｏｅｈ
ｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）およびアッセイ培地対照。
ＥＣＧＦはヘパリンナトリウムを有する調製物として得た。 ２． ５０μｌ／ウエルの試験化合物希釈物を，第０日からのＨＵＶ−ＥＣ−Ｃ
細胞０．８−１．０ｘ１０4細胞／１００μｌ／ウエルを含む９６ウエルアッセ
イプレートに移し，３７oＣ，５％ＣＯ2で約２時間インキュベートする。 ３． 三重に，８０μｇ／ｍｌＶＥＧＦ，２０ｎｇ／ｍｌＥＣＧＦ，または各試
験化合物の条件に対する培地対照を５０μｌ／ウエルで加える。試験化合物につ
いては，成長因子濃度は所望の最終濃度の４倍である。第０日，工程２からのア
ッセイ培地を用いて，成長因子の濃度を調節する。３７℃，５％ＣＯ2で約２４
時間インキュベートする。各ウエルに５０μｌの試験化合物希釈物，５０μｌの
成長因子または培地，および１００μｌの細胞を加え，総量２００μｌ／ウエル
とする。すなわち，すべてをウエルに加えたとき，４倍濃度の試験化合物および
成長因子は１倍となる。
【０３９７】第２日 １． 3Ｈ−チミジン（Ａｍｅｒｓｈａｍ；カタログＮｏ．ＴＲＫ−６８６）を
１μＣｉ／ウエル（ＲＰＭＩ培地＋１０％熱不活性化ウシ胎児血清中で調製した
１００μＣｉ／ｍｌ溶液を１０μｌ／ウエル）で加え，３７℃，５％ＣＯ2で約
２４時間インキュベートする。ＲＰＭＩはＧｉｂｃｏ ＢＲＬから入手する，カ
タログＮｏ．１１８７５−０５１第３日 １． プレートを−２０℃で一夜凍結する。第４日 １． プレートを融解し，９６ウエルプレート回収器（Ｔｏｍｔｅｃ Ｈａｒｖ
ｅｓｔｅｒ９６（登録商標））でフィルターマット（Ｗａｌｌａｃ；カタログＮ
ｏ．１２０５−４０１）上に回収する；Ｗａｌｌａｃ Ｂｅｔａｐｌａｔｅ（商
標）液体シンチレーション計数機で計数する。
【０３９８】実施例１７：ＦＧＦ−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ このアッセイは，外来性ＦＧＦレセプターを発現する３Ｔｃ７／ＥＧＦｒ細胞
におけるＦＧＦ誘導性ＤＮＡ合成を測定する。材料および試薬： １．ＦＧＦ：ヒトＦＧＦ２／ｂＦＧＦ（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ，Ｎｏ．１３２５６
−０２９） ２．ＢｒｄＵ標識試薬，（１０ｍＭＰＢＳ（ｐＨ７．４），Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅ
ｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ ＣａｔＮｏ．１６４７２２９） ３．Ｆｉｘｄｅｎａｔ固定溶液（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ Ｃ
ａｔ Ｎｏ．１６４７２２９） ４．抗ＢｒｄＵ−ＰＯＤ（ペルオキシダーゼとコンジュゲートしたマウスモノク
ローナル抗体，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ ＭａｎｎｈｅｉｍＣａｔ：．Ｎｏ．１６
４７２２９） ５．ＴＭＢ（テトラメチルベンジジン，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉ
ｍＣａｔ．Ｎｏ．１６４７２２９） ６．ＰＢＳ洗浄溶液，ｐＨ７．４（Ｓｕｇｅｎ，Ｉｎｃ．） ７．アルブミン，ウシ（ＢＳＡ），画分Ｖ粉末（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｃｏ．，Ｃａｔ．Ｎｏ．Ａ−８５５１）
【０３９９】方法 １．３Ｔ３遺伝子工学処理細胞株：３Ｔ３ｃ７／ＥＧＦｒ ２．細胞は，ＤＭＥＭ，１０％ＣＳおよび２ｍＭＧｌｎで，９６ウエルプレート
に８，０００細胞／ウエルで播種する。５％ＣＯ2中で３７℃で２４時間インキ
ュベートする。 ３．２４時間後，細胞をＰＢＳで洗浄し，次に，無血清培地（０％ＤＭＥＭ，０
．１％ＢＳＡ）中で２４時間血清飢餓とする。 ４．リガンド（ＦＧＦ２（ＤＭＥＭ中１．５ｎＭ，０．１％ＢＳＡ）および試験
化合物を同時に加える。陰性対照ウエルには０．１％ＢＳＡを含む無血清ＤＭＥ
Ｍのみを加え，陽性対照ウエルにはＦＧＦ２リガンドを加えるが試験化合物は加
えない。試験化合物は，９６ウエルプレート中で無血清ＤＭＥＭ中でリガンドと
ともに調製し，連続希釈して７種類の試験濃度とする。 ５．２０時間後，希釈ＢｒｄＵ標識試薬を細胞に加え（１：１００ＢｒｄＵ：Ｄ
ＭＥＭ，０．１％ＢＳＡ，最終濃度１０μＭ），１．５時間インキュベートする
。 ６．培地をデカントする。ペーパータオルで痕跡量の物質を除去する。ＦｉｘＤ
ｅｎａｔを加え（５０μｌ／ウエル），プレート振盪器で室温で４５分間インキ
ュベートする。 ７．Ｆｉｘｄｅｎａｔ溶液を除去する。ブロッキング溶液（ＰＢＳ中５％脱水ミ
ルク（２００μｌ／ウエル））を加え，プレート振盪器で室温で３０分間インキ
ュベートする。 ８．ブロッキング溶液をデカントし，ウエルをＰＢＳで１回洗浄する。抗Ｂｒｄ
Ｕ−ＰＯＤ溶液（ＰＢＳ中１：１００希釈，０．１％ＢＳＡ）を加え，プレート
振盪器で室温で９０分間インキュベートする。 ９．抗体コンジュゲートをデカントし，ウエルをＰＢＳで５回すすぐ。ペーパー
タオル上で逆さにして軽くたたくことによりプレートを乾燥する。 １０．ＴＭＢ溶液を加え（１００μｌ／ウエル），プレート振盪器で室温で２０
分間，発色が光度検出に十分となるまでインキュベートする。 １１．Ｄｙｎａｔｅｃｈ ＥＬＩＳＡプレートリーダーで"二波長"モードを用い
，４９０ｎＭのフィルターを用いて，４１０ｎＭで吸光度を測定する。
【０４００】実施例１８：生化学的ＥＧＦＲアッセイ このアッセイは，ＥＬＩＳＡを用いてＥＧＦＲのインビトロキナーゼ活性を測
定する材料および試薬 １．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥｌｉｓａプレート（ＣｏｒｎｉｎｇカタログＮ
ｏ．２５８０５−９６） ２．ＳＵＭ０１モノクローナル抗ＥＧＦＲ抗体（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌ
ａｂ，ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．） ３．ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食塩水，ＧｉｂｃｏカタログＮｏ．４５０
−１３００ＥＢ） ４．ＴＢＳＴ緩衝液
【表６】 ５．ブロッキング緩衝液：
【表７】 ６．Ａ４３１細胞溶解物（Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｌａｂ，ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．
）７．ＴＢＳ緩衝液：
【表８】 ８．ＴＢＳ＋１０％ＤＭＳＯ
【表９】 ９．アデノシン−５'−三リン酸（ウマ筋肉からのＡＴＰ，Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ
．Ｎｏ．Ａ−５３９４） ｄＨ2Ｏ中１．０ｍＭ溶液を調製する。この試薬は使用の直前に作成し，氷上に
保存する。 １０．ＭｎＣｌ2 ｄＨ2Ｏ中１．０Ｍの保存溶液を調製する。 １１．ＡＴＰ／ＭｎＣｌ2リン酸化混合物
【表１０】 この試薬は，使用直前に調製し，氷上に保存しなければならない。 １２．ＮＵＮＣ９６ウエルＶ底ポリプロピレンプレート（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃ
ｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＡＳ−７２０９２） １３．エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ） ｄＨ2Ｏ中２００ｍＭの作業溶液を調製する。１０ＮＮａＯＨでｐＨ８．０に調
製する。 １４．ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン血清（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
Ｌａｂ，ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．） １５．ヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼコンジュゲート（Ｂｉｏｓｏｕｒｃ
ｅ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＡＬＴ０４０４） １６．ＡＢＴＳ（２，２'−アジノ−ビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−
硫酸），Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．Ｎｏ．Ａ−１８８８）
【表１１】 最初に，約９００ｍｌのｄＨ2Ｏ中で２つの成分を混合する。リン酸でｐＨを４
．０に調製する。ＡＢＴＳを加え，カバーし，約０．５時間放置し，濾過する。
溶液は使用前まで暗所で４℃で保存すべきである。 １７．過酸化水素３０％溶液（Ｆｉｓｈｅｒ Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｈ３２５） １８．ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2 １５ｍｌのＡＢＴＳ溶液と２．０μｌのＨ2Ｏ2を混合する。使用の５分前に調製
する。 １９．０．２ＭＨＣｌ
【０４０１】方法 １．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートをウエルあたり１００μｌＰ
ＢＳ中０．５μｇのＳＵＭ０１でコーティングし，４℃で一夜保存する。 ２．プレートを逆さにして液体を除去することにより，未結合ＳＵＭ０１をウエ
ルから除去する。ｄＨ2Ｏで１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽く
たたいて過剰の液体を除去する。 ３．１５０μｌのブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。振盪しながら室温で
３０分間インキュベートする。 ４．プレートを脱イオン水で３回，次にＴＢＳＴで１回洗浄する。プレートをペ
ーパータオル上で軽くたたいて，過剰の液体および気泡を除去する。 ５．溶解物をＰＢＳ中で希釈する（７μｇ溶解物／１００μｌＰＢＳ）。 ６．１００μｌの希釈溶解物を各ウエルに加える。室温で６０分間振盪する。 ７．上述の工程４に記載したようにプレートを洗浄する。 ８．１２０μｌのＴＢＳを，捕捉ＥＧＦＲを含有するＥＬＩＳＡプレートに加え
る。 ９．試験化合物を９６ウエルポリプロピレンプレート中でＴＢＳで１：１０に希
釈する（すなわち，１０μｌ化合物＋９０μｌＴＢＳ）。 １０．１３．５μｌの希釈試験化合物をＥＬＩＳＡプレートに加える。対照ウエ
ルには１３．５μｌＴＢＳ＋１０％ＤＭＳＯを加える（ウエルには試験化合物を
加えない）。 １１．振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。 １２．１５μｌリン酸化混合物を陰性対照ウエルを除くすべてのウエルに直接加
える。陰性対照ウエルにはＡＴＰ／ＭｎＣｌ2を加えない。（最終ウエル容量は
約１５０μｌ，各ウエル中３μＭＡＴＰ／５ｍＭＭｎＣｌ2の最終濃度となるは
ずである）。振盪しながら５分間インキュベートする。 １３．５分後，１６．５μｌの２００ｍＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）を各ウエルに
加えることにより反応を停止させ，振盪を続ける。ＥＤＴＡを加えた後，１分間
振盪する。 １４．脱イオン水で４回，ＴＢＳＴで２回洗浄する。 １５．ウエルあたり１００μｌの抗ホスホチロシン（ＴＢＳＴ中１：３０００希
釈）を加える。振盪しながら室温で３０−４５分間インキュベートする。 １６．上述の工程４に記載したように洗浄する。 １７．１００μｌのＢｉｏｓｏｕｒｃｅヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼコ
ンジュゲート（ＴＢＳＴ中１：２０００希釈）を各ウエルに加える。振盪しなが
ら室温で３０分間インキュベートする。 １８．上述の工程４に記載したように洗浄する。 １９．１００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液を各ウエルに加える。 ２０．振盪しながら５−１０分間インキュベートする。気泡を除去する。 ２１．必要ならば，ウエルあたり１００μｌの０．２ＭＨＣｌを加えて，反応を
停止させる。 ２２．アッセイをＤｙｎａｔｅｃｈ ＭＲ70００ ＥＬＩＳＡリーダーで読む；
試験フィルター：４１０ｎＭ参照フィルター：６３０Ｎｍ。
【０４０２】実施例１９：生化学的ＰＤＧＦＲアッセイ このアッセイは，ＥＬＩＳＡを用いてＰＤＧＦＲのインビトロキナーゼ活性を
測定する。材料および試薬 特に記載しないかぎり，以下の試薬の作業溶液の調製は，上述の生化学的ＥＧ
ＦＲアッセイと同じである。 １．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥｌｉｓａプレート（ＣｏｒｎｉｎｇカタログＮ
ｏ．２５８０５−９６） ２．２８Ｄ４Ｃ１０モノクローナル抗ＰＤＧＦＲ抗体（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ Ｌａｂ，ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．） ３．ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食塩水，ＧｉｂｃｏカタログＮｏ．４５０
−１３００ＥＢ） ４．ＴＢＳＴ緩衝液 ５．ブロッキング緩衝液 ６．ＰＤＧＦＲ−β発現ＮＩＨ３Ｔ３細胞溶解物（Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｌａｂ
，ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．） ７．ＴＢＳ緩衝液 ８．ＴＢＳ＋１０％ＤＭＳＯ ９．アデノシン−５'−三リン酸（ＡＴＰ，ウマ筋肉由来，Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ
．Ｎｏ．Ａ−５３９４） １０．ＭｎＣｌ2 １１．キナーゼ緩衝液リン酸化混合物
【表１２】 １２．ＮＵＮＣ９６ウエルＶ底ポリプロピレンプレート（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃ
ｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＡＳ−７２０９２） １３．エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ） １４．ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン血清（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
Ｌａｂ，ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．） １５．ヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼコンジュゲート（Ｂｉｏｓｏｕｒｃ
ｅ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＡＬＩ０４０４） １６．２，２'−アジノ−ビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−硫酸）（Ａ
ＢＴＳ，Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．Ｎｏ．Ａ−１８８８） １７．過酸化水素３０％溶液（Ｆｉｓｈｅｒ Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｈ３２５） １８．ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2 １９．０．２ＭＨＣｌ
【０４０３】方法 １．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートをウエルあたり１００μｌＰ
ＢＳ中の０．５μｇの２８Ｄ４Ｃ１０でコーティングする。４℃で一夜保存する
。 ２．プレートを逆さにして液体を除去することにより，未結合２８Ｄ４Ｃ１０を
ウエルから除去する。ｄＨ2Ｏで１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で
軽くたたいて過剰の液体を除去する。 ３．１５０μｌのブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。振盪しながら室温で
３０分間インキュベートする。 ４．プレートを脱イオン水で３回，次にＴＢＳＴで１回洗浄する。プレートをペ
ーパータオル上で軽くたたいて，過剰の液体および気泡を除去する。 ５．溶解物をＨＮＴＧ中で希釈する（１０μｇ溶解物／１００μｌＨＮＴＧ） ６．１００μｌの希釈溶解物を各ウエルに加える。室温で６０分間振盪する。 ７．プレートを上述の工程４に記載したように洗浄する。 ８．８０μｌの作業用キナーゼ緩衝液混合物を捕捉ＰＤＧＦＲを含有するＥＬＩ
ＳＡプレートに加える。 ９．試験化合物を９６ウエルポリプロピレンプレート中でＴＢＳで１：１０に希
釈する（１０μｌ化合物＋９０μｌＴＢＳ）。 １０．１０μｌの希釈試験化合物をＥＬＩＳＡプレートに加える。対照ウエル（
試験化合物を加えないウエル）には１０μｌＴＢＳ＋１０％ＤＭＳＯを加える。 １１．振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。 １２．１０μｌのＡＴＰを陰性対照ウエルを除く全てのウエルに直接加える。（
各ウエル中最終ウエル容量は２０μＭＡＴＰを含む約１００μｌとなるはずであ
る）。振盪しながら３０分間インキュベートする。 １３．３０分後，１０μｌの２００ｍＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）を各ウエルに加
えることにより反応を停止する。 １４．脱イオン水で４回，ＴＢＳＴで２回洗浄する。 １５．ウエルあたり１００μｌの抗ホスホチロシン（ＴＢＳＴ中１：３０００希
釈）を加える。振盪しながら室温で３０−４５分間インキュベートする。 １６．上述の工程４に記載したように洗浄する。 １７．１００μｌのＢｉｏｓｏｕｒｃｅヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼコ
ンジュゲート（ＴＢＳＴ中１：２０００希釈）を各ウエルに加える。振盪しなが
ら室温で３０分間インキュベートする。 １８．上述の工程４に記載したように洗浄する。 １９．１００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液を各ウエルに加える。 ２０．振盪しながら１０−３０分間インキュベートする。気泡を除去する。 ２１．必要ならば，ウエルあたり１００μｌの０．２ＭＨＣｌを加えて反応を停
止する。 ２２．Ｄｙｎａｔｅｃｈ ＭＲ70００ ＥＬＩＳＡリーダーでアッセイを読む：
試験フィルター：４１０ｎＭ，参照フィルター：６３０ｎＭ。
【０４０４】実施例２０：生化学的ＦＧＦＲアッセイ このアッセイは，ＥＬＩＳＡを用いてＭｙｃ−ＧｙｒＢ−ＦＧＦＲ融合蛋白質
のキナーゼ活性をインビトロで測定する。材料および試薬 １．ＨＮＴＧ
【表１３】 １リットルの５ｘ保存溶液を作成するためには，ＨＥＰＥＳおよびＮａＣｌを
約３５０ｍｌのｄＨ2Ｏに溶解し，ＨＣｌまたはＮａＯＨでｐＨを７．２に調節
し（用いるＨＥＰＥＳによる），グリセロール，ＴｒｉｔｏｎＸ10０を加え，次
にｄＨ2Ｏを加えて最終容量とする。 ２．ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食塩水，Ｇｉｂｃｏカタログ＃４５０−１
３００ＥＢ） ３．ブロッキング緩衝液 ４．キナーゼ緩衝液
【表１４】 ５．フッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ，Ｓｉｇｍａ，Ｃａｔ．Ｎｏ．
Ｐ−７６２６） 作業溶液：エタノール中１００ｍＭ ６．ＡＴＰ（細菌起源，Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．Ｎｏ．Ａ−７６９９） ６ｍＭの濃度の保存液のためには，１ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏあたり３．３
１ｍｇを用いる。 ７．ビオチンコンジュゲート化抗ホスホチロシンモノクローナル抗体（クローン
４Ｇ１０，Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．Ｃａｔ．Ｎ
ｏ．１６−１０３，Ｓｅｒ．Ｎｏ．１４４９５） ８．Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ Ｅｌｉｔｅ ＡＢＣ試薬（アビジンペルオキシダー
ゼコンジュゲート，Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｃａｔ．Ｎｏ．
ＰＫ−６１００） ９．ＡＢＴＳ溶液 １０．過酸化水素３０％溶液（Ｆｉｓｈｅｒカタログ＃Ｈ３２５） １１．ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2 １２．０．２ＭＨＣｌ １３．ＴＲＩＳ ＨＣｌ（Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＢＰ１５２−５） ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏ中の１．０ｍＭ溶液を調製し，ＨＣｌでｐＨを７．２に調
節する １４．ＮａＣｌ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｓ２７１−１０） ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏ中の５Ｍ溶液を調製する １５．ＭｇＣｌ2（Ｆｉｓｈｅｒ Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｍ３３−５００） ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏ中の１Ｍ溶液を調製する １６．ＨＥＰＥＳ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＢＰ３１０−５００） ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏ中の１Ｍ溶液を調製し，ｐＨを７．５に調節し，濾過滅菌
する。 １７．ＴＢＳＴ緩衝液 １８．炭酸ナトリウム緩衝液（Ｆｉｓｈｅｒ Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｓ４９５） ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏ中に０．１Ｍ溶液を調製し，ＮａＯＨでｐＨを９．６に調
製し，濾過する。 １９．ジチオスレイトール（ＤＴＴ，Ｆｉｓｈｅｒ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＢＰ１７２
−２５） 使用直前にＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏ中に０．５ｍＭの作業溶液を調製する。使用す
るまで−２０℃で保存し，残りは廃棄する。 ２０．ＭｎＣｌ2 ２１．ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ２２．ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｃａｐｐｅｌ） ２３．アフィニティー精製ウサギ抗ＧＳＴ ＧｙｒＢ（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ Ｌａｂ．ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．）
【０４０５】方法 以下の全ての工程は，特に記載しない限り，室温で実施する。 １．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを，ウエルの総容量が１００
μｌとなるように，ウエルあたり２μｇの炭酸緩衝液中のヤギ抗ウサギ抗体でコ
ーティングする。４℃で一夜保存する。 ２．プレートを逆さにして液体を除去することにより，未結合ヤギ抗ウサギ抗体
を除去する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて，過剰の液体および気
泡を除去する。 ３．１５０μｌのブロッキング緩衝液（ＰＢＳ中５％低脂肪ミルク）を各ウエル
に加える。マイクロタイタープレート振盪器で振盪しながら３０分間インキュベ
ートする。 ４．ＴＢＳＴで４回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて，過
剰の液体および気泡を除去する。 ５．ウエルあたり０．５μｇのウサギ抗ＧｙｒＢ抗体を加える。抗体をＤＰＢＳ
中で希釈して最終容量をウエルあたり１００μｌとする。マイクロタイタープレ
ート振盪器で振盪しながら室温で１時間インキュベートする。 ６．工程４に記載したようにＴＢＳＴで４回洗浄する。 ７．ＨＮＴＧ中の２μｇのＣＯＳ／ＦＧＦＲ細胞溶解物（Ｍｙｃ−ＧｙｒＢ−Ｆ
ＧＦＲ源）を各ウエルに加えて，ウエルあたり１００μｌの最終容量とする。マ
イクロタイタープレート振盪器で振盪しながら１時間インキュベートする。 ８．工程４に記載したようにＴＢＳＴで４回洗浄する。 ９．ウエルあたり８０μｌの１ｘキナーゼ緩衝液を加える。 １０．ポリプロピレン９６ウエルプレート中で試験化合物を１ｘキナーゼ緩衝液
＋１％ＤＭＳＯで１：１０に希釈する。 １１．希釈した試験化合物溶液および対照ウエルの１０μｌをポリプロピレンプ
レートウエルから対応するＥＬＩＳＡプレートウエルに移し，マイクロタイター
プレート振盪器で振盪しながら２０分間インキュベートする。 １２．キナーゼ緩衝液中で希釈した７０μＭＡＴＰの１０μｌを陽性対照および
試験ウエル（最終ＡＴＰ濃度は７μＭ／ウエル）に加える。１０μｌの１ｘキナ
ーゼ緩衝液を陰性対照ウエルに加える。マイクロタイタープレート振盪器で振盪
しながら１５分間インキュベートする。 １３．５μｌの０．５ＭＥＤＴＡをすべてのウエルに加えることによりキナーゼ
反応を停止する。 １４．工程４に記載したようにＴＢＳＴで４回洗浄する。 １５．ＴＢＳＴ中で希釈したビオチンコンジュゲート化抗ホスホチロシンモノク
ローナル抗体（ｂ４Ｇ１０）１００μｌを各ウエルに加える。マイクロタイター
プレート振盪器で振盪しながら３０分間インキュベートする。 １６．Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ ＡＢＣ試薬を調製する。１滴の試薬Ａを１５ｍｌ
のＴＢＳＴに加える。管を数回逆さにすることにより混合する。１滴の試薬Ｂを
加え，再び混合する。 １７．工程４に記載したようにＴＢＳＴで４回洗浄する。 １８．１００μｌのＡＢＣ ＨＲＰ試薬を各ウエルに加える。マイクロタイター
プレート振盪器で振盪しながら３０分間インキュベートする。 １９．工程４に記載したようにＴＢＳＴで４回洗浄する。 ２０．１００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液を各ウエルに加える。 ２２．振盪しながら５−１５分間インキュベートする。気泡を除去する。 ２３．必要ならば，１００μｌの０．２ＭＨＣｌ／ウエルを加えることにより 反応を停止させる。 ２４．アッセイをＤｙｎａｔｅｃｈ ＭＲ70００ ＥＬＩＳＡプレートリーダー
で読む；試験フィルター：４１０ｎＭ，参照フィルター：６３０ｎＭ。
【０４０６】実施例２１：生化学的ＦＬＫ−１アッセイ このアッセイは，ＥＬＩＳＡを用いて，ｆｌｋ−１自己リン酸化活性をインビ
トロで評価する。材料および試薬 １．１５ｃｍ組織培養皿 ２．Ｆｌｋ−１／ＮＩＨ細胞：ヒトｆｌｋ−１クローン３（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ
．，ＭＰＩ，Ｍａｒｔｉｎｓｒｉｅｄ，Ｇｅｒｍａｎｙより入手）を過剰発現す
るＮＩＨ繊維芽細胞株 ３．成長培地：ＤＭＥＭプラス熱不活性化１０％ＦＢＳおよび２ｍＭグルタミン
（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ） ４．飢餓培地：ＤＭＥＭプラス０．５％熱不活性化ＦＢＳ，２ｍＭグルタミン（
Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ） ５．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃａｔ．
Ｎｏ．２５８０５−９６） ６．ｆｌｋ−１に特異的なＬ４またはＥ３８モノクローナル抗体；蛋白質−Ａア
ガロースアフィニティークロマトグラフィーにより精製（ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．
） ７．ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食塩水）Ｇｉｂｃｏ Ｃａｔ．Ｎｏ．４５
０−１３００ＥＢ） ８．ＨＮＴＧ（調製については生化学的ＦＧＦＲを参照） ９．ＰｉｅｒｃｅＢＣＡ蛋白質検定キット １０．ブロッキング緩衝液 １１．ＴＢＳＴ（ｐＨ７．０） １２．キナーゼ緩衝液 １３．キナーゼ停止溶液：２００ｍＭＥＤＴＡ １４．ビオチニル化４Ｇ１０，ホスホチロシンに特異的（ＵＢＩ，Ｃａｔ．Ｎｏ
．Ｎｏ．１６−１０３） １５．ＡＢキット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｃａｔ．Ｎｏ．
ＰＫ４０００） １６．ＤＭＳＯ １７．ＮＵＮＣ９６ウエルＶ底ポリプロピレンプレート（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃ
ｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＡＳ−７２０９２） １８．Ｔｕｒｂｏ−ＴＭＢ（Ｐｉｅｒｃｅ） １９．Ｔｕｒｂｏ−ＴＭＢ停止溶液：１Ｍ Ｈ2ＳＯ4 ２０．ＡＴＰ（Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．Ｎｏ．Ａ−７６９９） ２１．２０％ＤＭＳＯ，ＴＢＳ（ｐＨ７．０）中
【０４０７】方法 細胞成長および溶解物調製 １．細胞を成長培地中に播種し，３７℃，５％ＣＯ2で９０−１００％コンフル
エントとなるまで２−３日間成長させる。２０継代を越えないこと。 ２．培地を除去し，細胞をＰＢＳで２回洗浄する。ＨＮＴＧ溶解緩衝液で溶解す
る。すべての溶解物を回収し，２０−３０秒間ボルテックス混合する。 ３．遠心分離（５−１０分間，約１０，０００ｘｇ）により不溶性物質を除去す
る。 ４．ＢＣＡキットを用いて蛋白質濃度を決定する。 ５．溶解物を１ｍｇのアリコートに分配し，−８０℃で保存する。アッセイ方法 １．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを，１００μｌのＰＢＳ中の
２μｇ／ウエルの精製Ｌ４（またはＥ３８）でコーティングする。４℃で一夜保
存する。 ２．プレートを逆さにして液体を除去することにより，未結合蛋白質をウエルか
ら除去する。ｄＨ2Ｏで１回洗浄し，プレートをペーパータオル上で軽くたたい
て過剰の液体を除去する。 ３．プレートをウエルあたり１５０μｌのブロッキング緩衝液でブロッキングす
る。４℃で振盪しながら４５−６０分間インキュベートする。 ４．ブロッキング緩衝液を除去し，ＥＬＩＳＡプレートをｄＨ2Ｏで３回，ＴＢ
ＳＴで１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて過剰の液体を
除去する。 ５．溶解物をＰＢＳ中で希釈して，最終濃度を５０μｇ／１００μｌとする。１
００μｌの希釈溶解物を各ウエルに加える。振盪しながら４℃で一夜インキュベ
ートする。 ６．プレートを逆さにすることにより未結合蛋白質をウエルから除去する。工程
４と同様に洗浄する。 ７．８０μｌのキナーゼ緩衝液をウエルに加える（陰性対照ウエルには９０μｌ
）。 ８．試験化合物をＴＢＳ中２０％ＤＭＳＯを含むポリプロピレンプレートのウエ
ル中で希釈する（通常は１０倍）。 ９．１０μｌの希釈化合物を固定化ｆｌｋ−１を含むＥＬＩＳＡウエルに加え，
振盪する。対照ウエルには化合物を加えない。 １０．１ｍＭＡＴＰ保存液から，ｄＨ2Ｏ中０．３ｍＭＡＴＰ溶液を調製する（
あるいは，キナーゼ緩衝液を用いてもよい）。 １１．陰性対照を除くすべてのウエルに１０μｌの０．３ｍＭＡＴＰを加える。
振盪しながら室温で６０分間インキュベートする。 １２．１時間後，１１μｌの２００ｍＭＥＤＴＡを加えることにより，キナーゼ
反応を停止させる。１−２分間振盪する。 １３．ＥＬＩＳＡプレートをｄＨ2Ｏで４回，ＴＢＳＴで２回洗浄する。 １４．１００μｌの１：５０００ビオチニル化４Ｇ１Ｏ：ＴＢＳＴをすべてのウ
エルに加える。振盪しながら室温で４５分間インキュベートする。 １５．上述のものをインキュベートしている間，ＡＢＣキットからの５０μｌの
溶液ＡおよびＢを１０ｍｌのＴＢＳＴに加える。これらの溶液は，使用の約３０
分前に混合しなければならない。 １６．工程４と同様にプレートを洗浄する。 １７．あらかじめ形成したＡとＢの複合体１００μｌをすべてのウエルに加える
。振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。 １８．工程４と同様にプレートを洗浄する。 １９．１００μｌのＴｕｒｂｏ−ＴＭＢを加える。室温で１０−１５分間振盪す
る。 ２０．陽性対照ウエルの色が吸光度約０．３５−０．４に達したとき，１００μ
ｌのＴｕｒｂｏ−ＴＭＢ停止溶液で反応を停止する。 ２１．Ｄｙｎａｔｅｃｈ ＭＲ70００ ＥＬＩＳＡリーダーでプレートを読む。
試験フィルター：４５０ｎＭ，参照フィルター：４１０ｎＭ。
【０４０８】インビボ動物モデル 実施例２２：異種移植片動物モデル ヒト腫瘍が無胸腺マウス（例えば，Ｂａｌｂ／ｃ，ｎｕ／ｎｕ）中で異種移植
片として成長する能力は，ヒト腫瘍の治療に対する生物学的応答を研究するのに
有用なインビボモデルを提供する。ヒト腫瘍の無胸腺マウスへの最初の成功的な
異種移植（Ｒｙｇａａｒｄ ａｎｄ Ｐｏｖｌｓｅｎ，１９６９，Ａｃｔａ Ｐ
ａｔｈｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ．Ｓｃａｎｄ．７７：７５８−７６０）以来，
多くの異なるヒト腫瘍細胞株（例えば，***，肺，尿生殖器，胃腸，頭頸部，神
経膠芽細胞腫，骨，および悪性黒色腫）が移植され，ヌードマウス中での成長に
成功してきた。以下のアッセイを用いて，本発明の種々の化合物の活性，特異性
および効果のレベルを決定することができる。３種類の一般的アッセイ，すなわ
ち細胞／触媒，細胞／生物学的およびインビボアッセイが化合物の評価に有用で
ある。細胞／触媒アッセイの目的は，ＴＫが細胞中の既知の基質上のチロシンを
リン酸化する能力に及ぼす化合物の影響を判定することである。細胞／生物学的
アッセイの目的は，細胞中でＴＫにより刺激される生物学的応答に及ぼす化合物
の影響を判定することである。インビボアッセイの目的は，特定の疾患，例えば
癌の動物モデルにおける化合物の影響を判定することである。 皮下異種移植片実験に適した細胞株としては，Ｃ６細胞（神経膠腫，ＡＴＣＣ
＃ＣＣＬ１０７），Ａ３７５細胞（黒色腫，ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ１６１９），Ａ４
３１細胞（類表皮癌腫，ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ１５５５），Ｃａｌｕ６細胞（肺，Ａ
ＴＣＣ＃ＨＴＢ５６），ＰＣ３細胞（前立腺，ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ１４３５），お
よびＥＧＦＲ，ＰＤＧＦＲ，ＩＧＦ−１Ｒまたは任意の他の試験キナーゼを過剰
発現するように遺伝子工学処理されたＳＫＯＶ３ＴＰ５細胞およびＮＩＨ３Ｔ３
繊維芽細胞が挙げられる。以下のプロトコルを用いて異種移植片実験を行うこと
ができる。 雌無胸腺マウス（ＢＡＬＢ／ｃ，ｎｕ／ｎｕ）はＳｉｍｏｎｓｅｎ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｇｉｌｒｏｙ，ＣＡ）から入手する。すべての動物は，クリ
ーンルーム条件下で，マイクロアイソレーターケージでアルファドライ敷きわら
で維持する。動物には，滅菌齧歯類食および水を任意に与える。 細胞株は，適当な培地（例えば，ＭＥＭ，ＤＭＥＭ，Ｈａｍ'ｓＦ１０，また
はＨａｍ'ｓＦ１２プラス５％−１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）および２ｍＭグ
ルタミン（ＧＬＮ））中で成長させる。すべての細胞培養培地，グルタミン，お
よびウシ胎児血清は，特に断らない限り，Ｇｉｂｃｏ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ（Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）から購入する。すべての細胞
は，９０−９５％空気および５−１０％ＣＯ2の湿潤環境下で３７℃で成長させ
る。すべての細胞株は，週に２回，定期的に継代し，Ｍｙｃｏｔｅｃｔ法（Ｇｉ
ｂｃｏ）により判定して，マイコプラズマについては陰性である。 細胞は，コンフルエント，またはそれに近い状態で，０．０５％トリプシン−
ＥＤＴＡで回収し，４５０ｘｇで１０分間ペレット化する。ペレットを滅菌ＰＢ
Ｓまたは培地（ＦＢＳなし）中に懸濁して特定の濃度とし，細胞をマウス（１群
あたり，８−１０匹のマウス，２−１０ｘ１０6細胞／動物）の後側腹部内に移
植する。腫瘍成長は，ベニエカリパスを用いて３−６週間にわたり測定する。腫
瘍体積は，とくに記載のないかぎり，長さｘ幅ｘ高さの積として計算する。Ｐ値
は，スチューデントｔ−テストを用いて計算する。５０−１００μｌの賦形剤（
ＤＭＳＯ，またはＶＰＤ：Ｄ５Ｗ）中の試験化合物は，通常は移植後の第１日か
ら初めて，異なる濃度でＩＰ注入により輸送することができる。
【０４０９】実施例２３：腫瘍侵襲モデル 以下の腫瘍侵襲モデルが開発されており，ＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプターを選
択的に阻害すると同定された化合物の治療的価値および有効性を評価するために
用いることができる。方法 ８週齢のヌードマウス（雌）（ＳｉｍｏｎｓｅｎＩｎｃ．）を実験動物として
用いる。腫瘍細胞の移植は，層流フード内で行うことができる。麻酔用に，キシ
ラジン／ケタミンカクテル（１００ｍｇ／ｋｇケタミンおよび５ｍｇ／ｋｇキシ
ラジン）を腹膜内に投与する。中線切開を行って，腹腔を露出して（約１．５ｃ
ｍの長さ），容量１００μｌの培地中の１０7個の腫瘍細胞を注入する。細胞は
，膵臓の十二指腸葉または結腸の漿膜下に注入する。腹膜および筋肉を６−０絹
連続縫糸により縫合し，皮膚は創傷クリップを用いて縫合する。動物は毎日観察
する。分析 動物の全体的所見により２−６週間後，マウスを殺し，局所腫瘍の種々の臓器
（肺，肝臓，脳，胃，脾臓，心臓，筋肉）への転移を調べ，分析する（腫瘍サイ
ズ，侵襲の程度，免疫化学，およびインサイチオハイブリダイゼーション測定）
。
【０４１０】実施例２４：細胞毒性の測定 治療用化合物は，細胞毒性効果を発揮するよりも，蛋白質キナーゼ活性の阻害
においてより強力であるべきである。ある化合物の有効性および細胞毒性の尺度
は，治療指数，すなわちＩＣ50／ＬＤ50を決定することにより得ることができる
。５０％阻害を達成するのに必要な用量ＩＣ50は，標準的な技術，例えば本明細
書に記載される技術を用いて測定することができる。５０％毒性を与える用量Ｌ
Ｄ50もまた，標準的な技術を用いて（Ｍｏｓｓｍａｎ，１９８３，Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，６５：５５−６３），放出されたＬＤＨの量を測定す
ることにより（Ｋｏｒｚｅｎｉｅｗｓｋｉ ａｎｄ Ｃａｌｌｅｗａｅｒｔ，１
９８３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，６４：３１３；Ｄｅｃｋｅｒ
ａｎｄ Ｌｏｈｍａｎｎ−Ｍａｔｔｈｅｓ，１９８８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍ
ｅｔｈｏｄｓ，１１５：６１），または動物モデルにおける致死量を測定するこ
とにより，測定することができる。高い治療指数を有する化合物が好ましい。治
療指数は，２より大きくなくてはならず，好ましくは少なくとも１０，より好ま
しくは少なくとも５０である。
【０４１１】実施例２５：本発明の化合物の活性 本発明のいくつかの化合物の生物学的または生化学的活性を，上述のアッセイ
を用いて試験した。本発明の化合物のいくつかについてＩＣ50値を測定した。結
果は以下の表に示される。
【０４１２】 表４
【表１５】
【０４１３】 表５
【表１６】
【表１７】
【０４１４】 表６
【表１８】
【表１９】
【０４１５】結論 当業者は，本発明は，その目的を実施し，記載される結果および利点，ならび
に本明細書に固有のものを得るのによく適合していることを容易に理解するであ
ろう。本明細書に記載される分子複合体および方法，手順，処理，分子，特定の
化合物は，現在のところ好ましい態様の代表的なものであり，例示的なものであ
って，本発明の範囲を限定することを意図するものではない。当業者は，特許請
求の範囲において定義される本発明の精神の中に包含される変更および他の用途
をなすであろう。
【０４１６】 当業者は，本発明の範囲および精神から逸脱することなく，本明細書に開示さ
れる本発明に対して置換基および修飾の変更をなすことが可能であることを容易
に理解するであろう。
【０４１７】 本明細書において言及されるすべての特許および刊行物は，本発明の属する技
術分野の技術者のレベルを示す。すべての特許および刊行物は，それぞれの刊行
物が特定的に個々に本明細書の一部としてここに引用されることと同じ程度に，
本明細書の一部として引用される。
【０４１８】 本明細書に例示的に記載されている発明は，本明細書に特定的に開示されてい
ない任意の要素または限定なしでも適切に実施することができる。すなわち，例
えば，本明細書における各例において，"・・・を含む"，"・・・から本質的に
なる"および"・・・からなる"との用語は，他の２つのいずれかと置き換えるこ
とができる。本明細書において用いた用語および表現は，説明の用語として用い
るものであり，限定ではない。そのような用語および表現の使用においては，示
されかつ記載されている特徴またはその一部の等価物を排除することを意図する
ものではなく，特許請求の範囲に記載される本発明の範囲中で種々の変更が可能
であることが理解される。すなわち，好ましい態様および任意の特徴により本発
明を特定的に開示してきたが，当業者には本明細書に記載される概念の変更およ
び変種が可能であり，そのような変更および変種も特許請求の範囲に定義される
本発明の範囲内であると考えられることが理解されるべきである。
【０４１９】 さらに，発明の特徴および局面がマーカッシュグループの用語で記載されてい
る場合，当業者は，本発明が，マーカッシュグループのメンバーの個々のメンバ
ーまたはサブグループに関してもまた記載されていることを認識するであろう。
例えば，Ｘが，臭素，塩素およびヨウ素からなる群より選択されるとして記載さ
れている場合，Ｘが臭素である特許請求の範囲およびＸが臭素および塩素である
特許請求の範囲も完全に記載されている。
【０４２０】 本明細書においては，本発明を広くかつ一般的に記載している。一般的開示に
含まれるより狭い種および亜属のそれぞれのグループもまた本発明の一部を形成
する。これには，除かれたものが具体的に記載されているか否かにかかわらず，
属から任意の主題を除く「ただし・・・」またはネガティブ限定を含む発明の一
般的記載が含まれる。
【０４２１】 他の態様も特許請求の範囲の範囲内である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 17/06 Ａ６１Ｐ 17/06 19/02 19/02 29/00 29/00 １０１ １０１ 35/00 35/00 37/00 37/00 43/00 １０５ 43/00 １０５ １１１ １１１ Ｃ０７Ｄ 401/06 Ｃ０７Ｄ 401/06 401/10 401/10 401/12 401/12 401/14 401/14 403/06 403/06 403/10 403/10 409/10 409/10 409/14 409/14 Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｎ 9/99 // Ａ６１Ｋ 31/404 Ａ６１Ｋ 31/404 31/4439 31/4439 31/5377 31/5377 (31)優先権主張番号 ６０／１３１，１９２ (32)優先日 平成11年４月26日(1999．4．26) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ６０／１３２，２４３ (32)優先日 平成11年５月３日(1999．5．3) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ， ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ Ｎ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ， ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，Ｋ Ｐ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ， ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，Ｓ Ｇ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 タン，ペン・チョウ アメリカ合衆国 94556 カリフォルニア 州 モラガ，カミノ・リカルド 827 (72)発明者 スン，リ アメリカ合衆国 94404 カリフォルニア 州 フォスター シティ，ロックハーバ ー・レーン 64 (72)発明者 マクマホン，ジェラルド アメリカ合衆国 95452 カリフォルニア 州 ケンウッド，シュルツ・ロード 1800 (72)発明者 ミラー，トッド・アンソニー アメリカ合衆国 94587 カリフォルニア 州 ユニオン・シティ，コルサ・ストリー ト 4928 (72)発明者 シレイジアン，シャラザッド アメリカ合衆国 94925 カリフォルニア 州 コルテ・マデラ，コンスティテューシ ョン・ドライブ １ (72)発明者 ウェイ，チャン・チェン アメリカ合衆国 94404 カリフォルニア 州 フォスター・シティ，コモンズ・レイ ン 39 (72)発明者 ハリス ジー．・ディビス アメリカ合衆国 94114 カリフォルニア 州 サン・フランシスコ，ルーズベルト・ ウェイ 417 (72)発明者 シャオユアン，リ アメリカ合衆国 95130 カリフォルニア 州 サン・ホセ，バーウッド・ドライブ 2437 (72)発明者 リャン・コンジン アメリカ合衆国 94087 カリフォルニア 州 サニーベイル，ダブリュー・レミント ン・ドライブ 729 Ｆターム(参考） 4C063 AA01 AA03 BB03 BB06 BB08 CC06 CC12 CC92 DD04 DD06 EE01 4C086 AA01 AA02 AA03 BB02 BC13 BC17 BC73 GA04 GA07 GA08 GA09 NA14 ZA36 ZA39 ZA45 ZA89 ZA96 ZB02 ZB05 ZB11 ZB15 ZB21 ZB26 ZC02 ZC35 4C204 BB01 CB03 DB15 DB30 EB03 FB01 GB32

Claims (39)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 式Ｉ： 【化１】 ［式中， ｎおよびｍは，独立して，０または１であり； ｎが１であるとき，Ａ，Ｂ，Ｄ，ＥおよびＦは，独立して，炭素および窒素から
    なる群より選択され；ただし，Ａ，Ｂ，Ｄ，ＥおよびＦの３個以下が同時に窒素
    であり，Ａ，Ｂ，Ｄ，Ｅ，またはＦが窒素であるとき，Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，Ｒ7また
    はＲ8はそれぞれ存在せず； ｍが１であるとき，Ｇ，Ｈ，Ｊ，ＫおよびＬは，独立して，炭素および窒素から
    なる群より選択され；ただし，Ｇ，Ｈ，Ｊ，ＫおよびＬの少なくとも１つおよび
    ３個以下が同時に窒素であり，Ｇ，Ｈ，Ｊ，ＫまたはＬが窒素であるとき，Ｒ9
    ，Ｒ10，Ｒ11，Ｒ12，またはＲ13はそれぞれ存在せず； ｎが０であるとき，Ａは，炭素および窒素からなる群より選択され，ＢおよびＦ
    は，炭素，窒素，ＮＨ，酸素およびイオウからなる群より選択され，ただし，Ｂ
    またはＦがＮＨであるとき，他方はＮＨではありえず，およびＥは，炭素，窒素
    ，酸素およびイオウからなる群より選択され，Ｂ，ＥまたはＦの１個以下は酸素
    またはイオウであり，かつ，Ａ，Ｂ，ＥまたはＦの少なくとも１つはヘテロ原子
    であり（すなわち炭素ではない）； ｍが０であるとき，Ｇは，炭素および窒素からなる群より選択され，Ｈ，Ｋおよ
    びＬは，炭素，窒素，ＮＨ，酸素およびイオウからなる群より選択され，ただし
    ，ＨまたはＬがＮＨであるとき，他方はＮＨではありえず，およびＫは，炭素，
    窒素，酸素およびイオウからなる群より選択され，ただし，Ｈ，ＫまたはＬの１
    個以下は酸素またはイオウであり，かつ，Ｇ，Ｈ，ＫまたはＬの少なくとも１つ
    はヘテロ原子であり（すなわち，炭素ではない）； Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，Ｒ7，Ｒ8，Ｒ9，Ｒ10，Ｒ11，Ｒ12およびＲ13
    は，独立して，水素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニ
    ル，アルキニル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アル
    コキシ，メルカプト，アルキルチオ，アリールオキシ，アリールチオ，スルフィ
    ニル，スルホニル，Ｓ−スルホンアミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ
    −カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，カルボキシアルキル，シアノ，ニトロ，ハロ，
    Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル，Ｃ−アミド，Ｎ−アミドおよび−ＮＲ14Ｒ15 からなる群より選択され； Ｒ4およびＲ5またはＲ5およびＲ6またはＲ6およびＲ7またはＲ7およびＲ8は，一
    緒になって５員環または６員環アリールまたはヘテロアリール環を形成してもよ
    く；および， Ｒ14およびＲ15は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル，
    アルキニル，アリール，ヘテロアリール，カルボニル，スルホニルからなる群よ
    り選択され，または一緒になって５員環または６員環ヘテロ脂環式環を形成して
    もよい］ に記載される化学構造を有する化合物またはその薬学的に許容しうる塩。
  2. 【請求項２】 Ｒ1，Ｒ2およびＲ3は，独立して， 水素； １またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アルキル； １またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アルコキシ； ハロ； （低級アルキル）−Ｓ−スルホンアミド； （アリール）−Ｓ−スルホンアミド；および −ＮＲ14Ｒ15； からなる群より選択され， Ｒ4，Ｒ5，Ｒ6，Ｒ7，Ｒ8，Ｒ9，Ｒ10，Ｒ11，Ｒ12およびＲ13は，独立して，水
    素； アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ハロ，ヒドロキシ，低級アルコキシ
    ，メルカプト，低級アルキルチオ，Ｃ−カルボキシおよび−ＮＲ14Ｒ15からなる
    群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい低級アル
    キル； シクロアルキル； ヒドロキシ； １またはそれ以上のハロ基，アリール，ヘテロアリールおよびヘテロ脂環式から
    なる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい低級
    アルコキシ， ハロ； シアノ， ニトロ， カルボキシアルキル， １またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アルキル； ハロ； ヒドロキシ； １またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アルコキシ； アリールオキシ；および −ＮＲ10Ｒ11； からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    アリール； １またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アルキル； ハロ； ヒドロキシ； １またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アルコキシ；お
    よび −ＮＲ14Ｒ15； からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    ，アリールオキシ； １またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アルキル； ハロ； ヒドロキシ； １またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アルコキシ；お
    よび −ＮＲ14Ｒ15， からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    ヘテロアリール； １またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アルキル； ハロ； ヒドロキシ； １またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アルコキシ；お
    よび −ＮＲ14Ｒ15； からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    ヘテロ脂環式， （低級アルキル）Ｃ−カルボキシ， （低級アルキル）カルボニル， アリールカルボニル， （低級アルキル）−Ｓ−スルホンアミド， アリール−Ｓ−スルホンアミド， （低級アルキル）−Ｎ−スルホンアミド， アリール−Ｎ−スルホンアミド， （低級アルキル）−Ｎ−カルバモイル， （低級アルキル）−Ｃ−アミド， （低級アルキル）−Ｎ−アミド， （シクロアルキル）−Ｎ−アミド，および −ＮＲ14Ｒ15； からなる群より選択され； Ｒ14およびＲ15は，独立して，水素および低級アルキルからなる群より選択され
    る， 請求項１記載の化合物または塩。
  3. 【請求項３】 ｎが１であり； Ａ，Ｂ，Ｄ，ＥおよびＦが炭素であり； ｍが１であり；および Ｇ，Ｈ，Ｊ，ＫおよびＬの１つが窒素である，請求項１記載の化合物または塩。
  4. 【請求項４】 ｎが１であり； Ａ，Ｂ，Ｄ，ＥおよびＦが炭素であり； ｍが０であり； Ｇ，ＨおよびＫが炭素であり；および ＬがＮＨである，請求項１記載の化合物または塩。
  5. 【請求項５】 ｎは０であり； Ａ，ＢおよびＥは炭素であり； ＦはＮＨであり； Ｒ4およびＲ7は，独立して，水素および低級アルキルからなる群より選択され； Ｒ5は， ヒドロキシ； 少なくとも１つのＮＨ基を含むヘテロ脂環式； Ｃ−カルボキシ；および −ＮＲ14Ｒ15； からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    低級アルキル； カルボキシアルキル； （低級アルキル）−Ｃ−カルボキシ；および −ＮＲ14Ｒ15 からなる群より選択され； ｍは１であり； Ｇ，Ｈ，Ｊ，ＫおよびＬの１つは窒素であり；および Ｒ14およびＲ15は，独立して，水素，低級アルキルおよびカルボニルからなる群
    より選択される， 請求項１記載の化合物または塩。
  6. 【請求項６】 ｎは０であり； Ａ，ＢおよびＥは炭素であり； ＦはＮＨであり； Ｒ4およびＲ7は，独立して，水素および低級アルキルからなる群より選択され； Ｒ5は， ヒドロキシ； 少なくとも１つのＮＨ基を含むヘテロ脂環式； Ｃ−カルボキシ；および −ＮＲ14Ｒ15； からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    ，低級アルキル； カルボキシアルキル； （低級アルキル）−Ｃ−カルボキシ； および，−ＮＲ14Ｒ15； からなる群より選択され； ｍは０であり； Ｇ，ＨおよびＫは炭素であり； ＬはＮＨ，酸素またはイオウであり；および Ｒ14およびＲ15は，独立して，水素，低級アルキルおよびカルボニルからなる群
    より選択される， 請求項１記載の化合物または塩。
  7. 【請求項７】 式ＩＩ： 【化２】 ［式中， ｎは０または１であり； ｐが１であるとき，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｙ，およびＶは，独立して，炭素および窒素か
    らなる群より選択され，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｙ，またはＶが窒素であるとき，Ｒ20，Ｒ 21 ，Ｒ22，Ｒ23またはＲ24はそれぞれ存在せず； ｐが０であるとき，Ｍ，Ｑ，Ｙ，およびＶは，独立して，炭素，窒素，酸素およ
    びイオウからなる群より選択され，Ｍ，Ｑ，Ｙ，またはＶが酸素またはイオウま
    たは窒素（ここで前記窒素は二重結合に関与している）であるとき，Ｒ20，Ｒ21 ，Ｒ22，Ｒ23またはＲ24はそれぞれ存在せず； Ｒ16，Ｒ17，Ｒ18，Ｒ19，Ｒ20，Ｒ21，Ｒ22，Ｒ23またはＲ24は，独立して，水
    素，アルキル，トリハロアルキル，シクロアルキル，アルケニル，アルキニル，
    アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，メルカプ
    ト，アルキルチオ，アリールオキシ，スルフィニル，スルホニル，Ｓ−スルホン
    アミド，Ｎ−スルホンアミド，カルボニル，Ｃ−カルボキシ，Ｏ−カルボキシ，
    カルボキシアルキル，シアノ，ニトロ，ハロ，Ｏ−カルバミル，Ｎ−カルバミル
    ，Ｃ−アミド，Ｎ−アミドおよび−ＮＲ25Ｒ26； からなる群より選択され； Ｒ20およびＲ21またはＲ21およびＲ22またはＲ22およびＲ23またはＲ23およびＲ 24 は，一緒になって，５員環または６員環アリールまたはヘテロアリール環を形
    成してもよく； および， Ｒ25およびＲ26は，独立して，水素，アルキル，シクロアルキル，アルケニル，
    アルキニル，アリール，ヘテロアリール，カルボニル，スルホニルからなる群よ
    り選択されるか，または一緒になって５員環または６員環ヘテロ脂環式環を形成
    する］ に記載される化学構造を有する３−アラルキル−２−インドリノンまたはその生
    理学的に許容しうる塩。
  8. 【請求項８】 Ｒ16，Ｒ17，Ｒ18，Ｒ19，Ｒ20，Ｒ22，Ｒ23またはＲ24は，
    独立して， 水素； シクロアルキル，アリール，ヘテロアリール，ヘテロ脂環式，ハロ，ヒドロキシ
    ，Ｃ−カルボキシおよび−ＮＲ25Ｒ26からなる群より選択される１またはそれ以
    上の基で任意に置換されていてもよい低級アルキル； シクロアルキル； ヒドロキシ； １またはそれ以上のハロ基，アリール，ヘテロアリールおよびヘテロ脂環式から
    なる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい低級
    アルコキシ， トリハロメチル， トリハロメトキシ， ハロ， カルボキシアルキル， 低級アルキル，１またはそれ以上のハロ基で置換されている低級アルキル，，ト
    リハロメチル，トリハロメトキシ，ハロ，ヒドロキシ，低級アルコキシ，アリー
    ルオキシおよび−ＮＲ25Ｒ26からなる群より選択される１またはそれ以上の基で
    任意に置換されていてもよいアリール， アリールオキシ， 低級アルキル，トリハロメチル，ハロ，ヒドロキシ，（低級アルキル）アルコキ
    シ，アミノおよび−ＮＲ25Ｒ26からなる群より選択される１またはそれ以上の基
    で任意に置換されていてもよいヘテロアリール， ヘテロ脂環式， （低級アルキル）カルボキシ， （低級アルキル）カルボニル， アリールカルボニル， （低級アルキル）−Ｓ−スルホンアミド， アリール−Ｓ−スルホンアミド， （低級アルキル）−Ｎ−スルホンアミド， アリール−Ｎ−スルホンアミド， （低級アルキル）−Ｎ−カルバモイル， （低級アルキル）−Ｃ−アミド， （低級アルキル）−Ｎ−アミド， （シクロアルキル）−Ｎ−アミド，および −ＮＲ25Ｒ26 からなる群より選択される， 請求項７記載の化合物。
  9. 【請求項９】 ｐが１であり；および，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｕ，およびＶが炭素で
    ある，請求項７記載の化合物。
  10. 【請求項１０】 Ｒ16，Ｒ17，Ｒ18およびＲ19は，独立して， 水素， ハロ， ヒドロキシ， −ＮＲ25Ｒ26， 水素，低級アルキルおよびアリールからなる群より選択される１またはそれ以上
    の基で任意に置換されていてもよいＳ−スルホンアミド， ヒドロキシ， １またはそれ以上のハロ基， Ｃ−カルボキシ， Ｃ−アミド， ヘテロ脂環式および −ＮＲ25Ｒ26 からなる群より選択される基で任意に置換されていてもよい低級アルキル； １またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アルコキシ； 低級アルキル，低級アルコキシ，ハロ，ヒドロキシおよび−ＮＲ25Ｒ26から選択
    される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよいアリール；および 水素，低級アルキル，シクロアルキルおよびアリールからなる群より選択される
    １またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよいＮ−アミド； からなる群より選択され；および， Ｒ20，Ｒ21，Ｒ22，Ｒ23およびＲ24は，独立して， 水素； ハロ； ヒドロキシ； −ＮＲ25Ｒ26； ヒドロキシ， １またはそれ以上のハロ基， Ｃ−カルボキシ， Ｃ−アミド， ヘテロ脂環式および −ＮＲ25Ｒ26 からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    低級アルキル； シクロアルキル； １またはそれ以上のハロ基， アリール， −ＮＲ25Ｒ26，および ヘテロアリール からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    低級アルコキシ； ハロ， ヒドロキシ， 低級アルコキシ， −ＮＲ25Ｒ26および Ｃ−カルボキシ からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    アリール； からなる群より選択される， 請求項９記載の化合物。
  11. 【請求項１１】 ｐが１であり；および，Ｍ，Ｑ，Ｔ，Ｕ，またはＶの１ま
    たは２個が窒素である，請求項７記載の化合物。
  12. 【請求項１２】 Ｒ16，Ｒ17，Ｒ18およびＲ19は，独立して， 水素； ハロ； ヒドロキシ； −ＮＲ25Ｒ26； 水素，低級アルキルおよびアリールからなる群より選択される１またはそれ以上
    の基で任意に置換されていてもよいＳ−スルホンアミド； ヒドロキシ， １またはそれ以上のハロ基， Ｃ−カルボキシ， Ｃ−アミド， ヘテロ脂環式，および −ＮＲ25Ｒ26 からなる群より選択される基で任意に置換されていてもよい低級アルキル； １またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アルコキシ， 低級アルキル，低級アルコキシ，ハロ，ヒドロキシおよび−ＮＲ25Ｒ26からなる
    群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよいアリール
    ， 水素，低級アルキル，シクロアルキルおよびアリールからなる群より選択される
    １またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよいＮ−アミド； からなる群より選択され；および， Ｒ20，Ｒ21，Ｒ2，Ｒ23およびＲ24の窒素ではないものは，独立して， 水素； ハロ； ヒドロキシ； −ＮＲ25Ｒ26； ヒドロキシ， １またはそれ以上のハロ基， Ｃ−カルボキシ， Ｃ−アミド， ヘテロ脂環式および −ＮＲ25Ｒ26 からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    低級アルキル； シクロアルキル； １またはそれ以上のハロ基， アリール， −ＮＲ25Ｒ26および ヘテロアリール からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    低級アルコキシ； ハロ， ヒドロキシ， 低級アルコキシ， −ＮＲ25Ｒ26および Ｃ−カルボキシ からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    アリール； からなる群より選択される， 請求項１１記載の化合物。
  13. 【請求項１３】 ｐが１であり；および，Ｒ21およびＲ22が，一緒になって
    縮合ピロロ基を形成する，請求項７記載の化合物。
  14. 【請求項１４】 Ｒ16，Ｒ17，Ｒ18およびＲ19は，独立して， 水素； ハロ； ヒドロキシ； −ＮＲ25Ｒ26； 水素，低級アルキルおよびアリールからなる群より選択される１またはそれ以上
    の基で任意に置換されていてもよいＳ−スルホンアミド； ヒドロキシ， １またはそれ以上のハロ基， Ｃ−カルボキシ， Ｃ−アミド， ヘテロ脂環式および −ＮＲ25Ｒ26 からなる群より選択される基で任意に置換されていてもよい低級アルキル； １またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アルコキシ； 低級アルキル，低級アルコキシ，ハロ，ヒドロキシおよび−ＮＲ25Ｒ26からなる
    群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよいアリール
    ； 水素，低級アルキル，シクロアルキルおよびアリールからなる群より選択される
    １またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよいＮ−アミド； からなる群より選択され；および， Ｒ20，Ｒ23およびＲ24は，独立して， 水素； ハロ； ヒドロキシ； −ＮＲ25Ｒ26； ヒドロキシ， １またはそれ以上のハロ基， Ｃ−カルボキシ， Ｃ−アミド， ヘテロ脂環式および −ＮＲ25Ｒ26， からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    低級アルキル； シクロアルキル； １またはそれ以上のハロ基， アリール， −ＮＲ25Ｒ26および ヘテロアリール からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    低級アルコキシ； ハロ， ヒドロキシ， 低級アルコキシ， −ＮＲ25Ｒ26および Ｃ−カルボキシ からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    アリール； からなる群より選択される， 請求項１３記載の化合物。
  15. 【請求項１５】 ｐは，０であり； ＭまたはＱは，−ＮＨ，酸素またはイオウであり；および ＭまたはＱのいずれかは−ＮＨ，酸素またはイオウではなく，およびＵおよびＶ
    は炭素である，請求項７記載の化合物。
  16. 【請求項１６】 Ｒ16，Ｒ17，Ｒ18および１９は，独立して， 水素； ハロ； ヒドロキシ； −ＮＲ25Ｒ26； 水素，低級アルキルおよびアリールからなる群より選択される１またはそれ以上
    の基で任意に置換されていてもよいＳ−スルホンアミド； ヒドロキシ， １またはそれ以上のハロ基， Ｃ−カルボキシ， Ｃ−アミド， ヘテロ脂環式および −ＮＲ25Ｒ26 からなる群より選択される基で任意に置換されていてもよい低級アルキル； １またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アルコキシ； 低級アルキル，低級アルコキシ，ハロ，ヒドロキシおよび−ＮＲ25Ｒ26からなる
    群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよいアリール
    ； 水素，低級アルキル，シクロアルキルおよびアリールから選択される１またはそ
    れ以上の基で任意に置換されていてもよいＮ−アミド； からなる群より選択され；および Ｒ20，Ｒ21，Ｒ23およびＲ24は，独立して， 水素； ハロ； ヒドロキシ； −ＮＲ25Ｒ26； ヒドロキシ， １またはそれ以上のハロ基， Ｃ−カルボキシ， Ｃ−アミド， ヘテロ脂環式および −ＮＲ25Ｒ26 からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    低級アルキル； シクロアルキル； １またはそれ以上のハロ基， アリール， −ＮＲ25Ｒ26および ヘテロアリール からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    低級アルコキシ； からなる群より選択される， 請求項１５記載の化合物。
  17. 【請求項１７】 Ｒ16，Ｒ17，Ｒ18およびＲ19は，独立して， 水素； ハロ； ヒドロキシ； −ＮＲ25Ｒ26； 水素，低級アルキルおよびアリールからなる群より選択される１またはそれ以上
    の基で任意に置換されていてもよいＳ−スルホンアミド； ヒドロキシ， １またはそれ以上のハロ基， Ｃ−カルボキシ， Ｃ−アミド， ヘテロ脂環式および −ＮＲ25Ｒ26 からなる群より選択される基で任意に置換されていてもよい低級アルキル； １またはそれ以上のハロ基で任意に置換されていてもよい低級アルコキシ； 低級アルキル，低級アルコキシ，ハロ，ヒドロキシおよび−ＮＲ25Ｒ26からなる
    群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよいアリール
    ； 水素，低級アルキル，シクロアルキルおよびアリールから選択される１またはそ
    れ以上の基で任意に置換されていてもよいＮ−アミド； からなる群より選択され；および， Ｒ20，Ｒ23およびＲ24は，独立して， 水素； ハロ； ヒドロキシ； −ＮＲ25Ｒ26； ヒドロキシ， １またはそれ以上のハロ基， Ｃ−カルボキシ， Ｃ−アミド， ヘテロ脂環式および −ＮＲ25Ｒ26 からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    低級アルキル； シクロアルキル； １またはそれ以上のハロ基， アリール， −ＮＲ25Ｒ26および ヘテロアリール からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    低級アルコキシ； ハロ， ヒドロキシ， 低級アルコキシ， −ＮＲ25Ｒ26および Ｃ−カルボキシ からなる群より選択される１またはそれ以上の基で任意に置換されていてもよい
    アリール； からなる群より選択される， 請求項７記載の化合物。
  18. 【請求項１８】 式ＩＩＩ： 【化３】 ［式中， （ａ）Ｒ27は， （ｉ）ハロゲン，トリハロメチル，アルコキシ，カルボキシレート，アミノ，ニ
    トロ，エステルおよび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，ま
    たはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択される置換基で任意に置換されてい
    てもよい飽和または不飽和のアルキル， ここで，前記環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレー
    ト，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１
    ，２，または３個の置換基で任意に置換されていてもよく；および （ｉｉ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート
    ，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１，
    ２，または３個の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香
    族環； （ｉｉｉ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレー
    ト，アミノ，ニトロ，エステルからなる群より独立して選択される１またはそれ
    以上の置換基で任意に置換されていてもよい脂肪族またはヘテロ脂肪族環，およ
    びアルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミ
    ノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１またはそ
    れ以上の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香族環； からなる群より選択され， （ｂ）Ｒ32，Ｒ33およびＲ34は，それぞれ独立して， （ｉ）水素； （ｉｉ）ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，エス
    テルおよび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ
    脂肪族環成分からなる群より選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換
    されていてもよい飽和または不飽和のアルキル， ここで，前記環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレー
    ト，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１
    またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく； （ｉｉｉ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレー
    ト，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１
    またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香
    族環； （ｉｖ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート
    ，アミノ，ニトロ，エステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以
    上の置換基で任意に置換されていてもよい脂肪族またはヘテロ脂肪族環，および
    アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ
    ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１またはそれ
    以上の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香族環； （ｖ）式−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン （式中，Ｘ1は，飽和または不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳
    香族，ヘテロ芳香族，または脂肪族環成分からなる群より選択され， ｎ1は０または１であり，および Ｘ2およびＸ3は，独立して，水素，飽和または不飽和のアルキル，および５員環
    または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，または脂肪族環成分からなる群より選択
    される； （ｖｉ）式−ＮＯ2のニトロ； （ｖｉｉ）ハロゲンまたはトリハロメチル； （ｖｉｉｉ）式−（Ｘ4）n4−ＣＯ−Ｘ5のケトン （式中，Ｘ4およびＸ5は，独立して，アルキルおよび５員環または６員環の芳香
    族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され
    ， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択さ
    れる１，２，または３個の置換基で任意に置換されていてもよく，および ｎ4は０または１である）； （ｉｘ）式−（Ｘ6）n6−ＣＯＯＨのカルボン酸または式−（Ｘ7）n7−ＣＯＯ−
    Ｘ8のエステル （式中，Ｘ6，Ｘ7およびＸ8は，独立して，アルキルおよび５員環または６員環
    の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選
    択され，および ｎ6およびｎ7は，独立して，０または１である）； （ｘ）式−（Ｘ9）n9−ＯＨのアルコールまたは式−（Ｘ10）n10−Ｏ−Ｘ11のア
    ルコキシアルキル成分 （式中，Ｘ9，Ｘ10およびＸ11は，独立して，飽和または不飽和のアルキル，お
    よび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族
    環成分からなる群より選択され， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，および ｎ9およびｎ10は，独立して，０または１である）； （ｘｉ）式−（Ｘ12）n12−ＮＨＣＯＸ13または式−（Ｘ14）n14−ＣＯＮＸ15Ｘ 16 のアミド （式中，Ｘ12およびＸ14は，それぞれ独立して，アルキル，ヒドロキシル，およ
    び５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環
    成分からなる群より選択され， 前記環は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，
    ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の
    置換基で任意に置換されていてもよく，および ｎ12およびｎ14は，独立して，０または１であり， Ｘ13，Ｘ15，およびＸ16は，それぞれ独立して，水素，アルキル，ヒドロキシル
    ，および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂
    肪族環成分からなる群より選択され， 前記環は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，
    ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の
    置換基で任意に置換されていてもよい）； （ｘｉｉ）式−（Ｘ17）n17−ＳＯ2ＮＸ18Ｘ19のスルホンアミド （式中，Ｘ17はアルキル，および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，
    脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく， ｎ17は０，１または２であり， Ｘ18およびＸ19は，独立して，水素，アルキル，および５員環または６員環の芳
    香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択さ
    れ， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，または Ｘ18およびＸ19は，一緒になって，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カル
    ボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択さ
    れる１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよい５員環または６員
    環脂肪族またはヘテロ脂肪族環を形成してもよい）； （ｘｉｉｉ）式−（Ｘ20）n20−ＣＯ−Ｈのアルデヒド （式中，Ｘ20は飽和または不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳香
    族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され
    ， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，および ｎ20は０または１である）； （ｘｉｖ）式−（Ｘ21）n21−ＳＯ2−Ｘ22のスルホン （式中，Ｘ21およびＸ22は，独立して，飽和または不飽和のアルキル，および５
    員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分
    からなる群より選択され， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，および ｎ21は０または１である）；および （ｘｖ）式−（Ｘ23）n23−ＳＨのチオールまたは式−（Ｘ24）n24−Ｓ−Ｘ25の
    チオエーテル （式中，Ｘ23，Ｘ24およびＸ25は，独立して，飽和または不飽和のアルキル，お
    よび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族
    環成分からなる群より選択され， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，および ｎ23およびｎ24は，独立して，０または１である）； からなる群より選択され； または，Ｒ33およびＲ34は，一緒になって，アルキル，ハロゲン，トリハロメチ
    ル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立し
    て選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよい６員環脂
    肪族または芳香族環を形成してもよく；および （ｃ）Ｒ28，Ｒ29，Ｒ30，およびＲ31は，それぞれ独立して， （ｉ）水素； （ｉｉ）ヒドロキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，
    ニトロ，エステルおよび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，
    またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択される１またはそれ以上の置換基
    で任意に置換されていてもよい飽和または不飽和のアルキル， ここで，前記環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレー
    ト，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１
    またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく； （ｉｉｉ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレー
    ト，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１
    またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香
    族環； （ｉｖ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート
    ，アミノ，ニトロ，エステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以
    上の置換基で任意に置換されていてもよい脂肪族またはヘテロ脂肪族環，および
    アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ
    ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１またはそれ
    以上の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香族環； （ｖ）式−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン （式中，Ｘ1は，飽和または不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳
    香族，ヘテロ芳香族，または脂肪族環成分からなる群より選択され， ｎ1は０または１であり，および Ｘ2およびＸ3は，独立して，水素，飽和または不飽和のアルキル，および５員環
    または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，または脂肪族環成分からなる群より選択
    される）； （ｖｉ）式−ＮＯ2のニトロ； （ｖｉｉ）ハロゲンまたはトリハロメチル； （ｖｉｉｉ）式−（Ｘ4）n4−ＣＯ−Ｘ5のケトン （式中，Ｘ4およびＸ5は，独立して，アルキルおよび５員環または６員環の芳香
    族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され
    ， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択さ
    れる１，２，または３個の置換基で任意に置換されていてもよく，および ｎ4は０または１である）； （ｉｘ）式−（Ｘ6）n6−ＣＯＯＨのカルボン酸または式−（Ｘ7）n7−ＣＯＯ−
    Ｘ8のエステル （式中，Ｘ6，Ｘ7およびＸ8は，独立して，アルキルおよび５員環または６員環
    の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選
    択され，および ｎ6およびｎ7は，独立して，０または１である）； （ｘ）式−（Ｘ9）n9−ＯＨのアルコールまたは式−（Ｘ10）n10−Ｏ−Ｘ11のア
    ルコキシアルキル成分 （式中，Ｘ9，Ｘ10およびＸ11は，独立して，飽和または不飽和のアルキル，お
    よび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族
    環成分からなる群より選択され， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，および ｎ9およびｎ10は，独立して，０または１である）； （ｘｉ）式−（Ｘ12）n12−ＮＨＣＯＸ13または式−（Ｘ14）n14−ＣＯＮＸ15Ｘ 16 のアミド （式中，Ｘ12およびＸ14は，それぞれ独立して，アルキル，ヒドロキシル，およ
    び５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環
    成分からなる群より選択され， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく， ｎ12およびｎ14は，独立して，０または１であり，および Ｘ13，Ｘ15およびＸ16は，それぞれ独立して，水素，アルキル，ヒドロキシル，
    および５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪
    族環成分からなる群より選択され，および 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよい）； （ｘｉｉ）式−（Ｘ17）n17−ＳＯ2ＮＸ18Ｘ19のスルホンアミド （式中，Ｘ17は，アルキル，５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪
    族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，および ｎ17は０，１，または２であり，および Ｘ18およびＸ19は，独立して，水素，アルキル，５員環または６員環の芳香族，
    ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，または， Ｘ18およびＸ19は，一緒になって，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カル
    ボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択さ
    れる１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよい５員環または６員
    環脂肪族またはヘテロ脂肪族環を形成する）； （ｘｉｉｉ）式−（Ｘ20）n20−ＣＯ−Ｈのアルデヒド （式中，Ｘ20は飽和または不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳香
    族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され
    ， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，および ｎ20は０または１である）； （ｘｉｖ）式−（Ｘ21）n21−ＳＯ2−Ｘ22のスルホン （式中，Ｘ21およびＸ22は，飽和または不飽和のアルキル，および５員環または
    ６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群
    より独立して選択され， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，および ｎ21は０または１である）； および （ｘｖ）式−（Ｘ23）n23−ＳＨのチオールまたは式−（Ｘ24）n24−Ｓ−Ｘ25の
    チオエーテル （式中，Ｘ23，Ｘ24およびＸ25は，独立して，飽和または不飽和のアルキル，お
    よび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族
    環成分からなる群より選択され， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，および ｎ23およびｎ24は，独立して，０または１である） からなる群より選択される］ に記載される構造を有するインドリノン化合物。
  19. 【請求項１９】 （ａ）Ｒ6は水素であり； （ｂ）Ｒ7，Ｒ8およびＲ9は，それぞれ独立して， （ｉ）水素； （ｉｉ）６員環ヘテロ脂肪族環成分で任意に置換されていてもよい飽和アルキル
    ； （ｉｉｉ）式−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン（式中，Ｘ1は飽和アルキルであり
    ，ｎ1は０または１であり，およびＸ2およびＸ3は，独立して，水素，および飽
    和アルキルからなる群より選択される）； （ｉｖ）式−（Ｘ6）n6−ＣＯＯＨのカルボン酸または式−（Ｘ7）n7−ＣＯＯ−
    Ｘ8のエステル（式中，Ｘ6，Ｘ7およびＸ8はアルキルであり，およびｎ6および
    ｎ7は，独立して，０または１である）；および （ｖ）式−（Ｘ14）n14−ＣＯＮＸ15Ｘ16のアミド（式中，Ｘ14はアルキルであ
    り，ｎ12およびｎ14は，独立して，０または１であり，およびＸ15およびＸ16は
    ，それぞれ独立して，水素およびアルキルからなる群より選択される）； からなる群より選択され； またはＲ8およびＲ9は，一緒になって，任意に置換されていてもよい６員環脂肪
    族または芳香族環を形成してもよく；および （ｃ）Ｒ3，Ｒ4，およびＲ5は，それぞれ独立して， （ｉ）水素； （ｉｉ）飽和アルキル； （ｉｉｉ）ハロゲンまたはトリハロメチル； （ｉｖ）式−（Ｘ6）n6−ＣＯＯＨのカルボン酸または式−（Ｘ7）n7−ＣＯＯ−
    Ｘ8のエステル（式中，Ｘ6，Ｘ7およびＸ8はアルキルであり，およびｎ6および
    ｎ7は，独立して，０または１である）； （ｖ）式−（Ｘ9）n9−ＯＨのアルコールまたは式−（Ｘ10）n10−Ｏ−Ｘ11のア
    ルコキシアルキル成分（式中，Ｘ9，Ｘ10およびＸ11はアルキルであり，および
    ｎ9およびｎ10は，独立して，０または１である）； （ｖｉ）式−（Ｘ12）n12−ＮＨＣＯＸ13または式−（Ｘ14）n14−ＣＯＮＸ15Ｘ 16 のアミド（式中，Ｘ12およびＸ14はアルキルであり，ｎ12およびｎ14は，独立
    して，０または１であり，およびＸ13，Ｘ15およびＸ16は，それぞれ独立して，
    水素およびアルキルからなる群より選択される）；および （ｖｉｉ）式−（Ｘ17）n17−ＳＯ2ＮＸ18Ｘ19のスルホンアミド（式中，Ｘ17は
    アルキルであり，およびｎ17は０，１，または２であり，およびＸ18およびＸ19 は，独立して，水素およびアルキルからなる群より選択される） からなる群より選択される，請求項１８記載の化合物。
  20. 【請求項２０】 （ａ）Ｒ3は，水素，メチル，および２−ヒドロキシエチ
    ルからなる群より選択され； （ｂ）Ｒ4は，水素，メチル，クロロ，ブロモ，カルボキシ，メトキシ，−ＮＨ
    Ｃ（Ｏ）−ＣＨ3，および−ＳＯ2（ＣＨ3）2からなる群より選択され； （ｃ）Ｒ5は，水素，クロロ，メトキシ，および−ＮＨＣ（Ｏ）−ＣＨ3からなる
    群より選択され； （ｄ）Ｒ6は，水素であり； （ｅ）Ｒ7は，水素，メチル，−ＣＨ2ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＨ，−ＣＨ2ＣＨ2Ｃ（Ｏ
    ）ＮＨ2，−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2Ｎ（ＣＨ3）2および３−モルホリノプロピルからな
    る群より選択され；および （ｆ）Ｒ8およびＲ9は，それぞれ独立して，水素，メチル，−ＣＨ2ＣＨ2Ｃ（Ｏ
    ）ＯＨ，−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2Ｎ（ＣＨ3）2および３−モルホリノプロピルからな
    る群より選択されるか，またはＲ8およびＲ9は，一緒になって，６員環芳香族ま
    たは脂肪族環を形成してもよい， 請求項１８記載の化合物。
  21. 【請求項２１】 ケトンとオキシインドールとの反応により形成され，ここ
    で，前記ケトンは， 【化４】 【化５】 ［式中，Ｒ1は， （ｉ）ハロゲン，トリハロメチル，アルコキシ，カルボキシレート，アミノ，ニ
    トロ，エステルおよび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，ま
    たはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択される置換基で任意に置換されてい
    てもよい飽和または不飽和のアルキル， ここで，前記環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレー
    ト，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１
    ，２，または３個の置換基で任意に置換されていてもよく；および （ｉｉ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート
    ，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１，
    ２，または３個の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香
    族環； （ｉｉｉ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレー
    ト，アミノ，ニトロ，エステルからなる群より独立して選択される１またはそれ
    以上の置換基で任意に置換されていてもよい脂肪族またはヘテロ脂肪族環，およ
    びアルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミ
    ノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１またはそ
    れ以上の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香族環； からなる群より選択される］ からなる群より選択され；および 前記オキシインドールは，１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−メチ
    ル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−（２−ヒドロキシ−エチル
    ）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，５−クロロ−１，３−ジヒドロ
    −インドール−２−オン，５−ブロモ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オ
    ン，５−メトキシ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，２−オキソ−２
    ，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸，２−オキソ−２，３−ジ
    ヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ジメチルアミド，Ｎ−（２−オキソ
    −２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル）−アセトアミド，６−クロ
    ロ−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，６−メトキシ−１，３−ジヒド
    ロ−インドール−２−オン，およびＮ−（５−メチル−２−オキソ−２，３−ジ
    ヒドロ−１Ｈ−インドール−６−イル）−アセトアミドからなる群より選択され
    る， ことを特徴とするインドリノン化合物。
  22. 【請求項２２】 式ＩＶまたは式Ｖ： 【化６】 ［式中， （ａ）Ｒ1，Ｒ2およびＲ7は，それぞれ独立して， （ｉ）水素； （ｉｉ）ハロゲン，トリハロメチル，アルコキシ，カルボキシレート，アミノ，
    ニトロ，エステルおよび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，
    またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択される置換基で任意に置換されて
    いてもよい飽和または不飽和のアルキル， ここで，前記環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレー
    ト，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１
    ，２，または３個の置換基で任意に置換されていてもよく；および （ｉｉｉ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレー
    ト，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１
    ，２，または３個の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳
    香族環； からなる群より選択され； （ｂ）Ｒ3は，式−ＣＨ2ＣＨ2−ＯＲのエチル−２−オキシ基であり（式中，Ｒ
    は， （ｉ）水素； （ｉｉ）ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，エス
    テルおよび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ
    脂肪族環成分からなる群より選択される置換基で任意に置換されていてもよい飽
    和または不飽和のアルキル， 前記環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミ
    ノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１，２，ま
    たは３個の置換基で任意に置換されていてもよく； （ｉｉｉ）アルキル，アリール，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カル
    ボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選
    択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族または
    ヘテロ芳香族環； （ｉｖ）式−Ｃ（Ｅ）ＮＸ15Ｘ16の置換基 （式中，Ｘ15およびＸ16は，それぞれ独立して，水素，アルキル，ヒドロキシル
    ，式−ＳＯ2Ｘ22のスルホンおよび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族
    ，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され， 前記環は，アルキル，アリール，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート
    ，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される１または
    それ以上の置換基で任意に置換されていてもよく， Ｘ22は，飽和または不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳香族，ヘ
    テロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され， 前記環は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，
    ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以上の
    置換基で任意に置換されていてもよく， Ｅは酸素およびイオウからなる群より選択される）； からなる群より選択され；および （ｃ）Ｒ4，Ｒ5およびＲ6は，それぞれ水素であり； （ｄ）Ｚは，５，６，７，８，９，または１０員環の，単環式または二環式，芳
    香族またはヘテロ芳香族，環成分であって， （ｉ）水素； （ｉｉ）ヒドロキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミノ，
    ニトロ，エステルおよび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，
    またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択される１またはそれ以上の置換基
    で任意に置換されていてもよい飽和または不飽和のアルキル， 前記環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミ
    ノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１またはそ
    れ以上の置換基で任意に置換されていてもよく； （ｉｉｉ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレー
    ト，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１
    またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香
    族環； （ｉｖ）アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート
    ，アミノ，ニトロ，エステルからなる群より独立して選択される１またはそれ以
    上の置換基で任意に置換されていてもよい脂肪族またはヘテロ脂肪族環，および
    ，アルキル，アルコキシ，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキシレート，アミ
    ノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択される１またはそ
    れ以上の置換基で任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香族環； （ｖ）式−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン （式中，Ｘ1は，飽和または不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳
    香族，ヘテロ芳香族，または脂肪族環成分からなる群より選択され， ｎ1は０または１であり，および Ｘ2およびＸ3は，独立して，水素，飽和または不飽和のアルキル，および５員環
    または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，または脂肪族環成分からなる群より選択
    される）； （ｖｉ）式−ＮＯ2のニトロ； （ｖｉｉ）ハロゲンまたはトリハロメチル； （ｖｉｉｉ）式−（Ｘ4）n4−ＣＯ−Ｘ5のケトン （式中，Ｘ4およびＸ5は，独立して，アルキルおよび５員環または６員環の芳香
    族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され
    ， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステル成分からなる群より独立して選択さ
    れる１，２，または３個の置換基で任意に置換されていてもよく，および ｎ4は０または１である）； （ｉｘ）式−（Ｘ6）n6−ＣＯＯＨのカルボン酸または式−（Ｘ7）n7−ＣＯＯ−
    Ｘ8のエステル （式中，Ｘ6，Ｘ7およびＸ8は，独立して，アルキルおよび５員環または６員環
    の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選
    択され，および ｎ6およびｎ7は，独立して，０または１である）； （ｘ）式−（Ｘ9）n9−ＯＨのアルコールまたは式−（Ｘ10）n10−Ｏ−Ｘ11のア
    ルコキシアルキル成分 （式中，Ｘ9，Ｘ10およびＸ11は，独立して，飽和または不飽和のアルキル，お
    よび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族
    環成分からなる群より選択され， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，および ｎ9およびｎ10は，独立して，０または１である）； （ｘｉ）式−（Ｘ12）n12−ＮＨＣＯＸ13または式−（Ｘ14）n14−ＣＯＮＸ15Ｘ 16 のアミド （式中，Ｘ12およびＸ14は，それぞれ独立して，アルキル，ヒドロキシル，およ
    び５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環
    成分からなる群より選択され， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく， ｎ12およびｎ14は，独立して，０または１であり，およびＸ13，Ｘ15およびＸ16 は，それぞれ，独立して，水素，アルキル，ヒドロキシル，および５員環または
    ６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群
    より選択され，および 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよい）； （ｘｉｉ）式−（Ｘ17）n17−ＳＯ2ＮＸ18Ｘ19のスルホンアミド （式中，Ｘ17はアルキル，５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族
    ，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，またはエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，および ｎ17は０，１，または２であり，および Ｘ18およびＸ19は，独立して，水素，アルキル，５員環または６員環の芳香族，
    ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択され， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，またはエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく， またはＸ18およびＸ19は，一緒になって，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル
    ，カルボキシレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して
    選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよい５員環また
    は６員環脂肪族またはヘテロ脂肪族環を形成する）； （ｘｉｉｉ）式−（Ｘ20）n20−ＣＯ−Ｈのアルデヒド （式中，Ｘ20は，飽和または不飽和のアルキル，および５員環または６員環の芳
    香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分からなる群より選択さ
    れ， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，および ｎ20は０または１である）； （ｘｉｖ）式−（Ｘ21）n21−ＳＯ2−Ｘ22のスルホン （式中，Ｘ21およびＸ22は，独立して，飽和または不飽和のアルキル，および５
    員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族環成分
    からなる群より選択され， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，および ｎ21は０または１である）；および （ｘｖ）式−（Ｘ23）n23−ＳＨのチオールおよび式−（Ｘ24）n24−Ｓ−Ｘ25の
    チオエーテル （式中，Ｘ23，Ｘ24およびＸ25は，独立して，飽和または不飽和のアルキル，お
    よび５員環または６員環の芳香族，ヘテロ芳香族，脂肪族，またはヘテロ脂肪族
    環成分からなる群より選択され， 前記アルキルおよび環成分は，アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，カルボキ
    シレート，アミノ，ニトロ，およびエステルからなる群より独立して選択される
    １またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，および ｎ23およびｎ24は，独立して，０または１である）； からなる群より選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていても
    よい］ に記載される構造を有する化合物。
  23. 【請求項２３】 （ａ）Ｒ1，Ｒ2およびＲ7は水素であり； （ｂ）Ｒ3は，式−ＣＨ2ＣＨ2−Ｏ−Ｒのエチル−２−オキシ基であり（式中，
    Ｒは，水素，飽和アルキル，および，アルキル，アリール，およびアルコキシ成
    分からなる群より独立して選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換さ
    れていてもよい芳香族環，および式−Ｃ（Ｅ）ＮＨＸ15（式中，Ｘ15は，アルキ
    ル，式−ＳＯ2−Ｘ22のスルホンおよび６員環芳香族または脂肪族環成分からな
    る群より選択され，前記環は，アルキルおよびアリールからなる群より独立して
    選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていてもよく，Ｘ22は，
    飽和アルキル，および任意に置換されていてもよい６員環芳香族環成分からなる
    群より選択され，およびＥは，酸素およびイオウからなる群より選択される， からなる群より選択される置換基である）および； （ｃ）Ｚは，５，６，または９員環の単環式または二環式，芳香族またはヘテロ
    芳香族環成分であって， （ｉ）水素； （ｉｉ）飽和アルキル， （ｉｉｉ）任意に置換されていてもよい芳香族またはヘテロ芳香族環； （ｉｖ）式−（Ｘ1）n1−ＮＸ2Ｘ3のアミン （式中，Ｘ1はアルキルであり， ｎ1は０または１であり，および Ｘ2およびＸ3は，独立して，水素および飽和アルキルからなる群より選択される
    ）； （ｖ）ハロゲンまたはトリハロメチル； （ｖｉ）式−（Ｘ6）n6−ＣＯＯＨのカルボン酸 （式中，Ｘ6はアルキルであり，および ｎ6は０または１である）；および （ｖｉｉ）式−（Ｘ9）n9−ＯＨのアルコールまたは式−（Ｘ10）n10−Ｏ−Ｘ11 のアルコキシアルキル成分 （式中，Ｘ9，Ｘ10およびＸ11はアルキルであり， ｎ9およびｎ10は，独立して，０または１である）； からなる群より選択される１またはそれ以上の置換基で任意に置換されていても
    よい， 請求項２２記載の化合物。
  24. 【請求項２４】 （ａ）Ｒ3は，式−ＣＨ2ＣＨ2−Ｏ−Ｒ（式中，Ｒは，水
    素，メチル，エチル，２−イソプロピルフェニル，３−イソプロピルフェニル，
    ４−イソプロピルフェニル，４−メトキシフェニル，ビフェン−３−イル，５−
    クロロピリジン−３−イル，エチルカルバミル，ｔｅｒｔ−ブチルカルバミル，
    シクロヘキシルカルバミル，フェニルカルバミル，ベンゼンスルホニルカルバミ
    ル，ビフェン−２−イル−カルバミル，およびフェニルチオカルバミルからなる
    群より選択される）のエチル−２−オキシ基であり； （ｂ）Ｚは，４−ブロモフェニル，２−ピリジル，６−メチル−２−ピリジル，
    １Ｈ−インドール−５−イル，４−メトキシ−３−チオフェンフェニル，４−（
    ３−ジメチルアミノ）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル，３−ヒ
    ドロキシ−６−メチル−ピリジン−２−イル，４−（３−ジメチルアミノプロピ
    ル）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル，および３−カルボキシ−
    ２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルからなる群より選択される， 請求項２２記載の化合物。
  25. 【請求項２５】 前記化合物が，４−［２−（３−イソプロピル−フェノキ
    シ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−［２−（２−
    イソプロピル−フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−
    オン，４−［２−（ビフェニル−３−イルオキシ）−エチル］−１，３−ジヒド
    ロ−インドール−２−オン，３−（４−ブロモ−ベンジリデン）−４−（２−ヒ
    ドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−（２−ヒ
    ドロキシ−エチル）−３−ピリジン−２−イルメチレン−１，３−ジヒドロ−イ
    ンドール−２−オン，４−（２−ヒドロキシ−エチル）−３−（６−メチル−ピ
    リジン−２−イルメチレン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−
    （２−ヒドロキシ−エチル）−３−（１Ｈ−インドール−５−イルメチレン）−
    １，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−（２−ヒドロキシ−エチル）−
    ３−（４−メトキシ−３−チオフェン−２−イル−ベンジリデン）−１，３−ジ
    ヒドロ−インドール−２−オン，３−［４−（３−ジメチルアミノ−プロピル］
    ）−３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−４−（２−ヒド
    ロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，フェニル−チオ
    カルバミン酸Ｏ−［２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−
    ４−イル）−エチル］エステル，フェニル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２
    ，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステル，ｔｅｒｔ−
    ブチル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール
    −４−イル）−エチルエステル，シクロヘキシル−カルバミン酸２−（２−オキ
    ソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステル，ベン
    ゼンスルホニル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イ
    ンドール−４−イル）−エチルエステル，ビフェニル−２−イル−カルバミン酸
    ２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチル
    エステル，エチル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−
    インドール−４−イル）−エチルエステル，４−［２−（４−メトキシ−フェノ
    キシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−（２−メト
    キシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−（２−エトキ
    シ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−［２−（４−イ
    ソプロピル−フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オ
    ン，４−［２−（５−クロロ−ピリジン−３−イルオキシ）−エチル］−１，３
    −ジヒドロ−インドール−２−オン，４−（２−ヒドロキシ−エチル）−３−（
    ３−ヒドロキシ−６−メチル−ピリジン−２−イルメチレン）−１，３−ジヒド
    ロ−インドール−２−オン，３−［４−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−３
    ，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−４−［２−（３−イソ
    プロピル−フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
    ，および３−（５−｛４−［２−（４−イソプロピル−フェノキシ）−エチル］
    −２−オキソ−ｌ，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル｝−２，４
    −ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−プロピオン酸からなる群より選択さ
    れる，請求項２２記載の化合物。
  26. 【請求項２６】 ４−［２−（３−イソプロピル−フェノキシ）−エチル］
    −１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−［２−（２−イソプロピル−
    フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−［２
    −（ビフェニル−３−イルオキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール
    −２−オン，３−（４−ブロモ−ベンジリデン）−４−（２−ヒドロキシ−エチ
    ル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−（２−ヒドロキシ−エチ
    ル）−３−ピリジン−２−イルメチレン−１，３−ジヒドロ−インドール−２−
    オン，４−（２−ヒドロキシ−エチル）−３−（６−メチル−ピリジン−２−イ
    ルメチレン）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−（２−ヒドロキ
    シ−エチル）−３−（１Ｈ−インドール−５−イルメチレン）−１，３−ジヒド
    ロ−インドール−２−オン，４−（２−ヒドロキシ−エチル）−３−（４−メト
    キシ−３−チオフェン−２−イル−ベンジリデン）−１，３−ジヒドロ−インド
    ール−２−オン，３−［４−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−３，５−ジメ
    チル−１Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−４−（２−ヒドロキシ−エチル）
    −１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，フェニル−チオカルバミン酸Ｏ−
    ［２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチ
    ル］エステル，フェニル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−
    １Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステル，ｔｅｒｔ−ブチル−カルバミ
    ン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エ
    チルエステル，シクロヘキシル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒ
    ドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステル，ベンゼンスルホニル−
    カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イ
    ル）−エチルエステル，ビフェニル−２−イル−カルバミン酸２−（２−オキソ
    −２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステル，エチル
    −カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−
    イル）−エチルエステル，４−［２−（４−メトキシ−フェノキシ）−エチル］
    −１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−（２−メトキシ−エチル）−
    １，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−（２−エトキシ−エチル）−１
    ，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−［２−（４−イソプロピル−フェ
    ノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−［２−（
    ５−クロロ−ピリジン−３−イルオキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−イン
    ドール−２−オン，４−（２−ヒドロキシ−エチル）−３−（３−ヒドロキシ−
    ６−メチル−ピリジン−２−イルメチレン）−１，３−ジヒドロ−インドール−
    ２−オン，３−［４−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−３，５−ジメチル−
    １Ｈ−ピロール−２−イルメチレン］−４−［２−（３−イソプロピル−フェノ
    キシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，および３−（５
    −｛４−［２−（４−イソプロピル−フェノキシ）−エチル］−２−オキソ−１
    ，２−ジヒドロ−インドール−３−イリデンメチル｝−２，４−ジメチル−１Ｈ
    −ピロール−３−イル）−プロピオン酸からなる群より選択される化合物。
  27. 【請求項２７】 前記化合物が蛋白質キナーゼの触媒活性を阻害しうる，請
    求項１，７，１８，２１，２２，または２６のいずれかに記載の化合物。
  28. 【請求項２８】 前記蛋白質キナーゼが，レセプター蛋白質チロシンキナー
    ゼ，細胞性チロシンキナーゼおよびセリン−トレオニンキナーゼからなる群より
    選択される，請求項２７記載の化合物。
  29. 【請求項２９】 蛋白質キナーゼの触媒活性を調節する方法であって，前記
    蛋白質キナーゼを請求項１，７，１８，２１，２２，または２６のいずれかに記
    載の前記化合物と接触させることを含む方法。
  30. 【請求項３０】 請求項１，７，１８，２１，２２，または２６のいずれか
    に記載の化合物を用いて細胞におけるシグナル伝達経路を調節する方法であって
    ，前記細胞を前記化合物と接触させる工程を含む方法。
  31. 【請求項３１】 前記細胞が蛋白質キナーゼを発現し，かつ，前記化合物が
    前記蛋白質キナーゼの機能を調節する，請求項３０記載の方法。
  32. 【請求項３２】 蛋白質キナーゼの機能を調節するインドリノン化合物を同
    定する方法であって： （ａ）前記蛋白質キナーゼを発現する細胞を請求項１，７，１８，２１，２２，
    または２６のいずれかに記載の化合物と接触させ； そして （ｂ）前記細胞に及ぼす影響をモニターする， の各工程を含む方法。
  33. 【請求項３３】 前記影響が，細胞表現型の変化，細胞増殖の変化，前記蛋
    白質キナーゼの触媒活性の変化，および前記蛋白質キナーゼと結合パートナーと
    の間の相互作用の変化からなる群より選択される，請求項３２記載の方法。
  34. 【請求項３４】 制御されない蛋白質キナーゼシグナル伝達を制御する方法
    であって，被験者に治療上有効量の請求項１，７，１８，２１，２２，または２
    ６のいずれかに記載の化合物を投与することを含む方法。
  35. 【請求項３５】 制御されない蛋白質キナーゼシグナル伝達が生物における
    疾病または異常な状態につながり，前記方法が前記疾病または異常な状態の治療
    または予防につながり，かつ，前記疾病または異常な状態が蛋白質キナーゼと結
    合パートナーとの間の相互作用により特徴づけられるシグナル伝達経路の異常型
    に関連しており，および前記方法が前記異常な相互作用を促進または破壊する工
    程をさらに含む，請求項３４記載の方法。
  36. 【請求項３６】 前記疾病または異常な状態が癌である，請求項３５記載の
    方法。
  37. 【請求項３７】 前記疾病または異常な状態が，免疫学的疾患，過増殖性疾
    患，心臓血管疾患，炎症性疾患，再狭窄，繊維症，乾癬，変形性関節症，慢性関
    節リウマチ，動脈硬化症，糖尿病，および新脈管形成からなる群より選択される
    ，請求項３５記載の方法。
  38. 【請求項３８】 前記蛋白質キナーゼが，レセプター蛋白質チロシンキナー
    ゼ，細胞性チロシンキナーゼおよびセリン−トレオニンキナーゼからなる群より
    選択される，請求項２９，３１，３２，または３４のいずれかに記載の方法。
  39. 【請求項３９】 （ｉ）生理学的に許容しうる担体，希釈剤，または賦形剤
    またはこれらの組み合わせ；および （ｉｉ）請求項１，７，１８，２１，２２，または２６のいずれかに記載の化合
    物 を含む医薬組成物。
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