CZ279782B6 - Způsob výroby derivátů avarmectinu B - Google Patents
Způsob výroby derivátů avarmectinu B Download PDFInfo
- Publication number
- CZ279782B6 CZ279782B6 CS88407A CS40788A CZ279782B6 CZ 279782 B6 CZ279782 B6 CZ 279782B6 CS 88407 A CS88407 A CS 88407A CS 40788 A CS40788 A CS 40788A CZ 279782 B6 CZ279782 B6 CZ 279782B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- cooh
- avermectin
- acid
- compound
- group
- Prior art date
Links
- 239000005660 Abamectin Substances 0.000 title claims abstract description 87
- RRZXIRBKKLTSOM-XPNPUAGNSA-N avermectin B1a Chemical compound C1=C[C@H](C)[C@@H]([C@@H](C)CC)O[C@]11O[C@H](C\C=C(C)\[C@@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C3)[C@@H](OC)C2)[C@@H](C)\C=C\C=C/2[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](O)[C@H]3OC\2)O)C[C@H]4C1 RRZXIRBKKLTSOM-XPNPUAGNSA-N 0.000 title claims abstract description 60
- 241001468227 Streptomyces avermitilis Species 0.000 title claims abstract description 54
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 18
- 108010046716 3-Methyl-2-Oxobutanoate Dehydrogenase (Lipoamide) Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 101710116650 FAD-dependent monooxygenase Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 101710128228 O-methyltransferase Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 77
- -1 hydrolyzed starch Chemical class 0.000 claims description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 37
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 31
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 31
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 25
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims description 20
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 19
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 13
- 150000004716 alpha keto acids Chemical class 0.000 claims description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Inorganic materials [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 13
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 claims description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 11
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 11
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 10
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 7
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 claims description 6
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 5
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 5
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 125000003682 3-furyl group Chemical group O1C([H])=C([*])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 2
- 125000001541 3-thienyl group Chemical group S1C([H])=C([*])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 2
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims 2
- 125000000175 2-thienyl group Chemical group S1C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims 1
- 125000004487 4-tetrahydropyranyl group Chemical group [H]C1([H])OC([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 claims 1
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 claims 1
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 1
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 claims 1
- 125000000582 cycloheptyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 claims 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 claims 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 claims 1
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 claims 1
- 229940099607 manganese chloride Drugs 0.000 claims 1
- PVGBHEUCHKGFQP-UHFFFAOYSA-N sodium;n-[5-amino-2-(4-aminophenyl)sulfonylphenyl]sulfonylacetamide Chemical compound [Na+].CC(=O)NS(=O)(=O)C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=C1 PVGBHEUCHKGFQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 claims 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 claims 1
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000003096 antiparasitic agent Substances 0.000 abstract description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 38
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 30
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 23
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 10
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 10
- WLAMNBDJUVNPJU-UHFFFAOYSA-N 2-methylbutyric acid Chemical compound CCC(C)C(O)=O WLAMNBDJUVNPJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 8
- AYJRCSIUFZENHW-UHFFFAOYSA-L barium carbonate Chemical compound [Ba+2].[O-]C([O-])=O AYJRCSIUFZENHW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 8
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 8
- LMXOHSDXUQEUSF-YECHIGJVSA-N sinefungin Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](C[C@H](CC[C@H](N)C(O)=O)N)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 LMXOHSDXUQEUSF-YECHIGJVSA-N 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 7
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 7
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 7
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 7
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 7
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- MNULEGDCPYONBU-UIXCWHRQSA-N (1R,4E,5'S,6S,6'S,7R,8S,10R,11R,12S,14R,15S,16R,18Z,20Z,22R,25S,27R,28S,29R)-22-ethyl-7,11,14,15-tetrahydroxy-6'-[(2R)-2-hydroxypropyl]-5',6,8,10,12,14,16,28,29-nonamethylspiro[2,26-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-4,18,20-triene-27,2'-oxane]-3,9,13-trione Polymers CC[C@@H]1CC[C@@H]2O[C@]3(CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O3)[C@@H](C)[C@H](OC(=O)\C=C\[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)C\C=C/C=C\1)[C@@H]2C MNULEGDCPYONBU-UIXCWHRQSA-N 0.000 description 6
- MNULEGDCPYONBU-CBLVMMTCSA-N (1R,4Z,5'S,6S,6'S,7R,8S,10R,11R,12S,14R,15S,16R,18Z,20Z,22R,25S,27R,28S,29R)-22-ethyl-7,11,14,15-tetrahydroxy-6'-[(2R)-2-hydroxypropyl]-5',6,8,10,12,14,16,28,29-nonamethylspiro[2,26-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-4,18,20-triene-27,2'-oxane]-3,9,13-trione Polymers CC[C@@H]1CC[C@@H]2O[C@]3(CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O3)[C@@H](C)[C@H](OC(=O)\C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)C\C=C/C=C\1)[C@@H]2C MNULEGDCPYONBU-CBLVMMTCSA-N 0.000 description 6
- MNULEGDCPYONBU-WABYXMGOSA-N (1S,4E,5'R,6R,6'R,7S,8R,10S,11S,12R,14S,15R,16S,18E,22S,25R,27S,28R,29S)-22-ethyl-7,11,14,15-tetrahydroxy-6'-(2-hydroxypropyl)-5',6,8,10,12,14,16,28,29-nonamethylspiro[2,26-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-4,18,20-triene-27,2'-oxane]-3,9,13-trione Polymers CC[C@H]1CC[C@H]2O[C@@]3(CC[C@@H](C)[C@@H](CC(C)O)O3)[C@H](C)[C@@H](OC(=O)\C=C\[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@@](C)(O)[C@H](O)[C@@H](C)C\C=C\C=C1)[C@H]2C MNULEGDCPYONBU-WABYXMGOSA-N 0.000 description 6
- MNULEGDCPYONBU-QECWTJOCSA-N (1r,4s,5e,5'r,6'r,7e,10s,11r,12s,14r,15s,16s,18r,19s,20r,21e,25s,26r,27s,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-(2-hydroxypropyl)-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers O([C@@H]1CC[C@@H](/C=C/C=C/C[C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)O[C@H]([C@H]2C)[C@H]1C)CC)[C@]12CC[C@@H](C)[C@@H](CC(C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-QECWTJOCSA-N 0.000 description 6
- MNULEGDCPYONBU-WMBHJXFZSA-N (1r,4s,5e,5'r,6'r,7e,10s,11r,12s,14r,15s,16s,18r,19s,20r,21e,25s,26r,27s,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2s)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trio Polymers O([C@@H]1CC[C@@H](/C=C/C=C/C[C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)O[C@H]([C@H]2C)[C@H]1C)CC)[C@]12CC[C@@H](C)[C@@H](C[C@H](C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-WMBHJXFZSA-N 0.000 description 6
- MNULEGDCPYONBU-BOXGPLBDSA-N (1r,4s,5e,5'r,6'r,7e,10s,11s,12s,14r,15s,16s,18r,19s,20r,21e,25s,26r,27s,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2s)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trio Polymers O([C@@H]1CC[C@@H](/C=C/C=C/C[C@H](C)[C@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)O[C@H]([C@H]2C)[C@H]1C)CC)[C@]12CC[C@@H](C)[C@@H](C[C@H](C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-BOXGPLBDSA-N 0.000 description 6
- MNULEGDCPYONBU-YOKYSHDFSA-N (5'R,10S,11R,12S,14S,15R,16R,18R,19S,20R,26R,29S)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2S)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers C([C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C=CC(=O)OC([C@H]1C)[C@H]2C)C=CC=CC(CC)CCC2OC21CC[C@@H](C)C(C[C@H](C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-YOKYSHDFSA-N 0.000 description 6
- MNULEGDCPYONBU-VVXVDZGXSA-N (5e,5'r,7e,10s,11r,12s,14s,15r,16r,18r,19s,20r,21e,26r,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2s)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers C([C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)OC([C@H]1C)[C@H]2C)\C=C\C=C\C(CC)CCC2OC21CC[C@@H](C)C(C[C@H](C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-VVXVDZGXSA-N 0.000 description 6
- MNULEGDCPYONBU-MQLHLVDXSA-N CC[C@@H]1CC[C@@H]2O[C@]3(CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O3)[C@@H](C)[C@H](OC(=O)\C=C\[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)C\C=C\C=C\1)C2C Polymers CC[C@@H]1CC[C@@H]2O[C@]3(CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O3)[C@@H](C)[C@H](OC(=O)\C=C\[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)C\C=C\C=C\1)C2C MNULEGDCPYONBU-MQLHLVDXSA-N 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 6
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 6
- MNULEGDCPYONBU-AWJDAWNUSA-N oligomycin A Polymers O([C@H]1CC[C@H](/C=C/C=C/C[C@@H](C)[C@H](O)[C@@](C)(O)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)/C=C/C(=O)O[C@@H]([C@@H]2C)[C@@H]1C)CC)[C@@]12CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-AWJDAWNUSA-N 0.000 description 6
- MNULEGDCPYONBU-UHFFFAOYSA-N oligomycin A Natural products CC1C(C2C)OC(=O)C=CC(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)(O)C(O)C(C)CC=CC=CC(CC)CCC2OC21CCC(C)C(CC(C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N CoASH Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N 0.000 description 5
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 5
- RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N coenzime A Natural products OC1C(OP(O)(O)=O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000005516 coenzyme A Substances 0.000 description 5
- 229940093530 coenzyme a Drugs 0.000 description 5
- NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N cyclohexanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCCC1 NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N dephosphocoenzyme A Natural products OC1C(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 4
- 229950008974 sinefungin Drugs 0.000 description 4
- UAXOELSVPTZZQG-UHFFFAOYSA-N tiglic acid Natural products CC(C)=C(C)C(O)=O UAXOELSVPTZZQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 3
- VZFUCHSFHOYXIS-UHFFFAOYSA-N Cycloheptanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCCCC1 VZFUCHSFHOYXIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 3
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 3
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000000507 anthelmentic effect Effects 0.000 description 3
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- JBDSSBMEKXHSJF-UHFFFAOYSA-N cyclopentanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCC1 JBDSSBMEKXHSJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 229910003002 lithium salt Inorganic materials 0.000 description 3
- 159000000002 lithium salts Chemical class 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- GXDHCNNESPLIKD-UHFFFAOYSA-N 2-methylhexane Chemical compound CCCCC(C)C GXDHCNNESPLIKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 2
- 241000244174 Strongyloides Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 2
- ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N acetyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 125000002015 acyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000000211 autoradiogram Methods 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 125000000392 cycloalkenyl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 125000000600 disaccharide group Chemical group 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 2
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 2
- KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N isobutyric acid Chemical compound CC(C)C(O)=O KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 2
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 2
- HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N mechlorethamine Chemical class ClCCN(C)CCCl HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 2
- WCYWZMWISLQXQU-UHFFFAOYSA-N methyl Chemical compound [CH3] WCYWZMWISLQXQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 2
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 2
- 125000006413 ring segment Chemical group 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229960002363 thiamine pyrophosphate Drugs 0.000 description 2
- 235000008170 thiamine pyrophosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000011678 thiamine pyrophosphate Substances 0.000 description 2
- YXVCLPJQTZXJLH-UHFFFAOYSA-N thiamine(1+) diphosphate chloride Chemical compound [Cl-].CC1=C(CCOP(O)(=O)OP(O)(O)=O)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N YXVCLPJQTZXJLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UBQZUBPODLPCFG-PIBDHAAFSA-N (2S)-2-amino-4-[[(2S,3S,4R,5R)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl-ethylsulfonio]butanoate Chemical compound CC[S+](CC[C@@H](C([O-])=O)N)C[C@H]([C@H]([C@H]1O)O)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 UBQZUBPODLPCFG-PIBDHAAFSA-N 0.000 description 1
- OVBFMEVBMNZIBR-RXMQYKEDSA-N (2r)-2-methylpentanoic acid Chemical compound CCC[C@@H](C)C(O)=O OVBFMEVBMNZIBR-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- OVBFMEVBMNZIBR-UHFFFAOYSA-N -2-Methylpentanoic acid Natural products CCCC(C)C(O)=O OVBFMEVBMNZIBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RELMFMZEBKVZJC-UHFFFAOYSA-N 1,2,3-trichlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=CC(Cl)=C1Cl RELMFMZEBKVZJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SWWQQSDRUYSMAR-UHFFFAOYSA-N 1-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-6,7-diol;hydrochloride Chemical group Cl.C1=CC(O)=CC=C1CC1C2=CC(O)=C(O)C=C2CCN1 SWWQQSDRUYSMAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLUXAKJPHJEFKL-UHFFFAOYSA-N 1-ethylcyclobutane-1-carboxylic acid Chemical compound CCC1(C(O)=O)CCC1 XLUXAKJPHJEFKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole-2-carbaldehyde Chemical compound O=CC1=NC=CN1 XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYEGPMGNMOIHDL-UHFFFAOYSA-N 2-methylcyclopropane-1-carboxylic acid Chemical compound CC1CC1C(O)=O AYEGPMGNMOIHDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZBSDPCQVZJAOGX-UHFFFAOYSA-N 2-methylidenecyclohexane-1-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCCC1=C ZBSDPCQVZJAOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 3-Methylbutanoic acid Natural products CC(C)CC([O-])=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- IBMXMCXCSPGCDQ-UHFFFAOYSA-N 3-cyclopentylpropan-1-ol Chemical compound OCCCC1CCCC1 IBMXMCXCSPGCDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZRPLANDPDWYOMZ-UHFFFAOYSA-N 3-cyclopentylpropionic acid Chemical compound OC(=O)CCC1CCCC1 ZRPLANDPDWYOMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQXHCYIDZUPZNK-UHFFFAOYSA-N 3-fluorocyclobutane-1-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CC(F)C1 LQXHCYIDZUPZNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RBIGKSZIQCTIJF-UHFFFAOYSA-N 3-formylthiophene Chemical compound O=CC=1C=CSC=1 RBIGKSZIQCTIJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLXHOVJKNATDMT-UHFFFAOYSA-N 3-methylcyclobutane-1-carboxylic acid Chemical compound CC1CC(C(O)=O)C1 ZLXHOVJKNATDMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CIFSKZDQGRCLBN-UHFFFAOYSA-N 3-methylcyclohexane-1-carboxylic acid Chemical compound CC1CCCC(C(O)=O)C1 CIFSKZDQGRCLBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NNKLICLIBKMDOY-UHFFFAOYSA-N 3-methylidenecyclobutane-1-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CC(=C)C1 NNKLICLIBKMDOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WSSSPWUEQFSQQG-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-1-pentene Chemical compound CC(C)CC=C WSSSPWUEQFSQQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- POVPYUUZOZBLOH-UHFFFAOYSA-N 5-chlorothiophene-3-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CSC(Cl)=C1 POVPYUUZOZBLOH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CWGATOJEFAKFBK-UHFFFAOYSA-N Ac-(E)-8-Tridecen-1-ol Natural products C1C(O)C(C)C(C(C)CC)OC11OC(CC=C(C)C(OC2OC(C)C(OC3OC(C)C(O)C(OC)C3)C(OC)C2)C(C)C=CC=C2C3(C(C(=O)O4)C=C(C)C(O)C3OC2)O)CC4C1 CWGATOJEFAKFBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 241001147657 Ancylostoma Species 0.000 description 1
- 240000007087 Apium graveolens Species 0.000 description 1
- 235000015849 Apium graveolens Dulce Group Nutrition 0.000 description 1
- 235000010591 Appio Nutrition 0.000 description 1
- 241000238421 Arthropoda Species 0.000 description 1
- 241000244186 Ascaris Species 0.000 description 1
- JVGWUGTWQIAGHJ-DFAYUBCLSA-N Avermectin A2a Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](C(C)CC)O[C@]11O[C@H](C\C=C(C)\[C@@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C3)[C@@H](OC)C2)[C@@H](C)\C=C\C=C/2[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](OC)[C@H]3OC\2)O)C[C@H]4C1 JVGWUGTWQIAGHJ-DFAYUBCLSA-N 0.000 description 1
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 108010023063 Bacto-peptone Proteins 0.000 description 1
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 1
- 241001674044 Blattodea Species 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNUALPPJLMYHDK-UHFFFAOYSA-N C[CH]C Chemical compound C[CH]C HNUALPPJLMYHDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000253350 Capillaria Species 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000132536 Cirsium Species 0.000 description 1
- NMEZJSDUZQOPFE-UHFFFAOYSA-N Cyclohex-1-enecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CCCCC1 NMEZJSDUZQOPFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 1
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 1
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 1
- 241000243990 Dirofilaria Species 0.000 description 1
- 241000498256 Enterobius Species 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N Furan Chemical group C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 208000006968 Helminthiasis Diseases 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-Tyrosine Natural products OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 239000004158 L-cystine Substances 0.000 description 1
- 235000019393 L-cystine Nutrition 0.000 description 1
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 1
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 1
- 125000003580 L-valyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 1
- 235000003228 Lactuca sativa Nutrition 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical class [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Natural products CCC(C)C(C)=O UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940123379 Methyltransferase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241000257159 Musca domestica Species 0.000 description 1
- DCFWPBQDXDJTFQ-UHFFFAOYSA-N N#[N+][O-].CS(=O)(=O)OCC Chemical compound N#[N+][O-].CS(=O)(=O)OCC DCFWPBQDXDJTFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CAUBWLYZCDDYEF-UHFFFAOYSA-N N-Nitroso-N-methylurethane Chemical compound CCOC(=O)N(C)N=O CAUBWLYZCDDYEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 235000017879 Nasturtium officinale Nutrition 0.000 description 1
- 240000005407 Nasturtium officinale Species 0.000 description 1
- 241000498271 Necator Species 0.000 description 1
- 241000238814 Orthoptera Species 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 240000009164 Petroselinum crispum Species 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Chemical class CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000055026 Protein O-Methyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108700040119 Protein O-Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- ZJUKTBDSGOFHSH-WFMPWKQPSA-N S-Adenosylhomocysteine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CSCC[C@H](N)C(O)=O)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 ZJUKTBDSGOFHSH-WFMPWKQPSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 244000300264 Spinacia oleracea Species 0.000 description 1
- 235000009337 Spinacia oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 241000255628 Tabanidae Species 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 241000243774 Trichinella Species 0.000 description 1
- 241001489151 Trichuris Species 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQOWUDKEXDCGQS-UHFFFAOYSA-N [CH]1CCCC1 Chemical group [CH]1CCCC1 BQOWUDKEXDCGQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000895 acaricidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000642 acaricide Substances 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004183 alkoxy alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000921 anthelmintic agent Substances 0.000 description 1
- 229940124339 anthelmintic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000002141 anti-parasite Effects 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 229940125687 antiparasitic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- JVGWUGTWQIAGHJ-UHFFFAOYSA-N avermectin A2a Natural products C1C(O)C(C)C(C(C)CC)OC11OC(CC=C(C)C(OC2OC(C)C(OC3OC(C)C(O)C(OC)C3)C(OC)C2)C(C)C=CC=C2C3(C(C(=O)O4)C=C(C)C(OC)C3OC2)O)CC4C1 JVGWUGTWQIAGHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPAKHHSWIYDSBJ-QDXJZMFISA-N avermectin b2 Chemical compound O1C(C)C(O)C(OC)CC1OC1C(OC)CC(O[C@@H]2C(=C/C[C@@H]3C[C@@H](C[C@@]4(O[C@@H]([C@@H](C)C(O)C4)C(C)C)O3)OC(=O)[C@@H]3C=C(C)[C@@H](O)[C@H]4OC\C([C@@]34O)=C/C=C/[C@@H]2C)/C)OC1C ZPAKHHSWIYDSBJ-QDXJZMFISA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L barium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ba+2] RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001863 barium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- MJAMCTLGWXIKOT-UHFFFAOYSA-M benzyl-dimethyl-[2-[2-[2-methyl-4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethoxy]ethyl]azanium;hydroxide Chemical compound [OH-].CC1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 MJAMCTLGWXIKOT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N beta-methyl-butyric acid Natural products CC(C)CC(O)=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000009903 catalytic hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002962 chemical mutagen Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- TXWOGHSRPAYOML-UHFFFAOYSA-N cyclobutanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCC1 TXWOGHSRPAYOML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WPOPOPFNZYPKAV-UHFFFAOYSA-N cyclobutylmethanol Chemical compound OCC1CCC1 WPOPOPFNZYPKAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HJZLEGIHUQOJBA-UHFFFAOYSA-N cyclohexane propionic acid Chemical compound OC(=O)CCC1CCCCC1 HJZLEGIHUQOJBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYRZPBDTPRQYKG-UHFFFAOYSA-N cyclopentene-1-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CCCC1 PYRZPBDTPRQYKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ISQVBYGGNVVVHB-UHFFFAOYSA-N cyclopentylmethanol Chemical compound OCC1CCCC1 ISQVBYGGNVVVHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006114 decarboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000013057 ectoparasiticide Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 244000079386 endoparasite Species 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- FPIQZBQZKBKLEI-UHFFFAOYSA-N ethyl 1-[[2-chloroethyl(nitroso)carbamoyl]amino]cyclohexane-1-carboxylate Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)NC1(C(=O)OCC)CCCCC1 FPIQZBQZKBKLEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKEVUYHSFYVONZ-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-methyl-3-oxo-3-thiophen-3-ylpropanoate Chemical compound CCOC(=O)C(C)C(=O)C=1C=CSC=1 JKEVUYHSFYVONZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 1
- 230000026030 halogenation Effects 0.000 description 1
- 238000005658 halogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000007373 indentation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 150000004715 keto acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002596 lactones Chemical group 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 238000005567 liquid scintillation counting Methods 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003120 macrolide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229960004961 mechlorethamine Drugs 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- HZVOZRGWRWCICA-UHFFFAOYSA-N methanediyl Chemical compound [CH2] HZVOZRGWRWCICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 239000003697 methyltransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000001617 migratory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 229940101270 nicotinamide adenine dinucleotide (nad) Drugs 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- UNCAXIZUVRKBMN-UHFFFAOYSA-N o-(4-methylphenyl) chloromethanethioate Chemical compound CC1=CC=C(OC(Cl)=S)C=C1 UNCAXIZUVRKBMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVPKHOTUOHDTLW-UHFFFAOYSA-N oxane-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCOCC1 AVPKHOTUOHDTLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 208000014837 parasitic helminthiasis infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 235000011197 perejil Nutrition 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JSSXHAMIXJGYCS-UHFFFAOYSA-N piperazin-4-ium-2-carboxylate Chemical compound OC(=O)C1CNCCN1 JSSXHAMIXJGYCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 1
- QAQREVBBADEHPA-IEXPHMLFSA-N propionyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)CC)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 QAQREVBBADEHPA-IEXPHMLFSA-N 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052703 rhodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010948 rhodium Substances 0.000 description 1
- MHOVAHRLVXNVSD-UHFFFAOYSA-N rhodium atom Chemical compound [Rh] MHOVAHRLVXNVSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QBERHIJABFXGRZ-UHFFFAOYSA-M rhodium;triphenylphosphane;chloride Chemical compound [Cl-].[Rh].C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 QBERHIJABFXGRZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003385 sodium Chemical class 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001981 tert-butyldimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([H])(C([H])([H])[H])[*]C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- SCKSQOIXSGPVJS-UHFFFAOYSA-N thiane-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCSCC1 SCKSQOIXSGPVJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BSNQHVPRAPQLSW-UHFFFAOYSA-N thiolane-3-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCSC1 BSNQHVPRAPQLSW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QERYCTSHXKAMIS-UHFFFAOYSA-N thiophene-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CS1 QERYCTSHXKAMIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YNVOMSDITJMNET-UHFFFAOYSA-N thiophene-3-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C=1C=CSC=1 YNVOMSDITJMNET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- DBGVGMSCBYYSLD-UHFFFAOYSA-N tributylstannane Chemical compound CCCC[SnH](CCCC)CCCC DBGVGMSCBYYSLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XREXPQGDOPQPAH-QKUPJAQQSA-K trisodium;[(z)-18-[1,3-bis[[(z)-12-sulfonatooxyoctadec-9-enoyl]oxy]propan-2-yloxy]-18-oxooctadec-9-en-7-yl] sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].CCCCCCC(OS([O-])(=O)=O)C\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CC(CCCCCC)OS([O-])(=O)=O)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CC(CCCCCC)OS([O-])(=O)=O XREXPQGDOPQPAH-QKUPJAQQSA-K 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 1
- MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N vanillin Chemical compound COC1=CC(C=O)=CC=C1O MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N vanillin Natural products COC1=CC(O)=CC(C=O)=C1 FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012141 vanillin Nutrition 0.000 description 1
- 235000015192 vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000007222 ypd medium Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/22—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains four or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/01—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing oxygen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
- A01N43/90—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having two or more relevant hetero rings, condensed among themselves or with a common carbocyclic ring system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/10—Anthelmintics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
- C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
- C12P19/623—Avermectin; Milbemycin; Ivermectin; C-076
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
Způsob výroby avermectinu B tak, že se pěstuje kmen Streptomyces avermitilis, jemuž chybí dehydrogenáza 2-oxokyselin s rozvětvěným řetězcem a O-methyltransféeráza avermectinu B. Získané přírodní i nepřírodní avermectiny B je možno užít jako parasiticidních prostředků. Streptomyces avermitilis ATCC 53 692.ŕ
Description
Streptomyces avermitilis ATCC 53692 a způsob přípravy avermectinu B
Vynález se týká způsobu výroby derivátů avermectinu B, které je možno získat pěstováním kmenů Streptomyces avermitilis, které nemají avermectin B-O-metyltransferázovou účinnost a účinnost dehydrogenázy 2-oxo kyselin v postranním řetězci. Získat je možno přírodní i polosyntetické deriváty avermectinu B.
V US patentových spisech č. 4 310 519 a 4 429 042 se popisují avermectiny jako komplex příbuzných látek, které mají vysokou antiparazitární účinnost, a také jejich výroba aerobních fermentací kmenů Streptomyces avermitilis, a to zejména S. avermitilis ATCC č. 31267, 31271 a 31272. Zvláště dva uvedené poslední kmeny jsou k dispozici ve zmrazené nebo lyofilizované formě a byly získány ozářením kmene S. avermitilis ATCC 31267 ultrafialovým světlem.
V evropském patentovém spisu č. 214 731 , uveřejněném 18.března 1987, který odpovídá US patentové přihlášce č. 886 867, podané 16. července 1986, se uvádí celá řada sloučenin, které jsou příbuzné přírodním nebo známým avermectinovým derivátům, avšak nejsou přírodního původu a mají nový substituent v poloze 25. Ve spisu se rovněž popisuje způsob výroby těchto látek fermentací mikroorganismů, produkujícího avermectin za přítomnosti určitých karboxylových kyselin nabo derivátů těchto kyselin, nebo jejich prekurzorů. Mikroorganismy S. avermitilis, užité k výrobě uvedených nových avermectinových derivátů, substitovaných na uhlíkovém atomu v poloze 25, jsou S. avermitilis ATCC 31267, 31271, 31272 a NCIB 12121. Poslední z těchto organismů, popsaný v evropském patentovém spisu č. 214 731, je odvozen od S. avermitilis ATCC 31271. Při použití tohoto mikroorganismu je možno získat zlepšené výtěžky nových avermectinových derivátů, substitovaných v poloze 25 v případě, že se tyto mikroorganismy pěstují na určitém prostředí. Každý z kmenů ATCC 31267, 31272, 31271 a NCIB 12121 může také produkovat kromě nových derivátů, substitovaných v poloze 25, ještě různá množství známých přírodních avermectinů, v nichž je substituentem v poloze 25 izopropylová nebo sek-butylová skupina (1-metylpropyl).
Uhlíková kostra avermectinu, která bude dále znázorněna, je odvozena od acetátů a propionátů a substinent v poloze 25 přírodních avermectinů je odvozen od L-izoleucinu (R=(S)-sek-butyl) nebo od L-valinu (R=izopropyl), jak bylo popsáno v publikaci Fisher a Mrozik, Macrolide Antibiotics, Academie Press (1984) kap. 14.
Pod pojmem známé nebo přírodní avermectiny se rozumí ty látky, které jsou produkovány S. avermitilis ATCC 31267, ATCC 31271 a ATCC 31272, přičemž substituentem v poloze 25 je buď izopropyl nebo (S)-sek-butyl(1-metylpropyl). Avermectiny, které nesou v poloze 25 jiný substituent než izopropyl nebo sek.butyl((S)-forma), se nazývají novými avermectiny, nebo avermectiny jiného než přírodního původu.
Kmeny S. avermitilis, které jsou uvedeny ve svrchu zmíněných US patentových spisech, produkují skupinu látek, které se souhrn
-1CZ 279782 B6 ně označují jako C-076. Tato skupina látek sestává z osmi zřetelně odlišných, avšak blízce příbuzných sloučenin, které se obvykle označují jako C-076, Ala, Alb, A2a, A2b, Bia, Blb, B2a a B2b. Skupina a uvedených sloučenin zahrnuje přírodní avermectiny, v nichž je substituentem v poloze 25 (S)-sek-butyl, skupina b uvedených sloučenin zahrnuje ty látky, v nichž je substituentem v poloze 25 izopropylový zbytek. Označení A a B se týká avermectinu, v nichž substituentem v poloze 5 je v prvním případě metoxyskupina a ve druhém hydroxylová skupina. Číslo 1 znamená avermectiny, v nichž se v poloze 22-23 nachází dvojná vazba a číslo 2 se týká avermectinů, které obsahují v poloze 22 atom vodíku a v poloze 23 hydroxylovou skupinu.
V průběhu této přihlášky nebude užito žádných identifikujících označení, pokud jde o substituent v poloze 25 nových avermectinů. Označení AI, A2, B1 a B2 bylo zachováno pro nové avermectiny, jejichž strukturní vlastnosti odpovídají svrchu uvedeným strukturním vlastnostem dosud známých avermectinových derivátů.
Tvorba mutantů prostých účinnosti dehydrogenázy
2-oxo kyselin postranního řetězce, již byla uvedena pro Bacillus subtilis v publikaci Willecke a Pardee, J. Biol. Chem. 246, 5264 - 72 (1971) a pro Pseudomonas putida v publikaci Martin a další, J. Bacteriology, 115, 198-204 (1973), tvorba podobných mutantů nebyla ještě nikdy popsána v případě čeledi Streptomyces.
S. avermitilis Agly-1, mutant, který produkuje v podstatě pouze aglykony avermictinu Ala a A2a, byl popsán v publikaci Schulman a další J. Antibiot, 38(11), 1494-1498 (1985). V publikaci se popisuje také fermentace S. avermitilis Agly-1 za přítomnosti sinefunginu, čímž je možno dokázat zvýšené produkce složek aglykonu avermectinů B. Stejně tak při pěstování S. avermitilis 0,8, vysoce produkčního kmene za přítomnosti sinefunginu jako inhibitoru O-metyltransferáz dochází k produkci avermectinových derivátů, které jsou prosté 0-metylové skupiny na aglykonu na uhlíkovém atomu v poloze 5 a v oleandrosové disacharidové skupině .
US patentový spis č. 4 378 353 popisuje sloučeniny, příbuzné skupině C-076, a jejich získávání pěstováním MA-5218, což je mutant kmene S. avermitilis ATCC 31272, získaný ozářením tohoto kmene ultrafialovým světlem. Mutant je identifikován jako ATCC 31780. Sloučeniny, příbuzné skupině C-076, produkované fermentací tohoto mutantu, nemají C-076 furanový kruh. Mimoto v některých těchto látkách došlo k odštěpení jedné nebo obou oleandrosových sacharidových skupin, kdežto v jiných látkách této skupiny došlo k oxidaci skupiny v poloze 5 na ketoskupinu.
Tři skupiny O-metyltransferázových mutantů S. avermitilis, které jsou schopné produkovat avermectinové deriváty, v nichž chybí 0-metylové skupiny, byly popsány v publikaci Ruby a další, 6th Internatiónal Symposium on the Biology of Actinomycetes, Debrecen, Maďarsko, 26.-30. srpna 1985, a v publikaci Schulman a další, Antimicrobial Agents and Chemotherapy 31, 744-7, (1987). První z těchto skupin produkuje převážně avermectiny B vzhledem k neschopnosti metylace hydroxylové skupiny v poloze 5 makrocyklického laktonového kruhu. Druhá skupina těchto mutantů produkuje 3'-O, 3-0-bis-demetylavermectiny (avermectiny, které
-2CZ 279782 B6 nemají O-metylový zbytek jako substituent v poloze 3 na obou oleandrosových monosacharidových zbytcích), tyto látky se nazývají demetylavermectiny. Třetí skupina mutantů není schopna metyláce v žádné poloze.
V publikaci Schulman a další, Fed. Proč. 44, 931 (1985) se popisuje zvýšená produkce avermectinů B fermentací S. avermitilis za přítomnosti různých látek, například sinefunginu, S-adenosylethioninu a S-adenosylhomocysteinu, které inhibují metylaci hydroxylové skupiny v poloze 5 aglykonové skupiny působením enzymu avermectin B-O-metyltransferázy. Mutanty Streptomyces avermitilis, které nemají O-metyltransferázovou účinnost a produkují zvýšené množství složek avermectinů B, již byly rovněž popsány například v publikaci Schulman a další, Antimicrobial Agents and Chemitherapy 29, 620-624 (1986).
Mutagenezí S. avermitilis je možno získat také mutanty, které již nemají účinnost dehydrogenázy 2-oxo kyselin v postranním řetězci. Tyto mutanty již nemají schopnost produkovat větší množství přírodních avermectinů v nepřítomnosti přidaných sloučenin vzorce RCOOH, v nichž R znamená izolpropyl nebo (S)-sek.butyl, nebo sloučenin, které je možno převést na sloučeniny vzorce RCOOH v průběhu fermentace. Je však překvapující a neočekávané, že při pěstování těchto mutantů došlo k produkci avermectinů, přírodních i nepřirodních v případě, že tyto mutanty byly pěstovány za přidání sloučeniny vzorce R-COOH, v němž R je izopropyl nebo (S)-sek.butyl, nebo prekurzoru sloučeniny RCOOH. Je dále překvapující, že uvedené mutanty, jimž chybí účinnost dehydrogenázy 2-oxo kyselin postranního řetězce a které jsou neschopné rozkládat L-izoleucin, L-leucin nebo L-valin, jsou schopné asimilovat celou řadu různých sloučenin do biosyntetických pochodů, které probíhají při tvorbě nepřirodních avermectinů, přičemž dochází k tvorbě těchto látek, které jsou prosté přítomnosti přírodních avermectinů.
Mutagenezí takto získaných jednoduše blokovaných mutantů vznikají mutanty, které jsou prosté účinnosti dehydrogenázy
2-oxo kyselin v postranním řetězci a účinnosti O-metyltransferázy avermectinů B. Takto dvojnásobně blokované mutanty jsou neočekávaně schopné produkovat v podstatě pouze přírodní a nepřírodní avermectiny B v případě, že jsou pěstovány v prostředí, k němuž byla přidána sloučenina obecného vzorce R-COOH, v němž R má svrchu uvedený význam.
Jak již bylo uvedeno, jsou přírodní avermectiny produkovány jako komplexní směs osmi od sebe odlišných, avšak blízce příbuzných sloučenin obecného vzorce I, v němž R znamená izopropyl nebo (S)-sek.butyl. Jednotlivé složky tohoto komplexu byly izolovány v podstatě čisté formě, jak bylo uvedeno v US patentovém spisu č. 4 429 042, přičemž způsob izolace jednotlivých složek je přinejmenším pracný. Avermectiny B mají obvykle vyšší anthelmintickou účinnost, než odpovídající avermectiny A. Při produkci nepřírodních avermectinů (složky A a B) způsobem, popsaným v evropském patentovém spisu č. 214 731, může rovněž docházet ke vzniku přírodních avermectinů v různém množství vzhledem k přítomnosti dehydrogenázy 2-oxo kyseliny v postranním řetězci a aminokyselin L-valinu a L-izoleucinu v buňkách mikroorganismů S. avermitilis a v prostředí, v němž jsou tyto mikroorganismy pěstovány.
-3CZ 279782 B6
Schopnost produkovat pouze účinnější složky B přírodního nebo nepřírodního původu, minimalizace komplexity produktu a počtu složek a zvýšení čistoty zvoleného derivátu avermectinu a tím i zjednodušení izolace jednotlivých složek celého komplexu by tedy bylo velmi žádoucí.
Kmeny S. avermitilis, které nemají účinnost dehydrogenázy
2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem, je možno získat mutací kmenů S. avermitilis, produkujících avermectin, a to zejména mutací kmenů S. avermitilis STCC 31267, ATCC 31271, ATCC 31272 nebo NCIB 12121. Získané mutanty nejsou schopné syntetizovat přírodní avermectiny s výjimkou případu, že se do živného prostředí, v nichž jsou tyto mutanty pěstovány, přidá alifatická kyselina nebo prekurzor alifatické kyseliny, nesoucí izopropylovou nebo sek.butylovou skupinu (S-formu). Tyto mutanty jsou schopné produkovat přírodní a nepřírodní avermectiny v případě, že jsou fermentovány ve vodném prostředí za aerobních podmínek, přičemž živné prostředí obsahuje příslušnou kyselinu nebo sloučeninu, kterou je možno na příslušnou kyselinu převést v průběhu fermentace.
Ty mutanty , které nemají účinnost dehydrogenázy 2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem, se izolují ze získaných kolonií při použití 14CO2· Při tomto postupu je nepřítomnost 14CO2 v buňkách, pěstovaných na substrátu s obsahem [14C-l]-2-izokapronové kyseliny nebo [14C-l]-2-oxo-3-metylvalerové kyseliny nebo [14C-l]-2-oxo-3-metylmáselné kyseliny důkazem nepřítomnosti účinnosti dehydrogenázy 2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem.
Je překvapující a neočekávané, že popsané mutanty, které nemají účinnost dehydrogenázy 2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem, si uchovávají schopnost produkovat avermectiny, zejména nepřírodního původu. Neschopnost těchto mutantů k produkci derivátů přírodního koenzymu A pro acylovou skupinu alifatických kyselin při pěstování na běžném prostředí by mohla být letální mutací v případě, že by integrita membrány závisela na derivátech
2-oxokyselin, nebo kdyby nahromadění 2-oxo kyselin bylo cytotoxické. Mimoto nebylo možno očekávat, že by uvedené mutanty mohly syntetizovat acetyl CoA, nebo propionyl CoA při degradaci L-izoleucinu a L-valinu, protože vznik těchto sloučenin obvykle vyžaduje účinnost enzymu, kterou mutanty nemají. Nutnost přítomnosti acyl CoA-derivátů pro biosyntézu avermectinu vedla k očekávání, že mutanty patrně nebudou schopny produkce nepřírodních avermectinů, tento předpoklad však proti všemu očekávání nebyl potvrzen.
Nepřítomnost účinnosti dehydrogenázy 2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem ve svrchu popsaných mutantech má za následek zábranu syntézy CoA s navázaným rozvětveným acylovým zbytkem alifatických kyselin z degradace L-izoleucinu, L-leucinu a L-valinu, takže do fermentačního prostředí se přidává kyselina obecného vzorce R-COOH (v němž R znamená (S)-sek.butyl nebo izopropyl), nebo prekurzor této kyseliny.
Další mutací mutantů, jimž chybí dehydrogenáza 2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem, je možno získat mutanty, jimž mimo to
-4CZ 279782 B6 chybí O-methyltransferáza avermectinu B. Mutanty, jimž chybí tato O-metyltransferázová účinnost avermectinu B, nejsou schopné metylace v poloze C-5 aglykonové skupiny avermectinu. Mutanty, které uvedenou účinnost nemají, produkují v podstatě pouze avermectiny B, protože nejsou schopné produkce avermectinu A.
Je zřejmé, že je možno k tomuto účelu užít jakéhokoliv mikroorganismu, který je možno získat transformací, transdukcí, genetickou rekombinací, nebo některými jinými genetickými postupy při použití nukleových kyselin nebo ekvivalentního materiálu z popsaných mikroorganismů a tak přenesením vlastností těchto mikroorganismů na další mikroorganismy.
Pod pojmem avermectin nebo avermectiny, tak, jak se užívají v průběhu přihlášky, se rozumí sloučeniny dále uvedeného vzorce I, v němž substituentem R v poloze 25 může být jakákoliv skupina, která je v této poloze asimilovatelná určitým kmenem S. avermitilis, používaným v průběhu způsobu podle vynálezu.
Popsané mutanty jsou velmi cenné pro produkci nepřírodních avermectinu B způsobem, který bude dále popsán a ilustrován jednotlivými příklady. Postup je zvláště cenný pro výrobu výhodných avermectinových derivátů, tj. sloučenin, v nichž substituentem v poloze 25 je cykloalkyl nebo cykloalkenyl vždy s 4 až 6 atomy uhlíku, popřípadě substituovaný alkylovým zbytkem o 1 až 4 atomech uhlíku, 1-metylthioetyl, nebo heterocyklický kruh s 5 nebo 6 atomy v kruhu a s obsahem kyslíku nebo síry, zvláště
3-thienyl nebo 3-furyl.
Mutace určitého kmene čeledi Streptomyces avermitilis, produkujícího avermectin, se provádí známým způsobem a je možno při ní použít celé řady mutačních činidel, jakým jsou například ultrafialové světlo, X-paprsky, přidání N-metyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidinu, etylmetansulfonátu, oxid dusitý a dusíkatý yperit, například N-metyl-bis-(2-chloretyl)aminu a podobně. Tvorbu mutací je možno uskutečnit jak na sporách, tak na vegetativních kulturách kmenů S. avermitilis, které jsou schopné produkovat přírodní avermectiny, je například možno použít kmene S. avermitilis ATCC 31272.
Na základě postupů, které jsou v oboru velmi dobře známy, je možno kolonie, získané mutagenezí podrobit selekci na nepřítomnost dehydrogenázy 2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem při použití biochemických postupů, které dovolují vyšetření velkého počtu bakteriálních kolonií, které byly podrobeny náhodné mutagenezi, podle produkce 14CO2 ze zvolených [14C-1] 2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem, jak bylo popsáno v publikaci Tábor a další, J. Bact. 128, 485-486, 1976.
Tento postup spočívá v tom, že se pěstují kolonie získaných mutantů ve vyhloubeních mikrotitarční plotny na vhodném živném prostředí, prostupnost buněk se zvýší působením toluenu a pak se přidá zvolená [14C-1]-2-oxo kyselina, například kyselina
2-oxoizokapronová do každého vyhloubení a prostředí se vyšetřuje nad jednotlivými vyhloubeními na přítomnost značeného oxidu uhličitého. Je možno také užít kyselinu [ 3_4C-l]-2-oxo-3-metylvale
-5CZ 279782 B6 rovou nebo kyselinu [14C-1]-2-oxo-3-metylmáselnou místo svrchu uvedené kyseliny [14C-l]-2-oxo-izokapronové. Produkce značeného oxidu uhličitého se snadno zjišťuje tak, že se jednotlivá vyhloubení překryjí vlhkým filtračním papírem, nasyceným hydroxidem barnatým, aby bylo možno zachytit jakýkoliv značený oxid uhličitý a prokázat jej ve formě značeného uhličitanu barnatého autoradiografií. Mutanty, jimž chybí dehydrogenáza 2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem, poskytují autoradiogramy, které se blíží těm, které byly získány od nenaočkovaných kontrolních kolonií, to znamená, že mutanty neprodukují žádný značený uhličitan barnatý.
Takto získané mutanty se pak podrobí další mutagenezi při použití jakéhokoliv svrchu uvedeného činidla, které může způsobit vznik mutace. Takto získané kolonie se zkouší na nepřítomnost účinnosti O-metyltransferázy avermectinu B chromatografií na tenké vrstvě, nebo vysokotlakou kapalinovou chromatografií po předchozí fermentací, která se provádí za přítomnosti přidaného prekurzoru, například kyseliny 2-methylmáselné. Avermectiny A jsou v podstatě nepřítomné v prostředích, v nichž byly pěstovány uvedené mutanty.
Mimo produkci požadovaných allel daného kmene mikroorganismu mutagenezi umožňuje fúze protoplastů včlenění požadovaných allel jednoho kmene do chromozomu dalšího kmene. Například kmen S. avermitilis, jemuž chybí dehydrogenáza 2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem a O-metyltransferáza avermectinu B, může fúzí protoplastů s kmenem S. avermitilis, který obsahuje svrchu uvedenou účinnost, produkovat kmen S. avermitilis, jemuž chybí pouzě O-metyltransferáza avermectinu B. Jak je v oboru známo, je možno získat fúzí protpolastů různé kombinace žádoucích allel z divergentních linií a spojit je v jediném kmeni.
Morfologické vlastnosti a vlastnosti při pěstování v kultuře jsou pro mutanty, získané v průběhu způsobu podle vynálezu, podstatně shodné s vlastnostmi, které byly popsány v US patentovém spisu č. 4 429 042. Rozlišující vlastností mutantů, získaným svrchu uvedeným způsobem, je skutečnost, že tyto mutanty neobsahují dehydrogenázy 2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem nebo O-metyltransferázu avermectinu B. Tyto vlastnosti je možno prokázat svrchu uvedeným způsobem. Nedostatek těchto vlastností má za následek neschopnost mutantu produkovat přírodní avermectiny B při pěstování na definovaném prostředí, které je v podstatě prosté alifatických kyselin obecného vzorce RCOOH, v němž R znamená izopropyl nebo (S)-sek.butyl, nebo sloučenin, které je možno v průběhu fermentace na sloučeninu obecného vzorce RCOOH převést. Taxonomické výzkumy, které byly prováděny ve sbírce Američan Type Culture Collection, potvrdily, že vlastnosti mutantu 1-3, izolovaného při použití značeného oxidu křemičitého, jsou velmi blízké vlastnostem původního kmene ATCC 31272, popsaného v US patentovém spisu č. 4 429 042, s některými výjimkami. Mutant 1-3 (ATCC 53567) tvoří podstatně menší počet řetězců spor než mateřský kmen ATCC 31272. V našich pokusech nebylo možno použitím rafinózy zlepšit růst mutantu 1-3. Na rozdíl od pokusu, který je uveden pro kmen ATCC 31272 v US patentovém spisu č. 4 429 042, nebylo možno pozorovat růst mutantu nebo kmene ATCC 31272 při použití sacharózy jako jediného zdroje uhlíku. Mutant 1-3 nemá dehydrogenázu 2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem. Dvojnásobně deficitní
-6CZ 279782 B6 mutant, kmen S. avermitilis 7881, který nemá ani dehydrogenázu
2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem, ani O-metyltransferázu avermectinu B, produkovaný další mutagenezí při použití kmene 1-3 (ATCC 53567), má k původnímu mateřskému kmeni ATCC 31272 podobné taxonomické vztahy, jako mutant 1-3.
Kmeny Streptomyces avermitilis 1-3 a 7881 byly uloženy v mezinárodní sbírce kultur Americal Type Culture Collection, Rockville, Maryland, odkud je možno oba uvedené kmeny volně získat, jakmile bude udělen patent na původní přihlášku. Tyto kmeny byly označeny Streptomyces Avermitilec ATCC 53567 a ATCC 53692. Uložené kultury jsou v průběhu řízení mateřské přihlášky dostupné pouze podle ustanovení Commissioner of the United States Patent and Trademark Office pod označením 37 CFR 1.14 a 35 USC 122 v souladu se zákonem. Všechna omezení dostupnosti uvedených mikroorganismů, uložených v uvedené sbírce, však budou neodvolatelně zrušena, jakmile bude na původní přihlášku udělen patent.
Každý z kmenů S. avermitilis ATCC 31267, ATCC 31271, ATCC 31272 a BCIB 12121 je schopen produkce přírodních avermectinů, které je možno označit obecným vzorcem I
kde přerušovaná čára v poloze 22-23 znamená případnou dvojnou vazbu, η
R znamena hydroxylovou skupinu pouze v případě, že není přítomna dvojná vazba,
R znamená 4 ' -(α-L-oleandrosyl)-α-L-oleandrosylskupinu vzorce
-7CZ 279782 B6
o
R znamena atom vodíku mebo metyl
R znamená izopropyl nebo (S)-sek-butyl.
V US patentovém spisu č. 4 285 963 se popisuje avermectin obecného vzorce I, který je v poloze 25 substituovaný metylovou a etylovou skupinou, R1 znamená hydroxylovou skupinu a R3 znamená metylový zbytek.
V avermectinech jiného než přírodního původu, které je možno získat způsobem podle vynálezu, znamená R odlišný substituent od izopropylové nebo (S)-sek.butylové skupiny.
Sloučeniny, které jsou nezbytné při biosyntéze sloučenin obecného vzorce I, se nacházejí v buňce S. avermitilis a v živném prostředí. Tyto látky vznikají rozkladem L-valinu a L-izoleucinu, nebo z jejich odpovídajících 2-oxo kyselin dekarboxylací těchto 2-oxo kyselin příslušnou dehydrogenázou za současné vazby získaného produktu na koenzym A. Přítomnost těchto látek zajišťuje současnou produkci sloučenin obecného vzorce I, v nichž substituentem je izopropylová skupina a (S)-sek.butylová skupina. Samozřejmě vznikají problémy při oddělování derivátů s obsahem izopropylové skupiny od derivátů, které obsahují (S)-sek.butylovou skupinu.
V případě fermentace v živném prostředí, které obsahuje příslušné výchozí látky, jsou mutanty, získané svrchu uvedeným způsobem, schopné produkovat sloučeninu obecného vzorce I nebo častěji směs dvou sloučenin obecného vzorce I, v nichž substituent R odpovídá použité výchozí látce. Je možno získat dva produkty, které se obvykle nazývají R-avermectin B1 a B2, podle označení, které bylo použito v US patentovém spisu č. 4 429 042. Substituent R se nachází v poloze 25 získaného výsledného produktu. Například v případě, že R znamená cyklopentylový zbytek, je možno získat následující dva avermectinové deriváty:
triviální název | R1 | R3 |
cyklopentylavermectin B1 | dvojná vazba | H |
cyklopentylavermectin B2 | hydroxyskupina | H |
V avermectinových derivátech nepřírodního původu má substituent R v poloze 25 obecného vzorce I odlišný význam od izopropylové nebo (S)-sek.butylové skupiny.
-8CZ 279782 B6
Sloučeniny obecného vzorce I, v nichž je přítomna dvojná vazba a které neobsahují hydroxylovou skupinu, je možno získat také z odpovídajících sloučenin obecného vzorce I, v němž R1 znamená hydroxylovou skupinu a sloučenina neobsahuje dvojnou vazbu, dehydratací. Reakce se provádí tak, že se nejprve selektivně chrání hydroxylové skupiny, které se nacházejí v polohách 5 a 4, například navázáním terc.butyldimetylsilyloxyacetylové skupiny, načež se provádí reakce se substituovaným thiokarbonylhalogenidem, například se (4-metylfenoxy)thiokarbonylchloridem s následným zahříváním ve vysokovroucím organickém rozpouštědle, například v trichlorbenzenu, k dosažení dehydratace. V získaném produktu se pak odštěpí ochranné skupiny, čímž se získá nenasycená výsledná látka. Tento postup spolu s příslušnými reakčními činidly a reakčními podmínkami byl popsán v US patentovém spisu Č. 4 328 335.
η
Sloučeniny obecného vzorce I, v němž R znamená atom vodíku a dvojná vazba není přítomná, je možno získat z odpovídajících sloučenin , které obsahují dvojnou vazbu a neobsahují substituent R1 selektivní katalytickou hydrogenací při použití příslušného katalyzátoru. Redukci je možno uskutečnit například při použití tris-(trifenylfosfin)rhodiumchloridu s obsahem jednovazného rhodia, jak bylo popsáno v uveřejněné evropské patentové přihlášce č. 0001689 a v odpovídajícím US patentovém spisu č. 4 199 569, vydaném 22. dubna 1980.
Sloučeniny obecného vzorce I, v němž R2 znamená atom vodíku, je možno získat z odpovídajících sloučenin, v nichž R2 znamená 4'-(a-L-oleandrosyl)-a-L-oleandrosyloxyskupinu tak, že se odstraní 4'-(α-L-oleandrosyl)-α-L-oleandrosová skupina mírnou hydrolýzou působením kyseliny ve směsi vody a organického rozpouštědla, čímž se získá aglykon s hydroxyskupinou v poloze 13. Tento aglykon se pak halogenuje, například reakcí s benzensulfonylhalogenidem, čímž se získá 13-deoxy-13-halogenovaný derivát, který se pak podrobí selektivní redukci, například při použití hydridu tributylcínu. Aby bylo možno zabránit nežádoucím vedlejším reakcím, je žádoucí chránit jakoukoliv další hydroxylovou skupinu, například navázáním ochranné terc.butyldimetylsilylové skupiny. Tuto skupinu je pak možno snadno odstranit po provedené halogenaci nebo redukci působením metanolu, který obsahuje malé množství kyseliny. Všechny tyto postupy jsou spolu s příslušnými reakčními činidly a reakčními podmínkami při jejich provádění popsány v uveřejněné evropské patentové přihlášce č. 0002615.
Sloučeniny, které je možno využit při fermentaci S. avermitilis pro biosyntézu avermectinů, jak přírodního tak nepřirodního původu, je možno vyjádřit obecným vzorcem II-A
R - COOH (II-A) včetně sloučenin, které je možno převést na sloučeniny II-A v průběhu fermentačního postupu. Tyto látky jsou také nazývány primery. V obecném vzorci II-A znamená R skupinu s řetězcem, vysvětleným v α-poloze, přičemž atom uhlíku, k němuž je vázána skupina -COOH, je rovněž vázán na alespoň dva další atomy nebo skupinu, odlišné od atomu vodíku. Je zřejmé, že toto vymezení
-9CZ 279782 B6 zahrnuje nasycené i nenasycené acyklické a cyklické skupiny, včetně skupin, které popřípadě obsahují jako heteroatom atom kyslíku nebo síry jako člen acyklického řetězce nebo kruhu.
Substituent R, který se nachází v poloze 25, může tedy být alkylový zbytek, alkenylový zbytek, alkinylový, alkoxyalkylový nebo alkylthioalkylový zbytek vždy o 3 až 8 atomech uhlíku, rozvětvený v poloze a, cykloalkylalkylový zbytek o 5 až 8 atomech uhlíku, v němž alkylová skupina obsahuje 2 až 5 atomů uhlíku a je rozvětvena v poloze a, dále cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku nebo cykloalkenyl o 5 až 8 atomech uhlíku, vždy popřípadě substituovaný metylénovým zbytkem nebo jednou nebo větším počtem alkylových skupin o 1 až 4 atomech uhlíku, nebo atomy halogenu, a to fluoru, chloru, jodu nebo bromu, dále heterocyklický zbytek o 3 až 6 atomech v kruhu s obsahem kyslíku nebo síry, a to nasycený, nebo zcela nebo částečně nenasycený a popřípadě substituovaný jednou nebo větším počtem alkylových skupin nebo atomů halogenu.
Sloučeniny, které je možno převést na sloučeniny obecného vzorce RCOOH, tj. prekurzory, které je možno v průběhu fermentačního postupu na tyto sloučeniny převádět, je možno vyjádřit obecným vzorcem II-B
R - (CH2)n - Z (II-B) kde R má svrchu uvedený význam, n znamená 0, 2, 4 nebo 6 a
Z znamená skupiny -CH2OH, -CHO, -CH2NH2, -COOR4 nebo -CONHR5, kde
R4 znamená atom vodíku nebo alkylový zbytek o 1 až 6 atomech uhlíku a
R5 znamená atom vodíku, alkylový zbytek o 1 až 4 atomech uhlíku, nebo zbytek aminokyseliny, zvláště asparagové, glutamové nebo methioninu, například -CH(COOH)CH2COOH, -CH(COOH)(CH2)2COOH a -CH(COOH)(CH2)2SCH3.
Do vynálezu spadají rovněž izomerní formy sloučenin obecného vzorce II-A a sloučeniny, které je na tyto sloučeniny možno převést v průběhu fermentačního postupu, a tedy i způsob izomerních avermectinů v poloze 25, které je možno získat při použití svrchu uvedených sloučenin způsobem podle vynálezu.
Způsob podle vynálezu se provádí tak, že se pěstuje za aerobních podmínek kmen S. avermitilis, který neobsahuje dehydrogenázu 2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem ani O-metyltransferázu avermectinů B, ve vodném živném prostředí, které obsahuje využitelné zdroje dusíku, uhlíku, anorganické soli a sloučeninu obecného vzorce RCOOH, nebo sloučeninu, kterou je možno na uvedenou sloučeninu převést, tj. prekurzor, který se na uvedenou látku převádí v průběhu fermentace. Uvedená kyselina nebo sloučenina, kterou je na tuto kyselinu možno převést, se do fermentačního prostředí přidává buď při naočkování živného prostředí nebo v různých intervalech v průběhu fermentace. Výroba avermectinových derivátů se sleduje tak, že se odebírají vzorky fermentační
-10CZ 279782 B6 ho prostředí, tyto vzorky se extrahují organickým rozpouštědlem a produkce analyzuje chromatograficky, například při použití vysokotlaké kapalinové chromatografie. Inkubace trvá tak dlouho, dokud se nedosáhne maximálního výtěžku výsledného produktu, za obvyklých podmínek 4 až 15 dnů.
S výhodou se přidává svrchu uvedená sloučenina, a to karboxylová kyselina nebo sloučenina, kterou je možno na tuto karboxylovou kyselinu převést, v množství 0,05 až 3,0 g na litr. Sloučeninu je možno přidávat kontinuálně, přerušovaně nebo je možno přidat celé množství najednou. Kyselinu obecného vzorce RCOOH je možno přidat jako takovou nebo ve formě soli, například ve formě soli sodné, lithné nebo amonné, nebo ve formě sloučeniny, kterou je možno na uvedenou kyselinu převést, jak již bylo uvedeno. V případě, že se kyselina nachází v pevné formě, s výhodou se rozpustí ve vhodném rozpouštědle, například ve vodě nebo v alkoholu o 1 až 4 atomech uhlíku.
Prostředí, které se užívá pro fermentaci, může být, a to zvláště v případě, že substituentem v poloze 25 má být izopropylový zbytek nebo (S)-sek.butylový zbytek, některé z obvyklých prostředí, která obsahují využitelné zdroje uhlíku, dusíku a stopových prvků. V případě, že substituentem v poloze 25 má být skupina, která se v přírodních avermectinech nevyskytuje, tj. skupina, odlišná od izopropylové nebo (S)-sek.butylové skupiny, je fermentační prostředí voleno tak, aby zvolené složky neobsahovaly látky, v nichž R znamená izopropyl nebo (S)-sek.butyl, nebo aby obsahovaly pouze velmi malé množství těchto látek.
Po fermentaci, která trvá několik dnů při teplotě, pohybující se s výhodou v rozmezí 24 až 33 CC, se fermentační prostředí odstředí nebo zfiltruje a takto oddělené mycelium se extrahuje, s výhodou při použití acetonu nebo metanolu. Organický extrakt se zahustí a požadovaný produkt se pak extrahuje organickým rozpouštědlem, mísitelným s vodou, například metylénchloridem, etylacetátem, chloroformem, butanolem nebo metylizobutylketonem. Takto získaný extrakt se pak odpaří do sucha a takto získaný surový produkt se pak dále čistí podle potřeby chromatograficky, například při použití preparativní chromatografie v reverzní fázi, nebo vysokotlaké kapalinové chromatografie.
Výsledný produkt se obvykle získá ve formě směsi sloučenin obecného vzorce I , v němž R znamená 4'-(a)-L-leandrosyl)-a-L, η
-oleandrosyloxyskupinu a bud R znamena hydroxylovou skupinu *] a dvojná vazba není přítomna, nebo R znamena atom vodíku a sloucenina obsahuje dvojnou vazbu, R znamena atom vodíku. K produkci sloučenin, v nichž R3 znamená metylový zbytek, v podstatě nedochází. Podíl určitých sloučenin v získaném produktu se však může měnit v závislosti na použitém mutantu mikroorganismu a na použitém primeru, jakož i na použitých fermentačních podmínkách.
Zdroje substituentů R, a to ať přímo sloučeniny obecného vzorce RCOOH, nebo některého z jejich prekurzorů, nemají žádný podstatný vliv na produkci avermectinového derivátu. Kritickým požadavkem na provádění způsobu podle vynálezu pro výrobu uvedených derivátů je skutečnost, aby požadovaná skupina R byla
-11CZ 279782 B6 dostupná pro použité kmeny S. avermetilis v průběhu fermentačního postupu.
Jako primery je možno užít zejména následující sloučeniny:
2.3- dimethylmáselná,
2-methylhexanová,
2-metyl-4-pentenová,
2- cyklopropylpropionová,
4.4- difluorcyklohexankarboxylová ve formě lithné soli, metyléncyklohexankarboxylová,
3- metylcyklohexankarboxylová (cis/trans), 1-cyklopentenkarboxylová,
1- cyklohexenkarboxylová, tetrahydropyran-4-karboxylová, thiofen-2-karboxylová,
3-a-furankarboxylová,
2- chlorthiofen-4-karboxylová, cyklobutankarboxylová, cyklopentankarboxylová, cyklohexankarboxylová, cykloheptankarboxylová,
2- metylcyklopropankarboxylová,
3- cyklohexen-l-karboxylová,
2-metylpropionová,
2-metyl-4-metoxomáselná, thiofen-3-karboxylové, kyselina kyselina kyselina kyselina kyselina kyselina kyselina kyselina kyselina kyselina kyselina kyselina kyselina kyselina kyselina kyselina kyselina kyselina kyselina kyselina kyselina kyselina hydroxymetylcyklopentan,
3-thiofenkarboxaldehyd, kyselina 3-cyklohexylpropionová, kyselina 3-cyklopentylpropionová, hydroxymetylcyklobutan, kyselina tetrahydrothiofen-3-karboxylové,
3-cyklopentyl-l-propanol,
3- metylcyklobutankarboxylová kyselina ve formě lithné soli, kyselina kyselina kyselina kyselina cyklobutylmeylamin, etylcyklobutankarboxylát,
4- hydroxymetylcklopenten, etylester kyseliny 2-(3-thiofenkarbonyl)propionové, kyselina S-2-metylpentanová, kyselina R-2-metylpentanová.
3-fluorcyklobutankarboxylová, 3-metylénxyklobutankarboxylová ve formě lithné soli, 2-metyl-4-metylthiomáselná, tetrahydrothiopyran-4-karboxylová,
Z mutantů, které neobsahují dehydrogenázu 2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem a které byly popsány, je možno získat tři skupiny mutantů s ohledem na přítomnost O-metyltransferázy. Mutanty, v nichž je mutace dehydrogenázové účinnosti pro 2-oxo kyseliny s rozvětveným řetězcem spojena s jednou nebo větším počtem mutací O-metyltransferázy, dávají vznik kmenům S. avermitilis, které budou schopné při dodání sloučenin obecného vzorce RCOOH do živného prostředí nebo při dodání sloučenin, které je možno na uvedené látky převést v průběhu fermentačního procesu, produkovat primárně avermectiny B, demetyl avermectiny nebo avermectiny, které již nejsou vůbec metylovány. Uvedené mutanty je možno získat získáním dalších mutantů z mutantů svrchu uvedených,
-12CZ 279782 B6 které neobsahují dehydrogenázu 2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem, a to běžnými postupy, jako jsou působení ultrafialového světla a/nebo působením chemických mutagenů, například N-metyl-N-nitrosouretanu, nitrozoguanidinu nebo dalších sloučenin, tak, jak byly svrchu uvedeny. Je také možno postupovat tím způsobem, že se použijí mutanty, které obsahují dehydrogenázu
2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem, avšak neobsahují jednu nebo větší počet o-methyltransferáz, a dosáhnout další mutace působením ultrafialového světla nebo působením některých mutagenů chemického původu za získání mutantů, které již neobsahují dehydrogenázu 2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem.
Avermectiny nepřírodního původu, které jsou produkovány takto získanými mutanty, jsou charakterizovány přítomností hydroxylové skupiny v poloze 5 aglykonového zbytku a/nebo v poloze 3' a/nebo v poloze 3 oleandrosové skupiny.
Svrchu uvedené mutanty byly identifikovány způsobem, který byl popsán v publikaci Schulman a další, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 29., 620-624 (1986). Takto získané avermectinové deriváty je možno použít stejným způsobem a ke stejným účelům, jako známé avermectinové deriváty.
Obdobně je možno získat velká množství avermectinů B včetně derivátů, které neobsahují metylovou skupinu na oleandrosové disacharidové skupině tak, že se k fermentaci užijí svrchu uvedené mutanty, které neobsahují účinnou dehydrogenázu 2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem za přítomnosti některých látek, například sinefunginu, S-adenosylethioninu nebo S-adenoxylhomocysteinu, které působí inhibici účinnosti O-metyltransferázy.
Sloučeniny, získané způsobem podle vynálezu, jsou vysoce účinné antiparazitální látky, které je možno užít zejména jako anthelmintika, ektoparaziticidní, insekticidní a akaricidní prostředky.
Svrchu uvedené látky jsou tedy účinné při léčbě různých stavů, které jsou způsobeny endoparazity, a to zejména helminthiázy, která je nejčastěji způsobena skupinou parazitických hlístů, které se označují jako nematody a které mohou způsobit těžké hospodářské ztráty u vepřů, ovcí, koní a skotu, i u dalších hospodářských zvířat, věčně drůbeže. Uvedené látky jsou rovněž účinné proti dalším nematodům, kteří napadají nejrůznější čeledi zvířat, jako jsou například dirofilaria u psů, a proti dalším parazitům, které mohou napadnout i člověka, včetně parazitů, kteří žijí v zažívací soustavě jako Ancylostoma, Necator, Ascaris, Strongyloides, Trinchinella, Capillaria, Trichuris, Enterobius, a včetně parazitů, které se nacházejí v krvi a dalších tkáních, jako jsou červi a mimostřevní stadia Strongyloides a Trichinella.
Tyto látky jsou rovněž účinné při léčbě ektoparazitárních infekcí, které zahrnují zejména arthropoda u zvířat i ptáků, jako jsou mouchy, ovádi, bodalky, další bodavý hmyz a také migrující larvy čeledi dvoukřídlých, které mohou napadat skot a koně.
Uvedené látky mají rovněž insekticidní účinek proti domácím škůdcům, jako jsou například švábi, moli a moucha domácí. Jsou
-13CZ 279782 B6 účinné i proti hmyzu na osivu a proti parazitům na plodinách, jakož i proti migrujícím jedincům rodu orthoptera.
Sloučeniny obecného vzorce I se podávají ve formě prostředků, které jsou přizpůsobeny specifickému použití těchto látek a potřebám hostitele, ohled je zapotřebí vzít také na to, proti jakému parazitu nebo hmyzu jsou sloučeniny použity. V případě použití jako anthelmintika je možno sloučeniny, získané způsobem podle vynálezu, podat perorálně jako kapsle, bolus, tablety, nebo v kapalné formě, nebo je tyto látky možno podávat injekčně nebo i v implantované formě. Všechny tyto prostředky je možno připravovat běžným způsobem. Kapsle, bolus nebo tablety se připravují tak, že se účinná složka smísí s vhodným jemně práškovaným ředidlem nebo nosičem, který dále obsahuje ještě činidlo, napomáhající rozpadu a/nebo pojivo, například škrob, laktózu, mastek, stearan hořečnatý a podobně. Kapalný prostředek je možno připravit tak, že se účinná látka disperguje ve vodném roztoku spolu s dispergačním činidlem nebo smáčedlem a podobně, prostředky pro injekční podání je možno připravit například ve formě sterilních roztoků, které mohou obsahovat ještě další složky, například dostatečné množství solí nebo glukózy, aby byl roztok izotonický s krví. Tyto prostředky budou obsahovat různé množství účinné látky v závislosti na typu hostitele, na závažnosti a typu infekce a na hmotnosti hostitele. Při perorálním podání se obvykle podává dávka 0,001 až 10 mg/kg hmotnosti v jediné dávce nebo rozděleně celkem 1 až 5 dní, zásadně je však možno použít i vyšší nebo nižší dávky.
Sloučeniny, získané způsobem podle vynálezu, je možno podávat také v krmivu pro zvířata, k tomuto účelu je možno připravit také příslušné koncentráty a přidávaná·krmivá, určená k promíchání s běžným krmivém.
Při použití jako insekticidy a proti zemědělským škůdcům ze sloučeniny, získané způsobem podle vynálezu, užívají jako postřiky λ poprašky, emulze a podobně běžným způsobem.
Fermentace S. avermitilis 1-3 (ATCC 53567)
Stupeň 1.
S. avermitilis ATCC 31272 se pěstuje v souvislé vrstvě na agarovém prostředí (New Patch) po dobu 12 dnů při teplotě 30 °C.
Užije se živného prostředí s následujícím složením:
I šťáva V-8X | CaCO3 agar | voda do | živný bujón octan sodný.3H2O
200 ml gramy gramů
1000 ml
1,0 gramů/1
1,4 gramů/1
-14CZ 279782 B6
Pokračování
kyselina izovalerová | | 50 | mg/1 |
kyselina izomáselná | | 50 | mg/1 |
kyselina metylmáselná | | 50 | mg/1 |
izoleucin | | 250 | mg/1 |
leucin | | 250 | mg/1 |
valin | | 250 | mg/1 |
roztok stopových prvkůxx I | 1 | ml/1 |
x šťáva V-8 je směs osmi zeleninových šťáv (rajče, mrkev, celer, řepa, petržel, salát, řeřicha a špenát), soli, kyseliny aspergové a citrónové a přírodních příchutí (Campbell Šoup Company, Camden, NJ).
xx složení roztoku stopových prvků:
složka | množství v g |
FeCl3.6H2O | 2,7 |
MnSO4.H2O | 4,2 |
CuS04.5H2O | 0,5 |
CaCl2 | 11,0 |
h3bo3 | 0,62 |
CoC12.6H20 | 0,24 |
ZnCl2 | 0,68 |
Na2Mo04 | 0,24 |
i_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________i__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________i
Složky se rozpustí v 1 litru O,1N HC1.
Spory se sklidí ze tří ploten a uvedou se do suspenze ve 20 ml 0,05M tris-pufru s kyselinou maleinovou o pH 9,0.
Stupeň 2 ml suspenze spor se přidá do lahvičky s obsahem 10 mg N-metyl-N'-nitro-N-nitrózoguanidinu (NTG). Lahvička se inkubuje za protřepávání při teplotě 28 CC celkem 60 minut, načež se spory důkladně promyjí 1% roztokem chloridu sodného.
Stupeň 3
Promyté spory se uvedou do suspenze v 1% roztoku chloridu sodného a suspenze se smísí se stejným objemem 80% etylénglykolu. Tato suspenze se uchovává při teplotě -10 ’C a užívá se jako
-15CZ 279782 B6 zdroj buněk, které se sledují na přítomnost mutantů. Z tohoto množství je možno získat přibližně 104 kolonií buněk/ml.
Tyto spory se nanesou na plotny s prostředím YPD tak, aby vzniklo přibližně 100 kolonií na jedné plotně. Prostředí YPD obsahuje vždy 10 g/1 extraktu z kvasnic, peptonu Bacto a dextrózy a 15 g/1 agaru Bacto, prostředí se upravuje na pH 6,9 před sterilizací v autoklávu. Složky, označené (x) je možno získat od Dfco Laboratoires, Detroir, Michigan 48238.
Stupeň 4
Jednotlivé kolonie se izolují z ploten po 2 až 3 týdnech růstu při teplotě 28 Ca uloží se do jednotlivých vyhloubení standardní mikrotitrační plotny s 96 vyhloubeními. Malé množství každé kolonie se také nanese na čerstvé agarové prostředí, aby bylo možno získat z kolonie další zdroj životaschopných buněk v případě, že by kolonie byla identifikována jako mutant.
Stupeň 5
Do každého vyhloubení se přidá přibližně 75 mikrolitrů prostředí M9 v kapalném stavu s obsahem 1 % glukózy, 0,1 % aminokyselin z kaseinu a 0,01 % každé z kyselin izovalerové, izomáselné a 2-metylmáselné. Po několika dnech inkubace při teplotě 28 °C se buňky sledují na přítomnost dehydrogenázy 2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem.
Každý litr prostředí M9 obsahuje 6 g hydrogenfosforečnanu sodného, 3 g dihydrogenfosforečnanu draselného, 0,5 g chloridu sodného a 1 g chloridu amonného. Prostředí se steriluzuje v autoklávu a pak se přidá 1 ml sterilizovaného 1M síranu hořečnatého a 1 ml 0,1M chloridu vápenatého za aseptických podmínek.
Stupeň 6
Mikrosuspenze 5% toluenu v prostředí M9 se připraví tak, že se nemísitelná směs podrobí působení ultrazvuku. K 25 ml získané suspenze se přidá 1,2 ml roztoku s obsahem [14C-l]-2-oxokapronové kyseliny v množství 2,5 μο/ml a 10,0 μο/μιηοΐ. 50 mikrolitrů této směsi se pak přidá do každého vyhloubení nitrotitrační plotny, která obsahuje zkoumané kolonie.
Stupeň 7
Značený oxid uhličitý, vznikající v jednotlivých vyhloubeních, se zachycuje a stanoví způsobem, popsaným v publikaci Tábor a další, J. Bacteriol. 128, 485-486 /1976/ Convenient Method for Detecting 14CO2 in Multiple Samples: Application to Rapid Screening for Mutants. Mutanty, které nemají dehydrogenázu
2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem, neprodukují větší množství značeného uhličitanu barnatého, než kontrolní kolonie.
-16CZ 279782 B6
Dalším způsobem, který zlepšuje kontrast mezi kontrolními pokusy a pozitivním pokusem na značený oxid uhličitý, bylo možno prokázat tmavou skvrnou na autoradiogramu tvorbu značeného uhličitanu barnatého, kdežto negativní výsledek není vyznačen žádnou skvrnou, nebo pouze velmi světlou skvrnou.
Jednotlivé kolonie ve svrchu uvedeném stupni 4 se odebírají z agarového prostředí již po 7 až 14 dnech růstu, a nikoliv až po dvou až třech týdnech jako svrchu, a pak se přímo sledují podle svrchu uvedených stupňů 6 a 7. Původní stupeň 5 se v tomto případě vynechá.
Ještě citlivější způsob, kterým je možno kvantitativně zjišťovat uvolňování značeného oxidu uhličitého, spočívá v tom, že se zjištěné mutanty pěstují na vhodném prostředí, které sestává z prostředí M9 s obsahem 1 % glukózy a 0,1 % Syncasa-bcaa, což je syntetická směs L-aminokyselin, přibližně odpovídající běžným aminokyselinám kaseinu, avšak bez L-valinu, L-izoleucinu a L-leucinu.
Po vypěstování buněk do vysoké hustoty se buňky promyjí prostředím M9 a znovu se uvedou do suspenze v tomtéž prostředí s obsahem 1 % toluenu. Toluen byl předem rozptýlen působením ultrazvuku, takže vznikla mléčně bílá disperze toluenu v prostředí M9. Suspenze buněk, pufru a toluenu se inkubuje 40 minut při teplotě 30 °C, čímž se buňky stanou propustnými. Takto změněné buňky se pak promyjí v prostředí M9 a pak se znovu uvedou do suspenze v 1/5 původního objemu uvedeného prostředí. K provedení zkoušky se pak užije 180 mikrolitrů takto připravené suspenze.
Reakční objem 300 mikrolitrů obsahuje buňky, pozměněné působením toluenu, 0,4 mM thiaminpyrofosfátu (TPP), 0,11 mM koenzymu A (CoA), 0,68 mM nikotinamidadenindinukleotidu (NAD), 2,6 mM dithiothreitolu (DTT), 4,1 mM chloridu hořečnatého, 60 mM tris-HCl, o pH 7,5 a 6,000 cpm [14C-l]-2-oxoizokapronátu mikrocurie na mikromol. Účinnost počítání impulzů byla 73 %. Reakce byla prováděna v 15 ml scintilačních nádobkách s obsahem 2x2 cm papíru Whatman 4, který byl natlačen do šroubovacího uzávěru lahvičky. Papír obsahuje 30 mikrolitrů 1M Hyaminhydroxidu (1M roztok metylbenzethonimhydroxidu v metanolu, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO 63178), který zachycuje značený oxid uhličitý, vyvíjející se při reakci. Směs se inkubuje 2 hodiny, načež se papír ponoří do 10 ml Beckman Aquasol II (universální LSS (kapalina pro scintilační počítač), New England Nuclear Research Products, Boston, MA 02118) a radioaktivita se měří kapalinovým scintilačním počítačem po dosažení rovnovážného stavu ve svrchu uvedeném rozpouštědle po dobu alespoň 4 hodin. Slepá kontrola, která neobsahuje žádné buňky, poskytuje 50 až 300 impulzů za minutu.
Mutanta 1-3 a podobné mutanty poskytují počty impulzů, které přibližně odpovídají slepé reakci, která neobsahuje buňky, kdežto původní kmen poskytuje několikrát vyšší počty impulzů, než slepá kontrola.
Složení stonásobného koncentrátu Syncasa-bccaa
-17CZ 279782 B6
složka | g/i |
L-alanin | 3 |
L-arginin | 4 |
L-asparagová kyselina | 6 |
L-cystin | 1 |
L-glutamová kyselina | 20 |
glycin | 1 |
L-histidin | 2 |
L-lysin | 7 |
L-methionin | 3 |
L-fenylalanin | 6 |
L-prolin | 10 |
L-serin | 6 |
L-threonin | 4- |
L-tyrosin | 4 |
L-tryptofan | 1 |
Směs se upraví na pH 7 a sterilizuje se filtrací. Jeden objem koncentrátu se přidá k 99 objemům prostředí, aby bylo možno dosáhnout standardní výsledné koncentrace.
Produkce dvojnásobně blokovaných mutantů S.avermitilis 7881 (ATCC 53692), kterým chybí dehydrogenáza 2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem a O-metyltransferáza pro avermectin B
Stupeň 1
S. avermitilis ATCC 53567 se pěstuje v souvislé vrstvě na agarovém prostředí (New Patch) celkem 12 dní při teplotě 30 ’C.
Spory se sklidí ze tří ploten a uvedou se do suspenze ve 20 ml 0,05M tris-pufru s kyselinou maleinovou o pH 9,0.
Stupeň 2 ml získané suspenze spor se přidá do lékovky, která obsahuje 10 mg N-methyl-N'-nitro-N-nitrózoguanidinu (NTG). Lahvička se inkubuje za stálého protřepávání 60 minut při teplotě 28 °C, načež se spory důkladně promyjí 1% roztokem chloridu sodného.
Stupeň 3
Promyté spory se uvedou do suspenze v 1% roztoku chloridu sodného a smísí se se stejným objemem 80% etylénglykolu. Tato suspenze se uchovává při teplotě -20 °C a užívá se jako zdroj buněk, zkoumaných na přítomnost mutantů.
Spory se pak nanesou na plotny s prostředím YPD tak, aby bylo získáno přibližně 100 kolonií na jedné plotně. Kolonie, které byly zpracovány působením nitrózoguanidinu se vzniklými mutacemi kmene Streptomyces avermitilis 1-3 (ATCC 53567), se izolují a nanesou se na agarové prostředí následujícího složení
-18CZ 279782 B6 (gramy/litr): 80 škrobu, 1 hydrogenfosforečnanu draselného, 1
MgSO4.7H2O, 5 prostředku ardamine PH, 5 uhličitanu vápenatého, 1 ml P-200, 0,01 FeSO4.7H2O, 0,001 MnCl2.4H20, 0,001 ZnSO4.7H2O, 17 Bacto agaru, destilovaná voda do 980 ml. Pak se upraví pH na 7,0 hydroxidem sodným, načež se směs sterilizuje v autoklávu 20 minut při teplotě 121 °C. Po sterilizaci v autoklávu se přidá 20 ml sterilního 5% zásobního roztoku kyseliny (±)-2-metylmáselné o pH 7,0.
Agarové kultury se inkubují 8 až 12 dnů při teplotě 28 °C. Pak se buňky (mycelia) z povrchu agaru odeberou a vloží se do 250 mikrolitrů acetonu. Pak se 25 mikrolitrů acetonového extraktu nanese na chromatografické plotny pro chromatografii na tenké vrstvě (Analtech Silica Gel GF). Chromatogram se vyvíjí 30 až 40 minut při použití etylacetátu jako rozpouštědla, načež se usuší a pak se postřikuje tříprocentním roztokem vanilinu v etanolu. Pak se plotny uloží do sušící pece při teplotě 100 °C na 1 až 3 minuty, načež se postříkají 3% roztokem kyseliny sírové v etanolu a znovu uloží do pece při teplotě 100 °C na 10 až 15 minut. Mutanty, kterým chybí O-metyltransferáza avermectinu B, je možno identifikovat změnou chromatogramu, skvrny, odpovídající avermectinu B (Rf přibližně 0,54, 0,42 pro B1 a B2), jsou stále přítomny, avšak skvrny, odpovídající složkám avermectinu A (Rf přibližně 0,69, 0,58 pro AI a A2), chybí.
Postup s použitím vysokotlaké kapalinové chromatografie
Mobilní fáze
150 ml vody ml acetonitrilu do 1 litru metanol.
Sloupec
Ultrasphere ODS 25 cm (Beckman Instruments, Fullerton, CA 92643-3100) průtok: 0,75 ml/min detekce: ultrafialovým světlem o 240 nm zeslabení: přibližně 6
Ředidlo pro vzorek (D):
ml acetonitrilu + 390 ml metanolu
Standardy:
1. naváží se 0,5 mg avermectinu A2A do baňky o objemu 10 ml a objem se doplní metanolem
2. naváží se 0,5 mg zkoumané látky do baňky o objemu 10 ml a objem se doplní metanolem.
Roztoky 1 a 2 jsou standardní zásobní roztoky. V případě použití se smísí 100 μΐ roztoku 1 a totéž množství roztoku 2 v lahvičce a přidá se 800 μΐ mobilní fáze.
-19CZ 279782 B6
Vzorky:
1. 1 ml protřepaného bujónu se odstředí
2. odstraní se co největší množství supernatantu bez porušení usazeniny,
3. přidá se 100 μΐ vody, vhodné pro vysokotlakou chromatograf ii k usazenině a usazenina se nyní disperguje,
4. přidají se 2 ml ředidla D a vše se promísí,
5. výsledná směs se zfiltruje a provede se chromatografie.
Avermectinové deriváty přírodního a nepřírodního typu, tak, jak byly v průběhu přihlášky popsány, byly podrobeny svrchu uvedené vysokotlaké kapalinové chromatografii a doba retence vrcholu pro jednotlivé avermectinové deriváty byla dělena retenční dobou pro oligomycin A, který byl užit jako vnitřní standard. Oligomycin A je téměř vždy pozorován při vysokotlaké kapalinové chromatograf ii jako vedlejší produkt při fermentaci S. avermitilis a je jediným produktem, který je možno odlišit vysokotlakou kapalinovou chromatografií v produktech popsaných mutantů v případě, že tyto mutanty jsou pěstovány v prostředí, prostém kyselin obecného vzorce RCOOH, v němž R má svrchu uvedený význam, nebo prostředí, prostém sloučenin, které je na uvedené kyseliny možno převést. Typický retenční čas pro oligomycin A je 12,5 až 14 minut. Podíl retenčních dob (RT) poskytuje možnost srovnat totožnost a výtěžky avermectinových derivátů. Pořadím, s jakým se vymývají při provedení chromatografie avermectinové deriváty, je B2, A2, B1 a Al.
přírodní avermectin | RT(RT (oligomycin A) |
B2b | 0,70 |
B2a | 0,84 |
A2b | 0,90 |
A2a | 1,09 |
Blb | 1,40 |
Bia | 1,83 |
Alb | 1,83 |
Ala | 2,42 |
Z tabulky je zřejmé, že nedošlo k oddělení derivátu Bia a Alb od sebe navzájem.
nepřírodní avermectin | RT/RT (oligomycin A) |
cyklopentyl B2 | 0,94 |
cyklopentyl A2 | 1,23 |
cyklopentyl B1 | 1,99 |
cyklopentyl Al | 2,62 |
Doba retence byla v rozmezí 1 až 2 minuty, oligomycin A se obvykle vymývá přibližně po 12,5 až 14 minutách.
-20CZ 279782 B6
V následujících příkladech byly avermectinové deriváty stanoveny svrchu uvedeným postupem, není-li uvedeno jinak.
Bylo užito následujících živných prostředí:
Prostředí AS-7
3/1 hydrolyzovaný škrob320
Ardamine pH135
Pharmadeiac15
CaCO32 3 Připravený hydrolýzou škrobu působením α-amylázy z Bacillus licheniformis (Novo Enzymes, Wilton, CT obchodní název Thermamyl), dextrozový ekvivalent je 40 % ± 5 %.
b je produkt Yeast Products, lne., Clifton, NJ 07012 c produkt Traders Protein., Memphis, TN 38108.
Prostředí se upraví na pH 7,2 hydroxidem sodným.
Prostředí AP-5
3/1 hydrolyzovaný škrob80
Ardamin pH5 k2hpo41
MgSO4.7H2O1
NaCl1
CaCO37
FeSO4.7H2O0,01
MnCl2.7H2O0,001
ZnSO4.7H2O0,001
P-2000 (protipěnivé činidlo)3 1 ml/1 3 Dow Chemical Co., Midland, Michigan 48640, pH se upraví na 6,9 25% hydroxidem sodným.
Příklady 1 až 4
Avermectiny kmene Streptomyces avermitilis 1-3 (ATCC 53567)
S. avermitilis 1-3 (ATCC 53567) ze sporulované plotny V-8 se naočkuje do 80 ml prostředí AS-7 v baňce o objemu 500 ml. Baňka se inkubuje na rotační třepačce za míchání 200 ot/min při teplotě 28 až 30 °C. Po 24 hodinách inkubace se 1 ml živného prostředí užije k naočkování baněk s objemem 300 ml a obsahem 40 ml prostředí AP-5. Každá fermentace se provádí dvakrát při teplotě 28 až
-21CZ 279782 B6 “C za přítomnosti 400 ppm každého ze svrchu uvedených primerů, které se přidávají po 24 hodinách.
Po 312 hodinách se vzorky o objemu 2 ml smísí s 8 ml směsi metanolu a acetonitrilu v poměru 390 : 35. Po filtraci se 50 μΐ vzorku vstřikne do sloupce Beckman Ultrasphere ODS s rozměrem 3,9x250 mm. Sloupec se promývá směsí metanolu, acetonitrilu a vody v poměru 89:14:7 při průtoku 0,8 ml/min a eluát se sleduje v ultrafialovém světle při 240 nm. Retenční doby nových avermectinů jsou uvedeny v následující tabulce:
Primer | Retenční doby v minutách | |||
B2 | A2 | Bl | AI | |
1) kyselina ±2methylmáselná | xll,60 | X14,75 | 23,1 | 29,82 |
12,40 | 16,10 | |||
2) kyselina cyklopentankarboxylová | 12,32 | 15,86 | 25,28 | 32,96 |
3) kyselina cyklohexankarboxylová | 14,84 | 19,26 | 31,46 | 41,14 |
4) kyselina +2 metylmáselná | 11,60 | 14,75 | 23,1 | 29,82 |
V
Do avermectinových derivátů je možno včlenit kyselinu +metylmáselnou i -metylmáselnou. Za použití chromatografických podmínek bylo dosaženo vzájemného oddělení + a - avermectinu pouze v případě derivátu B2 a A2.
Příklad 5
Cyklohexyl avermectinu, produkované kmenem Streptomyces avermitilis 7881 (ATCC 53692)
Zmrazená kultura S. avermitilis 7881 (ATCC 53692) se naočkuje do 100 ml prostředí AS-7 v baňkách o objemu 500 ml. Baňky se inkubují na rotační třepačce při 200 ot/min a teplotě 28 až 30 °C. Po 28 hodinách inkubace se vždy 5 ml prostředí užije k naočkování dalších 100 ml prostředí AS-7, obsaženého v baňce o objemu 500 ml. Tyto baňky se znovu inkubují na rotační třepačce při 200 ot/min a teplotě 28 až 30 “C. Po 24 hodinách inkubace se 1 ml prostředí užije k naočkování baněk o objemu 300 ml s obsahem 40 ml prostředí AP-5. Baňky se inkubují při teplotě 28 až 30 °C při 200 ot/min. Po .24 hodinách se přidá 400 ppm kyseliny cyklohexankarboxylové, po 312 hodinách se odeberou vzorky o objemu 2 ml a provádí se vysokotlaká kapalinová chromatografie způsobem podle příkladu 1. Za těchto podmínek se jediné složky avermectinu, zjištěné ve fermentačním prostředí, vymývaly po 14,84 minutách (54,9 mg/1) a o 31,46 inutách (32,1 mg/1), což odpovídá avermectinu cyklohexyl B2 a Bl.
-22CZ 279782 B6
Příklad 6
Sek. butyl avermectinové deriváty ze Streptomyces avermitilis 7881 (ATCC 53692)
Byl opakován způsob podle příkladu 5 s tím rozdílem, že bylo užito 400 ppm kyseliny ±2-metylmáselné místo kyseliny cyklohexankarboxylové, jinak byly podmínky stejné jako v příkladu 2. Ve fermentačním prostředí bylo možno prokázat pouze sek.butyl avermectin B2 (11,60, 12,40 minut, 63,5 a 42,4 mg/1) a sek.butylavermectin B1 (23,1 minut, 105,5 mg/1).
Claims (9)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Streptomyces avermitilis ATCC 53692, postrádající dehydrogenázovou aktivitu 2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem a O-metyltransferázovou aktivitu avermectinu B, charakterizovaný neschopností svých permeabilizovaných buněk produkovat 14CO2 z přidané [14C-1]-2-oxoizokapronové kyseliny.
- 2. Způsob přípravy avermectinu B, vyznačující se tím, že se za aerobních podmínek fermentuje kmen Streptomyces avermitilis, který postrádá dehydrogenázovou aktivitu2-oxo kyselin s rozvětveným řetězcem a O-metyltransferázovou aktivitu avermectinu B, po dobu až 15 dní při teplotě v rozmezí od 24 'C do 33 ‘C ve vodném živném prostředí, obsahujícím využitelný zdroj dusíku, uhlíku a anorganických solí, jako je hydrolyzovaný škrob, Ardamine pH, uhličitan vápenatý CaC03, hydrogenfosforečnan draselný K2HPO4, síran hořečnatý MgSO4, chlorid sodný NaCl, síran železnatý FeSO4, chlorid manganatý MnCl2 a síran zinečnatý ZnS04, a sloučeninu, schopnou utilizace při biosyntéze avermectinu, která má obecný vzorecR-COOH ve kterém znamená R skupinu s α-rozvětveným řetězcem, jehož uhlíkový atom, na který je vázána skupina -COOH, je vázán na přinejmenším dva jiné atomy nebo skupiny odlišné od vodíku, nebo sloučeninu, kterou je možno na uvedenou sloučeninu převést v průběhu fermentace.
- 3. Způsob podle nároku 2,vyznačující se tím, že jako sloučeniny, která je přeměnitelná na substrát obecného vzorce R-COOH, se použije sloučeniny obecného vzorceR-(CH2)n-Z ve kterém má R již uvedený význam, n je o, 2, 4 nebo 6,-23CZ 279782 B6Z je skupina -CH2OH, -CHO, -COOR4, -CH2NH2 nebo -CONHR5, ve kterých R4 je atom vodíku nebo alkylová skupina, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, aR5 je atom vodíku, alkylová skupina, obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, -CH(COOH)CH2COOH, -ch(cooh)(ch2)2cooh nebo -CH(COOH)(CH2)2SCH3.
- 4. Způsob podle nároku 2,vyznačující se tím, že v uvedené sloučenině je skupinou R cyklobutylová skupina, cyklopentylová skupina, cyklohexylová skupina, cykloheptylová skupiny, 2-metylcyklopropylová skupina,3-cyklohexenylová skupina, 1-cyklopentenylová skupina,1- cyklohexenylová skupina, 3-metylcyklohexenylová skupina (cis/trans), 4-metyléncyklohexylová skupina,3-metylcyklobutylová skupina, 3-metyléncyklobutylová skupina,3-cyklopentenylová skupina, 1-cyklopropyletylová skupina,3-fluorcyklobutylová skupina, 4,4-difluorcyklohexylová skupina, izopropylová skupina, sekundární butylová skupina,2- pentylová skupina, 2,3-dimetylpropylová skupina,2-hexylová skupina, 2-pent-4-enylová skupina,2- metylthioetylová skupiny, S-2-pentylová skupina, R-2-pentylová skupiny, 2-thienylová skupina,3- thienylová skupina, 4-tetrahydropyranylová skupina,3-furylová skupina, 2-chlorthienylová skupina,3- tetrahydrothienylová skupina, 4-metylthio-2-butylová skupina, 4-tetrahydrothiopyranylová skupina,4- metoxy-2-butylová skupina nebo 4-metylthio-2-butylová skupina.
- 5. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že skupina R je odvozená od karboxylové kyseliny obecného vzorce R-COOH.
- 6. Způsob podle nároku 5, vyznačující se tím, že R je cyklopentylová skupina, cyklohexylová skupina nebo thienylová skupina.
- 7. Způsob podle nároku 4,vyznačující se tím, že skupina R je odvozena od sloučeniny, přeměnitelné na sloučeninu R-COOH během provádění fermentačního postupu, přičemž tato sloučenina má obecný vzorec.R-(CH2)n-Z ve kterém má R již uvedený význam, n je 0, 2, 4 nebo 6,Z je skupina -CH2OH, -CHO, -COOR4, -CH?NH2 nebo -CONHR5, ve kterých R4 je atom vodíku nebo alkylova skupina, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, aR5 je atom vodíku, alkylová skupina, obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, -CH(COOH)CH2COOH,-CH(COOH)(CH2)2COOH nebo -CH(COOH)(CH2)2SCH3.
- 8. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že skupinou R je α-rozvětvená alkylová skupina, obsahující 3-24CZ 279782 B6 až 8 atomů uhlíku, kterou není izopropylová (S)-sek.butylová skupina.
- 9. Způsob podle nároku 2 ,vyznačuj ící že uvedeným kmenem S.avermitilis je S.avermitilis skupina nebo se tím, ATCC 53692.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US651287A | 1987-01-23 | 1987-01-23 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ40788A3 CZ40788A3 (en) | 1994-12-15 |
CZ279782B6 true CZ279782B6 (cs) | 1995-06-14 |
Family
ID=21721247
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CS88407A CZ279782B6 (cs) | 1987-01-23 | 1988-01-21 | Způsob výroby derivátů avarmectinu B |
Country Status (30)
Country | Link |
---|---|
EP (2) | EP0276103B1 (cs) |
JP (2) | JPH0681757B2 (cs) |
KR (2) | KR900004419B1 (cs) |
CN (1) | CN1056883C (cs) |
AR (1) | AR241798A1 (cs) |
AT (2) | ATE96174T1 (cs) |
AU (2) | AU595673B2 (cs) |
BG (1) | BG51051A3 (cs) |
BR (1) | BR8800271A (cs) |
CZ (1) | CZ279782B6 (cs) |
DD (2) | DD267512A5 (cs) |
DE (2) | DE3884973T2 (cs) |
DK (2) | DK175720B1 (cs) |
EG (1) | EG18797A (cs) |
ES (2) | ES2059498T3 (cs) |
FI (2) | FI90091C (cs) |
GR (1) | GR3007586T3 (cs) |
HU (2) | HU201973B (cs) |
IE (2) | IE61483B1 (cs) |
IL (2) | IL85118A (cs) |
IN (1) | IN167980B (cs) |
MA (1) | MA21160A1 (cs) |
MY (1) | MY103514A (cs) |
NZ (2) | NZ223272A (cs) |
PL (2) | PL156763B1 (cs) |
PT (2) | PT86583B (cs) |
RU (1) | RU1806198C (cs) |
SK (1) | SK279351B6 (cs) |
YU (1) | YU47878B (cs) |
ZA (3) | ZA88447B (cs) |
Families Citing this family (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4806527A (en) * | 1987-03-16 | 1989-02-21 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
US4874749A (en) * | 1987-07-31 | 1989-10-17 | Merck & Co., Inc. | 4"-Deoxy-4-N-methylamino avermectin Bla/Blb |
DE3881147T2 (de) * | 1987-10-23 | 1993-09-02 | Pfizer | Verfahren zur herstellung von aglykonen von avermectin und sie enthaltende kulturen. |
GB8807280D0 (en) * | 1988-03-26 | 1988-04-27 | Pfizer Ltd | Antiparasitic agents |
GB8811036D0 (en) * | 1988-05-10 | 1988-06-15 | Glaxo Group Ltd | Chemical compounds |
GB8813760D0 (en) * | 1988-06-10 | 1988-07-13 | American Cyanamid Co | Chemical process |
GB8815967D0 (en) * | 1988-07-05 | 1988-08-10 | Pfizer Ltd | Antiparasitic agents |
NZ231773A (en) * | 1988-12-23 | 1992-09-25 | Merck & Co Inc | Avermectin derivatives, preparation and parasiticidal pharmaceutical compositions thereof |
NZ231772A (en) * | 1988-12-23 | 1992-11-25 | Merck & Co Inc | Avermectin derivatives, preparation and parasiticidal compositions thereof |
US5015630A (en) * | 1989-01-19 | 1991-05-14 | Merck & Co., Inc. | 5-oxime avermectin derivatives |
US4897383A (en) * | 1989-02-13 | 1990-01-30 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
US5252474A (en) * | 1989-03-31 | 1993-10-12 | Merck & Co., Inc. | Cloning genes from Streptomyces avermitilis for avermectin biosynthesis and the methods for their use |
US5057499A (en) * | 1989-06-02 | 1991-10-15 | Merck & Co. Inc. | Avermectin derivatives |
US5030622A (en) * | 1989-06-02 | 1991-07-09 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
US5023241A (en) * | 1989-07-31 | 1991-06-11 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
US5830875A (en) * | 1989-10-30 | 1998-11-03 | Merck & Co., Inc. | 24-and 25-substituted avermectin and milbemycin derivatives |
JP2888586B2 (ja) * | 1990-03-05 | 1999-05-10 | 社団法人北里研究所 | エバーメクチンの特定成分を選択生産するための微生物およびその選択的製造法 |
US5169839A (en) * | 1990-05-11 | 1992-12-08 | Merck & Co., Inc. | Derivatives of 3'- and 3"-o-desmethyl avermectin compounds, compositions and methods of treating melmintic and parasitic infections |
US5208222A (en) * | 1991-03-28 | 1993-05-04 | Merck & Co., Inc. | 4"-and 4'-alkylthio avermectin derivatives |
US5240915A (en) * | 1991-10-15 | 1993-08-31 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
US6103504A (en) * | 1992-03-25 | 2000-08-15 | Pfizer Inc. | Process for production of avermectins and cultures therefor |
US5292647A (en) * | 1992-11-30 | 1994-03-08 | Eli Lilly And Company | Strain of streptomyces for producing avermectins and processes therewith |
CN1038330C (zh) * | 1993-07-05 | 1998-05-13 | 塞泰克斯公司 | 阿弗麦菌素的生产与分离 |
ES2204914T3 (es) * | 1993-07-30 | 2004-05-01 | Pfizer Inc. | Genes que codifican el complejo alfa cetoacido deshidrogenasa de cadena ramificada de streptomyces avermitilis. |
KR100186946B1 (ko) * | 1993-10-05 | 1999-04-01 | 알렌 제이.스피겔 | 도라멕틴의 구충활성 중간체 및 도라멕틴의 제조방법 |
FI942725A (fi) * | 1993-12-16 | 1995-06-17 | Pfizer | Haaraketjuista alfaketohappodenydrogenaasikompleksia koodaavia geenejä Streptomyces avermitiliksesta |
US5701591A (en) * | 1995-04-07 | 1997-12-23 | Telecommunications Equipment Corporation | Multi-function interactive communications system with circularly/elliptically polarized signal transmission and reception |
KR20040099389A (ko) * | 1998-02-13 | 2004-11-26 | 화이자 프로덕츠 인코포레이티드 | 스트렙토마이세스 하이그로스코피쿠스 유전자 |
DE60031126T2 (de) * | 1999-08-12 | 2007-02-08 | Pfizer Products Inc., Groton | Streptomyces avermitilis gen zum regulieren des verhältnisses der b2:b1 avermectinen |
KR100415395B1 (ko) * | 2000-08-02 | 2004-01-16 | 한국생명공학연구원 | 에버멕틴 bc-5-o-메칠트랜스퍼라제의 유전자가 파괴된 스트렙토마이세스 에버미티리스 변이균주 및 그의 제조 방법 |
EP1476539B1 (en) | 2002-02-12 | 2009-03-25 | Pfizer Products Inc. | Streptomyces avermitilis gene directing the ratio of b2:b1 avermectins |
WO2023203038A1 (en) | 2022-04-19 | 2023-10-26 | Syngenta Crop Protection Ag | Insect, acarina and nematode pest control |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SE434277B (sv) | 1976-04-19 | 1984-07-16 | Merck & Co Inc | Sett att framstella nya antihelmintiskt verkande foreningar genom odling av streptomyces avermitilis |
NZ188459A (en) * | 1977-10-03 | 1982-09-07 | Merck & Co Inc | Derivatives of c-076 compounds and pesticidal compositions |
US4429042A (en) | 1978-09-08 | 1984-01-31 | Merck & Co., Inc. | Strain of Streptomyces for producing antiparasitic compounds |
ES8800986A1 (es) * | 1985-07-27 | 1987-12-01 | Pfizer | Un procedimiento para la produccion de un nuevo derivado de avermectina |
GB8606120D0 (en) * | 1986-03-12 | 1986-04-16 | Glaxo Group Ltd | Process |
-
1987
- 1987-12-10 IN IN1059/DEL/87A patent/IN167980B/en unknown
-
1988
- 1988-01-18 AT AT88300354T patent/ATE96174T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-01-18 ES ES88300354T patent/ES2059498T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-18 IL IL85118A patent/IL85118A/xx not_active IP Right Cessation
- 1988-01-18 EP EP88300354A patent/EP0276103B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-18 BG BG82657A patent/BG51051A3/xx unknown
- 1988-01-18 DE DE88300354T patent/DE3884973T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-19 MA MA21397A patent/MA21160A1/fr unknown
- 1988-01-19 MY MYPI88000037A patent/MY103514A/en unknown
- 1988-01-20 AT AT88300426T patent/ATE87927T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-01-20 ES ES88300426T patent/ES2053719T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-20 DE DE8888300426T patent/DE3879975T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-20 EP EP88300426A patent/EP0276131B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-21 IL IL85165A patent/IL85165A/xx not_active IP Right Cessation
- 1988-01-21 CZ CS88407A patent/CZ279782B6/cs unknown
- 1988-01-21 PT PT86583A patent/PT86583B/pt unknown
- 1988-01-21 PL PL1988270238A patent/PL156763B1/pl unknown
- 1988-01-21 PT PT86584A patent/PT86584B/pt unknown
- 1988-01-21 SK SK407-88A patent/SK279351B6/sk unknown
- 1988-01-21 EG EG3588A patent/EG18797A/xx active
- 1988-01-21 PL PL1988270239A patent/PL156764B1/pl unknown
- 1988-01-22 DK DK198800290A patent/DK175720B1/da not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 YU YU11988A patent/YU47878B/sh unknown
- 1988-01-22 RU SU884355079A patent/RU1806198C/ru active
- 1988-01-22 KR KR1019880000470A patent/KR900004419B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 DK DK028988A patent/DK28988A/da not_active Application Discontinuation
- 1988-01-22 ZA ZA88447A patent/ZA88447B/xx unknown
- 1988-01-22 NZ NZ223272A patent/NZ223272A/xx unknown
- 1988-01-22 HU HU88260D patent/HU201973B/hu unknown
- 1988-01-22 AU AU10696/88A patent/AU595673B2/en not_active Expired
- 1988-01-22 IE IE16088A patent/IE61483B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 NZ NZ223271A patent/NZ223271A/en unknown
- 1988-01-22 CN CN88100649A patent/CN1056883C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-22 ZA ZA88448A patent/ZA88448B/xx unknown
- 1988-01-22 JP JP63012462A patent/JPH0681757B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-22 AR AR88309888A patent/AR241798A1/es active
- 1988-01-22 FI FI880280A patent/FI90091C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 FI FI880281A patent/FI90088C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 DD DD88312394A patent/DD267512A5/de unknown
- 1988-01-22 DD DD88312393A patent/DD290214A5/de unknown
- 1988-01-22 HU HU88261A patent/HU200487B/hu unknown
- 1988-01-22 IE IE16188A patent/IE61066B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 ZA ZA88449A patent/ZA88449B/xx unknown
- 1988-01-23 KR KR1019880000506A patent/KR910002225B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1988-01-23 JP JP63011881A patent/JPH0817693B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-25 BR BRPI8800271-3A patent/BR8800271A/pt not_active IP Right Cessation
-
1991
- 1991-02-15 AU AU71110/91A patent/AU631298B2/en not_active Expired
-
1993
- 1993-04-08 GR GR930400638T patent/GR3007586T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5077278A (en) | Non-natural demethylavermectins compositions and method of use | |
CZ279782B6 (cs) | Způsob výroby derivátů avarmectinu B | |
AU636709B2 (en) | Process for production of avermectins and cultures therefor | |
US5565359A (en) | Cultures for production of B avermectins | |
US5238848A (en) | Cultures for production of avermectins | |
EP0313297B1 (en) | Process for production of avermectin aglycones and cultures therefor | |
US5240850A (en) | Cultures for production of avermectin aglycones | |
US5387509A (en) | Ethylated avermectins | |
US5525506A (en) | Process for production of avermectins and cultures therefor | |
US6103504A (en) | Process for production of avermectins and cultures therefor | |
AP64A (en) | "Process for production of B avermectins and cultures therefor". |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic |