EA028035B1

EA028035B1 - Производные пиразолопирролидин-4-она и их применение при лечении заболевания

Info

Publication number: EA028035B1
Application number: EA201592254A
Authority: EA
Inventors: Ютта Бланк; Симона Котеста; Вито Гуаньяно; Хайнрих Рюэгер
Original assignee: Новартис Аг
Priority date: 2013-05-28
Filing date: 2014-05-27
Publication date: 2017-09-29
Also published as: CN105246896B; JP6403761B2; ES2650562T3; EP3004112B1; KR20160012197A; WO2014191911A1; US20160096843A1; AU2014272700A1; PL3004112T3; JP2016520119A; US9714249B2; CA2912991A1; CN105246896A; EP3004112A1; EA201592254A1; BR112015029353A2; PT3004112T; MX2015016425A; AU2014272700B2

Abstract

Изобретение относится к соединению формулы (I)или его фармацевтически приемлемой соли; к способу получения производных пиразолопирролидин-4-она и их применению в качестве ингибиторов белка BET для лечения состояний или заболеваний, таких как раковое заболевание. Изобретение далее относится к комбинации фармакологически активных агентов и фармацевтической композиции.

Description

Изобретение относится к производным пиразолопирролидин-4-она и их применению в качестве ингибиторов ВЕТ для лечения состояний или заболеваний, таких как раковое заболевание.

Предпосылки создания изобретения

Белки ВЕТ представляют собой белки, кодируемые или генами ΒΚΌ2, ВКЭ3, ΒΚΌ4 или ВКЭТ. Каждый из этих белков несет два Ν-концевых бромодомена. Бромодомены включают консервативный сегмент из ~110 аминокислот, найденный по меньшей мере в 42 различных белках, которые специфически взаимодействуют с ацетилированными лизинами, встречающимися, например, на гистоновых хвостах (РШрракорои1о8 аиб Кпарр, РЕВ§ Ьейег8, 586 (2012), 2692-2704). Гистоны являются составной частью хроматина и их ковалентные модификации, включая ацетилирование лизина, регулируют генную транскрипцию. Таким образом, полагают, что бромодомены регулируют транскрипцию путем рекрутинга белков для генов, которые маркированы с помощью специфических структур ацетилирования лизина.

В некоторых опубликованных сообщениях прослеживается связь семейства белков ВЕТ с заболеваниями, включая раковое заболевание, метаболическое заболевание и воспалительное заболевание. Онкогенные гибриды из ВКЭ4 или ВКЭ3 и гена ядерного белка из семенника (ΝΤΎ вызываемые хромосомными транслокациями, лежат в основе агрессивного типа ракового заболевания, называемого как ΝυΓмедиальная карцинома (Ргепей е( а1., 1. С1ш. Опсо1., 22 (2004), 4135-9; Ргепей е( а1., 1. С1ш. Ра(йо1., 63 (2008), 492-6). Бромодомены ВКО3/ВКО4 сохраняются в этих гибридных белках и их ингибирование или посредством разрушения или с помощью селективного ингибитора ВЕТ-бромодомена Л^1 приводит к гибели и/или дифференцировке этих раковых клеток как ш уйго, так и в случае животных моделей опухолей (РШрракорои1о8 е( а1., №!иге, 468 (2010), 1067-73). 101 и некоторые другие селективные ингибиторы ВЕТ связываются с бромодоменами ВЕТ и, таким образом, предотвращают связывание ацетил-лизин, что предохраняет белки ВЕТ от взаимодействия с хроматином и, таким образом, регулирования транскрипции. ВКЭ4 также идентифицирован по скринингу иРНК в качестве мишени при остром миелоидном лейкозе (АМЬ) (2иЬег е! а1., №!иге, 478 (2011), 524-8). Этот вывод подтвержден ш уйго и ш у1уо, используя ВЕТ-ингибитор Л^1 и другой селективный ВЕТ-ингибитор, называемый 1-ВЕТ 151, который не является химически родственным ингибитору Л^1 (Эа\У8оп е! а1., №!иге, 478 (2011), 529-33). Эти и другие исследования показали, что ВЕТ-ингибиторы обладают широкой противораковой активностью при острых лейкозах, множественной миеломе и других гематологических злокачественностях. В случае некоторых моделей раковых заболеваний наблюдали сильную даун-регуляцию онкогенного фактора транскрипции Мус относительно ВЕТ-ингибирования (Ие1шоге е! а1., Се11, 146 (2011), 904-17; Мей/ е! а1., Ргос. №11. Асаб. 8с1. И8А, 108 (2011), 16669-74). Более недавние исследования наводят на мысль, что терапевтический потенциал ВЕТ-ингибиторов распространяется на другие признаки ракового заболевания, например рак легких и рак головного мозга.

Сообщалось, что другой ВЕТ-ингибитор, называемый 1-ВЕТ 762, который является близкородственным Л^1 по химической структуре и способу, посредством которого он связывается с ВЕТбромодоменами, модулирует экспрессию ключевых воспалительных генов и, таким образом, защищает от эндотоксического шока и вызваемого бактериями сепсиса в случае мышиных моделей (№собете е! а1., №йиге. 468 (2010), 1119-23). Эта основная часть данных была использована для подтверждения клинической оценки ВЕТ-ингибитора КУХ-208 при клинических исследованиях пациентов, страдающих от артериосклероза, коронарного артериального заболевания, дислипидемии, диабета и сердечнососудистых заболеваний (Мс№й1, Сигг. Орш. 1пуе8Йд. Игид8, 3 (2010), 357-364, и \у\у\у.с1Ппса181па18.доу). Показано, что как КУХ-208, так и 1-ВЕТ7 62 активируют аполипопротеин А-1, который критически вовлекается в патологический процесс при снижении уровней в ткани холестерина. В заключение, ВЕТбелки связаны с репродукцией и регуляцией транскрипции некоторых вирусов и, следовательно, полагают, что ВЕТ-ингибиторы могут обладать противовирусной активностью (^е1бпег-С1ипбе, Ргопйег8 ш Вю8с1епсе, 15 (2010), 537-549).

Резюмируя, ингибиторы ВЕТ-бромодоменов обладают терапевтическим потенциалом в случае некоторых заболеваний у человека.

- 1 028035

Краткое изложение сущности изобретения

Эти сведения необходимы для новых способов лечения и терапий, для лечения ракового заболевания. Данное изобретение относится к соединениям, в качестве ингибиторов ВЕТ, их фармацевтически приемлемым солям, включающим их фармацевтическим композициям и их комбинациям. Данное изобретение, далее, относится к способам лечения, предупреждения или уменьшения интенсивности ракового заболевания, включающим введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества ингибитора ВЕТ.

В данном контексте раскрыты различные воплощения данного изобретения. В особенности представляющие интерес соединения согласно данному изобретению проявляют хорошую эффективность в биологических тестах, описанных в данном контексте. В другом аспекте эти соединения обладают благоприятным профилем безопасности. В другом аспекте эти соединения обладают благоприятными фармакокинетическими свойствами.

В соответствии с первым аспектом данного изобретения, воплощение 1, данное изобретение относится к соединению формулы (I) или к его соли

К² выбирают из хлора и фтора;

К³ выбирают из метила и циклопропила;

К⁴ выбирают из Н; (С₁-С₄)алкила, необязательно замещенного -ОН или -О-(С₁-С₄)алкилом; циклопропила;

- 2 028035

К⁴ выбирают из Н; (С^СДалкила, необязательно замещенного -ОН или -О-(С1-С₄)алкилом; и циклопропила;

К⁵ означает Н;

К⁶ означает -О-(С₁-С₄)алкил;

К⁷ выбирают из Н и метокси;

* указывает на место присоединения к остатку молекулы.

В другом воплощении данное изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения, в соответствии с определением формулы (I) или ее субформул, или его соли и один или более фармацевтически приемлемый(ых) носитель(ей).

В другом воплощении данное изобретение относится к комбинации, в особенности фармацевтической комбинации, содержащей терапевтически эффективное количество соединения, в соответствии с определением формулы (I) или ее субформул, или его соли, и один или более терапевтически активный(ых) агент(ов).

Подробное описание изобретения

Ниже приводится целый ряд воплощений (Е) первого аспекта данного изобретения, где для удобства воплощение 1 является идентичным ему.

За исключением иначе указанного, термин соединения согласно настоящему изобретению относится к соединениям формулы (I) или ее субформул и их солям, а также ко всем стереоизомерам (включая диастереоизомеры и энантиомеры), ротамерам, таутомерам и меченым изотопами соединениям (включая замещенные дейтерием), а также к образованным по своей природе остаткам.

Как используется в данном контексте, термин С_1-4алкил относится к полностью насыщенному углеводородному радикалу с разветвленной или неразветвленной цепью, имеющему 1-4 атома углерода. Типичные примеры С_1-4-алкила включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил и трет-бутил.

В данном контексте раскрыты различные воплощения данного изобретения. Должно быть понятно, что признаки, описанные в каждом воплощении, можно комбинировать с другими указанными признаками для получения дальнейших воплощений согласно настоящему изобретению.

Следовательно, данное изобретение относится к соединению формулы (I), как описано выше, в виде воплощения 1.

Воплощение 2. Соединение формулы (I), или его соль, в соответствии с воплощением 1, которое представляет собой соединение формулы ^а)

Воплощение 3. Соединение формулы (I), или его фармацевтически приемлемая соль, в соответствии с воплощением 1 или 2, где соединение представлено формулой (II) или (Па)

- 3 028035

Воплощение 4. Соединение формулы (I), или его фармацевтически приемлемая соль, в соответствии с воплощением 1 или 2, где соединение представлено формулой (III) или (111а)

Воплощение 4а. Соединение формулы (I), или его соль, в соответствии с любым предыдущим воплощением, где К² означает хлор.

Воплощение 5. Соединение формулы (I), или его соль, в соответствии с любым предыдущим во-

площением, где К³ выбирают из метила, циклопропила и .

Воплощение 6. Соединение формулы (I), или его соль, в соответствии с любым предыдущим воплощением, где К⁴ выбирают из метила, этила, изопропила, -СН₂СН₂ОН, -СН₂СН₂ОСН₃, циклопропила

или К⁴ означает Н.

Воплощение 7. Соединение формулы (I), или его соль, в соответствии с любым одним из воплощений 1 или 3-6, где соединение представлено в виде рацемата из двух энантиомерных форм (Ш) и (ГЬ), описанных в данном контексте.

- 4 028035

Воплощение 8. Соединение формулы (I), или его соль, в соответствии с воплощением 1, которое выбирают из группы, состоящей из следующих соединений:

Пример 1: 6-(4-хлорфенил)-З-циклопропил-5-(1,5-диметил-6оксо-1,6-дигидропиридин-З-ил)-1-метил-5,б-дигидропирроло[3, 4с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 2: (К)-б-(4-хлорфенил)-З-циклопропил-5-(3,8-диметил[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридин-6-ил)-1-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 3: 6-(4-хлорфенил)-З-циклопропил-5-(1,5-диметил-6оксо-1,б-дигидропиридин-3-ил)-1-(2-гидроксиэтил)-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 4: 6-(4-хлорфенил)-З-циклопропил-5-(1,5-диметил-6оксо-1,б-дигидропиридин-3-ил)-1-(2-метоксиэтил)-5,бдигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 5: 6-(4-хлорфенил)-З-циклопропил-5-(1,5-диметил-6оксо-1,б-дигидропиридин-3-ил)-1-(1-метил-1Н-пиразол-5-ил)-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример б: 5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-Зил) -б-(4-хлорфенил)-З-метил-5,б-дигидропирроло[3,4-с]пиразол4(2Н)-он;

Пример 7а: 5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-Зил) -б-(4-хлорфенил)-1-(2-метоксипиридин-З-ил)-З-метил-5,бдигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 7Ь: 5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-Зил) -б-(4-хлорфенил)-2-(2-метоксипиридин-З-ил)-З-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он;

Пример 8а: 5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-Зил) -б-(4-хлорфенил)-1-(2-метоксипиримидин-5-ил)-З-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 8Ь: 5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-Зил) -б-(4-хлорфенил)-2-(2-метоксипиримидин-5-ил)-З-метил-5,бдигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он;

Пример 9: б-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-б-оксо-1, бдигидропиридин-3-ил)-З-метил-5,б-дигидропирроло[3,4-с]пиразол4(2Н)-он;

Пример 10: б-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-б-оксо-1,бдигидропиридин-3-ил)-1,З-диметил-5,б-дигидропирроло[3,4с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 11: 6-(4-хлорфенил)-1-циклопропил-5-(1,5-диметил-6оксо-1, б-дигидропиридин-3-ил)-З-метил-5,б-дигидропирроло[3,4- 5 028035

с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 12: 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6 дигидропиридин-3-ил)-1-изопропил-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 13: 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6 дигидропиридин-3-ил)-1-(4-метоксифенил)-З-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 14: 6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)

5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-З-ил)-З-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он;

Пример 15: 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6 дигидропиридин-3-ил)-3-(2-метоксипиридин-З-ил)-1-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 16: (К)- 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6 дигидропиридин-3-ил)-3-(2-метоксипиридин-З-ил)-1-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 17а: 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6 дигидропиридин-3-ил)-1-(2-метоксипиридин-З-ил)-З-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 17Ь: 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6 дигидропиридин-3-ил)-2-(2-метоксипиридин-З-ил)-З-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он;

Пример 18а: 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6 дигидропиридин-3-ил)-1-(2-этоксипиридин-З-ил)-З-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 18Ь: 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6 дигидропиридин-3-ил)-2-(2-этоксипиридин-З-ил)-З-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он;

Пример 19: 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6 дигидропиридин-3-ил)-1-(2-фторпиридин-З-ил)-З-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 20а: 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6 дигидропиридин-3-ил)-2-(6-метоксипиридин-З-ил)-З-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он;

Пример 20Ь: б-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-б-оксо-1, б дигидропиридин-3-ил)-1-(6-метоксипиридин-З-ил)-З-метил-5,6- 6 028035 дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 21а: б-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-б-оксо-1,бдигидропиридин-3-ил)-1-(2-метоксипиримидин-5-ил)-З-метил-5,бдигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 21Ь: б-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-б-оксо-1,бдигидропиридин-3-ил)-2-(2-метоксипиримидин-5-ил)-З-метил-5,бдигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он;

Пример 22: (К)- 6-(4-хлорфенил)-З-циклопропил-5-(1,5диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-З-ил)-1-(1-метил-1Н-пиразол-5ил)-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 23: 6-(4-хлорфенил)-З-циклопропил-5-(1,5-диметил-6оксо-1,6-дигидропиридин-З-ил)-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол4(1Н)-он;

Пример 24: (К)- 6-(4-хлорфенил)-З-циклопропил-5-(1,5диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-З-ил)-5,6-дигидропирроло[3,4с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 25: (К)- б-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-б-оксо-1,бдигидропиридин-3-ил)-1-(2-метоксипиридин-З-ил)-З-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 26: (К)- б-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-б-оксо-1,бдигидропиридин-3-ил)-2-(2-метоксипиридин-З-ил)-З-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он;

Пример 27: (К)-6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1, 6дигидропиридин-3-ил)-З-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол4(2Н)-он; и

Пример 28: (К)-5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридинЗ-ил) -6-(4-хлорфенил)-З-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол4(2Н)-он.

Воплощение 9. Соединение формулы (I), или его соль, в соответствии с воплощением 1, которое выбирают из группы, состоящей из следующих соединений:

Пример 2: (К)-б-(4-хлорфенил)-З-циклопропил-5-(3,8-диметил[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридин-б-ил)-1-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 11: 6-(4-хлорфенил)-1-циклопропил-5-(1,5-диметил-6оксо-1,б-дигидропиридин-3-ил)-З-метил-5,б-дигидропирроло[3,4- 7 028035

с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 16: (К)-6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6дигидропиридин-3-ил)-3-(2-метоксипиридин-З-ил)-1-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 17Ь: 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6дигидропиридин-3-ил)-2-(2-метоксипиридин-З-ил)-З-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он;

Пример 20а: 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6дигидропиридин-3-ил)-2-(6-метоксипиридин-З-ил)-З-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он;

Пример 20Ь: 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6дигидропиридин-3-ил)-1-(6-метоксипиридин-З-ил)-З-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 21а: 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6дигидропиридин-3-ил)-1-(2-метоксипиримидин-5-ил)-З-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

Пример 25: (К)-6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6дигидропиридин-3-ил)-1-(2-метоксипиридин-З-ил)-З-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он; и

Пример 26: (К)-6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6дигидропиридин-3-ил)-2-(2-метоксипиридин-З-ил)-З-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он.

Описание настоящего изобретения включает соединения, имеющие стереохимию, как показано в формуле (1Ь)

В зависимости от выбора исходных веществ и методик соединения могут находиться в форме одного из возможных изомеров или в виде их смесей, например в виде чистых оптических изомеров или в виде смесей изомеров, таких как рацематы и диастереоизомерные смеси, в зависимости от количества асимметрических атомов углерода. Подразумевают, что настоящее изобретение включает все такие возможные изомеры, включая рацемические смеси, диастереомерные смеси и оптически чистые формы. Оптически активные (К)- и (8)-изомеры можно получать, используя хиральные синтоны или хиральные реагенты или разделение с использованием стандартных методик. Если соединение содержит двойную связь, то заместитель может быть в Е- или Ζ-конфигурации. Если соединение содержит дизамещенный циклоалкил, заместитель циклоалкила может иметь цис- или транс-конфигурацию. Подразумевают, что все таутомерные формы также включены в данный контекст.

Как используется в данном контексте, термины соль или соли относится к аддитивной соли с кислотой или аддитивной соли с основанием соединения согласно данному изобретению. Соли включают, в особенности, фармацевтически приемлемые соли. Термин фармацевтически приемлемые соли относится к солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства соединений согласно данному изобретению и которые обычно не являются биологически или иным образом нежелательными. Во многих случаях соединения согласно настоящему изобретению способны образовывать соли с кислотой и/или с основанием в силу присутствия аминогрупп и/или карбоксильных групп или подобных им групп.

Фармацевтически приемлемые аддитивные соли с кислотой могут быть образованы с неорганическими кислотами и органическими кислотами.

- 8 028035

Неорганические кислоты, при использовании которых можно получать соли, включают, например, соляную кислоту, бромоводородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, фосфорную кислоту и т.п.

Органические кислоты, при использовании которых можно получать соли, включают, например, уксусную кислоту, пропионовую кислоту, гликолевую кислоту, щавелевую кислоту, малеиновую кислоту, малоновую кислоту, янтарную кислоту, фумаровую кислоту, винную кислоту, лимонную кислоту, бензойную кислоту, миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, толуолсульфоновую кислоту, сульфосалициловую кислоту и т.п.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединениям формулы I, в солевой форме ацетата, аскорбата, адипата, аспартата, бензоата, безилата, бромида/гидробромида, бикарбоната/карбоната, бисульфата/сульфата, камфорсульфоната, капрата, хлорида/гидрохлорида, хлортеофиллоната, цитрата, этандисульфоната, фумарата, глюцептата, глюконата, глюкуроната, глутамата, глутарата, гликолята, гиппурата, гидроиодида/иодида, изетионата, лактата, лактобионата, лаурилсульфата, малата, малеата, малоната, манделата, мезилата, метилсульфата, муката, нафтоата, напзилата, никотината, нитрата, октадеканоата, олеата, оксалата, пальмитата, памоата, фосфата/гидрофосфата/дигидрофосфата, полигалактуроната, пропионата, себаката, стеарата, сукцината, сульфосалицилата, сульфата, тартрата, тозилата, трифенатата, трифторацетата или ксинафоата.

Подразумевают также, что любая формула, приведенная в данном контексте, изображает немеченые изотопами формы, а также меченых изотопами форм соединений. Меченые изотопами соединения имеют структуры, изображенные с помощью формул, приведенных в данном контексте, за исключением того, что один или более атом(ов) замещен(ы) атомом, имеющим выбранную атомную массу или массовое число, примеры изотопов, которые можно вводить в соединения согласно данному изобретению, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, такие как ²Н, ³Н, ¹¹С, % Ί соответственно. Данное изобретение включает различные,

13с ^^С 15^” 31р 32р 35^ 3^С1 123ι меченые изотопами, соединения, как описано в данном контексте, например, таковые, в которых присутствуют радиоактивные изотопы, такие как ³Н и ¹⁴С, или таковые, в которых присутствуют нерадиоактивные изотопы, такие как ²Н и ¹³С. Такие меченые изотопами соединения являются пригодными при метаболических исследованиях (с ¹⁴С), исследованиях кинетики реакций (например, с ²Н или ³Н), в способах детектирования или визуализации, как, например, позитронно-эмиссионная томография (РЕТ) или однофотонная эмиссионная компьютерная томография (8РЕСТ), включая тесты в отношении распределения в ткани лекарственного средства или субстрата, или при радиоактивном лечении пациентов. В особенности, ¹⁸Р или меченое этим изотопом соединение может быть особенно желательным для исследований РЕТ или 8РЕСТ. Меченые изотопами соединения формулы (I) обычно можно получать с помощью стандартных методик, известных квалифицированному специалисту в данной области, или с помощью способов, аналогичных таковым, описанным в сопроводительных примерах и получениях, с использованием подходящих меченых изотопами реагентов вместо немеченых изотопами реагентов.

Далее, замена с помощью более тяжелых изотопов, в особенности, с помощью дейтерия (то есть, ²Н или Ό) может давать некоторые терапевтические преимущества, в результате приводя к большей метаболической стабильности, например к увеличению периода полураспада ίη νίνο или к потребностями уменьшенной дозировки или к улучшению терапевтического индекса. Подразумевают, что дейтерий, в данном контексте, рассматривают как заместитель соединения формулы (I). Концентрацию такого более тяжелого изотопа, конкретно, дейтерия, можно определять посредством фактора изотопного обогащения. Термин фактор изотопного обогащения, как используется в данном контексте, означает соотношение между изотопным избытком и природным избытком конкретного изотопа. Если заместитель в соединении согласно данному изобретению означает дейтерий, такое соединение имеет фактор изотопного обогащения для каждого указанного атома дейтерия, по меньшей мере, равный 3500 (включение 52,5% дейтерия на каждый указанный атом дейтерия), по меньшей мере 4000 (включение 60% дейтерия), по меньшей мере 4500 (включение 67,5% дейтерия), по меньшей мере 5000 (включение 75% дейтерия), по меньшей мере 5500 (включение 82,5% дейтерия), по меньшей мере 6000 (включение 90% дейтерия), по меньшей мере 6333,3 (включение 95% дейтерия), по меньшей мере 6466,7 (включение 97% дейтерия), по меньшей мере 6600 (включение 99% дейтерия) или по меньшей мере 6633,3 (включение 99,5% дейтерия).

Фармацевтически приемлемые сольваты согласно данному изобретению включают таковые, где растворитель кристаллизации может быть замещенным изотопами, например Э₂О. й₆-ацетон, й₆-ДМСО.

Соединения согласно данному изобретению, т.е. соединения формулы (I), которые содержат группы, способные действовать как доноры и/или акцепторы для водородных связей, могут быть способны к образованию со-кристаллов с подходящими образователями со-кристаллов. Эти со-кристаллы можно получать из соединений формулы (I) с помощью известных способов образования со-кристаллов. Такие способы включают измельчение, нагревание, со-сублимирование, со-плавление или контактирование в растворе соединений формулы (I) с образователем со-кристаллов, при условиях кристаллизации, и выделение таким образом образовавшихся со-кристаллов. Подходящие образователи со-кристаллов включают таковые, описанные в заявке на патент под номером \УО 2004/078163. Следовательно, данное изобретение, далее, относится к со-кристаллам, содержащим соединение формулы (I).

- 9 028035

Как используется в данном контексте, термин фармацевтически приемлемый носитель включает любой растворитель и все растворители, дисперсионные среды, покрытия, поверхностно-активные вещества, антиоксиданты, консерванты (например, антибактериальные агенты, противогрибковые агенты), изотонические агенты, агенты замедления абсорбции, соли, консерванты, стабилизаторы лекарственных средств, связующие вещества, эксципиенты, дезинтегрирующие агенты, смазочные вещества, подсластители, вкусовые добавки, красители и т.п., и их комбинации, которые должны быть известны квалифицированному специалисту в данной области (см., например, КеттфопЕ РЬаттасеийса1 8с1спсс5. 18-е изд., Маск Ρτίηΐίη§ Сотрапу, 1990, сс.1289-1329). За исключением того, когда какой-либо стандартный носитель является несовместимым с активным ингредиентом, рассматривают использование носителя в терапевтических или фармацевтических композициях.

Термин терапевтически эффективное количество соединения согласно настоящему изобретению относится к количеству соединения согласно настоящему изобретению, которое вызывает биологический или медицинский ответ у субъекта, например снижение или ингибирование активности фермента или белка, или уменьшение интенсивности симптомов, облегчение состояний, уменьшение или замедление прогрессирования заболевания или предупреждение заболевания и т.д. В одном, не являющемся ограничивающим воплощении, термин терапевтически эффективное количество относится к количеству соединения согласно настоящему изобретению, которое, когда его вводят субъекту, является эффективным (1) по меньшей мере, для частичного облегчения, ингибирования, предупреждения и/или улучшения состояния, или уменьшения интенсивности нарушения или заболевания (ί) опосредованного белками ВЕТ, или (ίί) связанного с активностью белка ВЕТ, или (ίίί) характеризующегося активностью (обычной или анормальной) белков ВЕТ; или (2) снижения или ингибирования активности белков ВЕТ; или (3) снижения или ингибирования экспрессии белков ВЕТ. В другом, не являющемся ограничивающим воплощении, термин терапевтически эффективное количество относится к количеству соединения согласно настоящему изобретению, которое, когда его вводят в клетку или ткань или во внеклеточный биологический материал, или среду, является эффективным, по меньшей мере, для частичного снижения или ингибирования активности белков ВЕТ; или, по меньшей мере, для частичного снижения или ингибирования экспрессии белков ВЕТ.

Белок ВЕТ представляет собой белок, кодируемый или генами ВКБ2, ВКБ3, ВКБ4 или ВКБТ. За исключением иначе указанного, термины белки ВЕТ или белок ВЕТ используют в данном контексте в единичной и множественной формах взаимозаменяемо и использование того или другого термина не является ограничивающим. За исключением иначе указанного, термин белки ВЕТ включает все или любую комбинацию таких кодируемых белков.

Как используется в данном контексте, термин субъект относится к животному. Обычно животным является млекопитающее. Термин субъект также относится, например, к приматам (например, люди, мужского пола или женского пола), коровам, овцам, козам, лошадям, собакам, кошкам, кроликам, крысам, мышам, рыбам, птицам и т.п. В некоторых воплощениях субъектом является примат. Еще в других воплощениях, субъектом является человек.

Как используется в данном контексте, термин ингибировать, ингибирование или ингибирующий относится к уменьшению или подавлению данного состояния, симптома, или нарушения, или заболевания, или к значительному снижению, в отношении базовой активности, биологической активности или процесса.

Как используется в данном контексте, термин лечить, лечащий или лечение любого заболевания или нарушения относится, в одном воплощении, к уменьшению интенсивности заболевания или нарушения (т.е. к замедлению или подавлению или уменьшению развития заболевания или по меньшей мере одного из его клинических симптомов). В другом воплощении термин лечить, лечащий или лечение относится к облегчению или улучшению по меньшей мере одного физического параметра, включая таковые, которые могут быть не очевидны пациенту. В еще другом воплощении термин лечить, лечащий или лечение относится к модулированию заболевания или нарушения или в физическом плане (например, стабилизация видимого симптома), в физиологическом плане (например, стабилизация физического параметра) или в обоих планах. В еще другом воплощении термин лечить, лечащий или лечение относится к предупреждению или замедлению атаки или развития или прогрессирования заболевания или нарушения.

Как используется в данном контексте, субъект является нуждающимся в лечении, если такой субъект получает пользу от такого лечения в биологическом плане, медицинском плане или в плане качества жизни.

Все способы, раскрытые в данном контексте, можно осуществлять в любом подходящем порядке, за исключением иначе указанного в данном контексте или иным образом ясно опровергаемого согласно данному контексту. Использование любого примера и всех примеров или касающегося конкретных примеров выражения (например, такой как), предусмотренное в данном контексте, предназначено только для лучшего разъяснения данного изобретения и не представляет ограничения относительно объема данного изобретения, иным образом заявленного.

- 10 028035

Любой асимметрический атом (например, атом углерода или т.п.) соединения(ий) согласно настоящему изобретению может присутствовать в рацемической или энантиомерно обогащенной смеси, как, например, в (К)-, (8)- или (^.^(-конфигурации. В некоторых воплощениях каждый асимметрический атом имеет по меньшей мере 50%-ный энантиомерный избыток, по меньшей мере 60%-ный энантиомерный избыток, по меньшей мере 70%-ный энантиомерный избыток, по меньшей мере 80%-ный энантиомерный избыток, по меньшей мере 90%-ный энантиомерный избыток, по меньшей мере 95%-ный энантиомерный избыток или по меньшей мере 99%-ный энантиомерный избыток в (К)- или (8)-конфигурации. Заместители у атомов с ненасыщенными двойными связями могут, если возможно, находиться в цис-(2)- или транс-(Е)-форме.

Соответственно, как используется в данном контексте, соединение согласно настоящему изобретению может быть в форме одного из возможных изомеров, ротамеров, атропоизомеров, таутомеров или их смесей, например, в виде, по существу, чистых геометрических (цис или транс) изомеров, диастереомеров, оптических изомеров (антиподов), рацематов или их смесей.

Любые полученные смеси изомеров можно разделять, на основе физико-химических различий компонентов, на чистые или, по существу, чистые геометрические или оптические изомеры, диастереомеры, рацематы, например, с помощью хроматографии и/или фракционной кристаллизации.

Любые полученные рацематы конечных продуктов или промежуточных продуктов можно разделять на оптические антиподы, с помощью известных способов, например путем разделения их диастереомерных солей, полученных с оптически активной кислотой или основанием, и высвобождения оптически активного кислого или основного соединения. В особенности, основной фрагмент, таким образом, можно использовать для разделения соединений согласно настоящему изобретению на их оптические антиподы, например, с помощью фракционной кристаллизации соли, образованной с оптически активной кислотой, как, например, винная кислота, дибензоилвинная кислота, диацетилвинная кислота, диО,О'-п-толуоилвинная кислота, миндальная кислота, яблочная кислота или камфор-10-сульфоновая кислота. Рацемические продукты также можно разделять с помощью хиральной хроматографии, как, например, высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), с использованием хирального адсорбента.

Кроме того, соединения согласно настоящему изобретению, включая их соли, также можно получать в форме их гидратов или они включают другие растворители, используемые для их кристаллизации. Соединения согласно настоящему изобретению могут, неотъемлемо или намеренно, образовывать сольваты с фармацевтически приемлемыми растворителями (включая воду); более того, подразумевают, что данное изобретение охватывает как сольватированные, так и несольватированные формы. Термин сольват относится к молекулярному комплексу соединения согласно настоящему изобретению (включая его фармацевтически приемлемые соли) с одной или более молекулой(ами) растворителя. Такие молекулы растворителя представляют собой таковые, обычно используемые в фармацевтической области, которые являются известными в связи со своей безвредностью для реципиента, например, вода, этанол и т.п. Термин гидрат относится к комплексу, где молекулой растворителя является вода.

Соединения согласно настоящему изобретению, включая их соли, гидраты и сольваты, могут, неотъемлемо или намеренно, образовывать полиморфы.

Композиции.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение согласно настоящему изобретению, или его фармацевтически приемлемую соль, и фармацевтически приемлемый носитель. В дальнейшем воплощении композиция содержит по меньшей мере два фармацевтически приемлемых носителя, таких как таковые, описанные в данном контексте. Для целей настоящего изобретения, за исключением иначе указанного, сольваты и гидраты обычно представляют собой рассматриваемые композиции. Предпочтительно, фармацевтически приемлемые носители являются стерильными. Фармацевтическую композицию можно получать для конкретных путей введения, таких как пероральное введение, парентеральное введение и ректальное введение и т.д. В дополнение, фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут находиться в твердой форме (включая, без ограничения, капсулы, таблетки, пилюли, гранулы, порошки или суппозитории) или в жидкой форме (включая, без ограничения, растворы, суспензии или эмульсии). Фармацевтические композиции можно подвергать обычным фармацевтическим операциям, таким как стерилизация, и/или эти композиции могут содержать стандартные инертные разбавители, смазочные вещества или забуферивающие агенты, а также вспомогательные вещества, такие как консерванты, стабилизаторы, смачиватели, эмульгаторы и буферы и т.д.

Типично, фармацевтические композиции представляют собой таблетки или желатиновые капсулы, содержащие активный ингредиент, вместе с одним или более:

a) разбавителями, как, например, лактоза, декстроза, сахароза, маннит, сорбит, целлюлоза и/или глицин;

b) смазочными веществами, как, например, диоксид кремния, тальк, стеариновая кислота, ее кальциевая или магниевая соль и/или полиэтиленгликоль; для таблеток также

c) связующими веществами, как, например, алюмосиликат магния, крахмальная паста, желатин,

- 11 028035 трагакант, метилцеллюлоза, натрийкарбоксиметилцеллюлоза и/или поливинилпирролидон; если желательно

ά) дезинтегрирующими агентами, как, например, крахмалы, агар, альгиновая кислота или ее натриевая соль, или шипучие смеси; и

е) абсорбентами, красителями, вкусовыми добавками и подсластителями.

На таблетки может быть нанесено или пленочное покрытие или энтеросолюбильное покрытие в соответствии со способами, известными в данной области.

Подходящие композиции для перорального введения включают эффективное количество соединения согласно данному изобретению в форме таблеток, лепешек, водных или масляных суспензий, диспергируемых порошков или гранул, эмульсий, твердых или мягких капсул, или сиропов или эликсиров. Композиции, предназначенные для перорального применения, приготовляют в соответствии с любым способом, известным в данной области, для получения фармацевтических композиций, и такие композиции могут содержать один или более агент(ов), выбираемый(ых) из группы, состоящей из подсластителей, ароматизаторов, красителей и консервантов, для того чтобы получать фармацевтически превосходные и вкусные готовые лекарственные формы. Таблетки могут содержать активный ингредиент в смеси с нетоксичными, фармацевтически приемлемыми, эксципиентами, которые являются пригодными для получения таблеток. Эти эксципиенты представляют собой, например, инертные разбавители, такие как карбонат кальция, карбонат натрия, лактоза, фосфат кальция или фосфат натрия; гранулирующие и дезинтегрирующие агенты, например кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связующие вещества, например, крахмал, желатин или гуммиарабик; и смазочные вещества, например стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Таблетки представляют собой таковые без покрытия или с покрытием, нанесенным с помощью известных способов, для замедления, дезинтеграции и абсорбции в желудочнокишечном тракте, и, таким образом, обеспечивают непрерывное воздействие в течение длительного периода времени. Например, можно использовать вещество с замедленным высвобождением во времени, такое как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат. Готовые лекарственные формы для перорального применения могут быть представлены в виде твердых желатиновых капсул, где активный ингредиент смешан с инертным твердым разбавителем, как, например, карбонат кальция, фосфат кальция или каолин, или в виде мягких желатиновых капсул, где активный ингредиент смешан с водной или масляной средой, как, например, арахисовое масло, вазелиновое масло или оливковое масло.

Некоторые композиции для инъекций представляют собой водные изотонические растворы или суспензии, а суппозитории преимущественно получают из жировых эмульсий или суспензий. Вышеуказанные композиции можно стерилизовать и/или эти композиции содержат вспомогательные вещества, такие как консерванты, стабилизаторы, смачиватели или эмульгаторы, ускорители растворения, соли для регулирования осмотического давления и/или буферы. В дополнение, эти композиции также могут содержать другие терапевтически полезные вещества. Вышеуказанные композиции получают в соответствии со стандартными способами смешения, гранулирования или нанесения покрытия, соответственно, и эти композиции содержат примерно 0,1-75% или примерно 1-50% активного ингредиента.

Подходящие композиции для трансдермального применения включают эффективное количество соединения согласно данному изобретению с подходящим носителем. Носители, подходящие для трансдермальной доставки, включают абсорбируемые, фармакологически приемлемые, растворители, для способствования прохождению через кожу хозяина. Например, трансдермальные устройства представлены в форме бандажа, включающего поддерживающий элемент, емкость, содержащую соединение, необязательно с носителями, необязательно контролирующий скорость барьер для доставки соединения к коже хозяина с контролируемой и предопределенной скоростью в течение пролонгированного периода времени, и средство для надежного прикрепления к коже.

Подходящие композиции для местного применения, например для кожи и глаз, включают водные растворы, суспензии, мази, крема, гели или готовые лекарственные формы в виде спрея, например для доставки с помощью аэрозоля или т.п. Такие системы местной доставки, в особенности, должны быть подходящими для дермального применения, например для лечения ракового заболевания кожи, например для профилактического применения в солнцезащитных кремах, лосьонах, спреях и т.п. Таким образом, они являются особенно подходящими для использования в местных, включая косметические, готовых лекарственных формах, хорошо известных в данной области. Такие лекарственные формы могут содержать солюбилизаторы, стабилизаторы, усиливающие тонус агенты, буферы и консерванты.

Как используется в данном контексте, местное применение также может относиться к ингаляции или к интраназальному применению. Композиции могут быть подходящим образом доставлены в форме сухого порошка (или индивидуально, в виде смеси, как, например, сухая смесь с лактозой, или в виде смешанных частиц компонентов, например, с фосфолипидами) посредством ингалятора с сухим порошком или аэрозольного спрея, подаваемого из контейнера под давлением, насоса, спрея, пульверизатора или аэрозольного аппарата, вместе или без использования подходящего пропеллента.

Соединения формулы I в свободной форме или в виде фармацевтически приемлемой соли проявляют полезные фармакологические свойства, например свойства модулирования белка ВЕТ, например, как показано в тестах, как предусмотренные в ближайших разделах, и, следовательно, показаны для терапии

- 12 028035 или применения в качестве химикатов для исследований, например, в качестве соединений инструментов.

В отношении их активности в качестве ингибиторов ВЕТ, соединения формулы (I), в свободной форме или в виде фармацевтически приемлемой соли, являются пригодными при лечении состояний, которые являются опосредованными активностью белков ВЕТ, таких как раковое заболевание, и/или которые являются чувствительными (что особенно имеет значение при терапевтически благоприятном пути введения) к ингибированию белка ВЕТ, наиболее особенно, при лечении заболевания или нарушения, как указано в данном контексте ниже.

Соединения согласно изобретению являются пригодными при лечении заболеваний или нарушений, таких как раковое заболевание. В особенности, такие раковые заболевания включают доброкачественные или злокачественные опухоли, саркому мягкой ткани или саркому, такую как липосаркома, рабдомиосаркома или рак костей, как, например, остеосаркома, карцинома, такая как рак головного мозга, почек, печени, надпочечников, мочевого пузыря, молочной железы, желудка, яичников, толстой кишки, прямой кишки, предстательной железы, поджелудочной железы, легких (включая мелкоклеточный рак легких), влагалища или щитовидной железы, глиобластома, менингиома, глиома, мезотелиома, нейроэндокринная опухоль, такая как нейробластома, множественная миелома, рак желудочно-кишечного тракта, в особенности карцинома толстой кишки или колоректальная аденома, опухоль головы и шеи, меланома, гиперплазия предстательной железы, неоплазия, неоплазия эпителиального характера, неоплазия, возникающая в крови или костном мозге, лейкоз, как например острый миелоидный лейкоз (ЛМЬ) или острый лимфобластный лейкоз (ЛЬЬ) или хроническый лимфоцитный лейкоз В-клеток, лимфома, такая как В- или Т-клеточного происхождения, такая как диффузная В-крупноклеточная лимфома (ОБВСЬ), ΝυΤ-медиальная карцинома или любая другая неоплазия с хромосомными реаранжировками генов ВЕТ и метастазами в других органах. В особенности, полагают, что соединения согласно данному изобретению должны быть пригодными при раковом заболевании, выбираемом из группы, состоящей из неоплазии, возникающей в крови или костном мозге; лейкоза, такого как острый миелоидный лейкоз (ЛМЬ) или острый лимфобластный лейкоз (ЛЬЬ) или хронический лимфоцитный лейкоз В-клеток; лимфомы, такой как В-или Т-клеточного происхождения, как например диффузная В-крупноклеточная лимфома (ОБВСЬ); ΝυΤ-медиальной карциномы или любой другой неоплазии с хромосомной реаранжировкой генов ВЕТ, нейроэндокринной опухоли, такой как нейробластома; множественной миеломы; рака легких (включая мелкоклеточный рак легких); и рака толстой кишки.

Соединения согласно данному изобретению также можно применять при лечении атеросклероза, заболевания коронарной артерии, дислипидемии, диабета и других сердечно-сосудистых заболеваний и/или в качестве противовирусных агентов.

Таким образом, в виде дальнейшего воплощения настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I), или его соли, в терапии. В дальнейшем воплощении терапию выбирают в зависимости от заболевания, которое можно подвергать лечению путем ингибирования белков ВЕТ. В другом воплощении это заболевание представляет собой раковое заболевание, выбираемое из вышеуказанного перечня.

Таким образом, в виде дальнейшего воплощения настоящее изобретение относится к соединению формулы (I), или его соли, для применения в терапии. В дальнейшем воплощении терапию выбирают в зависимости от заболевания, которое можно подвергать лечению путем ингибирования белка ВЕТ. В другом воплощении это заболевание представляет собой раковое заболевание, выбираемое из вышеуказанного перечня.

В другом воплощении данное изобретение относится к способу лечения заболевания, которое подвергают лечению путем ингибирования белка ВЕТ, включающему введение терапевтически приемлемого количества соединения формулы (I), или его соли. В дальнейшем воплощении это заболевание представляет собой раковое заболевание, выбираемое из вышеуказанного перечня.

Таким образом, в виде дальнейшего воплощения настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I), или его соли, для получения лекарственного средства. В дальнейшем воплощении, представлено лекарственное средство для лечения заболевания, которое можно подвергать лечению путем ингибирования белка ВЕТ. В другом воплощении это заболевание представляет собой раковое заболевание, выбираемое из вышеуказанного перечня.

Фармацевтическая композиция или комбинация согласно настоящему изобретению может быть в унифицированной дозе примерно 1-1000 мг активного(ых) ингредиента(ов) для субъекта массой примерно 50-70 кг, или примерно 1-500 мг или примерно 1-250 мг или примерно 1-150 мг или примерно 0,5-100 мг, или примерно 1-50 мг активных ингредиентов. Терапевтически эффективная дозировка соединения, фармацевтической композиции или их комбинаций зависит от типа субъекта, массы тела, возраста и индивидуального состояния, нарушения или заболевания, которое подвергают лечению, или его тяжести. Квалифицированный врач, клиницист или ветеринар без труда может определить эффективное количество каждого из активных ингредиентов, необходимых для предупреждения, лечения или ингибирования прогрессирования нарушения или заболевания.

- 13 028035

Вышеупомянутые свойства лекарственной формы доказаны тестами ίη νίίΓΟ и ίη νίνο, используя преимущественно млекопитающих, как, например, мыши, крысы, собаки, обезьяны, или их изолированные органы, ткани и препараты. Соединения согласно настоящему изобретению можно применять ίη νίίΓΟ в виде растворов, как, например, водные растворы, и ίη νίνο, или энтерально, парентерально, преимущественно, внутривенно, например в виде суспензии или в водном растворе. Дозировка ίη νίίτο может находиться в диапазоне между примерно 10^-3 молярной и 10^-9 молярной концентрациями. Терапевтически эффективное количество ίη νίνο может находиться в диапазоне в зависимости от пути введения между примерно 0,1-500 мг/кг или между примерно 1-100 мг/кг.

Соединение согласно настоящему изобретению можно вводить или одновременно с одним или более другим(и) терапевтическим(ми) агентом(ами), или до или после одного или более другого(их) терапевтического(их) агента(ов). Соединение согласно настоящему изобретению можно вводить отдельно, тем же самым путем или другим путем введения, или совместно, в одной и той же фармацевтической композиции, как и другие агенты.

Терапевтический агент представляет собой, например, химическое соединение, пептид, антитело, фрагмент антитела или нуклеиновую кислоту, которые являются терапевтически активными или усиливают терапевтическую активность, когда вводят пациенту в комбинации с соединением согласно данному изобретению.

Комбинации.

В одном воплощении данное изобретение относится к продукту, содержащему соединение формулы (I) и по меньшей мере один другой терапевтический агент, в виде комбинированного фармацевтического препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в терапии. В одном воплощении терапия представляет собой лечение заболевания или состояния, опосредованного белком ВЕТ. Продукты, предусмотренные в виде комбинированного фармацевтического препарата, включают композицию, содержащую соединение формулы (I) и другой(ие) терапевтический(ие) агент(ы) вместе в одной и той же фармацевтической композиции, или соединение формулы (I) и другой(ие) терапевтический(ие) агент(ы) в отдельной форме, например, в форме комплекта.

В одном воплощении данное изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I) и другой(ие) терапевтический(ие) агент(ы). Необязательно, фармацевтическая композиция может содержать фармацевтически приемлемый носитель, как описано выше.

В одном воплощении данное изобретение относится к комплекту, включающему две или более раздельных фармацевтических композиций, по меньшей мере одна из которых содержит соединение формулы (I). В одном воплощении комплект включает средства для раздельно хранящихся вышеуказанных композиций, такие как контейнер, отдельный флакон или отдельный пакет из фольги. Примером такого комплекса служит блистерная упаковка, как типично используемая для упаковки таблеток, капсул и т.п.

Комплект согласно данному изобретению можно использовать для введения различных лекарственных форм, например перорально и парентерально, для введения раздельных композиций в различные интервалы дозирования или для титрования раздельных композиций относительно друг друга. Для способствования соответствию комплект согласно данному изобретению типично содержит инструкции по введению.

При комбинированных терапиях согласно данному изобретению соединение согласно данному изобретению и другой терапевтический агент могут быть получены и/или составлены одним и тем же или разными изготовителями. Кроме того, соединение согласно данному изобретению и другой терапевтический агент можно вводить вместе в комбинированной терапии: (ί) до высвобождения продукта комбинации для врачей (например, в случае комплекта, содержащего соединение согласно данному изобретению и другой терапевтический агент); (ίί) самим врачом (или под руководством врача), незадолго перед введением; (ίίί) в случае самого пациента, например, во время последовательного введения соединения согласно данному изобретению и другого терапевтического агента.

Соответственно, данное изобретение относится к применению соединения формулы (I) для лечения заболевания или состояния, опосредованного белком ВЕТ, где лекарственное средство получают для введения с другим терапевтическим агентом. Данное изобретение также относится к применению другого терапевтического агента для лечения заболевания или состояния, опосредованного белком ВЕТ, где лекарственное средство вводят с соединением формулы (I).

Данное изобретение также относится к соединению формулы (I) для применения в способе лечения заболевания или состояния, опосредованного белком ВЕТ, где соединение формулы (I) получают для введения с другим терапевтическим агентом. Данное изобретение также относится к другому терапевтическому агенту, для применения в способе лечения заболевания или состояния, опосредованного белком ВЕТ, где другой терапевтический агент получают для введения с соединением формулы (I). Данное изобретение также относится к соединению формулы (I) для применения в способе лечения заболевания или состояния, опосредованного белком ВЕТ, где соединение формулы (I) вводят с другим терапевтическим агентом. Данное изобретение также относится к другому терапевтическому агенту, для применения в способе лечения заболевания или состояния, опосредованного белком ВЕТ, где другой терапевтический агент вводят с соединением формулы (I).

- 14 028035

Данное изобретение также относится к применению соединения формулы (I) для лечения заболевания или состояния, опосредованного белком ВЕТ, где пациента предварительно (например, в течение 24 ч) подвергали лечению с помощью другого терапевтического агента. Данное изобретение также относится к применению другого терапевтического агента для лечения заболевания или состояния, опосредованного белком ВЕТ, где пациента предварительно (например, в течение 24 ч) подвегали лечению с помощью соединения формулы (I).

В одном воплощении другой терапевтический агент представляет собой противораковый агент.

В дальнейшем воплощении другой терапевтический агент представляет собой модулятор мишени в области эпигенетики, такой как ингибитор гистондеацетилазы (НПЛС) или ингибитор гистонметилтрансферазы (НМТ).

Общие схемы.

Типично, соединения формулы (I) можно получать в соответствии со схемами, представленными ниже.

Соединения формулы (I), где С представляет собой

Е⁴ и К¹, К², К³, К⁴, К⁵, К⁶ и К⁷ имеют значения, как описано в воплощении 1, можно получать, как описано на схеме 1.

где К означает -Н или -8-(пиридин-2-ил);

X означает -ОН или С1;

М представляет собой подходящий металл, такой как I з или Να;

ЬС представляет собой подходящую удаляемую группу, такую как мезилат; и

РС представляет собой подходящую защитную группу кислоты, такую как метил.

Схема 1 иллюстрирует один способ получения соединений согласно данному изобретению (например, примеры 1-7 и 10-17). Карбоновую кислоту или хлорангидрид кислоты превращают с помощью 1,2-ди(пиридин-2-ил)дисульфана или пиридин-2-тиола в соответствующее сложноэфирное производное 2-тиопиридина, которое может быть введено во взаимодействие с 8-трет-бутилэтантиоатом в присутствии подходящего сильного основания (ΕΪΗΜΌ8, ΝαΗΜΌ8) до образования соответствующего сложного бета-кетотиоэфира.

Превращение вторичного спирта соответствующего производного 2-арил-2-гидроксиацетата в удаляемую группу, например (а) с помощью метансульфонилхлорида или ангидрида метансульфоновой кислоты в присутствии органического основания, такого как пиридин, (вместе с каталитическим количест- 15 028035 вом 4-диметиламинопиридина) или триэтиламин, или (Ь) с помощью 1-χΛορ-Ν,Ν,2триметилпропениламина, с последующим введением во взаимодействие с соответствующим амином, при температуре между -20 и 50°С, приводит к введению фрагмента 5-амино-1-метилпиридин-2(1Н)-она, содержащему различные ^-заместители в положении С-3. Полученный вторичный амин вводят во взаимодействие с производным сложного β-кето-тиоэфира в присутствии трифторацетата серебра(1), при температуре окружающей среды, до получения соответствующего β-кето-тиоамидного производного. Последующая конденсация Клайзена до циклизованного бета-дикетона может быть осуществлена в щелочных условиях (а) или с помощью С§Е в ДМФА, при температуре между 20 и 100°С, или (Ь) с помощью этоксида натрия в ЕЮН, при повышенной температуре. Производное пиразоло-пирролидинона обычно получают путем конденсации производного бета-дикетона с соответствующим гидразином, содержащим К⁴, в растворителе, таком как метанол или этанол, при повышенной температуре, предпочтительно, между 60 и 150°С. Для конденсации производного бета-дикетона с содержащими арильные или гетероарильные группы гидразинами, конечной стадии дегидратации до пиразоло-пирролидинона можно способствовать путем добавления уксусной кислоты или комбинации из уксусной кислоты и сульфаминовой кислоты и осуществления при повышенной температуре, предпочтительно между 100 и 150°С, под воздействием микроволнового излучения.

Альтернативно, соединения формулы (I), где С, К¹, К², К³, К⁴, К⁵ и К⁶ имеют значения, как описано в воплощении 1, можно получать, как описано на схеме 2.

где X, М, ЬС и РС имеют значения, как определено на схеме 1.

Схема 2 иллюстрирует модификацию способа, представленного на схеме 1, для получения соединений согласно данному изобретению (например, примеры 8-9 и 18-21). Этот способ является подобным способу, описанному на схеме 1, за исключением того, что К⁴-заместитель вводят посредством реакции связывания Чан-Лама. Ν-незамещенное производное пиразолопирролидинона обрабатывают с помощью производного бороновой кислоты, содержащей К⁴, и подходящей соли Си(11), такой как Си(ОАс)₂, и пи- 16 028035 ридина, в подходящем растворителе, таком как ацетонитрил, при повышенных температурах, предпочтительно, между 60 и 80°С.

Данное изобретение далее включает любой вариант способов согласно настоящему изобретению, в случае которых промежуточный продукт, получаемый на любой их стадии, используют в качестве исходного вещества и осуществляют остальные стадии, или в случае которых исходные вещества образуются ίη δίΐιι при условиях реакции, или в случае которых компоненты реакции используют в форме их солей или оптически чистых веществ. Соединения согласно данному изобретению и промежуточные продукты можно также превращать друг в друга в соответствии со способами обычно известными квалифицированному специалисту в данной области.

Методы синтеза.

Следующие примеры предназначены для иллюстрации данного изобретения и не могут быть истолкованы как ограничивающие данное изобретение. Температуры указаны в градусах Цельсия. Если не указано иным образом, все выпаривания осуществляют при пониженном давлении, типично, между примерно 15 и 100 мм рт.ст. (= 20-133 мбар). Структуры конечных продуктов, промежуточных продуктов и исходных веществ подтверждены с помощью стандартных аналитических методов, например микроанализ и спектральные характеристики, например МС, ИК, ЯМР. Используемые аббревиатуры являются таковыми, стандартными в данной области.

Все исходные вещества, элементы структуры, реагенты, кислоты, основания, дегидратирующие агенты, растворители и катализаторы, используемые для синтеза соединений согласно настоящему изобретению, являются или коммерчески доступными или их можно получать с помощью методов органического синтеза, известных квалифицированному специалисту в данной области. Далее, соединения согласно настоящему изобретению можно получать с помощью методов органического синтеза, известных квалифицированному специалисту в данной области, как представлено в следующих примерах.

Аббревиатуры:

САИ - ацетонитрил;

Ас₂О - ангидрид уксусной кислоты; ад. - водный (водн.);

Аг - аргон;

Вос - трет-бутоксикарбонил;

Вгше - насыщенный (при комнатной температуре) раствор хлорида натрия;

Ьг.8. - уширенный синглет (уш.с);

СН₂С1₂ - дихлорметан;

Си(ОАс)₂ - ацетат меди (II); ά - дублет (д);

И1РЕА - диизопропилэтиламин;

ИМАР - 4-диметиламинопиридин;

ИМР - Ν,Ν-диметилформамид (ДМФА);

ИМ§0 - диметилсульфоксид (ДМСО); ед. - эквивалент (экв);

ΕδΙ-Μδ - масс-спектрометрия с ионизацией электрораспылением;

ЕЮАс - этилацетат;

ЕЮН - этанол; ч - час(ы);

Н20 - вода;

К₂С0₃ - карбонат калия;

К₃Р0₄ - фосфат калия;

ЬС-Μδ - масс-спектрометрия с жидкостной хроматографией;

ЫНМИ8 - гексаметилдисилазид лития; т - мультиплет (м);

МеОН - метанол;

М^0₄ - сульфат магния; мин - минута(ы); мл - миллилитр(ы);

МС - масс-спектрометрия;

М5₂0 - ангидрид метансульфоновой кислоты;

МА - микроволновое излучение;

ИаНС0₃ - бикарбонат натрия;

Иа0Н - гидроксид натрия;

Να₂δ0₄ - сульфат натрия;

ИН₄С1 - хлорид аммония;

ЯМР - ядерный магнитный резонанс; ррт - частей на миллион (ч./млн);

- 17 028035

К® - фактор разделения фронтов; г! - (или КТ) комнатная температура; δ - синглет (с);

δαί - насыщенный (насыщ.);

ЗТС - сверхкритическая флюидная хроматография; ί - триплет (т);

1_К - время удерживания;

ТТЛ - трифторуксусная кислота (ТФУК);

ТНТ - тетрагидрофуран (ТГФ);

ТигЪоОпдпагб -изо-РгМ§С1-Ь1С1;

ИРЬС - сверхэффективная жидкостная хроматография.

Метод ИРЬС.

ИРЬС 1: колонка: Асцийу ИРЬС НЗЗ Т3 С18, 1,7 мкм, размером 2,1x50 мм, расход: 1,0 мл/мин. Температура колонки: 30°С. Градиент: 5-100% В, в течение 1,5 мин, 100% В, в течение 1 мин, А = вода + 0,1% ТФУК, В = АСЫ + 0,1% ТФУК.

Метод ЬС-МЗ.

ЬС-МЗ 1.

Колонка: ^αϊΒΓδ Асцийу НЗЗ Т3, 1,8 мкм, размером 2,1x50 мм, температура термостата: 60°С. Расход: 1,0 мл/мин. Градиент: 5-98% В, в течение 1,40 мин, затем - 98% В, в течение 0,40 мин, от 98 до 5% В, в течение 0,10 мин, 5% В, в течение 0,10 мин; А = вода + 0,05% муравьиной кислоты + 3,75 мМ ацетата аммония, В = АСЫ + 0,04% муравьиной кислоты. Детектирование с помощью спектрофотометрического анализа в видимой и ультрафиолетовой областях света, ϋν/νΐδ (ΌΑΌ), ΕδΙ (+/-). Диапазон массспектрометра: 100-1200 Да.

Пример 1. 6-(4-Хлорфенил)-3-циклопропил-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1метил-5,6-дигидропирроло [3,4-с]пиразол-4( 1Н)-он

К раствору 5-(4-хлорфенил)-3-(циклопропанкарбонил)-1-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин3-ил)пирролидин-2,4-диона (160 мг, 0,4 ммоль) в МеОН (1,5 мл) добавляют метилгидразин (38 мг, 0,8 ммоль) и реакционную смесь перемешивают под воздействием микроволнового излучения в течение 2,5 ч при температуре 110°С. Реакционную смесь концентрируют и оставшееся масло очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/Е1ОАс/МеОН = от 75:25:5 до 0:100:10), получая указанный в заголовке продукт (110 мг, выход 67%) в виде пены светло-желтого цвета.

!_К: 0,881 мин (ИРЬС 1); !_К: 0,89 мин (ЬС-МЗ 1);

ΕδΙ-МЗ: 409/411 [М+Н]+ (ЬС-МЗ 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ ррт 0,94-1,12 (м, 4Н), 1,93 (с, 3Н), 1,98 (м, 1Н), 3,35 (с, 3Н), 3,43 (с, 3Н),6,23 (с, 1Н), 7,28-7,34 (м, 3Н), 7,44 (д, 1=8,4 Гц, 2 Н), 7, 63 (д, 1=2,7 Гц, 1н).

Стадия 1.1. Этил-2-(4-хлорфенил)-2-((1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)амино)ацетат

К раствору этил-2-(4-хлорфенил)-2-гидроксиацетата (3,22 г, 15 ммоль) и ΝΕί₃ (10,45 мл, 75,0 ммоль) в СН₂С1₂ (60 мл) при температуре 0°С добавляют Мδ₂О (5,23 г, 30,0 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивают в течение 0,5 ч при температуре 0°С. К реакционной смеси добавляют 5-амино-1,3диметилпиридин-2(1Н)-он (1,946 г, 12,00 ммоль) и реакционную смесь оставляют нагреваться до комнатной температуры. После нагревания в течение 16 ч при температуре 40-45°С реакционную смесь добавляют к насыщенному раствору ЫаНСО₃ и Е1ОАс и продукт экстрагируют с помощью Е1ОАс. Объединенные экстракты промывают небольшим количеством насыщенного раствора хлорида натрия, сушат над МдЗО₄, отфильтровывают и концентрируют. Сырой продукт очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/Е1ОАс/МеОН = от 80:20:2 до 0:100:10), получая указанный в заголовке продукт (3,0 г, выход 59%) в виде пены коричневого цвета.

1к: 0,939 мин (ИРЬС 1); ί_κ: 0,93 мин (ЬС-МЗ 1);

ΕδΙ-МЗ: 335/337 [М+Н]+ (ЬС-МЗ 1);

К_г = 0,30 (Е1ОАс/МеОН = 9:1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ ррт 1,14 (т, 1=7,1 Гц, 3Н),2,05 (с, 3Н), 3,31 (с, 3Н),4,01-4,23 (м, 2Н),

- 18 028035

4,63 (м, 1Н), 6,11 (уш. с, 1Н), 6,88 (уш. с, 1Н), 7,24-7,35 (м, 4Н).

Стадия 1.2. Этил-2-(4-хлорфенил)-2-(3-циклопропил-У(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3ил)-3-оксопропанамидо)ацетат

К раствору этил-2-(4-хлорфенил)-2-((3,8-диметил[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридин-6-ил)амино)ацетата (стадия 1.1) (1,005 г, 3,0 ммоль) и 8-трет-бутил-3-циклопропил-3-оксопропантиоата (стадия 1.5) (785 мг, 3,9 ммоль) в ТГФ (25 мл) добавляют трифторацетат серебра (861 мг, 3,9 ммоль), при комнатной температуре. Полученный раствор темно-коричневого цвета перемешивают в течение 0,5 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь отфильтровывают через целит, фильтрат концентрируют и полученный сырой продукт очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/ЕЮАс = от 90:10 до 0:100), получая указанный в заголовке продукт (1,13 г, выход 82%) в виде пены красноватого цвета.

К_г = 0,18 (ЕЮАс);

Ю 0,955 мин (иРЬС 1); ΐ_Η: 0,94 мин (ЬС-М8 1);

Е8ГМ8: 445/447 [М+Н]+ (ЬС-М8 1).

Стадия 1.3. 5-(4-Хлорфенил)-3-(циклопропанкарбонил)-1-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин3-ил)пирролидин-2,4-дион

К раствору этил-2-(4-хлорфенил)-2-(3-циклопропил^-(3,8-диметил[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридин6-ил)-3-оксопропанамидо)ацетата (стадия 1,2) (1,0 г, 2,25 ммоль) в ДМФА (10 мл) в атмосфере аргона добавляют СзР (0,7 г, 2 ммоль) при комнатной температуре и полученный раствор темно-коричневого цвета перемешивают в течение 16 ч при температуре 60°С. Реакционную смесь концентрируют и остаток добавляют к 1н. холодному раствору Н₂8О₄ и продукт экстрагируют с помощью ЕЮАс. Объединенные экстракты промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над Мд8О₄, отфильтровывают, концентрируют и высушивают при температуре 60°С, получая указанный в заголовке продукт (625 мг, выход 70%) в виде пены желтого цвета.

ί_κ: 1,083 мин (иРЬС 1); ί_κ: 0,86 мин (ЬС-М8 1);

Е8ГМ8: 399/401 [М+Н]+ (ЬС-М8 1).

Стадия 1.4. 8-Пиридин-2-илциклопропанкарботиоат

К раствору пиридин-2-тиола (29,2 г, 260 ммоль) в ТГФ (260 мл) в атмосфере аргона добавляют циклопропанкарбонилхлорид (27,7 г, 260 ммоль) при комнатной температуре и реакционную смесь перемешивают при температуре 25°С в течение 0,5 ч. Осажденный гидрохлорид отфильтровывают и промывают смесью Е1₂О-гексан (1:4) и гексаном. Осадок светло-желтого цвета добавляют к насыщенному раствору Να 1СО₃ и ЕЮАс и продукт экстрагируют с помощью ЕЮАс. Объединенные экстракты промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над Мд8О₄, отфильтровывают и концентрируют, получая указанное в заголовке соединение (37,3 г, выход 80%) в виде масла желтого цвета.

ί_κ: 0,79 мин (ЬС-М8 1);

Е8ГМ8: 180 [М+Н]+ (ЬС-М8 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, СПС1₃) δ ррт 0,83-1,03 (м, 2Н), 1,09-1,28 (м, 2Н), 1,91-2,16 (м, 1Н), 7,10-7,28 (м, 1Н), 7,60-7,74 (м, 1Н), 8,55 (дд, 1=4,8, 1,1 Гц, 1Н).

- 19 028035

Стадия 1.5. 8-трет-Бутил-3-циклопропил-3-оксопропантиоат

К раствору 8-пиридин-2-илциклопропанкарботиоата (стадия 1,4) (16,5 г, 92 ммоль) в ТГФ (250 мл) в атмосфере аргона добавляют 1М раствор ΤΪΗΜΌ8 в ТГФ (229 мл, 229 ммоль) при температуре менее -70°С. К реакционной смеси добавляют раствор 8-трет-бутилэтантиоата (14,0 мл, 96 ммоль) в ТГФ (30 мл) при температуре ниже -70°С. После перемешивания в течение 0,5 ч при температуре -78°С реакционную смесь медленно нагревают до температуры -50°С в течение периода времени, составляющего 1 ч. После завершения этого процесса реакционную смесь добавляют к 300 мл холодной 1н. Н₂8О₄ и льда и продукт экстрагируют с помощью ЕЮАс. Объединенные экстракты промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над Мд8О₄, отфильтровывают и концентрируют. Сырое масло повторно растворяют в Е1₂О, поддерживая температуру 0°С в течение 14 ч, отфильтровывают через небольшой слой силикагеля и снова концентрируют, получая указанный в заголовке продукт (18,3 г, выход 95%) в виде масла желтого цвета.

1,089 мин (иРБС 1); 1,06 мин (БС-М8 1);

Е81-М8: 201 [М+Н]+ (БС-М8 1);

К_г = 0,59 (ЕЮАс);

¹Н-ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ ррт 0,80 (м, 2Н), 0,91-0,99 (м, 2Н), 1,33 (с, 9Н), 1,92 (м, 1Н), 3,53 (с,

2Н).

Пример 2. (К)-6-(4-Хлорфенил)-3-циклопропил-5-(3,8-диметил[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридин-6-ил)1-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он

Указанное в заголовке соединение (33 мг, выход 45%) получают энантиомерно чистым (>99% ее) в виде твердого вещества белого цвета, после хиральной препаративной хроматографии (система: 8БС-Р1сБаЬ-Ргер 100; колонка: СЫга1рак 1А, 5 мкм, размером 20x250 мм; мобильная фаза: гептан/этанол/СН₂С1₂ = 60:20:20 (изократическая); расход: 10 мл/мин; детектирование УФ: 245 нм) рацемической смеси 6-(4-хлорфенил)-3-циклопропил-5 -(1,5-диметил-6-оксо- 1,6-дигидропиридин-3-ил)-1 метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-она (пример 1) (72 мг, 0,176 ммоль) и растирания полученного остатка в Е1₂О.

1_К: 0,88 мин (БС-М8 1);

Е81-М8: 409/411 [М+Н]+ (БС-М8 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ ррт 0,94-1,12 (м, 4Н), 1,93 (с, 3Н), 1,98 (м, 1Н), 3,35 (с, 3Н), 3,43 (с, 3Н), 6,23 (с, 1Н), 7,28-7,34 (м, 3Н), 7,44 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,63 (д, 1=2,7 Гц, 1Н).

Пример 3. 6-(4-Хлорфенил)-3-циклопропил-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1-(2гидроксиэтил)-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он

Указанное в заголовке соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, при использовании 5-(4-хлорфенил)-3-(циклопропанкарбонил)-1 -(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3ил)пирролидин-2,4-диона (стадия 1.3) и 2-гидразинилэтанола.

1_К: 0,80 мин (БС-М8 1);

Е81-М8: 439/441 [М+Н]+ (БС-М8 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ ррт 0,95-1,15 (м, 4Н), 1,92 (с, 3Н), 1,95-2,04 (м, 1Н), 3,35 (с, 3Н), 3,42-3,61 (м, 4Н), 3,79-3,89 (м, 1Н), 4,97 (т, 1=5,1 Гц, 1Н), 5,77 (с, 1Н), 6,18 (с, 1Н), 7,29 (д, 1=8,4 Гц, 2н), 7,35 (д, 1=2,1 Гц, 1Н), 7,43 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,67 (д, 1=2,5 Гц, 1Н).

- 20 028035

Пример 4. 6-(4-Хлорфенил)-3-циклопропил-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1-(2метоксиэтил)-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он

Указанное в заголовке соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, при использовании 5-(4-хлорфенил)-3-(циклопропанкарбонил)-1-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3ил)пирролидин-2,4-диона (стадия 1.3) и (2-метоксиэтил)гидразина.

1_К: 0,93 мин (ЬС-Μδ 1);

ΕδΙ-Μδ: 475/477 [М+Н]+ (ЬС-Μδ 1);

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-ф») δ ррт 0,91-1,14 (м, 4 Н) 1,92 (с, 3Н),1,94-2,04 (м, 1Н), 3,11 (с, 3Н), 3,35 (с, 3Н), 3,41 (т, 1=5,3 Гц, 2Н), 3,67 (дт, 1=14,4, 5,9 Гц, 1Н), 3,92 (дт, 1=14,4, 4,7 Гц, 1Н), 6,16 (с, 1Н), 7,29 (д, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,34 (д, 1=1,9 Гц, 1Н), 7,43 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,66 (д, 1=2,5 Гц, 1 Н).

Пример 5. 6-(4-Хлорфенил)-3-циклопропил-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1-(1метил-1Н-пиразол-5-ил)-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он

Указанное в заголовке соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, при использовании 5-(4-хлорфенил)-3-(циклопропанкарбонил)-1-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3ил)пирролидин-2,4-диона (стадия 1.3) и 5-гидразинил-1-метил-1Н-пиразола.

ΐ_κ: 0,93 мин (ЬС-Μδ 1);

ΕδΙ-Μδ: 475/477 [Μ+Η]+ (ЬС-Μδ 1);

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ ррт 1,03-1,27 (м, 4Н), 1,93 (с, 3Н), 2,06-2,16 (м, 1Н), 3,35 (с, 3Н), 3,49 (с, 3Н), 5,77 (с, 1Н), 6,07 (д, 1=2,1 Гц, 1Н), 6,37 (с, 1 Н), 7,14 (д, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,32 (д, 1=8,0 Гц, 2н), 7,35-7,39 (м, 1Н), 7,44 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 7,66 (д, 1=2,5 Гц, 1Н).

Пример 6. 5-(5-Хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-3-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он

Указанное в заголовке соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, при использовании 3 -ацетил-1 -(5-хлор-1 -метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3 -ил)-5 -(4-хлорфенил)пирролидин-2,4-диона (стадия 6.3) и гидразингидрата.

К_г = 0,26 (СН₂С1₂МеОН = 19:1);

1_К: 0,73 мин (ЬС-Μδ 1);

ΕδΙ-Μδ: 389/391 [М+Н]+ (ЬС-Μδ 1);

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ ррт 2,53 (с, 3Н), 3,47 (с, 3Н),5,77 (с, 1Н), 6,37 (с, 1Н) 7,36 (д, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,43 (д, 1=8,0 Гц, 2Н), 8,00 (с, 2Н).

Стадия 6.1. Этил-2-((5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)амино)-2-(4-хлорфенил)ацетат

Указанное в заголовке соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, при использовании этил-2-(4-хлорфенил)-2-гидроксиацетата и 5-амино-3-хлор-1-метилпиридин-2(1Н)-она.

К_г = 0,58 (ЕЮЛсЖеОН = 9:1); ΐ_κ: 0,96 мин (ЬС-Μδ 1);

- 21 028035

Е81-М8: 353/355 [М-Н]+ (БС-М8 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, СВС1₃) δ ррт 1,21 (т, 1=7,2 Гц, 3Н), 3,07 (с, 1Н), 3,55 (с, 3Н),4,28 (м, 3Н), 7,09 (д, 1=2,7 Гц, 1Н) 7,34-7,40 (д, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,43 (д, 1=2,8 Гц, 1Н), 7,65-7,71 (д, 1=8,3 Гц, 2Н).

Стадия 6.2. Этил-2-Ш-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3-оксобутанамидо)-2-(4хлорфенил)ацетат

Указанное в заголовке соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, при использовании этил-2-((5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)амино)-2-(4-хлорфенил)ацетата (стадия 1.1) и 8-трет-бутил-3-оксобутантиоата (стадия 1.5).

Кр = 0,46 (гексан/ацетон = 1:1);

!_К: 0,94 мин (БС-М8 1);

Е81-М8: 439/441 [М+Н]+ (БС-М8 1).

Стадия 6.3. 3-Ацетил-1 -(5-хлор-1 -метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-5-(4-хлорфенил)пирролидин-2,4-дион

Указанное в заголовке соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, при использовании этил-2-Ш-(5-хлор-1 -метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3-оксобутанамидо)-2-(4хлорфенил)ацетата (стадия 6.2).

!к: 0,65 мин (БС-М8 1);

Е81-М8: 393/395 [М+Н]+ (БС-М8 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, СВС1₃) δ ррт 2,44 (с, 3Н), 3,49 (с, 3Н),4,96 (с, 1Н), 7,11 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,31 (д, 1=8,5 Гц, 2Н), 7,49 (д, 1=2,7 Гц, 1Н), 7,54 (д, 1=2,8 Гц, 1н), 7,96 (с, 1Н).

Пример 7а. 5-(5-Хлор-1 -метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-1 -(2-метоксипиридин-3-ил)-3 -метил-5,6-дигидропирроло [3,4-с]пиразол-4(1 Н)-он.

Пример 7Ь. 5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2метоксипиридин-3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он

К раствору 5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-3-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-она (пример 6) (100 мг, 0,257 ммоль), (2-метоксипиримидин-5ил)бороновой кислоты (79 мг, 0,514 ммоль) и пиридина (0,042 мл, 0,514 ммоль) в АСN (2 мл), в атмосфере аргона, добавляют Си(ОАс)₂ (93 мг, 0,514 ммоль) и молекулярные сита (50 мг). Реакционную смесь перемешивают при температуре 65°С и каждые 0,5 ч добавляют по 2 экв. (2-метоксипиримидин-5ил)бороновой кислоты и по 1 экв. пиридина, пока реакция не завершится. Реакционную смесь добавляют к смеси льда с водой и продукт экстрагируют с помощью СН₂С1₂. Объединенные экстракты промывают Н₂О, сушат над Мд8О₄, отфильтровывают и концентрируют. Сырой продукт очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/Е!ОАс/МеОН = от 80:20:2 до 0:100:10), получая смесь региоизомеров, которую разделяют с помощью 8РС (диоксид кремния (250x30 мм, 5 мкм), градиент: 17-22% В, в течение 9 мин, А: 8сСО₂, В: МеОН; расход: 100 мл/мин), получая указанные в заголовке продукт 7а (28 мг, выход 22%) в виде твердого вещества белого цвета:

!_К: 0,979 мин (иРБС 1); !_К: 0,97 мин (БС-М8 1);

Е81-М8: 496/498 [М+Н]+ (БС-М8 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ ррт 2,44 (с, 3Н), 3,45 (с, 3Н), 3,96 (с, 3Н),6,28 (с, 1Н), 7,00-7,07 (м, 3Н), 7,23 (д, 1=8,4 Гц, 2н), 7,77 (дд, 1=7,7; 1,7 Гц, 1Н), 7,90-7,95 (м, 2Н), 8,15 (дд, 1=5,0, 1,7 Гц, 1Н), и продукт 7Ь (9 мг, выход 7%) в виде твердого вещества светло-желтого цвета.

- 22 028035 ί_κ: 0,980 мин (АТ1.С I); ί_κ: 0,96 мин (ЬС-Μδ 1);

ΕδΡΜδ: 496/498 [М+Н]+ (ЬС-Μδ 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ ррт 2,30 (с, 3Н), 3,47 (с, 3Н), 3,91 (с, 3Н),6,35 (с, 1Н), 7,20 (дд, 1=7,6, 5,0 Гц, 1Н), 7,35 (д, 1=9,4 Гц, 2Н), 7,42 (д, 1=9,4 Гц, 2Н), 7,90 (дд, 1=7,6, 1,7 Гц, 1Н), 7,97-8,02 (м, 2Н), 8,00 (с, 2Н), 8,37 (дд, 1=5,0; 1,7 Гц, 1Н).

Пример 8а. 5-(5-Хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-1-(2метоксипиримидин-5-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он.

Пример 8Ь. 5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2метоксипиримидин-5-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он

Указанные в заголовке соединения получают по аналогии с методикой, описанной в примерах 7а и 7Ь, при использовании 5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-3-метил5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-она (пример 6) и (2-метоксипиримидин-5-ил)бороновой кислоты. Смесь региоизомеров разделяют с помощью 5РС (диоксид кремния (250x30 мм, 5 мкм), градиент: 2126% В, в течение 11 мин, А: §сСО₂, В: МеОН; расход: 100 мл/мин), получая указанные в заголовке продукт 8а (19 мг, выход 15%) в виде твердого вещества белого цвета:

1_К: 0,916 мин (иРЬС 1); 1_К: 0,91 мин (ЬС-Μδ 1);

ΕδΡΜδ: 497/499 [М+Н]+ (ЬС-Μδ 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ ррт 2,46 (с, 3Н), 3,46 (с, 3Н), 3,93 (с, 3Н), 6,78 (с, 1Н), 7,28 (д, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,36 (д, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,85 (с, 2Н), 8,75 (с, 2Н), и продукт 8Ь (41 мг, выход 32%), в виде твердого вещества белого цвета.

1_К: 0,897 мин (АТ1.С 1); 1_К: 0,89 мин (ЬС-Μδ 1);

ΕδΡΜδ: 497/499 [М+Н]+ (ЬС-Μδ 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ ррт 2,53 (с, 3Н), 3,47 (с, 3Н),4,00 (с, 3Н), 6,37 (с, 1Н), 7,36 (д, 1=8,8 Гц, 2Н), 7,43 (д, 1=8,8 Гц, 2Н), 7,99-8,01 (м, 2Н), 8,88 (с, 2Н).

Пример 9. 6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он

Указанное в заголовке соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, при использовании 3-ацетил-5-(4-хлорфенил)-1-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)пирролидин2,4-диона (стадия 9.2) и гидразингидрата.

К_г = 0,33 (СН₂С1₂/ΜеОН = 19:1); 1_К: 0,69 мин (ЬС-Μδ 1);

ΕδΡΜδ: 369/371 [М+Н]+ (ЬС-Μδ 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а6) δ ррт 1,91-1,96 (м, 3Н), 2,42 (с, 3Н), 3,31 (с, 1Н), 6,15 (с, 1Н), 7,25 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,38 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,43 (уш. с, 1Н), 7,71 (д, 1=2,4 Гц, 1Н), 13,19 (с, 1Н).

Стадия 9.1. Этил-2-(4-хлорфенил)-2-(Х-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3оксобутанамидо)ацетат

Указанное в заголовке соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, при использовании этил-2-(4-хлорфенил)-2-((1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3 -ил)амино)ацетата (стадия 1.1) и 5-трет-бутил-3-оксобутантиоата.

К = 0,33 (гексан/ацетон = 1:1); 1_К: 0,89 мин (ЬС-Μδ 1);

ΕδΡΜδ: 417/419 [М+Н]+ (ЬС-Μδ 1).

- 23 028035

Стадия 9.2. Этил-2-(4-хлорфенил)-2-(П-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3оксобутанамидо)ацетат

Указанное в заголовке соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, при использовании этил-2-(4-хлорфенил)-2-(П-( 1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3-оксобутанамидо)ацетата (стадия 9.1).

Ю 0,65 мин (ЬС-М8 1);

Е81-М8: 373/375 [М+Н]+ (ЬС-М8 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, СПС1₃) δ ррт 2,02 (с, 3Н), 2,40-2,45 (м, 3Н), 3,43 (с, 3Н), 4,98 (с, 1Н), 7,12 (д, 1=9,0 Гц, 2Н), 7,29 (д, 1=9,0 Гц, 2Н), 7,40-7,44 (м, 2Н), 7,95 (с, 1Н).

Пример 10. 6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1,3-диметил-5,6дигидропирроло [3,4-с]пиразол-4( 1 Н)-он

Указанное в заголовке соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, при использовании 3-ацетил-5-(4-хлорфенил)-1 -(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)пирролидин2,4-диона (стадия 9.2) и метилгидразина.

К_г = 0,33 (ЕЮЛс/МеОН = 4:1);

Ю 0,77 мин (ЬС-М8 1);

Е81-М8: 383/385 [М+Н]+ (ЬС-М8 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ ррт 1,93 (с, 3Н), 2,30 (с, 3Н), 3,36 (с, 3Н), 3,46 (с, 3Н), 6,25 (с, 1Н), 7,25-7,36 (м, 3Н), 7,44 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,64 (д, 1=2,7 Гц, 1Н).

Пример 11. 6-(4-Хлорфенил)-1-циклопропил-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3метил-5,6-дигидропирроло [3,4-с]пиразол-4( 1 Н)-он

Указанное в заголовке соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 13, при использовании 3-ацетил-5-(4-хлорфенил)-1 -(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)пирролидин-2,4-диона (стадия 9.2) и циклопропилгидразингидрохлорида.

К_г = 0,26 (ЕЮЛс/МеОН = 9:1);

Ю 0,86 мин (ЬС-М8 1);

Е81-М8: 409/411 [М+Н]+ (ЬС-М8 1);

¹Н-ЯМР (600 МГц, ДМСО-06) δ ррт 0,57-0,83 (м, 3Н), 1,10 (м, 1Н), 1,92 (с, 3Н), 2,28 (с, 3Н), 3,11 (м, 1Н) 3,35 (с, 3Н), 6,31 (с, 1Н), 7,32 (д, 1=8,0 Гц, 2Н), 7,37 (уш. с, 1Н), 7,41 (д, 1=8,0 Гц, 2Н), 7,64 (уш. с, 1Н).

Пример 12. 6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1 -изопропил-3метил-5,6-дигидропирроло [3,4-с]пиразол-4( 1 Н)-он

Указанное в заголовке соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, при использовании 3-ацетил-5-(4-хлорфенил)-1 -(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)пирролидин2,4-диона (стадия 9.2) и изопропилгидразина.

К_г = 0,35 (ЕЮЛс/МеОН = 9:1);

- 24 028035 ί_κ: 0,91 мин (^^δ 1);

ΕδΙ^δ: 411/413 [М+Н]+ (ЬС^ 1);

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб) δ ррт 1,01 (д, 1=6,7 Гц, 4Н,) 1,21 (д, 1=6,6 Гц, 4Н), 1,93 (с, 3Н),2,32 (с, 3Н), 3,36 (с, 3Н), 4,03-4,14 (м, 1Н), 6,30 (с, 1Н), 7,31 (д, 1=8,5 Гц, 2Н), 7,35 (д, 1=1,6 Гц, 1Н), 7,44 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,64 (д, 1=2,69 Гц, 1Н).

Пример 13. 6-(4-Хлорфенил)-5-( 1,5-диметил-6-оксо- 1,6-дигидропиридин-3 -ил)-1 -(4-метоксифенил)3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он

К раствору (4-метоксифенил)гидразингидрохлорида (141 мг, 0,805 ммоль) и ΝΕί₃ (0,110 мл, 0,789 ммоль) в ЕЮН (8 мл) добавляют 3-ацетил-5-(4-хлорфенил)-1-(1,5-диметил-6-оксо-1,6дигидропиридин-3-ил)пирролидин-2,4-дион (стадия 9,2) (300 мг, 0,805 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 4 ч при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляют АсОН (4 мл) и сульфаминовую кислоту (117 мг, 1,21 ммоль) и смесь нагревают под воздействием микроволнового излучения в течение 2 ч при температуре 100°С и в течение 2 ч при температуре 120°С. Реакционную смесь концентрируют и остаток растворяют в насыщенном растворе ИаНС0₃ и экстрагируют с помощью ЕЮАс. Объединенные экстракты промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над М^0₄, отфильтровывают и концентрируют. Сырой продукт очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/ЕЮАс/Ме0Н = от 50:50:5 до 0:100:10), получая указанный в заголовке продукт (288 мг, выход 75%) в виде пены желтого цвета.

Щ = 0,45 (ЕЮАс/Ме0Н = 9:1);

1_К: 1,015 мин (ГР1.С 1); 1_К: 0,99 мин (ΓΟ^δ 1);

ΕδI-Μδ: 475/477 [М+Н]+ (ЬС^ 1);

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-бе) δ ррт 1,95 (с, 3Н), 2,43 (с, 3Н), 3,37 (с, 3Н), 3,75 (с, 3Н),6,71 (с, 1Н), 6,93 (д, 1=8,5 Гц, 2Н), 7,21 (д, 1=8,6 Гц, 2Н), 7,30 (д, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,37 (д, 1=1,5 Гц, 1Н), 7,45 (д, 1=7,9 Гц, 2Н), 7,63 (д, 1=2,6 Гц, 1Н).

Пример 14. 6-(4-Хлорфенил)-2-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6дигидропиридин-3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н) -он

Указанное в заголовке соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 13, при использовании 3-ацетил-5-(4-хлорфенил)-1-(1,5-диметил-6-оксо- 1,6-дигидропиридин-3-ил)пирролидин-2,4-диона (стадия 9.2) и 5-гидразинил-2,4-диметоксипиримидина (стадия 14.2).

К_г = 0,61 (СН2С12/Ме0Н = 9:1);

1_К: 0,88 мин (^^δ 1);

ΕδI-Μδ: 507/509 [М+Н]+ (ЬС^ 1);

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66) δ ррт 1,93 (с, 3Н), 2,41 (с, 3Н), 3,36 (с, 3Н), 3,84 (с, 3Н), 3,91 (с, 3Н),6,23 (с, 1Н), 7,06 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,30 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,37-7,42 (м, 1Н), 7,66-7,73 (м, 1Н), 8,35 (с, 1Н).

Стадия 14.1. ди-трет-Бутил-1-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)гидразин-1,2-дикарбоксилат

К перемешиваемому раствору 5-бром-2,4-диметоксипиримидина (400 г, 1,826 моль) в безводном ТГФ (3 л) в атмосфере аргона, охлажденному до температуры 0°С, по каплям добавляют ТигЬоОпдпагб (1,821 л, 2,37 моль). Полученную смесь перемешивают при температуре 0°С до тех пор, пока не прекратится экзотермическая реакция, затем оставляют нагреваться и перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. К смеси по каплям добавляют раствор ди-трет-бутилазодикарбоксилата в безводном ТГФ (1 л) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь медленно гасят с помощью насыщенного водного раствора ИН₄С1, разбавляют с помощью

- 25 028035

ЕЮАс и воды. Водную фазу экстрагируют с помощью ЕЮАс, объединенные органические экстракты промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над №₂5О₄, отфильтровывают и концентрируют. Полученное масло желтого цвета растворяют в гексане и суспензию перемешивают при температуре 0°С в течение 3 ч. Осадок отфильтровывают и высушивают, получая первую партию кристаллов белого цвета. Маточный раствор концентрируют и очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, получая вторую порцию кристаллов белого цвета. Эти две порции объединяют, получая указанный в заголовке продукт (507 г, 1,369 моль, выход 75%) в виде кристаллов белого цвета.

ί_κ: 1,03 мин (БС-М5 1);

ЕМ-М5: 371 [М+Н]+; ЕМ-М5: 369 [М-Н]+ (БС-М5 1).

Стадия 14.2. 5-Гидразинил-2,4-диметоксипиримидин

К раствору ди-трет-бутил-1-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)гидразин-1,2-дикарбоксилата (стадия 14.1) (453 г, 1,223 моль) в МеОН (2,5 л) при температуре 0°С добавляют 4н. раствор НС1 в диоксане (2,5 л, 10 моль) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрируют и остаток обрабатывают 4н. раствором ΝΗ₃ (2 л), перемешивают в течение 1 ч и снова выпаривают. Высушенный остаток суспендируют в СН₂С1₂ (2 л), соли отфильтровывают и фильтрат концентрируют. Сырой продукт перемешивают с ЕьО (2 л) при температуре 0°С в течение 30 мин. Полученную суспензию снова отфильтровывают и фильтрат концентрируют, получая указанный в заголовке продукт (150 г, 864 ммоль, выход 70%) в виде твердого вещества светло-бежевого цвета.

ί_κ: 0,32 мин (БС-М5 1);

ЕМ-М5: 171,1 [М+Н]+ (БС-М5 1).

Пример 15. 6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3-(2-метоксипиридин-3 -ил)-1 -метил-5,6-дигидропирроло [3,4-с]пиразол-4( 1 Н)-он

Указанное в заголовке соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, при использовании 5-(4-хлорфенил)-1-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3-(2-метоксиникотиноил)пирролидин-2,4-диона (стадия 15.4) и метилгидразина.

ί_κ: 0,89 мин (БС-М5 1);

ЕМ-М5: 476/478 [М+Н]+ (БС-М5 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ ррт 1,94 (с, 3Н), 3,37 (с, 3Н), 3,59 (с, 3Н), 3,92 (с, 3Н), 6,36 (с, 1Н), 7,12 (дд, 1=7,4, 4,9 Гц, 1Н), 7,33-7,41 (м, 3Н), 7,47 (д, 1=8,7 Гц, 2Н), 7,69 (д, 1=2,7 Гц, 1Н), 8,24 (дд, 1=4,9, 1,8 Гц, 1Н), 8,32 (дд, 1=7,4, 1,9 Гц, 1Н).

Стадия 15.1. 5-Пиридин-2-ил-2-метоксипиридин-3-карботиоат

К раствору 2-метоксиникотиновой кислоты (4,59 г, 30 ммоль) и 1,2-ди(пиридин-2-ил)дисульфана (6,74 г, 30 ммоль) в ТГФ (60 мл) в атмосфере аргона добавляют трифенилфосфин и реакционную смесь перемешивают в течение 6 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрируют и оставшееся масло очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/ЕЮАс = от 80:20 до 50:50), получая указанный в заголовке продукт (6,6 г, выход 74%) в виде твердого вещества белого цвета.

Κί=0,36 (гексан/ЕЮАс = 1:1);

ί_κ: 0,803 мин (иРЬС 1); ί_κ: 0,87 мин (БС-М5 1);

ЕМ-М5: 247 [М+Н]+ (БС-М5 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ ррт 4,05 (с, 3Н), 6,95 (дд, 1=7,58, 4,89 Гц, 1Н), 7,26 (ддд, 1=7,3, 4,9, 1,1 Гц, 1Н), 7,66 (д, 1=8,6 Гц, 1Н), 7,7 (тд, 1=7,8, 1,8 Гц, 1Н), 8,12 (дд, 1=7,6, 2,0 Гц, 1Н), 8,29 (дд, 1=4,9, 1,8 Гц, 1Н), 8,58-8, 64 (м, 1Н).

- 26 028035

Стадия 15.2. 8-трет-Бутил-3 -(2-метоксипиридин-3 -ил)-3 -оксопропантиоат

К раствору 8-пиридин-2-ил-2-метоксипиридин-3-карботиоата (1,11 г, 4,5 ммоль) в ТГФ (30 мл) в атмосфере аргона добавляют 1М раствор ΓίΗΜΌδ в ТГФ (13,5 мл, 15,5 ммоль), при температуре ниже 70°С. К этому раствору добавляют раствор 3-трет-бутилэтантиоата в ТГФ (3 мл), при температуре -78°С. После перемешивания в течение 15 мин при температуре -78°С, реакционную смесь выливают в 1н. водный раствор НС1 и продукт экстрагируют с помощью ЕЮЛе. Объединенные экстракты промывают насыщенным раствором НаНСО₃ и насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над Мд3О₄, отфильтровывают и концентрируют. Сырой продукт очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/ЕЮЛс/МеОН = от 50:50:5 до 0:100:10), получая указанный в заголовке продукт (288 мг, выход 75%) в виде бесцветного масла.

К_г = 0,45 (ЕЮЛе/МеОН = 9:1);

ί_κ: 1,221 мин (ГРИС 1); ί_κ: 1,14 мин (ЬС-М3 1);

Е3ГМ3: 268 [М+Н]+ (ЬС-М3 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, СПС1₃) δ ррт 1,41 (с, 3,5 Н), 1,47-1,51 (м, 5,5Н), 3,38 и 3,98 (с, 3Н), 4,10 (с, 1,2Н), 6,43-6,49 (м, 0,4Н), 6,87-6,97 (м, 1Н), 8,09-8,29 (м, 2Н), 13,38 (с, 0,4Н).

Стадия 15.3. Этил-2-(4-хлорфенил)-2-(У-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3-(2метоксипиридин-3-ил)-3-оксопропанамидо)ацетат

Указанное в заголовке соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, при использовании 3-трет-бутил-3-(2-метоксипиридин-3-ил)-3-оксопропантиоата (стадия 15.2) и 2-(4-хлорфенил)-2-((1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)амино)ацетата (стадия 1.1).

К_г = 0,42 (ЕЮЛс);

1_К: 1,00 мин и 1,22 мин (ЬС-М3 1);

Е3ГМ3: 512/514 [М+Н]+ (ЬС-М3 1).

Стадия 15.4. 5-(4-Хлорфенил)-1-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3-(2-метоксиникотиноил)пирролидин-2,4-дион

Указанное в заголовке соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, стадия 1.3, при использовании этил-2-(4-хлорфенил)-2-(У-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3(2-метоксипиридин-3-ил)-3-оксопропанамидо)ацетата (стадия 15.3).

ί_κ: 0,60 мин (ЬС-М3 1);

Е3ГМ3: 466/468 [М+Н]+ (ЬС-М3 1).

Пример 16. (К)-6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3-(2-метоксипиридин-3-ил)-1-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он

- 27 028035

Указанное в заголовке соединение (159 мг, выход 35%) получают энантиомерно чистым (98% ее) в виде твердого вещества белого цвета, после хиральной препаративной хроматографии (система: ЗРС-РхсЬаЬ-Ргер 100; колонка: СЫга1рак ΑΌ-Η, размером 50x250 мм; мобильная фаза: §еСО₂/МеОН = 40:60 (изократическая); расход: 80 мл/мин; детектирование УФ: 245 нм) рацемической смеси 6-(4хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3-(2-метоксипиридин-3-ил)-1-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-она (пример 15) (450 мг, 0,927 ммоль) и растирания полученного остатка в РьО.

ΐ_κ: 0,89 мин (ЬС-МЗ 1);

ЕЗЬМЗ: 476/478 [М+Н]+ (ЬС-МЗ 1);

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ ррт 1,94 (с, 3Н), 3,37 (с, 3Н), 3,59 (с, 3Н), 3,92 (с, 3Н), 6,36 (с, 1Н), 7,12 (дд, 1=7,4, 4,9 Гц, 1Н), 7,33-7,41 (м, 3Н), 7,47 (д, 1=8,7 Гц, 2Н), 7,69 (д, 1=2,7 Гц, 1Н), 8,24 (дд, 1=4,9, 1,8 Гц, 1Н), 8,32 (дд, 1=7,4, 1,9 Гц, 1Н.

Второй энантиомер, (З)-6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3-(2метоксипиридин-3-ил)-1-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он, получают энантиомерно чистым путем того же самого разделения (98% ее) в виде твердого вещества белого цвета (177 мг, выход 39%).

Пример 17а. 6-(4-Хлорфенил)-5 -(1,5-диметил-6-оксо- 1,6-дигидропиридин-3-ил)-1 -(2-метоксипиридин-3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он.

Пример 17Ь. 6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-2-(2метоксипиридин-3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он

Указанные в заголовке соединения 17а и 17Ь получают по аналогии с методикой, описанной в примере 7а, при использовании 5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-3метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-она (пример 6) и (2-метоксипиридин-3-ил)бороновой кислоты. Смесь региоизомеров разделяют с помощью ЗРС (диоксид кремния (250x30 мм, 5 мкм), изократическая смесь: 7% В, в течение 60 мин, А: §сСО₂, В: МеОН; расход: 100 мл/мин), получая указанные в заголовке продукт 17а в виде твердого вещества белого цвета:

И- = 0,44 (ЕЮАс/МеОН = 9:1);

ΐ_κ: 0,927 мин (иРЬС 1); ΐ_κ: 0,93 мин (ЬС-МЗ 1);

ЕЗЬМЗ: 476/478 [М+Н]+ (ЬС-МЗ 1);

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ ррт 1,93 (с, 3Н), 2,43 (с, 3Н), 3,37 (с, 3Н), 3,96 (с, 3Н), 6,22 (с, 1Н), 6,98-7,06 (м, 3Н), 7,23 (д, >8,1 Гц, 2Н), 7,36-7,40 (м, 1Н), 7,71 (д, 1=2,7 Гц, 1Н), 7,77 (дд, 1=7,7, 1,7 Гц, 1Н), 8,14 (дд, 1=4,9, 1,7 Гц, 1Н), и продукт 17Ь в виде твердого вещества белого цвета.

И- = 0,44 (ЕЮАс/МеОН = 9:1);

> 0,927 мин (иРЬС 1); > 0,93 мин (ЬС-МЗ 1);

ЕЗЬМЗ: 476/478 [М+Н]+ (ЬС-МЗ 1);

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ ррт 1,96 (с, 3Н), 2,30 (с, 3Н), 3,39 (с, 3Н), 3,91 (с, 3Н),6,30 (с, 1Н), 7,20 (дд, 1=7,6, 5,0 Гц, 1Н), 7,32 (д, 1=8,8 Гц, 2Н), 7,41 (д, >9,1 Гц, 2Н), 7,48 (м, 1Н), 7,77 (д, 1=2,7 Гц, 1Н), 7,89 (дд, 1=7,6, 1,7 Гц, 1Н), 8,37 (дд, 1=4,9; 1,8 Гц, 1Н).

Пример 18а. 6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3 -ил)-1 -(2-этоксипиридин-3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он.

Пример 18Ь. 6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-2-(2этоксипиридин-3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он

Указанные в заголовке соединения 18а и 18Ь получают по аналогии с методикой, описанной в примере 7, при использовании 5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-3метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-она (пример 6) и (2-этоксипиридин-3-ил)бороновой кислоты. Смесь региоизомеров разделяют с помощью ЗРС (диоксид кремния (250x30 мм, 5 мкм), градиент: 18-23% В, в течение 11 мин, А: §сСО₂, В: МеОН; расход: 100 мл/мин), получая указанные в заголовке

- 28 028035 продукт 18а в виде твердого вещества белого цвета:

К_г = 0,49 (ЕЮАс/МеОН = 9:1);

Ю 0,992 мин (иРЬС 1); ΐ_Η: 0,99 мин (ЬС-М8 1);

Е8РМ8: 490/492 [М+Н]+ (ЬС-М8 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ ррт 1.32 (т, 1=8,1 Гц, 3Н) 1,92 (с, 3Н), 2,42 (с, 3Н), 3,36 (с, 3Н),4,36 (м, 1Н) 4,43 (м, 1Н), 6,13 (с, 1Н), 6,96-7,06 (м, 3Н), 7,20 (д, 1=8,1 Гц, 2Н), 7,33 (м, 1Н), 7,66 (д, 1=2,7 Гц, 1Н), 7,71 (дд, 1=7,7; 1,7 Гц, 1Н), 8,13 (м, 1Н), и продукт 18Ь в виде твердого вещества белого цвета:

К_г = 0,46 (ЕЮАс/МеОН = 9:1);

Ю 1,006 мин (иРЬС 1); Ю 0,99 мин (ЬС-М8 1);

Е8РМ8: 490/492 [М+Н]+ (ЬС-М8 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ ррт 1,24 (т, 1=8,1 Гц, 3Н),1,95 (с, 3Н), 2,31 (с, 3Н), 3,38 (с, 3Н),4,37 (ς, 1=8,1 Гц, 2Н) 6,29 (с, 1Н), 7,16 (м, 1Н), 7,32 (д, 1=8,1 Гц, 2Н), 7,39 (д, 1=8,1 Гц, 2Н), 7,47 (м, 1Н), 7,76 (м, 1Н), 7,85 (м, 1Н), 8,33 (м, 1Н).

Пример 19. 6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1-(2-фторпиридин-3ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он

Указанное в заголовке соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 7, при использовании 5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-3-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-она (пример 6) и (2-фторпиридин-3-ил)бороновой кислоты.

К_г = 0,54 (ЕЮАс/МеОН = 19:1);

0,886 мин (иРЬС 1); Ю 0,89 мин (ЬС-М8 1);

Е8РМ8: 464/466 [М+Н]+ (ЬС-М8 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ ррт 1,93 (с, 3Н), 2,45 (с, 3Н), 3,35 (с, 3Н),6,44 (с, 1Н), 7,13 (д, 1=8,1 Гц, 2Н), 7,24 (д, 1=8,1 Гц, 2Н), 7,41 (м, 1Н), 7,46 (дд, 1=7,7, 1,7 Гц, 1Н), 7,73 (м, 1Н) 8,09 (м, 1Н), 8,21 (м, 1Н).

Пример 20а. 6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-2-(6метоксипиридин-3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он.

Пример 20Ь. 6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1-(6метоксипиридин-3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он

Указанные в заголовке соединения 20а и 20Ь получают по аналогии с методикой, описанной в примере 7, при использовании 5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-3метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-она (пример 6) и (6-метоксипиридин-3-ил)бороновой кислоты. Смесь региоизомеров разделяют с помощью 8РС (ЭЕАР (250x30 мм, 5 мкм), градиент: 7-12% В, в течение 11 мин, А: §сСО₂, В: МеОН; расход: 100 мл/мин), получая указанные в заголовке продукт 20а в виде твердого вещества белого цвета:

Ю 0,957 мин (иРРС I); 1_К: 0,95 мин (РС-М8 1);

Е8РМ8: 476/478 [М+Н]+ (РС-М8 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ ррт 1,6 (с, 3Н), 2,8 (с, 3Н), 3,9 (с, 3Н), 3,92 (с, 3Н), 6,31 (с, 1Н), 7,00 (д, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,33 (д, 1=8,9 Гц, 2Н), 7,41 (д, 1=9,1 Гц, 2Н), 7,47 (д, 1=1,6 Гц, 1Н), 7,77 (д, 1=2,7 Гц, 1Н), 7,92 (дд, 1=8,9, 2,7 Гц, 1Н), 8,40 (д, 1=2,7 Гц, 1Н), и продукт 20Ь в виде твердого вещества белого цвета:

Ю 0,967 мин (иРРС 1); Ю 0,96 мин (РС-М8 1);

Е8РМ8: 476/478 [М+Н]+ (РС-М8 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ ррт 1,95 (с, 3Н), 2,44 (с, 3Н), 3,37 (с, 3Н), 3,85 (с, 3Н), 6,73 (с, 1Н), 6,88 (д, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,22 (д, 1=8,1 Гц, 2Н), 7,32 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,36 (д, 1=1,6 Гц, 1Н), 7,6 (д, 1=2,7 Гц, 1Н), 7,88 (дд, 1=8,9; 2,8 Гц, 1Н), 8,32 (д, 1=2,7 Гц, 1Н).

- 29 028035

Пример 21а. 6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1-(2-метоксипиримидин-5-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он.

Пример 21Ъ. 6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-2-(2метоксипиримидин-5-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он

Указанные в заголовке соединения 21а и 21Ъ получают по аналогии с методикой, описанной в примере 7, при использовании 5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-3метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-она (пример 6) и (2-метоксипиримидин-5-ил)бороновой кислоты. Смесь региоизомеров разделяют с помощью ЗТС (БЕАР (250x30 мм, 5 мкм), градиент: 8-13% В, в течение 11 мин, А: δсСО₂, В: МеОН; расход: 100 мл/мин), получая указанные в заголовке продукт 21а в виде твердого вещества белого цвета:

1_К: 1,008 мин (ИРЬС I); 1_К: 0,87 мин (ЬС-МЗ 1);

ЕЗ1-МЗ: 477/479 [М+Н]+ (ЬС-МЗ 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-ф,) δ ррт 1,95 (с, 3Н), 2,46 (с, 3Н), 3,37 (с, 3Н), 3,92 (с, 3Н), 6,74 (с, 1Н), 7,25 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,32-7,38 (м, 3н), 7,59-7,63 (м, 1Н), 7,62 (д, 1=2,7 Гц, 1Н), 8,76 (с, 2Н), и продукт 21Ъ в виде твердого вещества белого цвета:

1_К: 0,976 мин (ИРЬС 1); 1_К: 0,86 мин (ЬС-МЗ 1);

ЕЗ1-МЗ: 477/479 [М+Н]+ (ЬС-МЗ 1);

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-й₆) δ ррт 1,91 (с, 3Н),2,46 (с, 3Н), 3,32 (с, 3Н), 3,96 (с, 3Н),6,27 (с, 1Н), 7,29 (д, 1=8,8 Гц, 2Н), 7,36 (д, 1=8,8 Гц, 2Н), 7,42 (с, 1н), 7,72 (с, 1Н) 8, 63 (с, 2Н).

Пример 22. (К)-6-(4-Хлорфенил)-3-циклопропил-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)1-(1 -метил-1 Н-пиразол-5-ил)-5,6-дигидропирроло [3,4-с] пиразол-4( 1 Н)-он

Указанное в заголовке соединение получают энантиомерно чистым (>98% ее), после хиральной препаративной хроматографии (система: Тйаг ЗТС200; колонка: СЫга1рак АБ-Н, размером 50x250 мм; мобильная фаза: δсСО₂/IРΑ = 75:25 (изократическая); расход: 200 мл/мин) рацемической смеси 6-(4хлорфенил)-3-циклопропил-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1-(1-метил-1Н-пиразол-5ил)-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-она (пример 5).

(З)-6-(4-Хлорфенил)-3-циклопропил-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1-(1-метил1Н-пиразол-5-ил)-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он, 1_К: 1,55 мин (система: ТйагЖа1е1Ъ ЗТС Iηνеδ1^βа1о^ МЗ; колонка: СЫга1рак АБ-Н, размером 4,6x250 мм; мобильная фаза: δсСО₂/изопропанол = 70:30 (изократическая), расход: 4 мл/мин); детектирование УФ: 215 нм).

(К)-6-(4-Хлорфенил)-3-циклопропил-5-( 1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3 -ил)-1-(1 -метил1Н-пиразол-5-ил)-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он, 1_К: 2,36 мин (система: ТйагЖа1е1Ъ ЗТС Iηνеδ1^βа1о^ МЗ; колонка: СЫга1рак АБ-Н, размером 4,6x250 мм; мобильная фаза: δсСО₂/изопропанол = 70:30 (изократическая), расход: 4 мл/мин; детектирование УФ: 215 нм).

Пример 23. 6-(4-Хлорфенил)-3-циклопропил-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-5,6дигидропирроло[3,4-с] пиразол-4( 1 Н)-он

Указанное в заголовке соединение получают по аналогии с методикой, описанной в примере 1, при использовании 5-(4-хлорфенил)-3-(циклопропанкарбонил)-1-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3ил)пирролидин-2,4-диона (стадия 1.3) и гидразина.

1_К: 0,81 мин (ЬС-МЗ 1);

ЕЗ1-МЗ: 395/397 [М+Н]+ (ЬС-МЗ 1);

- 30 028035 ¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ ррт 13,29 (с, 1Н), 7,69 (д, I = 2,8 Гц, 1Н), 7,44-7,33 (м, 3Н), 7,28-7,19 (м, 2Н), 6,13 (с, 1Н), 5,76, 3,36 (с, 3Н), 2,04 (м, 1Н), 1,93 (с, 3Н), 1,21-1,07 (м, 4Н).

Пример 24. (К)-6-(4-Хлорфенил)-3-циклопропил-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)5,6-дигидропирроло [3,4-с]пиразол-4( 1 Н)-он

Указанное в заголовке соединение получают энантиомерно чистым (>99% ее) после хиральной препаративной хроматографии (система: Θίίδοπ РГС 2020; колонка: СЫгасе1 ΘΌ-Н 5 мкм, размером 20x250 мм; мобильная фаза: гептан/ЕЮН/МеОН = 80:10:10; расход: 10 мл/мин; детектирование УФ: 210 нм) рацемической смеси 6-(4-хлорфенил)-3-циклопропил-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3ил)-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-она (пример 23).

(К)-6-(4-Хлорфенил)-3-циклопропил-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он. ΐ_κ: 7,13 мин (система: Адйеп! НРГС; колонка: СЫгасе1 ΟΌ-Н 5 мкм, размером 4,6x250 мм; мобильная фаза: гептан/ЕЮН/МеОН = 80:10:10 (изократическая); расход: 1 мл/мин; детектирование УФ: 210 нм).

(8)-6-(4-Хлорфенил)-3-циклопропил-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он. ΐ_κ: 9,95 мин (система: Адйеп! НРГС; колонка: СЫгасе1 ΟΌ-Н 5 мкм, размером 4,6x250 мм; мобильная фаза: гептан/ЕЮН/МеОН = 80:10:10 (изократическая); расход: 1 мл/мин; детектирование УФ: 210 нм).

Пример 25. (К)-6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1-(2метоксипиридин-3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло [3,4-с]пиразол-4(1 Н)-он

Указанное в заголовке соединение получают энантиомерно чистым (>99% ее), после хиральной препаративной хроматографии (система: Мд II ргерагайуе 8РС; колонка: СЫга1рак ΑΌ-Н, размером 30x250 мм; мобильная фаза: 8сСО₂/МеОН = 55:45 (изократическая); расход: 50 мл/мин) рацемической смеси 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1-(2-метоксипиридин-3-ил)-3метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-она (пример 17а).

(8)-6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1-(2-метоксипиридин-3-ил)3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он. ΐ_κ: 2,34 мин (система: Тйаг апа1уйса1 8РС; колонка: СЙ1га1рак ΑΌ-Н, размером 4,6x250 мм; мобильная фаза: 8сСО₂/МеОН (0,05% ΌΕΑ) = 50:50 (изократическая); расход: 2 мл/мин; детектирование УФ: 220 нм).

(К)-6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1-(2-метоксипиридин-3-ил)3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он. ΐ_κ: 2,76 мин (система: Тйаг апа1уйса1 8РС; колонка: СЙ1га1рак ΑΌ-Н, размером 4,6x250 мм; мобильная фаза: 8сСО₂/МеОН (0,05% ΌΕΑ) = 50:50 (изократическая); расход: 2 мл/мин; детектирование УФ: 220 нм).

Пример 26. (К)-6-(4-Хлорфенил)-5-( 1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-2-(2метоксипиридин-3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он

Указанное в заголовке соединение получают энантиомерно чистым (>99% ее) после хиральной препаративной хроматографии (система: Мд II ргерагайуе 8РС; колонка: СЫга1рак ΑΌ-Н, размером 30x250 мм; мобильная фаза: 8сСО₂/МеОН = 55:45 (изократическая); расход: 50 мл/мин) рацемической смеси 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-2-(2-метоксипиридин-3-ил)-3метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-она (пример 17Ь).

(8)-6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-2-(2-метоксипиридин-3-ил)3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он. ΐ_κ: 4,75 мин (система: Тйаг апа1уйса1 8РС; колонка:

- 31 028035

СЕпа1рак ΑΌ-Н, размером 4,6x250 мм; мобильная фаза: 5еСО₂/МеОИ (0,05% ΌΕΆ) = 50:50 (изократическая); расход: 2 мл/мин; детектирование УФ: 220 нм).

(К)-6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-2-(2-метоксипиридин-3-ил)3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он. ΐ_κ: 6,46 мин (система: ТЕаг апа1уЕса1 8ЕС; колонка: СЕпа1рак ΑΌ-Н, размером 4,6x250 мм; мобильная фаза: 5еСО₂/МеОИ (0,05% ΌΕΑ) = 50:50 (изократическая); расход: 2 мл/мин; детектирование УФ: 220 нм).

Пример 27. (К)-6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он

С1

Указанное в заголовке соединение получают энантиомерно чистым (>99% ее) после хиральной препаративной хроматографии (система: Οϊ1δοη РЕС 2020; колонка: СЕЕа1рак ΙΑ 5 мкм, размером 20x250 мм; мобильная фаза: гептан/ЕЮН = 50:50; расход: 10 мл/мин; детектирование УФ: 220 нм) рацемической смеси 6-(4-хлорфенил)-3-циклопропил-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-она (пример 9).

(8)-6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он. ΐ_κ: 5,92 мин (система: Адйеп1 НРЕС; колонка: СЫга1рак ΙΑ, 5 мкм, размером 4,6x250 мм; мобильная фаза: гептан/ЕЮН = 50:50 (изократическая); расход: 1 мл/мин; детектирование УФ: 220 нм).

(К)-6-(4-Хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он. ΐ_κ: 8,74 мин (система: ΑμίΕ'ΐι! НРЕС; колонка: СЫга1рак ΙΑ 5 мкм, размером 4,6x250 мм; мобильная фаза: гептан/ЕЮН = 50:50 (изократическая); расход: 1 мл/мин; детектирование УФ: 220 нм).

Пример 28. (К)-5-(5-Хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-3-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он

Указанное в заголовке соединение получают энантиомерно чистым (>99% ее), после хиральной препаративной хроматографии (система: Οϊ1δοη РЕС 2020; колонка: СЕЕа1рак ГО 5 мкм, размером 20x250 мм; мобильная фаза: гептан/ЕЮН = 80:20; расход: 11 мл/мин; детектирование УФ: 210 нм) рацемической смеси 5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-3-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-она (пример 6).

(8)-5-(5-Хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он. ΐ_κ: 6,70 мин (система: Мегск НРЕС; колонка: СЕпа1рак ГО 5 мкм, размером 4,6x250 мм; мобильная фаза: гептан/ЕЮН/МеОН = 60:20:20 (изократическая); расход: 1 мл/мин; детектирование УФ: 210 нм).

(К)-5-(5-Хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он. ΐ_κ: 8,32 мин (система: Мегск НРЕС; колонка: СЕпа1рак ГО 5 мкм, размером 4,6x250 мм; мобильная фаза: гептан/ЕЮН/МеОН = 60:20:20 (изократическая); расход: 1 мл/мин; детектирование УФ: 210 нм).

Тесты.

Активность соединения согласно настоящему изобретению может быть оценена с помощью следующих способов.

Тесты на связывание ТК-ЕКЕТ ΐη νίΐΓΟ для ΒΚΌ2, ΒΚΌ3 и ΒΚΌ4.

Все тесты осуществляли на 384-луночных титрационных микропланшетах. Каждый аналитический планшет содержал 8-точечные последовательные разведения для 40 тестируемых соединений плюс 16 высших и 16 низших контролей. Стадии манипулирования с жидкостью и инкубации проводили на установке Iηηονаάуηе ХапоОгор Εxр^еδδ, оснащенной робототехническим манипулятором (ТЕегто СаΐX, Регкш Е1тег/СаЕрег ΊλνίδΚτ II) и инкубатором (Ысошс ЧТХ40, ТЕегто Суΐοтаΐ 2С450). Аналитические планшеты приготавливали путем добавления 50 нл на лунку раствора соединения в 90% ДМСО с помощью нанодиспенсера НиттшдВЕД (Ζ^ηδδе^ /\па1\Т1С). Тест начинали путем ступенчатого добавления 4,5 мкл/лунку бромодоменового белка (50 мМ НЕРЕЗ, рН 7,5, 0,005% Т\уееп 20, 0,1% ΒδΑ, 50 мМ №С1,

- 32 028035 нМ Н|3-Вгб2 (60-472) или 45 нМ Шз-Вгб3(20-477) или 45 нМ Н1з-Вгб4(44-477); все белки получали от фирмы-производителя) и 4,5 мкл на лунку раствора пептида (50 мМ НЕРЕ8, рН 7,5, 0,005% Т\\ееп 20, 0,1% В8А, 50 мМ №С1, 60 нМ ацетил-гистон Н4 (АсК 5, 8, 12, 16) (ВюзуШап СтЬН). Реакционные смеси инкубировали при температуре 30°С в течение 35 мин. Затем добавляли 4,5 мкл на лунку смеси для детектирования (50 мМ НЕРЕ8, рН 7,5, 0,005% Т\\ееп 20, 0,1% В8А, 50 мМ №С1, 3 нМ Еи-меченого антиΗίδ6 антитела, 21 нМ стрептовидин-аллофикоцианин). После инкубации в течение 35 мин при температуре 30°С планшеты оценивали на аппарате для прочтения планшетов Регкш Е1тег Епу18юп. Концентрации, вызывающие 50%-ное ингибирование (значения 1С₅₀), определяли из значений ингибирования в процентах при различных концентрациях соединения посредством нелинейного регрессионного анализа.

Тест на связывание ίη νίίτο А1рка8сгееп для СКЕВВР.

Для оценки бромодоменовой селективности авторы настоящего изобретения проводили тест на связывание, используя бромодомен, кодируемый СКЕВВР-геном. Соединения тестировали согласно СКЕВВР-тесту по аналогичному протоколу, однако, используя А1рЬа8сгееп (АтрППеб Ьиттезсей Ргоютйу Нотодепеоиз - тест, Регкш Е1тег) в качестве дисплея детектирования вместо ТК-РКЕТ. Тест начинали путем ступенчатого добавления 4,5 мкл/лунку бромодоменового белка (50 мМ НЕРЕ8, рН 7,5, 0,005% Т\\ееп 20, 0,02% В8А, 150 мМ №С1, 324 нМ Ηίδ-СКЕВВР (1081-1197)(специальное производство фирмы УАа Вю1есН Ыб.)) и 4,5 мкл на лунку раствора пептида (50 мМ НЕРЕ8, рН 7,5, 0,005% Т\\ееп 20, 0,02% В8А, 150 мМ №С1, 120 нМ ацетил-гистон Н4 (АсК 5, 8, 12)(Вюзуп1ап СтЬН). Реакционные смеси инкубировали при температуре 30°С в течение 35 мин. Затем добавляли 4,5 мкл/лунку смеси для детектирования (50 мМ НЕРЕ8, рН 7,5, 0,005% Т\\ееп 20, 0,02% В8А, 150 мМ №С1, 45 мкг/мл гранулакцепторов Νί-хелата, 45 мкг/мл гранул-доноров стрептавидина)(Регк1п Е1тег)). После инкубации в течение 60 мин при комнатной температуре планшеты оценивали на аппарате для прочтения планшетов Регкш Е1тег Еп\Ыоп. Значения 1С₅₎ определяли из значений ингибирования в процентах при различных концентрациях соединения посредством нелинейного регрессионного анализа.

Для дальнейшего профилирования бромодоменовой селективности осуществляли дополнительный ряд тестов, используя аналогичные протоколы с менее значительными модификациями, специфичными для индивидуального теста, и используя или ТК-РКЕТ или А1рНа8сгееп для детектирования.

Приготовление разведений соединения.

Тестируемые соединения растворяли в ДМСО (10 мМ) и переносили в емкостью 1,4 мл с плоским дном или У-образной формы пробирки, имеющие особенную 2Ό форму. Исходные растворы хранили при температуре +2°С, если немедленно не использовали. Для тест-процедуры пробирки размораживали и идентифицировали посредством сканирующего устройства, в соответствии с чем создавали схему действия, которой руководствовались на последующих рабочих стадиях.

Разведения соединений осуществляли на 96-луночных планшетах. Этот формат позволяет осуществлять тестирование максимально 40 индивидуальных тестируемых соединений в 8 концентрациях (единичные точки), включая 4 справочных соединения, если желательно (известные ВЕТ-ингибиторы из уровня техники для этого и других тестов раскрытого в данном контексте типа). Протокол разведения включает получение планшетов предварительного разведения, мастер-планшетов и аналитических планшетов.

Планшеты предварительного разведения.

Полипропиленовые 96-луночные планшеты использовали в качестве планшетов предварительного разведения. Приготовляли суммированно 4 планшета предварительного разведения, включающие, каждый, 10 тестируемых соединений в позициях планшета А1-А10, одно стандартное соединение в позиции А11 и один ДМСО-контроль в позиции А12. Все стадии разведения осуществляли при использовании робототехнического устройства НатПЮп8ТАК.

Мастер-планшеты.

мкл разведений индивидуального соединения, включая стандартное соединение и контроли из 4 планшетов предварительного разведения, переносили на 384-луночный мастер-планшет, включая следующие концентрации: 10000, 3003, 1000, 300, 100, 30, 10 и 3 мкМ соответственно в 90% ДМСО.

Аналитические планшеты.

Идентичные аналитические планшеты приготовляли затем путем пипетирования 50 нл каждого из разведений соединения из мастер-планшетов на 384-луночные аналитические планшеты посредством 384-канального диспенсера. Эти планшеты использовали непосредственно для теста, который осуществляли в общем объеме 13,55 мкл. Это приводило к конечной концентрации соединения 37, 11, 3,7, 1,1, 0,37, 0,11, 0,037 и 0,011 мкМ и конечной концентрации ДМСО 0,37% на тест.

Тест в отношении ингибирования клеточного роста.

Линии клеток лейкоза человека МУ-4-11, ТНР-1 и К-562 использовали для охарактеризовывания воздействия ВЕТ-ингибиторов на клеточную пролиферацию и жизнеспособность. Клетки получали из Американской коллекции типовых культур (АТСС) и культивировали при температуре 37°С в инкубаторе с влажной атмосферой, содержащей 5% СО₂, в следующих средах: МУ-4-11: ИМЕМ с высоким содержанием глюкозы (Аттеб, номер по каталогу 1-26Р01-1), 10% фетальной телячьей сыворотки (Аттеб, номер по каталогу 2-01Р26-1), 4 мМ Ь-глутамина (Аттеб, номер по каталогу 5-10К50), 1 мМ

- 33 028035 пирувата натрия (Аштей, номер по каталогу С03625Р), 1х пенициллин-стрептомицин (Аттей, номер по каталогу Р12478Р); К-562: МЕМ Искова (Аттей, номер по каталогу 1-28Ρ16-Ι), 10% фетальной телячьей сыворотки (Аттей, номер по каталогу 2-01Ρ26-Ι), 4 мМ Ь-глутамина (Аттей, номер по каталогу 5-10К50), 1х пенициллин-стрептомицин (Аттей, номер по каталогу Р12478Р); ТНР-1: КРМ1-1640 (Άηίтей, номер по каталогу 1-41Ρ01-Ι), 10% фетальной телячьей сыворотки (Аттей, номер по каталогу 201Ρ26-Ι), 2 мМ Ь-глутамина (Аттей, номер по каталогу 5-10К50), 10 мМ НЕРЕ8 (Аттей, номер по каталогу 5-31Р100), 1 мМ пирувата натрия (Аттей, номер по каталогу С03625Р), 1х пенициллинстрептомицин (Аттей, номер по каталогу Р12478Р). АМЬ-линии МУ-4-11 и ТНР-1 являются очень чувствительными к ВЕТ-ингибиторам и показывают высокую гибель клеток за счет ВЕТ-ингибирования (2иЬег е1 а1., Ыа1иге, 478 (2011), 524-528). Опосредуемое соединением подавление клеточной пролиферации/жизнеспособности оценивали посредством определения клеточных уровней АТФ, используя реагент С.’е11ТПег-О1о (СТО) (Рготеда). Вкратце, клетки высевали в 20 мкл свежей среды на 384-луночные планшеты с последующим добавлением 5 мкл среды, содержащей разведения соединения в их предназначенной 5-кратной конечной концентрации. Эффекты доза-ответ оценивали посредством 3-кратных последовательных разведений тестируемого соединения, начиная с 10 мкМ. После инкубации клеток в течение 4 суток при температуре 37°С и в присутствии 5% СО₂ воздействие ингибиторов на жизнеспособность клеток оценивали после добавления 20 мкл СТО и определения люминесценции (время интеграции: 100 мс) согласно руководству производителя, используя соответственно оснащенный Тесап М200 мульти-типа планшет-ридер (ТЕСАН Швейцария). Для анализа данных фоновое значение теста, определяемое в лунках, содержащих среду, но не содержащих клетки, вычитали из всех измеренных данных. Для облегчения дифференцировки цитотоксических от цитостатических соединений количество жизнеспособных клеток оценивали относительно количества, наблюдаемого во время добавления соединения, используя отдельную клеточную пластинку (день 0). Воздействие конкретной концентрации тестируемого соединения на клеточную пролиферацию/жизнеспособность выражали в виде процентного отношения показания фоновой и корректированной в день 0 люминесценции, получаемого для клеток, обработанных только растворителем (ДМСО, конечная концентрация 0,1%), которое устанавливали как 100%, тогда как таковое показания люминесценции для клеток, содержащих среду, устанавливали как -100%. Концентрации соединения, приводящие к полумаксимальному (1С₅₀) и полному ингибированию роста (ТО1), определяли, используя стандартный регрессионный анализ кривой по четырем параметрам.

Тест в отношении образования Νπί-ίίοά.

Клетки NυТ-медиальной карциномы НСС2494 (экспрессирующие гибридизацию ΒΚ^4-NυТ) получали из Университета юго-западного Техаса и культивировали на среде КРМ1-1640, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки, при температуре 37°С в инкубаторе с влажной атмосферой, содержащей 5% СО2.

Опосредуемое соединением ингибирование активности ВКО4 контролировали путем определения количества и интенсивности ядерного ^Κ^4-NυТ Госк используя автоматизированную иммунофлуоресцентную микроскопию. Вкратце, 5000 клеток в 20 мкл свежей среды высевали на предварительно покрытые поли-О-лизином 384-луночные планшеты и инкубировали в течение ночи при температуре 37°С и в присутствии 5% СО₂, с последующим добавлением 5 мкл среды, содержащей разведения соединения в их предназначенной последней 5-кратной концентрации. Эффекты доза-ответ оценивали путем 3-кратных последовательных разведений тестируемого соединения, начиная с 10 мкМ. После инкубации клеток в течение 24 ч при температуре 37°С и в присутствии 5% СО₂, клетки фиксировали путем инкубации с 3,7% формальдегида в течение 10 мин, затем посредством иммунофлуоресцентного окрашивания, используя кроличье против ΝΠΒ антитело (Се11 ЕидпаПпд ТесЬпо1од1ек, номер по каталогу 3625) в качестве первичного антитела и меченое А1ехаЬ1иог488 козье против кроличьего антитело (1пуйгодеп, номер по каталогу А11008) в качестве вторичного антитела (последнее дополнено с помощью 1 мкг/мл НоесЬкк33342 в качестве ДНК-красителя). Аналитические планшеты визуализировали, используя соответствующие наборы фильтров, на установке автоматизированной флуоресцентной микроскопии Се11от1с§ УТ1 (ТЬегтоИкЬег §тепййс) и определяли совокупное среднее значение количества ΝυΥ^α на ядро, используя алгоритм анализа изображения Сейоткк 8рок Эекесйоп ВюАррйсайоп (ТЬегтоИксЬег §шепййс). Воздействие конкретной концентрации тестируемого соединения на количество ИиТ-Гоа и интенсивность выражали в виде процентного отношения значения, получаемого для клеток, обработанных с помощью одного растворителя (ДМСО, конечная концентрация 0,1%), которое устанавливали как 100. Концентрации соединения, приводящие к полумаксимальному (1С₅₀) ингибированию вышеуказанных параметров, определяли, используя стандартный регрессионный анализ кривой по четырем параметрам.

Согласно использованию биохимических и клеточных тестов, как описанные в настоящей заявке, соединения согласно настоящему изобретению проявляют ингибирующую эффективность в соответствии с нижеприводимыми табл. 1 и 2.

- 34 028035

Таблица 1

Биохимические значения 1С₅₀*

	1С50 (мкм)
Пример	ΒΗϋ4	ΒΗϋ2	ΒΚϋ3	СНЕВВР
1	0, 028	0, 032	0, 03	1,4
2	0, 016	0, 022	0, 02	1,2
3	0, 043	0, 042	0, 034
4	0, 014	0, 015	0, 013	3
5	0, 096	0, 074	0, 082	5
6	0, 12	0, 094	0, 08	4,1
7а	0, 11	0, 076	0, 065	4,4
7Ь	0, 041	0, 032	0, 024	1,9
8а	0, 17	0, 12	0, 12	> 37
8Ь	0,21	0,16	0, 14	5,4
9	0, 09	0, 072	0, 067	3
10	0, 089	0, 084	0, 062	3
11	0, 04	0, 038	0, 034	1,9
12	0, 067	0, 052	0, 046	1,4
13	0, 103	0, 097	0,0755	2,2
14	0, 1	0, 094	0, 074	5,1
15	0,0625	0, 07	0,0655	1
16	0, 056	0,0485	0, 052	0,545
17а	0, 086	0, 078	0, 064	4
17Ь	0, 056	0, 053	0, 046	1,3
18а	0, 079	0, 068	0, 062	3,1
18Ь	0, 041	0, 035	0, 039	1,3
19	0, 1	0, 08	0, 073	3, 8
20а	0, 062	0, 061	0, 05	2
2 0Ь	0, 056	0, 049	0, 048	3
21а	0, 071	0, 063	0, 052	>11,1
21Ь	0, 11	0, 1	0, 094	4,7
22	0, 14	0,16	0, 089	2,9
23		0, 052	0, 049	3,3
24	0, 073	0, 074	0, 047	1,7
25	0, 15	0, 13	0, 064	2
26	0, 091	0, 11	0, 052	1
27	0, 037	0, 037	0, 027	1,2
28	0,16	0, 17	0, 069	2,2

* Значения или от одного определения или от п>2 независимых определений.

- 35 028035

Клеточные значения ГС₅₀*

Таблица 2

Пример	МУ-4-11 6150 (мкм)	МУ-4-11 Τ6Ι (мкм)	ТНР-1 6150 (мкм)	ТНР-1 Τ6Ι (мкм)	К-562 6150 (мкм)	К-562 Τ6Ι (мкм)	НСЗ Вг04- ыит 1650 (мкм)
1	0,0246	0,0412	0,0449	0, 104	0, 141	> 10	0,0333
2	0,0154	0,0303	0,0219	0,0468	0, 121	> 10	0,0201
3	0,0375	0, 064	0,0901	0,264	0,268	> 10	0, 049
4	0,0205	0,0336	0,0456	0, 1	0, 109	> 10	0,0299
5	0,0538	0, 1	0, 101	0, 179	0, 658	> 10	0, 138
6	0,0741	0, 134	0, 189	0,352	0,558	> 10	0, 108
7а	0,0877	0, 121	0,204	0,384	0,719	> 10	0,0609
7Ь	0,0567	0,0824	0, 104	0,285	0,548	> 10	0,0744
8а	0, 141	0,294	0, 127	0,493	0, 991	> 10	0,298
8Ь	0, 117	0, 195	0,293	0,562	0, 999	> 10	0, 058
9	0, 051	0,0721	0,0885	0,206	0,322	> 10	0,0438
10	0,0394	0,0655	0,0764	0, 132	0,336	> 10	0, 108
11	0,0186	0,0294	0,0366	0,0822	0, 127	> 10	0,0417
12	0,0191	0,0374	0,0622	0, 112	0, 193	> 10	0,0484
13	0, 03	0,0562	0,0698	0, 119	0,484	> 10
14	0, 122	0,203	0,219	0,352	0, 615	> 10
15	0,0546	0,0924	0,0678	0, 143	0, 64	> 10	0,0607
16	0,0236	0,0437	0, 043	0,0922	0, 197	> 10	0,0606
17а	0,0581	0,0879	0, 102	0, 175	0,293	> 10	0,0561

17Ь	0, 027	0,0343	0,0724	0,117	0, 154	> 10	0,0403
18а	0,0893	0, 101	0,0896	0,175	0,574	> 10	0,0666
18Ь	0,0169	0,0313	0,044	0,0931	0, 149	> 10	0,0217
19	0,0505	0,0798	0,091	0,164	0,302	> 10	0,0667
20а	0,0496	0, 065	0,104	0,178	0,236	> 10	0,0736
2 0Ь	0,0386	0,0542	0,0931	0,156	0,239	> 10	0,0576
21а	0, 115	0, 177	0,166	0,331	0,404	> 10
21Ь	0, 105	0,208	0,209	0,396	0,51	> 10
22	0,0495	0,08865	0,0874	0,165	0,2775	> 10
23	0,0256	0, 048	0,05935	0,1285	0,1695	> 10
24	0,02155	0,03495	0,0297	0,06225	0,10305	> 10
25	0,0407	0,07255	0,0727	0,1355	0,206	> 10
26	0,02255	0,03675	0,0276	0,0524	0,1735	> 10
27	0,0271	0,0496	0,0562	0,115	0, 112	> 10
28	0,0493	0,0864	0,10965	0,2015	0,318	> 10

* Значения или от одного определения или от η>2 независимых определений.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль где А означает

В означает

С выбирают из К¹ выбирают из метила и хлора;

К² выбирают из хлора и фтора;

К³ выбирают из метила и циклопропила;

К⁴ выбирают из Н; (С₁-С₄)алкила, необязательно замещенного -ОН или -О-(С₁-С₄)алкилом; циклопропила;

К³ означает и К⁴ выбирают из Н; (С₁-С₄)алкила, необязательно замещенного -ОН или -О-(С₁-С₄)алкилом; и циклопропила;

К⁵ означает Н;

К⁶ означает -О-(С₁-С₄)алкил;

К⁷ выбирают из Н и метокси;

* указывает на место присоединения к остатку молекулы.
2. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, где К² означает хлор.
3. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль по п.1 или 2, где К³ выбира- ют из метила, циклопропила и
4. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль по любому из предшествующих пунктов, где К⁴ выбирают из метила, этила, изопропила, -СН₂СН₂ОН, -СН₂СН₂ОСН₃, циклопропила,

- 37 028035 или К⁴ означает Н.
5. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, выбранное из пример 1: 6-(4-хлорфенил)-3-циклопропил-5-( 1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1 метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 2: (К)-6-(4-хлорфенил)-3-циклопропил-5-(3,8-диметил[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридин-6-ил)1-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 3: 6-(4-хлорфенил)-3-циклопропил-5-( 1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1 -(2гидроксиэтил)-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 4: 6-(4-хлорфенил)-3-циклопропил-5-( 1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1 -(2метоксиэтил)-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 5: 6-(4-хлорфенил)-3-циклопропил-5-( 1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1-(1 метил-1Н-пиразол-5-ил)-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 6: 5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-3-метил-5,6дигидропирроло [3,4-с] пиразол-4(2Н)-он;

пример 7а: 5-(5-хлор-1 -метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-1 -(2метоксипиридин-3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 7Ь: 5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2метоксипиридин-3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он;

пример 8а: 5-(5-хлор-1 -метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-1 -(2метоксипиримидин-5-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 8Ь: 5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2метоксипиримидин-5-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он;

пример 9: 6-(4-хлорфенил)-5-( 1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он;

пример 10: 6-(4-хлорфенил)-5-( 1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1,3-диметил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 11: 6-(4-хлорфенил)-1-циклопропил-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 12: 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1-изопропил-3-метил5,6-дигидропирроло [3,4-с] пиразол-4( 1 Н)-он;

пример 13: 6-(4-хлорфенил)-5-( 1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1 -(4-метоксифенил)3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 14: 6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6дигидропиридин-3-ил)-3 -метил-5,6-дигидропирроло [3,4-с] пиразол-4(2Н)-он;

пример 15: 6-(4-хлорфенил)-5-( 1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3 -(2метоксипиридин-3-ил)-1-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 16: (К)-6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3-(2метоксипиридин-3-ил)-1-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 17а: 6-(4-хлорфенил)-5-( 1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1 -(2метоксипиридин-3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 17Ь: 6-(4-хлорфенил)-5-( 1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-2-(2метоксипиридин-3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он;

пример 18а: 6-(4-хлорфенил)-5-( 1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1 -(2-этоксипиридин3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 18Ь: 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-2-(2-этоксипиридин3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он;

пример 19: 6-(4-хлорфенил)-5-( 1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1 -(2-фторпиридин-3ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 20а: 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-2-(6метоксипиридин-3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он;

пример 20Ь: 6-(4-хлорфенил)-5-( 1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1 -(6метоксипиридин-3-ил)-3-метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

- 38 028035 пример 21а: 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1-(2метоксипиримидин-5-ил)-3 -метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 21Ь: 6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-2-(2метоксипиримидин-5-ил)-3 -метил-5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он;

пример 22: (К)-6-(4-хлорфенил)-3-циклопропил-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1(1 -метил-1Н-пиразол-5-ил)-5,6-дигидропирроло [3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 23: 6-(4-хлорфенил)-3-циклопропил-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-5,6дигидропирроло [3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 24: (К)-6-(4-хлорфенил)-3-циклопропил-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)5,6-дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 25: (К)-6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-1-(2метоксипиридин-3 -ил)-3 -метил-5,6-дигидропирроло [3,4-с]пиразол-4(1Н)-он;

пример 26: (К)-6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-2-(2метоксипиридин-3 -ил)-3 -метил-5,6-дигидропирроло [3,4-с]пиразол-4(2Н)-он;

пример 27: (К)-6-(4-хлорфенил)-5-(1,5-диметил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-3-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он; и пример 28: (К)-5-(5-хлор-1-метил-6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-3-метил-5,6дигидропирроло[3,4-с]пиразол-4(2Н)-он.
6. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп.1-5, или его фармацевтически приемлемой соли, и один или более фармацевтически приемлемый(ых) носитель(ей).
7. Способ модулирования активности белка ВЕТ у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-5 или его фармацевтически приемлемой соли.
8. Способ лечения ракового заболевания, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемой соли.
9. Применение соединения по любому из пп.1-5 или его фармацевтически приемлемой соли для лечения ракового заболевания.
10. Применение соединения по любому из пп.1-5 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения ракового заболевания.