EA014230B1 - Замещенные бензимидазолы в качестве ингибиторов киназ - Google Patents

Abstract

В изобретении описаны новые бензимидазольные производные, композиции и способы ингибирования киназной активности, ассоциированной с онкогенезом, у человека или животного. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения и композиции обладают эффективностью в отношении ингибирования по меньшей мере одной сериновой/треониновой киназы или тирозинкиназного рецептора. Новые соединения и композиции можно применять индивидуально или в сочетании по меньшей мере с одним дополнительным агентом для лечения опосредуемого сериновой/треониновой киназой или тирозинкиназным рецептором заболевания, такого как рак.

Description

Настоящее изобретение относится к новым замещенным бензимидазольным производным, их таутомерам, стереоизомерам, полиморфам, сложным эфирам, метаболитам и пролекарствам, к фармацевтически приемлемым солям указанных соединений, их таутомерам, стереоизомерам, полиморфам, сложным эфирам, метаболитам и пролекарствам, к композициям, содержащим любой из указанных выше вариантов в сочетании с фармацевтически приемлемыми носителями, и к применению любого из вышеуказанных вариантов либо индивидуально, либо в сочетании по меньшей мере с одним дополнительным терапевтическим агентом для профилактики или лечения рака.

Краткое изложение сущности изобретения

Известны киназы, ассоциированные с онкогенезом, к которым относятся сериновые/треониновые киназы На! и тирозинкиназные рецепторы (НТК). Сериновые/треониновые киназы являются основными компонентами модуля пути передачи сигнала Нак/активируемой митогеном протеинкиназы (МАРК), который контролирует комплекс программ транскрипции в ответ на экзогенные клеточные стимулы. Гены На! кодируют высококонсервативные серин-треонинспецифические протеининазы, которые, как известно, связываются с онкогеном гак. Они являются частью пути трансдукции сигнала, который, вероятно, состоит из тирозинкиназных рецепторов, р21-гак, протеинкиназ На!, Мек1-(активатор ЕНК (внеклеточная регулируемая киназа) или МАРКК)-киназы и ЕКК-(МАРК)-киназы, которые, в конце концов, фосфорилируют факторы транскрипции. В этом пути киназы На! активируются Нак и фосфорилируют и активируют две изоформы киназы митогенактивируемой протеинкиназы (которую обозначают также как Мек1 и Мек2), которые представляют собой треониновые/тирозиновые киназы с двойной специфичностью. Обе изоформы Мек активируют активируемые митогеном киназы 1 и 2 (МАРК, которые называют также регулируемыми внеклеточным лигандом киназой 1 и 2 или Егк1 и Егк2). МАРК фосфорилируют целый ряд субстратов, включая факторы транскрипции, и в результате принимают участие в их программах транскрипции. Киназа На! оказывает влияние на Нак/МАРК-путь и регулирует несколько клеточных функций, таких как пролиферация, дифференцировка, выживание, онкогенная трансформация и апоптоз.

В исследованиях, в которых использовали понижающую регуляцию и доминантное ингибирование мутантов На! в клетках млекопитающих, а также в исследованиях, в которых применяли биохимические и генетические технологии для создания модельных организмов, продемонстрированы как важная роль, так и местоположение На! в целом ряде путей передачи сигналов. Во многих случаях активация На! рецепторами, которые симулируют фосфорилирование клеточного тирозина, зависит от активности Нак, что свидетельствует о том, что Нак осуществляет свою функцию до На! в пути передачи сигнала. После активации На!-1 фосфорилирует и активирует Мек1, что приводит к распространению сигнала на расположенные по его ходу эффекторы, такие как МАРК (активируемая митогеном протеинкиназа; Сге\\ъ и др., Се11 74, 1993, с. 215). Сериновые/треониновые киназы На! считаются первичными эффекторами Нак, которые участвуют в пролиферации клеток животных (Λνπιοίι и др., Тгепбк ВюсНеш. δει. 19, 1994, с. 279).

Киназа На! имеет три различные изоформы На!-1 (с-На!), А-На! и В-На!, которые различаются по их способности взаимодействовать с Нак, активировать путь киназы МАРК, их распределением в тканях и субклеточной локализацией (Мапак и др., ВюсНеш. 1. 351, 2000, с. 289-305; №ейег и др., Опсодепе 19, 2000, с. 169-176; Ргйсйагб и др., Мо1. Се11. Вю1. 75, 1995, с. 6430-6442). Активирующая мутация одного из генов Нак выявлена примерно в 20% всех опухолей, а активация Нак/Яа!/МЕК/ЕРК-пути выявлена примерно в 30% всех опухолей (Вок и др., Сапсег Нек. 49, 1989, с. 4682-4689; НокЫпо и др., Опсодепе 18, 1999, с. 813-822). В современных исследованиях установлено, что мутация В-На! в невусе кожи является имеющей решающее значение стадией в инициации меланоцитной неоплазии (Ро11оск и др., №1иге Сепейск 25, 2002, с. 1, 2). Кроме того, в исследованиях, проведенных в последние годы, установлено, что активирующая мутация в киназном домене В-На! присутствует примерно в 66% меланом, 12% карцином ободочной кишки и 14% случаев рака легкого (ЭдДек и др., Ыа1иге 417, 2002, с. 949-954; Уиеп и др., Сапсег Некеагсй 62, 2002, с. 6451-6455; Вгоке и др., Сапсег Некеагсй 62, 2002, с. 6997-7000).

Меланомы, которые продолжают оставаться важными заболеваниями, требующими медицинского вмешательства, представляют собой комплексное мультигенное заболевание с неблагоприятным прогнозом, прежде всего на прогрессирующей метастатической стадии. Активирующие соматические мутации проонкогена В-На! в настоящее время описаны как характерные для различных злокачественных заболеваний и наиболее часто встречаются при меланомах. Примерно в 70% случаев меланом происходит экспрессия мутантной и активированной формы В-На! (У600Е), что делает ее прекрасной мишенью для разработки лекарственных средств. Кроме того, в других 10-15% случаев меланом происходит экспрессия мутантной Ν-Нак, что дополнительно демонстрирует важность МАРК-пути для роста и выживания кле

- 1 014230 ток меланом. Ингибиторы Вак/ВаГ/МЕК/ЕВК-пути на уровне киназ ВаГ могут обладать эффективностью в качестве терапевтических агентов, предназначенных для лечения опухолей со сверхэкспрессирующимися и мутантными тирозинкиназными рецепторами, активированными внутриклеточными тирозинкиназами, опухолей с аномальной экспрессией СгЬ2 (белок-адаптер, который обеспечивает стимуляцию Вак посредством фактора обмена 8ок), а также опухолей, несущих активирующие мутации самой ВаГ. В проведенных ранее клинических опытах установлено, что ингибиторы киназы ВаГ-1, которые ингибируют также В-КаГ. являются перспективными в качестве терапевтических агентов для терапии рака (Сгитр, Ситгеи! Рйаттасеи1тса1 Эсшдп 8, 2002, с. 2243-2248; 8еЬак11еи и др., Ситгеи! Рйаттасеи11са1 Эеыди 8, 2002, с. 2249-2253).

Как было установлено, нарушение экспрессии КаГ в клеточных линиях, изученное с применением технологии антисмысловой РНК, подавляет как Вак-, так и ВаГ-опосредуемый онкогенез (Ко1сй и др., №Ц.1ге 349, 1991, с. 416-428; Моша и др., №11иге Мебюше 2(6), 1996, с. 668-675). Установлено также, что введение деактивирующих антител к киназе КаГ или коэкспрессия доминантно-негативной киназы КаГ или доминантно-негативной МЕК, являющейся субстратом киназы ВаГ, приводит к реверсии трансформированных клеток к нормальному фенотипу по признаку роста (см., Эаит и др., Тгеибк Вюсйет. 8с1, 19, 1994, с. 474-80; Рпбтаи и др., 1. Вю1. Сйет. 269, 1994, с. 30105-30108).

Описано несколько ингибиторов киназы ВаГ, которые обладают эффективностью в отношении ингибирования пролиферации опухолевых клеток в анализах ίη νίίτο и/или ίη νίνο (см., например, υδ 6391636, 6358932, 6037136, 5717100, 6458813, 6204467 и 6268391). В других патентах и заявках на патент предложено применение ингибиторов киназы ВаГ для лечения лейкоза (см., например, И8 6268391 и 6204467 и опубликованные заявки на патент США 20020137774; 20020082192; 20010016194 и 20010006975), или для лечения рака молочной железы (см., например, ϋδ 6358932, 5717100, 6458813, 6268391 и 6204467, и опубликованную заявку на патент США 20010014679).

В росте раковых клеток большую роль играет также ангиогенез. Известно, что, когда скопление (гнездо) раковых клеток достигает определенного размера, примерно 1-2 мм в диаметре, должна развиваться система поставки крови к раковым клеткам, необходимая для быстрого роста опухоли, поскольку диффузия оказывается недостаточной для поставки к раковым клеткам необходимого количества кислорода и питательных веществ. Таким образом, ингибирование ангиогенеза может ингибировать рост раковых клеток.

Тирозинкиназные рецепторы (ВТК) представляют собой трансмембранные полипептиды, которые регулируют рост и дифференцировку клеток, ремодулируя и регулируя ткань взрослого организма (Мик!оиеи Т. и др., 1. Се11 Вю1оду 129, 1995, с. 895-898; νаи бет Сеет Р. и др., Аии Веν. Се11 Вю1. 10, 1994, с. 251-337). Известно, что полипептидные лиганды, такие как факторы роста и цитокины, активируют ВТК. Путь передачи сигнала ВТК включает связывание лиганда и изменение конформации в наружном домене рецептора, что приводит к димеризации рецептора (ЬутЬоиккак1 А. Уакси1аг. Еибо1йейа1 Сго\\1й Рас1огк аиб 1йей Весер!огк ш ЕтЬгуок, АбиЙк, аиб ш Титогк, Асабетю Эккейайои, Ьшуегкйу оГ Не1кшк1, Мо1еси1аг/Саисег Вю1оду ЬайогаЮгу аиб Эерайтеи! оГ Ра1йо1оду, Наайтаи 1икй1и1е, 1999; И11йсй А. и др., Се11 61, 1990, с. 203-212). Связывание лиганда с ВТК приводит к трансфосфорилированию рецептора на определенных остатках тирозина и последующей активации каталитических доменов для фосфорилирования цитоплазматических субстратов (см. там же).

Для сосудистого эндотелия специфическими являются два подсемейства ВТК. К ним относятся подсемейство сосудистого эндотелиального фактора роста (УЕСР) и подсемейство Т1-рецептора. К классу V ВТК относятся УЕСРВ1 (РЬТ-Ι), УЕСРВ2 (КЭВ (человеческий), Р1к-1 (мышиный)) УЕСРВ3 (РЬТ4) (8й1Ьиуа М. и др., Оисодеие 5, 1990, с. 519-525; Тегтаи В. и др., Оисодеие 6, 1991, с. 1677-1683; АргеКкоуа О. и др., Саисег Век. 52, 1992, с. 746-748). Установлено, что представители подсемейства УЕСР обладают способностью индуцировать сосудистую проницаемость и пролиферацию эндотелиальных клеток, и они описаны также в качестве основного индуктора ангиогенеза и васкулогенеза (Реггага N. и др., Епбосппок Веу. 18, 1997, с. 4-25). Известно, что УЕСР специфически связывается с ВТК, в том числе РЬТ-Ι и Р1к-1 (ЭеУпек, С. и др., 8с1еисе 255, 1992, с. 989-991; Риши Т. и др., Ргос. №11. Асаб. 8ск, 90, 1993, с. 7533-1537). УЕСР стимулирует миграцию и пролиферацию эндотелиальных клеток и индуцирует ангиогенез как ш уйто, так и ш у|уо (Соинойу Ό. и др., 1. Вю1. Сйет. 264, 1989, с. 20017-20024; Соинойу Ό. и др., 1. Сйи. 1иуек1. 84, 1989, с. 1470-1478; Реггага N. и др., Еибоспио1. Веу. 18, 1997, с. 4-25; Ьеиид Ό. и др., 8с1еисе, 246, 1989, с. 1306-1309; Р1оие1 1. и др., ЕМВО 1. 5, 1989, с. 3801-3806).

Изучение различных систем культивируемых эндотелиальных клеток позволило установить, что УЕСРВ2 опосредует большинство передающихся по ходу передачи сигнала воздействий УЕСР на ангиогенез (\Уеу δ. и др., Сйшса1 Абуаисек ш Неша1о1оду аиб Оисо1оду, 2, 2004, с. 37-45). УЕСРВ2опосредуемая пролиферация эндотелиальных клеток, вероятно, включает активацию Вак/ВаГ/Мек/Егкпути (Уе1кко1а Т. и др., Саисег Век 60, 2000, с. 203-212). Экспрессия УЕСРВ2 обнаружена при меланоме, раке молочной железы, раке мочевого пузыря, раке легкого, раке щитовидной железы, раке предстательной железы и раке яичника (см. \Уеу и др., выше). Установлено, что нейтрализующие моноклональные антитела к УЕСРВ2 (КЭВ) обладают эффективностью в отношении блокады ангиогенеза опухолей (см. К1т и др., №11иге 362, 1993, с. 841; Воскете11 и др., Мо1. Се11 ЭйГет. 3, 1995, с. 315). Поскольку, как из

- 2 014230 вестно, ангиогенез имеет решающее значение для роста опухоли и может контролироваться УЕСЕ и УЕСЕ-КТК, предпринимались попытки создания соединений, ингибирующих и замедляющих ангиогенез и ингибирующих УЕ6Е-КТК.

Киназный рецептор тромбоцитарного фактора роста (ΡΌΟΕΚ) является другим типом КТК. Экспрессия ΡΌΟΕ обнаружена в некоторых различных типах плотных опухолей, от глиобластом и остеосарком до карцином предстательной железы. В этих различных типах опухолей биологическая роль передачи ΡΌΟΕ-сигнала может варьироваться от аутокринной стимуляции роста раковых клеток до более тонких паракринных взаимодействий, включая прилегающую строму и ангиогенез. ΡΌΟΕ взаимодействует с тирозинкиназными рецепторами ΡΌΟΕΚα и ΡΌΟΕΚβ. Таким образом, можно ожидать, что ингибирование киназной активности ΡΌΟΕΚ небольшими молекулами будет оказывать воздействие на рост и ангиогенез опухоли.

Киназные рецепторы фактора роста фибробластов (ΕΟΕΚ) представляют собой другой тип КТК. Факторы роста фибробластов относятся к семейству полипептидов факторов роста, которые принимают участие в различных видах активности, включая митогенез, ангиогенез и заживление ран. К ним относится семейство родственных, но имеющих индивидуальные различия, тирозинкиназных рецепторов, содержащих внеклеточный домен либо с 2, либо с 3 иммуноглобулин (1д)-подобными доменами, трансмембранный домен и цитоплазматический киназный домен. Идентифицированные рецепторы фактора роста фибробластов включают ΕΟΕΚ1 (Ки!а М. и др., Опсодепе 3, 1988, с. 9-15); ΕΟΕΚ2 (Эюппс С. и др., Су!одепе!. Се11 Сепе!. 60, 1992, с. 34-36); ΕΟΕΚ3 (Кеедап К. и др., Ρτο^ ΝηΙ. Асаб. 8с1. 88, 1991, с. 10951099) и ΕΟΕΚ4 (Ρа^ίапеп 1. и др., ЕМВО 1. 10, 1991, с. 1347-1354).

Освещена роль рецепторов факторов роста фибробластов, прежде всего ΕΟΕΚ3, при раке. Нарушение регуляции онкогенов путем транслокации в локус тяжелой цепи иммуноглобулина (1дН) 14с.]32 представляет собой инициирующий момент в патогенезе В-клеточных опухолей. При множественной миеломе транслокация в локус 1дН встречается в 20-60% случаев. Для большинства транслокаций хромосомапартнер является неизвестной; для других идентифицировано широкое разнообразие хромосомпартнеров, среди которых часто встречается только одна хромосома 11с.|13. Вегдзаде1 с соавторами идентифицировали незаконное переключение рекомбинации фрагментов (определенные как содержащие последовательности только из одной области переключения) в качестве потенциальных маркеров случаев транслокации в областях переключения 1дН в 15 из 21 линий миелом, включая 7 из 8 кариотипированных линий, которые имели выявляемую 14с.|32-транслокацию. Установлено, что эти точечные разрывы, затрагивающие 6 следующих локусов хромосомы: 4р16.3; 6; 8д24.13; Σ1η13.3; 16д23.1 и 2Ц22.1 (Вегдзаде1 и др., Ρτο^ №1. Асаб. 8с1. 93, 1996, с. 13931-13936, 1996; Сйез1 и др., №Шге Сепе!. 16, 1997, с. 260-264), образуют кариотипически молчащую транслокацию !(4; 14)(р16.3 ;с.]32.3) в 5 линиях клеток миелом и по меньшей мере в 3 из 10 первичных опухолей, ассоциированных с множественной миеломой, что приводит к повышенному уровню экспрессии и активации мутаций в ΕΟΕΚ3. Точечные разрывы на хромосоме-4 объединены в кластерную область, состоящую из 70 т.п.н., центромерную относительно ΕΟΕΚ3, который, вероятно, является онкогеном с нарушенной регуляцией. У двух линий миелом и одной первичной линии опухоли с указанной транслокацией избирательно экспрессируется аллель ΕΟΕΚ3, содержащий активирующие мутации, которые ранее идентифицированы при смертельной карликовости: 1уг373 на суз, 1уз650 на д1и и 1уз650 на те!. Для К650Е в экспериментах по трансфекции доказана конститутивная активация ΕΟΕΚ3 в отсутствии лиганда. Сйез1 с соавторами (1997) высказали предположение о том, что после !(4;14)-транслокации соматическая мутация при прогрессировании опухоли часто приводит к получению белка ΕΟΕΚ3, который обладает активностью в отсутствии лиганда.

Казтиззеп Т. и др. выявили частоту встречаемости от 3 до 24% !(4;14)-транслокации при множественной миеломе (Казтиззеп Т. и др., Вг. ί. Наета!о1. 117, 2002, с. 626-628, 2002). Существенно меньшая частота транслокации обнаружена у пациентов с моноклональной гаммапатией неустановленной этиологии (МОИ8), что позволяет предположить, что она играет роль в превращении МОИ8 в множественную миелому. !(4;14)-транслокация затрагивает 2 потенциальных онкогена: ΕΟΕΚ3 и постоянный домен множественной миеломы (ММ8ЕТ). Казтиззеп с соавторами (2002) определяли частоту нарушения регуляции ΕΟΕΚ3 и его предполагаемую роль при множественной миеломе. Они обнаружили нарушенную регуляция экспрессии ΕΟΕΚ3 в 16 из 110 (14,5%) образцах множественной миеломы костного мозга.

Кроме того, получены дополнительные данные, демонстрирующие роль ΕΟΕΚ3 при карциномах (Сарре11еп Ό. и др., (Ье!!ег) Ыа!иге Сепе!. 23, 1999, с. 18-20). Сарре11еп с соавторами обнаружили экспрессию конститутивно активируемого ΕΟΕΚ3 в большой части двух распространенных типов эпителиального рака, а именно мочевого пузыря и шейки матки. ΕΟΕΚ3, вероятно, является наиболее широко распространенным мутантным онкогеном при раке мочевого пузыря, являясь мутантным более чем в 30% случаев. ΕΟΕΚ3, вероятно, опосредует противоположные действия, проявляя активность в качестве отрицательного регулятора роста костной ткани и в качестве онкогена при некоторых типах опухоли. Все соматические миссенс-мутации ΕΟΕΚ3, выявленные при таких типах рака, оказались идентичны эмбриональным активирующим мутациям, которые вызывают смертельную дисплазию (указанные авторы сообщили, наличие такой эквивалентности в двух мутациях, поскольку изоформа ΕΟΕΚ36, экспрессируемая в эпителиальных клетках, содержит на 2 аминокислоты больше, чем изоформа ΕΟΕΚ3^ экспрессируемая в

- 3 014230 костной ткани). Из двух модификаций ЕСЕК3 в эпителиальных опухолях мутация 8249С оказалась наиболее широко распространенной, встречаясь в 5 из 9 случаев рака мочевого пузыря и в 3 из 3 случаев рака шейки матки.

Были получены также данные, свидетельствующие о том, что активированный ЕСЕК3 является мишенью для расщепления лизосомами посредством с-СЫ-опосредуемой убикитинизации и что активирующие мутации, обнаруженные у пациентов с ахондроплазией и родственными хондроплазиями, нарушают этот процесс, приводя к рециклизации активированных рецепторов и амплификации ЕСЕК3сигналов (Сйо и др., Ргос. №11. Асаб. 8с1. 101, 2004, с. 609-614). Сйо с соавторами высказали предположение о том, что этот механизм участвует в молекулярном патогенезе ахондроплазии и представляет собой потенциальную мишень для терапевтического вмешательства. Нарушение направленного переноса лизосом является аддитивным относительно других предполагаемых механизмов, предложенных для объяснения патогенеза ахондроплазии.

Другие результаты свидетельствуют о том, что ЕСЕК2 и ЕСЕК3 являются важными факторами онкогенеза (1апд ЕН. и др., Мшабопк ίη ПЬгоЫак! дго\\111 ГасЮг гсссрЮг 2 апб ПЬгоЫак! дго\\И1 ГасЮг гсссрЮг 3 депек аккоаа1еб \νί11ι йитап дакйтс апб со1огес1а1 сапсегк Сапсег Кек. 61(9), 2001, с. 3541-3543). С учетом их значения для множественной миеломы, рака мочевого пузыря и онкогенеза разработка ингибиторов тирозинкиназных рецепторов фактора роста фибробласта, прежде всего ингибиторов ЕСЕК2 и ЕСЕК3, должно иметь важное значение для лечения разных типов рака.

с-Κίΐ представляет собой другой тирозинкиназный рецептор, принадлежащий к семейству рецепторов РИСЕ, и он в норме экспрессируется в гематопоэтических клетках-предшественниках, тучных клетках и зародышевых клетках. Экспрессия с-кй обнаружена при нескольких типах рака, включая лейкоз тучных клеток, опухоли зародышевых клеток, мелкоклеточный рак легкого, опухоли, относящиеся к строме желудочно-кишечного тракта, острый миелолейкоз (ОМЛ), эритролейкоз, нейробластому, меланому, карциному яичника, карциному молочной железы (Нешпей М. С. и др., 1. Сйп. Опе. 20, 6, 2002, с. 1692-1703 (обзорная статья); 8тойсй В.Э. и др., В1ооб, 97, 5, с. 1413-1421).

Сверхэкспрессия С8Е-1К, рецептора колониестимулирующего фактора-1 (С8Е-1), обнаружена при некоторых человеческих карциномах, включая карциному молочной железы, яичника, эндометрия, легкого, почки, поджелудочных желез и предстательной железы (8ар1 Е., Ехр. Вю1. Меб 229, 2004, с. 1-11). С8Е-1К представляет собой тирозинкиназный рецептор, который при активации его лигандом С8Е-1 запускает пути трансдукции сигналов, контролирующих клеточную пролиферацию и дифференцировку. С8Е-1К экспрессируется в молочной железе при беременности и лактации. Аномальная экспрессия С8Е1К коррелировала с 58% всех случаев рака молочной железы и 85% случаев инвазивной карциномы молочной железы (см. 8ар1, выше).

Продолжает сохраняться потребность в соединениях, которые ингибируют пролиферацию капилляров, ингибируют рост опухолей, способствуют лечению рака, модулируют приостановку клеточного цикла и/или ингибируют одну или несколько таких молекул, как Как, КаГ, мутант В-КаГ, УЕСЕК2 (КОК, Е1к-1), ЕСЕК2/3, с-Κίΐ, РЭСЕКЗ, С8Е-1К, и фармацевтических композициях и лекарственных средствах, которые содержат такие соединения. Сохраняется также потребность в разработке способов введения таких соединений, фармацевтических композиций и лекарственных средств пациентам и индивидуумам, которые нуждаются в этом.

Краткое изложение сущности изобретения

Новые замещенные бензимидазольные производные представляют собой соединения формулы (I)

/ в которой К¹, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, С1-С6-алкил, С1-С6-алкоксигруппу, С1-С6-алкилсульфанил, С1-С6-алкилсульфонил, циклоалкил, гетероциклоалкил, фенил и гетероарил;

К² обозначает С1-С6-алкил или гало-С1-С6-алкил;

К³, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей галоген, С1-С₆-алкил и С₁С6-алкоксигруппу;

К⁴, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей гидроксигруппу, С₁-С₆алкил, С1-С₆-алкоксигруппу, галоген, карбоксил, С1-С₆-алкоксикарбонил, аминокарбонил, С₁-С₆алкиламинокарбонил, карбонитрил, циклоалкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилкарбонил, фенил и гетероарил;

где К¹, К², К³ и К⁴ необязательно могут быть замещены одним или несколькими заместителями, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, С1-С6-алкил, гало-С1-С6-алкил, С1-С6-алкоксигруппу и гало-С1-С6-алкоксигруппу;

а обозначает 1, 2, 3, 4 или 5;

- 4 014230

Ь обозначает 0, 1, 2 или 3 и с обозначает 1 или 2;

или их таутомеры, стереоизомеры, полиморфы, сложные эфиры, метаболиты или пролекарства либо фармацевтически приемлемые соли соединений, таутомеров, стереоизомеров, полиморфов, сложных эфиров, метаболитов или пролекарств.

В других вариантах осуществления изобретения новые замещенные бензимидазольные производные представляют собой соединения формулы (II)

в которой К¹, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей С₁-С₆-алкил, С₁С₆-алкоксигруппу, гидроксигруппу, галоген, С₁-С₆-алкилсульфанил, С₁-С₆-алкилсульфонил, циклоалкил, гетероциклоалкил, фенил и гетероарил;

К³, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей галоген, С₁-С₆-алкил и С₁С6-алкоксигруппу;

К⁴, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей гидроксигруппу, С₁-С₆алкил, С₁-С₆-алкоксигруппу, галоген, карбоксил, С₁-С₆-алкоксикарбонил, аминокарбонил, карбонитрил, циклоалкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилкарбонил, фенил и гетероарил;

где К¹, К², К³ и К⁴ необязательно могут быть замещены одним или несколькими заместителями, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, С₁-С₆-алкил и С₁С6-алкоксигруппу;

а обозначает 1, 2, 3, 4 или 5;

Ь обозначает 0, 1, 2 или 3 и с обозначает 1 или 2;

или их таутомеры, стереоизомеры, полиморфы, сложные эфиры, метаболиты или пролекарства либо фармацевтически приемлемые соли соединений, таутомеров, стереоизомеров, полиморфов, сложных эфиров, метаболитов или пролекарств.

В других вариантах осуществления изобретения новые замещенные бензимидазольные производные представляют собой соединения формулы (III)

ИзС (Щ) в которой К¹, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей С₁-С₆-алкил, С₁С₆-алкоксигруппу, гидроксигруппу, галоген, С₁-С₆-алкилсульфанил, С₁-С₆-алкилсульфонил, циклоалкил, гетероциклоалкил, фенил и гетероарил;

К⁴, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей гидроксигруппу, С1-С6алкил, С₁-С₆-алкоксигруппу, галоген, карбоксил, С₁-С₆-алкоксикарбонил, аминокарбонил, карбонитрил, циклоалкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилкарбонил, фенил и гетероарил;

где К¹ и К⁴ необязательно могут быть замещены одним или несколькими заместителями, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, С1-С6-алкил и С1-С6алкоксигруппу;

а обозначает 1, 2, 3, 4 или 5 и с обозначает 1 или 2;

или их таутомеры, стереоизомеры, полиморфы, сложные эфиры, метаболиты или пролекарства либо фармацевтически приемлемые соли соединений, таутомеров, стереоизомеров, полиморфов, сложных эфиров, метаболитов или пролекарств.

Изобретение относится также к соединениям формулы (IV)

в которой К¹, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей С₁-С₆-алкил, С₁С₆-алкоксигруппу, гидроксигруппу, галоген, С1-С₆-алкилсульфанил, С1-С₆-алкилсульфонил, циклоалкил, гетероциклоалкил, фенил и гетероарил;

- 5 014230

К² обозначает С₁-С₆-алкил или гало-С₁-С₆-алкил;

Я³, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей галоген, С₁-С₆-алкил и ДС₆-алкоксигруппу;

Я⁴, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей гидроксигруппу, С₁-С₆алкил, С₁-С₆-алкоксигруппу, галоген, карбоксил, С₁-С₆-алкоксикарбонил, аминокарбонил, С₁-С₆алкиламинокарбонил, карбонитрил, циклоалкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилкарбонил, фенил и гетероарил;

где Я¹, Я², Я³ и Я⁴ необязательно могут быть замещены одним или несколькими заместителями, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, С₁-С₆-алкил и С₁С6-алкоксигруппу;

а обозначает 1, 2, 3, 4 или 5;

Ь обозначает 0, 1, 2 или 3;

или их таутомеры, стереоизомеры, полиморфы, сложные эфиры, метаболиты или пролекарства либо фармацевтически приемлемые соли соединений, таутомеров, стереоизомеров, полиморфов, сложных эфиров, метаболитов или пролекарств.

В других вариантах осуществления изобретения новые замещенные бензимидазольные производные представляют собой соединения формул (Ι)-(ΐν), в которых Я¹, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей гидроксигруппу, хлор, фтор, бром, метил, этил, пропил, бутил, метоксигруппу, этоксигруппу, пропоксигруппу, бутоксигруппу, трифторметил, трифторэтил, трифторметоксигруппу, трифторэтоксигруппу, трифторметилсульфанил, пиперидинил, С1-С6-алкилпиперидинил, пиперазинил, С1-С6-алкилпиперазинил, тетрагидрофуранил, пиридинил, пиримидинил. В других вариантах осуществления изобретения новые замещенные бензимидазольные производные представляют собой соединения формул (Ι)-(ΐν), в которых а обозначает 1 или 2 и по меньшей мере один Я¹ обозначает гало(С1-С₆-алкил), такой как трифторметил. В других вариантах осуществления изобретения новые замещенные бензимидазольные производные представляют собой соединения формул (Ι) и (Ιν), в которых Я обозначает С₁-С₆-алкил, такой, например, как метил или этил. В других вариантах осуществления изобретения новые замещенные бензимидазольные производные представляют собой соединения формул (Ι), (ΙΙ) и (Ιν), в которых Ь обозначает 0 и, следовательно, в этом случае Я³ отсутствует. В альтернативных вариантах осуществления изобретения новые замещенные бензимидазольные производные представляют собой соединения формул (Ι)-(ΐν), в которых Ь обозначает 1 и Я³ обозначает С1-С6алкоксигруппу, такую, например, как метоксигруппа. Еще в одном варианте осуществления изобретения новые замещенные бензимидазольные производные представляют собой соединения формул (Ι)-(ΙΙΙ), в которых с обозначает 1 или 2 и по меньшей мере один Я⁴ обозначает гало(С1-С₆-алкил), такой, например, как трифторметил.

Другими объектами настоящего изобретения являются способы лечения связанных с Яа! заболеваний у человека или животного, нуждающегося в таком лечении, заключающиеся в том, что указанному индивидууму вводят соединение, являющееся любым вариантом настоящего изобретения, или его фармацевтически приемлемую соль формулы (Ι), (ΙΙ), (ΙΙΙ) или (Ιν) в количестве, эффективном для снижения или предупреждение роста опухоли у индивидуума.

Следующими объектами настоящего изобретения являются способы лечения связанных с Яа! заболеваний у человека или животного, нуждающегося в таком лечении, заключающиеся в том, что указанному индивидууму вводят соединение, являющееся любым вариантом настоящего изобретения, или его фармацевтически приемлемую соль формулы (Ι), (ΙΙ), (ΙΙΙ) или (Ιν) в количестве, эффективном для снижения или предупреждение роста опухоли у индивидуума, в сочетании по меньшей мере с одним дополнительным агентом, предназначенным для лечения рака.

Другими объектами настоящего изобретения являются терапевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение или его фармацевтически приемлемую соль формулы (Ι), (ΙΙ), (ΙΙΙ) или (Ιν) в сочетании по меньшей мере с одним или несколькими дополнительными агентами, предназначенными для лечения рака, которые обычно применяют в терапии рака. Соединения, предлагаемые в изобретении, можно применять для лечения различных типов рака, включая карциномы (например, легкого, поджелудочной железы, яичника, щитовидной железы, мочевого пузыря или ободочной кишки), меланому, миелоидные нарушения (например, миелолейкоз, множественную миелому и эритролейкоз), аденомы (например, ворсинчатая опухоль ободочной кишки) и саркомы (например, остеосаркома).

Другим объектом настоящего изобретения являются способы ингибирования по меньшей мере одной сериновой/треониновой киназы в пути передачи сигнала МАРК у индивидуума или лечения биологического состояния, опосредуемого сериновой/треониновой киназа пути передачи сигнала МАРК у индивидуума, заключающийся в том, что индивидууму вводят терапевтическую композицию, содержащую по меньшей мере одно соединение или его фармацевтически приемлемую соль формулы (Ι), (ΙΙ), (ΙΙΙ) или (IV), обладающее эффективностью в отношении ингибирования пути передачи сигнала МАРК. Терапевтические композиции можно применять для лечения пациентов, нуждающихся в лечении такими ингибиторами (например, страдающих раком, который опосредуется аномальной передачей сигнала МАРК). Одним из вариантов осуществления изобретения являются способы ингибирования киназы Яа! у инди

- 6 014230 видуума, заключающиеся в том, что вводят терапевтическую композицию, содержащую {1-метил-5-[2(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}-(4трифторметилфенил)амин и его таутомер, стереоизомер, полиморф, сложный эфир, метаболит или пролекарство или фармацевтически приемлемую соль соединения, таутомера, стереоизомера, полиморфа, сложного эфира, метаболита или пролекарства.

Следующим объектом настоящего изобретения являются способы ингибирования по меньшей мере одного тирозинкиназного рецептора, выбранного из группы, включающей УЕСРК.-2, ΡΌΟΡΚ-β, рЕКК, ЬРСР, РСРК1, РСРК2, РСРК3, с-Кй и С8Р-1К, у индивидуума, или лечения биологического состояния, опосредуемого по меньшей мере одним из УЕСРК-2, РОСРК-β, рЕКК, ЬРСР, РСРК1, РСРК2, РСРК3, сКй и С8Р-1К, заключающиеся в том, что вводят терапевтическую композицию, которая содержит по меньшей мере одно соединение или его фармацевтически приемлемую соль формулы (I), (II), (III) или (IV), обладающую эффективностью в отношении ингибирования тирозинкиназного рецептора у индивидуума. Терапевтические соединения можно применять для лечения пациентов, которые нуждаются в лечении такими ингибиторами (например, пациентов, страдающих раком, опосредуемым аномальной передачей сигнала тирозинкиназного рецептора). Одним из вариантов осуществления изобретения являются способы ингибирования тирозинкиназного рецептора, выбранного из группы, включающей VЕСРК-2. РОСРК-β, рЕКК, ЬРСР, РСРК1, РСРК2, РСРК3, с-Кй и С8Р-Ш, индивидууму, заключающиеся в том, что вводят терапевтическую композицию, которая содержит {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}-(4-трифторметилфенил)амин или его таутомер, стереоизомер, полиморф, сложный эфир, метаболит или пролекарство или фармацевтически приемлемую соль соединения, таутомера, стереоизомера, полиморфа, сложного эфира, метаболита или пролекарства.

Изобретение относится также к композициям, способам применения и способам приготовления, которые более подробно будут описаны ниже.

Краткое описание чертежей

Вышеизложенные объекты и ряд сопутствующих преимуществ настоящего изобретения станут более понятными со ссылкой на изложенное ниже подробное описание в сочетании с прилагаемыми чертежами, на которых показано:

на фиг. 1 - график, свидетельствующий о снижении среднего объема опухолей человеческой меланомы линии А375М у мышей после обработки соединением, предлагаемым в изобретении, которое описано в примере 78;

на фиг. 2А и 2Б - изображение результатов, полученных с помощью ПААГ, которые свидетельствуют об ингибировании передачи сигнала в направлении его распространения от киназы КаГ в опухолевых клетках человеческой меланомы линии А375М у мышей через 4 ч (фиг. 2 А) и 24 ч (фиг. 2Б) после обработки соединением, предлагаемым в изобретении, например, описанным в примере 79;

на фиг. 3 - график, свидетельствующий о снижении среднего объема опухолей человеческого рака ободочной кишки линии НТ29Р у мышей после обработки соединением, предлагаемым в изобретении, которое описано в примере 80;

на фиг. 4А, 4Б и 4В - результаты, полученные с помощью ПААГ, которые свидетельствуют об ингибировании передачи сигнала в направлении его распространения от киназы КаГ в опухолевых клетках человеческого рака ободочной кишки линии НТ29Р через 1 ч (фиг. 4А), 4 ч (фиг. 4Б) и 24 ч (фиг. 4В) после обработки соединением, предлагаемым в изобретении, которое описано в примере 81;

на фиг. 5 - проиллюстрирован путь передачи сигнала МАРК, включающий Как, КаГ. МЕК и ЕКК, и предполагаемые сайты ингибирования в направлении его распространения от киназы КаГ с помощью соединения из примера 1, что описано в примерах 82-86;

на фиг. 6А, 6Б и 6В - результаты, полученные с помощью ПААГ, которые свидетельствуют об ингибировании передачи сигнала в направлении его распространения от киназы КаГ в клетках линии А375М (фиг. 6А), клетках линии 8К-МЕЬ2 (фиг. 6Б) и клетках линии СНШ се11к (фиг. 6В) через 4 ч после инкубации культуры с различными концентрациями соединения из примера 1, что описано в примере 83;

на фиг. 7А - график зависимости ответа от дозы в виде уменьшения среднего объема опухолей человеческой меланомы линии А375М (В-КаГ V600Е) у мышей после обработки оральной дозой 10 мг/кг, 30 мг/кг или 100 мг/кг соединения из примера 1, что описано в примере 84;

на фиг. 7Б - результаты, полученные с помощью ПААГ, которые свидетельствуют об ингибировании передачи сигнала в направлении его распространения от киназы КаГ в клетках линии А375М у мышей через 8 ч после 14-й обработки соединением из примера 1, что описано в примере 84;

на фиг. 7В - результаты, полученные с помощью ПААГ, которые свидетельствуют об ингибировании передачи сигнала в направлении его распространения от киназы КаГ в клетках линии А375М у мышей через 24 ч после 14-й обработке соединением из примера 1, что описано в примере 84;

на фиг. 7Г - результаты, полученные с помощью ПААГ, которые свидетельствуют о модуляции маркеров, расположенных в направлении его распространения от киназы КаГ, в клетках линии А375М через 24 ч после 14-й обработке соединением из примера 1, что описано в примере 84;

- 7 014230 на фиг. 8А - график, свидетельствующий о снижении среднего объема опухолей злокачественной меланомы линии МЕХР276 (В-КаГ У600Е) у мышей после обработки соединением из примера 1, что описано в примере 85;

на фиг. 8Б - результаты, полученные с помощью ПААГ, которые свидетельствуют об ингибировании передачи сигнала в направлении его распространения от киназы КаГ в опухолевых клетках линии МЕХР276 у мышей через 4 ч после 20-й обработки соединением из примера 1, что описано в примере 85;

на фиг. 8В - результаты, полученные с помощью ПААГ, которые свидетельствуют об ингибировании передачи сигнала в направлении его распространения от киназы КаГ в опухолевых клетках линии МЕХР276 через 4 ч после 20-й обработки соединением из примера 1, что описано в примере 85;

на фиг. 9А - графическое изображение ингибирования среднего объема опухолей злокачественной меланомы линии МЕХР1341 (Ν-Как 061К) у мышей после обработки соединением из примера 1, что описано в примере 85;

на фиг. 9Б - результаты, полученные с помощью ПААГ, которые свидетельствуют об ингибировании передачи сигнала в направлении его распространения от киназы КаГ в опухолевых клетках линии МЕХР1341 у мышей 4 ч после 20-й обработки соединением из примера 1, что описано в примере 85;

на фиг. 9В - изображение результатов, полученных с помощью ПААГ, которые свидетельствуют о модуляции маркеров, расположенных в направлении распространения сигнала от киназы КаГ в опухолевых клетках линии МЕХР1341 через 4 ч после 20-й обработки соединением из примера 1, что описано в примере 85;

на фиг. 10А - график, свидетельствующий о снижении среднего объема опухолей колоректальной карциномы линии НСТ-116 (К-Как С13Э) у мышей после обработки соединением из примера 1, что описано в примере 86;

на фиг. 10Б - результаты, полученные с помощью ПААГ, которые свидетельствуют об ингибировании передачи сигнала в направлении его распространения от киназы КаГ в опухолевых клетках линии НСТ-116 через 4 ч после 3-й обработки соединением из примера 1, что описано в примере 86;

на фиг. 10В - результаты, полученные с помощью ПААГ, которые свидетельствуют об ингибировании передачи сигнала в направлении его распространения от киназы КаГ в опухолевых клетках линии НСТ-116 через 8 ч после 3-й обработки соединением из примера 1,что описано в примере 86;

на фиг. 10Г - результаты, полученные с помощью ПААГ, которые свидетельствуют об ингибировании передачи сигнала в направлении его распространения от киназы КаГ в опухолевых клетках линии НСТ-116 через 24 ч после 3-й обработки соединением из примера 1, что описано в примере 86;

на фиг. 11 - график, свидетельствующий о снижении среднего объема опухолей колоректальной карциномы линии НТ-29 (В-КаГ У600Е) у мышей после обработки соединением из примера 1, что описано в примере 86;

на фиг. 12А - график, свидетельствующий о снижении среднего объема опухолей острого миелолейкоза линии МУ4-11 (РЬТ3 ΙΤΌ) у мышей после обработки соединением из примера 1, что описано в примере 86;

на фиг. 12Б - результаты, полученные с помощью ПААГ, которые свидетельствуют об ингибировании передачи сигнала в направлении его распространения от киназы КаГ в опухолевых клетках линии МУ4-11 у мышей через 4 ч после 3-й обработки соединением из примера 1, что описано в примере 86;

на фиг. 13 - график, свидетельствующий об ингибировании УЕСР-опосредуемого ангиогенеза на модели СНО-УЕСР с использованием матригеля (Ма1г1дс1) после обработки 10, 30 и 100 мг/кг соединения из примера 1, что описано в примере 88;

на фиг. 14А - график, свидетельствующий о снижении среднего объема опухолей меланомы линии А375М у мышей после обработки 100 мг/кг соединения из примера 1 с использованием схемы введения лекарственного средства с.|2б. с.|3б или с.|4б. что описано в примере 89;

на фиг. 14Б - результаты, полученные с помощью ПААГ, которые свидетельствуют об ингибировании передачи сигнала в направлении его распространения от киназы КаГ в опухолевых клетках линии А375М у мышей через 8, 24, 48 ч после 5-й обработки соединением из примера 1 с использованием схемы введения лекарственного средства ς2ά, что описано в примере 89;

на фиг. 14В - результаты, полученные с помощью ПААГ, которые свидетельствуют об ингибировании передачи сигнала в направлении его распространения от киназы КаГ в опухолевых клетках линии А375М у мышей через 48 ч, 72 ч и 96 ч после 3-й обработки соединением из примера 1 с использованием схемы введения лекарственного средства с.|4<Г что описано в примере 89; и на фиг. 15 - график, демонстрирующий взаимосвязь между обработкой опухолевых клеток линии А375М различными концентрациями соединения из примера 1, концентрацией соединения в сыворотке через различные промежутки времени и пороговой концентрацией для модуляции мишеней, что описано в примере 90.

- 8 014230

Подробное описание предпочтительного варианта осуществления изобретения

Одним из объектов настоящего изобретения являются замещенные бензимидазольные производные формулы (I):

в которой К¹, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, С₁-С₆-алкил, С₁-С₆-алкоксигруппу, С₁-С₆-алкилсульфанил, С₁-С₆-алкилсульфонил, циклоалкил, гетероциклоалкил, фенил и гетероарил;

К² обозначает С₁-С₆-алкил или гало-С₁-С₆-алкил;

К³, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей галоген, С₁-С₆-алкил и С1С6-алкоксигруппу;

К⁴, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей гидроксигруппу, С₁-С₆алкил, С₁-С₆-алкоксигруппу, галоген, карбоксил, С₁-С₆-алкоксикарбонил, аминокарбонил, С₁-С₆алкиламинокарбонил, карбонитрил, циклоалкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилкарбонил, фенил и гетероарил;

где К¹, К², К³ и К⁴ необязательно могут быть замещены одним или несколькими заместителями, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, С₁-С₆-алкил, гало-С1-С6-алкил, С1-С6-алкоксигруппу и гало-С1-С6-алкоксигруппу;

а обозначает 1, 2, 3, 4 или 5;

Ь обозначает 0, 1, 2 или 3 и с обозначает 1 или 2;

или их таутомеры, стереоизомеры, полиморфы, сложные эфиры, метаболиты или пролекарства либо фармацевтически приемлемые соли соединений, таутомеров, стереоизомеров, полиморфов, сложных эфиров, метаболитов или пролекарств.

Другими вариантами осуществления изобретения являются новые замещенные бензимидазольные производные формулы (II)

в которой К¹, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей С₁-С₆-алкил, С₁С₆-алкоксигруппу, гидроксигруппу, галоген, С₁-С₆-алкилсульфанил, С₁-С₆-алкилсульфонил, циклоалкил, гетероциклоалкил, фенил и гетероарил;

К³, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей галоген, С₁-С₆-алкил и С1С6-алкоксигруппу;

К⁴, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей гидроксигруппу, С1-С6алкил, С₁-С₆-алкоксигруппу, галоген, карбоксил, С₁-С₆-алкоксикарбонил, аминокарбонил, карбонитрил, циклоалкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилкарбонил, фенил и гетероарил;

где К¹, К², К³ и К⁴ необязательно могут быть замещены одним или несколькими заместителями, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, С1-С6-алкил и С1С6-алкоксигруппу;

а обозначает 1, 2, 3, 4 или 5;

Ь обозначает 0, 1, 2 или 3 и с обозначает 1 или 2;

или их таутомеры, стереоизомеры, полиморфы, сложные эфиры, метаболиты или пролекарства либо фармацевтически приемлемые соли соединений, таутомеров, стереоизомеров, полиморфов, сложных эфиров, метаболитов или пролекарств.

Другими вариантами осуществления изобретения являются новые замещенные бензимидазольные производные формулы (III)

в которой К¹, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей С₁-С₆-алкил, С₁

- 9 014230

Сб-алкоксигруппу, гидроксигруппу, галоген, Ц-Сб-алкилсульфанил, Ц-Сб-алкилсульфонил, циклоалкил, гетероциклоалкил, фенил и гетероарил;

К⁴, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей гидроксигруппу, С₁-С_балкил, С₁-С_б-алкоксигруппу, галоген, карбоксил, С₁-С_б-алкоксикарбонил, аминокарбонил, карбонитрил, циклоалкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилкарбонил, фенил и гетероарил;

где К¹ и К⁴ необязательно могут быть замещены одним или несколькими заместителями, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, С₁-С_б-алкил и С^С_балкоксигруппу;

а обозначает 1, 2, 3, 4 или 5;

с обозначает 1 или 2;

или их таутомеры, стереоизомеры, полиморфы, сложные эфиры, метаболиты или пролекарства либо фармацевтически приемлемые соли соединений, таутомеров, стереоизомеров, полиморфов, сложных эфиров, метаболитов или пролекарств.

Объектами изобретения являются также соединения формулы (IV)

в которой К¹, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей С₁-С_б-алкил, С₁С_б-алкоксигруппу, гидроксигруппу, галоген, С₁-С_б-алкилсульфанил, С₁-С_б-алкилсульфонил, циклоалкил, гетероциклоалкил, фенил и гетероарил;

К² обозначает С₁-С_б-алкил или гало-С₁-С_б-алкил;

К³, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей галоген, С₁-С_б-алкил и С1Сб-алкоксигруппу;

К⁴, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей гидроксигруппу, С₁-С_балкил, С₁-С_б-алкоксигруппу, галоген, карбоксил, С₁-С_б-алкоксикарбонил, аминокарбонил, С₁-С_балкиламинокарбонил, карбонитрил, циклоалкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилкарбонил, фенил и гетероарил;

где К¹, К², К³ и К⁴ необязательно могут быть замещены одним или несколькими заместителями, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, С1-Сб-алкил и С1Сб-алкоксигруппу;

а обозначает 1, 2, 3, 4 или 5;

Ь обозначает 0, 1, 2 или 3;

или их таутомеры, стереоизомеры, полиморфы, сложные эфиры, метаболиты или пролекарства либо фармацевтически приемлемые соли соединений, таутомеров, стереоизомеров, полиморфов, сложных эфиров, метаболитов или пролекарств.

Другими вариантами осуществления изобретения являются новые замещенные бензимидазольные производные формул (Ι)-(ΐν), в которых К¹, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей гидроксигруппу, хлор, фтор, бром, метил, этил, пропил, бутил, метоксигруппу, этоксигруппу, пропоксигруппу, бутоксигруппу, трифторметил, трифторэтил, трифторметоксигруппу, трифторэтоксигруппу, трифторметилсульфанил, пиперидинил, С1-Сб-алкилпиперидинил, пиперазинил, С1-Сбалкилпиперазинил, тетрагидрофуранил, пиридинил, пиримидинил. В других вариантах осуществления изобретения новые замещенные бензимидазольные производные представляют собой соединения формул (Ι)-(ΐν), в которых а обозначает 1 или 2, и по меньшей мере один К¹ обозначает гало(С1-С_б-алкил), такой как трифторметил. В других вариантах осуществления изобретения новые замещенные бензимидазольные производные представляют собой соединения формул (I) и (IV), в которых К обозначает С₁-С_балкил, такой, например, как метил или этил. В других вариантах осуществления изобретения новые замещенные бензимидазольные производные представляют собой соединения формул (I), (II) и (IV), в которых Ь обозначает 0 и, следовательно, в этом случае К³ отсутствует. В альтернативных вариантах осуществления изобретения новые замещенные бензимидазольные производные представляют собой соединения формул Щ-(Щ), в которых Ь обозначает 1 и К³ обозначает С1-Сб-алкоксигруппу, такую, например, как метоксигруппа. Еще в одном варианте осуществления изобретения новые замещенные бензимидазольные производные представляют собой соединения формул (^-(Ш), в которых с обозначает 1 или 2 и по меньшей мере один К⁴ обозначает гало-С1-С_б-алкил, такой, например, как трифторметил.

В конкретных вариантах осуществления изобретения К¹, К², К³ и К⁴ необязательно могут быть замещены одним-пятью заместителями, независимо друг от друга выбранными из гидроксигруппы, галогена, С₁-С_б-алкила, гало-С₁-С_б-алкила, С₁-С_б-алкоксигруппы и гало-С₁-С_б-алкоксигруппы.

В конкретных вариантах осуществления изобретения К¹, К², К³ и К⁴ необязательно могут быть замещены одним-тремя заместителями, независимо друг от друга выбранными из гидроксигруппы, галоге

- 10 014230 на, С1-С₆-алкила, гало-С₁-С₆-алкила, С1-Сб-алкоксигруппы и гало-С1-Сб-алкоксигруппы.

В конкретных вариантах осуществления изобретения В¹ независимо выбран из группы, включающей галоген, С₁-С₆-алкоксигруппу, гало-С₁-С₆-алкил, гидроксигруппу, гало-С₁-С₆-алкоксигруппу, галоС₁-С₆-алкилсульфонил, гетероарил, гало-С₁-С₆-алкилсульфанил, гетероциклоалкил и С₁-С₆алкилгетероциклоалкил. В некоторых из таких вариантов осуществления изобретения а обозначает 1 и В¹ независимо выбран из группы, включающей 2-хлор, 2-этил, 2-трифторметил, 3-трифторметил, 4трифторметил, 3-трет-бутил, 4-трет-бутил, 3-этил, 4-этил, 4-хлор, 4-бром, 4-трифторметоксигруппу, 4трифторметилсульфанил, 4-трифторметилсульфонил и 4-(4-метилпиперазинил). В других вариантах осуществления изобретения а обозначает 2 и В¹, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей 2-фтор, 2-хлор, 2-гидроксигруппу, 2-метоксигруппу, 3-метоксигруппу, 5-метоксигруппу, 4хлор, 4-фтор, 3-трифторметил, 4-трифторметил, 5-трифторметил, 5-пиридинил, 5-пиридинил-3-ил, 5пиридинил-4-ил, 3-тетрагидрофуран-3-ил, 3-изопропил, 5-изопропил и 5-трет-бутил.

В конкретных вариантах осуществления изобретения В⁴ выбран из группы, включающей С1-С₆алкил, гидрокси-С₁-С₆-алкил, гало-С₁-С₆-алкил, гало-С₁-С₆-алкилсульфанил, С₁-С₆-алкоксикарбонил, С₁С₆-алкилгетероциклоалкил, карбонитрил, фенил, гало-С₁-С₆-алкилфенил, С₁-С₆алкилгетероциклоалкилкарбонил и гидрокси-С1-С6-алкиламинокарбонил.

В некоторых из таких вариантов осуществления изобретения с обозначает 1 и В⁴ выбран из группы, включающей трифторметил, карбонитрил, фенил, трифторметилсульфанил, метоксикарбонил, 4этилпиперазинил, 4-этилпиперазинил-1-карбонил или 2-гидроксиэтиламинокарбонил. В других вариантах осуществления изобретения с обозначает 2 и В⁴, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей метил, 3-трифторметилфенил, 4-трифторметилфенил, трифторметил, этоксикарбонил, гидроксиметил и фенил.

Другими вариантами осуществления изобретения являются соединение или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение имеет формулу

или таутомер соединения или фармацевтически приемлемая соль таутомера формулы

Другими объектами настоящего изобретения являются способы лечения связанных с ВаТ нарушений у человека или животного, нуждающегося в таком лечении, которые заключаются в том, что указанному индивидууму вводят соединение формулы (I), (II), (III) или (IV) в количестве, которое обладает эффективностью в отношении снижения или предупреждения роста опухоли у индивидуума.

Другими объектами настоящего изобретения являются способы лечения связанных с ВаТ заболеваний у человека или животного, нуждающегося в таком лечении, заключающиеся в том, что индивидууму вводят соединение формулы (I), (II), (III) или (IV) в количестве, которое обладает эффективностью в отношении снижения или предупреждения роста опухоли у индивидуума, в сочетании по меньшей мере с одним дополнительным агентом, предназначенным для лечения рака.

Следующими объектами настоящего изобретения являются способы лечения связанных с ВаТ нарушений у человека или животного, нуждающегося в таком лечении, заключающиеся в том, что вводят указанному индивидууму соединение формулы (I), (II), (III) или (IV) в количестве, которое обладает эффективностью в отношении снижения или предупреждения роста опухоли у индивидуума, в сочетании по меньшей мере с одним дополнительным агентом, предназначенным для лечения рака. Ряд приемлемых противораковых агентов, которые можно применять для совместной терапии, можно использовать в способах, предлагаемых в настоящем изобретении. Так, согласно настоящему изобретению можно применять несколько противораковых агентов, таких как (но не ограничиваясь ими) агенты, которые индуцируют апоптоз; полинуклеотиды (например, рибозимы); полипептиды (например, ферменты); лекарственные средства; биологические миметики; алкалоиды; алкилирующие агенты; противоопухолевые антибиотики; антиметаболиты; гормоны; соединения платины; моноклональные антитела, конъюгированные с противораковыми лекарственными средствами, токсины и/или радионуклиды; модификаторы биологического ответа (например, интерфероны [например, ΓΡΝ-а и т.д.] и интерлейкины [например, Т-2 и т.д.] и т.д.); агенты для адоптивной иммунотерапии; гематопоэтические факторы роста; агенты, которые индуцируют дифференцировку опухолевых клеток (например, полностью транс-ретиноевая кислота и т.д.); реагенты для генной терапии; реагенты и нуклеотиды для антисмысловой терапии; противоопухолевые вакцины; ингибиторы ангиогенеза и т.п. Некоторыми другими примерами химиотерапевтических соединений и противораковых терапий, которые можно применять совместно с описанными соедине

- 11 014230 ниями формулы (I), (II), (III) или (IV), известны специалистам в данной области.

В предпочтительных вариантах осуществления изобретения противораковые агенты, которые можно применять в сочетании с соединениями, предлагаемыми в настоящем изобретении, представляют собой агенты, которые индуцируют или стимулируют апоптоз. К агентам, которые индуцируют апоптоз, относятся (но не ограничиваясь ими) радиация; ингибиторы киназ (например, ингибитор киназного рецептора эпидермального фактора роста [ЕСЕК], ингибитор киназного рецептора сосудистого фактора роста [νΟΡΗ], ингибитор киназного рецептора фактора роста фибробластов [РОРК], ингибитор киназного рецептора тромбоцитарного фактора роста [РОРК] и ингибиторы киназ Всг-АЬ1, такие как 8Т!-571. глевек (С1ссусс) и гливек (С1Р^гсс)); антисмысловые молекулы; антитела [например, херцептин (НетсерЕи) и ритуксан (КЕихаи)]; антиэстрогены [например, ралоксифен и тамоксифен]; антиадрогены [например, флутамид, бикалутамид, финастерид, аминоглутетамид, кетоконазол и кортикостероиды]; ингибиторы циклооксигеназы 2 (СОХ-2) [например, целекоксиб (Се1есох1Ь), мелоксикам, N8-398 и нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (НСПВС)]; и противораковые химиотерапевтические лекарственные средства [например, иринотекан (Сашр!окаг), СРТ-П, флударабин (Р1ибата), дакарбазин (ЭНС), дексаметазон, митоксантрон, милотарг (Му1о!атд), νΡ-16, цисплатина, 5-ФУ, доксирубицин, таксотер или таксол]; молекулы, участвующие в передаче сигналов в клетке; керамиды и цитокины; стауросприн и т. п.

Другими объектами настоящего изобретения являются фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение или его фармацевтически приемлемую соль формулы (I), (II), (III) или (IV) в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, которые можно применять для введения человеку или животному либо индивидуально, либо в сочетании с другими противораковыми агентами.

Следующими объектами настоящего изобретения являются способы получения соединений формул (I), (II), (III) или (IV), представленных в настоящем описании.

Другими объектами настоящего изобретения являются соединения, представляющие собой ингибиторы фермента КаР-киназы. Поскольку фермент представляет собой расположенный по ходу пути передачи сигнала эффектор р21^гак, ингибиторы, предлагаемые в настоящем изобретении, применяют в фармацевтических композициях, предназначенных для медицины или ветеринарии, в случаях, когда показано ингибирование пути киназы КаР, например, для лечения опухолей и/или роста раковых клеток, опосредуемого киназой КаР. В частности, соединения можно применять для лечения рака у человека или животного, например рака мыши, поскольку развитие этих типов рака зависит от каскада трансдукции сигнала белка Как, и поэтому они чувствительны к лечению путем прерывания этого каскада посредством ингибирования активности киназы КаР. Таким образом, соединения, предлагаемые в изобретении, можно применять для лечения плотных опухолей таких, например, как саркомы (например, рак легкого, поджелудочной железы, щитовидной железы, яичника, мочевого пузыря, молочной железы, предстательной железы или ободочной кишки), меланомы, миелоидные нарушения (например, миелолейкоз, множественная миелома и эритролейкоз), аденомы (например, ворсинчатая опухоль ободочной кишки) и саркомы (например, остеосаркома).

В контексте настоящего описания понятие ингибитор КаР относится к соединению, значение ΣΟ₅₀, характеризующее активность в отношении киназы КаР, не превышает примерно 100 мкМ и, как правило, не превышает примерно 50 мкм, при оценке с помощью анализа с использованием фильтрации КаР/Мек, который описан в целом ниже. Предпочтительными изоформами киназы КаР, которые ингибируют соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, являются А-КаР, В-КаР и С-КаР (КаР-1). Понятие ΚΉ обозначает концентрацию ингибитора, которая снижает активность фермента (например, киназы КаР) наполовину от максимального уровня. Установлено, что репрезентативные соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, обладают ингибирующей активностью в отношении КаР. Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, предпочтительно характеризуются значением Κ'.'₅₀ в отношении КаР, не превышающим примерно 10 мкМ, более предпочтительно не превышающим примерно 5 мкМ, еще более предпочтительно не превышающим примерно 1 мкМ и наиболее предпочтительно не превышающим примерно 200 нМ, при оценке киназной активности КаР с помощью анализов, указанных в настоящем описании.

В контексте настоящего описания понятие путь трансдукции сигнала МАРК является сокращенным обозначением пути трансдукции сигнала активируемой митогеном протеинкиназы в модуле, состоящем из передающих сигнал молекул Как-КаР-МЕК1-ЕКК.

Понятие алкил относится к насыщенным углеводородным группам, которые не содержат гетероатомов, и оно включает алкильные группы с прямой цепью, такие как метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил, гептил, пропил, нонил, децил, ундецил, додецил и т.п. Понятие алкил относится также к изомерам прямоцепочечных алкильных групп с разветвленной цепью, включая (но не ограничиваясь ими) следующие, приведенные в качестве примера группы: -СН(СН₃)₂, -СН(СН₃)(СН₂СН₃), -СН(СН₂СН₃)₂, -С(СН3)3, -С(СН2СН3)3, -СН2СН(СН3)2, -СН2СН(СН3)(СН2СН3), -СН2СН(СН2СН3)2, -СН2С(СН3)3, -СН2С(СН2СН3)3, -СН(СН3)СН(СН3)(СН2СН3), -СН2СН2СН(СН3)2, -СН2СН2СН(СН3)(СН2СН3), -СН2СН2СН(СН2СН3)2, -СН2СН2С(СН3)3, -СН2СН2С(СН2СН3)3, -СН(СН3)СН2СН(СН3)2,

-СН(СН3)СН(СН3)СН(СН3)2, -Н(СН2СН3)СН(СН3)СН(СН3)(СН2СН3) и др. Так, алкильные группы вклю

- 12 014230 чают первичные, вторичные и третичные алкильные группы. Понятие С1-С12-алкил относится к алкильным группам, имеющим от одного до двенадцати атомов углерода. Понятие С₁-С₆-алкил относится к алкильным группам, имеющим от одного до шести атомов углерода.

Понятие алкенил относится к углеводородным группам с прямой или разветвленной цепью, имеющим от 2 до 6 атомов углерода и предпочтительно от 1 до 2 ненасыщенных винильных связей (>С=С<). Примерами таких групп могут служить винил, аллил и бут-3-ен-1-ил. Это понятие включает цис- и транс-изомеры или смеси таких изомеров.

Понятие алкоксигруппа относится к группе КО-, в которой К обозначает алкил. В контексте настоящего описания понятие С₁-С₆-алкоксигруппа относится к группе КО-, в которой К обозначает С₁С₆-алкил. Репрезентативными примерами С^С₆-алкоксигрупп являются метоксигруппа, этоксигруппа, трет-бутоксигруппа и т. п.

Понятие С₁-С₆-алкоксикарбонил относится к сложному эфиру -С(=О)-ОК, в котором К обозначает С₁-С₆-алкил.

Понятие амидиногруппа относится к группе -ί.'(=ΝΗ)ΝΗ₂. Понятие амидин относится к соединению, содержащему такую группу.

В контексте настоящего описания понятие аминокарбонил относится к группе -0(0)-ΝΗ₂.

Понятие С₁-С₆-алкиламинокарбонил относится к группе -ί’(0)-ΝΒΒ'. в которой К обозначает С₁С₆-алкил и К' выбран из водорода и С₁-С₆-алкила.

Понятие карбонил относится к двухвалентной группе -С(О)-.

Понятие карбоксил относится к группе -С(=О)-ОН.

Понятия цианогруппа, карбонитрил или нитрил относятся к группе -ΟΝ.

Понятие карбонитрил-С₁-С₆-алкил относится к С₁-С₆-алкилу, замещенному -ΟΝ.

Понятие циклоалкил относится к моно- или полициклическому алкильному заместителю. Как правило, циклоалкильные группы имеют от 3 до 8 кольцевых атомов углерода. Репрезентативными циклоалкильными группами являются циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и циклооктил.

Понятия галоген или гало обозначают хлор, бром, фтор и йод.

Понятие гало-С₁-С₆-алкил относится к С^С₆-алкильному радикалу, замещенному одним или несколькими атомами галогена, предпочтительно одним-пятью атомами галогена. Более предпочтительной гало-С₁-С₆-алкильной группой является трифторметил.

Понятие гало-С₁-С₆-алкилфенил относится к фенильной группе, замещенной гало-С₁-С₆алкильной группой.

Понятие гало-С₁-С₆-алкоксигруппа относится к алкоксигруппе, замещенной одним или несколькими атомами галогена, предпочтительно одним-пятью атомами галогена. Более предпочтительной галоС1-С6-алкоксигруппой является трифторметоксигруппа.

Понятия гало-С₁-С₆-алкилсульфонил и гало-С₁-С₆-алкилсульфанил относятся к замещению сульфонильной и сульфанильной групп гало-С₁-С₆-алкильными группами, где сульфонил и сульфанил имеют значения, указанные в настоящем описании.

Понятие гетероарил относится к ароматической группе, имеющей от 1 до 4 гетероатомов в качестве кольцевых атомов в ароматическом кольце, и где остальные кольцевые атомы представляют собой атомы углерода. Пригодными гетероатомами, которые можно применять в соединениях, предлагаемых в настоящем изобретении, являются азот, кислород и сера, причем атомы азота и серы необязательно могут быть окислены. Примерами гетероарильных групп являются группы, имеющие от 5 до 14 кольцевых атомов, и они включают, например, бензимидазолил, бензтиазолил, бензоксазолил, диазапинил, фуранил, пиразинил, пиразолил, пиридил, пиридазинил, пиримидинил, пирроил, оксазолил, изоксазолил, имидазолил, индолил, индазолил, хинолинил, изохинолинил, хиназолинил, хиноксалинил, тиазолил, тиенил и триазолил.

В контексте настоящего описания понятие гетероциклоалкил относится к циклоалкильным заместителям, которые имеют от 1 до 5, и, как правило, от 1 до 2 гетероатомов в кольцевой структуре. Пригодными гетероатомами, которые можно применять в соединениях, предлагаемых в настоящем изобретении, являются азот, кислород и сера, причем атомы азота и серы необязательно могут быть окислены. Репрезентативные гетероциклоалкильные радикалы включают, например, морфолиногруппу, пиперазинил, пиперидинил и т.п.

Понятие С₁-С₆-алкилгетероциклоалкил относится к гетероциклоалкильной группе, замещенной С1-С6-алкильной группой.

Понятие гетероциклоалкил-С₁-С₆-алкил относится к С^С₆-алкилу, замещенному гетероциклоалкилом.

Понятие гетероциклоалкилкарбонил относится к группе -С(О)-К¹⁰, в которой К¹⁰ обозначает гетероциклоалкил.

Понятие С₁-С₆-алкилгетероциклоалкилкарбонил относится к группе -С(О)-К¹¹, в которой К¹¹ обозначает С₁-С₆-алкилгетероциклоалкил.

Понятие гидроксигруппа относится к группе -ОН.

- 13 014230

Понятие гидрокси-С1-Сб-алкил относится к Ц-Сб-алкильной группе, замещенной гидроксигруппой.

Понятие гидрокси-С₁-С₆-алкиламинокарбонил относится к С₁-С₆-алкиламинокарбонильной группе, замещенной гидроксигруппой.

Понятие имидат или сложный эфир имидата относится к группе -С(=ПН)О- или к соединению, содержащему такую группу. Сложные эфиры имидата включают, например, сложный метиловый эфир имидата -ί’(=ΝΗ)0ί.Ή₃.

Понятие нитрогруппа относится к группе -Ν0₂.

В контексте настоящего описания понятие сульфонил относится к группе -8О₂-.

В контексте настоящего описания понятие сульфанил относится к группе -8-. Понятие алкилсульфонил относится к замещенному сульфонилу, имеющему структуру -8О₂К¹², в которой К¹² обозначает алкил.

Понятие алкилсульфанил относится к замещенному сульфанилу, имеющему структуру -8К.¹². в которой К¹² обозначает алкил. Алкилсульфонильные и алкилсульфанильные группы, применяемые в соединениях, предлагаемых в настоящем изобретении, включают С₁-С₆-алкилсульфонил и С₁-С₆алкилсульфанил. Так, типичные группы включают, например, метилсульфонил и метилсульфанил (т.е. группы, в которых К¹⁹ обозначает метил), этилсульфонил и этилсульфанил (т.е. группы, в которых К¹² обозначает этил), пропилсульфонил и пропилсульфанил (т.е. группы, в которых К¹² обозначает пропил) и т. п.

Понятие гидроксизащитная группа относится к защитным группам для группы ОН. В контексте настоящего описания понятие относится также к защите группы ОН кислоты СООН. Пригодные гидроксизащитные группы, а также пригодные условия для защиты и удаления защиты конкретных функциональных групп хорошо известны в данной области. Например, многочисленные такие защитные группы описаны у Т.А. Огеепе и Р.О.М. АиК Рго!есйпд Огоирк ίη Огдашс 8уп1йе515, 3-е изд., изд-во Айеу, Νο\ν Уогк, 1999. Такие защитные группы представляют собой сложные С₁-С₆-алкиловые эфиры, сложные бензиловые эфиры, сложные пара-метоксибензиловые эфиры и т.п.

Понятие полиморф относится к различным кристаллическим формам соединения. Полиморфы могут отличаться друг от друга различными физическими свойствами, такими, например, как различия их рентгенограмм, картин абсорбционной ИК-спектроскопии, температур плавления, стабильности или растворимости.

Понятие метаболит относится к любому производному, образовавшемуся в организме индивидуума после введения родительского соединения. Производные могут образовываться из родительского соединения в результате различных биохимических превращений в организме индивидуума, таких, например, как окисление, восстановление, гидролиз или конъюгация, и они включают, например, оксиды и деметилированные производные. Метаболиты, соответствующие таким производным, можно получать также с помощью методов ίη νίίτο или с помощью методов синтеза. В конкретных вариантах осуществления изобретения метаболит соединения формулы (Ι)-(ΐν) представляет собой оксид. В некоторых объектах оксид представляет собой Ν-оксид, полученный синтезом путем обработки соединения формулы (Ι)-(ΐν) окислителем. В конкретных объектах изобретения окислитель представляет собой Ν-оксид Νметилморфолина или гидроперекись, такую как перекись водорода. В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение формулы (Ι)-(Ιν) подвергают конъюгации с глюкуроновой кислотой с образованием метаболита. Другим объектом изобретения является метаболит, его таутомер или стереоизомер, имеющий структуру

Понятие необязательно замещенный или замещенный относится к замещению одного или нескольких атомов водорода одновалентным или двухвалентным радикалом.

Когда замещаемый фрагмент включает группу с прямой цепью, то замещение может иметь место внутри цепи (примером является 2-гидроксипропил, 2-аминобутил и т.п.) или на конце цепи (примером является 2-гидроксиэтил, 3-цианпропил и т.п.). Замещаемые фрагменты могут иметь прямоцепочечные, разветвленные или циклические конфигурации ковалентно связанных атомов углерода или гетероатомов.

Подразумевается, что приведенные выше определения не включают недопустимые схемы замещения (например, метил, замещенный пятью атомами фтора или атом галогена, замещенный другим атомом галогена). Такие недопустимые схемы замещения хорошо известны специалисту в данной области.

- 14 014230

Специалистам в данной области должно быть также очевидно, что соединения, предлагаемые в изобретении, включая соединения формул (Ι), (ΙΙ), (ΙΙΙ) или (Ιν) или их стереоизомеры и полиморфы, а также фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры, метаболиты и пролекарства любого из этих соединений, можно подвергать таутомеризации, и, следовательно, они могут существовать в различных таутомерных формах, в которых протон одного атома молекулы смещается к другому атому и вследствие этого преобразуются химические связи между атомами молекул (см., например, МагсЕ, Абуаисеб Огдашс СНетМгу: Яеасбоик, МесНапыт апб 81гис1шс5, 4-е изд., изд-во 6ο1ιη ХУбеу & 8оп§, 1992, с. 69-74). В контексте настоящего описания понятие таутомер относится к соединениям, образующимся в результате смещения протона, и подразумевается, что все таутомерные формы, если они могут существовать, подпадают под объем изобретения. Например, таутомер соединения приведенной ниже формулы (1а), являющийся соединением формулы (Ι), в которой с обозначает 1, представляет собой соединение формулы (1Ь). Аналогично этому таутомер соединения формула (Шс) представляет собой соединение формулы (ΐν6) или (Ше).

(1а) (П>)

/

I я² к² (1Ус) (ΐνΰ)

I к² (ГУе)

Соединения, предлагаемые в изобретении, включая соединения формул (ΐ), (ΐΐ), (ΐΐΐ) или (ΐν) или их таутомеры и полиморфы, а также фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры, метаболиты и пролекарства любого из этих соединений могут содержать асимметрично замещенные атомы углерода. Наличие таких асимметрично замещенных атомов углерода может приводить к образованию соединений, предлагаемых в изобретении, в форме энантиомеров, диастероизомеров и других стереоизомеров, которые в понятиях абсолютной стереохимии можно обозначать как (Я)- или (8)-формы. Таким образом, все такие возможные изомеры, индивидуальные стереоизомеры в их оптически чистых формах, их смеси, рацемические смеси (или рацематы), смеси диастереоизомеров, а также индивидуальные диастереоизомеры соединений, предлагаемых в изобретении, подпадают под объем настоящего изобретения. В контексте настоящего описания понятия 8- и Я-конфигурация имеют значения, определенные в ГОРАС 1974 ВЕСОММЕХЭЛТЮЖ ЕОЯ 8ЕСТЮХ Е, ЕЕХОАМЕХТАЕ 8ТЕЯЕОСНЕМ18ТЯУ, Риге Арр1. СНет. 45, 1976, с. 13-30. Понятия α и β используют для обозначения положений колец циклических соединений, α-сторона рассматриваемой плоскости представляет собой сторону, на которой предпочтительный заместитель находится в положении с наименьшим номером. Заместителям, находящимся с противоположной стороны рассматриваемой плоскости, присваивается идентификатор β. Следует отметить, что такое употребление отличается от того, которое используют для циклических стереопартнеров, в которых а означает находящийся ниже плоскости и обозначает абсолютную конфигурацию. В контексте настоящего описания понятия α- и β-конфигурация имеют значения, определенные в СНЕМ1САЕ АВ8ТЯАСТ8 ГНЭЕХ СиГОЕ. приложение IV, 1987, параграф 203.

Специалистам в данной области должно быть также очевидно, что соединения, предлагаемые в изобретении, включая соединения формул (ΐ), (ΐΐ), (ΐΐΐ) или (ΐν), или их стереоизомеры и таутомеры, а также фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры, метаболиты и пролекарства любого из этих соединений, могут существовать в различных кристаллических формах (или полиморфах), имеющих различные физические свойства. Подразумевается, что все полиморфы соединений, предлагаемых в изобретении, включая их метаболиты, пролекарства, стереоизомеры и таутомеры, а также фармацевтически

- 15 014230 приемлемые соли любого из этих соединений, если они могут существовать, как в выделенной форме, так и в виде смеси, подпадают под объем изобретения.

В контексте настоящего описания понятие фармацевтически приемлемые соли относится к нетоксичным солям кислот или щелочно-земельных металлов соединения, таутомера, стереоизомера, полиморфа, сложного эфира, метаболита, или пролекарства формул (I), (II), (III) или (IV). Эти соли можно получать ίη кби в процессе конечного выделения и очистки соединений формул (I), (II), (III) или (IV), или по отдельности, осуществляя взаимодействие основной или кислотной функции с пригодной органической или неорганической кислотой или основанием соответственно. Репрезентативными солями являются (но не ограничиваясь ими) следующие соли: ацетат, адипат, альгинат, цитрат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бутират, камфорат, камфорсульфонат, диглюконат, циклопентанпропионат, додецилсульфат, этансульфонат, глюкогептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, фумарат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, метансульфонат, никотинат, 2-нафталинсульфонат, оксалат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, пикрат, пивалат, пропионат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, пара-толуолсульфонат и ундеканоат. Основные азотсодержащие группы можно также кватернизировать с помощью таких агентов, как (низш.)алкилгалогениды, такие как метил-, этил-, пропил- и бутилхлориды, -бромиды и -йодиды; диалкилсульфаты, такие как диметил-, диэтил-, дибутил- и диамисульфаты, галогениды с длинной цепью, такие как децил-, лаурил-, миристил- и стеарилхлориды, -бромиды и -йодиды, фенилалкилгалогениды, такие как бензил- и фенэтилбромиды и другие. При этом получают растворимые или диспергируемые в воде или масле продукты.

Примерами кислот, которые можно использовать для получения фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей, являются такие неорганические кислоты, как соляная кислота, серная кислота и фосфорная кислота, и такие органические кислоты, как щавелевая кислота, малеиновая кислота, метансульфоновая кислота, янтарная кислота и лимонная кислота. Соли присоединения оснований можно получать ίη κίΐιι в процессе конечного выделения или очистки соединений формулы (I) или отдельно, подвергая взаимодействию фрагменты карбоновой кислоты с пригодным основанием, таким как гидроксид, карбонат или бикарбонат фармацевтически приемлемого катиона металла, или с аммиаком, или с органическим первичным, вторичным или третичным амином. Фармацевтически приемлемые соли включают (но не ограничиваясь ими) катионы щелочных или щелочно-земельных металлов, такие как натриевые, литиевые, калиевые, кальциевые, магниевые, алюминиевые соли и т.п., а также нетоксичные катионы аммония, четвертичного аммония и амина, включая (но не ограничиваясь ими) аммоний, тетраметиламмоний, тетраэтиламмоний, метиламин, диметиламин, триметиламин, триэтиламин, этиламин и т. п. Другие репрезентативные органические амины, которые можно применять для получения солей присоединения оснований, включают диэтиламин, этилендиамин, этаноламин, диэтаноламин, пиперазин и т.п.

Соли и препараты соединений, предлагаемых в изобретении, описаны также в предварительных заявках, озаглавленных Рогти1айоп8 Рог Βοηζίιηίάαζοίο Рупбу1 Е1бегк (И8 серийный номер 60/832715; досье у патентного поверенного номер РР028237.0001), зарегистрированной 21 июля 2006 г., и 8абк оГ Вегмп^иоР! Рупбу1 Е1бегк апб Рогти1абоп8 ТйсгсоГ (досье у патентного поверенного номер РР028258.0001), зарегистрированной 30 августа 2006 г., каждая из которых полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки.

В контексте настоящего описания понятие фармацевтически приемлемый сложный эфир относится к сложным эфирам, которые гидролизуются ίη у1уо, и включает сложные эфиры, которые легко расщепляются в человеческом организме с высвобождением родительского соединения или его соли. Пригодными сложноэфирными группами являются, например, группы, полученные из фармацевтически приемлемых алифатических карбоновых кислот, прежде всего алкановых, алкеновых, циклоалкановых и алкандионовых кислот, в которых каждый алкильный или алкенильный фрагмент предпочтительно имеет не более 6 атомов углерода. Примерами конкретных сложных эфиров являются формиаты, ацетаты, пропионаты, бутираты, акрилаты и этилсукцинаты.

В контексте настоящего описания понятие фармацевтически приемлемые пролекарства относится к таким пролекарствам соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, которые с медицинской точки зрения пригодны для контакта с тканями человека и низших животных и не вызывают чрезмерную токсичность, раздражение, аллергические реакции и т. п., характеризуются соразмерным соотношением благоприятного действия/риска и обладают эффективностью в отношении цели их применения, а также к цвиттерионным формам, если они существуют, соединений, предлагаемых в изобретении. Понятие пролекарство относится к соединениям, которые быстро трансформируются ίη у1уо, высвобождая родительское соединение указанной выше формулы, например в результате гидролиза в крови. Подробное обсуждение этого вопроса дано у Т. ШдисЫ и V. 81е11а, Рго-бгидк ак Ыоуе1 ЭеНуегу 8ук1етк, том 14 Л.С.8. 8утрокшт 8епек, и в Вюгеуегк1Ь1е Сатегк ίη Эгид Эс^^п, под ред. Ебтагб В. Косбе, изд-во Атенсаи Рйагтасеи11са1 Аккоаабоц анб Регдатоа Ргекк, 1987, обе публикации включены в настоящее описание в качестве ссылки.

Специалистам в данной области должно быть очевидно, что соединения, предлагаемые в изобретении, включая соединения формул (I), (II), (III) или (IV), или их таутомеры, пролекарства, стереоизомеры

- 16 014230 и полиморфы, а также фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры и пролекарства любого их этих соединений могут подвергаться процессингу ίη νίνο в результате метаболизма в организме или клетке человека или животного кроме человека с образованием фармацевтически активных метаболитов, которые сохраняют свою активность в качестве ингибиторов. Активные метаболиты соединения, предлагаемого в изобретении, можно идентифицировать с помощью стандартных методов, известных в данной области (см., например, Вейойш С. и др., 1. Мей. Сйет. 40, 1997, с. 2011-2016; 811ап Ό. и др., 1. Рйатт. 8с1. 86(7), с. 765-767; Вадкйа^е К., Эгид Эех. Век. 34, 1995, с. 220-230; Войог Ν., Айхапсек ίη Эгид Век. 73, 1984, с. 224-331; Випйдаагй Н., Эек1дп о£ Ргойгидк, изд-во Е1кехзег Ргекк, 1985; и Ьагкеп 1.К., Эек1дп апй Аррйеайоп о£ Ргойгидк, Эгид Эекщп апй Эехе1ортеп1. под ред. Кгодкдаагй-Ьагкеп и др., изд-во Нагхгоой Аеайетю РиЬНкйегк, 1991). Подразумевается, что индивидуальные химические соединения, которые являются активными метаболитами соединения, предлагаемого в изобретении, подпадают под объем изобретения.

Понятие рак относится к раковому заболеванию, на которое можно оказывать благоприятное лечебное действие путем ингибирования киназы, прежде всего киназы ВаТ, и оно включает, например, типы рака, характеризующиеся плотными опухолями, такие, например, как карциномы (например, рак легкого, поджелудочной железы, щитовидной железы, яичника, мочевого пузыря, молочной железы, предстательной железы или ободочной кишки), меланомы, миелоидные нарушения (например, миелоидный лейкоз, множественная миелома и эритролейкоз), аденомы (например, ворсинчатая опухоль ободочной кишки) и саркомы (например, остеосаркома).

В репрезентативных вариантах осуществления изобретения соединения, предлагаемые в изобретении, представляют собой, например, {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(4трифторметилфенил)амин, (2-фтор-5-пиридин-3-илфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (2-фтор-5-пиридин-4-илфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (4-трет-бутилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(3трифторметилфенил)амин, (3 -этилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, (4-хлорфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, (4-этилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, (4-хлор-3-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (4-фтор-3-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(4трифторметоксифенил)амин, (2-фтор-5-трифторметилфенил)-(1-метил-5-{2-[5-метил-4-(3-трифторметилфенил)-1Н-имидазол-2ил]пиридин-4-илокси}-1Н-бензоимидазол-2-ил)амин, (2-фтор-5-трифторметилфенил)-(1-метил-5-{2-[5-метил-4-(4-трифторметилфенил)-1Н-имидазол-2ил]пиридин-4-илокси}-1Н-бензоимидазол-2-ил)амин, этиловый эфир 2-{4-[2-(2-фтор-5-трифторметилфениламино)-1-метил-1Н-бензоимидазол-5илокси]пиридин-2-ил}-5-трифторметил-1Н-имидазол-4-карбоновой кислоты, (2-{4-[2-(2-фтор-5-трифторметилфениламино)-1-метил-1Н-бензоимидазол-5-илокси]пиридин-2-ил}5-трифторметил-1Н-имидазол-4-ил)метанол,

2-{4-[1-метил-2-(4-трифторметилфениламино)-1Н-бензоимидазол-5-илокси]пиридин-2-ил}-3Нимидазол-4-карбонитрил, (3-трет-бутилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-фенил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, {1-метил-5-[2-(5-фенил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(4трифторметилсульфанилфенил)амин, (3-трет-бутилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, [4-фтор-3-(тетрагидрофуран-3-ил)фенил]-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (4-бромфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н- 17 014230 бензоимидазол-2-ил}амин, (4-фтор-3-изопропилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]1 Н-бензоимидазол-2-ил } амин, {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(4трифторметилсульфанилфенил)амин, (2-фтор-5-изопропилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (2-фтор-5-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (5-трет-бутил-2-фторфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (2-фтор-5-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-метил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, (2-фтор-5-пиридин-3-илфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин,

2-{4-[2-(2-фтор-5-трифторметилфениламино)-1-метил-1Н-бензоимидазол-5-илокси]пиридин-2-ил}3Н-имидазол-4-карбонитрил, (2-хлор-4-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (5-трет-бутил-2-хлорфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (2-фтор-5-пиридин-4-илфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (2-фтор-5-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(4-фенил-5-трифторметил-1Н-имидазол-2ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (2-хлор-5-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(4-фенил-5-трифторметил-1Н-имидазол-2ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, {1-метил-5-[2-(4-фенил-5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол2-ил}-(3-трифторметилфенил)амин, (3-этилфенил)-{1-метил-5-[2-(4-фенил-5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, (4-трет-бутилфенил)-{1-метил-5-[2-(4-фенил-5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (2-хлор-5-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (2-фтор-5-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-метил-4-фенил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (2-хлор-5-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-метил-4-фенил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (4-трет-бутилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-метил-4-фенил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, {1-метил-5-[2-(5-метил-4-фенил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(3трифторметилфенил)амин, (5-трет-бутил-2-фторфенил)-{1-метил-5-[2-(5-метил-4-фенил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, [4-(4-метилпиперазин-1 -ил)фенил]-{1 -метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, метиловый эфир 2-{4-[2-(2-фтор-5-трифторметилфениламино)-1-метил-1Н-бензоимидазол-5илокси]пиридин-2-ил}-3Н-имидазол-4-карбоновой кислоты, этиловый эфир 2-{4-[2-(2-хлор-5-трифторметилфениламино)-1-метил-1Н-бензоимидазол-5илокси]пиридин-2-ил}-5-трифторметил-1Н-имидазол-4-карбоновой кислоты, (2-фтор-4-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (2-хлорфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, (2,5-диметоксифенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, (3,5-диметоксифенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(2трифторметилфенил)амин, (2-этилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н

- 18 014230 бензоимидазол-2-ил}амин, (4-этилпиперазин-1-ил)-(2-{4-[2-(2-фтор-5-трифторметилфениламино)-1-метил-1Н-бензоимидазол5-илокси] пиридин-2-ил}-3Н-имидазол-4-ил)метанон, (2-гидроксиэтил)амид 2-{4-[2-(2-фтор-5-трифторметилфениламино)-1-метил-1Н-бензоимидазол-5илокси]пиридин-2-ил}-3Н-имидазол-4-карбоновой кислоты, {1-этил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(2фтор-5-трифторметилфенил)амин, (2-фтор-5-трифторметилфенил)-{6-метокси-1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]- 1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, {6-метокси-1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}-(4-трифторметилфенил)амин, (4-этилпиперазин-1-ил)-(2-{4-[1-метил-2-(4-трифторметилфениламино)-1Н-бензоимидазол-5илокси]пиридин-2-ил}-3Н-имидазол-4-ил)метанон, {1-этил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(4трифторметилфенил)амин, (2-гидроксиэтил)амид 2-{4-[1-метил-2-(4-трифторметилфениламино)-1Н-бензоимидазол-5илокси]пиридин-2-ил}-3Н-имидазол-4-карбоновой кислоты,

2- {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2иламино}-5-трифторметилфенол и

3- {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2иламино }-6-трифторметилфенол;

или их таутомеры, стереоизомеры, полиморфы, сложные эфиры, метаболиты или пролекарства либо фармацевтически приемлемые соли соединений, таутомеров, стереоизомеров, полиморфов, сложных эфиров, метаболитов или пролекарств.

Другими объектами настоящего изобретения являются способы получения соединений формул (I), (II), (III) или (1У) и синтетические промежуточные продукты, которые можно применять в таких способах.

Настоящее изобретение относится также к способам получения соединений, предлагаемых в изобретении, и к синтетическим промежуточным продуктам, которые можно применять в таких способах, как это подробно описано ниже.

Методы синтеза

На схеме 1 проиллюстрирован синтез центрального фрагмента, представляющего собой простой биариловый эфир, соединений, предлагаемых в изобретении. Соединение 1.1 подвергают взаимодействию с соединением 1.2, где один из радикалов Ь¹ или Ь² обозначает галоген, а другой из радикалов Ь¹ или Ь² обозначает ОН, с получением простого эфира 1.3. Сочетание можно осуществлять в органическом растворителе, таком как ацетонитрил или диметилсульфоксид, в присутствии основания, и можно осуществлять также при повышенных температурах или температурах дефлегмации. Пригодными основаниями являются К2СО3, СаСО3, КОН, №1ОН или КР-А12О3 Ооигпа1 оГ Отдашс Сйеш151ту, том 63, № 18, 1998, с. 6338-6343). Группа О в соединении 1.1 может представлять собой ΝΉ2 или предшественник аминогруппы, такой как NО2, или защищенную аминогруппу, которую можно затем превращать в аминогруппу путем восстановления или удаления защитных групп с предшественников аминогруппы соответственно. Группа Ζ в соединении 1.2 может представлять собой имидазолильную группу, замещенную одной или двумя группами К⁴, или функциональную группу, которую можно использовать для формирования такой имидазолильной группы. Пригодными функциональными группами являются альдегид или предшественник альдегида, такой как сложный эфир или карбонитрил, который затем можно превращать в альдегид. Сложноэфирные и карбонитрильные группы можно восстанавливать до альдегида с помощью восстановителя, такого как гидрид диизобутилалюминия. Ζ может представлять собой также группу -СН2ОК⁵, в которой К⁵ обозначает гидроксизащитную группу. Альдегид можно получать на более поздней стадии путем удаления защитной группы с группы К⁵ и окисления образовавшегося спирта до альдегида. Превращение альдегида в замещенную имидазоильную группу проиллюстрировано на схеме 3. Другие методы формирования замещенной имидазоильной группы проиллюстрированы на схеме 6.

На схеме 2 представлен пример синтеза конкретных простых биариловых эфиров. Следует иметь в виду, что представленные на схеме 2 схемы замещения приведены в качестве примера: О обозначает NО₂, Ь¹ обозначает ОН, Ь² обозначает С1 и Ζ обозначает сложный трет-бутиловый эфир.

Пример синтеза альдегида 2.7, в котором К² обозначает метил и Ь обозначает О, представлен в примере 1. Амин 2.1 можно превращать в алкиламин 2.2 с помощью многочисленных известных методов. В

- 19 014230 одном из вариантов амин 2.1 обрабатывают уксусным ангидридом и муравьиной кислотой с получением соответствующего формамида, который можно восстанавливать до алкиламина 2.2. Пригодными восстановителями являются ЫаВН₄ в присутствии ВЕ₃(ОСН₂СН₃)₂. В альтернативном варианте алкиламин 2.2 можно синтезировать путем взаимодействия амина 2.1 с трифторуксусным ангидридом, алкилирования соответствующего амида с помощью алкилирующего агента, такого как алкилгалогенид, и удаления трифторацетамидозащитной группы путем обработки основанием, таким как ЫаОН.

Хлорид 2.5 можно получать путем обработки пиколиновой кислоты 2.3 избытком тионилхлорида с получением хлорангидрида 2.4, который затем обрабатывают ди-трет-бутилдикарбонатом и пиридином с получением хлорида 2.5. Путем сочетания спирта алкиламина 2.2 с хлоридом 2.5 в основных условиях получают простой эфир 2.6, который затем можно превращать непосредственно в альдегид 2.7 путем восстановления с помощью гидрида диизобутилалюминия или в две стадии путем восстановления сложного эфира 2.6 до спирта и последующего окисления до альдегида.

На схеме 3 проиллюстрировано создание имидазольного кольца. Альдегид 2.7 можно подвергать взаимодействию с соединением 3.1, в котором Х^ь обозначает =О или =№НОН и К^4р и К^4р независимо друг от друга обозначают Н или К⁴, где К⁴ имеет указанные выше значения, при условии, что по меньшей мере один из К^4р и К^4р обозначает К⁴. Реакцию можно осуществлять в полярном растворителе, таком как смесь этилацетат/этанол, и в присутствии ХН₄ОН с получением соединения 3.2. Нитрогруппу соединения 3.2 можно восстанавливать до аминогруппы 3.3 путем обработки восстановителем, таким как дитионит натрия (Ыа₂8₂О₄).

На схеме 4 проиллюстрировано создание бензимидазольного кольца. Диамин 3.3 подвергают взаимодействию с тиоизоцианатом 4.1, получая тиомочевину 4.2. Путем обработки соединения 4.2 десульфурирующим агентом получают соединение формулы (I). Понятие десульфурирующий агент относится к агентам, которые можно применять для осуществления замыкания кольца, таким как ЕеС1₃, йодид 2хлор-1-метилпиридиния (реагент Мукайямы), хлорид 2-хлор-1,3-диметилимидазолия, РОС1₃ или алкилгалогенид, такой как метилйодид. Можно использовать также модифицированные реагенты Мукайямы (1оигпа1 оГ Огдашс Сйет1к1гу, том 70, № 7, 2005, с. 2835-2838).

- 20 014230

В альтернативном варианте соединения, предлагаемые в изобретении, можно синтезировать с использованием модифицированной последовательности реакций сочетания. На схеме 5 проиллюстрировано сочетание соединения 5.1 с соединением 5.2 с формированием связи, представляющей собой простой эфир, и сочетание соединения 5.3 с соединением 3.1 с получением имидазольного кольца в качестве предпоследней стадии получения полностью замкнутого пентациклического ядра. В промежуточных продуктах 5.1 и 5.2 один из радикалов Ь³ или Ь⁴ обозначает галоген, а другой из радикалов Ь³ или Ь⁴ обозначает ОН. Эти промежуточные продукты можно получать, как показано на приведенных выше схемах с использованием пригодных исходных материалов и/или защитных групп в соответствующих последовательностях реакций. Такие факторы известны специалисту в данной области. Например, альдегид 5.3 можно получать путем восстановления соответствующего карбонитрила, синтез которого описан в примере б0, гидридом диизобутилалюминия. Путем взаимодействия альдегида 5.3 согласно приведенной выше схеме 3 с кетоном 3.1 получают соединения формулы (I).

Соединения, предлагаемые в изобретении, которые имеют триазольную концевую группу, можно получать, как проиллюстрировано на схеме б, путем взаимодействия соединения б.1, в котором Ζ обозначает карбонитрил, с гидразидом б.2. Пример синтеза соединения б.3 описан в примере б0.

Схема 6

Следует иметь в виду, что имидазольные промежуточные продукты, используемые в реакциях сочетания, можно получать с помощью других путей синтеза. Один из таких примеров проиллюстрирован на схеме 7. Соединение 1.3, в котором Ζ обозначает СЫ, превращают в соединение, в котором Ζ обозначает амидиногруппу. Это превращение можно осуществлять путем взаимодействия соединения 1.3 с алкоксидом, таким как метоксид, с превращением карбонитрила в сложный имидатный эфир, который затем подвергают взаимодействию с аммониевым реагентом, таким как ацетат аммония или бензоат аммония, с получением амидина. Путем взаимодействия амидина с соединением (να), в котором Х^а обозначает уходящую группу, получают алкилированное и циклизованное соединение 7.2 или его таутомер. Путем нагревания соединения 7.2 удаляют воду (дегидратация) и получают промежуточный продукт 7.3. Другие условия дегидратации включают обработку соединения 7.2 органическими кислотами, такими как уксусная кислота, метансульфоновая кислота, камфорсульфоновая кислота, трифторметансульфоновая кислота и трифторуксусная кислота, а также неорганическими кислотами, такими как соляная кислота и серная кислота. Четыре реакции - образование сложного имидатного эфира, образование амидина, алкилирование/циклизацию и дегидратацию, как правило, осуществляют в виде последовательности реакций в одном сосуде.

- 21 014230

Соединения, предлагаемые в изобретении, можно применять для ингибирования ίη νίίτο или ίη νίνο роста раковых клеток. Соединения можно использовать индивидуально или в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом. Пригодные фармацевтически приемлемые носители или эксципиенты представляют собой, например, процессирующие агенты и модификаторы введения лекарственного средства и энхансеры, такие, например, как фосфат кальция, стеарат магния, тальк, моносахариды, дисахариды, крахмал, желатин, целлюлоза, метилцеллюлоза, натрийкарбоксиметилцеллюлоза, декстроза, гидроксипропил-в-циклодекстрин, поливинилпирролидинон, воски с низкой температурой плавления, ионообменные смолы и т.п., а также комбинации любых двух или большего количества указанных соединений. Другие пригодные фармацевтически приемлемые эксципиенты описаны в справочнике Кештдоп'к Р11агтасеиНса1 ^аепсек, изд-во Маск РиЬ. Со., Ыете 1ет8еу, 1991, включенном в настоящее описание в качестве ссылки.

Эффективные количества соединений, предлагаемых в изобретении, как правило, представляют собой любые количества, достаточные для обнаруживаемого ингибирования активности КаГ, которое выявляют с помощью любого из методов, представленных в настоящем описании, других методов анализа киназной активности КаГ, которые известны или легко могут быть изучены обычными специалистами в данной области, или определяют по ингибированию или ослаблению симптомов рака.

Количество действующего вещества, которое можно объединять с носителями с получением лекарственной формы в виде однократной дозы, должно варьироваться в зависимости от хозяина, подлежащего лечению, и конкретного пути введения. Однако следует понимать, что конкретный уровень доз для любого конкретного пациента должен зависеть от различных факторов, включая активность конкретного применяемого соединения, возраст, вес тела, общее состояние здоровья, пол, диету, время введения, путь введения, скорость экскреции, комбинацию лекарственных средств и серьезность конкретного заболевания, подлежащего лечению. Терапевтически эффективное количество в конкретной ситуации легко можно определять с помощью общепринятых экспериментов, и решение этого вопроса находится в компетенции обычного лечащего врача.

Для целей настоящего изобретения под терапевтически эффективной дозой обычно подразумевают общую суточную дозу, вводимую хозяину, в виде однократных или разделенных доз в количестве, например, от 0,001 до 1000 мг/кг веса тела ежедневно, от 1,0 до 30 мг/кг веса тела ежедневно. В состав стандартной дозы могут входить такие количества составляющих, которые достаточны для получения суточной дозы.

Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, можно вводить орально, парентерально, подъязычно, с помощью аэрозоля или спрея для ингаляции, ректально или местно в виде стандартных доз, содержащих общепринятые нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и наполнители при необходимости. Местное применение может предусматривать также чрескожное введение, например, с помощью чрескожных бляшек или устройств для ионофореза. Понятие парентеральный в контексте настоящего описания включает подкожные инъекции, внутривенные, внутримышечные, надчревные инъекции или инфузии.

Препараты для инъекций, например стерильные инъецируемые водные или масляные суспензии, можно приготавливать с помощью приемлемых известных в данной области диспергирующих или смачивающих агентов и суспендирующих агентов. Стерильный препарат для инъекций может представлять собой также стерильный инъецируемый раствор или суспензию в нетоксичном приемлемом для парентерального введения разбавителе или растворителе, например раствор в 1,3-пропандиоле. Приемлемыми наполнителями или растворителями являются стерилизованная вода, раствор Рингера или изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителей или суспендирующих сред можно применять стерильные жирные масла. Для этой цели можно применять любую смесь жирных масел, включая синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, в составе инъецируемых препаратов нашли применение жирные кислоты, такие как олеиновая кислота.

Суппозитории для ректального введения лекарственного средства можно получать путем смешения лекарственного средства с приемлемым не взывающим раздражения эксципиентом, таким как масло какао и полиэтиленгликоли, которые находятся в твердой фазе при нормальной температуре, но находятся в жидкой фазе при температуре в прямой кишке и поэтому расплавляются в прямой кишке с высвобождением лекарственного средства.

- 22 014230

Твердые лекарственные формы для орального введения могут представлять собой капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В таких твердых лекарственных формах действующее вещество можно смешивать по меньшей мере с одним инертным разбавителем, таким как сахароза, лактоза или крахмал. Такие лекарственные формы могут содержать также согласно общепринятой практике дополнительные субстанции, отличные от инертных разбавителей, например замасливатели, такие как стеарат магния. В случае капсул, таблеток и пилюль лекарственные формы могут содержать также забуферивающие агенты. Таблетки и пилюли можно приготавливать также с энтеросолюбильными покрытиями.

Жидкие лекарственные формы для орального введения могут представлять собой фармацевтически приемлемые эмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры, содержащие инертные разбавители, которые обычно применяют в данной области техники, например воду. Такие композиции могут включать также адъюванты, такие как смачивающие агенты, эмульгаторы и суспендирующие агенты, циклодекстрины и подслащивающие вещества, корригенты и отдушки.

Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, можно вводить также в форме липосом. Как известно в данной области, липосомы, как правило, получают из фосфолипидов или других липидных субстанций. Липосомы состоят из одно- или многослойных гидратированных жидких кристаллов, которые диспергированы в водной среде. Для получения липосом можно использовать любой нетоксичный физиологически приемлемый и метаболизируемый липид. Предлагаемые в настоящем изобретении композиции в форме липосом могут содержать помимо соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, стабилизаторы, консерванты, эксципиенты и т.п. Предпочтительными липидами являются фосфолипиды и фосфатидилхолины (лецитины), как встречающиеся в естественных условиях, так и синтетические. Методы получения липосом известны в данной области (см., например, МеШобк ίη Се11 Βίοίο^γ, том XIV, под ред. Ргексой, изд-во Асабетк Рге88, Νονν Уогк, Ν.ν., 1976, с. 33 и далее).

Хотя соединения, предлагаемые в изобретении, можно применять в виде единственного фармацевтического агента, их можно использовать также в сочетании с одним или несколькими другими агентами, применяемыми для лечения рака. Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, можно применять также в сочетании с известными другими терапевтическими агентами и противораковыми агентами, и комбинации предлагаемых в настоящем изобретении соединений с другими противораковыми или химиотерапевтическими агентами подпадают под объем изобретения. Примеры таких агентов описаны в Сапсег Рппс1р1е8 апб Ргасйсе оТ Опсо1оду, под ред. МТ. Эеу|1а и 8. Не11тап, 6-ое изд., изд-во Ырртсой \νί11ί;·ιιη5 & ХУбкиъ РиЫкйега, 15 февраля 2001 г. Специалист в данной области может определять, какие комбинации агентов можно применять, основываясь на конкретных характеристиках лекарственных средств и подлежащего лечению рака. К таким противораковым агентам относятся (но не ограничиваясь ими) следующие субстанции: модуляторы рецепторов эстрогена, модуляторы рецепторов андрогена, модуляторы ретиноидных рецепторов, цитотоксические/цитостатические агенты, антипролиферативные агенты, ингибиторы пренилпротеинтрансферазы, ингибиторы НМС-СоА-редуктазы и другие ингибиторы ангиогенеза, ингибиторы клеточной пролиферации и пути передачи сигналов выживания, индуцирующие апоптоз вещества и агенты, взаимодействующие с реперными точками клеточного цикла. Соединения, предлагаемые в изобретении, можно применять также в сочетании с лучевой терапией.

Таким образом, согласно одному из вариантов осуществления изобретения соединения, предлагаемые в изобретении, применяют также в сочетании с известными противораковыми агентами, такими, например, как модуляторы рецепторов эстрогена, модуляторы рецепторов андрогена, модуляторы ретиноидных рецепторов, цитотоксические агенты, антипролиферативные агенты, ингибиторы пренилпротеинтрансферазы, ингибиторы НМС-СоА-редуктазы, ингибиторы ВИЧ-протеазы, ингибиторы обратной транскриптазы и другие ингибиторы ангиогенеза.

К модуляторам рецепторов эстрогена относятся соединения, которые взаимодействуют или ингибируют связывание эстрогена с рецептором вне зависимости от механизма действия. Примеры модуляторов рецепторов эстрогена включают (но не ограничиваясь ими) тамоксифен, ралоксифен, идоксифен, ЬУ353381, ЬУ1 17081, торемифен, фулвестрант, 4-[7-2,2-диметил-1-оксопропокси-4-метил-2-[4-[2-(1пиперидинил)этокси] фенил]-2Н-1 -бензпиран-3 -ил]-фенил-2,2-диметилпропаноат, 4,4'-дигидроксибензофенон-2,4-динитрофенилгидразон и 8Н646.

К модуляторам рецепторов андрогена относятся соединения, которые взаимодействуют или ингибируют связывание андрогена с рецептором андрогена. Репрезентативными примерами модуляторов рецепторов андрогена являются финастероид и другие ингибиторы 5а-редуктазы, нилутамид, флутамид, бикалутамид, лиарозол и абиратенона ацетат. К модуляторам ретиноидных рецепторов относятся соединения, которые взаимодействуют или ингибируют связывание ретиноидов с ретиноидным рецепторов. Примерами модуляторов ретиноидных рецепторов являются бексаротен, третиноин, 13-цис-ретиноевая кислота, 9-цис-ретиноевая кислота, α-дифторметилорнитин, ЬХ23-7553, транс-N-(4'гидроксифенил)ретинамид и 1Н-карбоксифенилретинамид.

Цитотоксические и/или цитостатические агенты представляют собой соединения, которые вызывают гибель клеток или ингибируют пролиферацию клеток, прежде всего путем непосредственного взаимодействия с клеточной функцией либо путем ингибирования, либо оказывая воздействие на митоз кле- 23 014230 ток, к ним относятся алкилирующие агенты, факторы некроза опухоли, интеркаляторы, активируемые гипоксией соединения, ингибиторы микротрубок/стабилизаторов микротрубок, ингибиторы митотических кинезинов, ингибиторы киназ, участвующих в развитии митоза, антиметаболиты; модификаторы биологических ответов; гормональные/антигормональные терапевтические агенты, гематопэтические факторы роста, терапевтические агенты, меченные моноклональными антителами, ингибиторы топоизомеразы, ингибиторы протеосом и ингибиторы убикитин-лигазы. Примерами цитотоксических агентов являются (но не ограничиваясь ими) сертенеф, кахектин, ифосфамид, тасонермин, лонидамин, карбоплатин, алтретамин, преднимустин, дибромдулцитол, ранимустин, фотемустин, недаплатин, оксалиплатин, темозоломид, гептаплатин, эстрамустин, импросульфана тозилат, трофосфамид, нимустин, диброспидия хлорид, пумитепа, лобаплатин, сатраплатин, профиромицин, цисплатин, ирофулвен, дексифосфамид, цис-аминдихлор(2-метилпиридин)платина, бензилгуанин, глуфосфамид, ΟΡΧ100, тетрахлорид (транс, транс, транс)-бисму(гексан-1,6-диамин)му-[диаминплатина(11)]бис[диамин(хлор)платины(11)], диаризидинилспермин, трехокись мышьяка, 1-(11-додециламино-10-гидроксиундецил)-3,7-диметилксантин, зорубицин, идарубицин, даунорубицин, бисантрен, митоксантрон, пирарубицин, пинафид, валрубицин, амрубицин, антинеопластон, 3'-деамино-3'-морфолино-13-дезоксо-10-гидроксикарминомицин, аннамицин, галарубицин, элинафид, МЕЫ10755 и 4-деметокси-3-деамино-3-азиридинил-4метилсульфонилдаунорубицин (см. АО 00/50032). Репрезентативным примером активируемого гипоксией соединения является тирапазамин. Ингибиторами протеосомы являются (но не ограничиваясь ими) лактацистин и бортезомиб. Примерами ингибиторов микротрубок/стабилизаторов микротрубок являются паклитаксел, виндесина сульфат, 3',4'-дидегидро-4'-дезокси-8'-норвинкалеукобластин, доцетаксол, ризоксин, доластатин, мивобулина изетионат, ауристатин, цемадотин, ΚΡΚ.1 09881, ВМ8 184476, винфлунин, криптофицин, 2,3,4,5,6-пентафтор-Ы-(3-фтор-4-метоксифенил)бензола сульфонамид, ангидровинбластин, ЦИ-диметил-Ь-валил-Ь-валил-Ы-метил-Ь -валил-Ь -пролил-Ь-пролин-трет-бутиламид, Т Ό X258, эпотилоны (см., например, И8 6284781 и 6288237) и ВМ81 88797. Репрезентативные примеры ингибиторов топоизомеразы включают топотекан, гикаптамин, иринотекан, рубитекан, 6-этоксипропионил-3',4'-Оэксобензилиденхартреусин, 9-метокси-Ы,Ы-диметил-5-нитропиразол[3,4,5-к1]акридин-2-(6Н)пропанамин, 1-амино-9-этил-5-фтор-2,3-дигидро-9-гидрокси-4-метил-1Н,12Н-бензо[бе]пирано[3',4':Ь,7]индолизино [152Ь] хинолин-10,13(9Н,15Н)дион, луртотекан, 7 - [2-(Ы-изопропиламино)этил](208)кампотецин, В№1350, ВNΡИ100, ВЫ80915, ВЫ80942, этопосида фосфат, тенипосид, собузоксан, 2'диметиламино-2'-дезоксиэтопосид, ОЬ331, Ы-[2-(диметиламино)этил]-9-гидрокси-5,6-диметил-6Нпиридо[4,3-Ь]карбазол-1-карбоксамид, асулакрин, (5а,5аВ,8аа,9Ь)-9-[2-[Ы-[2-(диметиламино)этил]-Ыметиламино]этил]-5-[4-гидрокси-3,5-диметоксифенил]-5,5а,6,8,8а,9-гексагидрофуро(3',4':6,7)нафто(2,3б)-1,3-диоксол-6-он, 2,3-(метилендиокси)-5-метил-7-гидрокси-8-метоксибензо[с]фенантридиний, 6,9бис[(2-аминоэтил)амино]бензо[д]изогуинолин-5,10-дион, 5-(3-аминопропиламино)-7,10-дигидрокси-2-(2гидроксиэтиламинометил)-6Н-пиразоло [4,5,1 '-бе]акридин-6-он, Ν-[ 1 -[2(диэтиламино)этиламино]-7 метокси-9-оксо-9Н-тиоксантен-4-илметил]формамид, Ы-(2-(диметиламино)этил)акридин-4-карбоксамид, 6-[[2-(диметиламино)этил]амино]-3-гидрокси-7Н-индено[2,1-с]хинолин-7-он и димесна. Примеры ингибиторов митотических кинезинов, таких как человеческий митотический кинезин Ε8Ρ. описаны в публикациях РСТ АО 01/30768 и АО 01/98278, АО 03/050064 (19 июня 2003 г.), АО 03/050122 (19 июня 2003 г.), АО 03/049527 (19 июня 2003 г.), АО 03/049679 (19 июня 2003 г.), АО 03/049678 (19 июня 2003 г.) и АО 03/39460 (15 мая 2003 г.) и находящихся на рассмотрении заявках РСТ И8 03/06403 (зарегистрирована 4 марта 2003 г.), И8 03/15861 (зарегистрирована 19 мая 2003 г.), И8 03/15810 (зарегистрирована 19 мая 2003 г.), И8 03/18482 (зарегистрирована 12 июня 2003 г.) и И8 03/18694 (зарегистрирована 12 июня 2003 г.). В одном из вариантов осуществления изобретения ингибиторы митотических кинесзинов включают (но не ограничиваясь ими) ингибиторы Ε8Ρ, ингибиторы МК^Ρ1, ингибиторы СЕОТ-Е, ингибиторы МСАК, ингибиторы Кй14, ингибиторы МрйозрЫ и ингибиторы КаЬ6-КIΕ^.

Ингибиторы киназ, участвующих в развитии митоза, включают (но не ограничиваясь ими) ингибиторы аигога-киназы, ингибиторы Ρο1ο-подобных киназ (ΡΕΗ) (например, ингибиторы ΡΕΕ-Ι), ингибиторы ЬиЬ-1 и ингибиторы ЬиЬ-К1. Антипролиферативные агенты включают антисмысловые РНК- и ДНКолигонуклеотиды, такие как С3139, ОИЫ698, КУА8ККА8, СЕМ231 и ΙΝΧ3001, и антиметаболиты, такие как еноцитабин, кармофур, тегафур, пентостатин, доксифлуридин, триметрексат, флударабин, капецитабин, галоцитабин, цитарабина окфосфат, гидрат фостеабина натрия, ралтитрексед, палтитрексид, эмитефур, тиазофурин, децитабин, нолатрексед, пеметрексед, нелзарабин, 2'-дезокси-2'-метилиденцитидин, 2'фторметилен-2'-дезоксицитидин, Ы-[5-(2,3-дигидробензофурил)сульфонил]-Ы'-(3,4дихлорфенил)мочевина, Ы6-[4-дезокси-4-[Ы2-[2(Е),4(Е)-тетрадекадиеноил]глициламино]-Е-глицеро-В-Еманногептопиранозил]аденин, аплидин, эктеинасцидин, троксацитабин, 4-[2-амино-4-оксо-4,6,7,8тетрагидро-3Н-пиримидино[554-Ь][1,4]тиазин-6-ил-(8)-этил]-2,5-тиеноил-Ь-глутаминовая кислота, аминоптерин, 5-фторурацил, аланосин, 11-ацетил-8-(карбамоилоксиметил)-4-формил-6-метокси-14-окса-1,1диазатетрацикло(7.4.1.0.0)-тетрадека-2,4,6-триен-9-иловый эфир уксусной кислоты, сваинсонин, лометрексол, декстразоксан, метиониназа, 2'-циано-2'-дезокси-Ы4-пальмитоил-1-В-Оарабинофураносилцитозин и 3-аминопиридин-2-карбоксальдегидтиосемикарбазон. Примерами терапевтических агентов, меченных моноклональными антителами, являются такие терапевтические агенты,

- 24 014230 которые несут цитотоксические агенты или радиоизотопы, связанные с моноклональным антителом, специфическим в отношении раковой клетки или клетки-мишени. Примером является, в частности, Веххаг. Ингибиторы НМС-СоА-редуктазы представляют собой ингибиторы 3-гидрокси-3-метилглутарилСоА-редуктазы. Соединения, обладающие ингибирующей активностью в отношении НМС-СоАредуктазы, можно легко идентифицировать с помощью методов анализа, хорошо известных в данной области, таких как методы, описанные или процитированные в И8 4231938 и АО 84/02131. Примерами ингибиторов НМС-СоА-редуктазы, которые можно применять, являются (но не ограничиваясь ими) ловастатин (МЕV АСОК(К); см. И8 4231938, 4294926 и 4319039), симвастатин (2ОСОК(К); см. И8 4444784, 4820850 и 4916239), правастатин (ΡКАVАСНО^(К); см. И8 4346227, 4537859, 4410629, 5030447 и 5180589), флувастатин (ЬЕ8СОЬ(К); см. И8 5354772, 4911165, 4929437, 5189164, 5118853, 5290946 и 5356896) и аторвастатин (ЫРГТОЩК); см. И8 5273995, 4681893, 5489691 и 5342952). Структурные формулы этих и других ингибиторов НМС-СоА-редуктазы, которые можно применять в способах, предлагаемых в настоящем изобретении, описаны на с. 87 у М. Уа1раш, СНо1ек1его1 Ьотеппд Огидк, изд-во СЕеш1к1гу & МиЕту, 5 февраля 1996 г., с. 85-89 и в И8 4782084 и 4885314. В одном из вариантов осуществления изобретения ингибитор НМС-СоА-редуктазы выбирают из ловастатина и симвастатина.

К ингибиторам пренил-протеинтрансферазы относятся соединения, которые ингибирует один фермент или любую комбинацию ферментов пренил-протеинтрансфераз, включая фарнезилпротеинтрансферазу (РРТ-азу), геранилгеранил-протеинтрансферазу типа I (66РТ-аза4) и геранилгеранил-протеинтрансферазу типа II (66РТ-аза-П, называемая также КаЬ ССРТ-азой). Примерами соединений, ингибирующих пренил-протеинтрансферазу, являются (±)-6-[амино(4-хлорфенил)(1-метил-1Нимидазол-5-ил)метил]-4-(3-хлорфенил)-1-метил-2(1Н)хинолинон, (-)-6-[амино(4-хлорфенил)(1 -метил-1Нимидазол-5-ил)метил]-4-(3-хлорфенил)-1-метил-2(1Н)-хинолинон, (+)-6-[амино(4-хлорфенил)(1 -метил1Н-имидазол-5-ил)метил]-4-(3 -хлорфенил)-1-метил-2(1Н)-хинолинон, 5(8)-н-бутил-1 -(2,3диметилфенил)-4-[1-(4-цианбензил)]-5-имидазолилметил-2-пиперазинон, (8)-1-(3-хлорфенил)-4-[1-(4цианбензил)-5-имидазолилметил]-5-[2-(этансульфонил)метил)-2-пиперазинон, 5(8)-п-бутил-1-(2метилфенил)-4-[1-(4-цианбензил)-5-имидазолилметил]-2-пиперазинон, 1-(3-хлорфенил)-4-[1-(4цианбензил)-2-метил-5-имидазолилметил]-2-пиперазинон, 1-(2,2-дифенилэтил)-3-[№(1-(4-цианбензил)1Н-имидазол-5-илэтил)карбамоил]пиперидин, 4-{[4-гидроксиметил-4-(4-хлорпиридин-2илметил)пиперидин-1 -илметил]-2-метилимидазол-1 -илметил}бензнитрил, 4-{5-[4-гидроксиметил-4-(3 хлорбензил)пиперидин-1-илметил]-2-метилимидазол-1-илметил}бензнитрил, 4-{3-[4-(2-оксо-2Нпиридин-1 -ил)бензил]-3Н-имидазол-4-илметил}бензнитрил, 4-{ 3 -[4-(5-хлор-2-оксо-2Н-[1,2']бипиридин5'-илметил)]-3Н-имидазол-4-илметил}бензнитрил, 4-{3-[4-(2-оксо-2Н-[1,2']бипиридин-5'-илметил)]-3Нимидазол-4-илметил}бензнитрил, 4-[3 -(2-оксо-1 -фенил-1,2-дигидропиридин-4-илметил)-3Н-имидазол-4илметил]бензнитрил, 18,19-дигидро-19-оксо-5Н,17Н-6,10:12,16-диметен-1Н-имидазо[4,3-с] [1,11,4] диоксаазациклононадецин-9-карбонитрил, (±)-19,20-дигидро-19-оксо-5Н-18,21-этан-12,14-этен6,10-метен-22Н-бенз[б]имидазо[4,3-к]-[1,6,9,12]оксатриазациклооктадецин-9-карбонитрил, 19,20дигидро-19-оксо-5Н,17Н-18,21-этано-6,10:12,16-диметено-22Н-имидазо[3,4Е][1,8,11,14]оксатриазациклоэйкозин-9-карбонитрил и (±)-19,20-дигидро-3-метил-19-оксо-5Н-18,21этано-12,14-этено-6,10-метено-22Н-бенз[б]имидазо[4,3-к][1,6,9,12]оксатриазациклооктадецин-9карбонитрил. Другие примеры ингибиторов пренил-протеинтрансфераз можно найти в следующих публикациях и патентах: АО 96/30343, АО 97/18813, АО 97/21701, АО 97/23478, АО 97/38665, АО 98/28980, АО 98/29119, АО 95/32987, И8 5420245, И8 5523430, И8 5532359, И8 5510510, и8 5589485, И8 5602098, публикация европейского патента 0618221, публикация европейского патента 0675112, публикация европейского патента 0604181, публикация европейского патента 0696593, АО 94/19357, АО 95/08542, АО 95/11917, АО 95/12612, АО 95/12572, АО 95/10514, И8 5661152, АО 95/10515, АО 95/10516, АО 95/24612, АО 95/34535, АО 95/25086, АО 96/05529, АО 96/06138,

АО 96/06193, АО 96/16443, АО 96/21701, АО 96/21456, АО 96/22278, АО 96/24611, АО 96/24612,

АО 96/05168, АО 96/05169, АО 96/00736, И8 5571792, АО 96/17861, АО 96/33159, АО 96/34850,

АО 96/34851, АО 96/30017, АО 96/30018, АО 96/30362, АО 96/30363, АО 96/31111, АО 96/31477,

АО 96/31478, АО 96/31501, АО 97/00252, АО 97/03047, АО 97/03050, АО 97/04785, АО 97/02920,

АО 97/17070, АО 97/23478, АО 97/26246, АО 97/30053, АО 97/44350, АО 98/02436 и И8 5532359. Роль ингибитора пренил-протеинтрансферазы в ангиогенезе описана, например, в Еигореап Р оР Сапсег 55(9), 1999, с. 1394-1401.

Ингибиторы ангиогенеза представляют собой соединения, которые ингибируют образование новых кровеносных сосудов вне зависимости от механизма действия. Примеры ингибиторов ангиогенеза включают (но не ограничиваясь ими) тирозинкиназные ингибиторы, такие как ингибиторы тирозинкиназных рецепторов РП^ (АЕСРК1) и РПШ/КЭК (’УЕбРКЦ, ингибиторы эпидермального, фибробластного или тромбоцитарного факторов роста, ингибиторы ММР (матриксная металлопротеаза), блокаторы интегрина, интерферон-альфа, интерлейкин-12, пентозанполисульфат, ингибиторы циклооксигеназ, включая нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (НСПВС) типа аспирина и ибупрофена, а также избирательные ингибиторы циклооксигеназы-2 типа целекоксиба и рофекоксиба (ΡNА8, 89, 1992,

- 25 014230

с. 7384; ,1\С1 69, 1982, с. 475; АгсН. ОрЫЕа1то1. 108, 1990, с. 573; Апа!. Кес, (238), 1994, с. 68; ЕЕВ8 1.е1!егк 372, 1995, с. 83; С1т. ОпНор. 313, 1995, с. 76; 1. Мо1. Епбосппо1. 16, 1996, с. 107; 1рп. 1. РНагтасо1. 75, 1997, с. 105; Сапсег Кек. 57, 1997, с. 1625; Се11 93, 1998, с. 705; 1п!1. 1. Мо1. Меб. 2, 1998, с. 715; 1. Вю1. СНет. 274, 1999, с. 9116), стероидные противовоспалительные лекарственные средства (такие как кортикостероиды, минералокортикоиды, дексаметазон, преднизон, преднизолон, метилпред, бетаматазон), карбоксиамидотриазол, комбретастатин А4, скваламин, 6-О-хлорацетилкарбонилфумагиллол, талидомид, ангиостатин, тропонин-1, антагонисты ангиотензина II (см. Еегпапбех и др., 1. ЬаЬ. С11п. Меб. 105, 1985, с. 141-145) и антитела к УЕСЕ (см. №Шге Вю1есНпо1о§у, 17, октябрь 1999 г., с. 963-968; К1т и др., №1иге, 362, 1993, с. 841-844; XVО 00/44777 и XVО 00/61186). Другие терапевтические агенты, которые модулируют или ингибируют ангиогенез и которые можно применять в сочетании с соединениями, предлагаемыми в настоящем изобретении, включают агенты, которые модулируют или ингибируют системы коагуляции и фибринолиза (см. обзор в С11п. СНет. Ьа. Меб. 38, 2000, с. 679-692). Примерами агентов, которые модулируют или ингибируют пути коагуляции и фибринолиза, являются (но не ограничиваясь ими) гепарин (см. ТНготЬ. Наеток!. 80, 1998, с. 10-23), низкомолекулярные гепарины и ингибиторы карбоксипептидазы и (известные также как ингибиторы активируемого активным тромбином ингибитора фибринолиза [ТАЕ1а]) (см. ТНготЬок1К Кек. 101, 2001, с. 329-354). Ингибиторы ТАЕ1а описаны в опубликованной заявке РСТ ^О 03/013526 и И8 60/349925 (зарегистрированная 18 января 2002 г.). Под объем изобретения подпадают также комбинации соединений, предлагаемых в изобретении, с НСПВС, которые являются избирательными ингибиторами СОХ-2 (к которым относят, как правило, соединения, которые обладают по меньшей мере в 100 раз более высокой специфичностью в отношении ингибирования СОХ-2 по сравнению с СОХ-1 при оценке соотношения значения 1С₅₀ для СОХ-2 по сравнению со значением 1С₅₀ для СОХ-1 с помощью клеточных или микросомальных анализов). Такие соединения включают (но не ограничиваясь ими) соединения, описанные в И8 5474995, выданном 12 декабря 1995 г., И8 5861419, выданном 19 января 1999 г., И8 6001843, выданном 14 декабря 1999 г., И8 6020343, выданном 1 февраля 2000 г., И8 5409944, выданном 25 апреля 1995 г., И8 5436265, выданном 25 июля 1995 г., И8 5536752, выданном 16 июля 1996 г., И8 5550142, выданном 27 августа 1996 г., И8 5604260, выданном 18 февраля 1997 г., И8 5698584, выданном 16 декабря 1997 г., И8 5710140, выданном 20 января 1998 г., XVО 94/15932, опубликованной 21 июля 1994 г., И8 5344991, выданном 6 июня 1994 г., И8 5134142, выданном 28 июля 1992 г., И8 5380738, выданном 10 января 1995 г., И8 5393790, выданном 20 февраля 1995 г., И8 5466823, выданном 14 ноября 1995 г., И8 5633272, выданном 27 мая 1997 г., и И8 5932598, выданном 3 августа 1999 г., которые все включены в настоящее описание в качестве ссылки. Репрезентативные ингибиторы СОХ-2, которые можно применять в способах, предлагаемых в настоящем изобретении, включают 3-фенил-4-(4-(метилсульфонил)фенил)-2-(5Н)-фуранон и 5-хлор-3-(4метилсульфонил)фенил-2-(2-метил-5-пиридинил)пиридин. Соединения, которые описаны в качестве специфических ингибиторов СОХ-2 и которые, следовательно, можно применять согласно настоящему изобретению, и методы их синтеза можно найти в следующих патентах, находящихся в рассмотрении заявках и публикациях, которые включены в настоящее описание в качестве ссылки: ^О 94/15932, опубликована 21 июля 1994 г., И8 5344991, выдан 6 июня 1994 г., И8 5134142, выдан 28 июля 1992, И8 5380738, выдан 10 января 1995 г., И8 5393790, выдан 20 февраля 1995 г., И8 5466823, выдан 14 ноября 1995 г., И8 5633272, выдан 27 мая 1997 г., И8 5932598, выдан 3 августа 1999 г., И8 5474995, выдан 12 декабря 1995 г., И8 5861419, выдан 19 января 1999 г., И8 6001843, выдан 14 декабря 1999 г., И8 6020343, выдан 1 февраля 2000 г., И8 5409944, выдан 25 апреля 1995 г., И8 5436265, выдан 25 июля 1995 г., И8 5536752, выдан 16 июля 1996 г., И8 5550142, выдан 27 августа 1996 г., И8 5604260, выдан 18 февраля 1997 г., И8 5698584, выдан 16 декабря 1997 г. и И8 5710140, выдан 20 января 1998 г. Другие примеры ингибиторов ангиогенеза включают (но не ограничиваясь ими) эндостатин, украин, ранпирназу, 1М862, 5-метокси-4-[2-метил-3-(3-метил-2-бутенил)оксиранил]-1-оксаспиро[2,5]окт-6-ил(хлорацетил)карбамат, ацетилдинаналин, 5-амино-1-[[3,5-дихлор-4-(4-хлорбензил)фенил]метил]-1Н-1,2,3-триазол-4карбоксамид, СМ101, скваламин, комбрестатин, КР14610, ΝΧ31838, сульфированный маннопентозофосфат, 7,7-карбонилбис [имино-№метил-4,2-пирролокарбонилимино [№метил-4,2-пиррол]карбонилимино]бис-(1,3-нафталиндисульфонат) и 3-[(2,4-диметилпиррол-5-ил)метилен]-2-индолинон (8И5416).

К агентам, которые оказывают воздействие на реперные точки клеточного цикла, относятся соединения, ингибирующие протеинкиназы, которые участвуют в трансдукции сигналов реперных точек клеточного цикла, повышая чувствительность тем самым раковых клеток к повреждающим ДНК агентам. К таким агентам относятся ингибиторы АТК, АТМ, СНк1- и СНк2-киназ и ингибиторы сбк- и сбс-киназ, и их конкретными примерами являются 7-гидроксистауроспорин, флавопиридол, СУС202 (циклацел) и ВМ8-387032.

Ингибиторы клеточной пролиферации и пути передачи сигналов выживания представляют собой фармацевтические агенты, которые ингибируют рецепторы клеточной поверхности и каскады трансдукции сигналов в направлении их распространения от этих поверхностных рецепторов. К таким агентам относятся ингибиторы ингибиторов ЕСЕК (например, гефитиниб и эрлотиниб), ингибиторы ЕКВ-2 (например, трастузумаб), ингибиторы 1СЕК, ингибиторы цитокиновых рецепторов, ингибиторы МЕТ5, ингибиторы Р13К (например, ЬУ294002), сериновых/треониновых киназ (включая (но не ограничиваясь

- 26 014230 ими) ингибиторы Лк1, описанные в АО 02/083064, АО 02/083139, АО 02/083140 и АО 02/083138), ингибиторы киназы КаГ (например, ΒΑΥ-43-9006), ингибиторы МЕК (например, С1-1040 и ΡΌ-098059) и ингибиторы тТОК (например, АуеЛ СС1-779). Такие агенты включают низкомолекулярные ингибиторы и антагонисты антител.

К индуцирующим апоптоз агентам относятся активаторы представителей семейства ΤΝΕрецепторов (включая ТКА1Ь-рецепторы).

В некоторых вариантах осуществления изобретения к репрезентативным агентам, которые можно применять в сочетании с соединениями, предлагаемыми в изобретении, для лечения рака, относятся, например, иринотекан, топотекан, гемицитабин, 5-фторурацил, леуковорин, карбоплатин, цисплатин, таксаны, тезацитабин, циклофосфамид, алкалоиды винка, иматиниб (гливек), антрациклины, ритуксимаб, трастузумаб, а также другие противораковые химиотерапевтические агенты.

Вышеуказанные соединения, которые можно применять в сочетании с соединениями, предлагаемыми в изобретении, следует использовать в терапевтических количествах, указанных в настольном справочнике врача (ΡΌΗ) 47-е изд. (1993), который включен в настоящее описание в качестве ссылки, или в таких терапевтических количествах, которые должны быть известны обычному специалисту в данной области.

Соединения, предлагаемые в изобретении, и другие противораковые агенты можно вводить в рекомендованных максимальных клинических дозах или в более низких дозах. Уровень доз действующего вещества в композициях, предлагаемых в изобретении, может варьироваться так, чтобы достигать требуемого терапевтического ответа в зависимости от пути введения, серьезности заболевания и реакции пациента. Комбинацию можно вводить в виде индивидуальных композиций или в виде однократной формы лекарственного средства, содержащей оба агента. При введении в виде комбинации терапевтические агенты можно приготавливать в виде индивидуальных композиций, которые применяют в одно и то же время или в различное время, или в виде терапевтических агентов, которые можно применять в виде одной композиции.

Антиэстрогены, такие как тамоксифен, ингибируют рост рака молочной железы посредством индукции приостановки клеточного цикла, для чего требуется активность ингибитора клеточного цикла р27К1р. В настоящее время установлено, что активация пути Как-КаГ-МАР-киназ изменяет статус фосфорилирования р27К1р, в результате чего его ингибирующая активность при приостановке клеточного цикла уменьшается, что приводит к устойчивости к антиэстрогенам (^оηоνаη и др., 1. ΒίοΙ. Сйет. 27(5), 2001, с. 40888). Как описано Оопогап с соавторами, ингибирование пути передачи сигнала МАРК в результате обработки ингибитором МЕК изменяет статус фосфорилирования р27 в устойчивых к гормонам линиях клеток рака молочной железы и в результате восстанавливает чувствительность к гормонам. Таким образом, согласно одному из объектов изобретения любые варианты соединений формулы (Ι), (ΙΙ), (ΙΙΙ) или (Ιν) или их таутомеры, фармацевтически приемлемые соли или фармацевтически приемлемые соли таутомеров можно использовать для лечения гормонзависимого рака, такого как рак молочной железы и предстательной железы, для реверсии устойчивости к гормона, обычно встречающейся при использовании общепринятых противораковых агентов.

При гематологических формах рака, таких как хронический миелолейкоз (ХМЛ), хромосомная транслокация ответственна за конститутивно активированную тирозинкиназу ВСК-АВ1. Страдающие таким раком пациенты обладают чувствительностью к гливеку, низкомолекулярному ингибитору тирозинкиназы, в результате ингибирования киназной активности АЫ. Однако многие пациенты, которые страдают прогрессирующей стадией заболевания, первоначально реагировали на гливек, но позднее у них наблюдался рецидив из-за обусловливающих устойчивость мутаций в киназном домене АЫ. В опытах ίη νίίτο продемонстрировано, что ВСК-Ау1 проявляют свое действие посредством характерного для киназы КаГ пути. Кроме того, ингибирование более одной киназы в этом пути обеспечивает дополнительную защиту от обусловливающих устойчивость мутаций. Таким образом, согласно другому объекту изобретения любые варианты соединений формулы (Ι), (ΙΙ), (ΙΙΙ) или (Ιν) или их таутомеры, фармацевтически приемлемые соли или фармацевтически приемлемые соли таутомеров можно использовать в сочетании по меньшей мере с одним дополнительным агентом, таким как гливек, для лечения гематологических форм рака, таких как хронический миелолейкоз (ХМЛ), для реверсии или предупреждения устойчивости по меньшей мере к одному дополнительному агенту.

Следующим объектом настоящего изобретения являются способы ингибирования по меньшей мере одной сериновой/треониновой киназы в пути передачи сигнала МАРК у индивидуума или лечения биологического состояния, опосредуемого сериновой/треониновой киназой пути передачи сигнала МАРК у индивидуума, заключающиеся в том, что вводят терапевтическую композицию, которая содержит по меньшей мере одно соединение формул (Ι), (ΙΙ), (ΙΙΙ) или (Ιν) или его таутомер, фармацевтически приемлемую соль или фармацевтически приемлемую соль таутомера, которая эффективно ингибирует активность по меньшей мере одной сериновой/треониновой киназы в пути передачи сигнала МАРК у индивидуума.

Согласно этому объекту изобретения терапевтическую композицию можно применять для лечения пациентов, которые нуждаются в лечении такими ингибиторами (например, страдающих раком, опосре

- 27 014230 дуемым аномальной передачей сигнала МАРК). К типам рака, опосредуемым аномальной передачей сигнала МАРК, относятся, например, меланома, папиллярный рак, рак щитовидной железы, рак яичника, рак ободочной кишки, рак поджелудочной железы, немелкоклеточный рак легкого (Ы8СЬС), острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ) и острый миелолейкоз. Аномальную передачу сигнала МАРК можно ингибировать путем введения соединения, которое ингибирует формы дикого типа или мутантные формы Как, КаГ, МЕК или ЕКК.

Одним из вариантов осуществления изобретения является способ ингибирования Как (дикого типа или мутантной Как). Способ заключается в том, что вводят в эффективном количестве любые варианты соединения формул (I), (II), (III) или (IV) или их таутомеры, фармацевтически приемлемые соли или фармацевтически приемлемые соли таутомеров индивидууму, который нуждается в этом.

Другим вариантом осуществления изобретения является способ ингибирования КаГ (дикого типа или мутантной В-КаГ). Способ заключается в том, что вводят в эффективном количестве любые варианты соединения формул (I), (II), (III) или (IV) или их таутомеры, фармацевтически приемлемые соли или фармацевтически приемлемые соли таутомеров индивидууму, который нуждается в этом.

Еще одним вариантом осуществления изобретения является способ ингибирования МЕК. Способ заключается в том, что вводят в эффективном количестве любые варианты соединения формул (I), (II), (III) или (IV) или их таутомеры, фармацевтически приемлемые соли или фармацевтически приемлемые соли таутомеров индивидууму, который нуждается в этом.

Еще одним вариантом осуществления изобретения является способ ингибирования ЕКК. Способ заключается в том, что вводят в эффективном количестве любые варианты соединения формул (I), (II), (III) или (IV) или их таутомеры, фармацевтически приемлемые соли или фармацевтически приемлемые соли таутомеров индивидууму, который нуждается в этом.

Приведенным в качестве примера соединением, которое применяют в способах этого объекта изобретения, является 1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил-1Н-(4-трифторметилфенил)амин, обладающий высокой ингибирующей активностью в отношении пути передачи сигнала МАРК, что описано ниже в примерах 82-86 и 89-90 и показано на фиг. 6-12Б; 14А-В и 15. Соединение является сильным ингибитором В-КаГ, с-КаГ, мутанта В-КаГ и мутанта Как в биохимических опытах, что видно из примера 82, в котором продемонстрировано ингибирование активности мутанта В-КаГ (значение КЭ, составляет 0,0053 мкМ), ингибирование активности В-КаГ (значение Κ’₅₀ 0,068 мкМ) и ингибирование активности с-КаГ (значение Κ’₅₀ 0,004 мкМ). Обработка соединением вызывала регресс опухоли на всех трех изученных моделях с использованием ксенотрансплантатов мутантной формы В-КаГ (А375М5, МЕХЕ276 и НТ29), и ингибирование роста опухоли на моделях ксенотрансплантата К-Как и Ν-Как, что обобщено ниже в табл. 7 и описано в примерах 84, 85 и 86.

Анализ модуляции мишеней в опухолевых клетках линий А375^ МЕХЕ276 и НСТ-116 после обработки {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}-(4трифторметилфенил)амином позволил установить, что фосфорилирование МЕК ингибировалось в зависимости от дозы и от времени, что видно из фиг. 7Б, 8Б и 10В. Кроме того, обработка опухолевых клеток линий А375^ МЕХЕ276 и НСТ-116 соединением модулировала маркеры, расположенные в направлении распространения сигнала от КаГ, включая ВИМ. циклин Ό1, р27К1р и рАКТ, что видно из фиг. 7Г, 8В и 9В. Эти анализы, проведенные с использованием доклинических моделей, свидетельствуют о том, что {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}-(4трифторметилфенил)амин обладает зависящей от дозы и времени способностью ингибировать как фосфорилирование мишени МЕК, так и участвующие в передаче сигнала молекулы, расположенные в направлении распространения сигнала от КаГ в пути МАРК.

Следующим объектом настоящего изобретения являются способы ингибирования по меньшей мере одного тирозинкиназного рецептора, выбранного из группы, включающей УЕ6ЕК-2, РПСЕК-β, рЕКК, ЬЕСЕ, ЕСЕК1, ЕСЕК2, ЕСЕК3, с-Кй и С8Е4К, у индивидуума или лечения биологического состояния, опосредуемого по меньшей мере одним из УЕ6ЕК-2, РПСЕК-β, рЕКК, ЬЕСЕ, ЕСЕК1, ЕСЕК2, ЕСЕК3, сКй и С8Е-ГК, заключающиеся в том, что вводят терапевтическую композицию, содержащую по меньшей мере одно соединение или его фармацевтически приемлемую соль формулы (I), (II), (III) или (IV), которая эффективно ингибирует тирозинкиназный рецептор у индивидуума.

Терапевтические соединения согласно этому объекту изобретения можно применять для лечения пациентов, которые нуждаются в лечении такими ингибиторами (например, страдающих раком, опосредуемым аномальной передачей сигнала тирозинкиназного рецептора). К формам рака, опосредуемым аномальной передачей сигнала тирозинкиназного рецептора, относятся, например, меланома, рак молочной железы, рак мочевого пузыря, рак легкого, рак щитовидной железы, рак предстательной железы, рак яичника, лейкоз тучных клеток, опухоли зародышевых клеток, мелкоклеточная карцинома легкого, опухоли, относящиеся к строме желудочно-кишечного тракта, острый миелолейкоз (ОМЛ), нейробластома и рак поджелудочной железы.

Одним из вариантов осуществления изобретения является способ ингибирования УЕСЕК-2. Способ заключается в введении в эффективном количестве соединения или его фармацевтически приемлемой

- 28 014230 соли, относящихся к любым вариантам соединений формулы (I), (II), (III) или (IV), индивидууму, который нуждается в этом. Способ можно применять для лечения плотных опухолей путем ингибирования ангиогенеза.

Следующим вариантом осуществления изобретения является способ ингибирования ΡΩΟΡΡ-β. Способ заключается в введении в эффективном количестве соединения или его фармацевтически приемлемой соли, относящихся к любым вариантам соединений формулы (I), (II), (III) или (IV), индивидууму, который нуждается в этом.

Другим вариантом осуществления изобретения является способ ингибирования с-Κίΐ. Способ заключается в введении в эффективном количестве соединения или его фармацевтически приемлемой соли, относящихся к любым вариантам соединений формулы (I), (II), (III) или (IV), индивидууму, который нуждается в этом.

Еще одним вариантом осуществления изобретения является способ ингибирования С8Г4К. Способ заключается в введении в эффективном количестве соединения или его фармацевтически приемлемой соли, относящихся к любым вариантам соединений формулы (I), (II), (III) или (IV), индивидууму, который нуждается в этом.

Примером соединения, которое можно применять в способах в этом объекте изобретения, является {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}(4трифторметилфенил)амин, представляющий собой эффективный ингибитор тирозинкиназных рецепторов АЕСГК-2, РПСЕК-β, рЕКК, ЬЕСЕ, Е6ЕК1, Е6ЕК2, Е6ЕК3, с-Κίΐ аиб С8Г4К при оценке с помощью биохимического анализа. Соединение обладает ингибирующей активностью в отношении АЕСЕК-2 (значение Κ.'₅₀ 0,07 мкМ), ингибирующей активностью в отношении РОСРК-β (значение Κ.'₅₀ 0,0032 мкМ), ингибирующей активностью в отношении с-Κίΐ (значение Κ.'₅₀ 0,02 мкМ) и ингибирующей активностью в отношении С8Г4К (значение с 0,20 мкМ), что описано в пример 87. Кроме того, соединение индуцировало ингибирование ангиогенеза на модели ίη νίνο, полученной с помощью матригеля, что видно из фиг. 13 и описано в примере 88.

Настоящее изобретение станет более понятным путем ссылки на приведенные ниже примеры, которые даны только для иллюстрации и не направлены на ограничение настоящего изобретения.

Ниже в примерах, а также в описании приведенные сокращения имеют указанные ниже значения. Понятие, которые не определены, имеют общепринятые значения.

ЛРС.Ч - масс-спектроскопия с химической ионизацией при атмосферном давлении;

ад. - водный;

атм - атмосфера;

см - сантиметр;

°С - градусы Цельсия;

ДИПЭА - диизопропилэтиламин;

ДМХ - 2-хлор-1,3-диметилимидазолиния хлорид;

ДМСО - диметилсульфоксид;

экв. - эквивалент;

ЕЮАс - этилацетат;

ΕΐΟΗ - этанол;

г - грамм(ы);

ч - час;

ЖХВР - жидкостная хроматография высокого разрешения;

ИПС - изопропиловый спирт;

л - литр;

ЬСАР - площадь в процентах на хроматограмме, полученной жидкостной хроматографией;

ЖХ/МС - жидкостная хроматография/масс-спектроскопия;

М - молярный;

МеСЫ - ацетонитрил;

мл - миллилитры;

ЫаОМе - метоксид натрия;

1-РгОН - 1-пропанол;

ТЭА - триэтиламин;

ТФУА - трифторуксусный ангидрид;

ТГФ - тетрагидрофуран.

Репрезентативные боковые цепи, применяемые в соединениях, которые представлены в следующих примерах, можно получать с помощью описанных ниже процессов.

Пример 1.

Получение {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил}-(4-трифторметилфенил)амина

- 29 014230

1а 1Ь 1с

В трехгорлую колбу объемом 500 мл, снабженную механической мешалкой, вносили К2СО3 (4,15 г, 30 ммоль). Сосуд герметично закрывали, откачивали воздух и сушили на пламени. Аппарату давали охладиться до комнатной температуры и продували аргоном. В реакционную колбу добавляли 4-амино-3нитрофенол 1а (3,08 г, 20 ммоль), трет-бутил-4-хлорпиридин-2-карбоксилат 1Ь (5,2 г, 24 ммоль) и безводный ДМСО (30 мл). Образовавшуюся смесь интенсивно перемешивали и нагревали до 100°С в течение ~14 ч. Реакционную смесь сливали на охлажденный на льду фосфатный буфер (рН 7) и реакционную колбу тщательно промывали МТБЭ (метил-трет-бутиловый эфир) и водой. Объединенную двухфазную смесь фильтровали через целит (подушка >2 см). Слои разделяли и отделяли, водную фазу экстрагировали МТБЭ (3x100 мл). Объединенные органические слои промывали водой (5x100 мл), сушили (Мд8О₄) и упаривали. Неочищенный остаток адсорбировали на 81О₂ и очищали с помощью экспрессхроматографии (4:1, 2:1, 1:1 гексан-ЕЮАс (этилацетат)), получая 4,92 г (14,9 ммоль, выход 74%) соединения 1с в виде твердого вещества светло-коричневого цвета.

'Н ЯМР (300 МГц, СОС1_;) δ 8,58 (б, 1=5,8 Гц, 1Н), 7,90 (б, 1=2,8 Гц, 1Н), 7,56 (б, 1=2,5 Гц, 1Н), 7,17 (бб, 1=2,8, 8,8 Гц, 1Н), 6,94 (бб, 1=2,8, 5,8, Гц, 1Н), 6,91 (б, 1=9,1 Гц, 1Н), 6,15 (Ьг 8, 2Н), 1,62 (8, 9Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОСГ) δ 165,8, 164,0, 151,8, 151,5, 143,4, 143,2, 131,5, 129,8, 121,0, 118,0, 114,2, 113,1, 83,0, 28,4;

Т_пл 163-166°С.

Стадия 2.

К раствору нитроанилина 1с (5,62 г, 17 ммоль) в СН₂С1₂ (85 мл) при 0°С добавляли ТФУА (2,4 мл, 3,6 г, 17 ммоль). Затем охлаждающую баню удаляли и реакционную смесь выдерживали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и добавляли ТВАС1 (хлорид тетрабутиламмония, 2,5 г, 8,5 ммоль), Ме₂8О₄ (диметилсульфат 3,2 мл, 4,3 г, 34 ммоль) и 10% ЫаОН (34 мл). Образовавшуюся смесь интенсивно перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли водой и образовавшиеся слои разделяли и отделяли. Водную фазу экстрагировали СН₂С1₂ (3x100 мл) и объединенные органические слои промывали соляным раствором (2x100 мл), сушили (Мд8О₄) и упаривали. Неочищенный остаток адсорбировали на силикагеле и очищали с помощью экспресс-хроматографии (4:1, 2:1, 1:1, 1:2 гексан/ЕЮАс), получая 4,5 г (13,0 ммоль, 76%) соединения 1б в виде твердого вещества светло-оранжевого цвета.

'|| ЯМР (300 МГц, СОС1_;) δ 8,54 (б, 1=5,5 Гц, 1Н), 8,04 (Ьг б, 1=4,7 Гц, 1Н), 7,93 (б, 1=2,8 Гц, 1Н), 7,53 (б, 1=2,5 Гц, 1Н), 7,25 (арр бб, 1=2,8, 9,1 Гц, 1Н), 6,91 (т, 2Н), 3,04 (б, 1=4,9 Гц, 3Н), 1,59 (8, 9Н);

¹³С ЯМР (75 МГц, СОСГ) δ 165,9, 164,1, 151,5, 144,7, 142,1, 130,4, 118,8, 115,5, 114,1, 112,9, 82,9, 30,4, 28,5;

Т_пл 187-189°С.

Стадия 3.

В высушенную на пламени трехгорлую круглодонную колбу объемом 500 мл, продутую Ν₂, вносили ЛАГ (алюмогидрид лития, 3,0 г, 75 ммоль) и безводный ТГФ (240 мл). Образовавшуюся суспензию охлаждали до 0°С и медленно добавляли сложный трет-бутиловый эфир 1б (20,7 г, 60 ммоль), поддержи

- 30 014230 вая внутреннюю температуру реакции на уровне ниже 5°С. Затем реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч, после чего перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Добавляли ЫаВН₄ (2,27 г, 60 ммоль) и реакционную смесь перемешивали еще в течение 1 ч при комнатной температуре. После завершения реакции реакционную смесь обрабатывали, добавляя по каплям последовательно воду (3 мл), 15% ЫаОН (3 мл) и воду (9 мл). Образовавшуюся смесь фильтровали через целит и оставшиеся твердые частицы промывали ЕЮАс и метанолом. Объединенные органические фракции упаривали и образовавшийся неочищенный остаток адсорбировали на 8Ю₂ и очищали с помощью экспрессхроматографии (97:3 СН₂С1₂ - МеОН), получая 7,63 г (27,7 ммоль, 46%) твердого вещества краснооранжевого цвета, представляющего собой соединение 1е.

Ή ЯМР (300 МГц, СЭС1₃) δ 8,40 (б, 1=5,5 Гц, 1Н), 8,05 (Ьг к, 1Н), 7,96 (б, 1=2,75 Гц, 1Н), 7,29 (б, 1=2,75 Гц, 1Н), 6,92 (б, 1=9,35 Гц, 1Н), 6,75 (т, 2Н), 4,68 (к, 2Н), 3,07 (б, 1=5,23 Гц, 3Н).

Стадия 4.

О

В круглодонную колбу объемом 100 мл вносили бензиловый спирт 1е (1,38 г, 5,0 ммоль), МпО₂ (6,52 г, 75 ммоль) и СНС1₃ (20 мл). Образовавшуюся суспензию перемешивали при комнатной температуре (КТ) в течение 2 дней. Реакционную смесь фильтровали через целит и оставшиеся твердые частицы промывали последовательно СНС1₃ и ЕЮН. Объединенные органические фракции упаривали и образовавшийся неочищенный остаток адсорбировали на силикагеле и очищали с помощью экспрессхроматографии (98:2 СН₂С1₂/МеОН), получая 790 мг (2,89 ммоль, 58%) органического твердого вещества оранжевого цвета, представляющего собой ГГ.

Ή ЯМР (300 МГц, СОСС) δ 10,01 (к, 1Н), 8,64 (б, 1=5,5 Гц, 1Н), 8,09 (Ьг к, 1Н), 7,96 (б, 1=2,75 Гц, 1Н), 7,37 (б, 1=2,48 Гц, 1Н), 7,29 (б, 1=2,75 Гц, 1Н), 7,08 (бб, 1=2,47, 5,5 Гц, 1Н), 6,94 (б, 1=9,35 Гц, 1Н), 3,08 (б, 1=5,23 Гц, 3Н).

Стадия 5.

Формирование имидазольного кольца (Ва1б\\зп И, Епде1Еагб1 Е.Ь., НпксЬтапп К., Ьипбе11 С.Р., Рописе11о С.8., I. Меб. СЬет., 22, 1979, 687).

Соединение 1д (фирма Бапсак1ег (Виндхам, шт. Нью-Гемпшир), 25,75 мл, 136,5 ммоль) добавляли к раствору ЫаОАс (22,4 г, 273 ммоль) в Н₂О (60 мл) и образовавшийся раствор нагревали до 100°С в течение 40 мин. После охлаждения до комнатной температуры (КТ) добавляли раствор соединения 1Ь к суспензии соединения 1Г (25 г, 91 ммоль) в МН₄ОН (150 мл) и метаноле (450 мл).

Образовавшуюся смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Результаты ТСХ (тонкослойная хроматография, 95:5 СН₂С1₂/МеОН) свидетельствовали о полном поглощении соединения 1Г. Неочищенный продукт концентрировали с получением водной суспензии и разделяли с помощью насыщенного Ыа₂СО₃ и СН₂С1₂. Водную фазу трижды экстрагировали СН₂С1₂ и объединенные органические фракции промывали соляным раствором, затем сушили (Мд8О₄) и концентрировали, получая 31,6 г соединения 11 (83 ммоль) в виде твердого вещества оранжевого цвета (выход 91%). Дополнительной очистки не требовалось.

Другие промежуточные продукты для получения замещенных имидазолов можно получать аналогичным образом. Например, промежуточный продукт 1ί² синтезировали, осуществляя стадию 5 с использованием дигидрата 3,3,3-трифтор-1-фенилпропан-1,2-диона вместо соединения Ш, как показано ниже (МеОН=метанол, КТ=комнатная температура, о/п=в течение ночи, мин=минуты):

- 31 014230

Промежуточный продукт 1ί³ синтезировали, осуществляя стадию 5 с использованием 1-фенил-1,2пропандиона вместо соединения 1й, как показано ниже:

Промежуточный продукт 1ί⁴ синтезировали, осуществляя стадию 5 с использованием 1-(3трифторметилфенил)-1,2-пропандиона или 1-(4-трифторметилфенил)-1,2-пропандиона вместо соединения 1й, как показано ниже:

Промежуточный продукт 1ί⁵ синтезировали, осуществляя стадию 5 совместно с процедурами, описанными в И8 5374615, с использованием этил-(22)-4,4,4-трифтор-2-(гидроксиимино)-3-оксобутаноата, полученного из этил-4,4,4-трифтор-3-оксобутаноата, вместо соединения 1й, как показано ниже (NМА=Nметилацетамид):

Стадия 6.

Суспензию нитроанилина 11 (45,76 г, 120 ммоль) в МеОН (220 мл) и ЕЮАс (200 мл) продували Ν₂ в течение 20 мин и затем в нее вносили суспензию 10% Рб/С (12,77 г, 120 ммоль) в МеОН (60 мл). Реакционную смесь продували Н2 и выдерживали в атмосфере Н2 в течение 2 дней. Реакционную смесь фильтровали через подушку из целита и собранные твердые частицы промывали последовательно МеОН и ЕЮАс. Объединенные органические фильтраты упаривали, образовавшийся твердый продукт азеотропировали с СН₂С1₂ и затем сушили в течение ночи в вакууме, получая 40,17 г (115 ммоль) соединения 1_] в виде порошка рыжевато-коричневого цвета (выход 96%).

ЖХ/МС т/ζ 336,1 (МН⁺), !_В=1,81 мин.

Стадия 7.

4-Трифторметилфенилизотиоцианат (23,37 г, 115 ммоль) добавляли при перемешивании к раствору диамина 1_) (40,17 г, 115 ммоль) в МеОН (460 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь вы- 32 014230 держивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После завершения реакции к реакционной смеси добавляли раствор РеС1₃ (20,52 г, 126,5 ммоль) в МеОН (50 мл) и образовавшуюся смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Неочищенную реакционную смесь вносили в делительную воронку объемом 3 л, содержащую ЕЮАс (750 мл) и воду (750 мл). Слои отделяли и водную фазу экстрагировали ЕЮАс (водную фазу сохраняли). Органические слои объединяли, промывали насыщенным водным раствором №₂СО₃, водой и соляным раствором, затем сушили (Мд§О₄) и концентрировали. Сохраненную водную фазу подщелачивали (до рН 10) путем добавления насыщенного водного раствора №₂С.’О₃, и образовавшуюся суспензию добавляли в делительную воронку объемом 3 л, содержащую ЕЮАс (500 мл). Смесь перемешивали и образовавшуюся эмульсию фильтровали через фильтровальную бумагу, затем слои отделяли и водную фазу экстрагировали ЕЮАс (2x500 мл). Органические слои объединяли, промывали соляным раствором, затем сушили (Мд§О₄), добавляли к ранее экстрагированному продукту и концентрировали. Объединенный продукт растирали с СН2С12 (500 мл), адсорбировали на 8Ю₂ и очищали с помощью экспресс-хроматографии. После завершающего растирания продукта с СН₂С1₂ получали {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил}-(4-трифторметилфенил)амин в виде чистого твердого вещества белого цвета.

ЖХ/МС т/ζ 519,1 (МН+);

Ή ЯМР (300 МГц, СЭС1₃) δ 8,44 (<, 1=5,5 Гц, 1Н), 7,75 (<, 1=8,8 Гц, 2Н), 7,61 (<<, 1=2,2, 8,5 Гц, 1Н), 7,59 (<, 1=8,8 Гц, 2Н), 7,56 (<, 1=2,5 Гц, 1Н), 7,38 (арр <, 1=8,5 Гц, 1Н), 7,23 (<, 1=1,9 Гц, 1Н), 6,96 (<<, 1=2,2, 8,5 Гц, 1Н), 6,93 (<<, 1=2,5, 5,5 Гц, 1Н), 3,76 (к, 3Н);

ЖХ/МС т^=519,0, 1_К=2,57 мин (МН⁺).

Аналитически рассчитано для С^Н^^Ю: С 55,6, Н 3,11, N 16,21; обнаружено: С 55,81, Н 3,43, N 16,42;

Т_пл: 217-220°С.

Пример 2.

Получение (2-фтор-5-пиридин-3-илфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2ил)пиридин-4-илокси]- 1Н-бензимидазол-2-ил}амина

(2-Фтор-5-пиридин-3-ил-фенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}амин синтезировали согласно методу, описанному на стадии 7 примера 1, с использованием 3-(4-фтор-3-изотиоцианатфенил)пиридина.

ЖХ/МС т/ζ 546,1 (МН⁺), 1_К=1,82 мин.

Пример 3.

Получение (2-фтор-5-пиридин-4-илфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2ил)пиридин-4-илокси]- 1Н-бензимидазол-2-ил}амина

(2-Фтор-5-пиридин-4-ил-фенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}амин синтезировали согласно методу, описанному на стадии 7 примера 1, с использованием 4-(4-фтор-3-изотиоцианатфенил)пиридин.

ЖХ/МС т/ζ 546,5 (МН⁺), 1_К=1,83 мин.

Пример 4.

Получение (4-трет-бутилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}амина

Н,С' (4-трет-Бутилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил}амин синтезировали согласно методу, описанному на стадии 7 примера 1, с исполь- 33 014230 зованием 4-трет-бутилфенилизотиоцианата.

ЖХ/МС т/ζ 425,4 (МН⁺), 4=2,56 мин.

Пример 5.

Получение {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил}-(3-трифторметилфенил)амина

{1-Метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}-(3трифторметилфенил)амин синтезировали согласно методу, описанному на стадии 7 примера 1, с использованием 3-(трифторметил)фенилизотиоцианата.

ЖХ/МС т/ζ 519,4 (МН⁺), 4=2,36 мин.

Пример 6.

Получение (3-этилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]1Н-бензимидазол-2-ил}амина

(3 -Этилфенил)-{ 1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил}амин синтезировали согласно методу, описанному на стадии 7 примера 1, с использованием 3-этилфенилизотиоцианата.

ЖХ/МС т/ζ 479,4 (МН⁺), 4=2,32 мин.

Пример 7.

Получение (4-хлорфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]1Н-бензимидазол-2-ил}амина

(4-Хлорфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил}амин синтезировали согласно методу, описанному на стадии 7 примера 1, с использованием 4-хлорфенилизотиоцианата.

ЖХ/МС т/ζ 485,4 (МН⁺), 4=2,23 мин.

Пример 8.

Получение (4-этилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]1Н-бензимидазол-2-ил}амина

(4-Этилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил}амин синтезировали согласно методу, описанному на стадии 7 примера 1, с использованием 4-этилфенилизотиоцианата.

ЖХ/МС т/ζ 479,5 (МН⁺), 4=2,31 мин.

Пример 9.

Получение (4-хлор-3-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2ил)пиридин-4-илокси]- 1Н-бензимидазол-2-ил}амина

- 34 014230 (4-Хлор-3-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}амин синтезировали согласно методу, описанному на стадии 7 примера 1, с использованием 4-хлор-3-(трифторметил)фенилизотиоцианата.

ЖХ/МС т/ζ 553,4 (МН⁺), !_В=2,51 мин.

Пример 10.

Получение (4-фтор-3-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2ил)пиридин-4-илокси]- 1Н-бензимидазол-2-ил}амина

(4-Фтор-3-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}амин синтезировали согласно методу, описанному на стадии 7 примера 1, с использованием 4-фтор-3-(трифторметил)фенилизотиоцианата.

ЖХ/МС т/ζ 537,4 (МН⁺), !_В=2,40 мин.

Пример 11.

Получение {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил}-(4-трифторметоксифенил)амина

{1-Метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}-(4трифторметоксифенил)амин синтезировали согласно методу, описанному на стадии 7 примера 1, с использованием 4-(трифторметокси)фенилизотиоцианата.

ЖХ/МС т/ζ 535,4 (МН⁺), !_В=2,24 мин.

Пример 12.

Получение (2-фтор-5-трифторметилфенил)-( 1-метил-5-{2-[5-метил-4-(3-трифторметилфенил)-1Нимидазол-2-ил]пиридин-4-илокси}-1Н-бензимидазол-2-ил)амина

(2-Фтор-5-трифторметилфенил)-(1-метил-5-{2-[5-метил-4-(3-трифторметилфенил)-1Н-имидазол-2ил]пиридин-4-илокси}-1Н-бензимидазол-2-ил)амин синтезировали согласно методу, описанному выше в примере 1, с использованием 2-фтор-5-(трифторметил)фенилизотиоцианата.

ЖХ/МС т/ζ 627,5 (МН⁺), !_В=2,79 мин.

Пример 13.

Получение (2-фтор-5-трифторметилфенил)-(1-метил-5-{2-[5-метил-4-(4-трифторметилфенил)-1Нимидазол-2-ил]пиридин-4-илокси}-1Н-бензимидазол-2-ил)амина

(2-Фтор-5-трифторметилфенил)-(1-метил-5-{2-[5-метил-4-(4-трифторметилфенил)-1Н-имидазол-2ил]пиридин-4-илокси}-1Н-бензимидазол-2-ил)амин синтезировали согласно методу, описанному выше в примере 1, с использованием 2-фтор-5-(трифторметил)фенилизотиоцианата.

ЖХ/МС т/ζ 627,5 (МН⁺), !_В=2,79 мин.

- 35 014230

Пример 14.

Получение этилового эфира 2-{4-[2-(2-фтор-5-трифторметилфениламино)-1-метил-1Нбензимидазол-5-илокси]пиридин-2-ил}-5-трифторметил-1Н-имидазол-4-карбоновой кислоты

Этиловый эфир 2-{4-[2-(2-фтор-5-трифторметилфениламино)-1-метил-1Н-бензимидазол-5илокси]пиридин-2-ил}-5-трифторметил-1Н-имидазол-4-карбоновой кислоты синтезировали согласно методу, описанному выше в примере 1, с использованием 2-фтор-5-(трифторметил)фенилизотиоцианата.

ЖХ/МС т/ζ 609,5 (МН⁺).

Пример 15.

Получение (2-{4-[2-(2-фтор-5-трифторметилфениламино)-1-метил-1Н-бензимидазол-5илокси]пиридин-2-ил}-5-трифторметил-1Н-имидазол-4-ил)метанола

Н.С

Неб-А1 (гидрид натрий-бис-(2-метоксиэтокси)алюминия, 65 мас.% в толуоле, 0,1 мл) добавляли по каплям к раствору этилового эфира 2-{4-[2-(2-фтор-5-трифторметилфениламино)-1-метил-1Нбензимидазол-5-илокси]пиридин-2-ил}-5-трифторметил-1Н-имидазол-4-карбоновой кислоты (0,0104 г, 0,017 ммоль) в толуоле. Начиналось бурное выделение газа и через 20 мин реакцию прекращали с помощью Н₂О, №ОН и осуществляли экстракцию с помощью ЕЮАс. Органический слой промывали Н₂О, сушили над №₂8О₄, фильтровали и концентрировали, получая 5,9 мг неочищенного (2-{4-[2-(2-фтор-5трифторметилфениламино)-1-метил-1Н-бензимидазол-5-илокси]пиридин-2-ил}-5-трифторметил-1Нимидазол-4-ил)метанола, который затем очищали с помощью ОФ-ЖХВР (ЖХВР с обращенной фазой), в результате чего получали 1,1 мг чистого соединения (чистота 98%).

ЖХ/МС т/ζ 567,1 (МН⁺), I 2,40 мин.

Пример 16.

Суспензию {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил}-(4-трифторметилфенил)амина получали согласно методу, описанному в примере 1 (1,83 г, 3,4 ммоль), и 28% NН₄ОН (23 мл) в МеОН (10 мл) помещали в пробирку, герметично закрывали и нагревали до 140°С в течение 3 ч. После того как по данным ЖХ/МС реакция была завершена, неочищенную реакционную смесь вносили в делительную воронку и разделяли в смеси ЕЮАс (50 мл) и воды (50 мл). Слои отделяли и водную фазу экстрагировали ЕЮАс (2x50 мл). Органические слои объединяли, промывали соляным раствором, затем сушили (Мд8О₄) и концентрировали. Неочищенный продукт адсорбировали на 81О₂ и очищали с помощью экспресс-хроматографии, получая 2-{4-[1-метил-2-(4трифторметилфениламино)-1Н-бензимидазол-5-илокси]пиридин-2-ил}-3Н-имидазол-4-карбонитрил в виде твердого вещества белого цвета.

ЖХ/МС т/ζ 476,1 (МН⁺).

Примеры 17-59а.

Соединения, представленные в табл. 1 (примеры 17-59а), получали согласно процедурам, описанным в примерах 1-16. Различные исходные продукты, используемые в синтезе соединений, должны быть известны специалисту в данной области (см., например, Тогбеих М., Ьаид1о1к В., №акке1таи С., 1. С.’11ет. 8ос. Регкш Тгапк 1, 1990, с. 2293).

- 36 014230

Таблица 1

Пример	Структура	Название	МН+
17		(З-жре/л-бутилфенил)- {1 -метил-5-[2(5-фенил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин4-илокси]-1 Н-бензимидазол-2ил}амин	515,4
18		{1 -метил-5 [2 -(5-фенил -1 Н-ими дазол2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-1-ил)-(4трифторметилсульфанилфенил)амин	559,3
19		(3 -трет-бутилфекил)- {1 -мети л-5-[2(5 -трифторметил-1 Н-ими дазол-2ил)пиридин-4-илокси] -1Нбензимидазол-2-ил} амин	507,1
20		[4-фтор-3-(тетрагидрофуран-3ил)фенил] - {1 -метил-5 -[2-(5трифторметил-1Н-имидазол-2ил)пиридин-4-нлокси]-1 Нбензимидазол-2 -ил} амин	539,3
21		(4-бромфенил)-{ 1-метил-5-[2-(5трифторметил-1 Н-имидазол-2ил)ниридин-4-илокси]-1Нбензим ид азол-2-ил }ами и	529,1
22		(4-фтор-3-изопролилфенил)-{ I-метил5-12 -(5-трифторметил-1 Н-имидазол-2ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил) ам ин	511,3
23		{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Нимидазол-2-ил)пиридии-4-илокси] 1Н-бензимидазол-2-ил)-(4трифторметилсульфанилфенил)амин	551,2
24		(2-фтор-5-изопропилфенил)- {1 -метил5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил)амин	511,1
25		(2-фтор-5-трифторметилфеннл)- (1 метил-5-[2-(5-трифторметил-1Нимидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]1Н-бензимидазол-2-ил)амин	537,0
26		(5-/ирет-бутил-2-фторфен ил)-{1метил-5-[2-(5-трифторметил-1Нимидазол-2-ил)пирндин-4-илокси]1Н-бензимидазол-2-ил}амин	525,1
27		(2-фтор-5-трифторметилфенил)-{ 1метил-5-[2-(5-метил-1Н*имидазол-2* ил)пиридин~4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил}амин	483,1
28		(2 -хлор-4-трифторметилфен ил)- {1 метил-5-[2-(5-трифторметил-1Нимидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]1 Н-бензим идазол-2-ил} амин	553,0
29		2-{4-[2-фтор-5- трифторметилфениламнно)-1-метил- 1 Н-бензим идазол-5-илокси]пиридин- 2-ил) -ЗН-имидазол-4-карбонитрил	494,1
30		(5-т/?егп-бутил-2-хлорфенил)-{ 1метил-5-[2-(5 -трифторметил-1Нимидазол-2-ил) пирндин-4-нлокси] 1 Н-бенэимидазол-2-ил) амин	541,1
31		(2-фтор-5-трифторметилфенил)- {1 метил-5-[2-(4-фенил-5-трифторметил1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси1-1 Н-бензимидазол-2-ил) ам ин	613,1
32		(2-хлор-5-трифторметилфен и л)- {1 метил-5 -[2-(4-фен ил-5 -трифторметилI Н-им ид азол-2 -ил)пиридин-4 · илокси] -1 Н-бензимидазол-2-ил} амин	629,0

- 37 014230

33		{1 -метил-5-[2-(4-фенил-5трифторметил-1Н-имидазол-2ил)пириди н-4-илокси}-1Нбензи м ид азол-2-ия} -(3 трифторметилфенил)амин	529,1
34		(3-эфтилфенил)- (1-метил-5-[2-(4фенил-5-трифторметнл-1Н-имидазол2-ил)пиридин-4-илокси]-Шбензим ид азол-2-ил} амин	555,1
35		(4-тдет-бутилфенил)-{ 1 -метил-5-[2- (4-фенил-5-трифторметил-1Нимидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]- 1 Н-бензими дазол-2-ил} амин	583,2
36		(2-хлор-5-трифторметилфенил)- {1 метил-5-[2-(5-трифторметил-1Нимидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]1 Н-бензимидазол-2-ил} ам ин	553,1
37		(2-фтор-5-трифторметилфенил)- {1 метил-5-[2*(5-метил-4-фенил*1 Нимидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]1 Н-бензимидазол-2-ил} ам ин	559,1
38		(2-хлор-5-трифторметилфенил)- {1 метил-5-[2-(5-метил-4-фенил-1 Нимидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]1 Н-бензнмидазол-2-ил} амин	575,1
39		(4-тдет-бутилфенил)- {1 -метил-5 -[2(5-метил-4-фенил-1Н-имидазол-2ИЛ /ПИрИДИН-4-ИЛОКСИ]- ι Ябензимидазол-2-ил} амин	529,3
40		{1 -метил-5 -[2-( 5-метил-4-феннл-1Нимидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]· 1Н-бензимидазол-2-ил}-(3трифторметилфенил)амин	541,2
41		(5-/»рет-бутил-2-фторфенил)-! 1 метил-5-[2 -(5-метил-4-фенил-1Нимидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]1 Н-бензимидазол-2-ил}амин	547,2 '
42		[4-(4-метилпиперазин-1ил)фенил]-{ 1метил-5-[2-(5-трифторметил-1Нимидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]- 1 Н-бензнм идазол-2 -ил} амин	549,2
43		метиловый эфир 2-{4-[2-(2-фтор-5трифторметилфенил амино)- ί -метил* 1Н-бензимидазол-5-илокси]пиридин2-ил}-ЗН*имидазол-4-кар боновой кислоты	527,1
44		этиловый эфир 2-{4-[2-(2-хлор-5трифторметллфениламино)-1 -метил1 Н-бензимидазол-5-илокси]лиридин2-ил} -5 -трифторметил-1 Н-имидазол4-карбоновой кислоты	625,0
45		(2-фтор-4-трифторметилфенил)-! 1 · метил-5-[2-(5-трифторметил-1Ними дазол-2 -ил)л иридин-4-и локси] 1 Н-беизимидазол-2-ил} амин	537,1

- 38 014230

46		(2 -хлорфенил}-{ 1 -метил-5-[2 -(5триф'1орметил-1Н-имидазол-2ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензим идазол-2-ил} ам ин	485,1
47		(2,5-диметоксифенил)-(1-метил-5-[2(5-трифторметил-1 Н-имидазол-2ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил} ами и	511.1
4«		(3,5-диметоксифения)-{ 1 -метил-5-[2(5 -тр нфторметил-1 Н-имидазол-2ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил}амин	511,2
49		(1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Нимидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]- 1 Н-бензимидазол-2 -ил } -(2трифторметилфенил)амин	519,1
50		(2-этилфенил)-{ 1-метил-5-[2-(5трифторметил-1 Н-имидазол-2ил)пиридин-4-илокси]-1Нбеизимидазол-2-ил}амин	479,2
51		(4-этилпиперазин-1-ил )-(2-(4-(2-(2фтор-5-трифторметилфен илами но)-1 метил-1 Н-бензимидазол-5илокси]пиридин-2-ил)-ЗН-имидазол4-ил)метанон	609,2
52		(2-гидроксиэтил)амид 2-(4-(2-(2фтор-5-трифторметилфениламино)-1метил-1 Н-бензимидазол-5илоксм]пиридин-2-ил)-ЗН-имндазол4-карбоновой кислоты	556,1
53		{1 -этнл-5-[2-(5-трифторметил-1Нимидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]- 1 Н-бензими дазол-2-ил }-(2-фтор-5трифторметилфенил)амин	551,1
54		(2-фтор-5-трифторметилфенил)-{6метокск-1-метил-5-[2-(трифторметил- 1 Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси1 -1 Н-бензи мидазол-2-ил} ам н н	567,4
55		(6‘метокси-1-метил-5-[2-(5· трифторметил-1 Н-имидазол-2ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензнмидазол-2-ил} -{4трифторметилфенил)амин	549,4
56		(4-этилпиперазин-1 -ил)-(2-{4-[ 1 метил-2-(4трифторметилфениламино}-1 Нбензимидазол-5-илокси]пиридин-2ил) -3 Н-имидазол-4-ил)метанон	592,2
57		(1 -этил-5-[2-(5-трифторметил-1Нимидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]Ш-бензи м идазол-2-ил} -(4трифторметилфенил)амин	533,1
5«		(2-гндроксиэтил)амид 2- (4-[ 1 -метил2-(4-трифторметилфениламино)-1Нбензимидазол-5-илокси]ииридин-2ил)-ЗН-имидазол-4-карбоновой кислоты	538,1
59		2-{1-метнл-5[2-(5-трифторметил-1Нимидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]1 Н-бе нзимидазол-2-и дамино} -5 трифторметилфеиол	535,3
59а		3-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Ним идазол-2 -ил)п иридин-4-илокси]1Н-бензимидазол-2-иламино}-6трифторметилфенол	535,3

Пример 60.

Получение (2-фтор-5-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-пиридин-2-ил-2Н-[1,2,4]триазол-3ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}амина

- 39 014230

Получение карбонитрила

4-[2-(2-фтор-5-трифторфениламино)-1-метил-1Н-бензимидазол-5-илокси]пиридин-2-

Стадия 1.

Синтез 4-(4-амино-3 -нитрофенокси)пиридин-2-карбонитрила

Карбонат калия (9 г) сушили в вакууме при нагревании, охлаждали до комнатной температуры в атмосфере азота. Добавляли 4-амино-3-нитрофенол (3,4 г), 4-хлор-2-цианпиридин (3,0 г) и диметилсульфоксид (30 мл, безводный). Систему перемешивали в атмосфере азота, нагревая до 103°С, и выдерживали при этой температуре в течение 1 ч. Затем реакционную смесь охлаждали до КТ, сливали на лед/Н₂О (500 мл), собирали осадок, промывали (Н₂О), растворяли (ЕЮАс), сушили (№₂8О₄), фильтровали и десорбировали до получения твердого вещества. Его суспендировали (Е1₂О), собирали, сушили на воздухе, получая 4,1 г (73,5%) и собирали вторую партию (0,55 г, 10%).

ιιι/ζ.257 (М+1).

Стадия 2.

Синтез М[4-(2-цианпиридин-4-илокси)-2-нитрофенил]-2,2,2-трифтор-Мметилацетамида

Карбонат калия (1,6 г) сушили в вакууме при нагревании, охлаждали до комнатной температуры и суспендировали в дихлорметане (30 мл) вместе с 4-(4-амино-3-нитрофенокси)пиридин-2-карбонитрилом (2,0 г) в атмосфере азота. Продукт охлаждали до 0°С и добавляли трифторуксусный ангидрид (2,2 мл), чистый. После добавления исходный материал быстро переходил в раствор. После выдерживания в течение 10 мин при 0°С смесь разбавляли дихлорметаном, промывали (Н₂О, водный раствор №С1), сушили (К2СО3), фильтровали и десорбировали до получения пены желтого цвета.

т//=353 (М+1).

Этот продукт применяли без очистки. К суспензии карбоната калия (1,858 г) в диметилформамиде (ДМФ) (30 мл, содержащем соединение 2, ~7,8 ммоль) в атмосфере азота добавляли йодметан (0,53 мл). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, затем сливали на Н₂О (300 мл), экстрагировали (Е1₂О, 3x150 мл), объединенные экстракты промывали (Н₂О, водный раствор №С1), сушили (карбонат калия), фильтровали и десорбировали до получения масла оранжевого цвета (7,4922 г).

т^=367 (М+1).

Стадия 3. Синтез 4-(4-метиламино-3-нитрофенокси)пиридин-2-карбонитрила

№1ОН (1 мл, 1н. водный раствор) добавляли по каплям к раствору М[4-(2-цианпиридин-4-илокси)2-нитрофенил]-2,2,2-трифтор-Мметилацетамида (соединение 3, 440 мг) в этаноле (6 мл) при комнатной температуре. Через 40 мин смесь разбавляли Н₂О (20 мл) и охлаждали до 0°С. Собирали кристаллы яркооранжевого цвета, промывали (Н₂О) и сушили на воздухе, получая 311,1 мг (94%).

ιιι/ζ.271 (М+1)

Стадия 4. Синтез 4-[2-(2-фтор-5-трифторфениламино)-1-метил-1Н-бензимидазол-5илокси]пиридин-2-карбонитрила

- 40 014230

Палладий на угле (46 мг, 10 мас.%) суспендировали в МеОН (2 мл) в атмосфере азота. Образовавшуюся суспензию добавляли в атмосфере азота к суспензии 4-(4-метиламино-3-нитрофенокси)пиридин2-карбонитрила (311 мг) в МеОН (3 мл) при комнатной температуре. Атмосферу заменяли на водород и систему интенсивно перемешивали в течение 1 ч при давлении водорода 1 атм. Затем атмосферу заменяли на азот, смесь фильтровали (целит) и фильтрат использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.

ιιι/ζ.242 (М+1).

2-Фтор-5-трифторметилфенилизотиоцианат (250 мг) добавляли к раствору соединения 5 в МеОН (10 мл). Раствор перемешивали при температуре дефлегмации в течение 2 ч. После завершения реакции к реакционной смеси добавляли безводный ЕеС1₃ (1,3 экв., 244 мг) и образовавшуюся смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Неочищенную реакционную смесь вносили в делительную воронку, содержащую ЕЮАс и воду. Слои разделяли и водную фазу экстрагировали ЕЮАс. Органические слои объединяли, промывали насыщенным водным раствором №₂СО₃, водой и соляным раствором, затем сушили (Мд§О₄) и концентрировали. Этот продукт хроматографировали (в градиенте 0-5% МеОН в дихлорметане на силикагеле), выделяя требуемое соединение из соединения 4 с выходом 28%.

ιιι/ζ.428 (М+1).

Стадия 5. (2-Фтор-5-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-пиридин-2-ил-2Н-[1,2,4]триазол-3ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}амин

Стадия 6.

4-[2-(4-Фторфениламино)-1-метил-1Н-бензимидазол-5-илокси]пиридин-2-карбонитрил солюбилизировали в ЕЮН (0,1М) и добавляли №ЮЕ1 (1 экв., 0,5М в ЕЮН), а затем гидразид пиколинила (1 экв.) и раствор выдерживали в микроволновой печи в течение 2000 с при 140°С. После этого реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью ЖХВР с обращенной фазой, получая требуемый продукт.

ιιι/ζ.547 (М+1).

Примеры 61-64.

Соединения, представленные ниже в табл. 2 (примеры 61-64), получали согласно процедуре, описанной в примере 60.

Таблица 2

Пример	Структура	Название	МН+
61		(5-{4-[2-(2-фтор-5- трифторметилфениламино)-1 -метил1 Н-бензимидазол- 5-илокси] пиридин2-ил} -1 Η- [ 1,2,4]триазол-3 ил)ацетонитрил	509,2
62		(5-{2-[5-(4-этилпиперазин-1 -илметил)-2Н-[ 1,2,4]триазол-3-ил]пиридин-4-илокси}-1 -метил-1Нбензимидазол-2-ил)-(2-фтор-5трифторметилфенил)амин	596,2
63		{1-метил-5-[2-(5 -трифторметил-2 Н[1,2,4]триазол-3-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}-(4трифторметилфенил)амин	520,2
64		(2-фтор-5-трифторметилфенил)-{1метил-5-[2-(5-трифторметил-2Н[1,2,4]триазол-3-ил)пиридин-4илоксиЕ 1 Н-бензимидазол-2-ил} ами н	538,2

- 41 014230

Пример б5.

Получение N-(4 -гидрокси-2-нитро фенил) формамида

Ы-(4-Гидрокси-2-нитрофенил)формамид можно получать согласно следующей процедуре.

1. Собирают устройство, включающее 5-горлую реакционную колбу объемом 3 л, снабженную датчиком для измерения внутренней температуры, терморегулятором, нагревательным кожухом, конденсатором, механической мешалкой, капельной воронкой объемом 1 л и впускным клапаном для азота. Реактор продувают азотом в течение 5 мин.

2. В колбу вносят уксусный ангидрид (245 мл). Перемешивают в атмосфере азота.

3. Вносят в виде одной порции муравьиную кислоту (125 мл) (при перемешивании происходит выделение тепла и реакция между уксусным ангидридом и муравьиной кислотой).

4. Устанавливают конечное значение внутренней температуры ЦТ), равное б0°С, и начинают нагревание. После того как ГТ достигнет б0°С, осуществляют перемешивание и выдерживают еще в течение 2 ч.

5. Охлаждают содержимое с помощью ледяной бани.

6. После того как РТ достигнет температуры окружающей среды (примерно 20°С), начинают добавление раствора 4-амино-3-нитрофенола (1б0 г) в 700 мл безводного ТГФ (тетрагидрофуран) с помощью капельной воронки объемом 1 л по частям так, чтобы БТ не превышала 40°С. Продукт начинает осаж даться в виде твердого вещества желтого цвета.

7. После завершения добавления ледяную баню заменяют нагревательным кожухом. Устанавливают конечное значение П¹ на уровне б0°С и начинают нагревание.

8. Осуществляют мониторинг прохождения реакции с помощью ЖХВР. Как правило, реакция занимает менее 1 ч.

9. Когда площадь, соответствующая исходному продукту, составляет <1%, добавляют 500 мл воды. Охлаждают до комнатной температуры с помощью ледяной бани.

10. Собирают продукт путем вакуумной фильтрации. Промывают осадок на фильтре с помощью 3x200 мл воды. Сушат на воздухе, а затем сушат в печи при 50°С в вакууме (давление 27 дюймов рт.ст.) при осторожном продувании струей воздуха или азота до достижения постоянной массы.

Пример бб.

Получение 4-метиламино-3-нитрофенола

Н

4-Метиламино-3-нитрофенол можно получать согласно следующей процедуре.

1. Собирают устройство, включающее 3-горлую реакционную колбу объемом 500 мл, снабженную датчиком для измерения внутренней температуры и впускным клапаном для азота. Реактор продувают азотом в течение 5 мин.

2. В реактор вносят Ы-(4-гидрокси-2-нитрофенил)формамид (5 г) и безводный ТГФ (100 мл). Перемешивают в атмосфере Ν₂, получая суспензию желтого цвета.

3. С помощью шприца медленно добавляют диэтилэтерат трифторида бора (3,83 мл).

4. Перемешивают реакционную смесь в течение 30 мин при комнатной температуре.

5. Добавляют порциями с помощью капельной воронки борогидрид натрия (1,04 г).

6. Перемешивают реакционную смесь в течение 1 ч и после этого через каждый час осуществляют мониторинг хода реакции с помощью ЖХВР (как правило, реакция занимает 3 ч).

7. Когда по данным ЖХВР в образце остается менее 1,0% исходного продукта, с помощью шприца медленно добавляют 1М НС1 (40 мл) в течение периода времени, составляющего 10 мин.

8. Перемешивают в течение б0 мин.

9. При необходимости добавляют с помощью шприца 1М ЫаОН для доведения значения рН до 7±0,5.

10. Сливают реакционную смесь в круглодонную колбу объемом 500 мл и концентрируют при пониженном давлении (20 мм рт.ст. при 25°С) до удаления примерно 100 мл прозрачной жидкости.

11. Добавляют воду (100 мл) в реакционный сосуд. Охлаждают до 0±2°С при перемешивании. Про дукт осаждается в виде твердого вещества красного цвета.

12. Собирают продукт путем вакуумной фильтрации через воронку с грубой фриттой. Промывают осадок на фильтре водой (2x20 мл). Сушат на воздухе, а затем сушат в печи при 50°С/27 дюймах рт.ст. до достижения постоянной массы. Образцы передают для анализа.

Пример б7.

Получение 4-хлорпиридин-2-карбонилхлорида

- 42 014230

С1

4-Хлорпиридин-2-карбонилхлорид можно получать согласно следующей процедуре.

1. Собирают устройство, включающее 5-горлую реакционную колбу объемом 5 л, снабженную датчиком для измерения внутренней температуры ЦТ), терморегулятором, нагревательным кожухом, конденсатором, механической мешалкой, впускным клапаном для азота, выпускным газовым клапаном наверху конденсатора, который соединен с 2-горлым отделителем жидкости объемом 2 л, который в свою очередь соединен со скруббером объемом 12 л, заполненным примерно 6 л 8М раствора ЫаОН, который перемешивают магнитной мешалкой. Продувают реактор азотом в течение 5 мин и затем отключают по ток азота.

2. В реактор вносят тионилхлорид (1,18 л), а затем бромид калия (38,4 г) при перемешивании с небольшой скоростью (примерно 200 об/мин).

3. В реактор вносят пиколиновую кислоту (397 г).

4. Устанавливают конечное значение РТ на уровне 80°С и начинают нагревание.

5. Берут образцы и осуществляют мониторинг хода реакции с помощью ЖХВР. Как правило, реакция протекает в течение примерно 14 ч. Продолжение нагревания может приводить к повышенному ди хлорированию.

6. Когда признано, что реакция завершилась (в реакционной смеси присутствует менее 1% пиколиновой кислоты), нагревание прекращают. Удаляют нагревательный кожух.

7. После снижения ΣΤ до уровня ниже 30°С жидкость переносят в реакционную колбу объемом 3 л. Реактор объемом 5 л промывают 700 мл толуола. Смывы переносят в колбу объемом 3 л. Удаляют избыток §ОС1₂ и толуола при пониженном давлении. Повторяют процесс с использованием 2x700 мл толуола. Полностью удаляют растворитель, получая твердое вещество желто-оранжевого цвета. К реакционной смеси добавляют толуол (400 мл). Образовавшуюся смесь используют на следующей стадии.

Пример 68.

Получение трет-бутилового эфира 4-хлорпиридин-2-карбоновой кислоты

трет-Бутиловый эфир 4-хлорпиридин-2-карбоновой кислоты можно получать согласно следующей процедуре.

1. Снабжают круглодонную колбу (4-горлую) объемом 12 л механической мешалкой и термомет ром.

2. В реактор вносят толуол (1 л), пиридин (977,7 г) и ди-трет-бутилдикарбонат (ВОС)2О (855,5 г).

3. Охлаждают реактор до достижения внутренней температуры 0°С.

4. В реактор добавляют 4-хлорпиридин-2-карбонилхлорид (686 г) с такой скоростью, чтобы внутренняя температура реакции поддерживалась на уровне ниже 5°С.

5. Реакционной смеси дают медленно нагреться до комнатной температуры (~20°С) и перемешивают в течение 16 ч.

6. Когда на основе результатов ЖХВР признано, что реакция завершилась (площадь, соответствующая исходному продукту, составляет < 0,5%), реакционную смесь промывают водой (2x4 л), затем 1М раствором НС1 (2x2 л).

7. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении для удаления толуола и остатка пиридина.

8. Добавляют толуол (500 мл) и затем реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении, получая требуемый продукт.

Пример 69.

Получение трет-бутилового эфира 4-(4-метиламино-3-нитрофенокси)пиридин-2-карбоновой кислоты

трет-Бутиловый эфир 4-(4-метиламино-3-нитрофенокси)пиридин-2-карбоновой кислоты можно получать согласно следующей процедуре.

1. Снабжают круглодонную колбу объемом 3 л механической мешалкой, термометром и впускным клапаном для азота.

2. В реактор вносят К2СО3 (123 г).

- 43 014230

3. Реакционный сосуд заполняют инертным газом.

4. В реактор вносят 4-метиламино-3-нитрофенол (100 г), трет-бутиловый эфир 4-хлорпиридин-2карбоновой кислоты (127 г) и безводный ДМСО (1 л).

5. Реакционную смесь интенсивно перемешивают и нагревают до 100°С.

6. Когда на основе результатов ЖХВР признано, что реакция завершилась (площадь, соответствующая трет-бутиловому эфиру 4-хлорпиридин-2-карбоновой кислоты составляет < 0,5%), горячую реакционную смесь сливают при перемешивании на холодную воду (объем 3 л).

7. Выделяют с помощью фильтрации требуемое соединение в виде твердого вещества оранжевокоричневого цвета.

8. Промывают выделенное твердое вещество водой (2x200 мл), а затем гептаном (2x200 мл).

9. Сушат продукт в вакуумной печи при 45-50°С до достижения постоянной массы.

Пример 70.

Получение 4-(4-(метиламино)-3-нитрофенокси)пиридин-2-карбальдегида

4-(4-(Метиламино)-3-нитрофенокси)пиридин-2-карбальдегид можно получать согласно следующей процедуре.

1. Снабжают круглодонную колбу объемом 1000 мл впускным клапаном для азота, механической мешалкой и термометром.

2. В реактор вносят трет-бутиловый эфир 4-(4-метиламино-3-нитрофенокси)пиридин-2-карбоновой кислоты (10 г) через воронку для сыпучих веществ.

3. Добавляют 2-метил-ТГФ (100 мл) через воронку для сыпучих веществ.

4. Охлаждают реактор до достижения внутренней температуры -25°С.

5. Добавляют ОГВАЬ (гидрид диизобутилалюминия, 1,5М в толуоле; 72 мл) через капельную воронку с такой скоростью, чтобы поддерживать внутреннюю температуру на уровне -15°С.

6. Анализируют ход реакции с помощью ЖХВР или ГХ (газовая хроматография), контролируя исчезновение эфира.

7. Перемешивают реакционную смесь при -20°С, осуществляя мониторинг через каждый час.

8. Если через 2 ч реакция перестает протекать, то добавляют еще 0,5 экв. ОГВАЬ (гидрид диизобутилалюминия) и осуществляют мониторинг реакции. Повторяют эту стадию до поглощения всего эфира.

9. После завершения реакции ее медленно прекращают путем добавления МеОН (10 мл).

10. Добавляют винно-кислый калий-натрий (40 г) к 200 мл воды и перемешивают до растворения.

11. Добавляют водный раствор к реакционной смеси и дают нагреться до КТ.

12. Добавляют 2-метил-ТГФ (100 мл) в реакционный сосуд.

13. Нагревают при перемешивании реакционную смесь до 50°С в течение 1 ч.

14. Дают разделиться фазам.

15. Удаляют нижний водный слой.

16. Фильтруют органический слой через пробку из целита.

17. Промывают целит 2-метил-ТГФ (2x50 мл).

18. Вносят реакционную смесь в круглодонную колбу объемом 500 мл.

19. Концентрируют реакционную смесь путем дистилляции до объема ~50 мл.

20. Охлаждают реакционную смесь при перемешивании до 0°С.

21. Перемешивают реакционную смесь в течение 1 ч при 0°С.

22. Фильтруют реакционную смесь через фильтр из грубой фритты.

23. Дают твердым частицам высохнуть на фильтре в течение периода времени от 30 мин до 1 ч.

24. Анализируют твердые частицы с помощью ГХ и ЯМР, определяя % спирта, при необходимости для удаления спиртовых примесей суспендируют в метаноле при 30°С в течение 1 ч (5 мл метанола на 1 г соединения).

Пример 71.

Получение 4-(2-(5-(трифторметил)-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси)-Ы-метил-2нитробензоламина

4-(2-(5-(Трифторметил)-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси)-Ы-метил-2-нитробензамин можно получать согласно следующей процедуре.

1. Снабжают круглодонную колбу (3-горлую) объемом 2 л механической мешалкой, датчиком для измерения внутренней температуры, терморегулятором и конденсатором.

- 44 014230

2. В реактор вносят воду (590 мл) через воронку для сыпучих веществ.

3. Начинают перемешивать смесь и в реактор вносят ацетат натрия (240 г).

4. Промывают колбу, используемую для внесения ацетата натрия, водой (30 мл).

5. Нагревают реакционную смесь до 50°С.

6. Добавляют порциями 3,3-дибром-1,1,1-трифторпропан-2-он (395 г) при 50°С, поддерживая внутреннюю температуру реакционной смеси на уровне ниже 100°С.

7. Нагревают реакционную смесь до внутренней температуры 100°С.

8. После перемешивания реакционной смеси в течение 1 ч при 100°С отбирают образец для анализа.

9. Температуру реакционной смеси поддерживают на уровне 100°С до тех пор, пока количество исходного продукта не станет <1,5%.

10. После завершения реакции реакционную смесь охлаждают до температуры <65°С.

11. После охлаждения реакционной смеси круглодонную колбу (4-горлую, снабженную кожухом) объемом 5 л снабжают датчиком для измерения внутренней температуры, терморегулятором и механической мешалкой.

12. Вносят в реактор объемом 5 л этилацетат (500 мл) через воронку для сыпучих веществ и начинают перемешивание.

13. Вносят в реактор объемом 5 л 4-(4-(метиламино)-3-нитрофенокси)пиридин-2-карбальдегид (200 г) через воронку для сыпучих веществ.

14. Промывают воронку для сыпучих веществ этилацетатом (200 мл) и смывы вносят в реактор объемом 5 л.

15. Вносят в реактор объемом 5 л 95%-ный этанол (1,3 л).

16. Переносят пирувальдегидную реакционную смесь из реактора объемом 2 л в реактор объемом 5 л. В этот момент времени температура составляет ~35°С.

17. Медленно добавляют порциями концентрированный NН₄ΟН (1,3 л), осуществляя мониторинг температуры. Реакция является экзотермической, поэтому первые 500 мл следует добавлять порциями, поддерживая внутреннюю температуру на уровне ниже 50°С. Общее время добавления составляет ~25 мин. Повышенная температура приводит к покраснению конечного продукта.

18. Нагревают реактор объемом 5 л до 50°С.

19. Перемешивают реакционную смесь при 50°С. В этот момент времени раствор, как правило, имеет красновато-оранжевый цвет.

20. Осуществляют мониторинг реакции через каждый час до завершения реакции.

21. Когда признано, что реакция завершилась, реакционную смесь охлаждают до 0°С в течение 2 ч.

22. Выделяют продукт путем фильтрации через грубый фильтр из спекшегося стекла.

23. Промывают реактор холодным этанолом (150 мл). Смыв переносят на фильтр.

24. Вносят в реактор объемом 5 л воду (2 л).

25. Перемешивают и охлаждают реактор до 10°С.

26. Переносят влажный осадок с фильтра в реактор объемом 5 л.

27. Перемешивают при 10°С в течение 60 мин.

28. Фильтруют продукт через грубый фильтр из спекшегося стекла.

29. Промывают реактор водой (250 мл). Смыв переносят на фильтр.

30. Сушат влажный осадок на фильтре в течение 1 ч.

31. Переносят продукт в круглодонную колбу (одногорлую) объемом 2 л и обрабатывают досуха в барабане с помощью роторного испарителя при температуре бани 45°С до достижения постоянной массы.

Пример 72.

Получение 4-(2-(5-(трифторметил)-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси)-№-метилбензол-1,2диамина

4-(2-(5-(Трифторметил)-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси)-1Н-метилбензол-1,2-диамин можно получать согласно следующей процедуре.

1. Снабжают круглодонную колбу (4-горлую) объемом 2 л механической мешалкой, датчиком для измерения внутренней температуры, терморегулятором, устройством для продувки азотом и парциальным конденсатором горячего орошения.

2. Вносят в реактор ЕЮН (125 мл) через воронку для сыпучих веществ. Начинают быстро перемешивать.

3. Вносят в реактор 4-(2-(5-(трифторметил)-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси)-№метил-2нитробензоламин (50 г) через воронку для сыпучих веществ.

4. Нагревают реакционную смесь до 50°С.

5. Во время нагревания реакционной смеси в колбу Эрленмейера объемом 250 мл вносят воду

- 45 014230 (75 мл) через воронку для сыпучих веществ. Начинают быстро перемешивать.

6. Вносят в колбу Эрленмейера объемом 250 мл 3,0 экв. карбоната натрия (41,92 г) через воронку для сыпучих веществ.

7. Перемешивают смесь до растворения всех твердых частиц.

8. Когда температура суспензии достигнет 50°С, переносят содержащую карбонат натрия смесь из колбы Эрленмейера объемом 250 мл в реакционную смесь через воронку для сыпучих веществ.

9. Вносят в колбу Эрленмейера объемом 250 мл воду (75 мл) через воронку для сыпучих веществ. Начинают быстро перемешивать.

10. Вносят в колбу Эрленмейера объемом 250 мл 1,0 экв. дитионита натрия (22,95 г) через воронку для сыпучих веществ, после чего сразу добавляют в реакционную колбу.

11. Быстро перемешивают твердые частицы до тех пор, пока не растворится их большая часть.

12. Быстро переносят содержащую дитионит натрия смесь из колбы Эрленмейера объемом 250 мл в реакционную смесь через воронку для сыпучих веществ.

13. Перемешивают реакционную смесь при 50°С в течение 30 мин.

14. Вносят в колбу Эрленмейера объемом 250 мл воду (75 мл) через воронку для сыпучих веществ. Начинают быстро перемешивать.

15. Вносят в колбу Эрленмейера объемом 250 мл 1,0 экв. дитионита натрия (22,95 г) через воронку для сыпучих веществ, после чего сразу добавляют в реакционную колбу.

16. Быстро перемешивают твердые частицы до тех пор, пока не растворится их большая часть.

17. Быстро переносят содержащую дитионит натрия смесь из колбы Эрленмейера объемом 250 мл в реакционную смесь через воронку для сыпучих веществ.

18. Перемешивают реакционную смесь при 50°С в течение 30 мин.

19. Вносят в колбу Эрленмейера объемом 250 мл воду (150 мл) через воронку для сыпучих веществ.

20. Вносят в колбу Эрленмейера объемом 250 мл 2,0 экв. дитионита натрия (45,90 г) через воронку для сыпучих веществ, после чего сразу добавляют в реакционную колбу.

21. Быстро перемешивают твердые частицы до тех пор, пока не растворится их большая часть.

22. Быстро переносят содержащую дитионит натрия смесь из колбы Эрленмейера объемом 250 мл в реакционную смесь через воронку для сыпучих веществ.

23. Перемешивают реакционную смесь при 50°С в течение 60 мин.

24. Берут образец для проверки того, завершилась ли реакция.

25. Если реакция завершилась на >98%, то переходят к стадии 36. Если нет, то продолжают осуществление реакции со стадии 26.

26. Вносят в реакционную колбу объемом 2 л 1,0 экв. дитионита натрия (22,95 г) через воронку для сыпучих веществ.

27. Быстро перемешивают реакционную смесь при 50°С в течение 60 мин.

28. Берут образец для проверки того, завершилась ли реакция.

29. Если реакция завершилась на >98%, то переходят к стадии 36. Если нет, то продолжают осуществление реакции со стадии 30.

30. Вносят в реакционную колбу объемом 2 л 1,0 экв. карбоната натрия (13,97 г) через воронку для сыпучих веществ.

31. Быстро перемешивают реакционную смесь при 50°С в течение 15 мин.

32. Вносят в реакционную колбу объемом 2 л 1,0 экв. дитионита натрия (22,95 г) через воронку для сыпучих веществ.

33. Быстро перемешивают реакционную смесь при 50°С в течение 60 мин.

34. Берут образец для проверки того, завершилась ли реакция.

35. Если реакция завершилась на >98%, то переходят к стадии 36.

36. После того как установлено, что реакция завершилась, вносят в реакционную колбу объемом 2 л воду (125 мл) через воронку для сыпучих веществ.

37. Охлаждают реакционную смесь до 10°С и перемешивают в течение 1 ч.

38. Выделяют продукт путем фильтрации через грубый фильтр из спекшегося стекла.

39. Промывают реактор водой (50 мл). Переносят смыв на фильтр.

40. Сушат влажный осадок на фильтре до тех пор, пока с него не перестанет капать.

41. Вносят в реакционную колбу объемом 2 л воду (500 мл) через воронку для сыпучих веществ.

42. Переносят осадок на фильтре в реакционную колбу через воронку для сыпучих веществ.

43. Перемешивают продукт при комнатной температуре в течение 60 мин.

44. Выделяют продукт путем фильтрации через грубый фильтр из спекшегося стекла.

45. Промывают реактор водой (25 мл). Переносят смыв на фильтр.

46. Сушат влажный осадок на фильтре в течение примерно 1 ч.

47. Переносят продукт в круглодонную колбу (одногорлую) объемом 2 л и сушат при медленном переворачивании с помощью роторного испарителя при температуре бани 50°С до достижения постоянной массы.

- 46 014230

Пример 73.

Получение {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил}-(4-трифторметилфенил)амина

{1-Метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}-(4трифторметилфенил)амин можно получать согласно следующей процедуре.

1. Снабжают круглодонную колбу (4-горлую) объемом 2 л механической мешалкой, датчиком для измерения внутренней температуры, терморегулятором, устройством для продувки азотом и конденсатором.

2. Вносят в реактор 4-(2-(5-(трифторметил)-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси)-1Н-метилбензол1,2-диамин (200 г) через воронку для сыпучих веществ.

3. Вносят в реактор ацетонитрил (1 л) через воронку для сыпучих веществ.

4. Начинают перемешивать смесь при температуре окружающей среды в атмосфере азота.

5. Через 20±5 мин вносят в реактор 4-трифторметилфенилизотиоцианат (104 г) через воронку для сыпучих веществ.

6. Через 30 мин после добавления изотиоцианата берут образец для проверки того, завершена ли реакция.

7. Если реакция завершена, то фильтруют смесь через грубый фильтр из спекшегося стекла.

8. Промывают реактор МеСN (200 мл). Переносят смыв на фильтр.

9. Промывают удаленные твердые частицы МеСN (200 мл).

10. Переносят фильтрат в 4-горлую круглодонную колбу объемом 3 л, снабженную механической мешалкой, датчиком для измерения внутренней температуры, терморегулятором, устройством для продувки азотом и конденсатором.

11. Вносят в реактор Ν,Ν-диизопропилэтиламин через воронку для сыпучих веществ.

12. Вносят в реактор хлорид 2-хлор-1,3-диметилимидазолиния через воронку для сыпучих веществ в виде четырех одинаковых порций каждые 10 мин (общее время добавления составляет 30 мин). После последнего добавления реакционную смесь перемешивают еще в течение 10 мин.

13. Нагревают реакционную смесь до 50±5°С.

14. Через 30 мин после нагревания берут образец для проверки того, завершена ли реакция.

15. Если реакция завершена, то переносят реакционную смесь через встроенный патронный 0,2миллиметровый фильтр в круглодонную колбу объемом 3 л, оснащенную как для стадии 10.

16. Добавляют воду через воронку для сыпучих веществ.

17. Нагревают реакционную смесь до 50±5°С.

18. После нагревания в течение 2 ч смеси дают охладиться до 20-25°С и перемешивают еще в течение 1 ч.

19. Выделяют продукт путем фильтрации через средний фильтр из спекшегося стекла.

20. Промывают реактор смесью 2:1 МеС^вода (300 мл). Переносят смыв на фильтр.

21. Промывают осадок на фильтре смесью 2:1 МеС^вода (300 мл).

22. Сушат влажный осадок на фильтре в течение примерно 1 ч.

23. Переносят продукт на сушильную чашку и сушат продукт в вакуумной печи при 70±5°С при слабой струе азота до тех пор, пока количество остаточного МеСN (ацетонитрил) на станет меньше 410 част./млн.

24. Для осуществления перекристаллизации продукт нагревают до температуры дефлегмации в 15 объемах (мас./об.) ЕЮН в реакторе, снабженном механической мешалкой, датчиком для измерения внутренней температуры, терморегулятором, устройством для продувки азотом и конденсатором.

25. Смесь кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин, после чего дистилляционную насадку заменяют на конденсатор.

26. ЕЮН отгоняют до тех пор, пока не останется 4 объема. Нагревание прекращают и добавляют один объем воды.

27. Смеси дают охладиться до 0-5°С.

28. Выделяют продукт путем фильтрации через средний фильтр из спекшегося стекла.

29. Промывают реактор смесью 4:1 ЕЮН/вода (1 объем). Переносят смыв на фильтр.

30. Промывают осадок на фильтре водой (1 объем).

31. Сушат влажный осадок на фильтре в течение примерно 1 ч.

32. Переносят продукт на сушильную чашку и сушат продукт в вакуумной печи при 50±5°С при слабой струе азота до достижения постоянной массы.

- 47 014230

Пример 74.

Получение {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил}-(4-трифторметилфенил)амина.

4-Трифторметилфенилизотиоцианат (200 мг, 1 ммоль) добавляли к смеси, содержащей 4-(2-(5(трифторметил)-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси)-1Н-метилбензол-1,2-диамин (350 мг, 1 ммоль) в 3 мл ацетонитрила. После перемешивания в течение 20 мин при температуре окружающей среды результаты ЖХВР показали, что произошло полное превращение. Добавляли триэтиламин (0,3 мл, 2,2 ммоль), а затем йодид 2-хлор-1-метилпиридиния (270 мг, 1,05 ммоль).

Реакционную смеь нагревали до 50°С в течение 5 ч. Нагревание прекращали и добавляли 1,5 мл воды. После перемешивания смеси в течение 2 ч твердый продукт собирали фильтрацией и промывали смесью 2:1 ацетонитрил/вода (3x1 мл), получая 317 мг (61%) указанного в заголовке соединения.

Пример 74а.

Получение нитробензоламина

4-(2-(5-(трифторметил)-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси)-Ы-метил-2-

ЫаОМе (1,5 мл, 6,3 ммоль, 25 мас.% в МеОН) добавляли к смеси, содержащей 4-(4-(метиламино)-3нитрофенокси)пиридин-2-карбонитрил (1,72 г, 6,3 ммоль) в 1-РгОН (10 мл). Смесь нагревали до 50°С (внутренняя температура). После нагревания в течение 1 ч результаты ЖХВР показали, что произошло полное превращение исходного продукта. Добавляли МН₄ОАс (1,46 г, 18,9 ммоль) и смесь нагревали до 70°С. После выдерживания в течение 1 ч при 70°С, смесь нагревали до 85°С. Одновременно добавляли 3бром-1,1,1-трифторацетон (0,8 мл, 7,56 ммоль) в виде четырех порций по 0,2 мл через каждые 30 мин. Смесь выдерживали при 85°С в течение 20 ч. Затем смеси давали охладиться до температуры окружающей среды и добавляли воду (10 мл). После перемешивания в течение нескольких часов смесь охлаждали в бане лед/вода. После выдерживания в течение 1 ч в бане лед/вода твердый продукт собирали фильтрацией и промывали смесью 1:1 1-РгОН/вода (2x7 мл). Твердый продукт сушили в вакуумной печи при 50°С в течение примерно 16 ч, получая 0,982 г (41%) указанного в заголовке соединения.

Пример 74б.

Получение 4-хлор-2-(5-(трифторметид)-1Н-имидазол-2-ил)пиридина

ЫаОМе (0,46 мл, 2 ммоль, 25 мас.% в МеОН) добавляли к смеси, содержащей 4-хлор-2цианпиридин (277 мг, 2 ммоль) в 1-РгОН (3 мл). Смесь нагревали до 50°С (температура в реакционном блоке). После нагревания в течение 1 ч результаты ЖХВР-анализа показали, что произошло полное превращение исходного материала. Смесь нагревали до 70°С и добавляли МН₄ОАс (462 мг, 6 ммоль). После выдерживания в течение 1 ч при 70°С смесь нагревали до 85°С. Одновременно добавляли 3-бром-1,1,1трифторацетон (0,25 мл, 2,4 ммоль) в виде 4-х порций по 0,063 мл через каждые 30 мин. Смесь выдерживали при 85°С в течение примерно 20 ч. Неочищенный продукт по данным ЖХВР-анализа имел чистоту 72,4% (ЬСАР), что подтверждали с помощью ЖХ-МС-анализа.

Пример 74в.

4-Хлор-2-цианпиридин

4-Хлор-2-пиридинкарбоксамид (93,9 г, 0,6 моль) и ТЭА (125 мл, 0,9 моль) в ЕЮАс (500 мл) охлаждали до 0,2°С с помощью внешнего охлаждающего устройства. С помощью капельной воронки добавляли ТФУА (92 мл, 0,66 моль) в течение 40 мин. В процессе добавления внутренняя температура повышалась до 10°С. После завершения добавления температура составляла 0,0°С. После добавления охлаждающее устройство отключали. Еще через 30 мин по данным ЖХВР-анализа присутствовало 4,3% (ЬСАР) исходного продукта. Добавляли еще 8,3 мл (0,06 моль) ТФУА. После перемешивания еще в течение 20 мин результаты ЖХВР-анализа показали, что произошло полное превращение. Добавляли 10%ный водный раствор К₂СО₃ (мас./об., 500 мл). Внутренняя температура повышалась от 13,7 до 22,0°С. После перемешивания в течение 20 мин смесь переносили в делительную воронку. Слои отделяли и водный слой экстрагировали с помощью ЕЮАс (150 мл). Объединенные органические слои промывали 10%-ной водной лимонной кислотой (мас./об., 300 мл), сушили (Ыа₂8О₄), фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт сушили в вакуумной печи при 50°С в течение 16 ч, получая 72,85 г (87%) ука занного в заголовке соединения.

Ή ЯМР (400 МГц, ГОСТ) δ 8,6 (т, 1Н), 7,7 (т, 1Н), 7,5 (т, 1Н); ¹³С ЯМР (100 МГц, СОС1_;) δ 151,8, 145,3, 134,9, 128,7, 127,4, 116,1;

- 48 014230 выход по данным ЖХВР >99% (ЬСАР).

Пример 74г.

4-(4-Метиламино-3-нитрофенокси)пиридин-2-карбонитрил

Смесь, содержащую 4-хлор-2-цианпиридин (б,9 г, 0,05 моль), 4-метиламин-3-нитрофенол (8,4 г, 0,05 моль) и К₂СО₃ (10,4 г, 0,075 моль) в ДМСО (80 мл), нагревали до б0°С. Через 11,5 ч по данным ЖХВР-анализа происходило полное превращение обоих исходных продуктов. После охлаждения до 20°С к реакционной смеси добавляли воду (240 мл). Температура поднималась до 40°С, после чего снижалась до температуры окружающей среды. Твердый продукт собирали фильтрацией и промывали водой (2x40 мл). Затем твердый продукт суспендировали в гептане (40 мл). Неочищенный продукт сушили в вакуумной печи при 50°С в течение 1б ч, получая 10,33 г (7б%) указанного в заголовке соединения.

' Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б_б) δ 8,5 (т, 1Н), 8,2 (т, 1Н), 7,9 (т, 1Н), 7,7 (т, 1Н), 7,5 (т, 1Н), 7,2 (т, 1Н), 7,1 (т, 1Н), 3,0 (8, 3Н);

¹³С ЯМР (100 МГц, ДМСО-б_б) δ 1б5,1, 152,9, 144,4, 140,б, 134,1, 130,4, 130,1, 117,9, 117,1, 117,0, 11б,5, 114,9, 29,8;

АРШ МС [М+Н]⁺=271; выход по данным ЖХВР >99% (ЬСАР).

Пример 74д.

4-(4-Метиламино-3-аминофенокси)пиридин-2-карбонитрил

4-(4-Метиламино-3-нитрофенокси)пиридин-2-карбонитрил (5,0 г, 0,019 моль) в ЕЮН (15 мл) нагревали до 40°С. Добавляли Ыа₂СО₃ (4,7 г, 0,044 моль), а затем Н₂О (8,4 мл). Добавляли Ыа₂8₂О₄ (3,3 г, 0,019 моль), а затем Н₂О (10 мл). Температура возрастала от 41,7 до 49,5°С. После охлаждения до 41,7°С добавляли Ыа₂8₂О₄ (3,3 г, 0,019 моль), а затем Н₂О (10 мл). Температура возрастала до 44,5°С. После охлаждения до 3б,7°С добавляли Ыа₂8₂О₄ (б,б г, 0,038 моль), а затем Н₂О (20 мл). Температура возрастала до 44,0°С. По данным ЖХВР-анализа присутствовало 4,1% (ЬСАР) исходного продукта. Добавляли дополнительную порцию Ыа₂8₂О₄ (3,3 г, 0,019 моль). После перемешивания еще в течение 15 мин нагревание прекращали и добавляли Н₂О (12,5 мл). При температуре 25°С добавляли дополнительную порцию Ыа₂СО₃ (1,3 г, 0,012 моль) и смесь охлаждали в бане со льдом/водой. При температуре менее 5°С смеси давали состариться в течение 30 мин (конечная температура 1,5°С). Твердый продукт собирали фильтрацией и промывали Н₂О (10 мл, а затем 5 мл). Твердый продукт сушили на фильтре в течение 30 мин и затем переносили в реакционную колбу и добавляли Н2О (50 мл). Смесь перемешивали в течение 45 мин. Затем твердый продукт собирали фильтрацией и промывали Н₂О (2x10 мл). Неочищенный продукт сушили в вакуумной печи при 50°С в течение 1б ч, получая 3,50 г (7б%) указанного в заголовке соединения.

'|| ЯМР (400 МГц, ДМСО-б_б) δ 8,5 (т, 1Н), 7,5 (т, 1Н), 7,1 (т, 1Н), б,4 (т, 1Н), б,3 (т, 2Н), 4,8 (8, 2Н), 4,7 (8, 1Н), 2,7 (8, 3Н);

АРС.Ч МС [М+Н]⁺=241; выход по данным ЖХВР >99% (ЬСАР).

Пример 74е.

4-[1-Метил-2-(4-(трифторметил)фениламино)-1Н-бензимидазол-5-илокси]пиридин-2-карбонитрил.

4-(Трифторметил)фенилизотиоцианат (9,б5 г, 0,0475 моль) добавляли к раствору 4-(4-метиламино-

3-аминофенокси)пиридин-2-карбонитрила (12,0 г, 0,05 моль) в МеСЫ (б0 мл). Через 40 мин результаты ЖХВР-анализа показали, что произошло полное превращение амина. Смесь фильтровали и удаленные твердые частицы промывали МеСЫ (2x12 мл). К фильтрату добавляли ДИПЭА (17,5 мл, 0,1 моль). Добавляли хлорид 2-хлор-1,3-диметилимидазолиния (ДМХ) в виде 4-х порций по 2,11 г (8,44 г, 0,05 моль) через каждые 10 мин. После последнего добавления смеси давали перемешиваться еще в течение 10 мин, после чего ЖХВР-анализ показал, что произошло полное превращение. Затем смесь нагревали до 50°С (внутренняя температура). После выдерживания в течение 45 мин при 50°С ЖХВР-анализ показал, что произошло полное превращение. Смеси давали охладиться до температуры окружающей среды и затем добавляли Н2О (45 мл). Сначала реакционная смесь была гомогенной, затем соединение начинало осаждаться из смеси. После перемешивания в течение 2 ч твердый продукт собирали фильтрацией и промывали смесью 2:1 МеСЫ/Н₂О (2x20 мл). Неочищенный продукт сушили в вакуумной печи при 50°С в течение 1б ч, получая 1б,10 г (78%) указанного в заголовке соединения.

- 49 014230 ' Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ 9,5 (т, 1Н), 8,5 (т, 1Н), 8,0 (т, 2Н), 7,7 (т, 2Н), 7,6 (т, 1Н), 7,4 (т, 1Н), 7,3 (т, 1Н), 7,1 (т, 1Н), 6,9 (т, 1Н), 3,7 (т, 3Н);

АРС1 МС [М+Н]⁺=410; выход по данным ЖХВР >99% (ЬСАР).

Пример 74ж.

{1-Метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}-(4трифторметилфенил)амин

№ЮМе (0,23 мл, 1 ммоль, 25 мас.% в МеОН) добавляли к смеси, полученной в примере 74е (409 мг, 1 ммоль) в МеОН (4 мл). После выдерживания в течение 1 ч при температуре окружающей среды ЖХВРанализ показал присутствие 46,2% (ЬСАР) исходного продукта. Смесь нагревали до 50°С (температура в реакционном блоке). После выдерживания в течение 1 ч по данным ЖХВР-анализа присутствовало 4,1% (ЬСАР) исходного продукта. Добавляли NН₄ОАс (231 мг, 3 ммоль), а затем 3-бром-1,1,1-трифторацетон (0,13 мл, 1,2 ммоль). Смесь выдерживали при 50°С в течение примерно 20 ч. Добавляли дополнительную порцию 3-бром-1,1,1-трифторацетона (0,06 мл, 0,58 ммоль) и смесь нагревали до 60°С. После выдерживания в течение 24 ч при 60°С смеси давали охладиться до температуры окружающей среды. Добавляли воду (4 мл), а затем ЕЮЛс (4 мл). Слои отделяли и водный слой экстрагировали ЕЮЛс. Объединенные органические слои сушили (№₂8О₄), фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт растворяли в ИПС (4 мл). К 1 мл раствора продукта в ИПС добавляли метансульфоновую кислоту (0,020 мл). Смесь выдерживали в течение ночи при 80°С. Затем смесь охлаждали до температуры окружающей среды и концентрировали, получая указанное в заголовке соединение:

АРС1 МС [М+Н]⁺=519.

Пример 74з.

{1-Метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}-(4трифторметилфенил)амин

Р₃С

/ №ЮМе (0,23 мл, 1 ммоль, 25 мас.% в МеОН) добавляли к смеси продукта, полученного в примере 74е (409 мг, 1 ммоль), с 1-РгОН (2 мл). Смесь нагревали до 50°С (температура в реакционном блоке). После выдерживания в течение 1 ч по данным ЖХВР-анализа происходило полное превращение исходного продукта. Смесь нагревали до 70°С и добавляли NН₄ОАс (231 мг, 3 ммоль). После выдерживания в течение 1 ч при 70°С смесь нагревали до 85°С. Одновременно добавляли 3-бром-1,1,1-трифторацетон (0,13 мл, 1,2 ммоль) в виде 4-х порций по 0,033 мл через каждые 30 мин. Смесь выдерживали при 85°С в течение примерно 20 ч. Смеси давали охладиться до температуры окружающей среды и добавляли воду (2 мл). После перемешивания в течение нескольких часов твердый продукт собирали фильтрацией и промывали смесью 1:1 1-РгОН/вода (2x3 мл). Твердый продукт сушили в вакуумной печи при 50°С в течение примерно 16 ч, получая 0,11 г (21%) указанного в заголовке соединения.

Пример 75.

Получение {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил}-(4-трифторметилфенил)амина.

4-Трифторметилфенилизотиоцианат (200 мг, 1 ммоль) добавляли к смеси, содержащей 4-(2-(5(трифторметил)-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси)-1Н-метилбензол-1,2-диамин (350 мг, 1 ммоль) и 3 мл ацетонитрила. После перемешивания в течение 20 мин при температуре окружающей среды ЖХВРанализ показал, что произошло полное превращение. Смесь, содержащую тиомочевину (553 мг, 1 ммоль) в РОС13 (3 мл), перемешивали при температуре окружающей среды. Через 4 ч смесь нагревали примерно до 50°С. После выдерживания в течение 2 ч ЖХВР-анализ показал, что реакция завершилась.

Пример 76.

Анализ Яа!/Мек методом фильтрации.

Буферы:

буфер для анализа: 50 мМ Трис, рН 7,5, 15 мМ МдС1₂, 0,1 мМ ЭДТК, 1 мМ ДТТ; буфер для отмывки: 25 мМ Нере8, рН 7,4, 50 мМ пирофосфат натрия, 500 мМ №С1; реагент для прекращения реакции: 30 мМ ЭДТК.

Материалы

Яа!, активная: фирма Ир81а1е Вю1еск №14-352;

- 50 014230

Мек, неактивная: фирма Ирк1а1е Вю1есЕ, № 14-205;

³³Р-АТФ: ΝΉΝ фирма Регкш Е1тег № NЕС 602 Н;

96-луночные планшеты для анализа: полипропиленовые планшеты с И-образным дном фирмы Еа1соп № 35-1190;

фильтрующее устройство: фирма М1Шроге, № МАУМ 096 ОК;

96-луночные планшеты для фильтрации: фирма МЕЕроге 1ттоЬ11оп 1 № МА1Р NОВ; сцинтилляционная жидкость: фирма ^а11ас ОрЕРЕаке 8ирегМ1х № 1200-439.

Условия анализа концентрация КаТ примерно 120 пМ; концентрация Мек примерно 60 нМ;

концентрация ³³Р-АТФ 100 мМ; продолжительность реакции 45-60 мин при комнатной температуре. Протокол анализа.

КаТ и Мек объединяли в 2-кратных конечных концентрациях в буфере для анализа (50 мМ Трис, рН 7,5, 15 мМ МдС1₂, 0,1 мМ ЭДТК и 1 мМ ДТТ) и распределяли из расчета 15 мкл на лунку в полипропиленовые планшеты для анализа (96-луночные планшеты для анализа: полипропиленовые планшеты с Иобразным дном фирмы Еа1соп № 35-1190). Исходные уровни определяли в лунках, содержащих Мек и ДМСО без КаТ.

В лунки, содержащие КаТ/Мек, добавляли по 3 мкл 10-кратного тестируемого соединения, представляющего собой ингибитор киназы КаТ, разбавленного в 100% ДМСО. Для инициации реакции с участием активности киназы КаТ добавляли 12 мкл на лунку 2,5х³³Р-АТФ, разбавленного в буфере для анализа. Через 45-60 мин реакцию прекращали путем добавления 70 мкл реагента для прекращения реакции (30 мМ ЭДТК). Планшеты для фильтрации предварительно смачивали в течение 5 мин 70%-ным этанолом и затем промывали путем фильтрации буфером для отмывки. После этого образцы (90 мкл) из лунок, в которых проводили реакцию, переносили на планшеты для фильтрации. Планшеты для фильтрации 6кратно промывали буфером для отмывки с использованием устройства для фильтрации фирмы МЕЕроге. Планшеты сушили и добавляли по 100 мкл на лунку сцинтилляционной жидкости (^а11ас ОрЕРЕаке 8ирегМ1х 1200-439). Затем определяли количество импульсов в минуту (СРМ) с помощью ридера типа ^а11ас М1сгоЬе1а 1450.

Пример 77.

Анализ 2. Скрининг биотинилированной КаТ.

Скрининг КаТ ш уЕго.

Активность различных изоформ сериновых/треониновых киназ КаТ можно измерять, используя АТФ в качестве субстрата для МЕК и оценивая перенос фосфатного фрагмента на МЕК-остаток. Рекомбинантные изоформы КаТ получали путем очистки из клеток насекомых линии кТ9, инфицированных рекомбинантным бакуловирусным экспрессионным вектором, несущим человеческую КаТ. Неактивную рекомбинантную киназу МЕК экспрессировали в Е.соЕ и после очистки метили биотином. Для каждого анализа тестируемые соединения серийно разводили в ДМСО, затем смешивали с КаТ (0,50 нМ) и неактивной меченной биотином киназой МЕК (50 нМ) в буфере для реакции, содержащем АТФ (1 мкМ). Затем реакционные смеси инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре и реакцию прекращали путем добавления 0,5М ЭДТК. Реакционную смесь после прекращения реакции переносили на сенсибилизированный нейтравидином планшет (фирма Р1егсе) и инкубировали в течение 1 ч. Фосфорилированный продукт оценивали с помощью флуоресцентной системы с временным разрешением типа БЕЬЕ1А (фирма ^а11ас) с использованием кроличьего антитела к фосфорилированной МЕК (р-МЕК) (фирма Се11 81дпаЕпд) в качестве первичного антитела и меченного с помощью европия антикроличьего антитела в качестве вторичного антитела. Флуоресценцию с временным разрешением измеряли с помощью флуориметра типа ^а11ас 1232 БЕЬЕ1А. Концентрацию каждого соединения, вызывающую 50%-ное ингибирование (1С₅₀), рассчитывали по методу нелинейной регрессии с помощью программы для анализа данных ХЬ ЕЕ.

С использованием процедур, описанных в примерах 76 или 77, было установлено, что соединения из примеров 1-64 обладают ингибирующей активностью в отношении киназы КаТ, характеризующейся величиной 1С₅₀ меньше 5 мкМ.

Пример 78.

Ингибирование роста опухоли меланомы.

3х10⁶ клеток человеческой меланомы линии А375М имплантировали подкожно в правый бок 10-12недельным самкам мышей линии Νϋ/Νπ весом примерно 24 г. Когда средний объем опухоли достигал примерно 150 мм (через 17 дней после имплантации), мышей распределяли произвольно в зависимости от объема опухоли на четыре группы по девять мышей в каждой и начинали обработку соединением, предлагаемым в изобретении. Мышам вводили ежедневно в течение 14 дней оральным путем через зонд либо только наполнитель, либо 10, 30 или 100 мг/кг соединения из примера 25, в каждом случае в объеме 0,2 мл. Объем опухоли измеряли дважды в неделю с помощью цифровых циркулей. Средний объем опу

- 51 014230 холи представлен на фиг. 1.

Пример 79.

Ингибирование передачи сигнала киназы КаГ в клетках меланомы.

Так же, как и в примере 78, 3х10⁶ клеток человеческой меланомы линии А375М имплантировали подкожно в правый бок 10-12-недельным самкам мышей линии Νιι/Νιι весом примерно 24 г. Когда средний объем опухоли достигал примерно 150 мм³ (через 17 дней после имплантации), мышей распределяли произвольно в зависимости от объема опухоли на четыре группы и вводили ежедневно в течение 5 дней оральным путем через зонд либо только наполнитель, либо 10, 30 или 100 мг/кг соединения из примера 25, в каждом случае в объеме 0,2 мл. Через 4 и 24 ч после введения дозы мышей умерщвляли, выделяли опухоли и быстро замораживали.

Замороженные опухоли подвергали оттаиванию на льду, взвешивали и затем гомогенизировали в буфере КГРА, содержащем мини-таблетки смеси (коктейля) ингибиторов протеазы без ЭДТК фирмы Косйе Сотр1е1е (2 таблетки на 25 мл буфера), 1 мМ фенилметилсульфонилфторид (РМ8Р) и 1-кратный коктейль II ингибиторов фосфатазы фирмы 81дта, с помощью гомогенизатора фирмы Косйе Мадт (2 цикла по 1 мин при 6500 об/мин при 4°С). На каждые 100 мг опухолевой ткани добавляли 1 мл буфера для лизиса КГРА. Гомогенаты центрифугировали при 14000 об/мин в течение 20 мин в микроцентрифуге при 4°С, а затем подвергали дополнительной гомогенизации с помощью устройства типа 0|адег1 Οίакйгеббегк (9000 об/мин в течение 2 мин при 4°С). Концентрацию белка определяли с помощью ВСАанализа белка, разработанного фирмой Р1егсе, и затем вносили по 20 мкг каждого образца на лунку в 420%-ный трис-глициновый полиакриламидный гель с ДСН. После ПААГ белок переносили на нитроцеллюлозные мембраны, блокировали (5%-ное обезжиренное порошкообразное молоко в ТВ8Т) в течение 1 ч при комнатной температуре и затем зондировали в течение ночи при 4°С с использованием разведения 1:1000 (в блокирующем буфере) кроличьего поликлонального антитела к фосфо-ЕКК1/2 (фирма Се11 8^дηа11^ηд, № 9101), кроличьего поликлонального антитела к фосфо-МЕК (фирма Се11 541131111¾ № 9121), кроличьего поликлонального антитела к ЕКК1/2 (фирма Се11 541131111¾ № 9102) или кроличьего поликлонального антитела к МЕК (фирма Се11 54^-1111¾ № 9122). После этого мембраны промывали ТВ8Т 5 раз (по 5 мин каждый раз) при комнатной температуре и во все блоты добавляли меченное с помощью НКР козье антикроличье антитело в разведении 1:5000 (в блокирующем буфере) и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем мембраны промывали ТВ8Т 5 раз (по 5 мин каждый раз) и мембраны инкубировали с Р1егсе 8ирег-81дпа1 в течение 4 мин, после чего экспонировали на пленку со временем экспозиции от 1 с до 20 мин. Результаты, полученные для образцов, взятых через 4 и 24 ч после введения дозы, представлены на фиг. 2 А и фиг. 2Б соответственно.

Пример 80.

Ингибирование роста злокачественной опухоли ободочной кишки.

2х10⁶ клеток рака ободочной кишки человека линии НТ29Р имплантировали подкожно в правый бок 10-12-недельным самкам мышей линии Νη/Νη весом примерно 24 г. Когда средний объем опухоли достигал примерно 250 мм³ (через 14 дней после имплантации), мышей распределяли произвольно в зависимости от объема опухоли на четыре группы по десять особей в каждой и начинали обработку соединением, предлагаемым в изобретении. Мышам вводили ежедневно в течение 14 дней оральным путем через зонд либо только наполнитель, либо 10, 30 или 100 мг/кг соединения из примера 25, в каждом случае в объеме 0,2 мл. Объем опухоли измеряли дважды в неделю с помощью цифровых циркулей. Средний объем опухоли представлен на фиг. 3.

Пример 81.

Ингибирование передачи сигнала киназы КаГ в клетках рака ободочной кишки.

3х10⁶ клеток рака ободочной кишки человека линии НТ29Р имплантировали подкожно в правый бок 10-12-недельным самкам мышей линии Νη/Νη весом примерно 24 г. Когда средний объем опухоли достигал примерно 150 мм³ (через 17 дней после имплантации), мышей распределяли произвольно в зависимости от объема опухоли на четыре группы и начинали обработку соединением, предлагаемым в изобретении. Мышам вводили ежедневно в течение 5 дней оральным путем через зонд либо только наполнитель, либо 10, 30 или 100 мг/кг соединения из примера 25, в каждом случае в объеме 0,2 мл. Через 1, 4 и 24 ч после введения доз мышей умерщвляли, вырезали опухоли и быстро замораживали. Замороженные опухоли обрабатывали согласно процедуре, описанной в примере 79. Результаты, полученные для образцов, взятых через 1, 4 и 24 ч после введения доз, представлены на фиг. 4А, 4Б и 2В соответственно.

Пример 82.

Ингибирование передачи сигнала киназы КаГ соединением из примера 1 в биохимическом анализе ίη νίΙΐΌ.

Анализ КаГ ίη νίΙΐΌ.

Ингибирующее действие соединения из примера 1, т.е. {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Нимидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}-(4-трифторметилфенил)амина, в отношении Β-КаГ дикого типа, с-КаГ дикого типа и мутантной Β-КаГ №600Е) оценивали с помощью следующего

- 52 014230 анализа с использованием биотинилированной метки. Киназную активность различных изоформ сериновых/треониновых киназ КаТ измеряли, используя АТФ, рекомбинантную неактивную киназу субстрат МЕК, и оценивая перенос фосфатного фрагмента на МЕК-остаток. Рекомбинантную полноразмерную МЕК, имеющую инактивирующую мутацию сайта связывания АТФ К97К (приводящий к утрате киназной активности) экспрессировали в Е.сой и после очистки метили биотином. кДНК МЕК субклонировали с Ν-концевой меткой (Ыз)₆ и экспрессировали в Е.сой, и рекомбинантный субстрат МЕК очищали из лизата Е.сой с помощью никель-аффинной хроматографии и последующей анионообменной хроматографии. Конечный препарат субстрата МЕК биотинилировали (Е2-Ьшк 8и1Ео-ЫН8-ЕС-Вюйп фирмы Ρ^е^се) и концентрировали до концентрации 11,25 мкМ. Рекомбинантные В-КаТ, с-КаТ и мутантную В-КаТ получали путем очистки из клеток насекомых линии зТ9, инфицированных соответствующими экспрессионными векторами, несущими человеческую рекомбинантную КаТ. Рекомбинантные изоформы КаТ очищали путем взаимодействия с антителом к С1и или с помощью хроматографии с использованием ионов металла.

Для каждого анализа соединение из примера 1 серийно разводили в ДМСО и затем смешивали с ВКаТ, с-КаТ или мутантной В-КаТ (концентрация каждой 0,50 нМ). Субстрат, представляющий собой неактивную биотинилированную киназу МЕК (50 нМ) добавляли в буфер для реакции, содержащий АТФ (1 мкМ). Буфер для реакции содержал 30 мМ трис-НС1, рН 7,5, 10 мМ МдС1₂, 2 мМ ДТТ, 4 мМ ЭДТК, 25 мМ бета-глицерофосфат, 5 мМ МпС1₂ и 0,01% БСА/ЗФР. Затем реакционные смеси инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре и реакцию прекращали путем добавления 0,5М ЭДТК. После прекращения реакции реакционную смесь переносили на сенсибилизированный нейтравидином планшет (фирма Ρ^е^се) и инкубировали в течение 1 ч. Фосфорилированный продукт оценивали с помощью флуоресцентной системы с временным разрешением типа ОЕББ1Л (фирма Аа11ас) с использованием кроличьего антитела к р-МЕК (фирма Се11 81дпа1шд) в качестве первичного антитела и меченного с помощью европия антикроличьего антитела в качестве вторичного антитела. Флуоресценцию с временным разрешением измеряли с помощью флуориметра типа Аа11ас 1232 ΟΞΕΕ^. Концентрацию каждого соединения, вызывающую 50%-ное ингибирование (1С₅₀), рассчитывали по методу нелинейной регрессии с помощью программы для анализа данных ХЬ Εί!.

Результаты.

Соединение из примера 1 обладало сильным ингибирующим действием (1С₅₀ < 0,1 мкМ) в отношении активности В-КаТ, с-КаТ и мутантной В-КаТ (У600Е), как проиллюстрировано в табл. 3.

Таблица 3 Ингибирующее действие ш У1!го соединения из примера 1 в отношении активности КаТ

Мишень	Соединение из примера 1, значение 1С5о, полученное в биохимическом анализе
В-Ка£ (У600Е)	О,ОО53мкМ
В-ЯаГ	0,068мкМ
с-Ка!	0,004мкМ

Как видно из табл. 3, соединение из примера 1 обладает сильной ингибирующей активностью в отношении изоформы В-КаТ дикого типа, изоформы с-КаТ дикого типа и мутантной формы В-КаТ (У600Е) киназ КаТ. Как проиллюстрировано на фиг. 5, считается, что киназы КаТ являются основными эффекторами Каз в пути передачи сигнала МАБК (Каз/КаТ/МЕК/ЕКК). Киназы КаТ активируются Каз и фосфорилируют и активируют Мек1 и Мек2, которые, в свою очередь, активируют активируемые митогеном киназы 1 и 2 (МАΡК) в пути МАБК. Известно, что киназы КаТ оказывают влияние и регулируют клеточную пролиферацию, дифференцировку, выживание, онкогенную трансформацию и апоптоз. Установлено, что изоформа В-КаТ является наиболее активной формой КаТ, участвующей в передаче сигнала и имеющей решающее значение для распространения сигнала Каз.

Как продемонстрировано ниже в табл. 4, путь передачи сигнала МАГК играет роль во многих типах рака человека. Мутации Каз (активирующие) выявлены в 15% всех случаев рака человека. Мутации ЕКК (гиперактивирующие) выявлены в 30% всех случаев рака человека. Онкогенные мутации, ассоциированные с раком, часто присутствуют в некоторых компонентах этого пути, например, мутантная В-КаТ (У600Е) встречается примерно в 70% случаев меланом и примерно 12% случаях карциномы ободочной кишки (Оа\зез и др., выше; Уиеп и др., выше и Вгозе и др., выше).

- 53 014230

Таблица 4 Корреляция между присутствием мутантных молекул, участвующих в пути передачи сигнала МАРК и неблагоприятным клиническим исходом

Показание	Мутантные молекулы в пути передачи сигнала
меланома	В-КаГ (У600Е) (70%); Ν-Ваз (15%)
папиллярный рак щитовидной железы	В-КаГ (У600Е) (35-70%); Η-, К-, Ν-Каз (60%)
рак яичника	В-КаГ (У600Е) (30%)
рак ободочной кишки	Β-КаГ (У600Е) (120%); К-Каз (45%)
рак поджелудочной железы	К-Каз (90%)
немелкоклеточный рак легкого	К-Ваз (35%)
АЛЛ, ОМЛ	К-Каз (30%)

См. 8еЬоЙ-Ьеоро1е и Неггега, №1иге Ке\зе\\'к Сапсег (4), 2004, с. 937.

Как продемонстрировано выше в табл. 4, мутантная форма В-КаГ (У600Е), которая является активированной, представляет собой важную мишень при лечении рака, поскольку ее экспрессия является признаком неблагоприятного прогноза, она обладает конститутивной активностью и функционирует в нескольких типах опухолей, включая меланому, папиллярный рак щитовидной железы, рак яичника и рак ободочной кишки. Ранее было установлено, что ингибиторы киназы КаГ дикого типа, которые ингибируют также мутантную В-КаГ, могут служить в качестве терапевтических агентов в терапии рака. Например, было установлено, что истощение мутантной В-КаГ с помощью К1РНК ухудшает передачу сигнала ЕКК и пролиферацию линий клеток меланомы (Э1ЬЬ Ν.Ρ и др., №11иге Ке\зе\\'к Сапсег (4), 2004, с. 718). Поэтому важно отметить, что соединение из примера 1 ингибирует мутантную В-КаГ даже в большей степени, чем В-КаГ дикого типа, что свидетельствует о возможности применения соединения для ингибирования КаГ при лечении опосредуемых КаГ заболеваний, включая меланому, рак яичника, папиллярный рак щитовидной железы и рак ободочной кишки.

Пример 83.

Ингибирование передачи сигнала мутантной киназы В-КаГ соединением из примера 1 в анализе, основанном на использовании клеток.

1. Ингибирование фосфорилирования ЕКК.

Методы.

Для оценки ингибирующего действия соединения из примера 1 в анализе, основанном на использовании клеток, применяли две линии клеток меланомы, а именно А375М (мутантная В-КаГ У600Е) и 8КМЕЬ-28 (мутантная В-КаГ У600Е). Фосфорилирование ЕКК анализировали после обработки серийными разведениями соединения из примера 1, т.е. {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}-(4-трифторметилфенил)амина, в клетках линии 8КМЕЬ28 и клетках линии А375М. Значения ЕС₅₀ определяли на основе аппроксимации данных с помощью 4параметрической кривой.

Результаты.

Как продемонстрировано в табл. 5, соединение из примера 1 ингибирует активность мутантной киназы В-КаГ (У600Е) в клетках линии 8КМЕЬ-28 и клетках линии Ά375Ν, что оценивали по снижению уровня рЕКК.

Таблица 5

Ингибирующее действие соединения из примера 1 в клеточных линиях меланомы, экспрессирующих мутантную В-КаГ.

Клеточная линия, экспрессирующая мутантную Β-КаГ (У600Е)	Значение ЕС50, характеризующее ингибирование рЕКК соединением из примера 1
А375М	160нМ
8КМЕЬ-28	100нМ

2. Ингибирование фосфорилирования МЕК.

Методы.

Для оценки ингибирующего действия соединения из примера 1 в анализе с использованием клеток применяли три линии клеток меланомы, а именно А375М (мутантная В-КаГ У600Е), 8КМЕЬ-2 (КаГ дикого типа, мутантная Ν-Как) и СНЬ-1 (КаГ дикого типа, Как дикого типа). Три линии клеток инкубировали при 37°С в 0,1%-ной фетальной быьей сыворотке с соединением из примера 1 в концентрациях 0,1, 0,5,1, 5 и 10 мкМ. После инкубации в течение 4 ч анализировали фосфорилирование МЕК с помощью анализа методом Вестерн-блоттинга.

Результаты.

Результаты представлены на фиг. 6А, 6Б и 6В. Как продемонстрировано на фиг. 6А, соединение из примера 1 является сильным ингибитором передачи сигнала КаГ в направлении его распространения в

- 54 014230 клетках А375М (фиг. 6А), клетках 8КМЕЬ-2 (фиг. 6Б) и клетках СНЬ-1 (фиг. 6В) в диапазоне концентрация от 0,1 до 10 мкМ.

3. Ингибирование независящего от заякоривания роста клеток.

Для проверки того, что ингибирование На! приводит к антипролиферативной активности, соединение из примера 1 тестировали с использованием различных линий клеток и изолятов человеческих опухолей, выращенных на мягком агаре, которые перечислены ниже в табл. 6.

Анализ пролиферации с использованием мягкого агара.

Для каждой из линий клеток, перечисленных ниже в табл. 6, высевали по 500 клеток на 100 мкл в 96-луночные плоскодонные микропланшеты с ультранизким прикреплением фирмы Согшпд (Согшпд № 3474). Для дополнения среды добавляли 1% кеакет СТС-агарозу (50 мкл/лунку), давали отвердеть и затем в каждую лунку добавляли по 100 мкл полной среды. Приготавливали серийные разведения соединения из примера 1, т.е. {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил}-(4-трифторметилфенил)амина до достижения конечной концентрации 5% ДМСО бессывороточной средой, и по 25 мкл разведенного соединения добавляли в каждую лунку (конечная концентрация ДМСО составляла 0,5%). В анализ включали также контрольную лунку, содержащую 0,5% ДМСО без соединения. После инкубации клеток с соединением в течение 7 дней в каждую лунку добавляли по 25 мкл красителя А1атаг В1ие (фирма Тгек П1адпокНс 8ук1етк. № #00-100) и инкубировали при 37°С в течение 4 ч. Планшеты считывали с помощью ридера для флуоресцентных планшетов при длине волны возбуждения 530 нм, длине волны испускания 590 нм. Значения ЕС₅₀ определяли с помощью аппроксимации данных 4-параметрической кривой.

Соединение из примера 1 тестировали также с использованием панели изолятов человеческих опухолей, выращенных на мягком агаре (фирма Опсо1екк СтЬН, Фрейбург, Германия). Образцы опухолей выделяли из организма пациентов и затем пересевали в виде кусочков опухолей мышам с нарушенной иммунологической реактивностью и анализировали с помощью описанных выше методов.

Результаты.

Соединение из примера 1 обладало сильным антипролиферативным действием в отношении линий клеток и изолятов человеческих опухолей, экспрессирующих мутантную В-На!, мутантную К-Нак и мутантную Ν-Нак, что продемонстрировано в табл. 6.

Таблица 6 Анализ пролиферации с использованием мягкого агара: ингибирование соединением из примера 1

Линия клеток/изоляты опухоли	Тип	Мутация	ЕС50 для соединения из примера 1
ДУМ 1799 (линия клеток)	меланома	В-Ка£ (УбООЕ)	<0,0098мкМ
ДУМ 1799 (линия клеток)	меланома	В-КаГ (УбООЕ)	0,016мкМ
А375М (линия клеток)	меланома	В-К.а£ (УбООЕ)	0,032мкМ
8К-МЕЬ28 (линия клеток)	меланома	В-КаГ (УбООЕ)	0,07мкМ
НТ-29 (линия клеток)	колоректальный рак	Β-Ка! (У600Е)	03026мкМ
Со1о205 (линия клеток)	колоректальный рак	В-ВаГ (У600Е)	0,13мкМ
НСТ-116 (линия клеток)	колоректальный рак	мутантная К-Кая	0,07мкМ
ЬоУо (линия клеток)	колоректальный рак	мутантная К-Кая	03016мкМ
Изолят человеческой опухоли №1	меланома	В-К.а£ (У600Е)	0,055мкМ
Изолят человеческой опухоли №2	меланома	В-Ка£ (УбООЕ)	0,20мкМ
Изолят человеческой опухоли №3	меланома	Ν-Каз (061К.)	0,57мкМ
Изолят человеческой опухоли №4	опухоль поджелудочной железы	К-Кая	1,27мкМ
Изолят человеческой опухоли №5	опухоль ободочной кишки	К-Кая	1,20мкМ

- 55 014230

Изолят человеческой опухоли №6	почечноклеточный рак	не установлена	>1мкМ
Изолят человеческой опухоли №7	почечноклеточный рак	не установлена	>1мкМ

Наличие ингибирующей активности соединения из примера 1 в отношении широкой панели линий клеток и изолятов человеческих опухолей, представленных выше в табл. 6, свидетельствует о выраженной антипролиферативной активности соединения в отношении опухолевых клеток, экспрессирующих мутантную В-ВаТ. Соединение обладает значительной ингибирующей активностью в отношении клеток меланомы, экспрессирующих мутантную В-ВаТ в диапазоне концентраций от <0,0098 до 0,07 мкМ. Соединение обладает также близким уровнем ингибирующей активности в отношении линий клеток колоректального рака, экспрессирующих мутантную В-ВаТ, в диапазоне концентраций от 0,026 до 0,13 мкМ. Соединение обладает также выраженной ингибирующей активностью в отношении двух линий опухолевых клеток колоректального рака, экспрессирующих мутантную К-Вак (в концентрации от 0,07 до 0,016 мкМ), это подтверждает, что ингибирование В-ВаТ/с-ВаТ в контексте мутации находящейся выше в пути передачи сигнала К-Вак приводит к антипролиферативной активности.

Установлено, что соединение из примера 1 при оценке на изолятах человеческих опухолей характеризовалось наиболее высокой ингибирующей активностью в отношении меланом, экспрессирующих мутантную В-ВаТ (ЕС₅₀=0,055 и 0,20 мкМ), за которыми следовала меланома, экспрессирующая мутантную Ν-Вак (ЕС₅₀=0,57 мкМ), что согласуется с результатами, полученными для описанных выше линий клеток. Значения ЕС₅₀ для опухоли поджелудочной железы и одной из колоректальных опухолей имели величину порядка 1 мкМ. Для остальных опухолей значения ЕС₅₀ были более 1 мкМ. Считается, что человеческие опухоли, выделенные из организма пациентов, представляют собой более точную модель заболевания, чем линии клеток, поскольку опухоли выделяют из организма пациентов и пересаживают в виде кусочков опухолей мышам с нарушенной иммунологической реактивностью. Следовательно, их не отбирают путем выращивания на пластических материалах и они сохраняют определенные особенности архитектуры первичной опухоли.

Следует отметить, что соединение из примера 1 обладает ингибирующей активностью в отношении изолятов опухоли почечно-клеточного рака в концентрациях более 1 мкМ. Хотя генотип этих конкретных опухолей не был определен, известно, что опухоли почечно-клеточного рака, как правило, не экспрессируют мутантную Вак или мутантную В-ВаТ. Таким образом, соединение из примера 1, повидимому, специфически ингибирует молекулы, участвующие в пути передачи сигнала МАРК, прежде всего молекулы киназ ВаТ и Вак.

Пример 84.

Лечение с помощью соединения из примера 1 приводит к регрессу опухоли на модели ксенотрансплантата человеческой меланомы А375М (экспрессирующей В-ВаТ У600Е).

Методы.

3х10⁶ клеток человеческой меланомы А375М имплантировали подкожно в правый бок 10-12недельным самкам мышей линии Νη/Νη весом примерно 24 г. Когда средний объем опухоли достигал примерно 150 мм (через 17 дней после имплантации), мышей распределяли произвольно в зависимости от объема опухоли на четыре группы по девять мышей в каждой и начинали обрабатку соединением из примера 1. Мышам вводили ежедневно в течение 14 дней оральным путем через зонд либо только наполнитель, либо 10, 30 или 100 мг/кг соединения из примера 1, в каждом случае в объеме 0,1 мл. Соединение из примера 1, т.е. {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил}-(4-трифторметилфенил)амин, приготавливали в 100% ПЭГ. Объем опухолей измеряли дважды в неделю с помощью цифровых циркулей.

Анализ методом Вестерн-блоттинга.

Через 8 и 24 ч после введения 14-й дозы мышей умерщвляли, опухоли удаляли и быстро замораживали. Замороженные опухоли подвергали оттаиванию на льду, взвешивали и затем гомогенизировали в буфере В1РА, содержащем мини-таблетки коктейля ингибиторов протеазы без ЭДТК фирмы Восйе Сотр1е1е (2 таблетки на 25 мл буфера), 1 мМ фенилметилсульфонилфторид (РМ8Е) и 1-кратный коктейль II ингибиторов фосфатазы фирмы 81дта, с помощью гомогенизатора фирмы Восйе Мадпа (2 цикла по 1 мин при 6500 об/мин при 4°С). На каждые 100 мг опухолевой ткани добавляли по 1 мл буфера для лизиса В1РА. Гомогенаты центрифугировали при 14000 об/мин в течение 20 мин в микроцентрифуге при 4°С, а затем подвергали дополнительной гомогенизации с помощью устройства типа Ц1адеп 01акНгеййегк (9000 об/мин в течение 2 мин при 4°С). Концентрацию белка определяли с помощью ВСА-анализа белка, разработанного фирмой Р1егсе, и затем вносили по 20 мкг каждого образца на лунку в 4-20%-ный трисглициновый полиакриламидный гель с ДСН. После ПААГ белок переносили на нитроцеллюлозные мембраны, блокировали (5%-ное обезжиренное порошкообразное молоко в ТВ8Т) в течение 1 ч при комнатной температуре и затем зондировали в течение ночи при 4°С с использованием разведения 1:1000 (в блокирующем буфере) кроличьего поликлонального антитела к фосфо-ЕВК1/2 (фирма Се11 81дпаШпд,

- 56 014230 № 9101), кроличьего поликлонального антитела к фосфо-МЕК (фирма Се11 81дпаШпд, № 9121), кроличьего поликлонального антитела к ЕКК1/2 (фирма Се11 81дпаШпд, № 9102) или кроличьего поликлонального антитела к МЕК (фирма Се11 81дпаШпд, № 9122). Анализ модуляции маркеров, находящихся в направлении распространения сигнала, осуществляли с использованием разведения 1:1000 антитела к В1т (фирма Сйетюоп, № АВ 17003), клона антитела к циклину Ό1 5Ό4 (фирма ирк!а!е, № 05-263), антитела к р27К1р-1 (182-198) (фирма Са1Ьюсйет, № 506127), антитела к фосфо-АКТ (8473) (фирма Се11 81дпаШпд, № 9271), антитела к фосфо-Ак! (Т308) (фирма Се11 81дпаШпд, № 9275) и антитела к полностью фосфорилированному Лк1 (фирма Се11 81дпаШпд, № 9272).

После этого мембраны промывали ТВ8Т 5 раз (по 5 мин каждый раз) при комнатной температуре и во все блоты добавляли меченное с помощью НКР козье антикроличье антитело в разведении 1:5000 (в блокирующем буфере) и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем мембраны промывали ТВ8Т 5 раз (по 5 мин каждый раз) и инкубировали с Р1егсе 8ирег-81дпа1 в течение 4 мин, после чего экспонировали на пленку со временем экспозиции от 1 с до 20 мин.

Результаты.

На фиг. 7 А представлен график, характеризующий зависимость уменьшения среднего объема опухоли от дозы для опухолей человеческой меланомы А375М (экспрессирующей В-КаР V600Е) у мышей, которых обрабатывали путем орального введения соединения из примера 1 в дозе 10, 30 или 100 мкг/кг. Как показано на фиг. 7А, соединение из примера 1 обладает выраженной противоопухолевой активностью, которая характеризуется профилем, зависящим от вводимой оральным путем дозы. При введении оральным путем соединения в дозе 100 мг/кг регресс опухоли был выявлен у 9/9 подопытных мышей.

Результаты анализа методом Вестерн-блоттинга, проведенного через 8 и 24 ч после введения 14-й дозы (по 10, 30 или 100 мг/кг) соединения из примера 1 представлены на фиг. 7Б и 7В соответственно. Результаты Вестерн-блоттинга свидетельствуют о том, что соединение в дозе 100 мг/кг ингибирует фосфорилирование МЕК (что приводит к регрессу опухоли), и что ингибирование МЕК сохраняется в течение более 24 ч после введения последней дозы, как продемонстрировано на фиг. 7В.

Как показано на фиг. 7Г, анализ модуляции биомаркеров, расположенных в направлении распространения сигнала, в лизатах опухоли через 24 ч после введения 14-1 дозы выявил увеличение уровней ВИМ (маркер апоптоза) и р27К1р (маркер приостановки клеточного цикла) и уменьшение уровня циклина Ό (ингибитор клеточного цикла). Эти результаты подтверждают, что соединение из примера 1 ингибирует передачу сигнала КаР в пути МАРК.

Пример 85.

Обработка соединением из примера 1 ингибирует рост опухоли меланомы.

Ингибирующую активность соединения из примера 1 тестировали на модели опухоли меланомы МЕХР276 (экспрессирующей мутантную В-КаР V600Е) и модели опухоли меланомы МЕХЕ 1341, экспрессирующей В-КаР дикого типа, мутантную Ν-Как (О61К).

Методы.

Полученные путем серийного пассажа опухолевые клетки человеческой меланомы МЕХР276 (экспрессирующие мутантную В-КаР V600Е) имплантировали подкожно в заднюю паховую область 10-12недельным самкам мышей линии Νυ/Νυ. Когда средний объем опухолей достигал примерно 65 мм³, мышей разделяли произвольно на группы и начинали обработку соединением из примера 1, т.е. {1-метил-5[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензимидазол-2-ил}-(4трифторметилфенил)амином. Поскольку известно, что модель с использованием МЕХР276 вызывает определенную кахексию, при которой можно ожидать возникновение некоторой токсичности у необработанных контрольных мышей, то применяли следующие режимы дробного введения доз для того, чтобы предупреждать значительную потерю веса в группах, обработанных лекарственным средством. Мышам вводили орально через зонд либо только наполнитель, либо соединение из примера 1 согласно следующей схеме введения лекакрственного средства: 10 мг/кг в дни 0, 2, 4, 6, 14, 16 и 20; 30 мг/кг в дни 0, 2, 14, 16 и 20; и 100 мг/кг в дни 0, 2, 14, 16 и 20. В модели с использованием МЕХР1341 полученные путем серийных пассажей опухолевые клетки человеческой меланомы МЕХЕ 1341 имплантировали подкожно в заднюю паховую область самкам мышей линии Νυ/Νυ. Когда средний объем опухолей достигал примерно 78 мм³, мышей разделяли произвольно на группы и начинали обработку соединением из примера 1. Мышам вводили орально через зонд либо только наполнитель, либо соединение из примера 1 согласно следующей схеме введения лекакрственного средства: 10 мг/кг в дни 0, 2, 4, 6, 12, 18 и 20; 30 мг/кг в дни 0, 2, 4, 6, 12, 18 и 20; и 100 мг/кг в дни 0, 2, 4, 6, 10, 12 и 20.

Через 4 ч после введения последней дозы мышей, на которых моделировали опухоли МЕХР276 и МЕХР1341, умерщвляли и опухоли удаляли и быстро замораживали. Затем лизаты этих опухолей анализировали методом Вестерн-блоттинга в отношении модуляции мишени (рМЕК, фосфорилированная МЕК) и модуляции маркеров, расположенных в направлении распространения сигнала (ВРМ, р27К1р и рАКТ) согласно методу, описанному в примере 84.

Результаты.

На фиг. 8А показан график, свидетельствующий о снижении среднего объема опухолей злокачественной меланомы линии МЕХР276 (В-КаР V600Е) у мышей после обработки соединением из примера 1.

- 57 014230

Результаты, представленные на фиг. 8А, демонстрируют, что соединение из примера 1 обладает выраженной способностью ингибировать рост опухолей МЕХР276-изолятов при использовании в дозе 10 мг/кг и приводит к регрессу опухоли более чем 50% или на 50% у 8/8 мышей при использовании в дозе 30 мг/кг и 100 мг/кг. Анализ фосфорилирования рМЕК (фиг. 8Б) и в направлении распространения сигнала и анализ модуляции биомаркеров, расположенных в направлении распространения сигнала, в лизатах опухолей (фиг. 8В) подтвердил, что активность мутантной В-КаГ ингибируется в опухолях линии МЕХР276, что видно по снижению уровня фосфо-МЕК на фиг. 8Б. Как видно из фиг. 8В, обнаружено снижение уровня В1М (маркер апоптоза) и р27К1р (маркер приостановки клеточного цикла) и снижение уровня фосфо-АКТ (маркер пути передачи сигнала выживания), что подтверждает ингибирование киназной активности в пути МАРК.

На фиг. 9А представлен график, свидетельствующий об ингибировании роста опухолей злокачественной меланомы линии МЕХР134 (Ν-Как О61К) у мышей после обработки соединением из примера 1. Результаты, представленные на фиг. 9А, свидетельствуют о том, что соединение из примера 1 вызывало выраженное ингибирование роста опухоли (ингибирование вплоть до 70%) на модели меланомы, вызываемой мутантом МЕХР1341 Ν-Как (Ν-Как О61К), при использовании в дозах 30 мг/кг и 100 мг/кг, но не индуцировало регресс опухоли. Как видно из фиг. 9Б, анализ фосфо-МЕК через 20 дней после обработки соединением в дозе 100 мг/кг позволил установить отсутствие заметного снижения уровня фосфо-МЕК, в отличие от результатов, полученных на модели, в которой использовали линию МЕХР276 (мутант ВКаГ). Кроме того, хотя при использовании МЕХР1341-модели обнаружено некоторое воздействие на участвующие в передаче сигнала молекулы в пути МАРК в направлении его распространения после КаГ, это действие оказалось менее выраженным по сравнению с обнаруженным при использовании МЕХР276модели. Например, как видно из фиг. 9В, уровни р27К1р (маркер приостановки клеточного цикла) возрастали в группах, обработанных 30 и 100 мг/кг, что свидетельствует о прекращении роста, обнаружено также некоторое увеличение уровней маркера апоптоза ВИМ Таким образом, очевидно, что соединение из примера 1 обладает выраженной активностью на модели ксенотранспланта МЕХР276 (мутант В-КаГ), вызывая регресс опухоли, и заметной, но менее выраженной активностью на модели ксенотрансплантата МЕХР1341 (В-КаГ дикого типа, мутант Ν-Как), вызывая ингибирование роста опухолей.

Пример 86.

Обработка соединением из примера 1 ингибирует рост опухоли человеческой колоректальной карциномы.

Оценивали ингибирующее действие соединения из примера 1 на моделях ксенотрансплантатов колоректальной карциномы линий НСТ-116 (мутант К-Как С13О), НТ-29 (В-КаГ ν600Ξ) и модели острого лейкоза с использованием ксенотрансплантата МV4-11 (РЬТ3 ΠΌ).

Методы.

5x10⁶ НСТ-116 (мутант К-Как С13О) клеток человеческой колоректальной карциномы имплантировали подкожно в задний пах 10-12-недельных самок мышей линии №/Ыи весом примерно 24 г. Когда средний объем опухолей достигал примерно 212 мм³, мышам вводили орально через зонд либо только наполнитель, либо соединение из примера 1 согласно следующей схеме введения лекарственного средства: 10, 30 и 100 мг/кг орально через зонд в день 1 и каждые 2 дня (с.]2б) всего в течение 28 дней. Заболевших мышей умерщвляли и опухоли удаляли через 4, 8 и 24 ч после введения 3-й дозы. Затем лизаты опухолей анализировали с помощью Вестерн-блоттинга в отношении модуляции мишени (рМЕК) согласно методу, описанному выше в примере 84.

Вторую модель человеческой колоректальной карциномы НТ-29 (В-КаГ ν600Ξ) анализировали следующим образом. 2x10⁶ НТ-29 клеток имплантировали подкожно в задний пах 10-12-недельных самок мышей линии Νϋ/Νϋ весом примерно 24 г. Когда средний объем опухолей достигал примерно 167 мм³, мышам вводили орально через зонд либо только наполнитель, либо соединение из примера 1 согласно следующей схеме введения лекарственного средства: 10, 30 и 100 мг/кг орально через зонд в день 1 и каждые 2 дня (с.]2б) всего в течение 28 дней.

Модель ксенотрансплантата человеческого острого миелолейкоза МV4-11 (РЬТ3 [ΤΌ) оценивали следующим образом: 5x10⁶ клеток линии МV4-11 имплантировали подкожно в задний пах 10-12недельных самок мышей линии Νϋ/Νϋ весом примерно 24 г. Когда средний объем опухолей достигал примерно 190 мм³, мышам вводили орально через зонд либо только наполнитель, либо соединение из примера 1 согласно следующей схеме введения лекарственного средства: 10 мг/кг, 30 мг/кг и 100 мг/кг орально через зонд в день 1 и каждые 2 дня (с.]2б) всего в течение 16 дней. Мышей из дополнительной (сателлитной) группы умерщвляли и удаляли опухоли через 4 ч после введения 3-й дозы. Затем лизаты опухолей анализировали с помощью Вестерн-блоттинга в отношении модуляции мишени (рМЕК) согласно методу, описанному выше в примере 84.

Результаты.

Результаты, полученные при использовании НСТ-116, представлены на фиг. 10А-Г. На фиг. 10А показан график, свидетельствующий о снижении среднего объема опухолей колоректальной карциномы линии НСТ-116 (К-Как С1 3Ό) у мышей, обработанных 100 мг/кг соединения из примера 1. Как видно из

- 58 014230 фиг. 10Б-10Г, анализ уровней фосфо-МЕК через 4 ч (фиг. 10Б), 8 ч (фиг. 10В) и 24 ч (фиг. 10Г) после 3-й обработки свидетельствует о выраженном снижении уровней фосфо-МЕК.

На фиг. 11 показан график, свидетельствующий о снижении среднего объема опухолей колоректальной карциномы линии НТ-29 (В-Яа! V600Ε) у мышей обработанных соединением из примера 1. Как видно из фиг. 11, регресс опухолей обнаружен при обработке дозой 30 и 100 мг/кг.

Результаты, полученные при использовании МV4-11, представлены на фиг. 12А, 12Б. На фиг. 12А показан график, свидетельствующий об уровне ингибировании среднего роста злокачественных опухолей острого миелолейкоза линии МV4-11 у мышей, обработанных соединением из примера 1. Клетки опухоли линии МV4-11 несли мутантный тирозинкиназный рецептор (МV4;11, ЕЬТ3 1ТЭ). Установлено, что соединение из примера 1 вызывало выраженное ингибирование роста опухоли на модели МV-11, однако не получено данных ни о регрессе опухолей (фиг. 12А), ни о заметном ингибировании передачи сигнала МЕК (фиг. 12Б). Не вдаваясь в теорию, можно предположить на основе данных, полученных на МV4-11-модели, что ингибирование роста опухолей является результатом антиангиогенной активности соединения, прежде всего в результате ингибирования УЕСЕЯ-2, что будет описано ниже в примерах 8788.

Обобщение результатов, полученных при оценке эффективности соединения из примера 1 в отношении меланомы, колоректальной карциномы и лейкоза, полученные при использовании описанных выше соответствующих моделей ксенотрансплантатов, представлены ниже в табл. 7.

Таблица 7 Обобщение данных об активности соединения из примера 1 на различных моделях ксенотрансплантатов

Модель ксенотр ансплантата	Генотип	Исходный объем опухоли	Доза (мг/кг)	Схема	ΤΟΙ (ингибирование роста опухоли/регресс
А375М (меланома)	В-КаР (У600Е)	100 мм3	10	д4х14	53% ΤΟΙ
(]24х14	33%Т<Л
	30	44x14	78% ТС1
Ч24х 14	81% ΊΌΙ
100	44	регресс
Ч24х14	регресс
цЗбхО	регресс
444x7	85% ΤΟΙ
МЕХЕ-276 (меланома)	В-В.аГ (У600Е)	65 мм3	10	дни 0, 2, 4, 6, 14, 16, 20	80% СТ1
30	ДНИ 0, 2, 14, 16, 20	регресс
100	дни 0, 2, 14, 16, 20	регресс
НТ29 (колоректальный рак)	В-КаГ (Υ600Ε)	167 мм3	10	ς24χ14	12%ТС1
	30	424x14	регресс
100	Ч24х14	регресс
МЕХЕ-1341 (меланома)	Ν-Βλϊ <Λνΐ/<261Κ)	78 мм3	10	дни 0, 2, 4, 6, 12, 18, 20	30% тел
	30	дни 0, 2, 4, 6, 12, 18, 20	60% Τ6Ι
100	дни 0, 2, 4, 6, 12, 20	71%Т61
НСТ-116 (колоректальный рак)	К-В.Й5 (νΛ/<313ϋ)	212 мм3	10	Ч24х14	33% ΤΟΙ
	30	η24χ!4	81% ТСН
100	424x14	регресс
МУ4;11 (ОМЛ)	РЬТЗПО	190 мм3	10	Ч24х7	41% Τ6Ι
	30	42(1x7	55% ΤΟΙ
100	424x7	79% ТС1

Из данных, обобщенных в табл. 7, представленных на фиг. 6-12 и описанных в примерах 82-86, видно, что соединение из примера 1 обладает эффективностью при использовании всех изученных моделей ксенотрансплантатов, в которых присутствует мутантная В-Яа!, вызывая регресс опухолей и модулирование мишеней при использовании всех трех изученных моделей (А375М МЕХЕ276 и НТ29).

Пример 87.

Анализы ингибирования тирозинкиназы.

- 59 014230

1. Биохимические анализы.

Киназную активность ряда протеинтирозинкиназ оценивали с использованием АТФ и соответствующего пептида или белка, содержащего остаток аминокислоты тирозина, предназначенный для фосфорилирования, и оценивая перенос фосфатного остаток на остаток тирозина. Рекомбинантные белки, соответствующие цитоплазматическим доменам ХЕСЕК2, РОСЕКв, С8Е4К и с-Κίΐ, получали очисткой из клеток насекомых линии 8Г9, зараженных соответствующим рекомбинантным экспрессионным бакуловирусным вектором, несущим человеческий УЕСЕ^, РОСЕКР, С8Е4К и с-Κίΐ. Для каждого анализа соединение из примера 1, т.е. {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензимидазол-2-ил}-(4-трифторметилфенил)амин, серийно разводили в ДМСО и затем смешивали с соответствующим реакционном буфером для киназ, дополненным АТФ (применяемая концентрация АТФ была несколько ниже соответствующего значения Κт). Добавляли белок киназы и соответствующий биотинилированный пептидный субстрат для получения конечного объема 50-100 мкл. Реакционные смеси инкубировали в течение 1-3 ч при комнатной температуре и затем реакцию прекращали, добавляя 25-50 мкл 45 мМ ЭДТК, 50 мМ Нере8, рН 7,5. Реакционную смесь, в которой была прекращена реакция (75 мкл), переносили на сенсибилизированный стрептавидином титрационный микропланшет (фирма Воейлпдег Маппйеш) и инкубировали в течение 1 ч. Фосфорилированный пептидный продукт оценивали с помощью флуоресцентной системы с временным разрешением типа ЭЕБЕ^ (фирма \Ха11ас или РЕ Вю8аепсе8) с использованием меченного европием антитела к фосфотирозину РТбб, с модификаций, состоящей в том, что буфер для анализа, входящий в систему ЭЕкЕМ, дополняли 1 мМ МдС1₂ для разведения антитела. Флуоресценцию с временным разрешением измеряли с помощью флуориметра типа \Ха11ас 1232 ОЕБЕМ или ридера множества сигналов (многоканального ридера) типа РЕ ^^01^- II. Концентрацию каждого соединения, вызывающую 50%-ное ингибирование (ГСбо), рассчитывали по методу нелинейной регрессии с помощью программы для анализа данных ХЬ Ρίΐ.

Киназную активность ХЕСЕК2 (0,05 мкг/мл) оценивали в буфере, содержащем 50 мМ Нере8, рН 7,0, 2 мМ МдС1₂, 10 мМ МпС1₂, 1 мМ ЫаЕ, 1 мМ дитиотреитол (ДТТ), 1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина (БСА), от 1 до 30 мкМ АТФ и 0,25 мкМ биотинилированный пептидный субстрат СССС^^СΚ^ΥIV^РI (8ЕО II) ЫО:1).

Для оценки киназной активности РЭСЕК использовали 120 мкг/мл фермента в сочетании с тем же самым буфером, который описан выше, за исключением изменения концентраций АТФ и пептидного субстрата на 1,4 мкМ АТФ и 0,25 мкМ биотинилированный пептидный субстрат ^СССрО^/ЭУ^ЬРГ' (8Е() ГО ЫО:1).

Киназную активность С8Е4К оценивали в буфере для анализа (50 мМ НЕРЕ8, рН 7,0, 5 мМ МдС1₂, 10 мМ МпС1₂, 0,1% БСА, 1 мМ ДТТ, 0,01% Твин, конечное значение рН 7,5), с использованием 1 мкМ АТФ и 50 нМ биотинилированного пептидного субстрата ЕЕЕЕЛУСХУБЫЕ (8ЕЦ Ю ЫО:2).

Киназную активность с-Κίΐ оценивали с использованием АТФ и рекомбинантного белка, соответствующего цитоплазматическому домену рецептора с-Κίΐ (полученного от фирмы Ргос.|шпа8е). Белок киназы с-Κίΐ (2 нМ) и биотинилированный пептидный субстрат (1 мкМ) СС^Е^^Р8\VNV^N^ (8ЕЦ Ю ЫО:3), добавляли в реакционный буфер, дополненный АТФ (8 мкМ) для получения конечного объема 100 мкл. Реакционный буфер для с-Κίΐ включал 50 мМ НЕРЕ8 рН 7,5, мМ ЫаЕ, 2 мМ МдС1₂, 10 мМ МпС1₂ и 1 мг/мл БСА. Реакционную смесь инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре и затем реакцию прекращали, добавляя 50 мкл 45 мМ ЭДТК, 50 мМ Нере8, рН 7,5. Реакционную смесь, в которой была прекращена реакция (75 мкл), переносили на сенсибилизированный стрептавидином титрационный микропланшет (фирма Воейппдег Маппйеш) и инкубировали в течение 1 ч. Фосфорилированный пептидный продукт оценивали с помощью флуоресцентной системы с временным разрешением типа ЭЕкЕМ (фирма \Ха11ас или РЕ Вю8с1епсе8) с использованием меченного европием антитела к фосфотирозину РТбб, с модификаций, состоящей в том, что буфер для анализа, входящий в систему ОЕЬЕ^, дополняли 1 мМ МдС1₂ для разведения антитела. Флуоресценцию с временным разрешением измеряли с помощью флуориметра типа \Ха11ас 1232 ЭЕкЕМ и многоканального ридера типа РЕ ^^01^- II. Концентрацию каждого соединения, вызывающую 50%-ное ингибирование ЦС50), рассчитывали по методу нелинейной регрессии с помощью программы для анализа данных ХЬ Ей.

Результаты.

Как видно из представленной ниже табл. 8, соединение из пример 1 является сильным ингибитором ХЕСЕК-2, с-Κίΐ, РОСЕК-β и С8Е4К.

- б0 014230

Таблица 8

Ингибирование тирозинкиназ соединением из примера 1

Мишень	Соединение из примера 1 1С50 на основе биохимического анализа	Соединение из примера 1 ЕС5о на основе клеточного анализа
УЕСРК-2	0,07мкМ	О,03мкМ
с-Κίί	0,0	1,1мкМ
ΡϋΟΡΚ-β	0,003 2мкМ	0,7мкМ
С8Р-1К.	0,20мкМ	н.о.

Для оценки активности соединения из примера 1 в отношении молекул-мишеней, представленных в табл. 8, использовали также следующие анализы, основанные на применении клеток.

Оценка модуляции мишеней в клетках линии НМУЕС после обработки соединением из примера 1 свидетельствовала об ингибировании опосредуемого УБОР фосфорилирования УЕСРК-2, которое характеризовалось значением ЕС₅₀ 0,03 мкМ, при оценке снижения уровней фосфо-УЕСРК с помощью анализа методом Вестерн-блоттинга (данные не представлены).

Анализ ингибирования е-Κίΐ с использованием клеток линии Мо7е после обработки соединением из примера 1 свидетельствовал об ингибировании фосфорилирования е-Κίΐ, которое характеризовалось значением ЕС₅₀ 1,1 мкМ, при оценке снижения уровней фосфо-е-Κίΐ с помощью ЕЫ8Л.

Анализ ингибирования РЛСРК-β с использованием клеток линии МО63 после обработки соединением из примера 1 свидетельствовал об ингибировании фосфорилирования РЛСРК-β, которое характеризовалось значением ЕС₅₀ 0,7мкМ, при оценке снижения уровней фосфо-ΡΌΟΡΚ-β с помощью ЕЫБЛ.

Пример 88.

Ингибирование ангиогенеза.

Для дополнительного изучения воздействия соединения из примера 1 на УЕСРК-2 оценивали соединение на модели СНО-УЕОР с использованием в качестве носителя матригеля (Ма1пде1).

Методы.

110 мышей линии Νιι/Νιι (п=10 особей/группу) подвергали акклиматизации в течение 1 недели перед началом опыта. 5х10⁶ УЕОР-СНО-клеток в 0,5 мл матригеля инъецировали в день 1 подкожно в верхнюю часть брюшной области мышей. В день 1 мышам вводили орально либо наполнитель, либо соединение из примера 1 в дозах 10, 30 или 100 мг/кг, используя схему введения лекарственного средства с.|б/5. Через 5 дней матригель удаляли из организма мышей и оценивали концентрацию гемоглобина.

Результаты.

На фиг. 13 показан график, свидетельствующий об ингибировании опосредуемого УЕСР ангиогенеза, при использовании в качестве модели СНО-УЕСР-матригеля после обработки соединением из примера 1 в дозах 10, 30 и 100 мг/кг. Как видно из фиг. 13, введение указанных доз соединения в течение 5 дней приводило к существенному ингибированию опосредуемого УЕСР ангиогенеза.

Пример 89.

Роль схемы применения лекарственного средства.

Опыты по оценке роли схемы применения соединения из примера 1 проводили на модели ксенотранплантатов человеческой миеломы линии А375М для выявления зависимости ингибирования мутантной В-КаР, ответа опухоли от концентрации соединения в плазме. Как видно из фиг. 7А, при использовании соединения из примера 1 на А375М-модели обнаружена четкая зависимость ответа от дозы. Результаты, представленные на фиг. 7А, свидетельствуют о том, что соединение из примера 1 индуцирует регресс опухолей при ежедневном введении дозы 100 мг/кг, и этот регресс опухолей связан с заметным ингибированием мутантной В-КаР (о чем свидетельствует снижение уровней фосфо-МЕК на фиг. 7Б). Однако при использовании указанной схемы применения соединение из примера 1 в дозах 30 и 100 мг/кг не достаточно хорошо переносилось мышами, поскольку к 14 дню выявлена потеря мышами в среднем 10% от их первоначального веса. Поэтому наиболее эффективную дозу 100 мг/кг дополнительно оценивали с помощью описанных ниже методов.

Методы.

Аналогично методу, описанному в примере 84, 3х10⁶ клеток человеческой меланомы линии А375М имплантировали подкожно в правый бок 10-12-недельных самок мышей линии Νη/Νη весом примерно 24 г. Когда средний объем опухоли достигал примерно 200 мм³, мышей распределяли произвольно в зависимости от объема опухоли на четыре группы по девять мышей в каждой и начинали обработку соединением из примера 1. Мышам вводили в течение 32 дней оральным путем через зонд либо только носитель, либо соединения из примера 1 с использованием следующей схемы применения: 100 мг/кг по схеме с.|2Т ц3б или ц4б в течение 28 дней.

В этом исследовании обрабатывали дополнительные (сателлитные) группы несущих опухоли мышей для мониторинга модуляции мишеней в опухоли. Получали образцы опухолей и плазмы из организма мышей через различные промежутки времени после введения 5-й дозы в группе, обработанной по схеме с.|2Т и после введения 3-й дозы в группе, обработанной по схеме ц4б. Опухоли подготавливали для анализа с помощью Вестерн-блоттинга уровней фосфо-МЕК согласно методу, описанному в примере 84,

- 61 014230 а образцы плазмы выделяли для оценки уровней лекарственного средства.

Результаты.

На фиг. 14 показан график, свидетельствующий о снижении среднего объема опухолей меланомы линии А375М у мышей, обработанных 100 мг/кг соединения из примера 1, при схеме применения д2б, с.|3б или с.|4б. Как видно из фиг. 14А, соединение из примера 1 при его оральном введении в дозе 100 мг/кг при схеме применения д2б, с.|3б или с.|4б обладало выраженной эффективностью. Результаты, полученные с помощью анализа методом Вестерн-блоттинга, представленные на фиг. 14Б, свидетельствуют о том, что в опухолях мышей, обработанных соединением, обнаружены пониженные уровни фосфо-МЕК по сравнению с группами, обработанными наполнителем, вплоть до 48 ч после обработки при применении схемы с.|2б. В образцах, полученных из мышей, обработанных по схеме д4б, через 72 ч только в одной из трех опухолей выявлены пониженные уровни фосфо-МЕК, а через 96 ч во всех образцах, полученных из обработанных соединением мышей, уровни фосфо-МЕК в опухолях были сопоставимыми с уровнями, обнаруженными в опухолях, обработанных наполнителем. Эти результаты согласуются с результатами, полученными при использовании схемы применения д2б, которые представлены на фиг. 7Б.

Как видно из табл. 9, схемы применения с.|3б и с.|4б лучше переносились подопытными мышами при оценке по потере веса.

Таблица 9

Изучение роли схемы применения соединения из примера 1 при использовании в дозе 100 мг/мл на модели ксенотрансплантата А375М

Схема применения: (100 мг/кг соединения из примера 1 на дозу)	Средняя потеря веса тела к 28 дню	ΊΌΙ/регресс
	12%	Регресс опухолей по меньшей мере на 50% в 10/10 случаев опухолей
чза	8%	Регресс опухолей по меньшей мере на 50% в 7/10 случаев опухолей
η4ά	7%	Регресс по меньшей мере на 50% в 3/10 случаев опухолей

В заключение следует отметить, что при совместном рассмотрении данных о модуляции мишеней и данных об эффективности ясно, что схемы применения с.|2б или с.|3б приводят к более высокой эффективности в отношении регресса опухолей и характеризуются максимальной переносимостью хозяином.

Пример 90.

Изучение концентрации мишеней в плазме.

Согласно методу, описанному в примере 89, получали образцы сыворотки из мышей, обработанных соединением из примера 1. Определяли концентрации лекарственного средства в образцах, полученные результаты в виде зависимости концентрации соединения от времени представлены на фиг. 15. Из представленного на фиг. 15 графика можно определять пороговую концентрацию лекарственного средства, необходимую для модуляции мишеней, с учетом данных о модуляции мишеней, представленных на фиг. 14А и 14Б. Как видно из фиг. 14Б, во все изученные моменты времени вплоть до 48 ч после обработки, уровни фосфо-МЕК снижались в обработанных соединением опухолях по сравнению с опухолями, обработанными наполнителем, таким образом, соответствующие концентрации лекарственного средства должны представлять собой концентрации, превышающие это пороговое значение. Как видно из фиг. 14В, через 72 и 96 ч после обработки не обнаружено модуляции мишеней и, таким образом, соответствующие концентрации лекарственного средства должны представлять собой концентрации, меньшие этого порогового значения. В заключение следует отметить, что порог соединения определен на уровне примерно от 50000 до 80000 нг/мл, примерно 70000 нг/мл (135 мкМ).

Важно отметить, что концентрация мишеней в плазме, определенная при использовании описанных выше исследований с помощью ксенотрансплантированных мышей, примерно в 1000 раз превышает значение ЕС₅₀, характеризующее модуляцию мишеней при использовании клеток линии А375М (0,16 мкМ) 1п νίΙΐΌ (см. табл. 5). Это различие можно в основном объяснить связыванием белка в плазме, поскольку более 99,9% соединения из примера 1 связывается белком в плазме. С учетом этого согласно грубому расчету концентрация свободного лекарственного средства составляет примерно 0,135 мкМ, что близко значению ЕС₅₀ ш уЕго, составляющему 0,16 мкМ, определенному в опытах по модуляции мишеней с использованием клеток линии А375М.

Для дополнительного объяснения воздействия связывания белком плазмы на активность соединения из примера 1 осуществляли серии экспериментов ш уЕго, в которых соединение предварительно инкубировали в 50%-ной сыворотке, взятой у мышей, крыс, собак, обезьян или человека, и затем обрабатывали клетки линии А375М или клетки линии Мо7е. Определяли уровни фосфо-МЕК и фосфо-ЕКК в клетках линии А375М (для оценки ингибирования мутантной В-КаТ) после инкубации в течение ночи. Определяли уровни фосфо-с-КЕ в клетках линии Мо7е (для оценки ингибирования с-КЕ) после инкуба- 62 014230 ции в течение 4 ч. Результаты этих анализов обобщены ниже в табл. 10.

Таблица 10

Воздействие сыворотки из различных видов на активность соединения из примера 1

Виды	Фосфо-МЕК. ЕС50 (мкМ)	Фосфо-ЕКК ЕС50 (мкМ)	Фосфо-с-Κίί ЕС5<) (мкМ)
МЫШЬ	153±15,3	160±27	126±22
крыса	24±5,7	37±7,0	29±б,4
собака	18±2,4	20±2,8	Н.0
обезьяна	9±3,3	13±0,9	Н+О
человек	15±1,5	2О±5,О	16±1,5

Данные, представленные в табл. 10, можно использовать для оценки относительного связывания соединения из примера 1 с белками плазмы различных видов и в качестве основы для коррекционного фактора для экстраполяции данных о концентрации мишеней в плазме мышей на другие виды. Например, на основе этих данных можно установить, что концентрация мишеней в плазме крыс примерно в 5 раз ниже, чем у мышей, а концентрация мишеней в плазме человека примерно в 10 раз ниже, чем у мышей.

Хотя выше проиллюстрированы и описаны предпочтительные варианты осуществления изобретения, должно быть очевидно, что различные изменения могут быть внесены без отклонения от сущности и объема изобретения.

Claims (41)

1. Соединение формулы (I) в которой К¹, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, С1-С₆-алкил, С1-С₆-алкоксигруппу, С1-С₆-алкилсульфанил, С1-С₆-алкилсульфонил, С₃-С₈циклоалкил, гетероциклоалкил, фенил и гетероарил;

К² обозначает С1-С₆-алкил или гало-С1-С₆-алкил;

К³, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей галоген, С1-С₆-алкил и С1С6-алкоксигруппу;

К⁴, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей гидроксигруппу, С1-С6алкил, С1-С₆-алкоксигруппу, галоген, карбоксил, С1-С₆-алкоксикарбонил, аминокарбонил, С1-С₆алкиламинокарбонил, карбонитрил, С3-С8-циклоалкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилкарбонил, фенил и гетероарил;

где К¹, К², К³ и К⁴ необязательно могут быть замещены одним или несколькими заместителями, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, С₁-С₆-алкил, гало-С1-С6-алкил, С1-С6-алкоксигруппу и гало-С1-С6-алкоксигруппу;

а обозначает 1, 2, 3, 4 или 5;

Ь обозначает 0, 1, 2 или 3 и с обозначает 1 или 2;

где гетероциклоалкил означает циклоалкильную группу, содержащую в кольцевой структуре 3-8 атомов углерода и от 1 до 5 гетероатомов, которые выбраны из группы, включающей атомы азота, кислорода и серы, причем атомы азота и серы необязательно могут быть окислены; а гетероарил означает ароматическую группу, имеющую в кольцевой структуре от 5 до 14 атомов, включая от 1 до 4 гетероатомов, которые выбраны из группы, состоящей из атомов азота, кислорода и серы, причем атомы азота и серы необязательно могут быть окислены, или его таутомер, стереоизомер, сложный эфир или фармацевтически приемлемую соль соединения, таутомера, стереоизомера, сложного эфира.

2. Соединение по п.1, в котором К¹, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей гидроксигруппу, хлор, фтор, бром, метил, этил, пропил, бутил, метоксигруппу, этоксигруппу, пропоксигруппу, бутоксигруппу, трифторметил, трифторэтил, трифторметоксигруппу, трифторэтоксигруппу, пиперидинил, С1-С6-алкилпиперидинил, пиперазинил, С1-С6-алкилпиперазинил, тетрагидрофуранил, пиридинил и пиримидинил.

3. Соединение по п.1, в котором а обозначает 1 или 2 и по меньшей мере один К¹ обозначает галоС1-С₆-алкил.

4. Соединение по п.3, в котором по меньшей мере один К¹ обозначает трифторметил.

5. Соединение по п.1, в котором К² обозначает С1-С6-алкил.

6. Соединение по п.1, в котором К² обозначает метил или этил.

- 63 014230

7. Соединение по п.4, в котором К² обозначает метил.

8. Соединение по п.1, в котором Ь обозначает 0 и К³ отсутствует.

9. Соединение по п.1, в котором Ь обозначает 1 и К³ обозначает С1-С₆-алкоксигруппу.

10. Соединение по п.9, в котором К³ обозначает метоксигруппу.

11. Соединение по п.1, в котором с обозначает 1 или 2 и по меньшей мере один из К⁴ обозначает гало-С1-С₆-алкил.

12. Соединение по п.11, в котором по меньшей мере один К⁴ обозначает трифторметил.

13. Соединение по п.1, которое имеет формулу (II) в которой К¹, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей С1-С₆-алкил, С₁С₆-алкоксигруппу, гидроксигруппу, галоген, С1-С₆-алкилсульфанил, С1-С₆-алкилсульфонил, С₃-С₈циклоалкил, гетероциклоалкил, фенил и гетероарил;

К³, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей галоген, С₁-С₆-алкил и С₁С6-алкоксигруппу;

К⁴, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей гидроксигруппу, С1-С6алкил, С1-С6-алкоксигруппу, галоген, карбоксил, С1-С6-алкоксикарбонил, аминокарбонил, карбонитрил, С3-С8-циклоалкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилкарбонил, фенил и гетероарил;

где К¹, К², К³ и К⁴ необязательно могут быть замещены одним или несколькими заместителями, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, С1-С6-алкил и С1С6-алкоксигруппу;

а обозначает 1, 2, 3, 4 или 5;

Ь обозначает 0, 1, 2 или 3 и с обозначает 1 или 2;

или его таутомер, стереоизомер, сложный эфир или фармацевтически приемлемую соль соединения, таутомера, стереоизомера, сложного эфира.

14. Соединение формулы (III) (Ш) в которой К¹, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей С1-С6-алкил, С1С6-алкоксигруппу, гидроксигруппу, галоген, С1-С6-алкилсульфанил, С1-С6-алкилсульфонил, С3-С8циклоалкил, гетероциклоалкил, фенил и гетероарил;

К⁴, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей гидроксигруппу, С1-С6алкил, С1-С6-алкоксигруппу, галоген, карбоксил, С1-С6-алкоксикарбонил, аминокарбонил, карбонитрил, С3-С8-циклоалкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилкарбонил, фенил и гетероарил;

где К¹ и К⁴ необязательно могут быть замещены одним или несколькими заместителями, независимо друг от друга выбранными из группы, включающей гидроксигруппу, галоген, С1-С6-алкил и С1-С6алкоксигруппу;

а обозначает 1, 2, 3, 4 или 5 и с обозначает 1 или 2;

где гетероциклоалкил означает циклоалкильную группу, содержащую в кольцевой структуре 3-8 атомов углерода и от 1 до 5 гетероатомов, которые выбраны из группы, включающей атомы азота, кислорода и серы, причем атомы азота и серы необязательно могут быть окислены; а гетероарил означает ароматическую группу, имеющую в кольцевой структуре от 5 до 14 атомов, включая от 1 до 4 гетероатомов, которые выбраны из группы, состоящей из атомов азота, кислорода и серы, причем атомы азота и серы необязательно могут быть окислены, или его таутомер, стереоизомер, сложный эфир или фармацевтически приемлемую соль соединения, таутомера, стереоизомера, сложного эфира.

15. Соединение по п.14, в котором К¹ независимо выбран из группы, включающей гидроксигруппу, хлор, фтор, бром, метил, этил, пропил, бутил, метоксигруппу, этоксигруппу, пропоксигруппу, бутоксигруппу, трифторметил, трифторэтил, трифторметоксигруппу, трифтоэтоксигруппу, пиперидинил, С₁-С₆алкилпиперидинил, пиперазинил, С₁-С₆-алкилпиперазинил, тетрагидрофуранил, пиридинил и пиримидинил.

16. Соединение по п.15, в котором а обозначает 1 или 2 и по меньшей мере один из К¹ обозначает

- 64 014230 гало-С1-С6-алкил.

17. Соединение по п.16, в котором по меньшей мере один В¹ обозначает трифторметил.

18. Соединение по п.14, в котором а обозначает 1.

19. Соединение по п.18, в котором В¹ обозначает трифторметил.

20. Соединение по п.14, в котором с обозначает 1 или 2 и по меньшей мере один из В⁴ обозначает гало-С1 -С₆-алкил.

21. Соединение по п.20, в котором по меньшей мере один из В⁴ обозначает трифторметил.

22. Соединение по п.21, в котором с обозначает 1.

23. Соединение, выбранное из группы, включающей {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(4- трифторметилфенил)амин, (2-фтор-5-пиридин-3-илфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (2-фтор-5-пиридин-4-илфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-иламин, (4-трет-бутилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(3трифторметилфенил)амин, (3 -этилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, (4-хлорфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, (4-этилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, (4-хлор-3-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (4-фтор-3-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(4трифторметоксифенил)амин, (2-фтор-5-трифторметилфенил)-(1-метил-5-{2-[5-метил-4-(3-трифторметилфенил)-1Н-имидазол-2ил]пиридин-4-илокси}-1Н-бензоимидазол-2-ил)амин, (2-фтор-5-трифторметилфенил)-(1-метил-5-{2-[5-метил-4-(4-трифторметилфенил)-1Н-имидазол-2ил]пиридин-4-илокси}-1Н-бензоимидазол-2-ил)амин, этиловый эфир 2-{4-[2-(2-фтор-5-трифторметилфениламино)-1-метил-1Н-бензоимидазол-5илокси]пиридин-2-ил}-5-трифторметил-1Н-имидазол-4-карбоновой кислоты, (2-{4-[2-(2-фтор-5-трифторметилфениламино)-1-метил-1Н-бензоимидазол-5-илокси]пиридин-2-ил}-

5-трифторметил-1Н-имидазол-4-ил)метанол,

2-{4-[1-метил-2-(4-трифторметилфениламино)-1Н-бензоимидазол-5-илокси]пиридин-2-ил}-3Нимидазол-4-карбонитрил, (3-трет-бутилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-фенил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, {1-метил-5-[2-(5-фенил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(4трифторметилсульфанилфенил)амин, (3-трет-бутилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, [4-фтор-3 -(тетрагидрофуран-3-ил)фенил]-{1 -метил-5 [2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (4-бромфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, (4-фтор-3-изопропилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(4трифторметилсульфанилфенил)амин, (2-фтор-5-изопропилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]1Н -бензоимидазол-2-ил } амин, (2-фтор-5-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)-пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (5-трет-бутил-2-фторфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (2-фтор-5-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-метил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н

- 65 014230 бензоимидазол-2-ил}амин, (2-фтор-5-пиридин-3-илфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин,

2-{4-[2-(2-фтор-5-трифторметилфениламино)-1-метил-1Н-бензоимидазол-5-илокси]пиридин-2-ил}3Н-имидазол-4-карбонитрил, (2-хлор-4-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (5-трет-бутил-2-хлорфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]1 Н-бензоимидазол-2-ил } амин, (2-фтор-5-пиридин-4-илфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (2-фтор-5-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(4-фенил-5-трифторметил-1Н-имидазол-2ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (2-хлор-5-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(4-фенил-5-трифторметил-1Н-имидазол-2ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, {1-метил-5-[2-(4-фенил-5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол2-ил}-(3-трифторметилфенил)амин, (3-этилфенил)-{1-метил-5-[2-(4-фенил-5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, (4-трет-бутилфенил)-{1-метил-5-[2-(4-фенил-5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (2-хлор-5-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (2-фтор-5-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-метил-4-фенил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (2-хлор-5-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-метил-4-фенил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (4-трет-бутилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-метил-4-фенил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, {1-метил-5-[2-(5-метил-4-фенил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(3трифторметилфенил)амин, (5-трет-бутил-2-фторфенил)-{1-метил-5-[2-(5-метил-4-фенил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, [4-(4-метилпиперазин-1-ил)фенил]-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, метиловый эфир 2-{4-[2-(2-фтор-5-трифторметилфениламино)-1-метил-1Н-бензоимидазол-5илокси]пиридин-2-ил}-3Н-имидазол-4-карбоновой кислоты, этиловый эфир 2-{4-[2-(2-хлор-5-трифторметилфениламино)-1-метил-1Н-бензоимидазол-5илокси]пиридин-2-ил}-5-трифторметил-1Н-имидазол-4-карбоновой кислоты, (2-фтор-4-трифторметилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, (2-хлорфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, (2,5-диметоксифенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, (3,5-диметоксифенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(2трифторметилфенил)амин, (2-этилфенил)-{1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}амин, (4-этилпиперазин-1-ил)-(2-{4-[2-(2-фтор-5-трифторметилфениламино)-1-метил-1Н-бензоимидазол-

5-илокси]пиридин-2-ил}-3Н-имидазол-4-ил)метанон, (2-гидроксиэтил)амид 2-{4-[2-(2-фтор-5-трифторметилфениламино)-1-метил-1Н-бензоимидазол-5илокси]пиридин-2-ил}-3Н-имидазол-4-карбоновой кислоты, {1-этил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(2фтор-5-трифторметилфенил)амин, (2-фтор-5-трифторметилфенил)-{6-метокси-1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}амин, {6-метокси-1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Нбензоимидазол-2-ил}-(4-трифторметилфенил)амин, (4-этилпиперазин-1-ил)-(2-{4-[1-метил-2-(4-трифторметилфениламино)-1Н-бензоимидазол-5

- 66 014230 илокси]пиридин-2-ил}-3Н-имидазол-4-ил)метанон, {1-этил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(4трифторметилфенил)амин, (2-гидроксиэтил)амид 2-{4-[1-метил-2-(4-трифторметилфениламино)-1Н-бензоимидазол-5илокси]пиридин-2-ил}-3Н-имидазол-4-карбоновой кислоты,

2- {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2- иламино}-5-трифторметилфенол и

3- {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол-2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2- иламино }-6-трифторметилфенол;

или его таутомер, стереоизомер, сложный эфир или фармацевтически приемлемую соль соединения, таутомера, стереоизомера, сложного эфира.

24. Соединение по п.23 или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение имеет формулу

Н₃С или таутомер соединения или фармацевтически приемлемая соль таутомера формулы

Н₃С

25. Композиция, содержащая соединение, таутомер, фармацевтически приемлемую соль или фармацевтически приемлемую соль его таутомера по п.1 или 24 в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем.

26. Способ лечения ракового заболевания у человека или животного, заключающийся в том, что человеку или животному вводят композицию, содержащую соединение, его таутомер, фармацевтически приемлемую соль или фармацевтически приемлемую соль его таутомера по п.1 или 24.

27. Способ по п.26, в котором композиция ингибирует киназу КаГ или мутантную киназу В-КаГ.

28. Способ по п.26, в котором, кроме того, человеку или животному вводят по меньшей мере один дополнительный агент, предназначенный для лечения рака.

29. Способ по п.28, в котором по меньшей мере один дополнительный агент, предназначенный для лечения рака, выбирают из группы, включающей иринотекан, топотекан, гемцитабин, 5-фторурацил, леуковорин, карбоплатин, цисплантин, таксаны, тезацитабин, циклофосфамид, алкалоиды винка, иматиниб, антрациклины, ритуксимаб и трастузумаб.

30. Способ по п.26, в котором раковое заболевание представляет собой меланому.

31. Способ по п.26, в котором раковое заболевание представляет собой рак молочной железы или рак предстательной железы.

32. Применение соединения, таутомера, фармацевтически приемлемой соли или фармацевтически приемлемой соли его таутомера по п.1 или 24 для лечения рака.

33. Применение соединения, таутомера, фармацевтически приемлемой соли или фармацевтически приемлемой соли его таутомера по п.1 или 24 для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения рака.

34. Способ ингибирования по меньшей мере одной сериновой/треониновой киназы в пути передачи сигнала МАРК у индивидуума или лечения биологического состояния, опосредуемого сериновой/треониновой киназой в пути передачи сигнала МАРК у индивидуума, заключающийся в том, что индивидууму вводят композицию, содержащую соединение, его таутомер, фармацевтически приемлемую соль или фармацевтически приемлемую соль его таутомера по п.1 или 24.

35. Способ по п.34, в котором композиция ингибирует киназу КаГ.

36. Способ по п.34, в котором композиция ингибирует мутантную киназу В-КаГ.

37. Способ по п.34, в котором биологическое состояние выбирают из группы, включающей меланому, папиллярный рак щитовидной железы, рак яичника, рак ободочной кишки, рак поджелудочной железы, рак легкого и лейкоз.

38. Способ по п.34, в котором композиция содержит {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(4-трифторметилфенил)амин или его фармацевтически приемлемую соль, таутомер или фармацевтически приемлемую соль его таутомера.

39. Способ ингибирования тирозинкиназного рецептора у индивидуума или лечения биологического состояния, опосредуемого тирозинкиназным рецептором, у индивидуума, заключающийся в том, что индивидууму вводят композицию, содержащую соединение, его таутомер, фармацевтически приемлемую соль или фармацевтически приемлемую соль его таутомера по п.1 или 24, где тирозинкиназный ре

- 67 014230 цептор выбирают из группы, включающей УЕСРК-2, РСРК-3, с-Кй, РЭбРК-β и С8Р4К.

40. Способ по п.39, в котором биологическое состояние, выбирают из группы, включающей лейкоз тучных клеток, эритролейкоз, опухоли зародышевых клеток, мелкоклеточный рак легкого, опухоли, относящиеся к строме желудочно-кишечного тракта, острый миелолейкоз, нейробластому, меланому, множественную миелому, рак яичника и рак молочной железы.

41. Способ по п.39, в котором композиция содержит {1-метил-5-[2-(5-трифторметил-1Н-имидазол2-ил)пиридин-4-илокси]-1Н-бензоимидазол-2-ил}-(4-трифторметилфенил)амин или его фармацевтически приемлемую соль, таутомер или фармацевтически приемлемую соль его таутомера.