EA021380B1

EA021380B1 - Фуразанобензимидазолы в качестве пролекарств для лечения опухолевых или аутоиммунных заболеваний

Info

Publication number: EA021380B1
Application number: EA201200189A
Authority: EA
Inventors: Йенс Польманн; Феликс Бахманн
Original assignee: Базилеа Фармацойтика Аг
Priority date: 2009-07-27
Filing date: 2010-07-26
Publication date: 2015-06-30
Also published as: CN102471329A; CA2767875C; HK1166316A1; IL217195A; TW201107318A; ZA201200228B; AU2010277688A1; KR101758400B1; BR112012001817A2; EP2459553A1; US8802858B2; IL217195A0; CY1115809T1; CA2767875A1; BR112012001817B8; TWI457337B; CN102471329B; SI2459553T1; HRP20141120T1; JP2013500304A

Abstract

Описывается соединение формулы (II)гдепредставляет собой двухвалентный бензольный остаток, который незамещен или замещен одним или двумя дополнительными заместителями, независимо выбранными из низшего алкила, гало-низшего алкила, гидрокси-низшего алкила, низшего алкокси-низшего алкила, ацилокси-низшего алкила, гидрокси, низшего алкокси, гидрокси-низшего алкокси, низшего алкокси-низшего алкокси, низшего алкилкарбонилокси, амино, моно(низший алкил)амино, ди(низший алкил)амино, моно(низший алкенил)амино, ди(низший алкенил)амино, низшего алкоксикарбониламино, низшего алкилкарбониламино, низшего алкилкарбонила, карбокси, низшего алкоксикарбонила, циано, галогена и нитро; Rпредставляет собой водород, низший алкилкарбонил, гидрокси-низший алкил или циано-низший алкил и Rпредставляет собой группу, выбранную изили его фармацевтически приемлемые соли, способы его получения и применения для лечения опухолевых и аутоиммунных заболеваний.

Description

представляет собой двухвалентный бензольный остаток, который незамещен или замещен одним или двумя дополнительными заместителями, независимо выбранными из низшего алкила, гало-низшего алкила, гидрокси-низшего алкила, низшего алкокси-низшего алкила, ацилокси-низшего алкила, гидрокси, низшего алкокси, гидрокси-низшего алкокси, низшего алкокси-низшего алкокси, низшего алкилкарбонилокси, амино, моно(низший алкил)амино, ди(низший алкил)амино, моно(низший алкенил)амино, ди(низший алкенил)амино, низшего алкоксикарбониламино, низшего алкилкарбониламино, низшего алкилкарбонила, карбокси, низшего алкоксикарбонила, циано, галогена и нитро; К¹ представляет собой водород, низший алкилкарбонил, гидрокси-низший алкил или циано-низший алкил и К² представляет собой группу, выбранную из о

о н

I

ΗΝ.Μ0

Η,Ν и ² ’ΝΗ₂.

или его фармацевтически приемлемые соли, способы его получения и применения для лечения опухолевых и аутоиммунных заболеваний.

Изобретение относится к пролекарствам замещенных фуразанобензимидазолов, способам их получения и фармацевтическим композициям, которые их содержат, к их применению необязательно в комбинации с одним или несколькими другими фармацевтически активными соединениями для лечения опухолевых заболеваний и аутоиммунных заболеваний.

Злокачественное новообразование является одной из основных причин летальных исходов у людей. Несмотря на то, что разработаны различные лекарственные средства для лечения опухолевых заболеваний и доступны такие техники, как хирургия и лучевая терапия, все еще существует потребность в альтернативных и улучшенных способах лечения опухолевых заболеваний.

Аутоиммунные заболевания связаны с аномальной пролиферацией лимфоидных клеток в результате нарушений завершения активации и роста лимфоцитов. Часто такие заболевания связаны с воспалением, таким как ревматоидный артрит, инсулиннезависимым сахарным диабетом, рассеянным склерозом, системной красной волчанкой и другими. Лечение таких заболеваний основано на противовоспалительных и иммуносупрессорных лекарственных средствах, которые во многих случаях проявляют тяжелые побочные действия. Поэтому существует потребность в альтернативных лекарственных средствах с новым типом действия, проявляющим меньше побочных действий.

Апоптоз представляет собой термин, используемый для описания каскада клеточных событий, которые приводят к запрограммированной клеточной гибели. Существуют различные пути апоптоза, некоторые из них были описаны, в то время как другие еще следует изучить. Если нарушено равновесие между делением клеток и апоптозом, то могут развиваться опасные для жизни заболевания, такие как злокачественное новообразование, аутоиммунные нарушения, нейродегенеративные и сердечно-сосудистые заболевания.

В последние годы было установлено, что запрограммированная клеточная гибель (апоптоз) является важной для здоровья многоклеточного организма относительно деления клеток. Посредством многократного деления клеток и дифференциации при развитии или восстановлении ткани создаются избыточные или даже опасные клетки. Для поддержания гомеостаза ткани эти клетки должны быть удалены или уничтожены. Точное взаимодействие между ростом клеток и апоптозом в организме отображено в комплексном молекулярном балансе, который определяет, будет ли индивидуальная клетка осуществлять деление, останавливаться в клеточном цикле или осуществлять запрограммированную клеточную гибель.

Нарушение регуляции пролиферации клеток, или отсутствие соответствующей гибели клеток, характеризуется различными клиническими последствиями. Различные заболевания, связанные с таким нарушением регуляции, включают гиперпролиферацию, воспаление, реконструкцию и восстановление ткани. Близкими показаниями в этой категории являются злокачественные новообразования, рестеноз, неоинтимальная гиперплазия, ангиогенез, эндометриоз, лимфопролиферативные нарушения, патологии, связанные с трансплантацией (отторжение трансплантата), полипоз, потеря невральной функции в случае реконструкции ткани и другие. Такие клетки могут терять нормальный регуляторный контроль за делением клетки и также могут не подвергаться соответствующей клеточной гибели.

Поскольку апоптоз ингибируется или замедляется при большинстве типов пролиферативных, опухолевых заболеваний, то индукция апоптоза является альтернативой для лечения злокачественного новообразования, в особенности при типах злокачественных новообразований, которые проявляют устойчивость к классической химиотерапии, облучению и иммунотерапии (Αρορΐοδίδ аиб Сапсег СйешоШегару, Нюкшап апб ЭКе, ред., В1аск\\е11 РиЪйкЫпд, 1999). Также при аутоиммунных заболеваниях и заболеваниях и патологиях, связанных с трансплантацией, соединения, индуцирующие апоптоз, можно использовать для восстановления процессов нормальной клеточной гибели и, следовательно, можно устранять симптомы и можно излечивать заболевания. Другими применениями соединений, индуцирующих апоптоз, может являться рестеноз, то есть накопление сосудистых гладких мышечных клеток в стенках артерий, и хронические инфекции, вызываемые тяжело поддающимися уничтожению бактериями и вирусами, инфицирующими клетки. Кроме того, апоптоз можно индуцировать или восстанавливать в эпителиальных клетках, в эндотелиальных клетках, в мышечных клетках и в других клетках, которые потеряли контакт с внеклеточным матриксом. Эти клетки потенциально способны колонизировать другие органы и, следовательно, могут превращаться в патологии, такие как неоплазии, эндометриоз и другие.

В \νϋ 2004/103994 описаны соединения фуразанобензимидазола формулы (I)

где К, Р'-Р⁶ и X имеют известные широко определенные значения в качестве индукторов апоптоза в злокачественных клетках.

В этом источнике также описано, что эти соединения могут вводиться в форме пролекарств, кото- 1 021380 рые распадаются в организме человека или животного с образованием соответствующего соединения формулы (I), и указано, что среди других типов пролекарств амиды встречающихся в природе аминокислот, например амиды, образованные из кислотной функциональной группы аминокислоты и подходящих аминогрупп соединения формулы (I), пригодны в качестве пролекарств.

Водная растворимость фуразанобензимидазолов, таких как описанные в \УО 2004/103994, в целом является низкой. Это составляет проблему для приготовления фармацевтических композиций, в особенности композиций для парентерального введения. В ссылке предполагается только очень общее применение водного раствора водорастворимой соли соединений формулы (I) для парентерального введения.

Сейчас было показано, что выбранные амиды, имеющие происхождение из фуразанобензимидазолов вышеуказанной формулы (I), где К представляет собой арильную или гетероарильную группу, замещенную по меньшей мере одной аминогруппой, и природную аминокислоту выбирают из глицина (О1у), аланина (А1а) и лизина (Ьук), проявляют существенно улучшенную растворимость в воде и расщепляются ίη νίνο на исходный ароматический или гетероароматический амин, таким образом действуя в качестве пролекарств. Повышение растворимости в воде облегчает приготовление фармацевтических композиций и уменьшает потребность в наполнителях, усиливающих растворимость, по сравнению с исходным лекарственным средством. Это является специфическим преимуществом, поскольку эти наполнители могут вызывать нежелательные токсические эффекты (ΕχοίρίοηΙ ТохКЬу апб 5>аГс1у; Уешег, Муга Ь.; КобюккК, Ьо18 А.; ред. (2000), изд. Эекксг, №\у Уотк, И8А. РЬагтасо1од1са1 сГГсс1к оГ Гогти1а1юп усЫс1ск: ЬпрЬсаОопк Гог сапссг сЬешоШегару; 1сп Туе, А1Ьсг1 1.; Успусу, 1аар; Ьоок, ХУаЬсг 1.; ЗраггсЬоот, А1сх; СЬшса1 РЬагтасоктсОск (2003), 42(7), 665-685).

Специфически для лекарственного средства, имеющего происхождение из лизина (Ьук), наблюдается очень сильное повышение растворимости в чрезвычайно широком диапазоне рН и даже при слабокислых условиях. Эти специфические свойства растворимости производного лизина даже при более высоких значениях рН обеспечивают очень хорошую пластичность для приготовления фармацевтически приемлемых композиций. Кроме того, в фармакокинетических исследованиях на мышах было обнаружено, что амидные пролекарства, полученные из глицина (О1у), аланина (А1а) и лизина (Ьук), обеспечивают существенно более высокую экспозицию животных для исходного лекарственного средства (выражается как значение АИС (площадь под кривой)), по сравнению с пролекарствами, полученными из других природных аминокислот. Например, значения АИС являются более чем на 50% выше по сравнению со значениями АИС, обнаруженными после введения амидных пролекарств, полученных из других очень сходных природных аминокислот, таких как аспарагин (Акп), серин (8сг), глутамин (О1п) или аргинин (Агд).

Дополнительно было обнаружено, что специфическое пролекарство, производное Ьук, согласно примеру 1 этой заявки, является лучше переносимым, обеспечивая более длительную экспозицию опухолей лекарственным средством, и имеет более высокую эффективность на моделях опухолей у животных при максимально переносимой дозе по сравнению с таковой соответствующего исходного лекарственного средства. Эти неожиданные эффекты также свидетельствуют о более высокой эффективности этого пролекарства для лечения опухолевых заболеваний и аутоиммунных заболеваний.

При полном анализе крови в условиях ίη νίίτο аминокислотное производное амида, полученное из аминогруппы на фуразановом кольце, превращается менее эффективно в исходное лекарственное средство по сравнению с соответствующим производным с аминокислотным амидом, являющимся заместителем остатка К в вышеуказанной формуле (I). Это указывает на то, что не все амиды, полученные из аминогруппы соединения формулы (I) и природной аминокислоты, являются одинаково хорошо пригодными в качестве пролекарств.

В литературе описаны различные другие типы аминовых пролекарств (например, А.Ь. ШтрЬсю, 1.М. С1апсу, ТР. Обтег, Мо1сси1ск 2008, 13, 519-546; Ргобгидк: СЬа11спдск апб Ксуагбк, [в Вю1ссЬпо1.: РЬагт. Акрссй, 2007; 5 (Ρί. 2)] У.Т 5>1с11а, К.Т. ВогсЬагбЬ М.1. Надстап, К. ОЬуац Н. Маад, 1ЛУ. Тт11су, редакторы, И8А. 2007, стр. 102-131, издательство (8ргшдсг, №\у Уотк, N. Υ.); 1. Каибо, Н. Китри1ашсп, Т. НешЬасЬ, К. ОЬуац Ό. ОЬ, Т. .Тагутеп, 1. §ауо1ашсп, №-11игс Реу. Эгид Эхксоусгу, 2008, 7, 255-270). Тем не менее, не каждое потенциальное пролекарство в достаточной мере превращается в исходное лекарственное средство в каждом случае, что иллюстрируется с помощью амидинового и сульфаматного производного фуразанобензимидазолов, которые не обеспечивают поддающихся количественному определению уровней в плазме крови исходного лекарственного средства после введения в исследованиях на животных. Это дополнительно подчеркивает потребность в идентификации для данного лекарственного средства подходящих пролекарств, комбинирующих все необходимые свойства.

Таким образом, настоящее изобретение относится к соединениям формулы (II)

- 2 021380

представляет собой двухвалентный бензольный остаток, который незамещен или замещен одним или двумя дополнительными заместителями, независимо выбранными из низшего алкила, гало-низшего алкила, гидрокси-низшего алкила, низшего алкокси-низшего алкила, ацилокси-низшего алкила, гидрокси, низшего алкокси, гидрокси-низшего алкокси, низшего алкокси-низшего алкокси, низшего алкилкарбонилокси, амино, моно(низший алкил)амино, ди(низший алкил)амино, моно(низший алкенил)амино, ди(низший алкенил)амино, низшего алкоксикарбониламино, низшего алкилкарбониламино, низшего алкилкарбонила, карбокси, низшего алкоксикарбонила, циано, галогена и нитро;

К¹ представляет собой водород, низший алкилкарбонил, гидрокси-низший алкил или циано-низший алкил и

К² представляет собой группу, выбранную из

и его фармацевтически приемлемые соли.

Фуразанобензимидазолы формулы (II) представляют собой пролекарства с улучшенной растворимостью в воде и расщепляются в условиях ίη νίνο, обеспечивая соответствующее исходное лекарственное средство формулы (Ι-ΙΙ)

где К¹ и Ζ имеют значения, аналогичные указанным в формуле (II). Соединения также расщепляются в клеточных исследованиях и цельной крови.

Фуразанобензимидазолы формулы (II), следовательно, имеют медицинские применения, аналогичные соответствующим исходным лекарственным средствам, которые подробно описаны в νθ 2004/103994. В частности, соединения формулы (II) селективно индуцируют апоптоз в раковых клетках и могут применяться для лечения опухолевых и аутоиммунных заболеваний. Таким образом, изобретение также относится к соединениям формулы (II) для применения в качестве лекарственных средств. Изобретение также относится к способам синтеза таких соединений, к фармацевтическим композициям, содержащим соединения формулы (II), к применению соединений формулы (II) для приготовления фармацевтической композиции для лечения опухолевых и аутоиммунных заболеваний, и к способам лечения опухолевых и аутоиммунных заболеваний, используя такие соединения формулы (II) или фармацевтические композиции, содержащие указанные соединения.

Для целей настоящего описания префикс низший обозначает радикал, имеющий от 1 вплоть до и включающий максимально 7, в особенности от 1 вплоть до и включающий максимально 4 атома углерода, данные радикалы являются либо линейными или разветвленными с одним или множественными разветвлениями.

Если множественная форма используется для соединений, солей и т.д., то это обозначает, что также охватывается единственное соединение, соль или др.

Двойные связи в принципе могут иметь Е- или Ζ-конфигурацию. Следовательно, соединения согласно настоящему изобретению могут существовать в виде изомерных смесей или индивидуальных изомеров. Если не указано, то подразумеваются обе изомерные формы.

Любой асимметрический атом углерода, не указанный в формуле (II), имеющей специфическую

- 3 021380 конфигурацию, может быть представлен в (К)-, (§)- или (К,§)-конфигурации, предпочтительно в (К)- или (8)-конфигурации. Таким образом, соединения могут присутствовать в виде смесей изомеров или в виде чистых изомеров, предпочтительно в виде энантиомер-чистых стереоизомеров.

Изобретение также относится к возможным таутомерам соединений формулы (II).

Низший алкил предпочтительно имеет 1-4 атома углерода и представляет собой бутил, такой как нбутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, пропил, такой как н-пропил или изопропил, этил или метил. Предпочтительно низший алкил представляет собой метил или этил.

Циклоалкил предпочтительно имеет 3-7 кольцевых атомов и может быть незамещен или замещен, например, низшим алкилом или низшим алкокси. Циклоалкил представляет собой, например, циклогексил, циклопентил или метилциклопентил.

Арил представляет собой моно- или бициклическую сопряженную кольцевую ароматическую группу с 5-10 атомами углерода, такую как фенил, 1-нафтил или 2-нафтил, или также частично насыщенное бициклическое сопряженное кольцо, содержащее фенильную группу, такое как инданил, дигидро- или тетрагидронафтил.

Если представляет собой двухвалентный бензольный остаток и дополнительно содержит заместители, то они предпочтительно представляют собой низший алкил, низший алкокси, низший алкокси-низший алкокси, амино, необязательно замещенный одним или двумя заместителями, выбранными из низшего алкила, низшего алкенила и алкилкарбонила, метилендиокси, гало-низшего алкила, низшего алкокси-низшего алкила или галогена, более предпочтительно низшего алкила, низшего алкокси, низшего алкоксинизшего алкокси, метилендиокси, гало-низшего алкила, низшего алкокси-низшего алкила или галогена.

Двухвалентный бензольный остаток предпочтительно представляет собой 1,4-фенилен.

Гетероарил представляет собой ароматическую группу, содержащую по меньшей мере один гетероатом, выбранный из азота, кислорода и серы, и является моно- или бициклическим. Моноциклический гетероарил включает 5- или 6-членные гетероарильные группы, содержащие 1, 2, 3 или 4 гетероатома, выбранные из азота, серы и кислорода. Бициклический гетероарил включает 9- или 10-членные сопряженные кольцевые гетероарильные группы. Примеры гетероарила включают пирролил, тиенил, фурил, пиразолил, имидазолил, триазолил, оксазолил, изоксазолил, оксадиазолил, тиазолил, изотиазолил, тиадиазолил, пиридил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, бензосопряженные производные таких моноциклических гетероарильных групп, такие как индолил, бензимидазолил или бензофурил, хинолинил, изохинолинил, хиназолинил или пуринил.

Гетероциклил обозначает предпочтительно насыщенное, частично насыщенное или ненасыщенное моно- или бициклическое кольцо, содержащее 4-10 атомов, включающее один, два или три гетероатома, выбранных из азота, кислорода и серы, которое может, если специально не указано иначе, быть связано с атомом углерода или азота, где кольцевой атом азота необязательно может быть замещен группой, выбранной из низшего алкила, амино-низшего алкила, арила, арил-низшего алкила и ацила, и кольцевой атом углерода может быть замещен низшим алкилом, амино-низшим алкилом, арилом, арил-низшим алкилом, гетероарилом, низшим алкокси, гидрокси или оксо. Примерами гетероциклила являются пирролидинил, оксазолидинил, тиазолидинил, пиперидинил, морфолинил, пиперазинил, диоксоланил и тетрагидропиранил.

Ацил обозначает, например, низший-алкилкарбонил, циклогексилкарбонил, арилкарбонил, арилнизший алкилкарбонил, или гетероарилкарбонил. Ацил предпочтительно представляет собой низший алкилкарбонил, в частности пропионил или ацетил.

Гидрокси-низший алкил предпочтительно представляет собой гидроксиметил, 2-гидроксиэтил или 2-гидрокси-2-пропил.

Циано-низший алкил обозначает предпочтительно цианометил и цианоэтил.

Гало-низший алкил предпочтительно представляет собой фтор-низший алкил, в особенности трифторметил, 3,3,3-трифторэтил или пентафторэтил.

Галоген представляет собой фтор, хлор, бром или йод.

Низший алкокси в особенности представляет собой метокси, этокси, изопропилокси или третбутилокси.

Соли главным образом представляют собой фармацевтически приемлемые соли. Такие соли образуются, например, в качестве солей присоединения кислот, предпочтительно с органическими или неорганическими кислотами, из соединений формулы (II) с основным атомом азота. Подходящие неорганические соли представляют собой, например, галогеновые кислоты, такие как соляная кислота, серная кислота или фосфорная кислота. Подходящие органические кислоты представляют собой, например, карбоновые, фосфоновые, сульфоновые или сульфаминовые кислоты, например уксусную кислоту, пропионовую кислоту, октановую кислоту, декановую кислоту, додекановую кислоту, гликолевую кислоту, молочную кислоту, фумаровую кислоту, янтарную кислоту, адипиновую кислоту, пимелиновую

- 4 021380 лочную кислоту, фумаровую кислоту, янтарную кислоту, адипиновую кислоту, пимелиновую кислоту, субериновую кислоту, азелаиновую кислоту, яблочную кислоту, винную кислоту, лимонную кислоту, аминокислоты, такие как глутаминовая кислота или аспарагиновая кислота, малеиновую кислоту, гидроксималеиновую кислоту, метилмалеиновую кислоту, циклогексанкарбоновую кислоту, адамантанкарбоновую кислоту, бензойную кислоту, салициловую кислоту, 4-аминосалициловую кислоту, фталевую кислоту, фенилуксусную кислоту, миндальную кислоту, коричную кислоту, метан- или этан-сульфоновую кислоту, 2-гидроксиэтансульфоновую кислоту, этан-1,2-дисульфоновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту, 2-нафталинсульфоновую кислоту, 1,5-нафталиндисульфоновую кислоту, 2-, 3- или 4метилбензолсульфоновую кислоту, метилсерную кислоту, этилсерную кислоту, додецилсерную кислоту, Ν-циклогексилсульфаминовую кислоту, Ν-метил-, Ν-этил- или Ν-пропилсульфаминовую кислоту или другие органические протонные кислоты, такие как аскорбиновая кислота.

Для выделения или очистки также представляется возможным использовать фармацевтически неприемлемые соли, например пикраты или перхлораты. Для терапевтического применения применяются только фармацевтически приемлемые соли или свободные соединения (если применяются в форме фармацевтических препаратов), и они, таким образом, являются предпочтительными.

Учитывая тесную взаимосвязь между новыми соединениями в свободной форме и соединениями в форме их солей, включая те соли, которые можно использовать в качестве промежуточных соединений, например, для очистки или идентификации новых соединений, любая ссылка на свободные соединения ранее в настоящем изобретении и в дальнейшем подразумевается как также относящаяся к соответствующим солям, в соответствующих случаях и средствах.

Соединения формулы (II) могут применяться аналогичным образом, как и соответствующие исходные лекарственные средства. Таким образом, изобретение также относится к соединениям формулы (II), как определено выше, для применения в качестве лекарственных средств, в частности для лечения опухолевого заболевания, аутоиммунного заболевания, патологии, связанной с трансплантацией, и/или дегенеративного заболевания, в частности для лечения солидного опухолевого заболевания.

Соединения формулы (II) в соответствии с изобретением проявляют терапевтическую эффективность, в особенности по отношению к опухолевым заболеваниям и аутоиммунным заболеваниям. В частности, соединения в соответствии с изобретением активные по отношению к злокачественным новообразованиям, например эпителиальным опухолям, плоскоклеточным опухолям, опухолям базальных клеток, папилломам переходных клеток и карциномам, аденомам и аденокарциномам, опухолям яичников и придатков кожи, мукоэпидермоидным опухолям, кистозным опухолям, слизеобразующим и серозным опухолям, протоковым, дольковым и медуллярным опухолям, опухолям ацинарных клеток, комплексным эпителиальным опухолям, специфическим гонадным опухолям, параганглиомам и гломусным опухолям, родинкам и меланомам, опухолям мягких тканей и саркомам, фиброматозным опухолям, миксоматозным опухолям, липоматозным опухолям, миоматозным опухолям, комплексным смешанным и стромальным опухолям, фиброэпителиальным опухолям, синовиальноподобным опухолям, мезотелиальным опухолям, опухолям стволовых клеток, трофобластическим опухолям, мезонефромам, опухолям кровеносных сосудов, опухолям лимфатических сосудов, костным и хонроматозным опухолям, гигантоклеточным опухолям, различным костным опухолям, одонтогенным опухолям, глиомам, нейроэпителиоматозным опухолям, менингиомам, шванномам, зернистоклеточным опухолям и альвеолярным саркомам мягких тканей, ходжкинским и неходжкинским лимфомам, другим лимфоретикулярным опухолям, плазмоцитомам, опухолям тучных клеток, иммунопролиферативным заболеваниям, лейкозам, различным миелопролиферативным нарушениям, лимфопролиферативным нарушениям и миелодиспластическим синдромам.

В частности, соединение формулы (II) в соответствии с изобретением проявляет терапевтическую эффективность в особенности по отношению к солидным опухолевым заболеваниям, например эпителиальным опухолям, плоскоклеточным опухолям, опухолям базальных клеток, папилломам переходных клеток и карциномам, аденомам и аденокарциномам, опухолям яичников и придатков кожи, мукоэпидермоидным опухолям, кистозным опухолям, слизеобразующим и серозным опухолям, протоковым, дольковым и медуллярным опухолям, опухолям ацинарных клеток, комплексным эпителиальным опухолям, специфическим гонадным опухолям, параганглиомам и гломусным опухолям, родинкам и меланомам, опухолям мягких тканей и саркомам, фиброматозным опухолям, миксоматозным опухолям, липоматозным опухолям, миоматозным опухолям, комплексным смешанным и стромальным опухолям, фиброэпителиальным опухолям, синовиальноподобным опухолям, мезотелиальным опухолям, опухолям стволовых клеток, трофобластическим опухолям, мезонефромам, опухолям кровеносных сосудов, опухолям лимфатических сосудов, костным и хондроматозным опухолям, гигантоклеточным опухолям, различным костным опухолям, одонтогенным опухолям, глиомам, нейроэпителиоматозным опухолям, менингиомам, шванномам, зернистоклеточным опухолям и альвеолярным саркомам мягких тканей.

Соединения в соответствии с изобретением также являются активными по отношению к аутоиммунным заболеваниям, например по отношению к системной, дискоидной или подострой кожной красной волчанке, ревматоидному артриту, антифосфолипидному синдрому, СКБ8Т, прогрессирующему системному склерозу, смешанному заболеванию соединительной ткани (синдром Шарпа), синдрому Рей- 5 021380 тера, ювенильному артриту, болезни холодовых агглютининов, наследственной криоглобулинемии смешанного типа, ревматической атаке, анкилозирующему спондилиту, хроническому полиартиту, тяжелой миастении, рассеянному склерозу, хронической воспалительной демиелинизирующей полинейропатии, острому идиопатическому полиневриту, дерматомиозиту/полимиозиту, аутоиммунной гемолитической анемии, тромбоцитопенической пурпуре, нейтропении, сахарному диабету I типа, тиреоидиту (включая тиреоидит Хашимота и диффузный тиреотоксический зоб), болезни Аддисона, полигландулярному синдрому, пузырчатке (обыкновенной, эксфолиативной, себорейной и вегетирующей), буллезному и рубцевому пемфигоиду, пемфигоиду беременных, тоническому буллезному эпидермолизу, 1§А-зависимому линейному дерматозу, склеротическому атрофическому лишаю, болезни Дюринга, обыкновенному псориазу, каплевидному, генерализированному пустулезному и локализированному пустулезному псориазу, витилиго, гнездной алопеции, первичному биллиарному циррозу, аутоиммунному гепатиту, всем формам гломерулонефрита, легочной геморрагии (синдрому Гудпасчера), 1дА нефропатии, пернициозной анемии и аутоиммунному гастриту, воспалительному заболеванию кишечника (включая язвенный колит и болезнь Крона), синдрому Бехчета, целиакии-спру, аутоиммунному увеиту, аутоиммунному миокардиту, гранулематозному орхиту, асперматогенезу без орхита, идиопатическому и вторичному фиброзу легких, воспалительным заболеваниям с возможностями аутоиммунного патогенеза, таким как гангренозная пиодермия, красный лишай, саркоидоз (включая Лофгрена и кожного/подкожного типа), анулярной гранульомы, аллергической иммунологической реакции I и IV типа, бронхиальной астмы, сенного насморка, атопического, контактного и воздушно-капельного дерматита, васкулита крупных сосудов (гигантоклеточного и Такаясу артериита), васкулита сосудов среднего диаметра (нодозного полиартериита, болезни Кавасаки), васкулита мелких сосудов (гранулематоза Вегенера, синдрома Черга-Страусс, микроскопического полангиита, пурпуры Шенлейна-Г еноха, наследственного криоглобулинемического васкулита, кожного лейкокластического ангиита), гиперчувствительности, токсического эпидермального некролиза (синдрома Стивенса-Джонсона, многоформной эритемы), заболеваний вследствие побочных действий лекарственных средств, всех форм кожных, органоспецифических и системных эффектов вследствие типа Ι-νΐ (классификация Кумбса) иммунологических форм реакции, патологий, связанных с трансплантацией, таких как острая и хроническая реакция трансплантат против хозяина и хозяин против трансплантата, включая все органы (кожу, сердце, почки, костный мозг, глаза, печень, селезенку, легкие, мышцы, центральную и периферическую нервную систему, соединительную ткань, кости, кровеносный и лимфатические сосуды, мочеполовую систему, ухо, хрящи, первичную и вторичную лимфатическую систему, включая костный мозг, лимфатические узлы, тимус, желудочно-кишечный тракт, включая ротоглотку, пищевод, желудок, тонкий кишечник, ободочную кишку и прямую кишку, включая части вышеуказанных органов вплоть до уровня и субструктур единичной клетки, например стволовые клетки).

Соединение формулы (II) можно вводить отдельно или в комбинации с одним или несколькими другими терапевтическими средствами, возможна комбинированная терапия в форме смешанных комбинаций, или введение соединения в соответствии с изобретением и одного или нескольких других терапевтических средств ступенчато или независимо друг от друга, или комбинированное введение фиксированных комбинаций и одного или нескольких других терапевтических средств. Соединение формулы (II) может, кроме того или дополнительно, вводиться в особенности для лечения опухолей в комбинации с химиотерапией, лучевой терапией, иммунотерапией, хирургическим вмешательством или комбинацией этих методов. Также возможно длительная терапия в качестве адъювантной терапии в контексте других терапевтических стратегий, как описано выше. Другими возможными лечениями является терапия для поддержания состояния пациента после регрессии опухоли или даже хемопревентивная терапия, например, у пациентов в группе риска. Особенно предпочтительным является применение соединений формулы (II) в комбинации с лучевой терапией.

Терапевтические агенты для возможных комбинаций представляют собой в особенности одно или несколько цитостатических или цитотоксических соединений, например химиотерапевтическое средство или несколько средств, выбранных из группы, включающей идарубицин, цитарабин, интерферон, гидроксимочевину, бисульфан или ингибитор биосинтеза полиамина, ингибитор протеинкиназы, в особенности серин/треонин протеинкиназы, такой как протеинкиназы С, или тирозин-протеинкиназы, такой как тирозинкиназа рецептора фактора роста эпидермиса, цитокин, отрицательный регулятор роста, такой как ΤΟΡ-β или ΓΡΝ-β, ингибитор ароматазы, классический цитостатик, ингибитор взаимодействия §Н2 домена с фосфорилированным белком, ингибитор Вс1-2 и модуляторы представителей Вс1-2 семейства, такие как Вах, Βίά, Ваф В1ш, Νίρ3 и ВНЗ-только белки.

Соединение в соответствии с изобретением применяется не только для (профилактического и предпочтительно терапевтического) лечения людей, но также и для лечения других теплокровных животных, например коммерчески используемых животных, например грызунов, таких как мыши, кролики или крысы или морские свинки. Такое соединение также может использоваться в качестве образца для сравнения, предоставляющего возможность сравнения с другими соединениями.

Краткое описание фигур

На фиг. 1 представлено сравнение противоопухолевой активности лизин-полекарства в соответствии с примером 1 и соответствующего исходного лекарственного средства в ксенотрансплантатах 8А480

- 6 021380 рака ободочной и прямой кишки после внутривенного введения один раз в неделю.

На фиг. 2 представлено сравнение противоопухолевой активности указанных соединений в ксенотрансплантатах 8^480 рака ободочной и прямой кишки после внутривенного введения три раза в неделю.

В группах предпочтительных соединений формулы (II), указанных в настоящей заявке далее, можно корректно использовать определения заместителей из общих определений, указанных в настоящей заявке ранее, например для замены более общих определений на более специфические определения или в особенности на определения, охарактеризованные как предпочтительные.

Специфический вариант осуществления изобретения представляет собой соединения формулы (II) как таковые, то есть не в форме соли. А именно, было обнаружено, что форма соли не является необходимой для обеспечения достаточной растворимости соединений в водной среде. Это представляет собой частный случай для соединения формулы (II), где К² представляет собой группу формулы

Эти соединения уже очень хорошо растворимы в водной среде, имеющей значение рН в диапазоне от 6,5 до 5.

Предпочтительными являются соединения формулы (II), где группа

представляет собой 1,4-фенилен.

Другой предпочтительной группой соединений формулы (II) являются соединения, в которых К¹ представляет собой водород или циано-низший алкил, в частности цианоэтил.

Дальнейшим особенно предпочтительным выбором соединений формулы (II) являются соединения формул

в особенности соединения формул

- 7 021380

Более предпочтительным является соединение, имеющее формулу

и его фармацевтически приемлемые соли, например гидрохлоридная соль.

Соединения в соответствии с изобретением могут быть получены с помощью способов, известных рег 8е, в частности способа, где соединение формулы (Ι-ΙΙ) где К¹ и группа

имеют значения, указанные в формуле (II), и где группа

необязательно может быть дополнительно замещена одним или двумя дополнительными заместителями, как определено выше, или производное такого соединения, включающее функциональные группы в защищенной форме, или его соль (1) ацилируют с аминокислотой формулы (III)

- 8 021380

О

Л^Р¹⁰ ноУ

ΗΝ> и

К (III) где К¹⁰ выбирают из водорода (С1у); метила (А1а) и защищенного аминобутила (Ьук) и

К¹¹ представляет собой подходящую аминозащитную группу, и (2) любые защитные группы в защищенном производном образованного соединения удаляют, получая соединение формулы (II), и, при необходимости, (3) указанное соединение формулы (II) превращают в соль, как описано выше, или соль соединения формулы (II) превращают в соответствующее свободное соединение формулы (II) или в другую соль, и/или смесь изомерных продуктов соединения разделяют на отдельные изомеры.

Ацилирование соединения формулы Ц-Н) с аминокислотой формулы (III) осуществляют с помощью способа, известного рег ке, обычно в присутствии подходящего полярного или диполярного апротонного растворителя, с охлаждением или нагреванием при необходимости, например при температуре в интервале от приблизительно -80°С до приблизительно +150°С, более предпочтительно от -30°С до +120°С, в особенности в интервале от приблизительно около 0°С до температуры флегмы используемого растворителя. Необязательно добавляют подходящее основание, в частности ароматическое основание, такое как пиридин или коллидин, или третичное аминовое основание, такое как триэтиламин или диизопропилэтиламин, или неорганическую основную соль, например карбонат калия или натрия.

Ацилирование можно осуществлять в условиях, используемых для образования амида, известных рег ке в химии пептидов, например с активирующими средствами для карбоксигруппы, такими как карбодиимиды, такие как Ν,Ν'-диэтил-, Ν,Ν'-дипропил-, Ν,Ν'-диизопропил-, Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид и ^(3-диметиламиноизопропил)-№-этилкарбодиимидгидрохлорид (ЕЭС), или с такими агентами, так 1-гидроксибензотриазол (НОВ!), гексафторфосфат бензотриазол-1-илокситрис(диметиламино)фосфония (ВОР), гексафторфосфат О-(7-аза-бензотриазол-1-ил)-П,^№,№-тетраметилурония (НАТИ), тетрафторборат 2-(2-оксо-1-(2Н)-пиридил)-1,1,3,3-тетраметилурония (ТРТИ), необязательно в присутствии подходящих оснований, катализаторов или сореагентов. Карбоксигруппа также может быть активирована в виде ацилгалогенида, предпочтительно в виде ацилхлорида, например, путем взаимодействия с тионилхлоридом или оксалилхлоридом, или в виде симметричного или асимметричного ангидрида, например, путем взаимодействия с галогеноформиатами, такими как этил хлорформиат, необязательно в присутствии подходящих оснований, катализаторов или сореагентов.

Если одна или несколько других функциональных групп, например карбокси, гидрокси или амино, являются или нуждаются в защите в соединении формулы Ц-Н) или (III), поскольку они могут принимать участие в реакции, то используют такие защитные группы, которые обычно используются при синтезе амидов, таких как, в частности, пептидных соединений, цефалоспоринов, пенициллинов, производных нуклеиновых кислот и сахаров, которые известны специалистам в данной области техники. Подходящие защитные группы для аминогрупп представляют собой, например, ΐ-бутил карбамат, бензил карбамат или 9-флуоренилметил карбамат.

Защитные группы могут уже присутствовать в предшественниках и должны защищать указанные функциональные группы от нежелательных вторичных реакций, таких как алкилирование, ацилирование, этерификация, эстерификация, окисление, сольволиз и сходных реакций. Характеристикой защитных групп является то, что они сами легко, то есть без нежелательных вторичных реакций, поддаются удалению обычно путем сольволиза, восстановления, фотолиза или также путем ферментативной активности, например, в условиях, аналогичных физиологическим условиям, и что они не присутствуют в конечных продуктах. Специалистам известно, или легко может быть установлено, какие защитные группы пригодны для реакций, указанных ранее в настоящей заявке и в дальнейшем.

Защита таких функциональных групп с помощью таких защитных групп, сами защитные группы и реакции их удаления описаны, например, в стандартных справочных пособиях по синтезу пептидов и в специальных учебниках для защитных групп, таких как ТЕЛУ. МсОт1е, РгоЮсПуе Сгоирк ίη Огдашс СЬет18йу, Р1епит Ргекк, Ьопбоп и №\ν Уогк 1973, в Мебюбеп бег огдаткскеп Скеппе (Методы органической химии), НоиЬеп-ХУеу1, 4-е изд., т. 15/Σ, Сеогд ТЫете Уег1ад, 8ЦШдаг1 1974, и в Т.У. Сгеепе, С.М. ХУи1к РгоЮсПуе Сгоирк ш Огдашс ЗуШкемк, ХУПеу, Νον Уогк, 2006.

На дополнительных стадиях способа, которые осуществляются при необходимости, функциональные группы исходных соединений, которые не должны принимать участие в реакции, могут находиться в незащищенной форме или могут быть защищены, например, с помощью одной или нескольких защитных групп, указанных ранее в настоящей заявке для защитных групп. После этого защитные группы полностью или частично удаляются в соответствии с одним из методов, описанных в настоящей заявке.

Соли соединения формулы (II) с солеобразующей группой могут быть приготовлены с помощью способа, известного рег ке. Следовательно, могут быть получены соли присоединения кислот соединений формулы (II) путем обработки с кислотой или с подходящим анионообменным реагентом.

- 9 021380

Солы обычно могут быть превращены в свободные соединения, например, для солей присоединения кислот путем обработки с подходящими щелочными агентами, например с карбонатами щелочных металлов, гидрокарбонатами щелочных металлов или гидроксидами щелочных металлов, обычно карбонатом калия или гидроксидом натрия.

Следует подчеркнуть, что реакции, аналогичные превращениям, указанным в данном разделе, также могут осуществляться на уровне подходящих промежуточных соединений.

Все стадии способов, описанных в настоящей заявке, могут осуществляться в известных условиях реакции, предпочтительно в тех, которые специфически указаны, при отсутствии или обычно в присутствии растворителей или разбавителей, предпочтительно таких, которые являются инертными для используемых реагентов и способны их растворять, при отсутствии или в присутствии катализаторов, конденсирующих средств или нейтрализирующих средств, например ионообменников, обычно катионообменников, например, в Н+ форме, в зависимости от типа реакции и/или реагентов при пониженной, нормальной или повышенной температуре, например в интервале от -100°С до приблизительно 190°С, предпочтительно от приблизительно -80°С до приблизительно 150°С, например от -80 до 60°С, от -20 до 40°С, при комнатной температуре или при температуре кипения используемого растворителя, при атмосферном давлении или в запечатанном сосуде, если это является подходящим, под давлением, и/или в инертной атмосфере, например, аргона или азота.

Соли могут присутствовать во всех исходных соединениях и промежуточных соединениях, если они содержат солеобразующие группы. Соли также могут присутствовать при осуществлении реакции таких соединений, при условии, что осуществление реакции при этом не нарушается.

На всех стадиях реакций изомерные смеси, которые встречаются, могут быть разделены на их отдельные изомеры, например диастереомеры или энантиомеры, или на любые смеси изомеров, например рацематы или диастереомерные смеси.

В предпочтительном варианте осуществления соединения формулы (II) приготавливают в соответствии с или аналогично способам и стадиям способов, описанных в примерах.

Соединения формулы (II), включая их соли, также могут быть представлены в форме гидратов или сольватов.

Исходные вещества формулы ^-Н) и (III) известны и либо являются коммерчески доступными или могут быть синтезированы аналогично или в соответствии со способами, которые известны в данной области техники. Приготовление соединений формулы ^-Н) описано, например, в \УО 2004/103994 и может быть осуществлено, например, в соответствии со следующей общей схемой реакции, где Ζ=ί'.Ή

Соединения формулы (II) также могут быть приготовлены, как показано для соответствующих ли- 10 021380 зин-амидных пролекарств на следующей схеме реакций, где СЬ/ обозначает бензилоксикарбонил, где 2=СН

Этот способ можно использовать не только для приготовления соединений согласно данной формуле (II), но благоприятно также можно использовать для приготовления пролекарственных амидов соединений формулы (I), как определено в \УО 2004/103994, со встречающейся в природе аминокислотой в целом, например пролекарственные амиды соединений формулы (Ι-ΙΙ), как определено выше, с указанными аминокислотами, то есть, например, с глицином, аланином, аргинином, аспарагином, аспарагиновой кислотой, цистеином, глутамином, глутаминовой кислотой, гистидином, изолейцином, лейцином, лизином, метонином, фенилаланином, пролином, серином, треонином, трипрофаном, тирозином или валином.

Таким образом, изобретение также относится к способу получения соединения формулы (II)

или его соли, который включает стадии:

(а) взаимодействия соединения формулы

с производным α-аминокислоты формулы О

НО—И—защищенная аминокислота в присутствии активирующего средства и необязательно в присутствии подходящих оснований, катализаторов или сореагентов, предпочтительно в присутствии гексафторфосфата О-(7-азабензотриазол-1ил)-Н,М,№,№-тетраметилурония (НАТИ) и 2,4,6-коллидина, получая соединение формулы

(Ь) взаимодействия продукта со стадии (а) с бромирующим средством, таким как бром или бромид

- 11 021380 меди, предпочтительно бромид меди, получая бром-соединение формулы

(с) взаимодействия указанного бром-соединения, полученного на стадии (Ь), с соединением формулы

в присутствии основания, например карбоната калия, получая соединение формулы

(ά) удаления любых присутствующих защитных групп из группы защищенная аминокислота, получая соединение формулы (II) и, необязательно, (е) превращения указанного соединения формулы (II) в его соль, где в формулах К¹ и

имеют одно из значений, указанных в настоящей заявке выше, защищенная аминокислота представляет собой остаток, имеющий происхождение из указанной α-аминокислоты, выбранной из глицина, аланина и лизина, первичные аминогруппы защищены защитной группой путем удаления карбоксильной группы из α-углеродного атома указанной аминокислоты.

Подходящие защитные группы известны специалистам в данной области техники и описаны, например, в Рго1ес11ме Огоирк ίη Огдашс §уи1Ьек15. Третье изд., ред. ТЬеойога Огееие и Ре1ег О.М. \УШ5. 1оЬи \УПеу & 8оик, Ыете Уогк. 1999. χχί + 779 рр. 16x24 ст. ЦБЫ 0-471-16019-9.

Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, которые содержат соединение формулы (II) в качестве активного компонента или ингредиента и которые можно использовать в особенности в качестве лекарственного средства, в частности для лечения заболеваний, указанных выше.

Особенно предпочтительными являются композиции для энтерального введения, такого как назальное, буккальное, ректальное или, в особенности, оральное введение, или для парентерального введения, такого как внутривенное, внутримышечное или подкожное введение, теплокровным животным, в особенности людям. Композиции включают активный ингредиент предпочтительно совместно с фармацевтически приемлемым носителем. Дозировка активного ингредиента зависит от заболевания, подвергаемого лечению, и от видов, возраста, веса тела и индивидуального состояния, индивидуальных фармакокинетических данных и способа введения.

Изобретение также относится к фармацевтическим композициям для применения в способе профилактического или в особенности терапевтического лечения организма человека или животного, в частности в способе лечения опухолевого заболевания, аутоиммунного заболевания, патологии, связанной с трансплантацией, и/или дегенеративного заболевания, в особенности тех, которые указаны выше.

Изобретение также относится к способам и к применениям соединений формулы (II) для приготовления фармацевтических препаратов, которые содержат соединения формулы (II) или их соли в качестве фармацевтически активного компонента.

Настоящее изобретение также относится к применению соединений формулы (II) в депо-системах в местной доставки лекарственного средства, таких как биоразлагаемые полимеры.

Также является предпочтительной фармацевтическая композиция для профилактического или в особенности терапевтического лечения опухолевого заболевания, аутоиммунного заболевания, патологии, связанной с трансплантацией, и/или дегенеративного заболевания у теплокровного животного, в

- 12 021380 особенности человека или млекопитающего, нуждающегося в таком лечении, которая содержит соединение формулы (II) в качестве активного компонента в количестве, которое является профилактически или в особенности терапевтически активным по отношению к указанным заболеваниям.

Фармацевтические композиции содержат от приблизительно 1 до приблизительно 95% активного ингредиента. Формы для однократного введения предпочтительно содержат от приблизительно 20 до приблизительно 90% активного ингредиента и формы, которые не предназначены для однократного введения, предпочтительно содержат от приблизительно 5 до приблизительно 20% активного ингредиента. Стандартные дозированные формы представляют собой, например, покрытые оболочкой таблетки и таблетки без оболочки, ампулы, флаконы, суппозитории или капсулы. Другими дозированными формами являются, например, мази, кремы, пасты, пены, настойки, губные помады, капли, спреи, дисперсии и др. Примерами являются капсулы, содержащие от приблизительно 0,01 до приблизительно 1,0 г активного ингредиента.

Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению приготавливают с помощью способа, известного рег 8е, например с помощью обычного смешивания, гранулирования, нанесения оболочки, растворения или процессов лиофилизации.

Особенно предпочтительным является применение растворов активного ингредиента, в особенности водных растворов, в частности изотонических водных растворов, которые, например, в случае лиофилизированных композиций, содержащих активный ингредиент отдельно или совместно с носителем, например маннитом, могут быть приготовлены перед использованием. Фармацевтические композиции могут стерилизоваться и/или могут содержать наполнители, например консерванты, стабилизаторы, смачивающие агенты и/или эмульсификаторы, солюбилизаторы, соли для регуляции осмотического давления и/или буферы, и приготавливают с помощью способа, известного рег 8е, например, путем общепринятых процессов растворения и лиофилизации. Указанные растворы или суспензии могут содержать агенты, повышающие вязкость, обычно натрий карбоксиметилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, декстран, поливинилпирролидон или желатины или также солюбилизаторы, например Т\уееп 80® (полиоксиэтилен(20)сорбитан моноолеат).

Приготовление препаратов для инъекций обычно осуществляют в стерильных условиях, таких как заполнение, например, в ампулы или флаконы и запечатывание контейнеров.

Подходящие носители в особенности представляют собой заполнители, такие как сахара, например лактоза, сахароза, маннит или сорбит, препараты целлюлозы и/или фосфаты кальция, например трикальцийфосфат или кальцийгидрофосфат, а также связующие, такие как крахмалы, например кукурузный, пшеничный, рисовый или картофельный крахмал, метилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, натрийкарбоксиметилцеллюлозу и/или поливинилпирролидон, и/или, при необходимости, дезинтеграторы, такие как вышеуказанные крахмалы, также карбоксиметилкрахмал, перекрестно-сшитый поливинилпирролидон, альгиновую кислоту или ее соль, такую как альгинат натрия. Дополнительные наполнители представляют собой в особенности стабилизаторы потока и замасливатели, например кремниевая кислота, тальк, стеариновая кислота или ее соли, такие как стеарат магния или кальция, и/или полиэтиленгликоль, или их производные.

Ядра таблеток могут быть покрыты подходящими, необязательно, кишечно-растворимыми оболочками путем применения, в частности, концентрированных растворов сахаров, которые могут содержать гуммиарабик, тальк, поливинилпирролидон, полиэтиленгликоль и/или диоксид титана, или растворов для нанесения покрытий в подходящих органических растворителях или смесях растворителей, или для приготовления кишечнорастворимых покрытий, растворов подходящих препаратов целлюлозы, таких как фталат ацетилцеллюлозы или фталат гидроксипропилметилцеллюлозы. Красители или пигменты можно добавлять к таблеткам или покрытиям для таблеток, например, для идентификации или для указания различных доз активного ингредиента.

Фармацевтические композиции для перорального введения также включают твердые капсулы, состоящие из желатина, а также мягкие, запечатанные капсулы, состоящие из желатина и пластификатора, такого как глицерин или сорбит. Твердые капсулы могут содержать активный ингредиент в форме гранул, например, в смеси с заполнителями, такими как кукурузный крахмал, связующие, и/или веществами, способствующими скольжению, такими как тальк или стеарат магния, и необязательно стабилизаторами. В мягких капсулах активный ингредиент предпочтительно растворен или суспендирован в подходящих жидких наполнителях, таких как жирные масла, парафиновое масло или жидкие полиэтиленгликоли или сложные эфиры жирных кислот и этилен- или пропиленгликоля, к которым могут быть добавлены стабилизаторы и детергенты, например типа сложного эфира жирной кислоты и полиоксиэтилен сорбитана.

Фармацевтические композиции, подходящие для ректального введения, представляют собой, например, суппозитории, которые состоят из комбинации активного ингредиента и основания суппозитория. Подходящими основаниями суппозиториев являются, например, природные или синтетические триглицериды, предельные углеводороды, полиэтиленгликоли или высшие алканолы.

Для парентерального введения чрезвычайно пригодны водные растворы активного ингредиента в водорастворимой форме, например водорастворимой соли, или водные суспензии для инъекций, которые

- 13 021380 содержат вещества, повышающие вязкость, например натрий карбоксиметилцеллюлозу, сорбит и/или декстран, и, при необходимости, стабилизаторы. Активный ингредиент, необязательно совместно с наполнителями, также может быть представлен в форме лиофилизата и может быть превращен в раствор перед парентеральным введением путем добавления подходящих растворителей.

Растворы, которые используются, например, для парентерального введения, также могут применяться в виде растворов для инфузии.

Предпочтительными консервантами являются, например, антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, или бактерицидные препараты, такие как сорбиновая кислота или бензойная кислота.

Соединения по изобретению могут использоваться в способе лечения опухолевого заболевания, аутоиммунного заболевания, патологии, связанной с трансплантацией, и/или дегенеративного заболевания, который включает введение соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли, где радикалы и символы имеют значения, как указано выше для формулы (II), в количестве, эффективном по отношению к указанному заболеванию, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении. Соединения формулы (II) могут вводиться как таковые или в особенности в форме фармацевтических композиций, профилактически или терапевтически, предпочтительно в количестве, эффективном по отношению к указанному заболеванию, теплокровному животному, например человеку, нуждающемуся в таком лечении. В случае индивидуума, имеющего вес тела около 70 кг, вводимая суточная доза составляет от приблизительно 0,01 до приблизительно 5 г, предпочтительно от приблизительно 0,05 до приблизительно 1,5 г соединения согласно настоящему изобретению.

Настоящее изобретение в особенности относится также к применению соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли, в особенности соединения формулы (II), которое, как указано, является предпочтительным, или его фармацевтически приемлемой соли, как таковых, или в форме фармацевтического препарата по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем для терапевтического и также профилактического лечения одного или нескольких заболеваний, указанных в настоящей заявке выше, в частности опухолевого заболевания, аутоиммунного заболевания, патологии, связанной с трансплантацией, и/или дегенеративного заболевания.

Предпочтительное дозируемое количество, состав и приготовление фармацевтических препаратов (лекарственных средств), которые будут использоваться в каждом конкретном случае, описаны выше.

Последующие примеры служат для иллюстрации изобретения, не ограничивая объем изобретения. Примеры

Сокращения: СЬ/ = бензилоксикарбонил, ЭРЕЛ = Ы^-диизопропил-Н-этиламин, ΌΜΑΡ = Ν,Νдиметиламинопиридин, ДМФА = Ν,Ν-диметилформамид, ДМСО = диметилсульфоксид, экв. = эквивалент, ЕИ = электрораспылительная ионизация, НАТИ = гексафторфосфат О-(7-азабензотриазол-1-ил)Ν,Ν,Ν',Ν'-тетраметилурония, ТГФ = тетрагидрофуран.

Все реагенты и растворители были обыкновенного качества и использовались без дополнительной очистки, если специально не указано иначе.

Указанные температуры представляли собой температуры наружных баней, если специально не указано иначе.

Масс-спектры (ЕИ-МС) записывали на спектрометре \Уа1егк Мктотакк Ζρ, спектрометре Уапап 1200Ь Риабгиро1е МС или спектрометре АД1еап1 1100 ЬС/ΜδΌ.

ЯМР спектры получали с помощью спектрометра Вгикег Ауапсе 400 МГц или спектрометра Уапап Мегсигу Р1ик 400 МГц, используя ДМСО-б₆, СЭСЕ, ацетон-б₆, ΤΌ^ΘΩ, Ό₂Θ в качестве растворителя. Химические сдвиги (δ) выражали в виде ч./млн.

Пример 1.

(А) Синтез 3-(4-{1-[2-(4-аминофенил)-2-оксоэтил]-1Н-бензоимидазол-2-ил}фуразан-3-иламино) пропионитрила

- 14 021380

Бензиловый эфир (4-ацетилфенил)карбаминовой кислоты

К перемешиваемому раствору 10 г 4-аминоацетофенона (74 ммоль, 1 экв.) в смеси 60 мл воды и 100 мл диоксана при 0°С добавляли 12,43 г ЫаНСО₃ (148 ммоль, 2 экв.) и 15,3 г бензилхлорформиата (85 ммоль, 1,15 экв., чистота 95%). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч и затем концентрировали при пониженном давлении для удаления диоксана. Суспензию разводили с помощью 70 мл воды и 150 мл этилацетата. Фазы разделяли и органический слой промывали с помощью 2x50 мл соляного раствора, высушивали над Ыа₂8О₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая 19,5 г продукта в виде твердого вещества. МС (Ε8Ι+): 270 [М+Н].

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) ч./млн: 10,18 (5, 1Н), 7,92-7,89 (т, 2Н), 7,61-7,58 (т, 2Н), 7,46-7,33 (т, 5Н), 5,18 (5, 2Н), 2,51 (5, 3Н).

Бензиловый эфир [4-(2-бромацетил)фенил]карбаминовой кислоты

Смесь 18,5 г бензилового эфира (4-ацетилфенил)карбаминовой кислоты (95%, 65,3 ммоль, 1 экв.) и 30,7 г СиВг₂ (138 ммоль, 2,1 экв.) в 740 мл этанола нагревали в колбе с обратным холодильником в течение 2 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь фильтровали и остаток промывали с помощью 2000 мл этилацетата. Кислотные (рН <1) объединенные фильтраты этанола и этилацетата доводили до рН 5 путем добавления водного 1н. раствора ЫаОН. После этого добавляли 200 мл воды. Органическую фазу отделяли, промывали с помощью 3x200 мл соляного раствора, высушивали над №-ь8О₄. фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая 23,78 г неочищенного продукта в виде твердого вещества, который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. МС (Ε8Ι+): 348+350 [М+Н].

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) ч./млн: 10,26 (5, 1Н), 8,00-7,90 (т, 2Н), 7,65-7,59 (т, 2Н), 7,46-7,34 (т,

- 15 021380

5Н), 5,19 (5, 2Н), 4,84 (5, 2Н).

(1Н-Бензоимидазол-2-ил)гидроксииминоацетонитрил

К охлажденному на льду перемешиваемому раствору 10 г 2-бензимидазолилацетонитрила (63,6 ммоль, 1 экв.) в 50 мл ледяной уксусной кислоты добавляли по каплям раствор 4,83 г нитрита натрия (70 ммоль, 1,1 экв.), растворенный в небольшом количестве воды (10 мл). После завершения добавления реакционной смеси позволяли перемешиваться при комнатной температуре в течение 1 ч. Осадок, образованный при осуществлении реакции, фильтровали и промывали с помощью 2x20 мл охлажденной воды и 2x30 мл простого диэтилового эфира, получая 11,8 г продукта в виде светло-желтого твердого вещества. МС (Ε8Ι+): 187 [М+Н].

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) ч./млн: 14,44 (широкий, 1Н), 13,15 (5, 1Н), 7,80-7,20 (т, 4Н).

4-(1Н-Бензоимидазол-2-ил)фуразан-3 -иламин

К охлажденному на льду перемешиваемому раствору 13,2 г гидрохлорида гидроксиламина (190 ммоль, 3 экв.) в 20 мл воды медленно добавляли 15,3 г гидроксида калия (27,2 ммоль, 4,3 экв.). После этого добавляли 60 мл диглима (диэтиленгликоль диметиловый эфир) и 11,8 г (1Н-бензоимидазол-2-ил)гидроксииминоацетонитрила (63,4 ммоль, 1 экв.). Ледяную баню удаляли и реакционную смесь нагревали в колбе с обратным холодильником в течение 8 ч (температура бани 170°С). После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали и остаток промывали водой, получая первую порцию желательного продукта (6,2 г). Фильтрат обрабатывали с помощью 150 мл воды. Полученную суспензию фильтровали и промывали водой, получая вторую порцию продукта (2,17 г). Обе порции объединяли и использовали на следующей стадии. МС (Ε8Ι+): 202 [М+Н].

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) ч./млн: 13,7 (широкий, 1Н), 7,78 (широкий, 2Н), 7,35-7,32 (т, 2Н), 6,84 (5, 2Н).

3-[4-(1Н-Бензоимидазол-2-ил)фуразан-3 -иламино]пропионитрил

К охлажденному на льду перемешиваемому раствору 18,2 г 4-(1Н-бензоимидазол-2-ил)фуразан-3иламина (90,5 ммоль, 1 экв.) в 240 мл пиридина добавляли 30 мл раствора метилата натрия (30% в МеОН) (163 ммоль, 1,8 экв.) и после этого 6 мл акрилонитрила (90,5 ммоль, 1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, затем ее концентрировали при пониженном давлении. Остаток суспендировали в 250 мл воды и экстрагировали с помощью 4x400 мл этилацетата. Объединенные органические слои промывали с помощью 2x500 мл соляного раствора, высушивали над Ыа₂8О₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт растворяли приблизительно в 1000 мл дефлегмированного этилацетата. После этого к раствору добавляли 1700 мл нгексана. Полученной мутной смеси позволяли отстаиваться при комнатной температуре в течение ночи и образованный осадок фильтровали, получая 11,1 г продукта в виде светло-желтого твердого вещества. Фильтрат концентрировали насухо при пониженном давлении и остаток суспендировали в 100 мл 1/1 смеси н-гексан/этилацетат. Суспензию фильтровали, получая 4,7 г дополнительного продукта. МС (Ε8Ι+): 255 [М+Н].

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) ч./млн: 13,75 (широкий, 1Н), 7,81 (широкий, 1Н), 7,61 (широкий, 1Н), 7,37-7,34 (т, 2Н), 7,21 (1, 1Н, 1=6 Гц), 3,68 (ф 2Н, 1=6 Гц), 2,94 (1, 2Н, 1=6 Гц).

Бензиловый эфир [4-(2-{2-[4-(2-цианоэтиламино)фуразан-3-ил]бензоимидазол-1-ил}ацетил)фенил] карбаминовой кислоты

- 16 021380

К перемешиваемому раствору 11,1 г 3-[4-(1Н-бензоимидазол-2-ил)фуразан-3-иламино]пропионитрила (95%, 41,5 ммоль, 1 экв.) в 90 мл Ν,Ν-диметилформамида добавляли 7,84 г карбоната калия (56,8 ммоль, 1,3 экв.), после этого добавляли 23,25 г бензилового эфира [4-(2-бромацетил)фенил]карбаминовой кислоты (75%, 50,1 ммоль, 1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. После этого добавляли 700 мл воды и полученную суспензию экстрагировали с помощью 3x800 мл этилацетата. Объединенные органические слои промывали водой и солевым раствором, высушивали над Ν;·ι₂8Ο₄. фильтровали и концентрировали, получая неочищенный продукт в виде темнокоричневого твердого вещества. Этот неочищенный продукт суспендировали в 150 мл смеси 2/1 этилацетат/метанол. При осуществлении фильтрации получали 12,63 г желательного продукта в виде светлокоричневого порошка. МС (Ε8Ι+): 522 [М+Н].

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) ч./млн: 10,33 (к, 1Н), 8,09 (ά, 2Н, 1=9 Гц), 7,91-7,82 (т, 2Н), 7,71 (б, 2Н, 1=9 Гц), 7,50-7,36 (т, 8Н), 6,33 (к, 2Н), 5,22 (к, 2Н), 3,70-3,65 (т, 2Н), 2,95 (1, 2Н, 1=6,5 Гц).

3-(4-{1-[2-(4-Аминофенил)-2-оксоэтил]-1Н-бензоимидазол-2-ил}фуразан-3-иламино)пропионитрил

К суспензии 6,4 г бензилового эфира [4-(2-{2-[4-(2-цианоэтиламино)фуразан-3-ил]бензоимидазол-1ил}ацетил)фенил]карбаминовой кислоты (12,3 ммоль, 1 экв.) в смеси 700 мл этилацетата и 500 мл метанола добавляли 1,3 г 10 % палладия на угле. Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч в атмосфере водорода (1 атм) при комнатной температуре. После этого ее фильтровали через целит и концентрировали при пониженном давлении, получая неочищенный продукт в виде светло-желтого твердого вещества, которое суспендировали в 60 мл смеси 7/5 этилацетат/метанол. При осуществлении фильтрации получали 3,5 г желательного продукта в виде не совсем белого твердого вещества. Фильтрат концентрировали и остаток обрабатывали, как описано выше, с помощью 5 мл смеси 7/5 этилацетат/метанол. При осуществлении фильтрации получали 0,45 г второй партии продукта. МС (Ε8Ι+): 388 [М+Н].

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) ч/млн: 7,89-7,87 (т, 1Н), 7,83-7,77 (т, 3Н), 7,47 (1, 1Н, 1=6 Гц), 7,427,38 (т, 2Н), 6,67-6,65 (т, 2Н), 6,28 (к, 2Н), 6,19 (к, 2Н), 3,70-3,66 (т, 2Н), 2,95 (1, 2Н, 1=6,5 Гц).

(В) Приготовление [4-(2-{2-[4-(2-цианоэтиламино)фуразан-3-ил]бензоимидазол-1-ил}ацетил)фенил]амид 8-2,6-диаминогексановой кислоты

- 17 021380

Бензиловый эфир §-{5-бензилоксикарбониламино-5-[4-(2-{2-[4-(2-цианоэтиламино)фуразан-3-ил] бензоимидазол-1-ил}ацетил)фенилкарбамоил]пентил}карбаминовой кислоты

Метод А.

К раствору 1,926 г М^-ди^-Ь-лизина (4,65 ммоль; 1,2 экв.) в 10 мл безводного Ν,Ν-диметилформамида при 0°С добавляли 0,862 г 4-метилморфолина (8,52 ммоль; 0,937 мл; 2,2 экв.) и 0,572 г этилхлорформиата (5,27 ммоль; 0,503 мл; 1,36 экв.) и смесь перемешивали при 0°С в течение 10 мин. После этого добавляли раствор 1,5 г 3-(4-{1-[2-(4-аминофенил)-2-оксоэтил]-1Н-бензоимидазол-2-ил}фуразан-3иламино)пропионитрила (3,87 ммоль; 1 экв.) в 10 мл безводного Ν,Ν-диметилформамида и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Превращение не завершалось, поэтому дополнительно добавляли 0,385 г М^-ди^-Ь-лизина (0,93 ммоль; 0,24 экв.) в небольшом количестве Ν,Νдиметилформамида и 0,172 г 4-метилморфолина (1,7 ммоль; 0,187 мл; 0,44 экв.) и 0,114 г этилхлорформиата (1,05 ммоль; 0,1 мл; 0,27 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После этого реакционную смесь разводили с помощью этилацетата и промывали с помощью 5% раствора лимонной кислоты и солевым раствором. Органический слой высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток промывали с помощью смеси дихлорметана и простого диизопропилового эфира и высушивали при пониженном давлении, получая 2,38 г продукта в виде не совсем белого твердого вещества. МС (Ε8Ι+): 784,5 [М+Н].

Ή-ЯМР (ДМСО-ά..) ч./млн: 10,5 (5, 1Н), 8,12 (ά, 1= 8,8 Гц, 2Н), 7,91-7,84 (т, 4Н), 7,66 (ά, 1= 7,5 Гц, 1Н), 7,48-7,26 (т, 14Н), 6,35 (5, 2Н), 5,06 (5, 2Н), 5,00 (5, 2Н), 4,21-4,15 (т, 1Н), 3,69 (ц, 1= 6,5 Гц, 2Н), 3,01-2,94 (т, 4Н), 1,80-1,65 (т, 2Н), 1,50-1,25 (т,4Н).

Метод В.

3,73 г N,N-ди-Ζ-^-лизина (9,0 ммоль; 1,2 экв.), 1,82 г 2,3,5-коллидина (15 ммоль; 1,95 мл; 2 экв.) и 5,7 г НАТИ (15 ммоль; 2 экв.) растворяли в 50 мл безводного Ν,Ν-диметилформамида и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. После этого добавляли раствор 2,9 г 3-(4-{1-[2-(4аминофенил)-2-оксоэтил]-1Н-бензоимидазол-2-ил}фуразан-3-иламино)пропионитрила (7,5 ммоль; 1 экв.) в 30 мл безводного Ν,Ν-диметилформамида и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 дней. Добавляли дополнительно 0,37 г НН-диАЕ-лизина (0,9 ммоль; 0,12 экв.) и смесь перемешивали в течение одного дня при комнатной температуре. Добавляли дополнительно 0,74 г Ν,Ν-,^-Ζ-Εлизина (1,8 ммоль; 0,24 экв.), 0,36 г 2,3,5-коллидина (3 ммоль; 0,39 мл; 0,4 экв.) и 1,14 г НАТИ (3 ммоль; 0,4 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение одного дня при комнатной температуре.

После этого реакционную смесь разводили с помощью этилацетата и промывали водой, 5% раствором лимонной кислоты и солевым раствором. Органический слой высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток промывали с помощью смеси циклогексан/дихлорметан/этилацетат 1/2/2 и после этого с помощью смеси дихлорметан/простой диизопро- 18 021380 пиловый эфир 1/1. После этого ее высушивали при пониженном давлении, получая 4,26 г продукта в виде не совсем белого твердого вещества.

[4-(2-{2-[4-(2-Цианоэтиламино)фуразан-3-ил]бензоимидазол-1-ил}ацетил)фенил]амид §-2,6-диаминогексановой кислоты и его гидрохлоридная соль (пример 1)

Раствор 4,77 г бензилового эфира 8-{5-бензилоксикарбониламино-5-[4-(2-{2-[4-(2-цианоэтиламино)фуразан-3-ил]бензоимидазол-1-ил}ацетил)фенилкарбамоил]пентил}карбаминовой кислоты (6,09 ммоль; 1 экв.) в смеси 200 мл ТГФ, 50 мл метанол и 3,5 мл 2н. соляной кислоты обрабатывали с помощью 0,129 г Рб/С (10%) и полученную смесь перемешивали в течение 5 ч при комнатной температуре в атмосфере водорода (1 атм). После этого катализатор удаляли путем фильтрации и растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали путем МО гель-хроматографии с водой/ ацетонитрилом 3/1 в качестве элюента, получая желательный продукт. Превращение в гидрохлоридную соль: продукт растворяли в смеси 50 мл диоксана и 20 мл метанола и обрабатывали с помощью 4 мл 4М раствора НС1 в диоксане. После этого растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток промывали с помощью смеси дихлорметана и простого диизопропилового эфира и высушивали при пониженном давлении, получая 1,59 г продукта в виде не совсем белого порошка. МС (Е§+): 516,4 [М+Н].

‘Н-ЯМР (ДМСО-б₆) ч./млн: 11,6 (5, 1Н), 8,51 (5, 3Н), 8,16 (б, I = 8,3 Гц, 2Н), 7,97-7,85 (т, 7Н), 7,457,39 (т, 3Н), 6,36 (5, 2Н), 4,19-4,17 (т, 1Н), 3,69 (φ I = 6,3 Гц, 2Н), 2,95 (ΐ, I = 6,3 Гц, 2Н), 2,81-2,79 (т, 2Н), 1,99-1,88 (т, 2Н), 1,65-1,61 (т, 2Н), 1,50-1,46 (т, 2Н).

Процедура II

Бензиловый эфир §-[5-(4-ацетилфенилкарбамоил)-5-бензилоксикарбониламинопентил]карбаминовой кислоты

- 19 021380

В колбе объемом 250 мл, оборудованной магнитной мешалкой, 5,0 г Ν,Ν'-дибензилоксикарбонил-Ьлизина (12,06 ммоль, 1,0 экв.), 9,17 г НАТИ (24,13 ммоль, 2,0 экв.) и 2,19 г 2,4,6-коллидина (18,10 ммоль, 1,5 экв.) растворяли в 70 мл Ν,Ν-диметилформамида, после этого добавляли 1,96 г 4-аминоацетофенона (14,48 ммоль, 1,2 экв.). Светло-желтую смесь перемешивали при 10°С в течение 18 ч. Реакционную смесь разводили с помощью 40 мл насыщенного водного раствора ΝΗ₄Ο. Белый осадок фильтровали и осадок на фильтре тщательно промывали водой и простым изопропиловым эфиром, получая 5,3 г желательного продукта в виде твердого вещества. МС (Ε8Ι+): 532,3 [М+Н].

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) ч./млн: 10,34 (5, 1Н), 7,90 (б, 1=8,8 Гц, 2Н), 7,71 (б, 1=8,8 Гц, 2Н), 7,58 (т, 1Н), 7,33-7,30 (т, 10Н), 7,20 (т, 1Н), 5,00 (5, 2Н), 4,95 (5, 2Н), 4,10 (т, 1Н), 2,96 (т, 2Н), 2,50 (5, 3Н), 1,71-1,27 (т, 6Н).

Бензиловый эфир 8-{5-бензилоксикарбониламино-5-[4-(2-бромацетил)фенилкарбамоил]пентил} карбаминовой кислоты

В колбе объемом 100 мл, оборудованной магнитной мешалкой, 0,5 г бензилового эфира 8-[5-(4ацетилфенилкарбамоил)-5-бензилоксикарбониламинопентил]карбаминовой кислоты (0,94 ммоль, 1,0 экв.) растворяли в 15 мл хлороформа и 15 мл этилацетата, после этого в колбу добавляли 0,53 г бромида меди (2,35 ммоль, 2,5 экв.). Темно-зеленую смесь перемешивали при 78°С в течение 6 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, разводили с помощью 40 мл дихлорметана и фильтровали. Фильтрат промывали с помощью 20 мл воды и фазы разделяли. Водную фазу два раза экстрагировали с помощью 10 мл дихлорметана. Объединенные органические фазы промывали с помощью солевого раствора, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали, получая неочищенный продукт, который очищали путем перекристаллизации из 3 мл толуола,.получая 350 мг желательного продукта в виде светложелтого твердого вещества.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) ч./млн: 10,39 (5, 1Н), 7,95 (б, 1=8,0 Гц, 2Н), 7,73 (б, 1=8,0 Гц, 2Н), 7,60 (т, 1Н), 7,39-7,20 (т, 10Н), 7,13 (т, 1Н), 5,00 (5, 2Н), 4,95 (5, 2Н), 4,81 (5, 2Н), 4,15 (т, 1Н), 2,97 (т, 2Н), 1,62-1,28 (т, 6Н).

Бензиловый эфир 8-{5-бензилоксикарбониламино-5-[4-(2-{2-[4-(2-цианоэтиламино)фуразан-3-ил] бензоимидазол-1-ил}ацетил)фенилкарбамоил]пентил}карбаминовой кислоты

В колбе объемом 50 мл, оборудованной магнитной мешалкой, 1,3 г бензилового эфира 8-{5бензилоксикарбониламино-5-[4-(2-бромацетил)фенилкарбамоил]пентил}карбаминовой кислоты (2,13 ммоль, 1,0 экв.) и 569 мг 3-[4-(1Н-бензоимидазол-2-ил)фуразан-3-иламино]пропионитрила (2,24 ммоль, 1,05 экв.) растворяли в 20 мл Ν,Ν-диметилформамида, после этого в колбу добавляли 441 мг карбоната калия (3,19 ммоль, 1,5 экв.) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной темпера- 20 021380 туре в течение 30 мин. После этого ее разводили с помощью 20 мл насыщенного водного раствора МН₄С1. Полученный осадок фильтровали и тщательно промывали водой и метанолом, получая 1,3 г желательного продукта в виде светло-желтого твердого вещества.

Следующие соединения получали аналогично вышеописанным методам либо в виде свободного основания или гидрохлоридной соли:

Структура		ЯМР	МС (Ε8Ι+)
	Пример 2	Ή-ЯМР (ДМСО-йб) част, на	459,2
Г	Аланин	млн: 8,11 (й, 2Н,7=9Гц), 7,92-7,84 (т, 4Н), 7,48-7,38 (т,	[М+Н]
ΗΝ	Изобретение	ЗН), 6,35 (а, 2Н), 3,69 (ч, 2Н, 7
		= 6,5 Гц), 3,49 (ч, 1Н, 7= 7 Гц),
ί Хн/		2,95 (1, 2Н, 7= 6,5 Гц), 1,25 (й,
ν'°		ЗН, 7= 7 Гц).
°Λ
ο
λ™,

О Οΐ	/Ν Г ΗΝ	Пример 3 Глицин НС1 соль Изобретение	Ή-ЯМР (ДМСО-йб) част, на млн: 11,14 (з, 1Н), 8,25 (8, ЗН), 8,16 (й, 2Н, 7 =8,5 Гц) 7,927,84 (т, 4Н), 7,48-7,40 (т, ЗН), 6,37 (5, 2Н), 3,92-3,87 (т, 2Н), 3,68 (ч, 2Н 7 = 6,5 Гц), 2,95 (I, 2Н, 7=6,5 Гц).	445,3 [М+Н]
-Ν Ν	Χν νθ
	х-	Λ
		\ 0 ^Η V ^νη₂

		Ζ/^Ν	Пример 4		574,4
		(	Триптофан	Ή-ЯМР (ДМСО-йб) част, на	[М+Н]
		>	НС1 соль	млн: 11,26(5, 1Н), 11,06(5,
		ΗΝ		1Н), 8,39 (8, 2Н), 8,15 (й, 2Н, 7
		Αν	Сравнение	= 8,5 Гц) 7,92-7,84 (т, 4Н), 7,72
и		4,-0		(й, 1Н, 7=7,8 Гц) 7,48-7,34 (т,
				4Н), 7,28 (8, 1Н), 7,10 (1, 1Н, 7
О				=7,6), 6,99 (1, 1Н, 7 = 7,5), 6,36 (з, 2Н), 4,35-4,27 (т, 1Н), 3,723,67 (т, 2Н), 3,50-3,30 (ю, 2Н),
		с° Η \ Ανη₂		2,96 (ΐ, 2Н, 7=6,5 Гц).
		Ху-ΝΗ
			Пример 5	Ή-ЯМР (ДМСО-йб) част, на	535,4
		<	Фенилаланин	млн: 11,28 (8, 1Н), 8,48(5	[М+Н]
			НС1 соль	широкий, ЗН), 8,14 (ά, 2Н, 3 =
		ΗΝ^?		8,8 Гц) 7,92-7,82 (т, 4Н), 7,48-
		Αν	Сравнение	7,38 (т, ЗН), 7,34 (8, ЗН), 7,34-
о			7,26 (т, 2Н), 6,35 (8, 2Н), 4,36
		Ν'°		(5 широкий, 1Н), 3,67 2Н, 3
				= 6,5 Гц), 3,28-3,13 (т, 2Н),
	X	Λ		2,95 (1, 2Н, 7=6,5 Гц).
		' ,0

		Η \
		Ανη₂
		Α
		А/

- 21 021380

		Пример 6	Ή-ЯМР (ДМСО-а_б) част, на	525,4
		ζ	Гистидин	млн: 11,66 (δ, 1Н), 9,07 (δ, 1Н),	[М+Н]
			НС1 соль	8,70 (з широкий, ЗН), 8,16 (ά,
	ΗΝ		2Н, 7= 8,5 Гц) 7,96-7,85 (ш,
	^Ν	/^Ν ν Α	Сравнение	4Н), 7,59 (з, 1Н), 7,48-7,40 (т,
и	X_		ЗН), 6,36 (δ, 2Н), 4,60-4,57 (т
^Ν	Ν°		1Н), 3,69 (я, 2Н, 7=6,5 Гц),
				3,48-3,32 (т, 2Н), 2,95 (1, 2Н,7
	Ο			= 6,5 Гц).
	Ν	ζ°
	Η	Ήνη₂
		/⁵¾.
	ΗΝ 1
		\^Ν
		X	Пример 7	'Н-ЯМР (ДМСО-а₆) част, на	502,4
		(	Аспарагин	млн: 11,07 (8, 1Н), 8,34 (з	[М+Н]
		\	НС1 соль	широкий, ЗН), 8,16 (ά, 2Н, 7 =
	ΗΝ		8,5 Гц) 7,92-7,85 (т, 4Н), 7,75
о	-Ν	Λ^Ν	Сравнение	(з, 1Н), 7,48-7,40 (т, ЗН), 7,31
X_		(з, 1Н), 6,36 (з, 2Н), 4,35-4,29
	''Ν	Ν°		(т, 1Н), 3,69 (я, 2Н, 7= 6,5 Гц),
				2,95 (ΐ, 2Н, 7=6,5 Гц), 2,92-
	Ο			2,73 (т, 2Н).
	Ν	0
	ΟΗ	Λ*ΝΗ,
η₂ν
		X	Пример 8	'Н-ЯМР (ДМСО-άί) част, на	516,4
		<	Глутамин	млн: 11,28 (з, 1Н), 8,45 (з	[М+Н]
		\	НС1 соль	широкий, ЗН), 8,18 (ά, 2Н, 7 =
	ΗΝ		8,8 Гц) 7,92-7,85 (т, 4Н), 7,51-
	_-Ν		Сравнение	7,40 (т, 4Н), 6,37 (з, 2Н), 4,16-
ί X	Χ_			4,09 (т, 1Н), 3,69 (я, 2Н, 7= 6,5
	Ν	Ν°		Гц), 2,95 (1, 2Н,7=6,5 Гц),
О:	Ο			2,34-2,28 (т, 2Н), 2,13-2,07 (т, 2Н).
	Ν-
		Ζ^ΝΗ2
0	ΝΗ₂

			Пример 9	'Н-ЯМР (ДМСО-ά,) част, на	544,3
		<	Аргинин	млн: 11,56(3, 1Н), 8,49 (з	[М+Н]
		)	НС1 соль	широкий, ЗН), 8,16 (а, 2Н, 7 =
		ΗΝ		8,5 Гц), 7,97-7,81 (т, 5Н), 7,47-
	Ήν —ν Α	Сравнение	7,38 (т, 4Н), 6,36 (з, 2Н), 4,25-
	>		4,19 (т, 1Н), 3,68 (я, 2Н, 7 = 6,5
	Ν°		Гц), 3,25-3,15 (т,2Н), 2,95(1,
				2Н,7 = 6,5 Гц), 1,94-1,85 (т,
				2Н), 1,64-1,55 (т, 2Н).
	/Л	Λ
		\ 0 ίΚ
	Ν^/	._/~^ΝΗί
Η₂Ν^
ΝΗ
		'/X	Пример 10	Ή-ЯМР (ДМСО-аб) част, на	475,4
		<	Серин	млн : 11,18 (з, 1Н), 8,35 (з	[М+Н]
		\	НС1 соль	широкий, 2-ЗН), 8,14 (а, 2Н, 7
	ΗΝ		= 8,5 Гц) 7,91-7,84 (т, 4Н),
	-Ν		Сравнение	7,47-7,39 (т, ЗН), 6,36 (з, 2Н),
Ο	X_			4,15-4,11 (т, 1Н), 3,97-3,87 (т,
	'Ν	Ν'°		2Н), 3,68 (я, 2Н, 7=6,5 Гц),
Οί	ο			2,95 (1, 2Н, 7=6,3 Гц).
	Ν-	ζ°
	Η	Ήνη,
		\ ΟΗ
		,Ν	Пример 11	Ή-ЯМР (ДМСО-а₆) част, на	501,2
			Лейцин	млн: 8,11 (а, 2Н, 7=8,9 Гц), 7,92-7,84 (т, 4Н), 7,46-7,39 (т,	[М+Н]
	ΗΝ	Сравнение	ЗН), 6,35 (з, 2Н), 3,69 (я, 2Н, 7
	-Ν	Λ*Ν Α		= 6,4 Гц), 3,40 (т, 1Н) 2,95 (ί,
0	X_		2Н, 7=6,5 Гц), 1,79 (т, 1Н),
Ν	Ν°		1,51 (т, 1Н), 1,37 (т, 1Н), 0,92
0=	Ο			(т, 6Н).
	Ν-	ζ°
	Η	ρ

- 22 021380

Пример 12. трет-Бутиловый эфир [(4-{2-[2-(4-аминофуразан-3-ил)бензоимидазол-1-ил]ацетил}фенилкарбамоил)метил] карбаминовой кислоты

К перемешиваемому раствору 0,06 г Ν-ВОС-глицина (СА8 4530-20-5) (0,34 ммоль; 1,2 экв.) в 1 мл Ν,Ν'-диметилформамида добавляли 0,16 г гексафторфосфата 2-(7-аза-1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3тетраметилурония (0,43 ммоль; 1,5 экв.) и 0,1 мл триэтиламина (0,71 ммоль; 2,5 экв.) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 0,5 ч при комнатной температуре добавляли раствор 0,1 г 2[2-(4-аминофуразан-3-ил)бензоимидазол-1-ил]-1-(4-аминофенил)этанона (СА8 798577-83-0) (0,28 ммоль; 1 экв.) в 1 мл Ν,Ν'-диметилформамида. Реакционный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. После этого к реакционному раствору добавляли раствор 0,03 г Ν-ВОС-глицина (0,17 ммоль; 0,6 экв.), содержащий 0,08 г гексафторфосфата 2-(7-аза-1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3тетраметилурония (НАТИ) (0,22 ммоль; 0,75 экв.) и 0,05 мл триэтиламина (0,35 ммоль; 1,25 экв.) в 0,5 мл Ν,Ν'-диметилформамида при комнатной температуре. Аналогичную смесь снова добавляли через дополнительные 24 ч и дополнительные 8 ч. После этого реакционную смесь дополнительно перемешивали в течение 64 ч (общее время реакции 120 ч). Реакционную смесь разводили с помощью этилацетата (10 мл) и после этого промывали водой (10 мл), 10% водным раствором лимонной кислоты (10 мл), солевым раствором (2x5 мл), высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали насухо, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт подвергали колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: этилацетат/циклогексан = 1/1 до 4/1). Полученный материал перекристаллизовывали из дихлорметана, получая 0,085 г желательного продукта в виде белого порошка.

МС (Ε8Ι+): 492,4 [М+Н].

' Н-ЯМР (ДМСО-б₆) ч./млн: 10,40 (5, 1Н), 8,12 (ά, 1 = 8,8 Гц, 2Н), 7,88 (б, 1 = 7,6 Гц, 2Н), 7,82 (б, 1 = 8,8 Гц; 2Н), 7,40 (т, 2Н), 7,11 (ΐ, 1 = 6,0 Гц), 7,00 (5, 2Н), 6,33 (5, 2Н), 3,79 (б, 1 = 6 Гц, 2Н), 1,41 (5, 9Н).

2-Амино-Л-(4-{2-[2-(4-аминофуразан-3-ил)бензоимидазол-1-ил]ацетил}фенил)ацетамид гидрохлоридная соль

К перемешиваемому раствору 0,045 г трет-бутилового эфира [(4-{2-[2-(4-аминофуразан-3-ил)бензоимидазол-1-ил]ацетил}фенилкарбамоил)метил]карбаминовой кислоты (0,09 ммоль; 1 экв.) в 0,5 мл 1,4диоксана добавляли по каплям 0,11 мл 4М раствора НС1 в 1,4-диоксане (0,44 ммоль; 5 экв.) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. После этого добавляли 5 мл простого диизопропилового эфира и полученную суспензию фильтровали, промывали с помощью простого диизопропилового эфира (2x2 мл) и высушивали при пониженном давлении, получая 0,04 г неочищенного материала. Неочищенное твердое вещество подвергали МС1 колоночной гель-хроматографии, элюируя с помощью смеси вода/ацетонитрил (85/15 до 70/30), содержащей 0,05% НС1, и получали 0,014 г желательного продукта в виде оранжевого порошка. МС (Ε8Ι+): 392,4 [М+Н].

‘Н-ЯМР (ДМСО-б₆) ч./млн: 11,21 (5, 1Н), 8,29 (Ьг.5., 3Н), 8,16 (б, 1 = 8,8 Гц, 2Н), 7,88 (б, 1 = 8,8 Гц, 2Н), 7,84 (т, 2Н), 7,41 (т, 2Н), 7,1-6,9 (т, 2Н), 6,36 (5, 2Н), 3,95 (т, 2Н).

Пример 13 (сравнение). 4-[1-(2-Триметилсиланилэтоксиметил)-1Н-бензоимидазол-2-ил]фуразан-3иламин

- 23 021380

К перемешиваемой суспензии 0,5 г 4-(1Н-бензоимидазол-2-ил)фуразан-3-иламина (СЛ8 332026-865) (2,49 ммоль; 1,0 экв.) в 15 мл безводного тетрагидрофурана, охлажденного до 0°С, порциями добавляли 0,075 г гидрида натрия (2,98 ммоль; 1,2 экв.). После перемешивания в течение 10 мин при 0-5°С полученный прозрачный раствор обрабатывали с помощью 0,54 мл 2-(триметилсилил)этоксиметилхлорида (2,91 ммоль; 1,17 экв.). Реакционный раствор перемешивали в течение 0,5 ч при 0-5°С и после этого разводили с помощью 30 мл этилацетата. Раствор промывали водой (20 мл) и солевым раствором (20 мл), высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали насухо. Маслянистый остаток растирали в порошок в простом диизопропиловом эфире (10 мл) и растворитель удаляли при пониженном давлении, получая 0,78 г желательного продукта в виде не совсем белого твердого вещества. МС (ΕΜ+): 332,4 [М+Н].

Ή-ЯМР (ДМСО-й₆) ч./млн: 8,01 (т, 2Н), 7,65-7,53 (т, 2Н), 7,13 (к, 2Н), 6,22 (к, 2Н), 3,72 (ΐ, 1 = 8,0 Гц, 2Н), 0,96 (ΐ, 1 = 8,0 Гц, 2Н), 0,01 (к, 9Н).

Бензиловый эфир ({4-[1 -(2-триметилсиланилэтоксиметил)-1Н-бензоимидазол-2-ил] фуразан-3 илкарбамоил}метил)карбаминовой кислоты

К перемешиваемой суспензии 1,42 г Ν-Ζ-глицина (СЛ8 1138-80-3) (6,65 ммоль; 2,9 экв.) в 4 мл дихлорметана добавляли по каплям 1,23 мл 1-хлор-Ц^2-триметил-1-пропениламина (9,17 ммоль; 4 экв.) при комнатной температуре. Полученный прозрачный раствор перемешивали в течение 1 ч и затем концентрировали насухо, получая соответствующий хлорангидрид в виде бесцветного масла. В запечатанной трубке перемешиваемый раствор 0,8 г 4-[1-(2-триметилсиланилэтоксиметил)-1Н-бензоимидазол-2ил]фуразан-3-иламина (2,29 ммоль; 1,0 экв.) в 10 мл тетрагидрофурана, охлажденного до 0-5°С, порциями обрабатывали с помощью 0,29 г гидрида натрия (11,5 ммоль; 5 экв.) и после этого с помощью раствора свежеприготовленного хлорангидрида в 5 мл тетрагидрофурана. После окончания добавления ледяную баню удаляли и крышку закрывали. Раствор нагревали до 70°С и перемешивали в течение 21 ч при этой температуре. Реакционной смеси позволяли охладиться до комнатной температуры и ее после этого разводили с помощью 40 мл этилацетата. Осторожно добавляли воду (30 мл) и два слоя разделяли. Органическую фазу промывали с помощью солевого раствора (2x20 мл), высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали насухо при пониженном давлении, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: этилацетат/циклогексан от 5/95 до 55/45), получая 0,57 г желательного продукта в виде белого твердого вещества. МС (Ε8Σ+): 523,4 [М+Н].

Ή-ЯМР (ДМСО-й₆) ч./млн: 11,76 (к, 1Н), 8,29 (ΐ, 1 = 5,6 Гц, 1Н), 7,89 (ά, 1 = 8,2 Гц, 2Н), 7,78 (ά, 1 = 8,2 Гц, 2Н), 7,53-7,29 (т, 5Н), 6,08 (к, 2Н), 5,08 (к, 2Н), 4,02 (1 = 5,6 Гц, 2Н), 3,59 (ΐ, 1 = 8,0 Гц, 2Н), 0,84 (ΐ, 1 = 8,0 Гц, 2Н), 0,01 (к, 9Н).

Бензиловый эфир {[4-(1Н-бензоимидазол-2-ил)фуразан-3-илкарбамоил]метил}карбаминовой кислоты

- 24 021380

0,55 г бензилового эфира ({4-[1-(2-триметилсиланилэтоксиметил)-1Н-бензоимидазол-2-ил]фуразан3-илкарбамоил}метил)карбаминовой кислоты (1,00 ммоль; 1 экв.) порциями добавляли к 2,75 мл трифторуксусной кислоты (35,3 ммоль; 35 экв.) при комнатной температуре. Раствор перемешивали в течение 1 ч и затем концентрировали насухо при пониженном давлении. Остаток растворяли в 3 мл ТГФ. После этого добавляли 2 мл водного раствора 8% гидрокарбоната натрия. Полученную двухфазную смесь нагревали до 50°С и интенсивно перемешивали в течение 1,5 ч. После этого смесь разводили с помощью 10 мл этилацетата и 5 мл воды и органический слой отделяли, промывали с помощью солевого раствора (5 мл), высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали насухо при пониженном давлении, получая 0,4 г желательного продукта в виде белого твердого вещества. МС (Е5!+): 393,3 [М+Н].

Ή-ЯМР (ДМСО-й₆) ч./млн: 11,65 (з, 1Н), 8,26 (ΐ, 1 = 6,0 Гц, 1Н), 7,67 (й, 1 = 8,0 Гц, 2Н), 7,38-7,30 (т, 7Н), 5,10 (з, 2Н), 4,04 (й, 1 = 6,0 Гц, 2Н).

Бензиловый эфир [4-(2-{2-[4-(2-бензилоксикарбониламиноацетиламино)фуразан-3-ил]бензоимидазол-1-ил}ацетил)фенил]карбаминовой кислоты

К перемешиваемому раствору 0,4 г бензилового эфира {[4-(1Н-бензоимидазол-2-ил)фуразан-3илкарбамоил]метил}карбаминовой кислоты (0,97 ммоль, 1 экв.) в 6 мл Ν,Ν'-диметилформамида добавляли 0,2 г карбоната калия (1,4 ммоль; 1,45 экв.) при комнатной температуре после этого добавляли 0,41 г бензилового эфира [4-(2-бромацетил)фенил]карбаминовой кислоты (СЛ8 157014-41-0) (1,16 ммоль; 1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре и ее после этого разводили с помощью 20 мл этилацетата. Раствор промывали водой (2x10 мл) и солевым раствором (2x10 мл), высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали насухо при пониженном давлении. Остаток после этого растворяли в горячем этилацетате (2 мл) и раствор помещали на ледяную баню. Через 0,5 ч полученную суспензию фильтровали и твердое вещество промывали с помощью холодного этилацетата (1 мл), получая 0,2 г желательного продукта в виде белого порошка. МС (ЕМ+): 660,5 [М+Н].

Ή-ЯМР (ДМСО-й₆) ч./млн: 11,80 (з, 1Н), 10,35 (з, 1Н), 8,34 (ΐ, 1 = 4,6 Гц, 1Н), 8,11 (й, 1 = 8,0 Гц, 2Н), 7,80 (т, 2Н), 7,73 (й, 1 = 8,0 Гц, 2Н), 7,50-7,32 (т, 12Н), 6,38 (з, 2Н), 5,23 (з, 2Н), 5,12 (з, 2Н), 4,06 (й, 1 = 4,6 Гц, 2Н).

2-Амино-Ы-(4-{1-[2-(4-аминофенил)-2-оксоэтил]-1Н-бензоимидазол-2-ил}фуразан-3-ил)ацетамид гидрохлоридная соль

- 25 021380

Смесь 0,2 г бензилового эфира [4-(2-{2-[4-(2-бензилоксикарбониламиноацетиламино)фуразан-3ил]бензоимидазол-1-ил}ацетил)фенил]карбаминовой кислоты (0,29 ммоль; 1 экв.) в 2 мл тетрагидрофурана и 2 мл метанола, содержащего 0,19 мл раствор 4М НС1 в 1,4-диоксане (0,86 ммоль; 3 экв.) и 0,046 г 10% Рб/С (0,04 ммоль; 0,14 экв.) перемешивали в течение 7 ч в атмосфере водорода при комнатной температуре. После этого смесь фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток суспендировали в 2 мл смеси дихлорметан/простой диизопропиловый эфир (1/1, об./об.) и суспензию фильтровали. Твердое вещество промывали с помощью 2 мл простого диизопропилового эфира и высушивали при пониженном давлении, получая неочищенный продукт. Твердое вещество очищали с помощью МО колоночной гель-хроматографии (элюент вода/ацетонитрил от 75/25 до 65/35, содержащий 0,1% НС1), получая 0,02 г желательного продукта в виде светло-коричневого порошка. МС (ΕδΗ): 392,3 [М+Н].

‘Н-ЯМР (ДМСО-б₆) ч./млн: 11,29 (5, 1Н), 8,46 (Ьг.5., 3Н), 7,95-7,83 (т, 4Н), 7,41 (т, 2Н), 6,98 (б, I = 8,4 Гц, 2Н), 6,22 (5, 2Н), 4,23 (т, 2Н).

Пример 14 (сравнение). Ы-[4-(2-{2-[4-(2-цианоэтиламино)фуразан-3-ил]бензоимидазол-1ил } ацетил) фенил] -Ν,Ν-диметилформамидин

Раствор 0,05 мл Ν,Ν-диизопропилэтиламина в 1 мл Ν,Ν-диметилформамида медленно добавляли к раствору 116 мг (0,3 ммоль) 3-(4-{1-[2-(4-аминофенил)-2-оксоэтил]-1Н-бензоимидазол-2-ил}фуразан-3иламино)пропионитрила и 459 мг (0,3 ммоль) оксихлорида фосфора в 3 мл Ν,Ν-диметилформамида при -10°С. После добавления смеси позволяли нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение трех дней. После этого добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония и реакционную смесь экстрагировали с помощью дихлорметана. Образовывался осадок в дихлорметановой фазе. Этот осадок собирали путем фильтрации, промывали водой и дихлорметаном и высушивали при пониженном давлении. Остаток растворяли в ацетонитриле и раствор добавляли к 2н. раствору гидроксида натрия в воде при 0°С. Полученное значение рН составляло приблизительно 11. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Образованный осадок собирали путем фильтрации, промывали водой и ацетонитрилом и высушивали при пониженном давлении, получая 89 мг желательного продукта. МС (ЕО+): 443,2 [М+Н].

‘Н-ЯМР (ДМСО-б₆) ч./млн: 8,00-7,97 (т, 3Н), 7,91-7,83 (т, 2Н), 7,49-7,38 (т, 3Н), 7,11 (б, I = 8,5 Гц, 2Н), 6,32 (5, 2Н), 3,69 (φ I = 6,5 Гц, 2Н), 3,09 (5, 3Н), 2,99 (5, 3Н), 2,95 (ΐ, I = 6,5 Гц, 2Н).

Пример 15 (сравнение). Натриевая соль [4-(2-{2-[4-(2-цианоэтиламино)фуразан-3ил]бензоимидазол-1-ил}ацетил)фенил]сульфаминовой кислоты

- 26 021380

мкл (0,75 ммоль) хлорсульфоновой кислоты добавляли по каплям к 603 мкл (7,5 ммоль) пиридина при охлаждении на бане лед/этанол. После перемешивания смеси в течение 1 ч добавляли 116 мг (0,3 ммоль) 3-(4-{1-[2-(4-аминофенил)-2-оксоэтил]-1Н-бензоимидазол-2-ил}фуразан-3-иламино)пропионитрила, растворенного в небольшом количестве пиридина, и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли водный 1н. раствор гидроксида натрия до тех пор, пока значение рН не достигало 10. После этого смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток обрабатывали водой и твердый продукт (143 мг) получали путем центрифугирования, последующего промывания водой и высушивания при пониженном давлении. МС (Ε3Ι+): 468,1 [М+Н].

‘Н-ЯМР (ДМСО-б₆) ч./млн: 8,89 (к, 1Н), 7,90-7,81 (т, 4Н), 7,49-7,37 (т, 3Н), 7,15 (б, 1 = 8,5 Гц, 2Н), 6,25 (к, 2Н), 3,69 (д, 1 = 6,5 Гц, 2Н), 2,95 (1, 1 = 6,5 Гц, 2Н).

Методы тестирования соединений в соответствии с изобретением

Определение кинетической растворимости.

Соединения, обеспечиваемые в виде 20 или 10 мМ маточных растворов в 100% ДМСО, разводили 1:40 в водном буфере до концентрации 0,5 или 0,25 мМ соответственно, с 2,5% остаточного ДМСО. Буфер рН 6,5 состоял из 0,05М 3-(Ы-морфолино)-2-гидроксипропансульфоновой кислоты (МОРЗО), доведенный до целевого значения рН с помощью ЫаОН. Буферы при рН 5 и рН 3 приготавливали из коммерчески доступных концентратов (Тт1гтко1®, Мегск). После этого образцы инкубировали при комнатной температуре в течение 6 ч при осторожном встряхивании, затем осуществляли вакуум-фильтрацию через планшет МиШЗсгееп БУ (Бигароге гидрофильная РУБР мембрана, размер пор 0,65 мкм, МПНроге). Фильтраты доводили до необходимого уровня с помощью 20% ацетонитрила и анализировали путем УФ-спектроскопии для получения области максимального поглощения и соответствующей длины волны. Концентрацию соединения в фильтрате рассчитывали, исходя из линейной части стандартной кривой, построенной используя 3-5 известных концентраций каждого образца в водном буфере, дополненном 20% ацетонитрилом.

Все пролекарства, производные аминокислот, проявляли улучшенную растворимость в воде по сравнению с исходным лекарственным средством. Наивысшая растворимость получена при рН 3 для всех пролекарств. При рН 5 и рН 6,5 лизиновое пролекарство проявляет наивысшую растворимость.

Пример	рН	С эфф (мкМ)
3 -(4-{ I -[2-(4-Амино-фенил)-2оксо-этил]-1 Н-бензоимидазол-2ил} -фуразан-3 -и ламино)пропионитрил Исходное лекарственное средство	6,5	<10
5,0	<10
3,0	<10
Ьеи Пример 11 Сравнение	6,5	20
5,0	37
3,0	189
А1а Пример 2	6,5	91
5,0	55
3,0	>200
О1у Пример 3	6,5	106
5,0	71
3,0	>200
Ьуз Пример 1	6,5	190
5,0	>200
3,0	>200

Фармакокинетические исследования в условиях ίη νίνο.

Соединения оценивали в условиях ίη νίνο после внутривенного введения самцам мышей ΝΜΚΙ, используя метод скрининга Уепа карНепа. Дозу 1 мг/кг соединения вводили в/в в виде болюса (5 мл/кг). Серийные образцы крови (40 мкл) отбирали после пункции подкожной вены и собирали в покрытых гепарином капиллярных трубках от двух мышей на временную точку до приема препарата через 5 мин, 15,

- 27 021380

30, 45 мин, 1 ч, 2, 4, 6, 8 и 24 ч после внутривенного введения.Образцы крови взвешивали и кровь закаливали в 300 мкл стоп-раствора, состоящего из ацетонитрила/воды (80:20) и внутреннего стандарта. Концентрацию соединения (пролекарства) и его исходного лекарственного средства в крови определяли, используя ЖХ-МС/МС анализ с пределом количественного определения от 4 до 40 нг/мл.

Расчет площади под кривой (АИС).

Среднее арифметическое концентраций плазма/кровь рассчитывали, используя ВЬЦ (ниже предела количественного определения) - значение нуля, при необходимости.

Среднее ΑΙΗ2)_Ηπν Площадь под кривой концентрация в крови [нг * ч/мл] время для среднего значения нормализовали (1 мг/кг) в/в введение от времени ноль до времени отбора последнего образца с концентрацией выше предела количественного определения.

Среднее АиС;„пу рассчитывали в соответствии с линейным правилом трапеции.

В исследовании мышам внутривенно вводили пролекарства в соответствии с изобретением, после этого определяли концентрацию лекарственного средства в крови. Для сравнения также тестировали амидные пролекарства на основе других природных аминокислот.

АИС значение является показателем для общей экспозиции животных к лекарственному средству.

Было обнаружено, что пролекарства, являющиеся производными лизина, глицина и аланина, обеспечивают по меньшей мере на 50% более высокие значения АИС исходного лекарственного средства относительно сравнительных пролекарств, основанных на химически наиболее близкородственных природных аминокислотах. Это удивительное повышение экспозиции исходного лекарственного средства после введения пролекарств в соответствии с изобретением является чрезвычайно неожиданным и непредсказуемым.

Аминокислота пролекарства	АЬ!С исходного лекарственного средства 3-(4-{1-[2-(4-амино-фенил)2-оксо-этил]-1 Н-бензоимидазол-2ил}-фуразан-3-иламино)пропионитрил Гнг ч/мл]
Ьу® (изобретение) Пример 1	1090
А1а (изобретение) Пример 2	1044
О1у (изобретение) Пример 3	1000

Тгр (сравнение) Пример 4	276
РЬе (сравнение) Пример 5	445
РН® (сравнение) Пример 6	598
Азп (сравнение) Пример 7	455
СЛп (сравнение) Пример 8	552
Аг§ (сравнение) Пример 9	660
8ег (сравнение) Пример 10	425
Ьеи (сравнение) Пример 11	680

После внутривенного введения примеров 14 и 15 мышам не было обнаружено существенных уровней исходного лекарственного средства 3-(4-{1-[2-(4-аминофенил)-2-оксоэтил]-1Н-бензоимидазол-2-ил} фуразан-3-иламино)пропионитрил.

Фармакокинетические исследования у мышей с ксенотрансплантатами.

Самок мышей СЭ-1 Νιι/Νιι. которым имплантировали клеточную линию 8А480 рака ободочной и прямой кишки человека, лечили либо с помощью исходного лекарственного средства, то есть 3-(4-{1-[2(4-аминофенил)-2-оксоэтил]-1Н-бензоимидазол-2-ил}фуразан-3-иламино)пропионитрил, или примера 1, то есть [4-(2-{2-[4-(2-цианоэтиламино)фуразан-3-ил]бензоимидазол-1-ил}ацетил)фенил]амид гидрохлоридная соль §-2,6-диамино гексановой кислоты, когда размер опухоли достигал приблизительно 150 мм³±10%. Мышей (33 на соединение) лечили в/в (5 мл/кг) один раз в неделю с помощью 10 мг/кг исходного лекарственного средства (наполнитель: ΝΜΡ 6,7%, δοϊυΐοΐ Н§15 10%, Κο1ίάοη12 8,3% в деминерализованной воде) или 24,5 мг/кг примера 1 (наполнитель: ацетат натрия в солевом растворе с|5 рН 5) в течение 2 недель. Вследствие потери веса тела >10% у некоторых животных объемы применения впоследствии уменьшали до 4 мл/кг, что приводило к дозам 8 мг/кг исходного лекарственного средства и 19,6 мг/кг примера 1 в течение последующей недели.

После 4-го применения (4-я неделя) отбирали трех мышей/точку отбора пробы из групп Исходное лекарственное средство и Пример 1 перед введением и через 5 мин, 15, 30, 45 мин, 1 ч, 1,5, 2, 4, 6 и 24 ч после введения. Кровь собирали путем сердечной пункции в К₃ЕЭТА пробирки, выдерживаемые на

- 28 021380 льду до центрифугирования при 4°С. Плазму хранили при -20°С. При вскрытии трупа опухоли удаляли и взвешивали. Опухоли хранили при -20°С. Образцы плазмы и опухоли анализировали путем ЖХ-МС/МС. Фармакокинетические параметры рассчитывали, используя ΝίηΝοηΓίη 5.2. Все результаты для примера 1 представляют свободное основание.

Результаты.

Продемонстрировано распределение опухоли для исходного лекарственного средства, вводимого как такового или в форме примера 1. Концентрации опухолей определяли уже во время отбора первого образца через 5 мин после введения. Соотношение опухоль/плазма составляло приблизительно 1. Не наблюдалось накопление в опухолях, поскольку концентрация в опухоли параллельна концентрации в плазме. Тем не менее, после введения примера 1 экспозиция опухолей для исходного лекарственного средства и примера 1 была почти в два раза длиннее (период полувыведения Т_1/2 8,3 и 9,6 ч) по сравнению с экспозицией после введения лекарственного средства (Т_1/2 5,4 ч).

Фармакокинетические параметры исходного лекарственного средства в плазме и ткани опухоли после в/в введения 8 мг/кг исходного лекарственного средства мышам с ксенотрансплантатами

	Плазма	Опухоли
С_тах (нг/мл)	11000	3210
АиСн,,, (нг.ч/мл)	44800	45500
Т,/₂(Ч)	3,2	5,4

Фармакокинетические параметры исходного лекарственного средства в плазме и ткани опухоли после в/в введения 19,6 мг/кг примера 1 мышам с ксенотрансплантатами

	Плазма	Опухоли
Стах (НГ/МЛ)	9290	5680
АиСьл (нг.ч/мл)	47400	56300
Т]/₂(ч)	6,8	8,3

Фармакокинетические параметры примера 1 в плазме и ткани опухоли после в/в введения 19,6 мг примера 1 мышам с ксенотрансплантатами

	Плазма	Опухоли
Стах (нг/мл)	81900	6010
АиС\|_ая (НГ.Ч/МЛ)	21100	29300
Τ ι/₂ (ч)	5,5	9,6

Исследования эффективности в условиях ίη νίνο.

В тесте использовали мышей, несущих 8\У480 ксенотрансплантаты рака ободочной и прямой кишки, и сравнивали противораковую эффективность и переносимость внутривенного (в/в) введения пролекарства в соответствии с примером 1 [4-(2-{2-[4-(2-цианоэтиламино)фуразан-3-ил]бензоимидазол-1-ил} ацетил)фенил]амид гидрохлоридная соль (8-2,6-диаминогексановой кислоты) и соответствующего исходного лекарственного средства (3-(4-{1-[2-(4-аминофенил)-2-оксоэтил]-1Н-бензоимидазол-2-ил}фуразан-3-иламино)пропионитрил) на уровне максимально переносимой дозы (МТЭ). Перед исследованием эффективности осуществляли определение МТЭ каждого соединения, вводимого один раз в неделю, шае мышам того же штамма, которые не несут опухолей. Введение 24,5 мг/кг пролекарства и 10 мг/кг исходного лекарственного средства, осуществляемое в виде в/в болюса один раз в неделю, приводит к потере массы тела >10% у нескольких животных в обеих группах. Таким образом, МТЭ у мышей, несущих опухоль, определяли как на 15-20% ниже, что приводило к дозам 21 мг/кг пролекарства и 8 мг/кг исходного лекарственного средства. Клетки рака ободочной и прямой кишки человека (8^480) вводили подкожно (4х 10⁶ клеток) в спину атимическим шае мышам в возрасте 4-8 недель. Объемы опухолей определяли путем измерения штангенциркулем длины (Ь) и ширины (1) опухоли в соответствии с формулой (Ьх1²)/2. Опухолям предоставляли возможность увеличиться до объема 200 мм (±10%) перед началом лечения. Пролекарство и исходное лекарственное средство вводили в/в в течение 24 дней либо один раз в неделю в дозе 21 и 8 мг/кг соответственно, или три раза в неделю (а 1/4/7) в дозе 7,1 и 2,7 мг/кг соответственно (обе схемы введения обеспечивают аналогичную общую недельную дозу). За объемом опухоли и весом тела наблюдали ежедневно.

Используя схему один раз в неделю (ср. фиг. 1), пролекарство проявляет конечное Т/С (соотношение объема опухоли в леченной группе относительно контрольной группы) в день 24 34% (р<0,001 относительно контролей) по сравнению с 45% для исходного лекарственного средства (р<0,001 относительно контролей). Используя схему три раза в неделю (ср. фиг. 2), пролекарство проявляет конечное Т/С (день 24) 26% (р<0,001 относительно контроля) по сравнению с 54% для исходного лекарственного средства (р=0,002 относительно контроля). Наблюдаемые изменения веса тела были незначительными во всех

- 29 021380 леченных группах. Тем не менее, одно животное в группе с исходным лекарственным средством (лечение три раза в неделю) умерло в день 10.

Введение пролекарства три раза в неделю обеспечивает существенно лучшую эффективность на модели ксенотрансплантата рака у мышей по сравнению с соответствующим введением исходного лекарственного средства (р< 0,05).

На фиг. 1 графически представлены изменения среднего объема опухоли во время лечения при использовании схемы введения, когда пролекарство и исходное лекарственное средство вводят один раз в неделю в течение 24 дней в дозах 21 и 8 мг/кг соответственно, с подходящими контрольными наполнителями (5 мл/кг), которые вводят по такой же схеме. Точки на графике представляют собой средние значения +/-СКО (п = 7-8 животных, каждому животному была привита одна опухоль).

На фиг. 2 графически представлены изменения среднего объема опухоли во время лечения при использовании схемы введения, когда пролекарство и исходное лекарственное средство вводят три раза в неделю (б 1/4/7) в течение 24 дней в дозах 7,1 и 2,7 мг/кг в 5 мл/кг соответственно, с подходящими контрольными наполнителями (5 мл/кг), которые вводят по такой же схеме. Точки на графике также представляют собой средние значения +/-СКО (п = 7-8 животных, каждому животному была привита одна опухоль).

Сравнение превращения пролекарство-лекарственное средство для пролекарства в соответствии с примером 12 (настоящее изобретение) и пролекарства в соответствии с примером 13 (сравнение) в цельной крови.

Процедура.

495 мкл свежей гепаринизированной крови крыс разбавляли с помощью 5 мкл 1 мг/мл ДМСО раствора аналита (пролекарство) при 37°С. Через ΐ = 0, 5, 15, 30, 60 и 120 мин образец крови отбирали и осаждали. Таким образом, к 50 мкл образцу крови или разбавленному образцу крови добавляли 150 мкл ацетонитрила, содержащего внутренний стандарт. Образцы центрифугировали и 20 мкл супернатанта инъецировали в ВЭЖХ систему для определения концентрации соединения (пролекарства и исходного лекарственного средства) путем ЖХ-МС/МС анализа.

Для калибровки готовили стандартную кривую с концентрацией соединения в диапазоне от 10 до 10000 нг/мл в свежегепаринизированной крови крыс. Таким образом, кровь разбавляли (2 мкл ДМСО раствора в 198 мкл свежей крови крыс) и осаждали, как неизвестные образцы.

Результаты.

Пролекарство 2-амино-И-(4-{2-[2-(4-аминофуразан-3-ил)бензоимидазол-1-ил]ацетил}фенил)ацетамид в соответствии с настоящим изобретением (пример 12) полностью превращается в его исходное лекарственное средство 2-[2-(4-аминофуразан-3-ил)бензоимидазол-1-ил]-1-(4-аминофенил)этанон в крови крыс через 120 мин, тогда как превращение региоизомера указанного пролекарства 2-амино-И-(4-{1[2-(4-аминофенил)-2-оксоэтил]-1Н-бензоимидазол-2-ил}фуразан-3-ил)ацетамида (пример 13) является значительно ниже (приблизительно 74% через 120 мин).

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы (II) представляет собой двухвалентный бензольный остаток, который незамещен или замещен одним или двумя дополнительными заместителями, независимо выбранными из низшего алкила, гало-низшего алкила, гидрокси-низшего алкила, низшего алкокси-низшего алкила, ацилокси-низшего алкила, гидрокси, низшего алкокси, гидрокси-низшего алкокси, низшего алкокси-низшего алкокси, низшего алкилкарбонилокси, амино, моно(низший алкил)амино, ди(низший алкил)амино, моно(низший алкенил)амино, ди(низший алкенил)амино, низшего алкоксикарбониламино, низшего алкилкарбониламино, низшего алкилкарбонила, карбокси, низшего алкоксикарбонила, циано, галогена и нитро;

К¹ представляет собой водород, низший алкилкарбонил, гидрокси-низший алкил или циано-низший алкил и

- 30 021380

К² представляет собой группу, выбранную из и где термин низший обозначает радикал, имеющий от 1 до 4 атомов углерода, причем данные радикалы являются линейными или разветвленными с одним или множественными разветвлениями;

или его фармацевтически приемлемые соли.
2. Соединение формулы (II) в соответствии с п.1, которое не представляет собой соль.
3. Соединение в соответствии с п.1 или 2, где представляет собой 1,4-фенилен.
4. Соединение в соответствии с любым из пп.1-3, где К¹ представляет собой водород или цианонизший алкил.
5. Соединение в соответствии с любым из пп.1-4, которое выбирают из соединений формул
6. Соединение в соответствии с любым из пп.1-5, где К¹ представляет собой цианоэтил.
7. Соединение в соответствии с п.5 или 6, выбранное из соединений формул

- 31 021380
8. Соединение в соответствии с п.2, имеющее формулу
9. Соединение в соответствии с п.1, которое представляет собой фармацевтически приемлемую соль соединения формулы
10. Соединение в соответствии с п.9, которое представляет собой гидрохлоридную соль.
11. Способ получения соединения формулы (II), как заявлено в любом из пп.1-10, или его фармацевтически приемлемой соли, включающий стадии, на которых:

(1) соединение формулы (ШП) где К¹ и группа имеют значения, указанные в п.1; или соединение, включающее функциональные группы в защищенной форме, или его соль ацилируют с аминокислотой формулы (III)

О

XX

НО где К¹⁰ выбирают из водорода (С1у), метила (А1а) и защищенного аминобутила (Ьу§) и К¹¹ представляет собой аминозащитную группу, и

- 32 021380 (2) любые защитные группы образованного соединения удаляют, получая соединение формулы (II) или его соль, и, при необходимости, (3) полученное соединение формулы (II) превращают в соль или полученную соль соединения формулы (II) превращают в соединение формулы (II).
12. Способ получения соединения формулы (II), как заявлено в любом из пп.1-10, или его фармацевтически приемлемой соли, который включает стадии:

(а) взаимодействия соединения формулы с производным α-аминокислоты, выбранным из глицина, аланина и лизина, указанное производное имеет формулу

О в присутствии активирующего средства и необязательно в присутствии подходящих оснований, катализаторов или сореагентов, получая соединение формулы

НО—¹¹—защищенная аминокислота (Ъ) взаимодействия продукта со стадии (а) с бромирующим средством, получая бром-соединение формулы (с) взаимодействия указанного бром-соединения, полученного на стадии (Ъ), с соединением формулы получая соединение формулы (б) удаления любых присутствующих защитных групп из группы защищенная аминокислота, получая соединение формулы (II), и, необязательно, (е) превращения указанного соединения формулы (II) в его соль, где в формулах

К¹ представляет собой водород, низший алкилкарбонил, гидрокси-низший алкил или циано-низший алкил, представляет собой двухвалентный бензольный остаток, который незамещен или замещен одним или двумя дополнительными заместителями, независимо выбранными из низшего алкила, гало-низшего

- 33 021380 алкила, гидрокси-низшего алкила, низшего алкокси-низшего алкила, ацилокси-низшего алкила, гидрокси, низшего алкокси, гидрокси-низшего алкокси, низшего алкокси-низшего алкокси, низшего алкилкарбонилокси, амино, моно(низший алкил)амино, ди(низший алкил)амино, моно(низший алкенил)амино, ди(низший алкенил)амино, низшего алкоксикарбониламино, низшего алкилкарбониламино, низшего алкилкарбонила, карбокси, низшего алкоксикарбонила, циано, галогена и нитро;

и где термин низший обозначает радикал, имеющий от 1 до 4 атомов углерода, причем данные радикалы являются линейными или разветвленными с одним или множественными разветвлениями;

защищенная аминокислота представляет собой остаток, имеющий происхождение из указанной α-аминокислоты, выбранной из глицина, аланина и лизина, первичные аминогруппы защищены защитной группой путем удаления карбоксильной группы из α-углеродного атома указанной аминокислоты.
13. Применение соединения в соответствии с любым из пп.1-10 в качестве лекарственного средства для лечения опухолевого заболевания, аутоиммунного заболевания, патологии, связанной с трансплантацией, и/или дегенеративного заболевания.
14. Применение соединения в соответствии с п.13 для лечения солидного опухолевого заболевания.
15. Фармацевтическая композиция для лечения опухолевого заболевания, аутоиммунного заболевания, патологии, связанной с трансплантацией, и/или дегенеративного заболевания, которая содержит соединение формулы (II) или его фармацевтически приемлемую соль, как заявлено в любом из пп.1-10, и фармацевтически приемлемый и инертный носитель.
16. Фармацевтическая композиция в соответствии с п.15 для лечения солидного опухолевого заболевания.
17. Фармацевтическая композиция в соответствии с п.15 или 16, которая представляет собой водный раствор.
18. Фармацевтическая композиция в соответствии с п.15 или 16, которая растворима в водном носителе.
19. Применения соединения формулы (II) в соответствии с любым из пп.1-10 или его фармацевтически приемлемой соли для приготовления фармацевтической композиции для лечения опухолевого заболевания, аутоиммунного заболевания, патологии, связанной с трансплантацией, и/или дегенеративного заболевания.
20. Применение в соответствии с п.19 для приготовления фармацевтической композиции для лечения солидного опухолевого заболевания.
21. Применение в соответствии с п.19 или 20 для приготовления фармацевтической композиции для парентерального введения.

Противоопухолевая активность пролекарства согласно примеру 1 относительно его исходного лекарственного средства в ксенотрансплантатах 8\У480 рака ободочной и прямой кишки после внутривенного введения один раз в неделю

- 34 021380

Противоопухолевая активность пролекарства согласно примеру 1 относительно его исходного лекарственного средства в ксенотрансплантатах 8\У480 рака ободочной и прямой кишки после внутривенного введения три раза в неделю