HU201973B - Process for producing avermeclin beta derivatives - Google Patents
Process for producing avermeclin beta derivatives Download PDFInfo
- Publication number
- HU201973B HU201973B HU88260D HU26088D HU201973B HU 201973 B HU201973 B HU 201973B HU 88260 D HU88260 D HU 88260D HU 26088 D HU26088 D HU 26088D HU 201973 B HU201973 B HU 201973B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- avermectin
- acid
- avermectins
- mutants
- formula
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 239000005660 Abamectin Substances 0.000 claims abstract description 100
- 241001468227 Streptomyces avermitilis Species 0.000 claims abstract description 37
- RRZXIRBKKLTSOM-XPNPUAGNSA-N avermectin B1a Chemical compound C1=C[C@H](C)[C@@H]([C@@H](C)CC)O[C@]11O[C@H](C\C=C(C)\[C@@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C3)[C@@H](OC)C2)[C@@H](C)\C=C\C=C/2[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](O)[C@H]3OC\2)O)C[C@H]4C1 RRZXIRBKKLTSOM-XPNPUAGNSA-N 0.000 claims abstract description 33
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 56
- -1 3-cyclohexenyl Chemical group 0.000 claims description 52
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims description 15
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 14
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 11
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 11
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 150000004716 alpha keto acids Chemical class 0.000 claims description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims description 5
- 125000001541 3-thienyl group Chemical group S1C([H])=C([*])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 4
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 125000000175 2-thienyl group Chemical group S1C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 3
- 125000003682 3-furyl group Chemical group O1C([H])=C([*])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000006552 (C3-C8) cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000005043 dihydropyranyl group Chemical group O1C(CCC=C1)* 0.000 claims description 2
- 125000002541 furyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 claims description 2
- 125000003718 tetrahydrofuranyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000001412 tetrahydropyranyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000005958 tetrahydrothienyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004632 tetrahydrothiopyranyl group Chemical group S1C(CCCC1)* 0.000 claims description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 48
- 108010046716 3-Methyl-2-Oxobutanoate Dehydrogenase (Lipoamide) Proteins 0.000 abstract description 8
- 101710116650 FAD-dependent monooxygenase Proteins 0.000 abstract description 7
- 101710128228 O-methyltransferase Proteins 0.000 abstract description 7
- 230000000590 parasiticidal effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000002297 parasiticide Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 32
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 19
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 17
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 239000000047 product Substances 0.000 description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 12
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 12
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 10
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- WLAMNBDJUVNPJU-UHFFFAOYSA-N 2-methylbutyric acid Chemical compound CCC(C)C(O)=O WLAMNBDJUVNPJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 7
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 7
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 7
- CWGATOJEFAKFBK-UHFFFAOYSA-N Ac-(E)-8-Tridecen-1-ol Natural products C1C(O)C(C)C(C(C)CC)OC11OC(CC=C(C)C(OC2OC(C)C(OC3OC(C)C(O)C(OC)C3)C(OC)C2)C(C)C=CC=C2C3(C(C(=O)O4)C=C(C)C(O)C3OC2)O)CC4C1 CWGATOJEFAKFBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- AYJRCSIUFZENHW-UHFFFAOYSA-L barium carbonate Chemical compound [Ba+2].[O-]C([O-])=O AYJRCSIUFZENHW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N cyclohexanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCCC1 NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 6
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- MNULEGDCPYONBU-UIXCWHRQSA-N (1R,4E,5'S,6S,6'S,7R,8S,10R,11R,12S,14R,15S,16R,18Z,20Z,22R,25S,27R,28S,29R)-22-ethyl-7,11,14,15-tetrahydroxy-6'-[(2R)-2-hydroxypropyl]-5',6,8,10,12,14,16,28,29-nonamethylspiro[2,26-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-4,18,20-triene-27,2'-oxane]-3,9,13-trione Polymers CC[C@@H]1CC[C@@H]2O[C@]3(CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O3)[C@@H](C)[C@H](OC(=O)\C=C\[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)C\C=C/C=C\1)[C@@H]2C MNULEGDCPYONBU-UIXCWHRQSA-N 0.000 description 5
- MNULEGDCPYONBU-CBLVMMTCSA-N (1R,4Z,5'S,6S,6'S,7R,8S,10R,11R,12S,14R,15S,16R,18Z,20Z,22R,25S,27R,28S,29R)-22-ethyl-7,11,14,15-tetrahydroxy-6'-[(2R)-2-hydroxypropyl]-5',6,8,10,12,14,16,28,29-nonamethylspiro[2,26-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-4,18,20-triene-27,2'-oxane]-3,9,13-trione Polymers CC[C@@H]1CC[C@@H]2O[C@]3(CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O3)[C@@H](C)[C@H](OC(=O)\C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)C\C=C/C=C\1)[C@@H]2C MNULEGDCPYONBU-CBLVMMTCSA-N 0.000 description 5
- MNULEGDCPYONBU-WABYXMGOSA-N (1S,4E,5'R,6R,6'R,7S,8R,10S,11S,12R,14S,15R,16S,18E,22S,25R,27S,28R,29S)-22-ethyl-7,11,14,15-tetrahydroxy-6'-(2-hydroxypropyl)-5',6,8,10,12,14,16,28,29-nonamethylspiro[2,26-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-4,18,20-triene-27,2'-oxane]-3,9,13-trione Polymers CC[C@H]1CC[C@H]2O[C@@]3(CC[C@@H](C)[C@@H](CC(C)O)O3)[C@H](C)[C@@H](OC(=O)\C=C\[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@@](C)(O)[C@H](O)[C@@H](C)C\C=C\C=C1)[C@H]2C MNULEGDCPYONBU-WABYXMGOSA-N 0.000 description 5
- MNULEGDCPYONBU-QECWTJOCSA-N (1r,4s,5e,5'r,6'r,7e,10s,11r,12s,14r,15s,16s,18r,19s,20r,21e,25s,26r,27s,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-(2-hydroxypropyl)-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers O([C@@H]1CC[C@@H](/C=C/C=C/C[C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)O[C@H]([C@H]2C)[C@H]1C)CC)[C@]12CC[C@@H](C)[C@@H](CC(C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-QECWTJOCSA-N 0.000 description 5
- MNULEGDCPYONBU-WMBHJXFZSA-N (1r,4s,5e,5'r,6'r,7e,10s,11r,12s,14r,15s,16s,18r,19s,20r,21e,25s,26r,27s,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2s)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trio Polymers O([C@@H]1CC[C@@H](/C=C/C=C/C[C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)O[C@H]([C@H]2C)[C@H]1C)CC)[C@]12CC[C@@H](C)[C@@H](C[C@H](C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-WMBHJXFZSA-N 0.000 description 5
- MNULEGDCPYONBU-BOXGPLBDSA-N (1r,4s,5e,5'r,6'r,7e,10s,11s,12s,14r,15s,16s,18r,19s,20r,21e,25s,26r,27s,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2s)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trio Polymers O([C@@H]1CC[C@@H](/C=C/C=C/C[C@H](C)[C@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)O[C@H]([C@H]2C)[C@H]1C)CC)[C@]12CC[C@@H](C)[C@@H](C[C@H](C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-BOXGPLBDSA-N 0.000 description 5
- MNULEGDCPYONBU-YOKYSHDFSA-N (5'R,10S,11R,12S,14S,15R,16R,18R,19S,20R,26R,29S)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2S)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers C([C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C=CC(=O)OC([C@H]1C)[C@H]2C)C=CC=CC(CC)CCC2OC21CC[C@@H](C)C(C[C@H](C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-YOKYSHDFSA-N 0.000 description 5
- MNULEGDCPYONBU-VVXVDZGXSA-N (5e,5'r,7e,10s,11r,12s,14s,15r,16r,18r,19s,20r,21e,26r,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2s)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers C([C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)OC([C@H]1C)[C@H]2C)\C=C\C=C\C(CC)CCC2OC21CC[C@@H](C)C(C[C@H](C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-VVXVDZGXSA-N 0.000 description 5
- MNULEGDCPYONBU-MQLHLVDXSA-N CC[C@@H]1CC[C@@H]2O[C@]3(CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O3)[C@@H](C)[C@H](OC(=O)\C=C\[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)C\C=C\C=C\1)C2C Polymers CC[C@@H]1CC[C@@H]2O[C@]3(CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O3)[C@@H](C)[C@H](OC(=O)\C=C\[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)C\C=C\C=C\1)C2C MNULEGDCPYONBU-MQLHLVDXSA-N 0.000 description 5
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 5
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 239000005516 coenzyme A Substances 0.000 description 5
- 229940093530 coenzyme a Drugs 0.000 description 5
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 5
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 5
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- MNULEGDCPYONBU-AWJDAWNUSA-N oligomycin A Polymers O([C@H]1CC[C@H](/C=C/C=C/C[C@@H](C)[C@H](O)[C@@](C)(O)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)/C=C/C(=O)O[C@@H]([C@@H]2C)[C@@H]1C)CC)[C@@]12CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-AWJDAWNUSA-N 0.000 description 5
- MNULEGDCPYONBU-UHFFFAOYSA-N oligomycin A Natural products CC1C(C2C)OC(=O)C=CC(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)(O)C(O)C(C)CC=CC=CC(CC)CCC2OC21CCC(C)C(CC(C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 5
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 241000893864 Nerium Species 0.000 description 4
- ZPAKHHSWIYDSBJ-QDXJZMFISA-N avermectin b2 Chemical compound O1C(C)C(O)C(OC)CC1OC1C(OC)CC(O[C@@H]2C(=C/C[C@@H]3C[C@@H](C[C@@]4(O[C@@H]([C@@H](C)C(O)C4)C(C)C)O3)OC(=O)[C@@H]3C=C(C)[C@@H](O)[C@H]4OC\C([C@@]34O)=C/C=C/[C@@H]2C)/C)OC1C ZPAKHHSWIYDSBJ-QDXJZMFISA-N 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 4
- RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N coenzime A Natural products OC1C(OP(O)(O)=O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N dephosphocoenzyme A Natural products OC1C(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 4
- KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N isobutyric acid Chemical compound CC(C)C(O)=O KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 4
- UAXOELSVPTZZQG-UHFFFAOYSA-N tiglic acid Natural products CC(C)=C(C)C(O)=O UAXOELSVPTZZQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 3
- RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N CoASH Chemical group O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 3
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 3
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 3
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 3
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 3
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- SWWQQSDRUYSMAR-UHFFFAOYSA-N 1-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-6,7-diol;hydrochloride Chemical group Cl.C1=CC(O)=CC=C1CC1C2=CC(O)=C(O)C=C2CCN1 SWWQQSDRUYSMAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole-2-carbaldehyde Chemical compound O=CC1=NC=CN1 XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SMNDYUVBFMFKNZ-UHFFFAOYSA-N 2-furoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CO1 SMNDYUVBFMFKNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002941 2-furyl group Chemical group O1C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 3-Methylbutanoic acid Natural products CC(C)CC([O-])=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 125000004487 4-tetrahydropyranyl group Chemical group [H]C1([H])OC([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 2
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001124076 Aphididae Species 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- IHCCAYCGZOLTEU-UHFFFAOYSA-N Furane-3-carboxylic acid Natural products OC(=O)C=1C=COC=1 IHCCAYCGZOLTEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 2
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZJUKTBDSGOFHSH-WFMPWKQPSA-N S-Adenosylhomocysteine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CSCC[C@H](N)C(O)=O)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 ZJUKTBDSGOFHSH-WFMPWKQPSA-N 0.000 description 2
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 2
- 241000244174 Strongyloides Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N acetyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N 0.000 description 2
- 238000000211 autoradiogram Methods 0.000 description 2
- MJAMCTLGWXIKOT-UHFFFAOYSA-M benzyl-dimethyl-[2-[2-[2-methyl-4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethoxy]ethyl]azanium;hydroxide Chemical compound [OH-].CC1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 MJAMCTLGWXIKOT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N beta-methyl-butyric acid Natural products CC(C)CC(O)=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 229960002713 calcium chloride Drugs 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- VZFUCHSFHOYXIS-UHFFFAOYSA-N cycloheptane carboxylic acid Natural products OC(=O)C1CCCCCC1 VZFUCHSFHOYXIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JBDSSBMEKXHSJF-UHFFFAOYSA-N cyclopentanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCC1 JBDSSBMEKXHSJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 125000000600 disaccharide group Chemical group 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 244000078703 ectoparasite Species 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 2
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 2
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 2
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- MOMBAXHNIPLMSI-RXMQYKEDSA-N (1s)-cyclopent-2-ene-1-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@H]1CCC=C1 MOMBAXHNIPLMSI-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- UBQZUBPODLPCFG-PIBDHAAFSA-N (2S)-2-amino-4-[[(2S,3S,4R,5R)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl-ethylsulfonio]butanoate Chemical compound CC[S+](CC[C@@H](C([O-])=O)N)C[C@H]([C@H]([C@H]1O)O)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 UBQZUBPODLPCFG-PIBDHAAFSA-N 0.000 description 1
- NRQHBNNTBIDSRK-YRNVUSSQSA-N (4e)-4-[(4-methoxyphenyl)methylidene]-2-methyl-1,3-oxazol-5-one Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1\C=C\1C(=O)OC(C)=N/1 NRQHBNNTBIDSRK-YRNVUSSQSA-N 0.000 description 1
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000081 (C5-C8) cycloalkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- WLAMNBDJUVNPJU-BYPYZUCNSA-N (S)-2-methylbutyric acid Chemical compound CC[C@H](C)C(O)=O WLAMNBDJUVNPJU-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- PBKONEOXTCPAFI-UHFFFAOYSA-N 1,2,4-trichlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1 PBKONEOXTCPAFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FFAADXOKPZHULO-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropanethioic s-acid Chemical compound CC(C)C(S)=O FFAADXOKPZHULO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OTLWUWJIIXAOEO-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydro-2h-pyran-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCC=CO1 OTLWUWJIIXAOEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HYIUDFLDFSIXTR-UHFFFAOYSA-N 4,4-difluorocyclohexane-1-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCC(F)(F)CC1 HYIUDFLDFSIXTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AJZOYSGAEPJFKH-UHFFFAOYSA-N 4-methoxy-2-methylbutanoic acid Chemical compound COCCC(C)C(O)=O AJZOYSGAEPJFKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BKAJNAXTPSGJCU-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-2-oxopentanoic acid Chemical compound CC(C)CC(=O)C(O)=O BKAJNAXTPSGJCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009051 Ambrosia paniculata var. peruviana Nutrition 0.000 description 1
- 241001147657 Ancylostoma Species 0.000 description 1
- 241000258993 Anthrenus museorum Species 0.000 description 1
- 240000007087 Apium graveolens Species 0.000 description 1
- 235000015849 Apium graveolens Dulce Group Nutrition 0.000 description 1
- 235000010591 Appio Nutrition 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 235000003097 Artemisia absinthium Nutrition 0.000 description 1
- 240000001851 Artemisia dracunculus Species 0.000 description 1
- 235000017731 Artemisia dracunculus ssp. dracunculus Nutrition 0.000 description 1
- 235000003261 Artemisia vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000238421 Arthropoda Species 0.000 description 1
- 241000244186 Ascaris Species 0.000 description 1
- JVGWUGTWQIAGHJ-DFAYUBCLSA-N Avermectin A2a Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](C(C)CC)O[C@]11O[C@H](C\C=C(C)\[C@@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C3)[C@@H](OC)C2)[C@@H](C)\C=C\C=C/2[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](OC)[C@H]3OC\2)O)C[C@H]4C1 JVGWUGTWQIAGHJ-DFAYUBCLSA-N 0.000 description 1
- 108010023063 Bacto-peptone Proteins 0.000 description 1
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 1
- 241001674044 Blattodea Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 0 CC(C(*)C1(*)[C@@]2C1)OC2(CC(C1)OC2)OC1CC=C(C)[C@](*)C(C)C=CC=C(COC13)C1(*)C2C=C(C)C3O* Chemical compound CC(C(*)C1(*)[C@@]2C1)OC2(CC(C1)OC2)OC1CC=C(C)[C@](*)C(C)C=CC=C(COC13)C1(*)C2C=C(C)C3O* 0.000 description 1
- VXMMYBNLZLLYMR-UHFFFAOYSA-N CC(C(C(C1)O)O)OC1OC(C(C)OC(C1)OC)C1OC Chemical compound CC(C(C(C1)O)O)OC1OC(C(C)OC(C1)OC)C1OC VXMMYBNLZLLYMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282421 Canidae Species 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 241000253350 Capillaria Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 1
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 1
- 235000019739 Dicalciumphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 241000243990 Dirofilaria Species 0.000 description 1
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000239183 Filaria Species 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N Furan Chemical group C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 208000006968 Helminthiasis Diseases 0.000 description 1
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 239000004158 L-cystine Substances 0.000 description 1
- 235000019393 L-cystine Nutrition 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 1
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 1
- 125000003580 L-valyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 1
- 235000003228 Lactuca sativa Nutrition 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- WAEMQWOKJMHJLA-UHFFFAOYSA-N Manganese(2+) Chemical compound [Mn+2] WAEMQWOKJMHJLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Natural products CCC(C)C(C)=O UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZRKWMRDKSOPRRS-UHFFFAOYSA-N N-Methyl-N-nitrosourea Chemical compound O=NN(C)C(N)=O ZRKWMRDKSOPRRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- OJQHWWHKSRTXRT-HHWRGAEVSA-N NC1=NC=NC2=C1N=CN2[C@@H]([C@@H]1O)O[C@H](C[S+]2C=CC=CC=CC=C2)[C@H]1O Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2[C@@H]([C@@H]1O)O[C@H](C[S+]2C=CC=CC=CC=C2)[C@H]1O OJQHWWHKSRTXRT-HHWRGAEVSA-N 0.000 description 1
- 235000017879 Nasturtium officinale Nutrition 0.000 description 1
- 240000005407 Nasturtium officinale Species 0.000 description 1
- 241000498271 Necator Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 240000009164 Petroselinum crispum Species 0.000 description 1
- 241001674048 Phthiraptera Species 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Chemical class CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000055026 Protein O-Methyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108700040119 Protein O-Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 244000300264 Spinacia oleracea Species 0.000 description 1
- 235000009337 Spinacia oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 241000243774 Trichinella Species 0.000 description 1
- 241001489151 Trichuris Species 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000895 acaricidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000642 acaricide Substances 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940100228 acetyl coenzyme a Drugs 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000002141 anti-parasite Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000003096 antiparasitic agent Substances 0.000 description 1
- 229940125687 antiparasitic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000001138 artemisia absinthium Substances 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- JVGWUGTWQIAGHJ-UHFFFAOYSA-N avermectin A2a Natural products C1C(O)C(C)C(C(C)CC)OC11OC(CC=C(C)C(OC2OC(C)C(OC3OC(C)C(O)C(OC)C3)C(OC)C2)C(C)C=CC=C2C3(C(C(=O)O4)C=C(C)C(OC)C3OC2)O)CC4C1 JVGWUGTWQIAGHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L barium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ba+2] RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001863 barium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010256 biochemical assay Methods 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 239000002962 chemical mutagen Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L cobalt dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Co+2] GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000000392 cycloalkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- VUSWCWPCANWBFG-UHFFFAOYSA-N cyclohex-3-ene-1-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCC=CC1 VUSWCWPCANWBFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYRZPBDTPRQYKG-UHFFFAOYSA-N cyclopentene-1-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CCCC1 PYRZPBDTPRQYKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000006114 decarboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003413 degradative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K dicalcium phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038472 dicalcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229910000390 dicalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000013057 ectoparasiticide Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 244000079386 endoparasite Species 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 1
- 230000026030 halogenation Effects 0.000 description 1
- 238000005658 halogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 244000000013 helminth Species 0.000 description 1
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 150000002596 lactones Chemical group 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N mechlorethamine Chemical compound ClCCN(C)CCCl HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 230000001617 migratory effect Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 239000007959 natural flavoring substance Substances 0.000 description 1
- 229940101270 nicotinamide adenine dinucleotide (nad) Drugs 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- UNCAXIZUVRKBMN-UHFFFAOYSA-N o-(4-methylphenyl) chloromethanethioate Chemical compound CC1=CC=C(OC(Cl)=S)C=C1 UNCAXIZUVRKBMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- MQAYFGXOFCEZRW-UHFFFAOYSA-N oxane-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCCO1 MQAYFGXOFCEZRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YEWPVCUHKJABMV-UHFFFAOYSA-N oxane-3-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCOC1 YEWPVCUHKJABMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVPKHOTUOHDTLW-UHFFFAOYSA-N oxane-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCOCC1 AVPKHOTUOHDTLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BOTREHHXSQGWTR-UHFFFAOYSA-N oxolane-3-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCOC1 BOTREHHXSQGWTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000014837 parasitic helminthiasis infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 235000011197 perejil Nutrition 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 1
- QAQREVBBADEHPA-IEXPHMLFSA-N propionyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)CC)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 QAQREVBBADEHPA-IEXPHMLFSA-N 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012925 reference material Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- QBERHIJABFXGRZ-UHFFFAOYSA-M rhodium;triphenylphosphane;chloride Chemical compound [Cl-].[Rh].C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 QBERHIJABFXGRZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000003345 scintillation counting Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011684 sodium molybdate Substances 0.000 description 1
- 235000015393 sodium molybdate Nutrition 0.000 description 1
- TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N sodium molybdate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 125000000446 sulfanediyl group Chemical group *S* 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010075550 termamyl Proteins 0.000 description 1
- BTYQWISIPUWRJR-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 3-(2-methoxy-2-oxoethyl)piperidine-1-carboxylate Chemical compound COC(=O)CC1CCCN(C(=O)OC(C)(C)C)C1 BTYQWISIPUWRJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001981 tert-butyldimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([H])(C([H])([H])[H])[*]C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- UJJLJRQIPMGXEZ-UHFFFAOYSA-N tetrahydro-2-furoic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCO1 UJJLJRQIPMGXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONPZMTBFHFTVIN-UHFFFAOYSA-N thiane-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCCS1 ONPZMTBFHFTVIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SCKSQOIXSGPVJS-UHFFFAOYSA-N thiane-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCSCC1 SCKSQOIXSGPVJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BSNQHVPRAPQLSW-UHFFFAOYSA-N thiolane-3-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCSC1 BSNQHVPRAPQLSW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QERYCTSHXKAMIS-UHFFFAOYSA-N thiophene-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CS1 QERYCTSHXKAMIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 1
- DBGVGMSCBYYSLD-UHFFFAOYSA-N tributylstannane Chemical compound CCCC[SnH](CCCC)CCCC DBGVGMSCBYYSLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XREXPQGDOPQPAH-QKUPJAQQSA-K trisodium;[(z)-18-[1,3-bis[[(z)-12-sulfonatooxyoctadec-9-enoyl]oxy]propan-2-yloxy]-18-oxooctadec-9-en-7-yl] sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].CCCCCCC(OS([O-])(=O)=O)C\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CC(CCCCCC)OS([O-])(=O)=O)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CC(CCCCCC)OS([O-])(=O)=O XREXPQGDOPQPAH-QKUPJAQQSA-K 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N vanillin Chemical compound COC1=CC(C=O)=CC=C1O MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N vanillin Natural products COC1=CC(O)=CC(C=O)=C1 FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012141 vanillin Nutrition 0.000 description 1
- 235000015192 vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000007222 ypd medium Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/22—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains four or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/01—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing oxygen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
- A01N43/90—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having two or more relevant hetero rings, condensed among themselves or with a common carbocyclic ring system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/10—Anthelmintics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
- C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
- C12P19/623—Avermectin; Milbemycin; Ivermectin; C-076
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás avermetin-B-O-metil-transzferáz aktivitással és elágazó láncú-2-οχοsav-dehidrogenáz aktivitással nem rendelkező Streptomyces avermitilis mikroorganizmus segítségével természetes és nem-természetes B avermektinek előállítására.
Az avermiktineket a 4 310 519, és a 4 429 042 számú amaerikai egyesült államokbeli szabadalmak írják le. Az avermetinek parazitaellenes hatással rendelkező rokonvegyületek csoportja, előállításuk Streptomyces avertimitilis törzsek, nevezetesen a S.avermitilis ATCC 31267,31271, és a 31272 törzsek aerob fermentálásával történik. Az említett utóbbi két törzs az S.avertimitilis ATCC 31267 ultraibolya fény besugárzásával nyert mutánsa.
Az 1987. március 18-án közzétett EP 214731 sz. szabadalom, mely az 1986. július 16-án közzétett 886 867 szériaszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás megfelelője, számos olyan vegyületet tartalmaz, melyek a természetes vagy ismert avermetinek származékai, de a 25-ös helyzetben új szubsztituenst tartalmaznak (ezeket itt nem-természetes avermektineknek nevezzük). Az említett szabadalom szerint ezek előállítása avermektint termelő mikroorganizmus tenyésztésével történik, oly módon, hogy a tenyészet bizonyos speciális karbonsavakat vagy ezek származékait vagy ezek előanyagait tartalmazza. A 25. szénatomos szubsztituált, említett új avermektineket a S.avermitilis ATCC
31267.31271 és az NCIB 12121 törzsekkel állítják elő. Az EP 214 731 sz. szabadalom közölt utóbbi törzs a S.avermitilis ATCC 31271 törzsből származik. Ez az új 25. szénatomon szubsztituált avermektineket nagyobb hozammal termeli, ha félszintetikus tápközegben tenyésztjük. Az ATCC 31267,
31271.31272 és az NCIB 12121 törzsek mindegyike a 25-ös szénatomon szubsztituált származékok mellett változó mennyiségben az ismert természetes savermektineket is termelik, melyeknél a 25-ös szénatom szubsztituense izopropilcsoport vagy (S)szek-butil-csoport (1-metil-propil-csoport).
Az (I) általános képletű avermektinek szénváza acetátokból, propionátokból, a természetes acermetinek 25-ös helyzetű szubsztituense pedig L-izoleucinból (R N = (S)-szek-butil-csoport) vagy lovaimból (R = izopropilcsoport) származik. [Fischer és Mrozik, „Makrolide antibiotics, Academic Press (1984) 14. fejezet].
Ismert” vagy „természetes” avermektineknek nevezzük azokat, az S.avermitilis ATCC31267, ATCC 31271 és ATCC 31272 törzsek által termelt avermektineket, melyeknél a 25-ös helyzetű szubsztituens vagy izopropilcsoport, vagy (S)-szek-butilcsoport (1-metil-propil-csoport). Azokat az avermektineket, melyeknél a 25-ös helyzetű szubsztituens nem izopropil- vagy (S)-szek-butil-csoport, új vagy „nem-természetes” avermektineknek nevezzük.
A fent említett amerikai egyesült államokbeli szabadalmakban szereplő S.avermetilis törzsek az azokban C-076 generikus megnevezéssel ellátott vegyületcsoportot termelik. Ez a csoport nyolc különböző, de szoros szerkezetbeli rokonságban levő vegyületből áll, melyeket C-076 Alá, Alb, A2a, A2b, Bla, Blb, B2a, és B2b jelöléssel láttak el.
Ezekben az „a” jelölés jelenti azokat a természetes avermektineket, ahol a 25-ös szubsztituens (S)szek-butil-csoport, és a „b” jelölés azokat, melyeknél a 25-ös szubsztituens izopropilcsoport.
Az „A” és „B” jelölés azt jelenti, hogy az avermetinek 5-ös helyzetű szubsztituense metoxicsoport, illetve hidroxiesoport. Végül az „1” szám azokat az avermektineket jelöli, ahol kettőskötés van a 22-23-as szénatomok között és ekkor R1 jelentése hidrogénatom; a „2” szám arra utal, hogy az avermektinek 22-es szénatomján egy további hidrogénatom, a 23-as szénatomján hidroxilcsoport van.
A jelen találmányban nem ezt a jelölést használjuk, minthogy zömmel nem-természetes avermektinekről van szó. Az Al, A2, B1 és B2 jelölést megtartjuk, az olyan nem-természetes avermektinek jelölésére, melyek a fentiek szerinti szerkezetbeli tulajdonságokkal rendelkeznek.
Az elágazó láncú-2-oxo-sav-dehidrogenáz aktivitással nem rendelkező mutánsok előállítását Bacillus subtulis esetében Willecke és Pardes [J.Biol.Chem., 246:5264-72 (1971)], Pseudomonas putida esetében Martin és munkatársai [J.Bacteriology, 115:198-204 (1973)] írták le. Ilyen mutánsok előállítása Streptomyceseknél eddig még nem történt.
Sculman és munkatársai [SAntibiot., 38(11): 1494-98 (1985)] beszámolnak a S.avermitihs Agly-1 mutánsról, mely lényegében csak Alá és A2a avermektin aglikonokat termel. Ugyancsak beszámolnak a S.avermitilis Agly-1 szinefungin jelenlétében történő fermentálásáról, ami a B-avermektinaglikon komponensek fokozódott termelődését eredményezi. Hasonlóképpen, ha a magas avermektintermelőképességű S.avermitilis 08 törzset az O-metil-transzferázt gátló szinefungin jelenlétében tenyésztik, olyan avermektinek termelődnek, melyek aglikonjának 5-ös szénatomján és az oleandróz diszacharid csoporton hiányaik az oxi-metil-csoport.
A 4 378 353 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalom C-076-tal rokon vegyületeket ír le, melyeket a S.avermitilis ATCC 31272 törzsből ultraibolya fény besugárzással kapott MA-5218 mutáns tenyészetével állítanak elő. A mutánst ATCC 31780 törzsként azonosították. A nevezett mutáns által termelt C-076-tal rokon vegyületeknél hiányzik a C-076 vegyületek furángyűrűje. Ezen kívül a leírt vegyületek némelyikénél hiányzik az egyik vagy mindkettő oleandróz cukorcsoport, másoknál pedig az 5-ös helyzetű csoport ketocsoporttá oxidált.
Ruby és munkatársa [6zh. International Symposium on the „Biology of Actionomycetes”, Debrecen, 1985. augusztus 26-30], valamint Schumlan és munkatársai [Antimicrobial Agents and Chemostherapy, 31: 744-7 (1987)] a S. avermititis O-metiltranszferáz mutáns, három csoportját írják le, melyek olyan avermektineket termelnek, ahol hinyoznak az O-metil-csoportok. Az első csoport főként B-avermektineket termel, minthogy a csoprotba tartozó mutánsok nem képesek a makrociklikus laktongyűrű 5-ös helyzetű hidroxilcsoportját metilezni. A második csoportba tartozó mutánsok 3’-O, 3”-O-bisz-demetil-avermektineket termelnek (olyan avermektineket, melyek mindkét oleandróz cukorcsoportján hiányzik a 3-as helyzetű O-metil
-2HU 201973 Β szubsztituens); ezeket demetil-avermektineknek hívják. A harmadik csoportba tartozó mutánsok egyik helyzetben sem képesek a metilezésre.
Schulman és munkatársai [Fed.Proc., 44: 931 (1985)] fokozott B-avermektin termelést érnek el
S.avermitilis mikroorganizmusokkal oly módon, hogy a fermentálást szmefungin, S-adenozil-etionin és S-adenozil-homocisztein jelenlétében végzik, mely anyagok gátolják a B-avermektin-O-metiltranszferáz enzimet és ezáltal az ágiikon 5-ös helyzetű hidroxiicsoportjának metilezését. Schulman és munkatársai [Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 29:620-624 (1986)] leírnak O-metil-transzferáz aktivitással nem rendelkező Streptomyces avermitilis mutánsokat is, melyek fokozott mennyiségben termelnek B-vermektin komponenseket.
A S.avermitilis mutagenezise elágazó láncú-2oxo-sav-dehidrogenáz aktivitással nem rendelkező mutánsokat eredményez. Ezek a mutánsok már nem képesek jelentős mennyiségű természetes avermektinek termelésére, ha nem tudunk a tenyészethez RCOOH általános képletű vegyületet, ahol R jelentése izopropilcsoport vagy (S)-szek-butilcsoport, vagy olyan vegyületet mely a fermentációs folyamatok során az említett RCOOH vegyületté képes átalakulni. Ezek a mutánsok azonban melepetésszerűen és váratlanul természetes és nem-természetes avermektineket termeltek, ha a fermentáció R-COOH általános képletű - ahol R jelentése izopropilcsoport, (S)-szek-butil-csoport vagy más itt tárgyalt csoport - vegyület vagy annak előanyaga jelenlétében történt. Még meglepőbb, hogy az itt leírt olyan mutánsok, melyek csak az elágazó láncú2-oxo-sav-dehidrogenáz aktivitással nem rendelkeznek és képesek lebontani az L-izoleudnt, az L-leucint vagy az L-valint, a vegyületek széles variációját fel tudják használni az avermektin bioszintézisénél, természetes avermektineket nem tartalmazó, nem-természetes avermektineket termelve.
Az ilyen egyszeresen blokkolt mutánsok további mutagenezise olyan mutánsok keletkezéséhez vezet, melyek nem rendelkeznek az elágazó láncú-2oxo-sav-dehidrogenáz aktivitással és a avermektinB-O-metil-transzferáz aktivitással sem. Az ilyen kettősen blokkolt mutánsok meglepően és váratlanul lényegében csak avermektin-B-komponenseket termelnek, ha a fent meghatározott RCOOH általános képletű vegyületet adjuk a tenyészethez.
Mint már említettük, a természetes avermektinek nyolc különálló, de egymáshoz nagyon hasonló komponensből állnak, melyeknek (I) általános képletében R jelentése izopropilcsoport vagy (S)-szekbutil-csoport. Noha lényegében tiszta állapotban nyerhetők ki (lásd 4 429 042 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalom), az eljárás a legjobb esetben is munkaigényes. A B-avermektinek antelmintikus aktivitása általában jobb, mint a megfelelő A-avermektineké. A nem-természetes avermektinek (A és B komponensek) EP 214731 szabadalom szerinti előállításánál különböző mennyiségben természetes avermektinek is termelődhetnek, minthogy jelen van az elágazó láncú-2-oxo-sav-dehidrogenáz és a S.avermitilis sejtjeiben és a tápközegben az L-valin és L-izoleucin aminosav.
A kívánatos cél: csak a biológiailag hatásosabb, természetes vagy nem-természetes B-komponensek termelése; a termékek számának, a termékkeverék komplexicitásának csökkentése; az adott avermiktin tisztaságának növelése, és ezáltal az elválasztási eljárás egyszerűsítése.
Az elágazó láncú-2-oxo-sav-dehidrogenáz aktivitással nem rendelkező S.avermitilis törzseket az avermektintermelő S.avermitilis, főként az S.avermitilis ATCC 31267, AZCC31271, ATCC 31272 vagy az NCIB 12121 törzsek mutagenezisével állítjuk elő. A mutánsok képtelenek a természetes avermektinek szintézisére, hacsak izopropilcsoportot vagy (S)-szek-butil-csoportot tartalmazó zsírsavat vagy annak előanyagát nem adjuk a tápközeghez. A mutánsok természetes és nem-természetes avermektineket képesek termelni, ha vizes, aerob körülmények között tenyésztjük őket, olyan táptalajon, mely megfelelő primer savat vagy a fermentációs folyamatokban azzá átalakuló előanyagot tartalmaz. _ 14
A mutagenizált telepek közül a WC izotóppal jelzett széndioxid-termelés alapján választjuk ki azokat, melyek nem rendelkeznek az elágazó láncú-2-oxo-sav-dehidrogenáz aktivitással. Ennél az eljárásnál azt a jelenséget használjuk fel, hogy az említett enzimaktivitással nem rendelkező permeabilízált sejtek a [WC-l]-2-oxo-izokapronsav vagy a [14C-l]-2-oxo-3-metil-vajsav szubsztrátokból nem termeinek 14C izotóppal jelzett széndioxidot.
Meglepő és váratlan, hogy az itt ismertetett, az elágazó láncú-2-oxo-sav-dehidrogenáz aktivitással nem rendelkező mutánsok megtartják avermektineket, főleg a nem-természetes avermektineket termelő képességüket. Az a tény, hogy a szokásos táptalajon növekvő mutánsok képtelenek természetes zsírsav-koenzim-A-származékokat termelni, letális mutációt jelenthet, ha a membránok integritása az említett származékoktól függ, vagy, ha a 2-oxo-sav felhalmozódása citotoxicitáshoz vezet. Nem volt továbbá várható, hogy a mutánsok képesek az L-izoleucin és az L-valin degradatív metabolizmusa révén acetil-koenzim-A-t vagy propionilkoenzim-A-t szintetizálni, minthogy ez olyan enzimaktivitásokat igényel, amivel a mutánsok nem rendelkeznek. A fent említett avermektin bioszintézis acil-koenzim-A iránti igénye alapján azt várhatnánk, hogy a mutánsok nem-természetes avermektin termelése súlyosan zavart. A várakozással ellentétben, nem ez a helyzet.
Az itt leírt mutánsok elágazó láncú-2-oxo-savdehidrogenáz aktivitásának a hiánya megakadályozza az elágazó láncú acil-koenzim-A L-izoleucin, L-leucin és L-valin lebomlásával kapcsolatos szintézisét, és ezáltal a természetes avermektinek szintézisét is, hacsak a fermentációs tápközegben nem adunk R-COOH általános képletű vegyületet vagy előanyagát, ahol R jelentése (S)-szek-butilcsoport vagy izopropilcsoport.
A 2-oxo-sav-dehidrogenáz aktivitással nem rendelkező mutánsok mutagenezisével továbbá olyan mutánsokhoz juthatunk, melyek az avermektin-BO-metil-transzferáz aktivitással sem rendelkeznek. Az avermektin-B-O-metil-transzferáz aktivitással nem rendelkező mutánsok képtelenek az avermektin aglikonok 5-ös helyzetű oxigénjét metilezni.
-3HU 201973 Β
Ezek a mutánsok lényegében csak B-vermektinek termelésére képesek, az A-avermektinekére nem.
A találmány szeimt (I) általános képletű avermektin-származékokat állítunk elő, ahol » ·
R hidroxicsoport, ha a 22,23-kettőskötés hiány- 5 zik, vagy hidrogénatom, ha a 22,23-kettőskötés jelen van,
R2 (II) képletű 4’-(a-L-oleandrozil)-a-L-oleandrozil-oxi-csoport,
R jelentése α-helyzetben elágazó láncú 3-7 szén- 10 atomos alkil-, 3-7 szénatomos alkenil-, 3-7 szénatomos alkinil-, (1-4 szénatomos alkoxi)-3-7 szénatomos alkil- vagy (1-4 szénatomos alkiltio)-2-7-szénatomos alkilcsoport; adott esetben egy vagy két halogénatommal vagy egy metiléncsoporttal 15 szubsztituált 3-8 szénatomos cikloalkilcsoport; egy 5-8 szénatomos cikloalkenilcsoport; furanil-, tetrahidrofuranil-, dihidropiranil-, tetrahidropiranil-, tetrahidro-tiopiranil-, tetrahidrotienil- vagy tienilcsoport. 20
Az itt leírt mutánsok a nem-természetes B-avermektinek leírt és példákkal szemléltetett előállítása szempontjából nagy értékűek. Különösen hasznosak ezek a mutánsok az előnyös avermektinek, azaz a 25-ös szénatomon 4-6 szénatomszámú cikloalkil- 25 vagy cikloalkenil-csoportot, 1-metil-tio-etil-csoportot vagy 3-tienil- vagy 3-furilcsoportot viselő avermektinek előállítása szempontjából.
Az avermektint termelő Streptomyces avermitilis törzsek mutációs kezelését az ismert eljárások 30 szerint végezzük a szokásos mutagén faktorokkal, azaz ultraibolya fény vagy Röntgen besugárzással, N-metil-N’-nitro-nitrozo-guanidinnal, etil-metánszulfonáttal, salétromossawal, N-mustárral, például N-metil-bisz(2-klór-etil)-aminnal, stb. történő 35 kezeléssel. A mutagenezist természetes avermektineket termelő S.avermitilis, például S.avermitilis ATCC 31272 törzs spóráin vagy vegetatív tenyészetén végezhetjük.
A szakemberek által jól ismert eljárást követve, 40 az elágazó láncú-2-oxo-sav-dehidrogenáz aktivitással nem rendelkező mutánsokat a biokémiai vizsgálati eljárás alapján szelektáljuk, mely lehetővé teszi, hogy a ráadom mutagenizált baktériumtelepek nagy számát megvizsgáljuk abból a szempontból, 45 hogy bizonyos elágazó láncú [14C-l]-2-oxo-savakból termelnek-e 14C izotóppal jelzett széndioxidot (Tábor és munkatársai, J.Bact., 128: 485-486 /1976/).
Az eljárás abból áll, hogy a mutáns telepeket 50 alkalmas táptalajon, mikrotiter lemez lukaiban növesztjük, a sejteket toluollal permabilizáljuk, majd [14C-l]-2-oxo-savat (például 2-oxo-izokapronsavat) adunk minden egyes lukba, és vizsgáljuk a 14CO2 jelenlétét a tenyészet feletti légtérben. A 55 r4C-l]-2-oxo-izokapronsav helyett használhatunk [14C-l]-2-ono-3-metil-valeriánsavat vagy [14C-l]-2οχο-3-metil-vajsavat. A14C izotóppal jelzett széndioxid termelődését a szokásos módon mutatjuk ki, vagyis bárium-hidroxiddal átitatott szűrőpapírt he- 60 lyezünk az egyes lukak fölé, ami megköti a l4CO2-t, bármennyi is termelődött, és a 14C izotóppal jelzett ábrium-karbonátot autoradiográfiával kimutatjuk. Azoknál a mutánsoknál, ahol hiányzik az elágazó láncú-2-oxo-sav-dehidrogenáz aktivitás, az adott 65 autoradiogramm közel azonos a vak kontroliéval (nem beoltott luk), azaz a mutáns nem eredményez több jelzett bárium-karbonátot.
Az így nyert mutánsokat további, fent említett mutagén kezelésnek vethetjük alá. A mutagenizált telepeket az avermektin-B-O-metil-transzferáz aktivitás szempontjából vizsgáljuk tovább. Ehhez kromatográfiás (vékonyréteg vagy HPLC) eljárást használunk, a hozzáadott előanyag - például 2-metil-vajsav-jelenlétében végzett fermentálást követően. Az avermektin-B-O-metil-transzferáz aktivitással nem rendelkező mutánsoknál a fermentléből lényegében hiányoznak az A-avermektin komponensek.
Egy adott törzs kívánt alléljeit a mikroogranizmus mutagén kezelése mellett előállíthatjuk protoplaszt fúzióval is. így például egy S.avermitilis törzset, mely nem rendelekzik sem az elágazó láncú-2-oxo-sav-dehidrogenáz, sem az avermektin-BO-metil-transzferáz aktivitással fuzionálhatunk egy, a fenti aktivitással rendelkező S.avermitilis törzzsel. A fúzió olyan S.avermitilis törzset eredményezhet, mely csak az avermektin-B-O-metiltranszferáz aktivitással rendelkezik. Amint az a szakemberek előtt ismert eltérő szelekciós vonalú törzsek kívánt alléljeit egyetlen törzsbe egyesíthetjük a protoplasztfúziós technikával.
A találmány szerinti eljárással alkalmazott mutánsok alaktani és tenyészeti tulajdonságai hasonlóak a 4 429 042 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalomban leírtakéhoz. A találmány szerinti mutánsok megkülönböztető tulajdonságai: az elágazó láncú-2-oxo-sav-dehidrogenáz aktivitás és a B-avermektin-O-metil-transzferáz aktivitás hiánya, mely tulajdonságokat az itt leírtak alapján határozzuk meg. Az említett aktivitások hiánya azt eredményezi, hogy a mutánsok nem termelnek természetes B-avermektineket, ha a tenyésztés RCOOH általános képletű - ahol R jelentése izopropilcsoport vagy (S)-szek-butil-csoport - zsírsavakat, vagy a fermentáció alatt ezekké átalakuló vegyületeket nem tartalmazó szintetikus táptalajon történik. Az American Type Culture Collection alapján végzett rendszertani vizsgálatok megerősítik, hogy a fenti 14CO2 teszttel szelektált 1-3 mutáns törzs szoros rokonságot mutat a 4 429 042 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalomban leírt ATCC 31272 szülőtörzzsel, de vannak bizonyos eltérések is. így például az 1-3 (ATCC 53567) lényegesen kevesebb spórafűzért képez, mint az ATCC 31272 törzs. A hasznosítási kísérletek szerint, az 1-3 törzs nem hasznosítja növekedéséhez a raffinózt. Ellentétben az ATCC 31272 törzs 4 429 042 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalomban leírt tulajdonságával, nem tapasztaltunk növekedést szacharózon, mint egyetlen szénforráson sem mutáns sem az ATCC 31272 törzs esetében. Az 1-3 mutáns nem rendelkezik elágazó láncú-2-oxo-sav-dehidrogenáz aktivitással.
A találmány szerinti eljárás mikroorganizmusa az elágazó-2-oxo-sav-dehidrogenáz aktivitással és a B-avermektin-O-metil-transzferáz aktivitással nem rendelkező S.avermitilis 7881 törzs, mely az 1-3 (ATCC 53567) mutáns további mutagenezisével keletkezett, az 1-3 mutánshoz hasonló rendszertani
-4HU 201973 Β viszonyban van az ATCC 31272 törzshöz.
A Streptomyces avermitilis 1-3 és 7881 törzsek a Budapesti Egyezményben szabályozott viszonyok között Streptomyces avermitilis ATCC 53567, illetve ATCC 53692 megnevezéssel lettek letétbe helyezve az American Type Culture Collection-ban, Rockville, Maryland, USA, ahonnan az ismert jogi rendelkezések mellett beszerezhetők.
A S.avermitilis ATCC 31267, AtcC 31271, ATCC 31272 és az NCIB 12121 törzsek mindegyike termel (I) általános képletű természetes avermektineket, ahol az (I) általános képletben a 22 és 23-as szénatomok közötti szaggatott vonal adott esetben kettős kötést jelent;
R1 jelentése hidroxilcsoport és csak akkor van jelen, ha nincs kettőskötés;
R2 jelentése (Π) általános képletű 4*-(a-L-oleandrozil)-a-L-oleandrozil-oxi-csoport, melyben belül
R3 jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport; és
R jelentése izopropilcsoport vagy (S)-szek-butil-csoport.
A 4 285 963 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalom olyan (I) általános képletű avermektineket ír le, ahol a 25-ös helyzetben a szubsztituens metilcsoport vagy etilcsoport; R1 jelentése hídroxilcsoport és R^jelentése metilcsoport.
A jelen találmányban szereplő nem-természetes avermektinek esetében R jelentése nem izopoopilcsoport, vagy (S)-szek-butil-csoport, jelentését az alábbiakban meghatározzuk.
Az (I) általános képletű vegyületek bioszintéziséhez felhasznált alapvegyületek a S.avermitilis sejtben és a tápközegben találhatók meg. Ezek a vegyületek az L-valin és L-izoleudn vagy az ezeknek megfelelő 2-oxo-savak lebomlásával keletkeznek a 2-oxo-savnak az elágazó láncú-2-oxo-sav-dehidrogenáz által katalizált dekarboxilálódásán keresztül, mialatt a termék koenzim-A-val kapcsolódik össze. Jelenlétük magyarázza az izopropilcsoportot és az (S)-szek-butil-csoportot hordozó (I) általános képletű vegyületek egyidejű termelődését. Ezzel természetesen fellép az izopropil- és az (S)-szek-butil-származékok elválasztásának a feladata.
Amikor a táptalaj egy adott kiindulási primer vegyületet tartalmaz, a találmány szerinti mutánsok olyan (Γ) általános képletű vegyületet, vagy ami az általánosabb eset, két olyan (I) általános képletű vegyület keverékét termelik, melyben R jelentése megfelel az alkalmazott kiindulási vegyületnek. Maximum két termék keletkezhet, melyeket a 4 429 042 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalom alapjá tiviálisan R-avermektin BI és B2 névvel illetünk. Az „R”-csoport természetesen a 25-ös helyzetű szubsztituenst jelenti. így például, ha R jelentése ciklopropilcsoport, a két lehetséges avermektin a következő:
triviális név R1 R3 ciklopentil-avermektin BI hidrogén- hidrogénatom atom ciklopentil-avermektin B2 hidroxil- hidrogéncsoport atom
A nem-természetes avermektineknél az (I) általános képlet 25-ös helyzetű R szubsztituense nem izopropilcsoport vagy (S)-szek-butil-csoport.
Az (I) általános képletű vegyületeket, ahol jelen van a kettős kötés és hiányzik a hidroxilcsoport, dehidrációval állíthatjuk elő (I) általános képletű vegyületekből, ahol R jelentése hidroxilcsoport és a kettőskötés hiányzik. A reakciónál előzőleg például terc-butil-dimetil-szilil-oxi-acetil szármatékként - védjük az 5-ös és 4” helyzetű hidroxilcsoportokat, majd helyettesített tiokarbonil-halogeniddel, például (4-metil-fenoxi)-tiokarbonil-kloriddal reagáltatunk, és a terméket magas forráspontú oldószerben, például triklór-benzolban melegítve dehidratáljuk. A védőcsoportok eltávolítása után hozzájutunk a telítetlen vegyülethez. Ezek a reakciók a szükséges reagensek és reakciókörülmények leírásával szerepelnek a 4 328 335 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalomban.
Az (I) általános képletnek megfelelő vegyületek, ahol R1 jelentése hidrogénatom és a kettőskötés nincs meg, az olyan megfelelő vegyületek katalizátor jelenlétében végzett szelektív hidrogénezésével állíthatók elő, ahol jelen van a kettőskötés és azR1 hidrogénatom. A redukciót elvégezhetjük például trisz(trifenil-foszfm)-ródium(I)-klorid alkalmazásával a 0001689 számú európai szabadalmi leírás és az annak megfelelő, 199 569 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalom alapján.
Az (I) általános képletnek megfelelő vegyületeket, ahol R2 jelentése hidrogénatom az Qlyan megfelelő vegyületekből állítjuk elő, ahol R2 jelentése 4’-(a-L-oleandrozil)-a-L-oleandrozil-oxi-csoport, enyhe savas hidrolízissel eltávolítva a 4’-(a-L-oleandrozil)-a-L-oleandróz csoport. A vizes szerves oldószerben végzett hidroíizis eredményeként olyan aglikont nyerünk, mely a 13-as helyzetben hidroxilcsoportot visel. Ezt a terméket azután halogénezzük, például benzolszulfonil-halogeniddel, 13-deoxi-13-halo-származékhoz jutva, amit végül szelektíven redukálunk, például tributil-ón-hidriddel. A nem kívánatos mellékreakciók elkerülése céljából, kívánatos a többi jelenlevő hidroxilcsoportot, például tcrc-butil-dimetil-szilil-csoporttal védeni. A halogénezés vagy a redukciós lépés után a védőcsoport azután könnyen eltávolítható nyomnyi savat tartalmazó metanolban. Mindezek a reakciók, valamint a szükséges reagensek és az alkalmazott reakciókörülmények szerepelnek a 0002615 számú európai szabadalmi leírásban.
A természetes és nem-természetes avermektinek bioszintéziséhez a találmány szerinti S-avermitilis törzsek R-COOH általános képletű vegyületeket (primer vegyületek) használnak fel, ahol R jelentése a fenti.
A találmány szerinti eljárásnál, egy elágazó láncú-2-oxo-sav-dehidrogenáz aktivitással és B-avermektin-O-metil-transzferáz aktivitással nem rendelkező, fent meghatározott S.avermitilis ATCC 53692 törzset, annak mutánsát vagy variánsát aerob körülmények között tenyésztünk asszimilálható szénforrást, nitrogénforrást, szervetlen sókat és RCOOH általános képletű vegyületet tartalmazó vizes tápközegben. A savat vagy a beoltás idejében adjuk a tápközeghez, vagy bizonyos időközönként
-5HU 201973 Β a fermentáció alatt. Az avermektinek termelődését minták vételével követjük nyomon. A kivett mintát szerves oldószerrel extraháljuk, és a terméket kromatográfiásan mutatjuk ki, például HPLC-t használva. Az inkubálását addig végezzük, amíg a tér- 5 mék mennyisége maximumot nem ér el. Ez rendszerint 4-5 napot jelent.
A hozzáadott primer anyagok - karbonsav előnyösen mennyisége 0,05-3,0 g literenként. A primer vegyületet hozzáadhatjuk a tenyészethez folya- 10 matosan, megszakításokkal vagy egyszerre. Az RCOOH általános képletű savat adhajtuk szabad sav formájában, sóként, mint például nátrium-, lítium- vagy ammóniumsó vagy a savvá átalakuló vegyület alakjában. Amennyiben a sav szilárd állapo- 15 tű, előnyös megfelelő oldószerben, például vízben vagy 1-4 szénatomszámú alkoholban oldani.
A fermentációhoz használt táptalaj a szokásos, asszimilálható szén- és nitrogénforrást és nyomelemeket tartalmazó tápközeg lehet. 20
A táptalajt úgy állítjuk össze, hogy ne vagy csak minimális mennyiségben tartalmazza azokat a primer vegyületeket, ahol R jelentése iropropilcsoport vagy (S)-szek-butil-csoport.
A 24-33 °C hőmérsékleten végzett fermentálás 25 befejeztével a fermentlevet lecentrifugáljuk vagy szűrjük, és a micéliumot előnyösen acetonnal vagy metanollal extraháljuk. Az extraktumot betöményítjük, és a kívánt terméket vízzel nem elegyedő oldószerrel - például mtilén-kloriddal, etil-acetát- 30 tál, kloroformmal, butanollal vagy metil-izobutilketonnal - extraháljuk. Az extraktumot betöményítjük, és a nyersterméket a kívánalmak szerint tovább tisztítjuk, például fordított fázisú, preparatív HPLC-t alkalmazva. 35
A nyerstermék általában az (I) általános képletű vegyületek keveréke, ahol R2 jelentése 4’-(a-L-oleandrozil)-a-L-oleandrozil-oxi-csoport; R1 jelentése hidroxilcsoport és a kettőskötés hiányzik, vagy R1 szubsztituens hidrogénatom és a kettőskötés 40 megvan; és R3 jelentése hidrogénatom. Azok a vegyületek, ahol R3 jelentése metilcsoport, lényegében hiányoznak. Az egyes komponensek aránya azonban erősen változhat az adott mutáns, az alkalmazott primer vegyület és a használt körülmények- 45 tői függően.
Az itt leírt elágazó láncú-2-oxo-sav-dehidrogenázt nem tartalmazó mutánsokból három típusú O-metil-transzferáz mutánsokat kaphatunk. A mutánsok, melyekben az elágazó láncú 2-oxo-sav-de- 50 hidrogenáz aktivitást nem tartalmazó mutáció egy vagy több O-metil-transzferázt nem tartalmazó mutációval párosul, főként B-avermektineket, demetil-avermektineket vagy egyáltalán nem metilezett avermektineket termelnek, ha RCOOH általános 55 képletű vegyületeket vagy a fermentáció során ezekké átalakuló vegyületeket adunk a tenyészetükhöz. A nevezett mutánsokat úgy kapjuk, hogy az elágazó láncú-2-oxo-sav-dehidrogenáz aktivitással nem rendelkező mutánsokat ultraibolya fénnyel 60 és/vagy kémiai mutagénekkel, például N-metil-Nnitrozó-karbamiddal, nitrozóguanidinnel vagy más hatóanyaggal kezeljük, mint már fentebb említettük. Ettől eltérő módon az elágazó láncú-2-oxo-savdehidrogenáz aktivitással rendelkező, de egy vagy 65 6 több O-metil-transzferáz aktivitásban blokkolt mutánsokat ultraibolya fénnyel vagy mutagén hatóanyagokkal kezelhetjük, olyan mutánsokhoz jutva, melyek nem rendelkeznek elágazó láncú-2-οχοsav-dehidrogenáz aktivitással.
Az ilyen mutánsok által termelt nem-természetes avermektinekre az jellemző, hogy az ágiikon 5-ös szénatomján és/vagy az oleandróz 3’-as szénatom és/vagy 3”-as szénatomján hídroxilcsoportok találhatók.
A fent leírt mutánsokat Schulman és munkatársai módszerével [Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 29: 620-624 (1986)] azonosítottuk. Az így előállított avermektinek azonos céllal és módon használhatók fel, mint az eddig ismert avermektinek.
Nagyobb mennyiségű B-avermektint, ideértve azokat, melyek oleandróz diszacharid csoportján hiányzik a metilcsoport, alternatív módon előállíthatunk úgy, hogy a találmány szerinti mutánsokat, melyeknél nincs meg az elágazó láncú-2-oxo-savdehidrogenáz aktivitás, szinefungin, S-adenoziletionin vagy S-adenozil-homocisztein jelenlétében tenyésztjük, mely anyagok gátolják az O-metiltranszferáz aktivitást.
A találmány szerinti vegyületek magas aktivitású antiparazitikumok, különösen mint antelmintikák, ektoparaziticidek, inszektícidek és akaricidek alkalmazhatók.
Ezek szerint a vegyületek hatásosak endoparaziták által okozott különféle betegségek kezelésére, különösen a helmintiázis gyógyítására, melyet leggyakrabban a parazita férgek egy nematódákként leírt csoportja okoz. Ezek súlyos gazdasági kárt okoznak a sertéseknél, juhoknál, lovaknál és szarvasmarháknál és megbetegítenek más háziállatokat és baromfiakat is. A vegyületek hatásosak más nematódákkal szemben is, melyek különféle állatfajokat betegíthetnek meg, ilyenek például a kutyák Dirofilaria parazitái. Alkalmazhatók embereket is megfertőzhető parazitákkal szemben is, ideértve az emésztőrendszerben élő Ancylostoma-t, Necatort, Ascaris-t, Strongyloides-t, Trinchinella-t, Capillaria-t, Trichuris-t, Enterobins-t, valamint a vérben vagy más szövetekben és szervekben található parazitákat, például a Filaria férgeket és a bélrendszeren kívüli állapotban levő Strongyloides-t és Trichinella-t.
Sikerrel alkalmazhatók a vegyületek ektoparazitákkal szemben is, ideértve elsősorban az emlősök és madarak ízeltlábú ektoparazitáit, mint amilyenek az atkák, kullancsok, tetvek, legyek, húslegyek, csípő rovarok és a kétszárnyúak; szarvasm/frhákon, lovakon élősködő migráló lárvái.
A vegyületeket hatásos inszekticidként használhatjuk a háztartásban előforduló rovarokkal, például csótánnyal, ruhamollyal, múzeumbogárral, és háziléggyel szemben, de hatékonyak a raktározott gabonát és mezőgazdasági növényeket károsító rovarok elpusztításában is, mint amilyenek az atkák, levéltetvek, hernyók és a vándorló egyenesszárnyúak, például a sáskák.
Az (I) általános képletű vegyületek bejuttatást módja függ attól, hogy miként akarjuk alkalmazni, milyen gazdaállatot kívánunk kezelni vele, és mi-6HU 201973 Β lyen parazita, illetve rovar ellen használjuk. Például antelmintikaként használva, a vegyületeket beadhatjuk szájon keresztül kapszula, bólusz, tabletta vagy folyadék alakjában, de bejuttathatjuk injekcióként vagy beültetéssel is. Ezeket a készítményeket az állatgyógyászatban általánosan alkalmazott, szokásos eljárásokkal állítjuk elő. A kapszulák, bóluszok és tabletták előállításánál a hatóanyagot finoman elporított hígító- vagy hordozóanyagokkal keverjük össze, a készítmény tartalmazhat még szétesést elősegítő anyagokat és/vagy kötőanyagokat, például keményítőt, laktózt, talkumot, magnéziumsztearátot stb. A folyékony orális készítmény a hatóanyagot vizes oldatban diszpergálva tartalmazza diszpergáló-, nedvesítőanyag stb. mellett. Az injektálható készítményt steril oldat alakjában készítjük el, mely más anyagokat is tartalmaz, például a vérrel izotóniát biztosító sókat vagy glükózt. A készítmények a hatóanyag mennyiségét illetően változhatnak. A hatóanyag alkalmazott mennyisége függ a kezelendő gazdaállat fajtájától, a fertőzés súlyosságától, a gazdaállat testsúlyától. Szájon át történő beadásnál a hatóanyag mennyisége általában 0,001-10 mg között változik testtömegkilogrammonként. Ezt a mennyiséget beadhatjuk egyszeri vagy elosztott dózisban. Általában 1-5 napos kezelésére van szükség. Természetes a megadott mennyiségek a találmány oltalmi körét nem korlátozzák, ennél kevesebb vagy több hatóanyagot is alkalmazhatunk.
A vegyületeket beadhatjuk az állatok táplálékával is, e célból töményebb adalékkészítményt vagy premixet készítünk, melyet a szokásos állati táplálékokhoz keverhetünk.
Inszekticidként és a mezőgazdasági káros rovarok elleni készítményként ρεπηεζ hintőpor, emulzió, stb. alakjában alkalmazzuk a vegyületeket, mely készítményeket a mezőgazdaságban szokásos eljárások szerint készítjük el.
A S.avermitilis 1-3 (ATCC 53567) törzset az alábbi többlépéses eljáráson keresztül állíthatjuk elő:
1. lépés: S. avermitilis ATCC 31272 törzset növesztünk 30 °C hőmérsékleten 12 napon keresztül egybefüggő tenyészetté New Patch Agar táptalajon. A táptalaj összetétele:
V-8 lé* 200 ml kálcium-karbonát 3 g agar 15 g vízzel kiegészítve 1000 ml-re
Nutrient broth 1,0 g/liter nátrium-acetát-3-vízql,4 g/1 izovaleriánsav 50 mg/1 izovajsav 50 mg/1 a-metil-vajsav 50 mg/1 izoleucin 250 mg/1 leucin 250 mg/1 valin 250 mg/1 nyomelemoldat** 1 nd/l *Nyolc növényi lé keveréke: paradicsom, sárgarépa, zeller, répa, petrezselyem, saláta, vízitorma és spenót, hozzáadva só, aszkorbinsav, citromsav és
természetes aromásítóanyagok. (Campbell Soup Company, Camden, NJ, USA). | |
**A nyomelemoldat összetétele: | |
vas(III)-klorid-6-víz | 2,7 g |
mangén(II)-szulfát-víz | 4,2 g |
réz-szulfát-5-víz | 0,5 g |
kálcium-klorid | 11,0 g |
bórsav | 0,62 g |
kobalt-klorid-6-νίζ | 0,24 g |
cink-klorid | 0,68 g |
nátrium-molibdenát | 0,24 g |
A felsorolt sók 1 liter 0,ln sósavban feloldva.
Három lemezről spórákat gyűjtünk, és 20 ml 0,05 mólos trisz/maleinsav pufferben, pH = 9,0 szuszpendáljuk.
2. lépés: 10 ml spóraszuszpenziót hozzáadunk egy kémcsőben 10 mg N-metil-N’-nitro-N-nitrozóguanidinhez (NTG), és a csövet 28 “C hőmérsékleten rázatjuk 60 percen keresztül. Ezután a spórákat bőséges mennyiségű 1%-os nátrium-klorid-oldattal mossuk.
3. lépés: A mosott spórákat 1%-os nátrium-klorid oldatban szuszpendáljuk, és a szuszpenziót azonos térfogatú 80%-os etílén-glikollal keverjük össze. A szuszpenziót -20 ’C hőmérsékleten tároljuk, és ezeket a sejteket használjuk a mutánsok keresésére. A szuszpenzió 1 milliliteréből kb. 104 telepet kapunk.
A spórákat YPD lemezekre szélesztjük, lemezenként kb. 100 telepet kapva. Az YPD táptalaj literenként 10 g élesztőkivonatot, 10 g Bacto peptont, 10 g dextrózt és 15 g Bacto agart tartalmaz, az autoklávozás előtt pH=6,9 értékre beállítva (a Bacto készítmények a Difco Laboratories-ból származnak, Detroit, Michigan 48238, USA).
4. lépés: 2-3 hetes, 28 ’C hőmérsékleten történő kinövesztés után különálló telepeket oltunk át a szabályos 96 lukú mikrotiter lemez egyes lukaiban. Ugyancsak átoltjuk a kérdéses telepeket friss agaros táptalajra is, hogy a mutánsok meghatározása után legyenek életerős sejtforrásaink.
5. lépés: minden egyes lukba bemérünk 75 mikroliter folyékony M9-es szintetikus tápközeget, mely 1% glükózt, 0,1% kazaminosavat, 0,01% izovaleriánsavat, 0,01% izovajsavat és 0,01% metilvajsavat is tartalmaz. Néhány napos 28 ’C hőmérsékleten történő inkubálás után a sejteknél megvizsgáljuk az elágazó láncú-2-oxo-sav-dehidrogenáz aktivitást. Az M9-es táptalaj egy litere 6 g dinátrium-hidrogén-foszfátot, 3 g kálium-dihidrogén-foszfátot, 0,5 g nátrium-klorídot és 1 g ammónium-kloridot tartalmaz. Autoklávozás után a fenti oldathoz hozzáadunk 1 ml steril 1M magnéziumszulfát oldatot és 1 ml 0,lM kálcium-kloridot.
6. lépés: 5% toluolt szuszpendálunk M9-es szintetikus táptalajban rövid ultrahangos kezeléssel. 25 ml ilyen szuszpenzióhoz hozzáadunk 1,2 ml [14C-l]-2-oxo-izokapronsav oldatot, melynek akti7
-7HU 201973 Β vitása milliliterenként 2,5 mikrocurie és mikromólonként 10,0 mikrocurie. Ebből a keverékből 50 mikrolitert adunk a mikrotiter lemez minden egyes, a viszgálandó telepeket tartalmazó lukába.
7. lépés: Az egyes tokákból termelődő jelzett széndioxidot (14CÖ2) megkötjük, és Tábor és munkatársai módszerével láthatóvá tesszük [J.Bacteriol., 128: 485-486 (1976), „Convenient method fór detecttog 14CŰ2 to multiple samples: Application 10 to rapid screening fór mutants”]. Azok a mutánsok, melyek nem tartalmaznak elágazó láncú-2-oxo-savdehidrogenáz aktivitást, csak annyi jelzett báriumkarbonátot eredményeznek, mint a kontrollok.
Egy javított módszernél, mely növeli a 14CO2 15 teszt érzékenységét, a pozitív vizsgálatnál a jelzett bárium-karbonát keletkezésének eredményeként sötét folt jelenik meg az autoradiogrammon; negatív vizsgálatnál nincs folt vagy csak nagyon halvány.
A fenti 4. lépésnél kapott különálló telepeket 20 2-3 hetes kinövesztés helyett 7-14 napos kinövesztés után kiemeljük az agarlemezről, és az 5. lépés kihagyásával közvetlenül vizsgáljuk a 6. és 7. lépésnél leírtak szerint.
A felszabaduló jelzett széndioxid mennyiségi 25 meghatározásán alapuló még tovább fejlesztett vizsgálati módszer a következő. A mutánsokat M9es pufferolt közegben tenyésztjük, mely 1% glükózt és 0,1% „Syncasa-bcaa”-t tartalmaz. A „Syncasabcaa” a kereskedelmi kazaminosavak összetételé- 30 vei körülbelül megegyező szintetikus L-aminosav keverék, de nem tartalmaz L-valint, L-izoleucmt, és L-leucint (1. alább).
Miután a tenyészet nagy sejtsűrűséget ért el, a sejteket M9-es pufferolt közegben mossuk, és M9- 35 es pufferben szuszpendáljuk fel, amely 1% toluolt is tartalmaz. Előzőleg a toluolt ultrahanggal diszpergáljuk, tejfehér szuszpenziót nyerve. A sejt/puffer/toluol szuszpenziót 30 ’C hőmérsékleten inkubáljuk 40 percen keresztül, hogy a sejtek permeábi- 40 lisek legyenek. A permeabllizált sejteket M9-es pufferolt közegben mossuk, és az eredeti térfogat egy ötödében szuszpendáljuk ugyanebben a közegben. 180 mikroliter szuszpenziót használunk fel a vizsgálatokhoz. 45
A 300 mikroliteres reakciókeverék tartalmazza a toluollal kezelt sejteket, 0,4 mM triamin-pirofoszfátot (TPP), 0,11 mM koenzim-A-t (CoA),
0,68 mM nikotinamid-adenin dinukleitidot (NAD), 2,6 mM ditiotreitolt (DTT), 4,1 mM mag- 50 nézium-kloridot, 60 mM Trisz-CCl-t (pH = 7,5) és [14C-l]-2-oxo-izokapronátot, melynek aktivitása 6000 cpm, mikrocurie mikromólonként. A számlálási hatékonyság 73%-os.
A reakciót egy 15 milliliteres szcintillációs cső- 55 ben végezzük, melyben egy 2x2 cm-es Whatman 4-es papír négyzet van a zárókupakba szorítva. A papírba 30 mikroliter 1M Hyamine Hydroxide-ot (metil-benzetonin-hidroxid 1 mólos oldata metanolban; Sigma Chemical Co., St.Louis, MO. 63178, 60
USA) szívatunk be, mely elnyeli a termelődő jelzett széndioxidot. 2 órás inkubáció után, a papírt 10 ml Beckman Aquasol II (New England Nuclear Research Product, Boston, MA 02118, USA) szcintillációs számlálási folyadékba merítjük, és 4 órás vagy 65 8 ennél hosszabb kiegyenlsúlyozódás után mérjük a rádioaktivitást folyadék szcintillációs számlálóban. A kontroll vak kísérlet - azaz ahol nincsenek sejtek jelen - kb. 50-300 cpm értéket ad.
Az 1-3 mutánsok vagy az ehhez hasonlók a vak kontrolinál kisebb vagy azzal egyenértéket adnak, míg a szülőtörzs a vak érték többszörösét eredményezi.
A „Syncasa-bccaa” készítmény százszoros töménységű koncentrátum:
g/l
L-alanin 3
T .-arginin 4
L-aszparginsav 6
L-cisztin 1
L-glutamonsav 20 glicin 1
L-hisztidin 2
L-lizin 7
L-metionin 3
L-fenil-alanin 6
L-prolin 10
L-szerin 6
L-treonin 4
L-tirozin 4
L-triptofán 1
Az oldat kémhatását pH=7 értékre állítjuk be, és szűréssel sterilizáljuk. 1 rész koncentrátumot adunk 99 rész közeghez, hogy a szokásosan használt koncentrációkat beállítsuk.
Az elágazó láncú 2-oxo-sav-dehidrogenáz és az avermektin-B-O-metil-transzferáz aktivitásokkal nem rendelkező, kétszeresen blokkolt mutánst [S.avermitilis 7881 (ATCC 53692) törzs] az alábbi lépéseken keresztül állítjuk elő.
1. lépés: S.avermitilis ATCC 53567 törzset összefüggő tenyészetté növesztünk New Patch Agar Medium-on tenyésztve 12 napon át 30 ’C hőmérsékleten.
Három lemezről összegyűjtjük a spórákat, és 20 ml 0,05M trisz/maleinsav pufferben, pH=9,0 szuszpendáljuk.
2. lépés: 10 mg N-metil-N’-nitro-N-nitrozóguanidint (NTG) tartalmazó csőbe bemérünk 10 ml spóraszuszpenziót. A csövet rázatva inkubáljuk 28 ’C hőmérsékleten 60 percen keresztül, majd a spórákat alaposan kimossuk 1%-os nátrium-klorid oldattal.
3. lépés: A mosott spórákat 1%-os nátrium-klorid oldatban szuszpendáljuk, és azonos térfogatú 80%-os etilénglikollal keverjük össze. A szuszpenziót -20 ’C hőmérsékleten tároljuk, és sejtforrásként használjuk a mutánsok kereséséhez.
A spóraszuszpenziót YPD lemezekre szélesztjük, hogy lemezenként kb. 100 telepet kapunk.
A nitrozóguanidinnel kezelt Streptomyces avermitilis 1-3 (ATCC 53567) törzs populációjának telepeit az alábbi összetételű agaros táptalajra viszszükát:
literenként 80 g hidrolizált keményítő, 1 g diká-8HU 201973 Β lium-hidrogén-foszfát, 1 g magnézium-szulfát-7víz, 5 g ardamine PH, 5 g kálcium-karbonát, 1 ml P-2000, 0,01 g vas(n)-szulfát-7-víz, 0,001 g mangén(n)-klorid-4-víz, 0,001 g cmk-szulfát-vfe, 17 g Bacto agar, desztillált vízzel 980 ml-re kiegészítve. A kémhatását pH=7,0 értékre állítjuk be nátriumhidroxiddal, majd 20 percig sterilezzük 121 °C hőmérsékleten autoklávozva. Sterilizálás után 20 ml steril 5%-os ( ± )-2-metil-vajsav törzsoldatot adunk a táptalajhoz, és a kémhatást pH=7,0 értékre állítjuk be.
Az agaros táptalajra oltott tenyészetet 28 ’C hőmérsékleten inkubáljuk 8-12 napon keresztül. A sejteket (micéliumot) eltávolítjuk az agar felszínéről és 250 mikroliter acetonba visszük. 25 mikroliter acetonos extraktumot felviszünk egy Analtech Silica Gél GF készrétegre. A kromatogrammot 30-40 perces futtatással etil-acetáttal fejlesztjük ki. A lemez megszárítása után 3%-os etanolos vanilinoldattal permetezzük be, és 1-3 percre 100 ’C hőmérsékleten tartjuk. Ezt követően 3% kénsavat tartalmazó etanollal permetezzük le a lemezt, és 10-15 percre visszahelyezzük 100 ’C hőmérsékletre. Az avermektm-B-O-metil-transzferáz aktivitással nem rendelkező mutánsokat a kromatogramm alapján azonosítjuk. A kromatogrammon megtalálhatjuk az (l-metil-propil)-avermetin-B-komponensek foltjai - Rp 0,54,0,42 értékeknél a Bl, illetve B2 viszont hiányoznak az avermektin A komponensek foltjai - 0,69 Rf értéknél az Al, illetve 0,58 értéknél az A2 foltjai.
A HPLC analízishez a következő rendszert használjuk:
Mozgófázis: 150 ml víz ml acetonitril literre metanollal kiegészítve.
Oszlop: Ultrasphere ODS 25 cm (Beckman Intruments, Dullerton, CA 92634-3100).
Áramlási sebesség: 0,75 ml/perc.
Detektálás: 240 nm.
Csillapítás (értékenység): 6 közeli
A minta hígításához acetonitril/metanol 35:390 térfogatarányú elegyét használjuk.
Referens anyagok:
(1) 0,5 mg avermektin A2a-t mérünk be egy 10 ml-es mérőedénybe és metanollal 10 ml-re feltöltünk;
(2) 0,5 mg vizsgálati terméket bemérünk egy 10 ml-es mérőedénybe és metanollal 10 ml-re feltöltünk;
100 μΐ (1) oldatot és 100 μΐ (2) oldatot mérünk egy kémcsőbe és 800 μΐ mozgófázist adunk hozzá.
1) az összerázott fermentléből 1 ml kivétet lecentrifugálunk;
2) annyi felülúszót távolítunk el, amennyi csak lehetséges anélkül, hogy az üledéket felzavarnánk;
3) 100 μΐ HPLC minőségű vizet adunk az üledékhez, és vortex-szel szuszpendáljuk;
4) 2 ml fenti összetételű hígítóelegyet adunk hozzá és jól összekeveijük;
5) a szuszpenziót leszűrjük, a szűrletet HPLC analízisnek vetjük alá.
A természetes és nem-természetes avermektinek analíziséhez a fenti HPLC rendszert használjuk. A meghatározás belső standardjaként oligomi16 cin A-t használunk. A S.avermitilis fermentációknál csaknem mindig megfigyelhető a HPLC-vel az oligomicin A, mint melléktermék, és a találmányban szereplő mutásnok esetében csak ez az egy termék látható, ha olyan táptalajon tenyésztjük őket, mely nem tartalmaz RCOOH általános képletű vegyületet - ahol R jelentése a fentiekben meghatározott - vagy azzá átalakulni képes vegyületet. Az oligomicin A retenciós ideje általában 12^-14 perc. A retenciós idők aránya pontosabb lehetőséget ad az avermektin termékek azonosítására.
Az avermektin termékek általában a következő sorrendben jelennek meg a HPLC kromatogrammon:
B2, A2, Bl és Al.
természetes avermektinek | retenciós idő (avermektin) retenciós idő (oligomicin A) |
B2b | 0,70 |
B2a | 0,84 |
A2b | 0,90 |
A2a | 1,09 1,40 |
Blb | |
Bla | 1,83 |
Alb | 1,83 |
Alá | 2,42 |
A Bla és az Alb nem válnak el. | |
nem-természetes | retenciós idő |
avermektinek | (avermektin) retenciós idő (oligomicin A) |
ciklopentil B2 0,94 ciklopentil A2 1,23 ciklopentil Bl 1,99 ciklopentil Al 2,62
A különböző napokon felvett kromatogrammon az oligomicin A retenciós ideje között általában 1-2 perc eltérés van. Általában 12,5-14 percnél jelenik meg a csúcsa.
A példákban, hacsak az eltérésre nem utalunk, a fenti HPLC rendszert alkalmaztuk.
A példákban az alábbi táptalajokat használtuk:
AS-7 táptalaj hidrolizált keményítő8 20 g/liter
Ardamin PHb 5 g/liter
Pharmamediac 15 g/liter kálcium-karbonát 2 g/liter 8 Bacillus licheriformis α-amilázával (Novo Enzymes, Wilton, CT; „Termamyl” néven forgalmazva) hidrolizált keményítő.
b Yeast Products, Inc., Clifton, NJ 07012, USA. c Traders Protein, Memphis, TN 38108, USA.
A táptalaj kémhatását nátrium-hidroxiddal
-9HU 201973 Β
pH = 7,2 értékre állítjuk be. | |
AP-5 táptalaj | |
hidrolizált keményítő | 80 g/liter |
Ardamine pH | 5 g/liter |
dikálium-hidrogén-foszfát | 1 g/liter |
magnézíum-szulfát-7 víz | 1 g/liter |
nátrium-klorid 1 g/liter | |
kálcium-karbonát | 7 g/liter |
vas(II)-szulfát-7 víz | 0,01 g/liter |
cink-szulfát-7 víz | 0,001 g/liter |
mangán(II)-klorid-7 víz | 0,001 g/liter |
P-2000(habzásgátló)a | Imi |
a The Dow Chemical Co., Midland, Michigan 15
48640, USA.
A táptalaj kémhatását pH = 6,9 értékre állítjuk be 25%-os nátrium-hidroxiddal.
Az elmondottak bővebb szemléltetésére az aláb- 20 biakban példákat adunk meg. A példák a találmány oltalmi körét nem korlátozzák.
1-4. példa (referencia példák)
V-8 lemezen tenyésztett S.avermitílis 1-3 (ATCC 53567) törzzsel beoltunk 80 ml AS-7 táptalajt egy 500 ml-es, háromszorosan horpasztott oldalú Erlenmeyer lombikban. A lombikot percenként 200 fordulatszámú rázógépen rázatjuk 28-30 ’C hőmérsékleten. 24 órás inkubálás után nyert tenyészet 1 milliliterével beoltunk egy 300 ml-es lombikban levő 40 ml AP-5 táptalajt. A második fermentálást 28-30 ’C hőmérsékleten végezzük. 24 órás tenyésztés után 400 ppm mennyiséget adagolunk az alábbiakban felsorolt primer vegyületből.
A 312 órás tenyészetből 2 ml mintát veszünk, és azt 8 ml metanol/acetonitril (390:35) eleggyel keverjük össze. Szűrés után 50 μΐ szűrletet injektálunk a Beckman Ultrasphere ODS oszlopra (3,9x250 cm). Az oszlopot metanol/acetonitril/víz (89:14:7) eleggyel eluáljuk, 0,8 ml/perc áramlási sebesség mellett. Detektálás 240 nm-nél. A keletkezett (± 1metil-propil-, ciklopentil-, ciklohexil- és + 1-metilpropil-) avermektinek retenciós idejét az alábbiakban adjuk meg:
'1 retenciós idő (perc) primer vegyület B2 A2
B1 Al
1. ± 2-metil-vajsav | *11,60 12,40 | *14,75 16,10 |
2. ciklopentán-karbonsav | 12,32 | 15,86 |
3. ciklohexán-karbonsav | 14,84 | 19,26 |
4 (+)2-metil-vajsav | 11,60 | 14,75 |
23,1 | 29,82 |
25,28 | 32,96 |
31,46 | 41,14 29,82 |
23,1 |
* Mind a (+)-metil-vajsav, mind a (-)-metil-vajsav beépül az avermektinekbe. Az adott kromatográfiás viszonyok között a ( +) és a (-) avermektiek csak a B2 és az A2 esetében válnak el.
5. példa
500 ml-es háromszorosan horpasztott oldalú Erlenmeyer lombikban levő 100 ml AS-7 táptalajt fagyasztva tárolt S.avermitilis 7881 (ATCC 53692) törzzsel oltunk be. A lombikokat körkörös rázógépen rázatjuk percenként 200 fordulatszám mellett 28-30 ’C hőmérsékleten. 28 órás tenyésztés után 5 ml tenyészettel beoltunk egy 500 ml-es, háromszorosan horpasztott lombikban 100 ml AS-7 táptalajt. A lombikot körkörös rázógépen rázatjuk percenként 200 fordulatszám mellett 28-30 ’C hőmérsékleten. 24 órás tenyészet 1 milliliterével beoltunk egy 300 ml-es lombikban 40 ml AP-5 táptalajt. A lombikot 28-30 ’C hőmérsékleten rázatjuk 200 fordulat/perc fordulatszámmal. A 24. órában 400 ppm ciklohexán-karbonsavat adunk a tenyészethez, és 312 óra után 2 ml mintát veszünk, amit az 1. példában leírtak alapján HPLC-vel analizálunk. Ezek között a körülmények között csak avermektin komponensek mutathatók ki a fermentléből: a ciklohexil B2, 14,84 percnél (54,9 mg/1), a ciklohexil B1 példa primer vegyület száma
31,46 percnél (32,1 mg/1) jelenik meg a kromatogrammon.
6. példa
Az 5. példában leírtak szerint végezzük az eljárást, de a ciklohexil-karbonsav helyett 400 ppm ±2-metil-vajsavat adva a tenyészethez. Az összes többi körülmény azonos a 2. példában leírtakkal. A fermentlében csak szek-butil-avermektin B2 (11,60, 12,40 percnél; 63,5, illetve 42,4 mg/1) és szek-butil-avermektin B1 (23,1 perc: 105,5 mg/1) mutatható ki.
Az előállított vegyületek 0,001-10 mg/kg dózis50 bán hatékonyak.
7-29. példa
Az 5. példa szerinti eljárást ismételjük meg azzal a különbséggel, hogy az alábbiakban felsorolt eljá55 rás további paraméterei megegyeznek a 2. példában megadottakkal. Az alábbi táblázatban a termékek retenciós időit adjuk meg.
avermektin retenciós idő (perc) B2 B1
7. 3-tiofén-karbonsav
8. 3-furán-karbonsav
9. 2-tiofén-karbonsav
10. 2-metil-epnt-4-énsav
6,95 | 13,79 |
7,81 | 14,13 14,7 |
7,32 | |
11,0 | 22,2 |
-10HU 201973 Β
20 példa primer vegyület avermektin retenciós idő (perc) száma B2 BI
11. | 2-metiltio-propionsav | 7,9 | 13,353 |
12. | 4-tetrahidropirán-karbonsav | 7,55 | 14,72 |
13 | 4-metoxi-2-metil-vajsav | 8,72 | 17,39 |
14. | 3-ciklohexén-karbonsav | 12,9 | 27,9 |
15. | 4-tetrahidro-tiopirán-karbonsav | 11,0 | 22,76 |
16. | 3-tetrahidro-tíofén-karbonsav | 8,97 | 17,96 |
17. | 4,4-difluor-ciklohexán-karbonsav | 14,85 | 32,26 |
18. | 2-ciklopentén-karbonsav | 12,43 | 26,23 |
19. | 1-ciklopentén-karbonsav | 12,43 | 26,23 |
20. | 1-ciklohexén-karbonsav | 15,24 | 33,23 |
21. | 4-exo-metilén-ciklohexán-karbonsav | 15,3 | 34,1 |
22. | 2-furán-karbonsav | 7,82 | 15,31 |
23. | 2-tetrahidrofurán-karbonsav | 6,16 | 11,62 |
24. | 3-tetrahidrofurán-karbonsav | 6,17 | 11,64 |
25. | 2-metilpent-3-insav | 10,5 | 21,78 |
26. | 3,4-dihidropirán-2-karbonsav | 7,72 | 15,10 |
27. | 2-tetrahidropirán-karbonsav | 7,55 | 14,72 |
28. | 3-tetrahidropirán-karbonsav | 7,56 | 14,74 |
29. | 2-tetrahidro-tiopirán-karbonsav | 11,00 | 22,76 |
A fenti példákban kapott vegyületek megneve- | 25 Példa | ||
zése a következő: | száma | Végtermék neve |
Példa száma Végtermék neve
7. 25-(3-tienil-avermektin BI 25-(3-tienil)-avermaktin B2
8. 25-(3-furaml)-avermektin BI 25-(3-furanil)-avermektin B2
9. 25-(2-tienil)-avermektin BI 25-(2-tienil)-avermektin B2
10. 25-(l-metil-but-3-enil)-avermektin BI 25-(l-metil-but-3-enil)-avermektin B2
11. 25-(l-metil-tio-etil)-avermektinBl 25-(l-metil-tio-etil)-avermektin B2
12. 25-(4-tetrahidro-piranil)-avermektin BI 25-(4-tetrahidro-piranil)-avermektin B2
13. 25-(l-metil-3-metoxi-propil)-avermektm BI
25-(l-metil-3-metoxi-propil)-avennektin
B2
14. 25-(3-ciklohexenil)-avermektin BI 25-(3-áklohexenil)-avermektin B2
15. 25-(4-tetrahidro-tiopiranil)-avermektin BI 25-(4-tetrahidro-tiopiranil)-avermektin B2
16. 25-(3-tetrahidro-tienil)-avermektin BI 25-(3-tetrahidro-tienil)-avermektin B2
17. 25-(4,4-difluor-ciklohexanil)-avermektin BI
25-(4,4-difluor-ciklohexanil)-avennektin B2
18. 25-(2-ciklopentenil)-avermektin BI 25-(2-ciklopentenil)-avermektin B2
19. 25-(l-ciklopentenil)-avermektinBl 25-(l-ciklopentenil)-avermektin B2
20. 25-(l-ciklohexenil)-avermektin BI 25-(l-ciklohexenil)-avermektin B2
21. 25-(4-exo-metilén-ciklohexil)-avennektin BI
25-(4-exo-metilén-ciklohexil)-avermektin
B2
22. 25-(2-furanil)-avermektin BI
25-(2-furanil)-avermektin B2
23. 25-(2-tetrahidro-furanil)-avermektin BI 25-(2-tetrahidro-furanil)-avermektín B2
24. 25-(3-tetrahidro-furanil)-avermektin BI
25-(3-tetrahidro-furanil)-avermektin B2
25. 25-(l-metil-but-2-inil)-avennektin BI 25-(l-metil-but-2-ínil)-avennektin B2
26. 25-(3,4-dihidro-pirán-2-il)-avermektin BI 25-(3,4-dihidro-pirán-2-il)-avermektin B2
27. 25-(2-tetrahidro-priaml)-avermektin BI
25-(2-tetrahidro-pirainil)-avermektin B2
28. 25-(3-tetrahidro-piranil)-avermektin BI 25-(3-tetrahidro-piranil)-avermektin B2
29. 25-(2-tetrahidro-tiopiranil)-avennektin BI
25-(2-tetrahidro-tiopiranil)-avermektin B2
Claims (4)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK 501. Eljárás (I) általános képletű avermektin-Bszármazékok előállítására - aholR* 1 hidroxicsoport, ha a 22,23-kettőskötés hiányzik, vagy hidrogénatom, ha a 22,23-kettőskötés je55 len van,R2 (II) képletű 4’-(a-L-oleandrozil)-a-L-oleandrozil-oxi-csoport,R3 hidrogénatom, ésR jelentése α-helyzetben elágazó láncú 3-7 szén60 atomos alkil-, 3-7 szénatomos alkenil·, 3-7 szénatomos alkinil-, (1-4 szénatomos alkoxi)-3-7 szénatomos alkil- vagy (1-4 szénatomos alkil-tio)-2-7 szénatomos alkilcsoport; adott esetben egy vagy két halogénatommal vagy egy metiléncsoporttal65 szubsztituált 3-8 szénatomos cikloalkilcsoport; 511-11HU 201S’73B8 szénatomos cikloalkenilcsoport; furanil-, tetrahidrofuranil-, dihidropiranil-, tetrahidropiranil-, tetrahidro-tiopiranil·, tetrahidrotienil- vagy tienilcsoport, azzal jellemezve, hogyaStreptomycesavermitilis ATCC 53692 törzset vagy annak elágazó láncú-2oxo-sav-dehidrogenáz aktivitással és avermektin-5O-metil-transzferáz aktivitással nem rendelkező mutánsát vagy variánsát asszimilálható nitrogénforrást, szénforrást, szervetlen sókat és RCOOH általános képletű vegyületet - ahol R jelentése a fenti tartalmazó vizes táptalajon, aerob körülmények között tenyésztjük.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan RCOOH általános képletű vegyüle22 tét használunk, ahol R jelentése ciklohexil-, 3-ciklohexenil-, 1-ciklopentenil-, 1-ciklohexenil-, 4-metilén-ciklohexil-, 4,4-difluor-ciklohexil-, szek-butil, 2-tienil-, 3-tienil-, 4-tetrahidro-pirarúl-, 3-furil-,5 3-tetrahidro-tienil-, 4-metil-tio-2-butil- vagy 4-tetrahidro-tiopiranil-, csoport.
- 3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan R-COOH általános képletű karbonsavat használunk, ahol R jelentése ciklohexil- vagy10 tienilcsoport.
- 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan RCOOH általános képletű vegyületet alkalmazunk, ahol R jelentése α-helyzetben elágazó, 3-7 szénatomszámú alkilcsoport, azonban15 izopropil- vagy (S)-szek-butil-csoporttól eltérő.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US651287A | 1987-01-23 | 1987-01-23 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HUT47644A HUT47644A (en) | 1989-03-28 |
HU201973B true HU201973B (en) | 1991-01-28 |
Family
ID=21721247
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU88260D HU201973B (en) | 1987-01-23 | 1988-01-22 | Process for producing avermeclin beta derivatives |
HU88261A HU200487B (en) | 1987-01-23 | 1988-01-22 | Process for producing new demethylavermeltin derivatives |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU88261A HU200487B (en) | 1987-01-23 | 1988-01-22 | Process for producing new demethylavermeltin derivatives |
Country Status (30)
Country | Link |
---|---|
EP (2) | EP0276103B1 (hu) |
JP (2) | JPH0681757B2 (hu) |
KR (2) | KR900004419B1 (hu) |
CN (1) | CN1056883C (hu) |
AR (1) | AR241798A1 (hu) |
AT (2) | ATE96174T1 (hu) |
AU (2) | AU595673B2 (hu) |
BG (1) | BG51051A3 (hu) |
BR (1) | BR8800271A (hu) |
CZ (1) | CZ279782B6 (hu) |
DD (2) | DD267512A5 (hu) |
DE (2) | DE3884973T2 (hu) |
DK (2) | DK175720B1 (hu) |
EG (1) | EG18797A (hu) |
ES (2) | ES2059498T3 (hu) |
FI (2) | FI90091C (hu) |
GR (1) | GR3007586T3 (hu) |
HU (2) | HU201973B (hu) |
IE (2) | IE61483B1 (hu) |
IL (2) | IL85118A (hu) |
IN (1) | IN167980B (hu) |
MA (1) | MA21160A1 (hu) |
MY (1) | MY103514A (hu) |
NZ (2) | NZ223272A (hu) |
PL (2) | PL156763B1 (hu) |
PT (2) | PT86583B (hu) |
RU (1) | RU1806198C (hu) |
SK (1) | SK279351B6 (hu) |
YU (1) | YU47878B (hu) |
ZA (3) | ZA88447B (hu) |
Families Citing this family (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4806527A (en) * | 1987-03-16 | 1989-02-21 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
US4874749A (en) * | 1987-07-31 | 1989-10-17 | Merck & Co., Inc. | 4"-Deoxy-4-N-methylamino avermectin Bla/Blb |
DE3881147T2 (de) * | 1987-10-23 | 1993-09-02 | Pfizer | Verfahren zur herstellung von aglykonen von avermectin und sie enthaltende kulturen. |
GB8807280D0 (en) * | 1988-03-26 | 1988-04-27 | Pfizer Ltd | Antiparasitic agents |
GB8811036D0 (en) * | 1988-05-10 | 1988-06-15 | Glaxo Group Ltd | Chemical compounds |
GB8813760D0 (en) * | 1988-06-10 | 1988-07-13 | American Cyanamid Co | Chemical process |
GB8815967D0 (en) * | 1988-07-05 | 1988-08-10 | Pfizer Ltd | Antiparasitic agents |
NZ231773A (en) * | 1988-12-23 | 1992-09-25 | Merck & Co Inc | Avermectin derivatives, preparation and parasiticidal pharmaceutical compositions thereof |
NZ231772A (en) * | 1988-12-23 | 1992-11-25 | Merck & Co Inc | Avermectin derivatives, preparation and parasiticidal compositions thereof |
US5015630A (en) * | 1989-01-19 | 1991-05-14 | Merck & Co., Inc. | 5-oxime avermectin derivatives |
US4897383A (en) * | 1989-02-13 | 1990-01-30 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
US5252474A (en) * | 1989-03-31 | 1993-10-12 | Merck & Co., Inc. | Cloning genes from Streptomyces avermitilis for avermectin biosynthesis and the methods for their use |
US5057499A (en) * | 1989-06-02 | 1991-10-15 | Merck & Co. Inc. | Avermectin derivatives |
US5030622A (en) * | 1989-06-02 | 1991-07-09 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
US5023241A (en) * | 1989-07-31 | 1991-06-11 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
US5830875A (en) * | 1989-10-30 | 1998-11-03 | Merck & Co., Inc. | 24-and 25-substituted avermectin and milbemycin derivatives |
JP2888586B2 (ja) * | 1990-03-05 | 1999-05-10 | 社団法人北里研究所 | エバーメクチンの特定成分を選択生産するための微生物およびその選択的製造法 |
US5169839A (en) * | 1990-05-11 | 1992-12-08 | Merck & Co., Inc. | Derivatives of 3'- and 3"-o-desmethyl avermectin compounds, compositions and methods of treating melmintic and parasitic infections |
US5208222A (en) * | 1991-03-28 | 1993-05-04 | Merck & Co., Inc. | 4"-and 4'-alkylthio avermectin derivatives |
US5240915A (en) * | 1991-10-15 | 1993-08-31 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
US6103504A (en) * | 1992-03-25 | 2000-08-15 | Pfizer Inc. | Process for production of avermectins and cultures therefor |
US5292647A (en) * | 1992-11-30 | 1994-03-08 | Eli Lilly And Company | Strain of streptomyces for producing avermectins and processes therewith |
CN1038330C (zh) * | 1993-07-05 | 1998-05-13 | 塞泰克斯公司 | 阿弗麦菌素的生产与分离 |
ES2204914T3 (es) * | 1993-07-30 | 2004-05-01 | Pfizer Inc. | Genes que codifican el complejo alfa cetoacido deshidrogenasa de cadena ramificada de streptomyces avermitilis. |
KR100186946B1 (ko) * | 1993-10-05 | 1999-04-01 | 알렌 제이.스피겔 | 도라멕틴의 구충활성 중간체 및 도라멕틴의 제조방법 |
FI942725A (fi) * | 1993-12-16 | 1995-06-17 | Pfizer | Haaraketjuista alfaketohappodenydrogenaasikompleksia koodaavia geenejä Streptomyces avermitiliksesta |
US5701591A (en) * | 1995-04-07 | 1997-12-23 | Telecommunications Equipment Corporation | Multi-function interactive communications system with circularly/elliptically polarized signal transmission and reception |
KR20040099389A (ko) * | 1998-02-13 | 2004-11-26 | 화이자 프로덕츠 인코포레이티드 | 스트렙토마이세스 하이그로스코피쿠스 유전자 |
DE60031126T2 (de) * | 1999-08-12 | 2007-02-08 | Pfizer Products Inc., Groton | Streptomyces avermitilis gen zum regulieren des verhältnisses der b2:b1 avermectinen |
KR100415395B1 (ko) * | 2000-08-02 | 2004-01-16 | 한국생명공학연구원 | 에버멕틴 bc-5-o-메칠트랜스퍼라제의 유전자가 파괴된 스트렙토마이세스 에버미티리스 변이균주 및 그의 제조 방법 |
EP1476539B1 (en) | 2002-02-12 | 2009-03-25 | Pfizer Products Inc. | Streptomyces avermitilis gene directing the ratio of b2:b1 avermectins |
WO2023203038A1 (en) | 2022-04-19 | 2023-10-26 | Syngenta Crop Protection Ag | Insect, acarina and nematode pest control |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SE434277B (sv) | 1976-04-19 | 1984-07-16 | Merck & Co Inc | Sett att framstella nya antihelmintiskt verkande foreningar genom odling av streptomyces avermitilis |
NZ188459A (en) * | 1977-10-03 | 1982-09-07 | Merck & Co Inc | Derivatives of c-076 compounds and pesticidal compositions |
US4429042A (en) | 1978-09-08 | 1984-01-31 | Merck & Co., Inc. | Strain of Streptomyces for producing antiparasitic compounds |
ES8800986A1 (es) * | 1985-07-27 | 1987-12-01 | Pfizer | Un procedimiento para la produccion de un nuevo derivado de avermectina |
GB8606120D0 (en) * | 1986-03-12 | 1986-04-16 | Glaxo Group Ltd | Process |
-
1987
- 1987-12-10 IN IN1059/DEL/87A patent/IN167980B/en unknown
-
1988
- 1988-01-18 AT AT88300354T patent/ATE96174T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-01-18 ES ES88300354T patent/ES2059498T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-18 IL IL85118A patent/IL85118A/xx not_active IP Right Cessation
- 1988-01-18 EP EP88300354A patent/EP0276103B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-18 BG BG82657A patent/BG51051A3/xx unknown
- 1988-01-18 DE DE88300354T patent/DE3884973T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-19 MA MA21397A patent/MA21160A1/fr unknown
- 1988-01-19 MY MYPI88000037A patent/MY103514A/en unknown
- 1988-01-20 AT AT88300426T patent/ATE87927T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-01-20 ES ES88300426T patent/ES2053719T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-20 DE DE8888300426T patent/DE3879975T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-20 EP EP88300426A patent/EP0276131B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-21 IL IL85165A patent/IL85165A/xx not_active IP Right Cessation
- 1988-01-21 CZ CS88407A patent/CZ279782B6/cs unknown
- 1988-01-21 PT PT86583A patent/PT86583B/pt unknown
- 1988-01-21 PL PL1988270238A patent/PL156763B1/pl unknown
- 1988-01-21 PT PT86584A patent/PT86584B/pt unknown
- 1988-01-21 SK SK407-88A patent/SK279351B6/sk unknown
- 1988-01-21 EG EG3588A patent/EG18797A/xx active
- 1988-01-21 PL PL1988270239A patent/PL156764B1/pl unknown
- 1988-01-22 DK DK198800290A patent/DK175720B1/da not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 YU YU11988A patent/YU47878B/sh unknown
- 1988-01-22 RU SU884355079A patent/RU1806198C/ru active
- 1988-01-22 KR KR1019880000470A patent/KR900004419B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 DK DK028988A patent/DK28988A/da not_active Application Discontinuation
- 1988-01-22 ZA ZA88447A patent/ZA88447B/xx unknown
- 1988-01-22 NZ NZ223272A patent/NZ223272A/xx unknown
- 1988-01-22 HU HU88260D patent/HU201973B/hu unknown
- 1988-01-22 AU AU10696/88A patent/AU595673B2/en not_active Expired
- 1988-01-22 IE IE16088A patent/IE61483B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 NZ NZ223271A patent/NZ223271A/en unknown
- 1988-01-22 CN CN88100649A patent/CN1056883C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-22 ZA ZA88448A patent/ZA88448B/xx unknown
- 1988-01-22 JP JP63012462A patent/JPH0681757B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-22 AR AR88309888A patent/AR241798A1/es active
- 1988-01-22 FI FI880280A patent/FI90091C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 FI FI880281A patent/FI90088C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 DD DD88312394A patent/DD267512A5/de unknown
- 1988-01-22 DD DD88312393A patent/DD290214A5/de unknown
- 1988-01-22 HU HU88261A patent/HU200487B/hu unknown
- 1988-01-22 IE IE16188A patent/IE61066B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 ZA ZA88449A patent/ZA88449B/xx unknown
- 1988-01-23 KR KR1019880000506A patent/KR910002225B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1988-01-23 JP JP63011881A patent/JPH0817693B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-25 BR BRPI8800271-3A patent/BR8800271A/pt not_active IP Right Cessation
-
1991
- 1991-02-15 AU AU71110/91A patent/AU631298B2/en not_active Expired
-
1993
- 1993-04-08 GR GR930400638T patent/GR3007586T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
HU201973B (en) | Process for producing avermeclin beta derivatives | |
US5077278A (en) | Non-natural demethylavermectins compositions and method of use | |
HU203130B (en) | Process for producing avermectine derivatives | |
US5565359A (en) | Cultures for production of B avermectins | |
US5238848A (en) | Cultures for production of avermectins | |
EP0313297B1 (en) | Process for production of avermectin aglycones and cultures therefor | |
US5240850A (en) | Cultures for production of avermectin aglycones | |
US5387509A (en) | Ethylated avermectins | |
US5525506A (en) | Process for production of avermectins and cultures therefor | |
US6103504A (en) | Process for production of avermectins and cultures therefor | |
AP64A (en) | "Process for production of B avermectins and cultures therefor". |