HUT75554A - Endothelin-converting enzyme - Google Patents
Endothelin-converting enzyme Download PDFInfo
- Publication number
- HUT75554A HUT75554A HU9601298A HU9601298A HUT75554A HU T75554 A HUT75554 A HU T75554A HU 9601298 A HU9601298 A HU 9601298A HU 9601298 A HU9601298 A HU 9601298A HU T75554 A HUT75554 A HU T75554A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- leu
- glu
- asn
- seq
- thr
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6489—Metalloendopeptidases (3.4.24)
- C12N9/6497—Endothelin-converting enzyme (3.4.24.71)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/24—Metalloendopeptidases (3.4.24)
- C12Y304/24071—Endothelin-converting enzyme 1 (3.4.24.71)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Psychiatry (AREA)
Description
A nemzetközi közzététel száma: WO 95/14095
A találmány endotelin konvertáló enzimekre (ECE), ezek elő állítására szolgáló eljárásokra és felhasználásukra vonatkozik.
Megállapították, hogy az ECE egy inhibitora emlős endoteli ális sejtekben az enzim túltermelését indukálja, és meghatároz ták a tiszta formában előállított ECE jellemző tulajdonságait.
Ismertették az ECE, valamint az ECE elleni antitestek diag nosztikai és kísérleti célra, valamint gyógyszerként való fel használásának lehetőségeit.
uVCCo-t ö Ú ί I * Nemzetközi
Szabadalmi Iroda i l -l (X?2 Budapest, Andrássy út 113. Telelőn: 34-24-950, Fax: 34-24-323
• · · · · ΐ
)
KÖZZÉTÉTELI
PÉLDÁNY • · · · · · • · • · · ·
62.393/BE
Endotelin konvertáló enzim (ECE)
BASF AKTIENGESELLSCHAFT
Feltalálók:
KROGER Burkhard, SEULBERGER Harald, MEYER Thomas, SCHMIDT Martin, JACOB Elard,
OTTER Rainer, SUBKOWSKI Thomas, HILLEN Heinz,
LÜDWIGSHAFEN, DE
LIMBURGERHOF, | DE |
DOSSENHEIM, | DE |
SPEYER, | DE |
BENSHEIM, | DE |
EISENBERG, | DE |
SANDHAUSEN, | DE |
MUTTERSTADT, | DE |
HALLOCH, | DE |
A bejelentés | napja | 199 | |
E1sőbbségéi : | 1 993. | 1 1 | . 1 6 |
1 994 . | 02 | . 07 | |
1 994. | 04 | . 12 |
A nemzetközi bejelentés . 10 .
• r | P | 4 3 | 39 | 10 0 | - 1, | DE |
• r | P | 44 | 03 | 665 | • 5, | DE |
• r | P | 44 | 12 | 372 | •8, | DE |
száma: PCT/ΕP94 / 0 370 6
A nemzetközi közzététel száma: WO 95/14095 • · · · · · · • · · · · · · • · · · · · · ······ _ ······· · ·«··»·····
A találmány endotelin konvertáló enzimekre, az előállításukra szolgáló eljárásra és használatukra vonatkozik.
A megnövekedett endotelin szintet számos betegséggel hozzák összefüggésbe, például az esszenciális hipertóniával, a szívinfarktussal, az akut veseelégtelenséggel, sokkal vagy szívelégtelenséggel. Erre az összefüggésre endotelin antitestekkel kapott eredményekből szintén lehetett következtetni. Ál1atmode1lekben endotelinnel a szívinfarktus kiterjedését dózisfüggően tudták csökkenteni [ Watanabe et al., Natúré, 3 4 4 , 1 1 4 (1 990 )] , a veseműködést pozitív módon tudták befolyásolni [ Kon et al.,
J.Clin. Invest., 8 3, 17 62 (1 98 9)] , és csökkenteni tudták a ciklosporín nefrotoxicitását [ Kon et al., Kidney Int.,
37, 1487 (1990)] .
Az endotelin konvertáló enzim (ECE-1) az endotelin-1-et a 38 aminosavból álló big-endote 1in-1 prekurzor molekulából szabadítja fel. Az endotelin-1 által okozott nem kívánt biológiai hatások ellen például az endotelin konvertáló enzim gátlásával és ezáltal az endotelin-1 bioszintézisének akadályozásával lehet védekezni.
Különböző sejtvonalakból olyan enzimaktivitásokat izoláltak, amelyek endote1 ineket, illetve endotelin-szerű molekulákat szabadítanak fel a megfelelő prekurzor molekulákból, vagyis a big-endote1 inékbő1 [ Takeda et al.,
Biochem. Biophys. Rés. Comm., 176, 860 (1991); Ohnaka et al . , Biochem. Biophys. Rés. Comm., 1 68 , 1 12 8 (1 9 90 );
• · · · · ·
V
3 | • · · • · · · · | • · · · • · · ·· | |||
Matsumura et al., | FEBS | Lett. | ., 293, 45 (1992); | Ahn | e t a 1 . , |
Proc. Natl. Acad. | Sci. | , 89, | 8606 (1992); PCT | WO 92/13944; | |
Ohnaka et al., | Clin. | E xp . | Hypertension A, | i£, | (Nr.4) |
(1992); Okada et | al . , | Biochem. Biophys. Rés. | Comm | ., 180, | |
1019 (1991); Takada et | al . , | Biochem. Biophys. | Re s . | Comm., |
182, 1383 (1992); Opgenorth et al.,
FASEB,
6,
653 (1992)] .
Ezeket az enzimaktivitásokat azonban eddig még nem vizsgálták kielégítően, mivel mint alacsony koncentrációjú enzimkeverékek állnak rendelkezésre. Specifikus ECE inhibitorok felkutatására szolgáló teszt-e1járásokban való alkalmazásra az ilyen nyers enzimkeverékek azonban kevéssé alkalmasak, mivel más, fiziológiailag nem jelentős idegen proteázok az enzimtesztet erősen zavarják. A big-endotelint például a szerin-proteáz kimotripszin, továbbá a papain, termolizin és a NÉP 24.11 endotelinné és endotelin-szerű termékekké hasítják, és a teszt eljárásokban ezeket az enzimeket tévesen hozzászámítják az ECE enzimekhez. A szakirodalomban ennélfogva az endotelin konvertáló enzim leírása ellentmondásos.
Az endotelin konvertáló enzim molekulatömegére vonatkozó adatok 65 kD-tól 540 kD-ig változnak; a Km és vmax értékek szintén jelentősen eltérnek egymástól [Opgenorth et al., FASEB, 6_, 2 653 (1 992); Sawamura et al., Biochem. Biophys. Acta, 1161, 295 (1993)] . Ellentmondások vannak olyan tekintetben is, hogy vajon az endotelin konvertáló enzim az aszpartát proteázok vagy a meta11oproteáζok csa• · ládjába sorolandó-e [ Sawamura et al . , Biochem. Biophys
Acta, 1 1 61 ,. 295 (1 993); Biochem. Pharmacol., 4 3 , 845 (1992)] . További ellentmondó közlések találhatók a szakirodalomban olyan jellemző adatokra vonatkozóan is, hogy vajon meta 11oproteázként citop1azmatikus vagy membránhoz kötött enzimről van-e szó, és hogy milyen szubsztrátummal reagál a szóbanforgó ECE (big-Et-1; big-Et-3) [Matsumura et al., FEBS Lett., 293, 45 (1992); Takahashi et al., J.
Bioi. Chem., 268, 21394 (1993); Okada et al., Biochem.
Biophys. Rés. Comm., 1 8 0 , 1 0 1 9 ( 1 991 ); Ohnaka et al.,
Clin. Exp . Hypertension A 14 , Nr . 4 (1 992) ; Matsumura et al., FEBS Lett., 305, 86 (1992)] .
Ezidáig nem jelentettek meg az ECE-ről olyan egyértelmű leírást, amely lehetővé tenné az ECE kifogástalan meghatározását. Egy ilyen meghatározás valószínűleg csak az ECE primer szerkezetének, azaz aminosavszekvenciájának a meghatározása esetén jöhet létre. Ehhez elsősorban az
ECE tiszta formában való előállítása szükséges.
Feladatul tűztük ki tehát, hogy az endotelin konvertáló enzimet tiszta formában állítsuk elő.
Találtunk egy olyan endotelin konvertáló enzimet, amelynek a molekulatömege 250 000 dalton. Részleges aminosavs zekvenciá j át az 1. számú szekvencia írja le.
A találmány szerinti endotelin konvertáló enzim jellemzői a következők: SDS-po1iakri1 amid gé 1 e 1 e k t r o f o r é z i s sel - nem redukáló körülmények mellett - meghatározva molekulatömege mintegy 250 000 dalton.
···· ···· • · · ·
Redukáló körülmények mellett, az SDS-ρο1iakri1amid gél egy 125 000 dalton tömegű sávot mutat ki, tehát vélhetően homodimerről van szó.
Az endotelin konvertáló enzim glikozilált. A cukormaradékok enzimes eltávolítása a valószínű 125 000 dalton molekulatömeget mintegy 82 000 daltonra változtatja.
Az endotelin konvertáló enzim tripszines peptidjeinek szekvenálása az 1., 2., 3., 4., 5. és 6. számú szekvenciák szerinti részleges aminosavszekvenciákat szolgáltatta .
Az endotelin konvertáló enzim további vizsgálatával a példákban foglalkozunk.
A találmány további tárgyát képezik azok az endotelin konvertáló enzimek, amelyeknek a molekulatömege körülbelül 250 000 dalton, és olyan aminosavszekvencia-részt tartalmaznak, amely legalább 80%-os homológiát mutat az 1. számú szekvenciával.
Ilyen endotelin konvertáló enzimek nemcsak marhából, hanem más szervezetekből, például emberi sejtekből izolálhatok .
A találmány olyan endotelin konvertáló enzimekre is vonatkozik, amelyek a 30. számú szekvenciában és a 36. számú szekvenciával leírt polipeptid szekvenciát vagy ezek működőképes fragmentumait tartalmazzák.
Működőképes fragmentumok alatt olyan rész-szekvenciák értendők, amelyek még rendelkeznek az endotelin konvertáló enzim enzimaktivitásával, antigén tulajdonsággal • · · · · · · • · • · • · · · · · · • ··« ··· ······ • · · · · • ··« ·· · ·· β
rendelkeznek, és 1igandumokhoζ - például kötőproteinekhez - affinitást mutatnak.
További működőképes fragmentumok az olyan polipeptid szekvenciák, amelyeket a 30. vagy a 36. számú szekvenciából kiindulva aminosavak vagy peptidek inszerciója, deléciója vagy szubsztitúciója révén kaphatunk, és amelyek még lényegében az endotelin konvertáló enzim enzimaktivitásával rendelkeznek, és/vagy a 30. vagy a 36. számú szekvenciák szerinti endotelin konvertáló enzimmel immunológiai ke resztreakeiót adnak.
A találmány tárgyát képezik azok a DNS szekvenciák, amelyek endotelin konvertáló enzimet kódolnak, továbbá azok, amelyeket a következő DNS szekvenciákból álló csoportból választunk ki:
a) DNS s’z e kvenc i á k, amelyek a 29. vagy a 35. számú szekvenciákkal leírt szerkezettel rendelkeznek,
b) DNS szekvenciák, amelyek a 30. vagy a 36. számú szekvenciákkal leírt szerkezetű proteineket kódolják, és
c) DNS szekvenciák, amelyek standard feltételek mellett az a) vagy b) pont alatti DNS szekvenciákkal hibridizálnak, továbbá
d) DNS szekvenciák, amelyek olyan protein termékeket kódolnak, amelyeket a 30. vagy a 36. számú szekvenciákból vagy ezek fragmentumaiból álló proteinek elleni antitestek felismernek.
• · · · · · · • · • ·
Ί
Standard feltételek alatt értjük például, ha egy 0,1 x SSC és 1 x SSC koncentrációjú vizes pufferoldat (1 x
SSC = 0,15 M nátrium-klorid, 15 mM nátrium-citrát, pH
7,2) hőmérséklete 42°C és 58°C között van. A DNS hibridizáláshoz szükséges kísérleti feltételeket géntechnikai szakkönyvek ismertetik, például: Sambrook et al, „Molecular Cloning [ Cold Spring Harbor Laboratory (1989)] .
Ilyen DNS szekvenciák előállítását a 8. példában ismertetjük. Azokat a DNS szekvenciákat, amelyeknek a proteintermékeit a 30. vagy a 36. számú szekvenciákból vagy ezek fragmentumaiból álló proteinek elleni antitestek ismerik fel, jól leírt módszerekkel állíthatjuk elő.
Ilyen proteinek elleni antitestek előállítását ismerteti például L.Hudson és F.C.Hay, „Practical Immunology [ Blackwell Sci. Publ . Oxford ( 1 980 )] című munkája.
Az olyan cDNS szekvenciák kimutatására szolgáló antitestek alkalmazásának leírása, amelyek az ezen antitestekkel keresztreagá1ó proteineket kódolják, például a következő kiadványban található: „ DNA Cloning I. kötet,
D.M.Glover (szerk.) [ IRL Press, Oxford (1 985 )] .
A találmány ezenkívül olyan endotelin konvertáló enzimek előállítására alkalmas eljárásra is vonatkozik, amelyre jellemző, hogy az endotelin konvertáló enzim egy inhibitora emlős sejteket, főként endoteliális sejteket endotelin konvertáló enzim túltermelésre stimulálja, és ···· ···· • · ezekből a sejtekből az endotelin konvertáló enzim a szokásos fehérjekémiai eljárásokkal izolálható.
Emlős sejtekben az ECE indukciójára minden ECE-inhibitor felhasználható. Megfelelő ECE-inhibitorok leírását tartalmazza például a JP-146737 számú japán szabadalmi leírás; a JP 05148277-A1 számú japán szabadalmi bejelentés; továbbá: Jpn . J . Biochem. , 6 4 , (8) kivonat, 2 3 67 (1992); Derwent NCE-93-0956 (1993); Derwent NCE-93-0971 (1993); J. Med. Chem., 3_6, 173 (1 993); EP 5182 99-A2 számú európai szabadalmi bejelentés. Előnyösen alkalmazható a foszforamidon. A tenyésztett sejteket ezen inhibitoroknak a sejt tenyésztő táptalajhoz való hozzáadásával stimulálják 6 órától 6 napos időtartamig. Előnyös, ha a stimulálást 2-3 napon át végzik. Az alkalmazott inhibitor koncentrációk 10'2 M-tól IC'7 M-ig terjednek, előnyös koncentráció a 10 “ - 10 4 M.
A találmány szerinti endotelin konvertáló enzimek azonban géntechnológiai úton is előállíthatók. A leírt részleges aminosavszekvenciák alapján olyan szintetikus oligonukleotidők állíthatók elő, amelyek ezeket a szekvenciákat kódolják, vagy komplementerek az ezeket kódoló szekvenciákkal. Ezeket a oligonukleotidokat hibridizációs szondákként használhatjuk a megfelelő gének izolálására vagy pedig cDNS molekuláknak génpoolból - ilyenek a génbankok - vagy cDNS poolból való izolálására. A gén izolálásnak ezt a módját a szakemberek molekuláris biológiai szakkönyvekből - például: Sambrook, Fritsch, Maniatis, ···· ···· • « ··· ··· ··· · * „Molecular Cloning [Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989) USA] - ismerik.
Alkalmas szintetikus oligonukleotidok és polimeráz láncreakció (PCR = polymerase chain reaction) segítségével szintén előállíthatjuk a gén részeit, például cDNS bankokból vagy egyszálú cDNS-ből [ PCR Protocols; Academic
Press; San Diego, USA, (1990)] . Az itt alkalmazható oligonukleotidokat az 1-6. számú szekvenciák szerinti peptidekből úgy vezethetjük le, hogy az aminosavszekvenciát kétszálú DNS szekvenciává (szensz és antiszensz szállal) fordítjuk le. A degenrált genetikai kód következtében egy peptidből degenerált oligonukleotid keverékek vezethetők le, amelyek ezután primerként alkalmazhatók. Az oligonukleotidokat az úgynevezett „codon usage alapján is levezethetjük a peptidekből, azaz annak figyelembevételével, hogy egy fajban - ebben az esetben marhában - egy adott aminosavhoz mely állandó nukleotid tripletnek a használata van előnyben. A PCR-t ezután két különböző oligonukleotid primer használatával végezzük, amikoris a PCR-hez szükséges két prímért az oligonukleotid szensz szálából és antiszensz szálából állítjuk öszsze. Ugyancsak felhasználhatók olyan oligonukleotidok, amelyek a cDNS vektorból származnak, vagy ilyen az oligo-dT a mRNS 3' része számára.
Ezeket a gén részeket ezután arra is használhatjuk, hogy gén izolálási eljárásokkal a teljes gént vagy a teljes cDNS-t megkapjuk.
···· ··r· • « • · · ··· ·* ··· ·· ·
Ilyen módon nemcsak azoknak az endotelin konvertáló enzimeknek a génjét izolálhatjuk, amelyek pontosan az 1. számú szekvencia szerinti részleges aminosavszekvenciát tartalmazzák, hanem variáns géneket is, például más szervezetek - így az ember - endotelin konvertáló enzimeit is, amelyek protein szinten legalább 80%-os homológiát mutatnak az 1. számú szekvenciával.
A találmány szerinti endotelin konvertáló enzimek könnyen előállíthatok, ha a megfelelő géneket izoláljuk, és ezeket a géneket a szokásos géntechnológiai módszerekkel egy gazdaszervezetben kifejezzük.
A találmány szerinti ECE vagy a belőle levezetett peptidek olyan antitestek vagy antitest fragmentumok - ilyenek például az Fv fragmentumok - előállítására használhatók, amelyeket például az ECE meghatározására, teszt-e1járásokban ECE-gátlók azonosítására vagy ECE-inhibitorokként használhatunk.
Ezek az antitestek általában értékes segédanyagok az olyan betegségek diagnosztikájában, amelyekben endotelin konvertáló enzimek vesznek részt.
Ilyen célokra a találmány szerinti DNS szekvenciákból levezetett PCR primerek is felhasználhatók, például az ECE-transzkripció méréséhez vagy a genotípus meghatározásához .
A kapott gének segítségével egy, a szakemberek által ismert módszerrel, állatok génkészletét olyan módon változtathatjuk meg, hogy ezek ebből a génből egy vagy több ···· ·«·· ·· ♦* »* « * « · · · · • *«· · · · ····« , ·····»' ·· ··· ·· Μ ·· extra másolatot tartalmazzanak, vagy hogy normál ECE génjük kitörlődjék. Ezek a transzgenikus állatok egyebek közt kísérleti célra alkalmasak.
Maguk az endotelin konvertáló enzimek gyógyszerek előállításához hatóanyagokként használhatók, például olyan betegségeknél, amelyekben az ECE-szubsztrátumok -ilyenek például a bradikinin, a P substance, a szomatosztatin, a neuropeptid Y - emelkedett szintje fordul elő. Ilyen betegségek például a következők: gyulladások, asztma, migrének, reuma és olyan sejt-fο 1yamatok és sejt-prο1iferáciό , amelyek peptid növekedési faktorok részvételével mennek végbe. Az ECE gyógyszerként alkalmazható olyan -betegségeknél is, amelyekben ECE adásával megszüntethető vazodi1atáció áll fenn, ilyenek például a szeptikus sokk, a migrének és a potencia zavarok.
Az ECE gyógyszerként való alkalmazása esetén, bizonyos körülmények között, szükség lehet az ECE mutatív megváltoztatására. Ezek a mutatív változtatások például olyan ECE származékokat eredményezhetnek, amelyek nem g1ikozi1á11ak, vagy amelyek nem tartalmaznak membrán-horgonyt (oldható ECE) . Membrán-horgonyt nem tartalmazó oldható ECE előállítható például olyan ECE-fragmentum expressziója révén, amely extracelluláris, katalitikus hatású domént tartalmaz. Ilyen ECE-fragmentumokhoz például úgy juthatunk, ha a kódoló szekvenciát - a 25. számú szekvenciából a 20. és a 703. aminosav közötti szakaszt, előnyösen a 25. számú szekvenciából a 27. és 703. amino12 «·····» ν ·· ·» *» ♦ » * · » ' » . «·· .»· «·· ··· • · « « » · ·· ·»· *· · ·· sav közötti szakaszt - összekapcsoljuk egy in vivő lehasítható szignálpeptid DNS szekvenciájával, majd egy szakemberek által ismert alkalmas expressziós vektorban eukarióta sejtekbe visszük be. Alkalmas szignálpeptid például a humán szöveti plazminogén aktivátor (tissue plasminogen activator = t-PA) szekvenciának a -35 és -4 aminosav-pozició közötti része [ D.Collen, Natúré, 301,
214-221 (1983)] . A változtatások befolyásolhatják például a specificitást, a hatás időtartamát és a felszívódást.
Az ECE működőképes részeit ezenkívül más proteinekkel is összekapcsolhatjuk, hogy olyan új proteineket állítsunk elő, amelyek gyógyszerként alkalmazhatók. Az ECE más, kovalens kötéssel kötött nem peptid molekulákkal - ilyenek például a PEG, .dextrán, zsírsavak - is módosítható.
A találmány szerinti DNS szekvenciák génterápiában való felhasználásra is alkalmasak, például génterápiás gyógyszerek előállítására. Emelkedett endotelin értékekkel járó betegségek az ECE-DNS-szekvenciábó1 levezetett ο1igonukieotidőkka1 is kezelhetők. Ezek az oligonukleotidok a nem-kódoló szálból (antiszensz) vezethetők le, és mint gyógyszerek alkalmazhatók. Egy ezen alapuló antiszensz terápia előnyösen az ο 1igonukieotidőkbó1 levezetett stabilabb kémiai származékokat használja. Olyan antiszensz oligonukleotidok használhatók például, amelyeket előnyösen a 35. számú szekvencia 31-100 pozíciója közti tartományból szintetizálunk. Az antiszensz oligonukleotidok előnyösen 15-30 csoport hosszúak. Az ···· ···· • · antiszensz terápia vagy betegség megelőzés ugyanazon javallatok esetén kerül alkalmazásra, mint az ECE-inhibitoroké, ilyenek például a következők: cerebrális isémiák; szubarachnoidá1is vérzések; vazospazmusok; koronária isémiák; olyan betegségek, amelyek sejt prο 1iferációs folyamatokkal járnak, mint a prosztata hiperplázia, mint az ateroszklerózis, mint a resztenózis; továbbá magas vérnyomás; pulmonális magas vérnyomás; elégtelen szervműködések, mint a szívelégtelenség és veseelégtelenség; vese isémiák; vese toxicitás: miokardiális infarktus;
koronáriás szívbetegség; szepszis.
Az ECE DNS szekvenciájából olyan szekvenciák is levezethetők, amelyekkel katalitikus hatású RNS molekulák állíthatók elő, ezek az úgynevezett „ribozimek. Ezek a katalitikus RNS molekulák úgy hatnak, hogy alkalmazásuk esetén az ECE-RNS-t vagy ECE-DNS-t elhasítják vagy inaktiválják, és ezáltal az ECE-protein szintézisét meggátolják.
Az ECE DNS szekvenciákat arra is felhasználhatjuk, hogy megfelelő expressziós vektorokkal olyan sejteket hozzunk létre, amelyek ezt az enzimet kifejezik. Ezek a sejtek többek között gyógyszerként alkalmazhatók.
Az endotelin konvertáló enzimek előnyösen ECE-inhibitorok azonosítására szolgáló teszt eljárásokban alkalmazhatók. Ezek a teszt eljárások rendszerint enzimreakciók, amelyekben egy szubsztrátum ECE-kata1izá11 hasítását potenciális inhibitorok jelenlétében mérik.
• · ·· ····
A találmány további tárgyát képezik az endotelin konvertáló enzimek inhibitorai, amelyeket a találmány szerinti endotelin konvertáló enzimek felhasználásával egy enzimtesztben azonosítunk.
A találmány olyan gyógyszerek előállítására szolgáló eljárásra is vonatkozik, amelyek egy endotelin konvertáló enzimet gátolnak. Az eljárás azzal jellemezhető, hogy ismert kémiai vegyületeket a találmány szerinti endotelin konvertáló enzim felhasználásával végzett enzim-tesztben vizsgálunk, és azokat, amelyek gátló hatással rendelkeznek, azonosítjuk, és az ilyen módon azonosított vegyületeket a szokásos vivő- és segédanyagokkal gyógyszerekké f o rmu1á ζ z u k.
Az alábbi példák a találmány szemléltetését szolgálják, és semmiképpen nem korlátozzák a találmány oltalmi körét .
1. példa: '
Az ECE-1 stimulálása foszforamidonna 1 primer FBHE marha endoteliális sejtekben.
Lefagyasztott FBHE marha endoteliális sejteket (ATCC CRL1395) - 14. passzázs - tartalmazó három csövecskét felolvasztottunk, és a sejteket három, egyenként 40 ml DMEM táptalajt (Gibco 041-01965) tartalmazó T175 sejt-tenyésztő palackhoz (Sarstedt cég) adtuk. A táptalajt a következőkkel egészítettük ki:
glutamin (200 mM; Gibco 043-05030) 5 ml/500 ml, • · · · ···· ·· gentamicín (Gibco 043-05750) 1 ml/500 ml, nem esszenciális aminosavak; végkoncentráció IX (Gibco, 0 4 3-0 1 1 4 0 ) ,
10% FCS (Gibco 011-06290) 37 percig 56°C-on inaktiválva;
+ 25 ng/ml bázikus FGF (Intergen 4125-80) (FGF = fibroblaszt növekedési faktor) .
A sejteket standard eljárás szerint, 37°C-on 7% szén-dioxidot tartalmazó légtérben, 100% levegő-nedvességtartalom mellett inkubáljuk. A következő nap táptalaj cserét végzünk. Mihelyt a sejtek összefolytak - ebben az esetben 4 nap múlva - a sejteket standard eljárás szerint tripszinnel kezeljük, és 9 T-175 palackba osztjuk el. A tenyészetet, mint leírtuk, 37°C-on inkubáljuk. Három nap múlva, amikor a tenyészet összefolyt, a sejteket standard eljárás szerint, újból tripszinnel kezeljük, és 20 T-palackba osztjuk el. További 3 nap múlva a sejtek 40 T-palackba oszthatók el. További 3 nap múlva 39 ilyen T-palack sejtjeit 78 T-palackba osztjuk el. Minthogy ezt a 78 T-palackot használjuk az aratáshoz, itt erre alkalmas sejt-tenyésztő palackokat (Costar; Acell 3155) alkalmazunk. Ezen T-palackok beoltása napján, a beoltás után, 68 palackhoz foszf oramidont (Peptide Institute; 4082 ; rövidítve: PHAM) adunk 10 4 M végkoncentrációban (+PHAM). Ez a kezelés az ECE-aktivitás indukcióját idézi elő. A megmaradt 10 T-palackot nem indukált kotroll sejtek gyanánt (-PHAM) futtatjuk. A leírt feltételek mellett további 2 • · napos inkubálás után a PHAM indukált sejteket és a kontroll sejteket (-PHAM) külön-külön learatjuk. A palackokat felnyitjuk, és a táptalajt leöntjük. A T-pa1ackokban lévő sejteket palackonként 10 ml PBS-sel ( Boehringer-Mannheim,
210331) mossuk (azaz a sejtgyep felett óvatosan öblögetjük) . A PBS-t leöntjük. Palackonként újból 5 ml PBS-t mérünk be. A sejteket a tenyésztő palack fenekéről sejt-kaparóval (cél1-scraper; Costar 3010) kaparjuk le, és sejtszuszpenzió formájában egy 150 ml-es centrifugacsőbe (Falcon 2076) visszük át, amelyet jégen tartunk el. Mindegyik T-palackot 10 ml PBS-sel még utána öblítünk. Az öblítéssel kapott sejtszuszpenziót a centrifugacsőbe lévő sejtszuszpenzióva1 egyesítjük. A sejteket centrifugálással (1200 ford/perc; 12 perc; Heraeus Christ Minifuge GL Nr. 4400; rotor 2150) ülepítjük le. A sejtmentes felülúszót eldobjuk, és az üledéket a sejtüledék háromszoros térfogatának megfelelő mennyiségű PBS-ben vesszük fel. Újbóli centrifugálás után a sejtmentes felülúszót megint eldobjuk. Az üledéket a feldolgozásig jégen tartjuk.
. példa:
A nem stimulált és a foszforamidonna1 stimulált FBHE marha endoteliális sejtek összehasonlító feldolgozása; a protein azonosítása.
Az 1. példában foszforamidon indukcióval és enélkül kapott FBHE sejteket (egyenként 500 pl nedves tömeg) 15 ml 0,5 mM diizopropi1-f1uoro-foszfát tartalmú PBS-ben 20 • · · · ···· · · • · · · • · · · · · · percig - jégfürdőben - ultrahanggal kezeljük. Centrifugálás után (20 perc; 1000 g) a felülúszóhoz hozzáadott 5%
Pluriol F68 segítségével a membránokat kicsapjuk, és újból 100 000 g melletti centrifugálással izoláljuk. A membránokat 2 ml 100 mM trisz pufferben (pH 8,0) digeráljuk, majd 1% Triton X-100 hozzáadásával oldhatóvá teszszük. A kapott membrán-oldatokat (egyenként 2,5 ml) lecentrifugáljuk, és az üledéket eldobjuk.
Mono-Q kromatografálás.
A foszforamidonna1 indukált (+) és nem indukált (-) sejtekből származó membránoldatokat Mono Q HR 5/5 oszlopon (Pharmacia), pontosan azonos körülmények mellett kromatografáljuk. Az oszlopokat 50 ml 0,1% Triton X-100 tartalmú trisz pufferrel (A puffer; pH 8,0) hozzuk egyensúlyba. A membrán-oldatok felvitele után az oszlopokat 15 percig A-pufferrel mossuk, majd B-puffer (A-puffer + 1 M nátrium-klorid) lineáris gradiensével 50 percig eluáljuk (átfolyási sebesség 0,2 ml/perc). Húsz 0,5 ml-es frakciót szedtünk, és ezeket humán big-Et-1 szubsztrátumma1 teszteltük. A kapott Et-l-et reverz fázisú HPLC-vel - a 3. példában leírt módon - mutattuk ki, és mennyiségi meghatározást is végeztünk. A legnagyobb enzimaktivitást mutató két frakciót mindkét anyagnál egyesítettük.
Superose 12 gé1kromatografá1ás
A Mono Q kromatografálással kapott eluátumokat
Centricon csövecskékben (Amicon) 250 μΙ-re koncentráljuk, és Superose 12 HR 10/36 oszlopon gé1-kromatografá1juk.
• · · · ···· • · · · ·
Feltételek: puffer 20 mM nátrium-foszfát
250 mM nátrium-klorid, pH 7,4
0,05% Triton X-l0 0 átfolyás 0,5 ml/perc frákció 0,5 ml
A frakciókat a 3. példában leírt vizsgálattal teszteltük, és a legnagyobb enzimaktivitású két frakciót mindkét anyagnál egyesítettük.
A frakciók protein tartalmát Bradford módszerével [Anal. Biochem., 7 2 , 24 8 ( 1 97 6)] határoztuk meg.
Eredmények :
A stimulált és nem stimulált sejtek tisztítása a következő eredményekkel járt a tisztítás különböző lépéseiben :
Tisztítási | FBHE sejtek | FBHE sejtek |
lépés | + foszforamidon | - foszforamidon |
Spec.akt. [ pU/mg] | pg/ml | |
Membránok | 129 | 44 |
Membrán-oldat | 188 | 22 |
Mono Q kromatográfia | 1470 | 78 |
Superose 12 kromatográf i a | 4500 | 130 |
A S upe r őse 12 kromatográfia két aktív összehasonlításul 8%-os SDS-po1iakri1 amid gélre vittük • · · · · · · fel. A foszforamidonnal kezelt sejtekből származó tisztított ECE-1 gé1-mintázata a nem kezelt sejtekéhez hasonlítva egy további sávot mutat 250 000 daltonnál. Ha a proteineket ditiotreitol (DTT) reduká1ószerre1 visszük fel, az összehasonlításban 125 000 daltonnál mutatkozik a további sáv.
. példa:
ECE-1 aktivitás vizsgálata HPLC-vel.
Big-endote1 in-1 endote 1 in-1-gyé alakítása endotelin konvertáló enzimmel.
A 4. példa szerint kapott 1 μΐ enzim oldathoz hozzáadunk 21 μΐ 50 mM trisz, 50 mM imidazol, 250 mM nátrium-klorid tartalmú puffért (pH 7,4) és 2,5 μΐ humán big-endotelint (2 mg/ml 0, 1%-os vizes ecetsav oldatban) . Két óra múlva a képződött endotelin analízise céljából, a reakciót 72 μΐ 0,5%-os trifluor-ecetsav hozzáadásával állítjuk le. A mintát 1ecentrifugá1juk, és a felülúszót reverz fázisú magas nyomású fο 1yadékkromatográfiáva1 (RP-HPLC) analizáljuk azonosítás céljából, ahogyan J.Takada és munkatársai [Biochem. Biophys. Rés. Comm., 176, 860 (1991)] és K.Ohnaka és munkatársai [ Biochem.
Biophys. Rés. Comm., 168, 1128 (1990)] leírták. A minta mennyiségi vizsgálatát endotelin standarddal való összehasonlítás révén - UV kimutatás (205 nm) - végeztük.
Az enzimaktivitást az alábbiak szerint számítottuk ki, aktivitásban kifejezve:
• · · • · • · · « • · feldolgozott 6 μΜ endotelin ECE [ μϋ] = ------------------perc
Ezen eljárás szerint határoztuk meg a
FBHE sejtek ECE aktivitását a tisztítás különböző fázisaiban. Ugyanakkor Bradford módszerével [Anal. Biochem.,
2 , 24 8 (197 6)] a protein mennyiségét is meghatároztuk.
4. példa:
ECE tisztítása FBHE marha endoteliális sejtekből.
a) membrán izolálás, idegen protein tripszines kezelése .
ml FBHE sejtüledéket (1. példa szerint) 25 ml PBS pufferben digerálunk. A sejteket 5 percen át ultrahang fürdőben, jéghűtés mellett tárjuk fel. A sejt törmelékeket centrifugálással (10 000 g; 20 perc) távolítjuk el.
A felülúszóhoz keverés közben hozzáadunk 3,6 mg tripszint, majd másfél órán át szobahőmérsékleten kevertetjük. A mintát 1 órán át 1 0 0 0 0 0 g mellett centrifugáljuk, és az üledékben lévő membránokat 25 ml 100 mM trisz pufferben (pH 8,0) szuszpendáljuk.
b) ECE-1 oldatba vitele.
A 25 ml membránszuszpenzióhoz diizopropi1-f1uoro-foszfátot adunk 0,5 mM koncentrációig és Triton X-100-at 0,5% koncéntrációig, majd az elegyet egy éjszakán át jégfürdőben tartjuk.
• · ·· ···· • · • · · ·*
c) Mono Q kromatográfia.
Egy Mono Q - FPLC oszlopot (HR 16/10; Pharmacia)
0,025% Triton X-100 tartalmú 50 mM trisz pufferrel (A puffer) hozunk egyensúlyba. Miután a feloldódott elegyet rávittük az oszlopra, azt 30 percen át A pufferrel mossuk, és ezután 100 percen belül B puffer (A puffer + 1 M nátrium-klorid) lineáris grádiensében eluáljuk. Harminc ml-es frakciót szedtünk. A minta protein tartalmát
Bradford módszerével, az ECE-1 aktivitást a 3. példa szerint határoztuk meg. A legnagyobb specifikus aktivitást mutató két frakciót egyesítettük.
d) Gé1s zűrés .
A 4c) pont szerinti Mono Q eluátumot egy 30 kD Centricon membránon (Amicon) 500 μΐ-re koncentráltuk.
Egy Superose 12, HR 10/30 oszlopot (Pharmacia) 250 mM nátrium-klorid és 0,05% Triton X-100 tartalmú 20 mM nátrium-foszfát pufferrel (pH 7,4) hozunk egyensúlyba, majd rávisszük a bekoncentrált mintát. A kiegyensúlyozó pufferrel kromatográfálunk 0,5 ml/perc átfolyási sebesség mellett, és 0,5 ml-es frakciókat szedünk.
A frakciók specifikus aktivitásának a meghatározását a 4c) pontban leírtak szerint végezzük. A legmagasabb specifikus aktivitást mutató frakciót alább ismertetjük;
ez a frakció körülbelül 250 000 dalton-nál eluálódik, azonos kromatográfiás feltételek mellett futtatott standard proteinekhez viszonyítva.
• · ·· ···· • · • · · · • · · · · · ·· ··· ··
e) Eredmények.
Protein (mg) | Specifikus aktivitás (pU/mg) | |
Membráno k | 87 | 410 |
Membrán-oldat | 87 | 360 |
Mono Q eluátum | 6,6 | 3760 |
Superose 12 eluátum | 0 , 35 | 15100 |
5. példa:
FBHE sejtekből tiszított ECE-1 SDS-gél analízise.
A 4. példa szerint tisztított ECE-l-et 8%-os Laemmli féle [ Natúré, 227, 680 (1979)] SDS-gélre visszük fel, és redukáló (+DTT) és nem redukáló feltételek mellett analizáljuk. Nem redukált állapotban az ECE-1 molekulatömege 250 000 dalton, de redukálás után egy 125 000 dalton körüli széles sávvá esik szét.
6. példa: .
Az ECE-1 deglikozi1á1 ás a.
A 4. példa szerint tisztított ECE-1 oldat 50 pl-ét
10%-os SDS oldattal 0,25% SDS tartalomra állítjuk be. A mintákat 20 percig szobahőmérsékleten inkubáljuk, és 1% Triton X-100 tartalomra állítjuk be. Húsz perc szobahőmérsékleten való tartás után a mintákhoz 5 pl 250 mM mátrium-foszfát puffért (pH 7,4) adunk, majd 0,25 μΐ • · · · · • · • · · · • · ·· · ··· • · · ··· • ·
PNGáz F-et és 0,5 pg Endo-F-et. (PNGáz F = glikopeptidáz F; Endo F = endoglikozidáz F). A mintákat 8 órán át 37’C-on inkubáljuk. Ezután ugyanilyen enzim mennyiségeket adagolunk, és további 8 órán át 37°C-on inkubálunk. A mintákat ezután 50 pl-re koncentráljuk, és 4-12%-os
SDS-gélben analizáljuk.
Eredmények:
Redukált állapotban a cukor-csoportok PNGáz F/Endo F eleggyel való hasítása révén a valószínű molekulatömeg
125 000 daltonról körülbelül 82 000 daltonra változik.
.példa:
Marha endoteliális sejtekből származó ECE-1 rész-szekvenciái.
A 4. példa szerint kapott ECE-1 oldatból 16x25 pg-ot preparatív 4-12%-os SDS-po1iakri1amid-grádiens-gé1ekre viszünk. A szokásos, Coomassie blue-val való festés után a gélt színtelenítjük, és 4x40 percig tiszta vízzel mossuk ki. A 250 kD-nál megfestődött sávokat szikével kivágjuk, és 200 pl 100 mM ammónium-hidrogén-karbonát oldattal digeráljuk. Hozzáadunk 0,5 pg tripszint, egy éjszakán át inkubáljuk, majd a felülúszót levesszük. A maradékhoz megint hozzáadunk 0,5 pg tripszint, és 5 órán át szobahőmérsékleten 200 pl 100 mM ammónium-hidrogén-karbonát pufferben inkubáljuk. A mintát ezután speed-vac-koncéntrátorban szárazra pároljuk. Az üledéket 40 pl vízben vesszük fel, és 4 pl 40 mM ditiotreitol oldat• · · · ···· ·· • · • · • · · · • · ·· ··♦ • · · ·· ·· tál 30 percig kevertetjük. Ezután 37°C-on hozzáadunk 4 pl 100 mM jód-acetamid oldatot. Két óra múlva a mintát szárazra pároljuk.
A kapott peptideket egy 1 mm x 15 cm-es reverz fázisú HPLC oszlopon 0,5%-os vizes trif1uor-ecetsav és 0,5% acetonitril tartalmú 90%-os acetonitril lineáris grádiensében választjuk el 3 órán keresztül. Az UV-aktív frakciókat összegyűjtjük, és a primer szekvenciákat gázfázisú szekvenátorban határozzuk meg.
Eredmények:
A következő rész-szekvenciákat határoztuk meg.
1. számú szekvencia:
Xaa-Xaa-Pro-As'n-Ala-Leu-Asn-Phe-Gly-Gly-Ile-Gly-ValVa1-Va1-G1y-His-Glu-Leu-Thr-His-Ala-Phe...
2. számú szekvencia:
Xaa-Tyr-Xaa-Lys-Xaa-Gly-Asn-Leu-Arg-Pro
3. számú szekvencia:
Xaa-I1e-Ala-Xaa-G1u-Thr-G1u-Leu-Glu-I1e. . .
(Ile) (Ile)
4. számú szekvencia:
Xaa-Pro-Glu-Phe-Leu-Leu-Glu-G1y-Leu-I1e-Thr-Asp-Pro...
5. számú szekvencia:
Xaa- (Gin) - (Ala) - (Glu) -Asn-Val-Ile-Gln-Val-Xaa-Gln. . .
•··· ····
Μ X • · • · ··· • « ·
β. számú szekvencia:
Val-Glu-Ile-Val-Phe-Pro-Ala-Gly-Ile-Leu-Gln-Ala-Pro-(Phe)-Tyr-Thr (Thr)
A zárójelben megadott aminosavak meghatározása bizonytalan .
Az 1. számú szekvencia alátámasztja, hogy az ECE-1 egy meta11oproteináz családhoz tartozó új protein, mivel összehasonlítva a NÉP 24.11 metállendopeptidázok és a termolizin szekvenciáival, jelentős, 72%-os, illetve 40%-os homológiát mutat.
8. péIda:
Endotelin konvertáló enzimet kódoló cDNS szekvencia előállítása.
a) RNS izolálás és cDNS bank létesítés.
Az 1. példa szerint foszforamidonna1 stimulált FBHE sejtekből vagy az 1. példa szerint foszforamidonnal stimulált HeLa sejtekből guanidinium-tiocianátos feltárással össz-RNS-t izoláltunk. Az eljárásban a Stratagene cég (La
Jolla, CA., USA) anyagaival és az „RNA Isolation Kit-tel (katalógus szám: 200345) dolgoztunk a cég útmutatója szerint.
A po1iadeni1 ált messenger RNS-t az származó fenti össz-RNS-ből szelektáltuk nitás-é1vá1asztással. Ezt az eljárást (Madison, WI . , USA) előírásai szerint, a
FBHE sejtekből oligo(dT) affia Promega cég cég anyagaival
• · ·· • « « · • · • ·» ··· • · • ·· és a „PolyATract mRNA Isolation System (katalógus szám: 25200) használatával hajtottuk végre. A po1iadeni1á1t messenger RNS-ből a Stratagene cég (La Jolla, CA . , USA) útmutatója s a Stratagene anyagaival és a „ZAP-cDNA Synthesis Kit (katalógus szám: 200400) használatával cDNS-t szintetizáltunk, amelyet ezután a Stratagene anyagainak a felhasználásával és előírásai szerint „Uni-Zap XR Gigapack II Cloning Kit (katalógus szám: 237611) segítségével lambda fágokba pakoltunk.
b) Oligonukleotid szondák előállítása „RACE-PCR-he z .
A cDNS fragmentumok polimeráz láncreakcióval [ PCR; lásd „Molecular Cloning, 2. kiadás (1989) J.Sambrook et al., CSH Press, 14.1 ff oldal] való klónozásánál a 7.
példában ismertetett 1. számú és 2. számú peptidekből indul tünk ki .
A genetikai kód alapján az 1. számú szekvencia 16-22 pozíciói közötti szakaszból és a 7. számú nukieinsavszekvenciából egy
5'-GGSCAYGARYTNACNCAYGC-3' képletű keveréket szerkesztettünk.
Hasonlóképpen, a 6. számú szekvencia 2-8 pozíciói közötti szakaszból és a 8. számú szekvenciából egy
5' -GARATYGTSTTYCCYGCYGG-3' képletű oligonukleotid keveréket, valamint a 6. számú szekvencia
9-16 pozíciói közötti szakaszból és a 9. számú szekvenciáié 1 egy « · • ·· r 4 • · · · ···· «· » · * · « • »· · · -¼ · • · * · ·· «·* ·« ··» • · «·
5'-ATYCTSCAGGCYCCYTTYTAYAC-3' képletű oligonukleotid keveréket szerkesztettünk.
A 7-9. számú szekvenciák a kódoló DNS szekvenciának felelnek meg. A genetikai kód ismert degenerá1tsága miatt bizonyos pozícióknál több nukleotidot vezettünk be. Ennélfogva a 7-9. számú szekvenciák esetén mintegy 512-szeres komplexitás keletkezik. Az említett szekvenciákat mint oligonukleotidokat szintetizáltuk.
A „PACE-PCR-hez kiegészítésül az alábbi nukleotidokat szintetizáltuk:
A-B-T18 (10. számú szekvencia):
5' -CGAGGGGGATGGTCGACGGAAGCGACCTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3'
A (az A-B-T18-ból (11. számú szekvencia):
5' -CGAGGGGGATGGTCGACGG-3' ;
B (az A-B-T18-ból) 12. számú szekvencia):
5'-GATGGTCGACGGAAGCGACC-3' .
A szintetizálásokat az Applied Biosystems 360A típusú DNS szekvenátórával végeztük. Az oligonukleotidokat a védőcsoportok eltávolítása után gé1e1ektroforézisse1 - akri1amid/karbamid gélben - tisztítottuk.
c) DNS-templátok előállítása a PCR-hez.
Az a) pont szerint foszforamidonna1 stimulált FBHE sejtekből származó RNS készítményből 5 pg össz-RNS-t vagy pg po1ί(A)+RNS-t 1 pg A-B-T18 oligonukleotiddal (10. számú szekvencia) és reverz transzkriptáz enzim segítségével egyszálú. cDNS-sé (l’cDNS) alakítottunk. Ennél az eljárásnál a Gibco-BRL (Eggenstein, Németország) anyagai28 ”*ϊ ϊ*·· .“· ·» ·· • · · · · * · . *. ···. -·· ··· ·..
val dolgoztunk, és a cég előírásai szerint a „Superscript
Preamplification System-et (katalógus szám: 8089SA) használtuk. Miután a reakció végbement, a szintézis termékeit a BIO 1.0 1 cég (La Jolla, CA. , USA) „Geneclean II
Kit készítményével tisztítottuk meg a kisebb molekuláktól és a felesleges ο 1igonukieotidoktó1.
d) cDNS rész-szekvencia PCR sokszorozása és klónozása.
A polimeráz láncreakciót ismert technológia szerint végeztük [ lásd: J.Sambrook et al., „Holecular Cloning 2.
kiadás (1989), CSH Press, 14.1 ff oldal] . A Perkin-Elmer cég „DNA Thermal Cycler készülékét használtuk. Ezesetben az M.A.Frohman és munkatársai [ Proc. Natl. Acad. Sci.,
5, 8998-9002 (1988)] szerinti „beskatulyázott primer („ ve rschachte11en Primer) elvet alkalmaztuk, J.D. Fritz és munkatársai [ Nucl . Acids Rés., 1 9, 3747 (1 991 )] módosításával .
A c) pontban kapott l°cDNS-t a 8. számú szekvencia szerinti oligonukleotid és az A ο 1igonukleotid (az A-B-T18-ból) 20-20 pM-jával sokszoroztuk. A feltételek a következők voltak: 35 ciklus, ciklusonként 1' 95°C; 2'
55°C; 3' 72°C.
A PCR termékeket elektroforézissel, 1,2%-os LMP-agaróz/TBE gélben választottuk el.
(LMP = low me'lting point; TBE puffer: 0 , 0 82 M trisz,
0,082 M bórsav, 0,002 M EDTA, pH 8).
A gélből a teljes nyomsávot mintegy 10 gélszeletke alakjában kivágtuk, és növekvő móltömegű külön frakciókként megolvasztottuk.
Ezen frakciók alikvot részeit külön-külön egy második PCR-ben sokszoroztuk a 9. számú oligonukleotid és a B oligonukleotid (az AB-T18-ból) 20-20 pmóljának felhasználásával. Ennél a reakciónál az agarózos rész nem haladta meg egyszer sem a PCR elegy térfogatának 1/10-ét. Re akeiófe11éte1ek: 35 ciklus; ciklusonként 1' 95°C; 2'
0°C; 3' 72°C. .
E frakciók sokszorozott termékeinek gélelektroforetikus elválasztása világosan mutatta, hogy az első PCR termékspektrumának komplexitása csökkent, a második PCR után pedig egy körülbelül 1000 bp hossúságú határozott sávot lehetett felismerni.
Az ilyenképpen szelektált PCR-terméket standard módszerekkel eluáltuk. Az 1000 bp méretű sáv azonosságának ellenőrzésére, azaz hogy ez egy bovin endotelin konvertáló enzim cDNS fragmentuma, egy további, harmadik PCR sokszorozást végeztünk a 7. számú oligonukleotid és a B oligonukleotid (az A-B-T18-ból) használatával. Ez a PCR termék egy körülbelül 950 bp méretű sávot mutatott.
A második PCR reakcióban kapott 1000 bp méretű sávot a pCRII vektorba (TA Cloning Kit; Invitrogen Corp., San Diago; katalógus szám: K2 0 0 0-0 1 ) szubki ónoztuk, a plazmidot E.coli DH5 alfa sejtekben elszaporitottuk. Az egyik klón szekvencia analízise egy 189 aminosavból álló nyílt • · leolvasási keretet mutatott ki (13. számú és 14. számú szekvenciák) . Ugyanebben a leolvasási keretben találhatók az 1. számú, 2. számú és a 4. számú peptid szekvenciák is, és ezek egyértelműen meghatározzák a cDNS fragmentum azonos ságát.
e) Bovin endotelin konvertáló enzim cDNS klónozása.
Az la) példában ismertetett technika szerint cDNS tárat létesítettünk az első szál szintézisének lépésében használt statisztikus primer keverékkel. A primereket az alábbi szekvenciaként szintetizáltuk:
5' -GAGAGAGAGTCGACGGTACCN7; 15. számú szekvencia.
A cDNS szintézis fent ismertetett technikájától eltérően a kétszálú cDNS-t egy 2 ml-es S-1000 Sephacryl oszlopon („Superfine fokozat; Pharmacia, Freibrug; katalógus szám: 17-0476-01) frakeioná1tuk. A legalább 1 kb méretű cDNS fragmentumokat tartalmazó frakciókat alkoholos kicsapással, ismert módon koncentráltuk, és a továbbiakban a cDNS-Synthese Kit használati utasításának megfelelően kezeltük olyan módon, hogy a cDNS készítményt
Xhol helyett Sáli restrikciós endonukleázzal hasítottuk, és lambda vektorba integráltuk.
A cDNS bankból 2x10° kiónt egy olyan DNS szondával hibridizá1 tünk, amelyet a részleges marha cDNS-ből (13.
számú szekvencia) - 136 - 156 pozíciók, illetve 391 - 412 pozíciók közötti szakasz - származó alábbi nukleotidokka 1
5' -CGGCCCTGGTGGAAGAACTCG-3' (16. számú szekvencia) és
5' -TGCGGACGGAACACCAGACCT-3' (17. számú szekvencia) állítottunk elő. A DNS szondát polimeráz láncreakcióban (PCR) digoxigenin-dUTP jelenlétében - mint az lf) példában leírtuk - jeleztük. A hibridizálást szigorúan meghatározott feltételek mellett végeztük (lásd az lf) példát), amikoris a hibridizáció megtörténte után az utolsó mosási lépésben 60°C hőmérsékletet és 0,1 x SSC-t használtunk, majd ezután a megkötött DNS szonda immunológiai kimutatása következett. A kiválasztott kiónok szekvenálása a marha C60 cDNS szekvenciát (18. számú szekvencia) eredményezte, amely egy teljes leolvasási keretet (19.
számú szekvencia) tartalmazott:
Ezután a bank 2 χ 106 kiónját egy olyan DNS szondával hibridizá1tuk, amelyet a C60 cDNS kiónból (18. számú szekvencia) - 500 - 522, illetve 14 - 35 pozíciók közötti szakaszok - származó alábbi ο 1igonukieotidokka1
5' -GCCAGCGCCGTCTCAAAGTCCAG-3' (20. számú szekvencia) és
5' -TGGGGGACCTTCAGCAACCTCT-3' (21. számú szekvencia) állítottunk elő, mint fent leírtuk. A hibridizálást azonos feltételek mellett végeztük. A kiválasztott kiónok szekvenálása egy 708 aminosavból álló teljes leolvasási kerettel (23. számú szekvenica) rendelkező marha cDNS szekvenciát (22. számú szekvencia) eredményezett.
A lambda gtll-ben fenntartott, kereskedelemben kapható marha tüdő cDNS bankból (Clontech Laboratories Inc.,
030 Fábián Way, Palo Alto, CA. , USA; katalógus szám: BllOOőb) 5xl08 plakk képző egységet 10% ρο 1ieti1éng1iko1 • · • · · · • · · · • · • · · · · · • · · • ··
6000 és 1 M nátrium-klorid elegyével való kicsapással koncentráltunk, majd 100 μΐ bideszti11á1t vízben reszuszpendáltuk, és 5 percig 70°C-on tartottuk. Ebből a lizátumból 5 μΙ-t 50 μΐ standard PCR reakcióban (8d) példa) sokszoroztunk a gtll fwd primer és az
5' -GGTGCTTGATGATGGCTTGGTTGT-3' (26. számú szekvencia) primer hasnálatával. A gtll fwd primer a β-galaktozidáz gén (génbank: ECLACZ) 2979-3003 pozíciói közötti szakasznak felel meg, és a lambda gtll klónozó vektorban közvetlenül azon EcoRI integrációs hely előtt helyezkedik el, amelyet a bank létesítésénél használtak [ R.A.Young. R.W. Davis, Genetic Engineering, szerk.: J.Setlow és A.Hollander; Plenum Press, N.Y., 29-41 old.] . A 26. számú szekvencia által leírt primer a 22. számú szekvencia
280-303 pozíciói közötti szakasznak felel meg.
A sokszorozást 40 ciklusban végeztük. A PCR-terméket egy 3%-os „Low Melting Point Nu-Sieve GTG-agaróz gélben (FMC Bio-Products, 191 Thomaston Street, Rockland, Me
04841, USA; katalógus szám: 50082) választottuk el, és
400-600 bázispár méretű tartományban az egyes gélszegmentumok kivágása révén frakeioná1tuk. A gé1szeleteket - mint ahogyan a 8d) példában leírtuk - megolvasztottuk, és ebből 1,5 μΙ-t 50 μΐ további PCR reakcióban sokszoroztunk a gtll fwd és az 5' -AGATGGAGCTGGTCACCGAGATGC-3' (27. számú szekvencia) primerek használatával. A 27. számú szekvencia által leírt primer a 22. számú szekvencia
127-150 közötti szakasznak felel meg.
···· ···· • · • · · ·
A kapott PCR fragmentumokat a pUC18 ρ1azmidvektorba [ D . Yani s eh-Pe r ron , J.Vieira, J.Messing, Gene, 3 3 , 103-119 (1985)] szubkiónoztuk, majd szekventá1tuk (28. számú s ze kvencia) .
Ez a szekvencia a 175-324 nukieotidőkka1 átfedi a
22. számú szekvencia 1-150 pozíciói közötti szakaszt, és ezt 5' irányban 174 nukleotiddal meghosszabbítja. A kapott teljes szekvencia (29. számú szekvencia) 754 aminosavnak (30. számú szekvencia) megfelelő nyílt leolvasási keretet határoz meg.
f) Humán endotelin konvertáló enzimet meghatározó cDNS klónozása.
Minthogy az endotelin-1 jelenlétét kimutatták humán placentában, feltételeztük, hogy az endotelin konvertáló enzim a placentában is kifejeződik. Ezért jelzett marha cDNS szonda használatával szűrtünk egy humán kgt-ll placenta cDNS bankot. A digoxigenin-dUTP jelzett marha cDNS szonda előállításához a részleges marha cDNS szekvencia (13. számú szekvencia) 1 ng-ját (1 ng/ml) „templát gyanánt használtuk egy PCR reakcióban [lásd: J.Sambrook et al . , „Molecular Cloning 2. kiadás (1 98 9) 14.1 ff old.,
CSH-Press] . A „szensz oligonukleotid (16. számú szekvencia) a 13. számú szekvenciában a 136-156 pozíciók közötti szakaszt ölelte fel, az „antíszensz oligonukleotid (17.
számú szekvencia) a 13. számú szekvenciában a 392-412 pozíciók közötti szakaszt ölelte fel. Perkin-Elmer féle „DNA Thermal Cycler készülékben 35 ciklust futtattunk.
• · ·· ·· ·· • · · · · • ··· «·· ···
Ciklusonként! paraméterek: 2 perc 9 4 ° C ; 2 perc 6 0 ° C ; 3 perc 72°C. A jelzett 276 bp méretű marha cDNS szondát ezután agaróz gélben tisztítottuk, és főzéssel denaturáltuk. A humán placenta Xgt-ll cDNS bankból (Clontech, HL
1008b) körülbelül 650 000 kiónt szűrtünk meg ezzel a szondával, kevéssé szigorú feltételek mellett. A szűrőlevonatok hibridizá1ását ezzel a szondával egy éjszakán át végeztük, 60°C hőmérsékleten, a következő elegyben: 5 x SSC, 2% blokkoló reagens (Boehringer-Mannheim, No. 1096176), 0,1% N-lauril-szarkozin, 0,02% SDS. A szűrőket ezután 2x5 percig 60°C-on 0,1% SDS tartalmú 2 x SSC-ben, majd 20 percig 60°C-on 0,1% SDS tartalmú 0,5 x SSC-ben mostuk. A megkötött DIG-szondák azonosítása végett a szűrő további kifejlesztését a Boehringer-Mannheim által leírt technológiának megfelelően végeztük (DIG = Nukleinsáuredetektionskit, No. 1175041.
A 24. számú szekvencia szerinti cDNS szekvenciával kiónokat izoláltunk. A 24. számú szekvencia szerinti cDNS szekvencia 1-2109 pozíciói közötti szakasz kódolja a 25.
s z amu s zekvencia aminosavszekvenciát
Az aminosavszekvencia megfelel a primer endotelin konvertáló enzim szekvencia nagy részének, mivel az izolált endotelin konvertáló enzim tripszines peptid szekvenálásából származó 1. - 6. szekvenciák szerinti peptidek e szekvenciában újból összetalálkoznak. Az általánosan elfogadott HEXXH .metalloproteináz szekvencia is, mint HELTH szekvencia azonosítható a 25. számú aminosavszekvencia
540-544 pozícióiban.
Placenta poliA(+) RNS-ből és az
5' -GAGAGAGAGAGAGAGAGAGAACTAGTCTCGAGCCAAGCAGGCCACCAGTCCTG-3' oligonukleotidból (31. számú szekvencia, mint első szál cDNS szintézis-primerbő1 cDNS tárat állítottunk elő a 8e) példában leírt módon. A 32-53 mukleotidok a 24. számú szekvencia 32-53 pozíciói közötti szakasznak felelnek meg. A cDNS készítményt - mint a 8a) példában leírtuk az Uni-ZAP XR lambda vektorba intergáltuk. A kapott 4xl05 független kiónt sokszoroztuk, és 5x10 plakk képző egységgel - mint a 8e) példában leírtuk - 100 μΐ reakcióelegyben PCR reakciót végeztünk, amelyben primerekként a
31. számú szekvenciát és a C szekvenciát használtuk. A C primer a lambda vektor Bluescript SK(-) részében (881-904 pozíciók; Sequenzfile ARBLSKM) helyezkedik el.
A PCR reakciót 40 ciklusban, 65°C hibridizációs hőmérséklet mellett végeztük. A reakciótermék 1 μΐ-ét 50 μΐ friss PCR reakcióelegyhez adtuk és 40 ciklusban, 60°C hibridizációs hőmérséklet mellett végeztük a sokszorozást. Primerekként a D oligonukleotidot és az
5'-CCTGCCGCCAGAAGTACCACCAACA-3' (32. számú szekvencia) oligonukleotidot használtuk.
A D primer a lambda Uni-ZAP XR vektor Bluescript
SK(-) részében (857-880 pozíciók; Sequencfile Genbank:
ARBLSKM) helyezkedik el, a 32. számú szekvencia szerinti primer a 24. számú szekvenciában a 11-35 pozíciók közötti • · ·
• ί szakasznak felel meg. A reákeióterméket, mint fent leírtuk, a pUC18 vektorba szubkiónoztuk, és a kiválasztott kiónokat szekvenáltuk.
A kapott szekvencia a humán ECE cDNS egy újabb 5'-részletének (33. számú szekvencia) felelt meg, amelynek 3'-terminális szakasza (188-222 pozíciók közötti rész) a 24. számú szekvencia 1-35 pozíciói közti szakaszával azonos. A szekvenciát ez a szakasz 187 nukleotiddal 5' irányban hosszabbítja meg, és így a teljes humán ECE szekvenciát (35. számú szekvencia) adja meg, amely 753 aminosavból álló (36. számú szekvencia) nyílt leolvasási keretet határoz meg.
. példa:
Rekombináns ECE előállítása emlős sejtekben.
1. Expressziós vektor készítése membránhoz kötött humán ECE részére.
A teljes humán ECE expressziója céljából a 35. számú szekvencia szerinti cDNS 29-2720 nukleotidjait, megfelelő adapterek segítségével, bevezettük a pcDNAneo expressziós vektor (Invitrogen, 3985 B Sorrento Valley Blvd., San Diego, CA., 92121, USA; termékszám: V790-20) KpnI és Xbal restrikciós helye közé. Az ECE szekvencia magával vitte saját transzlációs start és stop szekvenciáit, valamint egy általánosan elfogadott Kozák szekvenciát [M.Kozák, J.
Cell Bioi., 108, 229-241 (1989)] . Az ECE mRNS transzkripciója ebben a vektorban az erős citomagelövirus promoter • · · · ···· ··*· szabályozása alatt áll. A transzfektált sejtek szelekcióját a plazmádban lévő neomicin rezisztencia gén segítségével végeztük. Ez a gén csak a G418-rezisztens telepek növekedését engedi meg.
2. Expressziós rendszer előállítása szekretált humán
ECE részére.
a) A klónozást a kereskedelemben kapható pcDNAneo eukarióta expressziós vektorban (Invitrogen; termékszám: V79Q-20) végeztük. Ennek érdekében a vektort először
EcoRI és EcoRV restrikciós enzimekkel hasítottuk.
b) Ezután a humán ECE cDNS-ből (35. számú szekvencia) a 241-2396 pozíciókat felölelő nukleinsav fragmentumot polimeráz láncreakcióval - a megfelelő oligonukleotid primerek használatával - nyertük. A választott 5' primer szekvencia a nuk1einsavszekvenciában (35. számú szekvencia) a 241 és 245 pozíciók közötti 5'ACGCG-3' bázis-sor megváltozását vonja maga után. Ennek a lépésnek a révén, a 246. pozíció bevonásával, felismerő szekvencia képződött a Miül restrikciós endonukleáz számára. A kapott ECE fragmentumot egy következő lépésben Mlul-gyel hasitj uk.
c) További fragmentumként két szintetikus oligonukleotidból (szá1/e11enszá1) előállítottuk a humán szöveti plazminogén aktivátor (t-PA) kódoló szekvenciáját a publikált szekvencia [ C.Collen, Natúré, 3 0 1 , 2 1 4-22 1 (1983)] szerinti 74. és 176. nukleotid között. A megadott szekvencián felül a szintetikus oligonukleotidokat olyan • · · · · • · · · · · ··· ·«« « Λ .,* adapterekkel láttuk el, amelyek egy 5' EcoRI és egy 3' Miül túlnyúló véget hoztak létre.
A b) és c) pontok szerint előállított fragmentumok ligálása a bennük lévő azonos Miül restrikciós helyeknél a humán t-PA gén szignálpeptid leolvasási keret és a humán ECE gén extracelluláris dómén fúzióját eredményezte. Ennek a fúziós terméknek az a) pont szerinti EcoRI-gyel és EcoRV-vel hasított pcDNAneo vektorba való ligálása szekretált humán ECE-hez alkalmas expressziós rendszert eredménye z.
3. Expresszió emlős sejtekben.
Az expressziós vektorok DNS-ét lipofektamin (GIBCO; Life Technologies GmbH; Diese1strasse 5, 76334
Eggenstein, NSZK; termékszám: 530-8324SA) segítségével emlős sejtekbe transzfektá1tuk. A következő sejteket használtuk: CH0-K1 (ATCC CCL 61), BHK-21 (ATCC CCL 10),
293 (ATCC CRL 1573) és C1271 (ATCC CRL 1616).
Egy 6 tartályos tenyésztő lemezre tartályonként 3 ml táptalajban egyenként 2xl05 sejtet oltottunk le. A következő napon végeztük a transzfektálást. Ekkor a sejteket egyszer mostuk PBS-ben. A 1ipofektaminna1 való transzfekeiót a gyártó cég (GIBCO) előírásai szerint hajtottuk végre [ Focus, 3_, (15. szám) 73-78 (1 993)] . Minden tartályhoz 1 pg DNS-t és 6 μΐ 1 ipofektamint adtunk, amelyeket összesen 1000 μΐ szérum-mentes sejt-tenyésztő táptalajban vettünk fel. Hat órás 37°C-on való inkubálás után a sejteket egyszer mostuk PBS-ben, majd egy éjszakán • · *· *♦ **! ··♦ ··♦ . · · · « ·»· ···♦ át normál táptalajban inkubáltuk. A következő napon egy tartály sejtjeit tripszinnel való kezelés után 1, 5 vagy
Petri csészére (átmérő: 10 cm) osztottuk el. Egy nap múlva a transzfektált sejteket G418-cal (GIBCO; katalógus szám: 066-01811Y; az áru neve: geneticin) való kezeléssel szelektáltuk, azaz a táptalajt egy olyan táptalajra cseréltük, amely 1,2 mg/ml G418-at tartalmazott. A Petri csészében 7-10 nap múlva G418 rezisztens telepek növekedését észleltük. Ezeket „cloning cylinder módszerrel izoláltuk [ DNA’-cloning, II. kötet, 220. old. szerk. :
D.M.Glover, IRL Press (1985)] . Az izolált telepeket körülbelül 1,5 ml G418 tartalmú táptalajban egy 24-tartályos lemez egy-egy tartályához adtuk. Az összefolyás elérése után a sejteket - tripszines kezelés után - nagyobb tenyésztő edényekbe vittük át.
a) Membránzhoz kötött ECE.
Azokat az ECE sejteket, amelyek a membránhoz kötött
ECE-t fejezik ki, sejt-fe1tárás és frakcionálás után ECE jelenlétére vizsgáltuk az 1. és 2. példában leírt módon.
(Foszforamidőn stimulációt nem végeztünk.) A vizsgált telepek specifikus aktivitása membrán alapra vonatkoztatva elérte a 1550 μϋ/mg protein értéket. A 38-as telep membránjait tovább dolgoztuk fel, és a következő eredményt kaptuk:
• « · · * .·· • \ ·’\ ··; ··; jr· ·· ·«» .··..♦
Tisztítási lépés | Specifikus aktivitás (μϋ/mg protein) |
Membránok | 1550 |
Membrán-oldat | 2010 |
Mono Q kromatográfia | 12 00 0 |
b) Szekretált ECE.
Azokat a sejteket, amelyek az ECE-t membrán-horgony nélkül fejezik ki, és a sejt-tényésztő táptalajba választják ki, rekombináns ECE jelenlétére teszteltük úgy, hogy az összefolyt sejtek tenyészetének felülúszóját vizsgáltuk. A tenyészet-fe1ü1úsζót 2 napi tenyésztés után vettük le, és 1000 g mellett való centrifugálással távolítottuk el a sejttörmelékeket. A felülúszó 6 ml-ét ezután Centricon 10 000 készülékben (Amicon, W.R.Grace +
CO . , Danver, MA, 01923 USA; termékszám: 420 6) és 3220 g mellett való centrifugálással (körülbelül 30 perc) koncentráltuk. Az alacsony mo1eku1atömegű anyagokkal átfutó folyadékot („Centricon-e1uat) félretettük. A Centricon-t egyszer mostuk 1 ml 10 mM trisz és 150 mM nátrium-klorid tartalmú PBS-sel (pH 7,5). A koncentrátumot 300 μΐ „Centricon-Eluat-bán vettük fel.
A koncentrátum 18 μΙ-ét a 3. példában leirt ECEtesztben analizáltuk.
A szekretált ECE térfogat-aktivitása egyes vizsgált rekombináns sejt-telep esetén elérte a 10 pU/ml táptalaj értéket.
SZEKVENCIÁK JEGYZÉKE
AZ 1. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 23 aminosav (B) Típus: aminosav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: peptid (iii) FELTÉTELEZETT-E: nem (v) A FRAGMENTUM TÍPUSA: belső (vi) EREDETI SZÁRMAZÁS:
(A) SZERVEZET: Bős taurus (F) SZÖVETTÍPUS: endoteliális (H) SEJTVONAL: fetális marhaszív endoteliális sejtvonal (xi) Az 1. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
Xaa Xaa Pro Asn Ala Leu Asn Phe Gly Gly Ile Gly Val Val Val Gly 15 10 15
His Glu Leu Thr His Ala Phe 20
A 2. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 10 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (C) SZÁLTÍPUS: agyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) A FRAGMENTUM TÍPUSA: belső • · · · · · • · · · ···· ·· • · · · • · · · · · · » · · · · • · · · · · · (vi) EREDETI SZÁRMAZÁS:
(A) SZERVEZET: Bős taurus (H) SEJTVONAL: fetális marhaszív endoteliális sejtvonal (xi) A 2. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
Xaa Tyr Xaa Lys Xaa Gly Asn Leu Arg Pro 15 10
A 3. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) | HOSSZ: 10 | aminosav |
(B) | TÍPUS: aminosav | |
(C) | SZÁLTÍPUS: | agyszálú |
(D) | TOPOLÓGIA: | lineáris |
MOLEKULA TÍPUSA: | peptid |
(v) A FRAGMENTUM TÍPUSA: belső (vi) EREDETI SZÁRMAZÁS:
(A) SZERVEZET: Bős taurus (H) SEJTVONAL: fetális marhaszív endoteliális sejtvonal (ix) JELLEGZETESSÉGEK:
(A) NÉV/KULCS: módosított hely (B) HELYZET: 8 (D) Egyéb adatok: /megjegyzés3 Xaa = Leu vagy Ile (ix) JELLEGZETESSÉGEK:
(A) NÉV/KULCS: módosított hely (B) HELYZET: 7 (D) Egyéb adatok: /megjegyzés3 Xaa = Glu vagy Ile (xi) A 3.
SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
Xaa Ile Alá Xaa Glu Thr Xaa Xaa Glu 1 5
Ile 1 0 • · · · ····
A 4. SZÁMÓ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 13 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) A FRAGMENTUM TÍPUSA: belső (vi) EREDETI SZÁRMAZÁS:
(A) SZERVEZET: Bős taurus (H) SEJTVONAL: fetális marhaszív (xi) A 4. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
Xaa Pro Glu Phe Leu Leu Glu Gly 1 5 endoteliális sejtvonal
Leu Ile Thr Asp Pro 10
Az 5. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 11 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) A FRAGMENTUM TÍPUSA: belső (vi) EREDETI SZÁRMAZÁS:
(A) SZERVEZET: Bős taurus (H) SEJTVONAL: fetális marhaszív endoteliális sejtvonal (xi) Az 5. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
Xaa Gin Ala Glu Asn Val Ile Gin Val Xaa Gin 15 10
A 6. SZÁMÓ SZEKVENCIA ADATAI:
······ ·· « • · · · · • · · · · · (i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 16 aminosavn (B) TÍPUS: aminosav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) A FRAGMENTUM TÍPUSA: belső (vi) EREDETI SZÁRMAZÁS:
(A) | SZERVEZET: | Bős taurus | ||||
(H) | SEJTVONAL: | fetális marhaszív | endoteliális sej | tvonal | ||
ix) | JELLEGZETESSÉGEK: | |||||
(A) | NÉV/KULCS: | módosított hely | ||||
(B) | HELYZET: 7 | |||||
(D) | Egyéb adatok: /megjegyzés= | Xaa | = Alá vagy | Thr | ||
(xi) | A 6. | SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA: | ||||
Val | Glu Ile Val Phe Pro Xaa Gly Ile Leu | Gin | Alá Pro Phe | Tyr Thr | ||
1 | 5 | 10 | 15 |
A 7. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 20 Bázispár (B) TÍPUS: Nukleinsav (C) SZÁLTÍPUS: Egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: DNS (genomiális) (xi) A 7. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
GGSCAYGARY TNACNCAYGC • ·
A 8. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 20 Bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: DNS (genomiális) (xi) A 8. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
GARATYGTST TYCCYGCYGG 20
A 9. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 23 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: DNS (genomiális) (xi) A 9. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
ATYCTSCAGG CYCCYTTYTA YAC 23
A 10. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 45 Bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: DNS (genomiális) (xi) A 10. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA 10:
CGAGGGGGAT GGTCGACGGA AGCGACCTTT TTTTTTTTTT TTTTT • · · · · · · • ··· ··» «····· • · · * · · ·· *·» ·· · ,.
A 11. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 19 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: DNS (genomiális) (xi) A 11. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
CGAGGGGGAT GGTCGACGG 1 9
A 12. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 20 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: DNS (genomiális) (xi) A 12. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
GATGGTCGAC GGAAGCGACC 20
A 13. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 570 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: cDNS mRNS-hez (vi) EREDETI SZÁRMAZÁS:
(A) SZERVEZET: Bős taurus (H) SEJTVONAL: fetális marhasziv endoteliális sejtvonal • · (ix) JELLEGZETESSÉGEK:
(A) NÉV/KULCS: CDS (B) HELYZET: 1..567 (xi) A 13. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
ATC CTG CAG GCG | CCA TTC TAC | ACC CGC TCT TCA CCC AAT GCC TTA AAC | 48 | |||||||||||||
lle 1 | Leu | Gin | Alá | Pro Phe 5 | Tyr | Thr Arg | Ser 10 | Ser | Pro Asn | Alá | Leu 15 | Asn | ||||
TTC | GGC | GGC | ATC | GGC | GTC | GTC | GTG | GGC | CAC | GAG | CTG | ACT | CAT | GCT | TTT | 96 |
Phe | Gly Gly | He | Gly | Val | Val | Val | Gly | His | Glu | Leu | Thr | His | Alá | Phe | ||
20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
GAT | GAT | CAA | GGC | CGA | GAG | TAC | GAC | AAG | GAT | GGG | AAC | CTC | CGG | CCC | TGG | 144 |
Asp Asp | Gin | Gly Arg | Glu | Tyr Asp | Lys | Asp | Gly | Asn | Leu | Arg | Pro | Trp | ||||
35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
TGG | AAG | AAC | TCG | TCC | GTG | GAG | GCG | TTC | AAG | CAG | CAG | ACC | GCG | TGC | ATG | 192 |
Trp | Lys | Asn | Ser | Ser | Val | Glu | Alá | Phe | Lys | Gin | Gin | Thr | Alá | Cys | Met | |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
GTG | GAG | CAG | TAC | GGC | AAC | TAT | AGC | GTG | AAC | GGG | GAG | CCG | GTG | AAC | GGC | 240 |
Val | Glu | Gin | Tyr | Gly | Asn | Tyr | Ser | Val | Asn | Gly | Glu | Pro | Val | Asn | Gly | |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
CGG | CAC | ACC | CTC | GGC | GAA | AAC | ATC | GCC | GAC | AAC | GGG | GGC | CTC | AAG | GCG | 288 |
Arg | His | Thr | Leu | Gly | Glu | Asn | He | Alá | Asp | Asn | Gly Gly | Leu | Lys | Alá | ||
85 | 90 | 95 | ||||||||||||||
GCC | TAT | CGG | GCC | TAC | CAG | AAC | TGG | GTC | AAG | AAG | AAT | GGG | GCT | GAG | CAG | 336 |
Alá | Tyr Arg | Alá | Tyr | Gin | Asn | Trp | Val | Lys | Lys | Asn | Gly | Alá | Glu | Gin | ||
100 | ,105 | 110 | ||||||||||||||
ACA | CTG | CCC | ACC | CTG | GGT | CTC | ACC | AAC | AAC | CAG | CTC | TTC | TTC | CTG | AGT | 384 |
Thr | Leu | Pro | Thr | Leu | Gly | Leu | Thr | Asn | Asn | Gin | Leu | Phe | Phe | Leu | Ser | |
115 | 120 | 125 | ||||||||||||||
TTT | GCA | CAG | GTC | TGG | TGT | TCC | GTC | CGC | ACC | CCC | GAG | AGT | TCG | CAC | GAA | 432 |
Phe | Alá | Gin | Val | Trp | Cys | Ser | Val | Arg | Thr | Pro | Glu | Ser | Ser | His | Glu | |
130 | 135 | 140 | ||||||||||||||
GGT | CTC | ATC | ACC | GAT | CCC | CAC | AGC | CCC | TCC | CGC | TTC | CGG | GTC | ATC | GGC | 480 |
Gly | Leu | He | Thr | Asp | Pro | His | Ser | Pro | Ser | Arg | Phe | Arg | Val | lle | Gly | |
145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||||
TCC | ATC | TCC | AAC | TCC | AAG | GAG | TTC | TCG | GAA | CAC | TTC | CAC | TGC | CCG | CCC | 528 |
Ser | lle | Ser | Asn | Ser | Lys | Glu | Phe | Ser | Glu | His | Phe | His | Cys | Pro | Pro | |
165 | 170 | 175 | ||||||||||||||
GGC | TCA | CCC | ATG | AAC | CCG | CAT | CAC | AAG | TGT | GAA | GTC | TGG | TGA | 570 | ||
Gly | Ser | Pro | Met | Asn | Pro | His | His | Lys | Cys | Glu | Val | Trp |
180 185
A 14. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) | HOSSZ: | 189 | aminosav |
(B) | TÍPUS: | aminosav | |
(D) | TOPOLÓGIA: | lineáris |
(ii) A MOLEKULA TÍPUSA: protein (xi) A 14. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
Ile 1 | Leu Gin | Alá Pro 5 | Phe Tyr Thr Arg Ser Ser Pro Asn Alá Leu Asn | |
10 | 15 | |||
Phe | Gly Gly | Ile Gly 20 | Val Val Val Gly His 25 | Glu Leu Thr His Alá Phe 30 |
Asp Asp Gin 35 | Gly Arg | Glu Tyr Asp Lys Asp 40 | Gly Asn Leu Arg Pro Trp 45 | |
Trp | Lys Asn 50 | Ser Ser | Val Glu Alá Phe Lys 55 | Gin Gin Thr Alá Cys Met 60 |
Val 65 | Glu Gin | Tyr Gly | Asn Tyr Ser Val Asn 70 | Gly Glu Pro Val Asn Gly 75 80 |
Arg | His Thr | Leu Gly 85 | Glu Asn Ile Alá Asp 90 | Asn Gly Gly Leu Lys Alá 95 |
Alá | Tyr Arg | Alá Tyr 100 | Gin Asn Trp Val Lys 105 | Lys Asn Gly Alá Glu Gin 110 |
Thr | Leu Pro 115 | Thr Leu | Gly Leu Thr Asn Asn 120 | Gin Leu Phe Phe Leu Ser 125 |
Phe | Alá Gin 130 | Val Trp | Cys Ser Val Arg Thr 135 | Pro Glu Ser Ser His Glu 140 |
Gly 145 | Leu Ile | Thr Asp | Pro His Ser Pro Ser 150 | Arg Phe Arg Val Ile Gly 155 160 |
Ser | Ile Ser | Asn Ser 165 | Lys Glu Phe Ser Glu 170 | His Phe His Cys Pro Pro 175 |
Gly Ser Pro Met Asn Pro His His Lys Cys Glu Val Trp 180 185 • · · · • · · · · · • · · « · · ··
A 15. SZÁMÓ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 27 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: DNS (genomiális) (iii) FELTÉTELEZETT-E: igen (xi) A 15. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
GAGAGAGAGT CGACGGTACC NNNNNNN 27
A 16. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 21 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: DNS (genomiális) (xi) A 16. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
CGGCCCTGGT GGAAGAACTC G 21
A 17. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 21 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: DNS (genomiális) (iii) ANTISZENSZ-E: igen (xi) A 17. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
TGCGGACGGA ACACCAGACC T 21
A 18. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) | HOSSZ: | 1703 | bázispár |
(B) | TÍPUS: | nukleinsav | |
(C) | SZÁLTÍPUS: | egyszálú | |
(D) | TOPOLÓGIA: | lineáris |
(ii) A MOLEKULA TÍPUSA: cDNS mRNS-hez (vi) EREDETI SZÁRMAZÁS:
(A) SZERVEZET: Bős taurus (H) SEJTVONAL: fetális marhaszív endoteliális sejtvonal (ix) JELLEGZETESSÉGEK:
(A) NÉV/KULCS: CDS (B) HELYZET: 2..1703 (xi) A 18. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
T GGC CAC TCG CGC TGG GGG ACC TTC AGC AAC CTC TGG GAA CAC AAC 46
Gly His Ser Arg Trp Gly Thr Phe Ser Asn Leu Trp Glu His Asn
10 15
CAA GCC ATC ATC AAG Gin Alá Ile Ile Lys | CAC CTC | CTT GAA | AAC TCC ACG GCC AGC GTG AGC Asn Ser Thr Alá Ser Val Ser | 94 | ||||
His | Leu | Leu | Glu | |||||
20 | 25 | 30 | ||||||
GAG GCA | GAG AGG AAG | GAC | CAG | GAG | TAC | TAC | CGA GCC TGC ATG AAC GAA | 142 |
Glu Alá | Glu Arg Lys 35 | Asp | Gin | Glu | Tyr 40 | Tyr | Arg Alá Cys Met Asn Glu 45 | |
ACC AGG | ATT GAG GAG | CTC | AAG | GCC | AAA | CCC | CTG ATG GAG CTC ATT GAG | 190 |
Thr Arg | Ile Glu Glu 50 | Leu | Lys | Alá 55 | Lys | Pro | Leu Met Glu Leu Ile Glu 60 | |
AAG CTC | GGC GGC TGG | AAC | ATC | ACG | GGG | CCC | TGG GAC AAG GAC AAC TTC | 238 |
Lys Leu 65 | Gly Gly Trp | Asn | Ile 70 | Thr | Gly | Pro | Trp Asp Lys Asp Asn Phe 75 |
• · ·· ····
CAG GAC Gin Asp 80 | ACC CTG | CAG Gin | GTG Val 85 | GTC ACA TCC | CAC TAC CAC ACC TCC CCC TTC | 286 | |||||||
Thr | Leu | Val | Thr | Ser | His | Tyr 90 | His Thr Ser | Pro | Phe 95 | ||||
TTC TCC | GTC | TAC | GTC | AGT | GCC | GAC | TCC | AAG | AAT | TCC AAC AGC | AAC | GTG | 334 |
Phe Ser | Val | Tyr | Val 100 | Ser | Alá | Asp | Ser | Lys 105 | Asn | Ser Asn Ser | Asn 110 | Val | |
ATC CAA | GTG | GAC | CAG | TCT | GGC | CTG | GGC | TTA | CCC | TCA AGA GAT | TAT | TAC | 382 |
Ile Gin | Val | Asp 115 | Gin | Ser | Gly | Leu | Gly 120 | Leu | Pro | Ser Arg Asp 125 | Tyr | Tyr | |
CTG AAC | AAA | ACC | GAG | AAT | GAG | AAG | GTG | CTG | ACG | GGA TAC CTG | AAC | TAC | 430 |
Leu Asn | Lys 130 | Thr | Glu | Asn | Glu | Lys 135 | Val | Leu | Thr | Gly Tyr Leu 140 | Asn | Tyr | |
ATG GTC | CAG | CTG | GGG | AAG | CTG | CTG | GGA | GGA | GGG | GCC GAG GAC | ACC | ATC | 478 |
Met Val 145 | Gin | Leu | Gly | Lys | Leu 150 | Leu | Gly | Gly | Gly | Alá Glu Asp 155 | Thr | Ile | |
CGG CCC | CAG | ATG | CAG | CAG | ATC | CTG | GAC | TTT | GAG | ACG GCG CTG | GCC | AAC | 526 |
Arg Pro 160 | Gin | Met | Gin | Gin 165 | Ile | Leu | Asp | Phe | Glu 170 | Thr Alá Leu | Alá | Asn 175 | |
ATC ACC | ATC | CCC | CAG | GAG | AAG | CGC | CGG | GAC | GAG | GAA CTC ATC | TAC | CAC | 574 |
Ile Thr | Ile | Pro | Gin 180 | Glu | Lys | Arg Arg Asp 185 | Glu | Glu Leu Ile | Tyr 190 | His | |||
AAA GTG | ACG | GCG | GCT | GAG | TTG | CAG | ACC | TTG | GCG | CCC GCC ATC | AAC | TGG | 622 |
Lys Val | Thr | Alá 195 | Alá | Glu | Leu | Gin | Thr 200 | Leu | Alá | Pro Alá Ile 205 | Asn | Trp | |
CTG CCC | TTC | CTC | AAC | ACC | ATC | TTC | TAC | CCC | GTG | GAG ATC AAT | GAA | TCA | 670 |
Leu Pro | Phe 210 | Leu | Asn | Thr | Ile | Phe 215 | Tyr | Pro | Val | Glu Ile Asn 220 | Glu | Ser | |
GAG CCT | ATT | GTC | ATC | TAC | GAC | AAA | GAA | TAC | CTG | AGC AAG GTC | TCC | ACC | 718 |
Glu Pro 225 | Ile | Val | Ile | Tyr | Asp 230 | Lys | Glu | Tyr | Leu | Ser Lys Val 235 | Ser | Thr | |
CTC ATC | AAC | AGC | ACA | GAC | AAA | TGC | CTG | CTG | AAC | AAC TAC ATG | ATC | TGG | 766 |
Leu Ile 240 | Asn | Ser | Thr | Asp 245 | Lys | Cys | Leu | Leu | Asn 250 | Asn Tyr Met | Ile | Trp 255 | |
AAC CTG | GTA | CGG | AAG | ACG | AGC | TCC | TTC | CTC | GAT | CAG CGC TTC | CAG | GAC | 814 |
Asn Leu | Val | Arg | Lys 260 | Thr | Ser | Ser | Phe | Leu 265 | Asp | Gin Arg Phe | Gin 270 | Asp | |
GCC GAC | GAG | AAG | TTC | ATG | GAA | GTC | ATG | TAT | GGG | ACC AAG AAG | ACG | TGT | 862 |
Alá Asp | Glu | Lys 275 | Phe | Met | Glu | Val | Met 280 | Tyr | Gly | Thr Lys Lys 285 | Thr | Cys | |
CTT CCC | CGC | TGG | AAG | TTT | TGT | GTG | AGT | GAT | ACA | GAG AAC ACC | TTG | GGC | 910 |
Leu Pro | Arg | Trp | Lys | Phe | Cys | Val | Ser | Asp | Thr | Glu Asn Thr | Leu | Gly |
290 295 300 β · ·
TTC GCC CTG GGC | CCC ATG | TTC GTC AAA GCG ACC TTC GCT GAG | GAC AGC Asp Ser | 958 | ||||||||||||
Phe Ala Leu 305 | Gly | Pro | Met | Phe Val 310 | Lys | Ala | Thr | Phe Ala 315 | Glu | |||||||
AAG | AAC | ATA | GCC | AGC | GAG | ATC | ATC | CTG | GAG | ATC | AAG | AAG | GCG | TTT | GAA | 1006 |
Lys | Asn | Ile | Ala | Ser | Glu | Ile | Ile | Leu | Glu | Ile | Lys | Lys | Ala | Phe | Glu | |
320 | 325 | 330 | 335 | |||||||||||||
GAG | AGC | CTG | AGC | ACC | CTG | AAG | TGG | ATG | GAT | GAA | GAT | ACT | CGG | AAA | TCG | 1054 |
Glu | Ser | Leu | Ser | Thr | Leu | Lys | Trp | Met | Asp | Glu | Asp | Thr | Arg | Lys | Ser | |
340 | 345 | 350 | ||||||||||||||
GCC | AAG | GAA | AAG | GCG | GAC | GCG | ATC | TAC | AAC | ATG | ATA | GGC | TAC | CCC | AAC | 1102 |
Ala | Lys | Glu | Lys | Ala | Asp | Ala | Ile | Tyr | Asn | Met | Ile | Gly Tyr | Pro | Asn | ||
355 | 360 | 365 | ||||||||||||||
TTT | ATC | ATG | GAC | CCC | AAG | GAG | CTG | GAC | AAA | GTG | TTC | AAT | GAC | TAC | ACC | 1150 |
Phe | Ile | Met | Asp | Pro | Lys | Glu | Leu | Asp | Lys | Val | Phe | Asn | Asp | Tyr | Thr | |
370 | 375 | 380 | ||||||||||||||
GCT | GTG | CCA | GAC | CTC | TAC | TTC | GAG | AAC | GCC | ATG | CGG | TTT | TTC | AAC | TTC | 1198 |
Ala | Val | Pro | Asp | Leu | Tyr | Phe | Glu | Asn | Ala | Met | Arg | Phe | Phe | Asn | Phe | |
385 | 390 | 395 | ||||||||||||||
TCC | TGG | AGG | GTC | ACT | GCC | GAC | CAG | CTC | CGG | AAA | GCG | CCC | AAC | AGA | GAT | 1246 |
Ser | Trp | Arg | Val | Thr | Ala | Asp | Gin | Leu | Arg | Lys | Ala | Pro | Asn | Arg Asp | ||
400 | 405 | 410 | 415 | |||||||||||||
CAG | TGG | AGC | ATG | ACC | CCG | CCC | ATG | GTG | AAC | GCC | TAC | TAC | TCG | CCC | ACC | 1294 |
Gin | Trp | Ser | Met | Thr | Pro | Pro | Met | Val | Asn | Ala | Tyr | Tyr | Ser | Pro | Thr | |
420 | 425 | 430 | ||||||||||||||
AAG | AAC | GAG | ATC | GTG | TTT | CCG | GCC | GGA | ATC | CTG | CAG | GCG | CCA | TTC | TAC | 1342 |
Lys | Asn | Glu | Ile | Val | Phe | Pro | Ala | Gly | Ile | Leu | Gin | Ala | Pro | Phe | Tyr | |
435 | 440 | 445 | ||||||||||||||
ACC | CGC | TCT | TCA | CCC | AAT | GCC | TTA | AAC | TTC | GGC | GGC | ATC | GGC | GTC | GTC | 1390 |
Thr | Arg | Ser | Ser | Pro | Asn | Ala | Leu | Asn | Phe | Gly Gly | Ile | Gly | Val | Val | ||
450 | 455 | 460 | ||||||||||||||
GTG | GGC | CAC | GAG | CTG | ACT | CAT | GCT | TTT | GAT | GAT | CAA | GGC | CGA | GAG | TAC | 1438 |
Val | Gly | His | Glu | Leu | Thr | His | Ala | Phe | Asp Asp | Gin | Gly Arg | Glu | Tyr | |||
465 | 470 | 475 | ||||||||||||||
GAC | AAG | GAT | GGG | AAC | CTC | CGG | CCC | TGG | TGG | AAG | AAC | TCG | TCC | GTG | GAG | 1486 |
Asp | Lys | Asp | Gly | Asn | Leu | Arg | Pro | Trp | Trp | Lys | Asn | Ser | Ser | Val | Glu | |
480 | 485 | 490 | 495 | |||||||||||||
GCG | TTC | AAG | CAG | CAG | ACC | GCG | TGC | ATG | GTG | GAG | CAG | TAC | GGC | AAC | TAT | 1534 |
Ala | Phe | Lys | Gin | Gin | Thr | Ala | Cys | Met | Val | Glu | Gin | Tyr | Gly | Asn | Tyr | |
500 | 505 | 510 | ||||||||||||||
AGC | GTG | AAC | GGG | GAG | CCG | GTG | AAC | GGC | CGG | CAC | ACC | CTC | GGC | GAA | AAC | 1582 |
Ser | Val | Asn | Gly | Glu | Pro | Val | Asn | Gly Arg | His | Thr | Leu | Gly | Glu | Asn | ||
515 | 520 | 525 |
• · ·
ATC Ile | GCC GAC AAC Ala Asp Asn 530 | GGG GGC CTC Gly Gly Leu | AAG Lys 535 | GCG GCC TAT CGG | GCC TAC CAG AAC | 1630 | ||||||||||
Ala Ala | Tyr | Arg | Ala Tyr 540 | Gin | Asn | |||||||||||
TGG | GTC | AAG | AAG | AAT | GGG | GCT | GAG | CAG | ACA | CTG | CCC | ACC | CTG | GGT | CTC | 1678 |
Trp | Val | Lys | Lys | Asn | Gly | Ala | Glu | Gin | Thr | Leu | Pro | Thr | Leu | Gly | Leu | |
545 | 550 | 555 | ||||||||||||||
ACC | AAC | AAC | CAG | CTC | TTC | TTC | CTG | A | 1703 | |||||||
Thr | Asn | Asn | Gin | Leu | Phe | Phe | Leu |
560 565
A 19. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) | HOSSZ : | 567 | aminosav |
(B) | TÍPUS: | aminosav | |
(D) | TOPOLÓGIA: | lineáris |
(ii) A MOLEKULA TÍPUSA: protein (xi) A 19. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
Gly 1 | His Ser | Arg | Trp Gly Thr Phe Ser Asn Leu Trp Glu His Asn | Gin | ||
5 | 10 | 15 | ||||
Ala | Ile Ile | Lys | His Leu Leu | Glu Asn Ser Thr | Ala Ser Val Ser | Glu |
20 | 25 | 30 | ||||
Ala | Glu Arg | Lys Asp Gin Glu | Tyr Tyr Arg Ala | Cys Met Asn Glu | Thr | |
35 | 40 | 45 | ||||
Arg | Ile Glu | Glu | Leu Lys Ala | Lys Pro Leu Met | Glu Leu Ile Glu | Lys |
50 | 55 | 60 | ||||
Leu | Gly Gly Trp | Asn Ile Thr | Gly Pro Trp Asp | Lys Asp Asn Phe | Gin | |
65 | 70 | 75 | 80 | |||
Asp | Thr Leu | Gin | Val Val Thr | Ser His Tyr His | Thr Ser Pro Phe | Phe |
85 | 90 | 95 | ||||
Ser | Val Tyr | Val | Ser Ala Asp | Ser Lys Asn Ser | Asn Ser Asn Val | Ile |
100 | 105 | 110 | ||||
Gin | Val Asp | Gin | Ser Gly Leu | Gly Leu Pro Ser | Arg Asp Tyr Tyr | Leu |
115 | 120 | 125 |
Asn Lys Thr Glu Asn Glu Lys Val Leu Thr Gly Tyr Leu Asn Tyr Met 130 135 140
Val Gin Leu 145 | Gly | Lys | Leu Leu Gly Gly Gly Alá Glu Asp Thr | Ile | Arg 160 | |
150 | 155 | |||||
Pro Gin Met | Gin | Gin 165 | Ile | Leu Asp Phe Glu Thr Alá Leu Alá 170 | Asn 175 | Ile |
Thr Ile Pro | Gin 180 | Glu | Lys | Arg Arg Asp Glu Glu Leu Ile Tyr 185 190 | His | Lys |
Val Thr Alá 195 | Alá | Glu | Leu | Gin Thr Leu Alá Pro Alá Ile Asn 200 205 | Trp | Leu |
Pro Phe Leu 210 | Asn | Thr | Ile | Phe Tyr Pro Val Glu Ile Asn Glu 215 220 | Ser | Glu |
Pro Ile Val 225 | Ile | Tyr | Asp 230 | Lys Glu Tyr Leu Ser Lys Val Ser 235 | Thr | Leu 240 |
Ile Asn Ser | Thr | Asp 245 | Lys | Cys Leu Leu Asn Asn Tyr Met Ile 250 | Trp 255 | Asn |
Leu Val Arg | Lys 260 | Thr | Ser | Ser Phe Leu Asp Gin Arg Phe Gin 265 270 | Asp | Alá |
Asp Glu Lys 275 | Phe | Met | Glu | Val Met Tyr Gly Thr Lys Lys Thr 280 285 | Cys | Leu |
Pro Arg Trp 290 | Lys | Phe | Cys | Val Ser Asp Thr Glu Asn Thr Leu 295 300 | Gly | Phe |
Alá Leu Gly 305 | Pro | Met | Phe 310 | Val Lys Alá Thr Phe Alá Glu Asp 315 | Ser | Lys 320 |
Asn Ile Alá | Ser | Glu 325 | Ile | Ile Leu Glu Ile Lys Lys Alá Phe 330 | Glu 335 | Glu |
Ser Leu Ser | Thr 340 | Leu | Lys | Trp Met Asp Glu Asp Thr Arg Lys 345 350 | Ser | Alá |
Lys Glu Lys 355 | Ma | Asp | Alá | Ile Tyr Asn Met Ile Gly Tyr Pro 360 365 | Asn | Phe |
Ile Met Asp 370 | Pro | Lys | Glu | Leu Asp Lys Val Phe Asn Asp Tyr 375 380 | Thr | Alá |
Val Pro Asp 385 | Leu | Tyr | Phe 390 | Glu Asn Alá Met Arg Phe Phe Asn 395 | Phe | Ser 400 |
Trp Arg Val | Thr | Alá 405 | Asp | Gin Leu Arg Lys Alá Pro Asn Arg Asp 410 415 | Gin | |
Trp Ser Met | Thr 420 | Pro | Pro | Met Val Asn Alá Tyr Tyr Ser Pro 425 430 | Thr | Lys |
• · · ···· »··· • ·
Asn Glu Iie | Val | Phe Pro | Alá | Gly Ile Leu Gin Alá Pro Phe Tyr Thr | ||
435 | 440 | 445 | ||||
Arg Ser | Ser | Pro | Asn Alá | Leu | Asn | Phe Gly Gly Ile Gly Val Val Val |
450 | 455 | 460 | ||||
Gly His | Glu | Leu | Thr His | Alá | Phe | Asp Asp Gin Gly Arg Glu Tyr Asp |
465 | 470 | 475 480 | ||||
Lys Asp | Gly | Asn | Leu Arg | Pro | Trp | Trp Lys Asn Ser Ser Val Glu Alá |
485 | 490 495 | |||||
Phe Lys | Gin | Gin | Thr Alá | Cys | Met | Val Glu Gin Tyr Gly Asn Tyr Ser |
500 | 505 510 | |||||
Val Asn | Gly | Glu | Pro Val | Asn | Gly Arg His Thr Leu Gly Glu Asn Ile | |
515 | 520 | 525 | ||||
Alá Asp | Asn | Gly Gly Leu | Lys | Alá | Alá Tyr Arg Alá Tyr Gin Asn Trp | |
530 | 535 | 540 | ||||
Val Lys | Lys | Asn Gly Alá | Glu | Gin | Thr Leu Pro Thr Leu Gly Leu Thr | |
545 | 550 | 555 560 | ||||
Asn Asn | Gin | Leu | Phe Phe | Leu |
565
A 20. SZÁMÓ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 23 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: DNS (genomiális) (iii) ANTISZENSZ-E: igen (xi) A 20. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
GCCAGCGCCG TCTCAAAGTC CAG
A 21. SZÁMÓ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 22 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav • · • · · ♦ • · · · · · · • · · • *« (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: DNS (genomiális) (iii) ANTISZENSZ-E: nem (xi) A 21. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
TGGGGGACCT TCAGCAACCT CT 22
A 22. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) | HOSSZ: 2129 | bázispár |
(B) | TÍPUS: nukleinsav | |
(C) | SZÁLTÍPUS: | egyszálú |
(D) | TOPOLÓGIA: | lineáris |
(ii) A MOLEKULA TÍPUSA: cDNS mRNS-hez (vi) EREDETI SZÁRMAZÁS:
(A) SZERVEZET: Bős taurus (H) SEJTVONAL: fetális marhaszív endoteliális sejtvonal (ix) JELLEGZETESSÉGEK:
(A) NÉV/KULCS: CDS (B) HELYZET: 3..2126 (xi) A 22. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
GG ACC CCG GTG GAG AAG CGG CTG GTG GTG CTG GTG GCG CTC CTG GCG 47
Thr Pro Val Glu Lys Arg Leu Val Val Leu Val Alá Leu Leu Alá
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
GCG | GCA | TTG | GTG | GCC | TGT | TTG | GCA | GTA | CTG | GGC | ATC | CAA | TAC | CAG | ACA |
Alá | Alá | Leu | Val | Alá | Cys | Leu | Alá | Val | Leu | Gly | Ile | Gin | Tyr | Gin | Thr |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
AGA | ACG | ccc | TCG | GTG | TGC | CTA | AGT | GAG | GCC | TGC | ATC | TCG | GTG | ACC | AGC |
Arg | Thr | Pro | Ser | Val | Cys | Leu | Ser | Glu | Alá | Cys | Ile | Ser | Val | Thr | Ser |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
TCC | ATC | TTG | AGT | TCC | ATG | GAC | CCC | ACG | GTG | GAC | CCC | TGC | CAG | GAC | TTC |
Ser | Ile | Leu | Ser | Ser | Met | Asp | Pro | Thr | Val | Asp | Pro | Cys | Gin | Asp | Phe |
50 | 55 | 60 |
TTC ACC TAT GCC | TGT GGC | GGC TGG ATC AAA GCC AAC CCC GTG CCG GAT | 239 | |||||||
Phe Thr Tyr 65 | Alá | Cys | Gly | Gly Trp 70 | Ile | Lys | Alá | Asn Pro 75 | Val Pro Asp | |
GGC CAC TCG | CGC | TGG | GGG | ACC TTC | AGC | AAC | CTC | TGG GAA | CAC AAC CAA | 287 |
Gly His Ser 80 | Arg | Trp | Gly 85 | Thr Phe | Ser | Asn | Leu 90 | Trp Glu | His Asn Gin 95 | |
GCC ATC ATC | AAG | CAC | CTC | CTT GAA | AAC | TCC | ACG | GCC AGC | GTG AGC GAG | 335 |
Alá Ile Ile | Lys | His 100 | Leu | Leu Glu | Asn | Ser 105 | Thr | Alá Ser | Val Ser Glu 110 | |
GCA GAG AGG | AAG | GAC | CAG | GAG TAC | TAC | CGA | GCC | TGC ATG | AAC GAA ACC | 383 |
Alá Glu Arg | Lys Asp 115 | Gin | Glu Tyr | Tyr 120 | Arg | Alá | Cys Met | Asn Glu Thr 125 | ||
AGG ATT GAG | GAG | CTC | AAG | GCC AAA | CCC | CTG | ATG | GAG CTC | ATT GAG AAG | 431 |
Arg Ile Glu 130 | Glu | Leu | Lys | Alá Lys 135 | Pro | Leu | Met | Glu Leu 140 | Ile Glu Lys | |
CTC GGC GGC | TGG | AAC | ATC | ACG GGG | CCC | TGG | GAC | AAG GAC | AAC TTC CAG | 479 |
Leu Gly Gly 145 | Trp | Asn | Ile | Thr Gly 150 | Pro | Trp Asp | Lys Asp 155 | Asn Phe Gin | ||
GAC ACC CTG | CAG | GTG | GTC | ACA TCC | CAC | TAC | CAC | ACC TCC | CCC TTC TTC | 527 |
Asp Thr Leu 160 | Gin | Val | Val 165 | Thr Ser | His | Tyr | His 170 | Thr Ser | Pro Phe Phe 175 | |
TCC GTC TAC | GTC | AGT | GCC | GAC TCC | AAG | AAT | TCC | AAC AGC | AAC GTG ATC | 575 |
Ser Val Tyr | Val | Ser 180 | Alá | Asp Ser | Lys | Asn 185 | Ser | Asn Ser | Asn Val Ile 190 | |
CAA GTG GAC | CAG | TCT | GGC | CTG GGC | TTA | CCC | TCA | AGA GAT | TAT TAC CTG | 623 |
Gin Val Asp | Gin 195 | Ser | Gly | Leu Gly | Leu 200 | Pro | Ser | Arg Asp | Tyr Tyr Leu 205 | |
AAC AAA ACC | GAG | AAT | GAG | AAG GTG | CTG | ACG | GGA | TAC CTG | AAC TAC ATG | 671 |
Asn Lys Thr 210 | Glu | Asn | Glu | Lys Val 215 | Leu | Thr | Gly | Tyr Leu 220 | Asn Tyr Met | |
GTC CAG CTG | GGG | AAG | CTG | CTG GGA | GGA | GGG | GCC | GAG GAC | ACC ATC CGG | 719 |
Val Gin Leu 225 | Gly Lys | Leu | Leu Gly 230 | Gly Gly | Alá | Glu Asp 235 | Thr Ile Arg | |||
CCC CAG ATG | CAG | CAG | ATC | CTG GAC | TTT | GAG | ACG | GCG CTG | GCC AAC ATC | 767 |
Pro Gin Met 240 | Gin | Gin | Ile 245 | Leu Asp | Phe | Glu | Thr 250 | Alá Leu | Alá Asn Ile 255 | |
ACC ATC CCC | CAG | GAG | AAG | CGC CGG | GAC | GAG | GAA | CTC ATC | TAC CAC AAA | 815 |
Thr Ile Pro | Gin | Glu 260 | Lys | Arg Arg Asp | Glu 265 | Glu | Leu Ile | Tyr His Lys 270 | ||
GTG ACG GCG | GCT | GAG | TTG | CAG ACC | TTG | GCG | CCC | GCC ATC | AAC TGG CTG | 863 |
Val Thr Alá | Alá 275 | Glu | Leu | Gin Thr | Leu 280 | Alá | Pro | Alá Ile | Asn Trp Leu 285 |
·*· ·-» ·*·· ···· ·«
CCC TTC CTC AAC ACC ATC TTC TAC CCC GTG GAG ATC AAT GAA TCA GAG | 911 | |||||||||||||||
Pro | Phe | Leu 290 | Asn Thr Ile | Phe Tyr Pro 295 | Val Glu | Ile | Asn 300 | Glu | Ser | Glu | ||||||
CCT | ATT | GTC | ATC | TAC | GAC | AAA | GAA | TAC | CTG | AGC | AAG | GTC | TCC | ACC | CTC | 959 |
Pro | Ile | Val | Ile | Tyr | Asp | Lys | Glu | Tyr | Leu | Ser | Lys | Val | Ser | Thr | Leu | |
305 | 310 | 315 | ||||||||||||||
ATC | AAC | AGC | ACA | GAC | AAA | TGC | CTG | CTG | AAC | AAC | TAC | ATG | ATC | TGG | AAC | 1007 |
Ile | Asn | Ser | Thr | Asp | Lys | Cys | Leu | Leu | Asn | Asn | Tyr | Met | Ile | Trp | Asn | |
320 | 325 | 330 | 335 | |||||||||||||
CTG | GTA | CGG | AAG | ACG | AGC | TCC | TTC | CTC | GAT | CAG | CGC | TTC | CAG | GAC | GCC | 1055 |
Leu | Val | Arg | Lys | Thr | Ser | Ser | Phe | Leu | Asp | Gin | Arg | Phe | Gin | Asp | Alá | |
340 | 345 | 350 | ||||||||||||||
GAC | GAG | AAG | TTC | ATG | GAA | GTC | ATG | TAT | GGG | ACC | AAG | AAG | ACG | TGT | CTT | 1103 |
Asp | Glu | Lys | Phe | Met | Glu | Val | Met | Tyr | Gly | Thr | Lys | Lys | Thr | Cys | Leu | |
355 | 360 | 365 | ||||||||||||||
CCC | CGC | TGG | AAG | TTT | TGT | GTG | AGT | GAT | ACA | GAG | AAC | ACC | TTG | GGC | TTC | 1151 |
Pro | Arg | Trp | Lys | Phe | Cys | Val | Ser | Asp | Thr | Glu | Asn | Thr | Leu | Gly | Phe | |
370 | 375 | 380 | ||||||||||||||
GCC | CTG | GGC | CCC | ATG | TTC | GTC | AAA | GCG | ACC | TTC | GCT | GAG | GAC | AGC | AAG | 1199 |
Alá | Leu | Gly | Pro | Met | Phe | Val | Lys | Alá | Thr | Phe | Alá | Glu | Asp | Ser | Lys | |
385 | 390 | 395 | ||||||||||||||
AAC | ATA | GCC | AGC | GAG | ATC | ATC | CTG | GAG | ATC | AAG | AAG | GCG | TTT | GAA | GAG | 1247 |
Asn | Ile | Alá | Ser | Glu | Ile | Ile | Leu | Glu | Ile | Lys | Lys | Alá | Phe | Glu | Glu | |
400 | 405 | 410 | 415 | |||||||||||||
AGC | CTG | AGC | ACC | CTG | AAG | TGG | ATG | GAT | GAA | GAT | ACT | CGG | AAA | TCG | GCC | 1295 |
Ser | Leu | Ser | Thr | Leu | Lys | Trp | Met | Asp | Glu | Asp | Thr | Arg | Lys | Ser | Alá | |
420 | 425 | 430 | ||||||||||||||
AAG | GAA | AAG | GCG | GAC | GCG | ATC | TAC | AAC | ATG | ATA | GGC | TAC | CCC | AAC | TTT | 1343 |
Lys | Glu | Lys | Alá | Asp | Alá | Ile | Tyr | Asn | Met | Ile | Gly Tyr | Pro | Asn | Phe | ||
435 | 440 | 445 | ||||||||||||||
ATC | ATG | GAC | CCC | AAG | GAG | CTG | GAC | AAA | GTG | TTC | AAT | GAC | TAC | ACC | GCT | 1391 |
Ile | Met | Asp | Pro | Lys | Glu | Leu | Asp | Lys | Val | Phe | Asn | Asp | Tyr | Thr | Alá | |
450 | 455 | 460 | ||||||||||||||
GTG | CCA | GAC | CTC | TAC | TTC | GAG | AAC | GCC | ATG | CGG | TTT | TTC | AAC | TTC | TCC | 1439 |
Val | Pro | Asp | Leu | Tyr | Phe | Glu | Asn | Alá | Met | Arg | Phe | Phe | Asn | Phe | Ser | |
465 | 470 | 475 | ||||||||||||||
TGG | AGG | GTC | ACT | GCC | GAC | CAG | CTC | CGG | AAA | GCG | CCC | AAC | AGA | GAT | CAG | 1487 |
Trp | Arg | Val | Thr | Alá | Asp | Gin | Leu | Arg | Lys | Alá | Pro | Asn | Arg Asp | Gin | ||
480 | 485 | 490 | 495 | |||||||||||||
TGG | AGC | ATG | ACC | CCG | CCC | ATG | GTG | AAC | GCC | TAC | TAC | TCG | CCC | ACC | AAG | 1535 |
Trp | Ser | Met | Thr | Pro | Pro | Met | Val | Asn | Alá | Tyr | Tyr | Ser | Pro | Thr | Lys |
500 505 510 _ ' ” ’ -WW V « * ·· ··· ··* **
AAC Asn | GAG ATC GTG | TTT CCG GCC GGA ATC CTG CAG GCG CCA TTC TAC ACC | 1583 | |||||||||||||
Glu | Ile Val 515 | Phe Pro Ala | Gly | Ile Leu 520 | Gin Ala Pro | Phe 525 | Tyr | Thr | ||||||||
CGC | TCT | TCA | CCC | AAT | GCC | TTA | AAC | TTC | GGC | GGC | ATC | GGC | GTC | GTC | GTG | 1631 |
Arg | Ser | Ser | Pro | Asn | Ala | Leu | Asn | Phe | Gly Gly | Ile | Gly | Val | Val | Val | ||
530 | 535 | 540 | ||||||||||||||
GGC | CAC | GAG | CTG | ACT | CAT | GCT | TTT | GAT | GAT | CAA | GGC | CGA | GAG | TAC | GAC | 1679 |
Gly | His | Glu | Leu | Thr | His | Ala | Phe | Asp | Asp | Gin | Gly Arg | Glu | Tyr | Asp | ||
545 | 550 | 555 | ||||||||||||||
AAG | GAT | GGG | AAC | CTC | CGG | CCC | TGG | TGG | AAG | AAC | TCG | TCC | GTG | GAG | GCG | 1727 |
Lys | Asp | Gly | Asn | Leu | Arg | Pro | Trp | Trp | Lys | Asn | Ser | Ser | Val | Glu | Ala | |
560 | 565 | 570 | 575 | |||||||||||||
TTC | AAG | CAG | CAG | ACC | GCG | TGC | ATG | GTG | GAG | CAG | TAC | GGC | AAC | TAT | AGC | 1775 |
Phe | Lys | Gin | Gin | Thr | Ala | Cys | Met | Val | Glu | Gin | Tyr | Gly | Asn | Tyr | Ser | |
580 | 585 | 590 | ||||||||||||||
GTG | AAC | GGG | GAG | CCG | GTG | AAC | GGC | CGG | CAC | ACC | CTC | GGC | GAA | AAC | ATC | 1823 |
Val | Asn | Gly | Glu | Pro | Val | Asn | Gly Arg | His | Thr | Leu | Gly | Glu | Asn | Ile | ||
595 | 600 | 605 | ||||||||||||||
GCC | GAC | AAC | GGG | GGC | CTC | AAG | GCG | GCC | TAT | CGG | GCC | TAC | CAG | AAC | TGG | 1871 |
Ala | Asp | Asn | Gly Gly | Leu | Lys | Ala | Ala | Tyr Arg | Ala | Tyr | Gin | Asn | Trp | |||
610 | 615 | 620 | ||||||||||||||
GTC | AAG | AAG | AAT | GGG | GCT | GAG | CAG | ACA | CTG | CCC | ACC | CTG | GGT | CTC | ACC | 1919 |
Val | Lys | Lys | Asn | Gly | Ala | Glu | Gin | Thr | Leu | Pro | Thr | Leu | Gly | Leu | Thr | |
625 | 630 | 635 | ||||||||||||||
AAC | AAC | CAG | CTC | TTC | TTC | CTG | AGT | TTT | GCA | CAG | GTC | TGG | TGT | TCC | GTC | 1967 |
Asn | Asn | Gin | Leu | Phe | Phe | Leu | Ser | Phe | Ala | Gin | Val | Trp | Cys | Ser | Val | |
640 | 645 | 650 | 655 | |||||||||||||
CGC | ACC | CCC | GAG | AGT | TCG | CAC | GAA | GGT | CTC | ATC | ACC | GAT | CCC | CAC | AGC | 2015 |
Arg | Thr | Pro | Glu | Ser | Ser | His | Glu | Gly | Leu | Ile | Thr | Asp | Pro | His | Ser | |
660 | 665 | 670 | ||||||||||||||
CCC | TCC | CGC | TTC | CGG | GTC | ATC | GGC | TCC | ATC | TCC | AAC | TCC | AAG | GAG | TTC | 2063 |
Pro | Ser | Arg | Phe | Arg | Val | Ile | Gly | Ser | Ile | Ser | Asn | Ser | Lys | Glu | Phe | |
675 | 680 | 685 | ||||||||||||||
TCG | GAA | CAC | TTC | CAC | TGC | CCG | CCC | GGC | TCA | CCC | ATG | AAC | CCG | CAT | CAC | 2111 |
Ser | Glu | His | Phe | His | Cys | Pro | Pro | Gly | Ser | Pro | Met | Asn | Pro | His | His | |
690 | 695 | 700 |
AAG TGT GAA GTC TGG TGA Lys Cys Glu Val Trp
705
2129 • · · · • · · · · · · • ··· ··· ······ • · · · ·
A 23. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
···· ···· (i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) | HOSSZ: | 708 | aminosavn |
(B) | TÍPUS: | aminosav | |
(D) | TOPOLÓGIA: | lineáris |
(ii) A MOLEKULA TÍPUSA: protein
(xi; | 1 A | 23 . | SZÁMÚ SZEKVENCIA | LEÍRÁSA: | |
Thr 1 | Pro | Val | Glu | Lys Arg Leu Val 5 | Val Leu Val Alá Leu Leu Alá Alá 10 15 |
Alá | Leu | Val | Alá 20 | Cys Leu Alá Val | Leu Gly Ile Gin Tyr Gin Thr Arg 25 30 |
Thr | Pro | Ser 35 | Val | Cys Leu Ser Glu 40 | Alá Cys Ile Ser Val Thr Ser Ser 45 |
Ile | Leu 50 | Ser | Ser | Met Asp Pro Thr 55 | Val Asp Pro Cys Gin Asp Phe Phe 60 |
Thr 65 | Tyr | Alá | Cys | Gly Gly Trp Ile 70 | Lys Alá Asn Pro Val Pro Asp Gly 75 80 |
His | Ser | Arg | Trp | Gly Thr Phe Ser 85 | Asn Leu Trp Glu His Asn Gin Alá 90 95 |
Ile | Ile | Lys | His 100 | Leu Leu Glu Asn | Ser Thr Alá Ser Val Ser Glu Alá 105 110 |
Glu | Arg | Lys 115 | Asp | Gin Glu Tyr Tyr 120 | Arg Alá Cys Met Asn Glu Thr Arg 125 |
Ile | Glu 130 | Glu | Leu | Lys Alá Lys Pro 135 | Leu Met Glu Leu Ile Glu Lys Leu 140 |
Gly 145 | Gly | Trp | Asn | Ile Thr Gly Pro 150 | Trp Asp Lys Asp Asn Phe Gin Asp 155 160 |
Thr | Leu | Gin | Val | Val Thr Ser His 165 | Tyr His Thr Ser Pro Phe Phe Ser 170 175 |
Val | Tyr | Val | Ser 180 | Alá Asp Ser Lys | Asn Ser Asn Ser Asn Val Ile Gin 185 190 |
Val | Asp | Gin 195 | Ser | Gly Leu Gly Leu 200 | Pro Ser Arg Asp Tyr Tyr Leu Asn 205 |
Lys | Thr 210 | Glu | Asn | Glu Lys Val Leu 215 | Thr Gly Tyr Leu Asn Tyr Met Val 220 |
···· ···«
Gin 225 | Leu | Gly | Lys | Leu | Leu 230 | Gly | Gly | Gly | Alá | Glu 235 | Asp | Thr | Ile | Arg | Pro 240 |
Gin | Met | Gin | Gin | Ile | Leu | Asp | Phe | Glu | Thr | Alá | Leu | Alá | Asn | Ile | Thr |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Ile | Pro | Gin | Glu | Lys | Arg | Arg | Asp | Glu | Glu | Leu | Ile | Tyr | His | Lys | Val |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Thr | Alá | Alá | Glu | Leu | Gin | Thr | Leu | Alá | Pro | Alá | Ile | Asn | Trp | Leu | Pro |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Phe | Leu | Asn | Thr | Ile | Phe | Tyr | Pro | Val | Glu | Ile | Asn | Glu | Ser | Glu | Pro |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Ile | Val | Ile | Tyr | Asp | Lys | Glu | Tyr | Leu | Ser | Lys | Val | Ser | Thr | Leu | Ile |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Asn | Ser | Thr | Asp | Lys | Cys | Leu | Leu | Asn | Asn | Tyr | Met | Ile | Trp | Asn | Leu |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Val | Arg | Lys | Thr | Ser | Ser | Phe | Leu | Asp | Gin | Arg | Phe | Gin | Asp | Alá | Asp |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Glu | Lys | Phe | Met | Glu | Val | Met | Tyr | Gly | Thr | Lys | Lys | Thr | Cys | Leu | Pro |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Arg | Trp | Lys | Phe | Cys | Val | Ser | Asp | Thr | Glu | Asn | Thr | Leu | Gly | Phe | Alá |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Leu | Gly | Pro | Met | Phe | Val | Lys | Alá | Thr | Phe | Alá | Glu | Asp | Ser | Lys | Asn |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Ile | Alá | Ser | Glu | Ile | Ile | Leu | Glu | Ile | Lys | Lys | Alá | Phe | Glu | Glu | Ser |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Leu | Ser | Thr | Leu | Lys | Trp | Met | Asp | Glu | Asp | Thr | Arg | Lys | Ser | Alá | Lys |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Glu | Lys | Alá | Asp | Alá | Ile | Tyr | Asn | Met | Ile | Gly | Tyr | Pro | Asn | Phe | Ile |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Met | Asp | Pro | Lys | Glu | Leu | Asp | Lys | Val | Phe | Asn | Asp | Tyr | Thr | Alá | Val |
450 | 455 | 460 | |||||||||||||
Pro | Asp | Leu | Tyr | Phe | Glu | Asn | Alá | Met | Arg | Phe | Phe | Asn | Phe | Ser | Trp |
465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Arg | Val | Thr | Alá | Asp | Gin | Leu | Arg | Lys | Alá | Pro | Asn | Arg | Asp | Gin | Trp |
485 490 495
Ser Met Thr Pro Pro Met Val Asn Alá Tyr Tyr Ser Pro Thr Lys Asn 500 505 510 • ·
Glu | Ile | Val 515 | Phe | Pro | Alá | Gly | Ile 520 | Leu | Gin | Alá | Pro | Phe 525 | Tyr | Thr | Arg |
Ser | Ser | Pro | Asn | Alá | Leu | Asn | Phe | Gly | Gly | Ile | Gly | Val | Val | Val | Gly |
530 | 535 | 540 | |||||||||||||
His | Glu | Leu | Thr | His | Alá | Phe | Asp | Asp | Gin | Gly | Arg | Glu | Tyr | Asp | Lys |
545 | 550 | 555 | 560 | ||||||||||||
Asp | Gly | Asn | Leu | Arg | Pro | Trp | Trp | Lys | Asn | Ser | Ser | Val | Glu | Alá | Phe |
565 | 570 | 575 | |||||||||||||
Lys | Gin | Gin | Thr | Alá | Cys | Met | Val | Glu | Gin | Tyr | Gly | Asn | Tyr | Ser | Val |
580 | 585 | 590 | |||||||||||||
Asn | Gly | Glu | Pro | Val | Asn | Gly | Arg | His | Thr | Leu | Gly | Glu | Asn | Ile | Alá |
595 | 600 | 605 | |||||||||||||
Asp | Asn | Gly | Gly | Leu | Lys | Alá | Alá | Tyr | Arg | Alá | Tyr | Gin | Asn | Trp | Val |
610 | 615 | 620 | |||||||||||||
Lys | Lys | Asn | Gly | Alá | Glu | Gin | Thr | Leu | Pro | Thr | Leu | Gly | Leu | Thr | Asn |
625 | 630 | 635 | 640 | ||||||||||||
Asn | Gin | Leu | Phe | Phe | Leu | Ser | Phe | Alá | Gin | Val | Trp | Cys | Ser | Val | Arg |
645 | 650 | 655 | |||||||||||||
Thr | Pro | Glu | Ser | Ser | His | Glu | Gly | Leu | Ile | Thr | Asp | Pro | His | Ser | Pro |
660 | 665 | 670 | |||||||||||||
Ser | Arg | Phe | Arg | Val | Ile | Gly | Ser | Ile | Ser | Asn | Ser | Lys | Glu | Phe | Ser |
675 | 680 | 685 | |||||||||||||
Glu | His | Phe | His | Cys | Pro | Pro | Gly | Ser | Pro | Met | Asn | Pro | His | His | Lys |
690 | 695 | 700 | |||||||||||||
Cys | Glu | Val | Trp |
705
A 24. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 2533 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: cDNS mRNS-hez (vi) EREDETI SZÁRMAZÁS:
···· ··· · · · ·· • · · · · · · • ··· ··· ···· • · * · · · (A) SZERVEZET: Homo sapiens (F) SZÖVETTÍPUS: placenta (ix) JELLEGZETESSÉGEK:
(A) NÉV/KULCS: CDS (B) HELYZET: 1..2109 (xi) A 24. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
CGG Arg 1 | CTG GTG GTG TTG GTG GTA CTT CTG GCG GCA GGA CTG GTG GCC TGC | 48 | ||||||||||||||
Leu Val | Val | Leu Val Val 5 | Leu | Leu Alá 10 | Alá Gly Leu | Val | Alá 15 | Cys | ||||||||
TTG | GCA | GCA | CTG | GGC | ATC | CAG | TAC | CAG | ACA | AGA | TCC | CCC | TCT | GTG | TGC | 96 |
Leu | Alá | Alá | Leu | Gly | Ile | Gin | Tyr | Gin | Thr | Arg | Ser | Pro | Ser | Val | Cys | |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
CTG | AGC | GAA | GCT | TGT | GTC | TCA | GTG | ACC | AGC | TCC | ATC | TTG | AGC | TCC | ATG | 144 |
Leu | Ser | Glu | Alá | Cys | Val | Ser | Val | Thr | Ser | Ser | Ile | Leu | Ser | Ser | Met | |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
GAC | CCC | ACA | GTG | GAC | CCC | TGC | CAT | GAC | TTC | TTC | AGC | TAC | GCC | TGT | GGG | 192 |
Asp | Pro | Thr | Val | Asp | Pro | Cys | His | Asp | Phe | Phe | Ser | Tyr | Alá | Cys | Gly | |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
GGC | TGG | ATC | AAG | GCC | AAC | CCA | GTC | CCT | GAT | GGC | CAC | TCA | CGC | TGG | GGG | 240 |
Gly | Trp | Ile | Lys | Alá | Asn | Pro | Val | Pro | Asp | Gly | His | Ser | Arg | Trp | Gly | |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
ACC | TTC | AGC | AAC | CTC | TGG | GAA | CAC | AAC | CAA | GCA | ATC | ATC | AAG | CAC | CTC | 288 |
Thr | Phe | Ser | Asn | Leu | Trp | Glu | His | Asn | Gin | Alá | Ile | Ile | Lys | His | Leu | |
85 | 90 | 95 | ||||||||||||||
CTC | GAA | AAC | TCC | ACG | GCC | AGC | GTG | AGC | GAG | GCA | GAG | AGA | AAG | GCG | CAA | 336 |
Leu | Glu | Asn | Ser | Thr | Alá | Ser | Val | Ser | Glu | Alá | Glu | Arg | Lys | Alá | Gin | |
100 | 105 | 110 | ||||||||||||||
GTA | TAC | TAC | CGT | GCG | TGC | ATG | AAC | GAG | ACC | AGG | ATC | GAG | GAG | CTC | AGG | 384 |
Val | Tyr | Tyr Arg | Alá | Cys | Met | Asn | Glu | Thr | Arg | Ile | Glu | Glu | Leu | Arg | ||
115 | 120 | 125 | ||||||||||||||
GCC | AAA | CCT | CTA | ATG | GAG | TTG | ATT | GAG | AGG | CTC | GGG | GGC | TGG | AAC | ATC | 432 |
Alá | Lys | Pro | Leu | Met | Glu | Leu | Ile | Glu | Arg | Leu | Gly Gly | Trp | Asn | Ile | ||
130 | 135 | 140 | ||||||||||||||
ACA | GGT | CCC | TGG | GCC | AAG | GAC | AAC | TTC | CAG | GAC | ACC | CTG | CAG | GTG | GTC | 480 |
Thr | Gly | Pro | Trp | Alá | Lys | Asp | Asn | Phe | Gin | Asp | Thr | Leu | Gin | Val | Val | |
145 | 150 | 155 | 160 | |||||||||||||
ACC | GCC | CAC | TAC | CGC | ACC | TCA | CCC | TTC | TTC | TCT | GTC | TAT | GTC | AGT | GCC | 528 |
Thr | Alá | His | Tyr | Arg | Thr | Ser | Pro | Phe | Phe | Ser | Val | Tyr | Val | Ser | Alá | |
165 | 170 | 175 |
···· ···· • ·
GAT TCC Asp Ser | AAG AAC | TCC Ser | AAC AGC AAC GTG ATC CAG GTG GAC CAG TCT GGC | 576 | |||||||
Lys | Asn 180 | Asn Ser | Asn | Val Ile 185 | Gin Val Asp | Gin 190 | Ser | Gly | |||
CTG GGC | TTG | CCC | TCG | AGA GAC | TAT | TAC CTG | AAC AAA ACT | GAA | AAC | GAG | 624 |
Leu Gly | Leu | Pro | Ser | Arg Asp | Tyr | Tyr Leu | Asn Lys Thr | Glu | Asn | Glu | |
195 | 200 | 205 | |||||||||
AAG GTG | CTG | ACC | GGA | TAT CTG | AAC | TAC ATG | GTC CAG CTG | GGG | AAG | CTG | 672 |
Lys Val | Leu | Thr | Gly | Tyr Leu | Asn | Tyr Met | Val Gin Leu | Gly Lys | Leu | ||
210 | 215 | 220 | |||||||||
CTG GGC | GGC | GGG | GAC | GAG GAG | GCC | ATC CGG | CCC CAG ATG | CAG | CAG | ATC | 720 |
Leu Gly Gly Gly Asp | Glu Glu | Alá | Ile Arg | Pro Gin Met | Gin | Gin | Ile | ||||
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||
TTG GAC | TTT | GAG | ACG | GCA CTG | GCC | AAC ATC | ACC ATC CCA | CAG | GAG | AAG | 768 |
Leu Asp | Phe | Glu | Thr | Alá Leu | Alá | Asn Ile | Thr Ile Pro | Gin | Glu | Lys | |
245 | 250 | 255 | |||||||||
CGC CGT | GAT | GAG | GAG | CTC ATC | TAC | CAC AAA | GTG ACG GCA | GCC | GAG | CTG | 816 |
Arg Arg Asp | Glu | Glu | Leu Ile | Tyr | His Lys | Val Thr Alá | Alá | Glu | Leu | ||
260 | 265 | 270 | |||||||||
CAG ACC | TTG | GCA | CCC | GCC ATC | AAC | TGG TTG | CCT TTT CTC | AAC | ACC | ATC | 864 |
Gin Thr | Leu | Alá | Pro | Alá Ile | Asn | Trp Leu | Pro Phe Leu | Asn | Thr | Ile | |
275 | 280 | 285 | |||||||||
TTC TAC | CCC | GTG | GAG | ATC AAT | GAA | TCC GAG | CCT ATT GTG | GTC | TAT | GAC | 912 |
Phe Tyr | Pro | Val | Glu | Ile Asn | Glu | Ser Glu | Pro Ile Val | Val | Tyr Asp | ||
290 | 295 | 300 | |||||||||
AAG GAA | TAC | CTT | GAG | CAG ATC | TCC | ACT CTC | ATC AAC ACC | ACC | GAC | AGA | 960 |
Lys Glu | Tyr | Leu | Glu | Gin Ile | Ser | Thr Leu | Ile Asn Thr | Thr | Asp Arg | ||
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||
TGC CTG | CTC | AAC | AAC | TAC ATG | ATC | TGG AAC | CTG GTG CGG | AAA | ACA | AGC | 1008 |
Cys Leu | Leu | Asn | Asn | Tyr Met | Ile | Trp Asn | Leu Val Arg | Lys | Thr | Ser | |
325 | 330 | 335 | |||||||||
TCC TTC | CTT | GAC | CAG | CGC TTT | CAG | GAC GCC | GAT GAG AAG | TTC | ATG | GAA | 1056 |
Ser Phe | Leu | Asp | Gin | Arg Phe | Gin | Asp Alá | Asp Glu Lys | Phe | Met | Glu | |
340 | 345 | 350 | |||||||||
GTC ATG | TAC | GGG | ACC | AAG AAG | ACC | TGT CTT | CCT CGC TGG | AAG | TTT | TGC | 1104 |
Val Met | Tyr | Gly | Thr | Lys Lys | Thr | Cys Leu | Pro Arg Trp | Lys | Phe | Cys | |
355 | 360 | 365 | |||||||||
GTG AGT | GAC | ACA | GAA | AAC AAC | CTG | GGC TTT | GCG TTG GGC | CCC | ATG | TTT | 1152 |
Val Ser | Asp | Thr | Glu | Asn Asn | Leu | Gly Phe | Alá Leu Gly | Pro | Met | Phe | |
370 | 375 | 380 | |||||||||
GTC AAA | GCA | ACC | TTC | GCC GAG | GAC | AGC AAG | AGC ATA GCC | ACC | GAG | ATC | 1200 |
Val Lys | Alá | Thr | Phe | Alá Glu | Asp | Ser Lys | Ser Ile Alá | Thr | Glu | Ile | |
385 | 390 | 395 | 400 |
• ·
ATC CTG Ile Leu | GAG ATT Glu Ile | AAG AAG GCA TTT GAG GAA AGC CTG AGC ACC CTG AAG | 1248 | |||||||||||||
Lys Lys 405 | Alá Phe | Glu | Glu 410 | Ser | Leu Ser | Thr | Leu 415 | Lys | ||||||||
TGG | ATG | GAT | GAG | GAA | ACC | CGA | AAA | TCA | GCC | AAG | GAA | AAG | GCC | GAT | GCC | 1296 |
Trp | Met | Asp | Glu | Glu | Thr | Arg | Lys | Ser | Alá | Lys | Glu | Lys | Alá | Asp | Alá | |
420 | 425 | 430 | ||||||||||||||
ATC | TAC | AAC | ATG | ATA | GGA | TAC | CCC | AAC | TTC | ATC | ATG | GAT | CCC | AAG | GAG | 1344 |
Ile | Tyr | Asn | Met | Ile | Gly | Tyr | Pro | Asn | Phe | Ile | Met | Asp | Pro | Lys | Glu | |
435 | 440 | 445 | ||||||||||||||
CTG | GAC | AAA | GTG | TTT | AAT | GAC | TAC | ACT | GCA | GTT | CCA | GAC | CTC | TAC | TTT | 1392 |
Leu | Asp | Lys | Val | Phe | Asn | Asp | Tyr | Thr | Alá | Val | Pro | Asp | Leu | Tyr | Phe | |
450 | 455 | 460 | ||||||||||||||
GAA | AAT | GCC | ATG | CGG | TTT | TTC | AAC | TTC | TCA | TGG | AGG | GTC | ACT | GCC | GAT | 1440 |
Glu | Asn | Alá | Met | Arg | Phe | Phe | Asn | Phe | Ser | Trp | Arg | Val | Thr | Alá | Asp | |
465 | 470 | 475 | 480 | |||||||||||||
CAG | CTC | AGG | AAA | GCC | CCC | AAC | AGA | GAT | CAG | TGG | AGC | ATG | ACC | CCG | CCC | 1488 |
Gin | Leu | Arg | Lys | Alá | Pro | Asn | Arg Asp | Gin | Trp | Ser | Met | Thr | Pro | Pro | ||
485 | 490 | 495 | ||||||||||||||
ATG | GTG | AAC | GCC | TAC | TAC | TCG | CCC | ACC | AAG | AAT | GAG | ATT | GTG | TTT | CCG | 1536 |
Met | Val | Asn | Alá | Tyr | Tyr | Ser | Pro | Thr | Lys | Asn | Glu | Ile | Val | Phe | Pro | |
500 | 505 | 510 | ||||||||||||||
GCC | GGG | ATC | CTG | CAG | GCA | CCA | TTC | TAC | ACA | CGC | TCC | TCA | CCC | AAG | GCC | 1584 |
Alá | Gly | Ile | Leu | Gin | Alá | Pro | Phe | Tyr | Thr | Arg | Ser | Ser | Pro | Lys | Alá | |
515 | 520 | 525 | ||||||||||||||
TTA | AAC | TTT | GGT | GGC | ATA | GGT | GTC | GTC | GTG | GGC | CAT | GAG | CTG | ACT | CAT | 1632 |
Leu | Asn | Phe | Gly Gly | Ile | Gly | Val | Val | Val | Gly | His | Glu | Leu | Thr | His | ||
530 | 535 | 540 | ||||||||||||||
GCT | TTT | GAT | GAT | CAA | GGA | CGG | GAG | TAT | GAC | AAG | GAC | GGG | AAC | CTC | CGG | 1680 |
Alá | Phe | Asp Asp | Gin | Gly Arg | Glu | Tyr Asp | Lys | Asp | Gly | Asn | Leu | Arg | ||||
545 | 550 | 555 | 560 | |||||||||||||
CCA | TGG | TGG | AAG | AAC | TCA | TCC | GTG | GAG | GCC | TTC | AAG | CGT | CAG | ACC | GAG | 1728 |
Pro | Trp | Trp | Lys | Asn | Ser | Ser | Val | Glu | Alá | Phe | Lys | Arg | Gin | Thr | Glu | |
565 | 570 | 575 | ||||||||||||||
TGC | ATG | GTA | GAG | CAG | TAC | AGC | AAC | TAC | AGC | GTG | AAC | GGG | GAG | CCG | GTG | 1776 |
Cys | Met | Val | Glu | Gin | Tyr | Ser | Asn | Tyr | Ser | Val | Asn | Gly | Glu | Pro | Val | |
580 | 585 | 590 | ||||||||||||||
AAC | GGG | CGG | CAC | ACC | CTG | GGG | GAG | AAC | ATC | GCC | GAC | AAC | GGG | GGT | CTC | 1824 |
Asn | Gly Arg | His | Thr | Leu | Gly | Glu | Asn | Ile | Alá | Asp | Asn | Gly Gly | Leu | |||
595 | 600 | 605 | ||||||||||||||
AAG | GCG | GCC | TAT | CGG | GCT | TAC | CAG | AAC | TGG | GTG | AAG | AAG | AAC | GGG | GCT | 1872 |
Lys | Alá | Alá | Tyr Arg | Alá | Tyr | Gin | Asn | Trp | Val | Lys | Lys | Asn Gly | Alá |
610 615 620
GAG CAC TCG | CTC CCC ACC Leu Pro Thr 630 | CTG GGC CTC Leu Gly Leu | ACC AAT AAC CAG CTC TTC TTC | 1920 | ||||||||||||
Glu His 625 | Ser | Thr | Asn 635 | Asn Gin Leu | Phe | Phe 640 | ||||||||||
CTG | GGC | TTT | GCA | CAG | GTC | TGG | TGC | TCC | GTC | CGC | ACA | CCT | GAG | AGC | TCC | 1968 |
Leu | Gly | Phe | Alá | Gin | Val | Trp | Cys | Ser | Val | Arg | Thr | Pro | Glu | Ser | Ser | |
645 | 650 | 655 | ||||||||||||||
CAC | GAA | GGC | CTC | ATC | ACC | GAT | CCC | CAC | AGC | CCC | TCT | CGC | TTC | CGG | GTC | 2016 |
His | Glu | Gly | Leu | Ile | Thr | Asp | Pro | His | Ser | _Pro | Ser | Arg | Phe | Arg | Val | |
660 | 665 | 670 | ||||||||||||||
ATC | GGC | TCC | CTC | TCC | AAT | TCC | AAG | GAG | TTC | TCA | GAA | CAC | TTC | CGC | TGC | 2064 |
Ile | Gly | Ser | Leu | Ser | Asn | Ser | Lys | Glu | Phe | Ser | Glu | His | Phe | Arg | Cys | |
675 | 680 | 685 | ||||||||||||||
CCA | CCT | GGC | TCA | CCC | ATG | AAC | CCG | CCT | CAC | AAG | TGC | GAA | GTC | TGG | 2109 | |
Pro | Pro | Gly | Ser | Pro | Met | Asn | Pro | Pro | His | Lys | Cys | Glu | Val | Trp |
690 | 695 | 700 | ||||
TAAGGACGAA | GCGGAGAGAG | CCAAGACGGA | GGAGGGGAAG | GGGCTGAGGA | CGAGACCCCC | 2169 |
ATCCAGCCTC | CAGGGCATTG | CTCAGCCCGC | TTGGCCACCC | GGGGCCCTGC | TTCCTCACAC | 2229 |
TGGCGGGTTT | TCAGCCGGAA | CCGAGCCCAT | GGTGTTGGCT | CTCAACGTGA | CCCGCAGTCT | 2289 |
GATCCCCTGT | GAAGAGCCGG | ACATCCCAGG | CACACGTGTG | CGCCACCTTC | AGCAGGCATT | 2349 |
CGGGTGCTGG | GCTGGTGGCT | CATCAGGCCT | GGGCCCCACA | CTGACAAGCG | CCAGATACGC | 2409 |
CACAAATACC | ACTGTGTCAA | atgctttcaa | GATATATTTT | TGGGGAAACT | ATTTTTTAAA | 2469 |
CACTGTGGAA | TACACTGGAA | ATCTTCAGGG | AAAAACACAT | TTAAACACTT | TTTTTTTTAA | 2529 |
GCCC 2533
A 25. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
A | SZEKVENCIA | JELLEMZŐI: | |
(A) | HOSSZ: | 703 | aminosavn |
(B) | TÍPUS: | aminosav | |
(D) | TOPOLÓGIA: | lineáris |
(ii) A MOLEKULA TÍPUSA: protein (xi) A 25. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
Arg Leu Val Val Leu Val Val Leu Leu Alá Alá Gly Leu Val Alá Cys 15 10 15 • · • ·
Leu | Alá | Alá | Leu 20 | Gly | Ile | Gin | Tyr | Gin 25 | Thr | Arg | Ser | Pro | Ser 30 | Val | Cys |
Leu | Ser | Glu | Alá | Cys | Val | Ser | Val | Thr | Ser | Ser | Ile | Leu | Ser | Ser | Met |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Asp | Pro | Thr | Val | Asp | Pro | Cys | His | Asp | Phe | Phe | Ser | Tyr | Alá | Cys | Gly |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Gly | Trp | Ile | Lys | Alá | Asn | Pro | Val | Pro | Asp | Gly | His | Ser | Arg | Trp | Gly |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Thr | Phe | Ser | Asn | Leu | Trp | Glu | His | Asn | Gin | Alá | Ile | Ile | Lys | His | Leu |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Leu | Glu | Asn | Ser | Thr | Alá | Ser | Val | Ser | Glu | Alá | Glu | Arg | Lys | Alá | Gin |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Val | Tyr | Tyr | Arg | Alá | Cys | Met | Asn | Glu | Thr | Arg | Ile | Glu | Glu | Leu | Arg |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Alá | Lys | Pro | Leu | Met | Glu | Leu | Ile | Glu | Arg | Leu | Gly | Gly | Trp | Asn | Ile |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Thr | Gly | Pro | Trp | Alá | Lys | Asp | Asn | Phe | Gin | Asp | Thr | Leu | Gin | Val | Val |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Thr | Alá | His | Tyr | Arg | Thr | Ser | Pro | Phe | Phe | Ser | Val | Tyr | Val | Ser | Alá |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Asp | Ser | Lys | Asn | Ser | Asn | Ser | Asn | Val | Ile | Gin | Val | Asp | Gin | Ser | Gly |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Leu | Gly | Leu | Pro | Ser | Arg | Asp | Tyr | Tyr | Leu | Asn | Lys | Thr | Glu | Asn | Glu |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Lys | Val | Leu | Thr | Gly | Tyr | Leu | Asn | Tyr | Met | Val | Gin | Leu | Gly | Lys | Leu |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Leu | Gly | Gly | Gly | Asp | Glu | Glu | Alá | Ile | Arg | Pro | Gin | Met | Gin | Gin | Ile |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Leu | Asp | Phe | Glu | Thr | Alá | Leu | Alá | Asn | Ile | Thr | Ile | Pro | Gin | Glu | Lys |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Arg | Arg | Asp | Glu | Glu | Leu | Ile | Tyr | His | Lys | Val | Thr | Alá | Alá | Glu | Leu |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Gin | Thr | Leu | Alá | Pro | Alá | Ile | Asn | Trp | Leu | Pro | Phe | Leu | Asn | Thr | Ile |
275 280 285
Phe Tyr Pro Val Glu Ile Asn Glu Ser Glu Pro Ile Val Val Tyr Asp 290 295 300 ······ · · ·· · · • · · · · · · • ··· ··· ······
Lys 305 | Glu | Tyr | Leu | Glu | Gin 310 | Ile | Ser | Thr | Leu | Ile 315 | Asn | Thr | Thr | Asp | Arg 320 |
Cys | Leu | Leu | Asn | Asn | Tyr | Met | Ile | Trp | Asn | Leu | Val | Arg | Lys | Thr | Ser |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Ser | Phe | Leu | Asp | Gin | Arg | Phe | Gin | Asp | Ala | Asp | Glu | Lys | Phe | Met | Glu |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Val | Met | Tyr | Gly | Thr | Lys | Lys | Thr | Cys | Leu | Pro | Arg | Trp | Lys | Phe | Cys |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Val | Ser | Asp | Thr | Glu | Asn | Asn | Leu | Gly | Phe | Ala | Leu | Gly | Pro | Met | Phe |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Val | Lys | Ala | Thr | Phe | Ala | Glu | Asp | Ser | Lys | Ser | Ile | Ala | Thr | Glu | Ile |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Ile | Leu | Glu | Ile | Lys | Lys | Ala | Phe | Glu | Glu | Ser | Leu | Ser | Thr | Leu | Lys |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Trp | Met | Asp | Glu | Glu | Thr | Arg | Lys | Ser | Ala | Lys | Glu | Lys | Ala | Asp | Ala |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Ile | Tyr | Asn | Met | Ile | Gly | Tyr | Pro | Asn | Phe | Ile | Met | Asp | Pro | Lys | Glu |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Leu | Asp | Lys | Val | Phe | Asn | Asp | Tyr | Thr | Ala | Val | Pro | Asp | Leu | Tyr | Phe |
450 | 455 | 460 | |||||||||||||
Glu | Asn | Ala | Met | Arg | Phe | Phe | Asn | Phe | Ser | Trp | Arg | Val | Thr | Ala | Asp |
465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Gin | Leu | Arg | Lys | Ala | Pro | Asn | Arg | Asp | Gin | Trp | Ser | Met | Thr | Pro | Pro |
485 | 490 | 495 | |||||||||||||
Met | Val | Asn | Ala | Tyr | Tyr | Ser | Pro | Thr | Lys | Asn | Glu | Ile | Val | Phe | Pro |
500 | 505 | 510 | |||||||||||||
Ala | Gly | Ile | Leu | Gin | Ala | Pro | Phe | Tyr | Thr | Arg | Ser | Ser | Pro | Lys | Ala |
515 | 520 | 525 | |||||||||||||
Leu | Asn | Phe | Gly | Gly | Ile | Gly | Val | Val | Val | Gly | His | Glu | Leu | Thr | His |
530 | 535 | 540 | |||||||||||||
Ala | Phe | Asp | Asp | Gin | Gly | Arg | Glu | Tyr | Asp | Lys | Asp | Gly | Asn | Leu | Arg |
545 | 550 | 555 | 560 | ||||||||||||
Pro | Trp | Trp | Lys | Asn | Ser | Ser | Val | Glu | Ala | Phe | Lys | Arg | Gin | Thr | Glu |
565 | 570 | 575 |
Cys Met Val Glu Gin Tyr Ser Asn Tyr Ser Val Asn Gly Glu Pro Val 580 585 590 »······· ·· ·· · · • · · · · · · • ··· · · · ······ • · * · · · ·· ··· ·· · ··
Asn | Gly | Arg | His | Thr | Leu | Gly | Glu | Asn | Ile | Ala | Asp | Asn | Gly | Gly | Leu |
595 | 600 | 605 | |||||||||||||
Lys | Ala | Ala | Tyr | Arg | Ala | Tyr | Gin | Asn | Trp | Val | Lys | Lys | Asn | Gly | Ala |
610 | 615 | 620 | |||||||||||||
Glu | His | Ser | Leu | Pro | Thr | Leu | Gly | Leu | Thr | Asn | Asn | Gin | Leu | Phe | Phe |
625 | 630 | 635 | 640 | ||||||||||||
Leu | Gly | Phe | Ala | Gin | Val | Trp | Cys | Ser | Val | Arg | Thr | Pro | Glu | Ser | Ser |
645 | 650 | 655 | |||||||||||||
His | Glu | Gly | Leu | Ile | Thr | Asp | Pro | His | Ser | Pro | Ser | Arg | Phe | Arg | Val |
660 | 665 | 670 | |||||||||||||
Ile | Gly | Ser | Leu | Ser | Asn | Ser | Lys | Glu | Phe | Ser | Glu | His | Phe | Arg | Cys |
675 | 680 | 685 | |||||||||||||
Pro | Pro | Gly | Ser | Pro | Met | Asn | Pro | Pro | His | Lys | Cys | Glu | Val | Trp | |
690 | 695 | 700 |
A 26. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 24 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: DNS (genomiális) (iii) FELTÉTELEZETT-E: nem (iii) ANTISZENSZ-E: igen (xi) A 26. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
GGTGCTTGAT GATGGCTTGG TTGT
A 27. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 24 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: DNS (genomiális) (iii) FELTÉTELEZETT-E: nem (iii) ANTISZENSZ-E: igen (xi) A 27. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
AGATGGAGCT GGTCACCGAG ATGC 24
A 28. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 324 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: cDNS mRNS-hez (iii) FELTÉTELEZETT-E: nem (vi) EREDETI SZÁRMAZÁS:
(A) SZERVEZET: Bős taurus (F) SZÖVETTÍPUS: tüdő (xi) A 28. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
GGGAGCGCGG CGCGGGGCCG GAGCGGAGCG CGCGAGCGAT GATGTCTACC TACAAGCGGC 60
CCACGCTGGA CGAGGAGGAC CTGGTGGACT CGCTGTCCGA GAGCGACGTG TACCCCAACC 120
ACCTGCAGGT GAACTTCCGA GGCCCCCGGA ACGGCCAGAG ATGCTGGGCC GCCAGGACCC 180
CGGTGGAGAA GCGGCTGGTG GTGCTGGTGG CGCTCCTGGC GGCGGCATTG GTGGCCTGTT 240
TGGCAGTACT GGGCATCCAA TACCAGACAA GAACGCCCTC GGTGTGCCTA AGTGAGGCCT 300
GCATCTCGGT GACCAGCTCC ATCT 324
A 29. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 2314 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: cDNS mRNS-hez (vi) EREDETI SZÁRMAZÁS:
(A) SZERVEZET: Bős taurus (F) SZÖVETTÍPUS: tüdő (ix) JELLEGZETESSÉGEK:
(A) NÉV/KULCS: CDS (B) HELYZET: 39..2301 (xi) A 29. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
GGGAGCGCGG CGCGGGGCCG GAGCGGAGCG CGCGAGCG ATG ATG TCT ACC TAC 53
Met Met Ser Thr Tyr
5
AAG Lys | CGG CCC | ACG CTG Thr Leu 10 | GAC Asp | GAG GAG GAC CTG GTG GAC TCG CTG TCC GAG | 101 | ||||||||
Arg | Pro | Glu | Glu | Asp | Leu Val 15 | Asp | Ser | Leu Ser 20 | Glu | ||||
AGC | GAC | GTG | TAC CCC | AAC | CAC | CTG | CAG | GTG AAC | TTC | CGA | GGC CCC | CGG | 149 |
Ser | Asp | Val | Tyr Pro | Asn | His | Leu | Gin | Val Asn | Phe | Arg | Gly Pro | Arg | |
25 | 30 | 35 | |||||||||||
AAC | GGC | CAG | AGA TGC | TGG | GCC | GCC | AGG | ACC CCG | GTG | GAG | AAG CGG | CTG | 197 |
Asn | Gly | Gin | Arg Cys | Trp | Alá | Alá | Arg | Thr Pro | Val | Glu | Lys Arg | Leu | |
40 | 45 | 50 | |||||||||||
GTG | GTG | CTG | GTG GCG | CTC | CTG | GCG | GCG | GCA TTG | GTG | GCC | TGT TTG | GCA | 245 |
Val | Val | Leu | Val Alá | Leu | Leu | Alá | Alá | Alá Leu | Val | Alá | Cys Leu | Alá | |
55 | 60 | 65 | |||||||||||
GTA | CTG | GGC | ATC CAA | TAC | CAG | ACA | AGA | ACG CCC | TCG | GTG | TGC CTA | AGT | 293 |
Val | Leu | Gly | Ile Gin | Tyr | Gin | Thr | Arg | Thr Pro | Ser | Val | Cys Leu | Ser | |
70 | 75 | 80 | 85 | ||||||||||
GAG | GCC | TGC | ATC TCG | GTG | ACC | AGC | TCC | ATC TTG | AGT | TCC | ATG GAC | CCC | 341 |
Glu | Alá | Cys | Ile Ser | Val | Thr | Ser | Ser | Ile Leu | Ser | Ser | Met Asp | Pro | |
90 | 95 | 100 | |||||||||||
ACG | GTG | GAC | CCC TGC | CAG | GAC | TTC | TTC | ACC TAT | GCC | TGT | GGC GGC | TGG | 389 |
Thr | Val | Asp | Pro Cys | Gin | Asp | Phe | Phe | Thr Tyr | Alá | Cys | Gly Gly | Trp | |
105 | 110 | 115 | |||||||||||
ATC | AAA | GCC | AAC CCC | GTG | CCG | GAT | GGC | CAC TCG | CGC | TGG | GGG ACC | TTC | 437 |
Ile | Lys | Alá | Asn Pro | Val | Pro | Asp | Gly | His Ser | Arg | Trp | Gly Thr | Phe | |
120 | 125 | 130 |
• · · · · · · • ··· ··· ······ • · · · · · • ··* ·· · » * ··*· ··»·
AGC AAC CTC TGG | GAA CAC | AAC CAA GCC ATC ATC AAG CAC CTC | CTT Leu | GAA Glu | 485 | |||||||
Ser Asn Leu 135 | Trp | Glu | His | Asn Gin 140 | Alá | He | He | Lys His 145 | Leu | |||
AAC TCC ACG | GCC | AGC | GTG | AGC GAG | GCA | GAG | AGG | AAG GAC | CAG | GAG | TAC | 533 |
Asn Ser Thr 150 | Alá | Ser | Val 155 | Ser Glu | Alá | Glu | Arg 160 | Lys Asp | Gin | Glu | Tyr 165 | |
TAC CGA GCC | TGC | ATG | AAC | GAA ACC | AGG | ATT | GAG | GAG CTC | AAG | GCC | AAA | 581 |
Tyr Arg Alá | Cys | Met 170 | Asn | Glu Thr | Arg | He 175 | Glu | Glu Leu | Lys | Alá 180 | Lys | |
CCC CTG ATG | GAG | CTC | ATT | GAG AAG | CTC | GGC | GGC | TGG AAC | ATC | ACG | GGG | 629 |
Pro Leu Met | Glu 185 | Leu | lle | Glu Lys | Leu 190 | Gly Gly | Trp Asn | He 195 | Thr | Gly | ||
CCC TGG GAC | AAG | GAC | AAC | TTC CAG | GAC | ACC | CTG | CAG GTG | GTC | ACA | TCC | 677 |
Pro Trp Asp 200 | Lys | Asp | Asn | Phe Gin 205 | Asp | Thr | Leu | Gin Val 210 | Val | Thr | Ser | |
CAC TAC CAC | ACC | TCC | CCC | TTC TTC | TCC | GTC | TAC | GTC AGT | GCC | GAC | TCC | 725 |
His Tyr His 215 | Thr | Ser | Pro | Phe Phe 220 | Ser | Val | Tyr | Val Ser 225 | Alá | Asp | Ser | |
AAG AAT TCC | AAC | AGC | AAC | GTG ATC | CAA | GTG | GAC | CAG TCT | GGC | CTG | GGC | 773 |
Lys Asn Ser 230 | Asn | Ser | Asn 235 | Val He | Gin | Val | Asp 240 | Gin Ser | Gly | Leu | Gly 245 | |
TTA CCC TCA | AGA | GAT | TAT | TAC CTG | AAC | AAA | ACC | GAG AAT | GAG | AAG | GTG | 821 |
Leu Pro Ser | Arg Asp 250 | Tyr | Tyr Leu | Asn | Lys 255 | Thr | Glu Asn | Glu | Lys 260 | Val | ||
CTG ACG GGA | TAC | CTG | AAC | TAC ATG | GTC | CAG | CTG | GGG AAG | CTG | CTG | GGA | 869 |
Leu Thr Gly | Tyr 265 | Leu | Asn | Tyr Met | Val 270 | Gin | Leu | Gly Lys | Leu 275 | Leu | Gly | |
GGA GGG GCC | GAG | GAC | ACC | ATC CGG | CCC | CAG | ATG | CAG CAG | ATC | CTG | GAC | 917 |
Gly Gly Alá 280 | Glu | Asp | Thr | lle Arg 285 | Pro | Gin | Met | Gin Gin 290 | lle | Leu | Asp | |
TTT GAG ACG | GCG | CTG | GCC | AAC ATC | ACC | ATC | CCC | CAG GAG | AAG | CGC | CGG | 965 |
Phe Glu Thr 295 | Alá | Leu | Alá | Asn lle 300 | Thr | He | Pro | Gin Glu 305 | Lys | Arg Arg | ||
GAC GAG GAA | CTC | ATC | TAC | CAC AAA | GTG | ACG | GCG | GCT GAG | TTG | CAG | ACC | 1013 |
Asp Glu Glu 310 | Leu | lle | Tyr 315 | His Lys | Val | Thr | Alá 320 | Alá Glu | Leu | Gin | Thr 325 | |
TTG GCG CCC | GCC | ATC | AAC | TGG CTG | CCC | TTC | CTC | AAC ACC | ATC | TTC | TAC | 1061 |
Leu Alá Pro | Alá | lle 330 | Asn | Trp Leu | Pro | Phe 335 | Leu | Asn Thr | He | Phe 340 | Tyr | |
CCC GTG GAG | ATC | AAT | GAA | TCA GAG | CCT | ATT | GTC | ATC TAC | GAC | AAA | GAA | 1109 |
Pro Val Glu | He 345 | Asn | Glu | Ser Glu | Pro 350 | He | Val | lle Tyr | Asp 355 | Lys | Glu |
«· »· *· • « · · · · · « ··· ·«· ··· ··· • · « · · · ·· ··« ·· · ·· ···» ····
TAC CTG AGC AAG GTC TCC ACC CTC ATC AAC | AGC ACA GAC AAA TGC CTG | 1157 | ||||||||||||||
Tyr | Leu | Ser 360 | Lys Val Ser | Thr Leu Ile 365 | Asn | Ser | Thr Asp Lys 370 | Cys | Leu | |||||||
CTG | AAC | AAC | TAC | ATG | ATC | TGG | AAC | CTG | GTA | CGG | AAG | ACG | AGC | TCC | TTC | 1205 |
Leu | Asn | Asn | Tyr | Met | Ile | Trp | Asn | Leu | Val | Arg | Lys | Thr | Ser | Ser | Phe | |
375 | 380 | 385 | ||||||||||||||
CTC | GAT | CAG | CGC | TTC | CAG | GAC | GCC | GAC | GAG | TAG | TTC | ATG | GAA | GTC | ATG | 1253 |
Leu | Asp | Gin | Arg | Phe | Gin | Asp | Alá | Asp | Glu | Lys | Phe | Met | Glu | Val | Met | |
390 | 395 | 400 | 405 | |||||||||||||
TAT | GGG | ACC | AAG | AAG | ACG | TGT | CTT | CCC | CGC | TGG | AAG | TTT | TGT | GTG | AGT | 1301 |
Tyr | Gly | Thr | Lys | Lys | Thr | Cys | Leu | Pro | Arg | Trp | Lys | Phe | Cys | Val | Ser | |
410 | 415 | 420 | ||||||||||||||
GAT | ACA | GAG | AAC | ACC | TTG | GGC | TTC | GCC | CTG | GGC | CCC | ATG | TTC | GTC | AAA | 1349 |
Asp | Thr | Glu | Asn | Thr | Leu | Gly | Phe | Alá | Leu | Gly | Pro | Met | Phe | Val | Lys | |
425 | 430 | 435 | ||||||||||||||
GCG | ACC | TTC | GCT | GAG | GAC | AGC | AAG | AAC | ATA | GCC | AGC | GAG | ATC | ATC | CTG | 1397 |
Alá | Thr | Phe | Alá | Glu | Asp | Ser | Lys | Asn | Ile | Alá | Ser | Glu | Ile | Ile | Leu | |
440 | 445 | 450 | ||||||||||||||
GAG | ATC | AAG | AAG | GCG | TTT | GAA | GAG | AGC | CTG | AGC | ACC | CTG | AAG | TGG | ATG | 1445 |
Glu | Ile | Lys | Lys | Alá | Phe | Glu | Glu | Ser | Leu | Ser | Thr | Leu | Lys | Trp | Met | |
455 | 460 | 465 | ||||||||||||||
GAT | GAA | GAT | ACT | CGG | AAA | TCG | GCC | AAG | GAA | AAG | GCG | GAC | GCG | ATC | TAC | 1493 |
Asp | Glu | Asp | Thr | Arg | Lys | Ser | Alá | Lys | Glu | Lys | Alá | Asp | Alá | Ile | Tyr | |
470 | 475 | 480 | 485 | |||||||||||||
AAC | ATG | ATA | GGC | TAC | CCC | AAC | TTT | ATC | ATG | GAC | CCC | AAG | GAG | CTG | GAC | 1541 |
Asn | Met | Ile | Gly | Tyr | Pro | Asn | Phe | Ile | Met | Asp | Pro | Lys | Glu | Leu | Asp | |
490 | 495 | 500 | ||||||||||||||
AAA | GTG | TTC | AAT | GAC | TAC | ACC | GCT | GTG | CCA | GAC | CTC | TAC | TTC | GAG | AAC | 1589 |
Lys | Val | Phe | Asn | Asp | Tyr | Thr | Alá | Val | Pro | Asp | Leu | Tyr | Phe | Glu | Asn | |
505 | 510 | 515 | ||||||||||||||
GCC | ATG | CGG | TTT | TTC | AAC | TTC | TCC | TGG | AGG | GTC | ACT | GCC | GAC | CAG | CTC | 1637 |
Alá | Met | Arg | Phe | Phe | Asn | Phe | Ser | Trp | Arg | Val | Thr | Alá | Asp | Gin | Leu | |
520 | 525 | 530 | ||||||||||||||
CGG | AAA | GCG | CCC | AAC | AGA | GAT | CAG | TGG | AGC | ATG | ACC | CCG | CCC | ATG | GTG | 1685 |
Arg | Lys | Alá | Pro | Asn | Arg Asp | Gin | Trp | Ser | Met | Thr | Pro | Pro | Met | Val | ||
535 | 540 | 545 | ||||||||||||||
AAC | GCC | TAC | TAC | TCG | CCC | ACC | AAG | AAC | GAG | ATC | GTG | TTT | CCG | GCC | GGA | 1733 |
Asn | Alá | Tyr | Tyr | Ser | Pro | Thr | Lys | Asn | Glu | Ile | Val | Phe | Pro | Alá | Gly | |
550 | 555 | 560 | 565 | |||||||||||||
ATC | CTG | CAG | GCG | CCA | TTC | TAC | ACC | CGC | TCT | TCA | CCC | AAT | GCC | TTA | AAC | 1781 |
Ile | Leu | Gin | Alá | Pro | Phe | Tyr | Thr | Arg | Ser | Ser | Pro | Asn | Alá | Leu | Asn |
570 575 580 *·· 999·
Ί4
TTC GGC GGC ATC | GGC GTC GTC GTG GGC CAC GAG CTG ACT CAT GCT TTT | 1829 | ||||||||||||||
Phe | Gly | Gly | Ile 585 | Gly Val | Val | Val Gly His 590 | Glu Leu Thr | His 595 | Alá | Phe | ||||||
GAT | GAT | CAA | GGC | CGA | GAG | TAC | GAC | AAG | GAT | GGG | AAC | CTC | CGG | CCC | TGG | 1877 |
Asp | Asp | Gin | Gly Arg | Glu | Tyr | Asp | Lys | Asp | Gly | Asn | Leu | Arg | Pro | Trp | ||
600 | 605 | 610 | ||||||||||||||
TGG | AAG | AAC | TCG | TCC | GTG | GAG | GCG | TTC | AAG | CAG | CAG | ACC | GCG | TGC | ATG | 1925 |
Trp | Lys | Asn | Ser | Ser | Val | Glu | Alá | Phe | Lys | Gin | Gin | Thr | Alá | Cys | Met | |
615 | 620 | 625 | ||||||||||||||
GTG | GAG | CAG | TAC | GGC | AAC | TAT | AGC | GTG | AAC | GGG | GAG | CCG | GTG | AAC | GGC | 1973 |
Val | Glu | Gin | Tyr | Gly | Asn | Tyr | Ser | Val | Asn | Gly | Glu | Pro | Val | Asn | Gly | |
630 | 635 | 640 | 645 | |||||||||||||
CGG | CAC | ACC | CTC | GGC | GAA | AAC | ATC | GCC | GAC | AAC | GGG | GGC | CTC | AAG | GCG | 2021 |
Arg | His | Thr | Leu | Gly | Glu | Asn | Ile | Alá | Asp | Asn | Gly Gly | Leu | Lys | Alá | ||
650 | 655 | 660 | ||||||||||||||
GCC | TAT | CGG | GCC | TAC | CAG | AAC | TGG | GTC | AAG | AAG | AAT | GGG | GCT | GAG | CAG | 2069 |
Alá | Tyr Arg | Alá | Tyr | Gin | Asn | Trp | Val | Lys | Lys | Asn | Gly | Alá | Glu | Gin | ||
665 | 670 | 675 | ||||||||||||||
ACA | CTG | CCC | ACC | CTG | GGT | CTC | ACC | AAC | AAC | CAG | CTC | TTC | TTC | CTG | AGT | 2117 |
Thr | Leu | Pro | Thr | Leu | Gly | Leu | Thr | Asn | Asn | Gin | Leu | Phe | Phe | Leu | Ser | |
680 | 685 | 690 | ||||||||||||||
TTT | GCA | CAG | GTC | TGG | TGT | TCC | GTC | CGC | ACC | CCC | GAG | AGT | TCG | CAC | GAA | 2165 |
Phe | Alá | Gin | Val | Trp | Cys | Ser | Val | Arg | Thr | Pro | Glu | Ser | Ser | His | Glu | |
695 | 700 | 705 | ||||||||||||||
GGT | CTC | ATC | ACC | GAT | CCC | CAC | AGC | CCC | TCC | CGC | TTC | CGG | GTC | ATC | GGC | 2213 |
Gly | Leu | Ile | Thr | Asp | Pro | His | Ser | Pro | Ser | Arg | Phe | Arg | Val | Ile | Gly | |
710 | 715 | 720 | 725 | |||||||||||||
TCC | ATC | TCC | AAC | TCC | AAG | GAG | TTC | TCG | GAA | CAC | TTC | CAC | TGC | CCG | CCC | 2261 |
Ser | Ile | Ser | Asn | Ser | Lys | Glu | Phe | Ser | Glu | His | Phe | His | Cys | Pro | Pro | |
730 | 735 | 740 | ||||||||||||||
GGC | TCA | CCC | ATG | AAC | CCG | CAT | CAC | AAG | TGT | GAA | GTC | TGG | T GAAGGGCCAG | 2311 | ||
Gly | Ser | Pro | Met | Asn | Pro | His | His | Lys | Cys | Glu | Val | Trp |
745 750
GCA 2314
A 30. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 754 aminosavn (B) TÍPUS: aminosav »··· ···· *· • · · < · · ·· ··· ·· · ·»
75 | |||||||||||||||
(D) TOPOLÓGIA | : lineáris | ||||||||||||||
(ii: | 1 A ] | HOLEKULA | TÍPUSA: | protein | |||||||||||
(xi) A | 30 . | SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA: | |||||||||||||
Met | Met | Ser | Thr | Tyr | Lys | Arg | Pro | Thr | Leu | Asp | Glu | Glu | Asp | Leu | Val |
1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
Asp | Ser | Leu | Ser | Glu | Ser | Asp | Val | Tyr | Pro | Asn | His | Leu | Gin | Val | Asn |
20 | 25 | 30 | |||||||||||||
Phe | Arg | Gly | Pro | Arg | Asn | Gly | Gin | Arg | Cys | Trp | Alá | Alá | Arg | Thr | Pro |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Val | Glu | Lys | Arg | Leu | Val | Val | Leu | Val | Alá | Leu | Leu | Alá | Alá | Alá | Leu |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Val | Alá | Cys | Leu | Alá | Val | Leu | Gly | Ile | Gin | Tyr | Gin | Thr | Arg | Thr | Pro |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Ser | Val | Cys | Leu | Ser | Glu | Alá | Cys | Ile | Ser | Val | Thr | Ser | Ser | Ile | Leu |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Ser | Ser | Met | Asp | Pro | Thr | Val | Asp | Pro | Cys | Gin | Asp | Phe | Phe | Thr | Tyr |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Alá | Cys | Gly | Gly | Trp | Ile | Lys | Alá | Asn | Pro | Val | Pro | Asp | Gly | His | Ser |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Arg | Trp | Gly | Thr | Phe | Ser | Asn | Leu | Trp | Glu | His | Asn | Gin | Alá | Ile | Ile |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Lys | His | Leu | Leu | Glu | Asn | Ser | Thr | Alá | Ser | Val | Ser | Glu | Alá | Glu | Arg |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
Lys | Asp | Gin | Glu | Tyr | Tyr | Arg | Alá | Cys | Met | Asn | Glu | Thr | Arg | Ile | Glu |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Glu | Leu | Lys | Alá | Lys | Pro | Leu | Met | Glu | Leu | Ile | Glu | Lys | Leu | Gly | Gly |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Trp | Asn | Ile | Thr | Gly | Pro | Trp | Asp | Lys | Asp | Asn | Phe | Gin | Asp | Thr | Leu |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Gin | Val | Val | Thr | Ser | His | Tyr | His | Thr | Ser | Pro | Phe | Phe | Ser | Val | Tyr |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Val | Ser | Alá | Asp | Ser | Lys | Asn | Ser | Asn | Ser | Asn | Val | Ile | Gin | Val | Asp |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Gin | Ser | Gly | Leu | Gly | Leu | Pro | Ser | Arg | Asp | Tyr | Tyr | Leu | Asn | Lys | Thr |
245 | 250 | 255 |
• ·
Glu | Asn | Glu | Lys 260 | Val | Leu | Thr | Gly | Tyr 265 | Leu | Asn | Tyr | Met | Val 270 | Gin | Leu |
Gly | Lys | Leu | Leu | Gly | Gly | Gly | Alá | Glu | Asp | Thr | Ile | Arg | Pro | Gin | Met |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Gin | Gin | Ile | Leu | Asp | Phe | Glu | Thr | Alá | Leu | Alá | Asn | Ile | Thr | Ile | Pro |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Gin | Glu | Lys | Arg | Arg | Asp | Glu | Glu | Leu | Ile | Tyr | His | Lys | Val | Thr | Al a |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Alá | Glu | Leu | Gin | Thr | Leu | Alá | Pro | Alá | Ile | Asn | Trp | Leu | Pro | Phe | Leu |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Asn | Thr | Ile | Phe | Tyr | Pro | Val | Glu | Ile | Asn | Glu | Ser | Glu | Pro | Ile | Val |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Ile | Tyr | Asp | Lys | Glu | Tyr | Leu | Ser | Lys | Val | Ser | Thr | Leu | Ile | Asn | Ser |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Thr | Asp | Lys | Cys | Leu | Leu | Asn | Asn | Tyr | Met | Ile | Trp | Asn | Leu | Val | Arg |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Lys | Thr | Ser | Ser | Phe | Leu | Asp | Gin | Arg | Phe | Gin | Asp | Alá | Asp | Glu | Lys |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Phe | Met | Glu | Val | Met | Tyr | Gly | Thr | Lys | Lys | Thr | Cys | Leu | Pro | Arg | Trp |
405 | 410 | 415 | |||||||||||||
Lys | Phe | Cys | Val | Ser | Asp | Thr | Glu | Asn | Thr | Leu | Gly | Phe | Alá | Leu | Gly |
420 | 425 | 430 | |||||||||||||
Pro | Met | Phe | Val | Lys | Alá | Thr | Phe | Alá | Glu | Asp | Ser | Lys | Asn | Ile | Alá |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Ser | Glu | Ile | Ile | Leu | Glu | Ile | Lys | Lys | Alá | Phe | Glu | Glu | Ser | Leu | Ser |
450 | 455 | 460 | |||||||||||||
Thr | Leu | Lys | Trp | Met | Asp | Glu | Asp | Thr | Arg | Lys | Ser | Alá | Lys | Glu | Lys |
465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Alá | Asp | Alá | Ile | Tyr | Asn | Met | Ile | Gly | Tyr | Pro | Asn | Phe | Ile | Met | Asp |
485 | 490 | 495 | |||||||||||||
Pro | Lys | Glu | Leu | Asp | Lys | Val | Phe | Asn | Asp | Tyr | Thr | Alá | Val | Pro | Asp |
500 | 505 | 510 | |||||||||||||
Leu | Tyr | Phe | Glu | Asn | Alá | Met | Arg | Phe | Phe | Asn | Phe | Ser | Trp | Arg | Val |
515 520 525
Thr Alá Asp Gin Leu Arg Lys Alá Pro Asn Arg Asp Gin Trp Ser Met 530 535 540
77 | • · * · · · • · • · · • · • · · · 1 | • · · · • · • · · · • 9 • ·· | • · · • · · · · • · • · | • • • • | |
Thr Pro Pro Met | Val Asn Ala Tyr Tyr | Ser Pro Thr Lys | Asn | Glu | Ile |
545 | 550 | 555 | 560 | ||
Val Phe Pro Ala | Gly Ile Leu Gin Ala | Pro Phe Tyr Thr | Arg | Ser | Ser |
565 | 570 | 575 | |||
Pro Asn Ala Leu | Asn Phe Gly Gly Ile | Gly Val Val Val | Gly | His | Glu |
580 | 585 | 590 | |||
Leu Thr His Ala | Phe Asp Asp Gin Gly | Arg Glu Tyr Asp | Lys | Asp | Gly |
595 | 600 | 605 | |||
Asn Leu Arg Pro | Trp Trp Lys Asn Ser | Ser Val Glu Ala | Phe | Lys | Gin |
610 | 615 | 620 | |||
Gin Thr Ala Cys | Met Val Glu Gin Tyr | Gly Asn Tyr Ser | Val | Asn | Gly |
625 | 630 | 635 | 640 | ||
Glu Pro Val Asn | Gly Arg His Thr Leu | Gly Glu Asn Ile | Ala | Asp | Asn |
645 | 650 | 655 | |||
Gly Gly Leu Lys | Ala Ala Tyr Arg Ala | Tyr Gin Asn Trp | Val | Lys | Lys |
660 | 665 | 670 | |||
Asn Gly Ala Glu | Gin Thr Leu Pro Thr | Leu Gly Leu Thr | Asn | Asn | Gin |
675 | 680 | 685 | |||
Leu Phe Phe Leu | Ser Phe Ala Gin Val | Trp Cys Ser Val | Arg | Thr | Pro |
690 | 695 | 700 | |||
Glu Ser Ser His | Glu Gly Leu Ile Thr | Asp Pro His Ser | Pro | Ser | Arg |
705 | 710 | 715 | 720 | ||
Phe Arg Val Ile | Gly Ser Ile Ser Asn | Ser Lys Glu Phe | Ser | Glu | His |
725 | 730 | 735 | |||
Phe His Cys Pro | Pro Gly Ser Pro Met | Asn Pro His His | Lys | Cys | Glu |
740 | 745 | 750 | |||
Val Trp | |||||
A 31. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI: | |||||
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI: |
(A) HOSSZ: 53 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: DNS (genomiális) « · • · « ···· ···· ·, • · · · · ··· ...
* * · · ·· ··· .· (iii) FELTÉTELEZETT-E: nem (iii) ANTISZENSZ-E: igen (xi) A 31. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
GAGAGAGAGA GAGAGAGAGA ACTAGTCTCG AGCCAAGCAG GCCACCAGTC CTG 53
A 32. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 25 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁLTÍPUS: egyszálú (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: DNS (genomiális) (iii) FELTÉTELEZETT-E: nem (iii) ANTISZENSZ-E: igen (xi) A 32. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
CCTGCCGCCA GAAGTACCAC CAACA 25
A 33. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) | HOSSZ: 222 | bázispár |
(B) | TÍPUS: nukleinsav | |
(C) | SZÁLTÍPUS: | egyszálú |
(D) | TOPOLÓGIA: | lineáris |
(ii) A MOLEKULA TÍPUSA: cDNS mRNS-hez (iii) FELTÉTELEZETT-E: nem (vi) EREDETI SZÁRMAZÁS:
(A) SZERVEZET: Homo sapiens (F) SZÖVETTÍPUS: placenta ···· ····
(ix) JELLEGZETESSÉGEK:
(A) NÉV/KULCS: CDS (B) HELYZET: 38..222 (xi) A 33. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
CGCCCCCCCG GTGTCCGCCC TGCTGTCGGC GCTGGGG ATG TCG ACG TAC AAG CGG 55
Met Ser Thr Tyr Lys Arg
5
GCC Alá | ACG Thr | CTG GAC GAG GAG GAC CTG | GTG GAC TCG CTC TCC GAG | GGC GAC Gly Asp | 103 | |||||||||||
Leu | Asp Glu Glu 10 | Asp Leu | Val 15 | Asp | Ser | Leu | Ser | Glu 20 | ||||||||
GCA | TAC | CCC | AAC | GGC | CTG | CAG | GTG | AAC | TTC | CAC | AGC | CCC | CGG | AGT | GGC | 151 |
Alá | Tyr | Pro | Asn | Gly | Leu | Gin | Val | Asn | Phe | His | Ser | Pro | Arg | Ser | Gly | |
25 | 30 | 35 | ||||||||||||||
CAG | AGG | TGC | TGG | GCT | GCA | CGG | ACC | CAG | GTG | GAG | AAG | CGG | CTG | GTG | GTG | 199 |
Gin | Arg Cys | Trp | Alá | Alá | Arg | Thr | Gin | Val | Glu | Lys | Arg | Leu | Val | Val | ||
40 | 45 | 50 | ||||||||||||||
TTG | GTG | GTA | CTT | CTG | GCG | GCA | GG | 222 | ||||||||
Leu | Val | Val | Leu | Leu | Alá | Alá | ||||||||||
55 | 60 |
A 34. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 61 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: protein (xi) A 34. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
Met 1 | Ser | Thr | Tyr | Lys 5 | Arg Alá | Thr | Leu | Asp 10 | Glu | Glu | Asp | Leu Val 15 | Asp | ||
Ser | Leu | Ser | Glu | Gly | Asp | Alá | Tyr | Pro | Asn | Gly | Leu | Gin | Val | Asn | Phe |
20 | 25 | 30 |
His Ser Pro Arg Ser Gly Gin Arg Cys Trp Alá Alá Arg Thr Gin Val 35 40 45
Glu Lys Arg Leu Val Val Leu Val Val Leu Leu Alá Alá
55 60
A 35. SZÁMÓ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) | HOSSZ: | 2720 | bázispár |
(B) | TÍPUS: | nukleinsav | |
(C) | SZÁLTÍPUS: | egyszálú | |
(D) | TOPOLÓGIA: | lineáris |
(ii) A MOLEKULA TÍPUSA: cDNS mRNS-hez (iii) FELTÉTELEZETT-E: nem (vi) EREDETI SZÁRMAZÁS:
(A) SZERVEZET: Homo sapiens (F) SZÖVETTÍPUS: placenta (ix) JELLEGZETESSÉGEK:
(A) NÉV/KULCS: CDS (B) HELYZET: 38..2297 (xi) A 35. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA:
CGCCCCCCCG GTGTCCGCCC TGCTGTCGGC GCTGGGG ATG TCG ACG TAC AAG CGG 55
Met Ser Thr Tyr Lys Arg
5
GCC Alá | ACG CTG GAC | GAG Glu | GAG GAC CTG Glu Asp Leu | GTG GAC TCG CTC TCC GAG GGC GAC | 103 | |||||||||||
Thr Leu | Asp 10 | Val 15 | Asp | Ser | Leu Ser Glu 20 | Gly Asp | ||||||||||
GCA | TAC | CCC | AAC | GGC | CTG | CAG | GTG | AAC | TTC | CAC | AGC | CCC | CGG | AGT | GGC | 151 |
Alá | Tyr | Pro | Asn | Gly | Leu | Gin | Val | Asn | Phe | His | Ser | Pro | Arg | Ser | Gly | |
25 | 30 | 35 | ||||||||||||||
CAG | AGG | TGC | TGG | GCT | GCA | CGG | ACC | CAG | GTG | GAG | AAG | CGG | CTG | GTG | GTG | 199 |
Gin | Arg | Cys | Trp | Alá | Alá | Arg | Thr | Gin | Val | Glu | Lys | Arg | Leu | Val | Val | |
40 | 45 | 50 | ||||||||||||||
TTG | GTG | GTA | CTT | CTG | GCG | GCA | GGA | CTG | GTG | GCC | TGC | TTG | GCA | GCA | CTG | 247 |
Leu | Val | Val | Leu | Leu | Alá | Alá | Gly | Leu | Val | Alá | Cys | Leu | Alá | Alá | Leu | |
55 | 60 | 65 | 70 | |||||||||||||
GGC | ATC | CAG | TAC | CAG | ACA | AGA | TCC | CCC | TCT | GTG | TGC | CTG | AGC | GAA | GCT | 295 |
Gly | Ile | Gin | Tyr | Gin | Thr | Arg | Ser | Pro | Ser | Val | Cys | Leu | Ser | Glu | Alá | |
75 | 80 | 85 |
···· ····
TGT GTC Cys Val | TCA GTG | ACC Thr | AGC TCC ATC TTG AGC TCC ATG GAC CCC ACA GTG | 343 | |||||||
Ser | Val 90 | Ser Ser | Ile | Leu Ser 95 | Ser Met Asp | Pro 100 | Thr | Val | |||
GAC CCC | TGC | CAT | GAC | TTC TTC | AGC | TAC GCC | TGT GGG GGC | TGG | ATC | AAG | 391 |
Asp Pro | Cys | His | Asp | Phe Phe | Ser | Tyr Ala | Cys Gly Gly | Trp | Ile | Lys | |
105 | 110 | 115 | |||||||||
GCC AAC | CCA | GTC | CCT | GAT GGC | CAC | TCA CGC | TGG GGG ACC | TTC | AGC | AAC | 439 |
Ala Asn | Pro | Val | Pro | Asp Gly | His | Ser Arg | Trp Gly Thr | Phe | Ser | Asn | |
120 | 125 | 130 | |||||||||
CTC TGG | GAA | CAC | AAC | CAA GCA | ATC | ATC AAG | CAC CTC CTC | GAA | AAC | TCC | 487 |
Leu Trp | Glu | His | Asn | Gin Ala | Ile | Ile Lys | His Leu Leu | Glu | Asn | Ser | |
135 | 140 | 145 | 150 | ||||||||
ACG GCC | AGC | GTG | AGC | GAG GCA | GAG | AGA AAG | GCG CAA GTA | TAC | TAC | CGT | 535 |
Thr Ala | Ser | Val | Ser | Glu Ala | Glu | Arg Lys | Ala Gin Val | Tyr | Tyr Arg | ||
155 | 160 | 165 | |||||||||
GCG TGC | ATG | AAC | GAG | ACC AGG | ATC | GAG GAG | CTC AGG GCC | AAA | CCT | CTA | 583 |
Ala Cys | Met | Asn | Glu | Thr Arg | Ile | Glu Glu | Leu Arg Ala | Lys | Pro | Leu | |
170 | 175 | 180 | |||||||||
ATG GAG | TTG | ATT | GAG | AGG CTC | GGG | GGC TGG | AAC ATC ACA | GGT | CCC | TGG | 631 |
Met Glu | Leu | Ile | Glu | Arg Leu | Gly Gly Trp | Asn Ile Thr | Gly | Pro | Trp | ||
185 | 190 | 195 | |||||||||
GCC AAG | GAC | AAC | TTC | CAG GAC | ACC | CTG CAG | GTG GTC ACC | GCC | CAC | TAC | 679 |
Ala Lys Asp | Asn | Phe | Gin Asp | Thr | Leu Gin | Val Val Thr | Ala | His | Tyr | ||
200 | 205 | 210 | |||||||||
CGC ACC | TCA | CCC | TTC | TTC TCT | GTC | TAT GTC | AGT GCC GAT | TCC | AAG | AAC | 727 |
Arg Thr | Ser | Pro | Phe | Phe Ser | Val | Tyr Val | Ser Ala Asp | Ser | Lys | Asn | |
215 | 220 | 225 | 230 | ||||||||
TCC AAC | AGC | AAC | GTG | ATC CAG | GTG | GAC CAG | TCT GGC CTG | GGC | TTG | CCC | 775 |
Ser Asn | Ser | Asn | Val | Ile Gin | Val | Asp Gin | Ser Gly Leu | Gly | Leu | Pro | |
235 | 240 | 245 | |||||||||
TCG AGA | GAC | TAT | TAC | CTG AAC | AAA | ACT GAA | AAC GAG AAG | GTG | CTG | ACC | 823 |
Ser Arg Asp | Tyr | Tyr | Leu Asn | Lys | Thr Glu | Asn Glu Lys | Val | Leu | Thr | ||
250 | 255 | 260 | |||||||||
GGA TAT | CTG | AAC | TAC | ATG GTC | CAG | CTG GGG | AAG CTG CTG | GGC | GGC | GGG | 871 |
Gly Tyr | Leu | Asn | Tyr | Met Val | Gin | Leu Gly | Lys Leu Leu | Gly Gly Gly | |||
265 | 270 | 275 | |||||||||
GAC GAG | GAG | GCC | ATC | CGG CCC | CAG | ATG CAG | CAG ATC TTG | GAC | TTT | GAG | 919 |
Asp Glu | Glu | Ala | Ile | Arg Pro | Gin | Met Gin | Gin Ile Leu | Asp | Phe | Glu | |
280 | 285 | 290 | |||||||||
ACG GCA | CTG | GCC | AAC | ATC ACC | ATC | CCA CAG | GAG AAG CGC | CGT | GAT | GAG | 967 |
Thr Ala | Leu | Ala | Asn | Ile Thr | Ile | Pro Gin | Glu Lys Arg Arg Asp | Glu | |||
295 | 300 | 305 | 310 |
GAG CTC Glu Leu | ATC TAC Ile Tyr | CAC AAA GTG ACG GCA GCC GAG CTG CAG ACC TTG GCA | 1015 | |||||||||||||
His Lys 315 | Val Thr | Ala | Ala 320 | Glu Leu | Gin | Thr | Leu Ala 325 | |||||||||
CCC | GCC | ATC | AAC | TGG | TTG | CCT | TTT | CTC | AAC | ACC | ATC | TTC | TAC | CCC | GTG | 1063 |
Pro | Ala | Ile | Asn | Trp | Leu | Pro | Phe | Leu | Asn | Thr | Ile | Phe | Tyr | Pro | Val | |
330 | 335 | 340 | ||||||||||||||
GAG | ATC | AAT | GAA | TCC | GAG | CCT | ATT | GTG | GTC | TAT | GAC | AAG | GAA | TAC | CTT | 1111 |
Glu | Ile | Asn | Glu | Ser | Glu | Pro | Ile | Val | Val | Tyr | Asp | Lys | Glu | Tyr | Leu | |
345 | 350 | 355 | ||||||||||||||
GAG | CAG | ATC | TCC | ACT | CTC | ATC | AAC | ACC | ACC | GAC | AGA | TGC | CTG | CTC | AAC | 1159 |
Glu | Gin | Ile | Ser | Thr | Leu | Ile | Asn | Thr | Thr | Asp | Arg | Cys | Leu | Leu | Asn | |
360 | 365 | 370 | ||||||||||||||
AAC | TAC | ATG | ATC | TGG | AAC | CTG | GTG | CGG | AAA | ACA | AGC | TCC | TTC | CTT | GAC | 1207 |
Asn | Tyr | Met | Ile | Trp | Asn | Leu | Val | Arg | Lys | Thr | Ser | Ser | Phe | Leu | Asp | |
375 | 380 | 385 | 390 | |||||||||||||
CAG | CGC | TTT | CAG | GAC | GCC | GAT | GAG | AAG | TTC | ATG | GAA | GTC | ATG | TAC | GGG | 1255 |
Gin | Arg | Phe | Gin | Asp | Ala | Asp | Glu | Lys | Phe | Met | Glu | Val | Met | Tyr | Gly | |
395 | 400 | 405 | ||||||||||||||
ACC | AAG | AAG | ACC | TGT | CTT | CCT | CGC | TGG | AAG | TTT | TGC | GTG | AGT | GAC | ACA | 1303 |
Thr | Lys | Lys | Thr | Cys | Leu | Pro | Arg Trp | Lys | Phe | Cys | Val | Ser | Asp | Thr | ||
410 | 415 | 420 | ||||||||||||||
GAA | AAC | AAC | CTG | GGC | TTT | GCG | TTG | GGC | CCC | ATG | TTT | GTC | AAA | GCA | ACC | 1351 |
Glu | Asn | Asn | Leu | Gly | Phe | Ala | Leu | Gly | Pro | Met | Phe | Val | Lys | Ala | Thr | |
425 | 430 | 435 | ||||||||||||||
TTC | GCC | GAG | GAC | AGC | AAG | AGC | ATA | GCC | ACC | GAG | ATC | ATC | CTG | GAG | ATT | 1399 |
Phe | Ala | Glu | Asp | Ser | Lys | Ser | Ile | Ala | Thr | Glu | Ile | Ile | Leu | Glu | Ile | |
440 | 445 | 450 | ||||||||||||||
AAG | AAG | GCA | TTT | GAG | GAA | AGC | CTG | AGC | ACC | CTG | AAG | TGG | ATG | GAT | GAG | 1447 |
Lys | Lys | Ala | Phe | Glu | Glu | Ser | Leu | Ser | Thr | Leu | Lys | Trp | Met | Asp | Glu | |
455 | 460 | 465 | 470 | |||||||||||||
GAA | ACC | CGA | AAA | TCA | GCC | AAG | GAA | AAG | GCC | GAT | GCC | ATC | TAC | AAC | ATG | 1495 |
Glu | Thr | Arg | Lys | Ser | Ala | Lys | Glu | Lys | Ala | Asp | Ala | Ile | Tyr | Asn | Met | |
475 | 480 | 485 | ||||||||||||||
ATA | GGA | TAC | CCC | AAC | TTC | ATC | ATG | GAT | CCC | AAG | GAG | CTG | GAC | AAA | GTG | 1543 |
Ile | Gly | Tyr | Pro | Asn | Phe | Ile | Met | Asp | Pro | Lys | Glu | Leu | Asp | Lys | Val | |
490 | 495 | 500 | ||||||||||||||
TTT | AAT | GAC | TAC | ACT | GCA | GTT | CCA | GAC | CTC | TAC | TTT | GAA | AAT | GCC | ATG | 1591 |
Phe | Asn | Asp | Tyr | Thr | Ala | Val | Pro | Asp | Leu | Tyr | Phe | Glu | Asn | Ala | Met | |
505 | 510 | 515 | ||||||||||||||
CGG | TTT | TTC | AAC | TTC | TCA | TGG | AGG | GTC | ACT | GCC | GAT | CAG | CTC | AGG | AAA | 1639 |
Arg | Phe | Phe | Asn | Phe | Ser | Trp | Arg | Val | Thr | Ala | Asp | Gin | Leu | Arg | Lys |
520 525 530
GCC CCC Alá Pro 535 | AAC Asn | AGA GAT | CAG TGG AGC ATG ACC CCG CCC ATG GTG AAC GCC | 1687 | |||||
Arg | Asp | Gin 540 | Trp Ser | Met | Thr Pro Pro Met Val Asn Alá | ||||
545 | 550 | ||||||||
TAC TAC | TCG | CCC | ACC | AAG | AAT GAG | ATT | GTG TTT | CCG GCC GGG ATC CTG | 1735 |
Tyr Tyr | Ser | Pro | Thr 555 | Lys | Asn Glu | Ile | Val Phe 560 | Pro Alá Gly Ile Leu 565 | |
CAG GCA | CCA | TTC | TAC | ACA | CGC TCC | TCA | CCC AAG | GCC TTA AAC TTT GGT | 1783 |
Gin Alá | Pro | Phe 570 | Tyr | Thr | Arg Ser | Ser 575 | Pro Lys | Alá Leu Asn Phe Gly 580 | |
GGC ATA | GGT | GTC | GTC | GTG | GGC CAT | GAG | CTG ACT | CAT GCT TTT GAT GAT | 1831 |
Gly Ile | Gly 585 | Val | Val | Val | Gly His 590 | Glu | Leu Thr | His Alá Phe Asp Asp 595 | |
CAA GGA | CGG | GAG | TAT | GAC | AAG GAC | GGG | AAC CTC | CGG CCA TGG TGG AAG | 1879 |
Gin Gly Arg 600 | Glu | Tyr Asp | Lys Asp 605 | Gly | Asn Leu | Arg Pro Trp Trp Lys 610 | |||
AAC TCA | TCC | GTG | GAG | GCC | TTC AAG | CGT | CAG ACC | GAG TGC ATG GTA GAG | 1927 |
Asn Ser 615 | Ser | Val | Glu | Alá 620 | Phe Lys | Arg | Gin Thr 625 | Glu Cys Met Val Glu 630 | |
CAG TAC | AGC | AAC | TAC | AGC | GTG AAC | GGG | GAG CCG | GTG AAC GGG CGG CAC | 1975 |
Gin Tyr | Ser | Asn | Tyr 635 | Ser | Val Asn | Gly | Glu Pro 640 | Val Asn Gly Arg His 645 | |
ACC CTG | GGG | GAG | AAC | ATC | GCC GAC | AAC | GGG GGT | CTC AAG GCG GCC TAT | 2023 |
Thr Leu | Gly | Glu 650 | Asn | Ile | Alá Asp | Asn 655 | Gly Gly | Leu Lys Alá Alá Tyr 660 | |
CGG GCT | TAC | CAG | AAC | TGG | GTG AAG | AAG | AAC GGG | GCT GAG CAC TCG CTC | 2071 |
Arg Alá | Tyr 665 | Gin | Asn | Trp | Val Lys 670 | Lys | Asn Gly | Alá Glu His Ser Leu 675 | |
CCC ACC | CTG | GGC | CTC | ACC | AAT AAC | CAG | CTC TTC | TTC CTG GGC TTT GCA | 2119 |
Pro Thr 680 | Leu | Gly | Leu | Thr | Asn Asn 685 | Gin | Leu Phe | Phe Leu Gly Phe Alá 690 | |
CAG GTC | TGG | TGC | TCC | GTC | CGC ACA | CCT | GAG AGC | TCC CAC GAA GGC CTC | 2167 |
Gin Val 695 | Trp | Cys | Ser | Val 700 | Arg Thr | Pro | Glu Ser 705 | Ser His Glu Gly Leu 710 | |
ATC ACC | GAT | CCC | CAC | AGC | CCC TCT | CGC | TTC CGG | GTC ATC GGC TCC CTC | 2215 |
Ile Thr | Asp | Pro | His 715 | Ser | Pro Ser | Arg | Phe Arg 720 | Val Ile Gly Ser Leu 725 | |
TCC AAT | TCC | AAG | GAG | TTC | TCA GAA | CAC | TTC CGC | TGC CCA CCT GGC TCA | 2263 |
Ser Asn | Ser | Lys 730 | Glu | Phe | Ser Glu | His 735 | Phe Arg | Cys Pro Pro Gly Ser 740 | |
CCC ATG Pro Met | AAC Asn 745 | CCG Pro | CCT Pro | CAC His | AAG TGC Lys Cys 750 | GAA Glu | GTC TGG Val Trp | T AAGGACGAAG | 2307 |
• · • · Λ ·· ·· • ··· * · · • · , ··· ······
.......· . · ·
CGGAGAGAGC CAAGACGGAG GAGGGGAAGG GGCTGAGGAC GAGACCCCCA TCCAGCCTCC 2367
AGGGCATTGC TCAGCCCGCT TGGCCACCCG GGGCCCTGCT TCCTCACACT GGCGGGTTTT 2427
CAGCCGGAAC CGAGCCCATG GTGTTGGCTC TCAACGTGAC CCGCAGTCTG ATCCCCTGTG 2487
AAGAGCCGGA CATCCCAGGC ACACGTGTGC GCCACCTTCA GCAGGCATTC GGGTGCTGGG 2547
CTGGTGGCTC ATCAGGCCTG GGCCCCACAC TGACAAGCGC CAGATACGCC ACAAATACCA 2607
CTGTGTCAAA TGCTTTCAAG ATATATTTTT GGGGAAACTA TTTTTTAAAC ACTGTGGAAT 2667
ACACTGGAAA TCTTCAGGGA AAAACACATT TAAACACTTT TTTTTTTAAG CCC 2720
Α 36. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI:
(A) HOSSZ: 753 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: protein
(xi) | A | 36 . | SZÁMÚ SZEKVENCIA | LEÍRÁSA: | |
Met 1 | Ser | Thr | Tyr | Lys Arg Alá Thr 5 | Leu Asp Glu Glu Asp Leu Val Asp 10 15 |
Ser | Leu | Ser | Glu 20 | Gly Asp Alá Tyr | Pro Asn Gly Leu Gin Val Asn Phe 25 30 |
His | Ser | Pro 35 | Arg | Ser Gly Gin Arg 40 | Cys Trp Alá Alá Arg Thr Gin Val 45 |
Glu | Lys 50 | Arg | Leu | Val Val Leu Val 55 | Val Leu Leu Alá Alá Gly Leu Val 60 |
Alá 65 | Cys | Leu | Alá | Alá Leu Gly Ile 70 | Gin Tyr Gin Thr Arg Ser Pro Ser 75 80 |
Val | Cys | Leu | Ser | Glu Alá Cys Val 85 | Ser Val Thr Ser Ser Ile Leu Ser 90 95 |
Ser | Met | Asp | Pro 100 | Thr Val Asp Pro | Cys His Asp Phe Phe Ser Tyr Alá 105 110 |
Cys | Gly | Gly 115 | Trp | Ile Lys Alá Asn 120 | Pro Val Pro Asp Gly His Ser Arg 125 |
Trp | Gly 130 | Thr | Phe | Ser Asn Leu Trp 135 | Glu His Asn Gin Alá Ile Ile Lys 140 |
His 145 | Leu | Leu | Glu | Asn | Ser 150 | Thr Alá | Ser Val | Ser 155 | Glu | Alá | Glu | Arg | Lys 160 | ||
Alá | Gin | Val | Tyr | Tyr | Arg | Alá | Cys | Met | Asn | Glu | Thr | Arg | Ile | Glu | Glu |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Leu | Arg | Alá | Lys | Pro | Leu | Met | Glu | Leu | Ile | Glu | Arg | Leu | Gly | Gly | Trp |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Asn | Ile | Thr | Gly | Pro | Trp | Alá | Lys | Asp | Asn | Phe | Gin | Asp | Thr | Leu | Gin |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Val | Val | Thr | Alá | His | Tyr | Arg | Thr | Ser | Pro | Phe | Phe | Ser | Val | Tyr | Val |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Ser | Alá | Asp | Ser | Lys | Asn | Ser | Asn | Ser | Asn | Val | Ile | Gin | Val | Asp | Gin |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Ser | Gly | Leu | Gly | Leu | Pro | Ser | Arg | Asp | Tyr | Tyr | Leu | Asn | Lys | Thr | Glu |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Asn | Glu | Lys | Val | Leu | Thr | Gly | Tyr | Leu | Asn | Tyr | Met | Val | Gin | Leu | Gly |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Lys | Leu | Leu | Gly | Gly | Gly | Asp | Glu | Glu | Alá | Ile | Arg | Pro | Gin | Met | Gin |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Gin | Ile | Leu | Asp | Phe | Glu | Thr | Alá | Leu | Alá | Asn | Ile | Thr | Ile | Pro | Gin |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Glu | Lys | Arg | Arg | Asp | Glu | Glu | Leu | Ile | Tyr | His | Lys | Val | Thr | Alá | Alá |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Glu | Leu | Gin | Thr | Leu | Alá | Pro | Alá | Ile | Asn | Trp | Leu | Pro | Phe | Leu | Asn |
325 | 330 | 335 | |||||||||||||
Thr | Ile | Phe | Tyr | Pro | Val | Glu | Ile | Asn | Glu | Ser | Glu | Pro | Ile | Val | Val |
340 | 345 | 350 | |||||||||||||
Tyr | Asp | Lys | Glu | Tyr | Leu | Glu | Gin | Ile | Ser | Thr | Leu | Ile | Asn | Thr | Thr |
355 | 360 | 365 | |||||||||||||
Asp | Arg | Cys | Leu | Leu | Asn | Asn | Tyr | Met | Ile | Trp | Asn | Leu | Val | Arg | Lys |
370 | 375 | 380 | |||||||||||||
Thr | Ser | Ser | Phe | Leu | Asp | Gin | Arg | Phe | Gin | Asp | Alá | Asp | Glu | Lys | Phe |
385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
Met | Glu | Val | Met | Tyr | Gly | Thr | Lys | Lys | Thr | Cys | Leu | Pro | Arg | Trp | Lys |
405 410 415
Phe Cys Val Ser Asp Thr Glu Asn Asn Leu Gly Phe Alá Leu Gly Pro 420 425 430
86 | ·· ··, | • · ’ ·· | • · · • · * | ||||||||||||
Met | Phe | Val | Lys | Alá | Thr | Phe | Alá | Glu | Asp | Ser | Lys | Ser | Ile | Alá | Thr |
435 | 440 | 445 | |||||||||||||
Glu | Ile | Ile | Leu | Glu | Ile | Lys | Lys | Alá | Phe | Glu | Glu | Ser | Leu | Ser | Thr |
450 | 455 | 460 | |||||||||||||
Leu | Lys | Trp | Met | Asp | Glu | Glu | Thr | Arg | Lys | Ser | Alá | Lys | Glu | Lys | Alá |
465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
Asp | Alá | Ile | Tyr | Asn | Met | Ile | Gly | Tyr | Pro | Asn | Phe | Ile | Met | Asp | Pro |
485 | 490 | 495 | |||||||||||||
Lys | Glu | Leu | Asp | Lys | Val | Phe | Asn | Asp | Tyr | Thr | Alá | Val | Pro | Asp | Leu |
500 | 505 | 510 | |||||||||||||
Tyr | Phe | Glu | Asn | Alá | Met | Arg | Phe | Phe | Asn | Phe | Ser | Trp | Arg | Val | Thr |
515 | 520 | 525 | |||||||||||||
Alá | Asp | Gin | Leu | Arg | Lys | Alá | Pro | Asn | Arg | Asp | Gin | Trp | Ser | Met | Thr |
530 | 535 | 540 | |||||||||||||
Pro | Pro | Met | Val | Asn | Alá | Tyr | Tyr | Ser | Pro | Thr | Lys | Asn | Glu | I le | Val |
545 | 550 | 555 | 560 | ||||||||||||
Phe | Pro | Alá | Gly | Ile | Leu | Gin | Alá | Pro | Phe | Tyr | Thr | Arg | Ser | Ser | Pro |
565 | 570 | 575 | |||||||||||||
Lys | Alá | Leu | Asn | Phe | Gly | Gly | Ile | Gly | Val | Val | Val | Gly | His | Glu | Leu |
580 | 585 | 590 | |||||||||||||
Thr | His | Alá | Phe | Asp | Asp | Gin | Gly | Arg | Glu | Tyr | Asp | Lys | Asp | Gly | Asn |
595 | 600 | 605 | |||||||||||||
Leu | Arg | Pro | Trp | Trp | Lys | Asn | Ser | Ser | Val | Glu | Alá | Phe | Lys | Arg | Gin |
610 | 615 | 620 | |||||||||||||
Thr | Glu | Cys | Met | Val | Glu | Gin | Tyr | Ser | Asn | Tyr | Ser | Val | Asn | Gly | Glu |
625 | 630 | 635 | 640 | ||||||||||||
Pro | Val | Asn | Gly | Arg | His | Thr | Leu | Gly | Glu | Asn | Ile | Alá | Asp | Asn | Gly |
645 | 650 | 655 | |||||||||||||
Gly | Leu | Lys | Alá | Alá | Tyr | Arg | Alá | Tyr | Gin | Asn | Trp | Val | Lys | Lys | Asn |
660 | 665 | 670 | |||||||||||||
Gly | Alá | Glu | His | Ser | Leu | Pro | Thr | Leu | Gly | Leu | Thr | Asn | Asn | Gin | Leu |
675 | 680 | 685 | |||||||||||||
Phe | Phe | Leu | Gly | Phe | Alá | Gin | Val | Trp | Cys | Ser | Val | Arg | Thr | Pro | Glu |
690 | 695 | 700 | |||||||||||||
Ser | Ser | His | Glu | Gly | Leu | Ile | Thr | Asp | Pro | His | Ser | Pro | Ser | Arg | Phe |
705 | 710 | 715 | 720 |
8J
Arg | Val | Ile | Gly | Ser 725 | Leu | Ser | Asn | Ser | Lys 730 | Glu | Phe | Ser | Glu | His 735 | Phe |
Arg | Cys | Pro | Pro | Gly | Ser | Pro | Met | Asn | Pro | Pro | His | Lys | Cys | Glu | Val |
740 | 745 | 750 | |||||||||||||
Trp |
.........
SZABADALMI IGÉNYPONTOK
Claims (10)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Endotelin konvertáló enzimek, azzal jellemezve, hogy a36. számú szekvencia szerinti polipeptid-szekvenciát vagy ennek olyan rész-szekvenciáit tartalmazzák, amelyek még rendelkeznek az endotelin konvertáló enzim enzimaktivitásával, az antigén tulajdonságokkal vagy a ligandumokhoz való affinitással.
- 2. DNS szekvenciák, azzal jellemezve, hogy egy 1. igénypont szerinti endotelin konvertáló enzimet kódolnak, és az említett szekvenciák az alábbi csoportokba sorolhatók:a) DNS szekvenciák, amelyek a 35. számú szekvenciával leírt szerkezetűek,b) DNS szekvenciák, amelyek a 36. számú szekvenciával leírt szerkezetű proteineket kódolnak.
- 3. Eljárás endotelin konvertáló enzimek géntechnológiai előállítására a 2. igénypont szerinti DNS szekvenciák felhasználásával .
- 4. Eljárás az 1. igénypont szerinti endotelin konvertáló enzimek előállítására, azzal jellemezve, hogy emlős sejteket egy endotelin konvertáló enzim inhibitorral endotelin konvertáló enzim túltermelésre stimulálunk, és ezekből a sejtekből az endotelin konvertáló enzimet a szokásos proteinkémiai módszerekkel izolálj uk.
- 5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy inhibitorként foszforamidont használunk.
- 6. Eljárás az 1. igénypont szerinti endotelin konvertáló enzim előálítására, azzal jellemezve, hogy a 36. számú szekvencia62.393/riEip] • · · · egy rész-szekvenciáját kódoló oligonukleotidot vagy ezen szekvenciákkal komplementer oligonukleotidot hibridizációs szondaként használva egy génkönyvtárból egy endotelin konvertáló enzim gént izolálunk, és ezt a gént szokásos géntechnológiai módszerekkel egy gazdaszervezetben kifejezzük.
- 7 . Az 1. igénypont szerinti endotelin konvertáló enzim felhasználása az endotelin konvertáló enzimet gátló anyagok (inhibitorok) azonosítására.
- 8. Az 1. igénypont szerinti endotelin konvertáló enzimek felhasználása antitestek előállítására.
- 9. Egy 2. igénypont szerinti DNS szekvencia felhasználása olyan transzgenikus állatok előállítására, amelyek ezen DNS szekvencia egy vagy több extra másolatát tartalmazzák, vagy amelyekben a normál EXE-gén (endotelin konvertáló enzim gén) ki van oltva.
- 10. Az 1. igénypont szerinti endotelin konvertáló enzimek felhasználása gyógyszerek előállfására.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19934339100 DE4339100A1 (de) | 1993-11-16 | 1993-11-16 | Endothelinkonversionsenzym-1 (ECE-1) |
DE19944403665 DE4403665A1 (de) | 1994-02-07 | 1994-02-07 | Endothelinkonversionsenzym (ECE) |
DE19944412372 DE4412372A1 (de) | 1994-04-12 | 1994-04-12 | Endothelinkonversionsenzym (ECE) |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HU9601298D0 HU9601298D0 (en) | 1996-07-29 |
HUT75554A true HUT75554A (en) | 1997-05-28 |
Family
ID=27205762
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU9601298A HUT75554A (en) | 1993-11-16 | 1994-11-10 | Endothelin-converting enzyme |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6066502A (hu) |
EP (1) | EP0728209B1 (hu) |
JP (1) | JPH09505733A (hu) |
KR (1) | KR960705934A (hu) |
CN (1) | CN1141651A (hu) |
AT (1) | ATE315656T1 (hu) |
AU (1) | AU8107094A (hu) |
BR (1) | BR9408077A (hu) |
CA (1) | CA2176507A1 (hu) |
CZ (1) | CZ139496A3 (hu) |
DE (1) | DE59410427D1 (hu) |
FI (1) | FI962047A (hu) |
HU (1) | HUT75554A (hu) |
NO (1) | NO962023L (hu) |
NZ (1) | NZ275817A (hu) |
PL (1) | PL314480A1 (hu) |
SK (1) | SK59896A3 (hu) |
WO (1) | WO1995014095A1 (hu) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6255468B1 (en) * | 1998-05-07 | 2001-07-03 | Smithkline Beecham Plc | MPROT12 polynucleotides and methods thereof |
EP1409690A2 (en) | 1999-09-24 | 2004-04-21 | Lexicon Genetics Incorporated | Human endothelin converting enzyme-like proteins and polynucleotides encoding the same |
ES2255003T3 (es) * | 2004-02-13 | 2006-06-16 | B.R.A.H.M.S Aktiengesellschaft | Procedimiento para determinar la formacion de endotelinas con fines diagnostico medico, y anticuerpos y kits para realizar un procedimiento de este tipo. |
WO2009018209A1 (en) | 2007-07-27 | 2009-02-05 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | ENDOTHELIN SINGLE NUCLEOTIDE POLYMORPHISMS AND METHODS OF PREDICTING β-ADRENERGIC RECEPTOR TARGETING AGENT EFFICACY |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2966939B2 (ja) * | 1990-12-07 | 1999-10-25 | 日清製粉株式会社 | ヒト細胞由来のエンドセリン変換酵素 |
CA2100355A1 (en) * | 1991-02-04 | 1992-08-05 | Lynne H. Parker Botehlo | Endothelin converting enzyme |
-
1994
- 1994-11-10 US US08/646,273 patent/US6066502A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-11-10 AT AT95900130T patent/ATE315656T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-11-10 BR BR9408077A patent/BR9408077A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-11-10 WO PCT/EP1994/003706 patent/WO1995014095A1/de active IP Right Grant
- 1994-11-10 AU AU81070/94A patent/AU8107094A/en not_active Abandoned
- 1994-11-10 HU HU9601298A patent/HUT75554A/hu unknown
- 1994-11-10 SK SK598-96A patent/SK59896A3/sk unknown
- 1994-11-10 PL PL94314480A patent/PL314480A1/xx unknown
- 1994-11-10 CN CN94194828A patent/CN1141651A/zh active Pending
- 1994-11-10 CZ CZ961394A patent/CZ139496A3/cs unknown
- 1994-11-10 EP EP95900130A patent/EP0728209B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-11-10 CA CA002176507A patent/CA2176507A1/en not_active Abandoned
- 1994-11-10 DE DE59410427T patent/DE59410427D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1994-11-10 NZ NZ275817A patent/NZ275817A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-11-10 KR KR1019960702556A patent/KR960705934A/ko not_active Application Discontinuation
- 1994-11-10 JP JP7514199A patent/JPH09505733A/ja not_active Ceased
-
1996
- 1996-05-14 FI FI962047A patent/FI962047A/fi unknown
- 1996-05-15 NO NO962023A patent/NO962023L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0728209B1 (de) | 2006-01-11 |
CN1141651A (zh) | 1997-01-29 |
CZ139496A3 (en) | 1997-10-15 |
EP0728209A1 (de) | 1996-08-28 |
FI962047A0 (fi) | 1996-05-14 |
ATE315656T1 (de) | 2006-02-15 |
NZ275817A (en) | 1997-02-24 |
BR9408077A (pt) | 1997-08-12 |
AU8107094A (en) | 1995-06-06 |
KR960705934A (ko) | 1996-11-08 |
WO1995014095A1 (de) | 1995-05-26 |
HU9601298D0 (en) | 1996-07-29 |
NO962023D0 (no) | 1996-05-15 |
PL314480A1 (en) | 1996-09-16 |
US6066502A (en) | 2000-05-23 |
FI962047A (fi) | 1996-07-12 |
CA2176507A1 (en) | 1995-05-26 |
NO962023L (no) | 1996-07-16 |
DE59410427D1 (en) | 2006-04-06 |
SK59896A3 (en) | 1997-07-09 |
JPH09505733A (ja) | 1997-06-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US8263326B2 (en) | Compounds and methods for modulating activation of NF-κB | |
CN101184772A (zh) | 人类原癌基因及其编码的蛋白质 | |
JP2011172588A (ja) | Dp75をコードするdnaおよびその使用のためのプロセス | |
JPH10510986A (ja) | メタロプロテイナーゼ−4のヒト組織インヒビター | |
US5359045A (en) | Nucleic acid coding for the human angiotensin converting enzyme (ACE), and its uses, especially for the in vitro diagnosis of arterial hypertension | |
JPH10501962A (ja) | マトリックス金属プロテアーゼのdna配列、その調製および使用 | |
JP2533869B2 (ja) | Husi―i型インヒビタ―の生物学的活性を有するタンパク質をコ―ドするdna配列、前記dna配列を含む組換え体クロ―ニングベクタ―及び前記ベクタ―により形質転換された細菌 | |
WO1999028447A1 (en) | Human rnase h and compositions and uses thereof | |
JPH0673456B2 (ja) | ヒト・膵臓エラスタ−ゼ▲i▼ | |
HUT75554A (en) | Endothelin-converting enzyme | |
EP0748376A1 (en) | Rna editing enzyme and methods of use thereof | |
US6569665B1 (en) | Calpaines, production and use thereof | |
DK172400B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af renset minactivin, minactivinkodende DNA-molekyle, rekombinant DNA-molekyle, sammensmeltet gen, vært, reagent til lokalisering og definering af grænserne for tumorer i histologiske prøver, samt anvendelse af det rekombinante DNA-molekyle, minactivinet og peptider deraf | |
KR20020062375A (ko) | 인간 헤파라나제-관련 폴리펩티드 및 핵산 | |
US5612190A (en) | DNA molecule encoding bovine group I phospholipase A2 receptor | |
JP3197355B2 (ja) | アスパラギニルエンドペプチダーゼ遺伝子 | |
JP2623807B2 (ja) | セリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼ遺伝子 | |
EP0843006A2 (en) | Recombinant PSA expression vectors and assays using the same | |
JPH11225765A (ja) | 新規セリンプロテアーゼ | |
JP2001275687A (ja) | 膜結合型メタロプロテアーゼ及びその可溶性分泌型 | |
WO2000011146A1 (fr) | Epimorphine destinee a des artiodactyles | |
US20030144496A1 (en) | Human RNase H and compositions and uses thereof | |
JP2001046065A (ja) | 新規セリンプロテアーゼ | |
JP2001046072A (ja) | Ace類似遺伝子 | |
DE4403665A1 (de) | Endothelinkonversionsenzym (ECE) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
DFA9 | Temporary protection cancelled due to abandonment |